特開 2024-85748 極少細胞の培養方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024085748

(43)【公開日】2024-06-27

(54)【発明の名称】極少細胞の培養方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/071 20100101AFI20240620BHJP

   C12N 5/20 20060101ALI20240620BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALI20240620BHJP

【ＦＩ】

C12N5/071

C12N5/20

C12N5/0781

【審査請求】未請求

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022200443

(22)【出願日】2022-12-15

(71)【出願人】

【識別番号】000010076

【氏名又は名称】ヤマハ発動機株式会社

(71)【出願人】

【識別番号】000238201

【氏名又は名称】扶桑薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100115381

【弁理士】

【氏名又は名称】小谷 昌崇

(74)【代理人】

【識別番号】100127797

【弁理士】

【氏名又は名称】平田 晴洋

(72)【発明者】

【氏名】原田 額郎

(72)【発明者】

【氏名】引地 裕一

(72)【発明者】

【氏名】辻岡 一也

(72)【発明者】

【氏名】田原 寛

【テーマコード（参考）】

4B065

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA92X

4B065AA94X

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

(57)【要約】

【課題】極少細胞を効率的に増殖させることが可能な培養方法を提供する。
【解決手段】極少細胞の培養方法は、上面に開口部５２Ｈを有する複数のマイクログリッド５２を備えた培養プレート５に、液面が開口部５２Ｈよりも上方に位置する量の液体培地ＬＡと、複数個の単一細胞Ｃとを投入することで、複数のマイクログリッド５２のうちの少なくとも一部のマイクログリッド５２に、単一細胞Ｃを保持させる工程と、液体培地ＬＡの液面が、マイクログリッド５２の開口部５２Ｈの高さ位置と略一致するまで、培養プレート５内の液体培地ＬＡを除去する工程と、液体培地ＬＡの蒸発防止用の封止液７を培養プレート５に注液して、開口部５２Ｈの上方を封止する工程と、を含む。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

上面に開口部を有する複数の収容部を備えた容器に、液面が前記開口部よりも上方に位置する量の培地と、複数個の単一細胞とを投入することで、前記複数の収容部のうちの少なくとも一部の収容部に、前記単一細胞を保持させる工程と、
前記培地の液面が、前記収容部の前記開口部の高さ位置と略一致するまで、前記容器内の前記培地を除去する工程と、
前記培地の蒸発防止用の封止液を前記容器に注液して、前記開口部の上方を封止する工程と、を含む、極少細胞の培養方法。

【請求項2】

請求項１に記載の極少細胞の培養方法において、
前記単一細胞が、抗体を産生可能な単一細胞である、極少細胞の培養方法。

【請求項3】

請求項１または２に記載の極少細胞の培養方法において、
前記単一細胞を保持させる工程は、
予め前記容器に、液面が前記開口部よりも上方に位置する量の培地を注液する工程と、
他の容器から培地と共にチップでピッキングした単一細胞を、前記容器に吐出させる工程とを含む、極少細胞の培養方法。

【請求項4】

請求項１または２に記載の極少細胞の培養方法において、
前記封止液が通気性を備える、極少細胞の培養方法。

【請求項5】

請求項１または２に記載の極少細胞の培養方法において、
前記封止液が胚培養オイルからなる、極少細胞の培養方法。

【請求項6】

請求項１に記載の極少細胞の培養方法において、
前記収容部は、開口面積が１．０×１０^－３～１．０×１０^－１ｍｍ^２、容積が２．０×１０^－５～１．０×１０^－２ｍｍ^３の範囲から選ばれるサイズを有する、極少細胞の培養方法。

【請求項7】

請求項６に記載の極少細胞の培養方法において、
前記容器は、当該容器の比較的大サイズの領域を区分する大区画部と、この大区画部の内側をさらに細区分する小区画部とを含み、
前記小区画部が前記収容部である、極少細胞の培養方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、培養面積に対して極めて少数の細胞を播種して培養する極少細胞の培養方法に関する。

