特開 2024-75125 有形成分検出方法、有形成分検出装置およびプログラム

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024075125

(43)【公開日】2024-06-03

(54)【発明の名称】有形成分検出方法、有形成分検出装置およびプログラム

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/493 20060101AFI20240527BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240527BHJP

   G01N 33/536 20060101ALI20240527BHJP

   G01N 21/64 20060101ALI20240527BHJP

【ＦＩ】

G01N33/493 A

G01N33/53 K

G01N33/536 D

G01N21/64 F

【審査請求】未請求

【請求項の数】25

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022186333

(22)【出願日】2022-11-22

(71)【出願人】

【識別番号】390014960

【氏名又は名称】シスメックス株式会社

(71)【出願人】

【識別番号】390021577

【氏名又は名称】東海旅客鉄道株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100111383

【弁理士】

【氏名又は名称】芝野 正雅

(74)【代理人】

【識別番号】100170922

【弁理士】

【氏名又は名称】大橋 誠

(72)【発明者】

【氏名】眞砂 明典

(72)【発明者】

【氏名】坪井 一哉

【テーマコード（参考）】

2G043

2G045

【Ｆターム（参考）】

2G043AA04

2G043BA16

2G043DA02

2G043EA01

2G043FA02

2G043NA01

2G045AA16

2G045BB24

2G045CA02

2G045CB03

2G045DA13

2G045FA19

2G045FB03

2G045FB12

2G045JA07

(57)【要約】

【課題】マルベリー小体をより正確に抽出できる有形成分検出方法、有形成分検出装置およびプログラムを提供する。
【解決手段】ステップＳ１において、被検者から採取した尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、赤血球に特異的に結合する抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料を調製する。ステップＳ３において、試料中の複数の有形成分を撮像して蛍光画像を取得する。ステップＳ５において、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分を抽出する。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

被検者から採取した尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、前記抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料を調製し、
前記試料中の複数の有形成分を撮像して蛍光画像を取得し、
前記蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分を抽出する、
有形成分検出方法。

【請求項2】

前記蛍光画像から得られた前記情報は、有形成分から前記第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値および有形成分から前記第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値を含む、
請求項１に記載の有形成分検出方法。

【請求項3】

前記蛍光画像は、前記第１蛍光色素により生じた蛍光を撮像した第１蛍光画像および前記第２蛍光色素により生じた蛍光を撮像した第２蛍光画像を含む、
請求項２に記載の有形成分検出方法。

【請求項4】

前記有形成分を抽出する工程は、前記第１蛍光量に関する値および前記第２蛍光量に関する値が所定の条件に合致する有形成分を抽出する工程を含む、
請求項２に記載の有形成分検出方法。

【請求項5】

前記試料中の前記複数の有形成分を撮像して明視野画像を取得する工程をさらに含み、
前記有形成分を抽出する工程は、前記蛍光画像から得られた前記情報および前記明視野画像から得られた情報が前記マルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分を抽出する工程を含む、
請求項１に記載の有形成分検出方法。

【請求項6】

前記明視野画像から得られた前記情報は、前記明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値および有形成分のフォーカス状態に関する値の少なくとも一方を含む、
請求項５に記載の有形成分検出方法。

【請求項7】

前記明視野画像から得られた前記情報は、前記明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値および有形成分の輝度のばらつきに関する値の少なくとも一方を含む、
請求項５または６に記載の有形成分検出方法。

【請求項8】

前記蛍光画像は、前記第１蛍光色素により生じた蛍光を撮像した第１蛍光画像および前記第２蛍光色素により生じた蛍光を撮像した第２蛍光画像を含み、
前記有形成分を抽出する工程は、
前記明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値および有形成分のフォーカス状態に関する値の少なくとも一方が第１条件に合致する有形成分を抽出する第１抽出工程と、
有形成分から前記第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値を前記第１蛍光画像から取得し、有形成分から前記第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値を前記第２蛍光画像から取得し、前記第１蛍光量に関する値および前記第２蛍光量に関する値が第２条件に合致する有形成分を抽出する第２抽出工程と、
前記明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値および有形成分の輝度のばらつきに関する値の少なくとも一方が第３条件に合致する有形成分を抽出する第３抽出工程と、を含む、
請求項５に記載の有形成分検出方法。

【請求項9】

前記第１抽出工程、前記第２抽出工程および前記第３抽出工程は、先に実行された抽出工程によって抽出された有形成分群に対して抽出を実行する、
請求項８に記載の有形成分検出方法。

【請求項10】

前記第１抽出工程は、少なくとも前記有形成分の大きさに関する値が前記第１条件に合致する有形成分を抽出する工程を含み、
前記第１抽出工程は、前記第２抽出工程および前記第３抽出工程に先立って実行される、
請求項９に記載の有形成分検出方法。

【請求項11】

前記マルベリー小体に対応する範囲は、赤血球に対応する範囲および真菌に対応する範囲と重ならない範囲である、
請求項１に記載の有形成分検出方法。

【請求項12】

抽出した前記マルベリー小体に対応する範囲に含まれる前記有形成分の画像を表示する工程をさらに含む、
請求項１に記載の有形成分検出方法。

【請求項13】

前記試料中の前記複数の有形成分を撮像して明視野画像を取得する工程をさらに含み、
前記有形成分の画像を表示する工程は、前記抽出した有形成分の前記明視野画像を表示する、
請求項１２に記載の有形成分検出方法。

【請求項14】

前記有形成分の画像を表示する工程は、前記抽出した有形成分の画像を一覧表示する、
請求項１２に記載の有形成分検出方法。

【請求項15】

前記有形成分の画像を表示する工程は、前記抽出した有形成分の画像を、有形成分の大きさ順に一覧表示する、
請求項１４に記載の有形成分検出方法。

【請求項16】

前記有形成分の画像を表示する工程は、前記抽出した有形成分の画像を、有形成分の大きさ順に並べる指示入力を受け付け、受け付けた指示入力に応じて、一覧表示した前記有形成分の画像を並べ替える、
請求項１４に記載の有形成分検出方法。

【請求項17】

前記有形成分の画像を表示する工程は、一覧表示した前記有形成分の画像の任意の１つを特定する指示入力を受け付け、前記指示入力で特定された前記有形成分の画像を拡大表示する、
請求項１４に記載の有形成分検出方法。

【請求項18】

前記有形成分の画像を表示する工程は、一覧表示した前記有形成分の画像のうち前記マルベリー小体の画像を特定する指示入力を受け付け、前記指示入力で特定された前記有形成分の画像を計数した計数結果をさらに表示する、
請求項１４に記載の有形成分検出方法。

【請求項19】

同一被検者に対する前記計数結果の履歴を記憶する、
請求項１８に記載の有形成分検出方法。

【請求項20】

前記履歴に基づいて、前記計数結果の変化に基づく情報を表示する、
請求項１９に記載の有形成分検出方法。

【請求項21】

前記有形成分の画像の一覧とともに、前記計数結果の変化に基づく情報を表示する、
請求項２０に記載の有形成分検出方法。

【請求項22】

前記有形成分の画像を表示する工程は、一覧表示した前記有形成分の画像のうち前記マルベリー小体の画像を特定する指示入力を受け付け、前記指示入力で特定された前記有形成分の画像にフラグを紐づけて記憶する、
請求項１４に記載の有形成分検出方法。

【請求項23】

被検者から採取した尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、前記抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料を調製する試料調製部と、
前記試料中の複数の有形成分を撮像して蛍光画像を取得する撮像部と、
前記蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分を抽出する処理部と、を備える、
有形成分検出装置。

【請求項24】

前記撮像部は、前記試料が流されるフローセルを備え、前記フローセルを流れる前記試料中の前記複数の有形成分を撮像する、
請求項２３に記載の有形成分検出装置。

【請求項25】

被検者から採取した尿検体中の有形成分を検出する処理をコンピュータに実行させるプログラムであって、
前記尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、前記抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料中の複数の有形成分が撮像された蛍光画像から得られた情報が、マルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分を抽出する、
プログラム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、有形成分検出方法、有形成分検出装置およびプログラムに関する。

【背景技術】

【0002】

ファブリー病は、遺伝病の一種であり、細胞内消化の場であるライソゾームにグロボトリアオシルセラミド（Ｇｂ３）と呼ばれる脂質が蓄積することにより発症する。ファブリー病が発症すると、ライソゾームの機能が障害され、様々な臓器に障害が起こる。従来、ファブリー病の発症と尿中マルベリー小体との因果関係は知られているものの、尿沈渣に含まれる尿中マルベリー小体はごく少量であるため、尿沈渣検査によりマルベリー小体を検出することは難しい。

【0003】

さらに、尿中のマルベリー小体は、顕微鏡を用いて目視で確認されてきたが、その形態が赤血球や真菌と類似しているため、この方法による判別は難易度が高い。このため、この判別には、検査者に高度なスキルが要求される。

【0004】

以下の非特許文献１には、尿沈渣を染色することで、尿中マルベリー小体がポドサイトの細胞質内にある、Ｇｂ３が蓄積したライゾームに由来することを明らかにしたことが記載されている。

【0005】

また、以下の特許文献１には、尿沈渣画像をニューラルネットワークに適用して、被検者の尿検体にマルベリー小体が含まれているか否かを判別する方法が記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【非特許文献1】難波倫子、"尿検査で希少疾患の早期診断が可能に"、［online］、令和3年1月8日、リソウ、［令和4年10月14日検索］、インターネット〈URL：https://resou.osaka-u.ac.jp/ja/research/2021/20210108_4〉

