特開 2024-80681 柑橘類抽出物、化合物、及び新型コロナウイルスを抑制するための用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024080681

(43)【公開日】2024-06-13

(54)【発明の名称】柑橘類抽出物、化合物、及び新型コロナウイルスを抑制するための用途

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/75 20060101AFI20240606BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240606BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 31/37 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 31/352 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 31/353 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 31/12 20060101ALI20240606BHJP

   C07D 311/32 20060101ALI20240606BHJP

   C07C 49/84 20060101ALI20240606BHJP

   C07D 493/04 20060101ALI20240606BHJP

   A61K 36/752 20060101ALI20240606BHJP

【ＦＩ】

A61K36/75

A61P11/00

A61P31/14

A61K31/37

A61K31/352

A61K31/353

A61K31/12

C07D311/32 CSP

C07C49/84 E

C07D493/04 101A

A61K36/752

【審査請求】有

【請求項の数】16

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023203589

(22)【出願日】2023-12-01

(31)【優先権主張番号】111146470

(32)【優先日】2022-12-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523455105

【氏名又は名称】豐苗生物科技股▲分▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＦＯＮＧ－ＭＩＡＯ ＢＩＯＴＥＣＨ ＣＯＲＰ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ． １－１， Ｚｈｏｎｇｚｈｏｕ， Ｚｈｏｎｇｚｈｏｕ Ｖｉｌ．， Ｘｕｅｊｉａ Ｄｉｓｔ．， Ｔａｉｎａｎ Ｃｉｔｙ ７２６５１， Ｔａｉｗａｎ

(71)【出願人】

【識別番号】523455116

【氏名又は名称】劉 宗翰

【氏名又は名称原語表記】ＴＺＯＮＧ－ＨＡＮ ＬＩＵ

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ． １３０， Ｚｉｙｏｕ Ｓｔ．， Ｊｉａｌｉ Ｄｉｓｔ．， Ｔａｉｎａｎ Ｃｉｔｙ ７２２， Ｔａｉｗａｎ

(74)【代理人】

【識別番号】100102532

【弁理士】

【氏名又は名称】好宮 幹夫

(74)【代理人】

【識別番号】100194881

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 俊弘

(74)【代理人】

【識別番号】100215142

【弁理士】

【氏名又は名称】大塚 徹

(72)【発明者】

【氏名】劉 大維

(72)【発明者】

【氏名】李 慶國

(72)【発明者】

【氏名】劉 宗翰

【テーマコード（参考）】

4C071

4C086

4C088

4C206

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C071AA01

4C071AA08

4C071BB01

4C071BB05

4C071CC12

4C071EE05

4C071FF17

4C071HH04

4C071HH05

4C071KK17

4C071LL01

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4C086BA08

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4C086MA03

4C086MA06

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4C086MA37

4C086MA43

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA59

4C086ZB33

4C088AB62

4C088AC04

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4C088CA06

4C088CA07

4C088MA17

4C088MA35

4C088MA37

4C088MA43

4C088MA52

4C088NA14

4C088ZA59

4C088ZB33

4C206AA01

4C206AA02

4C206AA03

4C206CB19

4C206KA01

4C206MA03

4C206MA06

4C206MA12

4C206MA55

4C206MA57

4C206MA63

4C206MA72

4C206NA14

4C206ZA59

4C206ZB33

4H006AA01

4H006AA03

4H006AB20

(57)【要約】

【課題】柑橘類抽出物、化合物、及び新型コロナウイルスを抑制するための用途を提供する。
【解決手段】エタノール、酢酸エチル、ｎ－ブタノールで抽出した後、多種類の抽出物を得、また酢酸エチル抽出物から多種類の化合物を分離する柑橘類抽出物。以上の多種類の抽出物と多種類の化合物は、何れも新型コロナウイルスを抑制する効果を有する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

柑橘の果実を提供する工程と、
前記柑橘の果実を有機溶媒で抽出して、液体の部分と抽出後の果実を得る工程と、
前記液体の部分を乾燥させた後、粗抽出物を得る工程と、
前記粗抽出物を酢酸エチルと水で分配して、酢酸エチル層と高極性層を得、前記酢酸エチル層を乾燥させた後で酢酸エチル抽出物を得る工程と、
前記高極性層をｎ－ブタノールと水で分配して、ｎ－ブタノール層と水層を得、前記ｎ－ブタノール層を乾燥させた後でｎ－ブタノール抽出物を得、前記水層を乾燥させた後で水層抽出物を得る工程と、
を含んで調製される柑橘類抽出物。

【請求項2】

前記酢酸エチル抽出物は、ソラレン、ベルガプテン、２’－ヒドロキシ－４，４’，５’，６’－テトラメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン、５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン、５－ヒドロキシ－３’，４’，６，７，８－ペンタメトキシフラボン、３’，４’，５，６，７，８－ヘキサメトキシフラボン、及び３’，４’，５，７，８－ペンタメトキシフラバノンを含む請求項１に記載の柑橘類抽出物。

【請求項3】

前記柑橘の果実を有機溶媒で抽出する前記工程は、前記柑橘の果実とエタノールを重量体積比１：５～１５（ｗ／ｖ）の比で抽出することを含む請求項１に記載の柑橘類抽出物。

【請求項4】

２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン、５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン、３’，４’，５，７，８－ペンタメトキシフラバノン、及びその医薬的に許容される塩又はエステルからなる群から選ばれる化合物。

【請求項5】

請求項１に記載の前記柑橘類抽出物の前記粗抽出物、前記酢酸エチル抽出物、前記ｎ－ブタノール抽出物、前記水層抽出物、又はそれらの組み合わせを含む新型コロナウイルスを抑制する組成物。

【請求項6】

薬学
的に許容される担体を更に含む請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

前記新型コロナウイルスは、起源株、ａｌｐｈａ変異株、ｂｅｔａ変異株、ｇａｍｍａ変異株、ｄｅｌｔａ変異株、ｏｍｉｃｒｏｎ変異株、又はそれらの組み合わせを含む請求項５又は６に記載の組成物。

【請求項8】

前記ｏｍｉｃｒｏｎ変異株は、ＢＡ．１亜型の変異株、ＢＡ．２亜型の変異株、ＢＡ．３亜型の変異株、ＢＡ．４亜型の変異株、ＢＡ．５亜型の変異株、又はそれらの組み合わせを含む請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

請求項１に記載の柑橘類抽出物の新型コロナウイルス抑制用薬物の調製のための用途であって、前記柑橘類抽出物は、前記粗抽出物、前記酢酸エチル抽出物、前記ｎ－ブタノール抽出物、又は前記水層抽出物を含む用途。

【請求項10】

化合物の新型コロナウイルス抑制用薬物の調製のための用途であって、前記化合物は、ソラレン、ベルガプテン、２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン、５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン、３’，４’，５，６，７，８－ヘキサメトキシフラボン、３’，４’，５，７，８－ペンタメトキシフラバノン、又はそれらの組み合わせを含む用途。

【請求項11】

前記新型コロナウイルスは、起源株、ａｌｐｈａ変異株、ｂｅｔａ変異株、ｇａｍｍａ変異株、ｄｅｌｔａ変異株、ｏｍｉｃｒｏｎ変異株、又はそれらの組み合わせを含む請求項９又は１０に記載の用途。

