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▶ ジェネセイル バイオテック（シャンハイ）カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024079686
(43)【公開日】2024-06-11
(54)【発明の名称】改変された腫瘍溶解性ウイルス、組成物、およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 7/01 20060101AFI20240604BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20240604BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240604BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240604BHJP
C12N 15/34 20060101ALN20240604BHJP
C12N 15/53 20060101ALN20240604BHJP
A61K 39/395 20060101ALN20240604BHJP
【ＦＩ】
C12N7/01 ZNA
A61K35/76
A61K48/00
C12N15/12
C12N15/34
C12N15/53
A61K39/395 T
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024028268
(22)【出願日】2024-02-28
(62)【分割の表示】P 2021537461の分割
【原出願日】2019-09-10
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2018/104830
(32)【優先日】2018-09-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521099925
【氏名又は名称】ジェネセイル バイオテック（シャンハイ）カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100149076
【弁理士】
【氏名又は名称】梅田 慎介
(74)【代理人】
【識別番号】100119183
【弁理士】
【氏名又は名称】松任谷 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100173185
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 裕
(74)【代理人】
【識別番号】100162503
【弁理士】
【氏名又は名称】今野 智介
(74)【代理人】
【識別番号】100144794
【弁理士】
【氏名又は名称】大木 信人
(72)【発明者】
【氏名】セン，イ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】転移腫瘍細胞の排除のための腫瘍溶解性ウイルスを提供する。
【解決手段】免疫チェックポイント阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドと、イムノアクティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを有する改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。さらに、前記改変された腫瘍溶解性ウイルスを含む医薬組成物、および対象に前記改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは前記医薬組成物を投与することを含む癌を処置する方法も提供される。
【選択図】図１
【解決手段】免疫チェックポイント阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドと、イムノアクティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを有する改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。さらに、前記改変された腫瘍溶解性ウイルスを含む医薬組成物、および対象に前記改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは前記医薬組成物を投与することを含む癌を処置する方法も提供される。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
免疫チェックポイント阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドと、イムノアク
ティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを有するウイルスゲノムを含む、
改変された腫瘍溶解性ウイルス。
ティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを有するウイルスゲノムを含む、
改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項2】
ワクシニア、アデノウイルス、レオウイルス、麻疹、単純ヘルペス、セムリキ森林熱ウ
イルス、ベネズエラウマ脳炎、パルボウイルス、ニワトリ貧血ウイルス、麻疹ウイルス、
コクサッキーウイルス、水疱性口炎ウイルス、セネカバレーウイルス、マラバウイルス、
およびニューカッスル病ウイルスからなる群から選択される、請求項１に記載の改変され
た腫瘍溶解性ウイルス。
イルス、ベネズエラウマ脳炎、パルボウイルス、ニワトリ貧血ウイルス、麻疹ウイルス、
コクサッキーウイルス、水疱性口炎ウイルス、セネカバレーウイルス、マラバウイルス、
およびニューカッスル病ウイルスからなる群から選択される、請求項１に記載の改変され
た腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項3】
ワクシニアである、請求項２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項4】
弱毒化され、腫瘍細胞において複製することができる、請求項１に記載の改変された腫
瘍溶解性ウイルス。
瘍溶解性ウイルス。
【請求項5】
前記ウイルスゲノムが、前記ウイルスが腫瘍細胞内において選択的複製をできるように
する、少なくとも１つの欠失または破壊を含む、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
する、少なくとも１つの欠失または破壊を含む、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項6】
前記欠失または破壊が、前記ウイルスの複製に必須であり、かつ非腫瘍細胞より腫瘍細
胞において優先的に発現される酵素の少なくとも一部をコードするオープンリーディング
フレーム（ＯＲＦ）にある、請求項５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
胞において優先的に発現される酵素の少なくとも一部をコードするオープンリーディング
フレーム（ＯＲＦ）にある、請求項５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項7】
前記酵素がキナーゼである、請求項６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項8】
前記酵素がチミジンキナーゼである、請求項７に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス
。
。
【請求項9】
ウエスタンリザーブ株から誘導される、請求項２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
ス。
【請求項10】
前記免疫チェックポイント阻害因子が、免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結
合することができる第一抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の改変さ
れた腫瘍溶解性ウイルス。
合することができる第一抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の改変さ
れた腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項11】
前記免疫チェックポイントタンパク質が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１／２、ＣＴＬＡ－４、
Ｂ７－Ｈ３／４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、およびＣＤ１６０からなる群から
選択される、請求項１０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
Ｂ７－Ｈ３／４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、およびＣＤ１６０からなる群から
選択される、請求項１０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項12】
前記第一抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１に特異的に結合する、請求項１
０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項13】
前記第一抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２、３、および４を含む第一重鎖
を含む、請求項１０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
を含む、請求項１０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項14】
前記第一重鎖が、配列番号５、または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同
配列を有する可変領域を含む、請求項１３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
配列を有する可変領域を含む、請求項１３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項15】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、配列番号７の核酸配列または少なくとも８０％の配
列同一性を有するその相同配列を含む、請求項１１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
列同一性を有するその相同配列を含む、請求項１１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項16】
前記第一重鎖が、配列番号６のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有
するその相同配列を含む、請求項１３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
するその相同配列を含む、請求項１３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項17】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、配列番号８の核酸配列または少なくとも８０％の配
列同一性を有するその相同配列を含む、請求項１１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
列同一性を有するその相同配列を含む、請求項１１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項18】
前記第一抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号９、１０、および１１を含む第一
軽鎖をさらに含む、請求項１３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
軽鎖をさらに含む、請求項１３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項19】
前記第一軽鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を
有するその相同配列を有する可変領域を含む、請求項１８に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
有するその相同配列を有する可変領域を含む、請求項１８に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項20】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、配列番号１４の核酸配列または少なくとも８０％の
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項１５に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項１５に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
【請求項21】
前記第一軽鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を
有するその相同配列を含む、請求項１８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
有するその相同配列を含む、請求項１８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項22】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、配列番号１５の核酸配列または少なくとも８０％の
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項１７に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項１７に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
【請求項23】
前記イムノアクティベーターが、共刺激分子に結合する第二抗体またはその抗原結合性
断片である、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
断片である、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項24】
前記共刺激分子が、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ８６、ＣＤ
８０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ２７／７０、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０、
ＧＩＴＲ、ニュートロフィリン、およびＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項２３
に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
８０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ２７／７０、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０、
ＧＩＴＲ、ニュートロフィリン、およびＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項２３
に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項25】
前記第二抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６に特異的に結合する、請求項
２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項26】
前記第二抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１７、１８、および１９を含む第
二重鎖を含む、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
二重鎖を含む、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項27】
前記第二重鎖が、配列番号２０のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を
有するその相同配列を有する可変領域を含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
有するその相同配列を有する可変領域を含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項28】
前記第二異種ポリヌクレオチドが、配列番号２２の核酸配列または少なくとも８０％の
配列同一性を有するその相同配列を含む、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイ
ルス。
配列同一性を有するその相同配列を含む、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイ
ルス。
【請求項29】
前記第二重鎖が、配列番号２１のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を
有するその相同配列を含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
有するその相同配列を含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項30】
前記第二異種ポリヌクレオチドが、配列番号２３の核酸配列または少なくとも８０％の
配列同一性を有するその相同配列を含む、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイ
ルス。
配列同一性を有するその相同配列を含む、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイ
ルス。
【請求項31】
前記第二抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２４、２５、および２６を含む第
二軽鎖をさらに含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
二軽鎖をさらに含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項32】
前記第二軽鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を
有するその相同配列を有する可変領域を含む、請求項３１に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
有するその相同配列を有する可変領域を含む、請求項３１に記載の改変された腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項33】
前記第二異種ポリヌクレオチドが、配列番号２９の核酸配列または少なくとも８０％の
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項２８に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項２８に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
【請求項34】
前記第二軽鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を
有するその相同配列を含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
有するその相同配列を含む、請求項２６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項35】
前記イムノアクティベーターが、ＮＫ細胞活性を刺激するＮＫアクティベーターである
、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項36】
前記ＮＫアクティベーターが、ＮＫ分子に結合する第二抗体またはその抗原結合性断片
である、請求項３５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
である、請求項３５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項37】
前記ＮＫ分子が、Ｓｉｇｌｅｃ、ＴＩＧＩＴ、ＫＩＲｓ、およびＮＫＧ２Ａ／Ｄからな
る群から選択される、請求項３６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
る群から選択される、請求項３６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項38】
前記イムノアクティベーターが、マクロファージ細胞活性を刺激するマクロファージア
クティベーターである、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
クティベーターである、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項39】
前記マクロファージアクティベーターが、マクロファージ分子に結合する第二抗体また
はその抗原結合性断片である、請求項３８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
はその抗原結合性断片である、請求項３８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項40】
前記マクロファージ分子が、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ１キナーゼ、ＰＳ、およびＣＤ４７か
らなる群から選択される、請求項３９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
らなる群から選択される、請求項３９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項41】
前記第二異種ポリヌクレオチドが、配列番号３０の核酸配列または少なくとも８０％の
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項３０に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
配列同一性を有するその相同配列をさらに含む、請求項３０に記載の改変された腫瘍溶解
性ウイルス。
【請求項42】
前記免疫チェックポイント阻害因子が、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体またはその抗
原結合性断片であり、かつ前記イムノアクティベーターが、ＣＤ１３７に特異的に結合す
る抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
原結合性断片であり、かつ前記イムノアクティベーターが、ＣＤ１３７に特異的に結合す
る抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項43】
前記第一異種ポリヌクレオチドおよび前記第二異種ポリヌクレオチドが、前記欠失の位
置に挿入される、請求項４に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
置に挿入される、請求項４に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項44】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、前記第二異種ポリヌクレオチドのすぐ上流またはす
ぐ下流に存する、請求項４３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
ぐ下流に存する、請求項４３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項45】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、前記第一抗体の第一重鎖および第一軽鎖をコードす
る、請求項１０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
る、請求項１０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項46】
前記第一異種ポリヌクレオチドが、前記第一重鎖の発現を駆動することができる第一プ
ロモーターと、前記第一軽鎖の発現を駆動することができる第二プロモーターとをさらに
含み、前記第一プロモーターおよび前記第二プロモーターは、ヘッドトゥヘッド配向にあ
る、請求項４５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
ロモーターと、前記第一軽鎖の発現を駆動することができる第二プロモーターとをさらに
含み、前記第一プロモーターおよび前記第二プロモーターは、ヘッドトゥヘッド配向にあ
る、請求項４５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項47】
前記第二異種ポリヌクレオチドが、前記第二抗体の第二重鎖および第二軽鎖をコードす
る、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
る、請求項２３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項48】
前記第二異種ポリヌクレオチドが、前記第二重鎖の発現を駆動することができる第三プ
ロモーターと、前記第二軽鎖の発現を駆動することができる第四プロモーターとをさらに
含み、前記第三プロモーターおよび前記第四プロモーターは、ヘッドトゥヘッド配向にあ
る、請求項４７に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
ロモーターと、前記第二軽鎖の発現を駆動することができる第四プロモーターとをさらに
含み、前記第三プロモーターおよび前記第四プロモーターは、ヘッドトゥヘッド配向にあ
る、請求項４７に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項49】
前記第一異種ポリヌクレオチドおよび前記第二異種ポリヌクレオチドが、それらが前記
改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製サイクルにおける同じ段階または異なる段階で発現
されるように構成された、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製サイクルにおける同じ段階または異なる段階で発現
されるように構成された、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項50】
前記第一プロモーターおよび前記第二プロモーターが、同じである、または異なる、請
求項４６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
求項４６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項51】
前記第一プロモーターおよび前記第二プロモーターが、両方とも後期プロモーターであ
る、請求項４６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
る、請求項４６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項52】
前記後期プロモーターがｐＳＬである、請求項５１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイ
ルス。
ルス。
【請求項53】
前記第三プロモーターおよび前記第四プロモーターが、同じである、または異なる、請
求項４８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
求項４８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項54】
前記第三および前記第四が、両方とも初期および後期プロモーターである、請求項４８
に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項55】
前記初期および後期プロモーターがｐＳＥ／Ｌである、請求項５４に記載の改変された
腫瘍溶解性ウイルス。
腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項56】
センス鎖の５’から３’の方向において、インフレームで以下の要素：ＣＤ１３７に結
合する抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチド－第一初期および後期プロモーター ―
第二初期および後期プロモーター ― ＣＤ１３７に結合する抗体の重鎖をコードする
ポリヌクレオチド ― ＰＤ－１に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
― 第一後期プロモーター ― 第二後期プロモーター ― ＰＤ－１に結合する抗体の
軽鎖をコードするポリヌクレオチド、を含む、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウ
イルス。
合する抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチド－第一初期および後期プロモーター ―
第二初期および後期プロモーター ― ＣＤ１３７に結合する抗体の重鎖をコードする
ポリヌクレオチド ― ＰＤ－１に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
― 第一後期プロモーター ― 第二後期プロモーター ― ＰＤ－１に結合する抗体の
軽鎖をコードするポリヌクレオチド、を含む、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウ
イルス。
【請求項57】
前記第一異種ポリヌクレオチドから発現される免疫チェックポイント阻害因子および前
記第二異種ポリヌクレオチドから発現されるイムノアクティベーターが、別々のタンパク
質として発現される、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
記第二異種ポリヌクレオチドから発現されるイムノアクティベーターが、別々のタンパク
質として発現される、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項58】
請求項１～５７のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルスと薬学的に許容
される担体とを含む、医薬組成物。
される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項59】
対象に有効量の請求項１～５７のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス
または請求項５８に記載の医薬組成物を投与することを含む、腫瘍を処置する方法。
または請求項５８に記載の医薬組成物を投与することを含む、腫瘍を処置する方法。
【請求項60】
前記対象がヒトである、請求項５９に記載の方法。
【請求項61】
前記腫瘍が固形腫瘍である、請求項５９に記載の方法。
【請求項62】
前記腫瘍が、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌種、ホジキンリンパ腫、頭頚部の扁平上
皮癌、膀胱癌、結直腸癌、または肝細胞癌である、請求項５９に記載の方法。
皮癌、膀胱癌、結直腸癌、または肝細胞癌である、請求項５９に記載の方法。
【請求項63】
投与経路が局所である、請求項５９に記載の方法。
【請求項64】
前記投与経路が腫瘍内注入である、請求項６３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、概して、改変された腫瘍溶解性ウイルス、改変された腫瘍溶解性ウイルスを
含む組成物、および腫瘍の処置におけるその使用に関する。
含む組成物、および腫瘍の処置におけるその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
世界中において、毎年１４００万人を超える人々が腫瘍と診断されている。医学研究に
おける頻繁な進歩にもかかわらず、腫瘍は、全ての死亡のおよそ１６％を占める。
おける頻繁な進歩にもかかわらず、腫瘍は、全ての死亡のおよそ１６％を占める。
【0003】
悪性腫瘍はしばしば、従来の治療法に対して抵抗性があり、重要な治療課題を提示する
。例えば、微小転移巣は、原発腫瘍の発生における非常に初期の段階において成立し得る
。したがって、診断の時点で、多くの腫瘍患者は、既に、微小転移を有している。腫瘍反
応性Ｔ細胞は、これらの微小転移巣を探し出して破壊し、周囲の健全な組織を温存する。
しかしながら、悪性腫瘍に対しての天然に存在するＴ細胞の反応はしばしば、原発腫瘍ま
たは転移腫瘍の寛解を生じさせるには不十分である。
。例えば、微小転移巣は、原発腫瘍の発生における非常に初期の段階において成立し得る
。したがって、診断の時点で、多くの腫瘍患者は、既に、微小転移を有している。腫瘍反
応性Ｔ細胞は、これらの微小転移巣を探し出して破壊し、周囲の健全な組織を温存する。
しかしながら、悪性腫瘍に対しての天然に存在するＴ細胞の反応はしばしば、原発腫瘍ま
たは転移腫瘍の寛解を生じさせるには不十分である。
【0004】
腫瘍溶解性ウイルスは、抗腫瘍剤としての可能性を示している。従来の遺伝子治療とは
異なり、腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製および同時に生じる細胞溶解によって腫瘍
組織を通じて広がることができる。しかしながら、腫瘍溶解性ウイルス自体は、原発腫瘍
または転移腫瘍のどちらに対してもそれらを処置するには不十分である。
異なり、腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製および同時に生じる細胞溶解によって腫瘍
組織を通じて広がることができる。しかしながら、腫瘍溶解性ウイルス自体は、原発腫瘍
または転移腫瘍のどちらに対してもそれらを処置するには不十分である。
【0005】
したがって、腫瘍溶解性ウイルスの効力の増強および転移腫瘍細胞の排除に対する必要
性は、非常に急を要している。
性は、非常に急を要している。
【発明の概要】
【0006】
一態様において、本開示は、免疫チェックポイント阻害因子をコードする第一異種ポリ
ヌクレオチドと、イムノアクティベーター〔immuno activator〕をコードする第二異種ポ
リヌクレオチドとを有するウイルスゲノムを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスに関す
る。
ヌクレオチドと、イムノアクティベーター〔immuno activator〕をコードする第二異種ポ
リヌクレオチドとを有するウイルスゲノムを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスに関す
