特開 2024-53541 極低温保管のための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024053541

(43)【公開日】2024-04-15

(54)【発明の名称】極低温保管のための方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/04 20060101AFI20240408BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240408BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240408BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240408BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240408BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240408BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240408BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240408BHJP

   C12M 1/38 20060101ALN20240408BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20240408BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20240408BHJP

   C12Q 1/04 20060101ALN20240408BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20240408BHJP

【ＦＩ】

C12N1/04 ZNA

A61K35/17

A61P35/00

A61P35/02

A61P29/00

A61P37/06

A61P31/00

A61K45/00

C12M1/38 Z

C12N5/0783

C12N5/10

C12Q1/04

C12N15/09 Z

【審査請求】有

【請求項の数】33

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023165221

(22)【出願日】2023-09-27

(62)【分割の表示】P 2020500011の分割

【原出願日】2018-03-14

(31)【優先権主張番号】62/471,343

(32)【優先日】2017-03-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】516316897

【氏名又は名称】ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】519332069

【氏名又は名称】チャーチ， サラ エリザベス

(71)【出願人】

【識別番号】519332070

【氏名又は名称】ガンター， ジョン チャールズ

(71)【出願人】

【識別番号】519332081

【氏名又は名称】ポロック， キャサリン

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100106080

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 晶子

(72)【発明者】

【氏名】チャーチ， サラ エリザベス

(72)【発明者】

【氏名】ガンター， ジョン チャールズ

(72)【発明者】

【氏名】ポロック， キャサリン

【テーマコード（参考）】

4B029

4B063

4B065

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B029AA12

4B029BB11

4B029DG10

4B063QA18

4B063QQ08

4B063QQ79

4B063QS32

4B065AA90X

4B065BD09

4B065BD12

4B065BD22

4B065BD39

4B065BD42

4B065CA44

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB072

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZC202

4C084ZC412

4C084ZC751

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB65

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZB08

4C087ZB11

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZB31

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ドナーに由来する生物学的試料、特にアフェレーシス試料からの細胞を極低温で保管することを含む方法を提供する。
【解決手段】細胞は、少なくとも１つのステップを含む段階的な凍結プロファイルを使用する制御された速度で凍結装置で凍結され、ここで上記試料および／またはチャンバは、１分あたり１℃を超える速度で冷却され、そしてここで上記細胞は、Ｔ細胞を含むかＴ細胞について濃縮され得る。さらなる態様は、例えば、細胞が上記ドナーから得られる時点、保管時間、極低温凍結の前または後保管施設へ細胞を輸送すること、上記細胞を分類するためのコードまたは識別子で印を付けられている試料容器、上記極低温で凍結された細胞から生成された操作Ｔ細胞を含む治療有効量の組成物をそれを必要とする対象に投与すること、および疾患、特にがんに対する上記ドナーの処置に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であっ
て、
前記細胞が、前記ドナーが疾患または状態であると診断された後、またはそれを有する
かもしくはそれを有する疑いがあるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患ま
たは状態の１つまたは複数の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られ、
前記細胞が、前記試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却
される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御さ
れた速度の凍結装置において、凍結される、方法。

【請求項2】

ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であっ
て、前記細胞が、前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされ
た後、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾
患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られている、方法
。

【請求項3】

ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であっ
て、前記細胞が、前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されていないか、またはそ
れを有することが判明していないか、またはそれを有することが疑われていない時点で、
前記ドナーから得られており、
前記細胞が、前記試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却
される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御さ
れた速度の凍結装置において、凍結される、方法。

【請求項4】

－ ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
－ 前記極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれ
を有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナー
が前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患
または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後
に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける
前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記保管の期間中に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受
けるか、または受けた、方法。

【請求項5】

－ ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
－ 前記極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれ
を有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナー
が前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患
または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後
に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける
前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記細胞が、以下を上回るかもしくは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時
間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月
間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１
カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、
１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、
１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、もしくは４０年間、ま
たは前記ドナーが前記細胞を必要とするまで、極低温で保管される、方法。

【請求項6】

－ ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
－ 前記極低温で凍結させた細胞から生成された操作Ｔ細胞を含む、治療有効量の組成
物を、それを必要とする対象に投与することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれ
を有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナー
が前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患
または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後
に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける
前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記凍結と投与との間に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置
を受けるか、または受けた、方法。

【請求項7】

－ ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させ、それによって、
極低温で凍結させた細胞組成物を生成することと、
－ 前記極低温で凍結させた細胞組成物の細胞を操作して、操作Ｔ細胞を含む組成物を
生成することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれ
を有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナー
が前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患
または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後
に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける
前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記凍結と操作との間に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置
を受けるか、または受けた、方法。

【請求項8】

治療有効量の操作Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、処置の方法
であって、
前記細胞が、（ｉ）前記対象が疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを
有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記対象が前
記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記対象が疾患または
状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発
を経験した後であり、かつ前記対象が前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である
時点で、前記対象から得られるかまたは得られたものであり、
前記細胞が、前記対象から得られるかもしくは得られた後、かつ前記操作Ｔ細胞の前記
投与の前に、前記対象が、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、また
は受けた、方法。

【請求項9】

操作細胞の組成物を産生するための方法であって、
－ 極低温で保管した細胞を得て、必要に応じて解凍することと、
－ 前記極低温で保管した細胞に、組換え受容体を導入し、それによって、操作Ｔ細胞
を含む操作組成物を生成することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれ
を有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナー
が前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患
または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後
に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける
前である時点で、前記ドナーから採取した後に、極低温で保管され、
極低温保管の後および前記極低温で保管した細胞を得る前に、前記ドナーが、前記疾患
または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。

【請求項10】

前記生物学的試料が、アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、必要に応じて
白血球アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、かつ／または前記試料が、白血
球および／またはリンパ球を含有し、かつ／または前記試料中の前記細胞または血液細胞
が、白血球から本質的になるか、または前記試料中の前記細胞のうちの少なくとも８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、または前記試料
中の前記血液細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％
、９８％、もしくは９９％が、白血球である、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法
。

【請求項11】

前記細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞集団および／またはＴ細胞集団および
／またはＴ細胞サブセットの、免疫親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択およ
び／または濃縮のステップに供されていない、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方
法。

【請求項12】

前記細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞および／またはＴ細胞集団の、免疫親
和性に基づくおよび／または標的特異的な選択および／または濃縮ステップに供されてお
り、必要に応じて、前記極低温保管の前に、前記選択または濃縮を行うことをさらに含む
、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記選択ステップおよび／または濃縮が、免疫親和性に基づく選択を含む、および／ま
たは陽性選択もしくは陰性選択を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記選択ステップおよび／または濃縮が、ＣＤ４^＋細胞もしくはそのサブセットおよび
／またはＣＤ８＋細胞もしくはそのサブセットの濃縮および／または単離を含み、前記Ｃ
Ｄ４^＋細胞またはそのサブセットの濃縮または単離が、前記ＣＤ８^＋細胞またはそのサブ
セットの前記選択および／または単離とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで
行われ、
必要に応じて、前記ＣＤ８^＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４^＋細胞のサブ
セットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞、エフェ
クターメモリー細胞（Ｔ_ＥＭ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、エフェク
ターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（
Ｔ_Ｎ）細胞、および／または調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、請求
項１２～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記細胞が、Ｔ細胞を含むか、またはＴ細胞が濃縮されている、請求項１～１４のいず
れか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８^＋Ｔ細胞もしくはその
サブセット、またはこれらの混合物を含むか、またはそれらが濃縮されており、前記ＣＤ
８^＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４^＋細胞のサブセットが、必要に応じて、
メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（Ｔ_Ｅ
Ｍ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフ
ェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、および／また
は調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記細胞を極低温で保管する前に、前記細胞を、極低温保存媒体と合わせることをさら
に含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記極低温保存媒体が、約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および血清タン
パク質、必要に応じて、ヒト血清アルブミン、必要に応じて、約４％のヒト血清アルブミ
ンを含む、ならびに／または凍結溶液および／もしくは前記最終濃度の生物学的試料が、
約１体積％～約２０体積％、約３体積％～約９体積％、もしくは約６体積％～約９体積％
のＤＭＳＯを含む、および／もしくは約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体
積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．
５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％のＤＭＳＯを含む、請求項
１７に記載の方法。

【請求項19】

前記極低温保管が、１分間につき１℃または約１℃の速度で、必要に応じて、温度が－
８０℃または約－８０℃に達するまで、温度を低下させることを含む、請求項２または４
～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記細胞が、液体窒素の気相に入れた容器において極低温で保管され、前記容器が、必
要に応じて、バッグまたはバイアルである、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法
。

【請求項21】

前記細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間
、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間
、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ
月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１
０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１
８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低温
で保管される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記細胞が、ある期間保管され、前記期間の後、前記組成物中の生存細胞もしくは生存
Ｔ細胞またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、約２４％～約１００％で
あるか、または少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、
６０、６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０％である、請求項１～２１のいずれ
か１項に記載の方法。

【請求項23】

前記疾患が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または感
染性疾患もしくは状態である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記がんが、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、有
毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキン
リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾胞
性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、または
急性骨髄性白血病である、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記がんが、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、Ｃ
Ｄ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ
２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４、
ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ
２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ２、ｋ
ｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ
１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ
、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原
、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ
、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ
１２３、ＣＳ－１、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、およびＭＡＧＥ Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス
腫瘍１（ＷＴ－１）、およびサイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）のう
ちの少なくとも１つを発現する細胞を含む、請求項２３または２４に記載の方法。

【請求項26】

前記処置が、化学療法、放射線照射、外科手術、細胞療法である、および／またはデバ
ルキング処置である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記処置が、以下の処置：シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウラ
シル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、
ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピルビ
シン、カペシタビン、フォリン酸、オキサリプラチン、小分子阻害剤、免疫細胞、ナチュ
ラルキラー細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞、４００
０ｃＧｙ照射、自家幹細胞救援、幹細胞移植、骨髄移植、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、
ＣＡＲ Ｔ細胞療法、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、シタラビ
ン、高用量シタラビン、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、クラドリビ
ン、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド
、コルチコステロイド、プレドニゾン、デキサメタゾン、アルキル化剤、クロラムブシル
、ベンダムスチン、イホスファミド、白金薬物、シスプラチン、カルボプラチン、オキサ
リプラチン、プリン類似体、フルダラビン、ペントスタチン、クラドリビン、抗代謝薬、
ゲムシタビン、メトトレキサート、プララトレキサート、ビンクリスチン、ドキソルビシ
ン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プロテアソーム阻害剤、ヒストンデアセチラー
ゼ阻害剤、ロミデプシン、ベリノスタット、キナーゼ阻害剤、イブルチニブ、イデラリシ
ブ、抗体、抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、イブリツ
モマブチウキセタン、抗ＣＤ５２抗体、アレムツズマブ、抗ＣＤ３０抗体、ブレンツキシ
マブ、ベドチン、インターフェロン、免疫調節剤、サリドマイド、ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ＋
Ｒ（もしくはＲ－ＣＨＯＰ）、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、ＥＰＯＣＨ＋Ｒ、ＤＨＡＰ、ＤＨＡ
Ｐ＋Ｒ（もしくはＲ－ＤＨＡＰ）、ベネトクラックス、メチルプレドニゾロン、またはブ
ルトン型チロシンキナーゼ阻害剤（ＢＴＫｉ）のうちの１つまたは複数を、単独または組
合せで含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記ドナーまたは対象が、ヒトである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

極低温保管の前に、前記細胞を、必要に応じて、１つまたは複数の表現型マーカーにつ
いて、前記細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、請求項
１～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、請求項１～２９のいずれか１
項に記載の方法。

【請求項31】

前記細胞の極低温保管および／または解凍の後に、組換えまたは外因性分子を発現する
ように前記細胞を操作することをさらに含み、これが、必要に応じて、組換えタンパク質
、必要に応じて、組換え受容体であり、これが、必要に応じて、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
、キメラ受容体、および／またはキメラ抗原受容体であるか、またはそれらを含む、請求
項１～３０のいずれかに記載の方法。

【請求項32】

前記組換え分子が、前記疾患または状態と関連する細胞によって発現されるか、または
それによって特異的に発現される抗原を、特異的に認識するか、またはそれに特異的に結
合する組換え受容体である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ドナーもしくは対象から収集されたとき、および／または前記アフェレーシス試料
中の合計の、前記細胞の数が、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の
数もしくはおよそ以下の数を上回らない、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法：
５００×１０^６個、１０００×１０^６個、２０００×１０^６個、３０００×１０^６個、４
０００×１０^６個、もしくは５０００×１０^６個、またはそれよりも多くの合計細胞もし
くは合計有核細胞。

【請求項34】

前記試料を極低温で保管する前に、前記試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、
請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８^＋Ｔ細胞もしくはその
サブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃
縮されており、必要に応じて、前記ＣＤ８^＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４
^＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）
細胞、エフェクターメモリー細胞（Ｔ_ＥＭ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細
胞、エフェクターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、
ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、および／または調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択
される、ならびに／または前記試料が、バルクＴ細胞が濃縮されている、請求項３４に記
載の方法。

【請求項36】

前記試料を極低温で保管する前に、前記試料を極低温媒体において製剤化することをさ
らに含む、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記細胞を、極低温で凍結する前または凍結した後のいずれかで、保管施設に輸送する
ことをさらに含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記保管施設が、中央または共通のリポジトリの保管施設である、請求項３７に記載の
方法。

【請求項39】

前記試料が、低温環境において、前記保管施設に輸送される、請求項３７または３８に
記載の方法。

【請求項40】

輸送した後、かつ前記細胞を極低温で保管する前に、前記試料からＴ細胞を濃縮するこ
とをさらに含む、請求項３６～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８^＋Ｔ細胞もしくはその
サブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃
縮されており、必要に応じて、前記ＣＤ８^＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４
^＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）
細胞、エフェクターメモリー細胞（Ｔ_ＥＭ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細
胞、エフェクターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、
ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、および／または調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択
される、ならびに／またはバルクＴ細胞を含む、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

輸送した後、かつ前記細胞を極低温で保管する前に、前記試料および／または前記Ｔ細
胞を、極低温媒体において製剤化することをさらに含む、請求項４０または請求項４１に
記載の方法。

【請求項43】

前記極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、請求項１～４２のいずれか１
項に記載の方法。

【請求項44】

前記試料が、処理、極低温保存、および／または保管の間、前記細胞を分類するために
、１つまたは複数のコードまたは識別子で印を付けた容器に入れられる、請求項１～４３
のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、文字識別子、バーコード、ＱＲコード（
登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポンダを含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、前記ドナー、前記試料、前記バイアル、
前記容器、前記疾患、および／または前記保管施設のうちの１つまたは複数の識別に対応
するか、またはそれを示す、請求項４４または請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、患者識別のブレスレットまたは病院もし
くは医療施設もしくは収集施設のシステムもしくは書類に出現するコードに対応する、請
求項４４～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

処置の方法であって、
請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法によって、極低温で保管された細胞を得て、
必要に応じて解凍することであって、前記得ることの前に、前記細胞が、少なくとも１２
時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ
月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ
月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７
年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間
、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間
、または４０年間の期間、極低温で保管されていることと、
組換え受容体を、前記刺激した組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作
組成物を生成することと、
前記細胞を対象に投与することと
を含む、方法。

【請求項49】

前記処置が、前記操作Ｔ細胞または前記極低温で凍結した組成物の細胞を含まない、請
求項１～４８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願情報
本出願は、２０１７年３月１４日に出願された米国仮特許出願番号第６２／４７１，３
４３号に基づく優先権を主張しており、その全体の内容は、参考として本明細書中に援用
される。

【背景技術】

【0002】

概要
細胞療法は、治療目的を達成するために、細胞をレシピエントに投与する技法である。
任意の所与のレシピエントについて、投与される細胞は、別の人物を起源とするものであ
ってもよく、またはレシピエント自身を起源とするものであってもよい。後者の事例は、
自家細胞療法と称される場合があり、すなわち、細胞が収集されたレシピエントへと細胞
を戻して投与することである。自家細胞療法の利点としては、細胞を収集したドナーが、
レシピエントであるため、レシピエントの身体が、投与された細胞を拒絶する可能性が低
減されることを挙げることができる。

【0003】

細胞療法に関して、細胞をいつどのようにしてドナーから収集するか、ならびに収集後
および投与前に細胞をどのように処置するかにより、治療法の有効性および利用可能性、
たとえば、必要となった場合に細胞をどれほど迅速にレシピエントに投与することができ
るかが、影響を受け得る。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

これらの目的で、細胞および細胞組成物の極低温保管、ならびに／またはそれらの操作
および／もしくは対象、たとえば、レシピエントへの投与のための方法、システム、およ
び組成物、ならびに製品が、提供される。一部の態様では、これらの実施形態の利点には
、とりわけ、細胞療法の利用可能性、有効性、および／または他の側面を強化することが
ある。方法は、さらに、または代替として、ドナーから収集された細胞を使用する他の医
療プロセスまたは研究プロセスに、利益をもたらし得る。

【0005】

一部の態様では、本開示は、細胞の極低温保管、処理、操作、および投与の方法、なら
びに患者が細胞療法を必要とする前に収集され、将来的な使用のための極低温保存された
アフェレーシスが関与する、関連する物品、組成物、およびシステムに関する。

【0006】

一部の態様では、本開示の細胞および組成物、ならびに製品は、たとえば、ドナーおよ
び／または別のレシピエントなどにおいて、疾患または状態の後続の治療的処置に使用す
ることができるものである。一部の実施形態では、方法は、ドナーの血液に由来する細胞
を極低温で保管することを伴う。極低温で保管した細胞は、一部の実施形態では、次いで
、疾患または状態を処置するための細胞療法に使用され得る。

【0007】

一部の実施形態では、細胞は、ドナーが疾患または状態であると診断された後、かつド
ナーが以下の：疾患もしくは状態の任意の初回処置、疾患もしくは状態の処置のための任
意の標的化処置もしくはそれを対象とする任意の処置、または放射線照射および／もしく
は化学療法以外の任意の処置のうちの１つまたは複数を受ける前に、収集される。一部の
実施形態では、細胞は、疾患の初回処置の後の疾患の１回目の再発の後、かつドナーまた
は対象が疾患の後続の処置を受ける前に、収集される。初回および／または後続の処置は
、ある特定の実施形態によると、細胞療法以外の治療法であり得る。一部の実施形態では
、収集された細胞は、初回および／または後続の処置の後に、細胞療法において使用され
得る。

【0008】

一部の実施形態では、細胞は、疾患の第２の処置過程の後の疾患の２回目の再発の後、
かつドナーまたは対象が疾患の後続の処置を受ける前に、収集される。一部の実施形態で
は、患者は、たとえば、ある特定のリスク因子を評価することによって、第２の処置過程
の後に、再発する可能性が高いと識別される。一部の実施形態では、リスク因子は、疾患
の種類および／または遺伝学、たとえば、ダブルヒットリンパ腫、原発性難治性がん、ま
たは活性化Ｂ細胞リンパ腫に基づく。一部の実施形態では、リスク因子は、臨床症状、た
とえば、第１の処置過程の後の早期再発、または処置後の予後の悪さを示すその他のもの
（たとえば、ＩＰＩが２を上回る）に基づく。

【0009】

一部の実施形態では、細胞は、ドナーまたは対象が疾患と診断される前に収集される。
一部の態様では、ドナーまたは対象は、疾患を発症するリスクがあると判定され得るか、
または疾患を発症するリスクがあるとみなされることも疾患と診断されることもないが、
寿命の後期に細胞療法が必要となった場合のために細胞を貯蔵もしくは保管することを選
択する可能性がある。一部の実施形態では、ドナーまたは対象は、遺伝子の変異、遺伝子
の異常、遺伝子の破壊、家族の病歴、タンパク質の異常（たとえば、タンパク質産生およ
び／もしくはプロセシングの欠如）、ならびに疾患を発症するリスクを増加させ得る生活
スタイルの選択などの因子に基づいて、疾患を発症するリスクがあるとみなされ得る。一
部の実施形態では、細胞は、予防として収集される。

【0010】

一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２
４時間、３６時間、または４８時間、保管もしくは貯蔵される。一部の実施形態では、細
胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１週間、２週間、３週間、または４週間
、保管または貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、長期保管または長期貯蔵される
。一部の態様では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１カ月間、２カ月
間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ
月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間
、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、
１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、４０年間、
またはそれを上回る期間、保管される。

【0011】

本開示はまた、一部の態様では、アフェレーシス試料を処理する方法にも関する。一部
の実施形態では、方法は、ドナーから取得されたアフェレーシス試料を、低温環境で、保
管施設に輸送すること、および保管施設において、アフェレーシス試料を極低温で保管す
ることを伴う。一部の実施形態では、輸送する前に、試料は、たとえば、Ｔ細胞、たとえ
ば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞を選択することによって、処理される
。一部の実施形態では、そのような処理は、試料を輸送した後、かつ試料を極低温で保管
する前に、行われる。一部の実施形態では、処理は、極低温での保管後、試料を解凍した
後に行われる。

【0012】

一部の実施形態では、記載される実施形態による方法の利点としては、細胞療法の効率
性および／または有効性の改善が挙げられる。ドナー、したがってドナーの細胞が、疾患
の広範囲な処置を受けていない段階、および／または疾患もしくは状態もしくはその診断
が行われる前の段階で、ドナーが細胞を保管することを可能にすることにより、そのよう
な細胞は、１回の処置または複数回の処置の後に採取された細胞と比較して、細胞療法に
おける使用について、ある特定の利点を有し得る。たとえば、１回または複数回の処置の
前に採取した細胞は、複数回の処置を受けた後の細胞よりも、より健康であり得る、より
高いレベルのある特定の細胞活性を示し得る、より急速に成長し得る、および／または遺
伝子操作に対してより受容性があり得る。本明細書に記載される実施形態による利点の別
の例としては、利便性を挙げることができる。たとえば、細胞が細胞療法に必要とされる
前にドナーの細胞を収集し、必要に応じて処理し、保管することによって、細胞は、レシ
ピエントが、後の時点でそれらを必要とした場合および必要としたときに、容易に利用す
ることができるであろう。これにより、アフェレーシスラボの能力が増加し得、技師に提
供されるアフェレーシス収集プロセスのスケジュール決定の柔軟性がより大きくなる。

【0013】

一部の実施形態では、細胞および／または組成物および／または製品、たとえば、細胞
を含有する容器（たとえば、細胞バイアルまたはバッグ）には、たとえば、処理、極低温
保存、および／または保管、たとえば、長期保管の際の細胞および試料の分類のために、
１つまたは複数のコードまたは他の識別子で印が付けられる。一部の実施形態では、シス
テムおよび物品には、それぞれが、極低温保存された細胞組成物、たとえば、提供される
方法の実施形態に従って生成されたものを含む、複数の容器が含まれ、ここで、複数の容
器のそれぞれは、異なるドナーから得られた極低温保存試料を含有する。一部の実施形態
では、容器には、ドナー、試料、組成物、バイアル、容器、状態、疾患、収集施設、病院
、および／またはレシピエントのうちの１つまたは複数の識別に対応するかまたはそれを
示す、１つまたは複数の識別子、たとえば、バーコード、無線周波数識別（ＲＦＩＤ）タ
グ、または他の識別子で、印が付けられる。一部の態様では、容器に含まれるかまたは容
器に貼付される追加の情報には、アフェレーシス収集および／もしくは極低温保存の日付
、ならびに／または消費期限、ならびに／または貯蔵所もしくは保管施設内の場所に関す
る情報が含まれる。一部の実施形態では、コードは、患者識別のブレスレットまたは病院
または医療施設もしくは収集施設のシステムもしくは書類、たとえば、ドナーもしくは関
連施設に出現するコードに対応する。

【0014】

好適なコード付けまたは印付けの方法またはシステムとしては、光、電子、または磁気
を用いて読み取ることができる、印刷、磁気、または電子形態のタグを使用してコードす
ること、たとえば、バーコード、ＱＲコード（登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポ
ンダ、たとえば、光活性化マイクロトランスポンダ、固有の３０ビットの読取り専用識別
コードを保管し、光放出リーダデバイスで電力供給し、取り出すと、無線周波数シグナル
としてコードを放出する、低コストのシリコンデバイスが挙げられるが、これらに限定さ
れない。一部の実施形態では、処理の構成要素（試料収集チューブ、細胞精製の構成要素
、細胞の培養および増大の構成要素など）は、すべてが、施設の構成要素レジストリに事
前に登録され、このレジストリには、処理ワークフローにおけるそれぞれの構成要素の機
能および意図される使用段階が、構成要素の固有の識別子コードに対して記録される。一
部の実施形態では、トランスポンダが使用され、一部の態様では、トランスポンダは、読
み取ることができる固有の試料識別をコードするための任意の方法または物品を指す。

【0015】

一部の実施形態では、方法の様々な段階、たとえば、それぞれの段階、たとえば、処理
ワークフローおよび／またはレシピエントへの投与の前もしくは投与の時点で、１つまた
は複数の識別子コードは、レコード、たとえば、中央データベース内の固有の患者特異的
レコードに読み取られる、かつ／あるいは試料および／もしくは試料が由来する患者また
は試料を投与しようとする患者の識別ならびに／または試料および／またはその収集もし
くは処理に関する他の情報を確認するため、ならびに／または正しい保管過程を確認する
ために使用される。

【発明を実施するための形態】

【0016】

詳細な説明
以下の詳細な説明および例は、本開示のある特定の実施形態を例示する。当業者であれ
ば、本開示の多数の変化形および修正形が存在し、本開示の範囲内に含まれることを認識
するであろう。したがって、ある特定の実施形態の説明は、制限として解釈されるもので
はない。

【0017】

本明細書において使用されるとき、「極低温で保管する」または「極低温保管」という
用語は、一般に、試料、たとえば、細胞を含有する試料を、－２１０℃～－８０℃の温度
で保管することであり、細胞をそのような保管期間の後に解凍することができ、解凍時ま
たは解凍後に、試料中の細胞の少なくとも一部分または大部分が、生存可能なままである
および／またはその生物学的機能の少なくとも一部分を保持するような条件下で、保管す
ることを指す。一態様では、細胞試料は、試料中の細胞の少なくともある特定の割合、た
とえば、以下の割合、またはおよそ以下の割合、または以下を上回る割合が、生存可能な
ままとなる、ならびに／またはアポトーシスマーカーもしくはその指標、たとえば、切断
されたカスパーゼおよび／もしくはアネキシンＶ染色について陰性のままとなるように、
解凍することができる：２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９
０％、または１００％。

【0018】

本明細書において使用されるとき、極低温で凍結させるという用語は、試料、たとえば
、細胞を含有する試料の温度を、－２１０～－８０℃の温度まで低下させることを意味す
る。

【0019】

一部の実施形態では、細胞を含有する試料の文脈で本明細書において使用される、濃縮
するまたは濃縮という用語は、１種類または複数種類の細胞が、より高濃度で得られるよ
うに、その１種類または複数種類の細胞を、試料から分離、選択、または精製することを
意味する。「濃縮する」という用語は、必ずしも、絶対またはほぼ絶対の細胞純度を達成
することを含むわけではないが、一部の実施形態では、それを含み得る。

【0020】

本明細書において使用されるとき、対象またはドナーは、哺乳動物、たとえば、ヒトま
たは他の動物であり、典型的には、ヒトである。一部の実施形態では、細胞、細胞集団、
または組成物が投与される対象、たとえば、患者は、哺乳動物であり、典型的には、霊長
類、たとえば、ヒトである。一部の実施形態では、霊長類は、サルまたは類人猿である。
対象は、雄性であっても雌性であってもよく、幼児、少年期、青年期、成人、および／ま
たは老人期の対象を含め、任意の好適な年齢であり得る。一部の実施形態では、対象は、
非霊長類の哺乳動物、たとえば、げっ歯動物である。

【0021】

一部の実施形態では、「凍結溶液」という用語は、細胞を含有する試料、たとえば、ア
フェレーシス試料と合わせたときに、試料または細胞の冷却、極低温での凍結、および／
または極低温での保管のプロセスの間、細胞の１つまたは複数の生物学的機能を保存する
のを補助する、溶液を意味する。一部の実施形態では、凍結溶液および極低温媒体という
用語は、互換可能である。

【0022】

一部の実施形態では、「極低温後に修飾すること」または「極低温後の修飾」という用
語は、細胞を含有する極低温で保管された試料の文脈で本明細書において使用されるとき
、細胞を解凍した後に試料に適用されるプロセスを意味する。

【0023】

一部の実施形態では、「再発」という用語は、本明細書において使用されるとき、一般
に、改善期間の後に、疾患の兆候または症状が戻ることを意味する。

【0024】

アフェレーシスは、一般に、ドナーまたは対象の血液を収集するプロセスを指す。この
プロセスには、ドナーの血液から細胞を収集するプロセスが含まれ得る。白血球アフェレ
ーシスは、ドナーの血液から白血球を収集するそのようなプロセスを指して使用される。
一部の実施形態では、提供される実施形態および組成物は、たとえば、アフェレーシスに
よる、ドナーからの血液試料の収集に関し、一部の実施形態では、方法および組成物は、
組成物、たとえば、細胞療法の組成物を、レシピエントに投与することに関する。一部の
実施形態では、ドナーおよびレシピエントは、同じ個体である。一部の実施形態では、ド
ナーに由来する細胞は、異なる対象であるレシピエントに投与される。

【0025】

一部の実施形態では、方法は、ドナーの血液に由来する細胞を極低温で保管することを
伴う。一部の実施形態では、極低温で保管された細胞は、続いて、疾患を処置するために
レシピエントに投与される。たとえば、米国特許出願公開第２０１６／０１５８３５９号
および同第２０１６／０２０６６５６号およびＰＣＴ国際出願第２０１６／０６４９２９
号および同第２０１６／０３３５７０号に記載されているように、細胞は、細胞療法処置
、たとえば、Ｔ細胞療法の一部として、使用され得、これらの文献は、その全体が本明細
書に組み込まれる。

【0026】

一部の実施形態では、ドナーは、対象、たとえば、収集した細胞を後で受ける人物、す
なわち、レシピエントである。そのような実施形態では、この治療法は、自家細胞療法と
称される。本明細書において考察されるように、自家細胞療法の利点としては、細胞を収
集したドナーが、レシピエントであるため、レシピエントの身体が、投与された細胞を拒
絶する可能性が低減されることを挙げることができる。一部の実施形態では、ドナーおよ
びレシピエントは、異なる人物である。そのような実施形態では、治療法は、同種細胞療
法と称され得る。同種療法の利点としては、細胞試料全体での均一性および一貫性を挙げ
ることができる。他の利点としては、一部の態様では、たとえば、レシピエントに由来す
る細胞が利用可能でない可能性がある時点で、ドナーの細胞が利用可能であるという状況
において、たとえば、レシピエントがそのような細胞を提供することができないおよび／
またはアフェレーシスを受けることができない状況、たとえば、レシピエントの具合が悪
すぎる場合に、自家細胞療法と比較して、細胞の利用可能性が高いことを挙げることがで
きる。

【0027】

一部の実施形態では、細胞は、アフェレーシス、たとえば、多数の公知のアフェレーシ
ス技法のうちのいずれかによって、収集される。例示的なアフェレーシス収集方法として
は、医療従事者によって行われる一般的に許容される慣例方法を使用して、ドナーから採
血することが挙げられる。医療従事者は、たとえば、ドナーの身体における部位、典型的
には、腕を選択し、その部位を滅菌し、静脈穿刺を行い、血液を保存するのに好適な容器
、たとえば、抗凝血剤を含有する滅菌血液バッグに、採血することができる。たとえば、
医療従事者は、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（「ＷＨＯ」）、
ＷＨＯ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｎ ｄｒａｗｉｎｇ ｂｌｏｏｄ： ｂｅｓｔ ｐｒ
ａｃｔｉｃｅｓ ｉｎ ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｙ（２０１０年）に記載されている慣例方法
を行うことができる。従事者は、以下に記載されるように、ドナーにおいて疾患を診断す
る従事者であってもよく、またはそうでなくてもよい。血液の収集の後に、血液の成分、
たとえば、血漿および様々な血液細胞を、遠心分離を用いて分離してもよい。

【0028】

一部の実施形態では、細胞は、ドナーが疾患と診断された後、かつドナーが疾患の任意
の処置を受ける前、および／またはドナーが標的化された処置、たとえば、疾患もしくは
状態と関連する抗原もしくは他のリガンドを特異的に認識するかもしくはそれに特異的に
結合する処置を受ける前に、収集される。一部の実施形態では、細胞は、ドナーが疾患ま
たは状態と診断される前の時点で、収集される。そのような実施形態の利点としては、ド
ナーが疾患の処置を受けた後に収集される細胞と比較して、細胞の生存性、活性、および
遺伝子操作に対する受容性の改善を挙げることができる。一部の実施形態では、細胞は、
疾患の初回処置の後の疾患の１回目の再発の後、かつドナーが疾患の後続の処置を受ける
前に、ドナーから収集される。そのような実施形態の利点としては、ドナーが疾患の２回
またはそれを上回る処置を受けた後に収集される細胞と比較して、細胞の生存性、活性、
および遺伝子操作に対する受容性の改善を挙げることができる。他の実施形態では、細胞
は、疾患の２回目の再発の後、かつドナーが疾患の後続の処置を受ける前に、ドナーから
収集される。

【0029】

ドナーおよび／もしくはレシピエントの、ならびに／または本明細書におけるドナーお
よび／もしくはレシピエントが有するかもしくは有することが疑われる、ならびに／また
は組換え受容体によって標的とされる、疾患、状態、および障害には、固形腫瘍を含む腫
瘍、造血系悪性腫瘍、ならびに黒色腫があり、局所的腫瘍および転移腫瘍が含まれる。疾
患、状態、および障害にはまた、感染性疾患、たとえば、ウイルスまたは他の病原体、た
とえば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ、ＨＰＶによる感染、および寄生虫性疾患があ
る。疾患、状態、および障害にはまた、自己免疫性疾患および炎症性疾患がある。一部の
実施形態では、疾患または状態は、腫瘍、がん、悪性腫瘍、新生物、または他の増殖性疾
患もしくは障害である。そのような疾患としては、白血病、リンパ腫、たとえば、慢性リ
ンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（
ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ
腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、結腸がん、肺がん
、肝臓がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、皮膚がん、黒色腫、骨がん、および脳のが
ん、卵巣がん、上皮がん、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頸癌、結腸直腸
がん、膠芽腫、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、髄芽細胞腫、骨肉腫、滑膜肉腫、および
／または中皮腫が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、疾患また
は状態は、ＤＬＢＣＬ、特定できないもの（ＮＯＳ、濾胞性リンパ腫に由来する形質転換
ＤＬＢＣＬを含む）、ＤＬＢＣＬ組織学を有するＭＹＣおよびＢＣＬ２ならびに／または
ＢＣＬ６再配列を伴う高悪性度Ｂ細胞リンパ腫である。

【0030】

一部の実施形態では、対象は、ｉｗＣＬＬのガイドラインに基づく処置の兆候を有する
ＣＬＬ、および臨床的に測定可能な疾患、または生検によって実証されるＳＬＬであるＳ
ＬＬを呈する。一部の態様では、対象は、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤（ＢＴＫｉ
）処置を受け、それが失敗したか、ＢＴＫｉ療法に不適格であるとみなされている。

【0031】

一部の実施形態では、ＣＬＬまたはＳＬＬ、および高リスクの特徴、たとえば、複合染
色体異常（３つまたはそれを上回る染色体異常）、１７ｐ欠失、ＴＰ５３変異、または未
変異の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩＧＨＶ）を有する対象は、ＢＴＫｉを含め、これ
までの治療法の少なくとも２回の過程が失敗している。一部の実施形態では、ＣＬＬまた
はＳＬＬ、および標準的なリスクの特徴を有する対象は、ＢＴＫｉを含め、これまでの治
療法の少なくとも３回の過程が失敗している。一部の実施形態では、ＢＴＫｉ不耐性であ
り、少なくとも６カ月間のＢＴＫｉ療法を受けていないか、またはＢＴＫｉに不適格であ
る、ＣＬＬまたはＳＬＬを有する対象は、非ＢＴＫｉ療法の少なくとも１回（高リスク）
または２回（標準的なリスク）の過程が失敗している。

【0032】

一部の実施形態では、対象は、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操
作細胞免疫療法に適格でない。一部の実施形態では、対象は、まだ１つまたは複数の臨床
試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でないが、適格となるリスクがあ
るかまたは適格となり得る。一部の実施形態では、対象は、以前の治療法の１回もしくは
複数回の過程に対する、または自己ＨＳＣＴ後の、予測応答もしくは実際の応答に起因し
て、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でない
。一部の実施形態では、対象は、以前の治療法の１回または複数回の過程（たとえば、以
前の治療法の２回もしくはそれを上回る、３回もしくはそれを上回る、または４回もしく
はそれを上回る過程）、または自己ＨＳＣＴ後に、再発していない、および／またはこれ
らに対して不応性でない場合、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作
細胞免疫療法に適格でない。一部の実施形態では、対象は、高リスクの染色体異常の不在
に起因して、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適
格でない。

【0033】

一部の態様では、対象は、多数の転移および／または広範囲に拡がった転移の局在化を
有する。一部の態様では、対象における腫瘍負荷は、低く、対象は、転移をほとんど有さ
ない。一部の実施形態では、投薬のサイズまたはタイミングは、対象における初期疾患負
荷によって判定される。たとえば、一部の態様では、対象は、初回用量では、比較的低い
数の細胞が投与され得るが、より低い疾患負荷の状況では、用量はより高くなり得る。

【0034】

一部の実施形態では、疾患または状態は、感染性疾患または状態、たとえば、ウイルス
、レトロウイルス、細菌、および原虫の感染、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプス
タインバーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、ＢＫポリオーマウイルスなどであるが
、これらに限定されない。

【0035】

一部の実施形態では、疾患または状態は、自己免疫性または炎症性の疾患または状態、
たとえば、関節炎、たとえば、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマ
トーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、乾癬、強皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス
病、クローン病、多発性硬化症、喘息、免疫不全、および／または移植と関連する疾患も
しくは状態である。

【0036】

一部の実施形態では、疾患または状態は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、たとえば、移
植、たとえば、同種器官移植ならびに／または骨髄および／もしくは造血幹細胞移植を受
けているかまたは受けた対象におけるＧＶＨＤである。天然の単離したＣＤ４^＋ＣＤ２５
^＋Ｔ細胞、たとえば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで増大させたＴｒｅｇ細胞の付加により、一部の
状況では、移植片対宿主病を遅延および／または予防することができる。一部の実施形態
では、提供されるＴｒｅｇ組成物および方法は、ＧＶＨＤのリスクまたはその症状もしく
は兆候を予防および／または減少させる。一部の実施形態では、疾患または状態は、心臓
、肝臓、角膜、腎臓、肺、膵臓、または他の器官の移植片など、器官移植片拒絶またはそ
のリスクである。

