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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024081657
(43)【公開日】2024-06-18
(54)【発明の名称】新規ＩＬ－２１プロドラッグおよびそれを使用する方法
(51)【国際特許分類】
C07K 14/54 20060101AFI20240611BHJP
C07K 14/715 20060101ALI20240611BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240611BHJP
C07K 7/00 20060101ALI20240611BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240611BHJP
C12N 15/62 20060101ALN20240611BHJP
【ＦＩ】
C07K14/54
C07K14/715
C07K19/00
C07K7/00
C12N15/12 ZNA
C12N15/62 Z
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024033739
(22)【出願日】2024-03-06
(62)【分割の表示】P 2021503843の分割
【原出願日】2019-07-25
(31)【優先権主張番号】62/703,383
(32)【優先日】2018-07-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】520347328
【氏名又は名称】アスクジーン・ファーマ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＡｓｋＧｅｎｅ Ｐｈａｒｍａ， Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】ユエフォン・ルゥ
(72)【発明者】
【氏名】ユィ・チュンシャオ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ＩＬ－２１プロドラッグおよびその製造方法および免疫系の刺激または癌もしくは感染症の処置のための、その使用方法を提供する。
【解決手段】ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、マスキング部分および担体部分を含むプロドラッグであって、ここで、該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、プロドラッグを提供する。
【選択図】なし
【解決手段】ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、マスキング部分および担体部分を含むプロドラッグであって、ここで、該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、プロドラッグを提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、マスキング部分および担体部分を含むプロドラッグであって、ここで、
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、
該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、
プロドラッグ。
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、
該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、
プロドラッグ。
【請求項2】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが配列番号１または配列番号１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項3】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドがＤ１８、Ｑ１９、Ｅ１０９およびＫ１１７から選択される位置に１以上の変異を含む(ナンバリングは配列番号１に従う)、請求項２に記載のプロドラッグ。
【請求項4】
ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが配列番号２、３、４および５から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項5】
マスキング部分がヒトＩＬ－２１受容体の細胞外ドメイン(ＥＣＤ)またはその機能的アナログを含む、請求項１～４の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項6】
ＩＬ－２１受容体がＩＬ－２１ＲαまたはＩＬ－２１Ｒγである、請求項５に記載のプロドラッグ。
【請求項7】
ＩＬ－２１受容体ＥＣＤが配列番号６もしくは７または配列番号６もしくは７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のプロドラッグ。
【請求項8】
第二サイトカイン部分をさらに含む、請求項１～７の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項9】
第二サイトカイン部分が
(ｉ) 配列番号８または配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチド、
(ii)ヒトＩＬ－７アゴニストポリペプチド、
(iii)ヒトＩＬ－９アゴニストポリペプチド、
(iv)配列番号９または配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチド、
(ｖ)ヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチドおよびヒトＩＬ－１５受容体アルファスシドメインまたは
(vi)配列番号２７または配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＣＬ１９ポリペプチド
である、請求項８に記載のプロドラッグ。
(ｉ) 配列番号８または配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチド、
(ii)ヒトＩＬ－７アゴニストポリペプチド、
(iii)ヒトＩＬ－９アゴニストポリペプチド、
(iv)配列番号９または配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチド、
(ｖ)ヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチドおよびヒトＩＬ－１５受容体アルファスシドメインまたは
(vi)配列番号２７または配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＣＬ１９ポリペプチド
である、請求項８に記載のプロドラッグ。
【請求項10】
第二サイトカイン部分に結合し、第二サイトカイン部分の生物学的活性を阻害する第二マスキング部分をさらに含み、ここで、第二マスキング部分は第二サイトカイン部分にまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、請求項８または９に記載のプロドラッグ。
【請求項11】
第二マスキング部分がＩＬ－２受容体ベータサブユニットのＥＣＤまたはその機能的アナログ、ＩＬ－７受容体のＥＣＤまたはその機能的アナログおよびＩＬ－９受容体のＥＣＤまたはその機能的アナログから選択される、請求項１０に記載のプロドラッグ。
【請求項12】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよび／または第二サイトカイン部分が非開裂可能ペプチドリンカーを介して担体部分に融合している、請求項１～１１の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項13】
非開裂可能ペプチドリンカーが配列番号２９～３３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のプロドラッグ。
【請求項14】
開裂可能ペプチドリンカーがウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクティベーター(ｕＰＡ)、マトリックスメタロプロテアーゼ(ＭＭＰ)２またはＭＭＰ９の基質配列を含む、請求項１～１３の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項15】
開裂可能ペプチドリンカーが(ｉ)ｕＰＡおよびＭＭＰ２の両者、(ii)ｕＰＡおよびＭＭＰ９の両者または(iii)ｕＰＡ、ＭＭＰ２およびＭＭＰ９の基質配列を含む、請求項１４に記載のプロドラッグ。
【請求項16】
開裂可能ペプチドリンカーが配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のプロドラッグ。
【請求項17】
開裂可能ペプチドリンカーが腫瘍部位またはその周囲環境に位置する１以上のプロテアーゼにより開裂可能であり、開裂が腫瘍部位または周囲環境でのプロドラッグの活性化をもたらす、請求項１～１６の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項18】
担体部分がＰＥＧ分子、アルブミン、アルブミンフラグメント、抗体Ｆｃドメインまたは抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～１７の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項19】
担体部分がＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ(「ＬＡＬＡ」)変異(ＥＵナンバリング)を含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体である、請求項１８に記載のプロドラッグ。
【請求項20】
担体部がノブ・イントゥ・ホール変異を含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体であり、
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分が、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合しており、そして所望により
第二サイトカイン部分および第二マスキング部分も、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合している、
請求項１８または１９に記載のプロドラッグ。
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分が、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合しており、そして所望により
第二サイトカイン部分および第二マスキング部分も、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合している、
請求項１８または１９に記載のプロドラッグ。
【請求項21】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分がＦｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖のＣ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＣ末端に融合している、請求項２０に記載のプロドラッグ。
【請求項22】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分がＦｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖のＮ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＮ末端に融合している、請求項２０に記載のプロドラッグ。
【請求項23】
第二サイトカイン部分および第二マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分からのＦｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖の逆の末端または抗体の２つの異なる重鎖の逆の末端に融合している、請求項２１および２２に記載のプロドラッグ。
【請求項24】
ノブ・イントゥ・ホール変異がＦｃドメインのポリペプチド鎖または抗体の重鎖にＴ３６６Ｙ「ノブ」変異およびＦｃドメインの他のポリペプチドまたは抗体の他の重鎖にＹ４０７Ｔ「ホール」変異(ＥＵナンバリング)を含む、請求項２０～２３の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項25】
ノブ・イントゥ・ホール変異が「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃおよび／またはＴ３６６Ｗ変異および「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異(ＥＵナンバリング)を含む、請求項２０～２３の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項26】
担体部分がグアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)、インシュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭＢ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンドセリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、ＰＤ１、クローディン１８.２、クローディン６、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ(ＦＡＰアルファ)、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(ＭＣＳＰ)およびＥＰＣＡＭから選択される１以上の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１８～２５の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項27】
該プロドラッグが、アミノ酸配列がそれぞれ
配列番号３６および３８、
配列番号３７および３８、
配列番号３９および４１、
配列番号４０および４１、
配列番号４２および４４、
配列番号４３および４４、
配列番号４５および４７または
配列番号４６および４７
を含む２つのポリペプチド鎖を含む、請求項２０に記載のプロドラッグ。
配列番号３６および３８、
配列番号３７および３８、
配列番号３９および４１、
配列番号４０および４１、
配列番号４２および４４、
配列番号４３および４４、
配列番号４５および４７または
配列番号４６および４７
を含む２つのポリペプチド鎖を含む、請求項２０に記載のプロドラッグ。
【請求項28】
アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４８および４９を含む２つの重鎖ポリペプチドおよび配列番号５０または５１を含む２つの軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１８に記載のプロドラッグ。
【請求項29】
担体部分がＦＡＰαまたは５Ｔ４に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、所望により腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)リガンドファミリーメンバーまたは４－１ＢＢリガンドまたはそのフラグメントの２つまたは３つのエクトドメインをさらに含む、請求項１８に記載のプロドラッグ。
【請求項30】
請求項１～２９の何れかに記載のプロドラッグおよび薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物。
【請求項31】
請求項１～２９の何れかに記載のプロドラッグをコードするポリヌクレオチド。
【請求項32】
請求項３１に記載のポリヌクレオチドを含む１以上の発現ベクター。
【請求項33】
請求項３２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項34】
ｕＰＡ、ＭＭＰ２および／またはＭＭＰ９をコードする遺伝子が宿主細胞でノックアウトされている、請求項３３に記載の宿主細胞。
【請求項35】
請求項１～２９の何れかに記載のプロドラッグを製造する方法であって、
請求項３３または３４に記載の宿主細胞(ここで、宿主細胞は哺乳動物細胞である)をプロドラッグの発現を可能とする条件下で培養し、そして
プロドラッグを単離することを含む、
方法。
請求項３３または３４に記載の宿主細胞(ここで、宿主細胞は哺乳動物細胞である)をプロドラッグの発現を可能とする条件下で培養し、そして
プロドラッグを単離することを含む、
方法。
【請求項36】
処置を必要とする患者における癌もしくは感染症を処置するまたは免疫系を刺激する方法であって、患者に治療有効量の請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項37】
処置を必要とする患者における癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激に使用するための、請求項１～２９の何れかに記載のプロドラッグ。
【請求項38】
処置を必要とする患者における癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激のための医薬の製造における、請求項１～２９の何れかに記載のプロドラッグの使用。
【請求項39】
患者がＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＰＶ感染；または乳癌、肺癌、膵臓癌、食道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸直腸癌および胃癌からなる群から選択される癌を有する、請求項３６に記載の方法、請求項３７に記載の使用のためのプロドラッグまたは請求項３８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互援用
本出願は、２０１８年７月２５日出願の米国仮出願６２／７０３,３８３に基づく優先権を主張し、その内容を引用により全体として本明細書に包含させる。
本出願は、２０１８年７月２５日出願の米国仮出願６２／７０３,３８３に基づく優先権を主張し、その内容を引用により全体として本明細書に包含させる。
【0002】
配列表
本出願は、ASCII形式で電子的に提供されている配列表を含む。配列表は引用により全体として本明細書に包含させる。２０１９年７月２２日に作成したASCIIコピーは名称025471_WO003_SL.txtであり、サイズ１８９,６８３バイトである。
本出願は、ASCII形式で電子的に提供されている配列表を含む。配列表は引用により全体として本明細書に包含させる。２０１９年７月２２日に作成したASCIIコピーは名称025471_WO003_SL.txtであり、サイズ１８９,６８３バイトである。
【0003】
発明の分野
本発明は、腫瘍部位で活性化可能である新規ＩＬ－２１プロドラッグに関する。該新規プロドラッグの使用方法が本発明にさらに含まれる。
本発明は、腫瘍部位で活性化可能である新規ＩＬ－２１プロドラッグに関する。該新規プロドラッグの使用方法が本発明にさらに含まれる。
【背景技術】
【0004】
発明の背景
インターロイキン－２１(ＩＬ－２１)は、活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞、Ｔ－濾胞性ヘルパー細胞およびナチュラルキラーＴ(ＮＫＴ)細胞により産生される(Spolski and Leonard, Ann Rev Immunol. (2008) 26:57008)。ＩＬ－２１は種々のクラスのリンパ系細胞の増殖、分化および細胞毒性に多面的効果を発揮することが示されている。より最近、ＩＬ－２１は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞から、炎症状態および自己免疫疾患の発症と関連するＴ細胞のサブセットであるＴヘルパー１７(ＴＨ１７)細胞への分化に重要な役割を有することがさらに示されている(Korn et al., Nature (2007) 448(7152):484-87; Nurieva et al., Nature (2007) 448(7152):480-83)。
インターロイキン－２１(ＩＬ－２１)は、活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞、Ｔ－濾胞性ヘルパー細胞およびナチュラルキラーＴ(ＮＫＴ)細胞により産生される(Spolski and Leonard, Ann Rev Immunol. (2008) 26:57008)。ＩＬ－２１は種々のクラスのリンパ系細胞の増殖、分化および細胞毒性に多面的効果を発揮することが示されている。より最近、ＩＬ－２１は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞から、炎症状態および自己免疫疾患の発症と関連するＴ細胞のサブセットであるＴヘルパー１７(ＴＨ１７)細胞への分化に重要な役割を有することがさらに示されている(Korn et al., Nature (2007) 448(7152):484-87; Nurieva et al., Nature (2007) 448(7152):480-83)。
【0005】
ＩＬ－２１の受容体複合体は、固有鎖ＩＬ－２１Ｒαと共通鎖γＣ(またはＲγ)からなり、該共通鎖は５つの他のサイトカイン、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９およびＩＬ－１５と共有される(Spolski and Leonard, supra)。ヒトＩＬ－２１はＩＬ－２１Ｒαに極めて高い親和性で結合し(ＫＤ 約７０pM; Zhang et al., Biochem Biophys Res Commun. (2003) 300(2):291-6)、一方ＩＬ－２１Ｒγに比較的低い親和性で結合する(ＫＤ 約１６０μM)。
【0006】
