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特開2024-83246ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024083246
(43)【公開日】2024-06-20
(54)【発明の名称】ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法
(51)【国際特許分類】
G01N 30/88 20060101AFI20240613BHJP
G01N 30/95 20060101ALI20240613BHJP
G01N 33/02 20060101ALN20240613BHJP
G01N 30/94 20060101ALN20240613BHJP
【ＦＩ】
G01N30/88 M
G01N30/88 E
G01N30/95 A
G01N33/02
G01N30/94
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023183954
(22)【出願日】2023-10-26
(31)【優先権主張番号】P 2022197091
(32)【優先日】2022-12-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000002819
【氏名又は名称】大正製薬株式会社
(72)【発明者】
【氏名】古川 茶勲
(57)【要約】
【課題】
薄層クロマトグラフィーを利用して、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型とオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料中におけるこれら成分を同時に定性分析できる新規な方法を提供するものである。
【解決手段】
下記（１）～（２）の工程を含む、薄層クロマトグラフィーを利用した１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法：
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型の５環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること、
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
【選択図】図１
薄層クロマトグラフィーを利用して、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型とオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料中におけるこれら成分を同時に定性分析できる新規な方法を提供するものである。
【解決手段】
下記（１）～（２）の工程を含む、薄層クロマトグラフィーを利用した１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法：
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型の５環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること、
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記（１）～（２）の工程を含む、薄層クロマトグラフィーを利用した１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法：
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型の５環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること、
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型の５環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること、
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
【請求項2】
１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンが、ウルソール酸、オレアノール酸、コロソリン酸、マスリン酸、α－アミリン、β－アミリン、ウルソン酸、オレアノン酸、ウバオール及びエリスロジオールからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１に記載の分析方法。
【請求項3】
１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及びオレアナン型五環性トリテルペンが、下記（ａ）～（e）からなる群から選択される少なくとも一組の五環性トリテルペンである、請求項１に記載の分析方法。
（ａ）ウルソール酸とオレアノール酸
（ｂ）コロソリン酸とマスリン酸
（ｃ）α－アミリンとβ－アミリン
（ｄ）ウルソン酸とオレアノン酸
（ｅ）ウバオールとエリスロジオール
（ａ）ウルソール酸とオレアノール酸
（ｂ）コロソリン酸とマスリン酸
（ｃ）α－アミリンとβ－アミリン
（ｄ）ウルソン酸とオレアノン酸
（ｅ）ウバオールとエリスロジオール
【請求項4】
試料が天然物である、請求項１～３のいずれかに記載の分析方法。
【請求項5】
試料がウルソール酸及び／又はオレアノール酸を含む天然物であって、前記天然物が、ホーリーバジル、ローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ビルベリー、オリーブ、サンザシ、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の分析方法。
【請求項6】
試料がコロソリン酸及び／又はマスリン酸を含む天然物であって、前記天然物が、オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ及びリンゴからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを分析する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ウルサン型五環性トリテルペンにはウルソール酸やコロソリン酸などが分類され、オレアナン型五環性トリテルペンにはオレアノール酸やマスリン酸などが分類される。これら五環性トリテルペンは、植物の葉や果皮など広く天然物に含まれており、様々な生理活性を有することが報告されている。例えば、ウルソール酸とオレアノール酸は抗肥満作用、抗炎症作用、抗酸化作用、脂肪酸産生抑制作用、コロソリン酸は血糖値低下作用、マスリン酸は筋力量維持作用が報告されており、人々の健康の維持や増進につながることが期待されることから、これらを含む機能性表示食品の開発が注目されている。一方、機能性表示食品では、機能性関与成分を担保し、品質保証を行うことが重要である。
【0003】
薄層クロマトグラフィーは、複数サンプルを短時間で分離可能であり、高度な技術が不要のため、初心者でも手軽に利用することができる分析法である。低コストで手軽な分析方法のため、医薬品の純度試験や合成実験の追跡確認試験など、様々な分野で使用されている。
【0004】
今までに、ウルソール酸とオレアノール酸を分離定性分析する方法として、ヨウ素をクロロホルムに溶解させた溶液を使用した方法が報告されている（非特許文献１～２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Separation and determination of closely related triterpenic acids by high performance thin-layer chromatography after iodine derivatization（Magdalena Wojciak-Kosior,Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,45,337-340(2007)）
【非特許文献2】Simultaneous Quantification of Bioactive Triterpene acids (Ursolic acid and Oleanolic acid) in Different Extracts of Eucalyptus globulus (L) by HPTLC Method（Arti Gupta et al.,Pharmacognosy Journal,10,179-185(2018)）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
しかしながら、非特許文献１及び２の分析方法では、薄層板にスポットしたウルソール酸及び／又はオレアノール酸が誘導体化反応の過程で少なからず展開されてしまうことから、正しいＲｆ値が測定できなかった。また、試験者間で生じる展開距離の違いによって反応効率が変化し、Ｒｆ値や誘導体生成量にばらつきが生じていた。
【0007】
さらに、ウルソール酸とオレアノール酸は、それぞれ１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型五環性トリテルペンとオレアナン型五環性トリテルペンの構造を持つ異性体同士であり、これらが試料中に含まれている場合、同時に分離し分析することは非常に難しい。同様の理由により、コロソリン酸とマスリン酸、α－アミリンとβ－アミリン、ウルソン酸とオレアノン酸、ウバオールとエリスロジオールなどのウルサン型とオレアナン型の異性体同士の分析も難しい。
【0008】
本発明は、薄層クロマトグラフィーを利用して、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを正確に定性分析できる新規な分析法を提供するものである。
【0009】
また、薄層クロマトグラフィーを利用して、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型とオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料中におけるこれら成分を同時に定性分析できる新規な方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【0010】
すなわち、本発明は、
［１］ 下記（１）～（２）の工程を含む、薄層クロマトグラフィーを利用した１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法：
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型の５環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること、
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
［２］ １２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンが、ウルソール酸、オレアノール酸、コロソリン酸、マスリン酸、α―アミリン、β－アミリン、ウルソン酸、オレアノン酸、ウバオール及びエリスロジオールからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］に記載の分析方法。
［３］ １２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及びオレアナン型五環性トリテルペンが、下記（ａ）～（e）からなる群から選択される少なくとも一組の五環性トリテルペンである、［１］に記載の分析方法。
（ａ）ウルソール酸とオレアノール酸
（ｂ）コロソリン酸とマスリン酸
（ｃ）α－アミリンとβ－アミリン
（ｄ）ウルソン酸とオレアノン酸
（ｅ）ウバオールとエリスロジオール
［４］ 試料が天然物である、［１］～［３］のいずれかに記載の分析方法。
［５］ 試料がウルソール酸及び／又はオレアノール酸を含む天然物であって、前記天然物が、ホーリーバジル、ローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ビルベリー、オリーブ、サンザシ、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバからなる群から選択される少なくとも１種である、［１］に記載の分析方法。
［６］ 試料がコロソリン酸及び／又はマスリン酸を含む天然物であって、前記天然物が、オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ及びリンゴからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の分析方法。
［１］ 下記（１）～（２）の工程を含む、薄層クロマトグラフィーを利用した１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法：
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型の５環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること、
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