【0037】

一部の実施形態では、自己免疫性疾患または炎症性疾患は、慢性および／または急性炎
症性疾患である。一部の態様では、疾患または障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ
）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性筋炎、多発性硬化症（ＭＳ）、糖尿病、炎症性腸
疾患（ＩＢＤ）、Ｉ型真性糖尿病もしくは自己免疫性膵島炎、自己免疫性甲状腺炎、自己
免疫性ブドウ膜炎もしくは網膜ブドウ膜炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性卵巣炎、乾癬
、白斑、自己免疫性前立腺炎、任意の望ましくない免疫応答または他の炎症性もしくは自
己免疫性疾患もしくは状態、たとえば、望ましくない免疫応答および／もしくはウイルス
に誘導される免疫病理を特徴とする状態であるか、またはこれらを含む。一部の態様では
、抗原、たとえば、Ｔ細胞および／または組換え受容体が特異的に結合する抗原は、自己
抗原（ｓｅｌｆ ａｎｔｉｇｅｎ）または自己抗原（ａｕｔｏ－ａｎｔｉｇｅｎ）、たと
えば、正常なまたは非罹患組織に発現されるヒト抗原である。一部の態様では、抗原は、
がんに発現される抗原でもなく、対象においてがんに発現もされない。一部の態様では、
対象は、がんを有することが判明していない、および／またはがんを有することが疑われ
ていない。

【0038】

一部の実施形態では、細胞、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＴ細胞受容体（ＴＣ
Ｒ）、または他の組換え受容体によって認識される抗原は、自己抗原または自己抗原と交
差反応する抗原、たとえば、自己免疫性疾患の病態生理学における病原性抗原であるか、
またはそれを含む。一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が炎症性腸疾患（ＩＢＤ
）である場合には、抗原は、罹患した結腸または回腸に発現されるものである。一部の実
施形態、たとえば、ＲＡの状況では、抗原またはリガンドは、コラーゲンのエピトープま
たは関節に存在する抗原である。一部の実施形態、たとえば、Ｉ型真性糖尿病または自己
免疫性膵島炎の処置または予防については、抗原は、膵臓β細胞抗原である。一部の実施
形態、たとえば、ＭＳについては、抗原は、ミエリン塩基性タンパク質抗原、ＭＯＧ－１
、ＭＯＧ－２、または別の神経細胞抗原である。一部の実施形態、たとえば、疾患または
状態が自己免疫性甲状腺炎である場合には、抗原またはリガンドは、甲状腺抗原である。
一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が自己免疫性胃炎である場合には、抗原は、
胃抗原である。一部の実施形態、たとえば、自己免疫性ブドウ膜炎または網膜ブドウ膜炎
の処置については、抗原は、Ｓ抗原または別のブドウ膜もしくは網膜抗原である。一部の
実施形態、たとえば、疾患または状態が精巣炎である場合には、抗原は、精巣抗原である
。一部の実施形態、たとえば、自己免疫性卵巣炎を処置または予防する場合には、抗原は
、卵巣抗原である。一部の実施形態、たとえば、乾癬の処置または予防については、抗原
は、ケラチノサイト抗原または別の真皮もしくは上皮抗原である。一部の実施形態、たと
えば、白斑の処置または予防については、抗原は、メラノサイト抗原である。一部の実施
形態、たとえば、自己免疫性前立腺炎の処置または予防については、抗原は、前立腺抗原
である。一部の実施形態では、抗原は、望ましくない免疫応答の部位に存在するエフェク
ターＴ細胞に発現する活性化抗原を含み得る。

【0039】

一部の実施形態では、抗原は、シトルリン化ビメンチンである。

【0040】

一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が、組織または器官の拒絶であるかまたは
それを含む場合には、抗原は、移植された組織のハプロタイプを有するＭＨＣ分子または
その部分を含み得る。

【0041】

一部の実施形態では、疾患または障害と関連する抗原は、ＧＰＲＣ５Ｄ、神経膠腫関連
抗原、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｂ細胞成
熟抗原（ＢＣＭＡ、ＢＣＭ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦＲ、ＢＲ３）、膜貫通
型活性化因子およびＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５、
ＦｃＲＨ５）、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲ１、Ｈｅｒ２、Ｌｌ－ＣＡＭ、
ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸
受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＰ－２、ＥＧＰ－４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセ
チルコリン受容体（ｆｅｔａｌ ａｃｅｔｈｙｃｈｏｌｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、Ｇ
Ｄ２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ２、
ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソテリン、Ｍ
ＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１
、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原
（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プ
ロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ－１、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、お
よびＭＡＧＥ Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）、サイクリン、たとえば、
サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨ
ＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子である。

【0042】

一部の実施形態では、疾患は、がんである。たとえば、米国特許出願公開第２０１６／
０１５８３５９号および同第２０１６／０２０６６５６号、ならびにＰＣＴ特許出願公開
第２０１６／０６４９２９号に記載されているように、細胞は、がん療法の処置、たとえ
ば、Ｔ細胞療法の一部として使用され得、これらの文献は、その全体が本明細書に組み込
まれる。

【0043】

がんは、たとえば、良性または悪性であり得る。がんには、たとえば、原発性がんまた
は転移性がんが含まれ得る。一部の実施形態では、がんは、任意のステージ、たとえば、
ステージＴＸ、ステージＴ０、ステージＴ１、ステージＴ１ａ、ステージＴ１ｂ、ステー
ジＴ２、ステージＴ２ａ、ステージＴ２ｂ、ステージＴ３、ステージＴ３ａ、ステージＴ
３ｂ、ステージＴ４、ステージＴ４ａ、ステージＴ４ｂ、ステージＮＸ、ステージＮ０、
ステージＮ１、ステージＮ１ａ、ステージＮ１ｂ、ステージＮ２、ステージＮ２ａ、ステ
ージＮ２ｂ、ステージＮ２ｃ、ステージＮ３、ステージＭＸ、ステージＭ０、ステージＭ
１、ステージＭ１ａ、ステージＭ１ｂ、ステージＭ１ｃ、ステージＭ２、ステージＭ３、
ステージＭ３Ｖ、ステージＭ４、ステージＭ４Ｅ、ステージＭ５、ステージＭ６、または
ステージＭ７のものであり得る。

【0044】

一部の実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質
癌、カポジ肉腫、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管がん、膀胱がん、ユーイング肉腫、骨肉
腫、悪性線維性組織球腫、脳のがん、乳がん、気管支がん、バーキットリンパ腫、カルチ
ノイドがん、心臓がん（ｃａｒｄｉａｃ ｃａｎｃｅｒ）、非定型奇形腫様もしくは横紋
筋肉腫様腫瘍、胚芽腫、胚細胞腫瘍、原発性中枢神経系リンパ腫、子宮頸がん、胆管癌、
慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性新生物、結腸直腸がん、頭蓋
咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、頭
蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、卵管がん、胆嚢がん、
消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、膠芽腫、卵巣胚細胞腫瘍、精巣がん、妊娠性
絨毛性疾患、有毛細胞性白血病、頭頸部がん、肝細胞がん、ホジキンリンパ腫、眼内黒色
腫、膵島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、腎臓がん、肺がん（非小細胞および小細胞）、悪
性線維性組織球腫、メルケル細胞癌、中皮腫、正中線管癌（ｍｉｄｌｉｎｅ ｔｒａｃｔ
ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、口腔がん、多発性内分泌新生物、菌状息肉腫、骨髄異形成性も
しくは骨髄増殖性新生物、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性新生物
、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫、傍神
経節腫、副鼻腔がんおよび鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、
下垂体部腫瘍、形質細胞腫、多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、腹膜がん、前立腺がん、直腸が
ん、網膜芽細胞腫、唾液腺がん、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸がん、小リンパ球性
白血病、扁平上皮細胞癌、扁平上皮頸部がん、精巣がん、咽喉がん、鼻咽頭がん、口腔咽
頭がん、下咽頭がん、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺がん、尿道がん、子宮肉腫、膣がん、外陰
がん、またはウィルムス腫瘍である。

【0045】

一部の実施形態では、がんは、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性白血病、急性リン
パ球性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌ
ｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞
型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リ
ンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、または急性骨髄性白血病である。

【0046】

一部の実施形態では、がんは、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ
、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およ
びＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３
８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もし
くは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ
－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１
－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｂ細胞成熟抗原
（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド
、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７
２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２
／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、Ｃ
Ｓ－１、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、およびＭＡＧＥ Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（Ｗ
Ｔ－１）、サイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビ
オチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって
発現される分子のうちの少なくとも１つまたは複数を発現する細胞を含む。一部の実施形
態では、がんは、ＣＤ１９を発現する細胞を含む。一部の実施形態では、がんは、ＢＣＭ
Ａを発現する細胞を含む。

【0047】

一部の実施形態では、疾患は、医療従事者（たとえば、国、州（ｓｔａｔｅ）、州（ｐ
ｒｏｖｉｎｃｅ）、郡、地方自治体、または町区における医療規制当局による免許を得た
人物）によって診断され、この人物が、ドナーを検査し、ドナーにおいて構造または機能
の障害を観察することによってドナーにおける疾患の存在を確認する。医療従事者として
は、たとえば、医師、たとえば、血液学者、免疫学者、腫瘍学者、または実地看護師を挙
げることができる。

【0048】

一部の実施形態では、診断は、ドナーによる自己診断を除外する、および／または遺伝
子試験サービスによる診断を除外する。

【0049】

一部の実施形態では、初回処置および後続の処置は、それぞれ、互いに独立して、がん
療法、たとえば、化学療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、および／または外科
手術を含み得る。化学療法には、たとえば、シクロホスファミド、メトトレキサート、５
－フルオロウラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プ
レドニゾロン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラ
チン、エピルビシン、カペシタビン、フォリン酸、オキサリプラチン、および他の少分子
キナーゼ阻害剤のうちの少なくとも１つを投与することが含まれ得る。免疫療法には、た
とえば、抗体および免疫細胞、たとえば、ナチュラルキラー細胞、リンホカイン活性化キ
ラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および樹状細胞のうちの少なくとも１つを投与することが
含まれ得る。一部の実施形態では、処置（初回または後続のいずれか）には、放射線療法
（たとえば、４０００ｃＧｙ照射）、自家幹細胞救援（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｓｔｅｍ
ｃｅｌｌ ｒｅｓｃｕｅ）、幹細胞移植、骨髄移植、および造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ
）のうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施形態では、処置には、ＣＡＲ
Ｔ細胞療法が含まれ得る。一部の実施形態では、処置には、チサゲンレクロイセル（Ｋ
ｙｍｒｉａｈ）が含まれ得る。一部の実施形態では、処置には、アキシカブタゲンシロロ
イセル（Ｙｅｓｃａｒｔａ）が含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後
続の治療法には、シタラビン（ａｒａ－Ｃ、高用量シタラビンを含む）、ダウノルビシン
（ダウノマイシン）、イダルビシン、またはクラドリビン（ロイスタチン、２－ＣｄＡ）
のうちのいずれかまたはすべてが、単独または組合せで、含まれ得る。一部の実施形態で
は、初回および／または後続の治療法には、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、サリドマ
イド、レナリドマイド、ポマリドマイド、ならびにコルチコステロイド、たとえば、プレ
ドニゾンおよびデキサメタゾンのうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施
形態では、初回および／または後続の治療法には、アルキル化剤、たとえば、シクロホス
ファミド、クロラムブシル、ベンダムスチン、およびイホスファミド；白金薬物、たとえ
ば、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチン；プリン類似体、たとえば
、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビン、シタラビン；抗代謝薬、たとえ
ば、ゲムシタビン、メトトレキサート、およびプララトレキサート；ならびに他の薬剤、
たとえば、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、エトポシド、およびブ
レオマイシンのうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施形態では、初回お
よび／または後続の治療法には、プロテアソーム阻害剤、たとえば、ボルテゾミブ；ヒス
トンデアセチラーゼ阻害剤、たとえば、ロミデプシンおよびベリノスタット；キナーゼ阻
害剤、たとえば、イブルチニブおよびイデラリシブのうちのいずれかまたはすべてが含ま
れ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法には、ＣＤ２０を標的と
する抗体、たとえば、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、およびイブリツ
モマブチウキセタン；ＣＤ５２を標的とする抗体、たとえば、アレムツズマブ；ＣＤ３０
を標的とする抗体、たとえば、ブレンツキシマブベドチン；インターフェロン；ならびに
免疫調節剤、たとえば、サリドマイドおよびレナリドマイドが含まれ得る。一部の実施形
態では、初回および／または後続の治療法は、組合せ療法、たとえば、ＣＨＯＰ、ＣＨＯ
Ｐ＋Ｒ（またはＲ－ＣＨＯＰ）、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、ＥＰＯＣＨ＋Ｒ、ＤＨＡＰ、およ
びＤＨＡＰ＋Ｒ（またはＲ－ＤＨＡＰ）であってもよい。ＣＨＯＰには、シクロホスファ
ミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾンの薬物が含まれる。Ｒ－Ｃ
ＨＯＰ（またはＣＨＯＰ＋Ｒ）は、リツキシマブでの処置をさらに含む。ＣＶＰには、シ
クロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾンが含まれる。ＣＶＰはまた、リ
ツキシマブとの組合せで投与してもよい。ＥＰＯＣＨには、エトポシド、プレドニゾン、
ビンクリスチン、シクロホスファミド、およびドキソルビシンの薬物が含まれる。ＥＰＯ
ＣＨ－Ｒは、リツキシマブでの処置をさらに含む。ＤＨＡＰは、デキサメタゾン、高用量
シタラビン、およびシスプラチンの薬物を含む。ＤＨＡＰ＋Ｒ（またはＲ－ＤＨＡＰ）は
、リツキシマブでの処置をさらに含む。本明細書に記載される方法に従って使用すること
ができるさらなる組合せレジメンには、ベンダムスチンに加えてリツキシマブ（ＢＲ）；
リツキシマブ、シクロホスファミド、エトポシド、プロカルバジン、およびプレドニゾン
（Ｒ－ＣＥＰＰ）；リツキシマブ、シクロホスファミド、エピルビシン、およびプレドニ
ゾン（Ｒ－ＣＥＯＰ）；リツキシマブ、ゲムシタビン、シスプラチン、およびデキサメタ
ゾン（Ｒ－ＧＤＰ）；リツキシマブおよびレナリドマイドのうちのいずれか１つまたは複
数が含まれる。本明細書に記載される方法に従って使用することができるさらなる抗がん
療法には、クロラムブシル、ベンダムスチン、シクロホスファミド、フルダラビン、オフ
ァツムマブ、オビヌツズマブ、リツキシマブ、イデラリシブ、ベネトクラックス、レナリ
ドマイド、およびメチルプレドニゾロンのうちのいずれか１つもしくは複数、または組合
せが含まれる。

【0050】

一部の実施形態では、ドナーは、疾患の初回処置および改善の期間の後に、１回目の再
発に入る場合がある。一部の実施形態では、改善の期間は、疾患の兆候および症状の完全
な不在によって示される。一部の実施形態では、改善の期間の間、疾患の兆候および症状
は、緩和または低減されるが、完全に不在ではない。一部の実施形態では、疾患の兆候お
よび症状の完全な不在、または兆候および症状の緩和もしくは低減は、初回処置の結果で
ある。

【0051】

一部の実施形態では、ドナーは、疾患の、１回または複数回のこれまでの処置、および
１回または複数回の改善の期間の後に、２回目の再発に入る場合がある。一部の実施形態
では、改善の期間は、疾患の兆候および症状の完全な不在によって示される。一部の実施
形態では、改善の期間の間、疾患の兆候および症状は、緩和または低減されるが、完全に
不在ではない。一部の実施形態では、疾患の兆候および症状の完全な不在、または兆候お
よび症状の緩和もしくは低減は、これまでの処置の結果である。

【0052】

一部の実施形態では、再発は、医療従事者によって診断され、この人物が、ドナーを検
査し、ドナーにおける疾患の兆候および症状の戻りを確認する。一部の実施形態では、医
療従事者は、国、州（ｓｔａｔｅ）、州（ｐｒｏｖｉｎｃｅ）、郡、地方自治体、または
町区における医療規制当局による免許を有する人物である。医療従事者としては、たとえ
ば、医師、たとえば、血液学者、免疫学者、もしくは腫瘍学者、または実地看護師を挙げ
ることができる。疾患を診断する医療従事者および再発を診断する医療従事者は、同じ人
物であってもよく、またはそうでなくてもよい。

【0053】

一部の実施形態では、ドナーの血液に由来する細胞は、アフェレーシスまたは白血球ア
フェレーシスによって得られる。一部の実施形態では、ドナーから収集されたとき、およ
び／またはアフェレーシス試料中の合計の、細胞の数は、以下の数もしくはおよそ以下の
数であるか、または以下の数もしくはおよそ以下の数を上回らない：５００×１０^６個、
１０００×１０^６個、２０００×１０^６個、３０００×１０^６個、４０００×１０^６個、
もしくは５０００×１０^６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは合計有核細胞。
一部の実施形態では、対象に投与する際の試料は、ドナーの体重１キログラム当たり１０
^５個～１０^６個もしくは約１０^５個～約１０^６個の細胞もしくはＴ細胞もしくは操作細胞
、および／または５×１０^６個もしくは１０×１０^６個または約５×１０^６個もしくは約
１０×１０^６個の合計細胞もしくはＴ細胞もしくは操作細胞もしくはそのサブセットを含
有する。一部の実施形態では、ドナーから収集されたときの血液の体積は、ドナーの体重
１キログラムに対して、０．５～５ミリリットルである。

【0054】

一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞および／またはその集団を含む、および／または
それらの存在が濃縮されている。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞および／
またはＣＤ８^＋Ｔ細胞を、別個または組合せのいずれかで、含む。Ｔ細胞および／または
ＣＤ４^＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞のサブタイプおよび部分集団には、ナイー
ブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、およびそれらの
サブタイプ、たとえば、ステムセントラルメモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）、セントラルメモ
リーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、または最終分化型エフ
ェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘ
ルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然お
よび適応性調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、たとえば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２
細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、
アルファ／ベータＴ細胞、ならびにデルタ／ガンマＴ細胞がある。一部の実施形態では、
細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。一部の実施形態では、細胞は、単球また
は顆粒球、たとえば、骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞、好酸
球、および／または好塩基球である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、バルクＴ細胞、た
とえば、ＣＤ３発現、ＣＤ４もしくはＣＤ８発現、または血液細胞上に見出される非Ｔ細
胞マーカーの陰性に基づいて選択されるものを含むか、またはそれらである。

【0055】

一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、たとえば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（たとえば、ＣＤ８
^＋ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、もしくはエフェクターメモリーＴ細胞）
、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）
、幹細胞メモリーＴ細胞、リンパ球前駆細胞、造血幹細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ
細胞）、または樹状細胞であるか、またはこれらを含む。一部の実施形態では、細胞は、
単球または顆粒球、たとえば、骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細
胞、好酸球、および／または好塩基球である。ある実施形態では、細胞は、人工多能性幹
（ｉＰＳ）細胞またはｉＰＳ細胞に由来する細胞、たとえば、対象から生成され、１つま
たは複数の標的遺伝子を改変する（たとえば、標的遺伝子における変異を誘導する）かま
たはその発現を操作するように操作され、たとえば、Ｔ細胞、たとえば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞
（たとえば、ＣＤ８^＋ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、またはエフェクター
メモリーＴ細胞）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、リンパ球前駆細胞、または
造血幹細胞に分化した、ｉＰＳ細胞である。

【0056】

一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞または他の細胞型の１つまたは複数のサブセット
、たとえば、全Ｔ細胞集団、ＣＤ４^＋細胞、ＣＤ８^＋細胞、およびその部分集団、たとえ
ば、機能、活性化状態、成熟度、分化能、増大、再循環、局在化、および／または持続能
力、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官もしくはコンパートメントにおける存在
、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、ならびに／または分化の度合いによ
って定義されるものを含む。

【0057】

一部の実施形態では、Ｔ細胞および／またはＣＤ４^＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８^＋Ｔ
細胞のサブタイプおよび部分集団には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（
ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、およびそれらのサブタイプ、たとえば、幹細胞メモリーＴ
（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、
または最終分化型エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ
細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（Ｍ
ＡＩＴ）細胞、天然および適応性調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、たとえば
、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾
胞性ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞、ならびにデルタ／ガンマＴ細胞がある。
一部の実施形態では、細胞は、ドナーから収集された後、さらなる処理なしに、極低温で
凍結される、および／または極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞は、極低温
で凍結および／または保管される前に、１回または複数回、濃縮される。一部の実施形態
では、細胞は、極低温で保管された後に、１回または複数回、濃縮される。一部の事例で
は、極低温で凍結および／または保管する前に細胞に濃縮もさらなる処理も行わないこと
により、コストの低減および／または時間の節約の利点が得られる。一部の事例では、極
低温で凍結および／または保管する前に細胞に濃縮もさらなる処理も行わないことにより
、さらに、細胞の濃縮および／または処理を行うことができる施設へのアクセスを有さな
いドナーに対して、より広範な収集施設の選択肢が可能となり得る。濃縮は、たとえば、
ＰＣＴ出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載される通りであってもよく、これは、
その全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および
／または保管する前に、処理される。

【0058】

特定の実施形態では、細胞は、たとえば、例として、血漿および血小板を除去するため
の洗浄ステップの後に、凍結される。一部の実施形態では、細胞は、細胞、たとえば、組
換え受容体、たとえば、ＣＡＲを発現する、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細
胞を製造および／または生成することと関連するステップうちのいずれかよりも前、それ
に続いて、および／またはその最中に、凍結される。ある特定の実施形態では、そのよう
なステップには、細胞のサブセット、たとえば、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／もしくはＣＤ８
＋Ｔ細胞の選択および／もしくは単離、細胞、たとえば、Ｔ細胞もしくはそのサブセット
の刺激および／もしくは増大、または細胞のトランスフェクションもしくは形質導入を含
むがこれらに限定されない、操作細胞の生成と関連する任意のステップが含まれ得る。一
部の実施形態では、細胞は、細胞の選択および／もしくは単離、細胞の刺激および／もし
くは増大、または細胞のトランスフェクションもしくは形質導入の前に、対象から収集さ
れたアフェレーシス試料の細胞である。

【0059】

細胞処理方法

【0060】

一部の実施形態では、対象から収集された細胞を、洗浄して、たとえば、血漿画分を除
去し、細胞を、後続の処理ステップに適した緩衝液または媒体に入れる。一部の実施形態
では、細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄溶液
は、カルシウムおよび／もしくはマグネシウム、ならびに／または多数もしくはすべての
二価カチオンを含まない。一部の態様では、洗浄ステップは、半自動化された「フロース
ルー」遠心分離（たとえば、Ｃｏｂｅ ２９９１ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａ
ｘｔｅｒ）を製造業者の説明に従って使用して、達成される。一部の態様では、洗浄ステ
ップは、遠心分離チャンバ、たとえば、Ａ－２００／ＦおよびＡ－２００遠心分離チャン
バを含め、Ｓｅｐａｘ（登録商標）およびＳｅｐａｘ（登録商標）２システムで使用する
ためのものを含む、Ｂｉｏｓａｆｅ ＳＡによって製造および販売されているものにおい
て、製造業者の説明書に従って、行われる。一部の態様では、洗浄ステップは、製造業者
の説明に従って接線流濾過（ＴＦＦ）によって、達成される。一部の実施形態では、細胞
は、洗浄後に、たとえば、Ｃａ^＋＋／Ｍｇ^＋＋不含ＰＢＳなど、様々な生体適合性緩衝液
中に再懸濁される。ある特定の実施形態では、血液細胞試料の成分が除去され、細胞が、
直接、培養媒体中に再懸濁される。

【0061】

一部の実施形態では、方法には、密度に基づく細胞分離方法、たとえば、赤血球を溶解
し、ＰｅｒｃｏｌｌまたはＦｉｃｏｌｌ勾配を通じた遠心分離による、末梢血からの白血
球の調製が含まれる。

【0062】

一部の実施形態では、単離方法には、細胞における、１つまたは複数の特定の分子、た
とえば、表面マーカー、たとえば、表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸の発現
または存在に基づく、異なる細胞型の分離が含まれる。一部の実施形態では、そのような
マーカーに基づく任意の公知の分離方法を、使用することができる。一部の実施形態では
、分離は、親和性または免疫親和性に基づく分離である。たとえば、一部の態様では、単
離には、細胞の、１つまたは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの発現または
発現レベルに基づいて、たとえば、そのようなマーカーに特異的に結合する抗体または結
合パートナーとのインキュベーション、一般的にはそれに続く洗浄ステップおよび抗体ま
たは結合パートナーに結合した細胞の、抗体または結合パートナーに結合していない細胞
からの分離による、細胞および細胞集団の分離が含まれる。

【0063】

そのような分離ステップは、試薬に結合した細胞が、さらなる使用のために保持される
、陽性選択、および／または抗体もしくは結合パートナーに結合していない細胞が保持さ
れる、陰性選択に基づき得る。一部の例では、両方の画分が、さらなる使用のために保持
される。一部の態様では、不均一集団において細胞型を特異的に特定する抗体が利用可能
でなく、その結果、分離は、所望される集団以外の細胞が発現するマーカーに基づいて行
われるのが最もよくなるという場合には、陰性選択が、特に有用であり得る。

【0064】

分離は、必ずしも、特定の細胞集団または特定のマーカーを発現する細胞の１００％の
濃縮または除去をもたらすものではない。一部の実施形態では、濃縮した集団は、集団の
うちの少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、
または９５％を含む。たとえば、特定の種類の細胞、たとえば、マーカーを発現するもの
の陽性選択または濃縮は、そのような細胞の数または割合を増加させることを指すが、必
ずしも、そのマーカーを発現しない細胞の完全な不在をもたらすわけではない。同様に、
特定の種類の細胞、たとえば、マーカーを発現するものの陰性選択、除去、または枯渇は
、そのような細胞の数または割合の減少を指すが、必ずしも、すべてのそのような細胞の
完全な除去をもたらすわけではない。

【0065】

一部の例では、複数回の分離ステップが行われ、ここで、１つのステップから陽性選択
または陰性選択された画分が、別の分離ステップ、たとえば、後続の陽性選択または陰性
選択に供される。一部の例では、たとえば、細胞を、それぞれが陰性選択の標的とされる
マーカーに特異的な複数の抗体または結合パートナーとともにインキュベートすることに
よって、単回の分離ステップにより、複数のマーカーを発現する細胞を同時に枯渇させる
ことができる。同様に、細胞を、様々な細胞型に発現される複数の抗体または結合パート
ナーとともにインキュベートすることによって、複数の細胞型を、同時に陽性選択するこ
とができる。

【0066】

たとえば、一部の態様では、Ｔ細胞の特定の部分集団、たとえば、１つまたは複数の表
面マーカーが陽性であるかまたはそれらを高いレベルで発現する細胞、たとえば、ＣＤ２
８^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ２７^＋、ＣＤ１２７^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、Ｃ
Ｄ４５ＲＡ^＋、および／またはＣＤ４５ＲＯ^＋Ｔ細胞が、陽性選択または陰性選択の技法
によって単離される。

【0067】

たとえば、ＣＤ３^＋、ＣＤ２８^＋Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８コンジュゲート磁性ビー
ズ（たとえば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ Ｃ
ｅｌｌ Ｅｘｐａｎｄｅｒ）を使用して、陽性選択することができる。

【0068】

一部の実施形態では、単離は、陽性選択による特定の細胞集団の濃縮、または陰性選択
による特定の細胞集団の枯渇によって、行われる。一部の実施形態では、陽性選択または
陰性選択は、細胞を、それぞれ、陽性選択または陰性選択される細胞に発現される（マー
カー^＋）かまたは比較的高いレベルで発現される（マーカー高）１つまたは複数の表面マ
ーカーに特異的に結合する、１つまたは複数の抗体または他の結合剤とともにインキュベ
ートすることによって、達成される。

【0069】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、非Ｔ細胞、たとえば、Ｂ細胞、単球、または他の白血
球に発現されるマーカー、たとえば、ＣＤ１４の陰性選択によって、ＰＢＭＣ試料から分
離される。一部の態様では、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋の選択ステップを使用して、ＣＤ４
^＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離させる。そのようなＣＤ４^＋お
よびＣＤ８^＋集団は、１つまたは複数のナイーブ、メモリー、および／またはエフェクタ
ーＴ細胞部分集団に発現されるかまたは比較的高い程度で発現されるマーカーの陽性選択
または陰性選択によって、部分集団にさらに分類することができる。

【0070】

一部の実施形態では、ＣＤ８^＋細胞は、さらに、たとえば、それぞれの部分集団と関連
する表面抗原に基づく陽性選択または陰性選択によって、ナイーブ、セントラルメモリー
、エフェクターメモリー、および／またはステムセントラルメモリー細胞の濃縮または枯
渇が行われる。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、有
効性を増加させるため、たとえば、長期生存、増大、および／または投与後の生着を改善
するために、行われ、これは、一部の態様では、そのような部分集団において特にロバス
トである。Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１巻：７２～８２頁、Ｗ
ａｎｇら（２０１２年）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９～７０
１頁を参照されたい。一部の実施形態では、ＴＣＭを濃縮したＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ
４^＋Ｔ細胞を組み合わせることにより、有効性が、さらに強化される。

【0071】

いくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８^＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ^＋
およびＣＤ６２Ｌ^－の両方のサブセットに存在する。ＰＢＭＣは、たとえば、抗ＣＤ８抗
体および抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用して、ＣＤ６２Ｌ^－ＣＤ８^＋および／またはＣＤ６２Ｌ
^＋ＣＤ８^＋の画分を濃縮または枯渇させることができる。

【0072】

一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４５ＲＯ、
ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、および／またはＣＤ１２７の陽性または高い
表面発現に基づき、一部の態様では、これは、ＣＤ４５ＲＡおよび／またはグランザイム
Ｂを発現するかまたは高度に発現する細胞の陰性選択に基づく。一部の態様では、ＴＣＭ
細胞が濃縮されたＣＤ８^＋集団の単離は、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細
胞の枯渇、およびＣＤ６２Ｌを発現する細胞の陽性選択または濃縮によって、行われる。
一態様では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４の発現に基づいて選
択された陰性の細胞画分で開始して行われ、これが、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡの発現
に基づく陰性選択、ならびにＣＤ６２Ｌに基づく陽性選択に供される。そのような選択は
、一部の態様では、同時に行われ、他の態様では、いずれかの順序で順に行われる。一部
の態様では、ＣＤ８^＋細胞集団または部分集団の調製に使用される同じＣＤ４発現に基づ
く選択ステップは、ＣＤ４に基づく分離から得られた陽性画分および陰性画分の両方が、
保持され、方法の後続のステップにおいて、必要に応じて１つまたは複数のさらなる陽性
選択または陰性選択のステップの後に、使用されるように、ＣＤ４^＋細胞集団または部分
集団を生成するためにも使用される。

【0073】

特定の例では、ＰＢＭＣの試料または他の白血球試料を、ＣＤ４^＋細胞の選択に供し、
ここで、陰性画分および陽性画分の両方が保持される。陰性画分は、次いで、ＣＤ１４お
よびＣＤ４５ＲＡまたはＲＯＲ１の発現に基づく陰性選択、ならびにセントラルメモリー
Ｔ細胞の特徴であるマーカー、たとえば、ＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７に基づく陽性選択に
供され、ここで、陽性選択および陰性選択は、いずれかの順序で行われる。

【0074】

ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を特定することによって、
ナイーブ、セントラルメモリー、およびエフェクター細胞に分類される。ＣＤ４^＋リンパ
球は、標準的な方法によって得ることができる。一部の実施形態では、ナイーブＣＤ４^＋
Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ４^＋Ｔ細胞である
。一部の実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４^＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ^＋およびＣＤ４
５ＲＯ^＋である。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４^＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ^－およ
びＣＤ４５ＲＯ^－である。

【0075】

１つの例では、陰性選択によってＣＤ４^＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体
カクテルは、典型的に、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、お
よびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体または結合パートナーは、陽
性選択および／または陰性選択による細胞の分離を可能にするために、固体支持体または
基質、たとえば、磁性ビーズまたは常磁性ビーズに結合されている。たとえば、一部の実
施形態では、細胞および細胞集団は、免疫磁気（たとえば、親和性磁気）分離技法（Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５８巻：Ｍｅｔａｓｔａｓ
ｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２巻：Ｃｅｌｌ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｉ
ｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ、１７～２５頁：Ｓ． Ａ． Ｂｒｏｏｋｓ
ａｎｄ Ｕ． Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ編（著作権）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．
、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪにおいて考察されている）を使用して、分離または単離される。

【0076】

一部の態様では、２つまたはそれを上回る選択ステップが、順次行われ得る。たとえば
、分離しようとする細胞の試料または組成物は、ＣＤ８^＋細胞の選択に供され、ここで、
陰性画分および陽性画分の両方が、保持される。ＣＤ８陰性画分を、さらに、ＣＤ４^＋細
胞の選択に供してもよい。一部の態様では、分離しようとする細胞の試料または組成物は
、ＣＤ４^＋細胞の選択に供され、ここで、陰性画分および陽性画分の両方が保持され、Ｃ
Ｄ４陰性画分は、ＣＤ８^＋細胞の選択に供され得る。細胞選択のための例示的な方法は、
ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１５７３８４号および／または同第２０１５／１６４６
７５号に記載されており、これらは、参照によりその全体が組み込まれ、そのすべてまた
は一部分が、本明細書に記載される方法と併せて使用され得る。

【0077】

一部の態様では、分離しようとする細胞の試料または組成物は、小さな磁化可能または
磁気応答性の材料、たとえば、磁気応答性粒子またはマイクロ粒子、たとえば、常磁性ビ
ーズ（たとえば、ＤｙｎａｌｂｅａｄｓまたはＭＡＣＳビーズなど）とともに、インキュ
ベートされる。磁気応答性材料、たとえば、粒子は、一般に、分離することが所望される
、たとえば、陰性選択または陽性選択することが所望される細胞、複数の細胞、または細
胞集団に存在する分子、たとえば、表面マーカーに特異的に結合する結合パートナー、た
とえば、抗体に、直接的または間接的に結合されている。

【0078】

一部の実施形態では、磁性粒子またはビーズは、特定の結合メンバー、たとえば、抗体
または他の結合パートナーに結合された、磁気応答性材料を含む。磁気分離方法において
使用される周知の磁気応答性材料が、多数存在する。好適な磁性粒子としては、Ｍｏｌｄ
ａｙ、米国特許第４，４５２，７７３号および欧州特許明細書第４５２３４２号Ｂに記載
されているものが挙げられ、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。コロイドサ
イズ粒子、たとえば、Ｏｗｅｎの米国特許第４，７９５，６９８号およびＬｉｂｅｒｔｉ
らの米国特許第５，２００，０８４号に記載されているものは、他の例であり、これらは
、参照により本明細書に組み込まれる。

【0079】

インキュベーションは、一般に、抗体もしくは結合パートナー、またはそのような抗体
または結合パートナーに特異的に結合する磁性粒子またはビーズに結合した分子、たとえ
ば、二次抗体もしくは他の試薬が、試料内の細胞に存在する場合に細胞表面分子に特異的
に結合する条件下において、行われる。

【0080】

一部の態様では、試料は、磁場に置かれ、磁気応答性または磁化可能粒子が結合した細
胞が、磁石に引き寄せられ、未標識細胞から分離される。陽性選択については、磁石に引
き寄せられた細胞が保持され、陰性選択については、引き寄せられていない細胞（未標識
細胞）が保持される。一部の態様では、陽性選択および陰性選択の組合せが、同じ選択ス
テップの間に行われ、ここで、陽性画分および陰性画分が保持され、さらに処理されるか
、またはさらなる分離ステップに供される。

【0081】

ある特定の実施形態では、磁気応答性粒子は、一次抗体または他の結合パートナー、二
次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンでコーティングされる。ある特定の
実施形態では、磁性粒子は、１つまたは複数のマーカーに特異的な一次抗体のコーティン
グを介して、細胞に結合する。ある特定の実施形態では、ビーズというよりは細胞が、一
次抗体または結合パートナーで標識され、次いで、細胞型特異的な二次抗体または他の結
合パートナー（たとえば、ストレプトアビジン）でコーティングされた磁性粒子が、添加
される。ある特定の実施形態では、ストレプトアビジンでコーティングされた磁性粒子は
、ビオチン化一次または二次抗体とともに使用される。

【0082】

一部の実施形態では、磁気応答性粒子は、続いて、インキュベート、培養、および／ま
たは操作しようとする細胞に結合したままであり、一部の態様では、粒子は、患者への投
与のために細胞に結合したままである。一部の実施形態では、磁化可能または磁気応答性
粒子は、細胞から除去される。磁化可能粒子を細胞から除去するための方法は、公知であ
り、たとえば、競合する非標識抗体、切断可能なリンカーにコンジュゲートした磁化可能
粒子または抗体などの使用が挙げられる。一部の実施形態では、磁化可能粒子は、生体分
解性である。

【0083】

一部の実施形態では、親和性に基づく選択は、磁気活性化細胞分類（ＭＡＣＳ）（Ｍｉ
ｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）によるものである。磁気活性化細
胞分類（ＭＡＣＳ）システムは、磁化した粒子が結合している細胞の高純度での選択が可
能である。ある特定の実施形態では、ＭＡＣＳは、非標的種および標的種が、外部磁場の
適用後に、順に溶出される形態で、動作する。すなわち、磁化した粒子に結合した細胞は
、その場所に保持されるが、未結合の種は、溶出される。次いで、この第１の溶出ステッ
プが完了した後に、磁場に捕捉された種および溶出が防止された種が溶出され、回収され
得るような何らかの様式で、これらの種は、解放される。ある特定の実施形態では、非標
的細胞は、標識され、不均一な細胞集団から枯渇される。

【0084】

ある特定の実施形態では、単離または分離は、方法のなかの単離、細胞の調製、分離、
処理、インキュベーション、培養、および／または製剤化のステップのうちの１つまたは
複数を行うシステム、デバイス、または装置を使用して、行われる。一部の態様では、シ
ステムは、これらのステップのそれぞれを、たとえば、エラー、ユーザの取扱い、および
／または汚染を最小限に抑えるために、閉鎖または滅菌の環境において行うために使用さ
れる。１つの例では、システムは、ＰＣＴ特許出願公開第２００９／０７２００３号、ま
たは米国特許出願公開第２０１１／０００３３８０号Ａ１に記載されているシステムであ
り、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＰＣＴ特許出願公
開第２０１６／０７３６０２号または米国特許出願公開第２０１６／０１２２７８２号に
記載されているシステム、デバイス、装置、および／または方法を使用して、アフェレー
シスもしくは白血球アフェレーシス産物、またはそれらに由来する試料が処理される、な
らびに／あるいはこれらを使用して、単離または選択が行われ、これらの文献の内容は、
参照によりその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、単離または分離は、ＰＣＴ特
許出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載されている方法に従って行われ、この内容
は、参照によりその全体が組み込まれる。

【0085】

一部の実施形態では、システムまたは装置は、単離、処理、操作、および製剤化のステ
ップのうちの１つまたは複数、たとえば、すべてを、統合もしくは内蔵型システムにおい
て、および／または自動化もしくはプログラム可能な様式で、行う。一部の態様では、シ
ステムまたは装置は、システムまたは装置と通信状態にあり、ユーザが、処理、単離、操
作、および製剤化のステップの様々な側面をプログラム、制御、その結果を評価、および
／または調整するのを可能にする、コンピュータおよび／またはコンピュータプログラム
を含む。

【0086】

一部の態様では、分離および／または他のステップは、たとえば、閉鎖および滅菌シス
テムにおける臨床規模レベルでの細胞の自動化された分離のために、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ
システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｉｃ）を使用して、行われる。構成要素には、統
合マイクロコンピュータ、磁気分離ユニット、蠕動ポンプ、および様々なピンチバルブが
含まれ得る。統合コンピュータは、一部の態様では、機器のすべての構成要素を制御し、
標準的な順序で反復される手順を行うように、システムに指示する。磁気分離ユニットは
、一部の態様では、可動性永久磁石および選択カラムのホルダを含む。蠕動ポンプは、チ
ュービングセット全体の流速を制御し、ピンチバルブとともに、システムを流れる緩衝液
の流動の制御および細胞の継続的な懸濁を確実にする。

