特開 2024-80609 緑茶ペプチド組成物を含む抗肥満用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024080609

(43)【公開日】2024-06-13

(54)【発明の名称】緑茶ペプチド組成物を含む抗肥満用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/08 20190101AFI20240606BHJP

   A23L 33/18 20160101ALI20240606BHJP

   A23L 33/105 20160101ALI20240606BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20240606BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20240606BHJP

   C07K 14/415 20060101ALI20240606BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20240606BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20240606BHJP

   A61K 35/744 20150101ALI20240606BHJP

【ＦＩ】

A61K38/08

A23L33/18 ZNA

A23L33/105

C07K7/06

C07K7/08

C07K14/415

C12P21/02 A

A61P3/04

A61K38/10

A61K38/16

A61K35/747

A61K35/744

【審査請求】未請求

【請求項の数】17

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023180366

(22)【出願日】2023-10-19

(31)【優先権主張番号】10-2022-0166719

(32)【優先日】2022-12-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．Ｗｉｔｅｐｓｏｌ

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】506213681

【氏名又は名称】アモーレパシフィック コーポレーション

【氏名又は名称原語表記】ＡＭＯＲＥＰＡＣＩＦＩＣ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

【住所又は居所原語表記】１００， Ｈａｎｇａｎｇ－ｄａｅｒｏ， Ｙｏｎｇｓａｎ－ｇｕ， Ｓｅｏｕｌ， Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】110000556

【氏名又は名称】弁理士法人有古特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チョン， ヒョン ウ

(72)【発明者】

【氏名】チョン， ジノ

(72)【発明者】

【氏名】キム， ワンギ

(72)【発明者】

【氏名】ノ， チョン ファ

【テーマコード（参考）】

4B018

4B064

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B018LB01

4B018LB08

4B018MD20

4B018MD59

4B018ME14

4B018MF01

4B018MF02

4B018MF04

4B018MF11

4B018MF13

4B018MF14

4B064AG01

4B064BH07

4B064CA02

4B064CC15

4B064CE03

4B064CE10

4B064DA06

4B064DA10

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA17

4C084BA18

4C084BA19

4C084BA23

4C084CA13

4C084MA52

4C084NA14

4C084ZA701

4C084ZA702

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC56

4C087CA10

4C087CA11

4C087CA16

4C087MA52

4C087NA14

4C087ZA70

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA15

4H045BA16

4H045BA17

4H045BA18

4H045CA30

4H045EA27

4H045FA73

4H045GA01

4H045GA15

4H045GA21

(57)【要約】

【課題】本開示は、緑茶ペプチド組成物を含む抗肥満用組成物に関する。
【解決手段】本開示に係る緑茶ペプチド組成物は、優れた脂質代謝活性化により抗肥満効力を示し、様々な保健機能食品組成物、薬学組成物に適用することができる。
【選択図】図８

【特許請求の範囲】

【請求項1】

緑茶ペプチド組成物を有効成分として含む、抗肥満用組成物。

【請求項2】

前記緑茶ペプチド組成物が、配列番号１～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１種の緑茶ペプチドを含む、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項3】

前記緑茶ペプチド組成物が、緑茶タンパク質を植物性乳酸菌で発酵させて得られることを特徴とする、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項4】

前記植物性乳酸菌が、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）である、請求項３に記載の抗肥満用組成物。

【請求項5】

前記緑茶タンパク質が、緑茶を無水または含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールで抽出された１次エキスの残渣から得られることを特徴とする、請求項３に記載の抗肥満用組成物。

【請求項6】

前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコール中のアルコールの濃度が、２０～８０％（ｖ／ｖ）であることを特徴とする、請求項５に記載の抗肥満用組成物。

【請求項7】

前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールが、２０～８０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液であることを特徴とする、請求項６に記載の抗肥満用組成物。

【請求項8】

前記緑茶タンパク質が、前記１次エキスの残渣を熱水で抽出した２次エキスの残渣から得られることを特徴とする、請求項５に記載の抗肥満用組成物。

【請求項9】

前記緑茶ペプチド組成物が、脂肪細胞における脂質合成を阻害することを特徴とする、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項10】

前記緑茶ペプチド組成物が、ＳＲＥＢＰ１ｃ、ＡＣＣ、ＦＡＳ、及びＳＣＤ１のうち少なくとも１つの発現を減少させることを特徴とする、請求項９に記載の抗肥満用組成物。

【請求項11】

前記緑茶ペプチド組成物が、脂肪細胞における脂肪酸化を促進することを特徴とする、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項12】

前記緑茶ペプチド組成物が、ＡＣＯ、ＣＰＴ、ｍＣＡＤ、及びＰＰＡＲαのうち少なくとも１つの発現を増加させることを特徴とする、請求項１１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項13】

前記緑茶ペプチド組成物が、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成を促進することを特徴とする、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項14】

前記緑茶ペプチド組成物が、ＴＦＡＭ、ＮＤＵＦＡ９、ＣＯＸ４、ＡＴＰ５ａ、及びＵＣＰ２のうち少なくとも１つの発現を増加させることを特徴とする、請求項１３に記載の抗肥満用組成物。

【請求項15】

前記緑茶ペプチド組成物が、組成物の総重量に対して１～５０重量％含まれる、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項16】

前記緑茶ペプチド組成物が、１～４００ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【請求項17】

前記組成物が、薬学組成物または保健機能食品組成物であることを特徴とする、請求項１に記載の抗肥満用組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、緑茶ペプチド組成物を含む抗肥満用組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

茶木は、カメリア（Ｃａｍｅｌｌｉａ）属に分類される８２種のうちの１つで、現在アジアを中心にアフリカ、南アメリカ、オセアニアなどの約５０カ国で栽培されている。茶の種類は、茶葉の加工方法により大きく不発酵茶、半発酵茶、発酵緑茶、後発酵茶に区分され、その中で不発酵茶は、茶木に含まれるポリフェノールオキシダーゼを熱処理により失活させたもので、他の茶に比べてフラボノール（ｆｌａｖｏｎｏｌ）、フラバノン（ｆｌａｖａｎｏｎｅ）、フラボノイド（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ）などのポリフェノール（ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ）類が多く含まれており、強い抗酸化力を示し、それらの物質は、茶の乾燥重量の約３０％を占める。

【0003】

緑茶に含まれる様々な成分の薬理的なメカニズムが徐々に解明されるにつれて、一般人にもその価値が認識されつつあるが、特に、緑茶の主成分であるポリフェノールによる抗酸化作用、抗癌作用、血中コレステロール低下作用、抗老化作用、重金属解毒作用、虫歯予防及び口臭除去作用などの効果が実証されたことから、大きな注目を集めている。

【0004】

ペプチドは、植物に含まれる物質の中でも酸化に対して安定であり、構造が単純であるので高い皮膚効果が期待される物質である。植物におけるペプチドは、シグナル伝達物質として作用し、特に植物の成長と分化、外部の刺激による反応に関与することが知られている。

【0005】

一方、肥満は、エネルギー摂取と消費との不均衡により、体脂肪が過度に蓄積して脂肪細胞の数と大きさが増加することである。体内エネルギーは、中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）の形で脂肪細胞に貯蔵されてから、エネルギー源が枯渇すると、貯蔵された脂肪が遊離脂肪酸とグリセロールに分解され、エネルギー源として用いられるようになるが、エネルギーの過剰摂取は脂肪細胞の分化を促進し、体内の貯蔵脂肪量を増加させることから、肥満の直接的な原因となる。

