特開 2024-56791 生物医薬組成物及び関連する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024056791

(43)【公開日】2024-04-23

(54)【発明の名称】生物医薬組成物及び関連する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240416BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240416BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240416BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240416BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20240416BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240416BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N ZNA

A61K45/00

A61K47/68

A61K39/395 Y

A61K47/26

A61K47/12

A61K47/18

A61P35/00

C07K16/28

C12N15/13

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024016653

(22)【出願日】2024-02-06

(62)【分割の表示】P 2022506976の分割

【原出願日】2020-07-31

(31)【優先権主張番号】62/883,451

(32)【優先日】2019-08-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/948,432

(32)【優先日】2019-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/984,110

(32)【優先日】2020-03-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】513032275

【氏名又は名称】グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＧＬＡＸＯＳＭＩＴＨＫＬＩＮＥ ＩＮＴＥＬＬＥＣＴＵＡＬ ＰＲＯＰＥＲＴＹ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100120031

【弁理士】

【氏名又は名称】宮嶋 学

(74)【代理人】

【識別番号】100120617

【弁理士】

【氏名又は名称】浅野 真理

(74)【代理人】

【識別番号】100172557

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 啓靖

(72)【発明者】

【氏名】ジェームズ、ケイ．クランツ

(72)【発明者】

【氏名】マイケル、ジョセフ、モロイ

(72)【発明者】

【氏名】ジョセフ、ブイ．リネッラ、ジェイアール．

(72)【発明者】

【氏名】エリザベス、レイ、シュミット

(72)【発明者】

【氏名】ヒラリー、アンバー、シュスラー

(72)【発明者】

【氏名】テハシュ、シャー

(57)【要約】      （修正有）

【課題】抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含む組成物を提供する。
【解決手段】抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含む組成物であって、前記異性化バリアントが、特定の配列のＣＤＲＨ１、特定の配列のＣＤＲＨ２及び特定の配列のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、特定の配列のＣＤＲＬ１、特定の配列のＣＤＲＬ２及び特定の配列のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、前記組成物が、２５％以下の前記異性化バリアントを含む、前記組成物とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含む組成物であって、
前記異性化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、２５％以下の前記異性化バリアントを含む、前記組成物。

【請求項2】

抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含む組成物であって、
前記酸化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、４０％以下の前記酸化バリアントを含む、前記組成物。

【請求項3】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含み、
前記組成物が、０．１～２５％の、ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、前記組成物。

【請求項4】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含み、
前記組成物が、０．１～４０％の、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を含む、前記組成物。

【請求項5】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一であり、
前記組成物が、０．１～２５％の、ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、前記組成物。

【請求項6】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一であり、
前記組成物が、０．１～４０％の、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を含む、前記組成物。

【請求項7】

前記組成物が、６５％以下の、重鎖Ｍ２５６における酸化、及び／又は、６０％以下の、重鎖Ｍ４３２における酸化を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物が、抗体バリアントを含み、
前記抗体バリアントが、重鎖のＮ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化、ＣＤＲＨ３におけるＤ１０３からＮ１０３への変化、Ｃ末端のリジンの切断、並びに、Ｎ末端のグルタミンからピログルタミン酸への変換からなる群から選択される１以上を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記組成物が、最大１００％の、Ｎ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化、最大１００％の、ＣＤＲＨ３におけるＮ１０３、最大１００％の、Ｃ末端のリジンの切断、並びに、最大１００％の、Ｎ末端のグルタミンからピログルタミン酸への変換からなる群から選択される１以上を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記組成物が、任意のパーセンテージのグリコフォームＧ０、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ０－ＧｌｃＮａｃ又はＧ０－２ＧｌｃＮａｃを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記抗ＢＣＭＡ抗体がベランタマブである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記抗ＢＣＭＡ抗体が、細胞毒性薬にコンジュゲートされて、抗体－薬物複合体を形成する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記抗ＢＣＭＡ抗体がベランタマブマホドチンである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

ＤＬ２の割合が、少なくとも約３０％、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、少なくとも約３０％、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、少なくとも約５％、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、少なくとも約１０％、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いは、ＤＬ８の割合が、少なくとも約１％、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、請求項１２又は１３に記載の組成物。

【請求項15】

平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下である、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項18】

請求項１７に記載の医薬組成物を含む製剤であって、
前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、
前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、前記製剤。

【請求項19】

前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ又は約６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブマホドチンと、２５ｍＭのクエン酸緩衝液と、２００ｍＭのトレハロースと、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ二ナトリウムと、０．０２％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、請求項１８に記載の製剤。

【請求項20】

それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、癌を治療する方法。

【請求項21】

癌の治療に使用するための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

癌の治療に使用するための医薬の製造における、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物の使用。

【請求項23】

抗ＢＣＭＡ抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を含む組成物であって、ＤＬ２の割合が、少なくとも約３０％、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、少なくとも約３０％、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、少なくとも約５％、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、少なくとも約１０％、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いは、ＤＬ８の割合が、少なくとも約１％、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、前記組成物。

【請求項24】

前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含む、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

ＤＬ２の割合が約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が約１０％～約２０％であり、且つ、ＤＬ８の割合が約４％～約１５％である、請求項２３又は２４に記載の組成物。

【請求項26】

ＤＬ２の割合が約１５％～約２７％であり、ＤＬ４ａの割合が約３５％～約３８％であり、ＤＬ４ｂの割合が約７％～約９％であり、ＤＬ６の割合が約１４％～約２０％であり、ＤＬ８の割合が約６．０％～約１２．０％である、請求項２３又は２４に記載の組成物。

【請求項27】

平均薬物抗体比（ＤＡＲ）が約２．１～約５．７である、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項28】

平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項29】

平均ＤＡＲが約３．８～約４．５である、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項30】

抗ＢＣＭＡ抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を含む組成物であって、ＤＬ０の割合が約１０％以下又は約５％以下である、前記組成物。

【請求項31】

前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含む、請求項３０に記載の組成物。

【請求項32】

ＤＬ０の割合が約５％以下である、請求項３０又は３１に記載の組成物。

【請求項33】

ＤＬ２の割合が約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が約１０％～約２０％であり、且つ、ＤＬ８の割合が約４％～約１５％である、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項34】

ＤＬ２の割合が約１５％～約２７％であり、ＤＬ４ａの割合が約３５％～約３８％であり、ＤＬ４ｂの割合が約７％～約９％であり、ＤＬ６の割合が約１４％～約２０％であり、ＤＬ８の割合が約６．０％～約１２．０％である、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項35】

平均薬物抗体比（ＤＡＲ）が約２．１～約５．７である、請求項３０～３４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項36】

平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、請求項３０～３４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項37】

平均ＤＡＲが約３．８～約４．５である、請求項３０～３４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項38】

前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含む、請求項２３～３７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項39】

前記抗ＢＣＭＡ抗体がベランタマブである、請求項２３～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項40】

細胞毒性薬がＭＭＡＥ又はＭＭＡＦである、請求項２３～３７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項41】

前記抗ＢＣＭＡ ＡＤＣがベランタマブマホドチンである、請求項２１～４０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項42】

疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して個々のＤＬ種を分離し、各ＤＬピークに関する曲線下面積を計算し、各ＤＬピークを、合計されたすべてのＤＬ種に関する総曲線下面積で除算することによって、ＤＬの割合が決定される、請求項２３～４１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項43】

平均ＤＡＲが、以下の式：

【数1】

を使用して、各ＤＬ種の曲線下面積から計算される、請求項４２に記載の組成物。

【請求項44】

請求項２３～４３のいずれか一項に記載の組成物と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項45】

請求項４４に記載の医薬組成物を含む製剤であって、
前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、
前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、前記製剤。

【請求項46】

前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ又は約６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブマホドチンと、２５ｍＭのクエン酸緩衝液と、２００ｍＭのトレハロースと、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ二ナトリウムと、０．０２％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、請求項４５に記載の製剤。

【請求項47】

それを必要とする対象に、治療有効量の請求項２３～４３のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、癌を治療する方法。

【請求項48】

癌の治療に使用するための、請求項２３～４３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項49】

癌の治療に使用するための医薬の製造における、請求項２３～４３のいずれか一項に記載の組成物の使用。

【請求項50】

抗体の酸性バリアントを含む組成物であって、
前記酸性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１と、
配列番号２のＣＤＲＨ２と、
配列番号３のＣＤＲＨ３と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１～７０％の前記酸性バリアントを含む、前記組成物。

【請求項51】

抗体の酸性バリアントを含む組成物であって、
前記酸性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１と、
配列番号２のＣＤＲＨ２と、
配列番号３のＣＤＲＨ３と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、７０％以下の前記酸性バリアントを含む、前記組成物。

【請求項52】

抗体の塩基性バリアントを含む組成物であって、
前記塩基性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１～３０％の前記塩基性バリアントを含む、前記組成物。

【請求項53】

抗体の塩基性バリアントを含む組成物であって、
前記塩基性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、３０％以下の前記塩基性バリアントを含む、前記組成物。

【請求項54】

抗体の主要なアイソフォームを含む組成物であって、
前記主要なアイソフォームが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１～９０％の前記主要なアイソフォームを含む、前記組成物。

【請求項55】

抗体の主要なアイソフォームを含む組成物であって、
前記主要なアイソフォームが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１％以上の前記主要なアイソフォームを含む、前記組成物。

【請求項56】

抗体の荷電バリアントを含む組成物であって、
前記荷電バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、７０％以下の酸性バリアント及び／又は３０％以下の塩基性バリアント及び／又は１％以上の主要なアイソフォームを含む、前記組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。

【0002】

発明の分野
本明細書に記載の発明は、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物、及びＢＣＭＡ媒介性の疾患又は障害を治療するための関連する方法を提供する。

【背景技術】

【0003】

ＢＣＭＡ（ＣＤ２６９又はＴＮＦＲＳＦ１７）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。これは、リガンドであるＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬに対する非グリコシル化内在性膜受容体である。ＢＣＭＡのリガンドは、さらなる受容体にも結合することができる。ＴＡＣＩ（膜貫通活性化因子及びカルシウム調節因子及びシクロフィリンリガンド相互作用物質（Transmembrane Activator and Calcium modulator and cyclophilin ligand Interactor））は、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに結合し、並びに、ＢＡＦＦ－Ｒ（ＢＡＦＦ受容体又はＢＲ３）は、ＢＡＦＦに制限されるが、ＢＡＦＦに対して高い親和性を示す。一緒になって、これらの受容体及びそれらの対応するリガンドは、体液性免疫、Ｂ細胞の発達及び恒常性の異なる側面を調節する。

【0004】

ＢＣＭＡの発現は通常、Ｂ細胞系統に限定されており、最終的なＢ細胞分化において増加すると報告されている。ＢＣＭＡは、扁桃腺、脾臓及び骨髄由来のヒト形質芽細胞及び形質細胞により発現されるが、扁桃メモリーＢ細胞及び胚中心Ｂ細胞によっても発現され、これらはＴＡＣＩ－ＢＡＦＦＲ低表現型を有する（Darce et al., 2007）。ＢＣＭＡは、未感作及びメモリーＢ－２５細胞上にはほとんど存在しない（Novak et al., 2004a 及び Novak et al., 2004b）。ＢＣＭＡ抗原は細胞表面上で発現され、抗体にアクセスすることができるが、ゴルジ体においても発現されている。その発現プロファイルにより示唆されるように、ＢＣＭＡシグナル伝達は、典型的にはＢ細胞生存及び増殖と関連しており、Ｂ細胞分化の後期において重要であるが、長寿命の骨髄形質細胞（O’Connor et al., 2004）及び形質芽球（Avery et al., 2003）の生存にも重要である。さらに、ＢＣＭＡは高親和性でＡＰＲＩＬに結合するため、ＢＣＭＡ－ＡＰＲＩＬシグナル伝達軸は、Ｂ細胞分化の後期において優性であり、おそらく生理的に最も重要な相互作用であることが示唆されている。

【0005】

ＢＣＭＡの発現（転写産物及びタンパク質の両方）は、様々なＢ細胞障害、例えば、Ｂ細胞癌、例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）における疾患進行と相関することが報告されている。ＭＭは、血液循環に拡散する前に、ｄｅ ｎｏｖｏ又は意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）からの増悪としてのいずれかで骨髄内の多部位において発生するクローン性Ｂ細胞悪性腫瘍である。それは一般にパラプロテイン及び破骨細胞活性の増加、並びに高カルシウム血症、血球減少症、腎障害、過粘稠及び末梢神経障害を特徴とする。通常の抗体レベル及び好中球数の両方の減少もまた一般的であり、感染に対する重篤な感受性をもたらす。ＢＣＭＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける骨髄腫細胞株の増殖及び生存に関与している（Novak et al., 2004及びMoreaux et al., 2004）。

【発明の概要】

【0006】

抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含む組成物であって、
前記異性化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、２５％以下の前記異性化バリアント を含む、前記組成物。

【0007】

抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含む組成物であって、
前記酸化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、４０％以下の前記酸化バリアントを含む、前記組成物。

【0008】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含み、
前記組成物が、０．１～２５％の、ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、前記組成物。

【0009】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含み、
前記組成物が、０．１～４０％の、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を含む、前記組成物。

【0010】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一であり、
前記組成物が、０．１～２５％の、ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、前記組成物。

【0011】

抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一であり、
前記組成物が、０．１～４０％の、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を含む、前記組成物。

【0012】

抗ＢＣＭＡ抗体－薬物複合体（ＡＤＣ：antibody-drug-conjugate）を含む組成物であって、ＤＬ２の割合が、少なくとも約３０％、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、少なくとも約３０％、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、少なくとも約５％、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、少なくとも約１０％、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いは、ＤＬ８の割合が、少なくとも約１％、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、前記組成物。

【0013】

抗ＢＣＭＡ抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を含む組成物であって、ＤＬ０の割合が約１０％以下又は約５％以下である、前記組成物。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】図１は、ＡＤＣ組成物におけるＤＬ種の不均一な混合物の概略図を示す図である。

【図2】図２は、ＡＤＣ組成物におけるＤＡＲ分布を決定するための代表的なＨＩＣピーク特性を示す図である。

【図3】図３は、異種移植モデルにおける腫瘍体積に対するＡＤＣ組成物の平均ＤＡＲの影響を示している。

【図4】図４は、ベランタマブの代表的なｃＩＥＦエレクトロフェログラムを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本明細書に記載の発明は、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物、及びＢＣＭＡ媒介性の疾患又は障害を治療するための関連する方法を提供する。本明細書に記載のような抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物はまた、本明細書に記載のような抗ＢＣＭＡ抗体の集団を指し得、これらの用語は交換可能である。

【0016】

抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質
本明細書に記載の組成物中の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、Ｂ細胞媒介性癌、例えば、リンパ腫及び多発性骨髄腫を含む、様々なＢＣＭＡ媒介性疾患の治療又は予防に有用であり得る。本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、ヒトＢＣＭＡ、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｑ０２２２３．２のアミノ酸配列を含むヒトＢＣＭＡ又はそれに対して少なくとも９０％の相同性若しくは少なくとも９０％の同一性を有するヒトＢＣＭＡをコードする遺伝子のアミノ酸配列を含むヒトＢＣＭＡに結合し得る。

【0017】

本明細書で使用される「抗原結合タンパク質」という用語は、ＢＣＭＡ、例えば、ヒトＢＣＭＡに結合することができる抗体、抗体フラグメント及びその他のタンパク質構築物を指す。本発明の抗原結合タンパク質は、天然の抗体又はその機能的フラグメント若しくは同等物の構造にフォーマットされ得る本発明の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み得る。したがって、本発明の抗原結合タンパク質は、適切な軽鎖と組み合わせた場合に、全長抗体、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント又はそれらの同等物（例えば、ｓｃＦＶ、バイボディ、トリボディ又はテトラボディ、Ｔａｎｄａｂ等）にフォーマットされた本発明のＶＨ領域を含み得る。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４；ＩｇＭ；ＩｇＡ；ＩｇＥ；ＩｇＤ；又はそれらの改変バリアントであり得る。それに応じて、抗体重鎖の定常ドメインを選択することができる。軽鎖定常ドメインは、カッパ又はラムダ定常ドメインであり得る。さらに、抗原結合タンパク質は、すべてのクラスの改変、例えば、ＩｇＧダイマー、Ｆｃ受容体に結合しないＦｃ変異体、又はＣ１ｑ結合を調節しないＦｃ変異体を含み得る。抗原結合タンパク質はまた、抗原結合領域及び非免疫グロブリン領域を含んでなる、ＷＯ８６／０１５３３に記載されている種類のキメラ抗体であり得る。

【0018】

本発明の別の態様において、抗原結合タンパク質は、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体又はミニボディのいずれかであり得る。本発明の一態様において、抗原結合タンパク質は、完全なヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体のいずれかであり得る。さらなる態様において、抗原結合タンパク質は、ヒト化されている抗体である。本発明の一態様において、抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体である。

【0019】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、ＭＨＣ－抗原ペプチド複合体と結合する必要なくＴ細胞において新規な特異性を生むために、人工的Ｔ細胞受容体として開発された。これらの合成受容体は、単一の融合分子内のフレキシブルリンカーを介して１又は２以上のシグナル伝達ドメインに関連付けられている標的結合ドメインを含み得る。標的結合ドメインは、病理細胞の表面上に存在する特定の標的にＴ細胞を標的化するために使用され得、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞の活性化及び増殖のための分子機構を含む。Ｔ細胞膜を貫通する（すなわち、膜貫通ドメインを形成する）フレキシブルリンカーは、ＣＡＲの標的結合ドメインの細胞膜ディスプレー（cell membrane display）を可能とする。ＣＡＲは、リンパ腫及び固形腫瘍を含む様々な悪性腫瘍由来の腫瘍細胞の表面に発現される抗原にＴ細胞を再指向させることを上手く可能にし得る（Jena et al., 2010, Blood, 116(7):1035-44）。本発明の一態様において、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、キメラ抗原受容体を含み得る。さらなる態様において、ＣＡＲは、結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内エフェクタードメインを含み得る。

【0020】

例示的な抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質及びそれを作製する方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開番号ＷＯ２０１２／１６３８０５に開示されている。追加の例示的な抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質には、ＷＯ２０１６／０１４７８９、ＷＯ２０１６／０９０３２０、ＷＯ２０１６／０９０３２７、Ｗ０２０１６／０２０３３２、ＷＯ２０１６／０７９１７７、ＷＯ２０１４／１２２１４３、ＷＯ２０１４／１２２１４４、ＷＯ２０１７／０２１４５０、ＷＯ２０１６／０１４５６５、ＷＯ２０１４／０６８０７９、ＷＯ２０１５／１６６６４９、ＷＯ２０１５／１５８６７１、ＷＯ２０１５／０５２５３６、ＷＯ２０１４／１４０２４８、ＷＯ２０１３／０７２４１５、ＷＯ２０１３／０７２４０６、ＷＯ２０１４／０８９３３５、ＵＳ２０１７／１６５３７３、ＷＯ２０１３／１５４７６０及びＷ０２０１７／０５１０６８に記載されているものを含み、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0021】

別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、ＢＣＭＡ受容体に対するＢＡＦＦ及び／又はＡＰＲＩＬの結合を阻害し得る。別の実施形態において、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、ＦｃγＲＩＩＩＡに結合することができるか、又はＦｃγＲＩＩＩＡにより媒介されるエフェクター機能の能力を有する。

【0022】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、抗体（「抗ＢＣＭＡ抗体」）を含む。別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体を含む。本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン様ドメインを有する分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ又はＩｇＥ）を指し、これらのタイプのモノクローナル分子、組換え分子、ポリクローナル分子、キメラ分子、ヒト分子及びヒト化分子を含み得る。モノクローナル抗体は、真核生物の細胞クローン又は抗体を発現する原核生物の近縁細胞（prokaryotic close cell）によって産生され得る。モノクローナル抗体はまた、細胞に導入された抗体の重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列を有することによって、抗体の重鎖及び軽鎖を組換え的に発現することができる真核生物細胞株により産生され得る。異なる真核細胞株、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ハイブリドーマ、又は動物（例えば、ヒト）に由来する不死化抗体細胞から抗体を産生するための例示的な方法は、当業者によく知られている。

【0023】

抗体は、例えば、ラット、マウス、霊長類動物（例えば、カニクイザル、旧世界ザル又は類人猿）、ヒト、又はその他の供給源（例えば、当技術分野で知られている分子生物学技術を使用して生成された、抗体分子をコードする核酸）のいずれかに由来し得る。

【0024】

抗体は、定常領域を含み得、任意のアイソタイプ又はサブクラスであり得る。定常領域は、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、IｇＧ_１、IｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ｌｇＧ_４又はそれらのバリアントであり得る。

【0025】

抗原結合タンパク質は、例えば、抗原結合タンパク質が抗体である場合に、抗体のエフェクター機能／ＡＤＣＣ及び／又は補体活性化を増強するように、変異した定常ドメインを含む１又は２以上の改変を含み得る。

【0026】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、抗体依存性の細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）エフェクター機能が増強されている。用語「エフェクター機能」は、本明細書で使用される場合には、抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介応答、Ｆｃ媒介性貪食作用及び／又はＦｃＲｎ受容体を介した抗体リサイクルのうちの１又は２以上を指すことを意味する。ＩｇＧ抗体において、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを含み得るエフェクター機能は、重鎖定常領域と免疫細胞の表面に存在するＦｃγ受容体ファミリーとの相互作用により媒介され得る。ヒトにおいて、これらはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を含み得る。抗原に結合した抗原結合タンパク質とＦｃ／Ｆｃγ複合体形成体との間の相互作用は、様々な作用、例えば、細胞傷害性、免疫細胞活性化、貪食作用及び／又は炎症性サイトカインの放出を誘導し得る。

【0027】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡ受容体へのＢＡＦＦ及び／又はＡＰＲＩＬの結合を阻害し得る。別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡに結合することができるか、又はＦｃγＲＩＩＩＡ媒介性のエフェクター機能の能力を有し得る。

【0028】

一実施形態において、組成物は、２個の免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（「ＨＣ」）及び２個のＩｇ軽鎖（「ＬＣ」）を含む抗ＢＣＭＡ抗体を含む。基本的な抗体構造単位は、例えば、サブユニットの四量体を含み得る。各四量体は、２対のポリペプチド鎖を含み得、各対は、１個の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１個の「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み得る。この可変領域は、最初に、切断可能なシグナルペプチドに連結して発現されてもよい。シグナルペプチドのない可変領域は、成熟可変領域と呼ばれることがある。したがって、一例において、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを含まない軽鎖可変領域を含み得る。各鎖のカルボキシ末端部分は、定常領域を規定し得る。重鎖定常領域は、主にエフェクター機能に関与し得る。

【0029】

各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位（抗原結合部位とも呼ばれる）を形成し得る。「抗原結合部位」は、抗原に特異的に結合することができる抗体の部位を指し、これは単一の可変ドメインであり得るか、又は標準的な抗体に見られるような対のＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌドメインであり得る。したがって、インタクトな抗体は、例えば、２個の結合部位を有し得る。二機能性抗体又は二重特異性抗体の場合を除き、２個の結合部位は同一であり得る。鎖はすべて、相補性決定領域又は「ＣＤＲ」とも呼ばれる３個の超可変領域によって連結された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同一の一般構造を示し得る。各対の２個の鎖から生じるＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特定のエピトープへの結合を可能にする。したがって、一例では、Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖の両方が、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。

【0030】

「ＣＤＲ」は、抗体の相補性決定領域のアミノ酸配列として定義される。これらは免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、３個の重鎖及び３個の軽鎖ＣＤＲ（又はＣＤＲ領域）が存在する。したがって、本明細書で使用される「複数のＣＤＲ」は、３個すべての重鎖ＣＤＲ、３個すべての軽鎖ＣＤＲ、すべての重鎖及び軽鎖ＣＤＲ、又は少なくとも２個のＣＤＲを指す。一実施形態では、組成物は、本明細書に記載の発明による１個又は２個以上のＣＤＲ、又は本明細書に記載の発明による重鎖又は軽鎖可変ドメインの一方又は両方を含む抗ＢＣＭＡ抗体を含む。

