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特開2024-6969ＶＩ型コラーゲン産生亢進剤

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024006969

(43)【公開日】2024-01-17

(54)【発明の名称】ＶＩ型コラーゲン産生亢進剤

(51)【国際特許分類】

A61K 8/9789 20170101AFI20240110BHJP

A61K 36/28 20060101ALI20240110BHJP

A61K 36/88 20060101ALI20240110BHJP

A61K 36/06 20060101ALI20240110BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240110BHJP

A61K 8/9794 20170101ALI20240110BHJP

A61K 8/9728 20170101ALI20240110BHJP

A61Q 19/00 20060101ALI20240110BHJP

A61P 17/00 20060101ALI20240110BHJP

A61K 36/73 20060101ALI20240110BHJP

A61K 36/746 20060101ALI20240110BHJP

【ＦＩ】

A61K8/9789

A61K36/28

A61K36/88

A61K36/06 Z

A61P43/00 105

A61K8/9794

A61K8/9728

A61Q19/00

A61P17/00

A61K36/73

A61K36/746

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【請求項の数】9

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023075255

(22)【出願日】2023-04-28

(31)【優先権主張番号】P 2022105182

(32)【優先日】2022-06-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(71)【出願人】

【識別番号】000113470

【氏名又は名称】ポーラ化成工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100137338

【弁理士】

【氏名又は名称】辻田朋子

(74)【代理人】

【識別番号】100196313

【弁理士】

【氏名又は名称】村松大輔

(72)【発明者】

【氏名】横田真理子

(72)【発明者】

【氏名】清野絢美

(72)【発明者】

【氏名】五味貴優

【テーマコード（参考）】

4C083

4C087

4C088

【Ｆターム（参考）】

4C083AA031

4C083AA032

4C083AA082

4C083AA111

4C083AA112

4C083AB032

4C083AB222

4C083AB232

4C083AB242

4C083AB342

4C083AB432

4C083AC012

4C083AC022

4C083AC072

4C083AC102

4C083AC112

4C083AC122

4C083AC172

4C083AC242

4C083AC262

4C083AC302

4C083AC342

4C083AC402

4C083AC422

4C083AC432

4C083AC442

4C083AC482

4C083AC662

4C083AD042

4C083AD152

4C083AD162

4C083AD172

4C083AD212

4C083AD352

4C083AD662

4C083BB51

4C083CC03

4C083CC04

4C083CC05

4C083CC19

4C083DD33

4C083EE12

4C083EE13

4C083EE17

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC12

4C087MA63

4C087NA14

4C087ZA89

4C087ZC01

4C087ZC75

4C088AB14

4C088AB26

4C088AB71

4C088BA08

4C088MA07

4C088MA63

4C088NA14

4C088ZA89

4C088ZC01

4C088ZC75

(57)【要約】

【課題】ＶＩ型コラーゲン産生を亢進する、新規な組成物を提供すること。
【解決手段】
下記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む、ＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。
［Ａ群］
キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物及びサッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む、ＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。
［Ａ群］
キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物及びサッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌

【請求項2】

さらに、下記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含み、かつ前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物が前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物と異なる、請求項１に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。
［Ｂ群］
ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物、サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ムラサキバレンギク属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）に属する植物、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）ヤエヤマアオキ属（Ｍｏｒｉｎｄａ）に属する植物

【請求項3】

前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物が、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物の抽出物を含む、請求項２に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【請求項4】

前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物が、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物の抽出物を含む、請求項３に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【請求項5】

化粧料である、請求項１～４の何れか一項に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【請求項6】

Ｇ０期の細胞におけるＶＩ型コラーゲンを産生亢進するための、請求項１～４の何れか一項に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【請求項7】

オートファジーを活性化するための、請求項１～４の何れか一項に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【請求項8】

細胞外マトリックスの産生を亢進するための、請求項１～４の何れか一項に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【請求項9】

前記細胞外マトリックスが、ルミカン（ｌｕｍｉｃａｎ；ＬＵＭ）、エラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ；ＥＬＮ）、ＥＭＩＬＩＮ－１（ｅｌａｓｔｉｎｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｉｎｔｅｒｆａｃｅｒ１）から選択される１種又は２種以上を含む、請求項８に記載のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＶＩ型コラーゲン産生亢進剤に関する。

