特開 2025-19101 ヒト化抗カリクレイン－２抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2025019101

(43)【公開日】2025-02-06

(54)【発明の名称】ヒト化抗カリクレイン－２抗体

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20250130BHJP

   C07K 16/40 20060101ALI20250130BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250130BHJP

   A61K 51/10 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250130BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20250130BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20250130BHJP

   G01N 33/531 20060101ALI20250130BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20250130BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 P

C07K16/40 ZNA

C12N15/13

A61K39/395 L

A61K51/10 200

A61K51/10 100

A61P13/08

A61P35/00

A61P35/04

A61K47/68

G01N33/531 A

G01N33/574 A

C07K16/40

【審査請求】有

【請求項の数】32

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024201463

(22)【出願日】2024-11-19

(62)【分割の表示】P 2022003634の分割

【原出願日】2014-11-19

(31)【優先権主張番号】1320408.6

(32)【優先日】2013-11-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】1401973.1

(32)【優先日】2014-02-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(71)【出願人】

【識別番号】514107082

【氏名又は名称】フレダックス・アクチエボラーグ

(74)【代理人】

【識別番号】100130384

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 孝文

(72)【発明者】

【氏名】パー・オスカー・ヴィルヘルムソン・ティメマン

(72)【発明者】

【氏名】アマンダ・トゥイ・トラン

(72)【発明者】

【氏名】スヴェンーエリク・ストランド

(72)【発明者】

【氏名】ウルポ・ユハニ・ラミンマキ

(72)【発明者】

【氏名】シェル・ショーストレム

(57)【要約】

【課題】、非限局性前立腺癌、転移性前立腺癌、および／または去勢抵抗性前立腺癌を処置および／または診断するための新たな治療薬剤を提供する。
【解決手段】前立腺癌の処置および／または診断における使用のための組成物であって、組成物はヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）に対する結合特異性を持つ抗体ポリペプチドを含み、抗体ポリペプチドが、（ａ）配列番号１および配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列の、相補性決定領域（ＣＤＲ） ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む、重鎖可変領域、ならびに（ｂ）配列番号４および配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列の、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む、軽鎖可変領域を含む。
【選択図】図１５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

前立腺癌の処置および／または診断における使用のための組成物であって、前記組成物はヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）に対する結合特異性を持つ抗体ポリペプチドを含み、前記抗体ポリペプチドが、
（ａ）以下の、配列番号１および配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列の、相補性決定領域（ＣＤＲ） ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む、重鎖可変領域
ＣＤＲＨ１： ＳＤＹＡＷＮ 配列番号１
ＣＤＲＨ２： ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ 配列番号２
ＣＤＲＨ３： ＧＹＹＹＧＳＧＦ 配列番号３
ならびに
（ｂ）以下の、配列番号４および配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列の、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む、軽鎖可変領域
ＣＤＲＬ１： ＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨ 配列番号４
ＣＤＲＬ２： ＡＡＳＮＲＥＳ 配列番号５
ＣＤＲＬ３： ＱＱＴＲＫＶＰＹＴ 配列番号６
を含み、
前記抗体ポリペプチドの前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、１つまたはそれ以上のヒト抗体に由来するフレームワークアミノ酸配列を含み、
前記抗体ポリペプチドは、配列番号２３の重鎖アミノ酸配列および配列番号２４の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体と比較して治療可能比の増強を呈し、
処置しようとする前記前立腺癌は、非限局性前立腺癌、転移性前立腺癌、および／または去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）である、使用のための組成物。

【請求項2】

前記前立腺癌が微小転移性前立腺癌である、請求項１に記載の、使用のための組成物。

【請求項3】

前記前立腺癌が、リンパ系の転移、骨の転移、または、骨盤内、直腸内、膀胱内、または尿道内転移を含む、前記転移性前立腺癌である、請求項１または２に記載の、使用のための組成物。

【請求項4】

前記抗体ポリペプチドが、完全な抗体、またはＦｖフラグメントおよびＦａｂ様フラグメントからなる群から選択される抗原結合フラグメントを含む、またはそれからなる、請求項１～３のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項5】

配列番号８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項6】

重鎖定常領域、および／または、軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項7】

前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択される免疫グロブリンサブタイプのものである、請求項６に記載の、使用のための組成物。

【請求項8】

前記重鎖定常領域は、免疫グロブリンサブタイプＩｇＧ１のものである、請求項６に記載の、使用のための組成物。

【請求項9】

重鎖定常領域であって、前記重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３領域は各々、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＩｇＧ重鎖定常領域のＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３領域と１００％の同一性を有する、重鎖定常領域、および／または、軽鎖定常領域であって、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、または、配列番号１１のアミノ酸配列からなる、軽鎖定常領域、を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項10】

重鎖定常領域であって、前記重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３領域は各々、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＩｇＧ重鎖定常領域のＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３領域と１００％の同一性を有する、重鎖定常領域、および／または、軽鎖定常領域であって、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、または、配列番号１１のアミノ酸配列からなる、軽鎖定常領域、を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項11】

重鎖であって、前記重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３領域は各々、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＩｇＧ重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３領域と１００％の同一性を有する、重鎖、および／または、軽鎖であって、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、または、配列番号１３のアミノ酸配列からなる、軽鎖、を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項12】

重鎖であって、前記重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３領域は各々、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＩｇＧ重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３領域と１００％の同一性を有する、重鎖、および／または、軽鎖であって、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、または、配列番号１３のアミノ酸配列からなる、軽鎖、を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項13】

重鎖であって、配列番号１２のアミノ酸配列に対し１またはそれ以上の点突然変異を含む、または、からなる重鎖、および／または、軽鎖であって、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、または、からなる軽鎖、を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項14】

配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖定常領域、および／または、配列番号１１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖定常領域を含む、請求項６に記載の、使用のための組成物。

【請求項15】

配列番号１２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖、および／または、配列番号１３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖を含む、請求項１４に記載の、使用のための組成物。

【請求項16】

前記抗体ポリペプチドが、治療部分に直接または間接的に連結されている、請求項１～１５のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項17】

前記抗体ポリペプチドが検出可能な部分をさらに含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項18】

前記治療部分および／または前記検出可能な部分が、連結部分を介して前記抗体ポリペプチドに間接的に連結されている、請求項１６または１７に記載の、使用のための組成物。

【請求項19】

前記連結部分が、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０四酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体、および１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン－１，４，８，１１四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体からなる群から選択されるキレート化剤である、請求項１８に記載の、使用のための組成物。

【請求項20】

放射性同位元素に直接または間接的に連結された完全な抗体を含むか、またはそれからなる、請求項１～１９のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項21】

前記放射性同位元素が、β放射体、オーガー放射体、転換電子放射体、α放射体、および低光子エネルギー放射体からなる群より選択される、請求項２０に記載の、使用のための組成物。

【請求項22】

前記放射性同位元素が、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ａｃ、^２２５Ａｃおよび^２２１Ａｔから選択される前記α放射体である、請求項２１に記載の、使用のための組成物。

【請求項23】

前記放射性同位元素が^２２５Ａｃである、請求項２２に記載の、使用のための組成物。

【請求項24】

前記治療可能比が、移植されたヒト前立腺癌細胞を含むマウスにおける健康な骨における取り込みに対する腫瘍における取り込みの比として定義される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項25】

移植されたヒト前立腺癌細胞を含むマウスにおける健康な骨における取り込みに対する腫瘍における取り込みの前記比が、配列番号２３の重鎖アミノ酸配列および配列番号２４の軽鎖アミノ酸配列を含む前記抗体ポリペプチドまたは前記抗体の注射の７２時間後に決定される、請求項２４に記載の、使用のための組成物。

【請求項26】

移植されたヒト前立腺癌細胞がＬＮＣａＰ細胞である、請求項２４または２５記載の、使用のための組成物。

【請求項27】

増強された前記治療可能比が前記治療可能比の少なくとも４０％の増加として定義される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項28】

前記治療可能比が、移植されたヒト前立腺癌細胞を含むマウスにおける健康な骨における取り込みに対する腫瘍における取り込みの比として定義され、投与後７２時間における抗体ポリペプチドの前記治療可能比が、投与後７２時間における配列番号２３の重鎖アミノ酸配列および配列番号２４の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体の前記治療可能比よりも少なくとも４０％高い、請求項１～２７のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項29】

増強された前記治療可能比が、前立腺腫瘍を有する患者に投与され、同じ放射能および投与経路で比較された場合に、配列番号２３の重鎖アミノ酸配列および配列番号２４の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体と比較して、骨髄吸収線量に対する腫瘍吸収線量のより高い比を有する抗体ポリペプチドとして定義される、請求項１～２８のいずれか一項に記載の、使用のための組成物。

【請求項30】

前立腺癌の処置および／または診断における使用のための単離核酸分子であって、前記核酸分子は請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体ポリペプチドまたはそのポリペプチド鎖成分をコードする、使用のための単離された核酸分子。

【請求項31】

配列番号１４および／または配列番号１５のヌクレオチド配列を含む、請求項３０に記載の、使用のための核酸分子。

【請求項32】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体ポリペプチド、および薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体を含む、医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は一般に、治療および診断薬剤ならびに方法の分野、特に前立腺癌の分野に関する。

【背景技術】

【0002】

前立腺癌は、現在のところ男性の癌の最も一般的な形態である。前立腺は、男性にあるクルミサイズの腺であり、精液の成分である液体を産生する。前立腺は２つもしくはそれ以上の葉、または断片を有し、組織の外層によって囲まれている。前立腺は、直腸の前の膀胱直下に位置し、尿道を取り囲んでいる。

【0003】

前立腺癌の発生は、ヨーロッパの北西部および米国において最も高い。腫瘍の成長は、通常長期間の間に起こる過程である。前立腺癌は通常、穏やかな形態の癌である。実際のところ、前立腺癌と診断された男性の大多数は生存し、回復し、少数の男性だけが、初期段階において転移する悪性形態の前立腺癌になる。この悪性形態の前立腺癌は、癌が被膜外組織に広がる前の、初期段階で診断される場合にだけ治療可能である。

【0004】

今日、前立腺癌の診断およびモニターは、患者血液中の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の濃度を測定することによって一般に実行される。異なる時点で実行した数回の連続的な測定において、ＰＳＡの濃度が著しく高い場合、前立腺癌の可能性があると判定される。この時点で、生検を実行して、前立腺癌を確認することができる。

【0005】

ＰＳＡ（別名カリクレインＩＩＩ）は、２３７アミノ酸の一本鎖からなるタンパク質であり、前立腺の分泌細胞において産生される。これらの分泌細胞は、前立腺全体に見ることができる。ＰＳＡは、前立腺癌に関してしっかりと確立され、良く研究されているマーカーである。健康細胞との比較により、ＰＳＡの産生は、悪性細胞においてより低く、過形成細胞においてより高い。実際にＰＳＡの濃度が前立腺癌を患っている男性の血液中でより高いことは、むしろ矛盾している。しかしながら、１つの説明は、悪性細胞が劣化した細胞構造を有し、したがってＰＳＡに対してより透過性であるということである。

【0006】

前立腺癌の療法の標的として適している別の重要なセリンプロテアーゼは、ヒト腺性カリクレイン２（ｈＫ２）である。ｈＫ２をコードしている遺伝子は、ＰＳＡをコードしている遺伝子と共に第１９染色体に位置する。ｈＫ２は、前立腺組織において、まさにＰＳＡのように主に発現する。前立腺において、ＰＳＡは、不活性な前形態として存在し、ｈＫ２のペプチダーゼ作用によって活性化される。ｈＫ２に関する免疫組織化学的研究は、ｈＫ２が分化のレベルと関連して発現することが示されている。これは、ｈＫ２が、前立腺癌の状態の組織など低分化の組織においてより高い産生量で、および別の一般的な前立腺の問題である前立腺肥大症（ＢＰＨ）の状態の組織など高分化の組織においてより低い
産生量で発現することを意味する。

【0007】

今日の前立腺癌の療法は、手術（例えば、根治的前立腺切除）、放射線療法（近接照射療法および外照射療法を含む）、高密度焦点式超音波（ＨＩＦＵ）、化学療法、経口化学療法薬、凍結手術（腫瘍を凍らせる）、ホルモン療法（抗アンドロゲン療法など）、去勢または前述の組合せである。

