特開 2024-45106 製剤および調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024045106

(43)【公開日】2024-04-02

(54)【発明の名称】製剤および調製方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 49/00 20060101AFI20240326BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20240326BHJP

   A61K 47/04 20060101ALI20240326BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240326BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240326BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240326BHJP

   C07K 7/08 20060101ALN20240326BHJP

   C12Q 1/04 20060101ALN20240326BHJP

   G01N 33/533 20060101ALN20240326BHJP

【ＦＩ】

A61K49/00 ZNA

A61K9/19

A61K47/04

A61K47/18

A61K47/26

A61K47/64

C07K7/08

C12Q1/04

G01N33/533

【審査請求】有

【請求項の数】56

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023215576

(22)【出願日】2023-12-21

(62)【分割の表示】P 2020551822の分割

【原出願日】2019-03-26

(31)【優先権主張番号】1804835.5

(32)【優先日】2018-03-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】396019387

【氏名又は名称】ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ

(74)【代理人】

【識別番号】100147485

【弁理士】

【氏名又は名称】杉村 憲司

(74)【代理人】

【識別番号】230118913

【弁護士】

【氏名又は名称】杉村 光嗣

(74)【代理人】

【識別番号】100181847

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 かおり

(72)【発明者】

【氏名】マリト スワード ノルドゥモ キセルド

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ヒトｃＭｅｔに対して高い親和性を有する水溶性２６－アミノ酸環状ペプチドを含み、貯蔵寿命が長く、静脈内注射に適したイメージング用製剤を提供する。
【解決手段】医薬品有効成分（ＡＰＩ）と、緩衝剤と、凍結乾燥保護剤とを有する凍結乾燥製剤であって、ＡＰＩは、哺乳動物の身体をｉｎ ｖｉｖｏで光学的にイメージングするのに適したシアニン染料などをコンジュゲートさせた製剤とする。この製剤または医薬組成物を、がんなどの症状の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法などにおいて使用するイメージング方法も提供する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）と；
（ｉｉ）緩衝剤と；
（ｉｉｉ）凍結乾燥保護剤と
を含む凍結乾燥製剤であって、前記ＡＰＩが、哺乳動物の身体を光学的にイメージングす
るのに適した、少なくとも１種のｃＭｅｔ結合ペプチドを含むイメージング剤である、凍
結乾燥製剤。

【請求項2】

前記イメージング剤が、緑色～近赤外波長（４００～１，２００ｎｍ）の光を使用する
イメージングに適した少なくとも１種の光学レポーターを含む、請求項１に記載の凍結乾
燥製剤。

【請求項3】

イメージング剤が式Ｉの化合物を含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥製剤：

【化1】

（式中、
Ｚ^１は、ｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、ＨまたはＭ^ＩＧである；
Ｚ^２は、ｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＮＨ_２、ＯＢ^ｃ（Ｂ^ｃは生体適合性カ
チオンである）またはＭ^ＩＧである；
ｃＭＢＰは、１７～３０個のアミノ酸のｃＭｅｔ結合環状ペプチドであり、下記のアミノ
酸配列（配列番号１）を含む：
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ
－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである；
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であって、残基ａとｂと、ならびに残基ｃ
とｄとが環化して２つの別個のジスルフィド結合を形成している）；
Ｍ^ＩＧは代謝阻害基であって、前記ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害または抑制する
生体適合性基である；
Ｌは、式－（Ａ）ｍ－の合成リンカー基である
（各Ａは、独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２
－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ
（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣ
Ｒ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアル
キレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖また
は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである；
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキ
ニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキルまたはＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択される；
ｍは、値１～２０の整数である）；
ｎは、値０または１の整数である；
ＩＭは、紫色～近赤外波長（４００～１，２００ｎｍ）の光を使用して哺乳動物の身体を
イメージングするのに適した光学レポーターイメージング部位である）。

【請求項4】

配列番号１に加えて、前記ｃＭＢＰがさらに、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端の
いずれかの４個のアミノ酸残基内に、ＡｓｐもしくはＧｌｕ残基、またはそれらの類似体
を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭがアミン基で官能化されており、このアミン基が前記Ａｓｐもし
くはＧｌｕ残基、またはそれらの類似体のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド
結合を与えている、請求項３に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項5】

配列番号１に加えて、前記ｃＭＢＰが、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれ
かの４個のアミノ酸残基内に、Ｌｙｓ残基、またはその類似体を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭが
カルボキシル基で官能化されており、このカルボキシル基が前記Ｌｙｓ残基、またはその
類似体のε－アミン側鎖にコンジュゲートしてアミド結合を与えている、請求項３または
４に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項6】

ｃＭＢＰが、下記の配列番号２または配列番号３のいずれかのアミノ酸配列を含む、請
求項３～５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤：
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３
－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ
^６（配列番号２）；
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－
Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－
Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（配列番号３）。

【請求項7】

Ｘａａ^３がＡｒｇである、請求項３～６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項8】

配列番号１、配列番号２または配列番号３に加えて、ｃＭＢＰがさらに、そのＮ－また
はＣ－末端のいずれかに、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（配列番号４）、－Ｇｌｙ
－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列番号５）および－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－
Ｌｙｓ（配列番号６）から選択されるリンカーペプチドを含む、請求項３～７のいずれか
一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項9】

ｃＭＢＰが、下記のアミノ酸配列（配列番号７）を含む、請求項３～８のいずれか一項
に記載の凍結乾燥製剤：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒ
ｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－
Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ。

【請求項10】

Ｚ^１およびＺ^２の両方が、独立してＭ^ＩＧである、請求項３～９のいずれか一項に記載
の凍結乾燥製剤。

【請求項11】

Ｚ^１がアセチルであり、Ｚ^２が第一級アミドである、請求項３～１０のいずれか一項に
記載の凍結乾燥製剤。

【請求項12】

ｎが０である、請求項３～１１のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項13】

ＩＭが、６００～１，０００ｎｍの範囲の最大吸光度を有する染料である、請求項３～
１２のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項14】

ＩＭがシアニン染料である、請求項１３に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項15】

前記シアニン染料が式ＩＩＩを有する、請求項１４に記載の凍結乾燥製剤：

【化2】

（式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、ＨまたはＳＯ_３Ｍ^１であり、Ｒ^１およびＲ^２のうちの少な
くとも１つはＳＯ_３Ｍ^１（Ｍ^１はＨまたはＢ^ｃである）である；
Ｒ^３およびＲ^４は、独立して、Ｃ_１－４アルキルまたはＣ_１－６カルボキシアルキルであ
る；
Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、独立してＲ^ａ基である（Ｒ^ａは、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ
_１－６カルボキシアルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｋＳＯ_３Ｍ^１（ｋは、値３または４の整数
である）である）；
ただし、前記シアニン染料は、前記Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^ａ基に合計１～４個のＳＯ_３Ｍ^１
置換基を有することを条件とする）。

【請求項16】

復元したときに、約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の
間、任意選択で約ｐＨ６．５～約ｐＨ８．５の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８．
２の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐＨ８の間の
ｐＨを有する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項17】

復元したときに、前記緩衝剤が、約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．
３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．５～約ｐＨ８．５の間、任意選択で約ｐＨ６．
８～約ｐＨ８．２の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８の間、任意選択で約ｐＨ７～
約ｐＨ８の間のｐＨを有する溶液を提供する量で存在する、請求項１～１６のいずれか一
項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項18】

ＡＰＩ：緩衝剤のモル比が、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約１７～約４７モル、任意選択で
ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約２７～約４７モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３０
～約４７モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３４～約４７モル、任意選択でＡＰ
Ｉ約１モル：緩衝剤約２７～約３８モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３０～約
３８モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３４～約３８モルである、請求項１～１
７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項19】

ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比が、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約２
１６モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１６３モル、任意選
択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１５４モル、任意選択でＡＰＩ約１モ
ル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１４５モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護
剤約１０５～約１４１モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１
３２モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１２９モル、任意選
択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約２１６モル、任意選択でＡＰＩ約１モ
ル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１６３モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護
剤約１２９～約１５４モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１
４５モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１４１モル、任意選
択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１３２モルである、請求項１～１８の
いずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項20】

前記製剤が、ＡＰＩを約４～約１２重量％、任意選択でＡＰＩを約８～約１０重量％、
任意選択でＡＰＩを約９重量％含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製
剤。

【請求項21】

前記製剤が、緩衝剤を約３～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約７～約３５重量％、
任意選択で緩衝剤を約１２～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約１５～約３５重量％、
任意選択で緩衝剤を約１８～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約２５～約３５重量％、
任意選択で緩衝剤を約３２～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約３２％含む、請求項１
～２０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項22】

前記製剤が、凍結乾燥保護剤を約５６～約９１重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約
５６～約８２重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７７重量％、任意選択で凍
結乾燥保護剤を約５６～約７５重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７２重量
％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約６６重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約
５６～約５８重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５８重量％を含む、請求項１～２１
のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項23】

前記緩衝剤が、リン酸緩衝剤およびアルカノールアミン緩衝剤のうちの少なくとも１つ
である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項24】

前記リン酸緩衝剤がリン酸水素およびリン酸二水素を含み、任意選択で前記リン酸緩衝
剤が水和している、請求項２３に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項25】

前記アルカノールアミン緩衝剤がトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンである、請
求項２３または２４に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項26】

前記凍結乾燥保護剤が、スクロースおよびマンニトール、ならびにそれらの誘導体のう
ちの少なくとも１つである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項27】

前記凍結乾燥保護剤がマンニトールまたはその誘導体である、請求項１～２６のいずれ
か一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項28】

前記製剤がさらに張度調節剤を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の凍結乾燥
製剤。

【請求項29】

前記凍結乾燥保護剤が張度調節剤としても作用する、請求項１～２８のいずれか一項に
記載の凍結乾燥製剤。

【請求項30】

凍結乾燥製剤の調製方法であって、
ａ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）、緩衝剤、および凍結乾燥保護剤を凍結乾燥容器に供給す
る工程と；
ｂ）第１水分除去ステップを実行する工程と；
ｃ）第２水分除去ステップを実行する工程と
を含み、前記凍結乾燥を行う前に、前記凍結乾燥保護剤および前記緩衝剤を添加する、方
法。

【請求項31】

第１水分除去ステップを、約－３０℃以下、任意選択で約－３５℃以下、任意選択で約
－３８℃以下の温度で行う、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

第２水分除去ステップを、約１０℃以上、任意選択で約１５℃以上、任意選択で約２０
℃以上の温度で行う、請求項３０または３１に記載の方法。

【請求項33】

第１および第２水分除去ステップのうちの少なくとも１つを、５０μｂａｒ以下の圧力
で行う、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

第１および第２水分除去ステップの両方を、５０μｂａｒ以下の圧力で行う、請求項３
０～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記凍結乾燥製剤が、請求項１～２９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤である、請
求項３０～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

請求項３０～３４のいずれか一項に記載の方法によって調製された凍結乾燥製剤。

【請求項37】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤と生体適合性担体とを、哺乳動物への投与
に適した形態で含む医薬組成物。

【請求項38】

約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約
ｐＨ６．５～約ｐＨ８．５の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８．２の間、任意選択
で約ｐＨ７～約ｐＨ８の間のｐＨを有する、請求項３７に記載の医薬組成物。

【請求項39】

請求項３７または３８に記載の医薬組成物を調製するためのキットであって、請求項１
～２９のいずれか一項に記載の製剤を無菌固体形態で含み、請求項３７または３８に記載
の生体適合性担体の無菌供給物で復元させると、溶解が起こり、前記所望の医薬組成物が
得られるような、キット。

【請求項40】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤および請求項３７または３８に記載の医薬
組成物のうちの少なくとも１つを使用することを含む、前記哺乳動物の身体のイメージン
グ方法。

【請求項41】

前記イメージングがｉｎ ｖｉｖｏである、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記イメージングが光学イメージングである、請求項４０または４１に記載の方法。

【請求項43】

前記イメージングが、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を得るためのもの
である、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤または請求項３７もしくは３８に記載の医
薬組成物を、前記哺乳動物の身体に前もって投与している、請求項４０～４３のいずれか
一項に記載の方法。

【請求項45】

請求項４０～４４のいずれか一項に記載の方法であって、
ａ）対象の組織表面を励起光で照らす工程と；
ｂ）前記イメージング剤の励起により発生した前記イメージング剤からの蛍光を検出する
工程と；
ｃ）任意選択で、蛍光検出器によって検出した前記光をフィルタリングして蛍光成分を分
離する工程と；
ｄ）工程（ｂ）または（ｃ）の蛍光から前記対象の組織表面の画像を形成する工程と
を含む、方法。

【請求項46】

工程（ａ）の励起光が、本質的に連続波（ＣＷ）である、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

請求項４０～４４のいずれか一項に記載の方法であって、
ａ）前記哺乳動物の身体の不均一組成を有する光散乱生体組織を、所定の経時変化する強
度の光源からの光にさらして前記イメージング剤を励起させる工程であって、前記組織が
前記励起光を多重散乱させる工程と；
ｂ）前記露光に応答した前記組織からの多重散乱発光を検出する工程と；
ｃ）プロセッサを用いて複数の値を確立することにより、前記発光から前記組織全体の蛍
光特性を定量化する工程であって、前記値が、前記組織内の異なる位置における前記蛍光
特性のレベルにそれぞれ対応しており、前記蛍光特性のレベルが、前記組織の不均一組成
によって変化するものである工程と；
ｄ）工程（ｃ）の値に従って前記組織の不均一組成をマッピングすることにより、前記組
織の画像を生成する工程と
を含む、方法。

【請求項48】

前記光学イメージング方法が、蛍光イメージング、任意選択で蛍光内視鏡検査を含む、
請求項４０～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法を補
助するために使用される、請求項４０～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道が
ん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺
がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検出、診断、手術、病期分類、治療
、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法を補助するために使用される、請求項４０
～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

請求項４０～５０のいずれか一項に記載のイメージング方法を含んでなる、検出、診断
、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法の方法。

【請求項52】

前記哺乳動物の身体のイメージングにおけるイメージング剤として使用するための、請
求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３７もしくは３８に記載の医薬
組成物。

【請求項53】

薬剤として使用するための、請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、または請求
項３７もしくは３８に記載の医薬組成物。

【請求項54】

検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法にお
いて使用するための、請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３７も
しくは３８に記載の医薬組成物。

【請求項55】

前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道が
ん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺
がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検出、診断、手術、病期分類、治療
、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法において使用するための、請求項１～２９
のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３７もしくは３８に記載の医薬組成物。

【請求項56】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の
監視、疾患進行の監視または監視療法において使用するための、請求項１～２９のいずれ
か一項に記載の製剤、または請求項３７もしくは３８に記載の医薬組成物。

【請求項57】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得るた
めに使用される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３７もしく
は３８に記載の医薬組成物。

【請求項58】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、検出、診断、手術、病期分類、治療、治療
の監視、疾患進行の監視または監視療法の方法。

【請求項59】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、哺乳動物の身体のイメージング方法。

【請求項60】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、前がん症状およびがんのうちの１つもしく
は複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道がん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部が
ん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしく
は複数の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療
法の方法。

【請求項61】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の
検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法の方法
。

【請求項62】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つを使用して、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の
画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得る方法。

【請求項63】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つの使用。

【請求項64】

検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法にお
ける、請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載
の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【請求項65】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医
薬組成物のうちの少なくとも１つの、イメージング剤としての使用。

【請求項66】

前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道が
ん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺
がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検出、診断、手術、病期分類、治療
、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法における、請求項１～２９のいずれか一項
に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つ
の使用。

【請求項67】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の
監視、疾患進行の監視または監視療法における、請求項１～２９のいずれか一項に記載の
製剤、および請求項３７または３８に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つの使用。

【請求項68】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得る際
の、請求項１～２９のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３７または３８に記載の
医薬組成物のうちの少なくとも１つの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ヒトまたは動物に投与するための製剤およびその調製方法に関する。特に、
本発明は、より安定な医薬製剤、例えば静脈内投与用のものなど、およびそれらの調製方
法に関する。

【背景技術】

【0002】

国際公開第２００８／１３９２０７号（参照により本明細書に組み込まれる）は、ｉｎ
ｖｉｖｏでの光学イメージングに適した標識ｃＭｅｔ結合ペプチドを記載している。こ
のペプチドは、赤色～近赤外領域でのイメージングに適した光学レポーター基で標識され
ている。また、静脈内投与用の光学分子イメージングｃＭｅｔ結合ペプチド、例えば結腸
直腸がん（ＣＲＣ）の早期診断に使用することができるものなども記載されている。

【0003】

より詳細には、国際公開第２００８／１３９２０７号は、ヒトｃＭｅｔに対して高い親
和性を有する水溶性２６－アミノ酸環状ペプチドを記載しており、このペプチドは、哺乳
動物の身体をｉｎ ｖｉｖｏでイメージングするのに適した蛍光光学レポーターイメージ
ング部位を含む。この部位は、６５３ｎｍでの励起ピークと６７５ｎｍでの発光ピークと
を伴う強い蛍光シグナルを示し、これは、表在性病変のイメージングに最適な波長領域と
考えられている。

【0004】

しかしながら、本発明者らは、その記載されているイメージング剤は、溶液中での貯蔵
寿命が短く、したがって静脈内注射前のイメージング剤の貯蔵および分解が問題となり得
ることを確認している。さらに、静脈内使用では、イメージング剤は、静脈内投与に適切
なｐＨおよび張度であることが有益である。

【0005】

したがって、本発明の目的は、イメージング剤、特に光学イメージング剤、より具体的
には国際公開第２００８／１３９２０７号に記載のようなペプチドを含む光学イメージン
グ剤のためのより安定な製剤を提供することである。本発明のさらなる目的は、イメージ
ング剤、特に光学イメージング剤、より具体的には国際公開第２００８／１３９２０７号
に記載のようなペプチドを含む光学イメージング剤のための製剤であって、より良好な復
元を、特に静脈内使用に適したｐＨおよび／または張度で示す製剤を提供することである
。

【発明の概要】

【0006】

本発明の第１の態様によれば、
（ｉ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）と；
（ｉｉ）緩衝剤と；
（ｉｉｉ）凍結乾燥保護剤と
を含む凍結乾燥製剤であって、ＡＰＩが、哺乳動物の身体をｉｎ ｖｉｖｏで光学的にイ
メージングするのに適した、少なくとも１種のｃＭｅｔ結合ペプチドを含むイメージング
剤である凍結乾燥製剤が提供される。

【0007】

哺乳動物の身体の光学イメージングは、ｉｎ ｖｉｖｏであり得る。

【0008】

用語「緩衝剤」は、ｐＨ調整剤を意味する。緩衝剤は、溶解して緩衝液を形成する化合
物または組成物（例えば、塩）であり得る。緩衝剤は、脱水緩衝塩であり得る。緩衝剤は
、下記のもののうちの少なくとも１つであり得る：酸（典型的には弱酸）およびそれらの
塩のうちの１つ、ならびに塩基（典型的には弱塩基）およびそれらの塩のうちの１つ。

【0009】

用語が本発明の分野でしばしば交換可能に使用されることを考慮すると、「凍結乾燥保
護剤」への言及は「凍結保護剤」を含み、逆もまた同様である。

【0010】

イメージング剤は、紫色～近赤外波長（４００～１，２００ｎｍ）の光を使用してイメ
ージングするのに適した少なくとも１つの光学レポーターを含み得る。

【0011】

イメージング剤は、式Ｉの化合物を含み得る：

【化1】

（式中、
Ｚ^１は、ｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、ＨまたはＭ^ＩＧである；
Ｚ^２は、ｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＮＨ_２、ＯＢ^ｃ（Ｂ^ｃは生体適合性カ
チオンである）またはＭ^ＩＧである；
ｃＭＢＰは、１７～３０個のアミノ酸のｃＭｅｔ結合環状ペプチドであり、下記のアミノ
酸配列（配列番号１）を含む：
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ
－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである；
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であって、残基ａとｂと、ならびに残基ｃ
とｄとが環化して２つの別個のジスルフィド結合を形成している）；
Ｍ^ＩＧは代謝阻害基であって、ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害または抑制する生体
適合性基である；
Ｌは、式－（Ａ）ｍ－の合成リンカー基である
（各Ａは、独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２
－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ
（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣ
Ｒ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアル
キレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖また
は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである；
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキ
ニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキルまたはＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択される；
ｍは、値１～２０の整数である）；
ｎは、値０または１の整数である；
ＩＭは、緑色～近赤外波長（４００～１，２００ｎｍ）の光を使用して哺乳動物の身体を
イメージングするのに適した光学レポーターイメージング部位である）。

