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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024046434
(43)【公開日】2024-04-03
(54)【発明の名称】口腔内菌叢改善剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/21 20060101AFI20240327BHJP
A61Q 11/00 20060101ALI20240327BHJP
A61K 8/19 20060101ALI20240327BHJP
C12N 1/20 20060101ALN20240327BHJP
【ＦＩ】
A61K8/21
A61Q11/00
A61K8/19
C12N1/20 A ZNA
【審査請求】未請求
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022151827
(22)【出願日】2022-09-22
(71)【出願人】
【識別番号】000000918
【氏名又は名称】花王株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000084
【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】礒 百合絵
(72)【発明者】
【氏名】田力 鉄平
(72)【発明者】
【氏名】藤井 明彦
【テーマコード（参考）】
4B065
4C083
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA06X
4B065AA49X
4B065BB02
4B065BB12
4B065CA44
4C083AB081
4C083AB082
4C083AB471
4C083AB472
4C083AC132
4C083AC182
4C083AC422
4C083AC432
4C083AC442
4C083AC472
4C083AC692
4C083AC782
4C083AD392
4C083EE33
(57)【要約】
【課題】口腔内菌叢中における非病原性細菌を選択的かつ効果的に生育促進して、口腔内菌叢の改善を有効に図ることのできる口腔内菌叢改善剤に関する。
【解決手段】硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内菌叢改善剤。
【選択図】なし
【解決手段】硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内菌叢改善剤。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内菌叢改善剤。
【請求項2】
硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内菌叢改善作用持続剤。
【請求項3】
硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内環境改善剤。
【請求項4】
硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、歯周組織保護剤。
【請求項5】
硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内ナイセリア属菌の生育促進剤。
【請求項6】
口腔内病原性細菌の生育抑制作用を有する請求項５に記載の口腔内ナイセリア属菌の生育促進剤。
【請求項7】
口腔内病原性細菌が、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスである請求項６に記載の口腔内ナイセリア属菌の生育促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、口腔内菌叢改善剤に関する。
【背景技術】
【0002】
口腔内には、疾患の有無にかかわらず多種多様の細菌が数多く生息しており、歯面や歯肉、歯肉縁、口蓋や頬粘膜、舌表面や舌背部等の種々の部位には、これらの細菌が群集を構築してなる口腔内菌叢が存在する。かかる口腔内菌叢には、う蝕や歯周病等の口腔内疾患に関与する病原性細菌だけでなく、非病原性細菌も常在菌として混在している。これら非病原性細菌と病原性細菌とのバランスを整えること、すなわち、非病原性細菌の存在割合を増大させて、非病原性細菌を口腔内菌叢のなかで優勢な状態にすることは、健常な口腔内環境の維持を可能とする。したがって、非病原性細菌が適切な割合で存在する口腔細菌叢の恒常性を維持することは、口腔疾患の発症や予防、又は進行の抑制において有用性が高いことである。
【0003】
このような状況のなか、例えば、特許文献１には、ラクトフェリン等を有効成分として含む口腔内細菌叢改善剤が開示されており、主として常在菌のスプレプトコッカス・ミチスの占める割合の増加を図っている。また、特許文献２では、ケンフェライドとベチュレトールとを特定の比率で含有することにより、口腔内菌叢における悪玉菌と善玉菌の比率を増加させ得る口腔内細菌叢改善剤が開示されている。さらに、特許文献３には、特定の不飽和脂肪酸と多価アルコールとのエステル化合物を含有する剤が開示されており、口腔内常在菌の生育を選択的に促進してその存在割合を高めることで口腔細菌構成比を改善する試みがなされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】特開２０１８－１６５５３号公報
【特許文献2】特開２０２２－８０４５号公報
【特許文献3】特開２０２１－２０８６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
しかしながら、上記いずれの特許文献に記載の技術であっても、非病原性細菌を選択的かつ効果的に生育促進する点においては、依然として検討の余地がある。
【0006】
したがって、本発明は、口腔内菌叢中における非病原性細菌を選択的かつ効果的に生育促進して、口腔内菌叢の改善を有効に図ることのできる口腔内菌叢改善剤に関する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
そこで本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすることにより、口腔内菌叢中における非病原性細菌を選択的かつ効果的に生育促進することのできる剤を見出した。
【0008】
すなわち、本発明は、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする、口腔内菌叢改善剤、口腔内菌叢改善作用持続剤、口腔内環境改善剤、歯周組織保護剤、及び口腔内ナイセリア属菌の生育促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、口腔内におけるナイセリア属菌の生育を選択的に促進し、また病原性細菌の生育を選択的に抑制して、口腔内菌叢の改善を有効に図ることができ、さらにその口腔内菌叢の改善作用を持続させることもできる。
