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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024097212
(43)【公開日】2024-07-18
(54)【発明の名称】アルツハイマー病予防及び／又は治療薬
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20240710BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240710BHJP
A61K 31/245 20060101ALI20240710BHJP
A61K 31/407 20060101ALI20240710BHJP
A61K 31/343 20060101ALI20240710BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20240710BHJP
G01N 33/15 20060101ALI20240710BHJP
A61K 31/403 20060101ALI20240710BHJP
C07D 209/88 20060101ALN20240710BHJP
C07D 487/16 20060101ALN20240710BHJP
C07D 307/93 20060101ALN20240710BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61P25/28
A61K31/245
A61K31/407
A61K31/343
G01N33/50 Z
G01N33/15 Z
A61K31/403
C07D209/88
C07D487/16
C07D307/93
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023000610
(22)【出願日】2023-01-05
(71)【出願人】
【識別番号】502285457
【氏名又は名称】学校法人順天堂
(74)【代理人】
【識別番号】110000084
【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】藍 智彦
(72)【発明者】
【氏名】三井田 孝
(72)【発明者】
【氏名】堀 敦詞
(72)【発明者】
【氏名】赤松 和土
【テーマコード（参考）】
2G045
4C050
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
2G045AA40
4C050AA02
4C050AA07
4C050AA08
4C050BB04
4C050CC04
4C050DD01
4C050EE02
4C050FF02
4C050GG03
4C050HH01
4C084AA17
4C084NA14
4C084ZA16
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA05
4C086BC04
4C086BC12
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA16
4C206AA01
4C206AA02
4C206FA38
4C206MA01
4C206MA04
4C206NA14
4C206ZA16
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ＡＤ患者において、ＰＳＥＮ１変異がどのような機序で神経変性症状を引き起こすのかを解明し、さらにその神経変性症状の発症を予防及び／又は治療する手段を見出すこと。
【解決手段】ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分とするＡＤ予防及び／又は治療薬。
【選択図】なし
【解決手段】ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分とするＡＤ予防及び／又は治療薬。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分とするＡＤ予防及び／又は治療薬。
【請求項2】
ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である請求項１記載のＡＤ予防及び／又は治療薬。
【請求項3】
ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である請求項２記載のＡＤ予防及び／又は治療薬。
【請求項4】
ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分として含有する、ＡＤを予防及び／又は治療するための医薬組成物。
【請求項5】
ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異）より分化誘導させた神経細胞に試験薬剤を添加してＣａイメージング法により細胞内Ｃａ動態を計測することにより、異常Ｃａ波を抑制する成分を見出す、ＡＤ予防及び／又は治療薬のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アルツハイマー病予防及び／又は治療薬に関する。
【背景技術】
【0002】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の主な原因疾患である。ＡＤの病態機序として、異常アミロイドの沈着やタウタンパク質の沈着による神経細胞の機能障害が提唱されている（非特許文献１）。また、アミロイドβタンパク質（Ａβ）のプロセッシングにおいてセクレターゼという酵素が重要な役割を担っており、特に、Ａβ前駆体蛋白質（ＡＰＰ）のＮ末端側を切断する酵素としてβ－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）が着目され、β－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）阻害剤がＡＤ剤として開発されていたが、いずれも開発中止になっている。また、抗Ａβ抗体もいくつか開発されたが、アデュカヌマブが唯一ＦＤＡで承認になったにすぎない。