【0008】

これらの療法の大部分（手術および外照射療法）は、しかしながら原発腫瘍および大きい転移の治療にしか（または主に）有用でない。化学療法は、播種性の癌に使用されるが、これらの患者の大部分の場合、緩和効果および／または生存期間の延長である。したが
って、播種性悪性疾患、特に微小転移巣の場合、相当な改善を達成するには他のまたは相補的な治療様式が必要である。

【0009】

抗体およびフラグメントなど標的化分子を使用する免疫療法または放射免疫療法などの療法は、播種性疾患の療法の可能性を与える。

【0010】

したがって、前立腺癌を治療および診断するための新たな治療薬剤ならびに方法が必要とされている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

したがって、本発明は、上で定義した１つもしくはそれ以上の、当技術分野における不十分な点ならびに不都合を単独でまたは任意の組合せで緩和、軽減もしくは除去することを模索し、添付の特許請求の範囲による治療薬剤および方法を提供することによって少なくとも上述の問題を解決する。

【課題を解決するための手段】

【0012】

本発明の第１の態様は、ヒトカリクレイン－２（ｈK２）に対する結合特異性を持つ抗
体ポリペプチドであって、
（ａ）配列番号１および配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲＨ１： ＳＤＹＡＷＮ 配列番号１
ＣＤＲＨ２： ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ 配列番号２
ＣＤＲＨ３： ＧＹＹＹＧＳＧＦ 配列番号３
ならびに／または
（ｂ）配列番号４および配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１： ＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨ 配列番号４
ＣＤＲＬ２： ＡＡＳＮＲＥＳ 配列番号５
ＣＤＲＬ３： ＱＱＴＲＫＶＰＹＴ 配列番号６
を含み、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、１つまたはそれ以上のヒト抗体に由来するフレームワークアミノ酸配列を含む、抗体ポリペプチドを提供する。

【0013】

上記の６つのアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔら、（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（その開示を参照によって本明細書に組み入れる）にしたがって定義されるように、本発明の抗体ポリペプチドの相補性決定領域（ＣＤＲ）を表す。

【0014】

「抗体ポリペプチド」には、実質的に完全な抗体分子、一本鎖抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖および／または軽鎖のホモ二量体およびヘテロ二量体、ならびに抗原結合フラグメントおよびその誘導体を含める。

【0015】

本明細書では用語「アミノ酸」は、遺伝的にコードされている標準的な２０アミノ酸およびそれに対応する「Ｄ」体（天然の「Ｌ」体と比較する）の立体異性体、ω－アミノ酸、他の天然に存在するアミノ酸、非正規なアミノ酸（例えばα、α二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸等）ならびに化学的に誘導体化されたアミノ酸を含む（下記参照）。

【0016】

「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」のようにアミノ酸が具体的に挙げられている場合、明確に記述されない限り、その用語は、Ｌ－アラニンとＤ－アラニンの両方のことを指す。ポリペプチドによって望ましい機能特性が保持される限り、他の非正規なアミノ酸も、本発明のポリペプチドに適切な成分になることができる。示したペプチドについて、コードされた各アミノ酸残基は、必要に応じて、一文字指定によって表され、従来の
アミノ酸の慣用名に対応する。

【0017】

一実施形態において、本明細書に定義したポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸を含むまたはそれからなる。

【0018】

本発明の抗体ポリペプチドは、ｈＫ２に対する特異性を呈する。

【0019】

典型的なｈＫ２配列は、以下のワールドワイドウェブアドレス：
ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ／Ｈｏｍｏ＿ｓａｐｉｅｎｓ／Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ／Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｐｒｏｔｅｉｎ？ｇ＝ＥＮＳＧ０００００１６７７５１；ｒ＝１９：５１３７６６８９－５１３８３８２２；ｔ＝ＥＮＳＴ０００００３２５３２１
で見ることができるアンサンブルデータベースにあるように、転写産物：ＫＬＫ２－２０１（ＥＮＳＴ０００００３２５３２１）、遺伝子産物ＥＮＳＧ０００００１６７７５１と記述され、以下の配列：
ＭＷＤＬＶＬＳＩＡＬ ＳＶＧＣＴＧＡＶＰＬ ＩＱＳＲＩＶＧＧＷＥ ＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶ ＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣ ＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶ ＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮ ＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬ ＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶ ＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬ ＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳ
ＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤ ＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡ ＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧ ＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴ ＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩ ＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳ ＬＱＣＶＳＬＨＬＬＳ ＮＤＭＣＡＲＡＹＳＥ ＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧ ＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧ ＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮ ＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧ ＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰ ＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲ ＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰ
［配列番号７］
を有する（成熟した、活性なｈＫ２タンパク質の配列に下線を施し、その配列は、Ｎ末端においてシグナルペプチドおよびプロペプチド配列が前にある）。

【0020】

精漿に見られるｈＫ２の大部分は、不活性であり、プロテインＣインヒビター（ＰＣＩ）と複合体形成している。ｈＫ２が、他の細胞外プロテアーゼインヒビターと複合体を形成することも考えられる。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究は、ｈＫ２がα２－抗プラスミン（α２－ＡＰ）、ＡＣＴ、ＡＭＧ、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、Ｃ１不活化因子およびプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）に結合できることを示す。

【0021】

一実施形態において、抗体ポリペプチドは、複合型のｈＫ２アイソフォームと比較して、遊離（すなわち、非複合型）ｈＫ２アイソフォームに対する特異性を有する。遊離ｈＫ２アイソフォームに対する特異性がある結合部分は、遊離ｈＫ２アイソフォーム上で露出しているが、複合型ｈＫ２アイソフォーム上で露出していないエピトープに対する結合特異性を有し、これは直鎖状またはコンフォメーションを有する（すなわち、非直鎖状）エピトープであることがある。例えば、抗体ポリペプチドは、遊離ｈＫ２においては露出しているが、ｈＫ２がＰＣＩと複合体形成している場合に精液に存在する形態のような複合
型アイソフォームにおいては露出していない、ｈＫ２の触媒溝の一部である１つまたはそれ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに対する特異性を有していてよい。ｈＫ２のエピトープマッピングについては、Ｖａｉｓａｎｅｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５０：９、１６０７～１６１７頁（２００４年）に記述され、その開示を参照によって本明細書に組み入れる。

【0022】

ｈＫ２タンパク質のさらなる例は、以下の受託番号によって同定される：
（ａ）ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＦ０８２７７．１；
（ｂ）ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＦ０８２７５．１；および
（ｃ）ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ２０１５１．１

【0023】

組換えｈＫ２の産生については、Ｌｏｖｇｒｅｎら、１９９９年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６６：１０５０～５頁に記述される（その開示を参照によって本明細書に組み入れる）。

【0024】

「特異性」とは、抗体ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｖｏ、すなわち人体においてｈＫ２が存在する生理的条件下で、ｈＫ２に結合可能であることを意味する。好ましくは、抗体ポリペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏで他のどんなタンパク質にも結合しない。

【0025】

そのような結合特異性は、ｈＫ２を発現するトランスフェクトした細胞を使用するＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、免疫沈降、ウェスタンブロットおよびフローサイトメトリーのような当技術分野において周知の方法によって決定することができる。有利なことに、抗体ポリペプチドは、ｈＫ２に選択的に結合することが可能であり、すなわち、その抗体は別のタンパク質（特に、前立腺特異抗原またはＰＳＡのような他のカリクレイン）よりｈＫ２に少なくとも１０倍強く結合する。好ましくは、抗原ポリペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏでＰＳＡに結合しない。

【0026】

ｈＫ２に対する特異性を持つマウス抗体は、当業者に公知である。例えば、Ｖａｉｓａｎｅｎら、２００４年、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５０（９）：１６０７～１６１７頁は、マウスにおけるｈＫ２に対する特異性を持つモノクローナル抗体の産生について記述している（その開示を参照によって本明細書に組み入れる）。「１１Ｂ６」および「７Ｄ７」と称される２つの抗体は、ｈＫ２に対して選択的であると述べられる。

【0027】

マウス抗体１１Ｂ６の重鎖および軽鎖成分のアミノ酸配列は、国際出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１２／０５２６７５（ＷＯ２０１３／０６１０８３；その開示全体を参照によって本明細書に組み入れる）に開示され；特に、その中の配列番号４および５を参照のこと。

【0028】

本発明の抗体ポリペプチドは、１１Ｂ６抗体の選択されたヒト化バージョンに基づき、それは予想外の好ましい特性を呈する。

【0029】

特に、本発明のヒト化抗体は、ＣＤＲ配列が得られたマウス親１１Ｂ６抗体（ｍ１１Ｂ６）と比較して治療可能比の増強を呈する（実施例６を参照のこと）。

【0030】

「治療可能比の増強」とは、本発明の抗体ポリペプチド（１１Ｂ６抗体のヒト化形態）が、前立腺腫瘍の患者に投与される場合に、マウス親１１Ｂ６抗体（同じ放射活性および投与ルートで比較する）より高い比の腫瘍吸収線量対（健常）骨髄吸収線量が得られることを意味する。腫瘍対骨髄の吸収線量の比は、実施例６に記述される方法を使用して算出できる。

【0031】

本発明の抗体の予想外に良好な治療プロファイルは、より高い放射線量（吸収線量）を
使用することを可能にし、健康な組織および臓器に対する副作用または「副次的損傷」を増加させることなく、前立腺癌の治療においてより大きな効能をもたらす。

【0032】

ヒト化（再構築またはＣＤＲ移植とも称する）は、異種供給源由来（一般に、マウスなど齧歯動物由来）モノクローナル抗体の免疫原性を減少させ、ヒト免疫系の活性化を改善するための技術である（ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ、２００８年、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：１６１９～１６３３頁による総説を参照のこと；その開示を参照によって本明細書に組み入れる）。いくつものヒト化モノクローナル抗体が臨床試験中であり、いくつかは薬物として使用される承認を得ている。分子生物学の技術を使用して操作したモノクローナル抗体を産生する技法は比較的直接的であ
るが、ヒトフレームワークへの齧歯目の相補性決定領域（ＣＤＲ）の単純な移植では、起源モノクローナル抗体の結合親和性および特異性を必ずしも再構成しない。抗体をヒト化するためには、ヒト化抗体の設計は、起源分子の機能を再生させるにあたって重要な工程である。

【0033】

ヒト化抗体の設計は、使用しようとするＣＤＲの範囲および使用しようとするヒトフレームワークを含めたいくつかの鍵となる選択肢を含む。しかし、親抗体の特異性を保持するためには、ヒトフレームワーク領域に齧歯目ｍＡｂ由来残基を１つまたはそれ以上置換する（いわゆる復帰突然変異）ことも重要になる。必要な復帰突然変異の位置を同定するには、詳細な配列／構造分析を必要とする。近年では、ファージライブラリを使用して、選んだ位置でアミノ酸を変化させてきた。同様に、齧歯目のＣＤＲを移植するのに最適なヒトフレームワークを選ぶために、多くの手法が使用されてきた。初期の実験は、齧歯目のモノクローナル抗体に対する配列同一性に関係なく、よく特徴づけられたヒトモノクローナル抗体の限られたサブセット（しばしば構造が利用可能であった）を使用した（いわゆる固定フレームワーク手法）。いくつかのグループは、齧歯目の可変領域に対して高いアミノ酸配列同一性（相同性マッチングまたはベストフィット）を持つ可変領域を使用し；他のグループは共通のまたは生殖細胞系配列を使用し、一方でさらに他のグループは、異なるいくつかのヒトモノクローナル抗体から各軽鎖もしくは重鎖可変領域のフレームワーク配列のフラグメントを選択する。齧歯目の表面残基をヒトモノクローナル抗体に見られる最も一般的な残基と置きかえる（「再表面化（resurfacing）」または「化粧張り（veneering）」）および異なる定義のＣＤＲの範囲を使用するヒト化の手法も開発されている。

【0034】

しかしながら、抗体ヒト化の大規模研究にもかかわらず、いくつかの齧歯目モノクローナル抗体は、ヒト化が困難であることが判明した。

【0035】

本発明の抗体ポリペプチドの開発は、フレームワーク領域だけでなくいくつかのＣＤＲにおいても復帰突然変異を必要とした（下記の実施例１を参照のこと）。したがって、配列番号１～６で上に表される６つのＣＤＲ配列は、マウス抗ｈＫ２抗体１１Ｂ６から得られるが、マウス親抗体と比較してＣＤＲＨ２（配列番号２）およびＣＤＲＬ１（配列番号４）に突然変異を含有する。ＣＤＲ中のこれらの突然変異は、１１Ｂ６のヒト化バージョンにおける最適な特異性および安定性を得るために作製された。