る。
【0007】
ある特定の実施形態において、前記腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニア、アデノウイル
ス、レオウイルス、麻疹、単純ヘルペス、セムリキ森林熱ウイルス、ベネズエラウマ脳炎
、パルボウイルス、ニワトリ貧血ウイルス、麻疹ウイルス、コクサッキーウイルス、水疱
性口炎ウイルス、セネカバレーウイルス、マラバウイルス、およびニューカッスル病ウイ
ルスからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、前記腫瘍溶解性ウイルス
は、ウエスタンリザーブ〔Western Reserve〕株から誘導される。
ス、レオウイルス、麻疹、単純ヘルペス、セムリキ森林熱ウイルス、ベネズエラウマ脳炎
、パルボウイルス、ニワトリ貧血ウイルス、麻疹ウイルス、コクサッキーウイルス、水疱
性口炎ウイルス、セネカバレーウイルス、マラバウイルス、およびニューカッスル病ウイ
ルスからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、前記腫瘍溶解性ウイルス
は、ウエスタンリザーブ〔Western Reserve〕株から誘導される。
【0008】
ある特定の実施形態において、前記改変された腫瘍溶解性ウイルスは、弱毒化され、腫
瘍細胞において複製することができる。ある特定の実施形態において、前記ウイルスゲノ
ムは、前記ウイルスが腫瘍細胞内において選択的複製をできるようにする、少なくとも１
つの欠失または破壊を含む。ある特定の実施形態において、前記欠失または破壊は、ウイ
ルスの複製に必須であり、かつ非腫瘍細胞より腫瘍細胞において優先的に発現される酵素
の少なくとも一部をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）にある。ある特
定の実施形態において、前記酵素はキナーゼである。ある特定の実施形態において、前記
酵素はチミジンキナーゼである。
瘍細胞において複製することができる。ある特定の実施形態において、前記ウイルスゲノ
ムは、前記ウイルスが腫瘍細胞内において選択的複製をできるようにする、少なくとも１
つの欠失または破壊を含む。ある特定の実施形態において、前記欠失または破壊は、ウイ
ルスの複製に必須であり、かつ非腫瘍細胞より腫瘍細胞において優先的に発現される酵素
の少なくとも一部をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）にある。ある特
定の実施形態において、前記酵素はキナーゼである。ある特定の実施形態において、前記
酵素はチミジンキナーゼである。
【0009】
ある特定の実施形態において、前記免疫チェックポイント阻害因子は、免疫チェックポ
イントタンパク質に特異的に結合することができる第一抗体またはその抗原結合性断片で
ある。ある特定の実施形態において、前記免疫チェックポイントタンパク質は、ＰＤ－１
、ＰＤ－Ｌ１／２、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ３／４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ
、およびＣＤ１６０からなる群から選択される。
イントタンパク質に特異的に結合することができる第一抗体またはその抗原結合性断片で
ある。ある特定の実施形態において、前記免疫チェックポイントタンパク質は、ＰＤ－１
、ＰＤ－Ｌ１／２、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ３／４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ
、およびＣＤ１６０からなる群から選択される。
【0010】
ある特定の実施形態において、前記第一抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１
に特異的に結合する。
に特異的に結合する。
【0011】
ある特定の実施形態において、前記第一抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２
、３、および４を含む第一重鎖を含む。ある特定の実施形態において、前記第一重鎖は、
配列番号５または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を有する可変領域
を含む。ある特定の実施形態において、前記第一重鎖は、配列番号６のアミノ酸配列また
は少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
、３、および４を含む第一重鎖を含む。ある特定の実施形態において、前記第一重鎖は、
配列番号５または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を有する可変領域
を含む。ある特定の実施形態において、前記第一重鎖は、配列番号６のアミノ酸配列また
は少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0012】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、配列番号７の核酸配
列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施形
態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、配列番号８の核酸配列または少なくとも
８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施形
態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、配列番号８の核酸配列または少なくとも
８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0013】
ある特定の実施形態において、前記第一抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９
、１０、および１１を含む第一軽鎖をさらに含む。ある特定の実施形態において、前記第
一軽鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するそ
の相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、前記第一軽鎖は、配
列番号１３のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を
含む。
、１０、および１１を含む第一軽鎖をさらに含む。ある特定の実施形態において、前記第
一軽鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するそ
の相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、前記第一軽鎖は、配
列番号１３のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を
含む。
【0014】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、配列番号１４の核酸
配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列をさらに含む。ある特定
の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、配列番号１５の核酸配列または
少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列をさらに含む。
配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列をさらに含む。ある特定
の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、配列番号１５の核酸配列または
少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列をさらに含む。
【0015】
ある特定の実施形態において、前記イムノアクティベーターは、共刺激アクティベータ
ーである。ある特定の実施形態において、前記イムノアクティベーターは、共刺激分子に
結合する第二抗体またはその抗原結合性断片である。
ーである。ある特定の実施形態において、前記イムノアクティベーターは、共刺激分子に
結合する第二抗体またはその抗原結合性断片である。
【0016】
ある特定の実施形態において、前記共刺激分子は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２
７、ＣＤ７０、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＴＮＦＲＳ２５
、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ニュートロフィリン〔Neutrophilin〕、およびＩＣＯＳからなる
群から選択される。
７、ＣＤ７０、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＴＮＦＲＳ２５
、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ニュートロフィリン〔Neutrophilin〕、およびＩＣＯＳからなる
群から選択される。
【0017】
ある特定の実施形態において、前記第二抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１
６に特異的に結合する。
６に特異的に結合する。
【0018】
ある特定の実施形態において、前記第二抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１
７、１８、および１９を含む第二重鎖を含む。ある特定の実施形態において、前記第二重
鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相
同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、前記第二重鎖は、配列番
号２１のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む
。
７、１８、および１９を含む第二重鎖を含む。ある特定の実施形態において、前記第二重
鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相
同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、前記第二重鎖は、配列番
号２１のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む
。
【0019】
ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリヌクレオチドは、配列番号２２の核酸
配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施
形態において、前記第二異種ポリヌクレオチドは、配列番号２３の核酸配列または少なく
とも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施
形態において、前記第二異種ポリヌクレオチドは、配列番号２３の核酸配列または少なく
とも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0020】
ある特定の実施形態において、前記第二抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２
４、２５、および２６を含む第二軽鎖をさらに含む。ある特定の実施形態において、前記
第二軽鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有する
その相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリ
ヌクレオチドは、配列番号２８の核酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有する
その相同配列をさらに含む。
４、２５、および２６を含む第二軽鎖をさらに含む。ある特定の実施形態において、前記
第二軽鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有する
その相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリ
ヌクレオチドは、配列番号２８の核酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有する
その相同配列をさらに含む。
【0021】
ある特定の実施形態において、前記第二軽鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列または少
なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0022】
ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリヌクレオチドは、配列番号３０の核酸
配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列をさらに含む。
配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同配列をさらに含む。
【0023】
ある特定の実施形態において、前記イムノアクティベーターは、ＮＫ細胞活性を刺激す
るＮＫアクティベーターである。ある特定の実施形態において、前記ＮＫアクティベータ
ーは、ＮＫ分子に結合する第二抗体またはその抗原結合性断片である。ある特定の実施形
態において、前記ＮＫ分子は、Ｓｉｇｌｅｃ、ＴＩＧＩＴ、ＫＩＲｓ、およびＮＫＧ２Ａ
／Ｄからなる群から選択される。
るＮＫアクティベーターである。ある特定の実施形態において、前記ＮＫアクティベータ
ーは、ＮＫ分子に結合する第二抗体またはその抗原結合性断片である。ある特定の実施形
態において、前記ＮＫ分子は、Ｓｉｇｌｅｃ、ＴＩＧＩＴ、ＫＩＲｓ、およびＮＫＧ２Ａ
／Ｄからなる群から選択される。
【0024】
ある特定の実施形態において、前記イムノアクティベーターは、マクロファージ細胞活
性を刺激するマクロファージアクティベーターである。ある特定の実施形態において、前
記マクロファージアクティベーターは、マクロファージ分子に結合する第二抗体またはそ
の抗原結合性断片である。ある特定の実施形態において、前記マクロファージ分子は、Ｃ
ＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ１キナーゼ、ＰＳ、およびＣＤ４７からなる群から選択される。
性を刺激するマクロファージアクティベーターである。ある特定の実施形態において、前
記マクロファージアクティベーターは、マクロファージ分子に結合する第二抗体またはそ
の抗原結合性断片である。ある特定の実施形態において、前記マクロファージ分子は、Ｃ
ＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ１キナーゼ、ＰＳ、およびＣＤ４７からなる群から選択される。
【0025】
ある特定の実施形態において、前記免疫チェックポイント阻害因子は、ＰＤ－１に特異
的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であり、かつ前記イムノアクティベーターは
、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。
的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であり、かつ前記イムノアクティベーターは
、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。
【0026】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドおよび前記第二異種ポリ
ヌクレオチドは、前記欠失の位置に挿入される。
ヌクレオチドは、前記欠失の位置に挿入される。
【0027】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、前記第二異種ポリヌ
クレオチドのすぐ上流またはすぐ下流に存する。
クレオチドのすぐ上流またはすぐ下流に存する。
【0028】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドは、前記第一抗体の第一
重鎖および第一軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌク
レオチドは、前記第一重鎖の発現を駆動することができる第一プロモーターと、前記第一
軽鎖の発現を駆動することができる第二プロモーターとをさらに含み、当該第一および第
二プロモーターは、ヘッドトゥヘッド〔head-to-head〕配向にある。
重鎖および第一軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌク
レオチドは、前記第一重鎖の発現を駆動することができる第一プロモーターと、前記第一
軽鎖の発現を駆動することができる第二プロモーターとをさらに含み、当該第一および第
二プロモーターは、ヘッドトゥヘッド〔head-to-head〕配向にある。
【0029】
ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリヌクレオチドは、前記第二抗体の第二
重鎖および第二軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリヌク
レオチドは、当該第二重鎖の発現を駆動することができる第三プロモーターと、当該第二
軽鎖の発現を駆動することができる第四プロモーターとをさらに含み、当該第三および第
四プロモーターは、ヘッドトゥヘッド配向にある。
重鎖および第二軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、前記第二異種ポリヌク
レオチドは、当該第二重鎖の発現を駆動することができる第三プロモーターと、当該第二
軽鎖の発現を駆動することができる第四プロモーターとをさらに含み、当該第三および第
四プロモーターは、ヘッドトゥヘッド配向にある。
【0030】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドおよび前記第二異種ポリ
ヌクレオチドは、それらが前記改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製サイクルにおける同
じ段階または異なる段階で発現されるように構成される。
ヌクレオチドは、それらが前記改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製サイクルにおける同
じ段階または異なる段階で発現されるように構成される。
【0031】
ある特定の実施形態において、前記第一プロモーターおよび前記第二プロモーターは、
同じである、または異なる。ある特定の実施形態において、前記第一プロモーターおよび
前記第二プロモーターは、両方とも後期プロモーターである。ある特定の実施形態におい
て、前記後期プロモーターは、ｐＳＬである。
同じである、または異なる。ある特定の実施形態において、前記第一プロモーターおよび
前記第二プロモーターは、両方とも後期プロモーターである。ある特定の実施形態におい
て、前記後期プロモーターは、ｐＳＬである。
【0032】
ある特定の実施形態において、前記第三プロモーターおよび前記第四プロモーターは、
同じである、または異なる。ある特定の実施形態において、前記第三および前記第四は、
両方とも初期プロモーターおよび後期プロモーターである。ある特定の実施形態において
、前記初期プロモーターおよび後期プロモーターは、ｐＳＥ／Ｌである。
同じである、または異なる。ある特定の実施形態において、前記第三および前記第四は、
両方とも初期プロモーターおよび後期プロモーターである。ある特定の実施形態において
、前記初期プロモーターおよび後期プロモーターは、ｐＳＥ／Ｌである。
【0033】
ある特定の実施形態において、前記改変された腫瘍溶解性ウイルスは、センス鎖の５’
から３’の方向において、インフレームで以下の要素：ＣＤ１３７に結合する抗体の軽鎖
をコードするポリヌクレオチド－第一初期および後期プロモーター ― 第二初期および
後期プロモーター ― ＣＤ１３７に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
― ＰＤ－１に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド ― 第一後期プロ
モーター ― 第二後期プロモーター ― ＰＤ－１に結合する抗体の軽鎖をコードする
ポリヌクレオチド、を含む。
から３’の方向において、インフレームで以下の要素：ＣＤ１３７に結合する抗体の軽鎖
をコードするポリヌクレオチド－第一初期および後期プロモーター ― 第二初期および
後期プロモーター ― ＣＤ１３７に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
― ＰＤ－１に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド ― 第一後期プロ
モーター ― 第二後期プロモーター ― ＰＤ－１に結合する抗体の軽鎖をコードする
ポリヌクレオチド、を含む。
【0034】
ある特定の実施形態において、前記第一異種ポリヌクレオチドから発現される免疫チェ
ックポイント阻害因子および前記第二異種ポリヌクレオチドから発現されるイムノアクテ
ィベーターは、別々のタンパク質として発現される。
ックポイント阻害因子および前記第二異種ポリヌクレオチドから発現されるイムノアクテ
ィベーターは、別々のタンパク質として発現される。
【0035】
別の態様において、本開示は、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスと薬学的に許容
される担体とを含む、医薬組成物に関する。
される担体とを含む、医薬組成物に関する。
【0036】
別の態様において、本開示は、有効量の本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは
本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、腫瘍を処置する方法に関する。
本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、腫瘍を処置する方法に関する。
【0037】
ある特定の実施形態において、前記対象はヒトである。
【0038】
ある特定の実施形態において、前記腫瘍は固形腫瘍である。ある特定の実施形態におい
て、前記腫瘍は、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌種、ホジキンリンパ腫、頭頚部の扁平
上皮癌、膀胱癌、結直腸癌、または肝細胞癌である。
て、前記腫瘍は、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌種、ホジキンリンパ腫、頭頚部の扁平
上皮癌、膀胱癌、結直腸癌、または肝細胞癌である。
【0039】
ある特定の実施形態において、投与の経路は、局所である。ある特定の実施形態におい
て、投与の経路は、腫瘍内注入である。
て、投与の経路は、腫瘍内注入である。
【図面の簡単な説明】
【0040】
【図11】図１１は、ヒトＩｇＧ発現の免疫蛍光検出の結果を示す。図１１ａは、Ｕ２ＯＳ細胞の位相コントラスト画像を示す。図１１ｂは、バックグラウンド染色を示す。図１１ｃは、ＷＲ－ＧＳ－６００を感染させたＵ２ＯＳ細胞の画像を示す。図１１ｄは、ＷＲ－ＧＳ－６２０を感染させたＵ２ＯＳ細胞の画像を示す。
【図12】図１２は、細胞溶解物を使用した、組換えウイルス（ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０）によって発現されたヒト抗体のウエスタンブロットの結果を示しており、ここで、Ｐ６００、Ｐ６１０、およびＰ６２０は、それぞれ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０を意味する。このウエスタンブロッティング実験は、それぞれヒト抗体の重鎖および軽鎖に対応する、約５０ｋＤａおよび２５ｋＤａの分子量の２つのバンドを検出する。
【図13】図１３は、上清を使用した、組換えウイルス（ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０）によって発現されたヒト抗体のウエスタンブロットの結果を示しており、ここで、Ｐ６００、Ｐ６１０、およびＰ６２０は、それぞれ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０を意味する。このウエスタンブロッティング実験は、それぞれヒト抗体の重鎖および軽鎖に対応する、約５０ｋＤａおよび２５ｋＤａの分子量の２つのバンドを検出する。
【図32】図３２は、腫瘍内注入後の脳、脾臓、肝臓、および肺におけるインビボでのウイルス分布を示す。積算光子放出（１．９２８Ｅ１０対１．５５４Ｅ１０）は、腫瘍細胞の数に比例すると考えられる。当該データに基づいて、ＧＳ－６００は、腫瘍成長を制御する。
【発明を実施するための形態】
【0041】
一態様において、本開示は、免疫チェックポイント阻害因子をコードする第一異種ポリ
ヌクレオチドと、イムノアクティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを挿
入したウイルスゲノムを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスに関する。
ヌクレオチドと、イムノアクティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを挿
入したウイルスゲノムを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【0042】
腫瘍溶解性ウイルス
用語「腫瘍溶解性ウイルス」は、本明細書において使用される場合、インビトロまたは
インビボのいずれかにおいて、正常細胞に影響を与えずに、または最小の影響で、腫瘍細
胞内において選択的に複製することができ、かつ腫瘍細胞の成長を鈍化することができる
か腫瘍細胞の死を誘導することができる、ウイルスを意味する。ある特定の実施形態にお
いて、腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス粒子（またはビリオン）内にパッケージされたウ
イルスゲノムを含み、かつ感染性である（すなわち、宿主細胞または対象に感染してその
中に入ることができる）。ある特定の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＤＮＡ
ウイルスまたはＲＮＡウイルスであってもよく、かつ任意の好適な形態、例えば、ＤＮＡ
ウイルスベクター、ＲＮＡウイルスベクター、またはウイルス粒子など、であってもよい
。
用語「腫瘍溶解性ウイルス」は、本明細書において使用される場合、インビトロまたは
インビボのいずれかにおいて、正常細胞に影響を与えずに、または最小の影響で、腫瘍細
胞内において選択的に複製することができ、かつ腫瘍細胞の成長を鈍化することができる
か腫瘍細胞の死を誘導することができる、ウイルスを意味する。ある特定の実施形態にお
いて、腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス粒子（またはビリオン）内にパッケージされたウ
イルスゲノムを含み、かつ感染性である（すなわち、宿主細胞または対象に感染してその
中に入ることができる）。ある特定の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、ＤＮＡ
ウイルスまたはＲＮＡウイルスであってもよく、かつ任意の好適な形態、例えば、ＤＮＡ
ウイルスベクター、ＲＮＡウイルスベクター、またはウイルス粒子など、であってもよい
。
【0043】
用語「選択的に複製する」は、本明細書において使用される場合、腫瘍溶解性ウイルス
の複製速度が、非腫瘍細胞（例えば、健康な細胞）においてよりも腫瘍細胞において著し
く高いことを意味する。ある特定の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、非腫瘍細
胞（例えば、健康な細胞）においてよりも腫瘍細胞において少なくとも５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、
または１０００倍高い溶解の速度を示す。
の複製速度が、非腫瘍細胞（例えば、健康な細胞）においてよりも腫瘍細胞において著し
く高いことを意味する。ある特定の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、非腫瘍細
胞（例えば、健康な細胞）においてよりも腫瘍細胞において少なくとも５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、
または１０００倍高い溶解の速度を示す。
【0044】
ある特定の実施形態において、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、肝臓腫瘍細胞（例えば
、Ｈｅｐａｌ－６細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、７４０２細胞、および７７２１細胞）、乳房腫
瘍細胞（例えば、ＭＣＦ－７細胞）、舌腫瘍細胞（例えば、ＴＣａ８１１３細胞）、腺様
嚢胞腫瘍細胞（例えば、ＡＣＣ－Ｍ細胞）、前立腺腫瘍細胞（例えば、ＬＮＣａＰ細胞）
、ヒト胚腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）、肺腫瘍細胞（例えば、Ａ５４９細胞）
、または子宮頚部腫瘍細胞（例えば、ＨｅＬａ細胞）において選択的に複製することがで
きる。
、Ｈｅｐａｌ－６細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、７４０２細胞、および７７２１細胞）、乳房腫
瘍細胞（例えば、ＭＣＦ－７細胞）、舌腫瘍細胞（例えば、ＴＣａ８１１３細胞）、腺様
嚢胞腫瘍細胞（例えば、ＡＣＣ－Ｍ細胞）、前立腺腫瘍細胞（例えば、ＬＮＣａＰ細胞）
、ヒト胚腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）、肺腫瘍細胞（例えば、Ａ５４９細胞）
、または子宮頚部腫瘍細胞（例えば、ＨｅＬａ細胞）において選択的に複製することがで
きる。
【0045】
本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス）、
アデノウイルス（例えば、デルタ－２４、デルタ－２４－ＲＧＤ、ＩＣＯＶＩＲ－５、Ｉ
ＣＯＶＩＲ－７、Ｏｎｙｘ－０１５、ＣｏｌｏＡｄｌ、Ｈ１０１、およびＡＤ５／３－Ｄ
２４－ＧＭＣＳＦ）、レオウイルス（例えば、ＲＥＯＬＹＳＩＮ）、麻疹ウイルス、単純
ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ、ＯｎｃｏＶＥＸ ＧＭＣＳＦ）、ニューカッスル病
ウイルス（例えば、７３－Ｔ ＰＶ７０１およびＨＤＶ－ＨＵＪ株、ならびに以下の文献
に記載されるもの：Ｐｈｕａｎｇｓａｂ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃａｎｃｅｒ
Ｌｅｔｔ． １７２（１）： ２７－３６； Ｌｏｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ．， ２００
７， Ｃｕｒｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ７（２）： １５７－６
７；およびＦｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ２００６， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． １３
（１）： ２２１－８）、レトロウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、粘液腫
ウイルス、ラブドウイルス（例えば、水疱性口内炎ウイルス；以下の文献に記載されるも
の：Ｓｔｏｊｄｌ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ６（７）： ８
２１－５およびＳｔｏｊｄｌ ｅｔ ａｌ．， ２００３， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ
４（４）： ２６３－７５）、ピコルナウイルス（例えば、セネカバレーウイルス；ＳＷ
－００１およびＮＴＸ－０１０）、コクスサッキーウイルス、またはパルボウイルスから
誘導することができる。
アデノウイルス（例えば、デルタ－２４、デルタ－２４－ＲＧＤ、ＩＣＯＶＩＲ－５、Ｉ
ＣＯＶＩＲ－７、Ｏｎｙｘ－０１５、ＣｏｌｏＡｄｌ、Ｈ１０１、およびＡＤ５／３－Ｄ
２４－ＧＭＣＳＦ）、レオウイルス（例えば、ＲＥＯＬＹＳＩＮ）、麻疹ウイルス、単純
ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ、ＯｎｃｏＶＥＸ ＧＭＣＳＦ）、ニューカッスル病
ウイルス（例えば、７３－Ｔ ＰＶ７０１およびＨＤＶ－ＨＵＪ株、ならびに以下の文献
に記載されるもの：Ｐｈｕａｎｇｓａｂ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃａｎｃｅｒ
Ｌｅｔｔ． １７２（１）： ２７－３６； Ｌｏｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ．， ２００
７， Ｃｕｒｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ７（２）： １５７－６
７；およびＦｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ２００６， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． １３
（１）： ２２１－８）、レトロウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、粘液腫
ウイルス、ラブドウイルス（例えば、水疱性口内炎ウイルス；以下の文献に記載されるも
の：Ｓｔｏｊｄｌ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ６（７）： ８
２１－５およびＳｔｏｊｄｌ ｅｔ ａｌ．， ２００３， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ
４（４）： ２６３－７５）、ピコルナウイルス（例えば、セネカバレーウイルス；ＳＷ
－００１およびＮＴＸ－０１０）、コクスサッキーウイルス、またはパルボウイルスから
誘導することができる。
【0046】
ある特定の実施形態において、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ポックスウイルスから
誘導される。用語「ポックスウイルス」は、本明細書において使用される場合、ポックス
ウイルス亜科に属すウイルスを意味する。ある特定の実施形態において、ポックスウイル
スは、コードポックスウイルス〔Chordopoxviridae〕亜科に属すウイルスである。ある特
定の実施形態において、ポックスウイルスは、オルソポックスウイルス〔Orthopoxvirus
〕亜科に属すウイルスである。様々なポックスウイルスのゲノム、例えば、ワクシニアウ
イルス、牛痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、エクトロメリアウイルス、粘液腫ウイルス
のゲノムの配列は、当技術分野および専門データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（それ
