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特開2025-143198粒子封入方法、マイクロウェルデバイス、ターゲット物質検出方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025143198
(43)【公開日】2025-10-01
(54)【発明の名称】粒子封入方法、マイクロウェルデバイス、ターゲット物質検出方法
(51)【国際特許分類】
G01N 1/00 20060101AFI20250924BHJP
G01N 37/00 20060101ALI20250924BHJP
G01N 35/02 20060101ALI20250924BHJP
【ＦＩ】
G01N1/00 101H
G01N37/00 102
G01N35/02 A
【審査請求】未請求
【請求項の数】24
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2025018577
(22)【出願日】2025-02-06
(31)【優先権主張番号】P 2024042796
(32)【優先日】2024-03-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】000001007
【氏名又は名称】キヤノン株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100094112
【弁理士】
【氏名又は名称】岡部 讓
(74)【代理人】
【識別番号】100101498
【弁理士】
【氏名又は名称】越智 隆夫
(74)【代理人】
【識別番号】100106183
【弁理士】
【氏名又は名称】吉澤 弘司
(74)【代理人】
【識別番号】100136799
【弁理士】
【氏名又は名称】本田 亜希
(72)【発明者】
【氏名】安部 滋幹
(72)【発明者】
【氏名】笹栗 大助
(72)【発明者】
【氏名】小河 賢史
(72)【発明者】
【氏名】馬場 響子
【テーマコード（参考）】
2G052
2G058
【Ｆターム（参考）】
2G052AB16
2G052AD09
2G052AD29
2G052CA04
2G052DA06
2G052ED05
2G052GA11
2G058CA01
2G058CC19
2G058GA02
(57)【要約】
【課題】粒子をマイクロウェルに均一に封入することができる簡便な粒子封入方法を提供する。
【解決手段】複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、を有し、前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする粒子封入方法。
【選択図】図２
【解決手段】複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、を有し、前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする粒子封入方法。
【選択図】図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、
前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、
前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、
前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、
前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、
を有し、
前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする粒子封入方法。
前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、
前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、
前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、
前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、
を有し、
前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする粒子封入方法。
【請求項2】
前記マイクロウェルデバイスは、隔壁部材をさらに有し、
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を、前記アレイを挟んで２つ有し、また、前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第１の方向に垂直な第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分をさらに有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、請求項１に記載の粒子封入方法。
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を、前記アレイを挟んで２つ有し、また、前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第１の方向に垂直な第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分をさらに有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、請求項１に記載の粒子封入方法。
【請求項3】
前記ワイピング部材は、前記除去工程において前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させる第１の面を有し、
前記導入工程は、前記第１の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、
請求項２に記載の粒子封入方法。
前記導入工程は、前記第１の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、
請求項２に記載の粒子封入方法。
【請求項4】
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、請求項３に記載の粒子封入方法。
【請求項5】
前記ワイピング部材は、前記封止工程において前記封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させる第２の面を有し、
前記封止工程は、前記第２の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記封止媒体を導入することを含む、請求項２に記載の粒子封入方法。
前記封止工程は、前記第２の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記封止媒体を導入することを含む、請求項２に記載の粒子封入方法。
【請求項6】
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、請求項５に記載の粒子封入方法。
【請求項7】
前記ワイピング部材は、前記除去工程において前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させる第１の面と、前記第１の面から前記第１の方向に延びて前記第１の方向に垂直な第２の方向への前記分散媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切りとを有し、
前記導入工程は、前記第１の仕切りと前記第１の面とで画定される領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
前記導入工程は、前記第１の仕切りと前記第１の面とで画定される領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
【請求項8】
前記ワイピング部材は、前記封止工程において前記封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させる第２の面を有し、また、前記ワイピング部材は、前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられており、
前記封止工程は、前記第２の仕切りと前記第２の面とで画定される領域に、前記封止媒体を導入することを含む、請求項７に記載の粒子封入方法。
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられており、
前記封止工程は、前記第２の仕切りと前記第２の面とで画定される領域に、前記封止媒体を導入することを含む、請求項７に記載の粒子封入方法。
【請求項9】
前記ベースプレートは、透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されており、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されており、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
【請求項10】
前記ベースプレートおよび前記ワイピング部材は、それぞれ透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、
前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有し、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、
前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有し、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
【請求項11】
前記封止工程は、前記ワイピング部材を、前記ベースプレートの上面に接した状態で前記第１の方向と逆の方向にスライドさせて前記封止媒体を前記マイクロウェルの上に移動させることを含む、請求項１に記載の粒子封入方法。
【請求項12】
前記マイクロウェルの前記第１の方向の最大長さ、前記第１の方向に垂直な第２の方向の最大長さ、および深さは、それぞれ前記検査粒子の平均粒子径の１．０倍以上２．０倍未満である、請求項１に記載の粒子封入方法。
【請求項13】
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備え、
前記マイクロウェルは、分散媒体に分散された検査粒子を収容するためのウェルであり、
前記ワイピング部材は、前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることが可能なように構成されている、ことを特徴とするマイクロウェルデバイス。
前記マイクロウェルは、分散媒体に分散された検査粒子を収容するためのウェルであり、
前記ワイピング部材は、前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることが可能なように構成されている、ことを特徴とするマイクロウェルデバイス。
【請求項14】
隔壁部材をさらに有し、
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を少なくとも有することで、前記ベースプレートの上面において前記第１の方向と垂直な第２の方向に向かう前記分散媒体の流れを妨げるように構成されている、請求項１３に記載のマイクロウェルデバイス。
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を少なくとも有することで、前記ベースプレートの上面において前記第１の方向と垂直な第２の方向に向かう前記分散媒体の流れを妨げるように構成されている、請求項１３に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項15】
前記隔壁部材は、前記アレイを挟んで設けられた２つの前記第１の部分と、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分とを有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、請求項１４に記載のマイクロウェルデバイス。
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、請求項１４に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項16】
前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの一方の端部同士を接続する前記第２の部分と、前記２つの第１の部分のそれぞれの他方の端部同士を接続する前記第２の部分との２つの前記第２の部分を有する、請求項１５に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項17】
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、請求項１５に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項18】
前記ワイピング部材は、前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させるように構成された第１の面と、前記第１の面から前記第１の方向に延びて前記第１の方向に垂直な第２の方向への前記分散媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切りとを有する、請求項１３に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項19】
前記ワイピング部材は、前記マイクロウェルを封止するための封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させるように構成された第２の面を有し、また、前記ワイピング部材は、
前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられている、請求項１８に記載のマイクロウェルデバイス。
前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられている、請求項１８に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項20】
前記ベースプレートは、透光性を有する材料からなる、請求項１３に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項21】
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されている、請求項２０に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項22】
前記ワイピング部材は、透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、
前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有する、請求項２０に記載のマイクロウェルデバイス。
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、
前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有する、請求項２０に記載のマイクロウェルデバイス。
【請求項23】
ターゲット物質を特異的に捕捉する前記検査粒子と、前記ターゲット物質とを反応させる反応工程と、
前記反応工程の後に、前記検査粒子を用いて請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の粒子封入方法を行う粒子封入工程と、
前記粒子封入工程の後に、前記マイクロウェルの各々に収容された前記検査粒子のうちの前記ターゲット物質を捕捉した前記検査粒子を検出する検出工程と、
を有する、ことを特徴とするターゲット物質検出方法。
前記反応工程の後に、前記検査粒子を用いて請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の粒子封入方法を行う粒子封入工程と、
前記粒子封入工程の後に、前記マイクロウェルの各々に収容された前記検査粒子のうちの前記ターゲット物質を捕捉した前記検査粒子を検出する検出工程と、
を有する、ことを特徴とするターゲット物質検出方法。
【請求項24】
前記検出工程は、酵素の活性により発生した蛍光を検出することを含む、請求項２３に記載のターゲット物質検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、粒子封入方法、マイクロウェルデバイス、およびターゲット物質検出方法に関する。
【背景技術】
【0002】
タンパク質などの生体分子を識別できる形態にしてから観察することにより種々の測定を行う方法として、一分子測定という手法が知られており、この一分子測定を行うための手法がいくつか知られている。
【0003】
特許文献１には、マイクロウェルアレイ上に隔壁と天板とを設けて流路を形成し、さらに天板に注入口と吹き出し口とを設けた構成を用いてマイクロウェルに粒子を封入する技術が開示されている。特許文献１では、マイクロウェルに粒子を入れる際には、注入口から流路を使ってターゲット物質を捕捉した粒子を含む親水性液体媒体を導入している。また、マイクロウェルを封止する際には、同様に注入口から流路を使って疎水性液体媒体を導入し、不要となった余剰の親水性液体媒体を押し出している。
【0004】
また非特許文献１には、マイクロウェルを覆うように配置した粘着テープの上から、ローラーを押し付けながら複数回転がすことでマイクロウェルに粒子を封入する技術が開示されている。非特許文献１では、マイクロウェルアレイ上にカプトンテープで隔壁を設けて、マイクロウェルに粒子を含んだ親水性液体媒体を直接導入している。その後、隔壁を橋渡しするように粘着テープを設置し、その上からローラーを複数回押し付けつつ転がすことで、不要となった余剰の親水性液体媒体を押し出してマイクロウェルを封止している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際公開第２０１２／１２１３１０号
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｈ．Ｙａｇｉｎｕｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ ｏｎ ａ Ｃｈｉｐ，２０２２，２２， ２００１－２０１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
特許文献１および非特許文献１に記載の技術では、いずれもマイクロウェルに均一に粒子を封入することが難しいという問題があった。
【0008】
したがって本発明の目的は、粒子をマイクロウェルに均一に封入することができる簡便な粒子封入方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0009】
上記課題を解決するための本発明の一観点による粒子封入方法は、
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、
前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、
前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、
前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、
前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、
を有し、
前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする。
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、
前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、
前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、
前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、
前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、
を有し、
前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする。
【0010】
また、本発明の別の観点によるマイクロウェルデバイスは、
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備え、
前記マイクロウェルは、分散媒体に分散された検査粒子を収容するためのウェルであり、
前記ワイピング部材は、前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることが可能なように構成されている、ことを特徴とする。
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備え、
前記マイクロウェルは、分散媒体に分散された検査粒子を収容するためのウェルであり、
前記ワイピング部材は、前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることが可能なように構成されている、ことを特徴とする。
【0011】
また、本発明の別の観点によるターゲット物質検出方法は、
ターゲット物質を特異的に捕捉する前記検査粒子と、前記ターゲット物質とを反応させる反応工程と、
前記反応工程の後に、前記検査粒子を用いて上記の本発明の一観点による粒子封入方法を行う粒子封入工程と、
前記粒子封入工程の後に、前記マイクロウェルの各々に収容された前記検査粒子のうちの前記ターゲット物質を捕捉した前記検査粒子を検出する検出工程と、
を有する、ことを特徴とする。
ターゲット物質を特異的に捕捉する前記検査粒子と、前記ターゲット物質とを反応させる反応工程と、
前記反応工程の後に、前記検査粒子を用いて上記の本発明の一観点による粒子封入方法を行う粒子封入工程と、
前記粒子封入工程の後に、前記マイクロウェルの各々に収容された前記検査粒子のうちの前記ターゲット物質を捕捉した前記検査粒子を検出する検出工程と、
を有する、ことを特徴とする。
【発明の効果】
【0012】
本発明によれば、粒子をマイクロウェルに均一に封入することができる簡便な粒子封入方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す分解斜視図である。
【図2】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す斜視図である。
【図3】粒子封入方法の各工程を説明するための模式図である。
【図4】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す分解斜視図である。
【図5】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す斜視図である。
【図6】粒子封入方法の各工程を説明するための模式図である。
【図7】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す斜視図である。
【図8】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す斜視図である。
