(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024049691
(43)【公開日】2024-04-10
(54)【発明の名称】蛍光偏光免疫測定法及び蛍光偏光免疫測定装置
(51)【国際特許分類】
G01N 33/542 20060101AFI20240403BHJP
【ＦＩ】
G01N33/542 A
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022156079
(22)【出願日】2022-09-29
(71)【出願人】
【識別番号】303018827
【氏名又は名称】Ｔｉａｎｍａ Ｊａｐａｎ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100095407
【弁理士】
【氏名又は名称】木村 満
(74)【代理人】
【識別番号】100183955
【弁理士】
【氏名又は名称】齋藤 悟郎
(74)【代理人】
【識別番号】100132883
【弁理士】
【氏名又は名称】森川 泰司
(74)【代理人】
【識別番号】100180334
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 洋美
(74)【代理人】
【識別番号】100177149
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 浩義
(74)【代理人】
【識別番号】100174067
【弁理士】
【氏名又は名称】湯浅 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100136342
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 成美
(72)【発明者】
【氏名】小野瀬 翔
(72)【発明者】
【氏名】今井 阿由子
(72)【発明者】
【氏名】住吉 研
(57)【要約】 （修正有）
【課題】競合反応本来の偏光度を得ることができる蛍光偏光免疫測定法を提供する。
【解決手段】目的物質を含まない第１基準サンプルと、第１基準サンプルに抗体、蛍光標識物質及び目的物質を添加して生成され、目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルの偏光度を測定し、第１測定対象サンプルと、第１測定対象サンプルに、抗体及び蛍光標識物質を第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、第２基準サンプルの偏光度を第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、第２測定対象サンプルの偏光度を第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、第１検量線において、第２補正偏光度に対応する濃度を第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める。
【選択図】図１
【解決手段】目的物質を含まない第１基準サンプルと、第１基準サンプルに抗体、蛍光標識物質及び目的物質を添加して生成され、目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルの偏光度を測定し、第１測定対象サンプルと、第１測定対象サンプルに、抗体及び蛍光標識物質を第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、第２基準サンプルの偏光度を第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、第２測定対象サンプルの偏光度を第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、第１検量線において、第２補正偏光度に対応する濃度を第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
目的物質に対して結合能を有する抗体と、前記目的物質を蛍光色素で標識した蛍光標識物質と、を用いて第１測定対象サンプルに含まれる前記目的物質の濃度を測定する蛍光偏光免疫測定法であって、
目的物質を含まない第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める、
蛍光偏光免疫測定法。
目的物質を含まない第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める、
蛍光偏光免疫測定法。
【請求項2】
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が前記第１検量線において偏光度が最小となる濃度となる第３測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第３測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第３補正偏光度を算出する、
請求項１に記載の蛍光偏光免疫測定法。
前記第３測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第３補正偏光度を算出する、
請求項１に記載の蛍光偏光免疫測定法。
【請求項3】
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第４測定対象サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第４測定対象サンプルの偏光度を前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第４補正偏光度を算出し、前記第４測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第４補正偏光度との関係を示す第２検量線を生成する、
請求項１に記載の蛍光偏光免疫測定法。
前記第４測定対象サンプルの偏光度を前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第４補正偏光度を算出し、前記第４測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第４補正偏光度との関係を示す第２検量線を生成する、
請求項１に記載の蛍光偏光免疫測定法。
【請求項4】
目的物質に対して結合能を有する抗体と、前記目的物質を蛍光色素で標識した蛍光標識物質と、を用いて第１測定対象サンプルに含まれる前記目的物質の濃度を測定する蛍光偏光免疫測定装置であって、
サンプルに直線偏光の励起光を照射する照射光学系と、
サンプルから発せられる蛍光のうち、駆動信号に応じた直線偏光成分を選択的に通過させる偏光調整素子と、
前記偏光調整素子を通過した蛍光強度を検出する受光部と、
前記偏光調整素子に前記駆動信号を出力するとともに前記受光部で検出される蛍光強度に基づいて前記駆動信号に従ってサンプルの偏光度を測定する制御部と、
を備え、
前記制御部は、
目的物質を含まない第１基準サンプルをサンプルとして、前記第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルをサンプルとして、前記第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルをサンプルとして、前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルをサンプルとして、前記第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める、
蛍光偏光免疫測定装置。
サンプルに直線偏光の励起光を照射する照射光学系と、
サンプルから発せられる蛍光のうち、駆動信号に応じた直線偏光成分を選択的に通過させる偏光調整素子と、
前記偏光調整素子を通過した蛍光強度を検出する受光部と、
前記偏光調整素子に前記駆動信号を出力するとともに前記受光部で検出される蛍光強度に基づいて前記駆動信号に従ってサンプルの偏光度を測定する制御部と、
を備え、
前記制御部は、
目的物質を含まない第１基準サンプルをサンプルとして、前記第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルをサンプルとして、前記第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルをサンプルとして、前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルをサンプルとして、前記第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める、
蛍光偏光免疫測定装置。
【請求項5】
前記制御部は、第１信号と、前記第１信号とは信号レベルが異なる第２信号とを交互に繰り返す前記駆動信号を前記偏光調整素子に入力し、