【0006】

肥満は、内臓や腹部の脂肪蓄積による体型の変化だけでなく、様々な疾患の発症率を増加させる危険因子として作用する。内臓脂肪が過度に蓄えられると、体内の糖代謝に問題が生じ、ホルモン分泌異常、サイトカイン分泌異常などの症状が発生する。肥満による中性脂肪とＬＤＬコレステロールの増加、ＨＤＬコレステロールの減少は、体内の脂肪代謝異常を引き起こし、組織に存在するインスリン受容体を減少させ、さらにインスリン感受性も減少させ、細胞内に移動するブドウ糖の輸送が抑制されることから、高血糖、糖尿病を誘発することもある。また、肥満は、高脂血症、心血管系疾患、癌、呼吸器障害、脳卒中、骨関節炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）などの代謝疾患の発生と関係深いことが知られている。

【0007】

オルリスタット（ｏｒｌｉｓｔａｔ）やシブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎ）などの従来の抗肥満薬は、嘔吐、便秘、胃腸障害、心血管疾患などの深刻な副作用のあることが知られているため、効果的且つ安全な物質の開発に向けた努力が続けられている。脂肪細胞の分化を抑制する機能のある物質としては、レチノール、ビタミンＥ、ビタミンＵ、山椒の木エキス（抽出物）などが報告されており、安全且つ継続して摂取することができる天然物由来の抗肥満薬の開発研究が活発に行われている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】韓国登録特許第１０－１７４７２００号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本開示は、緑茶タンパク質と特定の植物性乳酸菌との培養により分離精製された新規なアミノ酸配列を有する緑茶ペプチドを有効成分として含むことで、優れた抗肥満効果を示す組成物を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

前記目的を達成するために、本発明の一実施例は、緑茶ペプチド組成物を有効成分として含む抗肥満用組成物を提供する。

【発明の効果】

【0011】

本開示に係る緑茶ペプチド組成物は、優れた脂質代謝活性化により抗肥満効力を示し、様々な保健機能食品組成物、薬学組成物に適用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】本発明の一実施例に係る緑茶ペプチドの調製工程を示す概略図である。

【図2A】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪合成阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図2B】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪合成阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図2C】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪合成阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図2D】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪合成阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図3A】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪酸化促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図3B】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪酸化促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図3C】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪酸化促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図3D】実験例１に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞における脂肪酸化促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図4A】実験例２に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成関連遺伝子の発現促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図4B】実験例２に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成関連遺伝子の発現促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図4C】実験例２に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成関連遺伝子の発現促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図4D】実験例２に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成関連遺伝子の発現促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図4E】実験例２に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成関連遺伝子の発現促進効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図5】実験例２に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各濃度において、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成促進効果を確認した結果図である（^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図6】実験例３に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における脂質蓄積阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図7A】実験例４に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における炎症反応阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．ＦＦＡ）。

【図7B】実験例４に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における炎症反応阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．ＦＦＡ）。

【図7C】実験例４に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における炎症反応阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．ＦＦＡ）。

【図7D】実験例４に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における炎症反応阻害効果を確認した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ．ＦＦＡ、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．ＦＦＡ）。

【図8】実験例５に係る加工方法による緑茶ペプチドの脂肪細胞における脂肪蓄積抑制効果を比較した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－）、^＊Ｐ＜０．０５ ｖｓ．（－））。

【図9】ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）と、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）との相同性を比較した結果図である。

【図10A】ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）及びラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）それぞれによる緑茶タンパク質分解物の分子量分析結果を示す図である。

【図10B】ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）及びラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）それぞれによる緑茶タンパク質分解物の分子量分析結果を示す図である。

【図11】実験例６に係る緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の各分子量画分における脂肪蓄積抑制効果を比較した結果図である（^＊＊＊Ｐ＜０．００１ ｖｓ．（－））。

【発明を実施するための形態】

【0013】

以下、本発明について詳細に説明する。

【0014】

本明細書において、「緑茶（茶；カメリアシネンシス；Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｓｉｎｅｎｓｉｓ）」は、チャノキ科に属する常緑広葉低木であり、その葉を乾燥した茶は、多方面で活用されている。特に、抗酸化作用、抗癌作用、心血管系において血中脂質減少作用、血液循環促進作用を示すことが知られている。前記緑茶は、茶葉、花、茎、果実、根、茎、及び根の芯からなる群から選択される少なくとも１つを含み、好ましくは葉であってもよい。

【0015】

本明細書において、「有効成分」とは、単独で所望の活性を示すか、あるいはそれ自体は活性のない担体と共に活性を示すことができる成分を意味する。

【0016】

本明細書において、「抗肥満」とは、体脂肪の減少、体脂肪蓄積の抑制、及び／または体重の減少を意味する。よって、肥満の予防、改善、及び治療を含む意味であり、さらに、体重が肥満または過体重に分類されないが、美容または健康目的で（いわゆるダイエット目的で）体重／体脂肪を減少させることを含む。

【0017】

本明細書において、前記「肥満」とは、それが遺伝的要因による肥満であるか、あるいは環境的要因による肥満であるかにかかわらず、脂肪組織が異常に増加した状態を意味し、体質指数（ＢＭＩ）の区分に従うときは、高度肥満（ＢＭＩが３０．０以上の場合）と肥満（ＢＭＩ２５～３０の場合）、過体重（ＢＭＩが２３～２５の場合）を含む意味である。

【0018】

本発明は、一態様において、緑茶ペプチド組成物を有効成分として含む抗肥満用組成物に関する。

【0019】

本発明は、別の態様において、緑茶ペプチド組成物の有効量を、それを必要とする対象体に投与することを含む、肥満の予防、改善、または治療方法に関する。

【0020】

本発明は、別の態様において、抗肥満用組成物を調製するための緑茶ペプチド組成物の用途に関する。

【0021】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、配列番号１～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１種の緑茶ペプチドを含んでもよい。具体的に、前記緑茶ペプチドは、ＡＹＫＲＲＫＧＫＦＡ（配列番号１）、ＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＦＹＬ（配列番号２）、ＩＳＫＩＷＮＳＥＶＰＥＴＥＶＫＮＥＡＥＳＰ（配列番号３）、ＰＦＦＣＥＫＭＭＥＴＮ（配列番号４）、ＲＦＬＨＥＲＭＡＹＹＨ（配列番号５）、ＲＮＬＮＲＬＱＲＬＬＳＭＫＱＥＹＳＰＲＮＨＬＧＳＲＷＲＥＹ（配列番号６）及びＴＴＳＳＲＫＫＥＫＰＲＲＦＷＮＮＨＥＥＶＦＬＩＴＴＫ（配列番号７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでもよい。

【0022】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物の６０％（ｗ／ｗ）以上、６５％（ｗ／ｗ）以上、７０％（ｗ／ｗ）以上、７５％（ｗ／ｗ）以上、８０％（ｗ／ｗ）以上、８５％（ｗ／ｗ）以上、９０％（ｗ／ｗ）以上、または９５％（ｗ／ｗ）以上が前記１種以上の緑茶ペプチドからなってもよい。

【0023】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物が、緑茶タンパク質を植物性乳酸菌で発酵させて得られてもよい。

