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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025019951
(43)【公開日】2025-02-07
(54)【発明の名称】発酵食品組成物の製造方法
(51)【国際特許分類】
A23L 5/00 20160101AFI20250131BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20250131BHJP
C12N 9/62 20060101ALN20250131BHJP
C12N 1/14 20060101ALN20250131BHJP
【ＦＩ】
A23L5/00 J
A23L33/10
C12N9/62
C12N1/14 A
【審査請求】未請求
【請求項の数】9
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023123883
(22)【出願日】2023-07-28
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年３月１４日、日本農芸化学会２０２３年度大会、において公開
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年２月７日、日本農芸化学会２０２３年度大会のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｊｓｂｂａ．ｏｒ．ｊｐ／２０２３／、ｈｔｔｐｓ：／／ｊｓｂｂａ２．ｂｉｏｗｅｂ．ｎｅ．ｊｐ／ｊｓｂｂａ２０２３／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ｂｔｎ２＿ｍｏｖｅ＝ｏｎ＆ｔｙｐｅ＝３＆ｃｏｄｅ＝２Ｃ０３）、において公開
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年５月１５日、Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙのウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｐｒｏｃｂｉｏ．２０２３．０５．０１７）、において公開
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年７月６日、第７５回日本生物工学会大会（２０２３）のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｂｊ．ｏｒ．ｊｐ／２０２３／ｐｒｏｇｒａｍ／）、において公開
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年２月２５日、日本農芸化学会２０２３年度大会のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｊｓｂｂａ．ｏｒ．ｊｐ／２０２３／、ｈｔｔｐｓ：／／ｊｓｂｂａ２．ｂｉｏｗｅｂ．ｎｅ．ｊｐ／ｊｓｂｂａ２０２３／）、において公開
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年３月１５日、日本農芸化学会２０２３年度大会、において公開
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和５年３月５日、日本農芸化学会２０２３年度大会のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｊｓｂｂａ．ｏｒ．ｊｐ／２０２３／、ｈｔｔｐｓ：／／ｊｓｂｂａ２．ｂｉｏｗｅｂ．ｎｅ．ｊｐ／ｊｓｂｂａ２０２３／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ａｉｄ＝６２９７２＆ｐｌａｃｅ＿ｎｕｍ＝１）、において公開
(71)【出願人】
【識別番号】504150450
【氏名又は名称】国立大学法人神戸大学
(71)【出願人】
【識別番号】590006398
【氏名又は名称】マルトモ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100127579
【弁理士】
【氏名又は名称】平野 泰弘
(74)【代理人】
【識別番号】100203301
【弁理士】
【氏名又は名称】都築 健太郎
(72)【発明者】
【氏名】竹中 慎治
(72)【発明者】
【氏名】土居 幹治
(72)【発明者】
【氏名】田中 伸一
【テーマコード（参考）】
4B018
4B035
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B018MD74
4B018MD90
4B018ME04
4B018ME06
4B018ME11
4B018ME14
4B018MF04
4B018MF12
4B018MF13
4B035LC06
4B035LC16
4B035LG42
4B035LG50
4B035LG51
4B035LP41
4B035LP44
4B065AA60X
4B065AC14
4B065BB23
4B065CA41
4B065CA55
(57)【要約】
【課題】産業廃棄物である鰹節抽出残渣の有効な活用方法を提供する。
【解決手段】魚節からだしを抽出する工程と、魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含む。加えて魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程が含まれてもよく、前記タンパク質分解酵素は、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼおよびエキソ型ペプチダーゼの少なくとも一方であることが好ましい。
【選択図】図１
【解決手段】魚節からだしを抽出する工程と、魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含む。加えて魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程が含まれてもよく、前記タンパク質分解酵素は、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼおよびエキソ型ペプチダーゼの少なくとも一方であることが好ましい。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
魚節からだしを抽出する工程と、
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、発酵食品組成物の製造方法。
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、発酵食品組成物の製造方法。
【請求項2】
魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼおよびエキソ型ペプチダーゼの少なくとも一方である、請求項１に記載の発酵食品組成物の製造方法。
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼおよびエキソ型ペプチダーゼの少なくとも一方である、請求項１に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項3】
魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼを含み、
前記エンド型ペプチダーゼが、二種のセリンプロテアーゼである、請求項２に記載の発酵食品組成物の製造方法。
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼを含み、
前記エンド型ペプチダーゼが、二種のセリンプロテアーゼである、請求項２に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項4】
魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエキソ型ペプチダーゼを含み、
前記エキソ型ペプチダーゼが、アミノペプチダーゼである、請求項２に記載の発酵食品組成物の製造方法。
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエキソ型ペプチダーゼを含み、
前記エキソ型ペプチダーゼが、アミノペプチダーゼである、請求項２に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項5】
好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌が、セリンプロテアーゼおよびアミノペプチダーゼの少なくとも一方によるタンパク質分解酵素活性を基準として、０．３ ｕｎｉｔ／培養物（ｇ）以上である、請求項１に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項6】
好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いる発酵期間が、１から３週間の範囲である、請求項１に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項7】
好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌が、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託番号ＮＩＴＥ ＡＰ－０２１２２菌株として寄託されているＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ ＭＡ０１９６である、請求項１に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項8】
発酵食品組成物の製造方法が、ラジカル消去活性用発酵食品組成物、抗酸化活性用発酵食品組成物、アンジオテンシン変換酵素阻害活性用発酵食品組成物および乳酸菌生育促進用発酵食品組成物よりなる群から選ばれる少なくとも一つの用途の発酵食品組成物を対象とする製造方法を含む、請求項１に記載の発酵食品組成物の製造方法。
【請求項9】
魚節からだしを抽出する工程と、
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、
発酵食品組成物の味覚向上方法、発酵食品組成物のラジカル消去活性向上方法、発酵食品組成物の抗酸化活性向上方法、アンジオテンシン変換酵素阻害活性向上方法および乳酸菌生育促進性向上方法よりなる群から選ばれる少なくとも一つの向上方法を含む、発酵食品組成物の品質向上方法。
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、
発酵食品組成物の味覚向上方法、発酵食品組成物のラジカル消去活性向上方法、発酵食品組成物の抗酸化活性向上方法、アンジオテンシン変換酵素阻害活性向上方法および乳酸菌生育促進性向上方法よりなる群から選ばれる少なくとも一つの向上方法を含む、発酵食品組成物の品質向上方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、発酵食品組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
鰹節等の魚節は昆布、煮干しやしいたけなどと同じく伝統的な和食料理のための基本調味料である。例えば、魚節の一つである鰹節の削り節等から抽出されるだしは、吸い物、味噌汁、煮物、めんつゆ等に利用される。
【0003】
鰹節の削り節等から水可溶性成分を抽出し、得られた液体のだしから液体調味料や粉末だしを製造する工程では、大量の鰹節抽出残渣が食品製造副産物として生じる。これらの食品製造副産物は、通常は産業廃棄物として廃棄される。
近年、食品製造副産物、余剰食品、調理残渣や農場残渣などは、飼料自給率向上や食品リサイクルの観点から、サイレージ化や液化が推進されている（農林水産省 畜産局飼料課 令和４年９月 エコフィードをめぐる情勢より）。
近年、食品製造副産物、余剰食品、調理残渣や農場残渣などは、飼料自給率向上や食品リサイクルの観点から、サイレージ化や液化が推進されている（農林水産省 畜産局飼料課 令和４年９月 エコフィードをめぐる情勢より）。
【0004】
鰹節抽出残渣はタンパク質と水が主成分であり、既存の飼料と混合利用等で肥育効果などが明らかとなれば、飼料化は促進される。例えば、先行技術として同抽出残渣をアイガモの自給飼料としての活用が検討されている（非特許文献１）。
これまで同抽出残渣を含め食品製造副産物に分類されるもの（例えば、おから、醤油・酒粕、大豆油粕、米糠、ふすま等）についての飼料化への試みは多数あり、同抽出残渣の成分に特化した有効利用法の開発が望ましい。
例えば、同抽出残渣の加工により、種々の生理活性を発揮する多機能な食品素材・保健機能食品やファインケミカルとしての活用が想定される。
これまで同抽出残渣を含め食品製造副産物に分類されるもの（例えば、おから、醤油・酒粕、大豆油粕、米糠、ふすま等）についての飼料化への試みは多数あり、同抽出残渣の成分に特化した有効利用法の開発が望ましい。
例えば、同抽出残渣の加工により、種々の生理活性を発揮する多機能な食品素材・保健機能食品やファインケミカルとしての活用が想定される。
【0005】
タンパク質を主成分とする鰹節抽出残渣を活用する方法としては、例えば加水分解による液化方法が挙げられる。この液化方法に関連して、これまで提案されている先行技術として、塩酸による酸加水分解法（非特許文献２）、市販のプロテアーゼを用いた酵素加水分解法（特許文献１）等が知られている。
これらの方法によれば処理時間を短縮できるが、分解が進みすぎると風味の劣化や着色の原因になる。
例えば、タンパク質を主成分とする卵殻膜タンパク質の分解において、酸やアルカリ処理では、茶褐色の着色やアミノ酸のさらなる分解による異臭発生の問題が指摘されている（特許文献２）。
よって、うま味やこく味などが増強されたアミノ酸溶液がうまく製造できなければ、活用法は前記の家畜飼料等に限定される恐れがある。
一方、市販のプロテアーゼを用いた酵素による加水分解のみで液化を期待すると、製造コストが膨大となることが容易に予想される。
これらの方法によれば処理時間を短縮できるが、分解が進みすぎると風味の劣化や着色の原因になる。
例えば、タンパク質を主成分とする卵殻膜タンパク質の分解において、酸やアルカリ処理では、茶褐色の着色やアミノ酸のさらなる分解による異臭発生の問題が指摘されている（特許文献２）。
よって、うま味やこく味などが増強されたアミノ酸溶液がうまく製造できなければ、活用法は前記の家畜飼料等に限定される恐れがある。
一方、市販のプロテアーゼを用いた酵素による加水分解のみで液化を期待すると、製造コストが膨大となることが容易に予想される。
【0006】
また先行技術として、アルコール・味噌・醤油醸造に用いられるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属麹菌をプロテアーゼの供給源とした分解法が知られている。
例えば、鰹節抽出残渣-醤油麹-エタノールからなるもろみからの調味料製造方法（特許文献３）、固体麹または麹菌による鰹節抽出残渣の分解による調味料素材の製造方法（特許文献４および特許文献５）、麹菌と市販の酵素製剤を組み合わせた鰹節抽出残渣の液化方法（非特許文献３）が挙げられる。
いずれも食経験のある麹菌を用いていることから安全性に配慮された方法であるが、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌を別途培養した麹を製造する必要や麹菌の分泌生産するタンパク質分解酵素群のいずれが鰹節抽出残渣のタンパク質効率よく働くか明らかではなく、製造製品の品質を維持することや最適化が難しい。
また、麹を添加していることから、鰹節抽出残渣を主体とする組成物とは言えない。
例えば、鰹節抽出残渣-醤油麹-エタノールからなるもろみからの調味料製造方法（特許文献３）、固体麹または麹菌による鰹節抽出残渣の分解による調味料素材の製造方法（特許文献４および特許文献５）、麹菌と市販の酵素製剤を組み合わせた鰹節抽出残渣の液化方法（非特許文献３）が挙げられる。
いずれも食経験のある麹菌を用いていることから安全性に配慮された方法であるが、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌を別途培養した麹を製造する必要や麹菌の分泌生産するタンパク質分解酵素群のいずれが鰹節抽出残渣のタンパク質効率よく働くか明らかではなく、製造製品の品質を維持することや最適化が難しい。
また、麹を添加していることから、鰹節抽出残渣を主体とする組成物とは言えない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】特開平０１－３００８７２
【特許文献2】特開２０１６－１５２８１６
【特許文献3】特開２００１－１４９０３３
【特許文献4】特開２００５－０８０６２７
【特許文献5】特開２０１１－３６２０６
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】農生技管誌 ２５（４） ９３－９７ （２０１９）
【非特許文献2】日本水産学会誌 ８６（３） １９６－２０３ （２０２０）
【非特許文献3】山口県産業技術センター 技術研究報告 ２４ １８－２０ （２０１２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
本発明の目的は、食品製造副産物である魚節抽出残渣を用いて微生物による発酵を行い、発酵食品組成物とし、全量を無駄なく食品素材として利用できる製造方法を提供することにある。
また、本発明の他の目的は、微生物発酵を行うことで味覚が向上した発酵食品組成物を製造でき、さらには、種々の生理活性も有する付加価値のある発酵食品組成物を製造できる製造方法を提供することにある。
また、本発明の他の目的は、微生物発酵を行うことで味覚が向上した発酵食品組成物を製造でき、さらには、種々の生理活性も有する付加価値のある発酵食品組成物を製造できる製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは、魚節抽出残渣の発酵について検討を重ねた結果、タンパク質分解酵素分泌量が高い好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いた発酵を含む場合に、うま味等の呈味性や種々の生理活性を示す可溶性アミノ酸やペプチドを含む発酵物を製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0011】
即ち、本発明は、
［１］魚節からだしを抽出する工程と、
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［１］魚節からだしを抽出する工程と、
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0012】
また本発明の一つは、
［２］魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼおよびエキソ型ペプチダーゼの少なくとも一方である、上記［１］に記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［２］魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼおよびエキソ型ペプチダーゼの少なくとも一方である、上記［１］に記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0013】
また本発明の一つは、
［３］魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼを含み、
前記エンド型ペプチダーゼが、二種のセリンプロテアーゼである、上記［２］に記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［３］魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエンド型ペプチダーゼを含み、
前記エンド型ペプチダーゼが、二種のセリンプロテアーゼである、上記［２］に記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0014】
また本発明の一つは、
［４］魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエキソ型ペプチダーゼを含み、