【背景技術】

【0002】

ＶＩ型コラーゲンは、細胞外においてビーズ状のマイクロフィラメントを形成するコラーゲンである。ＶＩ型コラーゲンは、細胞マトリックスを構成する成分や細胞表面の受容体と相互作用し、複雑な網目状構造を形成する。

【0003】

皮膚組織において、ＶＩ型コラーゲンは、表皮以外の真皮、皮下組織、血管系、神経線維、毛包等に広く分布し、特に表皮と真皮の接合部である基底膜に多く存在する。そして、Ｃｏｌ６ａ１欠損マウスでは、皮膚の引張強度が低下し、コラーゲン線維と基底膜の構造が変化することが知られている（非特許文献１）。

【0004】

筋肉においては、ＶＩ型コラーゲンが欠損すると、筋ジストロフィー等の疾患が引き起こされるとともに、アポトーシスやオートファジーなどの機構に著しい影響を与えることが知られている（非特許文献２）。
また、ＣｏｌＶＩ欠損マウス（Ｃｏｌ６ａ１^－／－）の初代及び不死化線維芽細胞を用いた研究により、ＶＩ型コラーゲンの欠損は線維芽細胞においてオートファジーの制御に影響を与えることが示されている（非特許文献３）。
一方で、ヒトの皮膚におけるＶＩ型コラーゲン欠損とオートファジーの関連性については、これまでに報告がない。

【0005】

ここで、オートファジーは、細胞が持っている、細胞内のタンパク質及び細胞小器官を分解するための仕組みの一つである。オートファジーの活性化はアポトーシス、ネクローシス等の細胞死の抑制、そして組織中の幹細胞の減衰の抑止などに繋がることが知られ、オートファジーを活性化する物質には、抗老化作用及び長寿化の作用があることが知られている（非特許文献４）。

【0006】

ところで、カミツレはジャーマンカモミールとも呼ばれ、そのエキスが保湿成分として広く利用されている。例えば、カミツレエキスを含む毛髪洗浄剤組成物（特許文献１）、タンブリッサ・トリコフィラ葉エキス及びカミツレエキスを含む保湿剤（特許文献２）等が報告されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特開２００６－２１９４４９号公報

【特許文献2】特開２０１５－２２９６５３号公報

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】PLoS One. 2014 Aug 26;9(8)

【非特許文献2】Matrix Biol. 2021 Jun;100-101:162-172.

【非特許文献3】Front Physiol. 2018 Aug 17;9:1129.

【非特許文献4】N Engl J Med. 2013 Feb 14;368(7):651-62.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

上記先行技術のあるところ、本発明者らは、細胞周期から外れ、休止状態の細胞によっても分泌・活性化される皮膚組織の構成成分を探索したところ、細胞のＧ０期においてＶＩ型コラーゲンの産生が他の周期と比較して特徴的に亢進することを発見した。また、ＶＩ型コラーゲンの発現に着目したスクリーニングを行うことで、Ｇ０期で産生亢進したＶＩ型コラーゲンをさらに産生亢進する成分を発見した。

【0010】

すなわち、本発明は、ＶＩ型コラーゲン産生を亢進する、新規な組成物を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0011】

上記課題を解決する本発明は、下記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む、ＶＩ型コラーゲン産生亢進剤である。
［Ａ群］
キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物及びサッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌

【0012】

前記Ａ群から選ばれる成分を含む本発明は、細胞・組織等におけるＶＩ型コラーゲンの産生を亢進することができる。

【0013】

本発明の好ましい形態では、本発明は、さらに、下記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含み、かつ前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物が前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物と異なることを特徴とする。
［Ｂ群］
ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物、サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ムラサキバレンギク属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）に属する植物、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）ヤエヤマアオキ属（Ｍｏｒｉｎｄａ）に属する植物

【0014】

前記Ｂ群から選ばれる成分をさらに含むことで、本発明は、ＶＩ型コラーゲンの産生亢進作用をより向上させることができる。

【0015】

本発明の好ましい形態では、前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物は、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物を少なくとも含む。
キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物を有効成分として含むことで、本発明は優れたＶＩ型コラーゲン亢進作用を発揮する。

【0016】

本発明の好ましい形態では、前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物は、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物由来の抽出物を少なくとも含む。

