特開2024-73383脂質化合物またはその誘導体およびそれを用いる医薬組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024073383
(43)【公開日】2024-05-29
(54)【発明の名称】脂質化合物またはその誘導体およびそれを用いる医薬組成物
(51)【国際特許分類】
C07F 9/09 20060101AFI20240522BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20240522BHJP
A61K 47/28 20060101ALI20240522BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20240522BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240522BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20240522BHJP
A61K 47/14 20170101ALI20240522BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240522BHJP
C07F 9/53 20060101ALI20240522BHJP
A61P 43/00 20060101ALN20240522BHJP
A61K 9/14 20060101ALN20240522BHJP
A61K 9/127 20060101ALN20240522BHJP
【ＦＩ】
C07F9/09 U CSP
A61K31/7088
A61K47/28
A61K47/24
A61K47/10
A61K47/34
A61K47/14
A61K47/26
C07F9/53
A61P43/00 111
A61K9/14
A61K9/127
【審査請求】有
【請求項の数】18
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023193291
(22)【出願日】2023-11-13
(31)【優先権主張番号】63/425,040
(32)【優先日】2022-11-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/491,843
(32)【優先日】2023-03-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】112137888
(32)【優先日】2023-10-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】390023582
【氏名又は名称】財團法人工業技術研究院
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＤＵＳＴＲＩＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．１９５，Ｓｅｃ．４，ＣｈｕｎｇＨｓｉｎｇＲｄ．，Ｃｈｕｔｕｎｇ，Ｈｓｉｎｃｈｕ，Ｔａｉｗａｎ ３１０４０
(74)【代理人】
【識別番号】100149076
【弁理士】
【氏名又は名称】梅田 慎介
(74)【代理人】
【識別番号】100119183
【弁理士】
【氏名又は名称】松任谷 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100173185
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 裕
(74)【代理人】
【識別番号】100162503
【弁理士】
【氏名又は名称】今野 智介
(74)【代理人】
【識別番号】100144794
【弁理士】
【氏名又は名称】大木 信人
(74)【代理人】
【識別番号】100204582
【弁理士】
【氏名又は名称】大栗 由美
(72)【発明者】
【氏名】フェリス チェン
(72)【発明者】
【氏名】ピン－フ チェン
(72)【発明者】
【氏名】ジェン－ツァン ファン
(72)【発明者】
【氏名】チ－ウェイ フ
(72)【発明者】
【氏名】ク－フェン リン
(72)【発明者】
【氏名】ヤ－リン チウ
(72)【発明者】
【氏名】ジェン－シャン リ
(72)【発明者】
【氏名】カン－リ ワン
(72)【発明者】
【氏名】ショウ－ハン チャン
(72)【発明者】
【氏名】チア－ユ ファン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
4H050
【Ｆターム（参考）】
4C076AA19
4C076AA30
4C076AA95
4C076CC29
4C076DD09
4C076DD46
4C076DD63
4C076DD69
4C076DD70
4C076EE23
4C076FF16
4C076FF34
4C086AA03
4C086EA16
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA24
4C086MA41
4C086NA11
4C086NA13
4C086ZC02
4H050AA01
4H050AA03
4H050AB20
(57)【要約】 （修正有）
【課題】脂質化合物またはその誘導体およびそれを用いる医薬組成物を提供する。
【解決手段】式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物である。
（式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、Ｚ２は－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１であり、Ｚ３とＺ２とは同じであり、Ｚ４は－Ｑ３－Ａ３－Ｑ４－Ａ４－Ｘ２であり、Ｑ１およびＱ３の各々は独立に単結合、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－等、であり、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基等であり、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基等であり、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基等である。）
【選択図】なし
【解決手段】式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物である。
（式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、Ｚ２は－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１であり、Ｚ３とＺ２とは同じであり、Ｚ４は－Ｑ３－Ａ３－Ｑ４－Ａ４－Ｘ２であり、Ｑ１およびＱ３の各々は独立に単結合、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－等、であり、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基等であり、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基等であり、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基等である。）
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
脂質化合物またはその誘導体であって、前記脂質化合物が式（Ｉ）で示される構造を有する、脂質化合物またはその誘導体。
（式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、Ｚ２は－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１であり、Ｚ３とＺ２とは同じであり、Ｚ４は－Ｑ３－Ａ３－Ｑ４－Ａ４－Ｘ２であり、Ｑ１およびＱ３の各々は独立に単結合、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であり、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であり、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ１Ｒ２、
であり、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ７Ｒ８、
であり、Ｒ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ９－Ｑ７－Ｘ５であり、Ｒ２は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１０－Ｑ８－Ｘ６であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立に水素またはＣ１－Ｃ６アルキル基であり、Ｒ７は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１１－Ｑ９－Ｘ７であり、Ｒ８は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１２－Ｑ１０－Ｘ８であり、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１およびＡ１２の各々は独立にＣ１－Ｃ１２アルキレン基であり、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８、Ｑ９およびＱ１０の各々は独立に－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であり、かつＸ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８の各々は独立にＣ１－Ｃ２４アルキル基である。）
【化1】
（式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、Ｚ２は－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１であり、Ｚ３とＺ２とは同じであり、Ｚ４は－Ｑ３－Ａ３－Ｑ４－Ａ４－Ｘ２であり、Ｑ１およびＱ３の各々は独立に単結合、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
【化2】
であり、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であり、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ１Ｒ２、
【化3】
であり、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ７Ｒ８、
【化4】
であり、Ｒ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ９－Ｑ７－Ｘ５であり、Ｒ２は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１０－Ｑ８－Ｘ６であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立に水素またはＣ１－Ｃ６アルキル基であり、Ｒ７は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１１－Ｑ９－Ｘ７であり、Ｒ８は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１２－Ｑ１０－Ｘ８であり、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１およびＡ１２の各々は独立にＣ１－Ｃ１２アルキレン基であり、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８、Ｑ９およびＱ１０の各々は独立に－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
【化5】
