特開 2024-88689 抗ＰＨＦ－タウ抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024088689

(43)【公開日】2024-07-02

(54)【発明の名称】抗ＰＨＦ－タウ抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20240625BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240625BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240625BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240625BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240625BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20240625BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240625BHJP

   G01N 33/531 20060101ALI20240625BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61P25/28

A61P25/16

A61P25/00

A61P21/00

A61P21/04

G01N33/53 D

G01N33/531 A

【審査請求】有

【請求項の数】11

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024055230

(22)【出願日】2024-03-29

(62)【分割の表示】P 2022164041の分割

【原出願日】2018-03-16

(31)【優先権主張番号】62/472,214

(32)【優先日】2017-03-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】509087759

【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(72)【発明者】

【氏名】マーケン，マーク

(72)【発明者】

【氏名】マリア，トーマス

(72)【発明者】

【氏名】ボージャーズ，マリアンヌ

(72)【発明者】

【氏名】ヴァン コレン，クリストフ

(57)【要約】      （修正有）

【課題】タウ凝集及びタウ異常症の進行を予防して、ＡＤ及び他の神経変性病などのタウ異常症を治療するのに効果的な治療薬を提供する。
【解決手段】リン酸化エピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する、特定の配列を有する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が提供される。前記抗体をコードする核酸、抗体を含む組成物、並びに抗体の製造方法、及びタウ異常症などの状態を治療又は予防するための、抗体の使用方法についてもまた、提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

リン酸化エピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する、単離モノクローナル
抗体又はその抗原結合断片であって、
（ａ）前記タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２及びリン酸化Ｔ２１７、並びに配列番号
：４８のアミノ酸配列を有する、又はその中にある前記リン酸化エピトープ；
（ｂ）前記タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１７、及び配列番号：５２のアミノ酸配列を
有する、又はその中にある前記リン酸化エピトープ；又は
（ｃ）前記タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２、及び配列番号：５４のアミノ酸配列を
有する、又はその中にある前記リン酸化エピトープ；
を含む、前記単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

前記モノクローナル抗体が、配列番号：１、４、７、１０、７１、８０のいずれかのＨ
ＣＤＲ１；配列番号：２、５、８、１１、７２、８１のいずれかのＨＣＤＲ２；配列番号
：３、６、９、１２、７３のいずれかのＨＣＤＲ３；配列番号：１３、１６、１９、２２
、７０のいずれかのＬＣＤＲ１；配列番号：１４、１７、２０、２３のいずれかのＬＣＤ
Ｒ２；配列番号：１５、１８、２１、２４のいずれかのＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記
載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

（ａ）それぞれ配列番号：７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン
重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、そ
れぞれ配列番号：１９、２０、及び２１のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖
相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号：１、２、及び３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１３、１４、及び１５のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号：４、５、及び６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１６、１７、及び１８のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号：１０、１１、及び１２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：２２、２３、及び２４の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号：８０、８１、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１
、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポ
リペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号：７１、７２、７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポリ
ペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号：７１、７２、及び７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣＤ
Ｒ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
（ｋ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
を含み、前記抗体又が、その抗原結合断片はＰＨＦ－タウに結合している、請求項２に記
載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項4】

配列番号：２６、２７、２８、及び２９のいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を
有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、並びに、配列番号：３１、３２、３３、
及び３４のいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する
軽鎖可変領域を含む、請求項３に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項5】

配列番号：２６、２７、２８、及び２９のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖可
変領域、並びに、配列番号：３１、３２、３３、及び３４のいずれかのポリペプチド配列
を有する軽鎖可変領域を含む、請求項４に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断
片。

【請求項6】

配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖に
由来するＶ_Ｈと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領
域、並びに、配列番号：３１、７５、７７、７９のいずれかの軽鎖に由来するＶＬと少な
くとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項３
に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項7】

配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖に
由来するＶ_Ｈのポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、並びに、配列番号：３１、７５
、７７、７９のいずれかの軽鎖に由来するＶＬのポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項６に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項8】

（ａ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３１のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（ｂ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３４のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（ｃ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３４のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（ｄ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３１のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（ｅ）配列番号：２７のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３１のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（ｆ）配列番号：７４の重鎖に由来するＶ_Ｈ、及び配列番号：７５の軽鎖に由来するＶ
_Ｌ；
（ｇ）配列番号：７６の重鎖に由来するＶ_Ｈ、及び配列番号：７７の軽鎖に由来するＶ
_Ｌ；又は
（ｈ）配列番号：７８の重鎖に由来するＶ_Ｈ、及び配列番号：７９の軽鎖に由来するＶ
_Ｌ；
を含む、請求項３に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項9】

配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかと少なくとも９５％の同一性を有す
るポリペプチド配列を有する重鎖、並びに、配列番号：４６、７５、７７、及び７９のい
ずれかと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、請求
項８に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項10】

配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖、
並びに、配列番号：４６、７５、７７、及び７９のいずれかのポリペプチド配列を有する
軽鎖を含む、請求項９に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項11】

（ａ）配列番号：４５の重鎖、及び配列番号：４６の軽鎖；
（ｂ）配列番号：７４の重鎖、及び配列番号：７５の軽鎖；
（ｃ）配列番号：７６の重鎖、及び配列番号：７７の軽鎖；又は
（ｄ）配列番号：７８の重鎖、及び配列番号：７９の軽鎖；
を含む、請求項１０に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項12】

ヒト重鎖ＩｇＧ１定常領域及びヒト軽鎖κ定常領域を含む、請求項１～１１のいずれか
一項に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片をコード
する、単離核酸。

【請求項14】

請求項１３に記載の単離核酸を含む、ベクター。

【請求項15】

請求項１４に記載の核酸を含む、宿主細胞。

【請求項16】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片、及
び医薬上許容できる担体を含む、医薬組成物。

【請求項17】

病理学的タウ凝集の低減、又はタウ異常症の拡大の低減を必要とする対象における、病
理学的タウ凝集の低減、又はタウ異常症の拡大の低減方法であって、前記対象に、請求項
１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項18】

タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症の治療方法であって、前記対
象に、請求項１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項19】

前記タウ異常症は、家族性アルツハイマー病、散発的アルツハイマー病、染色体１７（
ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症、進行性核上性
麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症
、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキ
ンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病
、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統
萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性
硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維濃縮による非ガマニアン（Guamania
n）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知
症（ボクサー病）からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記抗体又は抗原結合断片を製造する条件下において、前記抗体又は抗原結合断片をコ
ードする核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞又は細胞培養液から前記抗体又は抗
原結合断片を回収することとを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のモノクロー
ナル抗体又は抗原結合断片の製造方法。

【請求項21】

対象の生体サンプルにおけるＰＨＦ－タウの存在の検出方法であって、前記生体サンプ
ルを、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と接触させることと
、前記対象の前記サンプルにおいて、前記抗体又は抗原結合断片のＰＨＦ－タウへの結合
を検出することとを含む、前記方法。

【請求項22】

前記生体サンプルが、血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液サンプルである、請
求項２１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗ＰＨＦ－タウ抗体、抗体をコードする核酸及び発現ベクター、ベクターを
含有する組み換え細胞、並びに抗体を含む組成物に関する。抗体の作製方法、タウ異常症
を含む状態を治療するための抗体の使用方法、及び、タウ異常症などの疾病を診断するた
めの、抗体の使用方法もまた提供する。

【背景技術】

【0002】

アルツハイマー病（ＡＤ）は、徐々に激しい精神機能低下を導き、最終的には死に至ら
しめる、記憶、認知、論理的思考、判断力、及び情動安定性の進行性喪失を臨床的特徴と
する、退行性脳障害である。ＡＤは、高齢者の進行性精神機能不全（認知症）の非常に一
般的な原因であり、米国では４番目に多い医学的死亡原因を表すと考えられている。ＡＤ
は、世界中の民族で観察され、現在及び未来の、主たる公衆の健康上の問題を提示する。

【0003】

ＡＤ個体の脳は、老人性（又はアミロイド）斑、アミロイド血管症（血管におけるアミ
ロイド沈着）及び神経原線維変化と呼ばれる特徴的な病変を呈する。これら病変の大多数
、特にアミロイド斑及び対らせん状細線維の神経原線維変化は、一般にＡＤ患者の記憶及
び認知機能に重要なヒトの脳のいくつかの領域で見られる。

【0004】

現在のＡＤ治療の状況には、認知症を患う患者における認知症状を治療するために認可
された治療法のみが含まれる。ＡＤの進行を改変又は遅延させる、認可済みの治療法は存
在しない。潜在的な疾病改変剤としては、軽度のＡＤを患う患者用の、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌ
ｙヒト化抗－Ａ_βモノクローナルソラネズマブ、及び、軽度～中度のＡＤを患う患者用の
、Ｍｅｒｃｋ小分子ＢＡＣＥ阻害剤であるベルべセスタットが挙げられる。これらの治療
法、及び次の十年で発売され得る、大部分の他の潜在的な疾患改変剤は、Ａ_β（ＡＤの「
特徴」的な２つの病理学的兆候のうちの１つである、アミロイドプラークの本質的構成成
分）を標的にする。

【0005】

ＡＤの第２の特徴的な病理学的兆候である神経原線維濃縮体は主に、過剰リン酸化タウ
タンパク質のアグリゲートで構成される。タウの主な生理学的機能は、微小管の重合及び
安定化である。タウの微小管への結合は、タウの微小管結合領域における正電荷と、微小
管格子における負電荷とのイオン性相互作用により発生する（Ｂｕｔｎｅｒ ａｎｄ Ｋ
ｉｒｓｃｈｎｅｒ，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１５（３）：７１７－３０，１９９１）
。タウタンパク質は、８５個の可能なリン酸化反応部位を含有し、これらの部位の多くに
おけるリン酸化反応が、タウの一次機能を妨げる。軸索の微小管格子に結合したタウは、
擬リン酸化状態にあるが、ＡＤ内で凝集したタウは過剰リン酸化状態にあり、タウの生理
学的に活性なプールとは異なる独自のエピトープをもたらす。

【0006】

タウ異常症の伝播及び拡大仮説が説明されており、これは、ヒトの脳におけるタウ異常
症進行のＢｒａａｋ段階、及びタウ凝集の、前臨床タウモデルへの注射後のタウ異常症の
拡大に基づいている（Ｆｒｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８４：１
２８４５－５２，２００９；Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．１１：９０９－１３，２００９）。

【0007】

タウの凝集を予防又は一掃するための治療薬の開発は長年関心が持たれており、抗凝集
化合物及びキナーゼ阻害剤を含む候補薬剤が、臨床試験に導入されてきた（Ｂｒｕｎｄｅ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．８：７８３－９３，２０
０９）。トランスジェニックマウスにおける、能動タウ免疫付与及び受動タウ免疫付与の
両方の、有益な治療効果を示す、複数の研究が刊行されている（Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８６：３４４５７－６７，２０１１；Ｂｏｕｔａｊａｎｇ
ｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１１８：６５８－６７，２０１１；Ｂ
ｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３０：１６５５９－６
６，２０１０；Ａｓｕｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７：９１１５－２
９，２００７）。ホスホ特異的及び非ホスホ特異的抗体の両方において、活性が報告され
ている（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．１１（１）：９－２５，２０１６）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

当該技術分野における進展にもかかわらず、タウ凝集及びタウ異常症の進行を予防して
、ＡＤ及び他の神経変性病などのタウ異常症を治療するのに効果的な治療薬が依然として
必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明は、対らせん状細線維（ＰＨＦ）－タウに対して高い結合親和性を有し、リン酸
化タウに対して選択的である抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片を提供することに
よりこの必要性を満たす。マウスＰＨＦ－タウ特異的抗体の、ヒトフレームワークへの適
応（ＨＦＡ）により、本発明の抗体は生成された。リン酸化タウに対する抗体の選択性に
より、通常のタウ機能を妨げずに病原性タウに対する効能が可能となると考えられる。本
発明は、抗体をコードする核酸、抗体を含む組成物、並びに抗体の製造方法及び抗体の使
用方法もまた提供する。本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体、又はその抗原結合断片は、ＨＥＫ
細胞可溶化物に由来する、又は変異体タウトランスジェニックマウスの脊髄溶解物に由来
するタウシードを使用する細胞アッセイにより測定されるように、タウシードを阻害する
。更に、本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体の可変領域及びマウスＩｇ定常領域（例えばマウス
ＩｇＧ２ａ定常領域）を有するキメラ抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏでの変異体タウトランスジ
ェニックマウスにおいてシーディング活性をブロックした。

【0010】

ＡＤ脳におけるタウ異常症の進行は、異なる特殊な拡大パターンに従う。前臨床モデル
においては、細胞外ホスホ－タウシードがニューロンでのタウ異常症を誘発し得ることが
示されている（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０（２３）：９５
３５－４０，２０１３）。それ故、タウ異常症はある脳の領域から次の領域に、プリオン
のように拡大し得ると考えられている。この拡大プロセスには、近くのニューロンにより
取り込まれることができ、更なるタウ異常症を引き起こし得るタウシードの外在化が伴う
。理論に束縛されるものではないが、本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片
は、脳内でホスホ－タウシードと相互作用することにより、タウ凝集又はタウ異常症の拡
大を予防すると考えられている。

【0011】

一般的な一態様において、本発明は、ＰＨＦ－タウに結合する単離モノクローナル抗体
又はその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、抗体はヒト化モノクローナル抗体
である。

【0012】

特定の態様に従うと、本発明は、タウタンパク質のプロリンリッチなドメインにおける
リン酸化エピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する、単離モノクローナル抗
体又はその抗原結合断片に関する。より具体的な態様において、リン酸化エピトープは、
タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２及び／又はリン酸化Ｔ２１７、並びに、配列番号：４
８、５２、及び５４のアミノ酸配列のいずれかを有する、又はこれらのいずれかの中にあ
るリン酸化エピトープを含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、タウタンパク
質のリン酸化Ｔ２１２及びリン酸化Ｔ２１７を含むリン酸化エピトープに結合する。

【0013】

特定の態様に従うと、本発明は、
（１）それぞれ配列番号：４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン
重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、そ
れぞれ配列番号：１６、１７、及び１８のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖
相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（２）それぞれ配列番号：１、２、及び３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１３、１４、及び１５のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（３）それぞれ配列番号：７、８、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（４）それぞれ配列番号：１０、１１、及び１２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：２２、２３、及び２４の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（５）それぞれ配列番号：８０、８１、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１
、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポ
リペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（６）それぞれ配列番号：７１、７２、７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポリ
ペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（７）それぞれ配列番号：７１、７２、及び７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（８）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（９）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（１０）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
（１１）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
を含み、
抗体又はその抗原結合断片が、ＰＨＦ－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合して
いる、
単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0014】

より具体的な態様において、重鎖可変領域ドメインのフレームワーク領域及び軽鎖可変
領域ドメインのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリンからのアミノ酸配列を含む。

【0015】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２６、２７、２８、及び２９のいず
れか１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０
％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し
、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、若
しくは配列番号：７４、７６、及び７８のいずれか１つの任意の重鎖のＶ_Ｈ領域、又は、
配列番号：３１、３２、３３、及び３４のいずれか１つと少なくとも８０％、好ましくは
少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、よ
り好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有す
るポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、若しくは配列番号：７５、７７、及び７９の
軽鎖のいずれか１つのＶ_Ｌ領域を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に
関する。

【0016】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいず
れか１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０
％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し
、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖；並びに、配
列番号：４６、７５、７７、及び７９のいずれか１つと少なくとも８０％、好ましくは少
なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より
好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有する
ポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に
関する。

【0017】

別の具体的な態様に従うと、本発明の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は
、定常領域、例えばヒト又はマウス重鎖ＩｇＧ定常領域、及びヒト又はマウス抗体軽鎖κ
又はλ定常領域を更に含む。

【0018】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片をコードする単離核酸に関する。

【0019】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片をコードする単離核酸を含むベクターに関する。

【0020】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片をコードする単離核酸を含む宿主細胞に関する。

【0021】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片、及び医薬上許容できる担体を含む医薬組成物に関する。

【0022】

別の一般的な態様において、本発明は、病理学的タウ凝集の低下又はタウ異常症の拡大
の低下を必要とする対象における、病理学的タウ凝集の低下又はタウ異常症の拡大の低下
方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。

【0023】

別の一般的な態様において、本発明は、タウ異常症の治療を必要とする対象におけるタ
ウ異常症の治療方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む方法に関
する。タウ異常症としては、家族性アルツハイマー病、散発的アルツハイマー病、染色体
１７（ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症、進行性
核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、線維変化優位型
認知症、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・
パーキンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャイン
カー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、
多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、
亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維濃縮による非ガマニアン（Gu
amanian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘
家認知症（ボクサー病）からなる群から選択される１つ以上が挙げられるが、これらに限
定されない。

【0024】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片の製造方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含む
細胞を、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を製造する条件下にて培養することと
、細胞又は細胞培養液からモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を回収することとを
含む、方法に関する。

【0025】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片を含む医薬組成物の製造方法であって、医薬組成物を得るために、モノクローナル抗
体又はその抗原結合断片を医薬上許容できる担体と組み合わせることを含む、方法に関す
る。

【0026】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片を用いて、対象におけるリン酸化ＰＨＦ－タウの存在を検出する方法、又は、対象に
おいてＰＨＦ－タウの存在を検出することにより、対象のタウ異常症を診断する方法に関
する。

【0027】

本発明の他の態様、特徴、及び利点は、発明の詳細な説明、並びにその好ましい実施形
態及び添付の特許請求の範囲を含む以下の開示より明らかとなろう。

【図面の簡単な説明】

【0028】

上述の「課題を解決するための手段」及び以降の「発明を実施するための形態」は、添
付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される
実施形態そのものに限定されない点は理解されるべきである。

【図1】組み換えにより発現したＰＴ３（「Ｒ３７８８」）、及びハイブリドーマにより発現したＰＴ３（「ｈｙｂ」）の、ＰＨＦ－タウ及び可溶性タウへの結合を示す図である。

【図2】通常の組み換えヒトタウ（「ＮＴ」）及びサルコシル不溶性ＰＨＦ－タウ（「ＰＴ」）のＳＤＳ－ＰＡＧＥ後の、マウス抗タウモノクローナル抗体のウェスタンブロット分析を示す図である。

【図3A】抗アミロイド４Ｇ８陽性であるＡＤ海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図3B】抗アミロイド４Ｇ８陽性であるＡＤ海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図3C】抗アミロイド４Ｇ８陽性であるＡＤ海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図3D】抗アミロイド４Ｇ８陽性であるＡＤ海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図3E】抗アミロイド４Ｇ８陽性であるＡＤ海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図4A】抗アミロイド４Ｇ８陰性である対照海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図4B】抗アミロイド４Ｇ８陰性である対照海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図4C】抗アミロイド４Ｇ８陰性である対照海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図4D】抗アミロイド４Ｇ８陰性である対照海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図4E】抗アミロイド４Ｇ８陰性である対照海馬組織における、ＰＴ３の免疫組織化学分析を示す図である。使用したモノクローナル抗体は、（Ａ）ＰＴ１、（Ｂ）ＰＴ２、（Ｃ）ＰＴ３、（Ｄ）ＡＴ８、及び（Ｅ）ＨＴ７であった。

【図5A】（Ａ）タウノックアウト又は（Ｂ）野生型マウスの脳における、ＰＴ３のホスホ－タウ特異的染色パターンを示す図である。

【図5B】（Ａ）タウノックアウト又は（Ｂ）野生型マウスの脳における、ＰＴ３のホスホ－タウ特異的染色パターンを示す図である。

【図6A】（Ａ）タウノックアウト又は（Ｂ）野生型マウスの脳における、タウ－１の非ホスホ－タウ特異的染色パターンを示す図である。

【図6B】（Ａ）タウノックアウト又は（Ｂ）野生型マウスの脳における、タウ－１の非ホスホ－タウ特異的染色パターンを示す図である。

【図7】ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体の結晶構造を示す図であり、ＰＴ３ Ｆａｂを、空間を塗りつぶす表示（ライトグレー）で示し、タウペプチドを棒状（黒）の表示で示す。

【図8】ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体の結晶構造を示す図であり、ＰＴ３をリボン状（ライトグレー）で示し、そのパラトープ残基を棒状の表示で示し、タウペプチドを棒状（黒）の表示で示す。

【図9】ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチド構造の相互作用図を示す図であり、ペプチド残基を、白色でレタリングした黒の箱で示し、ＶＨ残基をダークグレーで示し、ＶＬ残基をライトグレーで示し、点線は水素結合を示して、実線はファン・デル・ワールス接触を示す。

【図10】ＨＦＡ ＰＴ３重鎖及び軽鎖可変領域の配列を示す図であり、ＨＦＡ多様体がＰＴ３マウス親Ｖ領域（ＶＨ１０及びＶＬ７）にアラインメントされており、ヒトＦＲへ転写された親ＣＤＲには下線を引いており、残基付番は連続している。