【発明を実施するための形態】
【0010】
以下、本発明について詳細に説明する。
なお、本発明において、「口腔内菌叢」とは、口腔内に生息する多種多様の細菌により形成されてなる群集を意味する。かかる「口腔内菌叢」は、「口腔内（口内又は口腔）フローラ」又は「口腔内（口内又は口腔）マイクロバイオータ」とも称される。
したがって、本発明の口腔内菌叢改善剤は、口腔内（口内又は口腔）フローラ改善剤、口腔内（口内又は口腔）マイクロバイオータ改善剤とも同義である。
なお、本発明において、「口腔内菌叢」とは、口腔内に生息する多種多様の細菌により形成されてなる群集を意味する。かかる「口腔内菌叢」は、「口腔内（口内又は口腔）フローラ」又は「口腔内（口内又は口腔）マイクロバイオータ」とも称される。
したがって、本発明の口腔内菌叢改善剤は、口腔内（口内又は口腔）フローラ改善剤、口腔内（口内又は口腔）マイクロバイオータ改善剤とも同義である。
【0011】
また、本発明において、口腔内菌叢を「改善」するとは、口腔内菌叢の細菌構成を変化させて、非病原性細菌が占める割合を増大させることにより、或いは病原性細菌が占める割合を低減させることにより、口腔内菌叢の状態を健常な口腔内環境をもたらす状態へ転じさせることを意味する。具体的には、口腔内において、ナイセリア属菌の代謝を活性化等させて、その生育を選択的に促進させることにより、口腔内菌叢中におけるナイセリア属菌が占める割合を増大させることを意味し、また病原性細菌の生育を選択的に抑制させることにより、口腔内菌叢中におけるナイセリア属菌が占める割合を増大させることをも意味する。
ここで、本発明において、「病原性細菌」とは、具体的には、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（Ｐ．ｇ．））、フゾバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ（Ｆ．ｎ．））、又はストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ））を意味する。
ここで、本発明において、「病原性細菌」とは、具体的には、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（Ｐ．ｇ．））、フゾバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ（Ｆ．ｎ．））、又はストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ））を意味する。
【0012】
ここで、ナイセリア属菌とは、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）科ナイセリア属に属する非病原性細菌を意味する。かかるナイセリア属菌としては、具体的には、ナイセリア・ムコサ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｕｃｏｓａ）、ナイセリア・シッカ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｉｃｃａ）、ナイセリア・フラバ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｆｌａｖａ）、ナイセリア・サブフラバ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｕｂｆｌａｖａ）、ナイセリア・フラべセンス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、ナイセリア・エロンガータ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｅｌｏｎｇａｔａ）等が挙げられる。
【0013】
本発明の口腔内菌叢改善剤は、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする。本発明の口腔内菌叢改善剤によれば、非病原性細菌であるナイセリア属菌が占める割合を増大させ、或いは病原性細菌が占める割合を低減させて、口腔内菌叢の細菌構成に変化を与えることができる。本発明の口腔内菌叢改善剤によりナイセリア属菌が占める割合が増大すれば、口腔内環境を健康な状態へと導くことが可能となる。
【0014】
本発明の口腔内菌叢改善剤において、一方の有効成分である硝酸イオン供給化合物は、水と接触したときに硝酸（ＮＯ３）イオンを放出することのできる化合物である。そして、他方の有効成分である含フッ素化合物は、分子構造中にフッ素原子を含む化合物である。
本発明の口腔内菌叢改善剤により奏される口腔内菌叢の改善効果についての詳細なメカニズムは定かではないが、口腔内において常在菌であるナイセリア属菌が、一方の有効成分である硝酸イオン供給化合物を利用して一酸化窒素を産生する際、他方の有効成分である含フッ素化合物が何らかの相乗効果をもたらすものと考えられる。その結果、これらの有効成分がナイセリア属菌の生育促進に大いに寄与することとなり、口腔内菌叢におけるナイセリア属菌が占める割合を迅速に、かつ持続的に増大させることができるものと推定される。
本発明の口腔内菌叢改善剤により奏される口腔内菌叢の改善効果についての詳細なメカニズムは定かではないが、口腔内において常在菌であるナイセリア属菌が、一方の有効成分である硝酸イオン供給化合物を利用して一酸化窒素を産生する際、他方の有効成分である含フッ素化合物が何らかの相乗効果をもたらすものと考えられる。その結果、これらの有効成分がナイセリア属菌の生育促進に大いに寄与することとなり、口腔内菌叢におけるナイセリア属菌が占める割合を迅速に、かつ持続的に増大させることができるものと推定される。
【0015】
本発明の口腔内菌叢改善剤において、一方の有効成分である硝酸イオン供給化合物としては、具体的には、硝酸アルカリ金属塩、及び硝酸アルカリ土類金属塩から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。これらは、天然物由来のものも存在するが、不純物の混在等により口腔内菌叢の改善効果が減退することを有効に回避する観点から、化学合成により得たものを用いるのが好ましい。
かかる硝酸イオン供給化合物としては、より具体的には、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、及び硝酸カルシウムから選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、硝酸カリウムが好ましい。
かかる硝酸イオン供給化合物としては、より具体的には、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、及び硝酸カルシウムから選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、硝酸カリウムが好ましい。