【図9】マイクロウェルデバイスの構成の一例を示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【0014】
以下、好適な実施の形態を挙げて、本発明を詳細に説明する。
特許文献１の技術では、マイクロウェルに均一に粒子を充填するために粒子を含んだ親水性液体媒体を注入する速度を的確に制御する必要がある。また、疎水性液体媒体を注入する際には、注入口から連続的に疎水性液体媒体を導入するため、疎水性液体媒体に気泡が混入する場合があり、さらに親水性液体媒体全体を均一に押し出して均一に封止することが難しいという問題があった。特にマイクロウェルアレイが大面積の場合では、幅の広い流路に均一に液体を押し流すことはさらに難しくなる。
特許文献１の技術では、マイクロウェルに均一に粒子を充填するために粒子を含んだ親水性液体媒体を注入する速度を的確に制御する必要がある。また、疎水性液体媒体を注入する際には、注入口から連続的に疎水性液体媒体を導入するため、疎水性液体媒体に気泡が混入する場合があり、さらに親水性液体媒体全体を均一に押し出して均一に封止することが難しいという問題があった。特にマイクロウェルアレイが大面積の場合では、幅の広い流路に均一に液体を押し流すことはさらに難しくなる。
【0015】
また、非特許文献１に記載の技術は、専門の職人が行ういわゆるウィンドウフィルムの施工の技術を適用する必要があり、粘着テープに気泡が残らないようにマイクロウェルを均一に封止することが難しい。さらに、マイクロウェルに入らなかった粒子を除去する工程を有しなく、マイクロウェルに入らなかった粒子がとどまった状態で粘着テープにより封止されることになる。そのため、検出のための有効な観察範囲を確保することが難しくなる場合がある。
【0016】
つまり、特許文献１および非特許文献１に記載の技術では、適切に行うためにいずれも相応の手技が必要となる。手技が足りないと、マイクロウェルに封入される粒子にムラが生じたり、粒子が封入されたマイクロウェルの数が少なくなったりする場合や、封止の際に気泡が混入する場合がある。その結果、測定時のシグナルが少なくなったり、ノイズが大きくなったりし、最終的に測定に時間がかかったりする場合があった。また、押し出された余剰の親水性液体媒体がマイクロウェルデバイスを備えた検査装置を汚損する可能性もあり、ユーザーによるメンテナンスの手間にもつながる。
【0017】
本願発明者らは、先行技術における課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、以下に詳細に説明する本発明に係る粒子封入方法を成すに至った。
本発明に係る粒子封入方法は、準備工程、導入工程、充填工程、除去工程、および封止工程を有する。準備工程は、複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する工程である。また、導入工程は、上記アレイに検査粒子を含む分散媒体を導入する工程である。また、充填工程は、上記マイクロウェルに上記検査粒子を充填する工程である。また、除去工程は、上記マイクロウェルの外にある上記分散媒体を除去する工程である。また、封止工程は、上記マイクロウェルを封止媒体で封止する工程である。さらに、上記除去工程は、上記ワイピング部材を上記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む。
本発明に係る粒子封入方法は、準備工程、導入工程、充填工程、除去工程、および封止工程を有する。準備工程は、複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する工程である。また、導入工程は、上記アレイに検査粒子を含む分散媒体を導入する工程である。また、充填工程は、上記マイクロウェルに上記検査粒子を充填する工程である。また、除去工程は、上記マイクロウェルの外にある上記分散媒体を除去する工程である。また、封止工程は、上記マイクロウェルを封止媒体で封止する工程である。さらに、上記除去工程は、上記ワイピング部材を上記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む。
【0018】
本発明に係る粒子封入方法により、測定までの時間を短くし、測定時のシグナルを大きくし、さらに検査装置が汚損される可能性も低減することが可能となる。
【0019】
以下、図面を参照しつつ、本発明の例示的な実施形態を用いて本発明の各構成について詳細に説明する。なお、図面において、同様の要素または対応する要素には同一の符号を付し、その説明を省略または簡略化することがある。
【0020】
＜マイクロウェルデバイス＞
まず、本発明に係る粒子封入方法に用いることができるマイクロウェルデバイスの具体的な構成例を図１、２、４、５、７乃至９に示す。図２、５、７乃至９は、マイクロウェルデバイス１０乃至５０の全体構成を示す斜視図である。また、図１は、図２に示すマイクロウェルデバイス１０の分解斜視図であり、図４は、図５に示すマイクロウェルデバイス２０の分解斜視図である。
まず、本発明に係る粒子封入方法に用いることができるマイクロウェルデバイスの具体的な構成例を図１、２、４、５、７乃至９に示す。図２、５、７乃至９は、マイクロウェルデバイス１０乃至５０の全体構成を示す斜視図である。また、図１は、図２に示すマイクロウェルデバイス１０の分解斜視図であり、図４は、図５に示すマイクロウェルデバイス２０の分解斜視図である。
【0021】
本発明に係るマイクロウェルデバイスは、複数のマイクロウェル１３からなるアレイ１４が上面１１ａに形成されたベースプレート１１と、ワイピング部材１２とを備えている。
【0022】
マイクロウェル１３は、分散媒体１８ｂに分散された検査粒子１８ａを収容するためのウェルである。なお、分散媒体１８ｂに分散された検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に収容する具体的な方法については、図３および図６を参照しつつ後述する。
【0023】
ワイピング部材１２は、ベースプレート１１の上面１１ａに接した状態で第１の方向Ａにスライドさせることで、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させることが可能なように構成されている。
【0024】
本発明に係るマイクロウェルデバイスは、隔壁部材１５をさらに有することが好ましい。ここで隔壁部材１５は、ベースプレート１１の上面１１ａに接して設けることが可能なように構成されており、ベースプレート１１の上面１１ａのアレイ１４の外側において第１の方向Ａに延在する第１の部分１５１を少なくとも有する。これにより隔壁部材１５は、ベースプレート１１の上面１１ａにおいて第１の方向Ａと垂直な第２の方向Ｂに向かう分散媒体１８ｂの流れを妨げるように構成されている。
【0025】
隔壁部材１５は、アレイ１４を挟んで設けられた２つの第１の部分１５１と、２つの第１の部分１５１のそれぞれの端部同士を接続し、第２の方向Ｂに延在する少なくとも１つの第２の部分１５２とを有することが好ましい。そしてさらに、ワイピング部材１２は、第２の部分１５２とともにアレイ１４を挟むことが可能なように２つの第１の部分１５１の間に設置された状態で用いられるように構成されていることが好ましい。これにより、具体例については後述するが、ワイピング部材１２が有する第１の面１２ａと、第２の部分１５２とで挟まれた第１の領域１６に、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入することができる。あるいは、ワイピング部材１２が有する第２の面１２ｂと、第２の部分１５２とで挟まれた第２の領域１７に、封止媒体１９を導入することができる。ここで、ワイピング部材１２が有する第１の面１２ａは、除去工程において分散媒体１８ｂと当接して分散媒体１８ｂを移動させるように構成された面である。また、ワイピング部材１２が有する第２の面１２ｂは、封止工程において封止媒体１９と当接して封止媒体１９を移動させるように構成された面である。そして、ワイピング部材１２を用いて分散媒体１８ｂあるいは封止媒体１９を移動させた際に、アレイ１４の上を通り過ぎた分散媒体１８ｂあるいは封止媒体１９の余剰分の流れを第２の部分１５２により堰き止めることができる。
【0026】
すなわち、マイクロウェルデバイスが、上記の構成を有する隔壁部材１５を有することで、マイクロウェルデバイスの外に流れ出た余剰の分散媒体１８ｂあるいは封止媒体１９により検査装置が汚損されることを効果的に防ぐことができる。また、マイクロウェルデバイスが隔壁部材１５を有することで、アレイ１４上に導入した分散媒体１８ｂが、アレイ１４の外の領域に流出することを抑制でき、マイクロウェル１３への検査粒子１８ａの充填効率を向上させることもできる。
【0027】
隔壁部材１５は、２つの第１の部分１５１のそれぞれの一方の端部同士を接続する第２の部分１５２と、２つの第１の部分１５１のそれぞれの他方の端部同士を接続する第２の部分１５２との２つの第２の部分１５２を有することが好ましい。これにより、分散媒体１８ｂおよび封止媒体１９の両方の押し出し方向の流れをともに堰き止めることができる。
【0028】
図１および図２に示すマイクロウェルデバイス１０では、ワイピング部材１２と隔壁部材１５とが、互いに独立しており、相対的な位置が可変なように構成されている。一方、ワイピング部材１２と隔壁部材１５とは、図４、５、７乃至９に示すマイクロウェルデバイス２０乃至５０のように、１体として構成されていてもよい。
【0029】
また、図１、２、４、５、８、９に示すマイクロウェルデバイス１０、２０、４０、５０では、ベースプレート１１と隔壁部材１５とが、ベースプレート１１および隔壁部材１５のそれぞれの輪郭により形成される矩形の平面同士で互いに接する構成となっている。
しかし本発明に係るマイクロウェルデバイスの全体的な形状はこれに限定されるものではなく、例えば図７に示すマイクロウェルデバイス３０のようにディスク形状であってもよい。図７に示すマイクロウェルデバイス３０では、軸３１を中心としてワイピング部材１２がベースプレート１１に対して相対的に回転することで、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させることができる。すなわち、図７に示すマイクロウェルデバイス３０においては、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させる際にワイピング部材１２が回転する方向が、第１の方向Ａとなる。なお、本発明において、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させる際にワイピング部材１２をスライドさせる第１の方向Ａの軌跡が直線的でない場合、第１の方向Ａが描く軌跡の接線に垂直な方向を第２の方向Ｂとする。すなわち、図７に示すマイクロウェルデバイス３０のように、第１の方向Ａが描く軌跡が軸３１を中心とした円弧である場合は、図７中に示すように軸３１を中心とした円の半径方向が第２の方向Ｂとなる。
しかし本発明に係るマイクロウェルデバイスの全体的な形状はこれに限定されるものではなく、例えば図７に示すマイクロウェルデバイス３０のようにディスク形状であってもよい。図７に示すマイクロウェルデバイス３０では、軸３１を中心としてワイピング部材１２がベースプレート１１に対して相対的に回転することで、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させることができる。すなわち、図７に示すマイクロウェルデバイス３０においては、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させる際にワイピング部材１２が回転する方向が、第１の方向Ａとなる。なお、本発明において、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４の外へ移動させる際にワイピング部材１２をスライドさせる第１の方向Ａの軌跡が直線的でない場合、第１の方向Ａが描く軌跡の接線に垂直な方向を第２の方向Ｂとする。すなわち、図７に示すマイクロウェルデバイス３０のように、第１の方向Ａが描く軌跡が軸３１を中心とした円弧である場合は、図７中に示すように軸３１を中心とした円の半径方向が第２の方向Ｂとなる。
【0030】
＜粒子封入方法＞
続いて、上記で説明したマイクロウェルデバイスを用いた本発明に係る粒子封入方法の各工程について、図３および図６を参照しつつ説明する。図３は、図１および図２に示すマイクロウェルデバイス１０を用いた粒子封入方法の各工程における各要素の配置を示す第１の方向Ａに沿った断面模式図である。また、図６は、図４および図５に示すマイクロウェルデバイス２０を用いた粒子封入方法の各工程における各要素の配置を示す第１の方向Ａに沿った断面模式図である。なお、図３および図６では、ワイピング部材１２ならびにこれによって移動される分散媒体１８ｂおよび封止媒体１９等を明瞭なものとするために隔壁部材１５が有する第１の部分１５１の記載を省略している。
続いて、上記で説明したマイクロウェルデバイスを用いた本発明に係る粒子封入方法の各工程について、図３および図６を参照しつつ説明する。図３は、図１および図２に示すマイクロウェルデバイス１０を用いた粒子封入方法の各工程における各要素の配置を示す第１の方向Ａに沿った断面模式図である。また、図６は、図４および図５に示すマイクロウェルデバイス２０を用いた粒子封入方法の各工程における各要素の配置を示す第１の方向Ａに沿った断面模式図である。なお、図３および図６では、ワイピング部材１２ならびにこれによって移動される分散媒体１８ｂおよび封止媒体１９等を明瞭なものとするために隔壁部材１５が有する第１の部分１５１の記載を省略している。
【0031】
【0032】
【0033】
（導入工程）
続いて、導入工程において、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂをアレイ１４に導入する。
アレイ１４への検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂの導入は、例えばピペットのようなもので直接検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂをアレイ１４上に滴下することで達成されてもよい。
あるいは、まず、ベースプレート１１の上面１１ａにおけるアレイ１４が形成されていない領域に検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入する。続いて、ワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに接した状態でスライドさせながら検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂをアレイ１４上に移動させることで達成されてもよい。
続いて、導入工程において、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂをアレイ１４に導入する。
アレイ１４への検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂの導入は、例えばピペットのようなもので直接検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂをアレイ１４上に滴下することで達成されてもよい。
あるいは、まず、ベースプレート１１の上面１１ａにおけるアレイ１４が形成されていない領域に検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入する。続いて、ワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに接した状態でスライドさせながら検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂをアレイ１４上に移動させることで達成されてもよい。
【0034】
具体的には例えば、準備工程において図１および図２に示すマイクロウェルデバイス１０を準備した場合には、まず図３（ａ）に示すように、ワイピング部材１２をアレイ１４から十分に離れた位置に置く。次に、図３（ｂ）に示すように、ワイピング部材１２が有する第１の面１２ａと、第２の部分１５２とで挟まれた第１の領域１６に、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入する。この時、検査粒子１８ａを含む分散溶媒１８ｂが導入されるベースプレート１１の上面１１ａ上の位置は、アレイ１４と第１の面１２ａとの間となるようにする。その後、ワイピング部材１２がベースプレート１１の上面１１ａに接した状態を維持しつつ、ワイピング部材１２をアレイ１４に向けて第１の方向Ａにスライドさせ、図３（ｃ）に示すように検査粒子１８ａを含む分散溶媒１８ｂをアレイ１４上に導入する。
【0035】
導入工程において、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂは、アレイ１４全体を覆う程度に導入されることが好ましい。アレイ１４全体を覆う程度に検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入する際には、ベースプレート１１上のアレイ１４以外の領域にも検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂが流れ広がることがある。そして、これによりマイクロウェル１３への検査粒子１８ａの充填効率が低くなる場合や、検査装置の汚損やコンタミを引き起こす場合がある。そのため、ベースプレート１１には、例えば隔壁や溝を設けたり、あるいはその代わりに同様の機能を付与するために隔壁や溝にあたる領域を特異的に親水性にしたり疎水性にすることが好ましい。
【0036】
本発明に係る粒子封入方法では、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂが、流れではなく、１つの大きな塊となってアレイ１４に導入される。また、その操作もアレイ１４上へのただの滴下であったり、ベースプレート１１に検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入した後にワイピング部材１２をスライドさせるだけであり、簡便にムラなく検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に導くことができる。
【0037】
（充填工程）
続いて、充填工程において、マイクロウェル１３に検査粒子１８ａを充填する。具体的には、図３（ｄ）に示すように、自然沈降や磁力の力を借りるなどして、分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に収納する。
続いて、充填工程において、マイクロウェル１３に検査粒子１８ａを充填する。具体的には、図３（ｄ）に示すように、自然沈降や磁力の力を借りるなどして、分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に収納する。
【0038】
アレイ１４上に充填された分散媒体１８ｂが含む検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に充填するためには、検査粒子１８ａの自重を利用した自然沈降で達成することができるが、より充填率を上げるために振動や遠心力などを併用してもよい。
【0039】
検査粒子１８ａが磁性体である場合には、磁場を利用することもできる。ただし磁性体である検査粒子１８ａの磁場応答性が高過ぎる場合や、印加する磁場の強度が大きすぎる場合、磁場を印加する時間が長すぎる場合などには、磁場により検査粒子１８ａが磁力線に沿って高さ方向に並ぶことがある。その結果、検査粒子１８ａの充填率が下がる懸念がある。そのため、印加する磁場の強度と印加時間は最適化する必要がある。
また、磁場により検査粒子１８ａが磁力線に沿って高さ方向に一度粒子が並んだ場合でも、印加する磁場を弱める、あるいは磁場をかけない時間を設けることにより、検査粒子１８ａをほぐして充填率の低下を防ぐことが好ましい。
また、磁場により検査粒子１８ａが磁力線に沿って高さ方向に一度粒子が並んだ場合でも、印加する磁場を弱める、あるいは磁場をかけない時間を設けることにより、検査粒子１８ａをほぐして充填率の低下を防ぐことが好ましい。
【0040】
また、より効率的に検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に充填するために、脱気操作を併用することが好ましい。脱気操作によりマイクロウェル１３内の空気と検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂとの気液交換を強制的に行い、マイクロウェル１３内に検査粒子１８ａが効率的に充填される環境を作ることが可能となる。脱気する方法としては、例えば、アレイ１４を有するベースプレート１１あるいはマイクロウェルデバイス１０全体を減圧環境下において放置する方法等を好適に用いることができる。具体的には例えば、約０．１気圧の減圧デシケータ内にアレイ１４を有するベースプレート１１あるいはマイクロウェルデバイス１０全体を約３０秒放置する方法などが挙げられる。
【0041】
本発明に係る粒子封入方法によりマイクロウェル１３に封入した検査粒子１８ａを検査に供する場合に検査精度を向上させる観点から、充填工程においては、それぞれのマイクロウェル１３に検査粒子１８ａが平均的に１つ充填されることが好ましい。
【0042】
（除去工程）
次に、除去工程において、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂを除去する。
具体的には、ワイピング部材１２が分散媒体１８ｂと当接する面である第１の面１２ａがアレイ１４の上を通過するようにワイピング部材１２をベースプレート１１に当接させたまま再び第１の方向Ａにスライドさせる。これにより図３（ｅ）に示すように、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４から十分離れた位置まで移動させる。
次に、除去工程において、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂを除去する。
具体的には、ワイピング部材１２が分散媒体１８ｂと当接する面である第１の面１２ａがアレイ１４の上を通過するようにワイピング部材１２をベースプレート１１に当接させたまま再び第１の方向Ａにスライドさせる。これにより図３（ｅ）に示すように、マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂをアレイ１４から十分離れた位置まで移動させる。
【0043】
アレイ１４に導入された分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａが全てマイクロウェル１３に充填されなかった場合、アレイ１４上には検査粒子１８ａと検査粒子１８ａの分散媒である分散媒体１８ｂとが存在する。また、アレイ１４に導入された分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａが全てマイクロウェル１３に充填された場合、アレイ１４上には検査粒子１８ａの分散媒である分散媒体１８ｂが存在する。マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂとはこの両者のことを指す。
【0044】
マイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂは、ベースプレート１１上でワイピング部材１２をスライドさせながら、ベースプレート１１のアレイ１４が形成されていない領域に移動させることで除去される。このとき、分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａがアレイ１４中のマイクロウェル１３がないベースプレート１１上に沈降している場合に、除去工程で検査粒子１８ａが移動されてマイクロウェル１３に入り込むことが期待され、充填率を向上させることもできる。
