特開2024-92943鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024092943
(43)【公開日】2024-07-08
(54)【発明の名称】鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤
(51)【国際特許分類】
A61K 36/02 20060101AFI20240701BHJP
A61P 29/02 20060101ALI20240701BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240701BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240701BHJP
A61K 36/11 20060101ALI20240701BHJP
A61K 36/756 20060101ALI20240701BHJP
A61K 36/346 20060101ALI20240701BHJP
A61K 36/65 20060101ALI20240701BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20240701BHJP
【ＦＩ】
A61K36/02 ZNA
A61P29/02
A61P25/04
A61P43/00 111
A61K36/11
A61K36/756
A61K36/346
A61K36/65
C12N15/09 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023150099
(22)【出願日】2023-09-15
(31)【優先権主張番号】P 2022208951
(32)【優先日】2022-12-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000100539
【氏名又は名称】アース製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002000
【氏名又は名称】弁理士法人栄光事務所
(72)【発明者】
【氏名】田村 典江
【テーマコード（参考）】
4C088
【Ｆターム（参考）】
4C088AA12
4C088AA18
4C088AB30
4C088AB51
4C088AB62
4C088AC01
4C088AC03
4C088AC05
4C088AC06
4C088AC11
4C088AC15
4C088BA08
4C088CA03
4C088NA14
4C088ZA08
4C088ZC41
(57)【要約】
【課題】侵害受容性疼痛等の疼痛に対して有効であり、簡便に投与し得る、新規な鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤を提供する。
【解決手段】スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
【選択図】なし
【解決手段】スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する鎮痛剤。
【請求項2】
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する、発痛関連物質の発現抑制剤。
【請求項3】
前記発痛関連物質がＣＯＸ－２、及びＢｄｋｒｂ１から選択される少なくとも１種である、請求項２に記載の発痛関連物質の発現抑制剤。
【請求項4】
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する、痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
【請求項5】
前記痛覚伝達物質がサブスタンスＰである、請求項４に記載の痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤に関する。
【背景技術】
【0002】
痛みには侵害受容性疼痛と神経障害性疼痛の２種があり、侵害受容器を介する痛み（侵害受容性疼痛）と、介さない痛みに大別される。侵害受容器とは痛みを起こす刺激（侵害刺激）の受容器で、熱刺激・機械刺激・化学刺激の受容器がこれにあたる。
侵害受容器を介さない痛みとしては、神経障害に起因する痛み（神経障害性疼痛）がある。
侵害受容器を介する痛みである侵害受容性疼痛は、種々の疾患や外傷に伴って生じるが、その一つとして口内炎が挙げられる。
侵害受容器を介さない痛みとしては、神経障害に起因する痛み（神経障害性疼痛）がある。
侵害受容器を介する痛みである侵害受容性疼痛は、種々の疾患や外傷に伴って生じるが、その一つとして口内炎が挙げられる。
【0003】
例えば、口内炎は、口腔粘膜に生じる炎症の総称であり、原因によってカタル性口内炎、アフタ性口内炎、薬剤性口内炎、放射線性口内炎などに分類される。カタル性口内炎は、義歯や矯正器具の接触、不正咬合などの物理的な刺激により発症する口内炎である。アフタ性口内炎は、主に心理的なストレスにより発症する口内炎であるが、その発症のメカニズムは不明である。薬剤性口内炎は、抗がん剤等が誘発する口内炎であり、強い痛みを伴い、広範囲に広がる重度の難治性口内炎である。放射線性口内炎は、主に口腔がん、咽頭がんなどの治療に用いる放射線によって発症する口内炎である。
口内炎の主要な病態の一つとして強い接触痛が挙げられ、摂食・嚥下時や発語時、ブラッシング時等に困難を伴うことが大きな問題となっている。
口内炎を治療するための薬剤として、例えば、特許文献１には、アラントイン又はその誘導体と、ビタミンＢ５又はその誘導体とを含有する口腔用組成物が記載されている。また、特許文献２には、局所麻酔剤を用いることで患部の痛みを緩和することができる口内炎用薬剤が記載されている。
口内炎の主要な病態の一つとして強い接触痛が挙げられ、摂食・嚥下時や発語時、ブラッシング時等に困難を伴うことが大きな問題となっている。
口内炎を治療するための薬剤として、例えば、特許文献１には、アラントイン又はその誘導体と、ビタミンＢ５又はその誘導体とを含有する口腔用組成物が記載されている。また、特許文献２には、局所麻酔剤を用いることで患部の痛みを緩和することができる口内炎用薬剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】特開２００７－８８３１号公報
【特許文献2】特開平９－９５４５６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
従来の技術においては、様々な鎮痛剤が検討されているが、特許文献１に記載のものは口腔内の創傷治癒作用による口内炎治療のための口腔用組成物であるため、疼痛そのものを抑制できるわけではない。特許文献２に記載のものは所望の場所に適用することが難しく、また局所麻酔剤により口腔内が鈍麻し、正常な感覚が喪失するため、飲食物の摂取や会話等、使用中のＱＯＬが著しく損なわれる。
そこで、十分な鎮痛効果を有し、かつ、簡便に投与し得る新たな鎮痛剤の開発が求められている。
そこで、十分な鎮痛効果を有し、かつ、簡便に投与し得る新たな鎮痛剤の開発が求められている。
【0006】
本発明は、十分な鎮痛効果を有し、炎症箇所に対し特異的かつ局所的に作用し、かつ簡便に使用できる新規な鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者は上記課題を解決するべく鋭意研究を重ねた結果、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物が侵害受容性疼痛及び神経障害性疼痛等の疼痛に対して鎮痛効果を有し、かつ、簡便に投与し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0008】
すなわち、本発明は、下記に示す手段により上記課題を解決することができたものである。
〔１〕
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する鎮痛剤。
〔２〕
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する、発痛関連物質の発現抑制剤。
〔３〕
前記発痛関連物質がＣＯＸ－２、及びＢｄｋｒｂ１から選択される少なくとも１種である、〔２〕に記載の発痛関連物質の発現抑制剤。
〔４〕
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する、痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
〔５〕
前記痛覚伝達物質がサブスタンスＰである、〔４〕に記載の痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
〔１〕
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する鎮痛剤。
〔２〕
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する、発痛関連物質の発現抑制剤。
〔３〕
前記発痛関連物質がＣＯＸ－２、及びＢｄｋｒｂ１から選択される少なくとも１種である、〔２〕に記載の発痛関連物質の発現抑制剤。
〔４〕
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する、痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
〔５〕
前記痛覚伝達物質がサブスタンスＰである、〔４〕に記載の痛覚伝達物質の遊離抑制剤。
【発明の効果】
【0009】
本発明の鎮痛剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有することにより、侵害受容性疼痛等の疼痛に対して有効であり、簡便に投与し得る。また、本発明の発痛関連物質の発現抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有することにより、発痛関連物質の発現を抑制することができる。さらに、本発明の痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有することにより、痛覚伝達物質の遊離を抑制することができる。また、本発明の鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、簡便な方法により投与が可能である。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【0012】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有することを特徴とする。
【0013】
スギナの抽出物（スギナ抽出物）は、生薬の一種であるトクサ科（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ）トクサ属（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ）スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ ａｒｖｅｎｓｅ）、の全草に含まれている成分を抽出したものであり、スギナエキス、油溶性スギナエキスが挙げられる。
スギナエキスは、例えば、医薬部外品原料規格 ２０２１（厚生労働省医薬・生活衛生局医薬品審査管理課）１５７１頁に記載の方法に準じて得られる。
具体的には、スギナエキスは、スギナの全草より水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液、もしくは１％尿素含有エタノール溶液、１％尿素含有１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られる。
中でも、スギナの全草より、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスがより好ましい。
スギナエキスは、例えば、医薬部外品原料規格 ２０２１（厚生労働省医薬・生活衛生局医薬品審査管理課）１５７１頁に記載の方法に準じて得られる。
具体的には、スギナエキスは、スギナの全草より水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液、もしくは１％尿素含有エタノール溶液、１％尿素含有１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られる。
中でも、スギナの全草より、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスがより好ましい。
【0014】
油溶性スギナエキスは、例えば、上記医薬部外品原料規格の３０４０頁に記載の方法に準じて得られる。
具体的には、スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ ａｒｖｅｎｓｅ Ｌ．（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ））の栄養茎を乾燥したものに、「ヒマワリ油（１）」を加え、抽出したものである。
具体的には、スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ ａｒｖｅｎｓｅ Ｌ．（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ））の栄養茎を乾燥したものに、「ヒマワリ油（１）」を加え、抽出したものである。
【0015】
海藻の抽出物（海藻抽出物）は、海藻の全藻に含まれている成分を抽出したものであり、例えば、上記医薬部外品原料規格の８４５～８４８頁に記載の方法に準じて得られる海藻エキス（２）～（５）を挙げることができる。
具体的には、海藻エキス（２）は、褐藻類（Ｐｈａｅｏｐｈｙｃｅａｅ）の全藻から塩化ナトリウム溶液で抽出して得られるエキスである。海藻エキス（２）は、主としてアルギン酸からなる。
海藻エキス（３）は、コンブ属（Ｌａｍｉｎａｒｉａ（Ｌａｍｉｎａｒｉａｃｅａｅ））又はイギス属（Ｃｅｒａｍｉｕｍ（Ｃｅｒａｍｉａｃｅａｅ））の全藻から水にて抽出して得られるエキスである。海藻エキス（３）は、主としてアルギン酸及びカラギーナンよりなる。
海藻エキス（４）は、褐藻類（Ｐｈａｅｏｐｈｙｃｅａｅ），紅藻類（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）又は緑藻類（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）の全藻から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られるエキスである。
海藻エキス（５）は、紅藻類（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）の全藻から水又はジプロピレングリコール溶液で抽出して得られるエキスである。
中でも、コンブ属又はイギス属の全藻から水にて抽出して得られるエキスや褐藻類，紅藻類又は緑藻類の全藻から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られるエキスが好ましい。
具体的には、海藻エキス（２）は、褐藻類（Ｐｈａｅｏｐｈｙｃｅａｅ）の全藻から塩化ナトリウム溶液で抽出して得られるエキスである。海藻エキス（２）は、主としてアルギン酸からなる。
海藻エキス（３）は、コンブ属（Ｌａｍｉｎａｒｉａ（Ｌａｍｉｎａｒｉａｃｅａｅ））又はイギス属（Ｃｅｒａｍｉｕｍ（Ｃｅｒａｍｉａｃｅａｅ））の全藻から水にて抽出して得られるエキスである。海藻エキス（３）は、主としてアルギン酸及びカラギーナンよりなる。