組み換えＩＬ－２１は、固形腫瘍の処置についていくつかの臨床治験で試験されている(Zarkavelis et al., Transl Cancer Res. (2017) 6(Suppl 2):S328-30)。治験の一つで、最大耐容用量が２００μg／kgで確立された(Schmidt et al., Clin Cancer Res. (2010) 16(21):5312-19)。それ故に、他のサイトカイン治療と同様、全身毒性はＩＬ－２１の治療投与量を重く制限し得る。さらに、ＩＬ－２１は、その受容体ＩＬ－２１Ｒαに極めて高い親和性で結合するため、インビボで「ＰＫシンク」に遭遇し得る(Zhang et al., supra)。その結果、ＩＬ－２１で患者における最適薬物動態(ＰＫ)および暴露の達成が困難であり得る。ＩＬ－２１のアナログは米国特許８,２１１,４２０およびKan et al., J Biol Chem. (2010) 285(16):12223-31に記載されている。しかしながら、アナログの一部はγＣ結合親和性が選択的に低減され、ＩＬ－２１アンタゴニストである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
より腫瘍部位選択的であり、ＰＫおよび有効性が改善し、同時に重篤な副作用を引き起こすことが少ない、ＩＬ－２１ベースの癌治療を開発する必要性がまだある。
【課題を解決するための手段】
【0008】
発明の概要
本発明は、サイトカイン部分、マスキング部分および担体部分を含むＩＬ－２１プロドラッグであって、ここで、該サイトカイン部分がＩＬ－２１アゴニストポリペプチドであり、該マスキング部分がサイトカイン部分に結合して、サイトカイン部分の生物学的活性を阻害し(例えば、サイトカイン部分が標的細胞上のその受容体と結合するのを阻止するまたはサイトカイン部分の１以上の生物学的活性、例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの免疫細胞によるインターフェロン－γ分泌の刺激を低減する)、そして、該サイトカイン部分が担体部分に融合しており、そして該マスキング部分はサイトカイン部分にまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、プロドラッグを提供する。ある実施態様において、マスキング部分はＩＬ－２１受容体アルファ(ＩＬ－２１Ｒα)細胞外ドメイン(ＥＣＤ)またはその機能的アナログを含む。
本発明は、サイトカイン部分、マスキング部分および担体部分を含むＩＬ－２１プロドラッグであって、ここで、該サイトカイン部分がＩＬ－２１アゴニストポリペプチドであり、該マスキング部分がサイトカイン部分に結合して、サイトカイン部分の生物学的活性を阻害し(例えば、サイトカイン部分が標的細胞上のその受容体と結合するのを阻止するまたはサイトカイン部分の１以上の生物学的活性、例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの免疫細胞によるインターフェロン－γ分泌の刺激を低減する)、そして、該サイトカイン部分が担体部分に融合しており、そして該マスキング部分はサイトカイン部分にまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、プロドラッグを提供する。ある実施態様において、マスキング部分はＩＬ－２１受容体アルファ(ＩＬ－２１Ｒα)細胞外ドメイン(ＥＣＤ)またはその機能的アナログを含む。
【0009】
ある実施態様において、サイトカイン部分は、野生型ヒトＩＬ－２１またはそのムテイン、例えば、配列番号１または配列番号１と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセント)同一であるアミノ酸配列を含むものなどのヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドである。ある実施態様において、ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｅ１０９およびＫ１１７(ナンバリングは配列番号１に従う)から選択される位置に１以上の変異を含む。特定の実施態様において、ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは配列番号１、２、３、４および５から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0010】
ある実施態様において、本プロドラッグのマスキング部分は、ヒトＩＬ－２１ＲαのＥＣＤまたはその機能的アナログを含む。さらなる実施態様において、マスキング部分は、(ｉ)ペプチドリンカーを介して一緒に融合された２コピーのヒトＩＬ－２１ＲαのＥＣＤまたはその機能的アナログまたは(ii)ペプチドリンカーを介してヒトＩＬ－２１ＲγのＥＣＤまたはその機能的アナログに融合したヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的アナログを含む。ある実施態様において、ヒトＩＬ－２１ＲγのＥＣＤまたはその機能的アナログは、配列番号７または配列番号７と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセント)同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施態様において、ヒトＩＬ－２１ＲαのＥＣＤまたはその機能的アナログは、配列番号６または配列番号６と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセント)同一であるアミノ酸配列を含む。
【0011】
ある実施態様において、プロドラッグは、さらに第二サイトカイン部分に結合し、該第二サイトカイン部分の生物学的活性を阻害する第二マスキング部分を含み、ここで、該第二マスキング部分は該第二サイトカイン部分にまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している。特定の実施態様において、第二マスキング部分はＩＬ－２受容体ベータサブユニットのＥＣＤまたはその機能的アナログ、ＩＬ－７受容体のＥＣＤまたはその機能的アナログおよびＩＬ－９受容体のＥＣＤまたはその機能的アナログから選択される。
【0012】
本プロドラッグのある実施態様において、サイトカイン部分は、配列番号２９～３３から選択されるような、非開裂可能ペプチドリンカーを介して担体部分に融合している。
【0013】
本プロドラッグのある実施態様において、マスキング部分を担体部分に直接的にまたは間接的に(例えば、サイトカイン部分を介して)結合させる開裂可能ペプチドリンカーは、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクティベーター(ｕＰＡ)、マトリックスメタロプロテアーゼ(ＭＭＰ)２またはＭＭＰ９の基質配列を含む。さらなる実施態様において、開裂可能ペプチドリンカーは、(ｉ)ｕＰＡおよびＭＭＰ２の両者、(ii)ｕＰＡおよびＭＭＰ９の両者または(iii)ｕＰＡ、ＭＭＰ２およびＭＭＰ９の基質配列を含む。特定の実施態様において、開裂可能ペプチドリンカーは、配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、開裂可能ペプチドリンカーは腫瘍部位またはその周囲環境に位置する１以上のプロテアーゼにより開裂可能であり、開裂は腫瘍部位または周囲環境でのプロドラッグの活性化をもたらす。
【0014】
本プロドラッグのある実施態様において、担体部分は、ＰＥＧ分子、脂肪酸鎖、アルブミン(例えば、ヒト血清アルブミン)またはそのフラグメント、抗体Ｆｃドメインまたは抗体またはその抗原結合フラグメントである。特定の実施態様において、担体部分は、ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインまたは変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ(「ＬＡＬＡ」)(ＥＵナンバリング)を含む抗体または変異２２８Ｐ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ(ＰＡＡ)を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。Tam et al., Antibodies (2017) 6(12):1-34に記載されているようなＦｃ機能性の低減に至る他の変異も、Ｆｃドメインまたは抗体のＦｃを担体部分として使用するとき、導入し得る。
【0015】
特定の実施態様において、担体部分は、ノブ・イントゥ・ホール変異を含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体であり、ここで、サイトカイン部分およびマスキング部分は、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合している。ある実施態様において、サイトカイン部分およびマスキング部分は、Ｆｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖のＣ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＣ末端に融合している。他の実施態様において、サイトカイン部分およびマスキング部分は、Ｆｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖のＮ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＮ末端に融合している。ある実施態様において、ノブ・イントゥ・ホール変異は、Ｆｃドメインのポリペプチド鎖または抗体の重鎖にＴ３６６Ｙ「ノブ」変異およびＦｃドメインの他のポリペプチドまたは抗体の他の重鎖にＹ４０７Ｔ「ホール」変異(ＥＵナンバリング)を含む。ある実施態様において、ノブ・イントゥ・ホール変異は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃおよび／またはＴ３６６Ｗ変異および「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異(ＥＵナンバリング)を含む。
【0016】
特定の実施態様において、プロドラッグは、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号３６および３８；配列番号３７および３８；配列番号３９および４１；配列番号４０および４１；配列番号４２および４４；配列番号４３および４４；配列番号４５および４７；または配列番号４６および４７を含む２つのポリペプチド鎖を含む。
【0017】
ある実施態様において、担体部分は、グアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)、インシュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭＢ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンドセリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、ＰＤ１、クローディン１８.２、クローディン６、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ(ＦＡＰアルファ)、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(ＭＣＳＰ)および上皮細胞接着分子(ＥＰＣＡＭ)から選択される１以上の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである。特定の実施態様において、担体部分は、ＦＡＰアルファまたは５Ｔ４に結合する抗体またはそのフラグメントである。
【0018】
特定の実施態様において、担体部分は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４８および配列番号４９を含む２つの重鎖ポリペプチドを含む抗体であり、ここで、該抗体は配列番号５０または５１に示すアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチド鎖を含む。
【0019】
ある実施態様において、プロドラッグは、ＴＮＦリガンドファミリーメンバーまたはそのフラグメントの２つまたは３つのエクトドメインまたは４－１ＢＢリガンドまたはそのフラグメントの２つまたは３つのエクトドメインをさらに含む。
【0020】
ある実施態様において、プロドラッグは、次の(ｉ)配列番号８または配列番号８と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセント)同一であるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドまたは(ii)ヒトＩＬ－７アゴニストポリペプチドまたは(iii)ヒトＩＬ－９アゴニストポリペプチドまたは(iv)配列番号９または配列番号９と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセント)同一であるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチドまたは(ｖ)ヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチドおよびＩＬ－１５受容体アルファスシドメインまたは(vi)配列番号２７と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセント)同一であるアミノ酸配列を含むＣＣＬ１９ポリペプチドから選択される第二エフェクターポリペプチドをさらに含む。
【0021】
他の実施態様において、プロドラッグは、第二サイトカインアゴニストポリペプチドなどの第二エフェクターポリペプチドおよび所望によりこの第二エフェクターポリペプチドに結合する第二マスキング部分をさらに含む。このようなプロドラッグの例は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４２および配列番号４４を含む２つのポリペプチド鎖を含む。他の例は、プロドラッグが、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４３および配列番号４４を含む２つのポリペプチド鎖を含むときである。他の例は、プロドラッグが、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４５および配列番号４７を含む２つのポリペプチド鎖であるときである。さらに他の例は、プロドラッグが、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４６および配列番号４７を含む２つのポリペプチド鎖であるときである。
【0022】
他の態様において、本発明は、本プロドラッグをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該発現ベクターを含む宿主細胞(例えば、ＣＨＯ、ＮＳ０細胞および２９３Ｔ細胞などの哺乳動物宿主細胞)を提供する。本発明はまた、哺乳動物宿主細胞をプロドラッグの発現を可能とする条件下で培養し、該プロドラッグを単離することを含む、本プロドラッグの製造法も提供する。
【0023】
本発明はまた、処置を必要とする患者(例えば、ヒト患者)における癌もしくは感染症を処置するまたは免疫系を刺激する方法であって、該患者に治療有効量の本発明のＩＬ－２１プロドラッグまたは医薬組成物を投与することを含む、方法も提供する。患者は、例えば、ウイルス感染(例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＰＶ感染)または乳癌、肺癌、膵臓癌、食道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸直腸癌および胃癌からなる群から選択される癌を有し得る。ここでまた提供されるのは、本方法において癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激に使用するＩＬ－２１プロドラッグ；本方法において癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激のための医薬の製造におけるＩｌ－２１プロドラッグの使用；および１以上の投与単位の本Ｉｌ－２１プロドラッグを含む、製品(例えば、キット)である。
【0024】
本発明の他の特性、目的および利点は、次の詳細な記載から明らかである。しかしながら、詳細な記載は、本発明の実施態様および態様を示しているが、限定ではなく、説明のためのみに示すことは理解されるべきである。本発明の範囲内の種々の変化および修飾は、詳細な記載から当業者に明らかである。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【0026】
【0027】
【0028】
【0029】
【0030】
【0031】
【0032】
【0033】
【発明を実施するための形態】
【0034】
発明の詳細な記載
本明細書および添付する特許請求の範囲で使用する単数表現、「または」および「その」は、文脈に明らかに反しない限り、複数物を含む。
本明細書および添付する特許請求の範囲で使用する単数表現、「または」および「その」は、文脈に明らかに反しない限り、複数物を含む。
【0035】
ここでの値またはパラメータへの「約」の付加は、その値またはパラメータ自体を包含する変動を含む(および記載する)。例えば、「約Ｘ」なる記載は、「Ｘ」を含む。さらに、ある一連の数値の前の「約」の使用は、その一連の記載する数値の各々の「約」を含む。例えば、「約Ｘ、ＹまたはＺ」なる記載は、「約Ｘ、約Ｙまたは約Ｚ」を含むことを意図する。
【0036】
用語「抗原結合部分」は、抗原に特異的に結合する一つのポリペプチドまたは一組の相互作用するポリペプチドをいい、抗体(例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異的抗体、二重特異的または二特異的抗体、抗イディオタイプ抗体または二機能性ハイブリッド抗体)またはその抗原結合フラグメント(例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆｖ、ジスルフィド架橋Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体(ｄＡｂ)または二重特異性抗体、一本鎖抗体およびイムノアドヘシンなどのＦｃ含有ポリペプチド)を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、抗体はどの重鎖アイソタイプ(例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ)またはサブタイプ(例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４)であってもよい。ある実施態様において、抗体はどの軽鎖アイソタイプ(例えば、カッパまたはラムダ)であってもよい。抗体はヒト、非ヒト(例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギまたは他の非ヒト動物)、キメラ(例えば、非ヒト可変領域およびヒト定常領域を有する)またはヒト化(例えば、非ヒトＣＤＲおよびヒトフレームワークおよび定常領域を有する)であり得る。ある実施態様において、抗体は誘導体化抗体である。
【0037】
用語「サイトカインアゴニストポリペプチド」は、野生型サイトカインまたはそのアナログをいう。野生型サイトカインのアナログは、野生型サイトカインと同じ生物学的特異性(例えば、同じ受容体に結合および同じ標的細胞を活性化)を有するが、アナログの活性レベルは野生型サイトカインのものと異なり得る。アナログは、例えば、野生型サイトカインのムテイン(すなわち、変異ポリペプチド)であってよく、野生型サイトカインに対して少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つまたは少なくとも１０の変異を含み得る。
【0038】
用語「サイトカインアンタゴニスト」または「サイトカインマスク」は、サイトカインに結合し、それによりアンタゴニストまたはマスクに結合されている間、サイトカインが標的細胞表面のその受容体に結合するおよび／または生物学的機能を発揮するのを阻止する、部分(例えば、ポリペプチド)をいう。サイトカインアンタゴニストまたはマスクの例は、サイトカインと接触するサイトカインの天然受容体の細胞外ドメイン由来のポリペプチドを含むが、これに限定されない。
【0039】
用語「有効量」または「治療有効量」は、特定の障害、状態または疾患の処置(例えば、その症状の１以上の改善、軽減、低減および／または遅延)に十分な化合物または組成物の量をいう。癌などの疾患に対して、有効量は、癌の発症または進行を遅らせる(例えば、腫瘍増殖速度低減および／または腫瘍血管形成、転移または癌細胞の末梢臓器への浸潤遅延または予防)、類上皮細胞数を減少させる、癌を退縮させる(例えば、腫瘍の縮小または根絶)および／または癌発生または再発を予防または遅延させるのに十分な量であり得る。有効量を、１回以上で投与し得る。
【0040】
用語「機能的アナログ」は、対照分子と同じ生物学的特異性(例えば、同じリガンドに結合)および／または活性(例えば、標的細胞の活性化または阻害)を有する分子をいう。
【0041】
２つのポリペプチド配列に関する用語「融合」または「融合体」は、主鎖ペプチド結合を介する２つのポリペプチド配列の結合をいう。２つのポリペプチドは、直接的にまたは１以上のアミノ酸長であり得るペプチドリンカーを介して融合され得る。融合ポリペプチドは、間にペプチドリンカーのためのコード配列を伴いまたは伴わずに、２つの融合パートナーの各コード配列を含むコード配列から、組み換え操作により製造し得る。ある実施態様において、融合は化学的結合を含む。
【0042】
用語「薬学的に許容される添加物」は、組成物中の成分についていうとき、その添加物が、ヒト対象を含む対象の処置のために、該対象への過度の有害副作用なく、かつ活性医薬成分(ＡＰＩ)の生物学的活性に影響することなく、投与するのに適するものを意味する。
【0043】
用語「プロドラッグ」は、インビボで活性化されるまで不活性である治療分子をいう。
【0044】
用語「対象」は哺乳動物をいい、ヒト、ペット(例えば、イヌまたはネコ)、農業用動物(例えば、ウシまたはウマ)、齧歯類または霊長類を含むが、これらに限定されない。
【0045】
ここで使用する「処置」または「処置する」は、有益なまたは所望の臨床的結果を得るための手段である。有益なまたは所望の臨床的結果は、次の、疾患に起因する１以上の症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患状態の改善、疾患の安定化(例えば、疾患の悪化または進行の予防または遅延)、疾患拡散(例えば、転移)の予防または遅延、疾患再発の予防または遅延、疾患の部分的または完全寛解の提供、疾患の処置に必要な１以上の他の医薬の用量の減少、患者のクオリティ・オブ・ライフの改善および／または生存延長の１以上を含むが、これらに限定されない。本発明の方法は、処置のこれら態様の何れか１以上を意図する。
【0046】
ここに記載する種々の実施態様の一つ、いくつかまたは全ての性質を組み合わせて、本発明の他の実施態様を形成し得ることは理解される。以下で使用するセクションの表題は全体の構成説明のためのみものであり、それに続いて記載される事項を限定すると解釈されてはならない。
【0047】
ＩＬ－２１プロドラッグ
