特開 2024-73651 ＰＳＭＡ結合デュアルモード放射性トレーサーおよび療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024073651

(43)【公開日】2024-05-29

(54)【発明の名称】ＰＳＭＡ結合デュアルモード放射性トレーサーおよび療法

(51)【国際特許分類】

   C07F 7/12 20060101AFI20240522BHJP

   C07K 7/02 20060101ALI20240522BHJP

   A61K 38/05 20060101ALI20240522BHJP

   A61K 51/08 20060101ALI20240522BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240522BHJP

   C07F 5/00 20060101ALI20240522BHJP

【ＦＩ】

C07F7/12 U CSP

C07K7/02 ZNA

A61K38/05

A61K51/08 100

A61K51/08 200

A61P35/00

C07F5/00 C

【審査請求】有

【請求項の数】12

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024046097

(22)【出願日】2024-03-22

(62)【分割の表示】P 2021544525の分割

【原出願日】2020-01-30

(31)【優先権主張番号】19154500.3

(32)【優先日】2019-01-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(71)【出願人】

【識別番号】504150162

【氏名又は名称】テクニシェ ユニバーシタット ミュンヘン

(71)【出願人】

【識別番号】520034716

【氏名又は名称】テクニシェ ユニバーシタット ミュンヘン－クリニクム レヒツ デア イーザル

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100135415

【弁理士】

【氏名又は名称】中濱 明子

(72)【発明者】

【氏名】ワーザー，アレクサンデル・ヨーゼフ

(72)【発明者】

【氏名】ウェスター，ハンス－ユルゲン

(72)【発明者】

【氏名】アイバー，マティアス・ヨハネス

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

4H048

4H049

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA06

4C084AA07

4C084AA12

4C084BA09

4C084BA14

4C084BA42

4C084CA59

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C085HH03

4C085KA09

4C085KA29

4C085KB07

4C085KB10

4C085KB11

4C085KB12

4C085KB15

4C085KB56

4C085KB82

4C085LL01

4C085LL18

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA13

4H045BA14

4H045BA50

4H045BA71

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA33

4H048AA01

4H048AA03

4H048AB20

4H048VA32

4H048VA85

4H048VB10

4H049VN01

4H049VP01

4H049VQ70

4H049VR23

4H049VR31

4H049VU06

4H049VW02

(57)【要約】      （修正有）

【課題】フッ化シリコーンアクセプターを含有し、同時に、好ましいｉｎ－ｖｉｖｏ特性を特徴とする、放射線診断及び放射線療法に用いる組成物を提供する。
【解決手段】下式（Ｖ）による化合物：

または、薬学的に許容されるその塩であって、キレート化放射性カチオンを場合によって含有し、Ｆが場合によって^１８Ｆである、化合物とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｖ）による化合物：

【化1】

または薬学的に許容されるその塩であって、キレート化放射性カチオンを含有し、またはＦが場合によって^１８Ｆである、化合物。

【請求項2】

式（Ｖａ）による、請求項１に記載の化合物：

【化2】

［式中、
各Ｘは、独立して、ＯＨまたはＯ^－であり；
Ｍは、キレート化放射性カチオンであり、または非存在であり；
Ｆは、場合によって、^１８Ｆである］
または薬学的に許容されるその塩。

【請求項3】

キレート化放射性カチオンが、Ｓｃ、Ｃｕ、Ｇａ、Ｙ、Ｉｎ、Ｔｂ、Ｈｏ、Ｌｕ、Ｒｅ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ａｃ、ＥｒおよびＴｈのカチオンから選択される、請求項１または請求項２に記載の化合物。

【請求項4】

キレート化放射性カチオンが、Ｇａである、請求項３に記載の化合物。

【請求項5】

キレート化放射性カチオンが、Ｌｕ－１７７、Ｙ－９０、またはＡｃ－２２５である、請求項３に記載の化合物。

【請求項6】

ａ）式（Ｉ）の化合物：

【化3】

を、式（ＩＩ）の化合物：

【化4】

と反応させて、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化5】

［式中、ＰＧ_１は、ｔＢｕであり、ＰＧ_２は、Ｆｍｏｃであり、ＰＧ_３は、Ｄｄｅであり；
反応条件は、塩基の使用を伴い、塩基は、２，４，６－コリジンまたは２，６－ジメチルピリジンである］を形成するステップと；
ｂ）式（ＩＶ）の化合物：

【化6】

を形成するのに適した条件下で、式（ＩＩＩ）の化合物を反応させるステップと、
ｃ）化合物（Ｖ）：

【化7】

を形成するのに適した条件下で、式（ＩＶ）の化合物を反応させるステップと
を含む、請求項１に記載の化合物を生成する方法。

【請求項7】

化合物（ＩＩ）が、化合物（Ｉ）との反応前に、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）および２，４，６－コリジンと反応させることにより、事前活性化される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

事前活性化を、５分以内に行う、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

式（ＶＩ）

【化8】

の請求項１または請求項２に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。

【請求項10】

式（ＶＩＩ）

【化9】

の請求項１または請求項２に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。

【請求項11】

先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物を含む、医薬または診断用組成物。

【請求項12】

がん診断または画像化剤としての使用のための、先行する請求項のいずれか一項に記載のコンジュゲート、化合物または組成物。

【請求項13】

先行する請求項のいずれか一項に記載のコンジュゲート、化合物または組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、がんを画像化および／または診断する方法。

【請求項14】

がんの治療における使用のための、先行する請求項のいずれか一項に記載のコンジュゲート、化合物または組成物。

【請求項15】

血管新生／血管形成の診断、画像化または予防のための、先行する請求項のいずれか一項に記載のコンジュゲート、化合物または組成物。

【請求項16】

前立腺、乳、肺、結腸直腸または腎細胞癌である、がん診断もしくは画像化剤としての使用のためまたはがんの治療における使用のための、先行する請求項のいずれか一項に記載のコンジュゲート、化合物または組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、式（Ｖ）による化合物：

【0002】

【化1】

【0003】

または薬学的に許容されるその塩であって、キレート化放射性カチオンを含有し、またはＦが場合によって^１８Ｆである、化合物に関する。本発明はまた、合成中にラセミ化を防ぐ化合物を合成する方法に関する。

【0004】

本明細書では、特許出願および製造者のマニュアルを含めた、多くの文献が引用される。これらの文献の開示は、本発明の特許要件に関連すると考えられず、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。より詳細には、それぞれ個々の文献が、参照により組み込まれることが、詳細におよび個別に示された場合と同じ程度で、参照されるすべての文献が、参照により組み込まれる。

【背景技術】

【0005】

前立腺がん
前立腺がん（ＰＣａ）は、過去数十年にわたって、依然として、生存率が低く、発生率が高い、男性において最も多く見られる悪性疾患である。前立腺がんにおけるその過剰発現により、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）またはグルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＧＣＰ ＩＩ）は、ＰＣａの内部放射線療法および画像化用の高感度放射能標識薬剤の開発のための優れた標的として、その適格性を証明した。前立腺特異的膜抗原は、触媒中心が、架橋ヒドロキシドリガンドを有する２個の亜鉛（ＩＩ）イオンを含む、細胞外加水分解酵素である。これは、転移性およびホルモン不応性前立腺癌において、大いに上方調節されるが、その生理学的発現はまた、腎臓、唾液腺、小腸、脳においておよび、低い程度まで、健常な前立腺組織においても報告されている。腸において、ＰＳＭＡは、プテロイルポリ－γ－グルタメートのプテロイルグルタメート（フォレート）への変換により、フォレートを容易に吸収する。脳において、これは、Ｎ－アセチル－Ｌアスパルチル－Ｌ－グルタメート（ＮＡＡＧ）を、Ｎ－アセチル－Ｌ－アスパルテートおよびグルタメートに加水分解する。

【0006】

前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）
前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）は、前立腺がん上皮細胞において高度に過剰発現されるＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。その名称にもかかわらず、ＰＳＭＡはまた、様々な程
度まで、広範囲の非前立腺がんの新生血管（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ）において発現される。ＰＳＭＡ発現を実証するために最も多く見られる非前立腺がんの中でもとりわけ、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、および腎細胞癌が含まれる。

【0007】

ＰＳＭＡ標的分子の一般に必要な構造は、Ｐ１’グルタメート部分に接続される亜鉛－結合基（例えば、尿素、ホスフィネートまたはホスホロアミデートなど）を包含する結合単位を含み、ＰＳＭＡへの高い親和性および特異性を保証し、通常、エフェクター官能基にさらに接続される。エフェクター部分は、より可動性があり、ある程度、構造上の改変に対して耐性がある。入口トンネルは、他の際立った２つの構造上の特徴を収容し、これらは、リガンド結合にとって重要である。第１のものは、アルギニンパッチ、入口ファンネルの壁において正電荷を持つ領域およびＰＳＭＡのＰ１位置において負電荷を持つ官能基の選好性についての機構的な説明である。これは、リガンド－足場内の負電荷を持つ残基の好ましい取込みの理由であると思われる。ＰＳＭＡリガンドに対する正電荷の効果についての綿密な分析は、本発明者らの知る限りでは、今までのところ行われていない。結合後、アルギニン側鎖の一致した再配置は、いくつかの尿素に基づいた阻害剤のヨード－ベンジル基を収容することが示されている、第２の重要な構造であるＳ１疎水性付属ポケットを開口させることができ、したがって、ＰＳＭＡに対するそれらの高い親和性に寄与している。

【0008】

Ｚｈａｎｇらは、ＰＳＭＡの遠隔結合部位を開発し、これは、二座結合モードに使用することができる（Ｚｈａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １３２、１２７１１～１２７１６（２０１０年））。いわゆるアレーン－結合部位は、Ａｒｇ４６３、Ａｒｇ５１１およびＴｒｐ５４１の側鎖により形作られる単純な構造モチーフであり、ＧＣＰＩＩ入口蓋の一部である。遠位阻害剤部分によるアレーン結合部位の結合によって、結合活性効果によりＰＳＭＡについての阻害剤親和性を大幅に増加させることができる。ＰＳＭＡ Ｉ＆Ｔは、結合モードの結晶構造分析が利用可能ではないが、ＰＳＭＡとこのように相互作用することを企図して開発された。Ｚｈａｎｇらによる必要な特徴は、リンカー単位（ＰＳＭＡ Ｉ＆Ｔの場合におけるスベリン酸）であり、ＧＣＰＩＩの入口蓋のオープン構造を容易にし、それにより、アレーン－結合部位の到達性を可能にする。リンカーの構造組成は、腫瘍標的指向化および生物活性に対して、ならびに画像化コントラストおよび薬物動態（Ｌｉｕら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｌｅｔｔｅｒｓ ２１巻、７０１３～７０１６（２０１１年））、高い画像化品質および効率的な標的内部放射線療法の両方について決定的である特性に対して大きな影響があることがさらに示された。

【0009】

ＰＳＭＡ標的指向化阻害剤の２つのカテゴリーは、臨床状況に現在用いられる。一方で、放射性核種複合体形成、例えば、ＰＳＭＡ Ｉ＆Ｔなどまたは関連した化合物についてのキレート化単位を有するトレーサーがある。他方で、標的指向化単位およびエフェクター分子を含む小分子がある。

【0010】

選択的ＰＳＭＡ画像化用に最も多く用いられる薬剤は、ＰＳＭＡ ＨＢＥＤ－ＣＣ、ＰＳＭＡ－６１７およびＰＳＭＡ Ｉ＆Ｔであり、これらは、^６８Ｇａ（８８．９％ β^＋、Ｅ_{β＋， ｍａｘ}＝１．８９ＭｅＶ、ｔ_1/2＝６８分）で主に標識される。これらの中でもとりわけ、^６８Ｇａ－ＰＳＭＡ－ＨＢＥＤ－ＣＣ（^６８Ｇａ－ＰＳＭＡ－１１としても公知である）は、ＰＣａのＰＥＴ画像化のゴールデンスタンダードとして、今までのところ考えられる。

【0011】

^１８Ｆ標識化
近年、いくつかのグループは、ＰＣａ診断用の新規な^１８Ｆ標識化尿素に基づいた阻害剤の開発に焦点を合わせた。商業的に流通する^６８Ｇｅ／^６８Ｇａ放射性核種ジェネレータ
ー（^６８Ｇｅ；ｔ_1/2＝２７０．８ｄ）から得ることができる、放射性金属^６８Ｇａと異
なり、放射性同位体^１８Ｆ－フッ化物（９６．７％ β^＋、Ｅ_{β＋， ｍａｘ}＝６３４ｋ
ｅＶ）は、その生成のためにオンサイトサイクロトロンを要する。こうした制限にも関わらず、^１８Ｆは、その半減期（ｔ_1/2＝１０９．８分）が長いおよびその陽電子エネルギ
ーが低いことにより、ルーチン的な取り扱いおよび画質に関して、有意な利点を提供する。さらに、サイクロトロンにおける大量生成に向けての可能性があり、これは、より高い患者処理量および製造コストの削減のために有益なはずである。^１８Ｆ－標識化尿素に基づいたＰＳＭＡ阻害剤^１８Ｆ－ＤＣＦＰｙｌによって、原発性および転移性ＰＣａ（Ｒｏｗｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１～９（２０１６年））の検出における有望な結果および比較試験における^６８Ｇａ－ＰＳＭＡ－ＨＢＥＤ－ＣＣへの優位性（Ｄｉｅｔｌｅｉｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７巻、５７５～５８４頁（２０１５年））を実証した。ＰＳＭＡ－６１７の構造に基づいて、^１８標識化類似体ＰＳＭＡ－１００７は、最近開発され、これは、同等の腫瘍対臓器比を示した（Ｃａｒｄｉｎａｌｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ： ｏｆｆｉｃｉａｌ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５８巻、４２５～４３１頁（２０１７年）；Ｇｉｅｓｅｌら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ４３巻、１９２９～１９３０（２０１６年））。^６８Ｇａ－ＰＳＭＡ－ＨＢＥＤ－ＣＣによる比較試験から、両トレーサーの類似の診断精度および前立腺のより良い評価を可能にする、^１８Ｆ－ＰＳＭＡ－１００７の尿クリアランスの低下が明らかになった（Ｇｉｅｓｅｌら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ４４巻、６７８～６８８頁（２０１７年））。

【0012】

^１８Ｆ標識を導入するための魅力的なアプローチは、フッ化ケイ素アクセプター（ＳＩＦＡ）の使用である。フッ化ケイ素アクセプターは、例えば、Ｌｉｎｄｎｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２５巻、７３８～７４９頁（２０１４年）に記載されている。フッ化ケイ素結合を維持するために、フッ化ケイ素アクセプターの使用は、シリコーン原子の周囲の立体的にかさ高い基の必要性を生じさせる。次に、これによって、フッ化ケイ素アクセプターが高度に疎水性になる。標的分子への結合、特に、ＰＳＭＡである標的分子への結合に関して、フッ化シリコーンアクセプターにより提供される疎水性部分は、Ｚｈａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １３２巻、１２７１１～１２７１６（２０１０年）に記載されている、疎水性ポケットを有する放射線診断用または放射線治療用化合物の相互作用を確立する目的のために活用することができる。さらに、結合前に、より高度な範囲の、分子に導入される親油性は、ｉｎ ｖｉｖｏ体内分布に適した、すなわち、非標的組織における非特異的結合が低い放射性医薬品の開発に関して、深刻な問題をもたらす。

【0013】

疎水性問題の解決の失敗
多くの試みにも関わらず、フッ化ケイ素アクセプターにより引き起こされる疎水性問題は、従来技術において十分に解決していない。

【0014】

さらに説明するために、Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ Ｅ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００７年、１８巻、２０８５～２０８９）は、非常に有効な標識化シントンｐ－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）ベンズアルデヒド（［^１８Ｆ］ＳＩＦＡ－Ａ）を用いて、異なる^１８Ｆ標識化ペプチドを合成したが、これは、フッ化ケイ素アクセプターの一例である。ＳＩＦＡ技術は、予想外に効率的な同位体^１９Ｆ－^１８Ｆ交換をもたらし、ＨＰＬＣ精製を適用せずに、２２５～６８０ＧＢｑ／μｍｏｌ（６０８１－１８ ３７８Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の間の高特異活性において、ほぼ定量的収率で^１８Ｆ－シントンを生成した。［^１８Ｆ］ＳＩＦＡ－ベンズアルデヒドは、高い放射化学収率で、Ｎ
末端アミノ－オキシ（Ｎ－ＡＯ）誘導体化ペプチドＡＯ－Ｔｙｒ３－オクトレオテート（ＡＯ－ＴＡＴＥ）、シクロ（ｆＫ（ＡＯ－Ｎ）ＲＧＤ）およびＮ－ＡＯ－ＰＥＧ_２－［Ｄ－Ｔｙｒ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｔｈｉ－Ｎｌｅ－ＮＨ_２］（ＡＯ－ＢＺＨ３、ボンベシン誘導体）を標識するために、最後に用いられた。それにもかかわらず、標識されたペプチドは、（本明細書に記載した条件を用いてＨＰＬＣ保持時間から取り込むことができるため）高親油性であり、したがって、動物モデルまたはヒトにおいてさらなる評価に適していない。