【特許文献1】特開２０２２－５９０９４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

Ｇｂ３は、マルベリー小体だけでなく尿細管細胞にも発現する。このため、上記非特許文献１により、尿中マルベリー小体がＧｂ３が蓄積したライゾームに由来することが明らかになってはいるが、Ｇｂ３を利用してマルベリー小体と尿細管細胞とを正確に弁別することは困難である。

【0008】

また、ファブリー病の患者数は極めて少なく、さらに、これらの患者の尿検体に含まれるマルベリー小体の数も極めて少ない。このため、上記特許文献１の方法では、ニューラルネットワークを学習させるために、十分な数の教師データを用いることができず、実用化することが難しい。

【0009】

かかる課題に鑑み、本発明は、マルベリー小体をより正確に抽出できる有形成分検出方法、有形成分検出装置およびプログラムを提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明の有形成分検出方法において、図３、６、２６に示すように、被検者から採取した尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、赤血球に特異的に結合する抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料を調製し（Ｓ１）、試料中の複数の有形成分を撮像して蛍光画像を取得し（Ｓ３）、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲（Ｒ２）に含まれる有形成分を抽出する（Ｓ５）。

【0011】

本発明の有形成分検出方法によれば、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分が抽出されるため、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0012】

本発明の有形成分検出装置（１）は、図１、６に示すように、被検者から採取した尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、赤血球に特異的に結合する抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料を調製する試料調製部（１８）と、試料中の複数の有形成分を撮像して蛍光画像を取得する撮像部（１９）と、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲（Ｒ２）に含まれる有形成分を抽出する処理部（１１）と、を備える。

【0013】

本発明の有形成分検出装置によれば、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分が抽出されるため、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0014】

本発明のプログラム（１２ａ）は、図１、６に示すように、被検者から採取した尿検体中の有形成分を検出する処理をコンピュータに実行させるプログラムであって、尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、赤血球に特異的に結合する抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料中の複数の有形成分が撮像された蛍光画像から得られた情報が、マルベリー小体に対応する範囲（Ｒ２）に含まれる有形成分を抽出する。

【0015】

本発明のプログラムによれば、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分が抽出されるため、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【発明の効果】

【0016】

本発明によれば、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、実施形態に係る、有形成分検出装置の機能を示すブロック図である。

【図2】図２は、実施形態に係る、撮像部の構成を模式的に示す図である。

【図3】図３は、実施形態に係る、処理部による有形成分検出方法に関する処理を示すフローチャートである。

【図4】図４は、実施形態に係る、第１抽出工程で生成されるスキャッタグラムを示す図である。

【図5】図５は、実施形態に係る、第１抽出工程のスキャッタグラムにおいて抽出の範囲以外の他の範囲にプロットされた有形成分の明視野画像を例示する図である。

【図6】図６は、実施形態に係る、第２抽出工程で生成されるスキャッタグラムを示す図である。

【図7】図７は、実施形態に係る、第２抽出工程のスキャッタグラムにおいて抽出の範囲以外の他の範囲にプロットされた赤血球、尿路上皮細胞および尿細管上皮細胞の明視野画像、第１蛍光画像および第２蛍光画像を例示する図である。

【図8】図８は、実施形態に係る、第２抽出工程のスキャッタグラムにおいて抽出の範囲以外の他の位置付近にプロットされた白血球および真菌の明視野画像、第１蛍光画像および第２蛍光画像を例示する図である。

【図9】図９は、実施形態に係る、第３抽出工程で生成されるスキャッタグラムを示す図である。

【図10】図１０は、実施形態に係る、第３抽出工程のスキャッタグラムにおいて抽出の範囲以外の他の位置付近にプロットされた有形成分の明視野画像を例示する図である。

【図11】図１１は、実施形態に係る、第３抽出工程のスキャッタグラムにおいて抽出の範囲にプロットされた有形成分の明視野画像、第１蛍光画像、第２蛍光画像および第３蛍光画像を例示する図である。

【図12】図１２は、実施形態に係る、第１～第３抽出工程において、各範囲に含まれる有形成分の数を示す表である。

【図13】図１３は、実施形態に係る、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラムである。

【図14】図１４は、実施形態に係る、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラムである。

【図15】図１５は、実施形態に係る、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラムである。

【図16】図１６は、実施形態に係る、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラムである。

【図17】図１７は、実施形態に係る、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラムである。

【図18】図１８は、実施形態に係る、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラムである。

【図19】図１９は、実施形態に係る、有形成分画像を表示する画面の構成を模式的に示す図である。

【図20】図２０は、実施形態に係る、有形成分画像を表示する画面の構成を模式的に示す図である。

【図21】図２１は、実施形態に係る、拡大画像領域が表示された画面の構成を模式的に示す図である。

【図22】図２２は、実施形態に係る、オペレータによりマルベリー小体と判断された有形成分の明視野画像を例示する図である。

【図23】図２３は、実施形態の変更例に係る、拡大画像領域の構成を模式的に示す図である。

【図24】図２４は、実施形態に係る、同一被検者に対するマルベリー小体の計数結果の履歴および変化を表示する画面の構成を模式的に示す図である。

【図25】図２５は、実施形態の変更例に係る、有形成分画像を表示する画面の構成を模式的に示す図である。

【図26】図２６は、実施形態の有形成分検出装置、方法およびプログラムの第１変更例に係る、抽出工程として第２抽出工程のみが行われる場合の、処理部による有形成分検出方法に関する処理を示すフローチャートである。

【図27】図２７は、実施形態の有形成分検出装置、方法およびプログラムの第２変更例に係る、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値のみを用いて第１抽出工程が行われる例を示す図である。

【図28】図２８は、実施形態の有形成分検出装置、方法およびプログラムの第２変更例に係る、明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値のみを用いて第１抽出工程が行われる例を示す図である。

【図29】図２９は、実施形態の有形成分検出装置、方法およびプログラムの第３変更例に係る、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値のみを用いて第３抽出工程が行われる例を示す図である。

【図30】図３０は、実施形態の有形成分検出装置、方法およびプログラムの第３変更例に係る、有形成分の輝度のばらつきに関する値のみを用いて第３抽出工程が行われる例を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

図１は、有形成分検出装置１の機能を示すブロック図である。

【0019】

有形成分検出装置１は、被検者から採取した尿検体に含まれる有形成分を検出する装置である。有形成分検出装置１は、処理部１１と、記憶部１２と、通信部１３と、表示部１４と、入力部１５と、読取部１６と、吸引部１７と、試料調製部１８と、撮像部１９と、を備える。

【0020】

処理部１１は、例えば、ＦＰＧＡまたはＣＰＵにより構成される。処理部１１は、有形成分検出装置１の各部が出力する信号を受信し、有形成分検出装置１の各部を制御する。記憶部１２は、例えば、ＨＤＤやＳＳＤにより構成される。記憶部１２は、図３を参照して後述する処理を処理部１１に実行させるプログラム１２ａを記憶している。処理部１１は、記憶部１２に記憶されたプログラム１２ａを読み出し、プログラム１２ａに従って図３に示す処理を実行する。プログラム１２ａは、記憶媒体を介して記憶部１２に記憶されてもよく、通信部１３を介して他のコンピュータから受信することにより記憶部１２に記憶されてもよい。

【0021】

通信部１３は、例えば、イーサネット規格に基づく通信インターフェースである。処理部１１は、通信部１３を介して、検体ＩＤに対応する被検者情報などをホストコンピュータから受信し、有形成分の計数結果などをホストコンピュータに送信する。

【0022】

表示部１４は、例えば、液晶ディスプレイにより構成される。入力部１５は、例えば、キーボード、マウス、またはタッチパネルを含むポインティングデバイスなどにより構成される。オペレータは、入力部１５を操作することにより、表示部１４に表示された画面内のボタン等の操作部を操作する。なお、表示部１４および入力部１５が一体的に構成されてもよい。例えば、有形成分検出装置１は、表示部１４および入力部１５として、タッチパネル式のディスプレイを備えてもよい。

【0023】

読取部１６は、例えば、バーコードリーダにより構成される。読取部１６は、尿検体が収容された容器に付されたバーコードラベルからバーコードを読み取り、検体ＩＤを取得する。検体ＩＤを読み取られた容器は、有形成分検出装置１にセットされる。

【0024】

吸引部１７は、有形成分検出装置１にセットされた容器から、ノズルを介して尿検体を吸引する。試料調製部１８は、尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、赤血球に特異的に結合する抗体に結合する第２蛍光色素と、第３蛍光色素で標識されたグロボトリアオシルセラミド（Ｇｂ３）抗体を含む試料を調製する。これにより、尿検体内の有形成分の核酸が第１蛍光色素により染色され、尿検体内の赤血球が抗体を介して第２蛍光色素により染色され、尿検体内のＧｂ３が第３蛍光色素により染色される。

【0025】

第１蛍光色素は、波長λ１１の光が照射されると波長λ２１の蛍光を生じるよう構成されており、第２蛍光色素は、波長λ１２の光が照射されると波長λ２２の蛍光を生じるよう構成されており、第３蛍光色素は、波長λ１３の光が照射されると波長λ２３の蛍光を生じるよう構成されている。本実施形態において、波長λ１１、λ１２、λ１３は、互いに異なる波長帯域であるが、互いに同一の波長帯域であってもよい。

【0026】

なお、ここでは試料調製部１８において、第３蛍光色素で標識されたＧｂ３抗体が試料に含まれるよう試料の調製が行われたが、後述するマルベリー小体の抽出工程においては特に第３蛍光色素により生じた蛍光は用いられないため、試料調製において、第３蛍光色素で標識されたＧｂ３抗体が混合されなくてもよい。

【0027】

図２は、撮像部１９の構成を模式的に示す図である。

【0028】

撮像部１９は、フローセル１１０と、光源１２１～１２４と、集光レンズ１３１～１３４と、ダイクロイックミラー１４１、１４２と、集光レンズ１５１と、光学ユニット１５２と、集光レンズ１５３と、カメラ１５４と、を備える。フローセル１１０の流路１１１には、試料調製部１８で調製された試料が流される。

