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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024077390
(43)【公開日】2024-06-07
(54)【発明の名称】細胞培養容器及びその製造方法
(51)【国際特許分類】
C12M 3/00 20060101AFI20240531BHJP
【ＦＩ】
C12M3/00 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】13
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022189456
(22)【出願日】2022-11-28
(71)【出願人】
【識別番号】000158208
【氏名又は名称】ＡＧＣテクノグラス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110001634
【氏名又は名称】弁理士法人志賀国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】伊藤 亨
(72)【発明者】
【氏名】三輪 達明
(72)【発明者】
【氏名】龍腰 健太郎
(72)【発明者】
【氏名】高橋 邦尚
(72)【発明者】
【氏名】桃井 弘
【テーマコード（参考）】
4B029
【Ｆターム（参考）】
4B029AA08
4B029BB01
4B029CC02
4B029GA03
4B029GB09
(57)【要約】
【課題】スフェロイドが形成されやすく、且つスフェロイドを観察しやすい細胞培養容器を提供する。
【解決手段】凹部１１が複数形成された透明な底部１０と、底部１０上に設けられ、上方から見たときに複数の凹部１１に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、それぞれの凹部１１と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成される、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器において、凹部１１の内面１１ａを細胞低接着面とし、凹部１１の内面１１ａの最大高さ粗さＲｚを０．１７０μｍ以下とし、凹部１１の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）と、凹部１１を上方から見て前記底から、凹部１１の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたときの厚さ比率ｔＡ／ｔＢを０．８０～１．２０以上とし、凹部１１内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とする。
【選択図】図２
【解決手段】凹部１１が複数形成された透明な底部１０と、底部１０上に設けられ、上方から見たときに複数の凹部１１に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、それぞれの凹部１１と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成される、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器において、凹部１１の内面１１ａを細胞低接着面とし、凹部１１の内面１１ａの最大高さ粗さＲｚを０．１７０μｍ以下とし、凹部１１の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）と、凹部１１を上方から見て前記底から、凹部１１の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたときの厚さ比率ｔＡ／ｔＢを０．８０～１．２０以上とし、凹部１１内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とする。
【選択図】図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器であって、
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の内面が細胞低接着面であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の内面が細胞低接着面であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
【請求項2】
前記培養部の表面粗さＲａが０．０２４μｍ以下である、請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項3】
前記培養部の表面の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓが０．１５０μｍ以下である、請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項4】
前記培養部の蛍光染色試薬で染めたスフェロイドに対して蛍光測定を行ったときのＳ／Ｎ比が１１．５以下である、請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項5】
前記底部がガラスからなる、請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項6】
前記枠体の前記側壁部が着色剤を含有している、請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項7】
細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器であって、
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
【請求項8】
前記培養部の表面粗さＲａが０．０２４μｍ以下である、請求項７に記載の細胞培養容器。
【請求項9】
前記培養部の表面の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓが０．１５０μｍ以下である、請求項７又は８に記載の細胞培養容器。
【請求項10】
前記底部がガラスからなる、請求項７又は８に記載の細胞培養容器。
【請求項11】
前記枠体の前記側壁部が着色剤を含有している、請求項７又は８に記載の細胞培養容器。
【請求項12】
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成される、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器を製造する方法であって、
複数の穴の開いた金型の上に板状部材を置き、加熱しながら各穴の前記板状部材が置かれた側とは反対側から真空引きし、前記板状部材を部分的に変形させて複数の凹部を形成して前記底部を得ることと、
前記底部と前記枠体とを結合することと、を含む、細胞培養容器の製造方法。
