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特開2024-95680完全ヒトグリコシル化ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を用いたムコ多糖症Ｉ型の治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024095680
(43)【公開日】2024-07-10
(54)【発明の名称】完全ヒトグリコシル化ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を用いたムコ多糖症Ｉ型の治療
(51)【国際特許分類】
A61K 38/47 20060101AFI20240703BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240703BHJP
A61K 35/30 20150101ALI20240703BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240703BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20240703BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/706 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/436 20060101ALI20240703BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20240703BHJP
C12N 9/26 20060101ALI20240703BHJP
C12N 15/56 20060101ALN20240703BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20240703BHJP
【ＦＩ】
A61K38/47 ZNA
A61K45/00
A61K35/30
A61K48/00
A61P3/00
A61P43/00 121
A61K31/706
A61K31/436
A61K31/573
C12N9/26 Z
C12N15/56
C12N15/63 Z
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024040767
(22)【出願日】2024-03-15
(62)【分割の表示】P 2021502545の分割
【原出願日】2019-07-17
(31)【優先権主張番号】62/699,923
(32)【優先日】2018-07-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】518362720
【氏名又は名称】レジェンクスバイオ インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100097456
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 徹
(72)【発明者】
【氏名】ステファン ヨー
(72)【発明者】
【氏名】リッキー ロバート ラインハルト
(72)【発明者】
【氏名】クラン マシュー シンプソン
(72)【発明者】
【氏名】ズフチュン ウー
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA13
4C084AA19
4C084BA44
4C084DC22
4C084MA02
4C084MA55
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZB082
4C084ZC54
4C084ZC75
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB22
4C086DA10
4C086EA04
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA55
4C086MA66
4C086NA05
4C086ZC54
4C086ZC75
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB65
4C087CA12
4C087MA55
4C087MA66
4C087NA05
4C087ZC54
4C087ZC75
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ－Ｉ）を治療するための組成物及び方法を提供する。
【解決手段】ヒト対象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む方法。前記ヒト神経細胞はヒトグリア細胞が好ましく、また前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含んでよい。
【選択図】図４
【解決手段】ヒト対象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む方法。前記ヒト神経細胞はヒトグリア細胞が好ましく、また前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含んでよい。
【選択図】図４
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対
象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イ
ズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、前記方法。
象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イ
ズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、前記方法。
【請求項2】
ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に
ヒトグリア細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含
む、前記方法。
ヒトグリア細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含
む、前記方法。
【請求項3】
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を
施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含む、請求項１または２に記載
の方法。
施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含む、請求項１または２に記載
の方法。
【請求項4】
ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項5】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル
化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル
化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項6】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含ま
ない治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含ま
ない治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項7】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項8】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にα２，６
－シアル酸付加される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にα２，６
－シアル酸付加される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項9】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項10】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、前記投与す
ることと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、前記投与す
ることと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項11】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にチロシン
硫酸化される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にチロシン
硫酸化される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項12】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項13】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項14】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記
投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記
投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項15】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
【請求項16】
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、請求項３～１５のいずれか１項に記載の方法。
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、請求項３～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記ヒトＩＤＵＡが配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１～１７のいずれか１項
に記載の方法。
に記載の方法。
【請求項19】
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与することを含む、請求項
１８に記載の方法。
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与することを含む、請求項
１８に記載の方法。
【請求項20】
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経
細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する
、請求項１２に記載の方法。
細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する
、請求項１２に記載の方法。
【請求項22】
検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記グリコシル化ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒ
ト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確
認する、請求項１３に記載の方法。
ト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確
認する、請求項１３に記載の方法。
【請求項23】
検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない前記グリコシル化ＩＤＵ
Ａの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認する、請求項１４に記載の方法。
Ａの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認する、請求項１４に記載の方法。
【請求項24】
チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換
えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する、請求項１５に記
載の方法。
えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する、請求項１５に記
載の方法。
【請求項25】
生産をマンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で確認する、請求項２１～２４の
いずれか１項に記載の方法。
いずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
前記発現ベクターまたは組換えヌクレオチド発現ベクターが、シグナルペプチドをコー
ドする、請求項８～１５及び２１～２５のいずれか１項に記載の方法、または請求項８～
１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の請求項１６～１７のいずれ
か１項に記載の方法。
ドする、請求項８～１５及び２１～２５のいずれか１項に記載の方法、または請求項８～
１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の請求項１６～１７のいずれ
か１項に記載の方法。
【請求項27】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中で前記α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中で前記α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
【請求項28】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記ＩＤＵＡを生産する、
前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記ＩＤＵＡを生産する、
前記方法。
【請求項29】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与
することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与
することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
【請求項30】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でチロシン硫酸化された前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でチロシン硫酸化された前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
【請求項31】
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、請求項２７～３０のいずれか１項に記載の方法。
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、請求項２７～３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項32】
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記ヒト対象が３歳未満である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０
１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与される、請求項８～１５及び２１～３３のいずれか１項
に記載の方法、または請求項８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する
場合の請求項１６～２０のいずれか１項に記載の方法。
ベクターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０
１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与される、請求項８～１５及び２１～３３のいずれか１項
に記載の方法、または請求項８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する
場合の請求項１６～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で投
与される、請求項８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または請求項８
～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の請求項１６～２０のいず
れか１項に記載の方法。
ベクターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で投
与される、請求項８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または請求項８
～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の請求項１６～２０のいず
れか１項に記載の方法。
【請求項36】
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、1×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量～５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で
投与される、請求項８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または請求項
８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の請求項１６～２０のい
ずれか１項に記載の方法。
ベクターが、1×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量～５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で
投与される、請求項８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または請求項
８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の請求項１６～２０のい
ずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０１８年７月１８日出願の米国仮特許出願第６２／６９９，９２３号の優
先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
電子的に提出された配列表の参照
本願は、２０１９年７月８日に作成されて、８１，９２０バイトのサイズを有する「Ｓ
ｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１１３－２２８．ｔｘｔ」という名のテ
キストファイルとして本出願とともに提出された配列表を参照により組み込む。
本願は、２０１９年７月８日に作成されて、８１，９２０バイトのサイズを有する「Ｓ
ｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１１３－２２８．ｔｘｔ」という名のテ
キストファイルとして本出願とともに提出された配列表を参照により組み込む。
【0003】
１．導入
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄
液に、完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達
するための組成物及び方法を記載する。
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄
液に、完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達
するための組成物及び方法を記載する。
【背景技術】
【0004】
２．発明の背景
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）は、発生率が１００，０００件の出生のうち１件と推定
されている稀な劣性遺伝疾患である（Ｍｏｏｒｅ Ｄ ｅｔ ａｌ．２００８，Ｏｒｐｈ
ａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３）。ＭＰＳ Ｉは、
遍在する複合多糖類、ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸のリソソーム異化に必要な酵素で
ある、α－ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）の欠損によって生じる。これらの多糖類はグ
リコサミノグリカン（ＧＡＧ）と呼ばれ、ＭＰＳ Ｉ患者の組織に蓄積されて、特徴的な
貯蔵病変及び多様な疾患後遺症をもたらす。患者は、低身長、骨及び関節の変形、顔の特
徴の粗雑化、肝脾腫、心臓弁膜疾患、閉塞性睡眠時無呼吸、再発性上気道感染症、聴覚障
害、手根管症候群、及び角膜混濁による視覚障害を呈し得る（Ｂｅｃｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ
．，２０１４，Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ＭＰＳ Ｉ：ｇｌｏｂ
ａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＭＰＳ Ｉ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ．
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ １６（１０）：７５９－７６５）。さらに、多くの患者は水頭症、脊髄圧迫症、及び
一部の患者では認知障害を含み得る中枢神経系におけるＧＡＧの貯蔵に関連した症状を発
症する。
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）は、発生率が１００，０００件の出生のうち１件と推定
されている稀な劣性遺伝疾患である（Ｍｏｏｒｅ Ｄ ｅｔ ａｌ．２００８，Ｏｒｐｈ
ａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３）。ＭＰＳ Ｉは、
遍在する複合多糖類、ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸のリソソーム異化に必要な酵素で
ある、α－ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）の欠損によって生じる。これらの多糖類はグ
リコサミノグリカン（ＧＡＧ）と呼ばれ、ＭＰＳ Ｉ患者の組織に蓄積されて、特徴的な
貯蔵病変及び多様な疾患後遺症をもたらす。患者は、低身長、骨及び関節の変形、顔の特
徴の粗雑化、肝脾腫、心臓弁膜疾患、閉塞性睡眠時無呼吸、再発性上気道感染症、聴覚障
害、手根管症候群、及び角膜混濁による視覚障害を呈し得る（Ｂｅｃｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ
．，２０１４，Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ＭＰＳ Ｉ：ｇｌｏｂ
ａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＭＰＳ Ｉ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ．
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ １６（１０）：７５９－７６５）。さらに、多くの患者は水頭症、脊髄圧迫症、及び
一部の患者では認知障害を含み得る中枢神経系におけるＧＡＧの貯蔵に関連した症状を発
症する。
【0005】
ＭＰＳ Ｉ患者は、広範囲の疾患重症度及びＣＮＳ障害の程度に及ぶ。この重症度の多
様性は、残存するＩＤＵＡの発現と相関する；活性酵素の発現をもたらさない２つの突然
変異を有する患者（ナンセンス突然変異、欠失、及びいくつかのミスセンス突然変異を含
む）は、典型的に２歳になる前に症状を示し、正常な発達初期の後に例外なく重度の認知
機能低下を示す（Ｔｅｒｌａｔｏ ＮＪ ＆ Ｃｏｘ ＧＦ，２００３，Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ５（４）：
２８６－２９４）。この重症型形態のＭＰＳ Ｉは、ハーラー（Ｈ）症候群とも呼ばれる
。少量の活性ＩＤＵＡの生産をもたらす少なくとも１つの突然変異を有する患者は、ハー
ラー－シャイエ（ＨＳ）症候群またはシャイエ症候群と呼ばれる軽症型表現型を示す。こ
れらの患者は、幼少期の初期に症状を示し得るか、または人生の最初の１０年を経た後ま
で特定できない場合もある。概して、発症が遅れ、重症度が低下し得るものの、軽症形態
のＭＰＳ Ｉを有する患者は、ハーラー症候群を有する患者と同じあらゆる身体的特徴を
経験し得る（Ｖｉｊａｙ Ｓ＆Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，２００５，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａ
ｔｒｉｃａ ９４（７）：８７２－８７７）。また、減弱型ＭＰＳ Ｉを有する患者は、
高い割合で脊髄圧迫及び水頭症を含む神経学的合併症を経験する。減弱型ＭＰＳ Ｉを有
すると分類された患者のおよそ３０％において、認知障害が報告されている（Ｂｅｃｋ
Ｍ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃ
ｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍ
ｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６（１０）：７５９－７６５）。
様性は、残存するＩＤＵＡの発現と相関する；活性酵素の発現をもたらさない２つの突然
変異を有する患者（ナンセンス突然変異、欠失、及びいくつかのミスセンス突然変異を含
む）は、典型的に２歳になる前に症状を示し、正常な発達初期の後に例外なく重度の認知
機能低下を示す（Ｔｅｒｌａｔｏ ＮＪ ＆ Ｃｏｘ ＧＦ，２００３，Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ５（４）：
２８６－２９４）。この重症型形態のＭＰＳ Ｉは、ハーラー（Ｈ）症候群とも呼ばれる
。少量の活性ＩＤＵＡの生産をもたらす少なくとも１つの突然変異を有する患者は、ハー
ラー－シャイエ（ＨＳ）症候群またはシャイエ症候群と呼ばれる軽症型表現型を示す。こ
れらの患者は、幼少期の初期に症状を示し得るか、または人生の最初の１０年を経た後ま
で特定できない場合もある。概して、発症が遅れ、重症度が低下し得るものの、軽症形態
のＭＰＳ Ｉを有する患者は、ハーラー症候群を有する患者と同じあらゆる身体的特徴を
経験し得る（Ｖｉｊａｙ Ｓ＆Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，２００５，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａ
ｔｒｉｃａ ９４（７）：８７２－８７７）。また、減弱型ＭＰＳ Ｉを有する患者は、
高い割合で脊髄圧迫及び水頭症を含む神経学的合併症を経験する。減弱型ＭＰＳ Ｉを有
すると分類された患者のおよそ３０％において、認知障害が報告されている（Ｂｅｃｋ
Ｍ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃ
ｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍ
ｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６（１０）：７５９－７６５）。
【0006】
酵素補充療法（ＥＲＴ）［Ａｌｄｕｒａｚｙｍｅ（登録商標）（ラロニダーゼ）］は、
ＭＰＳ Ｉの全身症状の標準治療として認められているが、ＣＮＳ症状発現を治療しない
（ｄｅ Ｒｕ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ６：９；Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００
７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。造血幹細胞移植（ＨＳＣ
Ｔ）は、ＭＰＳ Ｉの神経認知症状に影響を与えるが、手順に重大な制約がある。ＭＰＳ
ＩのためのＨＳＣＴは、相当な病的状態及び最大２０％の死亡率に関連付けられ、ＩＤ
ＵＡ発現が安定してもなお患者はＨＳＣＴの最長１年後に神経認知機能の低下に直面する
ため、治療は不完全である（ｄｅ Ｒｕ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｏｒｐｈａｎ
ｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ６：９；Ｆｌｅｍｉｎｇ
ＤＲ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
２（４）：２９９－３０４；Ｂｏｅｌｅｎｓ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｏｎ
ｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４０（３）：２２５－２３３；Ｓ
ｏｕｉｌｌｅｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐ
ｌａｎｔａｔｉｏｎ ３１（１２）：１１０５－１１１７；Ｗｈｉｔｌｅｙ ＣＢ，ｅｔ
ａｌ．，１９９３，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ ４６（２）：２０９－２１８）。移植に成功した患者において、知性は典
型的には、正常より著しく下回ったままである。
ＭＰＳ Ｉの全身症状の標準治療として認められているが、ＣＮＳ症状発現を治療しない
（ｄｅ Ｒｕ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ６：９；Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００
７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。造血幹細胞移植（ＨＳＣ
Ｔ）は、ＭＰＳ Ｉの神経認知症状に影響を与えるが、手順に重大な制約がある。ＭＰＳ
ＩのためのＨＳＣＴは、相当な病的状態及び最大２０％の死亡率に関連付けられ、ＩＤ
ＵＡ発現が安定してもなお患者はＨＳＣＴの最長１年後に神経認知機能の低下に直面する
ため、治療は不完全である（ｄｅ Ｒｕ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｏｒｐｈａｎ
ｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ６：９；Ｆｌｅｍｉｎｇ
ＤＲ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
２（４）：２９９－３０４；Ｂｏｅｌｅｎｓ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｏｎ
ｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４０（３）：２２５－２３３；Ｓ
ｏｕｉｌｌｅｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐ
ｌａｎｔａｔｉｏｎ ３１（１２）：１１０５－１１１７；Ｗｈｉｔｌｅｙ ＣＢ，ｅｔ
ａｌ．，１９９３，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ ４６（２）：２０９－２１８）。移植に成功した患者において、知性は典
型的には、正常より著しく下回ったままである。
【発明の概要】
【0007】
３．発明の概要
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群と診断された患者を含
むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の中枢
神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダ
ーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態において、治療は
遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体を
コードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉと診断さ
れた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産
物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成される
。デポーからＣＳＦに分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳ中の細胞によってエンド
サイトーシスされて、レシピエント細胞における酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃ
ｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態において、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養
で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば酵素を注入することにより投与
することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの
利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によ
ってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの
酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要
となるであろう。
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群と診断された患者を含
むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の中枢
神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダ
ーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態において、治療は
遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体を
コードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉと診断さ
れた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産
物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成される
。デポーからＣＳＦに分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳ中の細胞によってエンド
サイトーシスされて、レシピエント細胞における酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃ
ｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態において、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養
で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば酵素を注入することにより投与
することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの
利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によ
ってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの
酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要
となるであろう。
【0008】
導入遺伝子によってコードされるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、これらに限定はされないが、
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならび
にアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えばこれらに限定はされないが、図２
に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含
む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示
す（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０
１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ
突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れているＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃
５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０
（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程
度の、もしくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まない
ことを条件とする）。
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならび
にアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えばこれらに限定はされないが、図２
に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含
む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示
す（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０
１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ
突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れているＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃
５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０
（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程
度の、もしくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まない
ことを条件とする）。
【0009】
例えば、ｈＩＤＵＡの特定位置でのアミノ酸置換は図２（その全体が参照により本明細
書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６
２８、図Ｓ８に報告されたオーソログのアラインメントを示す）に表されるＩＤＵＡオー
ソログにおけるその位置に見出される対応する非保存的アミノ酸残基から選択することが
できる（ただし、そのような置換は図３に示されるか、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２０
０２もしくはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告される有害な突然変異のいずれも含
まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験
動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、
欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルにおけるＭＰＳ Ｉのためのｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでの従来のアッセイによって試験されるＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減
期を維持するか、または増加させるものとするべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵
素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素
アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイに
ついては、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｏｐｗ
ｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６
５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２
：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒ
ｉｆ ５：２２５－２３２を参照のこと）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正す
る能力は、例えば、培養中でＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイ
ルスベクターもしくは他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養中
のＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を加えることにより、またはＭ
ＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を発現及び分泌するように操作した
ヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養中で評価し、例えば、培養中のＭＰＳ
Ｉ細胞におけるＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより
、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれているＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ
．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照のこと）。
書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６
２８、図Ｓ８に報告されたオーソログのアラインメントを示す）に表されるＩＤＵＡオー
ソログにおけるその位置に見出される対応する非保存的アミノ酸残基から選択することが
できる（ただし、そのような置換は図３に示されるか、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２０
０２もしくはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告される有害な突然変異のいずれも含
まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験
動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、
欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルにおけるＭＰＳ Ｉのためのｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでの従来のアッセイによって試験されるＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減
期を維持するか、または増加させるものとするべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵
素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素
アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイに
ついては、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｏｐｗ
ｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６
５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２
：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒ
ｉｆ ５：２２５－２３２を参照のこと）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正す
る能力は、例えば、培養中でＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイ
ルスベクターもしくは他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養中
のＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を加えることにより、またはＭ
ＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を発現及び分泌するように操作した
ヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養中で評価し、例えば、培養中のＭＰＳ
Ｉ細胞におけるＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより
、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれているＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ
．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照のこと）。
【0010】
ＭＰＳ Ｉのための動物モデルは、マウス（例えば、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，１
９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１を参照のこと）、短毛
の雑種ネコ（例えば、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅ
ｓ １３（１１）：１２９４－９７を参照のこと）、及びいくつかの品種のイヌ（例えば
、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６
８；Ｓｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２
４４－２４８を参照のこと）について記載されている。イヌのＭＰＳ Ｉモデルは、ＩＤ
ＵＡ突然変異により検出可能なタンパク質が喪失するため、ＭＰＳ Ｉの最も重度の形態
であるハーラー症候群に類似している。ＩＤＵＡタンパク質間の遺伝子相同性が高いこと
（図２のアラインメントを参照のこと）は、ｈＩＤＵＡが動物において機能的であること
を意味し、ｈＩＤＵＡを包含する治療はこれらの動物モデルで試験することができる。
９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１を参照のこと）、短毛
の雑種ネコ（例えば、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅ
ｓ １３（１１）：１２９４－９７を参照のこと）、及びいくつかの品種のイヌ（例えば
、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６
８；Ｓｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２
４４－２４８を参照のこと）について記載されている。イヌのＭＰＳ Ｉモデルは、ＩＤ
ＵＡ突然変異により検出可能なタンパク質が喪失するため、ＭＰＳ Ｉの最も重度の形態
であるハーラー症候群に類似している。ＩＤＵＡタンパク質間の遺伝子相同性が高いこと
（図２のアラインメントを参照のこと）は、ｈＩＤＵＡが動物において機能的であること
を意味し、ｈＩＤＵＡを包含する治療はこれらの動物モデルで試験することができる。
【0011】
好ましくは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞に
おいて機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチ
ンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御されるべきであり、かつベクター
によって駆動される導入遺伝子の発現を増強する他の発現制御エレメント（例えば、ニワ
トリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができ
る。ｈＩＤＵＡ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入されたＣＮＳ
細胞による適切な翻訳中及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）
を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞によっ
て使用されるそのようなシグナルペプチドには：
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱ
ＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）があり得るが、これらに限
定されない。
シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも呼ぶこ
とができる。
おいて機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチ
ンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御されるべきであり、かつベクター
によって駆動される導入遺伝子の発現を増強する他の発現制御エレメント（例えば、ニワ
トリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができ
る。ｈＩＤＵＡ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入されたＣＮＳ
細胞による適切な翻訳中及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）
を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞によっ
て使用されるそのようなシグナルペプチドには：
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱ
ＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）があり得るが、これらに限
定されない。
シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも呼ぶこ
とができる。
【0012】
導入遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリ
ア細胞を含むがこれらに限定されない、ＣＮＳの細胞への向性を有するべきである。その
ようなベクターは非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むこと
ができ、特にＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ま
しい。これらに限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国
特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎによって記載された、特に好ましくは
ＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、な
らびにその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第８，６２８，
９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４
，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅによって
記載されたＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイ
キッドＤＮＡ」コンストラクト（５．２節を参照のこと）と呼ばれるレンチウイルスベク
ター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに
限定されない、他のウイルスベクターを使用することができる。
ア細胞を含むがこれらに限定されない、ＣＮＳの細胞への向性を有するべきである。その
ようなベクターは非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むこと
ができ、特にＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ま
しい。これらに限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国
特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎによって記載された、特に好ましくは
ＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、な
らびにその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第８，６２８，
９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４
，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅによって
記載されたＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイ
キッドＤＮＡ」コンストラクト（５．２節を参照のこと）と呼ばれるレンチウイルスベク
ター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに
限定されない、他のウイルスベクターを使用することができる。
【0013】
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及
び任意の賦形剤を含む製剤化緩衝液中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡベクターの懸濁液を含む。
ある実施形態において、医薬組成物は、髄腔内投与に好適である。ある実施形態において
、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある実施形態において、
医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔内への注入に好適である。ある実施形
態において、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある実施形態において、医薬組成
物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
び任意の賦形剤を含む製剤化緩衝液中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡベクターの懸濁液を含む。
ある実施形態において、医薬組成物は、髄腔内投与に好適である。ある実施形態において
、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある実施形態において、
医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔内への注入に好適である。ある実施形
態において、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある実施形態において、医薬組成
物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
【0014】
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下腔内投与を介して（すなわち、くも膜下腔
内へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて散布され、ＣＮＳの細胞が形質導入され
るようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法で、例えば、
頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる
。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺によって実施す
ることができ、または、患者に実行できそうな場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔
への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（典型的にＣＳＦの試料を収集するた
めに実施される診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。ある
いは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に
使用される、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接脳室内に滴下するこ
とができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達してもよ
い。ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、ま
たは９．２５～２７７μｇ／ｍＬの範囲の濃度に維持する用量を使用すべきである。
内へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて散布され、ＣＮＳの細胞が形質導入され
るようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法で、例えば、
頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる
。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺によって実施す
ることができ、または、患者に実行できそうな場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔
への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（典型的にＣＳＦの試料を収集するた
めに実施される診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。ある
いは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に
使用される、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接脳室内に滴下するこ
とができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達してもよ
い。ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、ま
たは９．２５～２７７μｇ／ｍＬの範囲の濃度に維持する用量を使用すべきである。
【0015】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵ
Ａの濃度を直接測定することによってモニタリングし、または患者の血清において検出さ
れたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態
において、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであるこ
とは、ＣＳＦ中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態
において、組換えベクターは、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００
ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
Ａの濃度を直接測定することによってモニタリングし、または患者の血清において検出さ
れたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態
において、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであるこ
とは、ＣＳＦ中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態
において、組換えベクターは、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００
ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0016】
背景として、ヒトＩＤＵＡは、６５３アミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、図１に
おいて表される６つの可能性のある部位（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｎ
４１５、及びＮ４５１）でＮ－グリコシル化される。シグナル配列が除去され、ポリペプ
チドはリソソーム内で成熟形態にプロセシングされる：７５ｋＤａの細胞内前駆体は数時
間で７２ｋＤａまでトリミングされ、最終的に、４～５日かけて６６ｋＤａの細胞内形態
にプロセシングされる。ＩＤＵＡの分泌形態（使用するアッセイに応じて７６ｋＤａまた
は８２ｋＤａ）は、マンノース－６－リン酸受容体を介して細胞に容易にエンドサイトー
シスされ、より小さい細胞内形態と同様にプロセシングされる。（その各々の全体が参照
により本明細書に組み込まれている、Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ
．，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２５９：１９９－２０８；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２７４：２６３－２６８；及びＺｈａｏ ｅｔ
ａｌ．，１９９７ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５を参照の
こと）。
おいて表される６つの可能性のある部位（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｎ
４１５、及びＮ４５１）でＮ－グリコシル化される。シグナル配列が除去され、ポリペプ
チドはリソソーム内で成熟形態にプロセシングされる：７５ｋＤａの細胞内前駆体は数時
間で７２ｋＤａまでトリミングされ、最終的に、４～５日かけて６６ｋＤａの細胞内形態
にプロセシングされる。ＩＤＵＡの分泌形態（使用するアッセイに応じて７６ｋＤａまた
は８２ｋＤａ）は、マンノース－６－リン酸受容体を介して細胞に容易にエンドサイトー
シスされ、より小さい細胞内形態と同様にプロセシングされる。（その各々の全体が参照
により本明細書に組み込まれている、Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ
．，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２５９：１９９－２０８；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２７４：２６３－２６８；及びＺｈａｏ ｅｔ
ａｌ．，１９９７ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５を参照の
こと）。
【0017】
ｈＩＤＵＡの全体の構造は、３つのドメインからなる：残基４２－３９６は、古典的な
（β／α）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＩＭ）バレルドメインを形成し、残基２７
－４２及び３９７－５４５は、短いへリックス－ループ－へリックス（４８２－５０８）
を有するβ－サンドイッチドメインを形成し、かつ残基５４６－６４２は、Ｉｇ様ドメイ
ンを形成する。最後に挙げた２つのドメインは、Ｃ５４１及びＣ５７７間のジスルフィド
架橋によって連結される。β－サンドイッチ及びＩｇ様ドメインは、ＴＩＭバレルの１番
目、７番目、及び８番目のα－へリックスに結合される。β－ヘアピン（β１２－β１３
）は、ＴＩＭバレルの８番目のβ－ストランド及び８番目のα－へリックスの間に挿入さ
れ、これは基質結合及び酵素活性に要求されるＮ－グリコシル化Ｎ３７２を含む。（図１
、及びその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ
．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３，及びＳａｉｔｏ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２に記載の結
晶構造を参照のこと）。
（β／α）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＩＭ）バレルドメインを形成し、残基２７
－４２及び３９７－５４５は、短いへリックス－ループ－へリックス（４８２－５０８）
を有するβ－サンドイッチドメインを形成し、かつ残基５４６－６４２は、Ｉｇ様ドメイ
ンを形成する。最後に挙げた２つのドメインは、Ｃ５４１及びＣ５７７間のジスルフィド
架橋によって連結される。β－サンドイッチ及びＩｇ様ドメインは、ＴＩＭバレルの１番
目、７番目、及び８番目のα－へリックスに結合される。β－ヘアピン（β１２－β１３
）は、ＴＩＭバレルの８番目のβ－ストランド及び８番目のα－へリックスの間に挿入さ
れ、これは基質結合及び酵素活性に要求されるＮ－グリコシル化Ｎ３７２を含む。（図１
、及びその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ
．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３，及びＳａｉｔｏ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２に記載の結
晶構造を参照のこと）。
【0018】
本発明は部分的に、以下の原理に基づく：
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳにおけるロバストなプロセスである、
グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのた
めの細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、そ
の各々の全体が参照により組み込まれている、例えばヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ
６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳が他の組織に見出されるよりはるかに多
くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化
タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏ
ｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅ
ｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞によって分泌されたチロシン硫酸化糖
タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ
Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘ
ｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照のこと。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１と特定される６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル
化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５
ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要
求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌された酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ
細胞の横断修正に要求される。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース
型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取
り込まれる（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記載
の遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に７
６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマン
ノース－６リン酸化された、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。
分泌されたグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞
及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングされるべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介す
る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素
について行われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である
。（例えば、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例
えばＤａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵素前駆体
の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示されたように、対照細胞のレベルに近いレ
ベルまで減少すると予測される。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば神経
細胞及びグリア細胞によって生成される酵素前駆体の取り込みは、取り込み量が対照細胞
より４倍高く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵
素前駆体の酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２
００２に示されたように高レベルを維持すると予測される。このアッセイを用いると、脳
細胞によって生成される酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測し、特に、異なる種類の細胞に
よって生成される酵素前駆体中のＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に
