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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024096920
(43)【公開日】2024-07-17
(54)【発明の名称】免疫チェックポイント阻害のための組成物および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/7088 20060101AFI20240709BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20240709BHJP
A61K 31/712 20060101ALI20240709BHJP
A61K 9/00 20060101ALI20240709BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20240709BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240709BHJP
A61K 31/7068 20060101ALI20240709BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240709BHJP
【ＦＩ】
A61K31/7088
A61K31/7105
A61K31/712
A61K9/00
A61K47/36
A61P35/00
A61K31/7068
A61K47/02
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024066494
(22)【出願日】2024-04-17
(62)【分割の表示】P 2021512698の分割
【原出願日】2019-09-06
(31)【優先権主張番号】62/728,459
(32)【優先日】2018-09-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/790,953
(32)【優先日】2019-01-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】592017633
【氏名又は名称】ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100153693
【弁理士】
【氏名又は名称】岩田 耕一
(72)【発明者】
【氏名】メダロヴァ，ズドラフカ
(72)【発明者】
【氏名】ユ，ビョンヒ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】化学療法剤と、免疫チェックポイント分子阻害剤を組み合わせることを含む、癌を処置するためのストラテジーを提供する。
【解決手段】免疫チェックポイント分子、例えば、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を標的化する阻害性核酸、例えば、ｓｉＲＮＡに連結されたナノ粒子を用いる、癌、例えば、膵癌を処置するための治療的組成物および方法が提供される。
【選択図】なし
【解決手段】免疫チェックポイント分子、例えば、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を標的化する阻害性核酸、例えば、ｓｉＲＮＡに連結されたナノ粒子を用いる、癌、例えば、膵癌を処置するための治療的組成物および方法が提供される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療用ナノ粒子であって、前記ナノ粒子が
１０ｎｍ～３０ｎｍの間の直径を有し、ならびに
酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている
、免疫チェックポイント分子を標的化する阻害性核酸を含み、
好ましくは、前記チェックポイント分子がプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）
である、治療用ナノ粒子。
１０ｎｍ～３０ｎｍの間の直径を有し、ならびに
酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている
、免疫チェックポイント分子を標的化する阻害性核酸を含み、
好ましくは、前記チェックポイント分子がプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）
である、治療用ナノ粒子。
【請求項2】
前記核酸が、配列番号１と相補的な少なくとも１０個の連続したヌクレオチドの配列を
含む、請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
含む、請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項3】
前記核酸が、少なくとも１個の改変ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の治療用ナノ
粒子。
粒子。
【請求項4】
前記少なくとも１個の改変ヌクレオチドがロックドヌクレオチドである、請求項３に記
載の治療用ナノ粒子。
載の治療用ナノ粒子。
【請求項5】
前記ポリマーコーティングがデキストランを含む、請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項6】
前記核酸が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である、請求項１に記載の治療用ナノ粒子
。
。
【請求項7】
前記核酸が、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を含む化学的部分を通してナノ
粒子へ共有結合性に連結されている、請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
粒子へ共有結合性に連結されている、請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項8】
前記ナノ粒子が磁性である、請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子および、任意で、化学療法剤を含
む薬学的組成物。
む薬学的組成物。
【請求項10】
治療的有効量の、請求項１～８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子および化学療法
剤を、癌を有する対象に投与することを含む、癌を有する対象を処置するための方法。
剤を、癌を有する対象に投与することを含む、癌を有する対象を処置するための方法。
【請求項11】
対象において癌を処置することにおける使用のための、請求項１～８のいずれか一項に
記載の治療用ナノ粒子および化学療法剤。
記載の治療用ナノ粒子および化学療法剤。
【請求項12】
前記癌が、乳癌、結腸癌、腎癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、胃
癌、甲状腺癌、および子宮癌からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法または
請求項１１に記載の使用。
癌、甲状腺癌、および子宮癌からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法または
請求項１１に記載の使用。
【請求項13】
対象における癌細胞の位置もしくは数、または対象における治療用ナノ粒子の位置を決
定するために、対象の組織を画像化することをさらに含む、請求項１０に記載の方法また
は請求項１１に記載の使用。
定するために、対象の組織を画像化することをさらに含む、請求項１０に記載の方法また
は請求項１１に記載の使用。
【請求項14】
前記治療用ナノ粒子が、対象に２回以上の用量で投与される、請求項１０に記載の方法
または請求項１１に記載の使用。
または請求項１１に記載の使用。
【請求項15】
前記治療用ナノ粒子が対象に少なくとも週１回、投与される、請求項１４に記載の方法
または使用。
または使用。
【請求項16】
前記治療用ナノ粒子が、対象に静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、または腹腔内投与によ
り投与される、請求項１０に記載の方法または請求項１１に記載の使用。
り投与される、請求項１０に記載の方法または請求項１１に記載の使用。
【請求項17】
前記対象が膵癌を有する、請求項１０に記載の方法または請求項１１に記載の使用。
【請求項18】
前記化学療法剤がゲムシタビンである、請求項１０もしくは１６に記載の方法または請
求項１１に記載の使用。
求項１１に記載の使用。
【請求項19】
前記化学療法剤がゲムシタビンである、請求項９に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
優先権の主張
この出願は、２０１８年９月７日に出願された米国特許出願第６２／７２８，４５９号
、および２０１９年１月１０日に出願された米国特許出願第６２／７９０，９５３号の恩
典を主張し、それらの特許出願の全内容は参照により本明細書に組み入れられている。
この出願は、２０１８年９月７日に出願された米国特許出願第６２／７２８，４５９号
、および２０１９年１月１０日に出願された米国特許出願第６２／７９０，９５３号の恩
典を主張し、それらの特許出願の全内容は参照により本明細書に組み入れられている。
【0002】
連邦支援による研究または開発
この発明は、国立衛生研究所により授与された認可番号ＣＡ１６３４６１による政府支
援でなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
この発明は、国立衛生研究所により授与された認可番号ＣＡ１６３４６１による政府支
援でなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【0003】
技術分野
免疫チェックポイント分子、例えば、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を
標的化する阻害性核酸、例えば、ｓｉＲＮＡに連結されたナノ粒子を用いる、癌、例えば
、膵癌を処置するための治療的組成物および方法が本明細書に記載される。
免疫チェックポイント分子、例えば、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を
標的化する阻害性核酸、例えば、ｓｉＲＮＡに連結されたナノ粒子を用いる、癌、例えば
、膵癌を処置するための治療的組成物および方法が本明細書に記載される。
【背景技術】
【0004】
近年、免疫療法を用いる様々な悪性腫瘍の処置において目覚ましい進歩が見られる。最
も有望なアプローチの一つは、免疫チェックポイント阻害剤を含む。
も有望なアプローチの一つは、免疫チェックポイント阻害剤を含む。
【0005】
癌免疫療法についてのチェックポイント阻害の有望さにも関わらず、その応答は、一般
的に変動し、多数の患者が応答することができない。ＦＤＡ認可のＰＤ－Ｌ１阻害剤の注
目すべき例には、転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）２１についてのアテゾリズマブ、お
よび局所進行性または転移性尿路上皮癌腫についてのデュルバルマブ２２が挙げられる。
しかしながら、膀胱癌についてのアテゾリズマブの最初の励まされる結果および迅速な認
可にも関わらず２３、２４、確認試験は、それの全生存の主要評価項目を達成することが
できなかった２５。同様に、非小細胞肺癌の一次処置としてのトレメリムマブと併用した
デュルバルマブの第ＩＩＩ相試験は、それの無進行生存の主要評価項目を満たすことがで
きなかった２６。
的に変動し、多数の患者が応答することができない。ＦＤＡ認可のＰＤ－Ｌ１阻害剤の注
目すべき例には、転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）２１についてのアテゾリズマブ、お
よび局所進行性または転移性尿路上皮癌腫についてのデュルバルマブ２２が挙げられる。
しかしながら、膀胱癌についてのアテゾリズマブの最初の励まされる結果および迅速な認
可にも関わらず２３、２４、確認試験は、それの全生存の主要評価項目を達成することが
できなかった２５。同様に、非小細胞肺癌の一次処置としてのトレメリムマブと併用した
デュルバルマブの第ＩＩＩ相試験は、それの無進行生存の主要評価項目を満たすことがで
きなかった２６。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
ゲムシタビンなどの化学療法剤と、免疫チェックポイント分子阻害剤、例えば、ＭＮ－
ｓｉＰＤＬ１と名づけられたプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤を組み合
わせることを含む、癌を処置するためのストラテジーが本明細書に記載される。例として
、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１は、磁性ナノ担体（ＭＮ）にコンジュゲートされた、ＰＤ－Ｌ１に
対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＰＤＬ１）を組み入れている。本明細書に示されているよ
うに、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の腫瘍への送達は、非侵襲性磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により
半定量的にモニターすることができ、ＭＮ担体は超常磁性であるからである。同系マウス
膵癌モデルにおけるゲムシタビンなどの化学療法剤およびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１からなる併
用療法は、腫瘍成長の有意な低下および生存率の増加を生じた。用量最適化後、腫瘍容積
の９０％低下が、処置の開始から３週間後に達成された。対照動物の１００％が、処置の
開始後の６週間目までに彼らの腫瘍で死んだが、５週間目まで実験群における死亡はなく
、実験動物の６７％が１２週間、生存した。これらの方法は、有効な処置がない難治性疾
患、およびほんの１％の５年生存率によって特徴づけられる難治性疾患における治療効果
のために用いることができる。
ｓｉＰＤＬ１と名づけられたプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤を組み合
わせることを含む、癌を処置するためのストラテジーが本明細書に記載される。例として
、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１は、磁性ナノ担体（ＭＮ）にコンジュゲートされた、ＰＤ－Ｌ１に
対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＰＤＬ１）を組み入れている。本明細書に示されているよ
うに、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の腫瘍への送達は、非侵襲性磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により
半定量的にモニターすることができ、ＭＮ担体は超常磁性であるからである。同系マウス
膵癌モデルにおけるゲムシタビンなどの化学療法剤およびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１からなる併
用療法は、腫瘍成長の有意な低下および生存率の増加を生じた。用量最適化後、腫瘍容積
の９０％低下が、処置の開始から３週間後に達成された。対照動物の１００％が、処置の
開始後の６週間目までに彼らの腫瘍で死んだが、５週間目まで実験群における死亡はなく
、実験動物の６７％が１２週間、生存した。これらの方法は、有効な処置がない難治性疾
患、およびほんの１％の５年生存率によって特徴づけられる難治性疾患における治療効果
のために用いることができる。
【0007】
したがって、治療用ナノ粒子が本明細書に提供され、前記ナノ粒子が、１０ｎｍ～３０
ｎｍの間の直径を有し、かつ、好ましくは、酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および
前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェックポイント分子、例えば、プロ
グラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を標的化する阻害性核酸を含む。
ｎｍの間の直径を有し、かつ、好ましくは、酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および
前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェックポイント分子、例えば、プロ
グラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を標的化する阻害性核酸を含む。
【0008】
いくつかの実施形態において、前記核酸は、配列番号１に相補的な少なくとも１０個の
連続したヌクレオチドの配列を含む。
連続したヌクレオチドの配列を含む。
【0009】
いくつかの実施形態において、前記核酸は、少なくとも１個の改変ヌクレオチド、例え
ば、ロックドヌクレオチドを含む。
ば、ロックドヌクレオチドを含む。
【0010】
いくつかの実施形態において、ポリマーコーティングは、デキストランを含む。
【0011】
いくつかの実施形態において、前記核酸は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。
【0012】
いくつかの実施形態において、前記核酸は、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合
を含む化学的部分を通して、ナノ粒子へ共有結合性に連結されている。
を含む化学的部分を通して、ナノ粒子へ共有結合性に連結されている。
【0013】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は磁性である。
【0014】
本明細書に記載された治療用ナノ粒子、および任意で、化学療法剤を含む薬学的組成物
もまた提供される。
もまた提供される。
【0015】
さらに、癌を有する対象を処置するための方法が提供される。その方法は、本明細書に
記載されているような治療用ナノ粒子の治療的有効量を、好ましくは化学療法剤と併用し
て、癌を有する対象に投与することを含む。対象において癌を処置することにおける使用
のための、好ましくは化学療法剤と併用した、本明細書に記載されているような治療用ナ
ノ粒子もまた提供される。
記載されているような治療用ナノ粒子の治療的有効量を、好ましくは化学療法剤と併用し
て、癌を有する対象に投与することを含む。対象において癌を処置することにおける使用
のための、好ましくは化学療法剤と併用した、本明細書に記載されているような治療用ナ
ノ粒子もまた提供される。
【0016】
いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸癌、腎癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵
癌、前立腺癌、直腸癌、胃癌、甲状腺癌、および子宮癌からなる群から選択される。
癌、前立腺癌、直腸癌、胃癌、甲状腺癌、および子宮癌からなる群から選択される。
【0017】
いくつかの実施形態において、方法は、対象における癌細胞の位置もしくは数、または
対象における治療用ナノ粒子の位置を決定するために対象の組織を画像化することを含む
。
対象における治療用ナノ粒子の位置を決定するために対象の組織を画像化することを含む
。
【0018】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、対象に２回以上の用量で投与される
。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも週１回、対象に投与され
る。
。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも週１回、対象に投与され
る。
【0019】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、ま
たは腹腔内投与により対象に投与される。
たは腹腔内投与により対象に投与される。
【0020】
いくつかの実施形態において、対象は膵癌を有する。
【0021】
いくつかの実施形態において、化学療法剤はゲムシタビンである。
【0022】
本明細書に記載された磁性粒子のいずれかを含有する薬学的組成物もまた提供される。
【0023】
癌を有する対象に治療用ナノ粒子（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）
を投与することを含む、癌（例えば、膵癌）を有する対象において腫瘍成長を減少させる
ための方法であって、前記治療用ナノ粒子が、前記対象において腫瘍成長を減少させるた
めに十分な量で投与される、方法もまた提供される。いくつかの実施形態において、癌細
胞は、乳癌細胞、結腸癌細胞、腎癌細胞、肺癌細胞、皮膚癌細胞、卵巣癌細胞、膵癌細胞
、前立腺癌細胞、直腸癌細胞、胃癌細胞、甲状腺癌細胞、および子宮癌細胞からなる群か
ら選択される。これらの方法のいくつかの実施形態は、対象における癌細胞の位置もしく
は数、または対象における治療用ナノ粒子の位置（例えば、治療用磁性ナノ粒子または共
有結合性に連結されたフルオロフォアを含有する治療用ナノ粒子の位置）を決定するため
に対象の組織を画像化することをさらに含む。
を投与することを含む、癌（例えば、膵癌）を有する対象において腫瘍成長を減少させる
ための方法であって、前記治療用ナノ粒子が、前記対象において腫瘍成長を減少させるた
めに十分な量で投与される、方法もまた提供される。いくつかの実施形態において、癌細
胞は、乳癌細胞、結腸癌細胞、腎癌細胞、肺癌細胞、皮膚癌細胞、卵巣癌細胞、膵癌細胞
、前立腺癌細胞、直腸癌細胞、胃癌細胞、甲状腺癌細胞、および子宮癌細胞からなる群か
ら選択される。これらの方法のいくつかの実施形態は、対象における癌細胞の位置もしく
は数、または対象における治療用ナノ粒子の位置（例えば、治療用磁性ナノ粒子または共
有結合性に連結されたフルオロフォアを含有する治療用ナノ粒子の位置）を決定するため
に対象の組織を画像化することをさらに含む。
【0024】
別の態様において、本開示は、対象において転移性癌を処置する方法を記載する。これ
らの方法は、転移性癌を有する対象に治療用ナノ粒子（本明細書に記載された治療用ナノ
粒子のいずれか）を投与するステップであって、前記治療用ナノ粒子が、対象において転
移性進行を阻害するのに十分な量で投与される、ステップを含む。いくつかの実施形態に
おいて、転移性癌は、原発性膵癌に起因する。いくつかの実施形態において、投与するス
テップは、対象における、原発性もしくは転移性腫瘍サイズの減少（例えば、有意な、検
出可能な、または観察可能な減少）もしくは安定化、または原発性もしくは転移性腫瘍成
長の速度の減少（例えば、有意な、検出可能な、または観察可能な減少）を生じる。
らの方法は、転移性癌を有する対象に治療用ナノ粒子（本明細書に記載された治療用ナノ
粒子のいずれか）を投与するステップであって、前記治療用ナノ粒子が、対象において転
移性進行を阻害するのに十分な量で投与される、ステップを含む。いくつかの実施形態に
おいて、転移性癌は、原発性膵癌に起因する。いくつかの実施形態において、投与するス
テップは、対象における、原発性もしくは転移性腫瘍サイズの減少（例えば、有意な、検
出可能な、または観察可能な減少）もしくは安定化、または原発性もしくは転移性腫瘍成
長の速度の減少（例えば、有意な、検出可能な、または観察可能な減少）を生じる。
【0025】
本明細書に記載された方法のいずれかにおいて、治療用ナノ粒子は、対象に複数回の用
量で投与することができる。本明細書に記載された方法のいくつかの実施形態において、
治療用ナノ粒子は、対象に少なくとも週１回、投与される。本明細書に記載された方法の
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、また
は腹腔内投与により対象に投与される。本明細書に記載された方法のいくつかの実施形態
において、対象は、化学療法剤をさらに投与される。
量で投与することができる。本明細書に記載された方法のいくつかの実施形態において、
治療用ナノ粒子は、対象に少なくとも週１回、投与される。本明細書に記載された方法の
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、また
は腹腔内投与により対象に投与される。本明細書に記載された方法のいくつかの実施形態
において、対象は、化学療法剤をさらに投与される。
【0026】
用語「磁性」は、磁場に応答性である組成物を記載するために用いられる。磁性組成物
（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）の非限定的例は、常磁性、
超常磁性、強磁性、または反磁性である材料を含有し得る。磁性組成物の非限定的例は、
マグネタイト、フェライト（例えば、マンガン、コバルト、およびニッケルのフェライト
）、酸化Ｆｅ（ＩＩ）、およびヘマタイト、ならびにそれらの金属合金の群から選択され
る酸化金属を含有する。追加の磁性材料は、本明細書に記載され、かつ当技術分野におい
て知られている。
（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）の非限定的例は、常磁性、
超常磁性、強磁性、または反磁性である材料を含有し得る。磁性組成物の非限定的例は、
マグネタイト、フェライト（例えば、マンガン、コバルト、およびニッケルのフェライト
）、酸化Ｆｅ（ＩＩ）、およびヘマタイト、ならびにそれらの金属合金の群から選択され
る酸化金属を含有する。追加の磁性材料は、本明細書に記載され、かつ当技術分野におい
て知られている。
【0027】
用語「反磁性の」は、１以下である相対的透磁率を有し、かつ磁場によって反発される
組成物を記載するために用いられる。
組成物を記載するために用いられる。
【0028】
用語「常磁性の」は、外部から印加された磁場の存在下でのみ磁気モーメントを発生す
る組成物を記載するために用いられる。
る組成物を記載するために用いられる。
【0029】
用語「強磁性の」または「強磁性の」は、磁場に対して感受性が高く、かつ外部から印
加された磁場が除去された後、磁気的性質（磁気モーメント）を保持する能力がある組成
物を記載するために用いられる。
加された磁場が除去された後、磁気的性質（磁気モーメント）を保持する能力がある組成
物を記載するために用いられる。
【0030】
用語「ナノ粒子」とは、約２ｎｍ～約２００ｎｍの間（例えば、１０ｎｍから２００ｎ
ｍの間、２ｎｍから１００ｎｍの間、２ｎｍから４０ｎｍの間、２ｎｍから３０ｎｍの間
、２ｎｍから２０ｎｍの間、２ｎｍから１５ｎｍの間、１００ｎｍから２００ｎｍ、およ
び１５０ｎｍから２００ｎｍの間）の直径を有する物体を意味する。ナノ粒子の非限定的
例には、本明細書に記載された治療用ナノ粒子が挙げられる。
ｍの間、２ｎｍから１００ｎｍの間、２ｎｍから４０ｎｍの間、２ｎｍから３０ｎｍの間
、２ｎｍから２０ｎｍの間、２ｎｍから１５ｎｍの間、１００ｎｍから２００ｎｍ、およ
び１５０ｎｍから２００ｎｍの間）の直径を有する物体を意味する。ナノ粒子の非限定的
例には、本明細書に記載された治療用ナノ粒子が挙げられる。
【0031】
用語「磁性ナノ粒子」とは、（本明細書に定義されているように）磁性があるナノ粒子
（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）を意味する。磁性ナノ粒子の非限定
的例は本明細書に記載されている。追加の磁性ナノ粒子は当技術分野において知られてい
る。
（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）を意味する。磁性ナノ粒子の非限定
的例は本明細書に記載されている。追加の磁性ナノ粒子は当技術分野において知られてい
る。
【0032】
用語「ポリマーコーティング」とは、３次元物体（例えば、酸化金属などの磁性材料を
含有する３次元物体）の表面に塗布された少なくとも１つのポリマー（例えば、デキスト
ラン）の少なくとも１つの（例えば、均一なまたは不均一な）分子層を意味する。ポリマ
ーコーティングを生成するために用いることができるポリマーの非限定的例は、本明細書
に記載されている。ポリマーコーティングを生成するために用いることができるポリマー
の追加の例は、当技術分野において知られている。物体（例えば、磁性材料を含有する３
次元物体）にポリマーコーティングを適用するための方法は、本明細書に記載され、当技
術分野においても知られている。
含有する３次元物体）の表面に塗布された少なくとも１つのポリマー（例えば、デキスト
ラン）の少なくとも１つの（例えば、均一なまたは不均一な）分子層を意味する。ポリマ
ーコーティングを生成するために用いることができるポリマーの非限定的例は、本明細書
に記載されている。ポリマーコーティングを生成するために用いることができるポリマー
の追加の例は、当技術分野において知られている。物体（例えば、磁性材料を含有する３
次元物体）にポリマーコーティングを適用するための方法は、本明細書に記載され、当技
術分野においても知られている。
【0033】
用語「核酸」とは、任意の一本鎖または二本鎖ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまた
はＲＮＡ、ｃＤＮＡ、半合成または合成起源）を意味する。核酸という用語は、少なくと
も１個の改変ヌクレオチド（例えば、塩基における改変および／または糖における改変を
含有する）、および／または２個のヌクレオチドを連結するホスホジエステル結合におけ
る改変を含有するオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、少
なくとも１個のロックドヌクレオチド（ＬＮＡ）を含有することができる。核酸の非限定
的例は本明細書に記載されている。核酸の追加の例は当技術分野に知られている。
はＲＮＡ、ｃＤＮＡ、半合成または合成起源）を意味する。核酸という用語は、少なくと
も１個の改変ヌクレオチド（例えば、塩基における改変および／または糖における改変を
含有する）、および／または２個のヌクレオチドを連結するホスホジエステル結合におけ
る改変を含有するオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、少
なくとも１個のロックドヌクレオチド（ＬＮＡ）を含有することができる。核酸の非限定
的例は本明細書に記載されている。核酸の追加の例は当技術分野に知られている。
【0034】
用語「改変ヌクレオチド」とは、それの塩基における少なくとも１つの改変、および／
またはそれの糖（リボースまたはデオキシリボース）における少なくとも１つの改変を含
有するＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドを意味する。改変ヌクレオチドはまた、核酸配列
における２個の隣接するヌクレオチド間のホスホジエステル結合を形成する原子における
改変を含有し得る。
またはそれの糖（リボースまたはデオキシリボース）における少なくとも１つの改変を含
有するＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドを意味する。改変ヌクレオチドはまた、核酸配列
における２個の隣接するヌクレオチド間のホスホジエステル結合を形成する原子における
改変を含有し得る。
【0035】
用語「フルオロフォア」とは、第１の波長での光を吸収し、かつ第２の波長での光を放
射する分子であって、前記第１の波長が前記第２の波長より短い（より高いエネルギー）
、分子を意味する。いくつかの実施形態において、フルオロフォアによって吸収される第
１の波長は、近赤外範囲にあり得る。フルオロフォアの非限定的例は本明細書に記載され
ている。フルオロフォアの追加の例は当技術分野において知られている。
射する分子であって、前記第１の波長が前記第２の波長より短い（より高いエネルギー）
、分子を意味する。いくつかの実施形態において、フルオロフォアによって吸収される第
１の波長は、近赤外範囲にあり得る。フルオロフォアの非限定的例は本明細書に記載され
ている。フルオロフォアの追加の例は当技術分野において知られている。
【0036】
用語「近赤外光」とは、約６００ｎｍから約３，０００ｎｍの間の波長を有する光を意
味する。
味する。
【0037】
用語「ターゲティングペプチド」とは、標的細胞（例えば、癌細胞）の形質膜の中また
は上に存在する分子（例えば、タンパク質、糖、もしくは脂質、またはそれらの組合せ）
により結合されるペプチドを意味する。本明細書に記載されているように、ターゲティン
グペプチドは、第２の分子または組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子
のいずれか）へ共有結合性に連結されて、その第２の分子または組成物を標的細胞（例え
ば、癌細胞）へ標的化することができる。いくつかの実施形態において、第２の分子また
は組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）へ共有結合性に連
結されているターゲティングペプチドは、標的化された細胞による第２の分子または組成
物の取り込み（例えば、エンドサイトーシスまたはピノサイトーシスによる細胞取り込み
）を生じる。ターゲティングペプチドの非限定的例は本明細書に記載されている。ターゲ
ティングペプチドの追加の例は当技術分野において知られている。
は上に存在する分子（例えば、タンパク質、糖、もしくは脂質、またはそれらの組合せ）
により結合されるペプチドを意味する。本明細書に記載されているように、ターゲティン
グペプチドは、第２の分子または組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子
のいずれか）へ共有結合性に連結されて、その第２の分子または組成物を標的細胞（例え
ば、癌細胞）へ標的化することができる。いくつかの実施形態において、第２の分子また
は組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）へ共有結合性に連
結されているターゲティングペプチドは、標的化された細胞による第２の分子または組成
物の取り込み（例えば、エンドサイトーシスまたはピノサイトーシスによる細胞取り込み
）を生じる。ターゲティングペプチドの非限定的例は本明細書に記載されている。ターゲ
ティングペプチドの追加の例は当技術分野において知られている。
【0038】
用語「低分子干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」とは、細胞においてＲＮＡ干渉を媒介
する能力がある二本鎖核酸分子を意味する。ＲＮＡ干渉の過程は、Ｅｂａｌｓｈｉｒら（
Nature 411:494-498, 2001）に記載されている。ｓｉＲＮＡの各鎖は、１９ヌクレオチド
長から２３ヌクレオチド長の間であり得る。本明細書で用いられる場合、ｓｉＲＮＡ分子
は、天然または内因性ＲＮＡヌクレオチドのみを含有する分子に限定される必要はなく、
化学修飾ヌクレオチドをさらに包含することができる。ｓｉＲＮＡの非限定的例は、本明
細書に記載されている。ｓｉＲＮＡの追加の例は、当技術分野において知られている。
する能力がある二本鎖核酸分子を意味する。ＲＮＡ干渉の過程は、Ｅｂａｌｓｈｉｒら（
Nature 411:494-498, 2001）に記載されている。ｓｉＲＮＡの各鎖は、１９ヌクレオチド
長から２３ヌクレオチド長の間であり得る。本明細書で用いられる場合、ｓｉＲＮＡ分子
は、天然または内因性ＲＮＡヌクレオチドのみを含有する分子に限定される必要はなく、
化学修飾ヌクレオチドをさらに包含することができる。ｓｉＲＮＡの非限定的例は、本明
細書に記載されている。ｓｉＲＮＡの追加の例は、当技術分野において知られている。
【0039】
句「腫瘍成長」とは、対象における腫瘍量の増大を意味する。腫瘍成長の非限定的例に
は、新しい腫瘍細胞の形成、既存腫瘍細胞の増殖、既存腫瘍細胞におけるアポトーシスに
対する抵抗性が挙げられる。腫瘍成長を検出および決定するための例示的な方法は、本明
細書に記載されている。腫瘍成長を検出および決定するための追加の方法は、当技術分野
において知られている。
は、新しい腫瘍細胞の形成、既存腫瘍細胞の増殖、既存腫瘍細胞におけるアポトーシスに
対する抵抗性が挙げられる。腫瘍成長を検出および決定するための例示的な方法は、本明
細書に記載されている。腫瘍成長を検出および決定するための追加の方法は、当技術分野
において知られている。
【0040】
用語「転移」とは、対象における、原発性腫瘍に存在する癌細胞の二次の非隣接組織へ
の遊走を意味する。転移の非限定的例には、原発性腫瘍からリンパ節（例えば、局所リン
パ節）、骨組織、肺組織、肝臓組織、および／または脳組織への転移が挙げられる。転移
という用語はまた、リンパ節に見出される転移性癌細胞の二次組織（例えば、骨組織、肝
臓組織、または脳組織）へ遊走もまた含む。いくつかの非限定的実施形態において、原発
性腫瘍に存在する癌細胞は、乳癌細胞、結腸癌細胞、腎癌細胞、肺癌細胞、皮膚癌細胞、
卵巣癌細胞、膵癌細胞、前立腺癌細胞、直腸癌細胞、胃癌細胞、甲状腺癌細胞、または子
宮癌細胞である。転移の追加の態様および例は、当技術分野において知られ、または本明
細書に記載されている。
の遊走を意味する。転移の非限定的例には、原発性腫瘍からリンパ節（例えば、局所リン
パ節）、骨組織、肺組織、肝臓組織、および／または脳組織への転移が挙げられる。転移
という用語はまた、リンパ節に見出される転移性癌細胞の二次組織（例えば、骨組織、肝
