特開 2024-93825 加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024093825

(43)【公開日】2024-07-09

(54)【発明の名称】加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/105 20160101AFI20240702BHJP

   A61K 31/4425 20060101ALI20240702BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240702BHJP

【ＦＩ】

A23L33/105

A61K31/4425

A61P25/28

【審査請求】未請求

【請求項の数】5

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022210409

(22)【出願日】2022-12-27

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和２年度、国立研究開発法人科学技術振興機構、研究成果展開事業 共創の場形成支援（共創の場形成支援プログラム）「つくば型デジタルバイオエコノミー社会形成の国際拠点形成にかかる国立大学法人筑波大学による研究開発」委託研究、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願

(71)【出願人】

【識別番号】595135774

【氏名又は名称】ダイドーグループホールディングス株式会社

(71)【出願人】

【識別番号】504171134

【氏名又は名称】国立大学法人 筑波大学

(74)【代理人】

【識別番号】100141139

【弁理士】

【氏名又は名称】及川 周

(74)【代理人】

【識別番号】100181722

【弁理士】

【氏名又は名称】春田 洋孝

(74)【代理人】

【識別番号】100175824

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 淳一

(72)【発明者】

【氏名】細谷 雄太

(72)【発明者】

【氏名】坂本 浩樹

(72)【発明者】

【氏名】北端（香川） 珠実

(72)【発明者】

【氏名】礒田 博子

(72)【発明者】

【氏名】近藤 真司

(72)【発明者】

【氏名】フェルドウシ ファラハナ

(72)【発明者】

【氏名】シャルミン アクタル

【テーマコード（参考）】

4B018

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B018MD61

4B018ME10

4B018ME14

4B018MF01

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC17

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA15

(57)【要約】

【課題】加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善する技術を提供する。
【解決手段】トリゴネリン（ＣＡＳ番号：５３５－８３－１）を有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤；トリゴネリンを有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物；トリゴネリンを有効成分として含有する食品組成物を摂取させる工程を含む、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く。）。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

トリゴネリン（ＣＡＳ番号：５３５－８３－１）を有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤。

【請求項2】

トリゴネリンを有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物。

【請求項3】

機能性表示食品又は特定保健用食品である、請求項２に記載の加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物。

【請求項4】

サプリメントである、請求項２に記載の加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物。

【請求項5】

トリゴネリンを有効成分として含有する食品組成物を摂取させる工程を含む、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く。）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤及びその使用に関する。より詳細には、本発明は、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物、及び、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法に関する。

【背景技術】

【0002】

脳機能の維持、向上、改善は、若年層から老年層まで幅広い世代で求められている。特に、加齢に伴う学習・記憶機能低下は、今後ますます進む高齢化社会において社会問題となっており、その対策が求められている。加齢に伴い進行する脳の炎症と神経変性は、加齢に伴う学習・記憶機能低下の原因の一つであると考えられている。

【0003】

ところで、トリゴネリン（ＣＡＳ番号：５３５－８３－１）は、下記式（１）で表される構造を有する植物アルカロイドの一種である。

【0004】

【化1】

【0005】

非特許文献１には、アルツハイマー病モデルマウスにおいて、トリゴネリンの投与により記憶機能の改善が認められたことが記載されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Farid M. M., et. al., Trigonelline recovers memory function in Alzheimer’s disease model mice: evidence of brain penetration and target molecule, Scientific Reports, 10, 16424, 2020.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善する技術を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は以下の態様を含む。
［１］トリゴネリン（ＣＡＳ番号：５３５－８３－１）を有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤。
［２］トリゴネリンを有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物。
［３］機能性表示食品又は特定保健用食品である、［２］に記載の加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物。
［４］サプリメントである、［２］に記載の加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物。
［５］トリゴネリンを有効成分として含有する食品組成物を摂取させる工程を含む、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く。）。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善する技術を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は、実験例１におけるＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。

【図2】図２は、実験例２におけるモリス水迷路試験の結果を示すグラフである。

【図3A】図３Ａは、実験例３において、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの間で発現量に差が認められた遺伝子を示すボルケーノプロットである。

【図3B】図３Ｂは、実験例３において、トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの間で発現量に差が認められた遺伝子を示すボルケーノプロットである。

【図3C】図３Ｃは、実験例３において、トリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの間で発現量に差が認められた遺伝子を示すボルケーノプロットである。

