特開 2025-11228 ＩＬ－１２及び抗ＦＡＰ抗体を含む融合タンパク質、並びにその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2025011228

(43)【公開日】2025-01-23

(54)【発明の名称】ＩＬ－１２及び抗ＦＡＰ抗体を含む融合タンパク質、並びにその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20250116BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250116BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250116BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250116BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20250116BHJP

   C07K 14/54 20060101ALN20250116BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20250116BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20250116BHJP

   C12N 15/24 20060101ALN20250116BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20250116BHJP

   C12N 15/63 20060101ALN20250116BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20250116BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20250116BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00

A61P35/00

A61P35/02

A61K39/395 U

A61K39/395 T

A61K39/395 E

A61P37/04

C07K14/54

C07K16/18

C12N15/13

C12N15/24

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12P21/08

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024178237

(22)【出願日】2024-10-10

(62)【分割の表示】P 2023501232の分割

【原出願日】2021-08-10

(31)【優先権主張番号】10-2020-0100229

(32)【優先日】2020-08-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(71)【出願人】

【識別番号】523005531

【氏名又は名称】カナプ セラピューティクス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＫＡＮＡＰＨ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(74)【代理人】

【識別番号】100211199

【弁理士】

【氏名又は名称】原田 さやか

(72)【発明者】

【氏名】キム， ドンゴン

(72)【発明者】

【氏名】リュ， スミン

(72)【発明者】

【氏名】リー， ダヘ

(72)【発明者】

【氏名】キム， ドンス

(72)【発明者】

【氏名】チャン， ジフン

(72)【発明者】

【氏名】リー， ビョン チュル

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE06

4B064CE12

4B064DA01

4B065AA90X

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4H045AA10

4H045BA09

4H045BA41

4H045DA02

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA10

4H045GA15

4H045GA26

(57)【要約】      （修正有）

【課題】抗がん効果を有する新規融合タンパク質を提供する。
【解決手段】ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質を提供する。該融合タンパク質は、ＩＬ－１２による抗がん効果を示す。特に、抗ＦＡＰ抗体が１つの抗体で実現された場合、腫瘍において高度に発現するＦＡＰを特異的に標的とし、ＩＬ－１２を腫瘍部位に特異的に局在させることによって、がんを効率的に処置することができる。したがって、該融合タンパク質は、抗がん処置のための医薬組成物として利用することができ、そのため、高い産業上の利用可能性を有する。
【選択図】図３３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、
ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質アルファ）に特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体と
を含む融合タンパク質。

【請求項2】

前記ＩＬ－１２又はその前記バリアントが、ＩＬ－１２Ａ（ｐ３５）又はそのバリアント；及びＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）又はそのバリアントを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項3】

前記ＩＬ－１２又はその前記バリアントが、以下の構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
Ｎ’－Ｙ－［リンカー（１）］ｏ－Ｚ－Ｃ’ （Ｉ）
Ｎ’－Ｚ－［リンカー（１）］ｏ－Ｙ－Ｃ’ （ＩＩ）
［前記構造式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、
Ｎ’は、前記融合タンパク質のＮ末端であり、
Ｃ’は、前記融合タンパク質のＣ末端であり、
Ｙは、前記ＩＬ－１２Ａ又はその前記バリアントであり、
Ｚは、前記ＩＬ－１２Ｂ又はその前記バリアントであり、
前記リンカー（１）は、ペプチドリンカーであり、
ｏは、０又は１である］
を含む、請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項4】

前記ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）の前記バリアントが、配列番号７４のアミノ酸配列におけるＫ２５８Ａ、Ｋ２６０Ａ、Ｋ２６３Ａ、及びＫ２６４Ａからなる群から選択される少なくとも１つの置換によって得られたアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項5】

前記ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）が、配列番号７４又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項6】

前記ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）の前記バリアントが、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８９又は配列番号９１のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の融合タンパク質。

【請求項7】

前記ＩＬ－１２Ａ（ｐ３５）が、配列番号７５又は配列番号８７のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項8】

前記ＩＬ－１２が、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８５、配列番号８８又は配列番号９０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項9】

ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部位が、
配列番号９６のＨＣＤＲ１、配列番号９７のＨＣＤＲ２及び配列番号９８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号９９のＬＣＤＲ１、配列番号１００のＬＣＤＲ２及び配列番号１０１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１０４のＨＣＤＲ１、配列番号１０５のＨＣＤＲ２及び配列番号１０６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１０７のＬＣＤＲ１、配列番号１０８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１２７のＨＣＤＲ１、配列番号１２８のＨＣＤＲ２及び配列番号１２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１３０のＬＣＤＲ１、配列番号１３１のＬＣＤＲ２及び配列番号１３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１３３のＨＣＤＲ１、配列番号１３４のＨＣＤＲ２及び配列番号１３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１３６のＬＣＤＲ１、配列番号１３７のＬＣＤＲ２及び配列番号１３８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１３９のＨＣＤＲ１、配列番号１４０のＨＣＤＲ２及び配列番号１４１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１４２のＬＣＤＲ１、配列番号１４３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１４５のＨＣＤＲ１、配列番号１４６のＨＣＤＲ２及び配列番号１４７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１４８のＬＣＤＲ１、配列番号１４９のＬＣＤＲ２及び配列番号１５０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１５１のＨＣＤＲ１、配列番号１５２のＨＣＤＲ２及び配列番号１５３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１５４のＬＣＤＲ１、配列番号１５５のＬＣＤＲ２及び配列番号１５６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１５７のＨＣＤＲ１、配列番号１５８のＨＣＤＲ２及び配列番号１５９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６０のＬＣＤＲ１、配列番号１６１のＬＣＤＲ２及び配列番号１６２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１６３のＨＣＤＲ１、配列番号１６４のＨＣＤＲ２及び配列番号１６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６６のＬＣＤＲ１、配列番号１６７のＬＣＤＲ２及び配列番号１６８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１６９のＨＣＤＲ１、配列番号１７０のＨＣＤＲ２及び配列番号１７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１７２のＬＣＤＲ１、配列番号１７３のＬＣＤＲ２及び配列番号１７４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１７５のＨＣＤＲ１、配列番号１７６のＨＣＤＲ２及び配列番号１７７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１７８のＬＣＤＲ１、配列番号１７９のＬＣＤＲ２及び配列番号１８０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１８１のＨＣＤＲ１、配列番号１８２のＨＣＤＲ２及び配列番号１８３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１８４のＬＣＤＲ１、配列番号１８５のＬＣＤＲ２及び配列番号１８６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１８７のＨＣＤＲ１、配列番号１８８のＨＣＤＲ２及び配列番号１８９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１９０のＬＣＤＲ１、配列番号１９１のＬＣＤＲ２及び配列番号１９２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１９３のＨＣＤＲ１、配列番号１９４のＨＣＤＲ２及び配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１９６のＬＣＤＲ１、配列番号１９７のＬＣＤＲ２及び配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号１９９のＨＣＤＲ１、配列番号２００のＨＣＤＲ２及び配列番号２０１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０２のＬＣＤＲ１、配列番号２０３のＬＣＤＲ２及び配列番号２０４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号２０５のＨＣＤＲ１、配列番号２０６のＨＣＤＲ２及び配列番号２０７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０８のＬＣＤＲ１、配列番号２０９のＬＣＤＲ２及び配列番号２１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号２１１のＨＣＤＲ１、配列番号２１２のＨＣＤＲ２及び配列番号２１３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２１４のＬＣＤＲ１、配列番号２１５のＬＣＤＲ２及び配列番号２１６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号２１７のＨＣＤＲ１、配列番号２１８のＨＣＤＲ２及び配列番号２１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２２０のＬＣＤＲ１、配列番号２２１のＬＣＤＲ２及び配列番号２２２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号２２３のＨＣＤＲ１、配列番号２２４のＨＣＤＲ２及び配列番号２２５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２２６のＬＣＤＲ１、配列番号２２７のＬＣＤＲ２及び配列番号２２８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号２２９のＨＣＤＲ１、配列番号２３０のＨＣＤＲ２及び配列番号２３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２３２のＬＣＤＲ１、配列番号２３３のＬＣＤＲ２及び配列番号２３４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
配列番号２３５のＨＣＤＲ１、配列番号２３６のＨＣＤＲ２及び配列番号２３７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２３８のＬＣＤＲ１、配列番号２３９のＬＣＤＲ２及び配列番号２４０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
配列番号２４１のＨＣＤＲ１、配列番号２４２のＨＣＤＲ２及び配列番号２４３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４４のＬＣＤＲ１、配列番号２４５のＬＣＤＲ２及び配列番号２４６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項10】

ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部位が、
配列番号１０２の重鎖可変領域及び配列番号１０３の軽鎖可変領域；
配列番号１１０の重鎖可変領域及び配列番号１１１の軽鎖可変領域；
配列番号２４８の重鎖可変領域及び配列番号２４９の軽鎖可変領域；
配列番号２５０の重鎖可変領域及び配列番号２５１の軽鎖可変領域；
配列番号２５２の重鎖可変領域及び配列番号２５３の軽鎖可変領域；
配列番号２５４の重鎖可変領域及び配列番号２５５の軽鎖可変領域；
配列番号２５６の重鎖可変領域及び配列番号２５７の軽鎖可変領域；
配列番号２５８の重鎖可変領域及び配列番号２５９の軽鎖可変領域；
配列番号２６０の重鎖可変領域及び配列番号２６１の軽鎖可変領域；
配列番号２６２の重鎖可変領域及び配列番号２６３の軽鎖可変領域；
配列番号２６４の重鎖可変領域及び配列番号２６５の軽鎖可変領域；
配列番号２６６の重鎖可変領域及び配列番号２６７の軽鎖可変領域；
配列番号２６８の重鎖可変領域及び配列番号２６９の軽鎖可変領域；
配列番号２７０の重鎖可変領域及び配列番号２７１の軽鎖可変領域；
配列番号２７２の重鎖可変領域及び配列番号２７３の軽鎖可変領域；
配列番号２７４の重鎖可変領域及び配列番号２７５の軽鎖可変領域；
配列番号２７６の重鎖可変領域及び配列番号２７７の軽鎖可変領域；
配列番号２７８の重鎖可変領域及び配列番号２７９の軽鎖可変領域；
配列番号２８０の重鎖可変領域及び配列番号２８１の軽鎖可変領域；
配列番号２８２の重鎖可変領域及び配列番号２８３の軽鎖可変領域；
配列番号２８４の重鎖可変領域及び配列番号２８５の軽鎖可変領域；
配列番号２８６の重鎖可変領域及び配列番号２８７の軽鎖可変領域；
配列番号７２のｓｃＦｖ；又は
配列番号８４のｓｃＦｖ
を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項11】

前記第１の単量体が、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位をさらに含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項12】

前記第１の単量体が、以下の構造式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）：
Ｎ’－Ｘ－［リンカー（２）］ｐ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（３）］ｑ－（Ｔ）ｒ－Ｃ’ （ＩＩＩ）
Ｎ’－（Ｔ）ｒ－［リンカー（２）］ｑ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（３）］ｐ－Ｘ－Ｃ’ （ＩＶ）
［前記構造式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）中、
Ｎ’は、前記融合タンパク質のＮ末端であり、
Ｃ’は、前記融合タンパク質のＣ末端であり、
Ｘは、前記構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）であり、
Ｔは、ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部位であり、
前記リンカー（２）及び（３）は、ペプチドリンカーであり、
ｐ、ｑ及びｒは、各々独立的に、０又は１である］
を含む、請求項３に記載の融合タンパク質。

【請求項13】

前記リンカーが、（Ｇ_４Ｓ）_ｎリンカーを含み、ｎが、１～１０の整数のうちのいずれか１つである、請求項３又は１２に記載の融合タンパク質。

【請求項14】

前記第１の単量体のＦｃ領域が、ヒトＩｇＧ１又はマウスＩｇＧ２ａに由来する、請求項１２に記載の融合タンパク質。

【請求項15】

前記第１の単量体のＦｃが、ノブ構造又はホール構造を含む、請求項１２に記載の融合タンパク質。

【請求項16】

前記第２の単量体が、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位をさらに含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項17】

ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部位が、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、又はその断片である、請求項１６に記載の融合タンパク質。

【請求項18】

ＦＡＰに特異的に結合する、追加的に結合した前記抗原結合部位が、前記第２の単量体のＮ末端又はＣ末端に結合している、請求項１６に記載の融合タンパク質。

【請求項19】

前記第２の単量体が、以下の構造式（Ｖ）：
Ｎ’－（Ｒ）ｓ－［リンカー（４）］ｔ－Ｑ－［リンカー（５）］ｕ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（６）］ｖ－（Ｗ）ａ－Ｃ’ （Ｖ）
［前記構造式（Ｖ）中、
Ｎ’は、前記融合タンパク質のＮ末端であり、
Ｃ’は、前記融合タンパク質のＣ末端であり、
Ｒは、ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部位であり、
Ｑは、ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部位であり、
Ｗは、ＦＡＰに特異的に結合するｓｃＦｖ；又は構造式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の前記ＩＬ－１２又はその前記バリアントであり、
前記リンカー（４）～（６）は、ペプチドリンカーであり、
ｓ、ｔ、ｕ及びｖは、各々独立的に、０又は１である］
を含む、請求項３に記載の融合タンパク質。

【請求項20】

前記構造式（Ｖ）が、以下の構造式（Ｖ’）及び（Ｖ”）：
Ｎ’－（Ｒ’）ｓ－［リンカー（４）］ｔ－Ｑ’－［リンカー（５）］ｕ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（６）］ｐ－（Ｗ）ａ－Ｃ’ （Ｖ’）
Ｎ’－（Ｒ”）ｓ－［リンカー（４）］ｔ－Ｑ”－［リンカー（７）］ｘ－（Ｗ）ｂ－Ｃ’ （Ｖ”）
［前記構造式（Ｖ’）及び（Ｖ”）中、
Ｒ’は、可変領域及びＣＨ１領域を含む、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の重鎖領域、又は前記抗体の軽鎖領域であり、
Ｒ”は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、前記抗体の重鎖領域であり、
ここで、Ｒ’及びＲ”は、互いに結合して、前記抗体の可変領域を形成し、前記可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
Ｑ’は、可変領域及びＣＨ１領域を含む、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の重鎖領域、又は前記抗体の軽鎖領域であり、
Ｑ”は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、前記抗体の重鎖領域であり、
ここで、Ｑ’及びＱ”は、互いに結合して、前記抗体の可変領域を形成し、前記可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
Ｒ’及びＱ’は各々、可変領域及びＣＨ１領域を含む、前記抗体の重鎖領域、又は前記抗体の軽鎖領域であり、
Ｒ”及びＱ”は各々、前記抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、前記抗体の重鎖領域であり、
ここで、Ｒ’及びＲ”；並びにＱ’及びＱ”は、互いに結合して、前記抗体の可変領域を形成し、前記可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
Ｗは、ＦＡＰに特異的に結合するｓｃＦｖであり、
前記リンカー（４）、（５）及び（７）は、ペプチドリンカーであり、
ｓ、ｔ、ｕ、ｘ、ａ及びｂは、各々独立的に、０又は１である］
を含む、請求項１９に記載の融合タンパク質。

【請求項21】

構造式（ＩＩＩ）及び構造式（Ｖ）；構造式（ＩＶ）及び構造式（Ｖ）；構造式（ＩＩＩ）及び構造式（ＩＩＩ）；構造式（ＩＶ）及び構造式（ＩＶ）；又は構造式（Ｖ）及び構造式（Ｖ）を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項22】

前記第２の単量体が、配列番号１０２のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１０３のアミノ酸配列からなる軽鎖；又は配列番号１１０のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１１１のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項23】

前記第２の単量体のＦｃが、ノブ構造又はホール構造を含む、請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項24】

がんを予防する又は処置するための医薬組成物であって、請求項１～２３のいずれか一項に記載の融合タンパク質を活性成分として含む医薬組成物。

【請求項25】

前記がんが、胃がん、肝臓がん、肺がん、結腸直腸がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、骨がん、多発性骨髄腫、神経膠腫、卵巣がん、膵臓がん、子宮頸がん、甲状腺がん、喉頭がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽腫、網膜芽細胞腫、頭頸部がん、唾液腺がん及びリンパ腫からなる群から選択されるいずれか１つである、請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項26】

請求項１に記載の第１の単量体をコードするポリヌクレオチド。

【請求項27】

請求項２６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項28】

請求項１に記載の第２の単量体をコードするポリヌクレオチド。

【請求項29】

請求項２８に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項30】

請求項２７又は２９に記載のベクターが導入された形質転換細胞。

【請求項31】

融合タンパク質を製造する方法であって、
ｉ）請求項３０に記載の形質転換細胞を培養するステップと、
ｉｉ）第１の単量体及び第２の単量体を含む融合タンパク質を回収するステップと
を含む方法。

【請求項32】

がんを処置する又は予防するための方法であって、
ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質を対象に投与するステップ
を含む方法。

【請求項33】

がんを処置するための、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質の使用。

【請求項34】

がんを処置するための医薬を製造するための、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、抗ＦＡＰ抗体とを含む新規融合タンパク質、及び該融合タンパク質を含む抗がん医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）は、代表的な炎症性サイトカインであり、細胞性免疫応答の有効な誘導に極めて重要な役割を果たす。ＩＬ－１２は、ジスルフィド結合によって連結された４０ｋＤａ（ｐ４０）及び３５ｋＤａ（ｐ３５）サブユニットを含むヘテロ二量体タンパク質であり、活性化したマクロファージ、単球、樹状細胞及び活性化したＢリンパ球によって産生される。ＩＬ－１２は、ヘルパーＴ１細胞免疫を増強し、細胞性Ｔリンパ球の細胞傷害を増加させ、血管新生を阻害することができる。一般に、ＩＬ－１２は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞におけるＩＦＮ－γ産生を活性化する。

【0003】

ＩＬ－１２の局所発現は、腫瘍細胞をＴ細胞媒介性細胞傷害に対して感受性にし、腫瘍成長阻害及び液性免疫の確立をもたらす。しかしながら、ＩＬ－１２の臨床応用における欠点は、投与時に、サイトカイン関連毒性が全身に生じ得ることである。これらの臨床結果は、がんを処置するための単独治療剤としてのＩＬ－１２の限界を示す。

【0004】

他方で、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）は、活性化した線維芽細胞に発現するゼラチナーゼである。ＦＡＰは、前立腺がん及び膵臓がんを含む様々なヒト癌腫のがん関連線維芽細胞において９０％を超えて発現することが知られている。したがって、近年、ＦＡＰ発現細胞を標的とする免疫療法の開発への関心が急速に高まっている（Ｆａｎｇ Ｊ．ら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ．、３：１６００７、２０１６）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

したがって、本発明者らは、抗がん効果を有する新規融合タンパク質を開発するために研究した。結果として、本発明者らは、ＩＬ－１２及び抗ＦＡＰ抗体を含む融合タンパク質が、全身毒性を低減すると同時に高められた抗がん活性を有することを見出し、それにより、本発明を完成させた。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の一態様では、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質が提供される。

