ホーム > 特許ランキング > 積水メディカル株式会社
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025001050
(43)【公開日】2025-01-08
(54)【発明の名称】ガニレリクス又はその塩の製造法
(51)【国際特許分類】
C07K 7/23 20060101AFI20241225BHJP
【ＦＩ】
C07K7/23
【審査請求】未請求
【請求項の数】11
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021142162
(22)【出願日】2021-09-01
(71)【出願人】
【識別番号】390037327
【氏名又は名称】積水メディカル株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000084
【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】矢野 真也
(72)【発明者】
【氏名】松本 卓
【テーマコード（参考）】
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H045AA10
4H045AA20
4H045BA15
4H045CA40
4H045DA30
4H045EA20
4H045FA30
4H045FA40
4H045FA44
4H045FA57
4H045FA61
4H045GA01
(57)【要約】 （修正有）
【課題】液相ペプチド合成法による新たなガニレリクスの製造法を提供する。
【解決手段】液相ペプチド合成法によるガニレリクス又はその塩の製造方法であって、Ｃ末端から３番目及び５番目のジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として、下記式
（式中、Ｒ１及びＲ２はＢｏｃ、Ｃｂｚ、Ｔｒｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｍｔ、Ｔｅｏｃ、Ｐｈｔｈ、ＳＥＳ、又はｉｖＤｄｅを示し、Ｒ３はアミノ保護基を示す）で表される群の１つ以上の化合物、および液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法。
【選択図】なし
【解決手段】液相ペプチド合成法によるガニレリクス又はその塩の製造方法であって、Ｃ末端から３番目及び５番目のジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として、下記式
（式中、Ｒ１及びＲ２はＢｏｃ、Ｃｂｚ、Ｔｒｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｍｔ、Ｔｅｏｃ、Ｐｈｔｈ、ＳＥＳ、又はｉｖＤｄｅを示し、Ｒ３はアミノ保護基を示す）で表される群の１つ以上の化合物、および液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
液相ペプチド合成法によるガニレリクス又はその塩の製造方法であって、Ｃ末端から３番目及び５番目のジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として、下記式（１）～（３）
（式中、Ｒ1及びＲ2はＢｏｃ、Ｃｂｚ、Ｔｒｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｍｔ、Ｔｅｏｃ、Ｐｈｔｈ、ＳＥＳ、又はｉｖＤｄｅを示し、Ｒ3はアミノ保護基を示す）
で表される群の１つ以上の化合物、および液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法。
【化1】
で表される群の１つ以上の化合物、および液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法。
【請求項2】
次の工程ａ～ｃを含むことを特徴とする、請求項１記載の製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、アミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記アミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、アミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記アミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
【請求項3】
工程ａに引き続き、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルのクエンチ剤を添加する工程を含む、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項4】
原料アミノ酸が、Ｃ末端側からＤ－ＡｌａＮＨ2、Ｐｒｏ、ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｌｅｕ、Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｄ－３－ピリジルＡｌａ、Ｄ－ｐ－クロロＰｈｅ、Ｄ－ナフチルＡｌａの順である請求項１～３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項5】
前記Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、前記Ｒ3がＦｍｏｃ又はＣｂｚである請求項１～４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項6】
前記Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、前記Ｒ3がＦｍｏｃである請求項１～５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項7】
前記アミノ酸活性エステルのクエンチ剤が、水溶性アミンである、請求項３～６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項8】
前記水溶性アミンが、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級、２級若しくは３級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である請求項７記載の製造方法。
【請求項9】
Ｒ3がＦｍｏｃである場合において、工程ｂに引き続き、ジベンゾフルベンのトラッピング剤を添加する工程を含む、請求項２～８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項10】
前記ジベンゾフルベンのトラッピング剤が、炭素数１～１０のアルキル基を有するメルカプト化合物であって、カルボン酸、カルボン酸のアルカリ金属塩、スルホン酸、又はスルホン酸のアルカリ金属塩から選ばれる１種以上の置換基を有するメルカプト化合物である、請求項９に記載の製造方法。
【請求項11】
前記液相ペプチド合成用担体が、下記式（Ｉ）で表される化合物である請求項１～１０のいずれか１項に記載の製造方法。
［式中、
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）：
（式中、＊は結合位置を示し；
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、
脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
【化2】
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【化3】
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）：
【化4】
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、
脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【化5】
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ゴナドトロピンアンタゴニストであるガニレリクス又はその塩の製造法に関する。
【背景技術】
【0002】
ガニレリクスは、ゴナドトロピンアンタゴニストであり、調節卵巣刺激下における早発排卵防止薬として上市されている。ガニレリクスは、Ｃ末端から３番目と５番目にジエチルホモアルギニン残基を有するデカペプチド医薬品であり、固相ペプチド合成法により製造されている（特許文献１、２、非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】ＣＮ１０２５８４９４５Ａ
【特許文献2】国際公開第２０１５／１８８７７４号
【特許文献3】特許第５１１３１１８号公報
【特許文献4】特許第４５００８５４号
【特許文献5】特許第５９２９７５６号公報
【特許文献6】特許第６０９２５１３号公報
【特許文献7】特許第５７６８７１２号公報
【特許文献8】特許第５８０３６７４号公報
【特許文献9】特許第６１１６７８２号公報
【特許文献10】特許第６２０１０７６号公報
【特許文献11】特許第６２８３７７４号公報
【特許文献12】特許第６２８３７７５号公報
【特許文献13】特許第６３２２３５０号公報
【特許文献14】特許第６３９３８５７号公報
【特許文献15】特許第６５３１２３５号公報
【特許文献16】国際公開第２０１９／００９３１７号
【特許文献17】国際公開第２０２０／１７５４７２号
【特許文献18】国際公開第２０２０／１７５４７３号
【特許文献19】特表２００３－５００４１６号公報
【特許文献20】特表２００４－５１６３３０号公報
【特許文献21】特開平４－２１１０９６号公報
【特許文献22】特開平５－１７０７９５号公報
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】厚生労働省医薬食品局審査管理課「ガニレスト皮下注０．２５ｍｇシリンジ」審議結果報告書ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐｍｄａ．ｇｏ．ｊｐ／ｄｒｕｇｓ／２００８／Ｐ２００８０００３４／１７００５００００＿２２０００ＡＭＸ０１７１４０００＿Ａ１００＿２．ｐｄｆ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
ガニレリクスのようなデカペプチドの製造法としては、試薬レベルの少量であれば固相ペプチド合成法が好ましいが、医薬品としての供給という大量生産には不向きである。これは、固相合成が不均一な反応系であり混合効率が低く、反応速度が遅いためである。さらに、反応途中にペプチドを精製することができないため、定量的に反応させる目的で、伸長させるアミノ酸や試薬を３～４当量と大過剰量使用する必要もある。一方、液相ペプチド合成法によれば、均一な反応系であり、試薬の使用量を抑えることも可能である。しかしながら、ペプチド鎖の伸長に伴い有機溶媒への溶解度が低下することに起因する反応速度の低下や、ペプチド伸長反応毎に各ペプチドの性質に適した分離工程を検討する必要があり煩雑であることから、いわゆる液相ペプチド合成は近年おこなわれておらず、液相ペプチド合成法によるガニレリクスの合成も行われていなかった。
【0006】
これに対し、近年、液相ペプチド合成において、液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）が報告されている（特許文献３～１８）。本担体は疎水性が高い化合物であるため、親水性の高いアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミド（以下、アミノ酸等ということがある）を本担体に結合することで、有機溶媒への溶解性を大きく向上させることができる。従って、本担体にアミノ酸等を結合した状態でペプチド伸長反応を実施した場合、担体に結合したアミノ酸等を有機層に溶解させ、不要成分、たとえばペプチド伸長反応に使用した余剰の原料アミノ酸や、その分解物、原料アミノ酸の保護基を脱保護した際に副生する化合物等を水層に溶解させることで、液液分離により、担体に結合したアミノ酸等を簡便に精製できるという利点がある。さらに担体が結合した状態でもペプチドの粗精製が可能という利点もある。このように、液相ペプチド合成用担体を使用すれば、煩雑な分離操作を必要とせずに、ペプチドの大量製造が可能となった。
なお、本明細書で「アミノ酸アミド」とは、アミノ酸のＣ末端のカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）がアミド基（－ＣＯＮＨ2）となった構造をいう。また、「ペプチドアミド」とは、ペプチドのＣ末端のカルボキシ基がアミド基となった構造をいう。
さらに、本明細書で「液液分離」と記載した場合、前述の工程、すなわち担体に結合したアミノ酸等を有機層に溶解させ、不要成分、たとえばペプチド伸長反応に使用した余剰の原料アミノ酸や、その分解物、原料アミノ酸の保護基を脱保護した際に副生する化合物等を水層に溶解させる工程をいう。
なお、本明細書で「アミノ酸アミド」とは、アミノ酸のＣ末端のカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）がアミド基（－ＣＯＮＨ2）となった構造をいう。また、「ペプチドアミド」とは、ペプチドのＣ末端のカルボキシ基がアミド基となった構造をいう。
さらに、本明細書で「液液分離」と記載した場合、前述の工程、すなわち担体に結合したアミノ酸等を有機層に溶解させ、不要成分、たとえばペプチド伸長反応に使用した余剰の原料アミノ酸や、その分解物、原料アミノ酸の保護基を脱保護した際に副生する化合物等を水層に溶解させる工程をいう。
【0007】
しかし、ガニレリクスの場合、この液相ペプチド合成用担体を使用しても、ガニレリクスの構造中に存在するグアニジル基含有アミノ酸（ジエチルホモアルギニン）の縮合反応の際の液液分離が困難であることが判明した。
【0008】
従って、本発明の課題は、液相ペプチド合成法による新たなガニレリクスの製造法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
そこで、本発明者は、液相ペプチド合成用担体を使用したガニレリクスの液相ペプチド合成に用いるジエチルホモアルギニンのグアニジル基の保護手段について種々検討した。まず、アルギニン類のグアニジル基の保護手段として汎用されてきたプロトン保護（特許文献１９～２２）を検討したところ、ジエチルホモアルギニンの縮合反応後の液液分離が困難であった。これに対し、アルギニン類のグアニジノ基をＢｏｃ基などの保護基で保護したジエチルホモアルギニンを原料として用いれば、縮合反応後の液液分離が良好になり、液相ペプチド合成法により工業的に有利な方法でガニレリクス又はその塩が製造できることを見出し、本発明を完成した。
【0010】
すなわち、本発明は、次の発明［１］～［１１］を提供するものである。
［１］液相ペプチド合成法によるガニレリクス又はその塩の製造方法であって、Ｃ末端から３番目及び５番目のジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として、下記式（１）～（３）
［１］液相ペプチド合成法によるガニレリクス又はその塩の製造方法であって、Ｃ末端から３番目及び５番目のジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として、下記式（１）～（３）
【0011】
【化1】
【0012】
（式中、Ｒ1及びＲ2はＢｏｃ、Ｃｂｚ、Ｔｒｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｍｔ、Ｔｅｏｃ、Ｐｈｔｈ、ＳＥＳ、又はｉｖＤｄｅを示し、Ｒ3はアミノ保護基を示す）
で表される群の１つ以上の化合物、および液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法。
［２］次の工程ａ～ｃを含むことを特徴とする、［１］記載の製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、アミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記アミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［３］工程ａに引き続き、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルのクエンチ剤を添加する工程を含む、［１］又は［２］記載の製造方法。