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成される、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器を製造する方法であって、
複数の穴の開いた金型の上に板状部材を置き、加熱しながら各穴の前記板状部材が置かれた側とは反対側から真空引きし、前記板状部材を部分的に変形させて複数の凹部を形成して前記底部を得ることと、
前記底部と前記枠体とを結合することと、を含む、細胞培養容器の製造方法。
【請求項13】
前記板状部材がガラスシートである、請求項１２に記載の細胞培養容器の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞培養容器及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
３次元培養で得られる細胞塊（スフェロイド）は、従来の２次元培養と比して、より生体内に近い生物活性を有していることが期待されている。
特許文献１には、樹脂の射出成形又は熱成形で得た不透明な孔空きプレート部分と、樹脂の射出成形又は熱成形で得た透明で丸みを帯びたウェル底部プレート部分とが結合されて形成された、複数のウェルを有する３次元培養用の細胞培養容器が開示されている。
特許文献２には、開口部を形成する側壁と、前記開口部の下端を塞ぐ底部とからなるウェルを有し、前記ウェルを構成する底部の上面に複数の凹部が形成され、前記凹部の内面に細胞接着を抑制する表層が形成された、３次元培養用の細胞培養容器が開示されている。
特許文献１には、樹脂の射出成形又は熱成形で得た不透明な孔空きプレート部分と、樹脂の射出成形又は熱成形で得た透明で丸みを帯びたウェル底部プレート部分とが結合されて形成された、複数のウェルを有する３次元培養用の細胞培養容器が開示されている。
特許文献２には、開口部を形成する側壁と、前記開口部の下端を塞ぐ底部とからなるウェルを有し、前記ウェルを構成する底部の上面に複数の凹部が形成され、前記凹部の内面に細胞接着を抑制する表層が形成された、３次元培養用の細胞培養容器が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】特表２０１６－５２０３０７号公報
【特許文献2】国際公開第２０１９／１５１１１４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
しかし、特許文献１、２のような従来の細胞培養容器では、ウェルによって、スフェロイドの形成が不充分となる、形成されたスフェロイドが観察しにくいといった問題が生じ得る。
【0005】
本発明は、スフェロイドが形成されやすく、且つスフェロイドを観察しやすい細胞培養容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らが検討した結果、特許文献１のような樹脂を射出成形や熱成形して得た底部を有する従来の細胞培養容器では、金型の切削痕が転写されて底部の凹部表面に凹凸が形成され、細胞のスムーズな移動が阻害されることによってスフェロイドの形成性が低下したり、スフェロイドの観察性が低下したりし得ることが判明した。また、特許文献２のような上面に複数の凹部を設けた底部を有する細胞培養容器では、凹部の厚さが場所によって異なるために、観察像が劣化する場合がある。
そして、さらに検討を進め、後述の凹部の内面の最大高さ粗さＲｚ、及び厚さ比率ｔＡ／ｔＢを特定の範囲に制御することにより、スフェロイドの形成性及び観察性が優れたものになることを見出して本発明を完成させた。
そして、さらに検討を進め、後述の凹部の内面の最大高さ粗さＲｚ、及び厚さ比率ｔＡ／ｔＢを特定の範囲に制御することにより、スフェロイドの形成性及び観察性が優れたものになることを見出して本発明を完成させた。
【0007】
すなわち、本発明は以下の態様を含む。
［１］細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器であって、
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の内面が細胞低接着面であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
［２］前記培養部の表面粗さＲａが０．０２４μｍ以下である、［１］に記載の細胞培養容器。
［３］前記培養部の表面の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓが０．１５０μｍ以下である、［１］又は［２］に記載の細胞培養容器。
［４］前記培養部の蛍光染色試薬で染めたスフェロイドに対して蛍光測定を行ったときのＳ／Ｎ比が１１．５以上である、［１］～［３］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［５］前記底部がガラスからなる、［１］～［４］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［６］前記枠体の前記側壁部が着色剤を含有している、［１］～［５］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［７］細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器であって、
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
［８］前記培養部の表面粗さＲａが０．０２４μｍ以下である、［７］に記載の細胞培養容器。
［９］前記培養部の表面の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓが０．１５０μｍ以下である、［７］又は［８］に記載の細胞培養容器。
［１０］前記底部がガラスからなる、［７］～［９］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［１１］前記枠体の前記側壁部が着色剤を含有している、［７］～［１０］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［１２］凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成される、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器を製造する方法であって、
複数の穴の開いた金型の上に板状部材を置き、加熱しながら各穴の前記板状部材が置かれた側とは反対側から真空引きし、前記板状部材を部分的に変形させて複数の凹部を形成して前記底部を得ることと、
前記底部と前記枠体とを結合することと、を含む、細胞培養容器の製造方法。
［１３］前記板状部材がガラスシートである、［１２］に記載の細胞培養容器の製造方法。
［１］細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器であって、
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の内面が細胞低接着面であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