【0024】

一実施例において、前記発酵は、ｐＨ５～８の条件で行われてもよい。具体的には、前記発酵は、ｐＨ５以上、ｐＨ５．２以上、ｐＨ５．４以上、ｐＨ５．６以上、ｐＨ５．８以上、ｐＨ６以上、ｐＨ６．２以上、ｐＨ６．４以上、ｐＨ６．６以上、ｐＨ６．８以上、ｐＨ７以上、ｐＨ７．２以上、ｐＨ７．４以上、ｐＨ７．６以上またはｐＨ７．８以上で行われてもよく、また、前記発酵は、ｐＨ８以下、ｐＨ７．８以下、ｐＨ７．６以下、ｐＨ７．４以下、ｐＨ７．２以下、ｐＨ７以下、ｐＨ６．８以下、ｐＨ６．６以下、ｐＨ６．４以下、ｐＨ６．２以下、ｐＨ６以下、ｐＨ５．８以下、ｐＨ５．６以下、ｐＨ５．４以下またはｐＨ５．２以下で行われてもよい。好ましくは、前記発酵は、ｐＨ６．８で行われてもよい。

【0025】

一実施例において、前記発酵は、２５～４５℃で行われてもよい。具体的には、前記発酵は、２５℃以上、２７℃以上、２９℃以上、３１℃以上、３３℃以上、３５℃以上、３７℃以上、３９℃以上、４１℃以上または４３℃以上で行われてもよく、また、前記発酵は、４５℃以下、４３℃以下、４１℃以下、３９℃以下、３７℃以下、３５℃以下、３３℃以下、３１℃以下、２９℃以下、または２７℃以下で行われてもよい。好ましくは、前記発酵は、３７℃で行われてもよい。

【0026】

一実施例において、前記発酵は、２４～７２時間にかけて行われてもよい。具体的には、前記発酵は、２４時間以上、２６時間以上、２８時間以上、３０時間以上、３２時間以上、３４時間以上、３６時間以上、３８時間以上、４０時間以上、４２時間以上、４４時間以上、４６時間以上、４８時間以上、５０時間以上、５２時間以上、５４時間以上、５６時間以上、５８時間以上、６０時間以上、６２時間以上、６４時間以上、６６時間以上、６８時間以上、または７０時間以上にかけて行われてもよく、また、前記発酵は、７２時間以下、７０時間以下、６８時間以下、６６時間以下、６４時間以下、６２時間以下、６０時間以下、５８時間以下、５６時間以下、５４時間以下、５２時間以下、５０時間以下、４８時間以下、４６時間以下、４４時間以下、４２時間以下、４０時間以下、３８時間以下、３６時間以下、３４時間以下、３２時間以下、３０時間以下、２８時間以下または２６時間以下にかけて行われてもよい。好ましくは、前記発酵は、４８時間にかけて行われてもよい。

【0027】

一実施例において、前記植物性乳酸菌は、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）であってもよい。より具体的には、前記植物性乳酸菌は、ラクチプランチバチルス・プランタルム ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１）（韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）、受託番号ＫＣＣＭ１１１７９Ｐ、受託日２０１１年３月２８日）である。

【0028】

前記一実施例において、前記緑茶タンパク質は、緑茶を無水または含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールで抽出された１次エキスの残渣から得られてもよい。

【0029】

一実施例において、前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコール中のアルコールの濃度は、２０～８０％（ｖ／ｖ）であってもよい。具体的には、前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコール中のアルコール濃度は、２０％（ｖ／ｖ）以上、２２％（ｖ／ｖ）以上、２４％（ｖ／ｖ）以上、２６％（ｖ／ｖ）以上、２８％（ｖ／ｖ）以上、３０％（ｖ／ｖ）以上、３２％（ｖ／ｖ）以上、３４％（ｖ／ｖ）以上、３６％（ｖ／ｖ）以上、３８％（ｖ／ｖ）以上／ｖ）以上、４０％（ｖ／ｖ）以上、４２％（ｖ／ｖ）以上、４４％（ｖ／ｖ）以上、４６％（ｖ／ｖ）以上、４８％（ｖ／ｖ）以上、５０％（ｖ／ｖ）以上、５２％（ｖ／ｖ）以上、５４％（ｖ／ｖ）以上、５６％（ｖ／ｖ）以上、５８％（ｖ／ｖ）以上、６０％（ｖ／ｖ）以上 ｖ）以上、６２％（ｖ／ｖ）以上、６４％（ｖ／ｖ）以上、６６％（ｖ／ｖ）以上、６８％（ｖ／ｖ）以上、７０％（ｖ／ｖ）以上、７２ ％（ｖ／ｖ）以上、７４％（ｖ／ｖ）以上、７６％（ｖ／ｖ）以上または７８％（ｖ／ｖ）以上であってもよく、また、８０％（ｖ／ｖ）以下、７８％（ｖ／ｖ）以下、７６％（ｖ／ｖ）以下、７４％（ｖ／ｖ）以下、７２％（ｖ／ｖ）以下、７０％（ｖ／ｖ）以下、６８％（ｖ／ｖ）以下、６６％（ｖ／ｖ）以下、６４％（ｖ／ｖ）以下、６２％（ｖ／ｖ）以下、６０％（ｖ／ｖ）以下、５８％（ｖ／ｖ）以下、５６％（ｖ／ｖ）以下、５４％（ｖ／ｖ）以下、５２％（ｖ／ｖ）以下、５０％（ｖ／ｖ）以下、４８％（ｖ／ｖ）以下、４６％（ｖ／ｖ）以下、４４％（ｖ／ｖ）以下、４２％（ｖ／ｖ）以下、４０％（ｖ／ｖ）以下、３８％（ｖ／ｖ）以下、３６％（ｖ／ｖ）以下、３４％（ｖ）／ｖ）以下、３２％（ｖ／ｖ）以下、３０％（ｖ／ｖ）以下、２８％（ｖ／ｖ）以下、２６％（ｖ／ｖ）以下、２４％（ｖ／ｖ）以下または２２％（ｖ／ｖ）以下であってもよい。

【0030】

一実施例において、前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールは、２０～８０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液であってもよい。具体的には、前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールは、２０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、２５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、３０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、３５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４１％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４２％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４３％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４４％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４６％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４７％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４８％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、４９％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５１％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５２％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５３％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５４％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５６％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５７％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５８％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、５９％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、６０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、６５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、７０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、７５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液または８０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液であってもよい。

【0031】

一実施例において、前記緑茶タンパク質は、前記１次エキスの残渣を熱水で抽出した２次エキスの残渣から得られてもよい。

【0032】

一実施例において、緑茶タンパク質は、２次エキスの残渣からアルカリ抽出、ろ過及び酸沈殿の過程を経て得られてもよい。

【0033】

図１に示されるように、本発明の一実施例に係る緑茶ペプチド組成物は、緑茶を酒精で１次抽出し、その後、残った残渣を熱水で２次抽出し、２次抽出後に残った残渣をアルカリで抽出、ろ過及び酸沈殿を経て得られた緑茶タンパク質を乳酸菌培養することで得られてもよい。

【0034】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞における脂質合成を阻害してもよい。

【0035】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、ＳＲＥＢＰ１ｃ（Ｓｔｅｒｏｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－１ｃ）、ＡＣＣ（Ａｃｅｔｙｌ－ＣｏＡ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）、ＦＡＳ（Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ）、及びＳＣＤ１（Ｓｔｅａｒｏｙｌ－ＣｏＡ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ－１）のうち少なくとも１つの発現を減少させてもよい。

【0036】

具体的には、前記緑茶ペプチド組成物は、ＳＲＥＢＰ１ｃ、ＡＣＣ、ＦＡＳ、及びＳＣＤ１のうち少なくとも１つの発現を減少させることによって、脂肪細胞における脂質合成を阻害してもよい。

【0037】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞における脂肪酸化を促進してもよい。

【0038】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、ＡＣＯ（Ａｃｙｌ－ＣｏＡ ｏｘｉｄａｓｅ）、ＣＰＴ（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ－ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）、ｍＣＡＤ（Ｍｅｄｉｕｍ－ｃｈａｉｎ ａｃｙｌ－ＣｏＡ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）、及びＰＰＡＲα（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ）のうち少なくとも１つの発現を増加させてもよい。

