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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025015465
(43)【公開日】2025-01-30
(54)【発明の名称】インスリン誘導体の医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 38/28 20060101AFI20250123BHJP
C07K 14/62 20060101ALI20250123BHJP
C07K 5/00 20060101ALI20250123BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20250123BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20250123BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20250123BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20250123BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20250123BHJP
【ＦＩ】
A61K38/28
C07K14/62 ZNA
C07K5/00
A61P3/10
A61K9/08
A61K47/18
A61K47/10
C07K14/62
A61K38/28 ZNA
C12N15/09 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024113358
(22)【出願日】2024-07-16
(31)【優先権主張番号】23186053
(32)【優先日】2023-07-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】23195708
(32)【優先日】2023-09-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】24162420
(32)【優先日】2024-03-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(71)【出願人】
【識別番号】509091848
【氏名又は名称】ノヴォ ノルディスク アー／エス
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】カスパ・フース
(72)【発明者】
【氏名】ピーター・クレステン・ニルセン
(72)【発明者】
【氏名】ヘレ・ビルク・オルセン
(72)【発明者】
【氏名】トーマス・ホウ－イェンセン
(72)【発明者】
【氏名】スティグ・クリストファーセン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076BB21
4C076CC21
4C076DD37R
4C076DD38Q
4C076DD51Q
4C076FF36
4C076FF39
4C076FF63
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA33
4C084BA44
4C084CA59
4C084DB34
4C084MA05
4C084MA17
4C084MA56
4C084MA66
4C084NA03
4C084NA05
4C084ZC351
4C084ZC352
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA01
4H045BA09
4H045BA10
4H045BA11
4H045BA63
4H045DA37
4H045EA20
4H045FA50
4H045FA74
4H045GA25
(57)【要約】
【課題】本発明が解決しようとする課題は、アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの１つ以上のアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体の安定した組成物を開発することである。
【解決手段】本発明は、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、メチオニンと、を含む組成物、ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む糖尿病の治療におけるその使用に関する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、メチオニンと、を含む組成物、ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む糖尿病の治療におけるその使用に関する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
液体医薬組成物であって、
アリールボロン酸またはアリールボロキソール（ａｒｙｌ ｂｏｒｏｘｏｌ）などの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
アリールボロン酸またはアリールボロキソール（ａｒｙｌ ｂｏｒｏｘｏｌ）などの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
【請求項2】
単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールをさらに含む、請求項１に記載の液体医薬組成物。
【請求項3】
マンニトールを含む、請求項２に記載の液体医薬組成物。
【請求項4】
マンニトールおよびグリセロールを含む、請求項２に記載の液体医薬組成物。
【請求項5】
ｐＨが、５．０～８．０の範囲内である、請求項１～４のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項6】
フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項7】
前記インスリン誘導体が、実施例１のインスリン誘導体、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または実施例２のインスリン誘導体、もしくはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１～６のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項8】
前記組成物が、
実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項9】
前記組成物が亜鉛を実質的に含まない、請求項８に記載の液体医薬組成物。
【請求項10】
前記組成物が、
０．６～４．８ｍＭの、実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、請求項１～９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
０．６～４．８ｍＭの、実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、請求項１～９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項11】
前記組成物が、
１．２ｍＭの、実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、請求項１０に記載の液体医薬組成物。
１．２ｍＭの、実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、請求項１０に記載の液体医薬組成物。
【請求項12】
液体医薬組成物であって、
１．２ｍＭの、実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、液体医薬組成物。
１．２ｍＭの、実施例２のインスリン誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、液体医薬組成物。
【請求項13】
医薬として使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項14】
１型糖尿病および２型糖尿病を含む、糖尿病の予防または治療において使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項15】
対象者における１型糖尿病および２型糖尿病などの糖尿病を治療するための方法であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の液体医薬組成物を前記対象者に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体の新規な医薬組成物、および糖尿病に関連する医学的状態の治療または予防のためのこのような組成物の使用に関する。
【0002】
配列表の参照による組み込み
配列表
本出願は、電子形式の配列表とともに提出される。配列表の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、電子形式の配列表とともに提出される。配列表の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0003】
近年、１つ以上のアリールボロン酸またはアリールボロキソール（ａｒｙｌ ｂｏｒｏｘｏｌ）部分の含有に基づいてグルコース感受性インスリン活性を示すインスリン誘導体が公開されている（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５）。
【0004】
アリールボロン酸などのアリールホウ素化合物は、中性値付近のｐＨにおいて、水溶液中で低い安定性を有する可能性がある。Ｃ－Ｂ結合は、加水分解してフェニル残基および遊離ホウ酸、Ｐｈ－Ｈ＋Ｂ（ＯＨ）３を得ることができるか、または化合物は、酸化されてフェノール残基＋遊離ホウ酸、Ｐｈ－ＯＨ＋Ｂ（ＯＨ）３を得ることができる。したがって、アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの１つ以上のアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体の安定した組成物を開発することが望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際公開第２０２０／２０１０４１号
【特許文献2】国際公開第２０１９／０９２１２５号
【特許文献3】国際公開第２０２２／１０９０７８号
【特許文献4】国際公開第２０２１／２０２８０２号
【特許文献5】国際公開第２０２３／２２５５３４号
【発明の概要】
【0006】
最も広い態様では、本発明は、インスリン誘導体の液体医薬組成物に関し、インスリン誘導体は、アリールボロン酸またはアリールボロキソール（ａｒｙｌ ｂｏｒｏｘｏｌ）部分などの１つ以上のアリールホウ素部分を含む。驚くべきことに、メチオニンの添加は、より安定した組成物をもたらすことが見出された。また、驚くべきことに、マンニトールなどの糖アルコール（ポリオール）の添加が、より安定した組成物をもたらすことも見出された。さらに、メチオニンおよびマンニトールの両方の添加が、驚くべき安定した組成物をもたらすことが見出された。さらなる態様では、組成物は、メチオニンおよびマンニトールを含む。一態様では、組成物は安定である。一態様では、組成物は、組成物がメチオニンを含有していない場合よりも安定である。一態様では、組成物は、組成物がマンニトールを含有していない場合よりも安定である。一態様では、組成物は、組成物がメチオニンおよびマンニトールを含有していない場合よりも安定である。
【0007】
本発明は、例示的な実施形態の開示から明らかとなるさらなる問題も解決し得る。
【発明を実施するための形態】
【0008】
一態様では、本発明による組成物は、
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む。
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む。
【0009】
一態様では、本発明による組成物は、
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
【0010】
一態様では、本発明による組成物は、
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、
ｂ）マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、
ｂ）マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
【0011】
一態様では、本発明による組成物は、
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
ａ）アリールボロン酸またはアリールボロキソールなどの少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
【0012】
一態様では、本発明による組成物は、
ａ）少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、
ｂ）単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
ａ）少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、
ｂ）単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールと、を含む。
【0013】
インスリン誘導体
本明細書で使用される場合、「インスリン誘導体」という用語は、修飾インスリンペプチドを意味し、修飾は、一般的に側鎖または修飾基とも呼ばれる、化学的部分の共有結合の形態にある。一態様では、修飾は、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソール部分を含む少なくとも１つの修飾基の共有結合の形態にある。一実施形態では、各修飾基は、少なくとも２つのアリールボロン酸またはアリールボロキソール部分を含む。一実施形態では、各修飾基は、少なくとも２つのアリールボロキソール部分を含む。
本明細書で使用される場合、「インスリン誘導体」という用語は、修飾インスリンペプチドを意味し、修飾は、一般的に側鎖または修飾基とも呼ばれる、化学的部分の共有結合の形態にある。一態様では、修飾は、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソール部分を含む少なくとも１つの修飾基の共有結合の形態にある。一実施形態では、各修飾基は、少なくとも２つのアリールボロン酸またはアリールボロキソール部分を含む。一実施形態では、各修飾基は、少なくとも２つのアリールボロキソール部分を含む。
【0014】
こうしたインスリン誘導体の例は、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０２０／２０１０４１号、国際公開第２０１９／０９２１２５号、国際公開第２０２２／１０９０７８号、国際公開第２０２１／２０２８０２号、および国際公開第２０２３／２２５５３４号に開示されている。
【0015】
いくつかの実施形態では、インスリン誘導体は、その完全または部分的にイオン化された形態で組成物中に存在してもよく、例えば、１つ以上のカルボン酸基（－ＣＯＯＨ）は、カルボキシレート基（－ＣＯＯ－）に脱プロトン化されてもよく、かつ／または１つ以上のアミノ基（－ＮＨ２）は、－ＮＨ３＋基にプロトン化されてもよい。いくつかの実施形態では、インスリン誘導体は、塩の形態で組成物に添加される。いくつかの実施形態では、インスリン誘導体は、ナトリウム塩の形態で組成物に添加される。
【0016】
アリールボロン酸およびアリールボロキソール
本発明の組成物は、少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体を含む。アリールホウ素部分は、アリールボロン酸またはアリールボロキソールであってもよい。
本発明の組成物は、少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体を含む。アリールホウ素部分は、アリールボロン酸またはアリールボロキソールであってもよい。
【0017】
本明細書で使用される場合、「アリールホウ素部分」、「アリールボロン酸」、および「アリールボロキソール」という用語は、置換または非置換のバリアントを含む。アリールボロン酸の一例は、フェニルボロン酸である（化学式１）。アリールボロキソールの例は、ベンゾボロキソールであり、ベンゾオキサボロール（化学式２）としても知られる。
化学式１．フェニルボロン酸
化学式２．ベンゾボロキソール
【化1】
【化2】
【0018】
アリールホウ素部分は、化学式４などのより大きな化学的部分の一部であってもよい（式中、Ｒ１は、ＣＦ３、Ｆ、またはＨであり、Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）。
化学式４．
【化3】
【0019】
アリールボロン酸またはアリールボロキソールを含む部分は、化学的ハンドルおよび任意選択でリンカーを介してインスリンペプチドに共有結合している。リンカーは、インスリンペプチドの化学リンカーもしくはペプチド延長部、またはそれらの組み合わせであってもよい。
【0020】
インスリンペプチド
本明細書で使用される場合、「インスリンペプチド」という用語は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のいずれかであるペプチドを意味する。一実施形態では、本明細書で使用される「インスリンペプチド」という用語は、インスリン活性を有する、すなわち、インスリン受容体を活性化するヒトインスリンまたはその類似体のいずれかであるペプチドを意味する。
本明細書で使用される場合、「インスリンペプチド」という用語は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のいずれかであるペプチドを意味する。一実施形態では、本明細書で使用される「インスリンペプチド」という用語は、インスリン活性を有する、すなわち、インスリン受容体を活性化するヒトインスリンまたはその類似体のいずれかであるペプチドを意味する。
【0021】
ヒトインスリン
本明細書で使用される場合、「ヒトインスリン」という用語は、その構造および特性が周知であるヒトインスリンホルモンを意味する。ヒトインスリンは、Ａ鎖およびＢ鎖と称される２つのポリペプチド鎖を有する。Ａ鎖は、２１個のアミノ酸のペプチドであり、Ｂ鎖は、３０個のアミノ酸のペプチドであり、２つの鎖は、ジスルフィド架橋によって接続され、第１の架橋は、Ａ鎖の７位におけるシステインとＢ鎖の７位におけるシステインとの間であり、また第２の架橋は、Ａ鎖の２０位におけるシステインとＢ鎖の１９位におけるシステインとの間である。第３の架橋は、Ａ鎖の６位におけるシステインとＡ鎖の１１位におけるシステインとの間に存在する。ヒトインスリンＡ鎖は、以下の配列：ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ（配列番号１）を有する一方、Ｂ鎖は、以下の配列：ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ（配列番号２）を有する。
本明細書で使用される場合、「ヒトインスリン」という用語は、その構造および特性が周知であるヒトインスリンホルモンを意味する。ヒトインスリンは、Ａ鎖およびＢ鎖と称される２つのポリペプチド鎖を有する。Ａ鎖は、２１個のアミノ酸のペプチドであり、Ｂ鎖は、３０個のアミノ酸のペプチドであり、２つの鎖は、ジスルフィド架橋によって接続され、第１の架橋は、Ａ鎖の７位におけるシステインとＢ鎖の７位におけるシステインとの間であり、また第２の架橋は、Ａ鎖の２０位におけるシステインとＢ鎖の１９位におけるシステインとの間である。第３の架橋は、Ａ鎖の６位におけるシステインとＡ鎖の１１位におけるシステインとの間に存在する。ヒトインスリンＡ鎖は、以下の配列：ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ（配列番号１）を有する一方、Ｂ鎖は、以下の配列：ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ（配列番号２）を有する。