【0016】
本発明の口腔内菌叢改善剤において、他方の有効成分である含フッ素化合物としては、具体的には、フッ化物イオン供給化合物、及びモノフルオロリン酸イオン供給化合物から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。
【0017】
フッ化物イオン供給化合物は、モノフルオロリン酸イオンを供給する化合物以外の含フッ素化合物である。かかるフッ化物イオン供給化合物としては、フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、フッ化カリウム、フッ化亜鉛、フッ化ベタイン、フッ化第一スズアラニン、フルオロケイ酸ナトリウム、フッ化ヘキシルアミン等から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、フッ化ナトリウム、又はフッ化第一スズが好ましい。
【0018】
モノフルオロリン酸イオン供給化合物としては、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウム、モノフルオロリン酸マグネシウム、モノフルオロリン酸カルシウム等から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、モノフルオロリン酸ナトリウムが好ましい。
【0019】
なかでも含フッ素化合物としては、ナイセリア属菌の生育促進への寄与を増強させる観点から、フッ化物イオン供給化合物であるのが好ましい。
【0020】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、硝酸イオン供給化合物の硝酸（ＮＯ３）換算量と含フッ素化合物のフッ素原子換算量との質量比（ＮＯ３／Ｆ）は、口腔菌叢改善効果を増大させる観点から、好ましくは０．５以上であり、より好ましくは２以上であり、さらに好ましくは４以上であり、よりさらに好ましくは８以上であり、またさらに好ましくは１２以上であり、よりさらに好ましくは１４以上であり、好ましくは５０以下であり、より好ましくは４８以下であり、さらに好ましくは４６以下であり、よりさらに好ましくは４４以下であり、またさらに好ましくは４２以下であり、よりさらに好ましくは３８以下である。そして、本発明の口腔内菌叢改善剤中における、硝酸イオン供給化合物の硝酸（ＮＯ３）換算量と含フッ素化合物のフッ素原子換算量との質量比（ＮＯ３／Ｆ）は、好ましくは０．５～５０であり、より好ましくは２～４８であり、さらに好ましくは４～４６あり、よりさらに好ましくは８～４４であり、またさらに好ましくは１２～４２であり、よりさらに好ましくは１４～３８である。
【0021】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、硝酸イオン供給化合物の含有量は、好ましくは０．５質量％以上であり、より好ましくは１質量％以上であり、さらに好ましくは２質量％以上であり、よりさらに好ましくは３質量％以上であり、またさらに好ましくは４質量％以上であり、好ましくは１５質量％以下であり、より好ましくは１２質量％以下であり、さらに好ましくは１０質量％以下であり、よりさらに好ましくは８質量％以下であり、またさらに好ましくは６質量％以下である。そして、本発明の口腔内菌叢改善剤中における、硝酸イオン供給化合物の含有量は、好ましくは０．５～１５質量％であり、より好ましくは１～１２質量％であり、さらに好ましくは２～１０質量％であり、よりさらに好ましくは３～８質量％であり、またさらに好ましくは４～６質量％である。
【0022】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、含フッ素化合物の含有量は、フッ素原子換算量で、好ましくは８５０ｐｐｍ以上であり、より好ましくは９００ｐｐｍ以上であり、さらに好ましくは９５０ｐｐｍ以上であり、好ましくは５０００ｐｐｍ以下であり、より好ましくは２０００ｐｐｍ以下であり、さらに好ましくは１４００ｐｐｍ以下である。そして、本発明の口腔内菌叢改善剤中における、含フッ素化合物の含有量は、フッ素原子換算量で、好ましくは８５０～５０００ｐｐｍであり、より好ましくは９００～２０００ｐｐｍであり、さらに好ましくは９５０～１４００ｐｐｍである。
【0023】
また、含フッ素化合物がフッ化物イオン供給化合物である場合、かかるフッ化物イオン供給化合物の含有量は、ナイセリア属菌生育促進作用及び病原性細菌育成抑制作用の観点から、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．１～１．５質量％であり、より好ましくは０．５～１．４質量％であり、さらに好ましくは０．７～１．３質量％である。
また、含フッ素化合物がフッ化物イオン供給化合物である場合、かかるフッ化物イオン供給化合物の含有量は、歯周病原性細菌割合の観点から、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．１～１．５質量％であり、より好ましくは０．１５～０．８質量％であり、さらに好ましくは０．１８～０．２５質量％である。
さらに、含フッ素化合物がモルオロリン酸イオン供給化合物である場合、かかるモノフルオロリン酸イオン供給化合物の含有量は、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．２～４質量％であり、より好ましくは０．４～２質量％であり、さらに好ましくは０．６～１．５質量％である。
また、含フッ素化合物がフッ化物イオン供給化合物である場合、かかるフッ化物イオン供給化合物の含有量は、歯周病原性細菌割合の観点から、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．１～１．５質量％であり、より好ましくは０．１５～０．８質量％であり、さらに好ましくは０．１８～０．２５質量％である。
さらに、含フッ素化合物がモルオロリン酸イオン供給化合物である場合、かかるモノフルオロリン酸イオン供給化合物の含有量は、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．２～４質量％であり、より好ましくは０．４～２質量％であり、さらに好ましくは０．６～１．５質量％である。
【0024】
本発明の口腔内菌叢改善剤は、口腔内菌叢改善効果を高める観点から、さらに糖アルコールを含有することができる。かかる糖アルコールとしては、エリスリトール、キシリトール及びマンニトールから選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、ナイセリア属菌の生育を促進させて、口腔内菌叢におけるナイセリア属菌が占める割合を効果的に増大させる観点から、エリスリトールが好ましい。