【0029】

光源１２１～１２４は、フローセル１１０を流れる試料に光を照射する。光源１２１～１２４は、半導体レーザ光源である。光源１２１～１２４から出射される光は、それぞれ、波長λ１１～λ１４のレーザ光である。集光レンズ１３１～１３４は、それぞれ、光源１２１～１２４から出射された光を集光する。ダイクロイックミラー１４１は、波長λ１１の光を透過し、波長λ１２の光を反射する。ダイクロイックミラー１４２は、波長λ１１、λ１２の光を透過し、波長λ１３の光を反射する。こうして、波長λ１１～λ１４の光が、フローセル１１０の流路１１１を流れる試料に照射される。

【0030】

フローセル１１０を流れる試料に波長λ１１～λ１３の光が照射されると、有形成分を染色している蛍光色素から蛍光が生じる。具体的には、核酸を染色する第１蛍光色素に波長λ１１の光が照射されると、第１蛍光色素から波長λ２１の蛍光が生じる。赤血球に結合した第２蛍光色素に波長λ１２の光が照射されると、第２蛍光色素から波長λ２２の蛍光が生じる。Ｇｂ３抗体を標識する第３蛍光色素に波長λ１３の光が照射されると、第３蛍光色素から波長λ２３の蛍光を生じる。波長λ２１、λ２２、λ２３は、例えば、それぞれ、緑色、赤色および黄色の光の波長帯域である。フローセル１１０を流れる試料に波長λ１４の光が照射されると、この光は試料中の有形成分を透過する。波長λ１４は明視野画像に適した波長帯域であり、波長λ１１～λ１３よりも波長帯域が広い。

【0031】

集光レンズ１５１は、フローセル１１０の流路１１１を流れる試料から生じた波長λ２１～λ２３の蛍光と、フローセル１１０の流路１１１を流れる試料を透過した波長λ１４の光とを集光する。光学ユニット１５２は、４枚のダイクロイックミラーが組み合わせられた構成を有する。光学ユニット１５２の４枚のダイクロイックミラーは、波長λ２１～λ２３の蛍光と波長λ１４の光とを、互いに僅かに異なる角度で反射し、カメラ１５４の受光面上において分離させる。集光レンズ１５３は、波長λ２１～λ２３の蛍光と波長λ１４の光とを集光する。

【0032】

カメラ１５４は、例えば、ＴＤＩ（Time Delay Integration）カメラである。カメラ１５４は、波長λ２１～λ２３の蛍光と波長λ１４の光とを撮像して、波長λ２１～λ２３の蛍光にそれぞれ対応した第１蛍光画像、第２蛍光画像および第３蛍光画像と、波長λ１４の光に対応した明視野画像とを、撮像信号として出力する。図１の処理部１１は、カメラ１５４により撮像された第１蛍光画像、第２蛍光画像および明視野画像を用いて、尿検体に含まれるマルベリー小体を抽出する。

【0033】

なお、第３蛍光画像は、後述するように有形成分がどの程度Ｇｂ３を含んでいるかを知る指標となるが、本実施形態においてはマルベリー小体の抽出に用いない。したがって、図２の撮像部１９において、光源１２３、集光レンズ１３３およびダイクロイックミラー１４２は、省略されてもよい。

【0034】

図３は、処理部１１による有形成分検出方法に関する処理を示すフローチャートである。

【0035】

処理部１１は、記憶部１２に記憶されたプログラム１２ａを実行することにより、図３に示す処理を行う。

【0036】

ステップＳ１において、処理部１１は、尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、この抗体に結合する第２蛍光色素と、第３蛍光色素で標識されたＧｂ３抗体と、を含む試料を調製するよう試料調製部１８を制御する。

【0037】

ステップＳ２において、処理部１１は、ステップＳ１で調製した試料をフローセル１１０の流路１１１に流すよう試料調製部１８を制御する。ステップＳ３において、処理部１１は、流路１１１を流れる試料に対して光が照射されるよう光源１２１～１２４を制御し、試料中の複数の有形成分を撮像するよう、すなわち、試料から生じた波長λ２１～λ２３の蛍光と、試料を透過した波長λ１４の光とを撮像するようカメラ１５４を制御する。これにより、処理部１１は、試料中の有形成分ごとに、第１～第３蛍光画像および明視野画像を取得する。なお、第１蛍光画像は緑色帯域以外の波長帯域を除外して撮像したカラー画像であり、第２蛍光画像は赤色帯域以外の波長帯域を除外して撮像したカラー画像であり、第３蛍光画像は黄色帯域以外の波長帯域を除外して撮像したカラー画像であり、明視野画像はグレースケール画像である。

【0038】

ステップＳ４において、処理部１１は、ステップＳ３で取得した全有形成分の明視野画像に基づいて、マルベリー小体に関する第１抽出工程を行う。ステップＳ５において、処理部１１は、ステップＳ４の第１抽出工程で抽出した有形成分の第１蛍光画像および第２蛍光画像に基づいて、マルベリー小体に関する第２抽出工程を行う。ステップＳ６において、処理部１１は、ステップＳ５の第２抽出工程で抽出した有形成分の明視野画像に基づいて、マルベリー小体に関する第３抽出工程を行う。第１～第３抽出工程の詳細については、追って図４～図１１を参照して説明する。

【0039】

ステップＳ７において、処理部１１は、ステップＳ６の第３抽出工程で抽出した有形成分の画像を、表示部１４に表示する。有形成分の画像の表示については、追って図１９～図２５を参照して説明する。なお、ステップＳ１において調製される試料には、第３蛍光色素で標識されたＧｂ３抗体が含まれなくてもよい。ステップＳ３において、第３蛍光画像は取得されなくてもよい。ステップＳ６の処理は省略されてもよい。

【0040】

次に、図４～図１１を参照して、マルベリー小体に関する第１～第３抽出工程について説明する。

【0041】

以下では、図４、６、９に示すように、処理部１１が抽出の際にスキャッタグラム２１０、２２０、２３０を生成するものとして抽出工程を説明しているが、スキャッタグラムの生成は必ずしも行われなくてもよい。すなわち、処理部１１は、スキャッタグラムを生成し所定の範囲の有形成分を抽出する処理を、同様の手順に沿ったデータ処理によって行ってもよい。

【0042】

図４は、第１抽出工程で生成されるスキャッタグラム２１０を示す図である。

【0043】

処理部１１は、カメラ１５４により取得した全有形成分の明視野画像から、明視野画像ごとに、明視野サイズおよび明視野フォーカスを取得する。

【0044】

明視野サイズは、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値の一例であり、有形成分の形態情報である。明視野サイズは、例えば、明視野画像において有形成分の領域であると特定された画素の数である。明視野フォーカスは、明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値の一例である。明視野フォーカスは、例えば、明視野画像において有形成分の領域であると特定された画素において、画素値を正規化し、隣接する画素間の画素値の勾配を合計した値を画素数で除算した値（平均勾配）である。明視野フォーカスの値が大きいほど、明視野画像において有形成分にフォーカス（ピント）が合った状態となる。

【0045】

処理部１１は、明視野画像から取得した明視野サイズおよび明視野フォーカスを用いて、全有形成分をスキャッタグラム２１０にプロットする。スキャッタグラム２１０の横軸は明視野サイズであり、縦軸は明視野フォーカスである。

【0046】

処理部１１は、スキャッタグラム２１０において、マルベリー小体に対応する範囲Ｒ１に含まれる有形成分を抽出する。範囲Ｒ１は、あらかじめ記憶部１２に記憶された固定の範囲である。範囲Ｒ１の横軸方向の範囲は、マルベリー小体が含まれる可能性が高く、単一の細菌、サイズの大きい尿路上皮細胞、および扁平上皮細胞などを除外できる明視野サイズの範囲に設定される。範囲Ｒ１の縦軸方向の範囲は、明視野画像においてフォーカスが合っていない有形成分を除外できる明視野フォーカスの範囲に設定される。なお、範囲Ｒ１の縦軸方向の上限は、設定されなくてもよい。範囲Ｒ１内の有形成分が抽出されることにより、第１抽出工程が終了する。

【0047】

図５の上段には、図４のスキャッタグラム２１０において範囲Ｒ１以外の他の範囲にプロットされた有形成分の明視野画像が例示されている。

【0048】

図５の上段の左側に示す３つの明視野画像に示すように、有形成分にフォーカスが合っていないと、明視野画像に写った有形成分が不鮮明となるため、当該明視野画像を以降の抽出に用いることができない。このようにフォーカスが合っていない有形成分は、範囲Ｒ１の外側に分布するため、第１抽出工程によって除外される。また、図５の上段の右側に示す明視野画像には、マルベリー小体よりもサイズが数段大きい扁平上皮細胞が写っている。図５の上段の右側に示す明視野画像に示すように、有形成分のサイズが通常のマルベリー小体のサイズよりも数段大きいと、この有形成分がマルベリー小体である可能性は低い。このようにサイズが数段大きい有形成分は、範囲Ｒ１の外側に分布するため、第１抽出工程によって除外される。

【0049】

なお、図５の下段には、大きさが５μｍであり、マルベリー小体と同等の大きさであるビーズを、有形成分検出装置１で撮像して得られた明視野画像が示されている。範囲Ｒ１をあらかじめ設定する際には、例えば、このように所定の大きさのビーズを撮像して得られた明視野画像を用いて、範囲Ｒ１の明視野フォーカスおよび明視野サイズの範囲を設定できる。