【図11】Ｂ３２４＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体の結晶構造を示す図であり、Ｂ３２４を、空間を塗りつぶす表示（ライトグレー）で示し、タウペプチドを棒状（黒）の表示で示す。

【図12】Ｂ３２４＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチド複合体の結晶構造を示す図であり、Ｂ３２４をリボン状（ライトグレー）で示し、そのパラトープ残基を棒状の表示で示し、タウペプチドを棒状（黒）の表示で示す。ただし、Ｄ９２（Ｌ）及びＥ９３（Ｌ）はＣγ及び側鎖のカルボキシレート原子に対して電子密度を有していない。

【図13】Ｂ３２４＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチド構造の相互作用図を示す図であり、ペプチド残基を、白色でレタリングした黒の箱で示し、ＶＨ残基をダークグレーで示し、ＶＬ残基をライトグレーで示し、点線は水素結合を示して、実線はファン・デル・ワールス接触を示す。

【図14】ＦＲＥＴバイオセンサセルモデルの概略図である。

【図15】ＢＲＥＴアッセイを使用して測定した、ＧＦＰ－タウＰ３０１Ｌアグリゲートを含有するＨＥＫ細胞ホモジェネートによりシードされた、ＰＴ３によるＫ１８アグリゲート導入の阻害を示す図である。

【図16】ＦＲＥＴアッセイを使用して測定した、ＴｇＰ３０１Ｓ脊髄ホモジェネートによりシードされた、ＰＴ３によるＫ１８アグリゲート導入の阻害を示す図である。

【図17】２つの独立した実験のデータを用いた、マウスＴｇＰ３０１Ｓ脊髄抽出物の免疫枯渇アッセイの結果を示す図である。

【図18】２つの実験のデータを用いた、ヒトＡＤ脳抽出物免疫枯渇アッセイの結果を示す図である（ｎ＝１である、ＨＴ７及びＡＴ８の場合を除く）。ＦＲＥＴアッセイを用いて測定すると、ＰＴ３はタウシーディングを阻害する。

【図19-1】変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおける、注射モデルの概略図を示す図である。ＩＨＣ画像は、注射後３ヶ月の対照抽出物（Ａ～Ｂ）を有するマウス、注射後１ヶ月のＡＤ脳由来のｅＰＨＦ－タウ（Ｃ～Ｄ）を有するマウス、注射後３ヶ月のＡＤ脳由来のｅＰＨＦタウ（Ｅ～Ｆ）を有するマウスからの、注射済み半球の代表的なＡＴ８染色を示す。

【図19-2】変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおける、注射モデルの概略図を示す図である。（Ｇ）ヒストグラムは、ｅＰＨＦの量を増加させて治療したマウスの代表的な生化学データを示す。

【図20】ＰＴ３の末梢投与（ＩＰ）に続いての変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおけるＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウによるシーディングの、タウ凝集における効果を示す図である。

【図21】ＰＴ３の用量を低下させた同時注射に続いての変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおけるＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウによりシーディングの、タウ凝集における効果を示す図である。

【図22A】ＰＴ３アイソタイプのＩＰ末梢投与と組み合わせた同時投与に続いての変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおけるＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウにおけるシーディングの、タウ凝集における効果を示す図である。（Ａ）に従い治療したマウスは、（Ｂ）注射済み半球、及び（Ｃ）非注射半球において効果を示す。

【図22B】ＰＴ３アイソタイプのＩＰ末梢投与と組み合わせた同時投与に続いての変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおけるＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウにおけるシーディングの、タウ凝集における効果を示す図である。（Ａ）に従い治療したマウスは、（Ｂ）注射済み半球、及び（Ｃ）非注射半球において効果を示す。

【図22C】ＰＴ３アイソタイプのＩＰ末梢投与と組み合わせた同時投与に続いての変異体ヒトＰ３０１Ｌタウを発現するトランスジェニックマウスにおけるＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウにおけるシーディングの、タウ凝集における効果を示す図である。（Ａ）に従い治療したマウスは、（Ｂ）注射済み半球、及び（Ｃ）非注射半球において効果を示す。

【図23A】ＡＤ患者に由来する脳ホモジェネートの濃度と比較した、ＰＳＰ患者由来の脳ホモジェネートにおける凝集タウの濃度を示す図である。使用したモノクローナル抗体は（Ａ）ＡＴ８及び（Ｂ）ＰＴ３であった。

【図23B】ＡＤ患者に由来する脳ホモジェネートの濃度と比較した、ＰＳＰ患者由来の脳ホモジェネートにおける凝集タウの濃度を示す図である。使用したモノクローナル抗体は（Ａ）ＡＴ８及び（Ｂ）ＰＴ３であった。

【図24】Ａ～Ｊは、（Ａ、Ｄ）ＡＤ患者、又は（Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ）ＰＳＰ患者の脳組織の凍結切片を、（Ａ～Ｃ）ＡＴ８、又は（Ｄ～Ｆ）ＰＴ３抗体で染色すると、ＰＳＰの影響を受けた解剖学領域において染色を示したことを示す図である。（Ｇ～Ｊ）対照は染色を示さなかった。

【図25】Ａ～Ｈは、ＰＨＦ－タウを有する親和性成熟ｍＡｂ、及びこれらのＦａｂに関する、ＳＰＲ結合のセンサーグラムを示す図である。実線（灰色）は、二価の結合モデル（ｍＡｂ）又は１：１ラングミュアモデル（Ｆａｂ）を用いる、反応速度の合致を示す。（Ａ）Ｂ２９６ ｍＡｂ、（Ｂ）Ｂ７１１ ｍＡｂ、（Ｃ）Ｂ８０９ ｍＡｂ、（Ｄ）Ｂ３３３ ｍＡｂ、（Ｅ）Ｂ２９６のＢ３２４ Ｆａｂ、（Ｆ）Ｂ７１１のＢ３３０ Ｆａｂ、（Ｇ）Ｂ８０９のＢ３３２ Ｆａｂ、（Ｈ）Ｂ３３３のＢ３３１ Ｆａｂ。

【図26A】（Ａ）ｍＡｂ、又は（Ｂ）Ｆａｂを用いる直接ＥＬＩＳＡ実験における、ＰＴ３－ＨＦＡ及び親和性成熟多様体の、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７ペプチドへの結合を示す図である。

【図26B】（Ａ）ｍＡｂ、又は（Ｂ）Ｆａｂを用いる直接ＥＬＩＳＡ実験における、ＰＴ３－ＨＦＡ及び親和性成熟多様体の、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７ペプチドへの結合を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0029】

発明の背景において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又
は記載する。これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本
明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキス
トを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示
又は特許請求されるいかなる発明に対しても先行技術の一部を構成することを容認するも
のではない。

【0030】

定義
別の定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本
発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでな
い場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するもので
ある。本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によって
恰もその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。本明細書及び
添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈
上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意すべきである。

【0031】

特に断らない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全
ての場合において、「約」なる語によって修飾されているものとして理解されるべきであ
る。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ
／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ
／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用する
場合、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整
数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的
に含む。

【0032】

本明細書で使用するところの「単離された」なる用語は、生物学的構成成分（例えば、
核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの構成成分が天然に生じる生物の他の生物
学的構成成分（すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質
）から実質的に分離されたか、これらの他の成分とは別に生成されたか、又はこれらの他
の成分から精製されたものであることを意味する。このため、「単離」された核酸、ペプ
チド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。
「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、こ
のような組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であ
っても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組み換え発現により調製され
た核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。

【0033】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」又は「免疫グロブリン」は広い意味で用いられ
、ポリクローナル抗体を含む免疫グロブリン又は抗体分子、マウス、ヒト、ヒト適合、ヒ
ト化、及びキメラモノクローナル抗体及び抗体断片を含むモノクローナル抗体を含む。

【0034】

一般に抗体とは、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖であ
る。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に
応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割
り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、Ｉｇ
Ｇ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。したがって、本発明の
抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラスのいずれかのものであることができ
る。本発明の抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４であることが好ましい
。本発明の抗体としては、半減期の延び、ＡＤＣＣ又はＣＤＣの増減、及びサイレンシン
グされたＦｃエフェクター機能が挙げられるがこれらに限定されない、野生型Ｆｃ領域と
比較して変化した特性を有するように、Ｆｃ領域に多様性を有するものが挙げられる。い
ずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの
明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。したが
って、本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖定常ドメインを含有することができる。特定の実施
形態に従うと、本発明の抗体は、マウス抗体又はヒト抗体の重鎖及び／又は軽鎖定常領域
を含む。

【0035】

重鎖及び軽鎖定常領域に加えて、抗体は軽鎖及び重鎖可変領域を含有する。免疫グロブ
リン軽鎖又は重鎖可変領域は、「抗原結合部位」が割り込んだ「フレームワーク」領域か
らなる。抗原結合部位は、以下のとおり様々な用語及び符番スキームを用いて定義される
：
（ｉ）Ｋａｂａｔ：「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、配列の変動性に基づく（Ｗ
ｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１３２：２１１－５０，１９７０）。一
般に、抗原結合部位は、各可変領域に３つのＣＤＲ（例えば、重鎖可変領域（ＶＨ）にＨ
ＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域（ＶＬ）にＬＣＤＲ１、Ｌ
ＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を有する。
（ｉｉ）Ｃｈｏｔｈｉａ：用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏ
ｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１
９６：９０１－１７，１９８７）により定義されているように、構造中で超可変性である
抗体可変ドメインの領域を意味する。一般的に、抗原結合部位は、各ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、
Ｈ３）及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの超可変領域を有する。符番システム、並び
にＣＤＲ及びＨＶのアノテーションは、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎ（Ａｂｈ
ｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２－９
，２００８）により改訂されている。
（ｉｉｉ）ＩＭＧＴ：抗原結合部位を形成する領域の別の定義が、免疫グロブリン及び
Ｔ細胞受容体のＶドメインの比較に基づいて、Ｌｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ
ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７，２００３）により提案
されている。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）
データベースが、標準化したこれらの領域の符番及び定義を提供している。ＣＤＲ、ＨＶ
、及びＩＭＧＴの描写の対応は、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｉｄに記載
されている。
（ｉｖ）ＡｂＭ：Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの符番スキームの妥協点は、Ｍａｒｔ
ｉｎ（Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ（２０１０）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
ｅｄｓ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ，Ｄｕｂｅｌ Ｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ
，Ｂｅｒｌｉｎ），Ｖｏｌ ２，ｐｐ ３３－５１）に記載されている、ＡｂＭ符番の取
り決めである。
（ｖ）抗原結合部位は、「Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｓ
ｉｄｕｅ Ｕｓａｇｅ」（ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ，Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１
７：１３２－４３，２００４）に基づいてもまた描写されることができ、ここでは、ＳＤ
Ｒは、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残基を意味する。

【0036】

「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位の配列であると定義
されるもの以外の、抗体の可変領域内の残りの配列である。抗原結合部位の正確な定義は
、上述したような様々な描写により決定され得るため、正確なフレームワーク配列は、抗
原結合部位の定義に依存する。フレームワーク領域（ＦＲ）は、より高度に保存された可
変ドメインの部分である。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、３つの超可変ルー
プにより接続された、βシート構成を一般的に用いる４つのＦＲ（それぞれＦＲ１、ＦＲ
２、ＦＲ３、及びＦＲ４）を含む。各鎖の超可変ループはＦＲにより互いに緊密に折りた
たまれ、他の鎖の超可変ループと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。抗体の構
造分析により、相補性決定領域により形成される、配列と結合部位の形状との関係が明ら
かとなった（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９－
８１７，１９９２；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１
５：１７５－１８２，１９９０）。これらの高い配列変動性にもかかわらず、６つのルー
プのうち５つだけが、「標準構造」と言われる、小さなレパートリーの主鎖構造を採用す
る。これらの構造はまず、ループの長さにより決定され、次に、折りたたみ、水素結合、
又は異常な主鎖構造を推定する能力により構造が決定される、ループ及びフレームワーク
領域の特定の位置における鍵となる残基の存在により決定される。

【0037】

本明細書で使用するとき、用語「抗原結合断片」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、
Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄ
ｓＦｖ）_２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイア
ボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ
）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形
成される多重特異的抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価
ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片など
の抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片が結合する同じ抗原に結合す
ることができる。特定の実施形態に従うと、抗原結合断片は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領
域、及び重鎖の定常領域のＦｄセグメントを含む。他の特定の実施形態に従うと、抗原結
合断片はＦａｂ及びＦ（ａｂ’）を含む。

【0038】

本明細書で使用する場合、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持される
が、人体における抗原の抗原性が低下するように、改変により配列相同性をヒト抗体のそ
れに対して増加させた非ヒト抗体を意味する。

【0039】

本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」とは、免疫グロブリン、抗体又はその抗
原結合断片が特異的に結合する、抗原上の部位を意味する。エピトープは、タンパク質の
三次折りたたみにより並置された連続アミノ酸から、又は非連続アミノ酸からの両方で形
成することができる。連続アミノ酸から形成したエピトープは、典型的には、変性溶媒に
さらして保持されるが、三次折りたたみにより形成したエピトープは、典型的には、変性
溶媒による処理で喪失される。エピトープは、典型的には、独自な空間構造の中に、少な
くとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミ
ノ酸を含む。エピトープの空間構造を決定する方法としては、例えば、ｘ線結晶構造解析
、及び２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照のこと。

【0040】

本明細書で使用する場合、用語「タウ」又は「タウタンパク質」とは、複数のアイソフ
ォームを有する、多くある中枢神経系及び末梢神経系のタンパク質を意味する。ヒト中枢
神経系（ＣＮＳ）において、長さが３５２～４４１個のアミノ酸のサイズの範囲となる、
６つの主要なタウアイソフォームが、選択的スプライシングにより存在する（Ｈａｎｇｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．１５：１１２－９，２００９）。ア
イソフォームは、０～２個のＮ末端挿入、及び、３又は４個の一列に配列した微小管結合
反復を制御して含めることにより互いに異なり、０Ｎ３Ｒ（配列番号：６４）、１Ｎ３Ｒ
（配列番号：６５）、２Ｎ３Ｒ（配列番号：６６）、０Ｎ４Ｒ（配列番号：６７）、１Ｎ
４Ｒ（配列番号：６８）、及び２Ｎ４Ｒ（配列番号：６９）と呼ばれる。本明細書で使用
する場合、用語「対照タウ」とは、リン酸化反応及び他の翻訳後修飾を欠いている、配列
番号：６９のタウアイソフォームを意味する。本明細書で使用する場合、用語「タウ」は
、完全長野生型タウの変異（例えば点変異、フラグメント、挿入、欠失、及びスプライス
バリアント）を含むタンパク質を含む。用語「タウ」はまた、タウアミノ酸配列の翻訳後
修飾を包含する。翻訳後修飾としては、リン酸化が挙げられるが、これに限定されない。

【0041】

タウは、微小管に結合しており、タウのリン酸化によって調節され得るプロセスである
、細胞を通じたカーゴの輸送を制御する。ＡＤ及び関連する疾患においては、タウの異常
リン酸化が広く生じ、これは、タウの対らせん状細線維（ＰＨＦ）と呼ばれる原線維への
凝集の前に生じ、及び／又はその凝集を誘発すると考えられる。ＰＨＦの主要構成成分は
、過剰リン酸化タウである。本明細書で使用する場合、用語「対らせん状細線維－タウ」
又は「ＰＨＦ－タウ」とは、対らせん状細線維中のタウのアグリゲートを意味する。ＰＨ
Ｆ構造における２つの主要な領域は電子顕微鏡、ファジーコート、及びコア細線維により
明らかであり、ファジーコートはタンパク質分解に敏感であり、細線維の外側に位置し、
細線維のプロテアーゼ耐性コアは、ＰＨＦの主鎖を形成する（Ｗｉｓｃｈｉｋ ｅｔ ａ
ｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．８５：４８８４－８，１９８８）
。

【0042】

本明細書で使用する場合、「ＰＨＦ－タウに結合する単離ヒト化抗体」、又は「単離ヒ
ト化抗ＰＨＦ－タウ抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない
、ヒト化抗ＰＨＦ－タウ抗体を意味することを意図する（例えば、単離ヒト化抗ＰＨＦ－
タウ抗体はＰＨＦ－タウ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しか
し、単離ヒト化抗ＰＨＦ－タウ抗体は、例えば他の種（ＰＨＦ－タウ種のホモログなど）
の他の関連抗原に対して交差反応性を有する。

【0043】

本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する（「ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂ
ｉｎｄｓ」又は「ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ」）とは、本発明の抗ＰＨＦ－タウ
抗体が、約１×１０^－６Ｍか、又はそれよりタイトな、例えば、約１×１０^－７Ｍ以下、
約１×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－９Ｍ以下、約１×１０Ｍ^－１０以下、約１×１０^－
１１Ｍ以下、約１×１０^－１２Ｍ以下、若しくは約１×１０^－１３Ｍ以下の解離定数（Ｋ
_Ｄ）にて、所定の標的に結合する能力を意味する。ＫＤは、Ｋａに対するＫｄの比率（す
なわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体のＫＤ値は、本
開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、抗Ｐ
ＨＦ－タウ抗体のＫＤ値は、表面プラズモン共鳴を用いることにより、バイオセンサシス
テム、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システム、Ｐｒｏｔｅｏｎ機器（ＢｉｏＲａ
ｄ）、ＫｉｎＥｘＡ機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ）、ＥＬＩＳＡ、又は当業者に知られている
競合結合アッセイを用いることなどにより、決定することができる。典型的には、抗ＰＨ
Ｆ－タウ抗体は、例えばＰｒｏｔｅＯｎ機器（ＢｉｏＲａｄ）を使用した表面プラズモン
共鳴によって測定した場合に、非特異的標的に対するＫ_Ｄよりも少なくとも１０倍低いＫ
_Ｄで所定の標的（すなわち、ＰＨＦ－タウ）に結合する。しかし、ＰＨＦ－タウに特異的
に結合する抗ＰＨＦ－タウ抗体は、他の関連標的、例えば他の種（ホモログ）の所定の同
一標的に対する交差反応性を有することができる。

【0044】

本明細書で使用するところの「ポリヌクレオチド」なる用語は、同義的に、「核酸分子
」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾
ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボ
ヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、これらに限定されるものではない
が、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及
び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖又はより
典型的には二本鎖又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってよいＤＮＡ及びＲＮＡを
含むハイブリッド分子が挙げられる。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくは
ＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。用語、ポリヌクレオチドに
は、１つ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性若しくは他の理由によ
り修飾された主鎖を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「修飾」塩基は、例えば、トリ
チル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに
行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的に天然に認められるポ
リヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞
のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた
、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと呼ばれる）も包含する。

【0045】

本明細書で使用するところの「ベクター」なる用語は、別の核酸セグメントを機能的に
挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を行うことができるレプリコンのこ
とである。

【0046】

本明細書で使用するところの「宿主細胞」なる用語は、本発明の核酸分子を含む細胞を
指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいず
れのタイプの細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本発明の核酸分子
をトランスフェクトした細胞である。別の実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトラン
スフェクトされた細胞の子孫又は潜在的な子孫である。ある細胞の子孫は、例えば、後続
の世代で生じ得る変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込み
によって、親細胞との同一性を有していない場合がある。

【0047】

本明細書で使用するところの「発現」なる用語は、遺伝子産物の生合成を指す。かかる
用語には、遺伝子のＲＮＡへの転写が含まれる。また、かかる用語には、ＲＮＡの１つ以
上のポリペプチドへの翻訳も含まれ、全ての天然に生じる転写後及び翻訳後修飾も更に含
まれる。ＰＨＦ－タウに結合する、発現したヒト化抗体又はその抗原結合断片は、宿主細
胞の細胞質内に存在することができ、細胞培養液の増殖培地などの細胞外環境に入ること
ができ、又は細胞膜に固着することができる。

【0048】

本明細書で使用するところの「担体」なる用語は、あらゆる賦形剤、希釈剤、充填剤、
塩、バッファー、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソ
ーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野では公知の他の材料を指す。担
体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう
。本明細書で使用するころの「医薬上許容できる担体」なる用語は、本発明による組成物
の効果又は本発明による組成物の生物活性を妨げない無毒性材料を指す。特定の実施形態
によると、本開示を考慮して、抗体の医薬組成物での使用に好適ないずれの医薬上許容で
きる担体も、本発明において使用することができる。

【0049】

本明細書で使用するところの「対象」なる用語は、動物、好ましくは哺乳動物を指す。
特定の実施形態によれば、対象は、非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、
ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット又はマウス）、又
は霊長類（例えば、サル、チンパンジー、又はヒト）を含む哺乳動物である。特定の実施
形態では、対象はヒトである。

【0050】

本明細書で使用するところの「治療的有効量」なる用語は、対象に所望の生物学的又は
薬理的応答を誘導する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的
に対して経験的かつ一般的な方法で決定することができる。例えば、インビトロアッセイ
を任意選択的に用いて、最適な用量範囲を特定することができる。具体的な有効量の選択
は、治療又は予防される疾病、伴う症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者が知
っている他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば、臨
床試験により）決定することができる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路
及び疾患の重症度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべき
である。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定
することができる。