【0045】
また、脱気操作を併用している場合には、除去工程でマイクロウェル１３内から浮上してきた微細な気泡も一緒に除去される。従来技術においては、脱気操作をして微細な気泡が存在する状態で、フローセルを用いて液状の封止媒体により検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを押し流す手法が用いられる場合がある。この場合には、気泡を避けるような流れができて分散媒体１８ｂが均一に流し出されず、結果として均一にムラなくマイクロウェル１３が封止されない場合がある。また、気泡を押し出すために液状の封止媒体を勢いよく流したり、多量に流したりすると、マイクロウェルデバイス１０の外に出た分散媒体１８ｂあるいは封止媒体１９により検査装置が汚染される懸念もあった。
【0046】
しかしながら、本発明に係る粒子封入方法では、ワイピング部材１２をスライドすることで分散媒体１８ｂが流れではなく、１つの大きな塊となってアレイ１４上から除去される。また、その操作も、アレイ１４に分散媒体１８ｂを導入して検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に充填した後に、ワイピング部材１２をスライドさせるだけであり、簡便にムラなく分散媒体１８ｂを除去することができる。また、マイクロウェルを封止する際に気泡が混入することを抑制することも可能となる。
【0047】
検査粒子１８ａを、磁場を用いて充填させた場合、先述したように検査粒子１８ａの磁場応答性や印加する磁場の強度あるいは時間の長さによっては、検査粒子１８ａが磁力線に沿って高さ方向に並ぶことがある。この状態でスライド操作を行うと、検査粒子１８ａがカバープレートとベースプレートとの間に入り込みやすくなり、液体媒体の除去工程や後述する封止工程に支障を及ぼす懸念がある。そのため、スライド操作の前に印加する磁場を弱める、あるいは磁場をかけないことが好ましい。
【0048】
（封止工程）
続いて封止工程において、マイクロウェル１３を封止媒体１９で封止する。具体的には、まず図３（ｅ）に示すように、ワイピング部材１２が有する第２の面１２ｂと、隔壁部材１５が有する第２の部分１５２とで挟まれた第２の領域１７に、封止媒体１９を導入する。この時、封止媒体１９が導入されるベースプレート１１の上面１１ａ上の位置は、アレイ１４と第２の面１２ｂとの間となるようにする。続いてワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに接した状態で第１の方向Ａとは逆の方向、つまりアレイ１４に向かってスライドさせて、図３（ｆ）に示すように封止媒体１９をマイクロウェル１３の上に移動させて封止する。つまりマイクロウェルデバイス１０で示す例では、ワイピング部材１２が分散媒体１８ｂと当接する第１の面１２ａと、ワイピング部材１２が封止媒体１９と接する第２の面１２ｂとは互いに異なる面である。
続いて封止工程において、マイクロウェル１３を封止媒体１９で封止する。具体的には、まず図３（ｅ）に示すように、ワイピング部材１２が有する第２の面１２ｂと、隔壁部材１５が有する第２の部分１５２とで挟まれた第２の領域１７に、封止媒体１９を導入する。この時、封止媒体１９が導入されるベースプレート１１の上面１１ａ上の位置は、アレイ１４と第２の面１２ｂとの間となるようにする。続いてワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに接した状態で第１の方向Ａとは逆の方向、つまりアレイ１４に向かってスライドさせて、図３（ｆ）に示すように封止媒体１９をマイクロウェル１３の上に移動させて封止する。つまりマイクロウェルデバイス１０で示す例では、ワイピング部材１２が分散媒体１８ｂと当接する第１の面１２ａと、ワイピング部材１２が封止媒体１９と接する第２の面１２ｂとは互いに異なる面である。
【0049】
封止工程では、例えば封止媒体１９が液体であれば、まずピペットのようなもので封止媒体１９をアレイ１４上に直接滴下してもよい。また、上述したようにアレイ１４が形成されていないベースプレート１１上の領域に導入した後で封止媒体１９をワイピング部材１２によりアレイ１４上に移動させてもよい。これによりマイクロウェル１３上に封止媒体１９の層が形成され、マイクロウェル１３が封止される。その後、図３（ｇ）に示すように、さらにワイピング部材１２を緩やかにスライドさせてアレイ１４上に導入された封止媒体１９をベースプレート１１上のアレイ１４が形成されていない領域に移動させる。
このとき、ワイピング部材１２をベースプレート１１に対して押し付け過ぎないようにする。これにより、マイクロウェル１３上に封止媒体１９の薄膜が形成され、マイクロウェル１３を封止することができる。
このとき、ワイピング部材１２をベースプレート１１に対して押し付け過ぎないようにする。これにより、マイクロウェル１３上に封止媒体１９の薄膜が形成され、マイクロウェル１３を封止することができる。
【0050】
封止媒体１９がカバーガラスのような固体である場合には、封止媒体１９をアレイ１４上に被せることでもマイクロウェル１３を封止することができる。この時、封止媒体１９は、アレイ１４の上方から降下させるように被せても良いし、ベースプレート上をスライドさせることでアレイ１４の上に移動させて被せても良い。
【0051】
また、封止工程は、一度液体の封止媒体１９で封止した後に固体の封止媒体１９で再度封止するように２つの操作を組み合わせてもよい。
【0052】
【0053】
【0054】
（導入工程）
続いて、まず図６（ａ）に示すように、第２の部分とワイピング部材１２の第１の面１２ａとで挟まれた第１の領域１６がアレイ１４と重ならないようにワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに設置する。次に、図６（ｂ）に示すように、第１の領域１６に、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入する。続いて、図６（ｃ）に示すように、ワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに接した状態を維持しつつ第１の方向Ａにスライドさせて第１の領域１６がアレイ１４を覆うようにし、アレイ１４に分散媒体１８ｂを導入する。
続いて、まず図６（ａ）に示すように、第２の部分とワイピング部材１２の第１の面１２ａとで挟まれた第１の領域１６がアレイ１４と重ならないようにワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに設置する。次に、図６（ｂ）に示すように、第１の領域１６に、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入する。続いて、図６（ｃ）に示すように、ワイピング部材１２をベースプレート１１の上面１１ａに接した状態を維持しつつ第１の方向Ａにスライドさせて第１の領域１６がアレイ１４を覆うようにし、アレイ１４に分散媒体１８ｂを導入する。
【0055】
（充填工程）
次に、図６（ｄ）に示すように、自然沈降や磁力の力を借りるなどして、分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に収納する。
次に、図６（ｄ）に示すように、自然沈降や磁力の力を借りるなどして、分散媒体１８ｂ中の検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に収納する。
【0056】
（除去工程）
図６（ｃ）あるいは図６（ｄ）に示すように、第１の領域１６がアレイ１４を覆うようにワイピング部材１２が配置された状態で、第２の領域１７に封止媒体１９を導入する。
そして、再びワイピング部材１２をベースプレート１１に接したまま第１の方向Ａにスライドさせて、図６（ｅ）に示すように第１の領域１６に導入された分散媒体１８ｂをベースプレート１１上のアレイ１４が形成されていない領域に移動させる。これによりマイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂが除去される。このとき同時に第２の領域１７に導入された封止媒体１９も移動される（図６（ｅ））。
図６（ｃ）あるいは図６（ｄ）に示すように、第１の領域１６がアレイ１４を覆うようにワイピング部材１２が配置された状態で、第２の領域１７に封止媒体１９を導入する。
そして、再びワイピング部材１２をベースプレート１１に接したまま第１の方向Ａにスライドさせて、図６（ｅ）に示すように第１の領域１６に導入された分散媒体１８ｂをベースプレート１１上のアレイ１４が形成されていない領域に移動させる。これによりマイクロウェル１３の外にある分散媒体１８ｂが除去される。このとき同時に第２の領域１７に導入された封止媒体１９も移動される（図６（ｅ））。
【0057】
この段階でワイピング部材１２が封止媒体１９としても機能してマイクロウェル１３が封止されていれば、除去工程と封止工程とが同時になされたことになり、封止された検査粒子１８ａを検査あるいは測定に供することも可能である。
【0058】
（封止工程）
図６（ｅ）に示す状態からそのままワイピング部材１２をベースプレート１１に接した状態を維持しつつ第１の方向Ａにスライドさせ続ける。そして、図６（ｆ）に示すように第２の領域１７に導入された封止媒体１９がアレイ１４を覆うようにワイピング部材１２を配置させる。これにより、マイクロウェル１３を封止媒体１９で封止することができる（図６（ｆ））。
図６（ｅ）に示す状態からそのままワイピング部材１２をベースプレート１１に接した状態を維持しつつ第１の方向Ａにスライドさせ続ける。そして、図６（ｆ）に示すように第２の領域１７に導入された封止媒体１９がアレイ１４を覆うようにワイピング部材１２を配置させる。これにより、マイクロウェル１３を封止媒体１９で封止することができる（図６（ｆ））。
【0059】
さらにそのままワイピング部材１２をベースプレート１１に接した状態を維持しつつ第１の方向Ａにスライドさせ続ける。これにより、図６（ｇ）に示すようにワイピング部材１２を用いてアレイ１４上にある余剰の封止媒体１９をベースプレート１１の上のアレイ１４が設けられていない領域に移動させて除去する。その後、図６（ｇ）に示すように、マイクロウェル１３を封止媒体１９の薄層とワイピング部材１２の底面との両方で封止した状態としてもよい。あるいは、ワイピング部材１２をさらに第１の方向Ａにスライドさせてアレイ１４の上から外れた位置まで移動させ、封止媒体１９のみでマイクロウェル１３を封止しても良い。
【0060】
このように、ワイピング部材１２をスライドさせることで、例えばアレイ１４が１ｃｍ２を超える大面積を有する場合であっても、簡便に、均一に、かつ高い効率で検査粒子１８ａをマイクロウェル１３に封入することができる。
【0061】
図６を用いて説明したプロセスは、導入工程、充填工程、封止工程、および除去工程の４つの工程を全てワイピング部材１２のスライドによって行っているが、これに限られない。上記の４つの工程のうちの除去工程を含む１以上の工程をワイピング部材１２のスライドによって行えれば、従来よりも簡便に粒子を封入することができる。
【0062】
【0063】
また、ワイピング部材１２がベースプレート１１に対して図６（ｃ）の位置にあるときに封止媒体１９を第２の領域１７に導入する例について説明したがこれに限られない。例えば、図６（ｂ）に示す配置において第２の領域１７の下にベースプレート１１が存在していれば、この配置のときに第２の領域１７に封止媒体１９を導入してもよい。また、上述したようにワイピング部材１２がベースプレート１１に対して図６（ｃ）に示す位置にあるときに導入工程を行うと同時に封止媒体１９を第２の領域１７に導入しても良い。また、ワイピング部材１２とベースプレート１１とが図６（ｅ）あるいは図６（ｆ）に示す配置にあるときに、第２の領域１７に封止媒体１９を導入してもよい。
【0064】
次に、本発明にかかわる各要素についてさらに説明する。
（ベースプレート）
ベースプレートを構成する材料はシクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマー、シリコン、ガラス、ＡＢＳ樹脂、ポリカーボネート樹脂、アクリル樹脂、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリ酢酸ビニル、ＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）、ＰＥＮ（ポリエチレンナフタレート）等から選択することが好ましい。ベースプレートに設けられたマイクロウェルに封止された検査粒子を、封止後に検査あるいは測定に供することを考慮すると、ベースプレートは透光性を有する材料からなることが好ましい。また、ベースプレートを構成する材料は自家蛍光を有しないものが好ましく、さらにマイクロウェルアレイを形成するための加工性も考慮すると、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマー、アクリル樹脂を選択することがより好ましい。
（ベースプレート）
ベースプレートを構成する材料はシクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマー、シリコン、ガラス、ＡＢＳ樹脂、ポリカーボネート樹脂、アクリル樹脂、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリ酢酸ビニル、ＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）、ＰＥＮ（ポリエチレンナフタレート）等から選択することが好ましい。ベースプレートに設けられたマイクロウェルに封止された検査粒子を、封止後に検査あるいは測定に供することを考慮すると、ベースプレートは透光性を有する材料からなることが好ましい。また、ベースプレートを構成する材料は自家蛍光を有しないものが好ましく、さらにマイクロウェルアレイを形成するための加工性も考慮すると、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマー、アクリル樹脂を選択することがより好ましい。
【0065】
ベースプレートは、マイクロウェルからなるアレイが形成されている領域と何も形成されていない平坦な領域とから構成される。また、検査粒子の分散媒体としては親水性の液体が好適に用いられる場合が多い。そのため、ベースプレートに形成されたマイクロウェルへの検査粒子の充填率を向上させるために少なくともアレイが形成された領域だけでも親水化処理されていることが好ましい。
【0066】
上述したようにマイクロウェルデバイスが隔壁部材を備えていることで、検査粒子のマイクロウェルへの充填率を向上させることができ、また検査装置の汚損を防ぐことができる。しかし、マイクロウェルデバイスが隔壁部材を備えていない場合には、ベースプレート上の隔壁部材が設けられ得る箇所に、例えば親水性や疎水性となるような化学的処理を施したり、あるいは溝を設けるなどの物理的な処理を施しておくことが好ましい。
【0067】
（ワイピング部材および隔壁部材）
ワイピング部材は、上述したようにベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、マイクロウェルの外にある分散媒体をアレイの外へ移動させることが可能なように構成されている。
ワイピング部材は、上述したようにベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、マイクロウェルの外にある分散媒体をアレイの外へ移動させることが可能なように構成されている。
【0068】
ワイピング部材が検査粒子の分散媒体と当接する第１の面の第２の方向の幅は、アレイの第２の方向の幅よりも大きいことが好ましい。ここで第２の方向とは、除去工程においてワイピング部材をスライドさせる方向である第１の方向に垂直な方向である。これにより除去工程を１回のスライド操作で行うことができる。
【0069】
ワイピング部材はベースプレート上をスライドさせることでワイパーとして機能し、導入工程、充填工程、封止工程、および除去工程の４つの工程のうち少なくとも除去工程をこのスライド操作にて行う。
【0070】
ワイピング部材のスライド操作は、ワイピング部材をベースプレートに押し付ける方向に力を加えながらスライドさせる。そのため、ワイピング部材をベースプレートに引っかからずに滑らかにスライドさせるために、ワイピング部材のベースプレートと接する第３の面のエッジには、適度なＲ加工が施してあることが好ましい。
【0071】
また、フィルムの水貼りのようにワイピング部材とベースプレートとを互いに密着させながらスライドさせるために、ワイピング部材とベースプレートとの間には滑り性を向上させるための媒体（水溶性媒体や疎水性媒体）を付与してもよい。滑り性を向上させるための媒体としては、例えば検査粒子の分散媒体や封止媒体と同じ媒体を用いることができる。
【0072】
ワイピング部材は、例えば１つのアレイで複数のサンプルあるいは複数の項目を検査するために、例えば図９に示すマイクロウェルデバイス５０のように仕切りを有することができる。ここで仕切りは、アレイを構成するマイクロウェルを２以上のグループに分ける機能を有する。すなわち、ワイピング部材１２は、第１の面１２ａから第１の方向Ａに延びて第１の方向Ａに垂直な第２の方向Ｂへの分散媒体１８ｂの移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切り５１を有することができる。また、ワイピング部材１２は、第２の面１２ｂから第１の方向Ａに延びて第２の方向Ｂへの封止媒体１９の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切り５２を有することができる。なお、第２の仕切り５２は、ワイピング部材１２に対して第２の方向Ｂにおいて第１の仕切り５１と同じ位置に設けられていることが好ましい。すなわち、第１の仕切り５１と第２の仕切り５２とは、ワイピング部材１２がベースプレート１１の上をスライドする際に同じ軌跡を通ることが好ましい。
【0073】
図９に示すマイクロウェルデバイス５０では、第１の面１２ａと、第２の部分１５２とで挟まれた第１の領域１６が、第１の仕切り５１と第１の面１２ａとで画定される２つの第３の領域１６ａ、１６ｂに分けられている。したがってマイクロウェルデバイス５０を用いる場合には、導入工程は第３の領域１６ａ、１６ｂに、検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入することを含むことができる。
【0074】
また同様に、図９に示すマイクロウェルデバイス５０では、第２の面１２ｂと、第２の部分１５２とで挟まれた第２の領域１７が、第２の仕切り５２と第２の面１２ｂとで画定される２つの第４の領域１７ａ、１７ｂに分けられている。したがってマイクロウェルデバイス５０を用いる場合には、封止工程は第４の領域１７ａ、１７ｂに、封止媒体１９を導入することを含むことができる。
【0075】
このようにワイピング部材が第１の仕切りおよび第２の仕切りを有することで、アレイが十分広い大きさを持つときに複数の検体や複数の検査を行うことが可能となる。また、第２の仕切りによって区切られた第４の領域ごとに、互いに異なる封止媒体を導入して用いることもできる。
【0076】
図６を参照してマイクロウェルデバイス２０を用いた粒子封入方法を説明した際にも述べたが、ワイピング部材１２は、封止媒体１９としての機能を有してもよい。すなわち、ワイピング部材１２のベースプレート１１と接する第３の面１２ｃは、アレイ１４を覆うために十分な大きさを有する封止面を有してもよい。このとき、封止工程は、例えばワイピング部材１２をベースプレート１１に対して例えば図６（ｅ）に示す位置に配置してアレイ１４を封止面で覆うことを含むことができる。
【0077】
さらに、例えばベースプレート１１が透光性を有する材料からなり、封止面が金属で被覆されていれば、ワイピング部材１２の第３の面が有する被覆面でマイクロウェル１３を封止した場合に、最終的に光を利用した検査を好適に実施することができる。具体的には例えば、マイクロウェル１３内の発光が封止面を被覆する金属の面で反射し、その結果発光の取り出し効率が上がることで検出感度を向上させることができる。
【0078】
また、封止面の金属による被覆を蒸着により行う場合には、金属と基板（封止面）との密着力が弱く、ワイピング部材１２をスライドする過程で蒸着した金属の薄膜が剥がれる懸念がある。そのため、ワイピング部材１２が直接ベースプレート１１に接する第３の面１２ｃに設けられた封止面ではなく、ワイピング部材１２の第３の面１２ｃと反対側の第４の面を金属で被覆してもよい。すなわち、ワイピング部材１２のベースプレート１１と接する第３の面１２ｃと反対の側の第４の面１２ｄは、封止面と対向し、封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有してもよい。この場合、封止工程においてアレイ１４を封止面で覆うことでマイクロウェル１３が封止される。また、ワイピング部材１２の厚さの範囲では光を直接反射できないが、ワイピング部材１２が金属で被覆された面を有しないよりは発光の取り出し効率を高くすることができる。
【0079】
ワイピング部材は、２つの第１の部分を有する隔壁部材とともに用いられ、さらに２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されていることが好ましい。これによりワイピング部材の第１の面と隔壁部材の第１の部分とで形成される領域と、ワイピング部材の第２の面と隔壁部材の第１の部分とで形成される領域とをワイピング部材自体を挟んで完全に分断することができる。これにより分散媒体と封止媒体とが互いに混ざり合うことの懸念がなく、操作が容易となる。
【0080】
本発明に係るマイクロウェルデバイスにおいて、ベースプレート１１の上面１１ａに隔壁部材の機能を有する構造を設けない場合は、マイクロウェルデバイスは隔壁部材を有することが好ましい。
【0081】
隔壁部材は、第２の方向に向かう前記分散媒体の流れを妨げるように構成された第１の方向に延在する第１の部分を少なくとも有するが、第１の部分の第１の方向の長さは、アレイの第１の方向の長さよりも長いことが好ましい。
【0082】
図１、２、４、５、７乃至９には、隔壁部材１５の形状が、ワイピング部材１２をスライドさせる第１の方向Ａに直線的に延在する第１の部分１５１と、第１の方向に垂直な第２の方向Ｂに直線的に延在する第２の部分１５２とにより規定される例を示している。しかし隔壁部材１５の形状はこれに限定されない。すなわち、隔壁部材１５は、分散媒体１８ｂあるいは封止媒体１９がアレイ１４の外に流れて検査装置を汚損するのを防ぐための壁として機能する構造をしていればよく、その壁として機能する構造の形状に特に限定はない。例えば、第１の領域１６および第２の領域１７の形状についても特に限定されず、その輪郭が四角でも丸でもよい。特に、第１の領域１６および第２の領域１７がアレイと重なったときに、第１の領域１６および第２の領域１７がアレイを完全に覆うのに十分な面積を有していることが好ましい。
【0083】
隔壁部材は複数の部材から構成されていても良いが、コストや構造の複雑さを考えると１つの部材で構成されていることが好ましい。さらに、隔壁部材とワイピング部材とが一体となって１つの部材で構成されていることがより好ましい。
【0084】
図４および図５に示すマイクロウェルデバイス２０は、隔壁部材とワイピング部材とが１つの部材で構成されているマイクロウェルデバイスの一例である。マイクロウェルデバイス２０では、隔壁部材およびワイピング部材が一体として構成された１つの部材に貫通した穴（第１の領域１６および第２の領域１７）が空いている形態となっている。マイクロウェルデバイス２０においては、第１の面１２ａおよび第２の面１２ｂとして機能するのは穴の内壁のスライドする方向の壁、つまり図４に示す例では四角く穴が設けられているが、その内側の壁である。図４では一例として検査粒子１８ａを含む分散媒体１８ｂを導入するための第１の領域１６としての穴と、封止媒体１９を導入するための第２の領域１７としての穴とからなる２つの穴が部材に設けられているが、これに限られない。例えば、加工の難易度を下げるために部材に設けられる穴は１つでも良い。図８に示すマイクロウェルデバイス４０は、隔壁部材およびワイピング部材が一体として構成された１つの部材に設けられた穴が１つである場合の１例である。マイクロウェルデバイス４０が有するワイピング部材１２（隔壁部材１５）は、図４および図５に示すワイピング部材１２（隔壁部材１５）において一方の穴の第１の方向Ａの側の壁を構成する第２の部分が除かれた形状となっている。