【0015】

Ｗａｎｇｌｅｒ Ｃ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２００９年、２０巻（２号）、３１７～３２１頁）において、タンパク質（ラット血清アルブミン、ＲＳＡ）の第１のＳＩＦＡに基づいたＫｉｔ様放射性フッ素付加を記載している。標識化剤として、４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチル［^１８Ｆ］フルオロシリル）ベンゼンチオール（Ｓｉ［^１８Ｆ］ＦＡ－ＳＨ）は、放射化学収率（ＲＣＹ）４０～６０％の単純な同位体交換により生成され、２０～３０分以内に、全ＲＣＹ１２％で、マレイミド誘導体化血清アルブミンに直接生成物をカップリングした。技術的に単純な標識化手順は、いかなる詳述された精製手順をも要さず、ＰＥＴを用いたｉｎ ｖｉｖｏ画像化用のＳｉ－１８Ｆ化学の成功した適用の明快な例である。マウスの時間－活性曲線およびμＰＥＴ画像によって、活性のほとんどが、肝臓において限局化したことが示され、したがって、標識化剤が、非常に親油性であり、ｉｎ ｖｉｖｏプローブを肝胆道排出および広範な肝代謝に方向づけられることを実証した。

【0016】

Ｗａｎｇｌｅｒ Ｃ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ． ２０１０年１２月１５日；２１巻（１２号）：２２８９～９６を参照のこと）は、引き続いて、新たなＳＩＦＡ－オクトレオテート類似体（ＳＩＦＡ－Ｔｙｒ３－オクトレオテート、ＳＩＦＡ－Ａｓｎ（ＡｃＮＨ－β－Ｇｌｃ）－Ｔｙｒ３－オクトレオテートおよびＳＩＦＡ－Ａｓｎ（ＡｃＮＨ－β－Ｇｌｃ）－ＰＥＧ－Ｔｙｒ３－オクトレオテート）を合成し、評価することにより、ＳＩＦＡ技術の主な弱点、得られた放射性医薬品の高親油性を克服しようと努めた。これらの化合物では、親水性リンカーおよび薬物動態学的修飾因子は、ペプチドとＳＩＦＡ－部分、すなわち、炭水化物と炭水化物を加えたＰＥＧリンカーの間で導入された。コンジュゲートの親油性の手段として、ｌｏｇ Ｐ（ｏｗ）が決定され、ＳＩＦＡ－Ａｓｎ（ＡｃＮＨ－β－Ｇｌｃ）－ＰＥＧ－Ｔｙｒ^３－オクトレオテートの場合０．９６およびＳＩＦＡ－Ａｓｎ（ＡｃＮＨ－β－Ｇｌｃ）－Ｔｙｒ^３－オクトレオテートの場合１．２３であることが見出された。これらの結果から、ＳＩＦＡ部分の高親油性が、親水部分を適用することにより、わずかに補正することができるにすぎないということが示される。第１の画像化試験によって、過剰な肝クリアランス／肝臓取込みが実証され、したがって、第１のヒト試験に決して移行されなかった。

【0017】

Ｂｅｒｎａｒｄ－Ｇａｕｔｈｉｅｒら（Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．２０１４；２０１４：４５４５０３）では、小型の補欠分子族および低分子量の他の化合物から、標識されたペプチドおよびごく最近の抗体分子に及ぶ文献において報告されている、異なるＳＩＦＡ種の重大な多血症が概説されている。これらのデータに基づいて、ＳＩＦＡに基づいた補欠分子族（ｐｒｏｓｔｈｅｔｒｉｃ ｇｒｏｕｐ）の親油性の問題は、今までのところ解決されておらず；すなわち、ＳＩＦＡコンジュゲートペプチドの全親油性を、およそ－２，０より低いｌｏｇ Ｄまで低下する方法論は、記載されていない。

【0018】

Ｌｉｎｄｎｅｒ Ｓ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０１４年４月１６日；２５巻（４号）：７３８～４９）において、特異的ＧＲＰ受容体リガンドとしてのペグ化ボンベシン（ＰＥＳＩＮ）誘導体および特異的αｖβ３結合剤としてのＲＧＤ（アルギニン－グリシン－アスパラギン酸の１文字コード）ペプチドが、合成され、ケイ素－フッ素－アクセプター（ＳＩＦＡ）部分でタグ付けされた。ＳＩＦＡ部分の高親油性を補正するた
めに、様々な親水性構造修飾を、ｌｏｇＤ値を減少させるよう導入した。ＳＩＦＡ－Ａｓｎ（ＡｃＮＨ－β－Ｇｌｃ）－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－Ｓｅｒ（β－Ｌａｃ）－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－Ｃｙａ－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－ＬｙｓＭｅ３－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－γ－カルボキシ－ｄ－Ｇｌｕ－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－Ｃｙａ２－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－ＬｙｓＭｅ３－γ－カルボキシ－ｄ－Ｇｌｕ－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－（γ－カルボキシ－ｄ－Ｇｌｕ）２－ＰＥＳＩＮ、ＳＩＦＡ－ＲＧＤ、ＳＩＦＡ－γ－カルボキシ－ｄ－Ｇｌｕ－ＲＧＤ、ＳＩＦＡ－（γ－カルボキシ－ｄ－Ｇｌｕ）２－ＲＧＤ、ＳＩＦＡ－ＬｙｓＭｅ３－γ－カルボキシ－ｄ－Ｇｌｕ－ＲＧＤ。親油性を低下させることを目標として、すでに改善され誘導体化された、これらのペプチドのすべては、＋２～－１．２２の間のｌｏｇＤ値を示した。

【0019】

Ｎｉｅｄｅｒｍｏｓｅｒ Ｓ．ら（Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．２０１５年７月；５６巻（７号）：１１００～５）では、新規に開発された^１８Ｆ－ＳＩＦＡ－および^１８Ｆ－ＳＩＦＡｌｉｎ－（ＳＩＦＡ＝フッ化ケイ素アクセプター）によって修飾されたＴＡＴＥ誘導体を、ソマトスタチン受容体担持腫瘍の高品質画像化用の現在の臨床のゴールドスタンダードである^６８Ｇａ－ＤＯＴＡＴＡＴＥと比較した。この目的のために、^１８Ｆ－ＳＩＦＡ－ＴＡＴＥおよび２つのかなり複雑な類似体、^１８Ｆ－ＳＩＦＡ－Ｇｌｃ－ＰＥＧ１－ＴＡＴＥ、^１８Ｆ－ＳＩＦＡｌｉｎ－Ｇｌｃ－Ａｓｐ２－ＰＥＧ１－ＴＡＴＥを開発した。これらの薬剤はいずれも、ｌｏｇＤ＜－１．５を示さなかった。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0020】

【非特許文献1】Ｚｈａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １３２、１２７１１～１２７１６（２０１０年）

【非特許文献2】Ｌｉｕら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｌｅｔｔｅｒｓ ２１巻、７０１３～７０１６（２０１１年）

【非特許文献3】Ｒｏｗｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１～９（２０１６年）

【非特許文献4】Ｄｉｅｔｌｅｉｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７巻、５７５～５８４頁（２０１５年）

【非特許文献5】Ｃａｒｄｉｎａｌｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ： ｏｆｆｉｃｉａｌ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５８巻、４２５～４３１頁（２０１７年）

【非特許文献6】Ｇｉｅｓｅｌら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ４３巻、１９２９～１９３０（２０１６年）

【非特許文献7】Ｇｉｅｓｅｌら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ４４巻、６７８～６８８頁（２０１７年）

【非特許文献8】Ｌｉｎｄｎｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２５巻、７３８～７４９頁（２０１４年）

【非特許文献9】Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ Ｅ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００７年、１８巻、２０８５～２０８９）

【非特許文献10】Ｗａｎｇｌｅｒ Ｃ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２００９年、２０巻（２号）、３１７～３２１頁）

【非特許文献11】Ｗａｎｇｌｅｒ Ｃ．ら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ． ２０１０年１２月１５日；２１巻（１２号）：２２８９～９６）

【非特許文献12】Ｂｅｒｎａｒｄ－Ｇａｕｔｈｉｅｒら（Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．２０１４；２０１４：４５４５０３）

【非特許文献13】Ｎｉｅｄｅｒｍｏｓｅｒ Ｓ．ら（Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．２０１５年７月；５６巻（７号）：１１００～５）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0021】

上記を考慮して、本発明の根底にある技術的な課題は、フッ化シリコーンアクセプターを含有し、同時に、好ましいｉｎ－ｖｉｖｏ特性を特徴とする、放射線診断および放射線療法を提供することにおいて示すことができる。

【0022】

次において明らかになる通り、本発明は、標的として、前立腺特異抗原（ＰＳＭＡ）に高い親和性で結合する、特異的なコンジュゲートを用いて、原理の証明を確立した。したがって、本発明の根底にあるさらなる技術的な課題は、がん、好ましくは、前立腺がんである医療適応症についての放射線療法および放射線診断の改善を提供することにおいて示すことができる。

【0023】

ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０７０５３３は、ＰＳＭＡ結合化合物の属を開示している。本明細書中で開示されるのは、先の出願からの化合物の有利なサブセットである。本明細書中の適用は、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０７０５３３出願時に発明者らにより認識されなかった有利な特徴の選択である。

【課題を解決するための手段】

【0024】

これらの技術的な課題は、クレームの主題により解決される。したがって、いくつかの態様では、本発明は、式（Ｖ）による化合物：

【0025】

【化2】

【0026】

または薬学的に許容されるその塩であって、キレート化放射性カチオンを含有し、またはＦが場合によって^１８Ｆである、化合物に関する。
開示される化合物は、塩の形態であり得る。本発明はまた、式（Ｖａ）：

【0027】

【化3】

【0028】

の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、
各Ｘは、独立して、ＯＨまたはＯ^－であり；
Ｍは、キレート化放射性カチオンのいずれかであり、または非存在であり；
Ｆは、場合によって、^１８Ｆである］に関する。

【0029】

さらに、キレート剤の使用および^１８Ｆ－フッ化物によるＳＩＦＡにおける同位体交換の組合せによって、オンサイトサイクロトロンによるセンターまたはサイクロトロンセンターからの輸送により^１８Ｆ－フッ化物を得るセンターで、［^１８Ｆ］［^ｎａｔＩｏｎ］トレーサーとしていずれも用いることができる「ペア」診断トレーサーをもたらし、一方、^１８Ｆ－フッ化物を利用できないが、放射性同位体ジェネレーター、例えば、Ｇｅ－６８／Ｇａ－６８ジェネレーターなどを利用する、センターにおいて、対応するバージョン、例えば、［^ｎａｔＦ］［^６８Ｇａ］トレーサーは、用いることができる。

【0030】

重要なことに、両方の場合において、化学的に同一の放射性医薬品は、注射され、したがって、ｉｎ ｖｉｖｏ挙動の差は、予想されない。一方で、現在、化学的相違により、ある部位における患者コホートにより提供される^１８Ｆ－標識化化合物の臨床データは、別の部位における別の群により提供される^６８Ｇａ－類似体の臨床データと直接比較することができず、本発明による放射性医薬品および／または診断学は、直接比較することができ、したがって、かかるデータ（例えば、Ｆ－１８を用いた欧州の作業におけるセンターおよびＧａ－６８を用いたインドの作業における別のセンターから得られたデータ）を連結することが可能になる。

【0031】

さらに、適切に選択された場合、キレートは、治療用同位体、例えば、β放出同位体、Ｌｕ－１７７、Ｙ－９０など、またはα放出同位体Ａｃ－２２５などで標識するために用いることもでき、したがって、診断用（［^１８Ｆ］［^ｎａｔＬｕ］トレーサー）および治療用放射性医薬品（［^ｎａｔＦ］［^１７７Ｌｕ］を架橋するために、「ペア」トレーサーの概念を拡張することが可能である。

【0032】

化合物、特に、本発明のＰＳＭＡ標的化合物のさらなる利点は、他のＰＳＭＡ標的放射性医薬品、例えば、ＰＳＭＡ Ｉ＆Ｔなどと比較した場合、マウスの腎臓において、それらの蓄積が驚くほど低いことである。ある特定の理論により縛られることを望まずに、腎臓において蓄積を予想外に減少させる、構造要素ＳＩＦＡのキレート剤との組合せであると思われる。

【0033】

親油性／親水性の点から、ｌｏｇＰ値（時折、ｌｏｇＤ値とも称される）は、技術分野で確立された手段である。
用語「親油性」とは、脂質溶液に溶解される、またはそれに吸収されるまたは脂質－様表面もしくはマトリックスで吸着される強度に関する。これは、脂質（文字通りの意味）についてのまたは有機もしくは無極性脂質についてのまたは水と比較して、小型の双極子モーメントを含む液体、溶液または表面についての選好性を示す。用語「疎水性」は、本明細書中で等価な意味で用いられる。形容詞親油性のおよび疎水性のは、上記に記載した名詞に対応する意味で用いられる。

【0034】

２つの不混和性のもしくはほぼ不混和性の溶媒の界面における分子の質量流束は、その親油性によって支配される。親油性であるほど、分子は、親油性有機相に溶解する。水とｎ－オクタノールとの間で観察される分子の分配係数は、親油性の標準単位として用いられている。種Ａの分配係数Ｐは、Ｐ＝［Ａ］_{ｎ－ｏｃｔａｎｏｌ}／［Ａ］_{ｗａｔｅｒ}比として定義される。一般に報告される数値は、ｌｏｇＰ値であり、これは、分配係数の対数である。分子が、イオン化可能な場合では、複数の異なる微細種（分子のイオン化されたおよびイオン化されない形態）は、両相に原理的に存在する。イオン化可能な種の全親油性を記述する含量は、比Ｄ＝［すべての微細種の濃度の和］_{ｎ－ｏｃｔａｎｏｌ}／［すべての微細種の濃度の和］_{ｗａｔｅｒ}として定義される分配係数Ｄである。ｌｏｇＰと類似して、頻繁に、分配係数の対数である、ｌｏｇＤは報告される。しばしば、緩衝系、例えば、リン酸緩衝食塩水などは、ｌｏｇＰの上記で記載した決定における水の代替として用いられる。

【0035】

第１の分子における置換基の親油性の特徴が、評価されようとするかつ／または定量的に決定されようとする場合、これは、その置換基に対応する第２の分子を評価することができ、前記第２の分子は、例えば、前記置換基を第１の分子の残部に接続する結合を切断し、それにより得られた自由原子価（複数可）を水素（複数可）に接続することにより、得られる。

【0036】

あるいは、分子のｌｏｇＰへの置換基の寄与を、決定することができる。分子Ｒ－ＸのｌｏｇＰへの置換基Ｘの寄与π_{Ｘ Ｘ}は、π_{Ｘ Ｘ}＝ｌｏｇＰ_Ｒ－Ｘ－ｌｏｇＰ_Ｒ－Ｈ［式中、Ｒ－Ｈは、非置換親化合物である］として定義される。

【0037】

１より大きいＰおよびＤの値ならびに０より大きいｌｏｇＰ、ｌｏｇＤおよびπ_{Ｘ Ｘ}値は、親油性／疎水性の特徴を示し、１より小さいＰおよびＤの値ならびに０より小さいｌｏｇＰ、ｌｏｇＤおよびπ_{Ｘ Ｘ}値は、それぞれの分子または置換基の親水性の特徴を示す。

【0038】

本発明による親油基または分子全体の親油性を特徴付ける上記で記載したパラメーターは、実験的手段により決定することができ、かつ／または当技術分野で公知の計算方法により予測することができる（例えば、Ｓａｎｇｓｔｅｒ、Ｏｃｔａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ：ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ．（１９９７年）を参照のこと）。

【0039】

好ましい実施形態では、本発明の化合物のｌｏｇＰ値は、－５～－１．５の間である。ｌｏｇＰ値が、－３．５～－２．０の間であることが、特に好ましい。
好ましい実施形態では、キレート基は、放射性であるキレート化カチオンを含む。より好ましいのは、キレート化放射性金属同位体である。