【0003】
一方、ＡＤに関連する遺伝子として多くの遺伝子変異が報告されており、そのうち、てんかんを有するＡＤ患者で報告されていた変異であるｐｒｅｓｅｎｉlｉｎ－１（ＰＳＥＮ１）遺伝子（非特許文献２）の多くの変異は、ＡＤの原因遺伝子であると認識されている（非特許文献３）。しかし、このＰＳＥＮ１の変異の多くは、大きいＡβ４２／Ａβ４０比や多量のＡβ産生をもたらさないことが報告されている（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２０１６；１３９：２３７－２５２
【非特許文献2】Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｂｅｈａｖ．２０１１；２１（１）：２０－２．
【非特許文献3】Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１５；７７（１）：４３－５１
【非特許文献4】ＰＮＡＳ．２０１７；１１４（４）：Ｅ４７６－Ｅ４８５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
すなわち、ＡＤの原因遺伝子であると認識されているＰＳＥＮ１変異がどのようにしてＡＤを引き起こすのかについては、全く知られていない。
そこで、本発明の課題は、ＡＤ患者において、ＰＳＥＮ１変異がどのような機序で神経変性症状を引き起こすのかを解明し、さらにその神経変性症状の発症を予防及び／又は治療する手段を見出すことである。
そこで、本発明の課題は、ＡＤ患者において、ＰＳＥＮ１変異がどのような機序で神経変性症状を引き起こすのかを解明し、さらにその神経変性症状の発症を予防及び／又は治療する手段を見出すことである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者は、非特許文献４においてＡβ４２、Ａβ４０の産生量が少ないと報告されているＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者由来ｉＰＳ細胞（ｉＰＳＣ）由来神経細胞と健常者ｉＰＳＣ由来神経細胞について細胞内Ｃａ動態を計測したところ、ＡＤ患者のＰＳＥＮ１変異神経細胞で健常者神経細胞には見られない異常興奮（異常Ｃａ波）が観察された。そして、ＰＳＥＮ１変異神経細胞における細胞外液からＣａ除去するとその異常Ｃａ波は消失した。これらのことから、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者においては、細胞内Ｃａ濃度の異常上昇に伴って神経細胞の異常興奮が生じることにより、神経変性症状が発症する可能性が示唆された。
そこで、細胞内におけるＣａストアである小胞体内のＣａ濃度を制御する薬剤を探索するべく、小胞体からのＣａ流出を制御しているリアノジン受容体１（ＲＹＲ１）及びリアノジン受容体２（ＲＹＲ２）、さらには小胞体へのＣａ流入を制御している小胞体Ｃａ2+ＡＴＰアーゼ（ＳＥＲＣＡ）について検討して、ＲＹＲ２阻害剤とＳＥＲＣＡ阻害剤が神経細胞の異常カルシウム波を抑制する成分であることを確認し、それらがＡＤ予防及び／又は治療薬として有用であることを見出した。
そこで、細胞内におけるＣａストアである小胞体内のＣａ濃度を制御する薬剤を探索するべく、小胞体からのＣａ流出を制御しているリアノジン受容体１（ＲＹＲ１）及びリアノジン受容体２（ＲＹＲ２）、さらには小胞体へのＣａ流入を制御している小胞体Ｃａ2+ＡＴＰアーゼ（ＳＥＲＣＡ）について検討して、ＲＹＲ２阻害剤とＳＥＲＣＡ阻害剤が神経細胞の異常カルシウム波を抑制する成分であることを確認し、それらがＡＤ予防及び／又は治療薬として有用であることを見出した。
【0007】
すなわち、本発明は、次の発明［１］～［１４］を提供するものである。
［１］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分とするＡＤ予防及び／又は治療薬。
［２］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［１］記載のＡＤ予防及び／又は治療薬。
［３］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［２］記載のＡＤ予防及び／又は治療薬。
［４］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分として含有する、ＡＤを予防及び／又は治療するための医薬組成物。
［５］ＡＤ予防及び／又は治療薬製造のための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分の使用。
［６］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［５］記載の使用。
［７］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［６］記載の使用。
［８］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を投与することを特徴とする、ＡＤ予防及び／又は治療方法。
［９］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［８］記載の方法。
［１０］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［９］記載の方法。
［１１］ＡＤの予防及び／又は治療に用いるための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分。
［１２］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［１１］記載の成分。
［１３］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［１２］記載の成分。