前記偏光調整素子は、前記第１信号を入力する第１期間、サンプルに入射する励起光に対して偏光方向が直交する直線偏光成分のみ通過させ、前記第２信号を入力する第２期間、サンプルに入射する励起光に対して偏光方向が垂直な直線偏光成分のみ通過させ、
前記制御部は、
サンプルを前記第１基準サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ａ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ａ（ＩII）とを、前記第１基準サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２基準サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｂ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｂ（ＩII）とを、前記第２基準サンプルの偏光度として測定し、
を計算して、前記第１補正偏光度ＰＢＡを求め、
前記制御部は、
サンプルを前記第１測定対象サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｃ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｃ（ＩII）とを、前記第１測定対象サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２測定対象サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｄ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｄ（ＩII）とを、前記第２測定対象サンプルの偏光度として測定し、
を計算して、前記第２補正偏光度ＰＤＣを求める、
請求項４に記載の蛍光偏光免疫測定装置。
前記偏光調整素子は、前記第１信号を入力する第１期間、サンプルに入射する励起光に対して偏光方向が直交する直線偏光成分のみ通過させ、前記第２信号を入力する第２期間、サンプルに入射する励起光に対して偏光方向が垂直な直線偏光成分のみ通過させ、
前記制御部は、
サンプルを前記第１基準サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ａ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ａ（ＩII）とを、前記第１基準サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２基準サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｂ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｂ（ＩII）とを、前記第２基準サンプルの偏光度として測定し、
【数1】
前記制御部は、
サンプルを前記第１測定対象サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｃ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｃ（ＩII）とを、前記第１測定対象サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２測定対象サンプルとしたときに、前記第１期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｄ（Ｉ⊥）と、前記第２期間において前記受光部で検出される蛍光強度Ｄ（ＩII）とを、前記第２測定対象サンプルの偏光度として測定し、
【数2】
請求項４に記載の蛍光偏光免疫測定装置。
【請求項6】
前記制御部は、前記駆動信号として励起光の偏光方向と垂直な直線偏光の第１透過光強度と、励起光の偏光方向と平行な直線偏光の第２透過光強度とを正弦波状に変化させる信号を前記偏光調整素子に入力し、
前記偏光調整素子は、前記第１透過光強度と前記第２透過光強度とを逆相に変化させ、
前記制御部は、
前記正弦波状に変化する透過光強度の１周期を４つの期間に等分割し、それぞれの期間を第１期間、第２期間、第３期間、第４期間としたときに、
サンプルを前記第１基準サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ａ、ｐ２Ａ、ｐ３Ａ、ｐ４Ａを、前記第１基準サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２基準サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｂ、ｐ２Ｂ、ｐ３Ｂ、ｐ４Ｂを、前記第２基準サンプルの偏光度として測定し、
ｐｘＢＡ＝ｐｘＢ－ｐｘＡ（ｘ＝１，２，３，４）を計算し、
を計算して、第１補正偏光度ＰＢＡを求め、
前記制御部は、
サンプルを前記第１測定対象サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｃ、ｐ２Ｃ、ｐ３Ｃ、ｐ４Ｃを、前記第１測定対象サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２測定対象サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｄ、ｐ２Ｄ、ｐ３Ｄ、ｐ４Ｄを、前記第２測定対象サンプルの偏光度として測定し、
ｐｘＤＣ＝ｐｘＤ－ｐｘＣ（ｘ＝１，２，３，４）を計算し、
を計算して、第２補正偏光度ＰＤＣを求める、
請求項４に記載の蛍光偏光免疫測定装置。
前記偏光調整素子は、前記第１透過光強度と前記第２透過光強度とを逆相に変化させ、
前記制御部は、
前記正弦波状に変化する透過光強度の１周期を４つの期間に等分割し、それぞれの期間を第１期間、第２期間、第３期間、第４期間としたときに、
サンプルを前記第１基準サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ａ、ｐ２Ａ、ｐ３Ａ、ｐ４Ａを、前記第１基準サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２基準サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｂ、ｐ２Ｂ、ｐ３Ｂ、ｐ４Ｂを、前記第２基準サンプルの偏光度として測定し、
ｐｘＢＡ＝ｐｘＢ－ｐｘＡ（ｘ＝１，２，３，４）を計算し、
【数3】
前記制御部は、
サンプルを前記第１測定対象サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｃ、ｐ２Ｃ、ｐ３Ｃ、ｐ４Ｃを、前記第１測定対象サンプルの偏光度として測定し、
サンプルを前記第２測定対象サンプルとしたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において前記受光部で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｄ、ｐ２Ｄ、ｐ３Ｄ、ｐ４Ｄを、前記第２測定対象サンプルの偏光度として測定し、
ｐｘＤＣ＝ｐｘＤ－ｐｘＣ（ｘ＝１，２，３，４）を計算し、
【数4】
請求項４に記載の蛍光偏光免疫測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、蛍光偏光免疫測定法及び蛍光偏光免疫測定装置に関する。
【背景技術】
【0002】
抗原抗体反応を利用するイムノアッセイの１つに、蛍光偏光測定により目的物質の濃度を見積もる蛍光偏光免疫測定法（ＦＰＩＡ）という測定法がある。ＦＰＩＡには、競合型と非競合型とがある。このうち、競合型のＦＰＩＡは、目的対象物質と、蛍光標識化した目的対象物質（トレーサ）とを競合させて抗体と反応させる。抗体と結合していないトレーサは、液体中で激しく動いており、偏光した励起光を照射しても蛍光はランダムに放射される。一方、抗体と結合したトレーサは、動き難くなるため、励起光の偏光方向に偏った蛍光を放射する。
【0003】
競合型のＦＰＩＡでは、励起光の偏光方向に対して平行な方向の蛍光強度と、垂直な方向の蛍光強度とをそれぞれ求め、両方向の蛍光強度の偏り具合を偏光度として測定する。この偏光度は、トレーサ－抗体複合体の量に依存するため、偏光度を指標とすることで目的物質の濃度の定量が可能となる。
【0004】
ＦＰＩＡでは、測定される偏光度と目的物質の濃度との関係を示す検量線を作成し、得られた検量線に基づいて、測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度を定量化する（例えば特許文献１、２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】特開２０１１－４７８０２号公報
【特許文献2】米国特許出願公開第２００９／００２３５９５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