臓組織、または脳組織）へ遊走もまた含む。いくつかの非限定的実施形態において、原発
性腫瘍に存在する癌細胞は、乳癌細胞、結腸癌細胞、腎癌細胞、肺癌細胞、皮膚癌細胞、
卵巣癌細胞、膵癌細胞、前立腺癌細胞、直腸癌細胞、胃癌細胞、甲状腺癌細胞、または子
宮癌細胞である。転移の追加の態様および例は、当技術分野において知られ、または本明
細書に記載されている。
【0041】
用語「原発性腫瘍」とは、腫瘍進行が始まって、癌性塊の生成へと進む解剖学的部位に
存在する腫瘍を意味する。いくつかの実施形態において、医師は、対象における原発性腫
瘍の部位をはっきりと同定することができない場合がある。
存在する腫瘍を意味する。いくつかの実施形態において、医師は、対象における原発性腫
瘍の部位をはっきりと同定することができない場合がある。
【0042】
用語「転移性腫瘍」とは、対象において原発性腫瘍から転移した腫瘍細胞から生じた対
象における腫瘍を意味する。いくつかの実施形態において、医師は、対象における原発性
腫瘍の部位をはっきりと同定することができない場合がある。
象における腫瘍を意味する。いくつかの実施形態において、医師は、対象における原発性
腫瘍の部位をはっきりと同定することができない場合がある。
【0043】
用語「リンパ節」とは、リンパ管によりリンパ系に接続されている、Ｂリンパ球、Ｔリ
ンパ球、およびマクロファージを含む様々な細胞を含有する免疫系の小さい球状または楕
円形の器官を意味する。様々なリンパ節が哺乳動物に存在し、そのリンパ節には、腋窩リ
ンパ節（例えば、側腺、前腺もしくは胸部腺、後腺もしくは肩甲下腺、中心腺もしくは中
間腺、または内側腺もしくは鎖骨上腺）、センチネルリンパ節、顎下リンパ節、前頚部リ
ンパ節、後頚部リンパ節、鎖骨上リンパ節、オトガイ下リンパ節、大腿リンパ節、腸間膜
リンパ節、縦隔リンパ節、鼠径リンパ節、亜区域（subsegmental）リンパ節、区域（segm
ental）リンパ節、大葉（lobar）リンパ節、葉間（interlobar）リンパ節、肺門リンパ節
、滑車上腺、三角筋胸筋腺、浅鼠径リンパ節、深鼠径リンパ節、上腕リンパ節、および膝
窩リンパ節が挙げられるが、それらに限定されない。
ンパ球、およびマクロファージを含む様々な細胞を含有する免疫系の小さい球状または楕
円形の器官を意味する。様々なリンパ節が哺乳動物に存在し、そのリンパ節には、腋窩リ
ンパ節（例えば、側腺、前腺もしくは胸部腺、後腺もしくは肩甲下腺、中心腺もしくは中
間腺、または内側腺もしくは鎖骨上腺）、センチネルリンパ節、顎下リンパ節、前頚部リ
ンパ節、後頚部リンパ節、鎖骨上リンパ節、オトガイ下リンパ節、大腿リンパ節、腸間膜
リンパ節、縦隔リンパ節、鼠径リンパ節、亜区域（subsegmental）リンパ節、区域（segm
ental）リンパ節、大葉（lobar）リンパ節、葉間（interlobar）リンパ節、肺門リンパ節
、滑車上腺、三角筋胸筋腺、浅鼠径リンパ節、深鼠径リンパ節、上腕リンパ節、および膝
窩リンパ節が挙げられるが、それらに限定されない。
【0044】
用語「画像化」とは、生物物理学的技術（例えば、電磁エネルギー吸収および／または
放射）を用いる対象の少なくとも１つの組織の可視化を意味する。画像化の非限定的実施
形態には、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影法、および光学的画像
法が挙げられる。
放射）を用いる対象の少なくとも１つの組織の可視化を意味する。画像化の非限定的実施
形態には、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影法、および光学的画像
法が挙げられる。
【0045】
句「腫瘍サイズの安定化」とは、時間が経って対象において腫瘍の総容積または近似容
積のわずかなまたは検出不可能な変化のみがある状態に腫瘍が達していることを意味する
。
積のわずかなまたは検出不可能な変化のみがある状態に腫瘍が達していることを意味する
。
【0046】
句「腫瘍成長の速度」とは、対象における、時間経過による腫瘍の総容積もしくは近似
容積の変化、または腫瘍に存在する細胞の総数もしくは近似数の変化を意味する。腫瘍成
長の速度は、本明細書に記載された例示的な方法を用いて決定することができる。腫瘍成
長の速度を決定するための追加の方法は、当技術分野において知られている。
容積の変化、または腫瘍に存在する細胞の総数もしくは近似数の変化を意味する。腫瘍成
長の速度は、本明細書に記載された例示的な方法を用いて決定することができる。腫瘍成
長の速度を決定するための追加の方法は、当技術分野において知られている。
【0047】
他に規定がない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者
により一般的に理解されているのと同じ意味をもつ。方法および材料は、本発明における
使用のために本明細書に記載されている；当技術分野において知られた他の適切な方法お
よび材料もまた用いることができる。材料、方法、および例は、例証となるのみであり、
限定することを意図されない。本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、配
列、データベースエントリー、および他の参考文献は、全体として参照により組み入れら
れている。矛盾する場合、定義を含む本明細書が、支配する。
により一般的に理解されているのと同じ意味をもつ。方法および材料は、本発明における
使用のために本明細書に記載されている；当技術分野において知られた他の適切な方法お
よび材料もまた用いることができる。材料、方法、および例は、例証となるのみであり、
限定することを意図されない。本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、配
列、データベースエントリー、および他の参考文献は、全体として参照により組み入れら
れている。矛盾する場合、定義を含む本明細書が、支配する。
【0048】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および図から、ならびに特許請求の
範囲から明らかであろう。
範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【0049】
【図1】図１Ａ～Ｂは、例示的なＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の構造、合成、および特徴づけを示す図である。Ａ． ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１は、２０ｎｍアミノ化デキストランコーティング化超常磁性酸化鉄ナノ粒子のヘテロ二官能性不安定性リンカーＳＰＤＰおよびＰＤ－Ｌ１に対するｓｉＲＮＡへの連続的コンジュゲーションにより合成された。Ｂ． ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１特徴づけ。
【図2】図２Ａ～Ｃは、画像ガイドのＭＮ－ｓｉＲＮＡの腫瘍への送達を示す図である。Ａ． 腫瘍保有動物のＴ２マップ。腫瘍組織におけるＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の局在は、Ｔ２緩和時間の短縮を引き起こし、造影剤投与前の画像と比較して、陰性コントラストを生じた。Ｂ． 処置の最初の３週間の間の実験動物および対照動物における腫瘍関心領域（ＲＯＩ）に渡るＭＮ－ｓｉＰＤＬ１濃度測定。ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の蓄積は、処置の最初の３週間の間、ＭＮ－ｓｉＳＣＲの蓄積より１．５倍速かった。Ｃ． 処置の３週間目～１２週間目の間の実験動物および対照動物における腫瘍関心領域（ＲＯＩ）に渡るＭＮ－ｓｉＰＤＬ１濃度測定。ＭＮ－ｓｉＳＣＲで処置された対照群におけるその作用物質の濃度は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１で処置された実験群においてより、５．１倍速く、減少した。
【図3-1】図３Ａ～Ｄは、ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１での併用処置を示す図である。Ａ． 処置の過程の間における代表的な色分けされたＴ２強調ＭＲ画像。Ｂ． 処置中の腫瘍容積の変化。ゲムシタビンと組み合わせた、高用量活性ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１治療用物質と不活性ＭＮ－ｓｉＳＣＲ治療用物質との間で、応答が、早くも２週間目から、有意に異なった。低用量ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１群において、この差は、６週間目後に明らかだった。Ｃ． ＭＮ－ｓｉＳＣＲ＋ゲムシタビンに対する、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１＋ゲムシタビンで処置された動物における生存の向上を示す、カプラン・マイアー生存分析。Ｄ． 対照腫瘍における壊死および潰瘍化を示す、６週間目における腫瘍保有マウスの写真。
【図3-2】上記と同様。
【図4-1】図４Ａ～Ｂは、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１およびゲムシタビンで処置されたマウス由来の腫瘍の免疫蛍光を示す図である。効率的なＰＤ－Ｌ１阻害、ＴＩＬ動員および活性化、Ｔｒｅｇ減弱、ならびに腫瘍細胞増殖の阻害を示す、Ａ：代表的な顕微鏡写真およびＢ：蛍光シグナル強度の定量的分析。ＴＬ：Ｔリンパ球；ＣＴＬ：細胞傷害性Ｔリンパ球；Ｔｒｅｇ：制御性Ｔ細胞；Ｋｉ－６７：増殖。
【図4-2】上記と同様。
【図5-1】図５Ａ～Ｄは、ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１での併用処置を示す図である。処置群のそれぞれについての処置中の腫瘍容積の変化。Ａ：ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１高用量レスポンダー；Ｂ：ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１高用量ノンレスポンダー；Ｃ：ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１低用量；Ｄ：ＭＮ－ｓｉＳＣＲ（スクランブル対照）。本研究についての試料サイズは６であった。高用量群において、応答しなかった、すなわち、腫瘍容積が退縮しなかった、２匹のマウスがあった；それらの結果は図５Ｂに示されている。
【図5-2】上記と同様。
【図6】癌細胞におけるＰＤ－Ｌ１ ｍＲＮＡの阻害についての例示的なナノドラッグ（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１）の調製の追加の詳細に関する概略を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0050】
大いに期待できるとは言え、チェックポイント阻害剤に関する臨床結果は、応答のばら
つきを示している。特に、膵癌は、最初の免疫療法アプローチに対する抵抗性が判明して
いる。
つきを示している。特に、膵癌は、最初の免疫療法アプローチに対する抵抗性が判明して
いる。
【0051】
膵癌は、米国において癌関連死の４番目に多い原因であり、全体の５年生存率はたった
８％である１。外科的切除は、依然として、切除可能な疾患を有する患者についての最適
な処置である。しかしながら、診断された患者の２０％未満が治癒的切除に適しており２
、患者の３０％が局所疾患を示し、５０％が遠隔転移を示し３、それぞれ、１１％および
２％の生存率である１。そのような予後不良の背後にある理由は、診断時点においての進
行期２および標準化学療法に対する抵抗性４を含むと仮定されている。化学抵抗性を与え
ると想像される以下の複数の因子がある：線維形成性間質の形成が薬物送達を制限するこ
と、反応性酸素種、サイトカイン、および／または成長因子による膵臓星状細胞の活性化
、ならびに活性化星状細胞の免疫抑制性シグナル伝達分子の分泌４、５。膵癌の複雑な腫
瘍生物学によって、複数の併用化学療法が登場している。そのようなものとして、ＦＯＬ
ＦＩＲＩＮＯＸ（５－フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、およびオキサリ
プラチンからなる組合せ）、およびゲムシタビン／ｎａｂ－パクリタキセルが、標準ゲム
シタビン単剤療法処置と比較して全生存の向上を示している６、７。しかしながら、これ
らの併用療法は、患者の全体的な健康に大きく依存し、最近の細胞傷害性併用療法につい
ての全体の延命効果は、たった約２～５カ月である。
８％である１。外科的切除は、依然として、切除可能な疾患を有する患者についての最適
な処置である。しかしながら、診断された患者の２０％未満が治癒的切除に適しており２
、患者の３０％が局所疾患を示し、５０％が遠隔転移を示し３、それぞれ、１１％および
２％の生存率である１。そのような予後不良の背後にある理由は、診断時点においての進
行期２および標準化学療法に対する抵抗性４を含むと仮定されている。化学抵抗性を与え
ると想像される以下の複数の因子がある：線維形成性間質の形成が薬物送達を制限するこ
と、反応性酸素種、サイトカイン、および／または成長因子による膵臓星状細胞の活性化
、ならびに活性化星状細胞の免疫抑制性シグナル伝達分子の分泌４、５。膵癌の複雑な腫
瘍生物学によって、複数の併用化学療法が登場している。そのようなものとして、ＦＯＬ
ＦＩＲＩＮＯＸ（５－フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、およびオキサリ
プラチンからなる組合せ）、およびゲムシタビン／ｎａｂ－パクリタキセルが、標準ゲム
シタビン単剤療法処置と比較して全生存の向上を示している６、７。しかしながら、これ
らの併用療法は、患者の全体的な健康に大きく依存し、最近の細胞傷害性併用療法につい
ての全体の延命効果は、たった約２～５カ月である。
【0052】
膵癌において、チェックポイント阻害剤に基づいた治療の進歩は、期待外れの臨床結果
を示している。第ＩＩ相試験において、抗ＣＴＬＡ－４、イピリムマブ単剤療法は、無効
であり、その試験からレスポンダーは生じなかった２７。同様に、多施設第Ｉ相試験にお
いて、抗ＰＤＬ－１抗体が、様々な進行癌患者において静脈内に投与された。募集された
１４人の膵癌患者のうち、客観的応答は報告されなかった２８。
を示している。第ＩＩ相試験において、抗ＣＴＬＡ－４、イピリムマブ単剤療法は、無効
であり、その試験からレスポンダーは生じなかった２７。同様に、多施設第Ｉ相試験にお
いて、抗ＰＤＬ－１抗体が、様々な進行癌患者において静脈内に投与された。募集された
１４人の膵癌患者のうち、客観的応答は報告されなかった２８。
【0053】
この疾患により引き起こされる甚だしい苦痛およびこれまで細胞傷害性処置で達成され
たささやかな進展を踏まえると、複数の角度からその疾患を攻撃する治療への抜本的、変
革的なアプローチを探索する必要があることは明らかである。
たささやかな進展を踏まえると、複数の角度からその疾患を攻撃する治療への抜本的、変
革的なアプローチを探索する必要があることは明らかである。
【0054】
この１０年間、癌免疫療法の分野においてとてつもない進歩が見られた。実際、免疫療
法は、１９４０年代の最初の化学療法の開発以来、最も有望な新しい癌処置アプローチを
表している。チェックポイント阻害剤は、黒色腫およびいくつかの肺癌などの致死性癌に
対して奏効しており（時には、劇的な成功を生じることがある）、数十の他の癌型におい
て試験されつつある８、９。しかし、膵癌は、通常の薬物で処置することは難しいことが
判明しており、最初の免疫療法アプローチに対して抵抗性を示している。一つには、これ
についての理由は、膵臓腺癌を特徴づける複雑な腫瘍微小環境である。主に、本来の免疫
抑制性と、抗体およびＴリンパ球浸潤についての物理的バリアとの両方である線維形成性
腫瘍形質の存在１０。それゆえに、以下を組み合わせる代替アプローチを設計することが
重要である：腫瘍細胞および腫瘍常在性マクロファージへ効率的に送達することができる
革新的チェックポイント阻害剤、ならびにＴリンパ球による腫瘍の透過を増強するストラ
テジー。
法は、１９４０年代の最初の化学療法の開発以来、最も有望な新しい癌処置アプローチを
表している。チェックポイント阻害剤は、黒色腫およびいくつかの肺癌などの致死性癌に
対して奏効しており（時には、劇的な成功を生じることがある）、数十の他の癌型におい
て試験されつつある８、９。しかし、膵癌は、通常の薬物で処置することは難しいことが
判明しており、最初の免疫療法アプローチに対して抵抗性を示している。一つには、これ
についての理由は、膵臓腺癌を特徴づける複雑な腫瘍微小環境である。主に、本来の免疫
抑制性と、抗体およびＴリンパ球浸潤についての物理的バリアとの両方である線維形成性
腫瘍形質の存在１０。それゆえに、以下を組み合わせる代替アプローチを設計することが
重要である：腫瘍細胞および腫瘍常在性マクロファージへ効率的に送達することができる
革新的チェックポイント阻害剤、ならびにＴリンパ球による腫瘍の透過を増強するストラ
テジー。
【0055】
化学療法剤、例えば、ゲムシタビン（Ｇｅｍ）、５－フルオロウラシル、ＦＯＬＦＩＲ
ＩＮＯＸ、およびインビボで腫瘍細胞へ高効率で送達されるナノ粒子担体を組み入れる新
規の免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１と名
づけられた）１１～１９を組み合わせることに頼る代替ストラテジーであって、それが、
転写後、ＲＮＡ干渉機構によって腫瘍細胞上の免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ
－Ｌ１、の発現を阻害する、代替ストラテジーが本明細書に提示される。そのアプローチ
は、小分子または抗体を上回って有利であり、そのｓｉＲＮＡ成分が、標的抗原を転写後
レベルで阻害し、タンパク質レベルではないからである。また、ＲＮＡｉ機構は触媒作用
であり、標的抗原の消滅のために腫瘍細胞へたったピコモル量のｓｉＲＮＡの送達を必要
とするだけである。対照的に、小分子または抗体は、抗原対治療用分子の少なくとも１：
１モル比の達成を必要とし、腫瘍細胞による標的抗原の発現の代償性増加の存在下では無
効であり得る。
ＩＮＯＸ、およびインビボで腫瘍細胞へ高効率で送達されるナノ粒子担体を組み入れる新
規の免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１と名
づけられた）１１～１９を組み合わせることに頼る代替ストラテジーであって、それが、
転写後、ＲＮＡ干渉機構によって腫瘍細胞上の免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ
－Ｌ１、の発現を阻害する、代替ストラテジーが本明細書に提示される。そのアプローチ
は、小分子または抗体を上回って有利であり、そのｓｉＲＮＡ成分が、標的抗原を転写後
レベルで阻害し、タンパク質レベルではないからである。また、ＲＮＡｉ機構は触媒作用
であり、標的抗原の消滅のために腫瘍細胞へたったピコモル量のｓｉＲＮＡの送達を必要
とするだけである。対照的に、小分子または抗体は、抗原対治療用分子の少なくとも１：
１モル比の達成を必要とし、腫瘍細胞による標的抗原の発現の代償性増加の存在下では無
効であり得る。
【0056】
現在の研究において、ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１からなる７週間の併用療
法が、同系マウス膵癌モデルにおいて投与された。このアプローチは、有意により低い死
亡率および毒性を生じ、腫瘍退縮、および生存率の劇的な向上をもたらした。特に、用量
最適化後、腫瘍容積の９０％低下が、処置の開始から３週間後に達成された。対照動物の
１００％が、処置の開始後６週間目までに彼らの腫瘍で死亡したが、５週間目まで実験群
において死亡はなく、実験動物の６７％が１２週間、生存した。
法が、同系マウス膵癌モデルにおいて投与された。このアプローチは、有意により低い死
亡率および毒性を生じ、腫瘍退縮、および生存率の劇的な向上をもたらした。特に、用量
最適化後、腫瘍容積の９０％低下が、処置の開始から３週間後に達成された。対照動物の
１００％が、処置の開始後６週間目までに彼らの腫瘍で死亡したが、５週間目まで実験群
において死亡はなく、実験動物の６７％が１２週間、生存した。
【0057】
記載された方法論は、薬物送達、送達過程の画像ガイダンス、および治療的応答の同調
的バイオマーカーのための統合ツールを表す。
的バイオマーカーのための統合ツールを表す。
【0058】
組成物
約２ｎｍ～約２００ｎｍの間（例えば、約１０ｎｍ～約３０ｎｍの間、約５ｎｍ～約２
５ｎｍの間、約１０ｎｍ～約２５ｎｍの間、約１５ｎｍ～約２５ｎｍの間、約２０ｎｍか
ら約２５ｎｍの間、約２５ｎｍ～約５０ｎｍの間、約５０ｎｍから約２００ｎｍの間、約
７０ｎｍから約２００ｎｍの間、約８０ｎｍから約２００ｎｍの間、約１００ｎｍから約
２００ｎｍの間、約１４０ｎｍ～約２００ｎｍ、および約１５０ｎｍ～約２００ｎｍの間
）の直径を有し、かつポリマーコーティングと、ヒト免疫チェックポイント分子、例えば
、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質－４（Cy
totoxic T-Lymphocyte-Associated Protein-4）；ＣＤ１５２）；ＬＡＧ－３（リンパ球
活性化遺伝子３（Lymphocyte Activation Gene 3）；ＣＤ２２３）；ＴＩＭ－３（Ｔ細胞
免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（T-cell Immunoglobulin domain and M
ucin domain 3）；ＨＡＶＣＲ２）；ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有する
Ｔ細胞免疫受容体（T-cell Immunoreceptor with Ig and ITIM domains））；Ｂ７－Ｈ３
（ＣＤ２７６）；ＶＳＩＲ（Ｖ－ｓｅｔ免疫調節性受容体（V-set immunoregulatory rec
eptor）、ａｋａ ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ５、Ｃ１０ｏｒｆ５４）；ＢＴＬＡ（Ｂリンパ球
およびＴリンパ球アテニュエータ（B- and T-Lymphocyte Attenuator）、ＣＤ２７２）；
ＧＡＲＰ（Glycoprotein A Repetitions Predominant；ＰＶＲＩＧ（PVR related immuno
globulin domain containing）；またはＶＴＣＮ１（V-set domain containing T cell a
ctivation inhibitor 1、ａｋａ Ｂ７－Ｈ４）に相補的である、配列内に少なくとも１
０個（例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１
９個、２０個、または２１個）の連続したヌクレオチドを含有する核酸とを含有する、治
療用ナノ粒子が本明細書に提供される。
約２ｎｍ～約２００ｎｍの間（例えば、約１０ｎｍ～約３０ｎｍの間、約５ｎｍ～約２
５ｎｍの間、約１０ｎｍ～約２５ｎｍの間、約１５ｎｍ～約２５ｎｍの間、約２０ｎｍか
ら約２５ｎｍの間、約２５ｎｍ～約５０ｎｍの間、約５０ｎｍから約２００ｎｍの間、約
７０ｎｍから約２００ｎｍの間、約８０ｎｍから約２００ｎｍの間、約１００ｎｍから約
２００ｎｍの間、約１４０ｎｍ～約２００ｎｍ、および約１５０ｎｍ～約２００ｎｍの間
）の直径を有し、かつポリマーコーティングと、ヒト免疫チェックポイント分子、例えば
、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質－４（Cy
totoxic T-Lymphocyte-Associated Protein-4）；ＣＤ１５２）；ＬＡＧ－３（リンパ球
活性化遺伝子３（Lymphocyte Activation Gene 3）；ＣＤ２２３）；ＴＩＭ－３（Ｔ細胞
免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（T-cell Immunoglobulin domain and M
ucin domain 3）；ＨＡＶＣＲ２）；ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有する
Ｔ細胞免疫受容体（T-cell Immunoreceptor with Ig and ITIM domains））；Ｂ７－Ｈ３
（ＣＤ２７６）；ＶＳＩＲ（Ｖ－ｓｅｔ免疫調節性受容体（V-set immunoregulatory rec
eptor）、ａｋａ ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ５、Ｃ１０ｏｒｆ５４）；ＢＴＬＡ（Ｂリンパ球
およびＴリンパ球アテニュエータ（B- and T-Lymphocyte Attenuator）、ＣＤ２７２）；
ＧＡＲＰ（Glycoprotein A Repetitions Predominant；ＰＶＲＩＧ（PVR related immuno
globulin domain containing）；またはＶＴＣＮ１（V-set domain containing T cell a
ctivation inhibitor 1、ａｋａ Ｂ７－Ｈ４）に相補的である、配列内に少なくとも１
０個（例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１
９個、２０個、または２１個）の連続したヌクレオチドを含有する核酸とを含有する、治
療用ナノ粒子が本明細書に提供される。
【0059】
ＰＤ－Ｌ１
ＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈ；Ｂ７Ｈ１；ＰＤＬ１；ＰＤＣＤ１Ｌ１；および
ＰＤＣＤ１ＬＧ１としても知られている。ヒトＰＤ－Ｌ１についての例示的な配列は、表
Ａに示されたＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号において提供されている。
ＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈ；Ｂ７Ｈ１；ＰＤＬ１；ＰＤＣＤ１Ｌ１；および
ＰＤＣＤ１ＬＧ１としても知られている。ヒトＰＤ－Ｌ１についての例示的な配列は、表
Ａに示されたＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号において提供されている。
【0060】
【表1】
【0061】
ＮＣＢＩ参照注釈により、バリアント１は、最も長い転写産物であり、最長アイソフォ
ーム（アイソフォームａ前駆体）をコードする。バリアント２は、バリアント１と比較し
て５’コード領域において選択的インフレームエクソンを欠損し、結果として、より短い
タンパク質アイソフォームｂを生じる。バリアント４は、いくつかのエクソンを欠損し、
それの３’末端エクソンは、バリアント１に用いられるスプライス部位を過ぎて伸長し、
結果として、バリアント１と比較して、新規の３’コード領域および新規の３’ＵＴＲを
生じ、アイソフォームｃ（アイソフォームａより短く、かつアイソフォームａと比較して
異なるＣ末端を有する）をコードする。
ーム（アイソフォームａ前駆体）をコードする。バリアント２は、バリアント１と比較し
て５’コード領域において選択的インフレームエクソンを欠損し、結果として、より短い
タンパク質アイソフォームｂを生じる。バリアント４は、いくつかのエクソンを欠損し、
それの３’末端エクソンは、バリアント１に用いられるスプライス部位を過ぎて伸長し、
結果として、バリアント１と比較して、新規の３’コード領域および新規の３’ＵＴＲを
生じ、アイソフォームｃ（アイソフォームａより短く、かつアイソフォームａと比較して
異なるＣ末端を有する）をコードする。
【0062】
本方法および組成物において、上記のいずれかまたは全部を標的化する（例えば、上記
の３つ全部に共通である領域を標的化する）ｓｉＲＮＡを用いることができる。ヒトバリ
アント１ ｍＲＮＡの配列は以下の通りである：
の３つ全部に共通である領域を標的化する）ｓｉＲＮＡを用いることができる。ヒトバリ
アント１ ｍＲＮＡの配列は以下の通りである：
【0063】
【化1】
【0064】
【表2】
【0065】
本方法は、ヒト対象を例示するが、他の哺乳動物対象、例えば、ネコ、イヌ、ウマ、ブ
タ、およびヒツジなどの獣医学的対象もまた本方法を用いて処置することができる。好ま
しい実施態様において、核酸は、処置されるべき対象と同じ種由来の配列を標的化する。
タ、およびヒツジなどの獣医学的対象もまた本方法を用いて処置することができる。好ま
しい実施態様において、核酸は、処置されるべき対象と同じ種由来の配列を標的化する。
【0066】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される治療用ナノ粒子は、球状もしくは
楕円形であり得、または無定形であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提
供される治療用ナノ粒子は、約２ｎｍ～約２００ｎｍの間（例えば、約１０ｎｍ～約２０
０ｎｍの間、約２ｎｍ～約３０ｎｍの間、約５ｎｍ～約２５ｎｍの間、約１０ｎｍ～約２
５ｎｍの間、約１５ｎｍ～約２５ｎｍの間、約２０ｎｍ～約２５ｎｍの間、約５０ｎｍ～
約２００ｎｍの間、約７０ｎｍ～約２００ｎｍの間、約８０ｎｍ～約２００ｎｍの間、約
１００ｎｍ～約２００ｎｍの間、約１４０ｎｍ～約２００ｎｍの間、および約１５０ｎｍ
～約２００ｎｍの間）の直径（治療用ナノ粒子の外面上の任意の２点の間）を有し得る。
いくつかの実施形態において、約２ｎｍ～約３０ｎｍの間の直径を有する治療用ナノ粒子
は、対象においてリンパ節に局在する。いくつかの実施形態において、約４０ｎｍ～約２
００ｎｍの間の直径を有する治療用ナノ粒子は、肝臓に局在する。
楕円形であり得、または無定形であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提
供される治療用ナノ粒子は、約２ｎｍ～約２００ｎｍの間（例えば、約１０ｎｍ～約２０
０ｎｍの間、約２ｎｍ～約３０ｎｍの間、約５ｎｍ～約２５ｎｍの間、約１０ｎｍ～約２
５ｎｍの間、約１５ｎｍ～約２５ｎｍの間、約２０ｎｍ～約２５ｎｍの間、約５０ｎｍ～
約２００ｎｍの間、約７０ｎｍ～約２００ｎｍの間、約８０ｎｍ～約２００ｎｍの間、約
１００ｎｍ～約２００ｎｍの間、約１４０ｎｍ～約２００ｎｍの間、および約１５０ｎｍ
～約２００ｎｍの間）の直径（治療用ナノ粒子の外面上の任意の２点の間）を有し得る。
いくつかの実施形態において、約２ｎｍ～約３０ｎｍの間の直径を有する治療用ナノ粒子
は、対象においてリンパ節に局在する。いくつかの実施形態において、約４０ｎｍ～約２
００ｎｍの間の直径を有する治療用ナノ粒子は、肝臓に局在する。
【0067】
いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書に記載された異なる治療用ナノ粒子
の２つ以上の混合物を含有することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、
ナノ粒子へ共有結合性に連結された、標的配列内の少なくとも１０個の連続したヌクレオ
チドを含有する少なくとも１つの治療用ナノ粒子（標的細胞においてｍｉＲ－１０ｂレベ
ルを減少させるためのナノ粒子）、および配列内に存在する少なくとも１０個の他の連続
したヌクレオチドの配列と相補的である配列を含有する少なくとも１つの治療用ナノ粒子
を含有する。
の２つ以上の混合物を含有することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、
ナノ粒子へ共有結合性に連結された、標的配列内の少なくとも１０個の連続したヌクレオ
チドを含有する少なくとも１つの治療用ナノ粒子（標的細胞においてｍｉＲ－１０ｂレベ
ルを減少させるためのナノ粒子）、および配列内に存在する少なくとも１０個の他の連続
したヌクレオチドの配列と相補的である配列を含有する少なくとも１つの治療用ナノ粒子
を含有する。
【0068】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、磁性であり得る（例えば、磁性材料
のコアを含有する）。
のコアを含有する）。
【0069】
ナノ粒子
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれかは、磁
性材料のコアを含有することができる（例えば、治療用磁性ナノ粒子）。いくつかの実施
形態において、磁性材料または粒子は、磁場に対して応答性である反磁性、常磁性、超常
磁性、または強磁性材料を含有することができる。治療用磁性ナノ粒子の非限定的例は、
マグネタイト、フェライト（例えば、マンガン、コバルト、およびニッケルのフェライト
）、酸化Ｆｅ（ＩＩ）、およびヘマタイト、ならびにそれらの金属合金の群から選択され
る酸化金属を含有する磁性材料のコアを含有する。磁性材料のコアは、当技術分野におい
て知られた方法を用いて金属塩を酸化金属へ変換することにより形成することができる（
例えば、Kieslich et al., Inorg. Chem. 2011）。いくつかの実施形態において、ナノ粒
子は、シクロデキストリン金または量子ドットを含有する。治療用磁性ナノ粒子を作製す
るために用いることができる方法の非限定的例は、Medarova et al., Methods Mol. Biol
. 555:1-13, 2009;および Medarova et al., Nature Protocols 1:429-431, 2006に記載
されている。追加の磁性材料、および磁性材料を作製する方法は、当技術分野において知
られている。本明細書に記載された方法のいくつかの実施形態において、治療用磁性ナノ
粒子の場所または局在性は、対象において画像化することができる（例えば、１回または
複数の用量の治療用磁性ナノ粒子の投与後、対象において画像化される）。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれかは、磁
性材料のコアを含有することができる（例えば、治療用磁性ナノ粒子）。いくつかの実施
形態において、磁性材料または粒子は、磁場に対して応答性である反磁性、常磁性、超常
磁性、または強磁性材料を含有することができる。治療用磁性ナノ粒子の非限定的例は、
マグネタイト、フェライト（例えば、マンガン、コバルト、およびニッケルのフェライト
）、酸化Ｆｅ（ＩＩ）、およびヘマタイト、ならびにそれらの金属合金の群から選択され
る酸化金属を含有する磁性材料のコアを含有する。磁性材料のコアは、当技術分野におい
て知られた方法を用いて金属塩を酸化金属へ変換することにより形成することができる（
例えば、Kieslich et al., Inorg. Chem. 2011）。いくつかの実施形態において、ナノ粒
子は、シクロデキストリン金または量子ドットを含有する。治療用磁性ナノ粒子を作製す
るために用いることができる方法の非限定的例は、Medarova et al., Methods Mol. Biol
. 555:1-13, 2009;および Medarova et al., Nature Protocols 1:429-431, 2006に記載
されている。追加の磁性材料、および磁性材料を作製する方法は、当技術分野において知
られている。本明細書に記載された方法のいくつかの実施形態において、治療用磁性ナノ
粒子の場所または局在性は、対象において画像化することができる（例えば、１回または
複数の用量の治療用磁性ナノ粒子の投与後、対象において画像化される）。
【0070】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された治療用ナノ粒子は、磁性材料を含
有しない。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、一部では、ポリマー（例え
ば、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸））を含有するコアを含有することができる。当技術
分野において知られた材料のいくつでもナノ粒子を調製するために用いることができるこ
とを熟練実践者は認識しており、その材料には、ゴム（例えば、アカシア、グアー）、キ
トサン、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、およびアルブミンが挙げられるが、それらに
限定されない。本明細書に記載された治療用ナノ粒子を作製するために用いることができ
る追加のポリマーは、当技術分野において知られている。例えば、治療用ナノ粒子を作製
するために用いることができるポリマーには、セルロース誘導体、ポリ（２－ヒドロキシ
エチルメタクリレート）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（メチルメタクリレート
）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アクリル酸）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチ
レン－コ－酢酸ビニル）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ乳
酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬ
ＧＡ）、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、およびポリカプ
ロラクトンが挙げられるが、それらに限定されない。