であり、かつＸ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８の各々は独立にＣ１－Ｃ２４アルキル基である。）
【請求項2】
Ｑ１が単結合であり、Ｑ２が－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【化6】
である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項3】
Ｑ２が単結合であり、Ｑ１が－Ｏ－または－ＮＨ－である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項4】
Ｑ３が単結合であり、Ｑ４が－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【化7】
である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項5】
Ｑ４が単結合であり、そしてＱ３が－Ｏ－または－ＮＨ－である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項6】
Ａ３が単結合であり、Ａ４がＣ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項7】
Ａ４が単結合であり、Ａ３がＣ１－Ｃ６アルキレン基である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項8】
Ａ３が単結合であり、Ａ４が単結合であり、そしてＱ４が単結合であり、かつＱ３が－Ｏ－または－ＮＨ－である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項9】
Ｚ４とＺ２とが異なる、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項10】
Ｚ２、Ｚ３およびＺ４が同じである、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項11】
前記脂質化合物が下記のいずれかである、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【化8】
【請求項12】
前記脂質化合物の前記誘導体が、前記脂質化合物の薬学的に許容し得る塩、または前記脂質化合物の溶媒和物である、請求項１に記載の脂質化合物またはその誘導体。
【請求項13】
請求項１に記載の前記脂質化合物またはその誘導体と、
ステロールと、
を含む医薬組成物。
ステロールと、
を含む医薬組成物。
【請求項14】
前記ステロールが、コレステロール、コレステロールヘキサコハク酸塩（cholesterol hexasuccinate）、エルゴステロール、ラノステロール、またはこれらの組み合わせである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
補助脂質をさらに含み、前記補助脂質が、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１－パルミトイル２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、水素添加ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナトリウム塩）（ＤＭＰＧ）、スルホキノボシルジアシルグリセロール（ＳＱＤＧ）、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｌ－セリン（ＤＯＰＳ）、Ｌ－ａ－ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）またはこれらの組み合わせである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項16】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化脂質（polyethylene glycol（PEG）-ylated lipid）をさらに含み、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化脂質が、ポリエチレングリコール修飾ホスファチジルエタノールアミン、ポリエチレングリコール修飾ホスファチジン酸、ポリエチレングリコール修飾セラミド、ポリエチレングリコール修飾ジアルキルアミン、ポリエチレングリコール修飾ジアシルグリセロール、ポリエチレングリコール修飾ジアルキルグリセロール、ポリエチレングリコール修飾ステロール、ポリエチレングリコール修飾リン脂質またはこれらの組み合わせである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項17】
前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化脂質が、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロール－３－コハク酸塩－ポリエチレングリコール（ＤＰＧＳ－ＰＥＧ）、コレステリル－ポリエチレングリコール、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＯＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロール－メトキシポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロール－３－メトキシ－ポリエチレングリコール（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロール－メトキシ－ポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、α－［２－（ジテトラデシルアミノ）－２－オキソエチル］－ω－メトキシ－ポリ（オキシ－１，２－エタンジイル）またはこれらの組み合わせである、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項18】
核酸をさらに含み、前記核酸が、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、プラスミドＤＮＡ、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）、低分子干渉（small interfering）リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、低分子活性化（small activated）リボ核酸（ｓａＲＮＡ）、環状リボ核酸(circular ＲＮＡ）またはこれらの組み合わせである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本技術分野は、脂質化合物またはその誘導体およびそれを用いる医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
バイオテクノロジー産業では、核酸医薬のキーである脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）送達技術が開発の焦点となるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）ワクチンの成功により、核酸医薬分野の積極的な投資が促進されている。しかしながら、リボ核酸医薬は人体中で容易に分解されると共に負に帯電し、細胞膜を容易に通過することができないため、キャリアの補助を要し、キャリア中に被包して送達する必要がある。
【0003】
イオン化可能なカチオン性脂質は、現在、脂質ナノ粒子によく用いられているキャリアである。しかし、インビボで投与したときに、従来のイオン化可能なカチオン性脂質は重大な副作用をもたらし得る。すでに観察されている問題としては、ターゲットへの有効な送達のパーセンテージが低く、結果として治療効果が比較的に低くなる、または有効性が低くなるということが含まれる。また、キャリアとして脂質ナノ粒子に用いられるイオン化可能なカチオン性脂質は、キャリアに活性剤を配合することができ、投与時に活性剤を分解から防ぐことができ、かつキャリアがそのターゲットに到達したらすぐに活性剤が放出し得るように、特定のｐＨ値に調整する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
よって、本業界では、脂質－核酸送達システムを満足させることができる新規の脂質を開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本開示の一実施形態によれば、本開示は脂質化合物またはその誘導体を提供し、脂質化合物の誘導体は、脂質化合物の薬学的に許容し得る塩、または脂質化合物の溶媒和物であってよい。本開示の一実施形態によれば、脂質化合物は式（Ｉ）で示される構造を有する。
【0006】
【化1】
【0007】
式中、Ｚ１はＯまたはＳであり、Ｚ２は－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１であり、Ｚ３とＺ２とは同じであり、Ｚ４は－Ｑ３－Ａ３－Ｑ４－Ａ４－Ｘ２であり、Ｑ１およびＱ３の各々は独立に単結合、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であり、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であり、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ１Ｒ２、
であり、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ７Ｒ８、
であり、Ｒ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ９－Ｑ７－Ｘ５であり、Ｒ２は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１０－Ｑ８－Ｘ６であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立に水素またはＣ１－Ｃ６アルキル基であり、Ｒ７は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１１－Ｑ９－Ｘ７であり、Ｒ８は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１２－Ｑ１０－Ｘ８であり、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１およびＡ１２の各々は独立にＣ１－Ｃ１２アルキレン基であり、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８、Ｑ９およびＱ１０の各々は独立に－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であり、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８の各々は独立にＣ１－Ｃ２４アルキル基である。
【化2】
であり、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であり、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であり、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ１Ｒ２、
【化3】
であり、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ７Ｒ８、
【化4】
