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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024045278
(43)【公開日】2024-04-02
(54)【発明の名称】グループＢアデノウイルス含有製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 35/761 20150101AFI20240326BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240326BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20240326BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20240326BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20240326BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240326BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240326BHJP
C12N 7/00 20060101ALI20240326BHJP
C12N 15/11 20060101ALI20240326BHJP
C12N 15/34 20060101ALI20240326BHJP
C12N 15/861 20060101ALI20240326BHJP
【ＦＩ】
A61K35/761
A61K9/08 ZNA
A61K47/24
A61K47/20
A61K47/18
A61K47/10
A61P35/00
C12N7/00
C12N15/11 Z
C12N15/34
C12N15/861 Z
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024007320
(22)【出願日】2024-01-22
(62)【分割の表示】P 2020538999の分割
【原出願日】2019-01-31
(31)【優先権主張番号】1801614.7
(32)【優先日】2018-01-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．プルロニック
(71)【出願人】
【識別番号】515023121
【氏名又は名称】アカミス バイオ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001656
【氏名又は名称】弁理士法人谷川国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】アルビス，サイモン
(72)【発明者】
【氏名】キールティカ，マグダレナ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】グループＢアデノウイルスに適した液体製剤を提供する。
【解決手段】ａ）複製可能なグループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルス、ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロール、ｃ）０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールなどの０．２～１％ｖ／ｖのエタノール、ｄ）緩衝液、およびｅ）任意に、アミノ酸を含み、製剤のｐＨが８．０～９．６の範囲内にある、液体製剤と、治療、特に、癌の治療におけるその使用と、を提供する。
【選択図】図８Ａ
【解決手段】ａ）複製可能なグループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルス、ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロール、ｃ）０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールなどの０．２～１％ｖ／ｖのエタノール、ｄ）緩衝液、およびｅ）任意に、アミノ酸を含み、製剤のｐＨが８．０～９．６の範囲内にある、液体製剤と、治療、特に、癌の治療におけるその使用と、を提供する。
【選択図】図８Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
グループＢアデノウイルスに適した液体製剤であって、
ａ）複製可能なグループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルスと、
ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｃ）０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールなどの０．２～１％ｖ／ｖのエタノールと、
ｄ）緩衝液と、を含み、
前記製剤のｐＨが、８．０～９．６の範囲内にあり、例えば、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５である、製剤。
ａ）複製可能なグループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルスと、
ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｃ）０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールなどの０．２～１％ｖ／ｖのエタノールと、
ｄ）緩衝液と、を含み、
前記製剤のｐＨが、８．０～９．６の範囲内にあり、例えば、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５である、製剤。
【請求項2】
前記製剤が静脈内投与用である、請求項１に記載の製剤。
【請求項3】
前記製剤がゆっくりとした注射による投与用である、請求項２に記載の製剤。
【請求項4】
前記製剤が注入による投与用である、請求項２に記載の製剤。
【請求項5】
界面活性剤、例えば、非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項6】
ポリソルベート、例えば、０．０５～０．１５％のポリソルベート２０、４０、６０、または８０などのポリソルベート２０、４０、６０、または８０をさらに含む、請求項５に記載の製剤。
【請求項7】
前記製剤が、ポリソルベート８０、例えば、０．１１５％のポリソルベート８０などの０．０５～０．１５％のポリソルベート８０を含む、請求項６に記載の製剤。
【請求項8】
メチオニン、例えば、０．０１～０．３ｍＭのメチオニン、例えば、０．２５ｍＭのメチオニンなどの０．０１～０．３ｍＭのメチオニンをさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項9】
アルギニン、例えば、１５ｍＭのアルギニンなどの５～２０ｍＭのアルギニンをさらに含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項10】
前記緩衝液が、メグルミン、グリシン（Ｇｌｙ－ＮａＣｌなど）、ＴＲＩＳおよびそれらの２つ以上の組み合わせから選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項11】
前記製剤がメグルミン緩衝液を含む、請求項１０に記載の製剤。
【請求項12】
前記製剤がＨＥＰＥＳ緩衝液を含まない、請求項１～１１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項13】
前記製剤が、
ａ）１５～２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．１～０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０と、
ｄ）０．２～０．３ｍＭのメチオニンと、
ｅ）１０～２０ｍＭのアルギニンと、
ｆ）メグルミンなどの緩衝液と、を含み、
前記製剤のｐＨが、ｐＨ８などの８．０～９．６の範囲内のｐＨである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の製剤。
ａ）１５～２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．１～０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０と、
ｄ）０．２～０．３ｍＭのメチオニンと、
ｅ）１０～２０ｍＭのアルギニンと、
ｆ）メグルミンなどの緩衝液と、を含み、
前記製剤のｐＨが、ｐＨ８などの８．０～９．６の範囲内のｐＨである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、エナデノツシレフ（ｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖ）（ＥｎＡｄ）などのグループＢアデノウイルスの製剤、製剤を製造するプロセス、および治療、特に、癌の治療での製剤の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
現在、製薬分野では、人間が使用する治療薬としてのウイルスの可能性を認識し始めたばかりである。現在までのところ、ＯＮＸＹ－１５由来のウイルス（ＯＮＹＸ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｕｎｗａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈが買収）は、限られた数の国で頭頸部癌での使用が承認されていて、Ｉｍｌｙｇｉｃ（登録商標）は黒色腫の治療に承認されている。しかし、現在臨床では数多くのウイルスが存在し、それらのウイルスの一部が人間での使用のために登録されるようになることが期待されている。
【0003】
多くのウイルス療法は、グループＢアデノウイルスなどのアデノウイルス、例えば、ＥｎＡｄに基づいている。ＥｎＡｄ（以前はＣｏｌｏＡｄ１として知られていた）は、現在上皮性癌の治療のための臨床試験が行われているキメラ腫瘍溶解性アデノウイルス（ＷＯ２００５／１１８８２５）である。これらのアデノウイルスベースの治療薬は、臨床試験および登録後の需要の両方に対応するために適切な量で、かつ適正製造基準（ＧＭＰ）に準拠した条件下で製造する必要がある。
【0004】
長期保存用のアデノウイルス製剤は当該技術分野で知られていて、例えば、ＵＳ７，８８８，０９６およびＵＳ７，３５１，４１５を参照されたい。そのような製剤は、Ａｄ５などのグループＣアデノウイルス、特に、ヒトｐ５３を発現するように操作された複製欠損Ａｄ５ウイルスを懸濁させるために使用されている。
【0005】
グループＢアデノウイルスはグループＣアデノウイルスとは異なる特性を有し、例えば、グループＢウイルスはＣＤ４６を介して細胞に感染する一方、グループＣウイルスはＣＡＲ受容体（コクサッキーウイルスおよびアデノウイルス受容体）を介して細胞に感染する。グループＢウイルスは、高速液体クロマトグラフィーで分析すると、グループＣウイルスとは異なる保持時間を有する。例えば、Ａｄ５およびＡｄ１１タイプのウイルス（ＥｎＡｄなど）の相対保持時間を示す図７を参照されたい。
【0006】
本発明者らは、先行技術の製剤をＥｎＡｄなどのグループＢアデノウイルスを懸濁するために使用するときに、アデノウイルスが、ウイルス濃度および効力の両方における著しい劣化が起こる前に、かなり短い期間の間しか４℃で維持できないことを見出した。このタイプの劣化は、製剤で発生する化学的プロセスに起因するため、化学的劣化と呼ばれる。
【0007】
物理的安定性も非常に重要であり、例えば、物理的不安定性は凝集によって顕在化し、免疫原性が高まる可能性がある。
【0008】
したがって、グループＢアデノウイルスのより長期間の貯蔵のために特別に調整された改良された製剤、例えば、４℃での貯蔵に適した製剤が必要である。これにより、アデノウイルスの効力および生存率に対する有害な影響を最小限に抑えながら、４℃で長期間保存することが可能になる。一方、これにより、製剤は、保管および、例えば、製造施設から臨床現場への輸送がより簡便かつ安価になる。
【0009】
驚くべきことに、本発明者らは、多くの成分がグループＢウイルス製剤の安定化に重要である一方、少量のエタノールが劣化を最小限に抑え、かつ感染力を維持するために重要であると考えられることを確立した。
【0010】
本開示は、特に、４℃で、ＥｎＡｄなどのグループＢウイルスを安定化させるように一緒に作用する成分の組み合わせを提供する。
【発明の概要】
【0011】
本開示は、グループＢアデノウイルス、例えば、少なくとも１つの導入遺伝子をコードするグループＢウイルスの保存に適した製剤を提供し、これについて、以下の項に要約している。
１．グループＢアデノウイルスに適した液体製剤であって、
ａ）複製可能グループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルスと、
ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、（例えば、１７～２０％ｖ／ｖ）、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｃ）０．１～１．６％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールまたは１．４％もしくは１．５％ｖ／ｖのエタノールなどの０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｄ）緩衝液と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．６の範囲内にあり、例えば、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５、例えば、８．５～９．５、特に、８．５～９．０、より具体的には、ｐＨ８．５、８．６、８．７、８．８または８．９である、製剤。
１．グループＢアデノウイルスに適した液体製剤であって、
ａ）複製可能グループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルスと、
ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、（例えば、１７～２０％ｖ／ｖ）、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｃ）０．１～１．６％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールまたは１．４％もしくは１．５％ｖ／ｖのエタノールなどの０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｄ）緩衝液と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．６の範囲内にあり、例えば、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５、例えば、８．５～９．５、特に、８．５～９．０、より具体的には、ｐＨ８．５、８．６、８．７、８．８または８．９である、製剤。
【0012】
２．ｐＨが８．０である、項１に記載の製剤。
【0013】
３．ｐＨが８．１である、項１に記載の製剤。
【0014】
４．ｐＨが８．２である、項１に記載の製剤。
【0015】
５．ｐＨが８．３である、項１に記載の製剤。
【0016】
６．ｐＨが８．４である、項１に記載の製剤。
【0017】
７．ｐＨが８．５である、項１に記載の製剤。
【0018】
８．ｐＨが８．６である、項１に記載の製剤。
【0019】
９．ｐＨが８．７である、項１に記載の製剤。
【0020】
１０．ｐＨが８．８である、項１に記載の製剤。
【0021】
１１．ｐＨが８．９である、項１に記載の製剤。
【0022】
１２．ｐＨが９である、項１に記載の製剤。
【0023】
１３．項１～１２のいずれか１つに記載の製剤であって、例えば、注射用の等張液または水などの注射用の液体で希釈後の、静脈内投与による投与用である、製剤。
【0024】
１４．製剤がゆっくりとした注射による投与用である、項１３に記載の製剤。
【0025】
１５．製剤が注入による投与用である、項１３に記載の製剤。
【0026】
１６．界面活性剤、例えば、非イオン性界面活性剤をさらに含む、項１～１５のいずれか１つに記載の製剤。
【0027】
１７．ポリソルベート、例えば、０．０５～０．１５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、４０、６０、または８０などのポリソルベート２０、４０、６０、または８０をさらに含む、項１６に記載の製剤。
【0028】
１８．製剤が、ポリソルベート８０、例えば、０．１１５％ｖ／ｖのポリソルベート８０などの０．０５～０．１５％ｖ／ｖのポリソルベート８０を含む、項１７に記載の製剤。
【0029】
１９．メチオニン、例えば、０．０１～０．２５ｍＭのメチオニン、特に、０．２５ｍＭのメチオニンなどの０．０１～０．３ｍＭのメチオニンをさらに含む、項１～１８のいずれか１つに記載の製剤。
【0030】
２０．メチオニン、例えば、０．０１～０．３ｍＭのメチオニン、例えば、０．１５ｍＭのメチオニンなどの０．０１～０．２ｍＭのメチオニンをさらに含む、項１～１８のいずれか１つに記載の製剤。
【0031】
２１．１５ｍＭのアルギニンなどの５～２０ｍＭのアルギニンをさらに含む、項１～２０のいずれか１つに記載の製剤。
【0032】
２２．アルギニン、例えば、１０ｍＭのアルギニンなどの５～１５ｍＭのアルギニンをさらに含む、項１～２０のいずれか１つに記載の製剤。
【0033】
２３．緩衝液が、メグルミン、Ｇｌｙ－ＮａＣｌ、およびＴＲＩＳから選択される、項１～２０のいずれか１つに記載の製剤。
【0034】
２４．製剤がメグルミン緩衝液を含む、項２３に記載の製剤。