［４］原料アミノ酸が、Ｃ末端側からＤ－ＡｌａＮＨ2、Ｐｒｏ、ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｌｅｕ、Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｄ－３－ピリジルＡｌａ、Ｄ－ｐ－クロロＰｈｅ、Ｄ－ナフチルＡｌａの順である［１］～［３］のいずれかに記載の製造方法。
［５］前記Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、前記Ｒ3がＦｍｏｃ又はＣｂｚである［１］～［４］のいずれかに記載の製造方法。
［６］前記Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、前記Ｒ3がＦｍｏｃである［１］～［５］のいずれかに記載の製造方法。
［７］前記アミノ酸活性エステルのクエンチ剤が、水溶性アミンである、［３］～［６］のいずれかに記載の製造方法。
［８］前記水溶性アミンが、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級、２級若しくは３級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である［７］記載の製造方法。
［９］Ｒ3がＦｍｏｃである場合において、工程ｂに引き続き、ジベンゾフルベンのトラッピング剤を添加する工程を含む、［２］～［８］のいずれかに記載の製造方法。
［１０］前記ジベンゾフルベンのトラッピング剤が、炭素数１～１０のアルキル基を有するメルカプト化合物であって、カルボン酸、カルボン酸のアルカリ金属塩、スルホン酸、又はスルホン酸のアルカリ金属塩から選ばれる１種以上の置換基を有するメルカプト化合物である、［９］に記載の製造方法。
［１１］前記液相ペプチド合成用担体が、下記式（Ｉ）で表される化合物である［１］～［１０］のいずれかに記載の製造方法。
で表される群の１つ以上の化合物、および液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法。
［２］次の工程ａ～ｃを含むことを特徴とする、［１］記載の製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、アミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記アミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［３］工程ａに引き続き、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルのクエンチ剤を添加する工程を含む、［１］又は［２］記載の製造方法。
［４］原料アミノ酸が、Ｃ末端側からＤ－ＡｌａＮＨ2、Ｐｒｏ、ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｌｅｕ、Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｄ－３－ピリジルＡｌａ、Ｄ－ｐ－クロロＰｈｅ、Ｄ－ナフチルＡｌａの順である［１］～［３］のいずれかに記載の製造方法。
［５］前記Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、前記Ｒ3がＦｍｏｃ又はＣｂｚである［１］～［４］のいずれかに記載の製造方法。
［６］前記Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、前記Ｒ3がＦｍｏｃである［１］～［５］のいずれかに記載の製造方法。
［７］前記アミノ酸活性エステルのクエンチ剤が、水溶性アミンである、［３］～［６］のいずれかに記載の製造方法。
［８］前記水溶性アミンが、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級、２級若しくは３級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である［７］記載の製造方法。
［９］Ｒ3がＦｍｏｃである場合において、工程ｂに引き続き、ジベンゾフルベンのトラッピング剤を添加する工程を含む、［２］～［８］のいずれかに記載の製造方法。
［１０］前記ジベンゾフルベンのトラッピング剤が、炭素数１～１０のアルキル基を有するメルカプト化合物であって、カルボン酸、カルボン酸のアルカリ金属塩、スルホン酸、又はスルホン酸のアルカリ金属塩から選ばれる１種以上の置換基を有するメルカプト化合物である、［９］に記載の製造方法。
［１１］前記液相ペプチド合成用担体が、下記式（Ｉ）で表される化合物である［１］～［１０］のいずれかに記載の製造方法。
【0013】
【化2】
【0014】
［式中、
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【0015】
【化3】
【0016】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）：
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）：
【0017】
【化4】
【0018】
（式中、＊は結合位置を示し；
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、
脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、
脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【0019】
【化5】
【0020】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
【発明の効果】
【0021】
本発明のジエチルホモアルギニンの保護体を用いる方法でガニレリクス又はその塩を製造すれば、縮合反応後の液液分離が容易になり、ガニレリクス又はその塩が工業的に有利に製造できる。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】実施例（１－ｄ）※１の工程における液液分離にて、分液漏斗を振盪後、室温で２５分間静置した後の液面の写真である。
【図2】参考例（１－ｄ）※２の工程における液液分離にて、分液漏斗を振盪後、室温で２５分間静置した後の液面の写真である。
【発明を実施するための形態】
【0023】
本発明の目的化合物である、ガニレリクスは下記の構造を有するデカペプチド［Ｎ－アセチル－３－（２－ナフチル）－Ｄ－アラニル－４－クロロ－Ｄ－フェニルアラニル－３－（３－ピリジル）－Ｄ－アラニル－Ｌ－セリル－Ｌ－チロシル－Ｎ６－（Ｎ，Ｎ'－ジエチルカルバミミドイル）－Ｄ－リジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ６－（Ｎ，Ｎ'－ジエチルカルバミミドイル）－Ｌ－リジル－Ｌ－プロリル－Ｄ－アラニンアミド）］であり、ゴナドトロピンアンタゴニストであり、調節卵巣刺激下における早発排卵防止薬として上市されている。
【0024】
【化6】
【0025】
上記の構造において、デカペプチド構造を構成するアミノ酸残基は、Ｃ末端側から、Ｄ－ＡｌａＮＨ2、Ｐｒｏ、ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｌｅｕ、Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｄ－３－ピリジルＡｌａ、Ｄ－ｐ－クロロＰｈｅ、Ｄ－ナフチルＡｌａと略記することがある。
【0026】
本発明のガニレリクス又はその塩の製造方法は、液相ペプチド合成法によるガニレリクス又はその塩の製造方法であって、Ｃ末端から３番目及び５番目のジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として、下記式（１）～（３）
【0027】
【化7】
【0028】
（式中、Ｒ1及びＲ2はＢｏｃ、Ｃｂｚ、Ｔｒｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｍｔ、Ｔｅｏｃ、Ｐｈｔｈ、ＳＥＳ、又はｉｖＤｄｅを示し、Ｒ3はアミノ保護基を示す）
で表される化合物のうち１つ以上と液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法である。
で表される化合物のうち１つ以上と液相ペプチド合成用担体を用いるガニレリクス又はその塩の製造方法である。
【0029】
まず、ジエチルホモアルギニン残基の縮合反応原料として用いる前記式（１）～（３）で表される化合物について説明する。
Ｒ1及びＲ2はＢｏｃ（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）、Ｃｂｚ（ベンジルオキシカルボニル）、Ｔｒｏｃ（２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル）又はＡｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）、Ｔｒｔ（トリチル）、Ｍｍｔ（４－モノメトキシトリチル）、Ｔｅｏｃ（２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル）、Ｐｈｔｈ（フタロイル）、ＳＥＳ（（２－トリメチルシリル）－エタンスルホニル）、ｉｖＤｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル）を示す。このうち、縮合反応物の液液分離を良好にする観点から、Ｂｏｃが好ましい。
Ｒ3はアミノ保護基を示す。当該アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ（９－フルオレニルメチルオキシカルボニル）、Ｂоｃ、Ｃｂｚなどが挙げられ、このうちＦｍｏｃ、Ｃｂｚが好ましく、塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃがより好ましい。
特に、Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、Ｒ3がＦｍоｃである化合物がより好ましい。
Ｒ1及びＲ2はＢｏｃ（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）、Ｃｂｚ（ベンジルオキシカルボニル）、Ｔｒｏｃ（２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル）又はＡｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）、Ｔｒｔ（トリチル）、Ｍｍｔ（４－モノメトキシトリチル）、Ｔｅｏｃ（２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル）、Ｐｈｔｈ（フタロイル）、ＳＥＳ（（２－トリメチルシリル）－エタンスルホニル）、ｉｖＤｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル）を示す。このうち、縮合反応物の液液分離を良好にする観点から、Ｂｏｃが好ましい。
Ｒ3はアミノ保護基を示す。当該アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ（９－フルオレニルメチルオキシカルボニル）、Ｂоｃ、Ｃｂｚなどが挙げられ、このうちＦｍｏｃ、Ｃｂｚが好ましく、塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃがより好ましい。
特に、Ｒ1及びＲ2がＢｏｃであり、Ｒ3がＦｍоｃである化合物がより好ましい。
【0030】
前記式（１）～（３）で表される構造は、Ｅ／Ｚ異性体又はイミノ／アミノ異性体であり、当該化合物は、これらの異性体の混合物であってもよい。
【0031】
前記式（１）～（３）で表される化合物は、例えば、αアミノ保護ジエチルホモアルギニン、又はこれと液相ペプチド合成用担体との結合体に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルイミダゾール等のＢｏｃ化剤などのアミノ保護化剤を反応させることにより製造できる。
例えば、このＢｏｃ化反応は、塩基の存在下、溶媒中で行うのが好ましい。塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＭＡＰ（４－ジメチルアミノピリジン）、Ｎ－メチルイミダゾールなどの有機塩基又はこれらの混合有機塩基でもよく、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化ナトリウムなどの無機塩基でもよい。塩基の添加量は、アルギニン誘導体に対して０．１～３０当量、好ましくは１～２０当量であるが、これに限定されない。
反応溶媒は、水、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、２－メチルＴＨＦ、１，４－ジオキサン、トルエン、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、又はこれらの混合溶媒などが用いられる。反応は、０℃～４０℃で、１～２４時間行うのが好ましい。
例えば、このＢｏｃ化反応は、塩基の存在下、溶媒中で行うのが好ましい。塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＭＡＰ（４－ジメチルアミノピリジン）、Ｎ－メチルイミダゾールなどの有機塩基又はこれらの混合有機塩基でもよく、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化ナトリウムなどの無機塩基でもよい。塩基の添加量は、アルギニン誘導体に対して０．１～３０当量、好ましくは１～２０当量であるが、これに限定されない。
反応溶媒は、水、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、２－メチルＴＨＦ、１，４－ジオキサン、トルエン、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、又はこれらの混合溶媒などが用いられる。反応は、０℃～４０℃で、１～２４時間行うのが好ましい。
【0032】
次に、前記液相ペプチド合成用担体について、説明する。このような液相ペプチド合成用担体は、アミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミド（アミノ酸等）の官能基を保護して、当該保護されたアミノ酸等を有機溶媒に可溶化する担体であれば良く、例えば、特許文献３～１８などに記載の化合物を用いることができる。
このような液相ペプチド合成用担体としては、具体的には、下記式（Ｉ）で表される化合物が挙げられる。
このような液相ペプチド合成用担体としては、具体的には、下記式（Ｉ）で表される化合物が挙げられる。
【0033】
【化8】
【0034】
［式中、
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【0035】
【化9】
【0036】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）：
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）：
【0037】
【化10】
【0038】
（式中、＊は結合位置を示し；
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【0039】
【化11】
【0040】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
【0041】
式（Ｉ）中の環Ａは、ヘテロ原子を含んでいてもよく、単環性でも、多環性でよいＣ４～２０の芳香環を示す。当該芳香環としては、Ｃ６～２０の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～２０の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環、１，１’－ビナフタレン環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の芳香族複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の芳香族複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
具体的なＣ６～２０の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環、１，１’－ビナフタレン環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の芳香族複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の芳香族複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
