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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024095194
(43)【公開日】2024-07-10
(54)【発明の名称】脂質代謝改善用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 36/185 20060101AFI20240703BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240703BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240703BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240703BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240703BHJP
A61K 36/88 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/164 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/047 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/593 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/4166 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/185 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/19 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/724 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/198 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/11 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/192 20060101ALI20240703BHJP
【ＦＩ】
A61K36/185
A61P3/06
A61P3/04
A61P3/10
A61P9/10
A61K36/88
A61K31/164
A61K31/047
A61K31/593
A61K31/4166
A61K31/185
A61K31/19
A61K31/724
A61K31/198
A61K31/11
A61K31/192
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022212297
(22)【出願日】2022-12-28
(71)【出願人】
【識別番号】000106324
【氏名又は名称】サンスター株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】石角 篤
(72)【発明者】
【氏名】リハブ アルシャルガビ
(72)【発明者】
【氏名】松本 元伸
【テーマコード（参考）】
4C086
4C088
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC38
4C086DA14
4C086EA20
4C088AB12
4C088AB71
4C088BA08
4C088NA14
4C088ZA45
4C088ZA70
4C088ZC33
4C088ZC35
4C206AA01
4C206AA02
4C206CA09
4C206CB05
4C206DA13
4C206DA14
4C206DA21
4C206FA53
4C206GA04
4C206GA25
4C206HA28
4C206JA09
4C206MA01
4C206MA04
4C206NA14
4C206ZA45
4C206ZA70
4C206ZC33
4C206ZC35
(57)【要約】
【課題】肥満や糖尿病で起こる遊離脂肪酸の増加による脂質代謝異常を抑制可能な素材を提供すること。
【解決手段】脂肪酸処理によって生じる脂質代謝異常を抑制可能な特定の素材を含有する、脂質代謝改善用組成物。
【選択図】なし
【解決手段】脂肪酸処理によって生じる脂質代謝異常を抑制可能な特定の素材を含有する、脂質代謝改善用組成物。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の表に記載される成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む、
脂質代謝改善用組成物。
脂質代謝改善用組成物。
【表1】
【請求項2】
以下の表に記載される成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む、
脂質代謝改善用組成物。
脂質代謝改善用組成物。
【表2】
【請求項3】
肥満者又は糖尿病患者のための、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
経口組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項5】
動脈硬化予防用である、請求項１又は２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、脂質代謝改善用組成物等に関する。
【背景技術】
【0002】
糖尿病患者ではインスリン抵抗性が生じていることが知られている。また、糖尿病と歯周病との間には関連性があると考えられており、例えば糖尿病モデル動物の歯肉においてインスリン抵抗性が生じていることが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】J Dent Res 2014: 93; 596-601.
【非特許文献2】PLOS ONE 2017; 12: e0189601.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
脂肪酸（特にパルミチン酸）の過剰投与がインスリン抵抗性を引き起こし得ることが知られているが、歯肉細胞においても同様にインスリン抵抗性を引き起こすかは確認されていなかった。
【0005】