であり、Ｒ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ９－Ｑ７－Ｘ５であり、Ｒ２は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１０－Ｑ８－Ｘ６であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立に水素またはＣ１－Ｃ６アルキル基であり、Ｒ７は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１１－Ｑ９－Ｘ７であり、Ｒ８は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１２－Ｑ１０－Ｘ８であり、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１およびＡ１２の各々は独立にＣ１－Ｃ１２アルキレン基であり、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８、Ｑ９およびＱ１０の各々は独立に－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
【化5】
であり、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８の各々は独立にＣ１－Ｃ２４アルキル基である。
【0008】
本開示のいくつかの実施形態によれば、本開示は医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、本開示による上述した脂質化合物またはその誘導体と、補助脂質（helper lipid）とを含む。
【0009】
添付の図面を参照にしながら、以下の実施形態において詳細に説明する。
［図面の簡単な説明］
添付の図面を参照にしながら、以下の詳細な記載および実施例を読むことによって、本発明をより充分に理解することができる。
［図面の簡単な説明］
添付の図面を参照にしながら、以下の詳細な記載および実施例を読むことによって、本発明をより充分に理解することができる。
【0010】
なし。
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下の詳細な記載においては、説明の目的で、開示される実施形態が完全に理解されるよう、多数の特定の詳細が示される。しかしながら、これらの特定の詳細がなくとも、１つまたはそれ以上の実施形態が実施可能であるということは明らかであろう。また、図を簡潔とするため、周知の構造および装置は概略的に示されている。
【0012】
下記は、本開示に記載される脂質化合物またはその誘導体およびそれを用いる医薬組成物に関する。以下の記載は、本開示を実施するために多くの異なる実施形態または実施例を提供するものである、ということが理解されなければならない。以下に記載された特定の成分および構成は単に本開示を記述しているに過ぎない。当然に、これらは単なる例であり、本開示を限定するものではない。本開示において、「約」という語は、特定の量が、当業者が一般的に合理的であると認める量だけ増加または減少することを意味する。
【0013】
本開示は脂質化合物またはその誘導体を提供する。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される脂質化合物は、その主要コアが５価リンであり、かつ１から３個のイオン化可能な第３級アミン基を含み得る特定の構造を有するイオン化可能なカチオン性リン脂質である。本開示に記載される脂質化合物はインビボでより容易に代謝され、かつより毒性が低い。本開示に記載される脂質化合物またはその誘導体は酸性環境で正に帯電し得るため、負に帯電した核酸を吸着して脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成することができる。加えて、本開示は、本開示に記載される脂質化合物またはその誘導体を含む医薬組成物も提供する。本開示に記載される脂質化合物またはその誘導体を有することによって、本開示に記載される医薬組成物は、リボ核酸（ＲＮＡ）および／またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）をカプセル化する脂質ナノ粒子（ＬＮＰｓ）を形成することができるため、例えばリボ核酸（ＲＮＡ）および／またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の保護といった目的が達成され、その分解速度が低減されると共に、細胞のトランスフェクション効率が改善される。
【0014】
本開示の一実施形態によれば、本開示により提供される脂質化合物は、式（Ｉ）で示される構造を有する。
【0015】
【化6】
【0016】
式中、Ｚ１はＯまたはＳであってよく、Ｚ２は－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１であってよく、Ｚ３とＺ２とは同じであり、Ｚ４は－Ｑ３－Ａ３－Ｑ４－Ａ４－Ｘ２であってよく、Ｑ１およびＱ３の各々は独立に単結合、－Ｏ－または－ＮＨ－であってよく、
Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であってよく、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であってよく、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であってよく、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であってよく、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ１Ｒ２、
であってよく、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ７Ｒ８、
であってよく、Ｒ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ９－Ｑ７－Ｘ５であってよく、Ｒ２は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１０－Ｑ８－Ｘ６であってよく、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立に水素またはＣ１－Ｃ６アルキル基であってよく、Ｒ７は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１１－Ｑ９－Ｘ７であってよく、Ｒ８は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１２－Ｑ１０－Ｘ８であってよく、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１およびＡ１２の各々は独立にＣ１－Ｃ１２アルキレン基であってよく、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８、Ｑ９およびＱ１０の各々は独立に－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であってよく、かつＸ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８の各々は独立にＣ１－Ｃ２４アルキル基であってよい。
Ｑ２およびＱ４の各々は独立に単結合、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
【化7】
であってよく、Ａ１はＣ１－Ｃ６アルキレン基であってよく、Ａ３は単結合またはＣ１－Ｃ６アルキレン基であってよく、Ａ２およびＡ４の各々は独立に単結合、Ｃ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であってよく、Ｘ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ１Ｒ２、
【化8】
であってよく、Ｘ２は水素、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基、－ＮＲ７Ｒ８、
【化9】
であってよく、Ｒ１は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ９－Ｑ７－Ｘ５であってよく、Ｒ２は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１０－Ｑ８－Ｘ６であってよく、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の各々は独立に水素またはＣ１－Ｃ６アルキル基であってよく、Ｒ７は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１１－Ｑ９－Ｘ７であってよく、Ｒ８は水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル基、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ２４アルカノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルケノール基、Ｃ２－Ｃ２４アルキノール基または－Ａ１２－Ｑ１０－Ｘ８であってよく、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１およびＡ１２の各々は独立にＣ１－Ｃ１２アルキレン基であってよく、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８、Ｑ９およびＱ１０の各々は独立に－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
【化10】
であってよく、かつＸ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８の各々は独立にＣ１－Ｃ２４アルキル基であってよい。
【0017】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される脂質化合物の誘導体は、薬学的に許容し得る脂質化合物の塩または脂質化合物の溶媒和物であってよい。
【0018】
本開示の一実施形態によれば、薬学的に許容し得る脂質化合物の塩は、脂質化合物を薬学的に許容し得る酸と反応させることによって形成され得る。ここで、薬学的に許容し得る塩には、脂質化合物および無機酸、例えば塩酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、スルフィナート、または硝酸塩により形成される塩が含まれる。本開示の一実施形態によれば、薬学的に許容し得る塩には、脂質化合物および有機酸、例えば乳酸塩、シュウ酸塩,リンゴ酸塩,マレイン酸塩,フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩,乳酸塩、スルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アミノ酸塩、または酢酸塩により形成される塩が含まれる。加えて、薬学的に許容し得るカチオンには、限定はされないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウムが含まれる。
【0019】
本開示の一実施形態によれば、脂質化合物の溶媒和物には、脂質化合物の水和物または脂質化合物のアルコラートが含まれる。
【0020】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される単結合とは、該当する部位に単一原子が存在しないことを指す。例えば、Ｚ２が－Ｑ１－Ａ１－Ｑ２－Ａ２－Ｘ１である構造において、Ｑ２が単結合である場合、Ｑ２で表される部位に単独の原子は存在せず、かつＡ１およびＡ２が直接連結して、Ｚ２が－Ｑ１－Ａ１－Ａ２－Ｘ１の構造となっている。
【0021】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルキル基は直鎖または分岐鎖のアルキル基であってよい。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルケニル基は直鎖または分岐鎖のアルケニル基であってよく、かつ少なくとも１つの炭素-炭素二重結合を含み得る。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルキニル基は直鎖または分岐鎖のアルキニル基であってよく、かつ少なくとも１つの炭素-炭素三重結合を含み得る。
【0022】
例えば、Ｃ１－Ｃ２４アルキルはメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシルまたはその異性体であってよい。