［２］前記培養部の表面粗さＲａが０．０２４μｍ以下である、［１］に記載の細胞培養容器。
［３］前記培養部の表面の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓが０．１５０μｍ以下である、［１］又は［２］に記載の細胞培養容器。
［４］前記培養部の蛍光染色試薬で染めたスフェロイドに対して蛍光測定を行ったときのＳ／Ｎ比が１１．５以上である、［１］～［３］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［５］前記底部がガラスからなる、［１］～［４］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［６］前記枠体の前記側壁部が着色剤を含有している、［１］～［５］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［７］細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器であって、
凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成され、
前記凹部は少なくとも底が丸みを帯びた形状であり、
前記凹部の底の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とし、前記凹部を上方から見て前記底から、前記凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の前記凹部の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）としたとき、厚さ比率ｔＡ／ｔＢが０．８０～１．２０であり、
前記凹部内における上方から見たときの前記円環領域よりも内側の領域を培養部とし、
前記培養部の表面の最大高さ粗さＲｚが０．１７０μｍ以下である、細胞培養容器。
［８］前記培養部の表面粗さＲａが０．０２４μｍ以下である、［７］に記載の細胞培養容器。
［９］前記培養部の表面の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓが０．１５０μｍ以下である、［７］又は［８］に記載の細胞培養容器。
［１０］前記底部がガラスからなる、［７］～［９］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［１１］前記枠体の前記側壁部が着色剤を含有している、［７］～［１０］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［１２］凹部が複数形成された透明な底部と、前記底部上に設けられ、上方から見たときに複数の前記凹部に対応する位置に複数の貫通孔を形成する側壁部を有する枠体と、を有し、
それぞれの前記凹部と前記貫通孔とによって複数のウェルが形成される、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器を製造する方法であって、
複数の穴の開いた金型の上に板状部材を置き、加熱しながら各穴の前記板状部材が置かれた側とは反対側から真空引きし、前記板状部材を部分的に変形させて複数の凹部を形成して前記底部を得ることと、
前記底部と前記枠体とを結合することと、を含む、細胞培養容器の製造方法。
［１３］前記板状部材がガラスシートである、［１２］に記載の細胞培養容器の製造方法。
【発明の効果】
【0008】
本発明によれば、スフェロイドが形成されやすく、且つスフェロイドを観察しやすい細胞培養容器を提供される。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図1】実施形態の一例の細胞培養容器を模式的に示した断面図である。
【図3】実施形態の他の例の細胞培養容器の底部を拡大して示した断面図である。
【図4】実施形態の細胞培養容器の底部を製造する様子を模式的に示した断面図である。
【図5】実験例１の培養後の各ウェルを蛍光顕微鏡で観察した写真である。
【図6】実験例３の培養後の各ウェルを蛍光顕微鏡で観察した写真である。
【図7】実験例１及び３のウェル内のスフェロイドの光学的測定によるＳ／Ｎ比の結果を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【0010】
以下、本発明の細胞培養容器の実施形態例について、図面に基づいて説明する。なお、以下の説明において例示される図の寸法等は一例であって、本発明はそれらに必ずしも限定されるものではなく、その要旨を変更しない範囲で適宜変更して実施することが可能である。
【0011】
［細胞培養容器］
本発明の細胞培養容器は、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器である。
図１に示すように、一態様に係る細胞培養容器１は、複数の凹部１１が形成された透明な底部１０と、底部１０上に設けられた、複数の貫通孔２１を形成する側壁部２２を有する枠体２０と、を備える。
本発明の細胞培養容器は、細胞の培養及び観察に使用するための細胞培養容器である。
図１に示すように、一態様に係る細胞培養容器１は、複数の凹部１１が形成された透明な底部１０と、底部１０上に設けられた、複数の貫通孔２１を形成する側壁部２２を有する枠体２０と、を備える。
【0012】
底部１０に形成される各凹部１１と、枠体２０に形成される各貫通孔２１とは、細胞培養容器１を上方から見たときに対応する位置にあり、それぞれの凹部１１と貫通孔２１とによって複数のウェル３０が形成される。
細胞培養容器１を上方から見た形状は、典型的には長方形状であるが、限定されるものではなく、正方形や、円形等であってもよい。
細胞培養容器１を上方から見た形状は、典型的には長方形状であるが、限定されるものではなく、正方形や、円形等であってもよい。
【0013】
細胞培養容器１における各ウェル３０の配置パターン、すなわち底部１０における各凹部１１の配置パターン、もしくは枠体２０における各貫通孔２１の配置パターンは、特に限定されない。例えば、正方格子パターン、千鳥パターン等の配置パターンとすることができる。
通常のマイクロプレートの場合、ウェル３０の数は６穴、１２穴、２４穴、４８穴、９６穴、３８４穴、１５３６穴等の規格化されたものを用いられるが、特に限定されず、細胞培養容器１のサイズや、所望のウェル２の大きさ等により適宜調整可能である。２～１６００個程度とすることが好ましい。凹部１１の数及び貫通孔２１の数は、ウェル３０の数と同じである。
通常のマイクロプレートの場合、ウェル３０の数は６穴、１２穴、２４穴、４８穴、９６穴、３８４穴、１５３６穴等の規格化されたものを用いられるが、特に限定されず、細胞培養容器１のサイズや、所望のウェル２の大きさ等により適宜調整可能である。２～１６００個程度とすることが好ましい。凹部１１の数及び貫通孔２１の数は、ウェル３０の数と同じである。
【0014】
底部１０は板状部材からなり、該板状部材が部分的に窪むように湾曲されて各々の凹部１１が形成されている。