［１４］ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異）より分化誘導させた神経細胞に試験薬剤を添加してＣａイメージング法により細胞内Ｃａ動態を計測することにより、異常Ｃａ波を抑制する成分を見出す、ＡＤ予防及び／又は治療薬のスクリーニング方法。
［１］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分とするＡＤ予防及び／又は治療薬。
［２］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［１］記載のＡＤ予防及び／又は治療薬。
［３］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［２］記載のＡＤ予防及び／又は治療薬。
［４］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分として含有する、ＡＤを予防及び／又は治療するための医薬組成物。
［５］ＡＤ予防及び／又は治療薬製造のための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分の使用。
［６］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［５］記載の使用。
［７］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［６］記載の使用。
［８］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を投与することを特徴とする、ＡＤ予防及び／又は治療方法。
［９］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［８］記載の方法。
［１０］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［９］記載の方法。
［１１］ＡＤの予防及び／又は治療に用いるための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分。
［１２］ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分が、ＲＹＲ２阻害剤及びＳＥＲＣＡ阻害剤から選ばれる成分である［１１］記載の成分。
［１３］ＲＹＲ２阻害剤が、カルベジロール又はその塩である［１２］記載の成分。
［１４］ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異）より分化誘導させた神経細胞に試験薬剤を添加してＣａイメージング法により細胞内Ｃａ動態を計測することにより、異常Ｃａ波を抑制する成分を見出す、ＡＤ予防及び／又は治療薬のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【0008】
ＲＹＲ２阻害剤、ＳＥＲＣＡ阻害剤など、ＡＤ患者の神経細胞における異常Ｃａ波を抑制する成分を用いれば、ＡＤ患者の神経細胞における異常Ｃａ波が抑制でき、神経細胞の異常興奮による種々の神経症状が抑制でき、ＡＤの種々の神経症状を予防及び／又は治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図1】健常者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＷＴ）とＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）の培養日程を示す。
【図2】ｉＰＳＣ由来神経幹細胞の神経細胞への分化の確認（免疫染色）結果を示す。培養した神経細胞を抗ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ２（ＭＡＰ２）抗体（ＡＢ５６２２，Ｍｅｒｃｋ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、抗βIIIチューブリン抗体（Ｔ８６６０，Ｍｅｒｃｋ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で染色し、成熟神経細胞であることを確認した。
【図3】ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）での異常Ｃａ波の観察結果を示す。健常者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＷＴ）では異常Ｃａ波は観察されなかったのに対し、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）では、明確な異常Ｃａ波が観察された。
【図4】Ｃａ波形による分類を示す。
【図5】細胞外液からＣａ2+を除外したときのＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）における異常Ｃａ波の観察結果を示す。
【図6】ＳＥＲＣＡ阻害剤であるシクロピアゾン酸（ＣＰＡ）を２０μＭ添加した結果を示す。
【図7】健常者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＷＴ）のＣａ信号を示す。
【図8】ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）におけるＣａ波信号を示す。
【図9】ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ｍ１４６Ｌ）における異常Ｃａ波信号を示す。
【図10】ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ Ｌ２８６Ｖ）における異常Ｃａ波信号を示す。
【図11】カルベジロール添加による、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）における異常Ｃａ波信号の抑制効果を示す。