【0039】

具体的には、緑茶ペプチド組成物は、ＡＣＯ、ＣＰＴ、ｍＣＡＤ、及びＰＰＡＲαのうち少なくとも１つの発現を増加させることによって、脂肪細胞における脂肪酸化を促進してもよい。

【0040】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成を促進してもよい。

【0041】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、ＴＦＡＭ（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ａ）、ＮＤＵＦＡ９（ＮＡＤＨ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ［ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ］１ ａｌｐｈａ ｓｕｂｃｏｍｐｌｅｘ ｓｕｂｕｎｉｔ９）、ＣＯＸ４（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃｏｘｉｄａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ４）、ＡＴＰ５ａ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ， ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｆ１ ｃｏｍｐｌｅｘ、ｓｕｂｕｎｉｔ ａｌｐｈａ）及びＵＣＰ２（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ２）のうち少なくとも１つの発現を増加させてもよい。

【0042】

具体的には、前記緑茶ペプチド組成物は、ＴＦＡＭ、ＮＤＵＦＡ９、ＣＯＸ４、ＡＴＰ５ａ、及びＵＣＰ２のうち少なくとも１つの発現を増加させることによって、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成を促進してもよい。

【0043】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、抗肥満用組成物の総重量に対して１～５０重量％含まれてもよい。具体的には、前記緑茶ペプチド組成物は、抗肥満用組成物の総重量に対して１重量％以上、３重量％以上、５重量％以上、７重量％以上、１０重量％以上、１２重量％以上、１４重量％以上、１６重量％以上、１８重量％以上、２０重量％以上、２２重量％以上、２４重量％以上、２６重量％以上、２８重量％以上、３０重量％以上、３２重量％以上、３４重量％以上、３６重量％以上、３８重量％以上、４０重量％以上、４２重量％以上、４４重量％以上、４６重量％以上、または４８重量％以上の量で含まれてもよく、また、緑茶ペプチド組成物は、抗肥満用組成物の総重量に対して５０重量％以下、４８重量％以下、４６重量％以下、４４重量％以下、４２重量％以下、４０重量％以下、３８重量％以下、３６重量％以下、３４重量％以下、３２重量％以下、３０重量％以下、２８重量％以下、２６重量％以下、２４重量％以下、２２重量％以下、２０重量％以下、１８重量％以下、１６重量％以下、１４重量％以下、１２重量％以下、１０重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、５重量％以下、または３重量％以下の量で含まれてもよい。

【0044】

一実施例において、前記緑茶ペプチド組成物は、１～４００ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与されてもよい。具体的には、前記緑茶ペプチド組成物は、１ｍｇ／ｋｇ／日以上、５ｍｇ／ｋｇ／日以上、１０ｍｇ／ｋｇ／日以上、２０ｍｇ／ｋｇ／日以上、３０ｍｇ／ｋｇ／日以上、４０ｍｇ／ｋｇ／日以上、５０ｍｇ／ｋｇ／日以上、６０ｍｇ／ｋｇ／日以上、７０ｍｇ／ｋｇ／日以上、８０ｍｇ／ｋｇ／日以上、９０ｍｇ／ｋｇ／日以上、１００ｍｇ／ｋｇ／日以上、１５０ｍｇ／ｋｇ／日以上、２００ｍｇ／ｋｇ／日以上、２５０ｍｇ／ｋｇ／日以上、３００ｍｇ／ｋｇ／日以上、または３５０ｍｇ／ｋｇ／日以上の量で投与されてもよく、また、前記緑茶ペプチド組成物は、４００ｍｇ／ｋｇ／日以下、３５０ｍｇ／ｋｇ／日以下、３００ｍｇ／ｋｇ／日以下、２５０ｍｇ／ｋｇ／日以下、２００ｍｇ／ｋｇ／日以下、１５０ｍｇ／ｋｇ／日以下、１００ｍｇ／ｋｇ／日以下、９０ｍｇ／ｋｇ／日以下、８０ｍｇ／ｋｇ／日以下、７０ｍｇ／ｋｇ／日以下、６０ｍｇ／ｋｇ／日以下、５０ｍｇ／ｋｇ／日以下、４０ｍｇ／ｋｇ／日以下、３０ｍｇ／ｋｇ／日以下、２０ｍｇ／ｋｇ／日以下、１０ｍｇ／ｋｇ／日以下、または５ｍｇ／ｋｇ／日以下の量で投与されてもよい。

【0045】

一実施例において、前記抗肥満用組成物は、薬学組成物または食品組成物であってもよい。より具体的には、前記組成物は、抗肥満用薬学組成物または抗肥満用保健機能食品組成物であってもよい。

【0046】

前記食品組成物の剤形は特に限定されないが、例えば、錠剤、顆粒剤、丸剤、粉末剤、ドリンク剤などの液剤、カラメル、ゲル、バー、ティーバッグなどに剤形化されてもよい。各剤形の食品組成物は、有効成分に加えて当該分野で通常用いられる成分を、剤形または使用目的に応じて当業界の当業者が困難なく適宜選定して配合することができ、他の原料と同時に適用すると、相乗効果が起こり得る。

【0047】

前記組成物は、単なる摂取、飲用、注射投与、スプレー投与またはスクイーズ投与などの様々な方法で投与されてもよい。

【0048】

本発明の一態様に係る食品組成物は、例えば、チューインガム、カラメル製品、キャンディー類、氷果類、菓子類などの各種食品類、清涼飲料、ミネラルウォーター、アルコール飲料などの飲料製品、ビタミンやミネラルなどを含む保健機能食品製品であってもよい。

【0049】

本発明の一態様に係る食品組成物は、その有効成分に加えて食品添加物を含んでもよい。食品添加物は、一般的に食品を製造、加工、または保存する際に食品に添加されて混合または浸潤する物質として理解することができるが、食品と共に毎日、そして長期間にわたって摂取されるものであるため、その安全性が確保されなければならない。食品の製造・流通を規律する各国法律（韓国では「食品衛生法」である）による食品添加物公典には、安全性の確保された食品添加物が成分面または機能面で限定的に規定されている。韓国食品添加物公典（食品医薬品安全処告示「食品添加物基準及び規格」）では、食品添加物が成分面で化学的合成品、天然添加物及び混合製剤類に区分され規定されているが、それらの食品添加物は、機能面においては甘味剤、風味剤、保存剤、乳化剤、酸味料、増粘剤などに分類される。

【0050】

甘味剤は、食品に適切な甘味を付与するために用いられるものであり、天然のものまたは合成されたもののいずれも本発明の一態様に係る食品組成物に使用することができる。好ましくは、天然甘味剤を用いる場合であるが、天然甘味剤としては、トウモロコシシロップ固形物、蜂蜜、スクロース、フルクトース、ラクトース、マルトースなどの糖甘味剤が挙げられる。

【0051】

風味剤は、味や香りを良くするために用いられるもので、天然のものと合成されたものの両方を用いることができる。好ましくは、天然のものを用いる場合である。天然のものを用いると、風味以外に栄養強化といった目的にも役立つ。天然風味剤としては、リンゴ、レモン、柑橘類、ブドウ、イチゴ、モモなどから得られたものであってもよく、緑茶葉、アマドコロ、竹の葉、シナモン、菊の葉、ジャスミンなどから得られたものであってもよい。また、高麗人参（紅参）、タケノコ、アロエベラ、銀杏などから得られたものを用いてもよい。天然風味剤は、液相の濃縮物または固形相のエキスであってもよい。場合によっては合成風味剤を用いてもよく、合成風味剤としては、エステル、アルコール、アルデヒド、テルペンなどを用いてもよい。