【0036】

一実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドは、０．１×１０^－９Ｍより大きいＫ_ＤでｈＫ２に結合する。

【0037】

相互作用（抗体とリガンドとの相互作用など）の全体的な親和性（Ｋ_Ｄ）ならびに会合速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）を測定する方法は、当業者に周知である。典型的なｉｎ ｖｉｔｒｏの方法については、下記の実施例３に記述される。フローサイトメトリーに基づく方法を使用することも考えられる（Ｓｋｌａｒら、２００２年、Ａｎｎｕ Ｒ
ｅｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｔｒｕｃｔ、３１：９７～１１９頁；その開示を参照によって本明細書に組み入れる）。

【0038】

有利には、本発明の抗体ポリペプチドは、ｈＫ２に対する１．０×１０^－１０Ｍ未満の親和性（Ｋ_Ｄ）、例えば９．０ｘ１０^－１１Ｍ、８．０ｘ１０^－１１Ｍ、７．０ｘ１０^－１１Ｍ、６．０ｘ１０^－１１Ｍ、５．０ｘ１０^－１１Ｍ、４．０ｘ１０^－１１Ｍ、３．０ｘ１０^－１１Ｍ、２．０ｘ１０^－１１Ｍ未満または１．０ｘ１０^－１１Ｍ未満のＫ_Ｄを有する。

【0039】

本発明の抗体ポリペプチドが、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖および／または軽鎖のホ
モ二量体およびヘテロ二量体、ならびに抗原結合フラグメントおよびその誘導体を構成できることは、当技術に熟達した者には認識されよう。

【0040】

一実施形態において、抗体ポリペプチドは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭ分子のような完全（すなわちすべて揃った）抗体を含むまたはそれからなる。

【0041】

有利には、抗体ポリペプチドは、完全なＩｇＧ分子または抗原結合フラグメントもしくはその誘導体を含むまたはそれからなる。

【0042】

ＩｇＧ分子は、任意の公知のサブタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４であってもよい。

【0043】

抗体の「抗原結合フラグメントおよび誘導体」には、Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合Ｆｖ）、Ｆａｂ様フラグメント［例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ）_２フラグメント］およびドメイン抗体（例えば単一Ｖ_Ｈ可変ドメインまたはＶ_Ｌ可変ドメイン）を含める。

【0044】

例えば、抗体ポリペプチドは、ｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントを含んでいるかまたはそれからなっていてもよい。

【0045】

本発明の抗体ポリペプチドをさらに特徴づけている特徴は、重鎖および軽鎖可変領域における１つまたはそれ以上のヒト抗体に由来するフレームワークアミノ酸配列の存在である。

【0046】

「フレームワーク配列」には、ＣＤＲ以外の重鎖および軽鎖可変ドメインの領域を含める。
一般に、各可変ドメインは、４つのフレームワーク領域を含むことになり、ＦＲ１～ＦＲ４と称され、その中にＣＤＲ配列が位置する：
ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４

【0047】

フレームワーク領域のアミノ酸配列は、完全にヒトの配列であっても、または１つもしくはそれ以上の復帰突然変異を含有していてもよい（すなわち、ヒトフレームワークに存在するアミノ酸配列を、ＣＤＲが由来する齧歯目の可変ドメイン内の対応する位置に見られるアミノ酸で置換することができる）ことはいうまでもない。結果的に、本発明の抗体ポリペプチドの重鎖ならびに／または軽鎖可変ドメインのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４の配列は、天然には存在しない配列であることがある。

【0048】

一実施形態において、抗体ポリペプチドのフレームワーク配列は、１つまたはそれ以上のヒト抗体に由来するフレームワーク領域と少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはより高い配列同一性
を共有する。したがって、抗体ポリペプチドは、ヒト抗体のＦＲ１領域と少なくとも７０％の配列同一性を共有する重鎖ＦＲ１領域を含むことができる。しかしながら、抗体ポリペプチドの重鎖および軽鎖が、異なるヒト抗体のフレームワーク領域と配列同一性を共有できることはいうまでもない。

【0049】

パーセント同一性は、例えば、Ｅｘｐａｓｙ機関サイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈ．ｅｍｂｎｅｔ．oｒｇ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ＬＡＬＩＧＮ＿ｆｏｒｍ．ｈｔｍｌ）にあ
るＬＡＬＩＧＮプログラム［ＨｕａｎｇおよびＭｉｌｌｅｒ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．（１９９１年）１２：３３７～３５７頁］により、パラメータとしてグローバルアラインメントオプション、スコア行列ＢＬＯＳＵＭ６２、開始ギャップペナルティ－１４、
延長ギャップペナルティ－４を使用して決定することができる。別法として、２つのポリペプチド間のパーセント配列同一性は、適切なコンピュータプログラム、例えばウィスコンシン大学Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ＧｒｏｕｐのＧＡＰプログラムを使用して決定することができ、パーセント同一性が、配列が最適に整列されたポリペプチドに対して算出されることはいうまでもない。

【0050】

別法として整列化は、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗプログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９９４年、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２：４６７３～４６８０頁に記載される、参照によって本明細書に組み入れる）を使用して実施することができる。使用したパラメータは、以下の通りである：
・高速ペアワイズ整列化パラメータ：Ｋ組（ワード）サイズ；１、ウィンドウサイズ；５、ギャップペナルティ；３、トップダイアゴナル数；５。スコア法：ｘパーセント。
・多重整列化パラメータ：ギャップ開始ペナルティ；１０、ギャップ伸長ペナルティ；０．０５。
・スコア行列：ＢＬＯＳＵＭ。

【0051】

別法として、ＢＥＳＴＦＩＴプログラムを使用して、局所配列整列化を決定することができる。

【0052】

一実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドの重鎖可変ドメインのフレームワーク配列は、ヒト免疫グロブリンＶＨ４遺伝子ファミリーにコードされている。

【0053】

例えば、フレームワーク配列は、少なくとも一部にはＶＨ４－２８生殖細胞遺伝子にコードされている（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３はＶＨ４－２８にコードされ、ＦＲ４はＪＨ１にコードされている）。

【0054】

したがって、一実施形態において、抗体ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる重鎖可変領域を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい：ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号８］

【0055】

一実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドの軽鎖可変ドメインのフレームワーク配列は、ヒト免疫グロブリンκＶ４遺伝子ファミリーにコードされている。

【0056】

例えば、フレームワーク配列は、少なくとも一部にはＩｇｋＶ４－Ｂ３生殖細胞遺伝子にコードされている（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３はＩｇｋＶ４－Ｂ３にコードされ、ＦＲ４はＪＫ２にコードされている）。

【0057】

したがって、一実施形態において、抗体ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる軽鎖可変領域を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい：ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴ ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
［配列番号９］

【0058】

「少なくとも一部」には、フレームワーク配列が、参照遺伝子にコードされる少なくとも１０個の連続するアミノ酸、例えば少なくとも２０個の連続するアミノ酸を含むことを含める。１つまたはそれ以上だがすべてではないＦＲ領域が、参照遺伝子にコードされる
（例えば、ＦＲ１およびＦＲ２が参照遺伝子にコードされるが、ＦＲ３はコードされない）ことも含める。

【0059】

好ましい実施形態において、抗体ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0060】

場合により、本発明の抗体ポリペプチドは、重鎖定常領域またはその一部をさらに含む。

【0061】

一実施形態において、抗体ポリペプチドは、ＩｇＧ重鎖（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖など）のＣＨ１、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域を含む。したがって、抗体ポリペプチドは、ＩｇＧ１重鎖由来の定常領域の一部または全部を含むことができる。例えば、抗体ポリペプチドは、ＣＨ１およびＣＬ定常領域を含むＦａｂフラグメントであってもよい。

【0062】

一実施形態において、抗体ポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域を含むことができる。Ｆｃ部分が、ＩｇＧ抗体に由来する、または異なるクラスの抗体（ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥなど）に由来することは、当業者には認識されよう。一実施形態において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体に由来する。

【0063】

Ｆｃ領域は、天然に存在する（例えば内生的に産生される抗体の一部）ものであっても、または人工的（例えば、天然に存在するＦｃ領域と比較して１つもしくはそれ以上の点突然変異および／またはＣＨ２ドメイン内の炭水化物部分に修飾を含む）なものであってもよい。ＦｃＲに結合する能力を改善する点突然変異を持つＦｃ領域は、例えば血清半減期を改変することにより、またはＡＤＣＣおよびＣＤＣに関係するＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する結合を変化させる（すなわち、増強または減少させる）ことにより有利になることがある。

【0064】

有利なことに、抗体ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列、またはその一部を含むことができる：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
［配列番号１０］

【0065】

場合により、本発明の抗体ポリペプチドは、軽鎖定常領域またはその一部をさらに含む。

【0066】

一実施形態において、抗体ポリペプチドは、ＩｇＧ軽鎖のＣＬ領域（κまたはλ軽鎖など）を含む。

【0067】

例えば、抗体ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列、またはその一部を含むことができる：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
［配列番号１１］

【0068】

有利には、抗体ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる重鎖定常領域、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる軽鎖定常領域を含む。

【0069】

好ましい一実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる重鎖（可変領域は太字体およびＣＤＲ配列は囲んだイタリックである）

【化1】

および／または

【0070】

（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる軽鎖（可変領域は太字体およびＣＤＲ配列は囲んだイタリックである）

【化2】

を含む。

【0071】

例えば、抗体ポリペプチドは、配列番号１２の重鎖２つおよび配列番号１３の軽鎖２つを含んでいるかまたはそれからなっていてもよく、それらはジスルフィド架橋によって互いに繋がれて、典型的なＩｇＧ抗体構造を形成する。

【0072】

本発明の抗体ポリペプチドは、修飾または誘導体化した１つまたはそれ以上のアミノ酸を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい。

【0073】

１つまたはそれ以上のアミノ酸の化学誘導体は、官能性側基との反応によって達成することができる。そのような誘導体化した分子には、例えば、遊離アミノ基を誘導体化したアミン塩酸塩、ｐ－トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ－ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基またはホルミル基を形成する分子がある。遊離カルボキシ基は誘導体化されて、塩、メチルおよびエチルエステルまたは他の型のエステルならびにヒドラジドを形成することができる。遊離水酸基は誘導体化されて、Ｏ－アシルまたはＯ－アルキル誘導体を形成することができる。２０種の標準アミノ酸の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも化学誘導体に含める。例えば：４－ヒドロキシプロリンをプロリンと置換できる；５－ヒドロキシリシンをリジンと置換できる；３－メチルヒスチジンをヒスチジンと置換できる；ホモセリンをセリンおよびオルニチンをリジンと置換できる。必要な活性が維持される限り、誘導体は１つもしくはそれ以上の付加または欠失を含有するペプチドも含む。他に含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端アシル化（例えばアセチル化またはチオグリコール酸アミド化）、末端カルボキシルアミド化（例えばアンモニアまたはメチルアミンによる）、などの末端修飾である。

【0074】

ペプチド模倣体化合物も有用であることは、当技術に熟達した者にはさらに認識されよう。用語「ペプチド模倣体」とは、治療薬剤として特定のペプチドのコンフォメーションおよび所望の特徴を模倣する化合物のことを指す。

【0075】

例えば、前記ポリペプチドは、アミノ酸残基がペプチド結合（－ＣＯ－ＮＨ－）で繋がれている分子だけでなくペプチド結合が逆転している分子も含む。そのようなレトロインベルソ（retro-inverso）ペプチド模倣体は、例えばＭｅｚｉｅｒｅら（１９９７年）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９、３２３０～３２３７頁に記述されるそれなど当技術分野において公知の方法を使用して作ることができ、これは参照によって本明細書に組み入れてあ
る。この手法は、側鎖の向きは変えない骨格の変化を含む偽ペプチドを製作する工程を含
む。ＣＯ－ＮＨペプチド結合の代わりにＮＨ－ＣＯ結合を含有するレトロインバース（Retro-inverse）ペプチドは、タンパク質分解に対し、より一層抵抗性である。別法として
、前記ポリペプチドは、ペプチド模倣体化合物であってもよく、アミノ酸残基の１つまたはそれ以上は、従来のアミド結合の場所において－ｙ（ＣＨ_２ＮＨ）－結合によって連結されている。