海藻エキス（４）は、褐藻類（Ｐｈａｅｏｐｈｙｃｅａｅ），紅藻類（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）又は緑藻類（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）の全藻から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られるエキスである。
海藻エキス（５）は、紅藻類（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）の全藻から水又はジプロピレングリコール溶液で抽出して得られるエキスである。
中でも、コンブ属又はイギス属の全藻から水にて抽出して得られるエキスや褐藻類，紅藻類又は緑藻類の全藻から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られるエキスが好ましい。
【0016】
オウバクの抽出物（オウバク抽出物）は、例えば、上記医薬部外品原料規格の７６７頁に記載の方法に準じて得られるオウバクエキスを挙げることができる。
具体的には、キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒｕｐｒ．（Ｒｕｔａｃｅａｅ））又はその他同属植物の周皮を除いた樹皮から水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出して得られるエキスである。
中でも、キハダの周皮を除いた樹皮から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出して得られるエキスがより好ましい。
具体的には、キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒｕｐｒ．（Ｒｕｔａｃｅａｅ））又はその他同属植物の周皮を除いた樹皮から水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出して得られるエキスである。
中でも、キハダの周皮を除いた樹皮から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出して得られるエキスがより好ましい。
【0017】
セージの抽出物（セージ抽出物）は、例えば、上記医薬部外品原料規格の１６７８頁に記載の方法に準じて得られるセージエキスを挙げることができる。
具体的には、セージ（Ｓａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．（Ｌａｂｉａｔａｅ））の花、葉又は全草から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液もしくは１％尿素含有エタノール溶液、１％尿素含有１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られるエキスである。
中でも、セージの全草から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスがより好ましい。
具体的には、セージ（Ｓａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．（Ｌａｂｉａｔａｅ））の花、葉又は全草から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液もしくは１％尿素含有エタノール溶液、１％尿素含有１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出して得られるエキスである。
中でも、セージの全草から、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスがより好ましい。
【0018】
シャクヤクの抽出物（シャクヤク抽出物）は、例えば、上記医薬部外品原料規格の１４９２頁に記載の方法に準じて得られるシャクヤクエキスを挙げることができる。
具体的には、シャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ．（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ． ｖａｒ． ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ） （Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ））又はその他近縁植物（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ）の根から、水、エタノール、１，３－ブチレングリコール、又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスである。
中でも、シャクヤクの根から、水、エタノール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスがより好ましい。
具体的には、シャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ．（Ｐａｅｏｎｉａ ａｌｂｉｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ． ｖａｒ． ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ Ｂｕｎｇｅ） （Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ））又はその他近縁植物（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ）の根から、水、エタノール、１，３－ブチレングリコール、又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスである。
中でも、シャクヤクの根から、水、エタノール、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスが好ましく、水、１，３－ブチレングリコール又はこれらの混液にて抽出して得られるエキスがより好ましい。
【0019】
痛み（疼痛）は、「機械的・化学的・熱刺激等のストレスによる組織損傷がもたらす不快な感覚的体験」と定義される。皮膚などに侵襲が加わると、侵襲ストレスが末梢神経のＡδ線維（伝導速度が速い）とＣ線維（伝導速度が遅く痛みが永く続く）の末端で認識され、脊髄後根、脊髄後角、脊髄視床路を経て大脳皮質に伝えられる。機械的刺激はＡδ／Ｃ線維、熱刺激と化学刺激はＣ線維によって感知される。
痛覚に関する神経伝達物質（以下、痛覚伝達物質という）の多くは神経線維Ａδ線維及びＣ線維によって伝達され、限局した鋭く速い痛みはＡδ線維によって伝達され、鈍く遅い痛みはＣ線維によって伝達される。
痛覚に関する神経伝達物質（以下、痛覚伝達物質という）の多くは神経線維Ａδ線維及びＣ線維によって伝達され、限局した鋭く速い痛みはＡδ線維によって伝達され、鈍く遅い痛みはＣ線維によって伝達される。
【0020】
発痛関連物質としては、例えば、ブラジキニン、セロトニン、ヒスタミン、プロスタグランジン等の発痛関連物質、ＣＯＸ－２（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２）等の発痛関連物質の合成酵素、Ｂｄｋｒｂ１（Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂ１）等の痛みの受容器が挙げられる。
遊離した発痛関連物質が、神経に存在する痛みの受容器（例えば、Ｂｄｋｒｂ１（Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂ１）に作用すると、痛覚伝達物質が産生・放出され脊髄を介し痛みの情報として脳へ伝わる。また、痛覚伝達物質により神経性炎症が起こる。
炎症性サイトカインは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与する物質である。炎症性サイトカインとしては、例えば、ＴＮＦ－α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ－α）、ＩＬ－１β（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １ ｂｅｔａ）、ＩＬ－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６）、ＩＦＮ－γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ）、ＩＬ－８（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ８）等が挙げられる。炎症性サイトカインは発痛関連物質と相互作用することで、炎症性疼痛を増強することが知られている。
痛覚伝達物質としては、例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グルタミン酸等のアミノ酸、サブスタンスＰ等の神経ペプチド等が挙げられる。
遊離した発痛関連物質が、神経に存在する痛みの受容器（例えば、Ｂｄｋｒｂ１（Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂ１）に作用すると、痛覚伝達物質が産生・放出され脊髄を介し痛みの情報として脳へ伝わる。また、痛覚伝達物質により神経性炎症が起こる。
炎症性サイトカインは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与する物質である。炎症性サイトカインとしては、例えば、ＴＮＦ－α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ－α）、ＩＬ－１β（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １ ｂｅｔａ）、ＩＬ－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６）、ＩＦＮ－γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ）、ＩＬ－８（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ８）等が挙げられる。炎症性サイトカインは発痛関連物質と相互作用することで、炎症性疼痛を増強することが知られている。
痛覚伝達物質としては、例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グルタミン酸等のアミノ酸、サブスタンスＰ等の神経ペプチド等が挙げられる。
【0021】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤における鎮痛効果のメカニズムは定かではないが、発明者は以下のように推測している。
すなわち、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、例えば、サブスタンスＰなどの痛覚伝達物質の遊離及び放出を抑制することで、血管透過性の亢進及びヒスタミンの放出を抑え、さらに、ＣＯＸ－２、および／または、ＰＧＥ２（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２）等の発痛関連物質の産生を抑制することで鎮痛効果を発揮していると推察される。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、ＴＲＰＶ１（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｖ１）に作用すると推測され、痛覚伝達物質の遊離及び放出を抑制し、鎮痛効果を得ることができる。
すなわち、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、例えば、サブスタンスＰなどの痛覚伝達物質の遊離及び放出を抑制することで、血管透過性の亢進及びヒスタミンの放出を抑え、さらに、ＣＯＸ－２、および／または、ＰＧＥ２（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２）等の発痛関連物質の産生を抑制することで鎮痛効果を発揮していると推察される。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、ＴＲＰＶ１（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｖ１）に作用すると推測され、痛覚伝達物質の遊離及び放出を抑制し、鎮痛効果を得ることができる。
【0022】
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物（固形分換算）は、本発明の実施形態に係る鎮痛剤の全量に対して、例えば、０．００１質量ｐｐｍ以上、好ましくは０．０１質量ｐｐｍ以上、より好ましくは０．０５質量ｐｐｍ以上、さらに好ましくは０．１質量ｐｐｍ以上含有することができ、また３質量％以下、好ましくは０．１質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０１質量％以下含有することができる。例えば、０．００１質量ｐｐｍ～３質量％、好ましくは０．０１質量ｐｐｍ～０．１質量％、より好ましくは０．０５質量ｐｐｍ～０．０５質量％、さらに好ましくは０．１質量ｐｐｍ～０．０１質量％含有することができる。０．００１質量ｐｐｍ以上とすることによって、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物の鎮痛効果の増強が期待され、３質量％以下とすることによって、処方化が容易となり、特に口腔用組成物において良好な使用感が得られる。
【0023】
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、実施例で後述するように市販のものを使用することもできる。
スギナの抽出物の市販品としては、例えば、「スギナ抽出液ＢＧ」（丸善製薬株式会社製）、「スギナ抽出液」（丸善製薬株式会社製）、「すぎな抽出液」（香栄興業株式会社製）等が挙げられる。
海藻の抽出物の市販品としては、例えば、「アルジェレックス Ｓ」（一丸ファルコス株式会社製）、「アルガヴィータＴ」（香栄興業株式会社製）、「マリンパージ」（一丸ファルコス株式会社製）等が挙げられる。
オウバクの抽出物の市販品としては、例えば、「オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ」（丸善製薬株式会社製）、「オウバク抽出液 ＢＧ」（香栄興業株式会社製）、「オウバクリキッド Ｂ」（一丸ファルコス株式会社製）等が挙げられる。
セージの抽出物の市販品としては、例えば、「ファルコレックス セージＢ」（一丸ファルコス株式会社製）、「サルビア抽出液ＢＧ－Ｊ」（丸善製薬株式会社製）、「セージエキス－ＢＧ」（株式会社ヤマダ薬研製）等が挙げられる。
シャクヤクの抽出物の市販品としては、例えば、「シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ」（丸善製薬株式会社製）、「ファルコレックス シャクヤク Ｂ」（一丸ファルコス株式会社製）、「シャクヤク抽出液 ＢＧ－５０」（香栄興業株式会社製）等が挙げられる。
スギナの抽出物の市販品としては、例えば、「スギナ抽出液ＢＧ」（丸善製薬株式会社製）、「スギナ抽出液」（丸善製薬株式会社製）、「すぎな抽出液」（香栄興業株式会社製）等が挙げられる。