【0035】
２５．製剤がＨＥＰＥＳ緩衝液を含まない、項１～２４のいずれか１つに記載の製剤。
【0036】
２６．製剤が、
ａ）１５～２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．２～０．３ｍＭのメチオニンと、
ｄ）１０～２０ｍＭのアルギニンと、
ｅ）メグルミンなどの緩衝液と、
ｆ）任意に、０．１～０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．５の範囲内にあり、例えば、ｐＨ８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０などの８．０～９．０、特に８．０のｐＨである、項１～１５のいずれか１つに記載の製剤。
ａ）１５～２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．２～０．３ｍＭのメチオニンと、
ｄ）１０～２０ｍＭのアルギニンと、
ｅ）メグルミンなどの緩衝液と、
ｆ）任意に、０．１～０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．５の範囲内にあり、例えば、ｐＨ８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０などの８．０～９．０、特に８．０のｐＨである、項１～１５のいずれか１つに記載の製剤。
【0037】
２７．製剤が、
ａ）２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１．４～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．２５ｍＭのメチオニンと、
ｄ）１５ｍＭのアルギニンと、
ｅ）メグルミンなどの緩衝液と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．５の範囲内にあり、例えば、ｐＨ８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０などの８．０～９．０、特に８．０のｐＨである、項２６に記載の製剤。
ａ）２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１．４～１．５％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．２５ｍＭのメチオニンと、
ｄ）１５ｍＭのアルギニンと、
ｅ）メグルミンなどの緩衝液と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．５の範囲内にあり、例えば、ｐＨ８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０などの８．０～９．０、特に８．０のｐＨである、項２６に記載の製剤。
【0038】
２８．製剤が、
ａ）２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．１１５％ｖ／ｖのポリソルベート８０と、
ｄ）０．１５ｍＭのメチオニンと、
ｅ）１０ｍＭのアルギニンと、
ｆ）メグルミンなどの緩衝液と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．５の範囲内にあり、例えば、ｐＨ８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０などの８．５～９．５、特に９．０のｐＨである、項１～１５のいずれか１つに記載の製剤。
ａ）２０％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｂ）１％ｖ／ｖのエタノールと、
ｃ）０．１１５％ｖ／ｖのポリソルベート８０と、
ｄ）０．１５ｍＭのメチオニンと、
ｅ）１０ｍＭのアルギニンと、
ｆ）メグルミンなどの緩衝液と、を含み、
製剤のｐＨが、８．０～９．５の範囲内にあり、例えば、ｐＨ８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０などの８．５～９．５、特に９．０のｐＨである、項１～１５のいずれか１つに記載の製剤。
【0039】
２９．グループＢアデノウイルスが、式（Ｉ）の配列を含み、
５’ＩＴＲ－Ｂ１－ＢＡ－Ｂ２－ＢＸ－ＢＢ－ＢＹ－Ｂ３－３’ＩＴＲ
式中、
Ｂ１が結合であるか、またはＥ１Ａ、Ｅ１ＢもしくはＥ１Ａ－Ｅ１Ｂを含み、
ＢＡが、－Ｅ２Ｂ－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｅ２Ａ－Ｌ４を含み、
Ｂ２が結合であるか、またはＥ３を含み、
ＢＸが結合、または制限部位、１つ以上の導入遺伝子、もしくはその両方を含むＤＮＡ配列であり、
ＢＢがＬ５を含み、
ＢＹが結合、または制限部位、１つ以上の導入遺伝子、もしくはその両方を含むＤＮＡ配列であり、
Ｂ３が結合であるか、またはＥ４を含み、
ＢＸまたはＢＹの少なくとも一方が結合ではない、項１～２８のいずれか１つに記載の製剤。
５’ＩＴＲ－Ｂ１－ＢＡ－Ｂ２－ＢＸ－ＢＢ－ＢＹ－Ｂ３－３’ＩＴＲ
式中、
Ｂ１が結合であるか、またはＥ１Ａ、Ｅ１ＢもしくはＥ１Ａ－Ｅ１Ｂを含み、
ＢＡが、－Ｅ２Ｂ－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｅ２Ａ－Ｌ４を含み、
Ｂ２が結合であるか、またはＥ３を含み、
ＢＸが結合、または制限部位、１つ以上の導入遺伝子、もしくはその両方を含むＤＮＡ配列であり、
ＢＢがＬ５を含み、
ＢＹが結合、または制限部位、１つ以上の導入遺伝子、もしくはその両方を含むＤＮＡ配列であり、
Ｂ３が結合であるか、またはＥ４を含み、
ＢＸまたはＢＹの少なくとも一方が結合ではない、項１～２８のいずれか１つに記載の製剤。
【0040】
３０．ＢＸが導入遺伝子または導入遺伝子カセットを含む、項２９に記載の製剤。
【0041】
３１．ＢＹが導入遺伝子または導入遺伝子カセットを含む、項２９または３０に記載の製剤。
【0042】
３２．ＢＹが導入遺伝子または導入遺伝子カセットを含み、ＢＸが結合である、項２９に記載の製剤。
【0043】
３３．１つ以上の導入遺伝子または導入遺伝子カセットが、内因性プロモーターなどの内因性または外因性プロモーターの制御下にある、項２９～３２のいずれか１つに記載の製剤。
【0044】
３４．導入遺伝子カセットが、Ｅ４および主要後期プロモーター、特に、主要後期プロモーターからなる群から選択される内因性プロモーターの制御下にある、項３３に記載の製剤。
【0045】
３５．導入遺伝子カセットが、独立して、
ａ）スプライスアクセプター配列（例えば、短いスプライスアクセプター配列ＣＡＧＧ、配列番号１または配列番号２）と、
ｂ）内部リボソーム進入配列または高い自己切断効率の２Ａペプチドと、
ｃ）コザック配列と、
ｄ）それらの組み合わせと、から選択される調節エレメントをさらに含む、項２９～３４のいずれか１つに記載の製剤。
ａ）スプライスアクセプター配列（例えば、短いスプライスアクセプター配列ＣＡＧＧ、配列番号１または配列番号２）と、
ｂ）内部リボソーム進入配列または高い自己切断効率の２Ａペプチドと、
ｃ）コザック配列と、
ｄ）それらの組み合わせと、から選択される調節エレメントをさらに含む、項２９～３４のいずれか１つに記載の製剤。
【0046】
３６．導入遺伝子カセットが、タンパク質コード配列の開始点にあるコザック配列を含む、項３５に記載の製剤。
【0047】
３７．導入遺伝子カセットが、高い自己切断効率の２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、Ｆ２ＡペプチドおよびＴ２Ａペプチドをコードする、項２９～３６のいずれか１つに記載の製剤。
【0048】
３８．導入遺伝子カセットが、２、３または４つのペプチドなどの複数の高い自己切断効率の２Ａペプチドをコードする、項３７に記載の製剤。
【0049】
３９．自己切断ペプチドが同一でないＤＮＡ配列によりコードされる、項３８に記載の製剤。
【0050】
４０．導入遺伝子カセットがポリアデニル化配列をさらに含む、項２９～３９のいずれか１つに記載の製剤。
【0051】
４１．導入遺伝子カセットが、リーダー配列をコードする配列をさらに含む、項２９～４０のいずれか１つに記載の製剤。
【0052】
４２．導入遺伝子カセットがＤＮＡ配列の３´末端および／またはＤＮＡ配列の５´末端に制限部位をさらに含む、項２９～４１のいずれか１つに記載の製剤。
【0053】
４３．少なくとも１つの導入遺伝子カセットがモノシストロニックｍＲＮＡをコードする、項２９～４２のいずれかに記載の製剤。
【0054】
４４．少なくとも１つの導入遺伝子カセットがポリシストロニックｍＲＮＡをコードする、項２９～４３のいずれか１つに記載の製剤。
【0055】
４５．導入遺伝子がＲＮＡｉ配列、ポリペプチド（タンパク質またはペプチドなど）をコードする、項２９～４４のいずれか１つに記載の製剤。
【0056】
４６．ポリペプチドが抗体またはその結合断片である、項４５に記載の製剤。
【0057】
４７．抗体またはその結合断片が、ＯＸ４０、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ７０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＩＬＴ－２、ＩＬＴ－３、ＩＬＴ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＢＴＬＡ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ１６０、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、例えば、ＣＤ４０およびＣＤ４０リガンドに特異的である、項４６に記載の製剤。
【0058】
４８．コードされたポリペプチドが、独立してＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２５、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、リンホトキシンα（ＬＴＡ）およびＧＭ－ＣＳＦ、例えば、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＧＦβおよびリンホトキシンα（ＬＴＡ）からなる群から選択されるサイトカインである、項４５～４７のいずれか１つに記載の製剤。
【0059】
４９．コードされたポリペプチドが、独立して、ＩＬ－８、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５およびＣＲＴＨ２、例えば、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４およびＣＸＣＲ４またはその受容体（ＩＬ－８、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、またはその受容体、より具体的には、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１またはその受容体から選択されるケモカインなど）からなる群から選択される、項２４～４４のいずれか１つに記載の製剤。
【0060】
５０．コードされたポリペプチドが、レポーター遺伝子、例えば、ヨウ化ナトリウム共輸送体、細胞内金属タンパク質、ＨＳＶ１－ｔｋ、ＧＦＰ、ルシフェラーゼまたはエストロゲン受容体、例えば、ヨウ化ナトリウム共輸送体である、項２９～４９のいずれか１つに記載の製剤。
【0061】
５１．レポーター遺伝子が蛍光タンパク質である、項５０に記載の製剤。
【0062】
５２．アデノウイルスのＥ４ｏｒｆ４領域が非機能的であり、例えば、完全に欠失、部分的に欠失または短縮されている、項１～５１のいずれか１つに記載の製剤。
【0063】
５３．アデノウイルスのＥ２Ｂ領域がキメラであり、例えば、Ｅ２Ｂ領域が、第１のアデノウイルス血清型に由来する核酸配列および第２の異なるアデノウイルス血清型に由来する核酸配列を含み、前記第１および第２の血清型は各々、アデノウイルスサブグループＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、またはＦから選択される、項１～４８のいずれか１つに記載の製剤。
【0064】
５４．アデノウイルスがキメラＥｎＡｄである、項１～５３のいずれか１つに記載の製剤。
【0065】
５５．アデノウイルスがＡｄ１１である、項１～５４のいずれか１つに記載の製剤。
【0066】
５６．グループＢアデノウイルスが複製可能である、項１～５５のいずれか１つに記載の製剤。
【0067】
５７．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグなしで、配列番号１４またはその誘導体で示される、項１～５６のいずれか１つに記載の製剤。
【0068】
５８．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号１５またはその誘導体で示される、項１～５７のいずれか１つに記載の製剤。
【0069】
５９．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号１６またはその誘導体で示される、項１～５８のいずれか１つに記載の製剤。
【0070】
６０．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号１７またはその誘導体で示される、項１～５９のいずれか１つに記載の製剤。
【0071】
６１．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号１８またはその誘導体で示される、項１～６０のいずれか１つに記載の製剤。
【0072】
６２．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号１９またはその誘導体で示される、項１～６１のいずれか１つに記載の製剤。
【0073】
６３．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２０またはその誘導体で示される、項１～６２のいずれか１つに記載の製剤。
【0074】
６４．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２１またはその誘導体で示される、項１～６３のいずれか１つに記載の製剤。
【0075】
６５．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２２またはその誘導体で示される、項１～６４のいずれか１つに記載の製剤。
【0076】
６６．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２３またはその誘導体で示される、項１～６５のいずれか１つに記載の製剤。
【0077】
６７．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２４またはその誘導体で示される、項１～６６のいずれか１つに記載の製剤。
【0078】
６８．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２５またはその誘導体で示される、項１～６７のいずれか１つに記載の製剤。
【0079】
６９．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２６またはその誘導体で示される、項１～６８のいずれか１つに記載の製剤。
【0080】
７０．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２７またはその誘導体で示される、項１～６９のいずれか１つに記載の製剤。
【0081】
７１．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２８またはその誘導体で示される、項１～７０のいずれか１つに記載の製剤。
【0082】
７２．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号２９またはその誘導体で示される、項１～７１のいずれか１つに記載の製剤。
【0083】
７３．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３０またはその誘導体で示される、項１～７２のいずれか１つに記載の製剤。
【0084】
７４．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３１またはその誘導体で示される、項１～７３のいずれか１つに記載の製剤。
【0085】
７５．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３２またはその誘導体で示される、項１～７４のいずれか１つに記載の製剤。
【0086】
７６．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３３またはその誘導体で示される、項１～７５のいずれか１つに記載の製剤。
【0087】
７７．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３４またはその誘導体で示される、項１～７６のいずれか１つに記載の製剤。
【0088】
７８．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３５またはその誘導体で示される、項１～７７のいずれか１つに記載の製剤。
【0089】
７９．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３６またはその誘導体で示される、項１～７８のいずれか１つに記載の製剤。
【0090】
８０．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３７またはその誘導体で示される、項１～７９のいずれか１つに記載の製剤。
【0091】
８１．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３８またはその誘導体で示される、項１～８０のいずれか１つに記載の製剤。