［２］ １２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンが、ウルソール酸、オレアノール酸、コロソリン酸、マスリン酸、α―アミリン、β－アミリン、ウルソン酸、オレアノン酸、ウバオール及びエリスロジオールからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］に記載の分析方法。
［３］ １２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及びオレアナン型五環性トリテルペンが、下記（ａ）～（e）からなる群から選択される少なくとも一組の五環性トリテルペンである、［１］に記載の分析方法。
（ａ）ウルソール酸とオレアノール酸
（ｂ）コロソリン酸とマスリン酸
（ｃ）α－アミリンとβ－アミリン
（ｄ）ウルソン酸とオレアノン酸
（ｅ）ウバオールとエリスロジオール
［４］ 試料が天然物である、［１］～［３］のいずれかに記載の分析方法。
［５］ 試料がウルソール酸及び／又はオレアノール酸を含む天然物であって、前記天然物が、ホーリーバジル、ローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ビルベリー、オリーブ、サンザシ、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバからなる群から選択される少なくとも１種である、［１］に記載の分析方法。
［６］ 試料がコロソリン酸及び／又はマスリン酸を含む天然物であって、前記天然物が、オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ及びリンゴからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の分析方法。
【発明の効果】
【0011】
本発明の分析方法は、頑健性及び再現性に優れており、従来の薄層クロマトグラフィーでは求めることができなかった１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンのＲｆ値の真値を求めることが可能となった。また、これらが天然物中に含まれる場合であっても分析可能であることが分かった。
【0012】
また、試料中に異性体同士となる１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型五環性トリテルペンとオレアナン型五環性トリテルペンが含まれる場合であっても、これら成分のＲｆ値を同時に求めることが可能となった。また、これらが天然物中に含まれる場合についても同時に分析可能であることが分かった。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図12】図１２は、昇華ヨウ素に暴露したローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（実施例３２～４１）。
【図13】図１３は、昇華ヨウ素に暴露しないローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（比較例９～１８）。
【図14】図１４は、昇華ヨウ素に暴露したラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（実施例４２～５１）。
【図15】図１５は、昇華ヨウ素に暴露しないラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（比較例１９～２８）。
【図16】図１６は、昇華ヨウ素に暴露したビルベリー、オリーブ、コリアンダー、サンザシ、ジャーマンカモミール、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（実施例５２～５９、比較例２９～３０）。なお、比較例２９はコリアンダー、比較例３０はジャーマンカモミールである。
【図17】図１７は、昇華ヨウ素に暴露しないビルベリー、オリーブ、コリアンダー、サンザシ、ジャーマンカモミール、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（比較例３１～４０）。
【図18】図１８は、昇華ヨウ素に暴露したビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバ、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（実施例６０～６９）。
【図19】図１９は、昇華ヨウ素に暴露しないビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバ、ウルソール酸／オレアノール酸混合物、オレアノール酸、及びウルソール酸の薄層クロマトグラフの写真である（比較例４１～５０）。
【図22】図２２は、昇華ヨウ素に暴露したオリーブエキス、オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ、リンゴ、マスリン酸／コロソリン酸混合物、マスリン酸、及びコロソリン酸の薄層クロマトグラフの写真である（実施例７３～８２）。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明の薄層クロマトグラフィーを使用した１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの分析方法は、下記（１）～（２）の工程を含む。
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること。
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
（１）１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料を昇華ヨウ素と反応させて、前記ウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体を生成すること。
（２）前記誘導体の薄層クロマトグラムを得ること。
【0015】
本発明の方法により分析される成分は、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンである。１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型五環性トリテルペンとしては、例えばウルソール酸、コロソリン酸、α―アミリン、ウルソン酸、ウバオール等が挙げられる。また、本発明の１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するオレアナン型五環性トリテルペンとしては、オレアノール酸、マスリン酸、β－アミリン、オレアノン酸、エリスロジオール等が挙げられる。
【0016】
本発明の分析方法により、これら１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型又はオレアナン型五環性トリテルペンのＲｆ値の真値を求めることができる。
【0017】
また、本発明の分析法により、異性体となる一組の五環性トリテルペンが含まれていても、各トリテルペンのＲｆ値の真値を求めることができる。本発明により分析可能となった一組の異性体の例としては、例えば以下の（ａ）～（ｅ）のペアが挙げられる。
（ａ）ウルソール酸とオレアノール酸
（ｂ）コロソリン酸とマスリン酸
（ｃ）α－アミリンとβ－アミリン
（ｄ）ウルソン酸とオレアノン酸
（ｅ）ウバオールとエリスロジオール
（ａ）ウルソール酸とオレアノール酸
（ｂ）コロソリン酸とマスリン酸
（ｃ）α－アミリンとβ－アミリン
（ｄ）ウルソン酸とオレアノン酸
（ｅ）ウバオールとエリスロジオール
【0018】
工程（１）では、試料中の１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型とオレアナン型五環性トリテルペンが昇華ヨウ素と反応し、この反応により、ウルサン型トリテルペンの誘導体とオレアナン型トリテルペンの誘導体が生成される。
本発明の分析方法で対象とする試料は、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンである。また、これらを含む試料であれば特に制限はなく、天然物そのものでもよく、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む天然物を含む食品、飲料、医薬品、医薬部外品、化粧品などでもよく、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを配合した食品、飲料、医薬品、医薬部外品、化粧品などであってもよい。
好ましくは、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む天然物であり、さらに好ましくはホーリーバジル、ローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ビルベリー、オリーブ、サンザシ、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバである。これら天然物には、ウルソール酸及び／又はオレアノール酸が含まれる。また、オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ、リンゴには、コロソリン酸及び／又はマスリン酸も含まれる。、
本発明の分析方法で対象とする試料は、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンである。また、これらを含む試料であれば特に制限はなく、天然物そのものでもよく、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む天然物を含む食品、飲料、医薬品、医薬部外品、化粧品などでもよく、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを配合した食品、飲料、医薬品、医薬部外品、化粧品などであってもよい。
好ましくは、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む天然物であり、さらに好ましくはホーリーバジル、ローズマリー、シソ、リンゴ、ネズミモチ、バジル、セージ、レモンバーム、ラベンダー、オレガノ、ペパーミント、スペアミント、タイム、ブルーベリー、ラズベリー、ビルベリー、オリーブ、サンザシ、セイヨウニワトコ、レモンバーベナ、ビワ、クローブ、トチュウ、ジャスミン、マジョラム、ウツボグサ、バナバである。これら天然物には、ウルソール酸及び／又はオレアノール酸が含まれる。また、オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ、リンゴには、コロソリン酸及び／又はマスリン酸も含まれる。、
【0019】
１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料と昇華ヨウ素との反応は、昇華ヨウ素で飽和した展開槽に、１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型及び／又はオレアナン型五環性トリテルペンを含む試料をスポットした薄層板を入れ、温度、時間などの反応条件を適宜設定することにより反応を行うことができる。
【0020】
昇華ヨウ素の作成は、展開槽にヨウ素とシリカゲルを入れることにより行うことができ、すべてのシリカゲルの色調が紫色になることで昇華ヨウ素が飽和したことを確認できる。
【0021】
工程（２）により、ウルサン型五環性トリテルペンの誘導体又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体の薄層クロマトグラムを得ることができる。１２位，１３位の炭素間に二重結合を有するウルサン型とオレアナン型五環性トリテルペンの両方を含む試料の場合、ウルサン型五環性トリテルペンの誘導体とオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体に分離される。ウルサン型五環性トリテルペンの誘導体又はオレアナン型五環性トリテルペンの誘導体のクロマトグラムを得る方法は、公知の展開方法で行うことができる。薄層クロマトグラフィーで使用する支持体及び担体は、通常用いられているものを使用することができる。支持体としては、例えばガラスプレートが挙げられ、担体としてはシリカゲル、酸化アルミニウム、セルロースなどが挙げられる。また、展開溶媒としては、例えば、ヘキサン、シクロヘキサン、酢酸エチル、エーテル、アセトン、メタノール、エタノール、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトニトリル、水など、通常用いられる溶媒を任意の割合で混合したものを使用することができる。また、展開距離は、適宜設定することができる。また、検出法は、公知の方法で行うことができ、例えば希硫酸などの発色試液などの発色処理を行うことによって行うことができる。
【実施例0022】
以下に、実施例を詳細に説明するが、本実施例により本発明が限定されるものではない。
【0023】
１．試料の調製
試料１：オレアノール酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したオレアノール酸溶液を試料１とした。
試料２：ウルソール酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したウルソール酸溶液を試料２とした。