有しない。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、一部では、ポリマー（例え
ば、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸））を含有するコアを含有することができる。当技術
分野において知られた材料のいくつでもナノ粒子を調製するために用いることができるこ
とを熟練実践者は認識しており、その材料には、ゴム（例えば、アカシア、グアー）、キ
トサン、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、およびアルブミンが挙げられるが、それらに
限定されない。本明細書に記載された治療用ナノ粒子を作製するために用いることができ
る追加のポリマーは、当技術分野において知られている。例えば、治療用ナノ粒子を作製
するために用いることができるポリマーには、セルロース誘導体、ポリ（２－ヒドロキシ
エチルメタクリレート）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（メチルメタクリレート
）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アクリル酸）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチ
レン－コ－酢酸ビニル）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ乳
酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬ
ＧＡ）、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、およびポリカプ
ロラクトンが挙げられるが、それらに限定されない。
【0071】
ナノ粒子の組成物に用いられる材料、ナノ粒子を調製し、コーティングするための方法
、およびナノ粒子のサイズを調節するための方法がかなり異なり得ることを熟練実践者は
認識しているだろう。しかしながら、これらの方法は、当業者によく知られている。重要
な点には、ナノ粒子の生分解性、毒性プロファイル、および薬物動態学／薬物動力学が挙
げられる。ナノ粒子の組成物および／またはサイズは、それらの生物学的運命の重要な決
定要因である。例えば、より大きいナノ粒子は、典型的には、肝臓によって取り上げられ
、分解されるが、一方、より小さいナノ粒子（直径＜３０ｎｍ）は、典型的には、長時間
（時には、ヒトにおいて２４時間を超える血中半減期）、循環し、リンパ節、および腫瘍
などの過透過性脈管構造を有する器官の間質に蓄積する。
、およびナノ粒子のサイズを調節するための方法がかなり異なり得ることを熟練実践者は
認識しているだろう。しかしながら、これらの方法は、当業者によく知られている。重要
な点には、ナノ粒子の生分解性、毒性プロファイル、および薬物動態学／薬物動力学が挙
げられる。ナノ粒子の組成物および／またはサイズは、それらの生物学的運命の重要な決
定要因である。例えば、より大きいナノ粒子は、典型的には、肝臓によって取り上げられ
、分解されるが、一方、より小さいナノ粒子（直径＜３０ｎｍ）は、典型的には、長時間
（時には、ヒトにおいて２４時間を超える血中半減期）、循環し、リンパ節、および腫瘍
などの過透過性脈管構造を有する器官の間質に蓄積する。
【0072】
ポリマーコーティング
本明細書に記載された治療用ナノ粒子は、コアの磁性材料を覆う（例えば、磁性材料の
表面を覆う）ポリマーコーティングを含有する。ポリマー材料は、１つまたは複数の生物
学的作用物質（例えば、本明細書に記載された、核酸、フルオロフォア、またはターゲテ
ィングペプチドのいずれかなど）を付着し、または結合する（coupling）のに適し得る。
１つまたは複数の生物学的作用物質（例えば、核酸、フルオロフォア、またはターゲティ
ングペプチド）は、化学的結合（coupling）（共有結合）によりポリマーコーティングに
固定することができる。
本明細書に記載された治療用ナノ粒子は、コアの磁性材料を覆う（例えば、磁性材料の
表面を覆う）ポリマーコーティングを含有する。ポリマー材料は、１つまたは複数の生物
学的作用物質（例えば、本明細書に記載された、核酸、フルオロフォア、またはターゲテ
ィングペプチドのいずれかなど）を付着し、または結合する（coupling）のに適し得る。
１つまたは複数の生物学的作用物質（例えば、核酸、フルオロフォア、またはターゲティ
ングペプチド）は、化学的結合（coupling）（共有結合）によりポリマーコーティングに
固定することができる。
【0073】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、磁性材料のコアを、水中で相対的に
安定であるポリマーでコーティングすることを含む方法により形成される。いくつかの実
施形態において、治療用ナノ粒子は、磁性材料をポリマーでコーティングすること、また
は磁性材料を、還元基を有する熱可塑性ポリマー樹脂の中へ吸収併合することを含む方法
により形成される。コーティングはまた、米国特許第５，８３４，１２１号明細書、第５
，３９５，６８８号明細書、第５，３５６，７１３号明細書、第５，３１８，７９７号明
細書、第５，２８３，０７９号明細書、第５，２３２，７８９号明細書、第５，０９１，
２０６号明細書、第４，９６５，００７号明細書、第４，７７４，２６５号明細書、第４
，７７０，１８３号明細書、第４，６５４，２６７号明細書、第４，５５４，０８８号明
細書、第４，４９０，４３６号明細書、第４，３３６，１７３号明細書、および第４，４
２１，６６０号明細書；ならびに国際公開第１０／１１１０６６号パンフレット（それら
の各開示は、参照により本明細書に組み入れられている）に記載された方法を用いて磁性
材料に適用することができる。
安定であるポリマーでコーティングすることを含む方法により形成される。いくつかの実
施形態において、治療用ナノ粒子は、磁性材料をポリマーでコーティングすること、また
は磁性材料を、還元基を有する熱可塑性ポリマー樹脂の中へ吸収併合することを含む方法
により形成される。コーティングはまた、米国特許第５，８３４，１２１号明細書、第５
，３９５，６８８号明細書、第５，３５６，７１３号明細書、第５，３１８，７９７号明
細書、第５，２８３，０７９号明細書、第５，２３２，７８９号明細書、第５，０９１，
２０６号明細書、第４，９６５，００７号明細書、第４，７７４，２６５号明細書、第４
，７７０，１８３号明細書、第４，６５４，２６７号明細書、第４，５５４，０８８号明
細書、第４，４９０，４３６号明細書、第４，３３６，１７３号明細書、および第４，４
２１，６６０号明細書；ならびに国際公開第１０／１１１０６６号パンフレット（それら
の各開示は、参照により本明細書に組み入れられている）に記載された方法を用いて磁性
材料に適用することができる。
【0074】
酸化鉄ナノ粒子の合成のための方法には、例えば、物理的および化学的方法が挙げられ
る。例えば、酸化鉄は、水溶液中にＦｅ２＋およびＦｅ３＋塩の共沈殿により調製するこ
とができる。生じたコアは、マグネタイ（Ｆｅ３Ｏ４）、マグヘマイト（γ－Ｆｅ２Ｏ３
）、またはその２つの混合物からなる。水溶液中の、陰イオン塩含量（塩化物、硝酸塩、
硫酸塩など）、Ｆｅ２＋とＦｅ３＋の比、ｐＨ、およびイオン強度が全て、サイズを調節
するのに役割を果たす。窒素またはアルゴンなどの不活性ガス下での無酸素環境において
その反応を行うことにより、合成されたナノ粒子の酸化を防止し、かつそれらの磁気的性
質を保護することは重要である。コーティング材料は、酸化鉄ナノ粒子のマイクロ粒子へ
の凝集を防止するために共沈殿過程中に加えることができる。当技術分野において知られ
た表面コーティング材料のいくつでも、酸化鉄ナノ粒子を安定化させるために用いること
ができることを熟練実践者は認識しており、その表面コーティング材料の中には、合成お
よび天然ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストラン、ポリビ
ニルピロリドン（ＰＶＰ）、脂肪酸、ポリペプチド、キトサン、ゼラチンなどがある。
る。例えば、酸化鉄は、水溶液中にＦｅ２＋およびＦｅ３＋塩の共沈殿により調製するこ
とができる。生じたコアは、マグネタイ（Ｆｅ３Ｏ４）、マグヘマイト（γ－Ｆｅ２Ｏ３
）、またはその２つの混合物からなる。水溶液中の、陰イオン塩含量（塩化物、硝酸塩、
硫酸塩など）、Ｆｅ２＋とＦｅ３＋の比、ｐＨ、およびイオン強度が全て、サイズを調節
するのに役割を果たす。窒素またはアルゴンなどの不活性ガス下での無酸素環境において
その反応を行うことにより、合成されたナノ粒子の酸化を防止し、かつそれらの磁気的性
質を保護することは重要である。コーティング材料は、酸化鉄ナノ粒子のマイクロ粒子へ
の凝集を防止するために共沈殿過程中に加えることができる。当技術分野において知られ
た表面コーティング材料のいくつでも、酸化鉄ナノ粒子を安定化させるために用いること
ができることを熟練実践者は認識しており、その表面コーティング材料の中には、合成お
よび天然ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストラン、ポリビ
ニルピロリドン（ＰＶＰ）、脂肪酸、ポリペプチド、キトサン、ゼラチンなどがある。
【0075】
例えば、米国特許第４，４２１，６６０号明細書は、無機材料のポリマーコーティング
化粒子が、通常、（１）無機固体を、酸、酸と塩基の組合せ、アルコール、またはポリマ
ー溶液で処理し、（２）処理された無機固体の水性分散体中に付加重合可能モノマーを分
散させ、および（３）生じた分散体をエマルション重合条件に供することにより、調製さ
れることに言及している（１段落目、２１～２７行目）。米国特許第４，４２１，６６０
号明細書はまた、（１）無機固体の別々の粒子の水性コロイド分散体中で疎水性のエマル
ション重合可能モノマーを乳化するステップ、および（２）生じたエマルションをエマル
ション重合条件に供して、疎水性モノマーの不水溶性ポリマーのマトリックス中に分散さ
れた無機固体粒子の安定な流体水性コロイド分散体を形成するステップを含む、無機ナノ
粒子をポリマーでコーティングするための方法を開示している（１段目、４２～５０行目
）。
化粒子が、通常、（１）無機固体を、酸、酸と塩基の組合せ、アルコール、またはポリマ
ー溶液で処理し、（２）処理された無機固体の水性分散体中に付加重合可能モノマーを分
散させ、および（３）生じた分散体をエマルション重合条件に供することにより、調製さ
れることに言及している（１段落目、２１～２７行目）。米国特許第４，４２１，６６０
号明細書はまた、（１）無機固体の別々の粒子の水性コロイド分散体中で疎水性のエマル
ション重合可能モノマーを乳化するステップ、および（２）生じたエマルションをエマル
ション重合条件に供して、疎水性モノマーの不水溶性ポリマーのマトリックス中に分散さ
れた無機固体粒子の安定な流体水性コロイド分散体を形成するステップを含む、無機ナノ
粒子をポリマーでコーティングするための方法を開示している（１段目、４２～５０行目
）。
【0076】
あるいは、サイズの出発必要条件を満たすポリマーコーティング化磁性材料が、商業的
に入手することができる。例えば、市販の超小型超常磁性酸化鉄ナノ粒子には、ＮＣ１０
０１５０ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（Ｎｙｃｏｍｅｄ Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｍｅｒｓｈａｍ
Ｈｅａｌｔｈ）およびＦｅｒｕｍｏｘｙｔｏｌ（ＡＭＡＧ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌｓ、Ｉｎｃ．）が挙げられる。
に入手することができる。例えば、市販の超小型超常磁性酸化鉄ナノ粒子には、ＮＣ１０
０１５０ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（Ｎｙｃｏｍｅｄ Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｍｅｒｓｈａｍ
Ｈｅａｌｔｈ）およびＦｅｒｕｍｏｘｙｔｏｌ（ＡＭＡＧ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌｓ、Ｉｎｃ．）が挙げられる。
【0077】
磁性材料のコアをコーティングするために用いることができる適切なポリマーには、非
限定的に、以下が挙げられる：ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリエーテルウレタ
ン、ポリスルホン、フッ素化または塩素化ポリマー、例えばポリ塩化ビニル、ポリエチレ
ンおよびポリプロピレン、ポリカーボネート、ならびにポリエステル。磁性材料のコアを
コーティングするために用いることができるポリマーの追加の例には、ポリオレフィン、
例えば、ポリブタジエン、ポリジクロロブタジエン、ポリイソプレン、ポリクロロプレン
、ポリビニリデンハライド、ポリビニリデンカーボネート、およびポリフッ素化エチレン
が挙げられる。スチレン／ブタジエン、α－メチルスチレン／ジメチルシロキサン、また
は他のポリシロキサンを含む、いくつかのコポリマーもまた、磁性材料のコアをコーティ
ングするために用いることができる（例えば、ポリジメチルシロキサン、ポリフェニルエ
チルシロキサン、およびポリトリフルオロプロピルメチルシロキサン）。磁性材料のコア
をコーティングするために用いることができる追加のポリマーには、ポリアクリロニトリ
ルまたはアクリロニトリル含有ポリマー、例えば、ポリα－アクリロニトリルコポリマー
、アルキドまたはテルペノイド樹脂、およびポリアルキレンポリスルホネートが挙げられ
る。いくつかの実施形態において、ポリマーコーティングはデキストランである。
限定的に、以下が挙げられる：ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリエーテルウレタ
ン、ポリスルホン、フッ素化または塩素化ポリマー、例えばポリ塩化ビニル、ポリエチレ
ンおよびポリプロピレン、ポリカーボネート、ならびにポリエステル。磁性材料のコアを
コーティングするために用いることができるポリマーの追加の例には、ポリオレフィン、
例えば、ポリブタジエン、ポリジクロロブタジエン、ポリイソプレン、ポリクロロプレン
、ポリビニリデンハライド、ポリビニリデンカーボネート、およびポリフッ素化エチレン
が挙げられる。スチレン／ブタジエン、α－メチルスチレン／ジメチルシロキサン、また
は他のポリシロキサンを含む、いくつかのコポリマーもまた、磁性材料のコアをコーティ
ングするために用いることができる（例えば、ポリジメチルシロキサン、ポリフェニルエ
チルシロキサン、およびポリトリフルオロプロピルメチルシロキサン）。磁性材料のコア
をコーティングするために用いることができる追加のポリマーには、ポリアクリロニトリ
ルまたはアクリロニトリル含有ポリマー、例えば、ポリα－アクリロニトリルコポリマー
、アルキドまたはテルペノイド樹脂、およびポリアルキレンポリスルホネートが挙げられ
る。いくつかの実施形態において、ポリマーコーティングはデキストランである。
【0078】
核酸
提供される治療用ナノ粒子は、ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェック
ポイント分子の配列、例えば、ＰＤ－Ｌ１配列、例えば、配列番号１内の少なくとも１０
個（例えば、少なくとも１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１
８個、１９個、２０個、２１個、または２２個）の連続したヌクレオチドと相補的である
配列を含む少なくとも１つの核酸を含有する。いくつかの実施形態において、共有結合性
に連結された核酸分子は、免疫チェックポイントタンパク質（本明細書に記載された免疫
チェックポイントタンパク質のいずれか）をコードするｍＲＮＡの全部または一部と相補
的である配列を含有する。例えば、共有結合性に連結された核酸は、免疫チェックポイン
トタンパク質（本明細書に記載された免疫チェックポイントタンパク質のいずれか）をコ
ードするヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域の全部または一部と相補的であり得
る。非コード領域（「５’および３’非翻訳領域」）は、遺伝子においてコード領域に隣
接する５’および３’配列であり、アミノ酸へ翻訳されない。いくつかの実施形態におい
て、治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結された核酸は、免疫チェックポイントタンパク質
（本明細書に記載された免疫チェックポイントタンパク質のいずれか）の翻訳開始コドン
またはアミノ酸１～５をコードする配列と相補的である。
提供される治療用ナノ粒子は、ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェック
ポイント分子の配列、例えば、ＰＤ－Ｌ１配列、例えば、配列番号１内の少なくとも１０
個（例えば、少なくとも１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１
８個、１９個、２０個、２１個、または２２個）の連続したヌクレオチドと相補的である
配列を含む少なくとも１つの核酸を含有する。いくつかの実施形態において、共有結合性
に連結された核酸分子は、免疫チェックポイントタンパク質（本明細書に記載された免疫
チェックポイントタンパク質のいずれか）をコードするｍＲＮＡの全部または一部と相補
的である配列を含有する。例えば、共有結合性に連結された核酸は、免疫チェックポイン
トタンパク質（本明細書に記載された免疫チェックポイントタンパク質のいずれか）をコ
ードするヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域の全部または一部と相補的であり得
る。非コード領域（「５’および３’非翻訳領域」）は、遺伝子においてコード領域に隣
接する５’および３’配列であり、アミノ酸へ翻訳されない。いくつかの実施形態におい
て、治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結された核酸は、免疫チェックポイントタンパク質
（本明細書に記載された免疫チェックポイントタンパク質のいずれか）の翻訳開始コドン
またはアミノ酸１～５をコードする配列と相補的である。
【0079】
付着した核酸は、一本鎖または二本鎖であり得る。いくつかの実施形態において、核酸
は、２３ヌクレオチドから５０ヌクレオチドの間（例えば、２３～３０ヌクレオチドの間
、３０～４０ヌクレオチドの間、および４０～５０ヌクレオチドの間）の全長を有する。
いくつかの実施形態において、核酸は、アンチセンスＲＮＡまたはｓｉＲＮＡであり得る
。
は、２３ヌクレオチドから５０ヌクレオチドの間（例えば、２３～３０ヌクレオチドの間
、３０～４０ヌクレオチドの間、および４０～５０ヌクレオチドの間）の全長を有する。
いくつかの実施形態において、核酸は、アンチセンスＲＮＡまたはｓｉＲＮＡであり得る
。
【0080】
アンチセンス核酸分子は、本明細書に記載された治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結す
ることができる。
ることができる。
【0081】
本明細書に提供された配列（例えば、ヒト免疫チェックポイント分子、例えばＰＤ－Ｌ
１についての配列、例えば、配列番号１、ならびに表ＡおよびＢにおける他の配列）に基
づいて、当業者は、いくつかの適切なアンチセンス分子（例えば、免疫チェックポイント
分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１を標的化するアンチセンス分子）のいずれかを容易に選択し、
かつ合成することができる。例えば、ＰＤ－Ｌ１を標的化するアンチセンス核酸は、配列
番号１、または当技術分野において知られたＰＤ－Ｌ１についての配列に存在する少なく
とも１０個（例えば、少なくとも１５個または２０個）の連続したヌクレオチドと相補的
な配列を含有することができる。
１についての配列、例えば、配列番号１、ならびに表ＡおよびＢにおける他の配列）に基
づいて、当業者は、いくつかの適切なアンチセンス分子（例えば、免疫チェックポイント
分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１を標的化するアンチセンス分子）のいずれかを容易に選択し、
かつ合成することができる。例えば、ＰＤ－Ｌ１を標的化するアンチセンス核酸は、配列
番号１、または当技術分野において知られたＰＤ－Ｌ１についての配列に存在する少なく
とも１０個（例えば、少なくとも１５個または２０個）の連続したヌクレオチドと相補的
な配列を含有することができる。
【0082】
アンチセンス核酸は、当技術分野において知られた手順を用いる、化学合成および酵素
ライゲーション反応を用いて、構築することができる。例えば、アンチセンス核酸（例え
ば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはその分
子の生物学的安定性を増加させるように、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間
で形成される二重鎖の物理的安定性を増加させるように設計された改変ヌクレオチド（例
えば、本明細書に記載された改変ヌクレオチドのいずれか）を用いて、化学合成すること
ができ、例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを用いる
ことができる。あるいは、アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス配向にサブクローニ
ングされている（すなわち、挿入された核酸から転写されるＲＮＡが、関心対象となる標
的核酸に対してアンチセンス配向であろう）発現ベクターを用いて生物学的に産生するこ
とができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたアンチセンス核酸分子
は、通常のヌクレオチド相補性により標的核酸とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形
成することができる。
ライゲーション反応を用いて、構築することができる。例えば、アンチセンス核酸（例え
ば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはその分
子の生物学的安定性を増加させるように、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間
で形成される二重鎖の物理的安定性を増加させるように設計された改変ヌクレオチド（例
えば、本明細書に記載された改変ヌクレオチドのいずれか）を用いて、化学合成すること
ができ、例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを用いる
ことができる。あるいは、アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス配向にサブクローニ
ングされている（すなわち、挿入された核酸から転写されるＲＮＡが、関心対象となる標
的核酸に対してアンチセンス配向であろう）発現ベクターを用いて生物学的に産生するこ
とができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたアンチセンス核酸分子
は、通常のヌクレオチド相補性により標的核酸とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形
成することができる。
【0083】
アンチセンス核酸分子は、α－アノマー核酸分子であり得る。α－アノマー核酸分子は
、通常のβ－ユニットに反して、鎖がお互いに平行している、相補性ＲＮＡとの特異的な
二本鎖ハイブリッドを形成する（Gaultier et al., Nucleic Acids Res. 15:6625-6641,
1987）。アンチセンス核酸分子はまた、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド（Inoue et a
l., Nucleic Acids Res., 15:6131-6148, 1987）またはキメラＲＮＡ－ＤＮＡアナログ（
Inoue et al., FEBS Lett. 215:327-330, 1987）を含み得る。
、通常のβ－ユニットに反して、鎖がお互いに平行している、相補性ＲＮＡとの特異的な
二本鎖ハイブリッドを形成する（Gaultier et al., Nucleic Acids Res. 15:6625-6641,
1987）。アンチセンス核酸分子はまた、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド（Inoue et a
l., Nucleic Acids Res., 15:6131-6148, 1987）またはキメラＲＮＡ－ＤＮＡアナログ（
Inoue et al., FEBS Lett. 215:327-330, 1987）を含み得る。
【0084】
いくつかの実施形態において、核酸は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。ＲＮ
Ａｉは、宿主細胞においてＲＮＡが分解される過程である。ＲＮＡの発現を減少させるた
めに、標的ＲＮＡ（例えば、免疫チェックポイント分子、例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）の一
部分に対応する配列を含有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が細胞に導入される。ｄｓＲ
ＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（またはｓｉＲＮＡ）と呼ばれる２１～２３ヌクレオチド長の
二重鎖へ消化され、それが、ヌクレアーゼ複合体と結合して、ＲＮＡ誘導サイレンシング
複合体（またはＲＩＳＣ）として知られているものを形成する。ＲＩＳＣは、内因性標的
ＲＮＡを、前記ｓｉＲＮＡの１つと前記内因性ＲＮＡとの間での塩基対形成相互作用によ
り、標的化する。その後、それは、前記ｓｉＲＮＡの３’末端から約１２ヌクレオチドの
所で前記内因性ＲＮＡを切断する（Sharp et al., Genes Dev. 15:485-490, 2001, and H
ammond et al., Nature Rev. Gen. 2:110-119, 2001参照）。
Ａｉは、宿主細胞においてＲＮＡが分解される過程である。ＲＮＡの発現を減少させるた
めに、標的ＲＮＡ（例えば、免疫チェックポイント分子、例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）の一
部分に対応する配列を含有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が細胞に導入される。ｄｓＲ
ＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（またはｓｉＲＮＡ）と呼ばれる２１～２３ヌクレオチド長の
二重鎖へ消化され、それが、ヌクレアーゼ複合体と結合して、ＲＮＡ誘導サイレンシング
複合体（またはＲＩＳＣ）として知られているものを形成する。ＲＩＳＣは、内因性標的
ＲＮＡを、前記ｓｉＲＮＡの１つと前記内因性ＲＮＡとの間での塩基対形成相互作用によ
り、標的化する。その後、それは、前記ｓｉＲＮＡの３’末端から約１２ヌクレオチドの
所で前記内因性ＲＮＡを切断する（Sharp et al., Genes Dev. 15:485-490, 2001, and H
ammond et al., Nature Rev. Gen. 2:110-119, 2001参照）。
【0085】
標準分子生物学技術を用いて、ｓｉＲＮＡを作製することができる。低分子干渉ＲＮＡ
は、化学合成され、例えばプラスミドなどの鋳型ＤＮＡからＲＮＡを発現することにより
、組換え的に産生され、またはＤｈａｒｍａｃｏｎなどの商業的ベンダーから入手するこ
とができる。ＲＮＡｉを媒介するために用いられるＲＮＡは、ホスホロチオエートヌクレ
オチドなどの改変ヌクレオチド（本明細書に記載された改変ヌクレオチドのいずれか）を
含むことができる。成熟ヒトｍｉＲ－１０ｂのレベルを減少させるために用いられるｓｉ
ＲＮＡ分子は、いくつかの様式によって異なり得る。例えば、それらは、３’ヒドロキシ
ル基、および２１個、２２個、または２３個の連続したヌクレオチドの鎖を含み得る。そ
れらは、平滑末端化され、または３’末端、５’末端、もしくは両端のいずれかにおいて
オーバーハンギング末端を含み得る。例えば、前記ＲＮＡ分子の少なくとも１つの鎖は、
（例えば、ピリミジンヌクレオチド、プリンヌクレオチドに関わらず）長さが約１ヌクレ
オチドから約６ヌクレオチドまで、例えば、１～５、１～３、２～４、または３～５ヌク
レオチドの３’オーバーハングを有し得る。両方の鎖がオーバーハングを含む場合、オー
バーハングの長さは、各鎖について同じまたは異なり得る。ＲＮＡ二重鎖の安定性をさら
に増強するために、３’オーバーハングは、（例えば、アデノシンもしくはグアノシンヌ
クレオチドなどのプリンヌクレオチドを含むこと、またはピリミジンヌクレオチドを改変
ヌクレオチドに置き換えること（例えば、ウリジンの２ヌクレオチド３’オーバーハング
の２’－デオキシチミジンによる置換が許容され、かつＲＮＡｉの効率に影響しない）に
より）分解に対して安定化され得る。関心対象となる標的と十分な相同性を有するという
条件で、任意のｓｉＲＮＡを用いることができる。用いることができるｓｉＲＮＡの長さ
の上限はない（例えば、ｓｉＲＮＡは、約２１～５０個、５０～１００個、１００～２５
０個、２５０～５００個、または５００～１０００個の塩基対の範囲であり得る）。
は、化学合成され、例えばプラスミドなどの鋳型ＤＮＡからＲＮＡを発現することにより
、組換え的に産生され、またはＤｈａｒｍａｃｏｎなどの商業的ベンダーから入手するこ
とができる。ＲＮＡｉを媒介するために用いられるＲＮＡは、ホスホロチオエートヌクレ
オチドなどの改変ヌクレオチド（本明細書に記載された改変ヌクレオチドのいずれか）を
含むことができる。成熟ヒトｍｉＲ－１０ｂのレベルを減少させるために用いられるｓｉ
ＲＮＡ分子は、いくつかの様式によって異なり得る。例えば、それらは、３’ヒドロキシ
ル基、および２１個、２２個、または２３個の連続したヌクレオチドの鎖を含み得る。そ
れらは、平滑末端化され、または３’末端、５’末端、もしくは両端のいずれかにおいて
オーバーハンギング末端を含み得る。例えば、前記ＲＮＡ分子の少なくとも１つの鎖は、
（例えば、ピリミジンヌクレオチド、プリンヌクレオチドに関わらず）長さが約１ヌクレ
オチドから約６ヌクレオチドまで、例えば、１～５、１～３、２～４、または３～５ヌク
レオチドの３’オーバーハングを有し得る。両方の鎖がオーバーハングを含む場合、オー
バーハングの長さは、各鎖について同じまたは異なり得る。ＲＮＡ二重鎖の安定性をさら
に増強するために、３’オーバーハングは、（例えば、アデノシンもしくはグアノシンヌ
クレオチドなどのプリンヌクレオチドを含むこと、またはピリミジンヌクレオチドを改変
ヌクレオチドに置き換えること（例えば、ウリジンの２ヌクレオチド３’オーバーハング
の２’－デオキシチミジンによる置換が許容され、かつＲＮＡｉの効率に影響しない）に
より）分解に対して安定化され得る。関心対象となる標的と十分な相同性を有するという
条件で、任意のｓｉＲＮＡを用いることができる。用いることができるｓｉＲＮＡの長さ
の上限はない（例えば、ｓｉＲＮＡは、約２１～５０個、５０～１００個、１００～２５
０個、２５０～５００個、または５００～１０００個の塩基対の範囲であり得る）。
【0086】
いくつかの実施形態において、核酸分子は、少なくとも１個の改変ヌクレオチド（改変
塩基または糖を含有するヌクレオチド）を含有することができる。いくつかの実施形態に
おいて、核酸分子は、リン酸（ホスホジエステル）バックボーン内に少なくとも１つの改
変を含有することができる。これらの改変の導入は、核酸分子の安定性を増加させ、また
は核酸分子のハイブリダイゼーションもしくは溶解性を向上させることができる。
塩基または糖を含有するヌクレオチド）を含有することができる。いくつかの実施形態に
おいて、核酸分子は、リン酸（ホスホジエステル）バックボーン内に少なくとも１つの改
変を含有することができる。これらの改変の導入は、核酸分子の安定性を増加させ、また
は核酸分子のハイブリダイゼーションもしくは溶解性を向上させることができる。
【0087】
本明細書に記載された分子は、１個または複数（例えば、２個、３個、４個、または５
個）の改変ヌクレオチドを含有することができる。改変ヌクレオチドは、改変塩基または
改変糖を含有することができる。改変塩基の非限定的例には、８－オキソ－Ｎ６－メチル
アデニン、７－デアザキサンチン、７－デアザグアニン、Ｎ４、Ｎ４－エタノシトシン、
Ｎ６，Ｎ６－エタノ－２，６－ジアミノプリン、５－（Ｃ３～Ｃ６）－アルキニル－シト
シン、プソイドイソシトシン、２－ヒドロキシ－５－メチル－４－トリアゾロピリジン、
イソシトシン、イソグアニン、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロ
ウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、
５－（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－
２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β
－Ｄ－ガラクトシルキューオシン（galactosylqueosine）、イノシン、Ｎ６－イソペンテ
ニルアデノシン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン
、２－メチルアデニン、２－メチルグアニ、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、
Ｎ６－アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシ
アミノメチル－２－チオウラシル、β－Ｄ－マンノシルキューオシン、５’－メトキシカ
ルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニ
ルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（wybutoxosine）、プ
ソイドウラシル、キューオシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２
－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メ
チルエステル、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、５－メチル－２－チオウラシル、３－
（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２
，６－ジアミノプリンが挙げられる。
個）の改変ヌクレオチドを含有することができる。改変ヌクレオチドは、改変塩基または
改変糖を含有することができる。改変塩基の非限定的例には、８－オキソ－Ｎ６－メチル
アデニン、７－デアザキサンチン、７－デアザグアニン、Ｎ４、Ｎ４－エタノシトシン、
Ｎ６，Ｎ６－エタノ－２，６－ジアミノプリン、５－（Ｃ３～Ｃ６）－アルキニル－シト
シン、プソイドイソシトシン、２－ヒドロキシ－５－メチル－４－トリアゾロピリジン、
イソシトシン、イソグアニン、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロ
ウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、
５－（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－
２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β
－Ｄ－ガラクトシルキューオシン（galactosylqueosine）、イノシン、Ｎ６－イソペンテ
ニルアデノシン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン
、２－メチルアデニン、２－メチルグアニ、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、
Ｎ６－アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシ
アミノメチル－２－チオウラシル、β－Ｄ－マンノシルキューオシン、５’－メトキシカ
ルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニ
ルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（wybutoxosine）、プ
ソイドウラシル、キューオシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２
－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メ
チルエステル、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、５－メチル－２－チオウラシル、３－
（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２
，６－ジアミノプリンが挙げられる。
【0088】
改変塩基の追加の非限定的例には、（参照により本明細書に組み入れられた）米国特許
第５，４３２，２７２号明細書および第３，６８７，８０８号明細書、Freier et al., N