【0076】

さらに別法として、アミノ酸残基の炭素原子間に間隔を保持する適切なリンカー部分が使用される場合、ペプチド結合は全く不要になり；ペプチド結合と実質的に同じ荷電分布および実質的に同じ平面性を有することは、リンカー部分にとって有利になる。

【0077】

エキソタンパク質分解性消化に対する感受性を減少させるために、前記ポリペプチドは、好都合には、そのＮまたはＣ末端をブロックできることはいうまでもない。

【0078】

Ｄ－アミノ酸およびＮ－メチルアミノ酸のような様々なコードされていないまたは修飾したアミノ酸を使用して、哺乳動物のペプチドも修飾した。加えて、推定される生理活性型コンフォメーションを、環化などの共有結合修飾によってまたはラクタムもしくは他の型の架橋の組み込みによって安定化することができ、例えば、Ｖｅｂｅｒら、１９７８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：２６３６頁およびＴｈｕｒｓｅｌｌら、１９８３年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１１１：１６６頁を参照のこと、参照によって本明細書に組み入れる。

【0079】

本発明の抗体ポリペプチドを官能部分で拡張して、例えばｉｎ ｖｉｖｏ造影剤または治療薬剤として目的とする使用を容易にできることは、当技術に熟達した者には認識されよう。

【0080】

したがって、一実施形態において、抗体ポリペプチドは、直接または間接的に治療部分に連結されている。

【0081】

任意の適切な治療部分を使用できる。適切な治療部分は、前立腺癌細胞の成長を減少または阻害する、特に死滅させることが可能なものである。例えば、治療薬剤は細胞障害性部分であってもよい。細胞障害性部分は、１つまたはそれ以上の放射性同位元素を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい。例えば、１つまたはそれ以上の放射性同位元素は、β放射体、オージェ放射体、転換電子放射体、α放射体、および低光子エネルギー放射体からなる群からそれぞれ独立に選択できる。１つまたはそれ以上の放射性同位元素は、薬剤付近において高い吸収線量を生じる局所的吸収エネルギーの放射パターンをそれぞれ独立に有することが望ましい。典型的な放射性同位元素は、^９０Ｙ、^３２Ｐ、^１８６Ｒｅ／^１８８Ｒｅのような長距離β放射体；^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^６７Ｃｕ、^１６１Ｔｂ、^１０５Ｒｈのような中距離β放射体；^１６６Ｈｏ、^７６Ａｓ／^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^１５３Ｓｍ；^４５Ｃａまたは^３５Ｓのような低エネルギーβ放射体；^５１Ｃｒ、^６７Ｇａ、^９９Ｔｃ^ｍ、^１１１Ｉｎ、^１１４ｍＩｎ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^２０１Ｔのような転換またはオージェ放射体；ならびに^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ａｃ、^２２５Ａｃ、^２１２Ｐｂ、^２５５Ｆｍ、^２２３Ｒａ、^１４９Ｔｂおよび^２２１Ａｔのようなα放射体を含むことができる。他の放射性核種が利用可能であり、療法に使用可能になる。

【0082】

別の実施形態において、治療部分または細胞障害性部分が、ＷＯ２００６／０８７３７４Ａ１、特に１１頁７～１５行において「トレーサ」として開示されている部分でないことが望ましい。

【0083】

好ましい一実施形態において、抗体ポリペプチドは、放射性同位元素^１７７Ｌｕに連結
されている（そうでない場合は標識される）。

【0084】

別法として、治療部分は、１つまたはそれ以上の治療薬（細胞毒など）、例えば、細胞増殖抑制薬；抗アンドロゲン薬；コルチゾンおよびその誘導体；ホスホン酸塩；テストステロン－５－α－レダクターゼインヒビター；ホウ素付加物（boron addend）；サイトカイン；タプシガルジンおよびその代謝産物；毒素（サポリンまたはカリケアマイシンなど）；化学療法剤（代謝拮抗物質など）；または前立腺癌の治療に有用な他の任意の治療または細胞障害性薬を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい。

【0085】

典型的な治療／細胞障害性薬は、例えば：
・細胞増殖抑止剤、特に、用量規制副作用があるシクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド、ブスルファン、ロムスチン、タキサン、エストラムスチンリン酸および他のナイトロジェンマスタード、抗生物質（ドキソルビシン、カリケアマイシンおよびエスペラミシンを含む）、ビンカアルカロイド、アジリジン、白金含有化合物、エンドスタチン、アルキルスルホン酸塩、ニトロソ尿素、トリアゼン、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、酵素、置換された尿素、メチルヒドラジン誘導体、ダウノルビシン、両親媒性アミンを含むがそれだけに限らない細胞増殖抑止剤
・フルタミドおよびビカルタミドならびにその代謝産物のような抗アンドロゲン；
・コルチゾンおよびその誘導体；
・ジホスホン酸塩およびビスホスホネートのようなホスホン酸塩；
・テストステロン－５－α－レダクターゼインヒビター；
・ホウ素付加物；
・サイトカイン；
・タプシガルジンおよびその代謝産物；
・前立腺癌の治療に使用される他の薬剤
を含むことができる。

【0086】

別法として、細胞障害性部分は、光子活性化療法、中性子活性化療法、中性子誘導オージェ電子線療法、シンクロトロン照射療法または低エネルギーＸ線光子活性化療法のような活性化療法における使用に適する１つまたはそれ以上の部分を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい。

【0087】

例えば、本発明の抗体ポリペプチドにより、いわゆる光活性化放射線療法（ＰＡＴ）に主に集中している放射線療法を向上させるためにシンクロトロン放射（または、低エネルギーＸ線）を使用する可能性が生まれ、それらにおいて外部Ｘ線照射からの局所エネルギー蓄積は、予め投与した高Ｚ腫瘍標的化薬剤（ｈｉｇｈ－Ｚ ｔｕｍｏｒ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）との相互作用によって癌組織において増強される。

【0088】

ＰＡＴ治療法は、グルノーブルにあるヨーロッパ放射光施設（ＥＳＲＦ）のＩＤ１７生医学的ビームラインによって提供されるような、および新しいスウェーデンシンクロトロン施設、Ｍａｘ－ＩＶのような他の施設で将来的に利用可能になると予想されるようなシンクロトロン供給源からの単色のＸ線を利用する。

【0089】

さらなる治療法候補となる、「誘導オージェ電子腫瘍療法」の研究は、ランドにできる予定のヨーロッパ核破砕中性子源（ＥＳＳ）、および願わくは医学的実験ステーションである。反応器で生成された熱および半熱中性子は、ホウ素中性子捕捉療法、ＢＮＣＴ、誘導α粒子を用いる臨床前実験および脳腫瘍治療の両方ならびに高い局所的吸収エネルギーを与える反跳核（^７Ｌ）に長い間使用されてきた。類似の手法は、中性子および中性子に対して高い断面積を持つ安定原子核で標識された適切な腫瘍標的化分子を使用することである。抗体またはペプチドを、例えば安定なガドリニウム（^１５７Ｇｄ）で標識すること
ができ、この抗体またはペプチドは、Ｇｄ－核によって捕捉される中性子の標的分子とし
て作用し得る。これが、いわゆるガドリニウム中性子捕捉療法（ＧｄＮＣＴ）である。モンテカルロ技術により、腫瘍および周囲の組織における線量分布は、それがγ－光子、中性子、核反跳、ならびに特性Ｘ線、ガドリニウムまたは他の潜在的元素由来の内部転換およびオージェ電子に起因するものとして算出される。

【0090】

前述のとおり、治療部分（放射性同位元素、細胞障害性部分などのような）を、結合部分（抗体またはそのフラグメントのような）に直接または間接的に連結することができる。適切なリンカーは当業者に公知であり、例えば、補欠分子族、非フェノール性リンカー（Ｎ－スクシンイミジルベンゾアートの誘導体；ドデカボラート）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０四酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体のような大環状と非環式キレート化剤両方のキレート化部分、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７三酢酸の誘導体（ＮＯＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン－１，４，８，１１四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体、３，６，９，１５－テトラアザビシクロ［９．３．１］－ペンタデカ－１（１５），１１，１３－トリエン－４－（Ｓ）－（４－イソチオシアナトベンジル）－３，６，９三酢酸（ＰＣＴＡ）の誘導体、５－Ｓ－（４－アミノベンジル）－１－オキサ－４，７，１０トリアザシクロドデカン－４，７，１０トリス（酢酸）（ＤＯ３Ａ）の誘導体ならびに他のキレート化部分がある。そのようなリンカーの使用は、薬剤が、リンカーを介して治療部分である放射性同位元素に連結された結合部分として抗体またはそのフラグメントを含むまたはそれからなる状況で、特に適切な可能性がある。

【0091】

好ましい一つのリンカーは、例えば^１７７Ｌｕ－ＤＴＰＡ－［本発明の抗体ポリペプチド］において使用されているＤＴＰＡである。

【0092】

さらなる好ましいリンカーは、例えば^８９Ｚｒ－ＤＦＯ－［本発明の抗体ポリペプチド］において使用されているデフェロキサミン、ＤＦＯである。

【0093】

場合により、本発明の抗体ポリペプチドは、検出可能な部分をさらに含む（または含まない）ことができる。例えば、検出可能な部分は、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７２Ａｓ，^８９Ｚｒ、^１２３Ｉおよび^２０１Ｔｌからなる群から選択される放射性同位元素のような放射性同位元素を含んでいるかまたはそれからなっていてもよい。場合により、薬剤は、^８６Ｙ／^９０Ｙまたは^１２４Ｉ／^２１１Ａｔのような一対の検出可能なおよび細胞障害性の放射性核種を含むことができる。別法として、薬剤は、検出可能な部分として、さらに細胞障害性部分として集学的方式で同時に作用していわゆる「集学的診断治療法（theragnostics）」を提供することが可能な放射性同位元素を含むことが
できる。したがって、結合部分を、放射性核種または化学療法剤のような細胞障害性薬を使用する治療能力と共に多重画像診断（例えば、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学的、または超音波）の能力を有するナノ粒子とカップリングさせることができる。高周波交番磁界、およびこれに付随する超音波画像診断を使用する温熱療法による治療の可能性も、本発明に含まれる。

【0094】

別法として、検出可能な部分は、常磁性同位元素を含んでいるかまたはそれからなっていてもよく、このような常磁性同位元素は、^１５７Ｇｄ、^５５Ｍｎ、^１６２Ｄｙ、^５２Ｃｒおよび^５６Ｆｅからなる群から選択される。

【0095】

抗体ポリペプチドが検出可能な部分を含む場合に、次いで、検出可能な部分は、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波画像診断のような画像診断技術によって検出可能である。

【0096】

治療および検出可能な部分は、当技術分野において周知の方法を使用して抗体ポリペプチドとコンジュゲート、さもなければ組み合わせることができる｛例えば、既存の免疫複合体療法、ゲムツズマブオゾガミシン［商品名：Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）］は、細胞毒素カリケアマイシンに連結されたモノクローナル抗体を含む｝。

【0097】

さらなる実施形態において、抗体ポリペプチド分子の集団を含む製剤の形態で本発明の抗体ポリペプチドを使用して、前立腺癌を治療する。１選択肢において、集団中の抗体ポリペプチド分子のすべて（または重量で９０％、９５％、９９％、９９．９％以上より多いような実質的にすべて）は、同じ治療部分を含む。別の選択肢において、集団は、異なる治療部分を持つ他の薬剤の混合物を含む。この選択肢は、化学療法剤、ホルモン療法剤または他の療法の組合せのような様々な薬剤を使用する標的化放射性核種療法の効果を増強する可能性を与えることになり、この療法において標的化薬剤は腫瘍関連抗原へ治療効果がある放射性核種を送達するだけでなく、同時に細胞内シグナル伝達カスケードを変化させる（例えば、始動させるまたは遮断する）ことにより標的した腫瘍細胞を放射線増感する。この選択肢は、大きな腫瘍、微小転移巣ならびに単一腫瘍細胞の併用治療のために、細胞毒性薬剤の混合物、例えば、α放射体と異なる範囲のβ放射体のカクテル、または異なる範囲を持つ放射性核種のカクテルを使用する前立腺癌の治療、ＬＥＴ（線エネルギー付与）およびＲＢＥ（生物学的効果比）にも有用である。一実施形態において、大きな腫瘍を治療するには長距離放射体を、微小転移巣、および単一腫瘍細胞のようなより小さい腫瘍を治療するには短距離放射体を使用することができる。