【0022】
インスリン類似体
本明細書で使用される場合、「インスリン類似体」という用語は、インスリンの１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基によって置換されており、かつ／または１つ以上のアミノ酸残基がインスリンから欠失しており、かつ／または１つ以上のアミノ酸残基がインスリンに付加および／もしくは挿入されている、修飾ヒトインスリンを意味する。本明細書で使用される場合、「インスリン類似体」という用語は、インスリン活性を示す、すなわち、インスリン受容体に結合しインスリン受容体を活性化する、インスリン類似体を意味する。
本明細書で使用される場合、「インスリン類似体」という用語は、インスリンの１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基によって置換されており、かつ／または１つ以上のアミノ酸残基がインスリンから欠失しており、かつ／または１つ以上のアミノ酸残基がインスリンに付加および／もしくは挿入されている、修飾ヒトインスリンを意味する。本明細書で使用される場合、「インスリン類似体」という用語は、インスリン活性を示す、すなわち、インスリン受容体に結合しインスリン受容体を活性化する、インスリン類似体を意味する。
【0023】
インスリン分子内の修飾は、鎖（ＡまたはＢ）、位置、および天然アミノ酸残基を置換するアミノ酸残基の１文字または３文字のコードを述べることで表わされる。本明細書では、「Ａ１」、「Ａ２」、および「Ａ３」などの用語は、（Ｎ末端から数えて）インスリンのＡ鎖のそれぞれ１位、２位、および３位などのアミノ酸を示す。同様に、Ｂ１、Ｂ２、およびＢ３などの用語は、（Ｎ末端から数えて）インスリンのＢ鎖のそれぞれ１位、２位、および３位などにおけるアミノ酸を示す。アミノ酸の１文字コードを使用すると、Ｂ２９Ｋという用語は、Ｂ２９位におけるアミノ酸がＫであることを指定している。アミノ酸の３文字コードを使用すると、対応する表現は、Ｂ２９Ｌｙｓである。「ｄｅｓＢ３０」とは、Ｂ３０アミノ酸を欠くインスリン類似体を意味する。
【0024】
特定の実施形態では、類似体は、特定の変化を「有する」または「含む」。他の特定の実施形態では、類似体は、変化「から成る」。「から成る」または「から成っている」という用語が類似体に関連して使用される場合、例えば、類似体が、特定のアミノ酸変異の群から成るか、または成っている場合、当然のことながら、特定のアミノ酸変異は、類似体における唯一のアミノ酸変異である。対照的に、特定のアミノ酸変異の群を「含む」類似体は、さらなる変異を有し得る。
【0025】
インスリン類似体の例としては、
ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号１のＡ鎖および配列番号３のＢ鎖）が挙げられる。
ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号１のＡ鎖および配列番号３のＢ鎖）が挙げられる。
【0026】
抗酸化物質
抗酸化物質は、液体製剤中の医薬タンパク質を酸化から安定化させるために使用され得る。一般的に知られている抗酸化物質はアスコルビン酸（ビタミンＣ）である。少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物にアスコルビン酸を添加すると、製剤中のインスリン誘導体の安定性の大幅な低下をもたらした。
抗酸化物質は、液体製剤中の医薬タンパク質を酸化から安定化させるために使用され得る。一般的に知られている抗酸化物質はアスコルビン酸（ビタミンＣ）である。少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物にアスコルビン酸を添加すると、製剤中のインスリン誘導体の安定性の大幅な低下をもたらした。
【0027】
メチオニン
Ｌ－メチオニンは、タンパク質原生アミノ酸である。ポリペプチドまたはタンパク質中のメチオニン残基は酸化の影響を受けやすく、メチオニンは、メチオニン残基を含むポリペプチドまたはタンパク質の製剤の安定剤として使用されてきた。添加される量は、メチオニンスルホキシドの量が許容可能なレベルまで、メチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量であるべきである。一般的に、これは、加えられたメチオニン対メチオニン残基の比が約１：１～約１０００：１（約１０：１～約１００：１など）の範囲となるように、組成物中にメチオニンを添加することによって達成できる。ヒトインスリンは、メチオニン残基を全く含まず、したがって、メチオニンは、インスリン製剤中の一般的な賦形剤ではないが、メチオニンは、抗酸化特性を有することが報告されている。
Ｌ－メチオニンは、タンパク質原生アミノ酸である。ポリペプチドまたはタンパク質中のメチオニン残基は酸化の影響を受けやすく、メチオニンは、メチオニン残基を含むポリペプチドまたはタンパク質の製剤の安定剤として使用されてきた。添加される量は、メチオニンスルホキシドの量が許容可能なレベルまで、メチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量であるべきである。一般的に、これは、加えられたメチオニン対メチオニン残基の比が約１：１～約１０００：１（約１０：１～約１００：１など）の範囲となるように、組成物中にメチオニンを添加することによって達成できる。ヒトインスリンは、メチオニン残基を全く含まず、したがって、メチオニンは、インスリン製剤中の一般的な賦形剤ではないが、メチオニンは、抗酸化特性を有することが報告されている。
【0028】
驚くべきことに、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物へのメチオニンの添加が、製剤中のインスリン誘導体の安定性の増加をもたらすことが見出された。
【0029】
本明細書で使用される場合、「メチオニン」という用語は、Ｌ－メチオニン、Ｄ－メチオニン、およびメチオニンのラセミ体を含む。
【0030】
等張化剤
等張化剤は、インスリン誘導体の溶液が体内に注射されるときに、適切な浸透圧を維持する効果を有する。一般的に使用される等張化剤には、塩（例えば、塩化ナトリウム）、糖（単糖類、二糖類もしくは多糖類または水溶性グルカン、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストランを含む）、糖アルコール（マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ダルシトール、キシリトール、アラビトールなど）、アミノ酸（例えば、Ｌ－グリシン、Ｌ－ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、トレオニン）、アルジトール（例えば、グリセロール（グリセリン）、１，２－プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３－プロパンジオール、１，３－ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、またはそれらの混合物が含まれる。等張化剤は、一般的に等張剤とも呼ばれる。医薬組成物に等張化剤を使用することは、当業者には周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照され得る。
等張化剤は、インスリン誘導体の溶液が体内に注射されるときに、適切な浸透圧を維持する効果を有する。一般的に使用される等張化剤には、塩（例えば、塩化ナトリウム）、糖（単糖類、二糖類もしくは多糖類または水溶性グルカン、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストランを含む）、糖アルコール（マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ダルシトール、キシリトール、アラビトールなど）、アミノ酸（例えば、Ｌ－グリシン、Ｌ－ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、トレオニン）、アルジトール（例えば、グリセロール（グリセリン）、１，２－プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３－プロパンジオール、１，３－ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、またはそれらの混合物が含まれる。等張化剤は、一般的に等張剤とも呼ばれる。医薬組成物に等張化剤を使用することは、当業者には周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照され得る。
【0031】
安定剤としてのグリセロールおよび糖アルコール
驚くべきことに、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物に、等張化剤として一般的に使用されるグリセロールを添加すると、製剤中のインスリン誘導体の安定性の増加をもたらすことが見出された。さらに驚くべきことに、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物に、等張化剤として使用される場合よりもはるかに少ない量で糖アルコールであるマンニトールを添加すると、製剤中のインスリン誘導体の安定性の増加をもたらすことが見出された。糖アルコールであるソルビトールについて同様の効果が見られた。比較すると、糖類であるスクロースおよびトレハロースの添加は、製剤中のインスリン誘導体の安定性に影響を及ぼさなかった。したがって、マンニトール、ソルビトール、および／またはグリセロールが、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物の安定剤として作用することは、非常に驚くべきことである。
驚くべきことに、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物に、等張化剤として一般的に使用されるグリセロールを添加すると、製剤中のインスリン誘導体の安定性の増加をもたらすことが見出された。さらに驚くべきことに、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物に、等張化剤として使用される場合よりもはるかに少ない量で糖アルコールであるマンニトールを添加すると、製剤中のインスリン誘導体の安定性の増加をもたらすことが見出された。糖アルコールであるソルビトールについて同様の効果が見られた。比較すると、糖類であるスクロースおよびトレハロースの添加は、製剤中のインスリン誘導体の安定性に影響を及ぼさなかった。したがって、マンニトール、ソルビトール、および／またはグリセロールが、少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体の組成物の安定剤として作用することは、非常に驚くべきことである。
【0032】
本明細書で使用される場合、「マンニトール」という用語には、Ｄ－マンニトール、Ｌ－マンニトールおよびマンニトールのラセミ体が含まれる。
【0033】
亜鉛
亜鉛は、貯蔵中の分解に対する予防策として、六量体形成を促進するために治療用インスリン調製物に常用される。六量体への促進は、Ｚｎ２＋残基とインスリンＨｉｓＢ１０残基との間の相互作用によって駆動される。Ｚｎ２＋は通常、塩化亜鉛または酢酸亜鉛などの亜鉛塩の形態で添加される。
亜鉛は、貯蔵中の分解に対する予防策として、六量体形成を促進するために治療用インスリン調製物に常用される。六量体への促進は、Ｚｎ２＋残基とインスリンＨｉｓＢ１０残基との間の相互作用によって駆動される。Ｚｎ２＋は通常、塩化亜鉛または酢酸亜鉛などの亜鉛塩の形態で添加される。
【0034】
実施例１のインスリン誘導体を含む試験された組成物は、亜鉛がない場合よりも亜鉛の存在下でより安定であった。驚くべきことに、実施例２のインスリン誘導体を含む試験された組成物は、亜鉛の存在下よりも亜鉛がない場合の方がより安定であることが見出された。
【0035】
防腐剤
本発明のさらなる態様では、製剤は、薬学的に許容可能な防腐剤をさらに含む。防腐剤は、医薬調製物での使用に適した防腐剤から選択することができる。本発明のさらなる実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾール、またはそれらの混合物などのフェノール系防腐剤から選択される。本発明のさらなる実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾール、またはそれらの混合物から成る群から選択される。医薬組成物に防腐剤を使用することは、当業者には周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照され得る。
本発明のさらなる態様では、製剤は、薬学的に許容可能な防腐剤をさらに含む。防腐剤は、医薬調製物での使用に適した防腐剤から選択することができる。本発明のさらなる実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾール、またはそれらの混合物などのフェノール系防腐剤から選択される。本発明のさらなる実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾール、またはそれらの混合物から成る群から選択される。医薬組成物に防腐剤を使用することは、当業者には周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照され得る。
【0036】
追加の賦形剤
本発明の組成物は、追加的な賦形剤も含み得る。「賦形剤」という用語は、活性治療成分以外の任意の成分を広範に指す。賦形剤は、非活性物質、不活性物質、および／または医薬的に活性でない物質であり得る。賦形剤は、例えば、担体、ビヒクル、希釈剤として様々な目的を果たし、かつ／または活性物質の投与および／もしくは吸収を改善するように機能し得る。賦形剤の非限定的な例は、溶媒、希釈剤、緩衝液、防腐剤、張性調節剤、キレート剤、および安定剤である。様々な賦形剤を伴った薬学的に活性成分の製剤化は、当技術分野において公知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば、第２１版（２００５）および任意のその後の版）を参照）。
本発明の組成物は、追加的な賦形剤も含み得る。「賦形剤」という用語は、活性治療成分以外の任意の成分を広範に指す。賦形剤は、非活性物質、不活性物質、および／または医薬的に活性でない物質であり得る。賦形剤は、例えば、担体、ビヒクル、希釈剤として様々な目的を果たし、かつ／または活性物質の投与および／もしくは吸収を改善するように機能し得る。賦形剤の非限定的な例は、溶媒、希釈剤、緩衝液、防腐剤、張性調節剤、キレート剤、および安定剤である。様々な賦形剤を伴った薬学的に活性成分の製剤化は、当技術分野において公知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば、第２１版（２００５）および任意のその後の版）を参照）。
【0037】
本発明の組成物は、液体製剤、すなわち、水を含む水性製剤の形態にある。液体製剤は、溶液または懸濁液であってもよい。本発明の組成物は、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、または静脈注射によって実施される非経口投与用であってもよい。
【0038】
実施形態のリスト
本発明は、以下の非限定的実施形態によってさらに説明される。
１．液体医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
２．液体医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
３．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～６０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～４５ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～３０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７．メチオニンの濃度が、７ｍＭ～２０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８．メチオニンの濃度が、１５ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９．メチオニンの濃度が、１６ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０．メチオニンの濃度が、３０ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１．メチオニンの濃度が、４５ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２．１つ以上の糖アルコールをさらに含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１３．糖アルコールをさらに含む、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１４．組成物中の糖アルコールの総濃度が、１ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１５．組成物中の糖アルコールの総濃度が、２ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１６．組成物中の糖アルコールの総濃度が、５ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１７．組成物中の糖アルコールの総濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１８．組成物中の糖アルコールの総濃度が、２０ｍＭ～４０ｍＭの範囲内である、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１９．マンニトールをさらに含む、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２０．組成物中のマンニトールの濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２１．組成物中のマンニトールの濃度が、２０ｍＭ～４０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２２．組成物中のマンニトールの濃度が、４０ｍＭ～８０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２３．組成物中のマンニトールの濃度が、２０ｍＭである、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２４．組成物中のマンニトールの濃度が、３０ｍＭである、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２５．組成物中のマンニトールの濃度が、４０ｍＭである、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２６．組成物中のマンニトールの濃度が、８０ｍＭである、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２７．単独または組み合わせのいずれかでの、糖アルコールまたはグリセロールをさらに含む、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２８．グリセロールおよび糖アルコールをさらに含む、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２９．単独または組み合わせのいずれかでの、マンニトール、ソルビトールまたはグリセロールをさらに含む、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３０．マンニトールおよびグリセロールをさらに含む、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３１．