【0042】
Ｒ11は、水素原子を示すか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが前記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。Ｒ11とＲ13が一緒になって形成してもよい環としては、フルオレン環又はキサンテン環が好ましい。
【0043】
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。
ここで、Ｒ15としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などの直鎖又は分岐鎖のＣ1～１０のアルキル基が挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
ここで、Ｒ15としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などの直鎖又は分岐鎖のＣ1～１０のアルキル基が挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
【0044】
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【0045】
【化12】
【0046】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す。
ｐは、１～４の整数を示す。
ｐは、１～４の整数を示す。
【0047】
本明細書において、脂肪族炭化水素基を有する有機基とは、その分子構造中に脂肪族炭化水素基を有する一価の有機基である。当該脂肪族炭化水素基を有する有機基中の脂肪族炭化水素基の部位は、特に限定されず、末端に存在してもよく、それ以外の部位に存在してもよい。
当該有機基中に存在する脂肪族炭化水素基とは、直鎖、分岐状若しくは環状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、有機溶媒溶解性の点から、Ｃ５以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、Ｃ５～５０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、Ｃ８～３０の脂肪族炭化水素基がさらに好ましい。当該脂肪族炭化水素基の具体例としては、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられるが、特にアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基が好ましく、アルキル基がより好ましい。さらに、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基がより好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がさらに好ましく、Ｃ８～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がよりさらに好ましい。
当該有機基中に存在する脂肪族炭化水素基とは、直鎖、分岐状若しくは環状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、有機溶媒溶解性の点から、Ｃ５以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、Ｃ５～５０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、Ｃ８～３０の脂肪族炭化水素基がさらに好ましい。当該脂肪族炭化水素基の具体例としては、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられるが、特にアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基が好ましく、アルキル基がより好ましい。さらに、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基がより好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がさらに好ましく、Ｃ８～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がよりさらに好ましい。
【0048】
アルキル基の具体例としては、炭素数１～３０のアルキル基が挙げられ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、デシル基、ラウリル基、トリデシル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基、アラキル基、べへニル基、テトラコサニル基、ヘキサコサニル基、イソステアリル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基、各種ステロイド基から水酸基などを除外した基が挙げられる。
分岐鎖を有するアルキル基としては、２、３―ジヒドロフィチル基、３，７，１１－トリメチルドデシル基が挙げられる。またＸ1が－ＮＨＣ（＝Ｏ）－の場合、Ｘ1Ｒ12として２，２，４，８，１０，１０－ヘキサメチル－５－ドデカン酸アミドが挙げられる。
アルケニル基としては、ビニル基、１－プロぺニル基、アリル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、オレイル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基が挙げられる。
アルキニル基としては、エチニル基、プロパルギル基、１－プロピニル基などが挙げられる。
分岐鎖を有するアルキル基としては、２、３―ジヒドロフィチル基、３，７，１１－トリメチルドデシル基が挙げられる。またＸ1が－ＮＨＣ（＝Ｏ）－の場合、Ｘ1Ｒ12として２，２，４，８，１０，１０－ヘキサメチル－５－ドデカン酸アミドが挙げられる。
アルケニル基としては、ビニル基、１－プロぺニル基、アリル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、オレイル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基が挙げられる。
アルキニル基としては、エチニル基、プロパルギル基、１－プロピニル基などが挙げられる。
【0049】
上記の脂肪族炭化水素基には、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換していてもよい。脂肪族炭化水素基に酸素原子を介して置換し得る脂肪族炭化水素基としては、炭素数１～２０の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、炭素数２～２０のアルケニルオキシ基、炭素数３～６のシクロアルキルオキシ基などの一価の基、それらから誘導される二価の基などが挙げられる。また、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換している脂肪族炭化水素基に、さらに酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換した繰り返し構造を有していてもよい。
具体的には、Ｒ12として１２－ドコシルオキシ－１－ドデシル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル基、２，２，２－トリス（オクタデシルオキシメチル）エチル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）シクロへキシルメチル基などが挙げられる。
具体的には、Ｒ12として１２－ドコシルオキシ－１－ドデシル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル基、２，２，２－トリス（オクタデシルオキシメチル）エチル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）シクロへキシルメチル基などが挙げられる。
【0050】
上記の脂肪族炭化水素基には、
【0051】
【化13】
【0052】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基、のいずれかである有機基が置換していてもよい。
シリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリル基が好ましい。ここで、置換基を有していてもよいアリール基としては、フェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
好ましいシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基である。シリル基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。
また、シリルオキシ基が結合したアルキル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリルオキシ基が１～３個結合した、炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が好ましい。好ましいシリルオキシ基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基である。シリルオキシ基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。
炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基は、分岐鎖であることが好ましく、４級炭素原子を有することがさらに好ましい。
シリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリル基が好ましい。ここで、置換基を有していてもよいアリール基としては、フェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
好ましいシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基である。シリル基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。
また、シリルオキシ基が結合したアルキル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリルオキシ基が１～３個結合した、炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が好ましい。好ましいシリルオキシ基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基である。シリルオキシ基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。
炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基は、分岐鎖であることが好ましく、４級炭素原子を有することがさらに好ましい。
【0053】
ｐは、１～４の整数を示す。ここで、ｐは、１～３が好ましく、１～２がより好ましい。
【0054】
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
【0055】
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示す。
ここで、芳香族環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
Ｒａの芳香族環には、１～３個のハロゲン原子が置換していてもよい。
ここで、芳香族環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
Ｒａの芳香族環には、１～３個のハロゲン原子が置換していてもよい。
【0056】
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環、又は前記式（ｂ）で表される基を示す。
式（ｂ）中のｑは、０～４の整数を示す。
ｑは、０～３が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
式（ｂ）中のｑは、０～４の整数を示す。
ｑは、０～３が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
【0057】
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。
ここで、Ｒ18としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
ここで、Ｒ18としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
【0058】
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
【0059】
【化14】
【0060】
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す。
Ｒ14で表される有機基は、前記のＲ12と同じものが挙げられ、前記のＲ12と同じものが好ましい。
Ｒ14で表される有機基は、前記のＲ12と同じものが挙げられ、前記のＲ12と同じものが好ましい。
【0061】
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。
【0062】
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
【0063】
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。
ここで、Ｒ20としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
ここで、Ｒ20としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
【0064】
前記の式（Ｉ）の化合物のうち、好ましい液相ペプチド合成用担体の具体例としては、下記式（７）、（２０）又は（２１）で表される化合物が挙げられる。その一つとしては、式（７）で表される化合物を用いることができる（特許文献９、１０）。
【0065】
【化15】
【0066】
（式中、Ｙｂは－ＣＨ2ＯＲ34（ここでＲ34は水素原子、ハロゲノカルボニル基、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＣＨ2ＮＨＲ35（ここで、Ｒ35は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）、ハロゲノメチル基、ホルミル基、又はオキシムを示し、Ｒ21、Ｒ22、Ｒ23、Ｒ24及びＲ25のうちの少なくとも１個は式（８）
【0067】
【化16】
【0068】
で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ26は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し；
Ｘ3はＯ又はＣＯＮＲ36（ここでＲ36は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し；
Ａは式（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）又は（１９）
Ｒ26は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し；
Ｘ3はＯ又はＣＯＮＲ36（ここでＲ36は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し；
Ａは式（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）又は（１９）
【0069】
【化17】
【0070】
（ここで、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29は、同一又は異なって、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し；Ｒ30は単結合又は炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33はそれぞれ、炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す）