測定対象サンプルには、トレーサの他、自家蛍光物が含まれる。蛍光の偏光度は、測定対象サンプルに含まれる自家蛍光物から発せられる蛍光の影響を受ける。自家蛍光物からの蛍光の影響により、競合反応本来の偏光度が得られないという不都合がある。
【0007】
本開示は、上記実情の下になされたものであり、競合反応本来の偏光度を得ることができる蛍光偏光免疫測定法及び蛍光偏光免疫測定装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
上記目的を達成するために、本開示の第１の観点に係る蛍光偏光免疫測定法は、
目的物質に対して結合能を有する抗体と、前記目的物質を蛍光色素で標識した蛍光標識物質と、を用いて第１測定対象サンプルに含まれる前記目的物質の濃度を測定する蛍光偏光免疫測定法であって、
目的物質を含まない第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める。
目的物質に対して結合能を有する抗体と、前記目的物質を蛍光色素で標識した蛍光標識物質と、を用いて第１測定対象サンプルに含まれる前記目的物質の濃度を測定する蛍光偏光免疫測定法であって、
目的物質を含まない第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める。
【0009】
本開示の第２の観点に係る蛍光偏光免疫測定装置は、
目的物質に対して結合能を有する抗体と、前記目的物質を蛍光色素で標識した蛍光標識物質と、を用いて第１測定対象サンプルに含まれる前記目的物質の濃度を測定する蛍光偏光免疫測定装置であって、
サンプルに直線偏光の励起光を照射する照射光学系と、
サンプルから発せられる蛍光のうち、駆動信号に応じた直線偏光成分を選択的に通過させる偏光調整素子と、
前記偏光調整素子を通過した蛍光強度を検出する受光部と、
前記偏光調整素子に前記駆動信号を出力するとともに前記受光部で検出された蛍光強度に基づいてサンプルの偏光度を測定する制御部と、
を備え、
前記制御部は、
目的物質を含まない第１基準サンプルをサンプルとして、前記第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルをサンプルとして、前記第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルをサンプルとして、前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルをサンプルとして、前記第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める。
目的物質に対して結合能を有する抗体と、前記目的物質を蛍光色素で標識した蛍光標識物質と、を用いて第１測定対象サンプルに含まれる前記目的物質の濃度を測定する蛍光偏光免疫測定装置であって、
サンプルに直線偏光の励起光を照射する照射光学系と、
サンプルから発せられる蛍光のうち、駆動信号に応じた直線偏光成分を選択的に通過させる偏光調整素子と、
前記偏光調整素子を通過した蛍光強度を検出する受光部と、
前記偏光調整素子に前記駆動信号を出力するとともに前記受光部で検出された蛍光強度に基づいてサンプルの偏光度を測定する制御部と、
を備え、
前記制御部は、
目的物質を含まない第１基準サンプルをサンプルとして、前記第１基準サンプルの偏光度を測定し、
前記第１基準サンプルに、前記抗体、前記蛍光標識物質及び前記目的物質を添加して生成され、前記目的物質の濃度が互いに異なる複数の第２基準サンプルをサンプルとして、前記第２基準サンプルの偏光度をそれぞれ測定し、
前記第１測定対象サンプルをサンプルとして、前記第１測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第１測定対象サンプルに、前記抗体及び前記蛍光標識物質を前記第２基準サンプルに添加された量と同量添加して生成される第２測定対象サンプルをサンプルとして、前記第２測定対象サンプルの偏光度を測定し、
前記第２基準サンプルの偏光度を前記第１基準サンプルの偏光度で補正して第１補正偏光度を算出し、前記第２基準サンプルに含まれる目的物質の濃度と前記第１補正偏光度との関係を示す第１検量線を生成し、
前記第２測定対象サンプルの偏光度を、前記第１測定対象サンプルの偏光度で補正して第２補正偏光度を算出し、
前記第１検量線において、前記第２補正偏光度に対応する濃度を、前記第１測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度として求める。
【発明の効果】
【0010】
本開示によれば、競合反応本来の偏光度を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】本開示の実施の形態１に係る蛍光偏光免疫測定法を示す模式図である。
【図2】蛍光偏光免疫測定装置の構成を示す模式図である。
【図3】制御部のハードウエア構成を示すブロック図である。
【図4】マイクロデバイスの模式図である。
【図5】第１検量線を用いた目的物質の濃度の検出原理を示す模式図である。
【図6】偏光調整素子の駆動方式の第１例を示す模式図である。
【図7】制御部の測定処理を示すフローチャートである。
【図8】偏光調整素子の駆動方式の第２例を示す模式図である。
【図9】本開示の実施の形態２に係る蛍光偏光免疫測定法を示す模式図である。
【図10】本開示の実施の形態３に係る蛍光偏光免疫測定法を示す模式図である。
【図11】（Ａ）は、ナンプラー及び純水に含まれるヒスタミンの補正前の検量線を示す図である。（Ｂ）は、ナンプラー及び純水に含まれるヒスタミンの補正後の検量線を示す図である。
【図12】（Ａ）は、醤油及び純水に含まれるヒスタミンの補正前の検量線を示す図である。（Ｂ）は、醤油及び純水に含まれるヒスタミンの補正後の検量線を示す図である。
【図13】（Ａ）は、ワイン及び純水に含まれるヒスタミンの補正前の検量線を示す図である。（Ｂ）は、ワイン及び純水に含まれるヒスタミンの補正後の検量線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本開示の実施の形態について図面を参照して詳細に説明する。各図面においては、同一又は同等の部分に同一の符号を付す。
【0013】
［実施の形態１］
まず、本開示の実施の形態１について説明する。本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法では、測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度を測定する。図１に模式的に示されるこの蛍光偏光免疫測定法において、測定の目的となる物質は第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢである。この蛍光偏光免疫測定法は、目的物質ＯＢに対して結合能を有する抗体Ａと、目的物質ＯＢを蛍光色素で標識した蛍光標識物質としてのトレーサＴと、を用いて第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定する。蛍光色素としては例えばフルオレセイン、ローダミン及びＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ６４７などがある。
まず、本開示の実施の形態１について説明する。本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法では、測定対象サンプルに含まれる目的物質の濃度を測定する。図１に模式的に示されるこの蛍光偏光免疫測定法において、測定の目的となる物質は第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢである。この蛍光偏光免疫測定法は、目的物質ＯＢに対して結合能を有する抗体Ａと、目的物質ＯＢを蛍光色素で標識した蛍光標識物質としてのトレーサＴと、を用いて第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定する。蛍光色素としては例えばフルオレセイン、ローダミン及びＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ６４７などがある。
【0014】
［サンプル］
本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法では、４種類のサンプルが用意される。
（１）第１基準サンプルＲＳ１
第１基準サンプルＲＳ１は本実施の形態に係る目的物質ＯＢを含まない溶液である。通常は第１測定対象サンプルＭＳ１とは異なる種類の溶液が用いられる。例えば、第１基準サンプルＲＳ１として、純水が用意される。純水を、水マトリクスともいう。第１基準サンプルＲＳ１には、自家蛍光物ＳＦが含まれていてもよい。
（２）第２基準サンプルＲＳ２
第２基準サンプルＲＳ２は第１基準サンプルＲＳ１に、抗体Ａ、トレーサＴ及び目的物質ＯＢを添加して生成された溶液である。第２基準サンプルＲＳ２として、目的物質ＯＢの濃度Ｃ１～ＣＮが互いに異なる複数のものが用意される。すなわち、第２基準サンプルＲＳ２は、目的物質ＯＢの濃度Ｃ１のサンプル、濃度Ｃ２のサンプル、…濃度ＣＮのサンプルと、互いに濃度が異なる計Ｎ個のサンプルがそれぞれ用意される。
