特開 2024-99493 感染抵抗性腸内菌株及びその用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024099493

(43)【公開日】2024-07-25

(54)【発明の名称】感染抵抗性腸内菌株及びその用途

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20240718BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240718BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20240718BHJP

   A61K 35/741 20150101ALI20240718BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20240718BHJP

【ＦＩ】

C12N1/20 A ZNA

A61P31/12

A61P31/04

A61P31/10

A61K35/741

A23L33/135

C12N1/20 E

【審査請求】有

【請求項の数】4

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024001564

(22)【出願日】2024-01-10

(31)【優先権主張番号】10-2023-0004607

(32)【優先日】2023-01-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(71)【出願人】

【識別番号】523348896

【氏名又は名称】エスエヌジェー ファーマ インコーポレーテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＮＪ ＰＨＡＲＭＡ ＩＮＣ

【住所又は居所原語表記】ＭＲＬ Ｂｌｄｇ ３Ｆ， １１２４ Ｗ Ｃａｒｓｏｎ Ｓｔ． Ｔｏｒｒａｎｃｅ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９０５０２， ＵＳ

(71)【出願人】

【識別番号】524013193

【氏名又は名称】キム，ヒョン ジン

【氏名又は名称原語表記】ＫＩＭ， Ｈｙｅｏｎ Ｊｉｎ

【住所又は居所原語表記】１１２４ Ｗ Ｃａｒｓｏｎ Ｓｔ ＭＲＬ Ｂｌｄｇ ３Ｆ， Ｔｏｒｒａｎｃｅ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９０５０２， ＵＳ

(74)【代理人】

【識別番号】100121382

【弁理士】

【氏名又は名称】山下 託嗣

(72)【発明者】

【氏名】キム，ヒョン ジン

(72)【発明者】

【氏名】ホン，ソン チュル

(72)【発明者】

【氏名】ホン，ジニ

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ミンダ

(72)【発明者】

【氏名】ヒャグワ，エンフチメ

(72)【発明者】

【氏名】キム，ス ラ

(72)【発明者】

【氏名】キム，ヘ ミ

【テーマコード（参考）】

4B018

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B018LB10

4B018MD85

4B018ME09

4B018MF13

4B065AA01X

4B065AC20

4B065BA22

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC55

4C087NA14

4C087ZB33

4C087ZB35

(57)【要約】

【課題】本発明は、感染抵抗性腸内菌株及びその用途に関し、より詳しくは、病原性微生物による感染疾患に対する予防または治療効果を付与する感染抵抗性腸内菌株及びその用途を提供する。
【解決手段】本発明による感染抵抗性腸内菌株は、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択されることを特徴とする。本発明による感染抵抗性腸内菌株は、摂取時に宿主に病原性微生物による感染疾患に抵抗性を持たせるという効果を有する。
【選択図】図１３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される、感染抵抗性腸内菌株。

【請求項2】

前記感染抵抗性腸内菌株は、病原性微生物による感染性疾患に対する予防または治療効果を持つことを特徴とする、請求項１に記載の感染抵抗性腸内菌株。

【請求項3】

オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される１以上の感染抵抗性腸内菌株またはその培養物を有効成分として含む、感染性疾患予防または治療用組成物。

【請求項4】

感染性疾患は、病原性ウイルス、病原性細菌または病原性真菌の感染による疾患であることを特徴とする、請求項３に記載の感染性疾患予防または治療用組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、感染抵抗性腸内菌株及びその用途に関し、より詳しくは、病原性微生物による感染疾患に対する予防または治療効果を付与する感染抵抗性腸内菌株及びその用途に関する。

【背景技術】

【0002】

有史以来、人類は病原菌と絶え間ない生存競争をして来ていたが、抗生剤、抗ウイルス剤及びワクチンが続々と開発されるに伴い、感染病の問題が相当解決されて来た。しかし、近年、地球温暖化など気候及び環境の変化、生活環境及び行動の変化、微生物の進化特性によって、一層致命的な新変種の病原菌が出現している。特に、結核、エボラウイルス、メルス、サスのみならず、２０１９年末に出現したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、世界人類全体に莫大な被害を誘発させている。新型コロナ－ウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の深刻性によって予防ワクチンが種々開発された。伝統的なワクチン以外にも、ｍＲＮＡワクチンが開発されており、２０２２年１２月を基準として、人類の７０％以上が最小限１回以上ＣＯＶＩＤ－１９ワクチン接種を受けた状態である。しかし、国民の８７％がｍＲＮＡワクチンの接種を受けた韓国の１人当りＣＯＶＩＤ－１９の発病率は、世界最高であって、これは接種率が１０～３０％水準である第３世界の国の１０倍以上である。そこで、既存のワクチンの技術と異なり、病原菌の種類や変異に関係なく、感染疾患予防効果を持つ画期的なワクチンの開発が急がれている。

