特開 2024-51373 血液浄化材料及び血液浄化材料の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024051373

(43)【公開日】2024-04-11

(54)【発明の名称】血液浄化材料及び血液浄化材料の製造方法

(51)【国際特許分類】

   A61M 1/36 20060101AFI20240404BHJP

【ＦＩ】

A61M1/36 165

【審査請求】未請求

【請求項の数】6

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022157508

(22)【出願日】2022-09-30

(71)【出願人】

【識別番号】000003159

【氏名又は名称】東レ株式会社

(72)【発明者】

【氏名】小町 駿介

(72)【発明者】

【氏名】高橋 博

(72)【発明者】

【氏名】神田 峻吾

(72)【発明者】

【氏名】山下 恭平

【テーマコード（参考）】

4C077

【Ｆターム（参考）】

4C077AA05

4C077BB03

4C077EE01

4C077KK13

4C077MM05

4C077NN02

4C077NN04

4C077PP18

(57)【要約】

【課題】血液中の白血球、血小板及びサイトカイン等を一括除去できる材料を提供すること。
【解決手段】表面にポリアリレートを有し、該ポリアリレートにリガンドが結合しており、陽性荷電量が１．０～４０．０ｍｍｏｌ／ｍ^２である、血液浄化材料。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

表面にポリアリレートを有し、
該ポリアリレートにリガンドが結合しており、
陽性荷電量が１．０～４０．０ｍｍｏｌ／ｍ^２である、血液浄化材料。

【請求項2】

白血球、血小板及びサイトカインを吸着する、請求項１記載の血液浄化材料。

【請求項3】

前記リガンドが、アミノ基を有する、請求項１又は２記載の血液浄化材料。

【請求項4】

前記ポリアリレートと前記リガンドとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造で結合している、請求項１又は２記載の血液浄化材料。

【化1】

一般式（Ｉ）中のＸは、ＮＲ^１Ｒ^２を表す。Ｒ^１は、水素原子、炭化水素基又は
陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基を表し、Ｒ^２は陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基を表す。Ｙはポリアリレートを表す。

【請求項5】

ポリアリレートの表面を加水分解する、加水分解工程と、
加水分解後のポリアリレートにリガンドを結合させる、リガンド結合工程と、を備える、請求項１又は２記載の血液浄化材料の製造方法。

【請求項6】

前記加水分解に硫酸又は水酸化ナトリウム水溶液を用いる、請求項５記載の血液浄化材料の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は血液浄化材料に関する。

【背景技術】

【0002】

潰瘍性大腸炎、クローン病、敗血症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害（ＡＬＩ）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症等の炎症性疾患の治療方法として、体外循環治療が用いられている。

【0003】

炎症性疾患では、白血球がサイトカインを放出し、サイトカインが白血球や血小板を活性化することにより炎症を惹起する。そのため、炎症性疾患を体外循環により治療する場合、血液中から白血球、血小板及びサイトカインを一括除去することが求められる。

【0004】

特に、潰瘍性大腸炎やクローン病では、一部の患者において、血小板数増加及び血中サイトカイン濃度の上昇が報告されており（非特許文献１～３）、血小板を含めた炎症性物質の一括除去による治療が効果的だと考えられている。

【0005】

潰瘍性大腸炎の治療法としては、サイトカインの作用を阻害する薬や顆粒球、単球、及び血小板を除去する血球成分除去カラムとしてイムノピュア（登録商標）を用いた体外循環療法がおこなわれている（非特許文献４）。

【0006】

特許文献１には、白血球及び血小板を効率よく除去する疎水性高分子樹脂吸着体が開示されている。

【0007】

特許文献２には、基材にアミド基とアミノ基とを有するリガンドが結合した水不溶性材料を含み、上記アミド基の含量は、上記水不溶性材料の乾燥質量１ｇ当たり３．０～７．０ｍｍｏｌであり、上記アミノ基の含量は、上記水不溶性材料の乾燥質量１ｇ当たり１．０～７．０ｍｍｏｌである、血液浄化用の材料が開示されている。