【0052】

保存剤としては、ソルビン酸カルシウム、ソルビン酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸カルシウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム、ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸）などを用いてもよく、また乳化剤としては、アカシアガム、カルボキシメチルセルロース、キサンタンガム、ペクチンなどを用いてもよく、酸味料としては、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、グルコン酸、酒石酸、アスコルビン酸、酢酸、リン酸などを用いてもよい。酸味料は、味を高める目的に加えて、微生物の増殖を抑制する目的で、食品組成物が適正酸度となるように添加してもよい。増粘剤としては、懸濁化実現剤、沈降剤、ゲル形成剤、膨化剤などを用いてもよい。

【0053】

本発明の一態様に係る食品組成物は、前述の食品添加物に加えて、機能性と栄養性を補充・補強するために、当業界にて公知であり、食品添加物として安定性が確保された生理活性物質やミネラル類を含んでもよい。

【0054】

そのような生理活性物質としては、緑茶などに含まれるカテキン類、ビタミンＢ１、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１２などのビタミン類、トコフェロール、ジベンゾイルチアミンなどが挙げられ、ミネラル類としては、クエン酸カルシウムなどのカルシウム製剤、ステアリン酸マグネシウムなどのマグネシウム製剤、クエン酸鉄などの鉄製剤、塩化クロム、ヨウ素カリウム、セレニウム、ゲルマニウム、バナジウム、亜鉛などが挙げられる。

【0055】

本発明の一態様に係る食品組成物には、前述の食品添加物が製品の種類に応じて、その添加目的を達成することができる量で含まれてもよい。

【0056】

本発明の一態様に係る食品組成物に含まれ得る他の食品添加物に関しては、各国の食品公典または食品添加物公典を参照してもよい。

【0057】

本発明の一態様に係る前記薬学組成物は、有効成分に加えて薬学的に許容される担体を含む、当技術分野で公知の通常の方法で、投与経路に応じて経口用剤形または非経口用剤形に製造されてもよい。ここで投与経路は、局所経路、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、及び粘膜組織を介した直接吸収を含む任意の適切な経路であってもよく、少なくとも２つの経路を組み合わせて用いてもよい。少なくとも２つの経路の組み合わせの例は、投与経路に応じた少なくとも２つの剤形の薬物が組み合わせられた場合であり、例えば、いずれかの薬物を静脈内経路で１次的に投与し、他の薬物を局所経路で２次的に投与する場合である。

【0058】

薬学的に許容される担体は、投与経路または剤形によって当業界に周知であり、具体的には「大韓民国薬典」を含む各国の薬典を参照してもよい。

【0059】

本発明の一態様に係る薬学組成物が経口剤形に調整される場合、適切な担体と共に当技術分野で公知の方法に従って、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、懸濁液、ウェハなどの剤形に製造されてもよい。そのとき、好適な担体の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトールなどの糖類、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、小麦デンプンなどのデンプン類、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース類、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油、麦芽、ゼラチン、タルク、ポリオール、植物油、エタノール、グリセロールなどが挙げられる。製剤化する場合、必要に応じて適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、希釈剤などが含まれてもよい。適当な結合剤としては、デンプン、マグネシウムアルミニウムシリケート、デンプンペースト、ゼラチン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、グルコース、トウモロコシ甘味剤、アルギン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられ、潤滑剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウム塩とカルシウム塩、ポリエチレングリコールなどが挙げられ、崩壊剤としては、メチルセルロース、アガー（ａｇａｒ）、ベントナイト、キサンタンガム、アルギン酸またはそのナトリウム塩などが挙げられる。また希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソビトール、セルロース、グリシンなどが挙げられる。

【0060】

本発明の一態様に係る薬学組成物が非経口用剤形に調製される場合、適切な担体と共に当技術分野で公知の方法に従って、注射剤、経皮投与剤、鼻腔吸入剤及び坐剤の形態に製剤化されてもよい。注射剤として製剤化する場合、適切な担体としては、水性等張溶液または懸濁液を用いてもよく、具体的には、トリエタノールアミンを含有したＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）や注射用滅菌水、５％のデキストロースなどの等張溶液などを用いてもよい。経皮投与剤として製剤化する場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ剤、リニメント剤、エアロール剤などの形態で製剤化してもよい。鼻腔吸入剤の場合、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素などの適切な推進剤を用いてエアロゾルスプレーの形態に製剤化してもよく、坐剤に製剤化する場合、その担体としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、ポリエチレングリコール類、カカオ脂、ラウリン脂、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンステアレート類、ソルビタン脂肪酸エステル類などを用いてもよい。

【0061】

本発明の一態様に係る前記薬学組成物の適用量または投与量は、投与される対象の年齢、性別、体重、病状、及びその重症度、投与経路または処方者の判断に依存するであろう。それらの要因に基づく有効成分投与量の決定は、当技術分野の当業者の水準内に属する。

【0062】

本発明の一態様に係る抗肥満用組成物は、有効成分に加えて、抗肥満効果の上昇・補強のために、または血圧調節活性などの類似活性の付加による服用や摂取の利便性を向上させるために、当業界で既に安全性が確保され、対応する活性を有することが知られている任意の化合物または天然エキスをさらに含んでもよい。それらの化合物またはエキスには、各国薬典（韓国では「大韓民国薬典」）、各国保健機能食品公典（韓国では食品医薬品安全処告示である「健康機能食品基準及び規格」である）などの公定書に載っている化合物またはエキス、医薬品の製造・販売を規律する各国の法律（韓国では「薬事法」である）により、品目許可を受けた化合物またはエキス、保健機能食品の製造・販売を規律する各国の法律（韓国では「健康機能食品に関する法律」である）に従って機能性の認められた化合物またはエキスが含まれる。

【0063】

例えば、韓国の「健康機能食品に関する法律」に基づき、「体脂肪減少」として機能性が認められたガルシニアカンボジアの皮エキス、共役リノレン酸（遊離脂肪酸）、共役リノレン酸（トリグリセリド）、緑茶エキス、キトサン、ラクトバチルス・ガセリＢＮＲ１７（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＢＮＲ１７）、Ｌ－カルニチン酒石酸塩、グリーンマテエキス、グリーンコーヒービンエキス、エゴマの葉エキス、大豆胚芽エキスなどの複合物、アマチャヅル葉酒精抽出粉末、ラクトフェリン（牛乳精製タンパク質）、レモンバームエキス混合粉末、マテ熱水エキス、ワカメ複合エキス（ザンシゲン）、発酵酢ザクロ複合体、プーアル茶エキス、ソモッテ（ネズミ目豆）ペプチド複合体、 ワイルドマンゴー種子エキス、重鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）含有油脂、コレウス・フォルスコリエキス、キトオリゴ糖、グラチャーイ（Ｆｉｎｇｅｒ Ｒｏｏｔ）抽出粉末、ハイビスカスなどの複合エキスなどと、「血圧調節」で機能性が認められたＬ－グルタミン酸由来ＧＡＢＡ含有粉末、カツオブシオリゴペプチド、納豆菌培養粉末、サーモンペプチド、オリーブ葉エキス、イワシペプチド、カゼイン加水分解物、コエンザイムＱ１０、ブドウ種子酵素分解抽出粉末、海苔オリゴペプチドなどと、「血中中性脂肪改善」機能性が認められたＤＨＡ濃縮油脂、グロビン加水分解物、 竹葉エキス、植物油脂ジグリセリド、イワシ精製魚油、精製イカ油などと、「血糖制御」として機能性が認められたＬ－ａｒａｂｉｎｏｓｅ、ｎｏｐａｌエキス、シナモン抽出粉末、グアバ葉エキス、難消化性マルトデキストリン、凍結乾燥カイコ粉末、ナガイモ酒精エキス、バナバ葉エキス、桑葉エキスなどと、「疲労改善」で機能性が認められた発酵生成アミノ酸複合物、ケンポナシ果柄エキス、紅景天エキスなどと、「抗ストレス」として機能性が認められたＬ－テアニン、アシュアガンダエキス、乳タンパク質加水分解物、アマチャヅル葉エキスなどと、が、そのような化合物またはエキスに対応する。