で表される基を示す）
で表される基を示す）
【0071】
また、液相ペプチド合成用担体としては、式（２０）で表される化合物を用いることができる（特許文献１１、１２、１５）。
【0072】
【化18】
【0073】
（式中、Ｘ4は－ＯＲ51（ここでＲ51は水素原子、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＮＨＲ35、アジド、ハロゲン、イソシアネート、Ｘ5と一緒になって＝Ｎ－ＯＨ又は＝Ｏを示し、Ｘ4が－ＯＲ51、－ＮＨＲ35、アジド又はハロゲンの場合Ｘ5は水素原子又は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し、Ｘ4がイソシアネートの場合Ｘ5は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し；
Ｒ41～Ｒ50のうちの少なくとも１個は式（２）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｘ4が－ＯＲ51、－ＮＨＲ35、アジド又はハロゲンであり、かつＸ5が水素原子のとき、若しくはＸ4とＸ5が一緒になって＝Ｏのとき、Ｒ45とＲ46は酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）
Ｒ41～Ｒ50のうちの少なくとも１個は式（２）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｘ4が－ＯＲ51、－ＮＨＲ35、アジド又はハロゲンであり、かつＸ5が水素原子のとき、若しくはＸ4とＸ5が一緒になって＝Ｏのとき、Ｒ45とＲ46は酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）
【0074】
また、液相ペプチド合成用担体としては、式（２１）で表される化合物を用いることができる（特許文献１３、１４）。
【0075】
【化19】
【0076】
（式中、Ｘ6はヒドロキシ基又はハロゲン原子を示し、Ｒ61～Ｒ75のうちの少なくとも１個は式（２）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し、Ｒ70とＲ71は単結合で結合してフルオレン環を形成していてもよく、酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）
【0077】
なお、液相ペプチド合成用担体は、原料であるアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はぺプチドアミド（アミノ酸等）のカルボキシル基にリンカーを介して結合させることもできる。
ここでいうリンカーとは、リンカーの一方が、前記アミノ酸等のカルボキシル基と結合し、他方が液相ペプチド合成用担体と結合する２つの反応基をもつ有機基である。好ましいリンカーは、分子量が約２０００以下（好ましくは約１５００以下、より好ましくは約１０００以下）の有機基であって、反応基として、同じでも異なってもよく、アミノ基、カルボキシル基、及びハロメチル基からなる群より選ばれる少なくとも２つの基を分子内にもつ化合物である。例えば、以下の化合物を挙げることができる。
ここでいうリンカーとは、リンカーの一方が、前記アミノ酸等のカルボキシル基と結合し、他方が液相ペプチド合成用担体と結合する２つの反応基をもつ有機基である。好ましいリンカーは、分子量が約２０００以下（好ましくは約１５００以下、より好ましくは約１０００以下）の有機基であって、反応基として、同じでも異なってもよく、アミノ基、カルボキシル基、及びハロメチル基からなる群より選ばれる少なくとも２つの基を分子内にもつ化合物である。例えば、以下の化合物を挙げることができる。
【0078】
【化20】
【0079】
【化21】
【0080】
（式中、Ｙは１～６、好ましくは１～４の整数である）。
【0081】
【化22】
【0082】
（式中、Ｘはハロゲン原子、好ましくは塩素又は臭素である）。
【0083】
【化23】
【0084】
（式中、Ｚは２～４０、好ましくは２～３５、より好ましくは、２～２８の整数である）。
（上記リンカーの構造式は、側鎖官能基等に結合する前の状態かつ液相ペプチド合成用担体と結合する前の状態を示す）。
（上記リンカーの構造式は、側鎖官能基等に結合する前の状態かつ液相ペプチド合成用担体と結合する前の状態を示す）。
【0085】
次に、ペプチド伸長反応について説明する。ぺプチド伸長反応は、次の工程ａ、工程ｂ及び工程ｃを有するのが好ましい。なお、工程ｂ、ｃの順序は不問であり、工程ｂ次いで工程ｃの順、すなわちアミノ基の保護基を除去した後に縮合体を含有する有機溶媒層を得てもよいし、工程ｃ次いで工程ｂの順、すなわち縮合体を含有する有機溶媒層を得た後にアミノ基の保護基を除去してもよい。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、アミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記アミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
なお、工程ａに引き続き、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルのクエンチ剤を添加する工程を実施してもよい。また、アミノ保護基がＦｍｏｃ基である場合、工程ｂに引き続き、ジベンゾフルベンのトラッピング剤を添加する工程を実施してもよい。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、アミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記アミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
なお、工程ａに引き続き、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルのクエンチ剤を添加する工程を実施してもよい。また、アミノ保護基がＦｍｏｃ基である場合、工程ｂに引き続き、ジベンゾフルベンのトラッピング剤を添加する工程を実施してもよい。
【0086】
工程ａ記載の液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド、又はペプチドアミド（以下、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドと略する）は、以下のように製造できる。まず、液相ペプチド合成用担体をＴＨＦ等の有機溶媒に溶解し、例えばＦｍｏｃで保護されたアミノ酸又はペプチド及び縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、塩基、例えばＤＭＡＰを添加して縮合を行う。すると、アミノ酸又はペプチドのカルボキシ基に液相ペプチド合成用担体が結合した中間体であるＮ－Ｆｍｏｃ－液相合成用担体結合ペプチドを製造できる。もしくは、液相ペプチド合成用担体をトルエン等の有機溶媒に溶解し、例えばＦｍｏｃで保護されたアミノ酸アミド又はペプチドアミド及び酸触媒、例えば、メシル酸を添加して縮合を行う。すると、アミノ酸アミドまたはペプチドアミドのアミド基に液相ペプチド合成用担体が結合した中間体であるＮ－Ｆｍｏｃ－液相合成用担体結合ペプチドを製造できる。
【0087】
もう一方の原料である、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチド（以下、アミノ基保護アミノ酸と略する）とは、アミノ酸又はペプチドのアミノ基がアミノ保護基で保護されており、一方、カルボキシル基は保護されておらず反応性であるアミノ酸又はペプチドを意味する。アミノ酸又はペプチドが１以上のアミノ基を有する場合は、少なくとも一つのアミノ基がアミノ保護基で保護されていれば良い。
アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基などが挙げられ、このうち塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃ基がより好ましい。
なお、アミノ基保護アミノ酸が、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ（ベンゾイル）基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｂｏｃ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ（ジチオ－ｔｅｒｔ－ブチル）基、Ｄｐｍ（ジフェニルメチル）基、ＭＢｏｍ（４－メトキシベンジルオキシメチル）基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ（ベンジルオキシメチル）基、Ｂｕｍ（ｔｅｒｔ－ブトキシメチル）基、Ｔｒｔ基、Ｄｄｍ（４，４’－ジメトキシジフェニル）基、ＭＢｏｍ基等を挙げることができる。
アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基などが挙げられ、このうち塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃ基がより好ましい。
なお、アミノ基保護アミノ酸が、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ（ベンゾイル）基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｂｏｃ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ（ジチオ－ｔｅｒｔ－ブチル）基、Ｄｐｍ（ジフェニルメチル）基、ＭＢｏｍ（４－メトキシベンジルオキシメチル）基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ（ベンジルオキシメチル）基、Ｂｕｍ（ｔｅｒｔ－ブトキシメチル）基、Ｔｒｔ基、Ｄｄｍ（４，４’－ジメトキシジフェニル）基、ＭＢｏｍ基等を挙げることができる。
【0088】
アミノ基保護アミノ酸は、例えば、アミノ保護基でアミノ基を保護したいアミノ酸又はペプチドに、例えばＴＨＦ／水などの混合溶媒中でＦｍｏｃ－ＯＳｕ等を塩基の存在下に反応させることにより、製造することができる。
【0089】
本発明の工程ａは前記の原料を縮合させる工程であり、工程ａに用いられる反応溶媒は有機溶媒を含む溶媒である。本発明で用いる前記の液相ペプチド合成用担体でアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドを保護すれば、得られた液相ペプチド合成用担体結合ペプチドが、有機溶媒に溶解するようになるため、液相ペプチド合成が可能となる。
そのような有機溶媒としては、例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、ＮＦＭ（Ｎ－ｆｏｒｍｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ）を挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＣＰＭＥ，２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。
そのような有機溶媒としては、例えば、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、ＮＦＭ（Ｎ－ｆｏｒｍｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ）を挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＣＰＭＥ，２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。
【0090】
縮合反応は、前記有機溶媒を含む溶媒中で、前記液相ペプチド合成用担体、又は液相ペプチド合成用担体結合ペプチドと、前記アミノ基保護アミノ酸と、縮合剤と塩基を混合することにより行うことができる。
【0091】
液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対する、アミノ基保護アミノ酸の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して、通常１．０１～４当量、好ましくは１．０３～３当量、より好ましくは１．０５～２当量、さらに好ましくは１．１～１．５当量である。本発明のペプチド製造法では、工程ａに引き続き、未反応のアミノ酸の活性エステルをその後に添加するクエンチ剤で捕獲して不活性化することができる。そのため、過剰のアミノ基保護アミノ酸を用いても、残存の問題が生じない。
【0092】
縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤を、本発明においても用いることができる、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ・ＨＣｌ）を挙げることができる。好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．４５当量である。
塩基としては、ペプチド合成において一般的に用いられる塩基を、本発明においても用いることができる。例えば、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＡＰ、ＮＭＭ（Ｎ－メチルモルホリン）、ＴＭＰ（２，４，６－トリメチルピリジン）を挙げることができる。好ましくはＤＩＰＥＡである。
塩基としては、ペプチド合成において一般的に用いられる塩基を、本発明においても用いることができる。例えば、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＡＰ、ＮＭＭ（Ｎ－メチルモルホリン）、ＴＭＰ（２，４，６－トリメチルピリジン）を挙げることができる。好ましくはＤＩＰＥＡである。
【0093】
縮合工程において、反応を促進し、ラセミ化などの副反応を抑制するために、好ましくは、活性化剤が添加される。ここで活性化剤とは、縮合剤との共存化で、アミノ酸を、対応する活性エステル、対称酸無水物などに導いて、ペプチド結合（アミド結合）を形成させやすくする試薬である。活性化剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる活性化剤を用いることができる。例えば、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－１，２，３－トリアゾールカルボン酸エチル（ＨＯＣｔ）、１－ヒドロキシ－7－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、３－ヒドロキシ－４－ケトベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシイミド（ＨＯＮｂ）、ペンタフルオロフェノール、シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）等を挙げることができる。好ましくは、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、Ｏｘｙｍａである。活性化剤の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．４５当量である。
【0094】
前記溶媒の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチド等を溶解した濃度が、好ましくは０．１ｍＭ～１Ｍとなる量であり、より好ましくは１ｍＭ～０．５Ｍとなる量である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。縮合反応時間は、通常１分～３０時間である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。縮合反応時間は、通常１分～３０時間である。
【0095】
工程ａに引き続き、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルクエンチ剤（以下、「クエンチ剤」ということがある）を添加する工程をおこなってもよい。工程ａにおいて、原料であるアミノ基保護アミノ酸は、液相ペプチド合成用担体又は液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して過剰量添加される。このため、アミノ基保護アミノ酸が縮合反応時に活性化されたアミノ酸活性エステルは、縮合反応後に余剰分が残存する。この余剰なアミノ酸活性エステルをクエンチする工程である。
