特開 2024-72614 クローディン量の変動剤、タイトジャンクション緩和剤、および、それらを用いた皮膚外用剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024072614

(43)【公開日】2024-05-28

(54)【発明の名称】クローディン量の変動剤、タイトジャンクション緩和剤、および、それらを用いた皮膚外用剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/53 20060101AFI20240521BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 31/198 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 8/9789 20170101ALI20240521BHJP

   A61K 8/44 20060101ALI20240521BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 17/04 20060101ALN20240521BHJP

   A61P 37/08 20060101ALN20240521BHJP

【ＦＩ】

A61K36/53

A61P43/00 105

A61K31/198

A61K8/9789

A61K8/44

A61Q19/00

A61P17/04

A61P37/08

【審査請求】未請求

【請求項の数】4

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022183554

(22)【出願日】2022-11-16

(71)【出願人】

【識別番号】390011442

【氏名又は名称】株式会社マンダム

(71)【出願人】

【識別番号】522449075

【氏名又は名称】合同会社ＢｅＣｅｌｌＢａｒ

(71)【出願人】

【識別番号】504139662

【氏名又は名称】国立大学法人東海国立大学機構

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】志賀 一博

(72)【発明者】

【氏名】嶋田 格

(72)【発明者】

【氏名】天野 剛志

(72)【発明者】

【氏名】廣明 秀一

【テーマコード（参考）】

4C083

4C088

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C083AA111

4C083AA112

4C083AC661

4C083AC662

4C083BB51

4C083CC02

4C083CC04

4C083CC05

4C083CC07

4C083CC13

4C083CC17

4C083CC23

4C083CC37

4C083DD11

4C083DD12

4C083DD23

4C083DD31

4C083DD41

4C083EE11

4C083EE13

4C083FF01

4C088AB38

4C088AC05

4C088BA08

4C088CA03

4C088MA02

4C088MA16

4C088MA28

4C088MA32

4C088MA34

4C088MA63

4C088NA14

4C088ZA89

4C088ZB13

4C088ZB21

4C206AA01

4C206AA02

4C206GA03

4C206GA37

4C206MA01

4C206MA02

4C206MA04

4C206MA36

4C206MA48

4C206MA52

4C206MA54

4C206MA83

4C206NA14

4C206ZA89

4C206ZB13

4C206ZB21

(57)【要約】

【課題】タイトジャンクション緩和剤に使用し得る、新規なクローディン量の変動剤、および、それらの利用技術を提供する。
【解決手段】マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有する、クローディン量の変動剤を用いる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有する、クローディン量の変動剤。

【請求項2】

クローディン１（ＣＬＤ１）量を減少させるものである、請求項１に記載のクローディン量の変動剤。

【請求項3】

マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有する、タイトジャンクション緩和剤。

【請求項4】

請求項１または２に記載のクローディン量の変動剤、および／または、請求項３に記載のタイトジャンクション緩和剤を含有する、皮膚外用剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、クローディン量の変動剤、タイトジャンクション緩和剤、および、それらを用いた皮膚外用剤に関する。

【背景技術】

【0002】

タイトジャンクションは、隣り合う上皮細胞同士をつなぎ、様々な物質が上皮細胞の間を通過することを防ぐ、細胞間接着の１つである。当該タイトジャンクションによって、様々な物質が体内から体外へ漏出すること、および、様々な物質が体外から体内へ侵入することが防がれ、これによって体内の恒常性が維持されている。タイトジャンクションの形成には様々なタンパク質（例えば、クローディン、ＺＯ－１）が関与することが知られている。

【0003】

ところで、医薬品および化粧品の有効成分の皮膚への浸透性は、医薬品および化粧品が効果を発揮する上で、非常に重要である。

【0004】

従来、医薬品や化粧品の有効成分の皮膚への浸透性を高める方法として、皮膚のバリアであるタイトジャンクションを一時的に緩和させる方法が知られている。例えば、特許文献１および２には、特定の化合物を含むタイトジャンクションの緩和剤が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】ＷＯ２０１６／１９０３１０号公報

【特許文献2】特開２０２０－０７５８７７号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

しかしながら、上述した技術には改善の余地があり、タイトジャンクション緩和剤等に利用可能な新規な製剤が求められている。

【0007】

本発明の一態様は、タイトジャンクション緩和剤に使用し得る、新規なクローディン量の変動剤、および、その利用技術を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者は、前記課題を解決するために鋭意検討した結果、マヨナラの抽出エキスであるマヨナラエキス、および／または、カプリロイルグリシンが、クローディン量を変動させ得ることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の一実施形態は、以下の構成を含むものである。