【0040】

キレート基によりキレート化することができるカチオンの好ましい例は、^４３Ｓｃ、^４
４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^５１Ｃｒ、^５２ｍＭｎ、^５８Ｃｏ、^５２Ｆｅ、^５６Ｎｉ、^５７Ｎｉ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６６Ｇａ、^６７Ｇａ ^６８Ｇａ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^８９Ｙ、＜Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^９７Ｒｕ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ，^１１０ｍＩｎ、^１１１Ｉｎ、^１１３ｍＩｎ、^１１４ｍＩｎ、^１１７ｍＳｎ、^１２１Ｓｎ、^１２７Ｔｅ、^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ、^１４９Ｐｍ、^１５１Ｐｍ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１６１Ｔｂ、^１５３Ｓｍ、^１５７Ｇｄ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１６５Ｄｙ、^１６９Ｅｒ、^１６９Ｙｂ、^１７５Ｙｂ、^１７２Ｔｍ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９１Ｐｔ、^１９７Ｈｇ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１２Ｐｂ、^２０３Ｐｂ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈのカチオン、^１８Ｆまたはカチオンを含むカチオン性分子、例えば、^１８Ｆ－［ＡｌＦ］^２＋など；より好ましくは、^４４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６８Ｇａ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、および^２２７Ｔｈのカチオンまたは^１８Ｆを含むカチオン性分子である。カチオンは、Ｌｕ－１７７、Ｙ－９０、またはＡｃ－２２５から選択することができる。

【0041】

さらなる態様では、本発明は、本明細書中で上記に開示される通り、本発明の１種または複数の化合物を含むまたはそれらからなる医薬組成物を提供する。
さらなる態様では、本発明は、本明細書中で上記に開示される通り、本発明の１種もしくは複数の化合物を含むまたはそれらからなる診断用組成物を提供する。

【0042】

さらなる態様では、本発明は、本明細書中で上記に開示される通り、本発明の１種もしくは複数の化合物を含むまたはそれらからなる治療用組成物を提供する。
医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤をさらに含むことができる。適当な医薬担体、賦形剤および／または希釈剤の例としては、当技術分野で周知であり、リン酸緩衝食塩溶液、水、乳剤、例えば、油／水型乳剤、様々なタイプの湿潤剤、無菌の溶液などが含まれる。かかる担体を含む組成物は、周知の定法により配合することができる。これらの医薬組成物は、適当な用量で対象に投与することができる。適当な組成物の投与は、異なるやり方により、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、皮内、鼻腔内または気管支内投与により行うことができる。前記投与は、例えば、膵臓中のまたは脳動脈中のまたは直接脳組織中の部位への、注射および／または送達により、行われることが特に好ましい。組成物はまた、例えば、膵臓または脳のような外部のまたは内部の標的部位への微粒子銃送達により、標的部位に、直接投与することもできる。投与量レジメンは、担当医および臨床学的因子により決定される。医学分野において周知の通り、任意の１人の患者用の投与は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与されようとする特定の化合物、性別、時間および投与の経路、一般的な健康、および同時に投与される他の薬物を含めた、多くの因子に依存する。薬学的に活性な物質は、用量当たり体重０，１ｎｇ～１０ｍｇ／ｋｇ間の量で存在することができ；しかしながら、この模範的な範囲を下回るまたは上回る用量が想像され、特に、前述の因子が考えられる。

【0043】

さらなる態様では、本発明は、医学における使用のための、本明細書中で上記に開示される、本発明の１種または複数の化合物を提供する。
医学における好ましい使用は、核医学、例えば、核診断用画像化など、やはり、指定された核分子画像化、および／または患部組織における、過剰発現、好ましくは、ＰＳＭＡを伴う疾患の標的された放射線療法においてである。

【0044】

さらなる態様では、本発明は、がん、好ましくは、前立腺がんを診断および／またはステージ分類する方法における使用のための、本明細書中で上記に定義された、本発明の化合物を提供する。前立腺がんは、ＰＳＭＡを発現する唯一のがんではない。ＰＳＭＡ発現を実証することが知られている非前立腺がんは、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、および腎細胞
癌が含まれる。したがって、ＰＳＭＡ結合部分を有する本明細書に記載される任意の化合物は、ＰＳＭＡ発現を有するがんの診断、画像化または治療において用いることができる。

【0045】

好ましい適用は、がん、例えば、それだけに限られないが、高悪性度グリオーマ、肺がん、特に、前立腺がんおよび転移した前立腺がんの検出またはステージ分類、中等度リスクから高リスクの原発性前立腺がんを伴う患者における転移性疾患の検出、および転移部位、さらに、生化学的に再発性前立腺がんを伴う患者における血清ＰＳＡ値低値の検出である。好ましい別の指示は、血管新生（ｎｅｏａｎｇｉｏｇｅｎｓｉｓ）の画像化および視覚化である。

【0046】

療法、特に、放射線療法を受けようとする医療適応症に関して、がんは、好ましい適応症である。前立腺がんは、特に好ましい適応症である。
さらなる態様では、本発明は、がん、好ましくは、前立腺がんを診断および／またはステージ分類する方法における使用のための、本明細書中で上記に定義された、本発明の化合物を提供する。

【0047】

本開示は、さらに、次の項目に関する。
式（Ｖ）による化合物：

【0048】

【化4】

【0049】

または薬学的に許容されるその塩であって、キレート化放射性カチオンを含有し、またはＦが場合によって^１８Ｆである、化合物。
本化合物は、Ｓｃ、Ｃｕ、Ｇａ、Ｙ、Ｉｎ、Ｔｂ、Ｈｏ、Ｌｕ、Ｒｅ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ａｃ、ＥｒおよびＴｈのカチオンから選択されるキレート化カチオンを含むことができる。キレート化カチオンは、放射性であり得る。キレート化放射性カチオンは、ガリウム、エルビウム、銅、スカンジウム、ルテチウムまたはイットリウムのうちのいずれかの放射性同位体（複数可）であり得る。

【0050】

式（Ｖａ）の化合物：

【0051】

【化5】

【0052】

または薬学的に許容されるその塩［式中、
各Ｘは、独立して、ＯＨまたはＯ^－であり；
Ｍは、キレート化放射性カチオンであり、または非存在であり；
Ｆは、場合によって、^１８Ｆである］。

【0053】

式（Ｖａ）の化合物において、Ｘは、ＯＨであり得る。Ｘは、Ｏ^－であり得る。Ｍが存在する場合、Ｘ基のうちの１つまたは複数は、Ｍにキレート化することができる。
式（Ｖａ）の化合物において、Ｍは、キレート化放射性カチオンであり得る。Ｍは、非存在でもよい。Ｍは、１つまたは複数のＸ基にキレート化された放射性カチオンであり得る。Ｍは、１個または複数のＮ原子にキレート化された放射性カチオンであり得る。Ｍは、１個もしくは複数のＮ原子または１つもしくは複数のＸ基にキレート化された放射性カチオンであり得る。Ｍは、１個または複数のＮ原子および１つまたは複数のＸ基にキレート化された放射性カチオンであり得る。

【0054】

式（Ｖ）または（Ｖａ）の化合物において、Ｆは、^１８Ｆであり得る。Ｆは、^１９Ｆであり得る。
式（Ｖ）または（Ｖａ）の化合物において、キレート化放射性カチオンは、^４３Ｓｃ、^４４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^５１Ｃｒ、^５２ｍＭｎ、^５８Ｃｏ、^５２Ｆｅ、^５６Ｎｉ、^５７Ｎｉ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６６Ｇａ、^６７Ｇａ ^６８Ｇａ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^８９Ｙ、＜Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^９７Ｒｕ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ，^１１０ｍＩｎ、^１１１Ｉｎ、^１１３ｍＩｎ、^１１４ｍＩｎ、^１１７ｍＳｎ、^１２１Ｓｎ、^１２７Ｔｅ、^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ、^１４９Ｐｍ、^１５１Ｐｍ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１６１Ｔｂ、^１５３Ｓｍ、^１５７Ｇｄ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１６５Ｄｙ、^１６９Ｅｒ、^１６９Ｙｂ、^１７５Ｙｂ、^１７２Ｔｍ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９１Ｐｔ、^１９７Ｈｇ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１２Ｐｂ、^２０３Ｐｂ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈのカチオン、^１８Ｆまたはカチオンを含むカチオン性分子、例えば、^１８Ｆ－［ＡｌＦ］^２＋など；より好ましくは、^４４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６８Ｇａ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、および^２２７Ｔｈのカチオンまたは^１８Ｆを含むカチオン性分子から選択することができる。キレート化放射性カチオンは、Ｓｃ、Ｃｕ、Ｇａ、Ｙ、Ｉｎ、Ｔｂ、Ｈｏ、Ｌｕ、Ｒｅ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ａｃ、ＥｒおよびＴｈのカチオンから選択することができる。キレート化放射性カチオンは、Ｇａであり得る。キレート化放射性カチオンは、Ｌｕ－１７７、Ｙ－９０、またはＡｃ－２２５であり得る。

【0055】

式（Ｖａ）の化合物において、Ｍは、^４３Ｓｃ、^４４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^５１Ｃｒ、^５２ｍＭｎ、^５８Ｃｏ、^５２Ｆｅ、^５６Ｎｉ、^５７Ｎｉ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６６Ｇａ、^６７Ｇａ ^６８Ｇａ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^８９Ｙ、＜Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^９７Ｒｕ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ，^１１０ｍＩｎ、^１１１Ｉｎ、^１１３ｍＩｎ、^１１４ｍＩｎ、^１１７ｍＳｎ、^１２１Ｓｎ、^１２７Ｔｅ、^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ、^１４９Ｐｍ、^１５１Ｐｍ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１６１Ｔｂ、^１５３Ｓｍ、^１５７Ｇｄ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１６５Ｄｙ、^１６９Ｅｒ、^１６９Ｙｂ、^１７５Ｙｂ、^１７２Ｔｍ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９１Ｐｔ、^１９７Ｈｇ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１２Ｐｂ、^２０３Ｐｂ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈのカチオン、^１８Ｆまたはカチオンを含むカチオン性分子、例えば、^１８Ｆ－［ＡｌＦ］^２＋など；より好ましくは、^４４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６８Ｇａ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、および^２２７Ｔｈのカチオンまたは^１８Ｆを含むカチオン性分子から選択することができる。Ｍは、Ｓｃ、Ｃｕ、Ｇａ、Ｙ、Ｉｎ、Ｔｂ、Ｈｏ、Ｌｕ、Ｒｅ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ａｃ、ＥｒおよびＴｈのカチオンから選択することができる。Ｍは、Ｇａでもよい。Ｍは、Ｌｕ－１７７、Ｙ－９０、またはＡｃ－２２５でもよい。

【0056】

可能な限り少ない異性体で化合物を合成することが有利である。これらの異性体は、分離することができ、単一の異性体のみが、ｉｎ－ｖｉｖｏで用いられ、したがって、誤った異性体は、単純に処分され、用いられない。したがって、定義された不斉中心のうちのいずれかのラセミ化または反転を最小限にする条件は、理想的には回避される。

【0057】

やはり記載されるのは、
ａ）式（Ｉ）の化合物：

【0058】

【化6】

【0059】

を、式（ＩＩ）の化合物：

【0060】

【化7】

【0061】

と反応させて、式（ＩＩＩ）の化合物：

【0062】

【化8】

【0063】

［式中、ＰＧ_１は、ｔＢｕであり、ＰＧ_２は、Ｆｍｏｃであり、ＰＧ_３は、Ｄｄｅであり；
反応条件は、塩基の使用を伴い、塩基は、２，４，６－コリジンまたは２，６－ジメチルピリジンである］を形成するステップと；
ｂ）式（ＩＶ）の化合物：

【0064】

【化9】

【0065】

を形成するのに適した条件下で、式（ＩＩＩ）の化合物を反応させるステップと、
ｃ）（Ｖ）の化合物：

【0066】

【化10】

【0067】

を形成するのに適した条件下で、式（ＩＶ）の化合物を反応させるステップと
を含む、化合物を生成する方法である。
による方法は、化合物（ＩＩ）が、化合物（Ｉ）との反応前に、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）および２，４，６－コリジンと反応させることにより、事前活性化されるものを含む。事前活性化を、５分以内に行う。

【0068】

短い賦活化時間と共に、塩基としての２，４，６－コリジンまたは２，６－ジメチルピリジンの使用は、他の窒素性塩基、例えば、ＤＩＰＥＡなどと比較した場合、活性化キラル化合物（ＩＩ）のラセミ化を最小限にするのに役立つ。より立体的に妨害された塩基は、酸の不斉中心における酸性プロトンを抽出せず、そのため、アミンにカップリングする前にラセミ化を弱める。

【0069】

本明細書中で開示されるのは、式（ＶＩ）

【0070】

【化11】

【0071】

による化合物または薬学的に許容されるその塩である。
キレート化金属が示される場合、キレートされる酸基は、単に代表としてＣＯＯ^－と示されるにすぎず、等価の第４の酸は、部分的にキレート化することもでき、そのため、文字通りＣＯＯＨでなくてもよい。

【0072】

本明細書中で開示されるのは、式（ＶＩＩ）

【0073】

【化12】

【0074】

による化合物または薬学的に許容されるその塩である。
本明細書中で開示されるのは、式（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物を含む医薬または診断用組成物である。コンジュゲート、化合物または組成物は、がん診断または画像化剤として用いることができる。

【0075】

開示されるのは、式（Ｖ）もしくは（ＶＩ）によるコンジュゲート、化合物または組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、がんを画像化および／または診断する方法である。

【0076】

開示されるのは、がんの治療における使用のための、式（Ｖ）もしくは（ＶＩ）によるコンジュゲート、化合物または組成物である。
開示されるのは、血管新生／血管形成の診断、画像化または予防における使用のための、式（Ｖ）もしくは（ＶＩ）によるコンジュゲート、化合物または組成物である。

【0077】

開示されるのは、前立腺、乳、肺、結腸直腸または腎細胞癌である、がん診断もしくは画像化剤としての使用のためまたはがんの治療における使用のための、式（Ｖ）もしくは（ＶＩ）によるコンジュゲート、化合物または組成物である。

【0078】

図は、次の通り図示される。

【図面の簡単な説明】

【0079】

【図1】ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ ２０１６Ｇにおける９つの参照物質の決定の模範的な相関を示す図である。

【図2a】［１９Ｆ］［ｎａｔＧａ］－ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃ（［１９Ｆ］［ｎａｔＧａ］Ｄ／Ｌ－Ｄａｐ－Ｒ／Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７－ｒａｃ）の品質管理、（バッチ１０、（核医学科、ＴＵＭにおける［１８Ｆ］［ｎａｔＧａ］Ｄ／Ｌ－Ｄａｐ－Ｒ／Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７）の生成についての前駆物質）を示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図2b】ピーク指定：エナンチオピュアなＤ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．１と同時注入した図２ａから得られたＤ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．１；ｒｈＰＳＭ７－ｒａｃを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図2c】Ｄ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．１のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図3a】ピーク指定：エナンチオピュアなＬ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．２と同時注入した図２ａから得られたＬ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．２；ｒｈＰＳＭ７－ｒａｃを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図3b】Ｌ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．２のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図4a】ピーク指定：エナンチオピュアなＤ－Ｄａｐ－Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３と同時注入した図２ａから得られたＤ－Ｄａｐ－Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３；ｒｈＰＳＭ７－ｒａｃを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図4b】Ｄ－Ｄａｐ－Ｄ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図5a】ピーク指定：エナンチオピュアなＤ－Ｄａｐ－Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３と同時注入した図２ａから得られたＬ－Ｄａｐ－Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．４；ｒｈＰＳＭ７－ｒａｃを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図5b】Ｌ－Ｄａｐ－Ｄ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ－７．４のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。勾配：Ｂ２５～３５％ ０～４０分、Ｂ９５～９５％ ４０～４５分、Ｂ３５～３５％ ４５～５０分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ、サンプル：１ｍＭ（ＤＭＳＯ）、１０μＬ。

【図6a】ｒｈＰＳＭＡ７．１および７．２のＰＳＭＡへの結合親和性（ＩＣ５０［ｎＭ］）を示す図である。親和性を、放射性リガンド（１ｈ、４℃、ＨＢＳＳ＋１％ＢＳＡ）として、ＬＮＣａＰ細胞（１５００００細胞／ウェル）および（（４－［１２５Ｉ］ヨードベンゾイル）ＫｕＥ（［１２５Ｉ］ＩＢ－ＫｕＥ；ｃ＝０．２ｎＭ）を用いて、決定した。データを、平均±ＳＤ（３つの異なる実験において、ｎ＝３）として表す。