前記エキソ型ペプチダーゼが、アミノペプチダーゼである、上記［２］に記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［４］魚節抽出残渣に対しタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
前記タンパク質分解酵素が、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌由来のエキソ型ペプチダーゼを含み、
前記エキソ型ペプチダーゼが、アミノペプチダーゼである、上記［２］に記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0015】
また本発明の一つは、
［５］好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌が、セリンプロテアーゼおよびアミノペプチダーゼの少なくとも一方によるタンパク質分解酵素活性を基準として、０．３ ｕｎｉｔ／培養物（ｇ）以上である、上記［１］から［４］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［５］好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌が、セリンプロテアーゼおよびアミノペプチダーゼの少なくとも一方によるタンパク質分解酵素活性を基準として、０．３ ｕｎｉｔ／培養物（ｇ）以上である、上記［１］から［４］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0016】
また本発明の一つは、
［６］好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いる発酵期間が、１から3週間の範囲である、上記［１］から［５］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［６］好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いる発酵期間が、１から3週間の範囲である、上記［１］から［５］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0017】
また本発明の一つは、
［７］好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌が、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに受託番号ＮＩＴＥ ＡＰ－０２１２２菌株として寄託されているＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ ＭＡ０１９６である、上記［１］から［６］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［７］好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌が、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに受託番号ＮＩＴＥ ＡＰ－０２１２２菌株として寄託されているＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ ＭＡ０１９６である、上記［１］から［６］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0018】
また本発明の一つは、
［８］発酵食品組成物の製造方法が、ラジカル消去活性用発酵食品組成物、抗酸化活性用発酵食品組成物、アンジオテンシン変換酵素阻害活性用発酵食品組成物および乳酸菌生育促進用発酵食品組成物よりなる群から選ばれる少なくとも一つの用途の発酵食品組成物を対象とする製造方法を含む、上記［１］から［７］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
［８］発酵食品組成物の製造方法が、ラジカル消去活性用発酵食品組成物、抗酸化活性用発酵食品組成物、アンジオテンシン変換酵素阻害活性用発酵食品組成物および乳酸菌生育促進用発酵食品組成物よりなる群から選ばれる少なくとも一つの用途の発酵食品組成物を対象とする製造方法を含む、上記［１］から［７］のいずれかに記載の発酵食品組成物の製造方法を提供するものである。
【0019】
また本発明は、
［９］魚節からだしを抽出する工程と、
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、
発酵食品組成物の味覚向上方法、発酵食品組成物のラジカル消去活性向上方法、発酵食品組成物の抗酸化活性向上方法、アンジオテンシン変換酵素阻害活性向上方法および乳酸菌生育促進性向上方法よりなる群から選ばれる少なくとも一つの向上方法を含む、発酵食品組成物の品質向上方法を提供するものである。
［９］魚節からだしを抽出する工程と、
魚節とだしとの混合物から魚節抽出残渣を分離する工程と、
魚節抽出残渣を好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属に属する糸状菌を用いて発酵させる工程を含むことを特徴とする、
発酵食品組成物の味覚向上方法、発酵食品組成物のラジカル消去活性向上方法、発酵食品組成物の抗酸化活性向上方法、アンジオテンシン変換酵素阻害活性向上方法および乳酸菌生育促進性向上方法よりなる群から選ばれる少なくとも一つの向上方法を含む、発酵食品組成物の品質向上方法を提供するものである。
【発明の効果】
【0020】
本発明の製造方法によれば、食品製造副産物である魚節抽出残渣の全量を無駄なく食品素材として利用できる。
また、本発明の製造方法によれば、味覚が向上した発酵食品組成物を製造でき、さらには、種々の生理活性も有する付加価値のある発酵食品組成物を製造できる。
また、本発明の製造方法によれば、味覚が向上した発酵食品組成物を製造でき、さらには、種々の生理活性も有する付加価値のある発酵食品組成物を製造できる。
【図面の簡単な説明】
【0021】
【図1】本発明の製造方法により得られた発酵食品組成物についての味覚センサーによる味覚の測定結果を示すグラフである。
【図2】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＢＲＣ１３９５１の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図3】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ＮＢＲＣ１０７１４７の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図4】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＮＢＲＣ１５８８３の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図5】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＮＢＲＣ３２０２の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図6】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＢＲＣ１５８８５の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図7】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ. ｌａｃｔｉｓ ＮＢＲＣ １００９３３の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図8】発酵食品組成物から調製した可溶性画分を添加した乳酸菌用培養培地を用いた場合の、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＢＲＣ １５８９１の乳酸菌の生育促進効果を示すグラフである。
【図9】発酵食品組成物から調製した可溶性画分に含まれるポリペプチド分布を表す、紫外線吸光分析（２８０ｎｍ）の結果を示すグラフである。
【図10】発酵食品組成物から調製した可溶性画分についてアミノ酸・ペプチド量（ニンヒドリン法、グリシン換算）を示すグラフである。
【図11】発酵食品組成物から調製した可溶性画分についてラジカル消去性試験の結果を示すグラフである。
【図12】発酵食品組成物から調製した可溶性画分についてラジカル消去性試験の結果を示すグラフである。
【図13】発酵食品組成物から調製した可溶性画分について抗酸化力試験の結果を示すグラフである。
【図14】発酵食品組成物から調製した可溶性画分についてアンジオテンシン変換酵素阻害活性試験の結果を示すグラフである。
【図15】発酵食品組成物から調製した可溶性画分から分離された成分の分子量分布をサイズ排除クロマトグラフィーにて調べた結果を示すグラフである。
【図16】発酵食品組成物から調製した可溶性画分から分離された成分の逆相クロマトグラフィーによる解析結果を示すグラフである。
【図17】フラクション番号１８について逆相クロマトグラフィーによる解析結果を示すグラフである。
【図18】フラクション番号２５について逆相クロマトグラフィーによる解析結果を示すグラフである。
【図19】フラクション番号３０について逆相クロマトグラフィーによる解析結果を示すグラフである。
【図20】フラクション番号４７について逆相クロマトグラフィーによる解析結果を示すグラフである。
【図21】フラクション番号８３について逆相クロマトグラフィーによる解析結果を示すグラフである。
【図22】粗酵素液が鰹肉由来タンパク質の分解に関わるか調べた電気泳動結果を示す図面代用写真である。
【図23】透析後の粗酵素液を弱酸性条件下のカラムクロマトグラフィーで分離した結果を示すグラフである。
【図24】精製後のタンパク質分解酵素の電気泳動結果を示す図面代用写真である。
【図25】透析後の粗酵素液を中性条件下のカラムクロマトグラフィーで分離した結果を示すグラフである。
【図26】精製後のタンパク質分解酵素の電気泳動結果を示す図面代用写真である。
【図27】精製したプロテアーゼを用いた鰹肉由来タンパク質の分解結果を示す電気泳動の図面代用写真である。
【図28】精製したプロテアーゼを用いた鰹肉由来タンパク質の分解結果を示す電気泳動の図面代用写真である。
【発明を実施するための形態】
【0022】
本発明の発酵食品組成物の製造方法は、魚節抽出残渣と、好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌とによる発酵工程を含む。
【0023】
本発明に使用する魚節抽出残渣とは、荒節、枯節等の魚節から製造した削り節について、だしを抽出した残渣であり、だしがらとも呼ばれる食品製造副産物を指す。
本発明に使用する魚節の原料としては、例えば、カツオ、サバ、マグロ、イワシ等の一種もしくは二種以上を使用することができる。
本発明に使用する魚節の原料としては、例えば、カツオが好ましく、魚節は、鰹節であればより好ましい。
本発明に使用する魚節の原料としては、例えば、カツオ、サバ、マグロ、イワシ等の一種もしくは二種以上を使用することができる。
本発明に使用する魚節の原料としては、例えば、カツオが好ましく、魚節は、鰹節であればより好ましい。
【0024】
削り節としての魚節からだしを取る工程は、通常日常生活で実施する範囲であれば特に制限はない。
例えば、１ｋｇの沸騰水に対し、削り節を２０ｇから６０ｇの範囲で使用する。水が沸騰したら加熱を止め、削り節を加える。
１～１０分程度で削り節が沈むので、沈んだ後の削り節を分離する。
削り節と、だしとの分離方法に制限はなく、例えば、濾布、濾紙等の濾過で分離する方法、遠心分離により分離する方法の一種もしくは二種以上を採用できる。
上記の操作により、魚節抽出残渣が得られる。
例えば、１ｋｇの沸騰水に対し、削り節を２０ｇから６０ｇの範囲で使用する。水が沸騰したら加熱を止め、削り節を加える。
１～１０分程度で削り節が沈むので、沈んだ後の削り節を分離する。
削り節と、だしとの分離方法に制限はなく、例えば、濾布、濾紙等の濾過で分離する方法、遠心分離により分離する方法の一種もしくは二種以上を採用できる。
上記の操作により、魚節抽出残渣が得られる。
【0025】
魚節抽出残渣は乾燥させることが好ましい。
魚節抽出残渣は乾燥させる方法に限定はなく、例えば、天日干しにする方法、加熱オーブンに入れて空気を循環さえながら加熱する方法、容器に入れて減圧する方法等の一種もしくは二種以上を採用できる。
魚節抽出残渣は乾燥させる方法に限定はなく、例えば、天日干しにする方法、加熱オーブンに入れて空気を循環さえながら加熱する方法、容器に入れて減圧する方法等の一種もしくは二種以上を採用できる。
【0026】
本発明の製造方法に含まれる発酵工程において、他の微生物による汚損の可能性を低減できることから、発酵開始時の魚節抽出残渣の水分含量は低いことが好ましく、より好ましくは水分活性値が0.8以下の範囲である。
【0027】
発酵工程に用いられる好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌は、上記の低水分活性下において生育可能な糸状菌群である。
例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｍｓｔｅｌｏｄａｍｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｃｈｅｖａｌｉｅｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｐｓｅｕｄｏｇｌａｕｃｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｕｂｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ等の一種もしくは二種以上の鰹節等の魚節の発酵熟成中に魚節表面に生息する糸状菌である。
例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｍｓｔｅｌｏｄａｍｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｃｈｅｖａｌｉｅｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｐｓｅｕｄｏｇｌａｕｃｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｕｂｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ等の一種もしくは二種以上の鰹節等の魚節の発酵熟成中に魚節表面に生息する糸状菌である。
【0028】
発酵工程に用いられる好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌は、特にタンパク質分解酵素の生産性に優れるものが好ましい。
発酵工程に用いられる好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌は、タンパク質を分解して得られる成分の分泌量だけでなく、ｅｎｄｏ－型ペプチダーゼおよびｅｘｏ－型ペプチダーゼの少なくとも一方を分泌する糸状菌であればより好ましく、両方を分泌する糸状菌であればさらに好ましい。
発酵工程に用いられる好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌は、タンパク質を分解して得られる成分の分泌量だけでなく、ｅｎｄｏ－型ペプチダーゼおよびｅｘｏ－型ペプチダーゼの少なくとも一方を分泌する糸状菌であればより好ましく、両方を分泌する糸状菌であればさらに好ましい。
【0029】
また、本発明に使用する好乾性Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属糸状菌は、カビ毒を生成しないことが明らかとなっている糸状菌種であることは言うまでもない（Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｎｚｙｍｅｓ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ. ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ―ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｋａｔｓｕｏｂｕｓｈｉ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏn ａｎｄ ｒｉｐｅｎｉｎｇ. Ｉｎｔ. Ｊ. Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ. ３５３：１０９２９９ （２０２１).）。
【0030】
発酵工程の温度範囲は、通常は１５～４５℃の範囲であり、２５～３５℃の範囲であれば好ましく、２８～３２℃の範囲であればさらに好ましい。
また発酵工程の時間範囲は、１週間から３週間の範囲が好ましい。
また発酵工程の時間範囲は、１週間から３週間の範囲が好ましい。
【0031】
次に本発明について実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。
【実施例0032】
本実施例に使用したＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに受託番号ＮＩＴＥ ＡＰ－０２１２２菌株として寄託されているＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ ＭＡ０１９６と同じである。
【0033】
〔鰹節抽出残渣由来発酵食品組成物の製造〕
鰹節（削り節）からだしをとった後に生じた鰹節抽出残渣を、定温恒温器にて７０℃、４８時間乾燥し、水分含量２．７％とした。
鰹節抽出残渣の乾燥は、送風機能がない恒温器でも、乾燥機を使用せずに天日干しでもよく、水分含量３．０%以下まで乾燥させれば好ましい。
鰹節（削り節）からだしをとった後に生じた鰹節抽出残渣を、定温恒温器にて７０℃、４８時間乾燥し、水分含量２．７％とした。
鰹節抽出残渣の乾燥は、送風機能がない恒温器でも、乾燥機を使用せずに天日干しでもよく、水分含量３．０%以下まで乾燥させれば好ましい。
【0034】
乾燥した同残渣に対し、イオン交換水を加えた三角フラスコ（５ｇ 残渣／５０ ｍｌ容三角フラスコから５０ｇ 残渣／５００ ｍｌ三角フラスコ）を１２０℃、２０分間オートクレーブにて殺菌を行い、室温まで冷却した。
これに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６の胞子懸濁液（２．５×１０６ ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌ）を３０から３００ μｌを接種し、温度２８から３０℃、湿度７５から８５の範囲で管理した恒温器にて２から３週間静置培養を行い、発酵食品組成物を得た。
乾燥物に加えるイオン交換水は、０．７５容量（ｇ／ｇ）の範囲で実験を行った。この範囲は、０．５から１容量（ｇ／ｇ）の範囲で行うのが好ましい。また、胞子懸濁液の濃度は、１．０から５．０×１０６ ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌの範囲で行うのが好ましい。
これに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６の胞子懸濁液（２．５×１０６ ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌ）を３０から３００ μｌを接種し、温度２８から３０℃、湿度７５から８５の範囲で管理した恒温器にて２から３週間静置培養を行い、発酵食品組成物を得た。
乾燥物に加えるイオン交換水は、０．７５容量（ｇ／ｇ）の範囲で実験を行った。この範囲は、０．５から１容量（ｇ／ｇ）の範囲で行うのが好ましい。また、胞子懸濁液の濃度は、１．０から５．０×１０６ ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌの範囲で行うのが好ましい。
【0035】
上記の方法で得られた発酵食品組成物について、成分分析（遊離アミノ酸量、可溶性ポリペプチド量、アミノ酸組成、味覚）を行った。
サンプルの調製法は、かつおだし抽出法を参考にした。つまり、５００ｍｌ容ステンレスマグカップに６ｇ量の培養物と９０℃に加温した蒸留水約２００ｍｌを添加して密栓後、３分間放置した。
つづいて、ろ紙（アドバンテック社製Ｎｏ．２）を置いたブフナー漏斗にて吸引ろ過し、得られた通過液（以下、可溶性画分と呼称する。）を２００ｍｌに定容後、成分分析用サンプルとした。