【図4】図４は、実験例３における遺伝子オントロジー（ＧＯ）分析の結果を示すグラフである。

【図5】図５は、実験例４において、実験例３で行った、海馬における網羅的トランスクリプトーム解析の結果に基づいて、炎症に関わる遺伝子の発現量を示したヒートマップである。

【図6】図６は、実験例４において、マウス海馬におけるＴＮＦαの発現量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。

【図7】図７は、実験例４において、マウス海馬におけるＩＬ６の発現量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。

【図8】図８は、実験例５において、実験例３で行った、海馬における網羅的トランスクリプトーム解析の結果に基づいて、ＳＡＭＰ８対照マウス及びトリゴネリンを投与したマウスの海馬で発現量が有意に変化した遺伝子の発現量を示したヒートマップである。

【図9】図９は、実験例５において、マウス海馬におけるドーパミンの産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。

【図10】図１０は、実験例５において、マウス海馬におけるノルアドレナリンの産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。

【図11】図１１は、実験例５において、マウス海馬におけるＢＤＮＦの産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。

【図12】図１２は、実験例５において、マウス海馬におけるセロトニン（５－ＨＴ）の産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。

【図13】図１３は、実験例６において、定量的リアルタイムＰＣＲによりＴＮＦα遺伝子の発現量を定量した結果を示すグラフである。

【図14】図１４は、実験例６において、定量的リアルタイムＰＣＲによりＩＬ６遺伝子の発現量を定量した結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0011】

［加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤］
一実施形態において、本発明は、トリゴネリン（ＣＡＳ番号：５３５－８３－１）を有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤を提供する。

【0012】

実施例において後述するように、発明者らは、トリゴネリンの投与により、老化促進モデルマウスであるＳＡＭＰ８マウスにおける、空間学習及び記憶機能の低下が改善されることを明らかにした。ＳＡＭＰ８マウスは、１２週齢から空間学習障害を示し、１６週齢から空間学習と記憶の喪失を示す。

【0013】

発明者らはまた、トリゴネリンの投与により、ＳＡＭＰ８マウスの海馬において、加齢に伴って上昇した炎症性サイトカインレベルが低下し、神経炎症を予防できることを明らかにした。発明者らはまた、ヒト神経芽腫細胞株であるＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞において、トリゴネリンの培地への添加により、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）で誘発した神経炎症が抑制されることを明らかにした。この結果は、トリゴネリンが、ヒトにおいても神経炎症抑制作用を示すことを支持するものである。

【0014】

発明者らはまた、トリゴネリンの投与により、ＳＡＭＰ８マウスの海馬において、加齢に伴って低下した神経伝達物質レベルを回復させることができることを明らかにした。

【0015】

発明者らはまた、トリゴネリンの投与が、ＳＡＭＰ８マウスの脳や神経系の発達を促進することを明らかにした。発明者らはまた、トリゴネリンの投与が、ヒト神経芽腫細胞株であるＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞の増殖を促進することを明らかにした。この結果は、トリゴネリンが、ヒトにおいても神経新生作用を示すことを支持するものである。

【0016】

以上のことから、本実施形態の改善剤は、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善に非常に有用である。ここで、学習機能としては、特に限定されず、例えば、空間学習機能が挙げられる。

【0017】

なお、アルツハイマー病は、アミロイドベータ（Ａβ）タンパク質の蓄積による脳組織の変性を特徴とする疾患であり、精神疾患や通常の老齢化とは異なることが知られている。このため、アルツハイマー病による認知機能の低下と、加齢に伴う学習・記憶機能低下は異なる。

【0018】

本実施形態の改善剤において、「有効成分とする」とは、トリゴネリンを、加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善させるのに十分な量を含むことを意味する。あるいは、トリゴネリンを主要な活性成分として含むことを意味する。

【0019】

本実施形態の改善剤は、薬学的に許容される担体と組み合わせた組成物として、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤等の形態で経口的に投与してもよいし、後述する食品組成物の形態で経口的に投与してもよい。

【0020】

薬学的に許容される担体としては、通常医薬組成物の製剤に用いられるものを特に制限なく用いることができる。より具体的には、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴム等の結合剤；デンプン、結晶性セルロース等の賦形剤；アルギン酸等の膨化剤；水、エタノール、グリセリン等の溶剤等が挙げられる。