【図6b-1】ｒｈＰＳＭＡ７異性体のＰＳＭＡへの結合親和性［ｎＭ］の決定を示す図である。４つのカラムのそれぞれは、ｒｈＰＳＡＭ７．１（左側）からｒｈＰＳＭＡ７．４（右側）についての個別の親和性測定を示す図である。図６ａへの説明文に記載される条件。

【図6b-2】図６ｂ続き。

【図6b-3】図６ｂ続き。

【図7】図６ａおよび図６ｂ中で示される個別のＩＣ５０［ｎＭ］測定の描写を示す図である。ｒｈＰＳＭＡ７．１の値番号５は、図６ａへの説明文において記載される条件が削除された。

【図8】個別の内部移行測定［［^１２５Ｉ］ＩＢ－ＫｕＥの％］の描写を示す図である。ＬＮＣａＰ細胞（３７℃、ＤＭＥＭ Ｆ１２＋５％ＢＳＡ、１２５０００細胞／ウェル）において決定した、参照リガンド（［^１２５Ｉ］Ｉ－ＢＡ）ＫｕＥ（ｃ＝０．２ｎＭ）の％として１時間で、内部移行された活性（ｃ＝０．５ｎＭ）。データは、非特異的結合（１０μｍｏｌ ＰＭＰＡ）に対して補正され、平均±ＳＤ（ｎ＝３）として表される。

【図9】ｒｈＰＳＭＡ異性体のｌｏｇＰ’ｓの個別の測定の描写を示す図である。

【図10】ＬＮＣａＰ担腫瘍ＳＣＩＤマウスにおける１ｈ ｐ．ｉでの^１８Ｆ－標識ｒｈＰＳＭＡトレーサーの体内分布（％ＩＤ／ｇ）を示す図である。データは、平均±ＳＤ（ｒｈＰＳＭＡ７．１の場合ｎ＝４、７．２の場合ｎ＝５、７．３の場合ｎ＝４、７．４の場合ｎ＝５および７－ｒａｃの場合ｎ＝３）として表される。

【図11】ＬＮＣａＰ担腫瘍ＳＣＩＤマウスにおける１ｈ ｐ．ｉでのＰＭＰＡ（８ｍｇ／ｋｇ）と同時注入される^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡｓの体内分布［％ＩＤ／ｇ］を示す図である。データは、平均±ＳＤ（ｎ＝３）として表される。

【図12】アミド結合の代謝開裂により生成されたあり得る種を示す図である。ｉＬ：開裂は、親油性の増加を伴う種を形成し；ＤＦ：脱フッ素化；ｎｄ：放射活性でないため、不検出。

【図13】左：重複ピーク１（ｒｈＰＳＭＡ７．２）および２（ｒｈＰＳＭＡ７．３）のグラフ解析；右：Ｓｙｓｔａｔ ＰｅａｋＦｉｔソフトウェアによるピークプロフィールの逆重畳積分および積分）；最上部：適合させた実験データ、最下部：畳み込みを解いた単一ピークを示す図である。

【図14a】ピーク４（ｒｈＰＳＭＡ７．１）の（ＨＰＬＣプログラムによる）従来の積分および（「ＰｅａｋＦｉｔ」による）逆重畳積分の再現性を評価するために、相対的変化（注射したラセミ混合物の変化％）の定量化を示す図である。両法は、このピークについての類似の性能を実証する。

【図14b】ピーク３（ｒｈＰＳＭＡ７．４）の（ＨＰＬＣプログラムによる）従来の積分および（「ＰｅａｋＦｉｔ」による）逆重畳積分の再現性を評価するために、相対的変化（注射したラセミ混合物の変化％）の定量化を示す図である。両法は、このピークについての類似の性能を実証する。

【図15】注射溶液（［^１８Ｆ］［^ｎａｔＧａ］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃ中のその割合に対する血液、肝臓、腎臓、腫瘍および尿中の各ｒｈＰＳＡＭ７．１～７．４異性体の変化百分率を示す図である。データは、平均値±ＳＤとして表される（ｎ＝４；図１６をやはり参照のこと）。

【図16】注射溶液（［^１８Ｆ］［^ｎａｔＧａ］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃ）中のその割合に対する血液、肝臓、腎臓、腫瘍および尿中の各サンプルおよび実験）の場合の各ｒｈＰＳＡＭ７．１～７．４異性体の変化百分率を示す図である。分析を、Ｓｙｓｔａｔ ＰｅａｋＦｉｔで行った。

【図17】左：肝臓サンプル（３０．０７．２０１８、全ｃｔｓ：１４２ｃｔｓ）を含むＴＬＣプレートのＴＬＣスキャナープロフィールを示す図である。それらの不十分な統計および限定された正当性により、ｃｔｓ＜２００であるデータセットを除去した。右：肝臓サンプルを含むＴＬＣプレートの写真画像（Ｐｈｏｐｈｏｉｍａｇｅ）：移動トレーサーの長いテーリングを示す図である。

【図18】左：品質管理サンプル（０１．０８．２０１８、全ｃｔｓ：３８４）を含むＴＬＣプレートのＴＬＣスキャナープロフィールを示す図である。右：尿、腎臓、肝臓、腫瘍、血液およびＱＫサンプルを有するＴＬＣプレートの模範的な写真画像を示す図である。

【図19】トレーサーの臨床応用前の核医学科における品質管理の一部としての［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃ（３０．０７．２０１８）の放射性－ＴＬＣを示す図である。トレーサーのテーリングが、配合物緩衝液において（したがって、タンパク質の非存在下で）、さらに観察されることが留意される。

【図20】尿サンプル（３０．０７．２０１８）の放射性－ＴＬＣによる遊離［Ｆ－１８］フッ化物および「未変化」［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃの定量化を示す図である。

【図21-1】左：それぞれの［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＡＭ－７．ｘトレーサーで注射された正常マウス４匹から採取しプールした尿の放射性－ＨＰＬＣ分析を示す図である。右：１ｈ（７．１．、７．２．）、０．５ｈ（７．３．）および２ｈ（７．４．）にわたって、それぞれの［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＡＭ－７．ｘトレーサーでスパイクした「冷」尿の放射性－ＨＰＬＣ分析を示す図である。ＨＰＬＣ－条件：溶媒Ａ：Ｈ２０＋０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ；勾配：アイソクラティック５％ ０～３分、Ｂ２５～３５％ ３～４３分、Ｂ９５～９５％ ４３～４８分；流量：１ｍＬ／分、カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００－５ Ｃ１８、１２５×４．６ｍｍ。

【図21-2】図２１続き。

【図22】カートリッジ固定化およびＴＬＣによる尿中の放射活性種の分離を示す図である。最上部：１．６分における小さい割合および約３４．５分における未変化トレーサーを示す、マウスにおける［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３の３０分ｐ．ｉ．尿の放射性－ＨＰＬＣ分析を示す図である。最下部（左）：［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３の３０分ｐ．ｉ．のマウスの尿を希釈し、ＳＴＲＡＴＡ－Ｘカートリッジ固定化にかけた。カートリッジを洗浄し、ＭｅＣＮ／水（６０／４０ｖ／ｖ＋１％ＴＦＡ）で溶出し；未変化トレーサーのみを検出した。最下部（右）：カートリッジ固定化（非保留構成成分）から得られたブレークスルーおよびカートリッジからＭｅＣＮ／水を最後に溶出した画分は、ＴＬＣにより分析した（最下部、右）。［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３ ９６．１％および［Ｆ－１８］フッ化物３．９％のみが、カートリッジの溶離液において見出され、逆の比は、カートリッジ（［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３ ３．４％および［Ｆ－１８］フッ化物９６．６％のみ）のブレークスルーにおいて見出された。

【図23】マウス［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３の新鮮なおよび非放射性の尿に加え、その後、０．５μｍｏｌ冷Ｆ－１９－フッ化物を加え；２ｈインキュベートした図である。放射活性を、［Ｆ－１８］フッ化物（１．６分におけるピーク）を表す非常に親水性の画分に完全に（９８．５％）転換した。注：１．６分におけるピークを、引き続いて、ＱＭＡカートリッジにおいて固定化し、ＮａＣｌ（１Ｍ）（＝フッ化物）で溶出した。

【図24】ＳＵＶｍａｘにより実証される通り、１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７（左）および１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３（右）の腫瘍病変における臨床体内分布および取込みを示す図である。データは、平均±ＳＤとして表される。

【図25】ＳＵＶ平均により実証される通り、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７（左）および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３（右）の腫瘍病変における臨床体内分布および取込みを示す図である。データは、平均±ＳＤとして表される。

【図26】ＳＵＶｍａｘ対バックグラウンド比により実証される通り、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７（左）および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３（右）の腫瘍病変における臨床体内分布および取込みを示す図である。データは、平均±ＳＤとして表される。

【図27】ＳＵＶ平均対バックグラウンド比により実証される通り、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７（左）および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３（右）の腫瘍病変における臨床体内分布および取込みを示す図である。データは、平均±ＳＤとして表される。

【図28】 ^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３ ＰＥＴ－画像化の２つの臨床症例を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0080】

これらの実施例は、本発明を例示している。

【実施例0081】

実施例１：材料および方法
Ｆｍｏｃ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル－）および他のすべての保護アミノ酸類似体を、Ｂａｃｈｅｍ社（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）またはＩｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ社（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。トリチルクロリドポリスチレン（ＴＣＰ）樹脂を、ＰｅｐＣｈｅｍ社（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。Ｃｈｅｍａｔｅｃｈ社（Ｄｉｊｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）によって、キレート剤ＤＯＴＡＧＡ－無水物、（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）_４および（Ｓ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）_４が供給された。すべての必要な溶媒および他の有機試薬を、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ社（Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｍｕｎｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）またはＶＷＲ社（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。ペプチドの固相合成を、Ｉｎｔｅｌｌｉ－Ｍｉｘｅｒシリンジシェーカー（Ｎｅｏｌａｂ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、手動操作により行った。分析用および分取逆相高圧クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を、ＳＰＤ－２０Ａ ＵＶ／Ｖｉｓ検出器（２２０ｎｍ、２５４ｎｍ）をそれぞれ装備した、Ｓｈｉｍａｄｚｕ勾配系（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、Ｎｅｕｆａｈｒｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて行った。Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ１００ Ｃ１８（１２５×４．６ｍｍ、５μｍ粒度）カラム（ＣＳ ＧｍｂＨ社、Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、流速１ｍＬ／分で、分析用測定のために用いた。ある特定の勾配および対応する保持時間ｔ_Ｒを、本文中で引用する。分取ＨＰＬＣ精製を、Ｍｕｌｔｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ １８（２５０×１０ｍｍ、粒度５μｍ）カラム（ＣＳ ＧｍｂＨ社、Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、一定流速５ｍＬ／分で行った。分析用および分取放射性ＲＰ－ＨＰＬＣを、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １００ Ｃ１８（５μｍ、１２５×４．０ｍｍ）カラム（ＣＳ ＧｍｂＨ社、Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて行った。すべてのＨＰＬＣ操作のための溶離液は、水（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）であり、いずれも０．１％トリフルオロ酢酸を含有した。物質の特徴付けのためのエレクトロスプレーイオン化－質量スペクトルを、ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ^Ｌ ＣＭＳ質量分析計（Ａｄｖｉｏｎ Ｌｔｄ．、Ｈａｒｌｏｗ、ＵＫ）で取得した。ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＨＤ－３００またはＡＶＨＤ－４００分光計において３００Ｋで記録した。ｐＨ値を、ＳｅｖｅｎＥａｓｙ ｐＨ－メーター（Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ社、Ｇｉｅｓｓｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定した。

【0082】

合成プロトコール
１）Ｆｍｏｃ－戦略後の固相ペプチド合成
ＴＣＰ－樹脂負荷（ＧＰ１）
トリチルクロリドポリスチレン（ＴＣＰ）樹脂のＦｍｏｃ－によって保護されたアミノ酸（ＡＡ）による負荷を、ＴＣＰ－樹脂（１．９５ｍｍｏｌ／ｇ）およびＦｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨ（１．５当量）の無水ＤＣＭ溶液をＤＩＰＥＡ（４．５当量）で室温で２ｈ撹拌することにより行った。１５分間メタノール（２ｍＬ／ｇ樹脂）を加えることにより、残りのトリチルクロリドに、帽子をかぶせた。引き続いて、樹脂をろ過し、ＤＣＭ（２×５ｍＬ／ｇ樹脂）、ＤＭＦ（２×５ｍＬ／ｇ樹脂）、メタノール（５ｍＬ／ｇ樹脂）で洗浄し、真空中で乾燥した。Ｆｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨの最終負荷ｌを、次の等式により決定した。

【0083】

【数1】

【0084】

樹脂アミド結合形成後（ＧＰ２）
基本単位の樹脂結合ペプチドへのコンジュゲーションのために、ＴＢＴＵおよびＨＯＢＴの混合物を、ＤＭＦ（１０ｍＬ／ｇ樹脂）中の塩基として５分間ＤＩＰＥＡまたは２，４，６－トリメチルピリジンとの前活性化のために用いる。各コンジュゲーションステップのための正確な化学量論および反応時間を、合成プロトコールにおいて示す。反応後、樹脂を、ＤＭＦ（６×５ｍＬ／ｇ樹脂）で洗浄した。

【0085】

樹脂Ｆｍｏｃ－脱保護後（ＧＰ３）
樹脂－結合Ｆｍｏｃ－ペプチドを、ＤＭＦ（ｖ／ｖ、８ｍＬ／ｇ樹脂）中の２０％ピペリジンで５分間処理し、引き続いて、１５分間処理した。後で、樹脂を、ＤＭＦ（８×５ｍＬ／ｇ樹脂）で十分に洗浄した。

【0086】

樹脂Ｄｄｅ－脱保護後（ＧＰ４）
Ｄｄｅ－によって保護されたペプチド（１．０当量）を、２％ヒドラジン一水和物のＤＭＦ（ｖ／ｖ、５ｍＬ／ｇ樹脂）溶液に溶解し、２０分間振り混ぜた（ＧＰ４ａ）。本Ｆｍｏｃ－基の場合、Ｄｄｅ－脱保護を、イミダゾール（０．９２ｇ／ｇ樹脂）、塩酸ヒドロキシルアミン（１．２６ｇ／ｇ樹脂（ｒｅｉｓｎ））のＮＭＰ（５．０ｍＬ）およびＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液を、室温で３ｈ加えることにより行った（ＧＰ４ｂ）。脱保護後、樹脂を、ＤＭＦ（８×５ｍＬ／ｇ樹脂）で洗浄した。

【0087】

酸に不安定な保護基の同時の脱保護による樹脂からのペプチド開裂（ＧＰ５）
十分に保護された樹脂－結合ペプチドを、ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／水（ｖ／ｖ／ｖ；９５／２．５／２．５）の混合物に溶解し、３０分間振り混ぜた。溶液を、ろ過し、樹脂を、同じやり方で、さらに３０分間処理した。両方のろ液を合わせ、さらに５ｈ撹拌し、窒素の気流下で濃縮した。ｔｅｒｔ－ブタノールおよび水の混合物に残基を溶解し、その後、凍結乾燥した後、粗ペプチドを得た。

【0088】

^ｎａｔＧａ－複合体形成（ＧＰ６）
^ｎａｔＧａ－複合体形成のために、ペプチド（１．０当量）を、Ｈ_２Ｏ中のｔＢｕＯＨの３：１（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、Ｇａ（ＮＯ_３）_３の水溶液（３．５当量）を加えた。７５℃で３０分間得られた混合物を加熱した後、ペプチドＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。

【0089】

２）ＰＳＭＡ結合モチーフの合成
Ｇｌｕ－尿素－Ｇｌｕ（（ｔＢｕＯ）ＥｕＥ（ＯｔＢｕ）２）

【0090】

【化13】

【0091】

ｔＢｕ－によって保護されたＧｌｕ－尿素－Ｇｌｕ結合モチーフ（ＥｕＥ）を、ｔＢｕ－によって保護されたＧｌｕ－尿素－Ｌｙｓ（ＥｕＫ）についてすでに発表された手順（スキーム１）に従って、合成した。