凹部１１の形状は、少なくとも底が丸みを帯びた形状であればよく、例えば、円錐の底が丸みを帯びている略円錐状、半球状、すり鉢状、釣鐘状等を例示できる。また、凹部１１の形状は、その内面１１ａが底から開口に向かうにつれて曲率が大きくなる曲面形状であってもよい。
図３に示すように、凹部１１の底（最深部）を通り、且つ底部の厚さ方向に平行な切断面における凹部１１の形状は、凹部１１の底部は曲率中心が凹部１１の内面１１ａよりも内側に位置する円弧状（図３において下に凸の円弧状）で、底から開口縁に向かう途中から直線的に広がった形状であってもよい。この場合、開口縁は丸みを帯びていてもよい。
凹部１１の底部曲率半径は０ｍｍ超～３．０ｍｍであれば細胞が集まりやすい。好ましくは０ｍｍ超～２．８ｍｍ、より好ましくは０．５ｍｍ～２．５ｍｍ、さらに好ましくは０．８ｍｍ～２．３ｍｍである。
凹部１１の形状は、少なくとも底が丸みを帯びた形状であればよく、例えば、円錐の底が丸みを帯びている略円錐状、半球状、すり鉢状、釣鐘状等を例示できる。また、凹部１１の形状は、その内面１１ａが底から開口に向かうにつれて曲率が大きくなる曲面形状であってもよい。
図３に示すように、凹部１１の底（最深部）を通り、且つ底部の厚さ方向に平行な切断面における凹部１１の形状は、凹部１１の底部は曲率中心が凹部１１の内面１１ａよりも内側に位置する円弧状（図３において下に凸の円弧状）で、底から開口縁に向かう途中から直線的に広がった形状であってもよい。この場合、開口縁は丸みを帯びていてもよい。
凹部１１の底部曲率半径は０ｍｍ超～３．０ｍｍであれば細胞が集まりやすい。好ましくは０ｍｍ超～２．８ｍｍ、より好ましくは０．５ｍｍ～２．５ｍｍ、さらに好ましくは０．８ｍｍ～２．３ｍｍである。
【0015】
また、図３に例示した形状の凹部１１の場合、凹部１１の内面１１ａにおける円弧部分よりも上側の直線部分の傾斜角度θ０は、２３°～６３°が好ましく、３３°～５８°がより好ましく、３８°～５３°がさらに好ましい。傾斜角度θ０が前記範囲内であれば、細胞が集まりやすい。
なお、傾斜角度θ０は、図３の断面における、凹部１１の内面１１ａの直線部分と、底部１０の凹部１１以外の部分の上面の面方向に平行な方向とがなす角度である。
なお、傾斜角度θ０は、図３の断面における、凹部１１の内面１１ａの直線部分と、底部１０の凹部１１以外の部分の上面の面方向に平行な方向とがなす角度である。
【0016】
凹部１１の開口形状は、典型的には円形であるが、限定はされず、楕円形、角形、ハニカム形、ドーナツ型等であってもよい。
凹部１１の開口の直径は、特に限定されず、例えば、２．０～３６．０ｍｍが好ましい。９６穴のウェルの場合は、６．０～８．０ｍｍ程度とする。なお、凹部１１の開口形状が円形でない場合、開口の直径は、当該開口が含まれ得る円のうち最小の円の直径を意味するものとする。
凹部１１の底（最深部）の深さ（凹部の開口面から、培養面の一番底部分の間の長さ）は、特に限定されず、１～１５ｍｍ程度とすることができる。
図３に例示した凹部１１の場合、底部の厚さ方向に平行な切断面において、凹部１１の開口面から、凹部１１の内面１１ａの円弧部分と直線部分との境界点ｄまでの深さＤは、特に限定されず、例えば１～２ｍｍとすることができる。
凹部１１の開口の直径や、底の深さは、細胞培養容器１の大きさや、ウェル３０の数、開口形状等によって適宜調整される。
凹部１１の開口の直径は、特に限定されず、例えば、２．０～３６．０ｍｍが好ましい。９６穴のウェルの場合は、６．０～８．０ｍｍ程度とする。なお、凹部１１の開口形状が円形でない場合、開口の直径は、当該開口が含まれ得る円のうち最小の円の直径を意味するものとする。
凹部１１の底（最深部）の深さ（凹部の開口面から、培養面の一番底部分の間の長さ）は、特に限定されず、１～１５ｍｍ程度とすることができる。
図３に例示した凹部１１の場合、底部の厚さ方向に平行な切断面において、凹部１１の開口面から、凹部１１の内面１１ａの円弧部分と直線部分との境界点ｄまでの深さＤは、特に限定されず、例えば１～２ｍｍとすることができる。
凹部１１の開口の直径や、底の深さは、細胞培養容器１の大きさや、ウェル３０の数、開口形状等によって適宜調整される。
【0017】
図２に示すように、凹部１１の底（図２の地点ａ、最深部）の平均厚さをｔＡ（ｍｍ）とする。また、凹部１１における、上方から見たときに底（図２の地点ａ、最深部）から、凹部の開口の半径ｒの５０～６０％の円環領域Ｃ、すなわち底（地点ａ）を中心とする半径０．５ｒの円と半径０．６ｒの円に囲まれた円環領域Ｃ上の位置（図２の地点ｂ）の平均厚さをｔＢ（ｍｍ）とする。ただし、平均厚さｔＡは、２個以上の凹部１１について測定した底の厚さの平均値である。また、平均厚さｔＢは、２個以上の凹部１１について測定した、凹部１１の開口の半径ｒの５０～６０％の円環領域Ｃ上の位置の厚さの平均値である。
細胞培養容器１においては、凹部１１内における上方から見たときの半径０．５ｒの円周よりも内側（円環領域Ｃよりも内側）の領域が、スフェロイドが培養される培養部１２となる。
細胞培養容器１においては、凹部１１内における上方から見たときの半径０．５ｒの円周よりも内側（円環領域Ｃよりも内側）の領域が、スフェロイドが培養される培養部１２となる。
【0018】
厚さ比率ｔＡ／ｔＢは、０．８０～１．２０であれば、培養部１２における凹部１１の厚さが均一であるためにスフェロイドの観察時に背景がクリアになり、また蛍光観察の際にノイズが低減されるため、スフェロイドの観察性に優れる。
ｔＡがｔＢより小さい場合は、ｔＡ／ｔＢは、０．８０以上１．００未満とする。好ましくは０．８５以上１．００未満であり、より好ましくは０．９０以上１．００未満であり、さらに好ましくは０．９５以上１．００未満である。
また、ｔＡがｔＢより大きい場合は、ｔＡ／ｔＢは、１．００超１．２０以下とする。好ましくは１．００超１．１５以下であり、より好ましくは１．００超１．１０以下であり、さらに好ましくは１．００超１．０５以下である。
最も好ましくは、ｔＡとｔＢが同じ値、すなわちｔＡ／ｔＢ＝１．００である。
ｔＡがｔＢより小さい場合は、ｔＡ／ｔＢは、０．８０以上１．００未満とする。好ましくは０．８５以上１．００未満であり、より好ましくは０．９０以上１．００未満であり、さらに好ましくは０．９５以上１．００未満である。
また、ｔＡがｔＢより大きい場合は、ｔＡ／ｔＢは、１．００超１．２０以下とする。好ましくは１．００超１．１５以下であり、より好ましくは１．００超１．１０以下であり、さらに好ましくは１．００超１．０５以下である。
最も好ましくは、ｔＡとｔＢが同じ値、すなわちｔＡ／ｔＢ＝１．００である。
【0019】
凹部１１の底の平均厚さｔＡは、好ましくは０．０２５～０．３５０ｍｍ、より好ましくは０．０５～０．３０ｍｍ、さらに好ましくは０．１０～０．２５ｍｍである。
凹部１１における前記円環領域Ｃ上の位置の平均厚さｔＢは、好ましくは０．０２５～０．３５ｍｍ、より好ましくは０．０５～０．３０ｍｍ、さらに好ましくは０．１０～０．２５ｍｍである。
凹部１１における前記円環領域Ｃ上の位置の平均厚さｔＢは、好ましくは０．０２５～０．３５ｍｍ、より好ましくは０．０５～０．３０ｍｍ、さらに好ましくは０．１０～０．２５ｍｍである。