【0021】

組成物は添加剤を含んでいてもよい。添加剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；ショ糖、乳糖、サッカリン、マルチトール等の甘味剤；ペパーミント、アカモノ油等の香味剤；ベンジルアルコール、フェノール等の安定剤；リン酸塩、酢酸ナトリウム等の緩衝剤；安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の溶解補助剤；酸化防止剤；防腐剤等が挙げられる。

【0022】

本実施形態の改善剤の投与量は、対象の症状、体重、年齢、性別等によって異なる場合があり、一概には決定できないが、成人１日あたり、例えば１０ｍｇ以上、例えば２０ｍｇ以上、例えば３０ｍｇ以上、例えば４０ｍｇ以上、例えば５０ｍｇ以上、例えば６０ｍｇ以上、例えば７０ｍｇ以上、例えば８０ｍｇ以上、例えば９０ｍｇ以上、例えば１００ｍｇ以上、例えば１５０ｍｇ以上、例えば１８０ｍｇ以上、例えば２００ｍｇ以上、例えば３００ｍｇ以上、例えば４００ｍｇ以上の有効成分（トリゴネリン）を投与することが適切であると考えられる。また、本実施形態の改善剤の投与量の上限としては、成人１日あたり、例えば５００ｍｇ以下、例えば４００ｍｇ以下、例えば３００ｍｇ以下、例えば２００ｍｇ以下、例えば１００ｍｇ以下の有効成分（トリゴネリン）を投与することが適切であると考えられる。上記の下限及び上限は任意に組み合わせることができる。改善剤は、１日あたり１回又は２～４回程度若しくはそれ以上に分けて投与してもよく、１日あたりの投与量が上記の範囲である限り、いつ投与しても構わない。

【0023】

［加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物］
一実施形態において、本発明は、トリゴネリンを有効成分として含有する、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善用食品組成物を提供する。本実施形態の食品組成物は、上述した、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤を含むものである。

【0024】

本実施形態の食品組成物を摂取することにより、ヒト又は非ヒト動物において、加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善させることができる。本実施形態の食品組成物は、神経新生促進用食品組成物等といいかえることもできる。

【0025】

本実施形態の食品組成物の好ましい摂取量は、上述した改善剤と同様であり、成人１日あたり、例えば１０ｍｇ以上、例えば２０ｍｇ以上、例えば３０ｍｇ以上、例えば４０ｍｇ以上、例えば５０ｍｇ以上、例えば６０ｍｇ以上、例えば７０ｍｇ以上、例えば８０ｍｇ以上、例えば９０ｍｇ以上、例えば１００ｍｇ以上、例えば１５０ｍｇ以上、例えば１８０ｍｇ以上、例えば２００ｍｇ以上、例えば３００ｍｇ以上、例えば４００ｍｇ以上の有効成分（トリゴネリン）を摂取できる量とすることが適切であると考えられる。また、本実施形態の食品組成物の摂取量の上限としては、成人１日あたり、例えば５００ｍｇ以下、例えば４００ｍｇ以下、例えば３００ｍｇ以下、例えば２００ｍｇ以下、例えば１００ｍｇ以下の有効成分（トリゴネリン）を摂取できる量とすることが適切であると考えられる。上記の下限及び上限は任意に組み合わせることができる。食品組成物は、１日あたり１回又は２～４回程度若しくはそれ以上に分けて摂取してもよく、１日あたりの摂取量が上記の範囲である限り、いつ摂取しても構わない。

【0026】

本実施形態の食品組成物は、例えば、サプリメントの形態であってもよいし、飲料の形態であってもよいし、固形状、半固形状又はゲル状の食品の形態であってもよいし、任意の調理済み食品の形態等であってもよい。

【0027】

サプリメントの形状としては、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の形状が挙げられる。飲料としては、コーヒー、茶、紅茶、スポーツドリンク、果実・野菜飲料、炭酸飲料等が挙げられる。食品としては、例えば、コーヒーゼリー等が挙げられる。

【0028】

また、食品を収容する容器は特に限定されず、缶、びん、ペットボトル、パウチ、プラスチック容器等が挙げられる。

【0029】

本実施形態の食品組成物において、有効成分（トリゴネリン）は、もともと食品に含まれているものであってもよいし、添加したものであってもよい。トリゴネリンは比較的熱に弱いため、有効量のトリゴネリンを含有する食品を製造するためには、加熱処理を制限する等の処理が必要になる場合がある。

