(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024094444
(43)【公開日】2024-07-10
(54)【発明の名称】ＩＴＧＡＶを標的とする核酸医薬
(51)【国際特許分類】
C12N 15/113 20100101AFI20240703BHJP
A61K 31/713 20060101ALI20240703BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240703BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240703BHJP
C07H 21/02 20060101ALN20240703BHJP
【ＦＩ】
C12N15/113 140Z
A61K31/713 ZNA
A61P35/00
A61P43/00 111
C07H21/02
【審査請求】未請求
【請求項の数】12
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021042912
(22)【出願日】2021-03-16
(71)【出願人】
【識別番号】000001926
【氏名又は名称】塩野義製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100113789
【弁理士】
【氏名又は名称】杉田 健一
(74)【代理人】
【識別番号】100209598
【弁理士】
【氏名又は名称】渡部 秀昭
(72)【発明者】
【氏名】永井 良平
(72)【発明者】
【氏名】藤原 孝博
(72)【発明者】
【氏名】横田 慎一
(72)【発明者】
【氏名】関口 光明
(72)【発明者】
【氏名】三岡 恭典
【テーマコード（参考）】
4C057
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C057BB01
4C057CC02
4C057CC05
4C057DD03
4C057MM02
4C057MM04
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086ZB26
4C086ZC41
(57)【要約】 （修正有）
【課題】本発明の目的は、新規のＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸を提供することにある。
【解決手段】特定の標的配列に対する核酸又は特定の配列を有する核酸が、優れたＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有することを見出した。該核酸を有効成分として含む医薬組成物は、線維化関連疾患の予防又は治療のための医薬として非常に有用である。
【選択図】なし
【解決手段】特定の標的配列に対する核酸又は特定の配列を有する核酸が、優れたＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有することを見出した。該核酸を有効成分として含む医薬組成物は、線維化関連疾患の予防又は治療のための医薬として非常に有用である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号１の２２９１位～２３１１位、６５７位～６８７位、７６８位～８０９位、９２７位～９５４位、１０９４位～１１４１位、１３１０位～１３３２位、１５７５位～１６００位、１７１０位～１７４３位、１８９７位～１９１９位、１９８９位～２０２１位、２０８９位～２１０９位、２１４５位～２１８５位、２３７６位～２４０４位、２４８３位～２５０９位、２７４８位～２７８２位又は３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、
インビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制することを特徴とする核酸。
インビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制することを特徴とする核酸。
【請求項2】
配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列；又は
配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含む、請求項１記載の核酸。
配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含む、請求項１記載の核酸。
【請求項3】
配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列；又は
配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。
配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。
【請求項4】
該化学修飾が、糖の２´位に置換基を有するヌクレオシド及び／又は糖の４´位と２´位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである、請求項３記載の核酸。
【請求項5】
該塩基配列からなるオリゴヌクレオチドの３´末端にオーバーハングを含む、請求項２～４のいずれかに記載の核酸。
【請求項6】
ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ又はｍｉＲＮＡである、請求項１～５のいずれかに記載の核酸。
【請求項7】
アンチセンス鎖が、配列番号３１７及び４４４～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるＩＴＧＡＶの発現を抑制するｓｉＲＮＡ。
【請求項8】
アンチセンス鎖が、配列番号４４４～４４６、４５３、４５５、４６３～４６６、４７８、４８３及び４９２～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドである請求項７記載のｓｉＲＮＡ。
【請求項9】
以下のいずれかである請求項７又は８記載のｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３３３、３５２～３６２及び４３５～４４１からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３９３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３６５、３７１～３８７及び配列番号３９１～４３３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３８１及び４０２～４０４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、４２３、４２４、４２９及び４３０からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０又は３８３に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３６０、３６４、３７５、３８３、４０６～４０９、４３４及び４３６～４４３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４７８に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４８３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９２に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；又は
アンチセンス鎖が配列番号４９４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ。
アンチセンス鎖が配列番号４４４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３３３、３５２～３６２及び４３５～４４１からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３９３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３６５、３７１～３８７及び配列番号３９１～４３３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３８１及び４０２～４０４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、４２３、４２４、４２９及び４３０からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０又は３８３に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３６０、３６４、３７５、３８３、４０６～４０９、４３４及び４３６～４４３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４７８に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４８３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９２に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；又は
アンチセンス鎖が配列番号４９４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ。
【請求項10】
請求項１～６のいずれかに記載の核酸又は請求項７～９のいずれかに記載のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物。
【請求項11】
ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療のために用いる、請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項12】
該疾患が、線維化関連疾患である、請求項１１記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、インテグリンα－ＶをコードするＩＴＧＡＶを標的とする核酸医薬に関する。より詳細には、線維化関連疾患の予防又は治療薬として有用なＩＴＧＡＶに対する核酸に関する。
【背景技術】
【0002】
線維化関連疾患は、組織の修復又は反応プロセスにおいて、過剰な線維組織が形成される疾患である。典型的には、炎症又は損傷の結果として、体内の多くの臓器や多くの組織で起こる可能性があり、例えば、肺の線維症（肺線維症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症等）、心臓の線維症（心房線維症、心内膜線維症、過去の心筋梗塞の結果として生じる損傷等）、肝臓の線維症（肝硬変等）が挙げられる。
【0003】
インテグリンは、細胞－細胞相互作用及び細胞－マトリックス相互作用を媒介する糖タンパク質膜貫通受容体のファミリーである。インテグリンは、２つの異なる鎖、αサブユニット及びβサブユニットを有するヘテロ二量体である。哺乳動物においては、１８個のαサブユニットと８個のβサブユニットが記載されている。
【0004】
インテグリンα－Ｖはオステオポンチン、フィブロネクチン等の受容体であり、細胞接着因子として作用する。インテグリンα－Ｖノックアウトマウスに肝臓に激しい障害を起こすことで知られている四塩化炭素を投与すると肝線維化進展が抑制されたこと（非特許文献１）、ヒト肝臓星細胞株ＬＸ－２にインテグリンα－Ｖ ｓｉＲＮＡを添加すると線維症の進行を示すマーカーの発現が大きく低下したこと（非特許文献２）等が知られている。これらのことから、ＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有する医薬組成物は、肝線維化関連疾患の治療又は予防に利用できることが示唆されている。
【0005】
特許文献１又は２には、ＩＴＧＡＶに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドが記載されている。
また、特許文献３又は４には、多数の遺伝子に関するｓｉＲＮＡターゲット配列が記載されている。特許文献３のＴａｂｌｅ１３には、多数のターゲットに対するｓｉＲＮＡが記載されており、ＩＤ：３７８６９０１～３７８７０００として１００のヒトのＩＴＧＡＶのｓｉＲＮＡターゲット配列が記載されている。特許文献４には、配列番号：３３０６２９～３３０７４３として１１５のヒトのＩＴＧＡＶのｓｉＲＮＡターゲット配列が記載されている。しかし、ＩＴＧＡＶ発現抑制を含め、生物学的データは一切記載されていない。
また、特許文献３又は４には、多数の遺伝子に関するｓｉＲＮＡターゲット配列が記載されている。特許文献３のＴａｂｌｅ１３には、多数のターゲットに対するｓｉＲＮＡが記載されており、ＩＤ：３７８６９０１～３７８７０００として１００のヒトのＩＴＧＡＶのｓｉＲＮＡターゲット配列が記載されている。特許文献４には、配列番号：３３０６２９～３３０７４３として１１５のヒトのＩＴＧＡＶのｓｉＲＮＡターゲット配列が記載されている。しかし、ＩＴＧＡＶ発現抑制を含め、生物学的データは一切記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】ＷＯ９９／０５４４５６
【特許文献2】ＷＯ０２／０３１１４２
【特許文献3】ＷＯ２００４／０４５５４３
【特許文献4】ＷＯ２００５／１１６２０４
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｎａｔ Ｍｅｄ． ２０１３；１９（１２）：１６１７－２４
【非特許文献2】Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ２０１６ ５１（１２）：１１６１－１１７４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明の目的は、優れたＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有する核酸を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、鋭意研究の結果、優れたＩＴＧＡＶ発現抑制活性（ノックダウン活性）を有する新規核酸（ｓｉＲＮＡ）の合成に成功した。さらに、本発明者らは、ＩＴＧＡＶのｍＲＮＡの中で特に、核酸のノックダウン活性に関連する標的領域を見出した。具体的には、６００以上の標的配列の異なるｓｉＲＮＡと２００以上の該ｓｉＲＮＡの変異体（塩基置換）からインビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞（ＨｅｐＧ２）におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制する１４４のｓｉＲＮＡと、それらの標的領域として１６箇所の領域を見出した（実施例２、４及び５）。また、本発明者らは、得られたｓｉＲＮＡに変異や化学修飾を導入し、生体内であっても標的組織に移行し、十分な活性を示すｓｉＲＮＡの合成に成功した（実施例６）。そのうち特に有用なｓｉＲＮＡとして、配列番号２４６の塩基配列を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡを見出した（実施例３）。さらに、該ｓｉＲＮＡがＩＴＧＡＶの発現を抑制することにより、肝線維化を抑制し得ることを見出した（実施例４、５、７、及び８）。
また、本発明者らは、肝実質細胞；胆管上皮細胞、類洞内皮細胞等を含む非実質細胞；肝星細胞等において本発明の核酸がノックダウン活性を有することを見出した。肝臓において複数の細胞種に作用し、強力な薬効が期待される。
なお、本発明の核酸は、医薬として使用するために十分安全である。
また、本発明者らは、肝実質細胞；胆管上皮細胞、類洞内皮細胞等を含む非実質細胞；肝星細胞等において本発明の核酸がノックダウン活性を有することを見出した。肝臓において複数の細胞種に作用し、強力な薬効が期待される。
なお、本発明の核酸は、医薬として使用するために十分安全である。
【0010】
すなわち、本発明は、以下に関する。
（１）配列番号１の２２９１位～２３１１位、６５７位～６８７位、７６８位～８０９位、９２７位～９５４位、１０９４位～１１４１位、１３１０位～１３３２位、１５７５位～１６００位、１７１０位～１７４３位、１８９７位～１９１９位、１９８９位～２０２１位、２０８９位～２１０９位、２１４５位～２１８５位、２３７６位～２４０４位、２４８３位～２５０９位、２７４８位～２７８２位又は３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、
インビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制することを特徴とする核酸。
（２）配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列；又は
配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含む、（１）記載の核酸。
（３）配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列；又は
配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。
（４）該化学修飾が、糖の２´位に置換基を有するヌクレオシド及び／又は糖の４´位と２´位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである、（３）記載の核酸。
（５）該塩基配列からなるオリゴヌクレオチドの３´末端にオーバーハングを含む、（２）～（４）のいずれかに記載の核酸。
（６）ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ又はｍｉＲＮＡである、（１）～（５）のいずれかに記載の核酸。
（７）アンチセンス鎖が、配列番号３１７及び４４４～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるＩＴＧＡＶの発現を抑制するｓｉＲＮＡ。
（８）アンチセンス鎖が、配列番号４４４～４４６、４５３、４５５、４６３～４６６、４７８、４８３及び４９２～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドである（７）記載のｓｉＲＮＡ。
（９）以下のいずれかである（７）又は（８）記載のｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３３３、３５２～３６２及び４３５～４４１からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３９３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３６５、３７１～３８７及び配列番号３９１～４３３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３８１及び４０２～４０４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、４２３、４２４、４２９及び４３０からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０又は３８３に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３６０、３６４、３７５、３８３、４０６～４０９、４３４及び４３６～４４３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４７８に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４８３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９２に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；又は
アンチセンス鎖が配列番号４９４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ。
（１０）（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物。
（１１）ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療のために用いる、（１０）記載の医薬組成物。
（１２）該疾患が、線維化関連疾患である、（１１）記載の医薬組成物。
（１）配列番号１の２２９１位～２３１１位、６５７位～６８７位、７６８位～８０９位、９２７位～９５４位、１０９４位～１１４１位、１３１０位～１３３２位、１５７５位～１６００位、１７１０位～１７４３位、１８９７位～１９１９位、１９８９位～２０２１位、２０８９位～２１０９位、２１４５位～２１８５位、２３７６位～２４０４位、２４８３位～２５０９位、２７４８位～２７８２位又は３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、
インビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制することを特徴とする核酸。
（２）配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列；又は
配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含む、（１）記載の核酸。
（３）配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列；又は
配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０及び２７２からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列；
を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。
（４）該化学修飾が、糖の２´位に置換基を有するヌクレオシド及び／又は糖の４´位と２´位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである、（３）記載の核酸。
（５）該塩基配列からなるオリゴヌクレオチドの３´末端にオーバーハングを含む、（２）～（４）のいずれかに記載の核酸。
（６）ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ又はｍｉＲＮＡである、（１）～（５）のいずれかに記載の核酸。
（７）アンチセンス鎖が、配列番号３１７及び４４４～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるＩＴＧＡＶの発現を抑制するｓｉＲＮＡ。
（８）アンチセンス鎖が、配列番号４４４～４４６、４５３、４５５、４６３～４６６、４７８、４８３及び４９２～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドである（７）記載のｓｉＲＮＡ。
（９）以下のいずれかである（７）又は（８）記載のｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３３３、３５２～３６２及び４３５～４４１からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３９３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４４６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２～３６５、３７１～３８７及び配列番号３９１～４３３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３８１及び４０２～４０４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４５５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、４２３、４２４、４２９及び４３０からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６５に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０又は３８３に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４６６に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３３２、３６０、３６４、３７５、３８３、４０６～４０９、４３４及び４３６～４４３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４７８に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４８３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号３６０、３７５、３８３、３８６及び４０３からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９２に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；