記載の遺伝子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、
高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたら
すべきである。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために
要求されるＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤ
ＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、その全体が参照により
組み込まれている、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸
の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１
３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照のこと。「規則」は、以下の通りに要約する
ことができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有し、かつＹの－１位が中性
または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えばＲ、Ｋ、
またはＨではない）。いかなる理論に束縛されることも意図するものではないが、チロシ
ン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連する
ことは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る
。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４
６３２－１４６３３を参照のこと）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向
上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加される
。大事なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加されるグリカンは２，６－シアル酸
を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体Ｎｅｕ
Ｇｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を
組み込まない高度にプロセシングされた複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグ
リカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求される２，６－シアリルトランスフェラーゼを
有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代
わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇ
ｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製されるラロニダーゼには存在しない。
例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１
－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ
１９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラー
ゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限されている』と考えられている」
）を参照のこと。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応
して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産
し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３
－１１５６を参照のこと。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、
導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞におけるロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロ
シン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソ
ームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、他のタンパ
ク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）のアビディティが増大し
、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進されることが示されている
。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び
Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７
３－７９を参照のこと）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして
起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）
は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗ
ｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに見出すことができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基
づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニ
ダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細
胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅ
ｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３
７、特にｐ．１５３７の考察を参照のこと）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入されたタンパク質薬物
の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され
得る。プロセス関連不純物、例えば宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及
び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えばタンパク質分解物及び構造特製、例え
ばグリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバント
としての機能を果たすことによって免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び
産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業的に製造されるＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし
得る細胞培養、精製、製剤化、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タ
ンパク質はｉｎ ｖｉｖｏで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タン
パク質産物は組換え技術によって生産されるタンパク質と関連した生産物関連不純物／分
解物、例えばタンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例え
ば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器と
の表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しか
し、導入遺伝子をｉｎ ｖｉｖｏで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在
しない。また、酸化、例えばメチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タ
ンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えばストレス負荷された細胞培養条件、金属及
び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤中の不純物によって引き起こされる。ｉｎ
ｖｉｖｏで発現されるタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化され得るが、ヒトは多く
の生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下する
だけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで
生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力
、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書
に記載の遺伝子治療アプローチは、商業的に製造された産物と比較して免疫原性の低下し
たｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳにおけるロバストなプロセスである、
グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのた
めの細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、そ
の各々の全体が参照により組み込まれている、例えばヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ
６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳が他の組織に見出されるよりはるかに多
くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化
タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏ
ｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅ
ｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞によって分泌されたチロシン硫酸化糖
タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ
Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘ
ｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照のこと。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１と特定される６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル
化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５
ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要
求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌された酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ
細胞の横断修正に要求される。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース
型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取
り込まれる（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記載
の遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に７
６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマン
ノース－６リン酸化された、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。
分泌されたグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞
及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングされるべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介す
る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素
について行われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である
。（例えば、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例
えばＤａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵素前駆体
の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示されたように、対照細胞のレベルに近いレ
ベルまで減少すると予測される。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば神経
細胞及びグリア細胞によって生成される酵素前駆体の取り込みは、取り込み量が対照細胞
より４倍高く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵
素前駆体の酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２
００２に示されたように高レベルを維持すると予測される。このアッセイを用いると、脳
細胞によって生成される酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測し、特に、異なる種類の細胞に
よって生成される酵素前駆体中のＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に
記載の遺伝子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、
高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたら
すべきである。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために
要求されるＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤ
ＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、その全体が参照により
組み込まれている、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸
の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１
３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照のこと。「規則」は、以下の通りに要約する
ことができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有し、かつＹの－１位が中性
または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えばＲ、Ｋ、
またはＨではない）。いかなる理論に束縛されることも意図するものではないが、チロシ
ン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連する
ことは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る
。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４
６３２－１４６３３を参照のこと）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向
上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加される
。大事なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加されるグリカンは２，６－シアル酸
を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体Ｎｅｕ
Ｇｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を
組み込まない高度にプロセシングされた複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグ
リカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求される２，６－シアリルトランスフェラーゼを
有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代
わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇ
ｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製されるラロニダーゼには存在しない。
例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１
－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ
１９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラー
ゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限されている』と考えられている」
）を参照のこと。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応
して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産
し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３
－１１５６を参照のこと。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、
導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞におけるロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロ
シン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソ
ームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、他のタンパ
ク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）のアビディティが増大し
、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進されることが示されている
。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び
Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７
３－７９を参照のこと）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして
起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）
は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗ
ｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに見出すことができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基
づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニ
ダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細
胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅ
ｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３
７、特にｐ．１５３７の考察を参照のこと）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入されたタンパク質薬物
の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され
得る。プロセス関連不純物、例えば宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及
び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えばタンパク質分解物及び構造特製、例え
ばグリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバント
としての機能を果たすことによって免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び
産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業的に製造されるＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし
得る細胞培養、精製、製剤化、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タ
ンパク質はｉｎ ｖｉｖｏで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タン
パク質産物は組換え技術によって生産されるタンパク質と関連した生産物関連不純物／分
解物、例えばタンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例え
ば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器と
の表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しか
し、導入遺伝子をｉｎ ｖｉｖｏで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在
しない。また、酸化、例えばメチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タ
ンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えばストレス負荷された細胞培養条件、金属及
び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤中の不純物によって引き起こされる。ｉｎ
ｖｉｖｏで発現されるタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化され得るが、ヒトは多く
の生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下する
だけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで
生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力
、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書
に記載の遺伝子治療アプローチは、商業的に製造された産物と比較して免疫原性の低下し
たｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
【0019】
前述の理由のために、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの生産は、例えば、ＭＰＳ Ｉ疾患（ハーラ
ー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエを含むが、これらに限定はされない）と診断さ
れる患者（ヒト対象）のＣＳＦにＨｕＧｌｙＩＤＵＡをコードするウイルスベクターまた
は他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞によって分泌さ
れる完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的
に供給するＣＮＳ中の永続的なデポーを作製することによる、遺伝子治療によって達成さ
れるＭＰＳ Ｉの治療のための「バイオベター」分子をもたらすべきである。デポーから
ＣＳＦ中に分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳ中の細胞によりエン
ドサイトーシスされ、ＭＰＳ Ｉレシピエント細胞における酵素欠陥を「横断修正」する
。
ー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエを含むが、これらに限定はされない）と診断さ
れる患者（ヒト対象）のＣＳＦにＨｕＧｌｙＩＤＵＡをコードするウイルスベクターまた
は他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞によって分泌さ
れる完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的
に供給するＣＮＳ中の永続的なデポーを作製することによる、遺伝子治療によって達成さ
れるＭＰＳ Ｉの治療のための「バイオベター」分子をもたらすべきである。デポーから
ＣＳＦ中に分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳ中の細胞によりエン
ドサイトーシスされ、ＭＰＳ Ｉレシピエント細胞における酵素欠陥を「横断修正」する
。
【0020】
遺伝子治療またはタンパク質治療アプローチにおいて生産される全てのｈＩＤＵＡ分子
が完全にグリコシル化され、硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖
タンパク質の集団は、有効性を実証するのに十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加
及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子
治療処置の目的は、疾患の進行を減速させ、または停止させることである。有効性は、認
知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止もしくは減少）；ＣＳＦ及び／もしくは血清
中の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／もしく
は血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することによってモニタリングすることができる
。炎症の徴候及び他の安全事象をモニタリングすることもできる。
が完全にグリコシル化され、硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖
タンパク質の集団は、有効性を実証するのに十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加
及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子
治療処置の目的は、疾患の進行を減速させ、または停止させることである。有効性は、認
知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止もしくは減少）；ＣＳＦ及び／もしくは血清
中の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／もしく
は血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することによってモニタリングすることができる
。炎症の徴候及び他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0021】
遺伝子治療に対する代替または追加治療として、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質は
組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株で生産することができ、糖タンパク質は、ＥＲＴの
ために、全身的に及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ Ｉと診断された患者に投与することが
できる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は
、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ
、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎
児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、Ｈ
ｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、その全体が参
照により組み込まれている、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使
用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６
，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２
の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒ
ｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照のこと）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付
加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化
を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６－
シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を
共発現するように宿主細胞を操作することによって強化することができる。
組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株で生産することができ、糖タンパク質は、ＥＲＴの
ために、全身的に及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ Ｉと診断された患者に投与することが
できる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は
、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ
、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎
児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、Ｈ
ｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、その全体が参
照により組み込まれている、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使
用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６
，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２
の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒ
ｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照のこと）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付
加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化
を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６－
シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を
共発現するように宿主細胞を操作することによって強化することができる。
【0022】
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子
治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがっ
てタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容し
ないヒト対象において、発現されたｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。
治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがっ
てタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容し
ないヒト対象において、発現されたｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。
【0023】
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩ
ＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー）を有する患者を治療する場合
に、適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、例えばミコフェノ
ール酸と組合わせた、もしくはプレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンなどの
コルチコステロイドと組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用される他の
免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑制治
療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、ある実施形態において、免疫抑制治療に
よる前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、治療医師の判断に基づいて、遺伝子
治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発された場合、例えば、１８
０日後に、中止してもよい。
ＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー）を有する患者を治療する場合
に、適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、例えばミコフェノ
ール酸と組合わせた、もしくはプレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンなどの
コルチコステロイドと組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用される他の
免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑制治
療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、ある実施形態において、免疫抑制治療に
よる前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、治療医師の判断に基づいて、遺伝子
治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発された場合、例えば、１８
０日後に、中止してもよい。
【0024】
他の利用可能な治療の送達を伴うＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達の組合わせは、
本発明の方法に包含される。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、または
その後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉ
のための利用可能な治療には、これらに限定はされないが、全身的に、もしくはＣＳＦに
投与されるラロニダーゼを使用する酵素補充療法及び／またはＨＳＣＴ療法が挙げられる
。
（例示的実施形態）
１．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対
象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イ
ズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、方法。
２．ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対象の脳の脳脊髄液に
ヒトグリア細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含
む、方法。
３．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、免疫抑制治療を該対象に施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含む、パラグラフ１または２に記
載の方法。
４．ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトＩＤＵＡを送達す
ることを含む、方法。
５．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル化
ヒトＩＤＵＡを送達することを含む、方法。
６．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、免疫抑制治療を該対象に施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、方法。
７．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液にチロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達する
ことを含む、方法。
８．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対
象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡが
ヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にα２，６－シアル酸付加
される、投与することを含む、方法。
９．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対
象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡが
ヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグリコシル化されるが検
出可能なＮｅｕＧｃを含まない、投与することを含む、方法。
１０．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡ
がヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグリコシル化されるが
検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、投与することを含む、方
法。
１１．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡ
がヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にチロシン硫酸化される
、投与することを含む、方法。
１２．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む
該ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含む、方法。
１３．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコ
シル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含む、方法。
１４．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－
Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与す
ることを含む、方法。
１５．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することにより、チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを放出するデ
ポーが形成される、投与することを含む、方法。
１６．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、該対象に、（ａ）タクロ
リムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）
タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／ま
たはメチルプレドニゾロンの組合わせを投与することを含む、免疫抑制療法を該対象に施
し、かつその後も継続することをさらに含む、パラグラフ３～１５のいずれか１つに記載
の方法。
１７．該免疫抑制治療を１８０日後に中止する、パラグラフ１６に記載の方法。
１８．該ヒトＩＤＵＡが配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～１７のいずれ
か１項に記載の方法。
１９．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、該対象に、（ａ）タクロ
リムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）
タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／ま
たはメチルプレドニゾロンの組合わせを投与することを含む、免疫抑制療法を該対象に施
すことをさらに含む、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．該免疫抑制治療を１８０日後に中止する、パラグラフ１９に記載の方法。
２１．α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神
経細胞株を該組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する
、パラグラフ１２に記載の方法。
２２．検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該グリコシル化ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中で
ヒト神経細胞株を該組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確
認する、パラグラフ１３に記載の方法。
２３．検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない該グリコシル化ＩＤ
ＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を該組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認する、パラグラフ１４のいずれか１つに記載の方法。
２４．チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を該組換
えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する、パラグラフ１５
に記載の方法。
２５．生産をマンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で確認する、パラグラフ２１
～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．該発現ベクターまたは組換えヌクレオチド発現ベクターが、シグナルペプチドをコ
ードする、パラグラフ８～１５及び２１～２５のいずれか１つに記載の方法、またはパラ
グラフ８～１５のいずれか１つに直接的もしくは間接的に従属する場合のパラグラフ１６
～１７のいずれか１つに記載の方法。
２７．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む
該ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、を含み、
該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中
で該α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該ＩＤＵＡを生産する、方法。
２８．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベ
クターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化
ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含み、該組換えベクターは、培
養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中でグリコシル化されるが
検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該ＩＤＵＡを生産する、方法。
２９．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベ
クターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ
抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含
み、該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い該ＩＤＵＡを生産する、方法。
３０．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを放出
するデポーが形成される、投与することを含み、
該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中
でチロシン硫酸化された該ＩＤＵＡを生産する、方法。
３１．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、該対象に、（ａ）タクロ
リムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）
タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／ま
たはメチルプレドニゾロンの組合わせを投与することを含む、免疫抑制療法を該対象に施
し、かつその後も継続することをさらに含む、パラグラフ２７～３０のいずれかに記載の
方法。
３２．該免疫抑制治療を１８０日後に中止する、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．該ヒト対象が３歳未満である、パラグラフ１～３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．該ヒト対象が３歳未満であり、該発現ベクターまたは該組換えヌクレオチド発現ベ
クターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０１
０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、単回固定用量）の用量で投与される（例えば、ＩＣ投与（例
えば、後頭下注入によって））、パラグラフ８～１５及び２１～３３のいずれか１つに記
載の方法、または請求項８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合
のパラグラフ１６～２０のいずれか１つに記載の方法。
３５．該ヒト対象が３歳未満であり、該発現ベクターまたは該組換えヌクレオチド発現ベ
クターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、単回固定
用量）の用量で投与される（例えば、ＩＣ投与（例えば、後頭下注入によって））、パラ
グラフ８～１５及び２１～３３のいずれか１つに記載の方法、または請求項８～１５のい
ずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合のパラグラフ１６～２０のいずれか１
つに記載の方法。
３６．該ヒト対象が３歳未満であり、該発現ベクターまたは該組換えヌクレオチド発現ベ
クターが、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量～５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、単回固
定用量）の用量で投与される（例えば、ＩＣ投与（例えば、後頭下注入によって））、パ
ラグラフ８～１５及び２１～３３のいずれか１つに記載の方法、または請求項８～１５の
いずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合のパラグラフ１６～２０のいずれか
１つに記載の方法。
本発明の方法に包含される。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、または
その後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉ
のための利用可能な治療には、これらに限定はされないが、全身的に、もしくはＣＳＦに
投与されるラロニダーゼを使用する酵素補充療法及び／またはＨＳＣＴ療法が挙げられる
。
（例示的実施形態）
１．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対
象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イ
ズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、方法。
２．ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対象の脳の脳脊髄液に
ヒトグリア細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含
む、方法。
３．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、免疫抑制治療を該対象に施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含む、パラグラフ１または２に記
載の方法。
４．ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトＩＤＵＡを送達す
ることを含む、方法。
５．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル化
ヒトＩＤＵＡを送達することを含む、方法。
６．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、免疫抑制治療を該対象に施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、方法。
７．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液にチロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達する
ことを含む、方法。
８．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対
象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡが
ヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にα２，６－シアル酸付加
される、投与することを含む、方法。
９．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト対
象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡが
ヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグリコシル化されるが検
出可能なＮｅｕＧｃを含まない、投与することを含む、方法。
１０．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡ
がヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグリコシル化されるが
検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、投与することを含む、方
法。
１１．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤＵＡ
がヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にチロシン硫酸化される
、投与することを含む、方法。
１２．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む
該ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含む、方法。
１３．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコ
シル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含む、方法。
１４．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－
Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与す
ることを含む、方法。
１５．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することにより、チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを放出するデ
ポーが形成される、投与することを含む、方法。
１６．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、該対象に、（ａ）タクロ
リムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）
タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／ま
たはメチルプレドニゾロンの組合わせを投与することを含む、免疫抑制療法を該対象に施
し、かつその後も継続することをさらに含む、パラグラフ３～１５のいずれか１つに記載
の方法。
１７．該免疫抑制治療を１８０日後に中止する、パラグラフ１６に記載の方法。
１８．該ヒトＩＤＵＡが配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～１７のいずれ
か１項に記載の方法。
１９．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、該対象に、（ａ）タクロ
リムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）
タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／ま
たはメチルプレドニゾロンの組合わせを投与することを含む、免疫抑制療法を該対象に施
すことをさらに含む、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．該免疫抑制治療を１８０日後に中止する、パラグラフ１９に記載の方法。
２１．α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神
経細胞株を該組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する
、パラグラフ１２に記載の方法。
２２．検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該グリコシル化ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中で
ヒト神経細胞株を該組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確
認する、パラグラフ１３に記載の方法。
２３．検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない該グリコシル化ＩＤ
ＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を該組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認する、パラグラフ１４のいずれか１つに記載の方法。
２４．チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を該組換
えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する、パラグラフ１５
に記載の方法。
２５．生産をマンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で確認する、パラグラフ２１
～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．該発現ベクターまたは組換えヌクレオチド発現ベクターが、シグナルペプチドをコ
ードする、パラグラフ８～１５及び２１～２５のいずれか１つに記載の方法、またはパラ
グラフ８～１５のいずれか１つに直接的もしくは間接的に従属する場合のパラグラフ１６
～１７のいずれか１つに記載の方法。
２７．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む
該ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、を含み、
該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中
で該α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該ＩＤＵＡを生産する、方法。
２８．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベ
クターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化
ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含み、該組換えベクターは、培
養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中でグリコシル化されるが
検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該ＩＤＵＡを生産する、方法。
２９．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、該ヒト
対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベ
クターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ
抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することを含
み、該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い該ＩＤＵＡを生産する、方法。
３０．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド
発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを放出
するデポーが形成される、投与することを含み、
該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中
でチロシン硫酸化された該ＩＤＵＡを生産する、方法。
３１．該ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、該対象に、（ａ）タクロ
リムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）
タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／ま
たはメチルプレドニゾロンの組合わせを投与することを含む、免疫抑制療法を該対象に施
し、かつその後も継続することをさらに含む、パラグラフ２７～３０のいずれかに記載の
方法。
３２．該免疫抑制治療を１８０日後に中止する、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．該ヒト対象が３歳未満である、パラグラフ１～３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．該ヒト対象が３歳未満であり、該発現ベクターまたは該組換えヌクレオチド発現ベ
クターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０１
０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、単回固定用量）の用量で投与される（例えば、ＩＣ投与（例
えば、後頭下注入によって））、パラグラフ８～１５及び２１～３３のいずれか１つに記
載の方法、または請求項８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合
のパラグラフ１６～２０のいずれか１つに記載の方法。
３５．該ヒト対象が３歳未満であり、該発現ベクターまたは該組換えヌクレオチド発現ベ
クターが、２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、単回固定
用量）の用量で投与される（例えば、ＩＣ投与（例えば、後頭下注入によって））、パラ
グラフ８～１５及び２１～３３のいずれか１つに記載の方法、または請求項８～１５のい
ずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合のパラグラフ１６～２０のいずれか１
つに記載の方法。
３６．該ヒト対象が３歳未満であり、該発現ベクターまたは該組換えヌクレオチド発現ベ
クターが、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量～５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、単回固
定用量）の用量で投与される（例えば、ＩＣ投与（例えば、後頭下注入によって））、パ
ラグラフ８～１５及び２１～３３のいずれか１つに記載の方法、または請求項８～１５の
いずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合のパラグラフ１６～２０のいずれか
１つに記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【0025】
（４．図面の簡単な説明）
【図1】ヒトＩＤＵＡのアミノ酸配列である。６つのＮ－結合型グリコシル化部位（Ｎ）は、太字にして下線を引いてある；１つのチロシン－Ｏ－硫酸化部位（Ｙ）は太字にして下線を引き、完全な硫酸化部位配列は網掛けをつけてある；かつジスルフィド結合（２つのシステイン残基；Ｃ）は、太字にして、下線を引いてある。ＣＨＯ細胞中で作製される分泌型組換え産物のＮ末端はＡ２６であるが、ヒト肝臓のネイティブ細胞内酵素のＮ末端はＥ２７である（Ｋａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒｉｆ ５：２２５－２３２，ｐ．２３０を参照のこと）。
【0026】
【図2】ｈＩＤＵＡの公知のオーソログとのマルチプル配列アラインメントである。配列は、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒ．２を使用してアラインした（Ｌａｒｋｉｎ ＭＡ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３（２１）：２９４７－２９４８）。種の名前及びタンパク質ＩＤは、以下の通りである：ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ；ＮＰ＿０００１９４．２）、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ；Ｍ８１８９３．１）、ウシ（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ；ＸＰ＿００２６８８４９２．１）、マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ；ＮＰ＿０３２３５１．２）、ラット（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ；ＮＰ＿００１１６５５５５．１）、カモノハシ（Ｏｒｎｉｔｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ａｎａｔｉｎｕｓ；ＸＰ＿００１５１４１０２．２）、ニワトリ（Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ；ＮＰ＿００１０２６６０４．１）、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ；ＮＰ＿００１０８７０３１．１）、ゼブラフィッシュ（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ；ＸＰ＿００１９２３６８９．３）、ウニ（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｃｅｎｔｒｏｔｕｓ ｐｕｒｐｕｒａｔｕｓ；ＸＰ＿７９６８１３．３）ユウレイボヤ（Ｃｉｏｎａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ；ＸＰ＿００２１２０９３７．１）、及びショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ；ＮＰ＿６０９４８９．１）。ヒトタンパク質（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｔ３７４、Ｎ４１５、Ｎ４５１）のＮ－グリコシル化部位；基質結合に関与する残基（Ｒ８９、Ｈ９１、Ｎ１８１、Ｅ１８２、Ｈ２６２、Ｋ２６４、Ｅ２９９、Ｄ３４９、及びＲ３６３）及びＮ３７２でのＮ－グリカンとの相互作用に関与する残基（Ｐ５４、Ｈ５８、Ｗ３０６、Ｓ３０７、Ｙ３５５、Ｒ３６８及びＱ３７０）は、網掛けによって示す。（適応元：Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３；Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ｍａｔｅｒｉａｌ，Ｆｉｇ．Ｓ８）。
【0027】
【図3】ＭＰＳ Ｉ突然変異、ＩＤＵＡの構造変化及び表現型である。（Ｓａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２，Ｔａｂｌｅ ３より）。
【0028】
【図4】ＣＨＯ細胞によって分泌された組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼの６つのグリコシル化部位のオリゴ糖である。Ｃは複合型；Ｍはハイマンノース型；Ｐは、リン酸化されたハイマンノース型である。大文字はよく識別された、主要なオリゴ糖を意味するが、小文字は軽微なまたは不完全に特徴づけられた構成要素を意味する。（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５より）。
【0029】
【図5】ＡＡＶキャプシド１～９のＣｌｕｓｔａｌマルチプル配列アラインメントである（配列番号１６～２６）。他のアラインされたＡＡＶキャプシドの対応する位置からアミノ酸残基を「動員する」ことによって、アミノ酸置換（一番下の列に太字で示す）がＡＡＶ９及びＡＡＶ８キャプシドになされ得る。「ＨＶＲ」＝超可変領域と呼ばれる配列領域である。
【発明の詳細な説明】
【0030】
５．発明の詳細な説明
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群と診断された患者を含
むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の中枢
神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダ
ーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態において、治療は
遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体を
コードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉと診断さ
れた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産
物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成される
。デポーからＣＳＦに分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳ中の細胞によってエンド
サイトーシスされて、レシピエント細胞における酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃ
ｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態において、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養
で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば酵素を注入することにより投与
することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの
利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によ
ってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの
酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要
となるであろう。
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群と診断された患者を含
むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の中枢
神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダ
ーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態において、治療は
遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体を
コードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉと診断さ
れた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産
物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成される