【0030】

本実施形態の食品組成物は、機能性表示食品であってもよい。機能性表示食品とは、科学的根拠を基に商品パッケージに機能性を表示するものとして、消費者庁に届け出られた食品を意味する。当該表示として、例えば、「加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善する」、「中高年の方の認知機能を向上させる」、「中高年の方の加齢に伴い低下する、認知機能の一部である記憶力を維持させる」等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0031】

本実施形態の食品組成物は、特定保健用食品であってもよい。特定保健用食品とは、健康の維持増進に役立つことが科学的根拠に基づいて認められ、その効果の表示が許可されている食品を意味する。表示されている効果や安全性については国が審査を行い、食品ごとに消費者庁長官により許可される。

【0032】

［加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法］
一実施形態において、本発明は、トリゴネリンを有効成分として含有する食品組成物を摂取させる工程を含む、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く。）を提供する。

【0033】

本実施形態の改善方法において、医療行為とは、医師（医師の指示を受けた者を含む。）がヒトに対して治療を実施する行為を意味する。

【0034】

本実施形態の改善方法には、例えば、飲食店等において、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善を目的として、トリゴネリンを有効成分として含有する食品組成物を対象に摂取させる行為等が含まれる。

【0035】

ここで、対象はヒトであってもよいし、非ヒト動物であってもよい。非ヒト動物としては、イヌ、ネコ等が挙げられるがこれらに限定されない。

【0036】

本実施形態の改善方法において、対象に摂取させる食品組成物の好ましい量は、食品組成物について上述したものと同様である。

【0037】

［その他の実施形態］
一実施形態において、本発明は、トリゴネリンの有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善方法を提供する。

【0038】

一実施形態において、本発明は、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善に使用するためのトリゴネリンを提供する。

【0039】

一実施形態において、本発明は、加齢に伴う学習・記憶機能低下の改善剤を製造するためのトリゴネリンの使用を提供する。

【実施例0040】

次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

【0041】

［材料及び方法］
（インビトロ実験）
《細胞及び細胞培養》
ヒト神経芽腫細胞株であるＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を使用した。ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞はＡＴＣＣより入手した。ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞は、ＤＭＥＭとＨａｍ’ｓ Ｆ－１２ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｉｘｔｕｒｅを１：１（ｖ：ｖ）で混合したもの（ＤＭＥＭ／Ｆ１２）に、１５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、富士フイルム和光純薬）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを添加した培地を用いて、３７℃、９５％空気／５％ＣＯ_２、湿潤環境のインキュベーター内で培養した。

【0042】

ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞は、接着単層培養で増殖し、コンフルエントに達した時点で、細胞剥離試薬（ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ、サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて継代した（３～４日毎。最大８継代）。

【0043】

《３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイ》
ＭＴＴアッセイにより、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞の代謝活性と細胞生存率を測定した。ＭＴＴの比色反応を使用してミトコンドリアの酸化還元酵素活性を評価し、酵素の作用を細胞生存率に変換した。

【0044】

２×１０^４個／ウェルの細胞を、１５％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを添加した、ＤＭＥＭ／Ｆ１２中、ポリ－Ｌ－リジンコートした９６ウェルプレートで２４時間培養した。続いて、細胞を、異なる濃度のトリゴネリンを含む、血清含有量を低下させたＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック）中で２４時間インキュベートした。続いて、培地をＭＴＴ溶液に交換し、１２時間インキュベートした。続いて、１０％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加し、マイクロプレートリーダー（Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ、サーモフィッシャーサイエンティフィック）を使用して、５７０ｎｍの吸光度を測定した。

【0045】

《定量的リアルタイムＰＣＲ》
単離したＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ ＶＩＬＯ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ）を用いて、取扱説明書にしたがって逆転写した。続いて、アプライドバイオシステムズ７５００ＲＴ－ＰＣＲシステムを用い、次のようにして定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を行った。５０℃２分間、９５℃１０分間、続いてＰＣＲ反応４５サイクル（９５℃１５秒間、６０℃１分間）。