【0051】

本明細書で使用する場合、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、
及び「治療（treatment）」は全て、タウ異常症に関連した少なくとも１つの測定可能な
物理的パラメータの改善又は逆転を指すものであり、これは対象において必ずしも認識さ
れるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。「治療する（treat）」、「
治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」なる用語はまた、疾患、障害、又
は病態の退縮を生じる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを
指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating
）」、及び「治療（treatment）」は、タウ異常症に関連する１つ以上の症状の緩和、進
展若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」
、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実
施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有
する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及
び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。

【0052】

本明細書で使用するとき、「タウ異常症」は、脳内のタウの病理学的凝集を伴う任意の
神経変性疾患を包含する。家族性及び特発性ＡＤに加えて、他の例示的なタウ異常症は、
染色体１７（ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症、
進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、線維濃縮
変化優位型認知症、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側
索硬化症・パーキンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー
・シャインカー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・
ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド
血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維濃縮による非ガマ
ニアン（Guamanian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、及び、拳闘家認
知症（ボクサー病）などの慢性外傷性脳症である（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕ
ｒｏｎ，７０：４１０－２６，２０１１）。

【0053】

本明細書で使用するところの「併用される」なる用語は、対象への２種以上の治療薬の
投与との関連において、複数の治療の使用を指す。「併用される」なる用語の使用は、治
療が対象に投与される順序を限定しない。例えば、第１の治療（例えば、本明細書に記載
される組成物）を、対象への第２の治療の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４
５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７
２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１
２週間前）、同時に、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２
時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間
、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与
することができる。

【0054】

抗ＰＨＦ－タウ抗体
一般的な一態様において、本発明は、ＰＨＦ－タウに結合する単離モノクローナル抗体
又はその抗原結合断片に関する。このような抗ＰＨＦ－タウ抗体は、ＰＨＦ－タウにてリ
ン酸化エピトープを結合させる特性、又はＰＨＦ－タウにて非リン酸化エピトープを結合
させる特性を有することができる。抗ＰＨＦ－タウ抗体は治療薬として有用である場合が
あり、また、例えば組織又は細胞中での、生体サンプルにおけるＰＨＦ－タウを検出する
ための調査又は診断試薬としても有用である場合がある。

【0055】

特定の態様に従うと、本発明は、タウタンパク質のプロリンリッチなドメインにおける
エピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する単離ヒト化抗体又はその抗原結合
断片に関する。より具体的な態様において、本発明は、リン酸化Ｔ２１２及び／又はＴ２
１７残基を含むエピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する単離ヒト化抗体又
はその抗原結合断片に関する。より具体的な態様において、本発明は、配列番号：４８、
５２、及び５４のいずれかのリン酸化エピトープに結合する単離モノクローナル抗体又は
その抗原結合断片に関する。また更に具体的な態様において、本発明は、配列番号：４８
のリン酸化エピトープに結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する
。本発明の抗体は、ヒト化抗体であることができる。

【0056】

表１は、配列番号によりホスホ－タウに結合する、５個のヒト化ｍＡｂの重鎖及び軽鎖
可変領域を示す。重鎖及び軽鎖配列は、ヒト化ｍＡｂ Ｂ２９６についてもまた示されて
いる。このｍＡｂは、親和性成熟していた（表３を参照）。

【0057】

表２は、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡＢＭ、Ｋａｂａｔ、及びＩＭＧＴ符番スキームに従い定義
される、本発明の例示的抗体の抗原結合部位残基（すなわち、ＣＤＲ領域）を示す。例示
的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号：２６～２９に示し、例示的な軽鎖可変領域
のアミノ酸配列を配列番号：３１～３４に示す。

【0058】

表３は、Ｂ２９６から生成した、親和性成熟モノクローナル抗体（すなわち、Ｂ３３３
、Ｂ７１１、及びＢ８０９）の配列を示す。可変領域配列は重鎖及び軽鎖配列中で下線を
引いている。親和性成熟モノクローナル抗体のＣＤＲ中の太字のアミノ酸は、Ｂ２９６Ｃ
ＤＲ配列と比較した際の置換を示す。ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ符番スキームにより決定さ
れる。

【0059】

【表1】

【0060】

【表2】

【0061】

【表3-1】

【0062】

【表3-2】

【0063】

ヒト化抗体は、実質的にヒト抗体からの可変領域フレームワーク残基（「アクセプター
抗体」と呼ばれる）、及び、実質的に非ヒト抗体（すなわち、マウス抗体）からの相補性
決定領域（ドナー免疫グロブリンと呼ばれる）を有する。Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：１００２９－１００３３，１９８
９、国際公開第９０／０７８６１号、米国特許第５６９３７６２号、同第５６９３７６１
号、同第５５８５０８９号、同第５５３０１０１号、及び同第５２２５５３９号を参照の
こと。存在する場合、定常領域もまた実質的に、又は全体的にヒト免疫グロブリンに由来
する。ヒト可変ドメインは通常、フレームワーク配列が、ＣＤＲが由来するマウス可変領
域ドメインと高度な配列同一性を示す、ヒト抗体から選択される。重鎖及び軽鎖可変領域
フレームワーク残基は、同一の又は異なるヒト抗体配列に由来することができる。ヒト抗
体配列は、自然に生じるヒト抗体の配列であることができる、又は、いくつかのヒト抗体
のコンセンサス配列であることができる。国際公開第９２／２２６５３号を参照されたい
。ＣＤＲ構造及び／又は抗原への結合に対する有り得る影響に基づいて、ヒト可変領域フ
レームワーク残基からの特定のアミノ酸が、置換のために選択される。このような有り得
る影響の調査は、モデリング、特定の位置におけるアミノ酸特性の検査、又は、特定のア
ミノ酸の置換若しくは変異誘発の影響についての実験的観察によるものである。

【0064】

例えば、アミノ酸の、マウス可変領域フレームワーク残基と選択されたヒト可変領域フ
レームワーク残基とが異なる場合、アミノ酸が、（１）抗原に直接非共有結合する、（２
）ＣＤＲ領域に隣接する、（３）別様においてはＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、約
６オングストロームのＣＤＲ領域の中に存在する）、又は（４）ＶＬ－ＶＨ界面に関与す
ることが合理的に予想されるのであれば、ヒトフレームワークアミノ酸は通常、マウス抗
体の等価なフレームワークアミノ酸により置換されるべきである。

【0065】

置換の他の候補は、その位置におけるヒト免疫グロブリンにとっては通常のものではな
い、アクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナ
ー抗体の等価な位置のアミノ酸、又は、より典型的なヒト免疫グロブリンの等価な位置の
アミノ酸で置換することができる。置換の他の候補は、その位置におけるヒト免疫グロブ
リンにとっては通常のものではない、アクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。
ヒト化免疫グロブリンの可変領域フレームワークは通常、ヒト可変領域フレームワーク配
列、又はそのようなコンセンサス配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を示す。

【0066】

抗体のヒト化は、公知の方法、例えば特異性決定残基のリサーフェシング（ＳＤＲＲ）
（米国特許公開第２０１０／０２６１６２０号）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－９８，１９９１）、スーパーヒト
化（国際公開第０４／００６９５５号）、及びヒトのストリング内容物の最適化（米国特
許第７６５７３８０号）を用いて達成することができる。グラフト化又はヒト化に有用な
ヒトフレームワーク配列は、当業者であれば関連するデータベースから選択することがで
きる。選択したフレームワークを、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｉｄに開示さ
れているような技術により更に改変し、結合親和性を保存又は向上させることができる。
特定の実施形態に従うと、マウス親抗体の抗ＰＨＦ－タウ抗体をヒト化する方法としては
、以下の実施例４に記載されているものが挙げられる。

【0067】

本発明の抗体は様々な技術により、例えばハイブリドーマ法（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ．２５６：４９５－７，１９７５）により製造すること
ができる。ドナー抗体（典型的にはマウス）に由来する軽鎖及び重鎖可変領域と共に、ア
クセプター抗体（典型的にはヒトなどの別の哺乳類種）に由来する軽鎖及び重鎖定常領域
を含有するキメラモノクローナル抗体を、米国特許第４８１６５６７号に記載されている
方法により調製することができる。非ヒトドナー免疫グロブリン（典型的にはマウス）に
由来するＣＤＲを有し、分子の残りの、免疫グロブリンに由来する部分は１種以上のヒト
免疫グロブリンに由来する、ＣＤＲグラフトモノクローナル抗体を、例えば米国特許第５
２２５５３９号に開示されている、当業者に知られている技術により調製することができ
る。非ヒト配列を全く欠いている完全ヒトモノクローナル抗体を、（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３６８：８５６－９，１９９４；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－５１，１９９６；Ｍｅｎｄｅｚ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６－５６，１９９７）を参照する技術
により、ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウスから調製することができる。ヒト
モノクローナル抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーから調製及び最適化する
ことができる（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２９６：５７－
８６，２０００；Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２
５４：６７－８４，２００１；Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３９７：
３８５－９６，２０１０）。

【0068】

本発明のモノクローナル抗体は、配列番号：１、４、７、１０、７１、８０のいずれか
のＨＣＤＲ１；配列番号：２、５、８、１１、７２、８１のいずれかのＨＣＤＲ２；配列
番号：３、６、９、１２、７３のいずれかのＨＣＤＲ３；配列番号：１３、１６、１９、
２２、７０のいずれかのＬＣＤＲ１；配列番号：１４、１７、２０、２３のいずれかのＬ
ＣＤＲ２；配列番号：１５、１８、２１、２４のいずれかのＬＣＤＲ３を有する抗体を含
む。本発明は、配列番号：１、４、７、１０、７１、８０のいずれかのＨＣＤＲ１；配列
番号：２、５、８、１１、７２、８１のいずれかのＨＣＤＲ２；配列番号：３、６、９、
１２、７３のいずれかのＨＣＤＲ３；配列番号：１３、１６、１９、２２、７０のいずれ
かのＬＣＤＲ１；配列番号：１４、１７、２０、２３のいずれかのＬＣＤＲ２；配列番号
：１５、１８、２１、２４のいずれかのＬＣＤＲ３と少なくとも９０％、より好ましくは
少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、より好ましくは少
なくとも９９％の同一性を有するＣＤＲ配列を有するモノクローナル抗体もまた包含する
。

【0069】

特定の態様に従うと、本発明は、
（１）それぞれ配列番号：４、５、及び６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、それぞれ配列番号：１６、１７、及び１８のポリペプチド配
列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（２）それぞれ配列番号：１、２、及び３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１３、１４、及び１５のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（３）それぞれ配列番号：７、８、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（４）それぞれ配列番号：１０、１１、及び１２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：２２、２３、及び２４の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（５）それぞれ配列番号：８０、８１、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１
、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポ
リペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（６）それぞれ配列番号：７１、７２、７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポリ
ペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（７）それぞれ配列番号：７１、７２、及び７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（８）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（９）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（１０）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
（１１）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
を含み、
抗体又はその抗原結合断片が、ＰＨＦ－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合して
おり、重鎖可変領域ドメインのフレームワーク領域、及び軽鎖可変領域ドメインのフレー
ムワーク領域は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を含む、
単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0070】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２６、２７、２８、若しくは２９と
少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好
ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ま
しくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は、配列番
号：３１、３２、３３、若しくは３４と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％
、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少な
くとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配
列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0071】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７４、７６、及び７８の重鎖の可変
領域と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最
も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は、
配列番号：７５、７７、及び７９のいずれかの軽鎖の可変領域と少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５
％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性
を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結
合断片に関する。

【0072】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２６と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：３１と少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくと
も９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の
同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその
抗原結合断片に関する。

【0073】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２８と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：３４と少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくと
も９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の
同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその
抗原結合断片に関する。

【0074】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２６と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：３４と少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくと
も９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の
同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその
抗原結合断片に関する。

【0075】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２８と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：３１と少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくと
も９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の
同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその
抗原結合断片に関する。

【0076】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：２７と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：３１と少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくと
も９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の
同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離ヒト化抗体又はその
抗原結合断片に関する。

【0077】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７４の重鎖の可変領域と少なくとも
８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少
なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１０
０％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：７５の
軽鎖の可変領域と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくと
も９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性
を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領
域を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0078】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７６の重鎖の可変領域と少なくとも
８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少
なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１０
０％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：７７の
軽鎖の可変領域と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくと
も９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性
を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領
域を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0079】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７８の重鎖の可変領域と少なくとも
８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少
なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１０
０％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号：７９の
軽鎖の可変領域と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくと
も９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性
を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領
域を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0080】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：４５と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖、及び、配列番号：４６と少なくとも８０％、好まし
くは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％
、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を
有するポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関
する。別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：４５のポリペプチド配列を有す
る重鎖、及び配列番号：４６のポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又
はその抗原結合断片に関する。

【0081】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７４と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖、及び、配列番号：７５と少なくとも８０％、好まし
くは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％
、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を
有するポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関
する。別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７４のポリペプチド配列を有す
る重鎖、及び配列番号：７５のポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又
はその抗原結合断片に関する。

【0082】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７６と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖、及び、配列番号：７７と少なくとも８０％、好まし
くは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％
、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を
有するポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関
する。別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７６のポリペプチド配列を有す
る重鎖、及び配列番号：７７のポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又
はその抗原結合断片に関する。

【0083】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７８と少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、
より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有
するポリペプチド配列を有する重鎖、及び、配列番号：７９と少なくとも８０％、好まし
くは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％
、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を
有するポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関
する。別の具体的な態様に従うと、本発明は、配列番号：７８のポリペプチド配列を有す
る重鎖、及び配列番号：７９のポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、単離ヒト化抗体又
はその抗原結合断片に関する。

【0084】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、ヒト重鎖ＩｇＧ１定常領域及びヒト軽鎖κ定常
領域を含む、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0085】

別の具体的な態様に従うと、本発明は、単離ヒト化抗体又はその抗原結合断片に関し、
抗体又は抗原結合断片はヒトＰＨＦ－タウに、５×１０^－９Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）、
好ましくは１×１０^－９Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで結合しており、Ｋ_Ｄ
は、Ｂｉａｃｏｒｅ又はＰｒｏｔｅＯｎシステムを用いるなどの、表面プラズモン共鳴分
析により測定される。

【0086】

ＰＨＦ－タウに結合するヒト化抗体及びその抗原結合断片の機能活性は、当該技術分野
において既知の方法により、そして本明細書に記載のとおりに特性決定することができる
。ＰＨＦ－タウに結合する抗体及びその抗原結合断片の特性決定方法としては、Ｂｉａｃ
ｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、及びＦＡＣＳ分析を含む親和性及び特異性アッセイ；免疫組織化学
分析；タウシーディングの阻害における抗体の効能を測定するための、インビトロ細胞ア
ッセイ及びインビボ注射アッセイ；抗体の、抗体依存性細胞介在性傷害（ＡＤＣＣ）、及
び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性の存在を検出するための細胞傷害性アッセイ；等が
挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態に従うと、ＰＨＦ－タウに結合す
る抗体及びその抗原結合断片の特性決定方法としては、以下の実施例５、６、８、及び９
に記載するものが挙げられる。対照タウではなくＰＨＦ－タウに結合するヒト化抗体の、
例示的なマウス親抗体は抗体ＰＴ３であり、これは配列番号：２５の重鎖可変領域、及び
配列番号：３０の軽鎖可変領域を有する（例えば、米国特許第９，３７１，３７６号を参
照のこと。この全容が参照により組み込まれる）。

【0087】

いくつかの公知の方法を用いて本発明の抗体の結合エピトープを決定することができる
。例えば、両方の個別の構成成分の構造が知られている場合、インシリコでタンパク質－
タンパク質ドッキングを行って、適合する相互作用部位を特定することができる。抗原抗
体複合体を用いて水素－重水素（Ｈ／Ｄ）交換を行うことによって、抗体が結合する抗原
の領域をマッピングすることができる。抗原のセグメント及び点変異誘導を用いることに
より、抗体の結合に重要なアミノ酸の位置を特定することができる。抗体－抗原複合体の
共結晶構造を使用して、エピトープ及びパラトープに寄与する残基を特定することができ
る。特定の実施形態に従うと、本発明の抗体の結合エピトープの決定方法としては、以下
の実施例２、３、及び７に記載するものが挙げられる。

【0088】

本発明の抗体は、二重特異的又は多重特異的であってよい。例示的な二重特異的抗体は
、ＰＨＦ－タウの２つの異なるエピトープに結合することができるか、又はＰＨＦ－タウ
及びアミロイドベータ（Ａβ）に結合することができる。別の例示的な二重特異的抗体は
、ＰＨＦ－タウと、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、インスリン様成長因子
－１受容体、及びリポタンパク質受容体等の内因性血液脳関門トランスサイトーシス受容
体とに結合することができる。例示的な抗体は、ＩｇＧ１タイプである。

【0089】

本発明の抗体の免疫エフェクターの特性は、当業者には既知の技術により、Ｆｃ修飾に
よって強化又はサイレンシングすることが可能である。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性
細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貧食、細胞表面受容
体（例えば、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ））の下方制御などのＦｃエフェクター機能は、これ
らの活性を担うＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は制御され得る。薬物動
態学特性は、抗体の半減期を延ばすＦｃドメイン内で残基を変異させることによってもま
た向上することができる（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
２０：６８５－９１，２００９）。

【0090】

更に、本発明の抗体は、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化、又はポリエチレング
リコール部分の付加及び脂質化等の自然界では生じない共有結合修飾等のプロセスによっ
て、翻訳後修飾してもよい。このような修飾はインビボ又はインビトロで行われ得る。例
えば、本発明の抗体はポリエチレングリコールと接合（コンジュゲート）（ＰＥＧ化）す
ることによって薬物動態的なプロファイルを向上させることができる。接合（コンジュゲ
ーション）は、当業者に既知の方法によって行うことができる。治療用抗体のＰＥＧとの
コンジュゲーションは、機能を妨げずに医薬動態を向上させることが示されている（Ｋｎ
ｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．１５：４０９－１８，２００４；Ｌｅｏ
ｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．１６：１０６－１９，２００１；Ｙａｎｇ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１６：７６１－７０，２００３）。

【0091】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片をコードする単離ポリヌクレオチドに関する。タンパク質のアミノ酸配列を変えるこ
となく、タンパク質のコード配列を変える（例えば置換する、欠失する、挿入するなど）
ことができることが、当業者には理解されよう。したがって、本発明のヒト化抗体又はそ
の抗原結合断片をコードする核酸配列は、タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく変
更することができることが当業者には理解されよう。例示的な単離ポリヌクレオチドは、
それぞれ配列番号：４、５、及び６に示す免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣ
ＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むポリペプチド、又は、それぞれ配列番号：１６、１７、及
び１８に示す免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含
むポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチドである。他の例示的な単離ポリヌクレオ
チドは、本発明の抗体の可変領域をコードする、配列番号：３６～３９、又は４１～４４
に示す配列を有するポリヌクレオチドである。遺伝コードの縮重又は所与の発現系におけ
るコドンの選好性を考慮すると、本発明の抗体をコードする他のポリヌクレオチドも本発
明の範囲内に含まれる。本発明の単離核酸は、公知の組み換え又は合成技術を用いて作製
することができる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、当該技術分野において公
知の方法を用いて容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマが生成される場合、
そのような細胞はそれらのＤＮＡの供給源として機能することができる。あるいは、コー
ド配列と翻訳生成物が結合したディスプレイ技術、例えばファージ又はリボソームディス
プレイライブラリーを使用することができる。

【0092】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片をコードする単離ポリヌクレオチドを含むベクターに関する。プラスミド、コスミド
、ファージベクター、又はウイルスベクターなどの、本開示の観点から当業者に公知の任
意のベクターも使用することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミ
ドなどの組み換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモーター、リボソーム
結合エレメント、ターミネーター、エンハンサー、選択マーカー、及び複製起点という、
発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロ
モーターは、常時発現型、誘導型、又は再形成可能なプロモーターであり得る。細胞に核
酸を送達することができる多数の発現ベクターが当技術分野において知られており、細胞
内で抗体又はその抗原結合断片を製造するために、本明細書で使用することができる。従
来のクローニング技術、又は人工遺伝子合成を使用して、本発明の実施形態に従った組み
換え発現ベクターを生成することができる。

【0093】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片をコードする単離ポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。本開示の観点から、当
業者に知られている任意の宿主細胞を、本発明の抗体又は抗原結合断片の組み換え発現に
使用することができる。そのような宿主細胞は、真核細胞、細菌細胞、植物細胞又は古細
菌細胞であってよい。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来の
ものであってもよい。哺乳類真核細胞としては、ＳＰ２／０（アメリカ培養コレクション
（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（ヨーロッパ細胞
培養コレクション（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、ＵＫ、Ｅ
ＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６
５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）ネズミ細胞株などといった、ハイブリドーマ又は骨
髄腫の細胞株などの不死化細胞株が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６
（ＡＴＴＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ
１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、又はＤＧ４４などのチャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）
細胞に由来するものが挙げられる。

