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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024080307
(43)【公開日】2024-06-13
(54)【発明の名称】超臨界によるトリプタンスリン抽出法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20240606BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240606BHJP
A61K 36/70 20060101ALI20240606BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
A61P31/04
A61K36/70
【審査請求】有
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022193389
(22)【出願日】2022-12-02
(71)【出願人】
【識別番号】522381177
【氏名又は名称】株式会社エル・カレア
(74)【代理人】
【識別番号】100110560
【弁理士】
【氏名又は名称】松下 恵三
(74)【代理人】
【識別番号】100109553
【弁理士】
【氏名又は名称】工藤 一郎
(71)【出願人】
【識別番号】523379926
【氏名又は名称】藍開発合同会社
(74)【代理人】
【識別番号】100110560
【弁理士】
【氏名又は名称】松下 恵三
(72)【発明者】
【氏名】岩村 公史
(72)【発明者】
【氏名】吉田 久幸
【テーマコード（参考）】
4C086
4C088
【Ｆターム（参考）】
4C086AA04
4C086CB05
4C086NA20
4C086ZB35
4C088AB43
4C088AC05
4C088BA08
4C088BA11
4C088CA10
4C088NA20
4C088ZB35
(57)【要約】
【課題】超臨界状態により短時間で効率的にトリプタンスリンの抽出するための方法を提案する。
【解決手段】超臨界状態の不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するトリプタンスリンの抽出方法である。具体的には、超臨界状態の不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するトリプタンスリンの抽出方法や、さらにこれに加えて、超臨界状態中でのトリプタンスリンの抽出は、エントレーナーを用いて行ったりする。また、
前記不活性ガスは、二酸化炭素であり、トリプタンスリンの単離は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることで行われる抽出方法である。
【選択図】図１
【解決手段】超臨界状態の不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するトリプタンスリンの抽出方法である。具体的には、超臨界状態の不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するトリプタンスリンの抽出方法や、さらにこれに加えて、超臨界状態中でのトリプタンスリンの抽出は、エントレーナーを用いて行ったりする。また、
前記不活性ガスは、二酸化炭素であり、トリプタンスリンの単離は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることで行われる抽出方法である。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
超臨界状態の不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するトリプタンスリンの抽出方法。
【請求項2】
超臨界状態中でのトリプタンスリンの抽出は、エントレーナーを用いて行う請求項１に記載のトリプタンスリンの抽出方法。
【請求項3】
前記不活性ガスは、二酸化炭素である請求項１又は請求項２に記載のトリプタンスリンの抽出方法。
【請求項4】
トリプタンスリンの単離は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることで行われる請求項２に記載のトリプタンスリンの抽出方法。
【請求項5】
超臨界時の雰囲気圧力は、１０ＭＰ以上、３０ＭＰ以下である請求項１又は請求項２に記載のトリプタンスリンの抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（本件出願は優先権の基礎出願とすることを考慮にいれた出願です。）
本発明は、藍の葉に含まれるトリプタンスリンを抽出するための方法に関するものである。
本発明は、藍の葉に含まれるトリプタンスリンを抽出するための方法に関するものである。
【背景技術】
【0002】
従来から特許文献１に開示されたトリプタンスリン含有藍葉エキス製造方法が知られている。特許文献１に開示されたトリプタンスリン含有藍葉溶液製造方法によれば、藍葉に対して、液体状のリモネンを一定時間接触させ、トリプタンスリンを含む溶液を得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】特開２０１８－０５２８７７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
しかしながら、上記のトリプタンスリン含有藍葉エキス製造方法では、一定量のトリプタンスリンを抽出するためには、長時間の抽出工程を要した。そこで、本発明においては、より短時間で効率的にトリプタンスリンを抽出するための方法を提案する。
【発明の効果】
【0005】
本発明によれば、短時間で効率的にトリプタンスリンを抽出することができる。
【課題を解決するための手段】
【0006】
第一の発明として、超臨界状態の不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するトリプタンスリンの抽出方法を提案する。
【0007】
第二の発明として、超臨界状態中でのトリプタンスリンの抽出は、エントレーナーを用いて行う第一の発明に記載のトリプタンスリンの抽出方法を提案する。
【0008】
第三の発明として、前記不活性ガスは、二酸化炭素である第一の発明又は第二の発
明に記載のトリプタンスリンの抽出方法を提案する。
明に記載のトリプタンスリンの抽出方法を提案する。
【0009】
第四の発明として、トリプタンスリンの単離は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることで行われる第二の発明に記載のトリプタンスリンの抽出方法を提供する。
【0010】
第五の発明として、超臨界時の雰囲気圧力は、１０ＭＰ以上、３０ＭＰ以下である第一の発明または第二の発明に記載のトリプタンスリンの抽出方法を提案する。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】本発明の抽出処理で行われる処理の流れの一例を示した図である。
【図2】実施形態１の抽出処理で用いられる各装置の全体構成を表した図である。
【図3】実施例３～５の抽出量と出口圧の関係を表にまとめたものである。
【図4】実施形態２、３の抽出処理で用いられる各装置の全体構成を表した図である。
【図5】実施例６のトリプタンスリンの時間別抽出量を示した図である。
【図6】実施例６における、０－１時間目の計測にて得られた抽出物を示した図である。
【図7】実施例６における１時間ごとの抽出物の写真である。