本工程における前記クエンチ剤の添加量は、理論上残存する活性アミノ酸エステル１当量に対して、好ましくは１～１０当量、より好ましくは１～６当量、さらに好ましくは１～３当量である。
本工程における前記クエンチ剤の添加量は、理論上残存する活性アミノ酸エステル１当量に対して、好ましくは１～１０当量、より好ましくは１～６当量、さらに好ましくは１～３当量である。
【0096】
前記のアミノ酸活性エステルのクエンチ剤は、分子内にアミノ基を有する化合物であり、特許第６７０３６６８号公報、特許第６７１３９８３号公報、国際公開第２０２１／１３２５４５号公報、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０２１, ２６, ３４９７－３５０５．などに記載の化合物を用いることができる。
当該クエンチ剤としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、１級アミン又は２級アミンを有するアルキルアミン、１級アミン又は２級アミンを有する芳香族アミンを使用することができ、３級アミンを使用することもできる。さらに、余剰のクエンチ剤を液液分離にて水層に除去できることから水溶性であることが好ましく、水酸基、スルホ基、硫酸基、リン酸基といった親水性置換基を有するアミンが好ましい。また、化合物中のアミノ基の数は１つ（１価）でもよく、２価以上でもよい。
用いることができるアルキルアミンとしては、例えば、炭素数１～１４のアルキルアミンを挙げることができ、好ましくは炭素数２～１０のアルキルアミン、より好ましくは炭素数２～８のアルキルアミン、さらに好ましくは炭素数３～４のアルキルアミンである。また本発明で用いることができる芳香族アミンとしては、たとえば炭素数１～１４の芳香族アミンを挙げることができ、好ましくは炭素数６～１０の芳香族アミンである。
具体的なアミンとしては、これに限定されないが、例えば、プロピルアミン、メチルアミン、ヘキシルアミン、ベンジルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ヒドロキシルアミン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（２－アミノエチル硫酸、ＡＥＨＳ）などを挙げることができる。また、ＮＭＩ（Ｎ－メチルイミダゾール）、ＤＭＡＰ、トリメチルアミンを挙げることができる。なかでも、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（２－アミノエチル硫酸、ＡＥＨＳ）が好ましい。
当該クエンチ剤としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、１級アミン又は２級アミンを有するアルキルアミン、１級アミン又は２級アミンを有する芳香族アミンを使用することができ、３級アミンを使用することもできる。さらに、余剰のクエンチ剤を液液分離にて水層に除去できることから水溶性であることが好ましく、水酸基、スルホ基、硫酸基、リン酸基といった親水性置換基を有するアミンが好ましい。また、化合物中のアミノ基の数は１つ（１価）でもよく、２価以上でもよい。
用いることができるアルキルアミンとしては、例えば、炭素数１～１４のアルキルアミンを挙げることができ、好ましくは炭素数２～１０のアルキルアミン、より好ましくは炭素数２～８のアルキルアミン、さらに好ましくは炭素数３～４のアルキルアミンである。また本発明で用いることができる芳香族アミンとしては、たとえば炭素数１～１４の芳香族アミンを挙げることができ、好ましくは炭素数６～１０の芳香族アミンである。
具体的なアミンとしては、これに限定されないが、例えば、プロピルアミン、メチルアミン、ヘキシルアミン、ベンジルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ヒドロキシルアミン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（２－アミノエチル硫酸、ＡＥＨＳ）などを挙げることができる。また、ＮＭＩ（Ｎ－メチルイミダゾール）、ＤＭＡＰ、トリメチルアミンを挙げることができる。なかでも、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（２－アミノエチル硫酸、ＡＥＨＳ）が好ましい。
【0097】
工程ｂは、反応液中の前記アミノ基保護アミノ酸のアミノ保護基を脱離する工程である。
当該アミノ保護基の脱離工程は、アミノ保護基の種類により相違する。例えば、アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合は反応液を塩基性条件とすればよい。アミノ保護基がＢｏｃ基の場合は反応液を酸性条件とすればよい。アミノ保護基がＣｂｚ基の場合は接触還元すればよい。このうち、ワンポット液相合成とするには、アミノ保護基をＦｍｏｃ基とするのがより好ましい。
当該アミノ保護基の脱離工程は、アミノ保護基の種類により相違する。例えば、アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合は反応液を塩基性条件とすればよい。アミノ保護基がＢｏｃ基の場合は反応液を酸性条件とすればよい。アミノ保護基がＣｂｚ基の場合は接触還元すればよい。このうち、ワンポット液相合成とするには、アミノ保護基をＦｍｏｃ基とするのがより好ましい。
【0098】
アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合のアミノ保護基の脱離工程について説明する。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、反応液を塩基性にできればよいが、アミン化合物、例えば、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミンなどの３級アミン類；１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピぺリジン、ピペラジンなどの１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミン類を用いることができる。好ましくは、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ピぺリジン、ピペラジン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミンであり、より好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、ピペラジン、１－メチルピペラジンである。
工程ｂにおいて添加するアミン化合物の当量は、系に存在するＦｍｏｃ基の量に対して、１～３０当量、好ましくは４～２０当量、より好ましくは４～１０当量である。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、反応液を塩基性にできればよいが、アミン化合物、例えば、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミンなどの３級アミン類；１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピぺリジン、ピペラジンなどの１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミン類を用いることができる。好ましくは、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ピぺリジン、ピペラジン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミンであり、より好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、ピペラジン、１－メチルピペラジンである。
工程ｂにおいて添加するアミン化合物の当量は、系に存在するＦｍｏｃ基の量に対して、１～３０当量、好ましくは４～２０当量、より好ましくは４～１０当量である。
【0099】
また、前記アミン化合物に加えて、脱Ｆｍｏｃ反応により生じるＤＢＦ（ジベンゾフルベン）及びＤＢＦとアミンとの付加体（ＤＢＦ－アミン付加体）のトラッピング剤を添加するのが好ましい。ここで用いられるＤＢＦ及びＤＢＦ－アミン付加体のトラッピング剤としては、メルカプト化合物が挙げられる。用いることができるメルカプト化合物としては、メルカプト基を有し、ＤＢＦと反応した化合物が水溶性を示すものであれば特に限定されないが、例えば炭素数１～１０のアルキル基を有するメルカプト化合物であって、カルボン酸、カルボン酸のアルカリ金属塩、スルホン酸、またはスルホン酸のアルカリ金属塩から選ばれる１種以上の置換基を有するメルカプト化合物が挙げられ、下記の一般式（４）又は（５）で表される化合物が挙げられる。
【0100】
【化24】
【0101】
（式中、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示し、Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す）
【0102】
一般式（４）又は（５）中のＬ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示す。当該２価の有機基としては、炭素数１～１０の２価の有機基が好ましく、より好ましくは、メルカプト基を有していてもよい炭素数１～１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数６～１０のアリーレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数４～９のヘテロアリーレン基が挙げられる。具体的には、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、メルカプトトリメチレン基、メルカプトプロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、ペンタメチレン基、フェニレン基、ナフチレン基、インドール基、ベンズイミダゾール基、キノリル基、イソキノリン基などが挙げられる。
Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す。具体的には、水素原子、ナトリウム、カリウムが挙げられる。
具体的には、３－メルカプトプロピオン酸、チオリンゴ酸、システイン、メルカプトメタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸ナトリウム、１，３－ジメルカプトプロパンスルホン酸、２－メルカプトベンズイミダゾール－５－スルホン酸ナトリウム、などが挙げられ、３－メルカプトプロパンスルホン酸が好ましい。
Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す。具体的には、水素原子、ナトリウム、カリウムが挙げられる。
具体的には、３－メルカプトプロピオン酸、チオリンゴ酸、システイン、メルカプトメタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸ナトリウム、１，３－ジメルカプトプロパンスルホン酸、２－メルカプトベンズイミダゾール－５－スルホン酸ナトリウム、などが挙げられ、３－メルカプトプロパンスルホン酸が好ましい。
【0103】
メルカプト化合物の添加量は、Ｆｍｏｃ基の量に対して１～３０当量が好ましく、１～１０当量がより好ましく、１～５当量がさらに好ましい。
前記アミン化合物とメルカプト化合物は、同時に添加してもよく、メルカプト化合物、次いでアミン化合物の順に添加してもよい。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、－２０～４０℃の温度で、１分～５時間行えばよい。
前記アミン化合物とメルカプト化合物は、同時に添加してもよく、メルカプト化合物、次いでアミン化合物の順に添加してもよい。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、－２０～４０℃の温度で、１分～５時間行えばよい。
【0104】
工程ｃは、反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程である。
工程ｂの反応液に水溶液を添加した後、水層と有機溶媒層を分液する。
水層には、アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドと活性エステルクエンチ剤との縮合体と、ＤＢＦ－トラッピング剤付加体が含まれる。すなわち、アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドと活性エステルクエンチ剤との縮合体は、工程ｃの水溶液の添加だけで、容易に水層に抽出される。
一方、有機溶媒層には、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体が含まれる。
ここで、用いられる水溶液としては、水、又は中性～塩基性付近のｐＨを有する水溶液が挙げられる。具体的には、水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カルシウム水溶液、塩化セシウム水溶液、塩化カリウム水溶液、塩化リチウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、炭酸セシウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸三ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸水素カリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸三カリウム水溶液又はこれらの水溶液とＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＮＦＭ、ＮＭＰの混合溶媒等が挙げられる。
工程ｂの反応液に水溶液を添加した後、水層と有機溶媒層を分液する。
水層には、アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドと活性エステルクエンチ剤との縮合体と、ＤＢＦ－トラッピング剤付加体が含まれる。すなわち、アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドと活性エステルクエンチ剤との縮合体は、工程ｃの水溶液の添加だけで、容易に水層に抽出される。
一方、有機溶媒層には、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体が含まれる。
ここで、用いられる水溶液としては、水、又は中性～塩基性付近のｐＨを有する水溶液が挙げられる。具体的には、水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カルシウム水溶液、塩化セシウム水溶液、塩化カリウム水溶液、塩化リチウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、炭酸セシウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸三ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸水素カリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸三カリウム水溶液又はこれらの水溶液とＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＮＦＭ、ＮＭＰの混合溶媒等が挙げられる。
【0105】
得られたガニレリクスは、必要に応じて酢酸塩、ギ酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、トリフルオロ酢酸塩などの有機酸塩、塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩に変換することができる。
【0106】
このように、本発明方法によれば、単に水溶液を添加して分液するだけで、アミノ酸活性エステルと生成物であるペプチドとの分液不良が起こることがない。また、固液分離を必要としないので、煩雑な分離操作を必要としないワンポット合成が可能になる。前記した一連の工程は、マイクロフロー技術を用いて実施しても良い。マイクロフロー技術を用いたペプチド合成技術については、例えばＮａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ７， Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１３４９１（２０１６）に記載がある。