アンチセンス鎖が配列番号４９３に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ；又は
アンチセンス鎖が配列番号４９４に記載のオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が配列番号４４０に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡ。
（１０）（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物。
（１１）ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療のために用いる、（１０）記載の医薬組成物。
（１２）該疾患が、線維化関連疾患である、（１１）記載の医薬組成物。
【0011】
（１３）（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡを投与する工程を含む、ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療方法。
（１４）ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療剤を製造するための、（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡ。
（１５）ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療のための、（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡ。
（１６）該疾患が、線維化関連疾患である、（１３）記載の方法又は（１４）若しくは（１５）記載の核酸又はｓｉＲＮＡ。
（１７）線維化関連疾患が、肝線維症（肝臓の線維化）である、（１２）記載の医薬組成物又は（１６）記載の方法、核酸若しくはｓｉＲＮＡ。
（１４）ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療剤を製造するための、（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡ。
（１５）ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療のための、（１）～（６）のいずれかに記載の核酸又は（７）～（９）のいずれかに記載のｓｉＲＮＡ。
（１６）該疾患が、線維化関連疾患である、（１３）記載の方法又は（１４）若しくは（１５）記載の核酸又はｓｉＲＮＡ。
（１７）線維化関連疾患が、肝線維症（肝臓の線維化）である、（１２）記載の医薬組成物又は（１６）記載の方法、核酸若しくはｓｉＲＮＡ。
【発明の効果】
【0012】
本発明の核酸は優れたＩＴＧＡＶ発現抑制活性を示し、医薬品、特にＩＴＧＡＶの関与する疾患、例えば、線維化関連疾患の予防又は治療のための医薬として非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】四塩化炭素（ＣＣｌ４）誘導肝線維症モデルにおける血中アミノ基転移酵素（ＡＬＴ）活性
【図2】ＣＣｌ４誘導肝線維症モデルにおける肝臓中ヒドロキシプロリン量
【図3】コリン欠乏メチオニン減量高脂肪食 （ＣＤＨＦＤ） 負荷モデルにおける血中アミノ基転移酵素（ＡＬＴ）活性
【図4】ＣＤＨＦＤ負荷モデルにおける血中アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）活性
【図5】ＣＤＨＦＤ負荷モデルにおける肝臓線維化陽性面積率
【図6】ＣＤＨＦＤ負荷モデルにおける肝臓中ヒドロキシプロリン量
【発明を実施するための形態】
【0014】
本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。
本発明においては、当該分野で公知の遺伝子操作的手法が利用可能である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｆｏｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （２０１２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （２０１２）に記載された方法等が挙げられる。
本発明においては、当該分野で公知の遺伝子操作的手法が利用可能である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｆｏｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （２０１２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （２０１２）に記載された方法等が挙げられる。
【0015】
以下に本明細書中で使用する各用語を説明する。
「ヌクレオシド」とは、核酸塩基と糖とがＮ－グリコシド結合をした化合物を意味する。
「オリゴヌクレオチド」とは、同一又は異なるヌクレオシドがヌクレオシド間結合を介して複数個結合したヌクレオチドを意味する。
「ヌクレオチド」とはオリゴヌクレオチドを構成する１単位であり、ヌクレオシドとヌクレオシド間結合を有する。
「ヌクレオシド」とは、核酸塩基と糖とがＮ－グリコシド結合をした化合物を意味する。
「オリゴヌクレオチド」とは、同一又は異なるヌクレオシドがヌクレオシド間結合を介して複数個結合したヌクレオチドを意味する。
「ヌクレオチド」とはオリゴヌクレオチドを構成する１単位であり、ヌクレオシドとヌクレオシド間結合を有する。
【0016】
本願発明の「核酸」とは、医薬品として利用可能な核酸として当該分野で公知の核酸であればいずれも利用可能である。例えば、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等が挙げられる。ｓｉＲＮＡには、一本鎖オリゴヌクレオチドｓｉＲＮＡ（ＷＯ２０１５／１６８６６１等参照）も含まれる。また、アンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ハイブリダイズ可能な配列と共に二本鎖オリゴヌクレオチドを形成していてもよい（ＷＯ２０１３／０８９２８３等参照）。
【0017】
本発明の核酸の標的遺伝子としては、ＩＴＧＡＶが挙げられる。例えば、ヒトＩＴＧＡＶ、マウスＩｔｇａｖ等が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトＩＴＧＡＶのｍＲＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＭ＿００２２１０．５（配列番号１）、アミノ酸配列は、ＧｅｎＰｅｐｔ：ＮＰ＿００２２０１．２に記載されている。本発明における「ＩＴＧＡＶ」は、これらの配列に限定されるものではなく、インテグリンα－Ｖの機能が保持される限り、アミノ酸配列やｍＲＮＡ配列におけるの変異数や変異部位に制限はないものとする。
【0018】
本発明の「核酸」としては、
（ａ）配列番号１の２２９１位～２３１１位、６５７位～６８７位、７６８位～８０９位、９２７位～９５４位、１０９４位～１１４１位、１３１０位～１３３２位、１５７５位～１６００位、１７１０位～１７４３位、１８９７位～１９１９位、１９８９位～２０２１位、２０８９位～２１０９位、２１４５位～２１８５位、２３７６位～２４０４位、２４８３位～２５０９位、２７４８位～２７８２位又は３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、
インビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制することを特徴とする核酸
が挙げられる。該核酸は、該オリゴヌクレオチドに相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをさらに含んでいてもよい。上記標的領域は、それぞれ、ヒトＩＴＧＡＶ ｍＲＮＡの中で特に、核酸のノックダウン活性に関連する領域である。該標的領域に「相補的な」オリゴヌクレオチドとは、実質的に相補的な配列であれば、長さやヌクレオチドの修飾や変異の有無に関わらず、本発明の核酸に含まれる。「実質的に相補的な配列」とは、上記標的領域の塩基配列の完全相補配列と少なくとも７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、もっとも好ましくは９５％以上の相同性を有する配列が挙げられる。ここで、相同性は、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２１５，４０３－４１０（１９９０）．）の開発したアルゴリズムを使用した検索プログラムＢＬＡＳＴを用いることにより、スコアで類似度が示される。
（ａ）配列番号１の２２９１位～２３１１位、６５７位～６８７位、７６８位～８０９位、９２７位～９５４位、１０９４位～１１４１位、１３１０位～１３３２位、１５７５位～１６００位、１７１０位～１７４３位、１８９７位～１９１９位、１９８９位～２０２１位、２０８９位～２１０９位、２１４５位～２１８５位、２３７６位～２４０４位、２４８３位～２５０９位、２７４８位～２７８２位又は３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、
インビトロで５ｎＭの濃度で、ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現を８７．５％以上抑制することを特徴とする核酸
が挙げられる。該核酸は、該オリゴヌクレオチドに相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをさらに含んでいてもよい。上記標的領域は、それぞれ、ヒトＩＴＧＡＶ ｍＲＮＡの中で特に、核酸のノックダウン活性に関連する領域である。該標的領域に「相補的な」オリゴヌクレオチドとは、実質的に相補的な配列であれば、長さやヌクレオチドの修飾や変異の有無に関わらず、本発明の核酸に含まれる。「実質的に相補的な配列」とは、上記標的領域の塩基配列の完全相補配列と少なくとも７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、もっとも好ましくは９５％以上の相同性を有する配列が挙げられる。ここで、相同性は、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２１５，４０３－４１０（１９９０）．）の開発したアルゴリズムを使用した検索プログラムＢＬＡＳＴを用いることにより、スコアで類似度が示される。
【0019】
ＩＴＧＡＶ発現抑制活性（ノックダウン活性）は、公知の方法により測定することが可能である。例えば、後述する実施例２～６記載の方法により測定することができる。
ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現抑制は公知の方法により測定することが可能である。例えば、実施例２及び３に記載の方法で測定することができる。
ヒト肝癌由来細胞におけるＩＴＧＡＶの発現抑制は公知の方法により測定することが可能である。例えば、実施例２及び３に記載の方法で測定することができる。
【0020】
特に好ましくは、以下が挙げられる。
（ｂ）配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列を含む、上記（ａ）記載の核酸；又は
（ｃ）配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列を含む、上記（ａ）記載の核酸。該核酸は、該塩基配列に相補的な塩基配列をさらに含んでいてもよい。
（ｂ）配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列を含む、上記（ａ）記載の核酸；又は
（ｃ）配列番号２４６～２４９、１５８～１６２、１６５～１７０、１７３～１７５、１７８～１８６、１９２～１９５、２０１～２０６、２１２～２１７、２１９～２２５、２２７～２２９、２３１～２４０、２５１～２５５、２５８～２６３、２６５～２６８及び２７３～２７９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列を含む、上記（ａ）記載の核酸。該核酸は、該塩基配列に相補的な塩基配列をさらに含んでいてもよい。
【0021】
「１～３の塩基」とは、好ましくは１又は２個の塩基を意味している。また、２又は３個の塩基が変異している場合、変異の種類は同じであっても異なっていてもよく、欠失、置換及び挿入の中から選ばれる１又は２以上である。欠失、置換又は挿入によっても、標的遺伝子（ＩＴＧＡＶ）の発現抑制作用を有する限り、本発明の核酸に包含される。
【0022】
配列番号１の２２９１位～２３１１位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２４６～２４９のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－９６、ＳＮＧ－９７ａ、ＳＮＧ－９８、ＳＮＧ－９８ａ等が挙げられる。
配列番号１の６５７位～６８７位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１５８～１６２のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１２、ＳＮＧ－１３、ＳＮＧ－１３ａ、ＳＮＧ－１４、ＳＮＧ－１５等が挙げられる。
配列番号１の７６８位～８０９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１６５～１７０のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１８、ＳＮＧ－１９、ＳＮＧ－２０ａ、ＳＮＧ－２１、ＳＮＧ－２２、ＳＮＧ－２２ａ等が挙げられる。
配列番号１の９２７位～９５４位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１７３～１７５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－２５～ＳＮＧ－２７等が挙げられる。
配列番号１の１０９４位～１１４１位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１７８～１８６のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３０ａ、ＳＮＧ－３１ａ、ＳＮＧ－３２ａ、ＳＮＧ－３３、ＳＮＧ－３４ａ、ＳＮＧ－３５～ＳＮＧ－３８等が挙げられる。
配列番号１の１３１０位～１３３２位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１９２～１９５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－４２ａ、ＳＮＧ－４３～ＳＮＧ－４５等が挙げられる。
配列番号１の１５７５位～１６００位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２０１～２０６のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５１ａ、ＳＮＧ－５２、ＳＮＧ－５３、ＳＮＧ－５４ａ、ＳＮＧ－５５、ＳＮＧ－５６等が挙げられる。
配列番号１の１７１０位～１７４３位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２１２～２１７のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－６２ａ、ＳＮＧ－６３ａ、ＳＮＧ－６４、ＳＮＧ－６５、ＳＮＧ－６６ａ、ＳＮＧ－６７等が挙げられる。
配列番号１の１８９７位～１９１９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２１９～２２１のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－６９ａ、ＳＮＧ－７０、ＳＮＧ－７１等が挙げられる。
配列番号１の１９８９位～２０２１位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２２２～２２５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７２、ＳＮＧ－７３ａ、ＳＮＧ－７４、ＳＮＧ－７５ａ等が挙げられる。
配列番号１の２０８９位～２１０９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２２７～２２９のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７７～ＳＮＧ－７９等が挙げられる。
配列番号１の２１４５位～２１８５位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２３１～２４０のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－８１ａ、ＳＮＧ－８２、ＳＮＧ－８３ａ、ＳＮＧ－８４ａ、ＳＮＧ－８５ａ、ＳＮＧ－８６ａ、ＳＮＧ－８７ａ、ＳＮＧ－８８、ＳＮＧ－８９ａ、ＳＮＧ－９０ａ等が挙げられる。
配列番号１の２３７６位～２４０４位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２５１～２５５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１００、ＳＮＧ－１０１ａ、ＳＮＧ－１０２ａ、ＳＮＧ－１０３ａ、ＳＮＧ－１０４ａ等が挙げられる。
配列番号１の２４８３位～２５０９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２５８～２６３のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０７、ＳＮＧ－１０８ａ、ＳＮＧ－１０９、ＳＮＧ－１１０ａ、ＳＮＧ－１１１、ＳＮＧ－１１２等が挙げられる。
配列番号１の２７４８位～２７８２位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２６５～２６８のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１１４～ＳＮＧ－１１７等が挙げられる。
配列番号１の３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２７３～２７９のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１２２ａ、ＳＮＧ－１２３ａ、ＳＮＧ－１２４ａ、ＳＮＧ－１２５ａ、ＳＮＧ－１２６ａ、ＳＮＧ－１２７ａ、ＳＮＧ－１２８等が挙げられる。
配列番号１の６５７位～６８７位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１５８～１６２のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１２、ＳＮＧ－１３、ＳＮＧ－１３ａ、ＳＮＧ－１４、ＳＮＧ－１５等が挙げられる。
配列番号１の７６８位～８０９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１６５～１７０のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１８、ＳＮＧ－１９、ＳＮＧ－２０ａ、ＳＮＧ－２１、ＳＮＧ－２２、ＳＮＧ－２２ａ等が挙げられる。
配列番号１の９２７位～９５４位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１７３～１７５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－２５～ＳＮＧ－２７等が挙げられる。
配列番号１の１０９４位～１１４１位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１７８～１８６のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３０ａ、ＳＮＧ－３１ａ、ＳＮＧ－３２ａ、ＳＮＧ－３３、ＳＮＧ－３４ａ、ＳＮＧ－３５～ＳＮＧ－３８等が挙げられる。
配列番号１の１３１０位～１３３２位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号１９２～１９５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－４２ａ、ＳＮＧ－４３～ＳＮＧ－４５等が挙げられる。
配列番号１の１５７５位～１６００位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２０１～２０６のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５１ａ、ＳＮＧ－５２、ＳＮＧ－５３、ＳＮＧ－５４ａ、ＳＮＧ－５５、ＳＮＧ－５６等が挙げられる。
配列番号１の１７１０位～１７４３位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２１２～２１７のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－６２ａ、ＳＮＧ－６３ａ、ＳＮＧ－６４、ＳＮＧ－６５、ＳＮＧ－６６ａ、ＳＮＧ－６７等が挙げられる。
配列番号１の１８９７位～１９１９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２１９～２２１のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－６９ａ、ＳＮＧ－７０、ＳＮＧ－７１等が挙げられる。
配列番号１の１９８９位～２０２１位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２２２～２２５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７２、ＳＮＧ－７３ａ、ＳＮＧ－７４、ＳＮＧ－７５ａ等が挙げられる。
配列番号１の２０８９位～２１０９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２２７～２２９のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７７～ＳＮＧ－７９等が挙げられる。
配列番号１の２１４５位～２１８５位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２３１～２４０のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－８１ａ、ＳＮＧ－８２、ＳＮＧ－８３ａ、ＳＮＧ－８４ａ、ＳＮＧ－８５ａ、ＳＮＧ－８６ａ、ＳＮＧ－８７ａ、ＳＮＧ－８８、ＳＮＧ－８９ａ、ＳＮＧ－９０ａ等が挙げられる。
配列番号１の２３７６位～２４０４位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２５１～２５５のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１００、ＳＮＧ－１０１ａ、ＳＮＧ－１０２ａ、ＳＮＧ－１０３ａ、ＳＮＧ－１０４ａ等が挙げられる。
配列番号１の２４８３位～２５０９位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２５８～２６３のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０７、ＳＮＧ－１０８ａ、ＳＮＧ－１０９、ＳＮＧ－１１０ａ、ＳＮＧ－１１１、ＳＮＧ－１１２等が挙げられる。