【0064】

本発明は、一実施例として以下の実施形態を提供することができる。

【0065】

第１の実施形態は、緑茶ペプチド組成物を有効成分として含む、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0066】

第２の実施形態は、第１の実施形態において、前記緑茶ペプチド組成物は、配列番号１～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１種の緑茶ペプチドを含む、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0067】

第３の実施形態は、第１の実施形態及び第２の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、緑茶タンパク質を植物性乳酸菌で発酵させて得られることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0068】

第４の実施形態は、第１の実施形態ないし第３の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記植物性乳酸菌は、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）である、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0069】

第５の実施形態は、第１の実施形態ないし第４の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶タンパク質は、緑茶を無水または含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールで抽出された１次エキスの残渣から得られることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0070】

第６の実施形態は、第１の実施形態ないし第５の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコール中のアルコールの濃度は、２０～８０％（ｖ／ｖ）であることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0071】

第７の実施形態は、第１の実施形態ないし第６の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記含水Ｃ１～Ｃ６の低級アルコールは、２０～８０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液であることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0072】

第８の実施形態は、第１の実施形態ないし第７の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶タンパク質は、前記１次エキスの残渣を熱水で抽出した２次エキスの残渣から得られることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0073】

第９の実施形態は、第１の実施形態ないし第８の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞における脂質合成を阻害することを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0074】

第１０の実施形態は、第１の実施形態ないし第９の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物が、ＳＲＥＢＰ１ｃ、ＡＣＣ、ＦＡＳ、及びＳＣＤ１のうち少なくとも１つの発現を減少させることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0075】

第１１の実施形態は、第１の実施形態ないし第１０の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞における脂肪酸化を促進することを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0076】

第１２の実施形態は、第１の実施形態ないし第１１の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、ＡＣＯ、ＣＰＴ、ｍＣＡＤ、及びＰＰＡＲαのうち少なくとも１つの発現を増加させることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0077】

第１３の実施形態は、第１の実施形態ないし第１２の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞におけるミトコンドリア生合成を促進することを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0078】

第１４の実施形態は、第１の実施形態ないし第１３の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、ＴＦＡＭ、ＮＤＵＦＡ９、ＣＯＸ４、ＡＴＰ５ａ、及びＵＣＰ２のうち少なくとも１つの発現を増加させることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0079】

第１５の実施形態は、第１の実施形態ないし第１４の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、組成物の総重量に対して１～５０重量％含まれることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0080】

第１６の実施形態は、第１の実施形態ないし第１５の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記緑茶ペプチド組成物は、１～４００ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与されることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0081】

第１７の実施形態は、第１の実施形態ないし第１６の実施形態のうち少なくとも１つにおいて、前記組成物は、薬学組成物または保健機能食品組成物であることを特徴とする、抗肥満用組成物を提供することができる。

【0082】

以下、実施例及び試験例を挙げて、本発明の内容をより具体的に説明する。しかしながら、そのような実施例及び試験例は、本発明の内容の理解を助けるために提示されるものに過ぎず、そのような実施例及び試験例によって本発明の権利範囲が限定されるものではなく、当業界において通常周知の変形、置換及び挿入などが行われてもよく、それらも本発明の範囲に含まれる。

【0083】

［実施例１］
緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の調製
緑茶（ｃａｍｅｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，（株）農業法人オソルロック農場）５０ｋｇを１トンの抽出タンクに入れ、５０％（ｖ／ｖ）エタノールを１５倍数で加え、次に７０℃で２時間抽出（１次抽出）及びろ過してカテキン類を除去し、緑茶１次エキスの残渣を得た。得られた緑茶１次エキスの残渣固形分に１５倍の割合で精製水を添加し、９０℃で３時間抽出（２次抽出）及びろ過して水溶性多糖などを除去し、緑茶２次エキスの残渣を得た。得られた緑茶２次エキスの残渣固形分に１０倍の割合で２％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ（９８％，（株）ヨンジン）水溶液を添加し、７０℃で３時間抽出（アルカリ抽出）及びろ過してろ液を得た。得られたろ液を常温まで冷却し、３５％（ｗ／ｗ）塩酸（大井化金）を添加してｐＨを３．５～４．５以下にした。上澄み液を除去し、沈殿物を精製水で３～７回洗浄した後、大川原制ＯＣ－１６スプレードライヤー（ｉｎｌｅｔ ２２０℃，ｏｕｔｌｅｔ ９０℃）を用いて沈殿物を噴霧乾燥することで、粗タンパク質含量が５０％（ｗ／ｗ）以上の緑茶タンパク質を得た。緑茶タンパク質を１％（ｗ／ｗ）含有したラクチプランチバチルス・プランタルム ＡＰｓｕｌｏｃ ３３１２６１（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｔａｒｕｍ ＡＰｓｕｌｏｃ ３３１２６１）培地（精製水、ビタミン溶液、アミノ酸溶液、ミネラル溶液含有）を嫌気発酵槽に入れ、ｐＨ６．８及び３７℃で４８時間培養した後、培養液を４℃、１０，０００ｇで２０分間遠心分離（Ｌａｂｏｇｅｎｅ １５８０Ｒ（Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．ＫＬＧ４２２６１８０２２００２３））して上清みを得た。得られた上清みを７０℃のドライオーブンで濃縮し、濃縮液を４℃、１００，０００ｇで１時間遠心分離（Ｈｉｔａｃｈｉ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ＣＳ１５０ＮＸ）して上清みを得た。得られた上澄み液を膜ろ過（ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ ０．２２μｍ）してろ液を取得し、得られたろ液を凍結乾燥することで、緑茶ペプチド組成物（Ｇｒｅｅｎ Ｔｅａ Ｐｅｐｔｉｄｅ；ＧＴＰ）（緑茶ペプチド含有量１４％（ｗ／ｗ））を得た。

【0084】

一方、前記緑茶ペプチド組成物に含まれる緑茶ペプチドの配列は、以下のステップを経て分析した：
１）前記緑茶タンパク質を含有するラクチプランチバチルス・プランタルム ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１）培地を遠心分離して上清みを分離し、その後、膜ろ過及びサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）を経て低分子ペプチド区間で分画されたペプチドのみを取得するステップと、
２）１）で取得したペプチドを凍結乾燥及び脱塩（ｄｅ－ｓａｌｔｉｎｇ）し、その後、０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸に溶解してＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析するステップと、であり、
そのとき、試料３μｇ（タンパク質定量基準）を対象にＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行った。使用した機器及び分析条件は以下のとおりである。

【0085】

【表1】

【0086】

３）２）でＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析により得られたスペクトルファイル（ｓｐｅｃｔｒａ ｆｉｌｅ）を対象に緑茶（ｃａｍｅｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ［ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ ＩＤ：ＵＰ０００３２７４６８］）及び乳酸菌（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０１７４［ＮＣＢＩ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＧＣＡ＿０１４１３１７３５．１］、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１）タンパク質配列データベースを利用してペプチド配列を探索するステップであり、 そのとき活用した分析条件は以下のとおりである。