【0007】

本発明の別の態様では、がんを予防する又は処置するための医薬組成物であって、融合タンパク質を活性成分として含む医薬組成物が提供される。

【0008】

本発明の別の態様では、第１の単量体をコードするポリヌクレオチドが提供される。

【0009】

本発明の別の態様では、第２の単量体をコードするポリヌクレオチドが提供される。

【0010】

本発明の別の態様では、ポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。

【0011】

本発明の別の態様では、ベクターが導入された形質転換細胞が提供される。

【0012】

本発明の別の態様では、融合タンパク質を製造する方法であって、ｉ）形質転換細胞を培養するステップと、ｉｉ）第１の単量体及び第２の単量体を含む融合タンパク質を回収するステップとを含む方法が提供される。

【0013】

本発明のさらに別の態様では、がんを処置する又は予防するための方法であって、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質を対象に投与するステップを含む方法が提供される。

【0014】

本発明のさらに別の態様では、がんを処置するための、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質の使用が提供される。

【0015】

本発明のさらに別の態様では、がんを処置するための医薬を製造するための、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質の使用が提供される。

【発明の効果】

【0016】

ＩＬ－１２と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位とを含む融合タンパク質は、ＩＬ－１２による抗がん効果を示し得る。加えて、抗ＦＡＰ抗体が１つの抗体で実現された場合、ＩＬ－１２は、高いＦＡＰ発現を有する腫瘍に特異的に蓄積され、それにより、全身毒性を低減し、腫瘍特異的な抗がん効果を示すことが見出された。つまり、腫瘍において高度に発現するＦＡＰを特異的に標的とし、ＩＬ－１２を腫瘍部位に特異的に局在させることによって、がんを効率的に処置することができる。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた一実施形態に従って、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３、Ｔ１．０４、Ｔ１．０５、Ｔ１．０６及びＴ１．０７を同定することによって得られた結果を示す図である。

【図2】ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた一実施形態に従って、Ｔ１．０８、Ｔ１．０９、Ｔ１．１０、Ｔ１．１１、Ｔ１．１２、Ｔ１．１３、Ｔ１．１４及びＴ１．１５を同定することによって得られた結果を示す図である。

【図3】ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた一実施形態によるＴ１．１６、Ｔ１．１７、Ｔ１．１８、Ｔ１．１９及びＴ１．２１を同定することによって得られた結果を示す図である。

【図4】ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた一実施形態に従って、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ、Ｔ１．０３ｍ、Ｔ１．０４ｍ、Ｔ１．０５ｍ、Ｔ１．０６ｍ及びＴ１．０７ｍを同定することによって得られた結果を示す図である。

【図5】ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた一実施形態に従って、Ｔ１．０８ｍ、Ｔ１．０９ｍ、Ｔ１．１０ｍ、Ｔ１．１１ｍ、Ｔ１．１２ｍ、Ｔ１．１３ｍ及びＴ１．１５ｍを同定することによって得られた結果を示す図である。

【図6】ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた一実施形態に従って、Ｔ１．１６ｍ、Ｔ１．１７ｍ、Ｔ１．１８ｍ、Ｔ１．１９ｍ、Ｔ１．２０ｍ、Ｔ１．２１ｍ及びＴ１．２２ｍを同定することによって得られた結果を示す図である。

【図7】表面プラズモン共鳴分析法による組換えヒトＦＡＰ（ｒｈＦＡＰ）に対するＴ１．０１及びＴ１．０２の結合親和性を示すグラフである。

【図8】表面プラズモン共鳴分析法による組換えヒトＦＡＰに対するＴ１．０３の結合親和性を示すグラフである。

【図9】表面プラズモン共鳴分析法による組換えヒトＦＡＰに対するＴ１．０４及びＴ１．０５の結合親和性を示すグラフである。

【図10】表面プラズモン共鳴分析法による組換えヒトＦＡＰに対するＴ１．０６及びＴ１．０７の結合親和性を示すグラフである。

【図11】表面プラズモン共鳴分析法による組換えヒトＦＡＰに対するＴ１．０８及びＴ１．０９の結合親和性を示すグラフである。

【図12】表面プラズモン共鳴分析法による組換えヒトＦＡＰに対するＴ１．１０及びＴ１．１１の結合親和性を示すグラフである。

【図13】表面プラズモン共鳴分析法による組換えマウスＦＡＰに対するＴ１．０１ｍ及びＴ１．０２ｍの結合親和性を示すグラフである。

【図14】表面プラズモン共鳴分析法による組換えマウスＦＡＰに対するＴ１．０３ｍの結合親和性を示すグラフである。

【図15】フローサイトメトリーによるＨＥＫ２９３－ｈＦＡＰ細胞及びＨＥＫ２９３細胞に対するＴ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３の結合親和性を示すグラフである。

【図16】フローサイトメトリーによるＢ１６Ｆ１０－ｍＦＡＰ細胞及びＢ１６Ｆ１０細胞に対するＴ１．１２ｍ、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍの結合親和性を示すグラフである。

【図17】酵素結合免疫吸着検定法によるＩＬ－１２受容体β１に対するＴ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２の結合親和性を示すグラフである。

【図18】ＨＥＫブルーレポーター細胞における吸光度を介してＴ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ、Ｔ１．０３ｍ及びＴ１．１２ｍのＩＬ－１２活性を同定することによって得られた結果を示すグラフである。

【図19】ヒトＴ細胞のシグナル伝達能力を介したＴ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２のＩＬ－１２活性を示すグラフである。

【図20】ヒトＴ細胞のシグナル伝達能力を介した低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）の存在下におけるＴ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３のＩＬ－１２活性を示すグラフである。

【図21】Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３によってヒトＴ細胞がサイトカインＩＦＮ－γを分泌する能力を測定することによって得られた結果を示すグラフである。

【図22】Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３によってヒトＮＫ細胞がサイトカインＩＦＮ－γを分泌する能力を測定することによって得られた結果を示すグラフである。

【図23】マウスＦＡＰ過剰発現線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及び大腸がん細胞株ＣＴ２６を同時注入したマウス腫瘍モデルの腫瘍サイズの変化を測定することによって、Ｔ１．０１ｍ及びＴ１．０２ｍによる腫瘍成長阻害能力を示すグラフである。

【図24】マウスＦＡＰ過剰発現線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及び大腸がん細胞株ＣＴ２６を同時注入したマウス腫瘍モデルにおいて、Ｔ１．０１ｍ及びＴ１．０２ｍによる腫瘍成長阻害能力を同定するために、各対象について腫瘍サイズを測定することによって得られた結果を示すグラフである。

【図25】マウス腫瘍モデル移植マウスＦＡＰ過剰発現大腸がん細胞株ＣＴ２６において、各対象についての腫瘍サイズの変化を測定することによって、各濃度に対してＴ１．０１ｍ及びＴ１．０２ｍを投与することによる腫瘍成長阻害能力を示すグラフである。

【図26】マウスＦＡＰ過剰発現線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及び大腸がん細胞株ＣＴ２６を同時注入したマウス腫瘍モデルにおいて、Ｔ１．０１ｍ処理によって完全奏効が達成された、マウスへのＣＴ２６細胞及び４Ｔ１細胞移植による腫瘍再誘発モデルの構築後のＣＴ２６腫瘍サイズの変化を示すグラフである。

【図27】マウスＦＡＰ過剰発現線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及び大腸がん細胞株ＣＴ２６を同時注入したマウス腫瘍モデルにおいて、Ｔ１．０１ｍ処理によって完全奏効が達成された、マウスへのＣＴ２６細胞及び４Ｔ１細胞移植による腫瘍再誘発モデルの構築後の４Ｔ１腫瘍サイズの変化を示すグラフである。

【図28】マウスＦＡＰ過剰発現ＣＴ２６細胞を移植したマウスモデルにおいて、各対象の腫瘍サイズを測定することにより、各対象にＴ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍを投与することによる腫瘍成長阻害能力を示すグラフである。

【図29】マウスＦＡＰ過剰発現ＣＴ２６細胞を移植したマウスモデルにおいて、各対象の腫瘍サイズの変化を測定することにより、各濃度についてＴ１．０３ｍを投与することによる各対象についての腫瘍成長阻害能力を示すグラフである。

【図30】マウスＦＡＰ過剰発現Ｂ１６Ｆ１０細胞を移植したマウスモデルにおいて、各対象の腫瘍サイズの変化を測定することにより、各濃度についてＴ１．０３ｍを投与することによる腫瘍成長阻害能力を示すグラフである。

【図31】マウスＦＡＰ過剰発現線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及び肺がん細胞株ＬＬＣ１を同時注射したマウスモデルにおいて、各対象についての腫瘍サイズの変化を測定することにより、各濃度に対してＴ１．０３ｍを投与することによる腫瘍成長阻害能力を示すグラフである。

【図32】マウスＦＡＰ過剰発現線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及び肺がん細胞株ＬＬＣ１を同時注射したマウスモデルにおいて、Ｔ１．１６ｍ、Ｔ１．１７ｍ、Ｔ１．０３ｍ、又はＴ１．１６ｍとＴ１．１７ｍの組合せの投与後１０日目の時点での腫瘍サイズを測定することによって得られた結果を示すグラフである。

【図33】抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２融合タンパク質（左から１番目；図中、左は抗ＦＡＰ単量体であり、右はＩＬ－１２を含む単量体である）、二重可変ドメインを有する抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２融合タンパク質（２番目）、ＦＡＰ特異的一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が結合された抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２二重抗体（３番目及び４番目）、及びＩＬ－１２がＦｃのＣ末端に結合された抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２融合タンパク質（５番目）の概略図を示す。

【図34】ＦＡＰ特異的Ｆａｂ／ＦＡＰ特異的一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）及びＩＬ－１２融合タンパク質（左）、ＦＡＰ特異的Ｆａｂ及びＩＬ－１２を含む融合タンパク質二量体（中央）、並びにＦＡＰ特異的一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）及びＩＬ－１２を含む融合タンパク質二量体（右）の概略図を示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

ＩＬ－１２及び抗ＦＡＰ抗体を含む融合タンパク質
本発明の一態様では、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質アルファ）に特異的に結合する抗原結合部位とを含む融合タンパク質が提供される。詳細には、融合タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域を含んでもよい。ここで、ＩＬ－１２又はそのバリアントは、低いヘパリン結合能を有するバリアントであってもよい。

【0019】

一実施形態では、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質が提供される。

【0020】

別の実施形態では、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位とを含む融合タンパク質二量体が提供される。

【0021】

ＩＬ－１２又はそのバリアント
本明細書で使用される場合、「ＩＬ－１２」という用語は、２つの別個の遺伝子、ＩＬ－１２Ａ及びＩＬ－１２Ｂによってそれぞれコードされるｐ３５及びｐ４０サブユニットから構成されるヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－１２は、マクロファージなどの抗原提示細胞によって産生され、活性化したＴ細胞及びＮＫ細胞の細胞表面の受容体に結合する。ＩＬ－１２は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖を促進し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びマクロファージの細胞傷害効果を増強する。加えて、ＩＬ－１２は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦの産生を誘導し、Ｔｈ１細胞の活性化を誘導するように作用する。他方で、ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２Ｒβ１及びＩＬ－１２Ｒβ２によって形成されるヘテロ二量体受容体であるＩＬ－１２受容体に結合する。

【0022】

本明細書で使用される場合、ＩＬ－１２の「バリアント」という用語は、野生型ＩＬ－１２タンパク質の機能と類似又は同一の機能を有するアミノ酸配列を含む。詳細には、ＩＬ－１２を構成するｐ３５及びｐ４０サブユニットのアミノ酸配列は、野生型と比較して置換、挿入又は欠失を有してもよい。

【0023】

ＩＬ－１２又はそのバリアントは、ＩＬ－１２Ａ（ｐ３５）又はそのバリアント、及びＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）又はそのバリアントを含み得る。

【0024】

加えて、ＩＬ－１２又はそのバリアントは、ＩＬ－１２Ａ又はそのバリアント；及びＩＬ－１２Ｂ又はそのバリアントがペプチドリンカーによって結合された構造を含み得る。

【0025】

一実施形態では、ＩＬ－１２又はそのバリアントは、以下の構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
Ｎ’－Ｙ－［リンカー（１）］ｏ－Ｚ－Ｃ’ （Ｉ）
Ｎ’－Ｚ－［リンカー（１）］ｏ－Ｙ－Ｃ’ （ＩＩ）
［構造式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、
Ｎ’は、融合タンパク質のＮ末端であってもよく、
Ｃ’は、融合タンパク質のＣ末端であってもよく、
Ｙは、ＩＬ－１２Ａ又はそのバリアントであってもよく、
Ｚは、ＩＬ－１２Ｂ又はそのバリアントであってもよく、
リンカー（１）は、ペプチドリンカーであってもよく、
ｏは、０又は１であってもよい］
を含む融合タンパク質であってもよい。

【0026】

ＩＬ－１２又はそのバリアントの一実施形態は、ＩＬ－１２Ｂ又はそのバリアント、ペプチドリンカー、及びＩＬ－１２Ａ又はそのバリアントがＮ末端から順に結合した構造であってもよい。加えて、ＩＬ－１２又はそのバリアントの一実施形態は、ＩＬ－１２Ａ又はそのバリアント、ペプチドリンカー、及びＩＬ－１２Ｂ又はそのバリアントがＮ末端から順に結合した構造であってもよい。

【0027】

本明細書で使用される場合、「ＩＬ－１２Ａ」という用語は、ＩＬ－１２の３５ｋＤａサブユニット（ｐ３５）であり、ＩＬ－１２Ａは、ジスルフィド結合を介してＩＬ－１２の４０ｋＤａサブユニット（ｐ４０）に結合して、活性サイトカインを生成する。

【0028】

ＩＬ－１２Ａのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＫ８４４２５に記載されたものであってもよい（マウスｐ３５のアミノ酸配列については、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ３９２９２を参照）。加えて、ＩＬ－１２Ａ（ｐ３５）遺伝子は、ＩＬ－１２Ａサブユニットをコードする配列であり、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ４０４７７３に記載された配列の中のコード配列（ＣＤＳ）に対応するヌクレオチド配列であってもよい（マウス配列については、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ８６６７２を参照）。

【0029】

本明細書で使用される場合、ＩＬ－１２Ａの「バリアント」という用語は、野生型ＩＬ－１２Ａタンパク質の機能と類似又は同一の機能を有するアミノ酸配列を含む。詳細には、ＩＬ－１２Ａの「バリアント」とは、ＩＬ－１２Ａのアミノ酸配列が野生型と比較して置換、挿入又は欠失を有することを意味する。詳細には、ＩＬ－１２Ａバリアントは、ＩＬ－１２Ａの断片であってもよく、配列番号１２２の１番目～２２番目のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列を有してもよい。より詳細には、ＩＬ－１２Ａのバリアントは、配列番号７５のアミノ酸配列を有してもよい。

【0030】

加えて、本発明の一実施形態で使用されるＩＬ－１２Ａは、ヒトＩＬ－１２Ａとしての配列番号７５のアミノ酸配列であってもよい。一実施形態では、マウスＩＬ－１２Ａは、配列番号８７のアミノ酸配列であってもよい。

【0031】

本明細書で使用される場合、「ＩＬ－１２Ｂ」という用語は、ＩＬ－１２の４０ｋＤａサブユニット（ｐ４０）を指し、ＩＬ－１２Ｂは、ジスルフィド結合を介してＩＬ－１２の３５ｋＤａサブユニット（ｐ３５）に結合して、ＩＬ－１２を形成し、また、ＩＬ－２３のサブユニットｐ１９に結合して、ＩＬ－２３を形成する。他方で、ＩＬ－１２Ｂは、ナチュラルキラー細胞刺激因子２とも呼ばれる。

【0032】

「ＩＬ－１２Ｂ」のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＤ５６３８６に記載されたものであってもよい（マウスｐ４０のアミノ酸配列については、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ３９２９６を参照）。加えて、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）遺伝子は、ＩＬ－１２Ｂサブユニットをコードする配列であり、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ１８０５６３に記載された配列の中のコード配列（ＣＤＳ）に対応するヌクレオチド配列であってもよい（マウス配列については、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ８６６７１を参照）。

【0033】

加えて、本発明の一実施形態で使用されるＩＬ－１２Ｂは、ヒトＩＬ－１２Ｂであってもよく、詳細には、ＩＬ－１２Ｂは、配列番号７４のアミノ酸配列であってもよい。一実施形態では、マウスＩＬ－１２Ｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を有してもよい。

【0034】

本明細書で使用される場合、ＩＬ－１２Ｂの「バリアント」という用語は、野生型ＩＬ－１２Ｂタンパク質の機能と類似又は同一の機能を有するアミノ酸配列を含む。詳細には、ＩＬ－１２Ｂの「バリアント」とは、ＩＬ－１２Ｂのアミノ酸配列が野生型と比較して置換、挿入又は欠失を有することを意味する。

【0035】

詳細には、ＩＬ－１２Ｂバリアントは、配列番号１２１の１番目～２２番目のアミノ酸が欠失したものであってもよい。より詳細には、ＩＬ－１２Ｂバリアントは、配列番号７４の配列において１～８個のアミノ酸が置換されたものであってもよい。加えて、ＩＬ－１２Ｂバリアントは、配列番号１２３の１番目～２２番目のアミノ酸が欠失したものであってもよい。より詳細には、ＩＬ－１２Ｂバリアントは、配列番号８６の配列において最大１～８個のアミノ酸が置換されたものであってもよい。

【0036】

ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、ＩＬ－１２のヘパリン結合に関与するアミノ酸が置換されたものであってもよい。

【0037】

一実施形態では、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、ＩＬ－１２Ｂにおけるヘパリンへのリシン（Ｋ）結合が別のアミノ酸で置換された形態であってもよい。詳細には、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号７４の２５８番目、２６０番目、２６３番目及び２６４番目のリシンが他のアミノ酸で置換された形態であってもよい。詳細には、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号７４のアミノ酸配列におけるＫ２５８Ａ、Ｋ２６０Ａ、Ｋ２６３Ａ、及びＫ２６４Ａからなる群から選択される少なくとも１つの置換によって得られたアミノ酸配列を含み得る。詳細には、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号７４のアミノ酸配列におけるＫ２５８Ａ及びＫ２６３Ａの置換によって得られたアミノ酸配列を含み得るか、又は配列番号７４のアミノ酸配列におけるＫ２６０Ａ及び／又はＫ２６４Ａの突然変異をさらに含み得る。

【0038】

一実施形態では、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、ＩＬ－１２Ｂにおけるヘパリンへのアルギニン（Ｒ）又はリシン（Ｋ）結合が別のアミノ酸で置換された形態であってもよい。詳細には、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号８６の２５４番目のアルギニン並びに／又は２５５番目、２５６番目及び２６０番目のリシンが他のアミノ酸で置換された形態であってもよい。詳細には、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号８６のアミノ酸配列におけるＲ２５４Ａ、Ｋ２５５Ａ、Ｋ２５６Ａ及びＫ２６０Ａからなる群から選択される少なくとも１つの置換によって得られたアミノ酸配列を含み得る。詳細には、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号８６のアミノ酸配列におけるＲ２５４Ａ及びＫ２６０Ａの置換によって得られたアミノ酸配列を含み得るか、又は配列番号８６の配列におけるＫ２５５Ａ及び／又はＫ２５６Ａの突然変異をさらに含み得る。