【図8】実施例７のトリプタンスリンの抽出量を時間別に表したものである。
【図9】実施例７における、１時間ごとの抽出物の写真である。
【図10】実施例９における、１時間ごとの抽出物の液量、トリプタンスリンの濃度およびトリプタンスリンの抽出量を表にまとめたものである。
【図11】実施例１０における、１時間ごとの抽出物の液量、トリプタンスリンの濃度およびトリプタンスリンの抽出量を表にまとめたものである。
【図12】実施例１１における、１時間ごとの抽出物の液量、トリプタンスリンの濃度およびトリプタンスリンの抽出量を表にまとめたものである。
【図11】比較例３－１実施例９～１１の各出口圧と抽出量の関係を表にまとめたものである。
【図12】実施例９～１１の各出口圧とトリプタンスリンの濃度の関係を表にまとめたものである。
【図13】実施例１３における抽出量の比較表である。
【図13】実施形態２、３の抽出処理で行われる処理の流れの例を示した図である。
【図14】比較例１におけるリモネン抽出の抽出液と実施例８の抽出液の写真である。
【図15】実施形態１の実施例１～５の実験結果をまとめた表である。
【図16】実施形態２の実施例６～８の実験結果をまとめた表である。
【図17】実施形態３の実施例９～１２の実験結果をまとめた表である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本発明の各実施形態について図面と共に説明する。実施形態と請求項の相互の関係は以下のとおりである。実施形態１は主に請求項１、３及び５に対応する。また、実施形態２は主に請求項２乃至５に対応する。なお、本発明は本明細書の記載に何ら限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲内において、様々な態様で実施しうる。
また、図面についても同様に、図面の記載により本願発明を何ら限定するものではない。
また、図面についても同様に、図面の記載により本願発明を何ら限定するものではない。
【0013】
＜目次＞
１．実施形態１について
実施形態１はエントレーナーを用いない場合の超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出方法に関する。実施例１、２、３、４、５は実施形態１に関する。
２．実施形態２について
実施形態２はエントレーナーとしてエタノール水溶液又はエタノールを用いた場合の超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出方法に関する。実施例６、７、８は実施形態２に関する。
３．実施形態３について
実施形態３はエントレーナーとしてリモネンを用いた場合の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出方法に関する。実施例９、１０、１１、１２は実施形態３に関する。
１．実施形態１について
実施形態１はエントレーナーを用いない場合の超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出方法に関する。実施例１、２、３、４、５は実施形態１に関する。
２．実施形態２について
実施形態２はエントレーナーとしてエタノール水溶液又はエタノールを用いた場合の超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出方法に関する。実施例６、７、８は実施形態２に関する。
３．実施形態３について
実施形態３はエントレーナーとしてリモネンを用いた場合の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出方法に関する。実施例９、１０、１１、１２は実施形態３に関する。
【0014】
＜全実施形態：概要＞
本発明の抽出方法は、藍の葉を密閉した容器に入れ、その容器を所定の条件で超臨界状態とすることにより、藍の葉からトリプタンスリンを抽出する方法である。本発明の抽出方法は、主に超臨界状態を作りだす際にエントレーナーを用いる方法とエントレーナーを用いない方法に分類される。なお、本明細書の実施形態においては、エントレーナーが、エタノール、エタノール水溶液またはリモネンである場合の実施例を挙げているが、本発明に用いることができるエントレーナーは、これらのものに限定されない。例えば、これら以外に、エントレーナーとしてジメチルスルホキシド等を用いてもよい。
本件出願書類においては「不活性ガス」とは、化学反応を起こしにくい気体の意味で用いる単語である。ヘリウム・ネオン・アルゴンなど希ガス類元素や、窒素、二酸化炭素などが含まれる。
本発明の抽出方法は、藍の葉を密閉した容器に入れ、その容器を所定の条件で超臨界状態とすることにより、藍の葉からトリプタンスリンを抽出する方法である。本発明の抽出方法は、主に超臨界状態を作りだす際にエントレーナーを用いる方法とエントレーナーを用いない方法に分類される。なお、本明細書の実施形態においては、エントレーナーが、エタノール、エタノール水溶液またはリモネンである場合の実施例を挙げているが、本発明に用いることができるエントレーナーは、これらのものに限定されない。例えば、これら以外に、エントレーナーとしてジメチルスルホキシド等を用いてもよい。
本件出願書類においては「不活性ガス」とは、化学反応を起こしにくい気体の意味で用いる単語である。ヘリウム・ネオン・アルゴンなど希ガス類元素や、窒素、二酸化炭素などが含まれる。
【0015】
＜実施形態１＞
＜実施形態１：概要＞
実施形態１は、全実施形態の基本となる発明である。本実施形態１は、超臨界状態の
不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するための方法に関する。
図１は、トリプタンスリンの抽出方法の処理の流れの一例を示す図である。実施形態１におけるトリプタンスリンの抽出方法は、下記に示すステップＳ１０１～ステップＳ０１０５を含む。ステップＳ１０１は主に、所定量の藍の葉を乾燥及び粉末化するための工程である。ステップＳ１０２～ステップＳ１０５は主に、試料を抽出装置にセットし、超臨界状態により上記の藍の葉の粉末からトリプタンスリンを抽出するための工程である。
以上の処理を経ることによって、トリプタンスリンの抽出を効率的に行うことができる。以下各ステップについて詳述する。
＜実施形態１：概要＞
実施形態１は、全実施形態の基本となる発明である。本実施形態１は、超臨界状態の
不活性ガス中で藍の葉のトリプタンスリンを抽出するための方法に関する。
図１は、トリプタンスリンの抽出方法の処理の流れの一例を示す図である。実施形態１におけるトリプタンスリンの抽出方法は、下記に示すステップＳ１０１～ステップＳ０１０５を含む。ステップＳ１０１は主に、所定量の藍の葉を乾燥及び粉末化するための工程である。ステップＳ１０２～ステップＳ１０５は主に、試料を抽出装置にセットし、超臨界状態により上記の藍の葉の粉末からトリプタンスリンを抽出するための工程である。
以上の処理を経ることによって、トリプタンスリンの抽出を効率的に行うことができる。以下各ステップについて詳述する。
【0016】
＜試料（藍の葉の粉末）の準備＞
まず、ステップＳ１０１によって、試料（藍の葉の粉末）を準備する。
ステップＳ１０１は、藍の葉を乾燥及び粉砕することで、トリプタンスリンを抽出するための試料を準備する工程である。以下、具体的に説明する。
まず、例えば藍の葉の部分を茎から切り取り、切り取った藍の葉を乳鉢等に液体窒素等とともに入れ、藍の葉をすり潰し、粉砕してそれらを粉末状にする。このように粉末化することでトリプタンスリンの抽出効率を向上させることができる。
次に低温冷凍機等を用いてすり潰した葉を、例えば－７０℃の温度下で一晩凍らせる。そして上記の凍らせた藍の葉を、凍結乾燥機等を用いて所定日数の間、乾燥させる。