試料３：ウルソール酸及びオレアノール酸各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したウルソール酸／オレアノール酸混合溶液を試料３とした。
試料４：ホーリーバジルエキス（ホーリーバジルをアルコール抽出し、乾燥後、粉末化したもの）０．２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて１０分間振とうし、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のホーリーバジルエキス試料溶液を試料４とした。
試料５：ホーリーバジル粉末（ホーリーバジルを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のホーリーバジル試料溶液を試料５とした。
試料６：ローズマリー粉末（ローズマリーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のローズマリー試料溶液を試料６とした。
試料７：シソ粉末（蘇葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のシソ試料溶液を試料７とした。
試料８：リンゴ粉末（リンゴ果皮を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のリンゴ試料溶液を試料８とした。
試料９：ネズミモチ粉末（女貞子を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のネズミモチ試料溶液を試料９とした。
試料１０：バジル粉末（バジルを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のバジル試料溶液を試料１０とした。
試料１１：セージ粉末（セージを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のセージ試料溶液を試料１１とした。
試料１２：レモンバーム粉末（レモンバームを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のレモンバーム試料溶液を試料１２とした。
試料１３：ラベンダー粉末（ラベンダーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のラベンダー試料溶液を試料１３とした。
試料１４：オレガノ粉末（オレガノを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のオレガノ試料溶液を試料１４とした。
試料１５：ペパーミント粉末（ペパーミントを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のペパーミント試料溶液を試料１５とした。
試料１６：スペアミント粉末（スペアミントを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のスペアミント試料溶液を試料１６とした。
試料１７：タイム粉末（タイムを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のタイム試料溶液を試料１７とした。
試料１８：ブルーベリー粉末（ブルーベリー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のブルーベリー試料溶液を試料１８とした。
試料１９：ラズベリー粉末（ラズベリー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のラズベリー試料溶液を試料１９とした。
試料２０：ビルベリー粉末（ビルベリー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のビルベリー試料溶液を試料２０とした。
試料２１：オリーブ粉末（オリーブ葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のオリーブ試料溶液を試料２１とした。
試料２２：サンザシ粉末（山査子を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のサンザシ試料溶液を試料２２とした。
試料２３：セイヨウニワトコ粉末（エルダーフラワーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のセイヨウニワトコ試料溶液を試料２２とした。
試料２４：レモンバーベナ粉末（レモンバーベナを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のレモンバーベナ試料溶液を試料２４とした。
試料２５：コリアンダー粉末（コリアンダー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のコリアンダー試料溶液を試料２５とした。
試料２６：ジャーマンカモミール粉末（ジャーマンカモミールを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のジャーマンカモミール試料溶液を試料２６とした。
試料２７：ビワ粉末（ビワ葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のビワ試料溶液を試料２７とした。
試料２８：クローブ粉末（丁字を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のクローブ試料溶液を試料２８とした。
試料２９：トチュウ粉末（杜仲葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のトチュウ試料溶液を試料２９とした。
試料３０：ジャスミン粉末（ジャスミンフラワーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のジャスミン試料溶液を試料３０とした。
試料３１：マジョラム粉末（マジョラムを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のマジョラム試料溶液を試料３１とした。
試料３２：ウツボグサ粉末（夏枯草を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のウツボグサ試料溶液を試料３２とした。
試料３３：バナバ粉末（バナバ葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のバナバ試料溶液を試料３３とした。
試料３４：マスリン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したマスリン酸溶液を試料３４とした。
試料３５：コロソリン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したコロソリン酸溶液を試料３５とした。
試料３６：マスリン酸及びコロソリン酸各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したマスリン酸／コロソリン酸混合溶液を試料３６とした。
試料３７：オリーブエキス（オリーブ果実をアルコール抽出し、乾燥後、粉末化したもの）０．１ｇに１００ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のオリーブエキス試料溶液を試料３７とした。
試料３８：β－アミリン１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したβ－アミリン溶液を試料３８とした。
試料３９：α－アミリン１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したα－アミリン溶液を試料３９とした。
試料４０：β－アミリン及びα－アミリン各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したβ－アミリン／α－アミリン混合溶液を試料４０とした。
試料４１：オレアノン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したオレアノン酸溶液を試料４１とした。
試料４２：ウルソン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したウルソン酸溶液を試料４２とした。
試料４３：オレアノン酸及びウルソン酸各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したオレアノン酸／ウルソン酸混合溶液を試料４３とした。
試料４４：エリスロジオール１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したエリスロジオール溶液を試料４４とした。
試料４５：ウバオール１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、ウバオール原液とする。この液１ｍLをとり、酢酸エチルを加えて１０ｍLとしたウバオール溶液を試料４５とした。
試料４６：エリスロジオール１ｍｇをウバオール原液１ｍＬに溶解し、酢酸エチルを加えて１０ｍLとしたエリスロジオール／ウバオール混合溶液を試料４６とした。
試料１：オレアノール酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したオレアノール酸溶液を試料１とした。
試料２：ウルソール酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したウルソール酸溶液を試料２とした。
試料３：ウルソール酸及びオレアノール酸各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したウルソール酸／オレアノール酸混合溶液を試料３とした。
試料４：ホーリーバジルエキス（ホーリーバジルをアルコール抽出し、乾燥後、粉末化したもの）０．２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて１０分間振とうし、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のホーリーバジルエキス試料溶液を試料４とした。
試料５：ホーリーバジル粉末（ホーリーバジルを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のホーリーバジル試料溶液を試料５とした。
試料６：ローズマリー粉末（ローズマリーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のローズマリー試料溶液を試料６とした。
試料７：シソ粉末（蘇葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のシソ試料溶液を試料７とした。
試料８：リンゴ粉末（リンゴ果皮を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のリンゴ試料溶液を試料８とした。
試料９：ネズミモチ粉末（女貞子を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のネズミモチ試料溶液を試料９とした。
試料１０：バジル粉末（バジルを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のバジル試料溶液を試料１０とした。
試料１１：セージ粉末（セージを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のセージ試料溶液を試料１１とした。
試料１２：レモンバーム粉末（レモンバームを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のレモンバーム試料溶液を試料１２とした。
試料１３：ラベンダー粉末（ラベンダーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のラベンダー試料溶液を試料１３とした。
試料１４：オレガノ粉末（オレガノを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のオレガノ試料溶液を試料１４とした。
試料１５：ペパーミント粉末（ペパーミントを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のペパーミント試料溶液を試料１５とした。
試料１６：スペアミント粉末（スペアミントを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のスペアミント試料溶液を試料１６とした。
試料１７：タイム粉末（タイムを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のタイム試料溶液を試料１７とした。
試料１８：ブルーベリー粉末（ブルーベリー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のブルーベリー試料溶液を試料１８とした。
試料１９：ラズベリー粉末（ラズベリー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のラズベリー試料溶液を試料１９とした。
試料２０：ビルベリー粉末（ビルベリー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のビルベリー試料溶液を試料２０とした。