組成物中のグリセロールの濃度が、１０ｍＭ～６００ｍＭの範囲内である、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３２．組成物中のグリセロールの濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３３．組成物中のグリセロールの濃度が、１００ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３４．組成物中のグリセロールの濃度が、１００ｍＭ～２３０ｍＭの範囲内である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３５．組成物中のグリセロールの濃度が、１５０ｍＭ～２３０ｍＭの範囲内である、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３６．組成物中のグリセロールの濃度が、１５２ｍＭ～２１７ｍＭの範囲内である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３７．組成物中のグリセロールの濃度が、１８５ｍＭ～２１７ｍＭの範囲内である、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３８．組成物中のグリセロールの濃度が、１５２ｍＭである、実施形態１～３７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３９．組成物中のグリセロールの濃度が、１６５ｍＭである、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４０．組成物中のグリセロールの濃度が、１７４ｍＭである、実施形態１～３９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４１．組成物中のグリセロールの濃度が、１８５ｍＭである、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４２．組成物中のグリセロールの濃度が、１９５ｍＭである、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４３．組成物中のグリセロールの濃度が、２１７ｍＭである、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４４．ｐＨが、５．０～８．０の範囲内である、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４５．ｐＨが、６．４～７．４の範囲内である、実施形態１～４４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４６．ｐＨが、６．６である、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４７．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～４５ｍＭの範囲内であり、組成物中のマンニトールの濃度が、４０ｍＭ～８０ｍＭの範囲内であり、組成物中のグリセロールの濃度が、１５２ｍＭ～２１７ｍＭの範囲内である、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４８．フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４９．フェノール系防腐剤が、フェノールである、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５０．フェノール系防腐剤が、６０ｍＭの濃度のフェノールである、実施形態１～４９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５１．フェノール系防腐剤が、ｍ－クレゾールである、実施形態１～５０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５２．フェノール系防腐剤が、３２ｍＭの濃度のｍ－クレゾールである、実施形態１～５１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５３．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールである、実施形態１～５２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５４．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１０～６０ｍＭの範囲内であり、メタクレゾールの濃度が、１０～４０ｍＭの範囲内である、実施形態１～５３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５５．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１６～３２ｍＭの範囲内であり、メタクレゾールの濃度が、１６～３２ｍＭの範囲内である、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５６．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１６ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、１６ｍＭである、実施形態１～５５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５７．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、２１ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、２１ｍＭである、実施形態１～５６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５８．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、２５ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、２５ｍＭである、実施形態１～５７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５９．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１６ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、３２ｍＭである、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６０．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、６０ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、１６ｍＭである、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６１．インスリン誘導体が、少なくとも４つのアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６２．インスリン誘導体が、４～２０個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６３．インスリン誘導体が、４～１６個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６４．インスリン誘導体が、４～１２個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６５．インスリン誘導体が、４～８個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６６．インスリン誘導体が、４～６個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６７．アリールボロン酸またはアリールボロキソールが、アリールボロン酸である、実施形態１～６６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６８．アリールボロン酸またはアリールボロキソールが、アリールボロキソールである、実施形態１～６７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６９．インスリン誘導体が、２つのアリールボロキソールを各々が含む１つ以上の修飾基を含む、実施形態１～６８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７０．インスリン誘導体が、２つのアリールボロキソールを各々が含む１～６個の修飾基を含む、実施形態１～６９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７１．インスリン誘導体が、任意選択的に置換されている、
の少なくとも１つを含む、実施形態１～７０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７２．インスリン誘導体が、任意選択的に置換されている、
の少なくとも１つを含む、実施形態１～７１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７３．インスリン誘導体が、
の少なくとも１つを含む（式中、フェニル環は、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、およびＣＦ３から選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されている）、実施形態１～７２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７４．インスリン誘導体が、
の少なくとも１つを含む（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、またはＣＦ３である）、実施形態１～７３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７５．インスリン誘導体が、
の少なくとも１つを含む（式中、Ｒ１は、ＨまたはＣＦ３である）、実施形態１～７４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７６．インスリン誘導体が、
の少なくとも１つを含む、実施形態１～７５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７７．インスリン誘導体が、
の少なくとも１つを含む（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、またはＣＦ３であり、Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）、実施形態１～７６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７８．インスリン誘導体が、
の少なくとも１つを含む（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨＦ２、またはＣＦ３であり、Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）、実施形態１～７７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７９．Ｒ１が、ＨまたはＣＦ３である、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８０．Ｒ２が、Ｈであり、Ｒ３が、Ｈである、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８１．Ｒ２が、Ｈであり、Ｒ３が、ＣＨ３である、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８２．Ｒ２が、ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｈである、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８３．インスリン誘導体が、以下の少なくとも１つを含む、実施形態１～８２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８４．インスリン誘導体が、インスリン骨格および／またはペプチド延長インスリン骨格内のアミノ酸残基に共有結合された、
の少なくとも１つを含む、実施形態１～８３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８５．インスリン誘導体が、以下の少なくとも１つを含む、実施形態１～８４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８６．インスリン誘導体が、インスリン骨格および／またはペプチド延長インスリン骨格内のアミノ酸残基に共有結合された、
の少なくとも１つを含む、実施形態１～８５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８７．インスリン誘導体が、
（実施例１のインスリン誘導体）、またはその薬学的に許容可能な塩である、実施形態１～８６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８８．インスリン誘導体が、実施例１のインスリン誘導体である、実施形態１～８７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８９．インスリン誘導体が、
（実施例２のインスリン誘導体）、またはその薬学的に許容可能な塩である、実施形態１～８８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９０．インスリン誘導体が、実施例２のインスリン誘導体である、実施形態１～８９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９１．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、実施形態１～９０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９２．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
フェノールと、
メタクレゾールと、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、実施形態１～９１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９３．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
フェノールと、
メタクレゾールと、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、から実質的に成る、実施形態１～９２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９４．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１５～４５ｍＭのメチオニンと、
１４０～２５０ｍＭのグリセロールと、
２０～８０ｍＭのマンニトールと、を含む、実施形態１～９３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９５．組成物が、３０～４５ｍＭのメチオニンを含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９６．組成物が、４０～８０ｍＭのマンニトールを含む、実施形態１～９５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９７．組成物が、１５２～２１７ｍＭのグリセロールを含む、実施形態１～９６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９８．組成物が、亜鉛を実質的に含まない、実施形態１～９７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９９．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、を含む、実施形態１～９８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１００．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～９９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０１．組成物が、
０．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１００のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０２．組成物が、
１．２ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０３．組成物が、
２．４ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０４．組成物が、
３．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０５．組成物が、
４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０６．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０７．組成物が、
０．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０８．組成物が、
１．２ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０９．組成物が、
２．４ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１０．組成物が、
３．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１１．組成物が、
４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１２．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１６ｍＭのフェノールと、
１６ｍＭのメタクレゾールと、
１８５ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
３０ｍＭのメチオニンと、を含み
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１１１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１３．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１６ｍＭのフェノールと、
１６ｍＭのメタクレゾールと、
１８５ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