【0012】

用語「イメージング剤」は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで哺乳動物の身体を
イメージングするのに適した化合物を意味する。Ｅｘ ｖｉｖｏイメージングは、依然と
して哺乳動物の身体への投与を必要とするが、組織試料などを取り出し、その試料を体外
でイメージングすることも伴い得る。そのような例では、製剤は、哺乳動物の身体に投与
される限りにおいてｉｎ ｖｉｖｏで使用され、イメージングが哺乳動物の身体の外部で
行われる限りにおいてｅｘ ｖｉｖｏで使用される。哺乳動物は、ヒト被験体であり得る
。イメージングは、侵襲的（例えば、手術中もしくは内視鏡的）または非侵襲的であり得
る。イメージング方法は、内視鏡検査であり得る。式Ｉの化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏイメ
ージングに適しているが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ用途（例えば、生体試料中のｃＭｅｔを定量
するアッセイまたは組織試料中のｃＭｅｔの可視化）もあり得る。本イメージング剤は、
ｉｎ ｖｉｖｏイメージングに使用され得る。

【0013】

Ｚ^１基は、最後のアミノ酸残基のアミン基を置換する。したがって、Ｚ^１がＨの場合、
ｃＭＢＰのアミノ末端は、最後のアミノ酸残基の遊離ＮＨ_２基で終端する。Ｚ^２基は、最
後のアミノ酸残基のカルボニル基を置換する。したがって、Ｚ^２がＯＨの場合、ｃＭＢＰ
のカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＣＯ_２Ｈ基で終端し、Ｚ^２がＯＢ^ｃの場合
、その末端カルボキシ基はＣＯ_２Ｂ^ｃ基としてイオン化されている。

【0014】

用語「代謝阻害基」（Ｍ^ＩＧ）は、アミノ末端（Ｚ^１）またはカルボキシ末端（Ｚ^２）
のいずれかにおいて、ｃＭＢＰペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害または抑制する生体
適合性基を意味する。そのような基は、当業者によく知られており、適切には、ペプチド
のアミン末端では、Ｎ－アシル化基－ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^Ｇ（式中、アシル基－（Ｃ＝Ｏ）
Ｒ^Ｇは、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－１０アリール基から選択されるＲ^Ｇを有するか、ポリ
エチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックを含む）から選択される。適切なＰ
ＥＧ基は、下記のリンカー基（Ｌ）で記載している。そのようなＰＥＧ基は、式ＩＡまた
はＩＢの生体修飾基であり得る。そのようなアミノ末端Ｍ^ＩＧ基は、アセチル、ベンジル
オキシカルボニルまたはトリフルオロアセチル、典型的にはアセチルであり得る。

【0015】

ペプチドのカルボキシル末端に適した代謝阻害基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ－ブ
チルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコールまたはポ
リエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックが挙げられる。ｃＭＢＰペプチド
のカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭ基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ_１－４ア
ルキル基、任意にメチル基でＮ－アルキル化したものである。そのようなＭ^ＩＧ基は、カ
ルボキサミドまたはＰＥＧであり得、カルボキサミドであり得る。

【0016】

式Ｉは、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位が、Ｚ^１、Ｚ^２またはｃＭＢＰの任意の適当な位置に
結合していてもよいことを示す。Ｚ^１またはＺ^２については、Ｚ^１／Ｚ^２のいずれかがＭ
^ＩＧであるとき、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位は、どちらのＭ^ＩＧ基にも結合し得る。Ｚ^１が
Ｈであるか、Ｚ^２がＯＨであるとき、Ｚ^１またはＺ^２の位置に－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位が
結合すると、それぞれ式［ＩＭ］－（Ｌ）_ｎ－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２またはＺ^１－［ｃＭＢ
Ｐ］－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］の化合物を与える。いずれかのペプチド末端でのｃＭＢＰの代
謝の阻害は、このように－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］部位の結合によっても達成され得るが、－
（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］は、本明細書中のＭ^ＩＧの定義の範囲外である。

【0017】

式Ｉの－（Ｌ）_ｎ－部位は、ＩＭの任意の適当な位置に結合し得る。この－（Ｌ）_ｎ－
部位は、ＩＭの既存の置換基の代わりになるか、ＩＭの既存の置換基に共有結合している
。この－（Ｌ）_ｎ－部位は、任意選択で、ＩＭのカルボキシアルキル置換基を介して結合
している。

【0018】

用語「ｃＭｅｔ結合環状ペプチド」（ｃＭＢＰ）は、ｃＭｅｔ（ｃ－Ｍｅｔまたは肝細
胞増殖因子受容体）としても知られる肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）高親和性受容体に結合す
るペプチドを意味する。適切なｃＭＢＰペプチドでは、ｃＭｅｔ／ＨＧＦ複合体のｃＭｅ
ｔに対する見かけのＫｄは約２μＭ未満である。ｃＭＢＰペプチドはプロリン残基を含み
、かかる残基は、主鎖アミド結合のシス／トランス異性化を示し得ることが知られている
。本明細書に記載のｃＭＢＰペプチドには、任意のそのような異性体が含まれる。

【0019】

用語「生体適合性カチオン」（Ｂ^ｃ）は、イオン化して負に荷電した基と塩を形成する
正に荷電した対イオンを意味し、前記正に荷電した対イオンはさらに、非毒性であり、そ
れ故に哺乳動物の身体、特に人体への投与に適したものである。適切な生体適合性カチオ
ンの例としては、アルカリ金属であるナトリウムまたはカリウム；アルカリ土類金属であ
るカルシウムおよびマグネシウム；ならびにアンモニウムイオンが挙げられる。典型的な
生体適合性カチオンは、ナトリウムおよびカリウムであり、典型的にはナトリウムである
。

【0020】

用語「アミノ酸」は、Ｌ－もしくはＤ－アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチル
アラニン）またはアミノ酸模倣体を意味し、天然のものでも、純粋な合成品であってもよ
く、光学的に純粋なもの、すなわち単一のエナンチオマーであり、したがってキラルであ
ってもよく、またはエナンチオマーの混合物であってもよい。本明細書では、アミノ酸に
ついて慣用の３文字または１文字の略語を使用している。使用するアミノ酸は、光学的に
純粋であり得る。用語「アミノ酸模倣体」は、アイソスターである天然アミノ酸の合成類
似体、すなわち天然化合物の立体構造および電子構造を模倣するように設計されたものを
意味する。そのようなアイソスターは、当業者によく知られており、デプシペプチド、レ
トロインベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカンまたは１，５－二置換テトラゾー
ルが挙げられるが、これらに限定されない［Ｍ． Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｂｉｏｐｏｌｙｍ
ｅｒｓ， ２４， １３７， （１９８５）を参照］。

【0021】

用語「ペプチド」は、上記で定義したように、ペプチド結合（すなわち、あるアミノ酸
のアミンと別のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）によって連結された２
個以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。用語「ペプチド模倣体」または「模倣体」は
、ペプチドまたはタンパク質の生物活性を模倣するが、化学的性質がもはやペプチドでは
ない生物活性化合物を指し、すなわち、それらはもはやペプチド結合（すなわち、アミノ
酸間のアミド結合）を含まない。ここでは、ペプチド模倣体という用語はより広い意味で
使用され、性質がもはや完全にはペプチドではない分子、例えば擬似ペプチド、半ペプチ
ドおよびペプトイドなどを含む。

【0022】

用語「光学レポーターイメージング部位」（ＩＭ）は、緑色～近赤外波長（４００～１
，２００ｎｍ、任意選択で６００～１，０００ｎｍ）の光を使用する光学イメージング手
順において、直接的もしくは間接的に検出することが可能な蛍光染料または発色団を意味
する。ＩＭは、蛍光特性を有し得る。

【0023】

式Ｉのリンカー基－（Ａ）_ｍ－の役割の１つは、ＩＭをｃＭＢＰペプチドの活性部位か
ら遠ざけることであり得る。これは、イメージング部位が比較的かさ高い場合、酵素との
相互作用が損なわれないように、特に重要である。これは、かさ高い基が活性部位から離
れた位置に自らを位置付ける自由度を有するような柔軟性（例えば、単純アルキル鎖）お
よび／またはＩＭを活性部位から離れた位置に配向させるシクロアルキルもしくはアリー
ルスペーサーなどの硬直性を組み合わせることで達成され得る。リンカー基の性質は、イ
メージング剤の生体内分布を調整するためにも使用することができる。したがって、例え
ば、リンカー中にエーテル基を導入することは、血漿タンパク質の結合を調整するのに役
立つ。－（Ａ）_ｍ－がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックまたは１
～１０個のアミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、リンカー基は、ｉｎ ｖｉｖｏでイメ
ージング剤の薬物動態および血中クリアランス速度を調整するように機能し得る。そのよ
うな「バイオモディファイア」リンカー基は、筋肉もしくは肝臓などのバックグラウンド
組織、および／または血液からのイメージング剤のクリアランスを加速させ、バックグラ
ウンド干渉を減少させることで、より良好な診断画像を与え得る。バイオモディファイア
リンカー基を使用して、特定の排泄経路、例えば、肝臓経由ではなく腎臓経由を有利にす
ることもできる。

【0024】

用語「糖」は、単糖、二糖または三糖を意味する。適切な糖には、グルコース、ガラク
トース、マルトース、マンノース、およびラクトースが挙げられる。任意選択で、糖は、
アミノ酸への容易なカップリングを可能にするように官能化されていてもよい。したがっ
て、例えば、アミノ酸のグルコサミン誘導体は、ペプチド結合を介して他のアミノ酸にコ
ンジュゲートすることができる。アスパラギンのグルコサミン誘導体（ＮｏｖａＢｉｏｃ
ｈｅｍから市販されている）は、その一例である：

【化2】

【0025】

イメージング剤の分子量は、適切には最大８，０００ダルトンである。任意選択で、分
子量は２，８００～６，０００ダルトンの範囲であり、典型的には３，０００～４，５０
０ダルトンであり、３，２００～４，０００ダルトンが最も典型的である。

【0026】

本発明のイメージング剤は、ペプチド末端の両方がＭ^ＩＧ基によって保護され得、すな
わち、任意選択でＺ^１およびＺ^２の両方がＭ^ＩＧであり、これらは通常異なっている。上
述したように、Ｚ^１／Ｚ^２のいずれかが、任意選択で－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］に相当し得る。
このようにペプチド末端の両方が保護されていることは、ｉｎ ｖｉｖｏイメージング用
途にとって重要であり、その理由は、そうでなければ急速な代謝が起こり、ｃＭｅｔに対
する選択的結合親和性の喪失という結果を生じると予想されるためである。Ｚ^１およびＺ
^２の両方がＭ^ＩＧである場合、任意選択でＺ^１はアセチルであり、Ｚ^２は第一級アミドで
ある。Ｚ^１はアセチルであり得、Ｚ^２は第一級アミドであり得、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位
は、ｃＭＢＰのリシン残基のε－アミン側鎖に結合し得る。

【0027】

本発明のｃＭＢＰペプチドは、ｃＭｅｔ／ＨＧＦ複合体に対するｃＭｅｔの結合につい
てのＫ_Ｄが約１０ｎＭ未満（蛍光偏光アッセイ測定に基づく）であり得、最も典型的には
１～５ｎＭの範囲であり、３ｎＭ未満が理想的である。

【0028】

式ＩのｃＭＢＰの下記ペプチド配列（配列番号１）は、１７量体ペプチド配列であり、
主にｃＭｅｔへの選択的結合に関与する：
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ
－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（配列番号１）。
本発明のｃＭＢＰペプチドが１７個を超えるアミノ酸残基を含むとき、残りのアミノ酸は
、システイン以外の任意のアミノ酸であり得る。追加の無保護システイン残基は、定義し
たＣｙｓ^ａ－Ｃｙｓ^ｂおよびＣｙｓ^ｃ－Ｃｙｓ^ｄジスルフィド架橋の不要なスクランブリ
ングを引き起こす可能性がある。追加のペプチドは、好ましくは、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部
位の容易なコンジュゲーションに適した側鎖を有する少なくとも１個のアミノ酸残基を含
む。そのような適切な残基としては、アミン官能化－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］基とのコンジュゲ
ーション用のＡｓｐもしくはＧＩｕ残基、またはカルボキシ官能化もしくは活性エステル
官能化－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］基とのコンジュゲーション用のＬｙｓ残基が挙げられる。－（
Ｌ）_ｎ［ＩＭ］のコンジュゲーション用のアミノ酸残基は、適切には、ｃＭＢＰペプチド
の１７量体結合領域（配列番号１）から離れて位置しており、任意選択で、Ｃ－末端また
はＮ－末端に位置している。任意選択で、コンジュゲーション用のアミノ酸残基はＬｙｓ
残基である。

【0029】

配列番号１のトリプトファン残基の置換を、既知アミノ酸置換体であるフェニルアラニ
ンおよびナフチルアラニンで評価した。しかし、ｃＭｅｔ親和性の喪失が見出され、これ
はトリプトファン残基が活性にとって重要であることを示唆している。任意選択で、ｃＭ
ＢＰペプチドはさらにＮ末端セリン残基を含み、下記の１８量体（配列番号２）を与える
：
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３
－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ
^６。
（配列番号２）

【0030】

配列番号１、または配列番号２に加えて、ｃＭＢＰは、下記のいずれかをさらに含み得
る：
（ｉ）ｃＭＢＰペプチドのＣ－またはＮ－ペプチド末端のいずれかの４個のアミノ酸残基
内にあるＡｓｐもしくはＧｌｕ残基、またはそれらの類似体（－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］はアミ
ン基で官能化されており、このアミン基は前記ＡｓｐもしくはＧｌｕ残基、またはそれら
の類似体のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド結合を与えている）；
（ｉｉ）ｃＭＢＰペプチドのＣ－またはＮ－ペプチド末端のいずれかの４個のアミノ酸残
基内にあるＬｙｓ残基、またはその類似体（－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］はカルボキシル基で官能
化されており、このカルボキシル基は前記Ｌｙｓ残基、またはその類似体のε－アミン側
鎖にコンジュゲートしてアミド結合を与えている）。

【0031】

Ａｓｐおよび／またはＧｌｕの類似体には、２－アミノブタン二酸、２－アミノヘキサ
ン二酸、２－アミノヘプタン二酸、２－アミノオクタン二酸、２－アミノノナン二酸、２
－アミノデカン二酸、２－アミノウンデカン二酸、および２－アミノドデカン二酸のうち
の１種または複数種が挙げられ得る。

【0032】

Ｌｙｓの類似体には、２，３－ジアミノプロパン酸、２，４－ジアミノブタン酸、２，
５－ジアミノペンタン酸、２，７－ジアミノヘプタン酸、２，８－ジアミノオクタン酸、
２，９－ジアミノノナン酸、２，１０－ジアミノデカン酸、２，１１－ジアミノウンデカ
ン酸、２，１２－ジアミノドデカン酸のうちの１種または複数種が挙げられ得る。

【0033】

ｃＭＢＰペプチドは、下記の２２量体アミノ酸配列（配列番号３）を含み得る：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－
Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－
Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ。
（配列番号３）

【0034】

ｃＭＢＰペプチドは、Ｘａａ^３がＡｒｇに等しいものであり得る。

【0035】

ｃＭＢＰペプチドは、配列番号１、配列番号２または配列番号３に加えて、Ｎ－または
Ｃ－末端のいずれかにおいて、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列番号４）、－
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列番号５）または－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓ
ｅｒ－Ｌｙｓ－（配列番号６）から選択されるリンカーペプチドをさらに含み得る。

【0036】

リンカーペプチドのＬｙｓ残基は、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位のコンジュゲーションの典
型的な位置である。いくつかのｃＭＢＰペプチドは、配列番号４のリンカーペプチドとと
もに配列番号３を含み、下記の２６量体アミノ酸配列（配列番号７）を有している：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒ
ｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－
Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ。
（配列番号７）

【0037】

配列番号１、配列番号２、配列番号３および配列番号７のｃＭＢＰペプチドでは、Ｚ^１
＝Ｚ^２＝Ｍ^ＩＧであり得、Ｚ^１＝アセチルおよびＺ^２＝第一級アミドであり得る。

【0038】

適切には、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位は、Ｚ^１もしくはＺ^２基のいずれか、または配列番
号１のｃＭｅｔ結合配列とは異なるｃＭＢＰペプチドのアミノ酸残基に結合している。可
能なアミノ酸残基およびコンジュゲーション部位は、上述した通りである。－（Ｌ）_ｎ［
ＩＭ］部位がＺ^１またはＺ^２に結合するとき、それはＮ－もしくはＣ－末端へのコンジュ
ゲーションによってＺ^１またはＺ^２に取って代わり、そのようにしてｉｎ ｖｉｖｏ代謝
を阻止することができる。

【0039】

典型的なＩＭ基は、広範な非局在化電子系を有し、例えば シアニン類、メロシアニン
類、インドシアニン類、フタロシアニン類、ナフタロシアニン類、トリフェニルメチン類
、ポルフィリン類、ピリリウム染料、チアピリリウム染料、スクアリリウム染料、クロコ
ニウム染料、アズレニウム染料、インドアニリン類、ベンゾフェノキサジニウム染料、ベ
ンゾチアフェノチアジニウム染料、アントラキノン類、ナフトキノン類、インダスレン類
、フタロイルアクリドン類、トリスフェノキノン類、アゾ染料、分子内および分子間電荷
移動染料および染料錯体、トロポン類、テトラジン類、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（
ベンゼン－ジチオレート）錯体、ヨードアニリン染料、ビス（Ｓ，Ｏ－ジチオレン）錯体
が挙げられる。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）などの蛍光タンパク質、および異なる吸収
／発光特性を有するＧＦＰの修飾物も有用である。特定の希土類金属（例えば、ユーロピ
ウム、サマリウム、テルビウムまたはジスプロシウム）の錯体は、蛍光ナノ結晶（量子ド
ット）と同様に、特定の状況で使用される。