試料２１：オリーブ粉末（オリーブ葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のオリーブ試料溶液を試料２１とした。
試料２２：サンザシ粉末（山査子を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のサンザシ試料溶液を試料２２とした。
試料２３：セイヨウニワトコ粉末（エルダーフラワーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のセイヨウニワトコ試料溶液を試料２２とした。
試料２４：レモンバーベナ粉末（レモンバーベナを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のレモンバーベナ試料溶液を試料２４とした。
試料２５：コリアンダー粉末（コリアンダー葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のコリアンダー試料溶液を試料２５とした。
試料２６：ジャーマンカモミール粉末（ジャーマンカモミールを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のジャーマンカモミール試料溶液を試料２６とした。
試料２７：ビワ粉末（ビワ葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のビワ試料溶液を試料２７とした。
試料２８：クローブ粉末（丁字を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のクローブ試料溶液を試料２８とした。
試料２９：トチュウ粉末（杜仲葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のトチュウ試料溶液を試料２９とした。
試料３０：ジャスミン粉末（ジャスミンフラワーを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のジャスミン試料溶液を試料３０とした。
試料３１：マジョラム粉末（マジョラムを粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のマジョラム試料溶液を試料３１とした。
試料３２：ウツボグサ粉末（夏枯草を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のウツボグサ試料溶液を試料３２とした。
試料３３：バナバ粉末（バナバ葉を粉末化したもの）２ｇに２０ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のバナバ試料溶液を試料３３とした。
試料３４：マスリン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したマスリン酸溶液を試料３４とした。
試料３５：コロソリン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したコロソリン酸溶液を試料３５とした。
試料３６：マスリン酸及びコロソリン酸各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したマスリン酸／コロソリン酸混合溶液を試料３６とした。
試料３７：オリーブエキス（オリーブ果実をアルコール抽出し、乾燥後、粉末化したもの）０．１ｇに１００ｍＬの酢酸エチルを加えて３０分間超音波処理を施した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して得た上清のオリーブエキス試料溶液を試料３７とした。
試料３８：β－アミリン１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したβ－アミリン溶液を試料３８とした。
試料３９：α－アミリン１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したα－アミリン溶液を試料３９とした。
試料４０：β－アミリン及びα－アミリン各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したβ－アミリン／α－アミリン混合溶液を試料４０とした。
試料４１：オレアノン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したオレアノン酸溶液を試料４１とした。
試料４２：ウルソン酸１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したウルソン酸溶液を試料４２とした。
試料４３：オレアノン酸及びウルソン酸各１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したオレアノン酸／ウルソン酸混合溶液を試料４３とした。
試料４４：エリスロジオール１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解したエリスロジオール溶液を試料４４とした。
試料４５：ウバオール１ｍｇを１０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、ウバオール原液とする。この液１ｍLをとり、酢酸エチルを加えて１０ｍLとしたウバオール溶液を試料４５とした。
試料４６：エリスロジオール１ｍｇをウバオール原液１ｍＬに溶解し、酢酸エチルを加えて１０ｍLとしたエリスロジオール／ウバオール混合溶液を試料４６とした。
【0024】
２．昇華ヨウ素の調製
約１００ｇのシリカゲル及び約２００ｇのヨウ素を、展開槽（縦２１ｃｍ、横２３．５ｃｍ、奥行き１０．５ｃｍ、ガラス製）に入れ、均一な状態にした後、蓋をして、すべてのシリカゲルの色調が紫になるまで約２時間放置した。
約１００ｇのシリカゲル及び約２００ｇのヨウ素を、展開槽（縦２１ｃｍ、横２３．５ｃｍ、奥行き１０．５ｃｍ、ガラス製）に入れ、均一な状態にした後、蓋をして、すべてのシリカゲルの色調が紫になるまで約２時間放置した。
【0025】
３．１％ヨウ素クロロホルム溶液の調製
約２ｇのヨウ素及び約２００ｇのクロロホルムを、展開槽（縦２１ｃｍ、横２３．５ｃｍ、奥行き１０．５ｃｍ、ガラス製）に入れ、蓋をして、ヨウ素が完全に溶解するまで時々撹拌しながら約３時間放置した。
約２ｇのヨウ素及び約２００ｇのクロロホルムを、展開槽（縦２１ｃｍ、横２３．５ｃｍ、奥行き１０．５ｃｍ、ガラス製）に入れ、蓋をして、ヨウ素が完全に溶解するまで時々撹拌しながら約３時間放置した。
【0026】
実施例１（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例２
実施例１と同様の方法で、試料１（オレアノール酸溶液）の分析を行った。
実施例３
実施例１と同様の方法で、試料２（ウルソール酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１に示す。
比較例１（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例２
比較例１と同様の方法で、試料１の分析を行った。
比較例３
比較例１と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２に示す。
次に、図１及び図２の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表１に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例２
実施例１と同様の方法で、試料１（オレアノール酸溶液）の分析を行った。
実施例３
実施例１と同様の方法で、試料２（ウルソール酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１に示す。
比較例１（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例２
比較例１と同様の方法で、試料１の分析を行った。
比較例３
比較例１と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２に示す。
次に、図１及び図２の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表１に示す。
【0027】
【表1】
【0028】
【0029】
実施例４（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約２ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、５分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例５
実施例４と同様の方法で、試料１の分析を行った。
実施例６
実施例４と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図３に示す。
実施例７（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約２ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、２０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例８
実施例７と同様の方法で、試料１の分析を行った。
実施例９
実施例７と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図４に示す。
次に、図３及び図４の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表２に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約２ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、５分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例５
実施例４と同様の方法で、試料１の分析を行った。
実施例６
実施例４と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図３に示す。
実施例７（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約２ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、２０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例８
実施例７と同様の方法で、試料１の分析を行った。
実施例９
実施例７と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図４に示す。
次に、図３及び図４の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表２に示す。
【0030】
【表2】
【0031】
【0032】
実施例１０
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）５μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、発色試液を使用し、検出を行った。
実施例１１
スポット量を１０μＬに変更した以外は実施例１０と同様の方法で試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例１２
スポット量を２０μＬに変更した以外は実施例１０と同様の方法で、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図５に示す。
次に、図５の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表３に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）５μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、発色試液を使用し、検出を行った。
実施例１１
スポット量を１０μＬに変更した以外は実施例１０と同様の方法で試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例１２
スポット量を２０μＬに変更した以外は実施例１０と同様の方法で、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図５に示す。
次に、図５の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表３に示す。
【0033】
【表3】
【0034】
図５及び表３より、スポット量が半分になった場合、２倍になった場合のどちらも得られる結果に影響を与えないことが分かった。
【0035】
実施例１３
展開距離を７ｃｍにした以外は実施例１と同様の方法で、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例１４
実施例１３と同様の方法で、試料１（ウルソール酸溶液）の分析を行った。
実施例１５
実施例１３と同様の方法で、試料２（オレアノール酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図６に示す。