サンプルの調製法は、かつおだし抽出法を参考にした。つまり、５００ｍｌ容ステンレスマグカップに６ｇ量の培養物と９０℃に加温した蒸留水約２００ｍｌを添加して密栓後、３分間放置した。
つづいて、ろ紙（アドバンテック社製Ｎｏ．２）を置いたブフナー漏斗にて吸引ろ過し、得られた通過液（以下、可溶性画分と呼称する。）を２００ｍｌに定容後、成分分析用サンプルとした。
【0036】
可溶性画分に含まれる遊離アミノ酸および可溶性ポリペプチド量は、ニンヒドリン法（グリシン量換算、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ., Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ ｏｎ ｎｉｎｈｙｄｒｉｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ. Ｊ. Ｆｏｏｄ Ｃｏｍｐ. Ａｎａｌ., １９（２-３）： １１２－１１７ (２００６)）およびＬｏｗｒｙ法（Ｂｏｖａｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）換算、Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ., Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｏｌｉｎ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ. Ｊ. Ｂｉｏｌ. Ｃｈｅｍ. １９３： ２６５２７５ (１９５１).）によって求めた。
【0037】
遊離アミノ酸類の組成は、ニンヒドリンポストカラム誘導体化法によるＨＰＬＣ分析法によった。
また、味覚センサー（味認識装置）による味覚の測定は、株式会社インテリジェントセンサーテクノロジー製のＳＡ４０２Ｂを使用した。
既報の方法を参考に、味覚センサーは、ＣＡ０（酸味）、ＣＴ０（塩味）、Ｃ００（苦味雑味）、ＡＥ１（渋味刺激）、ＡＡＥ（旨味）の５種類を使用し、先味である酸味、苦味雑味、渋味刺激、旨味、塩味と、後味である苦味、渋味、うま味コクの計８つの味覚項目について測定を行った。
また、味覚センサー（味認識装置）による味覚の測定は、株式会社インテリジェントセンサーテクノロジー製のＳＡ４０２Ｂを使用した。
既報の方法を参考に、味覚センサーは、ＣＡ０（酸味）、ＣＴ０（塩味）、Ｃ００（苦味雑味）、ＡＥ１（渋味刺激）、ＡＡＥ（旨味）の５種類を使用し、先味である酸味、苦味雑味、渋味刺激、旨味、塩味と、後味である苦味、渋味、うま味コクの計８つの味覚項目について測定を行った。
【0038】
上記の方法で、得られた結果を表１（遊離アミノ酸総量および可溶性タンパク質総量）および表２（アミノ酸等組成）および図１（味覚測定結果）に示す。
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６を接種・培養して得られた培養物から調製した可溶性画分は、接種しなかった対照（コントロール）と比較し、遊離アミノ酸量や可溶性ポリペプチド量は有意に増大した。
また、同培養条件でＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ ＲＩＢ４０を培養することで得られた培養物から調製した可溶性画分は、糸状菌未接種のコントロールとは有意な差は見られなかった（表１）。
よって、鰹節抽出残渣の発酵には、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６のような好乾性糸状菌が適していることが明らかとなった。
培養物１ｇあたりに換算すると、アミノ酸量は０．１２ ｍｍｏｌ／培養物（ｇ）、可溶性タンパク質量は１．５５ ｍｇ／培養物（ｇ）であった。
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６を接種・培養して得られた培養物から調製した可溶性画分は、接種しなかった対照（コントロール）と比較し、遊離アミノ酸量や可溶性ポリペプチド量は有意に増大した。
また、同培養条件でＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ ＲＩＢ４０を培養することで得られた培養物から調製した可溶性画分は、糸状菌未接種のコントロールとは有意な差は見られなかった（表１）。
よって、鰹節抽出残渣の発酵には、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６のような好乾性糸状菌が適していることが明らかとなった。
培養物１ｇあたりに換算すると、アミノ酸量は０．１２ ｍｍｏｌ／培養物（ｇ）、可溶性タンパク質量は１．５５ ｍｇ／培養物（ｇ）であった。
【0039】
【表1】
【0040】
【表2】
【0041】
図１の結果から、コントロールに比べて苦味雑味、塩味味、うま味の膜電位の変化量が大きくなり、これらの呈味が増強される傾向にあった。一方で、酸味の変化量は小さくなった。
【0042】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６の培養物から調製した可溶性画分についてラジカル消去性試験、抗酸化力、アンジオテンシン変換酵素阻害活性、乳酸菌生育促進効果を調べた。
【0043】
ａ） ＡＢＴＳ (２，２′―ａｚｉｎｏ―ｂｉｓ（３－ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ－６－ｓｕｌｐｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）)消去活性
Ｍａｌｕｎｇａ ＆ Ｂｅｔａの方法に従った (Ｍａｌｕｎｇａ ａｎｄ Ｂｅｔａ. Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｆｒｏｍ ｗｈｅａｔ ａｌｅｕｒｏｎｅ ｕｓｉｎｇ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ｏｒ Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ ｐａｔｒｉｃｉａｒｕｍ ｘｙｌａｎａｓｅ. Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ. １６７：３１１―３１９ （２０１５）.)。つまり、ＡＢＴＳラジカル原液は、７ ｍＭ ＡＢＴＳ水溶液に２．４５ ｍＭペルオキソ二硫酸カリウムを１：１ （ｖ／ｖ） となるように加え、暗所室温で１２－１６時間放置することによって調製した。ＡＢＳラジカル消去活性測定時には、この原液を７３４ ｎｍの吸光度がおよそ０．７となるように脱イオン水で希釈して使用した。ＡＢＴＳラジカル溶液 （８５０ μｌ） にサンプル （５０ μｌ） を添加し、暗所室温で３０分間放置後、７３４ ｎｍの吸光度を測定した。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０５から０．４ μＭ溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで２倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。ＡＢＴＳラジカル消去活性は、Ｔｒｏｌｏｘ （６－ｈｙｄｒｏｘｙ－２,５,７,８―ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｃｈｒｏｍａｎ―２－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ、東京化成工業、東京) を標準物質にして作成した検量線を用いてＴｒｏｌｏｘ相当量 （μｍｏｌ/Ｌ） として算出した。
Ｍａｌｕｎｇａ ＆ Ｂｅｔａの方法に従った (Ｍａｌｕｎｇａ ａｎｄ Ｂｅｔａ. Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｆｒｏｍ ｗｈｅａｔ ａｌｅｕｒｏｎｅ ｕｓｉｎｇ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ｏｒ Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ ｐａｔｒｉｃｉａｒｕｍ ｘｙｌａｎａｓｅ. Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ. １６７：３１１―３１９ （２０１５）.)。つまり、ＡＢＴＳラジカル原液は、７ ｍＭ ＡＢＴＳ水溶液に２．４５ ｍＭペルオキソ二硫酸カリウムを１：１ （ｖ／ｖ） となるように加え、暗所室温で１２－１６時間放置することによって調製した。ＡＢＳラジカル消去活性測定時には、この原液を７３４ ｎｍの吸光度がおよそ０．７となるように脱イオン水で希釈して使用した。ＡＢＴＳラジカル溶液 （８５０ μｌ） にサンプル （５０ μｌ） を添加し、暗所室温で３０分間放置後、７３４ ｎｍの吸光度を測定した。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０５から０．４ μＭ溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで２倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。ＡＢＴＳラジカル消去活性は、Ｔｒｏｌｏｘ （６－ｈｙｄｒｏｘｙ－２,５,７,８―ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｃｈｒｏｍａｎ―２－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ、東京化成工業、東京) を標準物質にして作成した検量線を用いてＴｒｏｌｏｘ相当量 （μｍｏｌ/Ｌ） として算出した。
【0044】
ｂ） ＤＰＰＨ （2, 2-Ｄｉｐｈｅｎｙｌ―1-ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）消去活性
Ｖｅｅｎａｓｈｒｉ ＆ Ｍｕｒａｌｉｋｒｉｓｈｎａの方法に従った (Ｖｅｅｎａｓｈｒｉ ａｎｄ Ｍｕｒａｌｉｋｒｉｓｈｎａ. Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉ―ｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｘｙｌｏ―ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｃｅｒｅａｌ ａｎｄ ｍｉｌｌｅｔ ｂｒａｎｓ －Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ. Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ. １２６：１４７５－１４８１(２０１１).)。サンプルまたは標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液 (５０％(v/v)エタノール溶液) １００ μｌに対して、２００ ｍＭ ＭＥＳ―ＮａＯＨ緩衝液 （ｐＨ ６．０）５０ μｌおよび０．８ ｍＭ ＤＰＰＨ溶液 ５０ μｌを添加し、室温で２０分間インキュベートした後、５２０ ｎｍにおける吸光度を測定した。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０８から０．８μＭ溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで２倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。消去活性はＴｒｏｌｏｘ相当量 （μｍｏｌ/ｌ） として算出した。
Ｖｅｅｎａｓｈｒｉ ＆ Ｍｕｒａｌｉｋｒｉｓｈｎａの方法に従った (Ｖｅｅｎａｓｈｒｉ ａｎｄ Ｍｕｒａｌｉｋｒｉｓｈｎａ. Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉ―ｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｘｙｌｏ―ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｃｅｒｅａｌ ａｎｄ ｍｉｌｌｅｔ ｂｒａｎｓ －Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ. Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ. １２６：１４７５－１４８１(２０１１).)。サンプルまたは標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液 (５０％(v/v)エタノール溶液) １００ μｌに対して、２００ ｍＭ ＭＥＳ―ＮａＯＨ緩衝液 （ｐＨ ６．０）５０ μｌおよび０．８ ｍＭ ＤＰＰＨ溶液 ５０ μｌを添加し、室温で２０分間インキュベートした後、５２０ ｎｍにおける吸光度を測定した。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０８から０．８μＭ溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで２倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。消去活性はＴｒｏｌｏｘ相当量 （μｍｏｌ/ｌ） として算出した。
【0045】
ｃ） 第二鉄還元力（ＦＲＡＰ， ｆｅｒｒｉｃ ｉｏｎ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｏｗｅｒ）
Ｂｅｎｚｉｅ ＆ Ｓｔｒａｉｎの方法に従った (Ｂｅｎｚｉｅ ＆ Ｓｔｒａｉｎ. Ｔｈｅ ｆｅｒｒｉｃ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｌａｓｍａ (ＦＲＡＰ) ａｓ ａ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ “ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｏｗｅｒ”： Ｔｈｅ ＦＲＡＰ ａｓｓａｙ. Ａｎａｌ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. ２３９：７０－７６（１９９６）.)。
Ｆｅ３＋からＦｅ２＋への還元反応を利用して、抗酸化力を測定した。
ＦＲＡＰ試薬は、１０ ｍＭ ＦＲＡＰ―４０ ｍＭ ＨＣｌ溶液：３００ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液 （ｐＨ ３．６） ：２０ ｍＭ 塩化鉄 (III) 水溶液を１０ ： １ ： １ （ｖ/ｖ/ｖ） の割合で混合することで調製した。サンプルまたは標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液 （５０％（ｖ/ｖ）エタノール溶液） ５０ μｌをＦＲＡＰ試薬１．５ ｍｌ に加えて、３分間室温で放置した後、５９３ ｎｍにおける吸光度を測定した。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０８から０．８ μＭ溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで2倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０８から０．８ μＭ 溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで２倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。消去活性はＴｒｏｌｏｘ相当量 （μｍｏｌ/ｌ） として算出した。
Ｂｅｎｚｉｅ ＆ Ｓｔｒａｉｎの方法に従った (Ｂｅｎｚｉｅ ＆ Ｓｔｒａｉｎ. Ｔｈｅ ｆｅｒｒｉｃ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｌａｓｍａ (ＦＲＡＰ) ａｓ ａ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ “ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｏｗｅｒ”： Ｔｈｅ ＦＲＡＰ ａｓｓａｙ. Ａｎａｌ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. ２３９：７０－７６（１９９６）.)。
Ｆｅ３＋からＦｅ２＋への還元反応を利用して、抗酸化力を測定した。
ＦＲＡＰ試薬は、１０ ｍＭ ＦＲＡＰ―４０ ｍＭ ＨＣｌ溶液：３００ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液 （ｐＨ ３．６） ：２０ ｍＭ 塩化鉄 (III) 水溶液を１０ ： １ ： １ （ｖ/ｖ/ｖ） の割合で混合することで調製した。サンプルまたは標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液 （５０％（ｖ/ｖ）エタノール溶液） ５０ μｌをＦＲＡＰ試薬１．５ ｍｌ に加えて、３分間室温で放置した後、５９３ ｎｍにおける吸光度を測定した。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０８から０．８ μＭ溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで2倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。標準Ｔｒｏｌｏｘ溶液は、０．０８から０．８ μＭ 溶液を調製した。また、サンプル溶液はエタノールで２倍希釈することで５０％エタノール溶液とした。消去活性はＴｒｏｌｏｘ相当量 （μｍｏｌ/ｌ） として算出した。
【0046】
ｄ） アンジオテンシン変換酵素（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ：ＡＣＥ）阻害活性
株式会社 同仁グローカル社製 ＡＣＥ阻害活性キットおよび添付の取扱説明書に従って行い、ＡＣＥ阻害活性値（阻害率％）および阻害率５０％に相当するサンプル量（グリシン濃度換算でのペプチド量）を算出した。
株式会社 同仁グローカル社製 ＡＣＥ阻害活性キットおよび添付の取扱説明書に従って行い、ＡＣＥ阻害活性値（阻害率％）および阻害率５０％に相当するサンプル量（グリシン濃度換算でのペプチド量）を算出した。
【0047】
コントロールと比較して可溶性画分は顕著なラジカル消去活性、第二鉄還元力活性が見られた（表３）。
また、可溶性画分のアンジオテンシン変換酵素阻害活性（ＩＣ５０、グリシン濃度 (ｍＭ)換算）は０．０４２１ ｍＭであった。
【表3】
【0048】
可溶性画分の乳酸菌生育促進効果について調べた。試験に用いた乳酸菌は、以下の7株である。これらの乳酸菌は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構から購入した。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＢＲＣ１３９５１（図２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ＮＢＲＣ１０７１４７（図３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＮＢＲＣ１５８８３（図４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＮＢＲＣ３２０２（図５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＢＲＣ１５８８５（図６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ. ｌａｃｔｉｓ ＮＢＲＣ １００９３３（図７）およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＢＲＣ １５８９１（図８）。
また、試験培地はＭＲＳ寒天培地 (ＭＲＳａｇａｒ： ｄｅＭａｎ， Ｒｏｇｏｓａ， ａｎｄ. Ｓｈａｒｐｅａｇａｒ)を参考にした。