（３）第１測定対象サンプルＭＳ１
第１測定対象サンプルＭＳ１は本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法の測定対象である。第１測定対象サンプルＭＳ１には、目的物質ＯＢの他、自家蛍光物ＳＦが含まれている。この自家蛍光物ＳＦは、第１基準サンプルＲＳ１に含まれるものと同じであってもよいし、異なるものであってもよい。
（４）第２測定対象サンプルＭＳ２
第２測定対象サンプルＭＳ２は本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法の測定対象である。第２測定対象サンプルＭＳ２は、第１測定対象サンプルＭＳ１に、抗体Ａ及びトレーサＴを第２基準サンプルＲＳ２に添加された量と同量添加して生成される。
本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法では、４種類のサンプルが用意される。
（１）第１基準サンプルＲＳ１
第１基準サンプルＲＳ１は本実施の形態に係る目的物質ＯＢを含まない溶液である。通常は第１測定対象サンプルＭＳ１とは異なる種類の溶液が用いられる。例えば、第１基準サンプルＲＳ１として、純水が用意される。純水を、水マトリクスともいう。第１基準サンプルＲＳ１には、自家蛍光物ＳＦが含まれていてもよい。
（２）第２基準サンプルＲＳ２
第２基準サンプルＲＳ２は第１基準サンプルＲＳ１に、抗体Ａ、トレーサＴ及び目的物質ＯＢを添加して生成された溶液である。第２基準サンプルＲＳ２として、目的物質ＯＢの濃度Ｃ１～ＣＮが互いに異なる複数のものが用意される。すなわち、第２基準サンプルＲＳ２は、目的物質ＯＢの濃度Ｃ１のサンプル、濃度Ｃ２のサンプル、…濃度ＣＮのサンプルと、互いに濃度が異なる計Ｎ個のサンプルがそれぞれ用意される。
（３）第１測定対象サンプルＭＳ１
第１測定対象サンプルＭＳ１は本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法の測定対象である。第１測定対象サンプルＭＳ１には、目的物質ＯＢの他、自家蛍光物ＳＦが含まれている。この自家蛍光物ＳＦは、第１基準サンプルＲＳ１に含まれるものと同じであってもよいし、異なるものであってもよい。
（４）第２測定対象サンプルＭＳ２
第２測定対象サンプルＭＳ２は本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法の測定対象である。第２測定対象サンプルＭＳ２は、第１測定対象サンプルＭＳ１に、抗体Ａ及びトレーサＴを第２基準サンプルＲＳ２に添加された量と同量添加して生成される。
【0015】
［蛍光偏光免疫測定装置］
蛍光偏光免疫測定法は、図２に示す蛍光偏光免疫測定装置１によって実行される。蛍光偏光免疫測定装置１は、光源１０、集光レンズ１１、アイリス１２、コリメータ１３、偏光素子１４、励起光フィルタ１５及びダイクロイックミラー２０を備える。蛍光偏光免疫測定装置１は、対物レンズ２１、サンプル２２が配置されるマイクロデバイス２３、ステージ２４、吸収フィルタ２５、偏光調整素子２６、結像レンズ２７、撮像素子２８及び制御部３０を備える。
蛍光偏光免疫測定法は、図２に示す蛍光偏光免疫測定装置１によって実行される。蛍光偏光免疫測定装置１は、光源１０、集光レンズ１１、アイリス１２、コリメータ１３、偏光素子１４、励起光フィルタ１５及びダイクロイックミラー２０を備える。蛍光偏光免疫測定装置１は、対物レンズ２１、サンプル２２が配置されるマイクロデバイス２３、ステージ２４、吸収フィルタ２５、偏光調整素子２６、結像レンズ２７、撮像素子２８及び制御部３０を備える。
【0016】
光源１０は、例えば発光ダイオードであり、サンプルの蛍光を励起する波長の励起光（例えば中心波長４７０ｎｍの青色光）を出射する。光源１０からの励起光は、集光レンズ１１により集光され、アイリス１２を通過する。アイリス１２は、励起光以外の外光の混入を低減する。
【0017】
アイリス１２を通過した励起光は、コリメータ１３により平行光に変換され、偏光素子１４に入射する。偏光素子１４は、例えば、偏光板、偏光ビームスプリッタ又は液晶セルであり、ここでは偏光板である。偏光素子１４は、特定方位の直線偏光を通過させる。偏光素子１４からの直線偏光の励起光は、励起光フィルタ１５を通過する。励起光フィルタ１５は、励起光の波長を含む波長域を選択するフィルタであり、偏光素子１４からの励起光と異なる波長の光を低減する。ダイクロイックミラー２０は、励起光フィルタ１５を通過した励起光を、対物レンズ２１に向かって反射する。
【0018】
対物レンズ２１は、ダイクロイックミラー２０によって反射された直線偏光の励起光を、ステージ２４上のマイクロデバイス２３に収容されたサンプル２２に集光する。サンプル２２は、対物レンズ２１からの直線偏光の励起光に応じて特定波長の蛍光（例えば緑色光）を生成する。蛍光は、対物レンズ２１で平行光となり、ダイクロイックミラー２０及び吸収フィルタ２５を通過する。ダイクロイックミラー２０は、サンプル２２からの蛍光を含む特定波長域の光を選択的に通過させ、他の光を反射する。吸収フィルタ２５は、サンプル２２からの蛍光の波長を含む波長域を選択するフィルタであり、蛍光以外の光を低減する。
【0019】
吸収フィルタ２５を通過した蛍光は、偏光調整素子２６に入射する。偏光調整素子２６は、例えば、偏光板、偏光ビームスプリッタ又は液晶セルである。偏光調整素子２６は、偏光カメラ内の偏光フィルタでもよい。偏光カメラは、偏光フィルタをセンサ上に搭載することにより被写体の偏光情報を取得する撮像装置である。以下の説明において、偏光調整素子２６は、駆動信号（印加電圧）が制御される液晶セルである。偏光調整素子２６は、直線偏光成分の透過光強度を調整可能である。具体的には、偏光調整素子２６は、励起光の偏光方位と平行な直線偏光又は垂直な直線偏光の他、後述の駆動信号に応じた方向の偏光の透過光強度を調整可能である。
【0020】
偏光調整素子２６を通過した直線偏光の蛍光は、結像レンズ２７を介して、撮像素子２８の撮像面に入射する。サンプル２２の面と撮像素子２８の撮像面とは結像関係にある。撮像素子２８は、例えば、複数の画素を有するＣＣＤ（Charge-Coupled Device）又はＣＭＯＳ（Complementary Metal-Oxide-Semiconductor）イメージセンサを含む。撮像素子２８は、サンプル２２で生成された蛍光強度に応じた画像データを生成して、制御部３０に送信する。
【0021】
蛍光偏光免疫測定装置１は、図２に示す構成と異なる構成を有することができる。例えば、蛍光偏光免疫測定装置１は、光源１０からの励起光をサンプル２２に対して斜入射させ、励起光を照射する光学系の光軸と、蛍光を観察する光学系の光軸とを分離することにより、ダイクロイックミラー２０を備えないようにしてもよい。また、アイリス１２、励起光フィルタ１５及び吸収フィルタ２５は、必要でなければ設置しなくてもよい。蛍光偏光免疫測定装置１は、図２に示す集光レンズ１１、対物レンズ２１及び結像レンズ２７に追加して又は代えて他のレンズを含むことができる。
【0022】
制御部３０は、蛍光偏光免疫測定装置１の全体を統括制御する。具体的には、制御部３０は、光源１０、偏光調整素子２６及び撮像素子２８を制御する。制御部３０は、撮像素子２８で撮像された蛍光画像を取得する。
【0023】
例えば、制御部３０は、測定動作中、光源１０から励起光をサンプル２２に出射させる。制御部３０は、ＤＡコンバータ（不図示）を使用して、偏光調整素子２６に駆動信号を出力する。偏光調整素子２６へ駆動信号を出力することで、制御部３０は、偏光調整素子２６を通過する蛍光の偏光成分を制御することができる。
【0024】
偏光調整素子２６は、例えば、対向する２つの透明基板、基板の対向面に配置されている透明電極、基板間に封入されている液晶材料及び偏光調整素子２６の撮像装置側（出射側又は下流側）の外側面に配置されている偏光板を含む。偏光調整素子２６の構成は、通過する蛍光の偏光成分を調整することができる構成であればよい。
【0025】
蛍光偏光免疫測定装置１は、偏光調整素子（液晶セル）２６への駆動信号と共に撮像素子２８の露出時間（撮像時間）、すなわち撮像の開始時刻及び期間を制御して、蛍光の所望の偏光成分の画像データを取得する。蛍光偏光免疫測定装置１は、取得した画像データの分析を行う。後述するように、蛍光偏光免疫測定装置１は、サンプル２２を第１基準サンプルＲＳ１、第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１及び第２測定対象サンプルＭＳ２の蛍光画像を撮像素子２８によって撮像し、その蛍光画像の画像データに基づいて、第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定する。これにより、第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる自家蛍光物ＳＦによる目的物質ＯＢの濃度の測定誤差を低減することができる。