【0017】

本発明の好ましい形態では、本発明は化粧料である。

【0018】

本発明の好ましい形態では、本発明は、Ｇ０期の細胞におけるＶＩ型コラーゲンを産生亢進するためのＶＩ型コラーゲン産生亢進剤である。

【0019】

本発明の好ましい形態では、本発明は、オートファジーを活性化するためのＶＩ型コラーゲン産生亢進剤である。

【0020】

本発明の好ましい形態では、本発明は、細胞外マトリックスの産生を亢進するためのＶＩ型コラーゲン産生亢進剤である。

【0021】

本発明の好ましい形態では、前記細胞外マトリックスが、ルミカン（ｌｕｍｉｃａｎ；ＬＵＭ）、エラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ；ＥＬＮ）、ＥＭＩＬＩＮ－１（ｅｌａｓｔｉｎｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｉｎｔｅｒｆａｃｅｒ１）から選択される１種又は２種以上を含む。

【発明の効果】

【0022】

本発明によれば、ＶＩ型コラーゲンの産生を亢進する、新規な組成物を提供することができる。また、本発明によれば、オートファジー活性を向上させる、新規な組成物を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、下記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む。
［Ａ群］
キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物及びサッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌

【0024】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物を含むことが好ましい。

【0025】

また、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、さらに、下記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む。
［Ｂ群］
ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物、サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ムラサキバレンギク属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）に属する植物、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）ヤエヤマアオキ属（Ｍｏｒｉｎｄａ）に属する植物

【0026】

前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物と共に、前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物を含むことで、ＶＩ型コラーゲンの産生亢進作用をより向上させることができる。
ここで、前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物は、前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物と異なることが好ましい。

【0027】

また、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤にかかる有効成分は、前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物としてキク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物と、Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物としてガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ムラサキバレンギク属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）及びバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物由来の抽出物から選択する１種または２種以上を組み合わせることが好ましい。
キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物と、上述したＢ群の植物由来の抽出物を組み合わせることで、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物の有するＶＩ型コラーゲンの産生亢進作用をより向上させることができる。

【0028】

より好ましい形態では、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤に含まれる前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物は、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物を少なくとも含み、前記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物は、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物由来の抽出物を少なくとも含む。

【0029】

本発明に係る、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物、ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ムラサキバレンギク属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）に属する植物、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）ヤエヤマアオキ属（Ｍｏｒｉｎｄａ）に属する植物としては、其々、カミツレ（ＭａｔｒｉｃａｒｉａｃｈａｍｏｍｉｌｌａＬ．）、ホソバヒメガマ（ＴｙｐｈａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａＬ．）、ホソババレンギク（Ｅｃｈｉｎａｃｅａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）、テンヨウケンコウシ（ＲｕｂｕｓｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓＳ．Ｌｅｅ）、ヤエヤマアオキ（Ｍｏｒｉｎｄａｃｉｔｒｉｆｏｒｉａ）であることが好ましい。

【0030】

本発明で使用する植物由来の抽出物について、前記植物から抽出物を得る場合、その抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。抽出溶媒としては、水、アルコール類又は水及びアルコール類の混合物を採用することが好ましい。

【0031】

具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量部に対して、溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられるが、抽出方法はこれに限定されない。

【0032】

次いで、本発明で使用する抽出物について、詳述する。

【0033】

キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）に属する植物由来の抽出物は、カミツレ（ＭａｔｒｉｃａｒｉａｃｈａｍｏｍｉｌｌａＬ．）の花から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、又はこれらの混液、もしくは１％尿素含有エタノール溶液、又は１％尿素含有１，３－ブチレングリコール溶液により抽出して得ることが好ましい。
また、市販のものを用いることができ、例えば、「カモミラエキス（１）（一丸ファルコス株式会社、香栄興業株式会社、丸善製薬株式会社など）」を用いることができる。

【0034】

ガマ科（Ｔｙｐｈａｃｅａｅ）ガマ属（Ｔｙｐｈａ）に属する植物由来の抽出物は、ホソバヒメガマ（ＴｙｐｈａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａＬ．）、又はその他同属植物の花穂から水、１，３－ブチレングリコール、又はこれらの混液により抽出して得ることが好ましい。
また、市販のものを用いることができ、例えば、「ガマエキス（香栄興業株式会社など）」を用いることができる。