【請求項12】

前記ｏｍｉｃｒｏｎ変異株は、ＢＡ．１亜型の変異株、ＢＡ．２亜型の変異株、ＢＡ．３亜型の変異株、ＢＡ．４亜型の変異株、ＢＡ．５亜型の変異株、又はそれらの組み合わせを含む請求項１１に記載の用途。

【請求項13】

前記薬物の形態は、カプセル、錠剤、粉剤又は液状である請求項９又は１０に記載の用途。

【請求項14】

前記薬物は、前記新型コロナウイルスとＡＣＥ２タンパク質との結合に対する抑制によるものである請求項９又は１０に記載の用途。

【請求項15】

前記薬物は、前記新型コロナウイルスを抑制することで、前記新型コロナウイルスによる疾病を治療する請求項９又は１０に記載の用途。

【請求項16】

前記疾病は、重症特殊感染性肺炎である請求項１５に記載の用途。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、抽出物、化合物及び用途に関し、特に、柑橘類抽出物、化合物、及び新型コロナウイルスを抑制するための用途に関する。

【背景技術】

【0002】

重症特殊感染性肺炎（ＣＯＶＩＤ－１９）は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる世界的大流行である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、新規のコロナウイルスであり、新型コロナウィルスとも呼ばれる。２０１９年の起源株から変異して、２０２２年までＯｍｉｃｒｏｎ変異種が主要な流行株となった。Ｏｍｉｃｒｏｎ変異株による低重症率、抗原のスクリーニングと次世代ワクチンの登場にもかかわらず、コロナ禍は、まだ消えていない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

従って、自然由来かつ新型コロナによる肺炎ウイルスに効果的に対抗する物質を提供することについて、既存の技術では実際に改善する必要がある。

【課題を解決するための手段】

【0004】

本開示の一実施形態は、柑橘の果実を提供する工程と、柑橘の果実を有機溶媒で抽出して、液体の部分と抽出後の果実を得る工程と、液体の部分を乾燥させた後、粗抽出物を得る工程と、粗抽出物を酢酸エチルと水で分配して、酢酸エチル層と高極性層を得、酢酸エチル層を乾燥させた後で酢酸エチル抽出物を得る工程と、高極性層をｎ－ブタノールと水で分配して、ｎ－ブタノール層と水層を得、ｎ－ブタノール層を乾燥させた後でｎ－ブタノール抽出物を得、水層を乾燥させた後で水層抽出物を得る工程と、を含んで調製される柑橘類抽出物を提供する。

【0005】

いくつかの実施形態において、酢酸エチル抽出物は、ソラレン、ベルガプテン、２’－ヒドロキシ－４，４’，５’，６’－テトラメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン、５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン、５－ヒドロキシ－３’，４’，６，７，８－ペンタメトキシフラボン、３’，４’，５，６，７，８－ヘキサメトキシフラボン、及び３’，４’，５，７，８－ペンタメトキシフラバノンを含む。

【0006】

いくつかの実施形態において、柑橘の果実を有機溶媒で抽出する工程は、柑橘の果実とエタノールを重量体積比１：５～１５（ｗ／ｖ）の比で抽出することを含む。

【0007】

本開示の別の実施形態は、２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン、５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン、３’，４’，５，７，８－ペンタメトキシフラバノン、又はその医薬的に
許容される塩又はエステルを含む化合物を提供する。

【0008】

本開示の別の実施形態は、前記に記載の柑橘類抽出物の粗抽出物、酢酸エチル抽出物、ｎ－ブタノール抽出物、水層抽出物、又はそれらの組み合わせを含む新型コロナウイルスを抑制する組成物を提供する。

【0009】

いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む。

【0010】

いくつかの実施形態において、新型コロナウイルスは、起源株、ａｌｐｈａ変異株、ｂｅｔａ変異株、ｇａｍｍａ変異株、ｄｅｌｔａ変異株、ｏｍｉｃｒｏｎ変異株、又はそれらの組み合わせを含む。

【0011】

いくつかの実施形態において、ｏｍｉｃｒｏｎ変異株は、ＢＡ．１亜型の変異株、ＢＡ．２亜型の変異株、ＢＡ．３亜型の変異株、ＢＡ．４亜型の変異株、ＢＡ．５亜型の変異株、又はそれらの組み合わせを含む。

【0012】

本開示の別の実施形態は、前記に記載の柑橘類抽出物の新型コロナウイルス抑制用薬物の調製のための用途であって、柑橘類抽出物は、粗抽出物、酢酸エチル抽出物、ｎ－ブタノール抽出物、又は水層抽出物を含む用途を提供する。

【0013】

本開示の別の実施形態は、化合物の新型コロナウイルス抑制用薬物の調製のための用途であって、化合物は、ソラレン、ベルガプテン、２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン、２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン、５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン、３’，４’，５，６，７，８－ヘキサメトキシフラボン、３’，４’，５，７，８－ペンタメトキシフラバノン、又はそれらの組み合わせを含む用途を提供する。

【0014】

いくつかの実施形態において、新型コロナウイルスは、起源株、ａｌｐｈａ変異株、ｂｅｔａ変異株、ｇａｍｍａ変異株、ｄｅｌｔａ変異株、ｏｍｉｃｒｏｎ変異株、又はそれらの組み合わせを含む。

【0015】

いくつかの実施形態において、ｏｍｉｃｒｏｎ変異株は、ＢＡ．１亜型の変異株、ＢＡ．２亜型の変異株、ＢＡ．３亜型の変異株、ＢＡ．４亜型の変異株、ＢＡ．５亜型の変異株、又はそれらの組み合わせを含む。

【0016】

いくつかの実施形態において、薬物の形態は、カプセル、錠剤、粉剤又は液状である。

【0017】

いくつかの実施形態において、薬物は、新型コロナウイルスとＡＣＥ２（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ＣｏｎｖｅｒｔｉｎｇＥｎｚｙｍｅ ２、アンジオテンシン変換酵素２）タンパク質との結合に対する抑制によるものである。

【0018】

いくつかの実施形態において、薬物は、新型コロナウイルスを抑制することで、新型コロナウイルスによる疾病を治療する。

【0019】

いくつかの実施形態において、疾病は、重症特殊感染性肺炎である（又は新型コロナ肺炎とも呼ばれる）。

【図面の簡単な説明】

【0020】

以下、添付図面に合わせて下記詳細な説明を読むと、本開示の各種の態様がより良く理解される。注意すべきなのは、業界標準の慣行によれば、各種の特徴構造は、一定の縮尺で描かれたものではない。実質的に、検討をより明確にするために、各種の特徴構造のサイズを任意に拡大又は縮小してもよい。本開示の上記及び他の目的、特徴、メリット及び実施例をより分かりやすくするために、添付図面の説明は、以下の通りである。

【図1】本開示のいくつかの実施形態に係るシークヮーサー抽出物の調製方法を示すフロー図である。

【図2】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物の高性能液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＨＰＬＣ）のクロマトグラムである。

【図3】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムである。

【図4】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムである。

【図5】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムである。

【図6】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用（ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ‐ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ；ＬＣ－ＭＳ）におけるＬＣクロマトグラムである。