【0026】
図２に示す蛍光偏光免疫測定装置１の制御部３０は、例えば、図３に示すハードウエア構成を有するコンピュータがソフトウエアプログラムを実現することにより実現される。具体的には、蛍光偏光免疫測定装置１は、装置全体の制御を司るＣＰＵ（Central Processing Unit）３１と、ＣＰＵ３１の作業領域として動作する主記憶部３２と、ＣＰＵ３１の動作プログラムを記憶する外部記憶部３３と、操作部３４と、表示部３５と、入出力部３６と、これらを接続する内部バス３８から構成される。
【0027】
主記憶部３２は、ＲＡＭ（Random Access Memory）から構成されている。主記憶部３２には、ＣＰＵ３１によって実行されるプログラム３９が外部記憶部３３からロードされる。また、主記憶部３２は、ＣＰＵ３１の作業領域（データの一時記憶領域）としても用いられる。
【0028】
外部記憶部３３は、フラッシュメモリ、ハードディスクの不揮発性メモリから構成される。外部記憶部３３には、ＣＰＵ３１に実行させるためのプログラム３９が予め記憶されている。
【0029】
操作部３４は、キーボード及びマウスのデバイスと、これらのデバイスを内部バス３８に接続するインターフェイス装置から構成されている。
【0030】
表示部３５は、ＣＲＴ（Cathode Ray Tube）、液晶モニタの表示用デバイスから構成される。
【0031】
入出力部３６は、外部機器とのデータ送受信を行うインターフェイスである。入出力部３６は、ＣＰＵ３１からの指令に従って、偏光調整素子２６に駆動信号を出力するとともに、撮像素子２８からの画像データを入力する。入力された画像データは、主記憶部３２又は外部記憶部３３に記憶され、表示部３５に表示される。
【0032】
制御部３０の機能は、１以上のプロセッサ及び一時的でない記憶媒体を含む１以上の記憶装置を含む１以上のコンピュータからなる計算機システムに実装することができる。複数のコンピュータは、相互に接続された通信ネットワークを介して通信を行いつつ、制御部３０の機能を実現する。例えば、制御部３０の複数の機能の一部が１つのコンピュータに実装され、他の一部が他のコンピュータに実装されてもよい。
【0033】
上述の蛍光偏光免疫測定装置１の構成要素は、次のようにまとめられる。
（Ａ）光源１０、集光レンズ１１、アイリス１２、コリメータ１３、偏光素子１４及び励起光フィルタ１５を備えるサンプル２２に直線偏光の励起光を照射する照射光学系１０Ａ
（Ｂ）サンプル２２を収容するマイクロデバイス２３、マイクロデバイス２３を搭載するステージ２４
（Ｃ）サンプル２２から発せられる蛍光のうち、制御部３０からの駆動信号に応じて透過する直線偏光成分を調整する偏光調整素子２６、偏光調整素子２６を透過した蛍光画像を撮像する撮像素子２８を含む観察光学系１０Ｂ
（Ｄ）偏光調整素子２６に駆動信号を出力する駆動部として機能するとともに、撮像素子２８で撮像された蛍光画像に基づいて蛍光強度を検出し、駆動信号に従ってサンプル２２の偏光度を測定して、サンプルの分析を行う制御部３０
（Ａ）光源１０、集光レンズ１１、アイリス１２、コリメータ１３、偏光素子１４及び励起光フィルタ１５を備えるサンプル２２に直線偏光の励起光を照射する照射光学系１０Ａ
（Ｂ）サンプル２２を収容するマイクロデバイス２３、マイクロデバイス２３を搭載するステージ２４
（Ｃ）サンプル２２から発せられる蛍光のうち、制御部３０からの駆動信号に応じて透過する直線偏光成分を調整する偏光調整素子２６、偏光調整素子２６を透過した蛍光画像を撮像する撮像素子２８を含む観察光学系１０Ｂ
（Ｄ）偏光調整素子２６に駆動信号を出力する駆動部として機能するとともに、撮像素子２８で撮像された蛍光画像に基づいて蛍光強度を検出し、駆動信号に従ってサンプル２２の偏光度を測定して、サンプルの分析を行う制御部３０
【0034】
本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定方法は、上記構成を有する蛍光偏光免疫測定装置１を用いて、以下の測定を行う。
（１）第１基準サンプルＲＳ１をサンプル２２としたときのその偏光度ＰＡ
（２）目的物質ＯＢの濃度Ｃ１～ＣＮが互いに異なる複数の第２基準サンプルＲＳ２をサンプル２２としたときのそれぞれの偏光度ＰＢ
（３）第１測定対象サンプルＭＳ１をサンプル２２としたときの偏光度ＰＣ
（４）第２測定対象サンプルＭＳ２をサンプル２２としたときの偏光度ＰＤ
（１）第１基準サンプルＲＳ１をサンプル２２としたときのその偏光度ＰＡ
（２）目的物質ＯＢの濃度Ｃ１～ＣＮが互いに異なる複数の第２基準サンプルＲＳ２をサンプル２２としたときのそれぞれの偏光度ＰＢ
（３）第１測定対象サンプルＭＳ１をサンプル２２としたときの偏光度ＰＣ
（４）第２測定対象サンプルＭＳ２をサンプル２２としたときの偏光度ＰＤ
【0035】
図４に示すように、マイクロデバイス２３は、一端が注入口２３ａに接続され、他端が排出口２３ｂに接続された流路２３ｃを複数備える。この複数の流路２３ｃに、サンプル２２として、第１基準サンプルＲＳ１、複数の第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１又は第２測定対象サンプルＭＳ２を個別に供給することができる。この流路２３ｃと、撮像素子２８の撮像面とは結像関係にあるため、複数の流路２３ｃを撮像素子２８で撮像すれば、複数の流路２３ｃに供給された複数のサンプル２２の蛍光画像を一度に得ることができ、各サンプル２２の偏光度ＰＡ、ＰＢ、ＰＣ、ＰＤを一度に測定することができる。この測定は、蛍光画像における流路２３ｃに対応する画像データのＲＯＩ（Region Of Interest）の蛍光強度に基づいて行われる。
【0036】
制御部３０は、第２基準サンプルＲＳ２の偏光度ＰＢを第１基準サンプルＲＳ１の偏光度ＰＡで補正して第１補正偏光度ＰＢＡを算出し、第１基準サンプルＲＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度Ｃ１～ＣＮと第１補正偏光度ＰＢＡとの関係を示す第１検量線ＤＬ１（図５参照）を生成する。なお、図５のグラフにおいて、横軸は濃度（対数）を示し、縦軸は偏光度を示す。また、制御部３０は、第２測定対象サンプルＭＳ２の偏光度ＰＤを、第１測定対象サンプルＭＳ１の偏光度ＰＣで補正して第２補正偏光度ＰＤＣを算出する。さらに、制御部３０は、図５に示すように、第１検量線ＤＬ１において、第２補正偏光度ＰＤＣに対応する濃度Ｃｘを、第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度として求める。
【0037】
算出された第２補正偏光度ＰＤＣは、第２測定対象サンプルＭＳ２の偏光度ＰＤを、第１測定対象サンプルＭＳ１の偏光度ＰＣで補正して求められたものである。トレーサＴの量は固定であるため、第２補正偏光度ＰＤＣは、第１測定対象サンプルＭＳ１が含有される目的物質ＯＢの量によって決まる。一方、第１検量線ＤＬ１は、第２基準サンプルＲＳ２の偏光度ＰＢを第１基準サンプルＲＳ１の偏光度ＰＡで補正して得られる第１補正偏光度ＰＢＡによって定まるものであり、第１補正偏光度ＰＢＡは、第２基準サンプルＲＳ２に添加される目的物質ＯＢの量によって決まる。図５に示すように、Ａ地点の第２補正偏光度ＰＤＣと、Ｂ地点の第１補正偏光度ＰＢＡとが同じ値である場合、Ａ地点における含有目的物質ＯＢの量と、Ｂ地点における添加目的物質ＯＢの量とが同量であることを意味する。したがって、第２補正偏光度ＰＤＣを求め、その第２補正偏光度ＰＤＣに対応するＢ地点での目的物質ＯＢの濃度を求めれば、求められた濃度が、第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる含有目的物質ＯＢの濃度に対応することになる。
【0038】
図６に示すように、制御部３０は、偏光調整素子２６をオン状態にするため、駆動信号として、正負の特定電圧値の間で周期的に振動する矩形パルス波を与える。この矩形パルス波が第１信号４０である。第１信号４０では正負のいずれの電圧値においても偏光調整素子２６はオン状態となる。偏光調整素子２６がオン状態である期間（第１期間）Ｔ１内において、検出期間Ｋ１が規定される。
【0039】
制御部３０は、検出期間Ｋ１において、撮像素子２８に蛍光を受光させ、蛍光画像を撮像させる。偏光調整素子２６がオン状態であるとき、サンプル２２からの蛍光の励起光の偏光方位に垂直な偏光成分が受光される。その蛍光強度Ｉ⊥は、検出期間Ｋ１における蛍光画像の流路２３ｃに対応するＲＯＩでの総受光量又はその時間平均で表わされる。
【0040】
制御部３０は、偏光調整素子２６をオフ状態にするため、電圧レベルが０の駆動信号を偏光調整素子２６に入力する。この駆動信号が第２信号４１である。第２信号４１は、第１信号４０とは信号レベルが異なる。この駆動信号により、偏光調整素子２６はオフ状態となる。偏光調整素子２６がオフ状態である第２期間Ｔ２内において、検出期間Ｋ２が規定される。制御部３０は、検出期間Ｋ２において、撮像素子２８にサンプル２２からの蛍光を受光させ、蛍光画像を撮像させる。偏光調整素子２６がオフ状態であるとき、サンプル２２からの蛍光の励起光の偏光方位に平行な偏光成分が受光される。その蛍光強度ＩＩＩは、検出期間Ｋ２における蛍光画像の流路２３ｃに対応するＲＯＩでの受光量又はその時間平均で表わされる。