【0023】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルカノール基は直鎖または分岐鎖のアルカノール基であってよい。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルケノール基は直鎖または分岐鎖のアルケノール基であってよく、かつ少なくとも１つの炭素-炭素二重結合を含み得る。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルキノール基は直鎖または分岐鎖のアルキニル基であってよく、かつ少なくとも１つの炭素-炭素三重結合を含み得る。ここで、用語「アルカノール基」とは、その炭素における水素の少なくとも１つが水酸基で置換されているアルキル基を指す。用語「アルケノール基」とは、その炭素における水素の少なくとも１つが水酸基で置換されているアルケニル基を指す。用語「アルキノール基」とは、その炭素における水素の少なくとも１つが水酸基で置換されているアルキニル基を指す。加えて、本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるＣ６－Ｃ１２アリール基はフェニル、ビフェニルまたはナフチルであってよい。
【0024】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルキレン基は直鎖または分岐鎖のアルキレン基であってよい。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルケニレン基は直鎖または分岐鎖のアルケニレン基であってよい。本開示の一実施形態によれば、本開示に記載されるアルキニレン基は直鎖または分岐鎖のアルキニレン基であってよい。
【0025】
例えば、Ｃ１－Ｃ２４アルキレン基は、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、ヘキシレン基またはその異性体であってよい。
【0026】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物において、Ｚ４はＺ２とは異なる（つまり、Ｚ４はＺ３とは異なる）。
【0027】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物において、Ｚ２、Ｚ３およびZ4は同じである。
【0028】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物において、Ｑ１およびＱ２は同時に単結合にはならない。換言すると、Ｑ１が単結合であるとき、Ｑ２は単結合ではなく、かつＱ２が単結合であるとき、Ｑ１は単結合ではない。
【0029】
本開示の一実施形態によれば、Ｑ１は単結合であり、かつＱ２は－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であってよい。
【化11】
であってよい。
【0030】
本開示の一実施形態によれば、Ｑ２は単結合であり、かつＱ１は－Ｏ－または－ＮＨ－であってよい。
【0031】
本開示の一実施形態によれば、Ｑ１は－Ｏ－または－ＮＨ－であってよく、かつＱ２は－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であってよい。
【化12】
であってよい。
【0032】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物において、Ｑ３およびＱ４は同時に単結合にはならない。換言すると、Ｑ３が単結合であるとき、Ｑ４は単結合ではなく、かつＱ４が単結合であるとき、Ｑ３は単結合ではない。
【0033】
本開示の一実施形態によれば、Ｑ３は単結合であり、かつＱ４は－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であってよい。
【化13】
であってよい。
【0034】
本開示の一実施形態によれば、Ｑ４は単結合であり、かつＱ３は－Ｏ－または－ＮＨ－であってよい。
【0035】
本開示の一実施形態によれば、Ｑ３は－Ｏ－または－ＮＨ－であってよく、Ｑ４は－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－Ｓ－、
であってよく、かつＡ３は単結合ではない。
【化14】
であってよく、かつＡ３は単結合ではない。
【0036】
本開示の一実施形態によれば、Ａ２がＣ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基であるとき、Ｑ２は単結合ではない。
【0037】
本開示の一実施形態によれば、Ａ３が単結合であるとき、Ａ４はＣ１－Ｃ１２アルキレン基、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレン基またはＣ２－Ｃ１２アルキニレン基である。
【0038】
本開示の一実施形態によれば、Ａ４が単結合であるとき、Ａ３はＣ１－Ｃ６アルキレン基である。
【0039】
本開示の一実施形態によれば、Ａ３が単結合であり、かつＡ４が単結合であるとき、Ｑ３は－Ｏ－または－ＮＨ－である。
【0040】
本開示の一実施形態によれば、本開示に記載される式（Ｉ）で示される構造を有する脂質化合物は次のいずれかであってよい。
【0041】
【化15】
【0042】
式中、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｘ１およびＸ２の定義は上述と同じである。
【0043】
本開示の一実施形態によれば、本開示は医薬組成物、例えば脂質ナノ粒子組成物も提供する。本開示の一実施形態によれば、医薬組成物は、本開示に記載される脂質化合物またはその誘導体と、ステロールとを含む。
【0044】
本開示の一実施形態によれば、医薬組成物中、脂質化合物（および／またはその誘導体）は１００モル部であり、かつステロールの含有量は５０から３００モル部、例えば６０モル部、８０モル部、１００モル部、１２０モル部、１５０モル部、１８０モル部、２００モル部、２３０モル部、２５０モル部または２８０モル部であってよい。本開示の一実施形態によれば、ステロールは、コレステロール、コレステロールヘキサコハク酸塩（cholesterol hexasuccinate）、エルゴステロール、ラノステロール、またはこれらの組み合わせであってよい。
【0045】
本開示の一実施形態によれば、医薬組成物は補助脂質をさらに含んでいてよく、補助脂質は５から２００モル部、例えば６モル部、８モル部、１０モル部、２０モル部、３０モル部、５０モル部、７５モル部、１００モル部、１２０モル部、１５０モル部、１７０モル部または１９０モル部であってよい。
【0046】
本開示の一実施形態によれば、補助脂質は、１、２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１、２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１－パルミトイル２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、水素添加ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナトリウム塩）（ＤＭＰＧ）、スルホキノボシルジアシルグリセロール（ＳＱＤＧ）、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｌ－セリン（ＤＯＰＳ）、Ｌ－ａ－ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）またはこれらの組み合わせであってよい。
【0047】
本開示の一実施形態によれば、医薬組成物は、ポリエチレン（ＰＥＧ）化脂質（polyethylene glycol (PEG)-ylated lipid）をさらに含んでいてよく、ＰＥＧ化脂質の含有量は１から３０モル部、例えば２モル部、３モル部、４モル部、５モル部、６モル部、７モル部、８モル部、９モル部、１０モル部、１１モル部、１２モル部、１３モル部、１４モル部、１５モル部、１６モル部、１７モル部、１８モル部、１９モル部、２０モル部、２１モル部、２２モル部、２３モル部、２４モル部、２５モル部、２６モル部、２７モル部、２８モル部または２９モル部であってよい。
【0048】
本開示の一実施形態によれば、ＰＥＧ化脂質は、ポリエチレングリコール修飾ホスファチジルエタノールアミン、ポリエチレングリコール修飾ホスファチジン酸、 ポリエチレングリコール修飾セラミド、ポリエチレングリコール修飾ジアルキルアミン、ポリエチレングリコール修飾ジアシルグリセロール、ポリエチレングリコール修飾ジアルキルグリセロール、ポリエチレングリコール修飾ステロール、ポリエチレングリコール修飾リン脂質またはこれらの組み合わせであってよい。
【0049】
本開示の一実施形態によれば、ＰＥＧ化脂質は１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロール－３－コハク酸塩－ポリエチレングリコール（ＤＰＧＳ－ＰＥＧ）、コレステリル－ポリエチレングリコール、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール（ＤＯＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロール－メトキシポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロール－３－メトキシ－ポリエチレングリコール（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロール－メトキシ－ポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、α－［２－（ジテトラデシルアミノ）－２－オキソエチル］－ω－メトキシ－ポリ（オキシ－１，２－エタンジイル）（ＡＬＣ－０１５９）またはこれらの組み合わせであってよい。
【0050】
本開示の一実施形態によれば、医薬組成物は核酸をさらに含んでいてよく、核酸の含有量は０．１から３０モル部、例えば０．２モル部、０．５モル部、１モル部、１．５モル部、２モル部、３モル部、４モル部、５モル部、６モル部、７モル部、８モル部、９モル部、１０モル部、１１モル部、１２モル部、１３モル部、１４モル部、１５モル部、１６モル部、１７モルモル部、１８モル部、１９モル部、２０モル部、２１モル部、２２モル部、２３モル部、２４モル部、２５モル部、２６モル部、２７モル部、２８モル部または２９モル部であってよい。
【0051】
本開示の一実施形態によれば、核酸は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、プラスミドＤＮＡ、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）、低分子干渉（small interfering）リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、低分子活性化（small activated）リボ核酸（ｓａＲＮＡ）、環状リボ核酸(circular ＲＮＡ）またはこれらの組み合わせであってよい。
【0052】
上述した本開示の内容および他の目的、特徴ならびに長所をより明らかかつ理解可能とするよう、例示的な実施例を以下に示し、詳細に説明するが、本開示はこれに限定されない。
【0053】
脂質化合物
本開示の実施例において記載される脂質化合物が表１に挙げられている。
本開示の実施例において記載される脂質化合物が表１に挙げられている。
【0054】
【表1】
【0055】
本開示に記載される脂質化合物の作製方法をさらに詳しく説明するため、実施例１～３、６～１５、１８および１９に記載される脂質化合物の作製プロセスを以下に示して説明する。
【0056】
実施例１