次に、図６の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表４に示す。
展開距離を７ｃｍにした以外は実施例１と同様の方法で、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例１４
実施例１３と同様の方法で、試料１（ウルソール酸溶液）の分析を行った。
実施例１５
実施例１３と同様の方法で、試料２（オレアノール酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図６に示す。
次に、図６の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表４に示す。
【0036】
【表4】
【0037】
図６及び表４より、展開距離を７ｃｍに短縮した場合であっても、得られる結果に影響を与えないことが分かった。
【0038】
実施例１６
実施例１の試験日とは別日に、実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例１７
実施例２の試験日とは別日に、実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例１８
実施例３の試験日とは別日に、実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図７に示す。
次に、図７の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表５に示す。
実施例１の試験日とは別日に、実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例１７
実施例２の試験日とは別日に、実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例１８
実施例３の試験日とは別日に、実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図７に示す。
次に、図７の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表５に示す。
【0039】
【表5】
【0040】
図７及び表５より、分析日を変更した場合であっても、得られる結果に影響を与えないことが分かった。
【0041】
実施例１９
実施例１の分析者とは別の分析者が実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例２０
実施例２の分析者とは別の分析者が実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例２１
実施例３の分析者とは別の分析者が実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図８に示す。
次に、図８の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表６に示す。
実施例１の分析者とは別の分析者が実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例２０
実施例２の分析者とは別の分析者が実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例２１
実施例３の分析者とは別の分析者が実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図８に示す。
次に、図８の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表６に示す。
【0042】
【表6】
【0043】
図８及び表６より、分析者を変更した場合であっても、得られる結果に影響を与えないことが分かった。
【0044】
表１～表６、図１～図８に示す通り、試験条件にバラつきが生じた際に、得られる結果に影響を与えないことが確認された。また、分析日、分析者が異なった際にも、同様の結果が得られることを確認した。本発明は、頑健性及び再現性に優れることが分かった。
【0045】
実施例２２
実施例１と同様の方法で、試料４（ホーリーバジルエキス試料溶液）の分析を行った。
実施例２３
実施例１と同様の方法で、試料５（ホーリーバジル試料溶液）の分析を行った。
実施例２４
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例２５
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例２６
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図９に示す。
比較例４
比較例１と同様の方法で、試料４（ホーリーバジルエキス試料溶液）の分析を行った。
比較例５
比較例１と同様の方法で、試料５（ホーリーバジル試料溶液）の分析を行った。
比較例６
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例７
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例８
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１０に示す。
次に、図９及び図１０の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表７に示す。
実施例１と同様の方法で、試料４（ホーリーバジルエキス試料溶液）の分析を行った。
実施例２３
実施例１と同様の方法で、試料５（ホーリーバジル試料溶液）の分析を行った。
実施例２４
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例２５
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例２６
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図９に示す。
比較例４
比較例１と同様の方法で、試料４（ホーリーバジルエキス試料溶液）の分析を行った。
比較例５
比較例１と同様の方法で、試料５（ホーリーバジル試料溶液）の分析を行った。
比較例６
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例７
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例８
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１０に示す。
次に、図９及び図１０の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表７に示す。
【0046】
【表7】
【0047】
【0048】
実施例２７
実施例２２の試験日とは別日に、試料４（ホーリーバジルエキス試料溶液）の分析を行った。
実施例２８
実施例２３の試験日とは別日に、試料５（ホーリーバジル試料溶液）の分析を行った。
実施例２９
実施例２４の試験日とは別日に、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例３０
実施例２５の試験日とは別日に、試料１の分析を行った。
実施例３１
実施例２６の試験日とは別日に、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１１に示す。
次に、図１１の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表８に示す。
実施例２２の試験日とは別日に、試料４（ホーリーバジルエキス試料溶液）の分析を行った。
実施例２８
実施例２３の試験日とは別日に、試料５（ホーリーバジル試料溶液）の分析を行った。
実施例２９
実施例２４の試験日とは別日に、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例３０
実施例２５の試験日とは別日に、試料１の分析を行った。
実施例３１
実施例２６の試験日とは別日に、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１１に示す。
次に、図１１の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表８に示す。
【0049】
【表8】
【0050】
図１１、表８より、分析日を変更し、再度試験を実施した場合であっても得られる結果影響を与えないことが分かった。
【0051】
実施例３２
実施例１と同様の方法で、試料６（ローズマリー試料溶液）の分析を行った。
実施例３３
実施例１と同様の方法で、試料７（シソ試料溶液）の分析を行った。
実施例３４
実施例１と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
実施例３５
実施例１と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
実施例３６
実施例１と同様の方法で、試料１０（バジル試料溶液）の分析を行った。
実施例３７
実施例１と同様の方法で、試料１１（セージ試料溶液）の分析を行った。
実施例３８
実施例１と同様の方法で、試料１２（レモンバーム試料溶液）の分析を行った。
実施例３９
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例４０
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例４１
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１２に示す。
実施例１と同様の方法で、試料６（ローズマリー試料溶液）の分析を行った。
実施例３３
実施例１と同様の方法で、試料７（シソ試料溶液）の分析を行った。
実施例３４
実施例１と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
実施例３５
実施例１と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
実施例３６
実施例１と同様の方法で、試料１０（バジル試料溶液）の分析を行った。
実施例３７
実施例１と同様の方法で、試料１１（セージ試料溶液）の分析を行った。
実施例３８
実施例１と同様の方法で、試料１２（レモンバーム試料溶液）の分析を行った。
実施例３９
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例４０
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例４１
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１２に示す。
【0052】
比較例９
比較例１と同様の方法で、試料６（ローズマリー試料溶液）の分析を行った。
比較例１０
比較例１と同様の方法で、試料７（シソ試料溶液）の分析を行った。
比較例１１
比較例１と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
比較例１２
比較例１と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
比較例１３
比較例１と同様の方法で、試料１０（バジル試料溶液）の分析を行った。
比較例１４
比較例１と同様の方法で、試料１１（セージ試料溶液）の分析を行った。
比較例１５
比較例１と同様の方法で、試料１２（レモンバーム試料溶液）の分析を行った。
比較例１７
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例１７
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例１８
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１３に示す。
次に、図１２及び図１３の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表９、表１０に示す。
比較例１と同様の方法で、試料６（ローズマリー試料溶液）の分析を行った。
比較例１０
比較例１と同様の方法で、試料７（シソ試料溶液）の分析を行った。
比較例１１
比較例１と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
比較例１２
比較例１と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
比較例１３
比較例１と同様の方法で、試料１０（バジル試料溶液）の分析を行った。
比較例１４
比較例１と同様の方法で、試料１１（セージ試料溶液）の分析を行った。
比較例１５
比較例１と同様の方法で、試料１２（レモンバーム試料溶液）の分析を行った。
比較例１７
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例１７
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例１８
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１３に示す。
次に、図１２及び図１３の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表９、表１０に示す。