本発明は、インビボで代謝されて活性ＩＬ－２１治療剤となる、ＩＬ－２１プロドラッグを提供する。ＩＬ－２１プロドラッグは、先のＩＬ－２１治療剤と比較して、少ない副作用、良好なインビボＰＫプロファイル(例えば、長い半減期)および良好な標的特異性を有し、より効果的である。本ＩＬ－２１プロドラッグは、担体部分に架橋し、ＩＬ－２１アンタゴニスト(マスキング部分またはサイトカインマスク)によりマスク(結合)されたＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(サイトカイン部分)を含む。例えば、ＩＬ－２１Ｒαの細胞外ドメインであり得るＩＬ－２１アンタゴニストを、サイトカイン部分にまたは担体部分に開裂可能リンカー(例えば、開裂可能ペプチドリンカー)を介して架橋し得る。マスクは、マスクが結合している間、サイトカイン部分の生物学的機能を阻害する。プロドラッグは、リンカーの開裂と続くプロドラッグからのサイトカインマスクの遊離により患者の標的部位(例えば、腫瘍部位または周囲環境)で活性化され、先にマスクされていたサイトカイン部分が露出され、サイトカイン部分が標的細胞上のその受容体に結合し、標的細胞にその生物学的機能を発揮することができる。ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグの担体は、標的部位の抗原に結合する、抗体などの抗原結合部分である。
本発明は、インビボで代謝されて活性ＩＬ－２１治療剤となる、ＩＬ－２１プロドラッグを提供する。ＩＬ－２１プロドラッグは、先のＩＬ－２１治療剤と比較して、少ない副作用、良好なインビボＰＫプロファイル(例えば、長い半減期)および良好な標的特異性を有し、より効果的である。本ＩＬ－２１プロドラッグは、担体部分に架橋し、ＩＬ－２１アンタゴニスト(マスキング部分またはサイトカインマスク)によりマスク(結合)されたＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(サイトカイン部分)を含む。例えば、ＩＬ－２１Ｒαの細胞外ドメインであり得るＩＬ－２１アンタゴニストを、サイトカイン部分にまたは担体部分に開裂可能リンカー(例えば、開裂可能ペプチドリンカー)を介して架橋し得る。マスクは、マスクが結合している間、サイトカイン部分の生物学的機能を阻害する。プロドラッグは、リンカーの開裂と続くプロドラッグからのサイトカインマスクの遊離により患者の標的部位(例えば、腫瘍部位または周囲環境)で活性化され、先にマスクされていたサイトカイン部分が露出され、サイトカイン部分が標的細胞上のその受容体に結合し、標的細胞にその生物学的機能を発揮することができる。ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグの担体は、標的部位の抗原に結合する、抗体などの抗原結合部分である。
【0048】
ある実施態様において、本ＩＬ－２１プロドラッグは、体内の担体により標的とされる標的部位で代謝されて、活性となる。さらなる実施態様において、プロドラッグにおける担体は、ＩＬ－２１プロドラッグが患者の腫瘍部位に送達され、サイトカインマスクを担体またはサイトカイン部分に結合するリンカーの開裂を介して局所的(例えば、腫瘍微小環境ないまたはその近辺)に代謝され、サイトカイン部分を標的細胞のその受容体と相互作用できるようにし、局所的に標的免疫細胞を刺激するように、腫瘍抗原を標的とする抗体である。
【0049】
Ａ. プロドラッグのサイトカイン部分
ＩＬ－２１プロドラッグはＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(サイトカイン部分)、担体(担体部分)およびＩＬ－２１アンタゴニスト(マスキング部分)を含み得て、ここで、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは直接的にまたはリンカー(例えば、開裂可能または非開裂可能ペプチドリンカー)を介して担体と融合しており、ＩＬ－２１アンタゴニストはＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体に開裂可能ペプチドリンカーを介して架橋している。本ＩＬ－２１プロドラッグにおいて、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは、野生型ヒトＩＬ－２１(例えば、配列番号１)などの野生型ＩＬ－２１ポリペプチドまたはヒトＩＬ－２１由来の、例えば、配列番号２～５から選択されるアミノ酸配列を有するものなどのＩＬ－２１ムテインであり得る。ＩＬ－２１ムテインは、野生型ＩＬ－２１と比較して、ＩＬ－２１ＲαまたはＩＬ－２１ＲαＲγに対する顕著に減少した親和性を有し得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１ムテインは、高親和性ＩＬ－２Ｒαに対して、野生型ＩＬ－２１と比較して、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１,０００倍または１０,０００倍低い結合親和性を有する。特に断らない限り、ここに記載するＩＬ－２１およびＩＬ－２１ムテインにおける全ての残基番号は、配列番号１のナンバリングに従う。
ＩＬ－２１プロドラッグはＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(サイトカイン部分)、担体(担体部分)およびＩＬ－２１アンタゴニスト(マスキング部分)を含み得て、ここで、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは直接的にまたはリンカー(例えば、開裂可能または非開裂可能ペプチドリンカー)を介して担体と融合しており、ＩＬ－２１アンタゴニストはＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体に開裂可能ペプチドリンカーを介して架橋している。本ＩＬ－２１プロドラッグにおいて、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは、野生型ヒトＩＬ－２１(例えば、配列番号１)などの野生型ＩＬ－２１ポリペプチドまたはヒトＩＬ－２１由来の、例えば、配列番号２～５から選択されるアミノ酸配列を有するものなどのＩＬ－２１ムテインであり得る。ＩＬ－２１ムテインは、野生型ＩＬ－２１と比較して、ＩＬ－２１ＲαまたはＩＬ－２１ＲαＲγに対する顕著に減少した親和性を有し得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１ムテインは、高親和性ＩＬ－２Ｒαに対して、野生型ＩＬ－２１と比較して、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１,０００倍または１０,０００倍低い結合親和性を有する。特に断らない限り、ここに記載するＩＬ－２１およびＩＬ－２１ムテインにおける全ての残基番号は、配列番号１のナンバリングに従う。
【0050】
Ｂ. ＩＬ－２１プロドラッグのマスキング部分
本プロドラッグにおけるＩＬ－２１アンタゴニスト、すなわち、マスキング部分は、プロドラッグのサイトカイン部分に結合し、サイトカイン部分をマスキングし、その生物学的機能を阻止する、ペプチドまたは抗体または抗体フラグメントであり得る。
本プロドラッグにおけるＩＬ－２１アンタゴニスト、すなわち、マスキング部分は、プロドラッグのサイトカイン部分に結合し、サイトカイン部分をマスキングし、その生物学的機能を阻止する、ペプチドまたは抗体または抗体フラグメントであり得る。
【0051】
例として、ＩＬ－２１アンタゴニストは、ＩＬ－２１と結合し、ＩＬ－２１のその受容体への結合を妨害し、マスクしている間、ＩＬ－２１部分の生物学的活性を低減させる、ペプチドおよび抗体を含み得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１アンタゴニストは、ヒトＩＬ－２１ＲαまたはヒトＩＬ－２１Ｒγ由来のものなどのＩＬ－２１ＲαまたはＩＬ－２１Ｒγ細胞外ドメインまたはその機能的アナログ(例えば、配列番号６または７)を含む。ある実施態様において、ＩＬ－２１アンタゴニストは、ペプチドライブラリーのスクリーニングにより同定されたペプチドを含む。ある実施態様において、ＩＬ－２１アンタゴニストは、ＩＬ－２１またはＩＬ－２１ムテインのＩＬ－２１受容体への結合を遮断する抗体またはそのフラグメントを含む。
【0052】
ある実施態様において、本プロドラッグにおけるＩＬ－２１アンタゴニストは、ＩＬ－２１Ｒα細胞外ドメイン(ＥＣＤ)である。本発明者らは、ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤをプロテアーゼにより開裂したとき、ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤに対するＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの高結合親和性にも関わらず、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの細胞ベースの活性がほぼ完全に回復したことを驚くべきことに発見した。
【0053】
Ｃ. プロドラッグの担体部分
本ＩＬ－２１プロドラッグの担体部分は、抗原結合部分または抗原結合部分ではない部分であり得る。担体部分は、サイトカインアゴニストポリペプチドの血清半減期などのＰＫプロファイルを改善し得て、またサイトカインアゴニストポリペプチドを、体内の腫瘍部位などの標的部位に向かわせ得る。
本ＩＬ－２１プロドラッグの担体部分は、抗原結合部分または抗原結合部分ではない部分であり得る。担体部分は、サイトカインアゴニストポリペプチドの血清半減期などのＰＫプロファイルを改善し得て、またサイトカインアゴニストポリペプチドを、体内の腫瘍部位などの標的部位に向かわせ得る。
【0054】
１. 抗原結合担体部分
担体部分は、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはイムノアドヘシンであり得る。ある実施態様において、抗原結合部分は、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する完全長抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ(ａｂ’)２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド架橋Ｆｖフラグメント、単一ドメイン抗体、ナノボディまたは一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)である。ある実施態様において、抗原結合部分は二特異的抗原結合部分であり、２つの異なる抗原または同じ抗原の２つの異なるエピトープに結合し得る。抗原結合部分は、サイトカインアゴニストポリペプチドに相加的および潜在的に相乗的治療有効性を提供し得る。
担体部分は、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはイムノアドヘシンであり得る。ある実施態様において、抗原結合部分は、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する完全長抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ(ａｂ’)２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド架橋Ｆｖフラグメント、単一ドメイン抗体、ナノボディまたは一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)である。ある実施態様において、抗原結合部分は二特異的抗原結合部分であり、２つの異なる抗原または同じ抗原の２つの異なるエピトープに結合し得る。抗原結合部分は、サイトカインアゴニストポリペプチドに相加的および潜在的に相乗的治療有効性を提供し得る。
【0055】
ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスクは、抗原結合部分の軽鎖および／または重鎖のＮ末端またはＣ末端に融合させ得る。例として、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスクは、抗体重鎖もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗体軽鎖もしくはその抗原結合フラグメントに融合させ得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの一端を、抗体の重鎖の一方または両方のＣ末端に融合させ、ＩＬ－２１マスクを、開裂可能ペプチドリンカーを介してＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの他の末端に融合させる。ある実施態様において、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドを、抗体の重鎖の一つのＣ末端に融合させ、ＩＬ－２１マスクを開裂可能ペプチドリンカーを介して抗体の他の重鎖のＣ末端に融合させ、ここで、２つの重鎖は、該２つの異なる重鎖の特異的対形成を可能にする変異を含む。
【0056】
ヘテロ二量体を形成する戦略は周知である(例えば、Spies et al., Mol Imm. (2015) 67(2)(A):95-106参照)。例えば、プロドラッグにおける２つの重鎖ポリペプチドは、「ノブ・イントゥ・ホール」変異を介して安定なヘテロ二量体を形成し得る。「ノブ・イントゥ・ホール」変異は、抗体重鎖のヘテロ二量体形成を促進するためになされて、二特異的抗体の産生のために一般に使用される(例えば、米国特許８,６４２,７４５参照)。例えば、抗体のＦｃドメインは、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｗ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異を含み得る。ＣＨ３ドメイン間のさらなる鎖間ジスルフィド架橋も、例えば、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ変異および「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＥ３５６ＣまたはＳ３５４Ｃ変異を導入することにより、使用できる(例えば、Merchant et al., Nature Biotech (1998) 16:677-81参照)。他の実施態様において、抗体部分は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃおよび／またはＴ３６６Ｗ変異および他方のＣＨ３ドメインにＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異を含み得る。ある実施態様において、抗体部分は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃおよび／またはＴ３６６Ｗ変異および他方のＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ(またはＥ３５６Ｃ)、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異を、一方のＣＨ３ドメインにさらなるＹ３４９Ｃ変異および他方のＣＨ３ドメインにさらなるＥ３５６ＣまたはＳ３５４Ｃ変異と共に含んでよく、鎖間ジスルフィド架橋を形成する(ナンバリングは常にＫａｂａｔのＥＵインデックスによる；Kabat et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。ＥＰ１８７０４５９Ａ１に記載されているような他のノブ・イントゥ・ホールテクノロジーをこれとは別にまたはこれに加えて使用し得る。それ故に、抗体部分のノブ・イントゥ・ホール変異の他の例は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＲ４０９Ｄ／Ｋ３７０Ｅ変異および「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＤ３９９Ｋ／Ｅ３５７Ｋ変異を有する(ＥＵナンバリング)。
【0057】
ある実施態様において、プロドラッグの抗体部分は、そのＦｃドメインにＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ(「ＬＡＬＡ」)変異を含む。ＬＡＬＡ変異は、補体結合および固定ならびにＦｃγ依存的ＡＤＣＣを排除する(例えば、Hezareh et al. J. Virol. (2001) 75(24):12161-8参照)。さらなる実施態様において、ノブ・イントゥ・ホール変異に加えて、ＬＡＬＡ変異が抗体部分に存在する。
【0058】
ある実施態様において、抗体部分は、ＦｃドメインにＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ(「ＹＴＥ」)変異を含む。ＹＴＥ変異は、血清半減期、組織分布およびＩｇＧ１の活性の同時調節を可能とする(Dall’Acqua et al., J Biol Chem. (2006) 281:23514-24; and Robbie et al., Antimicrob Agents Chemother. (2013) 57(12):6147-53参照)。さらなる実施態様において、ＹＴＥ変異が、ノブ・イントゥ・ホール変異に加えて抗体部分に存在する。特定の実施態様において、抗体部分は、ＹＴＥ、ＬＡＬＡおよびノブ・イントゥ・ホール変異またはこれらの何らかの組み合わせを含む。
【0059】
抗原結合部分は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびマクロファージなどの細胞の表面の抗原に結合するかまたはサイトカインに結合することができる。例えば、抗原結合部分はＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ－４またはＴＧＦ－ベータに結合でき、抗体であり得る。抗体は、免疫細胞を活性化し、その抗癌活性を増強する能力を有し得る。
【0060】
抗原結合部分は、腫瘍細胞の表面の抗原に結合し得る。例えば、抗原結合部分はＦＡＰアルファ、５Ｔ４、Ｔｒｏｐ－２、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ－２、ＥＧＦＲ、クローディン１８.２、ＤＬＬ－３、ＧＣＰ３または癌胎児性抗原(ＣＥＡ)に結合でき、抗体であり得る。抗体はＡＤＣＣ活性を有しても、有していなくてもよい。抗体はまた細胞毒性薬物にさらにコンジュゲートし得る。
【0061】
ある実施態様において、抗原結合部分は、グアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、インシュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭＢ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンドセリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、クローディン１８.２、クローディン６、ＢＣＭＡまたはＥＰＣＡＭに結合する。ある実施態様において、抗原結合部分は、ＤＬＬ３の上皮細胞増殖因子(ＥＧＦ)様ドメインに結合する。ある実施態様において、抗原結合部分は、ＤＬＬ３のデルタ／Ｓｅｒｒａｔｅ／Ｌａｇ２(ＤＳＬ)様ドメインに結合する。ある実施態様において、抗原結合部分は、ＧＰＣ３の３７４番目のアミノ酸の後ろに位置するエピトープに結合する。ある実施態様において、抗原結合部分はＧＰＣ３のヘパリン硫酸グリカンに結合する。ある実施態様において、抗原結合部分はクローディン１８.２に結合し、クローディン１８.１に結合しない。ある実施態様において、抗原結合部分は、クローディン１８.２より少なくとも１０倍弱い結合親和性でクローディン１８.１に結合する。
【0062】
抗原結合部分の例は、トラスツズマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ＧＣ３３(またはそのヒト化バージョン)、抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ８０６(またはそのヒト化バージョン)、抗ｄＰＮＡＧ抗体Ｆ５９８およびその抗原結合フラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合部分は、トラスツズマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブまたはパニツムマブ、ＧＣ３３(またはそのヒト化バージョン)、抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ８０６(またはそのヒト化バージョン)、抗ｄＰＮＡＧ抗体Ｆ５９８またはそのフラグメントと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する。ある実施態様において、抗原結合部分は、トラスツズマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ＧＣ３３(またはそのヒト化バージョン)、抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ８０６(またはそのヒト化バージョン)、抗ｄＰＮＡＧ抗体Ｆ５９８またはそのフラグメントの抗体重鎖と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する抗体重鎖を有する。ある実施態様において、抗原結合部分は、トラスツズマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ＧＣ３３(またはそのヒト化バージョン)、抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ８０６(またはそのヒト化バージョン)、抗ｄＰＮＡＧ抗体Ｆ５９８またはそのフラグメントの抗体軽鎖と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する抗体軽鎖を有する。抗原結合部分はＩＬ－２アゴニストポリペプチドに融合される。ある実施態様において、抗原結合部分は、トラスツズマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ＧＣ３３、抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ８０６または抗ｄＰＮＡＧ抗体Ｆ５９８の６つの相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む。
【0063】