【0035】

キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ムラサキバレンギク属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）に属する植物由来の抽出物は、ホソババレンギク（Ｅｃｈｉｎａｃｅａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）の葉からエタノール溶液により抽出して得ることが好ましい。
また、市販のものを用いることができ、例えば、「エチナシ葉エキス（一丸ファルコス株式会社、鈴木ハーブ研究所など）」を用いることができる。

【0036】

バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物由来の抽出物は、テンヨウケンコウシ（ＲｕｂｕｓｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓＳ．Ｋ．Ｌｅｅ）の葉を熱湯に浸漬した後、葉を乾燥し、さらに加熱したものを熱湯により抽出して得ることが好ましい。
また、市販のものを用いることができ、例えば、「テンチャエキス（丸善製薬株式会社など）」を用いることができる。

【0037】

アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）ヤエヤマアオキ属（Ｍｏｒｉｎｄａ）に属する植物由来の抽出物は、ヤエヤマアオキ（Ｍｏｒｉｎｄａｃｉｔｒｉｆｏｒｉａ）の果実を自然発酵させて得られるノニ果汁を、１，３－ブチレングリコールにより調整して得ることが好ましい。なお、使用する１，３－ブチレングリコールは、植物由来であることが好ましい。
また、市販のものを用いることができ、例えば、「ノニ果汁（丸善製薬株式会社など）」を用いることができる。

【0038】

サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌由来の抽出物は、サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属する菌を自己消化、又は酸加水分解によって得られた液をろ過した後、濃縮又は乾燥して得ることができる。
また、市販のものを用いることができ、例えば、「酵母エキス（１）（一丸ファルコス株式会社、丸善製薬株式会社など）」を用いることができる。

【0039】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤に対し、前記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物の含有量は、乾燥質量を基準として、通常０．００００１質量％以上であり、好ましくは０．０００１質量％以上であり、より好ましくは０．００１質量％以上であり、さらに好ましくは０．０１質量％以上であり、さらにより好ましくは０．１質量％以上である。また、乾燥質量を基準として、０．０００１質量％以上であることも好ましく、０．０００３質量％以上であることも好ましい。
また、乾燥質量を基準として、通常８０質量％以下であり、好ましくは３０質量％以下であり、より好ましくは１０質量％以下であり、より好ましくは１質量％以下であり、より好ましくは０．１質量％以下であり、さらに好ましくは０．０５質量％以下であり、特に好ましくは０．０１質量％以下である。

【0040】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤に対し、前記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物の含有量は、乾燥質量を基準として、通常０．００００１質量％以上であり、好ましくは０．０００１質量％以上であり、より好ましくは０．００１質量％以上であり、さらに好ましくは０．０１質量％以上であり、さらにより好ましくは０．１質量％以上である。また、乾燥質量を基準として、０．０００１質量％以上であることも好ましく、０．０００３質量％以上であることも好ましい。
また、乾燥質量を基準として、通常８０質量％以下であり、好ましくは３０質量％以下であり、より好ましくは１０質量％以下であり、より好ましくは１質量％以下であり、より好ましくは０．１質量％以下であり、さらに好ましくは０．０５質量％以下であり、特に好ましくは０．０１質量％以下である。

【0041】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤において、前記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物と、前記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物の含有質量比は、乾燥質量を基準として、好ましくは５：１～１：５であり、より好ましくは３：１～１：３であり、さらに好ましくは２：１～１：２である。

【0042】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、皮膚外用剤又は経口剤の形態とすることが好ましい。皮膚外用剤又は経口剤は、適宜公知の方法及び機器を使用して製造することができる。

【0043】

皮膚外用剤としては、化粧料、医薬部外品、医薬品などが好適に例示でき、日常的に使用できることから、化粧料、医薬部外品がより好ましい。
本願発明の化粧料としては、ローション剤、乳化剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤等の形態に加工することができる。具体的には、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、パック、ヘアクリーム、スプレー、サンケア品等が挙げられ、特に化粧水、乳液及びクリームが好適に例示できる。