本発明者らは、インスリンは歯根膜細胞において濃度依存的にＡｋｔのリン酸化を亢進すること、及び、パルミチン酸を歯根膜細胞に適用するとインスリンによるＡｋｔリン酸化亢進が抑制されること、を見いだした。Ａｋｔのリン酸化の阻害は、インスリン抵抗性の指標の一つとして広く知られている。このことから、歯肉細胞においても脂肪酸がインスリン抵抗性を引き起こし得ることが分かった。
【0006】
またさらに、本発明者らは、インスリン抵抗性を引き起こす可能性が考えられた脂肪酸以外の成分である高濃度の糖（グルコース）やＬＰＳ（Lipopolysaccharide）についても同様の検討を行ったが、高濃度の糖処理やＬＰＳ処理によってはＡｋｔのリン酸化の阻害はみられず、よってこれらの成分によってインスリン抵抗性は引き起こされないと考えられた。
【0007】
これらの知見に基づけば、肥満や糖尿病（特に２型糖尿病）で起こる遊離脂肪酸 (特にパルミチン酸) の増加が、各種細胞において、炎症・単球接着を誘導し、持続的な骨吸収を引き起こしていると考えることができる。また、特に、糖尿病と歯周病の間の関連性についても、遊離脂肪酸（特にパルミチン酸）が歯根膜細胞において炎症・単球接着を誘導し、持続的な骨吸収をともなう歯周炎を悪化させ、ひいては歯の喪失に繋がり得る、と考えることができる。
【0008】
そこでさらに、遊離脂肪酸（特にパルミチン酸）により、炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子の発現や、その炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子発現カスケードの上流に位置する受容体（Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＴＬＲ４）やＣＤ３６）の発現が向上するか確認したところ、これらの遺伝子発現はいずれも亢進することを見いだした。なお、ＴＬＲ４はＬＰＳなどを認識する受容体タンパク質である。また、ＣＤ３６は、脂肪酸の取り込みに関与する主要な膜タンパク質であり、高脂肪食によるインスリン抵抗性や糖尿病性心筋症などの病態生理学的状態の発症に伴って発生する脂肪酸および脂質代謝の障害に関与していると考えられている。
【0009】
これらのことから、前述の遺伝子発現を指標とすることで、肥満や糖尿病で起こる遊離脂肪酸の増加による脂質代謝異常を抑制する成分を探索できると考えられた。そこで、そのような成分を探索することを目的にさらに検討を行った。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは、脂肪酸処理（細胞に対して多量の脂肪酸を適用する処理）によって生じる脂質代謝異常を抑制可能な各種成分を見出し、さらに改良を重ねた。
【0011】
本開示は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
以下の表に記載される成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む、
脂質代謝改善用組成物。
項１．
以下の表に記載される成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む、
脂質代謝改善用組成物。
【0012】
【表1】
【0013】
【0014】
【0015】
【0016】
項２．
以下の表に記載される成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む、
脂質代謝改善用組成物。
以下の表に記載される成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む、
脂質代謝改善用組成物。
【0017】
【表2】
【0018】
項３．
肥満者又は糖尿病患者のための、項１又は２に記載の組成物。
項４．
経口組成物である、項１～３のいずれかに記載の組成物。
項５．
動脈硬化予防用である、項１～４のいずれかに記載の組成物。
肥満者又は糖尿病患者のための、項１又は２に記載の組成物。
項４．
経口組成物である、項１～３のいずれかに記載の組成物。
項５．
動脈硬化予防用である、項１～４のいずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【0019】
脂肪酸処理によって生じる代謝異常を抑制し得る。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【図1A】ヒト歯根膜線維芽細胞(Human periodontal ligament fibroblasts; HPDLF)にパルミチン酸処理を行い６時間又は２４時間培養した後に、どのように炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子発現量が変化するかを検討した結果を示す。パルミチン酸はＢｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）にコンジュゲートさせることによって投与した。コントロールはパルミチン酸をコンジュゲートしていない同量のＢＳＡで処置した。当該結果は、各遺伝子の発現レベルをそれぞれ、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１８（ＲＰＳ１８）の発現レベルで補正した値である。
【図1B】ヒト歯根膜線維芽細胞(Human periodontal ligament fibroblasts; HPDLF)にパルミチン酸処理を行い６時間又は２４時間培養した後に、どのように受容体遺伝子発現量が変化するかを検討した結果を示す。パルミチン酸はＢｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）にコンジュゲートさせることによって投与した。コントロールはパルミチン酸をコンジュゲートしていない同量のＢＳＡで処置した。当該結果は、各遺伝子の発現レベルをそれぞれ、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１８（ＲＰＳ１８）の発現レベルで補正した値である。
【図2】ヒト歯根膜線維芽細胞(Human periodontal ligament fibroblasts; HPDLF)に予め被験物質（サンプル）で処理しておき、その後にパルミチン酸処理を行った際に、どのように炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子や受容体の遺伝子発現量が変化するかを検討した実験の概要を示す。
【発明を実施するための形態】
【0021】
以下、本開示に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。本開示は、脂質代謝改善用組成物等を好ましく包含するが、これらに限定されるわけではなく、本開示は本明細書に開示され当業者が認識できる全てを包含する。