【0094】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片の製造方法であって、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を製造する
条件下において、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチ
ドを含む細胞を培養することと、細胞又は細胞培養液から（例えば上清から）、抗体又は
その抗原結合断片を回収することとを含む、方法に関する。発現した抗体又はその抗原結
合断片を細胞から回収して、当該技術分野において通常的な技術に従い精製することがで
きる。

【0095】

医薬組成物及び治療方法
本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体、又は本発明のその断片は、脳内でのタウの病理学的凝集
を伴う神経変性病、又はタウ異常症を有する患者、例えばＡＤを患う患者における症状の
治療、低減、又は予防に使用することができる。

【0096】

したがって、別の一般的な態様において、本発明は、本発明の単離モノクローナル抗体
又はその抗原結合断片、及び医薬上許容できる担体を含む、医薬組成物に関する。

【0097】

別の一般的な態様において、本発明は、タウ異常症などの病気、疾患又は状態の症状の
治療又は低減を必要とする対象における、タウ異常症などの病気、疾患又は状態の症状の
治療又は低減方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法に関
する。

【0098】

別の一般的な態様において、本発明は、病理学的タウ凝集の低下又はタウ異常症の拡大
の低下を必要とする対象における、病理学的タウ凝集の低下又はタウ異常症の拡大の低下
方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。

【0099】

本発明の実施形態に従うと、医薬組成物は、治療有効量のモノクローナル抗ＰＨＦ－タ
ウ抗体又はその抗原結合断片を含む。ヒト化抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片に
言及して本明細書で用いられる場合、「治療有効量」とは、病気、疾患又は状態の治療を
もたらす；病気、疾患又は状態の進行を予防する若しくは遅延させる；又は、免疫による
病気、疾患又は状態に関連する症状を低減する若しくは完全に緩和する、モノクローナル
抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片の量を意味する。

【0100】

特定の実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ
、又はそれ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若し
くは病態又はそれに関連する症状の重症度を低下又は改善すること、（ｉｉ）治療される
疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治
療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の進行を防止すること、（ｉ
ｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の退縮を生じさせるこ
と、（ｖ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の進展又は発症を予
防すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の再発を
防止すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは状態、又はそれに関連する症
状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状
態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療さ
れる疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状を有する対象の生存率を高めること、
（ｘｉ）治療される対象の疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状を阻害又は
軽減すること、及び／又は（ｘｉｉ）別の治療の予防又は治療効果を強化又は改善するこ
と。

【0101】

特定の実施形態に従うと、治療される病気、疾患又は状態はタウ異常症である。より具
体的な実施形態に従うと、治療される病気、疾患又は状態としては、家族性アルツハイマ
ー病、散発的アルツハイマー病、染色体１７（ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン
症候群による前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、
進行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜
銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲ
ルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入
体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオ
ンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、
神経原線維濃縮による非ガマニアン（Guamanian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキン
ソン症候群、慢性外傷性脳症、又は拳闘家認知症（ボクサー病）が挙げられるが、これら
に限定されない。

【0102】

タウ異常症に関連する行動的表現型としては、認知障害、初期人格変化及び脱抑制、感
情鈍麻、無為症、無言症、失行症、反復症、常同運動／挙動、口愛過度、混乱、連続タス
クを計画又は組織化する能力の欠如、利己的行動／無神経、反社会的特徴、共感の欠如、
言葉のつかえ、錯誤的誤りは頻繁にあるが比較的理解力は保たれている失文症的な話し方
、理解障害及び換語欠陥、緩徐進行性歩行不安定性、後方突進、すくみ、頻繁な転倒、非
レボドパ反応性軸剛性、核上性注視麻痺、方形波痙攣、緩徐な垂直断続性運動、仮性球麻
痺、四肢失行症、筋緊張異常、皮質性感覚消失、及び振戦が挙げられる。

【0103】

治療を受けやすい患者としては、ＡＤ又は他のタウ異常症のリスクがある無症候性の個
体、及び現在症状を示している患者が挙げられるが、これらに限定されない。治療の影響
を受けやすい患者としては、ＡＤの家族歴又はゲノムにおける遺伝的リスク因子の存在等
、ＡＤの公知の遺伝的リスクを有する個体が挙げられる。例示的なリスク因子は、特に、
位置７１７、並びに位置６７０及び６７１におけるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ
）の変異（それぞれ、Ｈａｒｄｙ及びＳｗｅｄｉｓｈ変異）である。他のリスク因子は、
プレセニリン遺伝子ＰＳ１及びＰＳ２、並びにＡｐｏＥ４における変異、高コレステロー
ル血症又はアテローム性動脈硬化症の家族歴である。現在ＡＤに罹患している個体は、上
記リスク因子の存在によって特徴的な認知症から認識することができる。更に、ＡＤを有
する個体を特定するために、多数の診断試験が利用可能である。これらとしては、脳脊髄
液のタウ濃度及びＡβ４２濃度の測定が挙げられる。タウ濃度の上昇及びＡβ４２濃度の
低下は、ＡＤの存在を表す。また、ＡＤに罹患している個体は、ＡＤ及び関連障害の協会
の基準によって診断することもできる。

【0104】

本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体は、ＡＤ又は他のタウ異常症等、タウの病理学的凝集を伴
う神経変性疾患を治療又は予防するための治療剤及び予防剤の両方に好適である。無症候
性患者では、治療は何歳から開始してもよい（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０
歳）。しかし、通常、患者が約４０、５０、６０、又は７０歳に達するまで治療を始める
必要はない。治療は、典型的には、ある期間にわたる複数回投与を伴う。治療は、経時的
に治療剤に対する抗体、又は活性化Ｔ細胞若しくはＢ細胞の応答を評価することによって
モニタリングしてもよい。応答（反応）が低下した場合、追加用量を指示してよい。

【0105】

予防用途では、医薬組成物又は薬剤は、疾患の生化学的、組織学的、及び／又は挙動的
症状、その合併症、並びに疾患の発現中に提示される中間病理学的表現型を含む、疾患の
リスクをなくす又は低減する、重症度を低下させる、又は疾患の発症を遅らせるのに十分
な量で、ＡＤに罹患しやすいか又はそうでなければＡＤのリスクを有する患者に投与され
る。治療用途では、組成物又は薬剤は、疾患の症状（生化学的、組織学的、及び／又は挙
動的）のいずれかを低減、阻止、又は遅延させるのに十分な量で、かかる疾患が疑われる
か又は既に罹患している患者に投与される。治療薬の投与により、特徴的なアルツハイマ
ー病状を未だ発現していない患者における軽度の認知障害を低減又はなくすことができる
。

【0106】

治療有効量又は用量は、治療される疾患、障害又は病態、投与手段、標的部位、対象の
生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物である
か、投与される他の薬剤、及び、治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、な
どの様々な因子によって異なり得る。治療用量は、安全性及び効能を最適化するために最
適に漸増される。

【0107】

本発明の抗体は、医薬上許容できる担体内の活性成分として、治療有効量の抗体を含有
する医薬組成物として調製することができる。担体は、液体、例えば水、及び落花生油、
大豆油、鉱油、ゴマ油等の、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む油であってよ
い。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いることができる。これらの
溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、従来から公知の滅菌技術（
例えば、濾過）によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近似させるの
に必要な医薬上許容できる補助物質、例えばｐＨ調節剤、並びに緩衝剤、安定化剤、増粘
剤、潤滑剤、及び着色剤などを含有することができる。このような医薬配合物における本
発明の抗体の濃度は広い範囲で、すなわち約０．５重量％未満から、通常は約１重量％又
は少なくとも約１重量％から、最大１５又は２０重量％まで変えることができ、主に必要
とされる用量、液の体積、粘度などに基づいて、選択される特定の投与様式に従って選択
される。

【0108】

本発明の抗体を治療的に使用するための投与様式は、薬剤を宿主に送達する任意の好適
な経路であってもよい。例えば、本明細書に記載する組成物は、非経口的投与、例えば皮
内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻孔内、若しくは頭蓋内投与に好適であるように配
合することができ、又は、脳若しくは脊椎の脳脊髄液内に投与することができる。

【0109】

治療は、単回投与スケジュール、又は複数回投与スケジュールで行ってもよく、複数回
投与計画では、一次治療過程が１～１０回の別個の投与と、応答を維持しかつ／又は強化
するのに必要な後続の時間間隔で他の投与とを行い、例えば第２の投与を、１～４ヶ月で
行い、また必要であれば、次の投与を数ヶ月後に行う。好適な治療スケジュールの例とし
ては、（ｉ）０、１ヶ月及び６ヶ月、（ｉｉ）０、７日及び１ヶ月、（ｉｉｉ）０及び１
ヶ月、（ｉｖ）０及び６ヶ月、又は疾病の症候を軽減し、若しくは疾病の重症度を低下さ
せることが期待される、所望の応答を誘発するのに十分な他のスケジュールが挙げられる
。

【0110】

本発明の抗体は、保存のために凍結乾燥させ、使用前に好適な担体に溶解させることが
できる。この技術は、抗体及び他のタンパク質調製物に効果的であることが示されており
、当該技術分野において公知の凍結乾燥及び溶解技術を用いることができる。

【0111】

特定の実施形態に従うと、タウ異常症の治療で使用される組成物を、関係する神経変性
病の治療に効果的な他の作用物質と組み合わせて使用することができる。ＡＤの場合、本
発明の抗体は、アミロイドベータ（Ａβ）の沈着を低減又は予防する作用物質と組み合わ
せて投与することができる。ＰＨＦ－タウ及びＡβの病理は相乗的である可能性がある。
したがって、ＰＨＦ－タウ、並びにＡβ及びＡβ関連病理の両方のクリアランスを同時に
標的とする併用療法は、各々を個々に標的とするよりも効果的である場合がある。パーキ
ンソン病及び関連する神経変性疾患の場合、α－シヌクレインタンパク質の凝集形態をク
リアランスするための免疫修飾も新たに開発された治療法である。タウ及びα－シヌクレ
インタンパク質のクリアランスを同時に標的とする併用療法は、いずれかのタンパク質を
個々に標的とするよりも効果的であり得る。

【0112】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合
断片を含む医薬組成物の製造方法であって、医薬組成物を得るために、モノクローナル抗
体又はその抗原結合断片を医薬上許容できる担体と組み合わせることを含む、方法に関す
る。

【0113】

診断方法及びキット
本発明のモノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体を、対象におけるＡＤ又は他のタウ異常症
の診断方法において使用することができる。

【0114】

したがって、別の一般的な態様において、本発明は、対象にＰＨＦ－タウが存在するこ
とを検出する方法、及び、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を使用して
対象にＰＨＦ－タウが存在することを検出することにより、タウ異常症を診断する方法に
関する。

【0115】

生体サンプルを診断抗体試薬と接触させ、対象のサンプルにおいて、診断抗体試薬のリ
ン酸化タウへの結合を検出することにより、対象の生体サンプル（例えば血清、血漿、間
質液、又は大脳脊髄液サンプル）においてリン酸化タウを検出することができる。検出を
実施するためのアッセイとしては、公知の方法、例えばＥＬＩＳＡ、免疫組織化学法、ウ
ェスタンブロット、又はインビトロイメージングが挙げられる。例示的な診断抗体は、本
発明の抗体ＰＴ３である。

【0116】

診断抗体又は同様の試薬は、患者の体内に静脈内注射により投与することができ、又は
作用物質を宿主に送達する任意の好適な経路により脳内に直接投与することができる。抗
体の用量は、治療方法と同じ範囲内であるべきである。典型的には、抗体は標識されるが
、いくつかの方法において、リン酸化タウに対して親和性を有する一次抗体は未標識であ
り、二次標識剤が、一次抗体に結合させるために用いられる。標識の選択は、検出手段に
依存する。例えば、蛍光標識は、光学検出に好適である。常磁性標識の使用は、外科的介
入のないトモグラフィー検出に好適である。また、放射標識は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを
用いて検出され得る。

【0117】

診断は、対象由来のサンプル又は対象における、標識ＰＨＦ－タウ、タウ凝集体、及び
／又は神経原線維変化の数、大きさ、及び／又は強度を対応するベースライン値と比較す
ることによって行われる。ベースライン値は、健全な個体の集団における平均レベルを表
し得る。また、ベースライン値は、同じ対象において決定された以前の値を表す。

【0118】

また、上記の診断方法は、治療前、治療中、又は治療後の対象におけるリン酸化タウの
存在を検出することによって治療に対する対象の応答をモニタリングするために用いるこ
ともできる。ベースラインに対する値の減少は、治療に対する陽性応答を示す。また、値
は、病理学的タウが脳からクリアランスされたとき、生物学的流体において一時的に増加
する場合がある。

【0119】

本発明は、更に、上記診断及びモニタリング方法を実施するためのキットに関する。典
型的には、このようなキットには、本発明の抗体等の診断試薬と、任意選択的に検出可能
な標識とが入っている。診断抗体自体は、直接検出可能であるか又は二次反応（例えば、
ストレプトアビジンとの反応）を介して検出可能である、検出可能な標識（例えば、蛍光
標識、ビオチン等）を含有してもよい。あるいは、検出可能な標識を含有する第２の試薬
を使用してもよく、この場合、第２の試薬は、一次抗体に対する結合特異性を有する。生
物学的サンプルにおけるＰＨＦ－タウを測定するのに好適な診断キットでは、キットの抗
体は、マイクロタイターディッシュのウェル等の固相に予め結合して供給され得る。

【0120】

本出願全体で引用した全ての引用参考文献（論文参考文献、交付済み特許、公開された
特許出願、及び同時係属の特許出願を含む）の内容は、参照により本明細書に明白に組み
込まれる。

【0121】

実施形態
本発明は以下の非限定的な実施形態も提供する。

【0122】

実施形態１は、タウタンパク質のプロリンリッチなドメインにおけるリン酸化エピトー
プにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結
合断片である。

【0123】

実施形態２は、タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２を含むリン酸化エピトープにおいて
リン酸化タウタンパク質に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であり
、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：５４のアミノ酸配列を有
する、又はその中のリン酸化エピトープに結合するのが好ましい。

【0124】

実施形態３は、タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１７を含むリン酸化エピトープにおいて
リン酸化タウタンパク質に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であり
、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：５２のアミノ酸配列を有
する、又はその中のリン酸化エピトープに結合するのが好ましい。

【0125】

実施形態４は、タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２及びリン酸化Ｔ２１７を含むリン酸
化エピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する単離モノクローナル抗体又はそ
の抗原結合断片であり、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号：４
８のアミノ酸配列を有する、又はその中にあるリン酸化エピトープに結合するのが好まし
い。

【0126】

実施形態５は、
（１）それぞれ配列番号：４、５、及び６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、それぞれ配列番号：１６、１７、及び１８のポリペプチド配
列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（２）それぞれ配列番号：１、２、及び３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１３、１４、及び１５のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（３）それぞれ配列番号：７、８、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１のポリペ
プチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（４）それぞれ配列番号：１０、１１、及び１２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：２２、２３、及び２４の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（５）それぞれ配列番号：８０、８１、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１
、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポ
リペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（６）それぞれ配列番号：７１、７２、７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポリ
ペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（７）それぞれ配列番号：７１、７２、及び７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１の
ポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（８）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（９）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（１０）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
（１１）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ_Ｌ領域のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
を含み、
抗体又はその抗原結合断片が、ＰＨＦ－タウと結合しており、
重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメインのフレームワーク領域が、ヒト免疫グ
ロブリンのアミノ酸配列を含む、
単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0127】

実施形態６は、配列番号：２６、２７、２８、若しくは２９と少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５
％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性
を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は、配列番号：３１、３２、３３、
若しくは３４と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を
有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0128】

実施形態７は、配列番号：７４、７６、及び７８の重鎖の可変領域と少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくと
も９５％、より好ましくは少なくとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の
同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は、配列番号：７５、７７、
及び７９のいずれかの軽鎖の可変領域と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％
、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少な
くとも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配
列を有する軽鎖可変領域を含む、単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0129】

実施形態８は、
（１）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３１のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（２）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３４のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（３）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３４のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（４）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３１のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（５）配列番号：２７のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：３１のポリペ
プチド配列を有するＶＬ；
（６）配列番号：７４の重鎖のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：７５の
軽鎖のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（７）配列番号：７６の重鎖のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：７７の
軽鎖のポリペプチド配列を有するＶＬ；又は
（８）配列番号：７８の重鎖のポリペプチド配列を有するＶ_Ｈ、及び配列番号：７９の
軽鎖のポリペプチド配列を有するＶＬ；
を含む、単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0130】

実施形態９は、配列番号：４５と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好
ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくと
も９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列を
有する重鎖、及び、配列番号：４６と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、
好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なく
とも９８％の同一性を有し、最も好ましくは１００％の同一性を有するポリペプチド配列
を有する軽鎖を含む、単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0131】

実施形態１０は、ヒト重鎖ＩｇＧ１定常領域及びヒト軽鎖κ定常領域を含む、実施形態
１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0132】

実施形態１１は、抗体又は抗原結合断片が、５×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄ、好ましくは１
×１０^－９Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＰＨＦ－タウに結合しており
、Ｋ_Ｄは、Ｂｉａｃｏｒｅシステムを用いるなどにより、表面プラズモン共鳴分析により
測定される、実施形態１～１０のいずれかの単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片で
ある。

【0133】

実施形態１２は、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又は抗
原結合断片をコードする、単離核酸である。

【0134】

実施形態１３は、実施形態１２に記載の単離核酸を含む、ベクターである。

【0135】

実施形態１４は、実施形態１３に記載の核酸を含む、宿主細胞である。

【0136】

実施形態１５は、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又
は抗原結合断片、及び医薬上許容できる担体を含む、医薬組成物である。

【0137】

実施形態１６は、病理学的タウ凝集の低減、又はタウ異常症の拡大の低減を必要とする
対象における、病理学的タウ凝集の低減、又はタウ異常症の拡大の低減方法であって、対
象に、実施形態１５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法である。

【0138】

実施形態１７は、タウ異常症の治療を必要とする対象におけるタウ異常症の治療方法で
あって、対象に、実施形態１５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法である。

【0139】

実施形態１８は、タウ異常症の治療を必要とする対象において、対象に、タウ異常症を
治療するための追加の作用物質を投与することを更に含む、実施形態１７に記載の方法で
ある。

【0140】

実施形態１９は、タウ異常症の治療を必要とする対象におけるタウ異常症の治療方法で
あって、対象に実施形態１５に記載の医薬組成物を投与することを含み、タウ異常症は、
家族性アルツハイマー病、散発的アルツハイマー病、染色体１７（ＦＴＤＰ－１７）に関
連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核
変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症、石灰化によるび漫性
神経原線維濃縮、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症合
併症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン－
シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン
・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直
性ジストロフィー、神経原線維濃縮による非ガマニアン（Guamanian）運動ニューロン疾
患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）から
なる群から選択される、方法である。

【0141】

実施形態２０は、タウ異常症の治療を必要とする対象において、対象に、タウ異常症を
治療するための追加の作用物質を投与することを更に含む、実施形態１９に記載の方法で
ある。

【0142】

実施形態２１は、抗体又は抗原結合断片を製造する条件下において、抗体又は抗原結合
断片をコードする核酸を含む細胞を培養することと、細胞又は細胞培養液から抗体又は抗
原結合断片を回収することとを含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のモノクロ
ーナル抗体又は抗原結合断片の製造方法である。

【0143】

実施形態２２は、医薬組成物を得るために、抗体又は抗原結合断片を医薬上許容できる
担体と組み合わせることを含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のモノクローナ
ル抗体又は抗原結合断片を含む、医薬組成物の製造方法である。

【0144】

実施形態２３は、タウ異常症の治療を必要とする対象において、タウ異常症の治療に使
用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又は抗
原結合断片である。

【0145】

実施形態２４は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、家族性アルツハイマー
病、散発的アルツハイマー病、染色体１７（ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン症
候群による前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進
行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜銀
顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲル
ストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体
筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオン
タンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神
経原線維濃縮による非ガマニアン（Guamanian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソ
ン症候群、慢性外傷性脳症、又は拳闘家認知症（ボクサー病）などの、タウ異常症の治療
に使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又
は抗原結合断片、又は実施形態１５に記載の医薬組成物である。

【0146】

実施形態２５は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症の治療にお
ける薬剤を製造するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の単離モノクローナ
ル抗体又は抗原結合断片の使用である。

【0147】

実施形態２６は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、家族性アルツハイマー
病、散発的アルツハイマー病、染色体１７（ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン症
候群による前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進
行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜銀
顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲル
ストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体
筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオン
タンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神
経原線維濃縮による非ガマニアン（Guamanian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソ
ン症候群、慢性外傷性脳症、又は拳闘家認知症（ボクサー病）などの、タウ異常症の治療
用薬剤を製造するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の単離モノクローナル
抗体又は抗原結合断片の使用である。

【0148】

実施形態２７は、対象の生体サンプルにおけるリン酸化タウの存在を検出する方法であ
って、生体サンプルを、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合断片
と接触させることと、対象のサンプルにおいて、抗体又は抗原結合断片のＰＨＦ－タウへ
の結合を検出することとを含む、方法である。