ucleic Acid Res. 25:4429-4443, 1997；Sanghvi, Antisense Research and Application
, Chapter 15, Ed. S. T. Crooke and B. Lebleu, CRC Press, 1993；Englisch, et al.,
Angewandte Chemie 30:613-722, 1991；Kroschwitz, Concise Encyclopedia of Polymer
Science and Engineering, John Wiley & Sons, pp. 858-859, 1990；ならびにCook, An
ti-Cancer Drug Design 6:585-607, 1991に記載された核酸塩基が挙げられる。改変塩基
の追加の非限定的例には、ユニバーサル塩基（例えば、３－ニトロピロールおよび５－ニ
トロイノドール）が挙げられる。他の改変塩基には、ピレンおよびピリジルオキサゾール
誘導体、ピレニル、ピレニルメチルグリセロール誘導体などが挙げられる。他の好ましい
ユニバーサル塩基には、当技術分野において知られたユニバーサル塩基を含め、ピロロー
ル、ジアゾール、またはトリアゾール誘導体が挙げられる。
第５，４３２，２７２号明細書および第３，６８７，８０８号明細書、Freier et al., N
ucleic Acid Res. 25:4429-4443, 1997；Sanghvi, Antisense Research and Application
, Chapter 15, Ed. S. T. Crooke and B. Lebleu, CRC Press, 1993；Englisch, et al.,
Angewandte Chemie 30:613-722, 1991；Kroschwitz, Concise Encyclopedia of Polymer
Science and Engineering, John Wiley & Sons, pp. 858-859, 1990；ならびにCook, An
ti-Cancer Drug Design 6:585-607, 1991に記載された核酸塩基が挙げられる。改変塩基
の追加の非限定的例には、ユニバーサル塩基（例えば、３－ニトロピロールおよび５－ニ
トロイノドール）が挙げられる。他の改変塩基には、ピレンおよびピリジルオキサゾール
誘導体、ピレニル、ピレニルメチルグリセロール誘導体などが挙げられる。他の好ましい
ユニバーサル塩基には、当技術分野において知られたユニバーサル塩基を含め、ピロロー
ル、ジアゾール、またはトリアゾール誘導体が挙げられる。
【0089】
いくつかの実施形態において、改変ヌクレオチドは、それの糖部分に改変を含有するこ
とができる。改変糖を含有する改変ヌクレオチドの非限定的例は、ロックドヌクレオチド
（ＬＮＡ）である。ＬＮＡモノマーは、（参照により本明細書に組み入れられた）国際公
開第９９／１４２２６号パンフレット、ならびに米国特許出願公開第２０１１００７６６
７５号明細書、第２０１００２８６０４４号明細書、第２０１００２７９８９５号明細書
、第２０１００２６７０１８号明細書、第２０１００２６１１７５号明細書、第２０１０
００３５９６８号明細書、第２００９０２８６７５３号明細書、第２００９００２３５９
４号明細書、第２００８００９６１９１号明細書、第２００３００９２９０５号明細書、
第２００２０１２８３８１号明細書、および第２００２０１１５０８０号明細書に記載さ
れている。ＬＮＡの追加の非限定的例は、（参照により本明細書に組み入れられた）米国
特許第６，０４３，０６０号明細書、米国特許第６，２６８，４９０号明細書、国際公開
第０１／０７４５５号パンフレット、第０１／００６４１号パンフレット、第９８／３９
３５２号パンフレット、第００／５６７４６号パンフレット、第００／５６７４８号、お
よび第００／６６６０４号パンフレット、加えて、Morita et al., Bioorg. Med. Chem.
Lett. 12(1):73-76, 2002；Hakansson et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 11(7):935-93
8, 2001；Koshkin et al., J. Org. Chem. 66(25):8504-8512, 2001；Kvaerno et al., J
. Org. Chem. 66(16):5498-5503, 2001；Hakansson et al., J. Org. Chem. 65(17):5161
-5166, 2000；Kvaerno et al., J. Org. Chem. 65(17):5167-5176, 2000；Pfundheller e
t al., Nucleosides Nucleotides 18(9):2017-2030, 1999；およびKumar et al., Bioorg
. Med. Chem. Lett. 8(16):2219-2222, 1998に開示されている。いくつかの実施形態にお
いて、改変ヌクレオチドは、オキシＬＮＡモノマー、例えば、国際公開第０３／０２０７
３９号に記載されたものである。
とができる。改変糖を含有する改変ヌクレオチドの非限定的例は、ロックドヌクレオチド
（ＬＮＡ）である。ＬＮＡモノマーは、（参照により本明細書に組み入れられた）国際公
開第９９／１４２２６号パンフレット、ならびに米国特許出願公開第２０１１００７６６
７５号明細書、第２０１００２８６０４４号明細書、第２０１００２７９８９５号明細書
、第２０１００２６７０１８号明細書、第２０１００２６１１７５号明細書、第２０１０
００３５９６８号明細書、第２００９０２８６７５３号明細書、第２００９００２３５９
４号明細書、第２００８００９６１９１号明細書、第２００３００９２９０５号明細書、
第２００２０１２８３８１号明細書、および第２００２０１１５０８０号明細書に記載さ
れている。ＬＮＡの追加の非限定的例は、（参照により本明細書に組み入れられた）米国
特許第６，０４３，０６０号明細書、米国特許第６，２６８，４９０号明細書、国際公開
第０１／０７４５５号パンフレット、第０１／００６４１号パンフレット、第９８／３９
３５２号パンフレット、第００／５６７４６号パンフレット、第００／５６７４８号、お
よび第００／６６６０４号パンフレット、加えて、Morita et al., Bioorg. Med. Chem.
Lett. 12(1):73-76, 2002；Hakansson et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 11(7):935-93
8, 2001；Koshkin et al., J. Org. Chem. 66(25):8504-8512, 2001；Kvaerno et al., J
. Org. Chem. 66(16):5498-5503, 2001；Hakansson et al., J. Org. Chem. 65(17):5161
-5166, 2000；Kvaerno et al., J. Org. Chem. 65(17):5167-5176, 2000；Pfundheller e
t al., Nucleosides Nucleotides 18(9):2017-2030, 1999；およびKumar et al., Bioorg
. Med. Chem. Lett. 8(16):2219-2222, 1998に開示されている。いくつかの実施形態にお
いて、改変ヌクレオチドは、オキシＬＮＡモノマー、例えば、国際公開第０３／０２０７
３９号に記載されたものである。
【0090】
改変ヌクレオチドはまた、アンタゴミル（２’－Ｏ－メチル－改変型、コレステロール
コンジュゲート化一本鎖ＲＮＡアナログ）；ＡＬＮ（□－Ｌ－ＬＮＡ）；ＡＤＡ（２’－
Ｎ－アダマンチルメチルカルボニル－２’－アミノ－ＬＮＡ）；ＰＹＲ（２’－Ｎ－ピレ
ニル－１－メチル－２’－アミノ－ＬＮＡ）；ＯＸ（オキセタン－ＬＮＡ）；ＥＮＡ（２
’－Ｏ，４”－Ｃ－エチレン架橋核酸）；ＡＥＮＡ（２’－デオキシ－２’－Ｎ，４’－
Ｃ－エチレン－ＬＮＡ）；ＣＬＮＡ（２’，４’－炭素環式ＬＮＡ）；およびＣＥＮＡ（
２’，４’－炭素環式ＥＮＡ）；ＨＭ－改変ＤＮＡ（４’－Ｃ－ヒドロキシメチル－ＤＮ
Ａ）；２’－置換ＲＮＡ（２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、２’－アミノエトキシメ
チル、２’－アミノプロポキシメチル、２’－アミノエチル、２’－グアニジノエチル、
２’－シアノエチル、２’－アミノプロピルを有する）；ならびにリボース糖環の抜本的
な改変を有するＲＮＡ、例えば、アンロックド核酸（Unlocked Nucleic Acid）（ＵＮＡ
）、アルトリトール核酸（Altritol Nucleic Acid）（ＡＮＡ）、およびヘキシトール核
酸（Hexitol Nucleic Acid）（ＨＮＡ）（Bramsen et al., Nucleic Acids Res. 37:2867
-81, 2009参照）を挙げることができる。
コンジュゲート化一本鎖ＲＮＡアナログ）；ＡＬＮ（□－Ｌ－ＬＮＡ）；ＡＤＡ（２’－
Ｎ－アダマンチルメチルカルボニル－２’－アミノ－ＬＮＡ）；ＰＹＲ（２’－Ｎ－ピレ
ニル－１－メチル－２’－アミノ－ＬＮＡ）；ＯＸ（オキセタン－ＬＮＡ）；ＥＮＡ（２
’－Ｏ，４”－Ｃ－エチレン架橋核酸）；ＡＥＮＡ（２’－デオキシ－２’－Ｎ，４’－
Ｃ－エチレン－ＬＮＡ）；ＣＬＮＡ（２’，４’－炭素環式ＬＮＡ）；およびＣＥＮＡ（
２’，４’－炭素環式ＥＮＡ）；ＨＭ－改変ＤＮＡ（４’－Ｃ－ヒドロキシメチル－ＤＮ
Ａ）；２’－置換ＲＮＡ（２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、２’－アミノエトキシメ
チル、２’－アミノプロポキシメチル、２’－アミノエチル、２’－グアニジノエチル、
２’－シアノエチル、２’－アミノプロピルを有する）；ならびにリボース糖環の抜本的
な改変を有するＲＮＡ、例えば、アンロックド核酸（Unlocked Nucleic Acid）（ＵＮＡ
）、アルトリトール核酸（Altritol Nucleic Acid）（ＡＮＡ）、およびヘキシトール核
酸（Hexitol Nucleic Acid）（ＨＮＡ）（Bramsen et al., Nucleic Acids Res. 37:2867
-81, 2009参照）を挙げることができる。
【0091】
本明細書に記載された分子はまた、ホスホジエステルバックボーン内に改変を含有する
ことができる。例えば、前記分子内の任意の２個の連続した（隣接する）ヌクレオチド間
の少なくとも１つの連結は、以下の群から選択される２～４個の基／原子を含有する部分
によって接続され得る：－ＣＨ２－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲＨ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ＝Ｎ
ＲＨ、＞Ｃ＝Ｓ、－Ｓｉ（Ｒ’’）２－、－ＳＯ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｐ（Ｏ）２－、
－ＰＯ（ＢＨ３）－、－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－、－Ｐ（Ｓ）２－、－ＰＯ（Ｒ’’）－、－ＰＯ
（ＯＣＨ３）－、および－ＰＯ（ＮＨＲＨ）－、ただし、ＲＨは水素およびＣ１～４－ア
ルキルから選択され、Ｒ’’はＣ１～６－アルキルおよびフェニルから選択される。その
ような連結の実例は、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＯ－ＣＨ２－、－ＣＨ
２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２
－ＣＨ＝（次のモノマーへの連結として用いられる場合、Ｒ５を含む）、－ＣＨ２－ＣＨ
２－Ｏ－、－ＮＲＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－ＣＨ２－ＮＲ
Ｈ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－ＣＯ－Ｏ－、－ＮＲＨ－Ｃ
Ｏ－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－ＣＳ－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｃ（＝ＮＲＨ）－ＮＲＨ－、－Ｎ
ＲＨ－ＣＯ－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＯ－Ｏ－、－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－
ＣＨ２－ＣＯ－Ｏ－、－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＯ－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｃ
Ｏ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－Ｃ
Ｈ＝Ｎ－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－Ｏ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ＝（次のモノマーへの連結と
して用いられる場合、Ｒ５を含む）、－ＣＨ２－Ｏ－ＮＲＨ－、－ＣＯ－ＮＲＨ－ＣＨ２
－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－ＣＯ－、－Ｏ－ＮＲＨ－ＣＨ２－、－
Ｏ－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＨ２－Ｓ－、－Ｓ－ＣＨ２－Ｏ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－、－
Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－、－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝（次のモノマーへの連結として用いら
れる場合、Ｒ５を含む）、－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｓ
－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＳＯ－ＣＨ２－、－ＣＨ
２－ＳＯ２－ＣＨ２－、－Ｏ－ＳＯ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ（Ｏ）２
－ＣＨ２－、－Ｏ－Ｓ（Ｏ）２－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｓ（Ｏ）２－ＣＨ２－、－Ｏ－Ｓ
（Ｏ）２－ＣＨ２－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（
Ｓ）２－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）２
－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）２－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）２－Ｓ－
、－Ｓ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）２－Ｓ－、－Ｏ－ＰＯ（Ｒ’’）－Ｏ－、
－Ｏ－ＰＯ（ＯＣＨ３）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ－（ＯＣＨ２ＣＨ３）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（
ＯＣＨ２Ｓ－Ｒ）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（ＢＨ３）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（ＮＨＲＮ）－Ｏ－
、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，ＮＲＨ）
２－Ｏ－、－ＣＨ２－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－ＣＨ２－、および－Ｏ－Ｓ
ｉ（Ｒ’’）２－Ｏ－；それらの中で、－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＲＨ－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－
Ｏ－、－Ｓ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｏ－、－Ｏ
－Ｐ（Ｓ）２－Ｏ－、－ＮＲＨ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，ＮＲＨ）－Ｏ－、－
Ｏ－ＰＯ（Ｒ’’）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（ＣＨ３）－Ｏ－、および－Ｏ－ＰＯ（ＮＨＲＮ
）－Ｏ－であり、ただし、ＲＨは、水素およびＣ１～４－アルキルから選択され、Ｒ’’
は、Ｃ１～６－アルキルおよびフェニルから選択される。さらなる実例は、Mesmaeker et
. al., Curr. Opin. Struct. Biol. 5:343-355, 1995; and Freier et al., Nucleic Aci
ds Research 25:4429-43, 1997に示されている。ヌクレオシド間の連結の左側は、３’位
における置換基Ｐ＊として５員環と結合しており、一方、右側は、次のモノマーの５’位
と結合している。
ことができる。例えば、前記分子内の任意の２個の連続した（隣接する）ヌクレオチド間
の少なくとも１つの連結は、以下の群から選択される２～４個の基／原子を含有する部分
によって接続され得る：－ＣＨ２－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲＨ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ＝Ｎ
ＲＨ、＞Ｃ＝Ｓ、－Ｓｉ（Ｒ’’）２－、－ＳＯ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｐ（Ｏ）２－、
－ＰＯ（ＢＨ３）－、－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－、－Ｐ（Ｓ）２－、－ＰＯ（Ｒ’’）－、－ＰＯ
（ＯＣＨ３）－、および－ＰＯ（ＮＨＲＨ）－、ただし、ＲＨは水素およびＣ１～４－ア
ルキルから選択され、Ｒ’’はＣ１～６－アルキルおよびフェニルから選択される。その
ような連結の実例は、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＯ－ＣＨ２－、－ＣＨ
２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２
－ＣＨ＝（次のモノマーへの連結として用いられる場合、Ｒ５を含む）、－ＣＨ２－ＣＨ
２－Ｏ－、－ＮＲＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－ＣＨ２－ＮＲ
Ｈ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－ＣＯ－Ｏ－、－ＮＲＨ－Ｃ
Ｏ－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－ＣＳ－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｃ（＝ＮＲＨ）－ＮＲＨ－、－Ｎ
ＲＨ－ＣＯ－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＯ－Ｏ－、－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－
ＣＨ２－ＣＯ－Ｏ－、－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＯ－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｃ
Ｏ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＲＨ－、－Ｃ
Ｈ＝Ｎ－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－Ｏ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ＝（次のモノマーへの連結と
して用いられる場合、Ｒ５を含む）、－ＣＨ２－Ｏ－ＮＲＨ－、－ＣＯ－ＮＲＨ－ＣＨ２
－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－ＣＯ－、－Ｏ－ＮＲＨ－ＣＨ２－、－
Ｏ－ＮＲＨ－、－Ｏ－ＣＨ２－Ｓ－、－Ｓ－ＣＨ２－Ｏ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－、－
Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－、－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝（次のモノマーへの連結として用いら
れる場合、Ｒ５を含む）、－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｓ
－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＳＯ－ＣＨ２－、－ＣＨ
２－ＳＯ２－ＣＨ２－、－Ｏ－ＳＯ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ（Ｏ）２
－ＣＨ２－、－Ｏ－Ｓ（Ｏ）２－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｓ（Ｏ）２－ＣＨ２－、－Ｏ－Ｓ
（Ｏ）２－ＣＨ２－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（
Ｓ）２－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）２
－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）２－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）２－Ｓ－
、－Ｓ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）２－Ｓ－、－Ｏ－ＰＯ（Ｒ’’）－Ｏ－、
－Ｏ－ＰＯ（ＯＣＨ３）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ－（ＯＣＨ２ＣＨ３）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（
ＯＣＨ２Ｓ－Ｒ）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（ＢＨ３）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（ＮＨＲＮ）－Ｏ－
、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－ＮＲＨ－、－ＮＲＨ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，ＮＲＨ）
２－Ｏ－、－ＣＨ２－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－ＣＨ２－、および－Ｏ－Ｓ
ｉ（Ｒ’’）２－Ｏ－；それらの中で、－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＲＨ－、－ＣＨ２－ＮＲＨ－
Ｏ－、－Ｓ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，Ｓ）－Ｏ－、－Ｏ
－Ｐ（Ｓ）２－Ｏ－、－ＮＲＨ－Ｐ（Ｏ）２－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ，ＮＲＨ）－Ｏ－、－
Ｏ－ＰＯ（Ｒ’’）－Ｏ－、－Ｏ－ＰＯ（ＣＨ３）－Ｏ－、および－Ｏ－ＰＯ（ＮＨＲＮ
）－Ｏ－であり、ただし、ＲＨは、水素およびＣ１～４－アルキルから選択され、Ｒ’’
は、Ｃ１～６－アルキルおよびフェニルから選択される。さらなる実例は、Mesmaeker et
. al., Curr. Opin. Struct. Biol. 5:343-355, 1995; and Freier et al., Nucleic Aci
ds Research 25:4429-43, 1997に示されている。ヌクレオシド間の連結の左側は、３’位
における置換基Ｐ＊として５員環と結合しており、一方、右側は、次のモノマーの５’位
と結合している。
【0092】
いくつかの実施形態において、核酸のデオキシリボースリン酸バックボーンは、ペプチ
ド核酸を作製するために改変することができる（Hyrup et al., Bioorganic & Medicinal
Chem. 4(1): 5-23, 1996参照）。ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、デオキシリボースリン酸
バックボーンがプソイドペプチドバックボーンによって置き換えられ、４つの天然の核酸
塩基のみが保持されている、核酸模倣体、例えば、ＤＮＡ模倣体である。ＰＮＡの中性バ
ックボーンは、低イオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡへの特異的なハイブリダイゼ
ーションを可能にする。ＰＮＡオリゴマーの合成は、例えば、Hyrup et al., 1996, supr
a; Perry-O’Keefe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:14670-675, 1996に記載
されているような、標準固相ペプチド合成プロトコールを用いて実施することができる。
ド核酸を作製するために改変することができる（Hyrup et al., Bioorganic & Medicinal
Chem. 4(1): 5-23, 1996参照）。ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、デオキシリボースリン酸
バックボーンがプソイドペプチドバックボーンによって置き換えられ、４つの天然の核酸
塩基のみが保持されている、核酸模倣体、例えば、ＤＮＡ模倣体である。ＰＮＡの中性バ
ックボーンは、低イオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡへの特異的なハイブリダイゼ
ーションを可能にする。ＰＮＡオリゴマーの合成は、例えば、Hyrup et al., 1996, supr
a; Perry-O’Keefe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:14670-675, 1996に記載
されているような、標準固相ペプチド合成プロトコールを用いて実施することができる。
【0093】
ＰＮＡは、例えばそれらの安定性または細胞取り込みを増強するために、親油性もしく
は他のヘルパー基をＰＮＡに付着させることにより、ＰＮＡ－ＤＮＡキメラの形成により
、またはリポソームもしくは当技術分野において知られた送達の他の技術の使用により、
改変することができる。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な性質を組み合わせ得るＰＮ
Ａ－ＤＮＡキメラを、作製することができる。そのようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素、例
えば、ＲＮアーゼＨがＤＮＡ部分と相互作用することを可能にし、一方、ＰＮＡ部分は、
高い結合親和性および特異性を与えるだろう。ＰＮＡ－ＤＮＡキメラは、塩基の積み重ね
、核酸塩基間の結合の数、および配向の観点から選択された適切な長さのリンカーを用い
て連結することができる（Hyrup,1996、上記）。ＰＮＡ－ＤＮＡキメラの合成は、Hyrup,
1996、上記、およびFinn et al., Nucleic Acids Res. 24:3357-63, 1996に記載されてい
るように実施することができる。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準ホスホロアミダイトカップリ
ング化学作用および改変ヌクレオシドアナログを用いて固体支持体上で合成することがで
きる。５’－（４－メトキシトリチル）アミノ－５’－デオキシ－チミジンホスホロアミ
ダイトなどの化合物を、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間の連結として用いることができ
る（Mag et al., Nucleic Acids Res., 17:5973-88, 1989）。その後、ＰＮＡモノマーは
、段階的様式でカップリングされて、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメント
を有するキメラ分子を生成する（Finn et al., Nucleic Acids Res. 24:3357-63, 1996）
。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを有するキメラ分子を、
合成することができる（Peterser et al., Bioorganic Med. Chem. Lett. 5:1119-11124,
1975）。
は他のヘルパー基をＰＮＡに付着させることにより、ＰＮＡ－ＤＮＡキメラの形成により
、またはリポソームもしくは当技術分野において知られた送達の他の技術の使用により、
改変することができる。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な性質を組み合わせ得るＰＮ
Ａ－ＤＮＡキメラを、作製することができる。そのようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素、例
えば、ＲＮアーゼＨがＤＮＡ部分と相互作用することを可能にし、一方、ＰＮＡ部分は、
高い結合親和性および特異性を与えるだろう。ＰＮＡ－ＤＮＡキメラは、塩基の積み重ね
、核酸塩基間の結合の数、および配向の観点から選択された適切な長さのリンカーを用い
て連結することができる（Hyrup,1996、上記）。ＰＮＡ－ＤＮＡキメラの合成は、Hyrup,
1996、上記、およびFinn et al., Nucleic Acids Res. 24:3357-63, 1996に記載されてい
るように実施することができる。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準ホスホロアミダイトカップリ
ング化学作用および改変ヌクレオシドアナログを用いて固体支持体上で合成することがで
きる。５’－（４－メトキシトリチル）アミノ－５’－デオキシ－チミジンホスホロアミ
ダイトなどの化合物を、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間の連結として用いることができ
る（Mag et al., Nucleic Acids Res., 17:5973-88, 1989）。その後、ＰＮＡモノマーは
、段階的様式でカップリングされて、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメント
を有するキメラ分子を生成する（Finn et al., Nucleic Acids Res. 24:3357-63, 1996）
。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを有するキメラ分子を、
合成することができる（Peterser et al., Bioorganic Med. Chem. Lett. 5:1119-11124,
1975）。
【0094】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された核酸のいずれかは、当技術分野に
おいて知られた任意の型の改変により、（その核酸がどのように治療用ナノ粒子へ共有結
合性に連結されるかに依存して）３’末端かまたは５’末端のいずれかにおいて改変する
ことができる。例えば、いずれかの末端は、基質表面（ポリマーコーティング）への付着
を助けるために、保護基でキャップされ、可動性連結基に付着し、または反応基に付着し
得る。３’または５’ブロッキング基の非限定的例には以下が挙げられる：２－アミノ－
２－オキシエチル、２－アミノベンゾイル、４－アミノベンゾイル、アセチル、アセチル
オキシ、（アセチルアミノ）メチル、３－（９－アクリジニル）、トリシクロ［３．３．
１．１（３，７）］デカ－１－イルオキシ、２－アミノエチル、プロペニル、（９－アン
トラセニルメトキシ）カルボニル、（１，１－ジメチルプロポキシ）カルボニル、（１，
１－ジメチルプロポキシ）カルボニル、［１－メチル－１－［４－（フェニルアゾ）フェ
ニル］エトキシ］カルボニル、ブロモアセチル、（ベンゾイルアミノ）メチル、（２－ブ
ロモエトキシ）カルボニル、（ジフェニルメトキシ）カルボニル、１－メチル－３－オキ
ソ－３－フェニル－１－プロペニル、（３－ブロモ－２－ニトロフェニル）チオ、（１，
１－ジメチルエトキシ）カルボニル、［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］ア
ミノ］エチル、２－（フェニルメトキシ）フェノキシ、（１＝［１，１’－ビフェニル］
－４－イル－１－メチルエトキシ）カルボニル、ブロモ、（４－ブロモフェニル）スルホ
ニル、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル、［（フェニルメチル）チオ］カルボニル、
［（フェニルメチル）チオ］メチル、２－メチルプロピル、１，１－ジメチルエチル、ベ
ンゾイル、ジフェニルメチル、フェニルメチル、カルボキシアセチル、アミノカルボニル
、クロロジフルオロアセチル、トリフルオロメチル、シクロヘキシルカルボニル、シクロ
ヘプチル、シクロヘキシル、シクロヘキシルアセチル、クロロ、カルボキシメチル、シク
ロペンチルカルボニル、シクロペンチル、シクロプロピルメチル、エトキシカルボニル、
エチル、フルオロ、ホルミル、１－オキソヘキシル、ヨード、メチル、２－メトキシ－２
－オキソエチル、ニトロ、アジド、フェニル、２－カルボキシベンゾイル、４－ピリジニ
ルメチル、２－ピペリジニル、プロピル、１－メチルエチル、スルホ、およびエテニル。
５’および３’ブロッキング基の追加の例は当技術分野において知られている。いくつか
の実施形態において、５’または３’ブロッキング基は、その分子のヌクレアーゼ分解を
防止する。
おいて知られた任意の型の改変により、（その核酸がどのように治療用ナノ粒子へ共有結
合性に連結されるかに依存して）３’末端かまたは５’末端のいずれかにおいて改変する
ことができる。例えば、いずれかの末端は、基質表面（ポリマーコーティング）への付着
を助けるために、保護基でキャップされ、可動性連結基に付着し、または反応基に付着し
得る。３’または５’ブロッキング基の非限定的例には以下が挙げられる：２－アミノ－
２－オキシエチル、２－アミノベンゾイル、４－アミノベンゾイル、アセチル、アセチル
オキシ、（アセチルアミノ）メチル、３－（９－アクリジニル）、トリシクロ［３．３．
１．１（３，７）］デカ－１－イルオキシ、２－アミノエチル、プロペニル、（９－アン
トラセニルメトキシ）カルボニル、（１，１－ジメチルプロポキシ）カルボニル、（１，
１－ジメチルプロポキシ）カルボニル、［１－メチル－１－［４－（フェニルアゾ）フェ
ニル］エトキシ］カルボニル、ブロモアセチル、（ベンゾイルアミノ）メチル、（２－ブ
ロモエトキシ）カルボニル、（ジフェニルメトキシ）カルボニル、１－メチル－３－オキ
ソ－３－フェニル－１－プロペニル、（３－ブロモ－２－ニトロフェニル）チオ、（１，
１－ジメチルエトキシ）カルボニル、［［（１，１－ジメチルエトキシ）カルボニル］ア
ミノ］エチル、２－（フェニルメトキシ）フェノキシ、（１＝［１，１’－ビフェニル］
－４－イル－１－メチルエトキシ）カルボニル、ブロモ、（４－ブロモフェニル）スルホ
ニル、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル、［（フェニルメチル）チオ］カルボニル、
［（フェニルメチル）チオ］メチル、２－メチルプロピル、１，１－ジメチルエチル、ベ
ンゾイル、ジフェニルメチル、フェニルメチル、カルボキシアセチル、アミノカルボニル
、クロロジフルオロアセチル、トリフルオロメチル、シクロヘキシルカルボニル、シクロ
ヘプチル、シクロヘキシル、シクロヘキシルアセチル、クロロ、カルボキシメチル、シク
ロペンチルカルボニル、シクロペンチル、シクロプロピルメチル、エトキシカルボニル、
エチル、フルオロ、ホルミル、１－オキソヘキシル、ヨード、メチル、２－メトキシ－２
－オキソエチル、ニトロ、アジド、フェニル、２－カルボキシベンゾイル、４－ピリジニ
ルメチル、２－ピペリジニル、プロピル、１－メチルエチル、スルホ、およびエテニル。
５’および３’ブロッキング基の追加の例は当技術分野において知られている。いくつか
の実施形態において、５’または３’ブロッキング基は、その分子のヌクレアーゼ分解を
防止する。
【0095】
本明細書に記載された核酸は、核酸を合成するための、当技術分野において知られた任
意の方法を用いて、合成することができる（例えば、Usman et al., J. Am. Chem. Soc.
