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特開2024-95228骨髄液の分析方法、試料分析装置及びコンピュータプログラム
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024095228
(43)【公開日】2024-07-10
(54)【発明の名称】骨髄液の分析方法、試料分析装置及びコンピュータプログラム
(51)【国際特許分類】
G01N 33/483 20060101AFI20240703BHJP
G01N 33/58 20060101ALI20240703BHJP
G01N 33/48 20060101ALI20240703BHJP
G01N 15/1429 20240101ALI20240703BHJP
G01N 15/14 20240101ALI20240703BHJP
G01N 21/64 20060101ALI20240703BHJP
【ＦＩ】
G01N33/483 C
G01N33/58 A
G01N33/48 P
G01N33/48 Z
G01N15/14 K
G01N15/14 C
G01N21/64 F
【審査請求】未請求
【請求項の数】33
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022212357
(22)【出願日】2022-12-28
(71)【出願人】
【識別番号】390014960
【氏名又は名称】シスメックス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100103034
【弁理士】
【氏名又は名称】野河 信久
(74)【代理人】
【識別番号】100159385
【弁理士】
【氏名又は名称】甲斐 伸二
(74)【代理人】
【識別番号】100163407
【弁理士】
【氏名又は名称】金子 裕輔
(74)【代理人】
【識別番号】100166936
【弁理士】
【氏名又は名称】稲本 潔
(74)【代理人】
【識別番号】100174883
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 雅己
(74)【代理人】
【識別番号】100189429
【弁理士】
【氏名又は名称】保田 英樹
(74)【代理人】
【識別番号】100213849
【弁理士】
【氏名又は名称】澄川 広司
(72)【発明者】
【氏名】林 文明
(72)【発明者】
【氏名】吉本 倫子
(72)【発明者】
【氏名】小国 振一郎
(72)【発明者】
【氏名】長井 孝明
(72)【発明者】
【氏名】永井 雄也
(72)【発明者】
【氏名】丸岡 隼人
【テーマコード（参考）】
2G043
2G045
【Ｆターム（参考）】
2G043AA01
2G043AA03
2G043BA16
2G043CA03
2G043DA02
2G043EA01
2G045AA26
2G045CB02
2G045FA37
2G045JA01
(57)【要約】
【課題】骨髄像検査と同程度の性能で造血器腫瘍のスクリーニングを可能とする骨髄液の分析方法、分析装置及びコンピュータプログラムを提供することを課題とする。
【解決手段】骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料をフローサイトメータで測定し、試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得し、蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数し、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得することにより、上記の課題を解決する。
【選択図】図１
【解決手段】骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料をフローサイトメータで測定し、試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得し、蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数し、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得することにより、上記の課題を解決する。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料をフローサイトメトリ法で測定し、前記試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する工程と、
前記蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する工程と、
前記対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する工程と、
を含む、骨髄液の分析方法。
前記蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する工程と、
前記対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する工程と、
を含む、骨髄液の分析方法。
【請求項2】
前記光学的情報が、側方散乱光情報及び前方散乱光情報の少なくとも１つをさらに含む、請求項１に記載の分析方法。
【請求項3】
前記対象細胞の数を取得する工程において、前記光学的情報に基づいて、有核細胞の数をさらに取得する、請求項２に記載の分析方法。
【請求項4】
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記対象細胞の数の比率である第１の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
【請求項5】
前記第１の比率が、前記第１の比率に対応する閾値以上である場合、識別可能な表示を提供する工程をさらに含む、請求項４に記載の分析方法。
【請求項6】
前記第１の比率に対応する閾値が、２０～４０％の間の任意の値である、請求項５に記載の分析方法。
【請求項7】
前記第１の比率に対応する閾値が３０％である、請求項５に記載の分析方法。
【請求項8】
前記蛍光信号情報に対応する閾値が、成熟白血球の９５％以上を除外可能な値である、請求項１に記載の分析方法。
【請求項9】
前記蛍光信号情報に対応する閾値が、蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づく二次元平面上に前記試料中の粒子の分布を描いたとき、前記試料中の単球集団と交わるが、リンパ球集団とは交わらない直線で表される、請求項２に記載の分析方法。
【請求項10】
前記蛍光信号情報に対応する閾値が、以下の条件を満たす値である、請求項１に記載の分析方法：
少なくとも２０検体の健常人の末梢血と前記蛍光色素とから調製された複数の対照試料をフローサイトメトリ法で測定し、前記複数の対照試料について蛍光信号情報及び側方散乱光情報を取得し、
前記蛍光信号情報及び前記側方散乱光情報に基づいて、前記複数の対照試料における有核細胞の数を取得し、
任意の蛍光信号強度を暫定的閾値として設定し、前記暫定的閾値以上の蛍光信号強度を有する細胞の数を取得し、
有核細胞の数に対する、前記暫定的閾値以上の蛍光信号強度を有する細胞の数の比率を算出し、
前記複数の対照試料における前記比率の中央値を算出したとき、前記中央値が２．５％以上５％以下となること。
少なくとも２０検体の健常人の末梢血と前記蛍光色素とから調製された複数の対照試料をフローサイトメトリ法で測定し、前記複数の対照試料について蛍光信号情報及び側方散乱光情報を取得し、
前記蛍光信号情報及び前記側方散乱光情報に基づいて、前記複数の対照試料における有核細胞の数を取得し、
任意の蛍光信号強度を暫定的閾値として設定し、前記暫定的閾値以上の蛍光信号強度を有する細胞の数を取得し、
有核細胞の数に対する、前記暫定的閾値以上の蛍光信号強度を有する細胞の数の比率を算出し、
前記複数の対照試料における前記比率の中央値を算出したとき、前記中央値が２．５％以上５％以下となること。
【請求項11】
前記光学的情報が、蛍光信号情報及び側方散乱光情報を含み、
前記対象細胞を計数する工程において、前記蛍光信号情報が閾値以上である単核細胞を計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記単核細胞の数の比率である第２の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
前記対象細胞を計数する工程において、前記蛍光信号情報が閾値以上である単核細胞を計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記単核細胞の数の比率である第２の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
【請求項12】
前記第２の比率が、前記第２の比率に対応する閾値以上である場合、識別可能な表示を提供する工程をさらに含む、請求項１１に記載の分析方法。
【請求項13】
前記第２の比率が、１０％～３０％の間の任意の値である、請求項１２に記載の分析方法。
【請求項14】
前記第２の比率に対応する閾値が２０％である、請求項１２に記載の分析方法。
【請求項15】
前記光学的情報が、蛍光信号情報、側方散乱光情報及び前方散乱光情報を含み、
前記対象細胞を計数する工程において、芽球を計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記芽球の数の比率である第３の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
前記対象細胞を計数する工程において、芽球を計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記芽球の数の比率である第３の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
【請求項16】
前記第３の比率が、前記第３の比率に対応する閾値以上である場合、識別可能な表示を提供する工程をさらに含む、請求項１５に記載の分析方法。
【請求項17】
前記第３の比率に対応する閾値が、５％～２５％の間の任意の値である、請求項１６に記載の分析方法。
【請求項18】
前記第３の比率に対応する閾値が１０％である、請求項１７に記載の分析方法。
【請求項19】
前記第３の比率に対応する閾値が２０％である、請求項１７に記載の分析方法。
【請求項20】
前記対象細胞の数を取得する工程において、前記蛍光信号情報が閾値より低い単核細胞計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記単核細胞の数の比率である第４の比率を取得し、前記第４の比率の値に対する前記第２の比率の値の比率である第５の比率を取得する、請求項１１に記載の分析方法。
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記単核細胞の数の比率である第４の比率を取得し、前記第４の比率の値に対する前記第２の比率の値の比率である第５の比率を取得する、請求項１１に記載の分析方法。
【請求項21】
前記第５の比率が、前記第５の比率に対応する閾値以下である場合、識別可能な表示を提供する工程をさらに含む、請求項２０に記載の分析方法。
【請求項22】
前記第５の比率に対応する閾値が、５％～１５％の間の任意の値である、請求項２１に記載の分析方法。
【請求項23】
前記第５の比率に対応する閾値が１０％である、請求項２１に記載の分析方法。
【請求項24】
前記光学的情報が、蛍光信号情報及び側方散乱光情報を含み、
前記対象細胞を計数する工程において、形質細胞を計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記形質細胞の数の比率である第６の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
前記対象細胞を計数する工程において、形質細胞を計数し、
前記指標を取得する工程において、前記有核細胞の数に対する前記形質細胞の数の比率である第６の比率を取得する、請求項３に記載の分析方法。
【請求項25】
前記第６の比率が、前記第６の比率に対応する閾値以上である場合、識別可能な表示を提供する工程をさらに含む、請求項２４に記載の分析方法。
【請求項26】
前記第６の比率に対応する閾値が、５％～１５％の間の任意の値である、請求項２５に記載の分析方法。
【請求項27】
前記第６の比率に対応する閾値が５％である、請求項２５に記載の分析方法。
【請求項28】
前記識別可能な表示が、前記骨髄液が、造血器腫瘍に関する検査を優先的に行う必要のある検体であることを示す、請求項５、１２、１６、２１又は２５に記載の分析方法。
【請求項29】
前記試料が、カチオン性界面活性剤をさらに含む、請求項１に記載の分析方法。
【請求項30】
前記試料が、骨髄液と、蛍光色素を含む染色試薬と、カチオン性界面活性剤を含む溶血試薬とを混合することにより調製される、請求項２９に記載の分析方法。
【請求項31】
骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料を調製する試料調製部と、
前記試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する検出部と、
前記光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する制御部と、を備え、
前記制御部が、前記対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する、
試料分析装置。
前記試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する検出部と、
前記光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する制御部と、を備え、
前記制御部が、前記対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する、
試料分析装置。
【請求項32】
前記検出部が、
前記試料調製部によって調製された前記試料を流すように構成されたフローセルと、
前記フローセル内を流れる前記試料中の粒子に光を照射する光源部と、
前記粒子に光が照射されたときに得られる前記光学的情報を取得する受光部と、
を備える、請求項３１に記載の試料分析装置。
前記試料調製部によって調製された前記試料を流すように構成されたフローセルと、
前記フローセル内を流れる前記試料中の粒子に光を照射する光源部と、
前記粒子に光が照射されたときに得られる前記光学的情報を取得する受光部と、
を備える、請求項３１に記載の試料分析装置。
【請求項33】
骨髄液を分析するためのコンピュータプログラムであって、
前記骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得するステップと、
前記光学的情報に基づいて、前記蛍光信号強度が閾値以上である粒子を対象細胞として計数するステップと、
前記対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得するステップと、
をコンピュータに実行させる、
コンピュータプログラム。
前記骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得するステップと、
前記光学的情報に基づいて、前記蛍光信号強度が閾値以上である粒子を対象細胞として計数するステップと、
前記対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得するステップと、
をコンピュータに実行させる、
コンピュータプログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、骨髄液の分析方法に関する。本発明は、試料分析装置に関する。本発明は、骨髄液を分析するためのコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【0002】
非特許文献１には、自動血球計数装置ＸＥ－２１００（シスメックス株式会社）を用いた骨髄液の検査法について検討したことが開示されている。非特許文献１では、幼若細胞を測定するための試薬であるＳｔｒｏｍａｔｏｌｙｓｅｒ ＩＭ（以下、「ＩＭ試薬」ともいう）を用いて骨髄液を前処理することが開示されている。ＩＭ試薬は細胞膜にダメージを与えて核を露出させるが、幼若な細胞は成熟白血球に比べてダメージが小さい。そのため、ＩＭ試薬によって処理された骨髄液中の細胞が核酸染色試薬によって染色されると、成熟白血球の露出された核が強く染色されて強い蛍光強度を発する。一方、骨髄芽球や幼若顆粒球のような幼若な細胞では、核酸染色色素が浸透しにくいので蛍光強度が弱くなる（ＦＩＧ．１参照）。非特許文献１では、このような染色性の違いを利用して、ＸＥ－２１００によって骨髄細胞と成熟白血球とを区別して計数している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】Ｍｏｒｉ Ｙ．ら，Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ａｓｐｉｒａｔｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＸＥ－２１００ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐａｒｔ Ｂ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ），２００３，ｖｏｌ．５８Ｂ，ｐｐ．２５－３１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
非特許文献１による骨髄液の分析方法は、造血器腫瘍のスクリーニング精度の観点で改善の余地があった。本発明は、造血器腫瘍のスクリーニング精度を向上した骨髄液の分析方法、試料分析装置及びコンピュータプログラムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明者らは、造血器腫瘍の患者の骨髄液では、増殖能及びタンパク産生能が高い細胞が増加しており、これらの細胞が比較的多量の核酸を含むことに着目した。そして、本発明者らは、核酸を染色可能な蛍光色素を用いて骨髄液中の細胞を染色して、フローサイトメトリ法で測定し、得られた蛍光信号情報に基づいて、造血器腫瘍が疑われる骨髄液を検出することを着想した。本発明者らは、異常のない骨髄液及び造血器腫瘍又はその兆候が見られる骨髄液を分析したところ、蛍光信号情報が閾値以上である粒子の数に基づく値により、造血器腫瘍の骨髄液と他の骨髄液とを判別できることを見出した。さらに、この判別結果は、顕微鏡観察に基づく骨髄液の判別結果と良好に相関することを見出した。
【0006】
本発明は、骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料をフローサイトメトリ法で測定し、試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する工程と、蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する工程と、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する工程と、を含む、骨髄液の分析方法を提供する。
【0007】
本発明は、骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料を調製する試料調製部と、試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する検出部と、光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する制御部と、を備え、制御部が、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する、試料分析装置を提供する。
【0008】
本発明は、骨髄液を分析するためのコンピュータプログラムであって、骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得するステップと、光学的情報に基づいて、蛍光信号強度が閾値以上である粒子を対象細胞として計数するステップと、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得するステップと、をコンピュータに実行させる、コンピュータプログラムを提供する。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、造血器腫瘍のスクリーニング、骨髄液の異常の判定などを補助する情報の提供を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をフローサイトメータ（ＦＣＭ）で測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図2】健常人の末梢血と蛍光色素とを含む対照試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図3A】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図3B】健常人の末梢血と蛍光色素とを含む対照試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図4A】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図4B】健常人の末梢血と蛍光色素とを含む対照試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図4C】健常人の末梢血と蛍光色素とを含む対照試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図5A】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図5B】健常人の末梢血と蛍光色素とを含む対照試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの模式図である。
【図6】本実施形態の試料分析装置の構成を示す模式図である。
【図7】フローセルの構成を示す斜視図である。