つまり、酵母エキス（５．５ｇ／Ｌ）、ペプトン（１２．５ｇ／Ｌ）、グルコース（１１．０ｇ／Ｌ）、リン酸水素二カリウム（０．２５ｇ／Ｌ）、リン酸一水素カリウム（０．２５ｇ／Ｌ）、酢酸ナトリウム（１０．０ｇ／Ｌ）、硫酸マグネシウム（０．１ｇ／Ｌ）、硫酸マンガン（５．０ ｍｇ／Ｌ）、硫酸第一鉄（５．０ ｍｇ／Ｌ）からなる液体培地を用いた。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＢＲＣ１３９５１（図２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ＮＢＲＣ１０７１４７（図３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＮＢＲＣ１５８８３（図４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＮＢＲＣ３２０２（図５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＢＲＣ１５８８５（図６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ. ｌａｃｔｉｓ ＮＢＲＣ １００９３３（図７）およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＢＲＣ １５８９１（図８）。
また、試験培地はＭＲＳ寒天培地 (ＭＲＳａｇａｒ： ｄｅＭａｎ， Ｒｏｇｏｓａ， ａｎｄ. Ｓｈａｒｐｅａｇａｒ)を参考にした。
つまり、酵母エキス（５．５ｇ／Ｌ）、ペプトン（１２．５ｇ／Ｌ）、グルコース（１１．０ｇ／Ｌ）、リン酸水素二カリウム（０．２５ｇ／Ｌ）、リン酸一水素カリウム（０．２５ｇ／Ｌ）、酢酸ナトリウム（１０．０ｇ／Ｌ）、硫酸マグネシウム（０．１ｇ／Ｌ）、硫酸マンガン（５．０ ｍｇ／Ｌ）、硫酸第一鉄（５．０ ｍｇ／Ｌ）からなる液体培地を用いた。
【0049】
試験培地に対して１０分の１量（ｖ／ｖ）の可溶性画分を添加した後、乳酸菌試験菌株を移植し、アネロパック（Ｒ）・ケンキ パウチを入れたアネロパック角型ジャーにて３０℃で培養し、１２時間おきに生育量（ＯＤ６００）を測定した。また、試験培地に１０分の１量（ｖ／ｖ）の蒸留水を添加した培地についても同様に移植・培養を行い、対照（コントロール）との生育量を比較することで、乳酸菌の生育に与える可溶性画分の影響を調べた。
【0050】
試験菌株７株の中で、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＢＲＣ１３９５１（図２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＮＢＲＣ１５８８３（図４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＮＢＲＣ３２０２（図５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ. ｌａｃｔｉｓ ＮＢＲＣ １００９３３（図７）において可溶性画分の生育促進効果が見られた。
【0051】
乳酸菌に対する生育促進効果から、ヒトの腸内細菌叢の改善効果が期待される。また、培養物から得られた可溶性画分を、乳酸発酵や乳酸菌生育のための促進添加剤として利用することも可能である。さらに、発酵組成物を機能性食品として用いることも可能である。
【0052】
可溶性画分１００ ｍｌを１０ ｍｌまで濃縮し、遠心濾過膜にて不溶物を除去した。通過した濃縮液２ ｍｌをＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ－４０を充填したカラム（２．５×５０ ｃｍ）を用いて分離し、ペプチドを分離した。１０ ｍＭ酢酸アンモニウム溶液を用いて流速２０ ｍｌ／ｈで可溶性ペプチドを溶出した。
得られた画分（５ ｍｌ／ｔｕｂｅ）について、ポチペプチド量（ＵＶ ２８０ ｎｍ）、アミノ酸・ペプチド量（ニンヒドリン法、グリシン換算）、ＡＢＴＳ、ＤＰＰＨ、ＦＲＡＰ、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を調べた。
得られた画分（５ ｍｌ／ｔｕｂｅ）について、ポチペプチド量（ＵＶ ２８０ ｎｍ）、アミノ酸・ペプチド量（ニンヒドリン法、グリシン換算）、ＡＢＴＳ、ＤＰＰＨ、ＦＲＡＰ、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を調べた。
【0053】
芳香族アミノ酸（チロシンやトリプトファン）の側鎖に由来する２８０ ｎｍの吸収がフラクション番号１８、フラクション番号２５、フラクション番号３０、フラクション番号４７およびフラクション番号８３に見られた（図９）。
一方、ニンヒドリン反応では、フラクション番号３０前後にオリゴペプチドやアミノ酸類が含まれていることがわかった（図１０）。
これらのフラクションについて、ＡＢＴＳ、ＤＰＰＨ、ＦＲＡＰ、アンジオテンシン変換酵素阻害活性も見られた（それぞれ図１１から図１４）。
図１１および図１２は、トロロックス量換算での抗酸化力価を示し、図１３は、トロロックス量換算での鉄還元／抗酸化力価を示す。
一方、ニンヒドリン反応では、フラクション番号３０前後にオリゴペプチドやアミノ酸類が含まれていることがわかった（図１０）。
これらのフラクションについて、ＡＢＴＳ、ＤＰＰＨ、ＦＲＡＰ、アンジオテンシン変換酵素阻害活性も見られた（それぞれ図１１から図１４）。
図１１および図１２は、トロロックス量換算での抗酸化力価を示し、図１３は、トロロックス量換算での鉄還元／抗酸化力価を示す。
【0054】
生理活性が見られたフラクション番号１８、フラクション番号２５、フラクション番号３０、フラクション番号４７およびフラクション番号８３についてフラクションに含まれるペプチドの分子量分布をサイズ排除クロマトグラフィーにて調べた。
溶離液（１００ ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４ (ｐＨ ７．４)－アセトニトリル(８０：２０、ｖ／ｖ)）にて平衡化したＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ－６０ (４．６×３００ ｎｍ)(ワイエムシィ社、京都)に、 １０ μｌを適用し、流速０．２５ ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長２１６ ｎｍにてペプチドを溶出した。
また、同条件で標準タンパク質およびペプチドＭｙｏｇｌｏｂｉｎ（分子量，１７，０００ Ｄａ；溶出時間８．９３ ｍｉｎ）、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｃ（１２，４００ Ｄａ；９．６４ ｍｉｎ）、Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ（１，４２２ Ｄａ；１１．８３ ｍｉｎ）、Ｎ-Ｈｉｐｐｕｒｙｌ Ｈｉｓ Ｌｅｕ（４２９ Ｄａ；１２．８３ ｍｉｎ）、Ｇｌｙｃｙｌｇｌｙｃｙｌｇｌｙｃｉｎｅ（１８９ Ｄａ；１３．５５ ｍｉｎ）も分析した。
溶離液（１００ ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４ (ｐＨ ７．４)－アセトニトリル(８０：２０、ｖ／ｖ)）にて平衡化したＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ－６０ (４．６×３００ ｎｍ)(ワイエムシィ社、京都)に、 １０ μｌを適用し、流速０．２５ ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長２１６ ｎｍにてペプチドを溶出した。
また、同条件で標準タンパク質およびペプチドＭｙｏｇｌｏｂｉｎ（分子量，１７，０００ Ｄａ；溶出時間８．９３ ｍｉｎ）、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｃ（１２，４００ Ｄａ；９．６４ ｍｉｎ）、Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ（１，４２２ Ｄａ；１１．８３ ｍｉｎ）、Ｎ-Ｈｉｐｐｕｒｙｌ Ｈｉｓ Ｌｅｕ（４２９ Ｄａ；１２．８３ ｍｉｎ）、Ｇｌｙｃｙｌｇｌｙｃｙｌｇｌｙｃｉｎｅ（１８９ Ｄａ；１３．５５ ｍｉｎ）も分析した。
【0055】
標準タンパク質の溶出時間を参考に、可溶性画分には分子量１２，４００ Ｄａ以下の種々のポリペプチド、オリゴペプチドおよびアミノ酸類が含まれていることがわかった（図１５の参照符号１７）。
一方、コントロールにも分子量１，４２２ Ｄａ以下の種々のペプチドやアミノ酸類が含まれていたが、わずかであった（図１５の参照符号１８）。
図１５の参照符号Ｍ、Ｃ、Ｂ、ＨおよびＧは、分子量表示のための標準タンパク質やペプチドの略であり、それぞれ、Myoglobin、cytochrome c、bacitracin、N-hippuryl His Leu hydrateおよびglycylglycylglycineを意味する。
以下の場合も同様である。
一方、コントロールにも分子量１，４２２ Ｄａ以下の種々のペプチドやアミノ酸類が含まれていたが、わずかであった（図１５の参照符号１８）。
図１５の参照符号Ｍ、Ｃ、Ｂ、ＨおよびＧは、分子量表示のための標準タンパク質やペプチドの略であり、それぞれ、Myoglobin、cytochrome c、bacitracin、N-hippuryl His Leu hydrateおよびglycylglycylglycineを意味する。
以下の場合も同様である。
【0056】
フラクション番号１８、フラクション番号２５、フラクション番号３０およびフラクション番号８３には、それぞれ分子量１２，４００ Ｄａ前後、１，４２２ Ｄａ前後、４２９ Ｄａ前後および分子量１８９ Ｄａ以下のペプチドやアミノ酸類が含まれていることがわかった（図１６）。
【0057】
フラクション番号１８、フラクション番号２５、フラクション番号３０およびフラクション番号８３について逆相クロマトグラフィーを用いたペプチドマッピングを行った。
液体クロマトグラフィー装置にＣ１８カラムＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８―ＡＲ―ＩＩ（４．６×２５０ ｍｍ、ナカライテスク社製）を接続した。
移動相Ａ：５ ｍＭＴＦＡ／水、移動相Ｂ：５ ｍＭＴＦＡ／アセトニトリルでグラジエントは移動相B濃度 １から４０％／７５ ｍｉｎとなるように流量０．５ ｍＬ／ｍｉｎで送液し、ＵＶ２１６ ｎｍにおける吸収の変化を調べた（図１７から図２１）。
フラクション番号１８は、特定の鎖長のペプチドはほとんど含まれていなかったが、フラクション番号２５およびフラクション番号３０は５から６種のペプチドが含まれていることがわかった。また、フラクション番号８３については、１種のペプチドからなると予想された。
液体クロマトグラフィー装置にＣ１８カラムＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８―ＡＲ―ＩＩ（４．６×２５０ ｍｍ、ナカライテスク社製）を接続した。
移動相Ａ：５ ｍＭＴＦＡ／水、移動相Ｂ：５ ｍＭＴＦＡ／アセトニトリルでグラジエントは移動相B濃度 １から４０％／７５ ｍｉｎとなるように流量０．５ ｍＬ／ｍｉｎで送液し、ＵＶ２１６ ｎｍにおける吸収の変化を調べた（図１７から図２１）。
フラクション番号１８は、特定の鎖長のペプチドはほとんど含まれていなかったが、フラクション番号２５およびフラクション番号３０は５から６種のペプチドが含まれていることがわかった。また、フラクション番号８３については、１種のペプチドからなると予想された。
【0058】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６を接種・培養して得られた培養物からは、遊離アミノ酸類および可溶性ポリペプチド量が有意に増大したことから、本菌が分泌したｅｘｏ－型ペプチダーゼ類の活性を既報の方法に従って調べた（Ｂｌｉｎｋｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ. Ａ ｎｏｎ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ. Ｂｉｏｃｈｉｍ. Ｂｉｏｐｈｙｓ. Ａｃｔａ. １４８０, １７１１８１ （２０００））。
【0059】
ペプチダーゼの活性測定にはｌｅｕｃｙｌ－ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅを用い、酵素活性は加水分解にともなって遊離するｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ量をＡ４０５における吸光度の増大を測定した。
【0060】
一方、ｅｎｄｏ－型ペプチダーゼの活性測定には、ヘモグロビン（酸性条件）およびカゼイン（中性条件）を用い、酵素活性は加水分解にともなって遊離するｔｙｒｏｓｉｎｅ残基を含むペプチドをフォーリンチオカルト試薬により定量し、ｔｙｒｏｓｉｎｅ換算で生成量を算出した（Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｓｐａｒｔｉｃ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｂｌｅ ｔｏ ｈｙｄｒｏｌｙｚｅ ａｎｄ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚｅ ｈｅｍｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ. ９９, ２０４２－２０４７ （２０１９））。
【0061】
粗酵素液の調製法は、既報の方法を参考にした。
つまり、５ｇ量の培養物（／５０ ｍｌ三角フラスコ）に２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を３０ ｍｌ加え、３時間室温で振とうした。つづいて、ろ紙（アドバンテック社製Ｎｏ．２）をおいたブフナー漏斗にて吸引ろ過し、得られた通過液（粗酵素液）を酵素活性測定に用いた。
つまり、５ｇ量の培養物（／５０ ｍｌ三角フラスコ）に２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を３０ ｍｌ加え、３時間室温で振とうした。つづいて、ろ紙（アドバンテック社製Ｎｏ．２）をおいたブフナー漏斗にて吸引ろ過し、得られた通過液（粗酵素液）を酵素活性測定に用いた。
【0062】
上記の方法で、ｌｅｕｃｙｌ－ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅに対する活性は０．０４３±０．００２ Ｕ／ｍｌ、ヘモグロビンおよびカゼインに対する活性はそれぞれ０．０５０±０．００４ Ｕ／ｍｌおよび０．０８０±０．００４ Ｕ／ｍｌであった。
したがって、これらの基質に対する加水分解活性を示すｅｘｏ―型ペプチダーゼおよびｅｎｄｏ―型ペプチダーゼが鰹肉由来タンパク質の加水分解に関わると考えられる。
したがって、これらの基質に対する加水分解活性を示すｅｘｏ―型ペプチダーゼおよびｅｎｄｏ―型ペプチダーゼが鰹肉由来タンパク質の加水分解に関わると考えられる。
【0063】
つづいて、粗酵素液が鰹肉由来タンパク質の分解に関わるか調べた。
まず、鰹節粉（荒節粉）からの可溶性タンパク質の抽出を以下のように行った。
鰹節粉５ ｇを１００ ｍＬ容ビーカーにとり、５０ ｍＬの０．１Ｍ ＫＣｌ－２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．５） を加え、室温で１時間攪拌後、ブフナー漏斗にて通過液（可溶性タンパク質溶液）を回収した。可溶性タンパク質溶液（５００ ｍｉｃｒｏＬ）に対して酵素液（５０ ｍｉｃｒｏＬ）を添加し、３０℃で反応を行った。分解度は、電気泳動パターンを比較することによった。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用変性 ｂｕｆｆｅｒ（５０ ｍｉｃｒｏＬ）に対して反応溶液（５０ ｍｉｃｒｏＬ）を混合後、１００℃で３分間インキュベートした。 同サンプルから１０ ｍｉｃｒｏＬをＳＤＳ－ＰＡＧＥに供した。電気泳動は、アトー株式会社製ＡＥ―６５３０ラピダス ミニスラブ電気泳動槽、その既製ゲルｅ―ＰＡＧＥＬ Ｅ―Ｔ１２．５ＬおよびＳＤＳ―ＰＡＧＥ用電気泳動バッファーＡＥ―１４１０で行い、ＡＥ―１３４０ ＥｚＳｔａｉｎ Ａｑｕａ タンパク質検出用ＣＢＢ染色溶液にてタンパク質を検出した。
まず、鰹節粉（荒節粉）からの可溶性タンパク質の抽出を以下のように行った。
鰹節粉５ ｇを１００ ｍＬ容ビーカーにとり、５０ ｍＬの０．１Ｍ ＫＣｌ－２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．５） を加え、室温で１時間攪拌後、ブフナー漏斗にて通過液（可溶性タンパク質溶液）を回収した。可溶性タンパク質溶液（５００ ｍｉｃｒｏＬ）に対して酵素液（５０ ｍｉｃｒｏＬ）を添加し、３０℃で反応を行った。分解度は、電気泳動パターンを比較することによった。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用変性 ｂｕｆｆｅｒ（５０ ｍｉｃｒｏＬ）に対して反応溶液（５０ ｍｉｃｒｏＬ）を混合後、１００℃で３分間インキュベートした。 同サンプルから１０ ｍｉｃｒｏＬをＳＤＳ－ＰＡＧＥに供した。電気泳動は、アトー株式会社製ＡＥ―６５３０ラピダス ミニスラブ電気泳動槽、その既製ゲルｅ―ＰＡＧＥＬ Ｅ―Ｔ１２．５ＬおよびＳＤＳ―ＰＡＧＥ用電気泳動バッファーＡＥ―１４１０で行い、ＡＥ―１３４０ ＥｚＳｔａｉｎ Ａｑｕａ タンパク質検出用ＣＢＢ染色溶液にてタンパク質を検出した。
【0064】
上記の方法に従って実施した電気泳動結果を示す（図２２（ａ）および（ｂ））。
粗酵素液を（ａ）２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）または（ｂ）２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）にて透析し、得られたものを鰹肉由来可溶性タンパク質の分解に用いた。その結果、いずれのｐＨで処理した粗酵素液についても同可溶性タンパク質を分解することが電気泳動パターンから明らかとなった。鰹肉由来タンパク質の抽出には、塩を含む０．１Ｍ ＫＣｌ－２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．５）を用いたことから、アクチンやミオシンといった筋原線維タンパク質やミオグロビンやヘモグロビンを含む筋しょうタンパク質（筋形成タンパク質）が抽出されていると予想され、粗酵素液はこれらの鰹肉由来タンパク質を分解できると考えられる。
なお、図２２における参照符号ＢＭは、broad range protein markerを意味し、参照符号ＬＭは、low range prptein markerを意味する。以下の場合も同様である。
粗酵素液を（ａ）２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）または（ｂ）２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）にて透析し、得られたものを鰹肉由来可溶性タンパク質の分解に用いた。その結果、いずれのｐＨで処理した粗酵素液についても同可溶性タンパク質を分解することが電気泳動パターンから明らかとなった。鰹肉由来タンパク質の抽出には、塩を含む０．１Ｍ ＫＣｌ－２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．５）を用いたことから、アクチンやミオシンといった筋原線維タンパク質やミオグロビンやヘモグロビンを含む筋しょうタンパク質（筋形成タンパク質）が抽出されていると予想され、粗酵素液はこれらの鰹肉由来タンパク質を分解できると考えられる。
なお、図２２における参照符号ＢＭは、broad range protein markerを意味し、参照符号ＬＭは、low range prptein markerを意味する。以下の場合も同様である。
【0065】
上記の結果を受け、粗酵素液中に含まれるタンパク質分解酵素の精製とアミノ酸配列同定から同分解酵素を同定することにした。酵素精製は、２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）および２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）の条件で行った。
【0066】
[弱酸性条件下でのタンパク質分解酵素の精製]
酵素精製に用いたクロマトグラフィー用担体はいずれも東ソー社製である。
１）ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラムクロマトグラフィー
粗酵素液を２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）にて透析を行った。