【0087】

ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステムは、一部の態様では、滅菌の非発熱性溶液で供給される、
抗体にカップリングされた磁化可能粒子を使用する。一部の実施形態では、細胞を磁性粒
子で標識した後、細胞を、洗浄して、過剰な粒子を除去する。細胞調製バッグを、次いで
、チュービングセットに接続し、これが、緩衝液を含有するバッグおよび細胞収集バッグ
に接続される。チュービングセットは、前カラムおよび分離カラムを含む、事前にアセン
ブルされた滅菌チュービングからなり、単回使用に限られる。分離プログラムの開始後に
、システムは、自動的に、細胞試料を分離カラムに適用する。標識された細胞が、カラム
内に保持され、一方で、未標識細胞は、一連の洗浄ステップによって除去される。一部の
実施形態では、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は、未標識であり、
カラムに保持されない。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法で使用するため
の細胞集団は、標識されており、カラムに保持される。一部の実施形態では、本明細書に
記載される方法で使用するための細胞集団は、磁場を除去した後にカラムから溶出され、
細胞収集バッグ内に収集される。

【0088】

ある特定の実施形態では、分離および／または他のステップは、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ
Ｐｒｏｄｉｇｙシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して行われる。Ｃｌ
ｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙシステムは、一部の態様では、自動化された細胞の洗浄
および遠心分離による分画を可能にする細胞処理ユニティ（ｕｎｉｔｙ）が装備されてい
る。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙシステムにはまた、搭載されたカメラおよび画
像認識ソフトウェアも含まれ得、これは、肉眼で見える源細胞産物の層を認識することに
よって、最適な細胞分画のエンドポイントを判定する。たとえば、末梢血は、赤血球、白
血球、および血漿の層に自動的に分離され得る。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙシ
ステムにはまた、細胞培養プロトコール、たとえば、細胞の分化および増大、抗原の負荷
、および長期細胞培養などを達成する、一体型細胞培養チャンバも含まれ得る。入力ポー
トは、媒体の滅菌除去および補充を可能にすることができ、細胞は、組み込まれた顕微鏡
を使用して監視することができる。たとえば、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６５１～６６０頁、Ｔｅｒａｋｕｒａら（
２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１巻：７２～８２頁、およびＷａｎｇら（２０１２年）、
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９～７０１頁を参照されたい。

【0089】

一部の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、複数の細胞表面マーカーに関
して染色した細胞を、流体流に流す、フローサイトメトリーを介して収集および濃縮（ま
たは枯渇）される。一部の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、分取規模の
（ＦＡＣＳ）分類を介して収集および濃縮（または枯渇）される。ある特定の実施形態で
は、本明細書に記載される細胞集団は、微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップをＦＡ
ＣＳに基づく検出システムと組み合わせて使用することによって、収集および濃縮（また
は枯渇）される。たとえば、国際公開第２０１０／０３３１４０号、Ｃｈｏら（２０１０
年）、Ｌａｂ Ｃｈｉｐ、１０巻、１５６７～１５７３頁、およびＧｏｄｉｎら（２００
８年）、Ｊ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎ．、１巻（５号）：３５５～３７６頁を参照されたい。
いずれの事例においても、細胞は、複数のマーカーで標識することができ、十分に定義さ
れたＴ細胞サブセットを高純度で単離することが可能である。

【0090】

一部の実施形態では、抗体または結合パートナーは、陽性選択および／または陰性選択
のための分離を促進するために、１つまたは複数の検出可能なマーカーで標識される。た
とえば、分離は、蛍光標識した抗体への結合に基づくものであってもよい。一部の例では
、１つまたは複数の細胞表面マーカーに特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に
基づく細胞の分離は、流体流において、たとえば、分取規模の（ＦＡＣＳ）を含む蛍光活
性化細胞分類（ＦＡＣＳ）、および／またはたとえばフローサイトメトリー検出システム
と組み合わせた微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップによって、行われる。そのよう
な方法は、複数のマーカーに基づく陽性選択および陰性選択を同時に可能にする。

【0091】

一部の実施形態では、調製方法には、単離、インキュベーション、および／または操作
の前または後のいずれかで、細胞を凍結、たとえば、極低温保存するためのステップが含
まれる。一部の実施形態では、凍結およびそれに続く解凍のステップにより、細胞集団に
おける顆粒球、およびある程度の単球が、除去される。一部の実施形態では、細胞は、た
とえば、血漿および血小板を除去するための洗浄ステップの後に、凍結溶液中に懸濁され
る。様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用するこ
とができる。１つの例には、およそ２０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびお
よそ８％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有するＰＢＳ、または他の好適な細胞凍結
媒体を使用することが含まれる。一部の態様では、溶液は、次いで、ＤＭＳＯおよびＨＳ
Ａの最終濃度が、それぞれ、１０％および４％となるように、媒体で１：１希釈される。
細胞は、次いで、１分間につき１℃の速度で、－８０℃に凍結され、液体窒素保管タンク
の気相で保管される。

【0092】

様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用すること
ができる。一部の実施形態では、細胞試料は、極低温保護剤を含有する極低温保存または
ガラス化媒体または溶液を含有し得る。好適な極低温保護剤としては、ＤＭＳＯ、グリセ
ロール、グリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、プロパンジオール、
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，２－プロパンジオール（ＰＲＯＨ）、またはこ
れらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一部の例では、極低温保存溶液は
、ポリビニルピロリジオン、ヒドロキシエチルデンプン、多糖類、単糖類、アルギン酸塩
、トレハロース、ラフモース（ｒａｆｆｍｏｓｅ）、デキストラン、ヒト血清アルブミン
、Ｆｉｃｏｌｌ、リポタンパク質、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、
自家血漿、またはこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない、１つまたは複数
の非細胞透過性極低温保存剤を含有し得る。一部の実施形態では、細胞は、約１体積％～
約２０体積％、約３体積％～約９体積％、または約６体積％～約９体積％の最終濃度の極
低温保護剤を有する凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結溶液中の極
低温保護剤の最終濃度は、約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６
体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、
約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％である。

【0093】

特定の実施形態では、細胞は、約１体積％～約２０体積％、約３体積％～約９体積％、
または約６体積％～約９体積％の最終濃度のＤＭＳＯを有する凍結溶液中に懸濁される。
ある特定の実施形態では、凍結溶液中のＤＭＳＯの最終濃度は、約３体積％、約４体積％
、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体
積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％
である。

【0094】

一部の実施形態では、組成物は、極低温保存に好適な１つまたは複数のバッグに封入さ
れる（たとえば、ＣｒｙｏＭａｃｓ（登録商標）Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｂａｇｓ、Ｍｉｌｔ
ｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）。一部の実施形態では、組成物は、極低温保存に好適な１つま
たは複数のバイアルに封入される（たとえば、ＣｅｌｌＳｅａｌ（登録商標）Ｖｉａｌｓ
、Ｃｏｏｋ Ｒｅｇｅｎｔｅｃ）。

【0095】

一部の実施形態では、提供される方法は、極低温保存ステップの前または後のいずれか
に、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）、インキュベーション、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）、
および／または遺伝子操作のステップを含む。一部の実施形態では、少なくとも遺伝子操
作ステップが、極低温保存ステップの後に行われる。たとえば、一部の実施形態では、極
低温保存された細胞集団をインキュベートおよび／または操作するための方法が、提供さ
れる。

【0096】

したがって、一部の実施形態では、細胞集団は、培養開始組成物中でインキュベートさ
れる。インキュベーションおよび／または操作は、培養容器、たとえば、ユニット、チャ
ンバ、ウェル、カラム、チューブ、チュービングセット、バルブ、バイアル、培養皿、バ
ッグ、または細胞を培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）または培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｅ）するため
の他の容器において行われ得る。

【0097】

一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前またはそれとともに、インキュベートお
よび／または培養される。インキュベーションステップには、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）す
ること、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）すること、刺激すること、活性化すること、お
よび／または増やすことが含まれ得る。一部の実施形態では、組成物または細胞は、刺激
条件または刺激性薬剤の存在下において、インキュベートされる。そのような条件には、
集団中の細胞の増殖、増大、活性化、および／または生存を誘導し、抗原曝露を模倣し、
および／または遺伝子操作、たとえば、組換え抗原受容体の導入のために細胞を予備刺激
するように、設計されるものが含まれる。

【0098】

条件には、特定の媒体、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、たとえば
、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、たとえば、サイトカ
イン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、なら
びに細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質のうちの１つまたは複数が含
まれ得る。一部の態様では、細胞は、１つまたは複数のサイトカインの存在下においてイ
ンキュベートされ、一部の実施形態では、サイトカインカクテル、たとえば、ＰＣＴ特許
出願公開第２０１５／１５７３８４号に記載されるものを利用することができ、これは、
参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、細胞は、形質導入の前、同時
、または後に、１つまたは複数のサイトカインおよび／またはサイトカインカクテルとと
もにインキュベートされる。

【0099】

一部の実施形態では、刺激条件または刺激剤には、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達
ドメインを活性化することができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、リガンドが
含まれる。一部の態様では、作用物質は、Ｔ細胞におけるＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル
伝達カスケードを作動させるかまたは開始する。そのような作用物質としては、抗体、た
とえば、ＴＣＲに特異的なもの、たとえば、抗ＣＤ３を挙げることができる。一部の実施
形態では、刺激条件には、共刺激性受容体を刺激することができる、１つまたは複数の作
用物質、たとえば、リガンド、たとえば、抗ＣＤ２８が含まれる。一部の実施形態では、
そのような作用物質および／またはリガンドは、固体支持体、たとえば、ビーズ、および
／または１つもしくは複数のサイトカインに結合していてもよい。必要に応じて、増大方
法は、さらに、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体を、培養媒体に（たとえば、
少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で）添加するステップを含み得る。一部の実施形態
では、刺激剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、および／またはＩＬ－７を含む。一部の態様で
は、ＩＬ－２の濃度は、少なくとも約１０単位／ｍＬである。

【0100】

一部の態様では、インキュベーションは、Ｒｉｄｄｅｌｌらへの米国特許第６，０４０
，１７７号、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５
巻（９号）：６５１～６６０頁；Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１
巻：７２～８２頁；および／またはＷａｎｇら（２０１２年）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅ
ｒ．、３５巻（９号）：６８９～７０１頁に記載されているものなどの技法に従って行わ
れる。一部の態様では、インキュベーションは、ＰＣＴ特許出願公開第２０１６／０７３
６０２号または米国公開第２０１６／０１２２７８２号に記載されているシステム、デバ
イス、装置、および／または方法を使用して行われ、これらの内容は、参照によりその全
体が組み込まれる。一部の実施形態では、インキュベーションおよび／または培養は、Ｐ
ＣＴ特許出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載されている方法に従って行われ、こ
の内容は、参照によりその全体が組み込まれる。

【0101】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養開始組成物に、フィーダー細胞、たとえば、非分
裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を添加し（たとえば、結果として得られる細胞集団が、増
大させようとする初期集団中のＴリンパ球それぞれに対して少なくとも約５個、１０個、
２０個、もしくは４０個、またはそれを上回るＰＢＭＣフィーダー細胞を含有するように
）、培養物をインキュベートすること（たとえば、Ｔ細胞の数を増大させるのに十分な時
間）によって、増大される。一部の態様では、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ照射ＰＢ
ＭＣフィーダー細胞を含み得る。一部の実施形態では、ＰＢＭＣに、約３０００～３６０
０ラドの範囲でガンマ線を照射して、細胞分裂を防止する。一部の態様では、フィーダー
細胞は、Ｔ細胞集団の添加前に、培養媒体に添加される。

【0102】

一部の実施形態では、刺激条件としては、ヒトＴリンパ球の成長に好適な温度、たとえ
ば、少なくとも摂氏約２５度、一般に、少なくとも約３０度、および一般に、摂氏３７度
または約３７度が挙げられる。必要に応じて、インキュベーションは、フィーダー細胞と
して非分裂ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）を添加することをさらに含み得る
。ＬＣＬには、約６０００～１０，０００ラドの範囲でガンマ線を照射してもよい。ＬＣ
Ｌフィーダー細胞は、一部の態様では、任意の好適な量、たとえば、ＬＣＬフィーダー細
胞の初期Ｔリンパ球に対する比が少なくとも約１０：１で、提供される。

【0103】

いくつかの実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞、たとえば、抗原特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞お
よび／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞は、ナイーブまたは抗原特異的Ｔリンパ球を抗原で刺激する
ことによって得られる。たとえば、サイトメガロウイルス抗原に対する抗原特異的Ｔ細胞
株またはクローンは、Ｔ細胞を、感染した対象から単離し、細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏにお
いて同じ抗原で刺激することによって、生成することができる。

【0104】

一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および／または保管される前に、濃縮され
る。細胞を極低温で凍結および／または保管する前に細胞を濃縮する利点には、時間の節
約が含まれ得る。たとえば、レシピエントが、細胞置換え療法の一部として細胞を必要と
したときに、細胞を、極低温保管から解凍し、さらなる操作なしにレシピエントに投与す
ることができる。一部の実施形態では、方法は、１種または複数種の細胞の濃縮を含む。
一部の実施形態では、濃縮される細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ４^＋
Ｔ細胞が、濃縮される。一部の実施形態では、ＣＤ８^＋Ｔ細胞が、濃縮される。一部の実
施形態では、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方が、濃縮される。一部の実施形
態では、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞は、別個のプロセスで濃縮される。一部の
実施形態では、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞は、単一のプロセスで濃縮される。
ＣＤ４^＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞の濃縮は、たとえば、ＰＣＴ出願公開第２
０１５／１６４６７５号に記載される通りであってもよく、これは、その全体が本細書に
組み込まれる。

【0105】

一部の実施形態では、細胞は、極低温で保管される前に、分析される。一部の実施形態
では、細胞は、細胞の活性を測定するために分析され得る。一部の実施形態では、活性は
、細胞の生物学的機能である。一部の実施形態では、活性は、Ｂ細胞の形質細胞および／
もしくはメモリーＢ細胞への成熟、細胞傷害性Ｔ細胞および／もしくはマクロファージの
活性化などを含む、免疫学的プロセスを補助する細胞の能力である。一部の実施形態では
、活性は、受容体、受容体様分子、抗体、または抗体様分子を使用して、特定のリガンド
または抗原に結合する、細胞の能力である。一部の実施形態では、活性は、ウイルスに感
染した細胞および腫瘍細胞を認識し、それを破壊する、細胞の能力である。一部の実施形
態では、細胞は、細胞の活性に関連するかまたはそれに影響を及ぼす、細胞の別の生物学
的機能を測定するために、分析される。

【0106】

細胞の選択および／または処理のステップはまた、たとえば、国際公開第２０１７２１
４２０７号に記載される通りであってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書
に組み込まれる、および／または同第２０１６０７３６０２号に記載される通りであって
もよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0107】

極低温での凍結方法

【0108】

一部の実施形態では、細胞は、たとえば、特定の細胞密度、たとえば、公知または制御
された細胞密度で、凍結される。ある特定の実施形態では、凍結プロセスの間の細胞密度
は、凍結プロセスの間に生じるおよび／またはそれに起因して生じる、細胞の死および／
または細胞の損傷に影響を及ぼし得る。

【0109】

たとえば、特定の実施形態では、細胞密度は、平衡、たとえば、凍結プロセスの間の周
囲との浸透平衡に影響を及ぼす。一部の実施形態では、この平衡は、脱水である、脱水を
含む、および／または脱水をもたらす。ある特定の実施形態では、脱水は、凍結溶液、た
とえば、ＤＭＳＯおよび／またはＤＭＳＯ含有溶液との接触、組合せ、および／またはイ
ンキュベーションにより生じる細胞の脱水であるか、またはそれを含む。特定の実施形態
では、脱水は、たとえば、細胞に曝露される有効液状水分濃度を低減することによって、
細胞外空間における氷結晶の核形成および成長により生じる脱水であるか、またはそれを
含む。一部の実施形態では、細胞は、異なる細胞密度、たとえば、高いかまたは低い細胞
密度で凍結される細胞よりも、ゆっくりおよび／または低速な脱水をもたらす細胞密度で
、凍結される。一部の実施形態では、細胞は、同じかまたは類似の条件下において、異な
る細胞密度、たとえば、より高いかまたは低い細胞密度で凍結される細胞よりも、およそ
以下の値、少なくとも以下の値、または以下の値だけ遅い脱水をもたらす細胞密度で、凍
結される：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、
８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、１倍、２倍、３
倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、または１００倍。

【0110】

ある特定の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、１×１０^６個の細胞／
ｍＬ～１×１０^８個の細胞／ｍＬもしくは約１×１０^６個の細胞／ｍＬ～約１×１０^８個
の細胞／ｍＬ、約１×１０^６個の細胞／ｍＬ～約２×１０^７個の細胞／ｍＬ、約１×１０
^７個の細胞／ｍＬ～約５×１０^７個の細胞／ｍＬ、または約１×１０^７個の細胞／ｍＬ～
５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では
、細胞は、それぞれの値を含め、約１×１０^６個の細胞／ｍＬ、約２×１０^６個の細胞／
ｍＬ、約５×１０^６個の細胞／ｍＬ、約１×１０^７個の細胞／ｍＬ、約１．５×１０^７個
の細胞／ｍＬ、約２×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．
５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約３×１０^７個の細胞／
ｍＬ、約３．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約４×１０^７個の細胞／ｍＬ、約４．５×１０
^７個の細胞／ｍＬ、または約５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁され
る。ある特定の実施形態では、細胞は、両端の値を含め、約１．５×１０^７個の細胞／ｍ
Ｌ～約６×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形
態では、細胞は、少なくとも約１×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁さ
れる。ある特定の実施形態では、細胞は、両端の値を含め、約５×１０^６個の細胞／ｍＬ
～約１５０×１０^６個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。特定の実施形態
では、細胞は、少なくとも約１．５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁
される。一部の実施形態では、細胞は、生存細胞である。一部の実施形態では、細胞密度
は、Ｔ細胞の直径によって判定される。

【0111】

一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の容器において、凍結される。ある特定
の実施形態では、容器は、凍結容器および／または極低温保護容器である。極低温凍結に
好適な容器としては、バイアル、バッグ、たとえばプラスチックバッグ、およびケーン（
ｃａｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、細胞、たとえ
ば、同じ細胞組成物、たとえば、ＣＡＲを発現する細胞を含有する細胞組成物中の細胞は
、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上
回る別個の容器において、凍結される。たとえば、一部の実施形態では、細胞および／ま
たは細胞の組成物は、たとえば、溶液、凍結溶液、および／または極低温保護剤などに、
容器に好適な体積よりも大きい体積で懸濁され、そのため、体積は、２つまたはそれを上
回る容器に入れられる。一部の実施形態では、体積は、以下の値であるか、およそ以下の
値であるか、または以下の値を下回る：１００ｍＬ、５０ｍＬ、２５ｍＬ、２０ｍＬ、１
５ｍＬ、１０ｍＬ、５ｍＬ、または５ｍＬを下回る。細胞は、２個、３個、４個、５個、
６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個のバイアルにおいて凍結さ
れる。特定の実施形態では、同じ体積の細胞が、それぞれのバイアルに入れられる。一部
の実施形態では、バイアルは、同一のバイアル、たとえば、同じ製造業者、モデル、およ
び／または製造ロットのバイアルである。特定の実施形態では、体積は、以下の値である
か、およそ以下の値であるか、または以下の値を上回る：１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ
、２５ｍＬ、３０ｍＬ、４０ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、８０ｍＬ、９０ｍＬ
、１００ｍＬ、１２０ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、または２００ｍＬを上回る。細胞
は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る
別個のバッグにおいて凍結される。特定の実施形態では、同じ体積の細胞が、それぞれの
バッグに入れられる。一部の実施形態では、バッグは、同一のバッグ、たとえば、同じ製
造業者、モデル、および／または製造ロットのバッグである。

【0112】

一部の実施形態では、容器は、バイアルである。ある特定の実施形態では、容器は、以
下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値の充填容積を有するバイアルである
：０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９
ｍＬ、１０ｍＬ、１１ｍＬ、１２ｍＬ、１３ｍＬ、１４ｍＬ、１５ｍＬ、１６ｍＬ、１７
ｍＬ、１８ｍＬ、１９ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５
ｍＬ、または５０ｍＬ。一部の実施形態では、バイアルは、それぞれ、両端の値を含め、
１ｍＬ～１２０ｍＬ、１ｍＬ～２０ｍＬ、１ｍＬ～５ｍＬ、１ｍＬ～１０ｍＬ、１ｍＬ～
４０ｍＬ、または２０ｍＬ～４０ｍＬの充填容積を有する。一部の実施形態では、バイア
ルは、凍結用バイアル、極低温保護バイアル、および／または極低温バイアルである。好
適なバイアルは、公知であり、ＣｅｌｌＳｅａｌ（登録商標）Ｖｉａｌｓ（Ｃｏｏｋ Ｒ
ｅｇｅｎｔｅｃ）、ならびに米国特許第８，９３６，９０５号、同第９，５６５，８５４
号、および同第８，７０９，７９７号に記載されているバイアルが挙げられるがこれらに
限定されず、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0113】

特定の実施形態では、容器は、バッグである。ある特定の実施形態では、容器は、以下
の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値の充填容積を有するバッグである：０
．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ
、１０ｍＬ、１１ｍＬ、１２ｍＬ、１３ｍＬ、１４ｍＬ、１５ｍＬ、１６ｍＬ、１７ｍＬ
、１８ｍＬ、１９ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ
、または５０ｍＬ。一部の実施形態では、バッグは、それぞれ、両端の値を含め、１ｍＬ
～１２０ｍＬ、１ｍＬ～２０ｍＬ、１ｍＬ～５ｍＬ、１ｍＬ～４０ｍＬ、２０ｍＬ～４０
ｍＬ、１ｍＬ～７０ｍＬ、または５０ｍＬ～７０ｍＬの充填容積を有する。一部の実施形
態では、バッグには、以下の値、およそ以下の値、または以下の値を下回る体積が、充填
される：１００ｍＬ、７５ｍＬ、７０ｍＬ、５０ｍＬ、２５ｍＬ、２０ｍＬ、または１０
ｍＬ。好適なバッグは、公知であり、ＣｒｙｏＭａｃｓ（登録商標）Ｆｒｅｅｚｉｎｇ
Ｂａｇｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）が挙げられるが、これに限定されない。あ
る特定の実施形態では、体積は、室温での体積である。一部の実施形態では、体積は、両
端の値を含め、３７℃～４℃、１６℃～２７℃での体積であるか、または以下の温度、お
よそ以下の温度、もしくは少なくとも以下の温度での体積である：１６℃、１７℃、１８
℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８
℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、もしくは３７
℃。一部の実施形態では、体積は、２５℃での体積である。

【0114】

一部の実施形態では、両端の値を含め、１ｍＬ～２０ｍＬの体積の媒体または溶液、た
とえば、凍結溶液中の細胞は、１つまたは複数のバイアルにおいて、凍結される。一部の
実施形態では、１つまたは複数のバイアルは、両端の値を含め、１ｍＬ～５ｍＬの充填容
積を有する。ある特定の実施形態では、両端の値を含め、２０ｍＬ～１２０ｍＬの体積の
媒体または溶液、たとえば、凍結溶液中の細胞は、１つまたは複数のバッグにおいて、凍
結される。特定の実施形態では、１つまたは複数のバッグは、両端の値を含め、２０ｍＬ
～４０ｍＬの充填容積を有する。一部の実施形態では、１２０ｍＬまたはそれを上回る体
積の媒体または溶液、たとえば、凍結溶液中の細胞は、１つまたは複数のバッグにおいて
、凍結される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のバッグは、両端の値を含め、
５０ｍＬ～７０ｍＬの充填容積を有する。

【0115】

ある特定の実施形態では、細胞は、容器、たとえば、バッグまたはバイアルに入れられ
た溶液、たとえば、凍結溶液において、表面積対体積の比で、凍結される。特定の実施形
態では、表面積対体積の比は、それぞれ、両端の値を含め、以下の値であるかまたはおよ
そ以下の値である：０．１ｃｍ^－１～１００ｃｍ^－１、１ｃｍ^－１～５０ｃｍ^－１、１ｃ
ｍ^－１～２０ｃｍ^－１、１ｃｍ^－１～１０ｃｍ^－１、２ｃｍ^－１～１０ｃｍ^－１、３ｃｍ
^－１～７ｃｍ^－１、または３ｃｍ^－１～６ｃｍ^－１。特定の実施形態では、表面積対体積
の比は、３ｃｍ^－１～６ｃｍ^－１または約３ｃｍ^－１～約６ｃｍ^－１である。一部の実施
形態では、表面積対体積の比は、以下の値であるか、およそ以下の値であるか、または少
なくとも以下の値である：３ｃｍ^－１、４ｃｍ^－１、５ｃｍ^－１、６ｃｍ^－１、または７
ｃｍ^－１。

【0116】

一部の実施形態では、細胞は、１分間につき１℃または約１℃の速度で、－８０℃に凍
結される。一部の実施形態では、細胞は、制御された速度の凍結装置を使用して、１分間
につき１℃または約１℃の速度で、能動的および／または効果的に冷却される。一部の実
施形態では、細胞は、制御された速度の凍結装置を用いて凍結させることができる。一部
の態様では、制御された速度の凍結装置は、プログラムされた冷却プロファイル、たとえ
ば、複数の冷却および／または加熱速度を有するプロファイルで、細胞を凍結させるため
に使用される。そのような凍結プロファイルは、たとえば、細胞内での氷の形成を低減さ
せるために、核形成、たとえば、氷の形成を制御するようにプログラムすることができる
。一部の実施形態では、急速冷却プロファイルを開始するように選択される温度および終
了温度は、容器の種類および凍結される体積に関連する。一部の実施形態では、体積が小
さすぎるか、または容器が高すぎる表面積対体積の比を有する場合、試料は、温度の低下
に対して高速で応答しすぎて、凍結するのが急速すぎるため、細胞内での氷の形成のリス
クがある。他の実施形態では、体積が大きすぎるか、または容器の直径が低すぎる表面積
対体積の比を有する場合、試料は、温度の低下に対して応答せず、凍結が起こるのが遅す
ぎて、試料はプロファイルの後半で核形成が制御されないリスクがあり、溶液は、氷結晶
が形成される前に、極低温保存剤、たとえば、ＤＭＳＯへの長時間の曝露による損傷が生
じる。

【0117】

一部の実施形態では、細胞は、以下のプロファイルを使用して、凍結される：４．０℃
での保持ステップ、続いて、試料が－６℃の温度に達するまで、１分間につき１．２℃の
冷却ステップ。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが－６５℃に
達するまで、１分間につき２５℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで
、試料を含有するチャンバが－３０℃に達するまで、１分間につき１５℃の速度で加熱さ
れる。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが－４０℃に達するま
で、１分間につき１℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含
有するチャンバが－９０℃に達するまで、１分間につき１℃の速度で冷却される。一部の
態様では、試料は、次いで、制御された速度の凍結装置から取り出すまで、－９０℃で保
持される。

【0118】

一部の実施形態では、細胞は、以下のプロファイルを使用して、凍結される：４．０℃
での保持ステップ、続いて、試料が－６℃の温度に達するまで、１分間につき１．２℃の
冷却ステップ。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが－６５℃に
達するまで、１分間につき２５℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで
、試料を含有するチャンバが－３０℃に達するまで、１分間につき１５℃の速度で加熱さ
れる。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが－４０℃に達するま
で、１分間につき１℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含
有するチャンバが－９０℃に達するまで、１分間につき１０℃の速度で冷却される。一部
の態様では、試料は、次いで、制御された速度の凍結装置から取り出すまで、－９０℃で
保持される。

【0119】

一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および／または保管される前に、－８０℃
を上回る温度から０℃の温度に冷却される。たとえば、細胞は、－２０℃、または－８０
℃を上回るかもしくは－２０℃を下回る温度に、冷却され得る。

【0120】

一部の実施形態では、細胞は、極低温で保管される前に、－２１０℃～－８０℃の温度
に、極低温で凍結される。たとえば、細胞は、－２１０℃、または－１９６℃、または－
８０℃に、極低温で凍結され得る。

【0121】

一部の実施形態では、細胞は、１分間につき０．１℃～５℃の速度で、冷却および／ま
たは極低温で凍結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間につき０．２℃～４℃の
速度で、冷却および／または極低温で凍結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間
につき０．５℃～３℃の速度で、冷却および／または極低温で凍結される。一部の実施形
態では、細胞は、１分間につき０．５℃～２℃の速度で、冷却および／または極低温で凍
結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間につき１℃の速度で、冷却および／また
は極低温で凍結される。たとえば、細胞を、上述の速度で冷却および／または極低温で凍
結させる方法としては、細胞を、中の温度をそのような速度で低下させるプログラム可能
な冷蔵庫に入れることが挙げられる。それを行う別の方法としては、細胞のバイアルを容
器に入れ、そこで、バイアルを、イソプロピルアルコールで包囲し、容器を、低温環境ま
たは極低温で凍結される環境に置くことが挙げられる。一部の実施形態では、細胞は、段
階的なアプローチを使用して細胞が凍結される場合の温度よりも低い温度において、保管
される。たとえば、一部の実施形態では、保管は、－８０℃を下回る温度、たとえば、－
１００、－１１０、－１２０、－１３０、－１４０、－１５０、－１６０℃を下回る温度
、またはそれよりも低い温度において、行われる。一部の態様では、そのような保管は、
細胞または細胞の生物学的活性を、より多くの程度および／またはより長い期間、維持す
ることをもたらす。

【0122】

一部の実施形態では、冷却または極低温で凍結させる前に、細胞は、細胞が存在する試
料中のある特定の成分を除去するために、洗浄される。たとえば、細胞は、血漿および／
または血小板を除去するために、洗浄され得る。細胞は、たとえば、ＰＣＴ出願公開第２
０１５／１６４６７５号に記載されているように洗浄され得、これは、参照によりその全
体が本明細書に組み込まれる。

【0123】

一部の実施形態では、細胞は、冷却、極低温での凍結、および／または極低温での保管
の前に、凍結溶液と合わされる。一部の実施形態では、凍結溶液は、冷却、極低温での凍
結、または極低温保管の後、および細胞を解凍した後に、凍結溶液なしで冷却、極低温で
凍結、または極低温で保管した細胞と比較して、細胞の１つまたは複数の生物学的機能の
より優れた保持をもたらす。

【0124】

一部の実施形態では、凍結溶液は、０．１体積％～５０体積％のＤＭＳＯ、および０．
１重量％～２０重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、０．５体積％
～４０体積％のＤＭＳＯ、および０．２重量％～１５重量％のＨＳＡを含む。一部の実施
形態では、凍結溶液は、１体積％～３０体積％のＤＭＳＯ、および０．５重量％～１０重
量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、１体積％～２０体積％のＤＭＳ
Ｏ、および２重量％～７．５重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、
５体積％～２０体積％のＤＭＳＯ、および１重量％～５重量％のＨＳＡを含む。一部の実
施形態では、凍結溶液は、１０体積％のＤＭＳＯ、または７もしくは７．５もしくは８体
積％もしくはおよそこれらの割合のＤＭＳＯ、ならびに４重量％のＨＳＡを含む。一部の
実施形態では、上述の濃度は、凍結溶液を細胞と合わせる前のＤＭＳＯおよびＨＳＡの濃
度である。一部の実施形態では、上述の濃度は、凍結溶液を細胞と合わせた後のＤＭＳＯ
およびＨＳＡの濃度である。

【0125】

一部の実施形態では、細胞は、－２１０℃～－８０℃の温度において、極低温で保管さ
れる。一部の実施形態では、細胞は、－２１０℃～－１９６℃の温度において、極低温で
保管される。一部の実施形態では、細胞は、－１９６℃～－８０℃の温度において、極低
温で保管される。一部の実施形態では、細胞は、液体窒素保管タンクの気相において、極
低温で保管される。

【0126】

一部の実施形態では、細胞は、１日～１２年間の期間、極低温で保管される。たとえば
、細胞は、細胞療法において使用するための生存性を失う前、かつレシピエントの処置が
必要となるまでの期間、保管され得る。レシピエントの処置が必要となるまで、細胞をそ
のように保管することにより、ある特定の実施形態では、本開示の方法により、レシピエ
ントが細胞療法のために細胞を必要とした場合に、細胞が容易に利用可能となるという利
点が提供される。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間
：１２時間、２４時間、３６時間、または４８時間、保管もしくは貯蔵される。一部の実
施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１週間、２週間、３週間
、または４週間、保管または貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、「長期保管」ま
たは「長期貯蔵」される。一部の態様では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい
期間：１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ
月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、
６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間
、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間
、３５年間、４０年間、またはそれを上回る期間、保管される。

【0127】

一部の実施形態では、保管期間の後に、細胞は、解凍される。一部の実施形態では、細
胞は、細胞の生物学的機能の少なくとも一部分を回復させるように、細胞の温度を、０℃
または０℃よりも高くに上昇させることによって、解凍される。一部の実施形態では、細
胞は、細胞の生物学的機能の少なくとも一部分を回復させるように、細胞の温度を、３７
℃に上昇させることによって、解凍される。ある特定の実施形態によると、解凍すること
は、細胞を、容器に入れ、３７℃の水浴に、６０～９０秒間入れることを含む。

【0128】

一部の実施形態では、細胞は、解凍される。特定の実施形態では、細胞は、急速に、た
とえば、細胞を過熱することも細胞を３７℃を上回るなどの高温に曝露することもなく、
可能な限り急速に、解凍される。一部の実施形態では、急速な解凍により、細胞が高濃度
の極低温保護剤および／またはＤＭＳＯに曝露されるのが低減および／または予防される
。特定の実施形態では、解凍が起こる速度は、容器、たとえば、中で細胞が凍結および解
凍されるバイアルおよび／またはバッグの性質に影響を受け得る。

【0129】

特定の実施形態では、細胞は、以下の温度、およそ以下の温度、または以下を下回る温
度において、解凍される：３７℃、３５℃、３２℃、３０℃、２９℃、２８℃、２７℃、
２６℃、２５℃、２４℃、２３℃、２２℃、２１℃、２０℃、もしくは１５℃、またはそ
れぞれ両端の値を含め、１５℃～３０℃、２３℃～２８℃、もしくは２４℃～２６℃。

【0130】

一部の実施形態では、細胞は、熱ブロック、乾燥解凍装置、または水浴で、解凍される
。ある特定の実施形態では、細胞は、熱ブロックでも、乾燥解凍装置でも、水浴でも解凍
されない。一部の実施形態では、細胞は、室温で解凍される。

【0131】

一部の実施形態では、容器壁の厚さは、細胞解凍の速度に影響を及ぼし、たとえば、例
として、厚い壁を有する容器内の細胞は、より薄い壁を有する容器内よりもゆっくりと解
凍され得る。一部の実施形態では、表面積対体積の比が低い容器は、解凍の速度がゆっく
りおよび／または不均一であり得る。一部の実施形態では、極低温凍結された細胞は、表
面積対体積の比が以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値である容器にお
いて、急速に解凍される：１ｃｍ^－１、２ｃｍ^－１、３ｃｍ^－１、４ｃｍ^－１、５ｃｍ^－
１、６ｃｍ^－１、または７ｃｍ^－１、８ｃｍ^－１、９ｃｍ^－１、または１０ｃｍ^－１。特
定の実施形態では、細胞は、以下の時間以内、およそ以下の時間以内、または以下を下回
る時間以内に、解凍される：１２０分間、９０分間、６０分間、４５分間、３０分間、２
５分間、２０分間、１５分間、または１０分間。一部の実施形態では、細胞は、それぞれ
、両端の値を含め、１０分間～６０分間、１５分間～４５分間、または１５分間～２５分
間、解凍される。特定の実施形態では、細胞は、２０分以内、約２０分以内、または２０
分間を下回る時間以内に、解凍される。

【0132】

ある特定の実施形態では、解凍された細胞は、投与の前に、または任意の後続の操作お
よび／もしくは処理ステップの前に、静置、たとえば、インキュベートまたは培養される
。一部の実施形態では、細胞は、低いおよび／もしくは検出不可能な量の極低温保護剤下
において、または極低温保護剤、たとえばＤＭＳＯの非存在下において、静置される。特
定の実施形態では、解凍された細胞は、洗浄ステップの後または直後に、たとえば、極低
温保護剤および／またはＤＭＳＯを除去するために、静置される。一部の実施形態では、
静置は、３７℃または約３７℃での培養および／またはインキュベーションであるか、ま
たはそれを含む。一部の実施形態では、静置は、任意の処理または操作ステップで使用さ
れるおよび／またはそれと関連する、任意の試薬、たとえば、刺激性試薬、ビーズ試薬、
または組換えサイトカインの非存在下において、行われる。一部の実施形態では、細胞は
、以下の時間、およそ以下の時間、または少なくとも以下の時間、静置される：５分間、
１０分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８
時間、１２時間、１８時間、または２４時間。ある特定の実施形態では、細胞は、２時間
、約２時間、または少なくとも２時間、静置される。

【0133】

一部の実施形態では、保管期間の後、生存細胞の割合は、２４％～１００％である。生
存細胞の割合は、たとえば、例として、Ｓｃｈｕｌｚら、Ｔｏｗａｒｄｓ ａ ｘｅｎｏ
－ｆｒｅｅ ａｎｄ ｆｕｌｌｙ ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｄｅｆｉｎｅｄ ｃｒｙｏｐ
ｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｖｉａｂｉ
ｌｉｔｙ， ｒｅｃｏｖｅｒｙ， ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｕｎ
ｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｏｆ ＰＢＭＣ ｄｕｒｉｎｇ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｓｔｏｒ
ａｇｅ、３８２巻、Ｊ． Ｉｍｍｕ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４、２６頁に記載されている
、トリパンブルー色素排除技法を使用して、判定することができ、この文献は、ＶｉＣｅ
ｌｌ（商標）細胞生存性分析装置（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｋｒｅｆｅｌｄ、
Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してトリパンブルー排除を行うことを開示している。トリパンブ
ルー色素排除技法下では、たとえば、死細胞は、青色に見え、したがって、生存細胞と区
別することができる。生存細胞の割合はまた、たとえば、フローサイトメーターまたは別
の技法もしくは機器を使用することによって、判定することができる。

【0134】

試料または細胞の冷却、極低温での凍結、および／または極低温での保管のプロセスの
間、細胞の１つまたは複数の生物学的機能は、保存される。凍結溶液の使用により、これ
らの生物学的機能を保存するのが補助される。細胞を解凍すると、これらの生物学的機能
は、回復される。生存性に加えて、上述の生物学的機能、他の生物学的機能には、細胞の
複製能力、遺伝子修飾に対する受容性、ならびにＢ細胞の形質細胞および／もしくはメモ
リーＢ細胞への成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞および／もしくはマクロファージの活性
化などを含め、免疫学的プロセスを補助する能力が含まれ得る。

【0135】

一部の実施形態では、記載される細胞および組成物、たとえば、特定の濃度または細胞
密度の細胞組成物、極低温保護剤の存在下において凍結されたもの、および／または特定
の体積もしくは表面積対体積の比で容器に充填されたもののうちのいずれかを含む、凍結
された細胞の特徴としては、解凍した後、代替的な手段によって凍結された細胞よりも、
改善された、増加した、および／もしくはより高速な増大；改善された、増加した、およ
び／もしくは強化された細胞生存、ならびに低減された細胞死、たとえば、壊死、プログ
ラム細胞死、および／もしくはアポトーシスの事象；改善された、強化された、および／
もしくは増加した活性、たとえば、細胞溶解活性；ならびに／または低減された老化もし
くは休止の事象が挙げられる。