【0003】

腸内菌叢またはマイクロバイオームは、肥満、糖尿、認知症、癌、心血管疾患などのような各種疾病を含めて宿主の全般的な健康に多大な影響を及ぼす。最近２０年間の活発な研究結果、各種病原菌に露出する環境である腸内で群集を形成する腸内菌株は、感染疾患に対する宿主の抵抗性に影響を及ぼすと知られている。その結果、同じ病原菌に露出しても感染されないか、無症状であるか、または深刻な重症であるかなど宿主の抵抗性が多様であると考えられている。

【0004】

前述した理由によって、病原性微生物による感染疾患を予防または治療することができる感染抵抗性腸内細菌を開発しようと次のような技術が開発された。

【0005】

米国特許登録第１１４７１４９５号は、病原性細菌クロストリジウムディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の感染を予防するための腸内菌株として、Ｃ．ｓｃｉｎｄｅｎｓ、Ｃ．ｈｉｒａｎｏｎｉｓ、Ｃ．ｈｙｌｅｍｏｎａｅ、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃ．ｓｏｒｄｅｌｌｉ、Ｐｒｏｔｅｏｃａｔｅｌｌａ ｓｐｈｅｎｉｓｃｉ、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ ５＿１＿５７ＦＡＡ、Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ ｉｎｔｅｓｔｉｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｕｔｉａ ｈａｎｓｅｎｉｉ、およびＰｓｅｕｄｏｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ菌株を提供する。

【0006】

ＷＯ２０２１０６６５８５、ＵＳ２０２２０３４７２２９Ａは、一部の病原性細菌に対して免疫増強効果を持つ腸内菌株として、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ菌株を提供する。

【0007】

ＷＯ２０１６０８６１６１は、プロフィラキシス（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）治療のための腸内菌株として、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｏｂｅｕｍ、Ｃ．ｈａｔｈｅｗａｙｉ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｅｓｍｏｌａｎｓ、Ｄｏｒｅａ ｌｏｎｇｉｃａｔｅｎａ、Ｒ．ｌａｃｔａｒｉｓ（Ｂｌａｕｔｉａ ｐｒｏｄｕｃｔａ）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｏｎｔｏｒｕｍ、Ｒ．ｆａｅｃｉｓ、Ｈｏｌｄｅｍａｎｉａ ｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、およびＣ．ｓｏｒｄｅｌｌｉ菌株を提供する。

【0008】

ＵＳ０１０１９５２７３Ｂは、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤機能の腸内菌株として、ＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａまたはＦａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株を提供する。

【0009】

ＷＯ２０１９０２８４０２、ＵＳ２０２００３７６０４４Ａ、ＪＰ２０２０５２９４７８Ａ、ＥＰ０３６６１５２５Ａは、代謝性疾患を治療するためのＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｅｌｉｇｅｎｓ菌株を提供する。

【0010】

ＷＯ２０１８１１７２６３、ＥＰ０３５５９２０９Ａは、坑癌治療効果を持つＰｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆａｅｃｉｕｍ ＬＮ９９８０７３、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ ＫＲ８２２４６３、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｏｒｅｉ ＣＰ０１１５３１、Ｂ． ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＮＲ＿１１２９４５、Ｓｕｂｄｏｌｉｇｒａｎｕｌｕｍ ｓｐ． ４＿３＿５４Ａ２ＦＡＡ、Ｐａｒａｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｘｙｌａｎｉｐｈｉｌａ ＡＢ３３１８９７、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＡＢ２６１１２８、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ ｓｐ．ＪＣ１３６ ＮＺ－ＣＡＥＧ００００００００、Ｐ． ｇｏｒｄｏｎｉｉ ＡＢ４７０３４３、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｍｏｓｕｍ ＡＢ５９５１３４、Ｐ． ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ ＨＥ９７４９２０、Ｂ． ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｌｙｔｉｃｕｓ＿ＮＲ＿１１２９３３、Ｂ． ｃｌａｒｕｓ＿ＡＢ４９０８０１、Ｂ． ｓａｌｙｅｒｓｉａｅ＿ＡＹ６０８６９６、Ｂ． ｆｒａｇｉｌｉｓ＿ＣＲ６２６９２７、Ｂ． ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ＿ＡＢ２４７１４１、Ｂ． ｅｇｇｅｒｔｈｉｉ＿ＮＲ＿１１２９３５菌株を提供する。