【実施例0107】
次に実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【0108】
参考例１
Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）の合成
Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）の合成
【0109】
【化25】
【0110】
（Ｏ＝（Ｄ２－ＳＴａｇ）、ＯＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）は式中の構造を示す。）
【0111】
参考例（ａ）
Ｏ＝（Ｄ２－ＳＴａｇ）（積水メディカル株式会社製）４１．４ｇ（４７．７ｍｍｏｌ）をトルエン ２２８ｍＬ、メタノール ３６．０ｍＬの混合溶液に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム ２．１６ｇ（５７．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応溶液を水 ８３．０ｍＬで３回分液洗浄した。得られた有機層に無水硫酸ナトリウム２０．０ｇを添加し、充分撹拌した後濾過し、ＯＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含むトルエン溶液を得た。
Ｏ＝（Ｄ２－ＳＴａｇ）（積水メディカル株式会社製）４１．４ｇ（４７．７ｍｍｏｌ）をトルエン ２２８ｍＬ、メタノール ３６．０ｍＬの混合溶液に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム ２．１６ｇ（５７．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応溶液を水 ８３．０ｍＬで３回分液洗浄した。得られた有機層に無水硫酸ナトリウム２０．０ｇを添加し、充分撹拌した後濾過し、ＯＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含むトルエン溶液を得た。
【0112】
参考例（ｂ）
前行程で得られたトルエン溶液に９－フルオレニルメチルカルバメート １３．７ｇ（５７．２ｍｍｏｌ）、シュウ酸・２水和物 １．８０ｇ（１４．３ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で３時間撹拌した。反応溶液を室温まで冷却し、メタノール：水＝９：１ ４１４ｍＬ、へプタン４１４ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（５％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ.） ２０７ｍＬで１回、メタノール：水＝９：１ ４１４ｍＬで３回分液洗浄した。得られた有機層を減圧下で濃縮し、残渣にテトラヒドロフラン８３．０ｍＬを加え、減圧下で濃縮した。残渣をテトラヒドロフラン６２ｍＬに溶解し、メタノール８３０ｍＬに滴下した。析出した固体をろ取し、減圧下で乾燥して、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ４５．５ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ/ｚ） １１０７．９ （Ｍ＋ＮＨ4）+
前行程で得られたトルエン溶液に９－フルオレニルメチルカルバメート １３．７ｇ（５７．２ｍｍｏｌ）、シュウ酸・２水和物 １．８０ｇ（１４．３ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で３時間撹拌した。反応溶液を室温まで冷却し、メタノール：水＝９：１ ４１４ｍＬ、へプタン４１４ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（５％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ.） ２０７ｍＬで１回、メタノール：水＝９：１ ４１４ｍＬで３回分液洗浄した。得られた有機層を減圧下で濃縮し、残渣にテトラヒドロフラン８３．０ｍＬを加え、減圧下で濃縮した。残渣をテトラヒドロフラン６２ｍＬに溶解し、メタノール８３０ｍＬに滴下した。析出した固体をろ取し、減圧下で乾燥して、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ４５．５ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ/ｚ） １１０７．９ （Ｍ＋ＮＨ4）+
【0113】
実施例１
Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨとＦｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いたガニレリクスの合成（Ｆｍｏｃ－アミノ－活性エステル体のクエンチング剤として、２－（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈａｎｏｌ（ＡＥＥ）を使用した。）
なお、以降Ｄ体であるとの表記のないアミノ酸はＬ体を示す。
Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨとＦｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いたガニレリクスの合成（Ｆｍｏｃ－アミノ－活性エステル体のクエンチング剤として、２－（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈａｎｏｌ（ＡＥＥ）を使用した。）
なお、以降Ｄ体であるとの表記のないアミノ酸はＬ体を示す。
【0114】
【化26】
【0115】
反応式中、（ＮＨ2（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ｈ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ2・ｎＴＦＡ）は反応式中の構造を示す。なお、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨは反応式中の３種類の異性体の混合物を示す。このため、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）も３種類の異性体の混合物と推測される。さらに、Ｈ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）は、ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2とＤ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2がそれぞれ反応式中の３種の異性体となっていると推測され、合計９種類の異性体の混合物となっている可能性がある。）また、Ｒ’の構造中の＊は結合点を示す。
【0116】
実施例（１－ａ）
Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ２．００ｇ（１．８３ｍｍｏｌ）をシクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）２９．３ｍＬに溶解し、ＤＭＦ ７．３３ｍＬ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２．５５ｍＬに溶解した３－メルカプト－１－プロパンスルホン酸ナトリウム（ＭＰＳ）０．５４２ｇ（３．０４ｍｍｏｌ）、さらにＭＰＳ ０．１１１ｇ（０．６２ｍｍｏｌ）を固体状態で追加し、２，３，４，６，７，８，９，１０－Ｏｃｔａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｏｌ［１，２－ａ］ａｚｅｐｉｎｅ（ＤＢＵ） ０．５４８ｍＬ（３．６７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間３５分撹拌した。８℃まで冷却し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ） ０．３１９ｍＬ（１．８３ｍｍｏｌ）、１Ｎ硫酸３．６７ｍＬ（３．６７ｍｍｏｌ）、水２４．２ｍＬ、ＣＰＭＥ １．００ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ４．５５ｍＬ、５０％リン酸水素二カリウム水溶液（５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ．） ６．０７ｍＬを加え、分液洗浄し、ＮＨ2（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ２．００ｇ（１．８３ｍｍｏｌ）をシクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）２９．３ｍＬに溶解し、ＤＭＦ ７．３３ｍＬ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２．５５ｍＬに溶解した３－メルカプト－１－プロパンスルホン酸ナトリウム（ＭＰＳ）０．５４２ｇ（３．０４ｍｍｏｌ）、さらにＭＰＳ ０．１１１ｇ（０．６２ｍｍｏｌ）を固体状態で追加し、２，３，４，６，７，８，９，１０－Ｏｃｔａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｏｌ［１，２－ａ］ａｚｅｐｉｎｅ（ＤＢＵ） ０．５４８ｍＬ（３．６７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間３５分撹拌した。８℃まで冷却し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ） ０．３１９ｍＬ（１．８３ｍｍｏｌ）、１Ｎ硫酸３．６７ｍＬ（３．６７ｍｍｏｌ）、水２４．２ｍＬ、ＣＰＭＥ １．００ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ４．５５ｍＬ、５０％リン酸水素二カリウム水溶液（５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ．） ６．０７ｍＬを加え、分液洗浄し、ＮＨ2（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0117】
実施例（１－ｂ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ １．００ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．７２５ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４５分撹拌した。２－（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈａｎｏｌ（ＡＥＥ） ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、１０℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．２ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．７９６ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ５．１０ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ６．８０ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
得られた混合液に、ＣＰＭＥ １．００ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．７２５ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４５分撹拌した。２－（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈａｎｏｌ（ＡＥＥ） ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、１０℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．２ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．７９６ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ５．１０ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ６．８０ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0118】
実施例（１－ｃ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ２．２０ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．７８２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＡＥＥ ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．２ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．８６１ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ５．１１ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ６．８１ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ２．２０ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．７８２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＡＥＥ ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．２ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．８６１ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ５．１１ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ６．８１ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0119】
実施例（１－ｄ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ２．７０ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ（反応式中に示した３種のｉｓｏｍｅｒの混合物） １．４７ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＡＥＥ ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．３ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．９５０ｍＬを添加し、分液した※１。得られた有機層にＤＭＦ ５．１２ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ６．８３ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ） １４６３．７ （Ｍ＋Ｈ）+ （３種の異性体の混合物）
※１ 有機層中の目的物のＨＰＬＣ純度：７６．２％
ＨＰＬＣ分析条件（１）
カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８， Ｓ－５μｍ， １２ｎｍ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．
移動相Ａ：５００ｍＭ過塩素酸ナトリウムａｑ．
移動相Ｂ：ＴＨＦ
流速： １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４５℃
検出波長：２８０ｎｍ