多数のＣＤＲ線引き(delineation)が当分野で知られ、ここに包含させる。当業者は、重鎖または軽鎖可変領域の配列に基づき、ある線引きのＣＤＲを容易に決定できる。「Ｋａｂａｔ」ＣＤＲは配列変動性に基づくものであり、最も一般に使用される(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。「Ｃｈｏｔｈｉａ」ＣＤＲは、構造ループの位置をいう(Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. (1987) 196:901-917)。「ＡｂＭ」ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａのループ構造の妥協であり、Oxford Molecular’s AbM抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「Ｃｏｎｔａｃｔ」ＣＤＲは、入手可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらＣＤＲの各々からの残基を、一般的抗体ナンバリングスキームを引用して、下の表１に示す。ここで特に断らない限り、抗体のアミノ酸番号は、ＣＤＲ線引きがＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭまたはＣｏｎｔａｃｔスキームを引用してなされたときを含み、Kabat et al., supraに記載のＫａｂａｔナンバリングスキームをいう。このナンバリングシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのフレームワーク領域(ＦＲ)またはＣＤＲの短縮または挿入に応じて、アミノ酸を少なくまたは多く含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後ろに一アミノ酸挿入(Ｋａｂａｔにより残基５２ａ)および重鎖ＦＲ残基８２の後ろに挿入残基(例えば、Ｋａｂａｔにより残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど)を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、ある抗体について、該抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付配列の相同性の領域のアラインメントにより決定され得る。
【表1】
【0064】
ある実施態様において、ＣＤＲは「伸長ＣＤＲ」であり、異なるスキームにより開始または終結する領域を含む。例えば、伸長ＣＤＲ次のとおりであり得る。Ｌ２４－Ｌ３６、Ｌ２６－Ｌ３４またはＬ２６－Ｌ３６(ＶＬ－ＣＤＲ１)；Ｌ４６－Ｌ５２、Ｌ４６－Ｌ５６またはＬ５０－Ｌ５５(ＶＬ－ＣＤＲ２)；Ｌ９１－Ｌ９７(ＶＬ－ＣＤＲ３)；Ｈ４７－Ｈ５５、Ｈ４７－Ｈ６５、Ｈ５０－Ｈ５５、Ｈ５３－Ｈ５８またはＨ５３－Ｈ６５(ＶＨ－ＣＤＲ２)；および／またはＨ９３－Ｈ１０２(ＶＨ－ＣＤＲ３)。
【0065】
ある実施態様において、抗原結合部分はＨＥＲ２に結合し、配列番号５２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号５３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号５２からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号５３からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0066】
ある実施態様において、抗原結合部分はＣＤ２０に結合し、配列番号５４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号５５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号５４からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号５５からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0067】
ある実施態様において、抗原結合部分はＣＤ３０に結合し、配列番号５６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号５７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号５６からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号５７からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0068】
ある実施態様において、抗原結合部分はＥＧＦＲに結合し、配列番号５８もしくは６０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号５９もしくは６１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは配列番号５８および５９からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３または配列番号６０および６１からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0069】
ある実施態様において、抗原結合部分はｃ－ＭＥＴに結合し、配列番号６２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号６３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号６２からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号６３からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0070】
ある実施態様において、抗原結合部分はＧＰＣ３に結合し、配列番号６４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号６５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号６４からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号６５からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0071】
ある実施態様において、抗原結合部分はクローディン１８.２に結合し、配列番号６６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号６７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号６６からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号６７からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0072】
ある実施態様において、抗原結合部分はＦＡＰアルファに結合し、配列番号８０もしくは８１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号８２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは配列番号８０または８１からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号８２からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0073】
ある実施態様において、抗原結合はＦＡＰアルファに結合し、配列番号８３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号８４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号８４からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号８４からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0074】
ある実施態様において、抗原結合部分はＰＤＬ１に結合し、配列番号８９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号９０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号８９からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号９０からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0075】
ある実施態様において、抗原結合部分は５Ｔ４に結合し、配列番号８７もしくは８８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号８５もしくは８６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインまたはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号８７または８８からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号８５または８６からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0076】
ある実施態様において、抗原結合部分はＴｒｏｐ－２に結合し、KASQDVSIAVA(配列番号６８)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、SASYRYT(配列番号６９)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２およびQQHYITPLT(配列番号７０)のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域；およびNYGMN(配列番号７１)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、WINTYTGEPTYTDDFKG(配列番号７２)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２およびGGFGSSYWYFDV(配列番号７３)のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域を含む。
【0077】
ある実施態様において、抗原結合部分はメソテリンに結合し、SASSSVSYMH(配列番号７４)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、DTSKLAS(配列番号７５)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２およびQQWSGYPLT(配列番号７６)のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域；およびGYTMN(配列番号７７)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、LITPYNGASSYNQKFRG(配列番号７８)のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２およびGGYDGRGFDY(配列番号７９)のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域を含む。
【0078】
ある実施態様において、抗原結合部分はＰＤ－１に結合し、配列番号５０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号９１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号５０からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号９１からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0079】
ある実施態様において、抗原結合部分はＰＤ－１に結合し、配列番号９２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖またはそのフラグメントおよび配列番号９３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、配列番号９２からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および配列番号９３からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【0080】
ある実施態様において、抗原結合部分は１つ、２つまたは３つの抗原結合ドメインを含む。例えば、抗原結合部分は二特異的であり、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、５Ｔ４、ＦＡＰアルファ、Ｔｒｏｐ－２、ＧＰＣ３、ＶＥＧＦＲ２、クローディン１８.２およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される２つの異なる抗原に結合する。ある実施態様において、該二特異的抗原結合部分は、ＨＥＲ２の２つの異なるエピトープに結合する。
【0081】
２. 他の担体部分
他の非抗原結合担体部分を本プロドラッグで使用し得る。例えば、抗体Ｆｃドメイン(例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ)、ポリマー(例えば、ＰＥＧ)、アルブミン(例えば、ヒトアルブミン)またはそのフラグメントまたはナノ粒子が使用され得る。
他の非抗原結合担体部分を本プロドラッグで使用し得る。例えば、抗体Ｆｃドメイン(例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ)、ポリマー(例えば、ＰＥＧ)、アルブミン(例えば、ヒトアルブミン)またはそのフラグメントまたはナノ粒子が使用され得る。
【0082】
例として、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのアンタゴニストを抗体Ｆｃドメインに融合させて、Ｆｃ融合タンパク質を形成し得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドを、Ｆｃドメインポリペプチド鎖の一方のＣ末端またはＮ末端に融合(直接的にまたはペプチドリンカーを介して)させ、サイトカインマスクを開裂可能ペプチドリンカーを介して他のＦｃドメインポリペプチド鎖の対応するＣ末端またはＮ末端に融合させ、ここで、２つのＦｃドメインポリペプチド鎖は、２つの異なるＦｃ鎖の特異的対形成を可能とする変異を含む。ある実施態様において、Ｆｃドメインは、上記ノブ・イントゥ・ホール変異を含む。さらなる実施態様において、Ｆｃドメインは、上記ＹＴＥおよび／またはＬＡＬＡ変異も含み得る。
【0083】
プロドラッグの担体部分は、アルブミン(例えば、ヒト血清アルブミン)またはそのフラグメントを含み得る。ある実施態様において、担体部分は、約１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、６０以上、７０以上、８０以上、９０以上、１００以上、１２０以上、１４０以上、１６０以上、１８０以上、２００以上、２５０以上、３００以上、３５０以上、４００以上、４５０以上、５００以上または５５０以上のアミノ酸長であるアルブミンフラグメント(例えば、ヒト血清アルブミンフラグメント)を含む。ある実施態様において、アルブミンフラグメントは約１０アミノ酸～約５８４アミノ酸長(例えば約１０～約２０、約２０～約４０、約４０～約８０、約８０～約１６０、約１６０～約２５０、約２５０～約３５０、約３５０～約４５０または約４５０～約５５０アミノ酸長)である。ある実施態様において、アルブミンフラグメントはSudlow IドメインまたはそのフラグメントまたはSudlow IIドメインまたはそのフラグメントを含む。
【0084】
Ｄ. プロドラッグのリンカー成分
ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドを、ペプチドリンカーを用いてまたは用いずに担体部分に融合させ得る。ペプチドリンカーは開裂不可能であり得る。ある実施態様において、ペプチドリンカーは配列番号２９～３３から選択される。特定の実施態様において、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３１)を含む。
ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドを、ペプチドリンカーを用いてまたは用いずに担体部分に融合させ得る。ペプチドリンカーは開裂不可能であり得る。ある実施態様において、ペプチドリンカーは配列番号２９～３３から選択される。特定の実施態様において、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３１)を含む。
【0085】
ＩＬ－２１マスクサイトカイン部分または担体に開裂可能リンカーを介して融合させ得る。開裂可能リンカーは１以上の(例えば、２つまたは３つの)開裂可能部分(ＣＭ)を含み得る。各ＣＭは、レグマイン、プラスミン、ＴＭＰＲＳＳ－３／４、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＴ１－ＭＭＰ、カテプシン、カスパーゼ、ヒト好中球エラスターゼ、ベータ－セクレターゼ、ｕＰＡおよびＰＳＡから選択される酵素またはプロテアーゼの基質であり得る。開裂可能リンカーの例は、配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を含むものを含むが、これらに限定されない。例として、開裂可能ペプチドリンカーを使用して、ＩＬ－２１Ｒγ ＥＣＤをＩＬ－２１ Ｒα－サブユニットＥＣＤに結合させる。好ましくは、一方のＩＬ－２１Ｒα－サブユニットＥＣＤを他方のα－サブユニットＥＣＤに結合させて、二量体を形成する開裂可能ペプチドリンカーがある。
【0086】
Ｅ. さらなるエフェクターポリペプチドを有するＩＬ－２１プロドラッグ
特定の実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグは、第二サイトカイン部分などの第二エフェクターポリペプチドをさらに含む。このような場合、プロドラッグは、第二エフェクターポリペプチドに結合し、生物学的活性を阻害する第二マスキング部分をさらに含み得る。
特定の実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグは、第二サイトカイン部分などの第二エフェクターポリペプチドをさらに含む。このような場合、プロドラッグは、第二エフェクターポリペプチドに結合し、生物学的活性を阻害する第二マスキング部分をさらに含み得る。
【0087】
例として、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスクを、Ｆｃドメインの一端の別のＦｃ鎖に融合させ得て、一方第二サイトカイン部分およびそのマスクを、Ｆｃドメインの他端で別のＦｃ鎖と融合させ得て、ここで、マスクは、開裂可能ペプチドリンカーを介してＦｃ鎖に融合される。ある実施態様において、２つのＦｃドメインポリペプチド鎖は、２つの異なるＦｃ鎖の特異的対形成を可能とする変異を含む。
【0088】
２つのエフェクターポリペプチドおよび２つのマスキング部分を含むプロドラッグは、アミノ酸配列がそれぞれ(ｉ)配列番号４２および４４；(ii)配列番号４３および４４；(iii)配列番号４５および４７；または(iv)配列番号４６および４７を含む２つのポリペプチド鎖を含むものを含む。ＩＬ－２アゴニストポリペプチド(第二エフェクターポリペプチド)およびその対応するマスクを含むＩＬ－２１プロドラッグの構造の例を図３Ａに示す。ＩＬ－１５アゴニストポリペプチド、スシドメインおよびその対応するマスクを含むＩＬ－２１プロドラッグの構造の例を図３Ｂに示す。
【0089】
ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグは、腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)スーパーファミリーメンバーのリガンドのエクトドメインの１以上の(例えば、２つまたは３つの)コピーをさらに含む。ある実施態様において、ＴＮＦスーパーファミリーメンバーは４－１ＢＢである。２コピーの４－１ＢＢリガンド(４－１ＢＢＬ)エクトドメインをさらに含む例示的ＩＬ－２１プロドラッグの構造を図４に示す。ＩＬ－２１プロドラッグの担体は、腫瘍で発現される抗原、例えば、ＦＡＰまたは５Ｔ４に結合する抗体である。
【0090】
ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、サイトカインマスク、担体、ペプチドリンカーおよびプロドラッグの特定の、非限定的例を、下の配列セクションに示す。さらに、本発明のプロドラッグは、周知の組み換えテクノロジーにより製造され得る。例えば、プロドラッグのポリペプチド鎖のコード配列を含む１以上の発現ベクターを哺乳動物宿主細胞(例えば、ＣＨＯ細胞)にトランスフェクトし、該細胞を該コード配列の発現を可能とする条件下で培養し、発現されたポリペプチドをプロドラッグ複合体に組み立て得る。プロドラッグを不活性に維持するために、ｕＰＡ、ＭＭＰ２および／またはＭＭＰ９を全くまたはほとんど発現しない宿主細胞を使用し得る。ある実施態様において、宿主細胞は、これらプロテアーゼをコードする遺伝子のヌル変異(ノックアウト)を含み得る。
【0091】
医薬組成物
本発明のプロドラッグおよびムテイン(すなわち、活性医薬成分またはＡＰＩ)を含む医薬組成物を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態の所望の程度の純度を有するＡＰＩと１以上の任意の薬学的に許容される添加物(例えば、 Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition., Osol, A. Ed. (1980)参照)の混合により製造し得る。薬学的に許容される添加物(または担体)は、一般に用いる投与量および濃度で対象に非毒性であり、例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、酢酸または他の無機または有機酸またはその塩を含む緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤(例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール)；低分子量(約１０残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；スクロース、グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖、二糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成カウンターイオン；金属複合体(例えばＺｎ－タンパク質複合体)；および／またはポリエチレングリコール(ＰＥＧ)などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