【0149】

実施形態２８は、生体サンプルが血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液サンプル
である、実施形態２７に記載の方法である。

【0150】

実施形態２９は、対象における、対象の生体サンプルでのリン酸化タウの存在を検出す
ることによる、タウ異常症の診断方法であって、生体サンプルを、実施形態１～１１のい
ずれか１つに記載の抗体又は抗原結合断片と接触させることと、対象のサンプルにおいて
、抗体又は抗原結合断片のＰＨＦ－タウへの結合を検出することとを含む、方法である。

【実施例0151】

以下の本発明の実施例は、本発明の本質を更に説明するためのものである。以下の実施
例は本発明を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の請求項によって定められる点
を理解されたい。

【0152】

実施例１：抗体の特性決定
ＰＴ３、及びＡＤ脳からの、ＰＨＦ－タウが富化した（ｅＰＨＦ－タウ）のＢａｌｂ／
ｃマウスの免疫付与に由来する１組の抗体を、直接酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ
）、ウェスタンブロット、及び免疫組織化学（ＩＨＣ）で、ホスホ－タウ対非ホスホ－タ
ウでの標的選択性について試験した。ＰＴ３は、配列番号：２５の重鎖可変領域アミノ酸
配列、及び配列番号：３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有するマウス－ハイブリドーマ
由来の抗体である。ＰＴ３のＶＨ及びＶＬドメインについてのＣＤＲ配列は、米国特許第
９，３７１，３７６号に示されている。ヒトフレームワーク適応（ＨＦＡ）法（実施例４
を参照）を用いてＰＴ３をヒト化し、本発明のヒト化抗－ホスホ－タウ抗体を生成した（
表１及び２を参照）。ヒト化Ｂ２９６は、ＰＴ３と同じＣＤＲ配列を有する。ヒト化ｍＡ
ｂ Ｂ２９６は親和性成熟しており、本発明の更なる抗体を生成した（表３を参照）。

【0153】

ＥＬＩＳＡ
マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）としての組み換えＰＴ３を、ＥＬＩＳＡフォーマットに
おいて、富化ＰＨＦ－タウ及び組み換えヒト野生型タウへの結合について評価した。この
組み換えに由来するＰＴ３を、ハイブリドーマ由来の精製ＰＴ３と比較した。結果は、精
製ハイブリドーマ由来のＰＴ３抗体バッチ、及び組み換え由来のＰＴ３抗体のバッチの両
方の間で相当の結合力価曲線を示した（図１）。強力な結合がＰＨＦ－タウには存在し、
最小の結合がより高濃度にて可溶性タウに存在した。

【0154】

ウェスタンブロット
ＰＴ３を用いて、精製非リン酸化組み換えヒトタウ、及びＡＤ脳から調製したサルコシ
ル不溶性ＰＨＦ－タウに対してウェスタンブロット分析を実施した。ＰＴ３は、ホスホ選
択性参照抗体ＡＴ８ ｐＳ２０２／ｐＴ２０５／ｐＳ２０８と同様に、ＰＨＦ－タウとの
選択交差性を示した（Ｍｅｒｃｋｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏ
ｌ．８４（３）：２６５－７２，１９９２；Ｍａｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｓ．８４：４２７－４３４，２０１６）ａｎｄ ＡＴ１００ ｐＴ２１２／ｐＳ２１４（
Ｍｅｒｃｋｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｉｄ．；Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．３６（２６）：８１１４－２４，１９９７）（図２）。ホス
ホとは無関係の参照抗体ＨＴ７（Ｍｅｒｃｋｅｎ，Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ：Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｎｔｗｅｒｐ，Ｗｉｌｒｉｊｋ－Ａｎｔｗｅｒｐ，１９９１）を、
組み換えタウ及びＰＨＦ－タウの両方と反応させた。ホスホ選択性であるエピトープに向
けられるＢＴ２は、Ｓ１９９／Ｓ２０２においてリン酸化タウではなく、組み換えタウの
みと反応した（Ｍｅｒｃｋｅｎ，１９９１，Ｉｄ．）。他のウェスタンブロット実験では
、ＰＴ３は、より高濃度にてブロットした際でも、組み換えタウとは弱い反応性を示した
。

【0155】

ヒト脳における免疫組織化学法
ＡＤ及び対照脳の、ホルマリン固定したパラフィン埋め込み切片で免疫組織化学分析を
実施し、ｉｎ ｓｉｔｕでタウ異常症との反応性を確認した。ＰＴ３は、参照タウ異常症
特異的診断抗体陽性対照ＡＴ８と同様の、しかしより強力な反応性パターンを示した（図
３）。これらの実験条件下においては、対照脳の通常のタウとは、有意な反応が検出され
なかった（図４）。

【0156】

野生型及びタウノックアウトマウスでの免疫組織化学法
ＩＨＣ分析を、野生型及びノックアウトマウス脳のＰＴ３で実施した。野生型マウス脳
のＰＴ３でのＩＨＣ分析では、最適なエピトープ保存条件下にて、野生型タウの選択的プ
ールとの反応性を観察することが可能であることが示される。ＰＴ３の染色パターンによ
り、細胞体樹状突起の局在性（図５、矢印）が明らかとなり、ラット及びヒト生検由来組
織の抗ホスホ－タウ抗体について、文献に記載された染色が想起される（Ｍａｔｓｕｏ
ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．１３（４）：９８９－１００２，１９９４）。タウ－１抗
体で観察された、タウの典型的な非ホスホ軸索染色パターン（図６、矢印）は存在せず、
これは、ＰＴ３が微小管結合タウの生理学的に重要なプールとは限定的な反応性を有する
ことを示している。タウノックアウト動物での反応性の欠如により、ＰＴ３染色パターン
のタウ特異性が確認される。

【0157】

野生型マウス脳のＰＴ３エピトープ（ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、実施例２を参照）にお
けるリン酸化反応の存在は、Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．
１８（８）：１１８３－９，２０１５）による、質量分光分析における、Ｔ２１２及びＴ
２１７のマウスホモログにおいてリン酸化が検出されることにより支持される。ＰＴ３エ
ピトープは、タウリン酸化及びアグリゲート形成の初期段階にもまた存在することが示唆
され、このことは、治療用抗体エピトープに対して好ましい。

【0158】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による結合評価
ＰＴ１及びＰＴ３抗ＰＨＦ－タウ抗体について、ＰｒｏｔｅＯｎ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈ
ｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）及びＢｉａｃｏｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅ
ｄｅｎ）機器にてＳＰＲを行うことにより、ＰＨＦ－タウ及び組み換えタウとの相互作用
を評価した。全てのタウ抗体ＨＴ７を陽性対照として試験し、ＡＴ８を参照抗ＰＨＦ－タ
ウ抗体として試験した。

【0159】

表４及び５は、ＰＨＦ－タウ及び組み換えタウとの、抗体の親和性評価の代表的な結果
を示す。ＰＴ３モノクローナル抗体は、ＰＨＦ－タウに対して非常に強力な結合を示した
（表４）。

【0160】

【表4】

ｎ≧３の複製物に関しては、標準偏差を報告する；
ｈｙｂ、ハイブリドーマにより発現したｍＡｂ；ｒｅｃ、組み換えｍＡｂ；
括弧内の^ａＫ_Ｄ値は、７５ｎＭの注射したｍＡｂ濃度を除外することにより得られた。

【0161】

組み換えＰＴ３－ｍＧ２ａの見かけの結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、１６ｐＭに等しいか又は
これより強く、非常に遅い解離速度を有した。組み換えタウへの非常に弱い結合のみが、
４つの複製物のうちの１つにおける、ハイブリドーマにより発現したＰＴ３に関して観察
された（表５）。

【0162】

【表5】

ｈｙｂ、ハイブリドーマにより発現したｍＡｂ；ｒｅｃ、組み換え：
^ａ Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）製の組み換えタウ（５倍
希釈液にて０．１２～７５ｎＭ）によりＰｒｏｔｅＯｎにて試験をし、その後凝集したと
判断した。他の全ての試験サンプルについて、インハウスで生成した組み換えタウをＢｉ
ａｃｏｒｅで使用した。

【0163】

エピトープの複数のコピーを有するＰＨＦ－タウの多重結合／凝集性質、及び、ＩｇＧ
の二価の性質のために、モノクローナル抗体の親和性が、本研究フォーマットの結合活性
により影響を受けた。Ｆａｂの親和性は、抗体の固有親和性についての情報をもたらす。
ＰＴ３ Ｆａｂは、ＰＨＦ－タウへの強力な固有結合親和性（Ｋ_Ｄ＝６３ｐＭ）、及び遅
い解離速度を示した（表４）。Ｂｉａｃｏｒｅ ＳＰＲにおける、組み換えタウとのＦａ
ｂの反応性は、分析条件下において検出限界を下回っていた（表５）。

【0164】

特性決定研究により、ＰＴ３はＰＨＦ－タウに選択的に結合し、ＡＤ脳に由来するＰＨ
Ｆ－タウに対して高親和性を有することが示された。

【0165】

実施例２－ＰＴ３のエピトープマッピング
表６に示すホスホペプチドのパネルを用いた表面プラズモン共鳴（ＰｒｏｔｅＯｎ）に
より、ＰＴ３のエピトープを決定した。

【0166】

材料及び方法。ＰＴ３ Ｆａｂ（Ｂ１８７）を、マウス可変領域及びヒトＩｇＧ１／κ
定常領域を有するキメラ版として作製し、重鎖のＣ末端に６ｘＨｉｓタグが存在する（Ｖ
Ｈ１０、配列番号：２５及びＶＬ７、配列番号：３０）。ＦａｂをＨＥＫ ２９３細胞で
の一時的発現により作製し、Ｎｉ－アフィニティクロマトグラフィーにより精製し、２０
ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．４、５０ｎＭのＮａＣｌ）（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｓ）に透析した。

【0167】

表６に示す１４個のタウホスホペプチドの各々に対する、ＰＴ３ Ｆａｂの結合親和性
を、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰ
Ｒ）により評価した。短鎖ビオチン、及びＮ末端のＰＥＧ４部分を用いる標準的な化学的
方法により、ペプチド（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ）を合成した。ビオチ
ン化ペプチドを、ニュートラアビジンでコーティングしたＮＬＣバイオセンサチップ上で
捕捉し、ＰＴ３ Ｆａｂを表面に流して反応速度論的パラメータを測定した。

【0168】

全ての実験は、２５℃にて、ランニング緩衝液及びサンプル希釈緩衝液の両方としてリ
ン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ））を使用
して実施した。サンプルをランニングする前に、チップ表面にＰＢＳＴを１時間ランニン
グすることにより、ＮＬＣチップをコンディショニングした。ペプチドをＰＢＳＴ中で１
０ｎｇ／ｍＬまで希釈し、３０μＬ／分にて１００秒流路上に注入することにより、約５
～１０ＲＵのペプチドをチップ表面上に捕捉した。ＰＴ３ Ｆａｂの連続希釈液（１．１
～９０ｎＭ）を分析し、ペプチド－８を除いて、各濃度を重複して測定した。ペプチドの
捕捉後、抗体滴定には、緩衝液のみを、６０μＬ／分にて３分間（会合段階）、続いて３
００秒間、注入した（解離段階）。

【0169】

スポット間の応答を差し引くことによりデータを二重参照し、緩衝液のみを注入するこ
とにより、曲線を生成した。３０μＬ／分で１００秒の接触時間にわたり、０．８５％リ
ン酸を一度注入し、続いて、次の抗体滴定注入の前にランニング緩衝液を４回注入するこ
とで、チップ表面を再生した。データ処理及び反応速度論的解析を、機器ソフトウェアを
使用して行った。単純なラングミュア１：１結合モデルを用いてデータを分析した。

【0170】

結果。ＰＴ３ Ｆａｂの反応速度論的速度定数及び平衡結合親和性を表６に示す。

【0171】

【表6】

ｎ＝２について、範囲を報告する；
^＊ペプチド－３について、ｎ＝３であり、標準偏差を報告する；
^＊＊ペプチド－８について、ｎ＝１であり、平均又は範囲は報告されない；
^＊＊＊注記しない限り、全てのペプチドはタウ残基２０４～２２５を含み（アイソフォ
ーム２Ｎ４Ｒ）、Ｎ末端に短鎖ビオチン部位（ＳＣＢｉｏｔ）及びｄＰＥＧ４、並びにＣ
末端にアミドを含有する。
^＃ペプチド－１１は、タウ残基２０２～２２０を含む（アイソフォーム２Ｎ４Ｒ）。

【0172】

ＰＴ３ Ｆａｂは、Ｔ２１２又はＴ２１７がリン酸化したペプチドにナノ分子結合した
ことを示し、ＰＴ３ Ｆａｂの結合は、Ｔ２１２及びＴ２１７の両方がリン酸化した際に
向上した。ＰＴ３ Ｆａｂは、ｐＴ２１２及び／又はｐＴ２１７を含有するペプチドに最
も良く結合した。ＰＴ３ Ｆａｂは、Ｔ２１２／Ｔ２１７がリン酸化したタウペプチド（
ペプチド－２）、及びＴ２１２／Ｓ２１４／Ｔ２１７がリン酸化したタウペプチド（ペプ
チド－１）に、同様の親和性で結合し、このことは、Ｓ２１４における追加のリン酸化が
、ＰＴ３ Ｆａｂの結合を向上させないことを示している。ＰＴ３ Ｆａｂは、ｐＳ２１
４－タウペプチド（ペプチド－９）に非常に弱い結合のみを有した。Ｓ２１０が単独で、
又は他のリン酸化残基と組み合わせてリン酸化された場合、結合はほとんど、ないしは全
く観察されなかった。Ｔ２２０のリン酸化は、ＰＴ３ Ｆａｂに対する結合活性の喪失に
寄与するようであった（ペプチド－９対ペプチド－１３）。非リン酸化タウペプチド（ペ
プチド－Ｃ）に対して、ＰＴ３ Ｆａｂの結合活性は検出されなかった。ＰＴ３はタウの
プロリンリッチなドメイン内のホスホエピトープに結合する。

【0173】

結合の検討は、ＰＴ３エピトープがｐＴ２１２及びｐＴ２１７を含むこと、並びに、Ｐ
Ｔ３の最大結合エピトープが、二重リン酸化したｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウを含むこ
とを示唆している。ＰＴ３のエピトープは、ホスホ依存性の抗タウ抗体用の、報告されて
いる他のエピトープ、例えばＡＴ８（ｐＳ２０２／ｐＴ２０５／ｐＳ２０８；Ｍａｌｉａ
ｅｔ ａｌ．，２０１６ Ｉｄ．）、ＡＴ１８０（ｐＴ２３１；Ｇｏｅｄｅｒｔ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｊ．３０１（Ｐｔ３）：８７１－８７７）、ＡＴ２
７０（ｐＴ１８１；Ｇｏｅｄｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｄ．）、ＰＨＦ１（ｐＳ３９６／
ｐＳ４０４；Ｏｔｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ．３９（６）：
６６９－７３，１９９４）、１２Ｅ８（ｐＳ２６２；Ｓｅｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ
Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７０（３２）：１８９１７－２２，１９９５）、抗タウｐＳ４
２２抗体（Ｃｏｌｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ．１３７（Ｐｔ １０）：２８３４
－４６，２０１４）、及び抗タウｐＳ４０９抗体（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒ
ｅｐ．１６（６）：１６９０－７００，２０１６）とは異なる。

【0174】

実施例３－ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体の結晶構造
Ｘ線結晶構造解析により、２つのタウホスホペプチドを有するＰＴ３ Ｆａｂ（Ｂ１８
７）の共構造を測定し、これにより、タウエピトープ及びＰＴ３パラトープの同定を行っ
た。

【0175】

サンプル調製及び結晶化。Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓにより結晶化用
のペプチドを合成した。これは、以下の配列を有した：残基Ｔ２１２、Ｓ２１４、及びＴ
２１７がリン酸化した、タウ－４４１（２Ｎ４Ｒアイソフォーム）の残基２０７～２２０
に対応する、Ａｃ－ＧＳＲＳＲ（ｐＴ）Ｐ（ｐＳ）ＬＰ（ｐＴ）ＰＰＴ－ＯＨ（配列番号
：６１）（ｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１７－タウペプチド）、並びに、Ｔ２１２及
びＴ２１７がリン酸化した、残基２１０～２２２に対応するＡｃ－ＳＲ（ｐＴ）ＰＳＬＰ
（ｐＴ）ＰＰＴＲＥ－ＯＨ（配列番号：６２）（ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド
）。凍結乾燥したペプチドを１００ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．５、約５５ｍｇ／ｍＬ）に
溶解させた。

【0176】

ＰＴ３ Ｆａｂを１９．６４ｍｇ／ｍＬ又は１７．７６ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、１０．
７モル過剰、又は９．３モル過剰のｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１７－タウペプチド
、又はｐＴ２１２／ｐＴ２１７ペプチドと混合し、それぞれ、２０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ
７．５）中で１６．９ｍｇ／ｍＬ、及び１００ｍＭ又は５０ｍＭのＮａＣｌ中で１６．７
ｍｇ／ｍＬの最終複合体濃度にした。Ｍｏｓｑｕｉｔｏ結晶化ロボットを使用し、１５０
ｎＬの複合体及び１５０ｎＬのリザーバ溶液を混合して、インハウススクリーン及びＰＥ
Ｇ（Ｑｉａｇｅｎ）により、結晶化を実施した。回折用結晶を、以下の条件で入手した：
０．１Ｍのアセテート（ｐＨ４．５）、１８％のＰＥＧ３３５０、０．２のＭｇＣｌ_２中
の、ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体、及び
２０％のＰＥＧ３３５０、０．２Ｍのリン酸アンモニウム（一塩基性）中のＰＴ３ Ｆａ
ｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体。

【0177】

データ収集及び構造測定。ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１７－タ
ウペプチド複合体の結晶を、０．１Ｍのアセテート（ｐＨ４．５）、１８％のＰＥＧ３３
５０、０．２ＭのＭｇＣｌ_２（母液）から回収し、２０％グリセロールを補充した母液か
らなる凍害防止溶液と混合した。液体窒素中で結晶を急速冷却し、ＯｓｍｉｃＴＭ Ｖａ
ｒｉＭａｘ（商標）共焦点光学素子、Ｓａｔｕｒｎ ９４４ ＣＣＤ検出器、及びＸ－ｓ
ｔｒｅａｍ（商標）２０００凍結冷却システム（リガク）を装着した、Ｒｉｇａｋｕ Ｍ
ｉｃｒｏＭａｘＴＭ－００７ＨＦ微焦点Ｘ線発生器でデータを収集した。

【0178】

データをＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ
Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６（Ｐｔ ２）：１２５－３２，２０１０）で処理した。Ｆ
ａｂ Ｈ３－２３：Ｌ１－３９（ＰＤＢ ＩＤ：５Ｉ１９）Ｆａｂを研究モデルとして使
用し、ＰＨＥＮＩＸスイートのプログラム（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒ
ｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６（Ｐｔ ２）：２１
３－２１，２０１０）にて、フェーザー（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃ
ｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４０（Ｐｔ ４）：６５８－６７４，２００７）を用いて分子交
換を実施した。Ｐｈｅｎｉｘ．ｘｔｒｉａｇｅにより、７％双晶画分による結晶中で、擬
欠面双晶を同定した。大多数のモデルビルディングについて双晶精密化を用いて、精密化
を実施した。モデルビルディングにはＣｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｗｔａｎ，
Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６０（Ｐ
ｔ １２ Ｐｔ １）：２１２６－３２，２００４）を用い、精密化にはｐｈｅｎｉｘ．
ｒｅｆｉｎｅ（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｉｄ．）を用いた。双晶精密化は
マップを改善しなかったことが後で判明したため、精密化の最終段階では、双晶精密化を
用いなかった。データ及び精密化の統計を表７に示す。

【0179】

【表7】

最高の解像度シェルについての値を、括弧内に示す。

【0180】

ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体の単結晶を、結晶化液
滴から取り出し、２０％グリセロールを補充したリザーバ溶液（２０％のＰＥＧ３３５０
０、２Ｍリン酸アンモニウム（一塩基性））中に数秒間浸漬させ、液体窒素中で急速冷却
した。Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（Ａｒｇｏｎｎｅ，ＩＬ）ＩＭＣ
Ａ－ＣＡＴビームライン１７－ＩＤ－Ｂにて、１００Ｋでデータを収集した。画像半度当
たり０．５秒の曝露時間で、１８０°回転でＰｉｌａｔｕｓ ６Ｍ検出器にて回折強度を
収集した。ＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ，２０１０，Ｉｄ．）でデータを、２．０Åの最大解像
度まで処理した。調査モデルとしてＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１
７－タウペプチド構造を使用して、プログラムフェーザー（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，
２００７，Ｉｄ．）での分子交換により、構造を決定した。ＮＣＳ（Ａｄａｍｓ ｅｔ
ａｌ．，２０１０，Ｉｄ．）を使用して、ｐｈｅｎｉｘ．ｒｅｆｉｎｅにより構造精密化
を行った。プログラムＣｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ及びＣｏｗｔａｎ，２００４，Ｉｄ．）を
使用して、モデル調節を実施した。Ｘ線データ収集及び精密化の統計を、表７に示す。４
．０Åの距離カットオフを用いて、ＣＯＮＴＡＣＴ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏ
ｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ ４，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａ
ｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５０（Ｐｔ ５）：７６０－３，
１９９４）により分子間接触距離を計算し、Ｐｙｍｏｌにより目視検査した。