【0025】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、糖アルコールの含有量は、好ましくは１０質量％以上であり、より好ましくは２０質量％以上であり、さらに好ましくは２５質量％以上であり、よりさらに好ましくは３０質量％以上であり、好ましくは５０質量％以下であり、より好ましくは４５質量％以下であり、さらに好ましくは４０質量％以下である。そして、本発明の口腔内菌叢改善剤中における、糖アルコールの含有量は、好ましくは１０～５０質量％であり、より好ましくは２０～５０質量％であり、さらに好ましくは２５～４５質量％であり、よりさらに好ましくは３０～４０質量％である。
【0026】
本発明の口腔内菌叢改善剤は、本発明の効果を阻害しない範囲で、さらに界面活性剤を含有することができる。かかる界面活性剤としては、アニオン界面活性剤、及びノニオン界面活性剤から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。
【0027】
アニオン界面活性剤としては、アルキル硫酸塩やポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸塩等の、硫酸エステル塩以外のアニオン界面活性剤が好ましい。具体的には、例えば、オレイン酸塩、ラウリン酸塩等の脂肪酸塩；アルキルベンゼンスルホン酸塩、α－オレフィンスルホン酸塩、ヒドロキシアルカンスルホン酸塩等のアルキルスルホン酸塩；アルキルリン酸塩等のアルキルリン酸塩；高級脂肪酸スルホン化モノグリセリド塩、イセチオン酸の脂肪酸エステル塩；ポリオキシエチレンモノアルキルリン酸塩；Ｎ－アシルアミノ酸、Ｎ－アシルタウリン、及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。
なかでも、アルキルスルホン酸塩、脂肪酸エステル塩、Ｎ－アシルアミノ酸、Ｎ－アシルタウリン、及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上が好ましく、Ｎ－アシルアミノ酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上がより好ましい。
なかでも、アルキルスルホン酸塩、脂肪酸エステル塩、Ｎ－アシルアミノ酸、Ｎ－アシルタウリン、及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上が好ましく、Ｎ－アシルアミノ酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上がより好ましい。
【0028】
ノニオン界面活性剤としては、具体的には、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油；ショ糖脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；ソルビタン脂肪酸エステル；モノステアリン酸グリセリド等のグリセリン脂肪酸エステル；アルキルグルコシド；ポリオキシエチレンステアリルエーテル等のポリオキシエチレンモノアルキル（又はアルケニル）エーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル；ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド等の脂肪酸アルカノールアミド；ポリエチレングリコール脂肪酸エステルから選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。
なかでも、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンモノアルキル（又はアルケニル）エーテル、及びアルキルグルコシドから選ばれる１種又は２種以上が好ましい。
とりわけ、ナイセリア属菌生育促進作用の視点からは、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートから選ばれる１種又は２種が好ましく、歯周病原性細菌割合の視点からは、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、及びアルキルグルコシドから選ばれる１種又は２種以上が好ましい。
なかでも、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンモノアルキル（又はアルケニル）エーテル、及びアルキルグルコシドから選ばれる１種又は２種以上が好ましい。
とりわけ、ナイセリア属菌生育促進作用の視点からは、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートから選ばれる１種又は２種が好ましく、歯周病原性細菌割合の視点からは、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、及びアルキルグルコシドから選ばれる１種又は２種以上が好ましい。
【0029】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、界面活性剤の含有量は、好ましくは０．０５質量％以上であり、より好ましくは０．１質量％以上であり、さらに好ましくは０．２質量％以上であり、さらに好ましくは０．４質量％以上であり、口腔内菌叢改善効果を有効に高める観点から、好ましくは１０質量％以下であり、より好ましくは５質量％以下であり、さらに好ましくは２．５質量％以下であり、さらに好ましくは１質量％以下である。そして、本発明の口腔内菌叢改善剤中における、界面活性剤の含有量は、好ましくは０．０５～１０質量％であり、より好ましくは０．１～５質量％であり、さらに好ましくは０．２～２．５質量％であり、さらに好ましくは０．４～１質量％である。
なかでも、本発明の口腔内菌叢改善剤が含有する界面活性剤としては、ノニオン界面活性剤を含むことが好ましい。
かかるノニオン界面活性剤の含有量は、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．０５質量％以上であり、より好ましくは０．１質量％以上であり、さらに好ましくは０．３質量％以上であり、好ましくは５質量％以下であり、より好ましくは３質量％以下であり、さらに好ましくは１質量％以下である。
なかでも、本発明の口腔内菌叢改善剤が含有する界面活性剤としては、ノニオン界面活性剤を含むことが好ましい。
かかるノニオン界面活性剤の含有量は、本発明の口腔内菌叢改善剤中に、好ましくは０．０５質量％以上であり、より好ましくは０．１質量％以上であり、さらに好ましくは０．３質量％以上であり、好ましくは５質量％以下であり、より好ましくは３質量％以下であり、さらに好ましくは１質量％以下である。
【0030】
なお、本発明の口腔内菌叢改善剤において、高い口腔内菌叢改善効果を確保する観点から、アニオン界面活性剤である硫酸エステル塩の含有を制限することが好ましい。かかる硫酸エステル塩としては、アルキル硫酸塩、アルケニル硫酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシアルキレンアルケニルエーテル硫酸塩、及びポリオキシアルキレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。