【0092】
８２．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号３９またはその誘導体で示される、項１～８１のいずれか１つに記載の製剤。
【0093】
８３．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４０またはその誘導体で示される、項１～８２のいずれか１つに記載の製剤。
【0094】
８４．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４１またはその誘導体で示される、項１～８３のいずれか１つに記載の製剤。
【0095】
８５．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４２またはその誘導体で示される、項１～８４のいずれか１つに記載の製剤。
【0096】
８６．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４３またはその誘導体で示される、項１～８５のいずれか１つに記載の製剤。
【0097】
８７．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４４またはその誘導体で示される、項１～８６のいずれか１つに記載の製剤。
【0098】
８８．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４５またはその誘導体で示される、項１～８７のいずれか１つに記載の製剤。
【0099】
８９．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４６またはその誘導体で示される、項１～８８のいずれか１つに記載の製剤。
【0100】
９０．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４７またはその誘導体で示される、項１～８９のいずれか１つに記載の製剤。
【0101】
９１．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４８またはその誘導体で示される、項１～８６のいずれか１つに記載の製剤。
【0102】
９２．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号４９またはその誘導体で示される、項１～９１のいずれか１つに記載の製剤。
【0103】
９３．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５０またはその誘導体で示される、項１～９２のいずれか１つに記載の製剤。
【0104】
９４．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５１またはその誘導体で示される、項１～９３のいずれか１つに記載の製剤。
【0105】
９５．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５２またはその誘導体で示される、項１～９４のいずれか１つに記載の製剤。
【0106】
９６．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５３またはその誘導体で示される、項１～９５のいずれか１つに記載の製剤。
【0107】
９７．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５４またはその誘導体で示される、項１～９６のいずれか１つに記載の製剤。
【0108】
９８．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５５またはその誘導体で示される、項１～９７のいずれか１つに記載の製剤。
【0109】
９９．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５６またはその誘導体で示される、項１～９８のいずれか１つに記載の製剤。
【0110】
１００．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５７またはその誘導体で示される、項１～９９のいずれか１つに記載の製剤。
【0111】
１０１．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５８またはその誘導体で示される、項１～１００のいずれか１つに記載の製剤。
【0112】
１０２．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号５９またはその誘導体で示される、項１～１０１のいずれか１つに記載の製剤。
【0113】
１０３．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号６０またはその誘導体で示される、項１～１０２のいずれか１つに記載の製剤。
【0114】
１０４．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号６１またはその誘導体で示される、項１～１０３のいずれか１つに記載の製剤。
【0115】
１０５．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号６２またはその誘導体で示される、項１～１０４のいずれか１つに記載の製剤。
【0116】
１０６．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号６３またはその誘導体で示される、項１～１０５のいずれか１つに記載の製剤。
【0117】
１０７．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグなしで、配列番号６４またはその誘導体で示される、項１～１０６のいずれか１つに記載の製剤。
【0118】
１０８．ウイルスが、例えば、Ｈｉｓタグの有無に拘わらず、配列番号６５またはその誘導体で示される、項１～１０７のいずれか１つに記載の製剤。
【0119】
１０９．治療における使用のための、項１～１０８のいずれか１つに記載の製剤。
【0120】
１１０．癌、例えば、結腸直腸癌、肝癌、前立腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、甲状腺癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌または肺癌の治療における使用のための、項１０９に記載の製剤。
【0121】
１１１．例えば、注射用の液体での希釈後の静脈内投与のための、項１０９または１１０に記載の製剤。
【0122】
１１２．腫瘍内注射のための、項１０９または１１０に記載の製剤。
【0123】
１１３．癌、例えば、結腸直腸癌、肝癌、前立腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、甲状腺癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌または肺癌の治療のための医薬の製造における、項１～１０７のいずれか１つに記載の製剤の使用。
【0124】
１１４．それを必要とする患者に、項１～１０８のいずれか１つに記載の製剤を投与することを含む治療方法。
【0125】
１１５．治療される患者が癌、例えば、結腸直腸癌、肝癌、前立腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、甲状腺癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌または肺癌を有する、項１１４に記載の治療方法。
【0126】
１１６．製剤が静脈内注射または腫瘍内注射によって投与される、項１１４または１１５に記載の方法。
【0127】
有利なことに、本発明者らは、本明細書に記載の製剤により、大幅な劣化または効力の低下なしに、ＥｎＡｄなどのグループＢアデノウイルスを、例えば、４℃で、６ヶ月間以上などの長期間、例えば、１年間、１．５年および２年間（特に、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月間などの１８～２４ヶ月間）、保存に成功できることを確立した。本開示の製剤では、凝集も最小限に抑えてもよい。本開示の製剤はまた、適度な期間、２５℃などの温度で安定であり得る。
【0128】
ウイルスの長期保存は、例えば、－６０℃以下、より具体的には、－６０～－８０℃の範囲、特に、－６０、－６１、－６２、－６３、－６４、－６５、－６６、－６７、－６８、－６９、－７０、－７１、－７２、－７３、－７４、－７５、－７６、－７７、－７８、－７９および－８０などの温度でなされてもよい。
【0129】
一実施形態では、本開示の製剤は、生理学的ｐＨ、すなわち、ｐＨ７．４より有意に高い８．５～９．５のｐＨ（ｐＨ８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５など）を有する。
【0130】
一実施形態では、製剤はｐＨ９．０を有する。驚くべきことに、本発明者らは、高いｐＨが製剤においてグループＢアデノウイルス（ＥｎＡｄなど）の安定性に大きな影響を与えることを発見した。
【0131】
グリセロールの濃度は、グループＢアデノウイルス（ＥｎＡｄなど）の安定性にも重要である。
【0132】
欧州医薬品庁によると、エタノールは小さな化学物質の経口および局所医薬製剤とホメオパシー療法で使用されているが、エタノールの使用に関しては特定の安全性が懸念されている。エタノールは中枢神経系抑制薬である。成人の軽度から中程度の中毒には、陶酔、運動失調、鎮静、攻撃的な行動、吐き気および嘔吐が含まれる。より高い用量では、それは、呼吸抑制または不全、および心房性頻脈、心房細動、不整脈、ＡＶブロック、低血圧、うっ血性心不全および重度の心筋抑制などの心臓毒性を引き起こす可能性がある。子供のエタノール中毒は、低血糖症、低体温症、およびカンマを引き起こす可能性がある。急性暴露後の他の毒性には、けいれん、低緊張、反射低下、消化管出血、急性肝炎、急性膵炎、横紋筋融解症、低カリウム血症、および乳酸アシドーシスがある。
【0133】
エタノール代謝は個人間で、また年齢によって異なり、例えば、一部の個人は、アルコールを代謝する能力を低下させる酵素アルコールデヒドロゲナーゼが不足している。静脈内投与用の製剤では、エタノールは血流に直接入り、毒性作用を最大化する。さらに、投与量が多くなる可能性があるため、１０％のエタノールを含む５００ｍｌ～１Ｌの製剤においては５０～１００ｍｌがエタノールである。
【0134】
したがって、エタノールはグループＢアデノウイルス製剤の安定化にとって重要であるように思われるが、エタノールの毒性が最小限である製剤であることが重要である。驚くべきことに、安定化を提供するには、例えば、１％未満などの１．５％未満のかなり少量のエタノールで十分である。一実施形態では、１．５％以下のエタノールが使用され、例えば、１％以下が使用される。これは、安定化効果を提供しつつ、エタノールの毒性を最小限に抑えるために、有益である。さらに、それは、殆どの患者集団での使用に適した製剤になる。
【0135】
一実施形態では、本開示の製剤は、例えば、セトマクロゴール１０００（ブリジ５２、５６または５８としても知られている）、セトステアリルアルコール、パルミチン酸、グリセロールモノラウレート、オレイルアルコール、ポロキサマー、プルロニックＦ１２７、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、４０、６０、８０または８５）、ステアリン酸、ソルビタントリステアレートからなる群から選択される非イオン性界面活性剤を含む。一実施形態では、１４．５～１７の範囲の親水性－親油性バランスを有する非イオン性界面活性剤を使用する。
【0136】
一実施形態では、製剤は、ポリソルベート、例えば、０．０５～０．１５％のポリソルベート２０、４０、６０、８０、またはそれらの２つ以上の組み合わせなどのポリソルベート２０、４０、６０、または８０をさらに含む。一実施形態では、製剤は、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．１１％、０．１２％、０．１３％、０．１４％、または０．１５％のポリソルベート２０、４０、６０、８０、またはそれらの２つ以上の組み合わせを含む。ポリソルベートを製剤に加える利点は、ポリソルベートが長期間保存中にグループＢアデノウイルスの効力を維持するのに役立ち、凝集を最小限に抑えることができることである。
【0137】
一実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０、例えば、０．０５％～０．１５％のポリソルベート８０、例えば、０．０９～０．１１％のポリソルベート８０、例えば、０．１％または０．１１５％のポリソルベートを含む。一実施形態では、製剤は、０．１１５％のポリソルベートを含む。
【0138】
有利なことに、非イオン性界面活性剤、特に、ポリソルベート（ポリソルベート８０など）は、製剤内の界面応力を低減または阻害し、例えば、ウイルスの表面応力を低減し、それが一方でウイルスの破壊を引き起こし得る。
【0139】
理論に拘束されるつもりはないが、製剤への特定のアミノ酸、例えば、メチオニン、アルギニンおよびそれらの組み合わせの添加は、ウイルス／ウイルス相互作用を減少させ、それにより、例えば、立体保護を提供することによって、製剤中のグループＢアデノウイルスの分布の安定化に寄与すると考えられる。アミノ酸（複数可）、例えば、メチオニン、アルギニンおよびそれらの組み合わせの添加はまた、グループＢアデノウイルスの優先的な水和／排除を最適化してもよい。このパラメーターは、グループＢアデノウイルスを安定させる上で非常に重要であると考えられている。優先的相互作用は、共溶媒（水など）の優先的結合またはその優先的排除（優先的水和）の観点から表現できる。
【0140】
一実施形態では、製剤は、少なくとも１つのアミノ酸、例えば、１、２、または３つのアミノ酸をさらに含む。
【0141】
一実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸は疎水性側鎖を有し、例えば、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリンおよびそれらの組み合わせから選択される。
【0142】
一実施形態では、製剤は、メチオニン、例えば、０．０１～０．３ｍＭ（０．０１～０．２ｍＭ）、例えば、０．１５ｍＭのチオニンなどの、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０ｍＭのメチオニンをさらに含む。または、メチオニンは製剤中に０．２５ｍＭ存在してもよい。
【0143】
一実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の製剤は、例えば、アルギニン、ヒスチジン、リジンおよびそれらの組み合わせから選択される、帯電した塩基性の側鎖を有する。
【0144】
一実施形態では、製剤は、アルギニン、例えば、１～２０ｍＭ（または１～１５ｍＭ）、例えば、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｍＭのアルギニンなどの２～１０ｍＭのアルギニンをさらに含む。一実施形態では、製剤中のアルギニンは、１０～２０ｍＭの範囲内にあり、例えば、１４、１５または１６ｍＭなどの１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０ｍＭである。有利には、製剤へのアルギニンの添加は、特に、最初の１２ヶ月の貯蔵の間に、アデノウイルスの安定性をさらに向上させる。
【0145】
一実施形態では、製剤は、メグルミン緩衝液、グリシン緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液の１つ以上をさらに含む。これらの緩衝液はすべて、開示された製剤に組み込まれたときに良好な安定性をもたらすことが示された。
【0146】
一実施形態では、製剤は、例えば、ｐＨ８．０のメグルミン緩衝液を含む。メグルミン緩衝液は、８．５～１０．５などのｐＨ範囲８．０～１０．５での使用に適している。
【0147】
一実施形態では、緩衝液はＴＲＩＳである。ＴＲＩＳはｐＨ７～９範囲で緩衝することができる。一実施形態では、緩衝液はＴＲＩＳを含まない。
【0148】
一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ８．６～１０．６の範囲で緩衝することができるグリシン緩衝液である。
【0149】
緩衝液は、ｐＨに一致するように選択する必要があり、例えば、ＨＥＰＥＳはｐＨ８．２までのみ緩衝できる。本明細書に開示している他の緩衝液は、ＨＥＰＥＳと比較して、グループＢアデノウイルスについて改善した安定性プロファイルを提供する可能性がある。したがって、ＨＥＰＥは、ＥｎＡｄなどのグループＢアデノウイルスの保存に一般に使用されるが、一実施形態では、製剤はＨＥＰＥＳ緩衝液を含まない。
【0150】
一実施形態では、本開示による製剤中のウイルスは、１、２、３または４つの導入遺伝子をコードする。
【0151】
式（Ｉ）の定義
一実施形態では、ＢＸは、制限部位、例えば、１または２などの１、２、３または４つの制限部位を含む。一実施形態では、ＢＸは、少なくとも１つの導入遺伝子、例えば、１または２つの導入遺伝子を含む。一実施形態では、ＢＸは少なくとも１つの導入遺伝子、例えば、１または２つの導入遺伝子、および１つ以上の制限部位、例えば２または３つの制限部位を含み、特に、遺伝子、または遺伝子を含むＤＮＡ配列がゲノムから特異的に切除および／または置換されることを可能にするように、制限部位が、それ／それらを挟む。あるいは、制限部位が各遺伝子を挟んでもよく、例えば２つの導入遺伝子がある場合、遺伝子が選択的に切除および／または置換されることを確実にするために３つの異なる制限部位が必要とされる。一実施形態では、１つ以上の、例えば全ての導入遺伝子が導入遺伝子カセットの形態である。