【0008】

特許文献３には、表面に荷電を有する官能基を含む化合物が結合した水不溶性担体である活性化白血球－活性化血小板複合体の除去材料が開示されている。

【0009】

特許文献４には、アミド基を有するリガンドを含む活性化白血球－活性化血小板複合体の除去材料が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【特許文献1】特開２００９－２５４６９５号公報

【特許文献2】国際公開第２０１８／０４７９２９号

【特許文献3】国際公開第２０１８／２２５７６４号

【特許文献4】特開２０１９－１３４６９９号公報

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】日本薬理学雑誌，２００２年，第１２０巻，ｐ．３９～４５

【非特許文献2】日本大腸肛門病学会雑誌，１９９０年，第４３巻，ｐ．１３４１－１３５１

【非特許文献3】ＪＯＵＲＮＡＬ ｏｆ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ａｎｄ Ｃｏｌｉｔｓ，（英），２０１３，７，ｐ．９１６－９２２

【非特許文献4】潰瘍性大腸炎・クローン病診断基準・治療指針，令和３年３月，ｐ．５～１６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

白血球、血小板及びサイトカイン等の炎症性物質が連動して炎症性疾患を引き起こすが、これらはカスケード反応であるため、効率的な炎症性疾患の治療には、これら炎症性物質を一括除去することが求められる。

【0013】

特許文献１には、白血球及び血小板の除去に関する記載がある一方で、サイトカインの除去に関しては記載がない。白血球、血小板及びサイトカインは、それぞれ物理的性質や化学的性質が異なるため、除去のメカニズムは同一ではないことが一般的に知られている。

【0014】

特許文献２では、白血球及びサイトカインの除去性能を向上させる試みがなされている一方で、血小板の除去に関しては抑制する試みがなされており、白血球、血小板及びサイトカインの一括除去に関する記載はない。

【0015】

特許文献３には、白血球、サイトカイン及び活性化白血球－活性化血小板複合体の除去に関する記載がある一方で、血小板除去に関しては記載がない。活性化白血球－活性化血小板複合体と血小板は、それぞれ物理的性質や化学的性質が異なるため、除去のメカニズムは同一ではないことが一般的に知られている。

【0016】

特許文献４では、白血球及びサイトカインの除去性能を向上させる試みがなされている一方で、血小板の除去性能を抑制する試みがなされている。

【0017】

また、非特許文献４には、潰瘍性大腸炎の治療方法としてサイトカインの作用を阻害する薬と血球除去成分除去カラムを併用する方法が開示されているが、単一材料による一括除去については記載されていない。

【0018】

以上のような背景の下、炎症性疾患の患者等の血液中に含まれる白血球、血小板及びサイトカイン等の炎症性物質を一括除去可能な材料の開発が切望されている。

【0019】

そこで本発明は、白血球、血小板及びサイトカイン等の炎症性物質を一括除去できる材料を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0020】

上記課題を解決するため、本発明の血液浄化材料は以下の構成からなる。
（１）表面にポリアリレートを有し、該ポリアリレートにリガンドが結合しており、陽性荷電量が１．０～４０．０ｍｍｏｌ／ｍ^２である、血液浄化材料。
（２）白血球、血小板及びサイトカインを吸着する、（１）記載の血液浄化材料。
（３）上記リガンドが、アミノ基を有する、（１）又は（２）記載の血液浄化材料。
（４）上記ポリアリレートと上記リガンドとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造で結合している、（１）又は（２）記載の血液浄化材料。

【0021】

【化1】

【0022】

一般式（Ｉ）中のＸは、ＮＲ^１Ｒ^２を表す。Ｒ^１は、水素原子、炭化水素基又は陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基を表し、Ｒ^２は陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基を表す。Ｙはポリアリレートを表す。
（５）ポリアリレートの表面を加水分解する、加水分解工程と、加水分解後のポリアリレートにリガンドを結合させる、リガンド結合工程と、を備える、（１）又は（２）記載の血液浄化材料の製造方法。
（６）上記加水分解に硫酸又は水酸化ナトリウム水溶液を用いる、（５）記載の血液浄化材料の製造方法。