海藻の抽出物の市販品としては、例えば、「アルジェレックス Ｓ」（一丸ファルコス株式会社製）、「アルガヴィータＴ」（香栄興業株式会社製）、「マリンパージ」（一丸ファルコス株式会社製）等が挙げられる。
オウバクの抽出物の市販品としては、例えば、「オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ」（丸善製薬株式会社製）、「オウバク抽出液 ＢＧ」（香栄興業株式会社製）、「オウバクリキッド Ｂ」（一丸ファルコス株式会社製）等が挙げられる。
セージの抽出物の市販品としては、例えば、「ファルコレックス セージＢ」（一丸ファルコス株式会社製）、「サルビア抽出液ＢＧ－Ｊ」（丸善製薬株式会社製）、「セージエキス－ＢＧ」（株式会社ヤマダ薬研製）等が挙げられる。
シャクヤクの抽出物の市販品としては、例えば、「シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ」（丸善製薬株式会社製）、「ファルコレックス シャクヤク Ｂ」（一丸ファルコス株式会社製）、「シャクヤク抽出液 ＢＧ－５０」（香栄興業株式会社製）等が挙げられる。
【0024】
スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、上述したとおり、医薬部外品原料規格に記載の方法に準じて得られるものを好ましく使用できるが、従来公知の方法等により抽出した抽出物を使用することもできる。
【0025】
すなわち、本発明の実施形態に係る鎮痛剤において、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物の抽出方法は特に制限されず、従来公知の方法を用いることができる。
例えば、スギナ、海藻、オウバク、セージ、又はシャクヤクの任意の部位をそのまま、または裁断、粉砕等したのち、搾取、溶媒抽出、水蒸留、及び水蒸気蒸留等によって抽出物を得ることができる。
例えば、スギナ、海藻、オウバク、セージ、又はシャクヤクの任意の部位をそのまま、または裁断、粉砕等したのち、搾取、溶媒抽出、水蒸留、及び水蒸気蒸留等によって抽出物を得ることができる。
【0026】
溶媒抽出の方法としては、当該技術分野において公知の方法を採用すればよく、例えば水（温水、熱水を含む）抽出、アルコール抽出、超臨界抽出、マイクロウェーブ抽出、及び圧搾抽出等の従来公知の抽出方法を利用することができる。
【0027】
溶媒抽出を行う場合、溶媒としては、例えば水；メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、及び１，３－ブチレングリコール等のアルコール類；アセトン等のケトン類；ジエチルエーテル、ジオキサン等のエーテル類；アセトニトリル等のニトリル類；酢酸エチルエステル等のエステル類；ヘキサン、キシレン、ベンゼン、及びクロロホルム等が例示される。
溶媒抽出における溶媒として好ましくは、水、アルコール類、ケトン類、及びヘキサン等であり、より好ましくは水、アルコール類、及びケトン類である。これらの溶媒は１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
溶媒抽出における溶媒として好ましくは、水、アルコール類、ケトン類、及びヘキサン等であり、より好ましくは水、アルコール類、及びケトン類である。これらの溶媒は１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0028】
得られた抽出物は、そのままの状態で使用してもよく、乾燥させて使用してもよい。また、必要に応じて、得られた抽出物に精製、及び濃縮処理等を施してもよい。精製処理としては、例えば濾過またはイオン交換樹脂や活性炭カラム等を用いた吸着、脱色、及び分離といった処理を例示できる。また、濃縮処理としては、エバポレーター等を用いた常法を例示できる。
また、これらに対して更に凍結乾燥等の乾燥処理を施してもよく、更に従来公知の方法に従って粉末化させてもよい。また、このようにして得た抽出物を、必要に応じて水やエタノール等に溶解して用いてもよい。
また、これらに対して更に凍結乾燥等の乾燥処理を施してもよく、更に従来公知の方法に従って粉末化させてもよい。また、このようにして得た抽出物を、必要に応じて水やエタノール等に溶解して用いてもよい。
【0029】
上述のとおり、本発明の実施形態に係る鎮痛剤による発痛関連物質及び痛覚伝達物質の遊離抑制効果は、例えば、発痛関連物質遺伝子の合成酵素や発痛関連物質遺伝子の受容体又は炎症性サイトカインのｍＲＮＡの発現量を指標に評価することができる。
炎症性サイトカインは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与する物質である。炎症性サイトカインとしては、例えば、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８等が挙げられる。
炎症性サイトカインは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与する物質である。炎症性サイトカインとしては、例えば、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８等が挙げられる。
【0030】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤による痛覚伝達物質の遊離抑制効果は、例えば、ラットの脊髄後根神経節（ＤＲＧ）から神経細胞群を単離培養したものを用いて評価することができる。例えば、痛覚伝達物質として、サブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）に着目し高濃度カリウムイオン（Ｋ＋１００ｍＭ）やカプサイシンにより神経細胞を脱分極させた際に遊離するサブスタンスＰを測定する評価系で、刺激の前後におけるサブスタンスＰの遊離量比を指標として評価できる。
より具体的には実施例にて詳述する。
より具体的には実施例にて詳述する。
【0031】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤は、発痛関連物質の発現抑制剤、又は痛覚伝達物質の遊離抑制剤として用いることができる。また、本発明の実施形態に係る鎮痛剤は、炎症性サイトカインの発現抑制剤として用いることができる。
すなわち、本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する。また、本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤においては、発痛関連物質がＣＯＸ－２、及びＢｄｋｒｂ１から選択される少なくとも１種であってもよい。
本発明の実施形態に係る炎症性サイトカインの発現抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する。
また、本発明の実施形態に係る痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する。
本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を有効成分として含有し、発痛関連物質、及び炎症性サイトカインの発現並びに痛覚伝達物質の遊離・放出を抑制するため、鎮痛効果を奏する。
すなわち、本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する。また、本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤においては、発痛関連物質がＣＯＸ－２、及びＢｄｋｒｂ１から選択される少なくとも１種であってもよい。
本発明の実施形態に係る炎症性サイトカインの発現抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する。
また、本発明の実施形態に係る痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する。
本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物を有効成分として含有し、発痛関連物質、及び炎症性サイトカインの発現並びに痛覚伝達物質の遊離・放出を抑制するため、鎮痛効果を奏する。
【0032】
上述したとおり、発痛関連物質としては、例えば、ブラジキニン、セロトニン、ヒスタミン、プロスタグランジン等が挙げられる。
痛覚伝達物質としては、例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グルタミン酸等のアミノ酸、サブスタンスＰ等の神経ペプチド等が挙げられる。本発明の実施形態に係る痛覚伝達物質の遊離抑制剤において、痛覚伝達物質がサブスタンスＰであってもよい。
痛覚伝達物質としては、例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グルタミン酸等のアミノ酸、サブスタンスＰ等の神経ペプチド等が挙げられる。本発明の実施形態に係る痛覚伝達物質の遊離抑制剤において、痛覚伝達物質がサブスタンスＰであってもよい。
【0033】
本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤において、有効成分であるスギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の含有量（固形分換算）は、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤の全量に対して、例えば、０．００１質量ｐｐｍ以上、好ましくは０．０１質量ｐｐｍ以上、より好ましくは０．０５質量ｐｐｍ以上、更に好ましくは０．１質量ｐｐｍ以上、より更に好ましくは０．０００１質量％以上、特に好ましくは０．０００５質量％以上、最も好ましくは０．００１質量％以上含有することができ、また、例えば３質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下、更に好ましくは０．０５質量％以下、特に好ましくは０．０１５質量％以下、最も好ましくは０．０１質量％以下含有することができる。例えば０．０００１～１．０質量％、好ましくは０．０００５～０．１質量％、より好ましくは０．００１～０．０１５質量％含有することができる。また、例えば、０．００１質量ｐｐｍ～３質量％、好ましくは０．０１質量ｐｐｍ～０．１質量％、より好ましくは０．０５質量ｐｐｍ～０．０５質量％、さらに好ましくは０．１質量ｐｐｍ～０．０１質量％含有してもよい。
【0034】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤又は痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、ヒト、又は動物に使用することができる。
【0035】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、食品組成物、化粧品、口腔用組成物、入浴剤組成物、医薬品又は医薬部外品として用いることができる。
【0036】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、又はシャクヤクの抽出物のみからなってもよく、食品組成物、化粧品、口腔用組成物、入浴剤組成物、医薬部外品又は医薬品に使用可能な材料を更に含有してもよい。食品組成物、化粧品、口腔用組成物、入浴剤組成物、医薬部外品又は医薬品に使用可能な材料としては、特に制限されるものではないが、例えば、アミノ酸、タンパク質、炭水化物、油脂、甘味料、ミネラル、ビタミン、香料、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、乳化剤、界面活性剤、基剤、溶解補助剤、懸濁化剤等が挙げられる。
【0037】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤の形状は制限されず、固体（粉末、顆粒等）、液体（溶液、懸濁液等）、ゲル、ジェル、ペースト、クリーム等のいずれの形状であってもよく、散剤、丸剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、スプレー剤、液剤、懸濁剤、フィルム剤、貼付剤等のいずれの剤形であってもよく、口腔内全体にわたって均一かつ簡便に投与し得る点から液体であることが好ましい。
【0038】
食品組成物としては、例えば、健康食品、特定保健用食品、機能性食品、栄養機能食品、サプリメント等の形態で提供されてもよい。
化粧品としては、例えば、ローション、クリーム、ゲル、パウダーなどが例示される。化粧品には、化粧水、シャンプー、石けん、ボディーソープ、ボディークリーム、スキンパウダー等の形態で提供されてもよい。
口腔用組成物としては、例えば、洗口液、口中清涼剤、うがい薬（含嗽剤）、液状歯磨き及び練り歯磨き等の歯磨き類、ジェル、軟膏、泡、トローチ、フィルム、チューインガム等の形態とすることができる。
化粧品としては、例えば、ローション、クリーム、ゲル、パウダーなどが例示される。化粧品には、化粧水、シャンプー、石けん、ボディーソープ、ボディークリーム、スキンパウダー等の形態で提供されてもよい。
口腔用組成物としては、例えば、洗口液、口中清涼剤、うがい薬（含嗽剤）、液状歯磨き及び練り歯磨き等の歯磨き類、ジェル、軟膏、泡、トローチ、フィルム、チューインガム等の形態とすることができる。
【0039】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は患部に直接塗布してもよく、経口投与がされてもよく、経皮投与や静脈投与等の非経口投与がされてもよい。
【0040】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤が患部に経皮又は経粘膜投与や直接塗布される場合、その使用量としては、例えば、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量（固形分換算）が１回当たり５ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように適用されるのが好ましく、５０ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように使用されるのがより好ましく、５００ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように使用されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり５ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように使用されるのが好ましく、５０ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように使用されるのがより好ましく、５００ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように使用されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１回当たり２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが好ましく、１５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより好ましく、１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが更に好ましく、５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより更に好ましく、１００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより一層好ましく、５０ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが特に好ましく、１０ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが最も好ましい。