配列番号１の２７４８位～２７８２位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２６５～２６８のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１１４～ＳＮＧ－１１７等が挙げられる。
配列番号１の３３１３位～３３４６位からなる塩基配列に対して相補的な少なくとも１５塩基以上の塩基配列を有する１５～３０ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを含む、上記（ａ）記載の核酸として、例えば、配列番号２７３～２７９のいずれかの塩基配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１２２ａ、ＳＮＧ－１２３ａ、ＳＮＧ－１２４ａ、ＳＮＧ－１２５ａ、ＳＮＧ－１２６ａ、ＳＮＧ－１２７ａ、ＳＮＧ－１２８等が挙げられる。
【0023】
本発明の「核酸」の他の態様としては、以下が挙げられる。
（ｄ）配列番号１４６～２８９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列を含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸；又は
（ｅ）配列番号１４６～２８９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列を含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。該核酸は、該塩基配列に相補的な塩基配列をさらに含んでいてもよい。
例えば、表１～８に記載のｓｉＲＮＡが挙げられる。
（ｄ）配列番号１４６～２８９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列を含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸；又は
（ｅ）配列番号１４６～２８９からなる群から選ばれるいずれかの塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列を含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。該核酸は、該塩基配列に相補的な塩基配列をさらに含んでいてもよい。
例えば、表１～８に記載のｓｉＲＮＡが挙げられる。
【0024】
本発明の「核酸」の他の態様としては、以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０若しくは２７２の塩基配列を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸；又は
（ｇ）配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０若しくは２７２の塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。該核酸は、該塩基配列に相補的な塩基配列をさらに含んでいてもよい。
本発明の「核酸」は、該塩基配列を含み、ヒトＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有する限り、長さやヌクレオチドの化学修飾の数に関わらず、本発明の核酸に含まれる。
（ｆ）配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０若しくは２７２の塩基配列を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸；又は
（ｇ）配列番号２４６、１７８、１８３～１８５、２０３～２０５、２０８、２１４、２２０、２２４、２３７、２３８、２５１、２５４、２５５、２６０、２６３、２７０若しくは２７２の塩基配列において、１～３の塩基が欠失、置換若しくは挿入された塩基配列を含み、１以上の化学修飾を有するヌクレオチドを含み、かつ、ＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。該核酸は、該塩基配列に相補的な塩基配列をさらに含んでいてもよい。
本発明の「核酸」は、該塩基配列を含み、ヒトＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有する限り、長さやヌクレオチドの化学修飾の数に関わらず、本発明の核酸に含まれる。
【0025】
ヌクレオチドの化学修飾としては、当該分野で公知のヌクレオチドの修飾であれば、いずれも本発明の核酸に利用可能である。例えば、リン酸修飾、核酸塩基修飾、糖修飾が知られている。
【0026】
リン酸修飾としては、例えば、天然の核酸が有するリン酸ジエステル結合、Ｓ－オリゴ（ホスホロチオエート）、Ｄ－オリゴ（ホスホジエステル）、Ｍ－オリゴ（メチルフォスフォネイト）、ボラノホスフェート等が挙げられる。また、国際公開第２０１３／０２２９６６号、国際公開第２０１１／００５７６１号、国際公開第２０１４／０１２０８１号、国際公開第２０１５／１２５８４５号等に記載の結合も利用可能である。リン原子を有していない結合としては、アルキル、非芳香族炭素環式基、ハロアルキル、ハロゲンで置換された非芳香族炭素環式基等から誘導される二価の置換基が挙げられる。例えば、シロキサン、スルフィド、スルホキシド、スルホン、アセチル、ギ酸アセチル、チオギ酸アセチル、メチレンギ酸アセチル、チオギ酸アセチル、アルケニル、スルファマート、メチレンイミノ、メチレンヒドラジノ、スルホナート、スルホンアミド、アミド等から誘導される二価の置換基である。オリゴヌクレオチド中、全て同じ結合でもよいし、異なる結合を含んでいてもよい。
【0027】
核酸塩基修飾としては、例えば、５－メチルシトシン、５－ヒドロキシメチルシトシン、５－プロピニルシトシン等が挙げられる。
【0028】
糖修飾としては、糖の２´位に置換基を有するヌクレオシド及び／又は糖の４´位と２´位との間に架橋構造を有するヌクレオシドが挙げられる。
糖の２´位に置換基を有するヌクレオシドとしては、例えば、２´－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３（２´ＭＯＥ）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、２´－ＯＭｅ、２´－Ｆｌｕｏｒｏが挙げられる。
該架橋構造として、例えば、ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ）、ＡｍＮＡ（Ａｍｉｄｏ－ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＷＯ２０１１／０５２４３６参照）、ＴｒＮＡ（Ｔｒｉａｚｏｌｅ－Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ、ＷＯ２０１４／１２６２２９参照）が挙げられる。特に好ましくは、４´－（ＣＨ２）ｍ－Ｏ－２´（ｍは１～４の整数）又は、４´－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１－２´（Ｒ１は、水素原子又はアルキルである）である。
４´－（ＣＨ２）ｍ－Ｏ－２´（ｍは１～４の整数）の中で、特に好ましくは４´－ＣＨ２－Ｏ－２´（ＬＮＡ、Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）である。具体例及びその調製方法は、国際公開第９８／３９３５２号、国際公開第２００３／０６８７９５号、国際公開第２００５／０２１５７０号等に記載されている。
４´－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１－２´（Ｒ１は、水素原子又はアルキルである）の中で、特に好ましくは４´－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＣＨ３－２´である。具体例及びその調製方法は、国際公開第２０１１／０５２４３６号に記載されている。
糖の２´位に置換基を有するヌクレオシドとしては、例えば、２´－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３（２´ＭＯＥ）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、２´－ＯＭｅ、２´－Ｆｌｕｏｒｏが挙げられる。
該架橋構造として、例えば、ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ）、ＡｍＮＡ（Ａｍｉｄｏ－ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＷＯ２０１１／０５２４３６参照）、ＴｒＮＡ（Ｔｒｉａｚｏｌｅ－Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ、ＷＯ２０１４／１２６２２９参照）が挙げられる。特に好ましくは、４´－（ＣＨ２）ｍ－Ｏ－２´（ｍは１～４の整数）又は、４´－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１－２´（Ｒ１は、水素原子又はアルキルである）である。
４´－（ＣＨ２）ｍ－Ｏ－２´（ｍは１～４の整数）の中で、特に好ましくは４´－ＣＨ２－Ｏ－２´（ＬＮＡ、Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）である。具体例及びその調製方法は、国際公開第９８／３９３５２号、国際公開第２００３／０６８７９５号、国際公開第２００５／０２１５７０号等に記載されている。
４´－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１－２´（Ｒ１は、水素原子又はアルキルである）の中で、特に好ましくは４´－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＣＨ３－２´である。具体例及びその調製方法は、国際公開第２０１１／０５２４３６号に記載されている。
【0029】
当該分野で公知のヌクレオチドの修飾及び修飾方法については、例えば、以下の特許文献にも開示されている。
ＷＯ９８／３９３５２、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ２０００／０５６７４８、ＷＯ２００３／０６８７９５、ＷＯ２００４／０１６７４９、ＷＯ２００５／０２１５７０、ＷＯ２００５／０８３１２４、ＷＯ２００７／１４３３１５、ＷＯ２００９／０７１６８０、ＷＯ２０１１／０５２４３６、ＷＯ２０１４／１１２４６３、ＷＯ２０１４／１２６２２９等。
ＷＯ９８／３９３５２、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ２０００／０５６７４８、ＷＯ２００３／０６８７９５、ＷＯ２００４／０１６７４９、ＷＯ２００５／０２１５７０、ＷＯ２００５／０８３１２４、ＷＯ２００７／１４３３１５、ＷＯ２００９／０７１６８０、ＷＯ２０１１／０５２４３６、ＷＯ２０１４／１１２４６３、ＷＯ２０１４／１２６２２９等。
【0030】
本発明の「核酸」が二本鎖である場合、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の３´末端にオーバーハングを含んでいてもよい。「オーバーハング」とは、一本鎖の３´末端が他の鎖の５´末端を超えて伸長している（又は逆もある）際に、二本鎖構造から突き出ているヌクレオチドを意味する。当該分野で公知のオーバーハングとして用いられるヌクレオチドであればいずれも利用可能である。例えば、１～６ヌクレオチド、１～５ヌクレオチド、１～３ヌクレオチド、２又は３ヌクレオチド（ｄＴｄＴ、Ｕ（２´－ＯＭｅ）Ｕ（２´－ＯＭｅ）、Ｕ（２´－ＯＭｅ）Ａ（２´－ＯＭｅ）、Ａ（２´－ＯＭｅ）Ｕ（２´－ＯＭｅ）、Ａ（２´－ＯＭｅ）Ａ（２´－ＯＭｅ）、Ｕ（２´－Ｆ）Ｕ（２´－Ｆ）等）が挙げられる。標的配列のｍＲＮＡに対して相補的であってもよいし、非相補的であってもよい。
【0031】
本発明の「核酸」としては、好ましくは、ｓｉＲＮＡ（一本鎖オリゴヌクレオチドｓｉＲＮＡを含む）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ又はｍｉＲＮＡが挙げられる。さらに好ましくは、ｓｉＲＮＡ又はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。特に好ましくは、上記（１）～（５）に記載の核酸であるｓｉＲＮＡ又はアンチセンスオリゴヌクレオチド、上記（７）～（９）に記載のｓｉＲＮＡである。
オーバーハングや末端修飾を含まない核酸を構成する各鎖の長さは、１５～３０ヌクレオチドが好ましい。例えば、１５～２５、１７～２５、１７～２３、１７～２１、１９～２１ヌクレオチドの長さが挙げられる。
オーバーハングや末端修飾を含まない核酸を構成する各鎖の長さは、１５～３０ヌクレオチドが好ましい。例えば、１５～２５、１７～２５、１７～２３、１７～２１、１９～２１ヌクレオチドの長さが挙げられる。
【0032】
本発明の核酸の３´末端及び／又は５´末端は、修飾基を有していてもよい。水酸基の保護基、脱塩基型（Ａｂａｓｉｃ）ヌクレオチド、リン酸エステル部分（式：－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＨで示される基若しくは式：－Ｏ－Ｐ（＝Ｓ）（ＯＨ）ＯＨで示される基又はそれらの修飾基）等が挙げられる。
また、本発明の核酸は、上記塩基配列を有する限りにおいて、核酸中に脱塩基型（Ａｂａｓｉｃ）ヌクレオチドが挿入されていてもよい。
また、本発明の核酸は、上記塩基配列を有する限りにおいて、核酸中に脱塩基型（Ａｂａｓｉｃ）ヌクレオチドが挿入されていてもよい。
【0033】
該塩基配列が配列番号２４６である上記（ｆ）又は（ｇ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１７又は配列番号４４４～４９４に記載の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－９６ｍ、表２３～２６記載のｓｉＲＮＡ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１７８である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３０ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１８３である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３５ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１８４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３６ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１８５である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９７の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３７ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０３である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５３ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５４ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０５である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５５ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０８である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５８ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２１４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０７の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－６４ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２２０である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７０ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２２４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７４ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２３７である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－８７ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２３８である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－８８ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２５１である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１００ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２５４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０３ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２５５である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０４ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２６０である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０９ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２６３である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２７の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１１２ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２７０である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１１９ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２７２である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３３１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１２１ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１７８である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３０ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１８３である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３５ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１８４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３６ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号１８５である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９７の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－３７ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０３である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号２９９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５３ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５４ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０５である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５５ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２０８である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－５８ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２１４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０７の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－６４ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２２０である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３０９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７０ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２２４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－７４ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２３７である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－８７ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２３８である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－８８ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２５１である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３１９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１００ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２５４である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０３ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２５５である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２３の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０４ａｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２６０である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２５の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１０９ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２６３である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２７の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１１２ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２７０である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３２９の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１１９ｍ等が挙げられる。