透析後の粗酵素液をフラクション１とする。同緩衝液にて平衡化したＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、食塩濃度を０から０．３ Ｍ ＮａＣｌ-２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）としたリニアグラジエント法（図２３の点線）にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。
各フラクションについてヘモグロビンを基質として酵素活性測定 をしたところ、２つの活性ピークを見出した（図２３）。溶出の順にフラクション５Ｐｒｏ１―２および５Ｐｒｏ２－２とする。
酵素精製に用いたクロマトグラフィー用担体はいずれも東ソー社製である。
１）ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラムクロマトグラフィー
粗酵素液を２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）にて透析を行った。
透析後の粗酵素液をフラクション１とする。同緩衝液にて平衡化したＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、食塩濃度を０から０．３ Ｍ ＮａＣｌ-２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）としたリニアグラジエント法（図２３の点線）にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。
各フラクションについてヘモグロビンを基質として酵素活性測定 をしたところ、２つの活性ピークを見出した（図２３）。溶出の順にフラクション５Ｐｒｏ１―２および５Ｐｒｏ２－２とする。
【0067】
２）Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＧｉｇａＣａｐＱカラムクロマトグラフィー
フラクション５Ｐｒｏ１―２を２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）１リットルに対して１回目は６時間、２回目は１２時間透析した。
前記緩衝液で平衡化したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＧｉｇａＣａｐ Ｑカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、食塩濃度を０から０．５ Ｍ ＮａＣｌ-２０ ｍM 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐH ５．０）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。
各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。これをフラクション５Ｐｒｏ１―３とする。
フラクション５Ｐｒｏ１―２を２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）１リットルに対して１回目は６時間、２回目は１２時間透析した。
前記緩衝液で平衡化したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＧｉｇａＣａｐ Ｑカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、食塩濃度を０から０．５ Ｍ ＮａＣｌ-２０ ｍM 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐH ５．０）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。
各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。これをフラクション５Ｐｒｏ１―３とする。
【0068】
３）Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ―５５Ｆ
フラクション３－１を遠心ろ過で濃縮し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ―５５を充填したカラム（２．５×５０ ｃｍ）により分離した。０．２Ｍ ＮａＣｌ－２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐH ５．０）を用いて流速０．３５ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（３．５ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。これを５Ｐｒｏ１―４とする。
フラクション３－１を遠心ろ過で濃縮し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ―５５を充填したカラム（２．５×５０ ｃｍ）により分離した。０．２Ｍ ＮａＣｌ－２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐH ５．０）を用いて流速０．３５ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（３．５ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。これを５Ｐｒｏ１―４とする。
【0069】
４）Ｂｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラムクロマトグラフィー
５Ｐｒｏ２－２に対して終濃度２Ｍとなるように硫酸アンモニウムを加えた。つづいて、２Ｍ硫酸アンモニウムー２０ ｍM 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）で平衡化したＢｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、硫酸アンモニウム濃度を２Ｍから０Ｍ―２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。これをフラクション５Ｐｒｏ２－５とする。
上記のカラムクロマトグラフィーにてフラクション５Ｐｒｏ１―２および５Ｐｒｏ２－２に含まれていたプロテアーゼ（５Ｐｒｏ１および５Ｐｒｏ２）を単一に精製することができた（図２４）。各精製段階における総活性、総タンパク質量、比活性等をまとめた（表４）。
５Ｐｒｏ２－２に対して終濃度２Ｍとなるように硫酸アンモニウムを加えた。つづいて、２Ｍ硫酸アンモニウムー２０ ｍM 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）で平衡化したＢｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、硫酸アンモニウム濃度を２Ｍから０Ｍ―２０ ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。これをフラクション５Ｐｒｏ２－５とする。
上記のカラムクロマトグラフィーにてフラクション５Ｐｒｏ１―２および５Ｐｒｏ２－２に含まれていたプロテアーゼ（５Ｐｒｏ１および５Ｐｒｏ２）を単一に精製することができた（図２４）。各精製段階における総活性、総タンパク質量、比活性等をまとめた（表４）。
【0070】
【表4】
【0071】
[中性条件下でのタンパク質分解酵素の精製]
１）ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラムクロマトグラフィー
粗酵素液を２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）にて透析を行った。透析後の粗酵素液をフラクション１とする。同緩衝液にて平衡化したＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、食塩濃度を０から０．３ Ｍ ＮａＣｌ-２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。各フラクションについてカゼインを基質として酵素活性測定をし、１つの活性ピークを見出した。これをフラクション２とする。
１）ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラムクロマトグラフィー
粗酵素液を２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）にて透析を行った。透析後の粗酵素液をフラクション１とする。同緩衝液にて平衡化したＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、食塩濃度を０から０．３ Ｍ ＮａＣｌ-２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。各フラクションについてカゼインを基質として酵素活性測定をし、１つの活性ピークを見出した。これをフラクション２とする。
【0072】
２）Ｂｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラムクロマトグラフィー
フラクション２に対して終濃度２Ｍとなるように硫酸アンモニウムを加えた。つづいて、２Ｍ硫酸アンモニウムー２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）で平衡化したＢｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、硫酸アンモニウム濃度を２Ｍから０Ｍ―２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。
各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。各フラクションについてカゼインを基質として酵素活性測定をしたところ、２つの活性ピークを見出した（図２５）。溶出の順にフラクション７Ｐｒｏ３―１および７Ｐｒｏ３－２に含まれていたプロテアーゼ（７Ｐｒｏ１および７Ｐｒｏ２）は単一であった（図２６）。各精製段階における総活性、総タンパク質量、比活性等をまとめた（表５）。
フラクション２に対して終濃度２Ｍとなるように硫酸アンモニウムを加えた。つづいて、２Ｍ硫酸アンモニウムー２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）で平衡化したＢｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（１．５×２０ ｃｍ）に適用し、硫酸アンモニウム濃度を２Ｍから０Ｍ―２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５）としたリニアグラジエント法にて、流速１ ｍｌ／ｍｉｎの流速で、タンパク質を溶出／分画（６ ｍｌ／ｔｕｂｅ）した。
各フラクションのプロテアーゼの活性を測定し、高活性画分を集めた。各フラクションについてカゼインを基質として酵素活性測定をしたところ、２つの活性ピークを見出した（図２５）。溶出の順にフラクション７Ｐｒｏ３―１および７Ｐｒｏ３－２に含まれていたプロテアーゼ（７Ｐｒｏ１および７Ｐｒｏ２）は単一であった（図２６）。各精製段階における総活性、総タンパク質量、比活性等をまとめた（表５）。
【0073】
【表5】
【0074】
精製したプロテアーゼ（５Ｐｒｏ１、５Ｐｒｏ２、７Ｐｒｏ１および７Ｐｒｏ２）について鰹肉由来タンパク質の分解を調べた。
図２７の（ａ）は５Ｐｒｏ１を添加した反応系を示し、図２７の（ｂ）は５Ｐｒｏ２を添加した反応系を示す。
また図２８の（ａ）は７Ｐｒｏ１を添加した反応系を示し、図２８の（ｂ）は７Ｐｒｏ２を添加した反応系を示す。
図２７の（ａ）は５Ｐｒｏ１を添加した反応系を示し、図２７の（ｂ）は５Ｐｒｏ２を添加した反応系を示す。
また図２８の（ａ）は７Ｐｒｏ１を添加した反応系を示し、図２８の（ｂ）は７Ｐｒｏ２を添加した反応系を示す。
【0075】
５Ｐｒｏ１はほとんど分解を示さず（図２７（ａ））、５Ｐｒｏ２、７Ｐｒｏ１および７Ｐｒｏ２において、分解が確認された（図２８（ｂ）、図２２（ａ）および（ｂ））。よって、５Ｐｒｏ１は、５Ｐｒｏ２、７Ｐｒｏ１および７Ｐｒｏ２と協働することで、鰹肉由来タンパク質の分解が進むと考えられる。
【0076】
精製したプロテアーゼ（５Ｐｒｏ１、５Ｐｒｏ２、７Ｐｒｏ１および７Ｐｒｏ２）をＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動に供し、それぞれのバンドを切り出した。それぞれのプロテアーゼのアミノ酸配列の解析は、Ｔａｋａｈａｔａらの方法に従って（Ｔａｋａｈａｔａ ｅｔ ａｌ. Ｃｌｏｓｅ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ｔｏ ｌｉｇａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒｅｍｅ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅ Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＨＢ8. Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １２, １４１４１４３０ （２０１２）.）、トリプシンを用いたゲル内消化によりペプチドを調製し、ＬＣＭＳＭＳ－Ｍａｓｃｏｔ解析によりペプチドの配列を同定した。
【0077】
同定結果とＭＡ０１９６株の遺伝子解析から５Ｐｒｏ２と７Ｐｒｏ１は同一であった。
【0078】
得られた配列情報を参考に、ＭＡ０１９６株のゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡを鋳型として５Ｐｒｏ１（７Ｐｒｏ１）、５Ｐｒｏ２および７Ｐｒｏ２遺伝子のクローニングを行った。ＭＡ０１９６株からのゲノムＤＮＡの抽出と精製、トータルＲＮＡの抽出とｃＤＮＡの調製は、既報の方法に従った（Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｎｚｙｍｅｓ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ. ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ―ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｋａｔｓｕｏｂｕｓｈｉ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏn ａｎｄ ｒｉｐｅｎｉｎｇ. Ｉｎｔ. Ｊ. Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ. ３５３：１０９２９９ （２０２１).）。また、遺伝子クローニングの際のＰＣＲプライマーは表６とした。ＰＣＲは、ＴａＫａＲａ ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＭＡＸ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅを用い、反応液組成や遺伝子断片増幅条件は取扱説明書記載の方法に従った。
【0079】
配列表フリーテキスト
【0080】
【表6】
【0081】
５Ｐｒｏ１、５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ１）および７Ｐｒｏ２の配列は以下である。
【0082】
５Ｐｒｏ１（アミノペプチダーゼ）の塩基およびアミノ酸配列
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
【0083】
配列表フリーテキスト
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionおよびnon-coding regionからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGTGTGGTTCTCGTCGTGCTGGGGTCTCTGGTTCGACCAACGTTCCTGACCGTGAGGTT
M C G S R R A G V S G S T N V P D R E V
70 80 90 100 110 120
CTCCCCACCAACGTTAAGCCAACCCACTATGACTTGACTCTTGAGCCGAACTTTGAGACC
L P T N V K P T H Y D L T L E P N F E T
130 140 150 160 170 180
TTTAAATATGACGGGACTGTCGTTATCGAGtatgtagcactacggacgttctgtggccga
F K Y D G T V V I D
190 200 210 220 230 240
tcccaaatcggatcttgaagctgatagttccgtgtagcTTACAGGTTGTCGAGGACACGA
L Q V V E D T T
250 260 270 280 290 300
CATCCATCTCGCTCAACTCTACTGAAATCAACATCCACACAGCTACCGTGTCCTCTCAAG
S I S L N S T E I N I H T A T V S S Q G
310 320 330 340 350 360
GATCAGTAGTCAGCGCGTCACCTGAGATTTCCCTCAACGATGACAAGCAAGAGGCTACAA
S V V S A S P E I S L N D D K Q E A T I
370 380 390 400 410 420
TCAAGTTTTCGGATGTTATCCGCACCGGAACATCCGCTCAACTTAAGCTGACCTTCACCG
K F S D V I R T G T S A Q L K L T F T G
430 440 450 460 470 480
GTACTCTCAATGACAACATGGCCGGTTTCTACCGCTCATCTTACAAGACGTCGGACGGCG
T L N D N M A G F Y R S S Y K T S D G E
490 500 510 520 530 540
AGACCAAATACATTGCGTCAACTCAAATGGAGCCGACCGATTGCCGGAGAGCTTTCCCTT
T K Y I A S T Q M E P T D C R R A F P C
550 560 570 580 590 600
GCTTCGACGAGCCTGCGCTCAAGGCTAAATTTACTGTCAAACTGATTGCGGACAAGAGCA
F D E P A L K A K F T V K L I A D K S M
610 620 630 640 650 660
TGACTTGTTTGAGCAACATGGACGTTGCATCCGAAGAGGATATTGATGGTGGGAAGAAAA
T C L S N M D V A S E E D I D G G K K I
670 680 690 700 710 720
TTGTCAAGTTCAATGAGTCTCCGGTCATGTCTACCTACCTCGTGGCTTTCATTGTCGGCC
V K F N E S P V M S T Y L V A F I V G H
730 740 750 760 770 780
ACCTGAAGTACATTGAGACCAAGGACTTCCGTGTCCCTATCCGTGTCTATGCTACACCAG
L K Y I E T K D F R V P I R V Y A T P D
790 800 810 820 830 840
ATCAGGACATTGAACATGGCCGTTTCTCCCTGAACTTGGCGGCCAAGACGCTTGCCTTCT
Q D I E H G R F S L N L A A K T L A F Y
850 860 870 880 890 900
ACGAAAAGGCTTTCGATAACGAATTCCCTCTTCCAAAGATGGACATGGTTGCGGTCCCCG
E K A F D N E F P L P K M D M V A V P D
910 920 930 940 950 960
ATTTCAGTGCTGGAGCCATGGAGAACTGGGGTTTGATCACCTACCGTATCGTTGATGTGC
F S A G A M E N W G L I T Y R I V D V L
970 980 990 1000 1010 1020
TCCTGGATGAGAAGACAAGCAGTGCATCGCGGAAGGAGCGCATTGCTGAAACTGTTCAGC