【図12】カルベジロール添加による、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ Ｍ１４６Ｌ）における異常Ｃａ波信号の抑制効果を示す。
【図13】カルベジロール添加による、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ Ｌ２８６Ｖ）における異常Ｃａ波信号の抑制効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0010】
本発明の一態様は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分とするＡＤ予防及び／又は治療薬である。
また、本発明の他の一態様は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分として含有する、ＡＤを予防及び／又は治療するための医薬組成物である。
また、本発明の他の一態様は、ＡＤ予防及び／又は治療薬製造のための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分の使用である。
さらに、本発明の他の一態様は、ＡＤの予防及び／又は治療に用いるための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分である。
さらに本発明の他の一態様は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を投与することを特徴とする、ＡＤ予防及び／又は治療方法である。
また、本発明の他の一態様は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を有効成分として含有する、ＡＤを予防及び／又は治療するための医薬組成物である。
また、本発明の他の一態様は、ＡＤ予防及び／又は治療薬製造のための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分の使用である。
さらに、本発明の他の一態様は、ＡＤの予防及び／又は治療に用いるための、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分である。
さらに本発明の他の一態様は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を投与することを特徴とする、ＡＤ予防及び／又は治療方法である。
【0011】
前述のように、ＰＳＥＮ１変異とＡＤとが注目されており、ＰＳＥＮ１変異のうちＡ２４６Ｅ変異は、てんかんを有するＡＤ患者で報告された変異である。しかし、このＰＳＥＮ１のＡ２４６Ｅ変異は、Ａβ４２／Ａβ４０比やＡβ産生量に影響しなかったことが報告されている（非特許文献３）ことから、ＰＳＥＮ１の変異とＡβの産生とは直接関連していないと考えられた。
そこで、後記実施例に示すように、ＰＳＥＮ１変異と神経細胞の異常との関係を解明するべく、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者由来ｉＰＳ細胞 （ｉＰＳＣ）より分化させた神経細胞における細胞内Ｃａ動態を計測し、健常者由来神経細胞と比較したところ、ＰＳＥＮ１変異神経細胞で異常興奮（異常Ｃａ波）が観察され、その異常Ｃａ波は細胞外液からのＣａ除去により消失した。これらのことから、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者においては、細胞内Ｃａ濃度の異常上昇に伴って神経細胞の異常興奮が生じることにより、神経変性症状が発症する可能性が示唆された。
従って、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分は、ＡＤ予防及び／又は治療薬の有効成分として有用である。
そこで、後記実施例に示すように、ＰＳＥＮ１変異と神経細胞の異常との関係を解明するべく、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者由来ｉＰＳ細胞 （ｉＰＳＣ）より分化させた神経細胞における細胞内Ｃａ動態を計測し、健常者由来神経細胞と比較したところ、ＰＳＥＮ１変異神経細胞で異常興奮（異常Ｃａ波）が観察され、その異常Ｃａ波は細胞外液からのＣａ除去により消失した。これらのことから、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者においては、細胞内Ｃａ濃度の異常上昇に伴って神経細胞の異常興奮が生じることにより、神経変性症状が発症する可能性が示唆された。
従って、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分は、ＡＤ予防及び／又は治療薬の有効成分として有用である。
【0012】
細胞内においては、小胞体がＣａストアであることから、小胞体内のＣａ濃度を制御する薬剤を探索するべく、小胞体からのＣａ流出を制御しているリアノジン受容体１（ＲＹＲ１）及びリアノジン受容体２（ＲＹＲ２）、さらには小胞体へのＣａ流入を制御しているＳＥＲＣＡについて検討したところ、ＲＹＲ１阻害剤は神経細胞の異常Ｃａ波を抑制しなかったが、ＲＹＲ２阻害剤とＳＥＲＣＡ阻害剤が特異的に神経細胞の異常カルシウム波を抑制することが判明した。
従って、ＲＹＲ２阻害剤又はＳＥＲＣＡ阻害剤は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分の好ましい形態であり、ＡＤ予防及び／又は治療薬として有用である。
従って、ＲＹＲ２阻害剤又はＳＥＲＣＡ阻害剤は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分の好ましい形態であり、ＡＤ予防及び／又は治療薬として有用である。
【0013】
本発明に用いられるＲＹＲ２阻害剤としては、カルベジロール、プロカイン、テトラカインなどが挙げられるが、カルベジロール又はその塩がより好ましい。
カルベジロールは、アドレナリンαβ受容体遮断薬の一つであり、本態性高血圧症、腎実質性高血圧症、狭心症、虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全を効能効果とする医薬品として用いられている。しかし、ＡＤとの関係は知られていない。