【0085】
隔壁部材が有する第１の部分および第２の部分に例示されるような壁として機能する構造は、検査粒子を含む分散媒体や液状の封止媒体を導入したときに、分散媒体や封止媒体があふれるのを防ぐのに十分な高さを有していることが好ましい。隔壁部材が有する壁として機能する構造が十分な高さを有していれば、第１の領域や第２の領域が閉じた空間である場合には、それらの領域に分散媒体や封止媒体を収めることで、時間の経過や振動により濡れ広がることの懸念がなくなる。また、マイクロウェルデバイスを傾けた際に、第１の領域や第２の領域の中の分散媒体や封止媒体がこぼれ出ることを抑制することもできる。
【0086】
ワイピング部材および隔壁部材を構成する材料としては、検査粒子を含む分散媒体や封止媒体と接することを考慮すると、分散媒体や封止媒体に含まれる溶媒に溶出する成分を含まない材料を選択することが好ましい。ワイピング部材および隔壁部材を構成する具体的な材料としては、例えばベースプレートについての説明で挙げた材料から選択することができる。
【0087】
（マイクロウェルおよびアレイ）
マイクロウェルからなるアレイの形成には、フォトリソグラフィやマイクロ射出成形、ナノインプリントなど公知の製法を選択することができる。アレイ全体の輪郭の形状には特に限定はなく、四角くても丸くても良い。上述したように複数の検体や複数の検査をする際には粒子封入方法における各工程をワイピング部材のスライド操作により効率的に行えるため、四角い方が好ましい。
マイクロウェルからなるアレイの形成には、フォトリソグラフィやマイクロ射出成形、ナノインプリントなど公知の製法を選択することができる。アレイ全体の輪郭の形状には特に限定はなく、四角くても丸くても良い。上述したように複数の検体や複数の検査をする際には粒子封入方法における各工程をワイピング部材のスライド操作により効率的に行えるため、四角い方が好ましい。
【0088】
アレイを構成するマイクロウェルの形状についても特に限定はないが、加工の容易性から円柱、円錐、円錐台等であることが好ましい。例えば、型から抜く際に型が基材に接触することによるマイクロウェルの欠陥が生じにくかったり、検査粒子の入りやすさを考慮すると、マイクロウェルの形状は円錐台であることがより好ましい。
【0089】
マイクロウェルの開口部の最小口径および深さは、検査粒子の直径以上である。各マイクロウェルには検査粒子が１つ以上入ってもよいが、各マイクロウェルに入る検査粒子の数が多い場合には、必要となる総粒子数が多くなることで検査コストが高くなり、また、検出精度を高くするための工夫が必要になる場合がある。そのため、各マイクロウェルに入る検査粒子の数は１以上４以下であることが好ましく、１であることがより好ましい。
このことから、マイクロウェルの開口径の最大長さ、および深さは、それぞれ検査粒子の平均粒子径の１．０倍以上２．０倍未満であることが好ましい。また、マイクロウェルの開口径の最大長さは、検査粒子が有する平均粒子径の１．５倍以上２．０倍未満であることがより好ましい。具体的には例えば、マイクロウェルの最小口径は、１．５μｍ以上１０μｍ未満である。また、マイクロウェルの深さは、具体的には例えば、１．０μｍ以上１０μｍ未満である。
このことから、マイクロウェルの開口径の最大長さ、および深さは、それぞれ検査粒子の平均粒子径の１．０倍以上２．０倍未満であることが好ましい。また、マイクロウェルの開口径の最大長さは、検査粒子が有する平均粒子径の１．５倍以上２．０倍未満であることがより好ましい。具体的には例えば、マイクロウェルの最小口径は、１．５μｍ以上１０μｍ未満である。また、マイクロウェルの深さは、具体的には例えば、１．０μｍ以上１０μｍ未満である。
【0090】
アレイにおけるマイクロウェル同士の距離は、近すぎると観察したときにシグナルを分離することや加工自体が難しくなる。しかしながら離れすぎると同じマイクロウェルアレイの面積でも取得できるシグナル数が減ってしまう。そのためマイクロウェルの中心同士の距離は５μｍ以上１５μｍ以内であることが好ましい。
【0091】
（検査粒子）
検査粒子は平均粒子径が１μｍ以上５μｍ以下であることが好ましい。これによりマイクロウェルへの効率的な充填とアレイの高密度化が可能となる。平均粒子径とは、ここでは電子顕微鏡観察または動的光散乱法を用いて測定した値をいう。
検査粒子は平均粒子径が１μｍ以上５μｍ以下であることが好ましい。これによりマイクロウェルへの効率的な充填とアレイの高密度化が可能となる。平均粒子径とは、ここでは電子顕微鏡観察または動的光散乱法を用いて測定した値をいう。
【0092】
検査粒子は有機物および無機物のいずれから構成されていてもよく、種々の材料を組み合わせることができる。検査粒子をマイクロウェルに充填する工程と、後述するターゲット物質を捕捉するための分子を結合することを考えると、次のように構成されていることが好ましい。すなわち、検査粒子は、コア側に比重の重い無機層を有し、最表層のシェルとしてはターゲット物質を捕捉するための分子を結合しやすい有機層を有する構成であることが好ましい。
【0093】
無機層を構成する材料としては、シリカ、アルミナ、酸化鉄、鉄、ジルコニア、酸化チタンなどが挙げられる。検査粒子のコアは、単独の材料で形成してもよいし、有機物の層を無機層で覆った形態で形成されていてもよい。
【0094】
本発明に使用可能な市販されている粒子としては、例えば、Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ(登録商標) ＭＳ３００、Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ(登録商標) ＭＳ１６０、ＰｕｒｅＰｒｏｔｅｏｍｅ(登録商標) Ｎｉｃｋｅｌ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄｓ、Ｓｉｍｏａ(登録商標) Ｈｏｍｅｂｒｅｗアッセイキット(Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社)で供される磁性粒子やＰｏｌｙｂｅａｄ(登録商標) Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ、宇部エクシモ製ハイプレシカ(登録商標)等が挙げられる。
【0095】
検査粒子としては、構成材料に鉄、ニッケル、およびマグネタイト等の常磁性体、強磁性体、超磁性体等を含む検査粒子を用いることが好ましいが、それ以外でも構わない。磁性粒子を用いることで、磁場の印加により、上述した検査粒子のマイクロウェルへの充填だけでなく、後述する検査粒子にターゲット物質を捕捉させる反応工程の後にターゲット物質を捕捉した検査粒子を精製することが容易となる。
【0096】
なお、マイクロウェルに充填および封入される検査粒子は、ターゲット物質を捕捉した検査粒子の他にターゲット物質を捕捉していない検査粒子が混じる場合がある。ターゲット物質を特異的に捕捉する検査粒子としては、例えばターゲット物質を特異的に捕捉するための分子が結合されている検査粒子を用いることができる。ターゲット物質を特異的に捕捉するための分子は、検査粒子の表面にある修飾基に、例えばリンカーを介して結合させてもよい。ターゲット分子を特異的に捕捉するための分子は、例えば、アミノ基で修飾された検査粒子の表面にあるアミノ基に、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド等を持つ架橋剤を介して共有結合させることにより結合させることができる。ターゲット物質を特異的に捕捉するための分子は、ターゲット物質に応じて選択すればよく、例えばタンパク質、抗体、核酸等を用いることができる。ターゲット物質を特異的に捕捉するための分子は、検査粒子１個あたり１０万分子以上結合されていることが好ましい。例えば、ターゲット捕捉分子が抗体である場合には、解離定数がｎＭオーダー程度であるが、上述した構成であれば、検査粒子とターゲット物質とを反応させる際のターゲット捕捉分子の濃度を充分に高くすることができる。
【0097】
アレイに導入する検査粒子の数は、アレイを構成するマイクロウェルの総数と同等以上であることが好ましく、導入する検査粒子の数の上限の目安は、マイクロウェルと検査粒子との大きさの関係で決めることができる。例えば、１つのマイクロウェルに１つの検査粒子しか収容できないのであれば、導入する検査粒子の数の上限は、アレイを構成するマイクロウェルの総数と同じとすることができる。また例えば、１つのマイクロウェルに３つの検査粒子が充填され得るような大きさの関係であれば、導入する粒子の数の上限を、アレイを構成するマイクロウェルの総数の３倍とすればよい。
【0098】
（ターゲット物質）
ターゲット物質とは、検出対象である分子、すなわちここでは検査粒子に捕捉させることによって検出しようとする分子を指す。ターゲット物質としては、例えばタンパク質、酵素、核酸、ペプチド、脂質代謝物、糖等の生体分子、ならびにウイルス粒子そのものなどが挙げられる。
ターゲット物質とは、検出対象である分子、すなわちここでは検査粒子に捕捉させることによって検出しようとする分子を指す。ターゲット物質としては、例えばタンパク質、酵素、核酸、ペプチド、脂質代謝物、糖等の生体分子、ならびにウイルス粒子そのものなどが挙げられる。
【0099】
酵素は、例えば細胞外小胞が小胞表面あるいは内部に有するあらゆる酵素をも含む。そのような酵素の例としては、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）、ＡＤＡＭ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）、ＡＤＡＭＴＳ（ＡＤＡＭ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）等のＭＭＰファミリー、マトリプターゼ、β－セクレターゼ、ＥＣＥ（エンドセリン変換酵素）、カルパイン、ＤＰＰＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ Ｐｅｐｔｉｄａｓｅ－４）、ＡＣＥ１（アンジオテンシン変換酵素１）、ＡＣＥ２（アンジオテンシン変換酵素２）等を含む各種プロテアーゼ、ＡＣｈＥ（アセチルコリンエステラーゼ）、オートタキシン、リパーゼ、ホスホリパーゼ、ホスファターゼ等を含む各種エステラーゼ、β－ガラクトシダーゼ等を含む各種グリコシダーゼに代表される加水分解酵素、ＭＡＯ（モノアミン酸化酵素）等を含む各種オキシダーゼ、ＭＰＯ（ミエロペルオキシダーゼ）等を含む各種ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼに代表される酸化還元酵素、ＨＡＴ（ヒストンアセチルトランスフェラーゼ）、ＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）等を含む各種のアセチル化／脱アセチル化酵素、キナーゼ、タンパク質キナーゼ、糖転移酵素に代表される転移酵素、Ｐｉｎ１（ＰＰＩａｓｅ：ペプチジルプロリルイソメラーゼ）等を含む各種シス・トランスイソメラーゼ、ラセマーゼ、ムターゼに代表される異性化酵素等を挙げることができる。
【0100】
（分散媒体）
検査粒子を含んでマイクロウェルに検査粒子を充填するために用いる分散媒体は、種々の媒体から用いる検査粒子に合わせて適宜選択して用いることができる。中でも、親水性の液体媒体を分散媒体として好適に用いることができる場合が多い。分散媒体として使用することができる親水性の液体媒体としては、例えば、水、親水性アルコール、親水性エーテル、ケトン、ニトリル系溶媒、ジメチルスルホキシド、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドからなる群より選択される少なくとも１つ、またはこれを含む混合物等が挙げられる。親水性アルコールとしては、例えばエタノール、メタノール、プロパノール、グリセリン等が挙げられる。親水性エーテルとしては、例えばテトラヒドロフラン、ポリエチレンオキサイド、１，４－ジオキサン等が挙げられる。ケトンとしては、例えばアセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。ニトリル系溶媒としては、例えばアセトニトリル等が挙げられる。
分散媒体は、ターゲット物質を捕捉した検査粒子やターゲット物質を捕捉していない検査粒子を含んで用いられる。分散媒体は、他に、例えば検査粒子に捕捉されたターゲット物質を特異的に検出するための物質や、液滴あるいはマイクロウェルを確認するための標準蛍光物質、ブロッキング材料、バッファー、界面活性剤などをさらに含んでいてもよい。
検査粒子を含んでマイクロウェルに検査粒子を充填するために用いる分散媒体は、種々の媒体から用いる検査粒子に合わせて適宜選択して用いることができる。中でも、親水性の液体媒体を分散媒体として好適に用いることができる場合が多い。分散媒体として使用することができる親水性の液体媒体としては、例えば、水、親水性アルコール、親水性エーテル、ケトン、ニトリル系溶媒、ジメチルスルホキシド、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドからなる群より選択される少なくとも１つ、またはこれを含む混合物等が挙げられる。親水性アルコールとしては、例えばエタノール、メタノール、プロパノール、グリセリン等が挙げられる。親水性エーテルとしては、例えばテトラヒドロフラン、ポリエチレンオキサイド、１，４－ジオキサン等が挙げられる。ケトンとしては、例えばアセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。ニトリル系溶媒としては、例えばアセトニトリル等が挙げられる。
分散媒体は、ターゲット物質を捕捉した検査粒子やターゲット物質を捕捉していない検査粒子を含んで用いられる。分散媒体は、他に、例えば検査粒子に捕捉されたターゲット物質を特異的に検出するための物質や、液滴あるいはマイクロウェルを確認するための標準蛍光物質、ブロッキング材料、バッファー、界面活性剤などをさらに含んでいてもよい。
【0101】
検査粒子に捕捉されたターゲット物質を特異的に検出するための物質としては例えば、検査粒子に捕捉されたターゲット物質またはこれに特異的に結合した分子に結合した所定の酵素によって分解されて、蛍光物質を遊離する蛍光基質等が好ましい。ターゲット物質に特異的に結合する分子は、例えば二次抗体、核酸等であってもよい。
【0102】
酵素活性による構造の変化で発光強度が大きくなるようなレポーター分子としては、例えば、蛍光物質と消光物質で標識された分子を挙げることができる。そのようなレポーター分子としては、例えば、両末端あるいはレポーター分子内の修飾可能なアミノ酸残基上にそれぞれ蛍光物質と消光物質を有し、その間に、標的酵素の基質となるペプチドを含む分子（ＦＲＥＴ基質）を例示することができる。ＦＲＥＴ基質は、酵素切断前は、蛍光物質と消光物質とが互いに十分近くにあることで蛍光物質は消光されているが、ペプチドが酵素活性により切断されると、消光物質による消光が解除され蛍光を発する。ＦＲＥＴ基質をレポーター分子として用いることで、標的酵素の有無を蛍光の大きな輝度変化として観察することができる。ＦＲＥＴ基質が含むペプチドは、反応性の点で３残基以上、消光効果の点で３０残基以下であることが好ましい。また、酵素活性による化学構造の変化により無蛍光物質から蛍光物質に変換されるようなレポーター分子も大きな輝度変化が得られる点で好ましい。このようなレポーター分子としては、市販されるキットのレポーター分子を適宜使用することができる。
【0103】
また、標的となる酵素の基質配列を基に、基質配列の両端、あるいは基質配列内に蛍光物質と消光物質を組み合わせてカスタム合成することもできる。
【0104】
液滴あるいはマイクロウェルを確認するための標準蛍光物質としては例えばＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）色素やＤｙ Ｌｉｇｈｔ（登録商標）色素から好適な発光波長を有する色素を選択することができる。前者と後者を併用する際には観察しやすいように発光波長が異なるものを選択することが好ましい。
【0105】
ブロッキング材料は検査粒子と捕捉タンパク質とを結合させる際に、検査粒子のリンカー結合部のうち捕捉タンパク質が結合しなかった部分を埋める機能を有する。例えば、捕捉タンパク質のアミノ基と検査粒子のカルボキシル基とを、ＮＨＳ／ＷＳＣを用いて縮合反応させる場合、検査粒子は、反応後に未反応のカルボキシル基を有し得る。そこで、捕捉タンパク質と結合しなかったカルボキシル基をブロッキング剤としてのエタノールアミンやアミノ基を有するＰＥＧ等と反応させることができる。ブロッキング材料としては公知のものを使用することができ、例えばＢｌｏｃｋｍａｓｔｅｒ（登録商標）のＣＥ５１０，ＣＥ２１０，ＤＢ１１３０，ＰＡ１０８０などが挙げられる。
【0106】
バッファーとしては、Ｔｒｉｓ系のバッファーおよびＨＥＰＥＳ系のバッファーなどが挙げられる。
【0107】
界面活性剤は、検査粒子の分散の安定化やタンパク質の安定化に用いることができる。
界面活性剤としては、Ｂｒｉｊ ３５、Ｂｒｉｊ ５８やＴｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、ＮＰ４０、ＴｒｉｔｏｎＸ―１００、ＴｒｉｔｏｎＸ―１１４などが挙げられる。具体的には界面活性剤としては例えば、Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ （ｐＨ７．６）、１００ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ、５％グリセロール、５０μｇ／ｍＬ ｈｅｐａｒｉｎ）、ＮＥＢｕｆｆｅｒ（登録商標）２．１（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００μｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ），ｐＨ７．９）、ＦＺ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、６０ｍＭ ＮａＣｌ、６ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｐＨ６．８）などが挙げられる。
界面活性剤としては、Ｂｒｉｊ ３５、Ｂｒｉｊ ５８やＴｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、ＮＰ４０、ＴｒｉｔｏｎＸ―１００、ＴｒｉｔｏｎＸ―１１４などが挙げられる。具体的には界面活性剤としては例えば、Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ （ｐＨ７．６）、１００ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ、５％グリセロール、５０μｇ／ｍＬ ｈｅｐａｒｉｎ）、ＮＥＢｕｆｆｅｒ（登録商標）２．１（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００μｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ），ｐＨ７．９）、ＦＺ Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、６０ｍＭ ＮａＣｌ、６ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｐＨ６．８）などが挙げられる。
【0108】
（封止媒体）
封止媒体としては、液体であれば、疎水性の液体媒体を用いることで、分散媒体として親水性の液体媒体を用いた場合に互いに混ざり合うことを抑制することができる。疎水性の液体媒体としては、例えば飽和炭化水素、不飽和炭化水素、芳香族炭化水素、シリコーンオイル、フッ素系オイル、パーフルオロカーボン、ハロゲン系溶媒、および疎水性イオン液体からなる群より選択される少なくとも１つまたはこれを含む混合物等を好適に用いることができる。
封止媒体としては、液体であれば、疎水性の液体媒体を用いることで、分散媒体として親水性の液体媒体を用いた場合に互いに混ざり合うことを抑制することができる。疎水性の液体媒体としては、例えば飽和炭化水素、不飽和炭化水素、芳香族炭化水素、シリコーンオイル、フッ素系オイル、パーフルオロカーボン、ハロゲン系溶媒、および疎水性イオン液体からなる群より選択される少なくとも１つまたはこれを含む混合物等を好適に用いることができる。
【0109】
飽和炭化水素としては、例えばアルカン、シクロアルカンなどが挙げられる。アルカンとしては、例えばデカン、ヘキサデカン等が挙げられる。不飽和炭化水素としては、例えばスクアレン等が挙げられる。芳香族炭化水素としては、例えばベンゼン、トルエン等が挙げられる。フッ素系オイルとしてはＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌなどが挙げられる。パーフルオロカーボンとしては、例えばフロリナート（登録商標）ＦＣ４０（ＳＩＧＭＡ社製）等が挙げられる。ハロゲン系溶媒としては、例えばクロロホルム、塩化メチレン、クロロベンゼン等が挙げられる。疎水性イオン液体とは少なくとも水中では解離しないイオン液体をさし、例えばヘキサフルオロリン酸１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム等が挙げられる。イオン液体とは、室温において液体で存在する塩を指す。
封止媒体は、固体であれば、先に述べたように例えばワイピング部材を用いることができる。固体の封止媒体を構成する材料としては、ガラスや金属などを選択することができ、それらを組み合わせることもできる。
封止媒体は、固体であれば、先に述べたように例えばワイピング部材を用いることができる。固体の封止媒体を構成する材料としては、ガラスや金属などを選択することができ、それらを組み合わせることもできる。
【0110】
＜ターゲット物質検出方法＞
本発明に係るターゲット物質検出方法は、反応工程と、粒子封入工程と、検出工程とを有する。反応工程は、ターゲット物質を特異的に捕捉する検査粒子と、上記ターゲット物質とを反応させる工程である。粒子封入工程は、上記反応工程の後に、上記検査粒子用いてこれまでに説明した本発明に係る粒子封入方法を行う工程である。また、検出工程は、上記マイクロウェルの各々に収容された上記検査粒子のうちの上記ターゲット物質を捕捉した検査粒子を検出する工程である。
本発明に係るターゲット物質検出方法は、反応工程と、粒子封入工程と、検出工程とを有する。反応工程は、ターゲット物質を特異的に捕捉する検査粒子と、上記ターゲット物質とを反応させる工程である。粒子封入工程は、上記反応工程の後に、上記検査粒子用いてこれまでに説明した本発明に係る粒子封入方法を行う工程である。また、検出工程は、上記マイクロウェルの各々に収容された上記検査粒子のうちの上記ターゲット物質を捕捉した検査粒子を検出する工程である。
【0111】
（反応工程）
反応工程は検査粒子にターゲット物質を反応させる工程であり、例えば検査粒子を含む溶液と、ターゲット物質を含む溶液とを混合して反応させることで達成することができる。反応工程で行う反応としては、例えば抗原抗体反応、ストレプトアビジン－ビオチン反応、核酸の相補的な結合等、公知の分子認識反応や分子間の相互作用等を好適に用いることができる。
反応工程は検査粒子にターゲット物質を反応させる工程であり、例えば検査粒子を含む溶液と、ターゲット物質を含む溶液とを混合して反応させることで達成することができる。反応工程で行う反応としては、例えば抗原抗体反応、ストレプトアビジン－ビオチン反応、核酸の相補的な結合等、公知の分子認識反応や分子間の相互作用等を好適に用いることができる。
【0112】
（粒子封入工程）
粒子封入工程では、上述した粒子封入方法における各工程を同様に行うことができる。