。デポーからＣＳＦに分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳ中の細胞によってエンド
サイトーシスされて、レシピエント細胞における酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃ
ｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態において、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養
で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば酵素を注入することにより投与
することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの
利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によ
ってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの
酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要
となるであろう。
【0031】
導入遺伝子によってコードされるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、これらに限定はされないが、
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならび
にアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えばこれらに限定はされないが、図２
に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含
む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示
す（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０
１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ
突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れているＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃
５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０
（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程
度の、もしくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まない
ことを条件とする）ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる。
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならび
にアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えばこれらに限定はされないが、図２
に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含
む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示
す（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０
１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ
突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れているＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃
５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０
（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程
度の、もしくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まない
ことを条件とする）ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる。
【0032】
例えば、ｈＩＤＵＡの特定位置でのアミノ酸置換は図２（その全体が参照により本明細
書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６
２８、図Ｓ８に報告されたオーソログのアラインメントを示す）に表されるＩＤＵＡオー
ソログにおけるその位置に見出される対応する非保存的アミノ酸残基から選択することが
できる（ただし、そのような置換は図３に示されるか、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２０
０２もしくはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告される有害な突然変異のいずれも含
まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験
動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、
欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルにおけるＭＰＳ Ｉのためのｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでの従来のアッセイによって試験されるＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減
期を維持するか、または増加させるものとするべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵
素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素
アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイに
ついては、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｏｐｗ
ｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６
５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２
：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒ
ｉｆ ５：２２５－２３２を参照のこと）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正す
る能力は、例えば、培養中でＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイ
ルスベクターもしくは他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養中
のＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を加えることにより、またはＭ
ＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を発現及び分泌するように操作した
ヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養中で評価し、例えば、培養中のＭＰＳ
Ｉ細胞におけるＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより
、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれているＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ
．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照のこと）。
書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６
２８、図Ｓ８に報告されたオーソログのアラインメントを示す）に表されるＩＤＵＡオー
ソログにおけるその位置に見出される対応する非保存的アミノ酸残基から選択することが
できる（ただし、そのような置換は図３に示されるか、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２０
０２もしくはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告される有害な突然変異のいずれも含
まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験
動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、
欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルにおけるＭＰＳ Ｉのためのｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでの従来のアッセイによって試験されるＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減
期を維持するか、または増加させるものとするべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵
素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素
アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイに
ついては、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｏｐｗ
ｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６
５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２
：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒ
ｉｆ ５：２２５－２３２を参照のこと）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正す
る能力は、例えば、培養中でＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイ
ルスベクターもしくは他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養中
のＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を加えることにより、またはＭ
ＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を発現及び分泌するように操作した
ヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養中で評価し、例えば、培養中のＭＰＳ
Ｉ細胞におけるＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより
、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれているＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ
．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照のこと）。
【0033】
ＭＰＳ Ｉのための動物モデルは、マウス（例えば、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，１
９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１を参照のこと）、短毛
の雑種ネコ（例えば、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅ
ｓ １３（１１）：１２９４－９７を参照のこと）、及びいくつかの品種のイヌ（例えば
、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６
８；Ｓｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２
４４－２４８を参照のこと）について記載されている。イヌのＭＰＳ Ｉモデルは、ＩＤ
ＵＡ突然変異により検出可能なタンパク質が喪失するため、ＭＰＳ Ｉの最も重度の形態
であるハーラー症候群に類似している。ＩＤＵＡタンパク質間の遺伝子相同性が高いこと
（図２のアラインメントを参照のこと）は、ｈＩＤＵＡが動物において機能的であること
を意味し、ｈＩＤＵＡを包含する治療はこれらの動物モデルで試験することができる。
９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１を参照のこと）、短毛
の雑種ネコ（例えば、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅ
ｓ １３（１１）：１２９４－９７を参照のこと）、及びいくつかの品種のイヌ（例えば
、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６
８；Ｓｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２
４４－２４８を参照のこと）について記載されている。イヌのＭＰＳ Ｉモデルは、ＩＤ
ＵＡ突然変異により検出可能なタンパク質が喪失するため、ＭＰＳ Ｉの最も重度の形態
であるハーラー症候群に類似している。ＩＤＵＡタンパク質間の遺伝子相同性が高いこと
（図２のアラインメントを参照のこと）は、ｈＩＤＵＡが動物において機能的であること
を意味し、ｈＩＤＵＡを包含する治療はこれらの動物モデルで試験することができる。
【0034】
好ましくは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞に
おいて機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチ
ンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御されるべきであり、かつベクター
によって駆動される導入遺伝子の発現を増強する他の発現制御エレメント（例えば、ニワ
トリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができ
る。ｈｕＩＤＵＡ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入されたＣＮ
Ｓ細胞による適切な翻訳中及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化
）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞によ
って使用されるそのようなシグナルペプチドには：
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱ
ＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）があり得るが、これらに限
定されない。
シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも呼ぶこ
とができる。
おいて機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチ
ンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御されるべきであり、かつベクター
によって駆動される導入遺伝子の発現を増強する他の発現制御エレメント（例えば、ニワ
トリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができ
る。ｈｕＩＤＵＡ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入されたＣＮ
Ｓ細胞による適切な翻訳中及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化
）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞によ
って使用されるそのようなシグナルペプチドには：
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱ
ＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）があり得るが、これらに限
定されない。
シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも呼ぶこ
とができる。
【0035】
導入遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリ
ア細胞を含むがこれらに限定されない、ＣＮＳの細胞への向性を有するべきである。その
ようなベクターは非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むこと
ができ、特にＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ま
しい。これらに限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国
特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎによって記載された、特に好ましくは
ＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、な
らびにその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第８，６２８，
９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４
，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅによって
記載されたＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイ
キッドＤＮＡ」コンストラクト（５．２節を参照のこと）と呼ばれるレンチウイルスベク
ター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに
限定されない、他のウイルスベクターを使用することができる。
ア細胞を含むがこれらに限定されない、ＣＮＳの細胞への向性を有するべきである。その
ようなベクターは非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むこと
ができ、特にＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ま
しい。これらに限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国
特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎによって記載された、特に好ましくは
ＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、な
らびにその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第８，６２８，
９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４
，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅによって
記載されたＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイ
キッドＤＮＡ」コンストラクト（５．２節を参照のこと）と呼ばれるレンチウイルスベク
ター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに
限定されない、他のウイルスベクターを使用することができる。
【0036】
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及
び任意の賦形剤を含む製剤化緩衝液中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡベクターの懸濁液を含む。
ある実施形態において、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。あ
る実施形態において、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔内への注入に好
適である。ある実施形態において、医薬組成物は、髄腔内投与に好適である。ある実施形
態において、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある実施形態において、医薬組成
物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
び任意の賦形剤を含む製剤化緩衝液中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡベクターの懸濁液を含む。
ある実施形態において、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。あ
る実施形態において、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔内への注入に好
適である。ある実施形態において、医薬組成物は、髄腔内投与に好適である。ある実施形
態において、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある実施形態において、医薬組成
物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
【0037】
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下腔内投与を介して（すなわち、くも膜下腔
内へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて散布され、ＣＮＳの細胞が形質導入され
るようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法で、例えば、
頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる
。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺によって実施す
ることができ、または、患者に実行できそうな場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔
への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（典型的にＣＳＦの試料を収集するた
めに実施される診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。ある
いは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に
使用される、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接脳室内に滴下するこ
とができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達してもよ
い。ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、ま
たは９．２５～２７７μｇ／ｍＬの範囲の濃度に維持する用量を使用すべきである。
内へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて散布され、ＣＮＳの細胞が形質導入され
るようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法で、例えば、
頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる
。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺によって実施す
ることができ、または、患者に実行できそうな場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔
への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（典型的にＣＳＦの試料を収集するた
めに実施される診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。ある
いは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に
使用される、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接脳室内に滴下するこ
とができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達してもよ
い。ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、ま
たは９．２５～２７７μｇ／ｍＬの範囲の濃度に維持する用量を使用すべきである。
【0038】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵ
Ａの濃度を直接測定することによってモニタリングし、または患者の血清において検出さ
れたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態
において、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであるこ
とは、ＣＳＦ中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態
において、組換えベクターは、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００
ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
Ａの濃度を直接測定することによってモニタリングし、または患者の血清において検出さ
れたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態
において、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであるこ
とは、ＣＳＦ中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態
において、組換えベクターは、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００
ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0039】
背景として、ヒトＩＤＵＡは、６５３アミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、図１に
おいて表される６つの可能性のある部位（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｎ
４１５、及びＮ４５１）でＮ－グリコシル化される。シグナル配列が除去され、ポリペプ
チドはリソソーム内で成熟形態にプロセシングされる：７５ｋＤａの細胞内前駆体は数時
間で７２ｋＤａまでトリミングされ、最終的に、４～５日かけて６６ｋＤａの細胞内形態
にプロセシングされる。ＩＤＵＡの分泌形態（使用するアッセイに応じて７６ｋＤａまた
は８２ｋＤａ）は、マンノース－６－リン酸受容体を介して細胞に容易にエンドサイトー
シスされ、より小さい細胞内形態と同様にプロセシングされる。（その各々の全体が参照
により本明細書に組み込まれている、Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ
．，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２５９：１９９－２０８；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２７４：２６３－２６８；及びＺｈａｏ ｅｔ
ａｌ．，１９９７ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５を参照の
こと）。
おいて表される６つの可能性のある部位（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｎ
４１５、及びＮ４５１）でＮ－グリコシル化される。シグナル配列が除去され、ポリペプ
チドはリソソーム内で成熟形態にプロセシングされる：７５ｋＤａの細胞内前駆体は数時
間で７２ｋＤａまでトリミングされ、最終的に、４～５日かけて６６ｋＤａの細胞内形態
にプロセシングされる。ＩＤＵＡの分泌形態（使用するアッセイに応じて７６ｋＤａまた
は８２ｋＤａ）は、マンノース－６－リン酸受容体を介して細胞に容易にエンドサイトー
シスされ、より小さい細胞内形態と同様にプロセシングされる。（その各々の全体が参照
により本明細書に組み込まれている、Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ
．，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２５９：１９９－２０８；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２７４：２６３－２６８；及びＺｈａｏ ｅｔ
ａｌ．，１９９７ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５を参照の
こと）。
【0040】
ｈＩＤＵＡの全体の構造は、３つのドメインからなる：残基４２－３９６は、古典的な
（β／α）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＩＭ）バレルドメインを形成し、残基２７
－４２及び３９７－５４５は、短いへリックス－ループ－へリックス（４８２－５０８）
を有するβ－サンドイッチドメインを形成し、かつ残基５４６－６４２は、Ｉｇ様ドメイ
ンを形成する。最後に挙げた２つのドメインは、Ｃ５４１及びＣ５７７間のジスルフィド
架橋によって連結される。β－サンドイッチ及びＩｇ様ドメインは、ＴＩＭバレルの１番
目、７番目、及び８番目のα－へリックスに結合される。β－ヘアピン（β１２－β１３
）は、ＴＩＭバレルの８番目のβ－ストランド及び８番目のα－へリックスの間に挿入さ
れ、これは基質結合及び酵素活性に要求されるＮ－グリコシル化Ｎ３７２を含む。（図１
、及びその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ
．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３，及びＳａｉｔｏ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２に記載の結
晶構造を参照のこと）。
（β／α）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＩＭ）バレルドメインを形成し、残基２７
－４２及び３９７－５４５は、短いへリックス－ループ－へリックス（４８２－５０８）
を有するβ－サンドイッチドメインを形成し、かつ残基５４６－６４２は、Ｉｇ様ドメイ
ンを形成する。最後に挙げた２つのドメインは、Ｃ５４１及びＣ５７７間のジスルフィド
架橋によって連結される。β－サンドイッチ及びＩｇ様ドメインは、ＴＩＭバレルの１番
目、７番目、及び８番目のα－へリックスに結合される。β－ヘアピン（β１２－β１３
）は、ＴＩＭバレルの８番目のβ－ストランド及び８番目のα－へリックスの間に挿入さ
れ、これは基質結合及び酵素活性に要求されるＮ－グリコシル化Ｎ３７２を含む。（図１
、及びその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ
．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３，及びＳａｉｔｏ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２に記載の結
晶構造を参照のこと）。
【0041】
本発明は部分的に、以下の原理に基づく：
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳにおけるロバストなプロセスである、
グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのた
めの細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、そ
の各々の全体が参照により組み込まれている、例えばヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ
６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳が他の組織に見出されるよりはるかに多
くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化
タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏ
ｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅ
ｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞によって分泌されたチロシン硫酸化糖
タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ
Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘ
ｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照のこと。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１と特定される６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル
化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５
ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要
求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌された酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ
細胞の横断修正に要求される。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース
型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取
り込まれる。（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記
載の遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に
７６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマ
ンノース－６リン酸化された、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである
。分泌されたグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細
胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングされるべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介す
る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素について行
われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である。（例えば
、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例えばＤａｎ
ｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵素前駆体の取り込み
は、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示されたように、対照細胞のレベルに近いレベルまで減
少すると予測される。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば神経細胞及びグ
リア細胞によって生成される酵素前駆体の取り込みは、取り込み量が対照細胞より４倍高
く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵素前駆体の
酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２００２に示
されたように高レベルを維持すると予測される。このアッセイを用いると、脳細胞によっ
て生成される酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測し、特に、異なる種類の細胞によって生成
される酵素前駆体中のＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に記載の遺伝
子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで
神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきであ
る。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために
要求されるＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤ
ＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、その全体が参照により
組み込まれている、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸
の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１
３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照のこと。「規則」は、以下の通りに要約する
ことができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有し、かつＹの－１位が中性
または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えばＲ、Ｋ、
またはＨではない）。いかなる理論に束縛されることも意図するものではないが、チロシ
ン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連する
ことは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る
。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４
６３２－１４６３３を参照のこと）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向
上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加される
。大事なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加されるグリカンは２，６－シアル酸
を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体Ｎｅｕ
Ｇｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を
組み込まない高度にプロセシングされた複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグ
リカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求される２，６－シアリルトランスフェラーゼを
有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代
わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇ
ｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製されるラロニダーゼには存在しない。
例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１
－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ
１９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラー
ゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限されている』と考えられている」
）を参照のこと。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応
して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産
し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３
－１１５６を参照のこと。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、
導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞におけるロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロ
シン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソ
ームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、他のタンパ
ク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）のアビディティが増大し
、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進されることが示されている
。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び
Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７
３－７９を参照のこと）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして
起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）
は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗ
ｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに見出すことができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基
づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニ
ダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細
胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅ
ｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３
７、特にｐ．１５３７の考察を参照のこと）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入されたタンパク質薬物
の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され
得る。プロセス関連不純物、例えば宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及
び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えばタンパク質分解物及び構造特製、例え
ばグリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバント
としての機能を果たすことによって免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び
産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業的に製造されるＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし
得る細胞培養、精製、製剤化、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タ
ンパク質はｉｎ ｖｉｖｏで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タン
パク質産物は組換え技術によって生産されるタンパク質と関連した生産物関連不純物／分
解物、例えばタンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例え
ば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器と
の表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しか
し、導入遺伝子をｉｎ ｖｉｖｏで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在
しない。また、酸化、例えばメチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タ
ンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えばストレス負荷された細胞培養条件、金属及
び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤中の不純物によって引き起こされる。ｉｎ
ｖｉｖｏで発現されるタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化され得るが、ヒトは多く
の生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下する
だけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで
生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力
、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書
に記載の遺伝子治療アプローチは、商業的に製造された製品と比較して免疫原性が低下し
たｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳにおけるロバストなプロセスである、
グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのた
めの細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、そ
の各々の全体が参照により組み込まれている、例えばヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ
６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳が他の組織に見出されるよりはるかに多
くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化
タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏ
ｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅ
ｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞によって分泌されたチロシン硫酸化糖
タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ
Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘ
ｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照のこと。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１と特定される６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル
化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５
ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要
求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌された酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ
細胞の横断修正に要求される。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース
型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取
り込まれる。（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記
載の遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に
７６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマ
ンノース－６リン酸化された、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである
。分泌されたグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細
胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングされるべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介す
る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素について行
われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である。（例えば
、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例えばＤａｎ
ｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵素前駆体の取り込み
は、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示されたように、対照細胞のレベルに近いレベルまで減
少すると予測される。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば神経細胞及びグ
リア細胞によって生成される酵素前駆体の取り込みは、取り込み量が対照細胞より４倍高
く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作された腎細胞によって生成された酵素前駆体の
酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２００２に示
されたように高レベルを維持すると予測される。このアッセイを用いると、脳細胞によっ
て生成される酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測し、特に、異なる種類の細胞によって生成
される酵素前駆体中のＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に記載の遺伝
子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで
神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきであ
る。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために
要求されるＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤ
ＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、その全体が参照により
組み込まれている、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸
の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１
３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照のこと。「規則」は、以下の通りに要約する
ことができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有し、かつＹの－１位が中性
または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えばＲ、Ｋ、
またはＨではない）。いかなる理論に束縛されることも意図するものではないが、チロシ
ン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連する
ことは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る
。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４
６３２－１４６３３を参照のこと）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向
上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加される
。大事なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加されるグリカンは２，６－シアル酸
を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体Ｎｅｕ
Ｇｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を
組み込まない高度にプロセシングされた複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグ
リカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求される２，６－シアリルトランスフェラーゼを
有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代
わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇ
ｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製されるラロニダーゼには存在しない。
例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１
－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ
１９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラー
ゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限されている』と考えられている」
）を参照のこと。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応
して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産
し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３
－１１５６を参照のこと。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、
導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞におけるロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロ
シン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソ
ームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、他のタンパ
ク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）のアビディティが増大し
、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進されることが示されている
。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び
Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７
３－７９を参照のこと）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして
起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）
は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗ
ｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに見出すことができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基
づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニ
ダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細
胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅ
ｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３
７、特にｐ．１５３７の考察を参照のこと）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入されたタンパク質薬物
の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され
得る。プロセス関連不純物、例えば宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及
び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えばタンパク質分解物及び構造特製、例え
ばグリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバント
としての機能を果たすことによって免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び
産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業的に製造されるＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし
得る細胞培養、精製、製剤化、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タ
ンパク質はｉｎ ｖｉｖｏで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タン
パク質産物は組換え技術によって生産されるタンパク質と関連した生産物関連不純物／分
解物、例えばタンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例え
ば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器と
の表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しか
し、導入遺伝子をｉｎ ｖｉｖｏで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在
しない。また、酸化、例えばメチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タ
ンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えばストレス負荷された細胞培養条件、金属及
び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤中の不純物によって引き起こされる。ｉｎ
ｖｉｖｏで発現されるタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化され得るが、ヒトは多く
の生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下する
だけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで
生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力
、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書
に記載の遺伝子治療アプローチは、商業的に製造された製品と比較して免疫原性が低下し
たｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
【0042】
前述の理由のために、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの生産は、例えば、ＭＰＳ Ｉ疾患（ハーラ
ー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエを含むが、これらに限定はされない）と診断さ
れる患者（ヒト対象）のＣＳＦにＨｕＧｌｙＩＤＵＡをコードするウイルスベクターまた
は他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞によって分泌さ
れる完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的
に供給するＣＮＳ中の永続的なデポーを作製することによる、遺伝子治療によって達成さ
れるＭＰＳ Ｉの治療のための「バイオベター」分子をもたらすべきである。デポーから
ＣＳＦ中に分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳ中の細胞によりエン
ドサイトーシスされ、ＭＰＳ Ｉレシピエント細胞における酵素欠陥を「横断修正」する
。
ー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエを含むが、これらに限定はされない）と診断さ
れる患者（ヒト対象）のＣＳＦにＨｕＧｌｙＩＤＵＡをコードするウイルスベクターまた
は他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞によって分泌さ
れる完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的
に供給するＣＮＳ中の永続的なデポーを作製することによる、遺伝子治療によって達成さ
れるＭＰＳ Ｉの治療のための「バイオベター」分子をもたらすべきである。デポーから
ＣＳＦ中に分泌されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳ中の細胞によりエン
ドサイトーシスされ、ＭＰＳ Ｉレシピエント細胞における酵素欠陥を「横断修正」する
。
【0043】
遺伝子治療またはタンパク質治療アプローチにおいて生産される全てのｈＩＤＵＡ分子
が完全にグリコシル化され、硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖
タンパク質の集団は、有効性を実証するのに十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加
及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子
治療処置の目的は、疾患の進行を減速させ、または停止させることである。有効性は、認
知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止もしくは減少）；ＣＳＦ及び／もしくは血清
中の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／もしく
は血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することによってモニタリングすることができる
。炎症の徴候及び他の安全事象をモニタリングすることもできる。
が完全にグリコシル化され、硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖
タンパク質の集団は、有効性を実証するのに十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加
及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子
治療処置の目的は、疾患の進行を減速させ、または停止させることである。有効性は、認
知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止もしくは減少）；ＣＳＦ及び／もしくは血清
中の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／もしく
は血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することによってモニタリングすることができる
。炎症の徴候及び他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0044】
遺伝子治療に対する代替または追加治療として、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質は
組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株で生産することができ、糖タンパク質は、ＥＲＴの
ために、全身的に及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ Ｉと診断された患者に投与することが
できる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は
、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ
、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎
児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、Ｈ
ｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、その全体が参
照により組み込まれている、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使
用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６
，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２
の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒ
ｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照のこと）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付
加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化
を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６－
シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を
共発現するように宿主細胞を操作することによって強化することができる。
組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株で生産することができ、糖タンパク質は、ＥＲＴの
ために、全身的に及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ Ｉと診断された患者に投与することが
できる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は
、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ
、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎
児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、Ｈ
ｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、その全体が参
照により組み込まれている、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使
用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６
，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２
の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒ
ｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照のこと）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付
加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化
を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６－
シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を
共発現するように宿主細胞を操作することによって強化することができる。
【0045】
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子
治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがっ
てタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容し
ないヒト対象において、発現されたｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。
治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがっ
てタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容し
ないヒト対象において、発現されたｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。
【0046】
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩ
ＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー）を有する患者を治療する場合
に、適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、例えばミコフェノ
ール酸と組合わせた、及び／またはプレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンな
どのコルチコステロイドと組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用される