【0136】

特定の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対
体積の比で、凍結され、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／ま
たは異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、凍結、極低温凍結、および／
または極低温保存の間、および／またはそれによって生じる、細胞死、たとえば、壊死お
よび／またはアポトーシスが、低減されている。特定の実施形態では、細胞は、本明細書
に提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で、凍結され、凍結、極低温凍結
、および／または極低温保存後４８時間以内、たとえば、凍結した細胞の解凍後の、遅延
細胞死の低減、たとえば、壊死、プログラム細胞死、またはアポトーシスによって死滅す
る細胞の量の低減を有する。ある特定の実施形態では、同じかまたは類似の条件下におい
て、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して
、少なくとも以下の値またはおよそ以下の値だけ少ない細胞が、凍結および／または極低
温保存の間および／またはその結果として、死滅する：５％、１０％、２０％、２５％、
３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％。ある特定の
実施形態では、提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で凍結させた細胞の
うちの４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５
％未満、１％未満、０．１％未満、または０．０１％未満が、凍結、極低温凍結、および
／または極低温保存の間またはその結果として、死滅する。

【0137】

一部の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対
体積の比で凍結され、同じかまたは類似の条件下において異なる細胞密度および／または
異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、凍結、極低温凍結、および／また
は極低温保存に起因するおよび／またはその結果として生じる老化または休止の事象が、
低減されている。特定の実施形態では、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞
密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、少なくとも以
下の値またはおよそ以下の値だけ少ない細胞が、老化および／または休止した細胞である
：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、
９０％、または９９％。ある特定の実施形態では、細胞は、提供される細胞密度および／
または表面積対体積の比で凍結され、細胞のうちの４０％未満、３０％未満、２５％未満
、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、１％未満、０．１％未満、または０
．０１％未満が、凍結、極低温凍結、および／または極低温保存の結果として、老化およ
び／または休止した状態となる。

【0138】

ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面
積対体積の比で、凍結、たとえば、極低温凍結され、同じかまたは類似の条件下において
、異なる細胞密度および／または表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、細胞が
解凍された後に、たとえば、本明細書に記載される刺激性試薬とのインキュベーションな
どによる刺激条件下において、改善された、より高速な、および／またはより急速な、増
大を有する。特定の実施形態では、細胞は、同じかまたは類似の条件下において、異なる
細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、以下の値
、およそ以下の値、または少なくとも以下の値だけ高速および／またはより急速な速度で
、増大する：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％
、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍
、５倍、または１０倍。たとえば、一部の実施形態では、解凍された細胞は、同じかまた
は類似の条件下において、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結
させた細胞を解凍したものよりも、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の
値だけ短い時間で、閾値の増大、たとえば、所定の細胞数、密度、または係数、たとえば
、２倍の増大に達する：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０
％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％。

【0139】

一部の実施形態では、細胞は、その細胞密度で凍結、たとえば、極低温凍結され、同じ
かまたは類似の条件下において、異なる細胞密度、たとえば、より高いかまたはより低い
密度で凍結させた細胞と比較して、細胞を解凍した後に、改善された、増加した、および
／またはより高い、細胞溶解活性、たとえば、本明細書に記載される細胞溶解活性を測定
するための任意のアッセイによって測定されるものなどを有する。特定の実施形態では、
細胞溶解活性は、同じかまたは類似の条件下において、異なる密度で凍結させた細胞と比
較して、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値増加する：５％、１０％
、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００
％、１５０％、２００％、１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍。

【0140】

細胞の修飾

【0141】

一部の実施形態では、細胞は、たとえば、新しい、強化された、改変された、増加した
、または減少した活性のうちの１つまたは複数を細胞に付与するように、修飾され得る。
一部の実施形態では、細胞は、収集の後、かつ極低温での凍結および／または保管の前に
、修飾される。一部の実施形態では、細胞は、極低温保管後の解凍の後に、修飾される。
例示的な細胞修飾方法は、ＰＣＴ出願公開第２０１６／０３３５７０号および同第２０１
６／１１５５５９号に記載されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み
込まれる。例示的な細胞修飾方法はまた、国際公開第２０１７２１４２０７号および／ま
たは同第２０１６０７３６０２号にも記載されており、これらの内容は、参照によりその
全体が本明細書に組み込まれる。

【0142】

一部の実施形態では、活性は、細胞の生物学的機能、たとえば、例として、Ｂ細胞の形
質細胞および／もしくはメモリーＢ細胞への成熟、細胞傷害性Ｔ細胞および／もしくはマ
クロファージの活性化などを含む、免疫学的プロセスを補助する細胞の能力である。一部
の実施形態では、活性は、受容体、受容体様分子、抗体、または抗体様分子を使用して、
特定のリガンドまたは抗原に結合する、細胞の能力である。一部の実施形態では、活性は
、ウイルスに感染した細胞および腫瘍細胞を認識し、それを破壊する、細胞の能力である
。

【0143】

細胞の遺伝子修飾

【0144】

一部の実施形態では、細胞の修飾には、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。たとえ
ば、遺伝子修飾は、ＰＣＴ出願公開第２０１６／０３３５７０号および同第２０１６／１
１５５５９号に記載されている通りであってもよく、これらは、その全体が本明細書に組
み込まれる。例示的な遺伝子修飾方法はまた、国際公開第２０１７２１４２０７号および
／または同第２０１６０７３６０２号にも記載されており、これらの内容は、参照により
その全体が本明細書に組み込まれる。

【0145】

一部の実施形態では、遺伝子修飾には、細胞が、タンパク質を認識する一本鎖可変断片
（「ｓｃＦｖ」）を含むキメラ分子を発現することを可能にする様式で、細胞を遺伝子修
飾することが含まれる。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、特定のタンパク質に結合する
。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、特定のタンパク質に結合する抗体の一部分に由来す
る。一部の実施形態では、ｓｃＦｖが細胞によって発現されると、細胞は、がん細胞を認
識し、細胞自身を活性化することができる。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、オーファ
ンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲＩ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＬＩ－ＣＡＭ、ＣＤ１９、
ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、Ｃ
Ｄ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－２、
ＥＧＰ－４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン
受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－ア
ルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソ
テリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＢＣＭＡ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５
、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ｇ
ｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原（Ｃ
ＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲ
ステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ－１、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、および
ＭＡＧＥ Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）、サイクリン、たとえば、サイ
クリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ
、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子のうちの少なくとも１つ
に結合する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９に結合する。一部の実施形態で
は、ｓｃＦｖは、ＢＣＭＡに結合する。

【0146】

ＣＡＲ

【0147】

一部の実施形態では、遺伝子修飾には、１つまたは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
を発現するように、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。ＣＡＲを含め、例示的な抗原
受容体、およびそのような受容体を操作し、細胞に導入するための方法としては、たとえ
ば、ＰＣＴ特許出願公開第２０００／１４２５７号、同第２０１３／１２６７２６号、同
第２０１２／１２９５１４号、同第２０１４／０３１６８７号、同第２０１３／１６６３
２１号、同第２０１３／０７１１５４号、同第２０１３／１２３０６１号、米国特許出願
公開第２００２／１３１９６０号、同第２０１３／２８７７４８号、同第２０１３／０１
４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，
２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４
４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６
５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４
，３５３号、および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許第２５３７４１６号に
記載されているもの、ならびに／またはＳａｄｅｌａｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏ
ｖ．、３巻（４号）：３８８～３９８頁（２０１３年）；Ｄａｖｉｌａら、ＰＬｏＳ Ｏ
ＮＥ、８巻（４号）：ｅ６１３３８頁（２０１３年）；Ｔｕｒｔｌｅら、Ｃｕｒｒ． Ｏ
ｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻（５号）：６３３～３９頁（２０１２年）；Ｗｕら
、Ｃａｎｃｅｒ、１８巻（２号）：１６０～７５頁（２０１２年）に記載されているもの
が挙げられる。一部の態様では、抗原受容体としては、米国特許第７，４４６，１９０号
に記載されているＣＡＲ、およびＰＣＴ特許出願公開第２０１４／０５５６６８号Ａ１に
記載されているものが挙げられる。ＣＡＲの例としては、前述の刊行物、たとえば、国際
公開第２０１４／０３１６８７号、米国特許第８，３３９，６４５号、同第７，４４６，
１７９号、米国公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、
同第８，３８９，２８２号、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗ
ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１０巻、２６７～２７６頁（２０１３年）；
Ｗａｎｇら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９～７０１頁（２０
１２年）；ならびにＢｒｅｎｔｊｅｎｓら、Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．、５巻（１
７７頁）（２０１３年）のいずれかに開示されているＣＡＲが挙げられる。国際公開第２
０１４／０３１６８７号、米国特許第８，３３９，６４５号、同第７，４４６，１７９号
、米国公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、および同
第８，３８９，２８２号もまた、参照されたい。キメラ受容体、たとえば、ＣＡＲは、一
般に、細胞外抗原結合性ドメイン、たとえば、抗体分子の一部分、一般に、抗体の重鎖可
変（ＶＨ）領域および／または軽鎖可変（ＶＬ）領域、たとえば、ｓｃＦｖ抗体断片を含
む。一部の実施形態では、キメラ受容体は、抗体分子に由来しない細胞外抗原結合性ドメ
イン、たとえば、リガンドまたは他の結合性部分を含む。

【0148】

一部の実施形態では、受容体によって標的とされる抗原は、ポリペプチドである。一部
の実施形態では、それは、炭水化物または他の分子である。一部の実施形態では、抗原は
、正常であるかまたは標的とされない細胞または組織と比較して、疾患または状態の細胞
、たとえば、腫瘍細胞または病原性細胞に、選択的に発現されるかまたは過剰発現される
。他の実施形態では、抗原は、正常細胞に発現される、および／または操作細胞に発現さ
れる。

【0149】

受容体によって標的とされる抗原としては、一部の実施形態では、オーファンチロシン
キナーゼ受容体ＲＯＲＩ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＬＩ－ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、
ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、Ｃ
Ｄ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４
、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、Ｇ
Ｄ２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ２、
ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソテリン、Ｍ
ＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１
、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原
（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プ
ロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、およびＭＡＧ
Ｅ Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ－１）、サイクリン、たとえば、サイクリン
Ａ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣ
Ｖ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子が挙げられる。

【0150】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、病原体特異的抗原に結合する。一部の実施形態では、
ＣＡＲは、ウイルス抗原（たとえば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶなど）、細菌抗原、および
／または寄生虫抗原に特異的である。

【0151】

一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの抗体部分は、さらに、免疫グ
ロブリン定常領域の少なくとも一部分、たとえば、ヒンジ領域、たとえば、ＩｇＧ４ヒン
ジ領域、ならびに／またはＣＨ１／ＣＬおよび／もしくはＦｃ領域を含む。一部の実施形
態では、定常領域または部分は、ヒトＩｇＧ、たとえば、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１のもの
である。一部の態様では、定常領域の部分は、抗原認識要素、たとえば、ｓｃＦｖと、膜
貫通ドメインとの間のスペーサー領域としての機能を果たす。スペーサーは、スペーサー
の非存在下と比較して、抗原結合後の細胞の応答性の増加をもたらす長さのものであり得
る。例示的なスペーサー、たとえば、ヒンジ領域としては、国際特許出願公開第２０１４
／０３１６８７号に記載されているものが挙げられる。一部の例では、スペーサーは、１
２個もしくは約１２個のアミノ酸の長さであるか、または１２個を上回らないアミノ酸の
長さである。例示的なスペーサーとしては、少なくとも約１０～２２９個のアミノ酸、約
１０～２００個のアミノ酸、約１０～１７５個のアミノ酸、約１０～１５０個のアミノ酸
、約１０～１２５個のアミノ酸、約１０～１００個のアミノ酸、約１０～７５個のアミノ
酸、約１０～５０個のアミノ酸、約１０～４０個のアミノ酸、約１０～３０個のアミノ酸
、約１０～２０個のアミノ酸、または約１０～１５個のアミノ酸を有するものが挙げられ
、列挙された範囲のうちのいずれかの両端の間の任意の整数が含まれる。一部の実施形態
では、スペーサー領域は、約１２個もしくはそれを下回るアミノ酸、約１１９個もしくは
それを下回るアミノ酸、または約２２９個もしくはそれを下回るアミノ酸を有する。例示
的なスペーサーとしては、ＩｇＧ４ヒンジ単独、ＩｇＧ４ヒンジがＣＨ２およびＣＨ３ド
メインに連結されたもの、またはＩｇＧ４ヒンジがＣＨ３ドメインに連結されたものが挙
げられる。例示的なスペーサーとしては、Ｈｕｄｅｃｅｋら、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．、１９巻：３１５３頁（２０１３年）、国際特許出願公開第２０１４０３１６
８７号、米国特許第８，８２２，６４７号、または米国特許出願公開第２０１４／０２７
１６３５号に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0152】

一部の実施形態では、定常領域または部分は、ヒトＩｇＧ、たとえば、ＩｇＧ４または
ＩｇＧ１のものである。一部の実施形態では、スペーサーは、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰ
ＣＰを有する。一部の実施形態では、定常領域または部分は、ＩｇＤのものである。

【0153】

抗原認識ドメインは、一般に、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達要素、たとえば、
ＣＡＲの場合には、抗原受容体複合体、たとえば、ＴＣＲ複合体を通じた活性化を模倣す
る、および／または別の細胞表面受容体を介してシグナル伝達する、シグナル伝達要素に
、連結される。したがって、一部の実施形態では、抗原結合性要素（たとえば、抗体）は
、１つまたは複数の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに連結される。一
部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインに融合されている。一実施形態で
は、受容体、たとえば、ＣＡＲにおけるドメインのうちの１つと天然に会合している膜貫
通ドメインが、使用される。一部の事例では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメ
ンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、そのようなドメインが同じかまたは異なる
表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合することを回避するように、選択されるか、ア
ミノ酸置換によって修飾される。

【0154】

膜貫通ドメインは、一部の実施形態では、天然の供給源または合成の供給源のいずれか
に由来する。供給源が天然である場合、ドメインは、一部の態様では、任意の膜結合タン
パク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域としては、Ｔ細胞受容体のアルフ
ァ鎖、ベータ鎖、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、Ｃ
Ｄ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０
、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４に由来するものが挙げられる（すなわ
ち、少なくとも、これらの膜貫通領域を含む）。あるいは、膜貫通ドメインは、一部の実
施形態では、合成である。一部の態様では、合成の膜貫通ドメインは、主として、疎水性
残基、たとえば、ロイシンおよびバリンを含む。一部の態様では、フェニルアラニン、ト
リプトファン、およびバリンのトリプレットが、合成の膜貫通ドメインのそれぞれの末端
に見出されるであろう。一部の実施形態では、連結は、リンカー、スペーサー、および／
または膜貫通ドメインによるものである。

【0155】

細胞内シグナル伝達ドメインには、天然の抗原受容体によるシグナル、共刺激性受容体
と組み合わせたそのような受容体によるシグナル、および／または共刺激性受容体単独に
よるシグナルを模倣するかまたはそれらに近似するものがある。一部の実施形態では、短
いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカー、たとえば、長さが２～１０個のアミノ酸
のリンカー、たとえば、グリシンおよびセリンを含有するもの、たとえば、グリシン－セ
リンダブレットが、存在し、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの
間の連結を形成している。

【0156】

受容体、たとえば、ＣＡＲは、一般に、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達要素を含
む。一部の実施形態では、受容体は、Ｔ細胞活性化および細胞傷害性を媒介する、ＴＣＲ
複合体、たとえば、ＴＣＲ ＣＤ３鎖の細胞内構成要素、たとえば、ＣＤ３ゼータ鎖を含
む。したがって、一部の態様では、抗原結合性部分は、１つまたは複数の細胞シグナル伝
達モジュールに連結される。一部の実施形態では、細胞シグナル伝達モジュールは、ＣＤ
３膜貫通ドメイン、ＣＤ３細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または他のＣＤ膜貫通
ドメインを含む。一部の実施形態では、受容体、たとえば、ＣＡＲは、さらに、１つまた
は複数の追加の分子の一部分、たとえば、Ｆｃ受容体γ、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、ま
たはＣＤ１６を含む。たとえば、一部の態様では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体は、Ｃ
Ｄ３－ゼータ（ＣＤ３－ζ）またはＦｃ受容体γと、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、または
ＣＤ１６との間のキメラ分子を含む。

【0157】

一部の実施形態では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体のライゲーション時に、受容体の
細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞、たとえば、ＣＡＲを発
現するように操作されたＴ細胞の正常なエフェクター機能または応答のうちの少なくとも
１つを活性化する。たとえば、一部の状況では、ＣＡＲは、Ｔ細胞の機能、たとえば、細
胞溶解活性またはＴヘルパー活性、たとえば、サイトカインもしくは他の因子の分泌を誘
導する。一部の実施形態では、抗原受容体要素または共刺激性分子の細胞内シグナル伝達
ドメインの短縮された部分は、たとえば、エフェクター機能シグナルを伝達する場合、イ
ンタクトな免疫刺激性鎖の代わりに使用される。一部の実施形態では、１つまたは複数の
細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列を含み、一部の態
様ではまた、天然の状況において、そのような受容体と一緒に、抗原受容体の結合後にシ
グナル伝達を開始するように作用する共受容体のものも含む。

【0158】

天然のＴＣＲの状況では、完全な活性化は、一般に、ＴＣＲを通じたシグナル伝達だけ
でなく、共刺激性シグナルも必要とする。したがって、一部の実施形態では、完全な活性
化を促進するために、二次的なまたは共刺激性のシグナルを生成するための構成要素もま
た、ＣＡＲに含まれる。他の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激性シグナルを生成するため
の構成要素を含まない。一部の態様では、さらなるＣＡＲが、同じ細胞において発現され
、二次的なまたは共刺激性のシグナルを生成するための構成要素を提供する。

【0159】

Ｔ細胞活性化は、一部の態様では、以下の２つのクラスの細胞質シグナル伝達配列によ
って媒介されると説明される：ＴＣＲを通じて抗原依存性の一次活性化を開始するもの（
一次細胞質シグナル伝達配列）、および抗原非依存的様式で、二次的なまたは共刺激性の
シグナルを提供するように作用するもの（二次細胞質シグナル伝達配列）。一部の態様で
は、ＣＡＲは、そのようなシグナル伝達要素のうちの一方または両方を含む。

【0160】

一部の態様では、ＣＡＲは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する、一次細胞質シグナ
ル伝達配列を含む。刺激性様式で作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体活
性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。Ｉ
ＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃＲガンマ
、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンに由来するものが挙げられる。
一部の実施形態では、ＣＡＲにおける細胞質シグナル伝達分子は、ＣＤ３ゼータに由来す
る、細胞質シグナル伝達ドメイン、その一部分、または配列を含む。

【0161】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激性受容体、たとえば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、
ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、およびＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインおよび／または膜貫通部
分を含む。一部の態様では、同じＣＡＲに、活性化構成要素および共刺激性構成要素の両
方が含まれる。

【0162】

一部の実施形態では、活性化ドメインは、１つのＣＡＲに含まれ、共刺激性構成要素は
、別の抗原を認識する別のＣＡＲによって提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲには
、活性化または刺激性ＣＡＲ、共刺激性ＣＡＲが含まれるが、いずれも、同じ細胞に発現
される（国際公開第２０１４／０５５６６８号を参照されたい）。一部の態様では、細胞
は、１つまたは複数の刺激性もしくは活性化ＣＡＲならびに／または共刺激性ＣＡＲを含
む。一部の実施形態では、細胞は、阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖら、Ｓｃｉ
． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５巻（２１５号）（２０１３年）を参照された
い）、たとえば、疾患または状態と関連するものおよび／またはそれに特異的なものでは
ない抗原を認識し、それによって、疾患を標的とするＣＡＲを通じて送達される活性化シ
グナルが、阻害性ＣＡＲがそのリガンドに結合することによって減少または阻害されて、
たとえば、標的外作用が低減される、ＣＡＲをさらに含む。

【0163】

ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３（たとえば、ＣＤ３
－ゼータ）細胞内ドメインに連結された、ＣＤ２８膜貫通およびシグナル伝達ドメインを
含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメイ
ンに連結された、キメラＣＤ２８およびＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）共刺
激性ドメインを含む。

【0164】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の、たとえば、２つまたはそれを上回
る、共刺激性ドメインおよび活性化ドメイン、たとえば、一次活性化ドメインを、細胞質
部分に含む。例示的なＣＡＲには、ＣＤ３－ゼータ、ＣＤ２８、および４－１ＢＢの細胞
内構成要素が含まれる。

【0165】

一部の実施形態では、ＣＡＲまたは他の抗原受容体は、さらに、マーカー、たとえば、
細胞表面マーカーを含み、このマーカーは、受容体、たとえば、細胞表面受容体の短縮バ
ージョン、たとえば、短縮型ＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）を発現する細胞の形質導入または操
作を確認するために使用することができる。一部の態様では、マーカーとしては、ＰＳＭ
Ａ、Ｈｅｒ２、ＣＤ３４、ＮＧＦＲ、または上皮成長因子受容体（たとえば、ｔＥＧＦＲ
）のすべてまたは一部（たとえば、短縮形態）が挙げられる。一部の実施形態では、マー
カーをコードする核酸は、リンカー配列、たとえば、切断可能なリンカー配列、たとえば
、Ｔ２Ａをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されている。たとえば、マーカ
ー、および必要に応じてリンカーの配列は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１４０３１６８７
号に開示されているように、任意のものであってもよく、これは、参照により本明細書に
組み込まれる。一部の実施形態では、マーカーは、ＰＣＴ特許出願公開第２０１１／０５
６８９４号に記載されている通りであってもよく、この内容は、その全体が組み込まれる
。たとえば、マーカーは、必要に応じて、リンカー配列、たとえば、Ｔ２Ａ切断可能なリ
ンカー配列に連結された、短縮型ＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）であり得る。

【0166】

一部の実施形態では、マーカーは、Ｔ細胞に天然に見出されない、またはＴ細胞の表面
に天然に見出されない、分子、たとえば、細胞表面タンパク質、またはその一部分である
。一部の実施形態では、分子は、非自己分子、たとえば、非自己タンパク質、すなわち、
細胞が養子移入される宿主の免疫系によって「自己」として認識されないものである。

【0167】

一部の実施形態では、マーカーは、治療的機能を果たさず、および／または遺伝子操作
のため、たとえば、操作が成功した細胞を選択するためのマーカーとして使用すること以
外の作用をもたらさない。他の実施形態では、マーカーは、治療用分子、または別の形で
何らかの所望される作用を発揮する分子、たとえば、ｉｎ ｖｉｖｏで遭遇する細胞のリ
ガンド、たとえば、養子移入およびリガンドとの遭遇の際に細胞の応答を強化および／も
しくは低下させる共刺激性もしくは免疫チェックポイント分子であってもよい。

【0168】

一部の事例では、ＣＡＲは、第１世代、第２世代、および／または第３世代のＣＡＲと
称される。一部の態様では、第１世代のＣＡＲは、単に、抗原結合時にＣＤ３鎖に誘導さ
れるシグナルを提供するものであり、一部の態様では、第２世代のＣＡＲは、そのような
シグナルおよび共刺激性シグナルを提供するもの、たとえば、共刺激性受容体、たとえば
、ＣＤ２８またはＣＤ１３７に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含むものであり、
一部の態様では、第３世代のＣＡＲは、異なる共刺激性受容体の複数の共刺激性ドメイン
を含むものである。

【0169】

一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含む細胞外部分を含
む。一部の態様では、キメラ抗原受容体は、抗体または断片を含む細胞外部分、ならびに
細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体または断片は、ｓｃＦｖ
を含み、細胞内ドメインは、ＩＴＡＭを含む。一部の態様では、細胞内シグナル伝達ドメ
インは、ＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖のゼータ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。一部
の実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインと
を連結する膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫
通部分を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞共刺激性分子の細胞内
ドメインを含む。細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、直接的または間接的に連結さ
れ得る。一部の実施形態では、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、スペーサー、た
とえば、本明細書に記載される任意のものによって、連結される。一部の実施形態では、
受容体は、膜貫通ドメインが由来する分子の細胞外部分、たとえば、ＣＤ２８細胞外部分
を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞共刺激性分子またはその機能
性バリアントに由来する細胞内ドメインを、たとえば、膜貫通ドメインと細胞内シグナル
伝達ドメインの間に、含む。一部の態様では、Ｔ細胞共刺激性分子は、ＣＤ２８または４
１ＢＢである。

【0170】

たとえば、一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、たとえば、抗体断片、ＣＤ２８の膜
貫通部分またはその機能性バリアントであるかまたはそれを含む膜貫通ドメイン、ならび
にＣＤ２８のシグナル伝達部分またはその機能性バリアントおよびＣＤ３ゼータのシグナ
ル伝達部分またはその機能性バリアントを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部
の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、たとえば、抗体断片、ＣＤ２８の膜貫通部分またはそ
の機能性バリアントであるかまたはそれを含む膜貫通ドメイン、ならびに４－１ＢＢのシ
グナル伝達部分またはその機能性バリアントおよびＣＤ３ゼータのシグナル伝達部分また
はその機能性バリアントを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部のそのような実
施形態では、受容体は、さらに、Ｉｇ分子、たとえば、ヒトＩｇ分子の一部分、たとえば
、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジを含むスペーサー、たとえば、ヒンジのみのス
ペーサーを含む。

【0171】

一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ
２８の膜貫通ドメイン（たとえば、受託番号Ｐ０１７４７．１）またはそのバリアントで
あるか、またはそれを含む。

【0172】

一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達要素は、
ヒトＣＤ２８の細胞内共刺激性シグナル伝達ドメインまたはその機能性バリアントもしく
は一部分、たとえば、天然のＣＤ２８タンパク質の１８６位～１８７位に、ＬＬからＧＧ
の置換を有するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、４－１ＢＢの
細胞内共刺激性シグナル伝達ドメイン（たとえば、受託番号Ｑ０７０１１．１）またはそ
の機能性バリアントもしくは一部分を含む。

【0173】

一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン
は、ヒトＣＤ３ゼータ刺激性シグナル伝達ドメイン、またはその機能性バリアント、たと
えば、ヒトＣＤ３ζ（受託番号Ｐ２０９６３．２）のアイソフォーム３の１１２ ＡＡ細
胞質ドメイン、または米国特許第７，４４６，１９０号もしくは米国特許第８，９１１，
９９３号に記載されているＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。

【0174】

一部の態様では、スペーサーは、ＩｇＧのヒンジ領域のみ、たとえば、ＩｇＧ４または
ＩｇＧ１のヒンジのみを含む。他の実施形態では、スペーサーは、必要に応じてＣＨ２ド
メインおよび／またはＣＨ３ドメインに連結された、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４由
来のヒンジであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、ＣＨ２ド
メインおよびＣＨ３ドメインに連結された、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジであ
る。一部の実施形態では、スペーサーは、ＣＨ３ドメインのみに連結された、Ｉｇヒンジ
、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジである。一部の実施形態では、スペーサーは、グリシン－セ
リンリッチ配列または他の可動性リンカー、たとえば、公知の可動性リンカーであるか、
またはそれを含む。

【0175】

たとえば、一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、たとえば、ｓｃＦｖを含む、抗体断
片、スペーサー、たとえば、免疫グロブリン分子の一部分、たとえば、重鎖分子のヒンジ
領域および／または１つもしくは複数の定常領域を含むスペーサー、たとえば、Ｉｇヒン
ジを含むスペーサー、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメインのすべてまたは一部分を含む膜貫通
ドメイン、ＣＤ２８由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル
伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体または断片、たとえば、ｓｃ
Ｆｖ、スペーサー、たとえば、Ｉｇヒンジを含むスペーサーのうちの任意のもの、ＣＤ２
８由来の膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３
ゼータ由来のシグナル伝達ドメインを含む。

【0176】

一部の実施形態では、そのようなＣＡＲ構築物をコードする核酸分子は、さらに、Ｔ２
Ａリボソームスキップエレメントおよび／またはｔＥＧＦＲ配列をコードする配列を、た
とえば、ＣＡＲをコードする配列の下流に含む。一部の実施形態では、抗原受容体（たと
えば、ＣＡＲ）を発現するＴ細胞はまた、短縮型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）を非免疫原性選
択エピトープとして発現するように生成することができ（たとえば、同じ構築物から２つ
のタンパク質を発現するように、Ｔ２Ａリボソームスイッチによって分離されたＣＡＲお
よびＥＧＦＲｔをコードする構築物を導入することによって）、これを、次いで、そのよ
うな細胞を検出するためのマーカーとして使用することができる（たとえば、米国特許第
８，８０２，３７４号を参照されたい）。

【0177】

対象に投与された細胞によって発現される組換え受容体、たとえば、ＣＡＲは、一般に
、処置されている疾患もしくは状態またはその細胞に発現される、それらと関連する、お
よび／またはそれらに特異的である分子を認識するか、またはそれに特異的に結合する。
分子、たとえば、抗原に特異的に結合すると、受容体は、一般に、免疫刺激性シグナル、
たとえば、ＩＴＡＭにより伝達されるシグナルを、細胞に送達し、それによって、疾患ま
たは状態を標的とする免疫応答を促進する。たとえば、一部の実施形態では、細胞は、疾
患もしくは状態の細胞もしくは組織によって発現されるかまたは疾患もしくは状態と関連
する抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。

【0178】

ＴＣＲ

【0179】

一部の実施形態では、遺伝子修飾には、標的ポリペプチドのペプチドエピトープまたは
Ｔ細胞エピトープ、たとえば、腫瘍、ウイルス、または自己免疫タンパク質の抗原を認識
する、１つまたは複数のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその抗原結合性部分を発現するよ
うに、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。

【0180】

一部の実施形態では、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、可変α鎖およびβ鎖（そ
れぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβとして公知である）または可変γ鎖およびδ鎖（それぞ
れ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδとして公知である）、またはその抗原結合性部分を含む、分
子であり、これは、ＭＨＣ分子に結合したペプチドに特異的に結合することができる。一
部の実施形態では、ＴＣＲは、αβ形態である。典型的には、αβ形態およびγδ形態で
存在するＴＣＲは、一般に、構造が類似しているが、それらを発現するＴ細胞は、異なる
解剖学的位置または機能を有し得る。ＴＣＲは、細胞の表面上に見出すことができるか、
または可溶性形態で見出すことができる。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球
）の表面上に見出され、ここで、ＴＣＲは、一般に、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子
に結合した抗原を認識することを担う。

【0181】

別途言及されない限り、「ＴＣＲ」という用語は、完全ＴＣＲ、ならびにその抗原結合
性部分または抗原結合性断片を包含すると理解されるものとする。一部の実施形態では、
ＴＣＲは、インタクトまたは全長ＴＣＲであり、αβ形態またはγδ形態のＴＣＲを含む
。一部の実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲよりも短いが、ＭＨＣ分子に結合した特定
のペプチドに結合する、たとえば、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合する、抗原結合性部分
である。一部の事例では、ＴＣＲの抗原結合性部分または断片は、全長またはインタクト
なＴＣＲの構造ドメインの一部分のみしか含まない場合があるが、依然として、完全ＴＣ
Ｒが結合する、ペプチドエピトープ、たとえば、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合すること
ができる。一部の事例では、抗原結合性部分は、ＴＣＲの可変ドメイン、たとえば、ＴＣ
Ｒの可変α鎖および可変β鎖を含み、これは、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体に結合する
ための結合部位を形成するのに十分である。一般に、ＴＣＲの可変鎖は、ペプチド、ＭＨ
Ｃ、および／またはＭＨＣ－ペプチド複合体の認識に関与する相補性決定領域を含む。

【0182】

一部の実施形態では、ＴＣＲの可変ドメインは、超可変性ループ、または相補性決定領
域（ＣＤＲ）を含み、これらは、一般に、抗原認識ならびに結合能力および特異性への主
要な寄与因子である。一部の実施形態では、ＴＣＲのＣＤＲまたはその組合せにより、所
与のＴＣＲ分子の抗原結合性部位のすべてまたは実質的にすべてが形成される。ＴＣＲ鎖
の可変領域内の様々なＣＤＲは、一般に、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分離され
ており、この領域は、一般に、ＣＤＲと比較して、ＴＣＲ分子間で低い変動性を呈する（
たとえば、Ｊｏｒｅｓら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ
．、８７巻：９１３８頁、１９９０年、Ｃｈｏｔｈｉａら、ＥＭＢＯ Ｊ．、７巻：３７
４５頁、１９８８年を参照されたく、また、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７巻：５５頁、２００３年も参照されたい）。一部の実施形態では
、ＣＤＲ３は、抗原結合もしくは特異性を担う主要なＣＤＲであるか、または所与のＴＣ
Ｒ可変領域における３つのＣＤＲのなかで、抗原認識および／もしくはペプチド－ＭＨＣ
複合体のプロセシングされたペプチド部分との相互作用に最も重要なものである。一部の
状況では、アルファ鎖のＣＤＲ１は、ある特定の抗原性ペプチドのＮ末端部分と相互作用
し得る。一部の状況では、ベータ鎖のＣＤＲ１は、ペプチドのＣ末端部分と相互作用し得
る。一部の状況では、ＣＤＲ２は、ＭＨＣ－ペプチド複合体のＭＨＣ部分との相互作用ま
たはその認識に最も強力に寄与するか、またはそれを担う主要なＣＤＲである。一部の実
施形態では、β鎖の可変領域は、さらに、超可変領域（ＣＤＲ４またはＨＶＲ４）を含み
得、この領域は、一般に、スーパー抗原結合には関与するが、抗原認識には関与しない（
Ｋｏｔｂ（１９９５年）、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗ
ｓ、８巻：４１１～４２６頁）。

【0183】

一部の実施形態では、ＴＣＲはまた、定常ドメイン、膜貫通ドメイン、および／または
短い細胞質側尾部を含み得る（たとえば、Ｊａｎｅｗａｙら、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ： Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａ
ｓｅ、第３版、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐ．４：
３３頁、１９９７年を参照されたい）。一部の態様では、ＴＣＲのそれぞれの鎖は、１つ
のＮ末端側免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領
域、およびＣ末端側の短い細胞質側尾部を有し得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、シ
グナル伝達を媒介することに関与する、ＣＤ３複合体の不変タンパク質と会合している。

【0184】

一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖は、１つまたは複数の定常ドメインを含む。たとえば、
所与のＴＣＲ鎖（たとえば、α鎖またはβ鎖）の細胞外部分は、２つの免疫グロブリン様
ドメイン、たとえば、可変ドメイン（たとえば、ＶαまたはＶβ、典型的には、Ｋａｂａ
ｔの番号付けに基づいて、アミノ酸１～１１６（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ
Ｄｅｐｔ． Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｐｕｂｌｉｃ
Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈ
ｅａｌｔｈ、１９９１年、第５版））および細胞膜に隣接する定常ドメイン（たとえば、
α鎖定常ドメインもしくはＣα、典型的には、Ｋａｂａｔの番号付けに基づいて鎖の１１
７位～２５９位、またはβ鎖定常ドメインもしくはＣβ、典型的にはＫａｂａｔに基づい
て鎖の１１７位～２９５位）を含み得る。たとえば、一部の事例では、２つの鎖によって
形成されるＴＣＲの細胞外部分は、２つの膜近傍定常ドメイン、および２つの膜遠位可変
ドメインを含み、これらの可変ドメインは、それぞれがＣＤＲを含む。ＴＣＲの定常ドメ
インは、短い接続配列を含み得、そこで、システイン残基がジスルフィド結合を形成し、
それによってＴＣＲの２つの鎖が連結される。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲが
、定常ドメインに２つのジスルフィド結合を含むように、α鎖およびβ鎖のそれぞれにさ
らなるシステイン残基を有してもよい。

【0185】

一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫
通ドメインは、正に荷電している。一部の事例では、ＴＣＲ鎖は、細胞質側尾部を含む。
一部の事例では、この構造により、ＴＣＲは、ＣＤ３およびそのサブユニットなど、他の
分子と会合することが可能である。たとえば、膜貫通領域を有する定常ドメインを含むＴ
ＣＲは、タンパク質を細胞膜に固定し、ＣＤ３シグナル伝達装置または複合体の不変サブ
ユニットと会合することができる。ＣＤ３シグナル伝達サブユニット（たとえば、ＣＤ３
γ鎖、ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３ε鎖、およびＣＤ３ζ鎖）の細胞内尾部は、ＴＣＲ複合体のシ
グナル伝達能力に関与する１つまたは複数の免疫受容体活性化チロシンモチーフまたはＩ
ＴＡＭを含む。

【0186】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、αおよびβ（または必要に応じてγおよびδ）の２つ
の鎖のヘテロ二量体であってもよく、または一本鎖ＴＣＲ構築物であってもよい。一部の
実施形態では、ＴＣＲは、たとえば、１つまたは複数のジスルフィド結合によって連結さ
れた、２つの別個の鎖（α鎖およびβ鎖またはγ鎖およびδ鎖）を含む、ヘテロ二量体で
ある。

【0187】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、公知のＴＣＲ配列、たとえば、Ｖα、β鎖の配列から
生成することができ、これらの鎖の実質的に全長のコード配列は、容易に入手可能である
。Ｖ鎖配列を含め、全長ＴＣＲ配列を、細胞源から得るための方法は、周知である。一部
の実施形態では、ＴＣＲをコードする核酸は、様々な源から、たとえば、所与の１つまた
は複数の細胞内にある、もしくは所与の１つまたは複数の細胞から単離されたＴＣＲをコ
ードする核酸のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、または公的に入手可能なＴＣＲ
ＤＮＡ配列の合成によって、得ることができる。

【0188】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、生物学的源から、たとえば、細胞から、たとえば、Ｔ
細胞（たとえば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマ、または他の公的に入手可
能な源から、得られる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで単離された細
胞から得ることができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、胸腺選択されたＴＣＲである
。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ネオエピトープ制限ＴＣＲである。一部の実施形態で
は、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであってもよい。一部の
実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、ＴＣＲの配列の知識から合成で生成
することができる。

【0189】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、候補ＴＣＲライブラリーを、標的ポリペプチド抗原ま
たはその標的Ｔ細胞エピトープに対してスクリーニングすることにより特定または選択さ
れたＴＣＲから生成される。ＴＣＲライブラリーは、ＰＢＭＣ、脾臓、または他のリンパ
系器官に存在する細胞を含め、対象から単離したＴ細胞からのＶαおよびＶβのレパート
リーの増幅によって生成することができる。一部の事例では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ
球（ＴＩＬ）から増幅することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲライブラリーは、
ＣＤ４^＋細胞またはＣＤ８^＋細胞から生成することができる。一部の実施形態では、ＴＣ
Ｒは、正常または健常な対象のＴ細胞源から、すなわち、正常なＴＣＲライブラリーから
増幅することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、罹患した対象のＴ細胞源から、
すなわち、罹患ＴＣＲライブラリーから増幅することができる。一部の実施形態では、た
とえば、ヒトから得られた試料、たとえば、Ｔ細胞におけるＲＴ－ＰＣＲによって、Ｖα
およびＶβの遺伝子レパートリーを増幅するために、縮重プライマーが使用される。一部
の実施形態では、ｓｃＴｖライブラリーを、ナイーブＶαおよびＶβライブラリーからア
センブルしてもよく、ここで、増幅された産物は、リンカーによって分離されるようにク
ローニングまたはアセンブルされる。対象および細胞の源に応じて、ライブラリーは、Ｈ
ＬＡアレル特異的となり得る。あるいは、一部の実施形態では、ＴＣＲライブラリーは、
親または足場ＴＣＲ分子の変異生成または多様化によって、生成することができる。一部
の態様では、ＴＣＲは、たとえば、α鎖またはβ鎖の変異生成などによって、指向型進化
に供される。一部の態様では、ＴＣＲのＣＤＲ内の特定の残基が、改変される。一部の実
施形態では、選択されたＴＣＲは、親和性成熟によって修飾され得る。一部の実施形態で
は、抗原特異的Ｔ細胞は、たとえば、ペプチドに対するＣＴＬ活性を評価するスクリーニ
ングによって、選択され得る。一部の態様では、ＴＣＲ、たとえば、抗原特異的Ｔ細胞に
存在するものは、結合活性、たとえば、抗原に対する特定の親和性または結合力などによ
って、選択され得る。