【0009】

〔１〕マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有する、クローディン量の変動剤。

【0010】

〔２〕クローディン１（ＣＬＤ１）量を減少させるものである、〔１〕に記載のクローディン量の変動剤。

【0011】

〔３〕マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有する、タイトジャンクション緩和剤。

【0012】

〔４〕〔１〕または〔２〕に記載のクローディン量の変動剤、および/または、〔３〕に記載のタイトジャンクション緩和剤を含有する、皮膚外用剤。

【発明の効果】

【0013】

本発明の一態様によれば、タイトジャンクション緩和剤に使用し得る、新規なクローディン量の変動剤、および、その利用技術を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ３を添加したＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインのスペクトル、および、ｍｄ３を添加していないＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインのスペクトルを示す図である。

【図2】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ３の添加前後のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインでの変化部位を示す図である。

【図3】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ３を添加したＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインのスペクトル、および、ｍｄ３を添加していないＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインのスペクトルを示す図である。

【図4】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ３の添加前後のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインでの変化部位を示す図である。

【図5】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ２４を添加したＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインのスペクトル、および、ｍｄ２４を添加していないＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインのスペクトルを示す図である。

【図6】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ２４の添加前後のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインでの変化部位を示す図である。

【図7】本発明の一実施形態に係る１％（ｖ／ｖ）ｍｄ２４を添加したＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインのスペクトル、および、ｍｄ２４を添加していないＬＮＸ－１ ＰＤＺ２のスペクトルを示す図である。

【図8】本発明の一実施形態に係る１％（ｖ／ｖ）ｍｄ２４の添加前後のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインでの変化部位を示す図である。

【図9】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ１を添加したＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインのスペクトル、および、ｍｄ１を添加していないＺＯ－１ ＰＤＺ１のスペクトルを示す図である。

【図10】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ１の添加前後のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインでの変化部位を示す図である。

【図11】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ１を添加したＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインのスペクトル、および、ｍｄ１を添加していないＬＮＸ－１ ＰＤＺ２のスペクトルを示す図である。

【図12】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ１の添加前後のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインでの変化部位を示す図である。

【図13】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ２１を添加したＺＯ－１ ＰＤＺ１のスペクトル、および、ｍｄ２１を添加していないＺＯ－１ ＰＤＺ１のスペクトルを示す図である。

【図14】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ２１の添加前後のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインでの変化部位を示す図である。

【図15】本発明の一実施形態に係る１％（ｖ／ｖ）ｍｄ２１を添加したＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインのスペクトル、および、ｍｄ２１を添加していないＬＮＸ－１ ＰＤＺ２のスペクトルを示す図である。

【図16】本発明の一実施形態に係る１％（ｖ／ｖ）ｍｄ２１の添加前後のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメイン構成アミノ酸由来のピーク間の距離を表すグラフ、および、当該アミノ酸のＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインでの変化部位を示す図である。

【図17】本発明の一実施形態に係る５％（ｖ／ｖ）ｍｄ３、および、１０％（ｖ／ｖ）ｍｄ２４に曝露したヒト皮膚細胞のタイトジャンクション構成タンパク質の変化を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。ただし、本発明はこれに限定されるものではなく、記述した範囲内で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。なお、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ～Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意図する。

【0016】

〔１．クローディン量の変動剤〕
本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤は、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有するものである。本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤は、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動剤であってもよい。

【0017】

本発明の一実施形態によれば、薬剤などに含まれる有効成分の皮膚への浸透性を向上させることができ、これにより、例えば、目標３「あらゆる年齢のすべての人々の健康的な生活を確保し、福祉を促進する」等の持続可能な開発目標（ＳＤＧｓ）の達成に貢献できる。

【0018】

本明細書中にて、「クローディン量の変動剤」とは、クローディンの量を変動させる製剤を意図する。クローディンの量は、クローディンのタンパク質の量であってもよいし、クローディンのｍＲＮＡの量であってもよい。

【0019】

クローディンには、複数のファミリーが存在する（例えば、クローディン１～２７）。本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤によって量が変動するクローディンは、限定されないが、クローディン１であることが好ましい。本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤であれば、クローディン１の量を減少させることができる。

【0020】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤によるクローディン量を変動させる様式（増加、または、減少）は、タイトジャンクションを緩和させることができるのであれば限定されないが、クローディン量を減少させることが好ましい。当該構成であれば、タイトジャンクションを構成するタンパク質の量を減少させることによって、より良くタイトジャンクションを緩和させることができる。なお、クローディンの量が増加する場合、例えば、タイトジャンクションの形成能力が低いクローディンの量が増加し、当該クローディンが、タイトジャンクションの形成能力が高いクローディンと置き換わることによって、タイトジャンクションを緩和させることが可能である。

【0021】

本明細書中にて、「マヨナラエキス」（例えば、CAS No.84082-58-6）（マヨラナエキスとも言われる）は、シソ科植物マヨナラ（Origanum majorana）から得られる抽出物を意図する。マヨナラエキスは、シソ科植物マヨナラの任意の部分から得られる抽出物であり得るが、シソ科植物マヨナラの葉（マジョラムの葉とも言われる）から得られる抽出物であることが好ましい。