【0046】

使用したプライマーは、ヒトＧＡＰＤＨ（Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック）、ヒトＴＮＦα（Ｈｓ００１７４１２８＿ｍ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック）、ヒトＩＬ６（Ｈｓ００１７４１３１＿ｍ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック）、マウスＴＮＦα（Ｍｍ００４４３２５８＿ｍ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック）、マウスＩＬ６（Ｍｍ００４４６１９０＿Ｍ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック）、マウスＧＡＰＤＨ（Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック）であった。

【0047】

（インビボ実験）
《動物》
インビボ実験には、１６週齢のＳＡＭＰ８マウス（日本ＳＬＣ）を使用した。ＳＡＭＰ８マウスは、１２週齢から空間学習障害を示し、１６週齢から空間学習と記憶の喪失を示す。ＳＡＭＰ８マウスの対照として、老化促進モデルマウス（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｏｕｓｅ、ＳＡＭ）関連の遺伝子型を持ち、老化促進に対する耐性を示すｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ－ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｏｕｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ １（ＳＡＭＲ１）マウスを使用した。マウスは、制御された温度（２１～２３℃）及び日長（１２時間、明／暗）、自由摂食、自由飲水下で、個別に飼育した。

【0048】

全ての動物実験は日本生理学会評議会のガイドラインにしたがって行われ、実験プロトコールは、筑波大学動物実験委員会の承認（１８－３５６）を得て行った。

【0049】

《トリゴネリンの投与》
１週間順化させた後、ＳＡＭＰ８マウスを無作為に生理食塩水投与群（ｎ＝８）とトリゴネリン投与群（ｎ＝８）に分けた。ＳＡＭＲ１生理食塩水投与群（ｎ＝８）を通常の老化対照として飼育した。トリゴネリンをミリＱ水に溶解し、ＳＡＭＰ８マウスに、１日１回、５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与した。この投与量は発明者らの過去の研究に基づいて決定した。

【0050】

ＳＡＭＰ８対照群及びＳＡＭＲ１マウスに、トリゴネリン投与群におけるトリゴネリンと等容量の生理食塩水を投与した。３０日間のトリゴネリンの投与完了後、８日間行動試験を行い、その間トリゴネリンの投与を継続した。

【0051】

《モリス水迷路試験》
マウスの学習能力及び記憶能力を評価するために、モリス水迷路試験（ＭＷＭ試験）を行った。水迷路は、２３±２℃に保たれた水（深さ３０ｃｍ）で満たされた円形のプール（直径１２０ｃｍ、高さ４５ｃｍ）で構成されていた。プールには４つの領域を設定した。１つの領域の中間の水面下１ｃｍに目に見えない脱出プラットフォーム（直径１０ｃｍ）を設置した。

【0052】

試験では、マウスは６０秒以内に泳いで脱出プラットフォームに着地し、水から逃げることができた（逃避潜時、ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ）。マウスは、７日間、毎日４回のテストを受けた。最終日に、脱出プラットフォームを除去し、マウスを自由に６０秒間泳がせた。そして、脱出プラットフォームが配置されていた位置を通過した回数と、ターゲット領域で費やされた時間を記録した。

【0053】

《ＥＬＩＳＡ》
マウスを安楽死させ、氷上で、摘出した脳から海馬を分離し、プロテアーゼ阻害剤を含むＲＩＰＡ溶解バッファー（サンタクルーズ）中で超音波処理してホモジナイズした。続いて、ホモジネートを１６，０００×ｇで２０分間遠心分離し、得られた上清を使用してＥＬＩＳＡにより神経伝達物質を測定した。

【0054】

組織中のモノアミンレベル（ドーパミン、ノルアドレナリン、Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ（ＢＤＮＦ）、及びセロトニン（５－ＨＴ））を、サンドイッチＥＬＩＳＡで測定した。ＥＬＩＳＡキットとしては、ドーパミン（ＢＡ－Ｅ－５３００Ｒ、ＩｍｍｕＳｍｏｌ）、ノルアドレナリン（ＢＡ－Ｅ－５２００Ｒ、ＩｍｍｕＳｍｏｌ）、ＢＤＮＦ（ＫＥ０００９６、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）、セロトニン（ＢＡ－Ｅ－５９００Ｒ、ＩｍｍｕＳｍｏｌ）を使用した。

【0055】

また、ＴＮＦ－α及びＩＬ６レベルを、ＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ）を用いて取扱説明書にしたがって測定した。また、２Ｄ Ｑｕａｎｔキット（ＧＥヘルスケア）を使用して、各神経伝達物質レベルを総タンパク質濃度に正規化した。