【0181】

構造分析。ｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１７－タウペプチドを有するＰＴ３ Ｆａ
ｂの構造を、２．５Åの解像度で測定した。ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－
タウペプチド構造について以下で記載するように、非対称ユニット当たり、複合体の３つ
のコピーが存在する。Ｔ２１２及びＴ２１７もまたリン酸化された場合に、ＰＴ３はｐＳ
２１４のホスフェートとは相互作用しない（データは図示せず）ことが、構造により示さ
れ、このことは、ＰｒｏｔｅＯｎによるホスホペプチドマッピングにより支持される（実
施例２）。

【0182】

ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドを有するＰＴ３ Ｆａｂの構造を、２．０Åの
解像度にてＸ線結晶構造解析により決定した（図７）。非対称ユニット中には複合体の３
つのコピー（コピー１：鎖Ａ、Ｃ、Ｅ；コピー２：鎖Ｂ、Ｄ、Ｆ；コピー３：鎖Ｈ、Ｌ、
Ｐ）が存在し、これらは重鎖Ａ、Ｃ、及びＨ、軽鎖Ｂ、Ｄ、及びＬ、並びにペプチド鎖Ｅ
、Ｆ、及びＰからなる。３つのコピーは非常に類似しており、可変領域は０．３Åｒｍｓ
ｄ以内にあった。図７～８は、コピー３（鎖Ｈ、Ｌ、Ｐ）のものである。図７に示すよう
に、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖は浅い結合ポケットを形成し、ペプチドがＦａｂを横切って配置
される。タウホスホペプチドは、ポリプロリン－ＩＩヘリックス二次構造に一致する特徴
を有する、延びた構造の中にある。

【0183】

相互作用海面を含む、ＰＴ３ Ｆａｂパラトープ及びｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペ
プチドエピトープ残基を、図８及び９、並びに表８に示す。ＰＴ３とそのエピトープペプ
チドとの界面はファン・デル・ワールス及び静電相互作用で構成され、ペプチド残基２１
１から２２１まで延びる。ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドとの複合体中のＰＴ３
Ｆａｂの構造は、エピトープがｐＴ２１２及びｐＴ２１７のホスフェートを含むことを
示す。重鎖Ｙ３２ヒドロキシル基は、ｐＴ２１２のホスフェート酸素と重要な水素結合を
形成する。Ｔ２８（ＶＨ）の側鎖のヒドロキシル基もまた、ｐＴ２１２のホスフェート酸
素と水素結合を形成する。重鎖Ｋ５３は、鍵となる塩橋相互作用をｐＴ２１７と形成する
。重鎖Ｗ９９は、ペプチドのＬ２１５及びＰ２１６の側鎖残基と疎水性相互作用を形成す
る。重鎖残基Ｗ１０４は、ペプチドと広範囲にわたる相互作用を有し、また、ＶＨ／ＶＬ
界面の一部を形成する。軽鎖Ｙ３２は、Ｐ２１９と疎水性相互作用を形成する。ｐＴ２１
２及びｐＴ２１７のホスフェートとの静電相互作用は、ホスホ－タウに対するＰＴ３の選
択性に決定的なものであり、疎水性相互作用は更に、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウ（実
施例５）並びにＰＨＦ－タウ（実施例１及び６）に対する、ＰＴ３の高親和性に寄与する
。

【0184】

表８：ＰＴ３ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドのエピトープ及びパラ
トープ。ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド残基と相互作用するＰＴ３Ｆａｂ ＶＨ
又はＶＬからの残基が示される。水素結合相互作用を太字の活字で示す。

【0185】

【表8】

【0186】

実施例４－ＰＴ３に対するヒトフレームワーク適合
ヒトフレームワーク適合（ＨＦＡ）法（Ｆｒａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ．３９８（２）：２１４－３１，２０１０）を使用して、抗タウマウス抗体Ｐ
Ｔ３をヒト化した。Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ Ｍｏ
ｌ Ｂｉｏｌ．２６３（５）：８００－１５，１９９６）に従い、ヒトフレームワーク適
合のため、ＣＤＲを規定した。ヒト化ＨＣ及びＬＣの最も良い組み合わせを発見するため
に、いくつかのヒト重鎖Ｖ領域配列及び軽鎖Ｖ領域配列を試験のために選択した。４つの
ヒトフレームワーク適合ＰＴ３重鎖可変領域、及び４つのヒトフレームワーク適合ＰＴ３
軽鎖可変領域を設計し、完全ヒト重鎖ＩｇＧ１及びヒト軽鎖κ分子として生成した（図１
０）。フレームワーク領域（ＦＲ）のみの中のマウスＰＴ３ ＶＨ及びＶＬに対する配列
類似性に基づいて、ヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子（ＶＨに関して４つ：ＩＧＨＶ３－２３^＊０
１、ＩＧＨＶ３－３３^＊０１、ＩＧＨＶ３－１１^＊０１、及びＩＧＨＶ１－３^＊０１；Ｖ
Ｌに関して４つ：ＩＧＶＫ１－１６^＊０１、ＩＧＶＫ１－１６^＊０１＋、ＩＧＫＶ１－３
９^＊０１、及びＩＧＫＶ２－２４^＊０１）を、ヒトフレームワーク適合ＶＨ及びＶＬ多様
体を製造するために選択した。ＶＬ７８（ＩＧＶＫ１－１６^＊０１＋）はＶＬ７７（ＩＧ
ＶＫ１－１６^＊０１）の単一点変異体であり、潜在的な異性化のリスクを排除するために
、Ｄ５６Ｓ変異を含有する。４つのＨＦＡ ＨＣ及び４つのＨＦＡ ＬＣ分子を組み合わ
せて得られる、１６個のＨＦＡ多様体モノクローナル抗体の名称を、表９に示す。

【0187】

表９：ＨＦＡ－ＰＴ３多様体。Ｂ２３４はマウス親可変領域を含有し、陽性対照として
含められた。対応するヒト生殖細胞系遺伝子を括弧の中に示す。ＶＬ７８（ＩＧＶＫ１－
１６^＊０１＋）はＶＬ７７（ＩＧＶＫ１－１６^＊０１）単一点変異を含有する。

【0188】

【表9】

【0189】

１６個のＨＦＡ－ＰＴ３（ｈＩｇＧ１／κ）多様体のパネルに対するクローニング及び
ＤＮＡ合成を、標準的な方法により実施した。標準的な手順によりＤＮＡをＨＥＫ（Ｅｘ
ｐｉ２９３）細胞にトランスフェクションし、細胞の上清を、培養液中で５日後に収集し
た。１×ｄＰＢＳ（ｐＨ７．２）中にて予備平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ａ樹脂上でＩｇＧを捕捉することにより、高スループットの並行精製用Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ ＰｒｏｔｅｉｎＭａｋｅｒ（Ｇａｉｔｈｅｒ
ｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を使用して、透明にした上清を精製した。１×ｄＰＢＳ（ｐＨ７．２
）でカラムを洗浄した後、０．１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）を使用してモノクロ
ーナル抗体を溶出した。２．５ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．２）を、２０体積％まで
添加して溶出画分を中和し、最終的なタンパク質の配合物は、０．０８Ｍの酢酸ナトリウ
ム、０．５ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．１）であった。

【0190】

ＨＦＡパネルの最初の評価は、精製収率、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（Ｓ
Ｅ－ＨＰＬＣ）プロファイル、ＥＬＩＳＡ結合アッセイでのＰＨＦ－タウへの結合、及び
生物物理学的特性決定に基づいた。

【0191】

対応するモノクローナル抗体のＨＣ及びＬＣ可変領域を、重鎖のＣ末端にてヒトＩｇＧ
１／κ定常領域及び６ｘＨｉｓタグと対形成することより、Ｂ２９６のＦａｂ（Ｂ３２４
）及びＢ２５２のＦａｂ（Ｂ３２６）もまた生成した。Ｂ３２４及びＢ３２６はＨＥＫ（
Ｅｘｐｉ２９３）細胞内で発現し、記載したものと類似の方法（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．
，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．６７（２）：１８２－９，２００９）により
精製した。

【0192】

実施例５－ホスホペプチドでのＳＰＲによる、ＨＦＡ－ＰＴ３抗体の特性決定
生物物理学的特性決定、及びＰＨＦへのＥＬＩＳＡ結合に基づいて選択したＨＦＡ－Ｐ
Ｔ３モノクローナル抗体多様体のサブセットを、以下のホスホペプチド：ｐＴ２１２／ｐ
Ｔ２１７－タウペプチド（ペプチド－２、配列番号：４８）及びｐＴ２１２－タウペプチ
ド（ペプチド－８、配列番号：５４）への結合に関して、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６で
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により分析した。全ての実験は、２５℃にて、ランニング
緩衝液及びサンプル希釈緩衝液の両方としてＰＢＳＴ（ｐＨ７．４）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ
カタログ番号１７６－２７２０）を用いて実施した。

【0193】

モノクローナル抗体／ペプチド結合。ＰＢＳＴで予めコンディショニングした後、抗ヒ
トＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ １０９－００５－０９８）でＢｉｏｒａｄ ＧＬＣチップを約
６５００ＲＵの密度までコーティングすることにより、バイオセンサ表面を調製した。Ｅ
ＤＣ／ＮＨＳを使用して、抗ヒトＩｇＧをチップ表面にアミンカップリングさせ、次いで
エタノールアミンで洗浄した。抗体をＰＢＳＴ中に２μｇ／ｍＬまで希釈し、３０μＬ／
分にて５分間、表面上に注入して９００～１０００ＲＵの最大密度を達成した。ペプチド
を検体として、６０μＬ／分にて３分間注入し、続いて５分間解離させた。ペプチド－２
をＰＢＳＴに希釈させて、３倍希釈系列（０～３０ｎＭ）を生成し、二重に測定した。ペ
プチド－８へのモノクローナル抗体結合の一度の測定を、０～１００ｎＭの濃度範囲にわ
たり記録した。

【0194】

Ｆａｂ／ペプチド結合。ビオチン化ペプチドを、ＰＢＳＴで予めコンディショニングし
た、ニュートラアビジンによりコーティングしたＮＬＣバイオセンサで捕捉し、Ｆａｂを
表面上で流し、反応速度論的パラメータを測定した。ＰＢＳＴ中にペプチドを１０ｎｇ／
ｍＬまで希釈し、３０μＬ／分にて１００秒間、流路に注入することにより、チップ表面
上で約５～１０ＲＵのペプチドを捕捉した。ＰＴ３ Ｆａｂの連続希釈液（１．１ｎＭ～
９０ｎＭ）には、緩衝液のみを、６０μＬ／分で３分間（会合段階）、続いて３００秒間
注入した（解離段階）。

【0195】

スポット間の応答を差し引くことによりデータを二重参照し、緩衝液のみの注入により
、曲線を作成した。０．８５％のリン酸によりチップ表面を再生し、続いて、次の抗体滴
定注入の前にＰＢＳＴを注入した。データ処理及び分析を、機器のソフトウェアを用いて
実施した。単純なラングミュア１：１結合モデルを使用してデータを合致させた。

【0196】

ペプチド－８に対するＨＦＡ－ＰＴ３ ＩｇＧの反応速度論的速度定数及び平衡結合親
和性を、表１０に示す。Ｂ２３４は、マウスＰＴ３可変領域及びヒトＩｇＧ１／κ定常領
域を含有する。ヒト化多様体の中でも、Ｂ２９６が、ペプチド－８に対して最も強力な結
合を示した（ｐＴ２１２－タウ）。

【0197】

【表10】

全ての抗体について、ｎ＝２

【0198】

ペプチド－２に対する、ＨＦＡ－ＰＴ３ ＩｇＧの反応速度論的速度定数及び平衡結合
親和性を、表１１に示す。Ｂ２５２及びＢ２９６は、それぞれ１７２ｐＭ及び１９０ｐＭ
の平均Ｋ_Ｄ値を有して、ペプチド－２（ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウ）に対して最も強
力な結合を示した。

【0199】

【表11】

全ての抗体について、ｎ＝２

【0200】

Ｂ２９６及びＢ２５２のＦａｂの親和性を、ＰｒｏｔｅＯｎによりｐＴ２１２／ｐＴ２
１７－タウペプチド（ペプチド－２）にて測定し、マウス親Ｆａｂ Ｂ１８７と比較した
（表１２）。親マウスＦａｂと比較して、解離速度は２．７～５．１倍増加し、ＨＦＡ
Ｆａｂに対するＫ_Ｄ値は３．５～５．６倍増加した。Ｂ２９６のＦａｂ（Ｂ３２４）は、
Ｂ２５２のＦａｂ（Ｂ３２６）よりも、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドに対して
強い親和性を、かつ、遅い解離速度を示した。

【0201】

【表12】

全てのＦａｂについて、ｎ＝２

【0202】

実施例６－ＰＨＦ－タウ及び組み換えタウにおけるＳＰＲによる、ＨＦＡ－ＰＴ３抗体
の特性決定
アルツハイマー病の脳から単離したＰＨＦ－タウに対する結合について、ＨＦＡ－ＰＴ
３モノクローナル抗体のサブセットを試験した。３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％の
Ｔｗｅｅｎ２０を補充したＰＢＳ（ｐＨ７．４）をランニング又はシステム緩衝液として
使用して、２５℃にて全ての相互作用を検討した。マウス抗タウ抗体であるＨＴ７（Ｐｉ
ｅｒｃｅ、カタログ番号ＭＮ１０００）を陽性対照として使用した。

【0203】

ＨＴ７を捕捉試薬として使用する、ＰＨＦ－タウの捕捉カップリングにより調製したバ
イオセンサ表面を使用して、ＰｒｏｔｅＯｎにより、ＰＨＦ－タウを有する抗タウモノク
ローナル抗体の相互作用を分析した。５０００ｘｇ、５℃にて１０分間の遠心分離を２回
行いＰＨＦ－タウを調製し、次に、２回目の遠心分離での上清をランニング緩衝液に、１
／４０に希釈した。チップを調製するために、アミンカップリング化学についての、メー
カーの取扱説明書を使用して、ＨＴ７をＧＬＣ（ＰｒｏｔｅＯｎ）センサチップの表面に
共有結合により固定化した（約５０００個の応答単位（ＲＵ））。カップリング用緩衝液
は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）であった。ＨＴ７の固定化の後、ＰＨＦ－
タウを注入し、ＨＴ７により捕捉した（約３００ＲＵ）。捕捉後、アミンカップリング化
学についてのメーカーの取扱説明書に従って、チップの活性化によってＰＨＦ－タウをセ
ンサチップに共有結合で固定化した。エタノールアミンを注入することによって、残りの
反応部位をブロックした。ＰＨＦ－タウ修飾表面及び参照表面（抗原を含有しない）の調
製及び安定化後、抗ＰＨＦ－タウ抗体をランニング緩衝液で希釈し、溶液中に注入した（
０．１２～７５ｎＭ、５倍希釈）。３分間会合をモニタリングした（４０μｇ／分で１２
０μＬを注入）。解離を１５分間モニタリングした。１０ｍＭのＧｌｙ（ｐＨ２．０）を
用いてセンサ表面を再生した。見かけの親和性（Ｋ_Ｄ）をｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの比率として
報告した、二価の結合モデルを使用して、モノクローナル抗体用のデータを合致させた。
Ｆａｂの反応速度分析のために、ラングミュア１：１結合モデルを使用した。

【0204】

大部分のＨＦＡモノクローナル抗体は、２７ｐＭ～１６５ｐＭの範囲で、マウス親ＰＴ
３モノクローナル抗体と同様の強力な結合を保持した（表１３）。２つのトップのＨＦＡ
モノクローナル抗体であるＢ２５２及びＢ２９６はそれぞれ、３２ｐＭ及び２７ｐＭの親
和性を有した。Ｂ２３５は、このパネルでは最も弱いモノクローナル抗体親和性（１６５
ｐＭ）を示した。Ｂ３２４（Ｂ２９６のＦａｂ）及びＢ３２６（Ｂ２５２のＦａｂ）を、
ＰＨＦ－タウの結合について評価すると、それぞれ、マウスＰＴ３親ＦａｂＢ１８７より
も２．５倍、及び３．３倍弱いＫ_Ｄを示した。Ｂ３２４は、Ｂ３２６よりも１．３倍強い
親和性（Ｋ_Ｄ）、及び１．７倍遅い解離速度を示した。Ｆａｂの親和性は、対応するモノ
クローナル抗体よりも弱く、これは、ＰＨＦ－タウに対してモノクローナル抗体が結合活
性を有することを示唆している。同じ可変領域を有する、Ｂ２９６のＩｇＧ４多様体であ
るＢ３５２を、ＰＨＦ－タウへの結合についてもまた試験した。親和性（４３ｐＭ）は、
Ｂ２９６の親和性の２倍以内であった（表１１）。

【0205】

【表13】

ｍＡｂ：各実験において３つの複製物、ｎ＝２
Ｆａｂ：各実験において２つの複製物、ｎ＝２
Ｂ３５２：各実験において４つの複製物、ｎ＝２

【0206】

抗タウモノクローナル抗体と、組み換えにより発現した対照タウ（ヒトタウアイソフォ
ーム２Ｎ４Ｒ ４４１ａａ、Ｎ末端６ｘＨｉｓタグ、配列番号：６３）を有するＦａｂと
の相互作用を、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００により検討した。アミンカップリング化学につい
てのメーカーの取扱説明書を用いて、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的抗体（Ａｂ）、又は抗Ｆ
ｄを、ＣＭ５センサチップの表面にカップリングさせることにより、バイオセンサ表面を
調製した（約６５００応答単位（ＲＵ））。カップリング用緩衝液は、１０ｍＭの酢酸ナ
トリウム（ｐＨ４．５）であった。抗タウ抗体をランニング緩衝液に希釈し、注入して少
なくとも５ＲＵの捕捉を得た。抗タウモノクローナル抗体又はＦａｂの捕捉に続いて、組
み換えにより発現した対照タウの溶液（０．１２～７５ｎＭ、５倍希釈）を注入した。会
合を３分間モニタリングした（５０μＬ／分にて１５０μＬを注入した）。合理的な解離
速度測定に関して少なくとも５％のシグナル低下が観察されるまで、解離をモニタリング
した。センサ表面の再生を、０．８５％のリン酸、続いて５０ｍＭのＮａＯＨにより行っ
た。結合が観察された場合、モノクローナル抗体及びＦａｂの両方についてのデータを、
１：１ラングミュア結合モデルを使用して合致させた。

【0207】

Ｂ３２４及びＢ３２６のいずれも、対照タウに対する有意な結合を示さなかった。Ｂ２
９６もまた、対照タウに対して結合を示さなかった。

【0208】

実施例７－Ｂ３２４＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチド複合体の結晶構造
Ｘ線結晶構造解析により、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド（配列番号：６２）
を有するＢ３２４の共構造を決定し、これにより、タウエピトープ並びにＢ３２４（及び
Ｂ２９６）パラトープの同定を行った。

【0209】

サンプル調製及び結晶化。ＨＥＫ ２９３細胞内での一時的発現により、ＶＨ９２及び
ＶＬ７７を有するＢ２９６のＦａｂであるＢ３２４を製造し、Ｎｉアフィニティクロマト
グラフィー、ＳＥＣ、及び２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ６．０）、０．２ＭのＮａＣｌの最終
緩衝液中でのイオン交換により精製した。実施例３で記載したように、ｐＴ２１２／ｐＴ
２１７－タウペプチド（配列番号：６２）を共結晶化のために使用した。Ｂ３２４ Ｆａ
ｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド複合体の調製のために、１０倍モル過剰のペ
プチドを添加した。

【0210】

Ｂ３２４ Ｆａｂ＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドの結晶化を、２０ｍＭのＭ
ＥＳ（ｐＨ６．０）、０．２ＭのＮａＣｌ中で９～１８ｍｇ／ｍＬにて実施した。２つの
インハウススクリーン及びＰＥＧ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、２０℃にてシッティング
ドロップ蒸気拡散法により、Ｍｏｓｑｕｉｔｏ結晶化ロボットで最初の結晶化スクリーニ
ングを実施した。結晶は０．１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．６）、２０％のＰＥＧ １
０Ｋから現れ、更なる最適化スクリーニングに使用するために、Ｓｅｅｄ Ｂｅａｄキッ
ト（Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いた機械的均質化により、シードを作製し
た。