109:7845, 1987；Scaringe et al., Nucleic Acid Res. 18:5433, 1990；Wincott et al.
, Methods Mol. Biol. 74:59, 1997；およびMilligan, Nucleic Acid Res. 21:8783, 198
7参照）。これらは、典型的には、一般的な核酸保護基およびカップリング基を用いる。
合成は、この目的のために設計された市販の装置、例えば、３９４ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．シンセサイザーで、その製造会社により供給されたプロト
コールを用いて、実施することができる。本明細書に記載された分子を合成するための追
加の方法は、当技術分野において知られている。あるいは、核酸は、オリゴヌクレオチド
を合成する商業的ベンダーに特別に注文することができる。
意の方法を用いて、合成することができる（例えば、Usman et al., J. Am. Chem. Soc.
109:7845, 1987；Scaringe et al., Nucleic Acid Res. 18:5433, 1990；Wincott et al.
, Methods Mol. Biol. 74:59, 1997；およびMilligan, Nucleic Acid Res. 21:8783, 198
7参照）。これらは、典型的には、一般的な核酸保護基およびカップリング基を用いる。
合成は、この目的のために設計された市販の装置、例えば、３９４ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．シンセサイザーで、その製造会社により供給されたプロト
コールを用いて、実施することができる。本明細書に記載された分子を合成するための追
加の方法は、当技術分野において知られている。あるいは、核酸は、オリゴヌクレオチド
を合成する商業的ベンダーに特別に注文することができる。
【0096】
いくつかの実施形態において、核酸は、それの５’末端で治療用ナノ粒子に付着してい
る。いくつかの実施形態において、核酸は、それの３’末端で治療用ナノ粒子に付着して
いる。いくつかの実施形態において、核酸は、核酸に存在する塩基を通して治療用ナノ粒
子に付着している。
る。いくつかの実施形態において、核酸は、それの３’末端で治療用ナノ粒子に付着して
いる。いくつかの実施形態において、核酸は、核酸に存在する塩基を通して治療用ナノ粒
子に付着している。
【0097】
いくつかの実施形態において、核酸（例えば、本明細書に記載された核酸のいずれか）
は、チオエーテル結合またはジスルフィド結合を含有する化学的部分を通して治療用ナノ
粒子に（例えば、治療用ナノ粒子のポリマーコーティングに）付着している。いくつかの
実施形態において、核酸は、アミド結合を含有する化学的部分を通して治療用ナノ粒子に
付着している。核酸を治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結するために用いることができる
追加の化学的部分は当技術分野において知られている。
は、チオエーテル結合またはジスルフィド結合を含有する化学的部分を通して治療用ナノ
粒子に（例えば、治療用ナノ粒子のポリマーコーティングに）付着している。いくつかの
実施形態において、核酸は、アミド結合を含有する化学的部分を通して治療用ナノ粒子に
付着している。核酸を治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結するために用いることができる
追加の化学的部分は当技術分野において知られている。
【0098】
核酸を治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結するために、様々な異なる方法を用いること
ができる。核酸を磁性粒子に連結するために用いることができる方法の非限定的例は、欧
州特許出願公開第０９３７０９７号明細書；米国特許第ＲＥ４１００５号明細書；Lund e
t al., Nucleic Acid Res. 16:10861, 1998；Todt et al., Methods Mol. Biol. 529:81-
100, 2009；Brody et al., J. Biotechnol. 74:5-13, 2000；Ghosh et al., Nucleic Aci
ds Res. 15:5353-5372, 1987；米国特許第５，９００，４８１号明細書；米国特許第７，
５６９，３４１号明細書；米国特許第６，９９５，２４８号明細書；米国特許第６，８１
８，３９４号明細書；米国特許第６，８１１，９８０号明細書；米国特許第５，９００，
４８１号明細書；および米国特許第４，８１８，６８１号明細書（それらのそれぞれは、
全体として参照により組み入れられている）に記載されている。いくつかの実施形態にお
いて、核酸の治療用ナノ粒子への末端付着のためにカルボジイミドが用いられる。いくつ
かの実施形態において、核酸は、治療用ナノ粒子の表面上に存在する活性化部分とのそれ
の塩基のうちの１つの反応（例えば、治療用ナノ粒子の表面上の求核性部分との求電子性
塩基の反応、または治療用ナノ粒子の表面上の求電子性残基との求核性塩基の反応）を通
して、治療用ナノ粒子に付着している。いくつかの実施形態において、５’－ＮＨ２改変
核酸は、ＣＮＢｒ活性化ヒドロキシル基を含有する治療用ナノ粒子と付着している（例え
ば、Ｌｕｎｄら、上記参照）。アミノ改変核酸を治療用ナノ粒子に付着させるための追加
の方法は下に記載されている。いくつかの実施形態において、５’－リン酸核酸は、カル
ボジイミドの存在下でヒドロキシル基を含有する治療用ナノ粒子に付着している（例えば
、Ｌｕｎｄら、上記参照）。核酸を治療用ナノ粒子に付着させる他の方法には、治療用ナ
ノ粒子上のＮＨ２基への５’－リン酸核酸のカルボジイミド媒介性付着、およびカルボキ
シル基を有する治療用ナノ粒子への５’－ＮＨ２核酸のカルボジイミド媒介性付着が挙げ
られる（例えば、Ｌｕｎｄら、上記参照）。
ができる。核酸を磁性粒子に連結するために用いることができる方法の非限定的例は、欧
州特許出願公開第０９３７０９７号明細書；米国特許第ＲＥ４１００５号明細書；Lund e
t al., Nucleic Acid Res. 16:10861, 1998；Todt et al., Methods Mol. Biol. 529:81-
100, 2009；Brody et al., J. Biotechnol. 74:5-13, 2000；Ghosh et al., Nucleic Aci
ds Res. 15:5353-5372, 1987；米国特許第５，９００，４８１号明細書；米国特許第７，
５６９，３４１号明細書；米国特許第６，９９５，２４８号明細書；米国特許第６，８１
８，３９４号明細書；米国特許第６，８１１，９８０号明細書；米国特許第５，９００，
４８１号明細書；および米国特許第４，８１８，６８１号明細書（それらのそれぞれは、
全体として参照により組み入れられている）に記載されている。いくつかの実施形態にお
いて、核酸の治療用ナノ粒子への末端付着のためにカルボジイミドが用いられる。いくつ
かの実施形態において、核酸は、治療用ナノ粒子の表面上に存在する活性化部分とのそれ
の塩基のうちの１つの反応（例えば、治療用ナノ粒子の表面上の求核性部分との求電子性
塩基の反応、または治療用ナノ粒子の表面上の求電子性残基との求核性塩基の反応）を通
して、治療用ナノ粒子に付着している。いくつかの実施形態において、５’－ＮＨ２改変
核酸は、ＣＮＢｒ活性化ヒドロキシル基を含有する治療用ナノ粒子と付着している（例え
ば、Ｌｕｎｄら、上記参照）。アミノ改変核酸を治療用ナノ粒子に付着させるための追加
の方法は下に記載されている。いくつかの実施形態において、５’－リン酸核酸は、カル
ボジイミドの存在下でヒドロキシル基を含有する治療用ナノ粒子に付着している（例えば
、Ｌｕｎｄら、上記参照）。核酸を治療用ナノ粒子に付着させる他の方法には、治療用ナ
ノ粒子上のＮＨ２基への５’－リン酸核酸のカルボジイミド媒介性付着、およびカルボキ
シル基を有する治療用ナノ粒子への５’－ＮＨ２核酸のカルボジイミド媒介性付着が挙げ
られる（例えば、Ｌｕｎｄら、上記参照）。
【0099】
例示的な方法において、反応性アミンまたは反応性チオール基を含有する核酸を作製す
ることができる。核酸におけるアミンまたはチオールは、別の反応基に連結することがで
きる。この反応を実施するための２つの共通したストラテジーは、ホモ二官能性連結と呼
ばれる、核酸を、類似した反応性部分へ（アミンからアミンへ、またはチオールからチオ
ールへ）連結すること、またはヘテロ二官能性連結として知られた、核酸を逆の基へ（ア
ミンからチオールへ、またはチオールからアミンへ）連結することである。両方の技術が
、核酸を治療用ナノ粒子に付着させるために用いることができる（例えば、Misra et al.
, Bioorg. Med. Chem. Lett. 18:5217-5221, 2008；Mirsa et al., Anal. Biochem. 369:
248-255, 2007；Mirsa et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:3749-3753, 2007；および
Choithani et al., Methods Mol Biol. 381:133-163, 2007参照）。
ることができる。核酸におけるアミンまたはチオールは、別の反応基に連結することがで
きる。この反応を実施するための２つの共通したストラテジーは、ホモ二官能性連結と呼
ばれる、核酸を、類似した反応性部分へ（アミンからアミンへ、またはチオールからチオ
ールへ）連結すること、またはヘテロ二官能性連結として知られた、核酸を逆の基へ（ア
ミンからチオールへ、またはチオールからアミンへ）連結することである。両方の技術が
、核酸を治療用ナノ粒子に付着させるために用いることができる（例えば、Misra et al.
, Bioorg. Med. Chem. Lett. 18:5217-5221, 2008；Mirsa et al., Anal. Biochem. 369:
248-255, 2007；Mirsa et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:3749-3753, 2007；および
Choithani et al., Methods Mol Biol. 381:133-163, 2007参照）。
【0100】
特にアミン基についての、伝統的な付着技術は、ホモ二官能性連結に頼っている。最も
一般的な技術の一つは、グルタルアルデヒドなどのビスアルデヒドの使用である。合成核
酸プローブ（ＳＮＡＰ）テクノロジーとしてＳｙｎｇｅｎｅ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ
）により商品化されたジスクシンイミジル基質（ＤＳＳ）、または試薬ｐ－フェニレンジ
イソチオシアネートもまた、核酸と治療用ナノ粒子との間の共有結合性連結を生じさせる
ために用いることができる。Ｎ，Ｎ’－ｏ－フェニレンジマレイミドがチオール基を架橋
するために用いることができる。ホモ二官能性架橋剤の全部に関して、核酸は、最初に活
性化され、その後、治療用ナノ粒子に付加される（例えば、Swami et al., Int. J. Phar
m. 374:125-138, 2009, Todt et al., Methods Mol. Biol. 529:81-100, 2009；およびLi
manskii, Biofizika 51:225-235, 2006参照）。
一般的な技術の一つは、グルタルアルデヒドなどのビスアルデヒドの使用である。合成核
酸プローブ（ＳＮＡＰ）テクノロジーとしてＳｙｎｇｅｎｅ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ
）により商品化されたジスクシンイミジル基質（ＤＳＳ）、または試薬ｐ－フェニレンジ
イソチオシアネートもまた、核酸と治療用ナノ粒子との間の共有結合性連結を生じさせる
ために用いることができる。Ｎ，Ｎ’－ｏ－フェニレンジマレイミドがチオール基を架橋
するために用いることができる。ホモ二官能性架橋剤の全部に関して、核酸は、最初に活
性化され、その後、治療用ナノ粒子に付加される（例えば、Swami et al., Int. J. Phar
m. 374:125-138, 2009, Todt et al., Methods Mol. Biol. 529:81-100, 2009；およびLi
manskii, Biofizika 51:225-235, 2006参照）。
【0101】
ヘテロ二官能性リンカーもまた、核酸を治療用ナノ粒子に付着させるために用いること
ができる。例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート
（ＳＰＤＰ）は、最初に、一級アミンに連結して、ジチオール改変化合物を生じる。その
後、これは、チオールと反応して、ピリジルチオールをその入ってきたチオールと交換す
ることができる（例えば、Nostrum et al., J. Control Release 15;153(1):93-102, 201
1、およびBerthold et al., Bioconjug. Chem. 21:1933-1938, 2010参照）。
ができる。例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート
（ＳＰＤＰ）は、最初に、一級アミンに連結して、ジチオール改変化合物を生じる。その
後、これは、チオールと反応して、ピリジルチオールをその入ってきたチオールと交換す
ることができる（例えば、Nostrum et al., J. Control Release 15;153(1):93-102, 201
1、およびBerthold et al., Bioconjug. Chem. 21:1933-1938, 2010参照）。
【0102】
チオール使用についての代替アプローチは、チオール交換反応である。チオール化核酸
がジスルフィド治療用ナノ粒子へ導入された場合には、核酸がジスルフィド結合により治
療用ナノ粒子と共有結合することをもたらす、ジスルフィド交換反応が起こり得る。多数
の潜在的架橋化学作用が、アミンとチオールのヘテロ二官能性架橋に利用できる。一般的
に、これらの手順は、チオール化ヌクレオチドと共に用いられている。典型的に利用され
ている試薬は、ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＭＢＳ（ｍ－マレイ
ミドベンゾイル－Ｎ－スクシンイミドエステル）、およびＳＰＤＰ（ピリジルジスルフィ
ド系）である。一般的に用いられるヘテロ二官能性リンカーは、アミノ化核酸に頼ってい
る。核酸を治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結するための追加の方法は、当技術分野にお
いて知られている。
がジスルフィド治療用ナノ粒子へ導入された場合には、核酸がジスルフィド結合により治
療用ナノ粒子と共有結合することをもたらす、ジスルフィド交換反応が起こり得る。多数
の潜在的架橋化学作用が、アミンとチオールのヘテロ二官能性架橋に利用できる。一般的
に、これらの手順は、チオール化ヌクレオチドと共に用いられている。典型的に利用され
ている試薬は、ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＭＢＳ（ｍ－マレイ
ミドベンゾイル－Ｎ－スクシンイミドエステル）、およびＳＰＤＰ（ピリジルジスルフィ
ド系）である。一般的に用いられるヘテロ二官能性リンカーは、アミノ化核酸に頼ってい
る。核酸を治療用ナノ粒子へ共有結合性に連結するための追加の方法は、当技術分野にお
いて知られている。
【0103】
ターゲティングペプチド
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子はさらに、例えば国際公開第２０１３／
０１６１２６号パンフレットに記載されているような、共有結合性に連結されたターゲテ
ィングペプチドを含有する。用語「ターゲティングペプチド」とは、標的細胞（例えば、
癌細胞）の形質膜中または形質膜上に存在する分子（例えば、タンパク質、糖、もしくは
脂質、またはそれらの組合せ）によって結合されるペプチドを意味する。本明細書に記載
されているように、ターゲティングペプチドは、第２の分子または組成物（例えば、本明
細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）へ共有結合性に連結されて、その第２の分
子または組成物を標的細胞（例えば、癌細胞）へ標的化することができる。いくつかの実
施形態において、第２の分子または組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒
子のいずれか）へ共有結合性に連結されているターゲティングペプチドは、標的化された
細胞による第２の分子または組成物の取り込み（例えば、エンドサイトーシスまたはピノ
サイトーシスによる細胞取り込み）を生じる。ターゲティングペプチドの非限定的例は本
明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、Ｒ
ＧＤペプチド、ＥＰＰＴペプチド、ＮＹＬＨＮＨＰＹＧＴＶＧ（配列番号２）、ＳＮＰＦ
ＳＫＰＹＧＬＴＶ（配列番号３）、ＧＬＨＥＳＴＦＴＱＲＲＬ（配列番号４）、ＹＰＨＹ
ＳＬＰＧＳＳＴＬ（配列番号５）、ＳＳＬＥＰＷＨＲＴＴＳＲ（配列番号６）、ＬＰＬＡ
ＬＰＲＨＮＡＳＶ（配列番号７）、またはβＡｌａ－（Ａｒｇ）７－Ｃｙｓ（配列番号８
）を含有する。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、ジスルフィド
結合を含有する化学的部分を通してナノ粒子へ共有結合性に連結されている。いくつかの
実施形態において、治療用ナノ粒子は、磁性である。ターゲティングペプチド、およびそ
れらをナノ粒子に付着させるための方法の追加の例は、当技術分野において知られており
、例えば、国際公開第２０１３／０１６１２６号パンフレットを参照されたい。
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子はさらに、例えば国際公開第２０１３／
０１６１２６号パンフレットに記載されているような、共有結合性に連結されたターゲテ
ィングペプチドを含有する。用語「ターゲティングペプチド」とは、標的細胞（例えば、
癌細胞）の形質膜中または形質膜上に存在する分子（例えば、タンパク質、糖、もしくは
脂質、またはそれらの組合せ）によって結合されるペプチドを意味する。本明細書に記載
されているように、ターゲティングペプチドは、第２の分子または組成物（例えば、本明
細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）へ共有結合性に連結されて、その第２の分
子または組成物を標的細胞（例えば、癌細胞）へ標的化することができる。いくつかの実
施形態において、第２の分子または組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒
子のいずれか）へ共有結合性に連結されているターゲティングペプチドは、標的化された
細胞による第２の分子または組成物の取り込み（例えば、エンドサイトーシスまたはピノ
サイトーシスによる細胞取り込み）を生じる。ターゲティングペプチドの非限定的例は本
明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、Ｒ
ＧＤペプチド、ＥＰＰＴペプチド、ＮＹＬＨＮＨＰＹＧＴＶＧ（配列番号２）、ＳＮＰＦ
ＳＫＰＹＧＬＴＶ（配列番号３）、ＧＬＨＥＳＴＦＴＱＲＲＬ（配列番号４）、ＹＰＨＹ
ＳＬＰＧＳＳＴＬ（配列番号５）、ＳＳＬＥＰＷＨＲＴＴＳＲ（配列番号６）、ＬＰＬＡ
ＬＰＲＨＮＡＳＶ（配列番号７）、またはβＡｌａ－（Ａｒｇ）７－Ｃｙｓ（配列番号８
）を含有する。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、ジスルフィド
結合を含有する化学的部分を通してナノ粒子へ共有結合性に連結されている。いくつかの
実施形態において、治療用ナノ粒子は、磁性である。ターゲティングペプチド、およびそ
れらをナノ粒子に付着させるための方法の追加の例は、当技術分野において知られており
、例えば、国際公開第２０１３／０１６１２６号パンフレットを参照されたい。
【0104】
薬学的組成物
本明細書に記載されているような治療用ナノ粒子を含有する薬学的組成物もまた本明細
書に提供される。本明細書に記載されたいずれかの型の治療用ナノ粒子の２つ以上（例え
ば、２つ、３つ、または４つ）は、任意の組合せで薬学的組成物中に存在することができ
る。薬学的組成物は、当技術分野において知られた任意の様式で製剤化することができる
。
本明細書に記載されているような治療用ナノ粒子を含有する薬学的組成物もまた本明細
書に提供される。本明細書に記載されたいずれかの型の治療用ナノ粒子の２つ以上（例え
ば、２つ、３つ、または４つ）は、任意の組合せで薬学的組成物中に存在することができ
る。薬学的組成物は、当技術分野において知られた任意の様式で製剤化することができる
。
【0105】
薬学的組成物は、それらの意図された投与経路（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮
内、皮下、または腹腔内）に適合するように製剤化される。前記組成物は、滅菌希釈剤（
例えば、滅菌水または食塩水）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピ
レングリコールもしくは他の合成溶媒、抗細菌もしくは抗真菌剤、例えば、ベンジルアル
コールもしくはメチルパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメ
ロサールなど、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウム、キレ
ート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、バッファー、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、
もしくはリン酸塩、および等張剤、例えば、糖（例えば、デキストロース）、ポリアルコ
ール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）、または塩（例えば、塩化ナトリウム
）、またはそれらの任意の組合せを含み得る。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容さ
れる担体として用いることができる（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書参
照）。前記組成物の調製物は、製剤化され、アンプル、使い捨てシリンジ、または複数回
用量バイアル中に封入され得る。（例えば、注射製剤においてのように）必要な場合、適
切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングまたは表面活性剤の使用により、維
持することができる。治療用ナノ粒子の吸収は、吸収を遅らせる作用物質（例えば、モノ
ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を含むことにより延ばすことができる。ある
いは、徐放は、生分解性、生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無
水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ酢酸；Ａｌｚａ
ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）
を含むことができる植込錠およびマイクロカプセル化送達系により達成することができる
。
内、皮下、または腹腔内）に適合するように製剤化される。前記組成物は、滅菌希釈剤（
例えば、滅菌水または食塩水）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピ
レングリコールもしくは他の合成溶媒、抗細菌もしくは抗真菌剤、例えば、ベンジルアル
コールもしくはメチルパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメ
ロサールなど、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウム、キレ
ート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、バッファー、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、
もしくはリン酸塩、および等張剤、例えば、糖（例えば、デキストロース）、ポリアルコ
ール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）、または塩（例えば、塩化ナトリウム
）、またはそれらの任意の組合せを含み得る。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容さ
れる担体として用いることができる（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書参
照）。前記組成物の調製物は、製剤化され、アンプル、使い捨てシリンジ、または複数回
用量バイアル中に封入され得る。（例えば、注射製剤においてのように）必要な場合、適
切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングまたは表面活性剤の使用により、維
持することができる。治療用ナノ粒子の吸収は、吸収を遅らせる作用物質（例えば、モノ
ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を含むことにより延ばすことができる。ある
いは、徐放は、生分解性、生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無
水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ酢酸；Ａｌｚａ
ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）
を含むことができる植込錠およびマイクロカプセル化送達系により達成することができる
。
【0106】
本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれかの１つまたは複数を含有する組成物は
、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内）投与用に用量
単位形（すなわち、投与の簡便さおよび用量の均一性のための予め決められた量の活性化
合物を含有する、物理的に別々の単位）で製剤化することができる。
、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内）投与用に用量
単位形（すなわち、投与の簡便さおよび用量の均一性のための予め決められた量の活性化
合物を含有する、物理的に別々の単位）で製剤化することができる。
【0107】
組成物の毒性および治療効果は、細胞培養物または実験動物（例えば、サル）において
標準薬学的手順により決定することができる。例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死性
の用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的有効な用量）：ＬＤ５０：ＥＤ５
０の比である治療係数を決定することができる。高い治療係数を示す作用物質が好ましい
。作用物質が望ましくない副作用を示す場合、潜在的損傷を最小限にする（すなわち、望
まれない副作用を低下させる）ように気をつけるべきである。毒性および治療効果は、他
の標準薬学的手順により決定することができる。
標準薬学的手順により決定することができる。例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死性
の用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的有効な用量）：ＬＤ５０：ＥＤ５
０の比である治療係数を決定することができる。高い治療係数を示す作用物質が好ましい
。作用物質が望ましくない副作用を示す場合、潜在的損傷を最小限にする（すなわち、望
まれない副作用を低下させる）ように気をつけるべきである。毒性および治療効果は、他
の標準薬学的手順により決定することができる。
【0108】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、対象（例えば、ヒト）におけ
る使用のための任意の所定の作用物質の適切な用量を製剤化することにおいて用いること
ができる。１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）の治療用ナノ粒子
（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）の治療的有効量は、（例えば、同じ
疾患を有するが、処置を受けていない、もしくは異なる処置を受けた対照の対象、または
処置前の同じ対象と比較して、）対象（例えば、ヒト）において、癌（例えば、乳癌）を
有する対象における癌細胞浸潤もしくは転移を減少させ、対象においてリンパ節における
転移性癌を処置し、対象においてリンパ節における転移性腫瘍サイズを減少もしくは安定
化させ、対象においてリンパ節における転移性腫瘍成長の速度を減少させ、対象（例えば
、ヒト）においてリンパ節における転移性癌の１つもしくは複数の症状の重症度、頻度、
および／もしくは持続期間を減少させ、または対象においてリンパ節における転移性癌の
症状の数を減少させる量である。
る使用のための任意の所定の作用物質の適切な用量を製剤化することにおいて用いること
ができる。１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）の治療用ナノ粒子
（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）の治療的有効量は、（例えば、同じ
疾患を有するが、処置を受けていない、もしくは異なる処置を受けた対照の対象、または
処置前の同じ対象と比較して、）対象（例えば、ヒト）において、癌（例えば、乳癌）を
有する対象における癌細胞浸潤もしくは転移を減少させ、対象においてリンパ節における
転移性癌を処置し、対象においてリンパ節における転移性腫瘍サイズを減少もしくは安定
化させ、対象においてリンパ節における転移性腫瘍成長の速度を減少させ、対象（例えば
、ヒト）においてリンパ節における転移性癌の１つもしくは複数の症状の重症度、頻度、
および／もしくは持続期間を減少させ、または対象においてリンパ節における転移性癌の
症状の数を減少させる量である。
【0109】
本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれかの有効性および投薬は、当技術分野に
おいて知られた方法を用いて、加えて、対象（例えば、ヒト）においてのリンパ節におけ
る転移性癌の１つまたは複数の症状の観察により、医療専門家によって決定することがで
きる。ある特定の因子（例えば、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の一般的健
康および／または年齢、ならびに他の疾患の存在）が、対象を効果的に処置するのに必要
とされる用量およびタイミングに影響する場合がある。
おいて知られた方法を用いて、加えて、対象（例えば、ヒト）においてのリンパ節におけ
る転移性癌の１つまたは複数の症状の観察により、医療専門家によって決定することがで
きる。ある特定の因子（例えば、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の一般的健
康および／または年齢、ならびに他の疾患の存在）が、対象を効果的に処置するのに必要
とされる用量およびタイミングに影響する場合がある。
【0110】
例示的な用量には、対象の体重の１キログラムあたりの、本明細書に記載された治療用
ナノ粒子のいずれかのミリグラムまたはマイクログラム量が挙げられる。これらの用量は
幅広い範囲を網羅するが、本明細書に記載された治療用ナノ粒子を含む治療剤が、それら
の効力によって異なることを当業者は理解しており、有効量は、当技術分野において知ら
れた方法によって決定することができる。典型的には、相対的に低い用量が最初に投与さ
れ、担当医療専門家（治療適用の場合）または研究者（まだ開発段階で研究している時）
は、続いて、かつ徐々に、適切な応答が得られるまで用量を増加させることができる。加
えて、任意の特定の対象についての特定の用量レベルは、用いられる特定の化合物の活性
、対象の年齢、体重、一般的な健康、性別、および食事、投与の時点、投与の経路、排泄
速度、およびインビボでの治療用ナノ粒子の半減期を含む様々な因子に依存することは理
解されている。
ナノ粒子のいずれかのミリグラムまたはマイクログラム量が挙げられる。これらの用量は
幅広い範囲を網羅するが、本明細書に記載された治療用ナノ粒子を含む治療剤が、それら
の効力によって異なることを当業者は理解しており、有効量は、当技術分野において知ら
れた方法によって決定することができる。典型的には、相対的に低い用量が最初に投与さ
れ、担当医療専門家（治療適用の場合）または研究者（まだ開発段階で研究している時）
は、続いて、かつ徐々に、適切な応答が得られるまで用量を増加させることができる。加
えて、任意の特定の対象についての特定の用量レベルは、用いられる特定の化合物の活性