ぞれ、受託番号ＮＣ＿００６９９８、ＮＣ＿００３６６３、ＮＣ＿００５３０９、ＮＣ＿
００４１０５、ＮＣ＿００１１３２）などにおいて入手可能である。
誘導される。用語「ポックスウイルス」は、本明細書において使用される場合、ポックス
ウイルス亜科に属すウイルスを意味する。ある特定の実施形態において、ポックスウイル
スは、コードポックスウイルス〔Chordopoxviridae〕亜科に属すウイルスである。ある特
定の実施形態において、ポックスウイルスは、オルソポックスウイルス〔Orthopoxvirus
〕亜科に属すウイルスである。様々なポックスウイルスのゲノム、例えば、ワクシニアウ
イルス、牛痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、エクトロメリアウイルス、粘液腫ウイルス
のゲノムの配列は、当技術分野および専門データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（それ
ぞれ、受託番号ＮＣ＿００６９９８、ＮＣ＿００３６６３、ＮＣ＿００５３０９、ＮＣ＿
００４１０５、ＮＣ＿００１１３２）などにおいて入手可能である。
【0047】
ある特定の実施形態において、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルスか
ら誘導される。ワクシニアウイルスは、ウイルスが宿主細胞機構から独立して複製するの
を可能にする多数のウイルスの酵素および因子をコードする約１９０ｋｂの二本鎖ＤＮＡ
ゲノムによって特徴付けられる、ポックスウイルス科のメンバーである。ある特定の実施
形態において、本開示のワクシニアウイルスは、エルストリー〔Elstree〕株、コペンハ
ーゲン〔Copenhagen〕株、ウエスタンリザーブ株、またはワイエス〔Wyeth〕株から誘導
される。ある特定の実施形態において、本開示のワクシニアウイルスは、ウエスタンリザ
ーブ株である。ウエスタンリザーブ株は、十分に特性決定されており、その完全配列は、
ＡＹ２４３３１２のアクセス番号によりＮＣＢＩサイト（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎ
ｉｈ．ｇｏｖ）において入手可能である。
ら誘導される。ワクシニアウイルスは、ウイルスが宿主細胞機構から独立して複製するの
を可能にする多数のウイルスの酵素および因子をコードする約１９０ｋｂの二本鎖ＤＮＡ
ゲノムによって特徴付けられる、ポックスウイルス科のメンバーである。ある特定の実施
形態において、本開示のワクシニアウイルスは、エルストリー〔Elstree〕株、コペンハ
ーゲン〔Copenhagen〕株、ウエスタンリザーブ株、またはワイエス〔Wyeth〕株から誘導
される。ある特定の実施形態において、本開示のワクシニアウイルスは、ウエスタンリザ
ーブ株である。ウエスタンリザーブ株は、十分に特性決定されており、その完全配列は、
ＡＹ２４３３１２のアクセス番号によりＮＣＢＩサイト（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎ
ｉｈ．ｇｏｖ）において入手可能である。
【0048】
用語「改変された腫瘍溶解性ウイルス」は、本明細書において使用される場合、異種核
酸もしくはタンパク質の導入または天然核酸もしくはタンパク質の変更によって改変され
た腫瘍溶解性ウイルスを意味する。ある特定の実施形態において、本明細書において提供
される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、核酸配列の欠失および／または付加によって遺
伝子操作される。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される改変された
腫瘍溶解性ウイルスは、チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子の欠失を含む。ある特定の実施
形態において、本明細書において提供される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、抗ヒトＰ
Ｄ－１および／または抗ヒト４－１ＢＢ抗体をコードする核酸配列の付加を含む。
酸もしくはタンパク質の導入または天然核酸もしくはタンパク質の変更によって改変され
た腫瘍溶解性ウイルスを意味する。ある特定の実施形態において、本明細書において提供
される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、核酸配列の欠失および／または付加によって遺
伝子操作される。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される改変された
腫瘍溶解性ウイルスは、チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子の欠失を含む。ある特定の実施
形態において、本明細書において提供される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、抗ヒトＰ
Ｄ－１および／または抗ヒト４－１ＢＢ抗体をコードする核酸配列の付加を含む。
【0049】
ある特定の実施形態において、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、弱毒化され
る。ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、正常細胞（例えば
、健康な細胞）において、その野生型の相対物と比較して減少された（例えば、少なくと
も９０％、８０％、７０％、６０％、５０％未満の）病原性または検出不可能な病原性を
有する。
る。ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、正常細胞（例えば
、健康な細胞）において、その野生型の相対物と比較して減少された（例えば、少なくと
も９０％、８０％、７０％、６０％、５０％未満の）病原性または検出不可能な病原性を
有する。
【0050】
本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、非腫瘍細胞と比較して腫瘍細胞において選
択的に複製し腫瘍細胞を死に至らしめるその性向によって腫瘍溶解性であるよう、当技術
分野において既知の任意の腫瘍溶解性ウイルスから誘導することができる。腫瘍溶解性ウ
イルスは、天然において腫瘍溶解性であり得る、または遺伝子組み換え技術によって、例
えば、腫瘍選択性および／または腫瘍細胞での優先的複製を増加させるために１つまたは
複数の遺伝子を改変するなどによって、腫瘍溶解性にされ得る。改変のためのそのような
遺伝子の例としては、ＤＮＡ複製、核酸代謝、宿主指向性、表面接着、病原性、宿主細胞
溶解、およびウイルス拡散に関与するものが挙げられる（例えば、Ｋｉｒｎ ｅｔ ａｌ
．， ２００１， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ７： ７８１； Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，
２０１０， Ｖｉｒｕｓｅｓ ２： ７８－１０６を参照されたい）。
択的に複製し腫瘍細胞を死に至らしめるその性向によって腫瘍溶解性であるよう、当技術
分野において既知の任意の腫瘍溶解性ウイルスから誘導することができる。腫瘍溶解性ウ
イルスは、天然において腫瘍溶解性であり得る、または遺伝子組み換え技術によって、例
えば、腫瘍選択性および／または腫瘍細胞での優先的複製を増加させるために１つまたは
複数の遺伝子を改変するなどによって、腫瘍溶解性にされ得る。改変のためのそのような
遺伝子の例としては、ＤＮＡ複製、核酸代謝、宿主指向性、表面接着、病原性、宿主細胞
溶解、およびウイルス拡散に関与するものが挙げられる（例えば、Ｋｉｒｎ ｅｔ ａｌ
．， ２００１， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ７： ７８１； Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，
２０１０， Ｖｉｒｕｓｅｓ ２： ７８－１０６を参照されたい）。
【0051】
ある特定の実施形態において、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノ
ムは、ウイルスが腫瘍細胞内において選択的に複製できるようにする、少なくとも１つの
欠失または破壊を含む。例えば、欠失または破壊は、ウイルス複製にとって不可欠な酵素
の発現または機能を減少させ得、それによりウイルスは、そのような酵素の不在下におい
て複製する能力が減退する。いくつかの実施形態において、ウイルス複製は、細胞におけ
るそのような酵素の存在および／またはレベルに依存し、酵素のレベルが高いほど、ウイ
ルスの複製能力または複製速度は高い。
ムは、ウイルスが腫瘍細胞内において選択的に複製できるようにする、少なくとも１つの
欠失または破壊を含む。例えば、欠失または破壊は、ウイルス複製にとって不可欠な酵素
の発現または機能を減少させ得、それによりウイルスは、そのような酵素の不在下におい
て複製する能力が減退する。いくつかの実施形態において、ウイルス複製は、細胞におけ
るそのような酵素の存在および／またはレベルに依存し、酵素のレベルが高いほど、ウイ
ルスの複製能力または複製速度は高い。
【0052】
ある特定の実施形態において、欠失または破壊は、オープンリーディングフレーム（Ｏ
ＲＦ）にある。用語「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」または「コード
配列」は、本明細書において使用される場合、アミノ酸配列へと翻訳することができるＤ
ＮＡ配列を意味する。ＯＲＦは、通常、開始コドン（例えば、ＡＴＧ）で始まり、アミノ
酸コードコドンが続き、停止コドン（例えば、ＴＧＡ、ＴＡＡ、ＴＡＧ）で終わる。
ＲＦ）にある。用語「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」または「コード
配列」は、本明細書において使用される場合、アミノ酸配列へと翻訳することができるＤ
ＮＡ配列を意味する。ＯＲＦは、通常、開始コドン（例えば、ＡＴＧ）で始まり、アミノ
酸コードコドンが続き、停止コドン（例えば、ＴＧＡ、ＴＡＡ、ＴＡＧ）で終わる。
【0053】
ある特定の実施形態において、ＯＲＦは、ウイルスの複製に不可欠であって非腫瘍細胞
より腫瘍細胞において優先的に発現される酵素の少なくとも一部をコードする。用語「発
現する」は、本明細書において使用される場合、タンパク質またはペプチド配列がそのコ
ードＤＮＡまたはＲＮＡ配列から産生されるプロセスを意味する。ある特定の実施形態に
おいて、酵素は、キナーゼである。
より腫瘍細胞において優先的に発現される酵素の少なくとも一部をコードする。用語「発
現する」は、本明細書において使用される場合、タンパク質またはペプチド配列がそのコ
ードＤＮＡまたはＲＮＡ配列から産生されるプロセスを意味する。ある特定の実施形態に
おいて、酵素は、キナーゼである。
【0054】
ある特定の実施形態において、ＯＲＦにおける欠失は、ＯＲＦの全長の１００％、９９
％超、９８％超、９５％超、９０％超、８５％超、８０％超、７５％超、７０％超、６５
％超、６０％超、５５％超、５０％超、４５％超、４０％超、３５％超、３０％超、２５
％超、２０％超、１５％超、または１０％超を構成する。ある特定の実施形態において、
ＯＲＦにおける欠失は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、
５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２０
０、３００、５００、８００、１０００、１２００、１５００、１８００、２０００、２
２００、２４００、２５００、またはそれ以上のヌクレオチド（場合により、連続するヌ
クレオチド）を構成する。
％超、９８％超、９５％超、９０％超、８５％超、８０％超、７５％超、７０％超、６５
％超、６０％超、５５％超、５０％超、４５％超、４０％超、３５％超、３０％超、２５
％超、２０％超、１５％超、または１０％超を構成する。ある特定の実施形態において、
ＯＲＦにおける欠失は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、
５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２０
０、３００、５００、８００、１０００、１２００、１５００、１８００、２０００、２
２００、２４００、２５００、またはそれ以上のヌクレオチド（場合により、連続するヌ
クレオチド）を構成する。
【0055】
ある特定の実施形態において、チミジンキナーゼ（ＴＫ）のＯＲＦは、欠失させられる
または破壊される。ＴＫは、デオキシリボヌクレオチドの合成に関与する。正常細胞は一
般的に低い濃度のヌクレオチドを有するため、ＴＫはこれらの正常細胞でのウイルス複製
において必要であるが、その一方で高いヌクレオチド濃度を含む腫瘍細胞において、ＴＫ
は必ずしも必要でない。ポックスウイルスでは、チミジンキナーゼコード遺伝子は、遺伝
子座Ｊ２Ｒに位置する。ある特定の実施形態において、ＴＫは、完全に欠失させられる。
または破壊される。ＴＫは、デオキシリボヌクレオチドの合成に関与する。正常細胞は一
般的に低い濃度のヌクレオチドを有するため、ＴＫはこれらの正常細胞でのウイルス複製
において必要であるが、その一方で高いヌクレオチド濃度を含む腫瘍細胞において、ＴＫ
は必ずしも必要でない。ポックスウイルスでは、チミジンキナーゼコード遺伝子は、遺伝
子座Ｊ２Ｒに位置する。ある特定の実施形態において、ＴＫは、完全に欠失させられる。
【0056】
ある特定の実施形態において、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）のＯＲＦは、欠
失させられるまたは破壊される。ＲＲは、ＤＮＡ生合成における重要なステップであるリ
ボヌクレオチドからデオキシリボヌクレオチドへの還元を触媒する。ウイルス酵素は、Ｒ
１およびＲ２と命名された、２つの異種サブユニットで構成され、それぞれ、Ｉ４Ｌおよ
びＦ４Ｌ遺伝子座によってコードされる。Ｉ４ＬおよびＦ４Ｌ遺伝子に対する配列および
様々なポックスウイルスのゲノムにおけるそれらの位置は、公開データベースにおいて、
例えば、ＧｅｎｅＢａｎｋの受託番号ＤＱ４３７５９４、ＤＱ４３７５９３、ＤＱ３７７
８０４、ＡＨ０１５６３５、ＡＹ３１３８４７、ＡＹ３１３８４８、ＮＣ＿００３３９１
、ＮＣ＿００３３８９、ＮＣ＿００３３１０、Ｍ－３５０２７、ＡＹ２４３３１２、ＤＱ
０１１１５７、ＤＱ０１１１５６、ＤＱ０１１１５５、ＤＱ０１１１５４、ＤＱ０１１１
５３、Ｙ１６７８０、Ｘ７１９８２、ＡＦ４３８１６５、Ｕ６０３１５、ＡＦ４１０１５
３、ＡＦ３８０１３８、Ｕ８６９１６、Ｌ２２５７９、ＮＣ＿００６９９８、ＤＱ１２１
３９４、およびＮＣ＿００８２９１によって、入手可能である。本発明との関連において
、Ｉ４Ｌ遺伝子（Ｒ１大サブユニットをコードする）またはＦ４Ｌ遺伝子（Ｒ２小サブユ
ニットをコードする）のいずれかまたは両方が、欠失させられ得るまたは破壊され得る。
失させられるまたは破壊される。ＲＲは、ＤＮＡ生合成における重要なステップであるリ
ボヌクレオチドからデオキシリボヌクレオチドへの還元を触媒する。ウイルス酵素は、Ｒ
１およびＲ２と命名された、２つの異種サブユニットで構成され、それぞれ、Ｉ４Ｌおよ
びＦ４Ｌ遺伝子座によってコードされる。Ｉ４ＬおよびＦ４Ｌ遺伝子に対する配列および
様々なポックスウイルスのゲノムにおけるそれらの位置は、公開データベースにおいて、
例えば、ＧｅｎｅＢａｎｋの受託番号ＤＱ４３７５９４、ＤＱ４３７５９３、ＤＱ３７７
８０４、ＡＨ０１５６３５、ＡＹ３１３８４７、ＡＹ３１３８４８、ＮＣ＿００３３９１
、ＮＣ＿００３３８９、ＮＣ＿００３３１０、Ｍ－３５０２７、ＡＹ２４３３１２、ＤＱ
０１１１５７、ＤＱ０１１１５６、ＤＱ０１１１５５、ＤＱ０１１１５４、ＤＱ０１１１
５３、Ｙ１６７８０、Ｘ７１９８２、ＡＦ４３８１６５、Ｕ６０３１５、ＡＦ４１０１５
３、ＡＦ３８０１３８、Ｕ８６９１６、Ｌ２２５７９、ＮＣ＿００６９９８、ＤＱ１２１
３９４、およびＮＣ＿００８２９１によって、入手可能である。本発明との関連において
、Ｉ４Ｌ遺伝子（Ｒ１大サブユニットをコードする）またはＦ４Ｌ遺伝子（Ｒ２小サブユ
ニットをコードする）のいずれかまたは両方が、欠失させられ得るまたは破壊され得る。
【0057】
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムはさら
に、ウイルスの腫瘍特異性をさらに増加させる追加の欠失または破壊を含む。ある特定の
実施形態において、追加の欠失または破壊は、腫瘍細胞において優先的または特異的に発
現される腫瘍特異的タンパク質の少なくとも一部をコードするＯＲＦにある。腫瘍特異的
タンパク質の代表例は、ＶＧＦである。ＶＧＦは、ウイルスによる細胞感染後の早期に発
現される分泌タンパク質であり、その機能は、正常細胞でのウイルス拡散にとって重要で
あると考えられる。別の例は、ヘマグルチニンをコードするＡ５６Ｒ遺伝子である（Ｚｈ
ａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２００７， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６７： １００３８－
４６）。さらなる一例は、ＤＮＡ複製の正確さを維持すること、およびチミジル酸シンタ
ーゼによるＴＭＰの産生のための前駆体を提供することの両方に関与するウイルスｄＵＴ
ＰａｓｅをコードするＦ２Ｌ遺伝子である（Ｂｒｏｙｌｅｓ ｅｔ ａｌ．， １９９３
， Ｖｉｒｏｌ． １９５： ８６３－５）。ワクシニアウイルスＦ２Ｌ遺伝子の配列は
、受託番号Ｍ２５３９２によりＧｅｎＢａｎｋにおいて入手可能である。
に、ウイルスの腫瘍特異性をさらに増加させる追加の欠失または破壊を含む。ある特定の
実施形態において、追加の欠失または破壊は、腫瘍細胞において優先的または特異的に発
現される腫瘍特異的タンパク質の少なくとも一部をコードするＯＲＦにある。腫瘍特異的
タンパク質の代表例は、ＶＧＦである。ＶＧＦは、ウイルスによる細胞感染後の早期に発
現される分泌タンパク質であり、その機能は、正常細胞でのウイルス拡散にとって重要で
あると考えられる。別の例は、ヘマグルチニンをコードするＡ５６Ｒ遺伝子である（Ｚｈ
ａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２００７， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６７： １００３８－
４６）。さらなる一例は、ＤＮＡ複製の正確さを維持すること、およびチミジル酸シンタ
ーゼによるＴＭＰの産生のための前駆体を提供することの両方に関与するウイルスｄＵＴ
ＰａｓｅをコードするＦ２Ｌ遺伝子である（Ｂｒｏｙｌｅｓ ｅｔ ａｌ．， １９９３
， Ｖｉｒｏｌ． １９５： ８６３－５）。ワクシニアウイルスＦ２Ｌ遺伝子の配列は
、受託番号Ｍ２５３９２によりＧｅｎＢａｎｋにおいて入手可能である。
【0058】
免疫チェックポイント阻害因子
本明細書において提供される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、免疫チェックポイント
阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドを有するウイルスゲノムを含む。
本明細書において提供される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、免疫チェックポイント
阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドを有するウイルスゲノムを含む。
【0059】
用語「異種」は、本明細書において使用される場合、配列が野生型ウイルスに対して内
因性でないことを意味する。
因性でないことを意味する。
【0060】
用語「コードする」または「コードすること」は、本明細書において使用される場合、
ｍＲＮＡへ転写されることができることおよび／またはペプチドもしくはタンパク質に翻
訳されることができることを意味する。
ｍＲＮＡへ転写されることができることおよび／またはペプチドもしくはタンパク質に翻
訳されることができることを意味する。
【0061】
用語「免疫チェックポイントタンパク質」は、本明細書において使用される場合、非制
御の免疫反応を防ぐために、したがって、自己免疫寛容および／または組織保護の維持の
ために重要な免疫学的経路に、直接的または間接的に関与するタンパク質を意味する。本
明細書において使用される１つまたは複数の免疫チェックポイントモジュレーターは、抗
原特異的細胞のクローン選択、Ｔ細胞活性化、増殖、抗原および炎症の部位への輸送、直
接的なエフェクター機能の実行、ならびにサイトカインおよび膜リガンドによるシグナル
伝達を含む、Ｔ細胞媒介免疫の任意のステップにおいて、独立して機能し得る。
御の免疫反応を防ぐために、したがって、自己免疫寛容および／または組織保護の維持の
ために重要な免疫学的経路に、直接的または間接的に関与するタンパク質を意味する。本
明細書において使用される１つまたは複数の免疫チェックポイントモジュレーターは、抗
原特異的細胞のクローン選択、Ｔ細胞活性化、増殖、抗原および炎症の部位への輸送、直
接的なエフェクター機能の実行、ならびにサイトカインおよび膜リガンドによるシグナル
伝達を含む、Ｔ細胞媒介免疫の任意のステップにおいて、独立して機能し得る。
【0062】
用語「免疫チェックポイント阻害因子」は、本明細書において使用される場合、免疫チ
ェックポイントタンパク質の機能をネガティブな方向に調節することができる分子を意味
する。免疫チェックポイント阻害因子は、これらに限定されるわけではないが、アプタマ
ー、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ペプチド、抗体、球状核酸、
ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含む、当
技術分野において既知の分子モダリティのいずれかであり得る。
ェックポイントタンパク質の機能をネガティブな方向に調節することができる分子を意味
する。免疫チェックポイント阻害因子は、これらに限定されるわけではないが、アプタマ
ー、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ペプチド、抗体、球状核酸、
ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含む、当
技術分野において既知の分子モダリティのいずれかであり得る。
【0063】
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害因子は、阻害性免疫チェック
ポイント分子、例えば、ＣＴＬＡ－４のリガンド（例えば、Ｂ７．１、Ｂ７．２）、ＴＩ
Ｍ３のリガンド（例えば、ガレクチン－９）、Ａ２ａ受容体のリガンド（例えば、アデノ
シン、レガデノソン）、ＬＡＧ３のリガンド（例えば、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラ
スＩＩ分子）、ＢＴＬＡのリガンド（例えば、ＨＶＥＭ、Ｂ７－Ｈ４）、ＫＩＲのリガン
ド（例えば、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子）、ＰＤ－１のリガンド（例え
ば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２）、ＩＤＯのリガンド（例えば、ＮＫＴＲ－２１８、インド
キシモド、ＮＬＧ９１９）などの、天然のまたは遺伝子操作されたアンタゴニストである
。
ポイント分子、例えば、ＣＴＬＡ－４のリガンド（例えば、Ｂ７．１、Ｂ７．２）、ＴＩ
Ｍ３のリガンド（例えば、ガレクチン－９）、Ａ２ａ受容体のリガンド（例えば、アデノ
シン、レガデノソン）、ＬＡＧ３のリガンド（例えば、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラ
スＩＩ分子）、ＢＴＬＡのリガンド（例えば、ＨＶＥＭ、Ｂ７－Ｈ４）、ＫＩＲのリガン
ド（例えば、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子）、ＰＤ－１のリガンド（例え
ば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２）、ＩＤＯのリガンド（例えば、ＮＫＴＲ－２１８、インド
キシモド、ＮＬＧ９１９）などの、天然のまたは遺伝子操作されたアンタゴニストである
。
【0064】
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害因子は、抗ＰＤ－１（例えば
、ニボルマブ、ピディリズマブ、ペンブロリズマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＢＭＳ－９
３６５５８、アテゾリズマブ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、Ａ
ＭＰ－５１４、ＳＴＩ－Ａ１１１０、ＴＳＲ－０４２、またはＡＮＢ０１１）、抗ＰＤ－
Ｌ１（例えば、ＫＹ－１００３、ＭＣＬＡ－１４５、アテゾリズマブ、ＭＥＤＩ－４７３
６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＳＴＩ－Ａ１０１０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ダピロリズマ
ブ〔Dapirolizumab〕ＣＤＰ－７６５７、ＭＥＤＩ－４９２０、またはＰＣＴ／ＵＳ２０
０１／０２０９６４において引用されるもの）、抗ＰＤ－Ｌ２、抗（ＰＤ－Ｌ１およびＰ
Ｄ－Ｌ２の両方）（例えば、ＡＵＲ－０１２、およびＡＭＰ－２２４）、抗ＣＴＬＡ－４
（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ、またはＫＡＨＲ－１０２）、抗ＩＤＯ（例え
ば、Ｄ－ｌ－メチル－トリプトファン（Ｌｕｎａｔｅ）、抗ＫＩＲ（例えば、リリルマブ
〔Lirilumab〕、ＩＰＨ２１０１、またはＩＰＨ４１０２）、抗ＬＡＧ３（例えば、ＢＭ
Ｓ－９８６０１６、ＩＭＰ７０１、ＩＭＰ３２１、またはＣ９Ｂ７Ｗ）、抗ＴＩＭ３（例
えば、Ｆ３８－２Ｅ２またはＥＮＵＭ００５）、抗ＶＩＳＴＡ（例えば、ＶＡ．Ｆ６）、
抗ＢＴＬＡ（例えば、ＡＦ３３５４）、抗ＣＤ７３（例えば、ＯＳＵ－ＨＤＡＣ４２また
はＭＥＤＩ－９４４７）、抗Ｂ７－Ｈ３（例えば、ＭＧＡ２７１、ＤＳ－５５７３ａ、ま
たは８Ｈ９）、抗Ａ２ａＲ、抗Ｂ７－１、抗Ｂ７－Ｈ３（例えば、ＭＧＡ２７１）、抗Ｂ
７－Ｈ４、抗（Ｂ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４の両方）、抗ＣＤ５２（例えば、アレムツズ
マブ）、抗ＩＬ－１０、抗ＩＬ－３５、抗ＭＩＣＡ（例えば、ＩＰＨ４３）、および抗Ｃ
Ｄ３９からなる群から選択される抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）である。
、ニボルマブ、ピディリズマブ、ペンブロリズマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＢＭＳ－９
３６５５８、アテゾリズマブ、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、Ａ
ＭＰ－５１４、ＳＴＩ－Ａ１１１０、ＴＳＲ－０４２、またはＡＮＢ０１１）、抗ＰＤ－
Ｌ１（例えば、ＫＹ－１００３、ＭＣＬＡ－１４５、アテゾリズマブ、ＭＥＤＩ－４７３
６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＳＴＩ－Ａ１０１０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ダピロリズマ
ブ〔Dapirolizumab〕ＣＤＰ－７６５７、ＭＥＤＩ－４９２０、またはＰＣＴ／ＵＳ２０
０１／０２０９６４において引用されるもの）、抗ＰＤ－Ｌ２、抗（ＰＤ－Ｌ１およびＰ
Ｄ－Ｌ２の両方）（例えば、ＡＵＲ－０１２、およびＡＭＰ－２２４）、抗ＣＴＬＡ－４
（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ、またはＫＡＨＲ－１０２）、抗ＩＤＯ（例え
ば、Ｄ－ｌ－メチル－トリプトファン（Ｌｕｎａｔｅ）、抗ＫＩＲ（例えば、リリルマブ
〔Lirilumab〕、ＩＰＨ２１０１、またはＩＰＨ４１０２）、抗ＬＡＧ３（例えば、ＢＭ
Ｓ－９８６０１６、ＩＭＰ７０１、ＩＭＰ３２１、またはＣ９Ｂ７Ｗ）、抗ＴＩＭ３（例
えば、Ｆ３８－２Ｅ２またはＥＮＵＭ００５）、抗ＶＩＳＴＡ（例えば、ＶＡ．Ｆ６）、
抗ＢＴＬＡ（例えば、ＡＦ３３５４）、抗ＣＤ７３（例えば、ＯＳＵ－ＨＤＡＣ４２また
はＭＥＤＩ－９４４７）、抗Ｂ７－Ｈ３（例えば、ＭＧＡ２７１、ＤＳ－５５７３ａ、ま
たは８Ｈ９）、抗Ａ２ａＲ、抗Ｂ７－１、抗Ｂ７－Ｈ３（例えば、ＭＧＡ２７１）、抗Ｂ
７－Ｈ４、抗（Ｂ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４の両方）、抗ＣＤ５２（例えば、アレムツズ
マブ）、抗ＩＬ－１０、抗ＩＬ－３５、抗ＭＩＣＡ（例えば、ＩＰＨ４３）、および抗Ｃ
Ｄ３９からなる群から選択される抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）である。
【0065】
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害因子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ
１／２、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ３／４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、およびＣ
Ｄ１６０からなる群から選択される、免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合す
ることができる抗体またはその抗原結合性断片である。ある特定の実施形態において、免
疫チェックポイント阻害因子は、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－Ｌ２抗体、あるいはＰＤ－
Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２の両方の阻害因子である。ある特定の実施形態において、免疫チェ
ックポイント阻害因子は、抗Ｂ７－Ｈ３または抗Ｂ７－Ｈ４抗体、あるいはＢ７－Ｈ３お
よびＢ７－Ｈ４の両方の阻害因子である。
１／２、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ３／４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、およびＣ
Ｄ１６０からなる群から選択される、免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合す
ることができる抗体またはその抗原結合性断片である。ある特定の実施形態において、免
疫チェックポイント阻害因子は、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－Ｌ２抗体、あるいはＰＤ－
Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２の両方の阻害因子である。ある特定の実施形態において、免疫チェ
ックポイント阻害因子は、抗Ｂ７－Ｈ３または抗Ｂ７－Ｈ４抗体、あるいはＢ７－Ｈ３お
よびＢ７－Ｈ４の両方の阻害因子である。
【0066】
ＰＤ－１阻害因子
ある特定の実施形態において、本開示の第一異種ポリヌクレオチドは、ＰＤ－１阻害因
子をコードする。
ある特定の実施形態において、本開示の第一異種ポリヌクレオチドは、ＰＤ－１阻害因
子をコードする。
【0067】
用語「ＰＤ－１」は、本明細書において使用される場合、プログラム細胞死タンパク質
を意味し、それは、免疫グロブリンのスーパーファミリーに属し、免疫系をネガティブに
調整する共阻害性受容体として機能する。ＰＤ－１は、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリ
ーのメンバーであり、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２を含む２つの既知のリガンドを有する
。ヒトＰＤ－１の代表的なアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋの受託番号：ＮＰ＿００５０
０９．２において開示されており、ヒトＰＤ－１をコードする代表的な核酸配列は、Ｇｅ
ｎＢａｎｋの受託番号：ＮＭ＿００５０１８．２において示される。
を意味し、それは、免疫グロブリンのスーパーファミリーに属し、免疫系をネガティブに
調整する共阻害性受容体として機能する。ＰＤ－１は、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリ
ーのメンバーであり、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２を含む２つの既知のリガンドを有する
。ヒトＰＤ－１の代表的なアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋの受託番号：ＮＰ＿００５０
０９．２において開示されており、ヒトＰＤ－１をコードする代表的な核酸配列は、Ｇｅ
ｎＢａｎｋの受託番号：ＮＭ＿００５０１８．２において示される。
【0068】
ＰＤ－１は、Ｔ細胞活性化をネガティブに調節し、この阻害機能は、その細胞質ドメイ
ンの免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に関係している（Ｐａｒｒｙ
ｅｔ． ａｌ， ２００５， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ２５：９５４３－
５３）。ＰＤ－１のこの阻害機能の妨害は、自己免疫につながり得る。ＰＤ－１による持
続的ネガティブシグナルは、多くの病的状態、例えば、腫瘍免疫回避および慢性ウイルス
感染などにおけるＴ細胞機能不全に関与していた。
ンの免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に関係している（Ｐａｒｒｙ
ｅｔ． ａｌ， ２００５， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ２５：９５４３－
５３）。ＰＤ－１のこの阻害機能の妨害は、自己免疫につながり得る。ＰＤ－１による持
続的ネガティブシグナルは、多くの病的状態、例えば、腫瘍免疫回避および慢性ウイルス
感染などにおけるＴ細胞機能不全に関与していた。
【0069】
ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１の活性を阻害する任意の薬剤、例えば、ＰＤ－１の活性を
少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９５％、またはそ
れ以上に低下させるものなどであり得る。
少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９５％、またはそ
れ以上に低下させるものなどであり得る。
【0070】
活性（例えば、ＰＤ－１の）は、例えば、機能性タンパク質とそのリガンドとの間の結
合（例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の結合）の阻害、その生物活性化の阻害（例え
ば、ＰＤ－１の活性化）、および／またはレベル（例えば、ＰＤ－１のレベル）の低下な
どの結果として、低下され得る。
合（例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の結合）の阻害、その生物活性化の阻害（例え
ば、ＰＤ－１の活性化）、および／またはレベル（例えば、ＰＤ－１のレベル）の低下な
どの結果として、低下され得る。
【0071】
ある特定の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１に特異的に結合することが