グラジエント条件：７５％Ｂ（０ｍｉｎ）→９０％Ｂ（１０ｍｉｎ）→９０％Ｂ（２０ｍｉｎ）→７５％Ｂ（２１ｍｉｎ）→７５％Ｂ（３３ｍｉｎ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ２．７０ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ（反応式中に示した３種のｉｓｏｍｅｒの混合物） １．４７ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＡＥＥ ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．３ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．９５０ｍＬを添加し、分液した※１。得られた有機層にＤＭＦ ５．１２ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ６．８３ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ） １４６３．７ （Ｍ＋Ｈ）+ （３種の異性体の混合物）
※１ 有機層中の目的物のＨＰＬＣ純度：７６．２％
ＨＰＬＣ分析条件（１）
カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８， Ｓ－５μｍ， １２ｎｍ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．
移動相Ａ：５００ｍＭ過塩素酸ナトリウムａｑ．
移動相Ｂ：ＴＨＦ
流速： １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４５℃
検出波長：２８０ｎｍ
グラジエント条件：７５％Ｂ（０ｍｉｎ）→９０％Ｂ（１０ｍｉｎ）→９０％Ｂ（２０ｍｉｎ）→７５％Ｂ（２１ｍｉｎ）→７５％Ｂ（３３ｍｉｎ）
【0120】
実施例（１－ｅ）
実施例（１－ｄ）と同様に、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－ＯＨを用いてペプチドを伸長し、Ｈ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。なお、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ（３種の異性体の混合物）は下記の構造を示し、＊は結合点を示す。
実施例（１－ｄ）と同様に、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－ＯＨを用いてペプチドを伸長し、Ｈ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。なお、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ（３種の異性体の混合物）は下記の構造を示し、＊は結合点を示す。
【0121】
【化27】
【0122】
実施例（１－ｆ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．８００ｍＬ、ＤＭＦ ８．９５ｍＬ、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、酢酸０．１２６ｍＬ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、得られた残渣をアセトニトリル（ＭｅＣＮ） １０６ｍＬに滴下した。固体を濾取し、濾物をＭｅＣＮ ５０．０ｍＬで洗浄した。濾物にＭｅＣＮ １０６ｍＬを加え、撹拌した後、固体を濾取し、濾物をＭｅＣＮ ５０．０ｍＬで洗浄した。得られた固体を減圧下で乾燥し、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ３．９８ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １４６７．３ （Ｍ＋２Ｈ）2+
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．８００ｍＬ、ＤＭＦ ８．９５ｍＬ、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、酢酸０．１２６ｍＬ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、得られた残渣をアセトニトリル（ＭｅＣＮ） １０６ｍＬに滴下した。固体を濾取し、濾物をＭｅＣＮ ５０．０ｍＬで洗浄した。濾物にＭｅＣＮ １０６ｍＬを加え、撹拌した後、固体を濾取し、濾物をＭｅＣＮ ５０．０ｍＬで洗浄した。得られた固体を減圧下で乾燥し、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ３．９８ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １４６７．３ （Ｍ＋２Ｈ）2+
【0123】
実施例（１－ｇ）
トリフルオロ酢酸１３．９ｍＬ（１８１ｍｍｏｌ）、Ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｓｉｌａｎｅ ０．３６５ｍＬ（１．７８ｍｍｏｌ）、水０．３６５ｍＬ（２０．３ｍｍｏｌ）の混合溶液を５℃に冷却し、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） １．５０ｇを添加した。５分後、室温に昇温し、６時間５５分撹拌した。反応液を１０℃に冷却したｍｅｔｈｙｌ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ（ＭＴＢＥ）に滴下し、５℃、４４００ｒｐｍで１分間遠心分離し、デカンテーションにより上清を除去し、沈殿物を得た。このＭＴＢＥによる洗浄、遠心分離、デカンテーションをさらに３回行い、沈殿物を得た。沈殿物を減圧下で乾燥し、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ2・ｎＴＦＡ ０．９２９ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） ７８５．５ （Ｍ＋２Ｈ）2+
ＨＰＬＣ純度：９４．３％
ＨＰＬＣ分析条件（２）
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｕｓｔａｉｎ， Ｓ－３μｍ， ２５０ｍｍ×２．１ｍｍＩ．Ｄ．
移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ ａｑ．
移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有ＭｅＣＮ
流速： ０．２２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：３３℃
検出波長：２２５ｎｍ
グラジエント条件：３３％Ｂ（０ｍｉｎ）→４７％Ｂ（４０ｍｉｎ）→９５％Ｂ（６０ｍｉｎ）→９５％Ｂ（６５ｍｉｎ）→３３％Ｂ（６８ｍｉｎ）→３３％Ｂ（８５ｍｉｎ）
トリフルオロ酢酸１３．９ｍＬ（１８１ｍｍｏｌ）、Ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｓｉｌａｎｅ ０．３６５ｍＬ（１．７８ｍｍｏｌ）、水０．３６５ｍＬ（２０．３ｍｍｏｌ）の混合溶液を５℃に冷却し、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） １．５０ｇを添加した。５分後、室温に昇温し、６時間５５分撹拌した。反応液を１０℃に冷却したｍｅｔｈｙｌ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ（ＭＴＢＥ）に滴下し、５℃、４４００ｒｐｍで１分間遠心分離し、デカンテーションにより上清を除去し、沈殿物を得た。このＭＴＢＥによる洗浄、遠心分離、デカンテーションをさらに３回行い、沈殿物を得た。沈殿物を減圧下で乾燥し、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ2・ｎＴＦＡ ０．９２９ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） ７８５．５ （Ｍ＋２Ｈ）2+
ＨＰＬＣ純度：９４．３％
ＨＰＬＣ分析条件（２）
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｕｓｔａｉｎ， Ｓ－３μｍ， ２５０ｍｍ×２．１ｍｍＩ．Ｄ．
移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ ａｑ．
移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有ＭｅＣＮ
流速： ０．２２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：３３℃
検出波長：２２５ｎｍ
グラジエント条件：３３％Ｂ（０ｍｉｎ）→４７％Ｂ（４０ｍｉｎ）→９５％Ｂ（６０ｍｉｎ）→９５％Ｂ（６５ｍｉｎ）→３３％Ｂ（６８ｍｉｎ）→３３％Ｂ（８５ｍｉｎ）
【0124】
参考例２
Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌを用いたＨ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）の合成（Ｆｍｏｃ－アミノ－活性エステル体のクエンチング剤：ＡＥＥ）
Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌを用いたＨ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）の合成（Ｆｍｏｃ－アミノ－活性エステル体のクエンチング剤：ＡＥＥ）
【0125】
【化28】
【0126】
（Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌ、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）は反応式中の構造を示す。）
【0127】
参考例（１－ａ）、（１－ｂ）、（１－ｃ）
実施例１－ａ、１－ｂ、１－ｃと同様にして、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ２．００ｇ（１．８３ｍｍｏｌ）からＨ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
実施例１－ａ、１－ｂ、１－ｃと同様にして、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ２．００ｇ（１．８３ｍｍｏｌ）からＨ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0128】
参考例（１－ｄ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ２．６０ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌ １．１１ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＡＥＥ ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．３ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．９５０ｍＬを添加し、分液を試みたが、エマルジョン※２となり、分液操作を行うことができなかった。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １２６３．５ （Ｍ＋Ｈ）+
※２ エマルジョン中の目的物のＨＰＬＣ純度：１０．４％
ＨＰＬＣ分析条件：実施例（１－ｄ）の（１）と同一。
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ２．６０ｍＬ、ＤＭＦ ８．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌ １．１１ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ １．２８ｍＬ（７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．９４２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＡＥＥ ４４．０μＬ（０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ２．３５ｍＬに溶解したＭＰＳ ０．５０１ｇ（２．８１ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２８４ｇ（１．５９ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ １．４３ｍＬ（９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸１１．５ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）、水２０．３ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．９５０ｍＬを添加し、分液を試みたが、エマルジョン※２となり、分液操作を行うことができなかった。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １２６３．５ （Ｍ＋Ｈ）+
※２ エマルジョン中の目的物のＨＰＬＣ純度：１０．４％
ＨＰＬＣ分析条件：実施例（１－ｄ）の（１）と同一。
【0129】
実施例２
Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨとＦｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いたＧａｎｉｒｅｌｉｘの合成（Ｆｍｏｃ－アミノ－活性エステル体のクエンチング剤：硫酸水素２－アミノエチル（２－ＡＥＨＳ））
Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨとＦｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いたＧａｎｉｒｅｌｉｘの合成（Ｆｍｏｃ－アミノ－活性エステル体のクエンチング剤：硫酸水素２－アミノエチル（２－ＡＥＨＳ））
【0130】
【化29】
【0131】
実施例（２－ａ）
実施例（１－ａ）と同様の方法で、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ０．８００ｇ（０．７３３ｍｍｏｌ）からＮＨ2（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
実施例（１－ａ）と同様の方法で、Ｆｍｏｃ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ０．８００ｇ（０．７３３ｍｍｏｌ）からＮＨ2（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0132】