化合物（１）（２当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．１Ｍ）を得た。次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）溶液（テトラヒドロフラン中に溶解。濃度は１．０Ｍ、ＬｉＨＭＤＳは３当量とした）をその反応フラスコに加えた。室温で１時間撹拌して反応させた後、化合物（２）（１当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。反応が完了した後、得られたものを濃縮し、ｎ－ヘキサンおよび塩水で抽出した。その有機相を収集した後、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で水を除去し、溶媒を除去し、得られたものを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製し、脂質化合物（１）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（１）（２当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．１Ｍ）を得た。次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）溶液（テトラヒドロフラン中に溶解。濃度は１．０Ｍ、ＬｉＨＭＤＳは３当量とした）をその反応フラスコに加えた。室温で１時間撹拌して反応させた後、化合物（２）（１当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。反応が完了した後、得られたものを濃縮し、ｎ－ヘキサンおよび塩水で抽出した。その有機相を収集した後、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で水を除去し、溶媒を除去し、得られたものを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製し、脂質化合物（１）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0057】
【化16】
【0058】
次いで、実施例１において記載された脂質化合物（１）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．４８（ｓ，４Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝７．０，７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｓ，４Ｈ），３．０９（ｍ，９Ｈ），１．６８（ｓ，９Ｈ），１．３６－１．２６（ｍ，５５Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０，７．０Ｈｚ，１２Ｈ）。その後、脂質化合物（１）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７１８．７。
【0059】
実施例２
化合物（１）（２．５当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．１Ｍ）を得た。次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）溶液（テトラヒドロフラン中に溶解。濃度は１．０Ｍ、ＬｉＨＭＤＳは３当量とした）をその反応フラスコに加えた。室温で１時間撹拌して反応させた後、化合物（３）（１当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。反応が完了した後、得られたものを濃縮し、ｎ－ヘキサンおよび塩水で抽出した。その有機相を収集した後、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で水を除去し、溶媒を除去し、得られたものを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製し、脂質化合物（２）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（１）（２．５当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．１Ｍ）を得た。次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）溶液（テトラヒドロフラン中に溶解。濃度は１．０Ｍ、ＬｉＨＭＤＳは３当量とした）をその反応フラスコに加えた。室温で１時間撹拌して反応させた後、化合物（３）（１当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。反応が完了した後、得られたものを濃縮し、ｎ－ヘキサンおよび塩水で抽出した。その有機相を収集した後、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で水を除去し、溶媒を除去し、得られたものを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製し、脂質化合物（２）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0060】
【化17】
【0061】
次いで、実施例２において記載された脂質化合物（２）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．４２（ｓ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），４．１０－４．０９（ｍ，２Ｈ），３．７３（ｓ，４Ｈ），３．４７－３．４３（ｍ，２Ｈ），３．３２－３．３０（ｍ，４Ｈ），３．１１－３．０４（ｍ，８Ｈ），１．６７（ｓ，１２Ｈ），１．３２－１．２５（ｍ，７７Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．５，７．５Ｈｚ，１８Ｈ）。その後、脂質化合物（２）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９８６．１。
【0062】
実施例３
化合物（４）（２当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．１Ｍ）を得た。次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）溶液（テトラヒドロフラン中に溶解。濃度は１．０Ｍ、ＬｉＨＭＤＳは３当量とした）をその反応フラスコに加えた。室温で１時間撹拌して反応させた後、化合物（２）（１当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。反応が完了した後、得られたものを濃縮し、ｎ－ヘキサンおよび塩水で抽出した。その有機相を収集した後、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で水を除去し、溶媒を除去し、得られたものを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製し、脂質化合物（３）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（４）（２当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．１Ｍ）を得た。次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）溶液（テトラヒドロフラン中に溶解。濃度は１．０Ｍ、ＬｉＨＭＤＳは３当量とした）をその反応フラスコに加えた。室温で１時間撹拌して反応させた後、化合物（２）（１当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。反応が完了した後、得られたものを濃縮し、ｎ－ヘキサンおよび塩水で抽出した。その有機相を収集した後、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で水を除去し、溶媒を除去し、得られたものを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製し、脂質化合物（３）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0063】
【化18】
【0064】
次いで、実施例３において記載された脂質化合物（３）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：４．１３（ｔ，Ｊ＝６．５，７．５Ｈｚ，６Ｈ），３．１９（ｓ，４Ｈ），３．０３－３．０２（ｍ，８Ｈ），２．１７－２．１４（ｍ，１１Ｈ），１．６７（ｓ，８Ｈ），１．３５－１．２６（ｍ，５２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０，６．５Ｈｚ，１２Ｈ）。その後、脂質化合物（３）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４６．５。
【0065】
実施例６
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（６）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（６）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（６）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（６）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0066】
【化19】
【0067】
次いで、実施例６に記載された脂質化合物（６）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１０．６２（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），３．０９－３．０６（ｍ，４Ｈ），２．５４－２．５６（ｍ，２Ｈ），２．１１－２．１３（ｍ，４Ｈ），１．６３（ｓ，１２Ｈ），１．３２－１．２６（ｍ，７７Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．５，７．５Ｈｚ，１８Ｈ）。その後、脂質化合物（６）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１５１．３。
【0068】
実施例７
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（７）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（７）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（７）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（７）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0069】
【化20】
【0070】
次いで、実施例７において記載された脂質化合物（７）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９８（ｓ，３Ｈ），４．４９（ｓ，７Ｈ），３．２１（ｓ，６Ｈ），３．１０－２．８（ｍ，１８Ｈ），２．４８（ｓ，５Ｈ），２．０７（ｓ，５Ｈ），１．８０－１．４０（ｍ，２６Ｈ），１．４０－１．１０（ｍ，７８Ｈ），０．８４（ｔ，Ｊ＝６．０，７．０Ｈｚ，１８Ｈ）。その後、脂質化合物（７）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２３５．５。
【0071】
実施例８
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（８）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（８）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（８）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（８）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0072】
【化21】
【0073】