【図8】解析部の構成を示すブロック図である。
【図9】本実施形態の試料分析装置の動作の流れを示すフローチャートである。
【図10】試料の調製処理の手順を示すフローチャートである。
【図11A】測定データの解析処理の手順を示すフローチャートである。
【図11B】測定データの解析処理の手順を示すフローチャートである。
【図11C】測定データの解析処理の手順を示すフローチャートである。
【図11D】測定データの解析処理の手順を示すフローチャートである。
【図11E】測定データの解析処理の手順を示すフローチャートである。
【図12A】第１の比率に基づく判定処理の手順のフローチャートである。
【図12B】第２の比率に基づく判定処理の手順のフローチャートである。
【図12C】第３の比率に基づく判定処理の手順のフローチャートである。
【図12D】第５の比率に基づく判定処理の手順のフローチャートである。
【図12E】第６の比率に基づく判定処理の手順のフローチャートである。
【図13】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの一例である。
【図14】分析装置により得た第１の比率と鏡検により得た比率とをプロットしたグラフを示す。
【図15】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの一例である。
【図16】分析装置により得た第２の比率と鏡検により得た比率とをプロットしたグラフを示す。
【図17】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの一例である。
【図18】第３の領域に含まれる粒子の前方散乱光強度に基づくヒストグラムの一例である。
【図19】分析装置により得た第３の比率と鏡検により得た比率とをプロットしたグラフを示す。
【図20】骨髄液と蛍光色素とを含む試料をＦＣＭで測定したときのスキャッタグラムの一例である。
【発明を実施するための形態】
【0011】
［１．骨髄液の分析方法］
本実施形態の骨髄液の分析方法（以下、「本実施形態の分析方法」とも呼ぶ）では、まず、骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料をフローサイトメトリ法で測定し、当該試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する。
本実施形態の骨髄液の分析方法（以下、「本実施形態の分析方法」とも呼ぶ）では、まず、骨髄液と、核酸を染色可能な蛍光色素とを含む試料をフローサイトメトリ法で測定し、当該試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する。
【0012】
（骨髄液とそれに含まれる細胞）
「骨髄液」とは、骨髄穿刺又は骨髄生検により被検者から採取した骨髄液、及びその骨髄液を含む試料をいう。被検者から採取した骨髄液に、例えば骨片、血球細胞の凝集などの細胞測定の障害となり得る固形の夾雑物があるときは、メッシュなどを用いて骨髄液をろ過してもよい。骨髄液には、必要に応じて、キレート剤及び／又は抗凝固剤が添加されてもよい。キレート剤としては、例えばエチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）塩が挙げられる。抗凝固剤としては、例えばヘパリン、クエン酸又はクエン酸塩などが挙げられる。
「骨髄液」とは、骨髄穿刺又は骨髄生検により被検者から採取した骨髄液、及びその骨髄液を含む試料をいう。被検者から採取した骨髄液に、例えば骨片、血球細胞の凝集などの細胞測定の障害となり得る固形の夾雑物があるときは、メッシュなどを用いて骨髄液をろ過してもよい。骨髄液には、必要に応じて、キレート剤及び／又は抗凝固剤が添加されてもよい。キレート剤としては、例えばエチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）塩が挙げられる。抗凝固剤としては、例えばヘパリン、クエン酸又はクエン酸塩などが挙げられる。
【0013】
骨髄液には、種々の有核細胞が含まれる。骨髄液中の有核細胞としては、例えば、白血球系細胞、赤芽球系細胞、巨核芽球、前巨核球、骨髄巨核球、成熟巨核球及び形質細胞（プラズマ細胞）が挙げられる。「白血球系細胞」とは、例えば、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄球、後骨髄球、単芽球、前単球、桿状核球、分葉核球、未成熟好酸球、未成熟好塩基球、単球、好酸球、好塩基球及びリンパ球が挙げられる。桿状核球は、成熟した好中球であり、分葉核球は、桿状核球からさらに成熟した好中球である。「赤芽球系細胞」は、有核赤血球とも呼ばれ、例えば、前赤芽球、好塩基性赤芽球、多染性赤芽球及び正染性赤芽球が挙げられる。
【0014】
以下では、桿状核球及び分葉核球をまとめて、「好中球」とも呼ぶ。単球、リンパ球、好中球、好酸球及び好塩基球をまとめて、「成熟白血球」とも呼ぶ。単球及びリンパ球をまとめて、「単核白血球」とも呼ぶ。好中球、好酸球及び好塩基球をまとめて、「成熟顆粒球」とも呼ぶ。
【0015】
白血球系細胞及び赤芽球系細胞には、各種の白血病、悪性リンパ腫などの造血器腫瘍により出現及び増加する腫瘍化した細胞が含まれてもよい。例えば、急性白血病では芽球が増加し、形質細胞腫（骨髄腫とも呼ばれる）では形質細胞が増加する。「芽球」とは、骨髄芽球、単芽球及び前単球をいう。
【0016】
本明細書では、前骨髄球及び骨髄球を「分化早期幼若顆粒球」とも呼び、後骨髄球を「分化後期幼若顆粒球」とも呼ぶ。また、前赤芽球及び好塩基性赤芽球を「分化早期赤芽球」とも呼び、多染性赤芽球及び正染性赤芽球を「分化後期赤芽球」とも呼ぶ。また、巨核芽球、前巨核球及び骨髄巨核球を「巨核球系細胞」とも呼ぶ。分化早期幼若顆粒球、分化早期赤芽球、芽球、巨核球系細胞及び形質細胞は、他の有核細胞に比べて、核酸、特にリボ核酸を多く含む。また、上述のように、造血器腫瘍では、骨髄中に芽球や形質細胞が増加する。本実施形態の分析方法では、骨髄液中の上記の核酸量が多い有核細胞を選択的に検出するために、上記の試料をＦＣＭで測定して、蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する。
【0017】
「試料中の粒子」とは、試料中に存在する有形成分である。粒子には、細胞だけでなく、溶解した赤血球の残骸（以下、「赤血球ゴースト」とも呼ぶ）、血小板の凝集物、脂質粒子などの非細胞の粒子も含まれる。
【0018】
（蛍光色素）
「核酸を染色可能な蛍光色素」とは、細胞の核酸を染色可能な蛍光物質である。核酸を染色可能な蛍光色素を以下、単に「蛍光色素」とも呼ぶ。好ましい蛍光色素は、細胞のリボ核酸（ＲＮＡ）を染色可能な蛍光物質である。蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム－アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー－１、エチジウムホモダイマー－２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３－［［４－［［（３－メチルベンゾチアゾール－３－イウム）－２－イル］メチレン］－１，４－ジヒドロキノリン］－１－イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ－１）、４－［（３－メチルベンゾチアゾール－２（３Ｈ）－イリデン）メチル］－１－［３－（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ－ＰＲＯ－１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｎ，Ｎ’－ビス［３－［４－［３－［（３－メチルベンゾチアゾール－３－イウム）－２－イル］－２－プロペニリデン］－１，４－ジヒドロキノリン－１－イル］プロピル］－１，３－プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ－３）又は２－［３－［［１－［３－（トリメチルアミニオ）プロピル］－１，４－ジヒドロキノリン］－４－イリデン］－１－プロペニル］－３－メチルベンゾチアゾール－３－イウム・ジヨージド（ＴＯＰＲＯ－３）、下記の式（Ｉ）で表される蛍光色素、及びそれらの組み合わせなどが挙げられる。試料に含まれる蛍光色素は１種でもよいし、２種以上でもよい。
「核酸を染色可能な蛍光色素」とは、細胞の核酸を染色可能な蛍光物質である。核酸を染色可能な蛍光色素を以下、単に「蛍光色素」とも呼ぶ。好ましい蛍光色素は、細胞のリボ核酸（ＲＮＡ）を染色可能な蛍光物質である。蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム－アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー－１、エチジウムホモダイマー－２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３－［［４－［［（３－メチルベンゾチアゾール－３－イウム）－２－イル］メチレン］－１，４－ジヒドロキノリン］－１－イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ－１）、４－［（３－メチルベンゾチアゾール－２（３Ｈ）－イリデン）メチル］－１－［３－（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ－ＰＲＯ－１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｎ，Ｎ’－ビス［３－［４－［３－［（３－メチルベンゾチアゾール－３－イウム）－２－イル］－２－プロペニリデン］－１，４－ジヒドロキノリン－１－イル］プロピル］－１，３－プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ－３）又は２－［３－［［１－［３－（トリメチルアミニオ）プロピル］－１，４－ジヒドロキノリン］－４－イリデン］－１－プロペニル］－３－メチルベンゾチアゾール－３－イウム・ジヨージド（ＴＯＰＲＯ－３）、下記の式（Ｉ）で表される蛍光色素、及びそれらの組み合わせなどが挙げられる。試料に含まれる蛍光色素は１種でもよいし、２種以上でもよい。
【0019】
【化1】
【0020】
式（Ｉ）中、Ｒ１及びＲ４は、水素原子、メチル基、エチル基又は炭素数６～１８のアルキル基であって、いずれか一方が炭素数６～１８のアルキル基であるとき、他方が水素原子、メチル基又はエチル基である。Ｒ２及びＲ３は、互いに同一又は異なって、メチル基、エチル基、メトキシ基又はエトキシ基である。Ｚは、硫黄原子、酸素原子又はメチル基を有する炭素原子である。ｎは、０、１、２又は３である。Ｘ－は、アニオンである。
【0021】
式（Ｉ）において、炭素数６～１８のアルキル基は、直鎖状又は分枝鎖状のいずれであってもよい。炭素数６～１８のアルキル基の中でも、炭素数が６、８又は１０のアルキル基が好ましい。
【0022】
式（Ｉ）において、Ｒ１及びＲ４のベンジル基の置換基として、例えば炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基又は炭素数２～２０のアルキニル基が挙げられる。それらの中でも、メチル基又はエチル基が特に好ましい。
【0023】
式（Ｉ）において、Ｒ２及びＲ３のアルケニル基として、例えば炭素数２～２０のアルケニル基が挙げられる。また、Ｒ２及びＲ３のアルコキシ基としては、炭素数１～２０のアルコキシ基が挙げられる。それらの中でも、特にメトキシ基又はエトキシ基が好ましい。
【0024】
式（Ｉ）において、アニオンＸ－として、Ｆ－、Ｃｌ－、Ｂｒ－及びＩ－のようなハロゲンイオン、ＣＦ３ＳＯ３
－、ＢＦ４
－、ＣｌＯ４
－などが挙げられる。
【0025】
上記の式（Ｉ）で表される蛍光色素としては、下記の式（ＩＩ）で表される蛍光色素が好ましい。
【0026】
【化2】
【0027】
（染色試薬）
本実施形態の分析方法では、蛍光色素の溶液を含む染色試薬を用いることが好ましい。溶媒は、上記の蛍光色素を溶解できれば特に限定されない。例えば、水、有機溶媒、及びそれらの混合物が挙げられる。有機溶媒としては、水に混合可能な溶媒が好ましく、例えば炭素数１～６のアルコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などが挙げられる。染色試薬における蛍光色素の濃度は、蛍光色素の種類に応じて適宜決定できるが、例えば０．０１ｍｇ／Ｌ以上である。染色試薬における蛍光色素の濃度は、好ましくは０．１ｍｇ／Ｌ以上であり、より好ましくは０．２ｍｇ／Ｌ以上である。また、染色試薬における蛍光色素の濃度は１００ｍｇ／Ｌ以下であり、好ましくは９０ｍｇ／Ｌ以下であり、より好ましくは８０ｍｇ／Ｌ以下である。
本実施形態の分析方法では、蛍光色素の溶液を含む染色試薬を用いることが好ましい。溶媒は、上記の蛍光色素を溶解できれば特に限定されない。例えば、水、有機溶媒、及びそれらの混合物が挙げられる。有機溶媒としては、水に混合可能な溶媒が好ましく、例えば炭素数１～６のアルコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などが挙げられる。染色試薬における蛍光色素の濃度は、蛍光色素の種類に応じて適宜決定できるが、例えば０．０１ｍｇ／Ｌ以上である。染色試薬における蛍光色素の濃度は、好ましくは０．１ｍｇ／Ｌ以上であり、より好ましくは０．２ｍｇ／Ｌ以上である。また、染色試薬における蛍光色素の濃度は１００ｍｇ／Ｌ以下であり、好ましくは９０ｍｇ／Ｌ以下であり、より好ましくは８０ｍｇ／Ｌ以下である。
【0028】
蛍光色素を単独で含む市販の染色試薬を用いてもよい。例えば、フルオロセルＷＤＦ（シスメックス株式会社）、ストマトライザー４ＤＳ（シスメックス株式会社）が挙げられる。
【0029】
（界面活性剤）
本実施形態の分析方法では、試料は、カチオン性界面活性剤をさらに含むことが好ましい。カチオン性界面活性剤は、骨髄液中の赤血球を溶解し、かつ、有核細胞の細胞膜に蛍光色素が透過できる程度の損傷を与えることができる。カチオン性界面活性剤としては、例えば第四級アンモニウム塩型界面活性剤、ピリジウム塩型界面活性剤及びそれらの組み合わせが挙げられる。試料に含まれるカチオン界面活性剤は１種でもよいし、２種以上でもよい。第四級アンモニウム塩型界面活性剤としては、例えば、下記の式（ＩＩＩ）で表される、全炭素数が９～３０の界面活性剤が好ましい。
本実施形態の分析方法では、試料は、カチオン性界面活性剤をさらに含むことが好ましい。カチオン性界面活性剤は、骨髄液中の赤血球を溶解し、かつ、有核細胞の細胞膜に蛍光色素が透過できる程度の損傷を与えることができる。カチオン性界面活性剤としては、例えば第四級アンモニウム塩型界面活性剤、ピリジウム塩型界面活性剤及びそれらの組み合わせが挙げられる。試料に含まれるカチオン界面活性剤は１種でもよいし、２種以上でもよい。第四級アンモニウム塩型界面活性剤としては、例えば、下記の式（ＩＩＩ）で表される、全炭素数が９～３０の界面活性剤が好ましい。
【0030】
【化3】
【0031】
式（ＩＩＩ）中、Ｒ１は、炭素数６～１８のアルキル基又はアルケニル基であり；Ｒ２及びＲ３は、互いに同一又は異なって、炭素数１～４のアルキル基又はアルケニル基であり；Ｒ４は、炭素数１～４のアルキル基又はアルケニル基又はベンジル基であり、Ｘ－は、ハロゲンイオンである。
【0032】
式（ＩＩＩ）中、Ｒ１は、炭素数が６、８、１０、１２及び１４のアルキル基又はアルケニル基であることがましく、特に直鎖のアルキル基であることが好ましい。より具体的なＲ１としては、オクチル基、デシル基及びドデシル基が挙げられる。Ｒ２及びＲ３は、互いに同一又は異なって、メチル基、エチル基及びプロピル基であることが好ましい。Ｒ４は、メチル基、エチル基及びプロピル基であることが好ましい。
【0033】
ピリジウム塩型界面活性剤としては、例えば、式（ＩＶ）で表される界面活性剤が挙げられる。
【0034】
【化4】
【0035】
式（ＩＶ）中、Ｒ１は、炭素数６～１８のアルキル基又はアルケニル基であり；Ｘ－は、ハロゲンイオンである。
【0036】
式（ＩＶ）中、Ｒ１は、炭素数が６、８、１０、１２及び１４のアルキル基又はアルケニル基であることがましく、特に直鎖のアルキル基であることが好ましい。より具体的なＲ１としては、オクチル基、デシル基及びドデシル基が挙げられる。
【0037】
（溶血試薬）
本実施形態の分析方法では、カチオン性界面活性剤の溶液を含む溶血試薬を用いることが好ましい。溶媒は、カチオン性界面活性剤を溶解できれば特に限定されない。例えば、水、有機溶媒、及びそれらの混合物が挙げられる。有機溶媒としては、水に混合可能な溶媒が好ましく、例えば炭素数１～６のアルコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯなどが挙げられる。溶血試薬におけるカチオン性界面活性剤の濃度は、その種類に応じて適宜決定できるが、例えば１０ｐｐｍ以上である。カチオン界面活性剤の濃度は、好ましくは４００ｐｐｍ以上であり、より好ましくは５００ｐｐｍ以上であり、さらに好ましくは６００ｐｐｍ以上である。また、溶血試薬におけるカチオン界面活性剤の濃度は１００００ｐｐｍ以下である。溶血試薬におけるカチオン界面活性剤の濃度は、好ましくは１０００ｐｐｍ以下であり、より好ましくは８００ｐｐｍ以下であり、さらに好ましくは７００ｐｐｍ以下である。
本実施形態の分析方法では、カチオン性界面活性剤の溶液を含む溶血試薬を用いることが好ましい。溶媒は、カチオン性界面活性剤を溶解できれば特に限定されない。例えば、水、有機溶媒、及びそれらの混合物が挙げられる。有機溶媒としては、水に混合可能な溶媒が好ましく、例えば炭素数１～６のアルコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯなどが挙げられる。溶血試薬におけるカチオン性界面活性剤の濃度は、その種類に応じて適宜決定できるが、例えば１０ｐｐｍ以上である。カチオン界面活性剤の濃度は、好ましくは４００ｐｐｍ以上であり、より好ましくは５００ｐｐｍ以上であり、さらに好ましくは６００ｐｐｍ以上である。また、溶血試薬におけるカチオン界面活性剤の濃度は１００００ｐｐｍ以下である。溶血試薬におけるカチオン界面活性剤の濃度は、好ましくは１０００ｐｐｍ以下であり、より好ましくは８００ｐｐｍ以下であり、さらに好ましくは７００ｐｐｍ以下である。
【0038】
試料及び溶血試薬は、上記のカチオン性界面活性剤に加えて、ノニオン性界面活性剤を含むことが好ましい。カチオン性界面活性剤とノニオン性界面活性剤とを含むことにより、カチオン性界面活性剤による有核細胞への過度の損傷を抑えることができる。ノニオン性界面活性剤としては、例えば、下記の式（Ｖ）で表されるものが挙げられる。
【0039】
Ｒ１－Ｒ２－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－Ｈ （Ｖ）
（式（Ｖ）中、Ｒ１は、炭素数８以上２５以下のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基であり；Ｒ２は、酸素原子、－（ＣＯＯ）－又は下記の式（ＶＩ）：
（式（Ｖ）中、Ｒ１は、炭素数８以上２５以下のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基であり；Ｒ２は、酸素原子、－（ＣＯＯ）－又は下記の式（ＶＩ）：
【0040】
【化5】
【0041】
式（Ｖ）中、好ましくはｎが２３又は２５であり、より好ましくはｎが２３である。ｎが２３以上２５以下の場合、溶血試薬における式（Ｖ）で表されるノニオン界面活性剤の濃度は１７００ｐｐｍ以上であり、好ましくは１７５０ｐｐｍ以上である。また、ｎが２３以上２５以下の場合、試料における式（Ｉ）で表されるノニオン界面活性剤の濃度は２３００ｐｐｍ以下であり、好ましくは２２００ｐｐｍ以下である。
【0042】
ｎが３０である場合、溶血試薬における式（Ｖ）で表されるノニオン界面活性剤の濃度は１９００ｐｐｍ以上であり、好ましくは２０００ｐｐｍ以上であり、より好ましくは２１００ｐｐｍ以上である。また、ｎが３０である場合、試料における式（Ｖ）で表されるノニオン界面活性剤の濃度は２３００ｐｐｍ以下であり、好ましくは２２００ｐｐｍである。
【0043】
式（Ｖ）で表されるノニオン界面活性剤の具体例としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンステロール、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、及びそれらの組み合わせなどが挙げられる。それらの中でも、ポリオキシエチレンアルキルエーテルが好ましい。ポリオキシエチレンアルキルエーテルとしては、例えば、ポリオキシエチレン（２３）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（２５）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（３０）セチルエーテルが挙げられる。より好ましくは、ポリオキシエチレン（２３）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（２５）セチルエーテル及びそれらの組み合わせであり、さらに好ましくはポリオキシエチレン（２３）セチルエーテルである。試料及び溶血試薬に含まれるノニオン界面活性剤は１種でもよいし、２種以上でもよい。溶血試薬は、式（Ｖ）で表されるノニオン界面活性剤以外のノニオン界面活性剤をさらに含んでいてもよい。
【0044】
試料及び溶血試薬は、ｐＨを一定にするための緩衝物質が含まれていてもよい。例えば、無機酸塩類、有機酸塩類、グッドの緩衝剤、それらの組み合わせなどが挙げられる。無機酸塩類としては、例えば、リン酸塩、ホウ酸塩、それらの組み合わせなどが挙げられる。有機酸塩類としては、クエン酸塩、リンゴ酸塩、それらの組み合わせなどが挙げられる。グッドの緩衝剤としては、例えば、ＭＥＳ、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ－Ｐｒｏｐａｎｅ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＰＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｔｒｉｓ、Ｂｉｃｉｎｅ、ＴＡＰＳ、それらの組み合わせなどが挙げられる。
【0045】