【0011】

ＷＯ２０２１１９４２８１は、炎症性疾患の予防と治療のためにＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ微生物またはその産物を提供する。

【0012】

ＷＯ２０１３０３２７４４、ＪＰ２０１４５２８９２５Ａ、ＥＰ０２７９７６０６Ａは、腸内菌株菌叢において、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ ｐｈｙｌｕｍの割合に比べてファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）を増加させる組成物を提供する。

【0013】

ＷＯ２０１６１７２６５８及びＵＳ２０２００００９１６８Ａは、糖、糖アルコール、アミノ酸、ペプチド、微量営養素、脂肪酸またはポリフェノールをマイクロバイオームレギュレーター組成物として提供する。

【0014】

ＵＳ２０２１０３３２３２３Ａは、サイトカインの分泌量を増加させて抗ウイルス及び免疫調節効果を持つＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＣＪＬＰ４７５菌株を飼料添加剤として提供する。

【0015】

しかし、これらの前記技術は、感染抵抗性の効果が足りず、病原性微生物による深刻な感染疾患を予防または治療することができる腸内菌株の成功事例はない。ＣＯＶＩＤ－１９の場合、最も数多くの試みにもかかわらず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対する抵抗性の腸内菌株が種の水準で確認されたことはない。したがって、各種病原性細菌及びウイルスの感染疾患を予防または治療するための腸内菌株の開発が急がれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0016】

【特許文献1】米国特許登録第１１４７１４９５号

【特許文献2】ＷＯ２０２１０６６５８５

【特許文献3】ＵＳ２０２２０３４７２２９Ａ

【特許文献4】ＷＯ２０１６０８６１６１

【特許文献5】ＵＳ０１０１９５２７３Ｂ

【特許文献6】ＷＯ２０１９０２８４０２

【特許文献7】ＵＳ２０２００３７６０４４Ａ

【特許文献8】ＪＰ２０２０５２９４７８Ａ

【特許文献9】ＥＰ０３６６１５２５Ａ

【特許文献10】ＷＯ２０１８１１７２６３

【特許文献11】ＥＰ０３５５９２０９Ａ

【特許文献12】ＷＯ２０２１１９４２８１

【特許文献13】ＷＯ２０１３０３２７４４

【特許文献14】ＪＰ２０１４５２８９２５Ａ

【特許文献15】ＥＰ０２７９７６０６Ａ

【特許文献16】ＷＯ２０１６１７２６５８

【特許文献17】ＵＳ２０２００００９１６８Ａ

【特許文献18】ＵＳ２０２１０３３２３２３Ａ

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

本発明は、感染抵抗性腸内菌株及びその用途に関する。また、本発明は、病原性微生物による感染疾患の予防または治療効果を付与する感染抵抗性の腸内菌株及びその用途に関する。

【0018】

本発明が解決しようとする技術的課題は上述した技術的課題に制限されず、上述していない別の技術的課題は以降の記載から本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に明確に理解できるであろう。

【0019】

本発明の目的は、感染抵抗性腸内菌株を提供することにある。

【0020】

本発明のまた他の目的は、病原性微生物による感染疾患に対する予防または治療効果を付与する感染抵抗性腸内菌株及びその用途を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0021】

上記目的を達成するために、本発明は、病原性微生物による感染疾患に対する予防または治療効果を付与する感染抵抗性腸内菌株として、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される感染抵抗性腸内菌株を提供する。

【0022】

本発明はまた、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される１以上の感染抵抗性腸内菌株またはその培養物を有効成分として含む感染性疾患予防または治療用組成物を提供する。

【0023】

本発明はまた、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される１以上の感染抵抗性腸内菌株またはその培養物を哺乳動物に投与して感染性疾患を予防または治療する方法を提供する。

【発明の効果】

【0024】

本発明による感染抵抗性腸内菌株は、摂取時に宿主に病原性微生物による感染疾患に抵抗性を持たせるという効果がある。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における感染程度によって区分された群の体温測定結果のイメージ（上図）とグラフ（下図）である（Ａ：対照群、Ｂ：重症感染群、Ｃ：軽症感染群、Ｄ：無感染群）。

【図2】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における感染程度によって区分されたグループの肺写真及び肺組職のＨ＆Ｅ染色写真である（Ａ：対照群、Ｂ：重症感染群、Ｃ：軽症感染群、Ｄ：無感染群）。

【図3】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオーム（ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ）の相対存在量（ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ）を、門（Ｐｈｙｌｕｍ）と目（Ｏｒｄｅｒ）の水準で分析した結果である。

【図4】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオームの多様性（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）をα多様性（Ａｌｐｈａ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）で示した結果である。