【0020】
培養部１２の表面（凹部１１の内面１１ａ）の最大高さ粗さＲｚは、０．１７０μｍ以下である。これにより、培養部１２で細胞が底に向かって集まりやすくなり、スフェロイドが形成されやすくなる。また、培養部１２で細胞が凹凸に引っ掛かりにくくスムーズに集まりやすくなるため、形成されるスフェロイドを上方から見たときの形状は真円に近づく。
培養部１２の表面の最大高さ粗さＲｚは、好ましくは０．１５０μｍ以下、より好ましくは０．１２０μｍ以下、さらに好ましくは０．０９０μｍ以下である。
最大高さ粗さＲｚ（μｍ）は、粗さ曲線から、大きな傷を避けて基準長さＬだけ抜き出したときの一番高い部分と一番低い部分の高さの差であり、本発明で規定する数値は、凹形状に沿って直線状に測定した値である。Ｒｚの値は、例えば、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）等によって測定できる。
培養部１２の表面の最大高さ粗さＲｚは、好ましくは０．１５０μｍ以下、より好ましくは０．１２０μｍ以下、さらに好ましくは０．０９０μｍ以下である。
最大高さ粗さＲｚ（μｍ）は、粗さ曲線から、大きな傷を避けて基準長さＬだけ抜き出したときの一番高い部分と一番低い部分の高さの差であり、本発明で規定する数値は、凹形状に沿って直線状に測定した値である。Ｒｚの値は、例えば、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）等によって測定できる。
【0021】
培養部１２の表面（凹部１１の内面１１ａ）の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓは、好ましくは０．１５０μｍ以下、より好ましくは０．１００μｍ以下、さらに好ましくは０．０８０μｍ以下である。凹部１１の内面１１ａの表面粗さＲａが前記上限値以下であれば、培養部１２で細胞が底に向かって集まりやすくなり、スフェロイドが形成されやすくなる傾向がある。
最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓは、粗さ曲線の山頂部と谷底部をとり、山頂高さの高い順に５番目まで、谷底の低い順に５番目まで値をとり、高い方５つの中央値からのずれの平均と、低い方５つの中央値からのずれの平均を出し、それら２つを足し合わせた値であって、例えば、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）等によって測定できる。
最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓは、粗さ曲線の山頂部と谷底部をとり、山頂高さの高い順に５番目まで、谷底の低い順に５番目まで値をとり、高い方５つの中央値からのずれの平均と、低い方５つの中央値からのずれの平均を出し、それら２つを足し合わせた値であって、例えば、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）等によって測定できる。
【0022】
培養部１２の表面（凹部１１の内面１１ａ）の表面粗さＲａは、好ましくは０．０２４μｍ以下、より好ましくは０．０２０μｍ以下、さらに好ましくは０．０１８μｍ以下である。培養部１２の表面（凹部１１の内面１１ａ）の表面粗さＲａが前記上限値以下であれば、形成されたスフェロイドを蛍光観察する際などにノイズが小さくなり、スフェロイドの観察性に優れる傾向がある。
表面粗さＲａは、例えば、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）等によって測定できる。
表面粗さＲａは、例えば、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）等によって測定できる。
【0023】
底部１０を構成する材料としては、例えば、ガラス又は樹脂を例示でき、スフェロイドがより形成されやすく、またスフェロイドの観察性に優れる培養部が形成されやすい点から、ガラスが好ましい。
底部１０に用い得るガラスとしては、特に限定されず、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、リン酸ガラス、アルミノシリケートガラス、強化ガラスを例示できる。底部１０に用いられるガラスは、１種でもよく、２種以上でもよい。
底部１０に用い得るガラスとしては、特に限定されず、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、リン酸ガラス、アルミノシリケートガラス、強化ガラスを例示できる。底部１０に用いられるガラスは、１種でもよく、２種以上でもよい。
【0024】
底部１０に用い得る樹脂としては、例えば、アクリル樹脂、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリプロピレン樹脂、シリコーン樹脂、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）樹脂、ポリ塩化ビニル樹脂、高密度ポリエチレン、ポリエーテルサルファン、ＰＥＴ共重合体、パーマノックス（商標）、シクロオレフィンポリマー樹脂、サイトップ（商標）等を例示できる。底部１０に用いられる樹脂は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【0025】
この例の凹部１１の内面１１ａは、細胞低接着面である。「凹部の内面が細胞接着面である」とは、凹部の内面が、細胞の接着を抑制する処理が施された面であることを意味し、例えば、細胞接着抑制剤を塗布して被膜が形成された面が挙げられる。凹部（培養部）の内面が細胞低接着面であれば、凹部内で細胞同士が凝集してスフェロイドが形成されやすくなる。
【0026】
細胞接着抑制剤としては、例えば、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）等のリン脂質ポリマー、ポリヒドロキシエチルメタアクリレート、フッ素含有化合物、ポリエチレングリコール、ＭＰＣポリマー鎖を持つシランカップリング剤を例示できる。細胞接着抑制剤としては、１種を単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【0027】
枠体２０の形状及び厚みは、底部１０の凹部１１に対応する貫通孔２１を有する範囲であれば特に限定されず、目的の細胞培養容器１の形状に合わせて適宜設計できる。
【0028】
貫通孔２１の形状は、凹部１１の開口形状に応じて適宜設定でき、典型的には円柱状である。
貫通孔２１の高さは、枠体２０の厚さに一致する。
貫通孔２１の開口の直径は、典型的には凹部１１の開口の直径と同じであるが、本発明の効果を損なわない範囲であれば異なっていてもよい。
貫通孔２１の高さは、枠体２０の厚さに一致する。
貫通孔２１の開口の直径は、典型的には凹部１１の開口の直径と同じであるが、本発明の効果を損なわない範囲であれば異なっていてもよい。
【0029】