一実施形態では、ＢＸは、制限部位、例えば、１または２などの１、２、３または４つの制限部位を含む。一実施形態では、ＢＸは、少なくとも１つの導入遺伝子、例えば、１または２つの導入遺伝子を含む。一実施形態では、ＢＸは少なくとも１つの導入遺伝子、例えば、１または２つの導入遺伝子、および１つ以上の制限部位、例えば２または３つの制限部位を含み、特に、遺伝子、または遺伝子を含むＤＮＡ配列がゲノムから特異的に切除および／または置換されることを可能にするように、制限部位が、それ／それらを挟む。あるいは、制限部位が各遺伝子を挟んでもよく、例えば２つの導入遺伝子がある場合、遺伝子が選択的に切除および／または置換されることを確実にするために３つの異なる制限部位が必要とされる。一実施形態では、１つ以上の、例えば全ての導入遺伝子が導入遺伝子カセットの形態である。
【0152】
一実施形態では、ＢＸは制限部位を含まない。一実施形態では、ＢＸは結合である。一実施形態では、Ｂｘは１つ以上の導入遺伝子を含むかまたはそれからなる。
【0153】
一実施形態では、ＢＹは制限部位、例えば、１または２つなどの１、２、３または４つの制限部位を含む。一実施態様では、ＢＹは少なくとも１つの導入遺伝子、例えば、１または２つの導入遺伝子を含む。一実施形態では、ＢＹは少なくとも１つの導入遺伝子、例えば、１または２つの導入遺伝子、および１つ以上の制限部位、例えば２または３つの制限部位を含み、特に、制限部位が、遺伝子、またはそれ（複数可）がゲノムから特異的に切除および／または置換されることを可能にする遺伝子を含むＤＮＡ配列を挟む。あるいは、制限部位は各遺伝子を挟むことができ、例えば２つの導入遺伝子がある場合、遺伝子が選択的に切除および／または置換されることを確実にするために３つの異なる制限部位が必要とされる。
【0154】
一実施形態では、ＢＹは制限部位を含まない。一実施形態では、ＢＹは結合である。一実施形態では、ＢＹは１つ以上の導入遺伝子を含むまたはそれからなる。
【0155】
導入遺伝子カセットのサイズを最小化することに加えて、導入遺伝子はウイルスが複製しているときにのみ発現されるために、ウイルスに内因性プロモーターを使用することはまた、治療状況において有利であってもよい。これは、導入遺伝子を継続的に転写し、コードされたポリペプチドなどのコードされたエンティティの不適切な濃度または局在化につながる可能性がある構成的な外因性プロモーターとは対照的である。
【0156】
外因性プロモーターを使用することは、それがコードされたエンティティを強くかつ構成的に発現することができるので、特にいくつかの状況下で、例えば、患者が非常に広範囲にわたる癌を有する場合に、特に有用であり得る。したがって、一実施形態では、導入遺伝子の発現は、ＣＭＶプロモーターの制御下にある。
【0157】
一実施形態では、導入遺伝子カセットは、独立してスプライスアクセプター配列、内部リボソーム侵入配列または高い自己切断効率の２Ａペプチド、コザック配列、およびそれらの組み合わせから選択される調節エレメントをさらに含む。
【0158】
一実施形態では、導入遺伝子カセットは、タンパク質コード配列の開始点にあるコザック配列を含む。
【0159】
一実施形態では、導入遺伝子カセットは、高い自己切断効率の２Ａペプチドをコードする。
【0160】
一実施形態では、導入遺伝子カセットはポリアデニル化配列をさらに含む。
【0161】
一実施形態では、導入遺伝子カセットは、ＤＮＡ配列の３´末端および／またはＤＮＡ配列の５´末端に制限部位をさらに含む。
【0162】
開示の詳細な説明
現在開示されている製剤は、生理的ｐＨを超えるアルカリ性ｐＨを有する。特定のｐＨへの所与の溶液の緩衝は、例えば、トリス、リジン、強酸（例えば、ＨＣｌ）または弱酸（例えば、酢酸またはマレイン酸）、強塩基（例えば、ＮａＯＨ）または弱塩基（例えば、アンモニア）を含む酸／塩基系を含む、当該技術分野で既知の日常的な技術を使用して行うことができる。
現在開示されている製剤は、生理的ｐＨを超えるアルカリ性ｐＨを有する。特定のｐＨへの所与の溶液の緩衝は、例えば、トリス、リジン、強酸（例えば、ＨＣｌ）または弱酸（例えば、酢酸またはマレイン酸）、強塩基（例えば、ＮａＯＨ）または弱塩基（例えば、アンモニア）を含む酸／塩基系を含む、当該技術分野で既知の日常的な技術を使用して行うことができる。
【0163】
本明細書で使用する場合、緩衝液とは、例えば、グループＢアデノウイルスの構造的完全性またはそれらの複製能力に悪影響を与えることなく、グループＢアデノウイルスを懸濁または保存するのに適した緩衝液を指す。今日使用されているほとんどの生物学的緩衝液はＮＥ Ｇｏｏｄと彼の研究チーム（Ｇｏｏｄ ｅｔ ａｌ．１９６６，Ｇｏｏｄ＆Ｉｚａｗａ １９７２，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９８０；”Ｇｏｏｄ Ｂｕｆｆｅｒｓ”）によって開発され、Ｎ置換タウリンまたはグリシン緩衝液を含む。一般的に使用される生物学的緩衝液のいくつかを以下に挙げる。このリストは網羅的なものではなく、他の緩衝液も当業者に知られている。
【0164】
一実施形態では、開示された製剤は、２－アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ）緩衝液、ギ酸緩衝液（ギ酸アンモニウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液など）、２－アミノ－２－メチル－１－プロパノール（ＡＭＰ）緩衝液、２－アミノ－２－メチル－１－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）緩衝液、Ｎ－（１，１，－ジメチル－２－ヒドロキシエチル）－３－アミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）緩衝液、ビシン緩衝液、ビス－トリス－プロパン、ホウ酸緩衝液、３－（シクロヘキシルアミノ）－２－ヒドロキシ－１－プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）緩衝液、Ｎ－シクロヘキシル－２－アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）緩衝液、３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ）緩衝液、１－メチルピペリジン緩衝液、４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＨＥＰＰＳＯ）緩衝液、グリシルグリシン緩衝液、ピペラジン－１，４－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）二水和物またはピペラジン－Ｎ，Ｎ´－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）緩衝液、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）緩衝液、３－［Ｎ－トリス（ヒドロキシルメチル）－メチルアミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）緩衝液、トリエタノールアミン緩衝液、２－［トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］－エタンスルホン酸（ＴＥＳ）緩衝液、トリシン緩衝液、メグルミン緩衝液、グリシン緩衝液（Ｇｌｙ－ＮａＯＨなど）、ＴＲＩＳ緩衝液のうちの１つ以上を含む。
【0165】
一実施形態では、開示された製剤は、メグルミン緩衝液、Ｇｌｙ－ＮａＣｌ緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液のうちの１つ以上を含む。
【0166】
本明細書で使用する長期とは、少なくとも６ヶ月の期間、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６ヶ月を指す。一実施形態では、開示された製剤は、グループＢアデノウイルスを、１２ヶ月、１８ヶ月および２４ヶ月間などの少なくとも１２ヶ月間、安定して保存することを可能にする。特に指定がない限り、長期保存は、一般的に、４°Ｃでの保存を指す。
【0167】
一実施形態では、製剤は、－１～９５℃、例えば、－１、－２、－３、－４、または－６５、－６６、－６７、－６８、－６９、－７０、－７１、－７２、－７３、－７４、－７５、－７７、－７８、－７９、－８０、－８１、－８２、－８３、－８４、－８５、－８６、－８７、－８８、－８９、または－９０ °Ｃ、特に－８０℃などの－１～－８０℃の範囲の温度で保存される。
【0168】
一実施形態では、例えば、注入または注射のための、本開示による複製可能な腫瘍溶解性の液体非経口製剤（再構成製剤を含む）が提供され、製剤については、用量の体積あたり１ｘ１０１０～１×１０１４個のウイルス粒子の範囲の用量が提供される。
【0169】
一実施形態では、液体製剤は濃縮物として提供され、患者への投与前に希釈される必要がある。
【0170】
一実施形態では、製剤は、注射用水、生理食塩水またはグルコースなどの注射可能な液体での再構成のための凍結乾燥製剤として提供される。
【0171】
一実施形態では、製剤は、注射用水、生理食塩水、グルコースなどの注射用液体での希釈のための液体濃縮物として提供される。
【0172】
一実施形態では、製剤は、特に最終形態での、すなわち患者への投与に適した（どんなときでも凍結乾燥されない）液体として製造される。
【0173】
非経口製剤は、消化管を通して送達されないように設計された製剤を意味する。典型的な非経口送達経路は注射、移植または注入を含む。一実施形態では、製剤はボーラス送達用の形態で提供される。
【0174】
一実施形態では、非経口製剤は注射剤の形態である。注射としては、静脈内、皮下、腫瘍内または筋肉内注射が挙げられる。本明細書で使用される注射は、シリンジを介して体内に液体を挿入することを意味する。一実施形態では、本開示の方法は腫瘍内注射を含まない。
【0175】
一実施形態では、非経口製剤は注入剤の形態である。
【0176】
本明細書で使用する注入は、点滴、注入ポンプ、シリンジドライバーまたは同等の装置による流体の投与を意味する。一実施形態では、注入は、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、６５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０または１１５分など、１．５分～１２０分の範囲の期間にわたって投与される。
【0177】
一実施形態では、シリンジドライバーによって投与される場合など、製剤の１用量は１００ｍｌ未満、例えば３０ｍｌである。
【0178】
一実施形態では、注射は、例えば、１．５～３０分の期間にわたって、ゆっくりとした注射として投与される。本明細書で使用するゆっくりとした注射は、シリンジを使用した手動注射である。
【0179】
一実施形態では、製剤は静脈内（ｉ．ｖ．）投与用である。この経路は、大多数の臓器および組織への迅速なアクセスを可能にし、例えば確立された転移、特に肝臓および肺のような高度に血管新生化された領域にある転移の治療に特に有用であるため、腫瘍溶解性ウイルスの送達に特に有効である。
【0180】
治療用製剤は典型的に、製造および保存条件下で無菌かつ安定であろう。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、またはヒトへの投与に適した他の非経口製剤として処方され得る。
【0181】
本開示による製剤は、シリンジまたはバイアルなどのプレフィルドデバイスとして、特に単回用量として、製剤化されてもよい。
【0182】
製剤は一般に、薬学的に許容される希釈剤または担体、例えば、ウイルスと適合性であり、ウイルスが必要な期間安定である無毒性の等張性担体を含む。
【0183】
担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの分散剤もしくは界面活性剤、またはポリソルベート８０もしくは４０などの非イオン性界面活性剤の使用によって維持することができる。分散液において、必要な粒径の維持は、界面活性剤の存在によって補助され得る。等張化剤の例には、組成物中の糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムが含まれる。
【0184】
一実施形態では、使用される非経口製剤は、糖、例えば、デキストロース、マンノース、スクロースまたは同様のもの、塩化ナトリウム、塩化マグネシウムまたは塩化カリウムなどの塩、およびそれらの２つ以上の組み合わせを含んでもよい。
【0185】
一実施形態では、本開示による製剤は糖を含まない。緩衝液の成分は、本開示の目的では糖とは見なされない。
【0186】
一実施形態では、本開示の製剤は塩化ナトリウムなどの塩を含まない。緩衝液に使用される試薬は、本開示の目的では塩とは見なされない。
【0187】
一実施形態では、本開示の製剤は、二価陽イオン、例えば、ＣａＣｌ２、および／またはＭｇＣｌ２を含まない。
【0188】
製剤はまた、ＥＤＴＡなどの防腐剤を含んでもよい。一実施形態では、本開示の製剤はＥＤＴＡを含まない。
【0189】
一実施形態では、本開示による製剤はクロロブタノールを含まない。
【0190】
一実施形態では、本開示の製剤はゼラチンを含まない。
【0191】
一実施形態では、製剤は、グループＢアデノウイルスの免疫原性を増加させるいかなる成分も含まない、すなわち、製剤は、アジュバント（複数可）を含まない。
【0192】
一実施形態では、製剤は、例えば、用量当たり１ｘ１０１０～１ｘ１０１２個のウイルス粒子などの、用量当たり１ｘ１０１０～１ｘ１０１４個のウイルス粒子などの、本開示によって精製された腫瘍溶解性ウイルスを含むであろう。一実施形態では、製剤中のウイルスの濃度は、２ｘ１０１２ｖｐ／ｍｌなど、２ｘ１０８～２ｘ１０１４ｖｐ／ｍｌの範囲内にある。
【0193】
薬学的に許容される担体の徹底的な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．１９９１）にある。
【0194】
本開示はまた、例えば、両方とも参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００９／０６８８７７およびＵＳ２００４／０１５３０３３に開示されているデバイスを使用して、鼻腔内に送達される溶液または懸濁液にも及ぶ。
【0195】
使用されるグループＢアデノウイルスは、一般に、文脈上他を意味しない限り、グループＢウイルスとして指定された複製可能（複製能力のあるを含む）アデノウイルスまたは複製欠損ウイルス、例えば、ＥｎＡｄなどのそのキメラを含むＡｄ１１ｐなどのＡｄ１１を指す。場合によっては、それは、複製能力のあるウイルスのみを指すのに使用される場合があり、これは文脈上明らかであろう。
【0196】
本明細書で使用するサブグループＢ（グループＢまたはタイプＢ）は、グループＢアデノウイルス由来の少なくともファイバーおよびヘキソンを有するウイルス、例えば、実質的にグループＢウイルス由来の全ゲノムなどのグループＢウイルス由来のキャプシド全体を指す。サブグループＢウイルスには、３、７、１１、１４、１６、２１、３４、３５、５０、５５が含まれる。
【0197】
一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスなどの本開示のウイルスは、Ａ１１ｐヘキソンなどのＡｄ１１ヘキソンを有する。一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスなどの本開示のウイルスはサブグループＢファイバーを有する。１つでは、腫瘍溶解性ウイルスなどの本開示のウイルスは、Ａ１１ｐファイバーなどのＡｄ１１ファイバーを有する。一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスなどの本開示のウイルスは、同じ血清型に由来するファイバーおよびヘキソンタンパク質、例えば、Ａｄ１１、特に、Ａｄ１１ｐなどのサブグループＢアデノウイルスを有する。
【0198】
一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスなどの本開示のウイルスは、同じ血清型、例えば、Ａｄ１１、特に、Ａｄ１１ｐ由来で、例えば、後者のゲノム配列の３０８１１～３１７８８、１８２５４～２１１００および１３６８２～１５３６７の位置で見られる、ファイバー、ヘキソンおよびペントンタンパク質を有する。
【0199】
エナデノチュシレブ（Ｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖ）（ＥｎＡｄ）は、Ａｄ１１ｐ由来のファイバー、ペントンおよびヘキソンを有する旧称ＣｏｌｏＡｄ１（ＷＯ２００５／１１８８２５）であるキメラ腫瘍溶解性アデノウイルスであり、したがって、それはサブグループＢウイルスである。それは、Ａｄ１１ｐおよびＡｄ３由来のＤＮＡを含むキメラＥ２Ｂ領域を有する。ＥｎＡｄでは、Ｅ３領域のほとんどすべてとＥ４領域の一部が削除される。
【0200】
本明細書で使用されるＥ３は、アデノウイルスＥ３領域の一部または全部をコードするＤＮＡ配列（すなわち、タンパク質／ポリペプチド）を指し、Ｅ３遺伝子によってコードされるタンパク質が、例えば、野生型と同じ機能を有する（対応する未変異タンパク質）、野生型タンパク質と比較して向上した機能、野生型タンパク質と比較して機能がないなどの低下した機能を有し、あるいは、野生型タンパク質または必要に応じてそれらの組み合わせと比較して新しい機能を有する、などの保存的または非保存的アミノ酸変化を有するように変異されてもよい。Ｅ３領域の一部が削除される（Ｅ３領域で部分的に削除される）場合には、例えば、遺伝子のコード領域および／または非コード領域において、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４，９５、９６、９７または９８％が削除されるなどの、Ｅ３領域の１～９９％が削除される場所が含まれる。
【0201】
本明細書で使用されるＥ４は、アデノウイルスＥ４領域をコードするＤＮＡ配列（すなわち、ポリペプチド／タンパク質領域）を指して、Ｅ４遺伝子によってコードされるタンパク質が、保存的又は非保存的アミノ酸変化を有し、野生型と同じ機能（対応する未変異タンパク質）、野生型タンパク質と比較して向上した機能、野生型タンパク質と比較して機能がないなどの低下した機能を有し、あるいは、野生型タンパク質または必要に応じてそれらの組み合わせと比較して新しい機能を有するなど、変異されてもよい。