該塩基配列が配列番号２７２である上記（ｆ）記載の核酸として、例えば、配列番号３３１の配列を有する核酸、具体的には、ＳＮＧ－１２１ｍ等が挙げられる。
【0034】
該塩基配列が配列番号２４６である上記（ｆ）又は（ｇ）記載の核酸の中でより好ましくは、以下が挙げられる。
アンチセンス鎖が、配列番号４４４～４４６、４５３、４５５、４６３～４６６、４７８、４８３及び４９２～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。該核酸は、該オリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチドをさらに含んでいてもよい。より好ましくは、ｓｉＲＮＡである。
アンチセンス鎖が、配列番号４４４～４４６、４５３、４５５、４６３～４６６、４７８、４８３及び４９２～４９４からなる群から選ばれるいずれかに記載のオリゴヌクレオチドであるＩＴＧＡＶの発現を抑制する核酸。該核酸は、該オリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチドをさらに含んでいてもよい。より好ましくは、ｓｉＲＮＡである。
【0035】
より具体的には、以下が挙げられる。
Ａ－０（配列番号４４４）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－０であり、センス鎖がＳ－０（配列番号３３２）、Ｓ－１（配列番号３３３）、Ｓ－２０～Ｓ－３０（配列番号３５２～３６２）、Ｓ－１０３～Ｓ－１０９（配列番号４３５～４４１）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－１（配列番号４４５）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－１であり、センス鎖がＳ－０～Ｓ－６１（配列番号３３２～３９３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２（配列番号４４６）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２であり、センス鎖がＳ－０～Ｓ－３３（配列番号３３２～３６５）、Ｓ－３９～Ｓ－５５（配列番号３７１～３８７）、Ｓ－５９～Ｓ－１０１（配列番号３９１～４３３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－９（配列番号４５３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－９であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４９（配列番号３８１）、Ｓ－７０～Ｓ－７２（配列番号４０２～４０４）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－１１（配列番号４５５）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－１１であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－９１（配列番号４２３）、Ｓ－９２（配列番号４２４）、Ｓ－９７（配列番号４２９）及びＳ－９８（配列番号４３０）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－１９（配列番号４６３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－１９であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２０（配列番号４６４）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２０であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－５４（配列番号３８６）及びＳ－７１（配列番号４０３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２１（配列番号４６５）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２１であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－３２（配列番号３６４）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－１１０（配列番号４４２）又はＳ－１１１（配列番号４４３）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２２（配列番号４６６）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２２であり、センス鎖がＳ－０（配列番号３３２）、Ｓ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－３２（配列番号３６４）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－７４～７７（配列番号４０６～４０９）、Ｓ－１０２（配列番号４３４）、Ｓ－１０４～１１１（配列番号４３６～４４３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－３４（配列番号４７８）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－３４であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－３９（配列番号４８３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－３９であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－５４（配列番号３８６）及びＳ－７１（配列番号４０３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－４９（配列番号４９２）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－４９であり、センス鎖がＳ－１０８（配列番号４４０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－５０（配列番号４９３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－５０であり、センス鎖がＳ－１０８（配列番号４４０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－５１（配列番号４９４）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－５１であり、センス鎖がＳ－１０８（配列番号４４０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－０（配列番号４４４）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－０であり、センス鎖がＳ－０（配列番号３３２）、Ｓ－１（配列番号３３３）、Ｓ－２０～Ｓ－３０（配列番号３５２～３６２）、Ｓ－１０３～Ｓ－１０９（配列番号４３５～４４１）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－１（配列番号４４５）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－１であり、センス鎖がＳ－０～Ｓ－６１（配列番号３３２～３９３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２（配列番号４４６）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２であり、センス鎖がＳ－０～Ｓ－３３（配列番号３３２～３６５）、Ｓ－３９～Ｓ－５５（配列番号３７１～３８７）、Ｓ－５９～Ｓ－１０１（配列番号３９１～４３３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－９（配列番号４５３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－９であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４９（配列番号３８１）、Ｓ－７０～Ｓ－７２（配列番号４０２～４０４）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－１１（配列番号４５５）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－１１であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－９１（配列番号４２３）、Ｓ－９２（配列番号４２４）、Ｓ－９７（配列番号４２９）及びＳ－９８（配列番号４３０）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－１９（配列番号４６３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－１９であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２０（配列番号４６４）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２０であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－５４（配列番号３８６）及びＳ－７１（配列番号４０３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２１（配列番号４６５）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２１であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－３２（配列番号３６４）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－１１０（配列番号４４２）又はＳ－１１１（配列番号４４３）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－２２（配列番号４６６）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－２２であり、センス鎖がＳ－０（配列番号３３２）、Ｓ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－３２（配列番号３６４）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－７４～７７（配列番号４０６～４０９）、Ｓ－１０２（配列番号４３４）、Ｓ－１０４～１１１（配列番号４３６～４４３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－３４（配列番号４７８）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－３４であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－３９（配列番号４８３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－３９であり、センス鎖がＳ－２８（配列番号３６０）、Ｓ－４３（配列番号３７５）、Ｓ－５１（配列番号３８３）、Ｓ－５４（配列番号３８６）及びＳ－７１（配列番号４０３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－４９（配列番号４９２）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－４９であり、センス鎖がＳ－１０８（配列番号４４０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－５０（配列番号４９３）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－５０であり、センス鎖がＳ－１０８（配列番号４４０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ａ－５１（配列番号４９４）を有する核酸。好ましくは、アンチセンス鎖がＡ－５１であり、センス鎖がＳ－１０８（配列番号４４０）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
【0036】
該塩基配列が配列番号２４６である上記（ｆ）又は（ｇ）記載の核酸の他の態様としては、以下もまた挙げられる。
Ｓ－０（配列番号３３２）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－０であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－２（配列番号４４４～４４６）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４０～Ａ－４８（配列番号４８４、３１７、４８５～４９１）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－２７（配列番号３５９）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－２７であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－２（配列番号４４４～４４６）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－２８（配列番号３６０）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－２８であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－１１（配列番号４４４～４５５）、Ａ－１９～Ａ－３９（配列番号４６３～４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－３０（配列番号３６２）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－３０であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－２（配列番号４４４～４４６）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－３２（配列番号３６４）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－３２であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）、Ａ－４２（配列番号４８５）及びＡ－４９（配列番号４９３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―４３（配列番号３７５）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－４３であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－４（配列番号４４８）、Ａ－６（配列番号４５０）、Ａ－１０（配列番号４５４）、Ａ－１１（配列番号４５５）、Ａ－２０（配列番号４６４）、Ａ－２２（配列番号４６６）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―４９（配列番号３８１）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－４９であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－８（配列番号４５２）、Ａ－９（配列番号４５３）、Ａ－１５～Ａ－１８（配列番号４５９～４６２）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―５１（配列番号３８３）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－５１であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－４（配列番号４４８）、Ａ－６（配列番号４５０）、Ａ－１０（配列番号４５４）、Ａ－１１（配列番号４５５）、Ａ－２０～Ａ－２５（配列番号４６４～４６９）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―５４（配列番号３８６）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－５４であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－２０（配列番号４６４）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―７１（配列番号４０３）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－７１であり、アンチセンス鎖がＡ－２（配列番号４４６）、Ａ－４（配列番号４４８）、Ａ－６（配列番号４５０）、Ａ－９（配列番号４５３）、Ａ－２０（配列番号４６４）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－７３（配列番号４０５）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－７３であり、アンチセンス鎖がＡ－２（配列番号４４６）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―１０５（配列番号４３７）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１０５であり、アンチセンス鎖がＡ－０（配列番号４４４）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）、Ａ－４３～Ａ－４８（配列番号４８６～４９１）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―１０８（配列番号４４０）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１０８であり、アンチセンス鎖がＡ－０（配列番号４４４）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）、Ａ－４２（配列番号４８５）、Ａ－４９～Ａ－５１（配列番号４９２～４９４）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－１０９（配列番号４４１）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１０９であり、アンチセンス鎖がＡ－０（配列番号４４４）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）及びＡ－４２（配列番号４８５）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－１１０（配列番号４４２）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１１０であり、アンチセンス鎖がＡ－２１（配列番号４６５）又はＡ－２２（配列番号４６６）であるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－０（配列番号３３２）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－０であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－２（配列番号４４４～４４６）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４０～Ａ－４８（配列番号４８４、３１７、４８５～４９１）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－２７（配列番号３５９）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－２７であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－２（配列番号４４４～４４６）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－２８（配列番号３６０）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－２８であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－１１（配列番号４４４～４５５）、Ａ－１９～Ａ－３９（配列番号４６３～４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－３０（配列番号３６２）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－３０であり、アンチセンス鎖がＡ－０～Ａ－２（配列番号４４４～４４６）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－３２（配列番号３６４）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－３２であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）、Ａ－４２（配列番号４８５）及びＡ－４９（配列番号４９３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―４３（配列番号３７５）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－４３であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－４（配列番号４４８）、Ａ－６（配列番号４５０）、Ａ－１０（配列番号４５４）、Ａ－１１（配列番号４５５）、Ａ－２０（配列番号４６４）、Ａ－２２（配列番号４６６）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―４９（配列番号３８１）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－４９であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－８（配列番号４５２）、Ａ－９（配列番号４５３）、Ａ－１５～Ａ－１８（配列番号４５９～４６２）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―５１（配列番号３８３）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－５１であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－４（配列番号４４８）、Ａ－６（配列番号４５０）、Ａ－１０（配列番号４５４）、Ａ－１１（配列番号４５５）、Ａ－２０～Ａ－２５（配列番号４６４～４６９）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―５４（配列番号３８６）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－５４であり、アンチセンス鎖がＡ－１（配列番号４４５）、Ａ－２（配列番号４４６）、Ａ－２０（配列番号４６４）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―７１（配列番号４０３）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－７１であり、アンチセンス鎖がＡ－２（配列番号４４６）、Ａ－４（配列番号４４８）、Ａ－６（配列番号４５０）、Ａ－９（配列番号４５３）、Ａ－２０（配列番号４６４）及びＡ－３９（配列番号４８３）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－７３（配列番号４０５）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－７３であり、アンチセンス鎖がＡ－２（配列番号４４６）に記載のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―１０５（配列番号４３７）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１０５であり、アンチセンス鎖がＡ－０（配列番号４４４）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）、Ａ－４３～Ａ－４８（配列番号４８６～４９１）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ―１０８（配列番号４４０）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１０８であり、アンチセンス鎖がＡ－０（配列番号４４４）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）、Ａ－４２（配列番号４８５）、Ａ－４９～Ａ－５１（配列番号４９２～４９４）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－１０９（配列番号４４１）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１０９であり、アンチセンス鎖がＡ－０（配列番号４４４）、Ａ－２２（配列番号４６６）、Ａ－４１（配列番号３１７）及びＡ－４２（配列番号４８５）からなる群から選ばれるいずれかであるｓｉＲＮＡである。