【0044】

皮膚外用剤における、生物由来抽出物の含有量は、乾燥質量を基準として、通常０．００００１質量％以上であり、好ましくは０．０００１質量％以上であり、より好ましくは０．００１質量％以上であり、さらに好ましくは０．０１質量％以上であり、さらにより好ましくは０．１質量％以上である。また、乾燥質量を基準として、０．０００１質量％以上であることも好ましく、０．０００３質量％以上であることも好ましい。
また、乾燥質量を基準として、通常８０質量％以下であり、好ましくは３０質量％以下であり、より好ましくは１０質量％以下であり、より好ましくは１質量％以下であり、より好ましくは０．１質量％以下であり、さらに好ましくは０．０５質量％以下であり、特に好ましくは０．０１質量％以下である。
なお、前記Ａ群から選ばれる２種以上の生物由来抽出物、及び／又は前記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を含む場合、各生物由来抽出物の合計が、前記数値範囲内にあればよい。

【0045】

本発明を化粧料の形態とする場合、ＶＩ型コラーゲン産生の亢進効果を損ねない範囲で、美白成分、しわ改善成分、抗炎症成分、前記Ａ群及びＢ群に属する生物由来抽出物以外の動植物由来の抽出物、有効成分以外に通常化粧料で使用される成分を、任意成分として配合してもよい。
これらの任意成分は、市販されているものを入手して配合してもよく、公知の方法で合成したものを配合してもよい。また、各任意成分は、２以上の効果（例えば、美白効果としわ改善効果）を有していてもよい。

【0046】

美白成分としては、一般的に化粧料で用いられている成分を、特に制限なく使用することができる。
例えば、４－ｎ－ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３－О－エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、１－トリフェニルメチルピペリジン、１－トリフェニルメチルピロリジン、２－（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２－（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２－（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン及びアミノジフェニルメタン、Ｎ－（ｏ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｍ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－トルイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）システイン酸、Ｎ－ベンゾイル－セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－エチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン、Ｎ－（４－フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリンメチルエステル、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリンエチルエステル、Ｎ－（２－ナフトイル）セリンメチルエステル、Ｎ－ベンゾイル－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－アセチルセリン、Ｎ－（２－ナフトイル）－Ｏ－メチルセリン、デクスパンテノールＷ、ナイアシンアミド等が挙げられる。

【0047】

化粧料中における美白成分の含有量は、通常０．０００１～３０質量％であり、０．００１～１０質量％が好ましく、０．０１～５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。

【0048】

しわ改善成分としては、一般的に化粧料で用いられている成分を、特に制限なく使用することができる。
例えば、ビタミンＡ又はその誘導体としてレチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールが挙げられる。また、ウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステル、三フッ化イソプロピルオキソプロピルアミノカルボニルピロリジンカルボニルメチルプロピルアミノカルボニルベンゾイルアミノ酢酸ナトリウム、ナイアシンアミド等が挙げられる。

【0049】

化粧料中におけるしわ改善成分の含有量は、通常０．０００１～３０質量％であり、好ましくは０．００１～１０質量％であり、より好ましくは０．０１～５質量％である（抽出物の場合は乾燥質量）。

【0050】

抗炎症成分としては、例えば、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール、ナイアシンアミド、トラネキサム酸等が挙げられ、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩が好ましく挙げられる。

【0051】

化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常０．０１～３０質量％であり、好ましくは０．１～１０質量％であり、より好ましくは１～５質量％である（抽出物の場合は乾燥質量）。

【0052】

動植物由来の抽出物としては、例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウバクエキス、オタネニンジンエキス、オドリコソウエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クマザサエキス、クルミエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タンポポエキス、チョウジエキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ヘチマエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、マツエキス、ミズバショウエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズマリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。

【0053】

化粧料中における前記任意の動植物由来の抽出物の含有量は、乾燥質量を基準として、通常０．０１～３０質量％であり、好ましくは０．１～１０質量％であり、より好ましくは０．３～３質量％である。

【0054】

有効成分以外に通常化粧料で使用される成分としては、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３－ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、ルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２－ペンタンジオール、２，４－ヘキシレングリコール、１，２－ヘキサンジオール、１，２－オクタンジオール等のポリオール、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２－ココイル－２－イミダゾリニウムヒドロキサイド－１－カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２－オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック（登録商標）型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２－デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、表面処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面処理されていても良い、酸化コバルト、群青、紺青、酸化亜鉛の無機顔料類、表面処理されていても良い、酸化鉄二酸化チタン焼結体等の複合顔料、表面処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩，ビタミンＢ６トリパルミテート，ビタミンＢ６ジオクタノエート，ビタミンＢ２又はその誘導体，ビタミンＢ１２，ビタミンＢ１５又はその誘導体等のビタミンＢ類、α－トコフェロール，β－トコフェロール，γ－トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類が挙げられる。