【0031】

「バリアント」、「抗体バリアント」、「ＣＤＲバリアント」及び「翻訳後修飾バリアント」という用語は、抗体配列における１以上のアミノ酸変化を指す。バリアントは、翻訳後修飾、化学変化、又は１以上の欠失、置換若しくは付加による配列変化の結果であり得る。一部の翻訳後修飾は、配列を変更しない化学変化をもたらすが（例えば、Ｍｅｔ及び酸化Ｍｅｔ；又はＡｓｐ又は異性化／ｉｓｏ－Ａｓｐ；又は凝集）、その他の翻訳後修飾は、配列変化、例えば、あるアミノ酸残基の別のアミノ酸残基への変換（例えば、脱アミド化によるＡｓｎからＡｓｐへの変換；又はリジンの欠損）をもたらす。さらなる翻訳後修飾バリアントを以下に記載する。配列変化を含むバリアント抗体配列は、設計された配列変化又は翻訳後修飾の結果であり得る。アミノ酸配列の変化は、欠失、置換又は付加であり得る。

【0032】

そのような一実施形態において、置換は保存的置換である。別の実施形態において、抗体バリアントは、抗原結合タンパク質の標準形を保持しながら、１以上の置換を含む。一実施形態において、抗体バリアントは、抗体の一次配列に対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％同一である（すなわち、配列同一性を有する）抗体である。別の実施形態において、抗体バリアントは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％同一である重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％同一である重鎖アミノ酸配列を含む抗体を含む。

【0033】

本発明の抗原結合タンパク質は、ＦｃＲｎに対する定常ドメイン又はそのフラグメントの親和性を増加させるアミノ酸改変を有し得る。治療及び診断用ＩｇＧ抗体及びその他の生物活性分子の半減期（すなわち、血清半減期）を増加することには、多くの利点、例えば、これらの分子の投与量及び／又は投与頻度を減らすことがある。一実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、以下のアミノ酸改変のうちの１又は２以上を有するＩｇＧ定常ドメインの全部又は一部（ＦｃＲｎ結合部分）を含む。

【0034】

例えば、ＩｇＧ１に関して、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（一般に「ＹＴＥ」変異と呼ばれる）及びＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（一般に「ＬＳ」変異と呼ばれる）は、ｐＨ６．０でＦｃＲｎ結合を増加させる（Wang et al. 2018）。

【0035】

半減期は、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異（ＩｇＧ１及びＫａｂａｔの番号付けに関する）によっても延長され得る（Monnet et al.）。

【0036】

半減期及びＦｃＲｎ結合は、Ｈ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆ変異（一般に「ＨＮ」変異又は「ＮＨａｎｃｅ」変異と呼ばれる）（ＩｇＧ１に関する）を導入することによっても拡張され得る（Ｗ０２００６／１３０８３４）。

【0037】

ＷＯ００／４２０７２には、ＦｃＲｎ結合親和性が変化したバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドが記載されており、このポリペプチドは、Ｆｃ領域のアミノ酸位置２３８、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２６５、２７２、２８６、２８８、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８６、３８８、４００、４１３、４１５、４２４、４３３、４３４、４３５、４３６、４３９及び４４７（ＥＵインデックス番号付け）のうちの任意の１又は２以上のアミノ酸改変を含む。

【0038】

ＷＯ０２／０６０９１９には、野生型ＩｇＧ定常ドメインと比較して１又は２以上のアミノ酸改変を含むＩｇＧ定常ドメインを含む改変ＩｇＧが記載されており、この改変ＩｇＧの半減期は、野生型ＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期に比較して延長され、その１又は２以上のアミノ改変は、位置２５１、２５３、２５５、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９及び４２８～４３５のうちの１又２以上において存在する。

【0039】

Ｓｈｉｅｌｄｓら（2001, J Biol Chem; 276:6591-604）は、アラニンスキャニング変異誘発を使用して、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域の残基を変更し、次いで、ヒトＦｃＲｎへの結合を評価した。アラニンに変更されたときにＦｃＲｎへの結合を効果的に抑制する位置は、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５及びＹ４３６を含む。その他の位置では、Ｅ２３３－Ｇ２３６、Ｒ２５５、Ｋ２８８、Ｌ３０９、Ｓ４１５及びＨ４３３のように結合の減少がそれほど顕著ではなかった。いくつかのアミノ酸位置は、アラニンに変更されたときにＦｃＲｎ結合の向上を示し、これらの中で注目すべきは、Ｐ２３８、Ｔ２５６、Ｅ２７２、Ｖ３０５、Ｔ３０７、Ｑ３１１、Ｄ３１２、Ｋ３１７、Ｄ３７６、Ｅ３８０、Ｅ３８２、Ｓ４２４及びＮ４３４である。その他の多くのアミノ酸位置は、ＦｃＲｎ結合において、わずかな向上（Ｄ２６５、Ｎ２８６、Ｖ３０３、Ｋ３６０、Ｑ３６２及びＡ３７８）又は変化なし（Ｓ２３９、Ｋ２４６、Ｋ２４８、Ｄ２４９、Ｍ２５２、Ｅ２５８、Ｔ２６０、Ｓ２６７、Ｈ２６８、Ｓ２６９、Ｄ２７０、Ｋ２７４、Ｎ２７６、Ｙ２７８、Ｄ２８０、Ｖ２８２、Ｅ２８３、Ｈ２８５、Ｔ２８９、Ｋ２９０、Ｒ２９２、Ｅ２９３、Ｅ２９４、Ｑ２９５、Ｙ２９６、Ｎ２９７、Ｓ２９８、Ｒ３０１、Ｎ３１５、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｓ３２４、Ｋ３２６、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｐ３３１、Ｅ３３３、Ｋ３３４、Ｔ３３５、Ｓ３３７、Ｋ３３８、Ｋ３４０、Ｑ３４２、Ｒ３４４、Ｅ３４５、Ｑ３４５、Ｑ３４７、Ｒ３５６、Ｍ３５８、Ｔ３５９、Ｋ３６０、Ｎ３６１、Ｙ３７３、Ｓ３７５、Ｓ３８３、Ｎ３８４、Ｑ３８６、Ｅ３８８、Ｎ３８９、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｌ３９８、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｋ４１４、Ｒ４１６、Ｑ４１８、Ｑ４１９、Ｎ４２１、Ｖ４２２、Ｅ４３０、Ｔ４３７、Ｋ４３９、Ｓ４４０、Ｓ４４２、Ｓ４４４及びＫ４４７）を示した。

【0040】

ＦｃＲｎ結合の向上に関して最も顕著な効果は、組み合わせバリアントに対して見出された。ｐＨ６．０において、Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４ＡバリアントのＦｃＲｎへの結合は、天然（native）のＩｇＧ１に対して８倍以上優れており、比較として、Ｅ３８０Ａの場合は２倍であり、Ｎ４３４Ａの場合は３．５倍であったことを示した。これにＴ３０７Ａを追加すると、天然のＩｇＧ１と比較して結合が１２倍向上した。一実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異を含み、ＦｃＲｎへの結合が増加している。

【0041】

Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら（2002, J Immunol.;169:5171-80）は、マウスＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１ヒンジ－Ｆｃフラグメントファージディスプレイライブラリーのランダム変異誘発及びスクリーニングについて記載している。彼らは、位置２５１、２５２、２５４～２５６、３０８、３０９、３１１、３１２、３１４、３８５～３８７、３８９、４２８、４３３、４３４及び４３６のランダム変異誘発を記載した。ＩｇＧ１－ヒトＦｃＲｎ複合体の安定性の主な改善は、Ｆｃ－ＦｃＲｎ境界を横切るバンドに位置する残基（Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５６、Ｈ４３３、Ｎ４３４及びＹ４３６）を置換する場合に生じ、改善の程度は低いが、周辺（periphery）の残基、例えば、Ｖ３０８、Ｌ３０９、Ｑ３１１、Ｇ３８５、Ｑ３８６、Ｐ３８７及びＮ３８９の置換の場合に生じる。ヒトＦｃＲｎに対して最も高い親和性をするバリアントは、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（「ＹＴＥ」）及びＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ／Ｙ４３６Ｈ変異を組み合わせることによって得られ、野生型ＩｇＧ１と比較して５７倍の親和性の増加を示した。このような変異したヒトＩｇＧ１のｉｎ ｖｉｖｏでの挙動は、野生型ＩｇＧ１と比較して、カニクイザルの血清半減期のほぼ４倍の増加を示した。

【0042】

したがって、本発明は、ＦｃＲｎへの最適化された結合を有する抗原結合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、抗原結合タンパク質は、この抗原結合タンパク質のＦｃ領域に１以上のアミノ酸改変を含み、この改変は、Ｆｃ領域の２２６、２２７、２２８、２３０、２３１、２３３、２３４、２３９、２４１、２４３、２４６、２５０、２５２、２５６、２５９、２６４、２６５、２６７、２６９、２７０、２７６、２８４、２８５、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９４、２９７、２９８、２９９、３０１、３０２、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１１、３１５、３１７、３２０、３２２、３２５、３２７、３３０、３３２、３３４、３３５、３３８、３４０、３４２、３４３、３４５、３４７、３５０、３５２、３５４、３５５、３５６、３５９、３６０、３６１、３６２、３６９、３７０、３７１、３７５、３７８、３８０、３８２、３８４、３８５、３８６、３８７、３８９、３９０、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０３、４０４、４０８、４１１、４１２、４１４、４１５、４１６、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２４、４２６、４２８、４３３、４３４、４３８、４３９、４４０、４４３、４４４、４４５、４４６及び４４７からなる群から選択されるアミノ酸位置にある。

【0043】

さらに、様々な出版物に、半減期が変更された生理学的に活性な分子を得る方法が記載されており、その方法は、ＦｃＲｎ結合ポリペプチドを分子に導入することによって得る方法（ＷＯ９７／４３３１６、ＵＳ５８６９０４６、ＵＳ５７４７０３５、ＷＯ９６／３２４７８及びＷＯ９１／１４４３８）、又は分子を抗体に融合することによって、ＦｃＲｎ結合親和性は保持されているが、その他のＦｃ受容体への親和性が大幅に低下している抗体を得る方法（ＷＯ９９／４３７１３）、又は分子を抗体のＦｃＲｎ結合ドメインと融合することによって得る方法（ＷＯ００／０９５６０、ＵＳ４７０３０３９）のいずれかである。

【0044】

抗体の細胞傷害性及び半減期の両方を改善するためのＦｃＲｎ親和性増強Ｆｃバリアントは、ｐＨ６．０におけるスクリーニングで同定された。選択されたＩｇＧバリアントは、低フコシル化分子として作製され得る。得られたバリアントは、ｈＦｃＲｎマウスの血清持続性の増強、及び保存され、強化されたＡＤＣＣを示す（Monnet et al.）。例示的な変異体には、（ＩｇＧ１及びＫａｂａｔ番号付けに関する）以下が含まれる：
Ｐ２３０Ｔ／Ｖ３０３Ａ／Ｋ３２２Ｒ／Ｎ３８９Ｔ／Ｆ４０４Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｐ２２８Ｒ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｑ３１１Ｒ／Ｋ３３４Ｒ／Ｑ３４２Ｅ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｃ２２６Ｇ／Ｑ３８６Ｒ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｔ３０７Ｐ／Ｎ３８９Ｔ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｐ２３０Ｓ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｐ２３０Ｔ／Ｖ３０５Ａ／Ｔ３０７Ａ／Ａ３７８Ｖ／Ｌ３９８Ｐ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｐ２３０Ｔ／Ｐ３８７Ｓ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｐ２３０Ｑ／Ｅ２６９Ｄ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｎ２７６Ｓ／Ａ３７８Ｖ／Ｎ４３４Ｓ；
Ｔ３０７Ａ／Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／３８２Ｖ／Ｎ３８９Ｔ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｔ２５６Ｎ／Ａ３７８Ｖ／Ｓ３８３Ｎ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／Ｎ３６１Ｄ／Ａ３８７Ｖ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｖ２５９Ｉ／Ｎ３１５Ｄ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｐ２３０Ｓ／Ｎ３１５Ｄ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｆ２４１Ｌ／Ｖ２６４Ｅ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３７８Ｖ／Ｈ４３３Ｒ；
Ｔ２５０Ａ／Ｎ３８９Ｋ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｖ３０５Ａ／Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／Ｐ３９５Ａ／Ｎ４３４Ｙ；
Ｖ２６４Ｅ／Ｑ３８６Ｒ／Ｐ３９６Ｌ／Ｎ４３４Ｓ／Ｋ４３９Ｒ；
Ｅ２９４ｄｅｌ／Ｔ３０７Ｐ／Ｎ４３４Ｙ（「ｄｅｌ」は欠失を示す）。

【0045】

本発明はまた、本発明による抗原結合タンパク質を生産するための方法であって、以下の工程：ａ）本明細書に記載される単離された核酸を含む発現ベクターを含む組換え宿主細胞を培養する工程であって、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を組換え宿主細胞中で不活性化する工程；及びｂ）抗原結合タンパク質を回収する工程を含む、方法を提供する。抗原結合タンパク質を生産するためのこのような方法は、例えば、ＢｉｏＷａ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）から利用可能なＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ技術システムを使用して実施することができ、そのシステムにおいて、ＦＵＴ８遺伝子の機能的コピーを欠くＣＨＯＫ１ＳＶ細胞は、機能的ＦＵＴ８遺伝子を有する細胞内で生産された同一のモノクローナル抗体に対して増加している増強された抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有するモノクローナル抗体を生産する。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ技術システムの態様は、ＵＳ７２１４７７５、ＵＳ６９４６２９２、ＷＯ００６１７３９及びＷＯ０２３１２４０（これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。当業者はまた、抗原結合タンパク質、例えば、抗体を生成するためのその他の適切なシステム及び方法を認識する。

【0046】

抗体は、従来のタンパク質精製手順によって回収及び精製され得る。例えば、抗体は培養培地から直接採取され得る。細胞培養培地の採取は、清澄化、例えば、遠心分離及び／又は深層濾過による清澄化を介して行うことができる。抗体を回収した後、精製して適切な純度を確保する。したがって、一態様では、本明細書に記載の抗体を含む細胞培養培地が提供される。一実施形態において、細胞培養培地は、ＣＨＯ細胞を含む。

【0047】

次いで、抗体を細胞培養培地から精製することができる。これは、細胞培養上清を採取し、細胞培養上清を精製媒体（例えば、抗体分子を結合するためのプロテインＡ樹脂又はプロテインＧ樹脂）と接触させ、精製媒体から抗体分子を溶出して溶出液を生成することを含み得る。したがって、一態様において、本明細書に記載の抗体を含む溶出液が提供される。

【0048】

１又は２以上のクロマトグラフィー工程を精製に使用してもよく、例えば、１種又は２種以上のクロマトグラフィー樹脂及び／又は１又は２以上の濾過工程を精製に使用することができる。例えば、樹脂、例えば、プロテインＡ、Ｇ又はＬを使用するアフィニティークロマトグラフィーを使用して、組成物を精製することができる。或いは、又はそれに加えて、イオン交換樹脂、例えば、陽イオン交換樹脂を使用して、組成物を精製することができる。

【0049】

或いは、精製工程は、アフィニティークロマトグラフィー樹脂による工程と、それに続く陽イオン交換樹脂による工程とを含む。

【0050】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＨ１」）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＨ１」）は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に１のアミノ酸変異（「バリアント」）を有するアミノ酸配列を含む。

【0051】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＨ２」）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＨ２」）は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に１のアミノ酸変異（「バリアント」）を有するアミノ酸配列を含む。

【0052】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＨ３」）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＨ３」）は、配列番号３に記載のアミノ酸配列に１のアミノ酸変異（「バリアント」）を有するアミノ酸配列を含む。

【0053】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＬ１」）を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＬ１」）は、配列番号４に記載のアミノ酸配列に１のアミノ酸変異（「バリアント」）を有するアミノ酸配列を含む。

【0054】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＬ２」）を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＬ２」）は、配列番号５に記載のアミノ酸配列に１のアミノ酸変異（「バリアント」）を有するアミノ酸配列を含む。

【0055】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＬ３」）を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＬ３」）は、配列番号６に記載のアミノ酸配列に１のアミノ酸変異（「バリアント」）を有するアミノ酸配列を含む。

【0056】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１；配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２；配列番号３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３；配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１；配列番号５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２；及び／又は配列番号６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。

【0057】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（「Ｖ_Ｈ」）を含む。

【0058】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（「Ｖ_Ｌ」）を含む。

【0059】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0060】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖領域（「ＨＣ」）を含む。

【0061】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖領域（「ＬＣ」）を含む。

【0062】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣを含む。

【0063】

クエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントが実行された後にサブジェクトアミノ酸配列がクエリーアミノ酸配列と１００％のクエリーカバー率を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」値である。このようなクエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、アメリカ国立バイオテクノロジー情報センターのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を用いることにより、低複雑性領域のフィルターを解除して実行される。重要なこととして、クエリー配列は本明細書の１以上の請求項で特定されるアミノ酸配列により記載することができる。

【0064】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３；配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１；配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２；及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む。

【0065】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ；及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含む。

【0066】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＬＣを含むベランタマブを含む。

【0067】

抗体の配列は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって特定され得る（Kabat et al. Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987）。或いは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステム（Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948）、接触定義法（contact definition method）（MacCallum R.M., and Martin A.C.R. and Thornton J.M, (1996), Journal of Molecular Biology, 262 (5), 732-745）、又は抗体中の残基に番号を付け、当業者に知られているＣＤＲを特定するための任意のその他の確立された方法を使用して特定され得る。当業者が利用可能な、抗体配列のその他の番号付け慣例方法には、「ＡｂＭ」（バース大学）及び「接触」（ロンドン大学）法が含まれる。最後に、抗体配列には順番に番号を付けることができる。

【0068】

本明細書に記載のアミノ酸を数値的に言及する場合には、配列は、Ｋａｂａｔ法又は連続番号付け法（sequential numbering method）に従って番号付けされ得る。特に明記しない限り、特定のアミノ酸番号への数値言及は、本明細書では連続番号付けシステムにより記載されている。この明細書全体を通して、「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」という用語は、Ｋａｂａｔ番号付けの後に続く。可変領域配列及び全長抗体配列のアミノ酸残基は、任意の抗体配列バリアント位置又は翻訳後修飾バリアント位置、例えば、異性化バリアント（例えば、Ｄ１０３）、脱アミド化バリアント（例えば、Ｎ３８８）又は酸化バリアント（例えば、Ｍ３４）を示す。

【0069】

ＣＤＲ内の位置（例えば、Ｍ３４又はＤ１０３）への言及は、抗体配列全体に対する位置番号（連続番号付け）を提供する。したがって、ＣＤＲＨ１におけるＭ３４は、配列番号１の４番目の残基、すなわち、下線部：ＮＹＷＭＨ（配列番号１）を指すことが理解される。同様に、ＣＤＲＨ３におけるＤ１０３は、配列番号３の５番目の残基、すなわち、下線部：ＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮ（配列番号３）を指す。

【0070】

一態様において、組成物は、一次配列中の１又は２以上のアミノ酸の変化を含む抗体バリアントを含む。一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列と少なくとも約９０％同一である抗体であって、アスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）へのアミノ酸変化、例えば、ＣＤＲＨ３におけるＤ１０３Ｎ（すなわち、Ｋａｂａｔ番号付けのＤ９９Ｎ）を有する抗体を含む。

【0071】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、アスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）へのアミノ酸変化、例えば、ＣＤＲＨ３におけるＤ１０３Ｎを含む。

【0072】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、ベランタマブを含み、アスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）へのアミノ酸変化、例えば、ＣＤＲＨ３におけるＤ１０３Ｎを含む。

【0073】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上又は約９０％以上はＣＤＲＨ３におけるＤ１０３Ｎを含む。

【0074】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上又は約９０％以上はＣＤＲＨ３におけるＤ１０３Ｎを含む。

【0075】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブを含み、ベランタマブの約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上又は約９０％以上はＣＤＲＨ３におけるＤ１０３Ｎを含む。

【0076】

一実施形態において、組成物は、Ｇ２７Ｙ、Ｓ３０Ｔ、Ａ９３Ｔ、Ａ２４Ｇ、Ｋ７３Ｔ、Ｍ４８Ｉ、Ｖ６７Ａ、Ｆ７１Ｙ、Ｄ９９Ｎ、Ｍ４Ｌ及びＫ４５Ｅからなる群から選択されるＫａｂａｔ番号付けシステムを使用する少なくとも１種の抗体バリアントを含むベランタマブを含む。

【0077】

翻訳後修飾産物
本明細書に記載の抗体の「翻訳後修飾産物」は、組成物の全部又は一部が「翻訳後修飾」を含む抗体組成物である。翻訳後修飾は、宿主細胞での抗体の生産、上流及び下流の製造、及び／又は貯蔵（例えば、光、温度、ｐＨ、水への曝露の影響、或いは、賦形剤及び／又は直後の容器閉鎖システムとの反応）の結果であり得る。したがって、本発明の組成物は、抗体の製造又は貯蔵から形成され得る。例示的な翻訳後修飾には、抗体配列の変化（上記の「抗体バリアント」）、特定のリーダー配列の切断、様々なグリコシル化パターンにおける様々な糖部分の付加、非酵素的糖化、脱アミド化、酸化、ジスルフィド結合スクランブリング（disulfide bond scrambling）及びその他のシステインバリアント（例えば、遊離スルフヒドリル、ラセミ化ジスルフィド、チオエーテル及びトリスルフィド結合）、異性化、Ｃ末端リジンの切断、及び／又はＮ末端グルタミンの環化が含まれる。

【0078】

一例において、翻訳後修飾産物は、機能及び／又は活性の低下をもたらす化学変化を含む「産物関連不純物（product-related impurity）」を含む。別の例において、翻訳後修飾産物は、機能及び／又は活性の低下をもたらさない化学変化を含む「産物関連物質（product-related substance）」を含む。本明細書に記載の抗体の産物関連不純物には、異性化バリアント及び酸化バリアントが含まれる。本明細書に記載の抗体の産物関連物質には、脱アミド化バリアント、グリコシル化バリアント、Ｃ末端切断バリアント及びＮ末端ピログルタミン酸バリアントが含まれる。

【0079】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、１又は２以上のその機能的な翻訳後修飾を含む。別の実施形態において、組成物は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号１４の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、１又は２以上のその機能的な翻訳後修飾を含む。

【0080】

本明細書で提供されるバリアントの割合は、組成物中の抗体（例えば、抗体の「集団」）の総量のパーセンテージとして表される。例えば、４０％以下の酸化バリアントは、組成物中の総量１００％の抗体であって、そのうちの４０％以下が酸化されている総量１００％の抗体を指す。例えば、２５％以下の異性化バリアントは、組成物中の総量１００％の抗体であって、そのうちの２５％以下が異性化されている総量１００％の抗体を指す。

【0081】

糖化は、還元糖、例えば、グルコースとタンパク質の遊離アミン基との間の非酵素的化学反応を含む翻訳後修飾であり、通常、リジン側鎖のイプシロンアミン又はタンパク質のＮ末端で見出される。糖化は、還元糖の存在下での製造及び／又は貯蔵中に起こり得る。