【0190】

一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、修飾または操作が行われた
ものである。一部の実施形態では、指向型進化方法は、改変された特性を有する、たとえ
ば、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体に対して高い親和性を有する、ＴＣＲを生成するため
に使用される。一部の実施形態では、指向型進化は、酵母ディスプレイ（Ｈｏｌｌｅｒら
（２００３年）、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ、４巻、５５～６２頁；Ｈｏｌｌｅｒら（２０
００年）、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ、９７巻、５３８７～９
２頁）、ファージディスプレイ（Ｌｉら（２００５年）、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
、２３巻、３４９～５４頁）、またはＴ細胞ディスプレイ（Ｃｈｅｒｖｉｎら（２００８
年）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、３３９巻、１７５～８４頁）を含むがこれ
らに限定されない、ディスプレイ方法によって達成される。一部の実施形態では、ディス
プレイアプローチは、公知の親または参照ＴＣＲの操作または修飾を伴う。たとえば、一
部の事例では、野生型ＴＣＲが、変異生成されたＴＣＲを産生するための鋳型として使用
され得、ここで、ＣＤＲの１つまたは複数の残基が変異され、所望される改変された特性
、たとえば、所望される標的抗原に対する高い親和性を有する変異体が、選択される。

【0191】

一部の実施形態では、目的のＴＣＲを産生または生成する際に使用される標的ポリペプ
チドのペプチドは、当業者に公知であるか、または当業者によって容易に特定することが
できる。一部の実施形態では、ＴＣＲまたは抗原結合性部分の生成に使用するのに好適な
ペプチドは、目的の標的ポリペプチド、たとえば、以下に記載される標的ポリペプチドに
おけるＨＬＡ制限モチーフの存在に基づいて判定することができる。一部の実施形態では
、ＨＬＡ－Ａ０２０１結合モチーフ、プロテアソームおよび免疫プロテアソームの切断部
位、ならびにペプチドは、当業者に公知のコンピュータ予測モデルを使用して特定される
。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩ結合部位の予測に関して、そのようなモデルとし
ては、ＰｒｏＰｒｅｄ１（ＳｉｎｇｈおよびＲａｇｈａｖａ（２００１年）、Ｂｉｏｉｎ
ｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１７巻（１２号）：１２３６～１２３７頁）、およびＳＹＦＰＥＩ
ＴＨＩ（Ｓｃｈｕｌｅｒら（２００７年）、Ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、４０９巻（１号）：７５～９
３頁、２００７年を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施
形態では、ＭＨＣ制限エピトープは、ＨＬＡ－Ａ０２０１であり、これは、全コーカソイ
ド人類のおよそ３９～４６％に発現され、したがって、ＴＣＲまたは他のＭＨＣ－ペプチ
ド結合性分子の調製に使用するのに好適なＭＨＣ抗原の選択肢を表す。

【0192】

一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、組換えで産生された天然の
タンパク質またはその変異形態であり得、ここで、１つまたは複数の特性、たとえば、結
合特性が、改変されている。一部の実施形態では、ＴＣＲは、様々な動物種、たとえば、
ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳動物のうちの１つに由来し得る。ＴＣＲは、細胞
結合型または可溶性形態であり得る。一部の実施形態では、提供される方法の目的では、
ＴＣＲは、細胞の表面に発現される細胞結合型の形態である。

【0193】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲである。一部の実施形態では、ＴＣＲは、
抗原結合性部分である。一部の実施形態では、ＴＣＲは、二量体ＴＣＲ（ｄＴＣＲ）であ
る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃ－ＴＣＲ）である。一部の実施
形態では、ｄＴＣＲまたはｓｃＴＣＲは、国際公開第０３／０２０７６３号、同第０４／
０３３６８５号、同第２０１１／０４４１８６号に記載されている構造を有し、これらは
、参照により本明細書に組み込まれる。

【0194】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通配列に対応する配列を含む。一部の実施形態で
は、ＴＣＲは、細胞質配列に対応する配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤ
３とＴＣＲ複合体を形成することができる。一部の実施形態では、ｄＴＣＲまたはｓｃＴ
ＣＲを含め、ＴＣＲのいずれも、Ｔ細胞の表面に活性なＴＣＲをもたらす、シグナル伝達
ドメインに連結され得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、細胞の表面上に発現される。

【0195】

一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、ＴＣＲα鎖の可変領域配列に対応する配列が、ＴＣ
Ｒα鎖の定常領域の細胞外配列に対応する配列のＮ末端に融合された、第１のポリペプチ
ドと、ＴＣＲβ鎖の可変領域配列に対応する配列が、ＴＣＲβ鎖の定常領域の細胞外配列
に対応する配列のＮ末端に融合された、第２のポリペプチドと、を含み、第１および第２
のポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結されている。一部の実施形態では、結
合は、天然の二量体αβ ＴＣＲに存在する天然の鎖間ジスルフィド結合に対応し得る。
一部の実施形態では、鎖間ジスルフィド結合は、天然のＴＣＲには存在しない。たとえば
、一部の実施形態では、１つまたは複数のシステインが、ｄＴＣＲポリペプチド対の定常
領域細胞外配列に組み込まれ得る。一部の事例では、天然および非天然の両方のジスルフ
ィド結合が、所望され得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、膜に固定するために、膜貫
通配列を含む。

【0196】

一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、可変αドメイン、定常αドメイン、および定常αド
メインのＣ末端に結合した第１の二量体化モチーフを含むＴＣＲα鎖、ならびに可変βド
メイン、定常βドメイン、および定常βドメインのＣ末端に結合した第１の二量体化モチ
ーフを含むＴＣＲβ鎖を含み、ここで、第１および第２の二量体化モチーフは、容易に相
互作用して、第１の二量体化モチーフ内のアミノ酸と、第２の二量体化モチーフ内のアミ
ノ酸との間で共有結合を形成し、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖同士を連結する。

【0197】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、ｓｃＴＣＲである。典型的には、ｓｃＴＣＲは、当業
者に公知の方法を使用して生成することができ、たとえば、Ｓｏｏ Ｈｏｏ， Ｗ． Ｆ
．ら、ＰＮＡＳ （ＵＳＡ）、８９巻、４７５９頁（１９９２年）；Ｗｕｌｆｉｎｇ，
Ｃ．およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ， Ａ．、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２４２巻、６５
５頁（１９９４年）；Ｋｕｒｕｃｚ， Ｉ．ら、ＰＮＡＳ （ＵＳＡ）、９０巻、３８３
０頁（１９９３年）；ＰＣＴ出願公開第９６／１３５９３号、同第９６／１８１０５号、
同第９９／６０１２０号、同第９９／１８１２９号、同第０３／０２０７６３号、同第２
０１１／０４４１８６号、およびＳｃｈｌｕｅｔｅｒ， Ｃ． Ｊ．ら、Ｊ． Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．、２５６巻、８５９頁（１９９６年）を参照されたい。一部の実施形態では
、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲ鎖の会合を促進するために、導入された非天然の鎖間ジスルフィ
ド結合を含む（たとえば、ＰＣＴ出願公開第０３／０２０７６３号を参照されたく、これ
は、参照により本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、そのＣ
末端に融合された異種ロイシンジッパーにより、鎖の会合が促進される、非ジスルフィド
結合の短縮型ＴＣＲである（たとえば、ＰＣＴ出願公開第９９／６０１２０号を参照され
たく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲ
は、ペプチドリンカーを介してＴＣＲβ可変ドメインに共有結合した、ＴＣＲα可変ドメ
インを含む（たとえば、ＰＣＴ出願公開第９９／１８１２９号を参照されたく、これは、
参照により本明細書に組み込まれる）。

【0198】

一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変領域に対応するアミノ酸配列によ
って構築される第１のセグメント、ＴＣＲβ鎖定常ドメイン細胞外配列に対応するアミノ
酸配列のＮ末端に融合されたＴＣＲβ鎖可変領域配列に対応するアミノ酸配列によって構
築される第２のセグメント、および第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末
端に連結するリンカー配列を含む。

【0199】

一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、α鎖細胞外定常ドメイン配列のＮ末端に融合され
たα鎖可変領域配列によって構築される第１のセグメント、ならびにβ鎖細胞外定常配列
のＮ末端および膜貫通配列に融合されたβ鎖可変領域配列によって構築される第２のセグ
メント、ならびに必要に応じて、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端
に連結するリンカー配列を含む。

【0200】

一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、β鎖細胞外定常ドメイン配列のＮ末端に融合され
たＴＣＲβ鎖可変領域配列によって構築される第１のセグメント、ならびにα鎖細胞外定
常配列のＮ末端および膜貫通配列に融合されたα鎖可変領域配列によって構築される第２
のセグメント、ならびに必要に応じて、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントの
Ｎ末端に連結するリンカー配列を含む。

【0201】

一部の実施形態では、第１および第２のＴＣＲセグメントを連結するｓｃＴＣＲのリン
カーは、ＴＣＲ結合特異性を保持しながら、単一のポリペプチド鎖を形成することができ
る、任意のリンカーであり得る。一部の実施形態では、リンカー配列は、たとえば、式－
Ｐ－ＡＡ－Ｐ－を有し得、ここで、Ｐは、プロリンであり、ＡＡは、アミノ酸配列を表し
、アミノ酸は、グリシンおよび／またはセリンである。一部の実施形態では、第１および
第２のセグメントは、それらの可変領域配列が、そのような結合のための配向となるよう
に、対合される。したがって、一部の事例では、リンカーは、第１のセグメントのＣ末端
と第２のセグメントのＮ末端との間の距離、または逆も同様である距離に及ぶのに十分で
あるが、ｓｃＴＣＲの標的リガンドへの結合を遮断または低減するほど長くはない、長さ
を有する。一部の実施形態では、リンカーは、１０個～４５個もしくは約１０個～約４５
個のアミノ酸、たとえば、１０個～３０個のアミノ酸、または２６個～４１個のアミノ酸
残基、たとえば、２９個、３０個、３１個、または３２個のアミノ酸を含み得る。一部の
実施形態では、リンカーは、式－ＰＧＧＧ－（ＳＧＧＧＧ）５－Ｐ－を有し、ここで、Ｐ
は、プロリンであり、Ｇは、グリシンであり、Ｓは、セリンである。一部の実施形態では
、リンカーは、配列ＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＧＫＳを有する。

【0202】

一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、α鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基
を、β鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基に連結させる、共有結合のジスルフ
ィド結合を含む。一部の実施形態では、天然のＴＣＲにおける鎖間ジスルフィド結合は、
存在しない。たとえば、一部の実施形態では、１つまたは複数のシステインが、ｓｃＴＣ
Ｒポリペプチドの第１および第２のセグメントの定常領域細胞外配列に組み込まれ得る。
一部の事例では、天然および非天然の両方のジスルフィド結合が、所望され得る。

【0203】

導入された鎖間ジスルフィド結合を含むｄＴＣＲまたはｓｃＴＣＲの一部の実施形態で
は、天然のジスルフィド結合は、存在しない。一部の実施形態では、天然の鎖間ジスルフ
ィド結合を形成している天然のシステインのうちの１つまたは複数は、別の残基、たとえ
ば、セリンまたはアラニンに置換されている。一部の実施形態では、導入されたジスルフ
ィド結合は、第１および第２のセグメントにおける非システイン残基を、システインに変
異させることによって、形成され得る。ＴＣＲの例示的な非天然のジスルフィド結合は、
ＰＣＴ出願公開第２００６／０００８３０号に記載されており、これは、参照により本明
細書に組み込まれる。

【0204】

一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性断片は、標的抗原に対して、１０－
５Ｍ～１０－１２Ｍまたは約１０－５Ｍ～約１０－１２Ｍならびにその中に含まれるすべ
ての個々の値および範囲の平衡結合定数で、親和性を呈する。一部の実施形態では、標的
抗原は、ＭＨＣ－ペプチド複合体またはリガンドである。

【0205】

一部の実施形態では、ＴＣＲ、たとえば、α鎖およびβ鎖をコードする１つまたは複数
の核酸は、ＰＣＲまたは他の好適な手段によって増幅させ、１つまたは複数の好適な発現
ベクターにクローニングすることができる。発現ベクターは、任意の好適な組換え発現ベ
クターであり得、任意の好適な宿主に形質転換またはトランスフェクションを行うために
使用することができる。好適なベクターとしては、増やす、および増大させること、また
は発現させること、またはその両方のために設計されたもの、たとえば、プラスミドおよ
びウイルスが挙げられる。

【0206】

一部の実施形態では、ベクターは、ｐＵＣ系列（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ系列（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ＬａＪｏｌｌａ
、Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴ系列（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）、ｐＧＥ
Ｘ系列（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、また
はｐＥＸ系列（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．）のベクターであ
り得る。一部の事例では、バクテリオファージベクター、たとえば、λＧ１０、λＧＴ１
１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４、およびλＮＭ１１４９もま
た、使用することができる。一部の実施形態では、植物発現ベクターを使用することがで
き、これには、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１、およ
びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が含まれる。一部の実施形態では、動物発現ベクタ
ーとしては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、ｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げら
れる。一部の実施形態では、ウイルスベクター、たとえば、レトロウイルスベクターが使
用される。

【0207】

一部の実施形態では、組換え発現ベクターは、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して、
調製することができる。一部の実施形態では、ベクターは、調節配列、たとえば、転写お
よび翻訳開始および終結コドンを含み得るが、これらは、適宜、ベクターを導入しようと
する宿主の種類（たとえば、細菌、真菌、植物、または動物）に特異的であり、ベクター
がＤＮＡに基づくかＲＮＡに基づくかが考慮される。一部の実施形態では、ベクターは、
ＴＣＲまたは抗原結合性部分（または他のＭＨＣ－ペプチド結合性分子）をコードするヌ
クレオチド配列に作動可能に連結された、非天然のプロモーターを含み得る。一部の実施
形態では、プロモーターは、非ウイルスプロモーターまたはウイルスプロモーター、たと
えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプ
ロモーター、およびマウス幹細胞ウイルスの長い末端反復に見出されるプロモーターであ
り得る。当業者に公知の他のプロモーターもまた、企図される。

【0208】

一部の実施形態では、ＴＣＲをコードするベクターを生成するために、α鎖およびβ鎖
が、目的のＴＣＲを発現するＴ細胞クローンから単離した全ｃＤＮＡからＰＣＲ増幅され
、発現ベクターにクローニングされる。一部の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、同じベ
クターにクローニングされる。一部の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、異なるベクター
にクローニングされる。一部の実施形態では、生成されたα鎖およびβ鎖は、レトロウイ
ルスベクター、たとえば、レンチウイルスベクターに組み込まれる。

【0209】

多重標的化

【0210】

一部の実施形態では、遺伝子修飾には、それぞれが、同じかまたは異なる抗原を認識し
、一部の実施形態では、それぞれが、異なる細胞内シグナル伝達要素を含む、２つまたは
それを上回る遺伝子操作された受容体を細胞上に発現するように、細胞を遺伝子修飾する
ことが含まれる。そのような多重標的化戦略は、たとえば、ＰＣＴ特許出願公開第２０１
４／０５５６６８号Ａ１およびＦｅｄｏｒｏｖら、Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ、５巻（２１５頁）（２０１３年）に記載されている。

【0211】

たとえば、一部の実施形態では、細胞は、一般に、第１の受容体によって認識される抗
原、たとえば、第１の抗原に特異的に結合したときに、細胞に活性化シグナルを誘導する
ことができる、第１の遺伝子操作された抗原受容体（たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）を
発現する受容体を含む。一部の実施形態では、細胞は、一般に、第２の受容体によって認
識される第２の抗原に特異的に結合したときに、免疫細胞に共刺激性シグナルを誘導する
ことができる、第２の遺伝子操作された抗原受容体（たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）、
たとえば、キメラ共刺激性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、第１の抗原および
第２の抗原は、同じである。一部の実施形態では、第１の抗原および第２の抗原は、異な
る。

【0212】

一部の実施形態では、第１および／または第２の遺伝子操作された抗原受容体（たとえ
ば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）は、細胞に活性化シグナルを誘導することができる。一部の実
施形態では、受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含む、細胞内シグナル伝達
要素を含む。一部の実施形態では、第１の受容体によって誘導される活性化は、ＩＴＡＭ
リン酸化および／もしくはＩＴＡＭにより媒介されるシグナル伝達カスケードの開始、免
疫シナプスの形成および／もしくは結合した受容体の近傍の分子（たとえば、ＣＤ４また
はＣＤ８など）のクラスタリング、１つまたは複数の転写因子、たとえば、ＮＦ－κＢお
よび／もしくはＡＰ－１の活性化、ならびに／またはサイトカインなどの因子の遺伝子発
現、増殖、および／もしくは生存の誘導など、免疫応答の開始をもたらすシグナル伝達ま
たは細胞におけるタンパク質発現の変化を含む。

【0213】

一部の実施形態では、第１および／または第２の受容体は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４
－１ＢＢ）、ＯＸ４０、および／またはＩＣＯＳなどの共刺激性受容体の細胞内シグナル
伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、第１および第２の受容体は、異なる共刺激性
受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、第１の受容体が、Ｃ
Ｄ２８共刺激性シグナル伝達領域を含み、第２の受容体が、４－１ＢＢ共刺激性シグナル
伝達領域を含むか、または逆も同様である。

【0214】

一部の実施形態では、第１および／または第２の受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様
モチーフを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、および共刺激性受容体の細胞内シグナル伝
達ドメインの両方を含む。

【0215】

一部の実施形態では、第１の受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含む細胞
内シグナル伝達ドメインを含み、第２の受容体は、共刺激性受容体の細胞内シグナル伝達
ドメインを含む。同じ細胞において誘導される活性化シグナルと組み合わせた共刺激性シ
グナルは、免疫応答、たとえば、強力かつ持続的な免疫応答、たとえば、遺伝子発現の増
加、サイトカインおよび他の因子の分泌、ならびに細胞殺滅などのＴ細胞により媒介され
るエフェクター機能をもたらすものである。

【0216】

一部の実施形態では、第１の受容体単独のライゲーションも、第２の受容体単独のライ
ゲーションも、強力な免疫応答を誘導しない。一部の態様では、１つの受容体のみがライ
ゲーションされる場合、細胞は、抗原に耐性もしくは非応答性となるか、または阻害され
るようになる、ならびに／あるいは増殖するようにも、因子を分泌するようにも、エフェ
クター機能を実行するようにも誘導されない。一部のそのような実施形態では、しかしな
がら、複数の受容体がライゲーションされる場合、たとえば、第１および第２の抗原を発
現する細胞の遭遇時に、たとえば、１つまたは複数のサイトカインの分泌、増殖、持続、
および／または標的細胞の細胞傷害性殺滅などの免疫エフェクター機能の実行によって示
される、所望される応答、たとえば、完全な免疫活性化または刺激が達成される。

【0217】

一部の実施形態では、２つの受容体は、それぞれ、細胞に、活性化シグナルおよび阻害
性シグナルを誘導し、結果として、受容体のうちの一方がその抗原に結合することにより
、細胞が活性化されるか、または応答が誘導されるが、第２の阻害性受容体がその抗原に
結合することにより、その応答を抑制または低下させるシグナルが誘導されることになる
。例は、活性化ＣＡＲおよび阻害性ＣＡＲまたはｉＣＡＲの組合せである。たとえば、活
性化ＣＡＲが、疾患または状態に発現されるが正常細胞にも発現される抗原に結合し、阻
害性受容体が、正常細胞に発現されるが疾患または状態の細胞には発現されない別の抗原
に結合するような戦略を、使用することができる。

【0218】

一部の実施形態では、多重標的化戦略は、特定の疾患または状態と関連する抗原が、非
罹患細胞に発現される、および／または一過的（たとえば、遺伝子操作と関連する刺激の
際に）もしくは恒久的に操作細胞自体に発現される場合に、利用される。そのような事例
では、２つの別個および個々の特定の抗原受容体のライゲーションを必要とすることによ
って、特異性、選択性、および／または有効性が、改善され得る。

【0219】

一部の実施形態では、複数の抗原、たとえば、第１および第２の抗原は、標的とされる
細胞、組織、または疾患もしくは状態、たとえば、がん細胞に、発現される。一部の態様
では、細胞、組織、疾患、または状態は、多発性骨髄腫または多発性骨髄腫細胞である。
一部の実施形態では、複数の抗原のうちの１つまたは複数はまた、一般に、細胞療法で標
的とすることが所望されない細胞、たとえば、正常もしくは非罹患の細胞もしくは組織、
および／または操作細胞自体に発現される。そのような実施形態では、細胞の応答を達成
するために複数の受容体のライゲーションを必要とすることにより、特異性および／また
は有効性が達成される。

【0220】

一部の実施形態では、細胞の修飾は、収集後かつ極低温で凍結および／または保管する
前に、細胞の分析に基づいて行われる。細胞は、極低温保管の前および／または後に、分
析に基づいて修飾してもよい。一部の実施形態では、細胞の修飾は、極低温保管後の解凍
の後に、細胞の分析に基づいて行われる。一部の実施形態では、分析は、ＣＤ４^＋細胞の
ＣＤ８^＋細胞に対する比を判定することを含む。一部の実施形態では、極低温後の修飾の
条件、たとえば、細胞をインキュベートするための時間、細胞をインキュベートするため
の温度、細胞刺激物質の使用および濃度、ならびに細胞を遺伝子修飾するためのステップ
は、分析に基づいて選択され得るか、またはＣＤ４^＋細胞のＣＤ８^＋細胞に対する比に基
づいて選択され得る。

【0221】

細胞を操作するためのベクター

【0222】

組換え受容体および／またはＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（核酸分子）は、そ
のような受容体を発現するように細胞を遺伝子操作するためのベクターに含まれ得る。一
部の実施形態では、ベクターまたは構築物は、ポリペプチドまたは受容体の発現を作動さ
せるために、それらをコードするヌクレオチドに作動可能に連結された１つまたは複数の
プロモーターを含む。一部の実施形態では、プロモーターは、１つまたは１つを上回る核
酸分子に作動可能に連結されている。一部の事例では、ベクターは、ウイルスベクター、
たとえば、レトロウイルスベクター、たとえば、レンチウイルスベクターまたはガンマレ
トロウイルスベクターである。一部の実施形態では、組換え受容体をコードするポリヌク
レオチド、たとえば、ベクターは、たとえば、レトロウイルス形質導入、トランスフェク
ション、または形質転換によって、培養された細胞を含む組成物に導入される。

【0223】

遺伝子操作された構成要素、たとえば、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲ
の導入のための様々な方法は、周知であり、提供される方法および組成物で使用すること
ができる。例示的な方法としては、ウイルスベクター、たとえば、レトロウイルスまたは
レンチウイルス、非ウイルスベクターまたはトランスポゾン、たとえば、スリーピングビ
ューティートランスポゾンシステムによるものを含む、ポリペプチドまたは受容体をコー
ドする核酸の移入のためのものが挙げられる。遺伝子移入の方法としては、形質導入、エ
レクトロポレーション、または細胞内への遺伝子の移入をもたらす他の方法を挙げること
ができる。

【0224】

一部の実施形態では、遺伝子移入は、たとえば、サイトカインまたは活性化マーカーの
発現によって測定されるように、まず、細胞を、たとえば増殖、生存、および／または活
性化の応答を誘導する刺激と合わせることなどによって、細胞を刺激すること、続いて、
活性化された細胞の形質導入、ならびに培養における臨床適用に十分な数への増大によっ
て、達成される。

【0225】

一部の状況では、刺激因子（たとえば、リンホカインまたはサイトカイン）、たとえば
、対象における毒性と関連する因子の過剰発現が、潜在的に対象において望ましくない予
後または有効性の低下をもたらし得る可能性に対して防御することが、望ましい場合があ
る。したがって、一部の状況では、操作細胞は、たとえば、養子免疫療法での投与の際に
、細胞をｉｎ ｖｉｖｏでの陰性選択を受けやすくさせる、遺伝子セグメントを含む。た
とえば、一部の態様では、細胞は、細胞を投与する患者のｉｎ ｖｉｖｏ条件の変化の結
果として、細胞が排除され得るように、操作される。陰性選択可能な表現型は、投与され
る薬剤、たとえば、化合物に対する選択性を付与する遺伝子の挿入により生じ得る。陰性
選択可能な遺伝子としては、ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスＩ型
チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－Ｉ ＴＫ）遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１巻、：
２２３頁、１９７７年）、細胞内ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｐ
ｈｏｓｐｈｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞内アデニ
ンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、細菌シトシンデアミナーゼ（
Ｍｕｌｌｅｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ．、８９巻：
３３頁（１９９２年））などが挙げられる。

【0226】

一部の実施形態では、組換え核酸は、組換え感染性ウイルス粒子、たとえば、シミアン
ウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などに由来
するベクターを使用して、細胞に移入される。一部の実施形態では、組換え核酸は、組換
えレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクター、たとえば、ガンマレトロウイ
ルスベクターを使用して、Ｔ細胞に移入される（たとえば、Ｋｏｓｔｅら（２０１４年）
、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、２０１４年４月３日、ｄｏｉ： １０．１０３８／ｇｔ．
２０１４．２５；Ｃａｒｌｅｎｓら（２０００年）、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ、２８巻（
１０号）：１１３７～４６頁；Ａｌｏｎｓｏ－Ｃａｍｉｎｏら（２０１３年）、Ｍｏｌ
Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ、２巻、ｅ９３頁；Ｐａｒｋら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌ．、２０１１年１１月２９日（１１巻）：５５０～５５７頁を参照された
い）。

【0227】

一部の実施形態では、レトロウイルスベクター、たとえば、モロニーマウス白血病ウイ
ルス（ＭｏＭＬＶ）、骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、マウス胚性幹細胞ウイルス
（ＭＥＳＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦ
Ｖ）、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来するレトロウイルスベクターは、長い
末端反復配列（ＬＴＲ）を有する。ほとんどのレトロウイルスベクターは、マウスレトロ
ウイルスに由来する。一部の実施形態では、レトロウイルスとしては、任意の鳥類または
哺乳動物の細胞源に由来するものが挙げられる。レトロウイルスは、典型的に、広宿主性
である、すなわち、レトロウイルスは、ヒトを含む複数の種の宿主細胞に感染することが
できる。一実施形態では、発現させようとする遺伝子が、レトロウイルスｇａｇ、ｐｏｌ
、および／またはｅｎｖ配列に置き換わる。いくつかの例示的なレトロウイルス系が、説
明されている（たとえば、米国特許第５，２１９，７４０号、同第６，２０７，４５３号
、同第５，２１９，７４０号、ＭｉｌｌｅｒおよびＲｏｓｍａｎ（１９８９年）、Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、７巻：９８０～９９０頁；Ｍｉｌｌｅｒ， Ａ． Ｄ．（１９９
０年）、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１巻：５～１４頁；Ｓｃａｒｐａら（
１９９１年）、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１８０巻：８４９～８５２頁；Ｂｕｒｎｓら（１９９
３年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９０巻：８０３３～
８０３７頁；ならびにＢｏｒｉｓ－ＬａｗｒｉｅおよびＴｅｍｉｎ（１９９３年）、Ｃｕ
ｒ． Ｏｐｉｎ． Ｇｅｎｅｔ． Ｄｅｖｅｌｏｐ．、３巻：１０２～１０９頁）。

【0228】

レンチウイルス形質導入の方法は、公知である。例示的な方法は、たとえば、Ｗａｎｇ
ら（２０１２年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９～７０１頁
；Ｃｏｏｐｅｒら（２００３年）、Ｂｌｏｏｄ．、１０１巻：１６３７～１６４４頁；Ｖ
ｅｒｈｏｅｙｅｎら（２００９年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、５０６巻：
９７～１１４頁；およびＣａｖａｌｉｅｒｉら（２００３年）、Ｂｌｏｏｄ．、１０２巻
（２号）：４９７～５０５頁に記載されている。

【0229】

一部の実施形態では、組換え核酸は、エレクトロポレーションによって、Ｔ細胞に移入
される（たとえば、Ｃｈｉｃａｙｂａｍら（２０１３年）、ＰＬｏＳ ＯＮＥ、８巻（３
号）：ｅ６０２９８頁およびＶａｎ Ｔｅｄｅｌｏｏら（２０００年）、Ｇｅｎｅ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ、７巻（１６号）：１４３１～１４３７頁を参照されたい）。一部の実施形態
では、組換え核酸は、トランスポジション（ｔｒａｎｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）によって、Ｔ
細胞に移入される（たとえば、Ｍａｎｕｒｉら（２０１０年）、Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈ
ｅｒ、２１巻（４号）：４２７～４３７頁；Ｓｈａｒｍａら（２０１３年）、Ｍｏｌｅｃ
Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ、２巻、ｅ７４頁；およびＨｕａｎｇら（２００９年
）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、５０６巻：１１５～１２６頁を参照されたい）
。遺伝子材料を免疫細胞に導入し、そこで発現させる他の方法としては、リン酸カルシウ
ムトランスフェクション（たとえば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ、Ｎ．Ｙ．に記載されている）、プロトプラスト融合、カチオン性リポソーム媒介ト
ランスフェクション；タングステン粒子により促進される微粒子衝撃（ｔｕｎｇｓｔｅｎ
ｐａｒｔｉｃｌｅ－ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｂｏｍｂ
ａｒｄｍｅｎｔ）（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３４６巻：７７６～７７７頁（１
９９０年））；およびストロンチウムリン酸ＤＮＡ共沈降（Ｂｒａｓｈら、Ｍｏｌ． Ｃ
ｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、７巻：２０３１～２０３４頁（１９８７年））が挙げられる。一部
の態様では、洗浄ステップは、遠心分離チャンバ、たとえば、Ａ－２００／ＦおよびＡ－
２００遠心分離チャンバを含め、Ｓｅｐａｘ（登録商標）およびＳｅｐａｘ（登録商標）
２システムで使用するためのものを含む、Ｂｉｏｓａｆｅ ＳＡによって製造および販売
されているものにおいて、製造業者の説明書に従って、行われる。

【0230】

組換え産物をコードする核酸の移入のための他のアプローチおよびベクターは、たとえ
ば、ＰＣＴ特許出願公開第２０１４０５５６６８号および米国特許第７，４４６，１９０
号に記載されているものであり、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0231】

一部の実施形態では、細胞、たとえば、Ｔ細胞には、増大の間または後のいずれかで、
たとえば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）がトランスフェク
トされ得る。所望されるポリペプチドまたは受容体の遺伝子の導入のためのこのトランス
フェクションは、たとえば、任意の好適なレトロウイルスベクターを用いて実行すること
ができる。遺伝子修飾された細胞集団は、次いで、初回刺激（たとえば、ＣＤ３／ＣＤ２
８刺激）から解放され、続いて、第２の種類の刺激（たとえば、ｄｅ ｎｏｖｏで導入し
た受容体を介して）で刺激され得る。この第２の種類の刺激には、ペプチド／ＭＨＣ分子
、遺伝子導入受容体の同種（架橋）リガンド（たとえば、ＣＡＲの天然のリガンド）、ま
たは新しい受容体のフレームワーク内に直接的に結合する（たとえば、受容体内の定常領
域を認識することによって）任意のリガンド（たとえば、抗体）の形態での抗原性刺激が
含まれ得る。たとえば、Ｃｈｅａｄｌｅら、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅ
ｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、２０１２年；９０７巻：６４５～６６頁またはＢａｒｒｅｔｔ
ら、Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ
Ｃａｎｃｅｒ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第６５巻：３３
３～３４７頁（２０１４年）を参照されたい。

【0232】

さらなる核酸、たとえば、導入のための遺伝子には、治療法の有効性を、たとえば、移
入される細胞の生存性および／もしくは機能を促進することによって改善するもの；細胞
の選択および／もしくは評価のため、たとえば、ｉｎ ｖｉｖｏでの生存もしくは局在化
を評価するための遺伝子マーカーを提供する遺伝子；ならびにＬｕｐｔｏｎ Ｓ． Ｄ．
ら、Ｍｏｌ． ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１１巻：６頁（１９９１年）；およびＲ
ｉｄｄｅｌｌら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、３巻：３１９～３３８頁（１
９９２年）に記載されているように、たとえば、細胞をｉｎ ｖｉｖｏでの陰性選択を受
けやすくすることによって、安全性を改善するための遺伝子がある。ドミナント陽性選択
可能なマーカーを陰性選択可能なマーカーと融合することによって導出される二官能性の
選択可能な融合遺伝子の使用について記載している、ＬｕｐｔｏｎらによるＰＣＴ／ＵＳ
第９１／０８４４２号およびＰＣＴ／ＵＳ第９４／０５６０１号の刊行物もまた参照され
たい。たとえば、Ｒｉｄｄｅｌｌら、米国特許第６，０４０，１７７号のカラム１４～１
７を参照されたい。

【0233】

一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前またはそれとともに、インキュベートお
よび／または培養される。インキュベーションステップには、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）す
ること、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）すること、刺激すること、活性化すること、お
よび／または増やすことが含まれ得る。インキュベーションおよび／または操作は、培養
容器、たとえば、ユニット、チャンバ、ウェル、カラム、チューブ、チュービングセット
、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、または細胞を培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）または培養
（ｃｕｌｔｉｖａｔｅ）するための他の容器において行われ得る。一部の実施形態では、
組成物または細胞は、刺激条件または刺激性薬剤の存在下において、インキュベートされ
る。そのような条件には、集団中の細胞の増殖、増大、活性化、および／または生存を誘
導し、抗原曝露を模倣し、および／または遺伝子操作、たとえば、組換え抗原受容体の導
入のために細胞を予備刺激するように、設計されるものが含まれる。一部の実施形態では
、インキュベーションステップのうちの１つまたは複数は、ロッキングバイオリアクター
、たとえば、ＷＡＶＥ（商標）Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）ま
たはＢＩＯＳＴＡＴ（登録商標）ＲＭ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して、実行され得る
。一部の実施形態では、インキュベーションステップのうちの１つまたは複数は、静式バ
イオリアクターまたはインキュベーションチャンバを使用して、実行され得る。特定の実
施形態では、１つまたは複数のインキュベーションステップにロッキングバイオリアクタ
ーを使用する場合には、抗せん断剤、たとえば、ポロキサマーが、組成物に添加され得る
。

【0234】

条件には、特定の媒体、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、たとえば
、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、たとえば、サイトカ
イン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、なら
びに細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質のうちの１つまたは複数が含
まれ得る。一部の態様では、細胞は、１つまたは複数のサイトカインの存在下においてイ
ンキュベートされ、一部の実施形態では、サイトカインカクテル、たとえば、ＰＣＴ特許
出願公開第２０１５／１５７３８４号に記載されるものを利用することができ、これは、
参照により組み込まれる。一部の実施形態では、細胞は、形質導入の前、同時、または後
に、１つまたは複数のサイトカインおよび／またはサイトカインカクテルとともにインキ
ュベートされる。

【0235】

一部の実施形態では、刺激条件または刺激剤には、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達
ドメインを活性化することができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、リガンドが
含まれる。一部の態様では、作用物質は、Ｔ細胞におけるＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル
伝達カスケードを作動させるかまたは開始する。そのような作用物質としては、抗体、た
とえば、ＴＣＲ構成要素に特異的なもの、たとえば、抗ＣＤ３を挙げることができる。一
部の実施形態では、刺激条件には、共刺激性受容体を刺激することができる、１つまたは
複数の作用物質、たとえば、リガンド、たとえば、抗ＣＤ２８が含まれる。一部の実施形
態では、そのような作用物質および／またはリガンドは、固体支持体、たとえば、ビーズ
、および／または１つもしくは複数のサイトカインに結合していてもよい。必要に応じて
、増大方法は、さらに、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体を、培養媒体に（た
とえば、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で）添加するステップを含み得る。一部の
実施形態では、刺激剤としては、ＩＬ－２、および／またはＩＬ－１５、たとえば、少な
くとも約１０単位／ｍＬの濃度のＩＬ－２が挙げられる。

【0236】

一部の態様では、インキュベーションは、Ｒｉｄｄｅｌｌらへの米国特許第６，０４０
，１７７号、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５
巻（９号）：６５１～６６０頁；Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１
巻：７２～８２頁；および／またはＷａｎｇら（２０１２年）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅ
ｒ．、３５巻（９号）：６８９～７０１頁に記載されているものなどの技法に従って行わ
れる。一部の態様では、形質導入は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１６／０７３６０２号ま
たは米国公開第２０１６／０１２２７８２号に記載されているシステム、デバイス、装置
、および／または方法を使用して行われ、これらの内容は、参照によりその全体が組み込
まれる。一部の実施形態では、形質導入は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１６４６７
５号に記載されている方法に従って行われ、この内容は、参照によりその全体が組み込ま
れる。

【0237】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養開始組成物に、フィーダー細胞、たとえば、非分
裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を添加し（たとえば、結果として得られる細胞集団が、増
大させようとする初期集団中のＴリンパ球それぞれに対して少なくとも約５個、１０個、
２０個、もしくは４０個、またはそれを上回るＰＢＭＣフィーダー細胞を含有するように
）、培養物をインキュベートすること（たとえば、Ｔ細胞の数を増大させるのに十分な時
間）によって、増大される。一部の態様では、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ照射ＰＢ
ＭＣフィーダー細胞を含み得る。一部の実施形態では、ＰＢＭＣに、約３０００～３６０
０ラドの範囲でガンマ線を照射して、細胞分裂を防止する。一部の態様では、フィーダー
細胞は、Ｔ細胞集団の添加前に、培養媒体に添加される。

【0238】

一部の実施形態では、刺激条件としては、ヒトＴリンパ球の成長に好適な温度、たとえ
ば、少なくとも摂氏約２５度、一般に、少なくとも約３０度、および一般に、摂氏３７度
または約３７度が挙げられる。必要に応じて、インキュベーションは、フィーダー細胞と
して非分裂ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）を添加することをさらに含み得る
。ＬＣＬには、約６０００～１０，０００ラドの範囲でガンマ線を照射してもよい。ＬＣ
Ｌフィーダー細胞は、一部の態様では、任意の好適な量、たとえば、ＬＣＬフィーダー細
胞の初期Ｔリンパ球に対する比が少なくとも約１０：１で、提供される。

【0239】

試料を処理するための方法

【0240】

一部の実施形態では、方法は、アフェレーシス試料を処理するための方法であって、（
ａ）ドナーから取得されたアフェレーシス試料を、低温環境で、保管施設に輸送すること
、および（ｂ）保管施設において、アフェレーシス試料を極低温で保管することを含む、
方法を含む。方法は、ある特定の実施形態によると、複数のアフェレーシス試料を処理す
ることであって、（ａ）それぞれが同じかまたは異なるドナーから取得され、同じかまた
は異なる時点のいずれかで輸送された、複数のアフェレーシス試料を、低温環境で、保管
施設に輸送すること、および（ｂ）保管施設において、アフェレーシス試料のそれぞれを
極低温で保管することを含む、処理することをさらに含み得る。