試料及び溶血試薬は、芳香族有機酸をさらに含んでいてもよい。本明細書において「芳香族有機酸」とは、分子中に少なくとも１つの芳香環を有する酸及びその塩を意味する。芳香族有機酸としては、例えば、芳香族カルボン酸、芳香族スルホン酸などが挙げられる。芳香族カルボン酸としては、例えば、フタル酸、安息香酸、サリチル酸、馬尿酸、それらの塩、それらの組み合わせなどが挙げられる。芳香族スルホン酸としては、例えば、ｐ－アミノベンゼンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、それらの塩、それらの組み合わせなどが挙げられる。試料及び溶血試薬に含まれる芳香族有機酸は１種でもよいし、２種以上でもよい。芳香族有機酸は、緩衝作用を示す場合がある。緩衝作用を示す芳香族有機酸を用いる場合、緩衝剤の添加は任意であり、上記の緩衝剤と組み合わせてもよい。
【0046】
溶血試薬における芳香族有機酸の濃度は２０ｍＭ以上であり、好ましくは２５ｍＭ以上である。また、溶血試薬における芳香族有機酸の濃度は５０ｍＭ以下であり、好ましくは４５ｍＭ以下である。
【0047】
溶血試薬のｐＨは特に限定されないが、例えば５．５以上である。溶血試薬のｐＨは、好ましくは５．７以上であり、より好ましくは５．９以上である。また、溶血試薬のｐＨは、例えば７．２以下であり、好ましくは６．９以下であり、より好ましくは６．６以下である。ｐＨの調整には、公知の塩基（水酸化ナトリウムなど）や酸（塩酸など）を用いることができる。
【0048】
溶血試薬の浸透圧は特に限定されないが、赤血球の溶血効率の観点から１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ以下が好ましく、１３０ｍＯｓｍ／ｋｇ以下がより好ましく、１１０ｍＯｓｍ／ｋｇ以下が最も好ましい。浸透圧の調整には、適切な浸透圧調整剤を添加してもよい。浸透圧調整剤としては、例えば、糖、アミノ酸、有機溶媒、塩化ナトリウム、それらの組み合わせなどが挙げられる。
【0049】
溶血試薬として、カチオン性界面活性剤を含む市販の溶血試薬を用いてもよい。例えば、ライザセルＷＤＦ（シスメックス株式会社）、ライザセルＷＤＦＩＩ（シスメックス株式会社）などが挙げられる。
【0050】
（試料）
試料は、骨髄液と、蛍光色素を含む染色試薬とを混合することにより調製できる。好ましくは、骨髄液と、蛍光色素を含む染色試薬と、カチオン性界面活性剤を含む溶血試薬とを混合することにより、試料を調製する。溶血試薬を用いる場合、カチオン性界面活性剤の作用により、骨髄液中の有核細胞は、蛍光色素で染色可能な状態となる。蛍光色素で染色可能な状態とは、細胞の細胞膜に、蛍光色素が透過できる程度の損傷を与えた状態をいう。骨髄液に赤血球が混入していた場合、カチオン性界面活性剤の作用により、赤血球は溶解される。カチオン性界面活性剤の作用により、赤血球と同様に、赤芽球系細胞の細胞膜も破壊されるが、赤芽球系細胞の細胞核は保たれる。そのため、赤芽球系細胞は、蛍光色素で染色可能な状態となる。
試料は、骨髄液と、蛍光色素を含む染色試薬とを混合することにより調製できる。好ましくは、骨髄液と、蛍光色素を含む染色試薬と、カチオン性界面活性剤を含む溶血試薬とを混合することにより、試料を調製する。溶血試薬を用いる場合、カチオン性界面活性剤の作用により、骨髄液中の有核細胞は、蛍光色素で染色可能な状態となる。蛍光色素で染色可能な状態とは、細胞の細胞膜に、蛍光色素が透過できる程度の損傷を与えた状態をいう。骨髄液に赤血球が混入していた場合、カチオン性界面活性剤の作用により、赤血球は溶解される。カチオン性界面活性剤の作用により、赤血球と同様に、赤芽球系細胞の細胞膜も破壊されるが、赤芽球系細胞の細胞核は保たれる。そのため、赤芽球系細胞は、蛍光色素で染色可能な状態となる。
【0051】
蛍光色素は、有核細胞の損傷した細胞膜から細胞内に入り、細胞核内の核酸を染色できる。染色された有核細胞は蛍光の放出が可能となり、ＦＣＭによる測定で蛍光信号情報が取得され得る。上記のように、分化早期幼若顆粒球、分化早期赤芽球、芽球、巨核球系細胞及び形質細胞は核酸を多く含むので、強く染色されて強い蛍光を発する。これらの有核細胞に比べて、分化後期幼若顆粒球、分化後期赤芽球、成熟白血球及び成熟巨核球は弱く染色される。赤血球、血球ゴースト、脂質粒子などの核を有なさい細胞及び粒子は、ほとんど染色されない。
【0052】
蛍光色素及びカチオン性界面活性剤を含む一つの試薬を用いる場合、骨髄液と試薬との混合比は、体積比で表して、通常１：５～５００であり、好ましくは１：１０～１００である。蛍光色素を含む染色試薬とカチオン性界面活性剤を含む溶血試薬とを用いる場合、骨髄液と染色試薬と溶血試薬の混合比は、体積比で表して、通常１：１～１０：５～５００であり、好ましくは１：１～５：１０～１００である。骨髄液と各試薬とを混合した後、混合物を所定の条件下でインキュベートすることが好ましい。所定の条件としては、例えば１５～５０℃、好ましくは３０～４５℃の温度で、５～１２０秒間、好ましくは５～３０秒間インキュベートする条件が挙げられる。試料の調製は、用手法で行ってもよいし、試料調製部を備えた分析装置により行ってもよい。
【0053】
（ＦＣＭ測定）
ＦＣＭによる測定では、試料に光を照射して、当該試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する。具体的には、まず、試料をＦＣＭのフローセルに導入し、当該試料中の一つ一つの粒子がフローセルを通過するときに各粒子に光を照射する。そして、個々の粒子から発せられる光を測定して、光学的情報を取得する。粒子から発せられる光は、蛍光色素に由来する蛍光と、散乱光である。散乱光としては、前方散乱光（例えば、受光角度が０度から約２０度の散乱光）及び側方散乱光（例えば、受光角度が約２０度から約９０度の散乱光）が挙げられる。光学的情報として、蛍光信号情報及び散乱光情報を取得することが好ましい。散乱光情報として、側方散乱光情報及び前方散乱光情報の少なくとも１つを取得することが好ましく、側方散乱光情報及び前方散乱光情報の両方を取得することが特に好ましい。
ＦＣＭによる測定では、試料に光を照射して、当該試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する。具体的には、まず、試料をＦＣＭのフローセルに導入し、当該試料中の一つ一つの粒子がフローセルを通過するときに各粒子に光を照射する。そして、個々の粒子から発せられる光を測定して、光学的情報を取得する。粒子から発せられる光は、蛍光色素に由来する蛍光と、散乱光である。散乱光としては、前方散乱光（例えば、受光角度が０度から約２０度の散乱光）及び側方散乱光（例えば、受光角度が約２０度から約９０度の散乱光）が挙げられる。光学的情報として、蛍光信号情報及び散乱光情報を取得することが好ましい。散乱光情報として、側方散乱光情報及び前方散乱光情報の少なくとも１つを取得することが好ましく、側方散乱光情報及び前方散乱光情報の両方を取得することが特に好ましい。
【0054】
蛍光信号情報及び散乱光情報は、蛍光信号及び散乱光信号のピーク値（パルスのピークの高さ）、パルス面積、パルス幅、透過率、ストークスシフト、比率、経時変化、それらに相関する値などが挙げられる。蛍光信号情報は、有核細胞中の核酸を染色した蛍光色素の量を反映する情報であれば特に限定されない。蛍光情報としては、蛍光信号のピーク値（以下、「蛍光信号強度」とも呼ぶ）が好ましい。側方散乱光情報は、細胞構造の複雑性、顆粒特性、核構造、分葉度などの内部情報を反映する情報であれば特に限定されない。前方散乱光情報は、細胞の大きさを反映する情報であれば特に限定されない。側方散乱光情報としては、側方散乱光信号のピーク値（以下、「側方散乱光強度」とも呼ぶ）が好ましい。前方散乱光情報としては、前方散乱光信号のピーク値（以下、「前方散乱光強度」とも呼ぶ）が好ましい。
【0055】
骨髄液のＦＣＭ測定により取得した光学的情報に基づいて、スキャッタグラムを作成してもよい。スキャッタグラムでは、例えば、横軸に側方散乱光情報をとり、縦軸に蛍光信号情報をとった二次元平面上に、測定された個々の粒子がドットとして表示される。
【0056】
ＦＣＭは特に限定されず、市販の自動血球分析装置を用いてもよい。そのような分析装置としては、例えばシスメックス株式会社のＸＲシリーズなどが挙げられる。ＦＣＭの光源は特に限定されず、蛍光色素の励起に適した波長の光源を適宜選択できる。光源としては、例えば、青色半導体レーザ、赤色半導体レーザ、アルゴンレーザ、Ｈｅ－Ｎｅレーザ、水銀アークランプなどが使用される。
【0057】
本実施形態の分析方法では、有核細胞を計数することが好ましい。本明細書において「有核細胞の数」は、白血球系細胞、赤芽球系細胞、巨核球系細胞、成熟巨核球及び形質細胞の数の合計をいう。有核細胞を計数する方法自体は公知であり、有核細胞の数は、試料をＦＣＭで測定して取得した光学的情報に基づいて取得できる。例えば、試料中の粒子から、赤血球、赤血球ゴースト及び脂質粒子などの核を有さない細胞及び粒子を除外することで、有核細胞を計数できる。核を有さない細胞及び粒子の蛍光信号強度は非常に低いので、蛍光信号強度に基づいて、これらを除外できる。有核細胞の計数は、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。そのような解析ソフトウェアは公知であり、例えばＦｌｏｗｊｏ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）が挙げられる。
【0058】
（第１の実施形態）
本実施形態の分析方法では、蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する。そして、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。対象細胞を計数し、これに基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する実施形態を、「第１の実施形態」とも呼ぶ。本明細書において「対象細胞」とは、分化早期幼若顆粒球、分化早期赤芽球、芽球、巨核球系細胞及び形質細胞をいう。上述のとおり、これらの有核細胞は、他の有核細胞と比べ、核酸量が多い細胞である。蛍光信号情報に対応する閾値は、上記の対象細胞と、それ以外の粒子との切り分けが可能な値である。対象細胞と、蛍光信号情報に対応する閾値との関係について、図１を参照して以下に説明する。
本実施形態の分析方法では、蛍光信号情報が閾値以上である粒子を対象細胞として計数する。そして、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。対象細胞を計数し、これに基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する実施形態を、「第１の実施形態」とも呼ぶ。本明細書において「対象細胞」とは、分化早期幼若顆粒球、分化早期赤芽球、芽球、巨核球系細胞及び形質細胞をいう。上述のとおり、これらの有核細胞は、他の有核細胞と比べ、核酸量が多い細胞である。蛍光信号情報に対応する閾値は、上記の対象細胞と、それ以外の粒子との切り分けが可能な値である。対象細胞と、蛍光信号情報に対応する閾値との関係について、図１を参照して以下に説明する。
【0059】
図１は、骨髄液のＦＣＭ測定により取得した蛍光信号情報及び散乱光情報に基づくスキャッタグラムの一例である。図１では、スキャッタグラムの横軸は側方散乱光強度であり、縦軸は蛍光信号強度である。図１では、成熟白血球は、リンパ球の集団、単球の集団、好中球の集団、好酸球の集団及び好塩基球の集団の５種の亜集団に分類されているが、本発明はこれに限定されない。成熟白血球は、リンパ球の集団、単球の集団及び成熟顆粒球の集団の３種の亜集団に分類されてもよいし、リンパ球の集団、単球の集団、好中球と好塩基球の集団、及び好酸球の集団の４種の亜集団に分類されてもよい。スキャッタグラムにおける各細胞の集団の分類は、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。図１中、スキャッタグラムの二次元平面を横切る直線（以下、「横線」とも呼ぶ）は、蛍光信号強度に対する閾値を示す。対象細胞である分化早期幼若顆粒球、分化早期赤芽球、芽球、巨核球系細胞及び形質細胞は核酸量が多いので、蛍光信号強度が高くなる。それゆえ、これらの細胞は、スキャッタグラムにおいて蛍光信号強度が高い領域において、それぞれの集団を形成して分布する。芽球の集団と分化早期赤芽球の集団は、出現する領域が重なっている。一方、分化後期赤芽球、分化後期幼若顆粒球、リンパ球、単球、好中球、好酸球、好塩基球及び未成熟好酸球は、核酸量が比較的少ないので、蛍光信号強度が低くなる。それゆえ、これらの細胞は、スキャッタグラムにおいて蛍光信号強度が低い領域において、それぞれの集団を形成して分布する。リンパ球及び単球の集団と、分化後期赤芽球の集団は、出現する領域が重なっている。ここで、図１中の横線のように、蛍光信号強度に対応する閾値でスキャッタグラムの二次元平面を区切ると、対象細胞である細胞群と、対象細胞ではない細胞群とを切り分けることができる。蛍光信号情報に対応する閾値は、固定の値を用いてもよいし、検体毎に可変に設定されてもよい。
【0060】
蛍光信号情報に対応する閾値は、例えば、骨髄液中の成熟白血球の９５％以上を除外できる値を閾値として定義することができる。このような閾値の一例が図１に示したスキャッタグラム上の横線である。図１では、説明のため、分化早期幼若顆粒球の集団と、分化後期幼若顆粒球の集団とを切り離して表している。実際の骨髄液のスキャッタグラムでは、これらの幼若顆粒球の集団は連続的に出現し、明確に切り分けられない場合がある。このことは、分化早期赤芽球の集団及び分化後期赤芽球の集団についても同様である。よって、蛍光信号情報に対応する閾値には、固定の値を用いることが好ましい。ここで、ＦＣＭは、蛍光及び散乱光のアナログ信号を所定のサンプリングレートでＡ／Ｄ変換して、デジタル信号を生成する。このとき、８ビットのデータでデジタル信号が表される場合、蛍光信号強度及び側方散乱光強度は、それぞれ０～２５５チャンネルの２５６階調で表示される。チャンネルは、デジタル信号の強度の単位である。蛍光強度を０～２５５チャンネルの２５６階調で表した場合に骨髄液中の成熟白血球の９５％以上を除外できる閾値として、例えば１００ｃｈの蛍光信号強度を設定できる。「ｃｈ」はチャンネルを表す。すなわち、蛍光信号情報に対応する閾値として、１００ｃｈの蛍光信号強度を設定できる。
【0061】
あるいは、蛍光信号情報に対応する閾値は、例えば図１に示すように、蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づく二次元平面上に試料中の粒子の分布を描いたとき、試料中の単球集団と交わるが、リンパ球集団とは交わらない横線として表される値として定義してもよい。この場合の蛍光信号情報に対応する閾値は、例えば、少なくとも次の２つの条件を満たす値である：
（１）リンパ球集団の蛍光信号強度の最大値より大きい；
（２）単球集団の蛍光信号強度の最大値より小さい。
より好ましくは、蛍光信号情報に対応する閾値は、さらに（３）単球集団の統計的代表値より大きい、という条件も満たす値である。この場合の統計的代表値は、例えば平均値、中央値又は最頻値である。上記の条件における最大値は、これに代えて各細胞集団の蛍光信号強度の大きい部分集団の代表値を用いてもよい。例えば、各細胞集団の蛍光信号強度の上位５％の平均値、中央値、又は最頻値であってもよい。
（１）リンパ球集団の蛍光信号強度の最大値より大きい；
（２）単球集団の蛍光信号強度の最大値より小さい。
より好ましくは、蛍光信号情報に対応する閾値は、さらに（３）単球集団の統計的代表値より大きい、という条件も満たす値である。この場合の統計的代表値は、例えば平均値、中央値又は最頻値である。上記の条件における最大値は、これに代えて各細胞集団の蛍光信号強度の大きい部分集団の代表値を用いてもよい。例えば、各細胞集団の蛍光信号強度の上位５％の平均値、中央値、又は最頻値であってもよい。
【0062】
あるいは、蛍光信号情報に対応する閾値は、例えば、健常人の末梢血中の有核細胞の母集団Ｘに対する、任意の値以上の蛍光信号情報を有する有核細胞の集団Ｙの比率により定義してもよい。具体的には、当該比率が所定の範囲、例えば０．１％以上１０％以下、より好ましくは１％以上９％以下、さらに好ましくは２．５％以上５％以下となるような蛍光信号情報の任意の値を、蛍光信号情報に対応する閾値として定義してもよい。この定義の場合、健常人の末梢血（以下、「正常血液」とも呼ぶ）をＦＣＭで測定した結果に基づいて、蛍光信号情報に対応する閾値を次のように決定してもよい。まず、正常血液と上記の蛍光色素とを含む対照試料を、骨髄液と同様にＦＣＭで測定して、蛍光信号情報及び側方散乱光情報を取得する。正常血液は、骨髄液よりも入手及びＦＣＭ測定が容易であるので、対照試料に適している。対照試料は複数であることが好ましい。例えば、少なくとも２０の対照試料、好ましくは２０以上４０以下の対照試料をＦＣＭで測定する。複数の対照試料は、複数の正常血液（例えば２０検体）のそれぞれから調製される。対照試料は、上記のカチオン性界面活性剤をさらに含むことが好ましい。より好ましくは、対照試料は、健常人の末梢血と、上記の染色試薬と、上記の溶血試薬とを混合することにより調製される。蛍光信号情報としては、蛍光信号強度が好ましい。側方散乱光情報としては、散乱光強度が好ましい。次いで、それらの光学的情報に基づいて有核細胞を選別し、有核細胞の数を取得する。さらに、それらの光学的情報に基づいてスキャッタグラムを作成し、成熟白血球を上記の３～５種の亜集団に分類してもよい。ここで、任意の蛍光信号強度を暫定的閾値として設定する。暫定的閾値は、例えば、単球の集団の蛍光信号強度より高い値から選択できる。ここで、スキャッタグラム上の細胞集団の蛍光信号強度は、当該集団に含まれる細胞の蛍光信号強度の統計学的代表値であり得る。統計的代表値としては、例えば平均値、中央値、最頻値、四分位点などが挙げられる。そのような統計的代表値は、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより取得できる。暫定的閾値の設定後、複数の測定試料のそれぞれについて、当該暫定的閾値以上の蛍光信号強度を有する細胞を計数する。そして、有核細胞の数に対する、暫定的閾値以上の蛍光信号強度を有する細胞の比率を算出する。複数の測定試料における当該比率の中央値を取得する。中央値は、例えばＥｘｃｅｌ（登録商標）のような公知の表計算ソフトにより取得できる。中央値が、例えば２．５％以上５％以下であるとき、暫定的閾値を、骨髄液のＦＣＭ測定における蛍光信号情報に対応する閾値として設定できる。あるいは、暫定的閾値の設定後、次のようにして閾値を設定してもよい。複数の測定試料のそれぞれについて、単球集団の側方蛍光強度の第一四分位点と第三四分位点を求め、複数の検体測定において第一四分位点ならびに第三四分位点をそれぞれ平均し四分位範囲を算出し、中央値を含む四分位範囲（第一四分位点から第三四分位点までの区間：ＩＱＲ）を取得する。この様に設定した単球集団の平均された四分位範囲に含まれる任意の暫定的閾値を、骨髄液のＦＣＭ測定における蛍光信号情報に対応する所定の閾値としてもよい。
【0063】
対象細胞の計数は、ＦＣＭで測定した試料中の全ての粒子の中から、蛍光信号情報に対応する閾値以上である粒子を抽出し、その数をカウントすることにより行われる。横軸に側方散乱光情報をとり、縦軸に蛍光信号情報をとったスキャッタグラムを作成している場合、蛍光信号情報に対応する閾値以上の領域（以下、「第１の領域」とも呼ぶ）に含まれる粒子を対象細胞として特定し、その数をカウントしてもよい。例えば、図１のスキャッタグラムでは、第１の領域は、蛍光信号情報に対応する閾値を示す横線で区切られた二次元平面の上側の領域である。対象細胞の計数は、例えば、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。
【0064】
あるいは、第１の領域を以下の工程により特定して、蛍光信号情報に対応する閾値を決定してもよい。具体的には、その第１の領域の最も低い蛍光信号強度を、蛍光信号情報に対する閾値として設定できる。第１の領域を特定する各工程について説明する。まず、正常血液と上記の蛍光色素とを含む対照試料を、骨髄液と同様にＦＣＭで測定して、蛍光信号情報及び側方散乱光情報を取得する。対照試料は１つでもよいし、複数でもよい。好ましくは、複数の対照試料を測定する。蛍光信号情報としては、蛍光信号強度が好ましい。側方散乱光情報としては、散乱光強度が好ましい。次いで、取得した蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、スキャッタグラムを作成する。作成したスキャッタグラムにおいて、成熟白血球の９５％以上が除外され、且つ蛍光信号強度が単球の集団の蛍光信号強度以上である領域を、第１の領域として特定する。このようにして特定した第１の領域は、例えば、図２に示される破線で囲まれた領域である。図２を参照して、第１の領域から成熟白血球の９５％以上が除外されている限り、第１の領域には単球の一部が出現してもよい。正常血液のＦＣＭ測定に基づいて特定した第１の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第１の領域は、上記の対象細胞が出現する領域を包含するか又は重複し得る。図２中の矢印が示す、第１の領域の最も低い蛍光信号強度を、骨髄液のＦＣＭ測定における蛍光信号情報に対応する閾値として設定できる。
【0065】
本明細書において「健常人の末梢血」とは、健常人から採取され、ＥＤＴＡ－２Ｋが添加された末梢血であって、各種の血球数及びヘモグロビン濃度が下記の基準を満たす末梢血をいう。
・白血球数 ２５００／μＬ以上かつ１８０００／μＬ以下
・ヘモグロビン １０ｇ／ｄＬ以上
・血小板数 ６００００／μＬ以上かつ６０００００／μＬ以下
・好中球数 １０００／μＬ以上かつ１１０００／μＬ以下
・リンパ球数 ８００／μＬ以上かつ４０００／μＬ以下
・単球数 １０００／μＬ以下
・好酸球数 ７００／μＬ以下
・好塩基球数 ２００／μＬ以下
・白血球数 ２５００／μＬ以上かつ１８０００／μＬ以下
・ヘモグロビン １０ｇ／ｄＬ以上
・血小板数 ６００００／μＬ以上かつ６０００００／μＬ以下
・好中球数 １０００／μＬ以上かつ１１０００／μＬ以下
・リンパ球数 ８００／μＬ以上かつ４０００／μＬ以下
・単球数 １０００／μＬ以下
・好酸球数 ７００／μＬ以下
・好塩基球数 ２００／μＬ以下
【0066】