【0082】

例えば、製造及び／又は貯蔵中に起こり得る脱アミド化は、酵素反応又は化学反応であり得る。脱アミド化は、分子内環化による単純な化学反応によって起こり得、鎖内の隣のアミノ酸のアミド窒素がアミドを求核攻撃し（Ｎ＋１がＮを攻撃する）、スクシンイミド中間体を形成する。脱アミド化は、主にアスパラギン（Ｎ）を約３：１の比率でイソアスパラギン酸（イソアスパラギネート）及びアスパラギン酸（アスパラギネート）（Ｄ）に変換する場合がある。したがって、この脱アミド化反応は、アスパラギン酸（Ｄ）のイソアスパラギン酸への異性化に関連している可能性がある。アスパラギンの脱アミド化及びアスパラギン酸の異性化は、両方とも中間体のスクシンイミドを伴い得る。程度ははるかに低いが、同様の方法で脱アミド化がグルタミン残基で起こり得る。脱アミド化は、ＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ領域）又はＦｃ領域で起こり得る。異性化は、アスパラギン酸（Ｄ）からイソアスパラギン酸への変換であり、中間体のスクシンイミドが関与する。

【0083】

酸化は、製造及び／又は貯蔵中に（すなわち、酸化条件の存在下で）起こり得、直接的には反応性酸素種により、又は間接的には酸化ストレスの二次的副産物との反応により誘導されるタンパク質の共有結合的修飾をもたらす。酸化は主としてメチオニン残基で起こり得るが、トリプトファン及び遊離システイン残基でも起こり得る。酸化はＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ）領域又はＦｃ領域で起こり得る。

【0084】

ジスルフィド結合のスクランブリングは、製造及び／又は保管条件中に起こり得る。ある特定の状況下では、ジスルフィド結合は破断することがあるか又は適切に形成しないことがあり、不対合システイン残基（－ＳＨ）を生じる。これらの遊離（不対合）スルフヒドリル（－ＳＨ）がシャッフリングを促進し得る。

【0085】

チオエーテルの形成及びジスルフィド結合のラセミ化は、製造又は貯蔵中の基本的な条件下で起こり得る。これは、ジスルフィド架橋のベータ脱離により、デヒドロアラニン及び過硫化物の中間体を介してシステイン残基に戻る。その後のデヒドロアラニン及びシステインの架橋により、チオエーテル結合が形成され得、或いは遊離システイン残基がＤ－システイン及びＬ－システインの混合物でジスルフィド結合を再形成し得る。

【0086】

三硫化物は、硫黄原子のジスルフィド結合への挿入から生じ得（Ｃｙｓ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｃｙｓ）、生産細胞培養における硫化水素の存在により形成され得る。

【0087】

重鎖及び／又は軽鎖のＮ末端グルタミン（Ｑ）及びグルタメート（グルタミン酸）（Ｅ）は、環化を介してピログルタメート（ｐＧｌｕ）を形成し得る。ｐＧｌｕの形成は生産バイリアクター内で起こり得るが、それはまた、例えば、処理及び貯蔵条件のｐＨ及び温度に依存して、非酵素的に形成される場合もある。Ｎ末端Ｑ又はＥの環化は一般に天然ヒト抗体で見られる。

【0088】

Ｃ末端のリジンの切断は、カルボキシペプチダーゼにより触媒される酵素反応であり、組換え及び天然ヒト抗体に共通に見られる。このプロセスの変形には、組換え宿主細胞からの細胞酵素による一方又は両方の重鎖からのリジンの除去が含まれる。ヒト対象／患者に投与すると、残っているＣ末端のリジンの除去がもたらされる可能性がある。

【0089】

本発明は、本明細書に記載の翻訳後修飾のうちの１又は２以上を施されたか、又は受けた可能性がある抗体を包含する。例示的な組成物は、以下の抗体の混合物又はブレンドを含み得る：１）（１又は２以上の）翻訳後修飾を有する及び有しない抗体の混合物又はブレンド、又は２）本明細書に記載の翻訳後修飾の２種以上を有する抗体の混合物又はブレンド。

【0090】

組成物は、抗体バリアント及び翻訳後修飾バリアントの混合物を含み得る。例えば、抗体組成物は、酸化バリアント、脱アミド化バリアント、異性化バリアント、Ｎ末端ピログルタミン酸バリアント及びＣ末端リジン切断バリアントのうちの１又は２以上、例えば、２又は３以上を含み得る。

【0091】

例えば、一実施形態において、組成物は抗体の混合物を含み得、混合物中の抗体の１０％が配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、混合物中の抗体の９０％がＣ末端のリジンの切断を有する配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含む。

【0092】

別の例示的な実施形態において、組成物は抗体の混合物を含み得、混合物中の抗体の１０％が配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、混合物中の抗体の９０％がＣ末端のリジンの切断を有する配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、その総量１００％の抗体混合物のうち、最大１００％のＮ末端グルタミンがピログルタメートに環化されている。

【0093】

別の例示的な実施形態において、組成物は抗体の混合物を含み得、混合物中の抗体の１０％が配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、混合物中の抗体の９０％がＣ末端のリジンの切断を有する配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、その総量１００％の抗体混合物のうち、最大１００％がＮ末端ピログルタメートであり、最大２３％がＣＤＲＨ３におけるＤ１０３で異性化されている。

【0094】

さらに別の例示的な実施形態において、組成物は抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の２０％が配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、混合物中の抗体の８０％がＣＤＲＨ３におけるＮ１０３のバリアントを有する配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、その総量１００％の抗体混合物のうち、最大３７％の抗体がＣＤＲＨ１におけるアミノ酸Ｍ３４で酸化されている。

【0095】

一実施形態において、本明細書に記載の翻訳後修飾は、抗原結合親和性、生物活性、薬物動態（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）、凝集、免疫原性及び／又はＦｃ受容体への結合に有意な変化をもたらさない。ただし、産物関連不純物として指定及び記載されている場合を除く。

【0096】

本明細書に記載の「機能」又は「活性」は、１）ＢＣＭＡへの結合、２）ＦｃγＲＩＩＩａへの結合、及び／又は３）ＦｃＲｎへの結合のうちの１又は２以上として定義される。一実施形態において、「機能低下」又は「活性低下」は、ＢＣＭＡへの結合、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合又はＦｃＲｎへの結合が、参照標準と比較したパーセンテージで減少し、アッセイのばらつきに対して有意であることを意味する。例えば、機能又は活性の低下は、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上又は５０％以上の低下として説明され得る。

【0097】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９及び配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である抗体を含み、存在する場合には、すべての翻訳後修飾を含む。

【0098】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、ベランタマブを含み、存在する場合にはすべての翻訳後修飾を含む。

【0099】

抗体の組成物を、荷電ベースの分離技術、例えば、等電点電気泳動（ＩＥＦ）であるゲル電気泳動、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）であるゲル電気泳動、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）及び陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）により分析すると、抗体バリアントが一般的に観察される。

【0100】

翻訳後修飾は、抗体の正味電荷の増加又は減少をもたらし、ｐＩ値の減少又は増加を引き起こし、それにより、主要なアイソフォーム（main isoform）に関して酸性バリアント及び塩基性バリアント（総称して「荷電バリアント」と呼ばれる）をもたらし得る。主要なアイソフォームは、クロマトグラムのメインピークとして溶出する抗体集団である。ＩＥＦベースの方法を使用して抗体を分析する場合には、酸性種は見かけのｐＩが低いバリアントであり、塩基性種は見かけのｐＩが高いバリアントである。クロマトグラフィーベースの方法で分析する場合には、酸性種及び塩基性種は、メインピークに対する保持時間に基づいて定義される。酸性種は、ＣＥＸから得られるメインピークよりも早く溶出するバリアント又はＡＥＸから得られるメインピークよりも遅く溶出するバリアントであり、塩基性種は、ＣＥＸから得られるメインピークよりも遅く溶出するバリアント又はＡＥＸから得られるメインピークよりも早く溶出するバリアントである。これらの方法は、抗体の主要なアイソフォームを酸性アイソフォーム（酸性バリアント）及び塩基性アイソフォーム（塩基性バリアント）から分離する。荷電バリアントは、様々な方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、ＷＣＸ－１０ ＨＰＬＣ（弱陽イオン交換クロマトグラフィー））又はＩＥＦ（等電点電気泳動）によって検出され得る。電荷バリアントの割合は、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して決定され得る。キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して、ドスタルリマブのｐＩを測定し、荷電バリアントを分離する（図１を参照）。この方法を使用して、酸性種及び塩基性種を総面積ピークのパーセンテージとして定量し得る。「種」、「アイソフォーム」、「フォーム」及び「ピーク」という用語は、主要なアイソフォーム及び荷電バリアント（酸性バリアント及び塩基性バリアント）を指すために交換可能に使用される。

【0101】

一実施形態において、組成物は抗体の酸性バリアントを含み、酸性バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１と、配列番号２のＣＤＲＨ２と、配列番号３のＣＤＲＨ３と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、１～７０％の酸性バリアントを含む。

【0102】

一態様において、組成物は、７０％以下の酸性バリアントを含む。一実施形態において、組成物は、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３５％以下又は３０％以下の酸性バリアントを含む。或いは、組成物は、１０～７０％、１０～６０％、１０～５０％、１０～４０％、１０～３５％又は１０～３０％の酸性バリアントを含む。或いは、組成物は、２０～７０％、２０～６０％、２０～５０％、２０～４０％、２０～３５％又は２０～３０％の酸性バリアントを含む。或いは、組成物は、約６０％、約５０％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％又は約２０％の酸性バリアントを含む。

【0103】

一態様において、組成物は、抗体の塩基性バリアントを含み、塩基性バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、１～３０％の塩基性バリアントを含む。

【0104】

一態様において、組成物は、３０％以下の塩基性バリアントを含む。一実施形態において、組成物は、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、７．５％以下又は５％以下の塩基性バリアントを含む。一実施形態において、組成物は、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％又は１～５％の塩基性バリアントを含む。或いは、組成物は、約１５％、約１０％又は約５％の塩基性バリアントを含む。

【0105】

一態様において、組成物は、抗体の主要なアイソフォームを含み、主要なアイソフォームは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、１～９０％の主要なアイソフォームを含む。

【0106】

一態様において、組成物は、１％以上の主要なアイソフォームを含む。一実施形態において、組成物は、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上又は９０％以上の主要なアイソフォームを含む。一実施形態において、組成物は、１０～９０％、２０～９０％、３０～９０％、４０～９０％、５０～９０％又は６０～９０％の主要なアイソフォームを含む。一実施形態において、組成物は、１０～８０％、２０～８０％、３０～８０％、４０～８０％、５０～８０％又は６０～８０％の主要アイソフォームを含む。或いは、組成物は、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５０％又は約５５％の主要アイソフォームを含む。

【0107】

酸性バリアントの割合、塩基性バリアントの割合及び主要なバリアントの割合は、等電点電気泳動は、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して決定され得る。これらのアイソフォーム／荷電バリアントの実施形態は、本明細書に記載の抗体バリアントの任意の１種又は組み合わせと併用され得ることができることが理解される。

【0108】

一態様において、組成物は、抗体の荷電バリアントを含み、荷電バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、７０％以下の酸性バリアント及び／又は３０％以下の塩基性バリアント及び／又は１％以上の主要なアイソフォームを含む。

【0109】

一態様において、組成物は、異性化翻訳後修飾を含む抗体（「異性化」又は「異性化された」）又は「異性化バリアント」を含む。バリアントは、重鎖配列及び／又は軽鎖配列、例えば、重鎖配列のＣＤＲ及び／又は軽鎖配列のＣＤＲに異性化されたアミノ酸残基を含み得る。異性化バリアントは、重鎖又は軽鎖の一方又は両方の鎖に存在し得る。異性化翻訳後修飾により、イソアスパラギン酸及び／又はスクシンイミド－アスパラギン酸が生じる。一例において、アスパラギン酸（Ａｓｐ）の異性化は、本明細書に記載のトリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。これらの異性化バリアントの実施形態は、本明細書に記載の抗体の特徴と組み合わせることができることが理解される。

【0110】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含み、異性化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、２５％以下の異性化バリアントを含む。

【0111】

一態様において、組成物は抗ＢＣＭＡ抗体の集団を含み、抗ＢＣＭＡ抗体の集団は、
配列番号１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２（ＣＤＲＨ２）及び配列番号３（ＣＤＲＨ３）を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４（ＣＤＲＬ１）、配列番号５（ＣＤＲＬ２）及び配列番号６（ＣＤＲＬ３）を含む軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体、及び
それらの異性化バリアント
を含み、抗体の集団の２５％以下は、異性化バリアントで構成されている。

【0112】

組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含み、異性化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、２５％以下のＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化バリアントを含む。

【0113】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含み、異性化バリアントは、配列番号９の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、組成物は、２５％以下の異性化バリアントを含む。

【0114】

或いは、異性化バリアントは、配列番号１１、１２、１３又は１４の重鎖配列を含む。

【0115】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体を含み、重鎖配列又は軽鎖配列のいずれかに異性化、例えば、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化を含む。

【0116】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、６個のＣＤＲ領域のうちの少なくとも１個における異性化、例えば、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化を含む。

【0117】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、ベランタマブを含み、重鎖配列又は軽鎖配列のいずれかにおける異性化、例えば、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化を含む。

【0118】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約２５％以下、約２３％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約８％以下、約７％以下、約０．１～２５％、約０．１～２０％、約０．１～１５％、約０．１～１０％、約０．１～８％、約０．１～７％、約１～６％、約２～６％、約３～６％、約４％、約５％又は約６％は、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３において異性化されている。一実施形態において、２５％以下又は２３％以下のＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。

【0119】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約２５％以下、約２３％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約８％以下、約７％以下、約０．１～２５％、約０．１～２０％、約０．１～１５％、約０．１～１０％、約０．１～８％、約０．１～７％、約１～６％、約２～６％、約３～６％、約４％、約５％又は約６％は、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３において異性化されている。一実施形態において、２５％以下又は２３％以下のＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。

【0120】

別の実施形態において、組成物は、ベランタマブを含み、ベランタマブの約２５％以下、約２３％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約８％以下、約７％以下、約０．１～２５％、約０．１～２０％、約０．１～１５％、約０．１～１０％、約０．１～８％、約０．１～７％、約１～６％、約２～６％、約３～６％、約４％、約５％又は約６％は、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３において異性化されている。一実施形態において、２５％以下又は２３％以下のＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含むベランタマブは、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。

【0121】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含み、異性化バリアントは、配列番号９の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、組成物は、２５％以下の異性化バリアントを含む。

【0122】

一例において、アスパラギン酸（Ａｓｐ）異性化は、トリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物を含むサンプルを、例えば６ＭグアニジンＨＣｌで変性させ、例えば４．２μｇ／μＬの濃度にすることができる。次いで、ジスルフィド結合を、還元、例えば、室温で２０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元することができる。次いで、例えばヨード酢酸を、例えば、１００ｍＭで添加し、遊離のシステイン残基と、例えば室温で３０分間、光から保護して反応させ得る。次いで、サンプルを、例えばＢｉｏＲａｄスピンカラム（ｐａｒｔ ｎｏ．７３２６２２１）を使用して、バッファー交換することができ、次いで、消化、例えば、３７℃で１５分間、０．５％トリプシンで消化することができる。次いで、得られたペプチドを、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラムにロードすることができ、ＵＰＬＣを使用して水及びアセトニトリルのグラジエントの溶液、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸溶液で溶出することができる。次いで、ペプチドをＵＶ検出器及び質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｄｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。未修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、異性化のレベルを計算することができる。

【0123】

一態様において、組成物は、酸化翻訳後修飾（「酸化」又は「酸化された」）を含む抗体又は「酸化バリアント」を含む。バリアントは、重鎖配列及び／又は軽鎖配列、例えば、重鎖配列のＣＤＲ及び／又は軽鎖配列のＣＤＲに酸化されたアミノ酸残基を含み得る。酸化バリアントは、重鎖又は軽鎖の一方又は両方の鎖に存在し得る。これらの酸化バリアントの実施形態は、本明細書に記載の抗体の特徴と組み合わせることができることが理解される。

【0124】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、４０％以下の酸化バリアントを含む。

【0125】

一態様において、組成物は抗ＢＣＭＡ抗体の集団を含み、抗ＢＣＭＡ抗体の集団は、
配列番号１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２（ＣＤＲＨ２）及び配列番号３（ＣＤＲＨ３）を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４（ＣＤＲＬ１）、配列番号５（ＣＤＲＬ２）及び配列番号６（ＣＤＲＬ３）を含む軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体、及び
それらの酸化バリアント
を含み、抗体の集団の４０％以下は、酸化バリアントで構成されている。

【0126】

一実施形態において、酸化バリアントは、１個又は２個以上のＣＤＲにおける酸化を含む。さらなる実施形態において、酸化バリアントは、配列番号１～６のいずれか１個中のメチオニン及び／又はトリプトファン残基における酸化を含む。

【0127】

別の実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、４０％以下の、ＣＤＲＨ１のアミノ酸Ｍ３４における酸化バリアントを含む。

【0128】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブの酸化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号９の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、組成物は、４０％以下の酸化バリアントを含む。

【0129】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体を含み、重鎖配列に酸化、例えば、アミノ酸Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）、Ｍ２５６及び／又はＭ４３２における酸化を含む。

【0130】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、重鎖配列に酸化、例えば、アミノ酸Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）、Ｍ２５６及び／又はＭ４３２における酸化を含む。

【0131】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体は、ベランタマブを含み、重鎖配列に酸化、例えば、アミノ酸Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）、Ｍ２５６及び／又はＭ４３２における酸化を含む。

【0132】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約４０％以下、約３５％以下、約３０％、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約２．５％以下、約２％以下、約０．１～４０％、約０．１～３５％、約０．１～３０％、約０．１～２５％、約０．１～２０％、約０．１～１５％、約０．１～１０％、約０．１～７．５％、約０．１～５％、約０．１～２．５％、約０．１～２％、約０．５％、約１％、約２％又は約５％は、アミノ酸Ｍ３４において酸化されている。一実施形態において、４０％以下の重鎖Ｍ３４における酸化を含む組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。別の実施形態において、３７％以下の重鎖Ｍ３４における酸化を含む組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。

【0133】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約４０％以下、約３５％以下、約３０％、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約２．５％以下、約２％以下、約０．１～４０％、約０．１～３５％、約０．１～３０％、約０．１～２５％、約０．１～２０％、約０．１～１５％、約０．１～１０％、約０．１～７．５％、約０．１～５％、約０．１～２．５％、約０．１～２％、約０．５％、約１％、約２％又は約５％は、アミノ酸Ｍ３４において酸化されている。一実施形態において、４０％以下の重鎖Ｍ３４における酸化を含む組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。別の実施形態において、３７％以下の重鎖Ｍ３４における酸化を含む組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。

【0134】

別の実施形態において、組成物は、ベランタマブを含み、ベランタマブの約４０％以下、約３５％以下、約３０％、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約２．５％以下、約２％以下、約０．１～４０％、約０．１～３５％、約０．１～３０％、約０．１～２５％、約０．１～２０％、約０．１～１５％、約０．１～１０％、約０．１～７．５％、約０．１～５％、約０．１～２．５％、約０．１～２％、約０．５％、約１％、約２％又は約５％は、アミノ酸Ｍ３４において酸化されている。一実施形態において、４０％以下の重鎖Ｍ３４における酸化を含むベランタマブは、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。別の実施形態において、３７％以下の重鎖Ｍ３４における酸化を含むベランタマブは、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を保持する。

【0135】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、９０％以上のＦｃ領域における酸化バリアントを含む。

【0136】

一実施形態において、抗体は、重鎖配列のＦｃ領域及び／又は軽鎖配列のＦｃ領域のメチオニン及び／又はトリプトファン残基における酸化を含む。いくつかの実施形態において、酸化バリアントは、重鎖配列のＦｃ領域のＭ２５６及び／又はＭ４３２における酸化の１又は組み合わせを含む。

【0137】

別の実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、９０％以下のＭ２５６及び／又はＭ４３２における酸化バリアントを含む。

【0138】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブの酸化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号９の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、組成物は、９０％以下のＦｃ領域における酸化バリアントを含む。

【0139】

或いは、酸化バリアントは、配列番号１１、１２、１３又は１４の重鎖配列を含む。

【0140】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約０．１～９０％、約０．１～８０％、約０．１～７０％、約０．１～６５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約１～１０％、約１～５％、約２～１０％、約２～４％、約２％、約３％又は約４％は、アミノ酸Ｍ２５６において酸化されている。一実施形態において、９０％以下又は８９％以下の重鎖Ｍ２５６における酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃγＲＩＩＩＡ結合を保持する。別の実施形態において、６５％以下又は６４％以下の重鎖Ｍ２５６における酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃＲｎ結合を保持する。

【0141】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約０．１～９０％、約０．１～８０％、約０．１～７０％、約０．１～６５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約１～１０％、約１～５％、約２～１０％、約２～４％、約２％、約３％又は約４％は、アミノ酸Ｍ２５６において酸化されている。一実施形態において、９０％以下又は８９％以下の重鎖Ｍ２５６における酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃγＲＩＩＩＡ結合を保持する。別の実施形態において、６５％以下又は６４％以下の重鎖Ｍ２５６における酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃＲｎ結合を保持する。

【0142】

別の実施形態において、組成物はベランタマブを含み、ベランタマブの約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約０．１～９０％、約０．１～８０％、約０．１～７０％、約０．１～６５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約１～１０％、約１～５％、約２～１０％、約２～４％、約２％、約３％又は約４％は、アミノ酸Ｍ２５６において酸化されている。一実施形態において、９０％以下又は８９％以下の重鎖Ｍ２５６における酸化を含むベランタマブは、７０％以上のＦｃγＲＩＩＩＡ結合を保持する。別の実施形態において、６５％以下又は６４％以下の重鎖Ｍ２５６における酸化を含むベランタマブは、７０％以上のＦｃＲｎ結合を保持する。

【0143】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約８６％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約２．５％以下、約２％以下、約０．１～８６％、約０．１～７０％、約０．１～６０％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％又は約３％は、アミノ酸Ｍ４３２において酸化されている。一実施形態において、８６％以下の重鎖Ｍ４３２における酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃγＲＩＩＡ結合を保持する。別の実施形態において、６０％以下の重鎖Ｍ４３２おける酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃＲｎ結合を保持する。

【0144】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約８６％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約２．５％以下、約２％以下、約０．１～８６％、約０．１～７０％、約０．１～６０％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％又は約３％は、アミノ酸Ｍ４３２において酸化されている。８６％以下の重鎖Ｍ４３２における酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃγＲＩＩＩＡ結合を保持する。別の実施形態において、６０％以下の重鎖Ｍ４３２おける酸化を含む組成物は、７０％以上のＦｃＲｎ結合を保持する。

【0145】

別の実施形態において、組成物はベランタマブを含み、ベランタマブの約８６％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約７．５％以下、約５％以下、約２．５％以下、約２％以下、約０．１～８６％、約０．１～７０％、約０．１～６０％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％又は約３％は、アミノ酸Ｍ４３２において酸化されている。一実施形態において、８６％以下の重鎖Ｍ４３２における酸化を含むベランタマブは、７０％以上のＦｃγＲＩＩＩＡ結合を保持する。別の実施形態において、６０％以下の重鎖Ｍ４３２おける酸化を含むベランタマブは、７０％以上のＦｃＲｎ結合を保持する。

【0146】

一例において、酸化は、トリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物を含むサンプルを、例えば６ＭグアニジンＨＣｌで変性させ、例えば４．２μｇ／μＬの濃度にすることができる。次いで、ジスルフィド結合を、還元、例えば、室温で２０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元することができる。次いで、例えばヨード酢酸を、例えば、１００ｍＭで添加し、遊離のシステイン残基と、例えば室温で３０分間、光から保護して反応させ得る。次いで、サンプルを、例えばＢｉｏＲａｄスピンカラム（ｐａｒｔ ｎｏ．７３２６２２１）を使用して、バッファー交換することができ、次いで、消化、例えば、３７℃で１５分間、０．５％トリプシンで消化することができる。次いで、得られたペプチドを、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラムにロードすることができ、ＵＰＬＣを使用して水及びアセトニトリルのグラジエントの溶液、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸溶液で溶出することができる。次いで、ペプチドをＵＶ検出器及び質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｄｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。未修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、酸化のレベルを計算する。