３０ｍＭのメチオニンと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１１２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１４．組成物が、亜鉛を実質的に含まない、実施形態１～１１３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１５．組成物が、亜鉛イオンを実質的に含まない、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１６．インスリン誘導体が、実施例２のインスリン誘導体である場合、組成物は、亜鉛を実質的に含まない、実施形態１～１１５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１７．インスリン誘導体が、実施例２のインスリン誘導体である場合、組成物は、亜鉛イオンを実質的に含まない、実施形態１～１１６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１８．医薬として使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１９．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）の予防または治療において使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２０．糖尿病の予防または治療において使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２１．１型糖尿病および２型糖尿病の予防または治療において使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２２．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）の治療または予防のための医薬の製造のための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物の、使用。
１２３．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）を治療または予防するための方法であって、それを必要とする対象者に、治療有効量の実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物を投与することを含む、方法。
１２４．対象者における糖尿病の治療するための方法であって、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物を前述の対象者に投与することを含む、方法。
本発明は、以下の非限定的実施形態によってさらに説明される。
１．液体医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのアリールホウ素部分を含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
２．液体医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
３．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～６０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～４５ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～３０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７．メチオニンの濃度が、７ｍＭ～２０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８．メチオニンの濃度が、１５ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９．メチオニンの濃度が、１６ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０．メチオニンの濃度が、３０ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１．メチオニンの濃度が、４５ｍＭである、実施形態１～２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２．１つ以上の糖アルコールをさらに含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１３．糖アルコールをさらに含む、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１４．組成物中の糖アルコールの総濃度が、１ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１５．組成物中の糖アルコールの総濃度が、２ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１６．組成物中の糖アルコールの総濃度が、５ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１７．組成物中の糖アルコールの総濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１８．組成物中の糖アルコールの総濃度が、２０ｍＭ～４０ｍＭの範囲内である、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１９．マンニトールをさらに含む、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２０．組成物中のマンニトールの濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２１．組成物中のマンニトールの濃度が、２０ｍＭ～４０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２２．組成物中のマンニトールの濃度が、４０ｍＭ～８０ｍＭの範囲内である、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２３．組成物中のマンニトールの濃度が、２０ｍＭである、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２４．組成物中のマンニトールの濃度が、３０ｍＭである、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２５．組成物中のマンニトールの濃度が、４０ｍＭである、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２６．組成物中のマンニトールの濃度が、８０ｍＭである、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２７．単独または組み合わせのいずれかでの、糖アルコールまたはグリセロールをさらに含む、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２８．グリセロールおよび糖アルコールをさらに含む、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２９．単独または組み合わせのいずれかでの、マンニトール、ソルビトールまたはグリセロールをさらに含む、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３０．マンニトールおよびグリセロールをさらに含む、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３１．組成物中のグリセロールの濃度が、１０ｍＭ～６００ｍＭの範囲内である、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３２．組成物中のグリセロールの濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３３．組成物中のグリセロールの濃度が、１００ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３４．組成物中のグリセロールの濃度が、１００ｍＭ～２３０ｍＭの範囲内である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３５．組成物中のグリセロールの濃度が、１５０ｍＭ～２３０ｍＭの範囲内である、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３６．組成物中のグリセロールの濃度が、１５２ｍＭ～２１７ｍＭの範囲内である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３７．組成物中のグリセロールの濃度が、１８５ｍＭ～２１７ｍＭの範囲内である、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３８．組成物中のグリセロールの濃度が、１５２ｍＭである、実施形態１～３７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３９．組成物中のグリセロールの濃度が、１６５ｍＭである、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４０．組成物中のグリセロールの濃度が、１７４ｍＭである、実施形態１～３９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４１．組成物中のグリセロールの濃度が、１８５ｍＭである、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４２．組成物中のグリセロールの濃度が、１９５ｍＭである、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４３．組成物中のグリセロールの濃度が、２１７ｍＭである、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４４．ｐＨが、５．０～８．０の範囲内である、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４５．ｐＨが、６．４～７．４の範囲内である、実施形態１～４４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４６．ｐＨが、６．６である、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４７．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～４５ｍＭの範囲内であり、組成物中のマンニトールの濃度が、４０ｍＭ～８０ｍＭの範囲内であり、組成物中のグリセロールの濃度が、１５２ｍＭ～２１７ｍＭの範囲内である、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４８．フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４９．フェノール系防腐剤が、フェノールである、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５０．フェノール系防腐剤が、６０ｍＭの濃度のフェノールである、実施形態１～４９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５１．フェノール系防腐剤が、ｍ－クレゾールである、実施形態１～５０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５２．フェノール系防腐剤が、３２ｍＭの濃度のｍ－クレゾールである、実施形態１～５１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５３．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールである、実施形態１～５２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５４．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１０～６０ｍＭの範囲内であり、メタクレゾールの濃度が、１０～４０ｍＭの範囲内である、実施形態１～５３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５５．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１６～３２ｍＭの範囲内であり、メタクレゾールの濃度が、１６～３２ｍＭの範囲内である、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５６．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１６ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、１６ｍＭである、実施形態１～５５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５７．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、２１ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、２１ｍＭである、実施形態１～５６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５８．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、２５ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、２５ｍＭである、実施形態１～５７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５９．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、１６ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、３２ｍＭである、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６０．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールであり、フェノールの濃度が、６０ｍＭであり、メタクレゾールの濃度が、１６ｍＭである、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６１．インスリン誘導体が、少なくとも４つのアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６２．インスリン誘導体が、４～２０個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６３．インスリン誘導体が、４～１６個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６４．インスリン誘導体が、４～１２個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６５．インスリン誘導体が、４～８個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６６．インスリン誘導体が、４～６個のアリールホウ素部分を含む、実施形態１～６５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６７．アリールボロン酸またはアリールボロキソールが、アリールボロン酸である、実施形態１～６６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６８．アリールボロン酸またはアリールボロキソールが、アリールボロキソールである、実施形態１～６７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６９．インスリン誘導体が、２つのアリールボロキソールを各々が含む１つ以上の修飾基を含む、実施形態１～６８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７０．インスリン誘導体が、２つのアリールボロキソールを各々が含む１～６個の修飾基を含む、実施形態１～６９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７１．インスリン誘導体が、任意選択的に置換されている、
【化4】
７２．インスリン誘導体が、任意選択的に置換されている、
【化5】
７３．インスリン誘導体が、
【化6】
７４．インスリン誘導体が、
【化7】
７５．インスリン誘導体が、
【化8】
７６．インスリン誘導体が、
【化9】
７７．インスリン誘導体が、
【化10】
７８．インスリン誘導体が、
【化11】
７９．Ｒ１が、ＨまたはＣＦ３である、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８０．Ｒ２が、Ｈであり、Ｒ３が、Ｈである、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８１．Ｒ２が、Ｈであり、Ｒ３が、ＣＨ３である、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８２．Ｒ２が、ＣＨ３であり、Ｒ３が、Ｈである、実施形態７７～７８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８３．インスリン誘導体が、以下の少なくとも１つを含む、実施形態１～８２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
【化12】
【化13】
８５．インスリン誘導体が、以下の少なくとも１つを含む、実施形態１～８４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
【化14】
【化15】
８７．インスリン誘導体が、
【化16】
８８．インスリン誘導体が、実施例１のインスリン誘導体である、実施形態１～８７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８９．インスリン誘導体が、
【化17】
９０．インスリン誘導体が、実施例２のインスリン誘導体である、実施形態１～８９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９１．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、実施形態１～９０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９２．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
フェノールと、
メタクレゾールと、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、実施形態１～９１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９３．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
フェノールと、
メタクレゾールと、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、から実質的に成る、実施形態１～９２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９４．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１５～４５ｍＭのメチオニンと、
１４０～２５０ｍＭのグリセロールと、
２０～８０ｍＭのマンニトールと、を含む、実施形態１～９３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９５．組成物が、３０～４５ｍＭのメチオニンを含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９６．組成物が、４０～８０ｍＭのマンニトールを含む、実施形態１～９５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９７．組成物が、１５２～２１７ｍＭのグリセロールを含む、実施形態１～９６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９８．組成物が、亜鉛を実質的に含まない、実施形態１～９７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９９．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、を含む、実施形態１～９８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１００．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～９９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０１．組成物が、