【0050】

図６は、第２抽出工程で生成されるスキャッタグラム２２０を示す図である。

【0051】

処理部１１は、第１抽出工程で抽出した範囲Ｒ１内の各有形成分の第１蛍光画像および第２蛍光画像から、それぞれ、核酸に関する平均輝度および赤血球に関する平均輝度を取得する。

【0052】

核酸に関する平均輝度は、有形成分から第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値の一例である。核酸に関する平均輝度は、例えば、第１蛍光画像において有形成分の領域であると特定された画素の緑色成分の輝度値の平均である。赤血球に関する平均輝度は、有形成分から第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値の一例である。赤血球に関する平均輝度は、例えば、第２蛍光画像において有形成分の領域であると特定された画素の赤色成分の輝度値の平均である。

【0053】

なお、本実施形態では、有形成分から第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値は、核酸に関する平均輝度であるが、これには限定されず、例えば、第１蛍光画像において有形成分の領域であると特定された画素の緑色成分の輝度値の合計値、最大値、または中間値などであってもよい。同様に本実施形態では、有形成分から第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値は、赤血球に関する平均輝度であるが、これには限定されず、例えば、第２蛍光画像において有形成分の領域であると特定された画素の赤色成分の輝度値の合計値、最大値、または中間値などであってもよい。

【0054】

処理部１１は、第１蛍光画像および第２蛍光画像からそれぞれ取得した核酸に関する平均輝度および赤血球に関する平均輝度を用いて、第１抽出工程で抽出した範囲Ｒ１内の全有形成分をスキャッタグラム２２０にプロットする。スキャッタグラム２２０の横軸は核酸に関する平均輝度であり、縦軸は赤血球に関する平均輝度である。

【0055】

処理部１１は、スキャッタグラム２２０において、マルベリー小体に対応する範囲Ｒ２に含まれる有形成分を抽出する。範囲Ｒ２は、あらかじめ記憶部１２に記憶された固定の範囲である。図６において、範囲Ｒ４１は赤血球に対応する範囲である。範囲Ｒ４２は、真菌に対応する範囲である。範囲Ｒ４２には、真菌に加え、尿路上皮細胞、尿細管上皮細胞、および白血球も含まれる。範囲Ｒ２は、赤血球に対応する範囲である範囲Ｒ４１および真菌に対応する範囲である範囲Ｒ４２と重ならない範囲である。すなわち、範囲Ｒ２は、範囲Ｒ４１に分布する赤血球と、範囲Ｒ４２に分布する尿路上皮細胞、尿細管上皮細胞、白血球および真菌とを除外できる範囲に設定される。範囲Ｒ２内の有形成分が抽出されることにより、第２抽出工程が終了する。

【0056】

図７の上段には、図６のスキャッタグラム２２０において範囲Ｒ４１にプロットされた赤血球の明視野画像、第１蛍光画像および第２蛍光画像が例示されている。

【0057】

赤血球は、明視野画像において円形に写り、形態的にマルベリー小体と類似している。このため、明視野画像を目視することにより、マルベリー小体（図１１参照）と赤血球とを区別するのは困難である。しかしながら、赤血球は核を有しないため、第１蛍光画像には第１蛍光色素からの蛍光がほぼ写らない。また、赤血球は第２蛍光色素により標識されるため、第２蛍光画像には第２蛍光色素からの蛍光が明瞭に写る。したがって、赤血球は、図６の範囲Ｒ２と重ならない範囲Ｒ４１に分布するため、第２抽出工程によって除外される。

【0058】

図７の下段および図８には、図６のスキャッタグラム２２０において範囲Ｒ４２にプロットされた尿路上皮細胞、尿細管上皮細胞、白血球および真菌の明視野画像、第１蛍光画像および第２蛍光画像が例示されている。

【0059】

これらの細胞は、いずれも明視野画像において円形に写るものが多いため、明視野画像を目視することにより、マルベリー小体（図１１参照）とこれらの細胞とを区別することは困難である。特に、真菌は形態的にマルベリー小体と類似しているため、目視によりマルベリー小体と真菌とを区別することは困難である。しかしながら、これらの細胞は核を有するため、第１蛍光画像には第１蛍光色素からの蛍光が明瞭に写る。また、これらの細胞は第２蛍光色素によってほぼ標識されないため、第２蛍光画像には第２蛍光色素からの蛍光がほぼ写らない。したがって、これらの細胞は、図６の範囲Ｒ２と重ならない範囲Ｒ４２付近に分布するため、第２抽出工程によって除外される。

【0060】

マルベリー小体は核を有しないため、第１蛍光画像には第１蛍光色素からの蛍光がほぼ写らない。また、マルベリー小体は第２蛍光色素によってほぼ標識されないため、第２蛍光画像には第２蛍光色素からの蛍光がほぼ写らない。したがって、範囲Ｒ２は、範囲Ｒ４１よりも第２蛍光量に関する値が小さく、範囲Ｒ４２よりも第１蛍光量に関する値が小さい領域に設定される。

【0061】

図９は、第３抽出工程で生成されるスキャッタグラム２３０を示す図である。

【0062】

処理部１１は、第２抽出工程で抽出した範囲Ｒ２内の各有形成分の明視野画像から、それぞれ、明視野のコントラストおよび明視野の輝度のばらつきを取得する。

【0063】

明視野のコントラストは、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値の一例であり、有形成分の形態情報である。明視野のコントラストは、例えば、明視野画像において有形成分の領域であると特定された画素において、３×３の画素範囲内で画素値の勾配を加算し、画素範囲をずらして画素範囲ごとに画素値の勾配を計算し、全画素範囲の画素値の勾配を有形成分の領域の画素数で除算した値である。明視野の輝度のばらつきは、明視野画像に基づく有形成分の輝度のばらつきに関する値の一例であり、有形成分の形態情報である。明視野の輝度のばらつきは、例えば、明視野画像において有形成分の領域であると特定された画素の値の標準偏差である。

【0064】

明視野のコントラストは、明視野画像における画素値の変化量を示している。例えば、明視野画像において有形成分の縁と内部との濃淡の差が大きいほど、明視野のコントラストが大きくなる。明視野のコントラストは、集塊面と内部との濃淡の差や、マルベリー小体の渦巻き形状による濃淡の差などにより変化する。明視野の輝度のばらつきは、明視野画像における画素値の分布状態を示している。例えば、明視野画像において有形成分の画素値のばらつきが大きく、画素値が不均一であるものほど、明視野の輝度のばらつきは大きくなる。マルベリー小体は渦巻状の形状を有しているものが多いため、マルベリー小体に対応する有形成分の明視野のコントラストおよび輝度のばらつきは、比較的大きくなる。

【0065】

処理部１１は、明視野画像から取得した明視野のコントラストおよび明視野の輝度のばらつきを用いて、第２抽出工程で抽出した範囲Ｒ２内の全有形成分をスキャッタグラム２３０にプロットする。スキャッタグラム２３０の横軸は明視野のコントラストであり、縦軸は明視野の輝度のばらつきである。

【0066】

処理部１１は、スキャッタグラム２３０において、マルベリー小体に対応する範囲Ｒ３に含まれる有形成分を抽出する。範囲Ｒ３は、あらかじめ記憶部１２に記憶された固定の範囲である。範囲Ｒ３は、位置Ｒ４３付近に分布する明暗のみで示される有形成分と、位置Ｒ４４付近に分布するディブリスと、位置Ｒ４５付近に分布するフォーカスが合っていない有形成分と、位置Ｒ４６付近に分布する小さい有形成分の集塊とを除外できる範囲に設定される。具体的には、範囲Ｒ３は、ディブリスが出現する位置Ｒ４４よりもコントラストに関する値が大きく、小さい有形成分の集塊が出現する位置Ｒ４６よりも輝度のばらつきに関する値が大きい領域に設定される。範囲Ｒ３内の有形成分が抽出されることにより、第３抽出工程が終了する。

【0067】

図１０には、図９のスキャッタグラム２３０において位置Ｒ４３、Ｒ４４、Ｒ４５、Ｒ４６付近にプロットされた有形成分の明視野画像が例示されている。

【0068】

図１０の一段目に示すように、位置Ｒ４３付近の有形成分の明視野画像には、明暗のみを示す有形成分が写っている。明暗のみで示される有形成分は、範囲Ｒ３の外側の位置Ｒ４３付近に分布するため、第３抽出工程によって除外される。

【0069】

図１０の二段目に示すように、位置Ｒ４４付近の有形成分の明視野画像には、ディブリスが写っている。ディブリスとは、例えば壊死組織片である。ディブリスは、範囲Ｒ３の外側の位置Ｒ４４付近に分布するため、第３抽出工程によって除外される。

【0070】

図１０の三段目に示すように、位置Ｒ４５付近の有形成分の明視野画像には、フォーカスが合っていない有形成分が写っている。フォーカスが合っていない有形成分は、範囲Ｒ３の外側の位置Ｒ４５付近に分布するため、第３抽出工程によって除外される。

【0071】

図１０の四段目に示すように、位置Ｒ４６付近の有形成分の明視野画像には、小さい有形成分の集塊が写っている。小さい有形成分の集塊は、範囲Ｒ３の外側の位置Ｒ４６付近に分布するため、第３抽出工程によって除外される。

【0072】

図１１には、図９のスキャッタグラム２３０において範囲Ｒ３にプロットされた有形成分の明視野画像、第１蛍光画像、第２蛍光画像および第３蛍光画像が例示されている。

【0073】

範囲Ｒ３には、マルベリー小体、尿細管上皮細胞および塩類などが分布する。

【0074】

範囲Ｒ３の明視野画像には、内部に、渦巻き形状、二重円および白抜けなどが形成されたマルベリー小体が含まれる。マルベリー小体は、マルベリー小体の最下段の明視野画像に示すように、集塊状（桑の実状）の形状を含むこともある。マルベリー小体は、第２蛍光色素によってほぼ染色されないため、第２蛍光画像には第２蛍光色素からの蛍光がほぼ写らない。また、多くのマルベリー小体は、集塊状となったマルベリー小体を除き、第１蛍光色素によってほぼ染色されないため、第１蛍光画像には第１蛍光色素からの蛍光がほぼ写らない。