【0041】
すなわち、本実施の形態では、制御部３０は、サンプル２２に入射する励起光に対して偏光方向が直交する直線偏光のみ通過させる第１信号４０と、サンプル２２に入射する励起光に対して偏光方向が平行な直線偏光のみ通過させる第２信号４１とを交互に繰り返す駆動信号を偏光調整素子２６に入力する。第１信号４０が入力される第１期間Ｔ１にて撮像素子２８で検出される蛍光強度を第１蛍光強度とし、第２信号４１が入力される第２期間Ｔ２にて撮像素子２８で検出される蛍光強度を第２蛍光強度とする。
【0042】
制御部３０は、サンプル２２を第１基準サンプルＲＳ１としたときに、第１期間Ｔ１において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ａ（Ｉ⊥）と、第２期間Ｔ２において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ａ（ＩII）とを、第１基準サンプルＲＳ１の偏光度ＰＡとして測定する。さらに、制御部３０は、サンプル２２を第２基準サンプルＲＳ２としたときに、第１期間Ｔ１において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ｂ（Ｉ⊥）と、第２期間Ｔ２において前記受光部で検出される蛍光強度Ｂ（ＩII）とを、第２基準サンプルＲＳ２の偏光度ＰＢとして測定する。さらに制御部３０は、以下の式
を計算して、第１補正偏光度ＰＢＡを求める。
【数1】
【0043】
また、制御部３０は、サンプル２２を第１測定対象サンプルＭＳ１としたときに、第１期間Ｔ１において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ｃ（Ｉ⊥）と、第２期間Ｔ２において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ｃ（ＩII）とを、第１測定対象サンプルＭＳ１の偏光度ＰＣとして測定する。さらに、制御部３０は、サンプル２２を第２測定対象サンプルＭＳ２としたときに、第１期間Ｔ１において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ｄ（ＩII）と、第２期間Ｔ２において撮像素子２８で検出される蛍光強度Ｄ（Ｉ⊥）とを、第２測定対象サンプルＭＳ２の偏光度ＰＤとして測定する。さらに、制御部３０は、以下の式
を計算して、第２補正偏光度ＰＤＣを求める。
【数2】
【0044】
次に、蛍光偏光免疫測定装置１の制御部３０によって実行される測定処理、すなわち蛍光偏光免疫測定方法について説明する。マイクロデバイス２３のセッティングが完了すると、測定処理が開始される。
【0045】
図７に示すように、まず、制御部３０は、光源１０に励起光の出射を開始させる（ステップＳ１）。続いて、制御部３０は、偏光調整素子２６への駆動信号の出力を開始する（ステップＳ２）。
【0046】
続いて、制御部３０は、蛍光強度の測定を行う（ステップＳ３）。この測定において、制御部３０は、駆動信号に同期して、第１期間Ｔ１（検出期間Ｋ１）において撮像素子２８で撮像される画像データに基づいて、第１基準サンプルＲＳ１に対応する蛍光強度Ａ（Ｉ⊥）、第２基準サンプルＲＳ２に対応する蛍光強度Ｂ（Ｉ⊥）、第１測定対象サンプルＭＳ１に対応する蛍光強度Ｃ（Ｉ⊥）、第２測定対象サンプルＭＳ２に対応する蛍光強度Ｄ（Ｉ⊥）を測定する。さらに、制御部３０は、第２期間Ｔ２（検出期間Ｋ２）において撮像素子２８で撮像される画像データに基づいて、第１基準サンプルＲＳ１に対応する蛍光強度Ａ（ＩＩＩ）、第２基準サンプルＲＳ２に対応する蛍光強度Ｂ（ＩＩＩ）、第１測定対象サンプルＭＳ１に対応する蛍光強度Ｃ（ＩＩＩ）、第２測定対象サンプルＭＳ２に対応する蛍光強度Ｄ（ＩＩＩ）を測定する。
【0047】
さらに、制御部３０は、上記式（１）、式（２）を計算して、第２補正偏光度ＰＤＣ及び第１補正偏光度ＰＢＡを算出する（ステップＳ４）。続いて、制御部３０は、算出された第１補正偏光度ＰＢＡに基づいて、第１検量線ＤＬ１を作成する（ステップＳ５）。そして、制御部３０は、第１検量線ＤＬ１において、第２補正偏光度ＰＤＣに対応する濃度Ｃｘを、第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度として求める（ステップＳ６）。ステップＳ６終了後は、制御部３０は、測定処理を終了する。
【0048】
なお、本実施の形態では、オンオフを繰り返す駆動信号により偏光調整素子２６を制御したが、これには限られない。制御部３０は、駆動信号として励起光の偏光方向と垂直な直線偏光の第１透過光強度と、励起光の偏光方向と平行な直線偏光の第２透過光強度とを正弦波状に変化させる信号を偏光調整素子２６に入力するようにしてもよい。この場合、例えば図８に示すように、駆動信号は、高い周波数で、正の値と負の値との間で反転するように時間変化する。この駆動信号における正の包絡線と負の包絡線は、横軸（時間軸）に対して線対称である。包絡線は、反転周期よりも長い周期において、周期的に変化する。
【0049】
このような駆動信号が偏光調整素子２６に入力されているときに、第１透過光強度は、図８に示すように、正弦波に近い形で変化する。なお、第２透過光強度の変化は、第１透過光強度の変化と逆相となる。第１透過光強度及び第２透過光強度は駆動信号の絶対値の増加に伴い減少し、減少に伴い増加している。なお、第１透過光強度及び第２透過光強度の変化が正弦波に近い変化を示すことができれば、偏光調整素子２６への印加電圧の波形は特に限定されない。
【0050】
制御部３０は、例えば、第１期間Ｄ１、第２期間Ｄ２、第３期間Ｄ３、第４期間Ｄ４の各期間において、蛍光サンプルの画像におけるＲＯＩの蛍光強度を計算する。各期間の蛍光強度は、各期間におけるＲＯＩの蛍光強度の時間についての積分値であり、各期間（露出期間）におけるＲＯＩの画素の総受光量である。制御部３０は、第１期間Ｄ１～第４期間Ｄ４それぞれの光強度に基づき、サンプルの蛍光偏光を評価する。第１期間Ｄ１～第４期間Ｄ４のそれぞれにおいて、撮像素子２８は、蛍光の特定の偏光成分の光を受光する。各期間における偏光成分は、偏光方位の幅を持っている。
【0051】
すなわち、制御部３０は、駆動信号として励起光の偏光方向と垂直な直線偏光の第１透過光強度と、励起光の偏光方向と平行な直線偏光の第２透過光強度とを正弦波状に変化させる信号を偏光調整素子２６に入力する。偏光調整素子２６は、第１透過光強度と前記第２透過光強度とを正弦波状かつ互いに逆相に変化させる。
【0052】
正弦波状に変化する透過光強度の１周期を４つの期間に等分割し、それぞれの期間を第１期間Ｄ１、第２期間Ｄ２、第３期間Ｄ３、第４期間Ｄ４とする。制御部３０は、サンプル２２を第１基準サンプルＲＳ１としたときに、第１期間Ｄ１、第２期間Ｄ２、第３期間Ｄ３、第４期間Ｄ４において撮像素子２８で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ａ、ｐ２Ａ、ｐ３Ａ、ｐ４Ａを、第１基準サンプルＲＳ１の偏光度ＰＡとして測定する。また、制御部３０は、サンプル２２を第２基準サンプルＲＳ２としたときに、第１期間、第２期間、第３期間、第４期間において撮像素子２８で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｂ、ｐ２Ｂ、ｐ３Ｂ、ｐ４Ｂを、第２基準サンプルＲＳ２の偏光度ＰＢとして測定する。そして、制御部３０は、ｐｘＢＡ＝ｐｘＢ－ｐｘＡ（ｘ＝１，２，３，４）を計算し、さらに、以下の式を計算して、
第１補正偏光度ＰＢＡを求める。
【数3】
【0053】
また、制御部３０は、サンプル２２を第１測定対象サンプルＭＳ１としたときに、第１期間Ｄ１、第２期間Ｄ２、第３期間Ｄ３、第４期間Ｄ４において撮像素子２８で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｃ、ｐ２Ｃ、ｐ３Ｃ、ｐ４Ｃを、第１測定対象サンプルＭＳ１の偏光度ＰＣとして測定する。また、制御部３０は、サンプル２２を第２測定対象サンプルＭＳ２としたときに、第１期間Ｄ１、第２期間Ｄ２、第３期間Ｄ３、第４期間Ｄ４において撮像素子２８で検出される蛍光強度の平均値ｐ１Ｄ、ｐ２Ｄ、ｐ３Ｄ、ｐ４Ｄを、第２測定対象サンプルＭＳ２の偏光度ＰＤとして測定する。
【0054】
そして、制御部３０は、ｐｘＤＣ＝ｐｘＤ－ｐｘＣ（ｘ＝１，２，３，４）を計算する。さらに、制御部３０は、以下の式を計算して、
第２補正偏光度ＰＤＣを求める。
【数4】
【0055】
［実施の形態２］
次に、本開示の実施の形態２について説明する。上記実施の形態１に係る蛍光偏光免疫測定法では、サンプル２２として、第１基準サンプルＲＳ１、複数の第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１、第２測定対象サンプルＭＳ２を用いて第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定している。図９に示すように、本実施の形態では、さらに、第３測定対象サンプルＭＳ３を用意する。