【0087】

【表2】

【0088】

前記ステップを経て分析された本発明の一実施例に係る緑茶ペプチド配列は、以下のとおりである。

【0089】

【表3】

【0090】

［実験例１］緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の濃度ごとの処理による脂肪細胞における脂質代謝関連遺伝子発現変化の確認
肥満とは、余剰栄養（エネルギー）が脂肪の形で脂肪細胞に過剰に蓄積する現象をいう。言い換えれば、肥満を改善する上で第一の指標となるのは、脂肪細胞における脂質蓄積抑制（体脂肪減少）といえる。脂肪細胞における脂質蓄積を抑制するためには、脂肪細胞における脂質合成を抑制し、脂肪消費（脂肪分解、脂肪酸化など）を促進させなければならない。そこで、緑茶ペプチドが脂肪細胞で脂肪酸合成を抑制し、脂肪燃焼を促進できるかどうかを調べるために、ＡＴＣＣから購入した３Ｔ３－Ｌ１脂肪前駆細胞を脂肪細胞に分化させた。脂肪細胞分化は、３Ｔ３－Ｌ１を１００％ｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで、ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）＋１０％ｂｏｖｉｎｅ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）培地で培養し、その後、さらに２日を置いて細胞間の完全密着を誘導した。そこにｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（１μＭ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、インスリン（１０μｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、３－イソブチル－１－メチルキサンチン（０．５ｍＭ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加したＤＭＥＭ＋１０％ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ）培地に４８時間処理し、脂肪細胞への分化を開始した。４８時間後、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１０μｇ／ｍＬのインスリン培地でさらに培養して完全な脂肪細胞への分化を誘導し、全細胞の８０％以上が脂肪前駆細胞から脂肪細胞に分化し、細胞形状が丸く変化して、内部に脂肪球を含有することを分化完了時点に選定した。細胞培養の過程で微生物による細胞汚染を防ぐために、抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン各１００Ｕ、１００ｍｇ／ｍＬ；Ｇｉｂｃｏ）を培地に添加した。

【0091】

そのように分化した脂肪細胞に、実施例１の緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）を様々な濃度（１０、５０、１００μｇ／ｍＬ）で２４時間処理し、その後、ＴａＫａＲａ ＭｉｎｉＢＥＳＴ Ｕｎｖｅｒｓｉａｌ ＲＮＡ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ）を用いて脂肪細胞からＲＮＡを抽出した。ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ １^ｓｔ－ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてｃＤＮＡを合成し、ＣＦＸ９６ ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて脂肪代謝関連遺伝子の発現変化を観察した。陽性対照群は、ＰＰＡＲα活性化によって脂肪酸化を促進し、脂肪合成を阻害する薬物であるフェノフィブラート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）（１００μＭ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。その結果を図２Ａ～図２Ｄ、図３Ａ～図３Ｄに示す。

【0092】

図２Ａ～図２Ｄに示されるように、実施例１による緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）を処理した脂肪細胞は、脂肪合成関連遺伝子（ＳＲＥＢＰ１ｃ、ＡＣＣ、ＦＡＳ、ＳＣＤ１）の発現が濃度依存的に減少することが確認され、特に、陽性対照群であるフェノフィブラートと同等またはそれ以上のレベルで脂肪合成関連遺伝子の発現が減少することが確認された。

【0093】

また、図３Ａ～図３Ｄの結果から、実施例１による緑茶ペプチド組成物を処理した脂肪細胞は、脂肪酸化関連遺伝子（ＡＣＯ、ＣＰＴ、ｍＣＡＤ、ＰＰＡＲα）の発現が濃度依存的に増加することが確認され、特に、陽性対照群であるフェノフィブラートと同等なレベルまで脂肪酸化関連遺伝子の発現が増加することが確認された。

【0094】

そのことから、本発明の一態様に係る緑茶ペプチド組成物は、脂肪細胞における脂肪合成を阻害し、脂肪酸化を促進して優れた肥満改善効果を示すことが分かる。

【0095】

［実験例２］緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の濃度ごとの処理による脂肪細胞におけるミトコンドリア増加の確認
実験例１の結果から、本発明の一態様に係る緑茶ペプチド組成物は、脂肪合成を阻害し、脂肪酸酸化を促進することが期待される。但し、脂肪酸が分解し、クレブス回路と電子伝達系を経てＡＴＰが生成される過程は、必然的に酸化ストレスを誘発する。十分な量のミトコンドリアと脱共役タンパク質は、過剰な酸化ストレスの発生を抑制し、より多くの脂肪をより安全に消費するのを助けることができる。そこで、緑茶ペプチドが単に脂肪酸化のみに影響を与えるのではなく、ミトコンドリア生合成及び脱共役タンパク質の発現も一緒に誘導するかどうかを調べるために、実験例１と同様の方法で、ミトコンドリア生合成関連遺伝子の発現をさらに確認した。その結果を図４Ａ～図４Ｅに示す。加えて、脂肪細胞におけるミトコンドリア増加の有無を確認した結果を図５に示した。

【0096】

図４Ａ～図４Ｅに示されるように、実施例１による緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）は、脂肪酸の酸化とエネルギーの生成が円滑に行われるように、ミトコンドリア及び電子伝達系構成遺伝子（ｔｆａｍ、ＮＤＵＦＡ９、ＣＯＸ４、ＡＴＰ５ａ、ＵＣＰ２）の発現も増加することが確認された。

【0097】

また、図５の結果から、実施例１による緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）は、脂肪細胞におけるミトコンドリアを有意に増加させることが確認された。

【0098】

それらの結果は、本発明の一態様に係る緑茶ペプチド組成物が、ＡＴＰ生成のために蓄積しておいたプロトンを熱に変換（消費）させることで、細胞維持のためにより多くの脂肪を燃焼させるように誘導すると共に、電子伝達系容量以上のプロトンの過剰な蓄積による酸化ストレスの発生確率を軽減するのに役立つことを示唆している。

【0099】

［実験例３］緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における脂質蓄積阻害効果の確認
実験例１により、緑茶ペプチドが脂肪酸合成を阻害し、脂肪酸酸化を促進できることが確認された。そこで、緑茶ペプチドが実際に脂肪細胞に蓄積された脂肪の量を減少させることができるかどうかを調べるために、分化した３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞に、実施例１の緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）を様々な濃度（１０、５０、１００μｇ／ｍＬ）で７２時間処理した。次いで細胞を１０％のホルマルデヒド溶液中で５分間固定し、３００ｎＭのＮｉｌｅ－ｒｅｄ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）溶液を用いて染色した。蓄積された脂肪の量は、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００ Ｍｕｌｔｉｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｔｅｃａｎ Ｔｒａｄｉｎｇ ＡＧ；ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ４９５ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ ５８５ｎｍ）機器を用いて定量した。その結果を図６に示す。