カルベジロールは、アドレナリンαβ受容体遮断薬の一つであり、本態性高血圧症、腎実質性高血圧症、狭心症、虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全を効能効果とする医薬品として用いられている。しかし、ＡＤとの関係は知られていない。
【0014】
本発明に用いられるＳＥＲＣＡ阻害剤としては、シクロピアゾン酸、タプシガルギンなどが挙げられるが、シクロピアゾン酸又はその塩が好ましい。これらの成分とＡＤとの関係は知られていない。
【0015】
本発明のＡＤ予防及び／又は治療薬は、Ａβの産生抑制やＡβに直接作用する薬剤ではなく、神経細胞の異常Ｃａ波抑制、すなわち神経細胞の異常興奮を抑制して、神経症状を予防又は治療する薬剤である。従って、ＡＤ患者の種々の神経症状、認知機能の低下抑制、記憶障害、異常行動障害の進行抑制、過度の興奮性、てんかんなどに有用であると考えられる。
また、特にＰＳＥＮ１遺伝子の変異を有するＡＤ患者の認知機能の低下抑制、異常行動障害の進行抑制、過度の興奮性の抑制などに有用である。
また、特にＰＳＥＮ１遺伝子の変異を有するＡＤ患者の認知機能の低下抑制、異常行動障害の進行抑制、過度の興奮性の抑制などに有用である。
【0016】
本発明のＡＤ予防及び／又は治療薬は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を含有するＡＤ予防及び／又は治療用医薬組成物（以下、本発明の医薬組成物ともいう）である。
本発明の医薬組成物は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を含有するものであって、通常は医薬として許容される担体、添加物等を配合して使用される。医薬組成物の投与形態は、特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択できる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、貼付剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法により製造できる。
本発明の医薬組成物は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分を含有するものであって、通常は医薬として許容される担体、添加物等を配合して使用される。医薬組成物の投与形態は、特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択できる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、貼付剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法により製造できる。
【0017】
経口用固形製剤を調製する場合は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分に賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【0018】
経口用液体製剤を調製する場合は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【0019】
注射剤を調製する場合は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【0020】
坐剤を調製する場合は、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じてツイーン（登録商標）等の界面活性剤等を加えた後、常法により製造することができる。
【0021】
ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分をＡＤ予防及び／又は治療薬として用いる場合、その投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して、ＡＤ患者の神経細胞の異常Ｃａ波を抑制する成分（特にカルベジロール）として、１日１ｍｇ～１００ｍｇ、好ましくは１．２５～５０ｍｇの範囲が挙げられる。
投与回数としては、１日１～２回に分けて経口投与に投与することができる。
投与回数としては、１日１～２回に分けて経口投与に投与することができる。
【0022】
また、本発明の一態様は、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異より分化誘導させた神経細胞に試験薬剤を添加してＣａイメージング法により細胞内Ｃａ動態を計測することにより、異常Ｃａ波を抑制する成分を見出す、ＡＤ予防及び／又は治療薬のスクリーニング方法である。
【0023】
本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞は、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異）より分化誘導させた神経細胞である。
ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異）は、ＰＳＥＮ１遺伝子の変異（例えば、Ａ２４６Ｅ変異、Ｍ１４６Ｌ変異、Ｌ２８６Ｖ変異など）を有するＡＤ患者の体細胞からｉＰＳ技術により得られたｉＰＳＣを神経幹細胞に分化誘導させた幹細胞であり、例えばＡｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）より入手できる。この神経幹細胞から神経細胞への分化誘導は、例えば、神経幹細胞を、ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ａ（ａｘ０６７４ａ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｂ（ａｘ０６７４ｂ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ （ＢＤＮＦ，７８８９０４，ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）、Ｎ６，２′－Ｏ－ｄｉｂｕｔｙｒｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ ３′，５′－ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ（ｃＡＭＰ, Ｄ０２６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ（Ａ５９６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）などの分化誘導因子を含有する培地で培養することにより得られる。
ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１変異）は、ＰＳＥＮ１遺伝子の変異（例えば、Ａ２４６Ｅ変異、Ｍ１４６Ｌ変異、Ｌ２８６Ｖ変異など）を有するＡＤ患者の体細胞からｉＰＳ技術により得られたｉＰＳＣを神経幹細胞に分化誘導させた幹細胞であり、例えばＡｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）より入手できる。この神経幹細胞から神経細胞への分化誘導は、例えば、神経幹細胞を、ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ａ（ａｘ０６７４ａ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｂ（ａｘ０６７４ｂ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ （ＢＤＮＦ，７８８９０４，ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ）、Ｎ６，２′－Ｏ－ｄｉｂｕｔｙｒｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ ３′，５′－ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ（ｃＡＭＰ, Ｄ０２６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ（Ａ５９６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）などの分化誘導因子を含有する培地で培養することにより得られる。
【0024】
本発明のスクリーニング方法では、前記神経細胞に試験薬剤を添加してＣａイメージング法により細胞内Ｃａ動態を計測する。ここで、Ｃａイメージング法による細胞内Ｃａ動態の計測は、カルシウム指示薬（例えばＣａｌ５２０－ＡＭ）を培地に添加して、３７℃、３０分間培養し、Ｃａイメージング装置（例えば、ＡｑｕａＣｏｓｍｏｓ２．０）を用いて、Ｃａシグナルを測定することにより行うことができる。
得られたＣａシグナルを、試験薬剤を添加しなかった場合と対比することにより、試験薬剤が異常Ｃａ波を抑制する成分か否かを判定することができる。
異常Ｃａ波を抑制する成分であると判定された試験薬剤は、ＡＤ予防及び／又は治療薬として有用である可能性がある。
得られたＣａシグナルを、試験薬剤を添加しなかった場合と対比することにより、試験薬剤が異常Ｃａ波を抑制する成分か否かを判定することができる。
異常Ｃａ波を抑制する成分であると判定された試験薬剤は、ＡＤ予防及び／又は治療薬として有用である可能性がある。
【実施例0025】
次に実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【0026】
実施例１（ＰＳＥＮ１変異と神経細胞の異常との関係を解明）
健常者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＷＴ）とＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）を図１に示す日程で約２８日間培養した。
すなわち、ｉＰＳＣ由来神経幹細胞は継代培養後、（１）Ｎｅｕｒａｌ Ｐｌａｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（ａｘ００３３， Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）にＹ２７６３２を混和させた培養液で細胞播種した。（２）Ｎｅｕｒａｌ Ｍｅｉｎｔｅｎａｎｃｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ａｘ００３１，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）＋ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ａ（ａｘ０６７４ａ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を混和させた培養液で１日おきに培地交換する（培養日数１～６日目）。（３）Ｎｅｕｒａｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂａｓａｌ ＭｅｄｉｕｍはＮｅｕｒｏｂａｓａｌ－Ａ Ｍｅｄｉｕｍに、Ｂ－２７ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（１７５０４０４４，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ），ＧｌｕｔａＭＡＸ（３５０５００６１，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ），２－Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ（Ｍ３１４８，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），ペニシリン／ストレプトマイシンを混和して作製した。