【0056】

（マイクロアレイを用いた遺伝子発現プロファイリング）
マウス海馬から抽出したＲＮＡサンプルを、３’ ＩＶＴ ＰＬＵＳ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（アフィメトリックス）で増幅しビオチン化した。

【0057】

続いて、ハイブリダイゼーションステーションにおいて、ビオチン化相補的ＲＮＡ（ｃＲＮＡ）を、４５℃で１６時間、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｅ ４３０ ＰＭアレイストリップ（アフィメトリックス）にハイブリダイズさせた。続いて、ハイブリダイズしたアレイを洗浄し、染色し、ＧｅｎｅＡｔｌａｓ Ｆｌｕｉｄｉｃｓ ａｎｄ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｔａｔｉｏｎを用いてスキャンした。

【0058】

続いて、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃｏｎｓｏｌｅ ソフトウェア（アフィメトリックス）のｒｏｂｕｓｔ ｍｕｌｔｉｃｈｉｐ ａｎａｌｙｓｉｓ （ＲＭＡ） 要約アルゴリズムを使用して、プローブ強度ファイル（ＣＥＬファイル）から遺伝子レベル情報（ＣＨＰファイル）を取得した。得られたデータのその後の分析は、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｃｏｎｓｏｌｅ（ＴＡＣ）バージョン４ソフトウェア（サーモフィッシャーサイエンティフィック）で実行した。マイクロアレイ分析は、各グループの２つのｍＲＮＡ試料に対して実施した。遺伝子オントロジー（ＧＯ）分析には、ｐ値が０．０５未満の差次的に発現する遺伝子（ＤＥＧ）（被験者間一元配置分散分析）を使用した。

【0059】

Ｇｅｎｅ Ｓｅｔ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＧＳＥＡ）ＷｅｂツールのＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ Ｄａｔａｂａｓｅ（ＭＳｉｇＤＢ）を使用して、遺伝子セットが２つの生物学的状態間で統計的に有意で一致する違いを示すかどうかを判断した。

【0060】

グラフィカルプレゼンテーションは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１６（マイクロソフト）で生成した。ヒートマップは、Ｍｏｒｐｈｅｕｓソフトウェアを使用して生成した。ベン図は、オープンソースツールを使用して作成した。マイクロアレイデータセットは、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｎｉｂｕｓ（ＧＥＯ）に登録した。

【0061】

《統計分析》
特に明記しない限り、データは平均±標準誤差（ＳＥＭ）として表示した。正規分布は、Ｓｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ正規性検定によって検定した。スチューデントのｔ検定（対応のない）により、２つのグループ間の有意差を決定した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とそれに続くダネットの事後検定により、各処理条件を単一の対照群と比較した。

【0062】

様々な時点での処理群間の生細胞数の違いは、双方向ＡＮＯＶＡとそれに続くＳｉｄａｋの事後検定を使用して評価した。インビトロ実験では、異なる時点での処理群間の逃避時間の差を、フィッシャーのＬＳＤ検定による双方向反復測定ＡＮＯＶＡを使用して評価した。

【0063】

他の行動試験は、一元配置又は二元配置（反復測定）のＡＮＯＶＡと正規分布データのフィッシャーのＬＳＤテストを使用して比較した。非正規分布データの場合、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定に続いてＤｕｎｎの事後検定を実行した。有意水準はα＜０．０５に設定した。

【0064】

すべての統計分析とグラフ表示は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して実行した。

【0065】

［実験例１］
（トリゴネリンによる神経新生作用の検討）
０、５、１０、２０、４０、８０μＭのトリゴネリンの存在下で、ヒト神経芽腫細胞株であるＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を２４時間培養し、ＭＴＴアッセイにより細胞生存率を測定した。図１は、ＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。図１中、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示す。その結果、トリゴネリンの存在下でＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞の増殖促進が認められ、トリゴネリンが神経新生作用を有することが明らかとなった。

【0066】

［実験例２］
（老化促進モデルマウスの学習・記憶能力に対するトリゴネリンの影響の検討）
老化促進マウスとして、ＳＡＭＰ８マウスを使用した。１日１回、トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与したＳＡＭＰ８マウスをモリス水迷路試験に供し、学習・記憶能力を評価した。対照として、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスをモリス水迷路試験に供した。