次に、本開示の実施の形態２について説明する。上記実施の形態１に係る蛍光偏光免疫測定法では、サンプル２２として、第１基準サンプルＲＳ１、複数の第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１、第２測定対象サンプルＭＳ２を用いて第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定している。図９に示すように、本実施の形態では、さらに、第３測定対象サンプルＭＳ３を用意する。
【0056】
第３測定対象サンプルＭＳ３は、第１測定対象サンプルＭＳ１に、抗体Ａ、トレーサＴ及び高濃度目的物質ＨＯＢを第２基準サンプルＲＳ２に添加した量と同量添加して生成される。高濃度目的物質ＨＯＢの濃度は、第１検量線ＤＬにおいて偏光度が最小となる濃度となる。第３測定対象サンプルＭＳ３は、他のサンプル２２と同様に、マイクロデバイス２３に収容される。制御部３０は、マイクロデバイス２３に収容される第３測定対象サンプルＭＳ３の偏光度ＰＥを測定する。
【0057】
図９に示すように、制御部３０は、第３測定対象サンプルＭＳ３の偏光度ＰＥを、第１測定対象サンプルＭＳ１の偏光度ＰＡで補正して第３補正偏光度ＰＥＡを算出する。制御部３０は、第１検量線ＤＬ１と、第３補正偏光度ＰＥＡと、を比較可能に表示部３５（図３参照）に表示する。この表示により、第１検量線ＤＬの最小値のレベルと、第３補正偏光度ＰＥＡとの差が許容値以内であるか否かを確認することができる。これにより、第１測定対象サンプルＭＳ１における自家蛍光物ＳＦの影響が、測定結果からキャンセルされていることを確認することができる。
【0058】
なお、制御部３０は、第１検量線ＤＬ１の最小値のレベルと、第３補正偏光度ＰＥＡとが一致するように、第１検量線ＤＬ１を縦軸方向にシフトさせるようにしてもよい。
【0059】
［実施の形態３］
次に、本開示の実施の形態３について説明する。上記実施の形態１に係る蛍光偏光免疫測定法では、サンプル２２として、第１基準サンプルＲＳ１、複数の第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１、第２測定対象サンプルＭＳ２を用いて第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定している。本実施の形態では、図１０に示すように、これらのサンプル２２に加え、第１測定対象サンプルＭＳ１に、抗体Ａ、トレーサＴ及び目的物質を添加して生成され、目的物質ＯＢの濃度が互いに異なる複数の第４測定対象サンプルＭＳ４を用意する。
次に、本開示の実施の形態３について説明する。上記実施の形態１に係る蛍光偏光免疫測定法では、サンプル２２として、第１基準サンプルＲＳ１、複数の第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１、第２測定対象サンプルＭＳ２を用いて第１測定対象サンプルＭＳ１に含まれる目的物質ＯＢの濃度を測定している。本実施の形態では、図１０に示すように、これらのサンプル２２に加え、第１測定対象サンプルＭＳ１に、抗体Ａ、トレーサＴ及び目的物質を添加して生成され、目的物質ＯＢの濃度が互いに異なる複数の第４測定対象サンプルＭＳ４を用意する。
【0060】
蛍光偏光免疫測定装置１は、目的物質ＯＢの濃度が互いに異なる複数の第４測定対象サンプルＭＳ４の偏光度ＰＦをそれぞれ測定する。制御部３０は、第４測定対象サンプルＭＳ４の偏光度ＰＦを第１測定対象サンプルＭＳ１の偏光度ＰＣで補正して第４補正偏光度ＰＦＣを算出し、制御部３０は、第４測定対象サンプルＭＳ４に含まれる目的物質ＯＢの濃度と第４補正偏光度ＰＦＣとの関係を示す第２検量線ＤＬ２を生成する。第２検量線ＤＬ２を見れば、第２測定対象サンプルＭＳ２において、添加された目的物質ＯＢに応じた偏光度の変化を確認することができる。
【0061】
制御部３０は、第１検量線ＤＬ１と第２検量線ＤＬ２とを表示部３５（図３参照）比較表示する。高濃度領域における両者の差が許容範囲内であるか否かにより、自家蛍光物ＳＦによる誤差が低減できていることを確認することができる。
【0062】
なお、制御部３０は、第１検量線ＤＬ１の最小値のレベルと、第２検量線ＤＬ２の最小値のレベルとが一致するように、第１検量線ＤＬ１を縦軸方向にシフトさせるようにしてもよい。
【0063】
なお、制御部３０は、第３測定対象サンプルＭＳ３と、第４測定対象サンプルＭＳ４とを、両方測定し、自家蛍光物ＳＦによる誤差が低減できていることを確認し、第１検量線ＤＬ１と第２検量線ＤＬ２と、第３補正偏光度ＰＥＡとの比較により、第１検量線ＤＬ１を補正するようにしてもよい。
【0064】
［実施例］
測定対象（第１測定対象サンプル）をナンプラー、醤油及びワインとして、それらの中に含まれるヒスタミンを目的物質ＯＢとしてヒスタミンの濃度の測定を行った。その測定手順は、以下の通りとした。
［第１基準サンプルの測定］
Ａ．：第１基準サンプルＲＳ１を純水とし、マイクロデバイス２３の９つの流路２３ｃに入れ、それぞれの偏光度を測定した。
測定対象（第１測定対象サンプル）をナンプラー、醤油及びワインとして、それらの中に含まれるヒスタミンを目的物質ＯＢとしてヒスタミンの濃度の測定を行った。その測定手順は、以下の通りとした。
［第１基準サンプルの測定］
Ａ．：第１基準サンプルＲＳ１を純水とし、マイクロデバイス２３の９つの流路２３ｃに入れ、それぞれの偏光度を測定した。
【0065】
［第２基準サンプルの測定］
Ｂ．：純水に、抗体Ａ、トレーサＴ及び目的物質ＯＢを添加し、目的物質ＯＢの濃度が互いに異なる９つの第２基準サンプル（９つの濃度水準の水溶液）を生成し、それぞれの偏光度を測定した。
１）トレーサＴとして、目的物質ＯＢであるヒスタミンをＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ６４７で修飾した。これを純水に溶解させ、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ（－））で４．５６ｎＭの溶液を調製した。
２）抗ヒスタミン抗体を、０．０１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含むＰＢＳ（－）を用いて希釈し、１．３×１０－７Ｍの溶液を調製した。
３）目的物質ＯＢであるヒスタミンを純水に溶解させ、３２ｍｇ／ｍｌの溶液を調製した。
４）得られたヒスタミン溶液を、純水で濃度を以下の表に示すように９水準に調整した。
５）９水準の各ヒスタミン溶液にアシル化試薬、アシル化バッファーを以下の表のとおりに混合した。
６）上記混合溶液各２５μＬ、上記１）のヒスタミントレーサ２５μＬ、上記２）の抗体溶液２５μＬを混合し、室温で１０分間遮光放置後、混合溶液の偏光度をそれぞれ測定した。
Ｂ．：純水に、抗体Ａ、トレーサＴ及び目的物質ＯＢを添加し、目的物質ＯＢの濃度が互いに異なる９つの第２基準サンプル（９つの濃度水準の水溶液）を生成し、それぞれの偏光度を測定した。
１）トレーサＴとして、目的物質ＯＢであるヒスタミンをＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ６４７で修飾した。これを純水に溶解させ、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ（－））で４．５６ｎＭの溶液を調製した。
２）抗ヒスタミン抗体を、０．０１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含むＰＢＳ（－）を用いて希釈し、１．３×１０－７Ｍの溶液を調製した。
３）目的物質ＯＢであるヒスタミンを純水に溶解させ、３２ｍｇ／ｍｌの溶液を調製した。
４）得られたヒスタミン溶液を、純水で濃度を以下の表に示すように９水準に調整した。
【表1】
【表2】
【0066】
［第１測定対象サンプルの測定］
Ｃ．第１測定対象サンプルＭＳ１のみをマイクロデバイス２３の９つの流路２３ｃに入れて測定した。醤油、ナンプラー、ワインの３種類の測定対象を、それぞれＰＢＳ（－）で５倍希釈してからマイクロデバイス２３の９つの流路２３ｃに入れて、偏光度を測定した。
Ｃ．第１測定対象サンプルＭＳ１のみをマイクロデバイス２３の９つの流路２３ｃに入れて測定した。醤油、ナンプラー、ワインの３種類の測定対象を、それぞれＰＢＳ（－）で５倍希釈してからマイクロデバイス２３の９つの流路２３ｃに入れて、偏光度を測定した。
【0067】
［第２、第４測定対象サンプルの測定］
Ｄ．第１測定対象サンプルＭＳ１に９つの濃度水準の目的物質ＯＢをそれぞれ添加し、第２測定対象サンプルＭＳ２、第４測定対象サンプルＭＳ４を生成して、偏光度を測定した。
１）ヒスタミンをＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ６４７で修飾してトレーサＴを生成した。これを純水に溶解させ、ＰＢＳ（－）で４．５６ｎＭの溶液を調製した。