【0202】
Ｅ４領域は、ウイルス複製に関連するいくつかの機能を有してもよく、したがって、Ｅ４領域の削除などの修飾はウイルスのライフサイクルおよび複製に影響を及ぼしてもよく、したがって、例えば、パッケージング細胞が複製に必要とされてもよい。
【0203】
一実施形態では、Ｅ４では、Ｅ４ＯＲＦ４領域が削除されている。
【0204】
本明細書で使用している「由来する」は、例えば、ＤＮＡ断片がアデノウイルスから得られるか、またはアデノウイルスに元来見出された配列に対応する場合を指す。この言語は、配列がどのようにして得られたのかを限定するように意図しておらず、例えば、本開示によるウイルスにおいて使用される配列が合成されてもよい。
【0205】
一実施形態では、誘導体は、元来のＤＮＡ配列に対してその全長にわたる１００％の配列同一性を有する。
【0206】
一実施形態では、誘導体は、元来のＤＮＡ配列に対して９５、９６、９７、９８または９９％の同一性または類似性を有する。
【0207】
一実施形態では、誘導体は、ストリンジェントな条件下で元来のＤＮＡ配列にハイブリダイズする。
【0208】
本明細書で使用する場合、「ストリンジェンシー」は、通常、約Ｔｍ（融解温度）－５０℃（プローブのＴｍを５°下回る）からＴｍを約２０°Ｃ～２５°Ｃ下回るまでの範囲で起こる。ストリンジェントなハイブリダイゼーションを使用して、同一のポリヌクレオチド配列を同定もしくは検出し、または類似もしくは関連するポリヌクレオチド配列を同定もしくは検出することができることを、当業者は理解できるであろう。本明細書で使用する場合、「ストリンジェントな条件」という用語は、配列間に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％の同一性がある場合に、ハイブリダイゼーションが一般に起こることを意味する。
【0209】
本明細書で使用する場合、「ハイブリダイゼーション」は、「ポリヌクレオチド鎖が塩基対形成を介して相補鎖と結合する任意のプロセス」を含むものとする（Ｃｏｏｍｂｓ，Ｊ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９４）。
【0210】
腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞に優先的に感染し、例えば、それを溶解することにより細胞死を早めるか、または癌細胞で選択的に複製するウイルスである。癌細胞に優先的に感染するウイルスは、正常な健康な細胞と比較して、癌細胞への高い感染率を示すウイルスである。
【0211】
癌細胞において選択的に複製するウイルスは、ｐ５３遺伝子などの、複製するための癌細胞において増加調節される遺伝子またはタンパク質を必要とするウイルスである。
【0212】
Ｅ２Ｂ領域はグループＢアデノウイルスの既知の領域であり、ウイルスゲノムの約１８％に相当する。それは、タンパク質ＩＶａ２、ＤＮＡポリメラーゼおよび末端タンパク質をコードすると考えられる。Ａｄ１１のＳｌｏｂｉｔｓｋｉ株（Ａｄ１１ｐと呼ばれる）では、これらのタンパク質は、それぞれゲノムシーケンスにおける５５８８－３９６４、８４３５－５０６７、１０３４２－８４３８の位置にコードされ、Ｅ２Ｂ領域は１０３４２－３９５０から実行される。Ｅ２Ｂ領域の正確な位置は、他の血清型では変わる可能性があるが、機能はすべて同じ一般的な組織を持っているために、これまでに調査されたすべてのヒトアデノウイルスゲノムで保存されている。
【0213】
本明細書で使用することができる複製は、ｐ５３などの罹患細胞において増加調節された遺伝子に依存する複製を伴うウイルス、および複製能力のあるウイルスを含む、インビボで複製できるウイルスを指す。
【0214】
一実施形態では、ウイルスは複製能力がある。本明細書で使用する複製能力のあるウイルスとは、Ｅ１領域（パッケージング細胞株とも呼ばれる）およびヘルパーウイルスの助けなしに複製できるウイルスによってコードされるものなどの必須ウイルスタンパク質をコードする相補的細胞株の助けなしに複製できるウイルスを指す。
【0215】
本明細書で使用するウイルスベクターは複製欠損である。本開示の複製欠損ウイルスは、複製するためにパッケージング細胞株を必要とする。パッケージング細胞株は、ウイルスが不足しているものを補完する遺伝子を含む。
【0216】
一実施形態では、本開示は、グループＢアデノウイルス（複製可能グループＢウイルスなど）を１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、緩衝液（％ｖ／ｖは最終的な製剤の容積）を含む医薬製剤を調製し、必要に応じて、８．０～９．５、例えば、８．０～８．５（または８．５～９）などの８．０～９．５（または８．５～９．５）の範囲内のｐＨに調節する、プロセスを提供する。
【0217】
一実施形態では、プロセスは、０．０１～０．３ｍＭ、例えば、０．２５ｍＭ（または０．１５ｍＭ）などの０．０１～０．２５ｍＭ（または０．０１～２ｍＭ）のメチオニンの添加をさらに含む。
【0218】
一実施形態では、製剤は、本明細書に登録している関連する配列表に開示しているウイルス配列を含む。
【0219】
治療
本開示による製剤の患者レシピエントは、ヒトまたは家畜などの動物であってもよい。一実施形態では、患者は成人などのヒトである。
本開示による製剤の患者レシピエントは、ヒトまたは家畜などの動物であってもよい。一実施形態では、患者は成人などのヒトである。
【0220】
本開示の製剤は、治療および診断用途、例えば、遺伝子治療用途、ワクチン、癌治療などのための、複製可能（複製能力のあるを含む）グループＢアデノウイルスおよび複製欠損グループＢアデノウイルスベクターの製剤に適している。
【0221】
さらなる態様では、本開示は、治療、特に、癌の治療における使用のための本明細書に記載の製剤に及ぶ。
【0222】
一実施形態では、治療方法は、腫瘍の治療における使用のためのものである。
【0223】
本明細書で用いられる腫瘍は、新生物とも呼ばれる、制御されずかつ進行性である過剰な細胞分裂から生じる異常な組織塊を指すことを意図している。腫瘍は良性（癌性ではない）または悪性のいずれかであり得る。腫瘍はあらゆる形態の癌および転移を包含する。一実施形態では、腫瘍は癌性である。
【0224】
一実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。固形腫瘍は局在性または転移性であり得る。
【0225】
一実施形態では、腫瘍は上皮起源のものである。
【0226】
一実施形態では、癌は、結腸直腸癌、肝癌、前立腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、甲状腺癌、腎臓癌、膀胱癌、頭頸部癌または肺癌などの悪性腫瘍である。
【0227】
一実施形態では、腫瘍は結腸直腸悪性腫瘍である。
【0228】
本明細書で使用する悪性腫瘍は、癌性細胞を指す。
【0229】
一実施形態では、腫瘍溶解性アデノウイルスは転移の治療または予防に使用される。
【0230】
一実施形態では、本明細書の製剤は薬剤耐性癌の治療に使用される。
【0231】
一実施形態では、ウイルスは、さらなる癌治療または療法の投与と組み合わせて投与される。
【0232】
一実施形態では、癌、例えば、上記の癌の治療用の医薬の製造における使用のための本開示による製剤を提供する。
【0233】
さらなる態様では、それを必要とする患者、例えばヒト患者に、本開示による製剤の治療有効量を投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【0234】
一実施形態では、本明細書の製剤は、別の療法と組み合わせて投与される。
【0235】
本明細書で使用する「組み合わせて」は、癌治療または療法の前に、同時におよび／または後に本明細書の製剤が投与される場合を包含するように意図している。しかしながら、一般に、併用療法の治療計画は全般的に重複するであろう。
【0236】
癌療法は、外科手術、放射線療法、標的療法および／または化学療法を含む。
【0237】
本明細書で使用される癌治療は、治療用化合物または生物学的薬剤、例えば、癌を治療するように意図した抗体および／またはその維持療法を用いた治療を指す。
【0238】
一実施形態では、癌治療は、化学療法剤、抗体薬物複合体などの標的抗癌剤、放射線療法、放射性同位体療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む任意の他の抗癌療法から選択される。
【0239】
一実施形態では、本開示の製剤を、外科手術（ネオアジュバント療法）などの療法に対する前処置として使用して、腫瘍を縮小、転移を治療、および／または転移もしくはさらなる転移を予防することができる。製剤を、外科手術（アジュバント療法）などの療法後に使用して、転移を治療、および／または転移もしくはさらなる転移を予防してもよい。
【0240】
一実施形態では、本開示の製剤は、維持療法で使用される。
【0241】
一実施形態では、本開示による製剤は、癌療法と組み合わせて、例えば、癌療法と同時に、投与される。
【0242】
本明細書で使用される同時には、追加の癌治療の投薬が、製剤と同時にまたはほぼ同時にということである。治療は、同じ製剤内に含まれてもよく、または別々の製剤として投与されてもよい。
【0243】
一実施形態では、ウイルスは、化学療法剤の投薬と組み合わせて、例えば、同時に、投与される。
【0244】
本明細書で使用される化学療法剤は、悪性細胞および組織に対して選択的に破壊的である特定の抗新生物化学剤または薬物を指すことを意図している。例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗腫瘍剤。特定の化学療法剤の例には、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、パクリタキセル、カペシタビン、イリノテカン、ならびにシスプラチンおよびオキサリプラチンなどのプラチンが含まれる。治療されている癌の性質に基づいて、担当医によって用量が選択されてもよい。
【0245】
併用療法および化学療法剤
本開示の製剤は、さらなる癌療法、例えば、化学療法と組み合わせて使用されてもよい。
本開示の製剤は、さらなる癌療法、例えば、化学療法と組み合わせて使用されてもよい。
【0246】
化学療法剤および化学療法剤または細胞毒性剤は、文脈がそうではないことを示さない限り、本明細書で互換的に使用される。
【0247】
本明細書で使用する化学療法については、悪性細胞および組織を「選択的に」破壊する特定の抗新生物化学薬剤または薬物、例えば、アルキル化剤、チミジル酸シンターゼ阻害剤を含む代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイドを含む抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ｐａｒｐ阻害剤および他の抗腫瘍剤を指すように意図している。もちろん、これらの剤の多くには深刻な副作用があるため、この文脈では選択的に大まかに使用される。
【0248】
好ましい用量は、治療されている癌の性質に基づいて、担当医によって選択され得る。
【0249】
本開示の方法で使用され得るアルキル化剤の例には、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、テトラジン、アジリジン、プラチンおよび誘導体、ならびに非古典的アルキル化剤が含まれる。
【0250】
例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチンおよびリポプラチン（シスプラチンのリポソーム版）、特にシスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンなどの白金含有化学療法剤（プラチンとも呼ばれる）。
【0251】
シスプラチンの用量は、正確な癌に応じて、約２０～約２７０ｍｇ／ｍ２の範囲である。多くの場合、用量は約７０～約１００ｍｇ／ｍ２の範囲である。
【0252】
ナイトロジェンマスタードには、メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、およびブスルファンが含まれる。ニトロソウレアには、Ｎ－ニトロソ－Ｎ－メチル尿素（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシンが含まれる。テトラジンには、ダカルバジン、ミトゾロミド、テモゾロミドが含まれる。
【0253】
アジリジンには、チオテパ、マイトマイシン、およびジアジコン（ＡＺＱ）が含まれる。
【0254】
本開示の方法で使用され得る代謝拮抗剤の例には、葉酸代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサートおよびペメトレキセド）、プリン類似体（例えば、チオプリン、例えば、アザチオプリン、メルカプトプリン、チオプリン、フルダラビン（リン酸塩形態を含む）、ペントスタチンおよびクラドリビン）、ピリミジン類似体（例えば、フルオロピリミジン、例えば、５－フルオロウラシル、それらのプロドラッグ、例えば、カペシタビン［Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）］）、フロクスウリジン、ゲムシタビン、シタラビン、デシタビン、ラルチトレキセド（トムデックス）塩酸塩、クラドリビン、および６－アザウラシルが含まれる。
【0255】
本開示の方法で使用してもよいアントラサイクリンの例には、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ダウノルビシン（リポソーム）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ドキソルビシン（リポソーム）、エピルビシン、イダルビシン、現在膀胱癌治療のみに使用されているバルルビシン、およびミトキサントロン、アントラサイクリン類似体、特にドキソルビシンが含まれる。
【0256】
本開示の方法で使用され得る抗微小管剤の例には、ビンカアルカロイドおよびタキサンが含まれる。
【0257】
ビンカアルカロイドには、完全に天然の化学物質、例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン、および半合成ビンカアルカロイド、例えば、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニンが含まれる。
【0258】
タキサンには、パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、カルバジタキセル、およびそれらの誘導体が含まれる。本明細書で使用されるタキサンの誘導体には、例えば、ミセル処方におけるタキソールのようなタキサンの再製剤化が含まれ、誘導体には、タキサンである出発物質を修飾するために合成化学が使用される化学誘導体も含まれる。
【0259】
本開示の方法で使用され得るトポイソメラーゼ阻害剤には、Ｉ型トポイソメラーゼ阻害剤、ＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、およびＩＩ型トポイソメラーゼ毒が含まれる。Ｉ型阻害剤には、トポテカン、イリノテカン、インドテカン、およびインジミテカンが含まれる。ＩＩ型阻害剤には、ゲニステインとＩＣＲＦ １９３が含まれ、ＩＣＲＦ１９３の構造は次のとおりである：
【化1】
【0260】
ＩＩ型の毒には、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド、およびドキソルビシン、およびフルオロキノロンが含まれる。
【0261】
一実施形態では、使用される化学療法剤の組み合わせは、例えば、プラチンと５－ＦＵまたはそのプロドラッグ、例えば、シスプラチンまたはオキサプラチンとカペシタビンまたはゲムシタビン、例えばＦＯＬＦＯＸである。
【0262】
一実施形態では、化学療法は、化学療法剤、特に、細胞毒性化学療法剤の組み合わせを含む。
【0263】
一実施形態では、化学療法の組み合わせは、シスプラチンなどのプラチン、およびフルオロウラシルまたはカペシタビンを含む。
【0264】
一実施形態では、カペシタビンとオキサリプラチン（Ｘｅｌｏｘ）の化学療法の組み合わせ。
【0265】
一実施形態では、化学療法は、場合によりオキサリプラチンと組み合わせた、フォリン酸と５－ＦＵの組み合わせである。
【0266】
一実施形態では、化学療法は、場合によりオキサリプラチン（ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ）と組み合わせた、フォリン酸、５－ＦＵおよびイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）の組み合わせである。レジメンは、以下から構成される：イリノテカン（９０分にわたって１８０ｍｇ／ｍ２のＩＶ）、同時に、フォリン酸（１２０分にわたって４００ｍｇ／ｍ２［または２ｘ ２５０ｍｇ／ｍ２］のＩＶ）；続いて、フルオロウラシル（４００～５００ｍｇ／ｍ２ＩＶボーラス）、次いで、フルオロウラシル（４６時間にわたって２４００～３０００ｍｇ／ｍ２の静脈内注入）。通常、このサイクルは２週間ごとに繰り返される。上記の投与量は、サイクルごとに変動し得る。
【0267】
一実施形態では、化学療法の組み合わせは、微小管阻害剤、例えば、硫酸ビンクリスチン、エポチロンＡ、Ｎ－［２－［（４－ヒドロキシフェニル）アミノ］－３－ピリジニル］－４－メトキシベンゼンスルホンアミド（ＡＢＴ－７５１）、タキソール由来化学療法剤、例えば、パクリタキセル、アブラキサン、またはドセタキセルまたはそれらの組み合わせを利用する。
【0268】
一実施形態では、組み合わせはｍＴｏｒ阻害剤を使用する。ｍＴｏｒ阻害剤の例には、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、ＷＹＥ－３５４、ＫＵ－００６３７９４、パパマイシン（シロリムス）、テムシロリムス、デフォロリムス（ＭＫ－８６６９）、ＡＺＤ８０５５およびＢＥＺ２３５（ＮＶＰ－ＢＥＺ２３５）が含まれる。