また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり３０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが好ましく、２５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより好ましく、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが更に好ましく、１５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより更に好ましく、１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより一層好ましく、５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが特に好ましく、１００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが最も好ましい。
上記の範囲であれば、十分な量が患部に吸収及び又は浸透移行することや、十分な血中濃度を達成することができ、鎮痛、発痛関連物質の発現抑制、又は痛覚伝達物質の遊離抑制作用をより効果的に発現することができる。
また、経粘膜投与の場合、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が単位面積当たり０．１ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが好ましく、０．５ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのがより好ましく、１ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが更に好ましく、５ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのがより更に好ましく、１０ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのがより一層好ましく、５０ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが特に好ましく、１００ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが最も好ましい。
また、経粘膜投与の場合、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が単位面積当たり１００ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが好ましく、５０ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのがより好ましく、１０ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが更に好ましく、５ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのがより更に好ましく、１ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのがより一層好ましく、０．５ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが特に好ましく、０．１ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが最も好ましい。
また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり３０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが好ましく、２５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより好ましく、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが更に好ましく、１５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより更に好ましく、１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのがより一層好ましく、５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが特に好ましく、１００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように使用されるのが最も好ましい。
上記の範囲であれば、十分な量が患部に吸収及び又は浸透移行することや、十分な血中濃度を達成することができ、鎮痛、発痛関連物質の発現抑制、又は痛覚伝達物質の遊離抑制作用をより効果的に発現することができる。
また、経粘膜投与の場合、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が単位面積当たり０．１ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが好ましく、０．５ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのがより好ましく、１ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが更に好ましく、５ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのがより更に好ましく、１０ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのがより一層好ましく、５０ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが特に好ましく、１００ｐｇ／ｃｍ２以上となるように使用されるのが最も好ましい。
また、経粘膜投与の場合、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が単位面積当たり１００ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが好ましく、５０ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのがより好ましく、１０ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが更に好ましく、５ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのがより更に好ましく、１ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのがより一層好ましく、０．５ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが特に好ましく、０．１ｍｇ／ｃｍ２以下となるように使用されるのが最も好ましい。
【0041】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤が経口投与される場合、投与量としては、例えば、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量（固形分換算）が１回当たり５ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが好ましく、５０ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのがより好ましく、５００ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり５ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが好ましく、５０ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのがより好ましく、５００ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１回当たり２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが好ましく、１５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのがより好ましく、１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり３０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが好ましく、２５００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのがより好ましく、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが更に好ましい。この範囲であれば、十分な血中濃度を達成することができ、鎮痛、発痛関連物質の発現抑制、炎症性サイトカインの発現抑制又は痛覚伝達物質の遊離抑制作用をより効果的に発現することができる。
【0042】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤が、非経口投与される場合、投与量としては、例えば、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量（固形分換算）が１回当たり５ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが好ましく、５０ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのがより好ましく、５００ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり５ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが好ましく、５０ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのがより好ましく、５００ｐｇ／ｋｇ（体重）以上となるように投与されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が、１回当たり４０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが好ましく、３０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのがより好ましく、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが更に好ましい。また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量が１日当たり４０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが好ましく、３０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのがより好ましく、２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下となるように投与されるのが更に好ましい。この範囲であれば、十分な血中濃度を達成することができ、鎮痛効果、発痛関連物質の発現抑制、炎症性サイトカインの発現抑制、及び痛覚伝達物質の遊離抑制をより効果的に発現することができる。
【0043】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤は、粘膜で吸収されやすいため簡便な方法により適用が可能である。例えば、口腔内の粘膜で吸収が可能であることから、口腔用組成物に用いることが好ましい。
【0044】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤を、口腔用組成物に用いる場合は、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出物の総量（固形分換算）を、例えば、０．００１質量ｐｐｍ以上、好ましくは０．０１質量ｐｐｍ以上、より好ましくは０．０５質量ｐｐｍ以上、更に好ましくは０．１質量ｐｐｍ以上、より更に好ましくは０．０００１質量％以上、特に好ましくは０．０００５質量％以上、最も好ましくは０．００１質量％以上含有することができ、また、例えば３質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下、更に好ましくは０．０５質量％以下、特に好ましくは０．０１５質量％以下、最も好ましくは０．０１質量％以下含有することができる。例えば０．０００１～１．０質量％、好ましくは０．０００５～０．１質量％、より好ましくは０．００１～０．０１５質量％含有することができる。また、例えば０．００１質量ｐｐｍ～３質量％、好ましくは０．０１質量ｐｐｍ～０．１質量％、より好ましくは０．０５質量ｐｐｍ～０．０５質量％、さらに好ましくは０．１質量ｐｐｍ～０．０１質量％含有してもよい。０．００１質量ｐｐｍ以上とすることによって、上記抽出物（固形分換算）の鎮痛効果を発揮しうる濃度となり、３質量％以下にすることにより、抽出物由来の苦味、えぐ味等の味やにおい等による嗜好性、使用感の低下、抽出物による褐変等の変色や析出等の製剤の安定性、容器への着色等への影響も少ない。
【0045】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤の有効成分であるスギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物は、粘膜から吸収されやすく、低刺激で優れた鎮痛効果を発揮するため、鎮痛剤を、口腔用組成物として用いることが好ましい。
本発明の実施形態に係る鎮痛剤を、口腔用組成物に用いる場合、口腔内に生じる種々の炎症性疾患に伴う痛み、例えば、歯肉炎や歯周炎等の歯周病や、口内炎やカンジダ菌等の真菌感染に起因する炎症、義歯等の補綴物との接触により生じる粘膜炎等に伴う痛みや、歯科治療に伴う創傷部の痛み等に適用することができる。
本発明の実施形態に係る鎮痛剤を、口腔用組成物に用いる場合、口腔内に生じる種々の炎症性疾患に伴う痛み、例えば、歯肉炎や歯周炎等の歯周病や、口内炎やカンジダ菌等の真菌感染に起因する炎症、義歯等の補綴物との接触により生じる粘膜炎等に伴う痛みや、歯科治療に伴う創傷部の痛み等に適用することができる。
【0046】
ここで、「歯周病」とは、デンタルプラーク中の歯周病原細菌等により、歯周組織辺縁部に炎症がひき起こされる炎症性疾患をいい、歯肉炎と歯周炎が包含される。
【0047】