【0022】

マヨナラエキスとしては、市販のマヨナラエキスを用いることも可能であるし、マヨナラ（例えば、マヨナラの葉）を抽出して得たマヨナラエキスを用いることも可能である。

【0023】

マヨナラからマヨナラエキスを得る方法は、限定されない。例えば、（ｉ）マヨナラを溶媒（例えば、水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、または、ブチレングリコール）によって抽出して得られる抽出物をマヨナラエキスとしてもよいし、（ｉｉ）マヨナラを溶媒（例えば、水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、または、ブチレングリコール）によって抽出して抽出物を得、当該抽出物から溶媒を除去して得られる乾燥物をマヨナラエキスとしてもよいし、（ｉｉｉ）マヨナラを溶媒（例えば、水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、または、ブチレングリコール）によって抽出して抽出物を得、任意で当該抽出物から溶媒を除去して乾燥物を得た後、当該抽出物または当該乾燥物に、化粧品などに使用される所望の溶媒（例えば、水、エタノールおよびブチレングリコールからなる群から選択される少なくとも１つ）を加えたものをマヨナラエキスとしてもよい。

【0024】

マヨナラエキスは、様々な用途に用いられ、人体への安全性も確認されている。それ故に、本発明の一実施形態によれば、安全性の高いクローディン量の変動剤を実現することができる。

【0025】

本明細書中にて、「カプリロイルグリシン」とは、グリシン、および、オクタン酸より得られるグリシンのカプリル酸アミドを意図する。

【0026】

カプリロイルグリシンとしては、市販のカプリロイルグリシンを用いることも可能であるし、グリシン、および、オクタン酸から得たカプリロイルグリシンを用いることも可能である。グリシン、および、オクタン酸からカプリロイルグリシンを得る方法は、限定されず、公知の方法によって得ることができる。

【0027】

カプリロイルグリシンは、様々な用途に用いられ、人体への安全性も確認されている。それ故に、本発明の一実施形態によれば、安全性の高いクローディン量の変動剤を実現することができる。

【0028】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤は、当該クローディン量の変動剤中、マヨナラエキスを０．００５％（ｖ／ｖ）以上０．０８０％（ｖ／ｖ）以下含むことが好ましく、０．０１０％（ｖ／ｖ）以上０．０７５％（ｖ／ｖ）以下含むことがより好ましく、０．０２０％（ｖ／ｖ）以上０．０７０％（ｖ／ｖ）以下含むことがさらに好ましく、０．０２３％（ｖ／ｖ）以上０．０６０％（ｖ／ｖ）以下含むことが特に好ましい。当該構成によると、得られるクローディン量の変動剤は、クローディング量を十分に減少させるとともに、毒性も示さないという利点を有する。

【0029】

勿論、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤（例えば、液剤、ゲル剤、クリーム剤のもの）は、当該濃度にて、マヨナラエキスを含有するものであってもよい。当該構成であれば、タイトジャンクションを崩壊させることなく、細胞間隙をより良く発現させ得る。

【0030】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤は、当該クローディン量の変動剤中、カプリロイルグリシンを０．００５％（ｖ／ｖ）以上０．５００％（ｖ／ｖ）以下含むことが好ましく、０．０１０％（ｖ／ｖ）以上０．４５０％（ｖ／ｖ）以下含むことがより好ましく、０．０２０％（ｖ／ｖ）以上０．４００％（ｖ／ｖ）以下含むことがさらに好ましく、０．０２３％（ｖ／ｖ）以上０．３５０％（ｖ／ｖ）以下含むことが特に好ましい。当該構成によると、得られるクローディン量の変動剤は、クローディング量を十分に減少させるとともに、毒性も示さないという利点を有する。

【0031】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤が、カプリロイルグリシンを含有する場合、当該クローディン量の変動剤のｐＨは、４．０～８．０が好ましく、４．５～７．０がより好ましく、５．０～６．０がさらに好ましく、５．０～５．５が最も好ましい。

【0032】

勿論、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤（例えば、液剤、ゲル剤、クリーム剤のもの）は、当該濃度にて、カプリロイルグリシンを含有するものであってもよい。当該構成であれば、タイトジャンクションを崩壊させることなく、細胞間隙をより良く発現させ得る。

【0033】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤は、上述した有効成分以外の成分を含有していてもよい。

【0034】

有効成分以外の成分は、特に限定されず、例えば、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、防腐剤、抗酸化剤、高分子量重合体、賦形剤、溶媒、抗菌剤等であり得る。