【0055】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤を、経口剤とする場合、前記Ａ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む、飲食品の形態とすることが好ましい。前記有効成分に加え、前記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を有効成分として含む、飲食品の形態とすることがより好ましい。

【0056】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤を、経口剤とする場合、生物由来抽出物の含有量は剤形に応じて、１回あたりの摂取量が、抽出物の乾燥質量として、通常、０．１ｍｇ以上であり、好ましくは１ｍｇ以上であり、より好ましくは１０ｍｇ以上である。
また、通常、２０００ｍｇ以下、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下である。
なお、前記Ａ群から選ばれる２種以上の生物由来抽出物、及び／又は前記Ｂ群から選ばれる１種又は２種以上の生物由来抽出物を含む場合、各生物由来抽出物の合計が、前記数値範囲内にあればよい。

【0057】

また、本発明を皮膚外用剤、経口剤の形態とする場合、本発明は「ＶＩ型コラーゲン産生亢進のため」の用途の表示が付された形態とすることも好ましい。

【0058】

前記「表示」は、需要者に対して前記用途を知らしめる機能を有する全ての表示を含む。すなわち、前記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て前記「表示」に該当する。
また、前記「表示が付された」とは、前記表示と、皮膚外用剤等（製品）を関連付けて認識させようとする表示行為が存在していることをいう。

【0059】

表示行為は、需要者が前記用途を直接的に認識できるものであることが好ましい。具体的には、本発明に係る商品又は商品の包装への前記用途の記載行為、商品に関する広告、価格表もしくは取引書類（電磁的方法により提供されるものを含む）への前記用途の記載行為が例示できる。

【0060】

また、上述の通り、細胞のＧ０期において、ＶＩ型コラーゲンの産生が亢進されることが、本発明者らによって明らかにされた。
すなわち、本発明の好ましい実施形態では、本発明は、Ｇ０期の細胞におけるＶＩ型コラーゲンを産生亢進するために用いることができる。

【0061】

さらに、本発明者らにより、ＶＩ型コラーゲンの存在下で、オートファジーの活性が促進されることが明らかになった。すなわち、ＶＩ型コラーゲンの発現が亢進されることで、オートファジー活性が向上するものといえる。
よって、本発明の好ましい実施形態では、本発明は、オートファジーを活性するために用いることができる。

【0062】

また、上述した通り、生体内のオートファジーを活性化させることで、抗老化作用、長寿化作用、自然免疫の強化作用、抗炎症作用、そして凝集したタンパク質の分解作用が得られることが知られている。
従って、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、オートファジーが関連する疾患を治療する目的で使用することができる。例えば、本発明は、抗老化、長寿化、自然免疫の強化、抗炎症、そして凝集したタンパク質の蓄積を原因とする疾患の予防又は治療を目的とする成分として使用することができる。
より具体的には、癌、神経障害疾患、感染症、免疫異常等の治療の目的で、本発明を使用することができる。神経障害疾患としては、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病等が挙げられる。

【0063】

また、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、オートファジー活性の低下によって引き起こされる、肌状態の予防及び／又は改善に用いることができる。

【0064】

本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、ＶＩ型コラーゲンの発現低下により生じるケロイドおよび乾燥肌、紅斑線条、及び毛孔性苔癬の改善や、その他の皮膚に関する症状、例えば日光弾力線維症による真皮の弾力性低下、Ｅｈｌｅｓ－Ｄａｎｌｏｓ症候群による真皮の弾力性低下、Ｍａｒｆａｎ症候群による真皮の弾力性低下、弾性線維仮性黄色腫による真皮の弾力性低下、皮膚形成異常症による真皮の弾力性低下、早老症による真皮の弾力性低下などの皮膚異常の改善のために用いることができる。

【0065】

また、後述の実施例で示す通り、ＶＩ型コラーゲンは、加齢に伴い真皮下層の真皮網状層において発現が低下する。すなわち、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、加齢に伴うＶＩ型コラーゲンの産生低下による皮膚異常や肌状態の悪化に対し好適に適用することができる。