【背景技術】

【0002】

細胞を培養する領域である培養面積に対して、ごく少数の単一細胞または単一起源細胞を播種して培養する極少培養環境での培養が必要となる場合がある。ウィルス感染細胞やがん細胞などの異物の抗原に特異的に結合して前記異物を除去する効能を有する抗体医薬品の開発に当たっては、抗体を産生可能な細胞の培養が不可欠である。抗体産生細胞の培養は、極少培養環境での培養となることが多い。細胞の培養方法としては、種々の先行技術が存在する。例えば特許文献１には、スフェロイドの培養技術ではあるが、アルギン酸のゲルを用いた培養方法が開示されている。

【0003】

培養した細胞の中から、抗体産生量の高い細胞を特定するスクリーニングが必要となる。特許文献２には、多数のウェル内で培養されている細胞に光を照射し、ウェルから発生する蛍光量に基づいて抗体産生量を評価するスクリーニング方法が開示されている。スクリーニングの次のステップとして、抗体産生量の高い細胞を培養して増殖させ、多量に抗体を産生させる作業が行われる。しかし、抗体産生量が多くても、増殖させることが難しい細胞が多々存在している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特表２０２１－５１１０７８号公報

【特許文献2】特許第６４６１５８０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明の目的は、抗体産生細胞のように極少培養環境での培養が必要な単一細胞を、効率的に増殖させることが可能な培養方法を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の一局面に係る極少細胞の培養方法は、上面に開口部を有する複数の収容部を備えた容器に、液面が前記開口部よりも上方に位置する量の培地と、複数個の単一細胞とを投入することで、前記複数の収容部のうちの少なくとも一部の収容部に、前記単一細胞を保持させる工程と、前記培地の液面が、前記収容部の前記開口部の高さ位置と略一致するまで、前記容器内の前記培地を除去する工程と、前記培地の蒸発防止用の封止液を前記容器に注液して、前記開口部の上方を封止する工程と、を含む。

【0007】

この態様によれば、収容部に細胞を保持させた後、培地を除去して封止液で開口部を封止することにより、収容部内の培地の蒸発を防ぎつつ、収容部単位で閉じられた培養環境を構築できる。狭小な培養領域で単一細胞を培養することで、増殖が促進されることが確認されている。従って、単一細胞を上記の通り培養することで、極少培養環境であっても、増殖の効率化を図ることができる。

【0008】

上記の培養方法において、前記単一細胞が、抗体を産生可能な単一細胞であることは、望ましい態様である。

【0009】

上記の培養方法において、前記単一細胞を保持させる工程は、予め前記容器に、液面が前記開口部よりも上方に位置する量の培地を注液する工程と、他の容器から培地と共にチップでピッキングした単一細胞を、前記容器に吐出させる工程とを含んで良い。

【0010】

この態様によれば、他の容器において高抗体産生能を有する単一細胞を選別してピッキングし、これを容器の収容部に保持させて培養・増殖させることができる。すなわち、抗体産生能の優れた細胞株を、より増殖し易い環境で培養させることができる。

【0011】

上記の培養方法において、前記封止液が通気性を備えることが望ましい。この場合、前記封止液が胚培養オイルであることがより望ましい。

【0012】

この態様によれば、封止液で収容部の開口部を封止しても、当該収容部内の培地を大気と連通させることができるので、収容部内の培養環境を健全に維持できる。

【0013】

上記の培養方法において、前記収容部は、開口面積が１．０×１０^－３～１．０×１０^－１ｍｍ^２、容積が２．０×１０^－５～１．０×１０^－２ｍｍ^３の範囲から選ばれるサイズを有することが望ましい。

【0014】

この態様によれば、単一細胞の培養領域を十分に微小化でき、限られたプレート面積で多量の単一細胞の独立的な培養が可能となる。従って、単一細胞の培養・増殖の効率化を図ることができる。

【0015】

上記の培養方法において、前記容器は、当該容器の比較的大サイズの領域を区分する大区画部と、この大区画部の内側をさらに細区分する小区画部とを含み、前記小区画部が前記収容部であることが望ましい。

【0016】

この態様によれば、大区画部の単位で細胞種や培養液を変更する等の活用が可能となり、培養の多様化を図ることが可能となる。

【発明の効果】

【0017】

本発明によれば、抗体産生細胞のように極少培養環境での培養が必要な単一細胞を、効率的に増殖させることが可能な培養方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】図１は、本発明の実施形態に係る高抗体産生細胞の培養方法の工程フローを示す図である。