【0039】

一実施形態では、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８９又は配列番号９１のアミノ酸配列を含み得る。

【0040】

一実施形態では、ヒトＩＬ－１２Ｂバリアントは、以下の構造式Ａ：
［構造式Ａ］
Ｘ_１－Ｌ－Ｘ_２
［式中、Ｘ_１は、配列番号１２５のアミノ酸配列であり、
Ｘ_２は、配列番号１２６のアミノ酸配列であり、
Ｌは、Ｖ－Ａ_１－Ａ_２－Ｑ－Ａ_３－Ｋ^＊－Ａ_４－Ａ_５－Ａ_６－Ａ_７－Ｋ^＊－Ａ_８からなるアミノ酸配列である］
からなってもよい。
Ａ_１は、Ｒ又はＱであり、Ａ_２は、Ｖ、Ａ又はＩであり、Ａ_３は、Ｇ又はＲ^＊であり、Ａ_４は、Ｓ、Ｎ又はＫ^＊であり、Ａ_５は、Ｋ^＊、Ｎ又はＥであり、Ａ_６は、Ｒ又はＫであり、Ａ_７は、Ｅ、Ｍ又はＴであり、Ａ_８は、Ｋ^＊又はＥである。
「^＊」が付された少なくとも１つのアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ及びＶからなる群から選択される非極性アミノ酸残基で置換されていてもよいが、これらに限定されない。

【0041】

一実施形態では、ＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）のバリアントは、がん細胞に対する殺滅効果を維持すると同時にＩＬ－１２のサイトカイン関連毒性を低減するために、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の置換を含み得る。
ＦＡＰ及びＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位
本明細書で使用される場合、「ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）」という用語は、細胞表面に発現し、様々な腫瘍型の腫瘍細胞の環境又は様々な腫瘍型の腫瘍細胞において提示されるタンパク質である、線維芽細胞活性化タンパク質を指す。ＦＡＰは、腫瘍微小環境においてがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の表面に選択的に過剰発現することが知られている。

【0042】

加えて、ＦＡＰは、酵素触媒ドメインが位置するＣ末端細胞外ドメインを有する２つのＮ－グリコシル化サブユニットを含有するホモ二量体であり、ＦＡＰのグリコシル化形態は、プロリル後ジペプチジルペプチダーゼ及びゼラチナーゼ活性の両方を有する。

【0043】

他方で、ＦＡＰは、約１７０ｋＤａの膜結合ゼラチナーゼであるプロリルエンドペプチダーゼである。プロリルエンドペプチダーゼＦＡＰは、特異的なアミノ酸配列を認識し、切断することができる。したがって、ＦＡＰは、ＦＡＰα、セパラーゼ、又は循環抗プラスミン切断酵素とも称される。

【0044】

ＦＡＰのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１６６８に記載されたものであってもよく、ヒトＦＡＰは、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｆ１９の使用によって培養線維芽細胞において最初に同定された（国際特許出願公開第ＷＯ９３／０５８０４号を参照）。ＦＡＰは、多くのがんにおいて発現し、正常組織における限定された発現に起因して、様々な癌腫のイメージング、診断及び処置のための有望な抗原性標的として利用される。

【0045】

ＦＡＰは、細胞によって天然に又はＦＡＰ遺伝子をトランスフェクトした細胞に発現される、ヒトＦＡＰの任意のバリアント、アイソフォーム及び種ホモログを含む。本発明の抗体は、がん細胞（腫瘍細胞又は腫瘍間質の細胞）の膜又は細胞表面に存在するＦＡＰに結合することができ、ＡＤＣＣ又は他のエフェクターにより媒介されるがん細胞の殺滅を引き起こすことができる。加えて、本発明の抗体は、ＦＡＰの酵素活性（例えば、セリンペプチダーゼ、ゼラチナーゼ、コラゲナーゼ活性）、ＦＡＰにより媒介されるＥＣＭ分解、及びＦＡＰにより媒介される細胞の浸潤又は遊走を遮断するために使用することができる。

【0046】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、非特異的相互作用と明らかに異なる結合を指す。特異的な結合は、結合活性を有さない標的と類似の対照分子との競合によって決定することができる。

【0047】

本明細書で使用される場合、「抗原結合部位（エピトープ）」という用語は、抗体の可変領域における特異的な抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。抗原結合部位は、特異的な構造特性及び特異的な電荷特性を通常は有する一群の分子、例えばアミノ酸又は糖側鎖である。ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、ＦＡＰに特異的に抗原－抗体結合が可能な分子の総称であり得る。

【0048】

加えて、抗体又はその断片は、ＦＡＰに特異的に結合することが可能な抗原結合ドメインを含有する限り任意の形態で使用することができる。

【0049】

抗原結合部位は、結合に直接関与しない他のアミノ酸、又は抗原結合部位のアミノ酸残基によって効果が遮断されるアミノ酸を含み得る。

【0050】

詳細には、抗原結合部位は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体又はその断片であってもよい。

【0051】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原結合部位を含有する分子、及び抗原結合部位を含有する免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片を指す。免疫グロブリン分子は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＹ又はそのサブクラスの免疫グロブリン分子であってもよい。抗体は、合成抗体、モノクローナル抗体、単一ドメイン抗体、単鎖抗体、組換えにより産生された抗体、多特異性抗体（二特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、ｓｃＦｖ（例えば単一特異性及び二特異性等を含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及びこれらの抗体の抗原結合断片を含むが、これらに限定されない。

【0052】

本明細書で使用される場合、「抗体断片」という用語は、抗体の一部、例えばＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖであり得る。構造にかかわらず、抗体断片は、無傷抗体によって認識されるのと同じ抗原に結合する。

【0053】

一実施形態では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号９６のＨＣＤＲ１、配列番号９７のＨＣＤＲ２及び配列番号９８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号９９のＬＣＤＲ１、配列番号１００のＬＣＤＲ２及び配列番号１０１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。ここで、一実施形態では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１０２の重鎖可変領域及び配列番号１０３の軽鎖可変領域を有してもよい。

【0054】

加えて、一実施形態では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１０４のＨＣＤＲ１、配列番号１０５のＨＣＤＲ２及び配列番号１０６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１０７のＬＣＤＲ１、配列番号１０８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。ここで、一実施形態では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１１０の重鎖可変領域及び配列番号１１１の軽鎖可変領域を有してもよい。

【0055】

一実施形態では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、ｓｃＦｖであってもよい。ここで、ｓｃＦｖは、上記の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含んでもよい。一実施形態では、ＦＡＰに特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号７２又は配列番号８４のアミノ酸配列を有してもよい。

【0056】

加えて、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、公知の抗ＦＡＰ抗体又はその断片を含み得る。抗ＦＡＰ抗体又はその断片とは、限定することなく、当業者に公知の抗体を指し得る。

【0057】

抗ＦＡＰ抗体又はその断片は、ＮＧ－６４１、ＡＭＧ－５０６／ＭＰ－０３１０、ＲＧ－７８２７の２８Ｈ１、ＲＧ－７８２７の４Ｂ９、ＯＭＴＸ－７０５、３Ｆ２、４Ｇ８、３Ｄ９、４Ｂ３、１９Ｇ１、２０Ｇ８、５Ｂ８、５Ｆ１、１４Ｂ３、１６Ｆ１、１６Ｆ８、Ｏ３Ｃ９、２９Ｂ１１、Ｏ２Ｄ７及び２３Ｃ１０からなる群から選択される少なくとも１つの可変領域を含み得る。

【0058】

別の例では、抗体として、韓国特許出願公開第ＫＲ２０２０００３７８２６Ａ号、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０－０３８５４８８Ａ１号、米国特許第ＵＳ３，９２４，４４５Ｂ２号、米国特許第ＵＳ９，０１１，８４７Ｂ２号又は米国特許出願公開第ＵＳ２０１７－００７７１６Ａ１号に開示された抗ＦＡＰ抗体又はその断片を使用することができる。

【0059】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、ＮＧ－６４１の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１２７のＨＣＤＲ１、配列番号１２８のＨＣＤＲ２及び配列番号１２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１３０のＬＣＤＲ１、配列番号１３１のＬＣＤＲ２及び配列番号１３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２４８の重鎖可変領域、及び配列番号２４９の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0060】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、２８Ｈ１の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１３３のＨＣＤＲ１、配列番号１３４のＨＣＤＲ２及び配列番号１３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１３６のＬＣＤＲ１、配列番号１３７のＬＣＤＲ２及び配列番号１３８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２５０の重鎖可変領域、及び配列番号２５１の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0061】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、４Ｂ９の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１３９のＨＣＤＲ１、配列番号１４０のＨＣＤＲ２及び配列番号１４１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１４２のＬＣＤＲ１、配列番号１４３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２５２の重鎖可変領域、及び配列番号２５３の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0062】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、ＯＭＴＸ－７０５の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１４５のＨＣＤＲ１、配列番号１４６のＨＣＤＲ２及び配列番号１４７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１４８のＬＣＤＲ１、配列番号１４９のＬＣＤＲ２及び配列番号１５０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２５４の重鎖可変領域、及び配列番号２５５の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0063】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、３Ｆ２の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１５１のＨＣＤＲ１、配列番号１５２のＨＣＤＲ２及び配列番号１５３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１５４のＬＣＤＲ１、配列番号１５５のＬＣＤＲ２及び配列番号１５６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２５６の重鎖可変領域、及び配列番号２５７の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0064】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、４Ｇ８の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１５７のＨＣＤＲ１、配列番号１５８のＨＣＤＲ２及び配列番号１５９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６０のＬＣＤＲ１、配列番号１６１のＬＣＤＲ２及び配列番号１６２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２５８の重鎖可変領域、及び配列番号２５９の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0065】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、３Ｄ９の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１６３のＨＣＤＲ１、配列番号１６４のＨＣＤＲ２及び配列番号１６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６６のＬＣＤＲ１、配列番号１６７のＬＣＤＲ２及び配列番号１６８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２６０の重鎖可変領域、及び配列番号２６１の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0066】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、４Ｂ３の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１６９のＨＣＤＲ１、配列番号１７０のＨＣＤＲ２及び配列番号１７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１７２のＬＣＤＲ１、配列番号１７３のＬＣＤＲ２及び配列番号１７４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２６２の重鎖可変領域、及び配列番号２６３の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0067】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、１９Ｇ１の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１７５のＨＣＤＲ１、配列番号１７６のＨＣＤＲ２及び配列番号１７７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１７８のＬＣＤＲ１、配列番号１７９のＬＣＤＲ２及び配列番号１８０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２６４の重鎖可変領域、及び配列番号２６５の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0068】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、２０Ｇ８の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１８１のＨＣＤＲ１、配列番号１８２のＨＣＤＲ２及び配列番号１８３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１８４のＬＣＤＲ１、配列番号１８５のＬＣＤＲ２及び配列番号１８６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２６６の重鎖可変領域、及び配列番号２６７の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0069】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、５Ｂ８の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１８７のＨＣＤＲ１、配列番号１８８のＨＣＤＲ２及び配列番号１８９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１９０のＬＣＤＲ１、配列番号１９１のＬＣＤＲ２及び配列番号１９２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２６８の重鎖可変領域、及び配列番号２６９の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0070】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、５Ｆ１の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１９３のＨＣＤＲ１、配列番号１９４のＨＣＤＲ２及び配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１９６のＬＣＤＲ１、配列番号１９７のＬＣＤＲ２及び配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２７０の重鎖可変領域、及び配列番号２７１の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0071】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、１４Ｂ３の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号１９９のＨＣＤＲ１、配列番号２００のＨＣＤＲ２及び配列番号２０１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０２のＬＣＤＲ１、配列番号２０３のＬＣＤＲ２及び配列番号２０４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２７２の重鎖可変領域、及び配列番号２７３の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0072】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、１６Ｆ１の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２０５のＨＣＤＲ１、配列番号２０６のＨＣＤＲ２及び配列番号２０７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０８のＬＣＤＲ１、配列番号２０９のＬＣＤＲ２及び配列番号２１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２７４の重鎖可変領域、及び配列番号２７５の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0073】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、１６Ｆ８の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２１１のＨＣＤＲ１、配列番号２１２のＨＣＤＲ２及び配列番号２１３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２１４のＬＣＤＲ１、配列番号２１５のＬＣＤＲ２及び配列番号２１６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２７６の重鎖可変領域、及び配列番号２７７の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0074】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、Ｏ３Ｃ９の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２１７のＨＣＤＲ１、配列番号２１８のＨＣＤＲ２及び配列番号２１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２２０のＬＣＤＲ１、配列番号２２１のＬＣＤＲ２及び配列番号２２２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２７８の重鎖可変領域、及び配列番号２７９の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0075】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、２２Ａ３の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２２３のＨＣＤＲ１、配列番号２２４のＨＣＤＲ２及び配列番号２２５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２２６のＬＣＤＲ１、配列番号２２７のＬＣＤＲ２及び配列番号２２８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２８０の重鎖可変領域、及び配列番号２８１の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0076】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、２９Ｂ１１の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２２９のＨＣＤＲ１、配列番号２３０のＨＣＤＲ２及び配列番号２３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２３２のＬＣＤＲ１、配列番号２３３のＬＣＤＲ２及び配列番号２３４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２８２の重鎖可変領域、及び配列番号２８３の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0077】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、Ｏ２Ｄ７の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２３５のＨＣＤＲ１、配列番号２３６のＨＣＤＲ２及び配列番号２３７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２３８のＬＣＤＲ１、配列番号２３９のＬＣＤＲ２及び配列番号２４０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２８４の重鎖可変領域、及び配列番号２８５の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0078】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、２３Ｃ１０の可変領域を含んでもよい。詳細には、抗体は、配列番号２４１のＨＣＤＲ１、配列番号２４２のＨＣＤＲ２及び配列番号２４３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４４のＬＣＤＲ１、配列番号２４５のＬＣＤＲ２及び配列番号２４６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。加えて、抗ＦＡＰ抗体は、配列番号２８６の重鎖可変領域、及び配列番号２８７の軽鎖可変領域を含んでもよい。

【0079】

一実施形態では、抗ＦＡＰ抗体は、ＡＭＧ－５０６／ＭＰ－０３１０であってもよい。詳細には、抗体は、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み得る。

【0080】

抗ＦＡＰ抗体は、がん細胞に存在するＦＡＰに特異的に結合し、がん細胞の死滅を誘導し得る限り任意の抗体を使用することができる。
第１の単量体の構造
第１の単量体は、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む。

【0081】

第１の単量体は、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位をさらに含んでもよい。

【0082】

一実施形態では、第１の単量体は、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、Ｆｃ領域断片又はそのバリアントとを含んでもよい。

【0083】

一実施形態では、第１の単量体は、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、Ｆｃ領域断片又はそのバリアントと、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位とを含んでもよい。

【0084】

第１の単量体は、以下の構造式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）：
Ｎ’－Ｘ－［リンカー（２）］ｐ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（３）］ｑ－（Ｔ）ｒ－Ｃ’ （ＩＩＩ）
Ｎ’－（Ｔ）ｒ－［リンカー（２）］ｑ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（３）］ｐ－Ｘ－Ｃ’ （ＩＶ）
［構造式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）中、
Ｎ’は、融合タンパク質のＮ末端であってもよく、
Ｃ’は、融合タンパク質のＣ末端であってもよく、
Ｘは、構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）であってもよく、
Ｔは、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位であってもよく、
リンカー（２）及び（３）は、ペプチドリンカーであってもよく、
ｐ、ｑ及びｒは、各々独立的に、０又は１であってもよい］
を含み得る。

【0085】

一実施形態では、ｒが０である場合、第１の単量体は、ＩＬ－１２又はそのバリアント及びＦｃ領域断片又はそのバリアントがペプチドリンカーによって連結された融合タンパク質の形態であってもよい。

【0086】

ここで、第１の単量体は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１５、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２又は配列番号３２のアミノ酸配列を含み得る。

【0087】

ここで、構造式（ＩＩＩ）中、ｒが１である場合、第１の単量体は、抗ＦＡＰ抗体の単量体がＩＬ－１２又はそのバリアントに結合した形態であってもよい。

【0088】

ここで、構造式（ＩＩＩ）中、ｒが１である場合、第１の単量体は、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３０２又は配列番号３０３のアミノ酸配列を含み得る。

【0089】

ここで、構造式（ＩＶ）中、ｒが１である場合、第１の単量体は、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号３００又は配列番号３０１のアミノ酸配列を含み得る。

【0090】

一実施形態では、ｒが１である場合、構造式（ＩＩＩ）は、以下の構造式（ＩＩＩ’）及び（ＩＩＩ”）：
Ｎ’－Ｘ－［リンカー（２）］ｐ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（３）］ｑ－（Ｔ’）－Ｃ’ （ＩＩＩ’）
Ｎ’－（Ｔ”）－Ｃ’ （ＩＩＩ”）
［構造式（ＩＩＩ’）及び（ＩＩＩ”）中、
Ｔ’は、可変領域及びＣＨ１領域を含む、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の重鎖領域、又は抗体の軽鎖領域であり、
Ｔ”は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、抗体の重鎖領域であり、
ここで、Ｔ’及びＴ”は、互いに結合して、抗体の可変領域を形成し、該可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
リンカー（２）～（３）は、ペプチドリンカーであり、
ｐ及びｑは、各々独立的に、０又は１であり、
Ｎ’、Ｘ及びＣ’は、上に定義したとおりである］
を含み得る。
一実施形態では、ｒが１である場合、構造式（ＩＶ）は、以下の構造式（ＩＶ’）及び（ＩＶ”）：
Ｎ’－（Ｔ’）－［リンカー（２）］ｑ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（３）］ｐ－Ｘ－Ｃ’ （ＩＶ’）；及び
Ｎ’－（Ｔ”）－Ｃ’ （ＩＶ”）
［構造式（ＩＶ’）及び（ＩＶ”）中、
Ｔ’は、可変領域及びＣＨ１領域を含む、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の重鎖領域、又は抗体の軽鎖領域であり、
Ｔ”は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、抗体の重鎖領域であり、
ここで、Ｔ’及びＴ”は、互いに結合して、抗体の可変領域を形成し、該可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
リンカー（２）～（３）は、ペプチドリンカーであり、
ｐ及びｑは、各々独立的に、０又は１であり、
Ｎ’、Ｘ及びＣ’は、上に定義したとおりである］
を含み得る。

【0091】

ここで、第１の単量体は、配列番号１０及び配列番号２；配列番号１１及び配列番号２；配列番号２７及び配列番号１９；配列番号２８及び配列番号１９；配列番号２９４及び配列番号２；配列番号２９５及び配列番号２；配列番号３００及び配列番号１９；又は配列番号３０１及び配列番号１９のアミノ酸配列を含み得る。
第２の単量体の構造
第２の単量体は、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位をさらに含んでもよい。

【0092】

一実施形態では、第２の単量体は、第１のＦＡＰ結合部位と、第２のＦＡＰ結合部位とを含んでもよい。

【0093】

ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、又はその断片であってもよい。ここで、第１のＦＡＰ結合部位は、Ｆａｂであってもよく、第２のＦＡＰ結合部位は、Ｆｖ又はｓｃＦｖであってもよい。