できる抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）である。
できる抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）である。
【0072】
用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、本明細書において使用される場合
、２つの分子の間、例えば、抗体と抗原との間などにおける非ランダム結合反応を意味す
る。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体または抗原結合性断
片は、≦１０－６Ｍ（例えば、≦５×１０－７Ｍ、≦２×１０－７Ｍ、≦１０－７Ｍ、≦
５×１０－８Ｍ、≦２×１０－８Ｍ、≦１０－８Ｍ、≦５×１０－９Ｍ、≦２×１０－９
Ｍ、≦１０－９Ｍ、≦１０－１０Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）でもって、ヒトおよび／また
はサルＰＤ－１に特異的に結合する。ＫＤは、本明細書において使用される場合、会合速
度に対する解離速度の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を意味し、それは、例えば、ビアコアなど
の機器を使用した表面プラズモン共鳴法を使用して特定され得る。
、２つの分子の間、例えば、抗体と抗原との間などにおける非ランダム結合反応を意味す
る。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体または抗原結合性断
片は、≦１０－６Ｍ（例えば、≦５×１０－７Ｍ、≦２×１０－７Ｍ、≦１０－７Ｍ、≦
５×１０－８Ｍ、≦２×１０－８Ｍ、≦１０－８Ｍ、≦５×１０－９Ｍ、≦２×１０－９
Ｍ、≦１０－９Ｍ、≦１０－１０Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）でもって、ヒトおよび／また
はサルＰＤ－１に特異的に結合する。ＫＤは、本明細書において使用される場合、会合速
度に対する解離速度の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を意味し、それは、例えば、ビアコアなど
の機器を使用した表面プラズモン共鳴法を使用して特定され得る。
【0073】
ある特定の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１に対する完全長モノクロー
ナル抗体である。
ナル抗体である。
【0074】
ある特定の実施形態において、ＰＤ－１抗体は、配列番号１に特異的に結合する。
【0075】
ある特定の実施形態において、ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２
、３、および４を含む第一重鎖を含む。
、３、および４を含む第一重鎖を含む。
【0076】
用語「同一性」は、アミノ酸配列（または核酸配列）に関して本明細書において使用さ
れる場合、最大数を達成するために、配列を位置合わせし、必要であれば同一のアミノ酸
（または核酸）のギャップを導入した後での、参照配列におけるアミノ酸（または核酸）
残基と同一の、候補の配列におけるアミノ酸（または核酸）残基の百分率を意味する。ア
ミノ酸残基の保存的置換は、同一残基と見なされない。アミノ酸（または核酸）配列の同
一性のパーセントを特定する目的のための位置合わせは、例えば、公的に入手可能なツー
ル、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣ
ＢＩ）のウェブサイトにおいて入手可能であり、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ． ｅｔ ａ
ｌ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２１５：４０３－４１０ （１９９０）； Ｓｔ
ｅｐｈｅｎ Ｆ． ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２５：３
３８９－３４０２ （１９９７）も参照されたい。）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（欧州バイオ
インフォマティクス研究所のウェブサイトにおいて入手可能であり、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ
．Ｇ． ｅｔ ａｌ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ２６６：３８
３－４０２ （１９９６）； Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｉｎｆｏ
ｒｍａｔｉｃｓ （Ｏｘｆｏｒｄ， Ｅｎｇｌａｎｄ）， ２３（２１）： ２９４７－
８ （２００７）も参照されたい。）、およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮ
ＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどを使用して達成することができる。当業者は、ツールによ
って提供されるデフォルトのパラメーターを使用してもよく、または、例えば好適なアル
ゴリズムを選択することによってアラインメントに対して適切にパラメーターをカスタマ
イズしてもよい。
れる場合、最大数を達成するために、配列を位置合わせし、必要であれば同一のアミノ酸
（または核酸）のギャップを導入した後での、参照配列におけるアミノ酸（または核酸）
残基と同一の、候補の配列におけるアミノ酸（または核酸）残基の百分率を意味する。ア
ミノ酸残基の保存的置換は、同一残基と見なされない。アミノ酸（または核酸）配列の同
一性のパーセントを特定する目的のための位置合わせは、例えば、公的に入手可能なツー
ル、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣ
ＢＩ）のウェブサイトにおいて入手可能であり、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ． ｅｔ ａ
ｌ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２１５：４０３－４１０ （１９９０）； Ｓｔ
ｅｐｈｅｎ Ｆ． ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２５：３
３８９－３４０２ （１９９７）も参照されたい。）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（欧州バイオ
インフォマティクス研究所のウェブサイトにおいて入手可能であり、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ
．Ｇ． ｅｔ ａｌ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ２６６：３８
３－４０２ （１９９６）； Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｉｎｆｏ
ｒｍａｔｉｃｓ （Ｏｘｆｏｒｄ， Ｅｎｇｌａｎｄ）， ２３（２１）： ２９４７－
８ （２００７）も参照されたい。）、およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮ
ＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどを使用して達成することができる。当業者は、ツールによ
って提供されるデフォルトのパラメーターを使用してもよく、または、例えば好適なアル
ゴリズムを選択することによってアラインメントに対して適切にパラメーターをカスタマ
イズしてもよい。
【0077】
ある特定の実施形態において、重鎖は、配列番号５または少なくとも８０％、８５％、
９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配
列同一性を有するその相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、
重鎖は、配列番号６のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相
同配列を含む。
９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配
列同一性を有するその相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、
重鎖は、配列番号６のアミノ酸配列または少なくとも８０％の配列同一性を有するその相
同配列を含む。
【0078】
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号７の核酸配列または少な
くとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９
８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施形態にお
いて、ポリヌクレオチドは、配列番号８の核酸配列または少なくとも８０％、８５％、９
０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列
同一性を有するその相同配列を含む。
くとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９
８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施形態にお
いて、ポリヌクレオチドは、配列番号８の核酸配列または少なくとも８０％、８５％、９
０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列
同一性を有するその相同配列を含む。
【0079】
ある特定の実施形態において、ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片はさらに、配列
番号９、１０、および１１を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖は、配
列番号１２のアミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、
９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同
配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖は、配列番号１３のア
ミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
番号９、１０、および１１を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖は、配
列番号１２のアミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、
９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同
配列を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖は、配列番号１３のア
ミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0080】
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドはさらに、配列番号１４の核酸配列ま
たは少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施
形態において、ポリヌクレオチドはさらに、配列番号１５の核酸配列または少なくとも８
０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、ま
たは９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
たは少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施
形態において、ポリヌクレオチドはさらに、配列番号１５の核酸配列または少なくとも８
０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、ま
たは９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0081】
イムノアクティベーター
本明細書において提供される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、イムノアクティベータ
ーをコードする第二異種ポリヌクレオチドを有するウイルスゲノムを含む。
本明細書において提供される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、イムノアクティベータ
ーをコードする第二異種ポリヌクレオチドを有するウイルスゲノムを含む。
【0082】
用語「イムノアクティベーター」は、本明細書において使用される場合、免疫系を増強
することができる任意の薬剤を意味する。
することができる任意の薬剤を意味する。
【0083】
用語「免疫系を増強する」は、本明細書において使用される場合、Ｔ細胞活性、Ｂ細胞
活性、マクロファージ活性、および／またはＮＫ細胞活性の発生を刺激する、薬剤の能力
を意味する。
活性、マクロファージ活性、および／またはＮＫ細胞活性の発生を刺激する、薬剤の能力
を意味する。
【0084】
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、共刺激アクティベーター、
ＮＫアクティベーター、またはマクロファージアクティベーターである。
ＮＫアクティベーター、またはマクロファージアクティベーターである。
【0085】
共刺激分子アクティベーター
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、共刺激分子アクティベータ
ーである。
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、共刺激分子アクティベータ
ーである。
【0086】
用語「共刺激分子」は、本明細書において使用される場合、抗原への結合の際のＴリン
パ球の効率的な活性化および機能に必要な第二シグナルを提供する、抗原受容体またはＦ
ｃ受容体以外の細胞表面分子を意味する。そのような共刺激分子の例としては、ＣＤ１３
７（すなわち、４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ２８、Ｃ
Ｄ４０、ＣＤ１２２、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＧＩＴＲ、ニュートロ
フィリン、およびＩＣＯＳ（すなわち、ＣＤ２７８）が挙げられる。
パ球の効率的な活性化および機能に必要な第二シグナルを提供する、抗原受容体またはＦ
ｃ受容体以外の細胞表面分子を意味する。そのような共刺激分子の例としては、ＣＤ１３
７（すなわち、４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ２８、Ｃ
Ｄ４０、ＣＤ１２２、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＧＩＴＲ、ニュートロ
フィリン、およびＩＣＯＳ（すなわち、ＣＤ２７８）が挙げられる。
【0087】
ある特定の実施形態において、共刺激アクティベーターは、細胞免疫系を増強すること
ができるペプチド、ポリペプチド（例えば、抗体）であり得る。ある特定の実施形態にお
いて、共刺激アクティベーターは、共刺激分子に結合し、それによって共刺激分子の活性
を刺激する抗体、またはそのような抗体の抗原結合性断片、例えば、ＣＤ１３７抗体（例
えば、ＢＭＳ－６６３５１３またはＰＦ－０５０８２５６６）、ＣＤ２８抗体（例えば、
ＴＧＮ－１４１２）、ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＰ－８７０，８９３、ＣＤＸ１１４０、
ＢＩ－６５５０６４、ＢＭＳ－９８６０９０、ＡＰＸ００５、またはＡＰＸ００５Ｍ）、
ＯＸ４０（ＣＤ１３４）抗体（例えば、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ
０５６２、または米国特許第７，９５９，９２５号に記載されるもの）、抗ＧＩＴＲ（例
えば、ＴＲＸ－５１８、ＩＮＢＲＸ－１１０、またはＮＯＶ－１２０３０１）、ＣＤ７０
抗体、ＣＤ８６抗体、ＣＤ８０抗体、ＣＤ１２２抗体、ＴＮＦＲＳ２５抗体、ニュートロ
フィリン抗体、およびＣＤ２７抗体（例えば、ＣＤＸ－１１２７、ＢＩＯＮ－１４０２、
またはｈＣＤ２７．１５）などである。
ができるペプチド、ポリペプチド（例えば、抗体）であり得る。ある特定の実施形態にお
いて、共刺激アクティベーターは、共刺激分子に結合し、それによって共刺激分子の活性
を刺激する抗体、またはそのような抗体の抗原結合性断片、例えば、ＣＤ１３７抗体（例
えば、ＢＭＳ－６６３５１３またはＰＦ－０５０８２５６６）、ＣＤ２８抗体（例えば、
ＴＧＮ－１４１２）、ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＰ－８７０，８９３、ＣＤＸ１１４０、
ＢＩ－６５５０６４、ＢＭＳ－９８６０９０、ＡＰＸ００５、またはＡＰＸ００５Ｍ）、
ＯＸ４０（ＣＤ１３４）抗体（例えば、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ
０５６２、または米国特許第７，９５９，９２５号に記載されるもの）、抗ＧＩＴＲ（例
えば、ＴＲＸ－５１８、ＩＮＢＲＸ－１１０、またはＮＯＶ－１２０３０１）、ＣＤ７０
抗体、ＣＤ８６抗体、ＣＤ８０抗体、ＣＤ１２２抗体、ＴＮＦＲＳ２５抗体、ニュートロ
フィリン抗体、およびＣＤ２７抗体（例えば、ＣＤＸ－１１２７、ＢＩＯＮ－１４０２、
またはｈＣＤ２７．１５）などである。
【0088】
ＣＤ１３７アクティベーター
ある特定の実施形態において、本開示の第二異種ポリヌクレオチドは、ＣＤ１３７アク
ティベーターをコードする。
ある特定の実施形態において、本開示の第二異種ポリヌクレオチドは、ＣＤ１３７アク
ティベーターをコードする。
【0089】
４－１ＢＢとも呼ばれるＣＤ１３７は、細胞増殖、分化、およびプログラム細胞死の調
整に関与するタンパク質を含む腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）遺伝子ファミリーのメン
バーである（Ａ． Ａｓｈｋｅｎａｚｉ， Ｎａｔｕｒｅ， ２： ４２０－４３０，
（２００２））。ＣＤ１３７は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の両方、ＮＫ細胞、および
ＮＫＴ細胞を含む、活性化されたＴ細胞において支配的に発現される（Ｂ． Ｋｗｏｎ
ｅｔ ａｌ． ， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ １０： １１９－１２６， （２０００）；
Ｊ． Ｈｕｒｔａｄｏ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５： ３３６０－
３３６５， （１９９５）；およびＬ． Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９０： １６７－１７２， （１９９８）を参照されたい）。
整に関与するタンパク質を含む腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）遺伝子ファミリーのメン
バーである（Ａ． Ａｓｈｋｅｎａｚｉ， Ｎａｔｕｒｅ， ２： ４２０－４３０，
（２００２））。ＣＤ１３７は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の両方、ＮＫ細胞、および
ＮＫＴ細胞を含む、活性化されたＴ細胞において支配的に発現される（Ｂ． Ｋｗｏｎ
ｅｔ ａｌ． ， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ １０： １１９－１２６， （２０００）；
Ｊ． Ｈｕｒｔａｄｏ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５： ３３６０－
３３６５， （１９９５）；およびＬ． Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９０： １６７－１７２， （１９９８）を参照されたい）。
【0090】
ＣＤ１３７アクティベーターは、ＰＤ－１の活性を増強する任意の薬剤、例えば、ＣＤ
１３７の活性を少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９
５％、またはそれ以上に増強するものなどであり得る。
１３７の活性を少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９
５％、またはそれ以上に増強するものなどであり得る。
【0091】
ある特定の実施形態において、ＣＤ１３７アクティベーターは、ＣＤ１３７に特異的に
結合する抗体である。ある特定の実施形態において、ＣＤ１３７アクティベーターは、完
全長抗体である。
結合する抗体である。ある特定の実施形態において、ＣＤ１３７アクティベーターは、完
全長抗体である。
【0092】
ある特定の実施形態において、ＣＤ１３７アクティベーターまたはその抗原結合性断片
は、配列番号１６に特異的に結合する。
は、配列番号１６に特異的に結合する。
【0093】
ある特定の実施形態において、ＣＤ１３７アクティベーターまたはその抗原結合性断片
は、配列番号１７、１８、および１９を含む重鎖を含む。
は、配列番号１７、１８、および１９を含む重鎖を含む。
【0094】
ある特定の実施形態において、重鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列または少なくとも
８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％の配列同一性を有するその相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実
施形態において、重鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％
、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の
配列同一性を有するその相同配列を含む。
８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％の配列同一性を有するその相同配列を有する可変領域を含む。ある特定の実
施形態において、重鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％
、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の
配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0095】
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２２の核酸配列または少
なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施形態に
おいて、ポリヌクレオチドは、配列番号２３の核酸配列または少なくとも８０％、８５％
、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の
配列同一性を有するその相同配列を含む。
なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。ある特定の実施形態に
おいて、ポリヌクレオチドは、配列番号２３の核酸配列または少なくとも８０％、８５％
、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の
配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0096】
ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片はさらに、配列番号２４
、２５、および２６を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖は、配列番号
２７のアミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を
有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、さらに、配
列番号２８の核酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列
を含む。
、２５、および２６を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖は、配列番号
２７のアミノ酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を
有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、さらに、配
列番号２８の核酸配列または少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列
を含む。
【0097】
ある特定の実施形態において、軽鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列または少なくとも
８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0098】
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドはさらに、配列番号３０の核酸配列ま
たは少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
たは少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するその相同配列を含む。
【0099】
ＮＫアクティベーター
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、ＮＫ細胞活性を刺激するＮ
Ｋアクティベーターである。ある特定の実施形態において、ＮＫアクティベーターは、Ｎ
Ｋ分子に結合する第二抗体またはその抗原結合性断片である。
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、ＮＫ細胞活性を刺激するＮ
Ｋアクティベーターである。ある特定の実施形態において、ＮＫアクティベーターは、Ｎ
Ｋ分子に結合する第二抗体またはその抗原結合性断片である。
【0100】
ある特定の実施形態において、ＮＫアクティベーターは、Ｓｉｇｌｅｃ抗体、ＴＩＧＩ
Ｔ抗体、ＫＩＲｓ抗体、およびＮＫＧ２Ａ／Ｄ抗体（例えば、モナリズマブ〔monalizuma
b〕からなる群から選択される。
Ｔ抗体、ＫＩＲｓ抗体、およびＮＫＧ２Ａ／Ｄ抗体（例えば、モナリズマブ〔monalizuma
b〕からなる群から選択される。
【0101】
マクロファージアクティベーター
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、マクロファージ細胞活性を
刺激するマクロファージアクティベーターである。ある特定の実施形態において、マクロ
ファージアクティベーターは、マクロファージ分子に結合する第二抗体またはその抗原結
合性断片である。
ある特定の実施形態において、イムノアクティベーターは、マクロファージ細胞活性を
刺激するマクロファージアクティベーターである。ある特定の実施形態において、マクロ
ファージアクティベーターは、マクロファージ分子に結合する第二抗体またはその抗原結
合性断片である。
【0102】
ある特定の実施形態において、マクロファージアクティベーターは、ＣＳＦ１Ｒ抗体（
例えば、ＦＰＡ００８）、ＣＳＦ１キナーゼ抗体、ＰＳ抗体、およびＣＤ４７抗体（例え
ば、ＣＣ－９０００２、ＴＴＩ－６２１、またはＶＬＳＴ－００７）からなる群から選択
される。
例えば、ＦＰＡ００８）、ＣＳＦ１キナーゼ抗体、ＰＳ抗体、およびＣＤ４７抗体（例え
ば、ＣＣ－９０００２、ＴＴＩ－６２１、またはＶＬＳＴ－００７）からなる群から選択
される。
【0103】
抗体
用語「抗体」は、本明細書において使用される場合、特定の抗原に結合する任意の免疫
グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、または二重特
異性（二価）抗体を包含する。天然のインタクトな抗体は、２つの重鎖と２つの軽鎖を含
む。各重鎖は、可変領域と、第一、第二、および第三定常領域とからなるが、その一方で
、各軽鎖は、可変領域と定常領域とからなる。哺乳動物の重鎖は、α、δ、ε、γ、およ
びμとして分類され、哺乳動物の軽鎖は、λまたはκとして分類される。抗体は、「Ｙ」
形状を有し、Ｙの幹は、ジスルフィド結合によって一緒に結合された２つの重鎖の第二お
よび第三定常領域からなる。Ｙの各腕部は、単一の軽鎖の可変領域および定常領域に結合
した単一の重鎖の可変領域および第一定常領域を含み、その場合、重鎖の第一定常領域は
、ヒンジ領域を介して第二定常領域に連結されている。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗
原結合特異性を担っている。両方の鎖の可変領域は、概して、相補性決定領域（ＣＤＲ）
と呼ばれる３つの高度に可変なループを含む（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ
３を含む軽（Ｌ）鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重（Ｈ）
鎖ＣＤＲ）。本明細書において開示される抗体および抗原結合性断片に対するＣＤＲ境界
は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの慣例によって定義ま
たは特定され得る（詳細については、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ， Ｂ．， Ｃｈｏｔｈｉ
ａ， Ｃ．， Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２７３（４
）， ９２７ （１９９７）； Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ． Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３ （１９８５）； Ｃｈｏｔｈ
ｉａ， Ｃ． ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ａ．Ｍ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９
６，９０１ （１９８７）； Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ
． Ｄｅｃ ２１－２８； ３４２（６２５２）：８７７－８３ （１９８９）； Ｋａ
ｂａｔ Ｅ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． （１９９１）を参照されたい）。３つの
ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られる隣接する伸縮部の間に介在し、フ
レームワーク領域は、ＣＤＲより高度に保存され、可変領域の構造を支えるための足場を
形成する。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合特異性には無関係だが、様々なエフェ
クター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいたクラスに
割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、Ｉ
ｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、それらは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμ重
鎖の存在によって特徴付けられる。主要な抗体クラスのいくつかは、サブクラス、例えば
、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ
４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）、またはＩｇＡ２（α２重鎖）などに分割される。
用語「抗体」は、本明細書において使用される場合、特定の抗原に結合する任意の免疫
グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、または二重特
異性（二価）抗体を包含する。天然のインタクトな抗体は、２つの重鎖と２つの軽鎖を含
む。各重鎖は、可変領域と、第一、第二、および第三定常領域とからなるが、その一方で
、各軽鎖は、可変領域と定常領域とからなる。哺乳動物の重鎖は、α、δ、ε、γ、およ
びμとして分類され、哺乳動物の軽鎖は、λまたはκとして分類される。抗体は、「Ｙ」
形状を有し、Ｙの幹は、ジスルフィド結合によって一緒に結合された２つの重鎖の第二お
よび第三定常領域からなる。Ｙの各腕部は、単一の軽鎖の可変領域および定常領域に結合
した単一の重鎖の可変領域および第一定常領域を含み、その場合、重鎖の第一定常領域は
、ヒンジ領域を介して第二定常領域に連結されている。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗
原結合特異性を担っている。両方の鎖の可変領域は、概して、相補性決定領域（ＣＤＲ）
と呼ばれる３つの高度に可変なループを含む（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ
３を含む軽（Ｌ）鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重（Ｈ）
鎖ＣＤＲ）。本明細書において開示される抗体および抗原結合性断片に対するＣＤＲ境界
は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの慣例によって定義ま
たは特定され得る（詳細については、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ， Ｂ．， Ｃｈｏｔｈｉ
ａ， Ｃ．， Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２７３（４
）， ９２７ （１９９７）； Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ． Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３ （１９８５）； Ｃｈｏｔｈ
ｉａ， Ｃ． ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ａ．Ｍ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９
６，９０１ （１９８７）； Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ
． Ｄｅｃ ２１－２８； ３４２（６２５２）：８７７－８３ （１９８９）； Ｋａ
ｂａｔ Ｅ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． （１９９１）を参照されたい）。３つの
ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られる隣接する伸縮部の間に介在し、フ
レームワーク領域は、ＣＤＲより高度に保存され、可変領域の構造を支えるための足場を