【図5】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオームの共起（Ｃｏ－ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ）ネットワーク分析（ｎｅｔｗｏｒｋ ａｎａｌｙｓｉｓ）を再起動アルゴリズム（ＲｅＢｏｏｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）で比べた結果である。

【図6】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオームの組成を比較したヒートマップ（Ｈｅａｔ ｍａｐ）の結果である。

【図7】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオームの分布を比較した非計量多次元尺度構成法（ｎｏｎ－ｍｅｔｒｉｃ ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｓｃａｌｉｎｇ；ＮＭＤＳ）プロットの結果である。

【図8】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオームの（Ａ）の主成分分析（ＰＣｏＡ）と（Ｂ）グループ重心（ｇｒｏｕｐ ｃｅｎｔｒｏｉｄ）までの距離の結果である。

【図9】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）と無感染群（ＮＩ）の群間腸内マイクロバイオームの差次的存在量（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｂｕｎｄａｎｃｅ）、すなわち群間差別的に増加された微生物を種水準で分析するためにＤＥＳｅｑ２分析を用いて各ＯＴＵ別ｌｏｇ２フォルドチェンジ（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ）で示した結果である。

【図10】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）と無感染群（ＮＩ）との群間の腸内マイクロバイオームの差次的存在量、すなわち群別に差別的に増加された微生物を種の水準で分析するためにＤＥＳｅｑ２分析を用いて各ＯＴＵ別クラスタされたヒートマップ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｈｅａｔｍａｐ）で示した結果である。

【図11】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）と無感染群（ＮＩ）との群間の差次的存在量、すなわち群別に差別的に増加された微生物であるＪＢＯ３－１０１の相対存在量を示した結果である。

【図12】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）と無感染群（ＮＩ）との群間の差次的存在量、すなわち群別に差別的に増加された微生物であるＪＢＲ５－５０１の相対存在量を示した結果である。

【図13】本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株から取り出された「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）およびＪＢＲ５－５０１（Ｂ）のグラム染色の写真である。

【図14】本発明の実施例２によって「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌させた実験動物にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較して７日間毎日測定した体重の結果である。

【図15】本発明の実施例２によって「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌させた実験動物にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較して７日間毎日測定した生存率の結果である。

【図16】本発明の実施例２によって「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌させた実験動物にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較した８日目肺組職の形態学的写真である。

【図17】本発明の実施例２によって「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌させた実験動物にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較した８日目肺組職切片のＨ＆Ｅ染色の写真である。

【図18】本発明の実施例２によって「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌させた実験動物にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較した８日目の肺組職のウイルスＲＴ－ＰＣＲの結果である。

【図19】本発明の実施例３によって流感ウイルスを感染させた実験動物に「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較した肺組職の流感ウイルスＲＴ－ＰＣＲの結果である。

【図20】本発明の実施例４によって「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１（Ａ）、ＪＢＲ５－５０１（Ｂ）、ＪＢＯ３－１０１／ＪＢＲ５－５０１（Ｃ）、または対照群菌株（（Ｄ）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）を１週間給餌後、実験動物に結核菌を感染させた後、感染対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較した肺組職の結核菌ＣＦＵの結果である。

【発明を実施するための形態】

【0026】

腸内菌株菌叢またはマイクロバイオームは、肥満、糖尿、認知症、癌、心血管疾患などのような各種疾病を含めて宿主の全般的な健康に多大な影響を及ぼす。各種病原菌に露出する環境である腸内で群集を形成する腸内菌株は、感染疾患に対する宿主の抵抗性に影響を及ぼすと知られている。その結果、同じ病原菌に露出しても感染されないか、無症状であるか、または深刻な重症であるかなど宿主の抵抗性が多様であると考えられている。

【0027】

本発明者らは、病原性微生物に露出しても感染されない者の腸内には感染抵抗性腸内菌株が集落を形成しているはずであるという点に着目して本発明を完成するに至った。

【0028】

そこで、本発明者らは、ＣＯＶＩＤ－１９ペンデミック期間の間ウイルスに露出してもＣＯＶＩＤ－１９にかかったことがない「感染抵抗性ヒト」の大便を用意した。次に、ＣＯＶＩＤ－１９モデル実験動物を抗生・抗菌複合剤を処理した後、「感染抵抗性ヒト」の大便試料を摂取させて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染させた。スクリーニングの結果、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染以後にも感染症状が全然現われない「感染抵抗性動物」を確保することに成功し、これらの腸内マイクロバイオーム分析（ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）を通じて２種の「感染抵抗性菌株」であるＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１を確認した。そして、これらに対する１６ｓＲＮＡシーケンシング結果、新種であることを確認した。