第１の実施形態では、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。造血器腫瘍は特に限定されず、例えば急性白血病、形質細胞腫、成熟リンパ腫などが挙げられる。これらの中でも、急性白血病は、進行が早く、致死性の腫瘍であるので特に重要である。造血器腫瘍のスクリーニングの指標は、例えば、被検者に造血器腫瘍が発生しているか又はその疑いがあるか、あるいは造血器腫瘍の発生につながる前兆があるかを示唆する数値である。対象細胞の数自体を造血器腫瘍のスクリーニングの指標として用いてもよい。好ましくは、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、有核細胞の数に対する対象細胞の数の比率を取得する。この比率を、以下「第１の比率」とも呼ぶ。有核細胞の数は、上述のように、試料のＦＣＭ測定により取得した光学的情報に基づいて計数した数である。第１の比率は、下記の式（Ａ）から算出された値である。
【0067】
（第１の比率）＝［（対象細胞の数）／（有核細胞の数）］×１００ ・・・（Ａ）
【0068】
試料中の有核細胞の数を基準として、対象細胞の数の変化の傾向が示唆される限り、上記の式（Ａ）から算出された値に基づく値も、第１の比率に包含される。上記の式（Ａ）から算出された値に基づく値とは、例えば、式（Ａ）において、任意の係数及び／又は定数を用いて得られた値が挙げられる。式（Ａ）から算出された値を１００で除算して、パーセンテージを実数で示してもよい。式（Ａ）から算出された値に任意の定数を足したり引いたりしてもよい。
【0069】
第１の実施形態では、第１の比率と閾値との比較により、骨髄液に異常があるか否かについて判定を行ってもよい。第１の比率が上記の式（Ａ）から算出された値であるとき、第１の比率に対応する閾値は、例えば、２０～４０％の間の任意の値であり、好ましくは２５～３５％の間の任意の値であり、より好ましくは３０％であり得る。例えば、第１の比率と閾値とを比較して、第１の比率が閾値以上であるとき、骨髄液に異常があると判定する。この場合、被検者の骨髄液では、正常骨髄液よりも芽球又は形質細胞が増加していることが示唆される。これは、急性白血病又は形質細胞腫が発生しているか又はその疑いがある。一方、第１の比率が閾値より低いとき、骨髄液に異常がないと判定する。この場合、被検者には造血器腫瘍の疑いがないことが示唆される。
【0070】
第１の実施形態では、第１の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示を提供してもよい。識別可能な表示は、ＦＣＭに搭載されているか又は通信可能に接続されている表示装置の画面に表すことが好ましい。表示装置としては、例えば、液晶ディスプレイ、プラズマディスプレイ、ＣＲＴディスプレイなどのディスプレイが挙げられる。表示装置の画面には、識別可能な表示として、例えば、第１の比率自体及び／又は当該比率が閾値以上であることを、他の文字及び数値と区別できる形式で表示される。例えば、表示装置の画面上で、第１の比率の数値を、他の数値とは異なるサイズや色で表示すること、第１の比率に下線やフラグ（ｆｌａｇ）などの強調表示を付すことなどが挙げられる。あるいは、第１の比率が閾値以上であることを、表示装置の画面上にポップアップメッセージで表示すること、特記事項を示すエリアに表示することなどが挙げられる。第１の比率が閾値より低い場合は、第１の比率を通常に表示してもよい。例えば、表示装置の画面上で、第１の比率の数値を、別の数値と同様に表示してもよい。
【0071】
そのような識別可能な表示の意義及び効果として、当該表示を見た医師や検査者などの医療従事者に対して、骨髄液に異常があるか否かの判定を補助する情報を提供できる。例えば、識別可能な表示を見た医療従事者は、骨髄液が急性白血病又は形質細胞腫の疑いのある検体として認識できる。また、必要に応じて、骨髄液に追加の検査を行うことや、被検者の治療、入院又は専門病院への紹介の手続を開始できる。
【0072】
第１の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示として、骨髄液が、造血器腫瘍に関する検査を優先的に行う必要のある検体であることを示してもよい。検査としては、例えば、骨髄像検査、遺伝子検査及び抗体パネル検査が挙げられる。それらの中でも、骨髄像検査が特に好ましい。上述のように、第１の比率が閾値以上である場合、急性白血病又は形質細胞腫が疑われる。そのような識別可能な表示の意義及び効果として、医師や検査者などは、当該骨髄液を他の検体よりも優先して検査を行うよう手配できる。
【0073】
（第２の実施形態）
急性白血病では、がん化した芽球が異常に増殖することが知られている。また、形質細胞腫では、骨髄液中の形質細胞の増加が見られる。芽球及び形質細胞はいずれも単核細胞である。よって、さらなる実施形態では、対象細胞のうち、単核細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得してもよい。この実施形態を「第２の実施形態」とも呼ぶ。単核細胞である対象細胞を、以下「対象単核細胞」とも呼ぶ。上記のとおり、対象細胞は、蛍光信号情報が閾値以上である粒子である。よって、第２の実施形態では、対象細胞の計数工程において、蛍光信号情報が閾値以上である単核細胞を、対象単核細胞として計数する。ここで、有核細胞のうち、単核細胞とは、分化早期赤芽球、芽球、形質細胞、単球、リンパ球及び分化後期赤芽球である。よって、対象単核細胞は、分化早期赤芽球、芽球及び形質細胞である。なお、有核細胞のうち、分化早期幼若顆粒球、巨核球系細胞、成熟巨核球、分化後期幼若顆粒球、成熟顆粒球、未成熟好酸球及び未成熟好塩基球は、多形核細胞である。
急性白血病では、がん化した芽球が異常に増殖することが知られている。また、形質細胞腫では、骨髄液中の形質細胞の増加が見られる。芽球及び形質細胞はいずれも単核細胞である。よって、さらなる実施形態では、対象細胞のうち、単核細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得してもよい。この実施形態を「第２の実施形態」とも呼ぶ。単核細胞である対象細胞を、以下「対象単核細胞」とも呼ぶ。上記のとおり、対象細胞は、蛍光信号情報が閾値以上である粒子である。よって、第２の実施形態では、対象細胞の計数工程において、蛍光信号情報が閾値以上である単核細胞を、対象単核細胞として計数する。ここで、有核細胞のうち、単核細胞とは、分化早期赤芽球、芽球、形質細胞、単球、リンパ球及び分化後期赤芽球である。よって、対象単核細胞は、分化早期赤芽球、芽球及び形質細胞である。なお、有核細胞のうち、分化早期幼若顆粒球、巨核球系細胞、成熟巨核球、分化後期幼若顆粒球、成熟顆粒球、未成熟好酸球及び未成熟好塩基球は、多形核細胞である。
【0074】
第２の実施形態では、試料中の粒子の蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、対象単核細胞を計数してもよい。あるいは、対象細胞を計数した後、当該対象細胞の側方散乱光情報に基づいて、対象単核細胞を計数してもよい。
【0075】
ＦＣＭ測定において、側方散乱光は、細胞内の核及び顆粒などの内部情報を反映することが知られている。単核細胞は、多形核細胞に比べて、側方散乱光強度が低くなる傾向にある。よって、単核細胞の集団と多形核細胞の集団とは、蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて作成したスキャッタグラムにおいて、側方散乱光情報に基づく補助線により切り分けることができる。このことについて、図３Ａを参照して説明する。図３Ａでは、図１のスキャッタグラムに、斜線で示されるように、側方散乱光強度に基づく補助線を引いている。図３中、横線は、図１と同様、蛍光信号強度に対応する閾値を示す。図３Ａから分かるように、横線より上側の領域では、斜線は、芽球及び分化早期赤芽球の集団と、分化早期幼若顆粒球の集団とが切り分けている。また、横線より下側の領域では、斜線は、単球及び分化後期赤芽球の集団の集団と、分化後期幼若顆粒球、好中球及び好塩基球の集団とを切り分けている。
【0076】
図３Ａに示されるように、骨髄液中の有核細胞を単核細胞と多形核細胞とに切り分ける斜線と、骨髄液中の成熟白血球の９５％以上を除外可能な蛍光信号強度に対応する閾値を示す横線とにより、スキャッタグラムの二次元平面は４つの領域に分けられる。第２の実施形態では、図３Ａのスキャッタグラムにおける、横線より上側で且つ斜線より左側の領域（破線で囲まれた領域）に出現する粒子を計数する。この領域には、蛍光信号情報が閾値以上である単核細胞、すなわち、芽球、分化早期赤芽球及び形質細胞が、それぞれの集団を形成して分布する。第２の実施形態では、試料中の粒子の蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、芽球、分化早期赤芽球及び形質細胞が出現する領域（以下、「第２の領域」とも呼ぶ）に含まれる粒子を、対象単核細胞として特定できる。対象単核細胞の計数は、例えば、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。
【0077】
図３Ａでは、説明のため、分化早期赤芽球及び芽球の集団と、分化早期幼若顆粒球の集団とを切り離して表している。実際の骨髄液のスキャッタグラムでは、これらの集団は連続的に出現し、明確に切り分けられない場合がある。このことは、単球及び分化後期赤芽球の集団の集団と、分化後期幼若顆粒球、好中球及び好塩基球の集団とについても同様である。第２の領域は、あらかじめ設定した領域を用いてもよいし、検体毎に可変に設定されてもよい。例えば、第２の領域は、正常骨髄液や急性白血病などの造血器腫瘍の骨髄液のＦＣＭ測定により得られた蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づくスキャッタグラムのデータを蓄積することにより、経験的に設定してもよい。あるいは、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づくスキャッタグラムの所定の座標から領域を設定してもよい。上述のとおり、ＦＣＭは、蛍光及び散乱光のアナログ信号を所定のサンプリングレートでＡ／Ｄ変換して、デジタル信号を生成する。このとき、８ビットのデータでデジタル信号が表される場合、スキャッタグラムにおいて蛍光信号強度及び側方散乱光強度の範囲は、それぞれ０～２５５ｃｈである。所定の座標は、Ｘ軸に側方散乱光強度をとり、Ｙ軸に蛍光信号強度をとったスキャッタグラムにおいて、次の４つの座標（Ｘ：Ｙ）＝（０ｃｈ：１００ｃｈ）、（１３５ｃｈ：１００ｃｈ）、（０ｃｈ：２５５ｃｈ）及び（１８０ｃｈ：２５５ｃｈ）でありえる。これら４つの座標で囲まれた領域を、第２の領域として設定できる。
【0078】
あるいは、第２の領域の４つの座標は、正常血液と上記の蛍光色素とを含む複数の対照試料の分析結果に基づいて設定してもよい。対照試料の数は少なくとも２０であり、好ましくは２０以上４０以下である。例えば、図３Ｂを参照して、点Ａ、点Ｂ、点Ｃ及び点Ｄで囲まれた領域を第２の領域とする。ここで、図３Ｂは、Ｘ軸に側方散乱光強度をとり、Ｙ軸に蛍光信号強度をとった正常血液のスキャッタグラムである。図３Ｂ中、スキャッタグラムの二次元平面を横切る直線は、蛍光信号強度に対応する閾値を示す直線である。この直線は、第１の実施形態で述べたように、対照試料の分析結果に基づいて設定できる。点ＡのＸ座標は、例えば、各検体の単球集団のＸ軸の中央値の平均値と好中球集団のＸ軸の中央値の平均値の間の任意の値と決定できる。点Ａは、蛍光信号強度に対する所定の閾値を示す直線上の点であるので、点ＡのＹ座標は、蛍光信号強度に対する所定の閾値と同じである。点ＢのＸ座標は、例えば、各検体の好中球集団のＸ軸の中央値の平均値と好酸球集団のＸ軸の中央値の平均値の間の任意の値と決定できる。点ＢのＹ座標は、図３Ｂのとおり、スキャッタグラムにおける蛍光信号強度の最大値である。点Ｃについては、図３Ｂのとおり、Ｘ座標は０であり、Ｙ座標は、スキャッタグラムにおける蛍光信号強度の最大値である。点Ｄは、点Ａと同様に、蛍光信号強度に対する所定の閾値を示す直線上の点である。よって、点Ｄについては、図３Ｂのとおり、Ｘ座標は０であり、Ｙ座標は、蛍光信号強度に対する所定の閾値と同じである。このようにして決定した４つの座標により特定される第２の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第２の領域は、上記の対象単核細胞が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0079】
あるいは、第２の領域は、第１の領域と同様に、正常血液と上記の蛍光色素とを含む対照試料の分析結果に基づいて設定してもよい。まず、第１の実施形態で述べたように、対照試料をＦＣＭで測定して、蛍光信号情報及び側方散乱光情報を取得する。対照試料の詳細は上記のとおりである。蛍光信号情報としては、蛍光信号強度が好ましい。側方散乱光情報としては、散乱光強度が好ましい。次いで、取得した蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、スキャッタグラムを作成する。作成したスキャッタグラムにおいて、成熟白血球の９５％以上が除外され、蛍光信号強度が、単球の集団の蛍光信号強度以上であり、且つ、側方散乱光強度が、好中球の集団の側方散乱光強度以下である領域を、第２の領域として特定する。スキャッタグラム上の細胞集団の蛍光信号強度及び側方散乱光強度は、当該集団に含まれる細胞の蛍光信号強度及び側方散乱光強度の統計学的代表値であり得る。統計的代表値は上記のとおりである。健常人の末梢血のＦＣＭ測定に基づいて特定した第２の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第２の領域は、上記の対象単核細胞が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0080】
第２の実施形態では、対象単核細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。造血器腫瘍及びそのスクリーニングの指標については、上記のとおりである。対象単核細胞の数自体を造血器腫瘍のスクリーニングの指標として用いてもよい。好ましくは、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、有核細胞の数に対する対象単核細胞の数の比率を取得する。この比率を、以下「第２の比率」とも呼ぶ。有核細胞の数は、上述のように、試料のＦＣＭ測定により取得した光学的情報に基づいて計数した数である。第２の比率は、下記の式（Ｂ）から算出された値である。
【0081】
（第２の比率）＝［（対象単核細胞の数）／（有核細胞の数）］×１００ ・・・（Ｂ）
【0082】
試料中の有核細胞の数を基準として、対象単核細胞の数の変化の傾向が示唆される限り、上記の式（Ｂ）から算出された値に基づく値も、第２の比率に包含される。上記の式（Ｂ）から算出された値に基づく値の例示については、上記の式（Ａ）から算出された値に基づく値と同様である。
【0083】
第２の実施形態では、第２の比率と閾値との比較により、骨髄液に異常があるか否かについて判定を行ってもよい。第２の比率が上記の式（Ｂ）から算出された値であるとき、第２の比率に対応する閾値は、例えば１０％～３０％の間の任意の値であり、好ましくは１５％～２５％の間の任意の値であり、より好ましくは２０％であり得る。例えば、第２の比率と、対応する所定の閾値とを比較して、第２の比率が閾値以上であるとき、骨髄液に異常があると判定する。この場合、被検者の骨髄液では、正常骨髄液よりも芽球又は形質細胞が増加していることが示唆される。これは、急性白血病又は形質細胞腫が発生しているか又はその疑いがある。一方、第２の比率が閾値より低いとき、骨髄液に異常がないと判定する。
【0084】
第２の実施形態では、第２の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示を提供してもよい。識別可能な表示は、第１の比率と同様に、表示装置の画面に表すことが好ましい。表示装置の画面には、例えば、第２の比率自体及び／又は当該比率が閾値以上であることを、他の文字及び数値と区別できる形式で表示される。表示装置及びその画面上の表示の態様は、第１の実施形態について述べたことと同様である。第２の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示として、骨髄液が、造血器腫瘍に関する検査を優先的に行う必要のある検体であることを示してもよい。当該検査については上記のとおりである。識別可能な表示の意義及び効果も、第１の実施形態について述べたことと同様である。
【0085】
（第３の実施形態）
上記のとおり、急性白血病では、がん化した芽球が異常に増殖する。さらなる実施形態では、対象細胞のうち、芽球の数に基づいて、造血器腫瘍（特に急性白血病）のスクリーニングの指標を取得してもよい。この実施形態を「第３の実施形態」とも呼ぶ。第３の実施形態では、対象細胞の計数工程において、芽球を計数する。
上記のとおり、急性白血病では、がん化した芽球が異常に増殖する。さらなる実施形態では、対象細胞のうち、芽球の数に基づいて、造血器腫瘍（特に急性白血病）のスクリーニングの指標を取得してもよい。この実施形態を「第３の実施形態」とも呼ぶ。第３の実施形態では、対象細胞の計数工程において、芽球を計数する。
【0086】
第３の実施形態では、試料中の粒子の光学的情報に基づいて、芽球を計数してもよい。あるいは、対象細胞を計数した後、当該対象細胞の光学的情報に基づいて、芽球を計数してもよい。好ましくは、試料中の粒子の光学的情報に基づいて、芽球を計数する。第３の実施形態では、光学的情報として、蛍光信号情報、側方散乱光情報及び前方散乱光情報を用いる。例えば、まず、試料中の粒子の蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、芽球を含む粒子を選別する。芽球を含む粒子には、芽球の他に、分化早期赤芽球及び形質細胞を含み得る。芽球を含む粒子からの芽球の選別は、当該粒子の前方散乱光情報に基づいて行われる。この点については後述する。
【0087】
上述の芽球を含む粒子の選別について、図４Ａを参照して説明する。図４Ａでは、図１のスキャッタグラムにおいて、芽球を含む粒子が出現する領域（以下、「第３の領域」とも呼ぶ）を、破線で示している。図４Ａ中、横線は、図１と同様、蛍光信号強度に対応する閾値を示す。第３の実施形態では、図４Ａのスキャッタグラムにおける破線で囲まれた領域に出現する粒子を、芽球を含む粒子として特定できる。図４Ａ中、破線で囲まれた領域は、横線よりも下側の領域の一部を包含している。これは、急性白血病の検体のように芽球が増殖した骨髄液では、芽球の集団が、単球の集団が出現する領域にまで分布する場合があり得ることによる。芽球を含む粒子の選別は、例えば、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。
【0088】
第３の領域は、あらかじめ設定した領域を用いてもよいし、検体毎に可変に設定されてもよい。例えば、第３の領域は、正常骨髄液や急性白血病などの造血器腫瘍の骨髄液のＦＣＭ測定により得られた蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づくスキャッタグラムのデータを蓄積することにより、経験的に設定してもよい。あるいは、蛍光信号強度及び側方散乱光強度がそれぞれ０～２５５チャンネルの範囲で表示されるスキャッタグラムに基づいて、第３の領域を決定してもよい。具体的には、当該スキャッタグラムにおいて、次の４つの座標（Ｘ：Ｙ）＝（８０ｃｈ：１００ｃｈ）、（１３０ｃｈ：８０ｃｈ）、（１８０ｃｈ：２５５ｃｈ）及び（１３０ｃｈ：２５５ｃｈ）で囲まれた領域を、第３の領域として設定できる。なお、Ｘは側方散乱光強度であり、Ｙは蛍光信号強度である。
【0089】
あるいは、第３の領域の４つの座標は、正常血液と上記の蛍光色素とを含む複数の対照試料の分析結果に基づいて、以下のように設定してもよい。対照試料の数は少なくとも２０であり、好ましくは２０以上４０以下である。例えば、図４Ｂを参照して、点Ｂ、点Ｅ、点Ｆ及び点Ｇで囲まれた領域を第３の領域とする。ここで、図４Ｂは、Ｘ軸に側方散乱光強度をとり、Ｙ軸に蛍光信号強度をとった正常血液のスキャッタグラムである。図４Ｂ中、スキャッタグラムの二次元平面を横切る直線は、蛍光信号強度に対応する閾値を示す直線である。この直線は、第１の実施形態で述べたように、対照試料の分析結果に基づいて設定できる。図４Ｂの点Ｂは、図３Ｂの点Ｂと同じであるので、点Ｂの座標は、第２の実施形態で述べたことと同様である。点ＥのＸ座標は、例えば、各検体の単球集団のＸ軸の中央値の平均値と好中球集団のＸ軸の中央値の平均値の間の任意の値と決定できる。点ＥのＹ座標は、図４Ｂのとおり、スキャッタグラムにおける蛍光信号強度の最大値である。点ＦのＸ座標は、例えば、各検体のリンパ球集団のＸ軸の中央値の平均値と単球集団のＸ軸の中央値の平均値の間の任意の値と決定できる。点Ｆは、蛍光信号強度に対応する閾値を示す直線上の点であるので、点ＦのＹ座標は、蛍光信号強度に対応する閾値と同じである。点ＧのＸ座標は、点ＥのＸ座標と同じであり得る。点ＧのＹ座標は、例えば、各検体の単球球集団の蛍光信号強度の０パーセンタイル値から第一四分位点（２５パーセンタイル値）の間の任意の値と決定できる。このようにして決定した４つの座標により特定される第３の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第３の領域は、上記の芽球が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0090】
あるいは、第３の領域は、第１の領域と同様に、正常血液と上記の蛍光色素とを含む対照試料の分析結果に基づいて設定してもよい。まず、第１の実施形態で述べたように、対照試料をＦＣＭで測定して、蛍光信号情報及び側方散乱光情報を取得する。対照試料の詳細は上記のとおりである。蛍光信号情報としては、蛍光信号強度が好ましい。側方散乱光情報としては、散乱光強度が好ましい。次いで、取得した蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、スキャッタグラムを作成する。作成したスキャッタグラムにおいて、成熟白血球の９５％以上が除外され、蛍光信号強度が、単球の集団の蛍光信号強度以上であり、且つ、側方散乱光強度が、リンパ球の集団の側方散乱光強度以上で好中球の集団の側方散乱光強度以下である領域を、第３の領域として特定する。スキャッタグラム上の細胞集団の蛍光信号強度及び側方散乱光強度は、当該集団に含まれる細胞の蛍光信号強度及び側方散乱光強度の統計学的代表値であり得る。統計的代表値は上記のとおりである。健常人の末梢血のＦＣＭ測定に基づいて特定した第３の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第３の領域は、上記の芽球を含む粒子が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0091】