本発明のプロドラッグおよびムテイン(すなわち、活性医薬成分またはＡＰＩ)を含む医薬組成物を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態の所望の程度の純度を有するＡＰＩと１以上の任意の薬学的に許容される添加物(例えば、 Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition., Osol, A. Ed. (1980)参照)の混合により製造し得る。薬学的に許容される添加物(または担体)は、一般に用いる投与量および濃度で対象に非毒性であり、例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、酢酸または他の無機または有機酸またはその塩を含む緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤(例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール)；低分子量(約１０残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；スクロース、グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖、二糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成カウンターイオン；金属複合体(例えばＺｎ－タンパク質複合体)；および／またはポリエチレングリコール(ＰＥＧ)などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
【0092】
緩衝液は、特に、安定性がｐＨ依存的であるならば、治療有効性を最適化する範囲内にｐＨを制御するために使用される。緩衝液は、好ましくは約５０mM～約２５０mMの範囲の濃度で存在する。本発明で使用する適当な緩衝剤は、クエン酸、リン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルコン酸、シュウ酸、乳酸および酢酸などの有機および無機両方の酸およびその塩を含む。さらに、緩衝液は、ヒスチジンおよびＴｒｉｓのようなトリメチルアミン塩を含み得る。
【0093】
防腐剤は微生物の増殖を抑えるために加え、一般に０.２％～１.０％(ｗ／ｖ)の範囲で存在する。本発明で使用するのに適当な防腐剤は、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；塩化ヘキサメトニウム；ベンザルコニウムハロゲン化物(例えば、クロライド、ブロマイド、アイオダイド)、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノールおよびｍ－クレゾールを含む。
【0094】
張性剤は、「安定化剤」としても知られることもあり、組成物の液体の張性を調節または維持するために使用される。タンパク質および抗体などの大型の、荷電生体分子と使用するとき、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それにより分子間および分子内相互作用の可能性を低減できるため、「安定化剤」と称されることがある。張性剤は、他の成分の相対量を考慮して、０.１％～２５重量％以上、好ましくは１％～５重量％の任意の量で存在し得る。好ましい張性剤は、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールなどの多価糖アルコール、好ましくは三価またはそれ以上の糖アルコールを含む。
【0095】
非イオン性界面活性剤または洗剤(「湿潤剤」としても知られる)は、治療剤の溶解を助けるためおよび治療タンパク質を撹拌誘発凝集から保護するために存在し、これはまた製剤が活性治療タンパク質または抗体の変性を起こすことなくせん断表面応力に曝されることも可能とする。非イオン性界面活性剤は、約０.０５mg／ml～約１.０mg／ml、好ましくは約０.０７mg／ml～約０.２mg／mlの範囲で存在する。
【0096】
適当な非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート(２０、４０、６０、６５、８０など)、ポリオキサマー(１８４、１８８など)、PLURONIC(登録商標)ポリオール、TRITON(登録商標)、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル(TWEEN(登録商標)-20、TWEEN(登録商標)-80など)、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースを含む。使用できるイオン性洗浄剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルソジウムスルホサクシネートおよびジオクチルナトリウムスルホネートを含む。カチオン性洗浄剤は、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。
【0097】
医薬担体、添加物または希釈剤の選択は、意図する投与経路および標準的製剤作業に基づいて選択され得る。医薬組成物は、さらに任意の適当な結合剤、流動化剤、懸濁化剤、コーティング剤または可溶化剤を含み得る。
【0098】
送達系が異なれば、異なる組成物／製剤要件が存在し得る。例として、本発明において有用な医薬組成物は、ミニポンプを使用してまたは粘膜経路により、例えば、経鼻スプレーまたは吸入用エアロゾルまたは摂取可能溶液としてまたは組成物が、例えば、静脈内、筋肉内または皮下経路により送達されるための注射用形態に製剤される非経腸で投与されるように製剤され得る。
【0099】
ある実施態様において、本発明の医薬組成物は凍結乾燥タンパク質製剤である。他の実施態様において、医薬組成物は水性液体製剤であり得る。
【0100】
処置方法
ＩＬ－２１プロドラッグを、抗原結合ドメインにより結合される抗原によって、疾患の処置に使用し得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグを癌の処置に使用する。ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグを感染症の処置に使用する。
ＩＬ－２１プロドラッグを、抗原結合ドメインにより結合される抗原によって、疾患の処置に使用し得る。ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグを癌の処置に使用する。ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグを感染症の処置に使用する。
【0101】
ある実施態様において、対象における疾患(例えば癌、寄生虫感染症、ウイルス感染症または細菌感染症)を処置する方法であって、該対象に有効量のＩＬ－２１プロドラッグを投与することを含む、方法が提供される。
【0102】
ある実施態様において、癌は固形癌である。ある実施態様において、癌は血液癌または固形腫瘍である。処置され得る癌の例は、白血病、リンパ腫、腎臓癌、膀胱癌、尿路癌、頸部癌、脳癌、頭頸部癌、皮膚癌、子宮癌、精巣癌、食道癌、肝臓癌、結腸直腸癌、胃癌、扁平上皮細胞癌腫、前立腺癌、膵臓癌、非小細胞肺癌のような肺癌、胆管細胞癌、乳癌および卵巣癌を含むが、これらに限定されない。
【0103】
ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグを、ウイルス感染症の処置に使用する。ある実施態様において、ウイルス感染症を引き起こすウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)、Ｂ型肝炎ウイルス(ＨＢＶ)、ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ)またはヒトパピローマウイルス(ＨＰＶ)である。ある実施態様において、抗原結合部分はウイルス抗原に結合する。
【0104】
ある実施態様において、ＩＬ－２１プロドラッグを、敗血症などの細菌感染の処置に使用する。ある実施態様において、細菌感染症を引き起こす細菌は薬物耐性細菌である。ある実施態様において、抗原結合部分は細菌抗原に結合する。
【0105】
一般に、本医薬組成物の投与量および投与経路は、標準的実務に従って、対象の体格および状態に従って、決定される。ある実施態様において、医薬組成物を、経口、経皮、吸入、静脈内、動脈内、筋肉内、創傷部位への直接適用、手術部位への適用、腹腔内、坐薬、皮下、皮内、経皮、噴霧療法、胸膜内、脳室内、関節内、眼内、頭蓋内または髄腔内を含むあらゆる経路により対象に投与する。ある実施態様において、組成物を対象に静脈内投与する。
【0106】
ある実施態様において、医薬組成物の投与量は一用量または反復用量である。ある実施態様において、対象に１日１回、１日２回、１日３回または１日４回またはそれ以上投与する。ある実施態様において、１週間以内に約１回以上(例えば約２回、３回、４回、５回、６回または７回以上)投与する。ある実施態様において、医薬組成物を毎週、２週に１回、３週に１回、４週に１回、３週中２週について毎週または４週中３週について毎週投与する。ある実施態様において、複数用量を数日、数週、数か月または数年にわたり与える。ある実施態様において、一連の処置は約１以上の用量(例えば約２、３、４、５、７、１０、１５または２０以上の用量)である。
【0107】
本明細書で特に断らない限り、本発明と関連して使用する科学的および技術的用語は、当業者に一般に理解されている意味を有する。例示的方法および材料を下に記載するが、ここに記載するものに類似するまたは等価の方法および材料も本発明の実施または試験に際して使用できる。矛盾があるときは、本明細書に含まれる定義が支配する。一般に、ここに記載する、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、分析化学、合成有機化学、医化学および薬化学およびタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションと関連しておよびその化学と関連して使用する命名法は周知のものであり、当分野で一般に使用される。酵素反応および精製技術は、当分野で一般に実行されるとおりまたはここに記載するとおり、製造業者の仕様に従い実施される。さらに、文脈から他の解釈が必要でない限り、単数表現は複数を含み、複数表現は単数を含む。本明細書および実施態様をとおして、用語「有する」および「含む」または「有し」、「有して」、「含み」または「含んで」などのその変形は、記載する整数または整数群を含むと解釈されるが、他のあらゆる整数または整数群を除外しないと理解される。ここに記載する本発明の態様およびバリエーションは「からなる」および／または「から本質的になる」態様およびバリエーションを含む。ここに記載する全ての刊行物および他の参考文献は、全体として引用により本明細書に包含させる。多数の文献が引用されているが、これらの引用は、これらの文献の何れかが当分野の技術常識の一部を構成することを認めるものではない。
【0108】
例示的実施態様
本発明のさらなる特定の実施態様を、次のとおり記載する。これらの実施態様は、本明細書に記載する組成物および方法を説明することを意図し、本発明の範囲を限定することを意図しない。
１. ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)、マスキング部分(ＭＭ)、担体(Ｃ)および少なくとも１つの開裂可能ペプチドリンカーを含むＩＬ－２１のプロドラッグであって、ここで、：
ａ) 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)が配列番号１と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有し；
ｂ) 該マスキング部分(ＭＭ)がＩＬ－２１受容体細胞外ドメイン、そのアナログおよびＩＬ－２１受容体細胞外ドメインとガンマ鎖の細胞外ドメインの融合タンパク質から選択され；
ｃ) 該担体がアルブミン、アルブミンフラグメント、Ｆｃおよび抗体から選択され；そして
ｄ) 該開裂可能ペプチドリンカーが該マスキング部分(ＭＭ)を担体またはＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合している、
プロドラッグ。
２. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)が配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２１またはそのアナログであり、ここで、該アナログはＤ１８、Ｅ１０９、Ｋ１１７およびまたはＫ１１９に１以上の変異を含み、そして、該変異は配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２１のナンバリングに従い記載される、実施態様１のプロドラッグ。
３. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)が配列番号２～５から選択されるアミノ酸配列を有する、実施態様１のプロドラッグ。
４. ＩＬ－２１受容体細胞外ドメインが配列番号６と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有し、そして、該ガンマ鎖が配列番号７に示すアミノ酸配列を有する、実施態様１～３のプロドラッグ。
５. 該開裂可能ペプチドリンカーが配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を有する、実施態様１～４のプロドラッグ。
６. 該担体(Ｃ)がアルブミンまたはそのフラグメントである、実施態様１～５のプロドラッグ。
７. 該担体(Ｃ)がＦｃフラグメントである、実施態様１～５のプロドラッグ。
８. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、一つのＦｃフラグメントのＣ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二ＦｃフラグメントのＣ末端に融合しており、そして、Ｆｃ融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成している、実施態様７のプロドラッグ。
９. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、一つのＦｃフラグメントのＮ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二ＦｃフラグメントのＮ末端に融合しており、そして、上記該二つのＦｃ融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成している、実施態様７のプロドラッグ。
１０. 該担体(Ｃ)が抗体である、実施態様１～６のプロドラッグ。
１１. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の重鎖のＮ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して軽鎖のＮ末端に融合している、実施態様１０のプロドラッグ。
１２. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の一つの重鎖のＣ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二の重鎖のＣ末端に融合しており、そして上記重鎖融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成している、実施態様１０のプロドラッグ。
１３. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の一つの重鎖のＮ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二の重鎖のＮ末端に融合しており、そして上記該２つの重鎖融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成する、実施態様１０のプロドラッグ。
１４. 一つの該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の重鎖のＣ末端の各々に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介してＩＬ－２１アゴニストポリペプチドのＣ末端に融合している、実施態様１０のプロドラッグ。
１５. 該抗体が癌細胞上の１以上の抗原に結合する、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１６. 該抗体がヒトＰＤ－Ｌ１またはＣＤ４７に対する抗体である、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１７. 該抗体が抗ＣＥＡ抗体ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３および抗ＦＡＰ－アルファ抗体シブロツズマブ(ＢＩＢＨ１)から選択される、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１８. 該抗体がグアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)、インシュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭＢ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンドセリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、ＰＤ１、クローディン１８.２、クローディン６およびＦＡＰ－アルファ、ＢＣＭＡおよびＥＰＣＡＭ、ＣＤ３、ＴＧＦ－ベータ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴおよびＣＴＬＡ－４から選択される１以上の抗原に結合する、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１９. 配列番号２７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＣＣＬ１９ポリペプチドをさらに含む、実施態様１０～１８のプロドラッグ。
２０. 該開裂可能ペプチドリンカーが腫瘍部位またはその周囲環境でみられる１種以上のプロテアーゼにより開裂可能である、実施態様１～１９のプロドラッグ。
２１. 該プロドラッグが腫瘍部位で活性化される、実施態様１～１９のプロドラッグ。
２２. 該抗体がＰＤ－Ｌ１に結合し、ここで、該ＰＤ－Ｌ１抗体がアテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される、実施態様１６のプロドラッグ。
２３. 該抗体がＰＤ－１に結合し、ここで、該抗ＰＤ－１抗体がニボルマブおよびペムブロリズマブから選択される、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
２４. ＩＬ－２１活性が腫瘍部位またはその周囲領域で活性化可能であるかまたは少なくとも２００％増加されるＩＬ－２１のプロドラッグであって、
ａ) 二つの同一軽鎖および第一重鎖と第二重鎖を含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体であって、ここで、該重鎖が「ノブ・アンド・ホール」変異を含む、抗体；
ｂ) 所望によりアミノ酸配列(ＧＧＧＧＳ)ｎ(ここで、ｎ＝１、２、３および４)(配列番号９７)を有するペプチドリンカーを介して、該抗体の第一重鎖のＣ末端に融合している、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド；
ｃ) １つまたは２つのＩＬ－２１受容体細胞外ドメインの細胞外ドメインを含む、マスキング部分(ＭＭ)；および
ｄ) 該マスキング部分(ＭＭ)を該抗体の第二の重鎖のＣ末端に結合させる開裂可能ペプチドリンカー
を含み、
ここで、該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列を含み；そして、該ＩＬ－２１受容体ベータサブユニット細胞外ドメインは配列番号６のアミノ酸配列を有する、
プロドラッグ。
２５. ＩＬ－２１活性が腫瘍部位またはその周囲領域で活性化可能であるかまたは少なくとも２００％増加されるＩＬ－２１のプロドラッグであって、
ａ) 二つの同一軽鎖および第一重鎖と第二重鎖を含む、ＣＤ４７に結合する抗体であって、ここで、該重鎖が「ノブ・アンド・ホール」変異を含む、抗体；
ｂ) 所望によりアミノ酸配列(ＧＧＧＧＳ)ｎ(ここで、ｎ＝１、２、３および４)(配列番号９７)を有するペプチドリンカーを介して、該抗体の第一重鎖のＣ末端に融合している、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド；
ｃ) １つまたは２つのＩＬ－２１受容体細胞外ドメインの細胞外ドメインを含む、マスキング部分(ＭＭ)；および
ｄ) 該マスキング部分(ＭＭ)を該抗体の第二の重鎖のＣ末端に結合させる開裂可能ペプチドリンカー
を含み、
ここで、該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列を含み；そして、該ＩＬ－２１受容体ベータサブユニット細胞外ドメインは配列番号６のアミノ酸配列を有する、
プロドラッグ。
２６. 実施態様１～２５のプロドラッグのアルブミン融合タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質、軽鎖融合タンパク質または重鎖融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
２７. 実施態様２６のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
２８. 実施態様２７のベクターでトランスフェクトされた、宿主細胞。
２９. 実施態様２８の宿主細胞を培養することを含む、実施態様１～２５の該プロドラッグを製造する方法。
３０. 活性成分として実施態様１～２５のプロドラッグを含む、医薬組成物。
３１.乳癌、肺癌、膵臓癌、食道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸癌、直腸癌または胃癌または感染症を処置する方法であって、乳癌、肺癌、膵臓癌、食道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸癌、直腸癌または胃癌または感染症を有するヒト対象に、実施態様３０の該医薬組成物を投与することを含む、方法。
３２. 投与される投与量が０.１～１８mg／kgである、実施態様３１の方法。
３３. 投与量が０.１mg／kg、０.２mg／kg、０.５mg／kg、１mg／kg、２mg／kg、３mg／kg、４mg／kg、５mg／kg、６mg／kg、８mg／kg、１０mg／kgおよび１５mg／kgからなる群から選択される、実施態様３１の方法。
３４. 投与量が、ヒト対象に(ｉ)毎週；(ii)隔週；(iii)１週間治療、その後２週間、３週間または４週間休薬；(iv)２週間治療、その後１週間、２週間、３週間または４週間休薬；(ｖ)３週間治療、その後１週間、２週間、３週間、４週間または５週間休薬；(vi)４週間治療、その後１週間、２週間、３週間、４週間または５週間休薬；(vii)５週間治療、その後１週間、２週間、３週間、４週間または５週間休薬；および(viii)毎月からなる群から選択されるサイクルのスケジュールで、週１回または２回投与される、実施態様３３の方法。