【0040】

使用され得る発色団の例には、下記のものが挙げられる：Ａｔｔｏ ６４７、ＣＦ６４
０Ｒ、Ａｔｔｏ ６４７Ｎ、ＳｉＲ６５０、ＣＦ６３３、Ｓｕｌｆｏ Ｃｙ５、Ｔ７００
－Ｈ、Ｔ７００－Ｆ、ＣＦ６４７ ＳＥ、Ｑｕａｓａｒ ６７０、Ｃｈｒｏｍｅｏ ６４
２、Ｏｙｓｔｅｒ ６４５、Ｏｙｓｔｅｒ ６４７、Ｏｙｓｔｅｒ ６５０、Ｉｒｉｓ
５、ＣｙＡＬ ５、ＩＲＤｙｅ ６５０、ＮＩＲ４、ＡＯＩ９８７、ＢＯＤＩＰＹ（登録
商標）６５０／６６５、ＤｙＬｉｇｈｔ ６３３、ＤｙＬｉｇｈｔ ６５０、ＤＤＡＯ（
７－ヒドロキシ－９Ｈ－（１，３－ジクロロ－９，９－ジメチルアクリジン－２－オン）
、Ｃｈｒｏｍｉｓ ６４５ Ｃ、Ｃｈｒｏｍｉｓ ６４５ Ｚ、Ｃｈｒｏｍｉｓ ６４５
Ａ、ＨｉＬｙｔｅ ６４７、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ６４７Ｐ、Ｄｙ－６３０、Ｄｙ－
６３１、Ｄｙ－６３２、Ｄｙ－６３３、Ｄｙ－６３６、Ｄｙ－６５０、Ｄｙ－６５１、Ｄ
ｙ－６５２、Ｄｙ－６５４、Ｔｒａｃｙ ６４５、Ｔｒａｃｙ ６５２、Ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｎｔ ｒｅｄ ＮＩＲ ７８２、Ａｔｔｏ ６５５、Ａｔｔｏ ６８０、ＣＦ６６０
Ｃ、ＣＦ６６０ Ｒ、Ｑｕａｓａｒ ７０５、ＣＦ６８０、ＩＲＤｙｅ６８０ＲＤ、Ｎ
ＩＲ２、ＩＲＤｙｅ６８０ＬＴ、ＨｉＬｙｔｅ ６８０、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ、Ｏｙｓ
ｔｅｒ ６８０、Ｉｒｉｓ ５．５、ＨＲＯＭＩＳ ＬＳＳ ６７０Ｚ、ＣＨＲＯＭＩＳ
ＬＳＳ ６９０Ｚ、ＤｙＬｉｇｈｔ ６８０（Ｐｉｅｒｃｅ）、マグネシウムフタロシ
アニン、Ｏｘａｚｉｎ ７５０、ＳｅＴａ－６６５、ＳｅＴａ－６６７、ＳｅＴａ－６７
０、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ６７０（Ｐｒｏｍｏ Ｋｉｎｅ）、Ｄｙ－６８２、Ｐｒｏｍ
ｏＦｌｕｏｒ ６８０、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ７００Ｐ、Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｂｌｕ
ｅ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｒｅｄ ＮＩＲ ７３０ Ｒｅａｃｔｉｖｅ、Ｆｌｕｏｒ
ｅｓｃｅｎｔ Ｒｅｄ ＮＩＲ ７８１ Ｒｅａｃｔｉｖｅ、ＢＭ１０４、ＢＭ１０５（
ＢＭ１０４のＮＨＳエステル）、ＳｉＲ７２０、Ａｔｔｏ ７４０、ＣＦ７５０、Ｓｕｌ
ｆｏ Ｃｙ７、ＩＲＤｙｅ７５０、ＮＩＲ３、ＤｙＬｉｇｈｔ ７５５、ＤＹ－７３２、
ＤＹ－７３４、ＤＹ－７５２、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ７５０ Ｐ、ＨｉＬｙｔｅ ７５
０、ＤＹ－７７６、ＮＩＲ１、ＩＲＤｙｅ８００ＲＳ、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ７７０
Ｐ、ＤＹ－７７８、ＣＨＲＯＭＩＳ ７７０ Ｃ、ＺＷ８００－１、ＺＷ８００－３、Ｉ
ＲＩＳ ７Ｇ－ＷＳ、ＩＲ ７８０、ＥＳＮＦ３１、ＣＦ７７０、Ｖｉｖｏｔａｇ ８０
０、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７９０、ＣＦ７９０、Ｏｙｓｔｅ
ｒ ８００、ＣＨＲＯＭＩＳ ７７０ Ａ、ＣＨＲＯＭＩＳ ８００ Ｃ、ＣＨＲＯＭＩ
Ｓ ８００ Ａ、ＣＨＲＯＭＩＳ ８３０ Ｃ、ＣＨＲＯＭＩＳ ８３０ Ａ、ＤｙＬｉ
ｇｈｔ ８００、ＤＹ－７７７、ＤＹ－７８２、ＤＹ－８００、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ
７８０ Ｐ、ＮＩＲ－７９７、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ８４０ Ｐ、フルオレセイン、ス
ルフォルホダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミ
ン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５
、Ｃｙ７、Ｃｙ７．５、Ｍａｒｉｎａ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｏｒｅｇ
ｏｎ Ｇｒｅｅｎ ４８８、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ５１４、ＴＡＭＲＡ（テトラメ
チルローダミン）、ＴＭＲ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ
４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅ
ｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ
５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅ
ｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ
７００、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０。典型的には、シアニン染料ならびに
それらの誘導体および類似体が使用され得る。

【0041】

使用され得る発色団の特定の例には、下記のものが挙げられる：Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、
Ｃｙ７、Ｃｙ７．５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４
７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ ７００、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０、Ａｔｔｏ ６４７、ＣＦ
６４０Ｒ、Ａｔｔｏ ６４７Ｎ、ＳｉＲ６５０、ＣＦ６３３、Ｓｕｌｆｏ Ｃｙ５、Ｔ７
００－Ｈ、Ｔ７００－Ｆ、ＣＦ６４７ ＳＥ、Ｑｕａｓａｒ ６７０、Ｃｈｒｏｍｅｏ
６４２、Ｏｙｓｔｅｒ ６４５、Ｏｙｓｔｅｒ ６４７、Ｏｙｓｔｅｒ ６５０、Ｉｒｉ
ｓ ５、ＣｙＡＬ ５、ＩＲＤｙｅ ６５０、ＮＩＲ４、ＡＯＩ９８７、ＢＯＤＩＰＹ（
登録商標）６５０／６６５、ＤｙＬｉｇｈｔ ６３３、ＤｙＬｉｇｈｔ ６５０、ＤＤＡ
Ｏ（７－ヒドロキシ－９Ｈ－（１，３－ジクロロ－９，９－ジメチルアクリジン－２－オ
ン）、Ｃｈｒｏｍｉｓ ６４５ Ｃ、Ｃｈｒｏｍｉｓ ６４５ Ｚ、Ｃｈｒｏｍｉｓ ６
４５ Ａ、ＨｉＬｙｔｅ ６４７、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ６４７Ｐ、Ｄｙ－６３０、Ｄ
ｙ－６３１、Ｄｙ－６３２、Ｄｙ－６３３、Ｄｙ－６３６、Ｄｙ－６５０、Ｄｙ－６５１
、Ｄｙ－６５２、Ｄｙ－６５４、Ｔｒａｃｙ ６４５、Ｔｒａｃｙ ６５２、Ｆｌｕｏｒ
ｅｓｃｅｎｔ ｒｅｄ ＮＩＲ ７８２、Ａｔｔｏ ６５５、Ａｔｔｏ ６８０、ＣＦ６
６０ Ｃ、ＣＦ６６０ Ｒ、Ｑｕａｓａｒ ７０５、ＣＦ６８０、ＩＲＤｙｅ６８０ＲＤ
、ＮＩＲ２、ＩＲＤｙｅ６８０ＬＴ、ＨｉＬｙｔｅ ６８０、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ、Ｏ
ｙｓｔｅｒ ６８０、Ｉｒｉｓ ５．５、ＨＲＯＭＩＳ ＬＳＳ ６７０Ｚ、ＣＨＲＯＭ
ＩＳ ＬＳＳ ６９０Ｚ、ＤｙＬｉｇｈｔ ６８０（Ｐｉｅｒｃｅ）、マグネシウムフタ
ロシアニン、Ｏｘａｚｉｎ ７５０、ＳｅＴａ－６６５、ＳｅＴａ－６６７、ＳｅＴａ－
６７０、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ６７０（Ｐｒｏｍｏ Ｋｉｎｅ）、Ｄｙ－６８２、Ｐｒ
ｏｍｏＦｌｕｏｒ ６８０、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ７００Ｐ、Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｂ
ｌｕｅ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｒｅｄ ＮＩＲ ７３０ Ｒｅａｃｔｉｖｅ、Ｆｌｕ
ｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｒｅｄ ＮＩＲ ７８１ Ｒｅａｃｔｉｖｅ、ＢＭ１０４、ＢＭ１０
５（ＢＭ１０４のＮＨＳエステル）、ＳｉＲ７２０、Ａｔｔｏ ７４０、ＣＦ７５０、Ｓ
ｕｌｆｏ Ｃｙ７、ＩＲＤｙｅ７５０、ＮＩＲ３、ＤｙＬｉｇｈｔ ７５５、ＤＹ－７３
２、ＤＹ－７３４、ＤＹ－７５２、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ７５０ Ｐ、ＨｉＬｙｔｅ
７５０、ＤＹ－７７６、ＮＩＲ１、ＩＲＤｙｅ８００ＲＳ、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ７７
０ Ｐ、ＤＹ－７７８、ＣＨＲＯＭＩＳ ７７０ Ｃ、ＺＷ８００－１、ＺＷ８００－３
、ＩＲＩＳ ７Ｇ－ＷＳ、ＩＲ ７８０、ＥＳＮＦ３１、ＣＦ７７０、Ｖｉｖｏｔａｇ
８００、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７９０、ＣＦ７９０、Ｏｙｓ
ｔｅｒ ８００、ＣＨＲＯＭＩＳ ７７０ Ａ、ＣＨＲＯＭＩＳ ８００ Ｃ、ＣＨＲＯ
ＭＩＳ ８００ Ａ、ＣＨＲＯＭＩＳ ８３０ Ｃ、ＣＨＲＯＭＩＳ ８３０ Ａ、Ｄｙ
Ｌｉｇｈｔ ８００、ＤＹ－７７７、ＤＹ－７８２、ＤＹ－８００、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏ
ｒ ７８０ Ｐ、ＮＩＲ－７９７、ＰｒｏｍｏＦｌｕｏｒ ８４０ Ｐおよびインドシア
ニングリーン。Ｌｉｃｈａらは、ｉｎ ｖｉｖｏ光学イメージングのための染料および染
料コンジュゲートをレビューしている［Ｔｏｐｉｃｓ Ｃｕｒｒ．Ｃｈｅｍ．， ２２２
， １－２９ （２００２）； Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．， ５７，
１０８７－１１０８ （２００５）］。

【0042】

使用され得る発色団のさらに特定の例には、下記のものが挙げられる：Ｃｙ５、Ｃｙ５
＊＊、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標） ６３０、Ａｔｔｏ
６４７、Ｏｙｓｔｅｒ ６４７、ＩＲＤｙｅ６５０、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標） ６５
０、ＤＹ６３１、ＤＹ６３２、Ｃｙ５．５、ＩＲＤｙｅ ６８０ＲＤ、Ａｌｅｘａ Ｆｌ
ｕｏｒ ６６０、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０。

【0043】

シアニン染料は、式ＩＩのフルオロフォアであり得る：

【化3】

（式中、
各Ｘ’は、独立して、－Ｃ（ＣＨ_３）_２－、－Ｓ－、－Ｏ－または
－Ｃ［（ＣＨ_２）_ａＣＨ_３］［（ＣＨ_２）_ｂＭ］－から選択される（ａは値０～５の整数
であり、ｂは値１～５の整数であり、ＭはＧ基であるか、ＳＯ_３Ｍ^１またはＨから選択さ
れる）；
各Ｙ’は、独立して、Ｈ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_３Ｍ^１、－ＣＨ_２ＣＯＯＭ^１、－ＮＣ
ＳおよびＦからなる群より選択される１～４個の基を表し、Ｙ’基は、芳香環の任意の位
置に位置している；
Ｑ’は、独立して、Ｈ、ＳＯ_３Ｍ^１、ＮＨ_２、ＣＯＯＭ^１、アンモニウム、エステル基、
ベンジルおよびＧ基からなる群より選択される；
Ｍ^１は、ＨまたはＢ^ｃである；
Ｉは１～３の整数である；
ｍは１～５の整数である；
Ｘ’、Ｙ’およびＱ’のうちの少なくとも１つは、Ｇ基を含む；
Ｇは、ｃＭＢＰペプチドに結合するのに適した反応性または官能性基である）。

【0044】

Ｇ基は、ｃＭＢＰペプチドの相補的な基と反応して、シアニン染料フルオロフォアとｃ
ＭＢＰペプチドとの間に共有結合を形成する。Ｇは、ペプチドの相補的な官能基と反応し
得る反応基であり得るか、あるいは、ｃＭＢＰペプチドの反応基と反応し得る官能基を含
み得る。反応基および官能基の例には、活性エステル；イソチオシアネート；マレイミド
；ハロアセトアミド；酸ハロゲン化物；ヒドラジド；ビニルスルホン；ジクロロトリアジ
ン；ホスホラミダイト；ヒドロキシル；アミノ；スルフヒドリル；カルボニル；カルボン
酸およびチオホスフェートが挙げられる。Ｇは、活性エステルであり得る。

【0045】

用語「活性化エステル」または「活性エステル」は、良好な離脱基を含み、したがって
アミンなどの求核剤と一層容易に反応するように設計された、関連するカルボン酸のエス
テル誘導体を意味する。適切な活性エステルの例は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ
ＨＳ）、スルホスクシンイミジルエステル、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロ
チオフェノール、パラニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾールおよびＰｙＢＯ
Ｐ（すなわち、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサ
フルオロホスフェート）である。活性エステルは、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドまたは
ペンタフルオロフェノールエステルであり得、特にＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステ
ルであり得る。

【0046】

式ＩＩの一実施形態：
各Ｘ’は、－Ｃ（ＣＨ_３）_２－および－Ｃ（ＣＨ_３）［（ＣＨ_２）_４Ｍ］－（Ｍは、Ｇ基
または－ＳＯ_３Ｍ^１である）からなる群より選択される；
各Ｙ’は、ＳＯ_３Ｍ^１、Ｈまたは１～４個のＦ原子を表す；
各Ｑ’は、Ｇ基およびＳＯ_３Ｍ^１から選択される；
１は好ましくは２であり、ｍは好ましくは３、４または５である；
Ｘ’またはＱ’のいずれかがＧ基であるとき、それはスクシンイミジルエステルであり得
る。

【0047】

シアニン染料は、式ＩＩＩのものであり得る：

【化4】

（式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、ＨまたはＳＯ_３Ｍ^１であり、Ｒ^１およびＲ^２のうちの少な
くとも１つはＳＯ_３Ｍ^１（Ｍ^１はＨまたはＢ^ｃである）である；
Ｒ^３およびＲ^４は、独立して、Ｃ_１－４アルキルまたはＣ_１－６カルボキシアルキルであ
る；
Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、独立してＲ^ａ基である（Ｒ^ａは、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ
_１－６カルボキシアルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｋＳＯ_３Ｍ^１（ｋは、値３または４の整数
である）である）；
ただし、シアニン染料は、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^ａ基に合計１～４個のＳＯ_３Ｍ^１置換基を
有することを条件とする）。

【0048】

式ＩＩＩの染料は、ｃＭＢＰへのコンジュゲーションを容易にするために、少なくとも
１つのＣ_１－６カルボキシアルキル基が存在するように選択され得る。

【0049】

可能な式ＩＩＩの個々の染料を、表１に要約する：

【表1】

【0050】

典型的に使用される式ＩＩの染料は、Ｃｙ５＊＊およびＡｌｅｘａ６４７であり、Ｃｙ
５＊＊が最も典型的である。

【0051】

合成リンカー基（Ｌ）が存在するとき、それは、［ＩＭ］およびＺ^１－［ｃＭＢＰ］－
Ｚ^２へのコンジュゲーションを容易にする末端官能基を含み得る。Ｌが１～１０個のアミ
ノ酸残基のペプチド鎖を含むとき、アミノ酸残基は、グリシン、リシン、アルギニン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸またはセリンから選択され得る。ＬがＰＥＧ部位を含むとき
、それは、下記の式ＩＡ（１７－アミノ－５－オキソ－６－アザ－３，９，１２，１５－
テトラオキサヘプタデカン酸）またはＩＢの単分散ＰＥＧ様構造のオリゴマー化に由来す
る単位を含み得る：

【化5】

（式中、ｐは１～１０の整数である）。あるいは、式ＩＢのプロピオン酸誘導体に基づく
ＰＥＧ様構造を使用することもできる：

【化6】

（式中、ｐは式ＩＡに関して定義した通りであり、ｑは３～１５の整数である。式ＩＢに
おいて、ｐは１または２であり得、ｑは５～１２であり得る。

【0052】

リンカー基がＰＥＧまたはペプチド鎖を含まないとき、Ｌ基は、２～１０個の原子、最
も好ましくは２～５個の原子からなり、２～３個の原子であることが特に好ましい－（Ａ
）_ｍ－部位を構成する連結原子の主鎖を有し得る。最小リンカー基主鎖が２原子であると
、イメージング部位が十分に離れているため、望ましくない相互作用が最小限に抑えられ
るという利点が得られる。

【0053】

式Ｉにおいて、ｎは０または１であり得、典型的には０であり、すなわちリンカー基は
存在しない。

【0054】

本明細書に記載されるようなイメージング剤は、式ＩＶ（配列番号７を含む）のもので
あり得る。

【化7】

（式中、（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］基は、Ｌｙｓ残基のε－アミノ基に結合している。式ＩＶのイ
メージング剤は、Ｍ（Ｎ末端Ａｌａ）がアセチルに等しく、Ｍ^ＩＧ（Ｃ末端Ｌｙｓ）が第
一級アミドに等しいものであり得る。式ＩＶにおいて、ｎはゼロであり得、ＩＭはシアニ
ン染料、典型的には式ＩＩのシアニン染料であり得る。ＩＭ＝Ｃｙ５＊＊またはＡｌｅｘ
ａ６４７、最も典型的にはＣｙ５＊＊を有する式ＩＶのイメージング剤が使用され得る。

【0055】

式Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２のペプチドは、下記工程を含む調製方法によって得ること
ができる：
（ｉ）所望のｃＭＢＰペプチドと同じペプチド配列を有し、Ｃｙｓ^ａおよびＣｙｓ^ｂが保
護されておらず、Ｃｙｓ^ｃおよびＣｙｓ^ｄ残基がチオール保護基を有する直鎖ペプチドの
固相ペプチド合成を行う工程と；
（ｉｉ）固体支持体からの開裂および工程（ｉ）のペプチドを溶液中の水性塩基で処理し
、Ｃｙｓ^ａおよびＣｙｓ^ｂを連結する第１ジスルフィド結合を有する単環ペプチドを得る
工程と；
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ^ｃおよびＣｙｓ^ｄチオール保護基を除去して環化し、Ｃｙｓ^ｃおよびＣ
ｙｓ^ｄを連結する第２ジスルフィド結合を形成したものが、所望の二環式ペプチド生成物
Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２となる工程。

【0056】

用語「保護基」は、望ましくない化学反応を阻害または抑制する基を意味するが、それ
は、分子の残りの部分を変質させない程度に温和な条件下で、問題の官能基から開裂させ
ることができるほど十分に反応性があるように設計されている。脱保護後、所望の生成物
が得られる。アミン保護基は、当業者にはよく知られており、適切には下記のものから選
択される：Ｂｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニルである）、Ｆｍｏｃ（Ｆ
ｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである）、トリフルオロアセチル、アリルオキ
シカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘ
キシリデン）エチル］またはＮｐｙｓ（すなわち、３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニ
ル）。適切なチオール保護基は、Ｔｒｔ（トリチル）、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）、
ｔ－Ｂｕ（ｔｅｒｔ－ブチル）、ｔｅｒｔ－ブチルチオ、メトキシベンジル、メチルベン
ジルまたはＮｐｙｓ（３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル）である。さらなる保護基
の使用は、’Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ’， Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．
Ｍ． Ｗｕｔｓ， （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， １９９１）に記載され
ている。典型的なアミン保護基は、ＢｏｃおよびＦｍｏｃであり、最も典型的にはＢｏｃ
である。他の典型的なチオール保護基は、ＴｒｔおよびＡｃｍである。

【0057】

実施例１および２は、さらに具体的な詳細を提供する。固相ペプチド合成のさらなる詳
細は、Ｐ． Ｌｌｏｙｄ－Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｆ． Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ ａｎｄ Ｅ
． Ｇｉｒａｌｄ； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ， １９９７に記載されている。ｃＭＢＰペプチドは、不活性雰囲気下で貯蔵し、冷
凍庫で保存するのが最適である。溶液中で使用するとき、ジスルフィド架橋のスクランブ
リングのリスクがあるため、７より高いｐＨを避けるのが最善であり、ペプチドの凝集を
誘発するため、低ｐＨを避けるのが最善である。