L D E K T S S A S R K E R I A E T V Q H
1030 1040 1050 1060 1070 1080
ACGAGCTTGCCCACCAGTGGTTTGGTAACTTGGTTACCATGGATTTCTGGGACGGTCTAT
E L A H Q W F G N L V T M D F W D G L W
1090 1100 1110 1120 1130 1140
GGCTGAACGAAGGCTTTGCTACTTGGATGTCGTGGTATTCTTGCAACACCTTCTACCCCG
L N E G F A T W M S W Y S C N T F Y P E
1150 1160 1170 1180 1190 1200
AATGGAAGGTCTGGCAAACATATGTCATCGACAACCTGCAAAGTGCGCTCTCCCTCGATT
W K V W Q T Y V I D N L Q S A L S L D S
1210 1220 1230 1240 1250 1260
CTCTCCGCAGCAGTCACCCCATCGAAGTGCCCGTGAAGCGCGCGGACGAGATAAACCAGA
L R S S H P I E V P V K R A D E I N Q I
1270 1280 1290 1300 1310 1320
TATTTGATGCCATCTCCTACTCCAAGGGTTCTTCTGTCCTGCGCATGATCTCAAAGTATC
F D A I S Y S K G S S V L R M I S K Y L
1330 1340 1350 1360 1370 1380
TGGGTGAAGACACCTTCCTGCAGGGCGTTCGTAATTACATTAAGAAGCACGCTTACGGCA
G E D T F L Q G V R N Y I K K H A Y G N
1390 1400 1410 1420 1430 1440
ACACACAAACCGGTGACCTGTGGTCCGCCCTTGCTGGTGCTAGTGGCAAGCCCGTGGAGG
T Q T G D L W S A L A G A S G K P V E E
1450 1460 1470 1480 1490 1500
AGGTCATGGATATCTGGACCAAGAATGTTGGATTCCCAGTCGTCTCTGTGTCGGAAAACC
V M D I W T K N V G F P V V S V S E N P
1510 1520 1530 1540 1550 1560
CAAGCTCCTCATCCATCAAGGTGAAACAGAATCGATTTCTCCGCACAGGCGACGTTCGAC
S S S S I K V K Q N R F L R T G D V R P
1570 1580 1590 1600 1610 1620
CCGAGGAAGACACGACTCTCTTCCCTGTGATGCTTGGATTGCGAACAAAGGAGGGAGTTG
E E D T T L F P V M L G L R T K E G V D
1630 1640 1650 1660 1670 1680
ACGAAAACACCCTGCTGTCATCGCGCGAGGAAGAGTTCAAGGTTCCCGATCTCGATTTTT
E N T L L S S R E E E F K V P D L D F Y
1690 1700 1710 1720 1730 1740
ACAAGCTTAATGCCGATCACACCGCAATTTACCGCACATCCTACACCCCTGAGCGTCTAA
K L N A D H T A I Y R T S Y T P E R L T
1750 1760 1770 1780 1790 1800
CCAAGCTGGGCAACGCTGCCAAGGAGGGTCTGCTTACTGTTGAGGACCGCGCGGGTATGA
K L G N A A K E G L L T V E D R A G M I
1810 1820 1830 1840 1850 1860
TTGCTGATGCTGGTGCACTGGCTGCTTCTGGTTACCAGAAAACGTCTGGTTTGCTATCGC
A D A G A L A A S G Y Q K T S G L L S L
1870 1880 1890 1900 1910 1920
TGCTTGCAGGATTTGATGGCGAGCCCGAATTTATTGTTTGGAACGAGATCTTGACTCGTA
L A G F D G E P E F I V W N E I L T R I
1930 1940 1950 1960 1970 1980
TTGGTGCCCTACGTGCCGCTTGGATATTCGAGGATTCCCAGTCCAAGGACGCACTGGAGG
G A L R A A W I F E D S Q S K D A L E A
1990 2000 2010 2020 2030 2040
CATTCCAGCGTGCCTTGGTCGGCGAGAAAGCGCAGAAACTGGGATGGGAGTTTTCCGACA
F Q R A L V G E K A Q K L G W E F S D K
2050 2060 2070 2080 2090 2100
AGGACGACCATATTCTACAACAATTCAAGGCTCTCTTGTTCAGTGCCGCTGGCAATGCTC
D D H I L Q Q F K A L L F S A A G N A Q
2110 2120 2130 2140 2150 2160
AGGAACCAACTGTAGTCAAGGCCGCCCAGGACATGTTCGAGCGCTTCGCTGCTGGTGATA
E P T V V K A A Q D M F E R F A A G D I
2170 2180 2190 2200 2210 2220
TCAGCGCCATCCACCCTAACATTCGCGGCAGCGTTTTCTCCATCGTCCTGAAAAACGGCG
S A I H P N I R G S V F S I V L K N G G
2230 2240 2250 2260 2270 2280
GTGAAAGGGAGTACAATGTTGTGTATGACCGCTTCCGCAATGCCCCCACCTCTGATGAGA
E R E Y N V V Y D R F R N A P T S D E K
2290 2300 2310 2320 2330 2340
AGACCACGGCTCTCCGCTGCCTTGGTACGGCCGAAGATCCGGCCCTCATCAAACGCACTC
T T A L R C L G T A E D P A L I K R T L
2350 2360 2370 2380 2390 2400
TCGGCTTGGCCCTGGGTGACGAGGTTAAGAACCAGGACATTTACATGCCGCTTGGCGGAC
G L A L G D E V K N Q D I Y M P L G G L
2410 2420 2430 2440 2450 2460
TCCGCACTCATGCCGCCGGTATTGAAGCGCGATGGACCTGGGTGAAGGATAACTGGGACA
R T H A A G I E A R W T W V K D N W D T
2470 2480 2490 2500 2510 2520
CCCTATACCAGCGCCTGCCCCCCGGATTGGGCATGCTCGGAACTGTCCTACAAATCTGCA
L Y Q R L P P G L G M L G T V L Q I C T
2530 2540 2550 2560 2570 2580
CTGCCTCTTTCTGTACGGAGGCGCAGCTGAAGGATGTTGAGGGCTTCTTCGCCAACAAAG
A S F C T E A Q L K D V E G F F A N K D
2590 2600 2610 2620 2630 2640
ATACCAAGgtaagtttcttgttatctgcgtccaggcggcgtataactaacactttcttag
T K
2650 2660 2670 2680 2690 2700
GGCTATGACCGTGCTATTGAGCAAAGCCTCGACGCAATCCGCGCCAAGGTCAGCTGGGTT
G Y D R A I E Q S L D A I R A K V S W V
2710 2720 2730 2740 2750 2760
CACCGTGACCGCGCGGATGTTACAGACTGGTTGAAGTCGAAGGGGTACTTCAAAGAAGGT
H R D R A D V T D W L K S K G Y F K E G
2770
GGCAAGCTTTAA
G K L *
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionおよびnon-coding regionからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGTGTGGTTCTCGTCGTGCTGGGGTCTCTGGTTCGACCAACGTTCCTGACCGTGAGGTT
M C G S R R A G V S G S T N V P D R E V
70 80 90 100 110 120
CTCCCCACCAACGTTAAGCCAACCCACTATGACTTGACTCTTGAGCCGAACTTTGAGACC
L P T N V K P T H Y D L T L E P N F E T
130 140 150 160 170 180
TTTAAATATGACGGGACTGTCGTTATCGAGtatgtagcactacggacgttctgtggccga
F K Y D G T V V I D
190 200 210 220 230 240
tcccaaatcggatcttgaagctgatagttccgtgtagcTTACAGGTTGTCGAGGACACGA
L Q V V E D T T
250 260 270 280 290 300
CATCCATCTCGCTCAACTCTACTGAAATCAACATCCACACAGCTACCGTGTCCTCTCAAG
S I S L N S T E I N I H T A T V S S Q G
310 320 330 340 350 360
GATCAGTAGTCAGCGCGTCACCTGAGATTTCCCTCAACGATGACAAGCAAGAGGCTACAA
S V V S A S P E I S L N D D K Q E A T I
370 380 390 400 410 420
TCAAGTTTTCGGATGTTATCCGCACCGGAACATCCGCTCAACTTAAGCTGACCTTCACCG
K F S D V I R T G T S A Q L K L T F T G
430 440 450 460 470 480
GTACTCTCAATGACAACATGGCCGGTTTCTACCGCTCATCTTACAAGACGTCGGACGGCG
T L N D N M A G F Y R S S Y K T S D G E
490 500 510 520 530 540
AGACCAAATACATTGCGTCAACTCAAATGGAGCCGACCGATTGCCGGAGAGCTTTCCCTT
T K Y I A S T Q M E P T D C R R A F P C
550 560 570 580 590 600
GCTTCGACGAGCCTGCGCTCAAGGCTAAATTTACTGTCAAACTGATTGCGGACAAGAGCA
F D E P A L K A K F T V K L I A D K S M
610 620 630 640 650 660
TGACTTGTTTGAGCAACATGGACGTTGCATCCGAAGAGGATATTGATGGTGGGAAGAAAA
T C L S N M D V A S E E D I D G G K K I
670 680 690 700 710 720
TTGTCAAGTTCAATGAGTCTCCGGTCATGTCTACCTACCTCGTGGCTTTCATTGTCGGCC
V K F N E S P V M S T Y L V A F I V G H
730 740 750 760 770 780
ACCTGAAGTACATTGAGACCAAGGACTTCCGTGTCCCTATCCGTGTCTATGCTACACCAG
L K Y I E T K D F R V P I R V Y A T P D
790 800 810 820 830 840
ATCAGGACATTGAACATGGCCGTTTCTCCCTGAACTTGGCGGCCAAGACGCTTGCCTTCT
Q D I E H G R F S L N L A A K T L A F Y
850 860 870 880 890 900
ACGAAAAGGCTTTCGATAACGAATTCCCTCTTCCAAAGATGGACATGGTTGCGGTCCCCG
E K A F D N E F P L P K M D M V A V P D
910 920 930 940 950 960
ATTTCAGTGCTGGAGCCATGGAGAACTGGGGTTTGATCACCTACCGTATCGTTGATGTGC
F S A G A M E N W G L I T Y R I V D V L
970 980 990 1000 1010 1020
TCCTGGATGAGAAGACAAGCAGTGCATCGCGGAAGGAGCGCATTGCTGAAACTGTTCAGC
L D E K T S S A S R K E R I A E T V Q H
1030 1040 1050 1060 1070 1080
ACGAGCTTGCCCACCAGTGGTTTGGTAACTTGGTTACCATGGATTTCTGGGACGGTCTAT
E L A H Q W F G N L V T M D F W D G L W
1090 1100 1110 1120 1130 1140
GGCTGAACGAAGGCTTTGCTACTTGGATGTCGTGGTATTCTTGCAACACCTTCTACCCCG
L N E G F A T W M S W Y S C N T F Y P E
1150 1160 1170 1180 1190 1200
AATGGAAGGTCTGGCAAACATATGTCATCGACAACCTGCAAAGTGCGCTCTCCCTCGATT
W K V W Q T Y V I D N L Q S A L S L D S
1210 1220 1230 1240 1250 1260
CTCTCCGCAGCAGTCACCCCATCGAAGTGCCCGTGAAGCGCGCGGACGAGATAAACCAGA
L R S S H P I E V P V K R A D E I N Q I
1270 1280 1290 1300 1310 1320
TATTTGATGCCATCTCCTACTCCAAGGGTTCTTCTGTCCTGCGCATGATCTCAAAGTATC
F D A I S Y S K G S S V L R M I S K Y L
1330 1340 1350 1360 1370 1380
TGGGTGAAGACACCTTCCTGCAGGGCGTTCGTAATTACATTAAGAAGCACGCTTACGGCA
G E D T F L Q G V R N Y I K K H A Y G N
1390 1400 1410 1420 1430 1440
ACACACAAACCGGTGACCTGTGGTCCGCCCTTGCTGGTGCTAGTGGCAAGCCCGTGGAGG
T Q T G D L W S A L A G A S G K P V E E
1450 1460 1470 1480 1490 1500
AGGTCATGGATATCTGGACCAAGAATGTTGGATTCCCAGTCGTCTCTGTGTCGGAAAACC
V M D I W T K N V G F P V V S V S E N P
1510 1520 1530 1540 1550 1560
CAAGCTCCTCATCCATCAAGGTGAAACAGAATCGATTTCTCCGCACAGGCGACGTTCGAC
S S S S I K V K Q N R F L R T G D V R P
1570 1580 1590 1600 1610 1620
CCGAGGAAGACACGACTCTCTTCCCTGTGATGCTTGGATTGCGAACAAAGGAGGGAGTTG
E E D T T L F P V M L G L R T K E G V D
1630 1640 1650 1660 1670 1680
ACGAAAACACCCTGCTGTCATCGCGCGAGGAAGAGTTCAAGGTTCCCGATCTCGATTTTT
E N T L L S S R E E E F K V P D L D F Y
1690 1700 1710 1720 1730 1740
ACAAGCTTAATGCCGATCACACCGCAATTTACCGCACATCCTACACCCCTGAGCGTCTAA
K L N A D H T A I Y R T S Y T P E R L T
1750 1760 1770 1780 1790 1800
CCAAGCTGGGCAACGCTGCCAAGGAGGGTCTGCTTACTGTTGAGGACCGCGCGGGTATGA
K L G N A A K E G L L T V E D R A G M I
1810 1820 1830 1840 1850 1860
TTGCTGATGCTGGTGCACTGGCTGCTTCTGGTTACCAGAAAACGTCTGGTTTGCTATCGC
A D A G A L A A S G Y Q K T S G L L S L
1870 1880 1890 1900 1910 1920
TGCTTGCAGGATTTGATGGCGAGCCCGAATTTATTGTTTGGAACGAGATCTTGACTCGTA
L A G F D G E P E F I V W N E I L T R I
1930 1940 1950 1960 1970 1980
TTGGTGCCCTACGTGCCGCTTGGATATTCGAGGATTCCCAGTCCAAGGACGCACTGGAGG
G A L R A A W I F E D S Q S K D A L E A
1990 2000 2010 2020 2030 2040
CATTCCAGCGTGCCTTGGTCGGCGAGAAAGCGCAGAAACTGGGATGGGAGTTTTCCGACA
F Q R A L V G E K A Q K L G W E F S D K
2050 2060 2070 2080 2090 2100
AGGACGACCATATTCTACAACAATTCAAGGCTCTCTTGTTCAGTGCCGCTGGCAATGCTC
D D H I L Q Q F K A L L F S A A G N A Q
2110 2120 2130 2140 2150 2160
AGGAACCAACTGTAGTCAAGGCCGCCCAGGACATGTTCGAGCGCTTCGCTGCTGGTGATA
E P T V V K A A Q D M F E R F A A G D I
2170 2180 2190 2200 2210 2220
TCAGCGCCATCCACCCTAACATTCGCGGCAGCGTTTTCTCCATCGTCCTGAAAAACGGCG
S A I H P N I R G S V F S I V L K N G G
2230 2240 2250 2260 2270 2280
GTGAAAGGGAGTACAATGTTGTGTATGACCGCTTCCGCAATGCCCCCACCTCTGATGAGA
E R E Y N V V Y D R F R N A P T S D E K
2290 2300 2310 2320 2330 2340
AGACCACGGCTCTCCGCTGCCTTGGTACGGCCGAAGATCCGGCCCTCATCAAACGCACTC
T T A L R C L G T A E D P A L I K R T L
2350 2360 2370 2380 2390 2400
TCGGCTTGGCCCTGGGTGACGAGGTTAAGAACCAGGACATTTACATGCCGCTTGGCGGAC
G L A L G D E V K N Q D I Y M P L G G L
2410 2420 2430 2440 2450 2460
TCCGCACTCATGCCGCCGGTATTGAAGCGCGATGGACCTGGGTGAAGGATAACTGGGACA
R T H A A G I E A R W T W V K D N W D T
2470 2480 2490 2500 2510 2520
CCCTATACCAGCGCCTGCCCCCCGGATTGGGCATGCTCGGAACTGTCCTACAAATCTGCA