【0053】
【表9】
【0054】
【表10】
【0055】
実施例４２
実施例１と同様の方法で、試料１３（ラベンダー試料溶液）の分析を行った。
実施例４３
実施例１と同様の方法で、試料１４（オレガノ試料溶液）の分析を行った。
実施例４４
実施例１と同様の方法で、試料１５（ペパーミント試料溶液）の分析を行った。
実施例４５
実施例１と同様の方法で、試料１６（スペアミント試料溶液）の分析を行った。
実施例４６
実施例１と同様の方法で、試料１７（タイム試料溶液）の分析を行った。
実施例４７
実施例１と同様の方法で、試料１８（ブルーベリー試料溶液）の分析を行った。
実施例４８
実施例１と同様の方法で、試料１９（ラズベリー試料溶液）の分析を行った。
実施例４９
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例５０
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例５１
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１４に示す。
実施例１と同様の方法で、試料１３（ラベンダー試料溶液）の分析を行った。
実施例４３
実施例１と同様の方法で、試料１４（オレガノ試料溶液）の分析を行った。
実施例４４
実施例１と同様の方法で、試料１５（ペパーミント試料溶液）の分析を行った。
実施例４５
実施例１と同様の方法で、試料１６（スペアミント試料溶液）の分析を行った。
実施例４６
実施例１と同様の方法で、試料１７（タイム試料溶液）の分析を行った。
実施例４７
実施例１と同様の方法で、試料１８（ブルーベリー試料溶液）の分析を行った。
実施例４８
実施例１と同様の方法で、試料１９（ラズベリー試料溶液）の分析を行った。
実施例４９
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例５０
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例５１
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１４に示す。
【0056】
比較例１９
比較例１と同様の方法で、試料１３（ラベンダー試料溶液）の分析を行った。
比較例２０
比較例１と同様の方法で、試料１４（オレガノ試料溶液）の分析を行った。
比較例２１
比較例１と同様の方法で、試料１５（ペパーミント試料溶液）の分析を行った。
比較例２２
比較例１と同様の方法で、試料１６（スペアミント試料溶液）の分析を行った。
比較例２３
比較例１と同様の方法で、試料１７（タイム試料溶液）の分析を行った。
比較例２４
比較例１と同様の方法で、試料１８（ブルーベリー試料溶液）の分析を行った。
比較例２５
比較例１と同様の方法で、試料１９（ラズベリー試料溶液）の分析を行った。
比較例２６
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例２７
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例２８
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１５に示す。
次に、図１４及び図１５の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１１、表１２に示す。
比較例１と同様の方法で、試料１３（ラベンダー試料溶液）の分析を行った。
比較例２０
比較例１と同様の方法で、試料１４（オレガノ試料溶液）の分析を行った。
比較例２１
比較例１と同様の方法で、試料１５（ペパーミント試料溶液）の分析を行った。
比較例２２
比較例１と同様の方法で、試料１６（スペアミント試料溶液）の分析を行った。
比較例２３
比較例１と同様の方法で、試料１７（タイム試料溶液）の分析を行った。
比較例２４
比較例１と同様の方法で、試料１８（ブルーベリー試料溶液）の分析を行った。
比較例２５
比較例１と同様の方法で、試料１９（ラズベリー試料溶液）の分析を行った。
比較例２６
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例２７
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例２８
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１５に示す。
次に、図１４及び図１５の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１１、表１２に示す。
【0057】
【表11】
【0058】
【表12】
【0059】
実施例５２
実施例１と同様の方法で、試料２０（ビルベリー試料溶液）の分析を行った。
実施例５３
実施例１と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
実施例５４
実施例１と同様の方法で、試料２２（サンザシ試料溶液）の分析を行った。
実施例５５
実施例１と同様の方法で、試料２３（セイヨウニワトコ試料溶液）の分析を行った。
実施例５６
実施例１と同様の方法で、試料２４（レモンバーベナ試料溶液）の分析を行った。
実施例５７
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例５８
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例５９
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
比較例２９
実施例１と同様の方法で、試料２５（コリアンダー試料溶液）の分析を行った。
比較例３０
実施例１と同様の方法で、試料２６（ジャーマンカモミール試料溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１６に示す。
実施例１と同様の方法で、試料２０（ビルベリー試料溶液）の分析を行った。
実施例５３
実施例１と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
実施例５４
実施例１と同様の方法で、試料２２（サンザシ試料溶液）の分析を行った。
実施例５５
実施例１と同様の方法で、試料２３（セイヨウニワトコ試料溶液）の分析を行った。
実施例５６
実施例１と同様の方法で、試料２４（レモンバーベナ試料溶液）の分析を行った。
実施例５７
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例５８
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例５９
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
比較例２９
実施例１と同様の方法で、試料２５（コリアンダー試料溶液）の分析を行った。
比較例３０
実施例１と同様の方法で、試料２６（ジャーマンカモミール試料溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１６に示す。
【0060】
比較例３１
比較例１と同様の方法で、試料２０（ビルベリー試料溶液）の分析を行った。
比較例３２
比較例１と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
比較例３３
比較例１と同様の方法で、試料２５（コリアンダー試料溶液）の分析を行った。
比較例３４
比較例１と同様の方法で、試料２２（サンザシ試料溶液）の分析を行った。
比較例３５
比較例１と同様の方法で、試料２６（ジャーマンカモミール試料溶液）の分析を行った。
比較例３６
比較例１と同様の方法で、試料２３（セイヨウニワトコ試料溶液）の分析を行った。
比較例３７
比較例１と同様の方法で、試料２４（レモンバーベナ試料溶液）の分析を行った。
比較例３８
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例３９
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例４０
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１７に示す。
次に、図１６及び図１７の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１３、表１４に示す。
比較例１と同様の方法で、試料２０（ビルベリー試料溶液）の分析を行った。
比較例３２
比較例１と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
比較例３３
比較例１と同様の方法で、試料２５（コリアンダー試料溶液）の分析を行った。
比較例３４
比較例１と同様の方法で、試料２２（サンザシ試料溶液）の分析を行った。
比較例３５
比較例１と同様の方法で、試料２６（ジャーマンカモミール試料溶液）の分析を行った。
比較例３６
比較例１と同様の方法で、試料２３（セイヨウニワトコ試料溶液）の分析を行った。
比較例３７
比較例１と同様の方法で、試料２４（レモンバーベナ試料溶液）の分析を行った。
比較例３８
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例３９
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例４０
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１７に示す。
次に、図１６及び図１７の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１３、表１４に示す。
【0061】
【表13】
【0062】
【表14】
【0063】
表７～１４、図９～図１７に示す通り、天然物試料中のウルソール酸とオレアノール酸の分離にも適用できることが分かった。また、コリアンダー試料溶液とジャーマンカモミール試料からはオレアノール酸及びウルソール酸のスポットは得られなかった。
【0064】
実施例６０
実施例１と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
実施例６１
実施例１と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
実施例６２
実施例１と同様の方法で、試料２９（トチュウ試料溶液）の分析を行った。
実施例６３
実施例１と同様の方法で、試料３０（ジャスミン試料溶液）の分析を行った。
実施例６４
実施例１と同様の方法で、試料３１（マジョラム試料溶液）の分析を行った。
実施例６５
実施例１と同様の方法で、試料３２（ウツボグサ試料溶液）の分析を行った。
実施例６６
実施例１と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
実施例６７
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例６８
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例６９
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１８に示す。
実施例１と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
実施例６１
実施例１と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
実施例６２
実施例１と同様の方法で、試料２９（トチュウ試料溶液）の分析を行った。
実施例６３
実施例１と同様の方法で、試料３０（ジャスミン試料溶液）の分析を行った。
実施例６４
実施例１と同様の方法で、試料３１（マジョラム試料溶液）の分析を行った。
実施例６５
実施例１と同様の方法で、試料３２（ウツボグサ試料溶液）の分析を行った。
実施例６６
実施例１と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
実施例６７
実施例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
実施例６８
実施例２と同様に試料１の分析を行った。
実施例６９
実施例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１８に示す。
【0065】
比較例４１
比較例１と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
比較例４２
比較例１と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
比較例４３
比較例１と同様の方法で、試料２９（トチュウ試料溶液）の分析を行った。
比較例４４
比較例１と同様の方法で、試料３０（ジャスミン試料溶液）の分析を行った。
比較例４５
比較例１と同様の方法で、試料３１（マジョラム試料溶液）の分析を行った。
比較例４６
比較例１と同様の方法で、試料３２（ウツボグサ試料溶液）の分析を行った。
比較例４７
比較例１と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
比較例４８
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例４９