【0058】

第１の態様のイメージング剤の一般的な調製方法は、工程（ｉ）～（ｉｖ）のうちの１
つを含む：
（ｉ）式Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２のｃＭＢＰペプチド（式中、Ｚ^１はＨであり、Ｚ^２は
Ｍ^ＩＧである）と式Ｙ^１－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］の化合物とを反応させて、Ｚ^１の位置に［
ＩＭ］がコンジュゲートしている式Ｉのイメージング剤を得る工程；
（ｉｉ）式Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２のｃＭＢＰペプチド（式中、Ｚ^１＝Ｚ^２＝Ｍ^ＩＧで
あり、ｃＭＢＰは、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかの４個のアミノ酸残
基内にＡｓｐもしくはＧｌｕ残基を含み、ｃＭＢＰペプチドの他の全てのＡｓｐ／Ｇｌｕ
残基は保護されている）と式Ｙ^２－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］の化合物とを反応させて、［ＩＭ
］がｃＭＢＰペプチドの前記ＡｓｐまたはＧＩｕ残基にコンジュゲートしている式Ｉのイ
メージング剤を得る工程；
（ｉｉｉ）式Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^３のｃＭＢＰペプチド（式中、Ｚ^１はＭ^ＩＧであり
、Ｚ^３はＺ^２基または活性化エステルであり、ｃＭＢＰペプチドの他の全てのＡｓｐ／Ｇ
ｌｕ残基は保護されている）と式Ｙ^２－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］の化合物とを反応させて、［
ＩＭ］がＺ^２の位置でコンジュゲートしている式Ｉのイメージング剤を得る工程；
（ｉｖ）式Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２のｃＭＢＰペプチド（式中、Ｚ^１＝Ｚ^２＝Ｍ^ＩＧで
あり、ｃＭＢＰは、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかの４個のアミノ酸残
基内にＬｙｓを含む）と式Ｙ^１－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］の化合物とを反応させて、［ＩＭ］
がｃＭＢＰペプチドのＬｙｓ残基にコンジュゲートしている式Ｉのイメージング剤を得る
工程
（Ｚ、ｃＭＢＰ、Ｚ、Ｍ、Ｌ、ｎおよびＩＭは上記で定義した通りであり、Ｚ^３はＺ^２基
または活性化エステルである；
Ｙ^１は、カルボン酸、活性化エステル、イソチオシアネートまたはチオシアネート基であ
る；
Ｙ^２はアミン基である）。

【0059】

用語「活性化エステル」または「活性エステル」およびそれらの実施形態は、上述した
通りである。Ｙ^２は、任意選択で第一級アミン基または第二級アミン基であり、典型的に
は第一級アミン基である。

【0060】

化合物Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２は、Ｚ^１およびＺ^２の両方がＭ^ＩＧに等しいものであ
り得る。典型的なｃＭＢＰペプチドおよびＺ^１／Ｚ^２基は、上述した通りである。特に、
上述の典型的なｃＭＢＰペプチドについて記載したようにコンジュゲーションを容易にす
るために、ｃＭＢＰペプチドがＡｓｐ、ＧＩｕまたはＬｙｓ残基を含むことが典型的であ
る。工程（ｉｖ）に記載したように、ｃＭＢＰペプチドがＬｙｓ残基を含むことが最も典
型的である。

【0061】

Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２の調製は、上述した通りである。Ｚ^３が活性エステルである
Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^３ペプチドは、Ｚ^２がＯＨまたは生体適合性カチオン（Ｂ^ｃ）で
あるＺ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２から、従来方法によって調製することができる。

【0062】

ペプチドへのコンジュゲーションに適するように官能化された光学レポーター染料（Ｉ
Ｍ）は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ａｔｔｏ－Ｔｅｃ、Ｄｙｏｍｉ
ｃｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓなどから市販されている。そのような染料のほ
とんどは、ＮＨＳエステルとして入手可能である。

【0063】

適切な光学レポーター（ＩＭ）、特に染料をアミノ酸およびペプチドにコンジュゲート
させる方法は、Ｌｉｃｈａ（上記参照）、ならびにＦｌａｎａｇａｎ ｅｔ ａｌ ［Ｂ
ｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．， ８， ７５１－７５６ （１９９７）］；Ｌｉｎ ｅｔ
ａｌ， ［ｉｂｉｄ， １３， ６０５－６１０ （２００２）］およびＺａｈｅｅｒ
［Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ， １（４）， ３５４－３６４ （２００２）］によって記
載されている。リンカー基（Ｌ）をｃＭＢＰペプチドにコンジュゲートさせる方法は、染
料単独の場合（上記参照）と類似の化学作用を使用するものであり、当技術分野で知られ
ている。

【0064】

配列番号１に加えて、ｃＭＢＰはさらに、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいず
れかの４個のアミノ酸残基内にＡｓｐまたはＧｌｕ残基を含んでいてもよく、－（Ｌ）_ｎ
ＩＭはアミン基で官能化されていてもよく、このアミン基が前記ＡｓｐまたはＧｌｕ残基
のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド結合を与えている。

【0065】

配列番号１に加えて、ｃＭＢＰは、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかの
４個のアミノ酸残基内にＬｙｓ残基を含んでいてもよく、－（Ｌ）_ｎＩＭはカルボキシル
基で官能化されていてもよく、このカルボキシル基が前記Ｌｙｓ残基のε－アミン側鎖に
コンジュゲートしてアミド結合を与えている。

【0066】

ｃＭＢＰは、下記の配列番号２または配列番号３のいずれかのアミノ酸配列を含み得る
：
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３
－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ
^６（配列番号２）；
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－
Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－
Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（配列番号３）。

【0067】

Ｘａａ^３はＡｒｇであり得る。

【0068】

配列番号１、配列番号２または配列番号３に加えて、ｃＭＢＰはさらに、そのＮ－また
はＣ－末端のいずれかに、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（配列番号４）、－Ｇｌｙ
－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列番号５）および－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－
Ｌｙｓ（配列番号６）から選択されるリンカーペプチドを含み得る。

【0069】

ｃＭＢＰは、下記のアミノ酸配列（配列番号７）を含み得る：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒ
ｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－
Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ。

【0070】

Ｚ^１およびＺ^２の両方とも、独立してＭ^ＩＧであり得る。

【0071】

Ｚ^１はアセチルであり得、Ｚ^２は第一級アミドであり得る。

【0072】

ｎは０であり得る。

【0073】

ＩＭは、６００～１，０００ｎｍの範囲の最大吸光度を有する染料であり得る。

【0074】

ＩＭはシアニン染料であり得る。

【0075】

シアニン染料は、式ＩＩＩを有し得る：

【化8】

（式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、ＨまたはＳＯ_３Ｍ^１であり、Ｒ^１およびＲ^２のうちの少な
くとも１つはＳＯ_３Ｍ^１（Ｍ^１はＨまたはＢ^ｃである）である；
Ｒ^３およびＲ^４は、独立して、Ｃ_１－４アルキルまたはＣ_１－６カルボキシアルキルであ
る；
Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、独立してＲ^ａ基である（Ｒ^ａは、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ
_１－６カルボキシアルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｋＳＯ_３Ｍ^１（ｋは、値３または４の整数
である）である）；
ただし、シアニン染料は、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^ａ基に合計１～４個のＳＯ_３Ｍ^１置換基を
有することを条件とする）。

【0076】

ｃＭＢＰは、下記のアミノ酸配列（配列番号７）を有し得る：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒ
ｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－
Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ；
Ｚ^１はアセチルであり得、Ｚ^２は第一級アミドであり得る；
ＩＭは、６００～１，０００ｎｍの範囲の最大吸光度を有する染料であり得、任意選択で
シアニン染料であり、任意選択で式ＩＩを有するシアニン染料であり得る：

【化9】

（式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、ＨまたはＳＯ_３Ｍ^１であり、Ｒ^１およびＲ^２のうちの少な
くとも１つはＳＯ_３Ｍ^１（Ｍ^１はＨまたはＢ^ｃである）である；
Ｒ^３およびＲ^４は、独立して、Ｃ_１－４アルキルまたはＣ_１－６カルボキシアルキルであ
る；
Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、独立してＲ^ａ基である（Ｒ^ａは、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ
_１－６カルボキシアルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｋＳＯ_３Ｍ^１（ｋは、値３または４の整数
である）である）；
ただし、シアニン染料は、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^ａ基に合計１～４個のＳＯ_３Ｍ^１置換基を
有することを条件とする）。

【0077】

復元したときに、製剤は、約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．３～約
ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．５～約ｐＨ８．５の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約
ｐＨ８．２の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐＨ
８の間のｐＨを有し得る。

【0078】

復元したときに、緩衝剤は、約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．３～
約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．５～約ｐＨ８．５の間、任意選択で約ｐＨ６．８～
約ｐＨ８．２の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐ
Ｈ８の間のｐＨを有する溶液を提供する量で存在し得る。

【0079】

ＡＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約１７～約４７モルであり得る。
ＡＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約２７～約４７モルであり得る。Ａ
ＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３０～約４７モルであり得る。ＡＰ
Ｉ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３４～約４７モルであり得る。

【0080】

ＡＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約２７～約３８モルであり得る。
ＡＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３０～約３８モルであり得る。Ａ
ＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３４～約３８モルであり得る。

【0081】

ＡＰＩ：緩衝剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３８モルであり得る。

【0082】

ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約２
１６モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保
護剤約１０５～約１６３モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約
１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１５４モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤の
モル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１４５モルであり得る。ＡＰＩ
：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１４１モル
であり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１
０５～約１３２モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：
凍結乾燥保護剤約１０５～約１２９モルであり得る。

【0083】

ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約２
１６モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保
護剤約１２９～約１６３モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約
１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１５４モルであり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤の
モル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１４５モルであり得る。ＡＰＩ
：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１４１モル
であり得る。ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１
２９～約１３２モルであり得る。

【0084】

ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比は、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９モルで
あり得る。

【0085】

製剤は、ＡＰＩを約４～約１２重量％、任意選択でＡＰＩを約８～約１０重量％、任意
選択でＡＰＩを約９重量％含み得る。

【0086】

製剤は、緩衝剤を約３～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約７～約３５重量％、任意
選択で緩衝剤を約１２～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約１５～約３５重量％、任意
選択で緩衝剤を約１８～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約２５～約３５重量％、任意
選択で緩衝剤を約３２～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約３２％含み得る。

【0087】

製剤は、凍結乾燥保護剤を約５６～約９１重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６
～約８２重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７７重量％、任意選択で凍結乾
燥保護剤を約５６～約７５重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７２重量％、
任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約６６重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６
～約５８重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５８重量％含み得る。

【0088】

製剤の成分は、総量が１００重量％となるように選択されることが理解されよう。

【0089】

製剤は、緩衝剤を少なくとも４０ｍＭ含み得る。

【0090】

緩衝剤は、リン酸緩衝剤およびアルカノールアミン緩衝剤のうちの少なくとも１つであ
り得る。リン酸緩衝剤は、リン酸水素およびリン酸二水素を含み得る。リン酸緩衝剤は、
水和したものであり得る。

【0091】

アルカノールアミン緩衝剤は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含み得る。
アルカノールアミン緩衝剤は、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３
－ジオールを含み得る。

【0092】

凍結乾燥保護剤は、糖、アルコールおよび糖アルコール、ならびにそれらの誘導体のう
ちの少なくとも１つであり得る。任意選択で、凍結乾燥保護剤は、糖および糖アルコール
、ならびにそれらの誘導体のうちの少なくとも１つである。任意選択で、凍結乾燥保護剤
は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、およびそれらの誘導体のうちの少なくとも１つである
。凍結乾燥保護剤は、スクロースおよびマンニトール、ならびにそれらの誘導体のうちの
少なくとも１つであり得る。凍結乾燥保護剤は、マンニトール、またはその誘導体であり
得る。

【0093】

製剤はさらに張度調節剤を含み得る。

【0094】

凍結乾燥保護剤は張度調節剤としても作用することがあり、その場合、それは、凍結乾
燥保護剤と張度調節剤との組み合わせである。

【0095】

本発明の第２の態様によれば、凍結乾燥製剤の調製方法が提供され、本方法は、
ａ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）、緩衝剤、および凍結乾燥保護剤を凍結乾燥容器に供給す
る工程と；
ｂ）第１水分除去ステップを実行する工程と；
ｃ）第２水分除去ステップを実行する工程と
を含み、凍結乾燥を行う前に、凍結乾燥保護剤を添加する。

【0096】

第１水分除去ステップは、約－３０℃以下、任意選択で約－３５℃以下、任意選択で約
－３８℃以下の温度で行うことができる。

【0097】

第２水分除去ステップは、約１０℃以上、任意選択で約１５℃以上、任意選択で約２０
℃以上の温度で行うことができる。

【0098】

第１および第２水分除去ステップのうちの少なくとも１つは、５０μｂａｒ以下の圧力
で行うことができる。任意選択で、第１および第２水分除去ステップの両方を、５０μｂ
ａｒ以下の圧力で行うことができる。

【0099】

凍結乾燥製剤は、本発明の第１の態様の凍結乾燥製剤であり得る。

【0100】

本発明の一態様によれば、本発明の第２の態様により調製された凍結乾燥製剤が提供さ
れる。

【0101】

本発明の第３の態様によれば、本発明の第１の態様の製剤と生体適合性担体とを、哺乳
動物への投与に適した形態で含む医薬組成物が提供される。

【0102】

生体適合性担体は溶媒であり得、典型的には水性溶媒、典型的には水であり得る。溶媒
は、流体であり得る。

【0103】

「生体適合性担体」は、組成物が生理学的に許容可能であるように、すなわち、毒性ま
たは過度の不快感なしに哺乳動物の身体に投与することができるように、イメージング剤
を懸濁または溶解させることができる流体、特に液体であり得る。生体適合性担体は、適
切には、下記のものなどの注射可能な担体液である：無菌のパイロジェンフリー注射用水
；生理食塩水などの水溶液（これは、注射用の最終生成物が等張になるように、有利に平
衡させることができる）；１種以上の張度調節物質（例えば、血漿カチオンの生体適合性
対イオンとの塩）、糖類（例えば、グルコースもしくはスクロース）、糖アルコール（例
えば、ソルビトールもしくはマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）、ま
たは他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリ
コールなど）の水溶液。生体適合性担体は、パイロジェンフリー注射用水または等張生理
食塩水であり得る。イメージング剤および生体適合性担体はそれぞれ、無菌完全性および
／または放射能安全性の維持を可能にする密閉容器を備え、任意選択で不活性ヘッドスペ
ースガス（例えば、窒素またはアルゴン）が加えられており、一方でシリンジまたはカニ
ューレによる溶液の添加および抜き取りを可能にする適切なバイアルまたは容器に供給さ
れる。そのような容器として好ましいのは、セプタム封止バイアルであり、気密性の高い
クロージャは、オーバーシール（典型的にはアルミニウム製）でクリンプされている。ク
ロージャは、無菌完全性を維持しながら、皮下注射針で単回または複数回穿刺するのに適
したもの（例えば、クリンプオンセプタムシールクロージャ）である。そのような容器は
、クロージャが、所望の場合（例えば、ヘッドスペースガスの変更または溶液のガス脱き
のため）に真空に耐えることができ、酸素または水蒸気などの外部大気ガスの侵入を許す
ことなく、減圧などの圧力変化に耐えることができるという付加的利点を有する。

【0104】

医薬組成物は、一人の患者に適した投与量であり得、適切なシリンジまたは容器に入れ
て供給され得る。

【0105】

複数回投与容器は、複数の患者投与量を含有する単一のバルクバイアル（例えば、容積
１０～３０ｃｍ^３）を含み、それにより、製剤の有効期間中、様々な時間間隔で、単一の
患者投与量を臨床グレードのシリンジに抜き取ることが可能となり、臨床状況に合わせる
ことができる。事前に充填されたシリンジは、単一のヒト用量、すなわち「単位用量」を
含有するように設計されており、したがって、好ましくは、使い捨てシリンジまたは臨床
使用に適した他のシリンジである。本発明の医薬組成物は、一人の患者に適した投与量で
あり得、上述のように、適切なシリンジまたは容器に入れて供給され得る。

【0106】

医薬組成物は、約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間、任意選択で約ｐＨ６．３～約ｐＨ９の間
、任意選択で約ｐＨ６．５～約ｐＨ８．５の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８．２
の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐＨ８の間のｐＨを有し得る。

【0107】

本発明の第４の態様によれば、本発明の第３の態様の医薬組成物を調製するためのキッ
トが提供され、このキットは、本発明の第１の態様の製剤を無菌固体形態で含み、本発明
の第３の態様の生体適合性担体の無菌供給物で復元させると、溶解が起こり、所望の医薬
組成物が得られるようなキットである。

【0108】

無菌固体形態は、凍結乾燥固体であり得る。

【0109】

本発明の第５の態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様の
医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用することを含む、哺乳動物の身体のイメージン
グ方法が提供される。

【0110】

Ｉｎ ｖｉｖｏで使用するために、例えば、生体適合性担体で復元させると、製剤は、
哺乳動物の投与に適した形態になることが理解されよう。

【0111】

イメージングは、ｉｎ ｖｉｖｏであり得る。

【0112】

イメージングは、光学イメージングであり得る。

【0113】

用語「光学イメージング」は、赤色～近赤外領域（波長４００～１，２００ｎｍ）の光
との相互作用に基づいて、疾患の検出、病期分類または診断、疾患進行のフォローアップ
または疾患治療のフォローアップのための画像を形成する任意の方法を意味する。光学イ
メージングはさらに、いかなるデバイスも使用しない直接可視化、ならびに様々なスコー
プ、カテーテルおよび光学イメージング装置、例えば、断層撮影画像表示用コンピュータ
支援ハードウェアなどのデバイスの使用を伴う直接可視化のあらゆる方法を包含する。モ
ダリティおよび測定技法には、下記のものが含まれるが、これらに限定されない：蛍光イ
メージング、発光イメージング；内視鏡検査；蛍光内視鏡検査；光コヒーレンス断層撮影
；透過率イメージング；時間分解透過率イメージング；共焦点イメージング；非線形顕微
鏡検査；光音響イメージング；音響光学イメージング；分光法；反射分光法；干渉分光法
；コヒーレンス干渉分光法；拡散光断層撮影および蛍光媒介拡散光断層撮影（連続波、時
間領域および周波数領域システム）、および光散乱、吸収、偏光、発光、蛍光寿命、量子
収率、および消光の測定。これらの技法のさらなる詳細は、以下に示されている：（Ｔｕ
ａｎ Ｖｏ－Ｄｉｎｈ （ｅｄｉｔｏｒ）： "Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｏｔｏｎｉ
ｃｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ" （２００３）， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＣＣ； Ｍｙｃｅ
ｋ ＆ Ｐｏｇｕｅ （ｅｄｉｔｏｒｓ）： "Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ" （２００３）， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ
， Ｉｎｃ．； Ｓｐｌｉｎｔｅｒ ＆ Ｈｏｐｐｅｒ： "Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔ
ｉｏｎ ｔｏ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｏｐｔｉｃｓ" （２００７）， ＣＲＣ Ｐｒ
ｅｓｓ ＬＣＣ。

【0114】

イメージングは、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を得るためのものであ
り得る。

【0115】

本発明の第１の態様の製剤または本発明の第３の態様の医薬組成物を、哺乳動物の身体
に前もって投与していてもよい。

【0116】

光学イメージング方法は、蛍光反射イメージング（ＦＲＩ）を使用してもよい。ＦＲＩ
では、本発明のイメージング剤を診断される被験体に投与し、その後、被験体の組織表面
を、励起光で、通常は連続波（ＣＷ）励起で照らす。この光はレポーター分子（ＩＭ）を
励起する。励起により発生したイメージング剤からの蛍光を、蛍光検出器を使用して検出
する。戻り光を濾光し、蛍光成分を（単独または部分的に）分離する。蛍光から画像を形
成する。通常、最小限の処理が行われ（寿命、量子収量などの光学パラメータを計算する
ためのプロセッサは不要）、画像は蛍光強度をマッピングする。イメージング剤は、疾患
領域に集中して高い蛍光強度を生成するように設計されている。したがって、疾患領域は
、蛍光強度画像において正のコントラストを生成する。画像は、リアルタイムイメージン
グが可能なように、ＣＣＤカメラまたはチップを使用して得ることもできる。

【0117】

励起波長は、使用する染料の種類に応じて変化する。励起光発生用の装置は、レーザー
（例えば、イオンレーザー、染料レーザー、半導体レーザー）；ハロゲン光源またはキセ
ノン光源などの従来の励起光源であればよい。最適な励起波長を得るために、様々な光学
フィルターを任意選択で使用することができる。

【0118】

本方法は、
ａ）対象の組織表面を励起光で照らす工程と；
ｂ）イメージング剤の励起により発生したイメージング剤からの蛍光を検出する工程と；
ｃ）任意選択で、蛍光検出器によって検出した光をフィルタリングして蛍光成分を分離す
る工程と；
ｄ）工程（ｂ）または（ｃ）の蛍光から対象の組織表面の画像を形成する工程と
を含む。