【図2】図２（Ａ）は、培養プレートの構造を示す拡大図付きの平面図、図２（Ｂ）は、図２（Ａ）のＩＩＢ－ＩＩＢ線断面図である。

【図3】図３は、吸引チップから培養プレートへ単一細胞を播種し、マイクログリッドに当該単一細胞を保持させる工程を示す模式的な断面図である。

【図4】図４は、培地吸引により極少培養環境を確立する工程を示す模式的な断面図である。

【図5】図５は、マイクログリッドの開口部を封止液で封止した状況を示す模式的な断面図である。

【図6】図６は、培養プレートでの培養期間における単一細胞の増殖状況を示す画像である。

【図7】図７は、比較例の培養方法を用いた単一細胞の増殖状況の画像である。

【図8】図８は、比較例の培養方法を用いた単一細胞の増殖状況の画像である。

【発明を実施するための形態】

【0019】

以下、本発明に係る極少細胞の培養方法の実施形態を、図面に基づいて詳細に説明する。本発明の培養方法は、細胞の培養面積に対して、ごく少数の単一細胞を播種する極少培養環境での培養を対象とする。なお、本明細書でいう「単一細胞」は、単一細胞が増殖した細胞である単一起源細胞も包含する。一般に、単一細胞は、極少培養環境での培養が困難な傾向があり、本発明はそのような環境において単一細胞を効率的に培養することを可能とする。単一細胞としては、組換えタンパク質産生能を有する単一細胞、例えばＣＨＯ細胞やＢ細胞のような、抗体医薬品製造での使用や抗体産生が期待される単一細胞（Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｅｌｌ）を例示される。以下では、抗体産生細胞を極少培養環境で培養する例を示す。

【0020】

［培養工程の全体フロー］
先ず、本実施形態に係る抗体産生細胞の培養方法の全体フローを、図１に示す工程フローを参照して説明する。本実施形態の培養方法は、順次実施される工程Ｓ１～工程Ｓ５を含む。最初に、所定の手法を用いて抗体を産生可能な単一細胞を大量に作成する（工程Ｓ１）。次に、作成した単一細胞を、液体培地と共に多数の細胞収容部を備えた培養プレート５（図２）へ播種する（工程Ｓ２）。

【0021】

続いて、培養プレート５から液体培地を吸引して、単一細胞を個々の細胞収容部内で培養する極小培養環境を確立する（工程Ｓ３／図４）。さらに、培養プレート５の上面を、培地の蒸発防止用の封止液で封止する（工程Ｓ４／図５）。しかる後、前記細胞収容部内で単一細胞を所定日数培養する（工程Ｓ５／図６）。以下、上記の工程Ｓ１～Ｓ５の各々について詳述する。

【0022】

［工程Ｓ１；抗体産生単一細胞の作成］
工程Ｓ１では、例えば培養対象の単一細胞に所定の遺伝子を導入することで、当該単一細胞に抗体産生能を付与する。単一細胞としては免疫細胞のＢ細胞を例示でき、産生する抗体としては単一種類のＢ細胞が作るモノクロナール抗体を例示できる。遺伝子の導入は、例えばカチオン性脂質等のキャリア分子を用いた化学的手法、エレクトロポレーション等の物理的手法、あるいはウィルスベクター等の生物学的手法により行うことができる。

【0023】

上記の遺伝子導入した単一細胞をそのまま次の工程Ｓ２での播種対象としても良いが、前記単一細胞の中から抗体産生能力の高い細胞株を選定して播種対象としても良い。この場合、工程Ｓ１で作成された単一細胞をマイクロプレート等で所定期間培養し、抗体産生期間を与える。その後、前記単一細胞が産生する抗体と結合する検出用抗体を含有する液体培地を前記マイクロプレートに添加し、抗体産生能力の高い単一細胞を特定する。高抗体産生細胞株として特定された単一細胞を、マイクロピペット等でピッキングして細胞懸濁液を作り、工程Ｓ２の播種を行う。