【0092】

ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）－Ｌ－グルタメート（ｉ）
ｌ－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｌ－グルタメートＨＣｌ２．０ｇ（７．７１ｍｍｏｌ、１．０当量）を含有するＤＣＭの溶液を、氷上で３０分間冷却し、後で、ＴＥＡ２．６９ｍＬ（１９．２８ｍｍｏｌ、２．５当量）およびＤＭＡＰ３．３ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、０．０４当量）で処理した。５分間さらに撹拌した後、ＤＣＭに溶解した１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）１．３８ｇ（８．８４ｍｍｏｌ、１．１当量）を、３０分にわたってゆっくりと加えた。反応混合物を、さらに終夜撹拌し、ＲＴまで加温することを可能にした。反応を、水（２×）およびブライン（２×）の洗浄ステップと同時に飽和ＮａＨＣＯ_３８ｍＬを用いて停止させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水した。残りの溶媒を、真空中で除去し、粗生成物（Ｓ）－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル２－（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボキサミド）ペンタンジオエート（ｉ）を、さらに精製せずに用いた。

【0093】

５－ベンジル１－（ｔｅｒｔ－ブチル）（（（Ｓ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）カルバモイル）－Ｌ－グルタメート（ｉｉ）
粗生成物（Ｓ）－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボキサミド）ペンタンジオエート（ｉ）２．７２ｇ（７．７１ｍｍｏｌ、１．０当量）を、１，２－ジクロロエタン（ＤＣＥ）に溶解し、氷上で３０分間冷却した。この溶液に、ＴＥＡ２．１５ｍＬ（１５．４２ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＨ－Ｌ－Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）－ＯｔＢｕ・ＨＣｌ２．５４ｇ（７．７１ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、溶液を、４０℃で終夜撹拌した。残りの溶媒を、蒸発させ、粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン／ＴＥＡ（５００：５００：０．８；ｖ／ｖ／ｖ）を含有する溶離液混合物を含むシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製した。溶媒の除去後、５－ベンジル－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－（（（Ｓ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）カルバモイル）－Ｌ－グルタメート（ｉｉ）を、無色の油状物として得た。

【0094】

（ｔＢｕＯ）ＥｕＥ（ＯｔＢｕ）_２（ｉｉｉ）
（ｔＢｕＯ）ＥｕＥ（ＯｔＢｕ）_２を合成するために、５－ベンジル－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－（（（Ｓ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）カルバモイル）－Ｌ－グルタメート（ｉｉ）３．１７ｇ（５．４７ｍｍｏｌ、１．０当量）を、ＥｔＯＨ７５ｍＬに溶解し、活性炭担持パラジウム（１０％）０．３４ｇ（０．５７ｍｍｏｌ、０．１当量）を、この溶液に与えた。反応混合物を含有するフラスコを、Ｈ_２で最初にパージし、溶液を、軽いＨ_２－圧力下で（バルーン）室温で終夜撹拌した。粗生成物を、セライトで精製し、溶媒を、真空中で蒸発させた。生成物（ｉｉｉ）を、吸湿性固体（８４％）として得た。ＨＰＬＣ（１５分におけるＢ１０％～９０％）：ｔ_Ｒ＝１１．３分。算出されたモノアイソトピック質量（Ｃ_２３Ｈ_４９Ｎ_２Ｏ_９）：４８８．３；次が見出された。ｍ／ｚ＝４８９．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、５１６．４［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0095】

【化14】

【0096】

３）フッ化ケイ素アクセプターの合成
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）安息香酸（ＳｉＦＡ－ＢＡ）

【0097】

【化15】

【0098】

ＳｉＦＡ－ＢＡを、すでに発表された手順（スキーム２）に従って合成した。すべての反応を、真空ガスマニフォールドを用いて、アルゴン下で、乾燥反応槽中で行った。
（（４－ブロモベンジル）オキシ）（ｔｅｒｔ－ブチル）ジメチルシラン（ｉ）
４－ブロモベンジルアルコール（４．６８ｇ、２５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水ＤＭＦ（７０ｍＬ）撹拌溶液に、イミダゾール（２．０４ｇ、３０．０ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＴＢＤＭＳＣｌ（４．５２ｇ、３０．０ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、得られた混合物を、室温で１６ｈ撹拌した。次いで、混合物を、氷冷Ｈ_２Ｏ（２５０ｍＬ）に注ぎ、Ｅｔ_２Ｏ（５×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機画分を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２×１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮して、粗生成物を得、これを、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、５％ＥｔＯＡｃ／ガソリン）により精製して、無色の油状物（７．１８ｇ、９５％）としてｉを得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl3): δ [ppm] = 0.10 (6H, s, SiMe₂t-Bu), 0.95 (9H, s, SiMe₂tBu), 4.69 (2H, s, CH₂OSi), 7.21 (2H, d), 7.46 (2H, d).ＨＰＬＣ（１５分でＢ５０～１００％）：ｔ_Ｒ＝１５分。

【0099】

ジ－ｔｅｒｔ－ブチル｛４－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）メチル］フェニル｝フルオロシラン（ｉｉ）
磁気撹拌下で－７８℃で、ｔＢｕＬｉのペンタン（７．２９ｍＬ、１．７ｍｏｌ／Ｌ、１２．４ｍｍｏｌ ２．４当量）溶液を、（（４－ブロモベンジル）オキシ）（ｔｅｒｔ－ブチル）ジメチルシラン（ｉ）（１．５６ｇ、５．１８ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を、－７８℃で３０分間撹拌した後、得られた懸濁液を、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジフルオロシラン（１．１２ｇ、６．２３ｍｍｏｌ、１．２当量）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）冷却（－７８℃）溶液に、３０分間にわたって滴加した。反応混合物を放置して、１２ｈにわたって室温まで加温し、次いで、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で加水分解した。有機層を分離し、水層を、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで脱水し、ろ過した。ろ液を、真空中で濃縮して、帯黄色の油状物（１．８８ｇ、９５％）として、ｉｉを生成
した。これを、さらに精製せずに、その後の反応のために用いた。ＮＭＲスペクトルを、文献^［２］中で報告されたデータに従った。ＨＰＬＣ（２０分でＢ５０～１００％）：ｔ_Ｒ＝１９分。

【0100】

４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシラニル）ベンジルアルコール（ｉｉｉ）
濃ＨＣｌ水溶液（０．５ｍＬ）の触媒量を、ｉｉ（１．８８ｇ、４．９２ｍｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（５０ｍＬ）懸濁液に加えた。反応混合物を、室温で１８ｈ撹拌し、次いで、溶媒および揮発物を、減圧下で除去した。残基を、ジエチルエーテル（４０ｍＬ）に再溶解し、溶液を、ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。水層を、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで脱水し、ろ過した。ろ液を、真空中で濃縮して、凝固した帯黄色の油状物（１．２９ｇ、９８％）としてｉｉｉを生成した。生成物を、さらに精製せずに用いた。ＮＭＲスペクトルを、文献^［２］中で報告されたデータに従った。ＨＰＬＣ（１５分でＢ５０～１００％）：ｔ_Ｒ＝８．２分。

【0101】

４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）ベンズアルデヒド（ｉｖ）
アルコールｉｉｉ（１．３７ｇ、５．１０ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を、クロロクロム酸ピリジニウム（２．７５ｇ、１２．８ｍｍｏｌ、２．５当量）の乾燥ジクロロメタン（６０ｍＬ）撹拌氷冷懸濁液に滴加した。反応混合物が、０℃で３０分間および室温で２．５ｈ撹拌した後、無水ジエチルエーテル（４０ｍＬ）を加え、上澄み溶液を、黒色のガム様物質からデカントした。不溶性物質を、ジエチルエーテルで十分に洗浄し、合わせた有機相を、ろ過のために、シリカゲルの短いパッド（粗生成物１ｇ当たり１０ｃｍ）に通した。溶媒を、真空中で除去して、帯黄色の油状物（１．３１ｇ、９６％）として、アルデヒドｉｖを生成した。ＮＭＲスペクトルを、文献^［２］中で報告されたデータに従った。ＨＰＬＣ（１５分でＢ５０～１００％）：ｔ_Ｒ＝１０．５分。

【0102】

４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）安息香酸（ｖ）
室温で、１Ｍ ＫＭｎＯ_４水溶液（３０ｍＬ）を、ｉｖ（１．３１ｇ、４．９２ｍｍｏｌ、１．０当量）、ｔｅｒｔ－ブタノール（３０ｍＬ）、ジクロロメタン（３．３ｍＬ）、および１．２５Ｍ ＮａＨ_２ＰＯ_４・Ｈ_２Ｏ緩衝液（２０ｍＬ）の混合物に、ｐＨ４．０～４．５で加えた。混合物を、２５分間撹拌した後、これを、５℃まで冷却し、その上で、過剰なＫＭｎＯ_４（０．７８ｇ、４．９２ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。次いで、飽和Ｎａ_２ＳＯ_３水溶液（５０ｍＬ）を加えることにより、反応をクエンチした。２Ｍ ＨＣｌ水溶液を加えた後、ＭｎＯ_２のすべてを溶解した。得られた溶液を、ジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮して、白色固形物を生成し、これを、Ｅｔ_２Ｏ／ｎ－ヘキサン（１：３、１２ｈ）から再結晶により精製して、ｖ（０．８４ｇ、６０％）を得た。ＮＭＲスペクトルを、文献^［２］中で報告されたデータに従った。ＨＰＬＣ（１５分でＢ５０～１００％）：ｔ_Ｒ＝８．５分。

【0103】

【化16】

【0104】

４）ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４の合成
ｒｈＰＳＭＡ－７の４種の異なる異性体の調製のための第１の合成ステップは、同一であり、一緒に行い、上記に記載した標準的なＦｍｏｃ－ＳＰＰＳプロトコールを適用し、樹脂結合Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）－ＯＨから開始する。ＤＭＦ中の２０％ピペリジン（ＧＰ３）を含むＦｍｏｃ基の開裂後、（ｔＢｕＯ）ＥｕＥ（ＯｔＢｕ）_２（２．０当量）を、４．５ｈ、ＤＭＦ中でＨＯＡｔ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）およびＤＩＰＥＡ（６．０当量）とコンジュゲートした。ＤＭＦ中の２％ヒドラジンの混合物を含むＤｄｅ－基（ＧＰ４ａ）の開裂後、無水コハク酸（７．０当量）およびＤＩＰＥＡ（７．０当量）のＤＭＦ溶液を加え、２．５ｈ反応させた。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）・ＨＣｌ（２．０当量）のコンジュゲーションを、ＤＭＦ中のＨＯＡｔ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）およびＤＩＰＥＡ（６．０当量）の混合物を樹脂に加えることにより達成した。５分間前活性化させた後、ＤＭＦに溶解したＦｍｏｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）・ＨＣｌ（２．０当量）を加え、２．５ｈ反応させた（ＧＰ２）。Ｆｍｏｃ－基のその後の開裂を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンの混合物を加えることにより行った（ＧＰ３）。最後に、樹脂を、ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４を合成するために分割した（スキーム３）。

【0105】

ｒｈＰＳＭＡ－７．１（Ｄ－Ｄａｐ－（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ）：

【0106】

【化17】

【0107】

Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨ（２．０当量）を、ＤＭＦ中のＨＯＡｔ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）の混合物中で前活性化させ、２．５ｈ樹脂－結合ペプチドに加えた。次の直交性Ｄｄｅ－脱保護を、イミダゾールを用いて行い、塩酸ヒドロキシルアミンを、３ｈ、ＮＭＰおよびＤＭＦの混合物に溶解した。ＳｉＦＡ－ＢＡ（１．５当量）を、ＤＭＦ中の活性化試薬として、２ｈ、ＨＯＡｔ（１．５当量）、ＴＢＴＵ（１．５当量）およびＤＩＰＥＡ（４．５当量）を有する側鎖の遊離アミンと反応させた。ピペリジン（ＧＰ３）によるＦｍｏｃ－脱保護の後、（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）_４（２．０当量）を、ＤＭＦ中で、２
．５ｈ、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）とコンジュゲートした。酸に不安定な保護基の同時の脱保護による樹脂からの開裂を、ＧＰ５に従って、ＴＦＡで行った。ペプチドの^ｎａｔＧａ－複合体形成を、ＧＰ６に記載される通り、行った。

【0108】

ｒｈＰＳＭＡ－７．２（Ｌ－Ｄａｐ－（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ）：

【0109】

【化18】

【0110】

Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨ（２．０当量）を、ＤＭＦ中でＨＯＡｔ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）の混合物で、２．５ｈ前活性化させた。直交性Ｄｄｅ－脱保護後、ＳｉＦＡ－ＢＡおよびＦｍｏｃ－開裂のコンジュゲーションを、ｒｈＰＳＭＡ－７．１について記載される通り行った。（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）_４（２．０当量）を、ＤＭＦ中で、２．５ｈ、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）とコンジュゲートした。酸に不安定な保護基の同時の脱保護による樹脂からの開裂を、ＧＰ５に従って、ＴＦＡで行った。ペプチドの^ｎａｔＧａ－複合体形成を、ＧＰ６に記載される通り、行った。

【0111】

ｒｈＰＳＭＡ－７．３（Ｄ－Ｄａｐ－（Ｓ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ）：

【0112】

【化19】

【0113】

Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨ（２．０当量）を、ＤＭＦ中でＨＯＡｔ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）の混合物で、２．５ｈ前活性化させた。直交性Ｄｄｅ－脱保護後、ＳｉＦＡ－ＢＡおよびＦｍｏｃ－開裂のコンジュゲーションを、ｒｈＰＳＭＡ－７．１について記載される通り行った。（Ｓ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）_４（２．０当量）を、ＤＭＦ中で、２．５ｈ、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）とコンジュゲートした。酸に不安定な保護基の同時の脱保護による樹脂からの開裂を、ＧＰ５に従って、ＴＦＡで行った。ペプチドの^ｎａｔＧａ－複合体形成を、ＧＰ６に記載される通り、行った。

【0114】

ｒｈＰＳＭＡ－７．４（Ｌ－Ｄａｐ－（Ｓ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ）：

【0115】

【化20】

【0116】

Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨ（２．０当量）を、ＤＭＦ中でＨＯＡｔ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）の混合物で、２．５ｈ前活性化させた。直交性Ｄｄｅ－脱保護後、ＳｉＦＡ－ＢＡおよびＦｍｏｃ－開裂のコンジュゲーションを、ｒｈＰＳＭＡ－７．１について記載される通り行った。（Ｓ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）_４（２．０当量）を、ＤＭＦ中で、２．５ｈ、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ＴＢＴＵ（２．０当量）および２，４，６－トリメチルピリジン（６．７当量）とコンジュゲートした。酸に不安定な保護基の同時の脱保護による樹脂からの開裂を、ＧＰ５に従って、ＴＦＡで行った。ペプチドの^ｎａｔＧａ－複合体形成を、ＧＰ６に記載される通り、行った。

【0117】

ｒｈＰＳＭＡ－７．１：
ＨＰＬＣ（１５分でＢ１０～７０％）：ｔ_Ｒ＝１０．５分。
ＨＰＬＣ（４０分でＢ２５～３５％）：ｔ_Ｒ＝３１．４分。

【0118】

ｒｈＰＳＭＡ－７．２：
ＨＰＬＣ（１５分でＢ１０～７０％）：ｔ_Ｒ＝１０．４分。
ＨＰＬＣ（４０分でＢ２５～３５％）：ｔ_Ｒ＝２７．９分。

【0119】

ｒｈＰＳＭＡ－７．３：
ＨＰＬＣ（１５分でＢ１０～７０％）：ｔ_Ｒ＝１０．４分。
ＨＰＬＣ（４０分でＢ２５～３５％）：ｔ_Ｒ＝２８．１分。

【0120】

ｒｈＰＳＭＡ－７．４：
ＨＰＬＣ（１５分でＢ１０～７０％）：ｔ_Ｒ＝１０．５分。
ＨＰＬＣ（４０分でＢ２５～３５％）：ｔ_Ｒ＝２９．１分。

【0121】

ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４：
算出されたモノアイソトピック質量（Ｃ６３Ｈ９６ＦＧａＮ１２Ｏ２５Ｓｉ）：１５３６．６ 次が見出された：ｍ／ｚ＝１５３９．４［Ｍ＋Ｈ］＋、７７０．３［Ｍ＋２Ｈ］２^＋。