枠体２０の側壁部２２を構成する材料としては、特に限定されず、例えば、アクリル樹脂、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリプロピレン樹脂、シリコーン樹脂、ＰＥＴ樹脂、ポリ塩化ビニル樹脂、高密度ポリエチレン、ポリエーテルサルファン、ＰＥＴ共重合体、パーマノックス（商標）、シクロオレフィンポリマー樹脂、サイトップ（商標）等の樹脂を例示できる。これらの樹脂は、１種を単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
枠体２０の側壁部２２を構成する材料としてガラスを用いてもよい。ガラスを用いる場合は、例えば、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、リン酸ガラス、アルミノシリケートガラス、強化ガラスを例示できる。これらのガラスは１種を単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
枠体２０の側壁部２２を構成する材料としてガラスを用いてもよい。ガラスを用いる場合は、例えば、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、リン酸ガラス、アルミノシリケートガラス、強化ガラスを例示できる。これらのガラスは１種を単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【0030】
枠体２０の側壁部２２は、透明でも不透明でもよい。例えば蛍光等の発光を利用してスフェロイドを観察する際、隣のウェルからの光を遮ってノイズを低減でき、観察性が向上する観点では、側壁部２２は不透明が好ましい。側壁部２２を不透明とする場合、色調としては黒がより好ましい。側壁部２２を不透明にする方法としては、特に限定されず、例えば、顔料等の着色剤を配合する方法を使用できる。
【0031】
実施形態の細胞培養容器１では、蛍光測定法により、凹部１１内の蛍光染色試薬で染めたスフェロイドの蛍光を測定したときのＳ／Ｎ比は、好ましくは１１．５以上、より好ましくは１２．０以上、さらに好ましくは１２．５以上である。Ｓ／Ｎ比が前記数値以上であれば、スフェロイドの観察性に優れる。
スフェロイドの蛍光は、例えば、ハイコンテント共焦点イメージングシステム（パーキンエルマー社Operetta）等によって測定できる。
なお、Ｓは、蛍光染色試薬で染めたスフェロイドが存在する状態のシグナル量（蛍光強度）であり、Ｎは、バックグラウンド（スフェロイドがない状態）のシグナル量（蛍光強度）である。
スフェロイドの蛍光は、例えば、ハイコンテント共焦点イメージングシステム（パーキンエルマー社Operetta）等によって測定できる。
なお、Ｓは、蛍光染色試薬で染めたスフェロイドが存在する状態のシグナル量（蛍光強度）であり、Ｎは、バックグラウンド（スフェロイドがない状態）のシグナル量（蛍光強度）である。
【0032】
［細胞培養容器の製造方法］
以下、前記した細胞培養容器の製造方法について説明する。
実施形態の細胞培養容器の製造方法は、以下のステップ（i）及び（ii）を含む。
（i）複数の穴の開いた金型の上に板状部材を置き、加熱しながら各穴の前記板状部材が置かれた側とは反対側から真空引きし、前記板状部材を部分的に変形させて複数の凹部を形成して底部を得ること。
（ii）前記底部と枠体とを結合すること。
以下、ステップ（i）及び（ii）についてさらに詳しく説明する。
以下、前記した細胞培養容器の製造方法について説明する。
実施形態の細胞培養容器の製造方法は、以下のステップ（i）及び（ii）を含む。
（i）複数の穴の開いた金型の上に板状部材を置き、加熱しながら各穴の前記板状部材が置かれた側とは反対側から真空引きし、前記板状部材を部分的に変形させて複数の凹部を形成して底部を得ること。
（ii）前記底部と枠体とを結合すること。
以下、ステップ（i）及び（ii）についてさらに詳しく説明する。
【0033】
（ステップ（i））
例えば、図４に示すように、真空チャンバ１１２に通じる複数の穴１１１が上面に開いた金型（下型）１１０の上に、それら複数の穴１１１が塞がれるように板状部材１０Ａを載置し、さらにその上に金型（上型）１２０を載せる。この状態で、板状部材１０Ａを加熱しながら真空チャンバ１１２側から真空引きすることにより、板状部材１０Ａの穴１１１を塞いでいる部分が真空チャンバ１１２側に引っ張られて部分的に変形し、凹部が形成される。
例えば、図４に示すように、真空チャンバ１１２に通じる複数の穴１１１が上面に開いた金型（下型）１１０の上に、それら複数の穴１１１が塞がれるように板状部材１０Ａを載置し、さらにその上に金型（上型）１２０を載せる。この状態で、板状部材１０Ａを加熱しながら真空チャンバ１１２側から真空引きすることにより、板状部材１０Ａの穴１１１を塞いでいる部分が真空チャンバ１１２側に引っ張られて部分的に変形し、凹部が形成される。
【0034】
金型１１０に形成されている穴１１１は、開口から下方に向かうにつれて縮径する円錐台状部１１１ａと、円錐台状部１１１ａと真空チャンバ１１２とを繋ぐ円柱状の連結部１１１ｂとを有する。
真空引きの際、板状部材１０Ａにおける各穴１１１で変形する部分の中央部は金型１１０には接触せず、その周辺部分のみが円錐台状部１１１ａの表面に接触する。これにより、形成される凹部の底周辺部には、金型１１０に穴１１１を形成する際の切削痕が転写されることがない。そのため、凹部において金型１１０とは接触していない底周辺部を培養部とすることで、スフェロイドが形成されやすくなり、また形成されたスフェロイドの観察性が良好になる。
真空引きの際、板状部材１０Ａにおける各穴１１１で変形する部分の中央部は金型１１０には接触せず、その周辺部分のみが円錐台状部１１１ａの表面に接触する。これにより、形成される凹部の底周辺部には、金型１１０に穴１１１を形成する際の切削痕が転写されることがない。そのため、凹部において金型１１０とは接触していない底周辺部を培養部とすることで、スフェロイドが形成されやすくなり、また形成されたスフェロイドの観察性が良好になる。
【0035】
穴１１１における円錐台状部１１１ａの下端の開口形状は、典型的には円形であるが、限定はされない。
円錐台状部１１１ａの下端の開口の直径は、目的の培養部のサイズに応じて適宜設定することができ、例えば０．８～２０．０ｍｍとすることができる。
円錐台状部１１１ａの下端の開口の直径は、目的の培養部のサイズに応じて適宜設定することができ、例えば０．８～２０．０ｍｍとすることができる。
【0036】
板状部材としては、例えばガラスシート、樹脂シート等を用いることができ、スフェロイドの形成性及び観察性の観点から、ガラスシートが好ましい。
板状部材の厚さは、特に限定されず、例えば０．０３～１．０ｍｍ、０．０４～０．８ｍｍ、又は０．０５～０．６ｍｍとすることができる。最も好ましくは、通常の顕微鏡観察用のカバーガラスと同等の厚みの０．１８ｍｍとする。
板状部材の厚さは、特に限定されず、例えば０．０３～１．０ｍｍ、０．０４～０．８ｍｍ、又は０．０５～０．６ｍｍとすることができる。最も好ましくは、通常の顕微鏡観察用のカバーガラスと同等の厚みの０．１８ｍｍとする。
【0037】