【0024】

［工程Ｓ２；培養プレートへの細胞播種］
工程Ｓ２では、工程Ｓ１で作成した単一細胞を、培養を行うために培養プレートへ播種する。図２（Ａ）は、培養プレート５の構造を示す拡大図付きの平面図、図２（Ｂ）は、図２（Ａ）のＩＩＢ－ＩＩＢ線断面図である。培養プレート５は、平板状の基材の片面にマトリクス配列された凹部からなるグリッド５１と、個々のグリッド５１内にマトリクス配列された微小サイズの凹部からなるマイクログリッド５２とを含む。

【0025】

グリッド５１は、培養プレート５の比較的大サイズの領域を区分する大区画部である。図２では、縦横のグリッド板で区画された上面視で矩形のグリッド５１を例示している。これに代えて、上面視で円形のウェル型のグリッド５１をハニカム状またはマトリクス状に配列した構造としても良い。マイクログリッド５２は、個々のグリッド５１の内側をさらに細区分する小区画部である。マイクログリッド５２は、グリッド５１の底板上に形成され、グリッド５１を区画するグリッド板よりも低い側板で区画された、上面視で矩形の凹部である。このマイクログリッド５２も、上面視で円形のウェル型としても良い。

【0026】

マイクログリッド５２は、上面に開口部を有し、単一細胞を保持する収容部となる。マイクログリッド５２のサイズの一例を挙げると、一辺が２００μｍ、深さが１００μｍである。培養プレート５は、このような微小サイズに区画された多数の収容部を備えたプレートである。マイクログリッド５２は、微小な培養空間を形成できるサイズに設定することが望ましく、例えば開口面積が４．０×１０^－２～１．０×１０^－１ｍｍ^２、容積が４．０×１０^－３～１．０×１０^－２ｍｍ^３の範囲から選ばれるサイズ、より望ましくは開口面積が１．０×１０^－３～１．０×１０^－１ｍｍ^２、容積が２．０×１０^－５～１．０×１０^－２ｍｍ^３の範囲から選ばれるサイズに設定することができる。

【0027】

図３は、培養プレート５へ単一細胞Ｃを播種する状況を示す模式的な断面図である。図３では、図２に示した培養プレート５の一つのグリッド５１の断面図が示されている。グリッド５１は、底面を形成するグリッド底板５１１と、側面を形成するグリッド側板５１２とを有している。各マイクログリッド５２は、共通のグリッド底板５１１と、個々の側面を形成する側板５２１とで区画されている。

【0028】

播種に際しては、工程Ｓ１で作成された、抗体を産生可能な単一細胞Ｃを液体培地ＬＡに含有させた細胞懸濁液２Ｌが準備される。細胞懸濁液２Ｌは分注容器２１に収容され、培養プレート５の各グリッド５１に対して注液される。この注液により、グリッド５１内の多数のマイクログリッド５２のうち、少なくとも一部のマイクログリッド５２には、液体培地ＬＡと一個または複数個の単一細胞Ｃとが保持される。細胞懸濁液２Ｌによる単一細胞Ｃの希釈度合いは、極少培養環境であるので、例えば２０～２５個のマイクログリッド５２に対して１個の単一細胞Ｃが割り当てられる程度に設定することができる。

【0029】

単一細胞Ｃの播種に先立ち、培養プレート５には所定量の液体培地ＬＡが投入される。液体培地ＬＡの投入量は、図３に示すように、マイクログリッド５２を区画する側板５２１の頂部５２２よりも上方に液面が達する量である。換言すると、マイクログリッド５２の上面開口部よりも上方に液面が位置する量の液体培地ＬＡが、予め培養プレート５のグリッド５１に注液される。なお、各マイクログリッド５２の頂部５２２は同じ高さ位置にある。液体培地ＬＡとしては、水性媒体に無機塩、ブドウ糖、アミノ酸等の成長因子と、抗生物質、成長促進因子などの添加成分とを含む通常の培養液を用いて良い。例えば、ＣＨ１５０培地（ジーメップ株式会社商品名）を、液体培地ＬＡとして好適に用いることができる。

【0030】

その後、分注容器２１から細胞懸濁液２Ｌ中の単一細胞Ｃが、培養プレート５へ播種される。この播種により、一つのグリッド５１が備える複数のマイクログリッド５２のうち、少なくとも一部のマイクログリッド５２に１個または複数個の単一細胞Ｃが保持される。