【0094】

第２のＦＡＰ結合部位は、第２の単量体のＮ末端又はＣ末端に結合していてもよい。詳細には、第２のＦＡＰ結合部位は、重鎖のＣ末端、軽鎖のＣ末端、又は可変領域のＮ末端に追加的に結合していてもよい。

【0095】

第２の単量体は、以下の構造式（Ｖ）：
Ｎ’－（Ｒ）ｓ－［リンカー（４）］ｔ－Ｑ－［リンカー（５）］ｕ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（６）］ｖ－（Ｗ）ａ－Ｃ’ （Ｖ）
［構造式（Ｖ）中、
Ｎ’は、融合タンパク質のＮ末端であってもよく、
Ｃ’は、融合タンパク質のＣ末端であってもよく、
Ｒ及びＱは、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位であってもよく、
Ｗは、ＦＡＰに特異的に結合するｓｃＦｖ；又は構造式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）のＩＬ－１２又はそのバリアントであってもよく、
リンカー（４）、（５）及び（６）は各々、ペプチドリンカーであってもよく、
ｓ、ｔ、ｕ、ｖ及びａは、各々独立的に、０又は１であってもよい］
を含み得る。

【0096】

一実施形態では、構造式（Ｖ）は、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１４、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号３１、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号３００及び配列番号３０１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。

【0097】

一実施形態では、構造式（Ｖ）は、以下の構造式（Ｖ’）及び（Ｖ”）：
Ｎ’－（Ｒ’）ｓ－［リンカー（４）］ｔ－Ｑ’－［リンカー（５）］ｕ－Ｆｃ領域断片又はそのバリアント－［リンカー（６）］ｐ－（Ｗ）ａ－Ｃ’ （Ｖ’）
Ｎ’－（Ｒ”）ｓ－［リンカー（４）］ｔ－Ｑ”－［リンカー（７）］ｘ－（Ｗ）ｂ－Ｃ’ （Ｖ”）
［構造式（Ｖ’）及び（Ｖ”）中、
Ｒ’は、可変領域及びＣＨ１領域を含む、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の重鎖領域、又は抗体の軽鎖領域であってもよく、
Ｒ”は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、抗体の重鎖領域であってもよく、
ここで、Ｒ’及びＲ”は、互いに結合して、抗体の可変領域を形成してもよく、該可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
Ｑ’は、可変領域及びＣＨ１領域を含む、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の重鎖領域、又は抗体の軽鎖領域であってもよく、
Ｑ”は、ＦＡＰに特異的に結合する抗体の軽鎖領域、又は可変領域及びＣＨ１領域を含む、抗体の重鎖領域であってもよく、
ここで、Ｑ’及びＱ”は、互いに結合して、抗体の可変領域を形成してもよく、該可変領域は、ＦＡＰに特異的に結合し、
Ｗは、ＦＡＰに特異的に結合するｓｃＦｖ；又は構造式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）のＩＬ－１２又はそのバリアントであってもよく、
リンカー（４）、（５）、（６）及び（７）は各々、ペプチドリンカーであってもよく、
ｓ、ｔ、ｕ、ｘ、ａ及びｂは、各々独立的に、０又は１であってもよい］
を含み得る。

【0098】

一実施形態では、構造式（Ｖ’）は、配列番号１、配列番号６、配列番号８、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２３、配列番号２５、配列番号３１、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号３００又は配列番号３０１であってもよい。

【0099】

一実施形態では、構造式（Ｖ”）は、配列番号２、配列番号７、配列番号９、配列番号１９、配列番号２４又は配列番号２６であってもよい。

【0100】

一実施形態では、第２の単量体は、配列番号１０２のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１０３のアミノ酸配列からなる軽鎖；又は配列番号１１０のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１１１のアミノ酸配列からなる軽鎖を含み得る。

【0101】

加えて、ＷがｓｃＦｖである場合、Ｗは、配列番号７２又は配列番号８４のアミノ酸配列を有してもよい。

【0102】

ペプチドリンカー
本明細書で使用される場合、「ペプチドリンカー」という用語は、融合タンパク質において物理化学的距離を設けるため又はドメイン間を接続するために使用されるペプチドを指す。リンカーは、免疫グロブリンのヒンジ領域を含んでもよい。

【0103】

ペプチドリンカー（１）～（７）とは、アミノ酸から構成されるペプチドリンカーを指す。詳細には、ペプチドリンカー（２）又は（５）は、５～８０個の連続するアミノ酸、７～７０個の連続するアミノ酸、又は１０～６０個の連続するアミノ酸、又は１２～５０個のアミノ酸からなってもよい。ペプチドリンカーは、（Ｇ_４Ｓ）ｎ（ここで、ｎは、１～１０の整数である）を含み得る。ここで、（Ｇ_４Ｓ）ｎ中、ｎは各々、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であってもよい。

【0104】

一実施形態では、ペプチドリンカー（１）は、配列番号９３、配列番号９４又は配列番号９５のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーであってもよい。

【0105】

ペプチドリンカー（２）又は（５）は、５～８０個の連続するアミノ酸、７～７０個の連続するアミノ酸、又は１０～６０個の連続するアミノ酸、又は１２～５０個のアミノ酸からなってもよい。一実施形態では、ペプチドリンカー（２）は、３０個のアミノ酸からなってもよい。加えて、ペプチドリンカー（２）は、少なくとも１つのシステインを含んでもよい。詳細には、ペプチドリンカー（２）は、１つ、２つ又は３つのシステインを含んでもよい。加えて、ペプチドリンカー（２）は、免疫グロブリンのヒンジに由来し得、（Ｇ_４Ｓ）ｎ（ここで、ｎは、１～１０の整数である）をさらに含み得る。詳細には、ペプチドリンカー（２）は、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなるヒンジ領域を含んでもよい。

【0106】

加えて、ペプチドリンカー（３）、（４）、（６）及び（７）は、１～３０個の連続するアミノ酸、５～２０個の連続するアミノ酸、又は１０～１５個の連続するアミノ酸からなってもよい。ペプチドリンカーは、（Ｇ_４Ｓ）ｎ（ここで、ｎは、１～１０の整数である）を含み得る。ここで、（Ｇ_４Ｓ）ｎ中、ｎは各々、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であってもよい。

【0107】

加えて、詳細には、ペプチドリンカー（２）、（３）又は（５）は、配列番号９３又は配列番号９４を含み得る。

【0108】

本発明の一実施形態では、ペプチドリンカー（２）又は（５）は、配列番号１１８又は１２０のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーであってもよい。
Ｆｃ領域又はその断片
ここで、上記の免疫グロブリン断片は、免疫グロブリンのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリンのＦｃ領域は、野生型Ｆｃドメイン及びＦｃドメインバリアントであり得る。ここで、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭのＦｃ領域であってもよい。詳細には、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ２ａに由来し得る。

【0109】

本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメインバリアント」という用語は、グリコシル化パターンに関して野生型Ｆｃドメインと異なるか、野生型Ｆｃドメインと比較して高いグリコシル化を有するか、野生型Ｆｃドメインと比較して低いグリコシル化を有するか、又は脱グリコシル化形態を有する形態を指し得る。加えて、「Ｆｃドメインバリアント」には、非グリコシル化Ｆｃドメインが含まれる。Ｆｃドメイン又はそのバリアントは、宿主の培養条件又は遺伝子操作によって、調整された数のシアル酸、フコシル化、又はグリコシル化を有するように構成され得る。

【0110】

加えて、免疫グロブリンのＦｃドメインのグリコシル化は、化学的方法、酵素的方法、及び微生物を使用する遺伝子工学的方法などの従来の方法によって修飾することができる。加えて、Ｆｃドメインバリアントは、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭのそれぞれのＦｃ領域の混合形態であってもよい。加えて、Ｆｃドメインバリアントは、Ｆｃドメインのいくつかのアミノ酸が他のアミノ酸で置換された形態であってもよい。

【0111】

置換及び／又は付加によって導入される「アミノ酸」は、リシン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、アルギニン（Ｒ）、アスパラギン（Ｎ）、アスパラギン酸（Ｄ）、システイン（Ｃ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）及びバリン（Ｖ）からなる群から選択されるいずれか１つであってもよい。

【0112】

加えて、Ｆｃ領域は、ノブ構造又はホール構造を含んでもよい。

【0113】

本明細書で使用される場合、「ノブ－イントゥ－ホール」という用語は、異なる領域に特異的に結合する抗体、例えば二特異性抗体、多特異性抗体、又はヘテロ二量体抗体を製造するための設計戦略である。一般に、この技法は、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げるようにノブがホール内に配置され得るように、第１のポリペプチドの界面（例えば、第１の抗体重鎖の第１のＣＨ３ドメイン）のノブ及び第２のポリペプチドの界面（例えば、第２の抗体重鎖の第２のＣＨ３ドメイン）の対応するホールを導入することを伴う。

【0114】

「ノブ」は、第１のポリペプチドの界面（例えば、第１の抗体重鎖の第１のＣＨ３ドメイン）からの小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えば、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン又はトリプトファン）で置き換えることによって構築される。ノブにおける同じ又は類似のサイズの相補的な「ホール」は、第２のポリペプチドの界面（例えば、第２の抗体重鎖の第２のＣＨ３ドメイン）からの大きいアミノ酸側鎖をより小さい側鎖（例えば、アラニン、セリン、バリン、又はトレオニン）で置き換えることによって作製される。ノブ及びホールは、ポリペプチドをコードする核酸を変化させることによって、例えば、部位特異的突然変異誘発又はペプチド合成によって作製することができる。

【0115】

一実施形態では、ＩｇＧ１のノブ構造は、配列番号１３又は２８８であってもよく、ホール構造は、配列番号１２又は２８９であってもよい。ノブ構造又はホール構造は、配列番号３０４のアミノ酸配列の１４６番目、１４８番目及び１８７番目のアミノ酸が他のアミノ酸で置換された形態であってもよい。詳細には、本発明の一実施形態では、ノブ構造又はホール構造は、配列番号３０４のアミノ酸配列がＴ１４６Ｗ、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ及びＹ１８７Ａで置換された形態であってもよい。詳細には、ノブ構造は、配列番号３０４のアミノ酸配列がＴ１４６Ｗで置換された形態であってもよく、ホール構造は、配列番号３０４のアミノ酸配列がＴ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ及びＹ１４８Ｖで置換された形態であってもよい。

【0116】

他方で、本発明の一実施形態では、ＩｇＧ２ａのノブ構造は、配列番号３０又は２９０であってもよく、ホール構造は、配列番号２９又は２９１であってもよい。ノブ構造又はホール構造は、配列番号３０５のアミノ酸配列の１５２番目、１５４番目及び１９３番目のアミノ酸が他のアミノ酸で置換された形態であってもよい。詳細には、本発明の一実施形態では、ノブ構造又はホール構造は、配列番号３０５のアミノ酸配列がＴ１５２Ｗ又はＴ１５２Ｓ、Ｍ１５４Ａ及びＹ１９３Ｖで置換された形態であってもよい。詳細には、ノブ構造は、配列番号３０５のアミノ酸配列がＴ１５２Ｗで置換された形態であってもよく、ホール構造は、配列番号３０５のアミノ酸配列がＴ１５２Ｓ、Ｍ１５４Ａ及びＹ１９３Ｖで置換された形態であってもよい。

【0117】

一実施形態では、Ｆｃドメインバリアントは、ＤＡＮＧ突然変異又はＮＧ突然変異を含み得る。ここで、「ＤＡＮＧ突然変異」とは、ヒトＩｇＧ１又はマウスＩｇＧ２ａにおけるエフェクター機能を除去するためのＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ突然変異を指す。

【0118】

ＩｇＧ分子におけるＦｃ領域によって媒介されるエフェクター機能は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方調節などを含む。一般に、これらのエフェクター機能は、Ｆｃ領域と結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）との結合を必要とする。

【0119】

エフェクター機能は、非変異Ｆｃ領域のアミノ酸配列の置換によって変更することができ、エフェクター機能が変更されたＦｃ領域は、例えば、Ｃ１ｑ結合及び／又はＦｃＲ結合を修飾し、それにより、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性を変更することによって設計することができる。つまり、「ＤＡＮＧ突然変異」とは、抗体産生中に望ましくないエフェクター機能が生じないように、Ｆｃ領域によって媒介されるエフェクター機能がＩｇＧ分子から除去されることを意味する。

【0120】

一実施形態では、ＤＡＮＧ突然変異は、配列番号２８９のヒトＩｇＧ１におけるアミノ酸がＤ４５Ａ／Ｎ７７Ｇで置換された形態であってもよい。加えて、ＤＡＮＧ突然変異は、配列番号２９１のマウスＩｇＧ２ａにおけるアミノ酸がＤ５１Ａ／Ｎ８３Ｇで置換された形態であってもよい。
融合タンパク質の構造
融合タンパク質は、抗体であってもよい。詳細には、抗体は、ノブ－イントゥ－ホール構造を含むヘテロ二量体抗体であってもよい。

【0121】

融合タンパク質は、構造式（ＩＩＩ）及び構造式（Ｖ）；又は構造式（ＩＶ）及び構造式（Ｖ）を含み得る。
より詳細には、融合タンパク質の一実施形態は、下記の（ｉ）又は（ｉｉ）の第１の単量体と、下記の（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）又は（ｖｉ）の第２の単量体とを含んでもよい：
第１の単量体の例：
（ｉ）ｒが０である場合、構造式（ＩＩＩ）
（ｉｉ）ｒが１である場合、構造式（ＩＶ）
第２の単量体の例：
（ｉｉｉ）ｓ、ａ及びｂが０である場合、構造式（Ｖ’）及び構造式（Ｖ”）
（ｉｖ）ｓが１であり、ａ及びｂが０である場合、構造式（Ｖ’）及び構造式（Ｖ”）
（ｖ）ｓ及びｂが０であり、ａが１である場合、構造式（Ｖ’）及び構造式（Ｖ”）
（ｖｉ）ｂが１であり、ｓ及びａが０である場合、構造式（Ｖ’）及び構造式（Ｖ”）。

【0122】

一実施形態では、融合タンパク質は、上記の（ｉ）を含む第１の単量体と、上記の（ｉｉｉ）を含む第２の単量体とを含んでもよい（図３３の左から１番目）。ここで、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３；配列番号１、配列番号２及び配列番号４；配列番号１、配列番号２及び配列番号５；配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０；配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２１；又は配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２２を含み得る。

【0123】

一実施形態では、融合タンパク質は、上記の（ｉ）を含む第１の単量体と、上記の（ｉｖ）を含む第２の単量体とを含んでもよい（図３３の左から２番目）。ここで、融合タンパク質は、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３及び配列番号２４からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号３、配列番号６及び配列番号７；配列番号５、配列番号６及び配列番号７；配列番号２０、配列番号２３及び配列番号２４；又は配列番号２２、配列番号２３及び配列番号２４を含み得る。

【0124】

一実施形態では、融合タンパク質は、上記の（ｉ）を含む第１の単量体と、上記の（ｖ）を含む第２の単量体とを含んでもよい（図３３の左から３番目）。ここで、融合タンパク質は、配列番号２、配列番号３、配列番号５、配列番号８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２及び配列番号２５からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号２、配列番号３及び配列番号８；配列番号２、配列番号５及び配列番号８；配列番号１９、配列番号２０及び配列番号２５；又は配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２５を含み得る。

【0125】

一実施形態では、融合タンパク質は、上記の（ｉ）を含む第１の単量体と、上記の（ｖｉ）を含む第２の単量体とを含んでもよい（図３３の左から４番目）。ここで、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号９、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２及び配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号３及び配列番号９；配列番号１、配列番号５及び配列番号９；配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２６；又は配列番号１８、配列番号２２及び配列番号２６を含み得る。

【0126】

一実施形態では、融合タンパク質は、上記の（ｉｉ）を含む第１の単量体と、上記の（ｉｉｉ）を含む第２の単量体とを含んでもよい（図３３の左から５番目）。ここで、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７及び配列番号２８からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号２及び配列番号１０；配列番号１、配列番号２及び配列番号１１；配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２７；又は配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２８を含み得る。

【0127】

加えて、一実施形態では、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位とを含む融合タンパク質二量体は、構造式（ＩＩＩ）の単量体及び構造式（Ｖ）の単量体を含む融合タンパク質二量体であってもよい（図３４の左）。ここで、構造式（ＩＩＩ）中、ｒは、１であり、構造式（Ｖ）中、ｓ、ａ及びｔは、０である。ここで、構造式（Ｖ）は、（Ｖ’）及び（Ｖ”）を含み得る。ここで、（Ｖ’）及び（Ｖ”）中、ｓ、ａ、ｔ及びｂは、０である。加えて、二量体のＦｃ領域は、異なる融合タンパク質が互いに結合することができるノブ－イントゥ－ホール構造を有する。

【0128】

詳細には、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９８及び配列番号２９９からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号１、配列番号２及び配列番号２９２；配列番号１、配列番号２及び配列番号２９３；配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２９８；又は配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２９９を含み得る。

【0129】

加えて、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位とを含む融合タンパク質二量体は、構造（Ｖ）の構造を含む融合タンパク質二量体であってもよい（図３４の中央）。ここで、融合タンパク質二量体は、（Ｖ’）及び（Ｖ”）を含み得る。ここで、構造式（Ｖ）中、ｓ及びｔは、０であり、ａは、１である。加えて、（Ｖ’）及び（Ｖ”）中、ｓ、ｔ及びｂは、０であり、ａは、１である。加えて、融合タンパク質二量体は、構造式（ＩＶ）の構造を含む融合タンパク質二量体であってもよい。ここで、構造式（ＩＶ）中、ｒは、１である。

【0130】

詳細には、融合タンパク質は、配列番号２、配列番号１９、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号３００及び配列番号３０１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み得る。詳細には、融合タンパク質は、配列番号２及び配列番号２９４；配列番号２及び配列番号２９５；配列番号１９及び配列番号３００；又は配列番号１９及び配列番号３０１を含み得る。

【0131】

一実施形態では、ＩＬ－１２又はそのバリアントと、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位とを含む融合タンパク質二量体は、構造式（ＩＩＩ）の構造を含む融合タンパク質二量体であってもよい（図３４の右）。ここで、構造式（ＩＩＩ）中、ｒは、１である。

【0132】

詳細には、融合タンパク質は、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号３０２又は配列番号３０３を含み得る。

【0133】

本明細書における多特異性融合タンパク質は、化学修飾された形態であってもよい。一実施形態では、融合タンパク質は、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断及び／又は細胞性リガンド若しくは他のタンパク質への結合によって化学修飾することができる。これらの化学修飾の多くは、公知の技法によって行うことができる。
融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
本発明の別の態様では、第１の単量体をコードするポリヌクレオチド又は第２の単量体をコードするポリヌクレオチドが提供される。

【0134】

一実施形態では、第１の単量体のポリペプチドは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１５、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３２、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、又は配列番号３０３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。

【0135】

一実施形態では、第１の単量体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４５、配列番号４６、配列番号５０、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号６２、配列番号６３、又は配列番号６７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約１００％の同一性を有してもよい。