【0119】

工程（ａ）の励起光は、本質的に連続波（ＣＷ）であり得る。

【0120】

工程（ａ）は、哺乳動物の身体内で行われ得る。

【0121】

代替的なイメージング方法は、ＦＤＰＭ（周波数領域光子移動）を使用する。これは、
組織内のＩＭをより深い位置で検出することが重要である連続波（ＣＷ）法に比べて、利
点がある［Ｓｅｖｉｃｋ－Ｍｕｒａｃａ ｅｔ ａｌ， Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ
．Ｂｉｏｌ．， ６， ６４２－６５０ （２００２）］。そのような周波数／時間領域
のイメージングは、イメージングされる病変の組織の深さと、使用する装置のタイプとに
応じて変調させることができる蛍光特性をＩＭが有する場合に有利である。

【0122】

本方法は、
ａ）前記哺乳動物の身体の不均一組成を有する光散乱生体組織を、所定の経時変化する強
度の光源からの光にさらしてイメージング剤を励起させる工程であって、組織が励起光を
多重散乱させる工程と；
ｂ）前記露光に応答した組織からの多重散乱発光を検出する工程と；
ｃ）プロセッサを用いて複数の値を確立することにより、発光から組織全体の蛍光特性を
定量化する工程であって、それら値が、組織内の異なる位置における蛍光特性のレベルに
それぞれ対応しており、蛍光特性のレベルが、組織の不均一組成によって変化するもので
ある工程と；
ｄ）工程（ｃ）の値に従って組織の不均一組成をマッピングすることにより、組織の画像
を生成する工程と
を含む。

【0123】

光学イメージング方法は、蛍光イメージング、任意選択で蛍光内視鏡検査を含み得る。

【0124】

本方法は、検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監
視療法を補助するために使用され得る。

【0125】

本方法は、がん、任意選択で結腸直腸がんの検出、診断、手術、病期分類、治療、治療
の監視、疾患進行の監視または監視療法を補助するために使用され得る。

【0126】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第５の態様のイメージング方法を含んでなる
、検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法の方
法が提供される。

【0127】

本発明のさらなる態様によれば、哺乳動物の身体のイメージングにおけるイメージング
剤として使用するための、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様の医薬組
成物のうちの少なくとも１つが提供される。

【0128】

本発明のさらなる態様によれば、薬剤として使用するための、本発明の第１の態様の製
剤および本発明の第３の態様の医薬組成物のうちの少なくとも１つが提供される。

【0129】

本発明のさらなる態様によれば、検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾
患進行の監視または監視療法において使用するための、本発明の第１の態様の製剤および
本発明の第３の態様の医薬組成物のうちの少なくとも１つが提供される。

【0130】

本発明のさらなる態様によれば、前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、
任意選択で結腸直腸がん、食道がん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣が
ん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検
出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法において
使用するための、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様の医薬組成物のう
ちの少なくとも１つが提供される。

【0131】

本発明のさらなる態様によれば、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の検出、診断
、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法において使用する
ための、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様の医薬組成物のうちの少な
くとも１つが提供される。

【0132】

本発明のさらなる態様によれば、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任
意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得るために使用される、本発明の第１の態様の製剤および本発
明の第３の態様の医薬組成物のうちの少なくとも１つが提供される。

【0133】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、検出、診断、手術、病期分類、治療、
治療の監視、疾患進行の監視または監視療法の方法が提供される。

【0134】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、哺乳動物の身体のイメージング方法が
提供される。

【0135】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、前がん症状およびがんのうちの１つも
しくは複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道がん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸
部がん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つも
しくは複数の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監
視療法の方法が提供される。

【0136】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部
位の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法の
方法が提供される。

【0137】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用して、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部
位の画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得る方法が提供される。

【0138】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つの使用が提供される。

【0139】

本発明のさらなる態様によれば、検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾
患進行の監視または監視療法における、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の
態様の医薬組成物のうちの少なくとも１つの使用が提供される。

【0140】

本発明のさらなる態様によれば、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様
の医薬組成物のうちの少なくとも１つの、イメージング剤としての使用が提供される。

【0141】

本発明のさらなる態様によれば、前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、
任意選択で結腸直腸がん、食道がん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣が
ん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検
出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法における
、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様の医薬組成物のうちの少なくとも
１つの使用が提供される。

【0142】

本発明のさらなる態様によれば、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の検出、診断
、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法における、本発明
の第１の態様の製剤および本発明の第３の態様の医薬組成物のうちの少なくとも１つの使
用が提供される。

【0143】

本発明のさらなる態様によれば、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任
意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得る際の、本発明の第１の態様の製剤および本発明の第３の態
様の医薬組成物のうちの少なくとも１つの使用が提供される。

【0144】

説明した代替の特徴および様々な実施形態は、必要な変更を加えて、どの態様およびど
の実施形態にも適用される。
次に、本発明の実施形態を、例として、以下の図面を参照して説明する：

【図面の簡単な説明】

【0145】

【図1】ＡＰＩ（ＥＭＩ－１３７）を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0146】

国際公開第２００８／１３９２０７号に記載のような光学イメージング剤を使用して一
連の実験を行い、より良好な復元を、特に静脈内使用に適したｐＨおよび／または張度で
示す、より安定な製剤を見つけた。使用した化合物は、図１に示すように、ＥＭＩ－１３
７であった。

【0147】

後述する実験では、ＥＭＩ－１３７の酢酸塩を使用したが、全ての重量および計算は、
遊離イオンを使用して行った。

【0148】

復元後、静脈内製剤は等張溶液であり、静脈内投与に適した生理的ｐＨである必要があ
る。また、均一であり、凝集体を形成することなく可溶化する必要がある。しかし、水に
溶解した場合、ＥＭＩ－１３７のｐＨは４．６であり、大きな構造体または凝集体の形成
が顕著に見られる。この凝集は、溶液のｐＨを上げても一部しか可逆的ではないため、静
脈内投与には不向きである。そのため、復元時に静脈内投与に適したｐＨになり、実質的
に均一で、凝集体または粒子を実質的に含まない製剤が必要とされている。さらに、ＥＭ
Ｉ－１３７の貯蔵寿命はかなり短いため、実用性および安全性の目的で、単離された形態
ではあまり使用することができない。したがって、ＥＭＩ－１３７の安定性および貯蔵寿
命を延長する製剤が必要とされている。

【0149】

（ＥＭＩ－１３７の調製およびＥＭＩ－１３７を使用したイメージング）
実施例１は、ｃＭＢＰペプチド（化合物１（配列番号７を含む））の合成を提供する。
実施例２は、化合物１のペプチド配列をスクランブリングして、下記のペプチド配列を有
する化合物２を与える、陰性対照としての関連ペプチドの合成を提供する：
Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－
Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－
Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
（配列番号８）。

【0150】

実施例３は、シアニン染料Ｃｙ５＊＊の合成を提供する。実施例４は、Ｃｙ５＊＊の活
性エステルの合成を提供する。実施例５は、ペプチド（ｃＭＢＰペプチドおよび対照）に
対するシアニン染料のコンジュゲーションを提供する。化合物３（配列番号７を含む）、
４（配列番号８を含む）、５（配列番号７を含む）、６（配列番号７を含む）および７（
配列番号８を含む）を、このようにして比較した。実施例６は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのｃ
Ｍｅｔに対するペプチドの親和性を判定する方法を提供する。それらの結合は、光学レポ
ーターイメージング部位（シアニン染料）が結合していても、選択的であることが結果と
して示されている。実施例７は、がんの動物モデルにおける化合物５および７のｉｎ ｖ
ｉｖｏ試験に関するデータを提供する。化合物５では、腫瘍：バックグラウンド比が優れ
ていることがわかったが、化合物７（陰性対照）では、腫瘍とバックグラウンドとの区別
がつかなかった。

【0151】

化合物の構造を下記の表２に示す。

【表2-1】

【表2-2】

【0152】

（実施例１：化合物１の合成）
（工程（ａ）：保護された前駆体直鎖ペプチドの合成）
前駆体直鎖ペプチドは、下記の構造を有する：
Ａｃ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－
Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ
－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＮＨ_２
（配列番号７を含む）。

【0153】

ペプチジル樹脂Ｈ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｔｙｒ（
ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－
Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）
－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｈｒ（Ψ^{Ｍｅ，Ｍｅ}ｐｒｏ）－Ｇｌｕ（Ｏ
ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ポリマー（
配列番号７を含む）を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成
装置上で、０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から開始するＦ
ｍｏｃ化学を用いて組み立てた。カップリングステップでは、（ＨＢＴＵを使用して）予
備活性化した過剰量の１ｍｍｏｌアミノ酸を適用した。Ｇｌｕ－Ｔｈｒ疑似プロリン（Ｎ
ｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ０５－２０－１１２２）を配列に組み込んだ。樹脂を窒素バブラー
装置に移し、無水酢酸（１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に
溶解した溶液で６０分間処理した。無水溶液を濾過によって除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄
し、窒素流下で乾燥させた。

【0154】

側鎖保護基の除去および樹脂からのペプチドの開裂を同時に、２．５％のＴＩＳ、２．
５％の４－チオクレゾールおよび２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で２時間
３０分行った。濾過により樹脂を除去し、ＴＦＡを真空除去し、残渣にジエチルエーテル
を加えた。形成された沈殿物をジエチルエーテルで洗浄し、風乾させ、クルードペプチド
２６４ｍｇを得た。

【0155】

分取ＨＰＬＣによるクルードペプチドの精製（グラジエント：２０－３０％Ｂを４０分
間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ
／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）５０ｘ２１．２０
ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０分）から、純粋な化合物１の直鎖前
駆体１００ｍｇを得た。この純粋な生成物を、分析ＨＰＬＣで分析した（グラジエント：
１０－４０％Ｂを１０分間、Ａ＝Ｈ_２ＣＶＯ．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％Ｔ
ＦＡ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８
（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）。さらなる
生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を使用して行った（ＭＨ_２ ^２＋計算
値：１４６４．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１４６５．１）。

【0156】

（工程（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４－１６ジスルフィド架橋の形成）
Ｃｙｓ４－１６；Ａｃ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）
－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｔｒ
ｐ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌ
ｙ－Ｌｙｓ－ＮＨ_２（配列番号７を含む）。

【0157】

工程（ａ）の直鎖前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、
アンモニアを用いて溶液をｐＨ６に調整した。反応混合液を５日間撹拌した。次いで、溶
液をＴＦＡを用いてｐＨ２に調整し、溶媒の大部分を真空蒸発させて除去した。残渣（４
０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラムに分注し、精製した。

【0158】

分取ＨＰＬＣによる残渣の精製（グラジエント：０％Ｂを１０分間、その後０－４０％
Ｂを４０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：
１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ
２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４４分）から、純粋な化合物
１の単環式前駆体７２ｍｇを得た。この純粋な生成物（異性体Ｐ１～Ｐ３の混合物として
）を、分析ＨＰＬＣで分析した（グラジエント：１０－４０％Ｂを１０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ
／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４
ｎｍ、生成物保持時間：５．３７分（Ｐ１）；５．６１分（Ｐ２）；６．０５分（Ｐ３）
）。さらなる生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を使用して行った（Ｍ
Ｈ_２ ^２＋計算値：１４６３．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１４６４．１（Ｐ１）；１４６４．
４（Ｐ２）；１４６４．３（Ｐ３））。

【0159】

（工程（ｃ）：第２Ｃｙｓ６－１４ジスルフィド架橋の形成（化合物１））
工程（ｂ）からの単環式前駆体（７２ｍｇ）を、窒素ブランケット下で７５％ＡｃＯＨ
／水（７２ｍＬ）に溶解した。１Ｍ ＨＣｌ（７．２ｍＬ）およびＡｃＯＨ中の０．０５
Ｍ Ｉ_２（４．８ｍＬ）をその順序で添加し、混合液を４５分間撹拌した。１Ｍアスコル
ビン酸（１ｍＬ）を加え、無色混合液を得た。溶媒の大部分を真空蒸発させ、残渣（１８
ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製し
た。

【0160】

分取ＨＰＬＣによる残渣の精製（グラジエント：０％Ｂを１０分間、その後２０－３０
％Ｂを４０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量
：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０
ｘ２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４３～５３分）から、５２
ｍｇの純粋な化合物１を得た。この純粋な生成物を、分析用ＨＰＬＣで分析した（グラジ
エント：１０－４０％Ｂを１０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０
．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ
Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）。
さらなる生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を使用して行った（ＭＨ_２
^２＋計算値：１３９１．５、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１３９２．５）。

【0161】

（実施例２：化合物２の合成）
Ａｃ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ
－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｇｌ
ｙ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＮＨ
_２
化合物２（配列番号８を含む）は、化合物１のペプチド配列をスクランブリングした陰性
対照である。

【0162】

（工程（ａ）：保護された前駆体直鎖ペプチドの合成）
ペプチジル樹脂Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ
）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ
）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｇｌ
ｕ（ＯｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｓ
ｅｒ（Ψ^{Ｍｅ，Ｍｅ}ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）－ポリマー（配列番号８を含む）を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３
３Ａペプチド合成装置上で、０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｎｏｖａｇｅｌ樹
脂から開始するＦｍｏｃ化学を用いて組み立てた。カップリングステップでは、（ＨＢＴ
Ｕを使用して）予備活性化した過剰量の１ｍｍｏｌアミノ酸を適用した。Ｔｙｒ－Ｓｅｒ
疑似プロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ０５－２０－１０１４）を配列に組み込んだ。樹
脂を窒素バブラー装置に移し、無水酢酸（１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）をＤ
ＣＭ（５ｍＬ）に溶解した溶液で６０分間処理した。無水溶液を濾過によって除去し、樹
脂をＤＣＭで洗浄し、窒素流下で乾燥させた。

【0163】

側鎖保護基の除去および樹脂からのペプチドの開裂を同時に、２．５％のＴＩＳ、２．
５％の４－チオクレゾールおよび２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で２時間
１０分行った。濾過により樹脂を除去し、ＴＦＡを真空除去し、残渣にジエチルエーテル
を加えた。形成された沈殿物をジエチルエーテルで洗浄し、風乾させ、クルードペプチド
２１６ｍｇを得た。

【0164】

分取ＨＰＬＣによるクルードペプチドの精製（グラジエント：２０－３０％Ｂを４０分
間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：５０ｍＬ／
分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ５０ｍｍ、
検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３４．１分）から、２００ｍＬのＡＣＮ／水に
溶解した純粋なＤＸ－１６６２陰性対照直鎖前駆体を得た。この純粋な生成物を、分析Ｈ
ＰＬＣで分析した（グラジエント：１０－４０％Ｂを５分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦ
ＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．６ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅ
ｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）２０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保
持時間：３．５２分）。さらなる生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を
使用して行った（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１４６４．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１４６４．９）
。

【0165】

（工程（ｂ）：単環式Ｃｖｓ４－１６ジスルフィド架橋の形成）
Ｃｙｓ４－１６；Ａｃ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）
－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｇｌ
ｕ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌ
ｙ－Ｌｙｓ－ＮＨ_２（配列番号８を含む）。

【0166】

工程（ａ）の陰性対照直鎖前駆体溶液（２００ｍＬ、４．３．１を参照）にＤＭＳＯ（
１０ｍＬ）を加え、アンモニアを用いて溶液をｐＨ７に調整した。反応混合液を４０℃で
１８時間加熱した後、６０℃で６０分間加熱した。溶液をＴＦＡを用いてｐＨ２に調整し
、ＡＣＮを真空蒸発させて除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ精製にかけた。

【0167】

分取ＨＰＬＣによる残渣の精製（グラジエント：０％Ｂを５分間、その後２０－３０％
Ｂを６０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：
５０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ
５０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２９．６分）から、ＡＣＮ／水１０
０ｍＬ中の純粋な陰性対照単環式前駆体を得た。この純粋な生成物を、分析ＨＰＬＣで分
析した（グラジエント：１０－４０％Ｂを５分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ
＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．６ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌ
ｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）２０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３
．４６分）。さらなる生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を使用して行
った（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１４６３．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１４６３．７）。

【0168】

（工程（ｃ）：第２Ｃｖｓ６－１４ジスルフィド架橋の形成（化合物２））
Ｃｙｓ４－１６，６－１４；Ａｃ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ
－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ
－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
－ＮＨ_２（配列番号８を含む）。

【0169】

工程（ｂ）からの陰性対照単環式前駆体溶液（１００ｍＬ）を、ＡｃＯＨ（１００ｍＬ
）で希釈した。１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）およびＡｃＯＨ中の０．０５Ｍ Ｉ_２（７ｍＬ）
をその順序でアルゴンブランケット下で添加し、混合液を２０分間撹拌した。１Ｍアスコ
ルビン酸（１ｍＬ）を加え、無色混合液を得た。溶媒の大部分を真空蒸発させ、残渣（３
０ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（１００ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を
精製した。分取ＨＰＬＣによる残渣の精製（グラジエント：０％Ｂを１０分間、その後２
０－３０％Ｂを６０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦ
Ａ、流量：５０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２
）２５０ｘ５０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３２．８分）から、３０
ｍｇの純粋な化合物２を得た。この純粋な生成物を、分析ＨＰＬＣで分析した（グラジエ
ント：１０－４０％Ｂを１０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡおよびＢ＝ＡＣＮ／０．
１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ
Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）。さ
らなる生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を使用して行った（ＭＨ_２ ^２
＋計算値：１３９１．５、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１３９２．５）。

【0170】

（実施例３：シアニン染料２－｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）－５－［１－（５－カルボキシペ
ンチル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－インドール－２－
イリデン］ペンタ－１，３－ジエニル｝－３－メチル－１，３－ビス（４－スルホブチル
）－３Ｈ－インドリウム－５－スルホン酸塩（Ｃｙ５＊＊）の合成

【化10】

【0171】

（（３ａ）５－メチル－６－オキソヘプタン－１－スルホン酸）

【化11】

ＤＭＦ（２５ｍｌ）中の２－メチルアセト酢酸エチル（５０ｇ）を、ＤＭＦ（１００ｍ
ｌ）中の水素化ナトリウム（鉱物油中の６０％ＮａＨ１２．０ｇ）の懸濁液に、氷浴冷却
しながら１時間かけて滴加した（内部温度０～４℃）。この混合液を、撹拌しながら４５
分間かけて周囲温度まで暖め、再冷却した。次に、ＤＭＦ（２５ｍｌ）中の１，４－ブタ
ンスルトン（４５ｇ）の溶液を１５分かけて滴加した。最終混合液を６０℃で１８時間加
熱した。溶媒を回転蒸発により除去し、残渣を水およびジエチルエーテル間で分配した。
水層を回収し、新しいジエチルエーテルで洗浄し、回転蒸発させて粘着性の泡を得た。こ
の中間体を水（１００ｍｌ）に溶解し、水酸化ナトリウム（１７．８ｇ）を撹拌しながら
１５分かけて添加した。この混合液を９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合液を
、濃塩酸（～４０ｍｌ）の添加により～ｐＨ２に調整した。溶液を回転蒸発させ、真空乾
燥させた。黄色固体を、２％塩酸を含むエタノール洗浄した（３×１５０ｍｌ）で。エタ
ノール溶液を濾過し、回転蒸発させ、真空乾燥させ、黄色固体を得た。収量７０ｇ。

【0172】

（（３ｂ）２，３－ジメチル－３－（４－スルホブチル）－３Ｈ－インドール－５－スル
ホン酸、二カリウム塩）

【化12】

４－ヒドラジノベンゼンスルホン酸（４０ｇ）、５－メチル－６－オキソヘプタン－１
－スルホン酸（３ａから；６０ｇ）および酢酸（５００ｍｌ）を混合し、還流下で６時間
加熱した。溶媒を濾過し、回転蒸発させ、真空乾燥させた。固体をメタノール（１Ｌ）に
溶解した。これに２Ｍメタノール水酸化カリウム（３００ｍｌ）を加えた。混合液を３時
間撹拌した後、回転蒸発を使用して溶媒の量を５０％減少させた。得られた沈殿物を濾過
し、メタノールで洗浄し、真空乾燥させた。収量６０ｇ。ＭＳ（ＬＣＭＳ）：ＭＨ^＋３６
２。Ａｃｃ． Ｍａｓｓ：実測値、３６２．０７２９。ＭＨ^＋＝Ｃ_１４Ｈ_２ＯＮＯ_６Ｓ_２
は、ｍ／ｚ ３６２．０７３２（－０．８ｐｐｍ）を必要とする。