【0031】

［工程Ｓ３；培地吸引による極小培養環境の確立］
工程Ｓ３は、培養プレート５の液体培地ＬＡを吸引して、マイクログリッド５２単位で独立した単一細胞Ｃの培養環境を確立する工程である。ここで確立される培養環境は、培養エリアが極めて小さい培養環境である。図４は、工程Ｓ３の動作を示す模式的な断面図である。図４では、吸液チップ２４により、グリッド５１内の液体培地ＬＡが吸引されている様子が示されている。

【0032】

吸液チップ２４による前記吸引は、図３の状態から、グリッド５１の液体培地ＬＡの液面が、マイクログリッド５２の側板５２１の頂部５２２が露出した状態となるまで行われる。すなわち、液体培地ＬＡの液面が、マイクログリッド５２の開口部５２Ｈの高さ位置と略一致するまで、グリッド５１の液体培地ＬＡが除去される。このような吸引により、一つのマイクログリッド５２内の液体培地ＬＡと他のマイクログリッド５２内の液体培地ＬＡとが混ざり合うことが無くなる。つまり、個々のマイクログリッド５２内の液体培地ＬＡからなる、単一細胞Ｃの極小培養環境が形成される。一つのマイクログリッド５２内の液体培地ＬＡの量は、例えば４ナノリットルである。

【0033】

広大な培養環境に１個～１０個程度の少数の単一細胞Ｃを投入する極少培養環境では、当該単一細胞Ｃは増殖し難い。例えば、図４において側板５２１を取り除いてマイクログリッド５２の区画を無くしたグリッド５１に液体培地ＬＡを注液し、単一細胞Ｃを投入して所定の培養期間を与えても、当該単一細胞Ｃは増殖し難い。一方、液体培地ＬＡが４ナノリットル程度の極小培養環境に１個～１０個程度の単一細胞Ｃを投入して培養すると、細胞同士が隣接し易いことも相俟って、当該単一細胞Ｃの増殖が促進される傾向が出る。工程Ｓ２の細胞播種では、液体培地ＬＡの液面が開口部５２Ｈよりも上位にある方が、１回の吐出動作でマイクログリッド５２に単一細胞Ｃを保持させ得るので好都合である。その後の工程Ｓ３で培地吸引を行うことにより、マイクログリッド５２単位で隔離された、少数の単一細胞Ｃの培養・増殖に適した極小培養環境を確立することができる。

【0034】

［工程Ｓ４；マイクログリッドの封止］
工程Ｓ４は、封止液７を培養プレート５に注液して、マイクログリッド５２の開口部５２Ｈの上方を封止する工程である。図５は、マイクログリッド５２の開口部５２Ｈが、封止液７で封止された状況を示す模式的な断面図である。封止液７の下面は、マイクログリッド５２の側板５２１の頂部５２２に接し、開口部５２Ｈを塞いでいる。すなわち、封止液７によって、液体培地ＬＡおよび単一細胞Ｃが一つのマイクログリッド５２内に閉じ込められた状態となっている。封止液７としては、例えば軽質流動パラフィン等からなる胚培養オイルを用いることができる。

【0035】

封止液７として求められる機能は、マイクログリッド５２内の液体培地ＬＡの蒸発防止機能である。液体培地ＬＡは水分を含むので、封止液７が存在しない場合は前記水分が蒸発してしまう。このため、工程Ｓ５の培養の期間中に、マイクログリッド５２内の液体培地ＬＡの量が減少ないしは枯渇する、浸透圧やｐＨなどの培地状態が変化するなどの不具合が生じる。蒸発防止機能を有する封止液７によって開口部５２Ｈを封止することにより、培養期間中における液体培地ＬＡの蒸発を抑制できる。

【0036】

封止液７の他の望ましい機能は、通気性である。通気性を有する封止液７であれば、マイクログリッド５２の開口部５２Ｈを封止しても、当該マイクログリッド５２内の液体培地ＬＡを大気と連通させることができる。従って、マイクログリッド５２内の単一細胞Ｃの培養環境を健全に維持できる。上掲の胚培養オイルは、前記蒸発防止の機能と前記通気性との双方を備えているので、封止液７として好適である。胚培養オイル以外に、少なくとも蒸発防止機能を有する他の液体、半液体（ゲル）を封止液７として用いても良い。言うまでもないが、液体培地ＬＡよりも比重が軽いことは必要である。