【0136】

一実施形態では、第２の単量体のポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１４、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号３１、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号３００又は配列番号３０１と約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。

【0137】

一実施形態では、第２の単量体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１又は配列番号６６と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約１００％の同一性を有してもよい。

【0138】

ポリヌクレオチドは、シグナル配列又はリーダー配列をコードする核酸をさらに含んでもよい。本明細書で使用される場合、「シグナル配列」という用語は、標的タンパク質の分泌を指示するシグナルペプチドを指す。シグナルペプチドは、宿主細胞において翻訳され、次いで切断される。詳細には、シグナル配列は、小胞体（ＥＲ）膜を通過するタンパク質の輸送を開始するアミノ酸配列である。

【0139】

シグナル配列は、その特性について当技術分野で周知である。このようなシグナル配列は、典型的には、１６～３０個のアミノ酸残基を含有し、このようなアミノ酸残基よりも多い又は少ないアミノ酸残基を含有してもよい。典型的なシグナルペプチドは、３つの領域、すなわち、塩基性のＮ末端領域、中心の疎水性領域、及びより極性のＣ末端領域から構成される。中心の疎水性領域は、膜脂質二重層を介した未成熟ポリペプチドの輸送中にシグナル配列を固定化させる４～１２個の疎水性残基を含有する。

【0140】

開始後、シグナル配列は、シグナルペプチダーゼとして一般に知られている細胞性酵素によってＥＲの内腔において切断される。ここで、シグナル配列は、ｔＰａ（組織プラスミノーゲンアクチベーター）、ＨＳＶ ｇＤｓ（単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄのシグナル配列）、又は成長ホルモンの分泌シグナル配列であってもよい。好ましくは、哺乳動物などを含む高等真核細胞において使用される分泌シグナル配列を使用することができる。加えて、野生型シグナル配列を使用することができるか、又は宿主細胞において高い発現頻度を有するコドンで置換されたシグナル配列を使用することができる。

【0141】

ポリヌクレオチドを有するベクター
本発明の別の態様では、ポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。

【0142】

ベクターは、宿主細胞に導入して、宿主細胞のゲノムと組み換え、挿入することができる。又は、ベクターは、エピソームとして自律的に複製することができるポリヌクレオチド配列を含有する核酸手段と理解される。ベクターは、直鎖状核酸、プラスミド、ファージミド、コスミド、ＲＮＡベクター、ウイルスベクター、及びそのアナログを含む。ウイルスベクターの例は、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルスを含むが、これらに限定されない。

【0143】

詳細には、ベクターは、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡなど；及び商業的に開発されたプラスミド（ｐＵＣ１８、ｐＢＡＤ、ｐＩＤＴＳＡＭＲＴ－ＡＭＰなど）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来のプラスミド（ｐＹＧ６０１ＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１１８、ｐＵＣ１１９など）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のプラスミド（ｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５など）、酵母由来のプラスミド（ＹＥｐ１３、ＹＥｐ２４、ＹＣｐ５０など）、ファージＤＮＡ（Ｃｈａｒｏｎ４Ａ、Ｃｈａｒｏｎ２１Ａ、ＥＭＢＬ３、ＥＭＢＬ４、λｇｔ１０、λｇｔ１１、λＺＡＰなど）、動物ウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルスなど）、昆虫ウイルスベクター（バキュロウイルスなど）を含み得る。ベクターは、宿主細胞によりタンパク質の異なる発現レベル及び修飾を示すことから、目的に最も好適な宿主細胞を選択し、使用することが好ましい。

【0144】

本明細書で使用される場合、「遺伝子発現」又は標的タンパク質の「発現」という用語は、ＤＮＡ配列の転写、ｍＲＮＡ転写物の翻訳、及び融合タンパク質産物又はその断片の分泌を意味すると理解される。有用な発現ベクターは、ＲｃＣＭＶ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ）又はそのバリアントであり得る。発現ベクターは、哺乳動物細胞における標的遺伝子の連続的転写を促進するためのヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、及び転写後のＲＮＡの安定性レベルを高めるためのウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル配列を含有してもよい。
融合タンパク質を発現する形質転換細胞
本発明の別の態様では、ベクターが導入された形質転換細胞が提供される。

【0145】

形質転換細胞の宿主細胞は、原核細胞、真核細胞、及び哺乳動物、植物、昆虫、真菌、又は細菌起源の細胞を含み得るが、これらに限定されない。原核細胞の例として、大腸菌を使用することができる。加えて、真核細胞の例として、酵母を使用することができる。加えて、哺乳動物細胞については、ＣＨＯ細胞、Ｆ２Ｎ細胞、ＣＳＯ細胞、ＢＨＫ細胞、Ｂｏｗｅｓ黒色腫細胞、ＨｅＬａ細胞、９１１細胞、ＡＴ１０８０細胞、Ａ５４９細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞などを使用することができる。しかしながら、哺乳動物細胞は、これらに限定されず、哺乳動物宿主細胞として使用できることが当業者に知られている任意の細胞を使用することができる。

【0146】

加えて、宿主細胞への発現ベクターの導入には、ＣａＣｌ_２沈殿、ＣａＣｌ_２沈殿においてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの還元剤を使用することによって効率が高められたＨａｎａｈａｎ法、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、原形質融合、炭化ケイ素繊維を使用する撹拌、アグロバクテリウムにより媒介される形質転換、ＰＥＧを使用する形質転換、硫酸デキストラン、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）、又は乾燥／阻害により媒介される形質転換などを使用することができる。

【0147】

上記のとおり、治療剤としての融合タンパク質の性質の最適化又は他の任意の目的のために、当業者に公知の方法によって、宿主細胞が保有するグリコシル化関連遺伝子を操作することによって、融合タンパク質のグリコシル化パターン（例えば、シアル酸、フコシル化、グリコシル化）を調整することができる。
融合タンパク質を製造する方法
本発明の別の態様では、融合タンパク質を製造する方法であって、ｉ）形質転換細胞を培養するステップと、ｉｉ）第１の単量体及び第２の単量体を含む融合タンパク質を回収するステップとを含む方法が提供される。

【0148】

形質転換細胞を培養する方法は、当技術分野で周知の方法を使用して実施することができる。詳細には、培養は、バッチプロセスで実施するか、又はフェッドバッチ若しくは反復フェッドバッチプロセスで連続的に実施することができる。
融合タンパク質の使用
本発明の別の態様では、がんを予防する又は処置するための医薬組成物であって、融合タンパク質を活性成分として含む医薬組成物が提供される。

【0149】

ここで、がんは、胃がん、肝臓がん、肺がん、結腸直腸がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、骨がん、多発性骨髄腫、神経膠腫、卵巣がん、膵臓がん、子宮頸がん、甲状腺がん、喉頭がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽腫、網膜芽細胞腫、頭頸部がん、唾液腺がん及びリンパ腫からなる群から選択されるいずれか１つであってもよい。

【0150】

医薬組成物の好ましい用量は、患者の状態及び体重、疾患の重症度、薬物の形態、投与の経路及び持続時間により変動し、当業者が適切に選択することができる。本発明の腫瘍を処置する又は予防するための医薬組成物において、活性成分は、活性成分が腫瘍を処置する活性又は、特に、がんに対する治療効果を示し得る限り、用途、剤形、配合目的などに応じた任意の量（有効量）で含有され得る。活性成分の通常の有効量は、組成物の総重量を基準として、０．００１重量％～２０．０重量％の範囲内で決定される。ここで、「有効量」という用語は、疾患の状態を改善する又は処置する効果を誘導すること、特に、がんの状態を改善する又は処置する効果を誘導することが可能な活性成分の量を指す。このような有効量は、当業者の常識の範囲内で実験的に決定することができる。

【0151】

本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、治療的処置及び予防的処置の両方を意味するために使用することができる。ここで、予防とは、対象の病態又は疾患が軽減される又は緩和されることを意味するために使用することができる。一実施形態では、「処置」という用語は、ヒトを含む、哺乳動物における疾患を処置するための適用又は任意の形態の投与の両方を含む。加えて、「処置」という用語は、疾患の進行を阻害する又は遅らせることを含み、疾患が部分的に若しくは完全に軽減されるように低下した若しくは失われた機能を回復する若しくは修復する；非効率的なプロセスを刺激する；又は重度の疾患を軽減するという意味を含む。

【0152】

バイオアベイラビリティなどの薬物動態パラメーター及びクリアランス速度などの基礎的なパラメーターもまた、有効性に影響を及ぼし得る。したがって、「増強された有効性」（例えば、有効性の改善）は、増強された薬物動態パラメーター及び増強された有効性に起因する可能性があり、クリアランス速度及び試験動物又はヒト対象における腫瘍の処置又は改善などのパラメーターを比較することによって測定することができる。

【0153】

本明細書で使用される場合、「治療有効量」又は「薬学的有効量」という用語は、問題の疾患を予防する又は処置するのに有効な化合物又は組成物の量であって、医学的処置に適用可能な妥当なベネフィット／リスク比で疾患を処置するのに十分であり、副作用を引き起こさない量を指す。有効量のレベルは、患者の健康状態、疾患の型及び重症度、薬物の活性、薬物に対する患者の感度、投与方式、投与時間、投与経路及び排泄速度、処置の持続時間、配合又は同時に使用される薬物、並びに医学分野で周知の他の因子を含む因子により決定することができる。一実施形態では、治療有効量とは、がんを処置するのに有効な薬物の量を指す。

【0154】

ここで、医薬組成物は、薬学的に許容できる担体をさらに含んでもよい。薬学的に許容できる担体は、患者への送達に好適な非毒性物質である限り、任意の担体であり得る。蒸留水、アルコール、脂肪、ワックス、及び不活性固体は、担体として含有され得る。薬学的に許容できるアジュバント（緩衝剤、分散剤）もまた、医薬組成物に含有され得る。

【0155】

詳細には、活性成分に加えて薬学的に許容できる担体を含めることによって、医薬組成物は、投与経路により、当技術分野で公知の従来の方法を使用して、非経口製剤に調製することができる。ここで、「薬学的に許容できる」という用語は、担体が、活性成分の活性を阻害しないと同時に、適用される（処方される）対象が適応できるよりも大きな毒性を有さないことを意味する。

【0156】

医薬組成物が非経口製剤に調製される場合、非経口製剤は、当技術分野で公知の方法に従って、好適な担体を用いて、注射剤、経皮パッチ、経鼻吸入剤、又は坐剤の形態の調製物にすることができる。注射剤にされる場合、滅菌水、エタノール、グリセロール若しくはプロピレングリコールなどのポリオール、又はこれらの混合物を好適な担体として使用することができ、等張液、例えばリンゲル液、トリエタノールアミンを含有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）又は注射用滅菌水、及び５％デキストロースなどを好ましくは使用することができる。医薬組成物の製剤化は、当技術分野で公知であり、詳細には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１９版、１９９５）などを参照することができる。同文献は、本明細書の一部と考えられる。

【0157】

医薬組成物の好ましい用量は、患者の状態、体重、性別、年齢、患者の重症度、及び投与経路により、１日当たり０．０１μｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇ、又は０．０１ｍｇ／ｋｇ～１ｇ／ｋｇの範囲であり得る。用量は、１日１回投与することができるか又は１日数回に分割することができる。このような用量は、本発明の範囲をいかなる面でも限定すると考えられるべきではない。

【0158】

医薬組成物を適用する（処方する）ことができる対象は、哺乳動物及びヒトであり、ヒトが特に好ましい。活性成分に加えて、本出願の医薬組成物は、腫瘍に対する治療効果を有することが知られている任意の化合物又は天然抽出物をさらに含有してもよい。

【0159】

本発明の別の態様では、がんを処置するための、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質の使用が提供される。

【0160】

本発明の別の態様では、がんを処置するための医薬を製造するための、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質の使用が提供される。

【0161】

本発明のさらに別の態様では、がんを処置する又は予防するための方法であって、ＩＬ－１２又はそのバリアントを含む第１の単量体と、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部位を含む第２の単量体とを含む融合タンパク質を対象に投与するステップを含む方法が提供される。

【0162】

ここで、対象は、がんに罹患している対象であってもよい。加えて、対象は、哺乳動物、好ましくはヒトであってもよい。

【0163】

融合タンパク質又は融合タンパク質二量体の投与経路、用量、及び投与頻度は、患者の状態及び副作用の有無により変動する可能性があり、そのため、融合タンパク質又は融合タンパク質二量体は、様々な方法及び量で対象に投与することができる。最適な投与方法、用量、及び投与頻度は、当業者が適切な範囲内で選択することができる。加えて、融合タンパク質又は融合タンパク質二量体は、処置される疾患に関する治療効果が知られている他の薬物又は生理活性物質と組み合わせて投与することができるか、又は他の薬物との組合せ調製物の形態で製剤化することができる。

【実施例0164】

これ以降、本発明を以下の実施例によってより詳細に説明する。しかしながら、以下の実施例は、本発明を例示するためのものにすぎず、本発明の範囲は、実施例に限定されない。

【0165】

調製例１．抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２ ＩｇＧ１ ＤＡＮＧ、ヒト融合タンパク質の概要

【0166】

【表1】

［ｓｅｑ１］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃで構成され、エフェクター機能はＤＡＮＧ突然変異（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｇ）によって除去され、ノブ構造がＴ３６６Ｗ突然変異によって形成される。

【0167】

［ｓｅｑ２］は、ヒト抗ＦＡＰ軽鎖配列で構成される。

【0168】

［ｓｅｑ３］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、及びリンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトインターロイキン１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃで構成され、エフェクター機能はＤＡＮＧ突然変異（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｇ）によって除去され、ホール構造がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ突然変異によって形成される。

【0169】

［ｓｅｑ４］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与する２８０番目及び２８５番目のアミノ酸であるリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異された配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧで構成される。

【0170】

［ｓｅｑ５］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与する２８０番目、２８２番目、２８５番目及び２８６番目のアミノ酸であるリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異された配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧで構成される。

【0171】

［ｓｅｑ６］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、及びヒトＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧで構成される。

【0172】

［ｓｅｑ７］は、ヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖配列で構成される。

【0173】

［ｓｅｑ８］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、ヒトＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0174】

［ｓｅｑ９］は、ヒト抗ＦＡＰ軽鎖配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0175】

［ｓｅｑ１０］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖配列、ヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0176】

［ｓｅｑ１１］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖配列、ヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0177】

［ｓｅｑ１２］は、ヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧのみで構成される。

【0178】

［ｓｅｑ１３］は、ヒトＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧのみで構成される。

【0179】

［ｓｅｑ１４］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧで構成される。

【0180】

［ｓｅｑ１５］は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩｌ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧで構成される。

【0181】

［ｓｅｑ１６］は、ヒト抗ＣＤ２０抗体の重鎖配列及びヒトＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧで構成される。

【0182】

［ｓｅｑ１７］は、ヒト抗ＣＤ２０抗体の軽鎖配列である。

【0183】

［ｓｅｑ２９２］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカー ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0184】

［ｓｅｑ２９３］は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0185】

［ｓｅｑ２９４］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖配列、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0186】

［ｓｅｑ２９５］は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖配列、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0187】

［ｓｅｑ２９６］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0188】

［ｓｅｑ２９７］は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒト抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒト抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0189】

Ｔ１．０１（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ３）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列とヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0190】

Ｔ１．０２（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ４）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0191】

Ｔ１．０３（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ５）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0192】

Ｔ１．０４（ｓｅｑ３、ｓｅｑ６、ｓｅｑ７）は、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）型のヒト抗ＦＡＰ配列と、ヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0193】

Ｔ１．０５（ｓｅｑ５、ｓｅｑ６、ｓｅｑ７）は、ＤＶＤ－Ｉｇ型のヒト抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0194】

Ｔ１．０６（ｓｅｑ２、ｓｅｑ３、ｓｅｑ８）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が重鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列と、ヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0195】

Ｔ１．０７（ｓｅｑ２、ｓｅｑ５、ｓｅｑ８）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0196】

Ｔ１．０８（ｓｅｑ１、ｓｅｑ３、ｓｅｑ９）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖが軽鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列と、ヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0197】

Ｔ１．０９（ｓｅｑ１、ｓｅｑ５、ｓｅｑ９）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖが軽鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0198】

Ｔ１．１０（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ１０）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列と、ヒトＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成する抗体である。

【0199】

Ｔ１．１１（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ１１）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成する抗体である。

【0200】

Ｔ１．１２（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ１２）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0201】

Ｔ１．１３（ｓｅｑ３、ｓｅｑ１３）は、ヒトＩＬ－１２配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0202】

Ｔ１．１４（ｓｅｑ４、ｓｅｑ１３）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0203】

Ｔ１．１５（ｓｅｑ５、ｓｅｑ１３）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列のみを有するノブ－イントゥ－ホールル構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0204】

Ｔ１．１６（ｓｅｑ２、ｓｅｑ１４）は、ヒトＦＡＰを標的とするヒト抗ＦＡＰ抗体である。

【0205】

Ｔ１．１７（ｓｅｑ１５）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列のみを有するＦｃ融合タンパク質である。

【0206】

Ｔ１．１８（ｓｅｑ３、ｓｅｑ１６、ｓｅｑ１７）は、ヒトＣＤ２０を標的とするヒト抗ＣＤ２０配列と、ヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0207】

Ｔ１．１９（ｓｅｑ４、ｓｅｑ１６、ｓｅｑ１７）は、ヒトＣＤ２０を標的とするヒト抗ＣＤ２０配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0208】

Ｔ１．２０（ｓｅｑ５、ｓｅｑ１６、ｓｅｑ１７）は、ヒトＣＤ２０を標的とするヒト抗ＣＤ２０配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0209】

Ｔ１．２１（ｓｅｑ１２、ｓｅｑ１６、ｓｅｑ１７）は、ヒトＣＤ２０を標的とするヒト抗ＣＤ２０配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0210】

Ｔ１．２３（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ２９２）は、ヒト抗ＦＡＰ配列と、ヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されているヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0211】

Ｔ１．２４（ｓｅｑ１、ｓｅｑ２、ｓｅｑ２９３）は、ヒト抗ＦＡＰ重鎖配列と、ヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されている、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0212】

Ｔ１．２５（ｓｅｑ２、ｓｅｑ２９４）は、ヒトＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されているヒト抗－ＦＡＰ配列を含有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0213】

Ｔ１．２６（ｓｅｑ２、ｓｅｑ２９５）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されているヒト抗ＦＡＰ配列を含有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0214】

Ｔ１．２７（ｓｅｑ２９６）は、ヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されているヒトＩＬ－１２配列を含有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0215】

Ｔ１．２８（ｓｅｑ２９７）は、ヒト抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されている、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するヒトＩＬ－１２配列で構成されるＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0216】

［ｓｅｑ１］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣ ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧ
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0217】

［ｓｅｑ２］抗ｈｕ ＦＡＰ ＬＣ
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0218】

［ｓｅｑ３］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２－ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0219】

［ｓｅｑ４］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ１－ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASKREAKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0220】

［ｓｅｑ５］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0221】

［ｓｅｑ６］（抗ｈｕ ＦＡＰ ＶＨ）２－ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧ
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0222】

［ｓｅｑ７］（抗ｈｕ ＦＡＰ ＶＬ）２
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0223】

［ｓｅｑ８］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣ ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧ－抗ｈｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