【0075】

本実施形態では、第３蛍光画像はマルベリー小体の抽出に用いられないが、有形成分中のＧｂ３の有無を確認するために、尿検体中のＧｂ３が第３蛍光色素で標識され、第３蛍光画像が取得されている。

【0076】

マルベリー小体の第３蛍光画像を参照すると、マルベリー小体にはＧｂ３が発現することがあり、例えば、マルベリー小体が集塊状の形状である場合にＧｂ３が発現することがある。しかしながら、尿細管上皮細胞の第３蛍光画像を参照すると、尿細管上皮細胞にもＧｂ３が発現することがある。したがって、Ｇｂ３の発現の有無によってマルベリー小体と尿細管上皮細胞とを分類するのは困難であることが分かる。これに対し、実施形態によるマルベリー小体の抽出工程では、範囲Ｒ３に一部の尿細管上皮細胞が残るものの、図６のスキャッタグラム２２０において、尿細管上皮細胞の多くは範囲Ｒ４２に分布し、範囲Ｒ４２は、マルベリー小体に対応する範囲Ｒ２とは重なっていないため、特に第２抽出工程において、多くの尿細管上皮細胞を除外できる。

【0077】

なお、図１１の上段に示すマルベリー小体のうち、上から２番目と３番目の画像のマルベリー小体は、第３蛍光色素によってほぼ染色されていない。このように、Ｇｂ３を特異的に染色する抗体染色色素を用いてマルベリー小体の視認性を向上させる従来の方法では、十分な視認性が得られないことがある。

【0078】

また、範囲Ｒ３には、図１１の中段に示す尿細管上皮細胞や、図１１の下段に示す塩類などが残るが、範囲Ｒ３に含まれるマルベリー小体は、オペレータにより、表示部１４に表示される画面３００を用いて目視により特定される。画面３００については、追って図１９以降を参照して説明する。第１～第３抽出工程によれば、尿検体中に含まれるマルベリー小体以外の多くの有形成分が除外されるため、すなわち、マルベリー小体に対応する範囲Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３に含まれる有形成分が抽出されるため、オペレータは、後述する画面３００に表示される画像を参照して、効率よくマルベリー小体を特定できる。

【0079】

次に、図１２～図１８を参照して、１２人の被検者に対して第１～第３抽出工程を行って、マルベリー小体を抽出した実験について説明する。

【0080】

本実験において、核酸を染色する第１蛍光色素として、ＵＦ－フルオロセルＣＲ（シスメックス株式会社製）を使用し、赤血球に特異的に結合する抗体として、Ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ Ａ抗体：ＳＣ―５３２９５（ＳＡＮＴＡ ＣＲＵＺ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ， ＩＮＣ.製）を使用し、当該抗体に結合する第２蛍光色素として、ＭＩＸ―ｎ－ＳＴＡＩＮ ＣＦ５９４ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔｓ：９２２５６（Biotium社製）を使用した。また、第１蛍光色素を励起する波長λ１１は、４８８ｎｍであり、第２蛍光色素を励起する波長λ１２は、５９２ｎｍであった。

【0081】

図１２は、第１～第３抽出工程において、各範囲に含まれる有形成分の数を示す表である。

【0082】

この実験では、１２人の被検者からそれぞれ尿検体を採取し、採取した尿検体の一部に対して熟練の検査技師による顕微鏡検査を行い、他の一部に対して図３のステップＳ１～Ｓ６の処理を行った。

【0083】

検査技師は、尿検体の一部に対して顕微鏡検査を行い、マルベリー小体が含まれると判断した場合に当該尿検体を陽性とし、マルベリー小体が含まれないと判断した場合に当該尿検体を陰性とした。検体ＩＤがＦ００５、Ｆ００６、Ｆ０３２、Ｆ０３５、Ｆ０４７、Ｆ０４９、Ｆ０６０、Ｆ０８３、Ｆ０８４、Ｆ０９５の尿検体は、顕微鏡検査の結果、陽性と判断された。検体ＩＤがＮ００７、Ｎ００８の尿検体は、顕微鏡結果の結果、陰性と判断された。

【0084】

一方、同一の尿検体の他の一部については、図３のステップＳ１～Ｓ６の処理を行い、ステップＳ４で得られたスキャッタグラム２１０、ステップＳ５で得られたスキャッタグラム２２０、ステップＳ６で得られたスキャッタグラム２３０の有形成分の数、マルベリー小体の数、およびマルベリー小体の比率を計数および算出した。マルベリー小体であるか否かは、ステップＳ３で撮像部１９により撮像された画像を熟練の検査技師が目視することによって判定された。表の「Ａｌｌ」は、ステップＳ４で得られたスキャッタグラム２１０に含まれる有形成分の数である。表の「Ｒ１」は、ステップＳ４で得られたスキャッタグラム２１０の範囲Ｒ１に含まれる有形成分の数である。表の「Ｒ２」は、ステップＳ５で得られたスキャッタグラム２２０の範囲Ｒ２に含まれる有形成分の数である。表の「Ｒ３」は、ステップＳ６で得られたスキャッタグラム２３０の範囲Ｒ３に含まれる有形成分の数である。マルベリー小体の割合は、同じ範囲において、マルベリー小体の数を有形成分の数で除算したものである。

【0085】

図１２に示すように、撮像部１９で撮像された全ての有形成分に対して、第１～第３抽出工程を行うことにより、いずれの尿検体においても有形成分の数は顕著に減少している。一方、いずれの尿検体においても、マルベリー小体の数は、第１～第３抽出工程によってほぼ減少しなかった。言い換えれば、最終的に範囲Ｒ３により抽出されたマルベリー小体の数は、撮像部１９で撮像された全てのマルベリー小体から僅かに減少するのみであった。これにより、マルベリー小体の割合は、抽出を行う度に上昇し、最終的に１％～５％程度まで大きく上昇した。よって、撮像部１９で撮像された全ての有形成分から、マルベリー小体をより正確に抽出できたことが分かる。

【0086】

図１３～図１８は、図１２に示した尿検体に対して第１～第３抽出工程において得られたスキャッタグラム２１０、２２０、２３０である。

【0087】

図１３～図１８において、グレーのプロットは、ステップＳ３で撮像部１９により撮像された画像を熟練の検査技師が目視することによってマルベリー小体であると判定された有形成分に対応し、白のプロットは、マルベリー小体であると判定された有形成分以外の有形成分に対応する。

【0088】

なお、図４、６、および９のスキャッタグラム２１０、２２０、２３０におけるグレーのプロットも同様に、ステップＳ３で撮像部１９により撮像された画像を熟練の検査技師が目視することによってマルベリー小体であると判定された有形成分に対応する。但し、熟練の検査技師が目視によりマルベリー小体であるか否かを判定すること、および、判定結果によってプロットを色分けすることは、本実験の効果を確認することを目的とするものであり、省略可能である。

【0089】

また、検体ＩＤがＦ００５の尿検体は、図４～図１１の説明で例示した尿検体と同一である。したがって、図１３の上段に示すスキャッタグラム２１０、２２０、２３０は、図４、６、９に示したスキャッタグラムと同一であるが、便宜上、再掲した。

【0090】

図１３～図１８の各尿検体のスキャッタグラム２１０、２２０、２３０を参照して分かるように、グレーで示すマルベリー小体のプロットは、第１～第３抽出工程による範囲Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３の抽出範囲にほぼ入っている。このように、あらかじめ記憶部１２に記憶された範囲Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３を用いることで、どの尿検体に対しても、適正にマルベリー小体を抽出できることが分かる。

【0091】

次に、図３のステップＳ７で行われる有形成分の画像を表示する処理について、図１９～図２５を参照して説明する。図３のステップＳ７では、第１～第３抽出工程により抽出された有形成分（図９のスキャッタグラム２３０の範囲Ｒ３に含まれる有形成分）の画像が、以下に示す画面３００に表示され、マルベリー小体の計数結果の履歴および計数結果の変化に基づく情報が、以下に示す画面４００に表示される。

【0092】

図１９は、有形成分画像を表示する画面３００の構成を模式的に示す図である。

【0093】

画面３００は、検体ＩＤ表示領域３０１と、被検者ＩＤ表示領域３０２と、有形成分の画像を表示する画像表示領域３１０と、を備える。また、画面３００は、画像表示領域３１０に表示する画像の種類を選択するための、明視野画像表示ボタン３２１と、第１蛍光画像表示ボタン３２２と、第２蛍光画像表示ボタン３２３と、第３蛍光画像表示ボタン３２４と、を備える。また、画面３００は、画像表示領域３１０に表示する画像の並び順を設定するための、番号順ボタン３３１と、大きさ順ボタン３３２と、を備える。また、画面３００は、画像表示領域３１０で選択されたマルベリー小体の数を表示する計数結果表示領域３４１と、計数結果を確定するための確定ボタン３４２と、を備える。

【0094】

オペレータが、検体ＩＤおよび被検者ＩＤを入力した上で、画面３００を表示させる指示を入力すると、処理部１１は、図１９に示す画面３００を表示部１４に表示する。

【0095】

オペレータが、明視野画像表示ボタン３２１、第１蛍光画像表示ボタン３２２、第２蛍光画像表示ボタン３２３および第３蛍光画像表示ボタン３２４のいずれかを操作すると、処理部１１は、操作されたボタンに対応する種類の画像を、画像表示領域３１０に表示する。画像表示領域３１０には、検体ＩＤ表示領域３０１で示された尿検体から得られた、範囲Ｒ３に含まれる有形成分の画像が表示される。図１９に示す例は、画像の種類を選択する４つのボタンのうち明視野画像表示ボタン３２１が操作された状態を示している。この結果、画像表示領域３１０には、明視野画像が表示されている。