本発明のさらなる特定の実施態様を、次のとおり記載する。これらの実施態様は、本明細書に記載する組成物および方法を説明することを意図し、本発明の範囲を限定することを意図しない。
１. ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)、マスキング部分(ＭＭ)、担体(Ｃ)および少なくとも１つの開裂可能ペプチドリンカーを含むＩＬ－２１のプロドラッグであって、ここで、：
ａ) 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)が配列番号１と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有し；
ｂ) 該マスキング部分(ＭＭ)がＩＬ－２１受容体細胞外ドメイン、そのアナログおよびＩＬ－２１受容体細胞外ドメインとガンマ鎖の細胞外ドメインの融合タンパク質から選択され；
ｃ) 該担体がアルブミン、アルブミンフラグメント、Ｆｃおよび抗体から選択され；そして
ｄ) 該開裂可能ペプチドリンカーが該マスキング部分(ＭＭ)を担体またはＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合している、
プロドラッグ。
２. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)が配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２１またはそのアナログであり、ここで、該アナログはＤ１８、Ｅ１０９、Ｋ１１７およびまたはＫ１１９に１以上の変異を含み、そして、該変異は配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２１のナンバリングに従い記載される、実施態様１のプロドラッグ。
３. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド(Ａ)が配列番号２～５から選択されるアミノ酸配列を有する、実施態様１のプロドラッグ。
４. ＩＬ－２１受容体細胞外ドメインが配列番号６と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有し、そして、該ガンマ鎖が配列番号７に示すアミノ酸配列を有する、実施態様１～３のプロドラッグ。
５. 該開裂可能ペプチドリンカーが配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を有する、実施態様１～４のプロドラッグ。
６. 該担体(Ｃ)がアルブミンまたはそのフラグメントである、実施態様１～５のプロドラッグ。
７. 該担体(Ｃ)がＦｃフラグメントである、実施態様１～５のプロドラッグ。
８. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、一つのＦｃフラグメントのＣ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二ＦｃフラグメントのＣ末端に融合しており、そして、Ｆｃ融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成している、実施態様７のプロドラッグ。
９. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、一つのＦｃフラグメントのＮ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二ＦｃフラグメントのＮ末端に融合しており、そして、上記該二つのＦｃ融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成している、実施態様７のプロドラッグ。
１０. 該担体(Ｃ)が抗体である、実施態様１～６のプロドラッグ。
１１. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の重鎖のＮ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して軽鎖のＮ末端に融合している、実施態様１０のプロドラッグ。
１２. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の一つの重鎖のＣ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二の重鎖のＣ末端に融合しており、そして上記重鎖融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成している、実施態様１０のプロドラッグ。
１３. 該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の一つの重鎖のＮ末端に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介して第二の重鎖のＮ末端に融合しており、そして上記該２つの重鎖融合タンパク質が「ノブ・イントゥ・ホール」変異によりヘテロ二量体を形成する、実施態様１０のプロドラッグ。
１４. 一つの該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが、所望によりペプチドリンカーを介して、該抗体の重鎖のＣ末端の各々に融合しており、該マスキング部分(ＭＭ)が開裂可能ペプチドリンカーを介してＩＬ－２１アゴニストポリペプチドのＣ末端に融合している、実施態様１０のプロドラッグ。
１５. 該抗体が癌細胞上の１以上の抗原に結合する、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１６. 該抗体がヒトＰＤ－Ｌ１またはＣＤ４７に対する抗体である、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１７. 該抗体が抗ＣＥＡ抗体ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３および抗ＦＡＰ－アルファ抗体シブロツズマブ(ＢＩＢＨ１)から選択される、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１８. 該抗体がグアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)、インシュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭＢ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンドセリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、ＰＤ１、クローディン１８.２、クローディン６およびＦＡＰ－アルファ、ＢＣＭＡおよびＥＰＣＡＭ、ＣＤ３、ＴＧＦ－ベータ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴおよびＣＴＬＡ－４から選択される１以上の抗原に結合する、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
１９. 配列番号２７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＣＣＬ１９ポリペプチドをさらに含む、実施態様１０～１８のプロドラッグ。
２０. 該開裂可能ペプチドリンカーが腫瘍部位またはその周囲環境でみられる１種以上のプロテアーゼにより開裂可能である、実施態様１～１９のプロドラッグ。
２１. 該プロドラッグが腫瘍部位で活性化される、実施態様１～１９のプロドラッグ。
２２. 該抗体がＰＤ－Ｌ１に結合し、ここで、該ＰＤ－Ｌ１抗体がアテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される、実施態様１６のプロドラッグ。
２３. 該抗体がＰＤ－１に結合し、ここで、該抗ＰＤ－１抗体がニボルマブおよびペムブロリズマブから選択される、実施態様１０～１４のプロドラッグ。
２４. ＩＬ－２１活性が腫瘍部位またはその周囲領域で活性化可能であるかまたは少なくとも２００％増加されるＩＬ－２１のプロドラッグであって、
ａ) 二つの同一軽鎖および第一重鎖と第二重鎖を含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体であって、ここで、該重鎖が「ノブ・アンド・ホール」変異を含む、抗体；
ｂ) 所望によりアミノ酸配列(ＧＧＧＧＳ)ｎ(ここで、ｎ＝１、２、３および４)(配列番号９７)を有するペプチドリンカーを介して、該抗体の第一重鎖のＣ末端に融合している、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド；
ｃ) １つまたは２つのＩＬ－２１受容体細胞外ドメインの細胞外ドメインを含む、マスキング部分(ＭＭ)；および
ｄ) 該マスキング部分(ＭＭ)を該抗体の第二の重鎖のＣ末端に結合させる開裂可能ペプチドリンカー
を含み、
ここで、該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列を含み；そして、該ＩＬ－２１受容体ベータサブユニット細胞外ドメインは配列番号６のアミノ酸配列を有する、
プロドラッグ。
２５. ＩＬ－２１活性が腫瘍部位またはその周囲領域で活性化可能であるかまたは少なくとも２００％増加されるＩＬ－２１のプロドラッグであって、
ａ) 二つの同一軽鎖および第一重鎖と第二重鎖を含む、ＣＤ４７に結合する抗体であって、ここで、該重鎖が「ノブ・アンド・ホール」変異を含む、抗体；
ｂ) 所望によりアミノ酸配列(ＧＧＧＧＳ)ｎ(ここで、ｎ＝１、２、３および４)(配列番号９７)を有するペプチドリンカーを介して、該抗体の第一重鎖のＣ末端に融合している、ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド；
ｃ) １つまたは２つのＩＬ－２１受容体細胞外ドメインの細胞外ドメインを含む、マスキング部分(ＭＭ)；および
ｄ) 該マスキング部分(ＭＭ)を該抗体の第二の重鎖のＣ末端に結合させる開裂可能ペプチドリンカー
を含み、
ここで、該ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドは配列番号１～５から選択されるアミノ酸配列を含み；そして、該ＩＬ－２１受容体ベータサブユニット細胞外ドメインは配列番号６のアミノ酸配列を有する、
プロドラッグ。
２６. 実施態様１～２５のプロドラッグのアルブミン融合タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質、軽鎖融合タンパク質または重鎖融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
２７. 実施態様２６のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
２８. 実施態様２７のベクターでトランスフェクトされた、宿主細胞。
２９. 実施態様２８の宿主細胞を培養することを含む、実施態様１～２５の該プロドラッグを製造する方法。
３０. 活性成分として実施態様１～２５のプロドラッグを含む、医薬組成物。
３１.乳癌、肺癌、膵臓癌、食道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸癌、直腸癌または胃癌または感染症を処置する方法であって、乳癌、肺癌、膵臓癌、食道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸癌、直腸癌または胃癌または感染症を有するヒト対象に、実施態様３０の該医薬組成物を投与することを含む、方法。
３２. 投与される投与量が０.１～１８mg／kgである、実施態様３１の方法。
３３. 投与量が０.１mg／kg、０.２mg／kg、０.５mg／kg、１mg／kg、２mg／kg、３mg／kg、４mg／kg、５mg／kg、６mg／kg、８mg／kg、１０mg／kgおよび１５mg／kgからなる群から選択される、実施態様３１の方法。
３４. 投与量が、ヒト対象に(ｉ)毎週；(ii)隔週；(iii)１週間治療、その後２週間、３週間または４週間休薬；(iv)２週間治療、その後１週間、２週間、３週間または４週間休薬；(ｖ)３週間治療、その後１週間、２週間、３週間、４週間または５週間休薬；(vi)４週間治療、その後１週間、２週間、３週間、４週間または５週間休薬；(vii)５週間治療、その後１週間、２週間、３週間、４週間または５週間休薬；および(viii)毎月からなる群から選択されるサイクルのスケジュールで、週１回または２回投与される、実施態様３３の方法。
【0109】
本発明がよりよく理解され得るために、次の実施例を示す。これらの実施例は説明のみを目的とし、本発明の範囲をいかなる方法でも限定すると解釈してはならない。
【実施例0110】
実施例１：ＨＥＫ２９３細胞を使用するＩＬ－２１プロドラッグの一過性トランスフェクション
発現プラスミドを、ＰＥＩ(ポリエチレンイミン)を使用して、３×１０６細胞／mlフリースタイルＨＥＫ２９３細胞に２.５～３μg／mlで共トランスフェクトした。ＦｃベースのＩＬ－２１プロドラッグ(ＡおよびＢ)について、Ｆｃ－ＩＬ－２１融合ポリペプチドとＦｃ－マスキング部分融合ポリペプチドは、１：２比であった。抗体ベースのＩＬ－２１プロドラッグについて、ノブ重鎖(ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド含有)およびホール重鎖(マスキング部分含有)および軽鎖ＤＮＡは２：１：２モル比であった。細胞培養物を、トランスフェクション６日後、９,０００rpmで４５分間遠心分離し、続いて０.２２μM濾過することにより回収した。
発現プラスミドを、ＰＥＩ(ポリエチレンイミン)を使用して、３×１０６細胞／mlフリースタイルＨＥＫ２９３細胞に２.５～３μg／mlで共トランスフェクトした。ＦｃベースのＩＬ－２１プロドラッグ(ＡおよびＢ)について、Ｆｃ－ＩＬ－２１融合ポリペプチドとＦｃ－マスキング部分融合ポリペプチドは、１：２比であった。抗体ベースのＩＬ－２１プロドラッグについて、ノブ重鎖(ＩＬ－２１アゴニストポリペプチド含有)およびホール重鎖(マスキング部分含有)および軽鎖ＤＮＡは２：１：２モル比であった。細胞培養物を、トランスフェクション６日後、９,０００rpmで４５分間遠心分離し、続いて０.２２μM濾過することにより回収した。
【0111】
２つのＩＬ－２１プロドラッグ(ＡおよびＢ)が発現された。プロドラッグＡは、それぞれ配列番号９４および３８を有する２つのポリペプチドからなる。プロドラッグＢは、それぞれ配列番号９５および３８を有する２つのポリペプチドからなる。それらの対応する対照であるマスキング部分がないＦｃ－ＩＬ－２１融合体分子も発現させた。配列番号を表２に記載する。
【表2】
【0112】
実施例２：ＦｃベースのＩＬ－２１プロドラッグの精製
ＦｃベースのＩＬ－２１プロドラッグＡおよびＢのタンパク質の精製を、プロテインＡ親和性、Capto Adhere(フロースルーモード)およびCapto SP ImpResの３クロマトグラフィー工程を使用して実施した。簡潔には、一過性発現細胞培養物の上清を、サンプル適用前に２５mM Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、３０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７.８(緩衝液Ａ)で平衡化したプロテインＡカラムに充填した。カラムを５カラム体積の緩衝液Ａで洗浄し、結合タンパク質を５０mM 酢酸、ｐＨ３.６で溶出した。溶出したタンパク質のｐＨを、１Ｍ Ｔｒｉｓ塩基を使用して５.２に調節し、５０mM 酢酸、３０mM ＮａＣｌ、ｐＨ５.２(緩衝液Ｂ)で平衡化したCapto Adhereカラムに充填した。フロースルーを回収し、さらに緩衝液Ｂで平衡化したCapto SP ImpResカラムに充填した。カラムを５カラム体積の緩衝液Ｂで洗浄し、結合タンパク質を、３０カラム体積の５０mM 酢酸、１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ５.２(緩衝液Ｃ)の０％～１００％勾配で溶出した。各工程からの溶出サンプルをＨＰＬＣ－ＳＥＣで分析した。凝集が１０％未満のCapto SP ImpRes工程のフラクションを、さらなる分析のために貯留した。
ＦｃベースのＩＬ－２１プロドラッグＡおよびＢのタンパク質の精製を、プロテインＡ親和性、Capto Adhere(フロースルーモード)およびCapto SP ImpResの３クロマトグラフィー工程を使用して実施した。簡潔には、一過性発現細胞培養物の上清を、サンプル適用前に２５mM Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、３０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７.８(緩衝液Ａ)で平衡化したプロテインＡカラムに充填した。カラムを５カラム体積の緩衝液Ａで洗浄し、結合タンパク質を５０mM 酢酸、ｐＨ３.６で溶出した。溶出したタンパク質のｐＨを、１Ｍ Ｔｒｉｓ塩基を使用して５.２に調節し、５０mM 酢酸、３０mM ＮａＣｌ、ｐＨ５.２(緩衝液Ｂ)で平衡化したCapto Adhereカラムに充填した。フロースルーを回収し、さらに緩衝液Ｂで平衡化したCapto SP ImpResカラムに充填した。カラムを５カラム体積の緩衝液Ｂで洗浄し、結合タンパク質を、３０カラム体積の５０mM 酢酸、１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ５.２(緩衝液Ｃ)の０％～１００％勾配で溶出した。各工程からの溶出サンプルをＨＰＬＣ－ＳＥＣで分析した。凝集が１０％未満のCapto SP ImpRes工程のフラクションを、さらなる分析のために貯留した。
【0113】
実施例３：ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析
ＳＥＣ－ＨＰＬＣを、Tosoh BioscienceのTSKgel G3000SWXLカラム(７.８mmＩＤ×３０cm、５μm粒子サイズ)を有するAgilent 1100 SeriesのＨＰＬＣシステムを使用して実施した。１００μlまでのサンプルを負荷した。カラムを２００mM Ｋ３ＰＯ４、２５０mM ＫＣｌ、ｐＨ６.５の緩衝液で流した。カラムを室温、流速は０.５ml／分で流した。タンパク質溶出を２２０nmおよび２８０nm両者でモニターした。ＩＬ－２１プロドラッグＡの工程内プールをＳＥＣ－ＨＰＬＣにより分析した。図５Ａは、プロテインＡカラムプールのアッセイ結果を示し、図５ＢはCapto Adhereカラムプールのアッセイ結果を示し、そして図５ＣはCapto Sp ImpResカラムプールのアッセイ結果を示す。データは、プロテインＡカラム精製プロドラッグが、一部凝集体を伴う主ピークからなることを示す(図５Ａ)。ＳＥＣ－ＨＰＬＣで分析して約８０％の主ピーク純度を有した。凝集体は、続くクロマトグラフィー工程により顕著に減少し、Capto SP Impresプールは、ＳＥＣ－ＨＰＬＣで試験して９８％を超える生成物純度を示した(図５Ｃ)。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣを、Tosoh BioscienceのTSKgel G3000SWXLカラム(７.８mmＩＤ×３０cm、５μm粒子サイズ)を有するAgilent 1100 SeriesのＨＰＬＣシステムを使用して実施した。１００μlまでのサンプルを負荷した。カラムを２００mM Ｋ３ＰＯ４、２５０mM ＫＣｌ、ｐＨ６.５の緩衝液で流した。カラムを室温、流速は０.５ml／分で流した。タンパク質溶出を２２０nmおよび２８０nm両者でモニターした。ＩＬ－２１プロドラッグＡの工程内プールをＳＥＣ－ＨＰＬＣにより分析した。図５Ａは、プロテインＡカラムプールのアッセイ結果を示し、図５ＢはCapto Adhereカラムプールのアッセイ結果を示し、そして図５ＣはCapto Sp ImpResカラムプールのアッセイ結果を示す。データは、プロテインＡカラム精製プロドラッグが、一部凝集体を伴う主ピークからなることを示す(図５Ａ)。ＳＥＣ－ＨＰＬＣで分析して約８０％の主ピーク純度を有した。凝集体は、続くクロマトグラフィー工程により顕著に減少し、Capto SP Impresプールは、ＳＥＣ－ＨＰＬＣで試験して９８％を超える生成物純度を示した(図５Ｃ)。
【0114】
実施例４：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析
１０μｌの培養上清または１０～２０μgの精製タンパク質サンプルを、還元剤を含むまたは含まないBoltTM LDSサンプル緩衝液(Novex)と混合した。サンプルを７０℃で３分間加熱し、次いでNuPAGETM ４～１２％BisTris Gel(Invitrogen)に負荷した。ゲルをNuPAGETM MOPS SDS 展開緩衝液(Invitrogen)で２００ボルトで４０分間流し、次いでクマシーで染色した。図６に示すとおり、プロドラッグＡおよびＢの精製サンプルを、プロテアーゼＭＭＰ－２処理したものと共に(下記参照)ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析で分析した。データは、プロドラッグＡおよびプロドラッグＢ両者のマスキング部分はプロテアーゼ消化により完全に除去され、活性化分子が予測された分子量で移動することを示す。
１０μｌの培養上清または１０～２０μgの精製タンパク質サンプルを、還元剤を含むまたは含まないBoltTM LDSサンプル緩衝液(Novex)と混合した。サンプルを７０℃で３分間加熱し、次いでNuPAGETM ４～１２％BisTris Gel(Invitrogen)に負荷した。ゲルをNuPAGETM MOPS SDS 展開緩衝液(Invitrogen)で２００ボルトで４０分間流し、次いでクマシーで染色した。図６に示すとおり、プロドラッグＡおよびＢの精製サンプルを、プロテアーゼＭＭＰ－２処理したものと共に(下記参照)ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析で分析した。データは、プロドラッグＡおよびプロドラッグＢ両者のマスキング部分はプロテアーゼ消化により完全に除去され、活性化分子が予測された分子量で移動することを示す。
【0115】
実施例５：タンパク分解性処理
プロテアーゼであるヒトＭＭＰ２、ヒトＭＭＰ９、マウスＭＭＰ２およびマウスＭＭＰ９をR&D systemsから購入した。１０μg～５０μgのプロドラッグと１μgのヒトＭＭＰ２、ヒトＭＭＰ９、マウスＭＭＰ２またはマウスＭＭＰ９を、２mM ＣａＣｌ２および１０μM ＺｎＣｌ２含有ＨＢＳ緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７.４)中、３７℃で１２時間インキュベーションすることにより、プロテアーゼ消化を実施した。消化前および後のプロドラッグをＳＤＳ－ＰＡＧＥ(図６)および細胞ベースの活性アッセイ(下記参照)により分析した。