０．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１００のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０２．組成物が、
１．２ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０３．組成物が、
２．４ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０４．組成物が、
３．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０５．組成物が、
４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０６．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０７．組成物が、
０．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０８．組成物が、
１．２ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０９．組成物が、
２．４ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１０．組成物が、
３．６ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１０９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１１．組成物が、
４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
３０ｍＭのメチオニンと、
１５２ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
２５ｍＭのフェノールと、
２５ｍＭのメタクレゾールと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１２．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１６ｍＭのフェノールと、
１６ｍＭのメタクレゾールと、
１８５ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
３０ｍＭのメチオニンと、を含み
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１１１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１３．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１６ｍＭのフェノールと、
１６ｍＭのメタクレゾールと、
１８５ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
３０ｍＭのメチオニンと、から実質的に成り、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１１２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１４．組成物が、亜鉛を実質的に含まない、実施形態１～１１３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１５．組成物が、亜鉛イオンを実質的に含まない、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１６．インスリン誘導体が、実施例２のインスリン誘導体である場合、組成物は、亜鉛を実質的に含まない、実施形態１～１１５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１７．インスリン誘導体が、実施例２のインスリン誘導体である場合、組成物は、亜鉛イオンを実質的に含まない、実施形態１～１１６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１８．医薬として使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１９．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）の予防または治療において使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２０．糖尿病の予防または治療において使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２１．１型糖尿病および２型糖尿病の予防または治療において使用するための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２２．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）の治療または予防のための医薬の製造のための、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物の、使用。
１２３．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）を治療または予防するための方法であって、それを必要とする対象者に、治療有効量の実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物を投与することを含む、方法。
１２４．対象者における糖尿病の治療するための方法であって、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物を前述の対象者に投与することを含む、方法。
【0039】
本発明は、以下の実施形態の第２のリストによってさらに定義される。
１．液体医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
２．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１に記載の液体医薬組成物。
３．単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールをさらに含む、実施形態１または２に記載の液体医薬組成物。
４．マンニトールをさらに含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５．マンニトールおよびグリセロールをさらに含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６．組成物中のマンニトールの濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７．組成物中のグリセロールの濃度が、１０ｍＭ～６００ｍＭの範囲内である、実施形態１～６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８．ｐＨが、６．４～７．４の範囲内である、実施形態１～７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９．フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０．アリールボロン酸またはアリールボロキソールが、アリールボロキソールである、実施形態１～９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１．少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体が、実施例１のインスリン誘導体または実施例２のインスリン誘導体である、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
フェノールと、
メタクレゾールと、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１３．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１６ｍＭのフェノールと、
１６ｍＭのメタクレゾールと、
１８５ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
３０ｍＭのメチオニンと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１４．医薬として使用するための、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１５．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）の予防または治療において使用するための、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１．液体医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体と、
ｂ）メチオニンと、を含む、液体医薬組成物。
２．メチオニンの濃度が、５ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１に記載の液体医薬組成物。
３．単独または組み合わせのいずれかでの、グリセロール、またはマンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコールをさらに含む、実施形態１または２に記載の液体医薬組成物。
４．マンニトールをさらに含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５．マンニトールおよびグリセロールをさらに含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６．組成物中のマンニトールの濃度が、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７．組成物中のグリセロールの濃度が、１０ｍＭ～６００ｍＭの範囲内である、実施形態１～６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
８．ｐＨが、６．４～７．４の範囲内である、実施形態１～７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９．フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０．アリールボロン酸またはアリールボロキソールが、アリールボロキソールである、実施形態１～９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１１．少なくとも１つのアリールボロン酸またはアリールボロキソールを含むインスリン誘導体が、実施例１のインスリン誘導体または実施例２のインスリン誘導体である、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１２．組成物が、
実施例２のインスリン誘導体と、
フェノールと、
メタクレゾールと、
グリセロールと、
マンニトールと、
メチオニンと、を含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１３．組成物が、
０．６～４．８ｍＭの実施例２のインスリン誘導体と、
１６ｍＭのフェノールと、
１６ｍＭのメタクレゾールと、
１８５ｍＭのグリセロールと、
４０ｍＭのマンニトールと、
３０ｍＭのメチオニンと、を含み、
ｐＨが、６．６である、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１４．医薬として使用するための、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１５．糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリック症候群（メタボリック症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群）の予防または治療において使用するための、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
【実施例0040】
材料および方法
以下の実施例で使用されるマンニトールは、Ｄ－マンニトールである。
以下の実施例で使用されるマンニトールは、Ｄ－マンニトールである。
【0041】
以下の実施例で使用されるソルビトールは、Ｄ－ソルビトールである。
【0042】
以下の実施例で使用されるメチオニンは、Ｌ－メチオニンである。
【0043】
以下の実施例で使用されるアスコルビン酸（アスコルビン酸ナトリウム）は、Ｌ－アスコルビン酸（Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム）である。
【0044】
略語リスト
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＬＰ ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｏｒ ｌｙｔｉｃｕｓプロテアーゼ
ＢＥＨ エチレン架橋型ハイブリッド（エチレン架橋ハイブリッド粒子技術）
Ｃ１８ オクタデカニル（ＨＰＬＣカラム）
ＣＶ カラム体積
Ｄａｐ ２，３－ジアミノプロピオン酸
ＤＣＣ Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＣ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＨＡＴＵ １－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ－
［４，５－ｂ］ピリジン３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ 塩酸
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ｈｒｓ 時間
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析
ｍｉｎ 分
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ｍｍ ミリメートル
ｍＭ ミリモル
ＮａＣｌ 塩化ナトリウム
ＮａＯＨ 水酸化ナトリウム
ＮＢＳ Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＮＨＳ Ｎ－ヒドロキシスクシンミド（ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｍｉｄｅ）
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ｑ．ｓ． 必要量（ｑｕａｎｔｕｍ ｓａｔｉｓ）
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高速液体クロマトグラフィー
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＵＰＬＣ 超高速液体クロマトグラフィー
ＵＶ 紫外線
Å オングストローム
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＬＰ ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｏｒ ｌｙｔｉｃｕｓプロテアーゼ
ＢＥＨ エチレン架橋型ハイブリッド（エチレン架橋ハイブリッド粒子技術）
Ｃ１８ オクタデカニル（ＨＰＬＣカラム）
ＣＶ カラム体積
Ｄａｐ ２，３－ジアミノプロピオン酸
ＤＣＣ Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＣ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＨＡＴＵ １－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ－
［４，５－ｂ］ピリジン３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ 塩酸
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ｈｒｓ 時間
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析
ｍｉｎ 分
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ｍｍ ミリメートル
ｍＭ ミリモル
ＮａＣｌ 塩化ナトリウム
ＮａＯＨ 水酸化ナトリウム
ＮＢＳ Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＮＨＳ Ｎ－ヒドロキシスクシンミド（ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｍｉｄｅ）
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ｑ．ｓ． 必要量（ｑｕａｎｔｕｍ ｓａｔｉｓ）
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高速液体クロマトグラフィー
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＵＰＬＣ 超高速液体クロマトグラフィー
ＵＶ 紫外線
Å オングストローム
【0045】
実施例１：実施例１のインスリン誘導体の調製
実施例１のインスリン誘導体は、国際公開第２０２０／２０１０４１号（実施例２８０）に開示されており、国際公開第２０２０／２０１０４１号に記載されるように調製された（インスリンＡ鎖は、配列番号１の配列を有し、延長Ｂ鎖は、配列番号４の配列を有する）。
【化18】
【0046】
実施例２：実施例２のインスリン誘導体の調製
【化19】
【0047】
酵母におけるインスリンバリアントの発現、およびＡＬＰなどでの形質転換
インスリン類似体ＧＫＰＥ－（ＧＥＱＰ）４－ＧＥＱＧＧＫＰＥＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ－Ｂ１ ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（インスリンＡ鎖は、配列番号１の配列を有し、延長Ｂ鎖は、配列番号５の配列を有する）を、例えば、国際公開第２０１７／０３２７９８号に開示されるように、周知の技術を使用して酵母で発現させた。より具体的には、インスリン類似体を単鎖前駆体として発現させ、イオン交換捕捉によって単離し、以下に記載されるＡＬＰでの処理によって２鎖インスリン類似体に切断した。
インスリン類似体ＧＫＰＥ－（ＧＥＱＰ）４－ＧＥＱＧＧＫＰＥＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ－Ｂ１ ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（インスリンＡ鎖は、配列番号１の配列を有し、延長Ｂ鎖は、配列番号５の配列を有する）を、例えば、国際公開第２０１７／０３２７９８号に開示されるように、周知の技術を使用して酵母で発現させた。より具体的には、インスリン類似体を単鎖前駆体として発現させ、イオン交換捕捉によって単離し、以下に記載されるＡＬＰでの処理によって２鎖インスリン類似体に切断した。
【0048】