【0147】

一態様において、組成物は、脱アミド化翻訳後修飾（「脱アミド化」又は「脱アミド化された」）を含む抗体又は「脱アミド化変異体」を含む。一実施形態において、抗体は、重鎖配列のＣＤＲ及び／又は軽鎖配列のＣＤＲ中のアスパラギン残基の脱アミド化を含む。さらなる実施形態において、抗体は、重鎖配列のＣＤＲにおけるアスパラギン残基の脱アミド化を含む。一実施形態において、抗体は、重鎖配列のＦｃ領域及び／又は軽鎖配列のＦｃ領域におけるアスパラギン残基の脱アミド化を含む。脱アミド化バリアントは、重鎖又は軽鎖の一方又は両方の鎖に存在し得る。これらの脱アミド化バリアントの実施形態は、本明細書に記載の抗体の特徴と組み合わせることができることが理解される。いくつかの実施形態において、脱アミド化バリアントは、重鎖配列のＦｃ領域のＮ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化の１又は組み合わせを含む。

【0148】

一実施形態において、脱アミド化バリアントは、アスパラギン酸残基、スクシンイミド－アスパラギン酸残基又はイソアスパラギン酸残基から選択される脱アミド化残基を含む。

【0149】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体を含み、重鎖配列における脱アミド化、例えば、アミノ酸Ｎ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化を含む。

【0150】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の脱アミド化バリアントを含み、脱アミド化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、最大１００％の脱アミド化バリアントを含む。

【0151】

別の実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ抗体の脱アミド化バリアントを含み、酸化バリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含み、組成物は、最大１００％のＮ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化バリアントを含む。

【0152】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブの脱アミド化バリアントを含み、脱アミド化バリアントは、配列番号９の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含み、組成物は、最大１００％の脱アミド化バリアントを含む。別の実施形態において、組成物は、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号１４の重鎖配列、及び配列番号１０の軽鎖配列を含む脱アミド化バリアントを含む。

【0153】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、重鎖配列における脱アミド化、例えば、アミノ酸Ｎ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化を含む。

【0154】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体はベランタマブを含み、重鎖配列における脱アミド化、例えば、アミノ酸Ｎ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化を含む。

【0155】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約１００％以下、約７５％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約２％以下、約０．１～１００％、約０．１～７５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％、約５％又は約１０％は、アミノ酸Ｎ３８８において脱アミド化されている。

【0156】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約１００％以下、約７５％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約２％以下、約０．１～１００％、約０．１～７５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％、約５％又は約１０％は、アミノ酸Ｎ３８８において脱アミド化されている。

【0157】

別の実施形態において、組成物はベランタマブを含み、ベランタマブの約１００％以下、約７５％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約２％以下、約０．１～１００％、約０．１～７５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％、約５％又は約１０％は、アミノ酸Ｎ３８８において脱アミド化されている。

【0158】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約１００％以下、約８５％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約２％以下、約０．１～１００％、約０．１～７５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％、約５％又は約１０％は、アミノ酸Ｎ３９３において脱アミド化されている。

【0159】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約１００％以下、約８５％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約２％以下、約０．１～１００％、約０．１～７５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％、約５％又は約１０％は、アミノ酸Ｎ３９３において脱アミド化されている。

【0160】

別の実施形態において、組成物はベランタマブを含み、ベランタマブの約１００％以下、約８５％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約２％以下、約０．１～１００％、約０．１～７５％、約０．１～５０％、約０．１～４０％、約０．１～３０％、約０．１～２０％、約０．１～１０％、約０．１～５％、約０．１～３％、約０．５％、約１％、約２％、約５％又は約１０％は、アミノ酸Ｎ３９３において脱アミド化されている。

【0161】

一例において、脱アミド化は、トリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物を含むサンプルを、例えば６ＭグアニジンＨＣｌで変性させ、例えば４．２μｇ／μＬの濃度にすることができる。次いで、ジスルフィド結合を、還元、例えば、室温で２０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元することができる。次いで、例えばヨード酢酸を、例えば、１００ｍＭで添加し、遊離のシステイン残基と、例えば室温で３０分間、光から保護して反応させ得る。次いで、サンプルを、例えばＢｉｏＲａｄスピンカラム（ｐａｒｔ ｎｏ．７３２６２２１）を使用して、バッファー交換することができ、次いで、消化、例えば、３７℃で１５分間、０．５％トリプシンで消化することができる。次いで、得られたペプチドを、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラムにロードすることができ、ＵＰＬＣを使用して水及びアセトニトリルのグラジエントの溶液、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸溶液で溶出することができる。次いで、ペプチドをＵＶ検出器及び質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｄｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。未修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、脱アミド化のレベルを計算する。

【0162】

一実施形態において、翻訳後修飾は抗体配列バリアントである。例示的な翻訳後修飾抗体配列バリアントは、アスパラギン（Ｎ）からアスパラギン酸（Ｄ）へのスイッチ、Ｎ末端のピログルタミン酸及び／又はＣ末端のリジンの切断を含む。

【0163】

一例において、抗体バリアント、例えば、ＣＤＲＨ３におけるＮ１０３Ｄは、トリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物を含むサンプルを、例えば６ＭグアニジンＨＣｌで変性させ、例えば４．２μｇ／μＬの濃度にすることができる。次いで、ジスルフィド結合を、還元、例えば、室温で２０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元することができる。次いで、例えばヨード酢酸を、例えば、１００ｍＭで添加し、遊離のシステイン残基と、例えば室温で３０分間、光から保護して反応させ得る。次いで、サンプルを、例えばＢｉｏＲａｄスピンカラム（ｐａｒｔ ｎｏ．７３２６２２１）を使用して、バッファー交換することができ、次いで、消化、例えば、３７℃で１５分間、０．５％トリプシンで消化することができる。次いで、得られたペプチドを、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラムにロードすることができ、ＵＰＬＣを使用して水及びアセトニトリルのグラジエントの溶液、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸溶液で溶出することができる。次いで、ペプチドをＵＶ検出器及び質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｄｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。未修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、抗体バリアント、例えば、ＣＤＲＨ３におけるＮ１０３Ｄのレベルを計算する。

【0164】

一態様において、組成物は、重鎖アミノ酸配列におけるＮ末端のピログルタミン酸（「ピログルタミン酸」）翻訳後修飾を含む抗体を含む。一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体を含み、重鎖のＮ末端にピログルタミン酸を含む。

【0165】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、重鎖のＮ末端にピログルタミン酸を含む。

【0166】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体はベランタマブを含み、重鎖のＮ末端にピログルタミン酸を含む。

【0167】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下又は約５０％以下は、重鎖アミノ酸配列のＮ末端にピログルタミン酸を含む。

【0168】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下又は約５０％以下は、重鎖アミノ酸配列のＮ末端にピログルタミン酸を含む。

【0169】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブを含み、ベランタマブの約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下又は約５０％以下は、重鎖アミノ酸配列のＮ末端にピログルタミン酸を含む。

【0170】

一例において、Ｎ末端のピログルタミン酸は、トリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物を含むサンプルを、例えば６ＭグアニジンＨＣｌで変性させ、例えば４．２μｇ／μＬの濃度にすることができる。次いで、ジスルフィド結合を、還元、例えば、室温で２０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元することができる。次いで、例えばヨード酢酸を、例えば、１００ｍＭで添加し、遊離のシステイン残基と、例えば室温で３０分間、光から保護して反応させ得る。次いで、サンプルを、例えばＢｉｏＲａｄスピンカラム（ｐａｒｔ ｎｏ．７３２６２２１）を使用して、バッファー交換することができ、次いで、消化、例えば、３７℃で１５分間、０．５％トリプシンで消化することができる。次いで、得られたペプチドを、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラムにロードすることができ、ＵＰＬＣを使用して水及びアセトニトリルのグラジエントの溶液、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸溶液で溶出することができる。次いで、ペプチドをＵＶ検出器及び質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｄｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。未修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、ピログルタミン酸のレベルを計算する。

【0171】

一態様において、組成物は、重鎖アミノ酸配列におけるＣ末端のリジンの切断である翻訳後修飾を含む抗体を含む。一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体を含み、重鎖のＣ末端のリジンの切断を含む。

【0172】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、重鎖のＣ末端のリジンの切断を含む。

【0173】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体はベランタマブを含み、重鎖のＣ末端のリジンの切断を含む。

【0174】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下又は約５０％以下は、Ｃ末端のリジンの切断を含む。

【0175】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、混合物中の抗体の約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下又は約５０％以下は、重鎖のＣ末端のリジンの切断を含む。

【0176】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブを含み、ベランタマブの約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下又は約５０％以下は、重鎖のＣ末端のリジンの切断を含む。

【0177】

一例において、Ｃ末端のリジンの切断は、トリプシンによるペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物を含むサンプルを、例えば６ＭグアニジンＨＣｌで変性させ、例えば４．２μｇ／μＬの濃度にすることができる。次いで、ジスルフィド結合を、還元、例えば、室温で２０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元することができる。次いで、例えばヨード酢酸を、例えば、１００ｍＭで添加し、遊離のシステイン残基と、例えば室温で３０分間、光から保護して反応させ得る。次いで、サンプルを、例えばＢｉｏＲａｄスピンカラム（ｐａｒｔ ｎｏ．７３２６２２１）を使用して、バッファー交換することができ、次いで、消化、例えば、３７℃で１５分間、０．５％トリプシンで消化することができる。次いで、得られたペプチドを、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラムにロードすることができ、ＵＰＬＣを使用して水及びアセトニトリルのグラジエントの溶液、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸溶液で溶出することができる。次いで、ペプチドをＵＶ検出器及び質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｄｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。未修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、Ｃ末端のリジンの切断のレベルを計算する。

【0178】

一態様において、組成物は、グリコシル化翻訳後修飾（「グリコシル化修飾」）を含む抗体又はグリコシル化バリアントを含む。例示的なグリコシル化修飾には、抗体に対するＧ０、Ｇ１、Ｇ０－ＧｌｃＮａｃ、Ｇ２及びシアル化の発現の変化が含まれる。一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体を含み、グリコシル化修飾を含む。

【0179】

別の実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、グリコシル化バリアントを含む。

【0180】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体はベランタマブを含み、グリコシル化バリアントを含む。

【0181】

一実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１０の軽鎖配列に対して少なくとも約９０％同一である抗体の混合物を含み、組成物は、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約０～１００％、約１～１００％、約３０～１００％、約４０～９０％、約５０～８０％又は５５～８０％のレベルのＧ０；約２．５％以上、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約５０％以上、約０～１００％、約１～１００％、約０～５０％、約１～５０％、約１～４０％、約１～３５％又は８～３１％のレベルのＧ１；約５％以下、約７．５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約４０％以下、約５０％以下、約７５％以下、約０～１００％、約０．５～１００％、約０～５０％、約０．５～５０％、約０．５～２５％、約０．５～１０％、約０．５～７．５％又は約０．９～５．３％のレベルのＧ０－ＧｌｃＮａｃ；０～１００％、１～１００％又は３９～９２％のレベルのＧ２；及び／又は０～１００％、１～１００％又は３８～８８％のレベルのＧ０－２ＧｌｃＮａｃを含む。

【0182】

一実施形態において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体の混合物を含み、組成物は、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約０～１００％、約１～１００％、約３０～１００％、約４０～９０％、約５０～８０％又は５５～８０％のレベルのＧ０；約２．５％以上、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約５０％以上、約０～１００％、約１～１００％、約０～５０％、約１～５０％、約１～４０％、約１～３５％又は８～３１％のレベルのＧ１；約５％以下、約７．５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約４０％以下、約５０％以下、約７５％以下、約０～１００％、約０．５～１００％、約０～５０％、約０．５～５０％、約０．５～２５％、約０．５～１０％、約０．５～７．５％又は約０．９～５．３％のレベルのＧ０－ＧｌｃＮａｃ；０～１００％、１～１００％又は３９～９２％のレベルのＧ２；及び／又は０～１００％、１～１００％又は３８～８８％のレベルのＧ０－２ＧｌｃＮａｃを含む。

【0183】

一実施形態において、組成物はベランタマブを含み、組成物は、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約０～１００％、約１～１００％、約３０～１００％、約４０～９０％、約５０～８０％又は５５～８０％のレベルのＧ０；約２．５％以上、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約５０％以上、約０～１００％、約１～１００％、約０～５０％、約１～５０％、約１～４０％、約１～３５％又は８～３１％のレベルのＧ１；約５％以下、約７．５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約４０％以下、約５０％以下、約７５％以下、約０～１００％、約０．５～１００％、約０～５０％、約０．５～５０％、約０．５～２５％、約０．５～１０％、約０．５～７．５％又は約０．９～５．３％のレベルのＧ０－ＧｌｃＮａｃ；０～１００％、１～１００％又は３９～９２％のレベルのＧ２；及び／又は０～１００％、１～１００％又は３８～８８％のレベルのＧ０－２ＧｌｃＮａｃを含む。

【0184】

一実施形態において、組成物は、１００％がフコシル化されていない抗体の混合物を含む。別の実施形態において、組成物は、０％がフコシル化されている抗体の混合物を含む。

【0185】

一例において、グリコシル化修飾及び結果として生じるプロファイルは、親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）分離及び蛍光検出を備えた超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）を使用して決定され得る。一例において、本明細書に記載の組成物、例えば、ベランタマブを含む本明細書に記載の組成物を、水で１０μｇ／μＬの濃度に希釈することができる。次いで、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ製のＰＮＧａｓｅＦキット（カタログ番号Ｐ０７０５Ｌ）を使用するＰＮＧａｓｅＦによる酵素消化によって、グリカンを組成物、例えば、ベランタマブを含む組成物から遊離させる。グリカンをＰＮＧａｓｅＦによって遊離させることができ、アントラニルアミド（Ｓｉｇｍａ－Ａｉｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ａ８９８０４）で標識することができる。次いで、ＨＩＬＩＣカラムステップ（グリカンをロードし、水で洗浄し、アセトニトリルで溶出することができるステップ）を使用して、標識されたグリカンを精製して過剰な標識溶液を除去することができる。次いで、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣで、Ｗａｔｅｒｓ Ｇｌｙｃａｎ ＢＥＨ Ａｍｉｄｅカラム（カタログ番号１８６００４７４２）を使用して、ギ酸アンモニウム／ギ酸及びアセトニトリルグラジエントによって、標識されたグリカンを分離することができる。次いで、グリカンを検出することができ、例えば、３６５ｎｍでの励起及び４３８ｎｍでの発光を伴う蛍光検出を使用することによって検出することができる。グリカンの定量を実施することができ、例えば、あるグリカンに関する曲線下面積を、検出されたすべてのグリカンに関する総曲線下面積で除算することによって実施することができる。

【0186】

一態様において、組成物は、本明細書で「アグリゲートバリアント（aggregated variant）」とも呼ばれるアグリゲート抗体（aggregated antibody）（高分子量（ＨＭＷ）種）である抗体を含む。アグリゲート抗体は、抗体モノマー及びそのサブユニットから形成される二量体又はより高次の構造を含み得る。アグリゲートバリアントは、例えば、本明細書に記載される抗体の共有結合又は非共有結合、還元可能又は還元不可能、及びビジブル（visible）又はサブビジブル（subvisible）の凝集体であり得る。アグリゲートバリアント又はフラグメント化バリアント（fragmented variant）は、それらのサイズに基づいて特徴付けられ得、抗体と区別され得る。例えば、抗体組成物のサイズ分布は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、例えば、ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して検出され得る。

【0187】

一態様において、組成物は抗体のアグリゲートバリアントを含み、アグリゲートバリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖配列とを含み、組成物は、１０％以下のアグリゲートバリアントを含む。

【0188】

抗体組成物は、１０％以下のアグリゲートバリアント、例えば、７．５％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下又は１％以下のアグリゲートバリアントを含み得る。別の実施形態において、組成物は、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％のアグリゲートバリアントを含み得る。或いは、組成物は、１％超１０％未満のアグリゲートバリアントを含む。或いは、組成物は、約７．５％、約５％、約４％、約３％、約２％又は約１％のアグリゲートバリアントを含み得る。

【0189】

フラグメント化バリアント（「フラグメントバリアント（fragment variant）」）は、全長抗体の一部を含むバリアントである。例えば、このようなフラグメントには、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、線状抗体（linear antibody）、一本鎖抗体分子及び免疫グロブリンシングル可変ドメイン（immunoglobulin single variable domain）が含まれる。

【0190】

一態様において、組成物は抗体のフラグメントバリアントを含み、フラグメントバリアントは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖配列とを含み、組成物は、１０％以下のフラグメントバリアントを含む。

【0191】

抗体組成物は、１０％以下のフラグメント化抗体、例えば、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下又は１％以下のフラグメント化抗体を含み得る。別の実施形態において、組成物は、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１．５％又は０．５～１％のフラグメント化抗体を含み得る。或いは、組成物は、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％又は約０．５％のフラグメント化抗体を含み得る。

【0192】

組成物は、本明細書に記載の酸性バリアント、塩基性バリアント、異性化バリアント、酸化バリアント、脱アミド化バリアント、Ｎ末端ピログルタミン酸バリアント、Ｃ末端リジン切断バリアント、及び／又は任意のパーセンテージのグリコシル化修飾バリアント、及び／又はアグリゲートバリアント及び／又はフラグメント化バリアントの任意の１又は組み合わせを含み得る。

【0193】

一実施形態において、組成物は、７０％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合、７０％以上のＦｃγＲＩＩＩａ結合、及び／又は７０％以上のＦｃＲｎ結合を有する。

【0194】

別の実施形態において、組成物は、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上又は約９５％以上のＢＣＭＡ特異的抗原結合を有する。別の実施形態において、組成物は、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上のＦｃγＲＩＩＩａ結合を有する。別の実施形態において、組成物は、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上のＦｃＲｎ結合を有する。

【0195】

別の実施形態において、組成物は、約７０～１３０％の特異的抗原結合、約７０～１３０％のＦｃγＲＩＩＩａ結合及び／又は約７０～１３０％のＦｃＲｎ結合を有する。

【0196】

いくつかの実施形態において、組成物は、約７５％～約１２５％、約８０％～約１２０％、約９０％～約１１０％、約７０％、約８０％、約９０％、１００％、約１１０％、約１２０％又は約１３０％の特異的抗原結合を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約７５％～約１２５％、約８０％～約１２０％、約９０％～約１１０％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％又は約１１０％のＦｃγＲＩＩＩａ結合を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約７５％～約１２５％、約８０％～約１２０％、約９０％～約１１０％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％のＦｃＲｎ結合を有する。

【0197】

別の実施形態において、バリアントを含む組成物の活性は、１００％の活性であるベランタマブの活性の少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％である。一態様において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含むバリアントを含み、組成物の効力は、配列番号９、１１、１２、１３又は１４の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含む組成物であって、（ｉ）最大２３％の、Ｄ１０３における異性化、及び／又は（ｉｉ）最大３７％の、Ｍ３４における酸化のうちの任意の１又は組み合わせを含む組成物の少なくとも７０％である。

【0198】

別の態様において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含むバリアントを含み、組成物の効力は、配列番号９、１１、１２、１３又は１４の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含む組成物であって、（ｉ）最大２３％の、Ｄ１０３における異性化、（ｉｉ）最大３７％の、Ｍ３４における酸化、（ｉｉｉ）最大６４％の、Ｍ２５６における酸化、（ｉｖ）最大６１％の、Ｍ４３２における酸化、（ｖ）最大１００％の、Ｎ３８８における脱アミド化、及び／又は（ｖｉ）最大１００％の、Ｎ３９３における脱アミド化のうちの任意の１又は組み合わせを含む組成物の少なくとも７０％である。さらに別の態様において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列とを含むバリアントを含み、組成物の効力は、配列番号９、１１、１２、１３又は１４の重鎖配列及び配列番号１０の軽鎖配列を含む組成物であって、（ｉ）最大２３％の、Ｄ１０３における異性化、（ｉｉ）最大３７％の、Ｍ３４における酸化、（ｉｉｉ）最大６４％の、Ｍ２５６における酸化、（ｉｖ）最大６１％の、Ｍ４３２における酸化、（ｖ）最大１００％の、Ｎ３８８における脱アミド化、（ｖｉ）最大１００％の、Ｎ３９３における脱アミド化、（ｖｉｉ）最大１００％の、ＨＣのＣ末端のリジンの切断、及び／又は（ｖｉｉｉ）最大１００％の、ＨＣのＮ末端のピログルタミン酸のうちの任意の１又は組み合わせを含む組成物の少なくとも７０％である。

【0199】

一例において、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定される。ベランタマブマホドチンを、ＰＢＳＴで１０μｇ／ｍＬに希釈し、注入し、ＣＭ５センサーチップに固定化されたプロテインＡによって捕捉することができる。次いで、ＢＣＭＡを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させることができる。次いで、ＦｃγＲＩＩＩａを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させることができる。ＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａに結合するベランタマブマホドチンの機能的濃度を、参照標準曲線から計算することができ、それぞれＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａ結合濃度として報告することができる。サンプルの総ベランタマブマホドチン濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって事前に決定する。ＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａの結合濃度を２８０ｎｍの濃度での吸光度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算することができる。

【0200】

胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、例えば、ベランタマブへの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定され得る。ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）センサーチップに固定化されたＦｃＲｎによって、ベランタマブを捕捉することができる。検量線上の結合反応の内挿によって、サンプルのＦｃＲｎ結合濃度を決定することができる。ＦｃＲｎ結合濃度を総タンパク質濃度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算する。

【0201】

当業者に知られているその他の方法の中で、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、例えば、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定され得る。一例では、ベランタマブマホドチンを注入し、ＣＭ５センサーチップに固定化されたプロテインＡによって捕捉する。次いで、ＢＣＭＡを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させる。次いで、ＦｃγＲＩＩＩａを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させる。ＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａに結合するベランタマブマホドチンの機能的濃度を、参照標準曲線から計算することができ、それぞれＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａ結合濃度として記録することができる。サンプルの総ベランタマブマホドチン濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって事前に決定することができる。ＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａの結合濃度を吸光度、例えば、２８０ｎｍの濃度での吸光度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算することができる。

【0202】

特定の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与える。別の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与えない。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合はＦｃＲｎへの結合に影響を与える。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与えない。一実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合を弱め得る。

【0203】

胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、例えば、ベランタマブマホドチンへの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定され得る。ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）センサーチップに固定化されたＦｃＲｎによって、ベランタマブマホドチンを捕捉することができる。検量線上の結合反応の内挿によって、サンプルのＦｃＲｎ結合濃度を決定することができる。ＦｃＲｎ結合濃度を総タンパク質濃度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算する。

【0204】

抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質がベランタマブマホドチンを含む場合には、特異的抗原結合、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎ結合に対して本明細書に記載のＳＰＲ法は、ベランタマブ又はベランタマブマホドチンの参照標準を使用し得る。ベランタマブ又はベランタマブマホドチン参照標準をアッセイで使用して、システムの適合性及びサンプルの比較可能性データを取得し、方法が適切に実行されていることを保証することができる。参照標準により、検量線を作成することができ、サンプルの濃度を検量線から内挿する。例えば、参照標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む組成物であり得る。