プロテアーゼであるヒトＭＭＰ２、ヒトＭＭＰ９、マウスＭＭＰ２およびマウスＭＭＰ９をR&D systemsから購入した。１０μg～５０μgのプロドラッグと１μgのヒトＭＭＰ２、ヒトＭＭＰ９、マウスＭＭＰ２またはマウスＭＭＰ９を、２mM ＣａＣｌ２および１０μM ＺｎＣｌ２含有ＨＢＳ緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７.４)中、３７℃で１２時間インキュベーションすることにより、プロテアーゼ消化を実施した。消化前および後のプロドラッグをＳＤＳ－ＰＡＧＥ(図６)および細胞ベースの活性アッセイ(下記参照)により分析した。
【0116】
￥
実施例６：細胞ベースの活性アッセイ
プロテアーゼ消化前および同消化後のプロドラッグおよび対照サンプルを、細胞ベースの活性アッセイにより試験した。簡潔には、ＮＫ９２細胞を、Ｌ－グルタミン、１０％ウシ胎児血清、１０％非必須アミノ酸、１０％ピルビン酸ナトリウムおよび５５μM ベータ－メルカプトエタノール添加ＲＰＭＩ－１６４０培地で増殖させた。ＮＫ９２細胞は非接着性であり、１×１０５～１×１０６細胞／mlで１００ng／mlのＩＬ－２を含む培地に維持した。共通して、細胞を週２回分けた。バイオアッセイのために、細胞を継代後４８時間以上で使用するのが最良であった。ＩＬ－２１機能的活性を、ＮＫ９２細胞を５×１０４細胞／ウェルで、サンプルの連続希釈物と共に一定量のＩＬ－２存在下で２日間培養することにより決定した。次いで、上清をＥＬＩＳＡによりインターフェロン－γについてアッセイした。結果を図７Ａおよび７Ｂに示す。データは、プロドラッグのバイオアッセイ活性がプロテアーゼＭＭＰ２処理により顕著に増加したことを示す。
実施例６：細胞ベースの活性アッセイ
プロテアーゼ消化前および同消化後のプロドラッグおよび対照サンプルを、細胞ベースの活性アッセイにより試験した。簡潔には、ＮＫ９２細胞を、Ｌ－グルタミン、１０％ウシ胎児血清、１０％非必須アミノ酸、１０％ピルビン酸ナトリウムおよび５５μM ベータ－メルカプトエタノール添加ＲＰＭＩ－１６４０培地で増殖させた。ＮＫ９２細胞は非接着性であり、１×１０５～１×１０６細胞／mlで１００ng／mlのＩＬ－２を含む培地に維持した。共通して、細胞を週２回分けた。バイオアッセイのために、細胞を継代後４８時間以上で使用するのが最良であった。ＩＬ－２１機能的活性を、ＮＫ９２細胞を５×１０４細胞／ウェルで、サンプルの連続希釈物と共に一定量のＩＬ－２存在下で２日間培養することにより決定した。次いで、上清をＥＬＩＳＡによりインターフェロン－γについてアッセイした。結果を図７Ａおよび７Ｂに示す。データは、プロドラッグのバイオアッセイ活性がプロテアーゼＭＭＰ２処理により顕著に増加したことを示す。
【0117】
プロテアーゼ処理(または活性化)プロドラッグは、マスキング部分、すなわち、ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤがプロテアーゼ処理サンプルから除去されていなくても、対照Ｆｃ－ＩＬ－２１融合体分子と類似する活性を示した。驚くべきことに、ＩＬ－２１がＩＬ－２１Ｒαに極めて高い親和性(約７０pMのＫＤ)で結合することを考えると、プロテアーゼ消化により除去されたマスキング部分の存在はＩＬ－２１バイオアッセイを妨害するようには見えなかった。
【0118】
実施例７：抗ＰＤ－１抗体－ＩＬ－２１プロドラッグ融合体分子
抗ＰＤ－１抗体ベースのＩＬ－２１プロドラッグを、二つの同一軽鎖(配列番号５０に示すアミノ酸配列を有する)、第一重鎖ポリペプチド鎖(配列番号４８に示すアミノ酸配列を有する)および第二重鎖ポリペプチド鎖(配列番号４９に示すアミノ酸配列を有する) を用いて構築した。分子を発現および精製した。対照として、マスクがない抗ＰＤ－１抗体－ＩＬ－２１融合体分子も発現および精製した。活性化前および活性化後のサイトカインプロドラッグの細胞ベースの活性アッセイを、上記と同じ方法を使用して試験した。データを図８に示す。結果は、活性化前のＩＬ－２１活性がごくわずかであったことを示す。活性化後、ＩＬ－２１活性は、ＰＤ－１－ＩＬ－２１融合体分子におけるＩＬ－２１に類似した。
抗ＰＤ－１抗体ベースのＩＬ－２１プロドラッグを、二つの同一軽鎖(配列番号５０に示すアミノ酸配列を有する)、第一重鎖ポリペプチド鎖(配列番号４８に示すアミノ酸配列を有する)および第二重鎖ポリペプチド鎖(配列番号４９に示すアミノ酸配列を有する) を用いて構築した。分子を発現および精製した。対照として、マスクがない抗ＰＤ－１抗体－ＩＬ－２１融合体分子も発現および精製した。活性化前および活性化後のサイトカインプロドラッグの細胞ベースの活性アッセイを、上記と同じ方法を使用して試験した。データを図８に示す。結果は、活性化前のＩＬ－２１活性がごくわずかであったことを示す。活性化後、ＩＬ－２１活性は、ＰＤ－１－ＩＬ－２１融合体分子におけるＩＬ－２１に類似した。
【0119】
抗ＰＤ－１抗体の活性も、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１遮断レポーターアッセイを使用して活性化前および活性化後に試験した。ＰＤ－Ｌ１介在ＰＤ１シグナル伝達を遮断する抗ＰＤ－１抗体の能力を、２つの操作細胞株を使用して測定した。第一は、ヒトＰＤ－Ｌ１およびＴ細胞受容体アクティベーター両者を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株(CHO-K1/TCRA/PD-L1, BPS Bioscience cat #60536)であった。第二細胞株(PD1/NFAT, BPS Bioscience cat # 60535)は、ＰＤ－１およびＮＦＡＴホタルルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株であった。ＣＨＯ－Ｋ１細胞のＴ細胞受容体アクティベーターはＪｕｒｋａｔ細胞を活性化し、ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターを発現させる。しかしながら、ＣＨＯ－Ｋ１細胞がＰＤ－Ｌ１も発現するため、ＰＤ－１を介するシグナル伝達がＮＦＡＴ活性化を阻止する。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用遮断は、ＮＦＡＴ活性化およびルシフェラーゼ活性を回復させる。
【0120】
本アッセイを実施するために、ＣＨＯ－Ｋ１／ＴＣＲＡ／ＰＤ－Ｌ１細胞を９６ウェル平底プレートに、３５,０００細胞／ウェルで５０μLアッセイ培地(ＲＰＭＩ－１６４０、１０％ウシ胎児血清、非必須アミノ酸、２－メルカプトエタノールおよびゲンタマイシン)で播種した。一夜培養後、培養培地を除去し、サンプルおよび標準(standards)を、２倍濃度で５０μL／ウェルで加えた。プレートを２０分間インキュベートし、４０,０００ ＰＤ１／ＮＦＡＴ細胞を各ウェルに５０μLで加えた。プレートを６時間、３７℃でインキュベートした。プレートを室温で５分間冷却し、１００μL／ウェルルシフェラーゼ試薬(Pierce Firefly Luc One-Step Glow Assay Kit, Thermo Scientific cat #16197)を加えた。プレートを１５分間インキュベートし、次いで発光をルミノメーターで測定した。
【0121】
アッセイ結果(図９)は、融合分子の抗ＰＤ－１抗体がその生物学的機能性を保持することを示す。
【0122】
実施例８：同系腫瘍モデルでのインビボ有効性試験
６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウス(Taconic Biosciences)に、１×１０６ ＣＴ２６／１８.２細胞を皮下注射する。７日後、腫瘍をデジタルキャリパーを使用して測定し、腫瘍体積を計算した(Ｖ＝(ａｂ２)ｐ／６、式中ｂは測定した２次元長の短い方)。次いで、全群がほぼ同じ平均腫瘍サイズ(約１００mm３)となるように、マウスを処置群に無作為化する。次いで、マウスをプラセボまたは試験サンプル０.５～５mg／kgの１００μｌで腹腔内注射により処置する。投与を７日目、９日目、１１日目、１３日目、１５日目および１８日目に行った。腫瘍を２～３日毎に測定し、腫瘍が２０００mm３に達したら、マウスを屠殺する。
６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウス(Taconic Biosciences)に、１×１０６ ＣＴ２６／１８.２細胞を皮下注射する。７日後、腫瘍をデジタルキャリパーを使用して測定し、腫瘍体積を計算した(Ｖ＝(ａｂ２)ｐ／６、式中ｂは測定した２次元長の短い方)。次いで、全群がほぼ同じ平均腫瘍サイズ(約１００mm３)となるように、マウスを処置群に無作為化する。次いで、マウスをプラセボまたは試験サンプル０.５～５mg／kgの１００μｌで腹腔内注射により処置する。投与を７日目、９日目、１１日目、１３日目、１５日目および１８日目に行った。腫瘍を２～３日毎に測定し、腫瘍が２０００mm３に達したら、マウスを屠殺する。
【0123】
上記非限定的実施例は、開示される主題のより完全な理解を容易にするために、説明のみを目的として提供される。これらの実施例は、抗体、医薬組成物または癌、神経変性または感染症処置における方法および使用に関するものを含み、本明細書に記載する実施態様の何れも限定すると解釈してはならない。
【0124】
配列
配列番号１ － ヒトＩＬ－２１
配列番号１ － ヒトＩＬ－２１
【化1】
【0125】
配列番号２ － ＩＬ－２１ムテインＡ
【化2】
【0126】
配列番号３ － ＩＬ－２１ムテインＢ
【化3】
【0127】
配列番号４ － ＩＬ－２１ムテインＣ
【化4】
【0128】
配列番号５ － ＩＬ－２１ムテインＤ
【化5】
【0129】
配列番号６ － ＩＬ－２１受容体ＥＣＤ(ソース：uniprot.org/uniprot/Q9HBE5)
【化6】
【0130】
配列番号７ － ヒトＩＬ－２１ Ｒγ ＥＣＤ
【化7】
【0131】
配列番号８ － ヒトＩＬ－２
【化8】
【0132】
配列番号９ － ヒトＩＬ－１５
【化9】
【0133】
配列番号１０ － ヒトＩＬ－１５ Ｒαスシドメイン
【化10】
【0134】
配列番号１１～１７ － ＭＭＰ２／ＭＭＰ９開裂可能ペプチドリンカー
【化11】
【0135】
配列番号１８～２６ － ウロキナーゼプラスミノーゲンアクティベーター(ｕＰＡ)開裂可能ペプチドリンカー
【化12】
【0136】
配列番号２７ － ヒトＣＣＬ１９
【化13】
【0137】
配列番号２８ － ヒトＩＬ－７
【化14】
【0138】
配列番号２９～３３ ペプチドリンカー
【化15】
【0139】
配列番号３４ － ＩｇＧ１ Ｆｃ
【化16】
【0140】
配列番号３５ － ＩｇＧ４ Ｆｃ
【化17】
【0141】
配列番号３６ － ノブ変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１
ここで、ｎ＝０、１、２、３、４または５。
【化18】
【0142】
配列番号３７ － ノブ変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１ムテイン
ここで、ｎ＝０、１、２、３、４または５。
【化19】
【0143】
配列番号３８ － ホール変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１受容体ＥＣＤ
【化20】
【0144】
配列番号３９ － ＩＬ－２１ － ノブ変異を有するＦｃ
ここで、ｎ＝０、１、２、３、４または５。
【化21】
【0145】
配列番号４０ － ＩＬ－２ムテイン－ ノブ変異を有するＦｃ
ここで、ｎ＝０、１、２、３、４または５。
【化22】
【0146】
配列番号４１ － ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤ － ホール変異を有するＦｃ
【化23】
【0147】
配列番号４２ － ＩＬ－１５－スシ － ノブ変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１
ここで、ｎ１＝０、１、２、３、４または５；ｎ２＝０、１、２、３、４または５；およびｎ３＝０、１、２、３、４または５。
【化24】
【0148】
配列番号４３ － ＩＬ－２アナログ － ノブ変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１ムテイン
ここで、ｎ１＝０、１、２、３、４または５；およびｎ２＝０、１、２、３、４または５。
【化25】
【0149】
配列番号４４ － ＩＬ－２Ｒβ ＥＣＤ － ホール変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤ
【化26】
【0150】
配列番号４５ － ＩＬ－２１ － ノブ変異を有するＦｃ － スシ－ＩＬ－１５
ここで、ｎ１＝０、１、２、３、４または５；ｎ２＝０、１、２、３、４または５；およびｎ３＝０、１、２、３、４または５。
【化27】
【0151】
配列番号４６ － ＩＬ－２１ムテイン － ノブ変異を有するＦｃ － ＩＬ－２アナログ
ここで、ｎ１＝０、１、２、３、４または５；およびｎ２＝０、１、２、３、４または５。
【化28】
【0152】
配列番号４７ － ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤ － ホール変異を有するＦｃ － ＩＬ－２Ｒβ ＥＣＤ
【化29】
【0153】
配列番号４８ － ノブ変異を有するＰＤ１－ＨＣ － ＩＬ－２１
【化30】
【0154】
配列番号４９ － ホール変異を有するＰＤ１－ＨＣ － ＩＬ－２１Ｒα ＥＣＤ
【化31】
【0155】
配列番号５０ － ＰＤ１－ＬＣ
【化32】
【0156】
配列番号５１ － ＰＤ１－ＬＣ － ＩＬ－２基底
ここで、Ｘａａ８８はＮおよびＡから選択されるアミノ酸であり、Ｘａａ１２６はＱ、Ｈ、ＷまたはＡから選択されるアミノ酸である。
【化33】
【0157】
配列番号５２ － トラスツズマブ軽鎖
【化34】
【0158】
配列番号５３ － トラスツズマブ重鎖
【化35】
【0159】
配列番号５４ － リツキシマブ軽鎖
【化36】
【0160】
配列番号５５ － リツキシマブ重鎖
【化37】
【0161】
配列番号５６ － ブレンツキシマブ軽鎖
【化38】
【0162】
配列番号５７ － ブレンツキシマブ重鎖
【化39】
【0163】
配列番号５８ － セツキシマブ軽鎖
【化40】
【0164】
配列番号５９ － セツキシマブ重鎖
【化41】
【0165】
配列番号６０ － パニツムマブ軽鎖
【化42】
【0166】
配列番号６１ － パニツムマブ重鎖
【化43】
【0167】
配列番号６２ － 抗ｃ－ＭＥＴ抗体軽鎖
【化44】
【0168】
配列番号６３ － 抗ｃ－ＭＥＴ抗体重鎖
【化45】
【0169】
配列番号６４ － 抗ＧＰＣ３抗体軽鎖
【化46】
【0170】
配列番号６５ － 抗ＧＰＣ３抗体重鎖
【化47】
【0171】
配列番号６６ － 抗クローディン１８.２抗体軽鎖
【化48】
【0172】
配列番号６７ － 抗クローディン１８.２抗体重鎖
【化49】
【0173】
配列番号６８ － 抗Ｔｒｏｐ－２抗体軽鎖ＣＤＲ１
【化50】
【0174】
配列番号６９ － 抗Ｔｒｏｐ－２抗体軽鎖ＣＤＲ２
【化51】
【0175】
配列番号７０ － 抗Ｔｒｏｐ－２抗体軽鎖ＣＤＲ３
【化52】
【0176】
配列番号７１ － 抗Ｔｒｏｐ－２抗体重鎖ＣＤＲ１
【化53】
【0177】
配列番号７２ － 抗Ｔｒｏｐ－２抗体重鎖ＣＤＲ２
【化54】
【0178】
配列番号７３ － 抗Ｔｒｏｐ－２抗体重鎖ＣＤＲ３
【化55】
【0179】
配列番号７４ － 抗メソテリン抗体軽鎖ＣＤＲ１
【化56】
【0180】
配列番号７５ － 抗メソテリン抗体軽鎖ＣＤＲ２
【化57】
【0181】
配列番号７６ － 抗メソテリン抗体軽鎖ＣＤＲ３
【化58】
【0182】
配列番号７７ － 抗メソテリン抗体重鎖ＣＤＲ１
【化59】
【0183】
配列番号７８ － 抗メソテリン抗体重鎖ＣＤＲ２
【化60】
【0184】
配列番号７９ － 抗メソテリン抗体重鎖ＣＤＲ３
【化61】
【0185】
配列番号８０ － 抗ＦＡＰバージョン１ ＬＣ
【化62】
【0186】
配列番号８１ － 抗ＦＡＰ ＬＣバージョン２
【化63】
【0187】
配列番号８２ － 抗ＦＡＰ ＶＨ
【化64】
【0188】
配列番号８３ － ＦＡＰアルファ抗体ＢＩＢＨ１のヒト化軽鎖可変ドメイン
【化65】
【0189】
配列番号８４ － ヒト化重鎖可変ドメインＦＡＰアルファ抗体ＢＩＢＨ１
【化66】
【0190】
配列番号８５ － ヒト化Ｈ８抗５Ｔ４バージョン１ ＶＨ
【化67】
【0191】
配列番号８６ － ヒト化Ｈ８抗５Ｔ４ ＶＨバージョン２
【化68】
【0192】
配列番号８７ － ヒト化Ｈ８抗５Ｔ４バージョン１ ＶＬ
【化69】
【0193】
配列番号８８ － ヒト化Ｈ８抗５Ｔ４ ＶＬバージョン２
【化70】
【0194】
配列番号８９ － 抗ＰＤＬ１アテゾリズマブＬＣ
【化71】
【0195】
配列番号９０ － 抗ＰＤＬ１アテゾリズマブＨＣ
【化72】
【0196】
配列番号９１ － 抗ＰＤ－１ ニボルマブＨＣ
【化73】
【0197】
配列番号９２ － 抗ＰＤ－１ ペムブロリズマブＬＣ
【化74】
【0198】
配列番号９３ － 抗ＰＤ－１ ペムブロリズマブＨＣ
【化75】
【0199】
配列番号９４ － ノブ変異を有するＦｃ－ ＩＬ－２１
【化76】
【0200】
配列番号９５ － ノブ変異を有するＦｃ － ＩＬ－２１ムテインＱ１９Ｋ／Ｅ１０９Ｒ
【化77】
【0201】
配列番号９６ － ホール変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ
【化78】
【0202】
配列番号９７ － ペプチドリンカー
ここで、ｎ＝１、２、３および４
【化79】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-04-03
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、マスキング部分および担体部分を含むプロドラッグであって、ここで、
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、
該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、
プロドラッグ。
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、
該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、
プロドラッグ。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0202】
配列番号９７ － ペプチドリンカー
ここで、ｎ＝１、２、３および４
さらに、本発明は次の態様を包含する。
１. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、マスキング部分および担体部分を含むプロ ドラッグであって、ここで、
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２ １アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、
該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能 ペプチドリンカーを介して融合している、
プロドラッグ。
２. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが配列番号１または配列番号１と少なくとも ９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項１に記載のプロドラッグ。
３. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドがＤ１８、Ｑ１９、Ｅ１０９およびＫ１１７ から選択される位置に１以上の変異を含む(ナンバリングは配列番号１に従う)、項２に記 載のプロドラッグ。
４. ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが配列番号２、３、４および５から選択されるア ミノ酸配列を有する、項１に記載のプロドラッグ。
５. マスキング部分がヒトＩＬ－２１受容体の細胞外ドメイン(ＥＣＤ)またはその機能的 アナログを含む、項１～４の何れかに記載のプロドラッグ。
６. ＩＬ－２１受容体がＩＬ－２１ＲαまたはＩＬ－２１Ｒγである、項５に記載のプロ ドラッグ。
７. ＩＬ－２１受容体ＥＣＤが配列番号６もしくは７または配列番号６もしくは７と少な くとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項６に記載のプロドラッグ。
８. 第二サイトカイン部分をさらに含む、項１～７の何れかに記載のプロドラッグ。
９. 第二サイトカイン部分が
(ｉ) 配列番号８または配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む
ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチド、
(ii)ヒトＩＬ－７アゴニストポリペプチド、
(iii)ヒトＩＬ－９アゴニストポリペプチド、
(iv)配列番号９または配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒ トＩＬ－１５アゴニストポリペプチド、
(ｖ)ヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチドおよびヒトＩＬ－１５受容体アルファスシ ドメインまたは
(vi)配列番号２７または配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含 むヒトＣＣＬ１９ポリペプチド
である、項８に記載のプロドラッグ。
１０. 第二サイトカイン部分に結合し、第二サイトカイン部分の生物学的活性を阻害する 第二マスキング部分をさらに含み、ここで、第二マスキング部分は第二サイトカイン部分 にまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、項８または９に記 載のプロドラッグ。
１１. 第二マスキング部分がＩＬ－２受容体ベータサブユニットのＥＣＤまたはその機能 的アナログ、ＩＬ－７受容体のＥＣＤまたはその機能的アナログおよびＩＬ－９受容体の ＥＣＤまたはその機能的アナログから選択される、項１０に記載のプロドラッグ。
１２. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよび／または第二サイトカイン部分が非 開裂可能ペプチドリンカーを介して担体部分に融合している、項１～１１の何れかに記載 のプロドラッグ。
１３. 非開裂可能ペプチドリンカーが配列番号２９～３３から選択されるアミノ酸配列を 含む、項１２に記載のプロドラッグ。
１４. 開裂可能ペプチドリンカーがウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクティベーター(
ｕＰＡ)、マトリックスメタロプロテアーゼ(ＭＭＰ)２またはＭＭＰ９の基質配列を含む
、項１～１３の何れかに記載のプロドラッグ。