【0037】

封止液７の層が形成されることで、工程Ｓ３で確立した極小培養環境を培養期間中において維持できるようになる。すなわち、マイクログリッド５２内の液体培地ＬＡの蒸発が防止されるだけでなく、外気に含まれる異物、例えば微小な塵埃やカビの胞子、細菌などがマイクログリッド５２内へ侵入することを抑止できる。また、マイクログリッド５２内で培養されている単一細胞Ｃが発する活性物質の拡散を防止し、単一細胞Ｃの増殖を促進できる利点もある。

【0038】

［工程Ｓ５；細胞培養］
工程Ｓ５は、図５の通り封止液７でマイクログリッド５２の開口部５２Ｈを封止した状態で、所定の培養期間だけ単一細胞Ｃの培養を行う工程である。つまり、工程Ｓ１で作成された単一細胞Ｃを所定期間だけ培養して増殖させることで、抗体を産生させる工程である。この培養の期間中、成長因子を含む液体培地がグリッド５１に補填される。

【0039】

図６は、培養プレート５での培養期間中における、単一細胞Ｃの増殖状況を示す画像である。図中の「Ｄａｙ１」は、第２次培養の開始から１日目の状態を意味する。図６では、一つのグリッド５１が備えるマイクログリッド５２の一部の、培養の開始から１日目、４日目、５日目、６日目、８日目、１１日目および１８日目の画像が示されている。複数のマイクログリッド５２のうち、注目グリッドＧＡにおける単一細胞Ｃの変異状況を見ると、日を追う毎に増殖していることが判る。なお、１１日目～１８日目の間で急激に注目グリッドＧＡの周囲の単一細胞Ｃも増殖しているのは、単純に培養日数が長いことに加え、前記液体培地の補填の際に注目グリッドＧＡから増殖した単一細胞Ｃが隣接するグリッドに入り込んだことも要因である。

【0040】

図７および図８は、比較例の培養方法を用いた単一細胞の増殖状況の画像である。図７は、工程Ｓ３の培地吸引（図４）を行わず、且つ、工程Ｓ４の胚培養オイルによる封止（図５）を行わない状態、つまり工程Ｓ２の細胞播種（図３）の後、直ちに培養を行うようにした、比較例１の画像である。図７では、培養の開始から１日目、６日目および１１日目の画像が示されている。複数のマイクログリッド５２のうちの注目グリッドＧＡ１における単一細胞Ｃの増殖状況を見ると、１日目～１１日目の間で有意な増殖は生じていないことが判る。

【0041】

図８は、工程Ｓ３の培地吸引（図４）を行わずに、工程Ｓ４の胚培養オイルによる封止を行った状態、つまり工程Ｓ２の細胞播種（図３）の後、液体培地ＬＡの液面が頂部５２２よりも高い位置にある状態で封止液７を注液し、培養を行った比較例２の画像である。図８でも、培養の開始から１日目、６日目および１１日目の画像が示されている。複数のマイクログリッド５２のうちの注目グリッドＧＡ２における単一細胞Ｃの増殖状況を見ると、１日目～１１日目の間で有意な増殖は生じていないことが判る。

【0042】

［作用効果］
以上説明した本発明に係る抗体産生細胞の培養方法によれば、次のような作用効果を奏する。すなわち、培養プレート５のマイクログリッド５２に単一細胞Ｃを保持させた後、液体培地ＬＡを除去して封止液７で開口部５２Ｈを封止する。これにより、マイクログリッド５２内の液体培地ＬＡの蒸発を防ぎつつ、マイクログリッド５２単位で閉じられた極小培養環境を構築できる。狭小な培養領域で単一細胞Ｃを培養することで、当該単一細胞Ｃの増殖が促進される。従って、抗体産生能を有する単一細胞Ｃを上記の通り培養することで、単一細胞Ｃの増殖の効率化を図ることができ、ひいては抗体を多量に産生させることができる。

【符号の説明】

【0043】

Ｃ 単一細胞
ＬＡ 液体培地（培地）
２３ 吸引チップ
５ 培養プレート（容器）
５１ グリッド（大区画部）
５２ マイクログリッド（収容部／小区画部）
５２Ｈ 開口部
７ 封止液

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】