【0031】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、硫酸エステル塩の含有量は、口腔内菌叢改善効果を有効に高める観点から、好ましくは０．５質量％未満であり、より好ましくは０．１質量％以下であり、さらに好ましくは０．０５質量％以下であり、或いは本発明の口腔内菌叢改善剤は、硫酸エステル塩を含有しないのが好ましい。
【0032】
本発明の口腔内菌叢改善剤は、ナイセリア属菌の生育を促進する効果が減退するのを回避して、高い口腔内菌叢改善効果を確保する観点から、殺菌剤の含有を制限することが好ましい。
【0033】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、殺菌剤の含有量は、口腔内菌叢改善効果を有効に高める観点から、好ましくは０．５質量％未満であり、より好ましくは０．１質量％以下であり、さらに好ましくは０．０５質量％以下であり、或いは本発明の口腔内菌叢改善剤は、殺菌剤を含有しないのが好ましい。
【0034】
さらに、殺菌剤のなかでも、カチオン性殺菌剤の含有を制限することが好ましい。
カチオン性殺菌剤としては、具体的には、例えば、第四級アンモニウム化合物、及びビグアニド化合物から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。第四級アンモニウム化合物に属するカチオン性殺菌剤としては、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化デカリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化アルキルジメチルアンモニウム、塩化アルキルトリメチルアンモニウム、及び塩化メチルベンゼトニウム等から選ばれる１種又は２週以上が挙げられる。また、ビグアニド化合物に属するカチオン性殺菌剤としては、グルコン酸クロルヘキシジンや塩酸クロルヘキシジン等のクロルヘキシジン及びその塩から選ばれる１種又は２週以上が挙げられる。
カチオン性殺菌剤としては、具体的には、例えば、第四級アンモニウム化合物、及びビグアニド化合物から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。第四級アンモニウム化合物に属するカチオン性殺菌剤としては、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化デカリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化アルキルジメチルアンモニウム、塩化アルキルトリメチルアンモニウム、及び塩化メチルベンゼトニウム等から選ばれる１種又は２週以上が挙げられる。また、ビグアニド化合物に属するカチオン性殺菌剤としては、グルコン酸クロルヘキシジンや塩酸クロルヘキシジン等のクロルヘキシジン及びその塩から選ばれる１種又は２週以上が挙げられる。
【0035】
本発明の口腔内菌叢改善剤中における、カチオン性殺菌剤の含有量は、口腔内菌叢改善効果を有効に高める観点から、好ましくは０．５質量％未満であり、より好ましくは０．１質量％以下であり、さらに好ましくは０．０５質量％以下であり、或いは本発明の口腔内菌叢改善剤は、カチオン性殺菌剤を含有しないのが好ましい。
【0036】
本発明の口腔内菌叢改善剤は、本発明の効果を阻害しない範囲で、上記成分のほか、水やエタノール等の溶剤；ｐＨ調整剤；粘結剤；グリセリン、プロピレングリコール、又はポリエチレングリコール等の湿潤剤；研磨剤；甘味剤；発泡剤や発泡助剤；保存料；色素；香料等を適宜含有させることができる。
【0037】
本発明の口腔内菌叢改善剤は、高い口腔内菌叢改善効果を持続的に発揮することができるため、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とする口腔内菌叢改善作用持続剤としても活用することができる。
すなわち、本発明の口腔内菌叢改善作用持続剤を所望の部位に適用した後、例えば実施例における試験例２にも示すように、一定期間にわたり口腔内菌叢改善効果を得ることができる。
すなわち、本発明の口腔内菌叢改善作用持続剤を所望の部位に適用した後、例えば実施例における試験例２にも示すように、一定期間にわたり口腔内菌叢改善効果を得ることができる。
【0038】
また、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、ナイセリア属菌の生育を促進させて、口腔内菌叢におけるナイセリア属菌が占める割合を効果的に増大させる効果を発揮することができるため、口腔内ナイセリア属菌の生育促進剤としても活用することができる。
そして、また硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、口腔内における病原性細菌である、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスの生育抑制作用をも有し、これら病原性細菌の生育を選択的に抑制して口腔内菌叢における病原性細菌が占める割合を低減させることができる。
また、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、これらポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスの生育抑制作用を有効に発揮することから、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスに対する抗菌剤としても活用することができる。
そして、また硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、口腔内における病原性細菌である、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスの生育抑制作用をも有し、これら病原性細菌の生育を選択的に抑制して口腔内菌叢における病原性細菌が占める割合を低減させることができる。
また、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、これらポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスの生育抑制作用を有効に発揮することから、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスに対する抗菌剤としても活用することができる。
【0039】
このように、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、非病原性細菌であるナイセリア属菌が占める割合を増大させ、或いはポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、又はストレプトコッカス・ミュータンスなる病原性細菌が占める割合を低減させて、口腔内菌叢の細菌構成に変化を与えることができるため、口腔内環境を健康な状態へと導くことが可能であることから、口腔内環境改善剤としても活用することができる。