【0205】

上記の抗体及び抗体バリアントを含む抗体組成物は、特異的抗原結合及び／又はＦｃＲｎ結合及び／又はＦｃγＲＩＩＩａ結合及び／又は効力を保持している。例えば、上記の抗体及び抗体バリアント及び翻訳後修飾バリアントを含む抗体組成物は、０．７０超のＢＣＭＡ特異的抗原結合、及び／又は７０％超のＦｃＲｎ結合、及び／又は７０％のＦｃγＲＩＩＩａ結合、及び／又は７０％超の効力を有する。したがって、これらのレベル（％）のバリアントは、機能に大きな影響を与えることなく（すなわち、活性の低下をもたらすことなく）、抗体組成物において許容され得る。一実施形態において、「機能低下」又は「活性低下」は、ＢＣＭＡへの結合、又はＦｃＲｎへの結合、又はＦｃγＲＩＩＩａへの結合、又は効力が、参照標準と比較してパーセンテージとして低下し、アッセイのばらつきに対して有意であることを意味する。例えば、機能又は活性又は効力の低下は、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上又は５０％以上の低下として説明され得る。

【0206】

別の実施形態において、参照サンプル標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む組成物であり、この組成物は、８０％以上の、重鎖Ｃ末端のリジンの切断と、１００％以下の、重鎖Ｎ末端のピログルタミン酸とを含む。さらなる実施形態において、参照サンプル標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む組成物であり、この組成物は、８０％以上の、重鎖Ｃ末端のリジンの切断と、１００％以下の、重鎖Ｎ末端のピログルタミン酸と、７％以下の、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化とを含む。さらなる実施形態において、参照サンプル標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む組成物であり、この組成物は、８０％以上の、重鎖Ｃ末端のリジンの切断と、１００％以下の、重鎖Ｎ末端のピログルタミン酸と、７％以下の、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化と、５％以下の、アミノ酸Ｍ３４、Ｍ２５６及び／又はＭ４３２における酸化とを含む。さらなる実施形態において、参照サンプル標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む組成物であり、この組成物は、８０％以上の、重鎖Ｃ末端のリジンの切断と、１００％以下の、重鎖Ｎ末端のピログルタミン酸と、７％以下の、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化と、５％以下の、アミノ酸Ｍ３４、Ｍ２５６及び／又はＭ４３２における酸化と、２％以下の、アミノ酸Ｎ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化とを含む。さらなる実施形態において、参照サンプル標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む組成物であり、この組成物は、８０％以上の、重鎖Ｃ末端のリジンの切断と、１００％の、重鎖Ｎ末端のピログルタミン酸と、７％以下の、ＣＤＲＨ３のアミノ酸Ｄ１０３における異性化と、５％以下の、Ｍ２５６における酸化と、２％以下の、Ｍ３４及びＭ４３２における酸化と、２％以下の、アミノ酸Ｎ３８８及びＮ３９３における脱アミド化とを含む。

【0207】

抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）
抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）は、新しいクラスの強力な抗癌剤であり、最近、顕著な臨床的利益を示している。ＡＤＣは、リンカーを介して抗体に化学的に結合した細胞毒性薬で構成されている。推定では、細胞表面での抗原結合、エンドサイトーシス、リソソームへの輸送、ＡＤＣの分解、ペイロードの放出、細胞プロセシング（例えば、有糸分裂）の中断及びアポトーシスを含む一連のイベントによって、ＡＤＣは、細胞表面タンパク質を過剰発現している癌細胞を破壊し得る。ＡＤＣは、モノクローナル抗体の抗原駆動型ターゲティング特性に細胞毒性薬の強力な抗腫瘍効果を組み合わせる。例えば、２０１１年にＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（抗ＣＤ３０抗体－ＭＭＡＥ ＡＤＣ）は、難治性ホジキンリンパ腫及び全身性未分化リンパ腫の治療薬として規制当局の承認を得た。

【0208】

ＡＤＣは、癌の治療において、細胞毒性薬、すなわち、細胞の成長又は増殖を傷害又は阻害する薬物の局所送達に使用されてきた（Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549; Wu et al. (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146; Payne, G. (2003) i 3:207-212; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Deliv. Rev. 26:151-172; U.S. Pat. No. 4,975,278）。ＡＤＣは、腫瘍への薬物部分の標的化送達及びそこでの細胞内蓄積を可能にし、非結合薬物の全身投与は、正常細胞及び排除しようとする腫瘍細胞に対して許容不可能なレベルの毒性をもたらし得る（Baldwin et al., Lancet (Mar. 15, 1986) pp. 603-05; Thorpe (1985) "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (A. Pinchera et al., eds) pp. 475-506）。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方がこれらの戦略に有用であると報告されている（Rowland et al., (1986) Cancer Immunol. Immunother. 21:183-87）。抗体－毒素複合体で使用される毒素には、細菌毒素、例えば、ジフテリア毒素、植物毒素、例えば、リシン（ricin）、低分子毒素、例えば、ゲルダナマイシン（Mandler et al (2000) J. Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581; Mandler et al. (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028;
Mandler et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791）、メイタンシノイド（EP 1391213; Liu et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623）、及びカリケアミシン（Lode et al (1998) Cancer Res. 58:2928; Hinman et al. (1993) Cancer Res. 53:3336-3342）が含まれる

【0209】

一実施形態において、ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質は、１種又は２種以上の細胞傷害性薬剤、例えば、化学療法薬、薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物若しくは動物起源の酵素活性のある毒素、又はそれらのフラグメント）、又は放射性同位体（すなわち、放射性複合体（radioconjugate））と結合している抗体又は抗体フラグメントを含む抗体－薬物複合体（「抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ」）である。

【0210】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、以下の一般構造：
ＡＢＰ－（（リンカー）_ｎ－Ｃｔｘ）_ｍ
［式中、
ＡＢＰは、抗原結合タンパク質であり、
リンカーは、存在しないか、又は任意の切断可能若しくは切断不可能なリンカーであり、
Ｃｔｘは、本明細書に記載される任意の細胞毒性薬であり、
ｎは、０、１、２又は３であり、且つ
ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。］
を有する。

【0211】

例示的な実施形態において、使用され得る酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来)、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開されたＷＯ９３／２１２３２を参照されたい。様々な放射性核種、例えば、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙ及び^１８６Ｒｅが放射性複合体抗体の生産に利用可能である。

【0212】

本発明の抗ＢＣＭＡ抗体又はそのフラグメントはまた、１種又は２種以上の細胞毒性薬、例えば、限定されないが、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン、トリコテセン及びＣＣ１０６５、又は毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体にコンジュゲートされ得る。適切な細胞毒性薬には、例えば、アウリスタチン、例えば、ドバリン－バリン－ドライソロイニン－ドラプロイン－フェニルアラニン（dovaline-valine-dolaisoleunine-dolaproinephenylalanine）（ＭＭＡＦ）及びモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）並びにＭＭＡＥのエステル形態；ＤＮＡマイナーグルーブ結合剤；ＤＮＡマイナーグルーブアルキル化剤；エンジイン；レキシトロプシン；デュオカルマイシン；タキサン、例えば、パクリタキセル及びドセタキセル；ピューロマイシン；ドラスタチン；メイタンシノイド；及びビンカアルカロイドが含まれる。特定の細胞毒性薬には、トポテカン、モルホリノ－ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、ドラスタチン－１０、エチノマイシン、コンブレタトスタチン(combretatstatin)、カリチアマイシン(chalicheamicin)、メイタンシン、ＤＭ－１、ＤＭ－４、ネトロプシンが含まれる。その他の適切な細胞毒性薬には、抗チューブリン剤（例えば、アウリスタチン）、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン、バッカチン誘導体、クリプトフィシン(cryptophysin)、メイタンシノイド、コンブレタスタチン又はドラスタチンが含まれる。抗チューブリン剤には、ジメチルバリン－バリンドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン－ｐ－フェニレンジアミン（ＡＦＰ）、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、アウリスタチンＥ、ビンクリスタチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ－１６、カンプトテシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ノコダゾール、コルヒチン、コルシミド（colcimid）、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモライド、メイタンシン、ＤＭ－１、ＤＭ－４又はエリュテロビンが含まれる。

【0213】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦに連結された抗ＢＣＭＡ抗体を含む。

【0214】

【化1】

【0215】

切断可能なリンカーは、細胞内条件下で切断されやすい場合がある。適切な切断可能リンカーには、細胞内プロテアーゼ、例えば、リソソームプロテアーゼ又はエンドソームプロテアーゼにより切断可能なペプチドリンカーが含まれる。例示的な実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）又はフェニルアラニン－リジン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカーであってもよい。その他の適切なリンカーには、例えば、ｐＨ５．５未満で加水分解可能なリンカー、例えば、ヒドラゾンリンカーが含まれる。さらなる適切な切断可能なリンカーには、ジスルフィドリンカーが含まれる。例示的なリンカーには、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及びＮ－スクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）が含まれる。

【0216】

一実施形態において、リンカーは、チオール反応性マレイミド、カプロイルスペーサー、ジペプチドバリン－５シトルリン、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル、自壊性フラグメント化基（self-immolative fragmenting group）、又はプロテアーゼ耐性マレイミドカプロイルを含み得る。

【0217】

別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、以下の構造に示されるように、ＭＣリンカーによってＭＭＡＥ又はＭＭＡＦに連結された抗ＢＣＭＡ抗体を含む。

【0218】

【化2】

【0219】

本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、本明細書に記載の任意の抗ＢＣＭＡ抗体を本明細書に記載の任意の細胞毒性薬とともに含み得る。

【0220】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１；配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２；配列番号３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３；配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１；配列番号５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２；及び／又は配列番号６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む抗ＢＣＭＡ抗体を含み、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦにコンジュゲートされている。

【0221】

さらに別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗ＢＣＭＡ抗体を含み、ＭＭＡＦ又はＭＭＡＥにコンジュゲートされている。

【0222】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；及び／又は配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む抗ＢＣＭＡ抗体を含み、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦにコンジュゲートされている。

【0223】

さらに別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ；及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含む抗ＢＣＭＡ抗体を含み、ＭＭＡＦ又はＭＭＡＥにコンジュゲートされている。

【0224】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣ；及び／又は配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣを含む抗ＢＣＭＡ抗体を含み、ＭＭＡＦ又はＭＭＡＥにコンジュゲートされている。

【0225】

さらに別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＨＣ；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＬＣを含むベランタマブマホドチンであり、ＭＭＡＦにコンジュゲートされている。

【0226】

ＡＤＣの調製及び特性評価
特定の天然のＩｇＧ１分子は、１６個のジスルフィド結合（３２個のシステイン又はスルフヒドリル基）を含む。特定の態様では、４個の鎖間ジスルフィド結合のみを還元し、細胞毒性薬にコンジュゲートさせるように抗体を還元することができ、細胞毒性薬に対する最大８個の接続部位を可能にする。言い換えれば、薬物担持数（「ＤＬ：drug load」）、すなわち、抗体分子あたりの細胞毒性薬の数は、０～８であり得、本明細書では、ＤＬ０、ＤＬ２（ＤＬ２ａ及びＤＬ２ｂを含む）、ＤＬ４（ＤＬ４ａ、ＤＬ４ｂ及びＤＬ４ｃを含む）、ＤＬ６（ＤＬ６ａ及びＤＬ６ｂを含む）及びＤＬ８として記載される。

【0227】

コンジュゲーションプロセスは、１）各抗体分子に結合する薬物の数、及び２）細胞毒性薬の位置の両方で変化する、所与のＡＤＣ組成物に対する薬物－抗体接続の不均一性をもたらし得る。これは、図１に例示されるように、様々なＤＬ種を有するＡＤＣ組成物をもたらし得る。本明細書で使用される「ＡＤＣ組成物」という用語は、様々な薬物担持数（「ＤＬ」）を含む抗体種の不均一な混合物を含む組成物を指す（例えば、図２を参照）。不均一なＡＤＣ組成物全体の平均薬物抗体比（average drug-antibody ratio）は、本明細書では「平均ＤＡＲ」又は「ＤＡＲ」と呼ばれる。例えば、ＡＤＣ組成物は、それぞれが独自のＤＬを有する抗体種の混合物を含み得（混合物中のいくつかの種はＤＬ２であり、混合物中のいくつかの種はＤＬ４であり、混合物中のいくつかの種はＤＬ６であり、混合物中のいくつかの種はＤＬ８である）、組成物全体の平均ＤＡＲは約４であり得る。

【0228】

別の実施形態において、「ＤＬの割合」という用語は、不均一なＡＤＣ組成物中の特定のＤＬ種の割合を記載するために使用され得る（例えば、ＤＬ２の割合は、不均一なＡＤＣ組成物全体の約１０％～約３０％である）。

【0229】

本発明の特定の態様において、薬物は、抗体のスルフヒドリル基を介して抗体にコンジュゲートされ得る。スルフヒドリル基は、システイン側鎖のスルフヒドリル基であり得る。システイン残基は、抗体に天然に存在する（例えば、鎖間ジスルフィド）か、又はその他の手段、例えば、変異誘発によって導入され得る。抗体のスルフヒドリル基に薬物をコンジュゲートさせる方法は、当技術分野で周知である（例えば、米国特許第７，６５９，２４１号、第７，４９８，２９８号、及び国際公開番号ＷＯ２０１１／１３０６１３、ＷＯ２０１４／１５２１９９、ＷＯ２０１５／０７７６０５、及びBioconjugate Chem. 2005, 16, 1282-1290を参照）。抗体は通常、スルフヒドリル基をコンジュゲートに利用可能にするために、コンジュゲートの前に還元される。抗体は、当技術分野で既知の条件を使用して還元され得る。還元条件は、一般に抗体の実質的な変性を引き起こさず、一般に抗体の抗原結合親和性に影響を与えない条件である。

【0230】

本発明の一態様において、還元工程で使用される還元剤は、ＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）であり、ＴＣＥＰは、例えば、室温で３０分間、過剰量で添加される。例えば、ｐＨ７．４の１０ｍＭ ＴＣＥＰ溶液２５０μＬは、室温３０分で１～１００μｇの抗体の鎖間ジスルフィドを容易に還元する。しかしながら、その他の還元剤及び条件を使用してもよい。反応条件の例には、ｐＨ５～８で５℃～３７℃の温度が含まれる。

【0231】

ＡＤＣ組成物中のＤＬ種の割合及び／又は平均ＤＡＲを計算するための様々な方法が存在し、当業者には知られている。例えば、システインが連結されているＡＤＣの不均一性は、通常、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって測定される。このクロマトグラフィーは、担持されている薬物数に基づいてＤＬ種を分離する。ＤＬ分布を評価するためのＬＣ－ＭＳアッセイも開発されている。ＡＤＣ組成物中の薬物担持数分布を計算するための例示的な方法は、例えば、Journal of Chromatography B 1060 (2017) 182-189に見出され得る。

【0232】

例えば、ＤＬ０は抗体に薬物を担持していない。例えば、ＤＬ２の薬物担持数は２である。一実施形態において、ＤＬ２のコンジュゲーション部位は、ＬＣ Ｃ２１４及びＨＣ ２２４である。例えば、ＤＬ４の薬物担持数は４である。一実施形態において、ＤＬ４ａのコンジュゲーション部位は、ＬＣ Ｃ２１４、ＨＣ ２２４、ＬＣ Ｃ２１４及びＨＣ ２２４である。一実施形態において、ＤＬ４ｂのコンジュゲーション部位は、ＬＣ Ｃ２３０、ＨＣ ２３３、ＬＣ Ｃ２３０及びＨＣ ２３３である。例えば、ＤＬ６の薬物担持数は６である。一実施形態において、ＤＬ６のコンジュゲーション部位は、ＬＣ Ｃ２１４、ＨＣ ２２４、ＬＣ Ｃ２３０、ＨＣ ２３３、ＬＣ Ｃ２３０及びＨＣ ２３３である。例えば、ＤＬ８の薬物担持数は８である。一実施形態において、ＤＬ８のコンジュゲーション部位は、ＬＣ Ｃ２１４、ＨＣ ２２４、ＬＣ Ｃ２１４、ＨＣ ２２４、ＬＣ Ｃ２３０、ＨＣ ２３３、ＬＣ Ｃ２３０及びＨＣ ２３３である。

【0233】

一実施形態において、特定のＤＬ種の割合（例えば、ＤＬ０の割合、ＤＬ２の割合、ＤＬ４ａの割合、ＤＬ４ｂの割合、ＤＬ６の割合、ＤＬ８の割合）は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して個々のＤＬ種を分離し、各ＤＬピークに関する曲線下面積を計算し、各ＤＬピークを、合計されたすべてのＤＬ種に関する総曲線下面積で除算することによって決定され得る。一実施形態において、平均ＤＡＲは、以下の式を使用して、各ＤＬ種の曲線下面積から計算され得る。

【0234】

【数1】

【0235】

一実施形態において、特定の下位種のＤＡＲの割合（例えば、ＤＬ２の合計に占めるＤＬ２ａの割合）は、ＨＩＣ、非還元分離法及び質量分析技術を含み得る分析技術の組み合わせを使用して、特定のＤＬ種を収集することによって決定される。

【0236】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物の平均ＤＡＲは、約２～約７、約２～約６、約２．１～約５．７、約２．１～約５．０、約２．１～約４．６、約２．１～約４．１、約２．１～約３．５、約２．１～約３．０、約３．０～約５．７、約３．０～約５．０、約３．０～約４．６、約３．０～約４．１、約３．０～約３．５、約３．５～約５．７、約３．５～約５．０、約３．５～約４．６、約３．５～約４．１、約３．８～約４．５、約４．１～約５．７、約４．１～約５．０、約４．１～約４．６、約４．６～約５．７、約４．６～約５．０、約５．０～約５．７、約２．１、約３．０、約３．５、約４．１、約４．６、約５．０又は約５．７である。

【0237】

別の実施形態において、組成物は、平均ＤＡＲが約２．１～約５．７、約３．４～約４．６、約３．８～約４．５又は約４である抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む。

【0238】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒性薬は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、平均ＤＡＲは、約２～約６、約２．１～約５．７、約３．４～約４．６又は約３．８～約４．５である。

【0239】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒性薬は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、平均ＤＡＲは、約２～約６、約２．１～約５．７、約３．４～約４．６又は約３．８～約４．５である。

【0240】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲは、約２～約６、約２．１～約５．７、約３．４～約４．６又は約３．８～約４．５である。

【0241】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物中のＤＬ０種の割合は、約１０％以下、約５％以下、約１％～約１０％、約１％～約５％又は約２．８％～約４．７％である。

【0242】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物中のＤＬ２種の割合は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、約１５．８％～約２６．３％、約１５％～約２７％、約１５％～約３２％又は約１０％～約４０％である。

【0243】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物中のＤＬ４ａ種の割合は、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、約３５．５％～約３７．９％、約３５％～約３８％、約３０％～約４０％又は約２０％～約５０％である。別の実施形態において、ＤＬ４ａ種の割合は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物における主要な種であり、組み合わされたすべての種の約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上又は約９０％以上である。

【0244】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物中のＤＬ４ｂ種の割合は、少なくとも約５％、少なくとも約７％、約７．１％～約８．５％、約７％～約９％、約５％～約１０％又は約１％～約１５％である。

【0245】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物中のＤＬ６種の割合は、少なくとも約１０％、少なくとも約１４％、約１４．０％～約１９．１％、約１４％～約２０％、約１０％～約２０％又は約５％～約３０％である。

【0246】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣ組成物中のＤＬ８種の割合は、少なくとも約１％、少なくとも約６％、約６．０％～約１２．０％、約４％～約１５％又は約１％～約２０％である。

【0247】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、ここで、ＤＬ２の割合は、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合は、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合は、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合は、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合は、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である。

【0248】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒性薬は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、ここで、ＤＬ２の割合は、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合は、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合は、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合は、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合は、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である。

【0249】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒性薬は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、ここで、ＤＬ２の割合は、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合は、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合は、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合は、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合は、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である。

【0250】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、ここで、ＤＬ２の割合は、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合は、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合は、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合は、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合は、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である。

【0251】

本明細書で使用される「望ましくないＤＡＲ種」という用語は、最終組成物において望ましくなく、最終治療用生成物の特定の特性（例えば、標的結合、有効性、安全性等）に悪影響を与え得る任意のＤＡＲ種を指す。一実施形態において、望ましくないＤＡＲ種は、ＤＬ０、すなわちコンジュゲーションプロセス後に細胞毒性薬と結合していない抗体である。一実施形態において、ＡＤＣ組成物中のＤＬ０の割合は、約１５％以下、約１４％以下、約１３％以下、約１２％以下、約１１％以下、約１０％以下、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下又は約０．５％以下である。別の実施形態において、ＡＤＣ組成物中のＤＬ０の割合は、約１％～約１０％、約２％～約５％又は約２．０％～約４．８％である。

【0252】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒性薬は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、ＤＬ０の割合は、約１０％以下又は約５％以下である。

【0253】

一実施形態において、組成物は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含み、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒性薬は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、ＤＬ０の割合は、約１０％以下又は約５％以下である。

【0254】

一実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、ＤＬ０の割合は、約１０％以下又は約５％以下である。

【0255】

一実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、ここで、ＤＬ０の割合は、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合は、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合は、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合は、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合は、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合は、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である。

【0256】

特定の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、細胞成長阻害及び／又は腫瘍体積に影響を与える。特定の実施形態において、平均ＤＡＲは、細胞成長阻害及び／又は腫瘍体積に影響を与えない。別の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合が増加するにつれて、細胞成長阻害が増強し、且つ／或いは腫瘍体積が減少する。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、組成物の平均ＤＡＲ又はＤＬの割合が増加するにつれて、癌細胞の成長阻害が増強し、且つ／或いは腫瘍体積が減少する。

【0257】

細胞成長阻害の相対的効力（relative potency）は、本明細書に記載の組成物（例えば、ベランタマブマホドチン）とのインキュベーション後の細胞株（例えば、多発性骨髄腫細胞株）の細胞生存率を測定することによって決定され得る。細胞生存率は、当業者に既知の細胞生存率アッセイを使用して測定され得る。用量反応（半数効果濃度又はＥＣ５０）は、非線形ロジスティック回帰モデルを使用して生成され得る。組成物を含むサンプルのＥＣ５０に対する参照標準のＥＣ５０の比率を計算して、相対的効力を決定することができる。

【0258】

一実施形態において、組成物の細胞成長阻害の相対的効力は、約０．５～約１．３又は約０．８～約１．１である。別の実施形態において、組成物の平均ＤＡＲは、約２．１～約５．７であり、組成物の細胞成長阻害の相対的効力は、約０．５～約１．３である。別の実施形態において、組成物の平均ＤＡＲは、約３．０～約５．０又は約３．５～約４．６であり、組成物の細胞成長阻害の相対的効力は、約０．８～約１．１である。別の実施形態において、組成物は、平均ＤＡＲが約３．０～約５．０又は約３．５～約４．６であるベランタマブマホドチンを含み、組成物の細胞成長阻害相対効力は、約０．８～約１．１である。

【0259】

特定の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＡＤＣＣ活性に影響を与える。別の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＡＤＣＣ活性に影響を与えない。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＡＤＣＣ活性に影響を与える。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＡＤＣＣ活性に影響を与えない。

【0260】

ＡＤＣＣ活性の相対的効力は、例えば、ベランタマブマホドチン、細胞（例えば、多発性骨髄腫細胞）、及びＮＫ細胞（エフェクター細胞）をインキュベートすることによって測定され得る。理論に拘束されることはないが、ベランタマブマホドチンは細胞表面に発現するＢＣＭＡに結合し、抗体のＦｃ領域はエフェクター細胞の受容体ＦｃγＲＩＩＩａを介してエフェクター細胞のＦｃγＲＩＩＩａに結合する。エフェクター細胞の表面へのこれらの受容体の会合は、サイトカイン（ＩＦＮｇ）の合成及び分泌、並びに標的細胞の細胞質に進入する顆粒（パーフォリン及びグランザイム）の放出をもたらす。グランザイムは、アポトーシスによるこれらの細胞の死を引き起こす、標的細胞内のシグナル伝達イベントを惹起する。ＮＫ細胞の供給源は、ヒトの全血から分離可能な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であってもよい。次いで、ＢＡＴＤＡ（ビス－（アセトキシメチル）２，２’：６’，２’’－ターピリジン－６，６’’－ジカルボキシレート）を添加して、標的の細胞膜に透過させ、細胞を標識することができる。細胞溶解後、このリガンドをＤＥＬＦＩＡ Ｅｕｒｏｐｉｕｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎと混合して、蛍光性が高く安定したキレート（ＥｕＴＤＡ）を形成させることができる。測定されたシグナルは、溶解した細胞量と直接的に相関する。次いで、参照標準のＥＣ５０値に対するサンプルのＥＣ５０値の比率としてＡＤＣＣ活性を報告することができる。