形成する。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合特異性には無関係だが、様々なエフェ
クター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいたクラスに
割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、Ｉ
ｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、それらは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμ重
鎖の存在によって特徴付けられる。主要な抗体クラスのいくつかは、サブクラス、例えば
、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ
４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）、またはＩｇＡ２（α２重鎖）などに分割される。
【0104】
用語「抗原結合性断片」は、本明細書において使用される場合、１つまたは複数のＣＤ
Ｒを含む抗体の一部から形成された抗体断片を意味するが、インタクトな抗体構造は含ま
ない。抗原結合性断片の例としては、これらに限定されるわけではないが、Ｆａｂ、Ｆａ
ｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ラク
ダ化単一ドメイン抗体、およびナノボディが挙げられる。抗原結合性断片は、親抗体が結
合する同じ抗原に結合することができる。
Ｒを含む抗体の一部から形成された抗体断片を意味するが、インタクトな抗体構造は含ま
ない。抗原結合性断片の例としては、これらに限定されるわけではないが、Ｆａｂ、Ｆａ
ｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ラク
ダ化単一ドメイン抗体、およびナノボディが挙げられる。抗原結合性断片は、親抗体が結
合する同じ抗原に結合することができる。
【0105】
用語「Ｆａｂ」は、本明細書において使用される場合、ジスルフィド結合によって単一
の重鎖の可変領域および第一定常領域に結合した単一の軽鎖（可変領域および定常領域の
両方）からなる抗体の一部を意味する。
の重鎖の可変領域および第一定常領域に結合した単一の軽鎖（可変領域および定常領域の
両方）からなる抗体の一部を意味する。
【0106】
用語「Ｆａｂ’」は、本明細書において使用される場合、ヒンジ領域の一部を含むＦａ
ｂ断片を意味する。
ｂ断片を意味する。
【0107】
用語「Ｆ（ａｂ’）２」は、本明細書において使用される場合、Ｆａｂ’の二量体を意
味する。
味する。
【0108】
用語「Ｆｖ」は、本明細書において使用される場合、単一の軽鎖の可変領域と単一の重
鎖の可変領域とからなるＦｖ断片を意味する。
鎖の可変領域とからなるＦｖ断片を意味する。
【0109】
用語「単鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」は、本明細書において使用される場合、直接
的にまたはペプチドリンカー配列を介してお互いに結合した軽鎖可変領域および重鎖可変
領域からなる、遺伝子操作された抗体を意味する（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ
ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８５：５８７９（１９８
８）を参照されたい）。
的にまたはペプチドリンカー配列を介してお互いに結合した軽鎖可変領域および重鎖可変
領域からなる、遺伝子操作された抗体を意味する（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ
ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８５：５８７９（１９８
８）を参照されたい）。
【0110】
用語「ｓｃＦｖ二量体」は、本明細書において使用される場合、２つのｓｃＦｖによっ
て形成された重合体を意味する。
て形成された重合体を意味する。
【0111】
用語「ラクダ化単一ドメイン抗体」は、「重鎖抗体」または「ＨＣＡｂ」（重鎖のみ抗
体〔heavy-chain-only antibody〕）としても知られ、２つの重鎖可変領域を含むが軽鎖
は含まない抗体を意味する（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ． ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅ
ｒｍａｎｓ Ｓ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｄｅｃ １０； ２３１
（１－２）：２５－３８ （１９９９）； Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．， Ｊ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｊｕｎ； ７４（４）：２７７－３０２ （２００１）； ＷＯ９
４／０４６７８； ＷＯ９４／２５５９１；および米国特許第６，００５，０７９号を参
照されたい）。重鎖抗体は、元々は、ラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびラマ）
から誘導された。ラクダ化抗体は、軽鎖を欠くが、正統な抗原結合性レパートリーを有す
る（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ． ３６
３（６４２８）：４４６－８ （１９９３）； Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ． ｅｔ ａｌ．，
“Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ； ａ
ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，” Ｉｍｍｕｎ
ｏｇｅｎｅｔｉｃｓ． ５４（１）：３９－４７ （２００２）；およびＮｇｕｙｅｎ
ＶＫ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １０９（１）：９３－１０１ （２
００３）を参照されたく、当該文献は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる）
。
体〔heavy-chain-only antibody〕）としても知られ、２つの重鎖可変領域を含むが軽鎖
は含まない抗体を意味する（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ． ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅ
ｒｍａｎｓ Ｓ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｄｅｃ １０； ２３１
（１－２）：２５－３８ （１９９９）； Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．， Ｊ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｊｕｎ； ７４（４）：２７７－３０２ （２００１）； ＷＯ９
４／０４６７８； ＷＯ９４／２５５９１；および米国特許第６，００５，０７９号を参
照されたい）。重鎖抗体は、元々は、ラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびラマ）
から誘導された。ラクダ化抗体は、軽鎖を欠くが、正統な抗原結合性レパートリーを有す
る（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ． ３６
３（６４２８）：４４６－８ （１９９３）； Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ． ｅｔ ａｌ．，
“Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ； ａ
ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，” Ｉｍｍｕｎ
ｏｇｅｎｅｔｉｃｓ． ５４（１）：３９－４７ （２００２）；およびＮｇｕｙｅｎ
ＶＫ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １０９（１）：９３－１０１ （２
００３）を参照されたく、当該文献は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる）
。
【0112】
用語「ナノボディ」は、本明細書において使用される場合、重鎖抗体由来の重鎖可変領
域と２つの定常領域ＣＨ２およびＣＨ３とからなる抗体を意味する。
域と２つの定常領域ＣＨ２およびＣＨ３とからなる抗体を意味する。
【0113】
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、完全ヒト抗体、ヒ
ト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、またはウサギ抗体である。ある特定の実施形態にお
いて、本明細書において提供される抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、
または組換え抗体である。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗
体は、単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。ある特定の実施
形態において、本明細書において提供される抗体はさらに、標識されてもよい。ある特定
の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、完全ヒト抗体であり、それは、
場合により、トランスジェニックラット、例えば内因性ラット免疫グロビン遺伝子の発現
が不活性化されたトランスジェニックラットによって産生され、かつＪ遺伝子座欠失およ
びＣ－κ変異を有する組換えヒト免疫グロビン遺伝子座を有し、遺伝子操作された細胞（
例えば、ＣＨＯ細胞）によっても発現され得る。
ト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、またはウサギ抗体である。ある特定の実施形態にお
いて、本明細書において提供される抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、
または組換え抗体である。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗
体は、単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。ある特定の実施
形態において、本明細書において提供される抗体はさらに、標識されてもよい。ある特定
の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、完全ヒト抗体であり、それは、
場合により、トランスジェニックラット、例えば内因性ラット免疫グロビン遺伝子の発現
が不活性化されたトランスジェニックラットによって産生され、かつＪ遺伝子座欠失およ
びＣ－κ変異を有する組換えヒト免疫グロビン遺伝子座を有し、遺伝子操作された細胞（
例えば、ＣＨＯ細胞）によっても発現され得る。
【0114】
用語「完全ヒト」は、抗体または抗原結合性断片に関して本明細書において使用される
場合、抗体または抗原結合性断片のアミノ酸配列が、ヒトまたはヒト免疫細胞によって産
生される抗体のアミノ酸配列に対応するか、非ヒト源、例えばヒト抗体レパートリーを利
用するトランスジェニック非ヒト動物などに由来するか、他のヒト抗体コード配列である
ことを意味する。
場合、抗体または抗原結合性断片のアミノ酸配列が、ヒトまたはヒト免疫細胞によって産
生される抗体のアミノ酸配列に対応するか、非ヒト源、例えばヒト抗体レパートリーを利
用するトランスジェニック非ヒト動物などに由来するか、他のヒト抗体コード配列である
ことを意味する。
【0115】
用語「ヒト化」は、抗体または抗原結合性断片に関して本明細書において使用される場
合、非ヒト動物に由来するＣＤＲと、ヒトに由来するＦＲ領域と、適切であればヒトに由
来する定常領域とを含む抗体または抗原結合性断片を意味する。ヒト化抗体または抗原結
合性断片は、免疫原性が減少しているため、ある特定の実施形態において人の治療法とし
て有用である。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、マウス
、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターなどである。ある特定
の実施形態において、ヒト化抗体または抗原結合性断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除
いて、実質的に全てヒト配列で構成される。
合、非ヒト動物に由来するＣＤＲと、ヒトに由来するＦＲ領域と、適切であればヒトに由
来する定常領域とを含む抗体または抗原結合性断片を意味する。ヒト化抗体または抗原結
合性断片は、免疫原性が減少しているため、ある特定の実施形態において人の治療法とし
て有用である。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、マウス
、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターなどである。ある特定
の実施形態において、ヒト化抗体または抗原結合性断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除
いて、実質的に全てヒト配列で構成される。
【0116】
用語「キメラ」は、抗体または抗原結合性断片に関して本明細書において使用される場
合、ある種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部と、異なる種に由来する重鎖および
／または軽鎖の残りの部分とを有する抗体または抗原結合性断片を意味する。ある特定の
実施形態において、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域と、非ヒト種、例えばマウス
またはラビットなどに由来する可変領域とを含み得る。
合、ある種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部と、異なる種に由来する重鎖および
／または軽鎖の残りの部分とを有する抗体または抗原結合性断片を意味する。ある特定の
実施形態において、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域と、非ヒト種、例えばマウス
またはラビットなどに由来する可変領域とを含み得る。
【0117】
用語「保存的置換」は、アミノ酸配列に関して本明細書において使用される場合、アミ
ノ酸残基を、同様の生理化学的性質の側鎖を有する異なるアミノ酸残基で置換することを
意味する。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ、
Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ）の間において、中性親水性側鎖を有する残基（
例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）の間において、酸性側鎖を有す
る残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）の間において、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば
、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）の間において、または芳香族側鎖を有する残基（例え
ば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）の間において、行うことができる。当技術分野にお
いて既知のように、保存的置換は、通常、タンパク質の立体配座構造において著しい変化
を引き起こさず、したがって、タンパク質の生物活性を維持することができる。
ノ酸残基を、同様の生理化学的性質の側鎖を有する異なるアミノ酸残基で置換することを
意味する。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ、
Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ）の間において、中性親水性側鎖を有する残基（
例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）の間において、酸性側鎖を有す
る残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）の間において、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば
、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）の間において、または芳香族側鎖を有する残基（例え
ば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）の間において、行うことができる。当技術分野にお
いて既知のように、保存的置換は、通常、タンパク質の立体配座構造において著しい変化
を引き起こさず、したがって、タンパク質の生物活性を維持することができる。
【0118】
ポリヌクレオチド
ある特定の実施形態において、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＤ－１に
特異的に結合する阻害抗体またはその抗原結合性断片をコードする第一異種ポリヌクレオ
チドと、ＣＤ１３７に特異的に結合する活性化抗体またはその抗原結合性断片をコードす
る第二異種ポリヌクレオチドとを含む。
ある特定の実施形態において、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＤ－１に
特異的に結合する阻害抗体またはその抗原結合性断片をコードする第一異種ポリヌクレオ
チドと、ＣＤ１３７に特異的に結合する活性化抗体またはその抗原結合性断片をコードす
る第二異種ポリヌクレオチドとを含む。
【0119】
用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書において使用される場合、リボ
核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、または混合リボ核酸－デオキシリボ核酸
、例えば、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッドを意味する。ポリヌクレオチドまたは核酸は、一
本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡまたはＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッドであり得る。
ポリヌクレオチドまたは核酸は、直鎖状または環状であり得る。ある特定の実施形態にお
いて、第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレオチドは、ウイルスがＤＮＡ
ウイルスの場合には両方ともＤＮＡであり、あるいは第一異種ポリヌクレオチドおよび第
二異種ポリヌクレオチドは、ウイルスがＲＮＡウイルスである場合、両方ともＲＮＡであ
る。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレ
オチドは、両方とも二本鎖ＤＮＡである。
核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、または混合リボ核酸－デオキシリボ核酸
、例えば、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッドを意味する。ポリヌクレオチドまたは核酸は、一
本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡまたはＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッドであり得る。
ポリヌクレオチドまたは核酸は、直鎖状または環状であり得る。ある特定の実施形態にお
いて、第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレオチドは、ウイルスがＤＮＡ
ウイルスの場合には両方ともＤＮＡであり、あるいは第一異種ポリヌクレオチドおよび第
二異種ポリヌクレオチドは、ウイルスがＲＮＡウイルスである場合、両方ともＲＮＡであ
る。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレ
オチドは、両方とも二本鎖ＤＮＡである。
【0120】
第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレオチドは、当技術分野において既
知の従来的方法の使用、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による合成および互換
性制御末端を有するウイルスゲノムとのライゲーションなどによって、改変された腫瘍溶
解性ウイルスに導入され得る。詳細については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ
． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎ．Ｙ． （１
９８９））を参照されたく、当該文献は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる
。
知の従来的方法の使用、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による合成および互換
性制御末端を有するウイルスゲノムとのライゲーションなどによって、改変された腫瘍溶
解性ウイルスに導入され得る。詳細については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ
． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎ．Ｙ． （１
９８９））を参照されたく、当該文献は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる
。
【0121】
ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレオ
チドは、ＯＲＦにおける欠失の位置に導入される。ある特定の実施形態において、第一異
種ポリヌクレオチドは、第二異種ポリヌクレオチドのすぐ上流またはすぐ下流にある。用
語「すぐ上流またはすぐ下流」は、本明細書において使用される場合、第一異種ポリヌク
レオチドおよび第二異種ポリヌクレオチドが、それらが０、１、２、３、４、５、６、７
、８、９、または１０以下のヌクレオチドによってお互いに離間されて、ウイルスゲノム
上において非常に接近して位置されていることを意味する。例えば、上流のポリヌクレオ
チドの３’末端が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以下のヌクレ
オチドによって下流のポリヌクレオチドの５’末端から離間されている場合、上流のポリ
ヌクレオチドの３’末端は、下流のポリヌクレオチドの５’末端にすぐ隣接している。あ
る特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドと第二異種ポリヌクレオチドとの
間にＯＲＦは存在しない。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドと第
二異種ポリヌクレオチドとの間に制限部位が存在する。
チドは、ＯＲＦにおける欠失の位置に導入される。ある特定の実施形態において、第一異
種ポリヌクレオチドは、第二異種ポリヌクレオチドのすぐ上流またはすぐ下流にある。用
語「すぐ上流またはすぐ下流」は、本明細書において使用される場合、第一異種ポリヌク
レオチドおよび第二異種ポリヌクレオチドが、それらが０、１、２、３、４、５、６、７
、８、９、または１０以下のヌクレオチドによってお互いに離間されて、ウイルスゲノム
上において非常に接近して位置されていることを意味する。例えば、上流のポリヌクレオ
チドの３’末端が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以下のヌクレ
オチドによって下流のポリヌクレオチドの５’末端から離間されている場合、上流のポリ
ヌクレオチドの３’末端は、下流のポリヌクレオチドの５’末端にすぐ隣接している。あ
る特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドと第二異種ポリヌクレオチドとの
間にＯＲＦは存在しない。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドと第
二異種ポリヌクレオチドとの間に制限部位が存在する。
【0122】
ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドは、第一抗体の第一重鎖およ
び第一軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドはさ
らに、第一重鎖の発現を駆動することができる第一プロモーターと、第一軽鎖の発現を駆
動することができる第二プロモーターとを含み、第一プロモーターおよび第二プロモータ
ーは、ヘッドトゥヘッド配向にある。
び第一軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドはさ
らに、第一重鎖の発現を駆動することができる第一プロモーターと、第一軽鎖の発現を駆
動することができる第二プロモーターとを含み、第一プロモーターおよび第二プロモータ
ーは、ヘッドトゥヘッド配向にある。
【0123】
ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドは、第一抗体の第一重鎖の可
変領域、リンカー、および第一抗体の第一軽鎖の可変領域をコードする。ある特定の実施
形態において、第一異種ポリヌクレオチドは、第一抗体の第一重鎖をコードするが、第一
抗体の第一軽鎖はコードしない。
変領域、リンカー、および第一抗体の第一軽鎖の可変領域をコードする。ある特定の実施
形態において、第一異種ポリヌクレオチドは、第一抗体の第一重鎖をコードするが、第一
抗体の第一軽鎖はコードしない。
【0124】
用語「ヘッドトゥヘッド配向」は、本明細書において使用される場合、２つのプロモー
ターがウイルスゲノム上においてお互いにすぐ近くに隣接しており、それらは反対の方向
にタンパク質発現を駆動することを意味する。具体例を図２に示す。
ターがウイルスゲノム上においてお互いにすぐ近くに隣接しており、それらは反対の方向
にタンパク質発現を駆動することを意味する。具体例を図２に示す。
【0125】
ある特定の実施形態において、第二異種ポリヌクレオチドは、第二抗体の第二重鎖およ
び第二軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、第二異種ポリヌクレオチドはさ
らに、第二重鎖の発現を駆動することができる第三プロモーターと、第二軽鎖の発現を駆
動することができる第四プロモーターとを含み、第三プロモーターおよび第四プロモータ
ーは、ヘッドトゥヘッド配向にある。
び第二軽鎖をコードする。ある特定の実施形態において、第二異種ポリヌクレオチドはさ
らに、第二重鎖の発現を駆動することができる第三プロモーターと、第二軽鎖の発現を駆
動することができる第四プロモーターとを含み、第三プロモーターおよび第四プロモータ
ーは、ヘッドトゥヘッド配向にある。
【0126】
用語「プロモーター」は、本明細書において使用される場合、コード配列の転写を制御
することができるポリヌクレオチド配列を意味する。プロモーター配列は、ＲＮＡポリメ
ラーゼ認識、結合、転写開始に対して十分である特定の配列を含む。さらに、プロモータ
ー配列は、ＲＮＡポリメラーゼのこの認識、結合、および転写開始の活性を調節する配列
を含み得る。プロモーターは、自身と同じ核酸分子上に位置する遺伝子または自身とは異
なる核酸分子上に位置する遺伝子の転写に影響を及ぼし得る。プロモーター配列の機能は
、調整の性質に応じて、恒常的である、または刺激により誘発的であり得る。「恒常的」
なプロモーターは、本明細書において使用される場合、宿主細胞における遺伝子発現を連
続的に活性化するように機能するプロモーターを意味する。「誘発的」プロモーターは、
本明細書において使用される場合、ある特定の刺激の存在下において宿主細胞における遺
伝子発現を活性化するプロモーターを意味する。
することができるポリヌクレオチド配列を意味する。プロモーター配列は、ＲＮＡポリメ
ラーゼ認識、結合、転写開始に対して十分である特定の配列を含む。さらに、プロモータ
ー配列は、ＲＮＡポリメラーゼのこの認識、結合、および転写開始の活性を調節する配列
を含み得る。プロモーターは、自身と同じ核酸分子上に位置する遺伝子または自身とは異
なる核酸分子上に位置する遺伝子の転写に影響を及ぼし得る。プロモーター配列の機能は
、調整の性質に応じて、恒常的である、または刺激により誘発的であり得る。「恒常的」
なプロモーターは、本明細書において使用される場合、宿主細胞における遺伝子発現を連
続的に活性化するように機能するプロモーターを意味する。「誘発的」プロモーターは、
本明細書において使用される場合、ある特定の刺激の存在下において宿主細胞における遺
伝子発現を活性化するプロモーターを意味する。
【0127】
ある特定の実施形態において、本開示のプロモーターは、真核細胞プロモーター、例え
ば、ＣＭＶ由来のプロモーター（例えば、ＣＭＶ最初期プロモーター（ＣＭＶプロモータ
ー））、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（Ｈ
ＩＶ）プロモーター（例えば、ＨＩＶ長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイ
ルスプロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス
（ＲＳＶ）プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ヒト遺伝子由来のプロモーター、
例えば、ヒトミオシンプロモーター、ヒトヘモグロビンプロモーター、ヒト筋クレアチン
プロモーター、ヒトメタロチオネインβ－アクチンプロモーター、ヒトユビキチンＣプロ
モーター（ＵＢＣ）、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーター（ＰＧＫ）、ヒ
トチミジンキナーゼプロモーター（ＴＫ）、ヒト延長因子１アルファプロモーター（ＥＦ
１Ａ）、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）３５Ｓプロモーター、Ｅ２Ｆ－１プ
ロモーター（Ｅ２Ｆ１転写因子１のプロモーター）、α－フェトタンパクのプロモーター
、コレシストキニンのプロモーター、癌胎児抗原のプロモーター、Ｃ－ｅｒｂＢ２／ｎｅ
ｕ腫瘍原のプロモーター、シクロオキシゲナーゼのプロモーター、ＣＸＣ－ケモカイン受
容体４（ＣＸＣＲ４）のプロモーター、ヒト精巣上体タンパク質４（ＨＥ４）のプロモー
ター、ヘキソキナーゼＩＩ型のプロモーター、Ｌ－プラスチンのプロモーター、ムチン様
糖タンパク質（ＭＵＣ１）のプロモーター、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のプロモーター、
サバイビンのプロモーター、チロシナーゼ関連タンパク質（ＴＲＰ１）のプロモーター、
およびチロシナーゼのプロモーターなど、である。
ば、ＣＭＶ由来のプロモーター（例えば、ＣＭＶ最初期プロモーター（ＣＭＶプロモータ
ー））、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（Ｈ
ＩＶ）プロモーター（例えば、ＨＩＶ長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイ
ルスプロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス
（ＲＳＶ）プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ヒト遺伝子由来のプロモーター、
例えば、ヒトミオシンプロモーター、ヒトヘモグロビンプロモーター、ヒト筋クレアチン
プロモーター、ヒトメタロチオネインβ－アクチンプロモーター、ヒトユビキチンＣプロ
モーター（ＵＢＣ）、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーター（ＰＧＫ）、ヒ
トチミジンキナーゼプロモーター（ＴＫ）、ヒト延長因子１アルファプロモーター（ＥＦ
１Ａ）、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）３５Ｓプロモーター、Ｅ２Ｆ－１プ
ロモーター（Ｅ２Ｆ１転写因子１のプロモーター）、α－フェトタンパクのプロモーター
、コレシストキニンのプロモーター、癌胎児抗原のプロモーター、Ｃ－ｅｒｂＢ２／ｎｅ
ｕ腫瘍原のプロモーター、シクロオキシゲナーゼのプロモーター、ＣＸＣ－ケモカイン受
容体４（ＣＸＣＲ４）のプロモーター、ヒト精巣上体タンパク質４（ＨＥ４）のプロモー
ター、ヘキソキナーゼＩＩ型のプロモーター、Ｌ－プラスチンのプロモーター、ムチン様
糖タンパク質（ＭＵＣ１）のプロモーター、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のプロモーター、
サバイビンのプロモーター、チロシナーゼ関連タンパク質（ＴＲＰ１）のプロモーター、
およびチロシナーゼのプロモーターなど、である。
【0128】
ある特定の実施形態において、本開示のプロモーターは、腫瘍特異的プロモーターであ
り得る。用語「腫瘍特異的プロモーター」は、本明細書において使用される場合、腫瘍細
胞において優先的にまたは排他的に遺伝子発現を活性化するように機能し、非腫瘍細胞ま
たは非腫瘍細胞において活性を有さない、または活性が低下する、プロモーターを意味す
る。腫瘍特異的プロモーターの具体例としては、これらに限定されるわけではないが、Ｅ
２Ｆ－１プロモーター、α－フェトタンパクのプロモーター、コレシストキニンのプロモ
ーター、癌胎児抗原のプロモーター、Ｃ－ｅｒｂＢ２／ｎｅｕ腫瘍原のプロモーター、シ
クロオキシゲナーゼのプロモーター、ＣＸＣＲ４のプロモーター、ＨＥ４のプロモーター
、ヘキソキナーゼＩＩ型のプロモーター、Ｌ－プラスチンのプロモーター、ＭＵＣ１のプ
ロモーター、ＰＳＡのプロモーター、サバイビンのプロモーター、ＴＲＰ１のプロモータ
ー、およびチロシナーゼのプロモーターが挙げられる。
り得る。用語「腫瘍特異的プロモーター」は、本明細書において使用される場合、腫瘍細
胞において優先的にまたは排他的に遺伝子発現を活性化するように機能し、非腫瘍細胞ま
たは非腫瘍細胞において活性を有さない、または活性が低下する、プロモーターを意味す
る。腫瘍特異的プロモーターの具体例としては、これらに限定されるわけではないが、Ｅ
２Ｆ－１プロモーター、α－フェトタンパクのプロモーター、コレシストキニンのプロモ
ーター、癌胎児抗原のプロモーター、Ｃ－ｅｒｂＢ２／ｎｅｕ腫瘍原のプロモーター、シ
クロオキシゲナーゼのプロモーター、ＣＸＣＲ４のプロモーター、ＨＥ４のプロモーター
、ヘキソキナーゼＩＩ型のプロモーター、Ｌ－プラスチンのプロモーター、ＭＵＣ１のプ
ロモーター、ＰＳＡのプロモーター、サバイビンのプロモーター、ＴＲＰ１のプロモータ
ー、およびチロシナーゼのプロモーターが挙げられる。
【0129】
ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドおよび第二異種ポリヌクレオ