【0029】

本発明者らは、「感染抵抗性菌株」として見出されたＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１菌株を利用したｄｅ ｎｏｖｏ マイクロバイオームを形成させた実験動物で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染に対する予防効果を確認した。

【0030】

本発明者らは、また、ウイルス感染治療効果を確認するために、最もありふれたウイルス性感染疾患の微生物であるインフルエンザウイルス（ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）に感染させた実験動物を、感染抵抗性菌株であるＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１菌株で治療し、流感治療効果を確認した。

【0031】

本発明者らは、最も深刻な細菌性感染疾病を起こす結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対する予防効果を確認するために、「感染抵抗性菌株」として見出されたＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１菌株を利用して実験動物にｄｅ ｎｏｖｏマイクロバイオームを形成させてから、結核菌感染予防効果を確認した。

【0032】

本発明の一実施例では、病原性微生物による感染疾患に対する予防または治療効果を付与する感染抵抗性腸内菌株及びその用途を提供する。

【0033】

したがって、本発明は、一態様において、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される感染抵抗性腸内菌株に関する。

【0034】

本発明はまた、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される１以上の感染抵抗性腸内菌株またはその培養物を有効成分として含む感染性疾患予防または治療用組成物に関する。

【0035】

本発明において、前記感染性疾患とは、病原性ウイルス、病原性細菌または病原性真菌の感染による疾患を意味する。

【0036】

前記ウイルス性感染は、病原性ウイルスによるすべての感染を含み、前記病原性ウイルスの具体例としては、重症急性呼吸器症侯群ウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト乳頭種ウイルス、インフルエンザウイルス（ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、ヒト免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ；ＨＩＶ）、エボラウイルス（ｅｖｏｌａ ｖｉｒｕｓ）、デングウイルス（ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ）、麻疹ウイルス（ｍｅａｓｌｅｓ ｖｉｒｕｓ）、ハンタンウイルス（Ｈａｎｔａｎ ｖｉｒｕｓ）、風疹ウイルス（ｒｕｂｅｌｌａ ｖｉｒｕｓ）、ロタウイルス（ｒｏｔａ ｖｉｒｕｓ）、ノロウイルス（ｎｏｒｏ ｖｉｒｕｓ）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0037】

前記細菌性感染は、病原性細菌によるすべての感染を含み、前記病原性細菌の具体例としては、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ジフテリア菌（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ ｂａｃｉｌｌｕｓ）、らい菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、破傷風菌（ｔｅｔａｎｕｓ ｂａｃｉｌｌｕｓ）、チフス菌（Ｓａｌｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0038】

前記真菌性感染は、病原性真菌によるすべての感染を含み、前記病原性真菌の具体例としては、アスペルギルス種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、カンジダ種（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．）、酵母（Ｙｅａｓｔ）、ヒストプラスマ種（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｓｐ．）、コクシジオイデス種（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、スポロトリクス種（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｐ．）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0039】

前記感染性疾患の予防または治療用組成物は、特に制限されないが、１０^３～１０^１２ｃｆｕ／ｇの菌株を含むことが望ましい。

【0040】

本発明において、前記培養物は前記菌株を培養して得られた培養物それ自体、またはこれから菌株を取り除いて得られた培養上清液、または培養上清液の濃縮物または凍結乾燥物であることができる。

【0041】

本発明における感染性疾患予防または治療用組成物は、ヒトを含む哺乳動物に多様な経路で投与されることができる。投与方式は、通常使われるすべての方式であってもよく、例えば、経口、皮膚、静脈、筋肉または皮下などの経路で投与されることができ、望ましくは、経口で投与されることができる。

【0042】

前記組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含むことができる。治療的使用のための許容可能な担体または希釈剤は、薬学分野によく知られている。好適な担体としては、例えば、ラクトース、でん粉、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。好適な希釈剤としては、例えば、エタノール、グリセロール及び水を含む。薬学的担体、賦形剤または希釈剤の選択は、意図された投与経路及び標準薬剤の実習と係わって選択されることができる。前記組成物は、担体、賦形剤または希釈剤であり、または、これらに加えて、任意の好適な結合剤、滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤を含むことができる。

【0043】

前記組成物を製剤化や剤形化する場合には通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調剤される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は前記組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、でん粉、炭酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜ合わせて調剤される。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も用いられる。

【0044】

経口のための液状製剤としては、懸濁剤、耐溶液剤、油剤、シロップ剤などが該当するが、多く使われる単純希釈剤である水、流動パラフィンに加えて、様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれることができる。非経口投与のための製剤には、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤などが含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが使われることができる。前記成分は有効成分、すなわち、混合死菌体、その培養物、その抽出物またはその菌体成分に組み合わせて追加されてもよい。