【0040】
さらに、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、歯周病原性細菌であるポルフィロモナス・ジンジバリスやフゾバクテリウム・ヌクレアタム、及びう蝕の原因菌でもあるストレプトコッカス・ミュータンスの生育抑制作用をもたらすため、これらの歯肉細胞への感染を抑制し、歯肉に炎症が惹起されたり、かかる炎症の悪化により歯肉の腫れや出血、又は歯周ポケットの深化により歯周炎が引き起こされたりするのを抑止することができる。また、歯垢の形成を抑制して歯周病の罹患を未然に防止することができる。さらに、かかる歯周炎がさらに進行して、歯肉の退縮や歯根を支える歯槽骨の吸収や歯の脱落を抑止することができる。このように、硝酸イオン供給化合物と含フッ素化合物を有効成分とすれば、歯肉や歯根、歯槽骨等の歯周組織を有効に保護することが可能となることから、歯周組織保護剤としても活用することができる。
【0041】
本発明の、これら口腔内菌叢改善剤等の剤についての具体的な形態としては、口腔内に所定期間滞留し得るものである限り特に限定されないが、例えば、液体歯磨剤、練歯磨剤、潤製歯磨剤、粉歯磨剤、洗口剤（マウスウォッシュ）、マウスリンス、含嗽剤、口中清涼剤（マウススプレー等）等の非可食性の製剤形態；トローチ、可食性フィルム、チューインガム、キャンディ、グミキャンディ、タブレット、顆粒、細粒、粉末、カプセル等の可食性の口腔用製剤形態が挙げられる。なかでも、本発明の作用効果の発現の点から、洗口剤、マウスウォッシュ、練歯磨剤、粉歯磨剤、水歯磨剤が好ましい。
【実施例0042】
以下、本発明について、実施例に基づき具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【0043】
（１）細菌の準備
下記表１に示すように、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｊａｐａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＪＣＭ）、ＮＩＴＥ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＢＲＣ）より入手した各菌種を用いた。
下記表１に示すように、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｊａｐａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＪＣＭ）、ＮＩＴＥ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＢＲＣ）より入手した各菌種を用いた。
【0044】
【表1】
【0045】
（２）菌の前培養
ナイセリア・ムコサ（Ｎ．ｍ．）、アクチノマイセス・ビスコーサス（Ａ．ｖ．）、及びストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）は、Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ（ＢＨＩ）寒天培地（日本ＢＤ社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で１日間培養したのち、Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ（ＢＨＩ）液体培地（日本ＢＤ社製）に継代し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で１日間培養した。
フゾバクテリア・ヌクレアータム（Ｆ．ｎ．）、及びポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐ．ｇ．）は、アネロコロンビア血液寒天培地（日本ＢＤ社製）に播種し、温度３７℃、アネロパック・ケンキ（三菱ガス化学社製）を使用した嫌気条件下にて３日間培養したのち、ＢＨＩ液体培地に５ｕｇ／ｍＬヘミン（サーモフィッシャーサイエンス社製）、１ｕｇ／ｍＬビタミンＫ１（富士フィルム和光純薬社製）を添加した培地に２回継代し、上記と同一条件下で各々１～２日間培養した。
ナイセリア・ムコサ（Ｎ．ｍ．）、アクチノマイセス・ビスコーサス（Ａ．ｖ．）、及びストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）は、Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ（ＢＨＩ）寒天培地（日本ＢＤ社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で１日間培養したのち、Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ（ＢＨＩ）液体培地（日本ＢＤ社製）に継代し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で１日間培養した。
フゾバクテリア・ヌクレアータム（Ｆ．ｎ．）、及びポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐ．ｇ．）は、アネロコロンビア血液寒天培地（日本ＢＤ社製）に播種し、温度３７℃、アネロパック・ケンキ（三菱ガス化学社製）を使用した嫌気条件下にて３日間培養したのち、ＢＨＩ液体培地に５ｕｇ／ｍＬヘミン（サーモフィッシャーサイエンス社製）、１ｕｇ／ｍＬビタミンＫ１（富士フィルム和光純薬社製）を添加した培地に２回継代し、上記と同一条件下で各々１～２日間培養した。
【0046】
（３）バイオフィルムモデルの作製
上記（２）の前培養後の菌液を遠心処理（Ｎ．ｍ．、Ａ．ｖ．、及びＳ．ｍｕｔａｎｓは、２０００ｇを室温にて１０分間；Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．は、４５００ｇを室温にて１０分間）した後、培養上清を除いた菌体を、５ｕｇ／ｍＬのヘミン及び１ｕｇ／ｍＬのビタミンＫ１含有ＢＨＩ液体培地に再懸濁して洗浄した。
次いで、再度遠心処理した後、培養上清を除いて５ｕｇ／ｍＬのヘミン及び１ｕｇ／ｍＬのビタミンＫ１含有ＢＨＩ培地に再懸濁し、分光光度計（エッペンドルフ社製）を用いて６００ｎｍでの吸光度（ＯＤ６００）を測定した。
なお、Ｎ．ｍ．、Ａ．ｖ．、及びＳ．ｍｕｔａｎｓは、ＯＤ６００＝０．１３２に調製し、Ｆ．ｎ．、Ｐ．ｇ．は、ＯＤ６００＝０．３９６に調製して、各試験に用いた。
上記（２）の前培養後の菌液を遠心処理（Ｎ．ｍ．、Ａ．ｖ．、及びＳ．ｍｕｔａｎｓは、２０００ｇを室温にて１０分間；Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．は、４５００ｇを室温にて１０分間）した後、培養上清を除いた菌体を、５ｕｇ／ｍＬのヘミン及び１ｕｇ／ｍＬのビタミンＫ１含有ＢＨＩ液体培地に再懸濁して洗浄した。