ＧＫＰＥ－（ＧＥＱＰ）４－ＧＥＱＧ－ＧＫＰＥＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ－Ｂ１ ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは、ＧＫＰＥ－ＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰ－ＧＥＱＧ－ＧＫＰＥＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６）（Ｃ末端ＳはＢ１Ｆに接続）でＢ１から延長されたｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを意味する。
【0049】
ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＢＢ上での前駆体の捕捉：
酵母上清を、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＢＢで充填したカラム上に１０～２０ＣＶ／時間の流量で装填した。０．１Ｍクエン酸、ｐＨ３．５による洗浄、および４０％ＥｔＯＨによる洗浄を実施した。類似体を０．２Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５．５／３５％ＥｔＯＨで溶出した。
酵母上清を、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＢＢで充填したカラム上に１０～２０ＣＶ／時間の流量で装填した。０．１Ｍクエン酸、ｐＨ３．５による洗浄、および４０％ＥｔＯＨによる洗浄を実施した。類似体を０．２Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５．５／３５％ＥｔＯＨで溶出した。
【0050】
ＡＬＰ消化：
単鎖前駆体の溶液をｐＨ９に調整し、ＡＬＰ酵素を１：１００（ｗ／ｗ）添加した。ＵＰＬＣで反応を追跡した。ＲＰ－ＨＰＬＣ精製用に調製するために、ＡＬＰ切断プールをｐＨ２．５に調整し、２倍に希釈した。
単鎖前駆体の溶液をｐＨ９に調整し、ＡＬＰ酵素を１：１００（ｗ／ｗ）添加した。ＵＰＬＣで反応を追跡した。ＲＰ－ＨＰＬＣ精製用に調製するために、ＡＬＰ切断プールをｐＨ２．５に調整し、２倍に希釈した。
【0051】
ＲＰ－ＨＰＬＣ精製：
精製をＲＰ－ＨＰＬＣ Ｃ１８によって以下のように実施した：
カラム：１５ｕｍ Ｃ１８ ５０×２５０ｍｍ ２００Å
緩衝液：
Ａ：０．２％ギ酸、５％ＥｔＯＨ、
Ｂ：０．２％ギ酸、５０％ＥｔＯＨ
勾配：２０～５５％Ｂ緩衝液。
勾配：２０ＣＶ
流量 ２０ＣＶ／時間
装填ｇ 約５ｇ／Ｌ樹脂
画分をＵＰＬＣによって分析し、プールし、凍結乾燥させた。
精製をＲＰ－ＨＰＬＣ Ｃ１８によって以下のように実施した：
カラム：１５ｕｍ Ｃ１８ ５０×２５０ｍｍ ２００Å
緩衝液：
Ａ：０．２％ギ酸、５％ＥｔＯＨ、
Ｂ：０．２％ギ酸、５０％ＥｔＯＨ
勾配：２０～５５％Ｂ緩衝液。
勾配：２０ＣＶ
流量 ２０ＣＶ／時間
装填ｇ 約５ｇ／Ｌ樹脂
画分をＵＰＬＣによって分析し、プールし、凍結乾燥させた。
【0052】
（Ｓ）－４－（（Ｓ）－２，３－ビス（１－ヒドロキシ－４－（トリフルオロメチル）－１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール－６－カルボキサミド）プロパンアミド）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソペンタン酸（構成ブロック１）の調製
ＮＢＳ（３４．０ｇ、１９１ｍｍｏｌ）を濃硫酸（４００ｍＬ）中の３－トリフルオロメチル－４－メチル安息香酸（３９．０ｇ、１９１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、反応混合物を室温で１６時間攪拌した。次いで、反応混合物を氷水（２Ｌ）に注いだ。得られた沈殿物を濾過して取り除き、水（５００ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（４００ｍＬ）中に溶解し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、３－ブロモ－４－メチル－５－トリフルオロメチル安息香酸を白色固体として得た。収率：５３．４ｇ（９８％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，δＨ）：１３．７１（ｂｓ，１Ｈ）；８．３５（ｄ，Ｊ＝０．４Ｈｚ，１Ｈ）；８．１５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ）；２．５６（ｓ，３Ｈ）。
【化20】
【0053】
濃硫酸（２４ｍＬ）をメタノール（５００ｍＬ）中の３－ブロモ－４－メチル－５－トリフルオロメチル安息香酸（３５．０ｇ、１２４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、反応混合物を還流下で４時間、および室温で１６時間攪拌した。次いで、反応混合物を減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテル（２５０ｍＬ）中に溶解し、水（２×１００ｍＬ）、ならびに炭酸カリウム（１００ｍＬ）の飽和溶液および食塩水（１００ｍＬ）の混合物で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、３－ブロモ－４－メチル－５－トリフルオロメチル安息香酸メチルを白色固体として得た。収率：３５．３ｇ（９６％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，δＨ）：８．３６（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ）；８．１３（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ）；３．９０（ｓ，３Ｈ）；２．５５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，３Ｈ）。
【0054】
水（３００ｍＬ）中のＮＢＳ（３１．７ｇ、１７８ｍｍｏｌ）および３－ブロモ－４－メチル－５－トリフルオロメチル安息香酸メチル（３５．３ｇ、１１９ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１００Ｗ電球下、８０℃で６時間攪拌した。反応混合物をジエチルエーテル（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、３－ブロモ－４－ブロモメチル－５－トリフルオロメチル安息香酸メチルを黄色固体として得た。収率：４４．０ｇ（９８％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δＨ）：８．４７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．３１（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ）；４．７５（ｓ，２Ｈ）；３．９８（ｓ，３Ｈ）。
【0055】
ＭｅＣＮ（０．５Ｌ）中、３－ブロモ－４－ブロモメチル－５－トリフルオロメチル安息香酸メチル（４４．０ｇ、１１７ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（２２．９ｇ、２３４ｍｍｏｌ）の溶液を７５℃で一晩攪拌した。懸濁液を濾紙を通して濾過し、蒸発させた。粗生成物をジクロロメタン中に溶解し、再び濾過した。蒸発により、４－（アセトキシメチル）－３－ブロモ－５－（トリフルオロメチル）安息香酸メチルを白色固体として得た。収率：３７．９ｇ（９１％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δＨ）：８．４９（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ）；８．３４（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ）；５．３７（ｓ，２Ｈ）；３．９９（ｓ，３Ｈ）；２．１１（ｓ，３Ｈ）。
【0056】
脱水テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中、４－（アセトキシメチル）－３－ブロモ－５－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（３７．９ｇ、１０７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（２９．８ｇ、１１７ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３１．４ｇ、２９４ｍｍｏｌ）、および［１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１．５７ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン雰囲気下で１３日間、７５℃で攪拌した。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、シリカゲルカラム（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ、０．０６３～０．２００ｍｍ、溶離液：シクロヘキサン／酢酸エチル８：１）を通して濾過して、４－（アセトキシメチル）－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）安息香酸メチルを得た。収率：３１．１ｇ（７２％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δＨ）：８．６５（ｓ，１Ｈ）；８．４３（ｓ，１Ｈ）；５．４８（ｓ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，３Ｈ）；２．０５（ｓ，３Ｈ）；１．３６（ｓ，１２Ｈ）。
【0057】
水（３００ｍＬ）中の４－（アセトキシメチル）－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（３１．０ｇ、７７．１ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（１５．４ｇ、３８６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３時間攪拌した。次いで、水（１００ｍＬ）中の塩酸（３５ｍＬ）の溶液を添加して、ｐＨを１に低下させた。反応混合物を一晩攪拌した。沈殿物を濾過して取り除き、乾燥させて、１－ヒドロキシ－４－（トリフルオロメチル）－１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール－６－カルボン酸を白色固体として得た。収率：１６．６ｇ（８６％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，δＨ）：１３．４７（ｂｓ，１Ｈ）；９．６６（ｓ，１Ｈ）；８．６２（ｓ，１Ｈ）；８．２４（ｓ，１Ｈ）；５．２２（ｓ，２Ｈ）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，δＨ）：１３．４７（ｂｓ，１Ｈ）；９．６６（ｓ，１Ｈ）；８．６２（ｓ，１Ｈ）；８．２４（ｓ，１Ｈ）；５．２２（ｓ，２Ｈ）。
【0058】
ＭｅＣＮ（０．５Ｌ）中、ペンタフルオロフェノール（７．４８ｇ、４０．７ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシ－４－（トリフルオロメチル）－１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール－６－カルボン酸（１０．０ｍｇ、４０．７ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、８．３７ｍｇ、４０．７ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濾過し、蒸発させ、ＭｅＣＮ中に溶解し、再濾過し、蒸発させて、ペンタフルオロフェニル１－ヒドロキシ－４－（トリフルオロメチル）－１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール－６－カルボキシレートを白色固体として得た。
収率：１６．７ｇ（１００％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，δＨ）：９．７９（ｓ，１Ｈ）；８．８６（ｓ，１Ｈ）；８．４６（ｓ，１Ｈ）；５．３０（ｓ，２Ｈ）。
収率：１６．７ｇ（１００％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，δＨ）：９．７９（ｓ，１Ｈ）；８．８６（ｓ，１Ｈ）；８．４６（ｓ，１Ｈ）；５．３０（ｓ，２Ｈ）。
【0059】
２－クロロトリチルクロリド樹脂１００～２００メッシュ１．５ｍｍｏｌ／ｇ（３、４．４７ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（３０ｍＬ）中に３０分間放置し膨潤させた。脱水ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の（２Ｓ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝－５－オキソペンタン酸（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ、１．９０ｇ、４．４７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．９６ｍＬ、１７．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、メタノール／ジクロロメタン混合物（４：１、２×５分、２×４０ｍＬ）中のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．５６ｍＬ、８．９５ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）、ジクロロメタン（２×４０ｍＬ）およびＤＭＦ（３×４０ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジン（１×５分、１×２０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＤＭＦ（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ（４０ｍＬ）中、（Ｓ）－２，３－ビス（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨ、３．６８ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、２．５５ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）、および２，４，６－トリメチルピリジン（１．６０ｍＬ、１２．１ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を２時間振盪した。樹脂を濾過し、ＤＭＦ（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（２×４０ｍＬ）およびＤＭＦ（２×４０ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジン（１×５分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＤＭＦ（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ（４０ｍＬ）中のペンタフルオロフェニル１－ヒドロキシ－４－（トリフルオロメチル）－１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール－６－カルボキシレート（５．５３ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．９９ｍＬ、３５．８ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、ＤＭＦ（６×４０ｍＬ）およびジクロロメタン（１０×５０ｍＬ）で洗浄した。生成物を２，２，２－トリフルオロエタノール（６０ｍＬ）で１６時間処理することによって樹脂から切断した。樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（４×５０ｍＬ）で洗浄した。粗生成物（４）を真空中で乾燥させ、酢酸エチル（２×７０ｍＬ）および１Ｍの硫酸水素カリウム水溶液（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。次いで、粗生成物をジエチルエーテル（２０ｍＬ）中で粉砕して、（Ｓ）－４－（（Ｓ）－２，３－ビス（１－ヒドロキシ－４－（トリフルオロメチル）－１，３－ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール－６－カルボキサミド）プロパンアミド）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソペンタン酸（構成ブロック１）をベージュ色固体として得た。収率：１．８９ｇ（５７％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，δＨ）：８．５０（ｓ，１Ｈ）；８．４６（ｓ，１Ｈ）；８．２９（ｓ，１Ｈ）；８．２６（ｓ，１Ｈ）；５．２８（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，４Ｈ）；５．２０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）；４．５５（ｄｄ，Ｊ＝８．５および５．２Ｈｚ，１Ｈ）；４．０８（ｄｄ，Ｊ＝６．０および２．１Ｈｚ，２Ｈ）；２．５７－２．４２（ｍ，２Ｈ）；２．３４－２．１６（ｍ，１Ｈ）；２．１７－２．０８（ｍ，１Ｈ）；１．４７（ｓ，９Ｈ）。ＬＣ－ＭＳ：７４６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0060】
インスリン誘導体の調製
構成ブロック１をＴＨＦ中のＮＨＳ／ＤＩＣで活性化し、ｔＢｕ保護基をＴＦＡで処理することによって除去した。次いで、ＴＦＡを、インスリンとのコンジュゲーションの前に蒸発させた。
構成ブロック１をＴＨＦ中のＮＨＳ／ＤＩＣで活性化し、ｔＢｕ保護基をＴＦＡで処理することによって除去した。次いで、ＴＦＡを、インスリンとのコンジュゲーションの前に蒸発させた。
【0061】
ＧＫＰＥ－（ＧＥＱＰ）４－ＧＥＱＧＧＫＰＥＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ－Ｂ１ ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（５３６ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を０．１ＭのＮａ２ＨＰＯ４（５．６ｍＬ）およびＤＭＳＯ（２．４ｍＬ）中に溶解し、１．０ＭのＮａＯＨ水溶液によってｐＨを１０．８に調整した。構成ブロック１（１４７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を上述のようにＮＨＳ活性化し、ｔＢｕ脱保護し、次いで、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中に溶解し、１０分間にわたって所与のインスリン溶液に滴加し、一方で０．１ＭのＮａＯＨを滴加することによってｐＨを１０．８付近に保持した。ＬＣＭＳは、所望の生成物の形成を示す。混合物をＭｅＣＮおよび水で希釈し、１ＭのＨＣｌを滴加することによってｐＨを３．８に調整した。生成物を、水中の０．１％ＴＦＡを緩衝液Ａとして、およびＭｅＣＮ中の０．１％ＴＦＡを緩衝液Ｂとして使用した、Ｃ１８カラム上の逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）によって精製した。生成物を凍結乾燥によって単離した。ＬＣＭＳ測定値１８９４．１［Ｍ＋６Ｈ－５×水］６＋、計算値１８９４．１；１６２３．６［Ｍ＋７Ｈ－５×水］７＋、計算値１６２３．６；１４２０．８［Ｍ＋８Ｈ－５×水］８＋、計算値１４２０．８；および１２６３．０［Ｍ＋９Ｈ－５×水］９＋、計算値１２６３．０（Ｃ４８０Ｈ６６６Ｂ６Ｆ１８Ｎ１２２Ｏ１６９Ｓ６に対して）。