【0261】

一実施形態において、組成物のＡＤＣＣ活性の相対的効力は、約０．７０～約１．３０又は約０．８～約１．１である。別の実施形態において、組成物の平均ＤＡＲは、約２．１～約５．７であり、組成物のＡＤＣＣ活性の相対的効力は、約０．５～約１．３である。別の実施形態において、組成物の平均ＤＡＲは、約３．０～約５．０又は約３．５～約４．６であり、組成物のＡＤＣＣ活性の相対的効力は、約０．８～約１．１である。別の実施形態において、組成物は、平均ＤＡＲが約３．０～約５．０又は約３．５～約４．６であるベランタマブマホドチンを含み、組成物のＡＤＣＣ活性の相対的効力は、約０．８～約１．１である。

【0262】

特定の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＢＣＭＡへの結合に影響を与える。別の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＢＣＭＡへの結合に影響を与えない。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＢＣＭＡへの結合に影響を与える。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＢＣＭＡへの結合に影響を与えない。一実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＢＣＭＡへの結合を弱め得る。

【0263】

一実施形態において、組成物の相対的なＢＣＭＡ特異的抗原結合は、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上である。別の実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、組成物の相対的なＢＣＭＡ特異的抗原結合は、８５％超又は９０％超である。別の実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、組成物の平均ＤＡＲは、約２．１～約５．７又は約３．０～約５．０又は約３．５～約４．６であり、組成物の相対的なＢＣＭＡ特異的抗原結合は、８５％超又は９０超である。

【0264】

特定の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合に影響を与える。別の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合に影響を与えない。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合に影響を与える。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合に影響を与えない。一実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を弱め得る。

【0265】

一実施形態において、組成物の相対的なＦｃγＲＩＩＩａ結合は、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上である。別の実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、組成物の相対的なＦｃγＲＩＩＩａ結合は、８５％超又は９０％超である。別の実施形態において、組成物は、ベランタマブマホドチンを含み、組成物の平均ＤＡＲは、約２．１～約５．７又は約３．０～約５．０又は約３．５～約４．６であり、組成物の相対的なＦｃγＲＩＩＩａ結合は、８５％超又は９０超である。

【0266】

当業者に知られているその他の方法の中で、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、例えば、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定され得る。一例では、ベランタマブマホドチンを注入し、ＣＭ５センサーチップに固定化されたプロテインＡによって捕捉する。次いで、ＢＣＭＡを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させる。次いで、ＦｃγＲＩＩＩａを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させる。ＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａに結合するベランタマブマホドチンの機能的濃度を、参照標準曲線から計算することができ、それぞれＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａ結合濃度として記録することができる。サンプルの総ベランタマブマホドチン濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって事前に決定することができる。ＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａの結合濃度を吸光度、例えば、２８０ｎｍの濃度での吸光度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算することができる。

【0267】

特定の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与える。別の実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与えない。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与える。さらに別の実施形態において、組成物はベランタマブマホドチンを含み、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合に影響を与えない。一実施形態において、平均ＤＡＲ又はＤＬの割合は、ＦｃＲｎへの結合を弱め得る。

【0268】

胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、例えば、ベランタマブマホドチンへの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定され得る。ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）センサーチップに固定化されたＦｃＲｎによって、ベランタマブマホドチンを捕捉することができる。検量線上の結合反応の内挿によって、サンプルのＦｃＲｎ結合濃度を決定することができる。ＦｃＲｎ結合濃度を総タンパク質濃度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算する。

【0269】

抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質がベランタマブマホドチンを含む場合には、特異的抗原結合、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎ結合に対して本明細書に記載のＳＰＲ法は、ベランタマブ又はベランタマブマホドチンの参照標準を使用し得る。ベランタマブ又はベランタマブマホドチン参照標準をアッセイで使用して、システムの適合性及びサンプルの比較可能性データを取得し、方法が適切に実行されていることを保証することができる。参照標準により、検量線を作成することができ、サンプルの濃度を検量線から内挿する。例えば、参照標準は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含み、既知のＤＬ及び／又は平均ＤＡＲ含有量を含む組成物であり得る。

【0270】

例示的な参照標準には、既知の成分／量のＤＬ種及び／又は平均ＤＡＲを含むベランタマブマホドチンのサンプルが含まれ得る。

【0271】

医薬組成物
本明細書に記載の組成物は、医薬組成物の形態であり得る。「医薬組成物」は、本明細書に記載の組成物（すなわち、有効成分）と、１種又は２種以上の薬学的に許容可能な賦形剤とを含み得る。賦形剤は、製剤のその他の成分と適合性があり、医薬製剤が可能であり、そのレシピエントに有害ではなく、且つ／或いは有効成分の有効性を妨害しないという意味で許容可能である必要がある。

【0272】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な賦形剤」は、ありとあらゆる溶媒、希釈剤、担体、分散媒体、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤及び／又は吸収遅延剤を含み得る。薬学的に許容可能な賦形剤の例には、緩衝剤、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、並びにそれらの組み合わせのうちの１種又は２種以上が含まれる。多くの場合に、等張剤、例えば、ポリオール、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）又は塩化ナトリウム；防腐剤；共溶媒；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸及びメチオニン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；金属錯体（例えば、Ｚｎ^２＋－タンパク質錯体）；生分解性ポリマー；及び／又はナトリウム若しくはカリウム等の塩形成対イオンを組成物に含むことが好ましい。

【0273】

賦形剤又はその他の材料の正確な性質は、投与経路に依存し得、投与経路は、例えば、経口、直腸、鼻、局所（頬及び舌下を含む）、膣、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜内を含む）及び腫瘍内であり得る。好ましい賦形剤は、例えば、レシピエントの状態及び治療される疾患によって変化し得ることが理解される。

【0274】

賦形剤及びそれぞれの集合物の混合物は、一緒になって「医薬製剤」（又は「製剤」）を形成する。製剤は、液体形態又は凍結乾燥形態であり得る。液体製剤中の組成物は、容器に充填され、凍結され得る。特定の実施形態において、組成物を含む凍結製剤のアリコートは、凍結乾燥され得る。凍結乾燥物は、水又はその他の水溶液を添加することによって再構成されて、組成物を含む再構成された製剤を生成し得る。

【0275】

いくつかの実施形態において、抗ＢＭＣＡ抗原結合タンパク質は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ又は少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤中に存在する。いくつかの実施形態において、抗ＢＭＣＡ抗原結合タンパク質は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、又は約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、製剤中に存在する抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質の濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ又は約１００ｍｇ／ｍＬである。一実施形態において、抗ＢＭＣＡ抗原結合タンパク質は、約２０ｍｇ／ｍＬ又は約２５ｍｇ／ｍＬの濃度で液体製剤中に存在する。別の実施形態において、抗ＢＭＣＡ抗原結合タンパク質は、約５０ｍｇ／ｍＬ又は約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で凍結乾燥製剤中に存在する。さらに別の実施形態において、抗ＢＭＣＡ抗原結合タンパク質は、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で再構成された製剤中に存在する。

【0276】

特定の実施形態において、緩衝剤はクエン酸緩衝液である。クエン酸緩衝液は、例えば、共役酸／共役塩基系（クエン酸ナトリウム／クエン酸）の使用によって、又はクエン酸ナトリウム溶液のＨＣｌ滴定によって達成され得る。特定の実施形態において、クエン酸緩衝液の濃度は、約１０ｍＭ～約３０ｍＭである。好ましい実施形態では、クエン酸緩衝液の濃度は２５ｍＭである。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、約５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液である。

【0277】

緩衝剤を使用して、好ましいｐＨ範囲を維持するのを補助することができる。特定の実施形態において、製剤のｐＨは、約５．５～約７、又は約５．９～約６．５、好ましくはｐＨ６．２である。

【0278】

いくつかの実施形態において、製剤は、ポリオールを含む。いくつかの実施形態において、ポリオールは糖であり、好ましくは非還元糖である。いくつかの実施形態において、非還元糖はトレハロースである。いくつかの実施形態において、製剤は、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースを含む。さらに別の実施形態において、製剤は、約２００ｍＭのトレハロースを含む。

【0279】

一実施形態において、製剤はキレート剤を含む。別の実施形態において、キレート剤はＥＤＴＡである。特定の実施形態において、製剤は、０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭの濃度のＥＤＴＡを含む。さらに別の実施形態において、製剤は、０．０５ｍＭの濃度でＥＤＴＡを含む。

【0280】

いくつかの実施形態において、製剤は界面活性剤を含む。「界面活性剤」は、親水性基及び疎水性基の両方を含む化学組成のために、固－固、固－液、液－液及び液－気界面の表面で効果を発揮することができる表面活性剤である。界面活性剤は、タンパク質が吸着され、潜在的に凝集する可能性がある空気－水及び／又は水－固体界面における、希薄溶液中のタンパク質の濃度を低下させ得る。界面活性剤は、タンパク質製剤の疎水性界面に結合し得る。いくつかの親として（parentally）許容可能な非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート又はポリエーテル基のいずれかを含む。ポリソルベート２０及び８０は、本発明の製剤における適切な界面活性剤安定剤である。いくつかの実施形態において、製剤は、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０を含む。さらに別の実施形態において、製剤は、約０．０２％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０を含む。好ましい実施形態において、製剤は、約０．０２％のポリソルベート８０を含む。

【0281】

本発明の一態様は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、約１０ｍＭ～約２５ｍＭの緩衝剤と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのポリオールとを含む製剤であって、製剤のｐＨが５．５～６．５である製剤に注目する。

【0282】

一実施形態において、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0283】

一実施形態において、組成物は、製剤中に抗体を含み、抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗体と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロース、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡ、及び約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０を含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0284】

一実施形態において、組成物は、製剤中に抗体を含み、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗体と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0285】

一実施形態において、組成物は、製剤中に抗体を含み、抗体は、ベランタマブであり、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブと、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0286】

一実施形態において、組成物は、製剤中にＡＤＣを含み、抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒素はＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬのＡＤＣと、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0287】

一実施形態において、組成物は、製剤中にＡＤＣを含み、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒素はＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬのＡＤＣと、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0288】

一実施形態において、組成物は、製剤中にＡＤＣを含み、ＡＤＣは、ベランタマブマホドチンであり、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブマホドチンと、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0289】

一実施形態において、組成物は、製剤中にベランタマブマホドチンを含み、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ又は６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブマホドチンと、２５ｍＭのクエン酸緩衝液と、２００ｍＭのトレハロースと、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ二ナトリウム塩と、０．０２％のポリソルベート８０とを含み、製剤のｐＨは約５．９～約６．５である。

【0290】

「安定な」製剤は、その中のタンパク質が、製造、輸送、貯蔵及び投与の間に、その物理的及び／又は化学的安定性を本質的に保持する製剤である。安定性は、選択した温度において選択した時間で測定され得る。例えば、２℃～８℃の推奨温度で保存される製品の場合、製剤は、室温、約３０℃又は４０℃で少なくとも１か月間安定であり、且つ／或いは約２～８℃で少なくとも１年間、好ましくは少なくとも２年間安定である。例えば、貯蔵中の凝集の程度は、タンパク質の安定性の指標として使用される。したがって、「安定な」製剤は、例えば、タンパク質の約１０％未満、好ましくは約５％未満が製剤中に凝集体として存在する製剤であり得る。タンパク質の安定性を測定するための様々な分析技術が、当技術分野で利用可能であり、例えば、Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) 及び Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)において概説されている。

【0291】

本発明の特定の態様において、製剤は、組成物が凍結、解凍及び／又は混合に対して安定性を保持することを可能にする。

【0292】

さらに別の態様において、本発明は、本明細書に記載の製剤中の組成物を収容する容器を含む製造品、例えばキットに関する。一態様では、製剤を含む注射デバイスが提供される。注射デバイスは、ペンインジェクターデバイス又はオートインジェクターデバイスを含み得る。一実施形態において、製剤は、プレフィルドシリンジに収容される。

【0293】

治療方法及び使用のための組成物
本発明の目的は、Ｂ細胞関連障害若しくは疾患（例えば、抗体媒介性疾患、形質細胞媒介性疾患又は形質細胞悪性腫瘍（例えば、癌、例えば、多発性骨髄腫））、又は抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質によって治療され得るその他の疾患の治療に対する治療的なアプローチを提供することである。特に、本発明の目的は、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、例えば、抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質が、ＢＣＭＡ（例えばヒトＢＣＭＡ）に特異的に結合し、ＢＣＭＡと、そのリガンド（例えば、ＢＡＦＦ及び／又はＡＰＲＩＬ）との相互作用を調節（すなわち、阻害又は遮断）する組成物を、その相互作用の調節に応答性の疾患及び障害の治療において提供することである。

【0294】

本発明の別の態様では、Ｂ細胞関連障害又は疾患、例えば、抗体媒介性疾患、形質細胞媒介性疾患又は形質細胞悪性腫瘍（例えば、癌、例えば、多発性骨髄腫）に苦しむ対象（例えば、ヒト患者）を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質組成物を対象に投与する工程を含む方法が提供される。

【0295】

さらに別の実施形態において、本発明は、癌患者を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質組成物を患者に投与する工程を含む方法が提供される。

【0296】

本明細書で使用される場合、「癌」及び「腫瘍」という用語は交換可能に使用され、単数形又は複数形のいずれでも、宿主生物を病的な状態にする、形質転換、例えば、悪性の形質転換を受けた細胞を指す。原発性癌細胞は、確立された技術、特に組織学的検査によって非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義は、原発性癌細胞だけではなく、癌細胞を原細胞とする任意の細胞を含む。これには、転移した癌細胞、並びに癌細胞に由来するｉｎ ｖｉｔｒｏの培養物及び細胞株が含まれる。固形腫瘍として通常現れる種類の癌に言及する場合、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、例えば、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線、超音波、身体検査における触診等の手順によって、腫瘤に基づいて検出可能な腫瘍、及び／又は患者から入手可能なサンプルにおいて、１種若しくは２種以上の癌特異的抗原の発現のために検出可能である腫瘍である。腫瘍は、造血性（hematopoietic）（又は血液性（hematologic）又は血液学的（hematological）又は血液関連性（blood-related））癌、例えば、血液細胞又は免疫細胞に由来する癌であり得、これらは「液性腫瘍」と呼ばれる場合もある。血液性腫瘍に基づく臨床状態の具体例には、白血病、例えば、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病及び急性リンパ性白血病；形質細胞悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、ＭＧＵＳ及びワルデンストレームマクログロブリン血症；リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫；等が含まれる。

【0297】

癌は、異常な数の芽球又は望ましくない細胞増殖が存在する癌、又はリンパ性悪性腫瘍及び骨髄性悪性腫瘍の両方を含む血液学的癌と診断される癌のいずれかであり得る。骨髄性悪性腫瘍には、急性骨髄性（myeloid）（又は骨髄性（myelocytic）又は骨髄性（myelogenous）又は骨髄芽球性（myeloblastic））白血病（未分化又は分化）、急性前骨髄性（又は前骨髄性又は前骨髄性又は前骨髄芽球性）白血病、急性骨髄単球性（又は骨髄単芽球性）白血病、急性単球性（又は単芽球性）白血病、赤白血病及び巨核球性（又は巨核芽球性）白血病が含まれるが、これらに限定されない。これらの白血病は、まとめて急性骨髄性（又は骨髄性又は骨髄性）白血病（ＡＭＬ）と呼ばれることがある。骨髄性悪性腫瘍には、慢性骨髄性（又は骨髄性）白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、本態性血小板血症（又は血小板増加症）及び真性赤血球増加症（ＰＣＶ）を含むがこれらに限定されない骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）も含まれる。とりわけ、骨髄性悪性腫瘍には、不応性貧血（ＲＡ）、芽球増加を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ）及び移行期の芽球増加を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢＴ）と呼ばれることもある骨髄異形成（又は骨髄異形成症候群又はＭＤＳ）；並びに原発性骨髄線維症を伴う又は伴わない骨髄線維症（ＭＦＳ）も含む。

【0298】

造血性癌はまた、リンパ性悪性腫瘍を含み、リンパ節、脾臓、骨髄、末梢血及び／又はリンパ節外部位に影響を与え得る。リンパ性癌には、Ｂ細胞悪性腫瘍が含まれ、これにはＢ細胞性非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）が含まれるが、これらに限定されない。Ｂ－ＮＨＬは、インドレント（又は低悪性度）、中悪性度（又はアグレッシブ）又は高悪性度（高度アグレッシブ）の場合がある。インドレントＢ細胞リンパ腫には、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）；小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、例えば、結節性ＭＺＬ、節外性ＭＺＬ、脾臓ＭＺＬ及び有毛リンパ球を伴う脾臓ＭＺＬ；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；及び粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ又は節外性辺縁帯）リンパ腫が含まれる。中悪性度Ｂ－ＮＨＬには、白血病の関与を伴う又は伴わないマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）；びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；濾胞性大細胞（又は悪性度３又は悪性度３Ｂ）リンパ腫；及び原発性縦隔リンパ腫（ＰＭＬ）が含まれる。高悪性度Ｂ－ＮＨＬには、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、バーキット様リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫（ＳＮＣＣＬ）及びリンパ芽球性リンパ腫が含まれる。その他のＢ－ＮＨＬには、免疫芽球性リンパ腫（又は免疫細胞腫）、原発性滲出液リンパ腫、ＨＩＶ関連（又はＡＩＤＳ関連）リンパ腫及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）又は移植後のリンパ腫が含まれる。Ｂ細胞悪性腫瘍には、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ワルデンストロームマクログロブリン血症（ＷＭ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、大顆粒リンパ球性（ＬＧＬ）白血病、急性リンパ性（又はリンパ球性又はリンパ芽球性）白血病及びキャッスルマン病も含まれるが、これらに限定されない。とりわけ、ＮＨＬには、Ｔ細胞性非ホジキンリンパ腫（Ｔ－ＮＨＬ）も含まれる場合があり、これには、非特定型（ＮＯＳ）Ｔ細胞性非ホジキンリンパ腫、末梢Ｔ細胞性リンパ腫（ＰＴＣＬ）、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性リンパ節症（ＡＩＬＤ）、鼻のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞性／Ｔ細胞性リンパ腫、ガンマ／デルタリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、菌状息肉腫及びセザリー症候群が含まれるが、これらに限定されない。

【0299】

造血性癌には、ホジキンリンパ腫（又はホジキン病）、例えば、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型ホジキンリンパ腫、混合細胞型ホジキンリンパ腫、リンパ球優位型（ＬＰ）ホジキンリンパ腫、結節性ＬＰホジキンリンパ腫及びリンパ球減少型ホジキンリンパ腫も含まれる。造血性癌には、形質細胞疾患又は形質細胞癌、例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）（くすぶり型ＭＭを含む）、意義不明（又は不明又は不明）の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、形質細胞腫（骨、髄外）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、ワルデンストロームマクログロブリン血症、形質細胞白血病及び原発性アミロイドーシス（ＡＬ）も含まれる。造血性癌には、さらなる造血細胞、例えば、多形核白血球（又は好中球）、好塩基球、好酸球、樹状細胞、血小板、赤血球及びナチュラルキラー細胞のその他の癌も含まれ得る。本明細書において「造血細胞組織」と呼ばれる造血細胞を含む組織には、骨髄；末梢血；胸腺；末梢リンパ組織、例えば、脾臓、リンパ節、粘膜（例えば、扁桃腺、パイエル板及び虫垂）関連リンパ組織（例えば、消化管関連リンパ組織）及びその他の粘膜（例えば、気管支内層）関連リンパ組織が含まれる。

【0300】

一実施形態において、癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、食道癌、頸部癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ＥＣ扁平上皮細胞癌、非小細胞肺癌、中皮腫、膵臓癌及び前立腺癌からなる群から選択される。

【0301】

本明細書で使用される「治療する」という用語及びその派生語は、治療療法を含むことを意味する。特定の状態に関して、治療するとは、以下を意味する：（１）状態を改善又は状態の生物学的徴候のうちの１若しくは２以上を改善する、（２）（ａ）状態につながる生物学的カスケード若しくは状態の原因である生物学的カスケードのうちの１若しくは２以上の点又は（ｂ）状態の生物学的徴候のうちの１若しくは２以上に干渉する、（３）状態に関連又はその治療に関連する症状、影響又は副作用のうちの１又は２以上を緩和する、（４）状態の進行又は状態の生物学的徴候のうちの１若しくは２以上の進行を緩徐化する、且つ／或いは（５）寛解期間中の追加の治療なしで、状態の生物学的徴候の寛解状態であるとみなされる期間、状態の生物学的徴候の１又は２以上を検出不可能なレベルまで除去又は低減することによって、状態又は状態の生物学的徴候の１又は２以上を治癒させる。当業者は、特定の疾患又は状態の寛解であると考えられる期間を理解する。

【0302】

Ｂ細胞障害は、Ｂ細胞発生／免疫グロブリン産生の欠陥（例えば、免疫欠損）及び過剰／無制限増殖（例えば、リンパ腫、白血病）に分けることができる。本明細書で使用される場合、Ｂ細胞障害とは両方の種類の疾患を指し、本明細書に記載の組成物によりＢ細胞障害を治療するための方法が提供される。

【0303】

特定の態様において、疾患又は障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、孤立性形質細胞腫（骨、髄外）、アミロイドーシス（ＡＬ）、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、孤立性形質細胞腫（骨、髄外）又はワルデンストロームマクログロブリン血症である。

【0304】

予防的治療も企図されている。当業者ならば、「予防」が絶対的な用語でないことを認識する。医学では、「予防」は、状態又はその生物学的徴候の可能性又は重症度を実質的に低減させるため、或いは状態又はその生物学的徴候の発生を遅延させるための薬物の予防的投与を意味すると理解される。予防的治療は、例えば、対象が癌を発症するリスクが高いと考えられる場合に、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合又は対象が発癌物質に曝露されてきた場合に適切である。

【0305】

「対象」又は「患者」は、本明細書において交換可能に使用され、治療を必要とする任意の人、例えば、癌治療を必要とする人を含むように広く定義される。対象は哺乳動物を含み得る。一実施形態において、対象はヒト患者である。癌治療を必要とする対象には、様々な段階の患者、例えば、新たに診断された患者、再発した患者、難治性の患者、進行性疾患の患者、寛解の患者及びその他の患者が含まれ得る。癌治療を必要とする対象には、幹細胞移植を受けた患者、又は移植不適格とみなされる患者も含まれ得る。

【0306】

本明細書に記載の組成物による治療に選択されるために、対象を事前にスクリーニングすることができる。一実施形態において、対象からのサンプルは、本明細書に記載の組成物で治療する前に、ＢＣＭＡの発現について試験される。

【0307】

対象は、本発明の組成物で治療される前に、少なくとも１種の癌治療を以前に受けていてもよい。一実施形態において、対象は、本発明の組成物で治療される前に、少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種、少なくとも６種又は少なくとも７種の癌治療により以前に治療されている。