【0067】

図２は、モリス水迷路試験の結果を示すグラフである。図２中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ＴＧＲ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ＴＧＲ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊」は、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスに対してｐ＜０．０５で有意差が存在することを示す。

【0068】

その結果、トリゴネリンの投与により、老化促進マウスの学習・記憶能力が有意に改善することが明らかとなった。

【0069】

［実験例３］
（網羅的トランスクリプトーム解析）
１日１回、トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与したＳＡＭＰ８マウスを安楽死させ、海馬からＲＮＡを抽出し、網羅的トランスクリプトーム解析を行った。対照として、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスについても同様の解析を行った。

【0070】

図３Ａ～図３Ｃは、網羅的トランスクリプトーム解析の結果、発現量に差が認められた遺伝子を示すボルケーノプロットである。図３Ａは、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの間で発現量に差が認められた遺伝子を示す。図３Ｂは、トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの間で発現量に差が認められた遺伝子を示す。図３Ｃは、トリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの間で発現量に差が認められた遺伝子を示す。図３Ａ～図３Ｃ中、縦軸は－ｌｏｇ_１０（ｐ値）を示し、横軸は線形ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅを示す。その結果、トリゴネリンの投与により遺伝子発現が変化することが明らかとなった。

【0071】

下記表１に、トリゴネリンの投与により遺伝子発現が下方制御された上位１０個の遺伝子を示す。

【0072】

【表1】

【0073】

下記表２に、トリゴネリンの投与により遺伝子発現が上方制御された上位１０個の遺伝子を示す。

【0074】

【表2】

【0075】

図４は、遺伝子オントロジー（ＧＯ）分析の結果を示すグラフである。トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスにおいて、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスと比較して発現量が上昇した遺伝子（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ＞１）の上位３５位までを棒グラフで示す。その結果、有意に濃縮された生物学的機能は、中脳の発達、化学シナプス伝達、神経系の発達、軸索誘導、樹状突起スパインの発達の正の制御、細胞死の負の制御視神経発達等であった。

【0076】

［実験例４］
（トリゴネリン投与による老化促進モデルマウスの海馬における炎症性サイトカインの発現抑制作用）
図５は、実験例３で行った、海馬における網羅的トランスクリプトーム解析の結果に基づいて、炎症に関わる遺伝子の発現量を示したヒートマップである。図５中、「ＳＡＭＰ８ ｃｏｎｔ ｖｓ ＳＡＭＲ１ ｃｏｎｔ」は、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスにおける遺伝子発現量を比較した結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８ ＴＧ５ ｖｓ ＳＡＭＰ８ ｃｏｎｔ」は、トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスにおける遺伝子発現量を比較した結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８ ＴＧ５０ ｖｓ ＳＡＭＰ８ ｃｏｎｔ」は、トリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスにおける遺伝子発現量を比較した結果であることを示す。

【0077】

図６は、マウス海馬におけるＴＮＦαの発現量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。図６中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」はｐ＜０．０１で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」はｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。

【0078】

その結果、トリゴネリンの投与により、炎症性サイトカインであるＴＮＦαの海馬における発現が抑制されたことが確認された。

【0079】

図７は、マウス海馬におけるＩＬ６の発現量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。図７中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」はｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。

【0080】

その結果、トリゴネリンの投与により、炎症性サイトカインであるＩＬ６の海馬における発現が抑制されたことが確認された。

【0081】

［実験例５］
（トリゴネリン投与による老化促進モデルマウスの海馬における神経伝達物質産生に対する影響）
図８は、実験例３で行った、海馬における網羅的トランスクリプトーム解析の結果に基づいて、ＳＡＭＰ８対照マウス及びトリゴネリンを投与したマウスの海馬で発現量が有意に変化した遺伝子の発現量を示したヒートマップである。図８中、「ＳＡＭＰ８ ｃｏｎｔ ｖｓ ＳＡＭＲ１ ｃｏｎｔ」は、生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスにおける遺伝子発現量を比較した結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８ ＴＧ５ ｖｓ ＳＡＭＰ８ ｃｏｎｔ」は、トリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスにおける遺伝子発現量を比較した結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８ ＴＧ５０ ｖｓ ＳＡＭＰ８ ｃｏｎｔ」は、トリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で３０日間経口投与したＳＡＭＰ８マウス及び生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスにおける遺伝子発現量を比較した結果であることを示す。