【図7】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。

【図8】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣのクロマトグラムである。

【図9】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。

【図10】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣのクロマトグラムである。

【図11】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。

【図12】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣのクロマトグラムである。

【図13】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。

【図14】本開示のいくつかの実施形態に係る４種類の抽出物による新型コロナウイルス起源株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図15】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図16】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図17】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図18】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図19】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図20】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図21】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図22】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図23】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図24】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図25】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図26】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図27】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域（ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ、受容体結合ドメイン）とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図28】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図29】本開示のいくつかの実施形態に係るｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図30】本開示のいくつかの実施形態に係る水層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図31】本開示のいくつかの実施形態に係る５種類の抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図32】本開示のいくつかの実施形態に係る４種類の抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図33】本開示のいくつかの実施形態に係る４種類の抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。

【図34】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図35】本開示のいくつかの実施形態に係る粗抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図36】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図37】本開示のいくつかの実施形態に係る酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38A】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ１の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38B】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ２の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38C】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ３の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38D】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ４の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38E】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ５の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38F】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ６の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38G】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ７の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38H】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ８の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38I】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ９の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図38J】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ１０の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39A】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ１の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39B】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ２の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39C】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ３の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39D】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ４の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39E】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ５の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39F】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ６の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39G】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ７の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39H】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ８の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39I】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ９の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図39J】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ１０の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40A】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ１の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40B】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ２の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40C】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ３の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40D】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ４の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40E】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ５の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40F】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ６の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40G】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ７の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40H】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ８の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40I】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ９の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【図40J】本開示のいくつかの実施形態に係る化合物Ｃｄ１０の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本開示についての記述をより詳細且つ完璧にするために、以下、本開示の実施態様と具体的な実施例について説明的な叙述を提出するが、これは本開示の具体的な実施例を実施又は運用する唯一の形式ではない。下記で開示する各実施例、有益な場合で互いに組み合わせ又は取り替わってもよいし、更なる記載又は説明をせずに、１つの実施例において他の実施例を加えてもよい。下記叙述において、下記の実施例を読者に十分に理解させるために、数多くの特定な細部を詳しく記述する。しかし、これらの特定な細部がなくても、本開示の実施例を実践することもできる。

【0022】

本文において、正文で冠詞に対して特別に限定されない限り、「一」と「前記」は、単一又は複数を総括して指してもよい。更に理解すべきなのは、本明細書に用いる「備える」、「含む」、「有する」及び類似用語については、それが記載される特徴、領域、整数、工程、操作、素子及び／又は部材を明らかにするが、その記述された又は別の１つ又は複数の他の特徴、領域、整数、工程、操作、素子、部材、及び／又はそれらの群は排除されない。

【0023】

本文において、「柑橘類」という用語は、文中でカンキツ属（学名：Ｃｉｔｒｕｓ）がミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の属であることを示し、その下の種には高木と低木がある。いくつかの重要な果物はこの属に属し、例えば、シトロン（Ｃｉｔｒｕｓ ｍｅｄｉｃａ）、ブンタン（Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａ）、ポンカン（Ｃｉｔｒｕｓ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、オレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、レモン（Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ）、ヒメレモン（Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎｉａ）、ライム（Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）、カブス（Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｕｍ）、ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ ｊｕｎｏｓ）、キンカン（Ｃｉｔｒｕｓ ｊａｐｏｎｉｃａ；Ｃｊ）、グレープフルーツ（Ｃｉｔｒｕｓ ｐａｒａｄｉｓｉ）、赤河オレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ ｈｏｎｇｈｅｅｎｓｉｓ）、イーチャンパペダ（Ｃｉｔｒｕｓ ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓ）、シトラス・マクロプテラ（Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｃｒｏｐｔｅｒａ ｖａｒ． ｋｅｒｒｉｉ）、コブミカン（Ｃｉｔｒｕｓ ｈｙｓｔｒｉｘ）、タチバナ（Ｃｉｔｒｕｓ ｔａｃｈｉｂａｎａ）、シークヮーサー（Ｃｉｔｒｕｓ ｄｅｐｒｅｓｓａ；Ｃｄ）等である。

【0024】

シークヮーサーは、ヒラミレモンとも呼ばれ、台湾原種の柑橘類の１つである。

【0025】

本文において、「果実」という用語は、果実の構造が通常、種子と皮の２つの部分に分けられることを表す。皮は、更に、外果皮、中果皮及び内果皮に分けられる。外果皮は、革のように柔らかくて厚い。内果皮は、厚くてジューシーな肉質の部分、いわゆる果肉である。中果皮は、外果皮と内果皮との間の組織であり、内果皮に比べて、ほとんど白くしっかりとした構造となる。

【0026】

本文において、フラノクマリン類（Ｆｕｒｏｃｏｕｍａｒｉｎｅｓ）とは、母核の７位のヒドロキシ基と６位又は８位の置換イソペンテニル基が縮合してフラン環を形成する一連の化合物である（位置の番号は例えば式（Ｉ）に示す）。ソラレン（ｐｓｏｒａｌｅｎ）は、線状フラノクマリン類に属し、ベルガプテン（ｂｅｒｇａｐｔｅｎ）は角型フラノクマリンに分類される。

【0027】

いくつかの実施形態において、有機溶媒は、極性と非極性の有機溶媒を含むが、それらに限定されない。例として、極性の有機溶媒は、アルコール類、ケトン類（アセトン、ジアルキルケトン、ピロリドン（ｐｙｒｏｌｌｉｄｏｎｅｓ））、アルキレンカーボネート（ａｌｋｙｌｅｎｅ ｃａｒｂｏｎａｔｅｓ）、アルキルエステル及びアリールエステルを含むが、それらに限定されない。非イオン又はアニオン界面活性剤は、カルボン酸塩、スルホン酸塩、天然油、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルフェノール、アリールフェノール、エトキシアルコール類、ポリオキシエチレン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ）、カルボン酸エステル、ポリアルキレングリコールエステル（ｐｏｌｙａｌｋｙｌｇｌｙｃｏｌ ｅｓｔｅｒｓ）、無水ソルビトール、ジオールエステル、カルボン酸アミド、モノアルカノールアミン、ポリオキシエチレン脂肪酸アミド（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ａｍｉｄｅｓ）、ポリソルベート、シクロデキストリン、グリコシル系（ｓｕｇａｒ ｂａｓｅｄ）アルコール類、シリコーン系（ｓｉｌｉｃｏｎｅ ｂａｓｅｄ）アルコール類、ポリアルキル化アルコール類、及びアルキルアリールエトキシドからなる群を含むが、それらに限定されない。

【0028】

本文において、「分配（ｐａｒｔｉｔｉｏｎ）」という用語は、溶媒と被抽出物とを混合した後、層状の液体となることを示す。例えば、酢酸エチルと水（１：１の体積）と被抽出物とを混合した後、低極性層と高極性層の液体が現れる。

【0029】

本文において、「新型コロナウイルス」という用語は、深刻な急性呼吸道症候群コロナウイルス２型（ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ２；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）を示し、新型のコロナウイルス、２０１９新型コロナウイルスとも呼ばれる。

【0030】

本文において、「医薬的に許容される塩」という用語は、遊離塩基又は遊離酸の生物的有効性と性質を保持し、通常生物学的又はその他の面で理想的な塩をいう。

【0031】

本文において、「医薬的に許容されるエステル」という用語は、式（Ｉ）～式（Ｘ）の化合物が官能基上で誘導体化して、生体内で母体化合物に変換できる誘導体を提供することができるものをいう。