ステップ（i）における金型温度は、真空引きによって板状部材１０Ａを充分に変形させて凹部を形成させることができる範囲で、板状部材１０Ａの材質に応じて設定する。具体的には、板状部材１０Ａのｌｏｇηが６．０～１０．０ポイズとなる温度とし、好ましくは７．０～９．０ポイズ、さらに好ましくは７．５～８．５ポイズとなる温度とする。例えば板状部材１０Ａがホウケイ酸ガラスからなるガラスシートの場合、金型温度は、好ましくは６００～８００℃、より好ましくは６３０～７８０℃、さらに好ましくは６５０～７５０℃である。
真空吸引の時間は、目的の形状の凹部が形成されるように適宜設定すればよく、例えば１～４分とすることができる。
真空吸引の時間は、目的の形状の凹部が形成されるように適宜設定すればよく、例えば１～４分とすることができる。
【0038】
凹部の内面を細胞低接着面とする際には、例えば公知の塗布方法を利用して凹部の内面に細胞接着抑制剤を塗布し、被膜を形成する。
【0039】
（ステップ（ii））
板状部材に凹部を形成して得た底部と枠体との結合方法は、特に限定されず、例えば圧着、溶着、接着剤による接着等を例示できる。具体的には、例えば基材シートの両面に接着剤層を有する両面テープを用いて底部を枠体に貼り付ける方法が挙げられる。
接着剤としては、特に限定されず、例えば、シリコーン系、瞬間系、エポキシ系、紫外線硬化系、ポリプロピレン系、アクリル系、ゴム系、ポリエチレン系の接着剤を例示できる。
板状部材に凹部を形成して得た底部と枠体との結合方法は、特に限定されず、例えば圧着、溶着、接着剤による接着等を例示できる。具体的には、例えば基材シートの両面に接着剤層を有する両面テープを用いて底部を枠体に貼り付ける方法が挙げられる。
接着剤としては、特に限定されず、例えば、シリコーン系、瞬間系、エポキシ系、紫外線硬化系、ポリプロピレン系、アクリル系、ゴム系、ポリエチレン系の接着剤を例示できる。
【0040】
以上説明したように、本発明の細胞培養容器では、凹部内の培養部の表面の最大高さ粗さＲｚや、ｔＡ／ｔＢが特定の範囲に制御されていることにより、スフェロイドの形成性及び観察性に優れている。このような細胞培養容器は、前記したステップ（i）及び（ii）を含む方法によって効率良く製造できる。
【0041】
なお、本発明の細胞培養容器は、前記した細胞培養容器１には限定されない。
例えば、凹部（培養部）の内面は細胞低接着面でなくてもよい。すなわち、凹部（培養部）の内面には、細胞接着抑制剤による被膜が形成されていなくてもよい。この場合、形成されるスフェロイドが凹部の内面に接着しやすくなるものの、形成されるスフェロイドの観察性は良好である。
例えば、凹部（培養部）の内面は細胞低接着面でなくてもよい。すなわち、凹部（培養部）の内面には、細胞接着抑制剤による被膜が形成されていなくてもよい。この場合、形成されるスフェロイドが凹部の内面に接着しやすくなるものの、形成されるスフェロイドの観察性は良好である。
【0042】
凹部の内面が細胞低接着面でない場合、厚さ比率ｔＡ／ｔＢは、０．８０～１．２０であれば、培養部における凹部の厚さが均一であるためにスフェロイドの観察時に背景がクリアになり、また蛍光観察の際にノイズが低減されるため、スフェロイドの観察性に優れる。
ｔＡがｔＢより小さい場合は、ｔＡ／ｔＢは、０．８０以上１．００未満とする。好ましくは０．８５以上１．００未満であり、より好ましくは０．９０以上１．００未満であり、さらに好ましくは０．９５以上１．００未満である。
また、ｔＡがｔＢより大きい場合は、ｔＡ／ｔＢは、１．００超１．２０以下とする。好ましくは１．００超１．１５以下であり、より好ましくは１．００超１．１０以下であり、さらに好ましくは１．００超１．０５以下である。
最も好ましくは、ｔＡとｔＢが同じ値、すなわちｔＡ／ｔＢ＝１．００である。
ｔＡがｔＢより小さい場合は、ｔＡ／ｔＢは、０．８０以上１．００未満とする。好ましくは０．８５以上１．００未満であり、より好ましくは０．９０以上１．００未満であり、さらに好ましくは０．９５以上１．００未満である。
また、ｔＡがｔＢより大きい場合は、ｔＡ／ｔＢは、１．００超１．２０以下とする。好ましくは１．００超１．１５以下であり、より好ましくは１．００超１．１０以下であり、さらに好ましくは１．００超１．０５以下である。
最も好ましくは、ｔＡとｔＢが同じ値、すなわちｔＡ／ｔＢ＝１．００である。
【0043】
凹部の内面が細胞低接着面でない場合、培養部の表面（凹部の内面）の最大高さ粗さＲｚは、０．１７０μｍ以下であり、好ましくは０．１５０μｍ以下、より好ましくは０．１２０μｍ以下、さらに好ましくは０．０９０μｍ以下である。
【0044】
凹部の内面が細胞低接着面でない場合、培養部の表面（凹部の内面）の最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓは、好ましくは０．１５０μｍ以下、より好ましくは０．１００μｍ以下、さらに好ましくは０．０８０μｍ以下である。
【0045】
凹部の内面が細胞低接着面でない場合、培養部の表面（凹部の内面）の表面粗さＲａは、好ましくは０．０２４μｍ以下、より好ましくは０．０２０μｍ以下、さらに好ましくは０．０１８μｍ以下である。
【0046】
その他、本発明の趣旨に逸脱しない範囲で、前記実施形態における構成要素を周知の構成要素に置き換えることは適宜可能であり、また、前記した変形例を適宜組み合わせてもよい。
【実施例0047】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の記載によっては限定されない。
【0048】
［実験例１］
板状部材として、ホウケイ酸ガラスからなる１１１ｍｍ×７５ｍｍのガラスシート（厚さ０．３ｍｍ）を用意し、図４に例示した金型１１０，１２０を用いて凹部を形成して底部を得た。
具体的には、金型（下型）１１０の上に、複数の穴１１１が塞がれるようにガラスシート（板状部材１０Ａ）を載置し、さらにその上に金型（上型）１２０を載せ、７１５℃で加熱しながら真空引きし、９６個の凹部を有する底部を得た。
各凹部の内面に、細胞接着抑制剤であるＭＰＣポリマー鎖を持つシランカップリング剤を塗布し、被膜を形成した。
次いで、両面テープを用い、得られた底部をポリスチレン製の枠体に貼り付けて９６ウェルの細胞培養容器を作製した。
板状部材として、ホウケイ酸ガラスからなる１１１ｍｍ×７５ｍｍのガラスシート（厚さ０．３ｍｍ）を用意し、図４に例示した金型１１０，１２０を用いて凹部を形成して底部を得た。
具体的には、金型（下型）１１０の上に、複数の穴１１１が塞がれるようにガラスシート（板状部材１０Ａ）を載置し、さらにその上に金型（上型）１２０を載せ、７１５℃で加熱しながら真空引きし、９６個の凹部を有する底部を得た。
各凹部の内面に、細胞接着抑制剤であるＭＰＣポリマー鎖を持つシランカップリング剤を塗布し、被膜を形成した。
次いで、両面テープを用い、得られた底部をポリスチレン製の枠体に貼り付けて９６ウェルの細胞培養容器を作製した。
【0049】
［実験例２］
各凹部の内面に細胞接着抑制剤の被膜を形成しなかった以外は、実験例１と同様の方法で９６ウェルの細胞培養容器を作製した。
各凹部の内面に細胞接着抑制剤の被膜を形成しなかった以外は、実験例１と同様の方法で９６ウェルの細胞培養容器を作製した。
【0050】
［実験例３］