【0035】

前記緩衝剤としては、例えば、リン酸またはリン酸塩、ホウ酸またはホウ酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、炭酸または炭酸塩、酒石酸または酒石酸塩、ε－アミノカプロン酸、トロメタモールが挙げられる。前記リン酸塩としては、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウムが挙げられる。前記ホウ酸塩としては、例えば、ホウ砂、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウムが挙げられる。前記クエン酸塩としては、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウムが挙げられる。前記酢酸塩としては、例えば、酢酸ナトリウム、酢酸カリウムが挙げられる。前記炭酸塩としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムが挙げられる。前記酒石酸塩としては、例えば、酒石酸ナトリウム、酒石酸カリウムが挙げられる。

【0036】

前記ｐＨ調整剤としては、例えば、塩酸、リン酸、クエン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが挙げられる。

【0037】

前記等張化剤としては、例えば、イオン性等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム）、非イオン性等張化剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトール）が挙げられる。

【0038】

前記防腐剤としては、例えば、ベンザルコニウム塩化物、ベンザルコニウム臭化物、ベンゼトニウム塩化物、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、クロロブタノールが挙げられる。

【0039】

前記抗酸化剤としては、例えば、アスコルビン酸、トコフェノール、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エリソルビン酸ナトリウム、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウムが挙げられる。

【0040】

前記高分子量重合体としては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、アテロコラーゲンが挙げられる。

【0041】

前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、デンプン、結晶セルロースが挙げられる。

【0042】

前記溶媒としては、例えば、水、生理的食塩水、アルコールが挙げられる。

【0043】

前記抗菌剤としては、例えば、β-ラクタム系、アミノグリコシド系、テトラサイクリン系、リンコマイシン系、クロラムフェニコール系、マクロライド系、ケトライド系、ポリペプチド系、グリコペプチド系の抗生物質；ピリドンカルボン酸（キノロン）系、ニューキノロン系、オキサゾリジノン系、サルファ剤系の合成抗菌薬が挙げられる。

【0044】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤に含有される有効成分以外の成分の量は、特に限定されず、例えば、変動剤を１００質量％とした場合に、０質量％～９９．９９９質量％であってもよく、０質量％～９９．９９質量％であってもよく、０質量％～９９．９質量％であってもよく、５質量％～９９．９質量％であってもよく、１０質量％～９９．９質量％であってもよく、２０質量％～９９．９質量％であってもよく、３０質量％～９９．９質量％であってもよく、４０質量％～９９．９質量％であってもよく、５０質量％～９９．９質量％であってもよく、６０質量％～９９．９質量％であってもよく、７０質量％～９９．９質量％であってもよく、８０質量％～９９．９質量％であってもよく、９０質量％～９９．９質量％であってもよい。

【0045】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤の剤型は、特に限定されず、例えば、外用剤（例えば、液剤、ゲル剤、クリーム剤、スティック剤、シート剤）、錠剤、粉末剤、顆粒剤が挙げられる。

【0046】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤の投与対象は、特に限定されず、例えば、ヒト、非ヒト動物（例えば、家畜、愛玩動物、および、実験動物）、これらから採取した組織、これらから採取した細胞、株化された細胞が挙げられる。前記非ヒト動物としては、特に限定されず、例えば、サル、チンパンジー、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、および、ラットが挙げられる。

【0047】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤の投与経路は、特に限定されず、例えば、非経口投与（例えば、経皮投与）、および、経口投与が挙げられる。

【0048】

本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤の対象への投与間隔は、特に限定されず、例えば、１時間に１回、１～６時間に１回、６～１２時間に１回、１２時間～１日あたり１回、１日～３日あたり一回、１日～５日あたり１回、１日～７日あたり１回、７日～１４日あたり１回、１４日～２１日あたり１回、１カ月あたり１回、２カ月あたり１回、３カ月あたり１回、４カ月あたり１回、５カ月あたり１回、６カ月あたり１回、または、１年あたり１回が挙げられる。

【0049】

〔２．タイトジャンクション緩和剤〕
本発明の一実施形態に係るタイトジャンクション緩和剤は、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有するものである。本発明の一実施形態に係るタイトジャンクション緩和剤は、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤を含有するもの、または、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤からなるものであってもよい。

【0050】

一実施形態において、前記クローディン量の変動剤は、クローディン量を変動させることができる。それ故に、本発明の一実施形態に係るタイトジャンクション緩和剤は、タイトジャンクションを崩壊させることなく、すなわち、バリア機能を完全に崩壊させずに、細胞間隙を生じさせ、有効成分の浸透性を上昇させることができる。

【0051】

前記クローディン量の変動剤、前記マヨナラエキス、および、前記カプリロイルグリシンについては、既に説明したので、ここではその説明を省略する。

【0052】

本発明の一実施形態に係るタイトジャンクション緩和剤の投与対象、投与経路、および、投与間隔は、特に限定されず、上述した本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤の投与対象、投与経路、および、投与間隔と同じであり得る。