【0308】

別の実施形態において、対象は、新たに癌と診断され、本発明の組成物で治療される前に、以前の治療を受けたことはない。

【0309】

本発明の組成物は、任意の適切な経路によって投与され得る。いくつかの組成物の場合には、投与経路は、経口、直腸、鼻、局所（頬及び舌下を含む）、膣、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜内を含む）及び腫瘍内を含む。好ましい経路は、例えば、レシピエントの状態及び治療される癌によって変化し得ることが理解される。

【0310】

特定の実施形態において、本発明の組成物は、医薬組成物として投与される。

【0311】

本明細書で使用される「投与する」という用語は、治療目的を達成するために本明細書に記載される組成物の送達を指すことを意味する。組成物は、臨床的利益を達成するのに十分な期間、投与間隔で投与され得る。組成物は、特定の部位に療法を標的化するような方法で対象に投与され得る。

【0312】

いくつかの実施形態において、組成物は注射によって投与される。したがって、一態様では、本発明の組成物、医薬組成物又は製剤を含む注射デバイスが提供される。注射デバイスは、ペンインジェクターデバイス又はオートインジェクターデバイスを含み得る。

【0313】

本明細書で使用される組成物の「治療有効量」又は「治療有効用量」という用語は、Ｂ細胞媒介性障害又は障害の症状の予防又は治療又は緩和に有効な量を指す。治療有効量及び治療計画は、一般に経験的に決定され、患者の年齢、患者の体重、患者の健康状態、及び治療される疾患又は障害等の要因に依存し得る。そのような要因は担当医の管理範囲内である。

【0314】

抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の適切な治療有効用量は、当業者によって容易に決定される。本明細書に記載の組成物の適切な用量は、患者の体重に応じて計算され得、例えば、適切な用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、又は例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0315】

一実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の治療有効用量は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約４．６ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の治療有効用量は、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．１２ｍｇ／ｋｇ、０．２４ｍｇ／ｋｇ、０．４８ｍｇ／ｋｇ、０．９６ｍｇ／ｋｇ、１．９２ｍｇ／ｋｇ、３．４ｍｇ／ｋｇ又は４．６ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の治療有効用量は、１．９ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ又は３．４ｍｇ／ｋｇである。

【0316】

特定の実施形態において、組成物は、１種又は２種以上の追加の治療薬とともに対象に同時投与され得る。別の実施形態において、組成物は、１種又は２種以上の追加の癌治療薬とともに対象に同時投与され得る。追加の癌治療薬には、その他の免疫調節薬、治療用抗体（例えば、抗ＣＤ３８抗体、例えば、ダラツムマブ）、ＣＡＲ－Ｔ治療薬、ＢｉＴＥ、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、抗炎症化合物及び免疫調節性イミド薬（ＩＭｉＤ）（例えば、サリドマイド及びその類似体）が含まれ得るが、これらに限定されない。

【0317】

「同時投与される」とは、同一の医薬組成物又は別個の医薬組成物の組み合わせによって対象に投与される２種又は３種以上の異なる医薬組成物又は治療（例えば、放射線治療）の投与を意味する。したがって、同時投与は、２種又は３種以上の医薬剤を含む単一の医薬組成物の同時投与、又は同じ又は異なる時間での同一対象への２種又は３種以上の異なる組成物の投与を含む。

【0318】

本発明の一態様において、本発明は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む治療有効用量の組成物のいずれかを投与することにより、それを必要とする対象におけるＢ細胞疾患又は障害を治療する方法を提供する。

【0319】

一実施形態において、本発明は、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法を提供する。

【0320】

別の実施形態において、本発明は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、方法を提供する。

【0321】

別の実施形態において、本発明は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒性薬がＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、方法を提供する。

【0322】

別の実施形態において、本発明は、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６であるベランタマブマホドチンを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法を提供する。

【0323】

別の実施形態において、本発明は、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６であるベランタマブマホドチンを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における多発性骨髄腫を治療する方法を提供する。

【0324】

一実施形態において、本発明は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、方法を提供する。

【0325】

別の実施形態において、本発明は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み；細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり；ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、方法を提供する。

【0326】

別の実施形態において、本発明は、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み；細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり；ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、方法を提供する。

【0327】

さらに別の実施形態において、本発明は、ベランタマブマホドチンを含む組成物の治療有効用量を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、方法を提供する。

【0328】

さらに別の実施形態において、本発明は、ベランタマブマホドチンを含む組成物の治療有効用量を投与することを含む、それを必要とする対象における多発性骨髄腫を治療する方法であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、方法を提供する。

【0329】

一態様において、本発明は、抗体を含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、方法を提供する。

【0330】

一実施形態において、本発明は、抗体を含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における多発性骨髄腫を治療する方法であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、方法を提供する。

【0331】

一実施形態において、本発明は、ベランタマブを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における多発性骨髄腫を治療する方法であって、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、方法を提供する。

【0332】

一態様において、本発明は、抗体を含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、方法を提供する。

【0333】

一実施形態において、本発明は、抗体を含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における多発性骨髄腫を治療する方法であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、方法を提供する。

【0334】

一実施形態において、本発明は、ベランタマブを含む治療有効用量の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象における多発性骨髄腫を治療する方法であって、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、方法を提供する。

【0335】

本発明の一態様において、本発明は、Ｂ細胞疾患又は障害の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物を提供する。

【0336】

一実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物であって、平均ＤＡＲが、約３．４～約４．６である、組成物を提供する。

【0337】

別の実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、組成物を提供する。

【0338】

別の実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物であって、抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒性薬がＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、組成物を提供する。

【0339】

別の実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するためのベランタマブマホドチンを含む組成物であって、平均ＤＡＲが３．４～約４．６である、組成物を提供する。

【0340】

さらに別の実施形態において、本発明は、多発性骨髄腫の治療に使用するためのベランタマブマホドチンを含む組成物であって、平均ＤＡＲが３．４～約４．６である、組成物を提供する。

【0341】

一実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、組成物を提供する。

【0342】

別の実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み；細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり；ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、組成物を提供する。

【0343】

別の実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物であって、抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み；細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり；ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、組成物を提供する。

【0344】

別の実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するためのベランタマブマホドチンを含む組成物であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２６％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％である、組成物を提供する。

【0345】

さらに別の実施形態において、本発明は、多発性骨髄腫の治療に使用するためのベランタマブマホドチンを含む組成物であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、組成物を提供する。

【0346】

一態様において、本発明は、癌の治療に使用するための抗体を含む組成物であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、組成物を提供する。

【0347】

一態様において、本発明は、多発性骨髄腫の治療に使用するための抗体を含む組成物であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、組成物を提供する。

【0348】

さらに別の実施形態において、本発明は、多発性骨髄腫の治療に使用するためのベランタマブマホドチンを含む組成物であって、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、組成物を提供する。

【0349】

一態様において、本発明は、癌の治療に使用するための抗体を含む組成物であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、組成物を提供する。

【0350】

一態様において、本発明は、多発性骨髄腫の治療に使用するための抗体を含む組成物であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、組成物を提供する。

【0351】

さらに別の実施形態において、本発明は、多発性骨髄腫の治療に使用するためのベランタマブマホドチンを含む組成物であって、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、組成物を提供する。

【0352】

本発明の一態様において、Ｂ細胞疾患又は障害の治療に使用するための医薬の製造における組成物の使用が提供される。

【0353】

一実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である使用が提供される。

【0354】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み、細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、使用が提供される。

【0355】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み、細胞毒性薬がＭＭＡＥ又はＭＭＡＦであり、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、使用が提供される。

【0356】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、ベランタマブマホドチンを含む組成物の使用であって、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、使用が提供される。

【0357】

別の実施形態において、多発性骨髄腫の治療に使用するための医薬の製造における、ベランタマブマホドチンを含む組成物の使用であって、平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、使用が提供される。

【0358】

一実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、使用が提供される。

【0359】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含み；細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり；ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、使用が提供される。

【0360】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含み；細胞毒性薬がＭＭＡＦ又はＭＭＡＥであり；ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、使用が提供される。

【0361】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ ＡＤＣを含む組成物の使用であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、使用が提供される。

【0362】

別の実施形態において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、ベランタマブマホドチンを含む組成物の使用であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、使用が提供される。

【0363】

さらに別の実施形態において、多発性骨髄腫の治療に使用するための医薬の製造における、ベランタマブマホドチンを含む組成物の使用であって、ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下であり、ＤＬ２の割合が、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いはＤＬ８の割合が、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、使用が提供される。

【0364】

一態様において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の使用であって、組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、使用が提供される。

【0365】

一実施形態において、多発性骨髄腫に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の使用であって、組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、使用が提供される。

【0366】

さらに別の実施形態において、多発性骨髄腫の治療に使用するための医薬の製造における、ベランタマブを含む組成物の使用であって、組成物が、２５％以下の重鎖ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、使用が提供される。

【0367】

一態様において、癌の治療に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の使用であって、組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、使用が提供される。

【0368】

一実施形態において、多発性骨髄腫に使用するための医薬の製造における、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を含む組成物の使用であって、組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む抗体を含み、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、使用が提供される。

【0369】

さらに別の実施形態において、多発性骨髄腫の治療に使用するための医薬の製造における、ベランタマブを含む組成物の使用であって、組成物が、４０％以下の重鎖Ｍ３４（ＣＤＲＨ１）における酸化を含む、使用が提供される。

【0370】

本明細書に開示されるすべての特許及び文献の参照は、参照により明示的且つ完全に本明細書に組み込まれる。

【0371】

本明細書に記載の発明は、以下を含む。
［１］抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含む組成物であって、
前記異性化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、２５％以下の前記異性化バリアントを含む、前記組成物。
［２］抗ＢＣＭＡ抗体の酸化バリアントを含む組成物であって、
前記酸化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、４０％以下の前記酸化バリアントを含む、前記組成物。
［３］抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含み、
前記組成物が、０．１～２５％の、ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、前記組成物。
［４］抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含み、
前記組成物が、０．１～４０％の、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を含む、前記組成物。
［５］抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一であり、
前記組成物が、０．１～２５％の、ＣＤＲＨ３のＤ１０３における異性化を含む、前記組成物。
［６］抗ＢＣＭＡ抗体を含む組成物であって、
前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一であり、
前記組成物が、０．１～４０％の、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を含む、前記組成物。
［７］前記組成物が、６５％以下の、重鎖Ｍ２５６における酸化、及び／又は、６０％以下の、重鎖Ｍ４３２における酸化を含む、［１］～［６］のいずれかに記載の組成物。
［８］前記組成物が、抗体バリアントを含み、
前記抗体バリアントが、重鎖のＮ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化、ＣＤＲＨ３におけるＤ１０３からＮ１０３への変化、Ｃ末端のリジンの切断、並びに、Ｎ末端のグルタミンからピログルタミン酸への変換からなる群から選択される１以上を含む、［１］～［７］のいずれかに記載の組成物。
［９］前記組成物が、最大１００％の、Ｎ３８８及び／又はＮ３９３における脱アミド化、最大１００％の、ＣＤＲＨ３におけるＮ１０３、最大１００％の、Ｃ末端のリジンの切断、並びに、最大１００％の、Ｎ末端のグルタミンからピログルタミン酸への変換からなる群から選択される１以上を含む、［１］～［８］のいずれかに記載の組成物。
［１０］前記組成物が、任意のパーセンテージのグリコフォームＧ０、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ０－ＧｌｃＮａｃ又はＧ０－２ＧｌｃＮａｃを含む、［１］～［９］のいずれかに記載の組成物。
［１１］前記抗ＢＣＭＡ抗体がベランタマブである、［１］～［１０］のいずれかに記載の組成物。
［１２］前記抗ＢＣＭＡ抗体が、細胞毒性薬にコンジュゲートされて、抗体－薬物複合体を形成する、［１］～［１１］のいずれかに記載の組成物。
［１３］前記抗ＢＣＭＡ抗体がベランタマブマホドチンである、［１］～［１２］のいずれかに記載の組成物。
［１４］ＤＬ２の割合が、少なくとも約３０％、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、少なくとも約３０％、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、少なくとも約５％、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、少なくとも約１０％、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いは、ＤＬ８の割合が、少なくとも約１％、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、［１２］又は［１３］に記載の組成物。
［１５］平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、［１２］～［１４］のいずれかに記載の組成物。
［１６］ＤＬ０の割合が、約１０％以下又は約５％以下である、［１２］～［１５］のいずれかに記載の組成物。
［１７］［１］～［１６］のいずれかに記載の組成物と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
［１８］［１７］に記載の医薬組成物を含む製剤であって、
前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、
前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、前記製剤。
［１９］前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ又は約６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブマホドチンと、２５ｍＭのクエン酸緩衝液と、２００ｍＭのトレハロースと、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ二ナトリウムと、０．０２％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、［１８］に記載の製剤。
［２０］それを必要とする対象に、治療有効量の［１］～［１６］のいずれかに記載の組成物を投与することを含む、癌を治療する方法。
［２１］癌の治療に使用するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の組成物。
［２２］癌の治療に使用するための医薬の製造における、［１］～［１６］のいずれかに記載の組成物の使用。
［２３］抗ＢＣＭＡ抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を含む組成物であって、ＤＬ２の割合が、少なくとも約３０％、約１５％～約２７％又は約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が、少なくとも約３０％、約３５％～約３８％又は約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が、少なくとも約５％、約７％～約９％又は約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が、少なくとも約１０％、約１４％～約２０％又は約１０％～約２０％であり、且つ／或いは、ＤＬ８の割合が、少なくとも約１％、約６．０％～約１２．０％又は約４％～約１５％である、前記組成物。
［２４］前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含む、［２３］に記載の組成物。
［２５］ＤＬ２の割合が約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が約１０％～約２０％であり、且つ、ＤＬ８の割合が約４％～約１５％である、［２３］又は［２４］に記載の組成物。
［２６］ＤＬ２の割合が約１５％～約２７％であり、ＤＬ４ａの割合が約３５％～約３８％であり、ＤＬ４ｂの割合が約７％～約９％であり、ＤＬ６の割合が約１４％～約２０％であり、ＤＬ８の割合が約６．０％～約１２．０％である、［２３］又は［２４］に記載の組成物。
［２７］平均薬物抗体比（ＤＡＲ）が約２．１～約５．７である、［２３］～［２６］のいずれかに記載の組成物。
［２８］平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である、［２３］～［２６］のいずれかに記載の組成物。
［２９］平均ＤＡＲが約３．８～約４．５である、［２３］～［２６］のいずれかに記載の組成物。
［３０］抗ＢＣＭＡ抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）を含む組成物であって、ＤＬ０の割合が約１０％以下又は約５％以下である、前記組成物。
［３１］前記抗ＢＣＭＡ抗体が、
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、
配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、及び
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３
を含む、［３０］に記載の組成物。
［３２］ＤＬ０の割合が約５％以下である、［３０］又は［３１］に記載の組成物。
［３３］ＤＬ２の割合が約１５％～約３２％であり、ＤＬ４ａの割合が約３０％～約４０％であり、ＤＬ４ｂの割合が約５％～約１０％であり、ＤＬ６の割合が約１０％～約２０％であり、且つ、ＤＬ８の割合が約４％～約１５％である、［３０］～［３２］のいずれかに記載の組成物。
［３４］ＤＬ２の割合が約１５％～約２７％であり、ＤＬ４ａの割合が約３５％～約３８％であり、ＤＬ４ｂの割合が約７％～約９％であり、ＤＬ６の割合が約１４％～約２０％であり、ＤＬ８の割合が約６．０％～約１２．０％である、［３０］～［３２］のいずれかに記載の組成物。
［３５］平均薬物抗体比（ＤＡＲ）が約２．１～約５．７である、［３０］～［３４］のいずれかに記載の組成物。
［３６］平均ＤＡＲが約３．４～約４．６である［３０］～［３４］のいずれかに記載の組成物。
［３７］平均ＤＡＲが約３．８～約４．５である、［３０］～［３４］のいずれかに記載の組成物。
［３８］前記抗ＢＣＭＡ抗体が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含む、［２３］～［３７］のいずれかに記載の組成物。
［３９］前記抗ＢＣＭＡ抗体がベランタマブである、［２３］～［３８］のいずれかに記載の組成物。
［４０］細胞毒性薬がＭＭＡＥ又はＭＭＡＦである、［２３］～［３７］のいずれかに記載の組成物。
［４１］前記抗ＢＣＭＡ ＡＤＣがベランタマブマホドチンである、［２１］～［４０］のいずれかに記載の組成物。
［４２］疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して個々のＤＬ種を分離し、各ＤＬピークに関する曲線下面積を計算し、各ＤＬピークを、合計されたすべてのＤＬ種に関する総曲線下面積で除算することによって、ＤＬの割合が決定される、［２３］～［４１］のいずれかに記載の組成物。
［４３］平均ＤＡＲが、以下の式：

【数2】

を使用して、各ＤＬ種の曲線下面積から計算される、［４２］に記載の組成物。
［４４］［２３］～［４３］のいずれかに記載の組成物と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
［４５］［４４］に記載の医薬組成物を含む製剤であって、
前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸緩衝液と、約１２０ｍＭ～約２４０ｍＭのトレハロースと、約０．０１ｍＭ～約０．１ｍＭのＥＤＴＡと、約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、
前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、前記製剤。
［４６］前記製剤が、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ又は約６０ｍｇ／ｍＬのベランタマブマホドチンと、２５ｍＭのクエン酸緩衝液と、２００ｍＭのトレハロースと、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ二ナトリウムと、０．０２％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０とを含み、前記製剤のｐＨが、約５．９～約６．５である、［４５］に記載の製剤。
［４７］それを必要とする対象に、治療有効量の［２３］～［４３］のいずれかに記載の組成物を投与することを含む、癌を治療する方法。
［４８］癌の治療に使用するための、［２３］～［４３］のいずれかに記載の組成物。
［４９］癌の治療に使用するための医薬の製造における、［２３］～［４３］のいずれかに記載の組成物の使用。
［５０］抗体の酸性バリアントを含む組成物であって、
前記酸性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１と、
配列番号２のＣＤＲＨ２と、
配列番号３のＣＤＲＨ３と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１～７０％の前記酸性バリアントを含む、前記組成物。
［５１］抗体の酸性バリアントを含む組成物であって、
前記酸性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１と、
配列番号２のＣＤＲＨ２と、
配列番号３のＣＤＲＨ３と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、７０％以下の前記酸性バリアントを含む、前記組成物。
［５２］抗体の塩基性バリアントを含む組成物であって、
前記塩基性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１～３０％の前記塩基性バリアントを含む、前記組成物。
［５３］抗体の塩基性バリアントを含む組成物であって、
前記塩基性バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、３０％以下の前記塩基性バリアントを含む、前記組成物。
［５４］抗体の主要なアイソフォームを含む組成物であって、
前記主要なアイソフォームが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１～９０％の前記主要なアイソフォームを含む、前記組成物。
［５５］抗体の主要なアイソフォームを含む組成物であって、
前記主要なアイソフォームが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、１％以上の前記主要なアイソフォームを含む、前記組成物。
［５６］抗体の荷電バリアントを含む組成物であって、
前記荷電バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、７０％以下の酸性バリアント及び／又は３０％以下の塩基性バリアント及び／又は１％以上の主要なアイソフォームを含む、前記組成物。

【実施例0372】

実施例１：ＡＤＣ組成物中のＤＬ種の割合及び平均ＤＡＲの決定
実施例２～９に対して、ＤＬの割合及び平均ＤＡＲは以下のように計算された：特定のＤＬ種の割合（例えば、ＤＬ０の割合、ＤＬ２の割合、ＤＬ４ａの割合、ＤＬ４ｂの割合、ＤＬ６の割合及びＤＬ８の割合）は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して個々のＤＬ種を分離し（図２に例示）、各ＤＬピークに関する曲線下面積を計算し、各ＤＬピークを、合計されたすべてのＤＬ種に関する総曲線下面積で除算することによって決定された。

【0373】

各サンプルの平均ＤＡＲは、以下の式を使用して、各ＤＬ種の曲線下面積から計算された。

【0374】

【数3】

【0375】

実施例２～８で使用され、その他の実験にも使用され得る参照標準には、表１のサンプルが含まれる。

【0376】

【表1】

【0377】

実施例２：細胞成長阻害に対する平均ＤＡＲの影響
ベランタマブマホドチンとの４８時間インキュベーション後の、ヒト多発性骨髄腫細胞株であるＮＣＩ－Ｈ９２９細胞の細胞生存率を測定することによって、ベランタマブマホドチンの細胞成長阻害を決定した。ＰｒｏｍｅｇａのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏテクノロジーを使用して、細胞生存率を測定した。ベランタマブマホドチンの濃度の増加は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ発光シグナルの減少に相対的に対応した。４パラメータの非線形ロジスティック回帰モデルを使用するＳｏｆｔＭａｘＰｒｏによって、用量反応（ＥＣ５０）を生成した。サンプルのＥＣ５０に対する参照標準＃１３２３７１４２４のＥＣ５０の比率を計算して、相対的効力を決定した。結果を表２にまとめる。

【0378】

【表2】

【0379】

実施例３：ＡＤＣＣ活性に対する平均ＤＡＲの影響
ベランタマブマホドチン、多発性骨髄腫細胞及びＮＫ細胞（エフェクター細胞）をインキュベートした。理論に拘束されることはないが、ベランタマブマホドチンは多発性骨髄腫細胞の表面に発現するＢＣＭＡに結合し、抗体のＦｃ領域はエフェクター細胞の受容体ＦｃγＲＩＩＩａを介してエフェクター細胞のＦｃγＲＩＩＩａに結合した。エフェクター細胞の表面へのこれらの受容体の会合は、サイトカイン（ＩＦＮｇ）の合成及び分泌、並びに標的細胞の細胞質に進入する顆粒（パーフォリン及びグランザイム）の放出をもたらした。グランザイムは、アポトーシスによるこれらの細胞の死を引き起こす、標的細胞内のシグナル伝達イベントを惹起した。ＮＫ細胞の供給源は、ヒトの全血から分離される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であった。次いで、１ｍＬのＮＣＩ－Ｈ９２９細胞（ヒト多発性骨髄腫細胞株）に、蛍光増強リガンドのアセトキシメチルエステルであり、細胞膜を透過するＢＡＴＤＡ（ビス－（アセトキシメチル）２，２’：６’，２’’－ターピリジン－６，６’’－ジカルボキシレート）（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ カタログ番号Ｃ１３６－１００）を１０μＬ投入した。ＢＡＴＤＡのエステル結合は加水分解されて親水性リガンド（ＴＤＡ）を形成するが、これはもはや細胞膜を通過することができない。標識された細胞を様々な量のベランタマブマホドチン及びエフェクター細胞（ＰＢＭＣ）に添加した。細胞は溶解し、ＴＤＡを放出する。細胞溶解後、このリガンドを２００μＬのＤＥＬＦＩＡ Ｅｕｒｏｐｉｕｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ カタログ番号Ｃ１３５－１００）と混合して、蛍光性が高く安定したキレート（ＥｕＴＤＡ）を形成させた。蛍光プレートリーダーで測定した場合には、測定した蛍光は、溶解した細胞量と直接的に相関する。参照標準＃１３２３７１４２４のＥＣ５０値に対するサンプルのＥＣ５０値の比率として、ベランタマブマホドチンのＡＤＣＣ活性を報告した。結果を表３にまとめる。

【0380】

【表3】

【0381】

実施例４：ＢＣＭＡ結合及びＦｃγＲＩＩＩａ結合に対する平均ＤＡＲの影響
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。ベランタマブマホドチンを、ＰＢＳＴで１０μｇ／ｍＬに希釈し、注入し、ＣＭ５センサーチップに固定化されたプロテインＡによって捕捉した。次いで、ＢＣＭＡを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させた。次いで、ＦｃγＲＩＩＩａを注入して、補足したベランタマブマホドチンに結合させた。ＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａに結合するベランタマブマホドチンの機能的濃度を、参照標準曲線（参照標準＃１３２３７１４２４）から計算し、それぞれＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａ結合濃度として報告した。サンプルの総ベランタマブマホドチン濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって事前に決定した。ＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａの結合濃度を２８０ｎｍの濃度での吸光度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算した。結果を表４にまとめる。