、対象の年齢、体重、一般的な健康、性別、および食事、投与の時点、投与の経路、排泄
速度、およびインビボでの治療用ナノ粒子の半減期を含む様々な因子に依存することは理
解されている。
【0111】
薬学的組成物は、投与についての使用説明書と共に、容器、パック、またはディスペン
サー内に含まれ得る。
サー内に含まれ得る。
【0112】
処置の方法
本明細書に記載された治療用ナノ粒子は、癌成長を減少させることが発見された。この
発見を勘案して、対象において癌を処置する方法が本明細書に提供される。これらの方法
の特定の実施形態および様々な態様が下に記載されている。
本明細書に記載された治療用ナノ粒子は、癌成長を減少させることが発見された。この
発見を勘案して、対象において癌を処置する方法が本明細書に提供される。これらの方法
の特定の実施形態および様々な態様が下に記載されている。
【0113】
癌を処置する方法
方法は一般的に、腫瘍、例えば、癌を有する対象を同定することを含む。本明細書で用
いられる場合、用語「癌」は、自律的成長の能力を有する細胞、すなわち、急速に増殖す
る細胞成長により特徴づけられる異常な状態または状況、を指す。過剰増殖性および腫瘍
性疾患状態は、病的、すなわち、疾患状態を特徴づけもしくは構成するものとして、分類
され得、または非病的、すなわち、正常から逸脱しているが、疾患状態に関連づけられな
いものとして分類され得る。一般的に、癌は、１つまたは複数の腫瘍、すなわち、異常な
細胞塊の存在と関連づけられる。用語「腫瘍」は、組織病理学的型や浸潤性の段階とは関
係なく、全ての型の、癌性成長もしくは発癌過程、転移性組織、または悪性形質転換した
細胞、組織、もしくは器官を含むことを意図される。「病的過剰増殖性」細胞は、悪性腫
瘍成長により特徴づけられる疾患状態で起こる。本研究は、膵癌に、それの憂うつな予後
およびそれの転移型に対する進行の欠如を理由に、焦点をおいているが、本組成物および
本方法は、固形悪性腫瘍に幅広く適用できる。したがって、癌は、任意の型の固形腫瘍で
あり得、その固形腫瘍には、乳癌、結腸癌、腎癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵癌、直腸癌
、胃癌、甲状腺癌、または子宮癌が挙げられるが、それらに限定されない。
方法は一般的に、腫瘍、例えば、癌を有する対象を同定することを含む。本明細書で用
いられる場合、用語「癌」は、自律的成長の能力を有する細胞、すなわち、急速に増殖す
る細胞成長により特徴づけられる異常な状態または状況、を指す。過剰増殖性および腫瘍
性疾患状態は、病的、すなわち、疾患状態を特徴づけもしくは構成するものとして、分類
され得、または非病的、すなわち、正常から逸脱しているが、疾患状態に関連づけられな
いものとして分類され得る。一般的に、癌は、１つまたは複数の腫瘍、すなわち、異常な
細胞塊の存在と関連づけられる。用語「腫瘍」は、組織病理学的型や浸潤性の段階とは関
係なく、全ての型の、癌性成長もしくは発癌過程、転移性組織、または悪性形質転換した
細胞、組織、もしくは器官を含むことを意図される。「病的過剰増殖性」細胞は、悪性腫
瘍成長により特徴づけられる疾患状態で起こる。本研究は、膵癌に、それの憂うつな予後
およびそれの転移型に対する進行の欠如を理由に、焦点をおいているが、本組成物および
本方法は、固形悪性腫瘍に幅広く適用できる。したがって、癌は、任意の型の固形腫瘍で
あり得、その固形腫瘍には、乳癌、結腸癌、腎癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵癌、直腸癌
、胃癌、甲状腺癌、または子宮癌が挙げられるが、それらに限定されない。
【0114】
腫瘍には、様々な器官系の悪性腫瘍、例えば、肺、乳房、甲状腺、リンパ系、胃腸管、
および尿生殖路を冒す悪性腫瘍、加えて、たいていの結腸癌、腎細胞癌腫、前立腺癌およ
び／または精巣腫瘍、肺の非小細胞癌腫、小腸の癌、ならびに食道の癌などの悪性腫瘍を
含む腺癌が挙げられる。用語「癌腫」は、当技術分野において認められており、呼吸器系
癌腫、胃腸管系癌腫、尿生殖器系癌腫、精巣癌腫、乳房癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫
、および黒色腫を含む上皮または内分泌組織の悪性腫瘍を指す。いくつかの実施形態にお
いて、疾患は、腎臓癌腫または黒色腫である。例示的な癌腫には、子宮頚部、肺、前立腺
、乳房、頭頚部、結腸、および卵巣の組織から形成される癌腫が挙げられる。その用語は
また、癌肉腫も含み、それには、例えば、癌性および肉腫組織で構成される悪性腫瘍が挙
げられる。「腺癌」は、腺組織に由来した癌腫、または腫瘍細胞が、認識できる腺状構造
を形成している癌腫を指す。用語「肉腫」は、当技術分野において認められており、間葉
系誘導の悪性腫瘍を指す。
および尿生殖路を冒す悪性腫瘍、加えて、たいていの結腸癌、腎細胞癌腫、前立腺癌およ
び／または精巣腫瘍、肺の非小細胞癌腫、小腸の癌、ならびに食道の癌などの悪性腫瘍を
含む腺癌が挙げられる。用語「癌腫」は、当技術分野において認められており、呼吸器系
癌腫、胃腸管系癌腫、尿生殖器系癌腫、精巣癌腫、乳房癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫
、および黒色腫を含む上皮または内分泌組織の悪性腫瘍を指す。いくつかの実施形態にお
いて、疾患は、腎臓癌腫または黒色腫である。例示的な癌腫には、子宮頚部、肺、前立腺
、乳房、頭頚部、結腸、および卵巣の組織から形成される癌腫が挙げられる。その用語は
また、癌肉腫も含み、それには、例えば、癌性および肉腫組織で構成される悪性腫瘍が挙
げられる。「腺癌」は、腺組織に由来した癌腫、または腫瘍細胞が、認識できる腺状構造
を形成している癌腫を指す。用語「肉腫」は、当技術分野において認められており、間葉
系誘導の悪性腫瘍を指す。
【0115】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された方法により評価または処置される
癌には、上皮癌、例えば、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳癌、結腸直
腸癌、腎癌、頭頚部癌、前立腺癌、膵癌（例えば、膵管腺癌（ＰＤＡＣ））、または卵巣
癌が挙げられる。上皮悪性腫瘍は、上皮組織を冒す癌である。
癌には、上皮癌、例えば、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳癌、結腸直
腸癌、腎癌、頭頚部癌、前立腺癌、膵癌（例えば、膵管腺癌（ＰＤＡＣ））、または卵巣
癌が挙げられる。上皮悪性腫瘍は、上皮組織を冒す癌である。
【0116】
癌は、医療専門家（例えば、医師、医師の助手、看護師、検査技師）によって、当技術
分野において知られた方法を用いて対象において診断することができる。例えば、転移性
癌は、一つには、当技術分野において知られているような対象における癌の少なくとも１
つの症状の観察または検出によって、対象において診断することができる。癌はまた、様
々な画像化技術を（例えば、単独で、または対象における癌の１つもしくは複数の症状の
観察と組み合わせて）用いて対象において診断することができる。例えば、癌の存在は、
コンピュータ断層撮影法、磁気共鳴画像法、ポジトロン放射型断層撮影法、およびＸ線法
を用いて、対象において検出することができる。癌はまた、対象由来の組織の生検を実施
することにより診断することができる。癌はまた、ＣＡ１９．９、ＣＥＡ、ＰＳＡなどの
血清バイオマーカーから診断することができる。
分野において知られた方法を用いて対象において診断することができる。例えば、転移性
癌は、一つには、当技術分野において知られているような対象における癌の少なくとも１
つの症状の観察または検出によって、対象において診断することができる。癌はまた、様
々な画像化技術を（例えば、単独で、または対象における癌の１つもしくは複数の症状の
観察と組み合わせて）用いて対象において診断することができる。例えば、癌の存在は、
コンピュータ断層撮影法、磁気共鳴画像法、ポジトロン放射型断層撮影法、およびＸ線法
を用いて、対象において検出することができる。癌はまた、対象由来の組織の生検を実施
することにより診断することができる。癌はまた、ＣＡ１９．９、ＣＥＡ、ＰＳＡなどの
血清バイオマーカーから診断することができる。
【0117】
いくつかの実施形態において、方法は、癌が免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ
－Ｌ１を発現または過剰発現するかどうかを決定することを含み得る。癌において、例え
ば、癌由来の細胞を含む生検または他の試料において、免疫チェックポイント分子、例え
ば、ＰＤ－Ｌ１の発現を検出するための方法は、当技術分野において知られており、それ
には、例えば、市販の、または研究室で開発された免疫組織化学法（ＩＨＣ）が挙げられ
、例えば、Udall et al., Diagn Pathol. 2018; 13: 12を参照されたい。そのレベルは、
閾値または参照レベルと比較することができ、閾値または参照レベルより上の免疫チェッ
クポイント分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１の発現のレベルが見られる場合には、その対象は、
本明細書に記載されているような処置に選択され得る。いくつかの実施形態において、方
法は、例えば、Kawakami et al., Curr Treat Options Oncol. 2015 Jul;16(7):30；Zein
alian et al., Adv Biomed Res. 2018; 7: 28に記載されているように、癌が、高レベル
のマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を有するかどうかを決定し、ＭＳＩが高い、ま
たは閾値もしくは参照レベルより上のＭＳＩのレベルを有する癌を処置のために選択する
ことを含み得る。
－Ｌ１を発現または過剰発現するかどうかを決定することを含み得る。癌において、例え
ば、癌由来の細胞を含む生検または他の試料において、免疫チェックポイント分子、例え
ば、ＰＤ－Ｌ１の発現を検出するための方法は、当技術分野において知られており、それ
には、例えば、市販の、または研究室で開発された免疫組織化学法（ＩＨＣ）が挙げられ
、例えば、Udall et al., Diagn Pathol. 2018; 13: 12を参照されたい。そのレベルは、
閾値または参照レベルと比較することができ、閾値または参照レベルより上の免疫チェッ
クポイント分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１の発現のレベルが見られる場合には、その対象は、
本明細書に記載されているような処置に選択され得る。いくつかの実施形態において、方
法は、例えば、Kawakami et al., Curr Treat Options Oncol. 2015 Jul;16(7):30；Zein
alian et al., Adv Biomed Res. 2018; 7: 28に記載されているように、癌が、高レベル
のマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を有するかどうかを決定し、ＭＳＩが高い、ま
たは閾値もしくは参照レベルより上のＭＳＩのレベルを有する癌を処置のために選択する
ことを含み得る。
【0118】
本明細書に記載された治療用ナノ粒子の任意の１つまたは複数は、癌を有する対象に投
与することができる。１つまたは複数の治療用ナノ粒子は、医療施設（例えば、病院また
は診療所）において、またはケア支援施設において対象に投与することができる。いくつ
かの実施形態において、対象は、以前、癌を有すると診断されている。いくつかの実施形
態において、対象はすでに、癌についての治療的処置を受けている。いくつかの実施形態
において、１つまたは複数の腫瘍は、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のうちの１つ
での処置の前に、外科的に除去されている。
与することができる。１つまたは複数の治療用ナノ粒子は、医療施設（例えば、病院また
は診療所）において、またはケア支援施設において対象に投与することができる。いくつ
かの実施形態において、対象は、以前、癌を有すると診断されている。いくつかの実施形
態において、対象はすでに、癌についての治療的処置を受けている。いくつかの実施形態
において、１つまたは複数の腫瘍は、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のうちの１つ
での処置の前に、外科的に除去されている。
【0119】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの治療用ナノ粒子の投与は、結果として
、腫瘍のサイズの減少（例えば、有意なまたは観察可能な減少）、腫瘍のサイズの安定化
（例えば、サイズの有意なまたは観察可能な変化がない）、または対象に存在する腫瘍の
成長の速度の減少（例えば、検出可能または観察可能な減少）を生じる。医療専門家は、
様々な異なる画像化技術を用いて対象における腫瘍のサイズおよび／またはサイズの変化
をモニターすることができ、その画像化技術には、コンピュータ断層撮影法、磁気共鳴画
像法、ポジトロン放射型断層撮影法、およびＸ線法が挙げられるが、それらに限定されな
い。例えば、治療に応答した、対象における腫瘍のサイズの減少または安定化があるかど
うかを決定するために、対象の腫瘍のサイズは、治療前および後に決定することができる
。腫瘍の成長の速度は、処置を受けていないまたは異なる処置を受けた別の対象または対
象集団における腫瘍の成長の速度と比較することができる。腫瘍の成長の速度の減少はま
た、治療的処置（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれかでの処置）の
前と後の両方の腫瘍の成長の速度を比較することにより決定することができる。いくつか
の実施形態において、腫瘍の可視化は、腫瘍における癌細胞と特異的に結合する標識プロ
ーブまたは分子（例えば、癌細胞の表面上に存在するエピトープと選択的に結合する標識
抗体）を利用する画像化技術を用いて実施することができる。
、腫瘍のサイズの減少（例えば、有意なまたは観察可能な減少）、腫瘍のサイズの安定化
（例えば、サイズの有意なまたは観察可能な変化がない）、または対象に存在する腫瘍の
成長の速度の減少（例えば、検出可能または観察可能な減少）を生じる。医療専門家は、
様々な異なる画像化技術を用いて対象における腫瘍のサイズおよび／またはサイズの変化
をモニターすることができ、その画像化技術には、コンピュータ断層撮影法、磁気共鳴画
像法、ポジトロン放射型断層撮影法、およびＸ線法が挙げられるが、それらに限定されな
い。例えば、治療に応答した、対象における腫瘍のサイズの減少または安定化があるかど
うかを決定するために、対象の腫瘍のサイズは、治療前および後に決定することができる
。腫瘍の成長の速度は、処置を受けていないまたは異なる処置を受けた別の対象または対
象集団における腫瘍の成長の速度と比較することができる。腫瘍の成長の速度の減少はま
た、治療的処置（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれかでの処置）の
前と後の両方の腫瘍の成長の速度を比較することにより決定することができる。いくつか
の実施形態において、腫瘍の可視化は、腫瘍における癌細胞と特異的に結合する標識プロ
ーブまたは分子（例えば、癌細胞の表面上に存在するエピトープと選択的に結合する標識
抗体）を利用する画像化技術を用いて実施することができる。
【0120】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子を対象に投与することは、原発性癌（例
えば、原発性乳癌）を有する（例えば、有すると診断された）対象において転移性癌（例
えば、リンパ節における転移性癌）を発症するリスクを（例えば、類似した原発性癌を有
するが、処置を受けていないまたは代替処置を受けた対象において転移性癌を発症する率
と比較して）減少させる。原発性癌を有する対象において転移性腫瘍を発症するリスクの
減少はまた、治療を受けていないまたは代替型の癌治療を受けた対象集団における転移性
癌形成の率を比較することができる。
えば、原発性乳癌）を有する（例えば、有すると診断された）対象において転移性癌（例
えば、リンパ節における転移性癌）を発症するリスクを（例えば、類似した原発性癌を有
するが、処置を受けていないまたは代替処置を受けた対象において転移性癌を発症する率
と比較して）減少させる。原発性癌を有する対象において転移性腫瘍を発症するリスクの
減少はまた、治療を受けていないまたは代替型の癌治療を受けた対象集団における転移性
癌形成の率を比較することができる。
【0121】
医療専門家はまた、癌の治療的処置の有効性を、対象における癌の症状の数の減少を観
察することにより、または対象における癌の１つもしくは複数の症状の重症度、頻度、お
よび／もしくは持続期間の減少を観察することにより、評価することができる。癌の様々
な症状は、当技術分野において知られており、本明細書に記載されている。
察することにより、または対象における癌の１つもしくは複数の症状の重症度、頻度、お
よび／もしくは持続期間の減少を観察することにより、評価することができる。癌の様々
な症状は、当技術分野において知られており、本明細書に記載されている。
【0122】
いくつかの実施形態において、投与は、結果として、（例えば、類似した癌を有するが
、異なる治療的処置を受け、または治療的処置を受けていない対象集団と比較して）対象
における寿命または生存の可能性の増加（例えば、有意な増加）を生じ得る。いくつかの
実施形態において、投与は、結果として、（例えば、類似した癌を有するが、異なる治療
的処置を受け、または治療的処置を受けていない対象集団と比較して）癌を有する対象に
ついての予後の改善を生じ得る。
、異なる治療的処置を受け、または治療的処置を受けていない対象集団と比較して）対象
における寿命または生存の可能性の増加（例えば、有意な増加）を生じ得る。いくつかの
実施形態において、投与は、結果として、（例えば、類似した癌を有するが、異なる治療
的処置を受け、または治療的処置を受けていない対象集団と比較して）癌を有する対象に
ついての予後の改善を生じ得る。
【0123】
投薬、投与、および組成物
本明細書に記載された方法のいずれかにおいて、治療用ナノ粒子は、医療専門家（例え
ば、医師、医師の助手、看護師、または検査室もしくは診療所従業員）、対象（すなわち
、自己投与）、または対象の友人もしくは家族メンバーによって投与することができる。
投与は、臨床設定（例えば、診療所または病院）において、介護施設において、または薬
局で実施することができる。
本明細書に記載された方法のいずれかにおいて、治療用ナノ粒子は、医療専門家（例え
ば、医師、医師の助手、看護師、または検査室もしくは診療所従業員）、対象（すなわち
、自己投与）、または対象の友人もしくは家族メンバーによって投与することができる。
投与は、臨床設定（例えば、診療所または病院）において、介護施設において、または薬
局で実施することができる。
【0124】
本明細書に記載された方法のいずれかのいくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子
は、癌を有すると診断されている対象に投与される。いくつかの実施形態において、対象
は、乳癌または膵癌と診断されている。いくつかの非限定的実施形態において、対象は、
男性もしくは女性、成人、若者、または子どもである。対象は、癌または転移性癌（例え
ば、リンパ節における転移性癌）の１つまたは複数の症状を経験したことがあり得る。対
象はまた、重度または進行期の癌（例えば、原発性または転移性癌）を有すると診断され
得る。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つのリンパ節に存在する転移
性腫瘍を有すると同定された可能性がある。いくつかの実施形態において、対象は、外科
的切除、例えば、部分的なまたは全体の膵切除、リンパ節切除、および／または乳腺切除
をすでに受けた可能性がある。
は、癌を有すると診断されている対象に投与される。いくつかの実施形態において、対象
は、乳癌または膵癌と診断されている。いくつかの非限定的実施形態において、対象は、
男性もしくは女性、成人、若者、または子どもである。対象は、癌または転移性癌（例え
ば、リンパ節における転移性癌）の１つまたは複数の症状を経験したことがあり得る。対
象はまた、重度または進行期の癌（例えば、原発性または転移性癌）を有すると診断され
得る。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つのリンパ節に存在する転移
性腫瘍を有すると同定された可能性がある。いくつかの実施形態において、対象は、外科
的切除、例えば、部分的なまたは全体の膵切除、リンパ節切除、および／または乳腺切除
をすでに受けた可能性がある。
【0125】
本明細書に記載された方法のいずれかの実施形態において、対象は、本明細書に記載さ
れた、磁性粒子または薬学的組成物のいずれかの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、
３つ、または４つ）を含有する組成物の少なくとも１回（例えば、少なくとも２回、３回
、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０
回）の用量を投与される。本明細書に記載された方法のいずれかにおいて、少なくとも１
つの磁性粒子または薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された磁性粒子または薬学的
組成物のいずれか）は、対象へ静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内に投与する
ことができる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの磁性粒子または薬学的組
成物は、対象におけるリンパ節へ直接投与（注射）される。
れた、磁性粒子または薬学的組成物のいずれかの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、
３つ、または４つ）を含有する組成物の少なくとも１回（例えば、少なくとも２回、３回
、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０
回）の用量を投与される。本明細書に記載された方法のいずれかにおいて、少なくとも１
つの磁性粒子または薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された磁性粒子または薬学的
組成物のいずれか）は、対象へ静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内に投与する
ことができる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの磁性粒子または薬学的組
成物は、対象におけるリンパ節へ直接投与（注射）される。
【0126】
いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つの治療用ナノ粒子または薬学的
組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のいずれか）
および少なくとも１つの追加の治療剤を投与される。少なくとも１つの追加の治療剤は、
化学療法剤であり得る。用語「化学療法剤」とは、対象（例えば、ヒト）において、癌細
胞成長の速度を低下させるために、または癌細胞の死（例えば、壊死またはアポトーシス
）を誘導もしくは媒介するために用いることができる分子を意味する。非限定的例におい
て、化学療法剤は、小分子、タンパク質（例えば、抗体、抗体の抗原結合断片、またはそ
れらの誘導体もしくはコンジュゲート）、核酸、またはそれらの任意の組合せであり得る
。化学療法剤の非限定的例には、１つもしくは複数のアルキル化剤；アントラサイクリン
；細胞骨格破壊物質（タキサン）；エポシロン；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；トポイ
ソメラーゼＩの阻害剤；トポイソメラーゼＩＩの阻害剤；キナーゼ阻害剤；ヌクレオチド
アナログおよび前駆体アナログ；ペプチド抗生物質；白金製剤；レチノイド；ならびに／
もしくはビンカアルカロイドおよび誘導体；またはそれらの任意の組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態において、化学療法剤は、ヌクレオチドアナログまたは前駆体アナロ
グ、例えば、アザシチジン；アザチオプリン；カペシタビン；シタラビン；ドキシフルリ
ジン；フルオロウラシル；ゲムシタビン；ヒドロキシウレア；メルカプトプリン；メトト
レキサート；またはチオグアニンである。他の例には、シクロホスファミド、メクロレタ
ミン、クロラムブシル、メルファラン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン
、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エ
トポシド、テニポシド、タフルポシド、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン
、オキサリプラチン、オールトランスレチノール酸、ビンブラスチン、ビンクリスチン、
ビンデシン、ビノレルビン、およびベバシズマブ（またはその抗原結合断片）が挙げられ
る。化学療法剤の追加の例は当技術分野において知られている。
組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のいずれか）
および少なくとも１つの追加の治療剤を投与される。少なくとも１つの追加の治療剤は、
化学療法剤であり得る。用語「化学療法剤」とは、対象（例えば、ヒト）において、癌細
胞成長の速度を低下させるために、または癌細胞の死（例えば、壊死またはアポトーシス
）を誘導もしくは媒介するために用いることができる分子を意味する。非限定的例におい
て、化学療法剤は、小分子、タンパク質（例えば、抗体、抗体の抗原結合断片、またはそ
れらの誘導体もしくはコンジュゲート）、核酸、またはそれらの任意の組合せであり得る
。化学療法剤の非限定的例には、１つもしくは複数のアルキル化剤；アントラサイクリン
；細胞骨格破壊物質（タキサン）；エポシロン；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；トポイ
ソメラーゼＩの阻害剤；トポイソメラーゼＩＩの阻害剤；キナーゼ阻害剤；ヌクレオチド
アナログおよび前駆体アナログ；ペプチド抗生物質；白金製剤；レチノイド；ならびに／
もしくはビンカアルカロイドおよび誘導体；またはそれらの任意の組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態において、化学療法剤は、ヌクレオチドアナログまたは前駆体アナロ
グ、例えば、アザシチジン；アザチオプリン；カペシタビン；シタラビン；ドキシフルリ
ジン；フルオロウラシル；ゲムシタビン；ヒドロキシウレア；メルカプトプリン；メトト
レキサート；またはチオグアニンである。他の例には、シクロホスファミド、メクロレタ
ミン、クロラムブシル、メルファラン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン
、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エ
トポシド、テニポシド、タフルポシド、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン
、オキサリプラチン、オールトランスレチノール酸、ビンブラスチン、ビンクリスチン、
ビンデシン、ビノレルビン、およびベバシズマブ（またはその抗原結合断片）が挙げられ
る。化学療法剤の追加の例は当技術分野において知られている。
【0127】
いくつかの実施形態において、化学療法剤は、癌型に基づいて、または癌の遺伝子解析
に基づいて、選択され、例えば、膵癌について、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（アルブミン結合パク
リタキセル）、Ｇｅｍｚａｒ（ゲムシタビン）、カペシタビン、５－ＦＵ（フルオロウラ
シル）およびＯＮＩＶＹＤＥ（イリノテカンリポソーム注射）、またはそれらの組合せ、
例えば、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、３つの化学療法薬（５－ＦＵ／ロイコボリン、イリノテ
カン、およびオキサリプラチン）の組合せ、もしくは改変ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（ｍＦＯ
ＬＦＩＲＩＮＯＸ）のうちの１つまたは複数を投与することができる。補完的機構により
相乗的に働き得る標的のさらなる組合せを用いることができる。例えば、組換えヒトヒア
ルロニダーゼ（ＰＥＧＰＨ２０）３０，３１による酵素分解、または他の代替化学療法剤
、および／またはＴ細胞を活性化することにおいて相乗効果を促進し得る代替チェックポ
イント阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１および／または抗ＣＴＬＡ－４）により、腫瘍微小環
境を物理的に変化させる併用療法を用いることができる。
に基づいて、選択され、例えば、膵癌について、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（アルブミン結合パク
リタキセル）、Ｇｅｍｚａｒ（ゲムシタビン）、カペシタビン、５－ＦＵ（フルオロウラ
シル）およびＯＮＩＶＹＤＥ（イリノテカンリポソーム注射）、またはそれらの組合せ、
例えば、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、３つの化学療法薬（５－ＦＵ／ロイコボリン、イリノテ
カン、およびオキサリプラチン）の組合せ、もしくは改変ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（ｍＦＯ
ＬＦＩＲＩＮＯＸ）のうちの１つまたは複数を投与することができる。補完的機構により
相乗的に働き得る標的のさらなる組合せを用いることができる。例えば、組換えヒトヒア
ルロニダーゼ（ＰＥＧＰＨ２０）３０，３１による酵素分解、または他の代替化学療法剤
、および／またはＴ細胞を活性化することにおいて相乗効果を促進し得る代替チェックポ
イント阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１および／または抗ＣＴＬＡ－４）により、腫瘍微小環
境を物理的に変化させる併用療法を用いることができる。
【0128】
方法および組成物はまた、鎮痛剤（例えば、アセトアミノフェン、ジクロフェナク、ジ
フルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イ
ンドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナム酸塩（meclofenamate）、
メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブ
タゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、セレコキシブ、ブプレノルフィン、ブ
トルファノール、コデイン、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、メペリ
ジン、メタドン、モルフィン、ナルブフィン、オキシコドン、オキシモルホン、ペンタゾ
シン、プロポキシフェン、およびトラマドール）の投与を含み得る。
フルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イ
ンドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナム酸塩（meclofenamate）、
メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブ
タゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、セレコキシブ、ブプレノルフィン、ブ
トルファノール、コデイン、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、メペリ
ジン、メタドン、モルフィン、ナルブフィン、オキシコドン、オキシモルホン、ペンタゾ
シン、プロポキシフェン、およびトラマドール）の投与を含み得る。
【0129】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤および少なくとも１つの
治療用ナノ粒子（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）が、同じ組成物（例
えば、同じ薬学的組成物）において投与される。いくつかの実施形態において、少なくと
も１つの追加の治療剤および少なくとも１つの治療用ナノ粒子は、異なる投与経路を用い
て対象に投与される（例えば、少なくとも１つの追加の治療剤が経口投与により送達され
、少なくとも１つの治療用ナノ粒子が静脈内投与により送達される）。
治療用ナノ粒子（本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）が、同じ組成物（例
えば、同じ薬学的組成物）において投与される。いくつかの実施形態において、少なくと