次に強力小型粉砕機等を用いて上記の乾燥させた藍の葉を粉末化し、所定のふるいを通過した画分のものを抽出試料とする。
まず、ステップＳ１０１によって、試料（藍の葉の粉末）を準備する。
ステップＳ１０１は、藍の葉を乾燥及び粉砕することで、トリプタンスリンを抽出するための試料を準備する工程である。以下、具体的に説明する。
まず、例えば藍の葉の部分を茎から切り取り、切り取った藍の葉を乳鉢等に液体窒素等とともに入れ、藍の葉をすり潰し、粉砕してそれらを粉末状にする。このように粉末化することでトリプタンスリンの抽出効率を向上させることができる。
次に低温冷凍機等を用いてすり潰した葉を、例えば－７０℃の温度下で一晩凍らせる。そして上記の凍らせた藍の葉を、凍結乾燥機等を用いて所定日数の間、乾燥させる。
次に強力小型粉砕機等を用いて上記の乾燥させた藍の葉を粉末化し、所定のふるいを通過した画分のものを抽出試料とする。
【0017】
＜試料のセッティング、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出＞
次に、ステップＳ１０２～ステップＳ１０５の工程によって、試料の圧力装置へのセッティングおよび超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出を行う。
図２は、ステップＳ１０２～ステップＳ１０５で用いられる装置等の仕組みを説明するための概略図である。
ステップＳ１０２では、圧力装置のオーブンの温度が所定温度に達するまで圧力装置のオーブンを加熱する。
ステップＳ１０３では、所定量の上記抽出試料を円筒濾紙等に入れ、圧力装置の抽出部に投入する。
ステップＳ１０４では、圧力の装置の出口圧が所定値になるように、その出口圧を調整し、その出口に抽出用の容器をセットする。
ステップＳ１０５では、所定の流速で二酸化炭素を圧力装置の抽出部に投入し、所定時間、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出処理を行う。ステップＳ１０５を経ると、超臨界状態により藍の葉の粉末から所定量のトリプタンスリンが抽出される。
次に実施例１～５に関して説明する。図１５は、実施例１～５の実験結果をまとめた表である。
次に、ステップＳ１０２～ステップＳ１０５の工程によって、試料の圧力装置へのセッティングおよび超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出を行う。
図２は、ステップＳ１０２～ステップＳ１０５で用いられる装置等の仕組みを説明するための概略図である。
ステップＳ１０２では、圧力装置のオーブンの温度が所定温度に達するまで圧力装置のオーブンを加熱する。
ステップＳ１０３では、所定量の上記抽出試料を円筒濾紙等に入れ、圧力装置の抽出部に投入する。
ステップＳ１０４では、圧力の装置の出口圧が所定値になるように、その出口圧を調整し、その出口に抽出用の容器をセットする。
ステップＳ１０５では、所定の流速で二酸化炭素を圧力装置の抽出部に投入し、所定時間、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出処理を行う。ステップＳ１０５を経ると、超臨界状態により藍の葉の粉末から所定量のトリプタンスリンが抽出される。
次に実施例１～５に関して説明する。図１５は、実施例１～５の実験結果をまとめた表である。
【0018】
＜＜実施例１＞＞
実施例１においては、上記試料のセッティング、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出の条件を以下のように設定し、実施形態１のトリプタンスリンの抽出を行った。
（１）抽出条件
実施例１においては、実施形態１におけるステップ１０２～ステップ１０５の抽出を以下の条件で行った。
・抽出試料：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：３時間１７分
（２）ＨＰＬＣ測定条件
また、実施例１では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、以下の条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
・カラム：大阪ソーダ製 ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ Ｃ１８ ＭＧ ４．６×２５０ｍｍ
・溶離液：７０％エタノール水溶液 ５００μｌ／ｍｉｎ
・検出波長：２５０ｎｍ
・カラム温度：４０℃
・サンプル注入量：５μｌ
・標準物質：和光純薬工業製トリプタンスリン
（３）結果
上記条件の下で、圧力装置のＨＰＬＣ測定をした結果、トリプタンスリンが２．２８μｇ存在することが確認された。
実施例１においては、上記試料のセッティング、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出の条件を以下のように設定し、実施形態１のトリプタンスリンの抽出を行った。
（１）抽出条件
実施例１においては、実施形態１におけるステップ１０２～ステップ１０５の抽出を以下の条件で行った。
・抽出試料：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：３時間１７分
（２）ＨＰＬＣ測定条件
また、実施例１では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、以下の条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
・カラム：大阪ソーダ製 ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ Ｃ１８ ＭＧ ４．６×２５０ｍｍ
・溶離液：７０％エタノール水溶液 ５００μｌ／ｍｉｎ
・検出波長：２５０ｎｍ
・カラム温度：４０℃
・サンプル注入量：５μｌ
・標準物質：和光純薬工業製トリプタンスリン
（３）結果
上記条件の下で、圧力装置のＨＰＬＣ測定をした結果、トリプタンスリンが２．２８μｇ存在することが確認された。
【0019】
＜＜実施例２＞＞
実施例２では、実施例１の抽出条件のうち、二酸化炭素の流速を４．０００ｍｌ／ｍｉｎに変更して抽出処理を行った。各設定条件は以下の通りである。
（１）抽出条件
・抽出試料：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・二酸化炭素の流速：４．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：３時間３８分
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例２では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
（３）結果
上記条件の下で、ＨＰＬＣ測定した結果、トリプタンスリンが４．４２μｇ存在することが確認された。
実施例２では、実施例１の抽出条件のうち、二酸化炭素の流速を４．０００ｍｌ／ｍｉｎに変更して抽出処理を行った。各設定条件は以下の通りである。
（１）抽出条件
・抽出試料：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・二酸化炭素の流速：４．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：３時間３８分