【0096】

オペレータが、番号順ボタン３３１および大きさ順ボタン３３２のいずれかを操作すると、処理部１１は、画像表示領域３１０に表示される画像の順序を入れ替える。各画像には有形成分の通し番号が付されており、番号順ボタン３３１が操作されると、この通し番号の順に画像が並べ替えられる。大きさ順ボタン３３２が操作されると、ステップＳ４で取得された明視野サイズに基づき、画像上の有形成分の大きさの順に画像が並べ替えられる。図１９に示す例は、並び順を設定する２つのボタンのうち番号順ボタン３３１が操作された状態を示している。番号順ボタン３３１および大きさ順ボタン３３２のいずれも、続けて操作されることにより、表示順が昇順と降順との間で入れ替えられる。

【0097】

図２０に示す例は、並び順を設定する２つのボタンのうち大きさ順ボタン３３２が操作された状態を示している。図２０には、図２１を参照して後述するように、マルベリー小体として選択された有形成分の画像に、太い枠線３１２が付与されている。マルベリー小体は互いに同等の大きさを有するため、各画像を大きさ順に並べることにより、マルベリー小体に対応する画像が近接して並ぶことになる。これにより、オペレータは、マルベリー小体の選択をより正確に行うことができる。

【0098】

なお、画面３００が表示される際に、処理部１１は、画像表示領域３１０に表示される画像を、番号順に表示してもよく、大きさ順に表示してもよい。また、画面３００には、明視野サイズの順で画像を並べ替えるためのボタン、明視野フォーカスの順で画像を並べ替えるためのボタン、核酸に関する平均輝度の順で画像を並べ替えるためのボタン、赤血球に関する平均輝度の順で画像を並べ替えるためのボタン、明視野のコントラストの順で画像を並べ替えるためのボタンおよび明視野の輝度のばらつきの順で画像を並べ替えるためのボタンの少なくとも一つが配置されてもよい。

【0099】

オペレータは、画像表示領域３１０内の画像を参照し、画像に写っている有形成分がマルベリー小体である可能性があると判断すると、当該画像に対して操作（例えば、クリック）を行う。処理部１１は、画像表示領域３１０内の画像が操作されると、画面３００上に拡大画像領域３１１を重ねて表示する。

【0100】

図２１は、拡大画像領域３１１が表示された画面３００の構成を模式的に示す図である。

【0101】

拡大画像領域３１１は、画像表示領域３１０で操作された画像を拡大して表示する。拡大画像領域３１１は、チェックボックス３１１ａを備える。オペレータは、拡大された画像をさらに観察し、当該画像に写っている有形成分がマルベリー小体であると判断すると、チェックボックス３１１ａにチェックを入れる。

【0102】

図２２には、オペレータによりマルベリー小体と判断された有形成分の明視野画像が例示されている。

【0103】

マルベリー小体は、一段目に示すように黒い渦巻状を有する場合、二段目に示すように白い渦巻状を有する場合、三段目に示すように二重円を有する場合、四段目に示すように白抜けを有する場合がある。オペレータは、このようなマルベリー小体の形状を把握した上で、図１９～２１に示す画像表示領域３１０および拡大画像領域３１１を参照して、画像に写っている有形成分がマルベリー小体か否かを判断する。このとき、上述したように、第１～第３抽出工程によりマルベリー小体以外の有形成分が大幅に除外されているため、オペレータは、図１９～２１に示すような画像を参照してマルベリー小体か否かを連続的に判定する作業を、より正確に行うことができる。

【0104】

図２１に戻り、処理部１１は、チェックボックス３１１ａにチェックが入れられた画像にフラグを紐付けて記憶部１２（図１参照）に記憶し、画像表示領域３１０の当該画像に太い枠線３１２を付与する。このように、画像に太い枠線３１２が付与されると、画像表示領域３１０の複数の画像のうち、マルベリー小体と判断された有形成分の画像を把握しやすくなる。また、チェックが入れられた画像にフラグが紐付けられると、マルベリー小体と判断された画像を、後日、再度確認することもできる。

【0105】

なお、画像に対する指示入力は、チェックボックス３１１ａを介して行われることに限らず、画像に対して他の操作（例えば、右クリックやダブルクリックなど）を介して行われてもよい。

【0106】

また、処理部１１は、チェックボックス３１１ａにチェックが入れられた有形成分の数を、計数結果表示領域３４１に表示する。これにより、オペレータは、マルベリー小体と判断した有形成分の数（太い枠線３１２が付与された有形成分の数）を円滑に把握できる。

【0107】

さらに、オペレータが確定ボタン３４２を操作すると、処理部１１は、チェックボックス３４１ａを介してマルベリー小体であると判断された有形成分の数と、範囲Ｒ３内の有形成分の数に対するマルベリー小体と判断された有形成分の数の割合と、検体ＩＤと、被検者ＩＤと、現在の日時とを含む計数結果を、外部のホストコンピュータ（図１参照）に送信する。計数結果は、ホストコンピュータに送信されることに代えて、または加えて、記憶部１２に記憶されてもよい。

【0108】

なお、図２１では、拡大画像領域３１１に、画像表示領域３１０内で操作された画像の拡大画像のみが表示されたが、これに限らず、図２３に示すように、画像表示領域３１０内で操作された画像中の有形成分について、対応する全ての画像（明視野画像、第１蛍光画像、第２蛍光画像および第３蛍光画像）が表示されてもよい。この場合、オペレータは、全ての画像を参照しながら、対象の有形成分がマルベリー小体であるか否かを円滑に判断できる。なお、この場合も第３蛍光画像の表示は省略可能である。

【0109】

また、拡大画像領域３１１に、マルベリー小体の形状（渦巻状、二重円および白抜けなど）に対するチェックボックスが配置されてもよい。この場合、オペレータは、画像を参照してマルベリー小体の形状を判断し、マルベリー小体の形状に応じてチェックボックスにチェックを入れる。そして、画面３００には、マルベリー小体の形状ごとの計数結果が表示され、マルベリー小体の形状ごとに画像を並べ替えるためのボタンが配置される。これにより、典型的な形状（渦巻状や二重円）のマルベリー小体と、非典型な形状（それ以外の形状）のマルベリー小体とを、画像表示領域３１０において確認しやすくなるため、例えば、ファブリー病の患者に対して行われた酵素補充療法の効果を確認できる。

【0110】

また、画面３００に、図４、６、９に示したスキャッタグラム２１０、２２０、２３０が表示されてもよい。この場合、オペレータが画像表示領域３１０内の画像を操作すると、スキャッタグラム上の対応する有形成分のプロットにマークが付されてもよく、オペレータがスキャッタグラム上の有形成分のプロットを操作すると、画像表示領域３１０内の対応する画像にマークが付されてもよい。

【0111】

図２４は、同一被検者に対するマルベリー小体の計数結果の履歴および変化を表示する画面４００の構成を模式的に示す図である。

【0112】

画面４００は、被検者ＩＤ表示領域４０１と、リスト表示領域４１１と、グラフ表示領域４１２と、を備える。

【0113】

オペレータが、被検者ＩＤを入力した上で、画面４００を表示させる指示を入力すると、処理部１１は、図２４に示す画面４００を表示部１４に表示する。このとき、処理部１１は、被検者ＩＤに基づいてホストコンピュータ（図１参照）に問い合わせを行い、ホストコンピュータから被検者ＩＤに対応する計数結果を受信する。１つの被検者ＩＤに対応する計数結果が複数ある場合、処理部１１は、ホストコンピュータから、複数の計数結果を計数結果の履歴として受信する。処理部１１は、受信した計数結果に基づいて、リスト表示領域４１１およびグラフ表示領域４１２を表示する。

【0114】

リスト表示領域４１１の各行は、１つの計数結果に対応する。リスト表示領域４１１は、マルベリー小体であると判断された有形成分の数と、範囲Ｒ３内の有形成分の数に対するマルベリー小体と判断された有形成分の数の割合とを表示する。グラフ表示領域４１２は、リスト表示領域４１１のデータに基づくグラフである。グラフ表示領域４１２のグラフは、計数結果の変化に基づく情報である。

【0115】

なお、図２４に示すリスト表示領域４１１およびグラフ表示領域４１２は、図１９～２１に示した画面３００とは別の画面４００に表示されたが、図２５に示すように、画面３００に合わせて表示されてもよい。

【0116】

＜実施形態による有形成分検出方法、有形成分検出装置およびプログラムの効果＞
図３のステップＳ１において、処理部１１は、被検者から採取した尿検体と、核酸を染色する第１蛍光色素と、赤血球に特異的に結合する抗体と、赤血球に特異的に結合する抗体に結合する第２蛍光色素とを含む試料を調製するよう、試料調製部１８を駆動する。ステップＳ３において、処理部１１は、試料中の複数の有形成分を撮像して蛍光画像を取得する。ステップＳ５において、処理部１１は、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲Ｒ２（図６参照）に含まれる有形成分を抽出する。

【0117】

この処理によれば、蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲Ｒ２に含まれる有形成分が抽出されるため、マルベリー小体をより正確に抽出できる。特に、マルベリー小体と形態的に類似する赤血球および真菌を除外して、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0118】

蛍光画像から得られた情報は、有形成分から第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値および当該有形成分から第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値を含む。