【0173】

（（３ｃ）２，３－ジメチル－１３－ビス（４－スルホブチル）－３Ｈ－インドリウム－
５－スルホン酸、二カリウム塩）

【化13】

２，３－ジメチル－３－（４－スルホブチル）－３Ｈ－インドール－５－スルホン酸（
３ｂから；６０ｇ）を、１，４ブタンスルトン（１８０ｇ）およびテトラメチレンスルホ
ン（１４６ｍｌ）とともに１４０℃で１６時間加熱した。得られた赤色固体をジエチルエ
ーテルで洗浄し、粉砕して粉末にし、真空乾燥させた。収量６０ｇ。

【0174】

（（３ｄ）Ｃｖ５^＊＊、ＴＦＡ塩として）
１－（５’－カルボキシペンチル）－２，３，３－トリメチル－インドレニウムブロミ
ド－５－スルホン酸、Ｋ^＋塩（２．７ｇ）、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）一
塩酸塩（９６０ｍｇ）、無水酢酸（３６ｍｌ）および酢酸（１８ｍｌ）を１２０℃で１時
間加熱し、暗褐色－赤色溶液を得た。反応混合液を周囲温度まで冷却した。２，３－ジメ
チル－１，３－ビス（４－スルホブチル）－３Ｈ－インドリウム－５－スルホネート（３
ｃから；８．１ｇ）および酢酸カリウム（４．５ｇ）を混合液に添加し、これを周囲温度
で１８時間撹拌した。得られた青色溶液を酢酸エチルを用いて沈殿させ、真空乾燥させた
。クルード染料を、液体クロマトグラフィーにより精製した（ＲＰＣ_１８．水＋０．１％
ＴＦＡ／ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡグラジエント）。主な染料ピークを含む画分を回収し
てプールし、真空蒸発させ、表題の染料２ｇを得た。ＵＶ／Ｖｉｓ（水＋０．１％ＴＦＡ
）：６５０ｎｍ。ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）：ＭＨ^＋８８７。ＭＨ^＋＝Ｃ_３８Ｈ_５０Ｎ
_２Ｏ_１４Ｓ_４は、ｍ／ｚ ８８７．１を必要とする。

【0175】

（実施例４：２－［（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）－５－（１－｛６－［２，５－ジオキソピロリ
ジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－３，３－ジメチル－５－スルホ－１
，３－ジヒドロ－２Ｈ－インドール－２－イリデン］ペンタ－１，３－ジエニル］－３－
メチル－１，３－ビス（４－スルホブチル）－３Ｈ－インドリウム－５－スルホン酸、ジ
イソプロピルエチルアミン塩の合成（Ｃｙ５^＊＊のＮＨＳエステル））

【化14】

Ｃｙ５^＊＊（実施例３；１０ｍｇ）を無水ＤＭＳＯ（３ｍｌ）に溶解した；これにＨＳ
ＰｙＵ（２０ｍｇ）およびＮ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（８０μｌ）を加えた
。得られた溶液を３時間混合すると、ＴＬＣ（ＲＰＣ_１８．水／ＭｅＣＮ）は完全な反応
を示した。酢酸エチル／ジエチルエーテル中での沈殿により染料を単離し、濾過し、酢酸
エチルで洗浄し、真空乾燥させた。ＵＶ／Ｖｉｓ（水）６５０ｎｍ。ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－
ＴＯＦ）ＭＨ^＋ ９８３．ＭＨ^＋＝Ｃ_４２Ｈ_５３Ｎ_３Ｏ_１６Ｓ_４は、ｍ／ｚ ９８４．１
６を必要とする。

【0176】

（実施例５：染料のコンジュゲーション、化合物３～７の合成）
Ｃｙｓ４－１６、６－１４；Ａｃ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ
－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ
－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
（Ｃｙ５）－ＮＨ_２（化合物３）（配列番号７を含む）。

【0177】

化合物１（１０ｍｇ）、ＮＭＭ（４μＬ）およびＣｙ５ ＮＨＳエステル（５．７ｍｇ
；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＰＡｌ ５１０４）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、反応
混合液を７時間撹拌した。反応混合液を５％ＡＣＮ／水（８ｍＬ）で希釈し、生成物を分
取ＨＰＬＣで精製した。

【0178】

分取ＨＰＬＣによるクルードペプチドの精製（グラジエント：５－５０％Ｂを４０分間
、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＨＣＯＯＨおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＨＣＯＯＨ、流量：１０
ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ２１
．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３５．５分）から、８．１ｍｇの
純粋な化合物３を得た。この純粋な生成物を、分析ＨＰＬＣで分析した（グラジエント：
５－５０％Ｂを１０分間、Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＨＣＯＯＨおよびＢ＝ＡＣＮ／０．１％
ＨＣＯＯＨ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ
Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：８．１５分）。さ
らなる生成物の特性評価を、エレクトロスプレー質量分析法を使用して行った（ＭＨ_２ ^２
＋計算値：１７１０．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１７１１．０）。

【0179】

化合物４を、同様の方法で調製した － エレクトロスプレー質量分析法（ＭＨ_２ ^２＋
計算値：１７１０．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１７１０．９）。

【0180】

他の染料－ペプチドコンジュゲート（化合物５～７）も、同様の方法で調製した。Ａｌ
ｅｘａ６４７は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Ａ２０１０６）から購入した。
化合物５（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１８２５．７、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１８２５．９）、
化合物６（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１８１１．７、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１８１２．０）、
化合物７（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１８２５．７、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１８２６．２）。

【0181】

（実施例６：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ蛍光偏光アッセイ）
蛍光偏光法の原理を簡単に説明すると、以下のようになり得る：
単色光が水平偏光フィルターを通過し、試料中の蛍光分子を励起する。垂直偏光面で適切
に配向した分子のみが光を吸収し、励起され、次いで発光する。放出された光を水平面お
よび垂直面の両方で測定する。異方性値（Ａ）は、下記の式に従う光強度の比である：
Ａ＝（水平偏光子での強度－垂直偏光子での強度）／（水平偏光子での強度＋２^＊垂直偏
光子での強度）。

【0182】

蛍光異方性の測定は、３８４ウェルマイクロプレートにおいて１０μＬの容量で、結合
緩衝液（ＰＢＳ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ ７．５）中、Ｔｅｃａｎ Ｓａｆ
ｉｒｅ蛍光偏光プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ、米国）を使用して、ｅｘ６４６／ｅｍ６
７８ｎｍで実施した。染料標識ペプチドの濃度を一定（２０ｎＭ）に保ち、ヒトまたはマ
ウスのｃＭｅｔ／Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＳｅｍａｐｈｏｒｉｎ
６Ａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の濃度を０～１５０ｎＭの間で変化させた。結合混合液
をマイクロプレート中で１０分間３０℃で平衡させた。観察された異方性の変化を、下記
の方程式に当てはめた：

【数1】

（式中、ｒ_ｏｂｓは観測された異方性であり、ｒ_ｆｒｅｅは遊離ペプチドの異方性であり
、ｒ_{ｂｏｕｎｄ}は結合ペプチドの異方性であり、Ｋ_Ｄは解離定数であり、ｃＭｅｔは全ｃ
Ｍｅｔ濃度であり、Ｐは全染料標識ペプチド濃度である）。この方程式は、合成ペプチド
および受容体が、溶液中で１：１の化学量論で可逆的な複合体を形成することを前提とし
ている。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して非線形回帰によりデータ
フィッティングを行い、Ｋ_Ｄ値（一部位結合）を得た。

【0183】

化合物３および４を、ヒトおよびマウスのｃＭｅｔ（Ｆｃキメラ）への結合について試
験した。結果は、化合物３のヒトｃ－Ｍｅｔへの結合についてのＫ_Ｄが３±１ｎＭである
ことを示した。化合物４のヒトｃＭｅｔへの結合は認められなかった。さらに、化合物３
および４は、試験範囲ではマウスｃＭｅｔへの結合を示さなかった。

【0184】

同じ方法を用いて、化合物５では、ヒトｃＭｅｔに対するＫ_Ｄが１．１ｎｍであること
がわかった。

【0185】

（実施例７：化合物５および７のｉｎ ｖｉｖｏ試験）
（（ａ）動物モデル）
雌のＢＡＬＢ ｃ／Ａヌード（Ｂｏｍ）マウス５４匹を、試験に使用した。動物の使用
は、地方倫理委員会によって承認された。ＢＡＬＢ ｃ／Ａヌードは、他のヌードマウス
系統と比較して、ヒト腫瘍の取り込み率が高い近交系免疫不全マウス系統である。マウス
は、到着時に４週齢で、試験開始時の体重は約２０グラムであった。動物を、ＨＥＰＡフ
ィルターで濾過された空気の個別換気ケージ（ＩＶＣ、Ｓｃａｎｂｕｒ ＢＫ）に収容し
た。動物は、"Ｒａｔ ａｎｄ Ｍｏｕｓｅ ｎｒ． ３ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ"飼料（Ｓｃ
ａｎｂｕｒ ＢＫ）と、１ｍＭのモル濃度までＨＣｌを添加して酸性化した水道水（ｐＨ
３．０）とを自由に摂取していた。

【0186】

結腸がん細胞ＨＣＴ－１５はヒト結腸がん由来であり、Ｚｅｎｇら［Ｃｌｉｎ． Ｅｘ
ｐ． Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ， ２１， ４０９－４１７． （２００４）］によると、
ｃＭｅｔを発現することが報告されている。この細胞株は、ヌードマウスに皮下接種した
際に、腫瘍を形成することが証明された［Ｆｌａｔｍａｒｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ．
Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ４０，１５９３－１５９８ （２００４）］。

【0187】

ＨＣＴ－１５細胞を、１０％血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭ
Ｉ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｒ０８８３）中で増殖させ、皮下接種用に調製した。継代数
４（Ｐ４）でストックを作製し、５％ＤＭＳＯを含む培地中、３×１０^７細胞／バイアル
で液体窒素中に貯蔵するために凍結した。移植当日、細胞を３７℃の水浴中で急速に解凍
し（約２分間）、洗浄し、ＰＢＳ／２％血清中に再懸濁させた（１２００ｒｐｍで１０分
間遠心分離）。細胞を投与用シリンジに吸引するたびに、確実にバイアル内の細胞を完全
に混合するようにした。動物が軽いガス麻酔下にある間、０．１ｍｌの量の細胞懸濁液を
、細口径針（２５Ｇ）を使用して肩と背中に皮下注射した。その後、動物をケージに戻し
、腫瘍を１３～１７日間増殖させた。動物には、接種処置の前に、少なくとも５日間の順
化期間を与えた。

【0188】

（（ｂ）処置）
全ての試験物質を、凍結乾燥粉末からＰＢＳで復元した。白色プリンター用紙の小さな
堆積物をイメージングし、照明の不均一性を補正するために使用するフラットフィールド
画像を得た。試験物質を物理的固定時に側尾静脈内に静脈内注射した。注射量は０．１ｍ
ｌであり、これは動物１匹あたり１ｎｍｏｌの試験物質の用量に相当する。注射後、動物
をケージに戻した。動物は、イメージングの直前に、頸椎脱臼により屠殺した。各試験物
質の最適なイメージング時点は、限られた数（ｎ＝１～６）の動物の皮膚および筋肉組織
におけるウォッシュアウト速度の比較に基づいて推定した。化合物３および４のイメージ
ング時点は、注射後１２０分であった。各動物について、皮下増殖した腫瘍を死後に切除
した。厚さ約１．６ｍｍ、直径約３～４ｍｍの薄いスライスを、１つの腫瘍の端から切り
取った。腫瘍のスライスを、その後、同じ動物の正常な結腸の領域に対してイメージング
した。

【0189】

（（ｃ）イメージング）
イメージングは、レポーターを励起するための光源と、蛍光成分を抽出するためのフィ
ルタリングシステムとを使用するように適合させた臨床腹腔鏡を介して実行した。レポー
ター分子の励起には６３５ｎｍレーザーを使用した。検出器にはＨａｍａｍａｔｓｕ Ｏ
ＲＣＡ ＥＲＧ ＣＣＤカメラを使用した。カメラは、ゲイン０の２ｘ２ビニングモード
で動作させた。結腸イメージングの標準露光時間は１０秒であった。システム較正の測定
では、動物イメージングシステムでの１０秒の露光時間は、臨床的に意味のある光源、視
野、および組織表面までの距離での４０ミリ秒の露光に対応することを示している。画像
の強度分布を、システム較正データにより、照明の不均一性について補正した。標的およ
びバックグラウンド比は、腫瘍上にある関心領域、および正常な結腸のバックグラウンド
から計算した。画像は、受信機動作特性解析に採用されている標準スコアリングシステム
を使用して、視覚的にスコアリングした。

【0190】

（（ｄ）結果）
化合物５は腫瘍対正常比が１．４６：１であり、同じ染料を持つ対応するスクランブリ
ング対照ペプチド（化合物７）は、比が１．０４：１であった。化合物５は容易に識別可
能な腫瘍を有していたが、化合物７ではバックグラウンドに対して識別可能なものは何も
なかった。

【0191】

（凍結乾燥ＥＭＩ－１３７製剤の調製）
製剤は、安定した均一固体を提供するために、効果的に（例えば、衝突または崩壊する
ことなく）凍結乾燥させる必要がある。前述のように、水中でのＥＭＩ－１３７のｐＨは
約４．６であり、これは静脈内投与には適していない。したがって、製剤のさらなる要件
は、復元時に静脈内投与に適したｐＨであることである。さらに、復元時の製剤の張度は
、静脈内投与に適していなければならない。さらなる利点は、製剤が冷蔵保存も可能であ
るが、室温で保存可能であることであろう。

【0192】

初期の製剤試験では、ｐＨが約６．８未満の製剤は凝集する傾向があることが示された
。したがって、ｐＨが約６．８未満である製剤は許容できないと考えられた。さらに、約
ｐＨ８を超える（場合によっては最大約ｐＨ９の）ｐＨでは、ジスルフィド架橋（ＥＭＩ
－１３７には２つある）の分解のリスクがあることが知られている。したがって、復元時
に、凝集を避けるのに十分高いｐＨでありながら、ジスルフィド架橋の分解のリスクを軽
減するのに十分低いｐＨを提供する製剤に達することが有益であろう。

【0193】

したがって、復元時にＥＭＩ－１３７溶液のｐＨを許容範囲内に維持するためには、凍
結乾燥の前に緩衝剤を含める必要がある。研究によると、ＥＭＩ－１３７溶液の粘度は、
塩化カリウムに富むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の存在下で上昇し、実質的なゲル形
成が発生することが示されている。このゲル化効果は、ＥＭＩ－１３７をｐＨ７．４のリ
ン酸ナトリウム緩衝液に溶解した場合には観察されなかった。したがって、ＮａＣｌおよ
びＫＣｌの使用は、（ゲル化の問題のために）考慮から外した。

【0194】

表３で取り上げているように、凍結乾燥プロセスを実施した。

【表3】

【0195】

凍結乾燥を、以下の通りに行った。

【0196】

下記の表４Ａ～４Ｆで取り上げているような製剤の構成成分を、適切な凍結乾燥容器に
添加した。記載の全ての成分（緩衝液を含む）を、凍結乾燥の前に添加したことに留意す
ること。

【0197】

積載段階は、約－４０℃で行われる。その後、温度を約－５５℃まで下げる。冷却速度
は、毎分約１．５℃とすることができる。次いで、混合物を、定常凍結条件で少なくとも
２時間置いておく。次いで、圧力を約４５分かけて５０μＢａｒまで低下させる。次いで
、温度を約－３８℃まで上昇させて一次乾燥段階を行う。加熱速度は、毎分約１℃とする
ことができる。次いで、混合物は、約９日間、定常凍結条件で置いておく。次いで、１時
間あたり約６．８℃の速度で、少なくとも１０時間にわたって、混合物を約３０℃まで加
熱する（一次乾燥から二次乾燥への移行段階、すなわち「立ち上げ段階」）。次いで、混
合物を、定常二次乾燥条件で約６時間置いておく。次いで、混合物を毎分約１℃の速度で
約２０℃にまで冷却してから、ヘッドスペースガス（すなわち、アルゴンまたは窒素など
の不活性ガス）を添加して、凍結乾燥容器内の真空を解放する。その後、製品を、５℃で
荷下ろし／貯蔵する。

【0198】

一次乾燥ステップ、立ち上げ段階および二次乾燥ステップは全て、混合物を約５０μｂ
ａｒの真空下に置くことで実施される。この圧力を一次乾燥段階で導入し、その後貯蔵／
荷下ろし段階まで維持してもよい。

【0199】

リン酸ナトリウムなどの緩衝剤を使用すると、凍結中にｐＨが低ｐＨに移行することが
知られており、したがって、凍結濃縮物のガラス転移温度が低いであろうことから、本製
剤を崩壊させずに凍結乾燥することは困難であると予想されていた。そのため、本発明は
、張度調節剤と凍結乾燥保護剤とを組み合わせたものを含む。マンニトールは、凍結乾燥
で最も広く使用され、文書化されている増量剤の１つであるが、いくつかの熱的問題およ
び結晶化の併発が報告されており、これは潜在的に生産および製品の安定性に影響を与え
る可能性がある。このように、マンニトール単独での使用は、通常、凍結乾燥に有利であ
るとは考えられず、いくつかの問題を生じさせることが知られている。

【0200】

本発明の緩衝剤と凍結乾燥保護剤との組み合わせは、凍結乾燥ケーキの崩壊を経ずに凍
結乾燥することが困難であったため、調整された凍結乾燥サイクルが必要であった。凍結
乾燥サイクルは、低い氷温を達成するために十分に低い真空および棚温度を有し、凍結乾
燥ケーキのこのメルトバック／崩壊を防ぐように選択した。凍結乾燥ケーキの崩壊は、凍
結乾燥プロセスの乾燥ステップ中にＥＭＩ－１３７が大きな構造体／凝集体を形成するの
を防ぐために、避けなければならない（これはｐＨ６．８未満で起こることが判明してお
り、完全に可逆的ではない）。

【0201】

いくつかの初期製剤試験の後、および上記を考慮して、さらなる試験のために以下の変
数を選択した：
・緩衝液：リン酸ナトリウムまたはトリスＨＣｌ（２５、４０および５５ｍＭ）；
・凍結乾燥保護剤：スクロースまたはマンニトール。

【0202】

（凍結乾燥製剤の例）
表４Ａ～４Ｆに示すように、４つの変数と混合レベルデザインとを組み合わせた要因計
画を使用して、製剤候補を調査した。デザインは、４つの変数（試料１～８）、４つの中
心点（試料１０～１３）についての画分的に２つのレベルデザイン、ならびに医薬品有効
成分（ＡＰＩ）の３つのレベルと、緩衝剤のタイプおよび凍結乾燥保護剤のタイプのカテ
ゴリー変数の２つのレベルとについての混合レベルデザイン（試料１４～２１）から構成
した。さらに、様々な参照試料を含めた（試料２２～２４）。追加試料２つ（試料２５お
よび２６）も調査した。試料２５は、１ｍＬの水中で凍結乾燥する前の溶液の組成物を指
し、試料２６は、前の試料の結果に基づいて調製したさらなる典型的な製剤を指している
。

【0203】

【表4A】

【0204】

【表4B】

【0205】

【表4C】

【0206】

【表4D】

【0207】

【表4E】

【0208】

【表4F】

【0209】

上記表４Ａ～４Ｆの（１）、（２）、（３）および（４）の参照は、以下の通りである
：
（１）０．２５ｍｇ／ｍＬ無水ＮａＨ_２ＰＯ_４＋３．２５ｍｇ／ｍＬ無水Ｎａ_２ＨＰＯ_４