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例２では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
（３）結果
上記条件の下で、ＨＰＬＣ測定した結果、トリプタンスリンが４．４２μｇ存在することが確認された。
【0020】
＜＜実施例３＞＞
実施例３では、オーブン温度が７０℃、出口圧が１０ＭＰａであって、他の抽出条件は、実施例１の抽出条件と同じ設定で、トリプタンスリンの抽出を行った。
実施例３では、オーブン温度が７０℃、出口圧が１０ＭＰａであって、他の抽出条件は、実施例１の抽出条件と同じ設定で、トリプタンスリンの抽出を行った。
【0021】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：７０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：７０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
【0022】
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例３では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
実施例３では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0023】
（３）結果
出口圧１０ＭＰａの場合のトリプタンスリン総抽出量は、４．５６μｇであった。
出口圧１０ＭＰａの場合のトリプタンスリン総抽出量は、４．５６μｇであった。
【0024】
＜＜実施例４＞＞
実施例４では、オーブン温度が７０℃、出口圧が２０ＭＰａであって、他の抽出条件は、実施例１の抽出条件と同じ設定で、トリプタンスリンの抽出を行った。
実施例４では、オーブン温度が７０℃、出口圧が２０ＭＰａであって、他の抽出条件は、実施例１の抽出条件と同じ設定で、トリプタンスリンの抽出を行った。
【0025】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：７０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：２０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：７０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：２０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
【0026】
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例４では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
実施例４では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0027】
（３）結果
出口圧２０ＭＰａの場合のトリプタンスリン総抽出量は、６１．２５５μｇであった。
出口圧２０ＭＰａの場合のトリプタンスリン総抽出量は、６１．２５５μｇであった。
【0028】
＜＜実施例５＞＞
実施例５では、オーブン温度が７０℃、出口圧が３０ＭＰａであって、他の抽出条件は、実施例１の抽出条件と同じ設定で、トリプタンスリンの抽出を行った。
実施例５では、オーブン温度が７０℃、出口圧が３０ＭＰａであって、他の抽出条件は、実施例１の抽出条件と同じ設定で、トリプタンスリンの抽出を行った。
【0029】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：７０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：３０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：７０℃
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：３０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
【0030】
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例５では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
実施例５では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0031】
（３）結果
出口圧３０ＭＰａの場合のトリプタンスリン総抽出量は、９０．９μｇであった。
＜＜実施例３～５の考察＞＞
図３は実施例３～５の抽出量と出口圧の関係を表にまとめたものである。
３０ＭＰａの場合の抽出量は、１０ＭＰａの場合の約２０倍であった。また、図３の表より１０ＭＰａ以下では、抽出量が低いことが推察される。
出口圧３０ＭＰａの場合のトリプタンスリン総抽出量は、９０．９μｇであった。
＜＜実施例３～５の考察＞＞
図３は実施例３～５の抽出量と出口圧の関係を表にまとめたものである。
３０ＭＰａの場合の抽出量は、１０ＭＰａの場合の約２０倍であった。また、図３の表より１０ＭＰａ以下では、抽出量が低いことが推察される。
【0032】
＜実施形態２＞
＜実施形態２：概要＞
実施形態２は、実施形態を１基礎をとして超臨界状態での抽出を実現する際にエントレーナーとしてエタノール又はエタノール水溶液を用いることを特徴とする。
図１３は、実施形態２のトリプタンスリンの抽出方法の処理の流れの一例を示す図であ
る。実施形態２におけるトリプタンスリンの抽出方法は、下記に示すステップＳ１０１
～ステップＳ１０５を含む。さらに、ステップＳ１０６が含まれることが好ましい。
ステップＳ１０１は主に、所定量の藍の葉を乾燥及び粉末化するための工程である。ス
テップＳ１０２～ステップＳ１０５は主に、エントレーナー用いた超臨界状態によって
上記の藍の葉の粉末からトリプタンスリンを抽出するための工程である。ステップ１
０６は主に、トリプタンスリンを上記の抽出物から単離するための工程である。以上の処
理を経ることによって、トリプタンスリンの抽出及び分離を効率的に行うことができる。
実施形態２では、ステップＳ１０２～Ｓ１０５の抽出において、エントレーナーとして
エタノール水溶液またはエタノールを使うことを特徴としている。以下各ステップについて詳述する。
＜実施形態２：概要＞
実施形態２は、実施形態を１基礎をとして超臨界状態での抽出を実現する際にエントレーナーとしてエタノール又はエタノール水溶液を用いることを特徴とする。
図１３は、実施形態２のトリプタンスリンの抽出方法の処理の流れの一例を示す図であ
る。実施形態２におけるトリプタンスリンの抽出方法は、下記に示すステップＳ１０１
～ステップＳ１０５を含む。さらに、ステップＳ１０６が含まれることが好ましい。
ステップＳ１０１は主に、所定量の藍の葉を乾燥及び粉末化するための工程である。ス
テップＳ１０２～ステップＳ１０５は主に、エントレーナー用いた超臨界状態によって
上記の藍の葉の粉末からトリプタンスリンを抽出するための工程である。ステップ１
０６は主に、トリプタンスリンを上記の抽出物から単離するための工程である。以上の処
理を経ることによって、トリプタンスリンの抽出及び分離を効率的に行うことができる。
実施形態２では、ステップＳ１０２～Ｓ１０５の抽出において、エントレーナーとして
エタノール水溶液またはエタノールを使うことを特徴としている。以下各ステップについて詳述する。
【0033】
＜試料（藍の葉の粉末）の準備＞