チドは、それらが改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製サイクルにおける同じ段階または
異なる段階で発現されるように構成される。例えば、２つのポリヌクレオチドは、ウイル
ス複製の初期段階において誘導された初期プロモーターによって両方とも駆動され得る、
あるいは、ウイルス複製の後期段階において誘導された後期プロモーターによって両方と
も駆動され得る、あるいは、一方は初期プロモーターによって駆動され、他方は後期プロ
モーターによって駆動される。
チドは、それらが改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製サイクルにおける同じ段階または
異なる段階で発現されるように構成される。例えば、２つのポリヌクレオチドは、ウイル
ス複製の初期段階において誘導された初期プロモーターによって両方とも駆動され得る、
あるいは、ウイルス複製の後期段階において誘導された後期プロモーターによって両方と
も駆動され得る、あるいは、一方は初期プロモーターによって駆動され、他方は後期プロ
モーターによって駆動される。
【0130】
ある特定の実施形態において、第一プロモーターおよび第二プロモーターは、同じであ
る、または異なる。ある特定の実施形態において、第一プロモーターおよび第二プロモー
ターは、両方とも後期プロモーターである。ある特定の実施形態において、後期プロモー
ターは、ｐＳＬである。
る、または異なる。ある特定の実施形態において、第一プロモーターおよび第二プロモー
ターは、両方とも後期プロモーターである。ある特定の実施形態において、後期プロモー
ターは、ｐＳＬである。
【0131】
ある特定の実施形態において、第三プロモーターおよび第四プロモーターは、同じであ
る、または異なる。ある特定の実施形態において、第三および第四は、両方とも初期およ
び後期プロモーターである。ある特定の実施形態において、初期および後期プロモーター
は、ｐＳＥ／Ｌである。
る、または異なる。ある特定の実施形態において、第三および第四は、両方とも初期およ
び後期プロモーターである。ある特定の実施形態において、初期および後期プロモーター
は、ｐＳＥ／Ｌである。
【0132】
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、センス鎖の５’から
３’の方向において、インフレームで以下の要素：ＣＤ１３７に結合する抗体の軽鎖をコ
ードするポリヌクレオチド ― 第一初期および後期プロモーター ― 第二初期および
後期プロモーター ― ＣＤ１３７に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
― ＰＤ－１に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド ― 第一後期プロ
モーター ― 第二後期プロモーター ― ＰＤ－１に結合する抗体の軽鎖をコードする
ポリヌクレオチド、を含む。
３’の方向において、インフレームで以下の要素：ＣＤ１３７に結合する抗体の軽鎖をコ
ードするポリヌクレオチド ― 第一初期および後期プロモーター ― 第二初期および
後期プロモーター ― ＣＤ１３７に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
― ＰＤ－１に結合する抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド ― 第一後期プロ
モーター ― 第二後期プロモーター ― ＰＤ－１に結合する抗体の軽鎖をコードする
ポリヌクレオチド、を含む。
【0133】
ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドから発現される免疫チェック
ポイント阻害因子および第二異種ポリヌクレオチドから発現されるイムノアクティベータ
ーは、別々のタンパク質として発現される。換言すると、それらは、融合タンパク質とし
ては発現されず、お互いには接続されていない（共有結合的にも、リンカーによっても）
。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドから発現される免疫チェック
ポイント阻害因子は、いかなる他のタンパク質とも融合されず、ならびに第二異種ポリヌ
クレオチドから発現されるイムノアクティベーターは、いかなる他のタンパク質とも融合
されない。
ポイント阻害因子および第二異種ポリヌクレオチドから発現されるイムノアクティベータ
ーは、別々のタンパク質として発現される。換言すると、それらは、融合タンパク質とし
ては発現されず、お互いには接続されていない（共有結合的にも、リンカーによっても）
。ある特定の実施形態において、第一異種ポリヌクレオチドから発現される免疫チェック
ポイント阻害因子は、いかなる他のタンパク質とも融合されず、ならびに第二異種ポリヌ
クレオチドから発現されるイムノアクティベーターは、いかなる他のタンパク質とも融合
されない。
【0134】
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、第一異種ポリヌクレ
オチドおよび第二異種ポリヌクレオチドを除いて、免疫チェックポイント阻害因子または
イムノアクティベーターをコードするいかなる他の異種ポリヌクレオチドをも含まない。
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、第一異種ポリヌクレオ
チドおよび第二異種ポリヌクレオチドを除いて、異種ポリヌクレオチドをコードするいか
なる他のタンパク質をも含まない。
オチドおよび第二異種ポリヌクレオチドを除いて、免疫チェックポイント阻害因子または
イムノアクティベーターをコードするいかなる他の異種ポリヌクレオチドをも含まない。
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、第一異種ポリヌクレオ
チドおよび第二異種ポリヌクレオチドを除いて、異種ポリヌクレオチドをコードするいか
なる他のタンパク質をも含まない。
【0135】
医薬組成物
別の態様において、本開示は、本開示において説明される改変された腫瘍溶解性ウイル
スと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
別の態様において、本開示は、本開示において説明される改変された腫瘍溶解性ウイル
スと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【0136】
用語「薬学的に許容される」は、本明細書において使用される場合、十分に医学的な判
断の範囲内において、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは併発
症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触しての使用に対して好適である、合理的なベネフ
ィット／リスク比に見合った、化合物、材料、組成物、および／または投薬形態を意味す
る。ある特定の実施形態において、薬学的に許容される化合物、材料、組成物、および／
または投薬形態は、規制機関（例えば、米食品医薬品局、中国食品医薬品局、または欧州
医薬品庁など）によって承認されているもの、または動物、より詳細にはヒト、における
使用に対して、一般的に認定されている薬局方（例えば、米国薬局方、中国薬局方、また
は欧州薬局方など）にリストされているものを意味する。
断の範囲内において、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは併発
症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触しての使用に対して好適である、合理的なベネフ
ィット／リスク比に見合った、化合物、材料、組成物、および／または投薬形態を意味す
る。ある特定の実施形態において、薬学的に許容される化合物、材料、組成物、および／
または投薬形態は、規制機関（例えば、米食品医薬品局、中国食品医薬品局、または欧州
医薬品庁など）によって承認されているもの、または動物、より詳細にはヒト、における
使用に対して、一般的に認定されている薬局方（例えば、米国薬局方、中国薬局方、また
は欧州薬局方など）にリストされているものを意味する。
【0137】
本発明の医薬組成物における使用のための薬学的に許容される担体は、これらに限定さ
れるわけではないが、例えば、薬学的に許容される液体、ゲル、または固体担体、水性ビ
ヒクル（例えば、塩化ナトリウム注射液、リンガー液、等張ブドウ糖注射液、滅菌水注射
液、またはグルコースおよび乳酸塩によるリンガー液など）、非水性ビヒクル（例えば、
野菜起源の不揮発性油、綿実油、トウモロコシ油、胡麻油、または落花生油など）、抗微
生物剤、等張剤（例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖など）、緩衝液（例えば、リン
酸塩緩衝液またはクエン酸塩緩衝液など）、酸化防止剤（例えば、重硫酸ナトリウムなど
）、麻酔薬（例えば、塩酸プロカインなど）、懸濁化剤／分配剤（例えば、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはポリビニルピ
ロリドンなど）、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥ
ＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）など）、乳化剤（例えば、ポリソルベート８０（Ｔ
ｗｅｅｎ－８０）など）、希釈剤、助剤、賦形剤、または非毒性補助剤、当技術分野にお
いて既知の他の成分、またはそれらの様々な組み合わせを含み得る。好適な成分は、例え
ば、充填剤、結合剤、崩壊剤、緩衝液、防腐剤、潤滑剤、風味剤、増粘剤、着色剤、また
は乳化剤を含み得る。
れるわけではないが、例えば、薬学的に許容される液体、ゲル、または固体担体、水性ビ
ヒクル（例えば、塩化ナトリウム注射液、リンガー液、等張ブドウ糖注射液、滅菌水注射
液、またはグルコースおよび乳酸塩によるリンガー液など）、非水性ビヒクル（例えば、
野菜起源の不揮発性油、綿実油、トウモロコシ油、胡麻油、または落花生油など）、抗微
生物剤、等張剤（例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖など）、緩衝液（例えば、リン
酸塩緩衝液またはクエン酸塩緩衝液など）、酸化防止剤（例えば、重硫酸ナトリウムなど
）、麻酔薬（例えば、塩酸プロカインなど）、懸濁化剤／分配剤（例えば、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはポリビニルピ
ロリドンなど）、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥ
ＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）など）、乳化剤（例えば、ポリソルベート８０（Ｔ
ｗｅｅｎ－８０）など）、希釈剤、助剤、賦形剤、または非毒性補助剤、当技術分野にお
いて既知の他の成分、またはそれらの様々な組み合わせを含み得る。好適な成分は、例え
ば、充填剤、結合剤、崩壊剤、緩衝液、防腐剤、潤滑剤、風味剤、増粘剤、着色剤、また
は乳化剤を含み得る。
【0138】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、経口製剤である。経口製剤としては、こ
れらに限定されるわけではないが、カプセル剤、カシェ剤、丸薬、錠剤、トローチ剤（味
覚基剤としては、通常、ショ糖およびアカシアまたはトラガント）、粉末剤、粒剤、また
は水性もしくは非水性の溶液剤もしくは懸濁剤、または油中水エマルションもしくは水中
油エマルション、またはエリキシル剤またはシロップ剤、または菓子錠剤（不活性基剤と
しては、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、あるいはショ糖またはアカシアなど）、お
よび／またはうがい薬およびその類似物が挙げられる。
れらに限定されるわけではないが、カプセル剤、カシェ剤、丸薬、錠剤、トローチ剤（味
覚基剤としては、通常、ショ糖およびアカシアまたはトラガント）、粉末剤、粒剤、また
は水性もしくは非水性の溶液剤もしくは懸濁剤、または油中水エマルションもしくは水中
油エマルション、またはエリキシル剤またはシロップ剤、または菓子錠剤（不活性基剤と
しては、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、あるいはショ糖またはアカシアなど）、お
よび／またはうがい薬およびその類似物が挙げられる。
【0139】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、無菌の水溶液、分散液、懸濁液、または
乳濁液などが挙げられる、注射製剤であり得る。全ての場合において、注射製剤は、無菌
でなければならず、かつ注射を容易にするために液体でなければならない。製造および貯
蔵の条件下において安定でなければならず、かつ微生物（例えば、細菌および菌類など）
の感染に対して抵抗性でなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオー
ル（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール
など）、ならびにそれらの好適な混合物および／または植物油などを含む、溶媒または分
散媒であり得る。注射製剤は、適切な流動性を維持しなければならず、それは、様々な方
法、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、界面活性剤の使用など、において維持
され得る。抗微生物汚染は、様々な抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブ
タノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）の添加によって達成することが
できる。
乳濁液などが挙げられる、注射製剤であり得る。全ての場合において、注射製剤は、無菌
でなければならず、かつ注射を容易にするために液体でなければならない。製造および貯
蔵の条件下において安定でなければならず、かつ微生物（例えば、細菌および菌類など）
の感染に対して抵抗性でなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオー
ル（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール
など）、ならびにそれらの好適な混合物および／または植物油などを含む、溶媒または分
散媒であり得る。注射製剤は、適切な流動性を維持しなければならず、それは、様々な方
法、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、界面活性剤の使用など、において維持
され得る。抗微生物汚染は、様々な抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブ
タノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）の添加によって達成することが
できる。
【0140】
ある特定の実施形態において、単位用量の非経口製剤は、アンプル、バイアル瓶、また
は針を伴った注射器にパッケージされる。当技術分野において既知であり実施されている
ように、非経口投与のための全ての調製物は、無菌でなければならず、発熱性であっては
ならない。
は針を伴った注射器にパッケージされる。当技術分野において既知であり実施されている
ように、非経口投与のための全ての調製物は、無菌でなければならず、発熱性であっては
ならない。
【0141】
処置方法
別の態様において、本開示は、有効量の本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは
本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、腫瘍を処置する方法を提供する。
別の態様において、本開示は、有効量の本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは
本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、腫瘍を処置する方法を提供する。
【0142】
用語「対象」は、本明細書において使用される場合、ヒトまたは非ヒト動物を意味する
。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物を包含する。「対
象」は、家畜動物（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ニワトリ、ウサギ、またはウマ）、また
は齧歯動物（例えば、ラットまたはマウス）、または霊長類（例えば、ゴリラまたはサル
）、または飼育動物（例えば、イヌまたはネコ）でもあり得る。「対象」は、雄または雌
であり得、さらに異なる年齢でもあり得る。ある特定の実施形態において、対象は、ヒト
である。ヒト「対象」は、コーカサス人、アフリカ人、アジア人、シュメール人、または
他の人種、あるいは異なる人種のハイブリッドであり得る。ヒト「対象」は、年配者、成
人、ティーンエイジャー、小児、または幼児であり得る。
。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物を包含する。「対
象」は、家畜動物（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ニワトリ、ウサギ、またはウマ）、また
は齧歯動物（例えば、ラットまたはマウス）、または霊長類（例えば、ゴリラまたはサル
）、または飼育動物（例えば、イヌまたはネコ）でもあり得る。「対象」は、雄または雌
であり得、さらに異なる年齢でもあり得る。ある特定の実施形態において、対象は、ヒト
である。ヒト「対象」は、コーカサス人、アフリカ人、アジア人、シュメール人、または
他の人種、あるいは異なる人種のハイブリッドであり得る。ヒト「対象」は、年配者、成
人、ティーンエイジャー、小児、または幼児であり得る。
【0143】
用語「腫瘍」は、本明細書において使用される場合、腫瘍性または悪性の細胞成長、増
殖、または転移によって媒介される任意の医学的状態を意味し、ならびに、固形腫瘍およ
び非固形腫瘍、例えば、白血病など、の両方を包含する。本開示において、「腫瘍」は、
用語「癌」、「悪性腫瘍」、「過増殖」、および「新生物」と相互互換的に使用される。
用語「腫瘍細胞」は、明記されない限り、用語「癌細胞」、「悪性細胞」、「過増殖細胞
」、および「新生細胞」と相互互換可能である。ある特定の実施形態において、腫瘍は、
頭頚部腫瘍、乳房腫瘍、直腸結腸腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腺癌、胆嚢および胆管腫瘍、卵巣
腫瘍、子宮頚部腫瘍、小細胞肺腫瘍、非小細胞肺腫瘍、腎細胞癌種、膀胱腫瘍、前立腺腫
瘍、骨腫瘍、中皮腫、脳腫瘍、軟部組織肉腫、子宮腫瘍、甲状腺腫瘍、上咽頭癌、および
黒色腫からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、腫瘍は固形腫瘍である
。ある特定の実施形態において、腫瘍は、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌種、ホジキン
リンパ腫、頭頚部の扁平上皮癌、膀胱癌、結直腸癌、または肝細胞癌である。ある特定の
実施形態において、腫瘍は、以前の治療（例えば、腫瘍溶解性ウイルス、免疫チェックポ
イント阻害因子、および／またはイムノアクティベーターの別々の投与）に対して難治性
であった。
殖、または転移によって媒介される任意の医学的状態を意味し、ならびに、固形腫瘍およ
び非固形腫瘍、例えば、白血病など、の両方を包含する。本開示において、「腫瘍」は、
用語「癌」、「悪性腫瘍」、「過増殖」、および「新生物」と相互互換的に使用される。
用語「腫瘍細胞」は、明記されない限り、用語「癌細胞」、「悪性細胞」、「過増殖細胞
」、および「新生細胞」と相互互換可能である。ある特定の実施形態において、腫瘍は、
頭頚部腫瘍、乳房腫瘍、直腸結腸腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腺癌、胆嚢および胆管腫瘍、卵巣
腫瘍、子宮頚部腫瘍、小細胞肺腫瘍、非小細胞肺腫瘍、腎細胞癌種、膀胱腫瘍、前立腺腫
瘍、骨腫瘍、中皮腫、脳腫瘍、軟部組織肉腫、子宮腫瘍、甲状腺腫瘍、上咽頭癌、および
黒色腫からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、腫瘍は固形腫瘍である
。ある特定の実施形態において、腫瘍は、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌種、ホジキン
リンパ腫、頭頚部の扁平上皮癌、膀胱癌、結直腸癌、または肝細胞癌である。ある特定の
実施形態において、腫瘍は、以前の治療（例えば、腫瘍溶解性ウイルス、免疫チェックポ
イント阻害因子、および／またはイムノアクティベーターの別々の投与）に対して難治性
であった。
【0144】
状態を「処置すること」または状態の「処置」なる用語は、本明細書において使用され
る場合、状態を予防または軽減すること、状態の発症または進行速度を鈍化すること、状
態が進行するリスクを減らすこと、状態に関連する症状の進行を予防することまたは遅延
させること、状態に関連する症状を減じることまたは終わらせること、状態の完全なまた
は部分的な改善を生じさせること、状態を治療すること、あるいはそれらのいくつかの組
み合わせ、を包含する。腫瘍に関連する場合、「処置すること」または「処置」は、新生
細胞または悪性細胞の成長、増殖、または転移を阻害することまたは鈍化させること、新
生細胞または悪性細胞の成長、増殖、または転移の進行を予防することまたは遅延させる
こと、あるいはそれらのいくつかの組み合わせを意味し得る。腫瘍に関連する場合、「処
置すること」または「処置」は、腫瘍の全てまたは一部を根絶させること、腫瘍の成長お
よび転移を阻害することまたは鈍化させること、腫瘍の進行を予防することまたは遅延さ
せること、あるいはそれらのいくつかの組み合わせを包含する。
る場合、状態を予防または軽減すること、状態の発症または進行速度を鈍化すること、状
態が進行するリスクを減らすこと、状態に関連する症状の進行を予防することまたは遅延
させること、状態に関連する症状を減じることまたは終わらせること、状態の完全なまた
は部分的な改善を生じさせること、状態を治療すること、あるいはそれらのいくつかの組
み合わせ、を包含する。腫瘍に関連する場合、「処置すること」または「処置」は、新生
細胞または悪性細胞の成長、増殖、または転移を阻害することまたは鈍化させること、新
生細胞または悪性細胞の成長、増殖、または転移の進行を予防することまたは遅延させる
こと、あるいはそれらのいくつかの組み合わせを意味し得る。腫瘍に関連する場合、「処
置すること」または「処置」は、腫瘍の全てまたは一部を根絶させること、腫瘍の成長お
よび転移を阻害することまたは鈍化させること、腫瘍の進行を予防することまたは遅延さ
せること、あるいはそれらのいくつかの組み合わせを包含する。
【0145】
改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび医薬組成物は、当技術分野において既知の任意の
好適な経路、例えば、これらに限定されるわけではないが、非経口、経口、経腸、頬側、
経鼻、局所、経直腸、経膣、経粘膜、上皮、経皮、真皮、点眼、経肺、および皮下投与経
路を介して投与され得る。ある特定の実施形態において、投与の経路は、局所である。あ
る特定の実施形態において、投与の経路は、腫瘍内注入である。
好適な経路、例えば、これらに限定されるわけではないが、非経口、経口、経腸、頬側、
経鼻、局所、経直腸、経膣、経粘膜、上皮、経皮、真皮、点眼、経肺、および皮下投与経
路を介して投与され得る。ある特定の実施形態において、投与の経路は、局所である。あ
る特定の実施形態において、投与の経路は、腫瘍内注入である。
【0146】
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび医薬組成物は、治
療有効投与量において投与される。用語「治療有効投与量」は、本明細書において使用さ
れる場合、対象の疾患または症状を改善または排除することができる薬物の量、または疾
患または症状の発生を予防的に阻害または予防することができる薬物の量を意味する。治
療有効量は、対象における１つまたは複数の疾患または症状をある特定の程度にまで改善
する薬物の量；疾患または症状の原因に関連する１つまたは複数の生理学的または生化学
的パラメーターを部分的にまたは完全に正常な状態に回復することができる薬物の量；お
よび／または疾患または症状が生じる可能性を減じることができる薬物の量であり得る。
療有効投与量において投与される。用語「治療有効投与量」は、本明細書において使用さ
れる場合、対象の疾患または症状を改善または排除することができる薬物の量、または疾
患または症状の発生を予防的に阻害または予防することができる薬物の量を意味する。治
療有効量は、対象における１つまたは複数の疾患または症状をある特定の程度にまで改善
する薬物の量；疾患または症状の原因に関連する１つまたは複数の生理学的または生化学
的パラメーターを部分的にまたは完全に正常な状態に回復することができる薬物の量；お
よび／または疾患または症状が生じる可能性を減じることができる薬物の量であり得る。
【0147】
改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび医薬組成物の治療有効投与量は、当技術分野にお
いて既知の様々な要因、例えば、体重、年齢、既存の医療状態、現在受けている治療、対
象の健康状態、ならびに薬物相互作用の強度、アレルギー性、高アレルギー性および副作
用、ならびに投与の経路、ならびに疾患の進行の程度、などに依存する。当業者（例えば
、医師または獣医）は、これらのおよび他の状態または要件に従って投与量を減少または
増加させ得る。
いて既知の様々な要因、例えば、体重、年齢、既存の医療状態、現在受けている治療、対
象の健康状態、ならびに薬物相互作用の強度、アレルギー性、高アレルギー性および副作
用、ならびに投与の経路、ならびに疾患の進行の程度、などに依存する。当業者（例えば
、医師または獣医）は、これらのおよび他の状態または要件に従って投与量を減少または
増加させ得る。
【0148】
ある特定の実施形態において、改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび医薬組成物は、約
１０４ＰＦＵから約１０１４ＰＦＵ（例えば、約１０４ＰＦＵ、約２×１０４ＰＦＵ、約
５×１０４ＰＦＵ、約１０５ＰＦＵ、約２×１０５ＰＦＵ、約５×１０５ＰＦＵ、約１０
６ＰＦＵ、約２×１０６ＰＦＵ、約５×１０６ＰＦＵ、約１０７ＰＦＵ、約２×１０７Ｐ
ＦＵ、約５×１０７ＰＦＵ、約１０８ＰＦＵ、約２×１０８ＰＦＵ、約５×１０８ＰＦＵ
、約１０９ＰＦＵ、約２×１０９ＰＦＵ、約５×１０９ＰＦＵ、約１０１０ＰＦＵ、約２
×１０１０ＰＦＵ、約５×１０１０ＰＦＵ、約１０１１ＰＦＵ、約２×１０１１ＰＦＵ、
約５×１０１１ＰＦＵ、約１０１２ＰＦＵ、約２×１０１２ＰＦＵ、約５×１０１２ＰＦ
Ｕ、約１０１３ＰＦＵ、約２×１０１３ＰＦＵ、約５×１０１３ＰＦＵ、または約１０１
４ＰＦＵ）の治療有効投与量において投与され得る。ある特定のこれらの実施形態におい
て、改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび医薬組成物は、約１０１１ＰＦＵ以下の投与量
において投与される。ある特定のこれらの実施形態において、投与量は、５×１０１０Ｐ
ＦＵ以下、２×１０１０ＰＦＵ以下、５×１０９ＰＦＵ以下、４×１０９ＰＦＵ以下、３
×１０９ＰＦＵ以下、２×１０９ＰＦＵ以下、または１０９ＰＦＵ以下である。特定の投
与量は分割することができ、ある間隔で分割された複数回、例えば、１日１回、１日２回
以上、１か月に２回以上、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１か月に１回、
または２か月以上に１回など、において投与することができる。ある特定の実施形態にお
いて、投与される投与量は、処置の過程において変わり得る。例えば、ある特定の実施形
態において、最初に投与される投与量は、その後に投与される投与量よりも多くすること
ができる。ある特定の実施形態において、投与される投与量は、投与対象の反応に応じて
、処置の過程において調節される。
１０４ＰＦＵから約１０１４ＰＦＵ（例えば、約１０４ＰＦＵ、約２×１０４ＰＦＵ、約
５×１０４ＰＦＵ、約１０５ＰＦＵ、約２×１０５ＰＦＵ、約５×１０５ＰＦＵ、約１０
６ＰＦＵ、約２×１０６ＰＦＵ、約５×１０６ＰＦＵ、約１０７ＰＦＵ、約２×１０７Ｐ
ＦＵ、約５×１０７ＰＦＵ、約１０８ＰＦＵ、約２×１０８ＰＦＵ、約５×１０８ＰＦＵ
、約１０９ＰＦＵ、約２×１０９ＰＦＵ、約５×１０９ＰＦＵ、約１０１０ＰＦＵ、約２
×１０１０ＰＦＵ、約５×１０１０ＰＦＵ、約１０１１ＰＦＵ、約２×１０１１ＰＦＵ、
約５×１０１１ＰＦＵ、約１０１２ＰＦＵ、約２×１０１２ＰＦＵ、約５×１０１２ＰＦ
Ｕ、約１０１３ＰＦＵ、約２×１０１３ＰＦＵ、約５×１０１３ＰＦＵ、または約１０１
４ＰＦＵ）の治療有効投与量において投与され得る。ある特定のこれらの実施形態におい
て、改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび医薬組成物は、約１０１１ＰＦＵ以下の投与量
において投与される。ある特定のこれらの実施形態において、投与量は、５×１０１０Ｐ
ＦＵ以下、２×１０１０ＰＦＵ以下、５×１０９ＰＦＵ以下、４×１０９ＰＦＵ以下、３
×１０９ＰＦＵ以下、２×１０９ＰＦＵ以下、または１０９ＰＦＵ以下である。特定の投
与量は分割することができ、ある間隔で分割された複数回、例えば、１日１回、１日２回
以上、１か月に２回以上、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１か月に１回、
または２か月以上に１回など、において投与することができる。ある特定の実施形態にお
いて、投与される投与量は、処置の過程において変わり得る。例えば、ある特定の実施形
態において、最初に投与される投与量は、その後に投与される投与量よりも多くすること
ができる。ある特定の実施形態において、投与される投与量は、投与対象の反応に応じて
、処置の過程において調節される。
【0149】
用語「ＰＦＵ」は、本明細書において使用される場合、プラーク形成単位を意味し、そ
れは、プラークを形成することができる粒子の数の指標である。
れは、プラークを形成することができる粒子の数の指標である。
【0150】
投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節してもよい
。例えば、１回用量を投与してもよく、または複数に分割された用量を、時間経過におい
て投与してもよい。
。例えば、１回用量を投与してもよく、または複数に分割された用量を、時間経過におい
て投与してもよい。
【0151】
組み合わせ
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１種または複数種の他の薬物と組み合わ
せて使用してもよい。ある特定の実施形態において、組成物は、少なくとも１種の他の薬
物を含む。
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１種または複数種の他の薬物と組み合わ
せて使用してもよい。ある特定の実施形態において、組成物は、少なくとも１種の他の薬
物を含む。
【0152】
ある特定の実施形態において、他の薬物は、抗腫瘍剤である。腫瘍に対して活性である
ことが知られている任意の薬剤は、抗腫瘍剤として使用してもよい。ある特定の実施形態
において、抗腫瘍剤は、化学薬剤、ポリヌクレオチド、ペプチド、タンパク質、またはそ
れらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
ことが知られている任意の薬剤は、抗腫瘍剤として使用してもよい。ある特定の実施形態
において、抗腫瘍剤は、化学薬剤、ポリヌクレオチド、ペプチド、タンパク質、またはそ
れらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【0153】
ある特定の実施形態において、抗腫瘍剤は、化学薬剤である。抗腫瘍化学薬剤の具体例
としては、これらに限定されるわけではないが、マイトマイシンＣ、ダウノルビシン、ド
キソルビシン、エトポシド、タモキシフェン、パクリタキセル、ビンクリスチン、および
ラパマイシンが挙げられる。
としては、これらに限定されるわけではないが、マイトマイシンＣ、ダウノルビシン、ド
キソルビシン、エトポシド、タモキシフェン、パクリタキセル、ビンクリスチン、および
ラパマイシンが挙げられる。
【0154】
ある特定の実施形態において、抗腫瘍剤は、ポリヌクレオチドである。抗腫瘍ポリヌク
レオチドの具体例としては、これらに限定されるわけではないが、アンチセンスオリゴヌ
クレオチド、例えば、ｂｃｌ－２アンチセンスオリゴヌクレオチド、クラステリンアンチ
センスオリゴヌクレオチド、およびｃ－ｍｙｃアンチセンスオリゴヌクレオチドなど、な
らびにＲＮＡ干渉ができるＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲ
ＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロ干渉ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられる）、例えば
、抗ＶＥＧＦ ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡなど、抗ｂｃｌ－２ ｓｉＲ
ＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡ、ならびに抗クローディン－３ ｓｉＲＮＡ、ｓｈ
ＲＮＡ、または、ｍｉＲＮＡが挙げられる。
レオチドの具体例としては、これらに限定されるわけではないが、アンチセンスオリゴヌ
クレオチド、例えば、ｂｃｌ－２アンチセンスオリゴヌクレオチド、クラステリンアンチ
センスオリゴヌクレオチド、およびｃ－ｍｙｃアンチセンスオリゴヌクレオチドなど、な
らびにＲＮＡ干渉ができるＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲ
ＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロ干渉ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられる）、例えば
、抗ＶＥＧＦ ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡなど、抗ｂｃｌ－２ ｓｉＲ
ＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡ、ならびに抗クローディン－３ ｓｉＲＮＡ、ｓｈ
ＲＮＡ、または、ｍｉＲＮＡが挙げられる。
【0155】
ある特定の実施形態において、抗腫瘍剤は、ペプチドまたはタンパク質である。抗腫瘍
ペプチドまたはタンパク質の具体例としては、これらに限定されるわけではないが、抗体
、例えば、トラスツズマブ、リツキシマブ、エドレコロマブ、アレムツズマブ、ダクリズ
マブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、およびエドレコロマブなど、タン
パク質治療薬、例えば、エンドスタチン、アンギオスタチンＫ１－３、ロイプロリド、性
ホルモン結合性グロブリン、およびビクニンなど、が挙げられる。
ペプチドまたはタンパク質の具体例としては、これらに限定されるわけではないが、抗体
、例えば、トラスツズマブ、リツキシマブ、エドレコロマブ、アレムツズマブ、ダクリズ
マブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、およびエドレコロマブなど、タン
パク質治療薬、例えば、エンドスタチン、アンギオスタチンＫ１－３、ロイプロリド、性
ホルモン結合性グロブリン、およびビクニンなど、が挙げられる。