口腔用組成物は、組成物全体を口腔内に十分にいきわたらせるため、口腔内に適量を含み使用する洗口液または、液状歯磨き剤としての用途が好適である。洗口液とするには、例えば、水やエタノール等を溶剤とし、常法によって調製すればよい。
また、液状歯磨き剤としては、例えば、リン酸水素カルシウム、水酸化アルミニウム、無水ケイ酸、及び炭酸カルシウム等の研磨剤を必要に応じて含有したものとして使用することもできる。
また、液状歯磨き剤としては、例えば、リン酸水素カルシウム、水酸化アルミニウム、無水ケイ酸、及び炭酸カルシウム等の研磨剤を必要に応じて含有したものとして使用することもできる。
【0048】
また、口腔用組成物は、本発明の効果を損なわない限り、その他任意の成分を含有してよい。
例えば、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム等のフッ化物；アズレン、アズレンスルホン酸塩、グリチルリチン酸又はその塩、β－グリチルレチン酸、ジヒドロコレステロール、エピジヒドロコレステリン、酢酸ｄｌ－α－トコフェロール、ニコチン酸ｄｌ－α－トコフェロール、ε－アミノカプロン酸、トラネキサム酸、アラントイン、アスコルビン酸等の抗炎症剤；リン酸塩、ポリリン酸塩、メトキシエチレン無水マレイン酸共重合体、塩化亜鉛、有機酸亜鉛等の歯石予防剤；ヒノキチオール、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、塩化ナトリウム等の収斂剤；グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール等の湿潤剤；ラウリル硫酸ナトリウム等の発泡剤；ピネン、ペパーミント油、スペアミント油、和種ハッカ油、シナモンオイル、クローブオイル、オイゲノール、レモンオイル、バニリン、シネオール、ユーカリオイル等の香料；セイヨウサンザシ、ハマメリス、シラカバ等の植物抽出物；サッカリン、サッカリンナトリウム、スクラロース、キシリトール、エリスリトール、ソルビトール、マルチトール、ステビア等の甘味料；青色１号、黄色５号、黄色４号、黄色２０３号、緑色３号、緑色２０１号、赤色１０２号等の着色剤；パラベン類、安息香酸ナトリウム等の保存剤；リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム等のｐＨ調整剤；ＰＯＥ硬化ヒマシ油、ＰＯＥ・ＰＯＰブロックポリマー、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル、ＰＯＥアルキルエーテル、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル、ＰＯＥ脂肪酸エステル、ＰＯＥ高級アルコールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ脂肪酸エステル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性剤；ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウム、ＰＯＥアルキルエーテル硫酸塩、ラウロイルサルコシナトリウム、ミリストイルサルコシンナトリウム、アルキルエーテルカルボン酸塩、アルキルリン酸塩、ＰＯＥアルキルエーテルリン酸塩、Ｎ－アシルタウリン塩、ＰＯＥアルキルエーテルリン酸・リン酸塩、スルホン酸塩等のアニオン性界面活性剤；塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、ＰＯＥアルキルアミン・脂肪酸アミド等のカチオン性界面活性剤；２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ラウリルジアミノエチルグリシンナトリウム等の両性界面活性剤等が挙げられる。
例えば、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム等のフッ化物；アズレン、アズレンスルホン酸塩、グリチルリチン酸又はその塩、β－グリチルレチン酸、ジヒドロコレステロール、エピジヒドロコレステリン、酢酸ｄｌ－α－トコフェロール、ニコチン酸ｄｌ－α－トコフェロール、ε－アミノカプロン酸、トラネキサム酸、アラントイン、アスコルビン酸等の抗炎症剤；リン酸塩、ポリリン酸塩、メトキシエチレン無水マレイン酸共重合体、塩化亜鉛、有機酸亜鉛等の歯石予防剤；ヒノキチオール、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、塩化ナトリウム等の収斂剤；グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール等の湿潤剤；ラウリル硫酸ナトリウム等の発泡剤；ピネン、ペパーミント油、スペアミント油、和種ハッカ油、シナモンオイル、クローブオイル、オイゲノール、レモンオイル、バニリン、シネオール、ユーカリオイル等の香料；セイヨウサンザシ、ハマメリス、シラカバ等の植物抽出物；サッカリン、サッカリンナトリウム、スクラロース、キシリトール、エリスリトール、ソルビトール、マルチトール、ステビア等の甘味料；青色１号、黄色５号、黄色４号、黄色２０３号、緑色３号、緑色２０１号、赤色１０２号等の着色剤；パラベン類、安息香酸ナトリウム等の保存剤；リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム等のｐＨ調整剤；ＰＯＥ硬化ヒマシ油、ＰＯＥ・ＰＯＰブロックポリマー、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル、ＰＯＥアルキルエーテル、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル、ＰＯＥ脂肪酸エステル、ＰＯＥ高級アルコールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ脂肪酸エステル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性剤；ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウム、ＰＯＥアルキルエーテル硫酸塩、ラウロイルサルコシナトリウム、ミリストイルサルコシンナトリウム、アルキルエーテルカルボン酸塩、アルキルリン酸塩、ＰＯＥアルキルエーテルリン酸塩、Ｎ－アシルタウリン塩、ＰＯＥアルキルエーテルリン酸・リン酸塩、スルホン酸塩等のアニオン性界面活性剤；塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、ＰＯＥアルキルアミン・脂肪酸アミド等のカチオン性界面活性剤；２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ラウリルジアミノエチルグリシンナトリウム等の両性界面活性剤等が挙げられる。
【0049】
本発明の実施形態に係る鎮痛剤、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤、又は痛覚伝達物質の遊離抑制剤を動物へ使用する場合、動物用医薬部外品又は動物用医薬品、飼料、飼料添加物として用いることができる。
【0050】
飼料としては、ドッグフード、キャットフード等のコンパニオン・アニマル用飼料、家畜用飼料、家禽用飼料等が挙げられる。「飼料」には、動物が栄養目的で経口的に摂取するもの全てが含まれる。より具体的には、養分含量の面から分類すると、粗飼料、濃厚飼料、無機物飼料、特殊飼料の全てを包含し、また公的規格の面から分類すると、配合飼料、混合飼料、単体飼料の全てを包含する。また、給餌方法の面から分類すると、直接給餌する飼料、他の飼料と混合して給餌する飼料、又は飲料水に添加し栄養分を補給するための飼料の全てを包含する。
【0051】
本発明の実施形態に係る発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤の具体的な態様は、上述した鎮痛剤における態様と同様であってもよい。すなわち、上述した鎮痛剤に関する記載は、発痛関連物質の発現抑制剤、炎症性サイトカインの発現抑制剤、及び痛覚伝達物質の遊離抑制剤に適用することができる。
【実施例0052】
以下、本発明を下記実験例によりさらに説明するが、本発明は下記例に制限されるものではない。
【0053】
＜実験例１：鎮痛剤の鎮痛効果の評価１＞
本試験では、スギナ抽出物を含む鎮痛剤の鎮痛効果について、口内炎モデルハムスターを用いて評価した。
本試験では、スギナ抽出物を含む鎮痛剤の鎮痛効果について、口内炎モデルハムスターを用いて評価した。
【0054】
〔検体の調製〕
まず、スギナ抽出物（丸善製薬社製、（製品名）スギナ抽出液ＢＧ）及び生理食塩水（大塚製薬社製、（製品名）大塚生食）を用いてスギナ抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含むスギナ抽出物含有生理食塩水（鎮痛剤）を調製した。
なお、生理食塩水をコントロール溶液とした。
まず、スギナ抽出物（丸善製薬社製、（製品名）スギナ抽出液ＢＧ）及び生理食塩水（大塚製薬社製、（製品名）大塚生食）を用いてスギナ抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含むスギナ抽出物含有生理食塩水（鎮痛剤）を調製した。
なお、生理食塩水をコントロール溶液とした。
【0055】
〔方法〕
４週齢のＳｙｒｉａｎ系ハムスター（雄）を１週間ケージで予備飼育し、５週齢とした（ｎ＝４）。
ハムスターを麻酔下でコルクボードに固定し、右側頬嚢に１０（ｗ／ｖ）％酢酸生理食塩水を３０μＬ皮内注射して、口内炎（創傷）を作製した。
口内炎作製後、創傷部の長径と短径を測定した後、１頭あたり鎮痛剤５０μＬを創傷部に塗布した。鎮痛剤の塗布及び体重測定は１日１回、創傷部の長径と短径の測定は２日に１回とし、これを６日間連続で行い、７日目は創傷部の長径と短径の測定、及び体重測定を行った。得られた結果から口内炎治癒率及び体重増加率の経日推移を評価した。
鎮痛剤を生理食塩水（コントロール溶液）に変更した以外は同様にして評価した。
４週齢のＳｙｒｉａｎ系ハムスター（雄）を１週間ケージで予備飼育し、５週齢とした（ｎ＝４）。
ハムスターを麻酔下でコルクボードに固定し、右側頬嚢に１０（ｗ／ｖ）％酢酸生理食塩水を３０μＬ皮内注射して、口内炎（創傷）を作製した。
口内炎作製後、創傷部の長径と短径を測定した後、１頭あたり鎮痛剤５０μＬを創傷部に塗布した。鎮痛剤の塗布及び体重測定は１日１回、創傷部の長径と短径の測定は２日に１回とし、これを６日間連続で行い、７日目は創傷部の長径と短径の測定、及び体重測定を行った。得られた結果から口内炎治癒率及び体重増加率の経日推移を評価した。
鎮痛剤を生理食塩水（コントロール溶液）に変更した以外は同様にして評価した。
【0056】
また、口内炎治癒率及び体重増加率は、以下の式を用いて算出した。
口内炎治癒率（％）＝｛（創傷作製時の面積－測定時点の面積）／創傷作製時の面積｝×１００
体重増加率（％）＝｛（測定時点の体重－創傷作製時の体重）／創傷作製時の体重｝×１００
口内炎治癒率（％）＝｛（創傷作製時の面積－測定時点の面積）／創傷作製時の面積｝×１００
体重増加率（％）＝｛（測定時点の体重－創傷作製時の体重）／創傷作製時の体重｝×１００
【0057】
〔結果〕
結果を図１及び図２に示す（ｎ＝４）。
図１は、鎮痛剤を塗布した場合と生理食塩水を塗布した場合の治癒率（創傷部の面積）の推移である。
図２は、鎮痛剤を塗布した場合と生理食塩水を塗布した場合の体重増加率の推移である。
結果を図１及び図２に示す（ｎ＝４）。
図１は、鎮痛剤を塗布した場合と生理食塩水を塗布した場合の治癒率（創傷部の面積）の推移である。
図２は、鎮痛剤を塗布した場合と生理食塩水を塗布した場合の体重増加率の推移である。
【0058】
図１に示すように、コントロール溶液を塗布した場合と鎮痛剤を塗布した場合とで、治癒率（創傷部の面積）の推移に差は見られなかった。図２に示す体重増加率は、鎮痛剤を塗布した場合、コントロール溶液を塗布した場合と比較して、全ての測定時点で高く推移することがわかった。
【0059】
試験に供試したＳｙｒｉａｎ系ハムスターの雄は、生後から６週齢にかけて生涯で最も体重が増加することが知られている。その間、飼料が豊富に存在する場合は摂食行動を続け、一次関数的な体重増加率を示す。また、口内炎を誘発したハムスターの場合、摂食時に創傷の程度（創傷部の面積）に比例した痛みを感じるため、摂食行動が低下し、結果として体重増加率も低下することが予想される。しかしながら、スギナ抽出物含有生理食塩水を塗布したハムスターでは、治癒率がコントロール溶液と変わらないにも関わらず、体重増加率は高い値を示した。このことから、スギナ抽出物は、口内炎の治癒効果には影響を及ぼさず、鎮痛効果を有することが示唆された。
【0060】
＜実験例２：発痛関連物質の発現抑制効果の評価＞
本試験ではスギナの抽出物を含む鎮痛剤による発痛関連物質の発現抑制効果について評価を行った。
本試験ではスギナの抽出物を含む鎮痛剤による発痛関連物質の発現抑制効果について評価を行った。
【0061】
〔検体の調製〕
まず、スギナ抽出物及び生理食塩水を用いてスギナ抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含む水溶液（鎮痛剤）を調製した。
なお、生理食塩水をコントロール溶液とした。
まず、スギナ抽出物及び生理食塩水を用いてスギナ抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含む水溶液（鎮痛剤）を調製した。
なお、生理食塩水をコントロール溶液とした。
【0062】
〔方法〕
４週齢のＳｙｒｉａｎ系ハムスター（雄）を１週間ケージで予備飼育し、５週齢とした（ｎ＝５）。
ハムスターを麻酔下でコルクボードに固定し、右側頬嚢に検体（鎮痛剤及びコントロール溶液）５０μＬ塗布した後、１０（ｗ／ｖ）％酢酸生理食塩水３０μＬを皮内注射し、口内炎（創傷）を作製した。その後、１頭あたり検体（鎮痛剤及びコントロール溶液）５０μＬを再度創傷部に塗布した。
１０時間後にＣＯ２ガスを用いハムスターをサクリファイスした後、創傷部を含む口腔組織を回収し、－８０℃にて凍結保管した。
口内炎の誘発及び検体による処理を行わなかった無処理群、及び上記の操作により得た鎮痛剤処理群及びコントロール溶液処理群について、下記（１）～（９）の操作を行った。
４週齢のＳｙｒｉａｎ系ハムスター（雄）を１週間ケージで予備飼育し、５週齢とした（ｎ＝５）。
ハムスターを麻酔下でコルクボードに固定し、右側頬嚢に検体（鎮痛剤及びコントロール溶液）５０μＬ塗布した後、１０（ｗ／ｖ）％酢酸生理食塩水３０μＬを皮内注射し、口内炎（創傷）を作製した。その後、１頭あたり検体（鎮痛剤及びコントロール溶液）５０μＬを再度創傷部に塗布した。
１０時間後にＣＯ２ガスを用いハムスターをサクリファイスした後、創傷部を含む口腔組織を回収し、－８０℃にて凍結保管した。
口内炎の誘発及び検体による処理を行わなかった無処理群、及び上記の操作により得た鎮痛剤処理群及びコントロール溶液処理群について、下記（１）～（９）の操作を行った。
【0063】
（１）凍結保管した各群の口腔組織を氷上で解凍し、剃刀で細断した後、容量が１．５ｍＬのチューブに入れ、ＲＮＡ抽出試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｉｎｃ．社製ＴＲＩ Ｒｅａｇｅｎｔ）を６００μＬ加え、ホモジナイズ棒を用いて粉砕した。
（２）クロロホルムを１２０μＬ加え、ボルテックスした。
（３）１３，２００ｒｐｍで２０分間４℃の条件で遠心分離した。
（４）上清を回収し、上清と等量の２－プロパノールを加えて転倒混和した後、一晩－２０℃で静置した。
（２）クロロホルムを１２０μＬ加え、ボルテックスした。
（３）１３，２００ｒｐｍで２０分間４℃の条件で遠心分離した。