ステップＳ１０１は、藍の葉を乾燥及び粉砕することでトリプタンスリンを抽出するための試料を準備する工程である。内容は、実施形態１のもの同様であるため、説明は省略する。
ステップＳ１０１は、藍の葉を乾燥及び粉砕することでトリプタンスリンを抽出するための試料を準備する工程である。内容は、実施形態１のもの同様であるため、説明は省略する。
【0034】
＜試料のセッティング、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出＞
次に、ステップＳ１０２～ステップＳ１０６の工程によって、試料の圧力装置へのセッティングおよび超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出を行う。
図２は、ステップＳ１０２～ステップＳ１０５で用いられる装置等の仕組みを説明するための概略図である。
ステップＳ１０２～ステップＳ１０４の処理内容は、実施形態１のものと同様であるため、説明は省略する。
ステップＳ１０５では、所定の流速で二酸化炭素を圧力装置の抽出部に投入するとともにエントレーナーとしてエタノール又はエタノール水溶液を抽出部に投入して所定時間、超臨界状態での抽出処理を行う。ステップＳ１０５を経ると、超臨界状態により藍の葉の粉末から所定量のトリプタンスリンが抽出される。
次に、ステップＳ１０２～ステップＳ１０６の工程によって、試料の圧力装置へのセッティングおよび超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出を行う。
図２は、ステップＳ１０２～ステップＳ１０５で用いられる装置等の仕組みを説明するための概略図である。
ステップＳ１０２～ステップＳ１０４の処理内容は、実施形態１のものと同様であるため、説明は省略する。
ステップＳ１０５では、所定の流速で二酸化炭素を圧力装置の抽出部に投入するとともにエントレーナーとしてエタノール又はエタノール水溶液を抽出部に投入して所定時間、超臨界状態での抽出処理を行う。ステップＳ１０５を経ると、超臨界状態により藍の葉の粉末から所定量のトリプタンスリンが抽出される。
【0035】
＜トリプタンスリンの単離＞
ステップＳ１０５に続いてステップＳ１０６が行われることが好ましい。
ステップＳ１０６は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることでトリプタンスリンの単離を行うためのステップである。
具体的に説明すると、トリプタンスリンよりも沸点が低いエントレーナーとトリプタンスリンを含む溶液の温度が、エントレーナーが蒸気となりトリプンタスリンが蒸気でない温度になるまで、その溶液を加熱し、それによりトリプタンスリンを単離する。ステップＳ１０６は、例えば、上記ステップＳ１０５で得られた抽出物が入ったガラス容器に対して公知のローターリーエバポレータ（不図示）を用いて抽出する処理であってよい。ローターリーエバポレータを用いてトリプタンスリンの単離を行う場合、例えば以下の手順で行うことが考えられる。
まず、ステップＳ１０５で得られた抽出液が入ったフラスコ内を減圧し、溶媒の沸点を下げる。すると、回転する上記フラスコ内で所定温度まで加熱された液体（エントレーナー等）は、蒸気として凝縮器へ流れる。冷却器内のパイプには冷却水が流れているため、蒸気が冷やされ液化して回収フラスコに流れる。これにより、フラスコからエントレーナーが除去され、トリプタンスリンの単離が可能となる。次に実施例６～８について説明する。図１６は、実施例６～８の実験結果をまとめた表である。
ステップＳ１０５に続いてステップＳ１０６が行われることが好ましい。
ステップＳ１０６は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることでトリプタンスリンの単離を行うためのステップである。
具体的に説明すると、トリプタンスリンよりも沸点が低いエントレーナーとトリプタンスリンを含む溶液の温度が、エントレーナーが蒸気となりトリプンタスリンが蒸気でない温度になるまで、その溶液を加熱し、それによりトリプタンスリンを単離する。ステップＳ１０６は、例えば、上記ステップＳ１０５で得られた抽出物が入ったガラス容器に対して公知のローターリーエバポレータ（不図示）を用いて抽出する処理であってよい。ローターリーエバポレータを用いてトリプタンスリンの単離を行う場合、例えば以下の手順で行うことが考えられる。
まず、ステップＳ１０５で得られた抽出液が入ったフラスコ内を減圧し、溶媒の沸点を下げる。すると、回転する上記フラスコ内で所定温度まで加熱された液体（エントレーナー等）は、蒸気として凝縮器へ流れる。冷却器内のパイプには冷却水が流れているため、蒸気が冷やされ液化して回収フラスコに流れる。これにより、フラスコからエントレーナーが除去され、トリプタンスリンの単離が可能となる。次に実施例６～８について説明する。図１６は、実施例６～８の実験結果をまとめた表である。
【0036】
＜＜実施例６＞＞
実施例６においては、実施形態２のトリプタンスリンの抽出を以下の条件で行った。
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：５．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：５０％濃度エタノール水溶液
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：５時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例６では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
実施例６においては、実施形態２のトリプタンスリンの抽出を以下の条件で行った。
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：５．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：５０％濃度エタノール水溶液
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：５時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例６では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0037】
（３）結果および考察
図５は、５０％濃度のエタノール水溶液をエントレーナーとして用いた場合のトリプタンスリンの抽出量を時間別に表したものである。
上記の抽出条件で実験を行った結果、抽出物はすべて固体として得られた。０－１時間目の計測に用いられた上記５００ｍｌ三角フラスコの底には、わずかに付着物がみられた（図６の左側の容器）。一方１－２時間目以降の場合では、肉眼で抽出物は確認できなかった（図６の右側の容器）。上記の抽出時間中、１時間ごとに得られた各抽出物が時間別に別々に入れられた各フラスコに、５０％濃度エタノール水溶液１０ｍｌを加えて攪拌して付着物を溶解させた。図７は１時間ごとの抽出物の写真である（図７では、向かって左から２番目の容器から右に向かって時間順に容器が並んでいる）。０－１時間目のものにのみ着色が確認された。
図５は、５０％濃度のエタノール水溶液をエントレーナーとして用いた場合のトリプタンスリンの抽出量を時間別に表したものである。