【0032】

いくつかの実施形態において、薬学的に許容される担体は、水、アルコール（ａｌｃｏｈｏｌｓ）、グリコール（ｇｌｙｃｏｌ）、保存剤（ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、酸化防止剤（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）、溶媒（ｓｏｌｖｅｎｔ）、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、分解剤（ｄｅｃｏｍｐｏｓｅｒ）、接着剤（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）、安定剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、キレート剤（ｃｈｅｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、ゲル化剤（ｇｅｌｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、防腐剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ）、潤滑剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）、吸収増強剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｒｓ）、活性剤（ａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ）、保湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔｓ）、消臭剤（ｏｄｏｒ ａｂｓｏｒｂｅｒｓ）、芳香剤（ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ）、ｐＨ調整剤（ｐＨ ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、閉塞剤（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ）、軟化剤（ｅｍｏｌｌｉｅｎｔｓ）、増粘剤（ｔｈｉｃｋｅｎｅｒｓ）、溶解補助剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、浸透増強剤（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｒｓ）、刺激防止剤（ａｎｔｉ－ｉｒｒｉｔａｎｔｓ）、着色剤（ｃｏｌｏｒａｎｔｓ）、推進剤（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔｓ）、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）、及びその他の本発明と類似する又は本発明に適する担体を含むが、それらに限定されない。

【0033】

スパイクタンパク結合の測定

【0034】

いくつかの実施形態において、酵素結合免疫吸着分析法（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ；ＥＬＩＳＡ）を用いて実験を行って、４種類の抽出物によるＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク野生型（ＷＴ、武漢株）又は変異株（α、β、γ、δ、又はο）とビオチン化したヒトＡＣＥ２組み換えタンパクとの結合に対する抑制性能を評価する。まず、９６ウェルプレートの各ウェルに１００μＬのスパイクタンパクを塗布して緩衝液で希釈し、緩衝液を４℃で一夜放置する。そして、Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳの洗浄緩衝液でコーティングプレートを３回洗浄してから、２５０μＬのウシ胎児血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むブロッキング液（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）を３７℃で１．５時間ブロッキングする。次に、９６ウェルプレートを３回洗浄して、希釈緩衝液における１００μＬの被試験抽出物又は阻害剤（１０μｇ／ｍＬ、ｃａｔ．ＧＴＸ６３５７９１、ＧｅｎｅＴｅｘ（登録商標））を９６ウェルプレートに加え、３７℃で１時間培養する。次に、１００μＬのビオチン化したヒトＡＣＥ２蛋白（１０ｎｇ／ｍＬ、ｃａｔ．ＡＣ２－Ｈ８２Ｅ６－２５ｕｇ、ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標））を各ウェルに加え、３７℃でまた１時間培養する。次に、９６ウェルプレート用洗浄緩衝液を３回洗浄して、希釈緩衝液における１００μＬのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰカップリングを加え、３７℃で１時間インキュベートする。次に、９６ウェルプレートを洗浄して、３７℃の遮光下で各ウェルの２００μＬのＴＭＢ（３，３’，５，５’－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－ｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）で２０分間培養する。そして、５０μＬの停止溶液を加えて反応を停止し、マイクロプレート検出器を用いて４５０ｎｍでの吸光度を検出する。

【0035】

細胞培養

【0036】

いくつかの実施形態において、ヒト胚腎（ＨＥＫ－２９３Ｔ／１７、ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－１１２６８ＴＭ）細胞は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から得られる。１０％のウシ胎児血清及び１ｘペニシリン－ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ）に、細胞を３７℃で培養する。ＨＥＫ－２９３Ｔ－ＡＣＥ２細胞は、ヒトＡＣＥ２遺伝子を持つＶＳＶ－Ｇ偽型レンチウイルス（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）の導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）によって生じる。

【0037】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク発現用プラスミド

【0038】

いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（ｓｐｉｋｅ）遺伝子をコードする合成ＤＮＡ断片は、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＩＤＴ）から購入され、哺乳動物発現担体にクローン（ｃｌｏｎｅ）される。以下、各スパイク変異体の突然変異部位を示す。

【0039】

Ａｌｐｈａ変異株（Ｂ．１．１．７）：６９－７０ ｄｅｌ、Ｙ１４４ ｄｅｌ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、Ｄ１１１８Ｈ。

【0040】

Ｂｅｔａ変異株（Ｂ．１．３５１（５０１Ｙ．Ｖ２））：Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、２４２－２４４ ｄｅｌ、Ｒ２４６Ｉ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ａ７０１Ｖ。

【0041】

Ｇａｍｍａ変異株（Ｌｉｎｅａｇｅ Ｐ１）：Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７Ｉ。

【0042】

Ｄｅｌｔａ変異株（Ｂ．１．６１７．２）：Ｔ１９Ｒ、Ｇ１４２Ｄ、１５６－１５７ ｄｅｌ、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｒ、Ｄ９５０Ｎ。

【0043】

Ｏｍｉｃｒｏｎ変異株（Ｂ．１．１．５２９）：Ａ６７Ｖ、Δ６９－７０、Ｔ９５Ｉ、Ｇ１４２Ｄ／Δ１４３－１４５、Δ２１１／Ｌ２１２Ｉ、ｉｎｓ２１４ＥＰＥ、Ｇ３３９Ｄ、Ｓ３７１Ｌ、Ｓ３７３Ｐ、Ｓ３７５Ｆ、Ｋ４１７Ｎ、Ｎ４４０Ｋ、Ｇ４４６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ａ、Ｑ４９３Ｒ、Ｇ４９６Ｓ、Ｑ４９８Ｒ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、Ｔ５４７Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｎ６７９Ｋ、Ｐ６８１Ｈ、Ｎ７６４Ｋ、Ｄ７９６Ｙ、Ｎ８５６Ｋ、Ｑ９５４Ｈ、Ｎ９６９Ｋ、Ｌ９８１Ｆ。

【0044】

Ｏｍｉｃｒｏｎ亜型の変異株ＢＡ１：Ａ６７Ｖ、Δ６９－７０、Ｔ９５Ｉ、Ｇ１４２Ｄ／Δ１４３－１４５、Δ２１１／Ｌ２１２Ｉ、ｉｎｓ２１４ＥＰＥ、Ｇ３３９Ｄ、Ｓ３７１Ｌ、Ｓ３７３Ｐ、Ｓ３７５Ｆ、Ｋ４１７Ｎ、Ｎ４４０Ｋ、Ｇ４４６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ａ、Ｑ４９３Ｒ、Ｇ４９６Ｓ、Ｑ４９８Ｒ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、Ｔ５４７Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｎ６７９Ｋ、Ｐ６８１Ｈ、Ｎ７６４Ｋ、Ｄ７９６Ｙ、Ｎ８５６Ｋ、Ｑ９５４Ｈ、Ｎ９６９Ｋ、Ｌ９８１Ｆ。