（４）上清を回収し、上清と等量の２－プロパノールを加えて転倒混和した後、一晩－２０℃で静置した。
【0064】
（５）１３，２００ｒｐｍで２０分間４℃の条件で遠心分離した後、上清を除去してペレットのみとし、７５（ｖ／ｖ）％エタノールを加えた。
（６）１３，２００ｒｐｍで１０秒間４℃の条件で遠心分離した後、上清を除去してペレットのみとし、７５（ｖ／ｖ）％エタノールを加えた。
（７）（６）の操作を３～５回繰り返した。
（６）１３，２００ｒｐｍで１０秒間４℃の条件で遠心分離した後、上清を除去してペレットのみとし、７５（ｖ／ｖ）％エタノールを加えた。
（７）（６）の操作を３～５回繰り返した。
【0065】
（８）上清を除去してペレットのみとし、常温で乾燥させた後、ＲＮａｓｅフリー水（ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ）を２０μＬ加えた。
（９）氷上で静置後、超微量分光計（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製Ｎａｎｏ ｄｒｏｐ）を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡの収量を測定した後、逆転写酵素（東洋紡株式会社製ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ）を用いてプロトコルに従いＲＮＡを鋳型にｃＤＮＡを合成した。
（９）氷上で静置後、超微量分光計（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製Ｎａｎｏ ｄｒｏｐ）を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡの収量を測定した後、逆転写酵素（東洋紡株式会社製ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ）を用いてプロトコルに従いＲＮＡを鋳型にｃＤＮＡを合成した。
【0066】
下記の操作にてｍＲＮＡ発現を解析した。
（リアルタイムＰＣＲ）
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＳｔｅｐＯｎｅＴＭ Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、ΔΔＣｔ法によるリアルタイム（Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ）ＰＣＲを行った。試験には、ＦａｓｔＳｔａｒｔ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ＤＮＡ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ（Ｒｏｃｈｅ社製）用い、プロトコルに従い以下の条件で実施した。
（リアルタイムＰＣＲ）
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＳｔｅｐＯｎｅＴＭ Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、ΔΔＣｔ法によるリアルタイム（Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ）ＰＣＲを行った。試験には、ＦａｓｔＳｔａｒｔ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ＤＮＡ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ（Ｒｏｃｈｅ社製）用い、プロトコルに従い以下の条件で実施した。
【0067】
（プライマー情報）
・配列番号１： ＧＡＰＤＨ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＡＣＡＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣＧＧ－３’
・配列番号２： ＧＡＰＤＨ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＣＡＧＧＣＧＡＣＡＴＧＴＧＡＧＡＴＣＣＡ－３’
・配列番号３： ＣＯＸ－２ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ ＡＴＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＣＴＣＣＣＴＴＧ－３’
・配列番号４： ＣＯＸ－２ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ ＡＣＡＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＴＧＡＣＣ－３’
・配列番号５： ＴＮＦ－ａｌｐｈａ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＧＧＡＧ－３’
・配列番号６： ＴＮＦ－ａｌｐｈａ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＧＡＧＣＣＧＡＴＧＡＴＡＧＧＧＴＴＧＧＧ－３’
・配列番号７： ＩＬ－６ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＴＣＴＴＣＴＴＧＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧ－３’
・配列番号８： ＩＬ－６ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＴＧＴＴＣＧＴＣＡＣＡＡＡＣＴＣＣＡＧＧＴ－３’
・配列番号９： Ｂｄｋｒｂ１ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＣＣＣＴＣＴＡＡＣＣＡＡＡＧＣＣＡＧＣＡ－３’
・配列番号１０： Ｂｄｋｒｂ１ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＴＴＣＡＧＧＴ－３’
・配列番号１： ＧＡＰＤＨ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＡＣＡＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣＧＧ－３’
・配列番号２： ＧＡＰＤＨ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＣＡＧＧＣＧＡＣＡＴＧＴＧＡＧＡＴＣＣＡ－３’
・配列番号３： ＣＯＸ－２ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ ＡＴＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＣＴＣＣＣＴＴＧ－３’
・配列番号４： ＣＯＸ－２ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ ＡＣＡＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＴＧＡＣＣ－３’
・配列番号５： ＴＮＦ－ａｌｐｈａ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＧＧＡＧ－３’
・配列番号６： ＴＮＦ－ａｌｐｈａ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＧＡＧＣＣＧＡＴＧＡＴＡＧＧＧＴＴＧＧＧ－３’
・配列番号７： ＩＬ－６ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＴＣＴＴＣＴＴＧＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧ－３’
・配列番号８： ＩＬ－６ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＴＧＴＴＣＧＴＣＡＣＡＡＡＣＴＣＣＡＧＧＴ－３’
・配列番号９： Ｂｄｋｒｂ１ Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’－ＣＣＣＴＣＴＡＡＣＣＡＡＡＧＣＣＡＧＣＡ－３’
・配列番号１０： Ｂｄｋｒｂ１ Ｒｅｖｅｒｓｅ： ５’－ＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＴＴＣＡＧＧＴ－３’
【0068】
上記配列番号１及び２に示される塩基配列を有するプライマーは、ハムスター由来ＧＡＰＤＨ 遺伝子ｍＲＮＡ配列（ＮＣＢＩ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ アクセッション番号 ＤＱ４０３０５５．１）に基づき、上記配列番号３及び４に示される塩基配列を有するプライマーは、ハムスター由来ＣＯＸ－２遺伝子ｍＲＮＡ配列（ＮＣＢＩ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ アクセッション番号 ＡＦ３４５３３１．１）に基づき、上記配列番号５及び６に示される塩基配列を有するプライマーは、ハムスター由来ＴＮＦ－α遺伝子ｍＲＮＡ配列（ＮＣＢＩ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ アクセッション番号 ＡＦ０４６２１５．１）に基づき、上記配列番号７及び８に示される基配列を有するプライマーは、ハムスター由来ＩＬ－６遺伝子ｍＲＮＡ配列（ＮＣＢＩ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ アクセッション番号 ＡＢ０２８６３５．１）に基づき、上記配列番号９及び１０に示される基配列を有するプライマーは、ハムスター由来Ｂｄｋｒｂ１遺伝子ｍＲＮＡ配列（ＮＣＢＩ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ アクセッション番号 ＸＭ ００５１３９２３１．３）に基づきそれぞれ設計した。
【0069】
（リアルタイムＰＣＲ条件）
・９５℃で１０分を１サイクル
・９５℃で１０秒、５５℃で１０秒、及び７２℃で１分のサイクルを計４５サイクル
・７２℃で５分を１サイクル
・９５℃で１０分を１サイクル
・９５℃で１０秒、５５℃で１０秒、及び７２℃で１分のサイクルを計４５サイクル
・７２℃で５分を１サイクル
【0070】
〔結果〕
無処理群、コントロール溶液処理群（口内炎＋生食）、及び鎮痛剤処理群（口内炎＋スギナ）における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＣＯＸ－２の発現量（ＣＯＸ－２／ＧＡＰＤＨ）、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＴＮＦ－αの発現量（ＴＮＦ－α／ＧＡＰＤＨ）、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＩＬ－６の発現量（ＩＬ－６／ＧＡＰＤＨ）、及びＧＡＰＤＨの発現量に対するＢｄｋｒｂ１の発現量（Ｂｄｋｒｂ１／ＧＡＰＤＨ）をそれぞれ図３～６に示す（ｎ＝５）。
無処理群、コントロール溶液処理群（口内炎＋生食）、及び鎮痛剤処理群（口内炎＋スギナ）における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＣＯＸ－２の発現量（ＣＯＸ－２／ＧＡＰＤＨ）、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＴＮＦ－αの発現量（ＴＮＦ－α／ＧＡＰＤＨ）、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＩＬ－６の発現量（ＩＬ－６／ＧＡＰＤＨ）、及びＧＡＰＤＨの発現量に対するＢｄｋｒｂ１の発現量（Ｂｄｋｒｂ１／ＧＡＰＤＨ）をそれぞれ図３～６に示す（ｎ＝５）。
【0071】
酢酸生理食塩水を皮内注射して口内炎及び痛みを誘発した場合、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤を２回塗布した鎮痛剤処理群においては、コントロール溶液処理群と比較して発痛関連物質（ＣＯＸ－２、Ｂｄｋｒｂ１）の発現が抑制される傾向が見られた。
【0072】
酢酸生理食塩水の皮内注射によりＣＯＸ－２の産生が遺伝子レベルで上昇する傾向を認めた。また、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤を塗布することで、ＣＯＸ－２の産生が遺伝子レベルで抑制される傾向を認めた。ＣＯＸ－２は痛みに寄与する代表的な因子であることから、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤が疼痛の緩和に寄与した可能性が遺伝子の動きからも考察される。
【0073】
また、酢酸生理食塩水を皮内注射して口内炎及び痛みを誘発した場合、コントロール溶液処理群、及び鎮痛剤処理群では、無処理群と比較して、炎症性サイトカイン（ＴＮＦ－α及びＩＬ－６）を含む発痛関連物質の発現が高くなる傾向を認めた。また、鎮痛剤処理群はコントロール溶液処理群に比べて炎症性サイトカインの発現を抑えることができた。
【0074】
酢酸生理食塩水の皮内注射によりＴＮＦ－α、ＩＬ－６の発現が遺伝子レベルで上昇する傾向を認めた。また、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤を塗布することで、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６の発現が遺伝子レベルで抑制される傾向を認めた。炎症性サイトカイン（ＴＮＦ－α、ＩＬ－６）は炎症に寄与する代表的な因子であることから、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤が炎症の緩和に寄与した可能性が遺伝子の動きからも考察される。
【0075】
また、酢酸生理食塩水の皮内注射によりＢｄｋｒｂ１の発現が遺伝子レベルで上昇する傾向を認めた。また、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤を塗布することで、酢酸生理食塩水の皮内注射により誘発したＢｄｋｒｂ１の発現が抑制される傾向を認めた。
【0076】
ブラジキニンは、炎症と内臓痛に関係するキニン類の一種で、部分的に活性化マスト細胞からの受容体非依存的なヒスタミン及びセロトニンの放出を通して炎症を誘発する。ブラジキニンの作用を媒介する膜受容体には、７つの推定膜貫通領域を有する代表的なＧ蛋白質結合受容体であるＢｄｋｒｂ１（ブラジキニンＢ１受容体）及びＢｄｋｒｂ２（ブラジキニンＢ２受容体）がある。両者とも炎症性及び神経因性の痛覚過敏に寄与するが、Ｂｄｋｒｂ２が恒常的に発現している一方、Ｂｄｋｒｂ１は恒常的に発現せず、外傷や炎症により発現が誘発される。
このため、Ｂｄｋｒｂ１の発現量への影響を評価することで、発痛関連物質であるブラジキニンのスギナ抽出物を含有する鎮痛剤による発現抑制効果を評価することができる。
このため、Ｂｄｋｒｂ１の発現量への影響を評価することで、発痛関連物質であるブラジキニンのスギナ抽出物を含有する鎮痛剤による発現抑制効果を評価することができる。
【0077】
口内炎モデルハムスターの創傷部における炎症性サイトカインの発現上昇を、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤が有意に抑制する傾向が確認されていることから、サイトカインにより発現が誘導されるＢｄｋｒｂ１もスギナ抽出物の効果により発現が抑制されたと考察する。
【0078】