【発明の効果】

【0023】

本発明の血液浄化材料は、炎症性疾患の患者等の血液中に含まれる白血球、血小板及びサイトカイン等を一括除去することができる。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本発明の血液浄化材料は、表面にポリアリレートを有し、該ポリアリレートにリガンドが結合しており、陽性荷電量が１．０～４０．０ｍｍｏｌ／ｍ^２である。

【0025】

「血液浄化」とは、少なくとも１つの血液中の成分が血液浄化材料を用いて吸着、透析、濾過又は不活化の少なくとも１つの操作により血液から分離除去された状態を意味する。

【0026】

「ポリアリレート」とは、芳香族ジカルボン酸と２価フェノールとがエステル結合したポリエステルを意味する。芳香族ジカルボン酸としては、例えば、イソフタル酸、パラフタル酸、テレフタル酸が挙げられ、なかでもイソフタル酸又はテレフタル酸が好ましい。２価フェノールとしては、ビスフェノール及びその誘導体が挙げられ、なかでもビスフェノールＡが好ましい。すなわち、イソフタル酸又はテレフタル酸とビスフェノールＡからなるポリアリレートであることが好ましい。

【0027】

「表面にポリアリレートを有する」とは、血液中に血液浄化材料を入れた際に血液がポリアリレートに接触できることを意味する。

【0028】

詳細なメカニズムは不明であるが、血液浄化材料の表面にポリアリレートを有する場合、ポリアリレートが疎水性であるために、白血球と血小板が吸着すると考えられる。

【0029】

「リガンド」とは、血液浄化の性能を付与するために、ポリアリレートに結合させた化学構造を意味する。

【0030】

「陽性荷電量」とは、ポリアリレートに結合したリガンドに由来した陽性荷電の量を意味する。サイトカイン除去性能を付与する観点から陽性荷電量は１．２ｍｍｏｌ／ｍ^２以上が好ましく、６．０ｍｍｏｌ／ｍ^２以上がより好ましい。一方で、白血球除去性能を維持する観点から陽性荷電量は３５．０ｍｍｏｌ／ｍ^２以下が好ましく、１５．０ｍｍｏｌ／ｍ^２以下がより好ましい。すなわち、白血球、血小板及びサイトカインを一括除去するためには、血液浄化材料表面の疎水性を維持できる範囲で、陽性荷電を付与する必要がある。

【0031】

血液浄化材料の表面に陽性荷電を付与することができるリガンドの官能基としては、アミノ基が挙げられる。本発明の血液浄化材料においては、アミノ基を有するリガンドであることが好ましい。

【0032】

ポリアリレートへのリガンドの結合様式として、共有結合、イオン結合、水素結合、静電相互作用、ファンデルワールス力などが挙げられる。リガンドが血液浄化材料から血液中へ遊離するリスクが低い方が好ましいため、結合様式は共有結合、イオン結合が好ましく、共有結合がより好ましい。また、リガンドが結合する位置については、血液浄化材料の力学的強度維持の観点から、ポリアリレートの末端に結合していることが好ましい。

【0033】

「サイトカイン」とは、感染や外傷等の刺激により、白血球を始めとする各種の細胞から産生され細胞外に放出されて作用する一群のタンパク質を意味し、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン１～インターロイキン１５、腫瘍壊死因子－α、腫瘍壊死因子－β、ハイモビリティーグループボックス－１、エリスロポエチン及び単球走化因子等が挙げられ、特に、インターロイキン６（以下「ＩＬ－６」という）、インターロイキン８（以下「ＩＬ－８」という）、ハイモビリティーグループボックス－１が炎症性疾患の原因物質とされている。

【0034】

「白血球」とは、顆粒球、単球又はリンパ球のことを表す。炎症性疾患の治療を目的とする場合は顆粒球及び／又は単球を血液中から除去することが好ましい。

【0035】

本発明の血液浄化材料は、炎症性疾患を治療する観点から白血球、血小板及びサイトカインを吸着することが好ましい、すなわち白血球、血小板及びサイトカインを一括除去できることが好ましい。また、炎症性疾患をより効率的に治療する観点から、炎症性疾患の主要原因物質を除去できることが好ましい。すなわち、白血球の中では、顆粒球及び／又は単球を除去できることが好ましく、サイトカインの中では、ＩＬ－６及び／又はＩＬ－８を除去できることが好ましい。