上述のとおり、芽球を含む粒子には、芽球の他に、分化早期赤芽球及び形質細胞を含み得る。よって、第３の実施形態では、芽球を含む粒子から、当該粒子の前方散乱光情報に基づいて、芽球を選別する。ここで、前方散乱光は、ＦＣＭ測定において細胞のサイズを反映することが知られている。また、芽球のサイズは１０～２０μｍであることが知られている。例えば、蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて選別した芽球を含む粒子について、前方散乱光強度のヒストグラムを作成し、前方散乱光強度に基づいて、芽球のサイズに相当する集団を選別できる。ここで、ＦＣＭが前方散乱光のデジタル信号を８ビットのデータで表す場合、前方散乱光強度の範囲は０～２５５チャンネルである。この場合、前方散乱光強度のヒストグラムにおいて、５０ｃｈ以上１００ｃｈ以下の粒子を芽球として選別してもよい。
【0092】
第３の実施形態では、選別した芽球の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。造血器腫瘍及びそのスクリーニングの指標については、上記のとおりである。芽球の数自体を造血器腫瘍のスクリーニングの指標として用いてもよい。好ましくは、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、有核細胞の数に対する芽球の数の比率を取得する。この比率を、以下「第３の比率」とも呼ぶ。有核細胞の数は、上述のように、試料のＦＣＭ測定により取得した光学的情報に基づいて計数した数である。第３の比率は、下記の式（Ｃ）から算出された値である。
【0093】
（第３の比率）＝［（芽球の数）／（有核細胞の数）］×１００ ・・・（Ｃ）
【0094】
試料中の有核細胞の数を基準として、芽球の数の変化の傾向が示唆される限り、上記の式（Ｃ）から算出された値に基づく値も、第３の比率に包含される。上記の式（Ｃ）から算出された値に基づく値の例示については、上記の式（Ａ）から算出された値に基づく値と同様である。
【0095】
第３の実施形態では、第３の比率と閾値との比較により、骨髄液に異常があるか否かについて判定を行ってもよい。第３の比率が上記の式（Ｃ）から算出された値であるとき、第３の比率に対応する閾値は、例えば５％～２５％の間の任意の値であり、好ましくは１０％であり得る。例えば、第３の比率と閾値とを比較して、第３の比率が閾値以上であるとき、骨髄液に異常があると判定する。第３の比率が１０％以上であるとき、被検者の骨髄液では、正常骨髄液よりも芽球が増加していることが示唆される。これは、急性白血病の発生につながる前兆があるか、あるいは急性白血病が発生しているか又はその疑いがある。一方、第３の比率が閾値より低いとき、骨髄液に異常がないと判定する。この場合、急性白血病の発生につながる前兆も、急性白血病の疑いもないことが示唆される。
【0096】
また、第３の比率に対応する閾値は、例えば２０％でもよい。第３の比率が２０％以上であるとき、被検者の骨髄液では、芽球が顕著に増加していることが示唆される。これは、急性白血病が発生しているか又はその疑いがある。一方、第３の比率が２０％より低いとき、骨髄液に顕著な芽球の増加は認められず、急性白血病の疑いがないことが示唆される。
【0097】
第３の比率による骨髄液の異常の判定では、２つの閾値を用いてもよい。第３の比率が上記の式（Ｃ）から算出された値であるとき、例えば、第１の閾値を１０％とし、第２の閾値を２０％として判定を行う。具体的には、まず、第３の比率と第１の閾値とを比較しする。第３の比率が第１の閾値より低いとき、骨髄液に異常がないと判定する。第３の比率が第１の閾値以上であるときは、第３の比率と第２の閾値とを比較する。第３の比率が第２の閾値より低いとき、骨髄液に異常として、芽球の増加の疑いがあると判定する。第３の比率が第２の閾値以上であるとき、骨髄液の異常として、急性白血病の疑いがあると判定する。
【0098】
第３の実施形態では、第３の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示を提供してもよい。識別可能な表示は、第１の比率と同様に、表示装置の画面に表すことが好ましい。表示装置の画面には、例えば、第３の比率自体及び／又は当該比率が閾値以上であることを、他の文字及び数値と区別できる形式で表示される。表示装置及びその画面上の表示の態様は、第１の実施形態について述べたことと同様である。第３の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示として、骨髄液が、造血器腫瘍、特に急性白血病に関する検査を優先的に行う必要のある検体であることを示してもよい。当該検査については上記のとおりである。第３の実施形態では特に芽球を検出しているので、第３の比率が閾値以上である場合、表示装置の画面上に、例えば「Ｂｌａｓｔｏｓｉｓ？」のように、芽球の増加を示唆する標識を表示してもよい。識別可能な表示の意義及び効果は、第１の実施形態について述べたことと同様である。
【0099】
（第４の実施形態）
成熟リンパ腫では、骨髄液において、分化早期の単核細胞の数に比べて、リンパ球系の腫瘍細胞が増加することが知られている。さらなる実施形態では、対象単核細胞の数と、単核白血球及び分化後期赤芽球の数とに基づいて、成熟リンパ腫のスクリーニングに関する指標を取得してもよい。この実施形態を「第４の実施形態」とも呼ぶ。第４の実施形態では、対象細胞の計数工程において、対象単核細胞、単核白血球及び分化後期赤芽球を計数する。計数は、蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて行うことができる。単核白血球及び分化後期赤芽球は、蛍光信号情報が閾値より低い単核細胞である。図３Ａを参照して、スキャッタグラムでは、単核白血球及び分化後期赤芽球は、横線より下側で且つ斜線より左側の領域に含まれる粒子として選別できる。当該領域に含まれる粒子を計数することで、単核白血球及び分化後期赤芽球を計数できる。単核白血球と分化後期赤芽球とが区別されてそれぞれ計数されてもよい。あるいは、単核白血球及び分化後期赤芽球を含む一つの細胞群として計数されてもよい。対象単核細胞は、上述のとおり、第２の領域に含まれる粒子として計数できる。計数は、例えば、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。
成熟リンパ腫では、骨髄液において、分化早期の単核細胞の数に比べて、リンパ球系の腫瘍細胞が増加することが知られている。さらなる実施形態では、対象単核細胞の数と、単核白血球及び分化後期赤芽球の数とに基づいて、成熟リンパ腫のスクリーニングに関する指標を取得してもよい。この実施形態を「第４の実施形態」とも呼ぶ。第４の実施形態では、対象細胞の計数工程において、対象単核細胞、単核白血球及び分化後期赤芽球を計数する。計数は、蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて行うことができる。単核白血球及び分化後期赤芽球は、蛍光信号情報が閾値より低い単核細胞である。図３Ａを参照して、スキャッタグラムでは、単核白血球及び分化後期赤芽球は、横線より下側で且つ斜線より左側の領域に含まれる粒子として選別できる。当該領域に含まれる粒子を計数することで、単核白血球及び分化後期赤芽球を計数できる。単核白血球と分化後期赤芽球とが区別されてそれぞれ計数されてもよい。あるいは、単核白血球及び分化後期赤芽球を含む一つの細胞群として計数されてもよい。対象単核細胞は、上述のとおり、第２の領域に含まれる粒子として計数できる。計数は、例えば、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。
【0100】
スキャッタグラムにおいて、単核白血球及び分化後期赤芽球が出現する領域（以下、「第４の領域」とも呼ぶ）は、第２の領域と同様、正常骨髄液や急性白血病などの造血器腫瘍の骨髄液のＦＣＭ測定により得られた蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づくスキャッタグラムのデータを蓄積することにより、経験的に設定してもよい。あるいは、蛍光信号強度及び側方散乱光強度がそれぞれ０～２５５チャンネルの範囲で表示されるスキャッタグラムに基づいて、第４の領域を決定してもよい。具体的には、当該スキャッタグラムにおいて、次の４つの座標（Ｘ：Ｙ）＝（０ｃｈ：０ｃｈ）、（０ｃｈ：１００ｃｈ）、（１３５ｃｈ：１００ｃｈ）及び（０ｃｈ：１００ｃｈ）で囲まれた領域を、第４の領域として設定できる。なお、Ｘは側方散乱光強度であり、Ｙは蛍光信号強度である。
【0101】
あるいは、第４の領域の４つの座標は、正常血液と上記の蛍光色素とを含む複数の対照試料の分析結果に基づいて設定してもよい。対照試料の数は少なくとも２０であり、好ましくは２０以上４０以下である。例えば、図４Ｃを参照して、点Ａ、点Ｄ、原点及び点Ｈで囲まれた領域を第４の領域とする。ここで、図４Ｃは、Ｘ軸に側方散乱光強度をとり、Ｙ軸に蛍光信号強度をとった正常血液のスキャッタグラムである。図４Ｃ中、スキャッタグラムの二次元平面を横切る直線は、蛍光信号強度に対応する閾値を示す直線である。この直線は、第１の実施形態で述べたように、対照試料の分析結果に基づいて設定できる。図４Ｃの点Ａ及び点Ｄは、図３Ｂの点Ａ及び点Ｄと同じであるので、これらの点の座標は、第２の実施形態で述べたことと同様である。点ＨのＸ座標は、直線ＢＡをＸ軸に向けて延長した線とＸ軸の交点と決定できる。点ＨのＹ座標は、図４Ｃのとおり、０である。このようにして決定した４つの座標により特定される第４領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第４の領域は、上記の単核白血球及び分化後期赤芽球が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0102】
あるいは、第４の領域は、第２の領域と同様に、健常人の末梢血と上記の蛍光色素とを含む対照試料についてのスキャッタグラムから設定してもよい。蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づくスキャッタグラムにおいて、単核白血球の９５％以上が含まれ、蛍光信号強度が、単球の集団の蛍光信号強度以下であり、且つ、側方散乱光強度が、好中球の集団の側方散乱光強度以下である領域を、第４の領域として特定する。健常人の末梢血のＦＣＭ測定に基づいて特定した第４の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第４の領域は、単核白血球及び分化後期赤芽球が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0103】
成熟リンパ腫のスクリーニングに関する指標を取得するため、有核細胞の数に対する、単核白血球及び分化後期赤芽球の数の比率を取得することが好ましい。この比率を、以下「第４の比率」とも呼ぶ。有核細胞の数は、上述のように、試料のＦＣＭ測定により取得した光学的情報に基づいて計数した数である。第４の比率は、下記の式（Ｄ）から算出された値である。
【0104】
（第４の比率）＝［（単核白血球及び分化後期赤芽球の数）／（有核細胞の数）］×１００ ・・・（Ｄ）
【0105】
試料中の有核細胞の数を基準として、単核白血球及び分化後期赤芽球の数の増加傾向を知ることができる限り、上記の式（Ｄ）から算出された値に基づく値も、第４の比率に包含される。上記の式（Ｄ）から算出された値に基づく値の例示については、上記の式（Ａ）から算出された値に基づく値と同様である。
【0106】
第４の実施形態では、成熟リンパ腫のスクリーニングに関する指標として、第２の比率と第４の比率とを取得してもよい。これらの比率から、対象単核細胞と、単核白血球及び分化後期赤芽球のいずれが増加している傾向にあるかを知ることができる。好ましくは、成熟リンパ腫のスクリーニングに関する指標として、単核白血球及び分化後期赤芽球の数に対する対象単核細胞の数の比率を取得する。この比率を、以下「第５の比率」とも呼ぶ。第５の比率は、第４の比率の値に対する第２の比率の値の比率であり、下記の式（Ｅ）から算出される。第２の比率は、上記の式（Ｂ）から算出された値である。
【0107】
（第５の比率）＝［（第２の比率）／（第４の比率）］×１００ ・・・（Ｅ）
【0108】
第５の比率は、対象単核細胞の数を、単核白血球及び分化後期赤芽球の数で除算して、パーセンテージを算出することによっても得られる。上記の式（Ｅ）を用いる場合は、第４の比率を要するので、結果として、第５の比率だけでなく、第２の比率及び第４の比率を得ることができる点で好ましい。
【0109】
第４の実施形態では、第５の比率と閾値との比較により、骨髄液に異常があるか否かについて判定を行ってもよい。第５の比率が上記の式（Ｅ）から算出された値であるとき、第５の比率に対応する閾値は、例えば５％～１５％の間の任意の値であり、好ましくは１０％であり得る。例えば、第５の比率と閾値とを比較して、第５の比率が閾値より低いとき、骨髄液に異常があると判定する。この場合、被検者の骨髄液では、リンパ系の腫瘍細胞が増加していることが示唆される。これは、成熟リンパ腫が発生しているか又はその疑いがある。一方、第５の比率が閾値以上であるとき、骨髄液に異常がないと判定する。
【0110】
第４の実施形態では、第５の比率が閾値より低い場合、識別可能な表示を提供してもよい。識別可能な表示は、第１の比率と同様に、表示装置の画面に表すことが好ましい。表示装置の画面には、例えば、第５の比率自体、及び／又は第５の比率が閾値より低いことを、他の文字及び数値と区別できる形式で表示される。第２の比率及び第４の比率もあわせて表示してよい。表示装置及びその画面上の表示の態様は、第１の実施形態について述べたことと同様である。第５の比率が閾値より低い場合、識別可能な表示として、骨髄液が、造血器腫瘍、特に成熟リンパ腫に関する検査を優先的に行う必要のある検体であることを示してもよい。当該検査については上記のとおりである。第４の実施形態では、特に成熟リンパ腫に着目しているので、第５の比率が閾値より低い場合、表示装置の画面上に、例えば「Ｍａｔｕｒｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ？」のように、リンパ球の増加を示唆する標識を表示してもよい。識別可能な表示の意義及び効果は、第１の実施形態について述べたことと同様である。
【0111】
（第５の実施形態）
形質細胞腫では、骨髄液中の有核細胞に対する形質細胞の比率が増加する。形質細胞は、抗体産生細胞であるので、芽球や分化早期赤芽球と比べても核酸量がさらに多いことが知られている。さらなる実施形態では、形質細胞の数に基づいて、形質細胞腫のスクリーニングに関する指標を取得してもよい。この実施形態を「第５の実施形態」とも呼ぶ。第５の実施形態では、対象細胞の計数工程において、形質細胞を計数する。
形質細胞腫では、骨髄液中の有核細胞に対する形質細胞の比率が増加する。形質細胞は、抗体産生細胞であるので、芽球や分化早期赤芽球と比べても核酸量がさらに多いことが知られている。さらなる実施形態では、形質細胞の数に基づいて、形質細胞腫のスクリーニングに関する指標を取得してもよい。この実施形態を「第５の実施形態」とも呼ぶ。第５の実施形態では、対象細胞の計数工程において、形質細胞を計数する。
【0112】
上記のとおり、形質細胞は、芽球や分化早期赤芽球と比べても核酸量がさらに多い。そのため、形質細胞を計数するためには、対象細胞の計数工程において、蛍光信号情報に対応する閾値を、第１の実施形態よりも高く設定することが好ましい。例えば、蛍光信号情報に対応する閾値として、芽球の集団又は分化早期赤芽球の集団の蛍光信号強度よりも高い蛍光信号強度を設定できる。ここで、ＦＣＭは、蛍光及び散乱光のアナログ信号を所定のサンプリングレートでＡ／Ｄ変換して、デジタル信号を生成する。上述のとおり、８ビットのデータでデジタル信号が表される場合、スキャッタグラムにおいて蛍光信号強度及び側方散乱光強度の範囲は、それぞれ０～２５５ｃｈである。粒子から発せられる蛍光のアナログ信号が、Ａ／Ｄ変換後、０～２５５ｃｈの範囲に収まる強度であった場合、当該アナログ信号は０～２５５ｃｈのデジタル信号に変換される。しかし、粒子から発せられる蛍光のアナログ信号が、Ａ／Ｄ変換後、２５５ｃｈを超える強度であった場合は、いずれの強度であっても２５５ｃｈのデジタル信号に変換される。スキャッタグラムにおいては、２５５ｃｈを超える蛍光信号強度の粒子であっても、蛍光信号強度が２５５ｃｈの座標にプロットされる。芽球や分化早期赤芽球の蛍光信号強度は通常１００～２５５の範囲内であるが、形質細胞の蛍光信号強度は通常２５５を超える。したがって、０～２５５ｃｈの範囲で表示されるスキャッタグラムでは、形質細胞と、芽球や分化早期赤芽球とを明確に区別することは難しい。そこで、第５の実施形態では、蛍光についてのデジタル信号を例えば１０～１６ビット、好ましくは１０ビットのデータで表すことが好ましい。１０ビットのデータでデジタル信号を表した場合は、蛍光信号強度は０～１０２３ｃｈの１０２４階調で表される。
【0113】
形質細胞は単核細胞であるので、形質細胞は、側方散乱光情報に基づいて、巨核球系細胞や分化早期幼若顆粒球と区別することができる。したがって、第５の実施形態では、試料中の粒子の蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づいて、形質細胞を選別できる。あるいは、対象細胞を選別した後、当該対象細胞の側方散乱光情報に基づいて、形質細胞を選別してもよい。
【0114】
形質細胞の計数について、図５Ａを参照して説明する。図５Ａでは、図１のスキャッタグラムの縦軸（蛍光信号強度）を０～１０２３ｃｈで表示し、横軸（側方散乱光強度）を０～２５５ｃｈで表示している。また、形質細胞が出現する領域（以下、「第５の領域」とも呼ぶ）を、破線で示している。第５の実施形態では、図５Ａのスキャッタグラムにおける破線で囲まれた領域に含まれる粒子を、形質細胞として特定できる。形質細胞の計数は、例えば、ＦＣＭに搭載された解析ソフトウェアにより行うことができる。
【0115】
第５の領域は、あらかじめ設定した領域を用いてもよいし、検体毎に可変に設定されてもよい。例えば、第５の領域は、正常骨髄液や急性白血病などの造血器腫瘍の骨髄液のＦＣＭ測定により得られた蛍光信号情報及び側方散乱光情報に基づくスキャッタグラムのデータを蓄積することにより、経験的に設定してもよい。あるいは、蛍光信号強度が０～１０２３ｃｈで表示され、側方散乱光強度が０～２５５ｃｈで表示されるスキャッタグラムに基づいて、第５の領域を決定してもよい。具体的には、当該スキャッタグラムにおいて、次の４つの座標（Ｘ：Ｙ）＝（０ｃｈ：１０２３ｃｈ）、（１７０ｃｈ：１０２３ｃｈ）、（１７０ｃｈ：２９６ｃｈ）及び（０ｃｈ：２９６ｃｈ）で囲まれた領域を、第５の領域として設定できる。なお、Ｘは側方散乱光強度であり、Ｙは蛍光信号強度である。
【0116】
あるいは、第５の領域の４つの座標は、正常血液と上記の蛍光色素とを含む複数の対照試料の分析結果に基づいて設定してもよい。対照試料の数は少なくとも２０であり、好ましくは２０以上４０以下である。例えば、図５Ｂを参照して、点Ｉ、点Ｊ、点Ｋ及び点Ｌで囲まれた領域を第５の領域とする。ここで、図５Ｂは、Ｘ軸に側方散乱光強度をとり、Ｙ軸に蛍光信号強度をとった正常血液のスキャッタグラムである。このスキャッタグラムでは、蛍光信号強度が０～１０２３ｃｈで表示され、側方散乱光強度が０～２５５ｃｈで表示されている。点Ｉについては、図５Ｂのとおり、Ｘ座標は０であり、Ｙ座標は、スキャッタグラムにおける蛍光信号強度の最大値である。点ＪのＸ座標は、図５Ｂのとおり、０である。点ＪのＹ座標は、例えば、複数の対照試料における有核細胞の蛍光信号強度のＩＱＲ（四分位範囲）の平均値の１５±１倍高い値（すなわち、１４～１６×ＩＱＲ）と決定できる。点ＫのＸ座標は、例えば、各検体の好中球集団のＸ軸の中央値の平均値と好酸球集団のＸ軸の中央値の平均値の間の任意の値と決定できる。点ＫのＹ座標は、点ＪのＹ座標と同じである。点Ｌについては、Ｘ座標は、点ＫのＸ座標と同じであり、Ｙ座標はスキャッタグラムにおける蛍光信号強度の最大値である。このようにして決定した４つの座標により特定される第５の領域を、骨髄液のＦＣＭ測定に基づいて作成したスキャッタグラムに当てはめると、当該第５の領域は、形質細胞が出現する領域を包含するか又は重複し得る。
【0117】
第５の実施形態では、形質細胞の数に基づいて、形質細胞腫のスクリーニングの指標を取得する。形質細胞の数自体を形質細胞腫のスクリーニングの指標として用いてもよい。好ましくは、形質細胞腫のスクリーニングの指標として、有核細胞の数に対する形質細胞の数の比率を取得する。この比率を、以下「第６の比率」とも呼ぶ。有核細胞の数は、上述のように、試料のＦＣＭ測定により取得した光学的情報に基づいて計数した数である。第６の比率は、下記の式（Ｆ）から算出された値である。
【0118】
（第６の比率）＝［（形質細胞の数）／（有核細胞の数）］×１００ ・・・（Ｆ）
【0119】
試料中の有核細胞の数を基準として、形質細胞の数の変化の傾向が示唆される限り、上記の式（Ｆ）から算出された値に基づく値も、第６の比率に包含される。上記の式（Ｆ）から算出された値に基づく値の例示については、上記の式（Ａ）から算出された値に基づく値と同様である。
【0120】
第５の実施形態では、第６の比率と閾値との比較により、骨髄液に異常があるか否かについて判定を行ってもよい。第６の比率が上記の式（Ｆ）から算出された値であるとき、第６の比率に対応する閾値は、例えば５％～１５％の間の任意の値であり、好ましくは５％であり得る。例えば、第６の比率と閾値とを比較して、第６の比率が閾値以上であるとき、骨髄液に異常があると判定する。この場合、被検者の骨髄液では、正常骨髄液よりも形質細胞が増加していることが示唆される。これは、形質細胞腫が発生しているか又はその疑いがある。一方、第６の比率が閾値より低いとき、骨髄液に異常がないと判定する。
【0121】
第５の実施形態では、第６の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示を提供してもよい。識別可能な表示は、第１の比率と同様に、表示装置の画面に表すことが好ましい。表示装置の画面には、例えば、第６の比率自体及び／又は当該比率が閾値以上であることを、他の文字及び数値と区別できる形式で表示される。表示装置及びその画面上の表示の態様は、第１の実施形態について述べたことと同様である。第６の比率が閾値以上である場合、識別可能な表示として、骨髄液が、造血器腫瘍、特に形質細胞腫に関する検査を優先的に行う必要のある検体であることを示してもよい。当該検査については上記のとおりである。第５の実施形態では、特に形質細胞腫に着目しているので、第６の比率が閾値以上である場合、表示装置の画面上に、例えば「Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｓｉｓ？」のように、形質細胞の増加を示唆する標識を表示してもよい。識別可能な表示の意義及び効果は、第１の実施形態について述べたことと同様である。