【0122】

【化21】

【0123】

５）^１８Ｆ－標識化
^１８Ｆ－標識化の場合、すでに発表された手順を適用し、これを、わずかに修正した。簡潔に言えば、水性^１８Ｆ^－を、ＳＡＸカートリッジ（Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ Ｃａｒｂｏｎａｔｅ ｌｉｇｈｔ）に通し、これを、水１０ｍＬで前もって調整した。空気１０ｍＬで乾燥した後、無水アセトニトリル１０ｍＬ、その後、空気２０ｍＬで、カートリッジをすすぐことにより、水を除去した。^１８Ｆを、無水アセトニトリル５００μＬに溶解した［Ｋ^＋⊂２．２．２］ＯＨ^－１００μｍｏｌで溶出した。標識化前に、無水アセトニトリル（１Ｍ、３０μＬ）中のシュウ酸３０μｍｏｌを加えた。この混合物を、全体としてまたはＰＳＭＡ－ＳｉＦＡ（無水ＤＭＳＯ中の１ｍＭ）１０～２５ｎｍｏｌのフッ素付加用のアリコートとして用いた。得られた反応混合物を、室温で５分間インキュベートした。トレーサーの精製のために、ＥｔＯＨ１０ｍＬ、その後、Ｈ_２Ｏ１０ｍＬで前もって調整した、Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８ ｌｉｇｈｔ ｃａｒｔｒｉ
ｄｇｅを用いた。標識化混合物を、ＰＢＳ（ｐＨ３）９ｍＬで希釈し、カートリッジを通し、その後、Ｈ_２Ｏ１０ｍＬで希釈した。ペプチドを、水中のＥｔＯＨの４：１混合物（ｖ／ｖ）５００μＬで溶出した。標識された化合物の放射化学純度を、放射性ＲＰ－ＨＰＬＣおよび放射性－ＴＬＣ（シリカゲル６０ ＲＰ－１８ Ｆ_２５４ｓ、移動相：２Ｍ水性ＮａＯＡｃ１０％およびＴＦＡ１％を補充した、Ｈ_２Ｏ中のＭｅＣＮの３：２混合物（ｖ／ｖ））により決定した。

【0124】

６）^１２５Ｉ－標識化
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験（［^１２５Ｉ］Ｉ－ＢＡ）ＫｕＥ用の参照リガンドを、すでに発表された手順に従って調製した。簡潔に言えば、スタンニル化前駆物質（ＳｎＢｕ_３－ＢＡ）（ＯｔＢｕ）ＫｕＥ（ＯｔＢｕ）_２０．１ｍｇを、過酢酸２０μＬ、［^１２５Ｉ］ＮａＩ（７４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ、３．１ＧＢｑ／ｍＬ、４０ｍＭ ＮａＯＨ、Ｈａｒｔｍａｎｎ Ａｎａｌｙｔｉｃ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）５．０μＬ（２１ＭＢｑ）、ＭｅＣＮ２０μＬおよび酢酸１０μＬを含有する溶液に溶解した。反応溶液を、ＲＴで１０分間インキュベートし、カートリッジに負荷し、水１０ｍＬですすいだ（ＭｅＯＨ１０ｍＬおよび水１０ｍＬで前もって調整した、Ｃ１８ Ｓｅｐ Ｐａｋ Ｐｌｕｓカートリッジ）。ＥｔＯＨ／ＭｅＣＮの１：１混合（ｖ／ｖ）２．０ｍＬで溶出後、放射活性溶液を、穏やかな窒素気流下で蒸発乾固させ、ＴＦＡ２００μＬで３０分間処理し、続いて、その後、ＴＦＡを蒸発させた。（［^１２５Ｉ］Ｉ－ＢＡ）ＫｕＥの粗生成物を、ＲＰ－ＨＰＬＣ（２０分でＢ２０％～４０％）により精製した：ｔ_Ｒ＝１３．０分。

【0125】

Ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験
１）ＩＣ_５０の決定
ＰＳＭＡ－陽性ＬＮＣａＰ細胞を、１０％ウシ胎仔血清を補充した、ダルベッコ（Ｄｕｂｌｅｃｃｏ）変法イーグル培地／Ｇｌｕｔａｍａｘ－Ｉを含むＮｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ－１２（１：１）（Ｉｎｖｉｔｒｉｇｏｎ社）中で成長させ、加湿されたＣＯ_２５％雰囲気下で、３７℃で維持した。ＰＳＭＡ親和性（ＩＣ_５０）の決定のために、細胞を、実験の２４±２時間前に回収し、２４穴プレート（１ｍＬ／ウェル中の１．５×１０^５細胞）に播種した。培地の除去後、細胞を、ＨＢＳＳ（１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を加えた、ハンクスの平衡塩類溶液、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ社、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）５００μＬで一度処理し、ＨＢＳＳ２００μＬ（１％ＢＳＡ）で平衡化するために、氷上で１５分放置した。次に、濃度（ＨＢＳＳ中の１０^－１０～１０^－４Ｍを増加させる上での、ＨＢＳＳ（１％ＢＳＡ、対照）またはそれぞれのリガンドを含有する、溶液のウェル当たり２５μＬを加え、それに続いて、ＨＢＳＳ（１％ＢＳＡ）中の（［^１２５Ｉ］Ｉ－ＢＡ）ＫｕＥ（２．０ｎＭ）２５μＬを加えた。すべての実験を、各濃度のために少なくとも３回行った。氷上で６０分インキュベートした後、培地を除去し、ＨＢＳＳ２００μＬで連続的にすすぐことにより、実験を終了した。両ステップの培地を、一画分中で合わせ、遊離放射性リガンドの量を表す。後で、細胞を、１Ｍ ＮａＯＨ２５０μＬで溶解し、次の洗浄ステップのＨＢＳＳ２００μＬで合体させた。結合および遊離放射性リガンドの定量化を、γ－カウンターで達成した。

【0126】

２）内部移行
内部移行試験のために、ＬＮＣａＰ細胞を、実験の２４±２時間前に回収し、２４穴プレート（１ｍＬ／ウェル中の１．２５×１０^５細胞）に播種した。培地の除去の後に、細胞を、ＤＭＥＭ－Ｆ１２（５％ＢＳＡ）５００μＬで一度洗浄し、ＤＭＥＭ－Ｆ１２（５％ＢＳＡ）２００μＬ中で、３７℃で少なくとも１５分間平衡化させた。各ウェルを、遮断のために、ＤＭＥＭ－Ｆ１２（５％ＢＳＡ）または１００μＭ ＰＭＰＡ溶液のいずれか２５μＬで処理した。次に、^６８Ｇａ／^１８Ｆ－標識化ＰＳＭＡ阻害剤（５．０ｎＭ）２５μＬを加え、細胞を、３７℃で６０分間インキュベートした。３分間氷上に２４穴プレートを置くことにより実験を終了し、培地を連続的に除去した。各ウェルを、ＨＢＳＳ２
５０μＬですすぎ、これらの第１の２つのステップから得られた画分を組み合わせ、遊離放射性リガンドの量を表した。表面結合活性の除去を、氷冷ＰＭＰＡ（ＰＢＳ中の１０μＭ）溶液２５０μＬで５分間細胞をインキュベートすることにより達成し、再び、氷冷ＰＢＳ２５０μＬでさらにすすいだ。内部移行された活性を、１Ｍ ＮａＯＨ２５０μＬでおよび１．０Ｍ ＮａＯＨ２５０μＬによるその後の洗浄ステップの画分と組み合わせて、細胞をインキュベートすることにより決定した。各実験（対照および遮断）を、３回行った。遊離、表面結合および内部移行された活性を、γ－カウンターで定量化した。すべての内部移行試験を、（［^１２５Ｉ］Ｉ－ＢＡ）ＫｕＥ（ｃ＝０．２ｎＭ）を用いて参照試験により達成し、これらを類似的に行った。データを、非特異的内部移行を補正し、放射ヨウ素標識された参照化合物について観察された特異的－内部移行に正規化した。

【0127】

３）オクタノール－水分配係数
標識されたトレーサーおよそ１ＭＢｑを、エッペンドルフ管中でリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）およびｎ－オクタノールの（体積による）１：１混合物１ｍＬに溶解した。懸濁液を室温で３分間激しく混合した後、バイアルを、１５０００ｇで３分間遠心し（Ｂｉｏｆｕｇｅ １５、Ｈｅｒａｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ、Ｏｓｔｅｒｏｄｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、２層のアリコート１００μＬを、γカウンターで測定した。実験を、少なくとも６回繰り返した。

【0128】

４）ＨＳＡ結合
ＨＳＡ結合を決定するため、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＨＳＡカラム（５０×３ｍｍ、５μｍ、Ｈ１３Ｈ－２４３３）を、一定流速０．５ｍＬ／分で用いた。移動相（Ａ：ＮＨ_４ＯＡｃ、水中の５０ｍＭ、ｐＨ７およびＢ：イソプロパノール）を、各実験のために新たに調製し、１日用いたにすぎなかった。カラムを、室温で維持し、各実行を、シグナルの検出後に停止して取得時間を減らした。すべての物質を、５０％ ２－プロパノールおよび５０％ ５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．９）に、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。ペプチドに関して幅広いアルブミン結合が想定されたため、選ばれた参照物質は、ＨＳＡ結合１３％～９９％までの範囲を示す。９つのすべての参照物質を、連続的に注射して、ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ ２０１６Ｇで非線形回帰を確立した。

【0129】

【表1】

【0130】

Ｉｎ ｖｉｖｏ実験
すべての動物実験を、ドイツにおける一般動物福祉規制（ｇｅｎｅｒａｌ ａｎｉｍａｌ
ｗｅｌｆａｒｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）および動物の管理および使用のための施設ガイドライン（ｔｈｅ ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ）に従って行った。腫瘍異種移植を確立するために、ＬＮＣａＰ細胞（１０^７細胞／２００μＬ）を、ダルベッコ変法イーグル培地／Ｇｌｕｔａｍａｘ－Ｉ（１：１）およびＭａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含む、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ－１２の１：１混合物（ｖ／ｖ）に懸濁し、６～８週齢のＣＢ１７－ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ社、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）の右肩に皮下接種した。腫瘍が、直径５～８ｍｍまで成長した場合（接種の３～４週後）に、マウスを利用した。

【0131】

１）体内分布
^１８Ｆ－標識化ＰＳＭＡ阻害剤およそ１～２ＭＢｑ（＜０．２ｎｍｏｌ）を、雄のＬＮＣａＰ担腫瘍ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスの尾静脈に注射し、注射の１ｈ後屠殺した（ｎ＝４～５）。選択された臓器を除去し、秤量し、γ－カウンターにおいて測定した。

【0132】

２）代謝試験
ａ）分析用装置
分析用逆相高圧クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を、ＳＰＤ－２０Ａ ＵＶ／Ｖｉｓ検出器（２２０ｎｍ、２５４ｎｍ）を装備した、Ｓｈｉｍａｄｚｕ勾配系（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、Ｎｅｕｆａｈｒｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて行った。Ｍｕｌｔｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ１８（１２５×４．６ｍｍ、５μｍ粒度）カラム（ＣＳ ＧｍｂＨ社、Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、流速１ｍＬ／分で分析用測定用に用いた。すべてのＨＰＬＣ操作のための溶離液は、水（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）であり、いずれも０．１％トリフルオロ酢酸を含有した。放射活性を、ＨＥＲＭ ＬＢ ５００検出器（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ ＧｍｂＨ、Ｂａｄ Ｗｉｌｄｂａｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）へのＵＶ－光度計の出口の接続によって検出した。すべてのＨＰＬＣ操作についての勾配は、次の通りであった。アイソクラティックＢ５％ ０～３分、Ｂ２５～３５％ ３～４３分、Ｂ９５～９５％ ４３～４８分。

【0133】

放射性－薄層クロマトグラフィーの場合、シリカゲル６０ ＲＰ－１８ Ｆ_２５４によってコーティングされたアルミニウム薄板を、２Ｍ水性ＮａＯＡｃ１０％およびＴＦＡ１％を補充した、Ｈ_２Ｏ中のＭｅＣＮの３：２混合物（ｖ／ｖ）からなる移動相と共に用いた。分析を、Ｓｃａｎ－ＲＡＭ放射性－ＴＬＣ検出器（ＬａｂＬｏｇｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．、Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）またはＣＲ ３５
ＢＩＯホスフォイメージャー（Ｄｕｅｒｒ Ｍｅｄｉｃａｌ ＧｍｂＨ、Ｂｉｅｔｉｇｈｅｉｍ－Ｂｉｓｓｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて行った。

【0134】

ｂ）ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４の代謝的安定性の決定
ｉｎ ｖｉｖｏ μ代謝試験のために、それぞれの^１８Ｆ－標識化リガンド（ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４）８～１２ＭＢｑ（＜０．６ｎｍｏｌ）を、健常な雌ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウス（ｎ＝４）の尾静脈に注射した。マウスを、麻酔下で３０分間放置し、尿を、膀胱カテーテルを用いて採取した。尿サンプルを、プールし、９０００ｒｐｍで５分間遠心して、懸濁物を除去した。上澄みを、前述の条件を有する、放射性－ＨＰＬＣ分析のために直接用いた。^１９Ｆのペプチド－結合^１８Ｆとの同位体交換が、尿中で起きていることを実証するために、各化合物を、健常な雌ＣＢ－１７－ＳＣＩＤマウスの尿サンプルでいくつかの時間間隔でインキュベートし、その場合、放射性－ＨＰＬＣおよび／または放射性－ＴＬＣにより分析した。さらに、本実験を、過剰なＮａ^１９Ｆ（０．５μｍｏｌ）を加えて行い、^１８Ｆ－標識化ｒｈＰＳＭＡ－７．３で２ｈインキュベートした。

【0135】

ｃ）ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４のｉｎ ｖｉｖｏ分布の決定
各異性体（ｒｈＰＳＭＡ－７．１～７．４）の相対的取込みを定量化するために、雄の担腫瘍ＣＢ－１７－ＳＣＩＤマウスに、ｒｈＰＳＭＡ－７のラセミ混合物（１８０～２８０ＭＢｑ、Ｓ_Ａ＝２４７～３４９ＧＢｑ／μｍｏｌ、完全に自動化された手順でＫｌｉｎｉｋｕｍ ｒｅｃｈｔｓ ｄｅｒ Ｉｓａｒ（ミュンヘン工科大学病院）で生成された）を注射した。動物を、麻酔下で３０分間放置し、屠殺した。尿、血液、肝臓、腎臓および腫瘍を採取し、以下に記載の手順に加工した。尿サンプルを、９０００ｒｐｍで５分間遠心して、清澄な溶液を生成し、直接、放射性－ＨＰＬＣ分析にかけた。血液を、Ｈ_２Ｏを用いて１ｍＬまで希釈し、１３０００ｇで５分間２回遠心した。上澄みを収集し、Ｓｔｒａｔａ Ｘカートリッジ（３３μｍポリマー逆相５００ｍｇ、ＭｅＯＨ５ｍＬ、その後、Ｈ_２Ｏ５ｍＬで前もって調整した）に負荷した。Ｈ_２Ｏ５ｍＬで洗浄した後、カートリッジを、１％ＴＦＡを補充したＨ_２Ｏ中のＭｅＣＮの６：４混合物（ｖ／ｖ）で溶出した。溶離液を、水で希釈し、放射性－ＨＰＬＣにより分析した。腫瘍、腎臓および肝臓を、ポッターエルベージェム組織グラインダー（Ｋｏｎｔｅｓ Ｇｌａｓｓ Ｃｏ、Ｖｉｎｅｌａｎｄ、ＵＳＡ）またはＭＭ－４００ボールミル（Ｒｅｔｓｃｈ ＧｍｂＨ、Ｈａａｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、ホモジナイズした。

【0136】

Ｉ）ポッターエルベージェム組織グラインダー
腫瘍および腎臓を、組織ホモジナイザーにおいて、抽出緩衝液１ｍＬ（１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）８５０μＬ、２０ｍＭ ＰＭＰＡ１００μＬおよび１Ｍ ＮａＣｌ１００μＬ）で、３０分間別々にホモジナイズした。得られたホモジネートを収集し、１３０００ｇで５分間遠心した。引き続いて、上澄みを収集し、再度遠心し（１３０００ｇ、５分）、Ｓｔｒａｔａ Ｘカートリッジ（３３μｍポリマー逆相５００ｍｇ、ＭｅＯＨ５ｍＬ、その後、Ｈ_２Ｏ５ｍＬで前もって調整した）に負荷した。Ｈ_２Ｏ５ｍＬで洗浄した後、カートリッジを、１％ＴＦＡを補充したＨ_２Ｏ中のＭｅＣＮの６：４混合物（ｖ／ｖ）で
溶出した。各臓器の溶離液を、水で希釈し、放射性－ＨＰＬＣにより分析した。