【0241】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、上述の実施形態に従ってドナーから収集
された血液である。

【0242】

一部の実施形態では、低温輸送環境の温度は、－８０℃よりも高い温度から０℃である
。一部の実施形態では、低温輸送環境の温度は、－８０℃よりも高い温度から－２０℃で
ある。一部の実施形態では、低温輸送環境の温度は、－２０℃～０℃である。

【0243】

一部の実施形態では、ドナーのアフェレーシス試料が収集される施設および保管施設は
、互いに提携しているが、これは、すべての実施形態で必要とされるわけではない。一部
の実施形態では、施設は、ドナーまたは別の実体が、収集施設においてアフェレーシス試
料を収集し、保管施設においてアフェレーシス試料を保管するよう選択することにより、
互いに提携される。一部の実施形態では、収集施設および保管施設は、同じ物理的位置を
共有していてもよい。一部の実施形態では、収集施設および保管施設は、異なる位置、た
とえば、異なる国または異なる州に位置していてもよい。

【0244】

一部の実施形態では、保管施設は、中央または共通のリポジトリの保管施設であり、こ
こで、異なる収集施設で得られた様々な患者のアフェレーシス試料が、保管される。一部
の実施形態では、中央または共通のリポジトリの保管施設は、アフェレーシス試料を、１
つまたは複数の製造施設に送る前に、これらの試料を極低温で保管する。一部の実施形態
では、中央または共通のリポジトリの施設ならびに製造施設は、互いに提携している。一
部の実施形態では、中央または共通のリポジトリの施設ならびに製造施設は、互いに提携
していない。一部の実施形態では、ドナーから得られた試料のすべてが、中央または共通
のリポジトリの施設から、製造施設へと送られる。他の実施形態では、ドナーから得られ
た試料の一部は、製造施設へと送られ、他の試料は、中央または共通のリポジトリの施設
で保持される。一部の実施形態では、ドナーから得られた試料のすべてが、中央または共
通のリポジトリの施設から、同じ製造施設へと送られる。他の実施形態では、ドナーから
得られた試料の一部は、中央または共通のリポジトリの施設から、１つの製造施設へと送
られ、ドナーから得られた他の試料は、別の製造施設へと送られる。

【0245】

一部の実施形態では、１種または複数種の細胞が、輸送する前に、アフェレーシス試料
から濃縮および／または単離される。別の事例では、細胞は、輸送の後に、アフェレーシ
ス試料から濃縮および／または単離され得る。たとえば、細胞は、上述の実施形態に従っ
て、濃縮および／または単離され得る。

【0246】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮および／もしくは単離された細胞
は、輸送される前に、分析される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮
および／もしくは単離された細胞は、輸送された後かつ極低温で保管される前に、分析さ
れる。アフェレーシス試料または濃縮および／もしくは単離された細胞は、上述の実施形
態に従って、分析され得る。

【0247】

一部の実施形態では、アフェレーシス、または濃縮および／もしくは単離された細胞集
団、または操作Ｔ細胞集団もしくは組成物の、一部分または複数の部分は、アフェレーシ
ス、または濃縮および／もしくは単離された細胞集団、または操作されたＴ細胞集団もし
くは組成物の極低温凍結の前に、取り出される。一部の実施形態では、取り出された一部
分または複数の部分は、たとえば、アフェレーシス、または濃縮および／もしくは単離さ
れた細胞集団、または操作Ｔ細胞集団もしくは組成物の極低温凍結の前または後を含め、
任意の時点で、分析される。

【0248】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送される前に、凍結溶液と
合わされる。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送された後かつ
極低温で保管される前に、凍結溶液と合わされる。凍結溶液は、上述の実施形態における
凍結溶液と同じであってもよい。

【0249】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、極低温で凍結させようとする凍結溶液と
合わせる前または後に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０
個、または１０個を上回る別個の容器に分割される。一部の実施形態では、アフェレーシ
ス試料は、輸送される前に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、
１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割される。一部の実施形態では、アフェレ
ーシス試料は、輸送された後に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９
個、１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割される。一部の実施形態では、分割
されたアフェレーシスを含む任意の数の別個の容器は、輸送される前または輸送された後
に、極低温で凍結される。

【0250】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、
７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割され、これらは、保
管施設において、極低温で保管される。一部の実施形態では、保管施設は、中央または共
通のリポジトリの保管施設である。一部の実施形態では、保管施設は、分割されたアフェ
レーシスを含む任意の数の別個の容器を、１つまたは複数の製造施設に送る。

【0251】

一部の実施形態では、中にアフェレーシス試料が極低温で保管されている１つまたは複
数の容器は、極低温保管から取り出され、一方で、残りの容器は、極低温保管で保持され
る。一部の実施形態では、極低温保管から取り出された１つまたは複数の容器内の細胞は
、解凍される。一部の実施形態では、解凍された細胞は、操作される。一部の実施形態で
は、解凍された細胞は、ＣＡＲ分子を発現するように操作される。一部の実施形態では、
中にアフェレーシス試料が極低温で保管されている１つまたは複数の後続の容器が、極低
温保管から取り出され、一方で、残りの容器は、極低温保管で保持される。一部の実施形
態では、極低温保管から取り出された１つまたは複数の後続の容器内の細胞は、解凍され
る。一部の実施形態では、解凍された細胞は、操作される。一部の実施形態では、解凍さ
れた細胞は、以前に解凍された細胞と類似または異なるＣＡＲ分子を発現する細胞を産生
するように、操作される。一部の実施形態では、中にアフェレーシス試料が極低温で保管
されている容器は、異なる長さの時間の間、極低温保管で保持される。

【0252】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送される前に、－８０℃を
上回る温度から０℃の温度に冷却される。アフェレーシス試料または細胞は、上述の実施
形態に従った様式で、冷却され得る。一部の実施形態では、細胞の冷却の前に、細胞は、
上述の実施形態に従った様式で、洗浄される。

【0253】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送される前に、－２１０℃
～－８０℃の温度に、極低温で凍結される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料ま
たは細胞は、輸送された後に、極低温で凍結される。アフェレーシス試料または細胞は、
上述の実施形態に従った様式で、極低温で凍結され得る。一部の実施形態では、細胞の極
低温凍結の前に、細胞は、上述の実施形態に従った様式で、洗浄される。

【0254】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、－２１０℃～－８０℃の温度
において、極低温で保管される。たとえば、アフェレーシス試料または細胞は、上述の実
施形態に従った様式で、たとえば、液体窒素保管タンクの気相において、たとえば、１日
間～１２年間の保管期間の間、極低温で保管され得る。一部の実施形態では、細胞は、以
下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、または４８時間
、保管もしくは貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に
等しい期間：１週間、２週間、３週間、または４週間、保管または貯蔵される。一部の実
施形態では、細胞は、長期保管または長期貯蔵される。一部の態様では、細胞は、以下を
上回るかまたは以下に等しい期間：１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間
、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間
、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１
２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２
０年間、２５年間、３０年間、３５年間、４０年間、またはそれを上回る期間、保管され
る。

【0255】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、－２１０℃～－８０℃の温度
において、極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞が保管される温度は、約－１
００℃、または－９５℃、または－９０℃、または－８５℃、または－８０℃、または－
７５℃、または－７０℃、または－６５℃、または－６０℃を上回らない。

【0256】

一部の実施形態では、保管期間の後に、アフェレーシス試料または細胞は、解凍される
。たとえば、アフェレーシス試料または細胞は、上述の実施形態に従った様式で、解凍さ
れ得る。また、ある特定の実施形態によると、保管期間の後、生存細胞の割合は、２４％
～１００％である。生存細胞の割合は、たとえば、上述の実施形態に従って、判定するこ
とができる。

【0257】

一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮された細胞は、収集の後かつ輸送
の前に、分析される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮された細胞は
、輸送の後かつ極低温保管の前に、分析される。一部の実施形態では、アフェレーシス試
料または濃縮された細胞は、保管期間の後に、分析される。一部の実施形態では、分析の
後に、アフェレーシス試料または細胞は、修飾され得る。一部の実施形態では、修飾は、
輸送する前に生じる。一部の実施形態では、修飾は、輸送した後かつ極低温で保管する前
に、生じる。一部の実施形態では、修飾は、極低温で保管した後に、生じる。そのような
実施形態では、修飾は、「極低温後の修飾」と称される。アフェレーシス試料または細胞
の分析および／または修飾は、上述の実施形態に従って行われ得る。

【0258】

組成物および製剤

【0259】

細胞を含む組成物もまた、提供され、これには、医薬組成物および製剤、たとえば、所
与の用量またはその画分での投与のための細胞数を含む単位用量形態の組成物が含まれる
。医薬組成物および製剤は、一般に、１つまたは複数の必要に応じた薬学的に許容される
担体または賦形剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１つの追加の治療
剤を含む。

【0260】

「医薬製剤」という用語は、中に含まれる活性成分の生物学的活性が有効となるのを許
容するような形態にあり、製剤が投与されるであろう対象にとって、許容できないほどに
毒性である追加の成分を含まない、調製物を指す。

【0261】

「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって非毒性である、医薬製剤中の活性成分
以外の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または
保存剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0262】

一部の態様では、担体の選択は、部分的に、特定の細胞および／または投与の方法によ
って決定される。したがって、様々な好適な製剤が存在する。たとえば、医薬組成物は、
保存剤を含有し得る。好適な保存剤としては、たとえば、メチルパラベン、プロピルパラ
ベン、安息香酸ナトリウム、および塩化ベンザルコニウムを挙げることができる。一部の
態様では、２つまたはそれを上回る保存剤の混合物が、使用される。保存剤またはその混
合物は、典型的に、全組成物の重量を基準として、約０．０００１％～約２％の量で存在
する。担体は、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ， Ａ．編（１９８０年）によって説明されている
。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量および濃度で、レシピエントに
とって非毒性であり、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：緩衝剤、たと
えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含
む、抗酸化剤；保存剤（たとえば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド
；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブ
チル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、たとえば、メチルもしくはプロ
ピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；
およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基よりも少ない）ポリペプチド；タンパク
質、たとえば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、
たとえば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、たとえば、グリシン、グルタミン、アスパ
ラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン；単糖類、二糖類、およびグルコース
、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、たとえば、ＥＤ
ＴＡ；糖類、たとえば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトー
ル；塩形成対イオン、たとえば、ナトリウム；金属錯体（たとえば、Ｚｎ－タンパク質錯
体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、たとえば、ポリエチレングリコール（Ｐ
ＥＧ）。

【0263】

一部の態様では、緩衝剤が、組成物に含まれる。好適な緩衝剤としては、たとえば、ク
エン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、ならびに様々な他の酸および塩
が挙げられる。一部の態様では、２つまたはそれを上回る緩衝剤の混合物が、使用される
。緩衝剤またはその混合物は、典型的に、全組成物の重量を基準として、約０．００１％
～約４％の量で存在する。投与可能な医薬組成物を調製するための方法は、公知である。
例示的な方法は、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍ
ｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、第２１版（２００５年５月１日）により詳細に記載されている
。

【0264】

製剤には、水溶液が含まれ得る。製剤または組成物はまた、細胞を用いて処置されてい
る特定の適応症、疾患、または状態にとって有用な１つを上回る活性成分、好ましくは、
細胞に相補的な活性を有するものを含有してもよく、ここで、それぞれの活性は、互いに
悪影響を及ぼさない。そのような活性成分は、意図される目的に有効な量での組合せで存
在することが、好適である。したがって、一部の実施形態では、医薬組成物は、他の薬学
的に活性な薬剤または薬物、たとえば、化学療法剤、たとえば、アスパラギナーゼ、ブス
ルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロ
ウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキ
シマブ、ビンブラスチン、および／またはビンクリスチンをさらに含む。

【0265】

一部の実施形態では、組成物は、疾患もしくは状態の負荷を低減するのに有効な量、な
らびに／または対象にＣＲＳもしくは重篤なＣＲＳをもたらさない、および／もしくは本
明細書に記載される方法の他の結果のいずれにも影響を及ぼさない量で、細胞を含む。

【0266】

医薬組成物は、一部の実施形態では、疾患または状態を処置または予防するのに有効な
量、たとえば、治療有効量または予防的有効量で、細胞を含有する。治療的または予防的
な有効性は、一部の実施形態では、処置される対象の周期的な評価によって監視される。
所望される投薬量は、細胞の単回ボーラス投与によって、細胞の複数回ボーラス投与によ
って、または細胞の連続的な注入投与によって、送達することができる。

【0267】

細胞および組成物は、標準的な投与技法、製剤、および／またはデバイスを使用して、
投与することができる。細胞の投与は、自家であっても異種であってもよい。たとえば、
免疫応答性細胞または前駆体を、１人の対象から得て、それを同じ対象または適合性のあ
る別の対象に投与することができる。末梢血由来の免疫応答性細胞またはそれらの子孫（
たとえば、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏに由来する）は、
カテーテル投与を含む、局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与
によって、投与することができる。治療用組成物（たとえば、遺伝子修飾された免疫応答
性細胞を含有する医薬組成物）を投与する場合、それは、一般に、単位投薬量の注射用形
態（溶液、懸濁液、エマルジョン）で製剤化されることになる。

【0268】

製剤には、経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺内、経皮、筋肉内、鼻内、頬内、舌下、ま
たは坐剤での投与のためのものが含まれる。一部の実施形態では、細胞集団は、非経口で
投与される。「非経口」という用語には、本明細書において使用されるとき、静脈内、筋
肉内、皮下、直腸内、膣内、および腹腔内の投与が含まれる。一部の実施形態では、細胞
は、静脈内、腹腔内、または皮下の注射による末梢全身送達を使用して、対象に投与され
る。

【0269】

組成物は、一部の実施形態では、滅菌液体調製物、たとえば、等張水溶液、懸濁液、エ
マルジョン、分散液、または粘性組成物として提供され、これらは、一部の態様では、選
択されたｐＨに緩衝され得る。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性組成物、および固体
組成物よりも、調製が容易である。加えて、液体組成物は、特に注射によって、投与する
のがいくらかより便利である。粘性組成物は、一方で、特定の組織とのより長い接触期間
をもたらすように、適切な粘度範囲内で製剤化することができる。液体または粘性の組成
物は、たとえば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（たとえば、グリセロ
ール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混
合物を含有する溶媒または分散媒であり得る、担体を含み得る。

【0270】

滅菌注射用溶液は、細胞を、溶媒に、たとえば、好適な担体、希釈剤、または賦形剤、
たとえば、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどとの混合物として、組
み込むことによって、調製することができる。組成物は、所望される投与経路および調製
物に応じて、補助物質、たとえば、湿潤剤、分散剤、もしくは乳化剤（たとえば、メチル
セルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化もしくは増粘添加剤、保存剤、香味剤、および／また
は着色剤を含有し得る。好適な調製物を調製するために、一部の態様では、標準的な文書
が参照され得る。

【0271】

抗菌保存剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤を含む、組成物の安定性および滅菌
性を強化する様々な添加剤を、添加することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗
細菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、およびソ
ルビン酸によって確実にすることができる。注射用医薬品形態の長期吸収は、吸収を遅延
する薬剤、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によって、も
たらすことができる。

【0272】

ｉｎ ｖｉｖｏでの投与に使用しようとする製剤は、一般に、滅菌である。滅菌性は、
たとえば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に達成することができる。

【0273】

一部の実施形態では、治療用Ｔ細胞組成物は、１ｍｌ当たり約１０００万個の細胞～１
ｍｌ当たり約７０００万個の細胞、または１ｍＬ当たり約１０００万個の生存細胞～１ｍ
Ｌ当たり約７０００万個の生存細胞を含む。一部の実施形態では、治療用Ｔ細胞組成物は
、１ｍｌ当たり約１５００万個の細胞または生存細胞～１ｍｌ当たり約６０００万個の細
胞または生存細胞を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、１ｍｌ当たり１０００
万個を上回る細胞または生存細胞を含む。一部の実施形態では、治療用Ｔ細胞組成物は、
１ｍｌ当たり１５００万個を上回る細胞または１５００万個を上回る細胞を含む。

【0274】

一部の実施形態では、本出願は、治療用Ｔ細胞組成物を含む容器を含む、製品を提供す
る。一部の実施形態では、製品は、容器が、標的単位数の治療用Ｔ細胞組成物を含むこと
を示す情報をさらに含む。一部の実施形態では、製品は、複数の容器を含み、ここで、容
器のそれぞれは、標的単位数のＴ細胞組成物を含む単位用量を含む。一部の実施形態では
、容器は、１ｍＬ当たり約１０００万個の細胞もしくは生存細胞～１ｍＬ当たり約７００
０万個の細胞もしくは生存細胞、１ｍＬ当たり約１５００万個の細胞もしくは生存細胞～
約６０００万個の細胞もしくは生存細胞、１ｍＬ当たり１０００万個を上回る細胞もしく
は生存細胞、１ｍＬ当たり１５００万個を上回る細胞もしくは生存細胞、またはこれらの
組合せを含む。一部の実施形態では、組成物は、極低温保護剤をさらに含む、および／ま
たは製品は、対象に投与する前に組成物を解凍するための説明書をさらに含む。

【0275】

一部の実施形態では、細胞は、たとえば、血漿および血小板を除去するための洗浄ステ
ップの後に、凍結溶液中に懸濁される。様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれ
かを、一部の態様では、使用することができる。１つの例には、２０％のＤＭＳＯおよび
８％のＨＳＡを含有するＰＢＳ、または他の好適な細胞凍結媒体を使用することが含まれ
る。これは、次いで、ＤＭＳＯおよびＨＳＡの最終濃度が、それぞれ、１０％および４％
となるように、媒体で１：１希釈される。

【0276】

様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用すること
ができる。一部の実施形態では、細胞試料は、極低温保護剤を含有する極低温保存または
ガラス化媒体または溶液を含有し得る。好適な極低温保護剤としては、ＤＭＳＯ、グリセ
ロール、グリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、プロパンジオール、
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，２－プロパンジオール（ＰＲＯＨ）、またはこ
れらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一部の例では、極低温保存溶液は
、ポリビニルピロリジオン、ヒドロキシエチルデンプン、多糖類、単糖類、アルギン酸塩
、トレハロース、ラフモース、デキストラン、ヒト血清アルブミン、Ｆｉｃｏｌｌ、リポ
タンパク質、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、自家血漿、またはこれ
らの混合物が挙げられるがこれらに限定されない、１つまたは複数の非細胞透過性極低温
保存剤を含有し得る。一部の実施形態では、細胞は、約１体積％～約２０体積％、約３体
積％～約９体積％、または約６体積％～約９体積％の最終濃度の極低温保護剤を有する凍
結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結溶液中の極低温保護剤の最終濃度
は、約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積
％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５
体積％、または約１０体積％である。

【0277】

一部の実施形態では、極低温保護剤は、ＤＭＳＯである。特定の実施形態では、細胞は
、約１体積％～約２０体積％、約３体積％～約９体積％、または約６体積％～約９体積％
の最終濃度のＤＭＳＯを有する凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結
溶液中のＤＭＳＯの最終濃度は、約３体積％、約４％体積％、約５体積％、約５．５体積
％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５
体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％である。

【0278】

ある特定の実施形態では、細胞は、約１×１０^６個の細胞／ｍｌ～約１×１０^８個の細
胞／ｍＬ、約１×１０^６個の細胞／ｍＬ～約２×１０^７個の細胞／ｍＬ、約１×１０^７個
の細胞／ｍＬ～約５×１０^７個の細胞／ｍＬ、または約１×１０^７個の細胞／ｍＬ～５×
１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細
胞は、約１×１０^６個の細胞／ｍＬ、約２×１０^６個の細胞／ｍＬ、約５×１０^６個の細
胞／ｍＬ、約１×１０^７個の細胞／ｍＬ、約１．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２×１０
^７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ
、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約３×１０^７個の細胞／ｍＬ、約３．５×１０^７個
の細胞／ｍＬ、約４×１０^７個の細胞／ｍＬ、約４．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、または
約５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態で
は、細胞は、約１．５×１０^７個の細胞／ｍＬ～約６×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、
凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、約５×１０^６個の細胞／ｍ
Ｌ～約１５０×１０^６個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実
施形態では、細胞は、少なくとも約１×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸
濁される。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１．５×１０^７個の細胞／ｍＬの
密度で、凍結溶液中に懸濁される。一部の実施形態では、細胞は、生存細胞である。

【0279】

特定の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、０．１×１０^６個の細胞／
ｍＬ～５，０００×１０^６個の細胞／ｍＬもしくは約０．１×１０^６個の細胞／ｍＬ～約
５，０００×１０^６個の細胞／ｍＬ、１×１０^６個の細胞／ｍＬ～５００×１０^６個の細
胞／ｍＬもしくは約１×１０^６個の細胞／ｍＬ～約５００×１０^６個の細胞／ｍＬ、５×
１０^６個の細胞／ｍＬ～１５０×１０^６個の細胞／ｍＬもしくは約５×１０^６個の細胞／
ｍＬ～約１５０×１０^６個の細胞／ｍＬ、１０×１０^６個の細胞／ｍＬ～７０×１０^６個
の細胞／ｍＬもしくは約１０×１０^６個の細胞／ｍＬ～約７０×１０^６個の細胞／ｍＬ、
または１５×１０^６個の細胞／ｍＬ～６０×１０^６個の細胞／ｍＬもしくは約１５×１０
^６個の細胞／ｍＬ～約６０×１０^６個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。
ある特定の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、約１×１０^６個の細胞／
ｍＬ～約１×１０^８個の細胞／ｍＬ、約１×１０^６個の細胞／ｍＬ～約２×１０^７個の細
胞／ｍＬ、約１×１０^７個の細胞／ｍＬ～約５×１０^７個の細胞／ｍＬ、または約１×１
０^７個の細胞／ｍＬ～５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。あ
る特定の実施形態では、細胞は、約１×１０^６個の細胞／ｍＬ、約２×１０^６個の細胞／
ｍＬ、約５×１０^６個の細胞／ｍＬ、約１×１０^７個の細胞／ｍＬ、約１．５×１０^７個
の細胞／ｍＬ、約２×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．
５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約３×１０^７個の細胞／
ｍＬ、約３．５×１０^７個の細胞／ｍＬ、約４×１０^７個の細胞／ｍＬ、約４．５×１０
^７個の細胞／ｍＬ、または約５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁され
る。ある特定の実施形態では、細胞は、両端の値を含め、約１．５×１０^７個の細胞／ｍ
Ｌ～約６×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形
態では、細胞は、少なくとも約１×１０^７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁さ
れる。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１．５×１０^７個の細胞／ｍＬの密度
で、凍結溶液中に懸濁される。一部の実施形態では、細胞は、生存細胞である。

【0280】

一部の実施形態では、極低温保存媒体への移入には、たとえば、媒体を除去するための
試料、たとえば、細胞および／もしくは操作細胞組成物の洗浄、ならびに／または後続の
凍結のための適切な極低温保存緩衝液もしくは媒体における細胞の置換えを伴い得る１つ
または複数の処理ステップが付随する。ある特定の実施形態では、極低温保存媒体への移
入は、閉鎖および滅菌システムにおいて臨床規模レベルで完全に自動化されている。ある
特定の実施形態では、極低温保存媒体への移入は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌ
ｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して行った。

【0281】

一部の実施形態では、細胞は、細胞を処理および／または操作するための前記方法の前
、最中、または後のいずれかで、凍結、たとえば、極低温保存される。一部の実施形態で
は、凍結およびそれに続く解凍のステップにより、細胞集団における顆粒球、およびある
程度の単球が、除去される。細胞は、１分間につき１℃の速度で、－８０℃に凍結され、
液体窒素保管タンクの気相で保管され得る。一部の実施形態では、組成物は、極低温保存
に好適なバッグに封入される（たとえば、ＣｒｙｏＭａｃｓ（登録商標）Ｆｒｅｅｚｉｎ
ｇ Ｂａｇｓ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）。一部の実施形態では、組成物は、極
低温保存に好適なバイアルに封入される（たとえば、ＣｅｌｌＳｅａｌ（登録商標）Ｖｉ
ａｌｓ、Ｃｏｏｋ Ｒｅｇｅｎｔｅｃ）。

【0282】

好適な容器としては、たとえば、ボトル、バイアル、シリンジ、および可撓性バッグ、
たとえば、注入バッグが挙げられる。特定の実施形態では、容器は、バッグ、たとえば、
可撓性バッグ、たとえば、対象への細胞の注入に好適なもの、たとえば、可撓性プラスチ
ックもしくはＰＶＣバッグ、および／またはＩＶ溶液バッグである。バッグは、一部の実
施形態では、細胞および組成物の滅菌溶液および送達を提供することができるように、封
止可能である、および／または滅菌することができる。一部の実施形態では、容器、たと
えば、バッグは、以下の値もしくはおよそ以下の値、または少なくとも以下の値もしくは
少なくともおよそ以下の値の容量を有する：１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０
、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、または１０００ｍＬの容量、
たとえば、それぞれ、両端の値を含め、１０もしくは約１０～１００もしくは約１００ｍ
Ｌ、または１０もしくは約１０～５００もしくは約５００ｍＬの容量。一部の実施形態で
は、容器、たとえば、バッグは、様々な温度、たとえば、低温、たとえば、以下の温度も
しくはおよそ以下の温度を下回るか、または以下の温度もしくはおよそ以下の温度：－２
０℃、－８０℃、－１２０℃、１３５℃、および／または極低温保存に好適な温度、なら
びに／または他の温度、たとえば、例として、対象の場所または処置の場所、たとえば、
ベッドのそばで、処置の直前に解凍するのを許容するために、細胞の解凍に好適な温度お
よび体温、たとえば、３７℃もしくは約３７℃のうちの１つまたは複数において、安定な
材料である、および／もしくはそのような材料から作製される、ならびに／または細胞の
安定な保管および／もしくは維持を提供する。

【0283】

容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成することができる。一部
の実施形態では、容器は、たとえば、チュービングの接続または１つもしくは複数のチュ
ーブへのカニューレ挿入のため、たとえば、静脈内もしくは他の注入のため、ならびに／
または他の容器、たとえば、細胞培養および／もしくは保管バッグまたは他の容器へおよ
びこれらからの移入を目的とする接続のための、１つまたは複数のポート、たとえば、滅
菌アクセスポートを有する。例示的な容器としては、注入バッグ、静脈内溶液バッグ、お
よび注射用ニードルによる穿刺可能なストッパを有するものを含むバイアルが挙げられる
。

【0284】

本発明は、本発明の個々の態様の１つの例示を意図している本明細書において開示され
る実施形態によって範囲が限定されるものではなく、機能的に同等であるものはすべて、
本発明の範囲内に含まれる。本発明のモデルおよび方法に対する様々な修正形は、本明細
書に記載されるものに加えて、前述の説明および教示から、当業者には明らかであり、同
様に、本発明の範囲内に含まれることが意図される。そのような修正形または他の実施形
態は、本発明の真の範囲および趣旨から逸脱することなく、実施することができる。

【0285】

刺激性試薬

【0286】

一部の実施形態では、濃縮された細胞の組成物を、刺激条件下においてインキュベート
することは、濃縮された細胞の組成物を、Ｔ細胞を活性化および／または増大させること
ができる刺激性試薬とともにインキュベートすることおよび／またはそれと接触させるこ
とであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、刺激性試薬は、細胞において１つ
または複数のシグナルを刺激および／または活性化することができる。一部の実施形態で
は、１つまたは複数のシグナルは、受容体によって媒介される。特定の実施形態では、１
つまたは複数のシグナルは、シグナル伝達および／または二次メッセンジャー、たとえば
、ｃＡＭＰおよび／もしくは細胞内カルシウムのレベルもしくは量における変化、１つま
たは複数の細胞内タンパク質の量、細胞内局在化、確認、リン酸化、ユビキチン化、およ
び／または短縮の変化、ならびに／または細胞活性、たとえば、転写、翻訳、タンパク質
分解、細胞形質学、活性化状態、および／もしくは細胞分裂における変化であるか、また
はこれらと関連している。特定の実施形態では、刺激性試薬は、ＴＣＲ複合体の１つもし
くは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または
１つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活
性化する、および／または活性化することができる。

【0287】

ある特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞、たとえば、Ｔ細胞を活性化および／ま
たは増大させることができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、生体分子にコンジ
ュゲートまたは連結された粒子、たとえば、ビーズを含む。一部の実施形態では、１つま
たは複数の作用物質は、ビーズに結合される。一部の実施形態では、ビーズは、生体適合
性である、すなわち、生物学的使用に好適である材料から構成される。一部の実施形態で
は、ビーズは、培養された細胞、たとえば、培養されたＴ細胞に対して、非毒性である。
一部の実施形態では、ビーズは、作用物質と細胞との間の相互作用を許容する様式で、作
用物質に結合することができる、任意の粒子であり得る。

【0288】

一部の実施形態では、刺激性試薬は、ビーズ、たとえば、ビーズの表面に結合している
か、またはそうでなければ付着している、細胞、たとえば、Ｔ細胞を活性化および／また
は増大させることができる、１つまたは複数の作用物質を含有する。ある特定の実施形態
では、ビーズは、非細胞粒子である。特定の実施形態では、ビーズとしては、コロイド粒
子、マイクロスフェア、ナノ粒子、磁性ビーズなどを挙げることができる。一部の実施形
態では、ビーズは、アガロースビーズである。ある特定の実施形態では、ビーズは、セフ
ァロースビーズである。

【0289】

特定の実施形態では、刺激性試薬は、単分散性のビーズを含有する。ある特定の実施形
態では、単分散性であるビーズは、直径の標準偏差が互いに５％未満であるサイズ分散を
含む。

【0290】

一部の実施形態では、ビーズは、１つまたは複数の作用物質、たとえば、ビーズの表面
にカップリング、コンジュゲート、または連結（直接的もしくは間接的）された作用物質
を含む。一部の実施形態では、本明細書において企図される作用物質としては、ＲＮＡ、
ＤＮＡ、タンパク質（たとえば、酵素）、抗原、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗
体、抗体断片、炭水化物、脂質、レクチン、または所望される標的に対する親和性を有す
る任意の他の生体分子を挙げることができるが、これらに限定されない。一部の実施形態
では、所望される標的は、Ｔ細胞受容体および／またはＴ細胞受容体の構成要素である。
ある特定の実施形態では、所望される標的は、ＣＤ３である。ある特定の実施形態では、
所望される標的は、Ｔ細胞共刺激性分子、たとえば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１－Ｂ
Ｂ）、ＯＸ４０、またはＩＣＯＳである。１つまたは複数の作用物質は、当該技術分野に
おいて公知であり利用可能である様々な方法によって、ビーズに直接的または間接的に結
合することができる。結合は、共有結合、非共有結合、静電、または疎水性のものであり
得、たとえば、化学的手段、機械的手段、または酵素的手段を含む、様々な結合手段によ
って、達成され得る。一部の実施形態では、生体分子（たとえば、ビオチン化抗ＣＤ３抗
体）は、ビーズに直接的に結合している別の生体分子（たとえば、抗ビオチン抗体）を介
して、ビーズに間接的に結合され得る。

【0291】

一部の実施形態では、刺激性試薬は、ビーズ、および細胞の表面上の巨大分子と直接的
に相互作用する１つまたは複数の作用物質を含有する。ある特定の実施形態では、ビーズ
（たとえば、常磁性ビーズ）は、細胞上の１つまたは複数の巨大分子（たとえば、１つま
たは複数の細胞表面タンパク質）に特異的な１つまたは複数の作用物質（たとえば、抗体
）を介して、細胞と相互作用する。ある特定の実施形態では、ビーズ（たとえば、常磁性
ビーズ）は、本明細書に記載される第１の作用物質、たとえば、一次抗体（たとえば、抗
ビオチン抗体）または他の生体分子で標識され、次いで、第２の作用物質、たとえば、二
次抗体（たとえば、ビオチン化抗ＣＤ３抗体）または他の第２の生体分子（たとえば、ス
トレプトアビジン）が添加され、それによって、二次抗体または他の第２の生体分子は、
粒子上のそのような一次抗体または他の生体分子に特異的に結合する。

【0292】

一部の実施形態では、刺激性試薬は、ビーズ（たとえば、常磁性ビーズ）に結合してお
り、細胞（たとえば、Ｔ細胞）上の以下の巨大分子のうちの１つまたは複数に特異的に結
合する、１つまたは複数の作用物質（たとえば、抗体）を含有する：ＣＤ２、ＣＤ３、Ｃ
Ｄ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３１、ＣＤ４４
、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ－１）、ＣＤ１２７、ＭＨＣＩ、Ｍ
ＨＣＩＩ、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＯＸ４０、ＣＤ２７Ｌ（ＣＤ７０）、４
－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－
１２Ｒ、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ；ＩＦＮ－ガンマＲ、ＴＮＦ－アルファＲ、ＩＬ－４
Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ１８／ＣＤｌ ｌａ（ＬＦＡ－１）、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ－セレクチ
ン）、ＣＤ２９／ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ－４）、ノッチリガンド（たとえば、デルタ様１／
４、Ｊａｇｇｅｄ １／２など）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５
、ＣＣＲ７、およびＣＸＣＲ３、またはこれらの断片（これらの巨大分子もしくはその断
片に対応するリガンドを含む）。一部の実施形態では、ビーズに結合した作用物質（たと
えば、抗体）は、細胞（たとえば、Ｔ細胞）上の以下の巨大分子のうちの１つまたは複数
に特異的に結合する：ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、ＣＤ１２７、ＣＤ３
、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ４５ＲＯ。

【0293】

一部の実施形態では、ビーズに結合される作用物質のうちの１つまたは複数は、抗体で
ある。抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領
域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗
体（たとえば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および一本鎖分子、ならびに抗体断片（
たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を挙げることができる。一部の実施形
態では、刺激性試薬は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ
’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片である。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ
、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常領域を含め、任意のアイソタイプの定常領域が、本明細書に
おいて企図される抗体に使用され得ること、ならびにそのような定常領域が、任意のヒト
または動物種（たとえば、マウス種）から得ることができることが、理解される。一部の
実施形態では、作用物質は、Ｔ細胞受容体の１つまたは複数の構成要素に結合する、およ
び／またはそれを認識する、抗体である。特定の実施形態では、作用物質は、抗ＣＤ３抗
体である。ある特定の実施形態では、作用物質は、共受容体に結合する、および／または
それを認識する、抗体である。一部の実施形態では、共刺激性試薬は、抗ＣＤ２８抗体を
含む。一部の実施形態では、ビーズは、約０．００１μｍを上回る、約０．０１μｍを上
回る、約０．１μｍを上回る、約１．０μｍを上回る、約１０μｍを上回る、約５０μｍ
を上回る、約１００μｍを上回る、または約１０００μｍを上回る、かつ約１５００μｍ
を上回らない、直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約１．０μｍ～約５００
μｍ、約１．０μｍ～約１５０μｍ、約１．０μｍ～約３０μｍ、約１．０μｍ～約１０
μｍ、約１．０μｍ～約５．０μｍ、約２．０μｍ～約５．０μｍ、または約３．０μｍ
～約５．０μｍの直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約３μｍ～約５μｍの
直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、少なくとも以下の値、または少なくとも
およそ以下の値、またはおよそ以下の値の直径を有する：０．００１μｍ、０．０１μｍ
、０．１μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．５μｍ、２．０μｍ、２．５μｍ、３．０
μｍ、３．５μｍ、４．０μｍ、４．５μｍ、５．０μｍ、５．５μｍ、６．０μｍ、６
．５μｍ、７．０μｍ、７．５μｍ、８．０μｍ、８．５μｍ、９．０μｍ、９．５μｍ
、１０μｍ、１２μｍ、１４μｍ、１６μｍ、１８μｍ、または２０μｍ。ある特定の実
施形態では、ビーズは、４．５μｍまたは約４．５μｍの直径を有する。ある特定の実施
形態では、ビーズは、２．８μｍまたは約２．８μｍの直径を有する。

【0294】

一部の実施形態では、ビーズは、０．００１ｇ／ｃｍ^３を上回る、０．０１ｇ／ｃｍ^３
を上回る、０．０５ｇ／ｃｍ^３を上回る、０．１ｇ／ｃｍ^３を上回る、０．５ｇ／ｃｍ^３
を上回る、０．６ｇ／ｃｍ^３を上回る、０．７ｇ／ｃｍ^３を上回る、０．８ｇ／ｃｍ^３を
上回る、０．９ｇ／ｃｍ^３を上回る、１ｇ／ｃｍ^３を上回る、１．１ｇ／ｃｍ^３を上回る
、１．２ｇ／ｃｍ^３を上回る、１．３ｇ／ｃｍ^３を上回る、１．４ｇ／ｃｍ^３を上回る、
１．５ｇ／ｃｍ^３を上回る、２ｇ／ｃｍ^３を上回る、３ｇ／ｃｍ^３を上回る、４ｇ／ｃｍ
^３を上回る、または５ｇ／ｃｍ^３を上回る密度を有する。一部の実施形態では、ビーズは
、約０．００１ｇ／ｃｍ^３～約１００ｇ／ｃｍ^３、約０．０１ｇ／ｃｍ^３～約５０ｇ／ｃ
ｍ^３、約０．１ｇ／ｃｍ^３～約１０ｇ／ｃｍ^３、約０．１ｇ／ｃｍ^３～約．５ｇ／ｃｍ^３
、約０．５ｇ／ｃｍ^３～約１ｇ／ｃｍ^３、約０．５ｇ／ｃｍ^３～約１．５ｇ／ｃｍ^３、約
１ｇ／ｃｍ^３～約１．５ｇ／ｃｍ^３、約１ｇ／ｃｍ^３～約２ｇ／ｃｍ^３、または約１ｇ／
ｃｍ^３～約５ｇ／ｃｍ^３の密度を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約０．５ｇ／
ｃｍ^３、約０．５ｇ／ｃｍ^３、約０．６ｇ／ｃｍ^３、約０．７ｇ／ｃｍ^３、約０．８ｇ／
ｃｍ^３、約０．９ｇ／ｃｍ^３、約１．０ｇ／ｃｍ^３、約１．１ｇ／ｃｍ^３、約１．２ｇ／
ｃｍ^３、約１．３ｇ／ｃｍ^３、約１．４ｇ／ｃｍ^３、約１．５ｇ／ｃｍ^３、約１．６ｇ／
ｃｍ^３、約１．７ｇ／ｃｍ^３、約１．８ｇ／ｃｍ^３、約１．９ｇ／ｃｍ^３、または約２．
０ｇ／ｃｍ^３の密度を有する。ある特定の実施形態では、ビーズは、約１．６ｇ／ｃｍ^３
の密度を有する。特定の実施形態では、ビーズまたは粒子は、約１．５ｇ／ｃｍ^３の密度
を有する。ある特定の実施形態では、粒子は、約１．３ｇ／ｃｍ^３の密度を有する。

【0295】

ある特定の実施形態では、複数のビーズが、一様な密度を有する。ある特定の実施形態
では、一様な密度は、平均ビーズ密度の１０％未満、５％未満、または１％未満の密度標
準偏差を含む。

【0296】

一部の実施形態では、ビーズは、粒子１グラム当たり約０．００１ｍ^２（ｍ^２／ｇ）～
約１，０００ｍ^２／ｇ、約．０１０ｍ^２／ｇ～約１００ｍ^２／ｇ、約０．１ｍ^２／ｇ～約
１０ｍ^２／ｇ、約０．１ｍ^２／ｇ～約１ｍ^２／ｇ、約１ｍ^２／ｇ～約１０ｍ^２／ｇ、約１
０ｍ^２／ｇ～約１００ｍ^２／ｇ、約０．５ｍ^２／ｇ～約２０ｍ^２／ｇ、約０．５ｍ^２／ｇ
～約５ｍ^２／ｇ、または約１ｍ^２／ｇ～約４ｍ^２／ｇの表面積を有する。一部の実施形態
では、粒子またはビーズは、約１ｍ^２／ｇ～約４ｍ^２／ｇの表面積を有する。