【0122】
このように、本実施形態の分析方法は、医師などの医療従事者に対して、造血器腫瘍のスクリーニング、骨髄液の異常の判定などを補助する情報の提供を可能にする。情報を取得した医療従事者は、分析した骨髄液について、造血器腫瘍に関する検査を優先的に行うか否か決定できる。また、取得した情報から、疑われる造血器腫瘍や着目すべき細胞を想定して、骨髄像検査を行うことができる。
【0123】
[２．試料分析装置]
以下、本実施形態の試料分析装置の一例を、図面を参照して説明する。
以下、本実施形態の試料分析装置の一例を、図面を参照して説明する。
【0124】
（試料分析装置の構成）
図６に示されるように、試料分析装置１０は、測定部２０と、解析部３０とを備える。測定部２０は、骨髄液を取り込み、骨髄液から試料を調製し、当該試料を光学測定する。解析部３０は、測定部２０の測定により得られた測定データを処理し、骨髄液の分析結果を出力する。しかし、本実施形態はこの例のみに限定されず、例えば、測定部２０及び解析部３０が一体的に構成された装置であってもよい。
図６に示されるように、試料分析装置１０は、測定部２０と、解析部３０とを備える。測定部２０は、骨髄液を取り込み、骨髄液から試料を調製し、当該試料を光学測定する。解析部３０は、測定部２０の測定により得られた測定データを処理し、骨髄液の分析結果を出力する。しかし、本実施形態はこの例のみに限定されず、例えば、測定部２０及び解析部３０が一体的に構成された装置であってもよい。
【0125】
測定部２０は、吸引部４０と、試料調製部５０と、検出部６０と、信号処理回路８１と、マイクロコンピュータ８２と、通信インターフェース８３とを備える。吸引部４０は、吸引管４２を有する。吸引部４０は、試験管４１に収容された骨髄液を吸引管４２によって吸引する。
【0126】
試料調製部５０は、反応槽５４を有し、試薬容器５１、５２及び５３に接続されている。試験管４１は、骨髄液を収容する。試薬容器５１は、希釈液を収容する。試薬容器５１に収容される希釈液は、フローサイトメトリ法による測定においてシース液として利用される。試薬容器５２は、溶血剤を含む溶血試薬を収容する。試薬容器５３は、蛍光色素を含む染色試薬を収容する。吸引部４０は、吸引管４２を反応槽５４の上方へ移動させ、試験管４１から吸引された骨髄液を反応槽５４に吐出する。骨髄液と溶血試薬と染色試薬とが反応槽５４で混合され、試料が調製される。染色試薬及び溶血試薬を用いることに替えて、蛍光色素及びカチオン性界面活性剤の両方を含む１つの試薬を用いてもよい。試料は、フローサイトメトリ法による光学的測定に供される。
【0127】
検出部６０は、フローサイトメトリ法による粒子の光学的測定に用いられる。検出部６０は、フローセル６１と、光源部６２と、受光部６３及び６４とを備える。フローセル６１は、試薬容器５１に収容された希釈液及び試料調製部５０により調製された試料が供給される。以下、検出部６０が試料中の粒子について蛍光信号情報を含む光学的情報を取得する方法を説明するが、この説明に限定されない。
【0128】
フローセル６１は、透光性を有する石英、ガラス、合成樹脂などの材料によって管状に構成される。フローセル６１の内部は、試料及びシース液が流れる流路となっている。図７を参照して、フローセル６１には、内部空間が他の部分よりも細く絞り込まれたオリフィス６１ａが設けられている。また、オリフィス６１ａの入口付近は二重管構造となっており、その内側管部分は試料ノズル６１ｂとなっており、これを介して、試料調製部５０により調製された試料が供給される。試料ノズル６１ｂの外側の空間は、シース液が流れる流路６１ｃである。シース液は、流路６１ｃを通って、オリフィス６１ａに導入される。このように、フローセル６１に供給されたシース液は、試料ノズル６１ｂから吐出された試料を包むように流れる。そして、オリフィス６１ａによって試料の流れが細く絞り込まれ、シース液で包まれた試料中の粒子が１つずつオリフィス６１ａを通過する。
【0129】
光源部６２は、半導体レーザ光源であり、例えば波長６３３ｎｍの赤色レーザ光をフローセル６１のオリフィス６１ａへ照射する。レーザの波長は特に限定されず、蛍光色素の励起に適した波長のレーザ光源を適宜選択できる。受光部６３、６４及び６５は、フローセル６１中の試料の流れに光が照射されたときに、当該試料中の個々の粒子から発せられる光を検出する。受光部６３、６４及び６５には、アバランシェフォトダイオード、フォトダイオード又は光電子倍増管を採用できる。以下、光源部６２とフローセル６１とを結ぶ方向を「Ｘ方向」といい、Ｘ方向に対して直交する方向を「Ｙ方向」という。フローセル６１からＹ方向側には、ダイクロイックミラー６６が配置されている。ダイクロイックミラー６６は、個々の粒子から発せられる蛍光を透過し、個々の粒子から発せられる側方散乱光を反射する。受光部６３は、フローセル６１からＹ方向側に配置され、ダイクロイックミラー６６を透過した蛍光を検出できる。受光部６４は、フローセル６１からＸ方向側に配置される。さらに具体的には、受光部６４は、フローセル６１を挟んで光源部６２の反対側に配置される。受光部６４は、個々の粒子から発せられる前方散乱光を検出できる。受光部６５は、ダイクロイックミラー６６から反射した側方散乱光を検出できる。
【0130】
側方散乱光は、光源部６２の光軸方向（Ｘ方向）に対して９０°の方向（Ｙ方向）に散乱する光に限定されない。側方散乱光は、例えば、Ｘ方向に対して８０°以上１００°以下の方向に散乱する光であってもよい。前方散乱光は、光源部６２の光軸方向（Ｘ方向）に散乱する光に限定されない。前方散乱光は、例えば、Ｘ方向に対して－１０°以上１０°以下の方向に散乱する光であってもよい。
【0131】
本実施形態では、光源部６２とフローセル６１との間に、図示しない複数のレンズからなる照射レンズ系を配置してもよい。照射レンズ系によって、半導体レーザ光源から射出された平行ビームがビームスポットに集束できる。
【0132】
受光部６３、６４及び６５はそれぞれ蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光し、受光量に応じて、異なる電圧のアナログの電気信号を信号処理回路８１へ出力する。すなわち、受光部６３、６４及び６５は、受光強度を示すアナログ信号を出力する。以下、受光部６３から出力されるアナログ信号を「蛍光信号」といい、受光部６４から出力されるアナログ信号を「前方散乱光信号」といい、受光部６５から出力されるアナログ信号を「側方散乱光信号」という。これらのアナログ信号は、フローセル６１中の粒子の通過にともなって波形状に電圧が変化する波形信号として、信号処理回路８１に入力される。
【0133】
信号処理回路８１は、受光部６３、６４、６５が出力するアナログ信号を所定のサンプリングレートでＡ／Ｄ変換して、デジタル信号からなる蛍光信号、前方散乱光信号及び側方散乱光信号を生成する。信号処理回路８１は、１つの粒子の波形に対応する蛍光信号のピーク値を、その粒子の「蛍光信号強度」として抽出する。同様に、信号処理回路８１は、前方散乱光信号のピーク値を「前方散乱光強度」として抽出し、側方散乱光信号のピーク値を「側方散乱光強度」として抽出する。
【0134】
信号処理回路８１が生成するデジタル信号が例えば８ビットのデータで表される場合、例えば蛍光信号強度の範囲は０～２５５ｃｈとなる。また、デジタル信号が例えば１０ビットのデータで表される場合、例えば蛍光信号強度の範囲は０～１０２３ｃｈとなる。また、デジタル信号が例えば１６ビットのデータで表現される場合、例えば蛍光信号強度は０～６５５３５の範囲内で表現される。ＦＣＭ測定で検出された粒子を、縦軸が２５６チャンネルの蛍光信号強度をとるスキャッタグラムにプロットする場合、０～２５５の蛍光強度を有する粒子は、そのまま０～２５５チャンネルの蛍光強度の座標にプロットされる。一方、２５６以上（例えば５００）の蛍光信号強度を有する粒子は、２５５チャンネルの座標にプロットされる。しかし、縦軸が１０２３チャンネルの蛍光信号強度をとるスキャッタグラムにプロットする場合、５００の蛍光信号強度を有する粒子は、５００チャンネルの座標にプロットされる。
【0135】
マイクロコンピュータ８２は、吸引部４０、試料調製部５０、検出部６０、信号処理回路８１、及び通信インターフェース８３を制御する。通信インターフェース８３は、通信ケーブルによって解析部３０に接続される。測定部２０は、通信インターフェース８３によって、解析部３０とデータ通信を行う。通信インターフェース８３は、各特徴パラメータを含む測定データを解析部３０へ送信する。
【0136】
図８を参照し、解析部３０の構成について説明する。解析部３０は、本体３００と、入力部３０９と、表示部３１０とを備えている。本体３００は、ＣＰＵ３０１と、ＲＯＭ３０２と、ＲＡＭ３０３と、ソリッドステートドライブ（ＳＳＤ）３０４と、読出装置３０５と、入出力インターフェース３０６と、画像出力インターフェース３０７と、通信インターフェース３０８とを有する。本体３００では、ＳＳＤに替えて、ハードディスクを備えてもよい。図５では、表示部３１０として、画像を表示するディスプレイを用いている。
【0137】
ＣＰＵ３０１は、ＲＯＭ３０２に記憶されているコンピュータプログラム３２２及びＲＡＭ３０３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＲＡＭ３０３は、ＲＯＭ３０２及びＳＳＤ３０４に記録されている各コンピュータプログラムの読み出しに用いられる。ＲＡＭ３０３は、各コンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ３０１の作業領域としても利用される。ＳＳＤ３０４には、測定部２０から与えられた測定データを解析して解析結果を出力するためのコンピュータプログラムであるアプリケーションプログラム３２０がインストールされている。コンピュータプログラム３２２には、基本入出力システム（ＢＩＯＳ）が含まれる。アプリケーションプログラム３２０には、ＯＳ、骨髄液分析用プログラム及び骨髄液の異常の判定用プログラムが含まれる。骨髄液分析用プログラムは、光学的情報に基づいて対象細胞の数を取得し、対象細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得するためのプログラムをいう。骨髄液の異常の判定用プログラムは、造血器腫瘍のスクリーニングの指標に基づいて、骨髄液に異常があるか否かを判定するためのプログラムをいう。
【0138】
読出装置３０５は、ＵＳＢポート、ＳＤカードリーダ、ＣＦカードリーダ、メモリースティックリーダ、ＣＤ－ＲＯＭドライブ、ＤＶＤ－ＲＯＭドライブ、フレキシブルディスクドライブなどであり、可搬型記録媒体３２１に記録されたコンピュータプログラム又はデータを読み出すことができる。可搬型記録媒体３２１には、コンピュータを解析部３０として機能させるためのコンピュータプログラム３２０が格納されている。可搬型記録媒体３２１から読み出されたコンピュータプログラム３２０は、ＳＳＤ３０４にインストールされる。
【0139】
入力部３０９は、入出力インターフェース３０６に接続される。表示部３１０は、画像出力インターフェース３０７に接続される。通信インターフェース３０８は、測定部２０の通信インターフェース８３に接続される。入力部３０９及び表示部３１０に替えて、表示入力部として、表示部の表面に入力部が配置されたタッチパネルを備えてもよい。タッチパネルとしては、例えば静電容量方式などの周知の方式のタッチパネルが挙げられる。
【0140】
（試料分析装置の動作）
図９を参照して、試料分析装置１０の動作について説明する。まず、解析部３０のＣＰＵ３０１が、ユーザからの測定実行の指示を、入力部３０９を介して受け付ける（ステップＳ１０１）。
図９を参照して、試料分析装置１０の動作について説明する。まず、解析部３０のＣＰＵ３０１が、ユーザからの測定実行の指示を、入力部３０９を介して受け付ける（ステップＳ１０１）。
【0141】
解析部３０が測定実行の指示を受け付けると、ＣＰＵ３０１は、測定部２０に測定開始を指示する指示データを送信し（ステップＳ１０２）、測定部２０が指示データを受信する（ステップＳ１０３）。測定部２０のマイクロコンピュータ８２は、試料調製処理を実行し（ステップＳ１０４）、測定処理を実行する（ステップＳ１０５）。
【0142】
図６及び１０を参照して、試料調製処理について説明する。マイクロコンピュータ８２が吸引部４０を制御して、反応槽５４に所定量の骨髄液を供給する（ステップＳ２０１）。次に、マイクロコンピュータ８２が試料調製部５０を制御して、試薬容器５２から反応槽５４に所定量の溶血試薬を供給し、試薬容器５３から反応槽５４に所定量の染色試薬を供給する（ステップＳ２０２）。反応槽５４は、ヒータによって所定温度（例えば３０～４５℃）になるように加温されている。加温された状態で、反応槽５４内の混合物の撹拌が行われる（ステップＳ２０３）。ステップＳ２０１～Ｓ２０３の動作により、反応槽５４において試料が調製される。マイクロコンピュータ８２が試料調製部５０を制御して、試料を反応槽５４から検出部６０へ導出する（ステップＳ２０４）。ステップＳ２０４の処理が終了すると、マイクロコンピュータ８２は、メインルーチンへ処理をリターンする。
【0143】
試料が検出部６０のフローセル６１を通過するとき、光源部６２によって、試料中の粒子にレーザ光が照射される。粒子から発せられた蛍光は、受光部６３によって検出される。粒子から発せられた前方散乱光は、受光部６４によって検出される。粒子から発せられた側方散乱光は、受光部６５によって検出される。受光部６３、６４及び６５のそれぞれは、受光レベルに応じた電気信号を、蛍光信号、前方散乱光信号及び側方散乱光信号として出力する。信号処理回路８１は、蛍光信号から蛍光強度を抽出し、前方散乱光信号から前方散乱光強度を抽出し、側方散乱光信号から側方散乱光強度を抽出する。図９を参照して、測定処理の後、マイクロコンピュータ８２は、各特徴パラメータを含む測定データを解析部３へ送信し（ステップＳ１０６）、処理を終了する。解析部３は、測定データを受信する(ステップＳ１０７)。その後、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を実行し、骨髄液の分析結果を生成して、分析結果をＳＳＤ３０４に格納する(ステップＳ１０８)。
【0144】
[３．コンピュータプログラム]
以下、測定データの解析処理の例について説明する。図１１Ａを参照し、第１の実施形態の測定データの解析処理では、測定データの解析処理を開始すると、解析部３のＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる蛍光強度に基づいて、対象細胞及び有核細胞を選別する(ステップＳ３０１)。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度に基づいて、試料中の粒子から、核を有さない細胞及び粒子を除外することにより、有核細胞を選別する。また、ＣＰＵ３０１は、試料中の粒子から、蛍光信号強度が閾値以上である粒子を抽出することにより、対象細胞を選別する。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度及び側方散乱光強度のデータを用いて、スキャッタグラムを作成してもよい。
以下、測定データの解析処理の例について説明する。図１１Ａを参照し、第１の実施形態の測定データの解析処理では、測定データの解析処理を開始すると、解析部３のＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる蛍光強度に基づいて、対象細胞及び有核細胞を選別する(ステップＳ３０１)。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度に基づいて、試料中の粒子から、核を有さない細胞及び粒子を除外することにより、有核細胞を選別する。また、ＣＰＵ３０１は、試料中の粒子から、蛍光信号強度が閾値以上である粒子を抽出することにより、対象細胞を選別する。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度及び側方散乱光強度のデータを用いて、スキャッタグラムを作成してもよい。
【0145】
ステップＳ３０２において、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０１で選別した対象細胞及び有核細胞を計数し、それらの数をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３０３において、ＣＰＵ３０１は、対象細胞の数及び有核細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。当該指標として、第１の比率を取得する場合、ＣＰＵ３０１は、上記の式（Ａ）で示される計算を行って、第１の比率を取得する。ＣＰＵ３０１は、取得した造血器腫瘍のスクリーニングの指標をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３０４において、ＣＰＵ３０１は、造血器腫瘍のスクリーニングの指標に基づいて骨髄液の異常を判定する。
【0146】
図１１Ｂを参照し、第２の実施形態の測定データの解析処理について説明する。測定データの解析処理を開始すると、解析部３のＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる蛍光強度及び側方散乱光強度に基づいて、対象単核細胞及び有核細胞を選別する(ステップＳ３１１)。有核細胞の選別については、第１の実施形態の解析処理と同様である。ＣＰＵ３０１は、試料中の粒子から、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づいて、第２の領域に含まれる粒子を抽出することにより、対象単核細胞を選別する。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度及び側方散乱光強度のデータを用いて、スキャッタグラムを作成してもよい。
【0147】
ステップＳ３１２において、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３１１で選別した対象単核細胞及び有核細胞を計数し、それらの数をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３１３において、ＣＰＵ３０１は、対象単核細胞の数及び有核細胞の数に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングの指標を取得する。当該指標として、第２の比率を取得する場合、ＣＰＵ３０１は、上記の式（Ｂ）で示される計算を行って、第２の比率を取得する。ＣＰＵ３０１は、取得した造血器腫瘍のスクリーニングの指標をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３１４については、ステップＳ３０４と同様である。すなわち、ＣＰＵ３０１は、ステップ３１５において骨髄液の異常を判定する。
【0148】
図１１Ｃを参照し、第３の実施形態の測定データの解析処理について説明する。この解析処理では、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、急性白血病のスクリーニングの指標を取得する。測定データの解析処理を開始すると、解析部３のＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる蛍光強度、側方散乱光強度及び前方散乱光強度に基づいて、芽球及び有核細胞を選別する(ステップＳ３２１)。有核細胞の選別については、第１の実施形態の解析処理と同様である。ＣＰＵ３０１は、試料中の粒子から、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づいて、第３の領域に含まれる粒子を抽出する。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度及び側方散乱光強度のデータを用いて、スキャッタグラムを作成してもよい。抽出された粒子の前方散乱光強度に基づいて、芽球の大きさに相当する粒子を抽出することにより、芽球を選別する。ＣＰＵ３０１は、前方散乱光強度のデータを用いて、ヒストグラムを作成してもよい。
【0149】
ステップＳ３２２において、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３２１で選別した芽球及び有核細胞を計数し、それらの数をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３２３において、ＣＰＵ３０１は、芽球の数及び有核細胞の数に基づいて、急性白血病のスクリーニングの指標を取得する。当該指標として、第３の比率を取得する場合、ＣＰＵ３０１は、上記の式（Ｃ）で示される計算を行って、第３の比率を取得する。ＣＰＵ３０１は、取得した急性白血病のスクリーニングの指標をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３２４については、ステップＳ３０４と同様である。すなわち、ＣＰＵ３０１は、ステップ３２５において骨髄液の異常を判定する。
【0150】
図１１Ｄを参照し、第４の実施形態の測定データの解析処理について説明する。この解析処理では、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、成熟リンパ腫のスクリーニングの指標を取得する。測定データの解析処理を開始すると、解析部３のＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる蛍光強度、側方散乱光強度及び前方散乱光強度に基づいて、芽球及び有核細胞を選別する(ステップＳ３３１)。有核細胞の選別については、第１の実施形態の解析処理と同様である。ＣＰＵ３０１は、試料中の粒子から、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づいて、第２の領域に含まれる粒子を抽出することにより、対象単核細胞を選別する。また、第４の領域に含まれる粒子を抽出することにより、単核白血球及び分化後期赤芽球を選別する。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度及び側方散乱光強度のデータを用いて、スキャッタグラムを作成してもよい。
【0151】