１５. 開裂可能ペプチドリンカーが(ｉ)ｕＰＡおよびＭＭＰ２の両者、(ii)ｕＰＡおよび ＭＭＰ９の両者または(iii)ｕＰＡ、ＭＭＰ２およびＭＭＰ９の基質配列を含む、項１４
に記載のプロドラッグ。
１６. 開裂可能ペプチドリンカーが配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を含 む、項１４に記載のプロドラッグ。
１７. 開裂可能ペプチドリンカーが腫瘍部位またはその周囲環境に位置する１以上のプロ テアーゼにより開裂可能であり、開裂が腫瘍部位または周囲環境でのプロドラッグの活性 化をもたらす、項１～１６の何れかに記載のプロドラッグ。
１８. 担体部分がＰＥＧ分子、アルブミン、アルブミンフラグメント、抗体Ｆｃドメイン または抗体またはその抗原結合フラグメントである、項１～１７の何れかに記載のプロド ラッグ。
１９. 担体部分がＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ(「ＬＡＬＡ」)変異(ＥＵナンバリング)を 含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体である、項１８に記載のプロドラッグ。
２０. 担体部がノブ・イントゥ・ホール変異を含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体であり、 ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分が、抗体Ｆｃドメイ ンの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合しており、そして所望により
第二サイトカイン部分および第二マスキング部分も、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペ プチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合している、
項１８または１９に記載のプロドラッグ。
２１. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分がＦｃドメイン の２つの異なるポリペプチド鎖のＣ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＣ末端に融合し ている、項２０に記載のプロドラッグ。
２２. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分がＦｃドメイン の２つの異なるポリペプチド鎖のＮ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＮ末端に融合し ている、項２０に記載のプロドラッグ。
２３. 第二サイトカイン部分および第二マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリ ペプチドおよびそのマスキング部分からのＦｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖の 逆の末端または抗体の２つの異なる重鎖の逆の末端に融合している、項２１および２２に 記載のプロドラッグ。
２４. ノブ・イントゥ・ホール変異がＦｃドメインのポリペプチド鎖または抗体の重鎖に Ｔ３６６Ｙ「ノブ」変異およびＦｃドメインの他のポリペプチドまたは抗体の他の重鎖に Ｙ４０７Ｔ「ホール」変異(ＥＵナンバリング)を含む、項２０～２３の何れかに記載のプ ロドラッグ。
２５. ノブ・イントゥ・ホール変異が「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃおよび／ またはＴ３６６Ｗ変異および「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、 Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異(ＥＵナンバリング)を含む、項２０～２３の何 れかに記載のプロドラッグ。
２６. 担体部分がグアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、 糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)、インシ ュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、 ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様 タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ
３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因
子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭ
Ｂ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンド
セリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体 アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱 水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファ ミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ １９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、Ｃ Ｄ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグ ナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、ＰＤ１、クローディン１８.２、クローディ
ン６、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ (ＦＡＰアルファ)、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(ＭＣＳＰ)およびＥ ＰＣＡＭから選択される１以上の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグ メントである、項１８～２５の何れかに記載のプロドラッグ。
２７. 該プロドラッグが、アミノ酸配列がそれぞれ
配列番号３６および３８、
配列番号３７および３８、
配列番号３９および４１、
配列番号４０および４１、
配列番号４２および４４、
配列番号４３および４４、
配列番号４５および４７または
配列番号４６および４７
を含む２つのポリペプチド鎖を含む、項２０に記載のプロドラッグ。
２８. アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４８および４９を含む２つの重鎖ポリペプチドお よび配列番号５０または５１を含む２つの軽鎖ポリペプチドを含む、項１８に記載のプロ ドラッグ。
２９. 担体部分がＦＡＰαまたは５Ｔ４に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント であり、所望により腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)リガンドファミリーメンバーまたは４－１ＢＢ リガンドまたはそのフラグメントの２つまたは３つのエクトドメインをさらに含む、項１ ８に記載のプロドラッグ。
３０. 項１～２９の何れかに記載のプロドラッグおよび薬学的に許容される添加物を含む 、医薬組成物。
３１. 項１～２９の何れかに記載のプロドラッグをコードするポリヌクレオチド。
３２. 項３１に記載のポリヌクレオチドを含む１以上の発現ベクター。
３３. 項３２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
３４. ｕＰＡ、ＭＭＰ２および／またはＭＭＰ９をコードする遺伝子が宿主細胞でノック アウトされている、項３３に記載の宿主細胞。
３５. 項１～２９の何れかに記載のプロドラッグを製造する方法であって、
項３３または３４に記載の宿主細胞(ここで、宿主細胞は哺乳動物細胞である)をプロド ラッグの発現を可能とする条件下で培養し、そして
プロドラッグを単離することを含む、
方法。
３６. 処置を必要とする患者における癌もしくは感染症を処置するまたは免疫系を刺激す る方法であって、患者に治療有効量の項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、 方法。
３７. 処置を必要とする患者における癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激に使用 するための、項１～２９の何れかに記載のプロドラッグ。
３８. 処置を必要とする患者における癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激のため の医薬の製造における、項１～２９の何れかに記載のプロドラッグの使用。
３９. 患者がＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＰＶ感染；または乳癌、肺癌、膵臓癌、食 道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸直腸癌および胃癌からな る群から選択される癌を有する、項３６に記載の方法、項３７に記載の使用のためのプロ ドラッグまたは項３８に記載の使用。
【化79】
さらに、本発明は次の態様を包含する。
１. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチド、マスキング部分および担体部分を含むプロ ドラッグであって、ここで、
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドに結合し、該ヒトＩＬ－２ １アゴニストポリペプチドの生物学的活性を阻害し、
該ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが担体部分と融合しており、そして
該マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドまたは担体部分に開裂可能 ペプチドリンカーを介して融合している、
プロドラッグ。
２. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが配列番号１または配列番号１と少なくとも ９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項１に記載のプロドラッグ。
３. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドがＤ１８、Ｑ１９、Ｅ１０９およびＫ１１７ から選択される位置に１以上の変異を含む(ナンバリングは配列番号１に従う)、項２に記 載のプロドラッグ。
４. ＩＬ－２１アゴニストポリペプチドが配列番号２、３、４および５から選択されるア ミノ酸配列を有する、項１に記載のプロドラッグ。
５. マスキング部分がヒトＩＬ－２１受容体の細胞外ドメイン(ＥＣＤ)またはその機能的 アナログを含む、項１～４の何れかに記載のプロドラッグ。
６. ＩＬ－２１受容体がＩＬ－２１ＲαまたはＩＬ－２１Ｒγである、項５に記載のプロ ドラッグ。
７. ＩＬ－２１受容体ＥＣＤが配列番号６もしくは７または配列番号６もしくは７と少な くとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項６に記載のプロドラッグ。
８. 第二サイトカイン部分をさらに含む、項１～７の何れかに記載のプロドラッグ。
９. 第二サイトカイン部分が
(ｉ) 配列番号８または配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む
ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチド、
(ii)ヒトＩＬ－７アゴニストポリペプチド、
(iii)ヒトＩＬ－９アゴニストポリペプチド、
(iv)配列番号９または配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒ トＩＬ－１５アゴニストポリペプチド、
(ｖ)ヒトＩＬ－１５アゴニストポリペプチドおよびヒトＩＬ－１５受容体アルファスシ ドメインまたは
(vi)配列番号２７または配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含 むヒトＣＣＬ１９ポリペプチド
である、項８に記載のプロドラッグ。
１０. 第二サイトカイン部分に結合し、第二サイトカイン部分の生物学的活性を阻害する 第二マスキング部分をさらに含み、ここで、第二マスキング部分は第二サイトカイン部分 にまたは担体部分に開裂可能ペプチドリンカーを介して融合している、項８または９に記 載のプロドラッグ。
１１. 第二マスキング部分がＩＬ－２受容体ベータサブユニットのＥＣＤまたはその機能 的アナログ、ＩＬ－７受容体のＥＣＤまたはその機能的アナログおよびＩＬ－９受容体の ＥＣＤまたはその機能的アナログから選択される、項１０に記載のプロドラッグ。
１２. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよび／または第二サイトカイン部分が非 開裂可能ペプチドリンカーを介して担体部分に融合している、項１～１１の何れかに記載 のプロドラッグ。
１３. 非開裂可能ペプチドリンカーが配列番号２９～３３から選択されるアミノ酸配列を 含む、項１２に記載のプロドラッグ。
１４. 開裂可能ペプチドリンカーがウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクティベーター(
ｕＰＡ)、マトリックスメタロプロテアーゼ(ＭＭＰ)２またはＭＭＰ９の基質配列を含む
、項１～１３の何れかに記載のプロドラッグ。
１５. 開裂可能ペプチドリンカーが(ｉ)ｕＰＡおよびＭＭＰ２の両者、(ii)ｕＰＡおよび ＭＭＰ９の両者または(iii)ｕＰＡ、ＭＭＰ２およびＭＭＰ９の基質配列を含む、項１４
に記載のプロドラッグ。
１６. 開裂可能ペプチドリンカーが配列番号１１～２６から選択されるアミノ酸配列を含 む、項１４に記載のプロドラッグ。
１７. 開裂可能ペプチドリンカーが腫瘍部位またはその周囲環境に位置する１以上のプロ テアーゼにより開裂可能であり、開裂が腫瘍部位または周囲環境でのプロドラッグの活性 化をもたらす、項１～１６の何れかに記載のプロドラッグ。
１８. 担体部分がＰＥＧ分子、アルブミン、アルブミンフラグメント、抗体Ｆｃドメイン または抗体またはその抗原結合フラグメントである、項１～１７の何れかに記載のプロド ラッグ。
１９. 担体部分がＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ(「ＬＡＬＡ」)変異(ＥＵナンバリング)を 含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体である、項１８に記載のプロドラッグ。
２０. 担体部がノブ・イントゥ・ホール変異を含む抗体Ｆｃドメインまたは抗体であり、 ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分が、抗体Ｆｃドメイ ンの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合しており、そして所望により
第二サイトカイン部分および第二マスキング部分も、抗体Ｆｃドメインの異なるポリペ プチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合している、
項１８または１９に記載のプロドラッグ。
２１. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分がＦｃドメイン の２つの異なるポリペプチド鎖のＣ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＣ末端に融合し ている、項２０に記載のプロドラッグ。
２２. ヒトＩＬ－２１アゴニストポリペプチドおよびそのマスキング部分がＦｃドメイン の２つの異なるポリペプチド鎖のＮ末端または抗体の２つの異なる重鎖のＮ末端に融合し ている、項２０に記載のプロドラッグ。
２３. 第二サイトカイン部分および第二マスキング部分がヒトＩＬ－２１アゴニストポリ ペプチドおよびそのマスキング部分からのＦｃドメインの２つの異なるポリペプチド鎖の 逆の末端または抗体の２つの異なる重鎖の逆の末端に融合している、項２１および２２に 記載のプロドラッグ。
２４. ノブ・イントゥ・ホール変異がＦｃドメインのポリペプチド鎖または抗体の重鎖に Ｔ３６６Ｙ「ノブ」変異およびＦｃドメインの他のポリペプチドまたは抗体の他の重鎖に Ｙ４０７Ｔ「ホール」変異(ＥＵナンバリング)を含む、項２０～２３の何れかに記載のプ ロドラッグ。
２５. ノブ・イントゥ・ホール変異が「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃおよび／ またはＴ３６６Ｗ変異および「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、 Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ変異(ＥＵナンバリング)を含む、項２０～２３の何 れかに記載のプロドラッグ。
２６. 担体部分がグアニル酸シクラーゼＣ(ＧＣＣ)、糖鎖抗原１９－９(ＣＡ１９－９)、 糖タンパク質Ａ３３(ｇｐＡ３３)、ムチン１(ＭＵＣ１)、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)、インシ ュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ１－Ｒ)、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２(ＨＥＲ２)、 ヒト上皮細胞増殖因子受容体３(ＨＥＲ３)、デルタ様タンパク質３(ＤＬＬ３)、デルタ様 タンパク質４(ＤＬＬ４)、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、グリピカン－３(ＧＰＣ
３)、ｃ－ＭＥＴ、血管内皮細胞増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、血管内皮細胞増殖因
子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)、ネクチン－４、Ｌｉｖ－１、糖タンパク質ＮＭＢ(ＧＰＮＭ
Ｂ)、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、Ｔｒｏｐ－２、炭酸脱水酵素IX(ＣＡ９)、エンド
セリンＢ受容体(ＥＴＢＲ)、前立腺の６回膜貫通上皮抗原１(ＳＴＥＡＰ１)、葉酸受容体 アルファ(ＦＲ－α)、ＳＬＩＴおよびＮＴＲＫ様タンパク質６(ＳＬＩＴＲＫ６)、炭酸脱 水酵素VI(ＣＡ６)、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファ ミリーメンバー３(ＥＮＰＰ３)、メソテリン、栄養芽細胞糖タンパク質(ＴＰＢＧ)、ＣＤ １９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、Ｃ Ｄ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３５２、ＣＤ４７、シグ ナル制御タンパク質アルファ(ＳＩＲＰα)、ＰＤ１、クローディン１８.２、クローディ
ン６、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ (ＦＡＰアルファ)、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(ＭＣＳＰ)およびＥ ＰＣＡＭから選択される１以上の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグ メントである、項１８～２５の何れかに記載のプロドラッグ。
２７. 該プロドラッグが、アミノ酸配列がそれぞれ
配列番号３６および３８、
配列番号３７および３８、
配列番号３９および４１、
配列番号４０および４１、
配列番号４２および４４、
配列番号４３および４４、
配列番号４５および４７または
配列番号４６および４７
を含む２つのポリペプチド鎖を含む、項２０に記載のプロドラッグ。
２８. アミノ酸配列がそれぞれ配列番号４８および４９を含む２つの重鎖ポリペプチドお よび配列番号５０または５１を含む２つの軽鎖ポリペプチドを含む、項１８に記載のプロ ドラッグ。
２９. 担体部分がＦＡＰαまたは５Ｔ４に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント であり、所望により腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)リガンドファミリーメンバーまたは４－１ＢＢ リガンドまたはそのフラグメントの２つまたは３つのエクトドメインをさらに含む、項１ ８に記載のプロドラッグ。
３０. 項１～２９の何れかに記載のプロドラッグおよび薬学的に許容される添加物を含む 、医薬組成物。
３１. 項１～２９の何れかに記載のプロドラッグをコードするポリヌクレオチド。
３２. 項３１に記載のポリヌクレオチドを含む１以上の発現ベクター。
３３. 項３２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
３４. ｕＰＡ、ＭＭＰ２および／またはＭＭＰ９をコードする遺伝子が宿主細胞でノック アウトされている、項３３に記載の宿主細胞。
３５. 項１～２９の何れかに記載のプロドラッグを製造する方法であって、
項３３または３４に記載の宿主細胞(ここで、宿主細胞は哺乳動物細胞である)をプロド ラッグの発現を可能とする条件下で培養し、そして
プロドラッグを単離することを含む、
方法。
３６. 処置を必要とする患者における癌もしくは感染症を処置するまたは免疫系を刺激す る方法であって、患者に治療有効量の項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、 方法。
３７. 処置を必要とする患者における癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激に使用 するための、項１～２９の何れかに記載のプロドラッグ。
３８. 処置を必要とする患者における癌もしくは感染症の処置または免疫系の刺激のため の医薬の製造における、項１～２９の何れかに記載のプロドラッグの使用。
３９. 患者がＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＰＶ感染；または乳癌、肺癌、膵臓癌、食 道癌、髄様甲状腺癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、結腸直腸癌および胃癌からな る群から選択される癌を有する、項３６に記載の方法、項３７に記載の使用のためのプロ ドラッグまたは項３８に記載の使用。
【外国語明細書】