も１つの追加の治療剤および少なくとも１つの治療用ナノ粒子は、異なる投与経路を用い
て対象に投与される（例えば、少なくとも１つの追加の治療剤が経口投与により送達され
、少なくとも１つの治療用ナノ粒子が静脈内投与により送達される）。
【0130】
本明細書に記載された方法のいずれかにおいて、少なくとも１つの治療用ナノ粒子また
は薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のい
ずれか）、および任意で、少なくとも１つの追加の治療剤は、対象に少なくとも週１回（
例えば、週１回、週２回、週３回、週４回、１日１回、１日２回、または１日３回）、投
与することができる。いくつかの実施形態において、少なくとも２つの異なる治療用ナノ
粒子が、同じ組成物（例えば、液体組成物）において投与される。いくつかの実施形態に
おいて、少なくとも１つの治療用ナノ粒子および少なくとも１つの追加の治療剤が、同じ
組成物（例えば、液体組成物）において投与される。いくつかの実施形態において、少な
くとも１つの治療用ナノ粒子および少なくとも１つの追加の治療剤が、２つの異なる組成
物（例えば、少なくとも１つの治療用ナノ粒子を含有する液体組成物、および少なくとも
１つの追加の治療剤を含有する固体経口組成物）において投与される。いくつかの実施形
態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、丸剤、錠剤、またはカプセルとして投与
される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、徐放性経口製
剤において投与される。
は薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のい
ずれか）、および任意で、少なくとも１つの追加の治療剤は、対象に少なくとも週１回（
例えば、週１回、週２回、週３回、週４回、１日１回、１日２回、または１日３回）、投
与することができる。いくつかの実施形態において、少なくとも２つの異なる治療用ナノ
粒子が、同じ組成物（例えば、液体組成物）において投与される。いくつかの実施形態に
おいて、少なくとも１つの治療用ナノ粒子および少なくとも１つの追加の治療剤が、同じ
組成物（例えば、液体組成物）において投与される。いくつかの実施形態において、少な
くとも１つの治療用ナノ粒子および少なくとも１つの追加の治療剤が、２つの異なる組成
物（例えば、少なくとも１つの治療用ナノ粒子を含有する液体組成物、および少なくとも
１つの追加の治療剤を含有する固体経口組成物）において投与される。いくつかの実施形
態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、丸剤、錠剤、またはカプセルとして投与
される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、徐放性経口製
剤において投与される。
【0131】
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の追加の治療剤は、少なくとも１つの治
療用ナノ粒子または薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または
薬学的組成物のいずれか）を投与する前に対象に投与することができる。いくつかの実施
形態において、１つまたは複数の追加の治療剤は、少なくとも１つの治療用ナノ粒子また
は薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された磁性粒子または薬学的組成物のいずれか
）を投与した後に対象に投与することができる。いくつかの実施形態において、１つもし
くは複数の追加の治療剤および少なくとも１つの治療用ナノ粒子または薬学的組成物（例
えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のいずれか）は、対象に
おいて前記１つまたは複数の追加の治療剤と前記少なくとも１つの治療用ナノ粒子（例え
ば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）の生物活性期間の重複があるよう
に、対象に投与される。
療用ナノ粒子または薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または
薬学的組成物のいずれか）を投与する前に対象に投与することができる。いくつかの実施
形態において、１つまたは複数の追加の治療剤は、少なくとも１つの治療用ナノ粒子また
は薬学的組成物（例えば、本明細書に記載された磁性粒子または薬学的組成物のいずれか
）を投与した後に対象に投与することができる。いくつかの実施形態において、１つもし
くは複数の追加の治療剤および少なくとも１つの治療用ナノ粒子または薬学的組成物（例
えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のいずれか）は、対象に
おいて前記１つまたは複数の追加の治療剤と前記少なくとも１つの治療用ナノ粒子（例え
ば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子のいずれか）の生物活性期間の重複があるよう
に、対象に投与される。
【0132】
いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つの治療用ナノ粒子または薬学的
組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のいずれか）
を長期間に渡って（例えば、少なくとも１週間、２週間、３週間、１カ月間、２カ月間、
３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間
、１１カ月間、１２カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、または１０年間
に渡って）投与され得る。熟練した医学専門家は、処置の有効性を診断または追跡するた
めの本明細書に記載された方法のいずれかを用いて（例えば、上記の方法および当技術分
野において知られた方法を用いて）、処置期間の長さを決定し得る。本明細書に記載され
ているように、熟練した医学専門家はまた、対象に投与される治療用ナノ粒子（および／
または１つまたは複数の追加の治療剤）のアイデンティティおよび数（例えば、増加また
は減少させる）を変化させることができ、（例えば、本明細書に記載された方法および当
技術分野において知られた方法のいずれかを用いた）処置の有効性の評価に基づいて、対
象への少なくとも１つの治療用ナノ粒子（および／または１つまたは複数の追加の治療剤
）の投与の用量または頻度も調整する（例えば、増加または減少させる）こともできる。
熟練した医学専門家はさらに、いつ処置を中断するべきか（例えば、対象の症状が有意に
減少した時）を決定することができる。
組成物（例えば、本明細書に記載された治療用ナノ粒子または薬学的組成物のいずれか）
を長期間に渡って（例えば、少なくとも１週間、２週間、３週間、１カ月間、２カ月間、
３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間
、１１カ月間、１２カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、または１０年間
に渡って）投与され得る。熟練した医学専門家は、処置の有効性を診断または追跡するた
めの本明細書に記載された方法のいずれかを用いて（例えば、上記の方法および当技術分
野において知られた方法を用いて）、処置期間の長さを決定し得る。本明細書に記載され
ているように、熟練した医学専門家はまた、対象に投与される治療用ナノ粒子（および／
または１つまたは複数の追加の治療剤）のアイデンティティおよび数（例えば、増加また
は減少させる）を変化させることができ、（例えば、本明細書に記載された方法および当
技術分野において知られた方法のいずれかを用いた）処置の有効性の評価に基づいて、対
象への少なくとも１つの治療用ナノ粒子（および／または１つまたは複数の追加の治療剤
）の投与の用量または頻度も調整する（例えば、増加または減少させる）こともできる。
熟練した医学専門家はさらに、いつ処置を中断するべきか（例えば、対象の症状が有意に
減少した時）を決定することができる。
【0133】
治療のモニタリング
本発明者らの治療アプローチの追加の重要な利点は、それが、標的組織における薬物生
物学的利用率についての知識と治療結果とを組み合わせる、臨床的に意義のある画像ガイ
ド処置プロトコールを開発するまたとない機会を提示するという事実に由来する。この能
力は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１が２０ｎｍ超常磁性ナノ粒子担体と合体して、そのことが、腫
瘍細胞への高効率的な送達を保証し、かつ組織におけるその蓄積が、定量的非侵襲性ＭＲ
Ｉによりモニターされ得るという事実によって、可能になる。この能力は、処置の間に薬
物生物学的利用率を非侵襲性に測定する可能性を示さない全ての他の利用可能な治療アプ
ローチの状況においては、独特である。
本発明者らの治療アプローチの追加の重要な利点は、それが、標的組織における薬物生
物学的利用率についての知識と治療結果とを組み合わせる、臨床的に意義のある画像ガイ
ド処置プロトコールを開発するまたとない機会を提示するという事実に由来する。この能
力は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１が２０ｎｍ超常磁性ナノ粒子担体と合体して、そのことが、腫
瘍細胞への高効率的な送達を保証し、かつ組織におけるその蓄積が、定量的非侵襲性ＭＲ
Ｉによりモニターされ得るという事実によって、可能になる。この能力は、処置の間に薬
物生物学的利用率を非侵襲性に測定する可能性を示さない全ての他の利用可能な治療アプ
ローチの状況においては、独特である。
【0134】
本研究に例証されているように、ΔＲ２パラメータによる組織におけるＭＮ－ｓｉＰＤ
Ｌ１の相対的濃度についての知識は、恒久的腫瘍退縮に関連した治療プロトコールの開発
および最適化を可能にする。同時に、解剖学的ＭＲＩは、応答の形態学的バイオマーカー
として腫瘍容積の客観的測定を可能にする。しかしながら、動力学的ＭＲ画像化プロトコ
ールの適用は、腫瘍血流および微小血管透過性に関連した生理的変数も測定するために容
易に用いることができる。
Ｌ１の相対的濃度についての知識は、恒久的腫瘍退縮に関連した治療プロトコールの開発
および最適化を可能にする。同時に、解剖学的ＭＲＩは、応答の形態学的バイオマーカー
として腫瘍容積の客観的測定を可能にする。しかしながら、動力学的ＭＲ画像化プロトコ
ールの適用は、腫瘍血流および微小血管透過性に関連した生理的変数も測定するために容
易に用いることができる。
【0135】
したがって、本方法は、磁性ナノ粒子を検出する画像化モダリティの使用を含み得る。
【実施例0136】
本発明は、以下の実施例にさらに記載されており、その実施例は、特許請求の範囲に記
載された本発明の範囲を限定しない。
載された本発明の範囲を限定しない。
【0137】
方法
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）オリゴ
ｐｄ－ｌ１に対するｓｉＲＮＡオリゴ（ｓｉＰＤＬ１；ＭＷ＝１３，７８８．９ｇ／ｍ
ｏｌ）の配列は、５’－ＴｈｉｏＭＣ６－Ｄ／ＧＧＵＣＡＡＣＧＣＣＡＣＡＧＣＧＡＡＵ
ＵＵ－３’（センス配列；配列番号２）および５’－ＰＡＵＵＣＧＣＵＧＵＧＧＣＧＵＵ
ＧＡＣＣＵＵ－３’（アンチセンス配列；配列番号３）からなった。スクランブルｓｉＲ
ＮＡオリゴ（ｓｉＳＣＲ；ＭＷ＝１３，７２８．８ｇ／ｍｏｌ）の配列は、５’－Ｔｈｉ
ｏＭＣ６－Ｄ／ＵＧＧＵＵＵＡＣＡＵＧＵＣＧＡＣＵＡＡＵＵ－３’（センス配列；配列
番号４）および５’－ＰＵＵＡＧＵＣＧＡＣＡＵＧＵＡＡＡＣＣＡＵＵ－３’（アンチセ
ンス配列；配列番号５）であった。両方のｓｉＲＮＡは、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａ
ｙｅｔｔｅ、ＣＯ）によって設計および合成された。５’－チオール修飾因子Ｃ６ジスル
フィド（５’－ＴｈｉｏＭＣ６）を、磁性ナノ粒子にコンジュゲートするためにセンス配
列中に導入した。
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）オリゴ
ｐｄ－ｌ１に対するｓｉＲＮＡオリゴ（ｓｉＰＤＬ１；ＭＷ＝１３，７８８．９ｇ／ｍ
ｏｌ）の配列は、５’－ＴｈｉｏＭＣ６－Ｄ／ＧＧＵＣＡＡＣＧＣＣＡＣＡＧＣＧＡＡＵ
ＵＵ－３’（センス配列；配列番号２）および５’－ＰＡＵＵＣＧＣＵＧＵＧＧＣＧＵＵ
ＧＡＣＣＵＵ－３’（アンチセンス配列；配列番号３）からなった。スクランブルｓｉＲ
ＮＡオリゴ（ｓｉＳＣＲ；ＭＷ＝１３，７２８．８ｇ／ｍｏｌ）の配列は、５’－Ｔｈｉ
ｏＭＣ６－Ｄ／ＵＧＧＵＵＵＡＣＡＵＧＵＣＧＡＣＵＡＡＵＵ－３’（センス配列；配列
番号４）および５’－ＰＵＵＡＧＵＣＧＡＣＡＵＧＵＡＡＡＣＣＡＵＵ－３’（アンチセ
ンス配列；配列番号５）であった。両方のｓｉＲＮＡは、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａ
ｙｅｔｔｅ、ＣＯ）によって設計および合成された。５’－チオール修飾因子Ｃ６ジスル
フィド（５’－ＴｈｉｏＭＣ６）を、磁性ナノ粒子にコンジュゲートするためにセンス配
列中に導入した。
【0138】
デキストランコーティング化磁性ナノ粒子（ＭＮ）の合成
ＭＮを、以前に発表されたプロトコール２０に従って合成した。簡単に述べれば、アル
ゴンガスを１時間、流しながら、３０ｍｌのＤｅｘｔａｎ－Ｔ１０（０．３ｇ ｍｌ－１
、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ Ａ／Ｓ、Ｈｏｌｂａｅｋ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、１ｍｌの
ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ（０．６５ｇ ｍｌ－１、Ｓｉｇｍａ、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ、
ＭＯ）と混合した。１ｍｌのＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ（０．４ｇ ｍｌ－１、Ｓｉｇｍａ）
を、その混合物へ加え、１５ｍｌの冷たいＮＨ４ＯＨ（２８％、Ｓｉｇｍａ）を、その撹
拌される混合物へ滴下した。温度を、ナノ粒子分散の形成を開始させるために８５℃まで
１時間、上昇させ、その後、室温まで冷却した。磁性ナノ粒子を、Ａｍｉｃｏｎ超遠心ユ
ニット（ＭＷＣＯ ３０ｋＤａ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａ
ｎｙ）を用いて２０ｍｌへ濃縮した。生じたデキストランコーティング化磁性ナノ粒子を
、エピクロロヒドリン（１４ｍｌ、８ｈ、Ｓｉｇｍａ）により架橋し、その後のＮＨ４Ｏ
Ｈ（２８％、６０ｍｌ）の添加でアミノ化した。アミノ化磁性ナノ粒子（ＭＮ）を、透析
により精製し、Ａｍｉｃｏｎ超遠心ユニットを用いて濃縮した。ＭＮの性質は以下の通り
であった：濃度、Ｆｅとして１０．９４ｍｇ ｍｌ－１；ＭＮあたりのアミン基の数、６
４；緩和能（Ｒ２）、８２．５ｍＭ－１秒－１；ＭＮのサイズ、２０．３±０．６ｎｍ（
ＮａｎｏＳｉｇｈｔ ＬＭ－１０システムおよびナノ粒子追跡分析ソフトウェア（Ｖｅｒ
．３．２）、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）。
ＭＮを、以前に発表されたプロトコール２０に従って合成した。簡単に述べれば、アル
ゴンガスを１時間、流しながら、３０ｍｌのＤｅｘｔａｎ－Ｔ１０（０．３ｇ ｍｌ－１
、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ Ａ／Ｓ、Ｈｏｌｂａｅｋ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、１ｍｌの
ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ（０．６５ｇ ｍｌ－１、Ｓｉｇｍａ、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ、
ＭＯ）と混合した。１ｍｌのＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ（０．４ｇ ｍｌ－１、Ｓｉｇｍａ）
を、その混合物へ加え、１５ｍｌの冷たいＮＨ４ＯＨ（２８％、Ｓｉｇｍａ）を、その撹
拌される混合物へ滴下した。温度を、ナノ粒子分散の形成を開始させるために８５℃まで
１時間、上昇させ、その後、室温まで冷却した。磁性ナノ粒子を、Ａｍｉｃｏｎ超遠心ユ
ニット（ＭＷＣＯ ３０ｋＤａ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａ
ｎｙ）を用いて２０ｍｌへ濃縮した。生じたデキストランコーティング化磁性ナノ粒子を
、エピクロロヒドリン（１４ｍｌ、８ｈ、Ｓｉｇｍａ）により架橋し、その後のＮＨ４Ｏ
Ｈ（２８％、６０ｍｌ）の添加でアミノ化した。アミノ化磁性ナノ粒子（ＭＮ）を、透析
により精製し、Ａｍｉｃｏｎ超遠心ユニットを用いて濃縮した。ＭＮの性質は以下の通り
であった：濃度、Ｆｅとして１０．９４ｍｇ ｍｌ－１；ＭＮあたりのアミン基の数、６
４；緩和能（Ｒ２）、８２．５ｍＭ－１秒－１；ＭＮのサイズ、２０．３±０．６ｎｍ（
ＮａｎｏＳｉｇｈｔ ＬＭ－１０システムおよびナノ粒子追跡分析ソフトウェア（Ｖｅｒ
．３．２）、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）。
【0139】
ナノドラッグ合成および特徴づけ
ナノドラッグ合成を、以前に発表されたプロトコール２０に従って行った。図１Ａおよ
び図６も参照。簡単に述べれば、ＭＮにヘテロ二官能性リンカー Ｎ－スクシンイミジル
３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオネート（ＳＰＤＰ、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）をコンジュゲートし、それを、活性化ｓｉＲ
ＮＡオリゴの連結のために利用した。ＳＰＤＰを無水ＤＭＳＯ中に溶解し、ＭＮとインキ
ュベートし、それは、ｓｉＲＮＡオリゴとの還元不安定性ジスルフィド連結を形成するた
めのピリジルジチオ基を有する。ｓｉＲＮＡオリゴの５’－ＴｈｉｏＭＣ６を、ヌクレア
ーゼフリーのＰＢＳ中、３％ＴＣＥＰ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ．、Ｒ
ｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）処理により活性化して、チオールを遊離させた。そのｓｉＲＮＡ
オリゴを、酢酸アンモニウム／エタノール沈殿法を用いて精製した。ＴＣＥＰ活性化およ
び精製後、各オリゴ（ｓｉＰＤＬ１およびｓｉＳＣＲ）を水中に溶解し、ＳＰＤＰ修飾Ｍ
Ｎと一晩、インキュベートして、ナノドラッグ（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１およびＭＮ－ｓｉＳ
ＣＲ）を調製した。オリゴを、２つの異なる比率でＭＮに加えて、電気泳動分析法２０に
より定量化した場合、ＭＮあたり２．１±０．４（低用量）または４．８±０．７（高用
量）ｓｉＲＮＡオリゴを組み入れるナノドラッグを得た。ナノドラッグを、毎週、新鮮に
調製した。最終ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１／ＳＣＲのサイズは、２３．２±０．９ｎｍであった
。
ナノドラッグ合成を、以前に発表されたプロトコール２０に従って行った。図１Ａおよ
び図６も参照。簡単に述べれば、ＭＮにヘテロ二官能性リンカー Ｎ－スクシンイミジル
３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオネート（ＳＰＤＰ、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）をコンジュゲートし、それを、活性化ｓｉＲ
ＮＡオリゴの連結のために利用した。ＳＰＤＰを無水ＤＭＳＯ中に溶解し、ＭＮとインキ
ュベートし、それは、ｓｉＲＮＡオリゴとの還元不安定性ジスルフィド連結を形成するた
めのピリジルジチオ基を有する。ｓｉＲＮＡオリゴの５’－ＴｈｉｏＭＣ６を、ヌクレア
ーゼフリーのＰＢＳ中、３％ＴＣＥＰ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ．、Ｒ
ｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）処理により活性化して、チオールを遊離させた。そのｓｉＲＮＡ
オリゴを、酢酸アンモニウム／エタノール沈殿法を用いて精製した。ＴＣＥＰ活性化およ
び精製後、各オリゴ（ｓｉＰＤＬ１およびｓｉＳＣＲ）を水中に溶解し、ＳＰＤＰ修飾Ｍ
Ｎと一晩、インキュベートして、ナノドラッグ（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１およびＭＮ－ｓｉＳ
ＣＲ）を調製した。オリゴを、２つの異なる比率でＭＮに加えて、電気泳動分析法２０に
より定量化した場合、ＭＮあたり２．１±０．４（低用量）または４．８±０．７（高用
量）ｓｉＲＮＡオリゴを組み入れるナノドラッグを得た。ナノドラッグを、毎週、新鮮に
調製した。最終ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１／ＳＣＲのサイズは、２３．２±０．９ｎｍであった
。
【0140】
細胞株
マウス膵管腺腫ＰＡＮ ０２細胞株（ＮＣＩ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）を、１０％
ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、１％抗生物質（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、および２ｍＭ Ｌ－グルタミンを追
加したＲＰＭＩ １６４０培地（Ｓｉｇｍａ）中で、供給会社の使用説明書通り、培養し
た。培地を、週３回、交換し、週１回、継代培養のためにトリプシン処理した。
マウス膵管腺腫ＰＡＮ ０２細胞株（ＮＣＩ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）を、１０％
ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、１％抗生物質（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、および２ｍＭ Ｌ－グルタミンを追
加したＲＰＭＩ １６４０培地（Ｓｉｇｍａ）中で、供給会社の使用説明書通り、培養し
た。培地を、週３回、交換し、週１回、継代培養のためにトリプシン処理した。
【0141】
免疫組織化学的組織染色および蛍光顕微鏡法
一次および二次抗体を、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）から購入し、それに
は以下が含まれた：一次抗体として、抗ＣＤ３（カタログ番号：ＡＢ１６６６９）、抗Ｃ
Ｄ８（カタログ番号：ＡＢ２５４７８）、抗ＦｏｘＰ３（カタログ番号：ＡＢ７５７６３
）、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ（カタログ番号：ＡＢ４０６９）、抗Ｋｉ６７（カタログ番号
：ＡＢ１６６６７）、および抗ＰＤＬ１（カタログ番号：ＡＢ８０２７６）、二次抗体と
して、ヤギ抗ラットＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８血清吸着済み、ＡＢ９８４
２０）およびヤギ抗ウサギＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８血清吸着済み、ＡＢ
９６８９９）。
一次および二次抗体を、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）から購入し、それに
は以下が含まれた：一次抗体として、抗ＣＤ３（カタログ番号：ＡＢ１６６６９）、抗Ｃ
Ｄ８（カタログ番号：ＡＢ２５４７８）、抗ＦｏｘＰ３（カタログ番号：ＡＢ７５７６３
）、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ（カタログ番号：ＡＢ４０６９）、抗Ｋｉ６７（カタログ番号
：ＡＢ１６６６７）、および抗ＰＤＬ１（カタログ番号：ＡＢ８０２７６）、二次抗体と
して、ヤギ抗ラットＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８血清吸着済み、ＡＢ９８４
２０）およびヤギ抗ウサギＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８血清吸着済み、ＡＢ
９６８９９）。
【0142】
免疫組織化学的組織染色を、各バイオマーカーについてのプロトコールに従って実施し
た。簡単に述べれば、切除された腫瘍組織を、Ｔｉｓｓｕｅ－Ｔｅｋ ＯＣＴコンパウン
ド（Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）内に包埋し、液体窒素中
で瞬間凍結した。組織を、７μｍ切片へ切断し、４％ホルムアルデヒド中に１０分間、固
定した。必要とされる場合、界面活性剤透過処理を、ＰＢＳ中０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ－１００を用いて実施した。ＰＢＳ中０．５％ウシ血清アルブミンにおける５％ヤギ血
清でのブロッキング後、各スライドを、対応する一次抗体（希釈度１／２００）と５℃で
一晩、インキュベートした。各スライドを、二次抗体（希釈度１／２００）と６０分間、
インキュベートし、ＤＡＰＩを含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ封入剤（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ． Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）でマウントした。スラ
イドを、必要なフィルターセット（ＭＶＩ Ｉｎｃ．、Ａｖｏｎ、ＭＡ）を備えたＮｉｋ
ｏｎ Ｅ４００蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて分析した。
画像を、近赤外感度を有する電荷結合素子カメラ（ＳＰＯＴ ７．４ Ｓｌｉｄｅｒ Ｒ
ＴＫＥ；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ Ｈｅｉｇ
ｈｔｓ、ＭＩ）を用いて取得した。画像を、ＳＰＯＴ ４．０ Ａｄｖａｎｃｅバージョ
ンソフトウェア（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）およびＩｍａｇｅＪ
（Ｖｅｒ．１．５１ｃ、ＮＩＨ）を用いて分析した。
た。簡単に述べれば、切除された腫瘍組織を、Ｔｉｓｓｕｅ－Ｔｅｋ ＯＣＴコンパウン
ド（Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）内に包埋し、液体窒素中
で瞬間凍結した。組織を、７μｍ切片へ切断し、４％ホルムアルデヒド中に１０分間、固
定した。必要とされる場合、界面活性剤透過処理を、ＰＢＳ中０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ－１００を用いて実施した。ＰＢＳ中０．５％ウシ血清アルブミンにおける５％ヤギ血
清でのブロッキング後、各スライドを、対応する一次抗体（希釈度１／２００）と５℃で
一晩、インキュベートした。各スライドを、二次抗体（希釈度１／２００）と６０分間、
インキュベートし、ＤＡＰＩを含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ封入剤（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ． Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）でマウントした。スラ
イドを、必要なフィルターセット（ＭＶＩ Ｉｎｃ．、Ａｖｏｎ、ＭＡ）を備えたＮｉｋ
ｏｎ Ｅ４００蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて分析した。
画像を、近赤外感度を有する電荷結合素子カメラ（ＳＰＯＴ ７．４ Ｓｌｉｄｅｒ Ｒ
ＴＫＥ；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ Ｈｅｉｇ
ｈｔｓ、ＭＩ）を用いて取得した。画像を、ＳＰＯＴ ４．０ Ａｄｖａｎｃｅバージョ
ンソフトウェア（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）およびＩｍａｇｅＪ
（Ｖｅｒ．１．５１ｃ、ＮＩＨ）を用いて分析した。
【0143】
インビトロＭＲ画像化
ＭＲ画像化を、それぞれの毎週のＭＮ－ｓｉＰＤＬ１／ＳＣＲでの処置の前および後に
、傾斜インサートを有し、かつＰａｒａＶｉｓｉｏｎ ５．１ソフトウェアを用いて操作
されるＢｒｕｋｅｒ ９．４Ｔ水平ボアマグネット（Ｍａｇｎｅｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉ
ｃ）を用いて実施した。接種から２週間後、マウスは、腫瘍を形成し、腫瘍容積の定量的
測定のために、緩和促進での高速収集（rapid acquisition with relaxation enhancemen
t）（ＲＡＲＥ）Ｔ１強調プロトコール（ＴＥ＝８．５ミリ秒、ＴＲ＝２５００ミリ秒、
平均の数＝４、ＲＡＲＥファクター＝４、ＦＯＶ＝４×４ｃｍ２、マトリックスサイズ＝
１２８×１２８ピクセル、スライスの数＝５０、スライス厚さ＝０．５ｍｍ、およびスラ
イス間厚さ＝０．５ｍｍ）およびＴ２強調プロトコール（ＴＥ＝８．５ミリ秒、ＴＲ＝７
５００ミリ秒、平均の数＝４、ＲＡＲＥファクター＝１６、ＦＯＶ＝４×４ｃｍ２、マト
リックスサイズ＝１２８×１２８ピクセル、スライスの数＝５０、スライス厚さ＝０．５
ｍｍ、およびスライス間厚さ＝０．５ｍｍ、フリップ角＝１６２度）を利用するＭＲ画像
化によりモニターした。マルチスライスマルチエコー（ＭＳＭＥ）Ｔ２強調マップを、以
下のパラメータを用いて収集した：ＴＥ＝８、１６、２４、３２、４０、４８、５６、６
４、７２、および８０ミリ秒、ＴＲ＝４５００ミリ秒、スライスの数＝５、スライス配向
＝軸方向、平均の数＝１、ＲＡＲＥファクター＝１、撮影視野（field of view）＝４×
４ｃｍ２、マトリックスサイズ＝１２８×１２８ピクセル、スライス厚さ＝０．５ｍｍ、
スライス間厚さ＝０．５ｍｍ、フリップ角＝１２８度）。腫瘍容積の測定およびＴ２マッ
プの再構築は、関心領域（ＲＯＩ）選択の変動性の原因となる試料アイデンティティを知
らされていない２人の独立した研究者によって実施された。腫瘍におけるＴ２マップおよ
びＴ２緩和時間を、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｖｅｒ．１．５０ｃ、ＮＩＨ）を用いて
計算した。緩和率Ｒ２を、緩和時間の逆数として得た。結果として、緩和率の変化（ΔＲ
２）は、ＭＮにおける酸化鉄の濃度に比例する。ΔＲ２は、以下の方程式：Ｓ＝Ｓ０ Ｅ
ｘｐ（ＴＥ／Ｔ２）、△Ｒ２＝１／Ｔ２，１－１／Ｔ２，２＝（１／ＴＥ）＊ｌｎ（Ｓ１
／Ｓ２）を用いて計算され、方程式：△Ｒ２＝ｒ２・△［Ｃ］に従って、ＭＮの濃度に相
関した。全てのΔＲ２値は、０週間目に対して計算された。
ＭＲ画像化を、それぞれの毎週のＭＮ－ｓｉＰＤＬ１／ＳＣＲでの処置の前および後に
、傾斜インサートを有し、かつＰａｒａＶｉｓｉｏｎ ５．１ソフトウェアを用いて操作
されるＢｒｕｋｅｒ ９．４Ｔ水平ボアマグネット（Ｍａｇｎｅｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉ
ｃ）を用いて実施した。接種から２週間後、マウスは、腫瘍を形成し、腫瘍容積の定量的
測定のために、緩和促進での高速収集（rapid acquisition with relaxation enhancemen
t）（ＲＡＲＥ）Ｔ１強調プロトコール（ＴＥ＝８．５ミリ秒、ＴＲ＝２５００ミリ秒、
平均の数＝４、ＲＡＲＥファクター＝４、ＦＯＶ＝４×４ｃｍ２、マトリックスサイズ＝
１２８×１２８ピクセル、スライスの数＝５０、スライス厚さ＝０．５ｍｍ、およびスラ
イス間厚さ＝０．５ｍｍ）およびＴ２強調プロトコール（ＴＥ＝８．５ミリ秒、ＴＲ＝７
５００ミリ秒、平均の数＝４、ＲＡＲＥファクター＝１６、ＦＯＶ＝４×４ｃｍ２、マト
リックスサイズ＝１２８×１２８ピクセル、スライスの数＝５０、スライス厚さ＝０．５
ｍｍ、およびスライス間厚さ＝０．５ｍｍ、フリップ角＝１６２度）を利用するＭＲ画像
化によりモニターした。マルチスライスマルチエコー（ＭＳＭＥ）Ｔ２強調マップを、以
下のパラメータを用いて収集した：ＴＥ＝８、１６、２４、３２、４０、４８、５６、６
４、７２、および８０ミリ秒、ＴＲ＝４５００ミリ秒、スライスの数＝５、スライス配向
＝軸方向、平均の数＝１、ＲＡＲＥファクター＝１、撮影視野（field of view）＝４×
４ｃｍ２、マトリックスサイズ＝１２８×１２８ピクセル、スライス厚さ＝０．５ｍｍ、
スライス間厚さ＝０．５ｍｍ、フリップ角＝１２８度）。腫瘍容積の測定およびＴ２マッ
プの再構築は、関心領域（ＲＯＩ）選択の変動性の原因となる試料アイデンティティを知
らされていない２人の独立した研究者によって実施された。腫瘍におけるＴ２マップおよ