【0119】

この構成によれば、赤血球、尿細管上皮細胞、尿路上皮細胞、白血球および真菌などを除外できる。

【0120】

蛍光画像は、第１蛍光色素により生じた蛍光を撮像した第１蛍光画像および第２蛍光色素により生じた蛍光を撮像した第２蛍光画像を含む。

【0121】

この構成によれば、第１蛍光色素により生じた蛍光および第２蛍光色素により生じた蛍光をそれぞれ個別に撮像することにより、第１蛍光量に関する値および第２蛍光量に関する値を円滑に取得できる。

【0122】

有形成分を抽出する工程は、第１蛍光量に関する値および第２蛍光量に関する値が範囲Ｒ２に含まれる（すなわち、所定の条件に合致する）有形成分を抽出する、図３のステップＳ５の第２抽出工程を含む。

【0123】

この構成によれば、所定の条件を用いることでマルベリー小体を抽出できるため、抽出を円滑に行うことができる。

【0124】

図３のステップＳ３において、処理部１１は、試料中の複数の有形成分を撮像して明視野画像をさらに取得する。有形成分を抽出する工程は、蛍光画像から得られた情報および明視野画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３（図４、６、９参照）に含まれる有形成分を抽出する、ステップＳ４の第１抽出工程、ステップＳ５の第２抽出工程およびステップＳ６の第３抽出工程を含む。

【0125】

この構成によれば、明視野画像を用いることで、マルベリー小体をさらに正確に抽出できる。

【0126】

明視野画像から得られた情報は、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値および明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値を含む。

【0127】

この構成によれば、有形成分の大きさに関する値により、マルベリー小体以外の尿検体の有形成分（単一の細菌、サイズの大きい尿路上皮細胞、および扁平上皮細胞など）を除外できる。また、フォーカス状態に関する値により、目視確認に適さない有形成分の画像を除外できる。

【0128】

明視野画像から得られた情報は、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値および明視野画像に基づく有形成分の輝度のばらつきに関する値を含む。

【0129】

この構成によれば、明暗のみで示される有形成分、ディブリス、フォーカスが合っていない有形成分、および小さい有形成分の集塊などを除外できる。

【0130】

有形成分を抽出する工程は、図３に示したように、ステップＳ４の第１抽出工程と、ステップＳ５の第２抽出工程と、ステップＳ６の第３抽出工程と、を含む。第１抽出工程において、処理部１１は、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値および明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値が図４の範囲Ｒ１に含まれる（すなわち、第１条件に合致する）有形成分を抽出する。第２抽出工程において、処理部１１は、有形成分から第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値を第１蛍光画像から取得し、有形成分から第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値を第２蛍光画像から取得し、第１蛍光量に関する値および第２蛍光量に関する値が図６の範囲Ｒ２に含まれる（すなわち、第２条件に合致する）有形成分を抽出する。第３抽出工程において、処理部１１は、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値および有形成分の輝度のばらつきに関する値が図９の範囲Ｒ３に含まれる（すなわち、第３条件に合致する）有形成分を抽出する。

【0131】

第１～第３抽出工程によれば、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0132】

蛍光画像から得られた情報がマルベリー小体に対応する範囲Ｒ２は、赤血球に対応する範囲Ｒ４１および真菌に対応する範囲Ｒ４２と重ならない範囲である。

【0133】

この構成によれば、マルベリー小体と形態的に類似する赤血球および真菌を除外して、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0134】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、抽出したマルベリー小体に対応する範囲（例えば、図９の範囲Ｒ３）に含まれる有形成分の画像を、図１９～２１に示した画面３００に表示する。

【0135】

この工程によれば、オペレータは、マルベリー小体に対応する範囲に含まれる有形成分の画像を参照して、マルベリー小体である可能性が高い有形成分を円滑に確認できる。

【0136】

処理部１１は、図３のステップＳ３において、試料中の複数の有形成分を撮像して明視野画像を取得し、ステップＳ７において、抽出した有形成分の明視野画像を、図１９～２１に示した画像表示領域３１０に表示する。

【0137】

マルベリー小体は、明視野画像において特徴が現れやすい。したがって、この工程によれば、オペレータは、明視野画像を参照して、マルベリー小体である可能性が高い有形成分を円滑に確認できる。

【0138】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、抽出した有形成分の画像を、図１９～２１に示した画像表示領域３１０に一覧表示する。

【0139】

この工程によれば、有形成分の画像が一覧表示されるため、オペレータは、複数の有形成分の画像を順に確認しやすい。

【0140】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、抽出した有形成分の画像を、図２０に示したように、画像表示領域３１０において、有形成分画像の大きさ順に一覧表示する。

【0141】

有形成分の大きさ順に並べ替えられると、画像表示領域３１０において、マルベリー小体と他の有形成分とが分かれて表示されやすくなる。このため、オペレータは、より正確にマルベリー小体を確認できる。

【0142】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、図１９～２１の大きさ順ボタン３３２を介して、抽出した有形成分の画像を有形成分の大きさ順に並べる指示入力を受け付け、受け付けた指示入力に応じて、一覧表示した有形成分の画像を並べ替える。

【0143】

この工程によれば、オペレータは、一覧表示された有形成分を円滑に並べ替えることができる。

【0144】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、一覧表示した有形成分の画像の任意の１つを特定する指示入力を受け付け、図２１の拡大画像領域３１１に示したように、指示入力で特定された有形成分の画像を拡大表示する。

【0145】

この工程によれば、オペレータは、細部まで有形成分を見やすくなるため、対象の有形成分がマルベリー小体であるか否かをより正確に確認できる。

【0146】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、図２１のチェックボックス３１１ａを介して、一覧表示した有形成分の画像のうちマルベリー小体の画像を特定する指示入力を受け付け、指示入力で特定された有形成分の画像を計数した計数結果を、図２１に示したように、計数結果表示領域３４１に表示する。

【0147】

この工程によれば、オペレータがマルベリー小体として特定した有形成分の数を、被検者がファブリー病に罹患しているか否かの判断などの病理診断に有効な情報として利用できる。

【0148】

処理部１１は、図２４のリスト表示領域４１１に示したような、同一被検者に対する計数結果の履歴を記憶する。

【0149】

このような計数結果の履歴が表示されることにより、オペレータは、対象の被検者におけるマルベリー小体の状態の変遷を、適宜、確認できる。

【0150】

処理部１１は、図２４のグラフ表示領域４１２に示したように、計数結果の履歴に基づいて、計数結果の変化に基づく情報を表示する。

【0151】

この工程によれば、オペレータは、対象の被検者におけるマルベリー小体数の変化を円滑に確認できる。したがって、被検者がファブリー病に罹患しているか否かの判断や被検者に対する投薬の効果の判断などの病理診断をより正確に進めることができる。

【0152】

図２５の画面３００に示したように、処理部１１は、画像表示領域３１０に示す有形成分の画像の一覧とともに、グラフ表示領域４１２に示す計数結果の変化に基づく情報を表示する。

【0153】

この工程によれば、画像の一覧と計数結果の変化とを同時に参照できる。例えば、被検者に対する投薬等が効果的であったかを確認できる。

【0154】

図３のステップＳ７において、処理部１１は、図２１のチェックボックス３１１ａを介して、一覧表示した有形成分の画像のうちマルベリー小体の画像を特定する指示入力を受け付け、指示入力で特定された有形成分の画像にフラグを紐づけて記憶する。

【0155】

この工程によれば、オペレータがマルベリー小体と判定した有形成分画像を、その後にマーキングとともに表示できる。これにより、例えば、オペレータによる判定結果を、後日、医師が円滑に確認できる。よって、診断をより正確に進めることができる。

【0156】

図２に示したように、撮像部１９は、試料が流されるフローセル１１０を備え、フローセル１１０を流れる試料中の複数の有形成分を撮像する。

【0157】

この構成によれば、多数の有形成分の画像を効率的に取得できる。

【0158】

＜有形成分検出装置、方法およびプログラムの第１変更例＞
上記実施形態では、第１抽出工程および第３抽出工程の両方が実行されたが、第１抽出工程および第３抽出工程のいずれか一方が省略されてもよく、第１抽出工程および第３抽出工程の両方が省略されてもよい。

【0159】

図２６は、ステップＳ１において調製される試料に、第３蛍光色素で標識されたＧｂ３抗体が含まれず、抽出工程として第２抽出工程のみが行われる場合の、処理部１１による有形成分検出方法に関する処理を示すフローチャートである。

【0160】

図２６の処理は、図３の実施形態の処理と比較して、ステップＳ４の第１抽出工程およびステップＳ６の第３抽出工程が省略されている。

【0161】

この場合、ステップＳ５の第２抽出工程において、処理部１１は、明視野画像、第１蛍光画像、および第２蛍光画像を取得する。また、処理部１１は、撮像部１９で撮像された全ての有形成分を、図６のスキャッタグラム２２０にプロットし、スキャッタグラム２２０の範囲Ｒ２の有形成分を抽出する。そして、ステップＳ７において、処理部１１は、ステップＳ５の第２抽出工程により抽出した有形成分の画像を画面３００に表示する。

【0162】

このように、抽出工程として第２抽出工程のみが行われる場合も、有形成分から第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値と、当該有形成分から第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値とにより規定される範囲Ｒ２内の有形成分が抽出される。範囲Ｒ２には、上述したように、マルベリー小体が含まれており、赤血球、尿細管上皮細胞、尿路上皮細胞、白血球および真菌はほぼ含まれない。したがって、図２６に示す処理においても、これらのマルベリー小体以外の有形成分を除外して、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0163】