ステップＳ３３２において、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３３１で選別した対象単核細胞、単核白血球、分化後期赤芽球及び有核細胞を計数し、それらの数をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３３３において、ＣＰＵ３０１は、対象単核細胞の数、単核白血球及び分化後期赤芽球の数、及び有核細胞の数に基づいて、成熟リンパ腫のスクリーニングの指標を取得する。当該指標として、第５の比率を取得する場合、ＣＰＵ３０１は、上記の式（Ｂ）及び（Ｄ）で示される計算を行って、第２の比率及び第４の比率を取得する。さらに、ＣＰＵ３０１は、上記の式（Ｅ）で示される計算を行って、第５の比率を取得する。ＣＰＵ３０１は、取得した成熟リンパ腫のスクリーニングの指標をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３３４については、ステップＳ３０４と同様である。すなわち、ＣＰＵ３０１は、ステップ３３５において骨髄液の異常を判定する。
【0152】
図１１Ｅを参照し、第５の実施形態の測定データの解析処理について説明する。この解析処理では、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、形質細胞腫のスクリーニングの指標を取得する。測定データの解析処理を開始すると、解析部３のＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる蛍光強度及び側方散乱光強度に基づいて、形質細胞及び有核細胞を選別する(ステップＳ３４１)。この解析処理では、蛍光についてのデジタル信号は１０ビットのデータで表され、側方散乱についてのデジタル信号は８ビットのデータで表される。したがって、蛍光信号強度の範囲は０～１０２３ｃｈであり、側方散乱光強度の範囲は０～２５５ｃｈである。有核細胞の選別については、第１の実施形態の解析処理と同様である。ＣＰＵ３０１は、試料中の粒子から、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づいて、第５の領域に含まれる粒子を抽出することにより、形質細胞を選別する。ＣＰＵ３０１は、蛍光信号強度及び側方散乱光強度のデータを用いて、スキャッタグラムを作成してもよい。
【0153】
ステップＳ３４２において、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３４１で選別した対象単核細胞及び有核細胞を計数し、それらの数をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３４３において、ＣＰＵ３０１は、形質細胞の数及び有核細胞の数に基づいて、形質細胞腫のスクリーニングの指標を取得する。当該指標として、第６の比率を取得する場合、ＣＰＵ３０１は、上記の式（Ｆ）で示される計算を行って、第６の比率を取得する。ＣＰＵ３０１は、取得した形質細胞腫のスクリーニングの指標をＳＳＤ３０４に記憶する。ステップＳ３４４については、ステップＳ３０４と同様である。すなわち、ＣＰＵ３０１は、ステップ３４５において骨髄液の異常を判定する。
【0154】
図９を参照して、上記の測定データの解析処理を終了すると、ステップＳ１０９において、ＣＰＵ３０１は、分析結果を表示部３１０に出力して、処理を終了する。
【0155】
上記のとおり、図１１Ａ～Ｅのそれぞれに示される測定データの解析処理を個別に説明した。しかし、図９の測定データの解析処理（ステップＳ１０８）は、これらの一部でも実施していればよく、また全ての解析処理を行ってもよい。例えば、図１１Ａを参照して、ステップＳ３０１において、対象細胞及び有核細胞の他に、対象単核細胞、芽球、単核白血球、分化後期赤芽球及び形質細胞を選別し、ステップＳ３０２において、それらを計数してもよい。また、ステップＳ３０３において、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、急性白血病、成熟リンパ腫及び形質細胞腫のスクリーニングの指標も取得してもよい。
【0156】
以下、骨髄液の異常の判定処理の例として、被検者に造血器腫瘍の疑いがあるか否かを判定する場合について説明する。図１２Ａを参照して、第１の実施形態の判定処理では、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、上記の式（Ａ）から算出された第１の比率を取得し、この比率に基づいて判定を行う。しかし、本発明はこれに限定されない。ステップＳ４０１において、ＣＰＵ３０１は、第１の比率と、第１の比率に対応する閾値（例えば３０％）とを比較する。この閾値は、ＳＳＤ３０４に記憶されている。第１の比率が所定の閾値より低いとき、処理は、ステップＳ４０２に進行する。ＣＰＵ３０１は、造血器腫瘍の疑いがないとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。第１の比率が所定の閾値以上であるとき、処理は、ステップＳ４０３に進行する。ＣＰＵ３０１は、造血器腫瘍の疑いがあるとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。以上で、ＣＰＵ３０１は、判定処理を終了し、メインルーチンへ処理をリターンする。
【0157】
図１２Ｂを参照して、第２の実施形態の判定処理では、造血器腫瘍のスクリーニングの指標として、上記の式（Ｂ）から算出された第２の比率を取得し、この比率に基づいて判定を行う。しかし、本発明はこれに限定されない。ステップＳ４１１において、ＣＰＵ３０１は、第２の比率と、第２の比率に対応する閾値（例えば２０％）とを比較する。この閾値は、ＳＳＤ３０４に記憶されている。第２の比率が所定の閾値より低いとき、処理は、ステップＳ４１２に進行する。ＣＰＵ３０１は、造血器腫瘍の疑いがないとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。第２の比率が所定の閾値以上であるとき、処理は、ステップＳ４１３に進行する。ＣＰＵ３０１は、造血器腫瘍の疑いがあるとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。以上で、ＣＰＵ３０１は、判定処理を終了し、メインルーチンへ処理をリターンする。
【0158】
図１２Ｃを参照して、第３の実施形態の判定処理では、急性白血病のスクリーニングの指標として、上記の式（Ｃ）から算出された第３の比率を取得し、この比率に基づいて判定を行う。判定では、第３の比率に対応する所定の閾値として、第１の閾値と、それよりも高い値である第２の閾値とを用いる。しかし、本発明はこれに限定されない。ステップＳ４２１において、ＣＰＵ３０１は、第３の比率と第１の閾値（例えば１０％）とを比較する。第１の閾値は、ＳＳＤ３０４に記憶されている。第３の比率が第１の閾値より低いとき、処理は、ステップＳ４２２に進行する。ＣＰＵ３０１は、急性白血病の疑いがないとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。第３の比率が第１の閾値以上であるとき、処理は、ステップＳ４２３に進行する。ステップＳ４２３において、ＣＰＵ３０１は、第３の比率と第２の閾値（例えば２０％）とを比較する。第２の閾値は、ＳＳＤ３０４に記憶されている。第３の比率が第２の閾値より低いとき、処理は、ステップＳ４２４に進行する。ＣＰＵ３０１は、芽球の増加の疑いがあるとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。第３の比率が第２の閾値以上であるとき、処理は、ステップＳ４２５に進行する。ＣＰＵ３０１は、急性白血病の疑いがあるとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。以上で、ＣＰＵ３０１は、判定処理を終了し、メインルーチンへ処理をリターンする。
【0159】
図１２Ｄを参照して、第４の実施形態の判定処理では、成熟リンパ腫のスクリーニングの指標として、上記の式（Ｅ）から算出された第５の比率を取得し、この比率に基づいて判定を行う。しかし、本発明はこれに限定されない。ステップＳ４３１において、ＣＰＵ３０１は、第５の比率と、第５の比率に対応する閾値（例えば１０％）とを比較する。この閾値は、ＳＳＤ３０４に記憶されている。第５の比率が所定の閾値より低いとき、処理は、ステップＳ４３２に進行する。ＣＰＵ３０１は、成熟リンパ腫の疑いがあるとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。第５の比率が所定の閾値以上であるとき、処理は、ステップＳ４３３に進行する。ＣＰＵ３０１は、成熟リンパ腫の疑いがないとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。以上で、ＣＰＵ３０１は、判定処理を終了し、メインルーチンへ処理をリターンする。
【0160】
図１２Ｅを参照して、第５の実施形態の判定処理では、形質細胞腫のスクリーニングの指標として、上記の式（Ｆ）から算出された第６の比率を取得し、この比率に基づいて判定を行う。しかし、本発明はこれに限定されない。ステップＳ４４１において、ＣＰＵ３０１は、第６の比率と、第６の比率に対応する閾値（例えば５％）とを比較する。この閾値は、ＳＳＤ３０４に記憶されている。第６の比率が所定の閾値より低いとき、処理は、ステップＳ４４２に進行する。ＣＰＵ３０１は、形質細胞腫の疑いがないとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。第６の比率が所定の閾値以上であるとき、処理は、ステップＳ４４３に進行する。ＣＰＵ３０１は、形質細胞腫の疑いがあるとの判定結果を取得し、ＳＳＤ３０４に記憶する。以上で、ＣＰＵ３０１は、判定処理を終了し、メインルーチンへ処理をリターンする。
【0161】
図９を参照して、上記の判定処理を終了すると、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ１０９において、分析結果として判定結果を表示部３１０に出力して、処理を終了する。上記のとおり、図１２Ａ～Ｅを用いて、「造血器腫瘍の疑いがあるかの判定処理」、「急性白血病の疑いがあるかの判定処理」、「成熟リンパ腫の疑いがあるかの判定処理」及び「形質細胞腫の疑いがあるかの判定処理」をそれぞれ個別に説明した。しかし、骨髄液の異常の判定処理はこれらの一部でも実施していればよく、また全ての判定処理を行ってもよい。
【0162】
表示部３１０に出力される分析結果画面は、例えば、有核細胞（ＴＮＣ）の数、及び造血器腫瘍のスクリーニングの指標としての比率（ＲＡＴＩＯ）を含んでもよい。また、画面は、これらの情報に加えて光学的情報に基づいて作成したスキャッタグラムを含んでもよい。さらに、画面は、造血器腫瘍のスクリーニングの指標に基づいて骨髄液の異常について判定を行った結果を含んでもよい。
【0163】
このように本実施形態の試料分析装置及びコンピュータプログラムは、医師などの医療従事者に対して、造血器腫瘍のスクリーニング、骨髄液の異常の判定などを補助する情報を提供できる。情報を取得した医療従事者は、分析した骨髄液について、造血器腫瘍に関する検査を優先的に行うか否か決定できる。また、取得した情報から、疑われる造血器腫瘍や着目すべき細胞を想定して、骨髄像検査を行うことができる。
【0164】
以下に、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例0165】
実施例１：蛍光信号強度が所定の閾値以上である細胞の数に基づくスクリーニング
急性白血病では、骨髄中での分化早期の幼若細胞等の増加が兆候である。また、形質細胞腫（骨髄腫）では、骨髄中での形質細胞の増加が兆候である。分化早期の幼若細胞及び形質細胞は、成熟細胞や分化後期の細胞に比べて核酸量が多い。そこで、ＦＣＭにより骨髄液中の細胞を分析し、細胞の核酸量に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングが可能であるかを検討した。
急性白血病では、骨髄中での分化早期の幼若細胞等の増加が兆候である。また、形質細胞腫（骨髄腫）では、骨髄中での形質細胞の増加が兆候である。分化早期の幼若細胞及び形質細胞は、成熟細胞や分化後期の細胞に比べて核酸量が多い。そこで、ＦＣＭにより骨髄液中の細胞を分析し、細胞の核酸量に基づいて、造血器腫瘍のスクリーニングが可能であるかを検討した。
【0166】
（１）検体
検体として、病院での骨髄像検査（鏡検）にて確認された下記症例の骨髄液（計３８例）を用いた。
－急性白血病（有核細胞数に対する芽球数の比率が２０％以上）２例
－形質細胞腫（有核細胞数に対する形質細胞数の比率が１０％以上）１例
－芽球中等度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が１０％以上２０％未満）１例
－芽球軽度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が５％以上１０％未満）３例
－芽球及び形質細胞の増加が認められなかった症例 ３１例
検体として、病院での骨髄像検査（鏡検）にて確認された下記症例の骨髄液（計３８例）を用いた。
－急性白血病（有核細胞数に対する芽球数の比率が２０％以上）２例
－形質細胞腫（有核細胞数に対する形質細胞数の比率が１０％以上）１例
－芽球中等度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が１０％以上２０％未満）１例
－芽球軽度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が５％以上１０％未満）３例
－芽球及び形質細胞の増加が認められなかった症例 ３１例
【0167】
（２）試薬及び分析装置
溶血試薬として、ライザセルＷＤＦＩＩ（シスメックス株式会社）を用いた。染色試薬として、フルオロセルＷＤＦ（シスメックス株式会社）を用いた。分析装置として、ＦＣＭを備えた自動血球分析装置であるＸＲ－１０００（シスメックス株式会社）を用いた。
溶血試薬として、ライザセルＷＤＦＩＩ（シスメックス株式会社）を用いた。染色試薬として、フルオロセルＷＤＦ（シスメックス株式会社）を用いた。分析装置として、ＦＣＭを備えた自動血球分析装置であるＸＲ－１０００（シスメックス株式会社）を用いた。
【0168】
（３）測定
（３．１）塗抹標本の作製及び鏡検
分析装置による分析結果と比較するため、上記の骨髄液の鏡検を行った。各検体から一部を取り、常法にしたがって染色して塗抹標本を作製した。塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞を計数した。また、下記の対象細胞の存否を確認した。対象細胞を検出した場合は、その細胞数をカウントした。鏡検の対象細胞は、芽球、前赤芽球、多染性赤芽球、形質細胞、前単球、幼若好中球（前骨髄球及び骨髄球）及び巨核球系細胞であった。細胞数は、これらの対象細胞の総和であった。
（３．１）塗抹標本の作製及び鏡検
分析装置による分析結果と比較するため、上記の骨髄液の鏡検を行った。各検体から一部を取り、常法にしたがって染色して塗抹標本を作製した。塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞を計数した。また、下記の対象細胞の存否を確認した。対象細胞を検出した場合は、その細胞数をカウントした。鏡検の対象細胞は、芽球、前赤芽球、多染性赤芽球、形質細胞、前単球、幼若好中球（前骨髄球及び骨髄球）及び巨核球系細胞であった。細胞数は、これらの対象細胞の総和であった。
【0169】
（３．２）分析装置による試料の調製及び測定
各検体を孔径４０μｍのナイロンメッシュでろ過して骨片を除き、自動血球計数装置ＸＲ－１０００にセットした。試料の調製及び測定は、分析装置により自動的に行われた。具体的には、骨髄液（１μＬ）に溶血試薬（５０μＬ）及び染色試薬（１μＬ）を添加し、４０℃で２０秒間インキュベートして、試料を調製した。試料に光を照射して、当該試料中の個々の粒子から発せられる光学的情報を取得した。光学的情報として、蛍光信号強度及び側方散乱光強度を取得した。また、取得した光学的情報に基づいて、横軸に側方散乱光強度をとり、縦軸に蛍光信号強度をとったスキャッタグラムを作成した。スキャッタグラムは、側方散乱光強度及び蛍光信号強度の最小値を０ｃｈとし、最大値を２５５ｃｈとして作成された。検体を自動血球計数装置にセットしてからスキャッタグラムの作成までに要した時間はいずれも３分以内であった。
各検体を孔径４０μｍのナイロンメッシュでろ過して骨片を除き、自動血球計数装置ＸＲ－１０００にセットした。試料の調製及び測定は、分析装置により自動的に行われた。具体的には、骨髄液（１μＬ）に溶血試薬（５０μＬ）及び染色試薬（１μＬ）を添加し、４０℃で２０秒間インキュベートして、試料を調製した。試料に光を照射して、当該試料中の個々の粒子から発せられる光学的情報を取得した。光学的情報として、蛍光信号強度及び側方散乱光強度を取得した。また、取得した光学的情報に基づいて、横軸に側方散乱光強度をとり、縦軸に蛍光信号強度をとったスキャッタグラムを作成した。スキャッタグラムは、側方散乱光強度及び蛍光信号強度の最小値を０ｃｈとし、最大値を２５５ｃｈとして作成された。検体を自動血球計数装置にセットしてからスキャッタグラムの作成までに要した時間はいずれも３分以内であった。
【0170】
（４）分析及び結果
作成したスキャッタグラムの一例を図１３に示す。分析装置で測定した各試料について、光学的情報に基づいて、有核細胞を計数した。また、蛍光信号強度に対する所定の閾値を１００ｃｈに設定し、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子を計数した。図１３では、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子は、破線で囲まれた領域に出現した。当該領域は、スキャッタグラムの二次元平面を蛍光信号強度１００ｃｈで区切ったときの上側の領域（以下、「蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域」とも呼ぶ）であった。
作成したスキャッタグラムの一例を図１３に示す。分析装置で測定した各試料について、光学的情報に基づいて、有核細胞を計数した。また、蛍光信号強度に対する所定の閾値を１００ｃｈに設定し、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子を計数した。図１３では、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子は、破線で囲まれた領域に出現した。当該領域は、スキャッタグラムの二次元平面を蛍光信号強度１００ｃｈで区切ったときの上側の領域（以下、「蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域」とも呼ぶ）であった。
【0171】
１００ｃｈの蛍光信号強度は、あらかじめ所定の閾値として決定した値であった。具体的には、次のようにして決定した。まず、上記の染色試薬及び溶血試薬を用いて、健常人の末梢血（２０検体）から２０の対照試料を調製し、上記の分析装置によりＦＣＭ測定した。蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づいて、有核細胞を選別及び計数した。次いで、１００ｃｈの蛍光信号強度を暫定的閾値として設定し、１００ｃｈ以上の蛍光信号強度を有する細胞を計数した。そして、有核細胞の数に対する、１００ｃｈ以上の蛍光信号強度を有する細胞の数の比率を算出した。２０の対照試料における当該比率の中央値、１０パーセンタイル値及び９０パーセンタイル値を算出した。その結果、中央値は３．８９％、１０パーセンタイル値は２．５２％、９０パーセンタイル値は５．０７％であった。この結果より、１００ｃｈの蛍光強度は、核酸量が比較的少ない成熟白血球及び分化後期の細胞と、核酸量が比較的多い対照細胞とを良好に区別できる値であることが示唆された。よって、１００ｃｈの蛍光強度を、所定の閾値として決定した。実際、図１３においても、骨髄液中の成熟白血球（リンパ球、単球、好中球及び好酸球）は、スキャッタグラムの二次元平面を蛍光信号強度１００ｃｈで区切ったときの下側の領域（以下、「蛍光信号強度が１００ｃｈ未満の領域」とも呼ぶ）に出現した。なお、図１３中の斜線は、単核細胞が出現する領域と、多形核細胞が出現する領域との境界を示す。
【0172】
各検体について、第１の比率として、有核細胞数に対する蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子の数の比率を算出した。鏡検により計数した有核細胞及び対象細胞についても、有核細胞数に対する対象細胞数の比率を算出した。各検体について、分析装置により得た第１の比率と鏡検により得た比率とをプロットして、回帰直線（ｙ＝０．６２ｘ＋８．６９）を得た。相関係数（ｒ）は０．８８であった。このグラフを図１４に示す。図１４から分かるように、分析装置による第１の比率と鏡検による比率とは良好に相関した。また、芽球又は形質細胞の増加が認められた検体は、第１の比率が高い傾向にあった。特に、第１の比率の閾値を３０％と設定したとき、急性白血病及び形質細胞腫の検体とそれ以外の検体とを切り分けできることが分かった。したがって、ＦＣＭを備える分析装置により、骨髄液中の有核細胞と蛍光信号強度が所定の閾値以上の粒子とを計数し、第１の比率を得ることにより、急性白血病及び形質細胞腫のスクリーニングを迅速に行い得ることが示唆された。
【0173】
実施例２：蛍光信号強度が所定の閾値以上である単核細胞の数に基づくスクリーニング
芽球及び形質細胞は単核細胞である。そこで、実施例１で選別した粒子のうち、単核細胞をさらに選別した。選別した単核細胞を分析することにより、造血器腫瘍のスクリーニングが可能であるかを検討した。
芽球及び形質細胞は単核細胞である。そこで、実施例１で選別した粒子のうち、単核細胞をさらに選別した。選別した単核細胞を分析することにより、造血器腫瘍のスクリーニングが可能であるかを検討した。
【0174】
（１）検体、試薬及び分析装置
検体、試薬及び分析装置は、実施例１と同じであった。
検体、試薬及び分析装置は、実施例１と同じであった。
【0175】
（２）測定データ及び分析