【0045】

Ｏｍｉｃｒｏｎ亜型の変異株ＢＡ２：Ｔ１９Ｉ、Ｌ２４Ｓ、Δ２５－２７、Ｇ１４２Ｄ、Ｖ２１３Ｇ、Ｇ３３９Ｄ、Ｓ３７１Ｆ、Ｓ３７３Ｐ、Ｓ３７５Ｆ、Ｔ３７６Ａ、Ｄ４０５Ｎ、Ｒ４０８Ｓ、Ｋ４１７Ｎ、Ｎ４４０Ｋ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ａ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９８Ｒ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｎ６７９Ｋ、Ｐ６８１Ｈ、Ｎ７６４Ｋ、Ｄ７９６Ｙ、Ｑ９５４Ｈ、Ｎ９６９Ｋ。

【0046】

Ｏｍｉｃｒｏｎ亜型の変異株ＢＡ４／５：Ｔ１９Ｉ、Ｌ２４Ｓ、Δ２５－２７、Δ６９－７０、Ｇ１４２Ｄ、Ｖ２１３Ｇ、Ｇ３３９Ｄ、Ｓ３７１Ｆ、Ｓ３７３Ｐ、Ｓ３７５Ｆ、Ｔ３７６Ａ、Ｄ４０５Ｎ、Ｒ４０８Ｓ、Ｋ４１７Ｎ、Ｎ４４０Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｑ４９８Ｒ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｎ６７９Ｋ、Ｐ６８１Ｈ、Ｎ７６４Ｋ、Ｄ７９６Ｙ、Ｑ９５４Ｈ、Ｎ９６９Ｋ。

【0047】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク偽型レンチウイルスの生産及び精製

【0048】

いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパクを持つ偽型レンチウイルスは、ｐＣＭＶ－Ｒ８．９１、ｐＬＡＳ２ｗ．Ｆｌｕｃ．ＰｐｕｒｏとｐｃＤＮＡ３．１－ｎＣｏＶ－Ｓ（Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｐ１、Ｂ．１．６１７．２、又はＢ．１．１．５２９）によって生じる。トランスフェクションの前日にＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を接種し、ＴｒａｎｓＩＴ－ＬＴ１トランスフェクション試薬を用いて標記プラスミドを細胞に送達する。培地は、１６時間で交換され、トランスフェクション後の４８時間と７２時間で収穫される。細胞の破片を遠心分離によって除去し、上澄み液に０．４５μｍの注射フィルターを通過させる。偽型レンチウイルスは、等分されて、－８０℃で貯蔵される。

【0049】

細胞生存試験によるレンチウイルスの力価に対する評価

【0050】

いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型レンチウイルスの導入単位（ＴＵ）は、レンチウイルスの希釈限界を反映するように、細胞生存試験によって評価される。簡単に言えば、レンチウイルス導入の前日に、ヒトＡＣＥ２遺伝子を安定に発現したＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を９６ウェルプレートに接種する。偽型レンチウイルスの滴定のために、異なる量のレンチウイルスをポリブレンを含む培地に加える。９６ウェルプレートに回転して感染する。３７℃で細胞を培養するした後、ウイルス及びポリブレンを含む培地を除去し、プリンマイシンを含む新鮮な完全ＤＭＥＭで代用する。プリンマイシン処理後、培地を除去しメーカーの説明に基づいて１０％のＡｌａｒｍａＢｌｕｅ試薬で細胞生存を検出する。未感染細胞（プリンマイシン処理無し）の生存率は１００％である。生存細胞と希釈されたウイルスの投与量をプロットしてウイルス力価（導入単位）を確定する。

【0051】

偽型レンチウイルスの中和試験

【0052】

いくつかの実施形態において、ウイルス中和試験について、熱不活化した血清を目的の希釈濃度で連続希釈し、同時に抽出物又は単一化合物を添加し、１，０００ＴＵのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型レンチウイルスと共にＤＭＥＭ（１％ＦＢＳと１００Ｕ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシンが加えられ）で３７℃で１時間培養する。そして、９６ウェルプレートに１０，０００個のヒトＡＣＥ２遺伝子を安定に発現したＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を接種する。感染の１６時間後に、培地を新鮮な完全ＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシンが加えられ）に交換し、ルシフェラーゼ測定（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ）の前に、細胞を別に４８時間連続培養する。ルシフェラーゼ測定のために、ルシフェラーゼ遺伝子の発現量は、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼ測定システムによって測定される。相対光単位（ＲＬＵ）は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ－ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＬによって検出される。抑制パーセンテージの計算方法は、希釈血清存在時のＲＬＵの減少量と無血清対照時のＲＬＵとの比であり、計算公式は、（ＲＬＵ^対照－ＲＬＵ^血清）／ＲＬＵ^{コントロール}である。

【0053】

以下、複数の実施例及び試験例を挙げて更に詳しく本開示の柑橘類抽出物及びその新型コロナ肺炎の治療に用いられる用途を説明するが、例示的に説明するためのものだけであり、本開示を制限するためのものではなく、本開示の保護範囲は、後の特許請求の範囲で指定した内容を基準とするものである。

【0054】

実施例

【0055】

以下、ここで開示された方法を一連の操作や工程によって説明するが、これらの操作や工程に示す順序は、本開示に対する制限として解釈されるべきではない。例えば、ある操作又は工程は、異なる順序で行い及び／又は他の工程と同時に行ってもよい。なお、全ての操作、工程及び／又は特徴を実行しなければ、本開示の実施形態を達成できないわけでもない。また、ここで述べられた複数の操作又は工程の各々は、複数のサブ工程又は動作を含んでもよい。

【0056】

明らかにするために、分野で既知の特徴であり、かつ説明された原則を理解するためには必要でない特徴と素子は、省略されてよい。

【0057】

実施例１ 抽出物の調製

【0058】

図１を参照されたく、図１は、本開示の一実施形態のシークヮーサー抽出物の調製方法を示すフロー図である。

【0059】

シークヮーサー（完全な全粒）と９５％エタノールを重量体積比１：１０（ｗ／ｖ）の比で１週間抽出して、第１の液体と第１の抽出後シークヮーサーを得た。第１の液体の部分を除去して真空蒸発させた後、乾燥した第１の粗抽出物を得た。次に、第１の抽出後シークヮーサーと９５％エタノールを重量体積比１：１０（ｗ／ｖ）の比で更に１週間抽出して、第２の液体と第２の抽出後シークヮーサーを得た。第２の液体の部分を除去して真空蒸発させた後、乾燥した第２の粗抽出物を得た。第１の粗抽出物と第２の粗抽出物とを組み合わせて、乾燥した粗抽出物を得た。

【0060】

次に、粗抽出物を取り酢酸エチルと蒸留水（１：１の比）で３回分配（ｐａｒｔｉｔｉｏｎ）した後、酢酸エチル層（低極性層）と高極性層を得た。高極性層をｎ－ブタノールと蒸留水（１：１の比）で更に３回分配した後、ｎ－ブタノール層と水層を得た。各層を乾燥させた後、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物と水層抽出物を得た。

【0061】

次に、酢酸エチル層抽出物を取り、中圧液体クロマトグラフィー（ｍｅｄｉｕｍ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＭＰＬＣ）でシリカゲルカラム（ＳＮＡＰ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌ ３４０ｇ，Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標））に合わせて酢酸エチル層抽出物における生物活性物質を分離させ、中圧液体クロマトグラフィーが移動相ヘキサン（ｈｅｘａｎｅ）と酢酸エチル（１００：０～０：１００）及びアセトンによって、１１０のレイヤー（Ｆｒ．１～Ｆｒ．１１０）を発生した。