【0269】
一実施形態では、組み合わせはＭＥＫ阻害剤を利用する。ＭＥＫ阻害剤の例には、ＡＳ７０３０２６、ＣＩ－１０４０（ＰＤ１８４３５２）、ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＰＤ３１８０８８、ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ８３３０、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６－ＥｔＯＨ、ＢＩＸ ０２１８９またはＢＩＸ ０２１８８が含まれる。
【0270】
一実施形態では、組み合わせはＡＫＴ阻害剤を使用する。ＡＫＴ阻害剤の例には、ＭＫ－２２０６およびＡＴ７８６７が含まれる。
【0271】
一実施形態では、組み合わせは、オーロラキナーゼ阻害剤を利用する。オーロラキナーゼ阻害剤の例には、オーロラＡ阻害剤Ｉ、ＶＸ－６８０、ＡＺＤ１１５２－ＨＱＰＡ（バラセルチブ）、ＳＮＳ－３１４メシレート、ＰＨＡ－６８０６３２、ＺＭ－４４７４３９、ＣＣＴ１２９２０２およびヘスペラジンが含まれる。
【0272】
一実施形態では、組み合わせは、例えば、ＷＯ２０１０／０３８０８６に開示されているｐ３８阻害剤、例えば、Ｎ－［４－（｛４－［３－（３－ｔｅｒｔ－ブチル－１－ｐ－トリル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ウレイド］ナフタレン－１－イルオキシ｝メチル）ピリジン－２－イル］－２－メトキシアセトアミドを使用する。
【0273】
一実施形態では、組み合わせは、例えば、ダクトリシブ、ピクチリシブ、ＬＹ２９４００２、イデラルシブ、ブパリリシブ、オートフィニブ、セラベリシブ、ＩＰ１－５４９、ＳＦ２５３４、ＧＤＣ－０３２６、ＳＡＲ４０５、ＴＧＲ－１２０２、ＶＰＳ３４、ＧＳＫ２２６９５５７、７４０Ｙ－Ｐ、ＰＩ－１０３、ＮＵ７４４１、ＴＧＸ－２２１、ＩＣ－８７１１４、ワーマンニン、ＸＬ１４７アナログ、ＺＳＴＫ４７４、アルペリシブ、ＡＳ－６０５２４０、ＰＩＫ－７５、３－メチルアデニン、Ａ６６、ボクスタリシブ、ＰＩＫ－９３、ＡＺＤ６４８２、ＰＦ－０４６９１５０２、アピトリシブ、ＧＳＫ１０５９６５、デュベリシブ、ＴＧ１００－１１５、ＡＳ－２５２４２４、ＢＧＴ２２６、ＣＵＤＵ－９０７、ＰＩＫ－２９４、ＡＳ－６０４８５０、ＧＳＫ２６３６７７１、コパンリシブ、ＹＭ２０１６３６、ＣＨ５１３２７９９、ＣＡＹ１０５０５、ＰＩＫ－２９３、ＴＧ１００７１３、ＶＳ－５５８４、タセリシブ、ＣＺＣ２４８３２、ＡＭＧ３１９、ＧＳＫ２２９２７６７、ＧＤＣ－００８４、ＨＳ－１７３、ケルセチン、ボクスタリシブ、ＧＮＥ－３１７、ＬＹ３０２３４１４、ＶＰＳ３４－ＩＮ１、ＰＩＫ－ＩＩＩ、ＰＩ－３０６５、ピララリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＦ－４９８９２１６およびＡＺＤ８１８６から選択されるｐｉ３Ｋ阻害剤を使用する。
【0274】
一実施形態では、この組み合わせは、Ｂｃｌ－２阻害剤を利用する。Ｂｃｌ－２阻害剤の例には、オバトクラックスメシル酸塩、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－２６３（ナビトクラックス）、およびＴＷ－３７が含まれる。
【0275】
一実施形態では、化学療法の組み合わせは、カペシタビン（ゼローダ）、リン酸フルダラビン、フルダラビン（フルダラ）、デシタビン、ラルチトレキセド（トムデックス）、ゲムシタビン塩酸塩、およびクラドリビンなどの代謝拮抗薬を含む。
【0276】
一実施形態では、組み合わせは、ガンシクロビルを含み、免疫応答および／または腫瘍血管形成の制御を支援してもよい。
【0277】
一実施形態では、組み合わせはＰＡＲＰ阻害剤を含む。
【0278】
一実施形態では、治療薬はガンシクロビルであり、これは免疫応答および／または腫瘍血管新生の制御を補助し得る。
【0279】
一実施形態では、本明細書の方法で使用される１つ以上の療法はメトロノーム療法、すなわち低用量の抗癌薬による連続的または頻繁な治療であり、他の治療法と同時に行われることが多い。
【0280】
サブグループＢの腫瘍溶解性アデノウイルス（特に、Ａｄ１１およびＥｎＡｄなどのそれに由来するもの）は、主に壊死性機構によって癌細胞を死滅させるアポトーシスとはほとんど無関係の作用機構を有すると考えられるため、化学療法薬と特に相乗的であってもよい。さらに、化学療法中に起こる免疫抑制は、腫瘍溶解性ウイルスがより高い効率で機能することを可能にし得る。
【0281】
本明細書で使用する治療用量は、特に、副作用を制限する容量を誘導することなく適切な治療計画で使用されるときに意図された治療効果を達成するのに適した、例えば、疾患の症状または状態を改善する、腫瘍溶解性アデノウイルスなどのウイルスの量を指す。ウイルス粒子の数が以下の結果をもたらすのに十分であり得る場合、用量は癌または転移の治療における治療用量と見なされ得る：腫瘍もしくは転移増殖が減速または停止する、または腫瘍もしくは転移のサイズが縮小することが見出されるおよび／または患者の寿命が延びる。適切な治療用量は、一般に、治療効果と許容される毒性との間のバランスであり、例えば、副作用および毒性が治療によって達成される利益を考えると許容される場合である。
【0282】
一実施形態では、本開示による腫瘍溶解性アデノウイルスの非経口製剤の複数の用量を単一の治療サイクルで全身投与することが提供され、例えば、各投与で与えられる総用量は、用量当たり１ｘ１０１０～１ｘ１０１４個のウイルスの粒子の範囲である。
【0283】
一実施形態では、ウイルスまたはそれを含む組成物の１回以上の用量（例えば、各用量）は、ウイルス粒子送達の速度が毎分２×１０１０個の粒子から毎分２×１０１２個の粒子の範囲になるように投与される。
【0284】
一実施形態では、本開示によるウイルスまたは治療用構築物（それを含む製剤を含む）は毎週投与され、例えば最初の１週間は、１、３、５日目に用量が投与され、その後毎週１回投与される。
【0285】
一実施形態では、本開示によるウイルスまたは治療用構築物（それを含む製剤を含む）は、週２回または週３回投与され、例えば、１週目は１、３および５日目に１回投与され、２週目または３週目もその１、３および５日目に投与される。この投与計画は、必要に応じて何度でも繰り返すことができる。
【0286】
一実施形態では、本開示による製剤（それを含む製剤を含む）は、例えば、治療サイクルにおいて、または維持療法として、毎月投与される。
【0287】
一実施形態では、本開示のウイルスおよび構築物は、組換え技術によって調製される。当業者は、武装アデノウイルスゲノムが、ゲノムまたは全ゲノムの一部を含むプラスミドを完全に合成することを含む他の技術的手段によって製造され得ることを理解するであろう。当業者は、ゲノムを合成する場合、後者はクローニング法を用いた遺伝子の挿入後の人工物であるので、挿入領域は制限部位ヌクレオチドを含まなくてもよいことを理解するであろう。
【0288】
一実施形態では、武装化アデノウイルスゲノムは完全に合成的に製造される。
【0289】
本明細書の文脈において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」と解釈されるべきである。
【0290】
特定の特徴／要素を含む本発明の実施形態は、関連する要素／特徴「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」代替の実施形態にも及ぶことも意図する。
【0291】
技術的に適切な場合には、本発明の実施形態を組み合わせることができる。
【0292】
特許および出願などの技術的参考文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0293】
本明細書に具体的かつ明示的に列挙された任意の実施形態は、単独で、または１つ以上のさらなる実施形態と組み合わせて、「除くクレーム」に基づいて形成し得る。
【0294】
本明細書の見出しは、文書を節に分割するために使用され、本明細書で提供される開示の意味を解釈するために使用されることを意図していない。
【0295】
本出願は、２０１８年１月３１日に提出され、参照により本明細書に組み込まれるＧＢ１８０１６１４．７からの優先権を主張する。この優先権出願は、本明細書の修正の根拠として使用することができる。
【0296】
本発明は、例示のためだけにある以下の例においてさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【0297】
【図1】さまざまなｐＨ値の範囲にわたって、さまざまな緩衝液中のグループＢアデノウイルスの安定性を比較した実験結果を示す。（Ａ）２～８で２０ヶ月間保存されたアデノウイルスの安定性（Ｂ）２５°Ｃで８週間保管されたグループＢアデノウイルスの安定性。
【図2-1】グループＢアデノウイルスの安定性に対するグリセロールの効果を決定するための実験結果を示す。（Ａ）グラフは、８～２０％の範囲のさまざまなグリセロール濃度の範囲にわたる０週目、７週目、１７週目のグループＢアデノウイルスの安定性を示す。（Ｂ）グラフは、７週間にわたる多分散性におけるグリセロールの役割を示す。（Ｃ）グラフは、ＨＰＬＣアッセイで測定した、０％、１０％、２０％のグリセロールを含む製剤中のグループＢアデノウイルスの濃度変化％を示す。
【図2-2】同上。
【図3】エタノール／アルギニン／メチオニン／ポリソルベートがグループＢアデノウイルスの安定性に寄与していることを確認するための実験結果を示す。（Ａ）さまざまな緩衝液について、グループＢアデノウイルスの効力を経時的に示すグラフ。（Ｂ）さまざまな緩衝液について、グループＢアデノウイルスの濃度を経時的に示すグラフ。（Ｃ）グリセロール、ＨＥＰＥＳ緩衝液、エタノール、アルギニン、メチオニンおよびポリソルベートを含む対照製剤の濃度を経時的に示すグラフ。
【図4-1】４℃での長期間保存中のアデノウイルスの効力に対するエタノール、アルギニン、メチオニンの影響を示す実験結果を示す。（Ａ）は、２０％グリセロールを含む５ｍＭのＨＥＰＥＳにおけるグループＢアデノウイルスの効力を示す。（Ｂ）エタノールが製剤に含まれる場合の相対効力への影響を示すグラフ。（Ｃ）エタノールおよびメチオニンが製剤に含まれている場合の相対効力への影響を示すグラフ。（Ｄ）エタノール、メチオニン、アルギニンが製剤に含まれている場合の相対効力への影響を示すグラフ。（Ｅ）図４Ｂ～４Ｄで試験した製剤についてアデノウイルスの濃度を経時的に示すグラフ。
【図5】アデノウイルスの安定性に対するポリソルベートの効果を評価するための実験結果を示す。（Ａ）０．１１５％のポリソルベートが０．１５％のポリソルベートに対して製剤に含まれている場合のアデノウイルスの効力を経時的に示すグラフ。（Ｂ）０．１１５％のポリソルベートが０．１５％のポリソルベートに対して製剤に含まれている場合のアデノウイルスの濃度を経時的に示すグラフ。
【図4-2】同上。
【図4-3】同上。
【図6A】２５℃で１０週間の期間にわたってさまざまな製剤で保存されたアデノウイルスの安定性を評価するための実験結果を示す。（Ａ）２５℃で１０週間の期間にわたってさまざまな製剤で保存されたアデノウイルスの効力。（Ｂ）２５℃で１０週間の期間にわたってさまざまな製剤で保存されたアデノウイルスの濃度。
【図6B】同上。
【図7】陰イオン交換クロマトグラフィーで分析したＡｄ５（グループＣウイルス）およびＡｄ１１（グループＢウイルス）の相対保持時間を示す。
【図8A】４℃で保存された腫瘍溶解性の相対的効力分析（２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニン）を示す。
【図8B】全ウイルスに対する４℃で保存された感染性ウイルス粒子の比（２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニン）を示す。
【図8C】腫瘍溶解性の相対的効力分析（２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニン）を示す。
【図8D】ＡＥＸ－ＨＰＬＣによるウイルス濃度（２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニン）を示す。
【図8E】ウイルス全体に対する感染性ウイルス粒子の比（２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニン）を示す。
【0298】
配列
配列番号１：スプライスアクセプター（ＳＡ）。配列番号２：分岐スプライスアクセプター（ＢＳＡ）。配列番号３：内部リボソーム侵入配列（ＩＲＥＳ）。配列番号４：ポリアデニル化配列。
配列番号：５ ＥｎＡｄゲノムのｂｐ２８１６６－２８３６６に対応するＢＸ ＤＮＡ配列。配列番号６：ＥｎＡｄゲノムのｂｐ２９３４５－２９３７９に対応し、これを含むＢＹ ＤＮＡ配列。配列番号７：リーダー配列。配列番号８：リーダー配列。配列番号９：Ｐ２Ａペプチド。配列番号１０：Ｆ２Ａペプチド。配列番号１１：Ｅ２Ａ ペプチド。配列番号１２：２Ａペプチド。配列番号１３：ＥｎＡｄゲノム。配列番号１４：ＮＧ－７３ウイルスゲノム配列。配列番号１５：ＮＧ－７４ウイルスのゲノム配列。配列番号１６：ＮＧ－７６ウイルスゲノム配列。配列番号１７：ＮＧ－７７ウイルスゲノム配列。配列番号１８：ＮＧ－７８ウイルスゲノム配列。
配列番号１９：ＮＧ－９２ウイルスゲノム配列。配列番号２０：ＮＧ－９５ウイルスゲノム配列。配列番号２１：ＮＧ－９６ウイルスのゲノム配列。配列番号２２：ＮＧ－９７ウイルスゲノム配列。配列番号２３：ＮＧ－１３４ウイルスゲノム配列。配列番号２４：ＮＧ－１３５ウイルスゲノム配列。配列番号２５：領域ＢＹに挿入されたサイトカインＴＮＦａをコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１３９ウイルスゲノム配列。配列番号２６：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、ＳＳＡ、５´リーダーを有するａｂ重鎖配列、ＳＳＡ、およびａｂ軽鎖配列が含まれる。配列番号２７：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるウイルスゲノム配列。配列番号２８：ＢＹ領域に挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１６５ウイルスゲノム配列。配列番号２９：ＢＹ領域に挿入された、Ｃ末端Ｈｉｓ６タグを有する抗ＶＥＧＦＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１６７ウイルスゲノム配列。配列番号：３０：領域ＢＹに挿入された抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１７７ウイルスゲノム配列。配列番号３１：ＢＸおよびＢＹ領域に挿入された固有の制限部位を有するＥｎＡｄゲノムからなるＮＧ－１８５ウイルスゲノム配列。配列番号３２：領域ＢＹに挿入された抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１９０ウイルスゲノム配列。配列番号３３：領域ＢＹに挿入された腫瘍関連抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２１７ウイルスゲノム配列。配列番号３４：領域ＢＹに挿入された腫瘍関連抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２２０ウイルスゲノム配列。配列番号３５：領域ＢＹに挿入された、Ｃ末端Ｈｉｓ６タグを有する抗ＰＤ－Ｌ１ＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットを持つＥｎＡｄゲノムからなるＮＧ－２２１ウイルスゲノム配列。配列番号３６：領域ＢＹに挿入された抗ＣＴＬＡ－４全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２４２ウイルスゲノム配列。配列番号３７：領域ＢＸに挿入された抗ＶＥＧＦＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－２５７ウイルスゲノム配列。配列番号３８：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ２５８ウイルスゲノム配列。配列番号３９：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦＳｃＦｖおよび抗ＰＤ－Ｌ１ＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－２７２ウイルスゲノム配列。配列番号４０：領域ＢＹに挿入されたヨウ化ナトリウム共輸送体（ＮＩＳ）をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２８０ウイルスゲノム配列。配列番号４１：領域ＢＸに挿入された抗ＶＥＧＦＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットおよび領域ＢＹに挿入された抗ＰＤ－Ｌ１ＳｃＦｖをコードする第２の導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－２８１ウイルスゲノム配列。配列番号４２：領域ＢＹに挿入されたＴリンパ球活性化抗原ＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３３０ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、ヒトＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４３：領域ＢＹに挿入されたＩＦＮαおよびＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４３ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、ＩＦＮαｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド、ＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４４：ＮＧ－６４１ゲノム。