びＴ２緩和時間を、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｖｅｒ．１．５０ｃ、ＮＩＨ）を用いて
計算した。緩和率Ｒ２を、緩和時間の逆数として得た。結果として、緩和率の変化（ΔＲ
２）は、ＭＮにおける酸化鉄の濃度に比例する。ΔＲ２は、以下の方程式：Ｓ＝Ｓ０ Ｅ
ｘｐ（ＴＥ／Ｔ２）、△Ｒ２＝１／Ｔ２，１－１／Ｔ２，２＝（１／ＴＥ）＊ｌｎ（Ｓ１
／Ｓ２）を用いて計算され、方程式：△Ｒ２＝ｒ２・△［Ｃ］に従って、ＭＮの濃度に相
関した。全てのΔＲ２値は、０週間目に対して計算された。
【0144】
動物モデル
週齢６週間の雌マウス（Ｃ５７Ｂｌ／６、ｎ＝１２）に、マウス膵癌細胞株、Ｐａｎ０
２細胞（０．２５×１０６細胞）を右側腹部に移植した。細胞注射から１週間後、腫瘍サ
イズを、ノギス測定によりモニターした。腫瘍容積を、以下の方程式に従って計算した：
容積＝０．５×Ｌ×Ｗ２、式中、Ｌは長さ、Ｗは幅である。ノギスを用いて見積もられた
場合、腫瘍体積が５０ｍｍ３に達するとすぐに、処置を開始した。その後、腫瘍容積を、
マウスを本研究に登録した時点、ならびにそれぞれの毎週の処置の前および後にＭＲＩに
より測定した。全ての動物実験は、施設内ガイドラインに従って実施され、Ｍａｓｓａｃ
ｈｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌにおける動物実験委員会（Institut
ional Animal Care and Use Committee）により承認された。
週齢６週間の雌マウス（Ｃ５７Ｂｌ／６、ｎ＝１２）に、マウス膵癌細胞株、Ｐａｎ０
２細胞（０．２５×１０６細胞）を右側腹部に移植した。細胞注射から１週間後、腫瘍サ
イズを、ノギス測定によりモニターした。腫瘍容積を、以下の方程式に従って計算した：
容積＝０．５×Ｌ×Ｗ２、式中、Ｌは長さ、Ｗは幅である。ノギスを用いて見積もられた
場合、腫瘍体積が５０ｍｍ３に達するとすぐに、処置を開始した。その後、腫瘍容積を、
マウスを本研究に登録した時点、ならびにそれぞれの毎週の処置の前および後にＭＲＩに
より測定した。全ての動物実験は、施設内ガイドラインに従って実施され、Ｍａｓｓａｃ
ｈｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌにおける動物実験委員会（Institut
ional Animal Care and Use Committee）により承認された。
【0145】
治療
マウス（ｎ＝６）を、実験群（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１＋ゲムシタビンで処置される）また
は対照群（ＭＮ－ｓｉＳＣＲ＋ゲムシタビンで処置される）へランダムに割り当てた。実
験群におけるマウスを、ゲムシタビン（３３３．３ｍｇ／ｋｇ）を含む溶液中低用量ＭＮ
－ｓｉＰＤＬ１（鉄として１０ｍｇ ｋｇ－１；５２０ナノモル／ｋｇ ｓｉＲＮＡ）、
またはゲムシタビン（３３３．３ｍｇ／ｋｇ）を含む溶液中高用量ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１（
鉄として１０ｍｇ ｋｇ－１；９３７ナノモル／ｋｇ ｓｉＲＮＡ）で処置した。対照群
におけるマウスは、同じ用量でＭＮ－ｓｉＳＣＲおよびゲムシタビンを受けた。どちらの
場合も、薬物を、ナノドラッグとゲムシタビンの混合物として尾静脈を通して（ｉ．ｖ．
注射）週１回の頻度で投与した。７週間目の後、ゲムシタビンの同時投与を、最大耐容量
を超えることを避けるために中断し、ナノドラッグのみを、研究の終わりまで投与した。
全てのマウスは、最初の処置後最大１２週間、または動物が瀕死状態になるまで、腫瘍容
積の変化の記録をつけるために磁気共鳴画像法により毎週、モニターした。
マウス（ｎ＝６）を、実験群（ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１＋ゲムシタビンで処置される）また
は対照群（ＭＮ－ｓｉＳＣＲ＋ゲムシタビンで処置される）へランダムに割り当てた。実
験群におけるマウスを、ゲムシタビン（３３３．３ｍｇ／ｋｇ）を含む溶液中低用量ＭＮ
－ｓｉＰＤＬ１（鉄として１０ｍｇ ｋｇ－１；５２０ナノモル／ｋｇ ｓｉＲＮＡ）、
またはゲムシタビン（３３３．３ｍｇ／ｋｇ）を含む溶液中高用量ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１（
鉄として１０ｍｇ ｋｇ－１；９３７ナノモル／ｋｇ ｓｉＲＮＡ）で処置した。対照群
におけるマウスは、同じ用量でＭＮ－ｓｉＳＣＲおよびゲムシタビンを受けた。どちらの
場合も、薬物を、ナノドラッグとゲムシタビンの混合物として尾静脈を通して（ｉ．ｖ．
注射）週１回の頻度で投与した。７週間目の後、ゲムシタビンの同時投与を、最大耐容量
を超えることを避けるために中断し、ナノドラッグのみを、研究の終わりまで投与した。
全てのマウスは、最初の処置後最大１２週間、または動物が瀕死状態になるまで、腫瘍容
積の変化の記録をつけるために磁気共鳴画像法により毎週、モニターした。
【0146】
統計解析
データは、示されている場合、平均±ｓ．ｄ．またはｓ．ｅ．ｍ．として表された。統
計比較は、両側ｔ検定（ＳｉｇｍａＳｔａｔ ３．０；Ｓｙｓｔａｔソフトウェア、Ｒｉ
ｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）を用いて引き出された。Ｐ＜０．０５の値は、統計的に有意である
と見なされた。
データは、示されている場合、平均±ｓ．ｄ．またはｓ．ｅ．ｍ．として表された。統
計比較は、両側ｔ検定（ＳｉｇｍａＳｔａｔ ３．０；Ｓｙｓｔａｔソフトウェア、Ｒｉ
ｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）を用いて引き出された。Ｐ＜０．０５の値は、統計的に有意である
と見なされた。
【0147】
[実施例１]
膵癌免疫療法のためのＲＮＡｉ媒介性ＰＤ－Ｌ１阻害
ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１は、原発性腫瘍へインビボで送達することができ、その送達は、非
侵襲性ＭＲＩによりモニターすることができる。
膵癌免疫療法のためのＲＮＡｉ媒介性ＰＤ－Ｌ１阻害
ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１は、原発性腫瘍へインビボで送達することができ、その送達は、非
侵襲性ＭＲＩによりモニターすることができる。
【0148】
静脈内注射後、治療的量のｓｉＲＮＡを腫瘍細胞へ成功裏に送達するために、本発明者
らは、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の設計を、水力学的サイズ、コンジュゲーション方法、および
ナノ粒子あたりのｓｉＲＮＡオリゴの数に関して最適化する必要があった。ＭＮ－ｓｉＰ
ＤＬ１の例示的な合成スキームは図１Ａに図示されている。長い循環時間（＞４時間）お
よび血管内皮を通って、かつ腫瘍間質に渡る効率的な拡散を保証するために、本発明者ら
は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１を、ＳＰＤＰリンカーおよびそのオリゴへの連続的コンジュゲー
ション後のそれの最終サイズが２３．２±０．９ｎｍであるように、設計した。ナノ粒子
あたりのｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドの数は、生体共役反応への立体干渉を最小限にす
ることを目的として４．８±０．７以下へ調整された。この設計は、血管透過性－貯留性
亢進（Enhanced Permeation-Retention）（ＥＰＲ）効果を通して腫瘍組織によるナノド
ラッグの取り込みを亢進するように最適化される。加えて、ＳＰＤＰリンカーは、それの
還元可能な性質により選択され、その性質は、癌細胞におけるナノ粒子からのオリゴの解
離、およびＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）への効率的な移行を保証する。
最後に、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の磁気共鳴画像法による検出を可能にするために、最終調製
物の緩和能（Ｒ２）を、８２．５ｍＭ－１秒－１のＲ２を達成するように［Ｆｅ３＋］／
［Ｆｅ２＋］の比率を変化させることにより調整した（図１Ｂ）。
らは、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の設計を、水力学的サイズ、コンジュゲーション方法、および
ナノ粒子あたりのｓｉＲＮＡオリゴの数に関して最適化する必要があった。ＭＮ－ｓｉＰ
ＤＬ１の例示的な合成スキームは図１Ａに図示されている。長い循環時間（＞４時間）お
よび血管内皮を通って、かつ腫瘍間質に渡る効率的な拡散を保証するために、本発明者ら
は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１を、ＳＰＤＰリンカーおよびそのオリゴへの連続的コンジュゲー
ション後のそれの最終サイズが２３．２±０．９ｎｍであるように、設計した。ナノ粒子
あたりのｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドの数は、生体共役反応への立体干渉を最小限にす
ることを目的として４．８±０．７以下へ調整された。この設計は、血管透過性－貯留性
亢進（Enhanced Permeation-Retention）（ＥＰＲ）効果を通して腫瘍組織によるナノド
ラッグの取り込みを亢進するように最適化される。加えて、ＳＰＤＰリンカーは、それの
還元可能な性質により選択され、その性質は、癌細胞におけるナノ粒子からのオリゴの解
離、およびＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）への効率的な移行を保証する。
最後に、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の磁気共鳴画像法による検出を可能にするために、最終調製
物の緩和能（Ｒ２）を、８２．５ｍＭ－１秒－１のＲ２を達成するように［Ｆｅ３＋］／
［Ｆｅ２＋］の比率を変化させることにより調整した（図１Ｂ）。
【0149】
効果的な治療プロトコールを確立するために、本発明者らは、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の膵
臓腫瘍組織への送達を確認すること、およびＭＲＩが、腫瘍におけるＭＮ－ｓｉＰＤＬ１
生物学的利用率を半定量的に測定する能力を実証することを必要とした。本発明者らは、
本発明者らの仮説を、ＰＡＮ０２同系膵癌モデルを用いて試験した。これらの動物は、接
種から２週間後、腫瘍を形成し、シングルエコーおよびマルチエコーＴ２強調プロトコー
ルを用いるＭＲ画像化によりモニターされた。緩和率の差（ΔＲ２）は、以下の方程式を
用いて計算された：Ｓ＝Ｓ０ Ｅｘｐ（ＴＥ／Ｔ２）、△Ｒ２＝１／Ｔ２，１－１／Ｔ２
，２＝（１／ＴＥ）＊Ｌｎ（Ｓ１／Ｓ２）、および△Ｒ２＝ｒ２・△［Ｃ］。腫瘍組織に
おけるＭＮ－ｓｉＰＤＬ１分布の可視化のために、Ｔ２マップを、マルチエコーＴ２強調
画像セットから再構築した。
臓腫瘍組織への送達を確認すること、およびＭＲＩが、腫瘍におけるＭＮ－ｓｉＰＤＬ１
生物学的利用率を半定量的に測定する能力を実証することを必要とした。本発明者らは、
本発明者らの仮説を、ＰＡＮ０２同系膵癌モデルを用いて試験した。これらの動物は、接
種から２週間後、腫瘍を形成し、シングルエコーおよびマルチエコーＴ２強調プロトコー
ルを用いるＭＲ画像化によりモニターされた。緩和率の差（ΔＲ２）は、以下の方程式を
用いて計算された：Ｓ＝Ｓ０ Ｅｘｐ（ＴＥ／Ｔ２）、△Ｒ２＝１／Ｔ２，１－１／Ｔ２
，２＝（１／ＴＥ）＊Ｌｎ（Ｓ１／Ｓ２）、および△Ｒ２＝ｒ２・△［Ｃ］。腫瘍組織に
おけるＭＮ－ｓｉＰＤＬ１分布の可視化のために、Ｔ２マップを、マルチエコーＴ２強調
画像セットから再構築した。
【0150】
図２Ａに示されているように、腫瘍組織におけるＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の局在は、Ｔ２緩
和時間の短縮を引き起こし、造影剤投与前の画像と比較して、陰性コントラストを生じた
。ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１のΔＲ２由来濃度は、最初の３週間の間、線形増加を示した。ＭＮ
－ｓｉＰＤＬ１の蓄積速度は、その期間の間、ＭＮ－ｓｉＳＣＲの蓄積速度より１．５倍
速かった（図２Ｂ）。腫瘍細胞におけるナノドラッグの濃度は、ほとんど、細胞分化によ
る希釈を反映し、ＭＮ－ｓｉＳＣＲで処置された対照腫瘍のより速い成長速度が、この群
において観察された、時間経過による濃度のより遅い増加をもたらした可能性が高い。こ
の差は、腫瘍成長のより後期においてより顕著であり、この仮説をさらに裏付けている。
ＭＮ－ｓｉＳＣＲで処置された対照群における腫瘍細胞分化による迅速なナノドラッグ希
釈を反映した、濃度減少の速度は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１で処置された実験群における濃度
減少速度の５．１倍であり、対照動物における腫瘍のより迅速な成長を示している（図２
Ｃ）。
和時間の短縮を引き起こし、造影剤投与前の画像と比較して、陰性コントラストを生じた
。ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１のΔＲ２由来濃度は、最初の３週間の間、線形増加を示した。ＭＮ
－ｓｉＰＤＬ１の蓄積速度は、その期間の間、ＭＮ－ｓｉＳＣＲの蓄積速度より１．５倍
速かった（図２Ｂ）。腫瘍細胞におけるナノドラッグの濃度は、ほとんど、細胞分化によ
る希釈を反映し、ＭＮ－ｓｉＳＣＲで処置された対照腫瘍のより速い成長速度が、この群
において観察された、時間経過による濃度のより遅い増加をもたらした可能性が高い。こ
の差は、腫瘍成長のより後期においてより顕著であり、この仮説をさらに裏付けている。
ＭＮ－ｓｉＳＣＲで処置された対照群における腫瘍細胞分化による迅速なナノドラッグ希
釈を反映した、濃度減少の速度は、ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１で処置された実験群における濃度
減少速度の５．１倍であり、対照動物における腫瘍のより迅速な成長を示している（図２
Ｃ）。
【0151】
ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１での併用処置は、同系膵癌のモデルにおいて有
効である。
効である。
【0152】
本発明者らの治療研究は、膵癌におけるゲムシタビンとＭＮ－ｓｉＰＤＬ１の併用処置
の潜在能力を例証した。これらの研究において、膵癌の同系モデルは、週齢６週間の雌Ｃ
５７ＢＬ／６マウスの右側腹部にマウス膵癌細胞株ＰＡＮ０２を移植することにより作製
された。
の潜在能力を例証した。これらの研究において、膵癌の同系モデルは、週齢６週間の雌Ｃ
５７ＢＬ／６マウスの右側腹部にマウス膵癌細胞株ＰＡＮ０２を移植することにより作製
された。
【0153】
ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１と組み合わせたゲムシタビンでの処置が、腫瘍成長を阻害すること
ができるかどうかを決定するために、マウスを、尾静脈を通して静脈内に（ｉ．ｖ．）送
達される低用量のＭＮ－ｓｉＰＤＬ１もしくはｓｉＳＣＲ（両方の群において１０ｍｇ／
ｋｇ Ｆｅ；５２０ナノモル／ｋｇ ｓｉＲＮＡ）または高用量のＭＮ－ｓｉＰＤＬ１も
しくはｓｉＳＣＲ（両方の群において１０ｍｇ／ｋｇ Ｆｅ、９３７ナノモル／ｋｇ ｓ
ｉＲＮＡ）を含む溶液中のゲムシタビンで処置した。併用処置を、解剖学的ＭＲ画像化に
より測定された場合、腫瘍サイズが＞５０ｍｍ３に達した時に開始し、１２週間、継続し
た。治療研究の全てにおいて、腫瘍容積の変化を、それぞれの毎週の処置の投与前に解剖
学的ＭＲ画像化によりモニターした（図３Ａ）。
ができるかどうかを決定するために、マウスを、尾静脈を通して静脈内に（ｉ．ｖ．）送
達される低用量のＭＮ－ｓｉＰＤＬ１もしくはｓｉＳＣＲ（両方の群において１０ｍｇ／
ｋｇ Ｆｅ；５２０ナノモル／ｋｇ ｓｉＲＮＡ）または高用量のＭＮ－ｓｉＰＤＬ１も
しくはｓｉＳＣＲ（両方の群において１０ｍｇ／ｋｇ Ｆｅ、９３７ナノモル／ｋｇ ｓ
ｉＲＮＡ）を含む溶液中のゲムシタビンで処置した。併用処置を、解剖学的ＭＲ画像化に
より測定された場合、腫瘍サイズが＞５０ｍｍ３に達した時に開始し、１２週間、継続し
た。治療研究の全てにおいて、腫瘍容積の変化を、それぞれの毎週の処置の投与前に解剖
学的ＭＲ画像化によりモニターした（図３Ａ）。
【0154】
ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１およびゲムシタビンでの同時処置されたマウスは、非活性ＭＮ－ｓ
ｉＳＣＲ対照と比べて、腫瘍成長の有意な阻害を示した（Ｐ＜０．０５）。この差は、腫
瘍容積が０週間目における５２．８±６．７ｍｍ３から２週間目における５．３±０．８
ｍｍ３へ減少した時の、処置の開始から２週間目において明らかであった（ｐ＝０．０１
２）。その差は、本研究の期間中、持続した（ｐ＜０．０５）。低用量群における腫瘍容
積は、６週間目までＭＮ－ｓｉＳＣＲ対照と異ならなかった（図３Ａ～Ｂおよび図５Ａ～
Ｄ）。
ｉＳＣＲ対照と比べて、腫瘍成長の有意な阻害を示した（Ｐ＜０．０５）。この差は、腫
瘍容積が０週間目における５２．８±６．７ｍｍ３から２週間目における５．３±０．８
ｍｍ３へ減少した時の、処置の開始から２週間目において明らかであった（ｐ＝０．０１
２）。その差は、本研究の期間中、持続した（ｐ＜０．０５）。低用量群における腫瘍容
積は、６週間目までＭＮ－ｓｉＳＣＲ対照と異ならなかった（図３Ａ～Ｂおよび図５Ａ～
Ｄ）。
【0155】
高用量ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１群において、マウスの６７％が、腫瘍成長の阻害として定義
される処置に対する客観的応答を示した。マウスの３３％が、応答することができず、６
週間後に死亡し、応答のばらつきを示している。応答によって実験動物を層別化する腫瘍
成長の時定数は表１に提示されている。
される処置に対する客観的応答を示した。マウスの３３％が、応答することができず、６
週間後に死亡し、応答のばらつきを示している。応答によって実験動物を層別化する腫瘍
成長の時定数は表１に提示されている。
【0156】
【表3】
【0157】
最後に、動物生存率を評価した時、併用処置の優位性が明らかに見られた（図３Ｃ）。
ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１（高用量）で処置されたマウスの６７％が１２週
間目まで生存した。ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１（低用量）で処置されたマウ
スの６７％が、８週間目まで生存した。ＭＮ－ｓｉＳＣＲおよびゲムシタビンで処置され
た対照マウスの全部は、６週間目までに死亡した。
ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１（高用量）で処置されたマウスの６７％が１２週
間目まで生存した。ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＰＤＬ１（低用量）で処置されたマウ
スの６７％が、８週間目まで生存した。ＭＮ－ｓｉＳＣＲおよびゲムシタビンで処置され
た対照マウスの全部は、６週間目までに死亡した。
【0158】
興味深いことに、ゲムシタビンおよびＭＮ－ｓｉＳＣＲで処置された群におけるマウス
の全部が、おそらく高速の腫瘍成長のせいで、大きな壊死性腫瘍を生じた。腫瘍壊死およ
び潰瘍化は、実験動物において見られなかった（図３Ｄ）。
の全部が、おそらく高速の腫瘍成長のせいで、大きな壊死性腫瘍を生じた。腫瘍壊死およ
び潰瘍化は、実験動物において見られなかった（図３Ｄ）。
【0159】
併用処置は、細胞傷害性Ｔ細胞の不活性化を防止した
抗腫瘍免疫応答への処置の効果を評価するために、本発明者らは、処置されたマウスの
腫瘍における免疫細胞の動員および活性化の組織バイオマーカーを分析した。ＭＮ－ｓｉ
ＰＤＬ１およびゲムシタビンでの併用処置後、ＰＤ－Ｌ１発現は有意に低下した。ＣＤ８
＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の動員、およびグランザイムＢのより高いレベルにより証
明されているように、細胞媒介性細胞傷害の増加の証拠があった。免疫抑制性Ｆｏｘｐ３
＋ 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞による腫瘍浸潤もまた、有意に低下した。最後に、腫瘍細
胞増殖が阻害された（図４Ａ～Ｂ）。興味深いことに、高用量ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１および
ゲムシタビンで処置された非応答性動物におけるこれらのバイオマーカーの発現は、対照
動物と退行する実験動物との中間であり、肉眼的応答を観察するために必要とされるＰＤ
－Ｌ１阻害の臨界レベルがあることを示唆している（図４Ａ～Ｂ）。これらの結果は、観
察された治療効果が、抗腫瘍免疫応答の誘導の成功の結果であることを示唆した。
抗腫瘍免疫応答への処置の効果を評価するために、本発明者らは、処置されたマウスの
腫瘍における免疫細胞の動員および活性化の組織バイオマーカーを分析した。ＭＮ－ｓｉ
ＰＤＬ１およびゲムシタビンでの併用処置後、ＰＤ－Ｌ１発現は有意に低下した。ＣＤ８
＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の動員、およびグランザイムＢのより高いレベルにより証
明されているように、細胞媒介性細胞傷害の増加の証拠があった。免疫抑制性Ｆｏｘｐ３
＋ 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞による腫瘍浸潤もまた、有意に低下した。最後に、腫瘍細
胞増殖が阻害された（図４Ａ～Ｂ）。興味深いことに、高用量ＭＮ－ｓｉＰＤＬ１および
ゲムシタビンで処置された非応答性動物におけるこれらのバイオマーカーの発現は、対照
動物と退行する実験動物との中間であり、肉眼的応答を観察するために必要とされるＰＤ
－Ｌ１阻害の臨界レベルがあることを示唆している（図４Ａ～Ｂ）。これらの結果は、観
察された治療効果が、抗腫瘍免疫応答の誘導の成功の結果であることを示唆した。
【0160】
参考文献
【0161】
【表4-1】
【0162】
【表4-2】
【0163】
【表4-3】
【0164】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と共に記載されているが、前述の説明は、例証することを意
図され、本発明の範囲を限定することを意図されず、本発明の範囲は添付の特許請求の範
囲の範囲によって定義されることは、理解されているはずである。他の態様、利点、およ
び改変は、以下の特許請求の範囲内である。
本発明は、その詳細な説明と共に記載されているが、前述の説明は、例証することを意
図され、本発明の範囲を限定することを意図されず、本発明の範囲は添付の特許請求の範
囲の範囲によって定義されることは、理解されているはずである。他の態様、利点、およ
び改変は、以下の特許請求の範囲内である。
【図1】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4-1】
【図4-2】
【図5-1】
【図5-2】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2024-05-17
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療用ナノ粒子であって、前記ナノ粒子が
１０ｎｍ～３０ｎｍの間の直径を有し、ならびに
酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェックポイント分子を標的化する阻害性核酸を含み、
好ましくは、前記チェックポイント分子がプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）である、治療用ナノ粒子。
１０ｎｍ～３０ｎｍの間の直径を有し、ならびに
酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェックポイント分子を標的化する阻害性核酸を含み、
好ましくは、前記チェックポイント分子がプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）である、治療用ナノ粒子。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0164】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と共に記載されているが、前述の説明は、例証することを意図され、本発明の範囲を限定することを意図されず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲の範囲によって定義されることは、理解されているはずである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内である。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を列挙する。
［発明１］
治療用ナノ粒子であって、前記ナノ粒子が
１０ｎｍ～３０ｎｍの間の直径を有し、ならびに
酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェックポイント分子を標的化する阻害性核酸を含み、
好ましくは、前記チェックポイント分子がプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）である、治療用ナノ粒子。
［発明２］
前記核酸が、配列番号１と相補的な少なくとも１０個の連続したヌクレオチドの配列を含む、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明３］
前記核酸が、少なくとも１個の改変ヌクレオチドを含む、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明４］
前記少なくとも１個の改変ヌクレオチドがロックドヌクレオチドである、発明３に記載の治療用ナノ粒子。
［発明５］
前記ポリマーコーティングがデキストランを含む、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明６］
前記核酸が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明７］
前記核酸が、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を含む化学的部分を通してナノ粒子へ共有結合性に連結されている、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明８］
前記ナノ粒子が磁性である、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明９］
発明１～８のいずれか一つに記載の治療用ナノ粒子および、任意で、化学療法剤を含む薬学的組成物。
［発明１０］
治療的有効量の、発明１～８のいずれか一つに記載の治療用ナノ粒子および化学療法剤を、癌を有する対象に投与することを含む、癌を有する対象を処置するための方法。
［発明１１］
対象において癌を処置することにおける使用のための、発明１～８のいずれか一つに記載の治療用ナノ粒子および化学療法剤。
［発明１２］
前記癌が、乳癌、結腸癌、腎癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、胃癌、甲状腺癌、および子宮癌からなる群から選択される、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１３］
対象における癌細胞の位置もしくは数、または対象における治療用ナノ粒子の位置を決定するために、対象の組織を画像化することをさらに含む、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１４］
前記治療用ナノ粒子が、対象に２回以上の用量で投与される、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１５］
前記治療用ナノ粒子が対象に少なくとも週１回、投与される、発明１４に記載の方法または使用。
［発明１６］
前記治療用ナノ粒子が、対象に静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、または腹腔内投与により投与される、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１７］
前記対象が膵癌を有する、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１８］
前記化学療法剤がゲムシタビンである、発明１０もしくは１６に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１９］
前記化学療法剤がゲムシタビンである、発明９に記載の薬学的組成物。
本発明は、その詳細な説明と共に記載されているが、前述の説明は、例証することを意図され、本発明の範囲を限定することを意図されず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲の範囲によって定義されることは、理解されているはずである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内である。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を列挙する。
［発明１］
治療用ナノ粒子であって、前記ナノ粒子が
１０ｎｍ～３０ｎｍの間の直径を有し、ならびに
酸化鉄コア、ポリマーコーティング、および前記ナノ粒子へ共有結合性に連結されている、免疫チェックポイント分子を標的化する阻害性核酸を含み、
好ましくは、前記チェックポイント分子がプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）である、治療用ナノ粒子。
［発明２］
前記核酸が、配列番号１と相補的な少なくとも１０個の連続したヌクレオチドの配列を含む、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明３］
前記核酸が、少なくとも１個の改変ヌクレオチドを含む、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明４］
前記少なくとも１個の改変ヌクレオチドがロックドヌクレオチドである、発明３に記載の治療用ナノ粒子。
［発明５］
前記ポリマーコーティングがデキストランを含む、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明６］
前記核酸が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明７］
前記核酸が、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を含む化学的部分を通してナノ粒子へ共有結合性に連結されている、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明８］
前記ナノ粒子が磁性である、発明１に記載の治療用ナノ粒子。
［発明９］
発明１～８のいずれか一つに記載の治療用ナノ粒子および、任意で、化学療法剤を含む薬学的組成物。
［発明１０］
治療的有効量の、発明１～８のいずれか一つに記載の治療用ナノ粒子および化学療法剤を、癌を有する対象に投与することを含む、癌を有する対象を処置するための方法。
［発明１１］
対象において癌を処置することにおける使用のための、発明１～８のいずれか一つに記載の治療用ナノ粒子および化学療法剤。
［発明１２］
前記癌が、乳癌、結腸癌、腎癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、胃癌、甲状腺癌、および子宮癌からなる群から選択される、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１３］
対象における癌細胞の位置もしくは数、または対象における治療用ナノ粒子の位置を決定するために、対象の組織を画像化することをさらに含む、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１４］
前記治療用ナノ粒子が、対象に２回以上の用量で投与される、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１５］
前記治療用ナノ粒子が対象に少なくとも週１回、投与される、発明１４に記載の方法または使用。
［発明１６］
前記治療用ナノ粒子が、対象に静脈内、皮下、動脈内、筋肉内、または腹腔内投与により投与される、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１７］
前記対象が膵癌を有する、発明１０に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１８］
前記化学療法剤がゲムシタビンである、発明１０もしくは１６に記載の方法または発明１１に記載の使用。
［発明１９］
前記化学療法剤がゲムシタビンである、発明９に記載の薬学的組成物。