＜有形成分検出装置、方法およびプログラムの第２変更例＞
上記実施形態では、第１抽出工程において、図４に示したように、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値および明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値の両方が用いられたが、これに限らず、大きさに関する値のみが用いられてもよく、フォーカス状態に関する値のみが用いられてもよい。以下では、図１２に示した検体ＩＤが「Ｆ００５」の尿検体から得られた画像を例として用いて、本第２変更例の有形成分検出方法における第１抽出工程について説明する。

【0164】

図２７は、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値のみを用いて第１抽出工程が行われる例を示す図である。

【0165】

図２７のグラフは、撮像部１９で撮像された全ての有形成分に基づくグラフである。図２７のグラフにおいて、横軸は明視野サイズを示し、縦軸は頻度を示している。範囲Ｒ１１は、図４の範囲Ｒ１の明視野サイズにおける範囲（横軸方向の範囲）と同一である。

【0166】

この場合の第１抽出工程では、範囲Ｒ１１（第１条件）に含まれる有形成分が抽出される。これにより、検体ＩＤが「Ｆ００５」の尿検体の場合、撮像部１９で撮像された２７６９２８個の全有形成分から、範囲Ｒ１１の８４３２８個の有形成分が抽出される。すなわち、全有形成分のうち３０．５％が抽出され、６９．５％が除外される。

【0167】

図２８は、明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値のみを用いて第１抽出工程が行われる例を示す図である。

【0168】

図２８のグラフにおいて、横軸は明視野フォーカスを示し、縦軸は頻度を示している。図２８のグラフは、撮像部１９で撮像された全ての有形成分に基づくグラフである。範囲Ｒ１２は、図４の範囲Ｒ１の明視野フォーカスにおける範囲（縦軸方向の範囲）と同一である。

【0169】

この場合の第１抽出工程では、範囲Ｒ１２（第１条件）に含まれる有形成分が抽出される。これにより、検体ＩＤが「Ｆ００５」の尿検体の場合、撮像部１９で撮像された２７６９２８個の全有形成分から、範囲Ｒ１２の２４０６４９個の有形成分が抽出される。すなわち、全有形成分のうち８６．９％が抽出され、１３．１％が除外される。なお、範囲Ｒ１１およびＲ１２は、範囲Ｒ１内の有形成分を少なくとも含む範囲であるため、範囲Ｒ１１およびＲ１２には、範囲Ｒ１内と同数以上のマルベリー小体が含まれる。

【0170】

以上のように、第１抽出工程において、明視野画像に基づく有形成分の大きさに関する値および明視野画像に基づく有形成分のフォーカス状態に関する値のいずれか一方が用いられたとしても、マルベリー小体である可能性が低い有形成分を大幅に除外することができ、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0171】

また、上記の検体ＩＤが「Ｆ００５」の例からも分かるように、大きさに関する値のみを用いた第１抽出工程によって除外される有形成分の割合（６９．５％）は、フォーカス状態に関する値のみを用いた第１抽出工程によって除外される有形成分の割合（１３．１％）よりも大きい。したがって、第１抽出工程では、少なくとも明視野サイズ（有形成分の大きさに関する値）が用いられることが好ましい。

【0172】

また、第１抽出工程、第２抽出工程および第３抽出工程は、上記実施形態に示した順序で実行されることに限らないが、第１抽出工程において少なくとも大きさに関する値が用いられる場合、第１抽出工程は、第２抽出工程および第３抽出工程に先立って実行されることが好ましい。この場合、第１抽出工程において有形成分の数を大きく減らした状態でその後の処理を進めることができるため、後の工程における処理部１１の演算量を減らすことができる。

【0173】

＜有形成分検出装置、方法およびプログラムの第３変更例＞
上記実施形態では、第３抽出工程において、図９に示したように、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値および有形成分の輝度のばらつきに関する値の両方が用いられたが、これに限らず、コントラストに関する値のみが用いられてもよく、輝度のばらつきに関する値のみが用いられてもよい。以下では、図１２に示した検体ＩＤが「Ｆ００５」の尿検体から得られた画像を例として用いて、本第３変更例の有形成分検出方法における第３抽出工程について説明する。

【0174】

図２９は、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値のみを用いて第３抽出工程が行われる例を示す図である。

【0175】

図２９のグラフは、第２抽出工程により抽出された有形成分（図６の範囲Ｒ２により抽出された有形成分）に基づくグラフである。図２９のグラフにおいて、横軸は明視野のコントラストを示し、縦軸は頻度を示している。範囲Ｒ３１は、図９の範囲Ｒ３の明視野のコントラストにおける範囲（横軸方向の範囲）と同一である。

【0176】

この場合の第３抽出工程では、範囲Ｒ３１に含まれる有形成分が抽出される。これにより、検体ＩＤが「Ｆ００５」の尿検体の場合、範囲Ｒ２により抽出された４２４３０個の有形成分から、範囲Ｒ３１の１４７９８個の有形成分が抽出される。すなわち、範囲Ｒ２の有形成分のうち３４．９％が抽出され、６５．１％が除外される。

【0177】

図３０は、有形成分の輝度のばらつきに関する値のみを用いて第３抽出工程が行われる例を示す図である。

【0178】

図３０のグラフは、第２抽出工程により抽出された有形成分（図６の範囲Ｒ２により抽出された有形成分）に基づくグラフである。図３０のグラフにおいて、横軸は明視野の輝度のばらつきを示し、縦軸は頻度を示している。範囲Ｒ３２は、図９の範囲Ｒ３の明視野の輝度のばらつきにおける範囲（縦軸方向の範囲）と同一である。

【0179】

この場合の第３抽出工程では、範囲Ｒ３２に含まれる有形成分が抽出される。これにより、検体ＩＤが「Ｆ００５」の尿検体の場合、範囲Ｒ２により抽出された４２４３０個の有形成分から、範囲Ｒ３２の１４９４５個の有形成分が抽出される。すなわち、範囲Ｒ２の有形成分のうち３５．２％が抽出され、６４．８％が除外される。なお、範囲Ｒ３１およびＲ３２は、範囲Ｒ３内の有形成分を少なくとも含む範囲であるため、範囲Ｒ３１およびＲ３２には、範囲Ｒ３内と同数以上のマルベリー小体が含まれる。

【0180】

以上のように、第３抽出工程において、明視野画像に基づく有形成分のコントラストに関する値および有形成分の輝度のばらつきに関する値のいずれか一方が用いられたとしても、マルベリー小体である可能性が低い有形成分を大幅に除外することができ、マルベリー小体をより正確に抽出できる。

【0181】

＜その他の変更例＞
上記実施形態では、図３に示したように、第１抽出工程、第２抽出工程および第３抽出工程は、この順序で実行された。しかしながら、第１抽出工程、第２抽出工程および第３抽出工程の実行順序は、これに限らない。例えば、第２抽出工程、第１抽出工程および第３抽出工程が、この順で実行されてもよい。３つの抽出工程の実行順序が入れ替えられる場合、第１抽出工程、第２抽出工程および第３抽出工程は、先に実行された抽出工程によって抽出された有形成分群に対して抽出を実行する。３つの抽出工程の実行順序が入れ替わったとしても、最終的に抽出される有形成分は、上記実施形態と同様である。

【0182】

ただし、図１２の有形成分数を参照して分かるように、第１抽出工程において除外できる有形成分の数は、他の抽出工程において除外できる有形成分の数に比べて数段多い。したがって、３つの抽出工程のうち第１抽出工程が最初に行われる方が、有形成分の数を減らした状態でその後の処理を進めることができるため、後の工程における処理部１１の演算量を減らすことができる。

【0183】

上記実施形態では、図３のステップＳ７において有形成分の画像の表示が行われたが、ステップＳ７の処理は省略されてもよい。この場合、例えば、第１～第３抽出工程によって抽出された有形成分が、処理部１１または他の装置によって画像解析され、各有形成分がマルベリー小体である可能性が判定されてもよい。

【0184】

上記実施形態では、核酸に関する平均輝度（第１蛍光色素により生じた第１蛍光量に関する値）が第１蛍光画像から取得され、赤血球に関する平均輝度（第２蛍光色素により生じた第２蛍光量に関する値）が第２蛍光画像から取得された。しかしながら、これに限らず、第１蛍光色素により生じた蛍光および第２蛍光色素により生じた蛍光の両方が、カメラ１５４の同じ受光面上に導かれ、カメラ１５４は、これら２つの蛍光を撮像して、カラーで表現された１つの蛍光画像を生成してもよい。この場合、例えば、処理部１１は、生成された１つの蛍光画像から、画像処理によって、核酸に関する平均輝度および赤血球に関する平均輝度の両方を抽出する。

【0185】

上記実施形態では、図２に示したように、撮像部１９は、フローセル１１０を備え、フローセル１１０を流れる試料中の複数の有形成分を撮像した。しかしながら、これに限らず、撮像部１９は、顕微鏡により構成されてもよい。この場合、顕微鏡はスライドガラス上の試料中の複数の有形成分を撮像し、有形成分ごとに、少なくとも蛍光画像を、好ましくは、第１蛍光画像、第２蛍光画像および明視野画像を生成する。処理部１１は、顕微鏡により取得された画像を用いて、上記実施形態と同様にマルベリー小体をより正確に抽出する。
上記実施形態では、範囲Ｒ１～Ｒ３は固定領域であったが、範囲Ｒ１～Ｒ３の少なくとも一つは可変領域であってもよい。例えば、範囲Ｒ１～Ｒ３の少なくとも一つは、スキャッタグラムにおける有形成分の分布状態に応じて変化する範囲であってもよい。

【0186】

本発明の実施形態は、特許請求の範囲に示された技術的思想の範囲内において、適宜、種々の変更が可能である。

【符号の説明】

【0187】

１ 有形成分検出装置
１１ 処理部
１２ａ プログラム
１８ 試料調製部
１９ 撮像部
１１０ フローセル
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３ 範囲

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】