【0297】

一部の実施形態では、ビーズは、ビーズの表面またはその近傍に、作用物質にカップリ
ング、連結、またはコンジュゲートすることができる少なくとも１つの材料を含む。一部
の実施形態では、ビーズは、表面官能化されている、すなわち、結合分子、たとえば、ポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドと共有結合を形成することができる官能基を含む。特
定の実施形態では、ビーズは、表面に露出したカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル
基、トシル基、エポキシ基、および／またはクロロメチル基を含む。特定の実施形態では
、ビーズは、表面に露出したアガロースおよび／またはセファロースを含む。ある特定の
実施形態では、ビーズの表面は、結合分子に結合または付着することができる結合型刺激
性試薬を含む。特定の実施形態では、生体分子は、ポリペプチドである。一部の実施形態
では、ビーズは、表面に露出したプロテインＡ、プロテインＧ、またはビオチンを含む。

【0298】

一部の実施形態では、ビーズは、磁場で反応する。一部の実施形態では、ビーズは、磁
性ビーズである。一部の実施形態では、磁性ビーズは、常磁性である。特定の実施形態で
は、磁性ビーズは、超常磁性である。ある特定の実施形態では、ビーズは、磁場に曝露さ
れない限り、いずれの磁気特性も示さない。

【0299】

特定の実施形態では、ビーズは、磁性コア、常磁性コア、または超常磁性コアを含む。
一部の実施形態では、磁性コアは、金属を含有する。一部の実施形態では、金属は、鉄、
ニッケル、銅、コバルト、ガドリニウム、マンガン、タンタル、亜鉛、ジルコニウム、ま
たはこれらの任意の組合せであり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施形態で
は、磁性コアは、金属酸化物（たとえば、酸化鉄）、フェライト（たとえば、マンガンフ
ェライト、コバルトフェライト、ニッケルフェライトなど）、ヘマタイト、ならびに金属
合金（たとえば、ＣｏＴａＺｎ）を含む。一部の実施形態では、磁性コアは、フェライト
、金属、金属合金、酸化鉄、または二酸化クロムのうちの１つまたは複数を含む。一部の
実施形態では、磁性コアは、元素鉄またはその化合物を含む。一部の実施形態では、磁性
コアは、マグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）、マグへマイト（γＦｅ２Ｏ３）、またはグレイジ
ャイト（Ｆｅ３Ｓ４）のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、内部コアは
、酸化鉄（たとえば、Ｆｅ_３Ｏ_４）を含む。

【0300】

ある特定の実施形態では、ビーズは、表面官能化コート（ｃｏａｔ）またはコーティン
グ（ｃｏａｔｉｎｇ）によって被覆された磁性コア、常磁性コア、および／または超常磁
性コアを含有する。一部の実施形態では、コートは、ポリマー、多糖類、シリカ、脂肪酸
、タンパク質、炭素、アガロース、セファロース、またはこれらの組合せが含まれ得るが
これらに限定されない材料を含有し得る。一部の実施形態では、ポリマーは、ポリエチレ
ングリコール、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリグルタルアルデヒド、ポリウレタ
ン、ポリスチレン、またはポリビニルアルコールであり得る。ある特定の実施形態では、
外側のコートまたはコーティングは、ポリスチレンを含む。特定の実施形態では、外側の
コーティングは、表面官能化されている。

【0301】

一部の実施形態では、刺激性試薬は、金属酸化物コア（たとえば、酸化鉄コア）および
コートを含有するビーズを含み、ここで、金属酸化物コアは、少なくとも１つの多糖類（
たとえば、デキストラン）を含み、コートは、少なくとも１つの多糖類（たとえば、アミ
ノデキストラン）、少なくとも１つのポリマー（たとえば、ポリウレタン）、およびシリ
カを含む。一部の実施形態では、金属酸化物コアは、コロイド状酸化鉄コアである。ある
特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗体またはその抗原結合性断片を含
む。特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８
抗体を含む。一部の実施形態では、刺激性試薬は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、およ
び抗ビオチン抗体を含む。一部の実施形態では、刺激性試薬は、抗ビオチン抗体を含む。
一部の実施形態では、ビーズは、約３μｍ～約１０μｍの直径を有する。一部の実施形態
では、ビーズは、約３μｍ～約５μｍの直径を有する。ある特定の実施形態では、ビーズ
は、約３．５μｍの直径を有する。

【0302】

一部の実施形態では、刺激性試薬は、金属酸化物コア（たとえば、酸化鉄内部コア）お
よびコート（たとえば、保護コート）を含むビーズに結合した、１つまたは複数の作用物
質を含み、ここで、コートは、ポリスチレンを含む。ある特定の実施形態では、ビーズは
、常磁性（たとえば、超常磁性）鉄コア、たとえば、マグネタイト（Ｆｅ_３Ｏ_４）および
／またはマグへマイト（γＦｅ_２Ｏ_３）ｃを含むコア、ならびにポリスチレンコートまた
はコーティングを含む、単分散性の常磁性（たとえば、超常磁性）ビーズである。一部の
実施形態では、ビーズは、非多孔性である。一部の実施形態では、ビーズは、１つまたは
複数の作用物質が付着する、官能化された表面を含む。ある特定の実施形態では、１つま
たは複数の作用物質は、表面で、ビーズに共有結合する。一部の実施形態では、１つまた
は複数の作用物質は、抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、１つ
または複数の作用物質は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態で
は、１つまたは複数の作用物質は、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体、ならび
に標識された抗体（たとえば、ビオチン化抗体）、たとえば、標識された抗ＣＤ３抗体ま
たは抗ＣＤ２８抗体に結合することができる抗体またはその抗原断片を含む。ある特定の
実施形態では、ビーズは、約１．５ｇ／ｃｍ^３の密度および約１ｍ^２／ｇ～約４ｍ^２／ｇ
の表面積を有する。特定の実施形態では、ビーズは、約４．５μｍの直径および約１．５
ｇ／ｃｍ^３の密度を有する、単分散性の超常磁性ビーズである。一部の実施形態では、ビ
ーズは、約２．８μｍの平均直径および約１．３ｇ／ｃｍ^３の密度を有する、単分散性の
超常磁性ビーズである。

【0303】

一部の実施形態では、濃縮されたＴ細胞の組成物は、ビーズの細胞に対する比が以下の
比またはおよそ以下の比で、刺激性試薬とともにインキュベートされる：３：１、２．５
：１、２：１、１．５：１、１．２５：１、１．２：１、１．１：１、１：１、０．９：
１、０．８：１、０．７５：１、０．６７：１、０．５：１、０．３：１、または０．２
：１。特定の実施形態では、ビーズの細胞に対する比は、２．５：１～０．２：１、２：
１～０．５：１、１．５：１～０．７５：１、１．２５：１～０．８：１、１．１：１～
０．９：１である。特定の実施形態では、刺激性試薬の細胞に対する比は、約１：１であ
るか、または１：１である。

【0304】

細胞からの刺激性試薬の除去

【0305】

ある特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞から除去および／または分離される。理
論に束縛されることを望むものではないが、特定の実施形態では、刺激性試薬と細胞との
間の結合および／または会合が、一部の状況では、インキュベーションの間に、経時的に
低減され得ることが企図される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質が
、刺激性試薬と細胞との間の結合および／または会合を低減するために、添加され得る。
特定の実施形態では、細胞培養条件、たとえば、媒体の温度またはｐＨの変化により、刺
激性試薬と細胞との間の結合および／または会合が低減され得る。したがって、一部の実
施形態では、刺激性試薬は、同様に、たとえば、インキュベーション、細胞培養システム
、および／または溶液から細胞を取り出すことなしに、細胞とは別個に、インキュベーシ
ョン、細胞培養システム、および／または溶液から除去することができる。

【0306】

刺激性試薬（たとえば、ビーズ粒子または磁化可能粒子などの粒子であるか、またはそ
れを含む、刺激性試薬）を細胞から除去するための方法は、公知である。一部の実施形態
では、たとえば、刺激性試薬の一次抗体に結合し、細胞上のその抗原に対するそれの親和
性を改変させ、それによって、緩徐な脱離を可能にする、競合抗体、たとえば、非標識抗
体の使用が、使用され得る。一部の事例では、脱離後に、競合抗体は、粒子（たとえば、
ビーズ粒子）と会合したままであり得るが、未反応の抗体は、洗い流すかまたは洗い流し
てもよく、細胞は、単離、選択、濃縮、および／または活性化抗体が含まれない。例示的
なそのような試薬は、ＤＥＴＡＣａＢＥＡＤである（Ｆｒｉｅｄｌら、１９９５年；Ｅｎ
ｔｓｃｈｌａｄｅｎら、１９９７年）。一部の実施形態では、粒子（たとえば、ビーズ粒
子）は、切断可能なリンカー（たとえば、ＤＮＡリンカー）の存在下において除去するこ
とができ、それによって、粒子が結合した抗体が、リンカーにコンジュゲートされる（た
とえば、ＣＥＬＬｅｃｔｉｏｎ、Ｄｙｎａｌ）。一部の事例では、リンカー領域は、単離
後に、たとえば、ＤＮａｓｅまたは他の剥離緩衝剤の添加によって、粒子（たとえば、ビ
ーズ粒子）を細胞から除去するための切断可能な部位を提供する。一部の実施形態では、
他の酵素的方法もまた、細胞からの粒子（たとえば、ビーズ粒子）の剥離に利用すること
ができる。一部の実施形態では、粒子（たとえば、ビーズ粒子または磁化可能粒子）は、
生体分解性である。

【0307】

一部の実施形態では、刺激性試薬は、磁性、常磁性、および／もしくは超常磁性である
、かつ／または磁性、常磁性、および／もしくは超常磁性であるビーズを含み、刺激性試
薬は、細胞を磁場に曝露することによって、細胞から除去することができる。磁場を生成
するための磁石を含む好適な機器の例としては、ＤｙｎａＭａｇ ＣＴＳ（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（Ｔａｋａｒａ）、およびＥ
ａｓｙＳｅｐＭａｇｎｅｔ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が挙げら
れる。

【0308】

特定の実施形態では、刺激性試薬は、本明細書に提供される方法によって産生される操
作細胞を採取、収集、および／または製剤化する前に、細胞から除去または分離される。
一部の実施形態では、刺激性試薬は、細胞に操作、たとえば、形質導入またはトランスフ
ェクトを行う前に、細胞から除去および／または分離される。特定の実施形態では、刺激
性試薬は、細胞を操作するステップの後に、細胞から除去および／または分離される。あ
る特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞の培養の前、たとえば、増殖および／または
増大を促進する条件下における、操作、たとえば、トランスフェクトまたは形質導入を行
った細胞の培養の前に、除去される。

【実施例0309】

目的の細胞集団の選択または単離の前に、アフェレーシスを極低温保存することの効果
を評価するために、アフェレーシス試料を、操作Ｔ細胞を産生するように設計されたプロ
セスの様々なステップから、取得した。試料を、様々な時点で、細胞生存性、細胞数収率
、細胞表現型、および細胞活性に関して、評価した。これらの研究は、アフェレーシス材
料の極低温保存が、（１）関連するＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の表現型
比率に影響を及ぼしたかどうか、（２）解凍後の関連するＴ細胞集団を分類および選択す
る能力に影響を及ぼしたかどうか、ならびに／または（３）細胞の健康状態および／もし
くは機能性に影響を及ぼしたかどうかを判定するように、設計した。

【0310】

以下の例では、アフェレーシスは、ドナーから収集されたアフェレーシスを指す。極低
温保存したアフェレーシスは、収集後ではあるが、試料内の目的の任意の細胞集団の選択
の前に、アフェレーシス試料の極低温保存により得られた細胞産物を指す。静置したアフ
ェレーシスは、極低温保存したアフェレーシスを解凍した後に、任意のさらなる処理ステ
ップの前に所定の時間静置させたステップにより得られた細胞産物を指す。極低温保存し
選択した材料は、目的の細胞（これらの例では、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞）
を単離した後に、それらに、単離後の極低温保存ステップを受けさせたステップにより得
られた細胞産物を指す。

【0311】

（実施例１）
抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現するＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞の治療用組成物を生成
するためのプロセス

【0312】

それぞれ、同じ抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する操作ＣＤ４＋Ｔ細胞
および操作ＣＤ８＋Ｔ細胞を、本明細書に概説されるようなプロセスによって、産生させ
た。以下の実施例２に記載されるように、細胞は、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞の別
個の組成物を、ヒト白血球アフェレーシス試料から単離したＰＢＭＣから選択し、極低温
凍結させるプロセスによって、産生させた。選択したＣＤ４＋組成物およびＣＤ８＋組成
物を、続いて、解凍させ、別個に、刺激、形質導入、および増大のステップを受けさせた
。第２の例示的なプロセスには、選択ステップの前に、追加の極低温保存ステップが含ま
れた。

【0313】

単離したＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、別個に、ビーズの細胞に対する比が１：
１で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が結合した常磁性ポリスチレンコーティングビ
ーズの存在下において、刺激した。細胞を、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、およびＮ－アセチル
システイン（ＮＡＣ）を含有する媒体において、刺激した。ＣＤ４＋細胞の媒体は、ＩＬ
－７もまた含んでいた。

【0314】

ビーズの導入の後に、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞に、同じ抗ＣＤ１９ ＣＡＲを
コードするレンチウイルスベクターを別個に形質導入した。ＣＡＲは、マウス抗体に由来
する抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、免疫グロブリンスペーサー、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメ
イン、４－１ＢＢに由来する共刺激性領域、およびＣＤ３－ゼータ細胞内シグナル伝達ド
メインを含んでいた。

【0315】

形質導入の後に、ビーズを、磁場への曝露によって、細胞組成物から除去した。ＣＤ４
＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、次いで、バイオリアクター（Ｘｕｒｉ Ｗ２５ Ｂｉｏｒ
ｅａｃｔｏｒ）による継続的な混合および酸素移動を伴う増大のために、別個に培養した
。ポロキサマーを、媒体に添加した。いずれの細胞組成物も、ＩＬ－２およびＩＬ－１５
の存在下において培養した。ＣＤ４＋細胞の媒体は、ＩＬ－７もまた含んでいた。ＣＤ４
＋細胞およびＣＤ８＋細胞は、それぞれ、採取の前に、所望される細胞数および／または
濃度まで、培養した。閾値に達した１日後に、それぞれの組成物から細胞を別個に採取し
、製剤化し、極低温凍結させた。

【0316】

段階的な凍結プロファイルを利用する制御された速度の凍結装置を、以下の実施例に記
載される極低温保存ステップに使用した。

【0317】

（実施例２）
研究の設計

【0318】

２人の健常なドナー（すなわち、ドナー１およびドナー２）を、この研究に使用し、初
回入手アフェレーシス（ＡＰＨ）材料を、それぞれのドナーについて、５つの異なるアー
ムに分割した。入手アフェレーシス量の５分の１（対照アームまたはアーム５および１０
）を、洗浄し、単離ステップに供して、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を単離し、
この時点で、選択した細胞を、２週間極低温保存した。それぞれのドナーに由来する残り
のアフェレーシスを、４つの試料に分割した後、極低温保存した（アーム１～４およびア
ーム６～９）。それぞれの極低温保存した試料を、解凍し、洗浄し、３７℃で２時間静置
した後に選択したか、または解凍および洗浄の直後に選択ステップに供したかのいずれか
であった。アームの半数は、選択後に凍結させ、もう半数は、直接、活性化へと進めた。

【0319】

アーム１、２、６、および７の試料は、２週間極低温保存した後に、細胞を解凍してＣ
Ｄ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の単離を行い、細胞活性化方法に供した。アー
ム１および６には、追加のステップである、解凍した後に細胞を、任意のさらなる処理の
前にインキュベーターにおいて２時間静置させる静置ステップが、含まれた。アーム３、
４、８、および９の試料は、２～４日間極低温保存した後に、解凍してＣＤ４＋Ｔ細胞お
よびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の選択を受けさせ、その時点で、選択した集団を、１週間極低
温保存した後に、細胞を解凍し、続いて、刺激に供した。アーム３および８には、追加の
ステップである解凍した後に細胞を、任意のさらなる処理の前にインキュベーターにおい
て２時間静置させる静置ステップが、含まれた。

【0320】

細胞に、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を単離する選択ステップを含む様々な処
理ステップを行った。この選択ステップにおいて、それぞれのアームを、部分アーム（す
なわち、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の部分アーム）に分割し、この時点で、選
択した細胞を、残りの処理ステップへと進めた。表１は、それぞれのアームが受けた極低
温保存ステップを含む研究設計を示す。

【0321】

【表1】

【0322】

（実施例３）
アフェレーシス材料の極低温保存は、細胞の表現型に、意味がある影響を及ぼさない

【0323】

凍結が異なる表現型の細胞の分布に対して与える影響を評価するために、アフェレーシ
ス試料の極低温保存前および極低温保存後に、フロー分析を行った。Ｔ細胞、Ｂ細胞、Ｎ
Ｋ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、単球、樹状細胞、およびメモリーＴ細胞の表現型の分布を評価す
るために、特注のフローパネルを開発した。結果により、異なる表現型の細胞の分布は、
極低温保存前の試料と極低温保存後の試料で、同等であったことが示唆される。

【0324】

極低温保存したアフェレーシス試料および新しいアフェレーシス試料の両方を、フロー
サイトメトリーを使用して、細胞表面上のＣＤ４分子およびＣＤ８分子の存在について、
分析した。このアッセイの結果は、表面のＣＤ４分子およびＣＤ８分子のレベルが、極低
温保存によって影響を受けないことを示した。また、これらの結果により、アフェレーシ
スの極低温保存は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の割合が、両方のドナーについ
て、極低温凍結前および極低温凍結後で、同程度であったため、試料中のこれらの細胞の
相対的な比率に影響を及ぼさなかったことが示唆される。

【0325】

（実施例４）
ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の単離に対する極低温保存の影響

【0326】

さらに、アフェレーシスを極低温保存することが、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細
胞の処理に影響を及ぼすかどうかを評価するために、生存性アッセイを、目的の細胞の選
択に至る様々なステップにおいて、行った。細胞生存性を、極低温保存後の静置期間なし
で選択ステップの前に極低温保存に供した細胞（アーム２、４、７、および９）、極低温
保存後の静置期間ありで選択ステップの前に極低温保存に供した細胞（アーム１、３、６
、および８）、ならびに単離ステップの後に極低温保存に供した細胞（アーム５および１
０、または対照アーム）について、プロセスの様々なステップにおいて、評価した。具体
的には、アフェレーシスを収集した後、アフェレーシスを極低温保存用に製剤化した後、
アフェレーシスを所定の期間極低温保存し、解凍および希釈を行った後、解凍し希釈した
アフェレーシスを洗浄した後、洗浄したアフェレーシスをインキュベーターにおいて２時
間静置させた後、抗体をコーティングしたビーズを試料に添加した後、ならびにＣＤ８＋
Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した後に、生存性を評価した。すべてのアー
ムにわたる細胞生存性の値は、それぞれの処理ステップにおいて、対照アームの細胞生存
性の値と同程度であった。

【0327】

全有核細胞数（ＴＮＣ）もまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の単離
に至る様々なステップの間に、すべての試料について、判定した。細胞喪失は、大部分が
、製剤化ステップ中に生じることが見出された。単離後の細胞数の値を、単離前の細胞数
の値に対して正規化することによって得られた細胞収率比は、極低温保存したアフェレー
シス試料における細胞喪失は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の単離前に生
じていたこと、ならびに単離プロセス内でのステップごとの細胞収率は、影響を受けなか
ったことを示した。しかしながら、この実験において、選択した細胞に対応する最終的な
ＴＮＣの値は、それぞれのドナーについて、それぞれの細胞型の、一部の極低温保存した
アフェレーシスのアームと対照アームとの間で、おそらくは単離前に生じる細胞喪失に起
因して、わずかに異なることが見出された。しかしながら、１人のドナーのＣＤ４＋Ｔ細
胞の収率は、極低温保存したアフェレーシスと対照アームとの間で、同程度であることが
見出された。

【0328】

（実施例５）
単離ステップおよび凍結ステップの後の細胞の表現型および生存性の評価

【0329】

単離ステップの後に、極低温保存ステップを要した細胞（アーム３、４、５、８、９、
および１０）を、極低温保存し、次いで、さらなる分析のために解凍した。アーム３、４
、８、および９の細胞は、１．５～２週間、極低温で保管した後、さらなる分析および処
理のために解凍した。アーム５および１０（または対照アーム）の細胞は、２週間、極低
温で保管した後、さらなる分析および処理のために解凍した。この時点で、それぞれのド
ナーのすべてのアームから得られたすべての単離Ｔ細胞集団について、任意の細胞活性化
ステップの前に、アッセイを行った。ＴＭＥＭアッセイにより、それぞれのドナーの異な
るアームから選択した細胞集団にわたって、様々なＴ細胞マーカーの存在を評価した。細
胞表現型分布（選択したマーカーの検出に基づく）は、それぞれのドナーについて、それ
ぞれの細胞型の、極低温保存したアフェレーシスのアームと対照のアームとの間で、大き
な差はなかった。単離後の凍結ステップを受けなかったアームの細胞は、ナイーブ様細胞
（ＣＤ４５ＲＡ＋／ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋／ＣＤ２８＋）への傾向が強く、最終エフェ
クター細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７－）は少なかった。ＣＤ６２Ｌは、単離後の凍結
ステップに供した試料では、わずかに低減された。

【0330】

細胞生存性を、細胞活性化の前に、それぞれのドナーに由来するそれぞれの細胞型のす
べてのアームについて評価した。細胞生存性は、それぞれのドナーに由来するそれぞれの
細胞型の、極低温保存したアフェレーシスのアームと対照アームとの間で、大きな差はな
かった。加えて、単離後の凍結ステップの作用を評価するために、単離後の凍結ステップ
の後に得られた細胞数を、単離直後、凍結前に得られた細胞数に対して正規化することに
よって、細胞収率比を得た。細胞収率比は、極低温保存したアフェレーシスのアームと、
対照アームとの間で、同様であった。

【0331】

カスパーゼ３のレベルは、アーム全体で、低いことが見出された（５％未満または約５
％）。

【0332】

（実施例６）
活性化、形質導入、および増大の間の細胞生存性および細胞収率の評価

【0333】

既に考察したように、単離ステップの後に、単離後の凍結ステップを受ける必要のある
研究アームは、所定の時間、極低温で保管した後に、解凍し、続けて活性化、形質導入、
および増大のステップを行った。細胞生存性およびＴＮＣの値は、極低温保存した材料を
解凍した後、解凍した材料を、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が結合した常磁性ポリ
スチレンコーティングビーズの存在下において刺激した後、活性化した細胞が形質導入を
受けた後、ビーズを細胞から除去した後、ならびに細胞を２または３日間増大させた後に
、判定した。細胞生存性は、それぞれのドナーについて、それぞれの細胞型の、極低温保
存したアフェレーシスのアームと対照アームとの間で、同程度であることが見出された。
刺激ステップにおいて、極低温保存したアフェレーシスのアームの細胞生存性の値は、対
応する対照アームの値と比較して、２０％未満の差を示した。このパーセント差は、すべ
ての他のステップでは、１０％よりも低かった。加えて、これらのステップのそれぞれに
おいて得られたＴＮＣの値は、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応
する対照アームとの間で、同等であった。さらに、それぞれのステップにおいて計算した
増大倍数もまた、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照アー
ムとの間で、同等であることが見出された。

【0334】

これらの結果により、この実験において、静置も単離直後のさらなる極低温保存ステッ
プもなしの極低温保存したアフェレーシス試料、および静置ステップはあるが、単離直後
のさらなる極低温保存ステップはなしの極低温保存したアフェレーシス試料が、それらの
対応する対照アームと比較して、類似かまたは高い最終細胞収率を有することが示された
。

【0335】

（実施例７）
極低温保存した組成物の製剤化の間の細胞生存性、細胞収率、および細胞活性の評価

【0336】

増大ステップの後に得られたそれぞれのアームからの細胞を、極低温保存媒体において
製剤化し、凍結させた。試料を、次いで、さらなる分析のために解凍した。細胞生存性お
よび細胞収率の値を、このステップの時点で、研究のすべてのアームにおける細胞につい
て、判定した。平均の生存性および細胞数収率は、このステップの時点で、極低温保存し
たアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照アームとの間で、同等であった。

【0337】

さらに、すべてのアームについて、細胞表現型分布を評価するために、アッセイを行っ
た。細胞表現型は、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照ア
ームとの間で、統計学的に同等であることが見出された。単離後の凍結ステップを受けな
かったアームは、ＣＤ４５ＲＡ＋／ＣＣＲ７＋細胞およびＣＤ２７＋／ＣＤ２８＋細胞を
より高い割合で含み、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＣＲ７－細胞は少ない傾向にあった。加え
て、この実験において、カスパーゼ３のレベルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞のアームでは、ＣＤ４
＋Ｔ細胞のアームと比較して、わずかに高いことが見出され、単離後の凍結ステップを含
んでいたアームは、このステップを含んでいなかったアームよりも高いカスパーゼレベル
を示した。

【0338】

インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）分泌を使用して、処理後のＴ細胞機能性を評価し
た。それぞれのアームからのＴ細胞を、ＩＦＮγを産生するように刺激した。刺激後に、
上清を収集し、上清中に分泌されたＩＦＮγを測定した。すべての実験条件について、値
は、それらの対応する対照の値と一致しており、最終的な細胞産物の細胞活性が、初期の
極低温保存ステップによって影響を受けなかったことが示された。

【0339】

さらに、産生されたＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞溶解活性を評価するために、細胞溶解アッセ
イも行った。細胞溶解活性を、様々なエフェクター細胞：標的細胞の比で測定して、ＥＣ
５０（標的細胞の５０％を殺滅するのに必要な比率）を判定した。極低温保存したアフェ
レーシスのアームの、それらの対応する対照アームと比較した、細胞溶解ＥＣ５０の差異
倍数は、２倍未満の差異であることが見出され、異なるアーム条件が、結果として得られ
る細胞の細胞溶解ＥＣ５０に、意味がある変化を及ぼすことはなかったことが示唆された
。
例示的な実施形態

【0340】

１．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法で
あって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断された後であり、かつド
ナーが以下の：疾患もしくは状態の任意の初回処置、疾患もしくは状態の処置のための任
意の標的化処置もしくはそれを対象とする任意の処置、または放射線照射および／もしく
は化学療法以外の任意の処置のうちの１つまたは複数を受ける前である時点、（ｉｉ）ド
ナーにおける、疾患もしくは状態の初回処置の後の疾患もしくは状態の１回目の再発の後
であり、かつドナーが疾患もしくは状態の再発後の処置を受ける前である時点、あるいは
（ｉｉｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されていないか、または疾患もしくは
状態を有することが判明していないか、または疾患もしくは状態を有することが疑われて
いない時点において、ドナーから得られている、方法。

【0341】

２．生物学的試料が、ドナーの血液試料であるか、またはそれに由来する、実施形態１
に記載の方法。

【0342】

３．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞集団および／またはＴ細胞集団および
／またはＴ細胞サブセットの選択ステップに供されていない、および／またはそれが濃縮
されていない、実施形態１または実施形態２に記載の方法。

【0343】

４．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞および／またはＴ細胞集団の選択ステ
ップおよび／または濃縮に供されており、必要に応じて、前記極低温保管の前に、生物学
的試料から細胞集団を選択または濃縮することをさらに含む、実施形態１または実施形態
２に記載の方法。

【0344】

５．選択ステップおよび／または濃縮が、免疫親和性に基づく選択を含む、および／ま
たは陽性選択もしくは陰性選択を含む、実施形態４に記載の方法。

【0345】

６．選択ステップおよび／または濃縮が、ＣＤ４^＋細胞もしくはそのサブセットおよび
／またはＣＤ８＋細胞もしくはそのサブセットの濃縮および／または単離を含み、ＣＤ４
^＋細胞またはそのサブセットの濃縮または単離が、ＣＤ８^＋細胞またはそのサブセットの
選択および／または単離とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで行われ、必要
に応じて、ＣＤ８^＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４^＋細胞のサブセットが、必要
に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞、エフェクターメモリー
細胞（Ｔ_ＥＭ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（Ｔ_Ｅ）
細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、お
よび／または調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態２～５のい
ずれかに記載の方法。

【0346】

７．細胞が、Ｔ細胞を含むか、またはＴ細胞が濃縮されている、実施形態１～６のいず
れか１つに記載の方法。

【0347】

８．Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８^＋Ｔ細胞もしくはその
サブセット、またはこれらの混合物を含むか、またはそれらが濃縮されており、ＣＤ８^＋
細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４^＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー
細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（Ｔ_ＥＭ）、ス
テムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフェクター
メモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、および／または調節性
Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態７に記載の方法。

【0348】

９．細胞を極低温で保管する前に、細胞を、０℃よりも低いかまたは０℃に等しい温度
に冷却することをさらに含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の方法。

【0349】

１０．細胞を保管する前および／または冷却する前に、細胞を、凍結溶液と合わせるこ
とをさらに含む、実施形態８に記載の方法。

【0350】

１１．凍結溶液が、約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および血清タンパク
質、必要に応じて、ヒト血清アルブミン、必要に応じて、約４％のヒト血清アルブミンを
含む、ならびに／または凍結溶液、および／もしくは細胞が極低温保存および保管される
最終濃度の組成物が、約１体積％～約２０体積％、約３体積％～約９体積％、もしくは約
６体積％～約９体積％のＤＭＳＯを含む、および／または約３体積％、約４体積％、約５
体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、
約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、もしくは約１０体積％のＤ
ＭＳＯを含む、実施形態１０に記載の方法。

【0351】

１２．細胞を冷却することが、１分間につき１℃または約１℃の速度で、必要に応じて
、温度が－８０℃または約－８０℃に達するまで、温度を低下させることを含む、実施形
態９～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0352】

１３．細胞が、液体窒素の気相に入れた容器において極低温で保管され、容器が、必要
に応じて、極低温保存に好適なバッグまたはバイアルである、実施形態１～１１のいずれ
か１つに記載の方法。

【0353】

１４．細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時
間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月
間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１
カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、
１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、
１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低
温で保管される、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の方法。

【0354】

１５．細胞が、ある期間保管され、期間の後、組成物中の生存細胞もしくは生存Ｔ細胞
またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、約２４％～約１００％であるか
、または少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、
６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０％である、実施形態１～１４のいずれかに
記載の方法。

【0355】

１６．疾患が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または
感染性疾患もしくは状態である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0356】

１７．がんが、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、
有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキ
ンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾
胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、また
は急性骨髄性白血病である、実施形態１６に記載の方法。

【0357】

１８．がんが、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、
ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、Ｃ
Ｄ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４
、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、Ｇ
Ｄ２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ２、
ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵ
Ｃ１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣ
Ａ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗
原、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭ
Ａ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、Ｃ
Ｄ１２３、ＣＳ－１、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、およびＭＡＧＥ Ａ３、ＣＥ７、ウィルム
ス腫瘍１（ＷＴ－１）、およびサイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）の
うちの少なくとも１つを発現する細胞を含む、実施形態１６または１７に記載の方法。

【0358】

１９．初回処置または後続の処置が、化学療法、放射線照射、および／もしくは外科手
術である、ならびに／またはデバルキング処置である、実施形態１～１８のいずれか１つ
に記載の方法。

【0359】

２０．初回処置または後続の処置が、化学療法の組合せであるか、またはそれを含む、
実施形態１９に記載の方法。

【0360】

２１．ドナーが、ヒトである、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法。

【0361】

２２．極低温保管の前に、細胞を、必要に応じて、１つまたは複数の表現型マーカーに
ついて、細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、実施形態
１～２１のいずれか１つに記載の方法。

【0362】

２３．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態１～２１のいずれ
か１つに記載の方法。

【0363】

２４．細胞の活性を増加させるために、極低温後修飾を行うことをさらに含む、実施形
態２３に記載の方法。

【0364】

２５．極低温後修飾が、極低温保管の前に細胞を分析することに基づく、実施形態２４
に記載の方法。

【0365】

２６．細胞の極低温保管および／または解凍の後に、組換えまたは外因性分子を発現す
るように細胞を操作することをさらに含み、これが、必要に応じて、組換えタンパク質、
必要に応じて、組換え受容体であり、これが、必要に応じて、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、
キメラ受容体、および／またはキメラ抗原受容体であるか、またはそれらを含む、実施形
態２３～２５のいずれかに記載の方法。

【0366】

２７．組換え分子が、疾患または状態によって発現されるか、それらによって特異的に
発現されるか、またはそれらと関連する抗原を特異的に認識するか、またはそれに特異的
に結合する組換え受容体である、実施形態２６に記載の方法。

【0367】

２８．ドナーから収集されたとき、および／またはアフェレーシス試料中の合計の、細
胞の数が、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の数もしくはおよそ以
下の数を上回らない、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の方法：５００×１０^６個
、１０００×１０^６個、２０００×１０^６個、３０００×１０^６個、４０００×１０^６個
、もしくは５０００×１０^６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは合計有核細胞
。

【0368】

２９．アフェレーシス試料を処理するための方法であって、（ａ）ドナーから得られた
アフェレーシス試料を、低温環境で、保管施設に輸送すること、および（ｂ）必要に応じ
て保管施設において、アフェレーシス試料を極低温で保管することを含む、方法。

【0369】

３０．試料を輸送する前および／または試料を極低温で保管する前に、アフェレーシス
試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、実施形態２９に記載の方法。

【0370】

３１．Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８^＋Ｔ細胞もしくはそ
のサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが
濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８^＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４^＋細胞
のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞、
エフェクターメモリー細胞（Ｔ_ＥＭ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、エ
フェクターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、ナイー
ブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、および／または調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択される
、ならびに／または試料が、バルクＴ細胞が濃縮されている、実施形態３０に記載の方法
。

【0371】

３２．輸送する前に、アフェレーシス試料を分析することをさらに含む、実施形態２９
～３１のいずれか１つに記載の方法。

【0372】

３３．輸送する前に、アフェレーシス試料に凍結溶液を添加することをさらに含む、実
施形態２９～３２のいずれか１つに記載の方法。

【0373】

３４．輸送する前に、アフェレーシス試料に凍結溶液を添加することをさらに含み、凍
結溶液が、輸送する前にアフェレーシス試料を分析することに基づいて選択される、実施
形態３２に記載の方法。

【0374】

３５．輸送する前に、アフェレーシス試料を極低温で凍結させることをさらに含む、実
施形態２９～３４のいずれか１つに記載の方法。

【0375】

３６．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料からＴ細胞
を濃縮することをさらに含む、実施形態３５に記載の方法。

【0376】

３７．Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８^＋Ｔ細胞もしくはそ
のサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが
濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８^＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４^＋細胞
のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞、
エフェクターメモリー細胞（Ｔ_ＥＭ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、エ
フェクターＴ（Ｔ_Ｅ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ_ＥＭＲＡ）細胞、ナイー
ブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、および／または調節性Ｔ（Ｔ_ＲＥＧ）細胞からなる群から選択される
、ならびに／またはバルクＴ細胞を含む、実施形態３６に記載の方法。

【0377】

３８．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細
胞を分析することをさらに含む、実施形態３６～３７のいずれか１つに記載の方法。

【0378】

３９．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細
胞に、凍結溶液を添加することをさらに含む、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載
の方法。

【0379】

４０．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細
胞に、凍結溶液を添加することをさらに含み、凍結溶液が、必要に応じて、輸送した後、
かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細胞を分析することに基
づいて選択される、実施形態３８に記載の方法。

【0380】

４１．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態２９～４０のいず
れか１つに記載の方法。

【0381】

４２．解凍の後に、細胞を分析することをさらに含む、実施形態４１に記載の方法。

【0382】

４３．解凍の後の分析に基づいて、細胞のさらなる修飾のための条件を選択することを
さらに含む、実施形態４２に記載の方法。

【0383】

４４．処置の方法であって、必要に応じて対象に由来するＴ細胞を含む、極低温で凍結
された細胞の試料を得て、必要に応じて解凍することであって、前記得ることの前に、細
胞が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月間、また
は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０年間の期間、極低温で
凍結されていることと、組換え抗原受容体を発現するように、細胞を修飾することと、細
胞を対象に投与することとを含む、方法。

【0384】

４５．試料が、実施形態１～４３のいずれかに記載の方法に従って凍結および／または
保管されている、実施形態４４に記載の方法。
さらなる例示的な実施形態Ｉ

【0385】

１．操作細胞の組成物を産生するための方法であって、（ａ）（ｉ）ＴＣＲ複合体の１
つもしくは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび／ま
たは１つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン
を活性化することができる刺激性試薬、ならびに（ｉｉ）１つまたは複数のサイトカイン
の存在を含む刺激条件下において、ＣＤ４＋初代ヒトＴ細胞が濃縮されたＴ細胞を含むイ
ンプット組成物をインキュベートし、それによって、刺激された組成物を生成することと
、（ｂ）組換え受容体を、刺激された組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む
、操作組成物を生成することとを含み、インプット組成物が、少なくとも１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月間、または少なくとも１、２、３、４、５
、６、７、８、９、もしくは１０年間の期間、極低温で保管されている試料であるか、ま
たはそれに由来する、方法。

【0386】

２．刺激性試薬が、ＴＣＲ複合体のメンバーに特異的に結合し、必要に応じてＣＤ３に
特異的に結合する一次作用物質を含む、実施形態１に記載の方法。

【0387】

３．刺激性試薬が、Ｔ細胞共刺激性分子に特異的に結合する二次作用物質をさらに含み
、必要に応じて、共刺激性分子が、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１－ＢＢ）、ＯＸ４０、
またはＩＣＯＳから選択される、実施形態２に記載の方法。

【0388】

４．一次および／または二次作用物質が、抗体を含み、必要に応じて、刺激性試薬が、
抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体またはそれらの抗原結合性断片とのインキュベーショ
ンを含む、実施形態２または実施形態３に記載の方法。

【0389】

５．一次作用物質および／または二次作用物質が、固体支持体の表面上に存在する、実
施形態２～４のいずれか１つに記載の方法。

【0390】

６．固体支持体が、ビーズであるか、またはビーズを含む、実施形態５に記載の方法。

【0391】

７．ビーズが、３．５μｍを上回るかまたは約３．５μｍを上回るが、約９μｍを上回
らない、または約８μｍを上回らない、または約７μｍを上回らない、または約６μｍを
上回らない、または約５μｍを上回らない直径を含む、実施形態６に記載の方法。

【0392】

８．ビーズが、４．５μｍまたは約４．５μｍの直径を含む、実施形態６または実施形
態７に記載の方法。

【0393】

９．ビーズが、不活性である、実施形態６～８のいずれか１つに記載の方法。

【0394】

１０．ビーズが、ポリスチレン表面であるか、またはそれを含む、実施形態６～９のい
ずれか１つに記載の方法。

【0395】

１１．ビーズが、磁性または超常磁性である、実施形態６～１０のいずれか１つに記載
の方法。

【0396】

１２．ビーズの細胞に対する比が、３未満：１である、実施形態６～１１のいずれか１
つに記載の方法。

【0397】

１３．ビーズの細胞に対する比が、２：１または約２：１～０．５：１である、実施形
態６～１２のいずれか１つに記載の方法。

【0398】

１４．ビーズの細胞に対する比が、１：１または約１：１である、実施形態６～１３の
いずれか１つに記載の方法。

【0399】

１５．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌ
クレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することを含む、実施形態１～１４のいず
れか１つに記載の方法。