【0098】

場合により、本発明の抗体ポリペプチドは、薬剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させるための部分をさらに含むことも（または含まないことも）できる。薬剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させるための典型的な部分には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒト血清アルブミン、グリコシル化基、脂肪酸およびデキストランがある。特にＰＥＧが検討される。

【0099】

本発明のポリペプチドを、例えば冷凍乾燥、噴霧乾燥、噴霧冷却によって、または超臨界二酸化炭素からの粒子形成（沈殿）の使用によって凍結乾燥して保管し、使用前に適切な担体に再溶解できることはいうまでもない。任意の適切な凍結乾燥方法（例えば、冷凍乾燥、噴霧乾燥、ケーキ乾燥）および／または再溶解技術を利用することができる。凍結乾燥および再溶解は様々な程度の活性消失をもたらすことがあり、その使用レベルを上方へ調整して、補正しなければならないことは、当技術に熟達した者には認識されよう。好ましくは、凍結乾燥した（冷凍乾燥した）ポリペプチドは、再水和した場合に、その（凍結乾燥前の）活性を約１％しか、または再水和した場合に、その（凍結乾燥前の）活性を約５％、１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％しか、もしくは約５０％しか失わない。

【0100】

本発明のポリペプチドを産生するための方法は、当業者に周知である。好都合には、ポリペプチドは、組換えポリペプチドであるまたはそれを含む。原核または真核生物宿主細胞における発現など、そのような組換えポリペプチドを産生するための適切な方法は当業者に周知である（例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ＆ Ｒｕｓｓｅｌｌ、２０００年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと、文書内の関連する開示を参照によって本明細書に組み入れる）。

【0101】

本発明の抗体ポリペプチドは、ウサギ網状赤血球溶解物または小麦麦芽溶解物（Ｐｒｏｍｅｇａから利用可能である）のような市販のｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳系を使用して産生することもできる。好ましくは、翻訳系はウサギ網状赤血球溶解物である。好都合には、翻
訳系を、ＴＮＴ転写翻訳系（Ｐｒｏｍｅｇａ）のような転写系とカップリングさせること
ができる。この系には、翻訳と同じ反応においてコードしているＤＮＡポリヌクレオチドから適切なｍＲＮＡ転写産物を産生するという長所がある。

【0102】

別法として本発明のポリペプチドを、例えば周知の液相または固相合成技術（ｔ－ＢｏｃまたはＦｍｏｃ固相ペプチド合成など）を使用して人工的に合成できることは当技術に熟達した者には認識されよう。

【0103】

本発明の第２の態様は、本発明の抗体ポリペプチド、またはそのポリペプチド鎖成分をコードする単離された核酸分子を提供する。「核酸分子」には、ＤＮＡ（例えばゲノムＤＮＡまたは相補ＤＮＡ）およびｍＲＮＡ分子を含め、それらは一本鎖または二本鎖であってもよい。

【0104】

一実施形態において、核酸分子はｃＤＮＡ分子である。

【0105】

核酸分子は、特定の宿主細胞における抗体ポリペプチドの発現、例えばヒト細胞における発現のためにコドンを最適化できることは、当技術に熟達した者には認識されよう［例えば、Ａｎｇｏｖ、２０１１年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊ．６（６）：６５０～６５９頁を参照のこと］。

【0106】

好ましい実施形態において、本発明の核酸分子は、
（ａ）配列番号１４のヌクレオチド配列

【化3】

および／または

【0107】

（ｂ）配列番号１５のヌクレオチド配列

【化4】

を含む。

【0108】

以下も、本発明の範囲に含まれる：
（ａ）本発明の第３の態様は、本発明の第２の態様に記載の核酸分子を含むベクター（発現ベクターなど）を提供する；
（ｂ）本発明の第４の態様は、本発明の第２の態様に記載の核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物細胞、例えばヒト細胞など）または本発明の第３の態様に記載のベクターを提供する；および
（ｃ）本発明の第５の態様は、前記ポリペプチドが発現される条件下で本発明の第４の態様に記載の宿主細胞の集団を培養する工程と、そこからポリペプチドを単離する工程とを含む、本発明の第１の態様に記載の抗体ポリペプチドを製作する方法を提供する。

【0109】

本発明の第６の態様は、医薬として有効な量の本発明の第１の態様の抗体ポリペプチドおよび薬学的に許容できる希釈剤、担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。

【0110】

ＥＤＴＡ、クエン酸、ＥＧＴＡまたはグルタチオンのようなキレート剤を含めた追加の化合物を、医薬組成物に含めることもできる。

【0111】

医薬組成物は、十分に保存に安定しており、ヒトおよび動物への投与に適切である当業者に公知の方式で調製することができる。例えば、医薬組成物は、例えば冷凍乾燥、噴霧乾燥、噴霧冷却によって、または超臨界粒子形成からの粒子形成の使用によって凍結乾燥することができる。

【0112】

「薬学的に許容できる」は、本発明の薬剤のカリクレインタンパク質結合活性の効果を低下させない非毒性材料を意味する。そのような薬学的に許容できる緩衝液、担体または賦形剤は、当業技術分野において周知である［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｒ Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９０年）およびＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第３版、Ａ．Ｋｉｂｂｅ編、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００年）を参照のこと、その開示を参照によって本明細書に組み入れる］。

【0113】

用語「緩衝液」は、ｐＨを安定させる目的で酸塩基混合物を含有する水溶液を意味するものとする。緩衝液の例は、Ｔｒｉｚｍａ、ビシン、トリシン、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＭＯＢＳ、トリス、Ｈｅｐｅｓ、ＨＥＰＢＳ、ＭＥＳ、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、ホウ酸塩、ＡＣＥＳ、ＡＤＡ、酒石酸塩、ＡＭＰ、Ａ
ＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＢＥＳ、ＣＡＢＳ、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＥＰＰＳ、エタノールアミン、グリシン、ＨＥＰＰＳＯ、イミダゾール、イミダゾール乳酸、ＰＩＰＥＳ、ＳＳＣ、ＳＳＰＥ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＴＡＢＳ、ＴＡＰＳＯおよびＴＥＳである。

【0114】

用語「希釈剤」は、医薬製剤において薬剤を希釈する目的の水性または非水性溶液を意味するものとする。希釈剤は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノールまたは油（ベニバナ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油またはゴマ油など）のうち１つもしくはそれ以上であってもよい。

【0115】

用語「アジュバント」は、本発明の薬剤の生物学的作用を増加させるために製剤に添加される任意の化合物を意味するものとする。アジュバントは、異なる陰イオン、例えば、それだけには限らないがフッ化物、クロリド、臭化物、ヨウ化物、チオシアン酸、亜硫酸、水酸化物、リン酸、炭酸、乳酸、グリコール酸、クエン酸、ホウ酸、酒石酸、および異なるアシル組成物の酢酸を伴う亜鉛、銅または銀塩のうち１つまたはそれ以上であってもよい。アジュバントは、陽イオンセルロースエーテル、陽イオンセルロースエステル、脱アセチル化ヒアルロン酸、キトサン、陽イオンデンドリマーのような陽イオンポリマー、ポリ（ビニルイミダゾール）のような陽イオン合成ポリマー、ならびにポリヒスチジン、ポリリシン、ポリアルギニンのような陽イオンポリペプチド、およびこれらのアミノ酸を含有するペプチドであることもできる。

【0116】

賦形剤は、１つまたはそれ以上の炭水化物、ポリマー、脂質および鉱物であってもよい。炭水化物の例には、ラクトース、グルコース、スクロース、マンニトール、およびシクロデキストリンがあり、それらは、例えば凍結乾燥を容易にするために組成物に添加される。ポリマーの例は、澱粉、セルロースエーテル、セルロースカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸、カラギーナン、ヒアルロン酸およびその誘導体、ポリアクリル酸、ポリスルホナート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、ポリビニルアルコール／異なる程度の加水分解のポリ酢酸ビニル、ならびにポリビニルピロリドン、分子量が異なるこれらのすべてであり、それらは、例えば、粘性制御、生物接着を達成する、または化学的およびタンパク質分解から脂質を保護するために組成物に添加される。脂質の例は、脂肪酸、リン脂質、モノ、ジおよびトリグリセリド、セラミド、スフィンゴ脂質および糖脂質、アシル鎖長および飽和が異なるこれらのすべて、卵レシチン、大豆レシチン、水素化卵ならびに大豆レシチンであり、それらは、ポリマーと類似の理由のために組成物に添加される。鉱物の例はタルク、酸化マグネシウム、酸化亜鉛および酸化チタンであり、それらは、蓄液の減少または有利な色素特性のような利点を得るために組成物に添加される。

【0117】

本発明の抗体ポリペプチドを、その送達を適切にするために、当業者に公知の任意の型の医薬組成物に製剤化することができる。

【0118】

一実施形態において、本発明の医薬組成物は、抗体ポリペプチドが、薬学的に許容できる他の担体に加えて、脂質のような両親媒性薬剤と組み合わされているリポソームの形態であってもよく、このリポソームはミセル、不溶性単分子層および液晶として凝集形態で存在する。リポソーム製剤用の適切な脂質には、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などがあるが、これに限定されない。適切な脂質には、血流循環時間を延長するために極性頭部基をポリ（エチレングリコール）で修飾した上記の脂質もある。そのようなリポソームの製剤の調製については、参照によって本明細書にその開示を組み入れる例えば米国特許第４，２３５，８７１号に見ることができる。

【0119】

本発明の医薬組成物は、生分解性微小球の形態であることもできる。ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ＰＬＡとＰＧＡ（ＰＬＧＡ）またはポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）とのコポリマー、およびポリ無水物のような脂肪族ポリエステルが、微小球の産生において生分解性ポリマーとして広く使用されてきた。そのような微小球の調製については、米国特許第５，８５１，４５１号および欧州特許第０ ２１３ ３０３号に見ることができ、その開示を参照によって本明細書に組み入れる。

【0120】

さらなる実施形態において、本発明の医薬組成物は、ポリマーゲルの形態で提供され、澱粉、セルロースエーテル、セルロースカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸、カラギーナン、ヒアルロン酸およびその誘導体、ポリアクリル酸、ポリビニルイミダゾール、ポリスルホナート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、ポリビニルアルコール／異なる程度の加水分解のポリ酢酸ビニル、ならびにポリビニルピロリドンなどのポリマーが、薬剤を含有する溶液を厚くするために使用される。ポリマーは、ゼラチンまたはコラーゲンを含むこともできる。

【0121】

別法として、抗体ポリペプチドを、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノールもしくは油（ベニバナ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油またはゴマ油など）、トラガカントゴム、および／または様々な緩衝液に単に溶解することができる。

【0122】

本発明の医薬組成物は、活性な抗体ポリペプチドの作用を強化するためにイオンおよび定義済みｐＨを含むことができることはいうまでもない。加えて、組成物を、滅菌のような従来の製薬工程に供することができおよび／または防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液、充填材等のような従来のアジュバントを含有することができる。

【0123】

本発明に記載の医薬組成物は、当業技術者に公知の任意の適切な経路によって投与することができる。したがって、考えられる投与経路には、非経口（静脈、皮下、筋肉内）、局所、眼、経鼻、肺、口腔、経口、非経口、および直腸がある。移植片からの投与も考えられる。投与される薬剤の潜在的に高い細胞障害性のため、輸注が望ましい経路であることがある。

【0124】

一実施形態において、医薬組成物は、非経口的、例えば、静脈内、脳室内、関節内、動脈内、腹膜内、くも膜下腔内、脳室内、大槽内、頭蓋内、筋肉内にもしくは皮下に投与され、またはそれらは輸注技術によって投与することができる。それらは、好都合には、他の物質、例えば、血液と等張な溶液を作るのに十分な塩またはグルコースを含有していてもよい無菌水溶液の形態で使用される。必要に応じて、水溶液は、適切に緩衝されるべきである（例えば、ｐＨ３～９に）。無菌状態下での適切な非経口製剤の調製は、当業技術者に周知の標準的な製薬技術によって容易に達成される。