L Y Q R L P P G L G M L G T V L Q I C T
2530 2540 2550 2560 2570 2580
CTGCCTCTTTCTGTACGGAGGCGCAGCTGAAGGATGTTGAGGGCTTCTTCGCCAACAAAG
A S F C T E A Q L K D V E G F F A N K D
2590 2600 2610 2620 2630 2640
ATACCAAGgtaagtttcttgttatctgcgtccaggcggcgtataactaacactttcttag
T K
2650 2660 2670 2680 2690 2700
GGCTATGACCGTGCTATTGAGCAAAGCCTCGACGCAATCCGCGCCAAGGTCAGCTGGGTT
G Y D R A I E Q S L D A I R A K V S W V
2710 2720 2730 2740 2750 2760
CACCGTGACCGCGCGGATGTTACAGACTGGTTGAAGTCGAAGGGGTACTTCAAAGAAGGT
H R D R A D V T D W L K S K G Y F K E G
2770
GGCAAGCTTTAA
G K L *
【0084】
配列表フリーテキスト
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionからなるDNAのCDS表記＞
ATGTGTGGTTCTCGTCGTGCTGGGGTCTCTGGTTCGACCAACGTTCCTGACCGTGAGGTTCTCCCCACCAACGTTAAGCCAACCCACTATGACTTGACTCTTGAGCCGAACTTTGAGACCTTTAAATATGACGGGACTGTCGTTATCGAGTTACAGGTTGTCGAGGACACGACATCCATCTCGCTCAACTCTACTGAAATCAACATCCACACAGCTACCGTGTCCTCTCAAGGATCAGTAGTCAGCGCGTCACCTGAGATTTCCCTCAACGATGACAAGCAAGAGGCTACAATCAAGTTTTCGGATGTTATCCGCACCGGAACATCCGCTCAACTTAAGCTGACCTTCACCGGTACTCTCAATGACAACATGGCCGGTTTCTACCGCTCATCTTACAAGACGTCGGACGGCGAGACCAAATACATTGCGTCAACTCAAATGGAGCCGACCGATTGCCGGAGAGCTTTCCCTTGCTTCGACGAGCCTGCGCTCAAGGCTAAATTTACTGTCAAACTGATTGCGGACAAGAGCATGACTTGTTTGAGCAACATGGACGTTGCATCCGAAGAGGATATTGATGGTGGGAAGAAAATTGTCAAGTTCAATGAGTCTCCGGTCATGTCTACCTACCTCGTGGCTTTCATTGTCGGCCACCTGAAGTACATTGAGACCAAGGACTTCCGTGTCCCTATCCGTGTCTATGCTACACCAGATCAGGACATTGAACATGGCCGTTTCTCCCTGAACTTGGCGGCCAAGACGCTTGCCTTCTACGAAAAGGCTTTCGATAACGAATTCCCTCTTCCAAAGATGGACATGGTTGCGGTCCCCGATTTCAGTGCTGGAGCCATGGAGAACTGGGGTTTGATCACCTACCGTATCGTTGATGTGCTCCTGGATGAGAAGACAAGCAGTGCATCGCGGAAGGAGCGCATTGCTGAAACTGTTCAGCACGAGCTTGCCCACCAGTGGTTTGGTAACTTGGTTACCATGGATTTCTGGGACGGTCTATGGCTGAACGAAGGCTTTGCTACTTGGATGTCGTGGTATTCTTGCAACACCTTCTACCCCGAATGGAAGGTCTGGCAAACATATGTCATCGACAACCTGCAAAGTGCGCTCTCCCTCGATTCTCTCCGCAGCAGTCACCCCATCGAAGTGCCCGTGAAGCGCGCGGACGAGATAAACCAGATATTTGATGCCATCTCCTACTCCAAGGGTTCTTCTGTCCTGCGCATGATCTCAAAGTATCTGGGTGAAGACACCTTCCTGCAGGGCGTTCGTAATTACATTAAGAAGCACGCTTACGGCAACACACAAACCGGTGACCTGTGGTCCGCCCTTGCTGGTGCTAGTGGCAAGCCCGTGGAGGAGGTCATGGATATCTGGACCAAGAATGTTGGATTCCCAGTCGTCTCTGTGTCGGAAAACCCAAGCTCCTCATCCATCAAGGTGAAACAGAATCGATTTCTCCGCACAGGCGACGTTCGACCCGAGGAAGACACGACTCTCTTCCCTGTGATGCTTGGATTGCGAACAAAGGAGGGAGTTGACGAAAACACCCTGCTGTCATCGCGCGAGGAAGAGTTCAAGGTTCCCGATCTCGATTTTTACAAGCTTAATGCCGATCACACCGCAATTTACCGCACATCCTACACCCCTGAGCGTCTAACCAAGCTGGGCAACGCTGCCAAGGAGGGTCTGCTTACTGTTGAGGACCGCGCGGGTATGATTGCTGATGCTGGTGCACTGGCTGCTTCTGGTTACCAGAAAACGTCTGGTTTGCTATCGCTGCTTGCAGGATTTGATGGCGAGCCCGAATTTATTGTTTGGAACGAGATCTTGACTCGTATTGGTGCCCTACGTGCCGCTTGGATATTCGAGGATTCCCAGTCCAAGGACGCACTGGAGGCATTCCAGCGTGCCTTGGTCGGCGAGAAAGCGCAGAAACTGGGATGGGAGTTTTCCGACAAGGACGACCATATTCTACAACAATTCAAGGCTCTCTTGTTCAGTGCCGCTGGCAATGCTCAGGAACCAACTGTAGTCAAGGCCGCCCAGGACATGTTCGAGCGCTTCGCTGCTGGTGATATCAGCGCCATCCACCCTAACATTCGCGGCAGCGTTTTCTCCATCGTCCTGAAAAACGGCGGTGAAAGGGAGTACAATGTTGTGTATGACCGCTTCCGCAATGCCCCCACCTCTGATGAGAAGACCACGGCTCTCCGCTGCCTTGGTACGGCCGAAGATCCGGCCCTCATCAAACGCACTCTCGGCTTGGCCCTGGGTGACGAGGTTAAGAACCAGGACATTTACATGCCGCTTGGCGGACTCCGCACTCATGCCGCCGGTATTGAAGCGCGATGGACCTGGGTGAAGGATAACTGGGACACCCTATACCAGCGCCTGCCCCCCGGATTGGGCATGCTCGGAACTGTCCTACAAATCTGCACTGCCTCTTTCTGTACGGAGGCGCAGCTGAAGGATGTTGAGGGCTTCTTCGCCAACAAAGATACCAAGGGCTATGACCGTGCTATTGAGCAAAGCCTCGACGCAATCCGCGCCAAGGTCAGCTGGGTTCACCGTGACCGCGCGGATGTTACAGACTGGTTGAAGTCGAAGGGGTACTTCAAAGAAGGTGGCAAGCTTTAA
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionからなるDNAのCDS表記＞
ATGTGTGGTTCTCGTCGTGCTGGGGTCTCTGGTTCGACCAACGTTCCTGACCGTGAGGTTCTCCCCACCAACGTTAAGCCAACCCACTATGACTTGACTCTTGAGCCGAACTTTGAGACCTTTAAATATGACGGGACTGTCGTTATCGAGTTACAGGTTGTCGAGGACACGACATCCATCTCGCTCAACTCTACTGAAATCAACATCCACACAGCTACCGTGTCCTCTCAAGGATCAGTAGTCAGCGCGTCACCTGAGATTTCCCTCAACGATGACAAGCAAGAGGCTACAATCAAGTTTTCGGATGTTATCCGCACCGGAACATCCGCTCAACTTAAGCTGACCTTCACCGGTACTCTCAATGACAACATGGCCGGTTTCTACCGCTCATCTTACAAGACGTCGGACGGCGAGACCAAATACATTGCGTCAACTCAAATGGAGCCGACCGATTGCCGGAGAGCTTTCCCTTGCTTCGACGAGCCTGCGCTCAAGGCTAAATTTACTGTCAAACTGATTGCGGACAAGAGCATGACTTGTTTGAGCAACATGGACGTTGCATCCGAAGAGGATATTGATGGTGGGAAGAAAATTGTCAAGTTCAATGAGTCTCCGGTCATGTCTACCTACCTCGTGGCTTTCATTGTCGGCCACCTGAAGTACATTGAGACCAAGGACTTCCGTGTCCCTATCCGTGTCTATGCTACACCAGATCAGGACATTGAACATGGCCGTTTCTCCCTGAACTTGGCGGCCAAGACGCTTGCCTTCTACGAAAAGGCTTTCGATAACGAATTCCCTCTTCCAAAGATGGACATGGTTGCGGTCCCCGATTTCAGTGCTGGAGCCATGGAGAACTGGGGTTTGATCACCTACCGTATCGTTGATGTGCTCCTGGATGAGAAGACAAGCAGTGCATCGCGGAAGGAGCGCATTGCTGAAACTGTTCAGCACGAGCTTGCCCACCAGTGGTTTGGTAACTTGGTTACCATGGATTTCTGGGACGGTCTATGGCTGAACGAAGGCTTTGCTACTTGGATGTCGTGGTATTCTTGCAACACCTTCTACCCCGAATGGAAGGTCTGGCAAACATATGTCATCGACAACCTGCAAAGTGCGCTCTCCCTCGATTCTCTCCGCAGCAGTCACCCCATCGAAGTGCCCGTGAAGCGCGCGGACGAGATAAACCAGATATTTGATGCCATCTCCTACTCCAAGGGTTCTTCTGTCCTGCGCATGATCTCAAAGTATCTGGGTGAAGACACCTTCCTGCAGGGCGTTCGTAATTACATTAAGAAGCACGCTTACGGCAACACACAAACCGGTGACCTGTGGTCCGCCCTTGCTGGTGCTAGTGGCAAGCCCGTGGAGGAGGTCATGGATATCTGGACCAAGAATGTTGGATTCCCAGTCGTCTCTGTGTCGGAAAACCCAAGCTCCTCATCCATCAAGGTGAAACAGAATCGATTTCTCCGCACAGGCGACGTTCGACCCGAGGAAGACACGACTCTCTTCCCTGTGATGCTTGGATTGCGAACAAAGGAGGGAGTTGACGAAAACACCCTGCTGTCATCGCGCGAGGAAGAGTTCAAGGTTCCCGATCTCGATTTTTACAAGCTTAATGCCGATCACACCGCAATTTACCGCACATCCTACACCCCTGAGCGTCTAACCAAGCTGGGCAACGCTGCCAAGGAGGGTCTGCTTACTGTTGAGGACCGCGCGGGTATGATTGCTGATGCTGGTGCACTGGCTGCTTCTGGTTACCAGAAAACGTCTGGTTTGCTATCGCTGCTTGCAGGATTTGATGGCGAGCCCGAATTTATTGTTTGGAACGAGATCTTGACTCGTATTGGTGCCCTACGTGCCGCTTGGATATTCGAGGATTCCCAGTCCAAGGACGCACTGGAGGCATTCCAGCGTGCCTTGGTCGGCGAGAAAGCGCAGAAACTGGGATGGGAGTTTTCCGACAAGGACGACCATATTCTACAACAATTCAAGGCTCTCTTGTTCAGTGCCGCTGGCAATGCTCAGGAACCAACTGTAGTCAAGGCCGCCCAGGACATGTTCGAGCGCTTCGCTGCTGGTGATATCAGCGCCATCCACCCTAACATTCGCGGCAGCGTTTTCTCCATCGTCCTGAAAAACGGCGGTGAAAGGGAGTACAATGTTGTGTATGACCGCTTCCGCAATGCCCCCACCTCTGATGAGAAGACCACGGCTCTCCGCTGCCTTGGTACGGCCGAAGATCCGGCCCTCATCAAACGCACTCTCGGCTTGGCCCTGGGTGACGAGGTTAAGAACCAGGACATTTACATGCCGCTTGGCGGACTCCGCACTCATGCCGCCGGTATTGAAGCGCGATGGACCTGGGTGAAGGATAACTGGGACACCCTATACCAGCGCCTGCCCCCCGGATTGGGCATGCTCGGAACTGTCCTACAAATCTGCACTGCCTCTTTCTGTACGGAGGCGCAGCTGAAGGATGTTGAGGGCTTCTTCGCCAACAAAGATACCAAGGGCTATGACCGTGCTATTGAGCAAAGCCTCGACGCAATCCGCGCCAAGGTCAGCTGGGTTCACCGTGACCGCGCGGATGTTACAGACTGGTTGAAGTCGAAGGGGTACTTCAAAGAAGGTGGCAAGCTTTAA
【0085】
配列表フリーテキスト
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionからなるアミノ酸配列のCDS表記＞
MCGSRRAGVSGSTNVPDREVLPTNVKPTHYDLTLEPNFETFKYDGTVVIDLQVVEDTTSISLNSTEINIHTATVSSQGSVVSASPEISLNDDKQEATIKFSDVIRTGTSAQLKLTFTGTLNDNMAGFYRSSYKTSDGETKYIASTQMEPTDCRRAFPCFDEPALKAKFTVKLIADKSMTCLSNMDVASEEDIDGGKKIVKFNESPVMSTYLVAFIVGHLKYIETKDFRVPIRVYATPDQDIEHGRFSLNLAAKTLAFYEKAFDNEFPLPKMDMVAVPDFSAGAMENWGLITYRIVDVLLDEKTSSASRKERIAETVQHELAHQWFGNLVTMDFWDGLWLNEGFATWMSWYSCNTFYPEWKVWQTYVIDNLQSALSLDSLRSSHPIEVPVKRADEINQIFDAISYSKGSSVLRMISKYLGEDTFLQGVRNYIKKHAYGNTQTGDLWSALAGASGKPVEEVMDIWTKNVGFPVVSVSENPSSSSIKVKQNRFLRTGDVRPEEDTTLFPVMLGLRTKEGVDENTLLSSREEEFKVPDLDFYKLNADHTAIYRTSYTPERLTKLGNAAKEGLLTVEDRAGMIADAGALAASGYQKTSGLLSLLAGFDGEPEFIVWNEILTRIGALRAAWIFEDSQSKDALEAFQRALVGEKAQKLGWEFSDKDDHILQQFKALLFSAAGNAQEPTVVKAAQDMFERFAAGDISAIHPNIRGSVFSIVLKNGGEREYNVVYDRFRNAPTSDEKTTALRCLGTAEDPALIKRTLGLALGDEVKNQDIYMPLGGLRTHAAGIEARWTWVKDNWDTLYQRLPPGLGMLGTVLQICTASFCTEAQLKDVEGFFANKDTKGYDRAIEQSLDAIRAKVSWVHRDRADVTDWLKSKGYFKEGGKL*
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionからなるアミノ酸配列のCDS表記＞
MCGSRRAGVSGSTNVPDREVLPTNVKPTHYDLTLEPNFETFKYDGTVVIDLQVVEDTTSISLNSTEINIHTATVSSQGSVVSASPEISLNDDKQEATIKFSDVIRTGTSAQLKLTFTGTLNDNMAGFYRSSYKTSDGETKYIASTQMEPTDCRRAFPCFDEPALKAKFTVKLIADKSMTCLSNMDVASEEDIDGGKKIVKFNESPVMSTYLVAFIVGHLKYIETKDFRVPIRVYATPDQDIEHGRFSLNLAAKTLAFYEKAFDNEFPLPKMDMVAVPDFSAGAMENWGLITYRIVDVLLDEKTSSASRKERIAETVQHELAHQWFGNLVTMDFWDGLWLNEGFATWMSWYSCNTFYPEWKVWQTYVIDNLQSALSLDSLRSSHPIEVPVKRADEINQIFDAISYSKGSSVLRMISKYLGEDTFLQGVRNYIKKHAYGNTQTGDLWSALAGASGKPVEEVMDIWTKNVGFPVVSVSENPSSSSIKVKQNRFLRTGDVRPEEDTTLFPVMLGLRTKEGVDENTLLSSREEEFKVPDLDFYKLNADHTAIYRTSYTPERLTKLGNAAKEGLLTVEDRAGMIADAGALAASGYQKTSGLLSLLAGFDGEPEFIVWNEILTRIGALRAAWIFEDSQSKDALEAFQRALVGEKAQKLGWEFSDKDDHILQQFKALLFSAAGNAQEPTVVKAAQDMFERFAAGDISAIHPNIRGSVFSIVLKNGGEREYNVVYDRFRNAPTSDEKTTALRCLGTAEDPALIKRTLGLALGDEVKNQDIYMPLGGLRTHAAGIEARWTWVKDNWDTLYQRLPPGLGMLGTVLQICTASFCTEAQLKDVEGFFANKDTKGYDRAIEQSLDAIRAKVSWVHRDRADVTDWLKSKGYFKEGGKL*
【0086】
配列表フリーテキスト
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionのみからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGTGTGGTTCTCGTCGTGCTGGGGTCTCTGGTTCGACCAACGTTCCTGACCGTGAGGTT
M C G S R R A G V S G S T N V P D R E V
70 80 90 100 110 120
CTCCCCACCAACGTTAAGCCAACCCACTATGACTTGACTCTTGAGCCGAACTTTGAGACC
L P T N V K P T H Y D L T L E P N F E T
130 140 150 160 170 180
TTTAAATATGACGGGACTGTCGTTATCGAGTTACAGGTTGTCGAGGACACGACATCCATC
F K Y D G T V V I E L Q V V E D T T S I
190 200 210 220 230 240
TCGCTCAACTCTACTGAAATCAACATCCACACAGCTACCGTGTCCTCTCAAGGATCAGTA
S L N S T E I N I H T A T V S S Q G S V
250 260 270 280 290 300
GTCAGCGCGTCACCTGAGATTTCCCTCAACGATGACAAGCAAGAGGCTACAATCAAGTTT
V S A S P E I S L N D D K Q E A T I K F
310 320 330 340 350 360
TCGGATGTTATCCGCACCGGAACATCCGCTCAACTTAAGCTGACCTTCACCGGTACTCTC
S D V I R T G T S A Q L K L T F T G T L
370 380 390 400 410 420
AATGACAACATGGCCGGTTTCTACCGCTCATCTTACAAGACGTCGGACGGCGAGACCAAA
N D N M A G F Y R S S Y K T S D G E T K
430 440 450 460 470 480
TACATTGCGTCAACTCAAATGGAGCCGACCGATTGCCGGAGAGCTTTCCCTTGCTTCGAC
Y I A S T Q M E P T D C R R A F P C F D
490 500 510 520 530 540
GAGCCTGCGCTCAAGGCTAAATTTACTGTCAAACTGATTGCGGACAAGAGCATGACTTGT
E P A L K A K F T V K L I A D K S M T C
550 560 570 580 590 600
TTGAGCAACATGGACGTTGCATCCGAAGAGGATATTGATGGTGGGAAGAAAATTGTCAAG