Ｓ－１１０（配列番号４４２）を有する核酸。好ましくは、センス鎖がＳ－１１０であり、アンチセンス鎖がＡ－２１（配列番号４６５）又はＡ－２２（配列番号４６６）であるｓｉＲＮＡである。
【0037】
該塩基配列が配列番号２４６である上記（ｆ）又は（ｇ）記載の核酸の他の態様として特に好ましくは、以下が挙げられる。
下記Ａ群から選ばれるいずれかの化学構造からなるオリゴヌクレオチド又はその塩を有するｓｉＲＮＡ。該オリゴヌクレオチドの塩としてはナトリウム塩又はカリウム塩が挙げられる。
下記Ａ群から選ばれるいずれかの化学構造からなるオリゴヌクレオチド又はその塩を有するｓｉＲＮＡ。該オリゴヌクレオチドの塩としてはナトリウム塩又はカリウム塩が挙げられる。
【0038】
Ａ群：
（配列番号４４４）、
（配列番号４４５）、
（配列番号４４６）、
（配列番号４５３）、
（配列番号４５５）、
【化1】
（配列番号４４４）、
【化2】
（配列番号４４５）、
【化3】
（配列番号４４６）、
【化4】
（配列番号４５３）、
【化5】
（配列番号４５５）、
【0039】
【化6】
（配列番号４６３）、
【化7】
（配列番号４６４）、
【化8】
（配列番号４６５）、
【化9】
（配列番号４６６）、
【化10】
（配列番号４７８）、
【0040】
【化11】
（配列番号４８３）、
【化12】
（配列番号４９２）、
【化13】
（配列番号４９３）又は
【化14】
（配列番号４９４）。
【0041】
下記Ｓ群から選ばれるいずれかの化学構造からなるオリゴヌクレオチド又はその塩を有するｓｉＲＮＡ。該オリゴヌクレオチドの塩としてはナトリウム塩又はカリウム塩が挙げられる。
【0042】
Ｓ群：
（配列番号３３２）、
（配列番号３５９）、
（配列番号３６０）、
（配列番号３６２）、
（配列番号３６４）、
【化15】
（配列番号３３２）、
【化16】
（配列番号３５９）、
【化17】
（配列番号３６０）、
【化18】
（配列番号３６２）、
【化19】
（配列番号３６４）、
【0043】
【化20】
（配列番号３７５）、
【化21】
（配列番号３８１）、
【化22】
（配列番号３８３）、
【化23】
（配列番号３８６）、
【化24】
（配列番号４０５）、
【0044】
【化25】
（配列番号４４０）又は
【化26】
（配列番号４４２）。
【0045】
好ましくは、上記Ａ群から選ばれるいずれかの化学構造からなるオリゴヌクレオチド又はその塩及び上記Ｓ群から選ばれるいずれかの化学構造からなるオリゴヌクレオチド又はその塩を有するｓｉＲＮＡである。例えば、以下のいずれかの組み合わせからなるオリゴヌクレオチド又はその塩が挙げられる。該オリゴヌクレオチドの塩としてはナトリウム塩又はカリウム塩が挙げられる。
Ａ－０及びＳ－０；Ａ－０及びＳ－２７；Ａ－０及びＳ－２８；Ａ－０及びＳ－３０；Ａ－１及びＳ－０；Ａ－１及びＳ－２７；Ａ－１及びＳ－２８；Ａ－１及びＳ－３０；Ａ－１及びＳ－４３；Ａ－１及びＳ－４９；Ａ－１及びＳ－５１；Ａ－２及びＳ－２８；Ａ－２及びＳ－３２；Ａ－２及びＳ－７３；Ａ－１１及びＳ－２８；Ａ－１９及びＳ－２８；Ａ－２０及びＳ－２８；Ａ－２０及びＳ－４３；Ａ－２０及びＳ－５１；Ａ－２０及びＳ－５４；Ａ－２１及びＳ－２８；Ａ－２１及びＳ－３２；Ａ－２１及びＳ－１１０；Ａ－２２及びＳ－２８；Ａ－２２及びＳ－３２；Ａ－２２及びＳ－１０８；Ａ－２２及びＳ－１１０；Ａ－３９及びＳ－２８；Ａ－３９及びＳ－５１；Ａ－３９及びＳ－５４；Ａ－４９及びＳ－１０８；Ａ－５０及びＳ－１０８；Ａ－５１及びＳ－１０８。
Ａ－０及びＳ－０；Ａ－０及びＳ－２７；Ａ－０及びＳ－２８；Ａ－０及びＳ－３０；Ａ－１及びＳ－０；Ａ－１及びＳ－２７；Ａ－１及びＳ－２８；Ａ－１及びＳ－３０；Ａ－１及びＳ－４３；Ａ－１及びＳ－４９；Ａ－１及びＳ－５１；Ａ－２及びＳ－２８；Ａ－２及びＳ－３２；Ａ－２及びＳ－７３；Ａ－１１及びＳ－２８；Ａ－１９及びＳ－２８；Ａ－２０及びＳ－２８；Ａ－２０及びＳ－４３；Ａ－２０及びＳ－５１；Ａ－２０及びＳ－５４；Ａ－２１及びＳ－２８；Ａ－２１及びＳ－３２；Ａ－２１及びＳ－１１０；Ａ－２２及びＳ－２８；Ａ－２２及びＳ－３２；Ａ－２２及びＳ－１０８；Ａ－２２及びＳ－１１０；Ａ－３９及びＳ－２８；Ａ－３９及びＳ－５１；Ａ－３９及びＳ－５４；Ａ－４９及びＳ－１０８；Ａ－５０及びＳ－１０８；Ａ－５１及びＳ－１０８。
【0046】
本発明の核酸は、ＩＴＧＡＶ発現抑制活性のみならず、医薬としての有用性を備えており、下記いずれか、あるいは全ての優れた特徴を有している。
ａ）肝臓の線維化及び／又は肝細胞障害を改善する。
ｂ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４等）に対する阻害作用が弱い。
ｃ）変異原性を有さない。
ｄ）心血管系に影響するリスクが低い。
ｅ）高い溶解性を示す。
ｆ）化学的安定性が高い。
ａ）肝臓の線維化及び／又は肝細胞障害を改善する。
ｂ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４等）に対する阻害作用が弱い。
ｃ）変異原性を有さない。
ｄ）心血管系に影響するリスクが低い。
ｅ）高い溶解性を示す。
ｆ）化学的安定性が高い。
【0047】
本発明の核酸において、ヌクレオチドは修飾されていてもよい。適切な修飾を施した核酸は、無修飾の核酸と比較し、下記いずれか、あるいは全ての特徴を有している。
ａ）標的遺伝子との親和性が高い。
ｂ）ヌクレアーゼに対する抵抗性が高い。
ｃ）薬物動態が改善する。
ｄ）組織移行性が高くなる。
ｅ）免疫刺激性が低い。
ｆ）高い溶解性を示す。
ｇ）化学的安定性が高い。
ｈ）持続的に作用を発現する。
ｉ）αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６及びαｖβ８の全てを阻害する。
よって、修飾された核酸は、無修飾の核酸と比較して、生体内で分解されにくくなり、より効率的に、持続的に標的遺伝子の発現を阻害できる。
ａ）標的遺伝子との親和性が高い。
ｂ）ヌクレアーゼに対する抵抗性が高い。
ｃ）薬物動態が改善する。
ｄ）組織移行性が高くなる。
ｅ）免疫刺激性が低い。
ｆ）高い溶解性を示す。
ｇ）化学的安定性が高い。
ｈ）持続的に作用を発現する。
ｉ）αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６及びαｖβ８の全てを阻害する。
よって、修飾された核酸は、無修飾の核酸と比較して、生体内で分解されにくくなり、より効率的に、持続的に標的遺伝子の発現を阻害できる。
【0048】
本発明の核酸は、適切なＤＤＳと共に利用することができる。その結果、下記いずれか、あるいは全ての特徴を有している。
ａ）肝臓の線維化及び／又は肝細胞障害を改善する。
ｂ）標的臓器へ高選択的に移行する。
ｃ）効率的に標的細胞内へ移行し、低用量で作用を発現する。
ｄ）良好な薬物動態を示す。
ｅ）代謝安定性が高い。
ｆ）変異原性を有さない。
ｇ）心血管系に影響するリスクが低い。
ｈ）高い溶解性を示す。
ｉ）化学的安定性が高い。
よって、本発明の核酸は、適切なＤＤＳと共に利用することによって、核酸単独で投与する場合と比較して、標的臓器及び標的細胞内へ効率的に移行し、より安定して標的遺伝子の発現を阻害できる。
ａ）肝臓の線維化及び／又は肝細胞障害を改善する。
ｂ）標的臓器へ高選択的に移行する。
ｃ）効率的に標的細胞内へ移行し、低用量で作用を発現する。
ｄ）良好な薬物動態を示す。
ｅ）代謝安定性が高い。
ｆ）変異原性を有さない。
ｇ）心血管系に影響するリスクが低い。
ｈ）高い溶解性を示す。
ｉ）化学的安定性が高い。
よって、本発明の核酸は、適切なＤＤＳと共に利用することによって、核酸単独で投与する場合と比較して、標的臓器及び標的細胞内へ効率的に移行し、より安定して標的遺伝子の発現を阻害できる。
【0049】
本発明の核酸（オーバーハングや末端修飾を含んでいる核酸も含む）の３´末端及び／又は５´末端は、公知のリガンドが付加されていてもよい。本発明の核酸の追跡を可能にするため、本発明の核酸の薬物動態又は薬力学を改善するため、本発明の核酸の安定性又は結合親和性を向上させるために、本発明の核酸の細胞内取り込みを含む細胞内動態を改善するため、あるいはそれらのすべて又はいずれかを達成させることを目的として単体又は複数種の多分子からなる輸送担体（リポソーム、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、ポリマー、ミセル、ウイルス粒子等）の構成成分とするため、当該分野で公知のリガンドを利用することができる。例えば、レポーター分子、脂質（脂肪酸、脂肪鎖、コレステロール、リン脂質等）、糖（Ｎ－アセチル－ガラクトサミン等）、ビタミン、ペプチド（膜透過ペプチド、細胞標的ペプチド、受容体結合ペプチド、エンドソーム脱出促進ペプチド、ＲＧＤペプチド、血中成分と親和性の高いペプチド、組織標的ペプチド等）、ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、色素、蛍光分子等が挙げられる。
【0050】
上記リガンドを本発明の核酸に付加する際は、リンカーを介していてもよい。「リンカー」としては、当該分野で用いられるリンカーであれば、いずれでも利用可能である。例えば、極性型リンカー（例えば、オリゴヌクレオチドリンカー）、アルキレンリンカー、エチレングリコールリンカー、エチレンジアミンリンカー等が挙げられる。リンカーは、当該分野において公知の手法を参考にしながら合成することができる。
【0051】
リンカーとして好ましくは、オリゴヌクレオチドリンカーである。オリゴヌクレオチドリンカーの長さは、２～１０塩基、２～５塩基、２塩基、３塩基、４塩基、５塩基である。例えば、ｄＧ、ｄＧｄＧ、ｄＧｄＧｄＧｄＧ、ｄＧｄＧｄＧｄＧｄＧ、ｄＴ、ｄＴｄＴ、ｄＴｄＴｄＴｄＴ、ｄＴｄＴｄＴｄＴｄＴ等が挙げられる。
【0052】
当該分野で公知のリガンド又はリンカー及びそれらの合成方法については、例えば、以下の特許文献にも開示されている。
ＷＯ２００９／１２６９３３、ＷＯ２０１２／０３７２５４、WO２００９／０６９３１３、ＷＯ２００９／１２３１８５、ＷＯ２０１３／０８９２８３、ＷＯ２０１５／１０５０８３、ＷＯ２０１８／１８１４２８等。
ＷＯ２００９／１２６９３３、ＷＯ２０１２／０３７２５４、WO２００９／０６９３１３、ＷＯ２００９／１２３１８５、ＷＯ２０１３／０８９２８３、ＷＯ２０１５／１０５０８３、ＷＯ２０１８／１８１４２８等。
【0053】
本発明の核酸（又はその修飾体）は常法によって合成することができ、例えば、市販の核酸自動合成装置（例えば、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製、（株）大日本精機製等）によって容易に合成することができる。合成法はホスホロアミダイトを用いた固相合成法、ハイドロジェンホスホネートを用いた固相合成法等がある。例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２２， １８５９－１８６２ （１９８１）、ＷＯ２０１１／０５２４３６等に開示されている。
【0054】
本発明の核酸は、ヒトを含む動物に投与する際、生物学的に活性な代謝産物又はその残渣物を（直接的に、あるいは、間接的に）提供し得る、任意の製薬上許容される塩、エステル、若しくはかかるエステルの塩、又は任意の他の同等物を包含する。つまり、本発明の核酸のプロドラッグ及び製薬上許容される塩、該プロドラッグの製薬上許容される塩、ならびに他の生物学的同等物を包含する。
【0055】
「プロドラッグ」とは、内在性酵素又は他の化学物質の作用及び／又は状態によってその生体内又は細胞内で活性形態（即ち、薬物）に変換される、不活性形態又はより低い活性形態の誘導体である。本発明の核酸のプロドラッグは、ＷＯ９３／２４５１０、ＷＯ９４／２６７６４、ＷＯ２００４／０６３３３１等に記載される方法に従って調製することができる。
【0056】
「製薬上許容される塩」とは、本発明の核酸の生理学的に及び製薬上許容される塩、即ち、該核酸の所望される生物学的な活性を保持し、そこで望まれない毒物学的効果を与えない塩のことをいう。
【0057】
製薬上許容される塩としては、例えば、アルカリ金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、バリウム等）、マグネシウム、遷移金属（例えば、亜鉛、鉄等）、アンモニア、有機塩基（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、ピリジン、ピコリン、キノリン等）及びアミノ酸との塩、又は無機酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、炭酸、臭化水素酸、リン酸、ヨウ化水素酸等）、及び有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、マンデル酸、グルタル酸、リンゴ酸、安息香酸、フタル酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等）との塩が挙げられる。特にナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられる。これらの塩は、通常行われる方法によって形成させることができる。
【0058】
本発明は、本発明の核酸を含有する医薬組成物も包含する。本発明の医薬組成物の投与方法及び製剤は、上述の修飾する方法やリガンドを付加する方法以外に、当該分野で公知の投与方法及び製剤であれば、いずれも利用可能である。核酸の投与方法及び製剤は、例えば、以下の文献にも開示されている。
ＷＯ２００８／０４２９７３、ＷＯ２００９／１２７０６０、ＷＯ２０１１／０６４１３０、ＷＯ２０１１／１２３４６８、ＷＯ２０１１／１５３５４２、ＷＯ２０１３／０７４９７４、ＷＯ２０１３／０７５０３５、ＷＯ２０１３／１６３２５８、ＷＯ２０１３／１９２４８６等。
ＷＯ２００８／０４２９７３、ＷＯ２００９／１２７０６０、ＷＯ２０１１／０６４１３０、ＷＯ２０１１／１２３４６８、ＷＯ２０１１／１５３５４２、ＷＯ２０１３／０７４９７４、ＷＯ２０１３／０７５０３５、ＷＯ２０１３／１６３２５８、ＷＯ２０１３／１９２４８６等。
【0059】
本発明の医薬組成物は、局所的あるいは全身的な治療のいずれが望まれるのか、又は治療すべき領域に応じて、様々な方法により投与することができる。投与方法としては、例えば、局所的（点眼、膣内、直腸内、鼻腔内、経皮を含む）、経口的、又は、非経口的であってもよい。非経口的投与としては、静脈内注射若しくは点滴、皮下、腹腔内若しくは筋肉内注入、吸引若しくは吸入による肺投与、硬膜下腔内投与、脳室内投与等が挙げられる。
【0060】
本発明の医薬組成物を局所投与する場合、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、滴下剤、坐剤、噴霧剤、液剤、散剤等の製剤を用いることができる。
経口投与用組成物としては、散剤、顆粒剤、水若しくは非水性媒体に溶解させた懸濁液又は溶液、カプセル、粉末剤、錠剤等が挙げられる。
非経口、硬膜下腔、又は、脳室内投与用組成物としては、バッファー、希釈剤及びその他の適当な添加剤を含む無菌水溶液等が挙げられる。
経口投与用組成物としては、散剤、顆粒剤、水若しくは非水性媒体に溶解させた懸濁液又は溶液、カプセル、粉末剤、錠剤等が挙げられる。
非経口、硬膜下腔、又は、脳室内投与用組成物としては、バッファー、希釈剤及びその他の適当な添加剤を含む無菌水溶液等が挙げられる。
【0061】
本発明の医薬組成物は、本発明の核酸の有効量にその剤型に適した賦形剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて混合して得ることができる。注射剤の場合には適当な担体と共に滅菌処理を行なって製剤とすればよい。
【0062】
賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム又は結晶セルロース等が挙げられる。結合剤としてはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン又はポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としてはカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末又はラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。滑沢剤としてはタルク、ステアリン酸マグネシウム又はマクロゴール等が挙げられる。坐剤の基剤としてはカカオ脂、マクロゴール又はメチルセルロース等を用いることができる。また、液剤又は乳濁性、懸濁性の注射剤として調製する場合には通常使用されている溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤等を適宜添加しても良い。経口投与の場合には嬌味剤、芳香剤等を加えても良い。
【0063】
投与は、治療される病態の重度と反応度に依存し、治療コースは、数日から数ヶ月、あるいは、治癒が実現されるまで、又は、病状の減退が達成されるまで持続する。最適投与スケジュールは、生体における薬剤蓄積の測定から計算が可能である。当該分野の当業者であれば、最適用量、投与法、及び、繰り返し頻度を定めることができる。最適用量は、個々の核酸の相対的効力に応じて変動するが、一般に、インビトロ及びインビボの動物実験におけるＩＣ５０又はＥＣ５０に基づいて計算することが可能である。例えば、核酸の分子量（核酸配列及び化学構造から導かれる）と、例えば、ＩＣ５０のような効果的用量（実験的に導かれる）が与えられたならば、ｍｇ／ｋｇで表される用量が通例に従って計算される。例えば、１日に０．００１～１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。注射剤の場合、一定期間、例えば、５～１８０分間にわたって投与することができる。また１日１回～数回投与することもでき、１日～数日の間隔をおいて（例えば、２週間ごとに）投与することもできる。
【0064】
本発明の医薬組成物は、ＩＴＧＡＶ発現抑制活性を有するため、ＩＴＧＡＶが関連する疾患の予防又は治療のために用いることができる。
ＩＴＧＡＶが関連する疾患としては、線維化関連疾患、例えば、皮膚、肺、心臓、肝臓、腎臓等の線維症が挙げられる。具体的には、肺線維症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、心房線維症、心内膜線維症、過去の心筋梗塞の結果として生じる損傷、拡張機能障害、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、原発性巣状糸球体硬化症、原発性分節性糸球体硬化症、糖尿病性腎症原発性硬化性胆管炎、骨髄線維症等が挙げられる。
ＩＴＧＡＶが関連する疾患としては、線維化関連疾患、例えば、皮膚、肺、心臓、肝臓、腎臓等の線維症が挙げられる。具体的には、肺線維症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、心房線維症、心内膜線維症、過去の心筋梗塞の結果として生じる損傷、拡張機能障害、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、原発性巣状糸球体硬化症、原発性分節性糸球体硬化症、糖尿病性腎症原発性硬化性胆管炎、骨髄線維症等が挙げられる。
【実施例0065】
以下に本発明の実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【0066】
実施例１
１）オリゴヌクレオチドの合成
本明細書の実施例に利用したオリゴヌクレオチドはｎＳ－８－Ｉ（大日本精機）、ｎＳ－８－ＩＩ（大日本精機）を用いて、ホスホロアミダイト法により合成した。モノマーアミダイトは０．１Ｍアセトニトリル溶液に調製した。カップリング時間は３２秒～１０分間とし、１つのモノマーの縮合に８～１０当量のアミダイト体を用いた。ＰＯ酸化には０．０２Ｍ Ｏｘｉｄｉｚｅｒ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用し、ＰＳ酸化には５０ｍＭ ＤＤＴＴ［（ジメチルアミノーメチリデン）アミノ－３Ｈ－１，２，４ージチアゾリンー３ーチオン）］のアセトニトリル／３－ピコリン＝１／４（ｖ／ｖ）、アセトニトリル／ピリジン＝１／４（ｖ／ｖ）溶液を用いた。活性化剤はＥＴＴ ａｃｔｉｖａｔｏｒ（０．２５Ｍ アセトニトリル溶液）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、キャッピング試薬はＣａｐＡ、ＣａｐＢ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。脱トリチル化試薬はＤｅｂ（３ｗ／ｖ％ＴＣＡ ジクロロメタン溶液）（和光純薬）を使用した。
１）オリゴヌクレオチドの合成
本明細書の実施例に利用したオリゴヌクレオチドはｎＳ－８－Ｉ（大日本精機）、ｎＳ－８－ＩＩ（大日本精機）を用いて、ホスホロアミダイト法により合成した。モノマーアミダイトは０．１Ｍアセトニトリル溶液に調製した。カップリング時間は３２秒～１０分間とし、１つのモノマーの縮合に８～１０当量のアミダイト体を用いた。ＰＯ酸化には０．０２Ｍ Ｏｘｉｄｉｚｅｒ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用し、ＰＳ酸化には５０ｍＭ ＤＤＴＴ［（ジメチルアミノーメチリデン）アミノ－３Ｈ－１，２，４ージチアゾリンー３ーチオン）］のアセトニトリル／３－ピコリン＝１／４（ｖ／ｖ）、アセトニトリル／ピリジン＝１／４（ｖ／ｖ）溶液を用いた。活性化剤はＥＴＴ ａｃｔｉｖａｔｏｒ（０．２５Ｍ アセトニトリル溶液）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、キャッピング試薬はＣａｐＡ、ＣａｐＢ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。脱トリチル化試薬はＤｅｂ（３ｗ／ｖ％ＴＣＡ ジクロロメタン溶液）（和光純薬）を使用した。
【0067】
２）樹脂からの切り出し、塩基及びリン酸の脱保護