【0125】

非経口投与に適している製剤には、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる水性および非水性の無菌注射溶液；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含むことができる水性および非水性無菌懸濁液がある。製剤は、単位服用量または多回投与用容器、例えば密封されたアンプルおよびバイアルで提供することができ、使用直前に無菌の液状担体、例えば注射用蒸留水を添加するだけで十分な、冷凍乾燥した（凍結乾燥した）条件で保管することができる。即時の注射溶液および懸濁液は、前に記述したたぐいの無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製することができる。

【0126】

したがって、本発明の医薬組成物は、患者の腫瘍（例えば、内部腫瘍性または周囲腫瘍性）への非経口、例えば、静脈内投与または局所的投与に特に適している。

【0127】

医薬組成物は、医薬として有効な用量、すなわち治療上有効な吸収線量の治療用放射性核種で患者に投与されることになる。

【0128】

本発明の抗体ポリペプチドの治療上の使用の文脈において、「医薬として有効な量」、または「有効な量」、または「治療的に有効な」は、本明細書では、所与の症状および投与治療計画に対して治療効果を提供する量のことを指す。これは、必要とされる添加物および希釈剤、すなわち、担体または投与媒体と関連して望ましい治療効果をもたらすために算出された活性物質の所定の量である。さらに、宿主の活動、機能および応答における臨床的に重要な障害を減少および／または予防するのに十分な量を意味するものとする。あるいは、治療上有効な量は、宿主における臨床的に重要な症状に改善をもたらすのに十分である。当業技術者によって認められているように、化合物の量はその比活性によって変わる。適切な投与量は、必要とされる希釈剤と関連して望ましい治療効果をもたらすように算出された所定の量の活性な組成物を含有することができる。本発明の組成物の製造の方法および使用において、治療上有効な量の活性成分が提供される。治療上有効な量は、当業者に周知であるように、年齢、重量、性別、症状、合併症、他の疾患などのような患者特性に基づいて通常の熟練した医療従事者によって決定することができる（下記の実施例８を参照のこと）。医薬として有効な用量の投与は、個別の用量単位または他のいくつかのより小さい用量単位の形態での単回投与、およびまた特定の間隔に再分した用量の複数回投与の両方によって実施することができる。別法として、用量は長期にわたる持続輸注で与えることができる。

【0129】

本発明の抗体ポリペプチドの診断使用の文脈において、「医薬として有効な量」、または「有効な量」または「診断上有効な」は、本明細書では、ｉｎ ｖｉｖｏ画像診断目的で検出可能なシグナルをもたらす量のことを指す。

【0130】

本発明の抗体ポリペプチドは、使用する化合物の効能／毒性に応じて様々な濃度で製剤化することができる。製剤は、０．１μＭ～１ｍＭ、１μＭ～５００μＭ、５００μＭ～１ｍＭ、３００μＭ～７００μＭ、１μＭ～１００μＭ、１００μＭ～２００μＭ、２００μＭ～３００μＭ、３００μＭ～４００μＭ、４００μＭ～５００μＭおよび約５００μＭの濃度でポリペプチドを含むことができる。

【0131】

一般に、ヒト患者における抗体ポリペプチドの治療用量（治療部分の有無にかかわらず）は、１投与につき１００μｇ～７００ｍｇになる（７０ｋｇの体重に基づく）。例えば、最大治療用量は、１投与につき０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１～５ｍｇ／ｋｇまたは１～５ｍｇ／ｋｇもしくは０．１～２ｍｇ／ｋｇであってもよい。腫瘍学者／内科医の決定にしたがって、そのような用量を異なる間隔で投与できることはいうまでもなく；例えば、用量は、毎日、週２回、週１回、隔週または毎月投与することができる。

【0132】

本発明の医薬組成物を、単独でもしくは前立腺癌の治療に使用される他の治療薬剤と併用して、または他の治療抗体、手術（例えば、根治的前立腺切除）、放射性核種療法、近接照射療法、外照射療法、高密度焦点式超音波（ＨＩＦＵ）、化学療法、経口化学療法薬、凍結手術（腫瘍を凍らせる）、ホルモン療法（抗アンドロゲン療法など）、去勢もしくは前述の組合せのような前立腺癌の治療の他の治療様式で患者を治療する前、後もしくは同時に投与できることは、当技術に熟達した者には認識されよう。

【0133】

本発明の第７の態様は、本発明の第１の態様に記載の抗体ポリペプチドまたは本発明の
第６の態様に記載の医薬組成物を、本明細書の記載したのと同じ使用についての説明書と一緒に含むキットを提供する。

【0134】

本発明の第８の態様は、医学に使用する本発明の第１の態様による抗体ポリペプチドを提供する。

【0135】

本発明の第９の態様は、前立腺癌の治療および／または診断に使用する本発明の第１の態様による抗体ポリペプチドを提供する。

【0136】

本発明の第１０の態様は、対象における前立腺癌の治療の方法であって、対象に本発明の第１の態様に記載の抗体ポリペプチドを治療上有効な量で投与する工程を含む方法を提供する。

【0137】

「治療」には、患者の治療的および予防的治療を含める。用語「予防的」は、薬剤もしくはその製剤の使用を包含するために使用され、本明細書に記載の通り、その薬剤は前立腺癌になる可能性、または患者もしくは対象における限局性前立腺癌の拡散、播種もしくは転移を予防するかもしくは減少させるかのいずれかである。用語「予防的」は、本明細書に記載の通り、以前に前立腺癌の治療を受けたことがある患者において前立腺癌の再発を予防するための薬剤、またはその製剤の使用も包含する。

【0138】

本発明の第１１の態様は、対象における前立腺癌の診断の方法であって、対象に本発明の第１の態様に記載の抗体ポリペプチドを診断上有効な量で投与する工程を含む方法を提供する。

【0139】

「診断」には、ｉｎ ｖｉｖｏ（すなわち患者の体内）またはｅｘ ｖｉｖｏ（すなわち患者の身体から摘出した組織または細胞サンプル内）のいずれかにおける前立腺癌細胞の検出を含める。

【0140】

治療もしくは診断しようとする前立腺癌は、前立腺に限局していることができ、または非限局性（すなわち、播種性）前立腺癌であってもよい。前立腺に限局している前立腺癌は、例えば、ＴＮＭシステム（腫瘍／リンパ節／転移で略記される）にしたがって臨床的Ｔ１またはＴ２癌と分類できるが、非限局性／播種性前立腺癌は、例えば、臨床的Ｔ３またはＴ４癌と分類できる。

【0141】

治療または診断しようとする前立腺癌は、転移性前立腺癌であってもよい。転移とは、元の位置から体内の他の部位への癌の拡散のことを指す。例えば、治療または診断しようとする転移性前立腺癌は、リンパ系；骨（脊椎、椎骨、骨盤、肋骨を含む）に存在する転移；骨盤、直腸、膀胱、もしくは尿道内転移である。他の一般的でない位置に存在する転移も、本発明により治療することができる。転移は、微小転移巣であってもよい。微小転移巣とは、新しく形成された腫瘍が一般に小さすぎて検出できない、または検出が困難である転移の形態である。例えば、そのような細胞または塊の存在が診断不能であるが存在している、例えばごく微量の播種性疾患であるとしても、本発明は、当業者に単一癌細胞もしくは細胞塊を治療する手段を提供する。

【0142】

したがって、前立腺癌の先行技術の治療と比較して、本発明によって提供される治療の特に重要な技術的長所は、播種性および／または転移性（微小転移を含めた）前立腺癌の治療における効能の増強であると予想される。

【0143】

したがって、一実施形態において、本発明は、原発性前立腺腫瘍の転移を予防または治療するための抗体ポリペプチドおよび方法を提供する。

【0144】

前立腺癌は５０歳を超えた男性、より一般には６０、６５または７０を超えた男性において発症する傾向があり、男性において最も多い型の癌の１つであるが、多くの人は病徴が全く無く、療法を受けず、最終的に他の原因で亡くなる。これは、前立腺の癌がほとんどの場合で成長が遅く、症状がないためであり、症状がある男性は老年なので、彼らは、心臓／循環器病、肺炎、他の無関係の癌または老齢のような前立腺癌とは無関係な原因でしばしば死亡する。前立腺癌の症例の約２／３は成長が遅く、他の１／３はより悪性であり、速く発達する。

【0145】

したがって、特に若年患者において、より悪性であり、速く発達する形態の癌の管理には、前立腺癌の治療および診断のための有効な方法の開発が特に重要である。したがって、一実施形態において、本発明は、前立腺癌の診断時および／または治療時に９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０歳未満、またはより若い患者の前立腺癌の治療もしくは診断に関する。

【0146】

前立腺癌である一親等の親族（父親または兄弟）が一人いる男性は、前立腺癌を発症する危険性が２倍であると考えられ、罹患した一親等の親族が２人では、家族の既往なしの男性と比較して５倍大きな危険性があると考えられる。したがって、本発明は、１人、２人、もしくはより多くの親族、特に一親等親族（父親または兄弟など）が前立腺癌であると以前に診断されたことを特徴とする患者の前立腺癌の治療または診断に関することができる。

【0147】

本発明は、患者の前立腺癌の治療または診断にも関し、治療しようとする前立腺癌は、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）である。ＣＲＰＣは、１～３年後にホルモン治療に対して一般に不能性になり、ホルモン療法にもかかわらず成長を再開することによって特徴づけることができる。

【0148】

本発明の医学的な使用および方法において、一般に抗体ポリペプチドは、患者の身体に注射または注入される。ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、次いで抗体ポリペプチドは、標的抗原、ｈＫ２を産生する組織；第一に、前立腺癌細胞およびその転移に結合する。結合と同時に、抗体ポリペプチドは、治療効果を直接及ぼすことができる（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣによってまたは放射性同位元素もしくは他の細胞障害性部分を運ぶことによって細胞死を誘導する）。別法として、結合した抗体ポリペプチドは、診断（画像診断）手段としての機能を果たすことができ、療法の選択肢を導くまたは癌細胞の外科的除去を補助することができる。

【0149】

本発明の抗体ポリペプチドを、外放射線療法、手術、細胞増殖抑止剤ならびにアンドロゲン治療など他の治療および／または診断薬剤／治療と併用して使用できることは当技術に熟達した者には認識されよう。

【0150】

前述の説明は、前立腺癌の治療および診断の方法に適用できる本発明の実施形態に重点を置く。しかしながら、本発明が、そのような適用に限定されておらず、術後検査、ならびに放射線、細胞増殖抑止剤およびアンドロゲン治療の間またはその後の検査に有用であることはいうまでもない。

【0151】

別の実施形態において、放射線ガイド下手術（ＲＧＳ）または画像ガイド下手術（ＩＧＳ）を使用して、手術の間および／またはその前に本発明のトレーサ標識抗体ポリペプチドを同定することができる。したがって、前述の検出可能な部分を含む抗体ポリペプチドを、手術の間および／またはその前に投与することができる。この実施形態において、抗体ポリペプチドは、最初に注入できる。その後、ＲＧＳ／ＩＧＳを使用して、手術の間ま
たはその前に検出可能な部分に感度が高い検出器具でｈＫ２産生組織を同定することができる。検出可能な部分は、例えば、放射線放射または磁気感度が高い検出可能な部分であってもよく；例えば、チェレンコフ放射の放射体および／または制御放射であってもよく；蛍光標識および／または磁気もしくは磁化可能な標識であってもよい。したがって、本発明によるＲＧＳ／ＩＧＳは、例えば、光学、チェレンコフ、制御放射もしくはβ線の検出；放射性核種標識の検出に基づく方法であってもよく、および／または磁力測定を含んでいてもよい。ＲＧＳは、外科医が検出可能な部分によって「マークされた」組織を同定することが可能になる手術技術として、当技術に熟達した者に周知である。

【0152】

上記の方法によって得られる可視化は、ＳＰＥＣＴ／ＰＥＴ、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、超音波（ＵＳ）および磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）など他の放射線可視化方法と組み合わせることができる。