【0045】

本発明による薬学的組成物の好適な投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性のような要因によって多様に処方されることができ、医師や薬剤師の判断によって、一定時間の間隔で１日１回～数回に分割して投与することもできる。例えば、有効成分含量を基準として１日投与量が０．１～１０，０００ｍｇ／ｋｇ、望ましくは、１～２，０００ｍｇ／ｋｇであることができる。前記投与量は、平均的な場合を例示したもので、投与される最適の投与量は当業者によって決められることができ、疾患の種類、疾患の重症度、組成物に含有されている有効成分及び他の成分の含量、剤形の種類、及び患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食餌、投与時間、投与経路及び組成物の分泌率、治療期間、同時使われる薬物をはじめ、多様な因子に従って当業界の専門家によって調節されることができる。

【0046】

本発明はまた、オリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）ＪＢＯ３－１０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＪＢＲ５－５０１菌株（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）からなる群より選択される１以上の感染抵抗性腸内菌株またはその培養物を哺乳動物に投与して感染性疾患を予防または治療方法に関する。

【実施例0047】

以下、具体的な実施例によって本発明をより詳しく説明する。しかし、これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのもので、本発明の範囲がこれらによって限定されるものではない。

【0048】

実施例１：感染抵抗性菌株の検出
本発明者らは感染抵抗性腸内菌株を見出すために病原性微生物に露出しても感染されない「感染抵抗性ヒト」の腸内菌株をスクリーニングした。このために、６週齢のロボロフスキーハムスターＳＨ１０１実験動物にアジスロマイシン（１５ｍｇ／ｋｇ）、ネオマイシン（２５ｍｇ／ｋｇ）、シプロフロキサシン（２０ｍｇ／ｋｇ）、ミコナゾール（３０ｍｇ／ｋｇ）からなる抗生剤／抗菌剤・複合剤を投与した。次に、ＣＯＶＩＤ－１９にかかったことのない「感染抵抗性ヒト」の大便をサンプリングした後、新鮮な状態で０．１ｇ～０．５ｇの試料として用意して、抗生剤／抗菌剤によって腸内細菌が枯渇した実験動物に摂取させた。一週間後にｄｅ ｎｏｖｏマイクロバイオームが形成された実験動物の鼻を介して１０^５ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを５０μｌずつ感染させた。その以後、７日間毎日体温を測定し（図１）、感染８日目の各試験群動物の剖検で肺器官を肉眼で観察して肺組職をＨ／Ｅ染色して病理学的変化を確認した（図２）。前記の結果を総合してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの代表的感染症状である発熱と肺組織の感染程度によって重症感染群（Ｓｅｖｅｒｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、軽症感染群（Ｍｉｌｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、無感染（Ｎｏｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）に分けた（表１）。

【0049】

【表1】

【0050】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス重症感染群、軽症感染群、無感染群に対して腸内マイクロバイオーム分析を行うために、各群の試験動物から腸内内容物をいずれも採取した後、これらの１６Ｓメタゲノムシーケンシングで１６ＳｒＲＮＡ超可変領域Ｖ３とＶ４を分析した。各実験群の腸内マイクロバイオームの構成分類単位ＯＴＵ（Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ Ｕｎｉｔ）の総個数は２，０７０個であり、２２個の門、１５３個の科及び２７８個の属に割り当てられた。

【0051】

感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）の群別腸内マイクロバイオーム分析のためには、導出されたＯＴＵを利用して、群別の相対存在量、α多様性及び共起ネットワーク分析を比較分析した（図３～図５）。総分析されたＯＴＵは、重症感染群（ＳＩ）でｎ＝９７４、軽症感染群（ＭＩ）でｎ＝８６９、無感染群（ＮＩ）でｎ＝８０２であった。群別腸内マイクロバイオームの組成は、ヒートマップで比較した（図６）。また、群別分布は、非計量多次元尺度構成法（ＮＭＤＳ）プロットで比較した（図７）。また、群別分布を（Ａ）主成分分析（ＰＣｏＡ）と（Ｂ）グループ重心までの距離の結果で比較した（図８）。

【0052】

さらに、本発明の実施例１によって感染抵抗性ヒトの腸内菌株を摂取させた後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた実験動物における、重症感染群（ＳＩ）と無感染群（ＮＩ）との群間の腸内マイクロバイオームの差次的存在量を、ＤＥＳｅｑ２分析を用いて各ＯＴＵ別ｌｏｇ２－フォルドチェンジで分析した（図９）。また、ＤＥＳｅｑ２分析を用いて各ＯＴＵ別クラスタされたヒートマップを分析した（図１０）。