【0137】

ＩＩ）ＭＭ－４００ボールミル
臓器（腫瘍、腎臓、肝臓）を、２ｍＬ管で、３個の粉砕ボール（直径３ｍｍ）および抽出緩衝液１ｍＬ（１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）８５０μＬ、２０ｍＭ ＰＭＰＡ１００μＬおよび１Ｍ ＮａＣｌ１００μＬ）と共に、３０Ｈｚで１０分間別々にホモジナイズした。ホモジネートを、１３０００ｇで５分間遠心し、上澄みを収集した。引き続いて、ペレットを、抽出緩衝液１ｍＬに懸濁し、再度、ボールミルで３０Ｈｚで１０分間ホモジナイズした。遠心（１３０００ｇ、５分）後、両方の上澄みを合わせ、Ｓｔｒａｔａ Ｘカートリッジ（３３μｍポリマー逆相５００ｍｇ、ＭｅＯＨ５ｍＬ、その後、Ｈ_２Ｏ５ｍＬで前もって調整した）に負荷した。Ｈ_２Ｏ５ｍＬで洗浄した後、カートリッジを、１％ＴＦＡを補充したＨ_２Ｏ中のＭｅＣＮの６：４混合物（ｖ／ｖ）で溶出した。各臓器の溶離液を、水で希釈し、放射性－ＨＰＬＣにより分析した。カートリッジ負荷中のブレークスルーが、非結合型Ｆ－１８の結果でないことを実証するために、上澄みを、やはり、遠心後放射性－ＴＬＣにより検査した。

【0138】

最後に、個別の異性体の比を、抽出されたサンプルのＨＰＬＣプロフィールから決定し、ｒｈＰＳＭＡ－７のラセミ混合物の品質管理から得られた異性体の比と比較した。崩壊補正された抽出－およびカートリッジ負荷－効率、ならびに検査されたサンプルの全抽出活性を、表２に示す。カートリッジ溶出－効率は、すべての実験の場合＞９９％であった。

【実施例0139】

実施例２：結果
クロマトグラフィーピーク指定
クロマトグラフィーピーク指定を、
ａ）ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃミクチャー（ｍｉｃｔｕｒｅ）の
ｂ）各エナンチオピュアｒｈＰＳＭＡ７化合物と同時注入した（ｃｏｎｉｎｊｅｃｔｅｄ）ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃミクチャーとのＵＶプロフィールの比較により行った。

【0140】

次の名称を、異なる異性体：
ｒｈＰＳＭＡ－ｒａｃ：［^１９Ｆ］［^ｎａｔＧａ］Ｄ／Ｌ－Ｄａｐ－Ｒ／Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ７
ｒｈＰＳＭＡ－７－１：［^１９Ｆ］［^ｎａｔＧａ］Ｄ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ７
ｒｈＰＳＭＡ－７－２：［^１９Ｆ］［^ｎａｔＧａ］Ｌ－Ｄａｐ－Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ７
ｒｈＰＳＭＡ－７－３：［^１９Ｆ］［^ｎａｔＧａ］Ｄ－Ｄａｐ－Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ７
ｒｈＰＳＭＡ－７－４：［^１９Ｆ］［^ｎａｔＧａ］Ｌ－Ｄａｐ－Ｓ－ＤＯＴＡＧＡ－ｒｈＰＳＭＡ７のために用いる。

【0141】

【表2】

【0142】

結合親和性
値の第１のセット（ｒｈＰＳＭＡ－７．１およびｒｈＰＳＭＡ－７．２；図６ａ）を、それぞれのリガンドの^ｎａｔＧａ－複合体形成後に直接得られた溶液の希釈シリーズのために用いることにより決定した。第２のデータセット（図６ｂ）において、複合型リガンドを、非複合型^ｎａｔＧａ－塩を分離するために、ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。観察される有意差がまったくなかったため、両シリーズを合併し、平均値（±ＳＤ）の算出のために用いた。

【0143】

【表3】

【0144】

【表4】

【0145】

内部移行試験

【0146】

【表5】

【0147】

【表6】

【0148】

親油性（オクタノール－水分配係数）
ｌｏｇＰ値の決定を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）およびｎ－オクタノール（＝ｌｏｇＰ_{ｏｃｔ／ＰＢＳ}）において行った。

【0149】

【表7】

【0150】

【表8】

【0151】

ヒト血漿タンパク質へのＰＳＭＡ阻害剤の結合

【0152】

【表9】

【0153】

１ｈ ｐｉにおける［^１８Ｆ］［^ｎａｔＧａ］ｒｈＰＳＭＡ７．１～７．４の体内分布

【0154】

【表10】

【0155】

競合による１ｈ ｐｉにおける［^１８Ｆ］［^ｎａｔＧａ］ｒｈＰＳＭＡ７．１－７．４の体内分布

【0156】

【表11】

【0157】

［^１８Ｆ］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃの適用後の血液、腎臓、肝臓、尿および腫瘍における、各ｒｈＰＳＭＡ７．ｘ異性体の量の相対的変化の定量化。
［^１８Ｆ］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃのＬＮＣａＰ担腫瘍マウスへの注射の３０分後に、血液、肝臓、腎臓、尿および腫瘍において、各ｒｈＰＳＭＡ７異性体の相対的変化を定量化することを目的として、２種の異なる均質化方法（ポッターおよびボールミル）を、腎臓、肝臓および腫瘍組織からトレーサーを抽出するために用いた（材料および方法を参照のこと）。

【0158】

表１２は、両方の均質化方法についての観察された効率および（タンパク質画分からトレーサーを分離するための）その後の固相抽出手順の有効性をまとめて示している。

【0159】

【表12】

【0160】

ポッターを用いたサンプルから得られた活性の抽出は、かなり効率的であり、ボールミルの使用は、期待外れであった。それにもかかわらず、ボールミルが＞６０％の抽出効率でも、達成された。

【0161】

ｒｈＰＳＭＡ７のアミド結合の代謝開裂により形成され得る、あり得る種を考慮すると、ｂ）Ｆ１８－フッ化物の親油性を有意に増加するａ）種のみは、ありそうに思える。したがって、原理的に、図１２に示される「ｉＬ」種は、組織サンプル（水抽出）から抽出されず、したがって、最終分析に現れないことが起こり得ると思われる。しかしながら、かかる種が、肝臓および腸においてｉｎ ｖｉｖｏで現れるはずである（親油性化合物の肝胆道排出）または、血漿タンパク質に結合されるべきである（血液について高活性レベルをもたらし、一方、優れた抽出効率を示した）ということを留意すべきである。

【0162】

ラセミ混合物中の各異性体の定量化の場合および特に、不十分に分離した第１および第２のピーク（ｒｈＰＳＭＡ ７．２およびｒｈＰＳＭＡ７．３）の場合、図面での近似を、最初に用いた。このアプローチは、ａ）各異性体が、同一のピーク形状を有するＨＰＬＣカラムから溶出され、ｂ）異なるピーク高さが、第１の近似として用いられて、直鎖因子によって、小さく分離したピーク（すなわち、ｒｈＰＳＭＡ７．２およびｒｈＰＳＭＡ７．３）を算出することができるという仮定に基づいている。

【0163】

これらの仮定に基づいて、第１の分析を、［^１８Ｆ］［^ｎａｔＧａ］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃと同時注入した、ＬＮＣａＰ担腫瘍マウス１匹を用いることにより行った。追加の
３つの実験によって、これらの実験を検証することおよびより妥当な手順によりグラフ分析を向上することを目的として、Ｓｙｓｔａｔソフトウェアパッケージ「ＰｅａｋＦｉｔ」を用いた。ＰｅａｋＦｉｔによって、フーリエ逆重畳積分／フィルタリングアルゴリズム（ｈｔｔｐｓ：／／ｓｙｓｔａｔｓｏｆｔｗａｒｅ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ＰｅａｋＦｉｔ／）によるガウス応答関数を用いる逆重畳積分手順によるＨＰＬＣ溶出プロフィールの自動化された非線形分離、分析および定量化が可能になる。

【0164】

第１の実験のグラフ解析を比較することによって、グラフ解析が、第２のピーク（ｒｈＰＳＭＡ７．３）を過大評価し、第１のピークは、過小評価されたことが、明らかになった。したがって、すべてのデータセットを、再分析し、ＰｅａｋＦｉｔによって定量化した。

【0165】

担腫瘍マウスにおける３０分ｐ．ｉ．の４つの非依存的実験のＨＰＬＣ－分析
１．放射性－ＨＰＬＣによるピーク３および４（ｒｈＰＳＭＡ７．４およびｒｈＰＳＭＡ７．１）の評価
逆重畳積分技術によって、（ベースラインが分かれていないが）良い分離を有する、最終の２つのピーク（ｒｈＰＳＭＡ７．４および７．１）について類似のデータが示されるか否かを最初に検査した。

【0166】

２．放射性－ＨＰＬＣによるすべてのピーク（ｒｈＰＳＭＡ７．１、７．２、７．３および７．４）の評価
図１４ａおよび１４ｂに、注射溶液（［^１８Ｆ］［^ｎａｔＧａ］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃ）中のその百分率に対して、所与のサンプルにおける各ｒｈＰＳＡＭ７．ｎ異性体の変化百分率をまとめて示し；個別の実験についての結果を、図１４に示す。各異性体の割合を、Ｓｙｓｔａｔ 「ＰｅａｋＦｉｔ」によるＨＰＬＣ溶出プロフィールの分析により定量化した。引き続いて、注射溶液におけるその百分率に対して所与のサンプルにおける各異性体の変化百分率を算出した。

【0167】

３．ＨＰＬＣデータの考察
ホモジナイズした（腎臓、肝臓、腫瘍）または希釈された（血液）組織から抽出し、引き続いて、固相抽出カートリッジで固定化し、固相抽出カートリッジから溶出させた、放射活性の放射性－ＨＰＬＣ分析は、代謝不安定性の徴候を示さなかった。したがって、親油性代謝フラグメントは、観察されなかった。Ｆ－１８－フッ化物が、サンプル調製用に用いた条件下でＨＰＬＣにより正確に検出することができないことを留意すべきである（ＴＬＣ分析を参照のこと）。

【0168】

Ｄ－Ｄａｐ－誘導体ｒｈＰＳＭＡ７．１および７．３によって、清澄なトレンドがあるが、全変化は、低い（最大１５％）。図１５および１６が、絶対取込み値を考慮せずに、「相対的変化」を示すことを、本文脈中で強く主張することがやはり重要である。

【0169】

ｒｈＰＳＭＡ７．１が、すべてのｒｈＰＳＭＡ７化合物の最も弱い親和性および内部移行を有するが、それは、血液 肝臓、腎臓および腫瘍の最大の陽性変化百分率を示す。
この結果の理由は、不明であるが、これは、ボールミルを用いても、組織サンプルの均質化によって、定量的細胞破壊がもたらされなかったことを推測することができる。したがって、最高の内部移行（ｒｈＰＳＭＡ７．２：１９１．８３％±１５．５４％、ｒｈＰＳＭＡ７．４：２０７．３３±４．０６％およびｒｈＰＳＭＡ７．３：１６１．４１％±８．８８％）を有するｒｈＰＳＭＡ７トレーサーは、効率的でない方式で抽出されているかもしれず、６９．５５％±５．２９％のみのその内部移行が低いｒｈＰＳＭＡ７．１は、効率的に抽出され、したがって、ＨＰＬＣ分析において過大評価される。

【0170】

さらに、ｒｈＰＳＭＡ化合物７．２および７．４は、いくらかより速やかに排出されるように見える（尿についての値を参照のこと）。ｒｈＰＳＭＡ７．１と比較した場合、両方の化合物が、より高い親和性および内部移行率を示すが、これらの化合物は、固体組織および血液の一般に否定的な変化を示す。代謝産物、すなわち、親液性代謝産物が検出されていないため、７．２および７．４（両方ともＬ－Ｄａｐ誘導体である）の代謝分解により引き起こされ得るか否かは、不明である。しかしながら、これらの高ｌｏｇＰ値による、かかる代謝産物（図１１を参照のこと）は、水性緩衝液中で抽出可能でないことがあり得る。この場合では、これらは、肝臓（体内分布を参照のこと）において、おそらく、血液サンプルにおいて現れるべきである（高血清タンパク質結合の場合確率が高い）。活性蓄積の上昇が、体内分布試験の間に肝組織についてまったく観察されず、血液から得られた活性抽出が、非常に効率的であったため（表３を参照のこと）、本発明者らは、ｒｈＰＳＭＡ７．２および７．４についての有意な分解が、起こらなかったと仮定する。この仮定は、ヒトにおける［^１８Ｆ］ｒｈｐｓｍａ－ｒａｃの臨床使用という状況において、肝組織（胆嚢、腸）についての疑わしくないＳＵＶ－値により裏付けられる。

【0171】

担腫瘍マウス３０分ｐ．ｉ．におけるＴＬＣ－分析
放射性－ＴＬＣ分析は、少量をＴＬＣストリップに直接かけることにより、ｂ）ＳＰＥプロセス（「ブレークスルー画分」）中の少量の非固定化活性の分析により、およびｃ）少量のカートリッジ溶離液の分析により、尿サンプルにおいてａ）を行った。

【0172】

【表13】

【0173】

ＴＬＣデータの考察
（ｎｃａフッ化物と相互作用するマトリックスの遊離Ｓｉ－ＯＨ基により）ＲＰ－１８クロマトグラフィーによって、ｎ．ｃ．ａ．^１８Ｆ－フッ化物を検出することが非常に難しいため、抽出された溶液中のＦ－１８－フッ化物の定量化を調査するために、薄層クロマトグラフィーを行った。

【0174】

タンパク質沈澱に対して標準的に用いられる試薬および塩のどれも、冷フッ化物について試験されないためならびに同位体交換によりトレーサーから得たＦ－１８－フッ化物のあり得る遊離を回避するために、－かかるタンパク質負荷によって、ピーク分離、ピークテーリングおよびスタートラインで固着する活性がしばしば制限されるが、タンパク質沈澱を、サンプル調製プロセスにおいて行わなかった。組織抽出（または血液遠心）後に得
られた溶液を、ＴＬＣ分析用に直接用いた。

【0175】

分析用に利用可能な活性が、すべてのサンプルにおいてかなり低かったが、ＴＬＣの結果によって、Ｆ－１８－フッ化物（ｆｌｕｒｉｄｅ）の総含有量は、
－ ２０１８年７月３０日に得られた尿サンプル（１７．４９％遊離フッ化物）、
－ ２０１８年８月２日に得られた肝臓サンプル（２５．８５％遊離フッ化物）を除き、調査された組織中のおよそ６％以下であったということが明らかになった。

【0176】

ＴＬＣによる尿の分析が、妥当な結果と見なされ（図２０中のプロフィールを参照のこと）、肝臓サンプルで得られた結果は、未変化トレーサーを表しているピークの広範なテーリングにより引き起こされる（図１８を参照のこと）。さらに、ＱＫ中にさらに得られたピークテーリング、および臨床応用のためのＰＢＳ（図１８）における［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃの放出が、生成物ピークのテーリングを示すために、前述の最大６％の遊離フッ化物は、過大評価を表すということを結論付けることができる。ホスフォイメージにより実証される通り、このテーリングは、ほぼすべてのＴＬＣ分析において観察され、Ｆ－１８－フッ化物の統合された領域に寄与する。

【0177】

ヒトにおける体内分布試験でも、臨床ＰＥＴスキャンでも（２０１８年７月の状態：［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃによるおよそ１４００スキャン）、遊離したＦ－１８－フッ化物により、骨中のいかなる疑わしいもしくは同定可能なＦ－１８－蓄積（ａｃｃｕｌｕａｔｉｏｎ）をももたらさなかったことを留意することが必要である。（１つの尿サンプル中で観察された通り）［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃから得られたＦ－１８フッ化物の遊離をさらに調査するために、本発明者らは、ＲＰ－１８ ＨＰＬＣ（新たなＲＰ－１８エンドキャップを有するカラム）およびＴＬＣ分析によって、さらなる尿サンプル（正常マウス）中のＦ－１８－フッ化物の発生を調査した。

【0178】

正常マウス３０分ｐ．ｉ．におけるＦ－１８－フッ化物の形成の放射性－ＴＬＣ－分析
こうした目的のために、正常マウスを用いた。尿サンプルを、３０分間にわたってカテーテルによって採取した。尿を、遠心し、ＨＰＬＣおよびＴＬＣに直接かけた。

【0179】

図２１中に示した通り、左カラム、遊離Ｆ－１８－フッ化物は、すべての異性体の尿サンプルにおいて見出され、新鮮な尿が、「［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．４でインキュベートさせる場合、やはり形成される（右カラム）。Ｆ－１８－フッ化物の同定を、ａ）この種が、ＱＭＡカートリッジに保持され（データを示さず）、ｂ）ＲＰ－１８カラムの死容積に溶出され、ｃ）用いられた移動相と関係なく、それぞれに、ＲＰ－１８カラムまたはＲＰ－１８ ＴＬＣプレートに保持するまたは動員することができないことを実証することにより行った。