【0022】
本開示に包含される脂質代謝改善用組成物は、次の表に記載される特定の成分を、１種単独で又は２種以上組み合わせて、含有する。本開示に包含される当該脂質代謝改善用組成物を本開示の組成物ということがある。また、これらの特性の成分を本開示の成分ということがある。
【0023】
【表3】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
これらの成分の中でも、次の表に記載される成分がより好ましい。
【0028】
【表4】
【0029】
本開示の組成物における本開示の成分の含有量は、効果が損なわれない範囲であれば特に限定されないが、例えば０．０１～９９．９９質量％程度が挙げられる。
【0030】
本開示の組成物の摂取形態は、特に限定はされないが、経口摂取であることが好ましい。つまり、本開示の組成物は経口組成物であることが好ましい。本開示の組成物を経口摂取することにより、細胞（特に口腔内の細胞）において、脂質代謝異常を抑制する効果が好ましく奏され得る。本開示の組成物は、例えば経口医薬品組成物や食品組成物（飲料組成物及び食品添加物組成物を包含する）であることが好ましい。
【0031】
本開示の組成物は、上記成分を含み、さらに他の成分を含むことができる。当該他の成分は、当該組成物を用いる分野に応じて適宜選択することができる。例えば、薬学的又は食品衛生学的に許容される担体を用いることができる。
【0032】
医薬組成物として用いる場合、他の成分としては、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等）等が例示できる。また、医薬組成物の形態も特に制限されず、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、クリーム剤、パップ剤等が例示できる。
【0033】
食品組成物として用いる場合、他の成分としては、食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤や、その他食品として利用され得る成分・材料などが例示できる。また、食品組成物の形態も特に制限されず、例えば加工食品、健康食品（栄養補助食品、栄養機能食品、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示商品等）、サプリメント、病者向け食品（病院食、病人食又は介護食等）等が例示できる。これらは常法により調製することができる。特に、健康食品（栄養補助食品、栄養機能食品、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示商品等）、又はサプリメントとして、食品組成物を調製する場合は、継続的な摂取が行いやすいように、例えば顆粒、カプセル、錠剤（チュアブル剤等を含む）、飲料（飲料パウダー、ドリンク剤、スムージー等）等の形態で調製することが好ましく、なかでもカプセル、タブレット、錠剤、飲料パウダー、ドリンク剤、ゼリー、グミの形態が摂取の簡便さの点からは好ましいが、特にこれらに限定されるものではない。なお、食品組成物の中でも食品添加物組成物として用いる場合には、その形態として、例えば液状、粉末状、フレーク状、顆粒状、ペースト状のものが挙げられる。
【0034】
本開示の組成物の摂取対象は、効果が好ましく奏され得るという観点から、脂質代謝異常が生じている対象が好ましく、遊離脂肪酸の増加が起こっている対象がより好ましい。遊離脂肪酸の増加により、炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子発現量が増えている対象が中でも好ましく、そのような炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子としては例えばＩＬ－６、ＣＸＣＬ１、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ－８等が挙げられる。
【0035】
また、本開示の組成物を摂取する時期としては、特に限定はされないが、例えば、食事を摂取する前若しくは後に摂取するよう用いられ得る。
【0036】
ところで、粥状動脈硬化では、酸化変性を受けた酸化ＬＤＬが血管内膜に蓄積し、マクロファージに取り組まれることによって泡沫化し、プラーク形成が起こる。この過程において慢性的な炎症反応が深く関係していることが良く知られている。具体的にはＩＬ－６は代表的な炎症性サイトカインの一つであり動脈硬化組織で発現が増加している。また、ＣＸＣＬ１やＩＬ－８といったケモカイン、ＩＣＡＭ－１といった接着因子も動脈硬化組織で発現が増加しており、動脈硬化組織の血管内皮への単球の誘引や接着を媒介することによってプラーク形成を促進する。よって、本開示の組成物は例えば動脈硬化の予防及び／又は治療のためにも有用と考えられる。
【0037】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本開示は、本明細書に説明した構成要件の任意の組み合わせを全て包含する。
【0038】
また、上述した本開示の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本開示に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本開示には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。
【実施例0039】
以下、例を示して本開示の実施形態をより具体的に説明するが、本開示の実施形態は下記の例に限定されるものではない。
【0040】
歯根膜細胞におけるパルミチン処理による検討
ヒト歯根膜線維芽細胞(Human periodontal ligament fibroblasts; HPDLF) に対してパルミチン処理を行い、各種炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子発現量及び各受容体遺伝子発現量がどのように変化するか、を検討した（図２において、各被験物質の添加の無い条件下での検討）。結果を図１Ａ及び図１Ｂに示す。（各遺伝子の発現レベルはそれぞれ、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１８（ＲＰＳ１８）の発現レベルで補正し、ＢＳＡで処置したときの発現を１としたときの相対値を求めた。）