次いで、実施例８において記載された脂質化合物（８）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１１．５２（ｓ，１Ｈ），５．５７（ｓ，１Ｈ），３．１８（ｓ，７Ｈ），２．３０（ｓ，１０Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，４Ｈ），１．６７－１．６５（ｍ，１１Ｈ），１．３４－１．２５（ｍ，５１Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝２．０，５．５Ｈｚ，９Ｈ）。その後、脂質化合物（８）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３１９．６。
【0074】
実施例９
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（３当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（７）（４当量）および化合物（９）（１当量）を滴下してその反応フラスコに加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（９）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（３当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（７）（４当量）および化合物（９）（１当量）を滴下してその反応フラスコに加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（９）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0075】
【化22】
【0076】
次いで、実施例９において記載された脂質化合物（９）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１０．８４（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），３．３３－３．２４（ｍ，６Ｈ），３．０４－２．９９（ｍ，１６Ｈ），２．８１（ｓ，１Ｈ），２．５３（ｓ，４Ｈ），２．１１（ｓ，４Ｈ），１．７６－１．５６（ｍ，１２Ｈ），１．３３－１．２７（ｍ，３８Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，７．５Ｈｚ，９Ｈ）。その後、脂質化合物（９）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９５５．８。
【0077】
実施例１０
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１０）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１０）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１０）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１０）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0078】
【化23】
【0079】
次いで、実施例１０において記載された脂質化合物（１０）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．７９（ｓ，１Ｈ），３．７０－３．６８（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．３８（ｓ，２Ｈ），３．２３－３．０３（ｍ，９Ｈ），２．６０－２．５７（ｍ，１６Ｈ），２．１６－２．０２（ｍ，５Ｈ），１．６３（ｓ，６Ｈ），１．５０（ｔ，Ｊ＝７．０，７．５Ｈｚ，１Ｈ），１．３３－１．２７（ｍ，３９Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．５，７．０Ｈｚ，９Ｈ）。その後、脂質化合物（１０）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０２４．８。
【0080】
実施例１１
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（３当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（６）（４当量）および化合物（９）（１当量）を滴下してその反応フラスコに加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１１）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（３当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（６）（４当量）および化合物（９）（１当量）を滴下してその反応フラスコに加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１１）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0081】
【化24】
【0082】
次いで、実施例１１において記載された脂質化合物（１１）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．７９（ｓ，１Ｈ），３．７０－３．６８（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．３８（ｓ，２Ｈ），３．２３－３．０３（ｍ，９Ｈ），２．６０－２．５７（ｍ，１６Ｈ），２．１６－２．０２（ｍ，５Ｈ），１．６３（ｓ，６Ｈ），１．５０（ｔ，Ｊ＝７．０，７．５Ｈｚ，１Ｈ），１．３３－１．２７（ｍ，３９Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．５，７．０Ｈｚ，９Ｈ）。その後、脂質化合物（１１）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８９９．７。
【0083】
実施例１２
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１１）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１２）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１１）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１２）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0084】
【化25】
【0085】
次いで、実施例１２において記載された脂質化合物（１２）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．５０（ｓ，２Ｈ），６．４６（ｓ，５Ｈ），４．１０－３．９０（ｍ，３Ｈ），３．９０－３．０（ｍ，１３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），１．６０－１．２０（ｍ，６１Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，７．５Ｈｚ，１０Ｈ）。その後、脂質化合物（１２）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４９９．４。
【0086】
実施例１３
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１２）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１３）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１２）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１３）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0087】
【化26】
【0088】
次いで、実施例１３において記載された脂質化合物（１３）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１０．６８（ｓ，２Ｈ），８．７８（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，５Ｈ），３．４５－３．２０（ｍ，１２Ｈ），３．２０－３．０（ｍ，１１Ｈ），２．６０－２．４０（ｍ，５Ｈ），２．２０－２．０（ｍ，５Ｈ），１．８０－１．４５（ｍ，１０Ｈ），１．４０－１．２０（ｍ，３２Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１５Ｈ）。その後、脂質化合物（１３）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８９８．８。
【0089】
実施例１４
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１３）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１４）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１３）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１４）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0090】
【化27】
【0091】
次いで、実施例１４において記載された脂質化合物（１４）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１０．６７（ｓ，２Ｈ），８．７５（ｓ，２Ｈ），４．２５－４．０（ｍ，５Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ），３．２５－３．２０（ｍ，４Ｈ），３．２０－３．０（ｍ，９Ｈ），２．６５－２．４５（ｍ，４Ｈ），２．２５－２．１５（ｍ，４Ｈ），１．８０－１．６０（ｍ，９Ｈ），１．４５－１．２０（ｍ，４４Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．０，７．５Ｈｚ，１２Ｈ）。その後、脂質化合物（１４）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０６７。
【0092】
実施例１５
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１４）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１５）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１４）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１５）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0093】
【化28】
【0094】
次いで、実施例１５において記載された脂質化合物（１５）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１０．７７（ｓ，２Ｈ），８．８０（ｓ，２Ｈ），３．６２－３．５０（ｍ，７Ｈ），３．３０－３．２０（ｍ，５Ｈ），３．２０－３．０（ｍ，１１Ｈ），２．６０－２．５０（ｍ，５Ｈ），２．２０－２．０（ｍ，５Ｈ），１．８０－１．５０（ｍ，１１Ｈ），１．５０－１．２０（ｍ，４０Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝５．０，７．０Ｈｚ，１４Ｈ）。その後、脂質化合物（１５）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９８２．８。
【0095】
実施例１８