【0062】
実施例３：抗酸化物質メチオニンおよびアスコルビン酸ナトリウムによる安定性への効果
この例では、２つの抗酸化物質メチオニンおよびアスコルビン酸ナトリウムの安定化効果を調査した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した製剤を表１に示す。
この例では、２つの抗酸化物質メチオニンおよびアスコルビン酸ナトリウムの安定化効果を調査した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した製剤を表１に示す。
【0063】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。２ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、１００ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１．３４Ｍメチオニン、１．０１Ｍアスコルビン酸ナトリウム、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。２ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、１００ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１．３４Ｍメチオニン、１．０１Ｍアスコルビン酸ナトリウム、注射用水。
【0064】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、時間ゼロ分析のために５０μｌを含有するように製剤をＨＰＬＣバイアルに充填し、貯蔵安定性分析のために０．５ｍｌの製剤を含有するように３ｍｌサイズの薬剤カートリッジに充填した。
【0065】
方法およびアッセイ実験
カートリッジを３７℃で４週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
カートリッジを３７℃で４週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0066】
実施例１のインスリン誘導体の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ１８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および９０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用し、かつ洗浄緩衝液として９％アセトニトリルを使用して、約６４分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は３５℃であり、注入量は１μｌであり、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１５ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0067】
結果
製剤１～５について、時間ゼロ、および３７℃で４週間貯蔵後の純度（割合として）を表１に示す。純度損失はまた、３７℃で４週間後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤１～５について、時間ゼロ、および３７℃で４週間貯蔵後の純度（割合として）を表１に示す。純度損失はまた、３７℃で４週間後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【0068】
抗酸化物質を有しない製剤１の場合、３７℃での４週間後の純度損失は、８．７割合ポイントであった。驚くべきことに、アスコルビン酸ナトリウムは、４週間後に５０割合ポイントを超える純度損失をもたらしたが、メチオニンの添加は、インスリン製剤の安定性を改善することが見出された。
【表1】
【0069】
実施例４：グリセロール、糖アルコール、および糖類による安定性への効果
この実施例では、実施例１のインスリン誘導体の製剤に対するグリセロール、糖アルコール、および糖類の安定化効果を調査した。試験した製剤を表２に示す。
この実施例では、実施例１のインスリン誘導体の製剤に対するグリセロール、糖アルコール、および糖類の安定化効果を調査した。試験した製剤を表２に示す。
【0070】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。２ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、１００ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、２００ｍＭソルビトール、３００ｍＭマンニトール、２００ｍＭスクロース、２００ｍＭトレハロース、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。２ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、１００ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、２００ｍＭソルビトール、３００ｍＭマンニトール、２００ｍＭスクロース、２００ｍＭトレハロース、注射用水。
【0071】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、時間ゼロ分析のために５０μｌを含有するように製剤をＨＰＬＣバイアルに充填し、貯蔵安定性のために０．５ｍｌの製剤を含有するように３ｍｌサイズの薬剤カートリッジに充填した。
【0072】
方法およびアッセイ実験
カートリッジを３７℃で１週間貯蔵し、純度について分析した。さらに、カートリッジを４５℃でさらに６日間貯蔵して、分解をさらに促進し、純度について分析した。
カートリッジを３７℃で１週間貯蔵し、純度について分析した。さらに、カートリッジを４５℃でさらに６日間貯蔵して、分解をさらに促進し、純度について分析した。
【0073】
実施例１のインスリン誘導体の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ１８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および９０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用し、かつ洗浄緩衝液として９％アセトニトリルを使用して、約７０分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は５０℃であり、注入量は２μｌであり、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１５ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0074】
結果
製剤６～１５について、時間ゼロ、ならびに３７℃で１週間貯蔵後ならびに３７℃で１週間１＋４５℃でさらに６日間貯蔵後の純度（割合として）を表２ａおよび表２ｂに示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤６～１５について、時間ゼロ、ならびに３７℃で１週間貯蔵後ならびに３７℃で１週間１＋４５℃でさらに６日間貯蔵後の純度（割合として）を表２ａおよび表２ｂに示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【0075】
製剤中にグリセロールも、糖アルコールも、糖も有さない製剤６についての３７℃で１週間＋４５℃でさらに６日間後の純度損失は、１２．３割合ポイントであった。
【0076】
等張化剤は、皮下注射を意図した医薬製剤で製剤の適切な浸透圧を確保するために一般的に使用される。驚くべきことに、１７４ｍＭの濃度の等張化剤グリセロールを添加することによって、安定性が大幅に改善されることが見出された（製剤７）。
【0077】
さらに驚くべきことに、２０ｍＭの糖アルコールであるマンニトールのみを含有する製剤８では、安定性がさらに良好であり、３７℃で１週間＋４５℃でさらに６日間後に、５．０割合ポイントの純度損失となった。
【0078】
驚くべきことに、１７４ｍＭのグリセロールと２０ｍＭのマンニトールとの組み合わせ（製剤１０）によって、安定性がさらに改善され得る。
【表2】
【0079】
１７４ｍＭのグリセロールおよび２０ｍＭの糖アルコールソルビトール（製剤１３）の添加は、１７４ｍＭのグリセロールのみ（製剤７）と比較して安定性の増加をもたらしたが、安定化効果は、１７４ｍＭのグリセロールおよび２０ｍＭのマンニトール（製剤１０）を含む製剤ほど良好ではなかった。
【0080】
逆に、２０ｍＭの糖類スクロース（製剤１４）またはトレハロース（製剤１５）の添加は、製剤７と比較すると分かるように、安定性に影響を及ぼさなかった。
【表3】
【0081】
マンニトール含有量の変動（表２ｂを参照）は、マンニトールが広い濃度範囲で安定化効果を有することを示した。
【0082】
実施例５：マンニトールと組み合わせたメチオニンによる安定性への効果
この実施例では、メチオニンおよびマンニトール酸の組み合わせの安定化効果を調査した。さらに、様々なｐＨレベルでの安定性を決定した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表３に示す。
この実施例では、メチオニンおよびマンニトール酸の組み合わせの安定化効果を調査した。さらに、様々なｐＨレベルでの安定性を決定した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表３に示す。
【0083】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。５ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、１００ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ塩化ナトリウム、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、３３５ｍＭメチオニン、４００ｍＭマンニトール、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。５ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、１００ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ塩化ナトリウム、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、３３５ｍＭメチオニン、４００ｍＭマンニトール、注射用水。
【0084】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、注射用水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、製剤を３ｍｌサイズの薬剤カートリッジに充填し、０．５ｍｌの製剤貯蔵安定性を含有した。
【0085】
方法およびアッセイ実験
カートリッジを４５℃で１週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
カートリッジを４５℃で１週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0086】
実施例１のインスリン誘導体の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ１８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および９０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用し、かつ洗浄緩衝液として９％アセトニトリルを使用して、約７０分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は５０℃であり、注入量は１μｌであり、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１５ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0087】
結果
製剤１６～２１について、時間ゼロ、および４５℃で１週間貯蔵後の純度（割合として）を表３に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤１６～２１について、時間ゼロ、および４５℃で１週間貯蔵後の純度（割合として）を表３に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【表4】
【0088】
実施例４では、グリセロールおよびマンニトールの添加がインスリン製剤の安定性の増加をもたらすことが見出され、実施例３では、メチオニンが安定性を増加させることが見出された。
【0089】
この実施例では、２１７ｍＭのグリセロールおよび２０ｍＭのマンニトールを含む製剤１６のｐＨ７．２での純度損失は、４５℃で１週間後、１０．５割合ポイントであった。２０ｍＭのメチオニンの添加は、驚くべきことに安定性の大きな増加をもたらし、同じ条件下で３．４割合ポイントの純度損失であった（製剤１９）。表３のデータは、ｐＨの効果も示す。
【0090】
実施例６：メチオニンおよびマンニトールによる安定性への効果
この実施例では、実施例１のインスリン誘導体の製剤に対するメチオニンおよびマンニトールの様々な量の安定化効果を調査した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表４に示す。
この実施例では、実施例１のインスリン誘導体の製剤に対するメチオニンおよびマンニトールの様々な量の安定化効果を調査した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表４に示す。
【0091】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。８ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１００ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。８ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１００ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、注射用水。
【0092】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、時間ゼロ分析のために５０μｌを含有するように製剤をＨＰＬＣバイアルに充填し、貯蔵安定性分析のために０．５ｍｌの製剤を含有するように３ｍｌサイズの薬剤カートリッジに充填した。
【0093】
方法およびアッセイ実験
カートリッジを３７℃で４週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
カートリッジを３７℃で４週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0094】
実施例１のインスリン誘導体の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ１８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および９０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用し、かつ洗浄緩衝液として９％アセトニトリルを使用して、約６４分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は３５℃であり、注入量は１μｌであり、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１５ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0095】
結果
製剤２２～２７について、時間ゼロ、ならびにそれぞれ３７℃で２週間および４週間貯蔵後の純度（割合として）を表４に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤２２～２７について、時間ゼロ、ならびにそれぞれ３７℃で２週間および４週間貯蔵後の純度（割合として）を表４に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【表5】
【0096】
表４のデータは、２１ｍＭのメチオニンを有しマンニトールを有さない製剤２２の純度損失が、３７℃で４週間後、５．９割合ポイントであったことを示す。２９ｍＭのマンニトールを有しメチオニンを有さない製剤２３の純度損失は、１１．０割合ポイントであった。同様の量のメチオニンおよびマンニトールを組み合わせた製剤２４および２５は、驚くべきことに、メチオニンおよびマンニトールの組み合わせによって安定性が大幅に増加することを示す。
【0097】
実施例７：亜鉛の存在による安定性への効果
この実施例では、実施例１および実施例２のインスリン誘導体に対する亜鉛の存在による影響が示される。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表５に示す。典型的には、インスリン誘導体は、インスリンについて六量体オリゴマー状態を支持することが知られている酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの存在下でより安定している。
この実施例では、実施例１および実施例２のインスリン誘導体に対する亜鉛の存在による影響が示される。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表５に示す。典型的には、インスリン誘導体は、インスリンについて六量体オリゴマー状態を支持することが知られている酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの存在下でより安定している。
【0098】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。１ｍＭの実施例１または実施例２のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１６８ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。１ｍＭの実施例１または実施例２のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１６８ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、注射用水。
【0099】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、製剤は、５０μｌを含有するようにＨＰＬＣバイアルに充填した。１つの試料は取り置かれ、時間ゼロ分析のために急速凍結され、もう１つの試料は分析前に３７℃で１週間の貯蔵安定性のために使用された。
【0100】
方法およびアッセイ実験
バイアルを３７℃で１週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
バイアルを３７℃で１週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0101】
実施例１および実施例２のインスリン誘導体の両方の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ１８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、３００Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および８０％ＡＣＮ中の０．０８％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用し、かつ洗浄緩衝液として９％アセトニトリルを使用して、約１００分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は５５℃であり、約８μｇがカラムにロードされ、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１５ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0102】