上記の抽出条件で実験を行った結果、抽出物はすべて固体として得られた。０－１時間目の計測に用いられた上記５００ｍｌ三角フラスコの底には、わずかに付着物がみられた（図６の左側の容器）。一方１－２時間目以降の場合では、肉眼で抽出物は確認できなかった（図６の右側の容器）。上記の抽出時間中、１時間ごとに得られた各抽出物が時間別に別々に入れられた各フラスコに、５０％濃度エタノール水溶液１０ｍｌを加えて攪拌して付着物を溶解させた。図７は１時間ごとの抽出物の写真である（図７では、向かって左から２番目の容器から右に向かって時間順に容器が並んでいる）。０－１時間目のものにのみ着色が確認された。
【0038】
トリプタンスリンを上記の方法で抽出する際に、エントレーナーとして５０％濃度のエタノール水溶液を用いると、５時間の抽出で１１０．５μｇのトリプタンスリンが回収された。抽出物を５０％エタノール水溶液に溶解させると、最初の１時間の抽出物にのみ着色が認められた。エントレーナーが１００％濃度エタノールの場合（後述の実施例７の場合）と５０％濃度エタノール水溶液の場合とを比較すると抽出物の着色の程度から、前者の場合の方がトリプタンスリンの抽出量は多いと考えられる。一方後者は透明度が高く、トリプタンスリン以外の夾雑物が少ないと考えられる。
【0039】
＜＜実施例７＞＞
実施例７では、エントレーナーとして１００％濃度のエタノールを用いて、実施形態２の超臨界状態によるトリプタンスリン抽出を行った。
抽出条件をまとめると以下の通りである。
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：５．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナーの種類：エタノール
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：５時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例７では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
実施例７では、エントレーナーとして１００％濃度のエタノールを用いて、実施形態２の超臨界状態によるトリプタンスリン抽出を行った。
抽出条件をまとめると以下の通りである。
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：５．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナーの種類：エタノール
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：５時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例７では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0040】
（３）結果及び考察
図８は、１００％濃度エタノールをエントレーナーとして用いた場合のトリプタンスリンの抽出量を時間別に表したものである。上記の抽出による抽出液量は７．８８ｍｌ、トリプタンスリン抽出量は２０６．９μｇとなった。
上記の１時間ごとに得られた各抽出物がそれぞれ入れられた各々のフラスコに、５０％エタノール水溶液１０ｍｌを加えて攪拌して付着物を溶解させた。すべての時間別の抽出物に赤褐色の着色が見られた。図９は１時間ごとの抽出物の写真である（図９では、向かって左から右に時間順に容器が並んでいる）。
図８は、１００％濃度エタノールをエントレーナーとして用いた場合のトリプタンスリンの抽出量を時間別に表したものである。上記の抽出による抽出液量は７．８８ｍｌ、トリプタンスリン抽出量は２０６．９μｇとなった。
上記の１時間ごとに得られた各抽出物がそれぞれ入れられた各々のフラスコに、５０％エタノール水溶液１０ｍｌを加えて攪拌して付着物を溶解させた。すべての時間別の抽出物に赤褐色の着色が見られた。図９は１時間ごとの抽出物の写真である（図９では、向かって左から右に時間順に容器が並んでいる）。
【0041】
抽出液は赤褐色に呈色しており、トリプタンスリン以外の物質も含まれると推察される。さらに、抽出物中のトリプタンスリンの濃度は、最初の１時間のものがもっとも高く、その後、徐々に減少した。抽出液中のトリプタンスリン濃度は最初の１時間が５６．５μｇ／ｍｌと最も高く、その後徐々に低下し、５時間目には１２．５μｇ／ｍｌとなった。
【0042】
一般に超臨界流体は、高圧・高密度であるため、抽出溶媒とその中に溶けた溶質との分子間引力の効果が大きくなる、そのため、より多くの溶質分子が抽出されて流体中に安定して存在することができる。このような作用により、本実施例の超臨界での抽出法により効率的にトリプタンスリンを抽出できると考えられる。
【0043】
＜＜実施例８＞＞
実施例８では、エントレーナーとしてエタノールを用いて、実施形態２の超臨界状態でのトリプタンスリン抽出を行った。
抽出条件をまとめると以下の通りである。
実施例８では、エントレーナーとしてエタノールを用いて、実施形態２の超臨界状態でのトリプタンスリン抽出を行った。
抽出条件をまとめると以下の通りである。
【0044】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：５．００ｇ
・オーブン温度：８０℃
・エントレーナー：５０％濃度エタノール水溶液
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：１２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例８では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
・抽出試料（藍の葉）：５．００ｇ
・オーブン温度：８０℃
・エントレーナー：５０％濃度エタノール水溶液
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：１２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例８では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0045】
（３）結果
抽出されたトリプタンスリン含量は、５６５μｇであった。
抽出されたトリプタンスリン含量は、５６５μｇであった。
【0046】
＜＜比較例１＞＞
次に、特許文献１に開示されたトリプタンスリンの抽出方法を参考にして、以下に示す方法でトリプタンスリンの抽出を行った。
藍の葉粉末０．５０ｇを、ねじ口バイアル瓶にとり、リモネン５．００ｍｌを加えて２０℃の恒温槽内でマグネチックスターラーにより１２時間攪拌した。
その後、懸濁試料を遠心分離（８０００×ｇ、４℃、１０分間）により固液分離した。これにより得られる抽出物のトリプタンスリンの量を、以下の条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって定量した。
（１）ＨＰＬＣ測定条件
・カラム：大阪ソーダ製 ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ Ｃ１８ ＭＧ ４．６×２５０ｍｍ
・溶離液：７０％エタノール水溶液 ５００μｌ／ｍｉｎ
・検出波長：２５０ｎｍ
・カラム温度：４０℃
・サンプル注入量：５μｌ
・標準物質：和光純薬工業製トリプタンスリン
次に、特許文献１に開示されたトリプタンスリンの抽出方法を参考にして、以下に示す方法でトリプタンスリンの抽出を行った。
藍の葉粉末０．５０ｇを、ねじ口バイアル瓶にとり、リモネン５．００ｍｌを加えて２０℃の恒温槽内でマグネチックスターラーにより１２時間攪拌した。