塗抹標本における細胞数は、実施例１の計数結果を利用した。実施例２では、鏡検の対象細胞は、単核細胞である芽球、前赤芽球、多染性赤芽球、形質細胞及び前単球であった。実施例１の計数結果より、これらの細胞数の総和を取得して、対象細胞数として用いた。分析装置による各検体の測定データとして、実施例１で取得した各検体の光学的情報を用いた。図１５を参照して、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子から単核細胞を選別するため、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域のうち、点Ｃ、Ｄ、Ｆ及びＥに囲まれた領域（以下、「領域ＣＤＦＥ」とも呼ぶ）を特定した。図１５中、領域ＣＤＦＥを破線で示した。点Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦの座標は、側方散乱光強度を示す横軸をＸ軸と呼び、蛍光信号強度を示す縦軸をＹ軸と呼ぶとき、次のとおりであった。点Ｃ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：１００ｃｈ）、点Ｄ（Ｘ：Ｙ＝１３５ｃｈ：１００ｃｈ）、点Ｅ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：２５５ｃｈ）及び点Ｆ（Ｘ：Ｙ＝１８０ｃｈ：２５５ｃｈ）。図１５中、点Ｆ及び点Ｄを通る斜線は、単核細胞が出現する領域と、多形核細胞が出現する領域との境界を示す。なお、図１５中、点Ａは原点（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：０ｃｈ）であり、点Ｂは、上記の斜線とＸ軸の交点（Ｘ：Ｙ＝１００ｃｈ：０ｃｈ）であった。
塗抹標本における細胞数は、実施例１の計数結果を利用した。実施例２では、鏡検の対象細胞は、単核細胞である芽球、前赤芽球、多染性赤芽球、形質細胞及び前単球であった。実施例１の計数結果より、これらの細胞数の総和を取得して、対象細胞数として用いた。分析装置による各検体の測定データとして、実施例１で取得した各検体の光学的情報を用いた。図１５を参照して、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子から単核細胞を選別するため、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域のうち、点Ｃ、Ｄ、Ｆ及びＥに囲まれた領域（以下、「領域ＣＤＦＥ」とも呼ぶ）を特定した。図１５中、領域ＣＤＦＥを破線で示した。点Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦの座標は、側方散乱光強度を示す横軸をＸ軸と呼び、蛍光信号強度を示す縦軸をＹ軸と呼ぶとき、次のとおりであった。点Ｃ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：１００ｃｈ）、点Ｄ（Ｘ：Ｙ＝１３５ｃｈ：１００ｃｈ）、点Ｅ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：２５５ｃｈ）及び点Ｆ（Ｘ：Ｙ＝１８０ｃｈ：２５５ｃｈ）。図１５中、点Ｆ及び点Ｄを通る斜線は、単核細胞が出現する領域と、多形核細胞が出現する領域との境界を示す。なお、図１５中、点Ａは原点（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：０ｃｈ）であり、点Ｂは、上記の斜線とＸ軸の交点（Ｘ：Ｙ＝１００ｃｈ：０ｃｈ）であった。
【0176】
図１５に示されるように、領域ＣＤＦＥは、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域のうち、当該斜線より左側の領域であった。各検体について、領域ＣＤＦＥに出現した粒子を計数し、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上である単核細胞の数を取得した。第２の比率として、有核細胞数に対する、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上である単核細胞の数の比率を算出した。鏡検により計数した有核細胞及び対象細胞についても、有核細胞数に対する対象細胞数の比率を算出した。
【0177】
各検体について、分析装置により得た第２の比率と鏡検により得た比率とをプロットして、回帰直線（ｙ＝０．６４ｘ＋５．０７）を得た。相関係数（ｒ）は０．９５であった。このグラフを図１６に示す。図１６から分かるように、分析装置による第２の比率と鏡検による比率とは良好に相関した。また、芽球又は形質細胞の増加が認められた検体は、第２の比率が高い傾向にあった。特に、第２の比率の閾値を２０％と設定したとき、急性白血病及び形質細胞腫の検体とそれ以外の検体とを切り分けできることが分かった。したがって、ＦＣＭを備える分析装置により、骨髄液中の有核細胞と蛍光信号強度が所定の閾値以上の単核細胞とを計数し、第２の比率を得ることにより、急性白血病及び形質細胞腫のスクリーニングを迅速に行い得ることが示唆された。
【0178】
実施例３：芽球数に基づくスクリーニング
急性白血病では、分化能を有さない腫瘍性芽球が増殖する。そこで、実施例１で選別した粒子のうち、芽球をさらに選別した。選別した芽球を分析することにより、急性白血病のスクリーニングが可能であるかを検討した。
急性白血病では、分化能を有さない腫瘍性芽球が増殖する。そこで、実施例１で選別した粒子のうち、芽球をさらに選別した。選別した芽球を分析することにより、急性白血病のスクリーニングが可能であるかを検討した。
【0179】
（１）検体、試薬及び分析装置
検体、試薬及び分析装置は、実施例１と同じであった。
検体、試薬及び分析装置は、実施例１と同じであった。
【0180】
（２）測定データ及び分析
塗抹標本における細胞数は、実施例１の計数結果を利用した。実施例３では、鏡検の対象細胞は芽球であった。ただし、芽球が良性又は悪性であるかを区別しなかった。実施例１の計数結果より、芽球の数を対象細胞数として用いた。分析装置による各検体の測定データとして、実施例１で取得した各検体の光学的情報を用いた。図１７を参照して、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子から芽球を選別するため、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域のうち、点Ｈ、Ｄ、Ｆ及びＩに囲まれた領域を特定した。また、芽球をより正確に計数するため、図１７中のスキャッタグラムにおいて、点Ｄ、Ｇ及びＨで囲まれた領域を特定した。よって、スキャッタグラムにおいて芽球が出現する領域として、点Ｈ、Ｇ、Ｆ及びＩに囲まれた領域（以下、「領域ＨＧＦＩ」とも呼ぶ）を特定した。点Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩの座標は、次のとおりであった。点Ｄ（Ｘ：Ｙ＝１３５ｃｈ：１００ｃｈ）、点Ｆ（Ｘ：Ｙ＝１８０ｃｈ：２５５ｃｈ）、点Ｇ（Ｘ：Ｙ＝１３０ｃｈ：８０ｃｈ）、点Ｈ（Ｘ：Ｙ＝８０ｃｈ：１００ｃｈ）及びＩ（Ｘ：Ｙ＝１３０ｃｈ：２５５ｃｈ）。
塗抹標本における細胞数は、実施例１の計数結果を利用した。実施例３では、鏡検の対象細胞は芽球であった。ただし、芽球が良性又は悪性であるかを区別しなかった。実施例１の計数結果より、芽球の数を対象細胞数として用いた。分析装置による各検体の測定データとして、実施例１で取得した各検体の光学的情報を用いた。図１７を参照して、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の粒子から芽球を選別するため、蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の領域のうち、点Ｈ、Ｄ、Ｆ及びＩに囲まれた領域を特定した。また、芽球をより正確に計数するため、図１７中のスキャッタグラムにおいて、点Ｄ、Ｇ及びＨで囲まれた領域を特定した。よって、スキャッタグラムにおいて芽球が出現する領域として、点Ｈ、Ｇ、Ｆ及びＩに囲まれた領域（以下、「領域ＨＧＦＩ」とも呼ぶ）を特定した。点Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩの座標は、次のとおりであった。点Ｄ（Ｘ：Ｙ＝１３５ｃｈ：１００ｃｈ）、点Ｆ（Ｘ：Ｙ＝１８０ｃｈ：２５５ｃｈ）、点Ｇ（Ｘ：Ｙ＝１３０ｃｈ：８０ｃｈ）、点Ｈ（Ｘ：Ｙ＝８０ｃｈ：１００ｃｈ）及びＩ（Ｘ：Ｙ＝１３０ｃｈ：２５５ｃｈ）。
【0181】
図１７に示されるように、領域ＨＧＦＩは、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づくスキャッタグラムにおいて芽球が出現する領域であった。各検体について、領域ＨＧＦＩに出現した粒子を計数した。図１８を参照して、芽球をより正確に計数するため、領域ＨＧＦＩに出現した粒子のうち、前方散乱光強度が５０ｃｈ以上１００ｃｈ以下の粒子を選別した。選別した粒子の数を、芽球数として取得した。第３の比率として、有核細胞数に対する芽球数の比率を算出した。鏡検により計数した有核細胞及び芽球についても、有核細胞数に対する芽球数の比率を算出した。
【0182】
各検体について、分析装置により得た第３の比率と鏡検により得た比率とをプロットして、回帰直線（ｙ＝０．６０ｘ＋５．２６）を得た。相関係数（ｒ）は０．９２１であった。このグラフを図１９に示す。図１９から分かるように、分析装置による第３の比率と鏡検による比率とは良好に相関した。また、有核細胞数に対する芽球数の比率が１０％以上であった検体は、第３の比率が高い傾向にあった。特に、第３の比率の閾値を２０％と設定したとき、急性白血病の検体とそれ以外の検体とを切り分けできることが分かった。したがって、ＦＣＭを備える分析装置により、骨髄液中の有核細胞と芽球とを計数し、第３の比率を得ることにより、急性白血病のスクリーニングを迅速に行い得ることが示唆された。
【0183】
実施例４：腫瘍性細胞の出現の示唆
分析装置による造血器腫瘍が疑われる検体の判別性能について、鏡検による検体の判別と比較して検討した。
分析装置による造血器腫瘍が疑われる検体の判別性能について、鏡検による検体の判別と比較して検討した。
【0184】
（１）検体
検体として、病院での鏡検にて確認された下記症例の骨髄液（計３８例）を用いた。
－急性白血病（有核細胞数に対する芽球数の比率が２０％以上）２例
－形質細胞腫（有核細胞数に対する形質細胞数の比率が１０％以上）１例
－芽球中等度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が１０％以上２０％未満）１例
－芽球軽度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が５％以上１０％未満）３例
－成熟リンパ腫骨髄転移例（有核細胞数に対する成熟リンパ腫細胞数の比率が５％以上）５例
－芽球及び形質細胞の増加が認められなかった症例 ２６例
検体として、病院での鏡検にて確認された下記症例の骨髄液（計３８例）を用いた。
－急性白血病（有核細胞数に対する芽球数の比率が２０％以上）２例
－形質細胞腫（有核細胞数に対する形質細胞数の比率が１０％以上）１例
－芽球中等度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が１０％以上２０％未満）１例
－芽球軽度増加例（有核細胞数に対する芽球数の比率が５％以上１０％未満）３例
－成熟リンパ腫骨髄転移例（有核細胞数に対する成熟リンパ腫細胞数の比率が５％以上）５例
－芽球及び形質細胞の増加が認められなかった症例 ２６例
【0185】
（２）試薬、分析装置及び測定
試薬及び分析装置は、実施例１と同じであった。それらを用いて上記の検体について、分析装置による測定及び鏡検を、実施例１と同様にして行った。
試薬及び分析装置は、実施例１と同じであった。それらを用いて上記の検体について、分析装置による測定及び鏡検を、実施例１と同様にして行った。
【0186】
（３）分析及び結果
（３．１）芽球増加検体の判別
各検体の塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞数及び芽球数を取得した。そして、有核細胞数に対する芽球数の比率を算出した。算出した比率が１０％以上であった検体を、芽球の増加が疑われる検体であると判別した。また、分析装置により取得した各検体の光学的情報に基づいて、実施例３と同様に分析して、有核細胞数及び芽球数を取得した。そして、第３の比率を算出した。第３の比率が１０％以上であった検体を、芽球の増加が疑われる検体であると判別した。分析装置による判別と鏡検による判別とを比較した結果を、表１に示す。表中、「Ｐｏｓｉｔｉｖｅ」は、芽球の増加が疑われた検体を示し、「Ｎｅｇａｔｉｖｅ」は、芽球の増加が認められなかった検体を示す。
（３．１）芽球増加検体の判別
各検体の塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞数及び芽球数を取得した。そして、有核細胞数に対する芽球数の比率を算出した。算出した比率が１０％以上であった検体を、芽球の増加が疑われる検体であると判別した。また、分析装置により取得した各検体の光学的情報に基づいて、実施例３と同様に分析して、有核細胞数及び芽球数を取得した。そして、第３の比率を算出した。第３の比率が１０％以上であった検体を、芽球の増加が疑われる検体であると判別した。分析装置による判別と鏡検による判別とを比較した結果を、表１に示す。表中、「Ｐｏｓｉｔｉｖｅ」は、芽球の増加が疑われた検体を示し、「Ｎｅｇａｔｉｖｅ」は、芽球の増加が認められなかった検体を示す。
【0187】
【表1】
【0188】
表１に示されるように、分析装置による判別結果と鏡検による判別結果との一致率は８４．２％であった。また、分析装置による判別の感度は１００％であり、特異度は８２．９％であった。このように、分析装置及び検鏡の判別結果の一致率は高く、分析装置による芽球増加検体の判別性能は良好であることが示された。分析装置は、検体の第３の比率が１０％以上であるという判別結果を得たとき、当該検体の分析結果の表示画面において「Ｂｌａｓｔｏｓｉｓ？」のような標識を出力してもよい。これにより、ユーザに急性白血病のスクリーニングの指標を提供できる。
【0189】
（３．２）成熟リンパ腫検体の判別
各検体の塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞数及び成熟リンパ腫細胞数を取得した。そして、有核細胞数に対する成熟リンパ腫細胞数の比率を算出した。算出した比率が１０％以上であった検体を、成熟リンパ腫が疑われる検体であると判別した。また、分析装置により取得した各検体の光学的情報に基づいて、実施例２と同様に分析して、有核細胞数、及び蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の単核細胞の数を取得した。また、第２の比率を算出した。さらに、各検体の光学的情報に基づいて、蛍光信号強度が１００ｃｈ未満の単核細胞の数を取得した。蛍光信号強度が所定の閾値未満の単核細胞は、各検体のスキャッタグラムにおいて、図１５を参照して点Ａ、Ｂ、Ｄ及びＣに囲まれた領域（以下、「領域ＡＢＤＣ」とも呼ぶ）に出現した。第４の比率として、有核細胞数に対する、蛍光信号強度が１００ｃｈ未満である単核細胞の数の比率を算出した。そして、上記の式（Ｅ）により、第５の比率を算出した。
各検体の塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞数及び成熟リンパ腫細胞数を取得した。そして、有核細胞数に対する成熟リンパ腫細胞数の比率を算出した。算出した比率が１０％以上であった検体を、成熟リンパ腫が疑われる検体であると判別した。また、分析装置により取得した各検体の光学的情報に基づいて、実施例２と同様に分析して、有核細胞数、及び蛍光信号強度が１００ｃｈ以上の単核細胞の数を取得した。また、第２の比率を算出した。さらに、各検体の光学的情報に基づいて、蛍光信号強度が１００ｃｈ未満の単核細胞の数を取得した。蛍光信号強度が所定の閾値未満の単核細胞は、各検体のスキャッタグラムにおいて、図１５を参照して点Ａ、Ｂ、Ｄ及びＣに囲まれた領域（以下、「領域ＡＢＤＣ」とも呼ぶ）に出現した。第４の比率として、有核細胞数に対する、蛍光信号強度が１００ｃｈ未満である単核細胞の数の比率を算出した。そして、上記の式（Ｅ）により、第５の比率を算出した。
【0190】
第５の比率が１０％未満であった検体を、成熟リンパ腫が疑われる検体であると判別した。分析装置による判別と鏡検による判別とを比較した結果を、表２に示す。表中、「Ｐｏｓｉｔｉｖｅ」は、成熟リンパ腫が疑われた検体を示し、「Ｎｅｇａｔｉｖｅ」は、成熟リンパ腫ではないと判別された検体を示す。
【0191】
【表2】
【0192】
表２に示されるように、分析装置による判別結果と鏡検による判別結果との一致率は９２．１％であった。また、分析装置による判別の感度は７５．０％であり、特異度は９４．１％であった。このように、分析装置及び検鏡の判別結果の一致率は高く、分析装置による成熟リンパ腫検体の判別性能は良好であることが示された。分析装置は、検体の第５の比率が１０％未満であるという判別結果を得たとき、当該検体の分析結果の表示画面において「Ｍａｔｕｒｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ？」のような標識を出力してよい。これにより、ユーザに成熟リンパ腫のスクリーニングの指標を提供できる。
【0193】
（３．３）形質細胞腫検体の判別
各検体の塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞数及び形質細胞数を取得した。そして、有核細胞数に対する形質細胞数の比率を算出した。算出した比率が１０％以上であった検体を、形質細胞腫が疑われる検体であると判別した。また、分析装置により取得した各検体の光学的情報に基づいて、横軸に側方散乱光強度をとり、縦軸に蛍光信号強度をとったスキャッタグラムを作成した。スキャッタグラムでは、蛍光信号強度の最小値を０ｃｈとし、最大値を１０２３ｃｈとし、側方散乱光強度の最小値を０ｃｈとし、最大値を２５５ｃｈとして作成された。作成したスキャッタグラムの一例を図２０に示す。図中、楕円で囲まれた領域に、形質細胞が出現した。形質細胞を特定するため、図２０参照して、点Ｊ、Ｋ、Ｌ及びＭに囲まれた領域（以下、「領域ＪＫＬＭ」とも呼ぶ）を特定した。図２０中、領域ＪＫＬＭを破線で示した。点Ｊ、Ｋ、Ｌ及びＭの座標は、側方散乱光強度を示す横軸をＸ軸と呼び、蛍光信号強度を示す縦軸をＹ軸と呼ぶとき、次のとおりであった。点Ｊ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：１０２３ｃｈ）、点Ｋ（Ｘ：Ｙ＝１７０ｃｈ：１０２３ｃｈ）、点Ｌ（Ｘ：Ｙ＝１７０ｃｈ：２９６ｃｈ）及びＭ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：２９６ｃｈ）。
各検体の塗抹標本を顕微鏡で観察して、有核細胞数及び形質細胞数を取得した。そして、有核細胞数に対する形質細胞数の比率を算出した。算出した比率が１０％以上であった検体を、形質細胞腫が疑われる検体であると判別した。また、分析装置により取得した各検体の光学的情報に基づいて、横軸に側方散乱光強度をとり、縦軸に蛍光信号強度をとったスキャッタグラムを作成した。スキャッタグラムでは、蛍光信号強度の最小値を０ｃｈとし、最大値を１０２３ｃｈとし、側方散乱光強度の最小値を０ｃｈとし、最大値を２５５ｃｈとして作成された。作成したスキャッタグラムの一例を図２０に示す。図中、楕円で囲まれた領域に、形質細胞が出現した。形質細胞を特定するため、図２０参照して、点Ｊ、Ｋ、Ｌ及びＭに囲まれた領域（以下、「領域ＪＫＬＭ」とも呼ぶ）を特定した。図２０中、領域ＪＫＬＭを破線で示した。点Ｊ、Ｋ、Ｌ及びＭの座標は、側方散乱光強度を示す横軸をＸ軸と呼び、蛍光信号強度を示す縦軸をＹ軸と呼ぶとき、次のとおりであった。点Ｊ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：１０２３ｃｈ）、点Ｋ（Ｘ：Ｙ＝１７０ｃｈ：１０２３ｃｈ）、点Ｌ（Ｘ：Ｙ＝１７０ｃｈ：２９６ｃｈ）及びＭ（Ｘ：Ｙ＝０ｃｈ：２９６ｃｈ）。
【0194】
図２０を参照して、領域ＪＫＬＭは、蛍光信号強度及び側方散乱光強度に基づくスキャッタグラムにおいて形質細胞が含まれる領域であった。各検体について、領域ＪＫＬＭに出現した粒子を計数し、形質細胞数として取得した。第６の比率として、有核細胞数に対する形質細胞数の比率を算出した。第６比率が５％以上であった検体を、形質細胞腫が疑われる検体であると判別した。分析装置による判別と鏡検による判別とを比較した結果を、表３に示す。表中、「Ｐｏｓｉｔｉｖｅ」は、形質細胞腫が疑われた検体を示し、「Ｎｅｇａｔｉｖｅ」は、形質細胞腫ではないと判別された検体を示す。
【0195】
【表3】
【0196】
表３に示されるように、分析装置による判別結果と鏡検による判別結果との一致率は１００％であった。また、分析装置による判別の感度及び特異度は共に１００％であった。このように、分析装置及び検鏡の判別結果の一致率は高く、分析装置による形質細胞腫検体の判別性能は良好であることが示された。分析装置は、検体の第６の比率が１０％以上であるという判別結果を得たとき、当該検体の分析結果の表示画面において「Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｓｉｓ？」のような標識を出力してよい。これにより、ユーザに形質細胞腫のスクリーニングの指標を提供できる。
【0197】
本実施例によれば、目視検査との相関性の高い判別結果を、装置への検体のセットから３分以内に得ることができる。よって、従来は目視検査によって行っていた造血器腫瘍のスクリーニングを自動的に、かつ迅速に行うことができ、例えば早期の治療が必要な急性骨髄性白血病患者を特定し、その後の精密検査を速やかに進めることができる。
【符号の説明】
【0198】
１０ 試料分析装置
２０ 測定部
３０ 解析部
４０ 吸引部
５０ 試料調製部
５１、５２及び５３ 試薬容器
５４ 反応槽
６０ 検出部
６１ フローセル
６２ 光源部
６３、６４及び６５ 受光部
６６ ダイクロイックミラー
３００ 本体
３０９ 入力部
３１０ 表示部
３２１ 可搬型記録媒体
２０ 測定部
３０ 解析部
４０ 吸引部
５０ 試料調製部
５１、５２及び５３ 試薬容器
５４ 反応槽
６０ 検出部
６１ フローセル
６２ 光源部
６３、６４及び６５ 受光部
６６ ダイクロイックミラー
３００ 本体
３０９ 入力部
３１０ 表示部
３２１ 可搬型記録媒体
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A】
【図5B】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図11C】
【図11D】
【図11E】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図12D】
【図12E】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