結果
製剤５８～６１について、時間ゼロ、および３７℃で１週間貯蔵後の純度（割合として）を表５に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤５８～６１について、時間ゼロ、および３７℃で１週間貯蔵後の純度（割合として）を表５に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【表6】
【0103】
表５のデータは、実施例１のインスリン誘導体では、最も低い純度損失が、酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの存在下で観察されるのに対し、実施例２のインスリン誘導体では、驚くべきことに、最も低い純度損失が、酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの非存在下で観察されることを示す。
【0104】
実施例８：ｐＨおよびＡＰＩ濃度を変化させる場合の、亜鉛の存在による安定性への効果
この実施例では、実施例２のインスリン誘導体の２つの濃度について、亜鉛の存在および変化するｐＨよる影響が示される。さらに、等張化剤としてグリセロールの代わりにソルビトールを使用することの影響を試験した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表６ａおよび表６ｂに示す。典型的には、インスリン誘導体は、インスリンについて六量体オリゴマー状態を支持することが知られている酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの存在下でより安定している。
この実施例では、実施例２のインスリン誘導体の２つの濃度について、亜鉛の存在および変化するｐＨよる影響が示される。さらに、等張化剤としてグリセロールの代わりにソルビトールを使用することの影響を試験した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表６ａおよび表６ｂに示す。典型的には、インスリン誘導体は、インスリンについて六量体オリゴマー状態を支持することが知られている酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの存在下でより安定している。
【0105】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。５．７ｍＭ実施例２のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１６８ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、１Ｍソルビトール、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。５．７ｍＭ実施例２のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ ＮａＣｌ、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１６８ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、１Ｍソルビトール、注射用水。
【0106】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、製剤をＨＰＬＣガラスバイアルに充填した。５０μｌサイズの１つの試料を、時間ゼロ分析のために急速凍結し、もう１つの１００μｌサイズの試料は、分析前に、３７℃で４週間、貯蔵安定性のために使用した。
【0107】
方法およびアッセイ実験
バイアルを３７℃で１週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
バイアルを３７℃で１週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0108】
実施例１および実施例２のインスリン誘導体の両方の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および８０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）、アイソクラチックを使用して、約５０分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は４７℃であり、０．３μｌ（実施例２のインスリン誘導体を０．６ｍＭに希釈した試料）がカラムにロードされ、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１４ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0109】
結果
製剤６２～６９について、時間ゼロ、および３７℃で４週間貯蔵後の純度（割合として）を表６ａに示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤６２～６９について、時間ゼロ、および３７℃で４週間貯蔵後の純度（割合として）を表６ａに示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【表7】
【0110】
表６ａのデータは、実施例２のインスリン誘導体では、驚くべきことに、最も低い純度損失が、酢酸亜鉛および塩化ナトリウムの非存在下、ｐＨ６．６付近で観察されることを示す。
【表8】
【0111】
表６ｂのデータから、グリセロールをソルビトールで置き換えることが、類似の安定性を有する製剤をもたらすことが分かる。
【0112】
実施例９：様々な賦形剤による安定性への効果
この実施例では、様々な量の実施例２のインスリン誘導体、様々な量のグリセロールおよびマンニトール、様々な量の抗酸化物質メチオニン、ならびに様々なｐＨを有する製剤を調製し、安定性を試験した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表７ａ、表７ｂ、表７ｃおよび表７ｄに示す。
この実施例では、様々な量の実施例２のインスリン誘導体、様々な量のグリセロールおよびマンニトール、様々な量の抗酸化物質メチオニン、ならびに様々なｐＨを有する製剤を調製し、安定性を試験した。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表７ａ、表７ｂ、表７ｃおよび表７ｄに示す。
【0113】
調製プロセス
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。５．７ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ塩化ナトリウム、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１６７．５ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、１０００ｍＭソルビトール、注射用水。
各製剤を、以下の貯蔵溶液から調製した。５．７ｍＭ実施例１のインスリン誘導体、５００ｍＭフェノール、１６０ｍＭメタクレゾール、１Ｍ塩化ナトリウム、２．１７Ｍグリセロール、１０ｍＭ酢酸亜鉛、１６７．５ｍＭメチオニン、５００ｍＭマンニトール、１０００ｍＭソルビトール、注射用水。
【0114】
製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、注射用水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、貯蔵安定性のために０．３ｍｌの製剤を含有するように製剤を平底ガラスＵＰＬＣバイアルに充填した。
【0115】
方法およびアッセイ実験
バイアルを３７℃で４週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
バイアルを３７℃で４週間貯蔵し、純度について分析し、これを時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0116】
インスリン誘導体の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ｍｉｌｌｉＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および９０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用し、かつ洗浄緩衝液として９％アセトニトリルを使用して、約５０分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は４７℃であり、注入量は、０．６ｍＭのインスリン誘導体を含有する試料では０．３μｌであり、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。１．２ｍＭのインスリン誘導体を含有する試料を、ロード直前に水を使用して０．６ｍＭに希釈した。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１４ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0117】
結果
製剤２８～３８について、時間ゼロ、および３７℃で４週間貯蔵後の純度（割合として）を表７ａ、表７ｂ、表７ｃ、および表７ｄに示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤２８～３８について、時間ゼロ、および３７℃で４週間貯蔵後の純度（割合として）を表７ａ、表７ｂ、表７ｃ、および表７ｄに示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【0118】
製剤２８～３０（表７ａ）を比較することによって、ｐＨがそれぞれ６．２および６．６であるときと比較して、ｐＨが５．８に低下した場合に安定性が低下することが分かる。
【0119】
製剤３２、３４、３５、および３６（表７ｂ）から、様々な濃度のメチオニン、マンニトール、およびグリセロールで安定した製剤を達成することができることが分かる。最も安定な製剤は、少なくとも３０ｍＭのメチオニン濃度および少なくとも４０ｍＭのマンニトール濃度によって達成されると考えられる。
【0120】
製剤３２および３３（表７ｃ）から、防腐剤フェノールおよびメタクレゾールを単独で、および組み合わせて使用して、安定な製剤を達成することができることが分かる。
【表9】
【表10】
【表11】
【表12】
【0121】
製剤３０、３１、３２、３７、および３８（表７ｄ）では、インスリン誘導体の濃度は、０．６ｍＭ～４．８Ｍｍ変動し、安定な製剤がこの濃度範囲全体にわたって達成され得ることが分かる。
【0122】
実施例１０：様々な賦形剤による安定性への効果
この実施例では、実施例２のインスリン誘導体を含有する製剤を、様々な量の防腐剤、メチオニン、マンニトール、およびグリセロールを含有するように調製し、安定性を試験した。化学的安定性は、高分子量生成物（ＨＭＷＰ）の形成の観点から測定することができ、ＨＭＷＰの含有量は、時間ゼロ、および特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表８ａ、表８ｂ、および表８ｃに示す。
この実施例では、実施例２のインスリン誘導体を含有する製剤を、様々な量の防腐剤、メチオニン、マンニトール、およびグリセロールを含有するように調製し、安定性を試験した。化学的安定性は、高分子量生成物（ＨＭＷＰ）の形成の観点から測定することができ、ＨＭＷＰの含有量は、時間ゼロ、および特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表８ａ、表８ｂ、および表８ｃに示す。
【0123】
調製プロセス
各製剤を、表８ａ、表８ｂ、および表８ｃに示されるように、実施例２のインスリン誘導体の貯蔵溶液および賦形剤から調製した。製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨまたは酢酸のいずれかを使用してｐＨを調整し、注射用水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、貯蔵安定性のために製剤をＨＰＬＣバイアルに充填した。
各製剤を、表８ａ、表８ｂ、および表８ｃに示されるように、実施例２のインスリン誘導体の貯蔵溶液および賦形剤から調製した。製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨまたは酢酸のいずれかを使用してｐＨを調整し、注射用水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、貯蔵安定性のために製剤をＨＰＬＣバイアルに充填した。
【0124】
方法およびアッセイ実験
バイアルを３７℃で６週間保存し、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）の存在について分析し、これを時点ゼロ試料の分析の結果と比較した。
バイアルを３７℃で６週間保存し、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）の存在について分析し、これを時点ゼロ試料の分析の結果と比較した。
【0125】
インスリン誘導体のＨＭＷＰ（割合として）を、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ ＳＥＣ Ｉｎｓｕｌｉｎカラム、４．６×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１２５Åを装備したＳＥ－ＵＰＬＣを使用し、３００ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、５ｍＭリン酸、１５％イソプロパノール、および３５％ＡＣＮを使用して約１０分間の実行時間にわたるアイソクラチック溶出を行い決定した。カラム温度は５０℃であり、注入量は、実施例２からの０．２４ｍＭのインスリン誘導体を含有するように希釈された試料（１０倍）では０．６μｌであり、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーをＵＶ検出（２１４ｎｍ）により分析し、ＨＭＷＰの割合を総ピーク面積（１００％）に対するＨＭＷＰピークの面積として評価した。
【0126】
結果
製剤３９～５７の試験された組成物を、表８ａ、表８ｂ、および表８ｃに、時間ゼロおよび３７℃で６週間貯蔵後のＨＭＷＰ（割合として）の結果とともに示す。
製剤３９～５７の試験された組成物を、表８ａ、表８ｂ、および表８ｃに、時間ゼロおよび３７℃で６週間貯蔵後のＨＭＷＰ（割合として）の結果とともに示す。
【表13】
【0127】
表８ａから、メチオニンまたはマンニトールのいずれかを含有する製剤では、含有しない製剤３９と比較して、６週間貯蔵中のＨＭＷＰの形成がより低いことが見出されたことが分かる。メチオニンおよびマンニトールの両方を含む製剤は、ＨＭＷＰ形成がさらに低下した。
【0128】
製剤４２、４９、５０、５１、および５２（表８ｂ）では、メチオニンの濃度は、１５ｍＭ～４５ｍＭで変動し、マンニトールの濃度は、２０ｍＭ～８０Ｍｍで変動し、安定な製剤は、濃度範囲全体にわたって達成され得ることが分かる。
【表14】
【0129】
製剤４２、４３、４４、４５、４６、４７、および４８（表８ｃ）から、防腐剤フェノールおよびメタクレゾールを単独で、および様々な濃度で組み合わせて使用して、安定な製剤を達成することができることが分かる。
【表15】
【0130】
実施例１１：実施例２のインスリン誘導体からの製剤の安定性データ
本実施例は、実施例２のインスリン誘導体の製剤についての長期安定性データを説明する。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表９に示す。
本実施例は、実施例２のインスリン誘導体の製剤についての長期安定性データを説明する。化学的安定性は、純度の観点から測定することができ、インタクトなインスリン誘導体の含有量を、時間ゼロおよび特定の温度で特定の時間貯蔵された時点で決定される。試験した組成物を表９に示す。
【0131】
調製プロセス
製剤を、粗の製薬局方グレードの賦形剤、フェノール、メタクレゾール、マンニトール、メチオニン、グリセロール、および注射用水から調製した。賦形剤製剤を、実施例２のインスリン誘導体が溶解された最終体積の８０％で調製した。製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、注射用水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、時間ゼロ分析のために５０μｌを含有するように製剤をガラスペンフィルに充填し、貯蔵安定性分析のために１ｍｌの製剤を含有するように３ｍｌサイズの薬剤カートリッジに充填した。
製剤を、粗の製薬局方グレードの賦形剤、フェノール、メタクレゾール、マンニトール、メチオニン、グリセロール、および注射用水から調製した。賦形剤製剤を、実施例２のインスリン誘導体が溶解された最終体積の８０％で調製した。製剤は、必要に応じてＨＣｌおよびＮａＯＨを使用してｐＨを調整し、注射用水を最終的な所望の体積に達するまで添加した後、０．２２μｍの滅菌フィルターで濾過して滅菌した。濾過後、時間ゼロ分析のために５０μｌを含有するように製剤をガラスペンフィルに充填し、貯蔵安定性分析のために１ｍｌの製剤を含有するように３ｍｌサイズの薬剤カートリッジに充填した。
【0132】
方法およびアッセイ実験
ペンフィルを時間ゼロで分析し、一方残りのペンフィルを５℃および２５℃で最大６ヶ月間、ならびに３０℃および３７℃で最大３ヶ月間保存し、その後、純度を分析した。結果を、時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
ペンフィルを時間ゼロで分析し、一方残りのペンフィルを５℃および２５℃で最大６ヶ月間、ならびに３０℃および３７℃で最大３ヶ月間保存し、その後、純度を分析した。結果を、時点ゼロの試料の分析の結果と比較した。
【0133】
実施例２のインスリン誘導体の純度（割合として）を、ＷａｔｅｒｓカラムＢＥＨ Ｃ８、２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Åを装備したＵＰＬＣを使用し、ミリＱ水中の０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ａ）および９０％ＡＣＮ中の０．０９％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）を使用して、約４０分間の実行時間にわたって勾配溶出させて、決定した。カラム温度は４１℃であり、約８μｇがカラムにロードされ、同時に流量は０．３ｍｌ／分に設定された。クロマトグラフィーはＵＶ検出（２１４ｎｍ）により分析され、主ピークの面積を全てのピークの面積で割った値×１００％として純度を評価した。
【0134】
結果
製剤７２について、時間ゼロ、ならびに５℃および２５℃で最大６ヶ月間貯蔵後、ならびに３０℃および３７℃で最大３ヶ月間貯蔵後の純度（割合として）を表９に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
製剤７２について、時間ゼロ、ならびに５℃および２５℃で最大６ヶ月間貯蔵後、ならびに３０℃および３７℃で最大３ヶ月間貯蔵後の純度（割合として）を表９に示す。純度損失はまた、貯蔵後の純度と時間ゼロの純度との間の差（割合ポイント）としても提供される。
【0135】
表９のデータは、それぞれ５℃、２５℃、３０℃、および３７℃での３ヶ月後および６ヶ月後の本発明の製剤の安定性を示す。
【表16】
【0136】
本明細書では本発明の特定の特徴を例示および説明してきたが、多くの修正、置換、変更、および均等物が当業者に思い浮かぶであろう。したがって、添付の特許請求の範囲が、本発明の真の趣旨の範囲内にあるそのような全ての修正および変更を網羅することを意図していることが理解されるべきである。
【配列表】
【外国語明細書】