【0400】

１６．ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、実施形態１５に記載の方
法。

【0401】

１７．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベク
ターである、実施形態１５または実施形態１６に記載の方法。

【0402】

１８．導入することが、形質導入アジュバントの存在下において行われる、実施形態１
５～１７のいずれか１つに記載の方法。

【0403】

１９．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌ
クレオチドを含むベクターをトランスフェクトすることを含む、実施形態１～１８のいず
れか１つに記載の方法。

【0404】

２０．ベクターが、トランスポゾン、必要に応じて、スリーピングビューティー（ＳＢ
）トランスポゾンまたはピギーバックトランスポゾンである、実施形態１９に記載の方法
。

【0405】

２１．操作細胞の増殖または増大を促進する条件下において、操作組成物を培養し、そ
れによって、操作Ｔ細胞を含むアウトプット組成物を産生することをさらに含む、実施形
態１～２０のいずれか１つに記載の方法。

【0406】

２２．刺激性試薬が、培養する前に、操作組成物から除去される、実施形態２１に記載
の方法。

【0407】

２３．ビーズを除去することが、操作組成物の細胞を、磁場に曝露することを含む、実
施形態２２に記載の方法。

【0408】

２４．培養することの少なくとも一部分が、継続的な混合および／または灌流によって
行われる、実施形態２１～２３のいずれか１つに記載の方法。

【0409】

２５．操作細胞組成物を産生する方法であって、（ａ）（ｉ）ＴＣＲ複合体の１つもし
くは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または１
つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性
化することができる刺激性試薬、ならびに（ｉｉ）１つまたは複数のサイトカインの存在
を含む刺激条件下において、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞のうちの一方または
両方が濃縮された、初代Ｔ細胞を含むインプット組成物をインキュベートし、それによっ
て、刺激された組成物を生成することと、（ｂ）組換え受容体を、刺激された組成物に導
入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む、操作組成物を生成することとを含み、インプッ
ト組成物が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月間
、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０年間の期間、極
低温で保管されている試料であるか、またはそれに由来する、方法。

【0410】

２６．刺激性試薬が、ＴＣＲ複合体のメンバーに特異的に結合し、必要に応じてＣＤ３
に特異的に結合する一次作用物質を含む、実施形態２４または実施形態３５に記載の方法
。

【0411】

２７．刺激性試薬が、Ｔ細胞共刺激性分子に特異的に結合する二次作用物質をさらに含
み、必要に応じて、共刺激性分子が、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１－ＢＢ）、ＯＸ４０
、またはＩＣＯＳから選択される、実施形態２６に記載の方法。

【0412】

２８．一次および／または二次作用物質が、抗体を含み、必要に応じて、刺激性試薬が
、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体またはそれらの抗原結合性断片とのインキュベーシ
ョンを含む、実施形態２６または実施形態２７に記載の方法。

【0413】

２９．一次作用物質および／または二次作用物質が、固体支持体の表面上に存在する、
実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の方法。

【0414】

３０．固体支持体が、ビーズであるか、またはビーズを含む、実施形態２９に記載の方
法。

【0415】

３１．ビーズが、３．５μｍを上回るかまたは約３．５μｍを上回るが、約９μｍを上
回らない、または約８μｍを上回らない、または約７μｍを上回らない、または約６μｍ
を上回らない、または約５μｍを上回らない直径を含む、実施形態３０に記載の方法。

【0416】

３２．ビーズが、４．５μｍまたは約４．５μｍの直径を含む、実施形態３０または実
施形態３１に記載の方法。

【0417】

３３．ビーズが、不活性である、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載の方法。

【0418】

３４．ビーズが、ポリスチレン表面であるか、またはそれを含む、実施形態３０～３３
のいずれか１つに記載の方法。

【0419】

３５．ビーズが、磁性または超常磁性である、実施形態３０～３４のいずれか１つに記
載の方法。

【0420】

３６．ビーズの細胞に対する比が、３未満：１である、実施形態３０～３５のいずれか
１つに記載の方法。

【0421】

３７．ビーズの細胞に対する比が、２：１または約２：１～０．５：１である、実施形
態３０～３６のいずれか１つに記載の方法。

【0422】

３８．ビーズの細胞に対する比が、１：１または約１：１である、実施形態３０～３７
のいずれか１つに記載の方法。

【0423】

３９．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌ
クレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することを含む、実施形態２４～３８のい
ずれか１つに記載の方法。

【0424】

４０．ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、実施形態３９に記載の方
法。

【0425】

４１．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベク
ターである、実施形態３９または実施形態４０に記載の方法。

【0426】

４２．導入することが、形質導入アジュバントの存在下において行われる、実施形態２
４～４１のいずれか１つに記載の方法。

【0427】

４３．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌ
クレオチドを含むベクターをトランスフェクトすることを含む、実施形態２４～３８のい
ずれか１つに記載の方法。

【0428】

４４．ベクターが、トランスポゾン、必要に応じて、スリーピングビューティー（ＳＢ
）トランスポゾンまたはピギーバックトランスポゾンである、実施形態４３に記載の方法
。

【0429】

４５．操作細胞組成物が、刺激性試薬を含まない、および／または刺激性試薬が、培養
の前に組成物から実質的に除去されており、前記刺激性試薬が、ＴＣＲ複合体の１つもし
くは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または１
つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性
化することができる試薬を含む、実施形態２４または実施形態２５に記載の方法。

【0430】

４６．培養することが、少なくとも、アウトプット組成物が閾値数のＴ細胞を含むまで
行われる、実施形態２１～４５のいずれか１つに記載の方法。

【0431】

４７．培養することが、閾値数のＴ細胞が達成された後、少なくとも１日間、継続され
る、実施形態４６に記載の方法。

【0432】

４８．培養に続いて、アウトプット組成物の細胞を収集する、実施形態２１～４７のい
ずれか１つに記載の方法。

【0433】

４９．アウトプット組成物の細胞を、極低温保存および／または対象への投与のために
、必要に応じて薬学的に許容される賦形剤の存在下において、製剤化することをさらに含
む、実施形態２１～４８のいずれかに記載の方法。

【0434】

５０．アウトプット組成物の細胞が、極低温保護剤の存在下において製剤化される、実
施形態４９に記載の方法。

【0435】

５１．極低温保護剤が、ＤＭＳＯを含む、実施形態５０に記載の方法。

【0436】

５２．アウトプット組成物の細胞が、容器、必要に応じてバイアルまたはバッグにおい
て、製剤化される、実施形態４９～５１のいずれかに記載の方法。

【0437】

５３．インキュベートする前に、生物学的試料からＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ
８＋Ｔ細胞を単離することをさらに含む、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の方法
。

【0438】

５４．単離することが、ＣＤ４および／またはＣＤ８の表面発現に基づいて、必要に応
じて陽性選択または陰性選択によって、細胞を選択することを含む、実施形態５３に記載
の方法。

【0439】

５５．単離することが、免疫親和性に基づく選択を実行することを含む、実施形態５３
または実施形態５４に記載の方法。

【0440】

５６．生物学的試料が、対象から得られた初代Ｔ細胞を含む、実施形態５３～５５のい
ずれか１つに記載の方法。

【0441】

５７．対象が、ヒト対象である、実施形態５６に記載の方法。

【0442】

５８．生物学的試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）
試料、未分画Ｔ細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血
球アフェレーシス産物であるか、またはそれらを含む、実施形態５３～５５のいずれか１
つに記載の方法。

【0443】

５９．生物学的試料が、極低温保存されたアフェレーシス産物または極低温保存された
白血球アフェレーシス産物であるか、またはそれらを含む、実施形態５３～５５のいずれ
か１つに記載の方法。

【0444】

６０．組換え受容体が、疾患、障害、または状態の細胞または組織と関連する、それに
特異的である、および／またはそこに発現される標的抗原に結合することができる、実施
形態１～５９のいずれか１つに記載の方法。

【0445】

６１．疾患、障害、または状態が、感染性疾患もしくは障害、自己免疫性疾患、炎症性
疾患、または腫瘍もしくはがんである、実施形態６０に記載の方法。

【0446】

６２．標的抗原が、腫瘍抗原である、実施形態６０または実施形態６１に記載の方法。

【0447】

６３．標的抗原が、５Ｔ４、８Ｈ９、ａｖｂ６インテグリン、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ細胞成熟
抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ９、がん－精巣抗原、炭酸脱水酵素９（ＣＡＩＸ）、ＣＣＬ－１
、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＥＡ、Ｂ型肝炎表面抗原、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｃ
Ｄ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ１２３
、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥ７、サイクリン、サイクリン
Ａ２、ｃ－Ｍｅｔ、二重抗原、ＥＧＦＲ、上皮糖タンパク質２（ＥＰＧ－２）、上皮糖タ
ンパク質４０（ＥＰＧ－４０）、ＥＰＨａ２、エフリンＢ２、ｅｒｂ－Ｂ２、ｅｒｂ－Ｂ
３、ｅｒｂ－Ｂ４、ｅｒｂＢ二量体、ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ、エストロゲン受容体、胎児性
ＡｃｈＲ、葉酸受容体アルファ、葉酸結合性タンパク質（ＦＢＰ）、ＦＣＲＬ５、ＦＣＲ
Ｈ５、胎児性アセチルコリン受容体、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、ｇｐ１００
、Ｇタンパク質共役型受容体５Ｄ（ＧＰＣＲ５Ｄ）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（受容体チロシン
キナーゼｅｒｂＢ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３受容体ア
ルファ２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、キナーゼインサートドメイン受容体（ｋｄｒ）、カッパ
軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－
Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１、メソテリン、マウスＣＭＶ、ム
チン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－
ＥＳＯ－１、Ｏ－アセチル化ＧＤ２（ＯＧＤ２）、癌胎児性抗原、優先的に発現される黒
色腫の抗原（ＰＲＡＭＥ）、ＰＳＣＡ、プロゲステロン受容体、サバイビン、ＲＯＲ１、
ＴＡＧ７２、ｔＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ－
１）、病原体特異的抗原、およびユニバーサルタグと関連する抗原の中から選択される、
実施形態６０～６２のいずれか１つに記載の方法。

【0448】

６４．組換え受容体が、機能性非ＴＣＲ抗原受容体、またはＴＣＲ、またはその抗原結
合性断片であるか、またはそれらを含む、実施形態１～６３のいずれか１つに記載の方法
。

【0449】

６５．組換え受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１～６４のいず
れか１つに記載の方法。

【0450】

６６．組換え受容体が、抗ＣＤ１９ ＣＡＲである、実施形態１～６５のいずれか１つ
に記載の方法。

【0451】

６７．キメラ抗原受容体が、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含む、実施形
態６５に記載の方法。

【0452】

６８．抗原結合性ドメインが、抗体またはその抗体断片であるか、またはそれを含み、
断片が、必要に応じて、一本鎖断片である、実施形態６７に記載の方法。

【0453】

６９．断片が、可動性リンカーによって接合された抗体可変領域を含む、実施形態６８
に記載の方法。

【0454】

７０．断片が、ｓｃＦｖを含む、実施形態６８または実施形態６９に記載の方法。

【0455】

７１．キメラ抗原受容体が、スペーサーおよび／またはヒンジ領域をさらに含む、実施
形態６７～７０のいずれか１つに記載の方法。

【0456】

７２．キメラ抗原受容体が、細胞内シグナル伝達領域を含む、実施形態６７～７１のい
ずれかに記載の方法。

【0457】

７３．細胞内シグナル伝達領域が、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態７２
に記載の方法。

【0458】

７４．細胞内シグナル伝達ドメインが、一次シグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞において一
次活性化シグナルを誘導することができるシグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ
）構成要素のシグナル伝達ドメイン、および／または免疫受容体活性化チロシンモチーフ
（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインであるか、またはそれらを含む、実施形態７３
に記載の方法。

【0459】

７５．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３鎖の細胞内シグナル伝達ドメイン、必要
に応じて、ＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖、またはそのシグナル伝達部分であるか、また
はそれを含む、実施形態７４に記載の方法。

【0460】

７６．キメラ抗原受容体が、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間に配置さ
れる、膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態７２～７５のいずれか１つに記載の方法。

【0461】

７７．細胞内シグナル伝達領域が、共刺激性シグナル伝達領域をさらに含む、実施形態
７２～７６のいずれか１つに記載の方法。

【0462】

７８．共刺激性シグナル伝達領域が、Ｔ細胞共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメイ
ンまたはそのシグナル伝達部分を含む、実施形態７７に記載の方法。

【0463】

７９．共刺激性シグナル伝達領域が、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、もしくはＩＣＯＳの細胞
内シグナル伝達ドメイン、またはこれらのシグナル伝達部分を含む、実施形態７７または
請求項７８に記載の方法。

【0464】

８０．共刺激性シグナル伝達領域が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間
にある、実施形態７７～７９のいずれか１つに記載の方法。

【0465】

８１．閾値数またはそれを上回る数の細胞を含むアウトプット組成物が、方法の反復の
うちの８５％を上回るかもしくは約８５％を上回る、９０％を上回るかもしくは約９０％
を上回る、または９５％を上回るかもしくは約９５％を上回る割合において産生される、
実施形態４６～４７のいずれか１つに記載の方法。

【0466】

８２．実施形態１～７９のいずれか１つに記載の方法によって産生される操作細胞を含
む、組成物。

【0467】

８３．薬学的に許容される担体をさらに含む、実施形態８２に記載の組成物。

【0468】

８４．極低温保護剤、必要に応じてＤＭＳＯを含む、実施形態８２または実施形態８３
に記載の組成物。

【0469】

８５．実施形態８０～８２のいずれかに記載の組成物と、アウトプット組成物を対象に
投与するための説明書とを含む製品。

【0470】

８６．対象が、疾患または状態を有し、必要に応じて、組換え受容体が、疾患もしくは
状態と関連するか、または疾患もしくは状態の細胞上に発現もしくは存在する抗原を特異
的に認識するか、またはそれに特異的に結合する、実施形態８５に記載の製品。

【0471】

８７．アウトプット組成物が、操作ＣＤ４＋Ｔ細胞の組成物である、実施形態８５また
は実施形態８６に記載の製品。

【0472】

８８．アウトプット組成物が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の操作組成物である、実施形態８５また
は実施形態８６に記載の製品。

【0473】

８９．実施形態１～２５または２６～８１のいずれか１つに記載の方法によって産生さ
れた、操作ＣＤ４＋Ｔ細胞の組成物と、請求項２～２３、２５、または２６～８１のいず
れかに記載の方法によって産生された、操作ＣＤ８＋Ｔ細胞の組成物と、操作ＣＤ４＋Ｔ
細胞および操作ＣＤ８＋Ｔ細胞を対象に投与するための説明書とを含む製品。

【0474】

９０．説明書により、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、別個に対象に投与する
ことが指定される、実施形態８９に記載の製品。

【0475】

９１．説明書により、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、所望される比で対象に
投与することが指定される、実施形態８９または実施形態９０に記載の製品。
さらなる例示的な実施形態ＩＩ

【0476】

１．生物学的試料を保管する方法であって、対象から生物学的試料を得ること、生物学
的試料を２つまたはそれを上回る別個の容器に分割すること、生物学的試料を極低温保存
すること、極低温保存した生物学的試料を保管することを含む、方法。

【0477】

２．対象が、ヒト対象である、実施形態１に記載の方法。

【0478】

３．生物学的試料が、アフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物である、実
施形態１～２のいずれか１つに記載の方法。

【0479】

４．２つまたはそれを上回る別個の容器が、それぞれ、極低温バッグおよび／または極
低温バイアルからなる群から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法。

【0480】

５．２つまたはそれを上回る別個の容器が、固有の識別子をそこに含む、実施形態１～
４のいずれか１つに記載の方法。

【0481】

６．固有の識別子が、文字情報、ＲＦＩＤタグ、ＱＲコード（登録商標）、および／ま
たはバーコードのうちの任意の１つまたは複数を含む、実施形態５に記載の方法。

【0482】

７．固有の識別子情報が、以下のカテゴリー：対象の識別、試料保管の場所、保管およ
び／または取扱いの説明、受領の日付、極低温保存の日付、消費期限、ならびに意図され
る使用のうちの任意の１つまたは複数に関する情報を含む、実施形態５～６のいずれか１
つに記載の方法。

【0483】

８．生物学的試料が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、
３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、
３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間
、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９
年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７
年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間
、保管される、実施形態１～７のいずれか１つに記載の方法。

【0484】

９．生物学的試料を保管する方法であって、（ａ）対象から生物学的試料を得ることと
、（ｂ）生物学的試料を、１つまたは複数の容器において極低温保存することと、（ｃ）
極低温保存した生物学的試料を、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２
４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２
カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１
０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８
年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年
間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または
４０年間、保管することとを含む、方法。

【0485】

１０．対象が、ヒト対象である、実施形態９に記載の方法。

【0486】

１１．生物学的試料が、アフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物である、
実施形態９～１０のいずれか１つに記載の方法。

【0487】

１２．１つまたは複数の容器が、それぞれ、極低温バッグおよび／または極低温バイア
ルからなる群から選択される、実施形態９～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0488】

１３．１つまたは複数の別個の容器が、固有の識別子をそこに含む、実施形態９～１２
のいずれか１つに記載の方法。

【0489】

１４．固有の識別子が、文字情報、ＲＦＩＤタグ、ＱＲコード（登録商標）、および／
またはバーコードのうちの任意の１つまたは複数を含む、実施形態１３に記載の方法。

【0490】

１５．固有の識別子情報が、以下のカテゴリー：対象の識別、試料保管の場所、保管お
よび／または取扱いの説明、受領の日付、極低温保存の日付、消費期限、ならびに意図さ
れる使用のうちの任意の１つまたは複数に関する情報を含む、実施形態１３～１４のいず
れか１つに記載の方法。

【0491】

１６．対象に対応する生物学的試料を得る方法であって、（ａ）試料を対象と関連付け
ている固有の識別子に基づいて、中央施設における極低温保存された試料の位置を特定す
ることと、（ｂ）極低温保存された試料を得ることとを含む、方法。

【0492】

１７．生物学的試料が、遺伝子的に対象に適合する、対象の自家産物を産生するのに好
適である、および／または対象の細胞を含んでいる、実施形態１６に記載の方法。
さらなる例示的な実施形態ＩＩＩ

【0493】

１．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法で
あって、細胞が、ドナーが疾患または状態であると診断された後、またはそれを有するか
もしくはそれを有する疑いがあるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の
１つまたは複数の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られ、細胞が、試料および
／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステッ
プを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御された速度の凍結装置において、
凍結される、方法。

【0494】

２．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法で
あって、細胞が、ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされた後
、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後
続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られている、方法。

【0495】

３．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法で
あって、細胞が、ドナーが疾患もしくは状態であると診断されていないか、またはそれを
有することが判明していないか、またはそれを有することが疑われていない時点で、ドナ
ーから得られており、細胞が、試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る
速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用し
て、制御された速度の凍結装置において、凍結される、方法。

【0496】

４．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
（ｂ）極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することとを含む方法であって、細胞が
、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしく
はそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処
置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不
応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつド
ナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまた
は得られたものであり、保管の期間中に、ドナーが、疾患または状態の少なくとも１つの
処置を受けるか、または受けた、方法。

【0497】

５．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
（ｂ）極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することとを含む方法であって、細胞が
、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしく
はそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処
置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不
応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつド
ナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまた
は得られたものであり、細胞が、以下を上回るかもしくは以下に等しい期間：１２時間、
２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、
２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、
１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、
８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６
年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、もし
くは４０年間、またはドナーが細胞を必要とするまで、極低温で保管される、方法。

【0498】

６．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
（ｂ）極低温で凍結させた細胞から生成された操作Ｔ細胞を含む、治療有効量の組成物を
、それを必要とする対象に投与することとを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが
疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有するこ
とが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処置を受ける前であ
る時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみな
されたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または
状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまたは得られたもので
あり、凍結と投与との間に、ドナーが、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受ける
か、または受けた、方法。

【0499】

７．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させ、それによ
って、極低温で凍結させた細胞組成物を生成することと、（ｂ）極低温で凍結させた細胞
組成物の細胞を操作して、操作Ｔ細胞を含む組成物を生成することとを含む方法であって
、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有する
かもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または
状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジ
メンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり
、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られ
るかまたは得られたものであり、凍結と操作との間に、ドナーが、疾患または状態の少な
くとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。

【0500】

８．治療有効量の操作Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、処置の
方法であって、細胞が、（ｉ）対象が疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそ
れを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ対象が疾
患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）対象が疾患または状態の処
置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後
であり、かつ対象が疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、対象から得ら
れるかまたは得られたものであり、細胞が、対象から得られるかもしくは得られた後、か
つ操作Ｔ細胞の投与の前に、対象が、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか
、または受けた、方法。

【0501】

９．操作細胞の組成物を産生するための方法であって、（ａ）極低温で保管した細胞を
得て、必要に応じて解凍することと、（ｂ）極低温で保管した細胞に、組換え受容体を導
入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作組成物を生成することとを含む方法であって
、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有する
かもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または
状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジ
メンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり
、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから採取し
た後に、極低温で保管され、極低温保管の後および極低温で保管した細胞を得る前に、ド
ナーが、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。

【0502】

１０．生物学的試料が、アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、必要に応じ
て白血球アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、かつ／または試料が、白血球
および／またはリンパ球を含有し、かつ／または試料中の細胞または血液細胞が、白血球
から本質的になるか、または試料中の細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、
９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、または試料中の血液細胞のうちの少
なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％が
、白血球である、実施形態１～９のいずれか１つに記載の方法。

【0503】

１１．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞集団および／またはＴ細胞集団およ
び／またはＴ細胞サブセットの、免疫親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択お
よび／または濃縮のステップに供されていない、実施形態１～１０のいずれか１つに記載
の方法。

【0504】

１２．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞および／またはＴ細胞集団の、免疫
親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択および／または濃縮ステップに供されて
おり、必要に応じて、前記極低温保管の前に、前記選択または濃縮を行うことをさらに含
む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法。

【0505】

１３．選択ステップおよび／または濃縮が、免疫親和性に基づく選択を含む、および／
または陽性選択もしくは陰性選択を含む、実施形態１２に記載の方法。

【0506】

１４．選択ステップおよび／または濃縮が、ＣＤ４＋細胞もしくはそのサブセットおよ
び／またはＣＤ８＋細胞もしくはそのサブセットの濃縮および／または単離を含み、ＣＤ
４＋細胞またはそのサブセットの濃縮または単離が、ＣＤ８＋細胞またはそのサブセット
の選択および／または単離とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで行われ、必
要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必
要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリ
ー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ
）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、
および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態１２～１
３のいずれか１つに記載の方法。

【0507】

１５．細胞が、Ｔ細胞を含むか、またはＴ細胞が濃縮されている、実施形態１～１４の
いずれか１つに記載の方法。

【0508】

１６．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそ
のサブセット、またはこれらの混合物を含むか、またはそれらが濃縮されており、ＣＤ８
＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリ
ー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、
ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクタ
ーメモリーＲＡ Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節
性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態１５に記載の方法。

【0509】

１７．細胞を極低温で保管する前に、細胞を、極低温保存媒体と合わせることをさらに
含む、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の方法。

【0510】

１８．極低温保存媒体が、約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および血清タ
ンパク質、必要に応じて、ヒト血清アルブミン、必要に応じて、約４％のヒト血清アルブ
ミンを含む、ならびに／または凍結溶液および／もしくは最終濃度の生物学的試料が、約
１体積％～約２０体積％、約３体積％～約９体積％、もしくは約６体積％～約９体積％の
ＤＭＳＯを含む、および／もしくは約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積
％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５
体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％のＤＭＳＯを含む、実施形態
１７に記載の方法。

【0511】

１９．極低温保管が、１分間につき１℃または約１℃の速度で、必要に応じて、温度が
－８０℃または約－８０℃に達するまで、温度を低下させることを含む、実施形態２また
は４～１８のいずれか１つに記載の方法。

【0512】

２０．細胞が、液体窒素の気相に入れた容器において極低温で保管され、容器が、必要
に応じて、バッグまたはバイアルである、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法
。

【0513】

２１．細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時
間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月
間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１
カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、
１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、
１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低
温で保管される、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法。

【0514】

２２．細胞が、ある期間保管され、期間の後、組成物中の生存細胞もしくは生存Ｔ細胞
またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、約２４％～約１００％であるか
、または少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、
６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０％である、実施形態１～２１のいずれか１
つに記載の方法。

【0515】

２３．疾患が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または
感染性疾患もしくは状態である、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の方法。

【0516】

２４．がんが、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、
有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキ
ンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾
胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、また
は急性骨髄性白血病である、実施形態２３に記載の方法。

【0517】

２５．がんが、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、
ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、Ｃ
Ｄ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４
、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、Ｇ
Ｄ２、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＩＬ－２２Ｒ－アルファ、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ２、
ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１－細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵ
Ｃ１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣ
Ａ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗
原、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭ
Ａ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、Ｃ
Ｄ１２３、ＣＳ－１、ｃ－Ｍｅｔ、ＧＤ－２、およびＭＡＧＥ Ａ３、ＣＥ７、ウィルム
ス腫瘍１（ＷＴ－１）、およびサイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）の
うちの少なくとも１つを発現する細胞を含む、実施形態２３または２４に記載の方法。

【0518】

２６．処置が、化学療法、放射線照射、外科手術、細胞療法である、および／またはデ
バルキング処置である、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の方法。

【0519】

２７．処置が、以下の処置：シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウ
ラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン
、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピル
ビシン、カペシタビン、フォリン酸、オキサリプラチン、小分子阻害剤、免疫細胞、ナチ
ュラルキラー細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞、４０
００ｃＧｙ照射、自家幹細胞救援、幹細胞移植、骨髄移植、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）
、ＣＡＲ Ｔ細胞療法、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、シタラ
ビン、高用量シタラビン、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、クラドリ
ビン、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイ
ド、コルチコステロイド、プレドニゾン、デキサメタゾン、アルキル化剤、クロラムブシ
ル、ベンダムスチン、イホスファミド、白金薬物、シスプラチン、カルボプラチン、オキ
サリプラチン、プリン類似体、フルダラビン、ペントスタチン、クラドリビン、抗代謝薬
、ゲムシタビン、メトトレキサート、プララトレキサート、ビンクリスチン、ドキソルビ
シン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プロテアソーム阻害剤、ヒストンデアセチラ
ーゼ阻害剤、ロミデプシン、ベリノスタット、キナーゼ阻害剤、イブルチニブ、イデラリ
シブ、抗体、抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、イブリ
ツモマブチウキセタン、抗ＣＤ５２抗体、アレムツズマブ、抗ＣＤ３０抗体、ブレンツキ
シマブ、ベドチン、インターフェロン、免疫調節剤、サリドマイド、ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ
＋Ｒ（もしくはＲ－ＣＨＯＰ）、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、ＥＰＯＣＨ＋Ｒ、ＤＨＡＰ、ＤＨ
ＡＰ＋Ｒ（もしくはＲ－ＤＨＡＰ）、ベネトクラックス、メチルプレドニゾロン、または
ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤（ＢＴＫｉ）のうちの１つまたは複数を、単独または
組合せで含む、実施形態２６に記載の方法。

【0520】

２８．ドナーまたは対象が、ヒトである、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の方
法。

【0521】

２９．極低温保管の前に、細胞を、必要に応じて、１つまたは複数の表現型マーカーに
ついて、細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、実施形態
１～２８のいずれか１つに記載の方法。

【0522】

３０．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態１～２９のいずれ
か１つに記載の方法。

【0523】

３１．細胞の極低温保管および／または解凍の後に、組換えまたは外因性分子を発現す
るように細胞を操作することをさらに含み、これが、必要に応じて、組換えタンパク質、
必要に応じて、組換え受容体であり、これが、必要に応じて、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、
キメラ受容体、および／またはキメラ抗原受容体であるか、またはそれらを含む、実施形
態１～３０のいずれかに記載の方法。

【0524】

３２．組換え分子が、疾患または状態と関連する細胞によって発現されるか、またはそ
れによって特異的に発現される抗原を、特異的に認識するか、またはそれに特異的に結合
する組換え受容体である、実施形態３１に記載の方法。

【0525】

３３．ドナーもしくは対象から収集されたとき、および／またはアフェレーシス試料中
の合計の、細胞の数が、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の数もし
くはおよそ以下の数を上回らない、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の方法：５０
０×１０^６個、１０００×１０^６個、２０００×１０^６個、３０００×１０^６個、４００
０×１０^６個、もしくは５０００×１０^６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは
合計有核細胞。

【0526】

３４．試料を極低温で保管する前に、試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、実
施形態１～３３のいずれか１つに記載の方法。

【0527】

３５．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそ
のサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが
濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞
のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、
エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エ
フェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイー
ブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される
、ならびに／または試料が、バルクＴ細胞が濃縮されている、実施形態３４に記載の方法
。

【0528】

３６．試料を極低温で保管する前に、試料を極低温媒体において製剤化することをさら
に含む、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の方法。

【0529】

３７．細胞を、極低温で凍結する前または凍結した後のいずれかで、保管施設に輸送す
ることをさらに含む、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の方法。

【0530】

３８．保管施設が、中央または共通のリポジトリの保管施設である、実施形態３７に記
載の方法。

【0531】

３９．試料が、低温環境において、保管施設に輸送される、実施形態３７または３８に
記載の方法。

【0532】

４０．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、試料からＴ細胞を濃縮すること
をさらに含む、実施形態３６～３９のいずれか１つに記載の方法。

【0533】

４１．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそ
のサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが
濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞
のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、
エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エ
フェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイー
ブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される
、ならびに／またはバルクＴ細胞を含む、実施形態４０に記載の方法。

【0534】

４２．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、試料および／またはＴ細胞を、
極低温媒体において製剤化することをさらに含む、実施形態４０または実施形態４１に記
載の方法。

【0535】

４３．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態１～４２のいずれ
か１つに記載の方法。

【0536】

４４．試料が、処理、極低温保存、および／または保管の間、細胞を分類するために、
１つまたは複数のコードまたは識別子で印を付けた容器に入れられる、実施形態１～４３
のいずれか１つに記載の方法。

【0537】

４５．１つまたは複数のコードまたは識別子が、文字識別子、バーコード、ＱＲコード
（登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポンダを含む、実施形態４４に記載の方法。

【0538】

４６．１つまたは複数のコードまたは識別子が、ドナー、試料、バイアル、容器、疾患
、および／または保管施設のうちの１つまたは複数の識別に対応するか、またはそれを示
す、実施形態４４または実施形態４５に記載の方法。

【0539】

４７．１つまたは複数のコードまたは識別子が、患者識別のブレスレットまたは病院も
しくは医療施設もしくは収集施設のシステムもしくは書類に出現するコードに対応する、
実施形態４４～４６のいずれか１つに記載の方法。

【0540】

４８．処置の方法であって、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の方法によって、
極低温で保管された細胞を得て、必要に応じて解凍することであって、前記得ることの前
に、細胞が、少なくとも１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３
週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間
、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、
４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１
３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２
５年間、３０年間、３５年間、または４０年間の期間、極低温で保管されていることと、
組換え受容体を、刺激した組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作組成物
を生成することと、細胞を対象に投与することとを含む、方法。

【0541】

４９．処置が、操作Ｔ細胞または極低温で凍結した組成物の細胞を含まない、実施形態
１～４８のいずれか１つに記載の方法。

【配列表】

2024053541000001.app

【手続補正書】

【提出日】2023-10-27

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

下記工程を含む操作Ｔ細胞の組成物を産生するための方法：
（ａ）組換え受容体を発現するように操作されたＴ細胞の集団を、３v/v％～９v/v％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および１w/v％～５w/v％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む極低温保存媒体中に懸濁して、約０．１ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬと約５０００ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬとの間の密度の懸濁組成物を形成すること、ここで、操作Ｔ細胞の集団が、少なくとも８０％Ｔ細胞を含む；
（ｂ）前記Ｔ細胞を含む懸濁組成物を、チャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用するチャンバを含む、制御された速度の凍結装置において、極低温で凍結すること；および
（ｃ）極低温で凍結した細胞を保管すること。

【請求項2】

下記工程を含む操作Ｔ細胞の組成物を産生するための方法：
（ａ）ドナーに由来する生物学的試料から得られた濃縮Ｔ細胞の集団を、３v/v％～９v/v％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および１w/v％～５w/v％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む凍結保存媒体中に懸濁して、約１０ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬと約１５０ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬとの間の密度の懸濁組成物を形成すること、ここで、濃縮Ｔ細胞の集団が、少なくとも８０％Ｔ細胞を含む；
（ｂ）前記Ｔ細胞を含む懸濁組成物を、前記チャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用するチャンバを含む、制御された速度の凍結装置において、極低温で凍結すること；
（ｃ）極低温で凍結したＴ細胞を保管すること；
（ｄ）極低温で保管したＴ細胞を解凍すること；
（ｅ）解凍Ｔ細胞に、組換え受容体を導入し、それによって、操作Ｔ細胞を生成すること、ここで、前記操作Ｔ細胞は、ドナーの疾患または状態を処置するためである；
（ｆ）操作Ｔ細胞を、３v/v％～９v/v％のＤＭＳＯおよび１w/v％～５w/v％のＨＳＡを含む極低温保存媒体中に懸濁して、約０．１ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬと約５０００ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬとの間の密度の懸濁組成物を形成すること；
（ｇ）前記操作Ｔ細胞の組成物を、チャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用するチャンバを含む、制御された速度の凍結装置において、極低温で凍結すること；および
（ｈ）極低温で凍結した操作Ｔ細胞を保管すること。

【請求項3】

前記Ｔ細胞の集団が、ドナーに由来する生物学的試料から得られている、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記生物学的試料が、前記ドナーが前記疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の１つ以上の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られるものである、請求項２または３に記載の方法。

【請求項5】

前記生物学的試料が、前記ドナーが前記疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られる、請求項２から４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記生物学的試料が、前記ドナーが前記疾患または状態であると診断されていないか、またはそれを有することが判明していないか、またはそれを有することが疑われていない時点で、前記ドナーから得られる、請求項２または３に記載の方法。

【請求項7】

前記生物学的試料が、アフェレーシス試料を含み、前記生物学的試料中の前記細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％が、白血球である、請求項３から６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記Ｔ細胞が、極低温で凍結される前に、（ａ）免疫親和性に基づくまたは標的特異的な選択ステップおよび／または（ｂ）血液細胞集団、Ｔ細胞集団またはＴ細胞サブセット集団の濃縮ステップに供されていない、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記Ｔ細胞が、極低温で凍結される前に、（ａ）免疫親和性に基づくまたは標的特異的な選択ステップおよび／または（ｂ）血液細胞集団、Ｔ細胞集団またはＴ細胞サブセット集団の濃縮ステップに供されている、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記血液細胞集団、Ｔ細胞集団またはＴ細胞サブセット集団が、ＣＤ４ ^＋ 細胞もしくはそのサブセットおよび／またはＣＤ８ ^＋ 細胞もしくはそのサブセットを含み、ＣＤ４ ^＋ 細胞またはそのサブセットの選択または濃縮が、ＣＤ８ ^＋ 細胞またはそのサブセットの選択または濃縮とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで行われる、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記血液細胞集団、Ｔ細胞集団またはＴ細胞サブセット集団が、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔ _ＣＭ ）細胞、エフェクターメモリー細胞（Ｔ _ＥＭ ）、ステムセントラルメモリー（Ｔ _ＳＣＭ ）細胞、エフェクターＴ（Ｔ _Ｅ ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ（Ｔ _ＥＭＲＡ ）細胞、ナイーブＴ（Ｔ _Ｎ ）細胞、および／または調節性Ｔ（Ｔ _ＲＥＧ ）細胞を含む、請求項９または１０に記載の方法。

【請求項12】

前記Ｔ細胞が、少なくとも約１．５ｘ１０ ^７ 個の細胞／ｍＬの密度で懸濁される、請求項２から１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記操作Ｔ細胞が、少なくとも約５ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬと約１５０ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬとの間の密度で懸濁される、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記操作Ｔ細胞が、少なくとも約０．１ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬの密度で懸濁される、請求項１から１１及び１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記操作Ｔ細胞が、少なくとも約０．２ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬの密度で懸濁される、請求項１から１１及び１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記操作Ｔ細胞が、少なくとも約０．５ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬの密度で懸濁される、請求項１から１１及び１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記操作Ｔ細胞が、少なくとも約０．６ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬの密度で懸濁される、請求項１から１１及び１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記操作Ｔ細胞が、少なくとも約０．７ｘ１０ ^６ 個の細胞／ｍＬの密度で懸濁される、請求項１から１１及び１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記極低温保存媒体が、約７．５％のＤＭＳＯを含む、請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記極低温保存媒体が、約５％のＤＭＳＯを含む、請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記操作Ｔ細胞の保管が、－８０℃を下回る温度においてである、請求項１から２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

段階的な凍結プロファイルが、極低温で凍結したＴ細胞を保管する前に、－８０℃を上回るかまたは－２０℃を下回る温度まで前記チャンバを冷却することを含む、請求項１から２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

段階的な凍結プロファイルが、一連の複数の冷却および加熱プロファイルを含む、請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

段階的な凍結プロファイルが、下記ステップを含む、請求項１から２３のいずれか１項に記載の方法：
（ａ）４．０℃での保持ステップ；
（ｂ）Ｔ細胞の組成物を含有するチャンバを、－６℃の温度に達するまで１分間につき１．２℃の冷却ステップ；
（ｃ）Ｔ細胞の組成物を含有するチャンバを、－６５℃の温度に達するまで１分間につき２５℃の冷却ステップ；
（ｄ）Ｔ細胞の組成物を含有するチャンバを、－３０℃の温度に達するまで１分間につき１５℃の加熱ステップ；
（ｅ）Ｔ細胞の組成物を含有するチャンバを、－４０℃の温度に達するまで１分間につき１℃の冷却ステップ；
（ｆ）Ｔ細胞の組成物を含有するチャンバを、－９０℃の温度に達するまで１分間につき１０℃の冷却ステップ；および
（ｇ）－９０℃での保持ステップ。

【請求項25】

極低温で凍結された操作Ｔ細胞の保管が、液体窒素の気相に入れた容器においてである、請求項１から２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記操作Ｔ細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低温で保管されていた、請求項１から２５のいずれか１項に方法。

【請求項27】

前記操作Ｔ細胞が、ある期間極低温で保管された後、生存細胞もしくは生存操作Ｔ細胞またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、もしくは９０％である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記疾患もしくは状態が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または感染性疾患もしくは状態である、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

極低温保管の前に、前記操作Ｔ細胞を、１つまたは複数の表現型マーカーについて、前記細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

組換え受容体が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはキメラ受容体を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

組換え受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記操作Ｔ細胞を、極低温で凍結する前または凍結した後のいずれかで、保管施設に輸送することをさらに含み、 前記保管施設が、中央または共通のリポジトリの保管施設である、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記操作Ｔ細胞または生物学的試料が、処理、極低温保存、および／または保管の間、前記細胞を分類するために、１つまたは複数のコードまたは識別子で印を付けた容器に入れられ、 前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、文字識別子、バーコード、ＱＲコード（登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポンダを含み、前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、ドナー、試料、バイアル、容器、疾患、および／または保管施設のうちの１つまたは複数の識別に対応するか、またはそれを示す、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【外国語明細書】