粒子封入工程では、上述した粒子封入方法における各工程を同様に行うことができる。
【0113】
（検出工程）
検出工程は、粒子封入工程の後に、それぞれのマイクロウェルにターゲット物質を捕捉した検査粒子が充填されているか否かを検出する工程である。
検出工程は、粒子封入工程の後に、それぞれのマイクロウェルにターゲット物質を捕捉した検査粒子が充填されているか否かを検出する工程である。
【0114】
マイクロウェルにターゲット物質を捕捉した検査粒子が収容されているか否かを検出する方法としては、例えば蛍光検出を利用した方法が挙げられる。具体的には例えば、マイクロウェルを有するベースプレートをインキュベートしてターゲット物質またはこれに特異的に結合した分子に結合した所定の酵素の活性により発生した蛍光を検出することを含んでもよい。酵素の活性により発生した蛍光とは、例えば酵素の活性により蛍光基質を分解し、これにより遊離した蛍光物質が発する蛍光である。蛍光の検出方法としては、蛍光顕微鏡およびイメージセンサ等を用いた方法等が挙げられる。
【0115】
また、検出工程は、各マイクロウェルに検査粒子が収容されているか否かを検出する工程を含むことが好ましい。各マイクロウェルに検査粒子が収容されているか否かを検出する方法としては、例えば顕微鏡下において検査粒子の有無を観察する方法が挙げられる。
また、検査粒子の有無を検出する方法として、検査粒子による散乱光を検出する方法、電界効果トランジスタによる電位計測を利用する方法等も挙げられる。さらに、他の検出方法としては、上述したように検査粒子を含む分散媒体に標準蛍光物質を添加することで蛍光を検出する方法が挙げられる。ここで蛍光を検出する方法としては、先に述べたのと同様に蛍光顕微鏡やイメージセンサ等を用いた方法等が挙げられる。
また、検査粒子の有無を検出する方法として、検査粒子による散乱光を検出する方法、電界効果トランジスタによる電位計測を利用する方法等も挙げられる。さらに、他の検出方法としては、上述したように検査粒子を含む分散媒体に標準蛍光物質を添加することで蛍光を検出する方法が挙げられる。ここで蛍光を検出する方法としては、先に述べたのと同様に蛍光顕微鏡やイメージセンサ等を用いた方法等が挙げられる。
【0116】
ターゲット物質を捕捉した検査粒子が収容されているか否かを検出する方法と、各マイクロウェルに検査粒子が収容されているか否かを検出する方法との両方で蛍光を検出する際には、それぞれの検出における蛍光波長は互いに十分に離れていることが好ましい。これによりそれぞれの検出が容易となる。
【0117】
以下に検出工程の流れをより詳細に説明する。
例えばインキュベートによって、ターゲット物質またはこれに特異的に結合した分子に結合した所定の酵素により蛍光基質を分解し、これにより遊離した蛍光物質が発する蛍光を検出する場合、まずインキュベート後に明視野画像および蛍光画像を取得する。明視野画像および蛍光画像の取得には蛍光顕微鏡等を用いることができる。
例えばインキュベートによって、ターゲット物質またはこれに特異的に結合した分子に結合した所定の酵素により蛍光基質を分解し、これにより遊離した蛍光物質が発する蛍光を検出する場合、まずインキュベート後に明視野画像および蛍光画像を取得する。明視野画像および蛍光画像の取得には蛍光顕微鏡等を用いることができる。
【0118】
取得された明視野画像にはマイクロウェルに収容された検査粒子やマイクロウェルが撮像されている。つまり、明視野画像はマイクロウェルおよび検査粒子の検知のために撮影する。ここで、反応液に標準蛍光物質等を入れておき、すべてのマイクロウェルが蛍光を発するようにしておけば、明視野画像の代わりに、その標準蛍光物質の蛍光波長に合った撮像条件で撮影した蛍光画像を取得することもできる。また、検査粒子の自家蛍光を利用して検査粒子の位置を判断するための蛍光画像を撮影してもよい。
【0119】
次に、前記明視野画像を用いて各マイクロウェルのマスク画像（ウェル：１、ウェル以外：０）（以下、ウェルマスク画像ともいう）と検査粒子が収容されたマイクロウェルに対応する部分をマスクした画像（以下、粒子マスク画像ともいう）とを作成する。
【0120】
最後に蛍光画像、ウェルマスク画像、および粒子マスク画像を用いて、各マイクロウェルの蛍光強度を算出し、検査粒子が存在し、かつ所定の閾値を超えた蛍光強度を有するマイクロウェルを特定する（ポジ判定）。前記閾値は、各マイクロウェルの蛍光強度から大津法等を用いて自動的に決定してもよいし、検査粒子が収容されていないウェルプレートを用いて測定しておいて、その蛍光強度バラツキから決定してもよい。または、検査粒子が収容されていない各マイクロウェルの蛍光強度情報を用いて算出してもよい。
【0121】
検出工程の結果、検査粒子が収容されているマイクロウェルの数と、検査粒子のうちターゲット物質を捕捉した粒子が収容されているマイクロウェルの数とを明らかにすることができる。これらの値を用いて、マイクロウェルに封入された検査粒子の全数のうちターゲット物質を捕捉した検査粒子の数の割合を算出することができる。これにより、ターゲット物質の濃度を定量化することが可能となる。
【0122】
また蛍光顕微鏡、イメージセンサ等を用いてアレイ中の蛍光物質を検出する際に、倍率が高すぎると観察範囲が狭くなり、検出精度が低くなる。そのため有効な観察範囲としては少なくとも２５０００程度のマイクロウェルが観察できような倍率が好ましく、１００万個のマイクロウェルが観察できる倍率であることがより好ましい。観察範囲が広ければ前述した複数のサンプル、複数の項目を一度に検査することも可能となる。
【実施例0123】
以下、実施例および比較例を用いて本発明をさらに詳細に説明する。本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例によって何ら限定されるものではない。
【0124】
（ベースプレート１の作製）
図１に示すベースプレート１１を、フッ素樹脂塗布工程、フォトリソグラフィ工程、エッチング・レジスト除去工程を経て作製した。
図１に示すベースプレート１１を、フッ素樹脂塗布工程、フォトリソグラフィ工程、エッチング・レジスト除去工程を経て作製した。
【0125】
ベースプレート１１の作製に用いる基板としては、石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用した。フッ素樹脂塗布工程では、上記基板をシランカップリング剤（ＫＢＥ‐９０３、信越シリコーン社製）で処理した後、フッ素樹脂（ＣＹＴＯＰ（登録商標） ＣＴＬ‐８０９Ａ、ＡＧＣ社製）を塗布した。
【0126】
フォトリソグラフィ工程では、ポジ型のフォトレジスト（ＡＺ Ｐ４９０３、ＡＺ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）を塗布した。次に、目的のパターンのフォトマスクを介して上部からＵＶを露光し、アルカリによる現像処理を行なった。この現像処理によりＵＶが照射された部分のみ、フォトレジストが溶解して疎水性の樹脂層がむき出しになった。
【0127】
エッチング・レジスト除去工程では、一部が溶解したフォトレジストを介して酸素プラズマによるエッチングで樹脂層の一部を除去して疎水性の隔壁を形成した。
【0128】
最後に、有機溶媒でフォトレジストを溶解させることによって目的とする複数のマイクロウェル１３からなるアレイ１４を形成した。各マイクロウェル１３の円形の開口の直径は５μｍ、深さは４μｍ、体積は７８．５ｆＬ、ピッチは１０μｍ、ウェル数は約１００万個であった。アレイ１４が形成されたベースプレート１１上の領域は、１辺およそ１０ｍｍの正方形であった。このようにしてベースプレート１を作製した。
【0129】
（ワイピング部材１の作製）
図１に示すワイピング部材１２を、材料となる基板として石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用してウォータージェット加工により作製し、ワイピング部材１とした。また、図１に示す隔壁部材１５についても、ワイピング部材１と同様にして作成し、隔壁部材１とした。
図１に示すワイピング部材１２を、材料となる基板として石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用してウォータージェット加工により作製し、ワイピング部材１とした。また、図１に示す隔壁部材１５についても、ワイピング部材１と同様にして作成し、隔壁部材１とした。
【0130】
（ワイピング部材２の作製）
図４に示すワイピング部材１２（隔壁部材１５）を、材料となる基板として石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用してウォータージェット加工により作製し、ワイピング部材２とした。すなわち、ワイピング部材２は、隔壁部材としても機能する部材である。なお、第１の領域１６の開口および第２の領域１７の開口はそれぞれ１辺１１ｍｍの正方形状となった。
図４に示すワイピング部材１２（隔壁部材１５）を、材料となる基板として石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用してウォータージェット加工により作製し、ワイピング部材２とした。すなわち、ワイピング部材２は、隔壁部材としても機能する部材である。なお、第１の領域１６の開口および第２の領域１７の開口はそれぞれ１辺１１ｍｍの正方形状となった。
【0131】
（ワイピング部材３の作製）
図９に示すワイピング部材１２（隔壁部材１５）を、材料となる基板として石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用してウォータージェット加工により作製し、ワイピング部材３とした。すなわち、ワイピング部材３は、隔壁部材としても機能する部材である。なお、第１の仕切り５１および第２の仕切り５２それぞれの第２の方向Ｂの幅はいずれも２ｍｍであった。また、第１の仕切り５１および第２の仕切り５２により分室された第３の領域１６ａ、１６ｂの開口および第４の領域１７ａ、１７ｂの開口はそれぞれ短辺４．５ｍｍ長辺１１ｍｍの長方形状となった。
図９に示すワイピング部材１２（隔壁部材１５）を、材料となる基板として石英基板（合成石英基板ＡＱグレード、厚さ１ｍｍ、ＡＧＣ社製）を使用してウォータージェット加工により作製し、ワイピング部材３とした。すなわち、ワイピング部材３は、隔壁部材としても機能する部材である。なお、第１の仕切り５１および第２の仕切り５２それぞれの第２の方向Ｂの幅はいずれも２ｍｍであった。また、第１の仕切り５１および第２の仕切り５２により分室された第３の領域１６ａ、１６ｂの開口および第４の領域１７ａ、１７ｂの開口はそれぞれ短辺４．５ｍｍ長辺１１ｍｍの長方形状となった。
【0132】
（ワイピング部材４の作製）
ワイピング部材２の片面（第３の面１２ｃまたは第４の面１２ｄ（図６（ｅ）参照）となる面）をアルミ蒸着して作製したワイピング部材をワイピング部材４とした。すなわち、ワイピング部材４は、ワイピング部材２と同様に隔壁部材としても機能する部材である。
ワイピング部材２の片面（第３の面１２ｃまたは第４の面１２ｄ（図６（ｅ）参照）となる面）をアルミ蒸着して作製したワイピング部材をワイピング部材４とした。すなわち、ワイピング部材４は、ワイピング部材２と同様に隔壁部材としても機能する部材である。
【0133】
（ワイピング部材５の作製）
本例では、図４で示されるワイピング部材１２（隔壁部材１５）を、厚さ１ｍｍの透明ポリスチレン板を使用しウォータージェット加工によりワイピング部材５として作製した。図４における第１の領域１６の開口および第２の領域１７の開口はそれぞれ１辺１１ｍｍの正方形状となった。
本例では、図４で示されるワイピング部材１２（隔壁部材１５）を、厚さ１ｍｍの透明ポリスチレン板を使用しウォータージェット加工によりワイピング部材５として作製した。図４における第１の領域１６の開口および第２の領域１７の開口はそれぞれ１辺１１ｍｍの正方形状となった。
【0134】
（検査粒子１の準備）
磁性粒子の分散液（Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ＭＳ１６０／Ｃａｒｂｏｘｙｌ、ＪＳＲ株式会社製）を準備し、検査粒子１の分散液とした。
磁性粒子の分散液（Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ＭＳ１６０／Ｃａｒｂｏｘｙｌ、ＪＳＲ株式会社製）を準備し、検査粒子１の分散液とした。
【0135】
（検査粒子２の準備）
磁性粒子の分散液（Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ＭＳ３００／Ｃａｒｂｏｘｙｌ、ＪＳＲ株式会社製）を準備し、検査粒子２の分散液とした。
磁性粒子の分散液（Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ＭＳ３００／Ｃａｒｂｏｘｙｌ、ＪＳＲ株式会社製）を準備し、検査粒子２の分散液とした。
【0136】
（検査粒子３の準備）
宇部エクシモ製ハイプレシカ（登録商標） Ｎ３Ｎ（粒子径２．９μｍ）を原料粒子として０．５ｇ用意し、これをエタノール７５ｍＬ（キシダ化学製）と純水７５ｍＬとの混合溶液に分散させた。次に、テトラエトキシシラン（ＴＥＯＳ）（キシダ化学製）を１．５ｍＬ添加し、触媒として２８％アンモニア水（キシダ化学製）を２２．５ｍＬ追加して撹拌しながら１．５時間反応させた。反応後、遠心分離で溶媒を除去し、純水で７回洗浄して原料粒子にシリカ層を形成した。
宇部エクシモ製ハイプレシカ（登録商標） Ｎ３Ｎ（粒子径２．９μｍ）を原料粒子として０．５ｇ用意し、これをエタノール７５ｍＬ（キシダ化学製）と純水７５ｍＬとの混合溶液に分散させた。次に、テトラエトキシシラン（ＴＥＯＳ）（キシダ化学製）を１．５ｍＬ添加し、触媒として２８％アンモニア水（キシダ化学製）を２２．５ｍＬ追加して撹拌しながら１．５時間反応させた。反応後、遠心分離で溶媒を除去し、純水で７回洗浄して原料粒子にシリカ層を形成した。
【0137】
得られたシリカ被覆粒子をエタノール１０ｍＬと純水１０ｍＬとの混合溶液に分散させ、シランカップリング剤として、３－メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン（ＬＳ－３３８０、信越化学工業製）を１００μＬ添加して十分に混合した。次に、２８％のアンモニア水２ｍＬを添加し１．５時間撹拌した。次に、遠心分離で溶媒を除去し、純水で十分洗浄した後、６０ｍＬの窒素バブリングした純水を追加して水分散液を得た。次に、この水分散液を４つ口のフラスコ（２００ｍＬ）に入れ、窒素バブリングして２００ｒｐｍの撹拌速度で１５分撹拌した。続いて、窒素バブリングを窒素フローに切り替た後、この水分散液にスチレンモノマー（キシダ化学社製）を５０μＬ添加した。
次に、０．０２ｇの過硫酸カリウム（シグマアルドリッチ社製）を予め窒素バブリングで脱気した純水２ｍＬに溶解して１ｍＬをフラスコ内に添加した。次に、オイルバスを用いて、３５℃で３０分加熱した後、６０℃に昇温して１時間保持した。続いて、グリシジルメタクリレート（キシダ化学社製）２００μＬ添加して、さらに１２時間保持して重合を終了した。重合終了後、遠心分離で溶媒を除去し、純水で十分洗浄した。
次に、０．０２ｇの過硫酸カリウム（シグマアルドリッチ社製）を予め窒素バブリングで脱気した純水２ｍＬに溶解して１ｍＬをフラスコ内に添加した。次に、オイルバスを用いて、３５℃で３０分加熱した後、６０℃に昇温して１時間保持した。続いて、グリシジルメタクリレート（キシダ化学社製）２００μＬ添加して、さらに１２時間保持して重合を終了した。重合終了後、遠心分離で溶媒を除去し、純水で十分洗浄した。
【0138】
続いて得られた粒子１０ｍｇを５ｍＬの純水に分散させた。この粒子分散液とは別に、メルカプトコハク酸（キシダ化学製）３５０ｍｇを純水５ｍＬに溶解して、ｐＨ調整としてトリエチルアミン（東京化成工業製）を０．８ｍＬ添加した。この溶液を、粒子分散液に１ｍＬ添加して十分撹拌して６０℃で３時間加熱処理した。この後、遠心分離で溶媒を除去し、純水で十分洗浄し検査粒子３の分散液を得た。
【0139】
示差熱-熱重量同時分析（ＴＧ－ＤＴＡ）により求めた検査粒子３の分散液の固形分濃度は３０ｍｇ／ｍＬであった。検査粒子の直径を３．０μｍ、比重を２．１ｇ／ｃｍ３と仮定し、この分散体の粒子数濃度は１．０×１０９個／ｍＬとした。
【0140】
（検査粒子４の作製）
検査粒子４としてＣａｓ１２ａとｃｒＲＮＡとの複合体が粒子に結合した複合粒子を作製した。
まず、磁性粒子の分散液（Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ＭＳ３００／Ｃａｒｂｏｘｙｌ）をマイクロチューブに入れて磁性粒子を磁石で沈殿させた。上清を除去した後に、磁性粒子ペレットにＭＥＳ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ５．４）を加えて再度分散させ、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ）、および、水溶性カルボジイミド（ＷＳＣ）を加えた。その後、２５℃で１時間攪拌し、磁石で磁性粒子を回収した。
検査粒子４としてＣａｓ１２ａとｃｒＲＮＡとの複合体が粒子に結合した複合粒子を作製した。
まず、磁性粒子の分散液（Ｍａｇｎｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ＭＳ３００／Ｃａｒｂｏｘｙｌ）をマイクロチューブに入れて磁性粒子を磁石で沈殿させた。上清を除去した後に、磁性粒子ペレットにＭＥＳ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ５．４）を加えて再度分散させ、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ）、および、水溶性カルボジイミド（ＷＳＣ）を加えた。その後、２５℃で１時間攪拌し、磁石で磁性粒子を回収した。
【0141】
続いて、回収した磁性粒子をＭＥＳ緩衝液で洗浄し、ＭＥＳ緩衝液で分散させて、任意の量の抗Ｈｉｓタグ抗体（Ａｎｔｉ－Ｈｉｓ－ｔａｇ ｍＡｂ、ＭＢＬライフサイエンス社）を加えた。その後、２５℃で２時間攪拌した。
続いて大過剰のエタノールアミンを添加して磁性粒子表面の活性基を失活させた。磁石で磁性粒子を回収し、回収した磁性粒子をＭＥＳ緩衝液で洗浄して、抗体固定化粒子を作製した。
続いて大過剰のエタノールアミンを添加して磁性粒子表面の活性基を失活させた。磁石で磁性粒子を回収し、回収した磁性粒子をＭＥＳ緩衝液で洗浄して、抗体固定化粒子を作製した。
【0142】
得られた抗体固定化粒子にストレージバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．９）、５０ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０％グリセロール）を添加し、抗体固定化粒子液を調製した。抗体固定化粒子液は使用時まで４℃で保存した。
次に、希釈したＣａｓ１２ａとｃｒＲＮＡとを１：１．２５の濃度比（モル比）になるように混合し、３７℃で３０分間インキュベートし、Ｃａｓ１２ａ－ｃｒＲＮＡ複合体を作製した。
次に、希釈したＣａｓ１２ａとｃｒＲＮＡとを１：１．２５の濃度比（モル比）になるように混合し、３７℃で３０分間インキュベートし、Ｃａｓ１２ａ－ｃｒＲＮＡ複合体を作製した。
【0143】
また、作製した抗体固定化粒子液（１ｗｔ％）を２ｍＬサンプルチューブ（ＶＩＯＬＡＭＯ製、型番：１－１６００－０４）に分取した。攪拌後、磁性スタンド（マジカルトラッパー、ＴＯＹＯＢＯ製、型番：ＭＧＳ－１０１）にサンプルチューブを立て、１分間静置したのち上清を除去することにより、溶液除去を行った。粒子洗浄液として０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ－Ｔ）を加え、攪拌後、上記と同様にして溶液を除去した。以上の操作を２度繰り返して洗浄した。
【0144】
洗浄後の抗体固定化粒子をＰＢＳ－Ｔに懸濁し、上記で調製したＣａｓ１２ａ－ｃｒＲＮＡ溶液を任意の濃度になるように添加し、攪拌後、振とう機で１時間反応させた。ここで、用いたＣａｓ１２ａはＮ末端にＨｉｓタグを有することから、Ｃａｓ１２が有するＨｉｓタグと、抗体固定化粒子が有する抗Ｈｉｓタグ抗体との抗原抗体反応によりＣａｓ１２ａと抗体固定化粒子とが結合される。これによりＣａｓ１２ａとｃｒＲＮＡとの複合体が粒子に結合した検査粒子４を作製した。最終的な検査粒子４の分散体中の粒子数濃度は計算から３．１×１０８個／ｍＬとなった。
反応後に溶液を除去し、ＰＢＳ－Ｔで洗浄操作を行った。洗浄後、精製水に懸濁し、攪拌後、使用時まで４℃で保存した。
反応後に溶液を除去し、ＰＢＳ－Ｔで洗浄操作を行った。洗浄後、精製水に懸濁し、攪拌後、使用時まで４℃で保存した。
【0145】
（検査粒子１を含む分散媒体１の調製）
検査粒子１の水分散体（１０ｍｇ／ｍＬ、４．０×１０９個／ｍＬ）１０μＬをバッファー（Ａ）４８９．２５μＬで希釈し、さらに標準蛍光物質として１ｍＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７を０．７５μＬ加え、検査粒子１を含む分散媒体１とした。
なお、バッファー（Ａ）の組成は以下のとおりである。
バッファー（Ａ）の組成：
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ （ｐＨ７．６）
１０ｍＭ ＣａＣｌ２
０．０１％ Ｂｒｉｊ（登録商標）３５
検査粒子１の水分散体（１０ｍｇ／ｍＬ、４．０×１０９個／ｍＬ）１０μＬをバッファー（Ａ）４８９．２５μＬで希釈し、さらに標準蛍光物質として１ｍＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７を０．７５μＬ加え、検査粒子１を含む分散媒体１とした。
なお、バッファー（Ａ）の組成は以下のとおりである。
バッファー（Ａ）の組成：
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ （ｐＨ７．６）
１０ｍＭ ＣａＣｌ２
０．０１％ Ｂｒｉｊ（登録商標）３５
【0146】
（検査粒子２を含む分散媒体２の調製）
検査粒子２の水分散体（１０ｍｇ／ｍＬ、６．０×１０８個／ｍＬ）１６．７μＬをバッファー（Ａ）４８２．５５μＬで希釈し、さらに標準蛍光物質として１ｍＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７を０．７５μＬ加え、検査粒子２を含む分散媒体２とした。
検査粒子２の水分散体（１０ｍｇ／ｍＬ、６．０×１０８個／ｍＬ）１６．７μＬをバッファー（Ａ）４８２．５５μＬで希釈し、さらに標準蛍光物質として１ｍＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７を０．７５μＬ加え、検査粒子２を含む分散媒体２とした。
【0147】
（検査粒子３を含む分散媒体３の調製）
検査粒子３の分散液（３０ｍｇ／ｍＬ、１．０×１０９個／ｍＬ）１０μＬをバッファー（Ａ）４９０μＬで希釈し、検査粒子３を含む分散媒体３とした。
検査粒子３の分散液（３０ｍｇ／ｍＬ、１．０×１０９個／ｍＬ）１０μＬをバッファー（Ａ）４９０μＬで希釈し、検査粒子３を含む分散媒体３とした。
【0148】
（検査粒子４を含む分散媒体４の調製）
まず、ターゲット物質であるＤＮＡとしては合成ＤＮＡ（以下、ＤＮＡ＿１１３ｂｐという）を用いた。ＤＮＡ＿１１３ｂｐを精製水で希釈してＤＮＡ原液（４ｎＭ）を調製し、Ｑｕｂｉｔ（登録商標） ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ （ライフテクノロジーズ社製）で計測して濃度を確認した。ＤＮＡ原液（４ｎＭ）を精製水で希釈し、ＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）を調製した。さらにＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）から精製水で希釈を行い、ＤＮＡ溶液１（０．２２８ｎＭ）を調製した。
なおＤＮＡ＿１１３ｂｐの塩基配列（配列番号１）は以下のとおりである。