比較対象として、９６個の凹部を有する底部であるポリスチレン製の市販品を用意し、実験例１と同様にして９６ウェルの細胞培養容器を作製した。
比較対象として、９６個の凹部を有する底部であるポリスチレン製の市販品を用意し、実験例１と同様にして９６ウェルの細胞培養容器を作製した。
【0051】
［最大高さ粗さＲｚ］
最大高さ粗さＲｚは、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）によって測定した。
最大高さ粗さＲｚは、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）によって測定した。
【0052】
［最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓ］
最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓは、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）によって測定した。
最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓは、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）によって測定した。
【0053】
［表面粗さＲａ］
表面粗さＲａは、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）によって測定した。
表面粗さＲａは、三次元測定機ＵＡ３Ｐ（パナソニックプロダクションエンジニアリング社製）によって測定した。
【0054】
［凹部の厚さ］
凹部の底の厚さ、及び、上方から見たときの底から凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の凹部の厚さは、ダイヤルゲージ（ミツトヨ社製）によって測定した。
凹部の底の厚さ、及び、上方から見たときの底から凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の凹部の厚さは、ダイヤルゲージ（ミツトヨ社製）によって測定した。
【0055】
各実験例の凹部について、底の平均厚さｔＡ、上方から見たときの底から凹部の開口の半径の５０～６０％の円環領域上の位置の凹部の平均厚さｔＢ、厚さ比率ｔＡ／ｔＢ、培養部の表面の最大高さ粗さＲｚ、表面粗さＲａ、及び最大十点高さ粗さＲｚｊｉｓを測定した結果を表１に示す。
【0056】
［培養試験１］
各実験例の９６ウェルの細胞培養容器を用い、各ウェルにＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌由来細胞株）を１ウェルあたりの細胞数が５×１０３個となるように播種し、３７℃、培地Ｅ－ＭＥＭ／血清１０％の条件下で２日間培養した。培養後、ＤＲＡＱ５（コスモバイオ社製）を用いて細胞塊を蛍光染色した後、ハイコンテント共焦点イメージングシステム（パーキンエルマー社Operetta）を用いて、蛍光イメージを取得した。実験例１の顕微鏡写真を図５（実験例１）、実験例３の顕微鏡写真を図６に示す。
また、画像解析ソフト（イメージ解析ソフトウェアHarmonyTM）によってスフェロイドのサイズ（面積）及び真円率を測定した。結果を表１に示す。
各実験例の９６ウェルの細胞培養容器を用い、各ウェルにＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌由来細胞株）を１ウェルあたりの細胞数が５×１０３個となるように播種し、３７℃、培地Ｅ－ＭＥＭ／血清１０％の条件下で２日間培養した。培養後、ＤＲＡＱ５（コスモバイオ社製）を用いて細胞塊を蛍光染色した後、ハイコンテント共焦点イメージングシステム（パーキンエルマー社Operetta）を用いて、蛍光イメージを取得した。実験例１の顕微鏡写真を図５（実験例１）、実験例３の顕微鏡写真を図６に示す。
また、画像解析ソフト（イメージ解析ソフトウェアHarmonyTM）によってスフェロイドのサイズ（面積）及び真円率を測定した。結果を表１に示す。
【0057】
【表1】
【0058】
図５及び図６に示すように、培養部の表面の最大高さ粗さＲｚと厚さ比率ｔＡ／ｔＢの条件を満たす実験例１の細胞培養容器は、最大高さ粗さＲｚとｔＡ／ｔＢの条件を満たさない実験例３の細胞培養容器に比べて背景がクリアであり、培養したスフェロイドの観察性が優れていた。
また、表１に示すように、実験例１の細胞培養容器では、実験例３の細胞培養容器で培養するよりも真円率が高いスフェロイドが形成された。これは、実験例３に比べて実験例１の方が培養部で細胞が底に向かってスムーズに集まってスフェロイドが形成やすかったことを示している。
また、表１に示すように、実験例１の細胞培養容器では、実験例３の細胞培養容器で培養するよりも真円率が高いスフェロイドが形成された。これは、実験例３に比べて実験例１の方が培養部で細胞が底に向かってスムーズに集まってスフェロイドが形成やすかったことを示している。
【0059】
［培養試験２］
実験例１及び３の９６ウェルの細胞培養容器を用い、各ウェルにＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌由来細胞株）細胞を１ウェルあたりの細胞数が５×１０３個となるように播種し、３７℃、培地Ｅ－ＭＥＭ／血清１０％の条件下で２日間培養した。培養後、ＤＲＡＱ５（コスモバイオ社製）を用いて細胞塊を蛍光染色した後、ハイコンテント共焦点イメージングシステム（パーキンエルマー社Operetta）を用いて、蛍光イメージを取得した。スフェロイドのシグナル量（Ｓ）とバックグラウンドのシグナル量（Ｎ）を取得してＳ／Ｎ比を算出した。結果を図７に示す。
実験例１及び３の９６ウェルの細胞培養容器を用い、各ウェルにＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌由来細胞株）細胞を１ウェルあたりの細胞数が５×１０３個となるように播種し、３７℃、培地Ｅ－ＭＥＭ／血清１０％の条件下で２日間培養した。培養後、ＤＲＡＱ５（コスモバイオ社製）を用いて細胞塊を蛍光染色した後、ハイコンテント共焦点イメージングシステム（パーキンエルマー社Operetta）を用いて、蛍光イメージを取得した。スフェロイドのシグナル量（Ｓ）とバックグラウンドのシグナル量（Ｎ）を取得してＳ／Ｎ比を算出した。結果を図７に示す。
【0060】
図７に示すように、実験例１の細胞培養容器では、実験例３の細胞培養容器に比べ、スフェロイドの蛍光観察においてＳ／Ｎ比が高く、スフェロイドの観察性が優れていた。なお、実験例１のＳ／Ｎ比の最小値は１１．９０、最大値は１９．１７であり、実験例３のＳ／Ｎ比の最小値は６．４８、最大値は１１．１４であった。
【符号の説明】
【0061】
１…細胞培養容器、１０…底部、１１…凹部、１１ａ…内面、１２…培養部、２０…枠体、２１…貫通孔、２２…側壁部、３０…ウェル、１１０…金型（下型）、１１１…穴、１１１ａ…円錐台状部、１１１ｂ…連結部、１１２…真空チャンバ。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】