【0036】

血液浄化材料の白血球除去性能の測定方法としては、例えば、白血球を含む液体に血液浄化材料を含浸し、含浸後に液体中の白血球の減少量を測定し、除去率を算出する方法が挙げられる。また、入口及び出口を有する容器に血液浄化材料を充填し、白血球を含む液体を通液させて、入口及び出口における白血球の濃度変化から除去率を算出する方法を用いることもできる。含浸及び通液時の温度は、白血球が活動可能な範囲であれば特に制限はないが、血液浄化に使用する観点から、３４～４４℃であることが好ましい。

【0037】

白血球の濃度の測定は、例えば、白血球を含む液体に白血球検出試薬を反応させ、試薬と結合した血球分画を測定することにより行われる。当該測定には、フローサイトメーターや血球計算機を用いることができる。また、白血球の検出には抗ＣＤ４５抗体を用いることができる。

【0038】

血液浄化材料の血小板除去性能の測定方法としては、例えば、血小板を含む液体に血液浄化材料を含浸し、含浸後に液体中の血小板の減少量を測定し、除去率を算出する方法が挙げられる。また、入口及び出口を有する容器に血液浄化材料を充填し、血小板を含む液体を通液させて、入口及び出口における血小板の濃度の変化から除去率を算出する方法を用いることもできる。含浸及び通液時の温度は、血小板が活動可能な範囲であれば特に制限はないが、血液浄化に使用する観点から、３４～４４℃であることが好ましい。

【0039】

血小板の濃度の測定は、例えば、血小板を含む液体に血小板検出試薬を反応させ、試薬と結合した血球分画を測定することにより行われる。当該測定には、フローサイトメーターや血球計算機を用いることができる。また、血小板の検出には抗ＣＤ４１抗体を用いることができる。

【0040】

血液浄化材料のサイトカイン除去性能の測定方法としては、例えば、サイトカインを溶解したウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ；以下「ＦＢＳ」という）に血液浄化材料を含浸し、含浸前後のＦＢＳ中のサイトカイン濃度を測定し、含浸前後のサイトカイン濃度からサイトカインの除去率を算出する方法が挙げられる。含浸時の温度は、サイトカインが生理活性をもつ範囲であれば特に制限はないが、血液浄化に使用する観点から、３４℃～４４℃であることが好ましい。

【0041】

サイトカインの濃度の測定は、例えば、サイトカインを含む液体にサイトカイン検出試薬を反応させ、試薬と結合したサイトカインを測定することにより行われる。当該測定には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ法）を用いることができる。

【0042】

陽性荷電量の測定は、陽性荷電と相互作用する物質を測定対象である血液浄化材料に吸着させた後に、吸着した物質を血液浄化材料から遊離させ、遊離した物質の量を測ることにより行われる。陽性荷電と相互作用する物質としては、例えば、アシッドオレンジ７などの色素が挙げられ、アシッドオレンジ７を用いる場合であれば、遊離した物質の量は４８２ｎｍの波長の吸光度を測定することで定量できる。

【0043】

本発明の血液浄化材料は、上記ポリアリレートと上記リガンドとが、下記一般式（Ｉ）で表される構造で結合していることが好ましい。

【0044】

【化2】

【0045】

一般式（Ｉ）中のＸは、ＮＲ^１Ｒ^２を表す。Ｒ^１は、水素原子、炭化水素基又は陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基を表し、Ｒ^２は陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基を表す。Ｙはポリアリレートを表す。

【0046】

ここで、陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基とは、１以上の炭素原子を窒素原子で置き換えた窒素原子含有炭化水素基である。該窒素原子含有炭化水素基は、さらに炭素原子をヘテロ原子で置き換えてもよい。

【0047】

また、炭化水素基とは、飽和脂肪族炭化水素基、不飽和脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基のいずれかを意味する。

【0048】

一般式（Ｉ）中のＸが表すＮＲ^１Ｒ^２において、Ｒ^１の炭化水素基若しくはＲ^１の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基、又はＲ^２の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基の分子量が大きすぎると、血液浄化材料の表面が疎水性となりサイトカインの吸着を阻害することから、Ｒ^１の炭化水素基又はＲ^１の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基と、Ｒ^２の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基の分子量の合計は８００以下であることが好ましい。