ctcacgccttatgactgcccttatgtcaccgcttatgtctcccgatatcacacccgttatctcagccctaatctctgcggtttagtctggccttaatccatgcctcatagcta
次に検査粒子４の水分散体（３．１×１０８個／ｍＬ）：７．３μＬ、水：２２．７μＬ、およびＤＮＡ溶液１（０．２２８ｎＭ）：３０μＬを混合した。得られた混合溶液を３７℃で３０分間反応させ、複合粒子とＤＮＡとの複合体を形成した。
まず、ターゲット物質であるＤＮＡとしては合成ＤＮＡ（以下、ＤＮＡ＿１１３ｂｐという）を用いた。ＤＮＡ＿１１３ｂｐを精製水で希釈してＤＮＡ原液（４ｎＭ）を調製し、Ｑｕｂｉｔ（登録商標） ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ （ライフテクノロジーズ社製）で計測して濃度を確認した。ＤＮＡ原液（４ｎＭ）を精製水で希釈し、ＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）を調製した。さらにＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）から精製水で希釈を行い、ＤＮＡ溶液１（０．２２８ｎＭ）を調製した。
なおＤＮＡ＿１１３ｂｐの塩基配列（配列番号１）は以下のとおりである。
ctcacgccttatgactgcccttatgtcaccgcttatgtctcccgatatcacacccgttatctcagccctaatctctgcggtttagtctggccttaatccatgcctcatagcta
次に検査粒子４の水分散体（３．１×１０８個／ｍＬ）：７．３μＬ、水：２２．７μＬ、およびＤＮＡ溶液１（０．２２８ｎＭ）：３０μＬを混合した。得られた混合溶液を３７℃で３０分間反応させ、複合粒子とＤＮＡとの複合体を形成した。
【0149】
次に、以下の材料を用意した。
・８００ｎＭのＨｉＬｙｔｅ４８８を含むレポーター分子溶液（１２μＭ）：２５μＬ ・Ｔｗｅｅｎ２０（５％）：１０μＬ
・ＢＳＡ（３０％）：１μＬ
・スペルミン水溶液（５０ｍＭ）：４μＬ
・１０×Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ：１０μＬ
これらをあらかじめ１．５ｍＬマイクロチューブ内で混合した。この混合溶液に、上記の複合粒子とＤＮＡとの複合体５０μＬを加えて検査粒子４を含む分散媒体４とした。
なおレポーター分子溶液としては、市販のキット（商品名：ＤＮａｓｅＡｌｅｒｔ（登録商標） Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｎｕｃｌｅａｓｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ １１－０２－０１－０４、ＩＤＴ社製）に含まれるレポーター分子を用いた。このレポーター分子は、蛍光物質であるＨＥＸと、消光剤とを有する。
・８００ｎＭのＨｉＬｙｔｅ４８８を含むレポーター分子溶液（１２μＭ）：２５μＬ ・Ｔｗｅｅｎ２０（５％）：１０μＬ
・ＢＳＡ（３０％）：１μＬ
・スペルミン水溶液（５０ｍＭ）：４μＬ
・１０×Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ：１０μＬ
これらをあらかじめ１．５ｍＬマイクロチューブ内で混合した。この混合溶液に、上記の複合粒子とＤＮＡとの複合体５０μＬを加えて検査粒子４を含む分散媒体４とした。
なおレポーター分子溶液としては、市販のキット（商品名：ＤＮａｓｅＡｌｅｒｔ（登録商標） Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｎｕｃｌｅａｓｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ １１－０２－０１－０４、ＩＤＴ社製）に含まれるレポーター分子を用いた。このレポーター分子は、蛍光物質であるＨＥＸと、消光剤とを有する。
【0150】
（検査粒子４を含む分散媒体５の調製）
まず、ターゲット物質であるＤＮＡとしてはＤＮＡ＿１１３ｂｐを用いた。ＤＮＡ＿１１３ｂｐを精製水で希釈してＤＮＡ原液（４ｎＭ）を調製し、Ｑｕｂｉｔ ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（ライフテクノロジーズ社製）で計測して濃度を確認した。ＤＮＡ原液（４ｎＭ）を精製水で希釈し、ＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）を調製した。さらにＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）から精製水で希釈を行い、ＤＮＡ溶液２（０．１１４ｎＭ）を調製した。
次に検査粒子４の分散体（３．１×１０８個／ｍＬ）：７．３μＬ、水：２２．７μＬ、およびＤＮＡ溶液２（０．１１４ｎＭ）：３０μＬを混合した。得られた混合溶液を３７℃で３０分間反応させ、複合粒子とＤＮＡとの複合体を形成した。
次に、以下の材料を用意した。
・８００ｎＭのＨｉＬｙｔｅ４８８を含むレポーター分子溶液（１２μＭ）：２５μＬ ・Ｔｗｅｅｎ２０（５％）：１０μＬ
・ＢＳＡ（３０％）：１μＬ
・スペルミン水溶液（５０ｍＭ）：４μＬ
・１０×Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ：１０μＬ
これらをあらかじめ１．５ｍＬマイクロチューブ内で混合した。この混合溶液に、上記の複合粒子とＤＮＡとの複合体５０μＬを加えて検査粒子４を含む分散媒体５とした。
まず、ターゲット物質であるＤＮＡとしてはＤＮＡ＿１１３ｂｐを用いた。ＤＮＡ＿１１３ｂｐを精製水で希釈してＤＮＡ原液（４ｎＭ）を調製し、Ｑｕｂｉｔ ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（ライフテクノロジーズ社製）で計測して濃度を確認した。ＤＮＡ原液（４ｎＭ）を精製水で希釈し、ＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）を調製した。さらにＤＮＡ溶液（０．６８４ｎＭ）から精製水で希釈を行い、ＤＮＡ溶液２（０．１１４ｎＭ）を調製した。
次に検査粒子４の分散体（３．１×１０８個／ｍＬ）：７．３μＬ、水：２２．７μＬ、およびＤＮＡ溶液２（０．１１４ｎＭ）：３０μＬを混合した。得られた混合溶液を３７℃で３０分間反応させ、複合粒子とＤＮＡとの複合体を形成した。
次に、以下の材料を用意した。
・８００ｎＭのＨｉＬｙｔｅ４８８を含むレポーター分子溶液（１２μＭ）：２５μＬ ・Ｔｗｅｅｎ２０（５％）：１０μＬ
・ＢＳＡ（３０％）：１μＬ
・スペルミン水溶液（５０ｍＭ）：４μＬ
・１０×Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ：１０μＬ
これらをあらかじめ１．５ｍＬマイクロチューブ内で混合した。この混合溶液に、上記の複合粒子とＤＮＡとの複合体５０μＬを加えて検査粒子４を含む分散媒体５とした。
【0151】
［実施例１］
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１とワイピング部材２との組み合わせを選択し、またアレイに導入する検査粒子を含む分散媒体としては、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ａ）に示す配置となるようにセットした。次に、ワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの検査粒子を含む分散媒体を、マイクロピペットを用いて投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｃ）に示す位置までベースプレート上をスライドさせてから、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行った。脱気後５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置している間にワイピング部材が有する第２の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。次にワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせ、マイクロウェルをフッ素系オイルで封止した。
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１とワイピング部材２との組み合わせを選択し、またアレイに導入する検査粒子を含む分散媒体としては、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ａ）に示す配置となるようにセットした。次に、ワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの検査粒子を含む分散媒体を、マイクロピペットを用いて投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｃ）に示す位置までベースプレート上をスライドさせてから、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行った。脱気後５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置している間にワイピング部材が有する第２の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。次にワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせ、マイクロウェルをフッ素系オイルで封止した。
【0152】
［実施例２］
実施例１において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１と同様に実施した。
図６（ｃ）に示す配置で静置している間に、ワイピング部材が有する第２の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。次に、ワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。さらに、ワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｇ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりかつ、ワイピング部材のベースプレートへの押さえつけを緩めながらスライドさせ、マイクロウェルをオイルの薄層とワイピング部材とで封止した。
実施例１において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１と同様に実施した。
図６（ｃ）に示す配置で静置している間に、ワイピング部材が有する第２の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。次に、ワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。さらに、ワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｇ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりかつ、ワイピング部材のベースプレートへの押さえつけを緩めながらスライドさせ、マイクロウェルをオイルの薄層とワイピング部材とで封止した。
【0153】
［実施例３］
実施例２において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子３を含む分散媒体３」に変更した。それ以外は実施例２と同様に実施した。
実施例２において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子３を含む分散媒体３」に変更した。それ以外は実施例２と同様に実施した。
【0154】
［実施例４］
実施例２において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子１を含む分散媒体１」に変更した。それ以外は実施例２と同様に実施した。
実施例２において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子１を含む分散媒体１」に変更した。それ以外は実施例２と同様に実施した。
【0155】
［実施例５］
実施例２において、ワイピング部材２をワイピング部材４に変更した。なお、ワイピング部材４は、金属蒸着面がベースプレートのアレイを有する面と接するようにセットして使用した。すなわちワイピング部材４の第３の面が金属蒸着面を有する構成とした。それ以外は実施例２と同様に実施した。
実施例２において、ワイピング部材２をワイピング部材４に変更した。なお、ワイピング部材４は、金属蒸着面がベースプレートのアレイを有する面と接するようにセットして使用した。すなわちワイピング部材４の第３の面が金属蒸着面を有する構成とした。それ以外は実施例２と同様に実施した。
【0156】
［実施例６］
実施例５において、ワイピング部材４を、金属蒸着面と反対の側の面がベースプレートのアレイを有する面と接するようにセットして使用した。すなわちワイピング部材４の第４の面が金属蒸着面を有する構成とした。それ以外は実施例５と同様に実施した。
実施例５において、ワイピング部材４を、金属蒸着面と反対の側の面がベースプレートのアレイを有する面と接するようにセットして使用した。すなわちワイピング部材４の第４の面が金属蒸着面を有する構成とした。それ以外は実施例５と同様に実施した。
【0157】
［実施例７］
実施例２において、導入工程を次のように変更した以外は実施例２と同様に実施した。
ベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次にワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
実施例２において、導入工程を次のように変更した以外は実施例２と同様に実施した。
ベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次にワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
【0158】
［実施例８］
実施例７において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子１を含む分散媒体１」に変更し、さらに充填工程を次のように変更した以外は実施例７と同様に実施した。
図６（ｃ）に示す配置において、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行い、脱気後ベースプレートの裏側からアレイ全体を５秒間かけてネオジム磁石（直径１５ｍｍ、高さ１０ｍｍ、二六製作所製）でなぞった。その後、５分間静置してマイクロウェルに検査粒子１が充填されるのを待った。
実施例７において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子１を含む分散媒体１」に変更し、さらに充填工程を次のように変更した以外は実施例７と同様に実施した。
図６（ｃ）に示す配置において、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行い、脱気後ベースプレートの裏側からアレイ全体を５秒間かけてネオジム磁石（直径１５ｍｍ、高さ１０ｍｍ、二六製作所製）でなぞった。その後、５分間静置してマイクロウェルに検査粒子１が充填されるのを待った。
【0159】
［実施例９］
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１とワイピング部材３との組み合わせを選択した。また、検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子１を含む分散媒体１と、検査粒子２を含む分散媒体２との２種類を選択した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次に、一方の第３の領域１６ａに８０μＬの検査粒子１を含む分散媒体１を投入し、同様に他方の第３の領域１６ｂに８０μＬの分散媒体２を投入した。
続いて、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行い、脱気後１０分間静置してマイクロウェルに検査粒子１と検査粒子２が充填されるのを待った。静置している間に第４の領域１７ａ、１７ｂにフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。次にワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。さらにワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｇ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりかつ、ワイピング部材のベースプレートへの押さえつけを緩めながらスライドさせ、マイクロウェルをオイルの薄層とワイピング部材とで封止した。
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１とワイピング部材３との組み合わせを選択した。また、検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子１を含む分散媒体１と、検査粒子２を含む分散媒体２との２種類を選択した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次に、一方の第３の領域１６ａに８０μＬの検査粒子１を含む分散媒体１を投入し、同様に他方の第３の領域１６ｂに８０μＬの分散媒体２を投入した。
続いて、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行い、脱気後１０分間静置してマイクロウェルに検査粒子１と検査粒子２が充填されるのを待った。静置している間に第４の領域１７ａ、１７ｂにフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。次にワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。さらにワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｇ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりかつ、ワイピング部材のベースプレートへの押さえつけを緩めながらスライドさせ、マイクロウェルをオイルの薄層とワイピング部材とで封止した。
【0160】
［実施例１０］
実施例１において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１と同様に実施した。
図６（ｃ）に示す配置で充填工程を行った後、ワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。その後、ワイピング部材が有する第２の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて穴の壁を沿わせて１００μＬ投入し、マイクロウェルをフッ素系オイルで封止した。
実施例１において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１と同様に実施した。
図６（ｃ）に示す配置で充填工程を行った後、ワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。その後、ワイピング部材が有する第２の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて穴の壁を沿わせて１００μＬ投入し、マイクロウェルをフッ素系オイルで封止した。
【0161】
［実施例１１］
実施例１０において、導入工程を次のように変更した以外は実施例１０と同様に実施した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次にワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
実施例１０において、導入工程を次のように変更した以外は実施例１０と同様に実施した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次にワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
【0162】
［実施例１２］
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１とワイピング部材１と隔壁部材１との組み合わせを選択し、また、アレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
まずベースプレート、ワイピング部材、および隔壁部材を図３（ａ）に示す配置となるようにセットした。次に、アレイとワイピング部材の第１の面との間のベースプレート上の領域に、１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｃ）に示す位置までベースプレート上をスライドさせた。その後、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行い、脱気後５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置後、ワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｅ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。その後、アレイとワイピング部材の第２の面との間のベースプレート上の領域に、フッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせ、マイクロウェルをオイルで封止した。
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１とワイピング部材１と隔壁部材１との組み合わせを選択し、また、アレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
まずベースプレート、ワイピング部材、および隔壁部材を図３（ａ）に示す配置となるようにセットした。次に、アレイとワイピング部材の第１の面との間のベースプレート上の領域に、１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｃ）に示す位置までベースプレート上をスライドさせた。その後、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行い、脱気後５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置後、ワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｅ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた。その後、アレイとワイピング部材の第２の面との間のベースプレート上の領域に、フッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｆ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせ、マイクロウェルをオイルで封止した。
【0163】
［実施例１３］
実施例１２において、導入工程を次のように変更した以外は実施例１２と同様に実施した。
まずベースプレート、ワイピング部材、および隔壁部材を図３（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次に、アレイ上に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いてワイピング部の第１の面に沿わせて投入した。