【0211】

データ収集及び構造測定。結晶は０．１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）、３７％の
ＰＥＧ２００から現れ、これを回収して、Ｘ線回折データ収集のために、冷凍保護するこ
となく液体窒素内で急速冷却した。１００Ｋにて、ＩＭＣＡ－ＣＡＴビームライン１７－
ＩＤ－Ｂ上でＡｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（Ａｒｇｏｎｎｅ，ＩＬ）
にて、結晶構造解析データを収集した。画像半度当たり０．５秒の曝露で、１８０°回転
でＰｉｌａｔｕｓ ６Ｍ検出器にて回折強度を収集した。ＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ，２０１
０，Ｉｄ．）でデータを、２．６Åの最大解像度まで処理した。ｐＴ２１２／ｐＴ２１７
－タウペプチドと複合体化したＢ３２４のＸ線結晶構造を、関連するＦａｂ構造を調査モ
デルとして用いて、Ｐｈａｓｅｒ（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｉｄ．）で分
子交換により解像し、Ｒｅｆｍａｃ（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃ
ｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５３（Ｐｔ ３）：２
４０－５５，１９９７）により精密化した（表１４）。４．０Åの距離カットオフを使用
して、ＣＯＮＴＡＣＴ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐ
ｒｏｊｅｃｔ，１９９４，Ｉｄ．）により分子間の接触距離を計算し、Ｐｙｍｏｌで目視
検査した。

【0212】

【表14】

【0213】

構造分析。Ｂ３２４＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチド相互作用の全体的な構造を
図１１に示す。ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドは、Ｂ３２４ ＶＨ及びＶＬの界
面に形成した溝に合致する。Ｂ３２４とｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチドとの界面に
は、ファン・デル・ワールス及び静電相互作用が含まれ、これらはペプチド残基２１１か
ら２２１まで延びる（図１２）。以下のＣＤＲが、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチ
ドへの直接結合に関与する：ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１
、ＣＤＲ－Ｌ３。ｐＴ２１２／ｐＴ２１７タウペプチドと複合体化したＢ３２４の構造は
、エピトープが、ｐＴ２１２及びｐＴ２１７のホスフェートを含むことを示す。Ｂ３２４
Ｆａｂ残基と、ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド残基との相互作用図を、図１３
に示す。鍵となる相互作用のいくつかは、以下のとおりである：ＶＨ Ｙ３２ヒドロキシ
ル基と、ＶＨ Ｔ２８ヒドロキシル基とが、各々、ｐＴ２１２の異なるホスフェート酸素
と水素結合を形成する；ＶＨ Ｙ３２とＶＨ Ｗ９９の側鎖からは、タウペプチドのＬ２
１５のメチル基に疎水性相互作用が存在する；ＶＨ Ｋ５３は、タウペプチドの残基ｐＴ
２１７と塩橋相互作用を形成する；ＶＨ Ｗ１０４の側鎖は、ｐＴ２１７のメチル基と疎
水性相互作用を、及びＰ２１８とＣＨ－πスタッキング相互作用を形成し、ＶＨ／ＶＬ界
面の一部を形成する；ＶＨ Ｗ１０４のインドールアミドは、Ｔ２２０の側鎖ヒドロキシ
ルと水素結合を形成する；ＶＬ Ｙ３２の側鎖とＰ２１９との間には、疎水性相互作用が
存在する；ＶＬ Ｌ９６と、Ｔ２２０のメチル基との間には、疎水性相互作用が存在する
；並びに、ＶＬ Ｆ９４の側鎖とＴ２２０のメチル基とにより疎水性相互作用が形成され
る。ｐＴ２１２及びｐＴ２１７のホスフェートとの静電相互作用は、ホスホ－タウに対す
るＢ３２４の選択性に決定的なものであり、疎水性相互作用は更に、ｐＴ２１２／ｐＴ２
１７－タウペプチド（実施例５）及びＰＨＦ－タウ（実施例６）に対するＢ３２４の高親
和性に寄与する。マウスＰＴ３とＢ３２４との、エピトープ及びパラトープは非常に類似
しており、このことは、エピトープ及びパラトープのいずれもが、ヒト化の後に有意に変
化していないことを示す（図９及び図１３、表８及び表１５）。

【0214】

表１５：Ｂ３２４＋ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチドのエピトープ及びパラトー
プ。ｐＴ２１２／ｐＴ２１７－タウペプチド残基と相互作用するＢ３２４ ＶＨ又はＶＬ
の残基を示す。水素結合相互作用を太字の活字で示す。

【0215】

【表15】

【0216】

実施例８－細胞アッセイにおける機能試験
２種類の細胞アッセイ：同時培養アッセイ及び枯渇アッセイにおける、タウシーディン
グの阻害についてＰＴ３を試験した。両方のアッセイ種において、例えば凝集により非常
に近接した際にシグナルを生成する、２つの発色団タグＫ１８タウフラグメントを発現す
るＨＥＫ細胞を使用する。細胞を、凝集してリン酸化した、異なる源由来の完全長タウの
シードで処理した場合、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）比の変化（すなわち、
ＢＲＥＴアッセイ）により、又は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いた、蛍光共鳴
エネルギー移動（ＦＲＥＴ）陽性細胞の数を数えること（すなわち、ＦＲＥＴアッセイ；
図１４）により、定量化可能なＫ１８アグリゲートが生じる（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ
．，２０１４，ＰＮＡＳ １１１（４１）：Ｅ４３７６－８５）。

【0217】

ＨＥＫ細胞ホモジェネート同時培養アッセイ（ＢＲＥＴアッセイ）
同時培養用のタウシードを含有するホモジェネートを、Ｋ１８により誘発された、凝集
ＧＦＰタグ完全長タウを含有する安定したＧＦＰ－タウＰ３０１Ｌ過剰発現ＨＥＫ細胞株
から生成した。レシピエント細胞は、Ｋ１８／Ｐ３０１Ｌ－ＮａｎｏＬｕｃ及びＫ１８／
Ｐ３０１Ｌ－ＨａｌｏＴａｇを安定して発現するＨＥＫ細胞であった。タウシードを、試
験抗体、及び受容する発色団－Ｋ１８含有ＨＥＫ細胞と、７２時間同時培養した。Ｋ１８
アグリゲート形成を、ＢＲＥＴ比（５９０ｎｍ／４５０ｎｍ）の変化により測定した。Ｐ
Ｔ３は、凝集の誘発を３００ｎＭにおいて４６．９７％、３０ｎＭにおいて１８．０２％
、及び３ｎＭにおいて１２．５７％ブロックした（図１５）。

【0218】

脊髄同時培養アッセイ（ＦＲＥＴアッセイ）
凝集トランスジェニックヒトタウを含有する、週齢２２～２３のＰ３０１Ｓの脊髄から
、同時培養用のタウシードを含有するホモジェネートを生成した。感度の増加のために、
このアッセイで使用したレシピエント細胞は、Ｋ１８／Ｐ３０１Ｓ－ＹＦＰ及びＫ１８／
Ｐ３０１Ｓ－ＣＦＰを安定して発現するＨＥＫ細胞であった。タウシードを、試験抗体、
及び受容する発色団－Ｋ１８含有ＨＥＫ細胞と、７２時間同時培養した。Ｋ１８アグリゲ
ート形成を、ＦＡＣＳによりＦＲＥＴ陽性細胞の数を数えることにより測定した。ＰＴ３
は、凝集の誘発を３００ｎＭにおいて３４．０３％、３０ｎＭにおいて３７．０２％、及
び３ｎＭにおいて３０．６８％ブロックした（図１６）。

【0219】

免疫枯渇細胞アッセイ
最大阻害割合（％）の値が、シードのエピトープの密度、又はＰＴ３エピトープを含有
するシードの数に関係するか否かを調査するために、免疫枯渇アッセイを実施した。免疫
枯渇アッセイにおいて、タウシードを試験抗体により培養（インキュベーション）し、Ｇ
タンパク質のビーズを用いて溶液から除去した。枯渇した上清を、発色団－Ｋ１８含有Ｈ
ＥＫ細胞内での残留シーディング能力について試験し、上述したようにＦＡＣＳにより分
析した（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ
Ａ．１１１（４１）：Ｅ４３７６－８５，２０１４）。

【0220】

免疫枯渇のためのタウシードを含有するホモジェネートを、週齢２２～２３のＰ３０１
Ｓトランスジェニック動物の脊髄から（図１７）、又は、冷凍保護したヒトＡＤ脳組織か
ら（図１８）生成した。ヒトＡＤ脳免疫枯渇アッセイにおいて、トランスフェクション試
薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の存在下において、枯渇後に上清を試験紙、許容
されるアッセイウィンドウを得た。脊髄抽出物、及びヒトＡＤ脳の全ホモジェネートの両
方において、ＰＴ３を用いてタウシーディングをほぼ完全に（＞９０％）枯渇することが
できた（図１７及び１８）。

【0221】

結果
ＰＴ３は、ＨＥＫ細胞可溶化物、及びＴｇＰ３０１Ｓ脊髄溶解物の両方に由来するタウ
シードを阻害した。アッセイで得た最大阻害は、異なる抗ホスホ－タウ抗体において、及
び異なるシードにおいて変化した（表１６）。観察された、３００ｎＭにおけるＰＴ３に
対する阻害値は、ＨＥＫ細胞シードに対しては４６．９７±５．８７％であり、ＴｇＰ３
０１Ｓ脊髄抽出物に対しては３４．０３±２．０５％であった。異なる細胞アッセイにお
ける、ホスホ－タウ抗体に対する異なる最大阻害値により、使用したタウシードのリン酸
化状態の違いを示すことができる。ＴｇＰ３０１Ｓ脊髄で生成したタウシードは神経細胞
由来のものであり、ＨＥＫ細胞由来のタウシードよりもＰＨＦ－タウに対して類似性が高
いことが予想される。このことにより、脊髄抽出物対ＨＥＫ細胞可溶化物に対するホスホ
－タウ抗体で観察された、全般的に高い効能を説明することができる。

【0222】

脊髄抽出物、及びヒトＡＤ脳の全ホモジェネートの両方において、ＰＴ３によりタウシ
ーディングをほぼ完全に枯渇させることができた。この結果は、脊髄シーディング材料を
用いた同時培養実験における完全阻害の欠如が、ＰＴ３エピトープを欠くシードが存在す
ることにより生じたのではなく、シードにおける限定的なエピトープの密度により生じた
ことを示唆している。

【0223】

【表16】

単位は陰性対照の％（パーセント）、異なる実験の平均であり、^ａ１６６．６７ｎＭに
おける阻害、及び^ｂ８９．９９ｎＭにおける阻害を除いて、全てのアッセイにおける抗体
濃度は３００ｎＭであった。

【0224】

タウ抗体治療の作用機序は依然として議論の主題であり、複数の機序が提示されている
。小膠細胞による、抗体が媒介する細胞外シードのクリアランスは、１つの優位な作用機
序として近年示唆されている（Ｆｕｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２９
０（３５）：２１６５２－６２，２０１５ ａｎｄ ＭｃＥｗａｎ ｅｔ ａｌ．，２０
１７，ＰＮＡＳ １１４：５７４－９）。本文脈では、ヒトの脳に由来するシーディング
材料の免疫枯渇が、最も並進的な細胞の結果であると考えることができ、この種の細胞ア
ッセイにおける親マウス抗体ＰＴ３の高い効能は、ＰＴ３のＨＦＡ版が効果的な治療薬で
あることを示唆している。

【0225】

実施例９－ｅＰＨＦ注入モデルにおけるマウスＰＴ３のｉｎ ｖｉｖｏでの効能
インビボでのタウ抗体の効能を評価するために、脳でタウの病状を示すマウスを、必須
のモデルシステムとする（Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉ
ｏｌ．８４９：４７３－９１，２０１２）。これらのモデルのいくつかが記載されており
、これらは一般的に、３つの群に分けることができる：１）株に応じて、５～９ヶ月後に
重篤な病状を示す変異体により、ＷＴ又は変異体（例えば、Ｐ３０１Ｌ若しくはＰ３０１
Ｓ）を過剰発現するタウトランスジェニックマウス（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎ
ｅｕｒｏｓｃｉ．２２（２１）：９３４０－５１，２００２；Ｓｃａｔｔｏｎｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０８（１）：２５０－７，２０１０；Ｔｅ
ｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８０（５）：３９６３－７３，２
００５；Ｙｏｓｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．５３（３）：３３７－５１
，２００７）；２）変異体タウ（例えば、Ｐ３０１Ｌ）を空間時間的に制御して発現する
マウス（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｂｅｈａｖ．６（４）：
６１０－２０，２０１２）、又は凝集後フラグメント（例えば、Ｋ１８）を有するマウス
（Ｍｏｃａｎｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（３）：７３７－４８，２
００８）；並びに３）プラーク及びタウの病状の両方を示す、変異体タウ及びＡＰＰの両
方を発現するマウス（Ｏｄｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１０２（４）
：１０５３－６３，２００７）。

【0226】

変異体タウを発現するマウスが強い病状を発現する一方で、病状の開始は動物によって
変化する可能性があり、検討において変動性を引き起こす。また、細胞の自律神経による
タウ凝集、及び全体のタウ凝集シグナルへの拡散の相対的寄与は、はっきりとしていない
。したがって、タウのシーディング及び拡散を効果的に検討するために使用可能なモデル
（例えば、ｄｅ Ｃａｌｉｇｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｎｅｕｒｏｎ．７３（４
）：６８５－９７，２０１２；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｄ．）は、価値が高い。ＡＬＺ
１７マウス（通常のヒトタウを発現する株）に、異なるタウ異常症に由来する脳のホモジ
ェネートを注射することにより、ヒトの脳におけるタウ異常症に類似するモルホロジーを
有して、タウが含まれる形成を誘発することの発見により、このようなモデルの並進的価
値は更に強化される。例えば、マウスに、嗜銀顆粒性認知症サンプルの材料を注射するこ
とにより、疾病そのものに回転楕円体又はコンマ様構造の特徴を有する沈着がもたらされ
、ＡＤ様のタウ病状が、ＡＤ材料を注射したマウスで観察された（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ
ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０（２３）：９５３５－４０）。

【0227】

したがって、タウの凝集後フラグメント、例えば合成Ｋ１８原線維（Ｌｉ ａｎｄ Ｌ
ｅｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４５（５１）：１５６９２－７０１，２００６）、又
はヒトＡＤ脳に由来するＰＦＨ－タウシードを、細胞の自律神経による凝集が始まってい
ない年齢のＰ３０１Ｌトランスジェニックマウスモデルにおける、皮質又は海馬領域に注
入した、トランスジェニックＰ３０１Ｌマウス注入モデルが確立された。注入モデルは、
タウ拡散の決定的な細胞外シーディング構成成分を再現することを目的としている。注入
されるＫ１８又はＰＨＦ－タウシードは、注入部位にてタウ異常症を誘発し、また、接続
した反対側の領域において、より軽度に、タウ異常症を誘発する（Ｐｅｅｒａｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ．７３：８３－９５，２０１５）。このモデルに
より、ＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウシード又はＫ１８原線維と同時注入した際に、本発明の
抗タウ抗体などの抗体の、抗シーディング能力の試験が可能となる（Ｉｂａ ｅｔ ａｌ
．，２０１５，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３３（３）：１０２４－３７，２０１３；Ｉｂａ
ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１３０（３）：３４９－６２）。

【0228】

トランスジェニックＰ３０１Ｌマウス注射モデルの概略図を図１９に示す。手短かに言
えば、死後のＡＤ脳への、サルコシル不溶性画分の皮質注射により、タウ凝集のゆっくり
と進行する増加が誘発される。注射された半球では、注射の１ヶ月後に最初のシグナルが
測定され、注射の更に３ヶ月後まで進行する。注射の５ヶ月後に、いくつかの動物では、
Ｐ３０１Ｌ変異により引き起こされる濃縮の形成が開始される（Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．，２００５，Ｉｄ．）。ＡＴ８の染色レベルは、１ヶ月と３ヶ月との間で増加する（
図１９Ｃ～図１９Ｄ、及び図１９Ｅ～図１９Ｆ）ため、抗体の効能実験を、同時注射の２
ヶ月後に分析する。更に、死後のＡＤ脳への、サルコシル不溶性画分の海馬注射が、注射
した半球のサルコシル不溶性画分をＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ（ＭＳ
Ｄ）により分析することで測定した、用量依存的なタウ凝集の増加の進行が誘発される（
図１９Ｇ）。

【0229】

動物治療及び頭蓋内注射
注射の検討のために、Ｐ３０１Ｌ変異を有する最長のヒトタウアイソフォーム（タウ－
４Ｒ／２Ｎ－Ｐ３０１Ｌ）（Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｉｄ．）を発現す
るトランスジェニックタウ－Ｐ３０１Ｌマウスを、月齢３ヶ月にて手術に使用した。現地
の倫理委員会が認可した手順を遵守して、全ての実験を実施した。定位的手術のために、
マウスは、モノクローナル抗体の存在下又は不存在下にて、毛皮質（ＡＰ＋２．０、前頂
からＭＬ＋２．０、ＤＶ、硬膜から２．７ｍｍ）、又は海馬（ＡＰ－２．０、ＭＬ＋２．
０（前頂から）、ＤＶ １．８ｍｍ（硬膜から））に、３μＬ（速度：０．２５μＬ／分
）で、死後ＡＤ組織（富化した対らせん状細線維、ｅＰＨＦ）からサルコシル不溶性ｐｒ
ｅｐの一側性（右半球）注射を受けた。抗体又は生理食塩水の腹腔内（ＩＰ）注射の場合
、治療（２０ｍｇ／ｋｇ、２×／週）は頭蓋内注射の１週間前に開始し、マウスを解離の
ために犠牲にする（頭蓋内注射の２ヶ月後）まで継続した。

【0230】

抽出手順
注射した半球のマウス組織の重量を測定し、６体積の均質化緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．６））中で均質化した。２７０００×ｇにて２０分間、ホモジェネ
ートを遠心分離にかけ、得られた上清（全ホモジェネート）からアリコートを取り出した
後、１％のＮ－ラウロイルサルコシンを添加した。９０分後（９００ｒｐｍ、３７℃）、
溶液を再び、１８４０００×ｇにて１時間遠心分離にかけた。上清はサルコシル可溶性画
分として保持したが、サルコシル不溶性材料を含有するペレットは、均質化緩衝液中に懸
濁させた。

【0231】

生化学的分析
被覆抗体（抗ＡＴ８又は全タウ抗体のいずれか）をＰＢＳに希釈（１μｇ／ｍＬ）し、
ＭＳＤプレート（ウェル当たり３０μＬ）（Ｌ１５ＸＡ，Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃ
ｏｖｅｒｉｅｓ）にアリコートとし、これらを終夜４℃でインキュベーションした。５×
２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄した後、プレートをＰＢＳ中の
０．１％のカゼインでブロックし、５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２
０で再び洗浄した。サンプル及び標準（共に、ＰＢＳ中の０．１％のカゼインに希釈）を
添加した後、プレートを終夜４℃でインキュベーションした。その後、プレートを５×２
００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄し、ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ（商標）
がコンジュゲートした検出抗体（ＰＢＳ中の０．１％のカゼイン中）を添加し、６００ｒ
ｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベーションした。最後の洗浄（５×２００μＬ
のＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０）の後、１５０μＬの２×緩衝液Ｔを添加し、プ
レートをＭＳＤイメージャで読み取った。死後のＡＤ脳（ｅＰＨＦ）のサルコシル不溶性
ｐｒｅｐの１６個の希釈物からなる検量線に対してそのままのシグナルを正規化し、任意
の単位（ＡＵ）ｅＰＨＦとして表した。統計分析（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後テストと合
わせたＡＮＯＶＡ）を、ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウェアで行った。

【0232】

結果
皮質同時注射モデルにおけるマウスＰＴ３の活性（図１９）が、４つの独立した検討に
て確認された。マウスを表１７に従い末梢投与し、結果を図２０に示す。モデルの更なる
改善（図１９Ｄ）により、表１８に示すように、ｅＰＨＦ－タウの用量及び同時注射され
る抗体の用量の低下が可能となった（結果を図２１に示す）。ｅＰＨＦ－タウのこの低下
させた用量を用いることにより、末梢投与した際に、ＰＴ３は凝集したタウを低下させる
有意な効果を有することもまた、発見された（Ｐ＜０．０００１；図２１）。

【0233】

【表17】

【0234】

【表18】

【0235】

図１９Ａのレイアウトに従い、ＰＴ３ーＨＦＡ ＩｇＧ２ａ多様体（ｍＩｇＧ２ａ／κ
定常領域に、可変領域ＶＨ９２（配列番号：２７）及びＶＬ７７（配列番号：３１）を含
有する）を含む、ｅＰＨＦ及びＰＴ３アイソタイプの同時注射により、Ｐ３０１Ｌマウス
における、ｅＰＨＦにより誘発されたタウ凝集が弱まった（図２２）。毛皮質に注射を行
った。（海馬ではない）。注射を受けた半球（生化学データ、図２２Ｂ）、及び注射を受
けていない半球（ＩＨＣＡＴ１００染色、図２２Ｃ）において、効果を観察した。ＩｇＧ
２ａ及びＩｇＧ１アイソタイプでは共に、ＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウを同時注射したとき
、タウ異常症の誘発が有意に低下した（ｐ＜０．０００１）。結果により、反対側の半球
にてＩＨＣが確認された。