【0053】

前述したように、本発明の実施例１によって「感染抵抗性ヒト」由来のｄｅ ｎｏｖｅマイクロバイオームを有する実験動物にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた後、腸内マイクロバイオームの２，０７０個のＯＴＵに対して重症感染群（ＳＩ）、軽症感染群（ＭＩ）、無感染群（ＮＩ）間の存在量、多様性、組成、分布を比較分析することで（図３～図１０）、無感染群特異的ＯＴＵを１２個見出すことになった（表２）。

【0054】

【表2】

【0055】

前記１２個の無感染群ＯＴＵに当たる６種の微生物の中で、特にＪＢＯ３－１０１とＪＢＲ５－５０１菌株は、オリバクテリウム種に属する新規の菌株ＪＢＯ３－１０１とルミノコッカス種に属する新規の菌株ＪＢＲ５－５０１菌株であって、無感染群（ＮＩ）特異性を示した。実際に、重症感染群（ＳＩ）との比較時、無感染群（ＮＩ）においてＪＢＯ３－１０１（図１１）とＪＢＲ５－５０１（図１２）が顕著に増えた差次的存在量を示すことを確認することで、前記これらの菌株が「感染抵抗性ヒト」に由来する「感染抵抗性菌株」であることが判明した。

【0056】

前記表２に示したように、１２個の無感染群の特異的ＯＴＵから取り出された「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１の形態をグラム染色で確認した（図１３）。その的確な同定のために、１６Ｓ－ｒＲＮＡ遺伝子配列分析を行った。各菌株からゲノミックＤＮＡを得た後、汎用のプライマーセット、２７Ｆ－ＡＧＡ ＧＴＴ ＴＧＡ ＴＣＣ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＧ（配列番号１）及び１４９Ｒ－ＧＧＴ ＴＡＣ ＣＴＴ ＧＴＴ ＡＣＧ ＡＣＴＴ（配列番号２）を利用してＰＣＲで増幅して１６ＳｒＲＮＡの塩基配列を得た（配列番号３～４）。各実験菌株の１６ＳｒＲＮＡの塩基配列をＮＣＢＩ－データベースのブラストサーチの結果を利用して同定した。その結果、「感染抵抗性菌株」ＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１は、それぞれオリバクテリウム種（Ｏｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）に属する新規の菌株ＪＢＯ３－１０１（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）とルミノコッカス種（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）に属する新規の菌株ＪＢＲ５－５０１（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）と確認され、２０２２年１２月２０日付けで国立農業科学院生物資源センターに寄託した。

【0057】

実施例２．感染抵抗性腸内菌株のＣＯＶＩＤ－１９予防効果
「感染抵抗性菌株」として見出されたＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１菌株を利用して、最も深刻なウイルス性感染疾病であるＣＯＶＩＤ－１９を引き起こすＣＯＶＩＤ－１９ウイルスのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する効果を動物実験で確認した。

【0058】

このために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２菌株ＨＢ－０１は、疾病管理本部（Ｋｏｒｅａ Ｉｌｌｎｅｓｓ Ｃｏｎｔｒｏｌａｎｄ ＡｎｔｉｃｉｐａｔｉｏｎＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、ＫＤＣＡ）のＮＣＣＰ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ）から入手した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２培養は、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞を１０％ＦＢＳ、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンの添加されたＤＭＥＭ培地で３７゜Ｃ、５％ＣＯ_２で培養して用意した。

【0059】

実験動物としては、病原性微生物感染に非常に脆弱な動物モデルであるロボロフスキーハムスター（Ｐｈｏｄｏｐｕｓ ｒｏｂｏｒｏｖｓｋｉｉ）ｓｔｒａｉｎ ＳＨ１０１（Ａｌｐｈａｂｉｏ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏ．社）を利用して、飼料（Ｄ１２４５０Ｂ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｉｎｃ．社製）と飲水を制限なしに飼育して全北大学校ＡＢＬ３研究室で１週間の適応期間を設けた後、実験を開始した。まず、腸内細菌枯渇のために抗生剤混合物であるアジスロマイシン（１５ｍｇ／ｋｇ）、ネオマイシン（２５ｍｇ／ｋｇ）、シプロフロキサシン（２０ｍｇ／ｋｇ）及びミコナゾール（３０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。２日後、各ハムスターをランダムにグループ化した後、各グループ別（ｎ＝８～１０）に当該微生物（Ｇｕｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を１×１０^９ＣＦＵ／１００μＬＰＢＳ／日の水準で経口投与した。１週間の間当該微生物を摂取させた後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを１０^５ＴＣＩＤ_５０でＳＨ１０１ハムスター鼻腔内に５０μｌを感染させた。感染後毎日体重（図１４）を記録し、感染８日目の死亡／生存率を記録した後（表３、図１５）、すべての試験動物を犠牲させて肺組職の形態学的観察（図１６）及び肺切片のＨ＆Ｅ染色（図１７）を行い、肺のウイルス定量化のためにＲＴ－ＰＣＲを行った（図１８）。