【0062】

次に、シリカゲルカラム（Ｌｕｎａ（登録商標） ｓｉｌｉｃａ ｃｏｌｕｍｎ ５μｍ、２５０×１０ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標））を用いて、セミ分取屈折率検出器―高速液体クロマトグラフィー（ｓｅｍｉ－ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ－ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｓｅｍｉ－ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＲＩ－ＨＰＬＣ）により、活性成分を持つレイヤーＦｒ．４４、レイヤーＦｒ．５９、レイヤーＦｒ．６６とレイヤーＦｒ．７８を選択した。

【0063】

レイヤーＦｒ．４４は、ヘキサンと酢酸エチル（８：２）からなる移動相を用いて２種類のフラノクマリン類（ｆｕｒａｎｏｃｏｕｍａｒｉｎｓ）化合物（Ｃｄ１、Ｃｄ２）を生成した。

【0064】

レイヤーＦｒ．５９は、ヘキサン、酢酸エチル及びジクロロメタン（７：１．５：１．５）からなる移動相を用いて２種類のカルコン類（ｃｈａｌｃｏｎｅｓ）化合物（Ｃｄ３、Ｃｄ４）を生成した。

【0065】

サブレイヤーＳｕｂＦｒ．６６－１～ＳｕｂＦｒ．６６－１８は、レイヤーＦｒ．６６がまずシリカゲルカラム（ＳＮＡＰ Ｃａｒｔｉｄｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌ １０ｇ、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標））と移動相がヘキサンと酢酸エチル（１００：０－０：１００）であることによって得られ、ＳｕｂＦｒ．６６－１４がフラボン類（ｆｌａｖｏｎｅｓ）化合物（Ｃｄ７）である。

【0066】

サブレイヤーＳｕｂＦｒ．６６－９は、ヘキサン、酢酸エチル（７．７：２．３）の移動相から、２つのカルコン類化合物（Ｃｄ５、Ｃｄ６）を生成した。

【0067】

サブレイヤーＳｕｂＦｒ．６６－１２は、ヘキサンと酢酸エチル（６．５：３．５）の移動相から、１つのフラボン類化合物（Ｃｄ８）を生成した。

【0068】

サブレイヤーＳｕｂＦｒ．６６－１３は、ヘキサンと酢酸エチル（６．３：３．７）の移動相から、フラボン類化合物（Ｃｄ１０）を生成した。

【0069】

レイヤーＦｒ．７８は、ヘキサンと酢酸エチル（２．５：７．５）からなる移動相から、フラボン類化合物（Ｃｄ９）を生成した。上記の分離プロセスを繰り返して活性実験に必要な量を得た。

【0070】

実施例２ 抽出物の分析

【0071】

実施例１からの粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物、及び水層抽出物をそれぞれ高性能液体クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー－質量分析併用によって分析を行った。

【0072】

実験結果は、図２～図１３に示す。図２は、粗抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムであり、吸收値が２２０ｎｍ、２８０ｎｍ、３２０ｎｍ、４００ｎｍである。図３は、酢酸エチル層抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムである。図４は、ｎ－ブタノール層抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムである。図５は、水層抽出物の高性能液体クロマトグラフィーのクロマトグラムである。図６は、粗抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣクロマトグラムであり、上段が正電荷であり、下段が負電荷であり、以下の図７～図１３は何れも同様の配置である。図７は、粗抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムであり、その質量電荷比（ｍａｓｓ－ｔｏ－ｃｈａｒｇｅ ｒａｔｉｏ；ｍ／ｚ）は１００～１５００と表示され、以下、図９、１１及び１３は、何れも同様の配置である。図８は、酢酸エチル層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣのクロマトグラムである。図９は、酢酸エチル層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。図１０は、ｎ－ブタノール層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣのクロマトグラムである。図１１は、ｎ－ブタノール層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。図１２は、水層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＬＣのクロマトグラムである。図１３は、水層抽出物の液体クロマトグラフィー－質量分析併用におけるＭＳクロマトグラムである。

【0073】

実施例３ 化合物の同定

【0074】

以上の１０種類の化合物に対してＮＭＲ検定を行った。

【0075】

Ｃｄ１、ｆｕｒｏ［３，２－ｇ］ｃｈｒｏｍｅｎ－７－ｏｎｅ（ソラレン、Ｐｓｏｒａｌｅｎ）。^１Ｈ：６．３６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）６．８１（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１．０Ｈｚ，１Ｈ）７．４６（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ）７．６７（ｓ，１Ｈ）７．６８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）７．７８（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：１００．１４，１０６．６０，１１４．９３，１１５．６７，１２０．０４，１２５．１０，１４４．２７，１４７．１３，１５２．３０，１５５．６７，１６１．２３。

【0076】

Ｃｄ２，４－ｍｅｔｈｏｘｙｆｕｒｏ［３，２－ｇ］ｃｈｒｏｍｅｎ－７－ｏｎｅ（ベルガプテン、Ｂｅｒｇａｐｔｅｎ）。^１Ｈ：４．２４（ｓ，３Ｈ）６．２４（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ）６．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．４，１．０Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｔ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）８．１２（ｄｄ，Ｊ＝９．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：６０．３１，９４．０６，１０５．２４，１０６．６４，１１２．７６，１１２．９１，１３９．４６，１４５．００，１４９．７９，１５２．９３，１５８．６０，１６１．４４。

【0077】

Ｃｄ３，２’－ヒドロキシ－４，４’，５’，６’－テトラメトキシカルコン（Ｅ）２’－ｈｙｄｒｏｘｙ－４，４’，５’，６’－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ。^１Ｈ：３．６９（ｓ，３Ｈ）３．８１（ｓ，３Ｈ）３．８２（ｓ，３Ｈ）３．８３（ｓ，３Ｈ）６．３７（ｓ，１Ｈ）７．０１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）７．４５（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ）７．５９（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ）７．６８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）。^１３Ｃ：５５．４７ ５６．１３ ６０．７６ ６１．６４ ９６．５２ １１０．３７ １１４．０５ １１４．７０ １１５．３１ １１８．９０ １２４．６７ １２４．７５ １２８．３０ １２９．４４ １３０．４７ １３４．７６ １４３．５６ １５３．３０ １５８．０３ １５８．１５ １６１．４４ １９２．６１。

【0078】

Ｃｄ４，２’－ヒドロキシ－３’，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン（Ｅ）２’－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３’，４，４’，５’，６’－ｐｅｎｔａｍｅｔｈｏｘｙ ｃｈａｌｃｏｎｅ。^１Ｈ：３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７５（ｓ，３Ｈ）３．７７（ｓ，３Ｈ）３．８１（ｓ，３Ｈ）３．９３（ｓ，３Ｈ）７．００（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）７．１４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ）７．４２（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ）７．６９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）。^１３Ｃ：５５．９９ ６０．８１ ６０．９２ ６１．０３ ６１．５３ １１４．５１ １１６．２３ １２５．５０ １２６．９１ １３０．４７ １３７．１３ １３８．５０ １４４．２１ １４６．３１ １４７．２８ １４９．２３ １６１．３７ １９２．７３。