作製したＮｅｕｒａｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍに、ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ （ＢＤＮＦ，７８８９０４，ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ），Ｎ６，２′－Ｏ－ｄｉｂｕｔｙｒｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ ３′，５′－ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ（ｃＡＭＰ, Ｄ０２６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ（Ａ５９６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｂ（ａｘ０６７４ｂ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を混和させた培養液で１日おきに培地交換する（培養日数７～１４日目）。（４）Ｎｅｕｒａｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍに、ＢＤＮＦ，ｃＡＭＰ，Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄを混和させた培養液で１５日目に全量培地交換し、それ以降は１日おきに半量培地交換した。
ｉＰＳＣ由来神経幹細胞の神経細胞への分化の確認（免疫染色）、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）での異常Ｃａ波の観察を行った。異常Ｃａ波の観察は、次の条件によるＣａイメージングによって行った。
・Ｃａ－ｉｎｄｉｃａｔｏｒのｌｏａｄｉｎｇ：Ｃａｌ５２０－ＡＭ（４μＭ），３７℃，３０分間
・Ｃａイメージング装置（ＡｑｕａＣｏｓｍｏｓ２．０，浜松ホトニクス，日本）でＣａ－ｓｉｇｎａｌを測定。
・細胞外液：Ｔｙｒｏｄｅ溶液，３７℃
健常者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＷＴ）とＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経幹細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）を図１に示す日程で約２８日間培養した。
すなわち、ｉＰＳＣ由来神経幹細胞は継代培養後、（１）Ｎｅｕｒａｌ Ｐｌａｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（ａｘ００３３， Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）にＹ２７６３２を混和させた培養液で細胞播種した。（２）Ｎｅｕｒａｌ Ｍｅｉｎｔｅｎａｎｃｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ａｘ００３１，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）＋ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ａ（ａｘ０６７４ａ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を混和させた培養液で１日おきに培地交換する（培養日数１～６日目）。（３）Ｎｅｕｒａｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂａｓａｌ ＭｅｄｉｕｍはＮｅｕｒｏｂａｓａｌ－Ａ Ｍｅｄｉｕｍに、Ｂ－２７ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（１７５０４０４４，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ），ＧｌｕｔａＭＡＸ（３５０５００６１，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ），２－Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ（Ｍ３１４８，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），ペニシリン／ストレプトマイシンを混和して作製した。作製したＮｅｕｒａｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍに、ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ （ＢＤＮＦ，７８８９０４，ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ），Ｎ６，２′－Ｏ－ｄｉｂｕｔｙｒｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ ３′，５′－ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ（ｃＡＭＰ, Ｄ０２６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ（Ａ５９６０，Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），ＮｅｕｒＯｎｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｂ（ａｘ０６７４ｂ，Ａｘｏｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を混和させた培養液で１日おきに培地交換する（培養日数７～１４日目）。（４）Ｎｅｕｒａｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍに、ＢＤＮＦ，ｃＡＭＰ，Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄを混和させた培養液で１５日目に全量培地交換し、それ以降は１日おきに半量培地交換した。