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１５）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１８）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１５）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１８）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0096】
【化29】
【0097】
次いで、実施例１８において記載された脂質化合物（１８）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．６６（ｓ，２Ｈ），４．６０－３．９０（ｍ，１３Ｈ），３．９０－３．０（ｍ，９Ｈ），２．７０－２．４０（ｍ，４Ｈ），２．３０－２．０（ｍ，４Ｈ），１．７０－１．２０（ｍ，４５Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．０，７．０Ｈｚ，１３Ｈ）。その後、脂質化合物（１８）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８６４．３。
【0098】
実施例１９
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１６）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１９）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（５）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０４Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１６）（４当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。８時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（１９）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0099】
【化30】
【0100】
次いで、実施例１９において記載された脂質化合物（１９）を核磁気共鳴分光により分析した。得られたスペクトル情報を以下に示す：１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．６３（ｓ，２Ｈ），４．７０－３．９０（ｍ，１２Ｈ），３．９０－３．０（ｍ，１７Ｈ），２．７０－２．５０（ｍ，４Ｈ），２．３０－２．１０（ｍ，４Ｈ），１．６０－１．２０（ｍ，４８Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，７．５Ｈｚ，１１Ｈ）。その後、脂質化合物（１９）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２４７．１。
【0101】
実施例２３
化合物（２３ａ）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１７）（２．５当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。１２時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（２３）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（２３ａ）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１７）（２．５当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。１２時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（２３）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0102】
【化31】
【0103】
次いで、実施例２３において記載された脂質化合物（２３）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１４７．６。
【0104】
実施例２４
化合物（２４ａ）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１８）（２．５当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。１６時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（２４）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
化合物（２４ａ）（１当量）およびジクロロメタンを窒素下で反応フラスコに加えて溶液（濃度：０．０５Ｍ）を得た。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４当量）およびＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イル－メチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）（４当量）をその反応フラスコに加えた。室温で１０分撹拌して反応させた後、化合物（１８）（２．５当量）をその反応フラスコに滴下して加えた。１６時間反応させた後、その反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（アセトニトリルおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液（濃度は０．１％とした）を溶離液として使用）で精製して、脂質化合物（２４）を得た。上述した反応の反応式は以下のとおりである。
【0105】
【化32】
【0106】
次いで、実施例２４において記載された脂質化合物（２４）を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析し、Ｍ／Ｚを測定した：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１７５．７。
【0107】
組成物の作製
【0108】
実施例３５
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（製品番号R1018、APExBIOより購入)を酸性緩衝剤(製品番号J63669、Alfa Aesarより購入)（ｐＨ値４．５）中に溶解し、核酸水溶液（濃度：０．１ｍｇ／ｍＬ）を得た。
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（製品番号R1018、APExBIOより購入)を酸性緩衝剤(製品番号J63669、Alfa Aesarより購入)（ｐＨ値４．５）中に溶解し、核酸水溶液（濃度：０．１ｍｇ／ｍＬ）を得た。
【0109】
実施例１で作製された脂質化合物（１）、コレステロール、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、およびＤＭＧ－ＰＥＧ脂質（１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール）（製品番号：DMG-PEG-2K、Nippon Fine Chemicalより購入)をエタノール中に溶解し、脂質溶液(濃度：１０～１５ｍｇ／ｍＬ）を得た。脂質化合物（１）、コレステロール、ＤＳＰＣおよびＤＭＧ－ＰＥＧ脂質の含有量を表２に示す。
【0110】
次いで、核酸水溶液と脂質溶液とをマイクロ流体システム(NanoAssemblr Ignite system、Precision NanoSystem Inc.より購入)によって混合し、核酸水溶液および脂質溶液の体積を、脂質化合物（１）の窒素原子（Ｎ）とルシフェラーゼｍＲＮＡ由来のリン原子（Ｐ）との比率（Ｎ／Ｐ）が１２となるように調整した。次いで、限外濾過または透析の後、得られた組成物を自己集合させて（self-assembled）、核酸-脂質ナノ粒子キャリア(1)を形成した。
【0111】
実施例３６～４３
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（２）～（９）を得たが、表１に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（２）～（９）を得たが、表１に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
【0112】
比較例１
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１０）を得たが、脂質化合物（１）を（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）に置き換え、かつＮ／Ｐの値を調整した（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）。
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１０）を得たが、脂質化合物（１）を（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）に置き換え、かつＮ／Ｐの値を調整した（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）。
【0113】
比較例２
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１１）を得たが、脂質化合物（１）をプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタン酸（ＳＭ－１０２）に置き換え、かつＮ／Ｐの値を調整した（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）。
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１１）を得たが、脂質化合物（１）をプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタン酸（ＳＭ－１０２）に置き換え、かつＮ／Ｐの値を調整した（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）。
【0114】
【表2】
【0115】
実施例４４～５２
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１２）～（２０）を得たが、表３に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１２）～（２０）を得たが、表３に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
【0116】
【表3】
【0117】
実施例５３～６１
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（２１）～（２９）を得たが、表４に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（２１）～（２９）を得たが、表４に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
【0118】
【表4】
【0119】
実施例６２～７０
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（３０）～（３８）を得たが、表５に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
実施例３５におけるのと同じ方式を行うことにより核酸－脂質ナノ粒子キャリア（３０）～（３８）を得たが、表５に基づいて脂質溶液中の成分および／または含有量ならびにＮ／Ｐの値（核酸水溶液と脂質溶液との体積比によって調整）は変えた。
【0120】
【表5】
【0121】
医薬組成物の特性評価