次いで、再度遠心処理した後、培養上清を除いて５ｕｇ／ｍＬのヘミン及び１ｕｇ／ｍＬのビタミンＫ１含有ＢＨＩ培地に再懸濁し、分光光度計（エッペンドルフ社製）を用いて６００ｎｍでの吸光度（ＯＤ６００）を測定した。
なお、Ｎ．ｍ．、Ａ．ｖ．、及びＳ．ｍｕｔａｎｓは、ＯＤ６００＝０．１３２に調製し、Ｆ．ｎ．、Ｐ．ｇ．は、ＯＤ６００＝０．３９６に調製して、各試験に用いた。
【0047】
以下の各試験１～３で用いる表４～７に示す処方の剤を、各々ＢＨＩ液体培地に溶解し、これらをＢＨＩ液体培地で６倍希釈した液を評価サンプルとした。Ｐｏｌｙ－Ｌ－Ｌｙｓｉｎｅ Ｃｏａｔ ２４Ｗｅｌｌ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ（ＡＧＣテクノグラス社製）に、評価サンプル又はＢＨＩ培地を１００μＬ、及び調製済みの菌液を各５０μＬずつ（計２５０μＬ）添加し、さらにＢＨＩ培地６５０μＬを添加して、温度３７℃、アネロパック・ケンキ（三菱ガス化学）を使用した嫌気条件下にて２４時間培養し、バイオフィルムを作製した。
【0048】
（４）バイオフィルムからのゲノムＤＮＡの抽出
プレートの底面に付着したバイオフィルムを、培養上清とピペッティングにより充分撹拌した後、そのうちの１００μＬを１．５ｍＬチューブに回収した。次いで、遠心処理（１４０００ｒｐｍで室温にて１０分間）し、培養上清を除いた沈殿物に２０ｍｇ／ｍＬのリゾチーム（富士フィルム和光純薬社製）溶液（２０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２ｍＭＥＤＴＡ、１．２％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００含有）を２００μＬ添加し、振盪（２００ｒｐｍ）しながら温度３７℃でインキュベートした。ゲノムＤＮＡの抽出は、Ｄｎｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｓｓｕｅ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用い、キットの標準プロトコールにしたがって行った。最終的に３００μＬの溶出液で溶出し、ゲノムＤＮＡサンプルを調製した。
プレートの底面に付着したバイオフィルムを、培養上清とピペッティングにより充分撹拌した後、そのうちの１００μＬを１．５ｍＬチューブに回収した。次いで、遠心処理（１４０００ｒｐｍで室温にて１０分間）し、培養上清を除いた沈殿物に２０ｍｇ／ｍＬのリゾチーム（富士フィルム和光純薬社製）溶液（２０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２ｍＭＥＤＴＡ、１．２％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００含有）を２００μＬ添加し、振盪（２００ｒｐｍ）しながら温度３７℃でインキュベートした。ゲノムＤＮＡの抽出は、Ｄｎｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｓｓｕｅ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用い、キットの標準プロトコールにしたがって行った。最終的に３００μＬの溶出液で溶出し、ゲノムＤＮＡサンプルを調製した。
【0049】
（５）ゲノムＤＮＡサンプルにおける菌の定量
菌の定量は、Ｔａｑｍａｎプローブを用いたリアルタイムＰＣＲ法により行った。
また、表２に示すように、各菌のｒＲＮＡ１６Ｓ遺伝子を特異的に検出するＴａｑｍａｎプローブとプライマーを作製した。またフゾバクテリア・ヌクレアータムのｒＲＮＡ１６Ｓ遺伝子を検出するＴａｑｍａｎプローブとプライマーは、既報（「Unculturable and culturable periodontal-related bacteria are associated with periodontal inflammation during pregnancy and with preterm low birth weight delivery」、Changchang Ye 外、Scientific reports 10、2020、15807）に記載の配列で作製した。
なお、リアルタイムＰＣＲの反応溶液組成と反応条件を表３に示す。
菌の定量は、Ｔａｑｍａｎプローブを用いたリアルタイムＰＣＲ法により行った。
また、表２に示すように、各菌のｒＲＮＡ１６Ｓ遺伝子を特異的に検出するＴａｑｍａｎプローブとプライマーを作製した。またフゾバクテリア・ヌクレアータムのｒＲＮＡ１６Ｓ遺伝子を検出するＴａｑｍａｎプローブとプライマーは、既報（「Unculturable and culturable periodontal-related bacteria are associated with periodontal inflammation during pregnancy and with preterm low birth weight delivery」、Changchang Ye 外、Scientific reports 10、2020、15807）に記載の配列で作製した。
なお、リアルタイムＰＣＲの反応溶液組成と反応条件を表３に示す。
【0050】
【表2】
【0051】
【表3】
【0052】
各菌の存在割合（％）については、まずコピー数が明らかなＰＣＲ産物を標品として検量線を作成した後、各菌のｒＲＮＡ１６Ｓ遺伝子のコピー数を算出し、以下の計算式により求めた。
各菌の存在割合（％）＝（各菌のコピー数）/（５菌種のコピー数の総和）×１００
各菌の存在割合（％）＝（各菌のコピー数）/（５菌種のコピー数の総和）×１００
【0053】
［試験１：実施例１～２１、比較例１～４］
表４～５に示す処方にしたがい、残部をＢＨＩ培地として全量１００質量％とする剤を調製し、上記（１）～（５）にしたがって菌の定量を行った。
なお、各実施例における硝酸カリウムの含有量に応じて、同量の硝酸カリウムのみを含有する比較例を対照例として選択し、以下の評価１～３の評価の基準として用いた。具体的には、例えば、実施例２～４の対照例としては比較例２を選択し、実施例５～１１の対照例としては比較例３を選択した。
次いで、下記方法にしたがって菌叢改善効果についての各評価１～３を行った。
結果を表４～５に示す。
表４～５に示す処方にしたがい、残部をＢＨＩ培地として全量１００質量％とする剤を調製し、上記（１）～（５）にしたがって菌の定量を行った。
なお、各実施例における硝酸カリウムの含有量に応じて、同量の硝酸カリウムのみを含有する比較例を対照例として選択し、以下の評価１～３の評価の基準として用いた。具体的には、例えば、実施例２～４の対照例としては比較例２を選択し、実施例５～１１の対照例としては比較例３を選択した。
次いで、下記方法にしたがって菌叢改善効果についての各評価１～３を行った。
結果を表４～５に示す。
【0054】
《評価１：ナイセリア・ムコサ（Ｎ．ｍ．）生育促進作用》