他の免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑
制治療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、ある実施形態において、免疫抑制治
療による前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、治療医師の判断に基づいて、遺
伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発された場合、例えば、
１８０日後に、中止してもよい。
ＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー）を有する患者を治療する場合
に、適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、例えばミコフェノ
ール酸と組合わせた、及び／またはプレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンな
どのコルチコステロイドと組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用される
他の免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑
制治療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、ある実施形態において、免疫抑制治
療による前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、治療医師の判断に基づいて、遺
伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発された場合、例えば、
１８０日後に、中止してもよい。
【0047】
一実施形態において、免疫抑制は、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及び／
またはメチルプレドニゾロンの投与、ならびに任意にＭＭＦとともに投与されるタクロリ
ムス及び／またはシロリムスのレジメンを含む。例えば、１回のコルチコステロイド、例
えばメチルプレドニゾロンを注入し、その後、経口コルチコステロイドを投与し、１２週
の経過にわたり段階的に漸減し、続いて中断する。同時に、タクロリムス及びシロリムス
を組合わせで低用量（例えば、４～８ｎｇ／ｍＬの血清濃度を維持する）で、またはラベ
ル用量で単独で、２４～４８週にわたって経口投与することができる。タクロリムスまた
はシロリムスは、ＭＭＦと組合わせてラベル用量で投与されることもできる。したがって
、患者は直ちに利用可能なステロイドの初期の注入を受け、このステロイドは続いて経口
投与によって維持されて、１２週までに漸減される。さらなる免疫抑制は、任意にＭＭＦ
と組合わせて、タクロリムス及び／またはシロリムスによって４８週を通じて維持される
。
またはメチルプレドニゾロンの投与、ならびに任意にＭＭＦとともに投与されるタクロリ
ムス及び／またはシロリムスのレジメンを含む。例えば、１回のコルチコステロイド、例
えばメチルプレドニゾロンを注入し、その後、経口コルチコステロイドを投与し、１２週
の経過にわたり段階的に漸減し、続いて中断する。同時に、タクロリムス及びシロリムス
を組合わせで低用量（例えば、４～８ｎｇ／ｍＬの血清濃度を維持する）で、またはラベ
ル用量で単独で、２４～４８週にわたって経口投与することができる。タクロリムスまた
はシロリムスは、ＭＭＦと組合わせてラベル用量で投与されることもできる。したがって
、患者は直ちに利用可能なステロイドの初期の注入を受け、このステロイドは続いて経口
投与によって維持されて、１２週までに漸減される。さらなる免疫抑制は、任意にＭＭＦ
と組合わせて、タクロリムス及び／またはシロリムスによって４８週を通じて維持される
。
【0048】
他の利用可能な治療の送達を伴うＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達の組合わせは、
本発明の方法に包含される。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、または
その後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉ
のための利用可能な治療には、これらに限定はされないが、全身的に、もしくはＣＳＦに
投与されるラロニダーゼを使用する酵素補充療法及び／またはＨＳＣＴ療法が挙げられる
。
本発明の方法に包含される。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、または
その後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉ
のための利用可能な治療には、これらに限定はされないが、全身的に、もしくはＣＳＦに
投与されるラロニダーゼを使用する酵素補充療法及び／またはＨＳＣＴ療法が挙げられる
。
【0049】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療するための方法であっ
て、該ヒト対象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産される治療有効量の組換えヒ
トＩＤＵＡを送達することを含む方法が、本明細書に記載される。ある実施形態において
、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療するための方法であって、該ヒト対象の脳の脳
脊髄液にヒトグリア細胞によって生産される治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達する
ことを含む方法が、本明細書に記載される。
て、該ヒト対象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産される治療有効量の組換えヒ
トＩＤＵＡを送達することを含む方法が、本明細書に記載される。ある実施形態において
、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療するための方法であって、該ヒト対象の脳の脳
脊髄液にヒトグリア細胞によって生産される治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達する
ことを含む方法が、本明細書に記載される。
【0050】
ある実施形態において、ムコ多糖症Ｉ（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象を治療する
方法であって、該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトα
－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前また
は同時に、免疫抑制療法を該対象に施し、かつその後も免疫抑制療法を継続することと、
を含む方法が、本明細書において提供される。
方法であって、該ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトα
－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前また
は同時に、免疫抑制療法を該対象に施し、かつその後も免疫抑制療法を継続することと、
を含む方法が、本明細書において提供される。
【0051】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル化ヒ
トＩＤＵＡを送達することと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前または同時に、免疫抑制療法
を該対象に施し、かつその後も免疫抑制療法を継続することと、を含む方法が、本明細書
において提供される。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル化ヒ
トＩＤＵＡを送達することと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前または同時に、免疫抑制療法
を該対象に施し、かつその後も免疫抑制療法を継続することと、を含む方法が、本明細書
において提供される。
【0052】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない
治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前
または同時に、免疫抑制療法を該対象に施し、かつその後も免疫抑制療法を継続すること
と、を含む方法が、本明細書において提供される。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない
治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前
または同時に、免疫抑制療法を該対象に施し、かつその後も免疫抑制療法を継続すること
と、を含む方法が、本明細書において提供される。
【0053】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達する
ことと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前または同時に、免疫抑制療法を該対象に施し、かつ
その後も免疫抑制療法を継続することと、を含む方法が、本明細書において提供される。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達する
ことと、ヒトＩＤＵＡによる治療の前または同時に、免疫抑制療法を該対象に施し、かつ
その後も免疫抑制療法を継続することと、を含む方法が、本明細書において提供される。
【0054】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤ
ＵＡがヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にα２，６－シアル
酸付加される、投与することと、
ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤ
ＵＡがヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にα２，６－シアル
酸付加される、投与することと、
【0055】
該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、か
つその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む方法が、本明細書に記載される。
つその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む方法が、本明細書に記載される。
【0056】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤ
ＵＡがヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグリコシル化され
るが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、
またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続す
ることと、を含む方法が、本明細書において提供される。
ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤ
ＵＡがヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグリコシル化され
るが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、
またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続す
ることと、を含む方法が、本明細書において提供される。
【0057】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、ａ
）該ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該
ヒトＩＤＵＡがヒトまたは不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグ
リコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、投与
する工程と、ｂ）該発現ベクターの投与の前に、及び／またはそれと同時に、及び／また
はその後に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続する工程と
、を含む方法が、本明細書において提供される。
）該ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該
ヒトＩＤＵＡがヒトまたは不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にグ
リコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、投与
する工程と、ｂ）該発現ベクターの投与の前に、及び／またはそれと同時に、及び／また
はその後に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続する工程と
、を含む方法が、本明細書において提供される。
【0058】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤ
ＵＡがヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にチロシン硫酸化さ
れる、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免
疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む方法が、本明細
書において提供される。
ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、該ＩＤ
ＵＡがヒト不死化神経細胞において該発現ベクターから発現される際にチロシン硫酸化さ
れる、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免
疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む方法が、本明細
書において提供される。
【0059】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該
ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に
、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続
することと、を含む方法が、本明細書において提供される。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該
ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に
、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続
することと、を含む方法が、本明細書において提供される。
【0060】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシ
ル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の
前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を
継続することと、を含む方法が、本明細書において提供される。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシ
ル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の
前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を
継続することと、を含む方法が、本明細書において提供される。
【0061】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇ
ａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与すること
と、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む方法が、本明細書において提供され
る。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇ
ａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与すること
と、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む方法が、本明細書において提供され
る。
【0062】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを放出す
るデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同
時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含
む方法が、本明細書において提供される。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを放出す
るデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同
時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含
む方法が、本明細書において提供される。
【0063】
ある実施形態において、α２，６－シアル化グリカンを含むＩＤＵＡの生産は、細胞培
養中でヒト神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することによ
り確認される。ある実施形態において、検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化Ｉ
ＤＵＡの生産は、細胞培養中でヒト神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認される。ある実施形態において、検出可能なＮｅｕＧｃ及
び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡの生産は、細胞培養中でヒト
神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認され
る。ある実施形態において、チロシン硫酸化を含むＩＤＵＡの生産は、細胞培養中でヒト
神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認され
る。具体的な実施形態において、ＩＤＵＡ導入遺伝子はシグナルペプチドをコードする。
ある実施形態において、ヒト神経細胞株は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ
、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭであ
る。
養中でヒト神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することによ
り確認される。ある実施形態において、検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化Ｉ
ＤＵＡの生産は、細胞培養中でヒト神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認される。ある実施形態において、検出可能なＮｅｕＧｃ及
び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡの生産は、細胞培養中でヒト
神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認され
る。ある実施形態において、チロシン硫酸化を含むＩＤＵＡの生産は、細胞培養中でヒト
神経細胞株を組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認され
る。具体的な実施形態において、ＩＤＵＡ導入遺伝子はシグナルペプチドをコードする。
ある実施形態において、ヒト神経細胞株は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ
、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭであ
る。
【0064】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該
ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に
、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続
することと、を含み、該組換えベクターが、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用す
る場合、該細胞培養中で該α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該ＩＤＵＡを生産する
、方法が、本明細書において提供される。ある実施形態において、ヒト神経細胞は、ＨＴ
－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳ
Ｃ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該
ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に
、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続
することと、を含み、該組換えベクターが、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用す
る場合、該細胞培養中で該α２，６－シアル酸付加グリカンを含む該ＩＤＵＡを生産する
、方法が、本明細書において提供される。ある実施形態において、ヒト神経細胞は、ＨＴ
－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳ
Ｃ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0065】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシ
ル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の
前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を
継続することと、を含み、該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使
用する場合、該細胞培養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該Ｉ
ＤＵＡを生産する、方法が、本明細書において提供される。ある実施形態において、ヒト
神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－
ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシ
ル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の
前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を
継続することと、を含み、該組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使
用する場合、該細胞培養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該Ｉ
ＤＵＡを生産する、方法が、本明細書において提供される。ある実施形態において、ヒト
神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－
ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0066】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇ
ａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与すること
と、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、該組換えベクターは、培養中でヒ
ト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中でグリコシル化されるが検出可能
なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない該ＩＤＵＡを生産する、方法が、本
明細書において提供される。ある実施形態において、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ
－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、また
はＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇ
ａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、投与すること
と、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、該対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、該組換えベクターは、培養中でヒ
ト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培養中でグリコシル化されるが検出可能
なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない該ＩＤＵＡを生産する、方法が、本
明細書において提供される。ある実施形態において、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ
－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、また
はＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0067】
ある実施形態において、ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象を治療する方法であって、該
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを放出す
るデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同
時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含
み、該組換えベクターが、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培
養中でチロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを生産する、方法が、本明細書において提供され
る。ある実施形態において、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１
Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細
胞である。
ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発
現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを放出す
るデポーが形成される、投与することと、該発現ベクターの投与の前に、またはそれと同
時に、該対象に免疫抑制治療を施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含
み、該組換えベクターが、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、該細胞培
養中でチロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを生産する、方法が、本明細書において提供され
る。ある実施形態において、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１
Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細
胞である。
【0068】
ある実施形態において、ヒトＩＤＵＡは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある実施
形態において、免疫抑制治療は、ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、
（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、または（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノー
ル酸の組合わせを対象に投与し、かつその後も継続することを含む。ある実施形態におい
て、免疫抑制療法は１８０日後に中止される。
形態において、免疫抑制治療は、ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、
（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、または（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノー
ル酸の組合わせを対象に投与し、かつその後も継続することを含む。ある実施形態におい
て、免疫抑制療法は１８０日後に中止される。
【0069】
好ましい実施形態において、グリコシル化ＩＤＵＡは、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／ま
たはα－Ｇａｌを含まない。本明細書で使用する語句「検出可能なＮｅｕＧｃ及び／また
はα－Ｇａｌ」は、ＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ部分が当技術分野において公知の
標準アッセイ方法によって検出可能であることを意味する。例えば、ＮｅｕＧｃは、Ｎｅ
ｕＧｃを検出する方法について参照により本明細書に組み込まれているＨａｒａ ｅｔ
ａｌ．，１９８９，“Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌ－ａｎｄ Ｎ－Ｇｌｙｃｏｌｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｕｒｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｔ Ｓｅｒ
ｕｍ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ－Ｐｈａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ ｗｉｔｈ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．” Ｊ．Ｃｈｒｏｍ
ａｔｏｇｒ．，Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄ．３７７：１１１－１１９に従ったＨＰＬＣによって検
出することができる。あるいは、ＮｅｕＧｃは、質量分析によって検出することができる
。α－Ｇａｌは、ＥＬＩＳＡを使用して（例えば、Ｇａｌｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９
８，“Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ａｌｐｈａ
－Ｇａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ－Ｇａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ
ｉｏｎ．６５（８）：１１２９－３２を参照のこと）、または質量分析により（例えば、
Ａｙｏｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１３，“Ｃｏｒｒｅｃｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏ－ｐｒｏｆ
ｉｌｉｎｇ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｂｙ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉ
ｎｔａｃｔ，ｍｉｄｄｌｅ－ｕｐ，ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｗｎ ａｎｄ ｂｏｔｔｏｍ－ｕ
ｐ ＥＳＩ ａｎｄ ＭＡＬＤＩ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ．” Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．５（５）：６９９－７１０を参照
のこと）検出することができる。また、Ｐｌａｔｔｓ－Ｍｉｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，２０
１５，“Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｉｄｅ
－Ｃｈａｉｎ Ａｌｐｈａ－ｇａｌ” Ｉｍｍｕｎｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｎ
ｏｒｔｈ Ａｍ．３５（２）：２４７－２６０において引用されている参考文献も参照の
こと。
たはα－Ｇａｌを含まない。本明細書で使用する語句「検出可能なＮｅｕＧｃ及び／また
はα－Ｇａｌ」は、ＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ部分が当技術分野において公知の
標準アッセイ方法によって検出可能であることを意味する。例えば、ＮｅｕＧｃは、Ｎｅ
ｕＧｃを検出する方法について参照により本明細書に組み込まれているＨａｒａ ｅｔ
ａｌ．，１９８９，“Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌ－ａｎｄ Ｎ－Ｇｌｙｃｏｌｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｕｒｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｔ Ｓｅｒ
ｕｍ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ－Ｐｈａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ ｗｉｔｈ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．” Ｊ．Ｃｈｒｏｍ
ａｔｏｇｒ．，Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄ．３７７：１１１－１１９に従ったＨＰＬＣによって検
出することができる。あるいは、ＮｅｕＧｃは、質量分析によって検出することができる
。α－Ｇａｌは、ＥＬＩＳＡを使用して（例えば、Ｇａｌｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９
８，“Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ａｌｐｈａ
－Ｇａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ－Ｇａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ
ｉｏｎ．６５（８）：１１２９－３２を参照のこと）、または質量分析により（例えば、
Ａｙｏｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１３，“Ｃｏｒｒｅｃｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏ－ｐｒｏｆ
ｉｌｉｎｇ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｂｙ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉ
ｎｔａｃｔ，ｍｉｄｄｌｅ－ｕｐ，ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｗｎ ａｎｄ ｂｏｔｔｏｍ－ｕ
ｐ ＥＳＩ ａｎｄ ＭＡＬＤＩ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ．” Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．５（５）：６９９－７１０を参照
のこと）検出することができる。また、Ｐｌａｔｔｓ－Ｍｉｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，２０
１５，“Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｉｄｅ
－Ｃｈａｉｎ Ａｌｐｈａ－ｇａｌ” Ｉｍｍｕｎｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｎ
ｏｒｔｈ Ａｍ．３５（２）：２４７－２６０において引用されている参考文献も参照の
こと。
【0070】
（５．１Ｎ－グリコシル化及びチロシン硫酸化）
（５．１．１．Ｎ－グリコシル化）
ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分
泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を備える分泌細胞である。ｈＩＤＵ
Ａは、図１において特定される６つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位（Ｎ１１
０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）を
有する。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマ
ンノース－６－リン酸化は分泌された酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正
に要求される。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸
化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取り込まれる。本
明細書に記載の遺伝子治療アプローチでは、２，６シアル酸付加され、かつマンノース－
６リン酸化されたＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌された
グリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア
細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングされるべきである。
（５．１．１．Ｎ－グリコシル化）
ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分
泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を備える分泌細胞である。ｈＩＤＵ
Ａは、図１において特定される６つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位（Ｎ１１
０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）を
有する。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマ
ンノース－６－リン酸化は分泌された酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正
に要求される。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸
化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取り込まれる。本
明細書に記載の遺伝子治療アプローチでは、２，６シアル酸付加され、かつマンノース－
６リン酸化されたＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌された
グリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア
細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングされるべきである。
【0071】
ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ
、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。大事
なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加されるグリカンは２，６－シアル酸を含み
、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（
Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込
まない高度にプロセシングされた複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカン
は、この翻訳後修飾を行うのに要求される２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず
、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりに
ヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（Ｎ
ＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製されるラロニダーゼには存在しない。さらに
、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィ
ラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓ
ｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照のこと
。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原
性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。大事
なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加されるグリカンは２，６－シアル酸を含み
、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（
Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込
まない高度にプロセシングされた複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカン
は、この翻訳後修飾を行うのに要求される２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず
、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりに
ヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（Ｎ
ＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製されるラロニダーゼには存在しない。さらに
、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィ
ラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓ
ｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照のこと
。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原
性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
【0072】
遺伝子治療またはタンパク質治療アプローチにおいて生産される全ての分子が完全にグ
リコシル化され、硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖タンパク質
の集団は、有効性を実証するのに十分なグリコシル化及び硫酸化を受けるべきである。
リコシル化され、硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖タンパク質
の集団は、有効性を実証するのに十分なグリコシル化及び硫酸化を受けるべきである。
【0073】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法に従って使用されるＨｕＧｌｙＩＤ
ＵＡは、神経細胞またはグリア細胞においてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発
現させた場合、そのＮ－グリコシル化部位の１００％でグリコシル化され得る。しかしな
がら、当業者であれば、グリコシル化のメリットが達成されるためには、必ずしも全ての
ＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位がＮ－グリコシル化される必要はないことを
認識されよう。むしろ、グリコシル化のメリットは、Ｎ－グリコシル化部位の一定の割合
のみがグリコシル化される場合、及び／または発現されたＩＤＵＡ分子の一定の割合のみ
がグリコシル化される場合に実現され得る。したがって、ある実施形態において、本明細
書に記載の方法に従って使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、神経細胞またはグリア細胞に
おいてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、その利用可能なＮ－グ
リコシル化部位の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、
５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１
００％でグリコシル化される。ある実施形態において、神経細胞またはグリア細胞におい
てｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、本明細書に記載の方法に従
って使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４
０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９
０％、または９０％～１００％は、それらの利用可能なＮ－グリコシル化部位の少なくと
も１つでグリコシル化される。
ＵＡは、神経細胞またはグリア細胞においてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発
現させた場合、そのＮ－グリコシル化部位の１００％でグリコシル化され得る。しかしな
がら、当業者であれば、グリコシル化のメリットが達成されるためには、必ずしも全ての
ＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位がＮ－グリコシル化される必要はないことを
認識されよう。むしろ、グリコシル化のメリットは、Ｎ－グリコシル化部位の一定の割合
のみがグリコシル化される場合、及び／または発現されたＩＤＵＡ分子の一定の割合のみ
がグリコシル化される場合に実現され得る。したがって、ある実施形態において、本明細
書に記載の方法に従って使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、神経細胞またはグリア細胞に
おいてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、その利用可能なＮ－グ
リコシル化部位の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、
５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１
００％でグリコシル化される。ある実施形態において、神経細胞またはグリア細胞におい
てｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、本明細書に記載の方法に従
って使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４
０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９
０％、または９０％～１００％は、それらの利用可能なＮ－グリコシル化部位の少なくと
も１つでグリコシル化される。
【0074】
具体的な実施形態において、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを神経細胞またはグリア細胞において
ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、本明細書に記載の方法に従っ
て使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡに存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、
２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、または９９％はＮ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または他の関連し
た残基）でグリコシル化される。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－
グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０
％、９５％または９９％は、グリコシル化される。
ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、本明細書に記載の方法に従っ
て使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡに存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、
２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、または９９％はＮ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または他の関連し
た残基）でグリコシル化される。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－
グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０
％、９５％または９９％は、グリコシル化される。
【0075】
別の具体的な実施形態において、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを神経細胞またはグリア細胞にお
いてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、本明細書に記載の方法に
従って使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ分子に存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも
１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、または９９％は、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または
他の関連した残基）に結合される同一の結合されたグリカンによりグリコシル化される。
すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５
０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％は、同
一の結合されたグリカンを有する。
いてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発現させた場合、本明細書に記載の方法に
従って使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡ分子に存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも
１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、または９９％は、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または
他の関連した残基）に結合される同一の結合されたグリカンによりグリコシル化される。
すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５
０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％は、同
一の結合されたグリカンを有する。
【0076】
重要なことに、本明細書に記載の方法に従って使用されるＩＤＵＡタンパク質が神経細
胞またはグリア細胞において発現される場合、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ
）または真核生物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ生産の必要
性は回避される。その代わりに、本明細書に記載の方法の結果（例えば、ＩＤＵＡを発現
させるための神経細胞またはグリア細胞の使用）、ＩＤＵＡタンパク質のＮ－グリコシル
化部位は、有利なことにヒトの治療に関連及び有益なグリカンで修飾される（ｄｅｃｏｒ
ａｔｅｄ）。ＣＨＯ細胞またはＥ．ｃｏｌｉがタンパク質生産に利用される場合、そのよ
うな利点には到達できない；それは、例えばＣＨＯ細胞は、（１）２，６シアリルトラン
スフェラーゼを発現せず、したがってＮ－グリコシル化の間、２，６シアル酸を付加する
ことができず、かつ（２）シアル酸としてＮｅｕ５Ａｃの代わりにＮｅｕ５Ｇｃを付加す
ることができるためであり、ならびにＥ．ｃｏｌｉは天然にはＮ－グリコシル化に必要な
構成要素を含まないためである。したがって、一実施形態において、神経細胞またはグリ
ア細胞において発現され、本明細書に記載の治療方法において使用されるＨｕＧｌｙＩＤ
ＵＡを生じるＩＤＵＡタンパク質は、ヒト神経細胞またはグリア細胞においてタンパク質
がＮ－グリコシル化される様式でグリコシル化されるが、ＣＨＯ細胞においてタンパク質
がグリコシル化される様式でグリコシル化されるのではない。別の実施形態において、神
経細胞またはグリア細胞において発現されて本明細書に記載の治療方法において使用され
るＨｕＧｌｙＩＤＵＡを生じるＩＤＵＡタンパク質は、神経細胞またはグリア細胞におい
てタンパク質がＮ－グリコシル化される様式でグリコシル化され、そのようなグリコシル
化は、原核生物宿主細胞を使用して、例えばＥ．ｃｏｌｉを使用した場合は手を加えずに
は不可能である。
胞またはグリア細胞において発現される場合、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ
）または真核生物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ生産の必要
性は回避される。その代わりに、本明細書に記載の方法の結果（例えば、ＩＤＵＡを発現
させるための神経細胞またはグリア細胞の使用）、ＩＤＵＡタンパク質のＮ－グリコシル
化部位は、有利なことにヒトの治療に関連及び有益なグリカンで修飾される（ｄｅｃｏｒ
ａｔｅｄ）。ＣＨＯ細胞またはＥ．ｃｏｌｉがタンパク質生産に利用される場合、そのよ
うな利点には到達できない；それは、例えばＣＨＯ細胞は、（１）２，６シアリルトラン
スフェラーゼを発現せず、したがってＮ－グリコシル化の間、２，６シアル酸を付加する
ことができず、かつ（２）シアル酸としてＮｅｕ５Ａｃの代わりにＮｅｕ５Ｇｃを付加す
ることができるためであり、ならびにＥ．ｃｏｌｉは天然にはＮ－グリコシル化に必要な
構成要素を含まないためである。したがって、一実施形態において、神経細胞またはグリ
ア細胞において発現され、本明細書に記載の治療方法において使用されるＨｕＧｌｙＩＤ
ＵＡを生じるＩＤＵＡタンパク質は、ヒト神経細胞またはグリア細胞においてタンパク質
がＮ－グリコシル化される様式でグリコシル化されるが、ＣＨＯ細胞においてタンパク質
がグリコシル化される様式でグリコシル化されるのではない。別の実施形態において、神
経細胞またはグリア細胞において発現されて本明細書に記載の治療方法において使用され
るＨｕＧｌｙＩＤＵＡを生じるＩＤＵＡタンパク質は、神経細胞またはグリア細胞におい
てタンパク質がＮ－グリコシル化される様式でグリコシル化され、そのようなグリコシル
化は、原核生物宿主細胞を使用して、例えばＥ．ｃｏｌｉを使用した場合は手を加えずに
は不可能である。
【0077】
タンパク質のグリコシル化パターンを決定するためのアッセイは、当技術分野において
公知である。例えば、ヒドラジン分解は、グリカンを分析するために使用することができ
る。第一に、多糖を、ヒドラジンとのインキュベーションによって、その会合するタンパ
ク質から放出させる（Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｉｂｅｒａｔｅヒドラジン分解グリカン放出キッ
ト，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫを使用することができる）。求核剤であるヒドラジン
は、多糖及びキャリアタンパク質間のグリコシド結合を攻撃して、結合したグリカンを放
出させる。Ｎ－アセチル基は、この処理の間、失われて、再Ｎ－アセチル化によって再構
成されなければならない。遊離グリカンは、炭素カラム上で精製され、続いて蛍光色素分
子である２－アミノベンズアミドを用いて還元末端を標識することができる。標識多糖は
、Ｒｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２，３０４（１）：７０
－９０のＨＰＬＣプロトコルに従ってＧｌｙｃｏＳｅｐ－Ｎカラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）上で分離することができる。結果として生じる蛍光クロマトグラムは、多糖の長さ
及び繰り返し単位の数を示す。構造情報は、個々のピークを収集し、引き続きＭＳ／ＭＳ
分析を実施することによって集めることができる。それにより、繰り返し単位の単糖の組
成及び配列を確認することができ、さらに多糖の組成の均一性を特定することができる。
低分子量の特定のピークは、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ／ＭＳによって分析でき、その結果を使用
してグリカン配列を確認することができる。各ピークは、特定の数の繰り返し単位及びそ
の断片からなるポリマーに対応する。従って、クロマトグラムを用いれば、ポリマー長の
分布の測定が可能となる。溶出時間はポリマー長の指標である一方、蛍光強度はそれぞれ
のポリマーのためのモル存在量と相関する。
公知である。例えば、ヒドラジン分解は、グリカンを分析するために使用することができ
る。第一に、多糖を、ヒドラジンとのインキュベーションによって、その会合するタンパ
ク質から放出させる（Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｉｂｅｒａｔｅヒドラジン分解グリカン放出キッ
ト，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫを使用することができる）。求核剤であるヒドラジン
は、多糖及びキャリアタンパク質間のグリコシド結合を攻撃して、結合したグリカンを放
出させる。Ｎ－アセチル基は、この処理の間、失われて、再Ｎ－アセチル化によって再構
成されなければならない。遊離グリカンは、炭素カラム上で精製され、続いて蛍光色素分
子である２－アミノベンズアミドを用いて還元末端を標識することができる。標識多糖は
、Ｒｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２，３０４（１）：７０
－９０のＨＰＬＣプロトコルに従ってＧｌｙｃｏＳｅｐ－Ｎカラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）上で分離することができる。結果として生じる蛍光クロマトグラムは、多糖の長さ
及び繰り返し単位の数を示す。構造情報は、個々のピークを収集し、引き続きＭＳ／ＭＳ
分析を実施することによって集めることができる。それにより、繰り返し単位の単糖の組
成及び配列を確認することができ、さらに多糖の組成の均一性を特定することができる。
低分子量の特定のピークは、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ／ＭＳによって分析でき、その結果を使用
してグリカン配列を確認することができる。各ピークは、特定の数の繰り返し単位及びそ
の断片からなるポリマーに対応する。従って、クロマトグラムを用いれば、ポリマー長の
分布の測定が可能となる。溶出時間はポリマー長の指標である一方、蛍光強度はそれぞれ
のポリマーのためのモル存在量と相関する。
【0078】
タンパク質と会合するグリカンパターンの均一性は、グリカン長及びグリコシル化部位
全体に存在するグリカンの数と関係しているため、この均一性は当技術分野で公知の方法
、例えばグリカン長及び流体力学半径を測定する方法を使用して評価することができる。
サイズ排除ＨＰＬＣは、流体力学半径の測定を可能にする。タンパク質中のグリコシル化
部位の数が多いほど、グリコシル化部位がより少ないキャリアと比較して、流体力学半径
のばらつきがより大きくなる。しかしながら、単一のグリカン鎖が分析される場合、それ
らは長さがより高度に制御されているために、より均一になり得る。グリカン長は、ヒド
ラジン分解、ＳＤＳ ＰＡＧＥ、及びキャピラリーゲル電気泳動によって測定することが
できる。さらに、また、均一であることは、特定のグリコシル化部位の使用パターンがよ
り広い／より狭い範囲に変化することを意味し得る。これらの因子は、糖ペプチドＬＣ－
ＭＳ／ＭＳで測定することができる。
全体に存在するグリカンの数と関係しているため、この均一性は当技術分野で公知の方法
、例えばグリカン長及び流体力学半径を測定する方法を使用して評価することができる。
サイズ排除ＨＰＬＣは、流体力学半径の測定を可能にする。タンパク質中のグリコシル化
部位の数が多いほど、グリコシル化部位がより少ないキャリアと比較して、流体力学半径
のばらつきがより大きくなる。しかしながら、単一のグリカン鎖が分析される場合、それ
らは長さがより高度に制御されているために、より均一になり得る。グリカン長は、ヒド
ラジン分解、ＳＤＳ ＰＡＧＥ、及びキャピラリーゲル電気泳動によって測定することが
できる。さらに、また、均一であることは、特定のグリコシル化部位の使用パターンがよ
り広い／より狭い範囲に変化することを意味し得る。これらの因子は、糖ペプチドＬＣ－
ＭＳ／ＭＳで測定することができる。
【0079】
Ｎ－グリコシル化は、本明細書に記載の方法で使用されるＨｕＧｌｙＩＤＵＡに多くの
メリットを付与する。そのようなメリットは、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるタンパク質生産によ
っては到達不能である。それは、Ｅ．ｃｏｌｉは、Ｎ－グリコシル化に必要とされる構成
要素を天然には有しないためである。さらに、いくつかのメリットは例えば、ＣＨＯ細胞
におけるタンパク質生産によっては到達不能である。それは、ＣＨＯ細胞が特定のグリカ
ン（例えば、２，６シアル酸）の付加に必要な構成要素を欠いており、かつヒトにとって
典型的でないグリカン、例えばＮｅｕ５Ｇｃ及び大部分の個体において免疫原性であり、
かつ高濃度ではアナフィラキシーを誘発し得るα－Ｇａｌ抗原を付加し得るためである。
従って、ヒト神経細胞またはグリア細胞におけるＩＤＵＡの発現により、そうせずにＣＨ
Ｏ細胞または、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて生産された場合はタンパク質と会合していないであ
ろう有益なグリカンを含むＨｕＧｌｙＩＤＵＡが生産される。
メリットを付与する。そのようなメリットは、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるタンパク質生産によ
っては到達不能である。それは、Ｅ．ｃｏｌｉは、Ｎ－グリコシル化に必要とされる構成
要素を天然には有しないためである。さらに、いくつかのメリットは例えば、ＣＨＯ細胞
におけるタンパク質生産によっては到達不能である。それは、ＣＨＯ細胞が特定のグリカ
ン（例えば、２，６シアル酸）の付加に必要な構成要素を欠いており、かつヒトにとって
典型的でないグリカン、例えばＮｅｕ５Ｇｃ及び大部分の個体において免疫原性であり、
かつ高濃度ではアナフィラキシーを誘発し得るα－Ｇａｌ抗原を付加し得るためである。
従って、ヒト神経細胞またはグリア細胞におけるＩＤＵＡの発現により、そうせずにＣＨ
Ｏ細胞または、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて生産された場合はタンパク質と会合していないであ
ろう有益なグリカンを含むＨｕＧｌｙＩＤＵＡが生産される。
【0080】
（５．１．２．チロシン硫酸化）
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求され
るＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ
２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、その全体が参照により組み込ま
れている、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析に
ついてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２
１６４、特に、ｐ．２１５４を参照のこと。「規則」は、以下の通りに要約することがで
きる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有し、かつＹの－１位が中性または酸
性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えばＲ、Ｋ、またはＨ
ではない）。いかなる理論に束縛されることも意図するものではないが、チロシン硫酸化
領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公
知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａ
ｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－
１４６３３を参照のこと）。
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求され
るＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ
２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、その全体が参照により組み込ま
れている、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析に
ついてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２
１６４、特に、ｐ．２１５４を参照のこと。「規則」は、以下の通りに要約することがで
きる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有し、かつＹの－１位が中性または酸
性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えばＲ、Ｋ、またはＨ
ではない）。いかなる理論に束縛されることも意図するものではないが、チロシン硫酸化
領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公
知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａ
ｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－
１４６３３を参照のこと）。
【0081】
重要なことに、チロシン硫酸化タンパク質は、チロシン硫酸化に要求される酵素を天然
には有しないＥ．ｃｏｌｉでは生産することができない。さらに、ＣＨＯ細胞は、チロシ
ン硫酸化について欠陥がある－この細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化
のための能力が限定されている。例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７を参照のこと。有利なことに、本
明細書において提供する方法は、分泌型であり、かつチロシン硫酸化のための能力を備え
る神経細胞またはグリア細胞におけるＩＤＵＡ、例えばＨｕＧｌｙＩＤＵＡの発現を必要
とする。チロシン硫酸化を検出するためのアッセイは、当技術分野において公知である。
例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２
１６４を参照のこと。
には有しないＥ．ｃｏｌｉでは生産することができない。さらに、ＣＨＯ細胞は、チロシ
ン硫酸化について欠陥がある－この細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化
のための能力が限定されている。例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７を参照のこと。有利なことに、本
明細書において提供する方法は、分泌型であり、かつチロシン硫酸化のための能力を備え
る神経細胞またはグリア細胞におけるＩＤＵＡ、例えばＨｕＧｌｙＩＤＵＡの発現を必要
とする。チロシン硫酸化を検出するためのアッセイは、当技術分野において公知である。
例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２
１６４を参照のこと。
【0082】
ヒトＣＮＳ細胞におけるロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロシン硫酸
化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタン
パク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、他のタンパク質では
、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）のアビディティが増大し、タンパ
ク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進されることが示されている。（Ｍｏ
ｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄ
ｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９
を参照のこと）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こる場
合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明ら
かに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂ
ｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに見出すことができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）
で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼに
おいて少数しか存在しない。
化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタン
パク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、他のタンパク質では
、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）のアビディティが増大し、タンパ
ク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進されることが示されている。（Ｍｏ
ｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄ
ｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９
を参照のこと）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こる場
合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明ら
かに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂ
ｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに見出すことができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）
で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼに
おいて少数しか存在しない。
【0083】
（５．２コンストラクト及び製剤化）
α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、例えばヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードす
るウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトは、本明細書において提供する
方法における使用のためのものである。本明細書において提供するウイルスベクター及び
他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための
任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム
、他の脂質を含む複合体、他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分
子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッ
ドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームが挙げ
られる。いくつかの実施形態において、ベクターは、標的化ベクター、例えば、神経細胞
を標的とするベクターである。
α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、例えばヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードす
るウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトは、本明細書において提供する
方法における使用のためのものである。本明細書において提供するウイルスベクター及び
他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための
任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム
、他の脂質を含む複合体、他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分
子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッ
ドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームが挙げ
られる。いくつかの実施形態において、ベクターは、標的化ベクター、例えば、神経細胞
を標的とするベクターである。
【0084】
いくつかの態様において、本開示は、ＩＤＵＡ、例えばｈＩＤＵＡをコードする使用の
ための核酸を提供し、該核酸はサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉
腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１αプロモーター、Ｕ
Ｂ６プロモーター、ニワトリβ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６
５プロモーター、及びオプシンプロモーターからなる群から選択されるプロモーターと作
用可能に連結されている。
ための核酸を提供し、該核酸はサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉
腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１αプロモーター、Ｕ
Ｂ６プロモーター、ニワトリβ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６
５プロモーター、及びオプシンプロモーターからなる群から選択されるプロモーターと作
用可能に連結されている。
【0085】
ある実施形態において、１以上の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む組換えベク
ターについて本明細書において提供される。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＤＮＡ及びＲ
ＮＡの組合わせを含むことができる。ある実施形態において、ＤＮＡは、プロモーター配
列、関心対象の遺伝子配列（導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）、非翻訳領域、及び終結配
列からなる群から選択される１以上の配列を含む。ある実施形態において、本明細書にお
いて提供するウイルスベクターは、関心対象の遺伝子と作用可能に連結されたプロモータ
ーを含む。
ターについて本明細書において提供される。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＤＮＡ及びＲ
ＮＡの組合わせを含むことができる。ある実施形態において、ＤＮＡは、プロモーター配
列、関心対象の遺伝子配列（導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）、非翻訳領域、及び終結配
列からなる群から選択される１以上の配列を含む。ある実施形態において、本明細書にお
いて提供するウイルスベクターは、関心対象の遺伝子と作用可能に連結されたプロモータ
ーを含む。
【0086】
ある実施形態において、本明細書に開示する核酸（例えば、ポリヌクレオチド）及び核
酸配列は、例えば、当業者に公知の任意のコドン－最適化技術を介して、コドン最適化す
ることができる（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９
：１４９－１６１を参照のこと）。
酸配列は、例えば、当業者に公知の任意のコドン－最適化技術を介して、コドン最適化す
ることができる（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９
：１４９－１６１を参照のこと）。
【0087】
（５．２．１．ｍＲＮＡ）
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例
えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）をコードしている修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへ
の導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、その全体が参照
により本明細書に組み込まれているＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６
，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において教示さ
れる。ある実施形態において、ＩＤＵＡ、例えば、ｈＩＤＵＡをコードしている修飾ｍＲ
ＮＡについて本明細書に記載する。
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例
えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）をコードしている修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへ
の導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、その全体が参照
により本明細書に組み込まれているＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６
，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において教示さ
れる。ある実施形態において、ＩＤＵＡ、例えば、ｈＩＤＵＡをコードしている修飾ｍＲ
ＮＡについて本明細書に記載する。
【0088】
（５．２．２．ウイルスベクター）
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡ
Ｖ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポッ
クスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊ
ａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベ
クターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト
免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベースのベクターがある。アルファウイルスベクターには、
セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。ある実施形
態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターで
ある。ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ヒトにお
いて複製欠損型となるように、改変される。ある実施形態において、ウイルスベクターは
、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置される
ＡＡＶベクターである。ある実施形態において、第１のウイルスからのウイルスキャプシ
ド及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターが
、本明細書において提供される。具体的な実施形態において、第２のウイルスは、水疱性
口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より具体的な実施形態において、エンベロープタンパ
ク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡ
Ｖ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポッ
クスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊ
ａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベ
クターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト
免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベースのベクターがある。アルファウイルスベクターには、
セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。ある実施形
態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターで
ある。ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ヒトにお
いて複製欠損型となるように、改変される。ある実施形態において、ウイルスベクターは
、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置される
ＡＡＶベクターである。ある実施形態において、第１のウイルスからのウイルスキャプシ
ド及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターが
、本明細書において提供される。具体的な実施形態において、第２のウイルスは、水疱性
口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より具体的な実施形態において、エンベロープタンパ
ク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
【0089】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ＨＩＶベース
のウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供するＨＩＶベ
ースのベクターは少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、ｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子は
ＨＩＶゲノム由来のものとし、ｅｎｖ遺伝子は別のウイルス由来のものとする。
のウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供するＨＩＶベ
ースのベクターは少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、ｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子は
ＨＩＶゲノム由来のものとし、ｅｎｖ遺伝子は別のウイルス由来のものとする。
【0090】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、単純ヘルペス
ウイルスベースのウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提
供する単純ヘルペスウイルスベースのベクターは、１以上の前初期（ＩＥ）遺伝子を含ま
ず、そのために細胞傷害性がなくなるように改変する。
ウイルスベースのウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提
供する単純ヘルペスウイルスベースのベクターは、１以上の前初期（ＩＥ）遺伝子を含ま
ず、そのために細胞傷害性がなくなるように改変する。
【0091】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ＭＬＶベース
のウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供するＭＬＶベ
ースのベクターは、ウイルス遺伝子の代わりに最高８ｋｂの異種ＤＮＡを含む。
のウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供するＭＬＶベ
ースのベクターは、ウイルス遺伝子の代わりに最高８ｋｂの異種ＤＮＡを含む。
【0092】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、レンチウイル
スベースのウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供する
レンチウイルスベクターは、ヒトレンチウイルスに由来する。ある実施形態において、本
明細書において提供するレンチウイルスベクターは、非ヒトレンチウイルスに由来する。
ある実施形態において、本明細書において提供するレンチウイルスベクターは、レンチウ
イルスキャプシドにパッケージングされる。ある実施形態において、本明細書において提
供するレンチウイルスベクターは、以下のエレメント：長い末端反復配列、プライマー結
合部位、ポリプリントラクト、ａｔｔ部位、及びキャプシド化部位の１以上を含む。
スベースのウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供する
レンチウイルスベクターは、ヒトレンチウイルスに由来する。ある実施形態において、本
明細書において提供するレンチウイルスベクターは、非ヒトレンチウイルスに由来する。
ある実施形態において、本明細書において提供するレンチウイルスベクターは、レンチウ
イルスキャプシドにパッケージングされる。ある実施形態において、本明細書において提
供するレンチウイルスベクターは、以下のエレメント：長い末端反復配列、プライマー結
合部位、ポリプリントラクト、ａｔｔ部位、及びキャプシド化部位の１以上を含む。
【0093】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、アルファウイ
ルスベースのウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供す
るアルファウイルスベクターは、組換え、複製欠損アルファウイルスである。ある実施形
態において、本明細書において提供するアルファウイルスベクターのアルファウイルスレ
プリコンは、それらのビリオン表面に機能的な異種リガンドを提示することによって、特
定の細胞種に標的化される。
ルスベースのウイルスベクターである。ある実施形態において、本明細書において提供す
るアルファウイルスベクターは、組換え、複製欠損アルファウイルスである。ある実施形
態において、本明細書において提供するアルファウイルスベクターのアルファウイルスレ
プリコンは、それらのビリオン表面に機能的な異種リガンドを提示することによって、特
定の細胞種に標的化される。
【0094】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ＡＡＶベース
のウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書において提供するウイルス
ベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベースのウイルスベクターである。ある実施
形態において、本明細書において提供するＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベースのウイル
スベクターは、ＣＮＳ細胞への向性を保持する。複数のＡＡＶ血清型が特定されている。
ある実施形態において、本明細書において提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの
１以上の血清型に由来する成分を含む。ある実施形態において、本明細書において提供す
るＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、Ａ
ＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、またはＡＡＶ１１の１以上に
由来する成分を含む。好ましい実施形態において、本明細書において提供するＡＡＶベー
スのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１血清型の１以上に由
来する成分を含む。ＡＡＶ９ベースのウイルスベクターは、本明細書に記載の方法で使用
する。ＡＡＶベースのウイルスベクターの核酸配列ならびに組換えＡＡＶ及びＡＡＶキャ
プシドの作製方法は、例えばその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、
米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国
特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際
特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号において教示される。一態様において
、導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９またはＡＡＶ
ｒｈ１０）ベースのウイルスベクターが、本明細書において提供される。具体的な実施形
態において、ＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが、本明細書にお
いて提供される。より具体的な実施形態において、ｈＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９ベー
スのウイルスベクターが、本明細書において提供される。
のウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書において提供するウイルス
ベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベースのウイルスベクターである。ある実施
形態において、本明細書において提供するＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベースのウイル
スベクターは、ＣＮＳ細胞への向性を保持する。複数のＡＡＶ血清型が特定されている。
ある実施形態において、本明細書において提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの
１以上の血清型に由来する成分を含む。ある実施形態において、本明細書において提供す
るＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、Ａ
ＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、またはＡＡＶ１１の１以上に
由来する成分を含む。好ましい実施形態において、本明細書において提供するＡＡＶベー
スのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１血清型の１以上に由
来する成分を含む。ＡＡＶ９ベースのウイルスベクターは、本明細書に記載の方法で使用
する。ＡＡＶベースのウイルスベクターの核酸配列ならびに組換えＡＡＶ及びＡＡＶキャ
プシドの作製方法は、例えばその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、
米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国
特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際
特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号において教示される。一態様において
、導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９またはＡＡＶ
ｒｈ１０）ベースのウイルスベクターが、本明細書において提供される。具体的な実施形
態において、ＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが、本明細書にお
いて提供される。より具体的な実施形態において、ｈＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９ベー
スのウイルスベクターが、本明細書において提供される。
【0095】
（ｉ）調節エレメントの制御下にあり、ＩＴＲと隣接している導入遺伝子を含む発現カ
セット；及び（ｉｉ）ＡＡＶ９キャプシドタンパク質のアミノ酸配列を有するか、または
ＡＡＶ９キャプシドタンパク質（配列番号２６）のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９
６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％同一であり、同時にＡＡＶ９キャプシ
ドの生物学的機能を保持するウイルスキャプシド：を含む人工ゲノムを含むＡＡＶ９ベク
ターを、特定の実施形態において提供する。ある実施形態において、コードされたＡＡＶ
９キャプシドは、配列番号２６の配列に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４
、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有し、かつＡＡＶ９キ
ャプシドの生物学的機能を保持する。図５は、ＳＵＢＳと表示された列における比較に基
づくアラインされた配列の特定の位置で置換され得る潜在的アミノ酸を有する異なるＡＡ
Ｖ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較アラインメントを提供する。した
がって、具体的な実施形態において、ＡＡＶ９ベクターは、ネイティブＡＡＶ９配列中の
その位置に存在しない図５のＳＵＢＳ列において特定される１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１
、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有
するＡＡＶ９キャプシドバリアントを含む。
セット；及び（ｉｉ）ＡＡＶ９キャプシドタンパク質のアミノ酸配列を有するか、または
ＡＡＶ９キャプシドタンパク質（配列番号２６）のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９
６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％同一であり、同時にＡＡＶ９キャプシ
ドの生物学的機能を保持するウイルスキャプシド：を含む人工ゲノムを含むＡＡＶ９ベク
ターを、特定の実施形態において提供する。ある実施形態において、コードされたＡＡＶ
９キャプシドは、配列番号２６の配列に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４
、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有し、かつＡＡＶ９キ
ャプシドの生物学的機能を保持する。図５は、ＳＵＢＳと表示された列における比較に基
づくアラインされた配列の特定の位置で置換され得る潜在的アミノ酸を有する異なるＡＡ
Ｖ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較アラインメントを提供する。した
がって、具体的な実施形態において、ＡＡＶ９ベクターは、ネイティブＡＡＶ９配列中の
その位置に存在しない図５のＳＵＢＳ列において特定される１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１
、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有
するＡＡＶ９キャプシドバリアントを含む。
【0096】
ある実施形態において、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、その全体が参照に
より組み込まれているＺｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６
）：１０５６－１０６８に記載の通り、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である。ある
実施形態において、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、その各々の全体が参照に
より本明細書に組み込まれている米国特許第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号
、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３
号に記載の通り、以下のアミノ酸挿入：ＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰのうち
の１つを含む。ある実施形態において、その各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れている米国特許第９，１９３，９５６号、第９，４５８，５１７号、及び第９，５８７
，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の通り、本
明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、ＡＡＶ．７ｍ８である。ある実施形態において
、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号において
開示される任意のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ）である。ある実施形態において
、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、その各々の全体が参照により本明細書に組
み込まれている以下の特許及び特許出願：米国特許第７，９０６，１１１号；第８，５２
４，４４６号；第８，９９９，６７８号；第８，６２８，９６６号；第８，９２７，５１
４号；第８，７３４，８０９号；米国第９，２８４，３５７号；第９，４０９，９５３号
；第９，１６９，２９９号；第９，１９３，９５６号；第９４５８５１７号；及び第９，
５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号；第２０１５／０１
２６５８８号；第２０１７／００６７９０８号；第２０１３／０２２４８３６号；第２０
１６／０２１５０２４号；第２０１７／００５１２５７号；及び国際特許出願番号ＰＣＴ
／ＵＳ２０１５／０３４７９９；ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５のいずれかにおい
て開示されるＡＡＶである。
より組み込まれているＺｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６
）：１０５６－１０６８に記載の通り、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である。ある
実施形態において、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、その各々の全体が参照に
より本明細書に組み込まれている米国特許第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号
、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３
号に記載の通り、以下のアミノ酸挿入：ＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰのうち
の１つを含む。ある実施形態において、その各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れている米国特許第９，１９３，９５６号、第９，４５８，５１７号、及び第９，５８７
，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の通り、本
明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、ＡＡＶ．７ｍ８である。ある実施形態において
、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号において
開示される任意のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ）である。ある実施形態において
、本明細書に記載の方法で使用するＡＡＶは、その各々の全体が参照により本明細書に組
み込まれている以下の特許及び特許出願：米国特許第７，９０６，１１１号；第８，５２
４，４４６号；第８，９９９，６７８号；第８，６２８，９６６号；第８，９２７，５１
４号；第８，７３４，８０９号；米国第９，２８４，３５７号；第９，４０９，９５３号
；第９，１６９，２９９号；第９，１９３，９５６号；第９４５８５１７号；及び第９，
５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号；第２０１５／０１
２６５８８号；第２０１７／００６７９０８号；第２０１３／０２２４８３６号；第２０
１６／０２１５０２４号；第２０１７／００５１２５７号；及び国際特許出願番号ＰＣＴ
／ＵＳ２０１５／０３４７９９；ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５のいずれかにおい
て開示されるＡＡＶである。
【0097】
ある実施形態において、一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）は、上記の通り使用することがで
きる。ある実施形態において、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用すること
ができる（例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれているＷｕ，２０
０７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２，ＭｃＣａｒ
ｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ
１６，Ｐａｇｅｓ １２４８－１２５４；及び米国特許第６，５９６，５３５号；第７，
１２５，７１７号；及び第７，４５６，６８３号を参照のこと）。
きる。ある実施形態において、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用すること
ができる（例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれているＷｕ，２０
０７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２，ＭｃＣａｒ
ｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ
１６，Ｐａｇｅｓ １２４８－１２５４；及び米国特許第６，５９６，５３５号；第７，
１２５，７１７号；及び第７，４５６，６８３号を参照のこと）。
【0098】
ある実施形態において、本明細書に記載の方法で使用されるウイルスベクターは、アデ
ノウイルスベースのウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターは、ＩＤＵ
Ａの導入に使用することができる。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を有し、Ｅ３欠失
を有していてもいなくてもよく、かつ発現カセットがいずれかの欠失した領域に挿入され
ている第一世代のベクターとし得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２及びＥ４領域の完全
または部分的欠失を含む第二世代のベクターとし得る。ヘルパー依存型アデノウイルスは
、アデノウイルス逆位末端反復配列及びパッケージングシグナル（φ）のみを保持する。
導入遺伝子は、パッケージングシグナル及び３’ＩＴＲの間に挿入され、およそ３６ｋｂ
の野生型のサイズの近くに人工ゲノムを維持するスタッファー配列があってもなくてもよ
い。アデノウイルスベクターの生産のための例示的なプロトコルは、その全体が参照によ
り本明細書に組み込まれているＡｌｂａ ｅｔ ａｌ．，２００５，“Ｇｕｔｌｅｓｓ
ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏ
ｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７に
見出すことができる。
ノウイルスベースのウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターは、ＩＤＵ
Ａの導入に使用することができる。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を有し、Ｅ３欠失
を有していてもいなくてもよく、かつ発現カセットがいずれかの欠失した領域に挿入され
ている第一世代のベクターとし得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２及びＥ４領域の完全
または部分的欠失を含む第二世代のベクターとし得る。ヘルパー依存型アデノウイルスは
、アデノウイルス逆位末端反復配列及びパッケージングシグナル（φ）のみを保持する。
導入遺伝子は、パッケージングシグナル及び３’ＩＴＲの間に挿入され、およそ３６ｋｂ
の野生型のサイズの近くに人工ゲノムを維持するスタッファー配列があってもなくてもよ
い。アデノウイルスベクターの生産のための例示的なプロトコルは、その全体が参照によ
り本明細書に組み込まれているＡｌｂａ ｅｔ ａｌ．，２００５，“Ｇｕｔｌｅｓｓ
ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏ
ｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７に
見出すことができる。
【0099】
ある実施形態において、本明細書に記載の方法で使用されるウイルスベクターは、レン
チウイルスベースのウイルスベクターである。組換えレンチウイルスベクターは、ＩＤＵ
Ａの導入に使用することができる。４つのプラスミドを、コンストラクト：Ｇａｇ／ｐｏ
ｌ配列を含むプラスミド、Ｒｅｖ配列を含むプラスミド、エンベロープタンパク質を含む
プラスミド（すなわち、ＶＳＶ－Ｇ）、ならびにパッケージングエレメント及びＩＤＵＡ
遺伝子を有するＣｉｓプラスミドを作製するために使用する。
チウイルスベースのウイルスベクターである。組換えレンチウイルスベクターは、ＩＤＵ
Ａの導入に使用することができる。４つのプラスミドを、コンストラクト：Ｇａｇ／ｐｏ
ｌ配列を含むプラスミド、Ｒｅｖ配列を含むプラスミド、エンベロープタンパク質を含む
プラスミド（すなわち、ＶＳＶ－Ｇ）、ならびにパッケージングエレメント及びＩＤＵＡ
遺伝子を有するＣｉｓプラスミドを作製するために使用する。
【0100】
レンチウイルスベクター作製のため、とりわけポリエチレンイミンまたはリン酸カルシ
ウムをトランスフェクション薬剤として使用し得ることにより、４つのプラスミドを細胞
（すなわち、ＨＥＫ２９３ベースの細胞）に共トランスフェクションする。続いて、上清
中のレンチウイルスを採取する（レンチウイルスは、活性を示すために細胞から出芽する
必要があるため、細胞からの採取は行う必要がないし、するべきではない）。上清を濾過
し（０．４５μｍ）、続いて、塩化マグネシウム及びベンゾナーゼを加える。さらに下流
のプロセスは、非常に様々なものがあり得、ＴＦＦ及びカラムクロマトグラフィーの使用
が最もＧＭＰに適合するプロセスである。他のプロセスでは、超遠心分離が使用され、カ
ラムクロマトグラフィーを伴ってもよいし、伴わなくてもよい。レンチウイルスベクター
の作製のための例示的なプロトコルは、その両方とも全体が参照により本明細書に組み込
まれている、Ｌｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｒａ
ｔｅｄ ｉｎ ２９３Ｔ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｕｌｏ
ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １８：５３１－５３８、及
びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＧＭＰ
－Ｇｒａｄｅ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎ
ｔ．１０（２）：３２－４３に見出すことができる。
ウムをトランスフェクション薬剤として使用し得ることにより、４つのプラスミドを細胞
（すなわち、ＨＥＫ２９３ベースの細胞）に共トランスフェクションする。続いて、上清
中のレンチウイルスを採取する（レンチウイルスは、活性を示すために細胞から出芽する
必要があるため、細胞からの採取は行う必要がないし、するべきではない）。上清を濾過
し（０．４５μｍ）、続いて、塩化マグネシウム及びベンゾナーゼを加える。さらに下流
のプロセスは、非常に様々なものがあり得、ＴＦＦ及びカラムクロマトグラフィーの使用
が最もＧＭＰに適合するプロセスである。他のプロセスでは、超遠心分離が使用され、カ
ラムクロマトグラフィーを伴ってもよいし、伴わなくてもよい。レンチウイルスベクター
の作製のための例示的なプロトコルは、その両方とも全体が参照により本明細書に組み込
まれている、Ｌｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｒａ
ｔｅｄ ｉｎ ２９３Ｔ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｕｌｏ
ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １８：５３１－５３８、及
びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＧＭＰ
－Ｇｒａｄｅ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎ
ｔ．１０（２）：３２－４３に見出すことができる。
【0101】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法に用いられるベクターはＩＤＵＡ（
例えば、ｈＩＤＵＡ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞（
例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏの神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤ
ＵＡのグリコシル化バリアントが形質導入された細胞によって発現されるようになってい
る。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法に用いられるベクターはＩＤＵＡ
（例えば、ｈＩＤＵＡ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞
（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏの神経細胞）に形質導入した際に、Ｉ
ＤＵＡの硫酸化バリアントが細胞によって発現されるようになっている。
例えば、ｈＩＤＵＡ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞（
例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏの神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤ
ＵＡのグリコシル化バリアントが形質導入された細胞によって発現されるようになってい
る。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法に用いられるベクターはＩＤＵＡ
（例えば、ｈＩＤＵＡ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞
（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏの神経細胞）に形質導入した際に、Ｉ
ＤＵＡの硫酸化バリアントが細胞によって発現されるようになっている。
【0102】
（５．２．３．遺伝子発現のプロモーター及び修飾物質（ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ））
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝
子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。ある実施形態に
おいて、本明細書において提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、細胞との結合に影響を及
ぼすかまたは細胞を標的とする構成要素を含む。ある実施形態において、本明細書におい
て提供するベクターは、取り込みの後、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝
子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある実施形態において、本明細書において
提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出するか、または
選択するための検出可能な、または選択可能なマーカーとして使用することができる構成
要素を含む。
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝
子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。ある実施形態に
おいて、本明細書において提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、細胞との結合に影響を及
ぼすかまたは細胞を標的とする構成要素を含む。ある実施形態において、本明細書におい
て提供するベクターは、取り込みの後、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝
子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある実施形態において、本明細書において
提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出するか、または
選択するための検出可能な、または選択可能なマーカーとして使用することができる構成
要素を含む。
【0103】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、１以上のプロ
モーターを含む。ある実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターである。
代替の実施形態において、プロモーターは、誘導性プロモーターである。ネイティブのＩ
ＤＵＡ遺伝子は、大部分のハウスキーピング遺伝子と同様に、主にＧＣリッチプロモータ
ーを使用する。好ましい実施形態において、ｈＩＤＵＡの持続的な発現を提供する強力な
構成的プロモーターを使用する。そのようなプロモーターには、「Ｃ」－サイトメガロウ
イルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント；「Ａ」－ニワトリβアクチン遺伝子のプ
ロモーターならびに第一エキソン及びイントロン；ならびに「Ｇ」－ウサギβ－グロビン
遺伝子のスプライスアクセプターを含む「ＣＡＧ」合成プロモーターがある（Ｍｉｙａｚ
ａｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７９：２６９－２７７、及びＮｉｗａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０８：１９３－１９９を参照のこと）。
モーターを含む。ある実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターである。
代替の実施形態において、プロモーターは、誘導性プロモーターである。ネイティブのＩ
ＤＵＡ遺伝子は、大部分のハウスキーピング遺伝子と同様に、主にＧＣリッチプロモータ
ーを使用する。好ましい実施形態において、ｈＩＤＵＡの持続的な発現を提供する強力な
構成的プロモーターを使用する。そのようなプロモーターには、「Ｃ」－サイトメガロウ
イルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント；「Ａ」－ニワトリβアクチン遺伝子のプ
ロモーターならびに第一エキソン及びイントロン；ならびに「Ｇ」－ウサギβ－グロビン
遺伝子のスプライスアクセプターを含む「ＣＡＧ」合成プロモーターがある（Ｍｉｙａｚ
ａｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７９：２６９－２７７、及びＮｉｗａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０８：１９３－１９９を参照のこと）。
【0104】
ある実施形態において、プロモーターはＣＢ７プロモーターである（その全体が参照に
より本明細書に組み込まれているＤｉｎｃｕｌｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｈｕ
ｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：６４９－６６３を参照のこと）。いくつかの実施形態に
おいて、ＣＢ７プロモーターは、ベクターによって駆動される導入遺伝子の発現を増強す
る他の発現制御エレメントを含む。ある実施形態において、他の発現制御エレメントには
、ニワトリβ－アクチンイントロン及び／またはウサギβ－グロビンｐｏｌＡシグナルが
ある。ある実施形態において、プロモーターは、ＴＡＴＡボックスを含む。ある実施形態
において、プロモーターは、１以上のエレメントを含む。ある実施形態において、１以上
のプロモーターエレメントは、互いに対して逆向きにしても、位置を変えてもよい。ある
実施形態において、プロモーターのエレメントは、協働的に機能するように配置する。あ
る実施形態において、プロモーターのエレメントは、独立して機能するように配置する。
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ヒトＣＭＶ前初
期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ）長鎖末
端反復配列、及びラットインスリンプロモーターからなる群から選択される１以上のプロ
モーターを含む。ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、ＡＡＶ
、ＭＬＶ、ＭＭＴＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ－１、及びＨＩＶ－２ ＬＴＲからなる
群から選択される１以上の長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターを含む。ある実施形
態において、本明細書において提供するベクターは、１以上の組織特異的プロモーター（
例えば、神経細胞特異的なプロモーター）を含む。
より本明細書に組み込まれているＤｉｎｃｕｌｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｈｕ
ｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：６４９－６６３を参照のこと）。いくつかの実施形態に
おいて、ＣＢ７プロモーターは、ベクターによって駆動される導入遺伝子の発現を増強す
る他の発現制御エレメントを含む。ある実施形態において、他の発現制御エレメントには
、ニワトリβ－アクチンイントロン及び／またはウサギβ－グロビンｐｏｌＡシグナルが
ある。ある実施形態において、プロモーターは、ＴＡＴＡボックスを含む。ある実施形態
において、プロモーターは、１以上のエレメントを含む。ある実施形態において、１以上
のプロモーターエレメントは、互いに対して逆向きにしても、位置を変えてもよい。ある
実施形態において、プロモーターのエレメントは、協働的に機能するように配置する。あ
る実施形態において、プロモーターのエレメントは、独立して機能するように配置する。
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ヒトＣＭＶ前初
期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ）長鎖末
端反復配列、及びラットインスリンプロモーターからなる群から選択される１以上のプロ
モーターを含む。ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、ＡＡＶ
、ＭＬＶ、ＭＭＴＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ－１、及びＨＩＶ－２ ＬＴＲからなる
群から選択される１以上の長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターを含む。ある実施形
態において、本明細書において提供するベクターは、１以上の組織特異的プロモーター（
例えば、神経細胞特異的なプロモーター）を含む。
【0105】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、１以上のプロ
モーター以外の調節エレメントを含む。ある実施形態において、本明細書において提供す
るウイルスベクターは、エンハンサーを含む。ある実施形態において、本明細書において
提供するウイルスベクターは、リプレッサーを含む。ある実施形態において、本明細書に
おいて提供するウイルスベクターは、イントロンまたはキメライントロンを含む。ある実
施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ポリアデニル化配列を
含む。
モーター以外の調節エレメントを含む。ある実施形態において、本明細書において提供す
るウイルスベクターは、エンハンサーを含む。ある実施形態において、本明細書において
提供するウイルスベクターは、リプレッサーを含む。ある実施形態において、本明細書に
おいて提供するウイルスベクターは、イントロンまたはキメライントロンを含む。ある実
施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、ポリアデニル化配列を
含む。
【0106】
（５．２．４．シグナルペプチド）
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、タンパク質送達を調節
する構成要素を含む。ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクタ
ーは、１以上のシグナルペプチドを含む。ある実施形態において、シグナルペプチドは、
導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリ
コシル化）を達成することを可能にする。ある実施形態において、シグナルペプチドは、
導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）が細胞内で適切な局在化を達成することを可能にす
る。ある実施形態において、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）
が細胞からの分泌を達成することを可能にする。ベクターに関連して使用されるシグナル
ペプチドの例及び本明細書において提供する導入遺伝子は、表３に見出すことができる。
シグナルペプチドはまた、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドと呼
ばれ得る。
表３．本明細書において提供するベクターとともに使用するためのシグナルペプチド。
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、タンパク質送達を調節
する構成要素を含む。ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクタ
ーは、１以上のシグナルペプチドを含む。ある実施形態において、シグナルペプチドは、
導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリ
コシル化）を達成することを可能にする。ある実施形態において、シグナルペプチドは、
導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）が細胞内で適切な局在化を達成することを可能にす
る。ある実施形態において、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）
が細胞からの分泌を達成することを可能にする。ベクターに関連して使用されるシグナル
ペプチドの例及び本明細書において提供する導入遺伝子は、表３に見出すことができる。
シグナルペプチドはまた、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドと呼
ばれ得る。
表３．本明細書において提供するベクターとともに使用するためのシグナルペプチド。
【表1】
【0107】
（５．２．５．非翻訳領域）
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、１以上の非翻
訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。ある実施形態におい
て、ＵＴＲは、タンパク質発現の所望のレベルのために最適化される。ある実施形態にお
いて、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期のために最適化される。ある実施形態にお
いて、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性のために最適化される。ある実施形態に
おいて、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造のために最適化される。
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、１以上の非翻
訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。ある実施形態におい
て、ＵＴＲは、タンパク質発現の所望のレベルのために最適化される。ある実施形態にお
いて、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期のために最適化される。ある実施形態にお
いて、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性のために最適化される。ある実施形態に
おいて、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造のために最適化される。
【0108】
（５．２．６．逆位末端反復配列）
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、１以上の逆位
末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺
伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。ある実施形態にお
いて、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれている、例えばＹａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．
Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９；米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、
米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国
特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７
６４６６を参照のこと）。
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、１以上の逆位
末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺
伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。ある実施形態にお
いて、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれている、例えばＹａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．
Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９；米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、
米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国
特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７
６４６６を参照のこと）。
【0109】
（５．２．７．導入遺伝子）
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、ＩＤＵＡ導入遺伝子を
コードする。具体的な実施形態において、ＩＤＵＡは、神経細胞における発現に適当な発
現制御エレメントによって制御される：ある実施形態において、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩ
ＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ＩＤ
ＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８５％
、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、本明細書において提供するベクターは、ＩＤＵＡ導入遺伝子を
コードする。具体的な実施形態において、ＩＤＵＡは、神経細胞における発現に適当な発
現制御エレメントによって制御される：ある実施形態において、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩ
ＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ＩＤ
ＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８５％
、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。
【0110】
導入遺伝子によってコードされるＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、これらに限定はされないが、
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならび
にアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えばこれらに限定はされないが、図２
に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含
む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示
す（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０
１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ
突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れているＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃
５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０
（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程
度の、もしくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まない
ことを条件とする）ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる。
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならび
にアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えばこれらに限定はされないが、図２
に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含
む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示
す（その全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０
１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ
突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込ま
れているＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃
５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０
（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程
度の、もしくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まない
ことを条件とする）ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる。
【0111】
例えば、ｈＩＤＵＡの特定位置でのアミノ酸置換は図２（その全体が参照により本明細
書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６
２８、図Ｓ８に報告されたオーソログのアラインメントを示す）に表されるＩＤＵＡオー
ソログにおけるその位置に見出される対応する非保存的アミノ酸残基から選択することが
できる（ただし、そのような置換は図３に示されるか、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２０
０２もしくはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告される有害な突然変異のいずれも含
まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験
動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、
欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルにおけるＭＰＳ Ｉのためのｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでの従来のアッセイによって試験されるＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減
期を維持するか、または増加させるものとするべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵
素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素
アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイに
ついては、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｏｐｗ
ｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６
５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２
：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒ
ｉｆ ５：２２５－２３２を参照のこと）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正す
る能力は、例えば、培養中でＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイ
ルスベクターもしくは他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養中
のＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を加えることにより、またはＭ
ＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を発現及び分泌するように操作した
ヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養中で評価し、例えば、培養中のＭＰＳ
Ｉ細胞におけるＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより
、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれているＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ
．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照のこと）。
書に組み込まれているＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６
２８、図Ｓ８に報告されたオーソログのアラインメントを示す）に表されるＩＤＵＡオー
ソログにおけるその位置に見出される対応する非保存的アミノ酸残基から選択することが
できる（ただし、そのような置換は図３に示されるか、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２０
０２もしくはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告される有害な突然変異のいずれも含
まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験
動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、
欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルにおけるＭＰＳ Ｉのためのｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでの従来のアッセイによって試験されるＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減
期を維持するか、または増加させるものとするべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵
素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素
アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイに
ついては、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｏｐｗ
ｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６
５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２
：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒ
ｉｆ ５：２２５－２３２を参照のこと）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正す
る能力は、例えば、培養中でＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイ
ルスベクターもしくは他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養中
のＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を加えることにより、またはＭ
ＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡもしくは誘導体を発現及び分泌するように操作した
ヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養中で評価し、例えば、培養中のＭＰＳ
Ｉ細胞におけるＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより
、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全体が
参照により本明細書に組み込まれているＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１
，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ
．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照のこと）。
【0112】
（５．２．８．コンストラクト）
ある実施形態において、本明細書において提供されるウイルスベクターは、以下の順序
で以下のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモータ
ー配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）
導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリ
Ａ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列を含む。
ある実施形態において、本明細書において提供されるウイルスベクターは、以下の順序
で以下のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモータ
ー配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）
導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリ
Ａ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列を含む。
【0113】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、以下の順序で