【0224】

［ｓｅｑ９］抗ｈｕ ＦＡＰ ＬＣ－抗ｈｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

【0225】

［ｓｅｑ１０］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣＰ ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ－ｈｕ ｓｃＩＬ－１２
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

【0226】

［ｓｅｑ１１］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣ ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ－ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

【0227】

［ｓｅｑ１２］ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0228】

［ｓｅｑ１３］ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧ
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0229】

［ｓｅｑ１４］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣ ｈｕ ＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0230】

［ｓｅｑ１５］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｈｕ ＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0231】

［ｓｅｑ１６］抗ｈｕ ＣＤ２０ ＨＣ ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃノブＤＡＮＧ
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0232】

［ｓｅｑ１７］抗ｈｕ ＣＤ２０ ＬＣ
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0233】

［ｓｅｑ２９２］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２－ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ－抗ｈｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

【0234】

［ｓｅｑ２９３］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｈｕ ＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧ－抗ｈｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

【0235】

［ｓｅｑ２９４］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣＰ ｈｕ ＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ－ｈｕ ｓｃＩＬ－１２
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

【0236】

［ｓｅｑ２９５］抗ｈｕ ＦＡＰ ＨＣ ｈｕ ＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ－ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

【0237】

［ｓｅｑ２９６］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２－ｈｕ ＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ－抗ｈｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

【0238】

［ｓｅｑ２９７］ｈｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｈｕ ＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ－抗ｈｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

【0239】

調製例２．抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２ ＩｇＧ２ａ ＤＡＮＧ、マウス融合タンパク質の概要

【0240】

【表2】

【0241】

［ｓｅｑ１８］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列及びマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃで構成され、エフェクター機能はＤＡＮＧ突然変異（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｇ）によって除去され、ノブ構造はＴ３２１Ｗ突然変異によって形成される。

【0242】

［ｓｅｑ１９］は、マウスの抗ＦＡＰ軽鎖配列で構成される。

【0243】

［ｓｅｑ２０］は、マウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃで構成され、エフェクター機能はＤＡＮＧ突然変異によって除去され、ホール構造はＴ３２１Ｓ、Ｍ３２３Ａ、Ｙ３６２Ｖ突然変異によって形成される。

【0244】

［ｓｅｑ２１］は、マウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与する２７７番目及び２８２番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異される配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧで構成される。

【0245】

［ｓｅｑ２２］は、マウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与する２７６番目のアミノ酸のアルギニン（Ｒ）、並びに２７７番目、２７８番目及び２８２番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異される配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧで構成される。

【0246】

［ｓｅｑ２３］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、及びマウスＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧで構成される。

【0247】

［ｓｅｑ２４］は、マウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖配列で構成される。

【0248】

［ｓｅｑ２５］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、マウスＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0249】

［ｓｅｑ２６］は、マウス抗ＦＡＰ軽鎖配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0250】

［ｓｅｑ２７］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖配列、マウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0251】

［ｓｅｑ２８］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖配列、マウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列 、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0252】

［ｓｅｑ２９］は、マウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧのみで構成される。

【0253】

［ｓｅｑ３０］は、マウスＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧのみで構成される。

【0254】

〔ｓｅｑ３１〕は、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域及びマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧで構成される。

【0255】

［ｓｅｑ３２］は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧで構成される。

【0256】

［ｓｅｑ３３］は、マウス抗ＣＤ２０抗体１８Ｂ１２の重鎖可変領域配列及びマウスＩｇＧ２ａノブＤＡＮＧで構成される。

【0257】

［ｓｅｑ３４］は、マウス抗ＣＤ２０抗体１８Ｂ１２の軽鎖配列で構成される。

【0258】

［ｓｅｑ３５］は、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧのみで構成される。

【0259】

［ｓｅｑ２９８］は、マウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びマウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0260】

［ｓｅｑ２９９］は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びマウスＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0261】

［ｓｅｑ３００］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖配列、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）で構成される。

【0262】

［ｓｅｑ３０１］は、マウス抗ＦＡＰ重鎖配列、マウスＩｇＧ１ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２のｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列で構成される。

【0263】

［ｓｅｑ３０２］は、マウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0264】

［ｓｅｑ３０３］は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウスＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、マウス抗ＦＡＰ重鎖可変領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びマウス抗ＦＡＰ軽鎖可変領域配列で構成される。

【0265】

Ｔ１．０１ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２０）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列とマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0266】

Ｔ１．０２ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２１）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0267】

Ｔ１．０３ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２２）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列がノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0268】

Ｔ１．０４ｍ（ｓｅｑ２０、ｓｅｑ２３、ｓｅｑ２４）は、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）型のマウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列とマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0269】

Ｔ１．０５ｍ（ｓｅｑ２２、ｓｅｑ２３、ｓｅｑ２４）は、ＤＶＤ－Ｉｇ型のマウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列よ、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0270】

Ｔ１．０６ｍ（ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２０、ｓｅｑ２５）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が重鎖のＣ末端に含まれるマウス抗ＦＡＰ配列と、マウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0271】

Ｔ１．０７ｍ（ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２２、ｓｅｑ２５）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に含まれるマウス抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0272】

Ｔ１．０８ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ２０、ｓｅｑ２６）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖが軽鎖のＣ末端に含まれるマウス抗ＦＡＰ配列とマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0273】

Ｔ１．０９ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ２２、ｓｅｑ２６）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖが軽鎖のＣ末端に含まれるマウス抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0274】

Ｔ１．１０ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２７）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列と、マウスＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されているマウス抗ＦＡＰ配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成する抗体である。

【0275】

Ｔ１．１１ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２８）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とが重鎖のＣ末端に連結されているマウス抗ＦＡＰ配列がノブ－イントゥ－ホール構造を形成する抗体である。

【0276】

Ｔ１．１２ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２９）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0277】

Ｔ１．１３ｍ（ｓｅｑ２０、ｓｅｑ３０）は、マウスＩＬ－１２配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0278】

Ｔ１．１４ｍ（ｓｅｑ２１、ｓｅｑ３０）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0279】

Ｔ１．１５ｍ（ｓｅｑ２２、ｓｅｑ３０）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0280】

Ｔ１．１６ｍ（ｓｅｑ１９、ｓｅｑ３１）は、マウスＦＡＰを標的とするマウス抗ＦＡＰ抗体である。

【0281】

Ｔ１．１７ｍ（ｓｅｑ３２）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列のみを有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0282】

Ｔ１．１８ｍ（ｓｅｑ２０、ｓｅｑ３３、ｓｅｑ３４）は、マウスＣＤ２０を標的とするマウス抗ＣＤ２０（１８Ｂ１２）配列と、マウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0283】

Ｔ１．１９ｍ（ｓｅｑ２１、ｓｅｑ３３、ｓｅｑ３４）は、マウスＣＤ２０を標的とするマウス抗ＣＤ２０（１８Ｂ１２）配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0284】

Ｔ１．２０ｍ（ｓｅｑ２２、ｓｅｑ３３、ｓｅｑ３４）は、マウスＣＤ２０を標的とするマウス抗ＣＤ２０配列と、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0285】

Ｔ１．２１ｍ（ｓｅｑ２９、ｓｅｑ３３、ｓｅｑ３４）は、マウスＣＤ２０を標的とするマウス抗ＣＤ２０配列のみを有するノブ－イントゥ－ホール構造のエフェクター機能が除去されている抗体である。

【0286】

Ｔ１．２２ｍ（ｓｅｑ３５）は、エフェクター機能が除去されているマウスＦｃ配列のみを有するタンパク質である。

【0287】

Ｔ１．２３ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２９８）は、マウス抗ＦＡＰ配列と、マウス抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されているマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホール構造を形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0288】

Ｔ１．２４ｍ（ｓｅｑ１８、ｓｅｑ１９、ｓｅｑ２９９）は、マウスの抗ＦＡＰ重鎖配列と、マウスの抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されている、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列とがノブ－イントゥ－ホールを形成し、エフェクター機能が除去されている二特異性抗体である。

【0289】

Ｔ１．２５ｍ（ｓｅｑ１９、ｓｅｑ３００）は、マウスＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されているマウス抗ＦＡＰ配列を含有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0290】

Ｔ１．２６ｍ（ｓｅｑ１９、ｓｅｑ３０１）は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列が重鎖のＣ末端に連結されている、マウス抗ＦＡＰ配列を含有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0291】

Ｔ１．２７ｍ（ｓｅｑ３０２）は、マウス抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されているマウスＩＬ－１２配列を含有するＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0292】

Ｔ１．２８ｍ（ｓｅｑ３０３）は、マウス抗ＦＡＰ配列のｓｃＦｖがＣ末端に連結されている、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列で構成されるＦｃ融合タンパク質二量体である。

【0293】

［ｓｅｑ１８］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧ
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0294】

［ｓｅｑ１９］抗ｍｕ ＦＡＰ ＬＣ
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWK
IDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

【0295】

［ｓｅｑ２０］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0296】

［ｓｅｑ２１］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ１－ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRAKEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0297】

［ｓｅｑ２２］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0298】

［ｓｅｑ２３］（抗ｍｕ ＦＡＰ ＶＨ）２、ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧ
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0299】

［ｓｅｑ２４］（抗ｍｕ ＦＡＰ ＶＬ）２
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

【0300】

［ｓｅｑ２５］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧ－抗ｍｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

【0301】

［ｓｅｑ２６］抗ｍｕ ＦＡＰ ＬＣ－抗ｍｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNECGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

【0302】

［ｓｅｑ２７］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ－ｍｕ ｓｃＩＬ－１２
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

【0303】

［ｓｅｑ２８］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ－ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

【0304】

［ｓｅｑ２９］ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ
EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0305】

［ｓｅｑ３０］ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧ
EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0306】

［ｓｅｑ３１］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0307】

［ｓｅｑ３２］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0308】

［ｓｅｑ３３］抗ｍｕ ＣＤ２０ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃノブＤＡＮＧ
QVQLQQPGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWIKQRPGQGLEWIGVIDPSDNYTKYNQKFKGKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAREGYYGSSPWFAYWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0309】

［ｓｅｑ３４］抗ｍｕ ＣＤ２０ ＬＣ
QIVMSQSPAILSASPGEKVTMTCRARSSVSYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPGRFSGSGSGTSYSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSKPPTFGGGTKLEIKRTDAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

【0310】

［ｓｅｑ３５］ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ
EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

【0311】

［ｓｅｑ２９８］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ－抗ｍｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

【0312】

［ｓｅｑ２９９］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ ＦｃホールＤＡＮＧ－抗ｍｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

【0313】

［ｓｅｑ３００］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ－ｍｕ ｓｃＩＬ－１２
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

【0314】

［ｓｅｑ３０１］抗ｍｕ ＦＡＰ ＨＣ ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ－ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２
QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

【0315】

［ｓｅｑ３０２］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ－抗ｍｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

【0316】

［ｓｅｑ３０３］ｍｕ ｓｃＩＬ－１２ ｍｕｔ２－ｍｕ ＩｇＧ２ａ Ｆｃ ＤＡＮＧ－抗ｍｕ ＦＡＰ ｓｃＦｖ
MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

【0317】

製造例１．融合タンパク質の製造
試薬及び装置を下記の表３及び４に記載する。

【0318】

【表3】

【0319】

【表4】

【0320】

合成したＤＮＡ断片をＰＣＲで増幅し、ＰＣＲ産物をゲルで精製した。制限酵素ＥｃｏＲＩ及びＢａｍＨＩによってｐＴＴ５ベクターを切断し、次にゲルを精製した。各ＰＣＲ産物及び直鎖状ベクターを、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎキットを用いて連結した。生成したベクターをＥＣＯＳ１０１ ＤＨ５αコンピテント細胞に形質転換し、細胞を１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有する２×ＹＴ寒天プレート上で培養した。操作プロセスは全て、標準的な形質転換プロトコルに従って行われた。陽性組換え体をコロニーＰＣＲにより同定し、組換えプラスミドについて配列検証配列決定を行った。単一のコロニーを選択し、種培養物を、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有する２×ＹＴ培地５ｍｌに接種した。３７℃で８時間振とう培養した。

【0321】

その後、種培養物を２００ｍｌの選択的２×ＹＴ培地中で１：１，０００の比で希釈した。３７℃で１６時間振とう培養した。細菌細胞を４℃、４，７００ｒｐｍで１０分間の遠心分離により回収した。細菌ペレットを１２ｍｌのＲＥＳ－ＥＦ緩衝剤に再懸濁した。その後、１２ｍｌのＬＹＳ－ＥＦ緩衝剤を添加し、密封管を激しく反転させて完全に混合し、次に室温で５分間インキュベートした。１２ｍｌのＮＥＵ－ＥＦ緩衝剤を溶解物に添加し、激しく反転して完全に及び迅速に混合した。

【0322】

ニュークリオボンド（ＮｕｃｌｅｏＢｏｎｄ）（商標）Ｘｔｒａカラムフィルターに溶解物を注入する前に、溶解物チューブを３回反転させて沈殿物の均一な懸濁液を調製し、フィルターが詰まらないようにした。その後、ニュークリオボンド（商標）Ｘｔｒａカラムフィルター及びニュークリオボンド（商標）Ｘｔｒａカラムを、１０ｍｌのフィルター洗浄緩衝剤ＦＩＬ－ＥＦで洗浄した。ニュークリオボンド（商標）Ｘｔｒａカラムフィルターは、カラムを引き抜いたり、反転させたりして取り除いた。ニュークリオボンド（商標）Ｘｔｒａカラムを９０ｍｌの洗浄緩衝剤ＥＮＤＯで洗浄した。

【0323】

ニュークリオボンド（商標）Ｘｔｒａカラムを４５ｍｌの洗浄緩衝剤ＷＡＳＨ－ＥＦで洗浄した。プラスミドＤＮＡを１５ｍｌの溶出緩衝剤ＥＬＵで溶出した。溶出液を５０ｍｌの遠心チューブに回収した。室温で１０．５ｍｌのイソプロパノールを添加して、溶出されたプラスミドＤＮＡを沈殿させた。ボルテックス後、混合物を２分間放置した。

【0324】

その後、５ｍｌの７０％エタノールをペレットに添加した。ピペットチップを用いてエタノールを注意深く完全にチューブから除去した。ペレットを室温（２０℃）で乾燥させた。その後、ＤＮＡペレットを１，０００μｌのＨ_２Ｏで溶解した。

【0325】

製造例２．細胞トランスフェクション及びタンパク質発現
製造例２．１．細胞トランスフェクション
使用する材料及び試薬を下記の表５に示す。

【0326】

【表5】

【0327】

完全培地を含む２９３Ｆ種子株を、１３０ｒｐｍ、３７℃、及び８％ＣＯ_２のインキュベーターシェーカー中で維持した。０．３～０．４×１０^６細胞／ｍｌの濃度で培養し、培地を２～３日ごとに交換した。トランスフェクションの２４時間前に、２９３Ｆ細胞の新しい継代数を２．６×１０^６細胞／ｍｌで調製した。調製した細胞を、１３０ｒｐｍ、３７℃、及び８％ＣＯ_２のインキュベーターシェーカー中で培養した。トランスフェクション当日、新鮮な培地を用いて細胞密度を５．０×１０^６細胞／ｍｌに調整した。３Ｌシェーカーフラスコ中で総体積１Ｌで行った。０．４ｍｇのＨＣ及び０．６ｍｇのＬＣプラスミドを５０ｍｌのＯＰＴＩ ＭＥＭ Ｉで希釈し、０．２２μｍフィルターを通してろ過した。その後、２ｍｇのＰＥＩを５０ｍｌのＯＰＴＩ ＭＥＭ Ｉで希釈し、トランスフェクション試薬を調製した。

【0328】

希釈したＰＥＩをＤＮＡ混合物に添加し、直ちに混合した。その後、室温で１５分間培養した。ＤＮＡ－ＰＥＩ混合物を、２．６×１０^６細胞／ｍｌで調製した２９３Ｆ細胞に添加した。その後、細胞を１３０ｒｐｍ、３７℃、及び８％ＣＯ_２のインキュベーターシェーカー中で２４時間連続的に培養した。トランスフェクション２４時間後、培養溶液の１／２０に１０％ペプトンを添加し、最終濃度を０．５％にした。その後、細胞を１３０ｒｐｍ、３７℃、及び８％ＣＯ_２のインキュベーターシェーカー中で連続的に培養した。細胞密度／生存率を測定し、トランスフェクション後２～５日間、毎日記録した。トランスフェクションの７日後又は細胞生存率が７０％未満の場合に、精製のために細胞を回収した。

【0329】

製造例２．２．タンパク質精製
タンパク質の精製に用いる試薬、緩衝剤の組成、及び装置については下記の表６～８に示す。

【0330】

【表6】

【0331】

【表7】

【0332】

【表8】

【0333】

Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ｓｕｒｅカラムを用いてタンパク質を精製した。具体的には、２，０００×ｇ、４℃、２０分間の遠心分離により上清を回収した。その後、上清をＳａｒｔｏｐｏｒｅ２フィルターでろ過した。緩衝剤Ａで平衡化した５ｍｌのＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅカラムに、清澄化した上清をロードした。その後、Ａ２８０吸光度がベースラインに達するまで、カラムを緩衝剤Ａで洗浄した。カラムを１０ＣＶ緩衝剤Ｂで洗浄した。カラムを１０ＣＶ緩衝剤Ａで洗浄した。結合タンパク質を６ＣＶ緩衝剤Ｃで溶離し、１／６体積の緩衝剤Ｄを添加して、溶出物質を中和した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を行った。その後、ＨＩＣカラムを用いてタンパク質を精製した。次に、タンパク質を緩衝剤Ｅに対して４℃で一晩透析した。緩衝剤Ｅで平衡化したＨＩＣカラムに上清をロードした。その後、Ａ２８０吸光度がベースラインに達するまで、カラムを緩衝剤Ｅで洗浄した。結合タンパク質を勾配溶出（１０ＣＶ緩衝剤Ｆ０％～４０％）により溶出させた。結合タンパク質を２ＣＶ １００％緩衝剤Ｆで溶出させ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を行った。

【0334】

精製されたタンパク質をプールし、次に、タンパク質を４℃で最終緩衝剤に対して一晩透析した。その後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を行った。

【0335】

その結果、図１～図６に示されるように、一実施形態のヒトタンパク質及びマウスタンパク質を精製したことが判明した。

【0336】

製造例３．二特異性抗体生成の改善
製造例３．１ ヒトＩＬ－１２を含む融合タンパク質の生成における改善の同定
ヒトＩＬ－１２突然変異によるヒト抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２二特異性抗体の生成の変化を下記の表９に示す。括弧はタンパク質の生成規模、単位はＬを示す。括弧の前の数値は、精製されたタンパク質量を生成規模で除した１リットルあたりの生成量である。

【0337】

【表9】

【0338】

上記の表９に示されるように、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異数が増加するにつれて、プロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅカラム）を介して精製されたタンパク質の量が増加した。２８０番目及び２８５番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異した二特異性抗体Ｔ１．０２は、Ｔ１．０１と比較して生成が改善されたことが判明した。２８０番目、２８２番目、２８５番目及び２８６番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異した二特異性抗体Ｔ１．０３は、Ｔ１．０１と比較して生成が約２．５倍改善されたことが判明した。