その後、懸濁試料を遠心分離（８０００×ｇ、４℃、１０分間）により固液分離した。これにより得られる抽出物のトリプタンスリンの量を、以下の条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって定量した。
（１）ＨＰＬＣ測定条件
・カラム：大阪ソーダ製 ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ Ｃ１８ ＭＧ ４．６×２５０ｍｍ
・溶離液：７０％エタノール水溶液 ５００μｌ／ｍｉｎ
・検出波長：２５０ｎｍ
・カラム温度：４０℃
・サンプル注入量：５μｌ
・標準物質：和光純薬工業製トリプタンスリン
【0047】
（２）結果
比較例１のリモネン抽出のトリプタンスリン含量は４３μｇ／ｇであった。
比較例１の抽出物には暗褐色の着色が見られた。実施例８の抽出物は、透明に近く着色がほとんど見られなかった。藍の葉１ｇ当たりの溶媒は、リモネン抽出で１０ｍｌ、超臨界二酸化炭素抽出で１６ｍｌとなった。図１４は、上記の抽出物の写真である。
図１４は、比較例１の抽出液（図１４左側）と実施例８の抽出液（図１４右側）の写真である。
比較例１のリモネン抽出のトリプタンスリン含量は４３μｇ／ｇであった。
比較例１の抽出物には暗褐色の着色が見られた。実施例８の抽出物は、透明に近く着色がほとんど見られなかった。藍の葉１ｇ当たりの溶媒は、リモネン抽出で１０ｍｌ、超臨界二酸化炭素抽出で１６ｍｌとなった。図１４は、上記の抽出物の写真である。
図１４は、比較例１の抽出液（図１４左側）と実施例８の抽出液（図１４右側）の写真である。
【0048】
＜実施形態３＞
＜実施形態３：概要＞
実施形態３は、実施形態１を基礎として超臨界状態での抽出を実現する際、エントレーナーとしてリモネンを用いることを特徴とする。
図１３は、トリプタンスリンの抽出方法の処理の流れの一例を示す図である。
実施形態１におけるトリプタンスリンの抽出方法は、下記に示すステップＳ１０１～
ステップＳ１０５を含む。さらに、ステップＳ１０６が含まれることが好ましい。
ステップＳ１０１は主に、所定量の藍の葉を乾燥及び粉末化するための工程である。
ステップＳ１０２～Ｓ１０５は主に、超臨界状態によって、上記の藍の葉の粉末からトリプタンスリンを抽出するための工程である。ステップＳ１０６は主に、トリプタンスリンを上記の抽出物から単離するための工程である。以上の処理を経ることによって、トリプタンスリンの抽出を効率的に行うことができる。実施形態３では、ステップＳ１０２～Ｓ１０５の抽出において、エントレーナーとしてリモネンを所定の手順で用いることを特徴としている。以下各ステップについて詳述する。
＜実施形態３：概要＞
実施形態３は、実施形態１を基礎として超臨界状態での抽出を実現する際、エントレーナーとしてリモネンを用いることを特徴とする。
図１３は、トリプタンスリンの抽出方法の処理の流れの一例を示す図である。
実施形態１におけるトリプタンスリンの抽出方法は、下記に示すステップＳ１０１～
ステップＳ１０５を含む。さらに、ステップＳ１０６が含まれることが好ましい。
ステップＳ１０１は主に、所定量の藍の葉を乾燥及び粉末化するための工程である。
ステップＳ１０２～Ｓ１０５は主に、超臨界状態によって、上記の藍の葉の粉末からトリプタンスリンを抽出するための工程である。ステップＳ１０６は主に、トリプタンスリンを上記の抽出物から単離するための工程である。以上の処理を経ることによって、トリプタンスリンの抽出を効率的に行うことができる。実施形態３では、ステップＳ１０２～Ｓ１０５の抽出において、エントレーナーとしてリモネンを所定の手順で用いることを特徴としている。以下各ステップについて詳述する。
【0049】
＜試料（藍の葉の粉末）の準備＞
ステップＳ１０１は、藍の葉を乾燥及び粉砕することでトリプタンスリンを抽出するための試料を準備する工程である。内容は、実施形態１のものと同様であるため説明は省略する。
ステップＳ１０１は、藍の葉を乾燥及び粉砕することでトリプタンスリンを抽出するための試料を準備する工程である。内容は、実施形態１のものと同様であるため説明は省略する。
【0050】
＜試料のセッティング、超臨界状態でのトリプタンスリンの抽出＞
ステップＳ１０２～ステップＳ１０４の処理内容は、実施形態１のものと同様であるため、説明は省略する。
ステップＳ１０５では、所定の流速で二酸化炭素を圧力装置の抽出部に投入するとともにエントレーナーとしてリモネンを抽出部に投入して所定時間、超臨界状態での抽出処理を行う。ステップＳ１０５を経ると、超臨界状態により藍の葉の粉末から所定量のトリプタンスリンが抽出される。
ステップＳ１０２～ステップＳ１０４の処理内容は、実施形態１のものと同様であるため、説明は省略する。
ステップＳ１０５では、所定の流速で二酸化炭素を圧力装置の抽出部に投入するとともにエントレーナーとしてリモネンを抽出部に投入して所定時間、超臨界状態での抽出処理を行う。ステップＳ１０５を経ると、超臨界状態により藍の葉の粉末から所定量のトリプタンスリンが抽出される。
【0051】
＜トリプタンスリンの単離＞
ステップＳ１０５に続いてステップＳ１０６が行われることが好ましい。
ステップＳ１０６は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることでトリプタンスリンの単離を行うためのステップである。
具体的に説明すると、トリプタンスリンよりも沸点が低いエントレーナーとトリプタンスリンを含む溶液の温度が、エントレーナー（リモネン）が蒸気となりトリプタンスリンが蒸気でない温度になるまで、その溶液を加熱し、それによりトリプタンスリンを単離する。ステップＳ１０６は、例えば、上記ステップＳ１０５で得られた抽出物が入ったガラス容器に対して公知のローターリーエバポレータ（不図示）を用いて抽出する処理であってよい。ローターリーエバポレータを用いてトリプタンスリンの単離を行う場合、例えば以下の手順で行うことが考えられる。
まず、ステップＳ１０５で得られた抽出液が入ったフラスコ内を減圧し、溶媒の沸点を下げる。すると、回転する上記フラスコ内で所定温度まで加熱された液体（エントレーナー等）は、蒸気として凝縮器へ流れる。冷却器内のパイプには冷却水が流れているため、蒸気が冷やされ液化して回収フラスコに流れる。これにより、フラスコからエントレーナーが除去され、トリプタンスリンの単離が可能となる。次に実施例９～１３について説明する。図１７は、実施例９～１２の実験結果をまとめた表である。
ステップＳ１０５に続いてステップＳ１０６が行われることが好ましい。
ステップＳ１０６は、沸点が相対的に低いエントレーナーを蒸発させることでトリプタンスリンの単離を行うためのステップである。
具体的に説明すると、トリプタンスリンよりも沸点が低いエントレーナーとトリプタンスリンを含む溶液の温度が、エントレーナー（リモネン）が蒸気となりトリプタンスリンが蒸気でない温度になるまで、その溶液を加熱し、それによりトリプタンスリンを単離する。ステップＳ１０６は、例えば、上記ステップＳ１０５で得られた抽出物が入ったガラス容器に対して公知のローターリーエバポレータ（不図示）を用いて抽出する処理であってよい。ローターリーエバポレータを用いてトリプタンスリンの単離を行う場合、例えば以下の手順で行うことが考えられる。
まず、ステップＳ１０５で得られた抽出液が入ったフラスコ内を減圧し、溶媒の沸点を下げる。すると、回転する上記フラスコ内で所定温度まで加熱された液体（エントレーナー等）は、蒸気として凝縮器へ流れる。冷却器内のパイプには冷却水が流れているため、蒸気が冷やされ液化して回収フラスコに流れる。これにより、フラスコからエントレーナーが除去され、トリプタンスリンの単離が可能となる。次に実施例９～１３について説明する。図１７は、実施例９～１２の実験結果をまとめた表である。