実施例（２－ｂ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．６００ｍＬ、ＤＭＦ ３．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．２９０ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ ０．５１１ｍＬ（２．９３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．３７７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．７０４ｍＬに溶解した２－ＡＥＨＳ ２４．８ｍｇ（０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．２３７ｍＬに溶解したＭＰＳ ５０．４ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２６３ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ ０．５９７ｍＬ（３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸４．６０ｍＬ（４．６０ｍｍｏｌ）、１０％炭酸ナトリウム水溶液（１０％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ．）８．３０ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．３１９ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ２．０４ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ２．７２ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．６００ｍＬ、ＤＭＦ ３．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．２９０ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ ０．５１１ｍＬ（２．９３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．３７７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．７０４ｍＬに溶解した２－ＡＥＨＳ ２４．８ｍｇ（０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．２３７ｍＬに溶解したＭＰＳ ５０．４ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２６３ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、８℃に冷却し、ＤＢＵ ０．５９７ｍＬ（３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸４．６０ｍＬ（４．６０ｍｍｏｌ）、１０％炭酸ナトリウム水溶液（１０％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ．）８．３０ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．３１９ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ２．０４ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ２．７２ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0133】
実施例（２－ｃ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．８００ｍＬ、ＤＭＦ ３．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．３１３ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ ０．５１１ｍＬ（２．９３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．３７７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．７０４ｍＬに溶解した２－ＡＥＨＳ ２４．８ｍｇ（０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．２３７ｍＬに溶解したＭＰＳ ５０．４ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２６３ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、６℃に冷却し、ＤＢＵ ０．５９７ｍＬ（３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分撹拌した。１Ｎ硫酸４．６０ｍＬ（４．６０ｍｍｏｌ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ． ８．３０ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．３４５ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ２．０４ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ２．７２ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．８００ｍＬ、ＤＭＦ ３．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ・Ｈ2Ｏ ０．３１３ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ ０．５１１ｍＬ（２．９３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．３７７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．７０４ｍＬに溶解した２－ＡＥＨＳ ２４．８ｍｇ（０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．２３７ｍＬに溶解したＭＰＳ ５０．４ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２６３ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、６℃に冷却し、ＤＢＵ ０．５９７ｍＬ（３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分撹拌した。１Ｎ硫酸４．６０ｍＬ（４．６０ｍｍｏｌ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ． ８．３０ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．３４５ｍＬを添加し、分液した。得られた有機層にＤＭＦ ２．０４ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ２．７２ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0134】
実施例（２－ｄ）
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．６００ｍＬ、ＤＭＦ ３．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ（図中に示した３種の異性体の混合物）０．５８７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ ０．５１１ｍＬ（２．９３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．３７７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．７０４ｍＬに溶解した２－ＡＥＨＳ ２４．８ｍｇ（０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．２３７ｍＬに溶解したＭＰＳ ５０．４ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２６３ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、７℃に冷却し、ＤＢＵ ０．５９７ｍＬ（３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸４．６０ｍＬ（４．６０ｍｍｏｌ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ． ８．４０ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．３８０ｍＬを添加し、分液した※3。得られた有機層にＤＭＦ ２．０５ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ２．７３ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １４６３．６ （Ｍ＋Ｈ）+ （３種の異性体の混合物）
※３ ＨＰＬＣ純度：７８．０％
ＨＰＬＣ分析条件：実施例（１－ｄ）の（１）と同一。
得られた混合液に、ＣＰＭＥ ０．６００ｍＬ、ＤＭＦ ３．３０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ（図中に示した３種の異性体の混合物）０．５８７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ ０．５１１ｍＬ（２．９３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．３７７ｇ（０．８８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．７０４ｍＬに溶解した２－ＡＥＨＳ ２４．８ｍｇ（０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。ＤＭＳＯ ０．２３７ｍＬに溶解したＭＰＳ ５０．４ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）、固体のＭＰＳ ０．２６３ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、７℃に冷却し、ＤＢＵ ０．５９７ｍＬ（３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１時間５０分撹拌した。１Ｎ硫酸４．６０ｍＬ（４．６０ｍｍｏｌ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3ａｑ． ８．４０ｍＬ、ＣＰＭＥ ０．３８０ｍＬを添加し、分液した※3。得られた有機層にＤＭＦ ２．０５ｍＬ、５０％Ｋ2ＨＰＯ4ａｑ． ２．７３ｍＬを加え、分液洗浄し、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １４６３．６ （Ｍ＋Ｈ）+ （３種の異性体の混合物）
※３ ＨＰＬＣ純度：７８．０％
ＨＰＬＣ分析条件：実施例（１－ｄ）の（１）と同一。
【0135】
実施例（２－ｅ）
実施例（２－ｄ）と同様に、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－ＯＨを用いてペプチドを伸長し、Ｈ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
実施例（２－ｄ）と同様に、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－ＯＨを用いてペプチドを伸長し、Ｈ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を含む混合液を得た。
【0136】
実施例（２－ｆ）
実施例（１－ｆ）と同様の方法で、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） １．３６ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １４６７．３ （Ｍ＋２Ｈ）2+
実施例（１－ｆ）と同様の方法で、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） １．３６ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） １４６７．３ （Ｍ＋２Ｈ）2+
【0137】
実施例（２－ｇ）
実施例（１－ｇ）と同様の方法で、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ０．７００ｇからＡｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ2・ｎＴＦＡ ０．４５５ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） ７８５．５ （Ｍ＋２Ｈ）2+
ＨＰＬＣ純度：９４．４％
ＨＰＬＣ分析条件：実施例（１－ｇ）の（２）と同一。
実施例（１－ｇ）と同様の方法で、Ａｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ） ０．７００ｇからＡｃ－Ｄ－Ｎａｌ（２）－Ｄ－ｐＣｌＰｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ（３）－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｌｅｕ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ2・ｎＴＦＡ ０．４５５ｇを得た。
ＥＳＩＭＳ （ｍ／ｚ） ７８５．５ （Ｍ＋２Ｈ）2+
ＨＰＬＣ純度：９４．４％
ＨＰＬＣ分析条件：実施例（１－ｇ）の（２）と同一。
【0138】
実施例（１－ｄ）の※１と参考例（１－ｄ）の※２の分液の様子を図１と図２に示した。図１に示した実施例（１－ｄ）では、有機層と水層の界面が明瞭であり、液液分離が良好であった。一方図２に示した参考例（１－ｄ）では、分液漏斗内全体がエマルジョンとなり、室温で２５分間静置してもエマルジョンは解消せず、有機層と水層に分離することができなかった。
次に、実施例１の※１と実施例２の※３と参考例１の※２のＨＰＬＣ分析結果を表１に示した。本発明のＢｏｃ基にて保護したＦｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを使用した実施例１、２では、分液性が良好で、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を７６．２％、７８．０％と高い純度で合成することができた。実施例１、２では、引き続きペプチド伸長反応を実施し、目的物であるガニレリクスの粗体を、９４．３％、９４．４％と高い純度で得ることができた。一方、Ｂｏｃ基ではなくプロトン保護のみおこなっているＦｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌを使用した参考例１では、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を合成した際に分液することができなかった。ガニレリクスの合成を継続するには、液液分離ではなく、他の方法でＨ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を精製する必要があり、工業的に不利であった。なお、エマルジョン中のＨ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）の純度は１０．４％と著しく低かった。
次に、実施例１の※１と実施例２の※３と参考例１の※２のＨＰＬＣ分析結果を表１に示した。本発明のＢｏｃ基にて保護したＦｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを使用した実施例１、２では、分液性が良好で、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を７６．２％、７８．０％と高い純度で合成することができた。実施例１、２では、引き続きペプチド伸長反応を実施し、目的物であるガニレリクスの粗体を、９４．３％、９４．４％と高い純度で得ることができた。一方、Ｂｏｃ基ではなくプロトン保護のみおこなっているＦｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌを使用した参考例１では、Ｈ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を合成した際に分液することができなかった。ガニレリクスの合成を継続するには、液液分離ではなく、他の方法でＨ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）を精製する必要があり、工業的に不利であった。なお、エマルジョン中のＨ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ－ＮＨ（Ｄ２－ＳＴａｇ）の純度は１０．４％と著しく低かった。
【0139】
【表1】
【0140】
以上の結果から、従来技術であるプロトン保護をおこなったＦｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2－ＯＨ・ＨＣｌの代わりに本発明のＢｏｃ保護をおこなったＦｍｏｃ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いることで、分液性が改善され、工業的に有利な方法でガニレリクスが得られることがわかった。
【図1】
【図2】