（２）０．５６ｍｇ／ｍＬ無水ＮａＨ_２ＰＯ_４＋７．１４ｍｇ／ｍＬ無水Ｎａ_２ＨＰＯ_４

（３）０．４１ｍｇ／ｍＬ無水ＮａＨ_２ＰＯ_４＋５．１９ｍｇ／ｍＬ無水Ｎａ_２ＨＰＯ_４

（４）０．５０８７７ｍｇ／ｍＬ無水ＮａＨ_２ＰＯ_４＋６．４９４６７ｍｇ／ｍＬ無水Ｎ
ａ_２ＨＰＯ_４

【0210】

使用した無水および水和リン酸ナトリウムの量を、下記の表５に示す。

【表5】

【0211】

製剤に使用したモル質量は、以下の通りであった：
・リン酸二水素ナトリウム（無水物）＝１１９．９８ｇ／ｍｏｌ
・リン酸水素二ナトリウム（無水物）＝１４１．９６ｇ／ｍｏｌ
・トリスＨＣｌ＝１２１．１４ｇ／ｍｏｌ
・マンニトール＝１８２．１７ｇ／ｍｏｌ
・スクロース＝３４２．２９ｇ／ｍｏｌ
・ＥＭＩ－１３７＝３，６５０．３ｇ／ｍｏｌ

【0212】

上記から、リン酸ナトリウム緩衝液の範囲＝凍結乾燥前に４．２６～１８．２６％ｗ／
ｗ、凍結乾燥後に９．７８～３５．２２％ｗ／ｗ、それに対してトリスＨＣＬ緩衝液の範
囲＝凍結乾燥前に３．２７～１２．６３％ｗ／ｗ、凍結乾燥後に３．２７～１２．６３％
ｗ／ｗであることがわかる。

【0213】

製剤に使用した材料を、下記の表６に示す。

【表6】

【0214】

スクリーニング試験に続いて、４週間の予備安定性試験を２５℃および４０℃で実施し
た。一連の実験を、選択した緩衝剤と凍結乾燥保護剤の両方のスクリーニングを達成し、
生産に関わるＡＰＩ濃度（標的４．８ｍｇ／ｍｌ）付近での頑健性を試験するようにデザ
インした。目標濃度±１０％の範囲で試験を行った。このデザインは、ＥＭＩ－１３７、
緩衝剤および凍結乾燥保護剤間の潜在的な相互作用を明らかにするものでもある。全ての
試料を等張にしたため、緩衝剤濃度および凍結乾燥保護剤濃度は共変量であった。試験パ
ラメータを表７に示す。凍結乾燥前のバルク溶液の工程内試験に加えて、潜在的な不安定
性が凍結または乾燥のプロセスに起因するかどうかを明らかにするために、凍結ステップ
からの試料も試験に含めた。

【0215】

【表7】

【0216】

（凍結乾燥製剤の結果）
２～８℃で１０２ヶ月、３０℃で６１ヶ月および４０℃で６ヶ月の安定性データを、そ
れぞれ表８Ａ～８Ｃ、９Ａ～９Ｃ、および１０に示す（以下のキーワード／略語を使用す
る：Ａｍｂ＝周囲湿度、調整なし；ＮＭＴ＝以下；ＮＤ＝不検出；－－－：不実施；^＊２
４ヶ月試料採取時点は、夏季休暇のため延期；^＊＊追加のサンプリング時点）。

【0217】

【表8A】

【0218】

【表8B】

【0219】

【表8C】

【0220】

【表9A】

【0221】

【表9B】

【0222】

【表9C】

【0223】

【表10】

【0224】

試験パラメータは、上記の通りである（表７）。純度は、６５０ｎｍでのＵＶ／可視検
出を備えたＨＰＬＣにより試験し、％面積単位で表した。凝集は、光子相関分光法（ＰＣ
Ｓ）によって測定された散乱強度として表した。凍結乾燥後の復元および外観の評価では
、凍結乾燥ケーキの様々な特性を記述するために開発された評価システムに従った。

【0225】

（凍結乾燥後の外観）
一般的に、マンニトールの良好な増量特性は、全てのマンニトール含有製剤に非常に良
好な構造を与えた。マンニトール－リン酸塩含有ケーキは、マンニトール－トリス－ＨＣ
ｌ製剤とは対照的に、バイアル壁に不均一な青／白っぽい色を呈しているように見えた。
原薬は濃い青色をしているため、これらの色のグラデーションが非常に顕著になった。不
均一な外観は、部分的にはもともとランダムな凍結の性質に、部分的には製剤の特性に起
因するものと予想された。水で復元すると、製品は均一溶液となった。その他の分析結果
は、初期および予備安定期間の両方で、不均一な外観が純粋に表面的な問題であると考え
られることを示した。トリスＨＣｌと組み合わせたスクロースは、凍結乾燥中に様々な程
度で崩壊／溶融する傾向があった。バッチの５０％で、凍結乾燥ケーキに明らかな崩壊が
なかったように、バイアル間でかなりのばらつきが見られた。４０℃で貯蔵すると、プラ
グの部分的な崩壊は、徐々に材料の完全な崩壊へと発展し、７日後にはすでに観察されて
いた。これは、崩壊した材料の水分濃度が上昇したためと考えられる。貯蔵中に見られた
大きな崩壊は、純度、復元および凝集体の形成傾向に悪影響を及ぼした。

【0226】

（凍結乾燥後の復元）
凍結乾燥保護剤を含む緩衝製剤は全て、数秒間非常に穏やかにかき混ぜることで容易に
復元された。結果は、４週間の貯蔵（２５℃および４０℃）後、崩壊のない試料および中
程度に崩壊したプラグを有する試料については、変化しなかった。大きく崩壊した凍結乾
燥プラグは、復元するのが非常に困難であった。これらの製品は純度も低く、凝集体を含
んでいた。凍結乾燥保護剤のない製剤（試料２２～２４）は、復元するためにより多く混
合するが必要であったが、それでも許容範囲内と見なされた。

【0227】

（ｐＨ）
リン酸ナトリウム緩衝製剤では、ｐＨは凍結乾燥中に安定していたが、４０℃での４週
間の貯蔵中に低下した。トリスＨＣｌ緩衝製剤では凍結乾燥中にｐＨが低下したが、４０
℃での貯蔵中はほとんどの場合より安定していた。ｐＨの結果は解釈が難しく、ケモメト
リックス分析では明確な理解が得られなかった。マンニトールまたはスクロースに起因す
る傾向は見られなかった。しかし、リン酸緩衝剤の濃度を上げると、貯蔵中のｐＨ低下が
緩和されることは明らかであった。緩衝液濃度が低い場合、ＥＭＩ－１３７濃度が高くな
ると、ｐＨ低下は激しくなる。トリスＨＣｌ製剤は、ＥＭＩ－１３７原薬濃度の増加に対
してさらに敏感であった。このことは、試験範囲上限の緩衝液濃度を選択する必要がある
ことを示している。

【0228】

（凝集体（ＰＣＳ））
各製剤を、凍結乾燥の前後、および４週間の予備安定期間の終了時に、大きな構造体／
凝集体の存在についてＰＣＳで試験した。中心点製剤（試料１０～１３）についても、１
週間後と２週間後に試験を行った。約２０ｋｓ／秒未満の値をバックグラウンドとみなし
、凝集体とは判定しなかった。凍結乾燥前のバルク溶液では、いずれも凝集体は検出され
なかった。凍結乾燥後、全ての凍結乾燥保護剤含有製剤に大きな構造体／凝集体はないと
判定した。４０℃で４週間貯蔵した後でも、大きく崩壊した試料（試料１７）およびＥＭ
Ｉ－１３７を水中に含む非緩衝試料２４を除いて、全ての試料に凝集体４は含まれていな
かった。後者の製剤は、ｐＨが４．２であった。低ｐＨでの凝集は、以前の初期の所見と
一致していた。しかし、凍結乾燥保護剤（スクロースまたはマンニトール）を含まないリ
ン酸緩衝剤製剤は、凍結乾燥後に凝集体を含んでいた（試料２３）。復元された試料の分
析では、約１００ｎｍの大きな構造体の存在が示された。凍結後に取り出された試料には
凝集体は見られなかったため、凝集体は、凍結ステップ中ではなく、乾燥プロセス中に形
成されたものである。リン酸ナトリウム緩衝液は、リン酸塩の溶解度の違いおよび結晶化
により、凍結中にｐＨ勾配を形成し、ｐＨを低い値に移行することが知られている。３．
５という低いｐＨが報告されている。このｐＨでは、ＥＭＩ－１３７溶液中に凝集体が形
成されることになる。凍結していても、凍結乾燥中にこのｐＨで長時間放置すると、凝集
体が形成される可能性がある。マンニトールおよびスクロースがこれを防ぐと考えられた
。（トリス－ＨＣｌ製剤では、凍結乾燥保護剤は必要なかった。トリスＨＣｌは、凍結中
にｐＨを高ｐＨ（＞９）に移行させる）。著しいメルトバック／崩壊は製剤の凝集レベル
に影響を与えるため、避けるべきであると結論づけられた。低ｐＨでは凝集体が形成され
ることが確認された。凍結乾燥中にリン酸緩衝液を成分として使用したとき、凍結乾燥プ
ロセスの乾燥ステップ中にＥＭＩ－１３７が大きな構造／凝集体を形成するのを防ぐため
に、凍結乾燥保護剤が必要であった。

【0229】

（示差走査熱量測定（ＤＳＣ））
製剤設計の中心点を表す製剤を、凍結濃縮試料としてＤＳＣで分析した。約２０μｌの
試料を密閉アルミニウム製るつぼに入れ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｄｉａｍｏｎｄ
ＤＳＣ装置を使用して分析した。試料を５℃／分で－８０℃に冷却し、－８０℃で１０分
間置いた後、窒素雰囲気下で５℃／分で２４℃に加熱した。全ての計算は、加熱時に収集
したデータに基づいて行った。

【0230】

（マンニトール製剤）
トリスＨＣｌ－マンニトール製剤のサーモグラムは複雑であり、３つの異なるガラス転
移と２つの結晶化ピークを示した。－６０℃未満でガラス転移が１回発生したにもかかわ
らず、凍結乾燥ケーキの視覚的な崩壊は観察されなかった。これは、結晶化したマンニト
ールの増量特性によるものと思われる。リン酸塩－マンニトール製剤のサーモグラムは、
２つのガラス転移と１つの結晶化ピークを示した。ガラス転移の１つは－５０℃～－６０
℃の間に発生したが、これは通常の凍結乾燥機の実用的な動作温度よりも著しく低い温度
であった。もう１つのガラス転移は－４１℃付近で発生したが、これは凍結乾燥サイクル
を設計する際の動作限界に近い温度である。凍結乾燥ケーキのわずかな収縮を除いて、リ
ン酸塩－マンニトール製剤の巨視的なメルトバック／崩壊はなかった。マンニトールは部
分的に結晶化しており、マンニトールの結晶化部分は凍結乾燥品に機械的安定性を与える
のに十分であると予想された。製剤の加熱時に、マンニトールのＴｇ’（－３３℃～－２
７℃）をわずかに上回って再結晶が起こり得るため、－２７．６℃で観察された発熱結晶
化ピーク（Ｔ結晶化開始）は、マンニトールの可能性のある失透温度に対応している。

【0231】

（スクロース製剤）
スクロース含有製剤のサーモグラムは、－５０℃をはるかに下回るガラス転移と、約－
３５℃～－３７℃のガラス転移とそれぞれ一致する２つの熱事象を示した。結晶化または
共晶融解ピークは、どのスクロース含有製剤でも観察されず、スクロースの含有量と一致
していた。しかし、非常に小さな結晶化反応からの熱流は、水の吸熱溶融の低温側からの
はるかに高い熱流と重なる場合、見分けがつかないであろう。著しい視覚的崩壊は、トリ
スＨＣｌ－スクロース含有バイアルのいくつかで見られたが、リン酸塩－スクロース含有
製剤では見られなかった。ＤＳＣデータは、リン酸塩－スクロース含有製剤（試料１３）
に有利に解釈できたが、リン酸塩－スクロース製剤で類似の問題が発生することが予想さ
れるかどうかを判断するには、わずか１２本のバイアルのバッチサイズは小さすぎると結
論づけられた。

【0232】

（近赤外分析（ＮＩＲ））
マンニトールは、冷却中および再加熱中の両方において、凍結水溶液から結晶化する傾
向が強いことがよく知られており、また、凍結乾燥プロセスで、部分的に非晶質で部分的
に結晶化した材料を生成する可能性があるため、凍結乾燥後も結晶化し続けることが観察
されている。凍結乾燥中の結晶化は、異なる無水多形（α、β、δ）およびそれらの混合
物をもたらすことができ、これは、貯蔵中の多形転移の余地を残す。

【0233】

主成分分析（ＰＣＡ）と組み合わせた予備的ＮＩＲ試験では、バイアル間の構造的な差
異が存在し、これが様々な程度の結晶化に起因していることが示された。

【0234】

（ＨＰＬＣ純度）
ＨＰＬＣ純度プロファイルから、純粋なＥＭＩ－１３７と比較して、リン酸塩およびト
リス－ＨＣｌの両方の製剤の純度プロファイルが非常に類似しており、分解パターンも類
似していることが示された。また、スクロースおよびマンニトール含有製剤の純度プロフ
ァイルも類似していた。いくつかのピーク間には、いくつかの小さな比率の違いが見られ
た。ＥＭＩ－１３７原薬と比較したとき、いずれの製剤においても新たなピークは見られ
なかった。緩衝液濃度は、影響を与えないようであった。しかし、視覚的外観分析中に、
一部のバイアルの外観が完全であったのに対し、他のバイアルでは凍結乾燥ケーキが著し
く崩壊していたように、トリス－ＨＣｌと組み合わせたスクロースは、崩壊したバイアル
に関して、バイアル間のばらつきを生じさせることが観察された。トリスＨＣｌとリン酸
ナトリウムはどちらもＴｇ’が低い物質であるため、リン酸塩スクロース含有製剤の可能
性のある類似の問題を明らかにするには、１２本のバイアルのバッチサイズは小さすぎる
と判断された。

【0235】

（ケモメトリックス分析の概要）
ケモメトリックスモデリングは、様々な凍結乾燥製剤に応じたＨＰＬＣ純度の、４０℃
で最大４週間にわたる変化、分解した凍結乾燥バイアルと分解していない凍結乾燥バイア
ルにおける有意な変化を識別するためのＮＩＲスペクトルの化学変化、およびＰＣＳで測
定された凝集体の変化に焦点を当てた。ケモメトリックスモデリングにより、トリス－Ｈ
Ｃｌを含有する全ての製剤が、リン酸緩衝製剤と比較してより分解することが示されたが
、これはＨＰＬＣ純度データの視覚的比較からは容易には検出できなかった。ケモメトリ
ックス分析の応答曲面は、トリスＨＣｌ濃度の増加が分解と化学的相互作用との増加につ
ながることを示している。一般的に、トリスＨＣｌ含有製剤は、リン酸塩よりも化学的分
解に関して予測しにくいと結論づけられた。これは、試料１０～１２（スクリーニング試
験の中心点を表す）から得られたＮＩＲスペクトルの主成分分析（ＰＣＡ）、およびＮＩ
ＲとＨＰＬＣ純度との相関によって支持された。

【0236】

リン酸ナトリウムを含有する製剤を用いて作成されたケモメトリックスモデルは、正確
で信頼性の高いものであった。スクロースとの組み合わせでは、リン酸緩衝剤はほとんど
分解が起こらず、試験した製剤空間内では化学的に非常に安定していた。しかし、凍結乾
燥中の崩壊が潜在的な問題にならないことを確認するためには、より多くの試験が必要で
あった。マンニトールと組み合わせたリン酸ナトリウムは、分析された全てのパラメータ
から判断して、適切な製剤を提供すると結論づけられた。

【0237】

（頑健性／デザインスペース）
ＨＰＬＣトレースでは、緩衝液濃度は分解プロファイルに重要な影響を与えないと思わ
れることが示されたが、ケモメトリックス分析では、マンニトールを含む製剤の場合、リ
ン酸塩濃度を上げることで、より化学的に安定した製品が得られると期待できることが示
された。応答曲面は、緩衝液濃度が４０ｍＭを超えると特に安定な領域を示し、分解はＥ
ＭＩ－１３７濃度の影響をあまり受けなかった。ＥＭＩ－１３７の目標濃度付近±１０％
のデザインスペースが試験された。これは、原薬の含有量の通常の仕様範囲をカバーして
いる。この範囲内でのＥＭＩ－１３７濃度の変動は、より高い緩衝液濃度では純度にほと
んど影響を与えず、製造中の製剤に十分な頑健性を与えることがわかった。ｐＨ変化の応
答曲面からは，リン酸ナトリウム緩衝液濃度を上げることで、貯蔵中のｐＨ変化が緩和す
ることが示された。また、緩衝液濃度が低すぎると、ＥＭＩ－１３７濃度の変化に対して
製剤が頑健にならないことも確認された。緩衝液濃度が４０ｍＭを超えると、ＥＭＩ－１
３７濃度が目標濃度（４．８ｍｇ／ｍｌ）から±１０％変動した場合、ｐＨ変化は０．２
ｐＨ単位未満であった。５０ｍＭを超えると、貯蔵中の予測ｐＨ変化は小さく、ＥＭＩ
－１３７濃度と緩衝液濃度の両方の変動に対して安定しており、製造中の製剤に良好な頑
健性を与えた。多変量解析では、４．３～５．３ｍｇ／ｍｌの間で変動する原薬濃度で、
医薬品の品質に影響を与えることなく、緩衝液濃度を４０～５５ｍＭの間で変動させるこ
とが可能であると示された。

【0238】

（ｃＭｅｔ受容体親和性ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験）
試料１１を、ｃ－Ｍｅｔ受容体に対する親和性について試験し、純粋なＥＭＩ－１３７
原薬と同等の結合データを示した。マンニトール－４０ｍＭリン酸塩製剤は、ペプチドの
標的受容体への結合に悪影響を及ぼさないと結論づけられた。

【0239】

（凍結乾燥製剤の結果の検討）
上の表に示すように、ＥＭＩ－１３７は、高温下でも長期間（１０２ヶ月）にわたって
安定しており、貯蔵寿命が長くなっている。測定期間にわたって製品の分解傾向が見られ
ないことも注目に値し、これは優れた安定性の証拠である。測定期間中に関連物質（すな
わち、不純物）が実質的に形成されていないこと、つまり、これらの形成傾向がないこと
も驚くべきことである。さらに、復元すると、製剤は静脈内投与に適したｐＨ（約ｐＨ７
．５）を有し、凝集することなく可溶化する。さらに、乾燥した凍結乾燥固体は、不均一
な青色の外観を保持している。復元した製剤は、復元後２４時間まで安定しており、関連
物質を実質的に含まないことも注目に値する。したがって、ＥＭＩ－１３７製剤は、乾燥
（凍結乾燥）および復元形態の両方で非常に安定していることが示された。

【0240】

分析結果およびケモメトリックス分析に基づいて、下記の結論が導き出された。

【0241】

中性ｐＨを維持し、凝集を避けるためには、製剤の調製時および凍結乾燥時に緩衝剤を
添加する必要がある。全ての結果のケモメトリックス分析に基づいて、リン酸ナトリウム
緩衝剤は、トリスＨＣｌ製剤よりも頑健であると判断された。リン酸緩衝剤の最小濃度は
４０ｍＭである必要がある。リン酸緩衝剤を凍結乾燥するためには、乾燥プロセス中の凝
集体形成を防止するために、凍結乾燥保護剤が必要であった。マンニトールは、良好な凍
結乾燥保護剤活性を有することが示された。大きく崩壊した凍結乾燥ケーキは、復元が難
しく、純度が低く、凝集体を形成する傾向があった。これは、中程度ではあるが明らかに
メルトバック／崩壊が見られるバイアルでは見られなかった。リン酸ナトリウム－スクロ
ース含有製剤は、化学的に最も頑健な製剤と考えられていたが、凍結乾燥の観点から見る
と、それほど頑健ではなかった可能性がある。凍結乾燥したリン酸ナトリウム－マンニト
ール製剤は、外観が不均一であり、凍結乾燥ケーキに色のグラデーションが現れるため、
トリスＨＣｌ－マンニトール製剤よりも「薬理学的に洗練されて」はなかった。これは凍
結段階に起因するものと予想され、製品は復元時に均一溶液を形成したため、許容範囲内
であると結論づけられた。トリスＨＣｌ含有製剤は一般的に予測データが少なく、ケモメ
トリックス分析に基づいて、これらの製剤は潜在的にリスクの高い（それでも有効ではあ
るが）選択であると考えられた。本試験の全体的な結論は、リン酸ナトリウム－マンニト
ール含有製剤は、利用可能な限られた予備安定性データ、分析データのケモメトリックス
分析、および頑健性の考慮に基づいて、リスク、予測可能性および受容性の十分なバラン
スを提供すると考えられるが、トリスＨＣｌおよびスクロースも、独立して代替品として
使用される可能性があるというものであった。