【0053】

クローディンが、皮膚、および、タイトジャンクションにおいて重要な機能を担っていることが知られている。例えば、「Reitaro Tokumasu et al., "Time- and dose-dependent claudin contribution to biological functions : Lessons from claudin-1 in skin" Tissue Barriers, 2017, VOL.5, NO.3, e1336194」および「Nina Kirschner et al., "Contribution of Tight Junction Proteins to Ion, Macromolecule, and Water Barrier in Keratinocytes" Journal of Investigative Dermatology, 2013, 133, 1161-1169」には、クローディンが、皮膚において重要な機能を担っていることが示されている。一方、「Nana Marunaka et al., "Brazilian Green Propolis Rescues Oxidative Stress-Induced Mislocalization of Claudin-1 in Human Keratinocyte-Derived HaCat Cells" International Journal of Molecular Sciences, 2019, 20, 3869」には、クローディンが、タイトジャンクションにおいて重要な機能を担っていることが示されている。

【0054】

より具体的に、ＣＬＤ１は皮膚疾患と関連しており、ＣＬＤ１の減少はアトピー性皮膚炎の症状の進行・悪化に関与し、ＣＬＤ１の欠損は致死的な脱水、ならびに、イオンおよび高分子の傍細胞での浸透性の上昇をもたらし得ることが知られている。

【0055】

これらは、クローディン量の変動剤を、タイトジャンクション緩和剤、および、皮膚外用剤として用い得ることを示唆している。

【0056】

本発明の一実施形態に係るタイトジャンクション緩和剤は、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤と同じ有効成分（マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシン）を含んでいるので、効果的にタイトジャンクションを緩和することができる。

【0057】

〔３．皮膚外用剤〕
本発明の一実施形態に係る皮膚外用剤は、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤、および／または、タイトジャンクション緩和剤を含有するものである。本発明の一実施形態に係る皮膚外用剤は、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤、および／または、タイトジャンクション緩和剤からなるものであってもよい。

【0058】

前記クローディン量の変動剤、前記タイトジャンクション緩和剤、前記マヨナラエキス、および、前記カプリロイルグリシンについては、既に説明したので、ここではその説明を省略する。

【0059】

上述したように、クローディンが、皮膚、および、タイトジャンクションにおいて重要な機能を担っていることが知られている。これらは、クローディン量の変動剤を、タイトジャンクション緩和剤、および、皮膚外用剤として用い得ることを示唆している。

【0060】

本発明の一実施形態に係る皮膚外用剤は、本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤、および、本発明の一実施形態に係るタイトジャンクション緩和剤と同じ有効成分（マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシン）を含んでいるので、効果的に皮膚外用剤として用いることができる。

【0061】

本明細書において、「皮膚外用剤」とは、皮膚における病状の改善、スキンケア等を目的として、体外から直接皮膚へ供する物質を意図する。外用剤としては、特に限定されないが、例えば、化粧品、医薬品、医薬部外品等が挙げられる。

【0062】

前記皮膚外用剤の適用は、特に限定されることなく、当該技術分野で通常用いられる場合において使用される。

【0063】

前記化粧料の具体例としては、例えば、ボディーローション、デオドラント化粧料、化粧水、乳液、スキンケアクリーム、トニック、スティック化粧料、リップ、洗顔料、洗浄料、シート状化粧料、髭そり用化粧料、育毛剤が挙げられる。

【0064】

前記外用剤の剤型としては、特に限定されず、例えば、液剤、ゲル剤、クリーム剤、スティック剤、および、シート剤が挙げられる。前記ゲル剤のゲル化度は、用途によって異なり得るので、特に限定されない。

【0065】

前記外用剤が適用され得る皮膚としては、特に限定されず、例えば、頭、顔、首、腕、手、肘、脛、背中、胴、および、足が挙げられる。

【0066】

本発明の一実施形態に係る皮膚外用剤に含有される、有効成分（換言すれば、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシン）の量は、特に限定されず、例えば、外用剤を１００質量％とした場合に、０．００１質量％～１．０質量％であってもよく、０．０１質量％～０．８質量％であってもよく、０．１質量％～０．６質量％であってもよく、０．１質量％～０．４質量％であってもよく、０．１質量％～０．２質量％であってもよい。

【0067】

本発明の一実施形態に係る皮膚外用剤は、上述したクローディン量の変動剤、および／または、タイトジャンクション緩和剤以外の成分を含有していてもよい。当該「クローディン量の変動剤、および／または、タイトジャンクション緩和剤以外の成分」としては、特に限定されず、例えば、上述した〔１．クローディン量の変動剤〕にて説明した「有効成分以外の成分」が挙げられる。

【0068】

本発明の皮膚外用剤は、前記各構成成分を混合し、公知の方法（例えばパドルミキサー）を用いて攪拌することにより製造することができる。

【0069】

本発明の一実施形態に係る皮膚外用剤の投与対象、投与経路、および、投与間隔は、特に限定されず、上述した本発明の一実施形態に係るクローディン量の変動剤、および／または、タイトジャンクション緩和剤の投与対象、投与経路、および、投与間隔と同じであり得る。