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例５０
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１９に示す。
次に、図１８及び図１９の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１５、表１６に示す。
比較例１と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
比較例４２
比較例１と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
比較例４３
比較例１と同様の方法で、試料２９（トチュウ試料溶液）の分析を行った。
比較例４４
比較例１と同様の方法で、試料３０（ジャスミン試料溶液）の分析を行った。
比較例４５
比較例１と同様の方法で、試料３１（マジョラム試料溶液）の分析を行った。
比較例４６
比較例１と同様の方法で、試料３２（ウツボグサ試料溶液）の分析を行った。
比較例４７
比較例１と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
比較例４８
比較例１と同様に試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）の分析を行った。
比較例４９
比較例２と同様に試料１の分析を行った。
比較例５０
比較例３と同様に試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図１９に示す。
次に、図１８及び図１９の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１５、表１６に示す。
【0066】
【表15】
【0067】
【表16】
【0068】
実施例７０（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：酢酸エチル）に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例７１
実施例７０と同様の方法で、試料３４（マスリン酸溶液）の分析を行った。
実施例７２
実施例７０と同様の方法で、試料３５（コロソリン酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２０に示す。
比較例５１（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：酢酸エチル）に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例５２
比較例５１と同様の方法で、試料３４の分析を行った。
比較例５３
比較例５１と同様の方法で、試料３５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２１に示す。
次に、図２０及び図２１の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表１７に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：酢酸エチル）に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例７１
実施例７０と同様の方法で、試料３４（マスリン酸溶液）の分析を行った。
実施例７２
実施例７０と同様の方法で、試料３５（コロソリン酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２０に示す。
比較例５１（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：酢酸エチル）に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例５２
比較例５１と同様の方法で、試料３４の分析を行った。
比較例５３
比較例５１と同様の方法で、試料３５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２１に示す。
次に、図２０及び図２１の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表１７に示す。
【0069】
【表17】
【0070】
【0071】
実施例７３
実施例７０と同様の方法で、試料３７（オリーブエキス試料溶液）の分析を行った。
実施例７４
実施例７０と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
実施例７５
実施例７０と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
実施例７６
実施例７０と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
実施例７７
実施例７０と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
実施例７８
実施例７０と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
実施例７９
実施例７０と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
実施例８０
実施例７０と同様に試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）の分析を行った。
実施例８１
実施例７１と同様に試料３４の分析を行った。
実施例８２
実施例７２と同様に試料３５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２２に示す。
実施例７０と同様の方法で、試料３７（オリーブエキス試料溶液）の分析を行った。
実施例７４
実施例７０と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
実施例７５
実施例７０と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
実施例７６
実施例７０と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
実施例７７
実施例７０と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
実施例７８
実施例７０と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
実施例７９
実施例７０と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
実施例８０
実施例７０と同様に試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）の分析を行った。
実施例８１
実施例７１と同様に試料３４の分析を行った。
実施例８２
実施例７２と同様に試料３５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２２に示す。
【0072】
比較例５４
比較例５１と同様の方法で、試料３７（オリーブエキス試料溶液）の分析を行った。
比較例５５
比較例５１と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
比較例５６
比較例５１と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
比較例５７
比較例５１と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
比較例５８
比較例５１と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
比較例５９
比較例５１と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
比較例６０
比較例５１と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
比較例６１
比較例５１と同様に試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）の分析を行った。
比較例６２
比較例５２と同様に試料３４の分析を行った。
比較例６３
比較例５３と同様に試料３５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２３に示す。
次に、図２２及び図２３の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１８、表１９に示す。
比較例５１と同様の方法で、試料３７（オリーブエキス試料溶液）の分析を行った。
比較例５５
比較例５１と同様の方法で、試料２１（オリーブ試料溶液）の分析を行った。
比較例５６
比較例５１と同様の方法で、試料３３（バナバ試料溶液）の分析を行った。
比較例５７
比較例５１と同様の方法で、試料２７（ビワ試料溶液）の分析を行った。
比較例５８
比較例５１と同様の方法で、試料２８（クローブ試料溶液）の分析を行った。
比較例５９
比較例５１と同様の方法で、試料９（ネズミモチ試料溶液）の分析を行った。
比較例６０
比較例５１と同様の方法で、試料８（リンゴ試料溶液）の分析を行った。
比較例６１
比較例５１と同様に試料３６（マスリン酸／コロソリン酸混合溶液）の分析を行った。
比較例６２
比較例５２と同様に試料３４の分析を行った。
比較例６３
比較例５３と同様に試料３５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２３に示す。
次に、図２２及び図２３の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を以下表１８、表１９に示す。
【0073】
【表18】
【0074】
【表19】
【0075】
図２２、図２３、表１８、表１９より、天然物試料（オリーブ、バナバ、ビワ、クローブ、ネズミモチ、リンゴ）中のマスリン酸とコロソリン酸の分離にも適用できることが分かった。また、天然物試料の原生薬及びエキスに対しても適用できることが分かった。
【0076】
実施例８３（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料４０（β－アミリン／α－アミリン混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、２４時間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例８４
実施例８３と同様の方法で、試料３８（β－アミリン溶液）の分析を行った。
実施例８５
実施例８３と同様の方法で、試料３９（α－アミリン溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２４に示す。
比較例６４（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料４０（β－アミリン／α－アミリン混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例６５
比較例６４と同様の方法で、試料３８の分析を行った。
比較例６６
比較例６４と同様の方法で、試料３９の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２５に示す。
次に、図２４及び図２５の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２０に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料４０（β－アミリン／α－アミリン混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、２４時間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例８４
実施例８３と同様の方法で、試料３８（β－アミリン溶液）の分析を行った。
実施例８５
実施例８３と同様の方法で、試料３９（α－アミリン溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２４に示す。
比較例６４（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料４０（β－アミリン／α－アミリン混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例６５
比較例６４と同様の方法で、試料３８の分析を行った。
比較例６６
比較例６４と同様の方法で、試料３９の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２５に示す。
次に、図２４及び図２５の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２０に示す。
【0077】
【表20】
【0078】
【0079】
実施例８６（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料４３（オレアノン酸／ウルソン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例８７
実施例８６と同様の方法で、試料４１（オレアノン酸溶液）の分析を行った。
実施例８８