実施例３５～４３で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１）～（９）ならびに比較例１および２で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１０）および（１１）の粒径、多分散性指数（ＰｄＩ）、ゼータ電位、リボ核酸回収率（mRNA recovery）、リボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）および酸解離定数（ｐＫａ）を評価した。その結果を表６に示している。
実施例３５～４３で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１）～（９）ならびに比較例１および２で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１０）および（１１）の粒径、多分散性指数（ＰｄＩ）、ゼータ電位、リボ核酸回収率（mRNA recovery）、リボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）および酸解離定数（ｐＫａ）を評価した。その結果を表６に示している。
【0122】
核酸－脂質ナノ粒子キャリアの粒径、多分散性指数（ＰｄＩ）およびゼータ電位は以下のように評価する。サンプルを２０μＬ取り、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）３３０μＬに加え、均一に振とうしてから、リポソームの粒径および多分散性指数（ＰｄＩ）を動的光散乱計器（Zetasizer Nano-ZS,Malvern Panalytical）で測定した。さらに、サンプルを２０μＬ取り、塩化ナトリウム水溶液６８０μＬ（濃度：１０ｍＭ）に加え、均一に振とうしてから、リポソームのゼータ電位を動的光散乱計器(Zetasizer Nano-ZS, Malvern Panalytical)で測定した。
【0123】
リボ核酸回収率（ｍＲＮＡ recovery)は以下のように評価する。核酸脂質ナノ粒子キャリアを滅菌ろ過した後、サンプルを１００μＬ取り、５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００ ２５μＬに加えた。次いで、３７℃で１０分インキュベートした後、クロロホルム１００μＬをそこに加えた。１０分の高速振とう（回転速度：２０００ｒｐｍ）、および３０分の遠心分離（遠心力：１４０００×ｇ）の後、上清を８０μＬ取り、その吸光度をＵＶ－可視分光光度計（UV7,Mettler Toledo）で分析した。その後、リボ核酸の濃度を下に示す式（１）を用いて算出し、回収率を下に示す式（２）を用いて算出した。式中、Ｃはリボ核酸の濃度、Ａ２６０ｎｍは波長２６０ｎｍにおけるリボ核酸の吸光度値、Ｖｆは上清の体積（μＬ）、Ｗはリボ核酸の初期重量（ｎｇ）である。
【0124】
Ｃ＝（Ａ２６０ｎｍ×４０）／（１００／１２５） 式（１）
回収率（％）＝［（Ｃ×Ｖｆ）／Ｗ］×１００％ 式（２）
回収率（％）＝［（Ｃ×Ｖｆ）／Ｗ］×１００％ 式（２）
【0125】
リボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）をＱｕａｎｔ－ｉＴ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ ＲＮＡ定量的検出キット（ＲＮＡ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ）(Invitrogenより購入)により測定した。つまり、０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００界面活性剤の存在および非存在下において、核酸－脂質粒子を含む分散液中のｍＲＮＡの濃度を定量化し、下に示す式（３）によりリボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）を算出した。式中、ＥＥはリボ核酸のカプセル化効率であり、ＣＦｒｅｅは未カプセル化リボ核酸濃度であり、ＣＡｌｌは総リボ核酸濃度である。
【0126】
ＥＥ（％）＝（１－ＣＦｒｅｅ／ＣＡｌｌ）×１００％ 式（３）
【0127】
酸解離定数（ｐＫａ）について、６－ｐ－トルイジノ－２－ナフタレンスルホン酸（ＴＮＳ）に基づく滴定法を用い、マイクロディスク蛍光分析装置(Infinite F200 Pro、Tecan、励起波長：３２０ｎｍ、発光波長：４４８ｎｍ）により、ｐＨ値２．５～１１．０で、全１８点の緩衝液中のサンプルの蛍光強度滴定曲線を分析した。その滴定曲線はシグモイドでフィットし、算出された酸解離定数（ｐＫａ）は、核酸－脂質ナノ粒子キャリアが最大蛍光強度の半分に達したときのｐＨ値であった。
【0128】
【表6】
【0129】
実施例４４～５２で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（１２）～（２０）の粒径、多分散性指数（ＰｄＩ）、ゼータ電位、リボ核酸回収率（ｍＲＮＡ recovery）、リボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）、および酸解離定数（ｐＫａ）を評価した。その結果が表７に示されている。
【0130】
【表7】
【0131】
実施例５３～６１で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（２１）～（２９）の粒径、多分散性指数（ＰｄＩ）、ゼータ電位、リボ核酸回収率（ｍＲＮＡ recovery）、リボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）、および酸解離定数（ｐＫａ）を評価した。その結果が表８に示されている。
【0132】
【表8】
【0133】
実施例６２～７０で得られた核酸－脂質ナノ粒子キャリア（３０）～（３８）の粒径、多分散性指数（ＰｄＩ）、ゼータ電位、リボ核酸回収率（ｍＲＮＡ recovery）、リボ核酸のカプセル化効率（ＥＥ）、および酸解離定数（ｐＫａ）を評価した。その結果が表９に示されている。
【0134】
【表9】
【0135】
表６から表９によると、本開示の医薬組成物の自己集合（self-assembly）により形成された核酸－脂質ナノ粒子キャリアの粒径は約５０ｎｍから２５０ｎｍとなり、かつ多分散性指数は０．０３から０．３３の間となり得たことがわかる。いくつかの実施例では、本開示の医薬組成物のうちいくつかの自己集合により形成された核酸－脂質ナノ粒子キャリアのリボ核酸回収率（％）は約８０％より高くなっており、酸解離定数（ｐＫａ）は５から８．５の範囲となり得た。
【0136】
トランスフェクション効率および細胞生存率の評価
ＨＥＫ２９３細胞を９６－ウェル培養プレートに５×１０４細胞／ウェルで播種し、２４時間付着培養を行った。次いで、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地９７μＬおよびｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬(Invitrogenより購入)3μＬを均一に混合し、室温で１０分反応させて第１の溶液を得た。ルシフェラーゼｍＲＮＡ（製品番号：R1018、APExBIOより購入)（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）１μＬおよびＯｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）培地９９μＬを均一に混合して第２の溶液を得た。その後、第２の溶液を第１の溶液に加えて、均一に混合し、室温で５分反応させて、トランスフェクション溶液を得た。次いで、実施例３５～４３で作製した脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）溶液を１×ＰＢＳでそれぞれ希釈し、希釈脂質ナノ粒子溶液（体積：２００μＬ、濃度：５μｇ／ｍＬ）をそれぞれ得た。次いで、細胞培地(製品番号:MT-10-009-CVS,Corningより購入)８００μＬをそれぞれの希釈脂質ナノ粒子溶液に加え、トランスフェクション溶液と混合してそれぞれの細胞共培養溶液（ルシフェラーゼｍＲＮＡの濃度は０．１μｇ／１００μＬ）を得た。その後、各細胞共培養溶液１００μＬを９６－ウェル培養プレートにそれぞれ加え、細胞と共培養した（０．１μｇｍＲＮＡ／ウェル）。２４時間培養した後、上清を０μＬ取り、細胞生存率アッセイ試薬（ＧＦ－ＡＦＣ）２０μＬに加えた。３７℃で３５～４０分反応させた後、その反応生成物の蛍光値を蛍光計で測定した（Ｅｘ：３８０ｎｍ；Ｅｍ：５４０ｎｍ）。サンプルの蛍光検出示度と未処理の陰性対照群の蛍光値を除することによって、それぞれ異なる脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）溶液の存在下における細胞生存率を算出した。その結果は表１０に示されている。
ＨＥＫ２９３細胞を９６－ウェル培養プレートに５×１０４細胞／ウェルで播種し、２４時間付着培養を行った。次いで、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地９７μＬおよびｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬(Invitrogenより購入)3μＬを均一に混合し、室温で１０分反応させて第１の溶液を得た。ルシフェラーゼｍＲＮＡ（製品番号：R1018、APExBIOより購入)（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）１μＬおよびＯｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）培地９９μＬを均一に混合して第２の溶液を得た。その後、第２の溶液を第１の溶液に加えて、均一に混合し、室温で５分反応させて、トランスフェクション溶液を得た。次いで、実施例３５～４３で作製した脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）溶液を１×ＰＢＳでそれぞれ希釈し、希釈脂質ナノ粒子溶液（体積：２００μＬ、濃度：５μｇ／ｍＬ）をそれぞれ得た。次いで、細胞培地(製品番号:MT-10-009-CVS,Corningより購入)８００μＬをそれぞれの希釈脂質ナノ粒子溶液に加え、トランスフェクション溶液と混合してそれぞれの細胞共培養溶液（ルシフェラーゼｍＲＮＡの濃度は０．１μｇ／１００μＬ）を得た。その後、各細胞共培養溶液１００μＬを９６－ウェル培養プレートにそれぞれ加え、細胞と共培養した（０．１μｇｍＲＮＡ／ウェル）。２４時間培養した後、上清を０μＬ取り、細胞生存率アッセイ試薬（ＧＦ－ＡＦＣ）２０μＬに加えた。３７℃で３５～４０分反応させた後、その反応生成物の蛍光値を蛍光計で測定した（Ｅｘ：３８０ｎｍ；Ｅｍ：５４０ｎｍ）。サンプルの蛍光検出示度と未処理の陰性対照群の蛍光値を除することによって、それぞれ異なる脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）溶液の存在下における細胞生存率を算出した。その結果は表１０に示されている。
【0137】
【表10】
【0138】
前述より、本開示に記載される脂質化合物は、インビボ細胞実験分析の実行時、細胞活性にほとんど影響しないということがわかる。
【0139】
次いで、ＯＮＥ－Ｇｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔ １００μＬを培養プレートの各ウェルに加え、３分以内にその発光値（luminescence value）を測定し、それぞれ異なる脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）溶液のトランスフェクション能を評価した。その結果は表１１に示されている。
【0140】
【表11】
【0141】
表１１より、本開示に記載される脂質化合物はＨＥＫ２９３細胞のトランスフェクション効率を実際に向上させ得ることがわかる。
【0142】
開示された実施形態に各種修飾および変更を加え得るということは、当業者には明らかであろう。詳述および例は単に例示として見なされることが意図されており、本開示の真の範囲は以下のクレームおよびそれらの均等物によって示される。
【外国語明細書】