【0382】

【表4】

【0383】

実施例５：腫瘍体積に対する平均ＤＡＲの影響
多発性骨髄腫細胞株を重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスの側腹部に皮下移植した。１５日目頃から、ノギスシステムを使用してすべての腫瘍を週に３回測定し、各マウス腫瘍の長径及び短径を記録して腫瘍体積を計算した（体積＝長径×（短径^２）×０．５）。平均腫瘍体積が約２００ｍｍ^３に達すると、マウスを複数の群に無作為化し、平均ＤＡＲサンプルの１種を含むベランタマブマホドチンを週２回で２週間投与した。すべての腫瘍をこの方法で測定し、腫瘍の平均腫瘍測定値が２．０ｍｍ^３に達するか、又は６０日目に達するかのいずれか早い方で、個々のマウスを安楽死させた。試験デザインの概要を表５にまとめ、結果を図３に示す。

【0384】

【表5】

【0385】

実施例６：ＢＣＭＡ結合、ＦｃγＲＩＩＩａ結合及びＦｃＲｎ結合に対するＤＬ種の影響 ＨＩＣクロマトグラムの別個のピークを収集することによって、特定のＤＬ種を含むベランタマブマホドチンのサンプルを準備した。実施例４に記載されるように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンのＢＣＭＡ又はＦｃγＲＩＩＩａとの結合を測定した。

【0386】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブマホドチンへの結合を測定した。サンプルを希釈し、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）センサーチップに固定化されたＦｃＲｎによって、ベランタマブマホドチンを捕捉した。検量線上の結合反応の内挿によって、サンプルのＦｃＲｎ結合濃度を決定した。ＦｃＲｎ結合濃度を総タンパク質濃度で除算することによって、特異的結合活性（％）を計算した。結果を表６にまとめる。

【0387】

参照標準＃１６２３９７９４０を使用した。

【0388】

【表6】

【0389】

実施例７：細胞成長阻害に対するＤＬ種の影響
ベランタマブマホドチンの特定のＤＬ種サンプルを、実施例７のように準備した。細胞成長阻害を実施例２のように決定した。参照標準＃１６２３９７９４０を使用した。結果を表７にまとめる。

【0390】

【表7】

【0391】

実施例８：ＡＤＣＣ活性に対するＤＬ種の影響
ベランタマブマホドチンを多発性骨髄腫細胞表面に発現したＢＣＭＡに結合させた。１）ヒトＦｃγＲＩＩＩａ受容体Ｖ１５８高親和性バリアント及び２）ＮＦＡＴ活性化配列の下流のプロモーターに融合しているルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定的に発現するように設計されているＪｕｒｋａｔ Ｔエフェクター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７１０２、ＢｉｏＣａｔ＃１４００１１）上のＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）に、ベランタマブマホドチンのＦｃ領域を結合させた。抗体が、Ｈ９２９及びエフェクター細胞に同時に結合すると、ＮＦＡＴ経路の活性化は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子からの遺伝子転写及びエフェクター細胞内でのホタルルシフェラーゼの発現をもたらす。発光基質（Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム、Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７９４０）を添加し、細胞溶解が起こった後、プレートリーダーを使用して相対発光単位（ＲＬＵ）として、ＮＦＡＴ活性化によって生成されたルシフェラーゼを測定する。このアッセイでは、ベランタマブマホドチンを用量依存的に添加した。したがって、非線形ロジスティック回帰モデルを使用して、用量反応（半数効果濃度又はＥＣ５０）を生成した。サンプルのＥＣ５０に対する参照標準のＥＣ５０の比率を計算して、相対的効力を決定した。参照標準＃１６２３９７９４０を使用した。結果を表８にまとめる。

【0392】

【表8】

【0393】

実施例９：ベランタマブマホドチンのいくつかのロットの平均ＤＡＲ及びＤＬ種の割合
ベランタマブマホドチンのいくつか（１９）のバッチを製造した。実施例１で記載したように、各ロットの平均ＤＡＲ及びＤＬ種の割合を計算した。結果を表９～１２にまとめる。

【0394】

【表9】

【0395】

【表10】

【0396】

【表11】

【0397】

【表12】

【0398】

実施例１０：ベランタマブマホドチン強制劣化の試験デザイン
実施例１１～１８の試験デザインの概要を表１３に示す。

【0399】

【表13】

【0400】

実施例１１：酸化条件
酸化ストレスサンプルを作製するために、ベランタマブマホドチンサンプルを１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、過酸化水素のベランタマブマホドチンに対するモル比が５００：１になるように過酸化水素を添加した。サンプルをメチオニンでクエンチし、３ｋＤａ分子量カットオフフィルター（ＭＷＣＯ）を使用してバッファーを交換した。

【0401】

トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、脱アミド化及び酸化を決定した。６Ｍ グアニジンＨＣｌ溶液でサンプルを変性させ、４．２μｇ／μＬの濃度にした。ジスルフィド結合を５０ｍＭ ＤＴＴにより室温で２０分間還元した。ヨード酢酸を１００ｍＭで添加し、遊離システイン残基と室温で３０分間反応させ、光から保護した。ＢｉｏＲａｄスピンカラム（部品番号７３２６２２１）を使用して、サンプルをバッファー交換した。次いで、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎトリプシン（部品番号ＴＲＴＰＣＫ）により、０．５％トリプシンで３７℃１５分間、消化した。得られたペプチドをＷａｔｅｒｓ逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）カラム（部品番号１８６００３６８７）にロードし、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣを使用して、水及びアセトニトリルのグラジエント溶液（０．１％トリフルオロ酢酸溶液）で溶出した。ＵＶ検出器、及び質量分析計、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ ＯｒｂｉｔｒａｐＸＬにより、ペプチドを検出した。非修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、脱アミド化又は酸化のいずれかのレベルを計算した。

【0402】

実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。実施例６に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブマホドチンへの結合を測定した。

【0403】

参照標準＃１８２４０７６６０Ａを使用した。結果のまとめを表１４及び表１５に示す。

【0404】

【表14】

【0405】

【表15】

【0406】

ＨＣ Ｍｅｔ３４における酸化のデータから外挿すると、最大３７％の酸化は、少なくとも７０％の抗原特異的結合活性をもたらす。これは、時間０（０．２～０．４％）及び２４時間（４５．１～４５．５％）のＭ３４酸化サンプルの線形勾配を使用して計算され、これらのサンプルはそれぞれ８８～９９％及び６２～８８％の抗原特異的結合活性を有する。

【0407】

ＨＣ Ｍｅｔ２５６における酸化のデータから外挿すると、最大８９％の酸化は、少なくとも７０％のＦｃγＲＩＩＩａ特異的結合活性をもたらす。これは、時間０（２．９～３．５％）及び２４時間（９８．３～９８．７％）のＭ２５６酸化サンプルの線形勾配を使用して計算され、これらのサンプルはそれぞれ８９～９９％及び６６～７０％のＦｃγＲＩＩＩａ特異的結合活性を有する。ＨＣ Ｍｅｔ２５６における酸化のデータから外挿すると、最大６４％の酸化は、少なくとも７０％のＦｃＲｎ特異的結合活性をもたらす。これは、時間０（２．９～３．５％）及び２４時間（９８．３～９８．７％）のＭ２５６酸化サンプルの線形勾配を使用して計算され、これらのサンプルはそれぞれ９３～９７％及び５２～５７％のＦｃＲｎ特異的結合活性を有する。

【0408】

ＨＣ Ｍｅｔ４３２における酸化のデータから外挿すると、最大８６％の酸化は、少なくとも７０％のＦｃγＲＩＩＩａ特異的結合活性をもたらす。これは、時間０（０．４～０．６％）及び２４時間（９４．８～９５．２％）のＭ４３２酸化サンプルの線形勾配を使用して計算され、これらのサンプルはそれぞれ８８～９９％及び６６～７０％のＦｃγＲＩＩＩａ特異的結合活性を有する。ＨＣ Ｍｅｔ４３２における酸化のデータから外挿すると、最大６１％の酸化は、少なくとも７０％のＦｃＲｎ特異的結合活性をもたらす。これは、時間０（０．４～０．６％）及び２４時間（９４．８～９５．２％）のＭ４３２酸化サンプルの線形勾配を使用して計算され、これらのサンプルはそれぞれ９３～９７％及び５２～５７％のＦｃＲｎ特異的結合活性を有する。

【0409】

実施例１２：化学作用：高ｐＨ（塩基処理）
高ｐＨサンプルを作製するために、ベランタマブマホドチンサンプルを４ｍＭ Ｔｒｉｓバッファーで希釈して、ｐＨを９に調整した。サンプルをさらに１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、２５℃／５０％ＲＨで２１日間までインキュベートした。

【0410】

実施例１１に記載のように、トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、脱アミド化、異性化及び酸化を決定した。非修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、脱アミド化、異性化又は酸化のいずれかのレベルを計算した。

【0411】

実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。実施例６のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブマホドチンへの結合を測定した。

【0412】

参照標準＃１８２４０７６６０Ａを使用した。結果を表１６及び表１７にまとめる。

【0413】

【表16】

【0414】

【表17】

【0415】

ＨＣ Ａｓｎ３８８及びＨＣ Ａｓｎ３９３における脱アミド化は、抗原特異的結合、ＦｃγＲＩＩＩａ特異的結合及びＦｃＲｎ特異的結合に影響を与えることなく、それぞれ報告したレベルの１０．３％及び１４．５％よりも高くなると予想される。

【0416】

実施例１３：化学作用：低ｐＨ（酸処理）
低ｐＨサンプルを作製するために、ベランタマブマホドチンサンプルをクエン酸緩衝液で希釈して、ｐＨを５に調整した。サンプルをさらに１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、２５℃／５０％ＲＨで２１日間までインキュベートした。

【0417】

実施例１１に記載のように、トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、異性化、脱アミド化及び酸化を決定した。非修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、異性化、脱アミド化又は酸化のいずれかのレベルを計算した。

【0418】

実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。実施例６のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブマホドチンへの結合を測定した。

【0419】

参照標準＃１８２４０７６６０Ａを使用した。結果を表１８及び表１９にまとめる。

【0420】

【表18】

【0421】

【表19】

【0422】

実施例１４：熱：高温
熱ストレスサンプルを作製するために、ベランタマブマホドチンサンプルを製剤バッファーで１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、４０℃／７５％ＲＨで２８日間までインキュベートした。

【0423】

実施例１１に記載のように、トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、異性化、脱アミド化及び酸化を決定した。非修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、異性化、脱アミド化又は酸化のいずれかのレベルを計算した。

【0424】

実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。実施例６のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブマホドチンへの結合を測定した。

【0425】

参照標準＃１８２４０７６６０Ａを使用した。結果を表２０及び表２１にまとめる。

【0426】

【表20】

【0427】

【表21】

【0428】

ＨＣ Ａｓｐ１３０における異性化のデータから外挿すると、最大２３％の異性化は、少なくとも７０％の抗原特異的結合活性をもたらす。これは、時間０（４．１～４．４％）及び２８日（２８．７～２９．３％）のＤ１０３異性化サンプルの線形勾配を使用して計算され、これらのサンプルはそれぞれ８８～９９％及び５５～６２％の抗原特異的結合活性を有する。

【0429】

実施例１５：露光
露光されたサンプルを作製するために、ベランタマブマホドチンサンプルを１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、ガラスバイアルに充填し、２５℃のＣａｒｏｎ Ｐｈｏｔｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｃｈａｍｂｅｒに移して、表１０に示す様々な程度の露光を行った。

【0430】

実施例１１に記載のように、トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、酸化、脱アミド化及び異性化を決定した。非修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、酸化、脱アミド化又は異性化のいずれかのレベルを計算した。

【0431】

実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブマホドチンによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。実施例６のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブマホドチンへの結合を測定した。

【0432】

参照標準＃１８２４０７６６０Ａを使用した。結果を表２２及び表２３にまとめる。

【0433】

【表22】

【0434】

【表23】

【0435】

実施例１６：Ｃ末端切断及びＮ末端ピログルタミン酸
実施例１１に記載のように、トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して、Ｎ末端ピログルタミン酸及びＣ末端切断のレベルについて、いくつかのロットのベランタマブを分析した。非修飾ペプチド及び修飾ペプチドの抽出イオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を、修飾ペプチド及び非修飾ペプチドの両方の総曲線下面積で除算することにより、Ｎ末端ピログルタミン酸及びＣ末端切断のいずれかのレベルを計算した。

【0436】

実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ベランタマブによるＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａの結合を測定した。実施例６のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のベランタマブへの結合を測定した。

【0437】

使用した参照標準は、＃１２２３６８０５９及び＃１７２４０５９００であった。結果を表２４～２５にまとめる。

【0438】

【表24】

【0439】

【表25】

【0440】

実施例１７：グリコシル化
グリコシル化パターンについて、いくつかのロットのベランタマブを分析した。親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）分離及び蛍光検出を備えた超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）を使用して、そのプロファイルを決定した。サンプルを水で１０μｇ／μＬの濃度に希釈した。Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ製のＰＮＧａｓｅＦキット（カタログ番号Ｐ０７０５Ｌ）を使用するＰＮＧａｓｅＦによる酵素消化によって、グリカンをベランタマブから遊離させた。ＰＮＧａｓｅＦによって遊離させたグリカンを、アントラニルアミド（Ｓｉｇｍａ－Ａｉｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ａ８９８０４）で標識した。次いで、ＨＩＬＩＣカラムステップ（グリカンをロードし、水で洗浄し、アセトニトリルで溶出することができるステップ）を使用して、標識されたグリカンを精製して過剰な標識溶液を除去した。次いで、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣで、Ｗａｔｅｒｓ Ｇｌｙｃａｎ ＢＥＨ Ａｍｉｄｅカラム（カタログ番号１８６００４７４２）を使用して、ギ酸アンモニウム／ギ酸及びアセトニトリルグラジエントによって、標識されたグリカンを分離した。３６５ｎｍでの励起及び４３８ｎｍでの発光を伴う蛍光検出を使用して、グリカンを検出した。あるグリカンに関する曲線下面積を、検出されたすべてのグリカンに関する総曲線下面積で除算することによって、グリカンの定量を実施した。

【0441】

使用した参照標準は、＃１２２３６８０５９であった。結果を表２６～２７にまとめる。

【0442】

【表26】

【0443】

【表27】

【0444】

実施例１８：糖鎖工学
ＡＤＣＣ活性及び結合に対するベランタマブの糖富化サンプル（glyco-enriched sample）の影響を決定した。実施例３のように、ＡＤＣＣ活性を測定した。実施例４のように、ＢＣＭＡ及びＦｃγＲＩＩＩａ結合を決定した。

【0445】

ガラクトシル化実験について、還元型ＬＣ－ＭＳによりグリコシル化を測定した。サンプルを１ｍｇ／ｍＬに希釈し、５０μＬの１Ｍ ＤＴＴを添加し、２５℃又は３７℃で３０分間反応させた後、質量分析計（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑ－ｔｏｆ）で分析した。水、アセトニトリル及びトリフルオロ酢酸のアイソクラティックフローを使用したサイズ排除クロマトグラフィーを使用して、重鎖及び軽鎖を分離した。Ｗａｔｅｒｓ製のＭａｘＥｎｔソフトウェアを使用して、各重鎖及び軽鎖のスペクトルを合計し、デコンボリューションした。主要なグリコフォームが検出され、シグナルカウント又は曲線下面積から相対量を評価した。結果を表２８～２９にまとめる。

【0446】

【表28】

【0447】

【表29】

【0448】

実施例１９：許容範囲
最初及び最後（条件に関連して、２１日目又は２８日目）の時点の表１１～表１８のデータを使用して、許容範囲（７０～１３０％の活性）を決定した。関連する翻訳後修飾の相対的なパーセンテージに対して結合データをプロットして、その関係の勾配を決定した。この情報を使用して、少なくとも７０％の結合測定に対して各翻訳後修飾の予測レベルを計算した。この外挿の結果を表３０にまとめる。報告された傾向は、ベランタマブ又はベランタマブマホドチンのいずれかで見られた観察結果を広く反映している。

【0449】

【表30】

【0450】

実施例２０：劣化産物のまとめ
ベランタマブマホドチン活性に影響を与えない様々な強制劣化条件下で観察された劣化産物の発生率を以下にまとめる（表３１）。

【0451】

【表31】

【0452】

実施例２１
実施例２１～２６におけるベランタマブ強制劣化の試験デザインの概要を表３２に示す。方法は、ベランタマブマホドチンについて上記の実施例１１～１８に記載されている方法とほぼ同様であった（記載されている場合を除く）。

【0453】

【表32】

【0454】

実施例２２：ベランタマブの酸化条件
２４時間後に、ＨＣ Ｍ２５６の酸化は、約２％から約９８％に増加し、Ｍ４３２は約１％から約９８％に増加した。ＳＰＲにより、ＦｃγＲＩＩＩａに対する特異的結合は２１～２５％減少し、ＦｃＲｎ結合は１０～１８％減少した。Ｆｃの酸化は、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎに対するベランタマブの結合活性を変化させる可能性がある。２４時間後に、ＣＤＲ１のＨＣ Ｍ３４の酸化は約０．３％から４７．７～４８．５％に増加し、抗原結合に変化はなく、アッセイのばらつきの範囲内であった。システイン及びトリプトファンの酸化レベルは、この試験を通して低く、その他の顕著な翻訳後修飾は検出されなかった。

【0455】

実施例２３：ベランタマブの塩基処理
ＨＣ Ｄ１０３異性化は、約３．５％から約６．５％に増加することが２８日後に観察された。２８日後に、脱アミド化は、ＨＣ Ｎ３１で０．１％から約２．５％に増加し、ＨＣ Ｎ３８８で約２．０％から約１０％に増加し、ＨＣ Ｎ３９３で約１．７％から約１８．５％に増加した。さらに、ｐＨ９のストレスに２８日間さらされたベランタマブにおいて、ＨＣ Ｍ２５６の酸化は、約２．２％から約３．７％に増加することもまた観察された。ｃＩＥＦ分析によって、酸性バリアントは、約２５％から約６２％に増加し、塩基性バリアントは、約９％から約４．５％に減少することを示した（以下の表３３を参照）。観察されたすべての変化は、抗原、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎ特異的結合のアッセイのばらつきの範囲内であった。したがって、ＳＰＲによる結合は、２８日目におけるｐＨ９．０のストレスにさらされたベランタマブと同等である。

【0456】

【表33】

【0457】

実施例２４：ベランタマブの酸処理
フラグメントは、２８日後に０．８％から２．３～２．７％に増加した。ＨＣ Ｄ１０３におけるスクシンイミド形成は、０．２％から４．０％に増加し、ＨＣ Ｄ１０３異性化は、約３．５％から約５．８％に増加することが２８日後に観察された。アスパラギン酸の異性化に加えて、ｐＨ３．５のストレスに２８日間さらされたベランタマブにおいて、ＨＣ Ｍ２５６酸化は、約２．２％から約３．７％に増加することもまた観察された。ｃＩＥＦ分析によって、酸性バリアントは、約２５％から約２８％に増加し、塩基性バリアントは、約９％から約１３％に増加することを示した（以下の表３４を参照）。抗原、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎ特異的結合において観察されたすべての変化は、アッセイのばらつきの範囲内であった。したがって、ＳＰＲによる結合は、２８日後におけるｐＨ３．５のストレスにさらされたベランタマブと同等である。

【0458】

【表34】

【0459】

実施例２５：熱処理されたベランタマブ
フラグメントは２８日後に０．８％から２．２～２．３％に増加した。％凝集は変化しなかった。ＨＣ Ｄ１０３におけるスクシンイミド形成は、０．２％から２．２％に増加し、ＨＣ Ｄ１０３異性化は、約３．５％から約２９％に増加することが２８日後に観察された。アスパラギン酸の異性化に加えて、熱ストレスに２８日間さらされたベランタマブにおいて、ＨＣ Ｍ２５６酸化は、約２．２％から約５．３％に増加し、ＨＣ Ｍ４３２酸化では約１％から２％に増加することもまた観察された。２８日後に、ＨＣ Ｎ３２９脱アミド化は、約０％から約７％に増加し、ＨＣ Ｎ３８８脱アミド化は、約２．０％から約２．５％に増加し、ＨＣ Ｎ３９３脱アミド化は、約１．７％から約２．６％に増加した。抗原特異的結合は、抗原結合に影響を与えることが示されたＨＣ Ｄ１０３異性化の増加と一致して、２８日で６３～６７％に減少した。ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎ特異的結合で観察された変化は、アッセイのばらつきの範囲内であった。

【0460】

実施例２６：光処理されたベランタマブ
フラグメントは、１．５×ＩＣＨにおいて０．８％から１．５％に増加し、凝集は、約１％から６．５～７．５％に増加した。１．５×ＩＣＨにおいて、ＨＣ Ｍ３４酸化は、約０．３％から１．６～２．１％に増加し、ＨＣ Ｍ２５６酸化は、約２．２％から１８．４～２５１％に増加し、ＨＣ Ｍ４３２酸化は、約１％から１３．７～１９．５％に増加した。ｃＩＥＦ分析によって、酸性バリアントは、約２５％から約３４％に増加し、塩基性バリアントは、変化しないことを示した（以下の表３５を参照）。抗原、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃＲｎ特異的結合において観察されたすべての変化は、アッセイのばらつきの範囲内であった。したがって、ＳＰＲによる結合は、２８日後におけるｐＨ３．５のストレスにさらされたベランタマブと同等である。

【0461】

【表35】

【0462】

ベランタマブ強制劣化試験は、ＨＣ Ｍ３４における最大４８．５％の酸化が、抗原結合に変化をもたらさず、アッセイのばらつきの範囲内であったことを除いて、上記のベランタマブマホドチン強制劣化試験と一致した結果を示している。

【0463】

なお、薬物担持数が電荷プロファイルに寄与するため、ベランタマブマホドチンのｃＩＥＦデータは示していないが、ベランタマブの場合には、ｃＩＥＦは酸性及び塩基性バリアントを主要な種から効果的に分離する（図４を参照）。

【0464】

配列表
配列番号１：ＣＤＲＨ１
ＮＹＷＭＨ

【0465】

配列番号２：ＣＤＲＨ２
ＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧ

【0466】

配列番号３：ＣＤＲＨ３
ＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮ

【0467】

配列番号４：ＣＤＲＬ１
ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ

【0468】

配列番号５：ＣＤＲＬ２
ＹＴＳＮＬＨＳ

【0469】

配列番号６：ＣＤＲＬ３
ＱＱＹＲＫＬＰＷＴ

【0470】

配列番号７：重鎖可変領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0471】

配列番号８：軽鎖可変領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＲＫＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0472】

配列番号９：重鎖領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0473】

配列番号１０：軽鎖領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＲＫＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0474】

配列番号１１：Ｄ１０３Ｎを有する重鎖領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＩＹＮＧＹＤＶＬＤＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0475】

配列番号１２：Ｎ３８８Ｄを有する重鎖領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＤＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0476】

配列番号１３：Ｎ３９３Ｄを有する重鎖領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＤＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0477】

配列番号１４：Ｎ３８８Ｄ及びＮ３９３Ｄを有する重鎖領域（ＣＤＲには下線を付す）
ＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＴＹＲＧＨＳＤＴＹＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＩＹＤＧＹＤＶＬＤＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＤＧＱＰＥＤＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-03-07

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

抗ＢＣＭＡ抗体の異性化バリアントを含む組成物であって、
前記異性化バリアントが、
配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２及び配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、
配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２及び配列番号６のＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と
を含み、
前記組成物が、２５％以下の前記異性化バリアントを含む、前記組成物。

【外国語明細書】