配列番号４５：領域ＢＹに挿入されたＦｌｔ３リガンド、ＭＩＰ１αおよびＩＦＮαをコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４５ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、Ｆｌｔ３リガンドｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド配列、ＭＩＰ１αｃＤＮＡ配列、Ｔ２Ａペプチド配列、ＩＦＮαｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４６：領域ＢＹに挿入されたＦｌｔ３リガンド、ＭＩＰ１αおよびＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４６ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、Ｆｌｔ３リガンドｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド配列、ＭＩＰ１αｃＤＮＡ配列、Ｔ２Ａペプチド配列、ＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４７：領域ＢＹに挿入されたＩＦＮα、ＭＩＰ１αおよびＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４７ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、ＩＦＮαｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド配列、ＭＩＰ１αｃＤＮＡ配列、Ｔ２Ａペプチド配列、ＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４８：領域ＢＹに挿入された膜アンカー型の単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅキメラ形態をコードする導入遺伝子カセットとＴリンパ球活性化抗原ＣＤ８０を有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４８ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド、ヒトＣＤ８０ｃＤＮＡ配列および３´ポリ（Ａ）配列を含まれる。配列番号４９：領域ＢＹに挿入された、Ｃ端末Ｖ５タグを有する単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅの膜アンカー型キメラ形態をコードする導入遺伝子カセットとＴリンパ球活性化抗原ＣＤ８０を有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４８Ａウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列、Ｖ５タグ、Ｐ２Ａペプチド、ヒトＣＤ８０ｃＤＮＡ配列および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号５０：ＮＧ－３５０Ａゲノム配列、配列番号５１：領域ＢＹに挿入された単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅの膜アンカー型キメラ形態をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－４２０ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号５２：領域ＢＹに挿入された単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅの膜アンカー型キメラ形態をコードする導入遺伝子カセットとＣ端末Ｖ５タグを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－４２０Ａウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列、Ｖ５タグ配列および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号５３：ＮＧ－６０１（ＥｎＡｄ－ＣＭＶ－ＥｐＣＡＮＢｉＴＥ）。配列番号５４：ＮＧ－６０２（ＥｎＡｄ－ＳＡ－ＥｐＣＡＮＢｉＴＥ）。配列番号５５：ＮＧ－６０５（ＥｎＡｄ－ＣＭＶ－ＦＡＰＢｉＴＥ）。配列番号５６：ＮＧ－６０６（ＥｎＡｄ－ＳＡ－ＦＡＰＢｉＴＥ）。配列番号５７：ＮＧ－６１１ゲノム。配列番号５８：ＮＧ－６１２ゲノム。配列番号５９：ＮＧ－６１３ゲノム。配列番号６０：ＮＧ－６１４ゲノム。配列番号６１：ＮＧ－６１５ゲノム。配列番号６２：ＮＧ－６１６ゲノム。配列番号６３：ＮＧ－６１７ゲノム。配列番号６４：ＮＧ－６１８ゲノム。配列番号６５：ＮＧ－６４０ゲノム。
配列番号１：スプライスアクセプター（ＳＡ）。配列番号２：分岐スプライスアクセプター（ＢＳＡ）。配列番号３：内部リボソーム侵入配列（ＩＲＥＳ）。配列番号４：ポリアデニル化配列。
配列番号：５ ＥｎＡｄゲノムのｂｐ２８１６６－２８３６６に対応するＢＸ ＤＮＡ配列。配列番号６：ＥｎＡｄゲノムのｂｐ２９３４５－２９３７９に対応し、これを含むＢＹ ＤＮＡ配列。配列番号７：リーダー配列。配列番号８：リーダー配列。配列番号９：Ｐ２Ａペプチド。配列番号１０：Ｆ２Ａペプチド。配列番号１１：Ｅ２Ａ ペプチド。配列番号１２：２Ａペプチド。配列番号１３：ＥｎＡｄゲノム。配列番号１４：ＮＧ－７３ウイルスゲノム配列。配列番号１５：ＮＧ－７４ウイルスのゲノム配列。配列番号１６：ＮＧ－７６ウイルスゲノム配列。配列番号１７：ＮＧ－７７ウイルスゲノム配列。配列番号１８：ＮＧ－７８ウイルスゲノム配列。
配列番号１９：ＮＧ－９２ウイルスゲノム配列。配列番号２０：ＮＧ－９５ウイルスゲノム配列。配列番号２１：ＮＧ－９６ウイルスのゲノム配列。配列番号２２：ＮＧ－９７ウイルスゲノム配列。配列番号２３：ＮＧ－１３４ウイルスゲノム配列。配列番号２４：ＮＧ－１３５ウイルスゲノム配列。配列番号２５：領域ＢＹに挿入されたサイトカインＴＮＦａをコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１３９ウイルスゲノム配列。配列番号２６：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、ＳＳＡ、５´リーダーを有するａｂ重鎖配列、ＳＳＡ、およびａｂ軽鎖配列が含まれる。配列番号２７：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるウイルスゲノム配列。配列番号２８：ＢＹ領域に挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１６５ウイルスゲノム配列。配列番号２９：ＢＹ領域に挿入された、Ｃ末端Ｈｉｓ６タグを有する抗ＶＥＧＦＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１６７ウイルスゲノム配列。配列番号：３０：領域ＢＹに挿入された抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１７７ウイルスゲノム配列。配列番号３１：ＢＸおよびＢＹ領域に挿入された固有の制限部位を有するＥｎＡｄゲノムからなるＮＧ－１８５ウイルスゲノム配列。配列番号３２：領域ＢＹに挿入された抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－１９０ウイルスゲノム配列。配列番号３３：領域ＢＹに挿入された腫瘍関連抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２１７ウイルスゲノム配列。配列番号３４：領域ＢＹに挿入された腫瘍関連抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２２０ウイルスゲノム配列。配列番号３５：領域ＢＹに挿入された、Ｃ末端Ｈｉｓ６タグを有する抗ＰＤ－Ｌ１ＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットを持つＥｎＡｄゲノムからなるＮＧ－２２１ウイルスゲノム配列。配列番号３６：領域ＢＹに挿入された抗ＣＴＬＡ－４全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２４２ウイルスゲノム配列。配列番号３７：領域ＢＸに挿入された抗ＶＥＧＦＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－２５７ウイルスゲノム配列。配列番号３８：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦ全長抗体をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ２５８ウイルスゲノム配列。配列番号３９：領域ＢＹに挿入された抗ＶＥＧＦＳｃＦｖおよび抗ＰＤ－Ｌ１ＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－２７２ウイルスゲノム配列。配列番号４０：領域ＢＹに挿入されたヨウ化ナトリウム共輸送体（ＮＩＳ）をコードする導入遺伝子カセットからなるＮＧ－２８０ウイルスゲノム配列。配列番号４１：領域ＢＸに挿入された抗ＶＥＧＦＳｃＦｖをコードする導入遺伝子カセットおよび領域ＢＹに挿入された抗ＰＤ－Ｌ１ＳｃＦｖをコードする第２の導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－２８１ウイルスゲノム配列。配列番号４２：領域ＢＹに挿入されたＴリンパ球活性化抗原ＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３３０ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、ヒトＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４３：領域ＢＹに挿入されたＩＦＮαおよびＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４３ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、ＩＦＮαｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド、ＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４４：ＮＧ－６４１ゲノム。配列番号４５：領域ＢＹに挿入されたＦｌｔ３リガンド、ＭＩＰ１αおよびＩＦＮαをコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４５ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、Ｆｌｔ３リガンドｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド配列、ＭＩＰ１αｃＤＮＡ配列、Ｔ２Ａペプチド配列、ＩＦＮαｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４６：領域ＢＹに挿入されたＦｌｔ３リガンド、ＭＩＰ１αおよびＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４６ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、Ｆｌｔ３リガンドｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド配列、ＭＩＰ１αｃＤＮＡ配列、Ｔ２Ａペプチド配列、ＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４７：領域ＢＹに挿入されたＩＦＮα、ＭＩＰ１αおよびＣＤ８０をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４７ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、ＩＦＮαｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド配列、ＭＩＰ１αｃＤＮＡ配列、Ｔ２Ａペプチド配列、ＣＤ８０ｃＤＮＡ配列、および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号４８：領域ＢＹに挿入された膜アンカー型の単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅキメラ形態をコードする導入遺伝子カセットとＴリンパ球活性化抗原ＣＤ８０を有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４８ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列、Ｐ２Ａペプチド、ヒトＣＤ８０ｃＤＮＡ配列および３´ポリ（Ａ）配列を含まれる。配列番号４９：領域ＢＹに挿入された、Ｃ端末Ｖ５タグを有する単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅの膜アンカー型キメラ形態をコードする導入遺伝子カセットとＴリンパ球活性化抗原ＣＤ８０を有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－３４８Ａウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列、Ｖ５タグ、Ｐ２Ａペプチド、ヒトＣＤ８０ｃＤＮＡ配列および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号５０：ＮＧ－３５０Ａゲノム配列、配列番号５１：領域ＢＹに挿入された単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅの膜アンカー型キメラ形態をコードする導入遺伝子カセットを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－４２０ウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号５２：領域ＢＹに挿入された単鎖Ｆｖ抗ヒトＣＤ３ｅの膜アンカー型キメラ形態をコードする導入遺伝子カセットとＣ端末Ｖ５タグを有するＥｎＡｄゲノムを含むＮＧ－４２０Ａウイルスゲノム配列。導入遺伝子カセットには、５´ＳＳＡ、膜アンカー型抗ＣＤ３εｃＤＮＡ配列、Ｖ５タグ配列および３´ポリ（Ａ）配列が含まれる。配列番号５３：ＮＧ－６０１（ＥｎＡｄ－ＣＭＶ－ＥｐＣＡＮＢｉＴＥ）。配列番号５４：ＮＧ－６０２（ＥｎＡｄ－ＳＡ－ＥｐＣＡＮＢｉＴＥ）。配列番号５５：ＮＧ－６０５（ＥｎＡｄ－ＣＭＶ－ＦＡＰＢｉＴＥ）。配列番号５６：ＮＧ－６０６（ＥｎＡｄ－ＳＡ－ＦＡＰＢｉＴＥ）。配列番号５７：ＮＧ－６１１ゲノム。配列番号５８：ＮＧ－６１２ゲノム。配列番号５９：ＮＧ－６１３ゲノム。配列番号６０：ＮＧ－６１４ゲノム。配列番号６１：ＮＧ－６１５ゲノム。配列番号６２：ＮＧ－６１６ゲノム。配列番号６３：ＮＧ－６１７ゲノム。配列番号６４：ＮＧ－６１８ゲノム。配列番号６５：ＮＧ－６４０ゲノム。
【実施例0299】
実施例１：アデノウイルス製剤の安定性に対するｐＨの影響の試験
グループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するｐＨの影響を決定する実験を行った。異なる緩衝液、すなわち、炭酸塩／重炭酸塩、ジエタノールアミン、Ｇｌｙ－ＮａＣｌ、ＨＥＰＥ、メグルミン、ホウ酸ナトリウムおよびＴｒｉｓ緩衝液を試験した。各緩衝液を、異なるｐＨ値の範囲、すなわち、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０で製造した。各緩衝液には、グリセロール、エタノール、アルギニン、メチオニンおよびポリソルベートも含まれていた。ＥｎＡｄを各緩衝液に懸濁し、製剤を４℃で保存した。各製剤から試料を定期的に採取し、各製剤中のアデノウイルスの安定性を、ＨＰＬＣを使用して試料中のウイルスＤＮＡの濃度を測定することにより測定した。ＤＮＡの濃度が低いほど、ウイルス分解のレベルが高く、したがって、安定性が低いことを強く示していた。
グループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するｐＨの影響を決定する実験を行った。異なる緩衝液、すなわち、炭酸塩／重炭酸塩、ジエタノールアミン、Ｇｌｙ－ＮａＣｌ、ＨＥＰＥ、メグルミン、ホウ酸ナトリウムおよびＴｒｉｓ緩衝液を試験した。各緩衝液を、異なるｐＨ値の範囲、すなわち、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０で製造した。各緩衝液には、グリセロール、エタノール、アルギニン、メチオニンおよびポリソルベートも含まれていた。ＥｎＡｄを各緩衝液に懸濁し、製剤を４℃で保存した。各製剤から試料を定期的に採取し、各製剤中のアデノウイルスの安定性を、ＨＰＬＣを使用して試料中のウイルスＤＮＡの濃度を測定することにより測定した。ＤＮＡの濃度が低いほど、ウイルス分解のレベルが高く、したがって、安定性が低いことを強く示していた。
【0300】
実験の結果を図１Ａおよび１Ｂに示す。図１Ａから分かるように、ｐＨはアデノウイルスの安定性に大きな影響を与える。ピークの安定性がｐＨ９．０で観察され、これは、ｐＨが８．０に低下または１０．０に上昇したときに、著しく低下した。同様の影響は、２５℃での短期間（最大８週間）保存でも観察された（図１Ｂ）。重要なことに、異なる緩衝液間で安定性にはわずかなばらつきがあるが、ｐＨの影響がはるかに重要であり、どの緩衝液が製剤において使用されたかに拘わらず、ｐＨ９．０から最も遠い製剤が最低の安定性を示した。したがって、結果は、８．５～９．５のｐＨが最良の安定性を提供することを示唆している。