【0153】

したがって、さらなる態様において、本発明は、放射線ガイド下または画像ガイド下手術などの手術の前または間に、前立腺癌である患者への投与によって医学に使用する抗体ポリペプチドも提供する。

【0154】

本発明のなおさらなる態様は、対象の血液における前立腺腫瘍細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ検出方法であって：
（ａ）試験する対象から血液のサンプルを得る工程と；
（ｂ）場合により、血液サンプル中に存在する細胞を抽出および／または精製する工程と；
（ｃ）本発明の第１の態様に記載の抗体ポリペプチドを、血液サンプル中に存在する細胞と接触させる工程と；
（ｄ）抗体ポリペプチドが遊離（すなわち複合体形成していない）ｈＫ２に結合するかどうか（直接または間接的に）決定する工程と
を含み、遊離ｈＫ２に対する抗体ポリペプチドの結合が、対象の血液における前立腺腫瘍細胞の存在を示す、方法を提供する。

【0155】

したがって、本方法は、血液サンプルが遊離ｈＫ２を含有するかどうか決定するアッセイを実施する工程と；遊離ｈＫ２の存在が対象の血液における前立腺腫瘍細胞の存在を示す工程とを含む。

【0156】

当技術に熟達した者は、そのようなアッセイを実行する多くの方法があることを理解しよう。例えば、免疫測定法は、均一または、より好ましくは、不均一のいずれかであってもよい。アッセイは、競合的または、より好ましくは、非競合的な形式のいずれかでも実行できる。

【0157】

不均一な、非競合的アッセイの場合に、典型的な手順は：
（ａ）試験する対象から血液のサンプルを得る工程と；
（ｂ）場合により、血液サンプル中に存在する細胞を抽出および／または精製する工程と；
（ｃ）本発明の第１の態様に記載の固相固定化抗体ポリペプチドを、血液サンプル中に存在する細胞と接触させる工程と；
（ｄ）洗浄して可溶性成分（固体表面に結合していない）を除去する工程と；
（ｅ）トレーサ、すなわち、レポータ分子／粒子で標識した別の抗ｈＫ２特異的抗体を添加する工程と；
（ｆ）洗浄して結合していないトレーサ抗体を除去する工程と；
（ｇ）トレーサ抗体からのシグナルを検出する工程と
であってもよい。

【0158】

工程ｂとｃまたはｃとｄの間に、細胞に可溶性ｈＫ２を産生させ、次いでそれを検出することを可能にするためのインキュベーション時間が一般にあるべきである。

【0159】

本発明の追加の態様は、対象の組織における前立腺腫瘍細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ検出方法であって、
（ａ）試験する対象から組織のサンプル（組織学的なサンプルのような）を得る工程と；
（ｂ）場合により、組織サンプル中に存在する細胞を抽出および／または精製する工程と；
（ｃ）本発明の第１の態様に記載の抗体ポリペプチドを、組織サンプル中に存在する細胞と接触させる工程と；
（ｄ）抗体ポリペプチドが遊離（すなわち複合体形成していない）ｈＫ２に結合するかどうか（直接または間接的に）決定する工程と
を含み、遊離ｈＫ２に対する抗体ポリペプチドの結合が、対象の組織における前立腺腫瘍細胞の存在を示す、方法を提供する。

【0160】

上記のｉｎ ｖｉｔｒｏ方法の一実施形態において、工程（ｄ）はＥＬＩＳＡによって実行される。しかしながら、ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗体抗原相互作用を検出するのに適切な任意のアッセイを使用することができる。

【0161】

追加の実施形態において、本方法は、サンプルにおける前立腺腫瘍細胞を定量する工程をさらに含む。

【0162】

上記ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法のさらなる実施形態において、本方法は対象における前立腺癌を診断するためのものである。

【0163】

単語「ａ」または「ａｎ」の使用は、請求項および／もしくは明細書において用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」と一緒に使用される場合、「１つ」を意味することができるが、「１つまたはそれ以上の」、「少なくとも１つ」ならびに「１つより１つまたはそれ以上の」の意味とも一致する。

【0164】

上記の説明ならびに添付の図面と一緒に考えると、これらのおよび他の、本発明の実施形態はよりよく認識され、理解されることになる。しかしながら、上記の説明は、本発明の様々な実施形態ならびにその特定の詳細を多数示すが、実例として与えられるものであり、制限するものではないことは理解されたい。多くの置換、修飾、追加および／または再構成を、本発明の精神を逸脱することなくその範囲内で作ることができ、本発明は、そのような置換、修飾、追加および／または再構成のすべてを含む。

【0165】

以下の図面は本明細書の部分を形成し、本発明の特定の態様をさらに実証するために含める。本発明は、これらの図面の１つまたはそれ以上を本明細書に存在する特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて参照することによって、よりよく理解することができる。

【図面の簡単な説明】

【0166】

【図1】本発明の典型的なヒト化１１Ｂ６ Ｆａｂフラグメントの重鎖および軽鎖可変領域の配列を示す図である。

【図2】マウスならびにヒト化１１Ｂ６抗体の未変性および還元サンプルによるＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す図である。

【図3】チップ上のｈＫ２に対する１１Ｂ６試験抗体の結合の結合段階を示す図である。

【図4】１１Ｂ６試験抗体の解離段階を示す図である。

【図5】 ^１７７Ｌｕ標識ヒト化１１Ｂ６抗体の体内分布を示す図である。

【図6】マウスの前立腺腫瘍に対する^１７７Ｌｕ標識ｈ１１Ｂ６の結合を示す典型的なＳＰＥＣＴ画像を示す図である。

【図7】腫瘍および骨における^１７７Ｌｕ標識ｈ１１Ｂ６ならびにｍ１１Ｂ６の取り込み率を示す図である。

【図8】 ^１７７Ｌｕ標識ｈ１１Ｂ６およびｍ１１Ｂ６のグラム当たりの取り込み率の腫瘍対骨の比を示す図である。

【図9A】ヒト化１１Ｂ６抗体の速度論を示す図である。

【図9B】マウス１１Ｂ６抗体の速度論を示す図である。

【図10】血液からの^１７７Ｌｕ標識ｈ１１Ｂ６およびｍ１１Ｂ６のクリアランスを示す図である。

【図11】 ^１７７Ｌｕ－１１Ｂ６による治療の前（上の画像）および後（下の画像）の腫瘍サイズの代表写真である。

【図12A】ＬＮＣａＰ異種移植における腫瘍サイズに対する^１７７Ｌｕ－１１Ｂ６の単一放射活性量「Ｄ」を示す図である。

【図12B】ＬＮＣａＰ異種移植における腫瘍サイズに対する^１７７Ｌｕ－１１Ｂ６の二重放射活性量「２ｘＤ」を示す図である。

【図12C】ＬＮＣａＰ異種移植における腫瘍サイズに対する対照治療の効果の概要を示す図である。

【図13】単一用量^１７７Ｌｕ－１１Ｂ６で治療した１匹のＬＮＣａＰ異種移植マウスの（ａ）腫瘍成長データおよび（ｂ）ＳＰＥＣＴ画像を示す図である。

【図14A】本発明による^１７７Ｌｕ標識ｈ１１Ｂ６抗体を与えた動物の注射後の日数に応じた腫瘍容積を示す図である。治療は、０日目に投与した。以下の出来事：大きい腫瘍容積（直径＞１４ｍｍ）；大きい重量減少（最初の重量と比較して重量減少＞１５％）；一般的な症状に悪影響を及した；またはこれらの３つの指標のすべての組合せが生じた場合、動物を終了させた。（右の数は、各動物のＩＤ番号である）

【図14B】 ^１７７Ｌｕ標識非特異的ＩｇＧ「アイソタイプ対照」抗体を与えた動物の注射後の日数に応じた腫瘍容積を示す図である。治療は、０日目に投与した。以下の出来事：大きい腫瘍容積（直径＞１４ｍｍ）；大きい重量減少（最初の重量と比較して重量減少＞１５％）；一般的な症状に悪影響を及した；またはこれらの３つの指標のすべての組合せが生じた場合、動物を終了させた。（右の数は、各動物のＩＤ番号である）

【図14C】ＮａＣｌだけを与えた動物の注射後の日数に応じた腫瘍容積を示す図である。治療は、０日目に投与した。以下の出来事：大きい腫瘍容積（直径＞１４ｍｍ）；大きい重量減少（最初の重量と比較して重量減少＞１５％）；一般的な症状に悪影響を及した；またはこれらの３つの指標のすべての組合せが生じた場合、動物を終了させた。（右の数は、各動物のＩＤ番号である）

【図15】図１４に示した３つの処理群のカプランマイアー曲線を示す図である。実線：^１７７Ｌｕ－ｈ１１Ｂ６；破線：１７７Ｌｕ標識非特異的ＩｇＧ「アイソタイプ対照」抗体；点線：ＮａＣｌ。

【発明を実施するための形態】

【0167】

本発明の特定の実施形態を実証するために以下の実施例を含める。後に続く実施例において開示される技術は、本発明者によって発見された技術が本発明の実践においてよく機能することを表し、したがって、その実践のための特定の様式を構成すると見なせることを、当業者は認識するべきである。しかしながら、本発明の精神と範囲から逸脱することなく、開示される特定の実施形態に多くの変更を作り、同様のまたは類似の結果をさらに得られることを、本開示を考慮して当業者は認識するべきである。

【実施例0168】

ハイブリドーマ細胞系からの１１Ｂ６のクローニング
試薬
モノクローナル抗体１１Ｂ６産生ハイブリドーマ細胞系を使用して、ｍＲＮＡ抽出および抗体産生行い、タンパク質配列決定のためにさらに親和性精製した（Ｖａｉｓａｎｅｎら、２００４年）。

【0169】

制限酵素、ＦａｓｔＡＰおよびＴ４ ＤＮＡリガーゼは、Ｆｅｒｍｅｎｔａｓから、プライマーは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｕｒｋｕ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＷＯ２５２）およびＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手した。ＤＮＡ精製は、Ｑｉａｇｅｎのゲル抽出およびＰＣＲ精製キットで行った。

【0170】

ｍＲＮＡ摘出およびｃＤＮＡ合成
ｍＲＮＡを、ＱｕｉｃｋＰｒｅｐ Ｍｉｃｒｏ ｍＲＮＡ精製キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で１１Ｂ６ ＭＡｂ産生ハイブリドーマ細胞（５Ｅ６細胞）から抽出し、ｍＲＮＡからのｃＤＮＡ合成を、説明書にしたがってＡｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＨｉｇｈ－ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ ａｒｃｈｉｖｅキットで行った。

【0171】

ｃＤＮＡからの抗体遺伝子の増幅
精製した１１Ｂ６ ＭＡｂの重鎖（Ｈ）および軽鎖（Ｌ）のＮ末端配列を、ヘルシンキ大学のタンパク質配列決定サービスでエドマン分解によって決定した。軽鎖配列は、ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳ［配列番号１６］、重鎖配列は、ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧ［配列番号１７］であった。アミノ酸のＩＭＧＴデータベース比較により、遺伝子：ＩＧＫＶ３およびＩＧＨＶ３をそれぞれ同定した。フォワードＰＣＲプライマー（縮重）の相補領域を、Ｎ末端アミノ酸をコードしているＤＮＡ配列（ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴによって見出した）に基づいて設計した。重鎖をクローニングするために使用したリバースプライマーは、Ｃ_Ｈ１に結合するように設計した。軽鎖の場合、２つのリバースプライマーを使用し；第１のＰＣＲに使用した方は、Ｃ_Ｌに結合し、第２のＰＣＲに使用したもう一方は、Ｖ_ＬとＣ_Ｌの境界に結合する。すべてのプライマーは、クローニングに必要な制限酵素認識部位も含有していた（後に下線を施した）。

【0172】

軽鎖フォワードプライマーは、ＳｆｉＩ＿ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳ［配列番号１６］：
（５’－ＴＴＡＣＴＣＧＣＧＧＣＣＣＡＧＣＣＧＧＣＣＡＴＧＧＣＧＧＡＹＡＴＨＧＴＲＹＴＶＡＣＮＣＡＲＴＣＴＣＣ－３’；［配列番号１８］）
であり、リバースプライマーは、ＷＯ２５２
（５’－ＧＣＧＣＣＧＴＣＴＡＧＡＡＴＴＡＡＣＡＣＴＣＡＴＴＣＣＴＧＴＴＧＡＡ－３’、ＸｂａＩ；［配列番号１９］）
およびＣｐｏＩ＿ＪＫ２
（５’－ＧＡＴＡＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＡＴＣＧＧＴＣＣＧＴＴＴＴＡＴＴＴＣＣＡＧＣＴＴＧＧＴＣＣＣＣＣＣＴ－３’；［配列番号２０］）
であった。