【0180】

Ｆ－１８フッ化物のかかる高用量が、血液または臓器、例えば、腎臓、腫瘍、肝臓などのＨＰＬＣ分析において検出されなかった、骨中の活性取込みの上昇が、マウスにおける体内分布試験において観察されず、［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃが、ＴＵＭで２０１７年の臨床スキャニング終了に設定されているため（状態の終了 ２０１８年７月：前立腺がんを伴う患者におけるおよそ１４００ ＰＥＴスキャン）、骨中の活性取込みの上昇が、［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃ化合物による臨床ＰＥＴスキャン中に観察されなかったという事実により、本発明者らは、［Ｆ－１８］フッ化物が、トレーサーの糸球体ろ過から下流を形成し得、血液、臓器または骨におけるＦ－１８－フッ化物の検出可能な取込みなしで、［Ｆ－１８］フッ化物を形成およびその後排出させると結論付けた。

【0181】

この仮定は、腎臓および尿中のフッ化物の関連する量を記載するフッ化物の毒物学に関
する文献により裏付けられる。正常な尿中フッ化物レベル０．３ｐｐｍを、マウスにおいて観察した（Ｂｏｕａｚｉｚ Ｈら、Ｆｌｕｏｒｉｄｅ ２００５年；３８巻（１号）：２３～３１頁）。別の公表文献では、正常マウスの尿中の平均フッ化物濃度は、０．１３～０．１４μｇ／ｍＬであることが決定され（Ｐｏｅｓｉｎａ ＮＤら、Ｒｏｍ Ｊ Ｍｏｒｐｈｏｌ Ｅｍｂｒｙｏｌ ２０１４年、５５巻（２号）：３４３～３４９頁）、Ｉｎｋｉｅｌｅｗｉｃｚ Ｉ．らは、ラットの血清中のフッ化物含有量が、腎臓中のフッ化物の濃度の約５％である（血清：０．０５１μｇ／ｍＬ、腎臓：０．９４２μｇ／ｍＬ）ことを見出した（Ｆｌｕｏｒｉｄｅ；３６巻（４号）；２６３～２６６頁）。トレーサーの大部分が、特に腎臓に吸収され、やはり腎臓により生理的に除去されることを考慮すると、体温３６．６℃と合わせて、腎臓中のフッ化物レベルの上昇は、腎臓においてｒｈＰＳＭＡ－化合物からＦ－１８－フッ化物を連続的に排出させ得る。

【0182】

したがって、正常マウスから採取された新鮮なおよび非放射性の尿サンプルを、様々な期間［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．ｘでインキュベートした（図２１への説明文を参照のこと）。図２２、右カラムは、［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．ｘで尿をＥＸ ＶＩＶＯでインキュベートすることによって、様々な程度まで遊離［Ｆ－１８］フッ化物が形成され、尿サンプル中の冷Ｆ－１９－フッ化物の異なる濃度により促進され、経時的に増加することが、明らかに実証される。

【0183】

仮説をさらに裏付けるために、５００ｎｍｏｌ冷Ｆ－１９－フッ化物を、マウスの新鮮なおよび非放射性の尿に加え、その後、［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３を加え、２ｈインキュベートした。仮説によれば、高濃度の［Ｆ－１９］フッ化物は、有意な量の［Ｆ－１８］フッ化物を形成させるべきである。図２３では、これらの条件下で、放射活性９８．５％が、交換され、２ｈ以内に［Ｆ－１８］フッ化物を形成することが示される（図２３）。

【0184】

同位体交換速度が、平衡状態にある４種の関連する種（［Ｆ－１８］フッ化物、［Ｆ－１９］フッ化物、［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３および［Ｆ－１９］ｒｈＰＳＭＡ７．３）の濃度に依存しているため、これはまた、［Ｆ－１８］フッ化物の、新鮮なおよび放射活性の尿（２０，６％［Ｆ－１８］フッ化物、７９，４％［Ｆ－１８］ｒｈｐｓｍａ７．３）への添加、その後、冷［Ｆ－１９］ｒｈＰＳＭＡ７．３トレーサーの添加によって、放射性医薬品［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７－３がやはり標識化されるか否か調査した。予想外に、上記の尿への少量の［Ｆ－１９］ｒｈＰＳＭＡ７－３ ５ｎｍｏｌでも、室温で、［Ｆ－１８］ｒｈＰＳＭＡ７．３は、７９．４％～８５．８％まで増加した（Ｆ－１８］フッ化物は、２０．６％～１４．２％まで減少した）。

【0185】

尿中の同位体交換により得られた結果から、４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチル［（１８）Ｆ］フルオロシリル）－ベンジル）オキシ部分でコンジュゲートされたすべてのトレーサーの代表、したがって、すべてのｒｈＰＳＡＭ７異性体の代表が考えられる。

【0186】

前臨床線量測定、ヒト体内分布および腫瘍病変の取込み
次の１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７は、^ｎａｔＧａ－^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ７－ｒａｃおよび１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３～^ｎａｔＧａ－^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ７．３を意味することをご留意いただきたい。

【0187】

Ａ）マウスにおける１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の前臨床線量測定
目的は、マウスにおける単回静脈内投与の３００分後まで、異なる時点で、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の分布および排出を評価することならびに内部の線量測定についての算出を行うことであった。

【0188】

方法
マウス３～５匹を、時点当たりで注射し、それぞれに、１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７が、平均２５．６±３．６ＭＢｑであり、１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３が、２８．５±４．８ＭＢｑであった。重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）のマウスを、実験のために用いた。すべての動物実験を、ドイツにおける一般動物福祉規制および動物の管理および使用のための施設ガイドラインに従って行った。

【0189】

マウスを、次の時点で屠殺した。
^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７：投与の１０、２０、４０、６０、１２０および１８０分後。^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３：投与の１０、６０、１２０、１８０および３００分後。初回の実験に基づいて、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３ ａの後期の時点（３００分）についての腎性腎臓取込み（ｒｅｎａｌ ｋｉｄｎｅｙ ｕｐｔａｋｅ）の延長が最後の実験のために用いられることを示すことをご留意いただきたい。

【0190】

次の組織／体液を、回収した。
尿、血液、心臓、肺、脾臓、膵臓、肝臓、胃（空腹時）、小腸（空腹時）、大腸（空腹時）、腎臓、膀胱、精巣、脂肪、筋肉（部分的、大腿）、大腿骨、尾部および脳。尿を、ＣＯ_２ガスチェンバーにおいてピペットで採取した。チェンバー中で排尿を逃す場合には、膀胱を、インスリン用注射筒で吸引した。血液を、心臓から、インスリン用注射筒で屠殺後直ちに取り除いた。すべての他の組織および臓器を、解剖し、プラスチック製容器に直接移した。

【0191】

プラスチック製容器中のサンプルの重量を、電子天秤を用いて測定した。専用のサンプルのための空のおよび前標識したプラスチック製容器の重量を、前もって測定した。プラスチック製容器の風袋重量を、プラスチック製容器を有する測定サンプルの重量から減算した。上で算出した重量を、測定サンプルの重量と表した。

【0192】

測定サンプルを含有するプラスチック製容器を、６０秒にわたって（カウント毎分＝ｃｐｍ）、計数率を測定するための自動γカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ－Ｗａｌｌａｃ社、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）の特定の試験管立てに入れた。さらに、公知の放射活性量を有する１％（ｖ／ｖ）標準（ｎ＝５）を、サンプルと共に測定して、臓器サンプルの計数率を、活性に変換した。

【0193】

データ分析
測定サンプルの計数率は、崩壊を自動的に補正した。放射活性分布比（単位：測定サンプル中の注入量（％ＩＤ）の百分率を、以下の等式を用いて決定した。１匹のマウスから得られたすべての測定サンプルからの計数率の和を、投与される放射活性についての計数率と表した。

【0194】

【数2】

【0195】

尿および糞便サンプルを除外した測定サンプル（単位：％ＩＤ／ｇ）の単位重量当たりの放射活性分布比を、以下の等式を用いることにより決定した。測定サンプルの重量を、サンプルを含む容器からの空の測定容器の減算により決定した。

【0196】

【数3】

【0197】

線量測定分析
各放射性トレーサーについての統計的算出のコンシステンシーの場合、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３についての時点の同数を用いた。したがって、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７の場合、１０分および２０分時点を、１５分エンドポイントを創出するよう組み合わせた。

【0198】

有意なソース器官（ＡＵＣｓ）における蓄積についての活性の時間積分を、Ｊ Ｊｕａｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９９３年、８２巻：７６２～７６３頁に従って、数値積分法および物理的崩壊で両方生成した。

【0199】

Ｋｉｒｓｈｎｅｒらは、両種におけるファントムの臓器重量および全体重の比による、動物におけるパーセント注入量の線形尺度を用いる方法を確立した。
－ Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ ＡＳ、Ｉｃｅ ＲＤ、Ｂｅｉｅｒｗａｌｔｅｓ ＷＨ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ ｏｆ １３１Ｉ－１９－Ｉｏｄｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．１９７３年９月１日；１４巻（９号）：７１３－７。
－ Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ Ａ、Ｉｃｅ Ｒ、Ｂｅｉｅｒｗａｌｔｅｓ Ｗ．Ｌｅｔｔｅｒｓ ｔｏ ｔｈｅ ｅｄｉｔｏｒ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．（１９７５年）：２４８－９。

【0200】

手短に言えば、マウスにおいて体内分布からヒト線量測定を算定するために、外挿は、動物とヒトとの間の差を明らかにすることが必要であった。正常な臓器の放射線量を、時間－依存臓器活性濃度（１グラム当たり注入量のパーセントで、％ＩＤ／ｇ）およびマウスにおける体内分布試験において測定された全身活性を用いて、７０－ｋｇ標準成人解剖モデルについて推定した。

【0201】

マウスにおける組織活性濃度を、標準成人および「標準」２５－グラムマウスにおいて相対的分画臓器質量を用いて、７０－ｋｇ標準成人における組織分画活性に変換した。時間－依存全身活性は、指数関数に適合し、肝臓中の活性濃度およびＧＩトレーサーが、試験したすべての時点で低かったため、注射された活性と全身活性との間の差は、尿に排出されるものと仮定された。

【0202】

臓器滞留時間を、台形法を用いて、数値積分法により算出し、身体の他の部分の^１８Ｆ滞留時間を、全身滞留時間と臓器および尿の滞留時間の和との間の差として算出した。膀胱含有量滞留時間を、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ１．０線量測定ソフトウェアにおいて、動的排尿モデルを用いて推定した。最後に、標準成人平均臓器線量当量（ｍＳｖ／ＭＢｑ）および有効線量（やはりｍＳｖ／ＭＢｑ）を、次いで、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ１．０を用いて算出した。

【0203】

マウスにおける体内分布からの放射線吸収量および線量測定の最終の算出：放射活性の有意な蓄積が起こる組織または臓器（すなわち、ソース器官）は、腎臓、脾臓、肺、肝臓および心臓であった。活性蓄積およびクリアランスに関して、血液からの速やかなクリアランスおよび尿へのクリアランスであるが、腎臓において比較的ゆっくりとした蓄積が見出された。
結果

【0204】

【表14】

【0205】

【表15】

【0206】

【表16】

【0207】

【表17】

【0208】

結論
放射活性分布比は、マウスにおけるすべての検査された時点での^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の投与後に、腎臓において最高であった。さらに、放射活性分布比は、すべての他の評価された組織と比較して、両方の放射性トレーサーについての脾臓および膀胱において高く、活性比は、８％ＩＤ／ｇより低かった。

【0209】

^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７／^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３活性の大半が、腎臓において増強し、膀胱による排出が、高活性を明らかにするため、主な排出経路は、腎臓および泌尿器系によって定義される。

【0210】

３．５ｈおよび１．０ｈの膀胱の排尿間隔を用いて、外挿された総有効線量は、それぞれに、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７の場合、２．６６Ｅ－０２および１．２２Ｅ－０２ｍＳｖ／ＭＢｑであり、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の場合、２．１７Ｅ－０２および１．２８Ｅ－０２ｍＳｖ／ＭＢｑであった。臨床スキャンについての３７０ＭＢｑ（１０ｍＣｉ）までの注射は、１ｈの排尿間隔を想定する両薬剤の場合、５ｍＳｖ未満の好ましい放射線曝露をもたらすはずである。

【0211】

両放射性トレーサー間の言及するに値する差は、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３が、より長い保持と共にさらに段階的に蓄積する傾向があるため、腎臓取込みに関して唯一明らかである。さらに、放射線曝露は、両薬剤間で同等である。

【0212】

Ｂ）１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３のヒト体内分布および腫瘍病変の取込み
次のセクションは、１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の体内分布を記載している。概念実証評価を、人道的使用下で行った。本薬剤は、ドイツ医薬品法（Ｇｅｒｍａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ａｃｔ）、ＡＭＧ §１３ ２ｂに従っておよび担当規制機関（Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｂｅｒｂａｙｅｒｎ）に従って適用した。

【0213】

すべての対象を、Ｂｉｏｇｒａｐｈ ｍＣＴスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｅｒｌａｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で検査した。すべてのＰＥＴスキャンを、ベッド位置当たり２～４分の取得時間で３Ｄ－モードにおいて取得した。放出データは、無作為、不感時間、散乱、および減衰を補正し、規則正しいサブセット期待値最大化アルゴリズム（４回の反復、８サブセット）、その後、再構成後スムージングガウスフィルター（ｐｏｓｔｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｓｍｏｏｔｈｉｎｇ Ｇａｕｓｓｉａｎ ｆｉｌｔｅｒ）（最大値の半分における５－ｍｍ全幅）により反復的に再構成した。

【0214】

方法
ヒト体内分布を、患者４７名および３２名において、それぞれに、臨床^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７－および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３－ＰＥＴ／ＣＴ検査を分析することにより、推定した。^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７対^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の場合、それぞれに、平均の注射された活性は、３２４（２３６～４２４の範囲）ＭＢｑ対３４５（２３５～４２０の範囲）ＭＢｑであり、取込み時間は、８４（４２～１６６の範囲）分対７６（５９～１２２の範囲）分であった。

【0215】

平均および最大標準化取込値（ＳＵＶ平均／ＳＵＶｍａｘ）を、バックグラウンド（殿筋）、正常な臓器（唾液腺、血液プール、肺、肝臓、脾臓、膵臓、十二指腸、腎臓、膀胱、骨）および３つの代表的な腫瘍病変について決定した。腫瘍取込みを、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３について、それぞれに、８９カ所の病変（原発性腫瘍／局所再発２６カ所、骨２３カ所、リンパ節３８カ所および内臓転移２カ所）および６３カ所の病変（原発性腫瘍／局所再発１４カ所、骨３０カ所、リンパ節１８カ所および内臓転移１カ所）において分析した。

【0216】

ＳＵＶの算出の場合、目的の円領域を、体軸横断スライス中の取込みが限局的に増加す
る領域の周りに描き、５０％等高線で目的の３次元体積（ＶＯＩ）に自動的に適応させた。臓器－バックグラウンドおよび腫瘍－バックグラウンド比を算出した。

【0217】

結果
^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３のヒト体内分布によって、他のＰＳＭＡ－リガンドから公知の典型的なパターンを示した。^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７および^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３についての取込みパラメーターは、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の場合に膀胱におけるより低い活性保持および腫瘍病変のより高い取込みと非常に類似した、すなわち、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７対^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３についてのＳＵＶ平均は、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７対^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の場合、それぞれに、１６．９対１６．０（耳下腺）、１９．６対１９．６（顎下腺）、２．０対１．９（血液プール）、０．７対０．７（肺）、７．０対７．３（肝臓）、９．１対８．５（脾臓）、３２．４対３５．５（腎臓）、２．５対２．８（膵臓）、１０．９対１１．０（十二指腸）、１．１対１．３（非疾患骨）および１０．２対２．０（膀胱）であった。特に、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３対^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７の取込値は、膀胱における保持の場合、有意に低く（２．０±０．８対６．３±２１．２、ｐ＜０．０５）、腫瘍病変の場合、有意に高かった（３２．５±４２．７対２０．０±２０．２、ｐ＜０．０５）。

【0218】

【表18】

【0219】

【表19】

【0220】

【表20】

【0221】

【表21】

【0222】

結論：
ヒト体内分布は、ほとんどの正常な臓器の場合、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７と^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３との間で類似する。しかしながら、^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の場合、膀胱におけるトレーサー保持は、有意に低く、腫瘍病変の取込みは、有意に高く、臨床画像化について明らかに有利な点をもたらした。^１８Ｆ－ｒｈＰＳＭＡ－７．３の好ましいヒト体内分布および腫瘍病変の高い取込みを有する画像化例を、図２８に示す。