【0156】
医学的使用
別の態様において、本開示は、腫瘍を処置するための医薬の製造における、本開示の改
変された腫瘍溶解性ウイルスまたは本開示の医薬組成物の使用を提供する。
別の態様において、本開示は、腫瘍を処置するための医薬の製造における、本開示の改
変された腫瘍溶解性ウイルスまたは本開示の医薬組成物の使用を提供する。
【0157】
別の態様において、本開示は、腫瘍の処置における使用のための、本開示の改変された
腫瘍溶解性ウイルスまたは本開示の医薬組成物を提供する。
腫瘍溶解性ウイルスまたは本開示の医薬組成物を提供する。
【実施例0158】
下記の実施例は、本開示の理解を支援するために詳細に説明され、いかなる点において
も、その後に続く特許請求の範囲において定義される本発明の範囲を制限すると解釈され
るべきではない。
も、その後に続く特許請求の範囲において定義される本発明の範囲を制限すると解釈され
るべきではない。
【0159】
［実施例１］ウイルス構築
出発材料のワクシニアウイルスのＷＲ株をＡＴＣＣ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ： Ｖ
Ｒ－１３５４）から得た。関与する同義遺伝子により、段階的な遺伝子組換え操作アプロ
ーチにおいてＷＲ－ＧＳ－６００を構築した。要するに、第一ステップでは、改変された
ｐＳＥＭ－１ベクター（Ｒｉｎｔｏｕｌ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）によってＷＲ Ｄ
ＮＡを組み換えることにより、ＴＫ遺伝子座にマーカー／選択遺伝子を挿入した。これは
、さらなる遺伝子操作のために、野生型の親との容易な区別を可能にする。その後、ＴＫ
を完全に欠失させて抗体配列を挿入するために、Ｊ１ＲおよびＪ３Ｒの隣接した配列を有
し、抗ヒトＰＤ－１（抗ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列および抗ヒトＰＤ－１をコードする
核酸配列を、それぞれ、図１５および１６に示す）および抗ヒト４－１ＢＢ（抗ヒト４－
１ＢＢのアミノ酸配列および抗ヒト４－１ＢＢをコードする核酸配列を、それぞれ、図１
７および１８に示す）をコードする組換えプラスミドを、ＷＲを感染させたＵ２ＯＳ細胞
にトランスフェクトした。図１は、ＷＲ－ＧＳ－６００におけるチミジンキナーゼ（ＴＫ
）欠失、抗ＰＤ－１抗体および抗４－１ＢＢ抗体挿入の構造を示しており、図３は、ＷＲ
－ＧＳ－６００を生成する組換えステップの概略図を示している。
出発材料のワクシニアウイルスのＷＲ株をＡＴＣＣ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ： Ｖ
Ｒ－１３５４）から得た。関与する同義遺伝子により、段階的な遺伝子組換え操作アプロ
ーチにおいてＷＲ－ＧＳ－６００を構築した。要するに、第一ステップでは、改変された
ｐＳＥＭ－１ベクター（Ｒｉｎｔｏｕｌ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）によってＷＲ Ｄ
ＮＡを組み換えることにより、ＴＫ遺伝子座にマーカー／選択遺伝子を挿入した。これは
、さらなる遺伝子操作のために、野生型の親との容易な区別を可能にする。その後、ＴＫ
を完全に欠失させて抗体配列を挿入するために、Ｊ１ＲおよびＪ３Ｒの隣接した配列を有
し、抗ヒトＰＤ－１（抗ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列および抗ヒトＰＤ－１をコードする
核酸配列を、それぞれ、図１５および１６に示す）および抗ヒト４－１ＢＢ（抗ヒト４－
１ＢＢのアミノ酸配列および抗ヒト４－１ＢＢをコードする核酸配列を、それぞれ、図１
７および１８に示す）をコードする組換えプラスミドを、ＷＲを感染させたＵ２ＯＳ細胞
にトランスフェクトした。図１は、ＷＲ－ＧＳ－６００におけるチミジンキナーゼ（ＴＫ
）欠失、抗ＰＤ－１抗体および抗４－１ＢＢ抗体挿入の構造を示しており、図３は、ＷＲ
－ＧＳ－６００を生成する組換えステップの概略図を示している。
【0160】
組換え反応を、特徴付けられたマスターワーキングセルバンクからのＵ２ＯＳ細胞を使
用して行った。Ｕ２ＯＳ細胞を使用して３ラウンドのプラーク精製を行い、ＨｅＬａ細胞
を使用して１ラウンド行った。その後、選択された最終プラークがクローナルであること
を確実にするために、０．６５μｍフィルターを使用した濾過ステップを組み入れた。詳
細な情報を下記の表１に記載する。
用して行った。Ｕ２ＯＳ細胞を使用して３ラウンドのプラーク精製を行い、ＨｅＬａ細胞
を使用して１ラウンド行った。その後、選択された最終プラークがクローナルであること
を確実にするために、０．６５μｍフィルターを使用した濾過ステップを組み入れた。詳
細な情報を下記の表１に記載する。
【0161】
【表1】
【0162】
さらなるプラーク精製の後、免疫蛍光およびフローサイトメトリーによって抗体発現を
モニターした。Ｕ２ＯＳおよびＨｅＬａ細胞を、別々に、模擬感染させるか（すなわち、
ウイルスを伴わないコントロール溶液によって感染させる）、抗体発現を有するコントロ
ールウイルスに感染させるか、ＷＲ－ＧＳ－６００の精製クローンに感染させた。
モニターした。Ｕ２ＯＳおよびＨｅＬａ細胞を、別々に、模擬感染させるか（すなわち、
ウイルスを伴わないコントロール溶液によって感染させる）、抗体発現を有するコントロ
ールウイルスに感染させるか、ＷＲ－ＧＳ－６００の精製クローンに感染させた。
【0163】
最後に、検証されたＤＮＡ配列と高レベルの抗体発現を有する唯一のクローンを、２つ
のローラーボトル（１７００ｃｍ２）において増殖させた。細胞をペレット化し、次いで
、ｐＨ９．０において１ｍＭＴｒｉｓに再懸濁させた。１ラウンドの凍結融解（－８０／
３７度）の後、混合物を再びペレット化した。上清を１２の極低温管に１ｍｌずつ分取し
た（プレＭａｓｔｅｒ Ｖｉｒｕｓ Ｂａｎｋ）。ペレット化した細胞を、ｐＨ９．０に
おいて３ｍｌの１ｍＭＴｒｉｓに再懸濁させ、凍結／融解のさらなるラウンドを行った。
ペレット化した後に上清を収集し、次いで、ベンゾナーゼ処理を終夜行い、スクロース精
製を行った。プレＭＶＢおよび精製したベンゾナーゼの力価を、Ｕ２ＯＳ細胞を使用して
特定した。力価は、合計５ｍＬのストックに対して１．０～２．１×１０９ＰＦＵ／ｍＬ
の範囲であることが見いだされ、それは、親ＷＲウイルスと同様である。
のローラーボトル（１７００ｃｍ２）において増殖させた。細胞をペレット化し、次いで
、ｐＨ９．０において１ｍＭＴｒｉｓに再懸濁させた。１ラウンドの凍結融解（－８０／
３７度）の後、混合物を再びペレット化した。上清を１２の極低温管に１ｍｌずつ分取し
た（プレＭａｓｔｅｒ Ｖｉｒｕｓ Ｂａｎｋ）。ペレット化した細胞を、ｐＨ９．０に
おいて３ｍｌの１ｍＭＴｒｉｓに再懸濁させ、凍結／融解のさらなるラウンドを行った。
ペレット化した後に上清を収集し、次いで、ベンゾナーゼ処理を終夜行い、スクロース精
製を行った。プレＭＶＢおよび精製したベンゾナーゼの力価を、Ｕ２ＯＳ細胞を使用して
特定した。力価は、合計５ｍＬのストックに対して１．０～２．１×１０９ＰＦＵ／ｍＬ
の範囲であることが見いだされ、それは、親ＷＲウイルスと同様である。
【0164】
抗ヒトＰＤ－１をコードする遺伝子および抗ヒト４－１ＢＢをコードする遺伝子のどち
らもＷＲ－ＧＳ－６００に挿入されていることを除いて、ＷＲ－ＧＳ－６００と同じプロ
トコルによって、ＷＲ－ＧＳ－６１０（抗ヒト４－１ＢＢをコードする遺伝子を挿入）お
よびＷＲ－ＧＳ－６２０（抗ヒトＰＤ－１をコードする遺伝子を挿入）を製造した。図２
は、ＷＲ－ＧＳ－６２０におけるＴＫ欠失および抗－４－１ＢＢ抗体挿入の構造を示して
おり、図４は、ＷＲ－ＧＳ－６２０に対する組換えステップの概略図を示している。
らもＷＲ－ＧＳ－６００に挿入されていることを除いて、ＷＲ－ＧＳ－６００と同じプロ
トコルによって、ＷＲ－ＧＳ－６１０（抗ヒト４－１ＢＢをコードする遺伝子を挿入）お
よびＷＲ－ＧＳ－６２０（抗ヒトＰＤ－１をコードする遺伝子を挿入）を製造した。図２
は、ＷＲ－ＧＳ－６２０におけるＴＫ欠失および抗－４－１ＢＢ抗体挿入の構造を示して
おり、図４は、ＷＲ－ＧＳ－６２０に対する組換えステップの概略図を示している。
【0165】
［実施例２］ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０のキ
ャラクタリゼーション
これらの新規のウイルスの遺伝子操作のプロセスの際、それらのゲノムの完全性および
タンパク質発現を、詳細にモニターした。
ャラクタリゼーション
これらの新規のウイルスの遺伝子操作のプロセスの際、それらのゲノムの完全性および
タンパク質発現を、詳細にモニターした。
【0166】
ＰＣＲ、配列決定、および制限消化
ウイルス調製物をベンゾナーゼエンドヌクレアーゼによって処理し、スクロースによっ
てペレット化し、その後にプロテイナーゼＫおよび界面活性剤処理を行い、次いでＤＮＡ
を抽出し、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール抽出を使用して回収し、エ
タノール沈殿を行うことで、精製されたスクロースクッションからウイルスのゲノムＤＮ
Ａを単離した。
ウイルス調製物をベンゾナーゼエンドヌクレアーゼによって処理し、スクロースによっ
てペレット化し、その後にプロテイナーゼＫおよび界面活性剤処理を行い、次いでＤＮＡ
を抽出し、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール抽出を使用して回収し、エ
タノール沈殿を行うことで、精製されたスクロースクッションからウイルスのゲノムＤＮ
Ａを単離した。
【0167】
ウイルスゲノムが、設計された抗体配列を含む予想された配列を有することを確実なも
のとするために、組換え領域内のものおよび遺伝子操作セクションの外側のものを含む、
一連のプライマーを設計した。ウイルス（ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、お
よびＷＲ－ＧＳ－６２０）の同一性を、ｑＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ）によって確認した。Ｐ
ＣＲに使用したプライマーを表２に示す。ウイルスゲノムにおけるプライマーの位置を図
５から７に示すが、ここで、ＰＣＲのバンドの予想されるサイズを図５から７に表す。Ｗ
Ｒ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０のゲノムＤＮＡのＰ
ＣＲ増幅の結果を図１４に示す。
のとするために、組換え領域内のものおよび遺伝子操作セクションの外側のものを含む、
一連のプライマーを設計した。ウイルス（ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、お
よびＷＲ－ＧＳ－６２０）の同一性を、ｑＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ）によって確認した。Ｐ
ＣＲに使用したプライマーを表２に示す。ウイルスゲノムにおけるプライマーの位置を図
５から７に示すが、ここで、ＰＣＲのバンドの予想されるサイズを図５から７に表す。Ｗ
Ｒ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０のゲノムＤＮＡのＰ
ＣＲ増幅の結果を図１４に示す。
【0168】
ＴＫ欠失も、サンガー配列決定法によって検証した。図８、９、１０は、抗体コード遺
伝子の挿入後における、ＷＲからの遺伝子変化を示している。ＷＲ－ＧＳ－６００におい
て抗ｈｕ４－１ＢＢおよび抗ｈｕＰＤ－１を発現するために設計されたＤＮＡ配列に対す
る、ＷＲ－ＧＳ－６００ウイルスゲノムのサンガー配列決定のアラインメントを実施した
。アラインメントは、ＷＲ－ＧＳ－６００のウイルスゲノムが設計されたＤＮＡ配列と同
一であることを示した。
伝子の挿入後における、ＷＲからの遺伝子変化を示している。ＷＲ－ＧＳ－６００におい
て抗ｈｕ４－１ＢＢおよび抗ｈｕＰＤ－１を発現するために設計されたＤＮＡ配列に対す
る、ＷＲ－ＧＳ－６００ウイルスゲノムのサンガー配列決定のアラインメントを実施した
。アラインメントは、ＷＲ－ＧＳ－６００のウイルスゲノムが設計されたＤＮＡ配列と同
一であることを示した。
【0169】
【表2】
【0170】
制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩは、ＷＲのＴＫ領域の周りを切断し、５００４ｂｐのバンドを
生じさせた。ＴＫが欠失して、抗ｈｕＰＤ－１および／または抗ｈｕ４－１ＢＢ抗体がＷ
Ｒ－ＧＳ－６００に挿入される場合、２つの余分なＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素認識部位が導
入され、それらは、それぞれ１６３８ｂｐ、２５４８ｂｐ、および４６６６ｂｐに３つの
バンドを生じる。ＷＲ－ＧＳ－６２０では、野生型ＷＲの５００４ｂｐのバンドは、１９
２２ｂｐおよび４６６６ｂｐの２つのバンドに置き換えられた。制限酵素消化パターンに
おけるこれらの違いは、これらのウイルスの迅速な同定のために用いることができる。結
果を表３に示す。
生じさせた。ＴＫが欠失して、抗ｈｕＰＤ－１および／または抗ｈｕ４－１ＢＢ抗体がＷ
Ｒ－ＧＳ－６００に挿入される場合、２つの余分なＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素認識部位が導
入され、それらは、それぞれ１６３８ｂｐ、２５４８ｂｐ、および４６６６ｂｐに３つの
バンドを生じる。ＷＲ－ＧＳ－６２０では、野生型ＷＲの５００４ｂｐのバンドは、１９
２２ｂｐおよび４６６６ｂｐの２つのバンドに置き換えられた。制限酵素消化パターンに
おけるこれらの違いは、これらのウイルスの迅速な同定のために用いることができる。結
果を表３に示す。
【0171】
【表3(1)】
【0172】
免疫蛍光
ヒト抗体のトランスジェニック発現を、ヒトＩｇＧに対する免疫蛍光によって検証した
（図１１を参照されたい）。ウイルス感染Ｕ２ＯＳ細胞を染色するために、ＦＩＴＣコン
ジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，、Ｃａｔ ＃６２－８
４１１）を使用した。
ヒト抗体のトランスジェニック発現を、ヒトＩｇＧに対する免疫蛍光によって検証した
（図１１を参照されたい）。ウイルス感染Ｕ２ＯＳ細胞を染色するために、ＦＩＴＣコン
ジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，、Ｃａｔ ＃６２－８
４１１）を使用した。
【0173】
フローサイトメトリー分析
別々に、模擬感染させた、コントロールＷＲウイルス（ＷＲ－ｍＣｈｅｒｒｙ）を感染
させた、ＷＲ－ＧＳ－６００を感染させた、およびＷＲ－ＧＳ－６２０を感染させた、Ｈ
ｅＬａ細胞のフローサイトメトリー分析を行うことにより、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷ
Ｒ－ＧＳ－６２０を感染させた場合におけるヒト抗体の特異的発現を確認した。ウエスタ
ンブロットにおいて感染させた上清から検出されたヒトＩｇＧは、ヒト抗体の発現のさら
なる証拠を提供した。
別々に、模擬感染させた、コントロールＷＲウイルス（ＷＲ－ｍＣｈｅｒｒｙ）を感染
させた、ＷＲ－ＧＳ－６００を感染させた、およびＷＲ－ＧＳ－６２０を感染させた、Ｈ
ｅＬａ細胞のフローサイトメトリー分析を行うことにより、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷ
Ｒ－ＧＳ－６２０を感染させた場合におけるヒト抗体の特異的発現を確認した。ウエスタ
ンブロットにおいて感染させた上清から検出されたヒトＩｇＧは、ヒト抗体の発現のさら
なる証拠を提供した。
【0174】
ウエスタンブロット法
感染させた上清からヒトＩｇＧを検出するウエスタンブロットは、抗体発現のさらなる
証拠を提供した。図１２および１３は、ウエスタンブロットを使用することにより、細胞
溶解物および上清を使用した場合の組換えウイルス（ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－
６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０）による抗ＰＤ－１抗体および抗－４１－ＢＢ抗体の
発現を示している。
感染させた上清からヒトＩｇＧを検出するウエスタンブロットは、抗体発現のさらなる
証拠を提供した。図１２および１３は、ウエスタンブロットを使用することにより、細胞
溶解物および上清を使用した場合の組換えウイルス（ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－
６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０）による抗ＰＤ－１抗体および抗－４１－ＢＢ抗体の
発現を示している。
【0175】
ＰＤ－１結合ＥＬＩＳＡを使用する発現された抗ＰＤ－１抗体の機能的キャラクタリゼー
ション
組換えヒトＰＤ－１Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）を、
０．２ｍｇ／ｍｌまで、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むダルベッコのリ
ン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）に再懸濁させ、０．０３μｇ／ｍｌの最終濃度までＤＰＢＳ
で希釈する。Ｎｕｎｃ－Ｉｍｍｕｎｏ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを、ウェ
ルあたり０．１ｍＬにおいて組換えＰＤ－Ｌ１－Ｆｃキメラでコーティングし、非特異的
結合コントロールに対しては空のウェルのままで、４℃で終夜インキュベートする。コー
ティング溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液（ＤＰＢＳ中における０．０５％のＴｗｅ
ｅｎ－２０、各回において１ウェルあたり２００μＬ）で洗浄する。ブロッキング緩衝液
（５％の脱脂粉乳、ＤＰＢＳ中における０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、各回において１
ウェルあたり２００μＬ）を全てのウェルに加え、混合しながら４℃で１時間インキュベ
ートする。ブロッキング緩衝液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ＷＲ－ＧＳ
－６２０上清およびＷＲ－ＧＳ－６００上清をＤＰＢＳで段階希釈し、希釈した上清（ウ
ェルあたり１００μＬ）をプレートに加える。プレートを室温で１．５時間インキュベー
トする。抗体を含有する上清溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ホースラ
ディッシュペルオキシダーゼで標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２特異的Ｆ（ａ
ｂ’）２抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、Ｐ
Ａ）を、ＤＰＢＳで希釈し、ウェルあたり１００μＬをプレートに加える。プレートを室
温で１時間インキュベートし、洗浄緩衝液で洗浄する。ウェルあたり１００μＬのＳｕｒ
ｅＢｌｕｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆
Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ ゲイザースバーグ、ＭＤ）を加え、室温で２０分間インキュベー
トする。同量の２ＭのＨ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止させ、Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ３４０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖ
ｉｃｅｓ、サニーベル、ＣＡ）において４５０ｎｍの吸光度を読み取る。
ション
組換えヒトＰＤ－１Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）を、
０．２ｍｇ／ｍｌまで、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むダルベッコのリ
ン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）に再懸濁させ、０．０３μｇ／ｍｌの最終濃度までＤＰＢＳ
で希釈する。Ｎｕｎｃ－Ｉｍｍｕｎｏ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを、ウェ
ルあたり０．１ｍＬにおいて組換えＰＤ－Ｌ１－Ｆｃキメラでコーティングし、非特異的
結合コントロールに対しては空のウェルのままで、４℃で終夜インキュベートする。コー
ティング溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液（ＤＰＢＳ中における０．０５％のＴｗｅ
ｅｎ－２０、各回において１ウェルあたり２００μＬ）で洗浄する。ブロッキング緩衝液
（５％の脱脂粉乳、ＤＰＢＳ中における０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、各回において１
ウェルあたり２００μＬ）を全てのウェルに加え、混合しながら４℃で１時間インキュベ
ートする。ブロッキング緩衝液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ＷＲ－ＧＳ
－６２０上清およびＷＲ－ＧＳ－６００上清をＤＰＢＳで段階希釈し、希釈した上清（ウ
ェルあたり１００μＬ）をプレートに加える。プレートを室温で１．５時間インキュベー
トする。抗体を含有する上清溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ホースラ
ディッシュペルオキシダーゼで標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２特異的Ｆ（ａ
ｂ’）２抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、Ｐ
Ａ）を、ＤＰＢＳで希釈し、ウェルあたり１００μＬをプレートに加える。プレートを室
温で１時間インキュベートし、洗浄緩衝液で洗浄する。ウェルあたり１００μＬのＳｕｒ
ｅＢｌｕｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆
Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ ゲイザースバーグ、ＭＤ）を加え、室温で２０分間インキュベー
トする。同量の２ＭのＨ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止させ、Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ３４０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖ
ｉｃｅｓ、サニーベル、ＣＡ）において４５０ｎｍの吸光度を読み取る。
【0176】
分析のため、ＭＯＩ０．０５で４８時間感染させたＵ２ＯＳからの上清を使用し、その
結果を図１９に示す。これらの結果は、ＧＳ－６２０において発現した抗ＰＤ－１抗体が
、ＰＤ－１に特異的に結合することができ、その結合が濃度依存性であることを示唆して
いる。
結果を図１９に示す。これらの結果は、ＧＳ－６２０において発現した抗ＰＤ－１抗体が
、ＰＤ－１に特異的に結合することができ、その結合が濃度依存性であることを示唆して
いる。
【0177】
４－１ＢＢ結合ＥＬＩＳＡを使用する発現された抗－４－１ＢＢ抗体の機能的キャラクタ
リゼーション
ヒト４－１ＢＢＩｇＧ１Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）
を、０．２ｍｇ／ｍｌまで、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むダルベッコ
のリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）によって再懸濁させ、０．０３μｇ／ｍｌの最終濃度ま
でＤＰＢＳで希釈する。Ｎｕｎｃ－Ｉｍｍｕｎｏ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレー
トを、ウェルあたり０．１ｍＬにおいて組換え４－１ＢＢキメラでコーティングし、非特
異的結合コントロールに対しては空のウェルのままで、４℃で終夜インキュベートする。
４－１ＢＢ溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液（ＤＰＢＳ中における０．０５％のＴｗ
ｅｅｎ－２０）で洗浄する。ブロッキング緩衝液（５％の脱脂粉乳、ＤＰＢＳ中における
０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）を全てのウェルに加え、混合しながら４℃で１時間イン
キュベートする。ブロッキング緩衝液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ＷＲ
－ＧＳ－６１０およびＷＲ－ＧＳ－６００上清の段階希釈をＤＰＢＳにおいて調製し、希
釈した上清をプレートに加える。プレートを室温で１．５時間インキュベートする。抗体
を含有する上清溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ホースラディッシュペ
ルオキシダーゼで標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２特異的Ｆ（ａｂ’）２抗体
（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、ＰＡ）を、ＤＰ
ＢＳで希釈し、プレートに加える。プレートを室温で１時間インキュベートし、洗浄緩衝
液で洗浄する。ＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ｋｉｒ
ｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ ゲイザースバーグ、ＭＤ）を加え、室温で２０
分間インキュベートする。同量の２ＭのＨ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止させ
、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ３４０（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、サニーベル、ＣＡ）において４５０ｎｍの吸光度を読み取る
。
リゼーション
ヒト４－１ＢＢＩｇＧ１Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）
を、０．２ｍｇ／ｍｌまで、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むダルベッコ
のリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）によって再懸濁させ、０．０３μｇ／ｍｌの最終濃度ま
でＤＰＢＳで希釈する。Ｎｕｎｃ－Ｉｍｍｕｎｏ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレー
トを、ウェルあたり０．１ｍＬにおいて組換え４－１ＢＢキメラでコーティングし、非特
異的結合コントロールに対しては空のウェルのままで、４℃で終夜インキュベートする。
４－１ＢＢ溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液（ＤＰＢＳ中における０．０５％のＴｗ
ｅｅｎ－２０）で洗浄する。ブロッキング緩衝液（５％の脱脂粉乳、ＤＰＢＳ中における
０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）を全てのウェルに加え、混合しながら４℃で１時間イン
キュベートする。ブロッキング緩衝液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ＷＲ
－ＧＳ－６１０およびＷＲ－ＧＳ－６００上清の段階希釈をＤＰＢＳにおいて調製し、希
釈した上清をプレートに加える。プレートを室温で１．５時間インキュベートする。抗体
を含有する上清溶液を除去し、プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。ホースラディッシュペ
ルオキシダーゼで標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２特異的Ｆ（ａｂ’）２抗体
（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、ＰＡ）を、ＤＰ
ＢＳで希釈し、プレートに加える。プレートを室温で１時間インキュベートし、洗浄緩衝
液で洗浄する。ＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ｋｉｒ
ｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ ゲイザースバーグ、ＭＤ）を加え、室温で２０
分間インキュベートする。同量の２ＭのＨ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止させ
、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ３４０（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、サニーベル、ＣＡ）において４５０ｎｍの吸光度を読み取る
。
【0178】
分析のため、ＭＯＩ０．０５で４８時間感染させたＵ２ＯＳからの上清を使用し、結果
を図２０に示す。これらの結果は、ＧＳ－６００およびＧＳ－６１０において発現した抗
４－１ＢＢ抗体が、４－１ＢＢに特異的に結合することができ、その結合が濃度依存性で
あることを示唆している。
を図２０に示す。これらの結果は、ＧＳ－６００およびＧＳ－６１０において発現した抗
４－１ＢＢ抗体が、４－１ＢＢに特異的に結合することができ、その結合が濃度依存性で
あることを示唆している。
【0179】
上記の試験は、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０
が十分に構成されており、機能的な対応する抗体（ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ
－６２０に対する抗ＰＤ１抗体、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０に対する
抗－４－１ＢＢ抗体）が発現することができることを示している。
が十分に構成されており、機能的な対応する抗体（ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ
－６２０に対する抗ＰＤ１抗体、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０に対する
抗－４－１ＢＢ抗体）が発現することができることを示している。
【0180】
［実施例３］ＷＲ－ＧＳ－６１０およびＷＲ－ＧＳ－６２０組換えウイルスのインビボ研
究
以下の研究は、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０
組換えウイルスがマウスに安全かどうか、および組換えウイルスがマウスにおいて腫瘍を
標的化し腫瘍に入り込むことができるか否かを特定するために実施される。送達経路は、
静脈投与（ＩＶ）または腹腔内投与（ＩＰ）である。全ての動物実験は、地元の動物実験
委員会のガイドラインに従って実施した。
究
以下の研究は、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０
組換えウイルスがマウスに安全かどうか、および組換えウイルスがマウスにおいて腫瘍を
標的化し腫瘍に入り込むことができるか否かを特定するために実施される。送達経路は、
静脈投与（ＩＶ）または腹腔内投与（ＩＰ）である。全ての動物実験は、地元の動物実験
委員会のガイドラインに従って実施した。
【0181】
ＣＴ２６、ＭＣ３８、ＨＴ－２９、およびＨＣＴ－１１６細胞株でのＷＲ－ＧＳ－６００
、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０の細胞傷害性の測定（細胞致死データ
）
インビトロ細胞傷害性試験のために、結直腸癌細胞株ＣＴ２６－ＬａｃＺ（マウス）、
ＭＣ３８－Ｌｕｃ（マウス）、ＨＴ－２９－Ｌｕｃ（ヒト）およびＨＣＴ－１１６－Ｌｕ
ｃ（ヒト）を使用した。ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－
６２０を、それぞれ３つの異なるＭＯＩ、すなわち、０．０１ＭＯＩ（３Ｅ２ＰＦＵ）、
０．１ＭＯＩ（３Ｅ３ＰＦＵ）および１．０ＭＯＩ（３Ｅ４ＰＦＵ）となるように調製し
た。測定は、３つの異なる時点、すなわち、２４時間、４８時間、および７２時間の時点
において実施した。
、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０の細胞傷害性の測定（細胞致死データ
）
インビトロ細胞傷害性試験のために、結直腸癌細胞株ＣＴ２６－ＬａｃＺ（マウス）、
ＭＣ３８－Ｌｕｃ（マウス）、ＨＴ－２９－Ｌｕｃ（ヒト）およびＨＣＴ－１１６－Ｌｕ
ｃ（ヒト）を使用した。ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－
６２０を、それぞれ３つの異なるＭＯＩ、すなわち、０．０１ＭＯＩ（３Ｅ２ＰＦＵ）、
０．１ＭＯＩ（３Ｅ３ＰＦＵ）および１．０ＭＯＩ（３Ｅ４ＰＦＵ）となるように調製し
た。測定は、３つの異なる時点、すなわち、２４時間、４８時間、および７２時間の時点
において実施した。
【0182】
細胞調製：最初に、各細胞株を２つの１５ｃｍの組織培養皿に蒔き、７５～９０％の間
のサブコンフルエントとなるまでインキュベートした。細胞を洗浄し、当業者に既知の従
来法を用いてカウントした。９６ウェル平底プレートの各ウェルに、約３Ｅ４の細胞を蒔
いた。各細胞タイプは、９つの異なる実験条件のための９枚のプレートを必要とする。
のサブコンフルエントとなるまでインキュベートした。細胞を洗浄し、当業者に既知の従
来法を用いてカウントした。９６ウェル平底プレートの各ウェルに、約３Ｅ４の細胞を蒔
いた。各細胞タイプは、９つの異なる実験条件のための９枚のプレートを必要とする。
【0183】
ウイルス希釈調製：ウイルスを氷上において解凍し、その後、完全な解凍を確実にする
ために、３７℃の水浴において解凍した。解凍されたウイルスを、２回、その都度２０秒
間、最大スピードでボルテックスした。ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およ
びＷＲ－ＧＳ－６２０ウイルスを、３つの異なる濃度、すなわち、ＭＯＩ１．０、ＭＯＩ
０．１、およびＭＯＩ０．０１となるように調製した。５０μＬのウイルスを、対応する
ウェルに加え、その後、混合するために９６ウェル平底プレートを４象限において穏やか
に揺動した。プレートを、５％のＣＯ２を補充した３７℃においてインキュベートした。
ＭＯＩ１．０は、３Ｅ４ＰＦＵ／５０μＬ、または６００ＰＦＵ／μＬ、または６Ｅ５Ｐ
ＦＵ／ｍＬに対応する。ＭＯＩ０．１は、３Ｅ３ＰＦＵ／５０μＬ、または６０ＰＦＵ／
μＬ、または６Ｅ４ＰＦＵ／ｍＬに対応する。ＭＯＩ０．０１は、３Ｅ２ＰＦＵ／５０μ
Ｌ、または６ＰＦＵ／μＬ、または６Ｅ３ＰＦＵ／ｍＬに対応する。
ために、３７℃の水浴において解凍した。解凍されたウイルスを、２回、その都度２０秒
間、最大スピードでボルテックスした。ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およ
びＷＲ－ＧＳ－６２０ウイルスを、３つの異なる濃度、すなわち、ＭＯＩ１．０、ＭＯＩ
０．１、およびＭＯＩ０．０１となるように調製した。５０μＬのウイルスを、対応する
ウェルに加え、その後、混合するために９６ウェル平底プレートを４象限において穏やか