オリゴヌクレオチドの切り出しは２８％アンモニア水／４０％メチルアミン水溶液／エタノール＝２／２／１（ｖ／ｖ／ｖ）を用いて、室温下で２２時間振とうした。１μｍｏｌ合成の際は、切り出し溶液を１ｍｌ用い、５μｍｏｌ又は１０μｍｏｌ合成の際は、切り出し液を５ｍｌ、１０ｍｌそれぞれ用いて切り出し反応を行った。樹脂を５０％エタノール水で洗浄後、ろ過液を減圧下で１～５ｍｌ程度まで濃縮した。
オリゴヌクレオチドの切り出しは２８％アンモニア水／４０％メチルアミン水溶液／エタノール＝２／２／１（ｖ／ｖ／ｖ）を用いて、室温下で２２時間振とうした。１μｍｏｌ合成の際は、切り出し溶液を１ｍｌ用い、５μｍｏｌ又は１０μｍｏｌ合成の際は、切り出し液を５ｍｌ、１０ｍｌそれぞれ用いて切り出し反応を行った。樹脂を５０％エタノール水で洗浄後、ろ過液を減圧下で１～５ｍｌ程度まで濃縮した。
【0068】
３）精製
オリゴヌクレオチドは逆相ＨＰＬＣで精製を行った。
逆相ＨＰＬＣの条件
移動相 Ａ液：１００ｍＭ ＴＥＡＡ （ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｐＨ７．０）水溶液
Ｂ液：１００ｍＭ ＴＥＡＡ （ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｐＨ７．０）水溶液／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）
Ｂ濃度グラジエント：２０－４０％
（条件１）
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８（ＹＭＣ社製）１５０ｘ１０ｍｍＩ．Ｄ、Ｓ－５μｍ、１２ｎｍ
流速：４．７ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出ＵＶ：２６０ｎｍ
（条件２）
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８（ＹＭＣ社製）１００ｘ２０ｍｍＩ．Ｄ、Ｓ－５μｍ、１２ｎｍ
流速：１５ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出ＵＶ：２６０ｎｍ
オリゴヌクレオチドは逆相ＨＰＬＣで精製を行った。
逆相ＨＰＬＣの条件
移動相 Ａ液：１００ｍＭ ＴＥＡＡ （ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｐＨ７．０）水溶液
Ｂ液：１００ｍＭ ＴＥＡＡ （ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ｐＨ７．０）水溶液／アセトニトリル＝１／１（ｖ／ｖ）
Ｂ濃度グラジエント：２０－４０％
（条件１）
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８（ＹＭＣ社製）１５０ｘ１０ｍｍＩ．Ｄ、Ｓ－５μｍ、１２ｎｍ
流速：４．７ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出ＵＶ：２６０ｎｍ
（条件２）
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８（ＹＭＣ社製）１００ｘ２０ｍｍＩ．Ｄ、Ｓ－５μｍ、１２ｎｍ
流速：１５ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出ＵＶ：２６０ｎｍ
【0069】
４）精製オリゴヌクレオチドの脱塩及び凍結乾燥
得られたオリゴヌクレオチドは減圧下で濃縮した後、凍結乾燥にて目的とするオリゴヌクレオチドを粉末として得た。
得られたオリゴヌクレオチドは減圧下で濃縮した後、凍結乾燥にて目的とするオリゴヌクレオチドを粉末として得た。
【0070】
５） オリゴヌクレオチドの構造確認
得られたオリゴヌクレオチドは、ＵＰＬＣ／ＭＳ測定による実測分子量が理論分子量と一致することで、目的の配列が合成できていることを確認した。
Ｘｅｖｏ Ｇ２ Ｔｏｆ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
Ｃｏｌｕｍｎ：ＵＰＬＣ Ａｑｕｉｔｙ ＯＳＴ Ｃ１８（２．１ｘ５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）
移動相 Ａ液：２００ｍＭ １，１，１，３，３，３ーヘキサフルオロー２ープロパノール／８ｍＭトリエチルアミン
Ｂ液：メタノール
Ｂ濃度グラジエント：１０－３０％（１０ｍｉｎ）
温度：５０℃
流速：０．２ｍｌ／ｍｉｎ
得られたオリゴヌクレオチドは、ＵＰＬＣ／ＭＳ測定による実測分子量が理論分子量と一致することで、目的の配列が合成できていることを確認した。
Ｘｅｖｏ Ｇ２ Ｔｏｆ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
Ｃｏｌｕｍｎ：ＵＰＬＣ Ａｑｕｉｔｙ ＯＳＴ Ｃ１８（２．１ｘ５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）
移動相 Ａ液：２００ｍＭ １，１，１，３，３，３ーヘキサフルオロー２ープロパノール／８ｍＭトリエチルアミン
Ｂ液：メタノール
Ｂ濃度グラジエント：１０－３０％（１０ｍｉｎ）
温度：５０℃
流速：０．２ｍｌ／ｍｉｎ
【0071】
なお、Ｎ（Ｘ）（ＡｍＮＡ）を導入したオリゴヌクレオチドはＷＯ２０１１／０５２４３６に記載の方法に従い、核酸合成及び精製を行った。
Ｎ（Ｙ）（ＴｒＮＡ）を導入したオリゴヌクレオチドはＷＯ２０１４／１２６２２９に記載の方法に従い、核酸合成及び精製を行った。
また、味の素バイオファーマサービス 株式会社ジーンデザインに核酸合成及び精製を委託することでオリゴヌクレオチドを得た。
Ｎ（Ｙ）（ＴｒＮＡ）を導入したオリゴヌクレオチドはＷＯ２０１４／１２６２２９に記載の方法に従い、核酸合成及び精製を行った。
また、味の素バイオファーマサービス 株式会社ジーンデザインに核酸合成及び精製を委託することでオリゴヌクレオチドを得た。
【0072】
６）二本鎖オリゴヌクレオチドの調製
各オリゴヌクレオチドの水溶液を等モル量となるように混合した後、７５℃下で５分間加温後、室温まで自然冷却させることで二本鎖核酸を得た。二本鎖形成の確認は、サイズ排除クロマトグラフィーにより実施した。
Ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ－ＰＡＣ Ｄｉｏｌ－１２０（４．６ｘ３００ｍｍ）（ＹＭＣ社製）
移動相：１ｘＰＢＳ溶液
流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ
温度：室温
各オリゴヌクレオチドの水溶液を等モル量となるように混合した後、７５℃下で５分間加温後、室温まで自然冷却させることで二本鎖核酸を得た。二本鎖形成の確認は、サイズ排除クロマトグラフィーにより実施した。
Ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ－ＰＡＣ Ｄｉｏｌ－１２０（４．６ｘ３００ｍｍ）（ＹＭＣ社製）
移動相：１ｘＰＢＳ溶液
流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ
温度：室温
【0073】
合成した二本鎖オリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）を以下に示す。
【表1】
【0074】
【表2】
【0075】
【表3】
【0076】
【表4】
【0077】
【表5】
【0078】
【表6】
【0079】
【表7】
【0080】
【表8】
【0081】
さらに、合成したオリゴヌクレオチドのうち修飾を有する二本鎖オリゴヌクレオチド（修飾型ｓｉＲＮＡ）を以下に示す。
【0082】
【表9】
【0083】
【表10】
【0084】
さらに、上記ＳＮＧ－９６のセンス鎖又はアンチセンス鎖の誘導体を合成した。
【0085】
【表11】
【0086】
【表12】
【0087】
【表13】
【0088】
【表14】
【0089】
【表15】
【0090】
【表16】
【0091】
【表17】
【0092】
【表18】
【0093】
【表19】
【0094】
上記の表中、Ｎ（Ｍ）＝２´－ＯＭｅ、Ｎ（Ｆ）＝２´－Ｆ、Ｎ（Ｄ）＝ＤＮＡ、Ｎ（Ｒ）＝ＲＮＡ、Ｎ（Ｘ）＝ＡｍＮＡ、Ｎ（Ｙ）＝ＴｒＮＡである。ヌクレオシド間結合に関しては、＾＝－Ｐ（Ｓ）ＯＨ－、無記号＝―Ｐ（Ｏ）ＯＨ－である。具体的には以下の通りである。
表中、５´末端修飾に関しては、以下の通りである。
【化27】
表中、５´末端修飾に関しては、以下の通りである。
【化28】
【0095】
社内合成した１本鎖オリゴヌクレオチドの純度分析の結果を以下に示す。なお、下記表に結果の記載が無いオリゴヌクレオチドは味の素バイオファーマサービス 株式会社ジーンデザインに核酸合成及び精製を委託することで得ている。
【0096】
【表20】
【0097】
【表21】
【0098】
【表22】
【0099】
上記で合成したＳＮＧ－９６ｍのセンス鎖又はアンチセンス鎖及びその誘導体から以下の二本鎖オリゴヌクレオチド（修飾型ｓｉＲＮＡ）を調製した。
【0100】
【表23】
【0101】
【表24】
【0102】
【表25】
【0103】
【表26】
【0104】
実施例２ ＩＴＧＡＶに対するｓｉＲＮＡの評価（ヒト由来肝細胞株ＨｅｐＧ２細胞）
ＨｅｐＧ２を、ＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ハイクロン）＋ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）（サーモフィッシャーサイエンティフィック）＋ストレプトマイシン（１００ｕｇ／ｍＬ）（サーモフィッシャーサイエンティフィック）で培養し、３７℃、９５～９８％湿度及び５％ＣＯ２で維持した。
実施例１で設計したｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖及びセンス鎖の３´末端にオーバーハングとしてｄＴｄＴを付加したｓｉＲＮＡ（二重鎖）をＳＩＧＭＡより購入した。該ｓｉＲＮＡを用いて、上記ＨｅｐＧ２でのノックダウン実験を行った。ｓｉＲＮＡはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて、リバーストランスフェクション法により細胞培養液にｓｉＲＮＡの最終濃度が５ｎｍｏｌ／Ｌになるように添加し、細胞に導入した。導入２４時間後にＣｅｌｌＡｍｐ Ｄｉｒｅｃｔ ＲＮＡ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ＰＣＲ（タカラバイオ）にて細胞ライセートを回収し、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＰＬＵＳ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（タカラバイオ）を用いてリアルタイムＰＣＲにより活性を評価した。内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。
ＨｅｐＧ２を、ＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ハイクロン）＋ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）（サーモフィッシャーサイエンティフィック）＋ストレプトマイシン（１００ｕｇ／ｍＬ）（サーモフィッシャーサイエンティフィック）で培養し、３７℃、９５～９８％湿度及び５％ＣＯ２で維持した。
実施例１で設計したｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖及びセンス鎖の３´末端にオーバーハングとしてｄＴｄＴを付加したｓｉＲＮＡ（二重鎖）をＳＩＧＭＡより購入した。該ｓｉＲＮＡを用いて、上記ＨｅｐＧ２でのノックダウン実験を行った。ｓｉＲＮＡはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて、リバーストランスフェクション法により細胞培養液にｓｉＲＮＡの最終濃度が５ｎｍｏｌ／Ｌになるように添加し、細胞に導入した。導入２４時間後にＣｅｌｌＡｍｐ Ｄｉｒｅｃｔ ＲＮＡ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ＰＣＲ（タカラバイオ）にて細胞ライセートを回収し、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＰＬＵＳ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（タカラバイオ）を用いてリアルタイムＰＣＲにより活性を評価した。内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。
【0105】
ヒトＩＴＧＡＶの発現量を測定するために使用したプライマー配列は、
Ｆｗプライマー（配列番号４９５）；ＡＡＡＣＴＣＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＡ
Ｒｖプライマー（配列番号４９６）；ＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＣＧＡＡＧＡ
を用い、
ヒトＧＡＰＤＨの発現量を測定するために使用したプライマー配列は、
Ｆｗプライマー（配列番号４９７）；ＧＣＡＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣ
Ｒｖプライマー（配列番号４９８）；ＴＧＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡＧＴＧＧＡ
を用いた。
Ｆｗプライマー（配列番号４９５）；ＡＡＡＣＴＣＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＧＡ
Ｒｖプライマー（配列番号４９６）；ＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＣＧＡＡＧＡ
を用い、
ヒトＧＡＰＤＨの発現量を測定するために使用したプライマー配列は、
Ｆｗプライマー（配列番号４９７）；ＧＣＡＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣ
Ｒｖプライマー（配列番号４９８）；ＴＧＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡＧＴＧＧＡ
を用いた。
【0106】
ＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性は、各ｓｉＲＮＡを導入した細胞のＩＴＧＡＶの発現量（Ｃｔ値）とＧＡＰＤＨの発現量（Ｃｔ値）の差（ΔＣｔ）を、未処理細胞におけるＩＴＧＡＶの発現量と相対比較（ΔΔＣｔ）し、解析した。
ΔΔＣｔ＝―（（ＧＡＰＤＨの発現量―未処理細胞のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ）―（ＧＡＰＤＨの発現量―各ｓｉＲＮＡ添加時のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ））
各ｓｉＲＮＡにおけるΔΔＣｔの値が小さいものほど、ｓｉＲＮＡがより強いＩＴＧＡＶの発現量の変化を誘導したことを示し、より高いノックダウン活性を示している。ΔΔＣｔ＝－３のとき８７．５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示し、ΔΔＣｔ＝－４のとき９３．７５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示す。
ΔΔＣｔ＝―（（ＧＡＰＤＨの発現量―未処理細胞のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ）―（ＧＡＰＤＨの発現量―各ｓｉＲＮＡ添加時のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ））
各ｓｉＲＮＡにおけるΔΔＣｔの値が小さいものほど、ｓｉＲＮＡがより強いＩＴＧＡＶの発現量の変化を誘導したことを示し、より高いノックダウン活性を示している。ΔΔＣｔ＝－３のとき８７．５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示し、ΔΔＣｔ＝－４のとき９３．７５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示す。
【0107】
表２７～表４５に示されるように本発明のｓｉＲＮＡは、いずれもΔΔＣｔが－３以下であり、ＩＴＧＡＶに対し８７．５％以上の高いノックダウン活性を示した。この結果、本発明の核酸がＩＴＧＡＶの発現を強く抑制することが分かった。
【0108】
【表27】
【0109】
【表28】
【0110】
【表29】
【0111】
【表30】
【0112】
【表31】
【0113】
【表32】
【0114】
【表33】
【0115】
【表34】
【0116】
【表35】
【0117】
【表36】
【0118】
【表37】
【0119】
【表38】
【0120】
【表39】
【0121】
【表40】
【0122】
【表41】
【0123】
【表42】
【0124】
【表43】
【0125】
【表44】
【0126】
【表45】
【0127】
実施例３ ＩＴＧＡＶに対する修飾型ｓｉＲＮＡの評価（ヒト由来肝細胞株ＨｅｐＧ２細胞）
実施例１で合成した修飾型ｓｉＲＮＡを用いて、ＨｅｐＧ２でのノックダウン実験を行った。実施例２に記載した条件にてＨｅｐＧ２を培養した。修飾型ｓｉＲＮＡはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて、フォワードトランスフェクション法により細胞培養液に修飾型ｓｉＲＮＡの最終濃度が１０ｎｍｏｌ／Ｌになるように添加し、細胞に導入した。導入２４時間後にＣｅｌｌＡｍｐ Ｄｉｒｅｃｔ ＲＮＡ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ＰＣＲ（タカラバイオ）にて細胞ライセートを回収し、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＰＬＵＳ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（タカラバイオ）を用いてリアルタイムＰＣＲを行った。内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。ヒトＩＴＧＡＶ及びヒトＧＡＰＤＨの発現量を測定するために使用したプライマー配列は実施例２と同じである。
実施例１で合成した修飾型ｓｉＲＮＡを用いて、ＨｅｐＧ２でのノックダウン実験を行った。実施例２に記載した条件にてＨｅｐＧ２を培養した。修飾型ｓｉＲＮＡはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて、フォワードトランスフェクション法により細胞培養液に修飾型ｓｉＲＮＡの最終濃度が１０ｎｍｏｌ／Ｌになるように添加し、細胞に導入した。導入２４時間後にＣｅｌｌＡｍｐ Ｄｉｒｅｃｔ ＲＮＡ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ＰＣＲ（タカラバイオ）にて細胞ライセートを回収し、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＰＬＵＳ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（タカラバイオ）を用いてリアルタイムＰＣＲを行った。内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。ヒトＩＴＧＡＶ及びヒトＧＡＰＤＨの発現量を測定するために使用したプライマー配列は実施例２と同じである。
【0128】
ＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性は、各修飾型ｓｉＲＮＡを導入した細胞のヒトＩＴＧＡＶの発現量（Ｃｔ値）とヒトＧＡＰＤＨの発現量（Ｃｔ値）の差（ΔＣｔ）を、未処理細胞におけるＩＴＧＡＶの発現量と相対比較（ΔΔＣｔ）し、解析した。
ΔΔＣｔ＝―（（ＧＡＰＤＨの発現量―未処理細胞のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ）―（ＧＡＰＤＨの発現量―各修飾型ｓｉＲＮＡ添加時のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ））
各修飾型ｓｉＲＮＡにおけるΔΔＣｔの値が小さいものほど、修飾型ｓｉＲＮＡがより強いＩＴＧＡＶの発現量の変化を誘導したことを示し、より高いノックダウン活性を示している。ΔΔＣｔ＝－３のとき８７．５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示し、ΔΔＣｔ＝－４のとき９３．７５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示す。
ΔΔＣｔ＝―（（ＧＡＰＤＨの発現量―未処理細胞のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ）―（ＧＡＰＤＨの発現量―各修飾型ｓｉＲＮＡ添加時のＩＴＧＡＶの発現量）（ΔＣｔ））
各修飾型ｓｉＲＮＡにおけるΔΔＣｔの値が小さいものほど、修飾型ｓｉＲＮＡがより強いＩＴＧＡＶの発現量の変化を誘導したことを示し、より高いノックダウン活性を示している。ΔΔＣｔ＝－３のとき８７．５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示し、ΔΔＣｔ＝－４のとき９３．７５％のＩＴＧＡＶに対するノックダウン活性を示す。
【0129】
結果１：センス鎖及びアンチセンス鎖を２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ又は２´－Ｆ－ＲＮＡで修飾し、アンチセンス鎖の５´末端にｐｏ修飾を有するＳＮＧ－９６ｍ＿０．０は、８７．５％以上の高いノックダウン活性を示した。ＳＮＧ－９６ｍ＿０．０に対し、センス鎖のオーバーハングｄＴｄＴを除き、２´－ＯＭｅ－ＲＮＡの数を増やし、２´－Ｆ－ＲＮＡの数を減らしたＳＮＧ－９６ｍ＿０．２０、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．２１、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．２２、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．２３、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．２５及びＳＮＧ－９６ｍ＿０．２６は、８７．５％以上の高いノックダウン活性を示した。次に、５´末端から７又は９番目がＲＮＡ又はＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿０．２７、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．２９及びＳＮＧ－９６ｍ＿０．３０は、８７．５％以上の高いノックダウン活性を確認した。特に、５´末端から５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであり、７及び９番目がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿０．２８は、９１％の著しく強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、センス鎖へのＤＮＡの導入が本発明の核酸にとって有用であることが示唆される。結果を表４６に示す。
【0130】
【表46】
【0131】
結果２：５´末端から７及び９番目がＲＮＡ又はＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ及び２´－Ｆ－ＲＮＡからなるアンチセンス鎖を有し、５´末端修飾をもたないＳＮＧ－９６ｍ＿１．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿１．２７、ＳＮＧ－９６ｍ＿１．２９及びＳＮＧ－９６ｍ＿１．３０は、８７．５％以上の高いノックダウン活性を示した。結果を表４７に示す。
【0132】
【表47】
【0133】