以下のエレメント：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）を
コードする配列を含む。ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベク
ターは、以下の順序で以下のエレメント：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（
例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列を含み、ここで導入遺伝子はシグナルペプチドを含
む。
以下のエレメント：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）を
コードする配列を含む。ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベク
ターは、以下の順序で以下のエレメント：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（
例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列を含み、ここで導入遺伝子はシグナルペプチドを含
む。
【0114】
ある実施形態において、本明細書において提供するウイルスベクターは、以下の順序で
以下のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター
配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第
１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｉ）第２のＵ
ＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ
）第２のＩＴＲ配列を含む。
以下のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター
配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第
１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｉ）第２のＵ
ＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ
）第２のＩＴＲ配列を含む。
【0115】
ある実施形態において、本明細書において提供されるウイルスベクターは、以下の順序
で以下のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモータ
ー配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）
第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｉ）第２の
ＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及び
ｍ）第２のＩＴＲ配列を含み、ここで導入遺伝子はシグナルペプチドを含み、かつ導入遺
伝子はｈＩＤＵＡをコードする。
で以下のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモータ
ー配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）
第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｉ）第２の
ＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及び
ｍ）第２のＩＴＲ配列を含み、ここで導入遺伝子はシグナルペプチドを含み、かつ導入遺
伝子はｈＩＤＵＡをコードする。
【0116】
（５．２．９．ベクターの製造及び試験）
本明細書において提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することがで
きる。本明細書において提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ
５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １
、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ
２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使
用して製造することができる。本明細書において提供するウイルスベクターは、ヒト、サ
ル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスターから宿主細胞を使用して製造することが
できる。
本明細書において提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することがで
きる。本明細書において提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ
５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １
、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ
２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使
用して製造することができる。本明細書において提供するウイルスベクターは、ヒト、サ
ル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスターから宿主細胞を使用して製造することが
できる。
【0117】
宿主細胞は、導入遺伝子及び関連するエレメント（すなわち、ベクターゲノム）、及び
ウイルスを宿主細胞で生産する手段、例えば、複製及びキャプシド遺伝子（例えば、ＡＡ
Ｖのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子）をコードする配列を用いて安定的に形質転換する。ＡＡＶ
８キャプシドを有する組換えＡＡＶベクターを生産する方法については、その全体が参照
により本明細書に組み込まれている米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号の詳細な説明
の第ＩＶ節を参照のこと。上記ベクターのゲノムコピー力価は、例えばＴＡＱＭＡＮ（登
録商標）分析によって決定することができる。ビリオンは、例えばＣｓＣｌ２沈降によっ
て回収することができる。
ウイルスを宿主細胞で生産する手段、例えば、複製及びキャプシド遺伝子（例えば、ＡＡ
Ｖのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子）をコードする配列を用いて安定的に形質転換する。ＡＡＶ
８キャプシドを有する組換えＡＡＶベクターを生産する方法については、その全体が参照
により本明細書に組み込まれている米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号の詳細な説明
の第ＩＶ節を参照のこと。上記ベクターのゲノムコピー力価は、例えばＴＡＱＭＡＮ（登
録商標）分析によって決定することができる。ビリオンは、例えばＣｓＣｌ２沈降によっ
て回収することができる。
【0118】
ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば細胞培養アッセイは、本明細書に記載のベクターか
らの導入遺伝子発現を測定するために使用することができ、従って例えば、ベクターの効
力を示すことができる。例えば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－
２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、もしくはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ細胞株、ま
たは神経細胞もしくはグリア細胞、または神経細胞もしくはグリア細胞の前駆細胞に由来
する他の細胞株を、導入遺伝子発現を評価するために使用することができる。発現される
と、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡと関連したグリコシル化及びチロシン硫酸化のパターンの決定を
含む、発現された産物（すなわち、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）の特徴を決定することができる
。
らの導入遺伝子発現を測定するために使用することができ、従って例えば、ベクターの効
力を示すことができる。例えば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－
２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、もしくはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ細胞株、ま
たは神経細胞もしくはグリア細胞、または神経細胞もしくはグリア細胞の前駆細胞に由来
する他の細胞株を、導入遺伝子発現を評価するために使用することができる。発現される
と、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡと関連したグリコシル化及びチロシン硫酸化のパターンの決定を
含む、発現された産物（すなわち、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）の特徴を決定することができる
。
【0119】
（５．２．１０．組成物）
本明細書に記載の導入遺伝子をコードしているベクター及び好適な担体を含む組成物を
記載する。好適な担体（例えば、ＣＳＦ、及び例えば神経細胞への投与のために）は、当
業者によって容易に選択される。
本明細書に記載の導入遺伝子をコードしているベクター及び好適な担体を含む組成物を
記載する。好適な担体（例えば、ＣＳＦ、及び例えば神経細胞への投与のために）は、当
業者によって容易に選択される。
【0120】
（５．３遺伝子治療）
ＭＰＳ Ｉを有するヒト対象への、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のた
めの方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ Ｉを有する患者に、治療有効量の導入遺伝
子コンストラクトを、投与するため、特にＣＳＦに投与のための方法を記載する。特定の
実施形態において、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与
方法は、ハーラー症候群またはハーラー－シャイエ症候群を有する患者を治療するために
使用することができる。
ＭＰＳ Ｉを有するヒト対象への、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のた
めの方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ Ｉを有する患者に、治療有効量の導入遺伝
子コンストラクトを、投与するため、特にＣＳＦに投与のための方法を記載する。特定の
実施形態において、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与
方法は、ハーラー症候群またはハーラー－シャイエ症候群を有する患者を治療するために
使用することができる。
【0121】
（５．３．１．標的患者集団）
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターをＭＰＳ Ｉと診断された患者
に投与する。具体的な実施形態において、患者は、ハーラー－シャイエ症候群と診断され
た。具体的な実施形態において、患者は、シャイエ症候群と診断された。具体的な実施形
態において、患者は、ハーラー症候群と診断された。
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターをＭＰＳ Ｉと診断された患者
に投与する。具体的な実施形態において、患者は、ハーラー－シャイエ症候群と診断され
た。具体的な実施形態において、患者は、シャイエ症候群と診断された。具体的な実施形
態において、患者は、ハーラー症候群と診断された。
【0122】
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、重度のＭＰＳ Ｉと診断さ
れた患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、減弱型
ＭＰＳ Ｉと診断された患者に投与する。
れた患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、減弱型
ＭＰＳ Ｉと診断された患者に投与する。
【0123】
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、ＭＰＳ Ｉと診断され、Ｉ
ＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）を用いた治療に反応すると特定された患者に投与する。
ＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）を用いた治療に反応すると特定された患者に投与する。
【0124】
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、小児患者に投与する。ある
実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、３歳未満である患者に投与する。
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、２～４歳である患者に投与す
る。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、３～８歳である患者に投
与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、８～１６歳である患
者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、６～１８歳で
ある患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、６歳以
上の患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、３歳未
満の患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、４ヶ月
齢以上であるが９ヶ月齢未満である患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用
量の組換えベクターを、９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満である患者に投与する。あ
る実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、１８ヶ月以上であるが３歳未満
である患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、１０
歳を超える患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、
青年期の患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、成
人の患者に投与する。
実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、３歳未満である患者に投与する。
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、２～４歳である患者に投与す
る。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、３～８歳である患者に投
与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、８～１６歳である患
者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、６～１８歳で
ある患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、６歳以
上の患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、３歳未
満の患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、４ヶ月
齢以上であるが９ヶ月齢未満である患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用
量の組換えベクターを、９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満である患者に投与する。あ
る実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、１８ヶ月以上であるが３歳未満
である患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、１０
歳を超える患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、
青年期の患者に投与する。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、成
人の患者に投与する。
【0125】
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターを、ＭＰＳ Ｉと診断され、遺
伝子治療処置の前にＣＳＦに注入されたＩＤＵＡ、例えばｈＩＵＡによる治療に反応する
と特定された患者に投与する。
伝子治療処置の前にＣＳＦに注入されたＩＤＵＡ、例えばｈＩＵＡによる治療に反応する
と特定された患者に投与する。
【0126】
（５．３．２．投薬量及び投与様式）
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターは、くも膜下腔内投与（すなわ
ち、くも膜下腔に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて散布され、ＣＮＳの細胞が
形質導入されるようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。このことは、いくつかの方法
で、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成する
ことができる。ある実施形態において、くも膜下腔内投与は、大槽内（ＩＣ）注入（例え
ば、大槽に）により実施する。具体的な実施形態において、大槽内注入は、ＣＴガイド後
頭下穿刺によって実施する。具体的な実施形態において、くも膜下腔内注入は、腰椎穿刺
によって実施する。具体的な実施形態において、患者に実行できそうな場合は、くも膜下
腔への注入はＣ１－２穿刺によって実施する。ある実施形態において、治療有効用量の組
換えベクターは、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。ある実施形態において、治療有
効用量の組換えベクターは、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。ある実施形態におい
て、脳実質内注入は、線条体を標的とする。ある実施形態において、脳実質内注入は、白
質を標的とする。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターは、当技術にお
いて公知の任意の手段、例えばその全体が参照により本明細書に組み込まれているＨｏｃ
ｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
２７（７）：４７８－４９６において開示された任意の手段によって、ＣＳＦに投与す
る。
ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターは、くも膜下腔内投与（すなわ
ち、くも膜下腔に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて散布され、ＣＮＳの細胞が
形質導入されるようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。このことは、いくつかの方法
で、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成する
ことができる。ある実施形態において、くも膜下腔内投与は、大槽内（ＩＣ）注入（例え
ば、大槽に）により実施する。具体的な実施形態において、大槽内注入は、ＣＴガイド後
頭下穿刺によって実施する。具体的な実施形態において、くも膜下腔内注入は、腰椎穿刺
によって実施する。具体的な実施形態において、患者に実行できそうな場合は、くも膜下
腔への注入はＣ１－２穿刺によって実施する。ある実施形態において、治療有効用量の組
換えベクターは、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。ある実施形態において、治療有
効用量の組換えベクターは、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。ある実施形態におい
て、脳実質内注入は、線条体を標的とする。ある実施形態において、脳実質内注入は、白
質を標的とする。ある実施形態において、治療有効用量の組換えベクターは、当技術にお
いて公知の任意の手段、例えばその全体が参照により本明細書に組み込まれているＨｏｃ
ｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
２７（７）：４７８－４９６において開示された任意の手段によって、ＣＳＦに投与す
る。
【0127】
組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５～２７７
μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与するべきである。ある実施形態に
おいて、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５、
１６、４６、９２、１８５、または２７７μｇ／ｍＬ）のＣｍｉｎに維持する用量で、Ｃ
ＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣ
ＳＦ濃度を少なくとも９．２５、１６、４６、９２、１８５、または２７７μｇ／ｍＬ）
のＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクタ
ーは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに
維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕ
ＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも１６μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、
ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの
ＣＳＦ濃度を少なくとも４６μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する
。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少な
くとも９２μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態に
おいて、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも１８５μｇ
／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換え
ベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも２７７μｇ／ｍＬのＣｍｉ
ｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与するべきである。ある実施形態に
おいて、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５、
１６、４６、９２、１８５、または２７７μｇ／ｍＬ）のＣｍｉｎに維持する用量で、Ｃ
ＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣ
ＳＦ濃度を少なくとも９．２５、１６、４６、９２、１８５、または２７７μｇ／ｍＬ）
のＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクタ
ーは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに
維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕ
ＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも１６μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、
ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの
ＣＳＦ濃度を少なくとも４６μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する
。ある実施形態において、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少な
くとも９２μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態に
おいて、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも１８５μｇ
／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。ある実施形態において、組換え
ベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも２７７μｇ／ｍＬのＣｍｉ
ｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0128】
ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌ
ｙＩＤＵＡの１．００～３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施
形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ
の１．００、１．７４、５．００、１０．００、２０．００、または３０．００ｍｇを維
持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベク
ターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投
与される。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒ
ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．７４ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態
において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中に総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの５
．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、小児患者の場
合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１０．００ｍｇを維持する
用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは
、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与さ
れる。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕ
ＧｌｙＩＤＵＡの３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。
ｙＩＤＵＡの１．００～３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施
形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ
の１．００、１．７４、５．００、１０．００、２０．００、または３０．００ｍｇを維
持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベク
ターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投
与される。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒ
ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．７４ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態
において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中に総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの５
．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、小児患者の場
合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１０．００ｍｇを維持する
用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは
、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与さ
れる。ある実施形態において、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕ
ＧｌｙＩＤＵＡの３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。
【0129】
ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌ
ｙＩＤＵＡの１．２９～３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施
形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ
の１．２９、２．２５、８．４０、１２．９６、２５．９３、または３８．８８ｍｇを維
持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベク
ターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．２９ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投
与される。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒ
ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２．２５ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態
において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの８
．４０ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、成人患者の場
合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１２．９６ｍｇを維持する
用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは
、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２５．９３ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与さ
れる。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕ
ＧｌｙＩＤＵＡ３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。
ｙＩＤＵＡの１．２９～３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施
形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ
の１．２９、２．２５、８．４０、１２．９６、２５．９３、または３８．８８ｍｇを維
持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベク
ターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．２９ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投
与される。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒ
ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２．２５ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態
において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの８
．４０ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、成人患者の場
合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１２．９６ｍｇを維持する
用量でＣＳＦに投与される。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは
、ＣＳＦ中の総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２５．９３ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与さ
れる。ある実施形態において、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中の総ｒＨｕ
ＧｌｙＩＤＵＡ３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与される。
【0130】
くも膜下腔内投与について、治療有効用量の組換えベクターは、注入容量を好ましくは
最高約２０ｍＬとしてＣＳＦに投与するべきである。くも膜下腔内注入に好適な担体、例
えばＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液は、組換えベクターのためのビヒクルとして使用するべき
である。Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ溶液（一般名：塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、無水デ
キストロース、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びリン酸ナトリウ
ム）は、静菌保存剤を含んでいない無菌の、非発熱性の、等張溶液であり、化学療法薬の
くも膜下腔内投与のための希釈剤として使用する。
最高約２０ｍＬとしてＣＳＦに投与するべきである。くも膜下腔内注入に好適な担体、例
えばＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液は、組換えベクターのためのビヒクルとして使用するべき
である。Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ溶液（一般名：塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、無水デ
キストロース、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びリン酸ナトリウ
ム）は、静菌保存剤を含んでいない無菌の、非発熱性の、等張溶液であり、化学療法薬の
くも膜下腔内投与のための希釈剤として使用する。
【0131】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵ
Ａの濃度を直接測定することによってモニタリングし、または患者の血清において検出さ
れたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態
において、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであるこ
とは、ＣＳＦ中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態
において、組換えベクターは、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００
ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
Ａの濃度を直接測定することによってモニタリングし、または患者の血清において検出さ
れたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態
において、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであるこ
とは、ＣＳＦ中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態
において、組換えベクターは、血清中のｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００
ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0132】
ある実施形態において、投薬量は、患者のＣＳＦに投与される（例えば、後頭下穿刺ま
たは腰椎穿刺を介して注入される）ゲノムコピーの数により測定する。ある実施形態にお
いて、１×１０１２～２×１０１４ゲノムコピーを投与する。ある実施形態において、５
×１０１２～２×１０１４のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１×
１０１３～１×１０１４のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１×１
０１３～２×１０１３のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、６×１０
１３～８×１０１３のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１．２×１
０１２のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態において、２．０×１０１２の
ゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態において、２．２×１０１２のゲノムコ
ピーを投与する。別の具体的な実施形態において、６．０×１０１２のゲノムコピーを投
与する。別の具体的な実施形態において、１．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。
別の具体的な実施形態において、１．１×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体
的な実施形態において、３．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施
形態において、５．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態にお
いて、５．５×１０１３のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１．２
×１０１２～６．０×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態におい
て、２．０×１０１２～１．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施
形態において、２．２×１０１２～１．１×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具
体的な実施形態において、６．０×１０１２～３．０×１０１３のゲノムコピーを投与す
る。別の具体的な実施形態において、１．０×１０１３～５．０×１０１３のゲノムコピ
ーを投与する。別の具体的な実施形態において、１．１×１０１３～５．５×１０１３の
ゲノムコピーを投与する。
たは腰椎穿刺を介して注入される）ゲノムコピーの数により測定する。ある実施形態にお
いて、１×１０１２～２×１０１４ゲノムコピーを投与する。ある実施形態において、５
×１０１２～２×１０１４のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１×
１０１３～１×１０１４のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１×１
０１３～２×１０１３のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、６×１０
１３～８×１０１３のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１．２×１
０１２のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態において、２．０×１０１２の
ゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態において、２．２×１０１２のゲノムコ
ピーを投与する。別の具体的な実施形態において、６．０×１０１２のゲノムコピーを投
与する。別の具体的な実施形態において、１．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。
別の具体的な実施形態において、１．１×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体
的な実施形態において、３．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施
形態において、５．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態にお
いて、５．５×１０１３のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、１．２
×１０１２～６．０×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施形態におい
て、２．０×１０１２～１．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具体的な実施
形態において、２．２×１０１２～１．１×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の具
体的な実施形態において、６．０×１０１２～３．０×１０１３のゲノムコピーを投与す
る。別の具体的な実施形態において、１．０×１０１３～５．０×１０１３のゲノムコピ
ーを投与する。別の具体的な実施形態において、１．１×１０１３～５．５×１０１３の
ゲノムコピーを投与する。
【0133】
ある実施形態において、１×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与す
る。ある実施形態において、５．６×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に
投与する。ある実施形態において、１×１０１２～５．６×１０１３のゲノムコピーの固
定用量を、小児患者に投与する。ある実施形態において、１×１０１３～５．６×１０１
３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。具体的な実施形態において、１．
２×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態
において、２．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具
体的な実施形態において、２．２×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投
与する。別の具体的な実施形態において、６．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を
、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、１．０×１０１３のゲノムコピ
ーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、１．１×１０１
３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、
３．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施
形態において、５．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別
の具体的な実施形態において、５．５×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者
に投与する。具体的な実施形態において、１．２×１０１２～６．０×１０１２のゲノム
コピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、２．０×１
０１２～１．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体
的な実施形態において、２．２×１０１２～１．１×１０１３のゲノムコピーの固定用量
を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、６．０×１０１２～３．０×
１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態にお
いて、１．０×１０１３～５．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投
与する。別の具体的な実施形態において、１．１×１０１３～５．５×１０１３のゲノム
コピーの固定用量を、小児患者に投与する。ある実施形態において、２．６×１０１２の
ゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態において、１．３×１０
１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態において、１．４
×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態において、
７．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態にお
いて、１．４×１０１３～７．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投
与する。ある実施形態において、１×１０１２～５．６×１０１３のゲノムコピーの固定
用量を、成人患者に投与する。
る。ある実施形態において、５．６×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に
投与する。ある実施形態において、１×１０１２～５．６×１０１３のゲノムコピーの固
定用量を、小児患者に投与する。ある実施形態において、１×１０１３～５．６×１０１
３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。具体的な実施形態において、１．
２×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態
において、２．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具
体的な実施形態において、２．２×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投
与する。別の具体的な実施形態において、６．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を
、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、１．０×１０１３のゲノムコピ
ーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、１．１×１０１
３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、
３．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施
形態において、５．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別
の具体的な実施形態において、５．５×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者
に投与する。具体的な実施形態において、１．２×１０１２～６．０×１０１２のゲノム
コピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、２．０×１
０１２～１．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体
的な実施形態において、２．２×１０１２～１．１×１０１３のゲノムコピーの固定用量
を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態において、６．０×１０１２～３．０×
１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の具体的な実施形態にお
いて、１．０×１０１３～５．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投
与する。別の具体的な実施形態において、１．１×１０１３～５．５×１０１３のゲノム
コピーの固定用量を、小児患者に投与する。ある実施形態において、２．６×１０１２の
ゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態において、１．３×１０
１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態において、１．４
×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態において、
７．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。ある実施形態にお
いて、１．４×１０１３～７．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投
与する。ある実施形態において、１×１０１２～５．６×１０１３のゲノムコピーの固定
用量を、成人患者に投与する。
【0134】
ある実施形態において、投薬量は、患者のＣＳＦに脳質量のグラム当たりで投与される
（例えば、後頭下穿刺または腰椎穿刺を介して注入される）ゲノムコピーの数により測定
する。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり２×１０９のゲノムコピーを投与す
る。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり１×１０１０のゲノムコピーを投与す
る。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり５×１０１０のゲノムコピーを投与す
る。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり１×１０９～２×１０１０のゲノムコ
ピーを投与する。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり２×１０９～１×１０１
０のゲノムコピーを投与する。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり５×１０９
～２×１０１０のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、脳質量のグラム
当たり９×１０９～１×１０１０のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において
、脳質量のグラム当たり１×１０１０～１．５×１０１０のゲノムコピーを投与する。具
体的な実施形態において、脳質量のグラム当たり１×１０１０～５×１０１０のゲノムコ
ピーを投与する。具体的な実施形態において、脳質量のグラム当たり５×１０１０～６×
１０１０のゲノムコピーを投与する。
（例えば、後頭下穿刺または腰椎穿刺を介して注入される）ゲノムコピーの数により測定
する。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり２×１０９のゲノムコピーを投与す
る。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり１×１０１０のゲノムコピーを投与す
る。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり５×１０１０のゲノムコピーを投与す
る。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり１×１０９～２×１０１０のゲノムコ
ピーを投与する。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり２×１０９～１×１０１
０のゲノムコピーを投与する。ある実施形態において、脳質量のグラム当たり５×１０９
～２×１０１０のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において、脳質量のグラム
当たり９×１０９～１×１０１０のゲノムコピーを投与する。具体的な実施形態において
、脳質量のグラム当たり１×１０１０～１．５×１０１０のゲノムコピーを投与する。具
体的な実施形態において、脳質量のグラム当たり１×１０１０～５×１０１０のゲノムコ
ピーを投与する。具体的な実施形態において、脳質量のグラム当たり５×１０１０～６×
１０１０のゲノムコピーを投与する。
【0135】
一実施形態において、ｈＩＤＵＡ発現カセットを含む血清型９キャプシドの非複製組換
えＡＡＶ（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を、治療用に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると
、ＩＣ投与の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクター
ゲノムは、ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを
含む。カセットからの発現は、強力な構成的プロモーターによって駆動される。
えＡＡＶ（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を、治療用に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると
、ＩＣ投与の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクター
ゲノムは、ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを
含む。カセットからの発現は、強力な構成的プロモーターによって駆動される。
【0136】
ある実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩ
ＤＵＡ）は、１．４×１０１３ＧＣ（１．１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～７．０×１０
１３ＧＣ（５．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量（好ましくは
、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として、（後頭下注入によって
）ＩＣ投与することができる。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有する場合、高い範囲の
用量を使用することができる。ある実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター
（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、２．６×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ脳
質量）～１．３×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定
用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として、（後
頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。患者が４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未
満の場合、一実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９
．ｈＩＤＵＡ）は、６．０×１０１２ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～３．０
×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量として（好
ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）、ＩＣで（後頭下注入
によって）投与することができ、別の実施形態において、本明細書に記載の組換えベクタ
ー（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、１．２×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ
脳質量）～６．０×１０１２ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固
定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として、（
後頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。患者が９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月
齢未満の場合、一実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡ
Ｖ９．ｈＩＤＵＡ）は、１．０×１０１３ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～５
．０×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量として
（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）、ＩＣで（後頭下
注入によって）投与することができ、別の実施形態において、本明細書に記載の組換えベ
クター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、２．０×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ
／ｇ脳質量）～１．０×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単
回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として
、（後頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。患者が１８ヶ月齢以上であるが３
歳未満の場合、一実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡ
Ｖ９．ｈＩＤＵＡ）は、１．１×１０１３ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～５
．５×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量として
（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）、ＩＣで（後頭下
注入によって）投与することができ、別の実施形態において、本明細書に記載の組換えベ
クター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、２．２×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ
／ｇ脳質量）～１．１×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単
回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として
、（後頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。具体的な実施形態において、本明
細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、以下の表１に列記
され、それに従って、用量１または用量２で単回固定用量として（後頭下注入によって）
ＩＣ投与することができる。別の具体的な実施形態において、本明細書に記載の組換えベ
クター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、以下の表２に列記され、それに従って、
用量１または用量２で単回固定用量として（後頭下注入によって）ＩＣ投与することがで
きる。
ＤＵＡ）は、１．４×１０１３ＧＣ（１．１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～７．０×１０
１３ＧＣ（５．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量（好ましくは
、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として、（後頭下注入によって
）ＩＣ投与することができる。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有する場合、高い範囲の
用量を使用することができる。ある実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター
（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、２．６×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ脳
質量）～１．３×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定
用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として、（後
頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。患者が４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未
満の場合、一実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９
．ｈＩＤＵＡ）は、６．０×１０１２ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～３．０
×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量として（好
ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）、ＩＣで（後頭下注入
によって）投与することができ、別の実施形態において、本明細書に記載の組換えベクタ
ー（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、１．２×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ
脳質量）～６．０×１０１２ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固
定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として、（
後頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。患者が９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月
齢未満の場合、一実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡ
Ｖ９．ｈＩＤＵＡ）は、１．０×１０１３ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～５
．０×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量として
（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）、ＩＣで（後頭下
注入によって）投与することができ、別の実施形態において、本明細書に記載の組換えベ
クター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、２．０×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ
／ｇ脳質量）～１．０×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単
回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として
、（後頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。患者が１８ヶ月齢以上であるが３
歳未満の場合、一実施形態において、本明細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡ
Ｖ９．ｈＩＤＵＡ）は、１．１×１０１３ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～５
．５×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単回固定用量として
（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）、ＩＣで（後頭下
注入によって）投与することができ、別の実施形態において、本明細書に記載の組換えベ
クター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、２．２×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ
／ｇ脳質量）～１．１×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲にわたる単
回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの容量、または約５ｍｌ以下の容量中）として
、（後頭下注入によって）ＩＣ投与することができる。具体的な実施形態において、本明
細書に記載の組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、以下の表１に列記
され、それに従って、用量１または用量２で単回固定用量として（後頭下注入によって）
ＩＣ投与することができる。別の具体的な実施形態において、本明細書に記載の組換えベ
クター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、以下の表２に列記され、それに従って、
用量１または用量２で単回固定用量として（後頭下注入によって）ＩＣ投与することがで
きる。
【0137】
表１．投薬時の患者の年齢に基づいて患者に投与する用量。
【表2】
【0138】
表２．投薬時の患者の年齢に基づいて患者に投与する用量
【表3】
【0139】
（５．４併用療法）
（５．４．１．免疫抑制との併用療法）
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子
治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがっ
てタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容し
ないヒト対象において、発現されたｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。した
がって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩＤＵＡ
のレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー症候群を有する患者）を有する患者を
治療する場合に望ましい。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、ミコフェ
ノール酸と組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用される他の免疫抑制レ
ジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝
子治療の過程で投与することができ、ある実施形態において、免疫抑制治療による前処理
が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、治療医師の判断に基づいて、遺伝子治療処置の
後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発された場合、例えば、１８０日後に、
中止してもよい。
（５．４．１．免疫抑制との併用療法）
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子
治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがっ
てタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容し
ないヒト対象において、発現されたｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。した
がって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩＤＵＡ
のレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー症候群を有する患者）を有する患者を
治療する場合に望ましい。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、ミコフェ
ノール酸と組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用される他の免疫抑制レ
ジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝
子治療の過程で投与することができ、ある実施形態において、免疫抑制治療による前処理
が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、治療医師の判断に基づいて、遺伝子治療処置の
後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発された場合、例えば、１８０日後に、
中止してもよい。
【0140】
ある実施形態において、本明細書において提供する治療方法は、プレドニゾロン、ミコ
フェノール酸、及びタクロリムスを含む免疫抑制レジメンとともに施す。ある実施形態に
おいて、本明細書において提供する治療方法は、プレドニゾロン、ミコフェノール酸、及
びラパマイシン（シロリムス）を含む免疫抑制レジメンとともに施す。ある実施形態にお
いて、本明細書において提供する治療方法は、タクロリムスを含まない免疫抑制レジメン
とともに施す。ある実施形態において、本明細書において提供する治療方法は、１以上の
コルチコステロイド、例えばメチルプレドニゾロン及び／またはプレドニゾロン、ならび
にタクロリムス及び／またはシロリムスを含む免疫抑制レジメンとともに施す。ある実施
形態において、免疫抑制治療は、ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、
対象に（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、または（ｂ）ラパマイシン及びミコフ