２）抗ヒスタミン抗体を、０．０１％ＢＳＡ入りＰＢＳ（－）を用いて希釈し、１．３×１０－７Ｍの溶液を調製した。
３）ヒスタミンを純水に溶解させ、３２ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。
４）得られたヒスタミン溶液を純水で濃度を以下の表に示すように９つの異なる濃度水準に調整した。
５）各ヒスタミン溶液の９つの濃度水準に、サンプルが溶液中５倍希釈となるように、以下の表の通りに添加した。
６）９つの異なる濃度水準のヒスタミンを添加したサンプル溶液それぞれに、アシル化試薬、アシル化バッファーを以下の表の通りに混合した。
７）上記混合溶液各２５μＬ、上記１）のヒスタミンのトレーサ溶液２５μＬ、上記２）の抗体溶液２５μＬを混合し、室温で１０分間遮光静置後、混合溶液の蛍光偏光度を測定した。
Ｄ．第１測定対象サンプルＭＳ１に９つの濃度水準の目的物質ＯＢをそれぞれ添加し、第２測定対象サンプルＭＳ２、第４測定対象サンプルＭＳ４を生成して、偏光度を測定した。
１）ヒスタミンをＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ６４７で修飾してトレーサＴを生成した。これを純水に溶解させ、ＰＢＳ（－）で４．５６ｎＭの溶液を調製した。
２）抗ヒスタミン抗体を、０．０１％ＢＳＡ入りＰＢＳ（－）を用いて希釈し、１．３×１０－７Ｍの溶液を調製した。
３）ヒスタミンを純水に溶解させ、３２ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。
４）得られたヒスタミン溶液を純水で濃度を以下の表に示すように９つの異なる濃度水準に調整した。
【表3】
【表4】
【表5】
【表6】
【0068】
測定対象をナンプラーとし、それらの中に含まれるヒスタミンを目的物質ＯＢとし、目的物質ＯＢの濃度の測定を行った結果を図１１（Ａ）及び図１１（Ｂ）に示す。図１１（Ａ）に示すように、ナンプラーを５倍に希釈したものを第１測定対象サンプルＭＳ１とし、純水を第１基準サンプルＲＳ１として、補正を行わずに、第１検量線ＤＬ１及び第２検量線ＤＬ２を生成した場合、高濃度領域でもずれが生じている。しかし、図１１（Ｂ）に示すように、本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法で補正を行いつつ生成された第１検量線ＤＬ１及び第２検量線ＤＬ２は、高濃度領域において両者のずれが小さくなっている。これは、補正により、第１検量線ＤＬ１、第２検量線ＤＬ２において、自家蛍光物ＳＦの影響がキャンセルされていることを示している。
【0069】
測定対象を醤油とし、それらの中に含まれるヒスタミンを目的物質ＯＢとして目的物質ＯＢの濃度の測定を行った結果を図１２（Ａ）及び図１２（Ｂ）に示す。図１２（Ａ）に示すように、醤油を５倍に希釈したものを第１測定対象サンプルＭＳ１とし、純水を第１基準サンプルＲＳ１として、補正を行わずに、第１検量線ＤＬ１及び第２検量線ＤＬ２を生成した場合、高濃度領域でもずれが生じている。しかし、図１２（Ｂ）に示すように、本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法で補正を行いつつ生成された第１検量線ＤＬ１及び第２検量線ＤＬ２は、高濃度領域において両者のずれが小さくなっている。これは、補正により、第１検量線ＤＬ１、第２検量線ＤＬ２において、自家蛍光物ＳＦの影響がキャンセルされていることを示している。
【0070】
測定対象をワインとし、それらの中に含まれるヒスタミンを目的物質ＯＢとして目的物質ＯＢの濃度の測定を行った結果を図１３（Ａ）及び図１３（Ｂ）に示す。図１３（Ａ）に示すように、ワインを５倍に希釈したものを第１測定対象サンプルＭＳ１とし、純水を第１基準サンプルＲＳ１として、補正を行わずに、第１検量線ＤＬ１及び第２検量線ＤＬ２を生成した場合、高濃度領域でもずれが生じている。しかし、図１３（Ｂ）に示すように、本実施の形態に係る蛍光偏光免疫測定法で補正を行いつつ生成された第１検量線ＤＬ１及び第２検量線ＤＬ２は、高濃度領域において両者のずれが小さくなっている。これは、補正により、第１検量線ＤＬ１、第２検量線ＤＬ２において、自家蛍光物ＳＦの影響がキャンセルされていることを示している。図１３（Ｂ）に示すように、ワインにおいては、第２検量線ＤＬ２と、第１検量線ＤＬ１とは、全域に渡って許容範囲内に入っている。
【0071】
検量線用の第２基準サンプルＲＳ２としては、目的物質ＯＢの濃度が既知であり、濃度水準が異なる複数のものがあればよい。また、上述の実施例では、第１基準サンプルＲＳ１として純水を用いているが、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などの緩衝液又は、他の溶媒を用いてもよい。目的物質ＯＢを溶解させることが可能で、抗原抗体反応を阻害しないものであれば選択可能である。例えば有機溶媒又は、極端にｐＨが大きい又は小さい溶媒など、抗体（タンパク質）が変性してしまうものは用いるのは困難である。
【0072】
上記実施の形態では、受光部を撮像素子２８としたが、これには限られない。第１基準サンプルＲＳ１、第２基準サンプルＲＳ２、第１測定対象サンプルＭＳ１、第２測定対象サンプルＭＳ２など、各サンプル２２の偏光度を個別に検出する場合、受光部をフォトダイオードのような蛍光強度のみを検出するものとしてもよい。
【0073】
測定対象及び目的物質は上述したものに限られない。基本的には、抗原抗体反応、中でも競合可能な物質、その物質を含有する測定対象であれば適用可能である。
【0074】
制御部３０のハードウエア構成及びソフトウエア構成は一例であり、任意に変更および修正が可能である。
【0075】
ＣＰＵ３１、主記憶部３２、外部記憶部３３、操作部３４、表示部３５、入出力部３６及び内部バス３８などから構成される制御部３０の処理を行う中心となる部分は、専用のシステムによらず、通常のコンピュータシステムを用いて実現可能である。例えば、前記の動作を実行するためのコンピュータプログラムを、コンピュータが読み取り可能な記録媒体（フレキシブルディスク、ＣＤ－ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ）に格納して配布し、当該コンピュータプログラムをコンピュータにインストールすることにより、前記の処理を実行する制御部３０を構成してもよい。また、インターネットの通信ネットワーク上のサーバ装置が有する記憶装置に当該コンピュータプログラムを格納しておき、通常のコンピュータシステムがダウンロードすることで制御部３０を構成してもよい。
【0076】
制御部３０の機能を、ＯＳ（オペレーティングシステム）とアプリケーションプログラムの分担、またはＯＳとアプリケーションプログラムとの協働により実現する場合などには、アプリケーションプログラム部分のみを記録媒体又は記憶装置に格納してもよい。
【0077】
搬送波にコンピュータプログラムを重畳し、通信ネットワークを介して配信することも可能である。たとえば、通信ネットワーク上の掲示板（BBS, Bulletin Board System）にコンピュータプログラムを掲示し、ネットワークを介してコンピュータプログラムを配信してもよい。そして、このコンピュータプログラムを起動し、ＯＳの制御下で、他のアプリケーションプログラムと同様に実行することにより、前記の処理を実行できるように構成してもよい。
【0078】
この発明は、この発明の広義の精神と範囲を逸脱することなく、様々な実施の形態及び変形が可能とされるものである。また、上述した実施の形態は、この発明を説明するためのものであり、この発明の範囲を限定するものではない。すなわち、この発明の範囲は、実施の形態ではなく、特許請求の範囲によって示される。そして、特許請求の範囲内及びそれと同等の発明の意義の範囲内で施される様々な変形が、この発明の範囲内とみなされる。
【符号の説明】
【0079】
１ 蛍光偏光免疫測定装置、１０ 光源、１０Ａ 照明光学系、１０Ｂ 観察光学系、１１ 集光レンズ、１２ アイリス、１３ コリメータ、１４ 偏光素子、１５ 励起光フィルタ、２０ ダイクロイックミラー、２１ 対物レンズ、２２ サンプル、２３ マイクロデバイス、２３ａ 注入口、２３ｂ 排出口、２３ｃ 流路、２４ ステージ、２５ 吸収フィルタ、２６ 偏光調整素子（液晶セル）、２７ 結像レンズ、２８ 撮像素子（受光部）、３０ 制御部（駆動部）、３１ ＣＰＵ、３２ 主記憶部、３３ 外部記憶部、３４ 操作部、３５ 表示部、３６ 入出力部、３８ 内部バス、３９ プログラム、４０ 第１信号、４１ 第２信号、Ａ 抗体、ＤＬ１ 第１検量線、ＤＬ２ 第２検量線、ＭＳ１ 第１測定対象サンプル、ＭＳ２ 第２測定対象サンプル、ＭＳ３ 第３測定対象サンプル、ＭＳ４ 第４測定対象サンプル、ＯＢ 目的物質、ＲＳ１ 第１基準サンプル、ＲＳ２ 第２基準サンプル、ＳＦ 自家蛍光物、Ｔ トレーサ（蛍光標識物質）
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