【0242】

（要約）
本発明は、ＡＰＩの十分な安定性を得るためには、凍結乾燥製剤が必要であることを教
示している。復元後の医薬品は、等張溶液であり、静脈内投与に適した生理的ｐＨを有す
ることが必要である。水中のＥＭＩ－１３７はｐＨが４．６であり、大きな構造体または
凝集体の形成が顕著に見られる。この凝集は、溶液のｐＨを上げても一部しか可逆的では
ないため、静脈内投与には不向きである。そのため、ｐＨは６．８より大きく９未満（ま
たはそれより低い可能性がある）が有利であり、その理由はこのｐＨ範囲では凝集体の形
成が観察されないためである。このｐＨ範囲は常に維持する必要があり、バルク医薬品溶
液の製造時にも適用する必要がある。したがって、ＥＭＩ－１３７溶液のｐＨを許容可能
な範囲内に維持するために、凍結乾燥の前に緩衝剤を溶液に含めることが有益である。ま
た、凍結乾燥中にＥＭＩ－１３７が分解しないようにするための凍結乾燥保護剤と、復元
された製剤が等張および／または静脈内投与に適しているようにするための張度調節剤（
これは、凍結乾燥保護剤と同じ材料であり得る）とを含めることも有益である。

【0243】

上記のような緩衝剤および凍結乾燥保護剤／張度調節剤を使用すると、安定で、復元時
に静脈内投与に適したｐＨおよび張度である均一固体が得られる。さらに、記載されてい
る製剤は、凍結乾燥中に十分なｐＨを保持し、凝集が起こるのを防ぎ、ＥＭＩ－１３７の
ジスルフィド架橋を破壊させることはない。さらに、この製剤は、顕著な分解を伴わずに
長期間室温で保存可能であり、復元時および復元後も安定したままである。

【0244】

上述のように、復元時にＥＭＩ－１３７溶液のｐＨを許容可能な範囲内に維持するため
には、凍結乾燥の前に緩衝剤を含めることが必要である。

【0245】

本発明の記載された実施形態に対する様々な修正および変形は、本発明の範囲および趣
旨から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明は、特定の実施形態に関連
して記載してきたが、クレームされる発明は、そのような特定の実施形態に不当に限定さ
れるべきではないことを理解されたい。実際、当業者にとって自明な本発明を実施するた
めの記載されたモードの様々な修正は、本発明によってカバーされることが意図されてい
る。

【0246】

（略語）
従来の１文字または３文字のアミノ酸の略語が使用されている。
Ａｃｍ：アセトアミドメチル
ＡＣＮ（またはＭｅＣＮ）：アセトニトリル
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：Ｏ－ベンゾトリアゾール－１－イル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロ
ニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＰｙＵ：Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチレンウロ
ニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＮＨＳ：Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド
ＮＭＭ：Ｎ－メチルモルホリン
ＮＭＰ：１－メチル－２－ピロリジノン
Ｐｂｆ：２，２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ｔＢｕ：ｔ－ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：トリチル
トリスＨＣｌ：２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－１，３－プロパンジオール塩酸
塩

【0247】

（配列表フリーテキスト）
配列番号１
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ
－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６

Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである。

１７量体ｃＭＥＴ結合ペプチド

配列番号２
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３
－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ
^６

Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである。

１８量体ｃＭＥＴ結合ペプチド

配列番号３
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－
Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－
Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ

Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである。

２２量体ｃＭＥＴ結合ペプチド。

配列番号４
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ

ｃＭＥＴ結合ペプチドの一部であるテトラペプチド配列。

配列番号５
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ

ｃＭＥＴ結合ペプチドの一部であるテトラペプチド配列。

配列番号６
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ

ｃＭＥＴ結合ペプチドの一部である５ペプチド配列。

配列番号７
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－
Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－
Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ

２６量体ｃＭＥＴ結合ペプチド

配列番号８
Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－
Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－
Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ

２６量体のスクランブリングされたｃＭＥＴ結合ペプチド（陰性対照）。

【図1】

【配列表】

2024045106000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-01-17

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）と；
（ｉｉ）緩衝剤と；
（ｉｉｉ）凍結乾燥保護剤と
を含む凍結乾燥製剤であって、前記ＡＰＩが、哺乳動物の身体を光学的にイメージングするのに適した、少なくとも１種のｃＭｅｔ結合ペプチドを含むイメージング剤である、凍結乾燥製剤。

【手続補正書】

【提出日】2024-01-30

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）と；
（ｉｉ）緩衝剤と；
（ｉｉｉ）凍結乾燥保護剤と
を含む凍結乾燥製剤であって、前記ＡＰＩが、哺乳動物の身体を光学的にイメージングするのに適した、少なくとも１種のｃＭｅｔ結合ペプチドを含むイメージング剤であり、前記イメージング剤が式Ｉの化合物を含み：

【化1】

（式中、
Ｚ^１は、ｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、ＨまたはＭ^ＩＧである；
Ｚ^２は、ｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＮＨ_２、ＯＢ^ｃ（Ｂ^ｃは生体適合性カチオンである）またはＭ^ＩＧである；
ｃＭＢＰは、１７～３０個のアミノ酸のｃＭｅｔ結合環状ペプチドであり、下記のアミノ酸配列（配列番号１）を含む：
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである；
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であって、残基ａとｂと、ならびに残基ｃとｄとが環化して２つの別個のジスルフィド結合を形成している）；
Ｍ^ＩＧは代謝阻害基であって、前記ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害または抑制する生体適合性基である；ここで、Ｎ末端のＭ ^ＩＧ は、アセチル、ベンジルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、または－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ ^Ｇ から選択され；Ｒ ^Ｇ は、Ｃ _１－６ アルキル、Ｃ _３－１０ アリール基、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックから選択され；Ｃ末端のＭ ^ＩＧ はカルボキサミド、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコールまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックから選択され；Ｌは、式－（Ａ）ｍ－の合成リンカー基である
（各Ａは、独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖または単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである；
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキルまたはＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択される；
ｍは、値１～２０の整数である）；
ｎは、値０または１の整数である；
ＩＭは、紫色～近赤外波長（４００～１，２００ｎｍ）の光を使用して哺乳動物の身体をイメージングするのに適した光学レポーターイメージング部位である）；
ＡＰＩを約４～約１２重量％、緩衝剤を約３～約３５重量％、凍結乾燥保護剤を約５６～約９１重量％含み、ここで、前記緩衝剤が、リン酸緩衝剤およびアルカノールアミン緩衝剤のうちの少なくとも１つであり、前記凍結乾燥保護剤が、スクロースおよびマンニトールのうちの少なくとも１つである；復元したときに、約ｐＨ６．８～約ｐＨ９の間のｐＨを有する、凍結乾燥製剤。

【請求項2】

配列番号１に加えて、前記ｃＭＢＰがさらに、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかの４個のアミノ酸残基内に、ＡｓｐもしくはＧｌｕ残基を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭがアミン基で官能化されており、このアミン基が前記ＡｓｐもしくはＧｌｕ残基のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド結合を与えている、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項3】

配列番号１に加えて、前記ｃＭＢＰが、Ｃ－またはＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかの４個のアミノ酸残基内に、Ｌｙｓ残基を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭがカルボキシル基で官能化されており、このカルボキシル基が前記Ｌｙｓ残基のε－アミン側鎖にコンジュゲートしてアミド結合を与えている、請求項１または２に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項4】

ｃＭＢＰが、下記の配列番号２または配列番号３のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤：
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６（配列番号２）；
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（配列番号３）。

【請求項5】

Ｘａａ^３がＡｒｇである、請求項１～４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項6】

配列番号１、配列番号２または配列番号３に加えて、ｃＭＢＰがさらに、そのＮ－またはＣ－末端のいずれかに、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（配列番号４）、－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列番号５）および－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ（配列番号６）から選択されるリンカーペプチドを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項7】

ｃＭＢＰが、下記のアミノ酸配列（配列番号７）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ。

【請求項8】

Ｚ^１およびＺ^２の両方が、独立してＭ^ＩＧである、請求項１～７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項9】

Ｚ^１がアセチルであり、Ｚ^２が第一級アミドである、請求項１～８のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項10】

ｎが０である、請求項１～９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項11】

ＩＭが、６００～１，０００ｎｍの範囲の最大吸光度を有する染料である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項12】

ＩＭがシアニン染料である、請求項１１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項13】

前記シアニン染料が式ＩＩＩを有する、請求項１２に記載の凍結乾燥製剤：

【化2】

（式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、ＨまたはＳＯ_３Ｍ^１であり、Ｒ^１およびＲ^２のうちの少なくとも１つはＳＯ_３Ｍ^１（Ｍ^１はＨまたはＢ^ｃである）である；
Ｒ^３およびＲ^４は、独立して、Ｃ_１－４アルキルまたはＣ_１－６カルボキシアルキルである；
Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、独立してＲ^ａ基である（Ｒ^ａは、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_１－６カルボキシアルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｋＳＯ_３Ｍ^１（ｋは、値３または４の整数である）である）；
ただし、前記シアニン染料は、前記Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^ａ基に合計１～４個のＳＯ_３Ｍ^１置換基を有することを条件とする）。

【請求項14】

復元したときに、約ｐＨ６．８～約ｐＨ８．２の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐＨ８の間のｐＨを有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項15】

復元したときに、前記緩衝剤が、約ｐＨ６．８～約ｐＨ８．２の間、任意選択で約ｐＨ６．８～約ｐＨ８の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐＨ８の間のｐＨを有する溶液を提供する量で存在する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項16】

ＡＰＩ：緩衝剤のモル比が、ＡＰＩ約１モル：緩衝剤約１７～約４７モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約２７～約４７モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３０～約４７モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３４～約４７モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約２７～約３８モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３０～約３８モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：緩衝剤約３４～約３８モルである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項17】

ＡＰＩ：凍結乾燥保護剤のモル比が、ＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約２１６モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１６３モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１５４モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１４５モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１４１モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１３２モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１０５～約１２９モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約２１６モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１６３モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１５４モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１４５モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１４１モル、任意選択でＡＰＩ約１モル：凍結乾燥保護剤約１２９～約１３２モルである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項18】

前記製剤が、ＡＰＩを約４～約１２重量％、任意選択でＡＰＩを約８～約１０重量％、任意選択でＡＰＩを約９重量％含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項19】

前記製剤が、任意選択で緩衝剤を約７～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約１２～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約１５～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約１８～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約２５～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約３２～約３５重量％、任意選択で緩衝剤を約３２％含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項20】

前記製剤が、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約８２重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７７重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７５重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約７２重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約６６重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５６～約５８重量％、任意選択で凍結乾燥保護剤を約５８重量％を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項21】

前記リン酸緩衝剤がリン酸水素およびリン酸二水素を含み、任意選択で前記リン酸緩衝剤が水和している、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項22】

前記アルカノールアミン緩衝剤がトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンである、請求項２１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項23】

前記凍結乾燥保護剤がマンニトールである、請求項１～２２のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項24】

前記製剤がさらに張度調節剤を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項25】

前記凍結乾燥保護剤が張度調節剤としても作用する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項26】

（ｉ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）と；
（ｉｉ）緩衝剤と；
（ｉｉｉ）凍結乾燥保護剤と
を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤であって、前記ＡＰＩが、哺乳動物の身体を光学的にイメージングするのに適した、少なくとも１種のｃＭｅｔ結合ペプチドを含むイメージング剤であり、前記イメージング剤が式Ｉの化合物を含み：

【化3】

（式中、
Ｚ^１は、ｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、アセチルである；
Ｚ^２は、ｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、第一級アミドである；
ｃＭＢＰは、ｃＭｅｔ結合環状ペプチドであり、下記のアミノ酸配列（配列番号７）を含む：
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であって、残基ａとｂと、ならびに残基ｃとｄとが環化して２つの別個のジスルフィド結合を形成している）；
Ｌは、式－（Ａ）ｍ－の合成リンカー基である
（各Ａは、独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖または単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである；
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキルまたはＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択される；
ｍは、値１～２０の整数である）；
ｎは、０である；
ＩＭは、シアニン染料である；
ＡＰＩを約８～約１０重量％、緩衝剤を約７～約３５重量％、凍結乾燥保護剤を約５６～約８２重量％含み、緩衝剤はリン酸緩衝剤であり、凍結乾燥保護剤はマンニトールであり、復元したときに、約ｐＨ７～約ｐＨ８の間のｐＨを有する、凍結乾燥製剤。

【請求項27】

凍結乾燥製剤の調製方法であって、
ａ）医薬品有効成分（ＡＰＩ）、緩衝剤、および凍結乾燥保護剤を凍結乾燥容器に供給する工程と；
ｂ）第１水分除去ステップを実行する工程と；
ｃ）第２水分除去ステップを実行する工程と
を含み、前記凍結乾燥を行う前に、前記凍結乾燥保護剤および前記緩衝剤を添加する方法であり、前記ＡＰＩが、哺乳動物の身体を光学的にイメージングするのに適した、少なくとも１種のｃＭｅｔ結合ペプチドを含むイメージング剤であり、前記イメージング剤が式Ｉの化合物を含み：

【化4】

（式中、
Ｚ^１は、ｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、ＨまたはＭ^ＩＧである；
Ｚ^２は、ｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＮＨ_２、ＯＢ^ｃ（Ｂ^ｃは生体適合性カチオンである）またはＭＩＧである；
ｃＭＢＰは、１７～３０個のアミノ酸のｃＭｅｔ結合環状ペプチドであり、下記のアミノ酸配列（配列番号１）を含む：
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１は、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｙｒである；
Ｘａａ^２は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである；
Ｘａａ^３は、ＴｈｒまたはＡｒｇである；
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＳｅｒである；
Ｘａａ^５は、ＳｅｒまたはＴｈｒである；
Ｘａａ^６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである；
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であって、残基ａとｂと、ならびに残基ｃとｄとが環化して２つの別個のジスルフィド結合を形成している）；
Ｍ^ＩＧは代謝阻害基であって、前記ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害または抑制する生体適合性基である；ここで、Ｎ末端のＭ ^ＩＧ は、アセチル、ベンジルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、または－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ ^Ｇ から選択され；Ｒ ^Ｇ は、Ｃ _１－６ アルキル、Ｃ _３－１０ アリール基、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックから選択され；Ｃ末端のＭ ^ＩＧ はカルボキサミド、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコールまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックから選択され；
Ｌは、式－（Ａ）ｍ－の合成リンカー基である
（各Ａは、独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖または単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである；
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキルまたはＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択される；
ｍは、値１～２０の整数である）；
ｎは、値０または１の整数である；
ＩＭは、紫色～近赤外波長（４００～１，２００ｎｍ）の光を使用して哺乳動物の身体をイメージングするのに適した光学レポーターイメージング部位である）；
前記製剤が、ＡＰＩを約４～約１２重量％、緩衝剤を約３～約３５重量％、凍結乾燥保護剤を約５６～約９１重量％含み、ここで、前記緩衝剤が、リン酸緩衝剤およびアルカノールアミン緩衝剤のうちの少なくとも１つであり、前記凍結乾燥保護剤が、スクロースおよびマンニトールのうちの少なくとも１つである；前記製剤が、復元したときに、約ｐＨ６．８～約ｐＨ９の間のｐＨを有する、方法。

【請求項28】

第１水分除去ステップを、約－３０℃以下、任意選択で約－３５℃以下、任意選択で約－３８℃以下の温度で行う、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

第２水分除去ステップを、約１０℃以上、任意選択で約１５℃以上、任意選択で約２０℃以上の温度で行う、請求項２７または２８に記載の方法。

【請求項30】

第１および第２水分除去ステップのうちの少なくとも１つを、５０μｂａｒ以下の圧力で行う、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

第１および第２水分除去ステップの両方を、５０μｂａｒ以下の圧力で行う、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記凍結乾燥製剤が、請求項１～２６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤である、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤と生体適合性担体とを、哺乳動物への投与に適した形態で含む医薬組成物。

【請求項34】

約ｐＨ６．８～約ｐＨ８．２の間、任意選択で約ｐＨ７～約ｐＨ８の間のｐＨを有する、請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項35】

請求項３３または３４に記載の医薬組成物を調製するためのキットであって、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤を無菌固体形態で含み、請求項３３または３４に記載の生体適合性担体の無菌供給物で復元させると、溶解が起こり、前記所望の医薬組成物が得られるような、キット。

【請求項36】

請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤および請求項３３または３４に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用することを含む、前記哺乳動物の身体のイメージング方法。

【請求項37】

前記イメージングがｉｎ ｖｉｖｏである、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記イメージングが光学イメージングである、請求項３６または３７に記載の方法。

【請求項39】

前記イメージングが、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を得るためのものである、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物を、前記哺乳動物の身体に前もって投与している、請求項３６～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

請求項３６～４０のいずれか一項に記載の方法であって、
（ａ）対象の組織表面を励起光で照らす工程と；
（ｂ）前記イメージング剤の励起により発生した前記イメージング剤からの蛍光を検出する工程と；
（ｃ）任意選択で、蛍光検出器によって検出した前記光をフィルタリングして蛍光成分を分離する工程と；
（ｄ）工程（ｂ）または（ｃ）の蛍光から前記対象の組織表面の画像を形成する工程と
を含む、方法。

【請求項42】

工程（ａ）の励起光が、本質的に連続波（ＣＷ）である、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

請求項３６～４０のいずれか一項に記載の方法であって、
（ａ）前記哺乳動物の身体の不均一組成を有する光散乱生体組織を、所定の経時変化する強度の光源からの光にさらして前記イメージング剤を励起させる工程であって、前記組織が前記励起光を多重散乱させる工程と；
（ｂ）前記露光に応答した前記組織からの多重散乱発光を検出する工程と；
（ｃ）プロセッサを用いて複数の値を確立することにより、前記発光から前記組織全体の蛍光特性を定量化する工程であって、前記値が、前記組織内の異なる位置における前記蛍光特性のレベルにそれぞれ対応しており、前記蛍光特性のレベルが、前記組織の不均一組成によって変化するものである工程と；
（ｄ）工程（ｃ）の値に従って前記組織の不均一組成をマッピングすることにより、前記組織の画像を生成する工程と
を含む、方法。

【請求項44】

前記光学イメージング方法が、蛍光イメージング、任意選択で蛍光内視鏡検査を含む、請求項３６～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法を補助するために使用される、請求項３６～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道がん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法を補助するために使用される、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記哺乳動物の身体のイメージングにおけるイメージング剤として使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物。

【請求項48】

薬剤として使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物。

【請求項49】

検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法において使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物。

【請求項50】

前がん症状およびがんのうちの１つもしくは複数の、任意選択で結腸直腸がん、食道がん、乳がん、前立腺がん、頭部がん、頸部がん、卵巣がん、直腸がん、膵臓がん、甲状腺がん、胃がんおよび肉腫のうちの１つもしくは複数の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法において使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物。

【請求項51】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の検出、診断、手術、病期分類、治療、治療の監視、疾患進行の監視または監視療法において使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物。

【請求項52】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得るために使用される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、または請求項３３もしくは３４に記載の医薬組成物。

【請求項53】

請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３３または３４に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用する、哺乳動物の身体のイメージング方法。

【請求項54】

請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３３または３４に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つを使用して、ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得る方法。

【請求項55】

請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３３または３４に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つの、イメージング剤としての使用。

【請求項56】

ｃＭｅｔの過剰発現部位または局在部位の画像を、任意選択でｉｎ ｖｉｖｏで得る際の、請求項１～２６のいずれか一項に記載の製剤、および請求項３３または３４に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つの使用。

【外国語明細書】