ェノール酸の組合わせを投与し、かつその後も継続することを含む。ある実施形態におい
て、免疫抑制療法は１８０日後に中止される。ある実施形態において、免疫抑制治療は、
３０、６０、９０、１２０、１５０、または１８０日後に中止する。
フェノール酸、及びタクロリムスを含む免疫抑制レジメンとともに施す。ある実施形態に
おいて、本明細書において提供する治療方法は、プレドニゾロン、ミコフェノール酸、及
びラパマイシン（シロリムス）を含む免疫抑制レジメンとともに施す。ある実施形態にお
いて、本明細書において提供する治療方法は、タクロリムスを含まない免疫抑制レジメン
とともに施す。ある実施形態において、本明細書において提供する治療方法は、１以上の
コルチコステロイド、例えばメチルプレドニゾロン及び／またはプレドニゾロン、ならび
にタクロリムス及び／またはシロリムスを含む免疫抑制レジメンとともに施す。ある実施
形態において、免疫抑制治療は、ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、
対象に（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、または（ｂ）ラパマイシン及びミコフ
ェノール酸の組合わせを投与し、かつその後も継続することを含む。ある実施形態におい
て、免疫抑制療法は１８０日後に中止される。ある実施形態において、免疫抑制治療は、
３０、６０、９０、１２０、１５０、または１８０日後に中止する。
【0141】
ある実施形態において、タクロリムスは、血清濃度を５～１０ｎｇ／ｍＬとする用量で
投与する。ある実施形態において、タクロリムスは、血清濃度を４～８ｎｇ／ｍＬとする
用量で投与する。ある実施形態において、特に、患者が３歳未満である場合、タクロリム
スは、血清濃度を２～４ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態において、ＭＭ
Ｆは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態において、
タクロリムスは、血清濃度を５～１０ｎｇ／ｍＬとする用量で投与し、かつＭＭＦは、血
清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態において、血清濃度
は、タクロリムス及び／またはＭＭＦのトラフレベルの測定後、タクロリムス及び／また
はＭＭＦのタイトレーションによって達成する。
投与する。ある実施形態において、タクロリムスは、血清濃度を４～８ｎｇ／ｍＬとする
用量で投与する。ある実施形態において、特に、患者が３歳未満である場合、タクロリム
スは、血清濃度を２～４ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態において、ＭＭ
Ｆは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態において、
タクロリムスは、血清濃度を５～１０ｎｇ／ｍＬとする用量で投与し、かつＭＭＦは、血
清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態において、血清濃度
は、タクロリムス及び／またはＭＭＦのトラフレベルの測定後、タクロリムス及び／また
はＭＭＦのタイトレーションによって達成する。
【0142】
ある実施形態において、メチルプレドニゾロンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で１回静脈内
投与する。ある実施形態において、プレドニゾロンは、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１
回経口投与する。ある実施形態において、プレドニゾロンは、段階的に漸減し、その後中
断する。ある実施形態において、タクロリムスは、４～８ｎｇ／ｍｌの目標血中レベルを
維持するために、１日２回１ｍｇを経口投与する。ある実施形態において、特に、患者が
３歳未満である場合、タクロリムスは、２～４ｎｇ／ｍｌの目標血中レベルを維持するた
めに１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇを経口投与する。ある実施形態において、シロリムスも
投与する。患者にシロリムスを事前投与し、続いてレジメンの間、目標血中レベルを４～
８ｎｇ／ｍｌに維持する。しかしながら、ある実施形態において、患者が３歳未満である
場合、好ましくは患者にシロリムスを事前投与し、続いてレジメンの間、目標血中レベル
を１～３ｎｇ／ｍｌに維持する。ある実施形態において、メチルプレドニゾロンを１０ｍ
ｇ／ｋｇの用量で１回静脈内投与し、プレドニゾロンを０．５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１
回経口投与し、タクロリムスを１日１回０．２ｍｇ／ｋｇ経口投与し、かつシロリムスを
投与する。
投与する。ある実施形態において、プレドニゾロンは、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１
回経口投与する。ある実施形態において、プレドニゾロンは、段階的に漸減し、その後中
断する。ある実施形態において、タクロリムスは、４～８ｎｇ／ｍｌの目標血中レベルを
維持するために、１日２回１ｍｇを経口投与する。ある実施形態において、特に、患者が
３歳未満である場合、タクロリムスは、２～４ｎｇ／ｍｌの目標血中レベルを維持するた
めに１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇを経口投与する。ある実施形態において、シロリムスも
投与する。患者にシロリムスを事前投与し、続いてレジメンの間、目標血中レベルを４～
８ｎｇ／ｍｌに維持する。しかしながら、ある実施形態において、患者が３歳未満である
場合、好ましくは患者にシロリムスを事前投与し、続いてレジメンの間、目標血中レベル
を１～３ｎｇ／ｍｌに維持する。ある実施形態において、メチルプレドニゾロンを１０ｍ
ｇ／ｋｇの用量で１回静脈内投与し、プレドニゾロンを０．５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１
回経口投与し、タクロリムスを１日１回０．２ｍｇ／ｋｇ経口投与し、かつシロリムスを
投与する。
【0143】
ある実施形態において、ラパマイシンを２または４ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投
与する。ある実施形態において、ＭＭＦを２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回経口投与する
。ある実施形態において、ラパマイシンを２または４ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投
与し、かつＭＭＦを２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回経口投与する。ある実施形態におい
て、ラパマイシンは、血清濃度を５～１５ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形
態において、ＭＭＦは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実
施形態において、ラパマイシンは血清濃度を５～１５ｎｇ／ｍＬとする用量で投与し、か
つＭＭＦは血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態におい
て、血清濃度は、ラパマイシン及び／またはＭＭＦのトラフレベルの測定後、ラパマイシ
ン及び／またはＭＭＦのタイトレーションによって達成する。
与する。ある実施形態において、ＭＭＦを２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回経口投与する
。ある実施形態において、ラパマイシンを２または４ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投
与し、かつＭＭＦを２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回経口投与する。ある実施形態におい
て、ラパマイシンは、血清濃度を５～１５ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形
態において、ＭＭＦは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実
施形態において、ラパマイシンは血清濃度を５～１５ｎｇ／ｍＬとする用量で投与し、か
つＭＭＦは血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。ある実施形態におい
て、血清濃度は、ラパマイシン及び／またはＭＭＦのトラフレベルの測定後、ラパマイシ
ン及び／またはＭＭＦのタイトレーションによって達成する。
【0144】
（５．４．２．標準治療を含む他の治療との共治療）
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの投与及びこれに伴う他の利用可能な治療を施すことの
組合わせは、本発明の方法に包含される。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同
時に、またはその後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができ
るＭＰＳ Ｉのための利用可能な治療には、これらに限定はされないが、全身的に、もし
くはＣＳＦに投与されるラロニダーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）及び／またはＨ
ＳＣＴ療法が挙げられる。別の実施形態において、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によって
ヒト細胞株において生産されたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質を使用して投与するこ
とができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞
株は、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－
１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒ
ト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ
、ＨｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、その全体
が参照により組み込まれている、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のため
に使用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０
１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１
２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕ
ｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照のこと）。完全なグリコシル化、特にシアル酸
付加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸
化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６
－シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素
を共発現するように宿主細胞を操作することによって強化することができる。
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの投与及びこれに伴う他の利用可能な治療を施すことの
組合わせは、本発明の方法に包含される。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同
時に、またはその後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができ
るＭＰＳ Ｉのための利用可能な治療には、これらに限定はされないが、全身的に、もし
くはＣＳＦに投与されるラロニダーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）及び／またはＨ
ＳＣＴ療法が挙げられる。別の実施形態において、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によって
ヒト細胞株において生産されたｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質を使用して投与するこ
とができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞
株は、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－
１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒ
ト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ
、ＨｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、その全体
が参照により組み込まれている、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のため
に使用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０
１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１
２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕ
ｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照のこと）。完全なグリコシル化、特にシアル酸
付加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸
化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６
－シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素
を共発現するように宿主細胞を操作することによって強化することができる。
【0145】
（５．５バイオマーカー／採取／モニタリング効率）
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止もしくは減少）；ＣＳＦ及び
／もしくは血清中の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳ
Ｆ及び／もしくは血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することによってモニタリングす
ることができる。炎症の徴候及び他の安全事象をモニタリングすることもできる。
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止もしくは減少）；ＣＳＦ及び
／もしくは血清中の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳ
Ｆ及び／もしくは血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することによってモニタリングす
ることができる。炎症の徴候及び他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0146】
（５．５．１．疾患マーカー）
ある実施形態において、組換えベクターによる治療の有効性は、患者における疾患バイ
オマーカーのレベルを測定することによってモニタリングする。ある実施形態において、
疾患バイオマーカーのレベルは、患者のＣＳＦにおいて測定する。ある実施形態において
、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の血清において測定する。ある実施形態において
、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の尿において測定する。ある実施形態において、
疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。ある実施形態において、疾患バイオマーカーは、
ＩＤＵＡ酵素活性である。ある実施形態において、疾患バイオマーカーは、炎症である。
ある実施形態において、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
ある実施形態において、組換えベクターによる治療の有効性は、患者における疾患バイ
オマーカーのレベルを測定することによってモニタリングする。ある実施形態において、
疾患バイオマーカーのレベルは、患者のＣＳＦにおいて測定する。ある実施形態において
、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の血清において測定する。ある実施形態において
、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の尿において測定する。ある実施形態において、
疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。ある実施形態において、疾患バイオマーカーは、
ＩＤＵＡ酵素活性である。ある実施形態において、疾患バイオマーカーは、炎症である。
ある実施形態において、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
【0147】
（５．５．２．神経認知機能の試験）
ある実施形態において、組換えベクターによる治療の有効性は、患者の認知機能のレベ
ルを測定することによってモニタリングする。認知機能は、当業者に知られている任意の
方法で測定することができる。ある実施形態において、認知機能は、知能指数（ＩＱ）を
測定するための認証された機器を介して測定する。具体的な実施形態において、ＩＱは、
Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎ
ｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）によって測定する。ある実施形
態において、認知機能は、記憶力を測定するための認証された装置を介して測定する。具
体的な実施形態において、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）によって測定
する。ある実施形態において、認知機能は、注意力を測定するための認証された装置を介
して測定する。具体的な実施形態において、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）によっ
て測定する。ある実施形態において、認知機能は、ＩＱ、記憶力、及び注意力の１以上を
測定するための認証された装置を介して測定する。
ある実施形態において、組換えベクターによる治療の有効性は、患者の認知機能のレベ
ルを測定することによってモニタリングする。認知機能は、当業者に知られている任意の
方法で測定することができる。ある実施形態において、認知機能は、知能指数（ＩＱ）を
測定するための認証された機器を介して測定する。具体的な実施形態において、ＩＱは、
Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎ
ｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）によって測定する。ある実施形
態において、認知機能は、記憶力を測定するための認証された装置を介して測定する。具
体的な実施形態において、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）によって測定
する。ある実施形態において、認知機能は、注意力を測定するための認証された装置を介
して測定する。具体的な実施形態において、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）によっ
て測定する。ある実施形態において、認知機能は、ＩＱ、記憶力、及び注意力の１以上を
測定するための認証された装置を介して測定する。
【0148】
（５．５．３．身体的変化）
ある実施形態において、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積
症に関連する身体的な特徴を測定することによってモニタリングする。ある実施形態にお
いて、身体的な特徴は、保存障害（ｓｔｏｒａｇｅ ｌｅｓｉｏｎ）である。ある実施形
態において、身体的な特徴は、低身長である。ある実施形態において、身体的な特徴は、
顔の特徴の粗雑化である。ある実施形態において、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸で
ある。ある実施形態において、身体的な特徴は、聴覚障害である。ある実施形態において
、身体的な特徴は、視覚障害である。具体的な実施形態において、視覚障害は、角膜混濁
に起因する。ある実施形態において、身体的な特徴は、水頭症である。ある実施形態にお
いて、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。ある実施形態において、身体的な特徴は、肝
脾腫である。ある実施形態において、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。ある実
施形態において、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。ある実施形態において、身体的
な特徴は、再発性上気道感染症である。ある実施形態において、身体的な特徴は、手根管
症候群である。ある実施形態において、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。あ
る実施形態において、身体的な特徴は、声帯肥大及び／または変声である。そのような身
体的な特徴は、当業者に公知の任意の方法によって測定することができる。
配列表
ある実施形態において、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積
症に関連する身体的な特徴を測定することによってモニタリングする。ある実施形態にお
いて、身体的な特徴は、保存障害（ｓｔｏｒａｇｅ ｌｅｓｉｏｎ）である。ある実施形
態において、身体的な特徴は、低身長である。ある実施形態において、身体的な特徴は、
顔の特徴の粗雑化である。ある実施形態において、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸で
ある。ある実施形態において、身体的な特徴は、聴覚障害である。ある実施形態において
、身体的な特徴は、視覚障害である。具体的な実施形態において、視覚障害は、角膜混濁
に起因する。ある実施形態において、身体的な特徴は、水頭症である。ある実施形態にお
いて、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。ある実施形態において、身体的な特徴は、肝
脾腫である。ある実施形態において、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。ある実
施形態において、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。ある実施形態において、身体的
な特徴は、再発性上気道感染症である。ある実施形態において、身体的な特徴は、手根管
症候群である。ある実施形態において、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。あ
る実施形態において、身体的な特徴は、声帯肥大及び／または変声である。そのような身
体的な特徴は、当業者に公知の任意の方法によって測定することができる。
配列表
【表4】
【実施例0149】
（６．実施例）
（６．１実施例１：ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡ）
ｈＩＤＵＡ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡベースのベク
ターが構築される。また、導入遺伝子は、表３に列記される群から選択されるシグナルペ
プチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
（６．１実施例１：ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡ）
ｈＩＤＵＡ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡベースのベク
ターが構築される。また、導入遺伝子は、表３に列記される群から選択されるシグナルペ
プチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
【0150】
（６．２実施例２：置換ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡ）
配列番号１のｈＩＤＵＡ配列と比較してアミノ酸置換、欠失、または付加を有する、例
えばこれに限定はされないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログ中の対応する非保存的残
基から選択されるアミノ酸置換を含むｈＩＤＵＡを含む、導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ
ｃＤＮＡベースのベクターを構築する（ただし、そのような突然変異が図３に示す（その
全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍ
ｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２、５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異
を列記する表３より）；またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている
Ｖｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２
Ｏｎｌｉｎｅ（“Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２”）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ
．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（“Ｂｅ
ｒｔｏｌａ ２０１１”）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程度の、も
しくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まないことを条
件とする）。また、導入遺伝子は、表３に列記される群から選択されるシグナルペプチド
を含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
配列番号１のｈＩＤＵＡ配列と比較してアミノ酸置換、欠失、または付加を有する、例
えばこれに限定はされないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログ中の対応する非保存的残
基から選択されるアミノ酸置換を含むｈＩＤＵＡを含む、導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ
ｃＤＮＡベースのベクターを構築する（ただし、そのような突然変異が図３に示す（その
全体が参照により本明細書に組み込まれているＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍ
ｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２、５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異
を列記する表３より）；またはその各々の全体が参照により本明細書に組み込まれている
Ｖｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２
Ｏｎｌｉｎｅ（“Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２”）、もしくはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ
．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（“Ｂｅ
ｒｔｏｌａ ２０１１”）によって報告された、重度の、中程度に重度の、中程度の、も
しくは軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定されたいずれの突然変異も含まないことを条
件とする）。また、導入遺伝子は、表３に列記される群から選択されるシグナルペプチド
を含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
【0151】
（６．３実施例３：ｈＩＤＵＡまたは置換ｈＩＤＵＡを用いた動物モデルにおけるＭＰ
Ｓ Ｉの治療）
導入遺伝子として発現される場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡベースのベクターはＭＰＳ
Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉのための動物モデル、例えば、Ｃｌａｒ
ｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１
１（マウス）、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １
３（１１）：１２９４－９７（雑種のイエネコ）、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２
，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６８（イヌ）、またはＳｈｕｌｌ ｅｔ
ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２４４－２４８（イヌ）に
記載される動物モデルに、導入遺伝子産物を送達し、動物のＣＳＦ中でＣｍｉｎを少なく
とも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持するのに十分な用量で、くも膜下腔内にｈＩＤＵＡ
をコードする組換えベクターを投与する。治療の後、動物を、特定の動物モデルの疾患と
一致した症状の改善について評価する。
Ｓ Ｉの治療）
導入遺伝子として発現される場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡベースのベクターはＭＰＳ
Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉのための動物モデル、例えば、Ｃｌａｒ
ｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１
１（マウス）、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １
３（１１）：１２９４－９７（雑種のイエネコ）、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２
，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６８（イヌ）、またはＳｈｕｌｌ ｅｔ
ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２４４－２４８（イヌ）に
記載される動物モデルに、導入遺伝子産物を送達し、動物のＣＳＦ中でＣｍｉｎを少なく
とも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持するのに十分な用量で、くも膜下腔内にｈＩＤＵＡ
をコードする組換えベクターを投与する。治療の後、動物を、特定の動物モデルの疾患と
一致した症状の改善について評価する。
【0152】
（６．４実施例４：ｈＩＤＵＡまたは置換ｈＩＤＵＡを用いたＭＰＳ Ｉの治療）
導入遺伝子として発現される場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡベースのベクターはＭＰＳ
Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉを呈する対象に導入遺伝子産物を送達し
、ＣＳＦ中でＣｍｉｎを少なくとも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持するのに十分な用量
で、くも膜下腔内にｈＩＤＵＡをコードするｃＤＮＡベースのベクターを投与する。治療
の後、対象を、ＭＰＳ Ｉの症状の改善について評価する。ｈＩＤＵＡをコードするｃＤ
ＮＡベースのベクターの投与の前に、それと同時に、またはその後に、患者に、ラパマイ
シン、ＭＭＦ、及びプレドニゾロンを含む免疫抑制治療薬を投与する。
導入遺伝子として発現される場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡベースのベクターはＭＰＳ
Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉを呈する対象に導入遺伝子産物を送達し
、ＣＳＦ中でＣｍｉｎを少なくとも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持するのに十分な用量
で、くも膜下腔内にｈＩＤＵＡをコードするｃＤＮＡベースのベクターを投与する。治療
の後、対象を、ＭＰＳ Ｉの症状の改善について評価する。ｈＩＤＵＡをコードするｃＤ
ＮＡベースのベクターの投与の前に、それと同時に、またはその後に、患者に、ラパマイ
シン、ＭＭＦ、及びプレドニゾロンを含む免疫抑制治療薬を投与する。
【0153】
（６．５実施例５：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0154】
患者集団。治療されることとなる患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球において測定された酵素活性によって確認されるＭＰ
Ｓ Ｉの診断、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、記憶力、注意力、または知覚推理）
の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での標準偏差が＞１低下していることを証明する文書化された過去の証拠（医
療記録）、を有する男性または女性を含み得る。
血漿、線維芽細胞、または白血球において測定された酵素活性によって確認されるＭＰ
Ｓ Ｉの診断、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、記憶力、注意力、または知覚推理）
の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での標準偏差が＞１低下していることを証明する文書化された過去の証拠（医
療記録）、を有する男性または女性を含み得る。
【0155】
患者には、ＥＲＴ（例えば、ＡＬＤＵＲＡＺＹＭＥ［ラロニダーゼ］ＩＶ）の安定レジ
メンを受けている患者を含み得る。出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰
性であるべきである。性的に活発な対象（女性及び男性の両方とも）は、ベクター投与の
２４週間後まで医学的に認められたバリア避妊法（例えば、コンドーム、ダイアフラム、
または禁欲法）を使用するべきである。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、
ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁
忌には、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
メンを受けている患者を含み得る。出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰
性であるべきである。性的に活発な対象（女性及び男性の両方とも）は、ベクター投与の
２４週間後まで医学的に認められたバリア避妊法（例えば、コンドーム、ダイアフラム、
または禁欲法）を使用するべきである。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、
ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁
忌には、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0156】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。
【0157】
治療医師が免疫抑制治療に適当でないと考える任意の状態を有する患者は、治療を受け
るべきではない（例えば、好中球の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００
×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性
］）。代替免疫抑制レジメンは、シロリムス、ＭＭＦ、またはプレドニゾロンに対する過
敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者に対し使用すべきである。
るべきではない（例えば、好中球の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００
×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性
］）。代替免疫抑制レジメンは、シロリムス、ＭＭＦ、またはプレドニゾロンに対する過
敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者に対し使用すべきである。
【0158】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0159】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
【0160】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）試験陽性の既往歴、活動性もしくは再発性のＢ型
肝炎もしくはＣ型肝炎、またはＢ型肝炎、Ｃ型肝炎、もしくはＨＩＶスクリーニング試験
陽性の既往歴；治療前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）試験陽性の既往歴、活動性もしくは再発性のＢ型
肝炎もしくはＣ型肝炎、またはＢ型肝炎、Ｃ型肝炎、もしくはＨＩＶスクリーニング試験
陽性の既往歴；治療前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0161】
一実施形態において、患者は、成人の患者である。別の実施形態において、患者は、小
児患者である。
児患者である。
【0162】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、プレドニゾロン（－２～８日に６０ｍｇを１日１回
、経口）、ＭＭＦ（第－２～６０日に１ｇを１日２回、経口）、及びシロリムス（第－２
日に６ｍｇを経口で、その後第－１日～第４８週まで２ｍｇを１日１回）を含む。シロリ
ムスの用量は、全血トラフ濃度を１６～２４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。
大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃
度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしなが
ら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである。好中球減少症
を発症する場合（絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ）、ＭＭＦの投薬は中断するか、
または用量を低下させるべきである。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、プレドニゾロン（－２～８日に６０ｍｇを１日１回
、経口）、ＭＭＦ（第－２～６０日に１ｇを１日２回、経口）、及びシロリムス（第－２
日に６ｍｇを経口で、その後第－１日～第４８週まで２ｍｇを１日１回）を含む。シロリ
ムスの用量は、全血トラフ濃度を１６～２４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。
大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃
度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしなが
ら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである。好中球減少症
を発症する場合（絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ）、ＭＭＦの投薬は中断するか、
または用量を低下させるべきである。
【0163】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0164】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量として投与する：１．４×１
０１３ＧＣ（１．１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の低用量、または７．０×１０１３ＧＣ
（５．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の高用量を、約５～２０ｍｌの容量中で使用するこ
とができる。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有する場合、高用量を使用することができ
る。
０１３ＧＣ（１．１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の低用量、または７．０×１０１３ＧＣ
（５．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の高用量を、約５～２０ｍｌの容量中で使用するこ
とができる。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有する場合、高用量を使用することができ
る。
【0165】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。腰椎穿刺を行い、最
初にＣＳＦを５ｃｃ除去し、その後、造影剤をＩＴ注入して大槽の視覚化を助ける。ＣＴ
（造影剤を伴う）を利用して、針挿入及び後頭下空間への選択された用量のｒＡＡＶ９．
ＩＤＵＡの投与をガイドする。
初にＣＳＦを５ｃｃ除去し、その後、造影剤をＩＴ注入して大槽の視覚化を助ける。ＣＴ
（造影剤を伴う）を利用して、針挿入及び後頭下空間への選択された用量のｒＡＡＶ９．
ＩＤＵＡの投与をガイドする。
【0166】
（６．６実施例６：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0167】
患者集団。治療されることとなる患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球において測定された酵素活性によって確認されるＭＰ
Ｓ Ｉの診断（これには、過去にＨＳＣＴを受けたことがあり、または過去もしくは現在
ラロニダーゼ治療を受けている患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する６歳以上の男性または女性を含み得る。
血漿、線維芽細胞、または白血球において測定された酵素活性によって確認されるＭＰ
Ｓ Ｉの診断（これには、過去にＨＳＣＴを受けたことがあり、または過去もしくは現在
ラロニダーゼ治療を受けている患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する６歳以上の男性または女性を含み得る。
【0168】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0169】
出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性的
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0170】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、絶対好中球数
＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ
／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。代替免疫抑制レジメンは、シロリムス
、ＭＭＦ、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者
に対し使用すべきである。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、絶対好中球数
＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ
／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。代替免疫抑制レジメンは、シロリムス
、ＭＭＦ、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者
に対し使用すべきである。
【0171】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0172】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0173】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
【0174】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0175】
３０日以内または５半減期前のいずれか長い方の期間内にいずれかの治験薬を投与され
た患者は、事前にいつでも投与可能なＩＴラロニダーゼを投与された患者を除き、治療す
るべきではない。
た患者は、事前にいつでも投与可能なＩＴラロニダーゼを投与された患者を除き、治療す
るべきではない。
【0176】
妊娠中の患者、産後６週未満の患者、スクリーニング時に授乳中の患者、または５２週
目までの間に妊娠を予定している患者は、治療するべきではない。
目までの間に妊娠を予定している患者は、治療するべきではない。
【0177】
臨床的に重要なＥＣＧ異常があり、対象の安全が損なわれるような患者は、治療するべ
きではない。対象の安全を損なうような重篤または不安定な医学的または精神的状態の患
者は、治療するべきではない。
きではない。対象の安全を損なうような重篤または不安定な医学的または精神的状態の患
者は、治療するべきではない。
【0178】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、プレドニゾロン（－２～８日に６０ｍｇを１日１回
、経口）、ＭＭＦ（第－２～６０日に１ｇを１日２回、経口）、及びシロリムス（第－２
日に６ｍｇを経口で、その後第－１日～第４８週まで２ｍｇを１日１回）を含む。シロリ
ムスの用量は、全血トラフ濃度を１６～２４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。
大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃
度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしなが
ら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、プレドニゾロン（－２～８日に６０ｍｇを１日１回
、経口）、ＭＭＦ（第－２～６０日に１ｇを１日２回、経口）、及びシロリムス（第－２
日に６ｍｇを経口で、その後第－１日～第４８週まで２ｍｇを１日１回）を含む。シロリ
ムスの用量は、全血トラフ濃度を１６～２４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。
大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃
度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしなが
ら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである。
【0179】
免疫抑制レジメンの基本的原則は、免疫を完全に抑制するためにコルチコステロイドを
投与することである－用量を負荷するためのＩＶメチルプレドニゾロンから始まり、徐々
に漸減する経口プレドニゾロンが続き、患者は１２週までにステロイドをやめる。コルチ
コステロイド治療は、タクロリムス（２４週間）及び／またはシロリムス（１２週間）に
よって補なわれ、さらにＭＭＦで補うことができる。タクロリムス及びシロリムスの両方
を使用する場合、それぞれの用量は、４～８ｎｇ／ｍｌの血中トラフレベルを維持するよ
うに調整された低用量であるべきである。薬剤を１つだけ使用する場合は、ラベル用量（
高用量）を使用するべきであり、例えば、タクロリムスを０．１５～０．２０ｍｇ／ｋｇ
／日を１２時間ごとに２回に分けて投与、及び１ｍｇ／ｍ２／日でシロリムス；その負荷
用量は３ｍｇ／ｍ２であるべきである。ＭＭＦがレジメンに追加された場合、作用機序が
異なるため、タクロリムス及び／またはシロリムスの用量を維持することができる。
投与することである－用量を負荷するためのＩＶメチルプレドニゾロンから始まり、徐々
に漸減する経口プレドニゾロンが続き、患者は１２週までにステロイドをやめる。コルチ
コステロイド治療は、タクロリムス（２４週間）及び／またはシロリムス（１２週間）に
よって補なわれ、さらにＭＭＦで補うことができる。タクロリムス及びシロリムスの両方
を使用する場合、それぞれの用量は、４～８ｎｇ／ｍｌの血中トラフレベルを維持するよ
うに調整された低用量であるべきである。薬剤を１つだけ使用する場合は、ラベル用量（
高用量）を使用するべきであり、例えば、タクロリムスを０．１５～０．２０ｍｇ／ｋｇ
／日を１２時間ごとに２回に分けて投与、及び１ｍｇ／ｍ２／日でシロリムス；その負荷
用量は３ｍｇ／ｍ２であるべきである。ＭＭＦがレジメンに追加された場合、作用機序が
異なるため、タクロリムス及び／またはシロリムスの用量を維持することができる。
【0180】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0181】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量
（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１
３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすること
ができる。
（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１
３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすること
ができる。
【0182】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0183】
（６．７実施例７：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0184】
患者集団。治療されることとなる患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する男性または女性を含み得る。
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する男性または女性を含み得る。
【0185】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0186】
出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性的
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0187】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、絶対好中球数
＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ
／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、絶対好中球数
＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ
／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0188】
代替免疫抑制レジメンは、タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する
過敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者に対し使用すべきである。原発性免疫不全
症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制
療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・
バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は
完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療するべきではない。（１）２回目の
受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を
必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗
感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活発な感染症、もしくは活発な結核
の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿Ｔ
Ｂ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署
名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコ
ンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大
手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。好中球の絶対数が＜
１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。
過敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者に対し使用すべきである。原発性免疫不全
症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制
療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・
バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は
完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療するべきではない。（１）２回目の
受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を
必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗
感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活発な感染症、もしくは活発な結核
の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿Ｔ
Ｂ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署
名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコ
ンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大
手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。好中球の絶対数が＜
１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。
【0189】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0190】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0191】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
【0192】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0193】
一実施形態において、患者は、成人の患者である。別の実施形態において、患者は、小
児患者である。
児患者である。
【0194】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、コルチコステロイド（第１日にメチルプレドニゾロ
ン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを０．５
ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タクロリ
ムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中
レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８週間にわたり漸減す
る）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続い
て第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血
中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／
シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタクロリムスの用量は
、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は
予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標
濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニ
タリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである
。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、コルチコステロイド（第１日にメチルプレドニゾロ
ン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを０．５
ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タクロリ
ムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中
レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８週間にわたり漸減す
る）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続い
て第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血
中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／
シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタクロリムスの用量は
、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は
予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標
濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニ
タリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである
。
【0195】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0196】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量
（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１
３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすること
ができる。
（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１
３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすること
ができる。
【0197】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0198】
（６．８実施例８：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0199】
患者集団。治療されることとなる患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性を含み得る
。
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性を含み得る
。
【0200】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0201】
出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性的
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0202】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜
１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜
１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0203】
代替免疫抑制レジメンは、タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する
過敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者に対し使用すべきである。原発性免疫不全
症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制
療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・
バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は
完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療するべきではない。（１）２回目の
受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を
必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗
感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活発な感染症、もしくは活発な結核
の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿Ｔ
Ｂ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署
名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコ
ンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大
手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。好中球数の絶対数が
＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。
過敏性反応の任意の既往歴を有する任意の患者に対し使用すべきである。原発性免疫不全
症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制
療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・
バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は
完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療するべきではない。（１）２回目の
受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を
必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗
感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活発な感染症、もしくは活発な結核
の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿Ｔ
Ｂ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署
名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコ
ンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大
手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。好中球数の絶対数が
＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療するべきではない。
【0204】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0205】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0206】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
【0207】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0208】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、コルチコステロイド（第１日にメチルプレドニゾロ
ン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを０．５
ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タクロリ
ムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中
レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８週間にわたり漸減す
る）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続い
て第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血
中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／
シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタクロリムスの用量は
、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は
予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標
濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニ
タリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである
。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、コルチコステロイド（第１日にメチルプレドニゾロ
ン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを０．５
ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タクロリ
ムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中
レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８週間にわたり漸減す
る）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続い
て第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血
中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／
シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタクロリムスの用量は
、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は
予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標
濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニ
タリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続するべきである
。
【0209】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0210】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量
（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１
３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすること
ができる。
（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１
３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすること
ができる。
【0211】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0212】
（６．９実施例９：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0213】
患者集団。治療されることとなる患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性及び３歳未
満の男性または女性を含み得る。
３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群をもたらすことが知られる
突然変異（複数可）によって確認される、重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有
する。
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性及び３歳未
満の男性または女性を含み得る。
３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群をもたらすことが知られる
突然変異（複数可）によって確認される、重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有
する。
【0214】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0215】
出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性的
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0216】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜
１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜
１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0217】
代替免疫抑制レジメンは、任意の患者に使用すべきであるか、またはタクロリムス、シ
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
【0218】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0219】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0220】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
【0221】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0222】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、６歳以上の患者に対し、コルチコステロイド（第１
日にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経
口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週まで
に中断する）、タクロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口
的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけて
の８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×
３用量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分け
て、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。そのよう
な免疫抑制治療は、３歳未満の患者に対し、コルチコステロイド（第１日にメチルプレド
ニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを
０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タ
クロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に
［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８
週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用
量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、
第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価
及びタクロリムス／シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタ
クロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後
は、免疫抑制治療は予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝
現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調
整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を
継続するべきである。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、６歳以上の患者に対し、コルチコステロイド（第１
日にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経
口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週まで
に中断する）、タクロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口
的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけて
の８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×
３用量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分け
て、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。そのよう
な免疫抑制治療は、３歳未満の患者に対し、コルチコステロイド（第１日にメチルプレド
ニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを
０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タ
クロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に
［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８
週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用
量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、
第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価
及びタクロリムス／シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタ
クロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後
は、免疫抑制治療は予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝
現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調
整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を
継続するべきである。
【0223】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0224】
６歳以上の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２
×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ
脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ
以下の容量にすることができる。
×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ
脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ
以下の容量にすることができる。
【0225】
３歳未満の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：１
×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については
６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については１．０×
１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）
、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者
については３．０×１０１３ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者について
は５．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については５．５×１０
１３ＧＣ）のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ以下の容量にすることができ
る。
×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については
６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については１．０×
１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）
、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者
については３．０×１０１３ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者について
は５．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については５．５×１０
１３ＧＣ）のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ以下の容量にすることができ
る。
【0226】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0227】
（６．１０実施例１０：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0228】
患者集団。治療されることとなる患者は：
ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関
連する突然変異のホモ接合性もしくは複合ヘテロ接合性の存在によって確認される重度Ｍ
ＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関
連する突然変異のホモ接合性もしくは複合ヘテロ接合性の存在によって確認される重度Ｍ
ＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
【0229】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0230】
大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁
忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌には、以下のいずれかを含むことが
できる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌には、以下のいずれかを含むことが
できる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0231】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではなく（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ）、ヘモグロビンを評
価する。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではなく（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ）、ヘモグロビンを評
価する。
【0232】
代替免疫抑制レジメンは、任意の患者に使用すべきであるか、またはタクロリムス、シ
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
【0233】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0234】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0235】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の履歴を有することが分かっ
ている場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の履歴を有することが分かっ
ている場合を除いては、治療するべきではない。
【0236】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0237】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。プレドニゾンの投薬は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、第１２週の受診まで
段階的に漸減させる。タクロリムスの用量は、最初の２４週にわたり全血中トラフ濃度を
２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで
減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、
第３２週に中断する。シロリムスの用量は、全血中トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に
維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用
量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、
濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続する
べきである。さらなる詳細については以下を参照のこと。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。プレドニゾンの投薬は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、第１２週の受診まで
段階的に漸減させる。タクロリムスの用量は、最初の２４週にわたり全血中トラフ濃度を
２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで
減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、
第３２週に中断する。シロリムスの用量は、全血中トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に
維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用
量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、
濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続する
べきである。さらなる詳細については以下を参照のこと。
【0238】
コルチコステロイド
【0239】
ベクター投与（第１日、前投与）の朝において、患者に、少なくとも３０分間にわたる
メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレド
ニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与するべきである。アセトアミノフェ
ン及び抗ヒスタミン剤による前投薬は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレド
ニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与するべきである。アセトアミノフェ
ン及び抗ヒスタミン剤による前投薬は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
【0240】
第１２週までにプレドニゾンを中断することを目標として、第２日に経口プレドニゾン
を開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
第２日から第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中断する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階高めた
臨床上実用的な用量に調整することができる。
を開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
第２日から第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中断する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階高めた
臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0241】
シロリムス
【0242】
ベクター投与の２日前（第－２日）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムス
の負荷用量を投与する。
の負荷用量を投与する。
【0243】
第－１日から：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投薬に分割した
０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
【0244】
シロリムスを、第４８週の受診後に中断する。
【0245】
タクロリムス
【0246】
第２日（ＩＰ投与の次の日）にタクロリムスを１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開
始し、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
始し、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
【0247】
タクロリムスは第２４週の受診から開始し、８週にわたって漸減する。第２４週に、用
量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させ
る。タクロリムスは、第３２週に中断する。
量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させ
る。タクロリムスは、第３２週に中断する。
【0248】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0249】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質
量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１２ＧＣ；
９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については１×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上
であるが３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）、または５×１０１０ＧＣ／
ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については３×１０１３ＧＣ
；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については５×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以
上であるが３歳未満の患者については５．５×１０１３ＧＣ）のいずれか、として投与す
る。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすることができる。
量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１２ＧＣ；
９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については１×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上
であるが３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）、または５×１０１０ＧＣ／
ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については３×１０１３ＧＣ
；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については５×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以
上であるが３歳未満の患者については５．５×１０１３ＧＣ）のいずれか、として投与す
る。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすることができる。
【0250】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0251】
（６．１１実施例１１：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0252】
患者集団。治療されることとなる患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性及び３歳未
満の男性または女性を含み得る。
３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群をもたらすことが知られる
突然変異（複数可）によって確認される、重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有
する。
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定された酵素活性によって確認されたＭＰＳ Ｉ
の診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のあ
る患者を含む）、
任意の他の神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいず
れかとして定義されるＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの
領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性及び３歳未
満の男性または女性を含み得る。
３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群をもたらすことが知られる
突然変異（複数可）によって確認される、重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有
する。
【0253】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0254】
出産可能性のある女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性的
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
に活発な対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めら
れたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性的に活発な女性は、スクリーニン
グ受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法
を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ
注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌に
は、以下のいずれかを含むことができる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0255】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜
１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜
１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0256】
代替免疫抑制レジメンは、任意の患者に使用すべきであるか、またはタクロリムス、シ
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
【0257】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0258】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0259】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の既往歴を有する、及び総ビ
リルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かってい
る場合を除いては、治療するべきではない。
【0260】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0261】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、６歳以上の患者に対し、コルチコステロイド（第１
日にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経
口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週まで
に中断する）、タクロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口
的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけて
の８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×
３用量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分け
て、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。そのよう
な免疫抑制治療は、３歳未満の患者に対し、コルチコステロイド（第１日にメチルプレド
ニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを
０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タ
クロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に
［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８
週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用
量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、
第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価
及びタクロリムス／シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタ
クロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後
は、免疫抑制治療は予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝
現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調
整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を
継続するべきである。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。そのような免疫抑制治療は、６歳以上の患者に対し、コルチコステロイド（第１
日にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経
口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週まで
に中断する）、タクロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口
的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけて
の８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×
３用量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分け
て、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。そのよう
な免疫抑制治療は、３歳未満の患者に対し、コルチコステロイド（第１日にメチルプレド
ニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与し、第２日に経口プレドニゾンを
０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、段階的に漸減させて、第１２週までに中断する）、タ
クロリムス（第２日から第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に
［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとし、第２４週から第３２週にかけての８
週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（第－２日に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用
量の負荷用量、続いて第－１日からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、
第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投薬する）を含む。神経学的評価
及びタクロリムス／シロリムス血中レベルのモニタリングを実施する。シロリムス及びタ
クロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後
は、免疫抑制治療は予定されない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝
現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調
整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を
継続するべきである。
【0262】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0263】
６歳以上の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２
×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ
脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ
以下の容量にすることができる。
×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ
脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ
以下の容量にすることができる。
【0264】
３歳未満の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２
×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については１
．２×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については２．０×１
０１２ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については２．２×１０１２ＧＣ）、
または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者に
ついては６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については
１．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については１．１×１０１
３ＧＣ）のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ以下の容量にすることができる
。
×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については１
．２×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については２．０×１
０１２ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については２．２×１０１２ＧＣ）、
または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者に
ついては６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については
１．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については１．１×１０１
３ＧＣ）のいずれか、として投与する。用量は、約５ｍｌ以下の容量にすることができる
。
【0265】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0266】
（６．１２実施例１２：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル）
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉを治療するためにヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベク
ターで治療するために使用することができるプロトコルを記載する。
【0267】
患者集団。治療されることとなる患者は：
ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関
連する突然変異のホモ接合性もしくは複合ヘテロ接合性の存在によって確認される重度Ｍ
ＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関
連する突然変異のホモ接合性もしくは複合ヘテロ接合性の存在によって確認される重度Ｍ
ＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
【0268】
患者は、補助具の有無にかかわらず、要求されるプロトコル試験を完了するのに十分な
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
聴覚的及び視覚的能力を有し、適用できる場合、試験日に進んで補助具を着用することに
従うべきである。
【0269】
大槽内（ＩＣ）治療から除外され得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁
忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌には、以下のいずれかを含むことが
できる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌には、以下のいずれかを含むことが
できる：
過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌となっている、
ＣＴ（もしくは造影剤）または全身麻酔に任意の禁忌を有する、
ＭＲＩ（またはガドリニウム）に任意の禁忌を有する、
推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を有する。
【0270】
いずれかの時にＩＴ治療を受けて、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではなく（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ）、ヘモグロビンを評
価する。
経験した患者は、ＩＣで治療されるべきではない。治療医師が免疫抑制治療に適当でない
と考える任意の状態を有する患者は、治療を受けるべきではなく（例えば、好中球数の絶
対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ）、ヘモグロビンを評
価する。
【0271】
代替免疫抑制レジメンは、任意の患者に使用すべきであるか、またはタクロリムス、シ
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
ロリムス、もしくはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除
外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患
の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療するべきではない。帯状疱疹、サイトメガロ
ウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリー
ニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療す
るべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院また
は親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２
回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とする任意の活
発な感染症、もしくは活発な結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの
間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）イ
ンフォームドコンセント用紙に署名をする前８週間以内に任意の生ワクチンを受けた患者
、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前８週間以内に大手術を行った患
者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療するべ
きではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で
治療するべきではない。
【0272】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療するべきではない。
【0273】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療するべきではない。
【0274】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランス
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の履歴を有することが分かっ
ている場合を除いては、治療するべきではない。
フェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）であるか、または総ビリルビンが＞
１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の履歴を有することが分かっ
ている場合を除いては、治療するべきではない。
【0275】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎ウイルス感染
の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原もしくはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎もしくは
ＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の履歴；スクリーニング前１年以内のアルコールま
たは薬物乱用の履歴である。
【0276】
施される治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。プレドニゾンの投薬は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、第１２週の受診まで
段階的に漸減させる。タクロリムスの用量は、最初の２４週にわたり全血中トラフ濃度を
２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで
減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、
第３２週に中断する。シロリムスの用量は、全血中トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に
維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用
量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、
濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続する
べきである。さらなる詳細については以下を参照のこと。
び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべき
である。プレドニゾンの投薬は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始し、第１２週の受診まで
段階的に漸減させる。タクロリムスの用量は、最初の２４週にわたり全血中トラフ濃度を
２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで
減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、
第３２週に中断する。シロリムスの用量は、全血中トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に
維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用
量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、
濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続する
べきである。さらなる詳細については以下を参照のこと。
【0277】
コルチコステロイド
【0278】
ベクター投与（第１日、前投与）の朝において、患者に、少なくとも３０分間にわたる
メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレド
ニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与するべきである。アセトアミノフェ
ン及び抗ヒスタミン剤による前投薬は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレド
ニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与するべきである。アセトアミノフェ
ン及び抗ヒスタミン剤による前投薬は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
【0279】
第１２週までにプレドニゾンを中断することを目標として、第２日に経口プレドニゾン
を開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
第２日から第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中断する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階高めた
臨床上実用的な用量に調整することができる。
を開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
第２日から第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中断する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階高めた
臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0280】
シロリムス
【0281】
ベクター投与の２日前（第－２日）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムス
の負荷用量を投与する。
の負荷用量を投与する。
【0282】
第－１日から：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投薬に分割した
０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
【0283】
シロリムスを、第４８週の受診後に中断する。
【0284】
タクロリムス
【0285】
第２日（ＩＰ投与の次の日）にタクロリムスを１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開
始し、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
始し、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
【0286】
タクロリムスは第２４週の受診から開始し、８週にわたって漸減する。第２４週に、用
量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させ
る。タクロリムスは、第３２週に中断する。
量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させ
る。タクロリムスは、第３２週に中断する。
【0287】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャ
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
プシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与
の後、ＣＮＳ中でｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、
ＡＡＶ２の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセ
ットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈ
ＩＤＵＡベクターは、くも膜下腔内注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液中に懸濁させ
る。
【0288】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量
の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については１．２×１０１２ＧＣ；９
ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については２．０×１０１２ＧＣ；１８ヶ月以
上であるが３歳未満の患者については２．２×１０１２ＧＣ）、または１×１０１０ＧＣ
／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１
２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については１．０×１０１３ＧＣ；
１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）のいずれか、と
して投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすることができる。
の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については１．２×１０１２ＧＣ；９
ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については２．０×１０１２ＧＣ；１８ヶ月以
上であるが３歳未満の患者については２．２×１０１２ＧＣ）、または１×１０１０ＧＣ
／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上であるが９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１
２ＧＣ；９ヶ月齢以上であるが１８ヶ月齢未満の患者については１．０×１０１３ＧＣ；
１８ヶ月以上であるが３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）のいずれか、と
して投与する。用量は、約５～２０ｍｌの容量にすることができる。
【0289】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0290】
均等物
本発明がその具体的な実施形態に関して詳細に記載されるにもかかわらず、機能的に等
価である変形が本発明の範囲内にあることが理解されよう。実際、本明細書において示さ
れ、説明される発明に加え、本発明の様々な修正が、上記明細書及び添付される図面から
当業者にとって明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲
内にあることを意図する。当業者であれば、本明細書に記載の発明の具体的な実施形態と
の多くの等価物を認識するかまたは定型的な実験の範囲の域でこれを使用し、確認するこ
とが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることを意図す
る。
本発明がその具体的な実施形態に関して詳細に記載されるにもかかわらず、機能的に等
価である変形が本発明の範囲内にあることが理解されよう。実際、本明細書において示さ
れ、説明される発明に加え、本発明の様々な修正が、上記明細書及び添付される図面から
当業者にとって明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲
内にあることを意図する。当業者であれば、本明細書に記載の発明の具体的な実施形態と
の多くの等価物を認識するかまたは定型的な実験の範囲の域でこれを使用し、確認するこ
とが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることを意図す
る。
【0291】
この明細書に言及のある全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個別の刊行物、特許
、または特許出願の全体が参照により本明細書に組み込まれていることが具体的かつ個別
的に示されているのと同程度に、明細書中に参照により本明細書に組み込まれる。
、または特許出願の全体が参照により本明細書に組み込まれていることが具体的かつ個別
的に示されているのと同程度に、明細書中に参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図2-4】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図5-4】
【図5-5】
【図5-6】
【図5-7】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-04-11
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
本願明細書に実質的に記載された、新規な物、方法及び製造方法。
【手続補正書】
【提出日】2024-04-11
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0291】
この明細書に言及のある全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個別の刊行物、特許
、または特許出願の全体が参照により本明細書に組み込まれていることが具体的かつ個別
的に示されているのと同程度に、明細書中に参照により本明細書に組み込まれる。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対
象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イ
ズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、前記方法。
（態様２）
ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に
ヒトグリア細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含
む、前記方法。
（態様３）
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を
施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含む、態様１または２に記載の
方法。
（態様４）
ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様５）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル
化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様６）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含ま
ない治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様７）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様８）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にα２，６
－シアル酸付加される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様９）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１０）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、前記投与す
ることと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１１）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にチロシン
硫酸化される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１２）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１３）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１４）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記
投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１５）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１６）
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、態様３～１５のいずれか１項に記載の方法。
（態様１７）
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、態様１６に記載の方法。
（態様１８）
前記ヒトＩＤＵＡが配列番号１のアミノ酸配列を含む、態様１～１７のいずれか１項に
記載の方法。
（態様１９）
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与することを含む、態様１
８に記載の方法。
（態様２０）
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、態様１９に記載の方法。
（態様２１）
α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経
細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する
、態様１２に記載の方法。
（態様２２）
検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記グリコシル化ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒ
ト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確
認する、態様１３に記載の方法。
（態様２３）
検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない前記グリコシル化ＩＤＵ
Ａの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認する、態様１４に記載の方法。
（態様２４）
チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換
えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する、態様１５に記載
の方法。
（態様２５）
生産をマンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で確認する、態様２１～２４のい
ずれか１項に記載の方法。
（態様２６）
前記発現ベクターまたは組換えヌクレオチド発現ベクターが、シグナルペプチドをコー
ドする、態様８～１５及び２１～２５のいずれか１項に記載の方法、または態様８～１５
のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の態様１６～１７のいずれか１項
に記載の方法。
（態様２７）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中で前記α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
（態様２８）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記ＩＤＵＡを生産する、
前記方法。
（態様２９）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与
することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
（態様３０）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でチロシン硫酸化された前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
（態様３１）
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、態様２７～３０のいずれか１項に記載の方法。
（態様３２）
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、態様３１に記載の方法。
（態様３３）
前記ヒト対象が３歳未満である、態様１～３２のいずれか１項に記載の方法。
（態様３４）
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、２×１０ ９ ＧＣ／ｇ脳質量、１×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０
１０ ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与される、態様８～１５及び２１～３３のいずれか１項に
記載の方法、または態様８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合
の態様１６～２０のいずれか１項に記載の方法。
（態様３５）
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、２×１０ ９ ＧＣ／ｇ脳質量～１×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で投
与される、態様８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または態様８～１
５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の態様１６～２０のいずれか１
項に記載の方法。
（態様３６）
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、1×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量～５×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で
投与される、態様８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または態様８～
１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の態様１６～２０のいずれか
１項に記載の方法。
、または特許出願の全体が参照により本明細書に組み込まれていることが具体的かつ個別
的に示されているのと同程度に、明細書中に参照により本明細書に組み込まれる。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対
象の脳の脳脊髄液にヒト神経細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イ
ズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、前記方法。
（態様２）
ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に
ヒトグリア細胞によって生産された治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含
む、前記方法。
（態様３）
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を
施し、かつその後も免疫抑制治療を継続することをさらに含む、態様１または２に記載の
方法。
（態様４）
ＭＰＳ Ｉと診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のα２，６－シアル酸付加ヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様５）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル
化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様６）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含ま
ない治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様７）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達
することと、
前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施
し、かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様８）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にα２，６
－シアル酸付加される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様９）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１０）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にグリコシ
ル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない、前記投与す
ることと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１１）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳にヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与することであって、前
記ＩＤＵＡがヒト不死化神経細胞において前記発現ベクターから発現される際にチロシン
硫酸化される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１２）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１３）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１４）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ヒトＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記
投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１５）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含む、前記方法。
（態様１６）
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、態様３～１５のいずれか１項に記載の方法。
（態様１７）
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、態様１６に記載の方法。
（態様１８）
前記ヒトＩＤＵＡが配列番号１のアミノ酸配列を含む、態様１～１７のいずれか１項に
記載の方法。
（態様１９）
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与することを含む、態様１
８に記載の方法。
（態様２０）
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、態様１９に記載の方法。
（態様２１）
α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経
細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する
、態様１２に記載の方法。
（態様２２）
検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記グリコシル化ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒ
ト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確
認する、態様１３に記載の方法。
（態様２３）
検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない前記グリコシル化ＩＤＵ
Ａの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換えヌクレオチド発現ベクターを用い
て形質導入することにより確認する、態様１４に記載の方法。
（態様２４）
チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡの生産を、細胞培養中でヒト神経細胞株を前記組換
えヌクレオチド発現ベクターを用いて形質導入することにより確認する、態様１５に記載
の方法。
（態様２５）
生産をマンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で確認する、態様２１～２４のい
ずれか１項に記載の方法。
（態様２６）
前記発現ベクターまたは組換えヌクレオチド発現ベクターが、シグナルペプチドをコー
ドする、態様８～１５及び２１～２５のいずれか１項に記載の方法、または態様８～１５
のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の態様１６～１７のいずれか１項
に記載の方法。
（態様２７）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果α２，６－シアル酸付加グリカンを含
む前記ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中で前記α２，６－シアル酸付加グリカンを含む前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
（態様２８）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリ
コシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない前記ＩＤＵＡを生産する、
前記方法。
（態様２９）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα
－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーが形成される、前記投与
することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でグリコシル化されるが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まな
い前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
（態様３０）
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）と診断されたヒト対象の治療方法であって、
前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチ
ド発現ベクターを投与することであって、その結果チロシン硫酸化を含む前記ＩＤＵＡを
放出するデポーが形成される、前記投与することと、
前記発現ベクターの投与の前に、またはそれと同時に、前記対象に免疫抑制治療を施し、
かつその後も免疫抑制治療を継続することと、を含み、
前記組換えベクターは、培養中でヒト神経細胞への形質導入に使用する場合、前記細胞培
養中でチロシン硫酸化された前記ＩＤＵＡを生産する、前記方法。
（態様３１）
前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、（ａ
）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、また
は（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン
及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に投与し、かつその後継続する
ことを含む、態様２７～３０のいずれか１項に記載の方法。
（態様３２）
前記免疫抑制治療を１８０日後に中止する、態様３１に記載の方法。
（態様３３）
前記ヒト対象が３歳未満である、態様１～３２のいずれか１項に記載の方法。
（態様３４）
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、２×１０ ９ ＧＣ／ｇ脳質量、１×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０
１０ ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与される、態様８～１５及び２１～３３のいずれか１項に
記載の方法、または態様８～１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合
の態様１６～２０のいずれか１項に記載の方法。
（態様３５）
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、２×１０ ９ ＧＣ／ｇ脳質量～１×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で投
与される、態様８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または態様８～１
５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の態様１６～２０のいずれか１
項に記載の方法。
（態様３６）
前記ヒト対象が３歳未満であり、前記発現ベクターまたは前記組換えヌクレオチド発現
ベクターが、1×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量～５×１０ １０ ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の用量で
投与される、態様８～１５及び２１～３３のいずれか１項に記載の方法、または態様８～
１５のいずれか１項に直接的もしくは間接的に従属する場合の態様１６～２０のいずれか
１項に記載の方法。
【外国語明細書】