【0060】

【表3】

【0061】

前記図１４～図１８の結果において、「感染抵抗性ヒト」に由来する「感染抵抗性菌株」で実験動物の腸内マイクロバイオームを形成した後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスへの感染時、生存率、体重変化、肺の形態学的及び病理学的観察、ウイルスの数値を定量分析した結果、ＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１菌株がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染に対する感染抵抗性菌株であることを確認した。

【0062】

実施例３．感染抵抗性腸内菌株の流感治療効果
「感染抵抗性菌株」として見出されたＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１菌株を利用して、最もありふれたウイルス性感染疾患であるインフルエンザを引き起こす流感ウイルスに対する治療効果を動物実験で確認した。

【0063】

このために、インフルエンザＡウイルスＨ１Ｎ１（ＮＣＣＰ４３０２１）とウイルス増殖のための菌株の培養は、ＭＤＣＫ細胞を１０％ＦＢＳ、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが添加されたＭＥＭ培地で３７゜Ｃ、５％ＣＯ_２で培養して用意した。

【0064】

７週齢の実験動物ロボロフスキーハムスターＳＨ１０１（Ａｌｐｈａ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏ．社）をランダムにグループ化した後、インフルエンザウイルス２×１０^３ＰＦＵ／５０μｌ水準で鼻腔内に感染させた。感染後７日間各グループ別（ｎ＝５）に当該微生物ＪＢＯ３－１０１（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びＪＢＲ５－５０１（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）を１×１０^９ＣＦＵ／１００μＬＰＢＳ／日の水準で経口投与した。臨床症状の有無をモニタリングしながら生存率を記録した後（表４）、すべての試験動物を犠牲させて肺組職をサンプリングした後にウイルス定量化のためにＲＴ－ＰＣＲを行った（図１９）。

【0065】

【表4】

【0066】

上記の結果から、インフルエンザウイルスに感染された実験動物に感染抵抗性菌株を給餌した後、生存率とウイルスを定量分析した結果、対照群とは異なり、ＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１が流感ウイルス感染に対する抵抗性菌株であることを確認した。

【0067】

実施例４．感染抵抗性腸内菌株の結核予防効果
「感染抵抗性菌株」として見出されたＪＢＲ５－５０１とＪＢＯ３－１０１菌株を利用して、最も深刻な細菌性感染疾病を引き起こす結核菌に対する効果を動物実験で確認した。結核菌株Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＮＣＣＰ１５９８６）は、Ｌ当たり５０ｇのアルブミン、２０ｇのデキストロース、８．５ｇＮａＣｌ含まれた７Ｈ１０寒天培地に接種して３７゜Ｃで１０日培養して用意した。実験動物は、実施例２と同様な方式で腸内細菌が枯渇したローブローブスキーハムスターを用意した後、グループ別（ｎ＝３）に当該微生物ＪＢＯ３－１０１（受託番号ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ）及びＪＢＲ５－５０１（受託番号ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ）を１×１０^９ＣＦＵ／１００μＬＰＢＳ／日の水準で１週間経口投与した。次に、感染抵抗性菌株が移植された実験動物に、用意した結核菌培養物を１×１０^４ＣＦＵ／５０μｌの水準で鼻腔内感染させて、感染後１４日間臨床症状の有無をモニタリングしながら生存率を記録した後（表５）、すべての試験動物を犠牲させて肺組職の感染菌ＣＦＵを測定した（図２０）。

【0068】

【表5】

【0069】

上記の結果から、結核菌に感染された実験動物に「感染抵抗性菌株」を給餌後、生存率と結核菌定量を分析した結果、ＪＢＯ３－１０１及びＪＢＲ５－５０１が結核菌感染に対する抵抗性菌株であることを確認した。

【受託番号】

【0070】

寄託機関：農村進興庁国立農業科学院微生物銀行（ＫＡＣＣ）
受託番号：ＫＡＣＣ８１２４９ＢＰ
受託日：２０２２年１２月２０日
寄託機関：農村進興庁国立農業科学院微生物銀行（ＫＡＣＣ）
受託番号：ＫＡＣＣ８１２５０ＢＰ
受託日：２０２２年１２月２０日

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【配列表】

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