実施例１２において、導入工程を次のように変更した以外は実施例１２と同様に実施した。
まずベースプレート、ワイピング部材、および隔壁部材を図３（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次に、アレイ上に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いてワイピング部の第１の面に沿わせて投入した。
【0164】
［実施例１４］
実施例１２において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１２と同様に実施した。
図３（ｃ）に示す配置において充填工程を行った後、ワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｅ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた後で、続いて図３（ｆ）に示す位置までスライドさせた。その後、フッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いてワイピング部材の第２の面に沿わせてアレイ上に１００μＬ投入し、マイクロウェルをオイルで封止した。
実施例１２において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１２と同様に実施した。
図３（ｃ）に示す配置において充填工程を行った後、ワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｅ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた後で、続いて図３（ｆ）に示す位置までスライドさせた。その後、フッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いてワイピング部材の第２の面に沿わせてアレイ上に１００μＬ投入し、マイクロウェルをオイルで封止した。
【0165】
［実施例１５］
実施例１３において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１３と同様に実施した。
図３（ｃ）に示す配置において充填工程を行った後、ワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｅ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた後で、続いて図３（ｆ）に示す位置までスライドさせた。その後、フッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いてワイピング部材の第２の面に沿わせてアレイ上に１００μＬ投入し、マイクロウェルをオイルで封止した。
実施例１３において、封止工程を次のように変更した以外は実施例１３と同様に実施した。
図３（ｃ）に示す配置において充填工程を行った後、ワイピング部材をベースプレートに対して図３（ｅ）に示す位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた後で、続いて図３（ｆ）に示す位置までスライドさせた。その後、フッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いてワイピング部材の第２の面に沿わせてアレイ上に１００μＬ投入し、マイクロウェルをオイルで封止した。
【0166】
［実施例１６］
実施例１において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例１と同様に実施した。
実施例１において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例１と同様に実施した。
【0167】
［実施例１７］
実施例２において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例２と同様に実施した。
実施例２において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例２と同様に実施した。
【0168】
［実施例１８］
実施例７において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例７と同様に実施した。
実施例７において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例７と同様に実施した。
【0169】
［実施例１９］
実施例８において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例８と同様に実施した。
実施例８において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例８と同様に実施した。
【0170】
［実施例２０］
実施例５において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例５と同様に実施した。
実施例５において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例５と同様に実施した。
【0171】
［実施例２１］
実施例６において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例６と同様に実施した。
実施例６において、「検査粒子２を含む分散媒体２」を、「検査粒子４を含む分散媒体４」に変更した。それ以外は実施例６と同様に実施した。
【0172】
［実施例２２］
実施例９において、検査粒子１を含む分散媒体１と、検査粒子２を含む分散媒体２との２種類を、検査粒子４を含む分散媒体４と、検査粒子４を含む分散媒体５との２種類に変更した。また、導入工程において、一方の第３の領域１６ａに検査粒子４を含む分散媒体４を投入し、他方の第３の領域１６ｂに検査粒子４を含む分散媒体５を投入した。それ以外は実施例９と同様に実施した。
実施例９において、検査粒子１を含む分散媒体１と、検査粒子２を含む分散媒体２との２種類を、検査粒子４を含む分散媒体４と、検査粒子４を含む分散媒体５との２種類に変更した。また、導入工程において、一方の第３の領域１６ａに検査粒子４を含む分散媒体４を投入し、他方の第３の領域１６ｂに検査粒子４を含む分散媒体５を投入した。それ以外は実施例９と同様に実施した。
【0173】
［実施例２３］
はじめに、マイクロピペットを用いてワイピング部材の裏面全体にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌ １２０μＬを塗布した。その後に、オイルを塗布した面をベースプレートに接触させ、図６（ａ）に示す配置となるようにセットした以外は実施例１０と同様に行った。
はじめに、マイクロピペットを用いてワイピング部材の裏面全体にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌ １２０μＬを塗布した。その後に、オイルを塗布した面をベースプレートに接触させ、図６（ａ）に示す配置となるようにセットした以外は実施例１０と同様に行った。
【0174】
［実施例２４］
ワイピング部材２の代わりにワイピング部材５を選択した以外は実施例２３と同様に行った。
ワイピング部材２の代わりにワイピング部材５を選択した以外は実施例２３と同様に行った。
【0175】
［実施例２５］
ワイピング部材裏面全体に塗布する媒体をフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌの代わりに純水を用いた以外は実施例２４と同様に行った。
ワイピング部材裏面全体に塗布する媒体をフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌの代わりに純水を用いた以外は実施例２４と同様に行った。
【0176】
［実施例２６］
最初のスライド操作の後のマイクロウェルデバイスの脱気操作を行わなかった以外は実施例２４と同様に行った。
最初のスライド操作の後のマイクロウェルデバイスの脱気操作を行わなかった以外は実施例２４と同様に行った。
【0177】
［実施例２７］
マグネットソフトケース（クラウン社、ＣＲ－ＭＧＡ５）のマグネット面に接触させるようにベースプレートを設置してからワイピング部材をセットした以外は実施例２６と同様に行った。
マグネットソフトケース（クラウン社、ＣＲ－ＭＧＡ５）のマグネット面に接触させるようにベースプレートを設置してからワイピング部材をセットした以外は実施例２６と同様に行った。
【0178】
［実施例２８］
マグネットソフトケースの代わりにマグネットバー（コクヨ社、マクー２０１ＮＢ）を用い、マグネット面に接触させるようにベースプレートを設置してからワイピング部材をセットした以外は実施例２７と同様に行った。
マグネットソフトケースの代わりにマグネットバー（コクヨ社、マクー２０１ＮＢ）を用い、マグネット面に接触させるようにベースプレートを設置してからワイピング部材をセットした以外は実施例２７と同様に行った。
【0179】
［実施例２９］
図６（ｃ）に示す配置でマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを５分間待った後に、マイクロウェルデバイスをマグネットバーから下ろして、磁場をかけない状態を１分保持した。その後でワイピング部材を図６の（ｆ）の位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた以外は実施例２８と同様に行った。
図６（ｃ）に示す配置でマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを５分間待った後に、マイクロウェルデバイスをマグネットバーから下ろして、磁場をかけない状態を１分保持した。その後でワイピング部材を図６の（ｆ）の位置までベースプレート上をゆっくりスライドさせた以外は実施例２８と同様に行った。
【0180】
［比較例１］
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１およびワイピング部材２の組み合わせを選択し、またアレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ａ）に示す配置となるようにセットした。次に、ワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｃ）に示す位置までベースプレート上をスライドさせてから、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行った。脱気後、５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置後、マイクロピペットを用いて第１の領域の中の分散媒体２を一回の吸引作業でゆっくりと吸い取った。その後、第１の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入して、マイクロウェルをオイルで封止した。
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１およびワイピング部材２の組み合わせを選択し、またアレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ａ）に示す配置となるようにセットした。次に、ワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。投入してすぐにワイピング部材をベースプレートに対して図６（ｃ）に示す位置までベースプレート上をスライドさせてから、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行った。脱気後、５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置後、マイクロピペットを用いて第１の領域の中の分散媒体２を一回の吸引作業でゆっくりと吸い取った。その後、第１の領域にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入して、マイクロウェルをオイルで封止した。
【0181】
［比較例２］
比較例１において、導入工程を次のように変更した以外は比較例１と同様に実施した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次に、ワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
比較例１において、導入工程を次のように変更した以外は比較例１と同様に実施した。
まずベースプレートおよびワイピング部材を図６（ｃ）に示す配置となるようにセットした。次に、ワイピング部材が有する第１の領域に１００μＬの分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
【0182】
［比較例３］
マイクロウェルデバイスとしてＳｉｍｏａ Ｄｉｓｃｓ（１６枚）：１００００１（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社製）を用いた。仕様からマイクロウェルの開口の直径は４．２５μｍ、深さは３．２５μｍ、容量は５０ｆＬ、マイクロウェルの総数は２３９，０００個であり、ベースプレート上のアレイが形成された領域は短辺３ｍｍ長辺４ｍｍの長方形である。アレイに導入する検査粒子を含む分散媒体としては、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
マイクロウェルデバイスのインレットの穴に２５μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いてゆっくりと投入した。投入後、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行った。脱気後５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置後、マイクロウェルデバイスのインレットの穴にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入し、マイクロウェルをオイルで封止した。なお、封止用のフッ素系オイルをインレットの穴から投入した際に、アウトレットの穴から少量の分散媒体２が押し出されてきた。
マイクロウェルデバイスとしてＳｉｍｏａ Ｄｉｓｃｓ（１６枚）：１００００１（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社製）を用いた。仕様からマイクロウェルの開口の直径は４．２５μｍ、深さは３．２５μｍ、容量は５０ｆＬ、マイクロウェルの総数は２３９，０００個であり、ベースプレート上のアレイが形成された領域は短辺３ｍｍ長辺４ｍｍの長方形である。アレイに導入する検査粒子を含む分散媒体としては、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
マイクロウェルデバイスのインレットの穴に２５μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いてゆっくりと投入した。投入後、マイクロウェルデバイスを０．１気圧の減圧デシケータ内に約３０秒放置することにより脱気を行った。脱気後５分間静置してマイクロウェルに検査粒子２が充填されるのを待った。静置後、マイクロウェルデバイスのインレットの穴にフッ素系オイルであるＳＲ－Ｘ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｏｉｌを、マイクロピペットを用いて１００μＬ投入し、マイクロウェルをオイルで封止した。なお、封止用のフッ素系オイルをインレットの穴から投入した際に、アウトレットの穴から少量の分散媒体２が押し出されてきた。
【0183】
［比較例４］
比較例３において、検査粒子２を含む分散媒体２の代わりに、検査粒子１を含む分散媒体１を選択し、また、静置時間を１０分にした他は比較例３と同様に実施した。なお、封止用のフッ素系オイルをインレットの穴から投入した際に、比較例３と同様にアウトレットの穴から少量の分散媒体１が押し出されてきた。
比較例３において、検査粒子２を含む分散媒体２の代わりに、検査粒子１を含む分散媒体１を選択し、また、静置時間を１０分にした他は比較例３と同様に実施した。なお、封止用のフッ素系オイルをインレットの穴から投入した際に、比較例３と同様にアウトレットの穴から少量の分散媒体１が押し出されてきた。
【0184】
［比較例５］
非特許文献１に記載の粒子の封入方法であるＰＩＴＡＴ ＭＥＴＨＯＤを再現するように以下の条件で実施した。
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１を選択し、またアレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
ベースプレートのアレイ上に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
マイクロウェルデバイスを氷冷したアルミブロックの上に１分間静置して脱気した後、２５℃の室温に戻して５分間静置した。
静置後、短辺がおよそ６ｍｍ長辺がおよそ１５ｍｍの長方形状に切り出したスコッチ（登録商標）１４５ＲＮ（３Ｍ社製）のテープ１枚を、アレイを横断する形で軽く貼り付けた。
その後、およそ０．２ｍｍの厚さにカプトンテープを巻いたプラスチック棒を、カプトンテープを巻いた部分が仮止めした１４５ＲＮテープに当たるように転がした。これにより、１４５ＲＮテープをアレイにしっかりと貼り付けて、マイクロウェルを１４５ＲＮテープで封止した。
なお、１４５ＲＮテープでマイクロウェルを封止する際にテープの脇から分散媒体２が押し出されてきた。さらにプラスチック棒を転がしているときに、巻いたカプトンテープ部分に押し出された分散媒体２が付着し、また、封止した１４５ＲＮテープの表面にも分散媒体２が付着した。
非特許文献１に記載の粒子の封入方法であるＰＩＴＡＴ ＭＥＴＨＯＤを再現するように以下の条件で実施した。
マイクロウェルデバイスとしてベースプレート１を選択し、またアレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子２を含む分散媒体２を選択した。
ベースプレートのアレイ上に１００μＬの検査粒子２を含む分散媒体２を、マイクロピペットを用いて投入した。
マイクロウェルデバイスを氷冷したアルミブロックの上に１分間静置して脱気した後、２５℃の室温に戻して５分間静置した。
静置後、短辺がおよそ６ｍｍ長辺がおよそ１５ｍｍの長方形状に切り出したスコッチ（登録商標）１４５ＲＮ（３Ｍ社製）のテープ１枚を、アレイを横断する形で軽く貼り付けた。
その後、およそ０．２ｍｍの厚さにカプトンテープを巻いたプラスチック棒を、カプトンテープを巻いた部分が仮止めした１４５ＲＮテープに当たるように転がした。これにより、１４５ＲＮテープをアレイにしっかりと貼り付けて、マイクロウェルを１４５ＲＮテープで封止した。
なお、１４５ＲＮテープでマイクロウェルを封止する際にテープの脇から分散媒体２が押し出されてきた。さらにプラスチック棒を転がしているときに、巻いたカプトンテープ部分に押し出された分散媒体２が付着し、また、封止した１４５ＲＮテープの表面にも分散媒体２が付着した。
【0185】
［評価］
充填率、有効な観察範囲の広さ、およびマイクロウェルデバイスの汚損の３つの項目で実施例の結果を評価した。
実際の検出感度としては、まず検査粒子がどれだけマイクロウェルに充填されたかが重要である。たとえ前処理で検査粒子がターゲット物質を捕捉していたとしても、マイクロウェルに検査粒子が充填されなければ検出することはできず、粒子の封入方法としては不適である。
充填率、有効な観察範囲の広さ、およびマイクロウェルデバイスの汚損の３つの項目で実施例の結果を評価した。
実際の検出感度としては、まず検査粒子がどれだけマイクロウェルに充填されたかが重要である。たとえ前処理で検査粒子がターゲット物質を捕捉していたとしても、マイクロウェルに検査粒子が充填されなければ検出することはできず、粒子の封入方法としては不適である。
【0186】
次に重要なのは有効な観察範囲の広さである。たとえ粒子がマイクロウェルに充填されても、実際に検出する際に、マイクロウェル上に検査粒子の凝集体や気泡が存在したり、封止媒体が均一にマイクロウェルアレイを覆えていなかったりする場合がある。このような場合が生じるような方法は、所定の画像処理においてマイクロウェル自体の位置や検査粒子、発光するマイクロウェルを検出できる領域が狭くなるため、粒子の封入方法としては不適である。
【0187】
また、実際のハンドリング操作においては、封止工程等で排出された分散媒体や封止媒体でマイクロウェルデバイス自体が汚損され、続く検出工程等で検査装置も汚損される場合がある。このような場合が生じるような方法は、検査結果の正確性に影響し得るため、たとえ高感度で検出できたとしても、粒子の封入方法としては不適である。
【0188】
上記実施例のうち、アレイに導入する検査粒子を含む分散媒体として、検査粒子３を含む分散媒体３および検査粒子４を含む分散媒体４を選択した実施例では、３７℃でインキュベートして反応させることにより蛍光の生成を促した。
【0189】
充填率および有効な観察範囲の広さは蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ８００（キーエンス社製））を用い、マイクロウェルがおよそ２５０００個観察できる範囲の条件で評価した。
【0190】
検査粒子の充填率は、具体的には次のようにして求めた。まず、標準蛍光物質の蛍光を基にマイクロウェルの位置を確認し、続いてそのマイクロウェルの中に検査粒子に起因する輪郭のエッジを有しているウェルを画像処理により抽出した。その後、観察範囲に占めるマイクロウェルの総数と検査粒子が充填されたマイクロウェルの数との比率から、検査粒子の充填率を求めた。分散媒体が標準蛍光物質を含まないときは、予め同じ標準蛍光物質を含む溶媒をマイクロウェルに充填して取得したマイクロウェルのマスク画像を基にマイクロウェルの位置を確認した。続いて、マイクロウェルの中に検査粒子に起因する輪郭のエッジを有しているマイクロウェルを画像処理により抽出し、観察範囲に占めるマイクロウェルの総数と検査粒子が充填されたマイクロウェルの数との比率から、検査粒子の充填率を求めた。
【0191】
また各マイクロウェルの蛍光強度を測定し、所定の閾値を超えたマイクロウェルを、ターゲット物質が有する酵素活性により蛍光が生じたポジティブのマイクロウェルと判断し、ポジティブのマイクロウェルの数を測定した。そして、検査粒子が充填されたマイクロウェルの数と、ポジティブのマイクロウェルの数との比率からポジ率を参考値として算出した。
【0192】
充填率を表１に、また、ポジ率を表２にそれぞれ示す。
なお、各蛍光物質の測定条件は以下のとおりである。
（検査粒子１を含む分散媒体１および検査粒子２を含む分散媒体２）
標準蛍光物質（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標） ６４７）：ｅｘ６５０ｎｍ、ｅｍ６７０ｎｍ
（検査粒子４を含む分散媒体４および検査粒子４を含む分散媒体５）
ＨＥＸ：ｅｘ５３３ｎｍ、ｅｍ５５９ｎｍ
標準蛍光物質（ＨｉＬｙｔｅ（登録商標）Ｆｌｕｏｒ４８８）：ｅｘ４９９ｎｍ、ｅｍ５２３ｎｍ
なお、各蛍光物質の測定条件は以下のとおりである。
（検査粒子１を含む分散媒体１および検査粒子２を含む分散媒体２）
標準蛍光物質（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標） ６４７）：ｅｘ６５０ｎｍ、ｅｍ６７０ｎｍ
（検査粒子４を含む分散媒体４および検査粒子４を含む分散媒体５）
ＨＥＸ：ｅｘ５３３ｎｍ、ｅｍ５５９ｎｍ
標準蛍光物質（ＨｉＬｙｔｅ（登録商標）Ｆｌｕｏｒ４８８）：ｅｘ４９９ｎｍ、ｅｍ５２３ｎｍ
【0193】
【表1】
【0194】
【表2】
【0195】