【0173】

重鎖フォワードプライマーは、ＮｏｔＩ＿ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧ［配列番号１７］
（５’－ＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＴＣＣＡＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＡＹＧＴＶＣＡＲＣＴＫＣＡＧＧＡＧＴＣＤＧＧ－３’；［配列番号２１］）
であり、リバースプライマーはａｓＣＨ１＿ＳａｃＩ
（５’－ＣＧＣＣＡＣＣＡＧＡＧＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＴＴＴＴＣ－３’；［配列番号２２］）。
であった。

【0174】

Ｖ_Ｌ＋Ｃ_Ｌフラグメントを、鋳型であるｃＤＮＡ １００ｎｇ、０．２ｍＭ ｄＮＴＰ、０．５μＭプライマー ＳｆｉＩ ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳ［配列番号１６］およびＷＯ２５２、１ｘＰｈｕｓｉｏｎ ＨＦ緩衝液ならびに０．６Ｕ Ｐｈｕｓｉｏｎ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ）を含有するＰＣＲ反応で増幅した。増幅は、９８℃３０秒間、３０サイクルの９８℃ ７秒間、５０℃ ２０秒間、７２℃ ２０秒間、および最終的な伸張７２℃ １０分間の手順によって行った。ＰＣＲ産物を配列決定し、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ境界の配列を解明した後、実際のクローニングのためのＰＣＲを、Ｖ_Ｌ部分だけをクローニングするためのプライマーＳｆｉＩ＿ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳ［配列番号１６］およびＣｐｏＩ＿ＪＫ２以外は上記と同様な反応でｃＤＮＡから再び行った。増幅は、９８℃３０秒間、１０サイクルの９８℃ ７秒間、６０℃ ２０秒間、７２℃ ２０秒間、２５サイクルの９８℃ ７秒間、５６℃ ２０秒間、７２℃ ２０秒間、および最終的な伸張７２℃ １０分間の手順によって行った。

【0175】

Ｖ_Ｈ＋Ｃ_Ｈ１フラグメントを、プライマーＮｏｔＩ＿ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧ［配列番号１７］およびＣＨ１＿ＳａｃＩ以外はＶ_Ｌと同様の反応で増幅した。増幅手順は、９８℃３０秒間、３０サイクルの９８℃ ７秒間、６４℃ ２０秒間、７２℃ ２０秒間、および最終的な伸張７２℃ １０分間であった。

【0176】

クローニング
正しいサイズの産物を、分取アガロースゲルから精製した。Ｖ_Ｌを、ＳｆｉＩおよびＣｐｏＩで、Ｖ_Ｈ＋Ｃ_Ｈ１をＳａｃＩおよびＮｏｔＩで消化した。レシピエントベクターｐＡＫ４００ ５４０４ＦＡｂ ｌｃｈ（ｐＡＫ４００から修飾した、Ｋｒｅｂｂｅｒら、１９９７年）を、両方の酵素の組合せで別々に消化し、フラグメントをＦａｓｔＡＰで脱リン酸化し、分取ゲルから精製した。

【0177】

消化した１１Ｂ６ Ｖ_Ｌおよび対応するベクターフラグメントを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼでライゲーションし、大腸菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にエレクトロポレーションによって形質転換して、ベクターｐＡＫ４００－１１Ｂ６－ＶＬを作製した。ＳａｃＩ＋ＮｏｔＩ消化したＶ_Ｈ＋Ｃ_Ｈ１およびベクターフラグメントのライゲーション産物を、ｐＡＫ４００－１１Ｂ６－ＶＨ＋ＣＨ１と名付けた。正しいクローンをＤＮＡ配列決定によって確認し、配列を起源タンパク質配列およびデータベース（ＢＬＡＳＴ探索）で見つかる抗体と比較した。

【0178】

完全な１１Ｂ６ Ｆａｂを構築するために、以前に作られた構築物の両方を、ＮｏｔＩおよびＳａｃＩで消化した。ベクターｐＡＫ４００－１１Ｂ６－ＶＬを、ベクターｐＡＫ４００－１１Ｂ６－ＶＨ＋ＣＨ１由来Ｖ_Ｈ＋Ｃ_Ｈ１を挿入するレシピエントベクターとして使用した。ライゲーションおよび形質転換を、上記のように行った。構築したｐＡＫ４００ １１Ｂ６ ＦＡｂ ｌｃｈベクターを、制限酵素分析で確認した。

【0179】

参照文献
Barbas CF 3rd, Kang AS, Lerner RA, Benkovic SJ. (1991) Assembly of combinatorial
antibody libraries on phage surfaces: The gene III site. Proc. Nat. Acad. Sci.,
Vol. 88, pp. 7978-7982
Biomagnetic Techniques in Molecular Biology: Technical handbook. Dynal A.S, 2^ndedition, 1995
Krebber A, Bornhauser S, Burmester J, Honegger A, Willuda J, Bosshard HR, Pluckthun A. (1997) Reliable cloning of functional antibody variable domains from hybridomas and spleen cell repertoires employing a reengineered phage display system. J Immunol Methods. 201(1):35-55
Lilja H, Christensson A, Dahlen U, Matikainen MT, Nilsson O, Pettersson K, Lovgr
en T. (1991) Prostate-specific antigen in serum occurs predominantly in complex with alpha 1-antichymotrypsin. Clin Chem. 37(9):1618-25
Pajunen M, Saviranta P, Jauria P, Karp M, Pettersson K, Mantsala P, Lovgren T. (1997) Cloning, sequencing, expression and characterization of three anti-estradiol-17beta Fab fragments. Biochim Biophys Acta. 1351(1-2):192-202
Vaisanen V, Eriksson S, Ivaska KK, Lilja H, Nurmi M, Pettersson K. (2004) Development of sensitive immunoassays for free and total human glandular kallikrein 2.
Clin Chem. 50(9):1607-17

【実施例0180】

１１Ｂ６抗体のヒト化
マウス抗ｈＫ２抗体１１Ｂ６の可変ドメインを、ＣＤＲ移植法を使用してヒト化した。この手法において、マウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、可変重鎖および軽鎖ドメインフレームワークに移植した。ＣＤＲ領域の残基に加えて、フレームワーク領域の特定の重要な位置にある残基を、ヒト様に変えるのではなくマウス様として保持して、移植したＣＤＲループのコンフォメーションがマウス親抗体におけるそのコンフォメーションと可能な限り類似するように維持した。

【0181】

この説明の全体を通じてＫａｂａｔナンバリングスキーム（Ｋａｂａｔら、１９９１年）を使用した。

【0182】

相同性モデリング
マウス１１Ｂ６抗体の相同性モデルを、自動Ｗｅｂ抗体モデリングサーバ（ＶＡＭ；ｈｔｔｐ：／／ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）を使用して生成した。モデルを使用して、マウス親抗体と、可変ドメインのヒト化のフレームワークとして使用したヒト免疫グロブリン配列との間で異なる残基の重要性を目で見て検討することによりそれぞれ評価した。

【0183】

１１Ｂ６ヒト化Ｖ－ドメイン配列の設計
Ｖ_Ｌドメイン設計
マウス１１Ｂ６軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を、ＮＣＢＩのＣｌｕｓｔａｌＷ配列整列化プログラムを使用して、ヒト免疫グロブリン生殖細胞系配列のデータベースと比較した。１１Ｂ６ Ｖ_Ｌは、ヒトＶ_κ４ファミリーの唯一のメンバーであるヒト生殖細胞遺伝子Ｂ３（ＩＧＫＶ４－１＊０１）と最も高い類似性を共有することが判明した。可変ドメイン配列のＣ末端部をコードしているＪ－区分に関しては、ヒトＪ_κ２が、マウス１１Ｂ６の対応する領域と最も類似していることが判明した。

【0184】

ＩＧＫＪ２の配列と一緒にヒトＢ３遺伝子をフレームワークとして使用して、マウス親抗体１１Ｂ６の軽鎖からＣＤＲループを移植した（図１）。マウス起源の残基（ロイシン）を、ヒト様のメチオニンの代わりにＶ_Ｌの４位に導入した。このバーニヤ帯（Vernier zone）（ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９２年）残基は、軽鎖のＣＤＲ１およびＣＤＲ３ループの真下に位置する。ＣＤＲ－Ｌ２の５４位で、ヒト様アルギニンを、マウス様バリンの代わりに使用した。モデリングによると、この位置にある残基は、抗原と直接的な相互作用を形成しないと思われるが、Ａｒｇ５４は、ヒトフレームワークの６０位で負に荷電したアスパラギン酸と塩橋を形成するようであった。ＣＤＲ－Ｌ１の２４位にある残基は、抗原接触に関係しないと考えられた。結果的に、ヒト様リジンを、マウス様アルギニンの代わりにこの位置に導入した。

【0185】

Ｖ_Ｈドメイン設計
マウス１１Ｂ６重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を、ＮＣＢＩのＣｌｕｓｔａｌＷ配列
整列化プログラムを使用して、ヒト免疫グロブリン生殖細胞系配列のデータベースと比較した。１１Ｂ６ Ｖ_Ｈは、ヒトＶ_Ｈ４ファミリーメンバーＶＨ４－２８と最も高い類似性を有することが判明した。可変ドメイン配列のＣ末端部をコードしているＪ－区分に関しては、ヒトＪ_Ｈ１が、マウス１１Ｂ６の対応する領域と最も類似していることが判明した。

【0186】

Ｊ_Ｈ１の配列と一緒にヒトＶＨ４－２８遺伝子をフレームワークとして使用して、マウス親抗体１１Ｂ６の重鎖からＣＤＲループを移植した（図１）。

【0187】

マウス様残基アスパラギンおよびトレオニンを、Ｖ_Ｈの２７および３０位にそれぞれ導入した。Ｋａｂａｔ定義（Ｋａｂａｔら、１９９１年；図１）によるＣＤＲ－Ｈ１に属さないにもかかわらず、それらは、Ｃｈｏｔｈｉａ（１９８９年）による定義など他の何らかのＣＤＲ定義手順によりＣＤＲ残基に分類された。残基２７および３０は、ＣＤＲ－Ｈ１の他の部分の構造に影響を及ぼすことができ、抗原との直接接触に関与する可能性があった。７１位にある残基は、ＣＤＲ－Ｈ２のコンフォメーションの維持に重要な役割を果たすことが公知であり（Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら、１９９０年）、マウス様アルギニンを、ヒト様バリンの代わりにここで使用した。重要なＣＤＲ－Ｈ３ループの前の９４位で、マウス１１Ｂ６由来残基のトレオニンを、ヒトＶＨ４－２８様アルギニンの代わりに導入した。加えて、ＣＤＲ－Ｈ２の６０位にある残基は、抗原接触に関係しないと考えられた。したがって、ヒト様アスパラギンを、マウス様セリンの代わりにこの位置に導入した。

【0188】

設計したＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメインが、ヒトＣ_Ｈ１ならびにヒトＣ_κ定常ドメインにそれぞれ繋がれているＦａｂフラグメントであるヒト化１１Ｂ６をコードする遺伝子を、合成構築物として購入した（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、ＵＳ）。遺伝子を、Ｆａｂカセットのいずれの側にも認識部位を有するＳｆｉＩ制限酵素を使用して、ｐＡＫ４００（Ｋｒｅｂｂｅｒら、１９９７年）から修飾した発現ベクターｐＡＫ４００Ｆａｂにクローニングした。ベクターを、大腸菌ＸＬ－１ ｂｌｕｅ細胞に形質転換して、ヒト化Ｆａｂフラグメントを発現させた。

【0189】

本発明の典型的なヒト化１１Ｂ６ Ｆａｂフラグメントの重鎖および軽鎖可変領域の配列を、図１に示す。

【0190】

参照文献
Chothia, C., Lesk, A. M., Tramontano, A., Levitt, M., Smith-Gill, S.J., Air, G.,
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