に揺動した。プレートを、５％のＣＯ２を補充した３７℃においてインキュベートした。
ＭＯＩ１．０は、３Ｅ４ＰＦＵ／５０μＬ、または６００ＰＦＵ／μＬ、または６Ｅ５Ｐ
ＦＵ／ｍＬに対応する。ＭＯＩ０．１は、３Ｅ３ＰＦＵ／５０μＬ、または６０ＰＦＵ／
μＬ、または６Ｅ４ＰＦＵ／ｍＬに対応する。ＭＯＩ０．０１は、３Ｅ２ＰＦＵ／５０μ
Ｌ、または６ＰＦＵ／μＬ、または６Ｅ３ＰＦＵ／ｍＬに対応する。
【0184】
当業者に既知の従来法を使用して、上記において言及した４つの細胞株におけるウイル
スの細胞傷害性を検出するために、アラマーブルー〔Alamar Blue〕を使用した各条件に
対して６回の反復試験によって細胞生存率を計算した。図２１～２３は、３つの異なる濃
度および３つの異なる時点において、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、
およびＷＲ－ＧＳ－６２０の処理による上述した４つの細胞タイプの細胞生存率に、有意
な差が無いことを示している。このことは、ワクシニアウイルス（ＷＲ）ゲノム中への、
チェックポイント阻害因子抗体のためのポリヌクレオチド配列の組み込みが、ウイルスの
細胞傷害性を変更しないことを示唆している。図２１～２３はさらに、ウイルスの処理に
関して、ＨＴ－２９およびＨＣＴ－１１６細胞株の細胞生存率が、ＣＴ－２６およびＭＣ
－３８よりも著しく減少したことを示しており、これは、ヒト癌細胞が、ウイルス感染お
よびウイルス殺傷性に対してより敏感であることを示している。
スの細胞傷害性を検出するために、アラマーブルー〔Alamar Blue〕を使用した各条件に
対して６回の反復試験によって細胞生存率を計算した。図２１～２３は、３つの異なる濃
度および３つの異なる時点において、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、
およびＷＲ－ＧＳ－６２０の処理による上述した４つの細胞タイプの細胞生存率に、有意
な差が無いことを示している。このことは、ワクシニアウイルス（ＷＲ）ゲノム中への、
チェックポイント阻害因子抗体のためのポリヌクレオチド配列の組み込みが、ウイルスの
細胞傷害性を変更しないことを示唆している。図２１～２３はさらに、ウイルスの処理に
関して、ＨＴ－２９およびＨＣＴ－１１６細胞株の細胞生存率が、ＣＴ－２６およびＭＣ
－３８よりも著しく減少したことを示しており、これは、ヒト癌細胞が、ウイルス感染お
よびウイルス殺傷性に対してより敏感であることを示している。
【0185】
ウイルスベクターの生体内分布の測定
組織のホモジナイズ：
５つの異なる群における２５Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）を一度に
１匹犠牲にした。消毒スプレーの後、マウスを開腹し、そこから、腫瘍、肺、脾臓、肝臓
、脳、または卵巣のいずれかの５０～１００ｍｇを切除した。残りの組織は、ＯＣＴによ
って瞬間凍結させた。切除した組織を秤量し、２．０ｍＬのエッペンチューブに入れた。
組織試料を－８０℃で終夜凍結させた。翌日、当業者に既知の方法において、組織試料を
ホモジナイズした。簡潔には、２つのオートクレーブ処理した５ｍｍのＴｉｓｓｕｅＬｙ
ｓｅｒビーズを各チューブに分注した。合計で４８本のチューブをＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅ
ｒに入れた。２８Ｈｚにおいて１分間、ホモジナイズを実施した。この後、アダプターの
差し込みを１８０°反転させ、一様なホモジナイズを達成するためにさらに１分間、均質
化を行った。この後、５００μＬのＤＭＥＭを各試料に加えた。チューブを、３５００ｇ
において２分間遠心分離処理した。上清を１．５ｍＬのエッペンチューブに移し、力価測
定まで－８０℃において貯蔵した。
組織のホモジナイズ：
５つの異なる群における２５Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）を一度に
１匹犠牲にした。消毒スプレーの後、マウスを開腹し、そこから、腫瘍、肺、脾臓、肝臓
、脳、または卵巣のいずれかの５０～１００ｍｇを切除した。残りの組織は、ＯＣＴによ
って瞬間凍結させた。切除した組織を秤量し、２．０ｍＬのエッペンチューブに入れた。
組織試料を－８０℃で終夜凍結させた。翌日、当業者に既知の方法において、組織試料を
ホモジナイズした。簡潔には、２つのオートクレーブ処理した５ｍｍのＴｉｓｓｕｅＬｙ
ｓｅｒビーズを各チューブに分注した。合計で４８本のチューブをＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅ
ｒに入れた。２８Ｈｚにおいて１分間、ホモジナイズを実施した。この後、アダプターの
差し込みを１８０°反転させ、一様なホモジナイズを達成するためにさらに１分間、均質
化を行った。この後、５００μＬのＤＭＥＭを各試料に加えた。チューブを、３５００ｇ
において２分間遠心分離処理した。上清を１．５ｍＬのエッペンチューブに移し、力価測
定まで－８０℃において貯蔵した。
【0186】
力価測定のための２４ウェルフォーマット：
ウイルス価測定のために、Ｕ２ＯＳ細胞を使用し、ならびに１０Ｅ２ ＰＦＵ／ｍＬ
ＪＸ５９４ストック（ａ）および３１．０ ＰＦＵ／ｍＬ ＪＸ５９４ストック（ｂ）を
調製して、ポジティブコントロールとして使用した。
ウイルス価測定のために、Ｕ２ＯＳ細胞を使用し、ならびに１０Ｅ２ ＰＦＵ／ｍＬ
ＪＸ５９４ストック（ａ）および３１．０ ＰＦＵ／ｍＬ ＪＸ５９４ストック（ｂ）を
調製して、ポジティブコントロールとして使用した。
【0187】
５種の組織、すなわち、脳（Ｂ）、肝臓（Ｖ）、肺（Ｌ）、卵巣（Ｏ）、および脾臓（
Ｓ）に対して、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０の
各ウイルスの３つの濃度を調製した：（１）感染のための純粋な１５０μＬ；（２）２１
２μＬのＤＭＥＭ中に（１）からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染のための１５０μ
Ｌを取る；および（３）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（２）からの９８μＬを入れ、ミック
スし、感染のための１５０μＬを取る。
Ｓ）に対して、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０の
各ウイルスの３つの濃度を調製した：（１）感染のための純粋な１５０μＬ；（２）２１
２μＬのＤＭＥＭ中に（１）からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染のための１５０μ
Ｌを取る；および（３）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（２）からの９８μＬを入れ、ミック
スし、感染のための１５０μＬを取る。
【0188】
コントロール（Ｃ）に対して、Ｕ２ＯＳ細胞を、（１）１５０μＬの１０Ｅ２ ＰＦＵ
／ｍＬ ＪＸ５９４ストック（ａ）；（２）１５０μＬの３１．０ ＰＦＵ／ｍＬ ＪＸ
５９４ストック（ｂ）；または（３）１５０μＬのＤＭＥＭ、で処理した。
／ｍＬ ＪＸ５９４ストック（ａ）；（２）１５０μＬの３１．０ ＰＦＵ／ｍＬ ＪＸ
５９４ストック（ｂ）；または（３）１５０μＬのＤＭＥＭ、で処理した。
【0189】
腫瘍（Ｔ）に対して、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－
６２０の各ウイルスに対して６つの濃度を調製した：（１）感染のための純粋な１５０μ
Ｌ；（２）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（１）からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染の
ための１５０μＬを取る；（３）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（２）からの９８μＬを入れ
、ミックスし、感染のための１５０μＬを取る；（４）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（３）
からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染のための１５０μＬを取る；（５）２１２μＬ
のＤＭＥＭ中に（４）からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染のための１５０μＬを取
る；および（６）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（５）からの９８μＬを入れ、ミックスし、
感染のための１５０μＬを取る。
６２０の各ウイルスに対して６つの濃度を調製した：（１）感染のための純粋な１５０μ
Ｌ；（２）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（１）からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染の
ための１５０μＬを取る；（３）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（２）からの９８μＬを入れ
、ミックスし、感染のための１５０μＬを取る；（４）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（３）
からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染のための１５０μＬを取る；（５）２１２μＬ
のＤＭＥＭ中に（４）からの９８μＬを入れ、ミックスし、感染のための１５０μＬを取
る；および（６）２１２μＬのＤＭＥＭ中に（５）からの９８μＬを入れ、ミックスし、
感染のための１５０μＬを取る。
【0190】
２４ウェルプレートを、図２４に示されるようにセットアップした。上記組織のホモジ
ナイズのセクションにおいて説明した方法を使用して、１匹のマウスから調製した腫瘍、
肺、脾臓、肝臓、脳、および卵巣の細胞を各プレートに蒔いた。
ナイズのセクションにおいて説明した方法を使用して、１匹のマウスから調製した腫瘍、
肺、脾臓、肝臓、脳、および卵巣の細胞を各プレートに蒔いた。
【0191】
上記において言及したように、２５匹のマウスを５つの群に分け、各群は、５匹のマウ
スを有し、すなわち、５つのプレートを有した。群１における腫瘍、肺、脾臓、肝臓、脳
、および卵巣の細胞にＷＲ－ＧＳ－６１０を感染させ、群２ではＷＲを感染させ、群３で
はＷＲ－ＧＳ－６２０を感染させ、群４ではＷＲ－ＧＳ－６００を感染させ、群５におけ
る全ての細胞（ポジティブコントロールのウェル細胞を除く）を、ネガティブコントロー
ルとして、製剤緩衝液（ＦＢ）によって処理した。当該製剤緩衝液は、ｐＨ値７において
、３０ｍＭのＴｒｉｓ、１０％のショ糖、および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む。図２５は
、ＷＲ－ＧＳ－６１０ウイルスプラークが、腫瘍細胞のウェルのみに存在すことを示して
いる。図２６は、ＷＲウイルスプラークが、腫瘍細胞のウェルと卵巣細胞のウェルの両方
に存在することを示している。図２７は、ＷＲ－ＧＳ－６２０ウイルスプラークが、腫瘍
細胞のウェルと卵巣細胞のウェルの両方に存在することを示している。図２８は、ＷＲ－
ＧＳ－６００ウイルスプラークが、腫瘍細胞のウェルのみに存在することを示している。
図２９は、群５において腫瘍細胞のウェルにウイルスプラークが存在しないことを示して
いる。これらのデータは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、ＷＲ－ＧＳ
－６２０およびＷＲと比較して、より特異的に腫瘍を標的化することができることを示唆
している。
スを有し、すなわち、５つのプレートを有した。群１における腫瘍、肺、脾臓、肝臓、脳
、および卵巣の細胞にＷＲ－ＧＳ－６１０を感染させ、群２ではＷＲを感染させ、群３で
はＷＲ－ＧＳ－６２０を感染させ、群４ではＷＲ－ＧＳ－６００を感染させ、群５におけ
る全ての細胞（ポジティブコントロールのウェル細胞を除く）を、ネガティブコントロー
ルとして、製剤緩衝液（ＦＢ）によって処理した。当該製剤緩衝液は、ｐＨ値７において
、３０ｍＭのＴｒｉｓ、１０％のショ糖、および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む。図２５は
、ＷＲ－ＧＳ－６１０ウイルスプラークが、腫瘍細胞のウェルのみに存在すことを示して
いる。図２６は、ＷＲウイルスプラークが、腫瘍細胞のウェルと卵巣細胞のウェルの両方
に存在することを示している。図２７は、ＷＲ－ＧＳ－６２０ウイルスプラークが、腫瘍
細胞のウェルと卵巣細胞のウェルの両方に存在することを示している。図２８は、ＷＲ－
ＧＳ－６００ウイルスプラークが、腫瘍細胞のウェルのみに存在することを示している。
図２９は、群５において腫瘍細胞のウェルにウイルスプラークが存在しないことを示して
いる。これらのデータは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、ＷＲ－ＧＳ
－６２０およびＷＲと比較して、より特異的に腫瘍を標的化することができることを示唆
している。
【0192】
注入された皮下腫瘍および他の組織におけるインビボウイルス分布
目標：ウイルスベクターの安全性および生体内分布
研究プロトコル
ｉ．３５Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を注文する。マウスは、
５つの処置群、すなわち、ＰＢＳコントロール（ＦＢ）、ならびにＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６
００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０の群、に分けられる。
ｉｉ．腫瘍群の腫瘍が５ｍｍのサイズに達したとき、処置を開始する。
ｉｉｉ．尾静脈注入によるウイルスの３回の注入（１日目、４日目、７日目に計画）
ｉｖ．マウスの体重と健康状態をモニターする。
ｖ．９日目に、マウスを犠牲にし、脳、肺、肝臓、卵巣、脾臓から組織を採取する。Ｕ
２ＯＳ細胞におけるプラークアッセイによって、異なる組織におけるワクシニア力価を特
定する。
目標：ウイルスベクターの安全性および生体内分布
研究プロトコル
ｉ．３５Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を注文する。マウスは、
５つの処置群、すなわち、ＰＢＳコントロール（ＦＢ）、ならびにＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６
００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０の群、に分けられる。
ｉｉ．腫瘍群の腫瘍が５ｍｍのサイズに達したとき、処置を開始する。
ｉｉｉ．尾静脈注入によるウイルスの３回の注入（１日目、４日目、７日目に計画）
ｉｖ．マウスの体重と健康状態をモニターする。
ｖ．９日目に、マウスを犠牲にし、脳、肺、肝臓、卵巣、脾臓から組織を採取する。Ｕ
２ＯＳ細胞におけるプラークアッセイによって、異なる組織におけるワクシニア力価を特
定する。
【0193】
下記の表３～５は、処置群、処置スケジュール、および麻酔、エンドポイントおよび安
楽死をまとめたものである。
楽死をまとめたものである。
【0194】
【表3(2)】
【0195】
【表4】
【0196】
【表5】
【0197】
データは、群あたり５匹のマウスの平均を取ることによって提示した。図３０～３２は
、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、むしろ腫瘍に存在し、卵巣、脳、脾
臓、肝臓、および肺では、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０ウイルスはほん
のわずかしか認められなかったことを示している。対照的に、腫瘍内注入の後、大量のＷ
Ｒ－ＧＳ－６２０ウイルスが、腫瘍、卵巣、脳、脾臓、肝臓、および肺において観察され
た。これらのデータは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０が、ＷＲ－ＧＳ－
６２０よりも非常に高い腫瘍標的化特異性を有することを裏付けている。その上、図３０
～３２の棒グラフにおける第二バーおよび第三バーは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－
ＧＳ－６１０に対する組織１グラムあたりのＰＦＵの数値が、卵巣（ＷＲ－ＧＳ－６１０
は、ＷＲ－ＧＳ－６００よりわずかに高い）、脳、脾臓、肝臓、および肺において同様で
あり、ＷＲ－ＧＳ－６００に対する腫瘍組織１グラムあたりのＰＦＵの数値が、ＷＲ－Ｇ
Ｓ－６１０より約３倍高いことを示している。このことは、他の細胞にＷＲ－ＧＳ－６０
０およびＷＲ－ＧＳ－６１０を同様に感染させた場合、ＷＲ－ＧＳ－６００の方がＷＲ－
ＧＳ－６１０よりも強く腫瘍に感染できることを示唆している。
、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、むしろ腫瘍に存在し、卵巣、脳、脾
臓、肝臓、および肺では、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０ウイルスはほん
のわずかしか認められなかったことを示している。対照的に、腫瘍内注入の後、大量のＷ
Ｒ－ＧＳ－６２０ウイルスが、腫瘍、卵巣、脳、脾臓、肝臓、および肺において観察され
た。これらのデータは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０が、ＷＲ－ＧＳ－
６２０よりも非常に高い腫瘍標的化特異性を有することを裏付けている。その上、図３０
～３２の棒グラフにおける第二バーおよび第三バーは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－
ＧＳ－６１０に対する組織１グラムあたりのＰＦＵの数値が、卵巣（ＷＲ－ＧＳ－６１０
は、ＷＲ－ＧＳ－６００よりわずかに高い）、脳、脾臓、肝臓、および肺において同様で
あり、ＷＲ－ＧＳ－６００に対する腫瘍組織１グラムあたりのＰＦＵの数値が、ＷＲ－Ｇ
Ｓ－６１０より約３倍高いことを示している。このことは、他の細胞にＷＲ－ＧＳ－６０
０およびＷＲ－ＧＳ－６１０を同様に感染させた場合、ＷＲ－ＧＳ－６００の方がＷＲ－
ＧＳ－６１０よりも強く腫瘍に感染できることを示唆している。
【0198】
以前の研究は、ワクシニアウエスタンリザーブ株が、正常なマウスの臓器、特に卵巣に
感染することができることを示しており（Ｚｈａｏ Ｙ． ｅｔ ａｌ， Ｖｉｒａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２０１１， ２４， ３８７）、これは、図３１に示された結
果に一致する。
感染することができることを示しており（Ｚｈａｏ Ｙ． ｅｔ ａｌ， Ｖｉｒａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２０１１， ２４， ３８７）、これは、図３１に示された結
果に一致する。
【0199】
まとめると、これらのデータは、腫瘍溶解性ウイルス、例えばＷＲなどへの免疫チェッ
クポイント阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドおよびイムノアクティベータ
ーをコードする第二異種ポリヌクレオチドの組み込みは、結果として、腫瘍標的化および
感染の相乗効果を生じ、そうでなければ、そのような相乗効果は、野生型腫瘍溶解性ウイ
ルス、または第一異種ポリヌクレオチドのみまたは第二異種ポリヌクレオチドのみを有す
る改変された腫瘍溶解性ウイルスによっては達成できないことを示唆している。
クポイント阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドおよびイムノアクティベータ
ーをコードする第二異種ポリヌクレオチドの組み込みは、結果として、腫瘍標的化および
感染の相乗効果を生じ、そうでなければ、そのような相乗効果は、野生型腫瘍溶解性ウイ
ルス、または第一異種ポリヌクレオチドのみまたは第二異種ポリヌクレオチドのみを有す
る改変された腫瘍溶解性ウイルスによっては達成できないことを示唆している。
【0200】
異なるウイルス感染の後のＣＴ－２６マウス腫瘍モデルにおける腫瘍サイズの変化の測定
２５Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）に、ＣＴ２６腫瘍を移植した（Ｃ
Ｔ－２６ ＬａｃＺ ５Ｅ６細胞、ＳＧ、右脇腹）。マウスをさらに、５つの処理群：製
剤緩衝液（剤）（ＦＢ）、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ
－ＧＳ－６２０、に分けた。腫瘍群の腫瘍が５ｍｍのサイズに達したとき、処理を開始す
る。１Ｅ７ＰＦＵの異なるウイルスを、１日目、４日目、および７日目に腫瘍内に注入し
、マウスの体重および健康状態をモニターした。腫瘍成長の後、ノギスによって腫瘍サイ
ズを測定した。
２５Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）に、ＣＴ２６腫瘍を移植した（Ｃ
Ｔ－２６ ＬａｃＺ ５Ｅ６細胞、ＳＧ、右脇腹）。マウスをさらに、５つの処理群：製
剤緩衝液（剤）（ＦＢ）、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ
－ＧＳ－６２０、に分けた。腫瘍群の腫瘍が５ｍｍのサイズに達したとき、処理を開始す
る。１Ｅ７ＰＦＵの異なるウイルスを、１日目、４日目、および７日目に腫瘍内に注入し
、マウスの体重および健康状態をモニターした。腫瘍成長の後、ノギスによって腫瘍サイ
ズを測定した。
【0201】
腫瘍サイズ変化を記録し、結果を図３３にまとめるが、ここで、ｘ日目の腫瘍の体積変
化％は、１日目の腫瘍の体積とｘ日目の腫瘍の体積とを比較することによって計算される
。図３３は、ウイルス注入後の１日目、４日目、および７日目に、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６
００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０で処理した場合の腫瘍体積サイズ
の増加は、製剤緩衝液（ＦＢ）で処理した場合より著しく小さいことを示しており、それ
は、上記において言及したウイルスのインビボでの腫瘍阻害効果を示唆している。
化％は、１日目の腫瘍の体積とｘ日目の腫瘍の体積とを比較することによって計算される
。図３３は、ウイルス注入後の１日目、４日目、および７日目に、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６
００、ＷＲ－ＧＳ－６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０で処理した場合の腫瘍体積サイズ
の増加は、製剤緩衝液（ＦＢ）で処理した場合より著しく小さいことを示しており、それ
は、上記において言及したウイルスのインビボでの腫瘍阻害効果を示唆している。
【0202】
同系マウスモデルにおける有効性の測定
Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける皮下ＣＴ－２６ＬａｃＺ腫瘍モデルを調製した。１Ｅ７の
異なるウイルスを、１日目、３日目、および７日目に尾静脈注入によって注入し、マウス
の体重および健康状態をモニターした。エンドポイントを、腫瘍＞１，７００ｍｍ３に設
定し、３１日目に研究を終了した。マウス生存の結果を図３４に示す。
Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける皮下ＣＴ－２６ＬａｃＺ腫瘍モデルを調製した。１Ｅ７の
異なるウイルスを、１日目、３日目、および７日目に尾静脈注入によって注入し、マウス
の体重および健康状態をモニターした。エンドポイントを、腫瘍＞１，７００ｍｍ３に設
定し、３１日目に研究を終了した。マウス生存の結果を図３４に示す。
【0203】
異なるウイルス感染後のヒト化ＨＴ－２９－Ｌｕｃ皮下腫瘍モデルの腫瘍サイズ変化の測
定
当該実験を、以下のように簡単に説明する。
定
当該実験を、以下のように簡単に説明する。
【0204】
１日目：３０ Ｒａｇ２ －／－ＩＬ２Ｒｇヌルマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）
を注文し、ＨＴ－２９腫瘍を移植する（ＨＴ－２９ Ｌｕｃ ５Ｅ６細胞、ＳＱ、右脇腹
）。
を注文し、ＨＴ－２９腫瘍を移植する（ＨＴ－２９ Ｌｕｃ ５Ｅ６細胞、ＳＱ、右脇腹
）。
【0205】
７日目：腫瘍成長をＩＶＩＳチェックする。
【0206】
８日目：静脈内注入により５．８Ｅ６ヒトＰＢＭＣ ＩＰを投与する。
【0207】
１４日目：群のＩＶＩＳ割り当て。
【0208】
１５日目：１Ｅ７ ＩＴ処理。
【0209】
１８日目：ＩＶＩＳおよび１Ｅ７ ＩＴ処理。
【0210】
２４日目：ＩＶＩＳ。
【0211】
ヒト末梢血単核細胞移植の確認
処理したマウスを顎下放血させ、１００μＬの血液を採取し、ナトリウムヘパリンに加
えた。赤血球を溶解させ、ｈＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、およびＣＤ４に対して染色する
蛍光結果をＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにおいて読み取り、それを図３５および３６にまと
めており、それは、ヒト末梢血単核細胞が首尾よく免疫不全マウスに移植されていること
を裏付けている。
処理したマウスを顎下放血させ、１００μＬの血液を採取し、ナトリウムヘパリンに加
えた。赤血球を溶解させ、ｈＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、およびＣＤ４に対して染色する
蛍光結果をＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにおいて読み取り、それを図３５および３６にまと
めており、それは、ヒト末梢血単核細胞が首尾よく免疫不全マウスに移植されていること
を裏付けている。
【0212】
ウイルス感染後の腫瘍体積変化を図３７および３８にまとめる。図３７は、コントロー
ル群と比較して、ＷＲ－ＧＳ－６００で処理したマウスは、ＷＲ－ＧＳ－６１０、ＷＲ－
ＧＳ－６２０、またはＷＲで処理したマウスと比較して、腫瘍体積において最少の増加を
示すことを示している。より興味深いことに、ＷＲ－ＧＳ－６００を感染させた後のマウ
スは、ＨＴ－２９－Ｌｕｃ注入後３２日目において、腫瘍サイズはあまり増加しておらず
、ＷＲ－ＧＳ－６００処理の８日目からは減少さえしている。図３８は、ＷＲ－ＧＳ－６
００およびＷＲ－ＧＳ－６１０より高いＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０の毒性に起因して
、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０は、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０より
早いエンドポイントを有することを示している。図３８はさらに、製剤緩衝液と比較した
場合、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０が腫瘍成長を制御することができる
ことを示している。まとめると、これらのデータは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－Ｇ
Ｓ－６１０が、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０より低い毒性を有し、ＷＲ－ＧＳ－６００
およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、ともに腫瘍成長を制御できることを示唆している。
ル群と比較して、ＷＲ－ＧＳ－６００で処理したマウスは、ＷＲ－ＧＳ－６１０、ＷＲ－
ＧＳ－６２０、またはＷＲで処理したマウスと比較して、腫瘍体積において最少の増加を
示すことを示している。より興味深いことに、ＷＲ－ＧＳ－６００を感染させた後のマウ
スは、ＨＴ－２９－Ｌｕｃ注入後３２日目において、腫瘍サイズはあまり増加しておらず
、ＷＲ－ＧＳ－６００処理の８日目からは減少さえしている。図３８は、ＷＲ－ＧＳ－６
００およびＷＲ－ＧＳ－６１０より高いＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０の毒性に起因して
、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０は、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０より
早いエンドポイントを有することを示している。図３８はさらに、製剤緩衝液と比較した
場合、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０が腫瘍成長を制御することができる
ことを示している。まとめると、これらのデータは、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－Ｇ
Ｓ－６１０が、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０より低い毒性を有し、ＷＲ－ＧＳ－６００
およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、ともに腫瘍成長を制御できることを示唆している。
【0213】
図３９および４０は、インビボイメージングＩＶＩＳ測定（Ｔｈｅ ＩＶＩＳ ｓｐｅ
ｃｔｒｕｍ、パーキンエルマー）により、ヒト腫瘍ＨＴ－２９が、ヒトＰＢＭＣの有無に
おけるＮＣＧマウスにおいて成長することを示している。
ｃｔｒｕｍ、パーキンエルマー）により、ヒト腫瘍ＨＴ－２９が、ヒトＰＢＭＣの有無に
おけるＮＣＧマウスにおいて成長することを示している。
【0214】
図４１および４２は、ウイルスが腹腔内に注入されるヒト化ＨＴ－２９－Ｌｕｃ腹膜内
マウスモデルの場合、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６２０感染は、腫瘍の化学
発光強度を著しく減少させることができることを示しており、それは、ＷＲ－ＧＳ－６０
０およびＷＲ－ＧＳ－６２０の腫瘍阻害効率を示唆している。製剤緩衝液と比較して、Ｗ
ＲおよびＷＲ－ＧＳ－６１０は、腫瘍の化学発光強度のより少ない増加を示しており、こ
れは、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６１０の腫瘍成長制御有効性を示唆している。
マウスモデルの場合、ＷＲ－ＧＳ－６００およびＷＲ－ＧＳ－６２０感染は、腫瘍の化学
発光強度を著しく減少させることができることを示しており、それは、ＷＲ－ＧＳ－６０
０およびＷＲ－ＧＳ－６２０の腫瘍阻害効率を示唆している。製剤緩衝液と比較して、Ｗ
ＲおよびＷＲ－ＧＳ－６１０は、腫瘍の化学発光強度のより少ない増加を示しており、こ
れは、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６１０の腫瘍成長制御有効性を示唆している。
【0215】
前述のインビトロおよびインビボの結果は、ＷＲ、ＷＲ－ＧＳ－６００、ＷＲ－ＧＳ－
６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０が、癌細胞を死に到らしめること、および腫瘍成長を
制御することができることを示している。しかしながら、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０
は、より高い毒性を示し、これは、薬物試験の早い終了につながっている。ＷＲ－ＧＳ－
６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、腫瘍成長制御においてより効果的であり、この場合
、ＷＲ－ＧＳ－６００は、ＷＲ－ＧＳ－６１０より高い腫瘍標的化特異性を有する。より
重要なことに、ヒト化ＨＴ－２９腹膜内腫瘍マウスモデルにおいて、ＷＲ－ＧＳ－６００
の腹腔内注入は、腫瘍サイズを減少させるが、その一方で、ＷＲ－ＧＳ－６１０の腹腔内
注入は、腫瘍サイズの増加を止めなかったが、腫瘍サイズ増加の百分率は、ＷＲで処理し
た場合より著しく小さい。これらのデータは、免疫チェックポイント阻害因子をコードす
る異種ポリヌクレオチドとイムノアクティベーターをコードする異種ポリヌクレオチドの
両方の組み込みは、毒性を減少させ、腫瘍標的化特異性を増加させ、腫瘍制御有効性を向
上できることを示唆している。
６１０、およびＷＲ－ＧＳ－６２０が、癌細胞を死に到らしめること、および腫瘍成長を
制御することができることを示している。しかしながら、ＷＲおよびＷＲ－ＧＳ－６２０
は、より高い毒性を示し、これは、薬物試験の早い終了につながっている。ＷＲ－ＧＳ－
６００およびＷＲ－ＧＳ－６１０は、腫瘍成長制御においてより効果的であり、この場合
、ＷＲ－ＧＳ－６００は、ＷＲ－ＧＳ－６１０より高い腫瘍標的化特異性を有する。より
重要なことに、ヒト化ＨＴ－２９腹膜内腫瘍マウスモデルにおいて、ＷＲ－ＧＳ－６００
の腹腔内注入は、腫瘍サイズを減少させるが、その一方で、ＷＲ－ＧＳ－６１０の腹腔内
注入は、腫瘍サイズの増加を止めなかったが、腫瘍サイズ増加の百分率は、ＷＲで処理し
た場合より著しく小さい。これらのデータは、免疫チェックポイント阻害因子をコードす
る異種ポリヌクレオチドとイムノアクティベーターをコードする異種ポリヌクレオチドの
両方の組み込みは、毒性を減少させ、腫瘍標的化特異性を増加させ、腫瘍制御有効性を向
上できることを示唆している。
【0216】
実質的に任意の複数形および／または単数形用語の使用に関して、当業者は、文脈およ
び／または適用に対して適切なように、複数形から単数形へ、および／または単数形から
複数形へ翻訳することができる。
び／または適用に対して適切なように、複数形から単数形へ、および／または単数形から
複数形へ翻訳することができる。
【0217】
さらに、本開示の特徴および態様が、マーカッシュ群の用語において説明される場合、
その結果、当業者は、本開示が、マーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバー
のサブグループの観点からも説明されることを理解するであろう。
その結果、当業者は、本開示が、マーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバー
のサブグループの観点からも説明されることを理解するであろう。
【0218】
本明細書において様々な態様および実施形態が開示されると同時に、他の態様および実
施形態も、当業者に明らかとなるであろう。本明細書において開示される様々な態様およ
び実施形態は、説明目的のためであり、限定であることを意図するものではなく、真の範
囲および趣旨は、以下の特許請求の範囲によって示される。
施形態も、当業者に明らかとなるであろう。本明細書において開示される様々な態様およ
び実施形態は、説明目的のためであり、限定であることを意図するものではなく、真の範
囲および趣旨は、以下の特許請求の範囲によって示される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17-1】
【図17-2】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35-1】
【図35-2】
【図35-3】
【図35-4】
【図36-1】
【図36-2】
【図36-3】
【図36-4】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-03-28
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
免疫チェックポイント阻害因子をコードする第一異種ポリヌクレオチドと、イムノアクティベーターをコードする第二異種ポリヌクレオチドとを有するウイルスゲノムを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【外国語明細書】