実施例８６と同様の方法で、試料４２（ウルソン酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２６に示す。
比較例６７（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料４３（オレアノン酸／ウルソン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例６８
比較例６７と同様の方法で、試料４１の分析を行った。
比較例６９
比較例６７と同様の方法で、試料４２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２７に示す。
次に、図２６及び図２７の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２１に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料４３（オレアノン酸／ウルソン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、１０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例８７
実施例８６と同様の方法で、試料４１（オレアノン酸溶液）の分析を行った。
実施例８８
実施例８６と同様の方法で、試料４２（ウルソン酸溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２６に示す。
比較例６７（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料４３（オレアノン酸／ウルソン酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例６８
比較例６７と同様の方法で、試料４１の分析を行った。
比較例６９
比較例６７と同様の方法で、試料４２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２７に示す。
次に、図２６及び図２７の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２１に示す。
【0080】
【表21】
【0081】
【0082】
実施例８９（昇華ヨウ素暴露あり）
マイクロシリンジを用いて、試料４６（エリスロジオール／ウバオール混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、３０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例９０
実施例８９と同様の方法で、試料４４（エリスロジオール溶液）の分析を行った。
実施例９１
実施例８９と同様の方法で、試料４５（ウバオール溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２８に示す。
比較例７０（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料４６（エリスロジオール／ウバオール混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例７１
比較例７０と同様の方法で、試料４４の分析を行った。
比較例７２
比較例７０と同様の方法で、試料４５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２９に示す。
次に、図２８及び図２９の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２２に示す。
マイクロシリンジを用いて、試料４６（エリスロジオール／ウバオール混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記２．で調製した昇華ヨウ素で飽和した展開槽に入れ、３０分間放置したのち、薄層板を取り出し、風乾した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
実施例９０
実施例８９と同様の方法で、試料４４（エリスロジオール溶液）の分析を行った。
実施例９１
実施例８９と同様の方法で、試料４５（ウバオール溶液）の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２８に示す。
比較例７０（昇華ヨウ素暴露なし）
マイクロシリンジを用いて、試料４６（エリスロジオール／ウバオール混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。この薄層板を、ガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例７１
比較例７０と同様の方法で、試料４４の分析を行った。
比較例７２
比較例７０と同様の方法で、試料４５の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図２９に示す。
次に、図２８及び図２９の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２２に示す。
【0083】
【表22】
【0084】
【0085】
＜非特許文献１の頑健性確認＞
比較例７３
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記３．で調製した１％ヨウ素クロロホルム溶液に入れ、展開操作を行った。１％ヨウ素クロロホルム溶液がスポット下端の位置まで上昇したとき薄層板を取り出し、スポット付近をガラス板で覆い、暗所で１０分間放置したのち、薄層板を風乾してヨウ素を除去した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例７４
比較例７３と同様の方法で、試料１の分析を行った。
比較例７５
比較例７３と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図３０に示す。
比較例７３
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記３．で調製した１％ヨウ素クロロホルム溶液に入れ、展開操作を行った。１％ヨウ素クロロホルム溶液がスポット下端の位置まで上昇したとき薄層板を取り出し、スポット付近をガラス板で覆い、暗所で１０分間放置したのち、薄層板を風乾してヨウ素を除去した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例７４
比較例７３と同様の方法で、試料１の分析を行った。
比較例７５
比較例７３と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図３０に示す。
【0086】
＜非特許文献１の頑健性確認２＞
比較例７６
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記３．で調製した１％ヨウ素クロロホルム溶液に入れ、展開操作を行った。１％ヨウ素クロロホルム溶液がスポット上端の位置まで上昇したとき薄層板を取り出し、スポット付近をガラス板で覆い、暗所で１０分間放置したのち、薄層板を風乾してヨウ素を除去した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例７７
比較例７６と同様の方法で、試料１の分析を行った。
比較例７８
比較例７６と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図３１に示す。
次に、図３０及び図３１の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２３に示す。
比較例７６
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記３．で調製した１％ヨウ素クロロホルム溶液に入れ、展開操作を行った。１％ヨウ素クロロホルム溶液がスポット上端の位置まで上昇したとき薄層板を取り出し、スポット付近をガラス板で覆い、暗所で１０分間放置したのち、薄層板を風乾してヨウ素を除去した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
比較例７７
比較例７６と同様の方法で、試料１の分析を行った。
比較例７８
比較例７６と同様の方法で、試料２の分析を行った。
このようにして得られた薄層板を図３１に示す。
次に、図３０及び図３１の薄層板を用いて、原線から溶媒先端までの展開距離、原線からスポット中心までの距離、Ｒｆ値を算出した。結果を表２３に示す。
【0087】
【表23】
【0088】
図３０より、標準溶液のスポット下端の位置まで１％ヨウ素クロロホルム溶液を展開した場合、誘導体化されたオレアノール酸のスポットは確認できたものの、誘導体化されていないオレアノール酸のスポットも同時に認められた。このことから、展開距離が短い場合、誘導体化処理が不十分となる可能性が示唆された。
また、図３１において、標準溶液のスポット上端の位置まで１％ヨウ素クロロホルム溶液を展開した場合、誘導体化されたウルソール酸及びオレアノール酸のスポットを確認できたものの、それらのＲｆ値が高値となった。このことから、展開距離が長い場合、誘導体化されたウルソール酸及びオレアノール酸が原線の位置から展開されてしまうことが分かった。
図３０、図３１及び表２３より、非特許文献１では試験条件にバラつきが生じた際に、誘導体生成量が低下すること、Ｒｆ値が期待値（真値）から外れた結果が得られることが分かった。非特許文献１の方法は、頑健性に問題があることが分かった。
一方、本願発明の方法は、非特許文献１と比べて頑健性に優れていた。
また、図３１において、標準溶液のスポット上端の位置まで１％ヨウ素クロロホルム溶液を展開した場合、誘導体化されたウルソール酸及びオレアノール酸のスポットを確認できたものの、それらのＲｆ値が高値となった。このことから、展開距離が長い場合、誘導体化されたウルソール酸及びオレアノール酸が原線の位置から展開されてしまうことが分かった。
図３０、図３１及び表２３より、非特許文献１では試験条件にバラつきが生じた際に、誘導体生成量が低下すること、Ｒｆ値が期待値（真値）から外れた結果が得られることが分かった。非特許文献１の方法は、頑健性に問題があることが分かった。
一方、本願発明の方法は、非特許文献１と比べて頑健性に優れていた。
【0089】
＜非特許文献１の再現性確認＞
比較例７９－１
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記３．で調製した１％ヨウ素クロロホルム溶液に入れ、展開操作を行った。１％ヨウ素クロロホルム溶液がスポット中心の位置まで上昇したとき薄層板を取り出し、スポット付近をガラス板で覆い、暗所で１０分間放置したのち、薄層板を風乾してヨウ素を除去した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
参考例１－１
比較例７９－１と同様の方法で、試料１の分析を行った。
参考例２－１
比較例７９－１と同様の方法で、試料２の分析を行った。
比較例７９－１、参考例１－１、参考例２－１の操作をさらに４回行った（比較例７９－２～比較例７９－５、参考例１－２～参考例１－５、参考例２－２～参考例２－５）。
比較例７９－１
マイクロシリンジを用いて、試料３（ウルソール酸／オレアノール酸混合溶液）１０μLを薄層板（製品名；TLC Silica gel ６０ plate）の下端から約2ｃｍの位置にスポットした。これを上記３．で調製した１％ヨウ素クロロホルム溶液に入れ、展開操作を行った。１％ヨウ素クロロホルム溶液がスポット中心の位置まで上昇したとき薄層板を取り出し、スポット付近をガラス板で覆い、暗所で１０分間放置したのち、薄層板を風乾してヨウ素を除去した。この薄層板を、別のガラス製の展開槽（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル混液（１：１））に入れ、展開操作を行った。展開溶媒がスポットの位置から約１０ｃｍ上昇したとき薄層板を取り出し、風乾した後、希硫酸を噴霧して呈色し、検出を行った。
参考例１－１
比較例７９－１と同様の方法で、試料１の分析を行った。
参考例２－１
比較例７９－１と同様の方法で、試料２の分析を行った。
比較例７９－１、参考例１－１、参考例２－１の操作をさらに４回行った（比較例７９－２～比較例７９－５、参考例１－２～参考例１－５、参考例２－２～参考例２－５）。
【0090】
【0091】
【表24】
【0092】
図３２～３６、及び表２４より、非特許文献１ではウルソール酸及びオレアノール酸のＲｆ値の幅がそれぞれ０．４０～０．４５、０．４９～０．５２であり、Ｒｆ値は高値になる傾向が確認された。また、非特許文献１の方法はＲｆ値のバラつきが大きく、再現性に問題があることが分かった。
一方、本願発明の方法は、非特許文献１と比べて再現性に優れていた（本願発明におけるウルソール酸及びオレアノール酸のＲｆ値の幅がそれぞれ０．３９～０．４１、０．４８～０．５０であった)。
一方、本願発明の方法は、非特許文献１と比べて再現性に優れていた（本願発明におけるウルソール酸及びオレアノール酸のＲｆ値の幅がそれぞれ０．３９～０．４１、０．４８～０．５０であった)。
【産業上の利用可能性】
【0093】
本発明の分析方法によれば、薄層クロマトグラフィーを利用し、試料中に含まれるウルソール酸及び／又はオレアノール酸を容易に分析することできる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