【0049】

また、陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基において、炭化水素基の炭素原子数は３０以下が好ましく、８以下がより好ましい。

【0050】

一般式（Ｉ）中のＸが表すＮＲ^１Ｒ^２において、Ｒ^１又はＲ^２の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基に含まれる官能基はアミノ基であることが好ましい。官能基がアミノ基である場合、アミノ基の数が多いと、白血球及び血小板の吸着を阻害してしまうことから、Ｒ^１とＲ^２の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基に含まれるアミノ基の数の合計は１～２０であることが好ましい。ここで、アミノ基とは、１～４級アミンに由来するアミノ基のいずれかを意味する。

【0051】

陽性荷電を有する官能基がアミノ基である場合、Ｒ^１又はＲ^２の陽性荷電を示す官能基を有する炭化水素基は以下の一般式（ＩＩ）で表される構造であることが好ましい。

【0052】

【化3】

【0053】

一般式（ＩＩ）中、Ｒ^３は炭化水素基、Ｒ^４はアミノ基を有する炭化水素基を表し、ｌ、ｍ及びｎはそれぞれ独立して０～１５の整数であり、ｌ、ｍ及びｎの和は１５以下である。波線は、一般式（Ｉ）中のＸが表すＮＲ^１Ｒ^２において、Ｎとの結合部位を表す。

【0054】

炭化水素基の炭素数が多すぎると、血液浄化材料の表面が疎水性となりサイトカインの吸着を阻害することから、Ｒ^３の炭化水素基及びＲ^４のアミノ基を有する炭化水素基の炭素数は、それぞれ１～２０であることが好ましく、１～１０であることがより好ましい。Ｒ^３の炭化水素基及びＲ^４のアミノ基を有する炭化水素基の炭素数の和は、１～２０であることが好ましく、１～１０であることがより好ましい。また、各構造単位はランダムに配置されていてもよく、繰り返し単位中のＲ^３及びＲ^４はそれぞれ異なる構造でもよい。

【0055】

なかでも、一般式（Ｉ）中のＸが表すＮＲ^１Ｒ^２において、Ｒ^１が水素原子又は一般式（ＩＩ）の構造、Ｒ^２が一般式（ＩＩ）の構造であることが好ましい。

【0056】

Ｒ^１が水素原子又は一般式（ＩＩ）の構造、Ｒ^２を一般式（ＩＩ）の構造とするには、例えば、エチレンジアミン、Ｎ－エチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、Ｎ－エチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン又は直鎖状若しくは分岐状のポリエチレンイミンを、後述する方法でポリアリレート末端のカルボキシル基に縮合して結合させる方法が挙げられる。

【0057】

血液浄化材料の作製方法に特に制限はないが、血液浄化材料の力学的強度維持の観点から、ポリアリレートの末端とリガンドとが結合していることが好ましい。特に、最表面のポリアリレートを部分的に加水分解することで生じたポリアリレート末端のカルボキシル基に、アミノ基を有する化合物を縮合して結合させる方法が挙げられる。

【0058】

最表面のポリアリレートを加水分解する方法に特に制限はないが、硫酸などの酸触媒を用いる方法や水酸化ナトリウム水溶液などの塩基触媒を用いる方法が好ましい。加水分解が進みすぎると血液浄化材料の力学的強度が下がり構造が保てなくなることから、酸触媒として、硫酸を用いる場合、硫酸濃度は３ｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、塩基触媒として水酸化ナトリウム水溶液を用いる場合、水酸化ナトリウム濃度は３ｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましい。

【0059】

本発明の血液浄化材料の形態は、繊維、ビーズ、不織布、編地、織地、中空糸などから任意に選択して構わない。体外循環において血液流路が狭いと血液が滞留し、凝固する危険性が高いため、血液流路の確保が容易であるビーズ、編地、織地が好ましい。

【実施例0060】

以下、本発明の血液浄化材料について、実施例及び比較例により具体的に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。