【0082】

その結果、発現量が有意に変化した遺伝子は、主に神経伝達物質の放出、シナプス伝達、神経新生に関与していることが明らかとなった。

【0083】

図９は、マウス海馬におけるドーパミンの産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。図９中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」はｐ＜０．００１で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」はｐ＜０．０００１で有意差が存在することを示す。

【0084】

その結果、トリゴネリンの投与により、老化に伴って減少した、海馬におけるドーパミンの産生量が上昇したことが確認された。

【0085】

図１０は、マウス海馬におけるノルアドレナリンの産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。図１０中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」はｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。

【0086】

その結果、トリゴネリンの投与により、老化に伴って減少した、海馬におけるノルアドレナリンの産生量が上昇したことが確認された。

【0087】

図１１は、マウス海馬におけるＢＤＮＦの産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。図１１中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」はｐ＜０．０００１で有意差が存在することを示す。

【0088】

その結果、トリゴネリンの投与により、老化に伴って減少した、海馬におけるＢＤＮＦの産生量が上昇したことが確認された。

【0089】

図１２は、マウス海馬におけるセロトニン（５－ＨＴ）の産生量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。図１２中、「ＳＡＭＲ１＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＲ１マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋Ｓａｌｉｎｅ」は生理食塩水を投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示し、「ＳＡＭＰ８＋５０ｍｇ／ｋｇ ＴＧ」はトリゴネリンを５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＳＡＭＰ８マウスの結果であることを示す。また、「＊＊」はｐ＜０．００１で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」はｐ＜０．０００１で有意差が存在することを示す。

【0090】

その結果、トリゴネリンの投与により、老化に伴って減少した、海馬におけるセロトニンの産生量が上昇したことが確認された。

【0091】

［実験例６］
（トリゴネリンによるヒト神経細胞保護作用の評価）
トリゴネリンによるヒト神経細胞保護作用を検討した。ヒト神経芽腫細胞株であるＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を、トリゴネリンの存在下でリポポリサッカライド（ＬＰＳ）処理し、定量的リアルタイムＰＣＲにより、ＬＰＳ処理により誘導される炎症性サイトカインの発現が抑制されるか否かを検討した。

【0092】

ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を９６ウェルプレートに２．０×１０^４個／ウェルで播種し、２４時間培養した。２４時間後、培地を、０、５、１０、５０μＭのトリゴネリン、及び、５０μｇ／ｍＬのＬＰＳを含有するＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地に交換し、更に４８時間インキュベートした。

【0093】

続いて、ＲＮＡを精製し、定量的リアルタイムＰＣＲにより、ＴＮＦα遺伝子及びＩＬ６遺伝子の発現量を定量した。

【0094】

図１３及び図１４は、定量的リアルタイムＰＣＲの結果を示すグラフである。図１３はＴＮＦα遺伝子の発現量を測定した結果を示し、図１４はＩＬ６遺伝子の発現量を測定した結果を示す。図１３及び図１４中、「－ＬＰＳ」はＬＰＳを添加しなかった結果であることを示し、「＋ＬＰＳ」は、培地にＬＰＳのみ添加しトリゴネリンを添加しなかった結果であることを示し、「ＴＲＧ５μＭ」は、培地にトリゴネリンを５μＭの終濃度で添加した結果であることを示し、「ＴＲＧ１０μＭ」は、培地にトリゴネリンを１０μＭの終濃度で添加した結果であることを示し、「ＴＲＧ５０μＭ」は、培地にトリゴネリンを５０μＭの終濃度で添加した結果であることを示す。また、「＊＊」はｐ＜０．００１で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」はｐ＜０．０００１で有意差が存在することを示す。図１４の縦軸は、Ｇａｐｄｈ遺伝子に対して標準化したＴＮＦα遺伝子の相対的発現量を示す。また、図１５の縦軸は、Ｇａｐｄｈ遺伝子に対して標準化したＩＬ６遺伝子の相対的発現量を示す。

【0095】

その結果、５～５０μＭのトリゴネリンの存在下において、ＬＰＳ処理により誘導される炎症性サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ６）の発現が、有意に抑制されたことが明らかとなった。

【産業上の利用可能性】

【0096】

本発明によれば、加齢に伴う学習・記憶機能低下を改善する技術を提供することができる。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】