【0301】
実施例２：アデノウイルス製剤の安定性に対するグリセロールの影響の試験
一連の実験を行って、グリセロールが製剤に含まれた場合のグループＢアデノウイルス製剤の安定性への影響を判定した。３つの濃度、すなわち、９％、１４％、２０％で決定的スクリーニング計画（Ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｄｅｓｉｇｎ（ＤＳＤ））を使用して組み合わせて、グリセロールをスクリーニングした。結果を、ＳＡＳ ＪＭＰ統計ソフトウェアを使用して分析した。ＤＳＤデータに基づいて、モデルを作成した。各製剤は１０ｍＭのＨＥＰＥＳも含んでいた。アデノウイルスを各製剤に懸濁し、製剤を４℃で１７週間の期間保存した。製剤の安定性を、ＨＰＬＣを使用して、試料のウイルスＤＮＡ濃度を測定することにより、０週目、７週目、１７週目に評価した。
一連の実験を行って、グリセロールが製剤に含まれた場合のグループＢアデノウイルス製剤の安定性への影響を判定した。３つの濃度、すなわち、９％、１４％、２０％で決定的スクリーニング計画（Ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｄｅｓｉｇｎ（ＤＳＤ））を使用して組み合わせて、グリセロールをスクリーニングした。結果を、ＳＡＳ ＪＭＰ統計ソフトウェアを使用して分析した。ＤＳＤデータに基づいて、モデルを作成した。各製剤は１０ｍＭのＨＥＰＥＳも含んでいた。アデノウイルスを各製剤に懸濁し、製剤を４℃で１７週間の期間保存した。製剤の安定性を、ＨＰＬＣを使用して、試料のウイルスＤＮＡ濃度を測定することにより、０週目、７週目、１７週目に評価した。
【0302】
結果を図２Ａに示す。認識できるように、グリセロール濃度と安定性との間には明確な相関関係があり、より高いグリセロール濃度を有する製剤はより高い安定性を有する。効果は１７～２０％のグリセロール濃度のマーク付近で徐々に減少するように考えられ、２０％グリセロールを超えても安定性に大きな影響を与える可能性は低いことを示唆している。したがって、これらの結果は、グリセロール濃度が１５～２０％の場合に安定性が大幅に向上し、濃度が約１９～２０％の場合に最良の結果が得られる可能性が高いことを示唆している。
【0303】
図２Ｂおよび２Ｃは、０％、１０％および２０％のグリセロール製剤が、３７℃での保存（図２Ｂ）および２５℃での保存後に評価された追加の研究の結果を示す。図２Ｂは、多分散性（溶液内の分子量の分布の尺度であり、より高い多分散性は、グループＢアデノウイルスのより大きい劣化と相関する）は、１０％または２０％のグリセロールを添加した場合と比較して、グリセロールが製剤から除かれている場合に、かなり高いことを示す。図２Ｃは、グループＢアデノウイルス濃度の経時的な％変化を示し、１０％または２０％のグリセロールを製剤に添加した場合と比較して、グリセロールを使用しない場合に、濃度レベルの急勾配で急激な低下を明確に示している。したがって、これらの結果は、図２Ａの調査結果、すなわち、グリセロールを製剤に含めることが安定性に大きな影響を与えることも裏付けている。
【0304】
実施例３：グループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するエタノール／アルギニン／メチオニン／ポリソルベートの添加の効果の試験
エタノール／アルギニン／メチオニン／ポリソルベートが製剤から除かれている場合のグループＢアデノウイルス製剤の安定性への影響を判定するために、一連の実験を行った。異なる範囲の緩衝液、すなわち、ＨＥＰＥＳ５ｍＭ、メグルミン１０ｍＭ、ＴＲＩＳ１０ｍＭおよびＧｌｙ－ＮａＣｌ１０ｍＭを試験した。いずれかのエタノール、アルギニン、メチオニンまたはポリソルベートを含む製剤はなかった。グループＢアデノウイルスを各製剤に懸濁し、製剤を４℃で９ヶ月間保存した。製剤の安定性および効力は、それぞれＨＰＬＣおよびＭＴＳ（細胞を溶解するアデノウイルスの能力を評価する細胞生存率アッセイ）により、３ヶ月間隔、すなわち、０ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月でそれぞれ評価された。
エタノール／アルギニン／メチオニン／ポリソルベートが製剤から除かれている場合のグループＢアデノウイルス製剤の安定性への影響を判定するために、一連の実験を行った。異なる範囲の緩衝液、すなわち、ＨＥＰＥＳ５ｍＭ、メグルミン１０ｍＭ、ＴＲＩＳ１０ｍＭおよびＧｌｙ－ＮａＣｌ１０ｍＭを試験した。いずれかのエタノール、アルギニン、メチオニンまたはポリソルベートを含む製剤はなかった。グループＢアデノウイルスを各製剤に懸濁し、製剤を４℃で９ヶ月間保存した。製剤の安定性および効力は、それぞれＨＰＬＣおよびＭＴＳ（細胞を溶解するアデノウイルスの能力を評価する細胞生存率アッセイ）により、３ヶ月間隔、すなわち、０ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月でそれぞれ評価された。
【0305】
図３Ａは、９か月間の保存期間にわたるグループＢアデノウイルスの効力を示す。認識できるように、この時間枠にわたってグループＢアデノウイルスの大幅な劣化が存在し、製剤の大部分は９ヶ月のマークまでに０Ｕ／ｖｐの効力に近づいている。注目すべき例外は、メグルミン含有製剤であるが、この製剤でさえ、元来の開始レベルである１Ｕ／ｖｐから約０．５Ｕ／ｖｐへの大幅な低下を免れず、すなわち、製剤中のグループＢアデノウイルスの効力は９ヶ月後に半分になった。この結果は、メグルミン緩衝液がグループＢアデノウイルスの効力を維持するのに最良であることを示唆していて、製剤にエタノール、アルギニン、メチオニン、ポリソルベートを含めることの重要性も強調している。
【0306】
図３Ｂは、９ヶ月の期間にわたるグループＢアデノウイルスの濃度レベルを示し、試験した製剤すべてについて、９ヶ月の期間にわたって濃度が大幅に低下する傾向を示している。比較のために、図３Ｃは、エタノール／アルギニン／メチオニン／ポリソルベートを含む製剤中のグループＢアデノウイルスの濃度を示す。４℃で２０ヶ月間保存した後でさえ、観測されるグループＢアデノウイルスの濃度が安定していることに注意されたい。図３Ｂに基づいて、少なくとも濃度レベルに関しては、ＴＲＩＳ緩衝液が最良のパフォーマンスとなるように考えられる。この実験は、これらの成分が製剤の全体的な安定性にとって重要であることも示している。
【0307】
実施例４：アデノウイルス製剤の安定性に対するエタノール、アルギニンおよびメチオニンの個別の影響の試験
実施例３の結果に続いて、４℃での長期間（２４ヶ月間）保存中のグループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するエタノール、アルギニンおよびメチオニンの各々の相対的影響を判定する試みにおいて、さらなる実験を行った。
実施例３の結果に続いて、４℃での長期間（２４ヶ月間）保存中のグループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するエタノール、アルギニンおよびメチオニンの各々の相対的影響を判定する試みにおいて、さらなる実験を行った。
【0308】
ＭＴＳアッセイの結果を図４に示す。第１は１％のエタノール（図４Ａ）、第２は１％のエタノールおよび０．１５ｍＭのメチオニン（図４Ｃ）、第３は１％のエタノール、０．１５ｍＭのメチオニンおよび１０ｍＭのアルギニン（図４Ｂ）である３つの異なる製剤を試験した。試験した製剤のすべてが５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１７％のグリセロールを含み、そのｐＨは８．０であった。
【0309】
結果は、グループＢアデノウイルスの効力が、ＨＥＰＥＳおよびグリセロールのみを有し、これらの成分をいずれも含まない対照製剤と比較して、３つの成分すべてによって保持されることを示唆している。対照製剤の効力は３ヶ月以内に０．５Ｕ／ｖｐに低下したが、図４Ａ～４Ｃは、３つの成分を添加する場合に安定期間が大幅に延長されることを示唆している。具体的には、結果は、エタノールの添加により製剤の安定性が約６ヶ月間延長され、エタノールおよびメチオニンの添加により安定性が約１５か月間改善され、エタノール、メチオニンおよびアルギニンの添加により安定性が約１２か月間改善されることを示唆している。したがって、これらの結果は、エタノール、メチオニン、アルギニンのすべてが安定性に寄与することを示している。
【0310】
図４Ｄは、ＨＰＬＣによって決定されたアデノウイルスの濃度レベルを示していて、２４ヶ月の保存期間を通して、３つの製剤すべてについてウイルス濃度がほぼ一定のままであることを示唆している。これはおそらく、エタノールが３つの製剤すべてに存在することを考えると、エタノールが最良の影響を与えることを示唆している。
【0311】
実施例５：グループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するポリソルベートの効果の試験
この実施例では、４℃での長期間（２０ヶ月間）保存中のアデノウイルス製剤の安定性に関するポリソルベートの重要性を評価する実験の結果について説明する。
この実施例では、４℃での長期間（２０ヶ月間）保存中のアデノウイルス製剤の安定性に関するポリソルベートの重要性を評価する実験の結果について説明する。
【0312】
１つは０．１１５％のポリソルベート８０、他は０．１５％のポリソルベート８０である２つの製剤について試験した。両方の製剤はまた、２０％のグリセロール、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．５％のエタノール、１０ｍＭのアルギニン、０．２ｍＭのメチオニンも含み、それらのｐＨは８．０であった。
【0313】
実験の結果を図５Ａおよび５Ｂに示す。図５Ａは、０．１５％のポリソルベートを含む製剤の場合に製剤の効力が１０ヶ月付近で約０．５Ｕ／ｖｐまで徐々に低下するが、２０ヶ月の時点まで０．５Ｕ／ｖｐで安定したままであることを示している。したがって、ポリソルベートは、製剤中のアデノウイルスの効力を維持するのに大きな寄与をしているように考えられる。効力の低下は、０．１１５％を含む製剤についても同様である。これは、ポリソルベートを約０．１％に保つと、安定性の良い製剤が得られることを示唆している。
【0314】
図５Ｂは、ＨＰＬＣによって決定されたアデノウイルスの濃度レベルを示していて、２０ヶ月間の保存期間を通して、ウイルス濃度が両方の製剤についてかなり一定のままであることを示唆している。
【0315】
実施例６：異なる緩衝液およびグループＢアデノウイルス製剤の安定性に対するそれらの影響の試験
この実施例では、２５℃での短期間（１１週間）保存中にグループＢアデノウイルス製剤中で使用した場合の異なる緩衝液の安定性を比較する実験の結果について説明している。
この実施例では、２５℃での短期間（１１週間）保存中にグループＢアデノウイルス製剤中で使用した場合の異なる緩衝液の安定性を比較する実験の結果について説明している。
【0316】
７つの異なる製剤、すなわち、ｐＨ９．０のＧｌｙ－ＮａＣｌ、ｐＨ８．０のＴＲＩＳ、ｐＨ８．８のＴＲＩＳ、ｐＨ８．０のメグルミン、ｐＨ８．５のメグルミン、ｐＨ９．０のメグルミン、およびｐＨ８．０のＨＥＰＥＳについて試験した。製剤のすべてが、２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．１５または０．２５ｍＭのメチオニン、０．１５％のポリソルベートを含んでいた。
【0317】
結果を図６Ａおよび６Ｂに示す。図６Ａは、効力比（１００ｐｐｃ／ＲＳ）を経時的に示し、図６Ｂは、経時的に測定された製剤の濃度（ｖｐ／ｍｌ）を示す。グラフに基づいて、製剤の安定性が高くなるおおよその順序は、ＨＥＰＥ、ＴＲＩＳ、Ｇｌｙ－ＮａＣｌおよびメグルミン（最良）であると考えられる。
【0318】
実施例７
安定性を示す方法のより幅広いパネルを用いて、加速条件でのスクリーニング方法を使用して特定された条件が４℃の長期間保存に変換されることを確認する実験を行った。一連の異なる緩衝液、すなわち、ｐＨ８．０のメグルミン、ｐＨ８．５のメグルミン、ｐＨ９．０のメグルミン、ｐＨ８．５のＴＲＩＳ、およびＧｌｙ－ＮａＣｌをすべて１０ｍＭで試験した。製剤のすべてが、２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニンを含んでいた。グループＢアデノウイルス製剤は、４℃および－８０℃の両方で１２ヶ月の期間保存された。４°Ｃで保存された製剤の安定性および効力は、ＡＥＸ－ＨＰＬＣ（ウイルス濃度）、ＭＴＳ（アデノウイルスが細胞を溶解する能力を評価する細胞生存率アッセイ）、および感染力アッセイ（細胞に感染し、かつ複製を開始するアデノウイルスの能力を評価する）によって評価された。１２ヶ月後、－８０℃および４℃で保存された試料は、同じ方法を使用して一緒に分析された。
安定性を示す方法のより幅広いパネルを用いて、加速条件でのスクリーニング方法を使用して特定された条件が４℃の長期間保存に変換されることを確認する実験を行った。一連の異なる緩衝液、すなわち、ｐＨ８．０のメグルミン、ｐＨ８．５のメグルミン、ｐＨ９．０のメグルミン、ｐＨ８．５のＴＲＩＳ、およびＧｌｙ－ＮａＣｌをすべて１０ｍＭで試験した。製剤のすべてが、２０％のグリセロール、１．４％のエタノール、１５ｍＭのアルギニン、０．２５ｍＭのメチオニンを含んでいた。グループＢアデノウイルス製剤は、４℃および－８０℃の両方で１２ヶ月の期間保存された。４°Ｃで保存された製剤の安定性および効力は、ＡＥＸ－ＨＰＬＣ（ウイルス濃度）、ＭＴＳ（アデノウイルスが細胞を溶解する能力を評価する細胞生存率アッセイ）、および感染力アッセイ（細胞に感染し、かつ複製を開始するアデノウイルスの能力を評価する）によって評価された。１２ヶ月後、－８０℃および４℃で保存された試料は、同じ方法を使用して一緒に分析された。
【0319】
４℃で保存したアデノウイルスの定期的分析の結果を図８Ａおよび８Ｂに示す。図８ＡにおけるＭＴＳ（相対的な腫瘍溶解力）は、ｐＨ８．０で保存されたアデノウイルスが、ｐＨ８．５およびｐＨ９．０緩衝液中に保存された場合よりも長期間安定であることを示している。これは、図８Ｂに示す代替分析によって確認され、４℃での保存時に存在する非感染性粒子の比率は、ｐＨが上昇するにつれてより早く増加する。ｐＨ８．０では、賦形剤（グリセロール、メチオニン、アルギニンおよびエタノール）が存在するため、アデノウイルスは保存中最も安定している。
【0320】
図８Ｃ、８Ｄおよび８Ｅにおいては、４℃で保存したアデノウイルスを－８０℃で同じ期間保存したアデノウイルスと比較している。すべての図において、グリセロール対照はｐＨ７．８で緩衝され、２０％のグリセロールを含み、他の賦形剤は含まない。図８Ｄにおいて、いずれかの温度で試験した製剤のいずれかにおいてＡＥＸ－ＨＰＬＣによって検出されたアデノウイルスの濃度に変化がないことが確認される。図８Ｃにおいては、両方の温度条件で保存されたアデノウイルスの相対的腫瘍溶解力（ＭＴＳ）を比較している。１つ以上の賦形剤（エタノール、アルギニンまたはメチオニン）の存在により、－８０℃と比較して４℃で保存した場合にアデノウイルスの効力が安定していた。すべての賦形剤が存在する場合、効力によって測定された４℃でのアデノウイルスの安定性はｐＨ８．０で最大であり、ｐＨが増加するにつれて安定性は減少した。保存時の非感染性粒子の形成率を比較する図８Ｅの結果により、腫瘍溶解力（ＭＴＳ）の結果が確認される。
【0321】
ウイルスを４℃で１２ヶ月間保存すると、１つ以上の賦形剤（メチオニン、アルギニン、エタノールおよびグリセロール）の存在がアデノウイルスの安定性を改善することが確認された。結果により、４℃で保存した場合に、アデノウイルスの安定性にとってｐＨの維持が不可欠であることが確認された。この実験では、安定性についての最適なｐＨは８．０であり、ｐＨの増加とともに安定性が低下した。実施例１では、データは、ｐＨ＞８．０がより安定していて、８．５～９．０が最適であることを示している。ただし、ｐＨ８．０で試験した唯一の緩衝液条件はＨＥＰＥＳであった。したがって、糖ベースの緩衝剤であるメグルミンは、実施例１で使用したＨＥＰＥＳ緩衝液と比較して、ｐＨ８．０でアデノウイルスに対してより大きな安定化効果を有すると結論付けることができる。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3】
【図4-1】
【図4-2】
【図4-3】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-02-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
グループＢアデノウイルスに適した液体製剤であって、
ａ）複製可能なグループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルスと、
ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｃ）０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールなどの０．２～１％ｖ／ｖのエタノールと、
ｄ）緩衝液と、を含み、
前記製剤のｐＨが、８．０～９．６の範囲内にあり、例えば、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５である、製剤。
ａ）複製可能なグループＢアデノウイルスなどのグループＢアデノウイルスと、
ｂ）１５～２５％ｖ／ｖのグリセロール、例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１％ｖ／ｖのグリセロールと、
ｃ）０．１～１．５％ｖ／ｖのエタノール、例えば、１％ｖ／ｖのエタノールなどの０．２～１％ｖ／ｖのエタノールと、
ｄ）緩衝液と、を含み、
前記製剤のｐＨが、８．０～９．６の範囲内にあり、例えば、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４または９．５である、製剤。
【外国語明細書】