【0061】

＜白血球除去性能及び血小板除去性能の測定＞
上下に液体の出入り口のある円筒状カラム（内径１．０ｃｍ×高さ２．５ｃｍ、内容積１．９６ｃｍ^３、外径２ｃｍ、ポリカーボネート製）に、表面積が４８ｃｍ^２となるように血液浄化材料を充填した。リポポリサッカライドを７０ＥＵ／ｍＬとなるように添加した健常ヒト血液を３７℃、３０分間、６５ｒｐｍで振盪し、血球を活性化させた後、上記カラムに流量０．１８ｍＬ／分で上記血液を通液し、カラムの入口側及び出口側で血液の採取を行った。カラム入口側の血液は、カラム内に血液が流入した時点で採取した。カラムの出口側の血液は、カラム内に血液が流入した時点を０分とし、血液が流入した時点から３０～３３分を経過する間にカラムの出口から流出した血液を採取した。採取した各血液を、血球計算機（シスメックス株式会社；多項目自動血球分析装置 ＸＴ－１８００ｉ）で測定し、白血球及び血小板の濃度を算出した。白血球除去率を式（１）、血小板除去率を式（２）から求め、小数点第１位を四捨五入した値を用いた。

【0062】

白血球除去率（％）＝｛（カラム入口側の白血球の濃度）－（カラム出口側の白血球の濃度）｝／（カラム入口側の白血球の濃度）×１００ ・・・式（１）
血小板除去率（％）＝｛（カラム入口側の血小板の濃度）－（カラム出口側の血小板の濃度）｝／（カラム入口側の血小板の濃度）×１００ ・・・式（２）
＜サイトカイン除去性能の測定＞
血液浄化材料をポリプロピレン製の容器に入れた。この容器に、ＩＬ－８又はＩＬ－６の濃度が２０００ｐｇ／ｍＬとなるように調製したＦＢＳ３０ｍＬを、ＩＬ－８の濃度の測定の際は表面積８．１ｃｍ^２の血液浄化材料に対して、ＩＬ－６濃度の測定の際は表面積８１ｃｍ^２の血液浄化材料に対して添加し、３７℃のインキュベータ内で２４時間転倒混和した後、ＥＬＩＳＡ法にてＦＢＳ中のＩＬ－８濃度又はＩＬ－６濃度を測定した。ＩＬ－８濃度の測定にはＨｕｍａｎ ＣＸＣＬ８／ＩＬ－８ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製）を使用し、ＩＬ－６濃度の測定にはＨｕｍａｎ ＩＬ－６ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用した。転倒混和前のＩＬ－８濃度から式（３）によりＩＬ－８除去率を求め、小数点第１位を四捨五入した値を用いた。転倒混和前のＩＬ－６濃度から式（４）によりＩＬ－６除去率を求め、小数点第１位を四捨五入した値を用いた。

【0063】

ＩＬ－８除去率（％）＝｛転倒混和前のＩＬ－８濃度（ｐｇ／ｍＬ）－転倒混和後のＩＬ－８濃度（ｐｇ／ｍＬ）｝／転倒混和前のＩＬ－８濃度（ｐｇ／ｍＬ）×１００ ・・・式（３）
ＩＬ－６除去率（％）＝｛転倒混和前のＩＬ－６濃度（ｐｇ／ｍＬ）－転倒混和後のＩＬ－６濃度（ｐｇ／ｍＬ）｝／転倒混和前のＩＬ－６濃度（ｐｇ／ｍＬ）×１００ ・・・式（４）
＜陽性荷電量の測定＞
表面積６．５ｃｍ^２の血液浄化材料に対して、アシッドオレンジ７の濃度が０．２ｍｇ／ｍＬとなるように調製した０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液を１ｍＬ添加し、２５℃で１時間、ローテータで旋回混和した。０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液で血液浄化材料を洗浄した後、１ｍｍｏｌＬ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液を血液浄化材料に１ｍＬ添加し、２５℃で１０分間、ローテータで旋回混和することで、血液浄化材料に付着したアシッドオレンジ７を抽出した抽出液を得た。抽出液の波長４８２ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で測定し、抽出液中のアシッドオレンジ７の濃度を求めた。得られたアシッドオレンジ７の濃度から下記式（５）により表面の陽性荷電量を求め、小数点第２位を四捨五入した値を用いた。