以上の実験結果から、スギナ抽出物を含有する鎮痛剤には、抗炎症効果及び鎮痛効果がある可能性が遺伝子レベルで示され、発痛関連物質の発現抑制、炎症性サイトカインの発現抑制、及び痛覚伝達物質の遊離抑制に有効であることが示された。
【0079】
＜実験例３：痛覚伝達物質の遊離抑制効果の評価＞
本実験では、医薬部外品原料規格 ２０２１（厚生労働省医薬・生活衛生局医薬品審査管理課）に記載の方法に準じて得た各種植物エキスを含有する鎮痛剤による痛覚伝達物質の遊離抑制効果について評価を行った。試験に供した植物エキス及びその製品名を下記に示した。
本実験では、医薬部外品原料規格 ２０２１（厚生労働省医薬・生活衛生局医薬品審査管理課）に記載の方法に準じて得た各種植物エキスを含有する鎮痛剤による痛覚伝達物質の遊離抑制効果について評価を行った。試験に供した植物エキス及びその製品名を下記に示した。
【0080】
（植物エキス）
・スギナエキス（丸善製薬社製、（製品名）スギナ抽出液ＢＧ、スギナの全草から５０容量１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・オウバクエキス（丸善製薬社製、（製品名）オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ、キハダ又はその他同属植物の周皮を除いた樹皮から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出し、５０容量％１，３－ブチレングリコール溶液としたもの）
・海藻エキス（４）（一丸ファルコス社製、（製品名）アルジェレックス Ｓ、褐藻類、紅藻類及び緑藻類の全藻から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・セージエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセージＢ、セージの花、葉又は全草から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・シャクヤクエキス（丸善製薬社製、（製品名）シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ、シャクヤク又はその他近縁植物の根から５０容量％１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・ニンジンエキス（丸善製薬社製、（製品名）ニンジン抽出液ＢＧ）
・セイヨウサンザシエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセイヨウサンザシＢ）
・スギナエキス（丸善製薬社製、（製品名）スギナ抽出液ＢＧ、スギナの全草から５０容量１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・オウバクエキス（丸善製薬社製、（製品名）オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ、キハダ又はその他同属植物の周皮を除いた樹皮から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出し、５０容量％１，３－ブチレングリコール溶液としたもの）
・海藻エキス（４）（一丸ファルコス社製、（製品名）アルジェレックス Ｓ、褐藻類、紅藻類及び緑藻類の全藻から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・セージエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセージＢ、セージの花、葉又は全草から１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・シャクヤクエキス（丸善製薬社製、（製品名）シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ、シャクヤク又はその他近縁植物の根から５０容量％１，３－ブチレングリコール溶液にて抽出したもの）
・ニンジンエキス（丸善製薬社製、（製品名）ニンジン抽出液ＢＧ）
・セイヨウサンザシエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセイヨウサンザシＢ）
【0081】
７～８週齢のＷｉｓｔａｒ系ラット（雄）の脊髄後根神経節（ＤＲＧ）から神経細胞群を単離培養したものを用い、各種植物エキスを含有する鎮痛剤による痛覚伝達物質の遊離抑制効果を検証した（ｎ＝３）。
【0082】
〔検体の調製〕
Ｋ＋ Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｐｅｓ Ｂｕｆｆｅｒを検体１（コントロール）とした。また、表１に従って各種植物エキスを固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含むＫ＋ Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｐｅｓ Ｂｕｆｆｅｒ混合液（鎮痛剤）を調製し、それぞれ検体２～８とした。
Ｋ＋ Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｐｅｓ Ｂｕｆｆｅｒを検体１（コントロール）とした。また、表１に従って各種植物エキスを固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含むＫ＋ Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｐｅｓ Ｂｕｆｆｅｒ混合液（鎮痛剤）を調製し、それぞれ検体２～８とした。
【0083】
（Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｐｅｓ Ｂｕｆｆｅｒの調製）
滅菌水にＮａＣｌ（１００ｍＭ）、ＫＣｌ（４．５ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２ｍＭ）、ＭｇＳＯ４（１．２ｍＭ）、ＫＨ２ＰＯ４（１．２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２５ｍＭ）、ｇｌｕｃｏｓｅ（１１．７ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）を溶解し、１Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ７．４に調整した。
滅菌水にＮａＣｌ（１００ｍＭ）、ＫＣｌ（４．５ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２ｍＭ）、ＭｇＳＯ４（１．２ｍＭ）、ＫＨ２ＰＯ４（１．２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２５ｍＭ）、ｇｌｕｃｏｓｅ（１１．７ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）を溶解し、１Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ７．４に調整した。
【0084】
（Ｋ＋ Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｐｅｓ Ｂｕｆｆｅｒの調製）
滅菌水にＮａＣｌ（１５．７ｍＭ）、ＫＣｌ（９８．８ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２ｍＭ）、ＭｇＳＯ４（１．２ｍＭ）、ＫＨ２ＰＯ４（１．２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２５ｍＭ）、ｇｌｕｃｏｓｅ（１１．７ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）を溶解し、１Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ７．４に調整した。
滅菌水にＮａＣｌ（１５．７ｍＭ）、ＫＣｌ（９８．８ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２ｍＭ）、ＭｇＳＯ４（１．２ｍＭ）、ＫＨ２ＰＯ４（１．２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２５ｍＭ）、ｇｌｕｃｏｓｅ（１１．７ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）を溶解し、１Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ７．４に調整した。
【0085】
【表1】
【0086】
〔方法〕
〔１〕ラミニンコート培養シャーレの作製
（１）Φ３．５ｍｍ培養シャーレに１ｍＬの滅菌水を加え、４℃で２時間静置した。
（２）（１）で加えた滅菌水を除去した後、７０（ｖ／ｖ）％エタノールを１ｍＬ加え、４℃で２時間静置した。
（３）（２）で加えた７０（ｖ／ｖ）％エタノールを除去した後、滅菌水で１回洗浄した。
（４）１％ポリエチレンイミン溶液を１ｍＬ加え、４℃で一晩静置した。
（５）滅菌水で６回洗浄した。
（６）ラミニンを５μｇ／ｍＬとなるように添加した０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を１ｍＬ加え、４℃で一晩静置した。
（７）（６）で加えたリン酸緩衝液を除去した後、使用直前に、１ｍＬのハンクス液で洗浄した。
〔１〕ラミニンコート培養シャーレの作製
（１）Φ３．５ｍｍ培養シャーレに１ｍＬの滅菌水を加え、４℃で２時間静置した。
（２）（１）で加えた滅菌水を除去した後、７０（ｖ／ｖ）％エタノールを１ｍＬ加え、４℃で２時間静置した。
（３）（２）で加えた７０（ｖ／ｖ）％エタノールを除去した後、滅菌水で１回洗浄した。
（４）１％ポリエチレンイミン溶液を１ｍＬ加え、４℃で一晩静置した。
（５）滅菌水で６回洗浄した。
（６）ラミニンを５μｇ／ｍＬとなるように添加した０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を１ｍＬ加え、４℃で一晩静置した。
（７）（６）で加えたリン酸緩衝液を除去した後、使用直前に、１ｍＬのハンクス液で洗浄した。
【0087】
〔２〕ＤＲＧの単離
（１）ラットをＣＯ２ガスを用いサクリファイスした。
（２）ラットの脊椎から脊髄後根神経節（ＤＲＧ：Ｄｏｒｓａｌ Ｒｏｏｔ Ｇａｎｇｌｉｏｎ）を単離し、ハンクス液中に回収した。
（３）ＤＲＧを容積が５０ｍＬのファルコンチューブ内のハンクス液で洗浄した。
（４）１０００ｒｐｍで５分間、常温で遠心分離した。
（５）上清を除去してペレットのみとし、０．１２５質量％コラゲナーゼ入りの無血清ＤＲＧ培地（ＤＭＥＭ１０ｇ／Ｌ、グルコース３．５ｇ／Ｌ、グルタミン０．５８４ｇ／Ｌ、ＨＥＰＥＳ２．３８ｇ／Ｌ、炭酸水素ナトリウム２ｇ／Ｌ、ペニシリン１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ/ｍＬになるように滅菌水に溶解させた水溶液）を５ｍＬ加え、３７℃で９０分間振盪した。
（６）１０００ｒｐｍで１０分間、常温で遠心分離した。
（７）再度上清を除去してペレットのみとし、０．１２５質量％コラゲナーゼ入りの無血清ＤＲＧ培地を５ｍＬ加え、３７℃で９０分間振盪した。
（８）１０００ｒｐｍで１５分間、常温で遠心分離した。
（９）上清を除去してペレットのみとし、ハンクス液を５ｍＬ加え、ピペッティングで軽く分散した。
（１０）再度１０００ｒｐｍで１５分間、常温で遠心分離した。
（１１）上清を除去してペレットのみとした後、０．２５％トリプシン添加ＰＢＳ ５ｍＬを加え、３７℃で３０分間振盪した。
（１２）１０００ｒｐｍで１５分間、常温で遠心分離した。
（１３）上清を除去してペレットのみとした後、１０％馬血清（Ｈｏｒｓｅ Ｓｅｒｕｍ ｈｅａｔ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ：ＧＩＢＣＯ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）及びＮＧＦ（Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ；Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を３０ｎｇ／ｍＬとなるように添加したＤＲＧ培地８ｍＬを加えて懸濁後、φ３．５ｍｍ培養シャーレに１ｍＬずつ播種した。
（１４）３７℃ ＣＯ２インキュベータで一晩培養後、培地交換を行った。
（１５）２日ごとに培地交換を行い、神経細胞の軸索伸長、及び、非神経細胞が密な状態になるまで培養した。
（１）ラットをＣＯ２ガスを用いサクリファイスした。
（２）ラットの脊椎から脊髄後根神経節（ＤＲＧ：Ｄｏｒｓａｌ Ｒｏｏｔ Ｇａｎｇｌｉｏｎ）を単離し、ハンクス液中に回収した。
（３）ＤＲＧを容積が５０ｍＬのファルコンチューブ内のハンクス液で洗浄した。
（４）１０００ｒｐｍで５分間、常温で遠心分離した。
（５）上清を除去してペレットのみとし、０．１２５質量％コラゲナーゼ入りの無血清ＤＲＧ培地（ＤＭＥＭ１０ｇ／Ｌ、グルコース３．５ｇ／Ｌ、グルタミン０．５８４ｇ／Ｌ、ＨＥＰＥＳ２．３８ｇ／Ｌ、炭酸水素ナトリウム２ｇ／Ｌ、ペニシリン１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ/ｍＬになるように滅菌水に溶解させた水溶液）を５ｍＬ加え、３７℃で９０分間振盪した。
（６）１０００ｒｐｍで１０分間、常温で遠心分離した。
（７）再度上清を除去してペレットのみとし、０．１２５質量％コラゲナーゼ入りの無血清ＤＲＧ培地を５ｍＬ加え、３７℃で９０分間振盪した。
（８）１０００ｒｐｍで１５分間、常温で遠心分離した。
（９）上清を除去してペレットのみとし、ハンクス液を５ｍＬ加え、ピペッティングで軽く分散した。
（１０）再度１０００ｒｐｍで１５分間、常温で遠心分離した。
（１１）上清を除去してペレットのみとした後、０．２５％トリプシン添加ＰＢＳ ５ｍＬを加え、３７℃で３０分間振盪した。
（１２）１０００ｒｐｍで１５分間、常温で遠心分離した。
（１３）上清を除去してペレットのみとした後、１０％馬血清（Ｈｏｒｓｅ Ｓｅｒｕｍ ｈｅａｔ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ：ＧＩＢＣＯ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）及びＮＧＦ（Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ；Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を３０ｎｇ／ｍＬとなるように添加したＤＲＧ培地８ｍＬを加えて懸濁後、φ３．５ｍｍ培養シャーレに１ｍＬずつ播種した。
（１４）３７℃ ＣＯ２インキュベータで一晩培養後、培地交換を行った。
（１５）２日ごとに培地交換を行い、神経細胞の軸索伸長、及び、非神経細胞が密な状態になるまで培養した。
【0088】
〔３〕ＤＲＧを用いた痛覚伝達物質（サブスタンスＰ）遊離抑制効果の検証
（１）各培養シャーレからＤＲＧ培地を除去し、表２に記載の反応前液を１ｍＬ添加した。（２）３７℃ ＣＯ２インキュベータ内で１０分間静置した。
（３）上清を回収した（回収反応前液）。
（４）表２に記載の刺激用の反応液を各培養シャーレに添加した。
（５）３７℃ ＣＯ２インキュベータ内で１０分間静置した。
（６）上清を回収した（回収反応液）。
（７）回収した上清（回収反応全液及び回収反応液）をそれぞれ－８０℃にて凍結保管した。