【0079】

Ｃｄ５，２’－ヒドロキシ－３，４，４’，５’，６’－ペンタメトキシカルコン（Ｅ）２’－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３，４，４’，５’，６’－ｐｅｎｔａｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ。^１Ｈ：３．８１（ｓ，３Ｈ）３．８７（ｓ，３Ｈ）３．９０（ｓ，３Ｈ）３．９０（ｓ，３Ｈ）３．９１（ｓ，３Ｈ）６．２６（ｓ，１Ｈ）６．８７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）７．１３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．７７（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ）７．８１（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：５６．１１ ５６．１７ ５６．２５ ６１．４７ ６２．１０ ９６．８２ １０８．９２ １１０．５６ １１１．４０ １２３．１２ １２４．４６ １２８．５８ １３５．４６ １４３．７９ １４９．４３ １５１．５０ １５５．０８ １６０．１６ １６２．８２ １９２．８９。

【0080】

Ｃｄ６，２’－ヒドロキシ－３，３’，４，４’，５’，６’－ヘキサメトキシカルコン（Ｅ）２’－ｈｙｄｒｏｘｙ－３、３’，４，４’，５’，６’－ｈｅｘａｍｅｔｈｏｘｙ－ｃｈａｌｃｏｎｅ。^１Ｈ：３．８４（ｓ，３Ｈ）３．８７（ｓ，６Ｈ）３．９１（ｓ，３Ｈ）３．９２（ｓ，３Ｈ）４．０７（ｓ，３Ｈ）６．８８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）７．１３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．２３（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．７７（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ）７．８１（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：５６．１４ ５６．２０ ６１．２３ ６１．５２ ６１．８０ ６２．３９ １１０．６０ １１１．３１ １１１．４１ １２３．３３ １２８．４１ １３７．４９ １３８．６２ １４４．３８ １４９．４７ １５１．０２ １５１．６８ １５３．５１ １５５．１２ １９３．６９。

【0081】

Ｃｄ７，５－ヒドロキシ－３’，４’，７，８－テトラメトキシフラボン５－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３’，４’，７，８－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ。^１Ｈ：３．９２（ｓ，３Ｈ）３．９３（ｓ，６Ｈ）３．９５（ｓ，３Ｈ）３．９６（ｓ，３Ｈ）６．４１（ｓ，１Ｈ）６．５７（ｓ，１Ｈ）６．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）７．４１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．１Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：５６．２２ ５６．３４ ５６．５６ ６１．７９ ９５．９８ １０４．２８ １０５．０３ １０９．０６ １１１．５０ １２０．３８ １２４．０４ １２９．１７ １４９．５８ １４９．６４ １５２．６３ １５７．７９ １５８．８２ １６４．０６ １８２．８５。

【0082】

Ｃｄ８，５－ヒドロキシ－３’，４’，６，７，８－ペンタメトキシフラボン５－ｈｙｄｒｏｘｙ－３’，４’，６，７，８－ｐｅｎｔａｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ。^１Ｈ：３．９３（ｓ，３Ｈ）３．９４（ｓ，３Ｈ）３．９５（ｓ，６Ｈ）４．０９（ｓ，３Ｈ）６．５９（ｓ，１Ｈ）６．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）７．４０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄｔ，Ｊ＝８．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：５６．２０ ５６．３２ ６１．３２ ６１．９１ ６２．２５ １０４．１６ １０７．１７ １０９．００ １１１．４９ １２０．３７ １２３．８８ １３３．１５ １３６．７８ １４５．９７ １４９．５９ １４９．７２ １５２．６９ １５３．２０ １６４．１５ １８３．１８。

【0083】

Ｃｄ９，３’，４’，５，６，７，８－ヘキサメトキシフラボン３’，４’，５，６，７，８－ｈｅｘａｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ（Ｎｏｂｉｌｅｔｉｎ）。^１Ｈ：３．８６（ｓ，９Ｈ）３．８８（ｓ，３Ｈ）３．９４（ｓ，３Ｈ）４．０２（ｓ，３Ｈ）６．５２（ｓ，１Ｈ）６．９０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）７．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．１Ｈｚ，１Ｈ）。^１３Ｃ：５５．９９ ５６．０９ ６１．６６ ６１．８１ ６１．９６ ６２．２５ １０６．８２ １０８．６３ １１１．３１ １１４．８３ １１９．６７ １２３．９９ １３８．０４ １４４．１０ １４７．７３ １４８．３９ １４９．３２ １５１．４５ １５１．９９ １６１．１０ １７７．３６ ２０６．９６。

【0084】

Ｃｄ１０，３’、４’、５、７、８－ペンタメトキシフラバノン ３’，４’，５，７，８ －ｐｅｎｔａｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ。^１Ｈ： ２．７０（ｄｄ，Ｊ＝１６．６，２．８Ｈｚ，１Ｈ）２．９７（ｄｄ，Ｊ＝１６．６，１３．４Ｈｚ，１Ｈ）３．７５（ｓ，３Ｈ）３．８１（ｓ，３Ｈ）３．８３（ｓ，３Ｈ）３．８５（ｓ，３Ｈ）３．８７（ｓ，３Ｈ）５．２８（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，２．８Ｈｚ，１Ｈ）６．２９（ｓ，１Ｈ）６．８４（ｄ，Ｊ＝，８．０Ｈｚ，１Ｈ）６．９２（ｄｄ，Ｊ＝２．０、８．０Ｈｚ，１Ｈ）６．９３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）。

表１、１０種類の化合物の化学構造式

【0085】

実施例４ 抽出物による新型コロナウイルスとＡＣＥ２との結合に対する抑制能力

【0086】

酵素結合免疫吸着分析法を用いて実験を行って、４種類の抽出物によるＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク野生型（ＷＴ、武漢株）又は変異株（α、β、δ、又はο）とビオチン化したヒトＡＣＥ２組み換えタンパクとの結合に対する抑制性能を評価した。実験は、主に、コントロール群（Ｂｌａｎｋ；Ｂ）、対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ、Ｃｔｒｌ．；ＡＣＥ２群とも呼ばれ、即ち、ＡＣＥ２とウイルスだけ入れて、抽出物は加えない）、阻害剤群（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｉｎｈ．、１０μｇ／ｍＬ、ｃａｔ．ＧＴＸ６３５７９１、ＧｅｎｅＴｅｘ（登録商標）、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ組換えタンパクに対して認識する（Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株））、及び多種類の抽出物群（例えば、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物、水層抽出物）に分けられた。

【0087】

図１４を参照されたく、図１４は、実施例１の４種類の抽出物（５ｍｇ／ｍＬ）の新型コロナウイルス起源株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物、水層抽出物群は、何れも新型コロナウイルス起源株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0088】

図１５を参照されたく、図１５は、実施例１の粗抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬの粗抽出物は、新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0089】

図１６を参照されたく、図１６は、実施例１の酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が０．２５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬの酢酸エチル層抽出物は、新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0090】

図１７を参照されたく、図１７は、実施例１のｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が２ｍｇ／ｍＬのｎ－ブタノール層抽出物は、新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する傾向があるものであった。

【0091】

図１８を参照されたく、図１８は、実施例１の水層抽出物による新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、各濃度の水層抽出物は、新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合を明らかに抑制しなかった。

【0092】

図１９を参照されたく、図１９は、実施例１の粗抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が０．５ｍｇ／ｍＬと２ｍｇ／ｍＬの粗抽出物は、新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0093】

図２０を参照されたく、図２０は、実施例１の酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が０．２５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬの酢酸エチル層抽出物は、新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0094】