【0064】

陽性荷電量（ｍｍｏｌ／ｍ^２）＝アシッドオレンジ７の濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）×抽出液量（Ｌ）／血液浄化材料表面積（ｍ^２） ・・・式（５）
［実施例１］
イムノピュア（登録商標；日機装株式会社製）を解体し、ビーズを取り出し、血液浄化材料Ａを得た。ビーズの直径は１ｍｍであった。血液浄化材料Ａ０．１ｇを０．０５ｍｏｌ／Ｌの水酸化トリウム水溶液３０ｍＬに入れ、２５℃にて、スターラーで２時間攪拌し、加水分解反応を行った。反応後は、蒸留水で中性になるまで、洗浄し、血液浄化材料Ｂを得た。

【0065】

テトラエチレンペンタミン（以下「ＴＥＰＡ」という）をメタノールに１．０質量％となるように溶解した。４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（以下「ＤＭＴ－ＭＭ」という）をメタノールに２質量％となるように調製した。蒸留水中の血液浄化材料Ｂ０．１ｇをメタノールで置換した後、２質量％ＤＭＴ－ＭＭ溶液１６ｍＬに血液浄化材料Ｂを入れ、２５℃にて、スターラーで１０分間攪拌した。次に、血液浄化材料Ｂの入ったＤＭＴ－ＭＭ溶液に、１．０質量％のＴＥＰＡ溶液を１６ｍＬ添加し、２５℃にて、スターラーで１時間攪拌し、反応させた。反応後は、メタノール３０ｍＬで３回洗浄した後、蒸留水で中性になるまで、洗浄し、血液浄化材料Ｃを得た。血液浄化材料Ｃの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0066】

［実施例２］
ＴＥＰＡをメタノールに５．０質量％となるように溶解した以外は、実施例１と同操作を行い、血液浄化材料Ｄを得た。血液浄化材料Ｄの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0067】

［実施例３］
ＴＥＰＡをメタノールに１０．０質量％となるように溶解した以外は、実施例１と同操作を行い、血液浄化材料Ｅを得た。血液浄化材料Ｅの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0068】

［実施例４］
平均分子量６００の分岐状ポリエチレンイミン（以下「ＰＥＩ」という）をメタノールに１０質量％となるように溶解した。ＤＭＴ－ＭＭをメタノールに２質量％となるように調製した。蒸留水中の血液浄化材料Ｂ０．１ｇをメタノールで置換した後、２質量％ＤＭＴ－ＭＭ溶液１６ｍＬに血液浄化材料Ｂを入れ、２５℃にて、スターラーで１０分間攪拌した。次に、血液浄化材料Ｂの入ったＤＭＴ－ＭＭ溶液に、１０質量％のＰＥＩ溶液を１６ｍＬ添加し、２５℃にて、スターラーで１時間攪拌し、反応させた。反応後は、メタノール３０ｍＬで３回洗浄した後、蒸留水で中性になるまで、洗浄することで、血液浄化材料Ｆを得た。血液浄化材料Ｆの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0069】

［比較例１］
血液浄化材料Ａの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0070】

［比較例２］
ＴＥＰＡをメタノールに０．２５質量％となるように溶解した以外は、実施例１と同操作を行い、血液浄化材料Ｇを得た。血液浄化材料Ｇの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0071】

［比較例３］
分岐状ＰＥＩの平均分子量を６００から８００に変更する以外は実施例４と同操作を行い、血液浄化材料Ｈを得た。血液浄化材料Ｈの白血球除去性能、血小板除去性能、サイトカイン除去性能及び陽性荷電量の測定結果を表１に示す。

【0072】

【表1】

【0073】

表１の結果から、陽性荷電量が１．０～４０．０ｍｍｏｌ／ｍ^２である血液浄化材料は、白血球、血小板及びサイトカイン除去性能に優れ、一括除去可能なことがわかる。

【産業上の利用可能性】

【0074】

本発明の血液浄化材料は、体外循環において、血中から白血球、血小板及びサイトカイン等を一括除去することができるため、炎症性疾患、特にクローン病や潰瘍性大腸炎治療用の体外循環カラムとして利用できる。