また、マイクロウェルデバイスの汚損の評価は、次のようにしておこなった。
封止工程の後に、マイクロウェルデバイスを５度の角度に１０分間静置し、マイクロウェルデバイスに導入した分散媒体や封止媒体がマイクロウェルデバイスの表面を伝ってマイクロウェルデバイスを汚損する懸念があるかどうかを観察した。なお、５度という角度は、マイクロウェルデバイスの通常のハンドリング操作で想定されるマイクロウェルデバイスの傾きとして設定した。
本発明においては、充填率、有効な観察範囲の広さ、およびデバイスの汚損の各評価を以下の評価基準に基づいてランク付けした。本発明においては、Ａ－Ｂを好ましいレベルとし、Ｃを許容できないレベルとした。各評価結果をまとめて表３に示す。
封止工程の後に、マイクロウェルデバイスを５度の角度に１０分間静置し、マイクロウェルデバイスに導入した分散媒体や封止媒体がマイクロウェルデバイスの表面を伝ってマイクロウェルデバイスを汚損する懸念があるかどうかを観察した。なお、５度という角度は、マイクロウェルデバイスの通常のハンドリング操作で想定されるマイクロウェルデバイスの傾きとして設定した。
本発明においては、充填率、有効な観察範囲の広さ、およびデバイスの汚損の各評価を以下の評価基準に基づいてランク付けした。本発明においては、Ａ－Ｂを好ましいレベルとし、Ｃを許容できないレベルとした。各評価結果をまとめて表３に示す。
【0196】
＜充填率＞
Ａ：充填率が５０％を超える。
Ｂ：充填率が３０％を超え、５０％以下である。
Ｃ：充填率が３０％以下である。
Ａ：充填率が５０％を超える。
Ｂ：充填率が３０％を超え、５０％以下である。
Ｃ：充填率が３０％以下である。
【0197】
＜有効な観察範囲の広さ＞
Ａ：観察範囲におけるマイクロウェルの総数に対する、画像処理で発光するマイクロウェルを正しく検出できない領域にあるマイクロウェルの数の割合が、最大で５％未満である。
Ｂ：観察範囲におけるマイクロウェルの総数に対する、画像処理で発光するマイクロウェルを正しく検出できない領域にあるマイクロウェルの数の割合が、最大で５％以上２０％未満である。
Ｃ：観察範囲におけるマイクロウェルの総数に対する、画像処理で発光するマイクロウェルを正しく検出できない領域にあるマイクロウェルの数の割合が、最大で２０％以上である。
Ａ：観察範囲におけるマイクロウェルの総数に対する、画像処理で発光するマイクロウェルを正しく検出できない領域にあるマイクロウェルの数の割合が、最大で５％未満である。
Ｂ：観察範囲におけるマイクロウェルの総数に対する、画像処理で発光するマイクロウェルを正しく検出できない領域にあるマイクロウェルの数の割合が、最大で５％以上２０％未満である。
Ｃ：観察範囲におけるマイクロウェルの総数に対する、画像処理で発光するマイクロウェルを正しく検出できない領域にあるマイクロウェルの数の割合が、最大で２０％以上である。
【0198】
＜デバイスの汚損＞
Ａ：マイクロウェルデバイスを５度の角度で傾けて１０分間保持してもマイクロウェルデバイスが汚損される懸念がない。
Ｃ：マイクロウェルデバイスを５度の角度で傾けて１０分間保持するとマイクロウェルデバイスが汚損される懸念がある。
Ａ：マイクロウェルデバイスを５度の角度で傾けて１０分間保持してもマイクロウェルデバイスが汚損される懸念がない。
Ｃ：マイクロウェルデバイスを５度の角度で傾けて１０分間保持するとマイクロウェルデバイスが汚損される懸念がある。
【0199】
【表3】
【0200】
本発明の実施形態に係る開示は、以下の構成および方法を含む。
（方法１）
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、
前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、
前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、
前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、
前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、
を有し、
前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする粒子封入方法。
（方法２）
前記マイクロウェルデバイスは、隔壁部材をさらに有し、
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を、前記アレイを挟んで２つ有し、また、前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第１の方向に垂直な第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分をさらに有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、方法１に記載の粒子封入方法。
（方法３）
前記ワイピング部材は、前記除去工程において前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させる第１の面を有し、
前記導入工程は、前記第１の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、
方法２に記載の粒子封入方法。
（方法４）
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、方法３に記載の粒子封入方法。
（方法５）
前記ワイピング部材は、前記封止工程において前記封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させる第２の面を有し、
前記封止工程は、前記第２の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記封止媒体を導入することを含む、方法２乃至４のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法６）
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、方法５に記載の粒子封入方法。
（方法７）
前記ワイピング部材は、前記除去工程において前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させる第１の面と、前記第１の面から前記第１の方向に延びて前記第１の方向に垂直な第２の方向への前記分散媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切りとを有し、
前記導入工程は、前記第１の仕切りと前記第１の面とで画定される領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、方法１乃至６のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法８）
前記ワイピング部材は、前記封止工程において前記封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させる第２の面を有し、また、前記ワイピング部材は、前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられており、
前記封止工程は、前記第２の仕切りと前記第２の面とで画定される領域に、前記封止媒体を導入することを含む、方法７に記載の粒子封入方法。
（方法９）
前記ベースプレートは、透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されており、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、方法１乃至８のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法１０）
前記ベースプレートおよび前記ワイピング部材は、それぞれ透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有し、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、方法１乃至９のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法１１）
前記封止工程は、前記ワイピング部材を、前記ベースプレートの上面に接した状態で前記第１の方向と逆の方向にスライドさせて前記封止媒体を前記マイクロウェルの上に移動させることを含む、方法１乃至１０のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法１２）
前記マイクロウェルの前記第１の方向の最大長さ、前記第１の方向に垂直な第２の方向の最大長さ、および深さは、それぞれ前記検査粒子の平均粒子径の１．０倍以上２．０倍未満である、方法１乃至１１のいずれかに記載の粒子封入方法。
（構成１）
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備え、
前記マイクロウェルは、分散媒体に分散された検査粒子を収容するためのウェルであり、
前記ワイピング部材は、前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることが可能なように構成されている、ことを特徴とするマイクロウェルデバイス。
（構成２）
隔壁部材をさらに有し、
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を少なくとも有することで、前記ベースプレートの上面において前記第１の方向と垂直な第２の方向に向かう前記分散媒体の流れを妨げるように構成されている、構成１に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成３）
前記隔壁部材は、前記アレイを挟んで設けられた２つの前記第１の部分と、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分とを有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、構成２に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成４）
前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの一方の端部同士を接続する前記第２の部分と、前記２つの第１の部分のそれぞれの他方の端部同士を接続する前記第２の部分との２つの前記第２の部分を有する、構成３に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成５）
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、構成３または４に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成６）
前記ワイピング部材は、前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させるように構成された第１の面と、前記第１の面から前記第１の方向に延びて前記第１の方向に垂直な第２の方向への前記分散媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切りとを有する、構成１乃至５のいずれかに記載のマイクロウェルデバイス。
（構成７）
前記ワイピング部材は、前記マイクロウェルを封止するための封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させるように構成された第２の面を有し、また、前記ワイピング部材は、前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられている、構成６に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成８）
前記ベースプレートは、透光性を有する材料からなる、構成１乃至７のいずれかに記載のマイクロウェルデバイス。
（構成９）
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されている、構成８に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成１０）
前記ワイピング部材は、透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有する、構成８または９に記載のマイクロウェルデバイス。
（方法１３）
ターゲット物質を特異的に捕捉する前記検査粒子と、前記ターゲット物質とを反応させる反応工程と、
前記反応工程の後に、前記検査粒子を用いて方法１乃至１１のいずれか１項に記載の粒子封入方法を行う粒子封入工程と、
前記粒子封入工程の後に、前記マイクロウェルの各々に収容された前記検査粒子のうちの前記ターゲット物質を捕捉した前記検査粒子を検出する検出工程と、
を有する、ことを特徴とするターゲット物質検出方法。
（方法１４）
前記検出工程は、酵素の活性により発生した蛍光を検出することを含む、方法１３に記載のターゲット物質検出方法。
（方法１）
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備えたマイクロウェルデバイスを準備する準備工程と、
前記アレイに、検査粒子を含む分散媒体を導入する導入工程と、
前記マイクロウェルに前記検査粒子を充填する充填工程と、
前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を除去する除去工程と、
前記マイクロウェルを封止媒体で封止する封止工程と、
を有し、
前記除去工程は、前記ワイピング部材を前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることを含む、ことを特徴とする粒子封入方法。
（方法２）
前記マイクロウェルデバイスは、隔壁部材をさらに有し、
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を、前記アレイを挟んで２つ有し、また、前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第１の方向に垂直な第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分をさらに有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、方法１に記載の粒子封入方法。
（方法３）
前記ワイピング部材は、前記除去工程において前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させる第１の面を有し、
前記導入工程は、前記第１の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、
方法２に記載の粒子封入方法。
（方法４）
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、方法３に記載の粒子封入方法。
（方法５）
前記ワイピング部材は、前記封止工程において前記封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させる第２の面を有し、
前記封止工程は、前記第２の面と、前記第２の部分とで挟まれた領域に、前記封止媒体を導入することを含む、方法２乃至４のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法６）
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、方法５に記載の粒子封入方法。
（方法７）
前記ワイピング部材は、前記除去工程において前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させる第１の面と、前記第１の面から前記第１の方向に延びて前記第１の方向に垂直な第２の方向への前記分散媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切りとを有し、
前記導入工程は、前記第１の仕切りと前記第１の面とで画定される領域に、前記検査粒子を含む前記分散媒体を導入することを含む、方法１乃至６のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法８）
前記ワイピング部材は、前記封止工程において前記封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させる第２の面を有し、また、前記ワイピング部材は、前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられており、
前記封止工程は、前記第２の仕切りと前記第２の面とで画定される領域に、前記封止媒体を導入することを含む、方法７に記載の粒子封入方法。
（方法９）
前記ベースプレートは、透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されており、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、方法１乃至８のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法１０）
前記ベースプレートおよび前記ワイピング部材は、それぞれ透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有し、
前記封止工程は、前記アレイを前記封止面で覆うことを含む、方法１乃至９のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法１１）
前記封止工程は、前記ワイピング部材を、前記ベースプレートの上面に接した状態で前記第１の方向と逆の方向にスライドさせて前記封止媒体を前記マイクロウェルの上に移動させることを含む、方法１乃至１０のいずれかに記載の粒子封入方法。
（方法１２）
前記マイクロウェルの前記第１の方向の最大長さ、前記第１の方向に垂直な第２の方向の最大長さ、および深さは、それぞれ前記検査粒子の平均粒子径の１．０倍以上２．０倍未満である、方法１乃至１１のいずれかに記載の粒子封入方法。
（構成１）
複数のマイクロウェルからなるアレイが上面に設けられたベースプレートと、ワイピング部材とを備え、
前記マイクロウェルは、分散媒体に分散された検査粒子を収容するためのウェルであり、
前記ワイピング部材は、前記ベースプレートの上面に接した状態で第１の方向にスライドさせることで、前記マイクロウェルの外にある前記分散媒体を前記アレイの外へ移動させることが可能なように構成されている、ことを特徴とするマイクロウェルデバイス。
（構成２）
隔壁部材をさらに有し、
前記隔壁部材は、前記ベースプレートの上面の前記アレイの外側において前記第１の方向に延在する第１の部分を少なくとも有することで、前記ベースプレートの上面において前記第１の方向と垂直な第２の方向に向かう前記分散媒体の流れを妨げるように構成されている、構成１に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成３）
前記隔壁部材は、前記アレイを挟んで設けられた２つの前記第１の部分と、前記２つの第１の部分のそれぞれの端部同士を接続し、前記第２の方向に延在する少なくとも１つの第２の部分とを有し、
前記ワイピング部材は、前記第２の部分とともに前記アレイを挟むことが可能なように前記２つの第１の部分の間に設置された状態で用いられるように構成されている、構成２に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成４）
前記隔壁部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれの一方の端部同士を接続する前記第２の部分と、前記２つの第１の部分のそれぞれの他方の端部同士を接続する前記第２の部分との２つの前記第２の部分を有する、構成３に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成５）
前記ワイピング部材は、前記２つの第１の部分のそれぞれと接続した状態で用いられるように構成されている、構成３または４に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成６）
前記ワイピング部材は、前記分散媒体と当接して前記分散媒体を移動させるように構成された第１の面と、前記第１の面から前記第１の方向に延びて前記第１の方向に垂直な第２の方向への前記分散媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第１の仕切りとを有する、構成１乃至５のいずれかに記載のマイクロウェルデバイス。
（構成７）
前記ワイピング部材は、前記マイクロウェルを封止するための封止媒体と当接して前記封止媒体を移動させるように構成された第２の面を有し、また、前記ワイピング部材は、前記第２の面から前記第１の方向に延びて前記第２の方向への前記封止媒体の移動を妨げるように構成された１つ以上の第２の仕切りを有し、
前記第２の仕切りは、前記第２の方向において前記第１の仕切りと同じ位置に設けられている、構成６に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成８）
前記ベースプレートは、透光性を有する材料からなる、構成１乃至７のいずれかに記載のマイクロウェルデバイス。
（構成９）
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、前記封止面は、金属で被覆されている、構成８に記載のマイクロウェルデバイス。
（構成１０）
前記ワイピング部材は、透光性を有する材料からなり、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面は、前記アレイを覆うために十分な大きさを有する封止面を有し、
前記ワイピング部材の前記ベースプレートと接する第３の面と反対の側の第４の面は、前記封止面と対向し、前記封止面を覆うのに十分な大きさを有する金属で被覆された面を有する、構成８または９に記載のマイクロウェルデバイス。
（方法１３）
ターゲット物質を特異的に捕捉する前記検査粒子と、前記ターゲット物質とを反応させる反応工程と、
前記反応工程の後に、前記検査粒子を用いて方法１乃至１１のいずれか１項に記載の粒子封入方法を行う粒子封入工程と、
前記粒子封入工程の後に、前記マイクロウェルの各々に収容された前記検査粒子のうちの前記ターゲット物質を捕捉した前記検査粒子を検出する検出工程と、
を有する、ことを特徴とするターゲット物質検出方法。
（方法１４）
前記検出工程は、酵素の活性により発生した蛍光を検出することを含む、方法１３に記載のターゲット物質検出方法。
【符号の説明】
【0201】
１０、２０、３０、４０、５０ マイクロウェルデバイス
１１ ベースプレート
１２ ワイピング部材
１２ａ 第１の面
１２ｂ 第２の面
１２ｃ 第３の面
１２ｄ 第４の面
１３ マイクロウェル
１４ アレイ
１５ 隔壁部材
１６ 第１の領域
１６ａ、１６ｂ 第３の領域
１７ 第２の領域
１７ａ、１７ｂ 第４の領域
１８ａ 検査粒子
１８ｂ 分散媒体
１９ 封止媒体
５１ 第１の仕切り
５２ 第２の仕切り
１５１ 第１の部分
１５２ 第２の部分
Ａ 第１の方向
Ｂ 第２の方向
１１ ベースプレート
１２ ワイピング部材
１２ａ 第１の面
１２ｂ 第２の面
１２ｃ 第３の面
１２ｄ 第４の面
１３ マイクロウェル
１４ アレイ
１５ 隔壁部材
１６ 第１の領域
１６ａ、１６ｂ 第３の領域
１７ 第２の領域
１７ａ、１７ｂ 第４の領域
１８ａ 検査粒子
１８ｂ 分散媒体
１９ 封止媒体
５１ 第１の仕切り
５２ 第２の仕切り
１５１ 第１の部分
１５２ 第２の部分
Ａ 第１の方向
Ｂ 第２の方向
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】