各剤において求めた菌の定量値をもとに、下記式を用いてＮ．ｍ．生育促進作用（％）の値を算出した。
Ｎ．ｍ．生育促進作用（％）＝
（Ｎ．ｍ．の存在割合）－（対照例として選択した比較例におけるＮ．ｍ．の存在割合）
次いで、得られたＮ．ｍ．生育促進作用（％）の値を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
Ａ：４０％以上
Ｂ：２０％以上４０％未満
Ｃ：１０％以上２０％未満
Ｄ：１％以上１０％未満
Ｅ：１％未満
各剤において求めた菌の定量値をもとに、下記式を用いてＮ．ｍ．生育促進作用（％）の値を算出した。
Ｎ．ｍ．生育促進作用（％）＝
（Ｎ．ｍ．の存在割合）－（対照例として選択した比較例におけるＮ．ｍ．の存在割合）
次いで、得られたＮ．ｍ．生育促進作用（％）の値を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
Ａ：４０％以上
Ｂ：２０％以上４０％未満
Ｃ：１０％以上２０％未満
Ｄ：１％以上１０％未満
Ｅ：１％未満
【0055】
《評価２：病原性細菌生育抑制作用》
各剤について求めた菌の定量値をもとに、下記式を用いて病原性細菌の生育抑制作用（％）の値を算出した。
病原性細菌生育抑制作用（％）＝
（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ、Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）－
（対照例として選択した比較例におけるＳ．ｍｕｔａｎｓ、Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）
次いで、得られた病原性細菌の生育抑制作用（％）の値を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
Ａ：－４０％未満
Ｂ：－４０％以上－２０％未満
Ｃ：－２０％以上－１０％未満
Ｄ：－１０％以上－１％未満
Ｅ：－１％以上
各剤について求めた菌の定量値をもとに、下記式を用いて病原性細菌の生育抑制作用（％）の値を算出した。
病原性細菌生育抑制作用（％）＝
（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ、Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）－
（対照例として選択した比較例におけるＳ．ｍｕｔａｎｓ、Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）
次いで、得られた病原性細菌の生育抑制作用（％）の値を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
Ａ：－４０％未満
Ｂ：－４０％以上－２０％未満
Ｃ：－２０％以上－１０％未満
Ｄ：－１０％以上－１％未満
Ｅ：－１％以上
【0056】
《評価３：歯周病原性細菌割合》
Ｆ．ｎ．及びＰ．ｇ．の存在割合の和の値（％）を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
歯周病原性細菌割合（％）＝
（Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）－（対照例として選択した比較例におけるＦ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）
Ａ：０．５％未満
Ｂ：０．５％以上１％未満
Ｃ：１％以上２％未満
Ｄ：２％以上４％未満
Ｅ：４％以上
Ｆ．ｎ．及びＰ．ｇ．の存在割合の和の値（％）を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
歯周病原性細菌割合（％）＝
（Ｆ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）－（対照例として選択した比較例におけるＦ．ｎ．、及びＰ．ｇ．の存在割合の和）
Ａ：０．５％未満
Ｂ：０．５％以上１％未満
Ｃ：１％以上２％未満
Ｄ：２％以上４％未満
Ｅ：４％以上
【0057】
【表4】
【0058】
【表5】
【0059】
［試験２：実施例２２～２７、比較例５～６］
実施例２１～２４及び比較例５については、培養時間を１２時間とし、実施例２５～２７及び比較例６については、培養時間を４８時間とし、試験１と同様にして菌叢改善効果の持続性評価を行った。
培養時間が２４時間であった実施例５～６、１０及び比較例３も含め、結果を表６に示す。
実施例２１～２４及び比較例５については、培養時間を１２時間とし、実施例２５～２７及び比較例６については、培養時間を４８時間とし、試験１と同様にして菌叢改善効果の持続性評価を行った。
培養時間が２４時間であった実施例５～６、１０及び比較例３も含め、結果を表６に示す。
【0060】
【表6】
【0061】
［試験３：実施例２８～３１、比較例７～１０］
表７に示す処方にしたがい、残部をＢＨＩ培地として全量１００質量％とする剤を調製し、また剤を添加しなかったものを対照例１とした。
次いで、得られた各剤について、Ｎ．ｍ．の菌増加数、及びＳ．ｍｕｔａｎｓの菌減少数を測定し、各々対照例との差分を求めた結果を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
なお、対照例１でのＮ．ｍ．の菌数は１．６４×１０５ｃｏｐｉｅｓ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓの菌数は２．４９×１０７ｃｏｐｉｅｓであった。
結果を表７に示す。
表７に示す処方にしたがい、残部をＢＨＩ培地として全量１００質量％とする剤を調製し、また剤を添加しなかったものを対照例１とした。
次いで、得られた各剤について、Ｎ．ｍ．の菌増加数、及びＳ．ｍｕｔａｎｓの菌減少数を測定し、各々対照例との差分を求めた結果を下記ランクに当てはめ、評価結果とした。
なお、対照例１でのＮ．ｍ．の菌数は１．６４×１０５ｃｏｐｉｅｓ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓの菌数は２．４９×１０７ｃｏｐｉｅｓであった。
結果を表７に示す。
【0062】
・Ｎ．ｍ．の菌増加数（対照例１との差分）
Ａ：１×１０７ｃｏｐｉｅｓ以上
Ｂ：１×１０６ｃｏｐｉｅｓ以上１×１０７ｃｏｐｉｅｓ未満
Ｃ：１×１０６ｃｏｐｉｅｓ未満
・Ｓ．ｍｕｔａｎｓの菌減少数（対照例１との差分）
Ａ：－１×１０７ｃｏｐｉｅｓ以上
Ｂ：－１×１０６ｃｏｐｉｅｓ以上１×１０７ｃｏｐｉｅｓ未満
Ｃ：－１×１０６ｃｏｐｉｅｓ未満
Ａ：１×１０７ｃｏｐｉｅｓ以上
Ｂ：１×１０６ｃｏｐｉｅｓ以上１×１０７ｃｏｐｉｅｓ未満
Ｃ：１×１０６ｃｏｐｉｅｓ未満
・Ｓ．ｍｕｔａｎｓの菌減少数（対照例１との差分）
Ａ：－１×１０７ｃｏｐｉｅｓ以上
Ｂ：－１×１０６ｃｏｐｉｅｓ以上１×１０７ｃｏｐｉｅｓ未満
Ｃ：－１×１０６ｃｏｐｉｅｓ未満
【0063】
【表7】
【配列表】