【0066】

さらに、本発明者らは、ＶＩ型コラーゲンの存在下において、ヒト皮膚線維芽細胞において細胞外マトリックス関連遺伝子の発現が活性化されることを発見した。この結果より、皮膚組織のＶＩ型コラーゲンにより、真皮組織における細胞外マトリックスの産生を亢進させることができることを見出した。
すなわち、本発明の好ましい実施形態では、本発明は、細胞外マトリックスの産生を亢進するために用いることができる。

【0067】

ＶＩ型コラーゲンの発現に伴い産生が亢進される細胞外マトリックスとしては、ルミカン（ｌｕｍｉｃａｎ；ＬＵＭ）、エラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ；ＥＬＮ）、ＥＭＩＬＩＮ－１（ｅｌａｓｔｉｎｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｉｎｔｅｒｆａｃｅｒ１）が好適に挙げられる。

【実施例0068】

以下、実施例を参照して本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は、以下の実施例に限定されない。

【0069】

＜試験例１＞Ｇ０期に誘導された細胞におけるＶＩ型コラーゲンの発現亢進
培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）を用いて、培養プレートに正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＨＤＦｓ）をセミコンフルエントになるよう播種した。細胞の接着後、培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ、血清枯渇なし（コントロール））あるいは培地（０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ、血清枯渇あり）の条件で細胞を培養後、細胞からＲＮＡを回収した。

【0070】

回収したＲＮＡを、リアルタイムＰＣＲ法を用いて分析し、ＶＩ型コラーゲンの遺伝子（ＣＯＬ６Ａ１及びＣＯＬ６Ａ３）の発現を評価した。同時に、細胞がＧ０期に誘導されていることを確認する目的でＭＫＩ６７の遺伝子発現低下を確認した。さらに、比較例としてＩ型コラーゲンの遺伝子発現を評価した。

【0071】

表１に示すように、血清枯渇なしの条件に対し、血清枯渇ありの条件においてＭＫＩ６７遺伝子発現の顕著な減少が確認されたことから、血清枯渇ありの条件において細胞がＧ０期に誘導されたといえる。そして、Ｇ０期への誘導が確認された血清枯渇ありの条件において、ＶＩ型コラーゲン（ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ３）の発現が亢進することが確認された。
一方で、同条件においてＩ型コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ１）の発現への影響は認められなかった。

【0072】

【表1】

【0073】

以上より、Ｇ０期の細胞において、ＶＩ型コラーゲンの発現が上昇するが、この作用機序にはＩ型コラーゲンの発現は関与しないことが明らかとなった。

【0074】

＜試験例２＞ＶＩ型コラーゲンの発現を亢進するエキスのスクリーニング
培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）を用いて、培養プレートに正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＨＤＦｓ）を、セミコンフルエントになるよう播種した。細胞の接着後、培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）あるいは培地（０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）に下記表２に記載のエキス（生物由来抽出物）を、各々最終濃度０．２％（乾燥質量で０．０００８～０．００２質量％）となるように添加してエキス含有培地とし、当該培地にて細胞を培養後、細胞からＲＮＡを回収した。
コントロール（ＮＣ）としては、エキスを未添加の培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）を用いて、同様の条件で培養したものを用いた。

【0075】

回収したＲＮＡを、リアルタイムＰＣＲ法を用いて分析し、ＶＩ型コラーゲン（ＣＯＬ６Ａ１）の遺伝子発現を評価した。具体的には、血清枯渇ありかつエキス未添加の細胞における遺伝子発現量を基準とし、血清枯渇ありの細胞におけるエキス添加後の遺伝子発現量を算出した。表２は、血清枯渇ありかつエキス未添加の細胞における遺伝子発現量を基準値（１００％）とした場合における、エキス添加後の遺伝子発現の上昇率（％）を示す。

【0076】

【表2】

【0077】

表２に示すように、０．２％カモミラエキス（１）、０．２％ガマエキス又は０．２％酵母エキス（１）を添加した場合に、ＶＩ型コラーゲン発現が上昇することが明らかとなった。本試験例２では、Ｇ０期に誘導され、ＶＩ型コラーゲンの発現が上昇した細胞を用いてスクリーニングを行っている。よって、上述の３種類のエキスは、Ｇ０期に誘導された細胞において、ＶＩ型コラーゲン発現を更に亢進する作用があることが示された。