【0339】

製造例３．２．マウスＩＬ－１２を含む融合タンパク質の生成における改善の同定
以下の表１０は、マウスＩＬ－１２突然変異によるマウス抗ＦＡＰ／ＩＬ－１２二特異性抗体の生成の変化を示す。

【0340】

【表10】

【0341】

上記の表１０に示されるように、マウスＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異数が増加するにつれて、プロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅカラム）を介して精製されたタンパク質の量が増加した。

【0342】

各々の表では、プロテイン質Ａカラムを通過した後のタンパク質の量は、総タンパク質生成量を生産スケールで叙することによって比較した。２７７番目及び２８２番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異した二特異性抗体Ｔ１．０２ｍ、並びに２７６番目のアミノ酸のアルギニン（Ｒ）がアラニン（Ａ）に突然変異し、２７７番目、２７８番目及び２８２番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異した二特異性抗体Ｔ１．０３ｍは、Ｔ１．０１ｍ及びＴ１．０２ｍと比較してタンパク質の生成が徐々に改善されたことが判明した。さらに、ＣＨＯ細胞株を用いたＴ１．０３ｍの生成は、ＨＥＫ２９３細胞株を用いた生成と比較して約１３倍改善されることが判明した。
製造例４．細胞株及び細胞株の培養
ヒト胚性腎線維芽細胞であるＨＥＫ２９３細胞にＩＬ－１２受容体遺伝子及びＳＴＡＴ４誘導性ＳＥＡＰレポーター遺伝子で形質転換したＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２細胞株をＩｎｖｉｖｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＵＳＡ）から入手した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２細胞を、１０％ ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）、１００μｇ／ｍｌノルモシン及び１×ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ選択を含有するＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）中に維持した。

【0343】

ヒト胚性腎線維芽細胞株ＨＥＫ２９３、マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６－ＷＴ、マウス黒色腫細胞株Ｂ１６Ｆ１０及びマウス線維芽細胞株ＮＩＨ３Ｔ３をＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）から入手した。ＨＥＫ２９３細胞、Ｂ１６Ｆ１０細胞及びＮＩＨ３Ｔ３細胞を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）を現有するＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）に維持した。ヒトＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質アルファ）をＨＥＫ２９３細胞で過剰発現させた細胞株（ＨＥＫ２９３－ｈＦＡＰ）を、ヒトＦＡＰ遺伝子を送達することができるレンチウイルスを用いて調製した。ＨＥＫ２９３－ｈＦＡＰ細胞を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）及び５μｇ／ｍｌピューロマイシンを含有するＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）に維持した。

【0344】

マウスＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質アルファ）をＣＴ２６－ＷＴ細胞、Ｂ１６Ｆ１０細胞及びＮＩＨ３Ｔ３細胞で過剰発現された細胞株（ＣＴ２６－ｍＦＡＰ、Ｂ１６Ｆ１０－ｍＦＡＰ、及びＮＩＨ３Ｔ３－ｍＦＡＰ）を、マウスＦＡＰ遺伝子を送達可能なレンチウイルスを用いて調製した。ＣＴ２６－ｍＦＡＰ細胞を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）及び１０μｇ／ｍｌピューロマイシンを含有するＲＰＭＩ－１６４０（ＧＩＢＣＯ）に維持した。Ｂ１６Ｆ１０－ｍＦＡＰ細胞を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）及び１０μｇ／ｍｌピューロマイシンを含有するＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）に維持した。ＮＩＨ３Ｔ３－ｍＦＡＰ細胞を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）及び５μｇ／ｍｌピューロマイシンを含有するＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）に維持した。

【0345】

製造例５．ヒト免疫細胞の単離及び活性化
韓国赤十字社より治験審査委員会（ＩＲＢ）の承認を得て血液パックを入手し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離及び凍結した。解凍したＰＢＭＣを正の選択法に供し、ヒトＮＫ細胞をＥａｓｙ ｓｅｐ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ、Ｖａｎｃｕｖｅｒ、ＢＣ、ＣＡ）キットを用いて単離した。単離したＮＫ細胞を、５０ＩＵ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ、ＵＳＡ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０（ＧＩＢＣＯ）及び１０％ＦＢＳで活性化し、維持した。

【0346】

解凍したＰＢＭＣを負の選択法に供し、ヒトＴ細胞をＥａｓｙ ｓｅｐ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）キットを用いて単離した。ヒトＴ細胞を、１μｇ／ｍｌ抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で被覆したプレート上で培養し、７２時間活性化した。ヒトＴ細胞を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０（ＧＩＢＣＯ）に維持した。

【0347】

実施例１．融合タンパク質の結合親和性の同定
実施例１．１．組換えヒトＦＡＰに対する融合タンパク質の結合の同定
組換えヒトＦＡＰへのＴ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３の結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって同定された。

【0348】

具体的には、ＣＭ５チップの表面を、５０ｎＭのＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）と２００ｎＭのＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）との１：１混合物で活性化し、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体２５μｇ／ｍｌを１０μｌ／分の速度で４００秒間固定化した。残りの活性エステル基を１Ｍエタノールアミンでブロックした。Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３を２μｇ／ｍｌに希釈し、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体とともに固定化したＣＭ５チップ上で反応させた。組換えヒトＦＡＰを１×ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中で２００ｎＭに希釈し、連続希釈により希釈した。希釈した組換えヒトＦＡＰを３０μｌ／分の速度で反応させた。会合及び解離時間はそれぞれ１８０秒及び４００秒であった。解離後、６０秒間安定化を行い、次に、３０μｌ／分の速度で１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）溶液で３０秒間再生を行った。

【0349】

結果として、図７及び８に示されるように、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３は組換えヒトＦＡＰに特異的に結合し得ることが判明した。

【0350】

組換えヒトＦＡＰへのＴ１．０４、Ｔ１．０５、Ｔ１．０６、Ｔ１．０７、Ｔ１．０８、Ｔ１．０９、Ｔ１．１０及びＴ１．１１の結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって同定された。ＣＭ５チップの表面を、５０ｎＭ ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）と２００ｎＭ ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）の１：１混合物で活性化し、２５μｇ／ｍｌの抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体を１０μｌ／分の速度で４００秒間固定化した。残りの活性エステル基を１Ｍエタノールアミンでブロックした。

【0351】

具体的には、ヒトタンパク質Ｔ１．０４、Ｔ１．０５、Ｔ１．０６、Ｔ１．０７、Ｔ１．０８、Ｔ１．０９、Ｔ１．１０、及びＴ１．１１をそれぞれ１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、及び１μｇ／ｍｌに希釈し、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体固定化ＣＭ５チップ上で反応させた。組換えヒトＦＡＰを１×ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中で２５ｎＭ又は５０ｎＭに希釈し、連続希釈により希釈した。希釈した組換えヒトＦＡＰを３０μｌ／分の速度で反応させた。会合及び解離時間はそれぞれ１８０秒及び４００秒であった。解離後、６０秒間安定化を行い、次に、３０μｌ／分の速度で１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）溶液で３０秒間再生を行った。

【0352】

結果として、表１１並びに図９及び図１０に示されるように、Ｔ１．０４、Ｔ１．０５、Ｔ１．０６及びＴ１．０７は、組換えヒトＦＡＰに結合して、ＦＡＰを特異的に標的化し得ることが判明した。さらに、表１２並びに図１１及び１２に示されるように、Ｔ１．０８、Ｔ１．０９、Ｔ１．１０及びＴ１．１１は、組換えヒトＦＡＰに結合して、ＦＡＰを特異的に標的化し得ることが判明した。

【0353】

【表11】

【0354】

【表12】

【0355】

実施例１．２．組換えマウスＦＡＰへのマウスタンパク質の結合の同定
組換えマウスＦＡＰへのＴ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍの結合を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって同定した。

【0356】

ＣＭ５チップの表面を、５０ｎＭ ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）と２００ｎＭ ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）の１：１混合物で活性化し、２５μｇ／ｍｌの抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）抗体を１０μｌ／分の速度で４００秒間固定化した。残りの活性エステル基を１Ｍエタノールアミンでブロックした。Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍを２μｇ／ｍｌに希釈し、抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）抗体と固定化したＣＭ５チップ上で反応させた。組換えマウスＦＡＰを１×ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中で２００ｎＭに希釈し、連続希釈により希釈した。希釈した組換えマウスＦＡＰを３０μｌ／分の速度で反応させた。会合及び解離時間はそれぞれ１８０秒及び４００秒であった。解離後、６０秒間安定化を行い、次に、３０μｌ／分の速度で１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）溶液で３０秒間再生を行った。

【0357】

結果として、図１３及び１４に示されるように、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍは、組換えマウスＦＡＰに結合して、ＦＡＰを特異的に標的化し得ることが判明した。

【0358】

実施例１．３．ＦＡＰ発現細胞への結合の同定
ＨＥＫ２９３及びＨＥＫ２９３－ｈＦＡＰ細胞へのＴ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３の結合の程度を同定した。

【0359】

具体的には、細胞株を１×１０^５細胞／１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に懸濁させ、Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３の各１μｇで処理することによって調製した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。陰性対照は抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）のみで染色した。染色細胞の発現率をＢＤ ＬＳＲを用いて測定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。

【0360】

結果として、図１５に示されるように、Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３は、９９％以上ヒトＦＡＰ発現細胞株に結合することが判明した。これらの結果は、一実施形態の融合タンパク質が、ヒトＦＡＰ発現細胞株に結合して、ＦＡＰを特異的に標的化し得ることを示す。

【0361】

さらに、Ｂ１６Ｆ１０及びＢ１６Ｆ１０－ｍＦＡＰ細胞へのＴ１．１２ｍ、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍの結合の程度を同定した。

【0362】

具体的には、細胞株を、１×１０^５細胞／１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に懸濁させて調製し、各Ｔ１．１２ｍ、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍの１μｇで処理した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。細胞を抗マウスＩｇＧ２ａ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。陰性対照は、抗マウスＩｇＧ２ａ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）のみで染色した。染色細胞の発現率をＢＤ ＬＳＲを用いて測定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。

【0363】

結果として、図１６に示されるように、Ｔ１．１２ｍ、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍが９９％以上ＦＡＰ発現細胞株に結合することが判明した。これらの結果は、一実施形態の融合タンパク質が、マウスＦＡＰ発現細胞株に結合して、ＦＡＰを特異的に標的化し得ることを示す。

【0364】

実施例１．４．組換えヒトＩＬ－１２受容体への融合タンパク質の結合の同定
融合タンパク質のＩＬ－１２が作用のためにＩＬ－１２受容体に結合しなければならないことを考慮すると、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２が組換えヒトＩＬ－１２受容体に結合することが判明した。

【0365】

Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３をプレート上に固定化し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートさせた組換えヒトＩＬ－１２受容体タンパク質を結合させた。具体的には、以下のステップを行った：

【0366】

（ｉ）Ｔ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２を５μｇ／ｍｌで懸濁し、連続希釈により希釈した。希釈したＴ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２を９６ウェル免疫プレートに等分し、２４時間処理した。

【0367】

（ｉｉ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、Ｓｉｇｍａ）溶液で１時間ブロッキングを行った。

【0368】

（ｉｉｉ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次に１ｎＭのＩＬ－１２受容体ベータ１－ビオチン（ＩＬ－１２Ｒβ１－ビオチン；Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｎｅｗａｒｋ、ＵＳＡ）で２時間処理した。

【0369】

（ｉｖ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次にストレプトアビジン－ＨＲＰで２０分間処理した。

【0370】

（ｖ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次に基質溶液で２０分間処理した。

【0371】

（ｖｉ）ウェルを停止溶液で処理し、４５０ｎｍで吸光度を測定した。

【0372】

結果として、図１７に示されるように、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３は、濃度依存的に組換えヒトＩＬ－１２受容体タンパク質に結合することが判明した。対照としてＴ１．１２を用いた。

【0373】

実施例２．シグナル伝達を誘導する融合タンパク質の能力の同定
実施例２．１．ＩＬ－１２認識細胞におけるシグナル伝達能力の同定
ＩＬ－１２が、シグナル伝達メディエーターであるＳＴＡＴ４（シグナル伝達兼転写活性化因子４）のリン酸化を誘導することによってシグナル伝達を開始することが知られていることを考慮し、ＩＬ－１２がＩＬ－１２受容体に結合した場合、ＩＬ－１２受容体を発現する細胞を認識するＩＬ－１２における一実施形態の融合タンパク質のシグナル伝達能力を評価した。

【0374】

具体的には、ＩＬ－１２認識細胞であるＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２細胞株を２．８×１０^５細胞／ｍｌに希釈し、１８０μｌ／ウェルで分注した。組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ、Ｔ１．０３ｍ及びＴ１．１２ｍを４ｎＭで懸濁し、連続希釈により希釈した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２細胞を、希釈された組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ、Ｔ１．０３ｍ及びＴ１．１２ｍで処理した。２４時間の処理後、細胞上清を回収し、９６ウェルプレート中でＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）と混合した。レポーター発現レベルは、分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて６２０ｎｍで測定した。

【0375】

結果として、図１８に示されるように、ＩＬ－１２、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍ処理群の場合、ＩＬ－１２が認識され、ＳＴＡＴ４がリン酸化を誘導することによりレポーター遺伝子を発現することが、６２０ｎｍの吸光度によって同定された。対照的に、対照Ｔ１．１２ｍは、ＩＬ－１２認識細胞をＴ１．１２ｍで処理した場合、ＩＬ－１２を認識しなかったことが同定された。これらの結果は、一実施形態の融合タンパク質が、シグナル伝達を誘導するためにＩＬ－１２受容体に特異的に結合することを示す。

【0376】

実施例２．２．ヒトＴ細胞におけるシグナル伝達能力の同定
ＩＬ－１２がヒトＴ細胞のＩＬ－１２受容体に結合した場合、ＩＬ－１２が、シグナル伝達メディエーターであるＳＴＡＴ４のリン酸化を誘導することによってシグナル伝達を開始するかどうかを同定するために、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化されたヒトＴ細胞を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＳＴＡＴ４（Ｔｙｒ６９３）アッセイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）を用いて分析した。

【0377】

具体的には、ヒトタンパク質ＩＬ－１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２を１００ｎｇ／ｍｌで懸濁し、連続希釈によって希釈した。抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化されたヒトＴ細胞を、希釈された組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２、Ｔ１．０３及びＴ１．１２で処理した。２時間の処理後、細胞を溶解し、ｐ－ＳＴＡＴ４（リン酸化ＳＴＡＴ４）を検出する試薬（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で処理した。ｐ－ＳＴＡＴ４は、分光光度計を用いて６８０ｎｍの励起波長及び６１５ｎｍの発光波長で検出された。

【0378】

結果として、図１９に示されるように、組換えヒトＩＬ－１２で処理された群の半最大有効濃度（ＥＣ５０）は８．９４５ｐＭであり、Ｔ１．０１で処理された群のＥＣ５０は１４．４８ｐＭであり、Ｔ１．０２で処理された群のＥＣ５０は５６．５１ｐＭであり、Ｔ１．０３で処理された群のＥＣ５０は１４７．２ｐＭであることが示された。対照的に、対照であるＴ１．１２で処理された群では、リン酸化ＳＴＡＴ４は検出されなかった。

【0379】

これらの結果は、ＩＬ－１２突然変異がＴ細胞シグナル伝達能力を減弱させたことを示す。

【0380】

実施例２．３．ヒトＴ細胞における低分子量ヘパリンによる融合タンパク質のシグナル伝達能力の変化の同定
次に、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＳＴＡＴ４（Ｔｙｒ６９３）アッセイキットで活性化したヒトＴ細胞を用いて、低分子量ヘパリンによるＩＬ－１２突然変異（ＩＬ－１２ ｍｕｔ１）融合タンパク質のシグナル伝達能力の増強を同定した。

【0381】

特に、シグナル伝達メディエーターであるＳＴＡＴ４のリン酸化の誘導が、減弱したＩＬ－１２ ｍｕｔ２がヒトＴ細胞のＩＬ－１２受容体に結合した場合に減弱されたかどうかを観察することにより、ヒトＴ細胞における低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）の有無によるシグナル伝達能力が同定された。

【0382】

具体的には、組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３を１００ｎｇ／ｍｌで懸濁し、連続希釈によって希釈した。活性化されたヒトＴ細胞を、低分子量ヘパリンとともに、希釈された組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３で処理した。２時間の処理後、細胞を溶解し、ｐ－ＳＴＡＴ４を検出するための試薬（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で処理した。ｐ－ＳＴＡＴ４は、分光光度計を用いて６８０ｎｍの励起波長及び６１５ｎｍの発光波長で検出された。

【0383】

結果として、図２０に示されるように、Ｔ１．０１及び低分子量ヘパリンで処理された群の半最大有効濃度（ＥＣ５０）は、Ｔ１．０１で処理された群と比較して９．４倍増加し、Ｔ１．０２及び低分子量ヘパリンで処理された群の半最大有効濃度（ＥＣ５０）は、Ｔ１．０２で処理された群と比較して５．５倍増加し、Ｔ１．０３及び低分子量ヘパリンで処理された群の半最大有効濃度（ＥＣ５０）はＴ１．０３で処理された群と比較して４倍増加した。

【0384】

これらの結果は、ＩＬ－１２突然変異（ＩＬ－１２ ｍｕｔ２）を既存のＩＬ－１２突然変異（ＩＬ－１２ ｍｕｔ１）に添加した場合、低分子量ヘパリンの添加によるシグナル伝達能力の増強の程度が低減し、ＩＬ－１２は効果的に減弱されたことを示す。

【0385】

実施例３．融合タンパク質のサイトカイン分泌能の同定
実施例３．１．サイトカイン測定用の酵素免疫測定法
サイトカイン測定では、－２０℃で保存した上清について、次のステップで酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を行った：
（ｉ）捕捉抗体を分析証明書（ＣｏＡ）に従って希釈し、９６ウェルプレート上に２４時間被覆した。

【0386】

（ｉｉ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、Ｓｉｇｍａ）溶液で１時間ブロッキングを行った。

【0387】

（ｉｉｉ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次に試料を２時間処理した。

【0388】

（ｉｖ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次に検出抗体を分析証明書に従って希釈し、ウェルに等分し、次に、ウェルをそれで２時間処理した。

【0389】

（ｖ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次にストレプトアビジン－ＨＲＰで２０分間処理した。

【0390】

（ｖｉ）ウェルを洗浄溶液で洗浄し、次に基質溶液で２０分間処理した。

【0391】

（ｖｉｉ）ウェルを停止溶液で処理し、４５０ｎｍで吸光度を測定した。

【0392】

実施例３．２．ヒトＴ細胞におけるサイトカイン分泌能の同定
主要な免疫応答であるＩＦＮ－γ（インターフェロン－ガンマ）分泌がヒトＴ細胞をＩＬ－１２で処理した場合に起こることを考慮し、ヒトＴ細胞を組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３で処理した場合のＩＦＮ－γ分泌能力を評価した。