【0070】

〔４．その他〕
本発明の一実施形態は、以下のように構成することもできる。

【0071】

＜１＞マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有するクローディン量の変動剤（例えば、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動剤）を被験体（例えば、ヒト、または、非ヒト動物（例えば、サル、チンパンジー、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、および、ラット））へ投与する工程を有する、クローディン量の変動方法（例えば、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動方法）。

【0072】

＜２＞クローディン１（ＣＬＤ１）の量を減少させる、＜１＞に記載のクローディン量の変動方法（例えば、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動方法）。

【0073】

＜３＞マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有するタイトジャンクション緩和剤を被験体（例えば、ヒト、または、非ヒト動物（例えば、サル、チンパンジー、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、および、ラット））へ投与する工程を有する、タイトジャンクションの緩和方法。

【0074】

＜４＞マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有するクローディン量の変動剤（例えば、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動剤）、および／または、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンを含有するタイトジャンクション緩和剤、を含有する、皮膚外用剤を被験体（例えば、ヒト、または、非ヒト動物（例えば、サル、チンパンジー、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、および、ラット））へ投与する工程を有する、皮膚処置方法。

【0075】

＜５＞クローディン量の変動剤（例えば、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動剤）を製造するための、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンの使用。

【0076】

＜６＞前記クローディン量の変動剤（例えば、タイトジャンクションにおけるクローディン量の変動剤）はクローディン１（ＣＬＤ１）の量を減少させるものである、＜５＞に記載の使用。

【0077】

＜７＞タイトジャンクション緩和剤を製造するための、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンの使用。

【0078】

＜８＞皮膚外用剤を製造するための、マヨナラエキスおよび／またはカプリロイルグリシンの使用。

【実施例0079】

以下に、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

【0080】

〔ＮＭＲによる一次スクリーニングの基本原理〕
タイトジャンクションは４回膜貫通型タンパク質であるクローディン（ＣＬＤ）と、膜裏打ちタンパク質であるＺＯ－１とが相互作用することで形成される。ＺＯ－１に存在するＰＤＺドメインに対する様々なサンプルの結合をＮＭＲにより観察することで、一次スクリーニングを行った。

【0081】

評価に使用したＰＤＺドメインは２種類である。一方は、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン（マウス由来の遺伝子情報をもとに作製した組換えタンパク質であって、ヒトと同一のアミノ酸配列を有する組換えタンパク質）であり、このＰＤＺドメインにサンプルが結合する場合、当該サンプルはタイトジャンクションを緩和すると期待できる。

【0082】

もう一方は、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメイン（マウス由来の遺伝子情報をもとに作製した組換えタンパク質であって、結合に重要なＰＤＺドメイン上のポケット表面を構成するアミノ酸についてはヒトと同一である組換えタンパク質）であり、このＰＤＺドメインにサンプルが結合する場合は、当該サンプルはタイトジャンクションを強化すると期待できる。

【0083】

試験にて得られるＮＭＲスペクトルは、タンパク質（ドメイン）を構成しているアミノ酸の主鎖アミド基、および、グルタミンやアスパラギンの側鎖アミノ基、を観測できるＮＭＲスペクトルである。各アミド基（アミノ基）は、それぞれ存在する磁気的環境に依存した化学シフトをもつため、各アミノ酸に由来する交差ピークとして現れる。

【0084】

サンプルの存在下でのＮＭＲスペクトルと、サンプルの非存在下でのＮＭＲスペクトルとを比較したときに、ＮＭＲスペクトルピークに変化が観察されない場合は、ＰＤＺドメインを構成しているアミド基（アミノ基）の磁気的環境に影響を与えなかった、すなわち、ＰＤＺドメインに結合する成分がサンプルには含まれていなかったことを意味する。

【0085】

サンプルの存在下でのＮＭＲスペクトルと、サンプルの非存在下でのＮＭＲスペクトルとを比較したときに、ＮＭＲスペクトルピークに変化が観察される場合は、ＰＤＺドメインを構成しているアミド基（アミノ基）の磁気的環境に影響を与えた、すなわち、ＰＤＺドメインに結合する成分がサンプルには含まれていたことを意味する。