またさらに、ヒト歯根膜線維芽細胞に予め各被験物質（サンプル）を処理しておき、その後にパルミチン酸処理を行った際に、各種炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子発現量及び各受容体遺伝子発現量がどのように変化するかを検討した（図２）。より詳細には、次のようにして検討した。なお、以下の詳細な説明は、図２（被験物質添加有り）記載の検討の説明だが、図１Ａ及び図１Ｂに結果を示す、被験物質添加のない条件下での記載の検討についても、被験物質添加工程以外は同様の条件で行った。
ヒト歯根膜線維芽細胞(Human periodontal ligament fibroblasts; HPDLF) に対してパルミチン処理を行い、各種炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子発現量及び各受容体遺伝子発現量がどのように変化するか、を検討した（図２において、各被験物質の添加の無い条件下での検討）。結果を図１Ａ及び図１Ｂに示す。（各遺伝子の発現レベルはそれぞれ、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１８（ＲＰＳ１８）の発現レベルで補正し、ＢＳＡで処置したときの発現を１としたときの相対値を求めた。）
またさらに、ヒト歯根膜線維芽細胞に予め各被験物質（サンプル）を処理しておき、その後にパルミチン酸処理を行った際に、各種炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子発現量及び各受容体遺伝子発現量がどのように変化するかを検討した（図２）。より詳細には、次のようにして検討した。なお、以下の詳細な説明は、図２（被験物質添加有り）記載の検討の説明だが、図１Ａ及び図１Ｂに結果を示す、被験物質添加のない条件下での記載の検討についても、被験物質添加工程以外は同様の条件で行った。
【0041】
［各種炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子及び各受容体遺伝子発現の検討］
ヒト歯根膜線維芽細胞 （Ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ； ＨＰＤＬＦ） を０．４５×１０５ ｃｅｌｌｓ／１ｍＬ／ｗｅｌｌの密度で１２－ｗｅｌｌ プレートに播種し７２時間培養した。細胞を２４時間、各被験物質（サンプル）（５μｇ／ｍＬ）で前処置後、引き続きＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ； Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）にコンジュゲートさせた１００μＭのパルミチン酸（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）で２４時間処置した。対照には同濃度のＢＳＡを使用した。総ＲＮＡはＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して抽出した。１本鎖のｃＤＮＡは０．５μｇの総ＲＮＡよりＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（タカラバイオ）を使用して合成した。各遺伝子発現の定量は、７５００ Ｆａｓｔ リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、それぞれに特異的なプライマー、およびＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（タカラバイオ）を用いたインターカレーター法により実施した。各遺伝子の発現レベルはそれぞれ、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１８（ＲＰＳ１８）の発現レベルで補正し、ＢＳＡで処置したときの発現を１としたときの相対値を求めた。各サンプルの遺伝子発現抑制率（％）は、次の式を用いて求めた。
ヒト歯根膜線維芽細胞 （Ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ； ＨＰＤＬＦ） を０．４５×１０５ ｃｅｌｌｓ／１ｍＬ／ｗｅｌｌの密度で１２－ｗｅｌｌ プレートに播種し７２時間培養した。細胞を２４時間、各被験物質（サンプル）（５μｇ／ｍＬ）で前処置後、引き続きＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ； Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）にコンジュゲートさせた１００μＭのパルミチン酸（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）で２４時間処置した。対照には同濃度のＢＳＡを使用した。総ＲＮＡはＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して抽出した。１本鎖のｃＤＮＡは０．５μｇの総ＲＮＡよりＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（タカラバイオ）を使用して合成した。各遺伝子発現の定量は、７５００ Ｆａｓｔ リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、それぞれに特異的なプライマー、およびＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（タカラバイオ）を用いたインターカレーター法により実施した。各遺伝子の発現レベルはそれぞれ、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ１８（ＲＰＳ１８）の発現レベルで補正し、ＢＳＡで処置したときの発現を１としたときの相対値を求めた。各サンプルの遺伝子発現抑制率（％）は、次の式を用いて求めた。
【0042】
【数1】
【0043】
すなわち、遺伝子発現抑制率（％）は、パルミチン酸のみを処置した時の相対値からサンプル処置後にパルミチン酸を処置した時の相対値を減算した値を、パルミチン酸のみを処置した時の相対値からＢＳＡのみを処置した時の相対値を減算した値で除した割合（％）を示す。
【0044】
結果を次の表に示す。なお、図２（被験物質添加有り）記載の検討では、各種炎症性サイトカイン、ケモカイン、接着因子遺伝子及び各受容体遺伝子として、ＩＬ－６、ＣＸＣＬ１、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ－８、ＴＬＲ４、及びＣＤ３６を選択して用いた。
【0045】
【表5】
【0046】
【0047】
【0048】
【0049】
【0050】
【図1A】
【図1B】
【図2】