【0100】

図６に示されるように、本発明の一態様に係る緑茶ペプチド組成物を処理すると、脂肪細胞に蓄積された中性脂肪の量が有意に減少することが確認された。

【0101】

［実験例４］緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における炎症反応阻害効果の確認
炎症反応は、外部汚染源に対する第一の防御機構であり、バクテリアの細胞壁構成物質（ＬＰＳ）を検知することができるＴＬＲ４などによって媒介される。しかしながら、ＴＬＲ４は、ＬＰＳだけでなく、遊離脂肪酸（ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ；ＦＦＡ）も認識して炎症反応を媒介するが、そのように外部物質がなくても己で炎症反応を誘発する現象を慢性炎症反応という。慢性炎症反応は、インスリンシグナル伝達体系などを乱し、インスリン抵抗性、糖尿、高脂血症など様々な代謝合併症を引き起こすため、脂肪細胞内、さらには体内の慢性炎症反応を改善することは、肥満による代謝疾患を予防する上で非常に重要である。そこで、本発明の一態様に係る緑茶ペプチド組成物が肥満によって引き起こされる遊離脂肪酸媒介の炎症反応を改善できるかどうかを調べるために、分化した脂肪細胞に、緑茶ペプチド組成物を１０、５０、１００μｇ／ｍＬの濃度で２４時間前処理し、その後、１２時間にかけてＦＦＡ（０．５ｍＭ，Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）処理して炎症反応を誘発した。実験例１と同様の方法で、ＲＮＡ分離、ｃＤＮＡ合成を行い、その後、Ｑ－ＰＣＲで炎症反応関連遺伝子の発現を観察した。その結果を図７Ａ～図７Ｄに示す。

【0102】

図７Ａ～図７Ｄの結果から、実施例１による緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）は、脂肪細胞における炎症反応関連遺伝子（ＴＬＲ４、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ｉＮＯＳ）の発現を大幅に減少させ、脂肪細胞で発生する炎症反応が効果的に改善されることが確認された。

【0103】

［実験例５］異なる調製方法による緑茶ペプチド組成物（ＧＴＰ）の脂肪細胞における脂質蓄積阻害効果の確認
調製方法による緑茶ペプチドの抗肥満効力を比較するために、ｉ）実施例１の緑茶ペプチド組成物の調製過程中に得られた緑茶粗タンパク質、ｉｉ）実施例１の緑茶ペプチド組成物の調製過程中に得られた緑茶タンパク質を、精製水を用いて１：４０（ｗ／ｖ）の濃度で調製し、その後、３５％（ｗ／ｗ）塩酸を加えてｐＨ５に滴定してから、３７℃で６時間加水分解し、４℃、１０，０００ｇで遠心分離（Ｌａｂｏｇｅｎｅ １５８０Ｒ（Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．ＫＬＧ４２２６１８０２２００２３））で得られた上清み（緑茶タンパク質酸処理画分）、ｉｉｉ）実施例１の緑茶ペプチド組成物の調製過程で得られた緑茶タンパク質を、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ、ｐＨ８）を用いて１：４０（ｗ／ｖ）の濃度で調製し、その後、タンパク質分解酵素のブロメライン（ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）を緑茶タンパク質に対して１％（ｗ／ｖ）加え、４５℃、ｐＨ６．２で２４時間加水分解した。次いで、９０℃で３０分間加熱し、４℃、１０，０００ｇで遠心分離（Ｌａｂｏｇｅｎｅ １５８０Ｒ（Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．ＫＬＧ４２２６１８０２２００２３））により得られた上清み（緑茶タンパク質酵素処理画分）、及びｉｖ）実施例１において、ラクチプランチバチルス・プランタルム ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＡＰｓｕｌｌｏｃ ３３１２６１）の代わりに、動物性乳酸菌であるラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＫＣＴＣ ３５１０（ＡＴＣＣ菌株番号：ＡＴＣＣ ２５３０２、生物資源センター（ＫＣＴＣ））を用いた以外は、同様の方法で調製したペプチド組成物を一緒に処理し、抗肥満効力を比較した。具体的な実験方法は、緑茶粗タンパク質、緑茶タンパク質酸処理画分、緑茶タンパク質酵素（ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）処理画分、動物性乳酸菌であるラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）発酵ペプチド組成物、実施例１による緑茶ペプチド組成物をそれぞれ１００μｇ／ｍＬの濃度で７２時間処理したことを除いては、実験例３と同様に行った。その結果を図８に示す。

【0104】

図８の結果から、緑茶粗タンパク質、酸分解ペプチドは有意な脂質蓄積阻害効力を示さず、酵素分解ペプチド及び動物性乳酸菌発酵ペプチド組成物はごく僅かな効力を示すのに対し、本発明の一実施例に係る緑茶ペプチド組成物のみが、陽性対照群とほぼ同等なレベルで最も優れた脂質蓄積阻害活性を示すことが確認された。

【0105】

一方、図９は、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）と、ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）との相同性を分析した結果図である。相同性分析は、ＮＣＢＩ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｂａｎｋ／）から各菌株のゲノム情報（ｇｅｎｂａｎｋ）をダウンロードし、アノテーション（ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ）された保存タンパク質（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）の遺伝情報のみを残し、残りは捨てた後、集計全体数に対する比率で計算して算出した。そのとき、ＰＯＣＰ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）の計算のためにＲプログラムを利用し（コードソース：ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ｈｏｅｌｚｅｒ／ｐｏｃｐ．ｇｉｔ）、分析条件は、次のとおりである：
‐Ｅ値＝１×ｅ^－５
‐配列相同性（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）＝０．４
‐整列長さ（Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ）＝０．５。

【0106】

そのうち、２つのゲノムが５０％以上の相同性を示す場合、同じクラスター（ｃｌｕｓｔｅｒ）に分類し、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）とラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）は、相同性が４６．８４％であって、非常に似ていることが分かった。そのように、実施例１で使用したラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）と非常に類似した動物性乳酸菌であるラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）で発酵して得られた緑茶ペプチド組成物（ＰＣａｓｅｉ）の場合には、脂肪細胞における脂質蓄積阻害効力、すなわち、抗肥満効力を示さないことが確認された。故に、本発明の一実施例に係る緑茶ペプチド組成物の抗肥満効力は、植物性乳酸菌であるラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を用いた発酵によって得られることが分かる。

【0107】

［実験例６］緑茶ペプチド（ＧＴＰ）の分子量による抗肥満効果の確認
実施例１で調製した緑茶ペプチド組成物から分離・精製したペプチドの配列分析の結果、配列番号１～７のアミノ酸配列を有するペプチドを同定した。

【0108】

図１０Ａ及び図１０Ｂは、ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）及びラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）それぞれによる緑茶タンパク質分解物の分子量分析結果を示す図である。具体的には、分子量分析は、ＦＰＬＣ（Ｆａｓｔｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を用いてサイズ排除クロマトグラフィーを行い、ＦＰＬＣ施行装置及び緩衝液に対する具体的な条件は、以下のとおりである。

【0109】

【表4】

【0110】

図１０Ａ及び図１０Ｂに示されるように、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の発酵により得られた緑茶ペプチド組成物は、ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）で発酵した緑茶ペプチド（ＰＣａｓｅｉ）とは異なり、ほとんどが１０ｋＤａ以下の低分子ペプチドを含むことが確認された。

【0111】

そこで、実施例１で調製された緑茶ペプチド組成物を、分子量１０ｋＤａ基準で、ｄｉａｌｙｓｉｓ ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて低分子画分及び高分子画分に分離し、各試料を表４に記載の濃度で処理し、実験例３と同様の方法で、各試料の脂肪細胞における脂質蓄積阻害効力を比較した。その結果を図１１に示す。

【0112】

図１１に示されるように、ラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の発酵によって生成された新規ペプチドを多く含む低分子画分では、優れた脂質蓄積阻害効力を示すのに対し、新規ペプチドを含まない高分子画分では、脂質蓄積阻害効力が現れていないことが確認された。故に、本発明の一実施例に係る緑茶ペプチド組成物の抗肥満効力は、発酵乳酸菌であるラクチプランチバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）によって分解された新規ペプチドによることが分かる。

【0113】

［受託番号］
寄託機関名：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ１１１７９Ｐ
受託日：２０１１年３月２８日

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【配列表】

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