【0078】

また、２種の抽出物を組み合わせて配合した場合、０．２％カモミラエキス（１）と０．２％エチナシ葉エキス、０．２％カモミラエキス（１）と０．２％ガマエキス、０．２％カモミラエキス（１）と０．２％テンチャエキスの組み合わせにおいて、０．２％カモミラエキス（１）を単独で添加した場合よりも、Ｇ０期におけるＶＩ型コラーゲン発現の更なる亢進作用が認められた。

【0079】

＜試験例３＞ＶＩ型コラーゲンのコーティングによるオートファジーの促進作用
ＶＩ型コラーゲン（ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ３）で培養プレートの底面を一晩コーティングした後、培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）に正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＨＤＦｓ）をセミコンフルエントになるよう播種した。また、コントロール（ＮＣ）として、ＶＩ型コラーゲンをコーティングしていない培養プレートに細胞を播種した。細胞の接着後、２４時間培養し、細胞からＲＮＡを回収した。

【0080】

回収したＲＮＡを、リアルタイムＰＣＲ法を用いて分析し、オートファジー関連の遺伝子（ＭＴＯＲ、ＡＴＧ３、ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、ＡＴＧ１２）の発現を評価した。

【0081】

表３に示すように、ＶＩ型コラーゲン（ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ３）をコーティングした条件において、上述のオートファジー関連遺伝子の発現が亢進した。
この結果より、ＶＩ型コラーゲンの発現が上昇することで、オートファジー活性が上昇することが推認される。すなわち、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、オートファジー活性を促進するために用いることができることを示している。また、ＶＩ型コラーゲンの発現がＧ０期に亢進され、ＶＩ型コラーゲンが産生されることにより、活動期（Ｇ１期、Ｓ期、Ｇ２期、又はＭ期）におけるオートファジー活性が促進されると推認される。

【0082】

【表3】

【0083】

＜試験例４＞ＶＩ型コラーゲンのコーティングによる細胞マトリックスの促進作用
ＶＩ型コラーゲン（ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ３）で培養プレートの底面を一晩コーティングした後、培地（１０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ）に正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＨＤＦｓ）をセミコンフルエントになるよう播種した。また、コントロール（ＮＣ）として、ＶＩ型コラーゲンをコーティングしていない培養プレートに細胞を播種した。細胞の接着後、２４時間培養し、細胞からＲＮＡを回収した。

【0084】

回収したＲＮＡについて、ＤＮＡａｒｒａｙ法（Ｃｌａｒｉｏｍ^ＴＭＳアッセイ）を用いて遺伝子発現を評価した。そして、遺伝子発現が向上した細胞外マトリックス関連遺伝子を選択した。結果を表４に示す。

【0085】

【表4】

【0086】

表４に示すように、ＶＩ型コラーゲン（ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ３）をコーティングした条件において、細胞外マトリックス関連遺伝子（ＬＵＭ、ＥＬＮ及びＥＭＩＬＩＮ－１）の発現が亢進した。これにより、ＶＩ型コラーゲンの発現を亢進させることにより、真皮の細胞外マトリックスの産生を亢進させることが可能であるといえる。すなわち、この結果は、本発明のＶＩ型コラーゲン産生亢進剤は、細胞外マトリックスの産生を亢進するために用いることができることを示している。

【0087】

＜試験例５＞加齢に伴うＶＩ型コラーゲンの発現量の変化
２０代、３０代、５０代、６０代の女性を各年代から２名ずつ選出し、頬部組織を採取した。得られたヒト頬部組織を用いてパラフィンブロックを作製し、当該パラフィンブロックを薄切して組織片を得た。

【0088】

次いで、取得した組織片について、免疫組織化学染色法によりＣＯＬ６Ａ１を染色し、蛍光顕微鏡を用いて染色画像を取得した。得られた染色画像について、同一ピクセル当たりＣＯＬ６Ａ１由来の平均輝度値を算出し、各検体のＣＯＬ６Ａ１発現量とした。ＣＯＬ６Ａ１発現量は、２０～３０代と５０～６０代の２群に分け、各群ｎ＝４として群ごとの平均を算出した。
結果を、表５に示す。

【0089】

【表5】