【0052】
＜＜実施例９＞＞
実施例９では、以下の条件でトリプタンスリンの抽出を行った。
抽出条件をまとめると以下の通りである。
実施例９では、以下の条件でトリプタンスリンの抽出を行った。
抽出条件をまとめると以下の通りである。
【0053】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例９では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：１０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例９では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0054】
（３）結果
出口圧１０ＭＰａの場合の総抽出量は５６．２４μｇであり、トリプタンスリンの濃度は３．３６μｇ／ｍｌであった。
出口圧１０ＭＰａの場合の総抽出量は５６．２４μｇであり、トリプタンスリンの濃度は３．３６μｇ／ｍｌであった。
【0055】
＜＜実施例１０＞＞
実施例１０では、実施例９の抽出条件のうち、出口圧の圧力のみを変化させて、トリプタンスリンの抽出を行った。
実施例１０では、実施例９の抽出条件のうち、出口圧の圧力のみを変化させて、トリプタンスリンの抽出を行った。
【0056】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：２０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例１０では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：２０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例１０では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0057】
（３）結果
出口圧２０ＭＰａの場合の総抽出量は５４．１１μｇであり、トリプタンスリンの濃度は、４．４１μｇ／ｍｌであった。
出口圧２０ＭＰａの場合の総抽出量は５４．１１μｇであり、トリプタンスリンの濃度は、４．４１μｇ／ｍｌであった。
【0058】
＜＜実施例１１＞＞
実施例１１では、実施例９の抽出条件のうち、出口圧の圧力のみを変化させて、トリプタンスリンの抽出を行った。
実施例１１では、実施例９の抽出条件のうち、出口圧の圧力のみを変化させて、トリプタンスリンの抽出を行った。
【0059】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：３０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例１１では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：４０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：３０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例１１では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【0060】
（３）結果
出口圧３０ＭＰａの場合の総抽出量は４３．１１μｇであり、トリプタンスリンの濃度は、５．０９μｇ／ｍｌであった。
＜＜実施例９～１１の考察＞＞
図１１は各出口圧における抽出量を表にまとめたものである。図１２は各出口圧におけるトリプタンスリンの濃度を表にまとめたものである。上記圧力範囲では、圧力が高くなるとトリプタンスリンの濃度が上昇することがわかる。
出口圧３０ＭＰａの場合の総抽出量は４３．１１μｇであり、トリプタンスリンの濃度は、５．０９μｇ／ｍｌであった。
＜＜実施例９～１１の考察＞＞
図１１は各出口圧における抽出量を表にまとめたものである。図１２は各出口圧におけるトリプタンスリンの濃度を表にまとめたものである。上記圧力範囲では、圧力が高くなるとトリプタンスリンの濃度が上昇することがわかる。
【0061】
＜＜実施例１２＞＞
実施例１２では、実施例９の抽出条件のうち、出口圧の圧力を３０ＭＰａに変更し、オーブン温度を８０℃に変更させた条件で、トリプタンスリンの抽出を行った。
実施例１２では、実施例９の抽出条件のうち、出口圧の圧力を３０ＭＰａに変更し、オーブン温度を８０℃に変更させた条件で、トリプタンスリンの抽出を行った。
【0062】
（１）抽出条件
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：８０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：３０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
・抽出試料（藍の葉）：１．００ｇ
・オーブン温度：８０℃
・エントレーナー：リモネン
・エントレーナーの添加速度：０．２００ｍｌ／ｍｉｎ
・二酸化炭素の流速：２．０００ｍｌ／ｍｉｎ
・出口圧：３０ＭＰａ
・抽出時間：２時間
【0063】
（２）ＨＰＬＣ測定条件
実施例１２では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
（３）結果
上記の抽出条件で実験を行った結果について説明する。オーブン温度８０℃の場合のトリプタンスリン総抽出量は、１２８．４４μｇであった。
実施例１２では、上記の超臨界状態によるトリプタンスリンの抽出量を、実施例１と同じ条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
（３）結果
上記の抽出条件で実験を行った結果について説明する。オーブン温度８０℃の場合のトリプタンスリン総抽出量は、１２８．４４μｇであった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【手続補正書】
【提出日】2023-01-17
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0011】
【図1】本発明の抽出処理で行われる処理の流れの一例を示した図である。
【図2】実施形態１の抽出処理で用いられる各装置の全体構成を表した図である。
【図3】実施例３～５の抽出量と出口圧の関係を表にまとめたものである。
【図4】実施形態２、３の抽出処理で用いられる各装置の全体構成を表した図である。
【図5】実施例６のトリプタンスリンの時間別抽出量を示した図である。
【図6】実施例６における、０－１時間目の計測にて得られた抽出物を示した図である。
【図7】実施例６における１時間ごとの抽出物の写真である。
【図8】実施例７のトリプタンスリンの抽出量を時間別に表したものである。
【図9】実施例７における、１時間ごとの抽出物の写真である。
【図10】実施例９における、１時間ごとの抽出物の液量、トリプタンスリンの濃度およびトリプタンスリンの抽出量を表にまとめたものである。
【図11】実施例９～１１の各出口圧と抽出量の関係を表にまとめたものである。
【図12】実施例９～１１の各出口圧とトリプタンスリンの濃度の関係を表にまとめたものである。
【図13】実施形態２、３の抽出処理で行われる処理の流れの例を示した図である。
【図14】比較例１におけるリモネン抽出の抽出液と実施例８の抽出液の写真である。
【図15】実施形態１の実施例１～５の実験結果をまとめた表である。
【図16】実施形態２の実施例６～８の実験結果をまとめた表である。
【図17】実施形態３の実施例９～１２の実験結果をまとめた表である。