結果３：２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ及び２´－Ｆ－ＲＮＡからなるアンチセンス鎖と、５´末端から５番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から７、８及び９番目が、全て２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１．４１、全てＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１．４７、少なくとも１か所以上がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿１．３９、ＳＮＧ－９６ｍ＿１．４２、ＳＮＧ－９６ｍ＿１．４３、ＳＮＧ－９６ｍ＿１．４５及びＳＮＧ－９６ｍ＿１．４６は、８７．５％以上の高いノックダウン活性を示した。５´末端から５番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から７、８及び９番目において少なくとも１か所以上がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１．４８及びＳＮＧ－９６ｍ＿１．４９は、８７．５％以上の高いノックダウン活性を示した。５´末端から１、７及び９番目がＤＮＡで、５番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１．５１は、９１％の著しく強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から１、５、７、８及び９番目において少なくとも１か所以上がＤＮＡであるセンス鎖を有することが、本発明の核酸にとって有用であることが示唆される。結果を表４８に示す。
【0134】
【表48】
【0135】
結果４：１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖と、５´末端から１、５、７、９及び１１番目において少なくとも２か所以上がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から１１番目がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．６２は、８７．５％のノックダウン活性を示し、１、５、７及び９番目において少なくとも２か所以上がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６３、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６４及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．６５は、９２．５％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。５´末端から５及び８番目に２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目にＤＮＡを有し、３´末端のヌクレオシド間結合において２か所のＰ（Ｓ）修飾されたセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．６６は、９２．５％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ａからなるアンチセンス鎖と、５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１１．２８は、９３％の著しく強いノックダウン活性を示した。
１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖と、アンチセンス鎖の５´末端から１６、１７又は１８塩基と対合するように短鎖化され、３´末端から１２及び１５番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、１１及び１３番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６７、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６８及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．６９は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。また、短鎖化したセンス鎖に対し、３´末端のＰ（Ｓ）修飾の数を変更したアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１２．６７及びＳＮＧ－９６ｍ＿１３．６８は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。
結果を表４９に示す。
１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖と、アンチセンス鎖の５´末端から１６、１７又は１８塩基と対合するように短鎖化され、３´末端から１２及び１５番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、１１及び１３番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６７、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６８及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．６９は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。また、短鎖化したセンス鎖に対し、３´末端のＰ（Ｓ）修飾の数を変更したアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１２．６７及びＳＮＧ－９６ｍ＿１３．６８は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。
結果を表４９に示す。
【0136】
【表49】
【0137】
結果５：１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、両末端２か所のＰ（Ｓ）修飾からなるアンチセンス鎖と、５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、３´末端及びその近傍の少なくとも１塩基がＡｍＮＡ又はＴｒＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．３１、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．３２、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．３３、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．６１及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．７３は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´及び３´末端におけるヌクレオシド間結合のＰ（Ｓ）修飾の数を変更したセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．７４、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．７５、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．７６、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．７７及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．７８は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡについて、５´末端及び３´末端におけるヌクレオシド間結合のＰ（Ｓ）修飾の数を変更したアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２１．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２３．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２４．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿２５．２８は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。特に、３´末端の１か所にＰ（Ｓ）修飾を有したアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２２．２８は、９０．５％の著しく強いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、アンチセンス鎖の５´末端にｐｏ修飾を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１９．２８及びｐｓ修飾を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２０．２８は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。
結果は表５０に示す。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´及び３´末端におけるヌクレオシド間結合のＰ（Ｓ）修飾の数を変更したセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．７４、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．７５、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．７６、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．７７及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．７８は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡについて、５´末端及び３´末端におけるヌクレオシド間結合のＰ（Ｓ）修飾の数を変更したアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２１．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２３．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２４．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿２５．２８は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。特に、３´末端の１か所にＰ（Ｓ）修飾を有したアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２２．２８は、９０．５％の著しく強いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、アンチセンス鎖の５´末端にｐｏ修飾を有するＳＮＧ－９６ｍ＿１９．２８及びｐｓ修飾を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２０．２８は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。
結果は表５０に示す。
【0138】
【表50】
【0139】
結果６：１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖と、５´末端から７、８及び９番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から１及び５番目がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．７０は、９０％の著しく強いノックダウン活性を示した。さらに、５´末端から１及び５番目が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．７１及び５´末端から１番目がＤＮＡ、５番目が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．７２は、９１．５％以上のさらに強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から７、８及び９番目がＤＮＡであり、それ以外の塩基がＤＮＡ又は２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
５´末端から２、６、１４及び１６番目がＤＮＡであり、残りの塩基が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるアンチセンス鎖と、ＤＮＡ及び２´－ＯＭｅ－ＲＮＡからなるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿９．４９、ＳＮＧ－９６ｍ＿９．７０及びＳＮＧ－９６ｍ＿９．７１は、８７％以上の高いノックダウン活性を示した。これらの結果から、ＤＮＡ及び２´－ＯＭｅ－ＲＮＡからなるセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
結果は表５１に示す。
５´末端から２、６、１４及び１６番目がＤＮＡであり、残りの塩基が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるアンチセンス鎖と、ＤＮＡ及び２´－ＯＭｅ－ＲＮＡからなるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿９．４９、ＳＮＧ－９６ｍ＿９．７０及びＳＮＧ－９６ｍ＿９．７１は、８７％以上の高いノックダウン活性を示した。これらの結果から、ＤＮＡ及び２´－ＯＭｅ－ＲＮＡからなるセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
結果は表５１に示す。
【0140】
【表51】
【0141】
結果７：１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡとオーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕからなるアンチセンス鎖と、５´末端から５、７及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、９番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、少なくとも１か所がＴｒＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２．７９、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８０、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８１、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８２、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８３、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８４、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８５、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８６、ＳＮＧ－９６ｍ＿２．８７及びＳＮＧ－９６ｍ＿２．８８が、９２％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、少なくとも１か所以上がＴｒＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、５´末端修飾にｐｓ修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から１、７、８又は９番目の少なくとも１か所がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２０．４３、ＳＮＧ－９６ｍ＿２０．５１及びＳＮＧ－９６ｍ＿２０．７１は、９２％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。特に、５´末端から７又は９番目がＤＮＡ、８番目が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２０．５４は、９３．７％のさらに高いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から７又は９番目の少なくとも１か所がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡがが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
９か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、５´末端から８～１２番目がＤＮＡからなるアンチセンス鎖と、５´末端から１、７、８及び９番目の少なくとも１か所がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３９．５１、ＳＮＧ－９６ｍ＿３９．５４及びＳＮＧ－９６ｍ＿３９．７１は、９２．８％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。さらに、５´末端から９番目がＤＮＡ、５、７及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３９．４３は、９３．７％のさらに高いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から８、９、１０、１１及び１２番目がＤＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
結果は表５２に示す。
１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、５´末端修飾にｐｓ修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から１、７、８又は９番目の少なくとも１か所がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２０．４３、ＳＮＧ－９６ｍ＿２０．５１及びＳＮＧ－９６ｍ＿２０．７１は、９２％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。特に、５´末端から７又は９番目がＤＮＡ、８番目が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２０．５４は、９３．７％のさらに高いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から７又は９番目の少なくとも１か所がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡがが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
９か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、５´末端から８～１２番目がＤＮＡからなるアンチセンス鎖と、５´末端から１、７、８及び９番目の少なくとも１か所がＤＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３９．５１、ＳＮＧ－９６ｍ＿３９．５４及びＳＮＧ－９６ｍ＿３９．７１は、９２．８％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。さらに、５´末端から９番目がＤＮＡ、５、７及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３９．４３は、９３．７％のさらに高いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から８、９、１０、１１及び１２番目がＤＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
結果は表５２に示す。
【0142】
【表52】
【0143】
結果８：５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、２、４、６、１４及び１６番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から５～１１番目のいずれか１か所がＡｍＮＡであるアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２９．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿３０．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿３１．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿３２．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿３３．２８、ＳＮＧ－９６ｍ＿３４．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿３５．２８は、８８％以上の高いノックダウン活性を示した。５´末端から５～１１番目の少なくとも１か所がＡｍＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、３´末端のヌクレオシド間結合に１か所のＰ（Ｓ）修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、センス鎖の両末端のヌクレオシド間結合のＰ（Ｓ）修飾の数が異なるＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７５、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７６及びＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７７は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。特に、Ｐ（Ｓ）修飾を有さないセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７４は、９３％のさらに高いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、２、４、６、１４及び１６番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から８～１２番目の少なくとも３か所がＲＮＡであるアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３６．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿３７．２８は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。同じ位置の少なくとも３か所がＤＮＡであるアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３８．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿３９．２８は、９２％以上のさらに強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から８～１２番目の少なくとも３か所がＤＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
結果は表５３に示す。