（８）氷上で融解した後、ＥＬＩＳＡ法（ＰａｒａｍｅｔｅｒＴＭ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ：Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて、サブスタンスＰ量をプロトコルに従い解析した。また、以下の式を用い、得られた結果から各サンプルにおける反応前後の遊離サブスタンスＰの遊離量比を算出し、検体間で評価した。
（１）各培養シャーレからＤＲＧ培地を除去し、表２に記載の反応前液を１ｍＬ添加した。（２）３７℃ ＣＯ２インキュベータ内で１０分間静置した。
（３）上清を回収した（回収反応前液）。
（４）表２に記載の刺激用の反応液を各培養シャーレに添加した。
（５）３７℃ ＣＯ２インキュベータ内で１０分間静置した。
（６）上清を回収した（回収反応液）。
（７）回収した上清（回収反応全液及び回収反応液）をそれぞれ－８０℃にて凍結保管した。
（８）氷上で融解した後、ＥＬＩＳＡ法（ＰａｒａｍｅｔｅｒＴＭ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ：Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて、サブスタンスＰ量をプロトコルに従い解析した。また、以下の式を用い、得られた結果から各サンプルにおける反応前後の遊離サブスタンスＰの遊離量比を算出し、検体間で評価した。
【0089】
サブスタンスＰの遊離量比＝回収反応液中のサブスタンスＰ（ｐｇ／ｍＬ）－回収反応前液中のサブスタンスＰ（ｐｇ／ｍＬ）
【0090】
【表2】
【0091】
【0092】
脊髄後根神経節（ＤＲＧ）は、末梢からの感覚情報の中継点として機能する神経細胞の集団であり、疼痛を含む知覚の伝達に重要な役割を果たす。今回、ラットの脊髄後根神経節から神経細胞群を単離培養したものを用い、各種植物エキスを含有する鎮痛剤の痛覚伝達物質遊離抑制効果を検証した。痛覚伝達物質として、サブスタンスＰに着目し高濃度カリウムイオン（Ｋ＋１００ｍＭ）により誘発されたサブスタンスＰ遊離を測定する評価系で、刺激の前後におけるサブスタンスＰの遊離量比を指標として検証した。
【0093】
その結果、実験例３－１（コントロール）では、高濃度カリウムイオンの刺激によりサブスタンスＰの遊離量が上昇した。一方で、スギナエキス、オウバクエキス、海藻エキス、セージエキス、シャクヤクエキスをそれぞれ含有する鎮痛剤（検体２～６）を用いた実験例３－２～３－６では、実験例３－１（コントロール）に比べサブスタンスＰの遊離量の上昇が抑制される傾向を認めた。また、ニンジンエキス、セイヨウサンザシエキスをそれぞれ含有する検体７、８を用いた実験例３－７、３－８では、実験例３－１（コントロール）に比べサブスタンスＰの遊離量が顕著に上昇する傾向を認めた。
【0094】
＜実験例４：鎮痛剤の鎮痛効果の評価２＞
本試験では、オウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤の鎮痛効果について、それぞれ、口内炎モデルハムスターを用いて評価した。
本試験では、オウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤の鎮痛効果について、それぞれ、口内炎モデルハムスターを用いて評価した。
【0095】
〔検体の調製〕
まず、スギナ抽出物に替えてオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を用いた以外は実験例１と同様にしてオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含む生理食塩水（鎮痛剤）を、それぞれ調製した。
また、試験に供した植物エキス及びその製品名を下記に示した。
まず、スギナ抽出物に替えてオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を用いた以外は実験例１と同様にしてオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含む生理食塩水（鎮痛剤）を、それぞれ調製した。
また、試験に供した植物エキス及びその製品名を下記に示した。
【0096】
（植物エキス）
・オウバクエキス（丸善製薬社製、（製品名）オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ）
・海藻エキス（４）（一丸ファルコス社製、（製品名）アルジェレックス Ｓ）
・セージエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセージＢ）
・シャクヤクエキス（丸善製薬社製、（製品名）シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ）
・オウバクエキス（丸善製薬社製、（製品名）オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ）
・海藻エキス（４）（一丸ファルコス社製、（製品名）アルジェレックス Ｓ）
・セージエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセージＢ）
・シャクヤクエキス（丸善製薬社製、（製品名）シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ）
【0097】
〔方法〕
４週齢のＳｙｒｉａｎ系ハムスター（雄）を１週間ケージで予備飼育し、５週齢とした（ｎ＝４）。
ハムスターを麻酔下でコルクボードに固定し、右側頬嚢に１０（ｗ／ｖ）％酢酸生理食塩水を３０μＬ皮内注射して、口内炎（創傷）を作製した。
口内炎作製後、１頭あたり鎮痛剤５０μＬを創傷部に塗布し続けた。鎮痛剤の塗布及び体重測定は１日１回とし、これを７日間連続で行った。得られた結果から体重増加率の経日推移を評価した。
４週齢のＳｙｒｉａｎ系ハムスター（雄）を１週間ケージで予備飼育し、５週齢とした（ｎ＝４）。
ハムスターを麻酔下でコルクボードに固定し、右側頬嚢に１０（ｗ／ｖ）％酢酸生理食塩水を３０μＬ皮内注射して、口内炎（創傷）を作製した。
口内炎作製後、１頭あたり鎮痛剤５０μＬを創傷部に塗布し続けた。鎮痛剤の塗布及び体重測定は１日１回とし、これを７日間連続で行った。得られた結果から体重増加率の経日推移を評価した。
【0098】
また、体重増加率は、以下の式を用いて算出した。
体重増加率（％）＝｛（測定時点の体重－創傷作製時の体重）／創傷作製時の体重｝×１００
体重増加率（％）＝｛（測定時点の体重－創傷作製時の体重）／創傷作製時の体重｝×１００
【0099】
〔結果〕
結果を図８に示す（ｎ＝４）。
図８は、オウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤を、それぞれ塗布した場合の体重増加率の推移である。図８には、実験例１で得られたスギナ抽出物を含む鎮痛剤を塗布した場合と生理食塩水（コントロール溶液）を塗布した場合の体重増加率の推移についても記載した。
結果を図８に示す（ｎ＝４）。
図８は、オウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤を、それぞれ塗布した場合の体重増加率の推移である。図８には、実験例１で得られたスギナ抽出物を含む鎮痛剤を塗布した場合と生理食塩水（コントロール溶液）を塗布した場合の体重増加率の推移についても記載した。
【0100】
実験例４の結果を示す図８から、植物エキス（海藻、オウバク、セージ、シャクヤク）を含む鎮痛剤を塗布した場合、体重増加率は、生理食塩水と比較し全ての測定時点で高く推移することがわかった。このことから、海藻、オウバク、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤は、鎮痛効果を有することが示唆された。
【0101】
＜実験例５：発痛関連物質の発現抑制効果の評価２＞
本試験ではオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤について、それぞれ、発痛関連物質の発現抑制効果の評価を行った。
本試験ではオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を含む鎮痛剤について、それぞれ、発痛関連物質の発現抑制効果の評価を行った。
【0102】
〔検体の調製〕
まず、スギナ抽出物に替えてオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を用いた以外は実験例２と同様にして、オウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含む水溶液（鎮痛剤）をそれぞれ調製した。
なお、生理食塩水をコントロール溶液とした。また、試験に供した植物エキス及びその製品名を下記に示した。
まず、スギナ抽出物に替えてオウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を用いた以外は実験例２と同様にして、オウバク、海藻、セージ、シャクヤクの各抽出物を固形分換算で１５μｇ／ｍＬ含む水溶液（鎮痛剤）をそれぞれ調製した。
なお、生理食塩水をコントロール溶液とした。また、試験に供した植物エキス及びその製品名を下記に示した。
【0103】
（植物エキス）
・オウバクエキス（丸善製薬社製、（製品名）オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ）
・海藻エキス（４）（一丸ファルコス社製、（製品名）アルジェレックス Ｓ）
・セージエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセージＢ）
・シャクヤクエキス（丸善製薬社製、（製品名）シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ）
・オウバクエキス（丸善製薬社製、（製品名）オウバク抽出液ＢＧ－Ｊ）
・海藻エキス（４）（一丸ファルコス社製、（製品名）アルジェレックス Ｓ）
・セージエキス（一丸ファルコス社製、（製品名）ファルコレックスセージＢ）
・シャクヤクエキス（丸善製薬社製、（製品名）シャクヤク抽出液ＢＧ－ＪＣ）
【0104】
〔方法〕
実験例２と同様の操作により、ｃＤＮＡを合成し、リアルタイムＰＣＲを実施し、ｍＲＮＡ発現を解析した。
実験例２と同様の操作により、ｃＤＮＡを合成し、リアルタイムＰＣＲを実施し、ｍＲＮＡ発現を解析した。
【0105】
〔結果〕
無処理群、コントロール溶液処理群（口内炎＋生食）、セージ抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋セージ）、及びシャクヤク抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋シャクヤク）における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＴＮＦ－αの発現量（ＴＮＦ－α／ＧＡＰＤＨ）を図９に示す（ｎ＝５）。図９には、実験例２で得られたスギナ抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋スギナ）における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＴＮＦ－αの発現量（ＴＮＦ－α／ＧＡＰＤＨ）も記載した。
無処理群、コントロール溶液処理群（口内炎＋生食）、セージ抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋セージ）、及びシャクヤク抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋シャクヤク）における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＴＮＦ－αの発現量（ＴＮＦ－α／ＧＡＰＤＨ）を図９に示す（ｎ＝５）。図９には、実験例２で得られたスギナ抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋スギナ）における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＴＮＦ－αの発現量（ＴＮＦ－α／ＧＡＰＤＨ）も記載した。
【0106】
無処理群、コントロール溶液処理群、海藻抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋海藻）、セージ抽出物を含む鎮痛剤処理群、及びシャクヤク抽出物を含む鎮痛剤処理群における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＩＬ－６の発現量（ＩＬ－６／ＧＡＰＤＨ）を図１０に示す（ｎ＝５）。図１０には、実験例２で得られたスギナ抽出物を含む鎮痛剤処理群における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＩＬ－６の発現量（ＩＬ－６／ＧＡＰＤＨ）も記載した。
【0107】
また、無処理群、コントロール溶液処理群、オウバク抽出物を含む鎮痛剤処理群（口内炎＋オウバク）、海藻抽出物を含む鎮痛剤処理群、セージ抽出物を含む鎮痛剤処理群、及びシャクヤク抽出物を含む鎮痛剤処理群における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＢｄｋｒｂ１の発現量（Ｂｄｋｒｂ１／ＧＡＰＤＨ）を図１１に示す（ｎ＝５）。図１１には、実験例２で得られたスギナ抽出物を含む鎮痛剤処理群における、ＧＡＰＤＨの発現量に対するＢｄｋｒｂ１の発現量（Ｂｄｋｒｂ１／ＧＡＰＤＨ）も記載した。
【0108】
酢酸生理食塩水を皮内注射して口内炎及び痛みを誘発した場合、図９から、セージ抽出物、シャクヤク抽出物を含有する鎮痛剤を塗布した鎮痛剤処理群においては、コントロール溶液処理群と比較して、ＴＮＦ－αの産生が遺伝子レベルで抑制される傾向を認めた。図１０から、海藻抽出物、セージ抽出物、シャクヤク抽出物を含有する鎮痛剤を塗布した鎮痛剤処理群においては、コントロール溶液処理群と比較して、ＩＬ－６の産生が遺伝子レベルで抑制される傾向を認めた。また、図１１から、オウバク抽出物、海藻抽出物、セージ抽出物、シャクヤク抽出物を含有する鎮痛剤を塗布した鎮痛剤処理群においては、コントロール溶液処理群と比較して、酢酸の皮内注射により誘発した発痛関連物質（Ｂｄｋｒｂ１）の発現が遺伝子レベルで抑制される傾向を認めた。
【0109】
発明者はこれまでに生体（ｉｎ ｖｉｖｏ）評価結果から、頬粘膜に誘発した創傷の疼痛を、創傷部に塗布したスギナエキスを含有する鎮痛剤が抑制する傾向を確認してきたが、本結果より、その作用の一部が、末梢神経の痛覚伝達物質の遊離を抑制することで発揮されている可能性が示された。
【0110】
以上の実験例の結果より、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物から選ばれる少なくとも１つの抽出物を含有する鎮痛剤は、鎮痛効果を有し、発痛関連物質の発現抑制、炎症性サイトカインの発現抑制、及び痛覚伝達物質の遊離抑制に有効であることがわかった。
また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物から選ばれる少なくとも１つの抽出物を含有する鎮痛剤は口腔内の粘膜で吸収が可能であり、簡便な方法により適用が可能であることが示された。
また、スギナ、海藻、オウバク、セージ、及びシャクヤクの抽出物から選ばれる少なくとも１つの抽出物を含有する鎮痛剤は口腔内の粘膜で吸収が可能であり、簡便な方法により適用が可能であることが示された。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【配列表】