【0236】

以上、本発明を詳細に、かつその具体的な実施形態を参照して説明したが、当業者には
、発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明に様々な変更及び改変を行い得る点
は明らかであろう。

【0237】

実施例１０－ＰＳＰタウとＡＤタウとの比較
進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）は、パーキンソン症候群、体位の不安定性及び転倒、核上
性注視麻痺、並びに認知症を特徴とする、希少かつ致死性の神経変性疾患である（Ｓｔｅ
ｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９６４，Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ １０
：３３３－３５９）。病理学的には、脳幹及び大脳基底核、並びに他の脳領域に、４リピ
ート（４Ｒ）タウの選択的蓄積が存在する（Ｄｉｃｋｓｏｎ ＤＷ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ
ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２００８；８９：４８７－４９１；Ｗｉ
ｌｌｉａｍｓ ＆ Ｌｅｅｓ，２００９，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ
８：２７０－２７９）。アミロイドなどの他の病状の不存在を考慮すると、ＰＳＰは一次
性タウ異常症であると考えられ、動物モデルデータは、ＰＳＰタウが、ＡＤにて生じてい
ると仮説が立てられているものに類似しているシーディングを受け得ることを示唆してい
る（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ ｅｔ ａｌ．．２０１３，ＰＮＡＳ １１０：９５３５－９
５４０；Ｓａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎｅｕｒｏｎ ８２：１２７１－１
２８８）。そのため、ＰＳＰは本発明の抗体で治療することができる。一連の実験を行い
、ＰＳＰタウとＡＤ ＰＨＦタウとの類似性を特性決定した。

【0238】

方法
ヒト脳組織：臨床診断を受けたＰＳＰ（ｎ＝５）患者（核尾状核＝ＣＡＵ、及び被殻＝
ＰＵＴ）の、典型的には非常に影響を受けている２つの脳領域、並びに、さほど影響を受
けていない脳領域（上前頭回＝ＧＦＳ）、並びに、２つの対照（＝タウ異常症を有しない
）患者の同一の脳領域の凍結保存組織を、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄ Ｂｒａｉｎ Ｂａｎｋ
から入手した。後述する凝集アッセイ及び免疫組織化学染色の両方を用いる分析のために
、組織を使用した。９名の散発性ＡＤ患者の凍結保存組織をＵｎｉｖｕｌｅｒｓｈｉｔｙ
ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａから入手し、凝集アッセイを用いる分析のために使用
した。１名のＡＤ患者の凍結保存組織をＵｎｉｖｕｌｅｒｓｈｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｗｃａ
ｓｔｌｅから入手し、免疫組織化学染色に使用した。

【0239】

脳組織の均質化：凍結保存組織を、１０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ
７．４）、フィルターで均質化し、０，２２μｍ＋ＣｏｍｐｌｅｔｅミニＥＤＴＡ非含有
プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号１１ ８３６ １７０ ００１）を、ダ
ウンス型ホモジナイザーで１０００ｒｐｍにて１０ストロークし、１０％ ｗ／ｖのホモ
ジェネートを得た。ホモジェネートを２７．０００×ｇ、１０分、４℃にて遠心分離にか
け、上清を、使用するまでー８０℃でアリコートに保管した。

【0240】

凝集アッセイ：ホスホ－タウ抗体ＡＴ８及びＰＴ３を捕捉及び検出抗体として使用する
、凝集特異的サンドイッチＭＳＤイムノアッセイを実施した。被覆抗体をＰＢＳ（１μｇ
／ｍＬ）に希釈し、ＭＳＤプレート（ウェル当たり３０μＬ）（Ｌ１５ＸＡ，Ｍｅｓｏｓ
ｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ）にアリコートとし、４℃にてインキュベーションし
た。５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄した後、プレートをＰ
ＢＳ中の０．１％のカゼインでブロックし、５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅ
ｅｎ－２０で再び洗浄した。サンプル及び標準（共に、ＰＢＳ中の０．１％のカゼインに
希釈）を添加した後、プレートを４℃にてインキュベーションした。その後、プレートを
５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄し、ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ（
商標）がコンジュゲートした検出抗体（ＰＢＳ中の０．１％のカゼイン中）を添加し、６
００ｒｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベーションした。最後の洗浄（５×２０
０μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０）の後、１５０μＬの２×緩衝液Ｔを添加
し、プレートをＭＳＤイメージャで読み取る。そのままのシグナルを、１つのＡＤ全脳ホ
モジェネートの７つの希釈物からなる検量線に対して正規化し、この検量の補間値として
、割合（％）で表す。

【0241】

免疫組織化学法：凍結保存したヒト脳組織を冷凍切片（２０μｍの厚さ）にスライスし
、使用前に－８０℃で保管した。切片を乾燥させ、続いてホルマリン固定、内因性ペルオ
キシダーゼの３％過酸化水素（ＤＡＫＯ，Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ，Ｓ２０２
３）でのブロッキング、及びＰＢＳ１ｘ＋０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００での１時間
の易透化を続けた。一次抗体（０．４μｇのＰＴ３／ｍＬ；０．４μｇ／ｍＬのＡＴ８）
を、バックグラウンドの還元構成成分（ＤＡＫＯ，Ｓ３０２２）で抗体希釈液に希釈し、
切片に１時間適用した。広範囲を洗浄した後、ＨＲＰがコンジュゲートした抗マウス二次
抗体（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ，ＤＡＫＯ，Ｋ４０００）、続いて色原体ＤＡＢ標識（ＤＡＫＯ
，Ｋ４３６８）により、スライドをインキュベーションした。スライドをヘマトキシリン
で対比染色し、無水化して有機固定培地（Ｖｅｃｔａｍｏｕｎｔ，Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂ
ｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ，ＵＳＡ，Ｈ－５０００）で固定した。イメージングを
、Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ ２．０ ｒｓ（浜松ホトニクス（静岡）
）で実施した。

【0242】

結果
凝集アッセイ：凝集アッセイを実施して、ＰＳＰタウのリン酸化度を特定決定した。Ｐ
Ｔ３反応性アグリゲートはＰＳＰ脳の中に存在したが、凝集度はＡＤ脳よりも低かった（
図２３）。参照抗体ＡＴ８を用いて得た結果は、ＰＴ３を用いて観察されたものに類似し
ていた。これらの結果は、様々なホスホ－タウ抗体を使用して評価した全てのリン酸化部
位がＰＳＰタウに存在するものの、ＡＤと比較して、ＰＳＰにはよりわずかしかタウ凝集
が存在していないことを示唆している。

【0243】

免疫組織化学法：ＡＤ又はＰＳＰ脳の凍結切片にて、ＰＴ３抗体により染色することに
よって、解剖学的領域（すなわち、尾状核及び被殻）における染色は、ＰＳＰに影響を与
えたことを示した（図２４）。タウ＋ニューロン及び房飾星状細胞を含むＰＳＰの、神経
病理学的特徴は、ホスホ－タウ抗体ＰＴ３により検出された。ＡＴ８を用いて得られた結
果は、ＰＴ３を用いて観察されたものに類似していた。

【0244】

結論
利用可能なデータは、ＰＴ３がＰＳＰのタウに結合することを示唆している。

【0245】

実施例１１－ＰＴ３－ＨＦＡの親和性成熟
親和性成熟した抗体の，ＰＨＦ－タウへのＳＰＲ結合の特性決定
親和性成熟したモノクローナル抗体を、アルツハイマー病の脳から単離したＰＨＦ－タ
ウへの結合について試験した。３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％のＴｗｅｅｎ ２０
をランニング又はシステム緩衝液として補充したＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いて、２５℃
にてＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６ ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，
ＣＡ）を使用して、結合反応速度及び親和性検討を実施した。

【0246】

アミンカップリング化学用の、供給元が推奨する手順を用いて、マウス抗タウ抗体であ
るＨＴ７（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，カタログ番号ＭＮ１０００）により、ＧＬＣセン
サチップを共有結合により固定化した（約５０００応答単位（ＲＵ））。カップリング緩
衝液は１０ｍＭ（ｐＨ４．５）の酢酸ナトリウムであった。ＰＨＦ－タウを、５０００×
ｇにて５℃で１０分間、２回遠心分離することにより調製した。２回目の遠心分離での上
清をランニング緩衝液に希釈させ（１／１２５）、ＨＴ７固定化表面に捕捉カップリング
した（約３００ＲＵ）。捕捉カップリングの後、表面を活性化及び不活性化して、抗体結
合検討用の均質なＰＨＦ－タウ表面を生成した。抗タウ抗体及びこれらのＦａｂ（ランニ
ング緩衝液にて調製、０．０２４～７５ｎＭ、５倍希釈）を、ＰＨＦ－タウ表面にわたり
５０μＬ／分で注入し、結合を測定した。会合及び解離プロファイルをそれぞれ、４分間
及び２時間モニタリングした。解離後、１０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．０）及びランニン
グ緩衝液の複数回注入を用いて、センサチップを再生した。参照表面（ＰＨＦ－タウを全
く有しない）を使用して、注入したｍＡｂ又はＦａｂの非特異的結合をモニタリングした
。ＨＴ７抗体を陽性対照として使用した。ｍＡｂに対する結合のセンサーグラムを、二価
の結合モデルを使用して合致させ、ここでは、見かけの親和性又は結合活性により引き起
こされる結合（Ｋ_Ｄ）は、解離速度と会合速度との比（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）として報告さ
れた。１：１ラングミュア結合モデルを、Ｆａｂの反応速度論的分析に使用した。

【0247】

親ヒト抗体（Ｂ２９６）は、ＰＨＦ－タウに対して強力な結合（Ｋ_Ｄ＝６．２ｐＭ）を
示し、非常に遅い解離速度が支配的であり、ｍＡｂの５％以下の解離が２時間にわたって
観察された（表１９、図２５）。親和性成熟した抗体は、１．８～２．５ｐＭの範囲で親
和性を有してＰＨＦ－タウに結合するという改善を示した。Ｂ７１１及びＢ８０９は、親
抗体と比較して会合速度に３倍の改善を示したが、解離速度は、全ての抗体においての目
視での区別はできなかった（図２５）。Ｆａｂは全体的に、対応するｍＡｂと比較してＰ
ＨＦ－タウに対して桁違いに弱い結合を示し、このことにより、ｍＡｂのＰＨＦ－タウへ
の、結合活性により引き起こされる結合が示唆された。Ｂ３２４（親ｍＡｂであるＢ２９
６のＦａｂ）は、６３．２ｐＭの固有の親和性でＰＨＦ－タウに結合した。親和性成熟し
たｍＡｂのＦａｂは、１５．６ｐＭ～３１ｐＭの範囲の値を有し、同様に親和性の改善を
示した。２つのＦａｂであるＢ３３０（Ｂ７１１のＦａｂ）、及びＢ３３２（８０９のＦ
ａｂ）は更に、会合速度において、対応するｍＡｂと同様の、３～４倍の改善を示した。

【0248】

【表19】

１実験において、Ｎ＝２～３の複製物。値は平均±ＳＤ（又は範囲）として報告した

【0249】

ＥＬＩＳＡによるホスホペプチドへの結合
ペプチド（１０ｎｇ／ｍＬ）をプレートに終夜直接コーティングしたＥＬＩＳＡにより
、タウホスホペプチドの結合を分析した。プレートを洗浄し、ＰＢＳ中の０．１％のカゼ
インでブロックした後、異なる濃度のＨＦＡ－ＰＴ３（Ｂ２９６）並びにＨＦＡ－ＰＴ３
の親和性成熟多様体（Ｂ８０９、Ｂ３３３、及びＢ７１１）ｍＡｂで、プレートをインキ
ュベーションした（図２６Ａ）。抗体とのインキュベーションの後、プレートを洗浄して
、ウェル当たり５０μＬのＨＲＰＯで、抗Ｆａｂ抗体を標識した（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（ブロッキング緩衝液中に１：
１００００に希釈）。別の洗浄ステップの後、メーカーの取扱説明書に従い、「ワンステ
ップ」ＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、検出を実施した。Ｅｎ
Ｖｉｓｉｏｎ（登録商標）２１０２ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉ
ｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）でプレートを分析した。結合曲線を、
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０ソフトウェアを使用して生成した。図２６Ａの結合
曲線から、Ｂ２９６は最も低い親和性を示した一方で、Ｂ７１１はＢ２９６と、またＢ３
３３及びＢ８０９とも比較して、最も強い結合を示したことを知ることができる。これに
より、Ｂ７１１は、ｐＴ２１７ペプチドに対して最も強い親和性を有するヒト化ＰＴ３で
あることが示唆される。Ｆａｂを用いる同様の実験（図２６Ｂ）により、Ｍ３３３（Ｂ７
１１のＦａｂ）は、親ＰＴ３分子のＦａｂであるＢ１８７と比較して、同様のペプチド結
合を有したことが示された。ここでも、Ｍ３２４（Ｂ２９６のＦａｂ、ＨＦＡ－ＰＴ３）
は、ＰＴ３－ＨＦＡの親Ｆａｂ及び親和性成熟した多様体と比較して弱い結合を示した。

【0250】

【表20】

少なくとも２つの実験にて、Ｎ＝２の複製物である。値は平均±ＳＤとして報告した。

【0251】

参考文献
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【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19-1】

【図19-2】

【図20】

【図21】

【図22A】

【図22B】

【図22C】

【図23A】

【図23B】

【図24】

【図25】

【図26A】

【図26B】

【配列表】

2024088689000001.app

【手続補正書】

【提出日】2024-04-17

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

リン酸化タウタンパク質に結合する、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、
ａ）（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
ｃ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

ａ）（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
ｃ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

リン酸化タウタンパク質に対する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号２６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）配列番号２８のポリペプチド配列を有するＶＨおよび配列番号３４のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｃ）配列番号２６のポリペプチド配列を有するＶＨおよび配列番号３４のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｄ）配列番号２８のポリペプチド配列を有するＶＨおよび配列番号３１のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｅ）配列番号７４のアミノ酸１～１１８のポリペプチド配列を有するＶＨおよび配列番号７５のアミノ酸１～１０７のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｆ）配列番号７６のアミノ酸１～１１８のポリペプチド配列を有するＶＨおよび配列番号７７のアミノ酸１～１０７のポリペプチド配列を有するＶＬ；または
（ｇ）配列番号７８のアミノ酸１～１１８のポリペプチド配列を有するＶＨおよび配列番号７９のアミノ酸１～１０７のポリペプチド配列を有するＶＬ
を含む、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

（ａ）配列番号７４の重鎖および配列番号７５の軽鎖；
（ｂ）配列番号７６の重鎖および配列番号７７の軽鎖；または
（ｃ）配列番号７８の重鎖および配列番号７９の軽鎖
を含む、請求項３に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

ヒト重鎖ＩｇＧ１定常領域およびヒト軽鎖κ定常領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

請求項１～５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸。

【請求項7】

請求項６に記載の単離核酸を含む、ベクター。

【請求項8】

請求項６に記載の核酸または請求項７に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項9】

請求項１～５のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および医薬上許容できる担体を含む、医薬組成物。

【請求項10】

請求項１～５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の製造方法であって、
前記抗体またはその抗原結合断片を製造する条件下において、前記抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞または細胞培養液から前記抗体またはその抗原結合断片を回収することとを含む、方法。

【請求項11】

サンプルにおけるリン酸化タウタンパク質の存在を検出する方法における、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の使用。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２５１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0251】

【表21】

本願明細書に記載の発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
リン酸化エピトープにおいてリン酸化タウタンパク質に結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、
（ａ）前記タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２及びリン酸化Ｔ２１７、並びに配列番号：４８のアミノ酸配列を有する、又はその中にある前記リン酸化エピトープ；
（ｂ）前記タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１７、及び配列番号：５２のアミノ酸配列を有する、又はその中にある前記リン酸化エピトープ；又は
（ｃ）前記タウタンパク質のリン酸化Ｔ２１２、及び配列番号：５４のアミノ酸配列を有する、又はその中にある前記リン酸化エピトープ；
を含む、前記単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
［２］
前記モノクローナル抗体が、配列番号：１、４、７、１０、７１、８０のいずれかのＨＣＤＲ１；配列番号：２、５、８、１１、７２、８１のいずれかのＨＣＤＲ２；配列番号：３、６、９、１２、７３のいずれかのＨＣＤＲ３；配列番号：１３、１６、１９、２２、７０のいずれかのＬＣＤＲ１；配列番号：１４、１７、２０、２３のいずれかのＬＣＤＲ２；配列番号：１５、１８、２１、２４のいずれかのＬＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
［３］
（ａ）それぞれ配列番号：７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号：１、２、及び３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１３、１４、及び１５のポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号：４、５、及び６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１６、１７、及び１８のポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号：１０、１１、及び１２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：２２、２３、及び２４のポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号：８０、８１、及び９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号：７１、７２、７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：７０、２０、及び２１のポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号：７１、７２、及び７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号：１９、２０、及び２１のポリペプチド配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ _Ｌ 領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ _Ｌ 領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶ _Ｌ 領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
（ｋ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶ _Ｌ 領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
を含み、前記抗体又が、その抗原結合断片はＰＨＦ－タウに結合している、上記［２］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［４］
配列番号：２６、２７、２８、及び２９のいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、並びに、配列番号：３１、３２、３３、及び３４のいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、上記［３］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［５］
配列番号：２６、２７、２８、及び２９のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、並びに、配列番号：３１、３２、３３、及び３４のいずれかのポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、上記［４］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［６］
配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖に由来するＶ _Ｈ と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、並びに、配列番号：３１、７５、７７、７９のいずれかの軽鎖に由来するＶＬと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、上記［３］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［７］
配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖に由来するＶ _Ｈ のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、並びに、配列番号：３１、７５、７７、７９のいずれかの軽鎖に由来するＶＬのポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、上記［６］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［８］
（ａ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 、及び配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｂ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 、及び配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｃ）配列番号：２６のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 、及び配列番号：３４のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｄ）配列番号：２８のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 、及び配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｅ）配列番号：２７のポリペプチド配列を有するＶ _Ｈ 、及び配列番号：３１のポリペプチド配列を有するＶＬ；
（ｆ）配列番号：７４の重鎖に由来するＶ _Ｈ 、及び配列番号：７５の軽鎖に由来するＶ _Ｌ ；
（ｇ）配列番号：７６の重鎖に由来するＶ _Ｈ 、及び配列番号：７７の軽鎖に由来するＶ _Ｌ ；又は
（ｈ）配列番号：７８の重鎖に由来するＶ _Ｈ 、及び配列番号：７９の軽鎖に由来するＶ _Ｌ ；
を含む、上記［３］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［９］
配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する重鎖、並びに、配列番号：４６、７５、７７、及び７９のいずれかと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、上記［８］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［１０］
配列番号：４５、７４、７６、及び７８のいずれかのポリペプチド配列を有する重鎖、並びに、配列番号：４６、７５、７７、及び７９のいずれかのポリペプチド配列を有する軽鎖を含む、上記［９］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［１１］
（ａ）配列番号：４５の重鎖、及び配列番号：４６の軽鎖；
（ｂ）配列番号：７４の重鎖、及び配列番号：７５の軽鎖；
（ｃ）配列番号：７６の重鎖、及び配列番号：７７の軽鎖；又は
（ｄ）配列番号：７８の重鎖、及び配列番号：７９の軽鎖；
を含む、上記［１０］に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［１２］
ヒト重鎖ＩｇＧ１定常領域及びヒト軽鎖κ定常領域を含む、上記［１］～［１１］のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［１３］
上記［１］～［１２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする、単離核酸。
［１４］
上記［１３］に記載の単離核酸を含む、ベクター。
［１５］
上記［１４］に記載の核酸を含む、宿主細胞。
［１６］
上記［１］～［１２］のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又は抗原結合断片、及び医薬上許容できる担体を含む、医薬組成物。
［１７］
病理学的タウ凝集の低減、又はタウ異常症の拡大の低減を必要とする対象における、病理学的タウ凝集の低減、又はタウ異常症の拡大の低減方法であって、前記対象に、上記［１６］に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
［１８］
タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症の治療方法であって、前記対象に、上記［１６］に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
［１９］
前記タウ異常症は、家族性アルツハイマー病、散発的アルツハイマー病、染色体１７（ＦＴＤＰ－１７）に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症、石灰化によるび漫性神経原線維濃縮、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症合併症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維濃縮による非ガマニアン（Guamanian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択される、上記［１８］に記載の方法。
［２０］
前記抗体又は抗原結合断片を製造する条件下において、前記抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞又は細胞培養液から前記抗体又は抗原結合断片を回収することとを含む、上記［１］～［１２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片の製造方法。
［２１］
対象の生体サンプルにおけるＰＨＦ－タウの存在の検出方法であって、前記生体サンプルを、上記［１］～［１２］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と接触させることと、前記対象の前記サンプルにおいて、前記抗体又は抗原結合断片のＰＨＦ－タウへの結合を検出することとを含む、前記方法。
［２２］
前記生体サンプルが、血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液サンプルである、上記［２１］に記載の方法。