【0393】

具体的には、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化されたヒトＴ細胞を５×１０^５細胞／ｍｌに希釈し、２００μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに分注した。組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３を１０ｎＭに希釈し、２０μｌ／ウェルで分注した。４８時間の処理後、細胞上清を回収し、試料を－８０℃で保存した。

【0394】

結果として、図２１に示されるように、組換えヒトＩＬ－１２で処理された試料は、平均１，６４０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有し、Ｔ１．０１で処理された試料は、平均１，１１５ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有し、Ｔ１．０２で処理された試料は、平均８４５ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有し、Ｔ１．０３で処理された試料は、平均６０７ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有することが判明した。対照的に、対照としてＴ１．１２で処理された試料はＩＦＮ－γを有しないことが判明した。

【0395】

これらの結果は、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３がヒトＴ細胞に作用してＩＦＮ－γ分泌を誘導することを示す。

【0396】

実施例３．３．ヒトＮＫ細胞におけるサイトカイン分泌能力の同定
主要な免疫応答であるＩＦＮ－γ（インターフェロン－ガンマ）分泌が、ヒトＮＫ細胞をＩＬ－１２で処理した場合に起こることを考慮し、本発明者らは、組換えヒトＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）で活性化されたヒトＮＫ細胞を組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３で処理した場合のＩＦＮ－γ分泌能力を評価した。

【0397】

具体的には、組換えヒトＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）で活性化されたヒトＮＫ細胞を５×１０^５細胞／ｍｌに希釈し、２００μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに分注した。組換えヒトＩＬ－１２、Ｔ１．１２、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３を１０ｎＭに希釈し、２０μｌ／ウェルで分注した。処理の２４時間後、細胞上清を回収し、試料を－８０℃で保存した。

【0398】

結果として、図２２に示されるように、組換えヒトＩＬ－１２で処理された試料は、平均１８０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有し、Ｔ１．０１で処理された試料は、平均２０５ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有し、Ｔ１．０２で処理された試料は、平均１３３ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有し、Ｔ１．０３で処理された試料は、平均８０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ－γを有することが判明した。対照的に、対照としてＴ１．１２で処理された試料はＩＦＮ－γを有しないことが判明した。これらの結果は、Ｔ１．０１、Ｔ１．０２及びＴ１．０３がヒトＮＫ細胞に作用してＩＦＮ－γ分泌を誘導することを示す。

【0399】

実施例４．大腸がん動物モデルにおける融合タンパク質の抗がん効果の評価
実施例４．１．ＦＡＰ発現線維芽細胞の同時注入による大腸がん動物モデルにおける抗がん効果の評価
融合タンパク質は、抗ＦＡＰ配列構造及びＩＬ－１２配列構造を有する二重抗体の形態であり、多くの腫瘍微小環境に存在する線維芽細胞においてＦＡＰが過剰発現されることを考慮し、マウス線維芽細胞株ＮＩＨ３Ｔ３細胞においてマウスＦＡＰを過剰発現させた後、マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６と１：１で同時注入された腫瘍動物モデルにおいて、腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0400】

マウス大腸がん細胞株であるＣＴ２６及びマウス線維芽細胞株であるＮＩＨ－３Ｔ３を使用して、ＦＡＰ発現腫瘍動物モデルを調製した。次に、ＮＩＨ－３Ｔ３をＦＡＰ発現細胞株として調製した。

【0401】

具体的には、培養中のＮＩＨ－３Ｔ３細胞及びＣＴ２６細胞を過剰発現するマウスＦＡＰを、それぞれ１×１０^６細胞／５０μｌの濃度でハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ、Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、細胞を１：１の比で混合し、次に、１ｃｃシリンジ（２５Ｇ）を用いて、６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹の皮下領域に各マウスあたり１００μｌを移植して、ＦＡＰ発現線維芽細胞を同時注射した動物モデルを得た。腫瘍サイズは、腫瘍の短軸及び長軸を測定することによりデジタルバーニアキャリパーを用いて測定し、腫瘍サイズは、（短軸、ｍｍ）^２×（長軸、ｍｍ）×０．５の算出式を用いて週２回測定した。

【0402】

次に、薬物の有効性評価では、腫瘍サイズが１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分けた。各実験群は１０匹からなり、対照として、５０μｇのＴ１．２４ｍの各１００μｌを３日間隔で３回腹腔内投与した。試験群では、腫瘍成長阻害能力を評価するために、１０μｇ及び５０μｇのＴ１．０２ｍ、及び５０μｇのＴ１．０１ｍの各１００μｌをそれぞれ、３日間隔で３回腹腔内投与した。

【0403】

結果として、図２３に示されるように、１４日目の腫瘍サイズを比較した場合、Ｔ１．０２ｍの１０μｇ及び５０μｇを投与された群は、対照としてＴ１．２４ｍを５０μｇを投与された群と比較して、それぞれ９３．２％及び９２．７％の優れた腫瘍成長阻害能力を有することが判明した。さらに、５０μｇのＴ１．０１ｍを投与された群は、５０μｇのＴ１．２４ｍを対照として投与された群と比較して９１．９％の腫瘍成長阻害を有することが観察された。

【0404】

さらに、図２４に示されるように、投与の２４日後に、対照と比べてＴ１．０１ｍ及びＴ１．０２ｍを投与された群で完全奏効の対象が観察された。

【0405】

これらの結果は、一実施形態の融合タンパク質が、大腸がん動物モデルにおいて優れた抗がん効果を有することを示す。

【0406】

実施例４．２．ＦＡＰ発現大腸がん動物モデルにおける抗がん効果の評価
大腸がんの場合、腫瘍細胞自体におけるＦＡＰの高発現を考慮し、抗がん効果を評価するために、マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６細胞においてマウスＦＡＰの過剰発現を誘導した腫瘍モデルにおいて腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0407】

マウスＦＡＰ発現腫瘍動物モデルを調製するために、マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６においてＦＡＰ過剰発現を誘導した。具体的には、培養中のＦＡＰ過剰発現ＣＴ２６細胞をハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ、Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、次に１ｃｃシリング（２５Ｇ）を用いて、６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスの左背側の皮下領域に各マウスあたり１００μｌの１×１０^６腫瘍細胞を移植して、マウスＦＡＰ発現大腸がん動物モデルを得た。腫瘍サイズは、腫瘍の短軸及び長軸を測定することによりデジタルバーニアキャリパーを用いて測定し、腫瘍サイズは、（短軸、ｍｍ）^２×（長軸、ｍｍ）×０．５の算出式を用いて週２回測定した。

【0408】

次に、薬物の有効性評価では、腫瘍の大きさが１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分けた。各実験群は８匹の動物からなり、対照として、５０μｇのＴ１．２４ｍの各１００μｌを３日間の間隔で４回腹腔内投与した。試験群では、１０μｇ及び１００μｇのＴ１．０１ｍの各１００μｌ、並びに２μｇ、１０μｇ及び１００μｇのＴ１．０２ｍをそれぞれ４回、３日間隔で腹腔内投与して、腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0409】

結果として、図２５に示されるように、１０μｇ及び１００μｇのＴ１．０１ｍを投与された群は、対照として５０μｇのＴ１．２４ｍを投与された群と比較して、腫瘍成長阻害能力がそれぞれ８４．９％及び８５．６％高いことが判明した。さらに、Ｔ１．２４ｍを対照として投与された群と比較して、Ｔ１．０２ｍを投与された群は、用量ごとに８０．１％、９０．５％及び８９．８％の高い腫瘍成長阻害能力を有することが観察された。

【0410】

さらに、投与３０日後には、各投与群において腫瘍成長阻害とともに完全奏効（ＣＲ）の対象が存在することが示され、投与に応じた体重変化は観察されなかった。これらの結果は、一実施形態の融合タンパク質が、大腸がん動物モデルにおいて優れた抗がん効果を有することを示す。

【0411】

実施例４．３．融合タンパク質による完全奏効マウスにおける再発固形がんの成長阻害の評価
融合タンパク質処置後に長期免疫応答を誘導することにより腫瘍再発を阻害し得るかどうかを評価するために、線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３及びＣＴ２６細胞を同時注入した腫瘍モデルにＴ１．０１ｍを投与することによって、完全奏効が達成された対象において腫瘍再攻撃を行った。処置歴のないＢＡＬＢ／ｃマウスを対照マウスとした。

【0412】

対照マウス、及びＴ１．０１ｍの投与により完全奏効が達成されたマウスの左側腹部に４Ｔ１細胞を皮下注射し、右側腹部にＣＴ２６細胞を皮下注射して、腫瘍再発モデルを得た。

【0413】

具体的には、ＦＡＰを過剰発現する線維芽細胞ＮＩＨ－３Ｔ３とＣＴ２６細胞とを同時注入されたモデルにおいて、Ｔ１．０１ｍの投与により完全奏効が示されたマウスにおいて腫瘍再発モデルが誘導された。ＣＴ２６細胞及び４Ｔ１細胞をそれぞれ１×１０^６細胞／１００μｌの濃度でハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ、Ｇｉｂｃｏ）に懸濁し、ＣＴ２６細胞を１ｃｃシリンジ（２５Ｇ）を用いてマウスの右側腹の皮下領域に移植した。腫瘍形成及び成長は、同じマウスの左側腹部への４Ｔ１細胞の皮下移植によって評価された。

【0414】

結果として、図２６及び２７に示されるように、移植された４Ｔ１腫瘍とＣＴ２６腫瘍はいずれも処置歴なしの対照マウスにおいて成長し、一方、Ｔ１．０１ｍの投与後に完全奏効が達成されたマウスにおいては、４Ｔ１腫瘍は成長したが、ＣＴ２６腫瘍の成長は阻害されたことが判明した。これらの結果は、一実施形態の融合タンパク質が腫瘍再発を阻害し得ることを示す。

【0415】

実施例４．４．融合タンパク質のＩＬ－１２アミノ酸変異による活性の減少の評価
ＩＬ－１２による免疫系の過剰な活性化によるインビボでの毒性を低減させるために、本発明者らは、ヘパリンに結合するアミノ酸配列の突然変異を含有するＩＬ－１２配列構造を用いて、ＩＬ－１２受容体への結合をブロックすることにより活性の減少を誘導し、これを腫瘍動物モデルによって同定した。

【0416】

抗ＦＡＰ抗体のうち、ヘパリン結合に関与するアミノ酸が突然変異したＴ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍをＴ１．０１ｍと比較し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を対照として使用した。次に、Ｔ１．０２ｍは、抗ＦＡＰ配列構造とともに、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（２つ）を含有するマウスＩＬ－１２配列構造を有する。Ｔ１．０３ｍは、抗ＦＡＰ配列構造とともに、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有するＩＬ－１２配列構造を有する融合タンパク質である。

【0417】

アミノ酸突然変異の有無及び程度に応じたＩＬ－１２活性の変化を評価するために、５×１０^５細胞／１００μｌの濃度でＰＢＳに再懸濁することにより、ＦＡＰ過剰発現マウス大腸がんＣＴ２６を調製し、５週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに細胞を移植することにより調製した腫瘍動物モデルにおいて腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0418】

具体的には、モデルにおける腫瘍サイズが１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分けた。各実験群は８匹の動物からなり、１００μｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を対照の尾静脈注射により１回投与し、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍの各々を１０μｇの用量で１回静脈内投与した。

【0419】

結果として、図２８に示されるように、Ｔ１．０１ｍ、Ｔ１．０２ｍ及びＴ１．０３ｍ投与群の全てが、投与後１５日で、対照と比較して優れた腫瘍成長阻害能力を有することが判明した。

【0420】

さらに、マウス抗ＦＡＰ配列とともに、ヘパリン結合に関与するアミノ酸のＩＬ－１２含有突然変異（４つ）を有するＴ１．０３ｍを投与された群では、Ｔ１．０１ｍが投与された群と比較して、腫瘍成長阻害能力が低減することが判明した。これらの結果は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含むマウスＩＬ－１２配列構造を有するＴ１．０３ｍを投与された群では、他の実験群及び対照と比較して、ＩＬ－１２活性が低減したことを示す。

【0421】

実施例４．５．ＩＬ－１２アミノ酸突然変異融合タンパク質の単回投与時の抗がん効果の評価
ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有する配列構造によりＩＬ－１２活性が低減した融合タンパク質の抗がん効果を評価するために、ＦＡＰ過剰発現マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６を移植した腫瘍モデルにおいて腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0422】

具体的には、６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスの右背側腹部に腫瘍細胞を移植し、動物モデルの腫瘍サイズが７０～１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分け、投与を行った。対照としてＰＢＳを投与し、試験群として１００μｌのＴ１．０３ｍを２μｇ、１０μｇ及び１００μｇの用量で１回静脈内投与した。腫瘍サイズは、実施例４．１と同じ方法で測定した。

【0423】

結果として、図２９に示されるように、２μｇ、１０μｇ及び１００μｇのＴ１．０３ｍを投与された群は、対照と比較して高い腫瘍成長阻害能力を有することが観察された。試験期間中、体重に変化は観察されなかった。これらの結果は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有する配列構造によりＩＬ－１２活性を低減させたＴ１．０３ｍが、ある種の濃度以上で優れた抗がん効果を有することを示す。

【0424】

実施例５．黒色腫動物モデルにおける融合タンパク質の抗がん効果の評価
融合タンパク質の免疫活性化による抗がん効果を同定するために、免疫細胞浸潤が少ないことが公知であるマウスメラノーマ細胞株Ｂ１６Ｆ１０にマウスＦＡＰを過剰発現させ、次にＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに移植し、腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0425】

具体的には、培養細胞をハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ、Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、次に、６週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの左側腹部の皮下領域に、各マウスあたり１００μｌの１×１０^６腫瘍細胞を移植した。

【0426】

次に、薬物の有効性評価では、腫瘍サイズが７０～１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分けた。対照としてＰＢＳを投与し、試験群としてＴ１．０３ｍを１０μｇ及び１００μｇの用量で１回静脈内投与した。

【0427】

結果として、図３０に示されるように、１０μｇ及び１００μｇのＴ１．０３ｍで投与された両群は、対照と比較して高い腫瘍成長阻害能力を有することが観察された。試験期間中、体重に変化は観察されなかった。これらの結果は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有する配列構造によりＩＬ－１２活性を低減させたＴ１．０３ｍが、黒色腫動物モデルにおいてさえ優れた抗がん効果を有することを示す。

【0428】

実施例６．肺がん動物モデルにおける融合タンパク質の抗がん効果の評価
実施例６．１．肺がん動物モデルにおけるＩＬ－１２アミノ酸突然変異融合タンパク質の抗がん効果の評価
腫瘍周囲の微小環境に存在する線維芽細胞にＦＡＰが過剰発現していることを考慮し、マウス線維芽細胞株ＮＩＨ－３Ｔ３にＦＡＰを過剰発現させ、次に、マウス肺がん細胞株ＬＬＣ１を１：１の比で同時注入し、腫瘍動物モデルを調製し、腫瘍成長阻害能力を評価した。

【0429】

具体的には、ＦＡＰを過剰発現するＮＩＨ－３Ｔ３細胞株及びＬＬＣ１細胞を、それぞれ１×１０^６細胞／５０μｌの濃度でハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ、Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、細胞を１：１の比で混合し、次に、各マウス１００μｌを１ｃｃシリンジ（２５Ｇ）を用いて６週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右側腹の皮下領域に移植した。

【0430】

次に、薬物の有効性評価では、腫瘍の大きさが７０～１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分けた。対照としてＰＢＳを投与し、試験群としてＴ１．０３ｍを１０μｇ及び１００μｇの用量で１回静脈内投与した。

【0431】

結果として、図３１に示されるように、１０μｇ又は１００μｇのＴ１．０３ｍで投与された両群は、対照と比較して優れた腫瘍成長阻害能力を有することが観察された。試験期間中、体重に変化は観察されなかった。これらの結果は、ヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異（４つ）を含有する配列構造によりＩＬ－１２活性を低減させたＴ１．０３ｍが腫瘍微小環境の標的因子を認識し、それにより肺がん動物モデルにおいてさえ優れた抗がん効果を有することを示す。

【0432】

実施例６．２．融合タンパク質の同時注入による肺がん動物モデルにおけるがん標的化効果の評価
抗ＦＡＰ配列構造とＩＬ－１２配列構造とがノブ－イン－ホール構造を形成する二重抗体型融合タンパク質のがん標的化による抗がん効果を比較するために、ＮＩＨ－３Ｔ３過剰発現ＦＡＰ、マウス線維芽細胞株、及びＬＬＣ１、マウス肺がん細胞株を１：１の比で同時注入した動物モデルにおいて、腫瘍成長阻害能力を同定した。

【0433】

具体的には、薬物の有効性評価では、腫瘍サイズが７０～１００ｍｍ^３に達した場合、マウスを無作為に群に分けた。対照として、ＰＢＳを週２回腹腔内投与した。Ｔ１．１６ｍ又はＴ１．１７ｍを単独投与した群、Ｔ１．１６ｍ及びＴ１．１７ｍを併用投与した群（Ｔ１．１６ｍ＋Ｔ１．１７ｍ）、及びＴ１．０３ｍを投与した群を試験群として用いて、腫瘍成長阻害能力を評価した。抗ＦＡＰ及びＩＬ－１２の二量体であるＴ１．１６ｍ及びＴ１．１７ｍをそれぞれ０．０１μｇの用量で週２回腹腔内投与し、単量体融合タンパク質であるＴ１．０３ｍを０．０２μｇの用量で週２回腹腔内投与して腫瘍成長阻害能力を観察した。

【0434】

結果として、図３２に示されるように、Ｔ１．０３ｍで投与された群は、対照と比較して、投与後１０日目の時点で優れた腫瘍成長阻害能力を有することが観察された。Ｔ１．１６ｍ又はＴ１．１７ｍを単独投与した群と各併用投与群を比較し、Ｔ１．０３ｍを単独で投与した群は、腫瘍成長阻害能力が極めて良好であることが見出された。これらの結果は、１つの実施形態の融合タンパク質の相乗効果が、ＦＡＰのみが標的とされる場合、又はがん標的をもたないＩＬ－１２と比較した場合と比較して有意であることを示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【配列表】

2025011228000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-10-17

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

融合タンパク質。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１６９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0169】

［ｓｅｑ４］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与する２５８番目及び２６３番目のアミノ酸であるリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異された配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧで構成される。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１７０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0170】

［ｓｅｑ５］は、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与する２５８番目、２６０番目、２６３番目及び２６４番目のアミノ酸であるリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異された配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５（アルファ）領域配列、リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、及びヒトＩｇＧ１ ＦｃホールＤＡＮＧで構成される。

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３３８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0338】

上記の表９に示されるように、ヒトＩＬ－１２ ｐ４０（ベータ）領域におけるヘパリン結合に関与するアミノ酸の突然変異数が増加するにつれて、プロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅカラム）を介して精製されたタンパク質の量が増加した。２５８番目及び２６３番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異した二特異性抗体Ｔ１．０２は、Ｔ１．０１と比較して生成が改善されたことが判明した。２５８番目、２６０番目、２６３番目及び２６４番目のアミノ酸のリシン（Ｋ）がアラニン（Ａ）に突然変異した二特異性抗体Ｔ１．０３は、Ｔ１．０１と比較して生成が約２．５倍改善されたことが判明した。

【外国語明細書】