【0086】

〔実施例１：サンプルｍｄ３に関する試験〕
（１．ＮＭＲによる一次スクリーニング）
１．０％のマヨナラエキス、４９．５％の１，３－ブチレングリコール（以下ＢＧと記載する）、および、４９．５％の精製水を混合し、サンプルｍｄ３を作製した。ＰＤＺドメインとして、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインを使用した。サンプルのバッファー条件は、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインについては、２０ｍＭのＭＥＳ（２－モルホリノエタンスルホン酸）－ＮａＯＨ（ｐＨ＝５．９）、および、１０％（ｖ／ｖ）のＤ_２Ｏとし、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインについては、２０ｍＭのＭＯＰＳ（３－モルフォリノプロパンスルホン酸）－ＮａＯＨ（ｐＨ＝６．８）、１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＭｇＳＯ_４、および、１０％（ｖ／ｖ）のＤ_２Ｏとした。５％濃度（ｖ／ｖ）となるようにサンプルｍｄ３を、バッファー中に混合し、ＮＭＲ装置（Ｂｒｕｋｅｒ社製、６００ ＭＨｚ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ クライオジェニックプローブ）を使用して、１Ｈ－１５Ｎ二次元相関スペクトルを測定し、マヨナラエキスのＰＤＺドメインへの結合評価を行った。

【0087】

結果を図１～図４、および、表１に示す。下記表１中、「〇」はサンプルがＰＤＺドメインに結合することを示し、「×」はサンプルがＰＤＺドメインに結合しないことを示す。マヨナラエキスを含有するｍｄ３の存在下では、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインを用いた場合にＮＭＲスペクトルピークに変化が認められた。すなわち、マヨナラエキスを含有するｍｄ３は、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインに結合することが分かった。

【表1】

（２．ヒト皮膚細胞を用いた二次スクリーニング）
（２－１．マヨナラエキスの濃度範囲の測定）
ＨａＣａＴ細胞を９６ウェルプレートに播種し、３～４日間に１回、培地Ａ（富士フイルム和光純薬製のＤ－ＭＥＭ（高グルコース）（Ｌ－グルタミン、フェノールレッド、ピルビン酸ナトリウム含有））を交換しながら、計９日間培養した。次いで、培地Ａに１．２ｍＭとなるようにカルシウムイオンを添加した培地Ｂに交換して細胞分化を誘導し、さらに５～６日間培養した。次に、２．５％、５％、１０％濃度（ｖ／ｖ）となるようにｍｄ３を添加した培地Ｂに交換して、１８時間培養した。その後、培地Ｂに１０％濃度（ｖ／ｖ）となるようにＷＳＴ－８試薬（同仁化学社製）を添加した培地Ｃへ交換した。ＷＳＴ－８ホルマザン増加による培地の着色を、プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）を使用して４５０ｎｍの光の吸収により測定し、細胞生育に影響が出ない、ｍｄ３の濃度範囲を決定した。

【0088】

結果を表２に示す。表２より、ｍｄ３について、１０％濃度（ｖ／ｖ）ではコントロールよりも低いミトコンドリア活性を示したことから、１０％濃度（ｖ／ｖ）では毒性であることが分かった。５％濃度（ｖ／ｖ）ではコントロールと同程度のミトコンドリア活性を示したことから、５％濃度（ｖ／ｖ）では毒性がないことが分かった。従って、ｍｄ３について、以下に記載の（２－２．ヒト皮膚細胞でのタイトジャンクション構成タンパク質の変化）の試験は、５％濃度（ｖ／ｖ）で行った。

【表2】

（２－２．ヒト皮膚細胞でのタイトジャンクション構成タンパク質の変化）
ＨａＣａＴ細胞を６ウェルプレートに播種し、３～４日間に１回、培地Ａを交換しながら、計１５日間培養した。次いで、培地Ｂに交換して細胞分化を誘導し、さらに３日間培養した。次に、培地を５％濃度（ｖ／ｖ）となるようにｍｄ３を添加した培地Ｂに交換し、１８時間培養した。得られた細胞を回収し、破砕し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより細胞由来のタンパク質を分離した。細胞由来のタンパク質を電気泳動させた後、ＰＶＤＦ膜へ転写し、一次抗体ＣＬＤ１、および、ＨＲＰ付二次抗体と反応させた。次いで、化学発光で検出し、ウェスタンブロッティング、および、抗体ブロッティングにより、ヒト皮膚細胞のタイトジャンクション構成タンパク質のクローディン量の変化を評価した。結果を図１７に示す。

【0089】

図１７より、ｍｄ３について、５％濃度（ｖ／ｖ）では、ＣＬＤ１が減少することが示された。従って、タイトジャンクションの構成成分を減少させるｍｄ３は、タイトジャンクションの緩和効果を有すると考えられる。なお、図１７において、各レーンは、左から順に「培地Ｂ」、「１０％ ＢＧ水溶液」、「５％ ｍｄ３」、「１０％ ｍｄ２４」の試験結果を示している。