図２１を参照されたく、図２１は、実施例１のｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が２ｍｇ／ｍＬのｎ－ブタノール層抽出物は、新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制し、濃度が０．２５ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬのｎ－ブタノール層抽出物もやや抑制する傾向があるものであった。

【0095】

図２２を参照されたく、図２２は、実施例１の水層抽出物による新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬの水層抽出物は、新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0096】

図２３を参照されたく、図２３は、実施例１の粗抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬの粗抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0097】

図２４を参照されたく、図２４は、実施例１の酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬの酢酸エチル層抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0098】

図２５を参照されたく、図２５は、実施例１のｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ～２．５ｍｇ／ｍＬのｎ－ブタノール層抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する傾向がある。

【0099】

図２６を参照されたく、図２６は、実施例１の水層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、水層抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を明らかに抑制しなかった。

【0100】

図２７を参照されたく、図２７は、実施例１の粗抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬの粗抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0101】

図２８を参照されたく、図２８は、実施例１の酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬの酢酸エチル層抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。

【0102】

図２９を参照されたく、図２９は、実施例１のｎ－ブタノール層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬのｎ－ブタノール層抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合を傾向的に又は著しく抑制した。

【0103】

図３０を参照されたく、図３０は、実施例１の水層抽出物による新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、各濃度の水層抽出物は、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株におけるＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合を明らかに抑制しなかった。

【0104】

図３１を参照されたく、図３１は、実施例１の４種類の抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、２ｍｇ／ｍＬの粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物と水層抽出物は、何れも新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。なお、２ｍｇ／ｍＬのキンカン粗抽出物（Ｃｊ）の調製方法は、実施例１の調製方法（アルコールで抽出する）と類似し、新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合も著しく抑制した。また、レイヤーＦｒ．８２は、新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合を促進した。

【0105】

図３２を参照されたく、図３２は、実施例１の４種類の抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフである。結果から分かるように、２ｍｇ／ｍＬ粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物と水層抽出物は、何れも新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制し、水層抽出物も結合を抑制する傾向があるものであった。

【0106】

図３３を参照されたく、図３３は、本開示のいくつかの実施形態の４種類の抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す棒グラフ（ＢＡ．４、ＢＡ．５結合サイトのシーケンスは同じ）である。結果から分かるように、２ｍｇ／ｍＬ粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物、水層抽出物は、何れも新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合を著しく抑制した。また、図面から分かるように、阻害剤は、新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合を効果的に抑制しなかった。

【0107】

実施例５ 抽出物と化合物による新型コロナウイルスの中和試験

【0108】

ウイルス中和試験に対して、１，０００ＴＵのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型レンチウイルスで、９６ウェルプレートに１０，０００個のヒトＡＣＥ２遺伝子を安定に発現したＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を接種することで感染を行った。同時に、異なる濃度の実施例１の異なる抽出物又は化合物を加えた後、ウイルスとＡＣＥ２との結合を観察し、半数阻害濃度ＩＣ_５０を記録した。

【0109】

図３４を参照されたく、図３４は、実施例１の粗抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示した。結果から分かるように、半数阻害濃度ＩＣ_５０は、７７．８μｇ／ｍＬであった。

【0110】

図３５を参照されたく、図３５は、実施例１の粗抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。結果から分かるように、半数阻害濃度ＩＣ_５０は、７７．４μｇ／ｍＬであった。

【0111】

図３６を参照されたく、図３６は、実施例１の酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。結果から分かるように、半数阻害濃度ＩＣ_５０は、７４μｇ／ｍＬであった。

【0112】

図３７を参照されたく、図３７は、実施例１の酢酸エチル層抽出物による新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。結果から分かるように、半数阻害濃度ＩＣ_５０は、１００μｇ／ｍＬであった。

【0113】

図３８Ａ～３８Ｊを参照されたく、図３８Ａ～３８Ｊは、実施例１の化合物Ｃｄ１～Ｃｄ１０の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。結果から分かるように、Ｃｄ１～Ｃｄ１０半数阻害濃度ＩＣ_５０は、それぞれ３５５．６３μＭ、２４８．３１μＭ、７０．４７μＭ、Ｎ／Ａ、１２４．１７μＭ、２４０．４４μＭ、５６．７５μＭ、６９．９８μＭ、４０３．６５μＭ、及び１８０．７２μＭであった。

【0114】

図３９Ａ～３９Ｊを参照されたく、図３９Ａ～３９Ｊは、実施例１の化合物Ｃｄ１～Ｃｄ１０の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。結果から分かるように、Ｃｄ１～Ｃｄ１０半数阻害濃度ＩＣ_５０は、それぞれ３０７．６１μＭ、２１９．２８μＭ、７４．８２μＭ、１８１．９７μＭ、５２．３６μＭ、１３４．２８μＭ、８０．１７μＭ、７９．２５μＭ、６９．５０μＭ、及び１１４．２９μＭであった。

【0115】

図４０Ａ～４０Ｊを参照されたく、図４０Ａ～４０Ｊは、実施例１の化合物Ｃｄ１～Ｃｄ１０の新型コロナウイルスＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合率を示す。結果から分かるように、Ｃｄ１～Ｃｄ１０半数阻害濃度ＩＣ_５０は、それぞれ１６１．０６μＭ、２０５．５９μＭ、６４．５７μＭ、１２５．６０μＭ、７０．３１μＭ、１７５．７９μＭ、１０４．２３μＭ、１６．２２μＭ、３９．３６μＭ、及び８７．１０μＭであった。

【0116】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物、水層抽出物の群は、それぞれ新型コロナウイルス起源株とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0117】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物は、新型コロナウイルスＡ１ｐｈａ変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0118】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物が２ｍｇ／ｍＬを超えるもの、水層抽出物が０．５ｍｇ／ｍＬを超えるものは、新型コロナウイルスＢｅｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0119】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物が１．２５～２．５ｍｇ／ｍＬであるものは、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0120】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物が１．２５～５ｍｇ／ｍＬであるものは、新型コロナウイルスＤｅｌｔａ変異株のＲＢＤ領域とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0121】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物は、新型コロナウイルスＢＡ．１、ＢＡ．２変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0122】

いくつかの実施形態において、粗抽出物、酢酸エチル層抽出物、ｎ－ブタノール層抽出物、水層抽出物は、新型コロナウイルスＢＡ．４／５変異株とＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0123】

いくつかの実施形態において、化合物Ｃｄ１～Ｃｄ１０は、新型コロナウイルスとＡＣＥ２との結合を抑制する効果がある。

【0124】

本開示は、実施形態を前述の通りに開示したが、これは本開示を限定するものではなく、当業者なら誰でも、本開示の精神と領域から逸脱しない限り、多様の変更や修正を加えることができる。従って、本開示の保護範囲は、後の特許請求の範囲で指定した内容を基準とする。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38A】

【図38B】

【図38C】

【図38D】

【図38E】

【図38F】

【図38G】

【図38H】

【図38I】

【図38J】

【図39A】

【図39B】

【図39C】

【図39D】

【図39E】

【図39F】

【図39G】

【図39H】

【図39I】

【図39J】

【図40A】

【図40B】

【図40C】

【図40D】

【図40E】

【図40F】

【図40G】

【図40H】

【図40I】

【図40J】