ｉＰＳＣ由来神経幹細胞の神経細胞への分化の確認（免疫染色）、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）での異常Ｃａ波の観察を行った。異常Ｃａ波の観察は、次の条件によるＣａイメージングによって行った。
・Ｃａ－ｉｎｄｉｃａｔｏｒのｌｏａｄｉｎｇ：Ｃａｌ５２０－ＡＭ（４μＭ），３７℃，３０分間
・Ｃａイメージング装置（ＡｑｕａＣｏｓｍｏｓ２．０，浜松ホトニクス，日本）でＣａ－ｓｉｇｎａｌを測定。
・細胞外液：Ｔｙｒｏｄｅ溶液，３７℃
【0027】
図２に、ｉＰＳＣ由来神経幹細胞の神経細胞への分化の確認（免疫染色）結果を示す。
培養した神経細胞をＭＡＰ２抗体、βIIIチューブリン抗体で染色し、成熟神経細胞であることを確認した。
培養した神経細胞をＭＡＰ２抗体、βIIIチューブリン抗体で染色し、成熟神経細胞であることを確認した。
【0028】
図３に、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）での異常Ｃａ波の観察結果を示す。健常者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＷＴ）では異常Ｃａ波は観察されなかったのに対し、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）では、明確な異常Ｃａ波が観察された。
Ｃａ波形による分類を図４に示す。図４から、ＰＳＥＮ１変異を有する神経細胞では健常者由来の神経細胞に比し、有意に、異常Ｃａ興奮波が認められる頻度が高いことがわかる。
細胞外液からＣａ2+を除外したときのＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）における異常Ｃａ波の観察結果を図５に示す。図５より、細胞外液からＣａ2+を除外すると異常Ｃａ波は生じない事が判明した。
これらのことから、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者においては、細胞内Ｃａ濃度の異常上昇に伴って神経細胞の異常興奮が生じることにより、神経変性症状が発症する可能性が示唆された。
Ｃａ波形による分類を図４に示す。図４から、ＰＳＥＮ１変異を有する神経細胞では健常者由来の神経細胞に比し、有意に、異常Ｃａ興奮波が認められる頻度が高いことがわかる。
細胞外液からＣａ2+を除外したときのＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）における異常Ｃａ波の観察結果を図５に示す。図５より、細胞外液からＣａ2+を除外すると異常Ｃａ波は生じない事が判明した。
これらのことから、ＰＳＥＮ１変異を有するＡＤ患者においては、細胞内Ｃａ濃度の異常上昇に伴って神経細胞の異常興奮が生じることにより、神経変性症状が発症する可能性が示唆された。
【0029】
実施例２（小胞体におけるカルシウムポンプ阻害剤の作用）
種々の小胞体におけるカルシウムポンプ阻害剤の、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）における異常Ｃａ波の発生に対する影響を検討した。
（１）ＲＹＲ１阻害剤であるダントロレン３０μＭを添加したところ、異常Ｃａ波の抑制は観察されなかった。
（２）ＳＥＲＣＡ阻害剤であるシクロピアゾン酸（ＣＰＡ）を２０μＭ添加した結果を図６に示す。その結果、シクロピアゾン酸の添加により、異常Ｃａ波の抑制が観察された。
（３）ＲＹＲ２阻害剤であるカルベジロール添加による異常Ｃａ波の抑制効果を図７～図１３に示す。図７は、健常者由来ｉＰＳＣ由来神経細胞のＣａ信号を示す。図８～１０は、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ、Ｍ１４６Ｌ、Ｌ２８６Ｖ）における異常Ｃａ波信号を示す。
図１１～１３は、カルベジロール添加による、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ、Ｌ２８６Ｖ、Ｍ１４６Ｖ）における異常Ｃａ波信号の抑制効果を示す。
図７～１３より、カルベジロールは、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ、Ｍ１４６Ｌ、Ｌ２８６Ｖ）における異常Ｃａ波の抑制効果を示すことがわかる。
種々の小胞体におけるカルシウムポンプ阻害剤の、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ）における異常Ｃａ波の発生に対する影響を検討した。
（１）ＲＹＲ１阻害剤であるダントロレン３０μＭを添加したところ、異常Ｃａ波の抑制は観察されなかった。
（２）ＳＥＲＣＡ阻害剤であるシクロピアゾン酸（ＣＰＡ）を２０μＭ添加した結果を図６に示す。その結果、シクロピアゾン酸の添加により、異常Ｃａ波の抑制が観察された。
（３）ＲＹＲ２阻害剤であるカルベジロール添加による異常Ｃａ波の抑制効果を図７～図１３に示す。図７は、健常者由来ｉＰＳＣ由来神経細胞のＣａ信号を示す。図８～１０は、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ、Ｍ１４６Ｌ、Ｌ２８６Ｖ）における異常Ｃａ波信号を示す。
図１１～１３は、カルベジロール添加による、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ、Ｌ２８６Ｖ、Ｍ１４６Ｖ）における異常Ｃａ波信号の抑制効果を示す。
図７～１３より、カルベジロールは、ＡＤ患者ｉＰＳＣ由来神経細胞（ＰＳＥＮ１ ｐ．Ａ２４６Ｅ、Ｍ１４６Ｌ、Ｌ２８６Ｖ）における異常Ｃａ波の抑制効果を示すことがわかる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