【0090】

〔実施例２：サンプルｍｄ２４に関する試験〕
（１．ＮＭＲによる一次スクリーニング）
実施例１におけるマヨナラエキス、ＢＧ、および、精製水を、カプリロイルグリシン（ＳＥＰＰＩＣ社製）、水酸化カリウム、および、精製水に変更し、表１の配合比で混合してサンプルｍｄ２４を作製した。得られたサンプルｍｄ２４について、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインではサンプルｍｄ２４の濃度を５％濃度（ｖ／ｖ）、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインではサンプルｍｄ２４の濃度を１．０％濃度（ｖ／ｖ）で使用した以外は、実施例１と同様にして、溶液ＮＭＲによるＰＤＺドメインへの結合評価を行った。

【0091】

結果を図５～図８、および、表１に示す。カプリロイルグリシンを含有するｍｄ２４の存在下では、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインを用いた場合にＮＭＲスペクトルピークに変化が認められた。すなわち、カプリロイルグリシンを含有するｍｄ２４は、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインに結合することが分かった。

【0092】

（２．ヒト皮膚細胞を用いた二次スクリーニング）
（２－１．カプリロイルグリシンの濃度範囲の測定）
ｍｄ３をｍｄ２４に変更し、培地中のサンプルの濃度を２．５％、５％、１０％、２０％、３０％濃度（ｖ／ｖ）に変更した以外は、実施例１と同様にして、細胞生育に影響が出ない濃度範囲を決定した。

【0093】

結果を表２に示す。表２より、ｍｄ２４について、２．５％、５％、１０％、２０％、３０％濃度（ｖ／ｖ）の何れの濃度でもコントロールと同程度のミトコンドリア活性を示したことから、２．５％、５％、１０％、２０％、３０％濃度（ｖ／ｖ）の何れの濃度でも毒性がないことが分かった。以下に記載の（２－２．ヒト皮膚細胞でのタイトジャンクション構成タンパク質の変化）の試験は、１０％濃度（ｖ／ｖ）で行った。

【0094】

（２－２．ヒト皮膚細胞でのタイトジャンクション構成タンパク質の変化）
５％濃度（ｖ／ｖ）のｍｄ３を１０％濃度（ｖ／ｖ）のｍｄ２４に変更した以外は、実施例１と同様にしてヒト皮膚細胞を培養し、ヒト皮膚細胞でのタイトジャンクション構成タンパク質の変化をウェスタンブロッティングにより評価した。結果を図１７に示す。

【0095】

図１７より、ｍｄ２４について、１０％濃度（ｖ／ｖ）では、ＣＬＤ１が減少することが示された。従って、タイトジャンクションの構成成分を減少させるｍｄ２４は、タイトジャンクションの緩和効果を有すると考えられる。なお、図１７において、各レーンは、左から順に「培地Ｂ」、「１０％ ＢＧ水溶液」、「５％ ｍｄ３」、「１０％ ｍｄ２４」の試験結果を示している。

【0096】

〔比較例１：サンプルｍｄ１に関する試験〕
（１．ＮＭＲによる一次スクリーニング）
実施例１におけるマヨナラエキス、ＢＧ、および、精製水を、ビワ葉エキス、および、ＢＧに変更し、表１の配合比で混合してサンプルｍｄ１を作製した。５％濃度（ｖ／ｖ）のサンプルｍｄ１を使用して、溶液ＮＭＲによるＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインへの結合評価を行った。

【0097】

結果を図９～図１２、および、表１に示す。ｍｄ１の存在下では、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインの何れを用いた場合にもＮＭＲスペクトルピークに変化が認められなかった。すなわち、ｍｄ１は、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインとの結合を示さなかった。従って、二次スクリーニング以降の試験は行わなかった。

【0098】

〔比較例２：サンプルｍｄ２１に関する試験〕
（１．ＮＭＲによる一次スクリーニング）
実施例１においてマヨナラエキス、ＢＧ、および、精製水を、レスベラトロール、エタノール、および、精製水に変更し、表１の配合比で混合してサンプルｍｄ２１を作製した。得られたサンプルｍｄ２１について、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメインではサンプルｍｄ２１の濃度を５％濃度（ｖ／ｖ）、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインではサンプルｍｄ２１の濃度を１．０％濃度（ｖ／ｖ）で使用した以外は、実施例１と同様にして溶液ＮＭＲによるＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインへの結合評価を行った。

【0099】

結果を図１３～図１６、および、表１に示す。ｍｄ２１の存在下では、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインの何れを用いた場合にもＮＭＲスペクトルピークに変化が認められなかった。すなわち、ｍｄ２１は、ＺＯ－１ ＰＤＺ１ドメイン、および、ＬＮＸ－１ ＰＤＺ２ドメインとの結合を示さなかった。従って、二次スクリーニング以降の試験は行わなかった。

【産業上の利用可能性】

【0100】

本発明は、クローディン量の変動剤、タイトジャンクション緩和剤、および、それらを用いた皮膚外用剤に利用することができる。それゆえ、本発明は、化粧品、医薬品、または、医薬部外品として好適に利用することができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】