１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、３´末端のヌクレオシド間結合に１か所のＰ（Ｓ）修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目がＤＮＡであるセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、センス鎖の両末端のヌクレオシド間結合のＰ（Ｓ）修飾の数が異なるＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７５、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７６及びＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７７は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。特に、Ｐ（Ｓ）修飾を有さないセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２２．７４は、９３％のさらに高いノックダウン活性を示した。
５´末端から７及び９番目がＤＮＡ、５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるセンス鎖と、２、４、６、１４及び１６番目が２´－Ｆ－ＲＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡの場合、５´末端から８～１２番目の少なくとも３か所がＲＮＡであるアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３６．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿３７．２８は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。同じ位置の少なくとも３か所がＤＮＡであるアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿３８．２８及びＳＮＧ－９６ｍ＿３９．２８は、９２％以上のさらに強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、５´末端から８～１２番目の少なくとも３か所がＤＮＡであるアンチセンス鎖を有する修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。
結果は表５３に示す。
【0144】
【表53】
【0145】
結果９：１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、アンチセンス鎖の３´末端のヌクレオシド間結合として１か所以下のＰ（Ｓ）修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から５及び８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目がＤＮＡ、１８番目がＡｍＮＡであり、５´末端にヌクレオシド間結合としてＰ（Ｓ）修飾又は３´末端にオーバーハングを有するセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２２．３２、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．１０８、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．１１０、ＳＮＧ－９６ｍ＿２２．１１１、ＳＮＧ－９６ｍ＿２１．３２、ＳＮＧ－９６ｍ＿２１．１１０及びＳＮＧ－９６ｍ＿２１．１１１は、９１．７％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。また、上記と同じセンス鎖と、１２～１３か所が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、６～７か所が２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ、３´末端に１か所のＰ（Ｓ）修飾を有するアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿４９．１０８、ＳＮＧ－９６ｍ＿５０．１０８及びＳＮＧ－９６ｍ＿５１．１０８は、９１％以上の著しく強いノックダウン活性を示した。これらの結果から、該修飾型ｓｉＲＮＡが、本発明の核酸として有用であることが示唆される。結果は表５４に示す。
【0146】
【表54】
【0147】
結果１０：１４か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、５か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングが２つの２´－ＯＭｅ－Ｕとその間にＰ（Ｓ）修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目がＤＮＡ、１８番目がＡｍＮＡであり、８か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、８か所の２´－Ｆ－ＲＮＡからなるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿２２．１０５（オーバーハング有）及びＳＮＧ－９６ｍ＿２２．１０９（オーバーハング無）は、８９％以上の高いノックダウン活性を示した。また、オーバーハングを有するセンス鎖に対し、９か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ、９か所の２´－Ｆ－ＲＮＡ、オーバーハングがｄＴｄＴ、ヌクレオシド間結合として４か所のＰ（Ｓ）修飾を有するアンチセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿４５．１０５は、８９％の高いノックダウン活性を示した。結果は表５５に示す。
【0148】
【表55】
【0149】
結果１１：センス鎖及びアンチセンス鎖が２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ及び２´－Ｆ－ＲＮＡからなり、オーバーハングがｄＴｄＴから構成されるＳＮＧ－９６ｍ＿４０．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４１．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４２．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４３．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４４．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４５．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４６．０、ＳＮＧ－９６ｍ＿４７．０及びＳＮＧ－９６ｍ＿４８．０は、８７％以上の高いノックダウン活性を示した。また、２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ及び２´－Ｆ－ＲＮＡからなり、オーバーハングがｄＴｄＴ、５´末端修飾としてｐｓ修飾を有するアンチセンス鎖と、５´末端から８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目がＤＮＡであり、３´近傍の１か所がＡｍＮＡであるセンス鎖を有するＳＮＧ－９６ｍ＿０．１０３、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．１０４、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．１０６、ＳＮＧ－９６ｍ＿０．１０７及びＳＮＧ－９６ｍ＿０．１０９は、８７％以上の高いノックダウン活性を示した。結果は表５６に示す。
【0150】
【表56】
【0151】
結果１２：５´末端から８番目が２´－Ｆ－ＲＮＡ、７及び９番目がＤＮＡ、１８番目がＡｍＮＡであるセンス鎖と、１０か所の２´－ＯＭｅ－ＲＮＡ及び９か所の２´－Ｆ－ＲＮＡから構成されるアンチセンス鎖を有し、オーバーハングを２つの２´－ＯＭｅ－Ｕ及び、Ｐ（Ｓ）修飾又はｄＴｄＴを付加したＳＮＧ－９６ｍ＿４１．１０９及びＳＮＧ－９６ｍ＿４２．１０９は、８８％以上の高いノックダウン活性を示した。結果は表５７に示す。
【0152】
【表57】
【0153】
実施例４ ＩＴＧＡＶに対するｓｉＲＮＡの評価（ヒト由来肝星細胞株ＬＸ－２細胞）
肝星細胞は肝線維化病態において、ＡＣＴＡ２やＣＴＧＦ遺伝子を高発現する筋線維芽細胞様の細胞に変化し、細胞外線維の産生を行うことが知られている。ヒト肝星細胞株ＬＸ－２細胞（２５，０００個細胞／ウェル）を抗生物質、グルタミン及びウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ培地に播種した。２４時間のインキュベーション後、核酸導入試薬としてＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（登録商標）を用いて、本発明の核酸をＬＸ－２細胞に導入した。核酸導入４８時間後に細胞からＲＮＡを抽出し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ法によりＡＣＴＡ２及びＣＴＧＦ遺伝子発現量の解析を行った。対照群として、スクランブル配列核酸を用いて同処置を施した細胞と比較した。
肝星細胞は肝線維化病態において、ＡＣＴＡ２やＣＴＧＦ遺伝子を高発現する筋線維芽細胞様の細胞に変化し、細胞外線維の産生を行うことが知られている。ヒト肝星細胞株ＬＸ－２細胞（２５，０００個細胞／ウェル）を抗生物質、グルタミン及びウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ培地に播種した。２４時間のインキュベーション後、核酸導入試薬としてＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（登録商標）を用いて、本発明の核酸をＬＸ－２細胞に導入した。核酸導入４８時間後に細胞からＲＮＡを抽出し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ法によりＡＣＴＡ２及びＣＴＧＦ遺伝子発現量の解析を行った。対照群として、スクランブル配列核酸を用いて同処置を施した細胞と比較した。
【0154】
ヒト肝星細胞株ＬＸ－２細胞において、本発明の核酸の導入により、対照群と比較してＡＣＴＡ２及びＣＴＧＦ遺伝子の発現低下を認め、細胞外線維の産生を行う筋線維芽細胞様への形質転換を抑制することを示した。
以上より、本発明の核酸は、病態に伴う星細胞の形質転換を抑制することにより、肝線維化を抑制しうることが明らかとなった。
以上より、本発明の核酸は、病態に伴う星細胞の形質転換を抑制することにより、肝線維化を抑制しうることが明らかとなった。
【0155】
実施例５ ＩＴＧＡＶに対するｓｉＲＮＡの評価（ヒト由来肝星細胞株ＬＩ９０）
肝星細胞は肝線維化病態において、細胞増殖又は細胞死抑制を伴い、細胞量が増加することが知られている。ヒト肝星細胞株ＬＩ９０細胞（８，０００個細胞／ウェル）を抗生物質、グルタミン及びウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ培地に播種した。２４時間のインキュベーション後、核酸導入試薬としてＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭＡＸ（登録商標）を用いて、本発明の核酸をＬＩ９０細胞に導入した。核酸導入後１２０時間にわたりインキュベートし、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標） Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて生存細胞数を、Ｃａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（登録商標） ３／７ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてアポトーシス活性を評価した。対照群として、スクランブル配列核酸を用いて同処置を施した細胞と比較した。
肝星細胞は肝線維化病態において、細胞増殖又は細胞死抑制を伴い、細胞量が増加することが知られている。ヒト肝星細胞株ＬＩ９０細胞（８，０００個細胞／ウェル）を抗生物質、グルタミン及びウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ培地に播種した。２４時間のインキュベーション後、核酸導入試薬としてＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭＡＸ（登録商標）を用いて、本発明の核酸をＬＩ９０細胞に導入した。核酸導入後１２０時間にわたりインキュベートし、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標） Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて生存細胞数を、Ｃａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（登録商標） ３／７ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてアポトーシス活性を評価した。対照群として、スクランブル配列核酸を用いて同処置を施した細胞と比較した。
【0156】
ヒト肝星細胞株ＬＩ９０細胞において、本発明の核酸の導入により、対照群と比較して、生存細胞数の減少と、アポトーシス活性の亢進を認めた。
以上より、本発明の核酸は、肝線維化に関わる星細胞の生存低下及びアポトーシス亢進により、肝線維化を抑制しうることが明らかとなった。
以上より、本発明の核酸は、肝線維化に関わる星細胞の生存低下及びアポトーシス亢進により、肝線維化を抑制しうることが明らかとなった。
【0157】
実施例６ ＩＴＧＡＶに対するｓｉＲＮＡの評価（健常マウス）
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、本発明の核酸を３ｍｇ／ｋｇの用量にて、尾静脈注射により単回投与を実施した。核酸導入のキャリアとしては、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。オリゴ核酸とキャリアの複合体形成後、Ｆｌｏａｔ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ（登録商標） Ｇ２（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を用いて透析を実施した。対照群には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与した。投与３日後に、イソフルラン麻酔下でマウスを屠殺し、肝臓サンプを採取した。肝臓からのＲＮＡ抽出はＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてメーカー推奨プロトコル通りに行った。得られたｔｏｔａｌ ＲＮＡを用いて、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＰＬＵＳ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ）によりＩｔｇａｖ ｍＲＮＡの発現量を定量的ＰＣＲで解析を行った。内在性コントロールとしてＲｐｌｐ０を使用した。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、本発明の核酸を３ｍｇ／ｋｇの用量にて、尾静脈注射により単回投与を実施した。核酸導入のキャリアとしては、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。オリゴ核酸とキャリアの複合体形成後、Ｆｌｏａｔ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ（登録商標） Ｇ２（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を用いて透析を実施した。対照群には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与した。投与３日後に、イソフルラン麻酔下でマウスを屠殺し、肝臓サンプを採取した。肝臓からのＲＮＡ抽出はＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてメーカー推奨プロトコル通りに行った。得られたｔｏｔａｌ ＲＮＡを用いて、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＰＬＵＳ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ）によりＩｔｇａｖ ｍＲＮＡの発現量を定量的ＰＣＲで解析を行った。内在性コントロールとしてＲｐｌｐ０を使用した。
【0158】
マウスＩｔｇａｖの発現量を測定するために使用したプライマー配列は、
Ｆｗプライマー（配列番号４９９）；ＣＧＴＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＡＧＡ
Ｒｖプライマー（配列番号５００）；ＡＣＧＧＣＧＡＧＧＴＣＡＡＣＣＴＴＧＴＡＡ
を用い、
マウスＲｐｌｐ０の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、
Ｆｗプライマー（配列番号５０１）；ＡＴＣＡＡＴＧＧＧＴＡＣＡＡＧＣＧＣＧＴ
Ｒｖプライマー（配列番号５０２）；ＣＡＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＧ
を用いた。
Ｆｗプライマー（配列番号４９９）；ＣＧＴＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＡＧＡ
Ｒｖプライマー（配列番号５００）；ＡＣＧＧＣＧＡＧＧＴＣＡＡＣＣＴＴＧＴＡＡ
を用い、
マウスＲｐｌｐ０の発現量を測定するために使用したプライマー配列は、
Ｆｗプライマー（配列番号５０１）；ＡＴＣＡＡＴＧＧＧＴＡＣＡＡＧＣＧＣＧＴ
Ｒｖプライマー（配列番号５０２）；ＣＡＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＧ
を用いた。
【0159】
ヒトＩＴＧＡＶ ｍＲＮＡに対し設計した修飾型ｓｉＲＮＡは、マウスの肝臓においてＩｔｇａｖの発現量を８５％以上抑制した。マウスＩｔｇａｖの発現量の変化について、ＰＢＳ投与群に対する発現量の変化の割合として結果を表５８に示した。
【表58】
【0160】
実施例７ 四塩化炭素（ＣＣｌ４）誘導肝線維症モデル
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、ＣＣｌ４：オリーブ油を１：９で混合した溶液を、ＣＣｌ４として１ ｍＬ／ｋｇの用量にて、週２回の頻度で腹腔内注射を４週間継続することにより、肝線維症を誘導した。ＣＣｌ４の腹腔内注射により、肝臓小葉中心部の壊死、アミノ基転移酵素（ＡＬＴ）活性上昇及び肝線維症を生じる。
上記のモデルマウスに対して、本発明の核酸であるＳＮＧ－９６ｍを１ ｍｇ／ｋｇの用量にて、週２回の頻度で尾静脈注射により２週間の反復投与を実施した。核酸導入のキャリアとしては、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。対照群には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与し、非病態対照群にはオリーブ油（ＣＣｌ４投与なし）とＰＢＳの投与を行った。その後、マウスを屠殺し、血漿サンプルを用いてＡＬＴを測定し、肝臓サンプルについては肝線維化の指標としてコラーゲン分解物であるヒドロキシプロリン含量をＬＣ／ＭＳにより解析した。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、ＣＣｌ４：オリーブ油を１：９で混合した溶液を、ＣＣｌ４として１ ｍＬ／ｋｇの用量にて、週２回の頻度で腹腔内注射を４週間継続することにより、肝線維症を誘導した。ＣＣｌ４の腹腔内注射により、肝臓小葉中心部の壊死、アミノ基転移酵素（ＡＬＴ）活性上昇及び肝線維症を生じる。
上記のモデルマウスに対して、本発明の核酸であるＳＮＧ－９６ｍを１ ｍｇ／ｋｇの用量にて、週２回の頻度で尾静脈注射により２週間の反復投与を実施した。核酸導入のキャリアとしては、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。対照群には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与し、非病態対照群にはオリーブ油（ＣＣｌ４投与なし）とＰＢＳの投与を行った。その後、マウスを屠殺し、血漿サンプルを用いてＡＬＴを測定し、肝臓サンプルについては肝線維化の指標としてコラーゲン分解物であるヒドロキシプロリン含量をＬＣ／ＭＳにより解析した。
【0161】
その結果、非病態対照群に対してＣＣｌ４投与群では有意にアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）の活性上昇、及び肝臓の線維化を認めた。本モデルにおいて、ＳＮＧ－９６ｍ（１ ｍｇ／ｋｇ）の投与により、ＰＢＳ対照群と比較して、ＣＣｌ４誘導性のＡＬＴ上昇を有意に抑制し（図１）、ヒドロキシプロリン量の増加を抑制した（図２）。
以上より、本発明の核酸は、ＣＣｌ４肝線維化モデルにおいて、肝障害を低減するとともに、肝線維化の進展を抑制することが確認された。
以上より、本発明の核酸は、ＣＣｌ４肝線維化モデルにおいて、肝障害を低減するとともに、肝線維化の進展を抑制することが確認された。
【0162】
実施例８ コリン欠乏メチオニン減量高脂肪食 （ＣＤＨＦＤ） 負荷モデル
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、ＣＤＨＦＤを８週間負荷することにより、ＮＡＳＨ様の肝線維症を誘導した。本モデルでは、アミノ基転移酵素（ＡＬＴ、ＡＳＴ）活性上昇及び脂肪蓄積、局所炎症、肝細胞壊死及び線維症を特徴とするヒトＮＡＳＨで観察される組織学的特徴と類似の変化を誘導する。
上記のモデルマウスに対して、本発明の核酸であるＳＮＧ－９６ｍを３ ｍｇ／ｋｇの用量にて、週２回の頻度で尾静脈注射により４週間の反復投与を実施した。核酸導入のキャリアとしては、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。対照群には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与し、非病態対照群には通常食負荷（ＣＤＨＦＤ負荷なし）とＰＢＳの投与を行た。その後、マウスを屠殺し、血漿サンプルを用いてＡＬＴ及びＡＳＴを測定し、肝臓サンプルについては肝線維化の指標として、シリウスレッド染色による線維化面積率評価及びコラーゲン分解物であるヒドロキシプロリン含量をＬＣ／ＭＳにより解析した。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して、ＣＤＨＦＤを８週間負荷することにより、ＮＡＳＨ様の肝線維症を誘導した。本モデルでは、アミノ基転移酵素（ＡＬＴ、ＡＳＴ）活性上昇及び脂肪蓄積、局所炎症、肝細胞壊死及び線維症を特徴とするヒトＮＡＳＨで観察される組織学的特徴と類似の変化を誘導する。
上記のモデルマウスに対して、本発明の核酸であるＳＮＧ－９６ｍを３ ｍｇ／ｋｇの用量にて、週２回の頻度で尾静脈注射により４週間の反復投与を実施した。核酸導入のキャリアとしては、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。対照群には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与し、非病態対照群には通常食負荷（ＣＤＨＦＤ負荷なし）とＰＢＳの投与を行た。その後、マウスを屠殺し、血漿サンプルを用いてＡＬＴ及びＡＳＴを測定し、肝臓サンプルについては肝線維化の指標として、シリウスレッド染色による線維化面積率評価及びコラーゲン分解物であるヒドロキシプロリン含量をＬＣ／ＭＳにより解析した。
【0163】
【産業上の利用可能性】
【0164】
本発明の核酸はＩＴＧＡＶ発現抑制活性を示す。従って、本発明化合物は線維化関連疾患の予防又は治療のための医薬として非常に有用である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】