L S N M D V A S E E D I D G G K K I V K
610 620 630 640 650 660
TTCAATGAGTCTCCGGTCATGTCTACCTACCTCGTGGCTTTCATTGTCGGCCACCTGAAG
F N E S P V M S T Y L V A F I V G H L K
670 680 690 700 710 720
TACATTGAGACCAAGGACTTCCGTGTCCCTATCCGTGTCTATGCTACACCAGATCAGGAC
Y I E T K D F R V P I R V Y A T P D Q D
730 740 750 760 770 780
ATTGAACATGGCCGTTTCTCCCTGAACTTGGCGGCCAAGACGCTTGCCTTCTACGAAAAG
I E H G R F S L N L A A K T L A F Y E K
790 800 810 820 830 840
GCTTTCGATAACGAATTCCCTCTTCCAAAGATGGACATGGTTGCGGTCCCCGATTTCAGT
A F D N E F P L P K M D M V A V P D F S
850 860 870 880 890 900
GCTGGAGCCATGGAGAACTGGGGTTTGATCACCTACCGTATCGTTGATGTGCTCCTGGAT
A G A M E N W G L I T Y R I V D V L L D
910 920 930 940 950 960
GAGAAGACAAGCAGTGCATCGCGGAAGGAGCGCATTGCTGAAACTGTTCAGCACGAGCTT
E K T S S A S R K E R I A E T V Q H E L
970 980 990 1000 1010 1020
GCCCACCAGTGGTTTGGTAACTTGGTTACCATGGATTTCTGGGACGGTCTATGGCTGAAC
A H Q W F G N L V T M D F W D G L W L N
1030 1040 1050 1060 1070 1080
GAAGGCTTTGCTACTTGGATGTCGTGGTATTCTTGCAACACCTTCTACCCCGAATGGAAG
E G F A T W M S W Y S C N T F Y P E W K
1090 1100 1110 1120 1130 1140
GTCTGGCAAACATATGTCATCGACAACCTGCAAAGTGCGCTCTCCCTCGATTCTCTCCGC
V W Q T Y V I D N L Q S A L S L D S L R
1150 1160 1170 1180 1190 1200
AGCAGTCACCCCATCGAAGTGCCCGTGAAGCGCGCGGACGAGATAAACCAGATATTTGAT
S S H P I E V P V K R A D E I N Q I F D
1210 1220 1230 1240 1250 1260
GCCATCTCCTACTCCAAGGGTTCTTCTGTCCTGCGCATGATCTCAAAGTATCTGGGTGAA
A I S Y S K G S S V L R M I S K Y L G E
1270 1280 1290 1300 1310 1320
GACACCTTCCTGCAGGGCGTTCGTAATTACATTAAGAAGCACGCTTACGGCAACACACAA
D T F L Q G V R N Y I K K H A Y G N T Q
1330 1340 1350 1360 1370 1380
ACCGGTGACCTGTGGTCCGCCCTTGCTGGTGCTAGTGGCAAGCCCGTGGAGGAGGTCATG
T G D L W S A L A G A S G K P V E E V M
1390 1400 1410 1420 1430 1440
GATATCTGGACCAAGAATGTTGGATTCCCAGTCGTCTCTGTGTCGGAAAACCCAAGCTCC
D I W T K N V G F P V V S V S E N P S S
1450 1460 1470 1480 1490 1500
TCATCCATCAAGGTGAAACAGAATCGATTTCTCCGCACAGGCGACGTTCGACCCGAGGAA
S S I K V K Q N R F L R T G D V R P E E
1510 1520 1530 1540 1550 1560
GACACGACTCTCTTCCCTGTGATGCTTGGATTGCGAACAAAGGAGGGAGTTGACGAAAAC
D T T L F P V M L G L R T K E G V D E N
1570 1580 1590 1600 1610 1620
ACCCTGCTGTCATCGCGCGAGGAAGAGTTCAAGGTTCCCGATCTCGATTTTTACAAGCTT
T L L S S R E E E F K V P D L D F Y K L
1630 1640 1650 1660 1670 1680
AATGCCGATCACACCGCAATTTACCGCACATCCTACACCCCTGAGCGTCTAACCAAGCTG
N A D H T A I Y R T S Y T P E R L T K L
1690 1700 1710 1720 1730 1740
GGCAACGCTGCCAAGGAGGGTCTGCTTACTGTTGAGGACCGCGCGGGTATGATTGCTGAT
G N A A K E G L L T V E D R A G M I A D
1750 1760 1770 1780 1790 1800
GCTGGTGCACTGGCTGCTTCTGGTTACCAGAAAACGTCTGGTTTGCTATCGCTGCTTGCA
A G A L A A S G Y Q K T S G L L S L L A
1810 1820 1830 1840 1850 1860
GGATTTGATGGCGAGCCCGAATTTATTGTTTGGAACGAGATCTTGACTCGTATTGGTGCC
G F D G E P E F I V W N E I L T R I G A
1870 1880 1890 1900 1910 1920
CTACGTGCCGCTTGGATATTCGAGGATTCCCAGTCCAAGGACGCACTGGAGGCATTCCAG
L R A A W I F E D S Q S K D A L E A F Q
1930 1940 1950 1960 1970 1980
CGTGCCTTGGTCGGCGAGAAAGCGCAGAAACTGGGATGGGAGTTTTCCGACAAGGACGAC
R A L V G E K A Q K L G W E F S D K D D
1990 2000 2010 2020 2030 2040
CATATTCTACAACAATTCAAGGCTCTCTTGTTCAGTGCCGCTGGCAATGCTCAGGAACCA
H I L Q Q F K A L L F S A A G N A Q E P
2050 2060 2070 2080 2090 2100
ACTGTAGTCAAGGCCGCCCAGGACATGTTCGAGCGCTTCGCTGCTGGTGATATCAGCGCC
T V V K A A Q D M F E R F A A G D I S A
2110 2120 2130 2140 2150 2160
ATCCACCCTAACATTCGCGGCAGCGTTTTCTCCATCGTCCTGAAAAACGGCGGTGAAAGG
I H P N I R G S V F S I V L K N G G E R
2170 2180 2190 2200 2210 2220
GAGTACAATGTTGTGTATGACCGCTTCCGCAATGCCCCCACCTCTGATGAGAAGACCACG
E Y N V V Y D R F R N A P T S D E K T T
2230 2240 2250 2260 2270 2280
GCTCTCCGCTGCCTTGGTACGGCCGAAGATCCGGCCCTCATCAAACGCACTCTCGGCTTG
A L R C L G T A E D P A L I K R T L G L
2290 2300 2310 2320 2330 2340
GCCCTGGGTGACGAGGTTAAGAACCAGGACATTTACATGCCGCTTGGCGGACTCCGCACT
A L G D E V K N Q D I Y M P L G G L R T
2350 2360 2370 2380 2390 2400
CATGCCGCCGGTATTGAAGCGCGATGGACCTGGGTGAAGGATAACTGGGACACCCTATAC
H A A G I E A R W T W V K D N W D T L Y
2410 2420 2430 2440 2450 2460
CAGCGCCTGCCCCCCGGATTGGGCATGCTCGGAACTGTCCTACAAATCTGCACTGCCTCT
Q R L P P G L G M L G T V L Q I C T A S
2470 2480 2490 2500 2510 2520
TTCTGTACGGAGGCGCAGCTGAAGGATGTTGAGGGCTTCTTCGCCAACAAAGATACCAAG
F C T E A Q L K D V E G F F A N K D T K
2530 2540 2550 2560 2570 2580
GGCTATGACCGTGCTATTGAGCAAAGCCTCGACGCAATCCGCGCCAAGGTCAGCTGGGTT
G Y D R A I E Q S L D A I R A K V S W V
2590 2600 2610 2620 2630 2640
CACCGTGACCGCGCGGATGTTACAGACTGGTTGAAGTCGAAGGGGTACTTCAAAGAAGGT
H R D R A D V T D W L K S K G Y F K E G
2650
GGCAAGCTTTAA
G K L *
5Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196
＜Coding regionのみからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGTGTGGTTCTCGTCGTGCTGGGGTCTCTGGTTCGACCAACGTTCCTGACCGTGAGGTT
M C G S R R A G V S G S T N V P D R E V
70 80 90 100 110 120
CTCCCCACCAACGTTAAGCCAACCCACTATGACTTGACTCTTGAGCCGAACTTTGAGACC
L P T N V K P T H Y D L T L E P N F E T
130 140 150 160 170 180
TTTAAATATGACGGGACTGTCGTTATCGAGTTACAGGTTGTCGAGGACACGACATCCATC
F K Y D G T V V I E L Q V V E D T T S I
190 200 210 220 230 240
TCGCTCAACTCTACTGAAATCAACATCCACACAGCTACCGTGTCCTCTCAAGGATCAGTA
S L N S T E I N I H T A T V S S Q G S V
250 260 270 280 290 300
GTCAGCGCGTCACCTGAGATTTCCCTCAACGATGACAAGCAAGAGGCTACAATCAAGTTT
V S A S P E I S L N D D K Q E A T I K F
310 320 330 340 350 360
TCGGATGTTATCCGCACCGGAACATCCGCTCAACTTAAGCTGACCTTCACCGGTACTCTC
S D V I R T G T S A Q L K L T F T G T L
370 380 390 400 410 420
AATGACAACATGGCCGGTTTCTACCGCTCATCTTACAAGACGTCGGACGGCGAGACCAAA
N D N M A G F Y R S S Y K T S D G E T K
430 440 450 460 470 480
TACATTGCGTCAACTCAAATGGAGCCGACCGATTGCCGGAGAGCTTTCCCTTGCTTCGAC
Y I A S T Q M E P T D C R R A F P C F D
490 500 510 520 530 540
GAGCCTGCGCTCAAGGCTAAATTTACTGTCAAACTGATTGCGGACAAGAGCATGACTTGT
E P A L K A K F T V K L I A D K S M T C
550 560 570 580 590 600
TTGAGCAACATGGACGTTGCATCCGAAGAGGATATTGATGGTGGGAAGAAAATTGTCAAG
L S N M D V A S E E D I D G G K K I V K
610 620 630 640 650 660
TTCAATGAGTCTCCGGTCATGTCTACCTACCTCGTGGCTTTCATTGTCGGCCACCTGAAG
F N E S P V M S T Y L V A F I V G H L K
670 680 690 700 710 720
TACATTGAGACCAAGGACTTCCGTGTCCCTATCCGTGTCTATGCTACACCAGATCAGGAC
Y I E T K D F R V P I R V Y A T P D Q D
730 740 750 760 770 780
ATTGAACATGGCCGTTTCTCCCTGAACTTGGCGGCCAAGACGCTTGCCTTCTACGAAAAG
I E H G R F S L N L A A K T L A F Y E K
790 800 810 820 830 840
GCTTTCGATAACGAATTCCCTCTTCCAAAGATGGACATGGTTGCGGTCCCCGATTTCAGT
A F D N E F P L P K M D M V A V P D F S
850 860 870 880 890 900
GCTGGAGCCATGGAGAACTGGGGTTTGATCACCTACCGTATCGTTGATGTGCTCCTGGAT
A G A M E N W G L I T Y R I V D V L L D
910 920 930 940 950 960
GAGAAGACAAGCAGTGCATCGCGGAAGGAGCGCATTGCTGAAACTGTTCAGCACGAGCTT
E K T S S A S R K E R I A E T V Q H E L
970 980 990 1000 1010 1020
GCCCACCAGTGGTTTGGTAACTTGGTTACCATGGATTTCTGGGACGGTCTATGGCTGAAC
A H Q W F G N L V T M D F W D G L W L N
1030 1040 1050 1060 1070 1080
GAAGGCTTTGCTACTTGGATGTCGTGGTATTCTTGCAACACCTTCTACCCCGAATGGAAG
E G F A T W M S W Y S C N T F Y P E W K
1090 1100 1110 1120 1130 1140
GTCTGGCAAACATATGTCATCGACAACCTGCAAAGTGCGCTCTCCCTCGATTCTCTCCGC
V W Q T Y V I D N L Q S A L S L D S L R
1150 1160 1170 1180 1190 1200
AGCAGTCACCCCATCGAAGTGCCCGTGAAGCGCGCGGACGAGATAAACCAGATATTTGAT
S S H P I E V P V K R A D E I N Q I F D
1210 1220 1230 1240 1250 1260
GCCATCTCCTACTCCAAGGGTTCTTCTGTCCTGCGCATGATCTCAAAGTATCTGGGTGAA
A I S Y S K G S S V L R M I S K Y L G E
1270 1280 1290 1300 1310 1320
GACACCTTCCTGCAGGGCGTTCGTAATTACATTAAGAAGCACGCTTACGGCAACACACAA
D T F L Q G V R N Y I K K H A Y G N T Q
1330 1340 1350 1360 1370 1380
ACCGGTGACCTGTGGTCCGCCCTTGCTGGTGCTAGTGGCAAGCCCGTGGAGGAGGTCATG
T G D L W S A L A G A S G K P V E E V M
1390 1400 1410 1420 1430 1440
GATATCTGGACCAAGAATGTTGGATTCCCAGTCGTCTCTGTGTCGGAAAACCCAAGCTCC
D I W T K N V G F P V V S V S E N P S S
1450 1460 1470 1480 1490 1500
TCATCCATCAAGGTGAAACAGAATCGATTTCTCCGCACAGGCGACGTTCGACCCGAGGAA
S S I K V K Q N R F L R T G D V R P E E
1510 1520 1530 1540 1550 1560
GACACGACTCTCTTCCCTGTGATGCTTGGATTGCGAACAAAGGAGGGAGTTGACGAAAAC
D T T L F P V M L G L R T K E G V D E N
1570 1580 1590 1600 1610 1620
ACCCTGCTGTCATCGCGCGAGGAAGAGTTCAAGGTTCCCGATCTCGATTTTTACAAGCTT
T L L S S R E E E F K V P D L D F Y K L
1630 1640 1650 1660 1670 1680
AATGCCGATCACACCGCAATTTACCGCACATCCTACACCCCTGAGCGTCTAACCAAGCTG
N A D H T A I Y R T S Y T P E R L T K L
1690 1700 1710 1720 1730 1740
GGCAACGCTGCCAAGGAGGGTCTGCTTACTGTTGAGGACCGCGCGGGTATGATTGCTGAT
G N A A K E G L L T V E D R A G M I A D
1750 1760 1770 1780 1790 1800
GCTGGTGCACTGGCTGCTTCTGGTTACCAGAAAACGTCTGGTTTGCTATCGCTGCTTGCA
A G A L A A S G Y Q K T S G L L S L L A
1810 1820 1830 1840 1850 1860
GGATTTGATGGCGAGCCCGAATTTATTGTTTGGAACGAGATCTTGACTCGTATTGGTGCC
G F D G E P E F I V W N E I L T R I G A
1870 1880 1890 1900 1910 1920
CTACGTGCCGCTTGGATATTCGAGGATTCCCAGTCCAAGGACGCACTGGAGGCATTCCAG
L R A A W I F E D S Q S K D A L E A F Q
1930 1940 1950 1960 1970 1980
CGTGCCTTGGTCGGCGAGAAAGCGCAGAAACTGGGATGGGAGTTTTCCGACAAGGACGAC
R A L V G E K A Q K L G W E F S D K D D
1990 2000 2010 2020 2030 2040
CATATTCTACAACAATTCAAGGCTCTCTTGTTCAGTGCCGCTGGCAATGCTCAGGAACCA
H I L Q Q F K A L L F S A A G N A Q E P
2050 2060 2070 2080 2090 2100
ACTGTAGTCAAGGCCGCCCAGGACATGTTCGAGCGCTTCGCTGCTGGTGATATCAGCGCC
T V V K A A Q D M F E R F A A G D I S A
2110 2120 2130 2140 2150 2160
ATCCACCCTAACATTCGCGGCAGCGTTTTCTCCATCGTCCTGAAAAACGGCGGTGAAAGG
I H P N I R G S V F S I V L K N G G E R
2170 2180 2190 2200 2210 2220
GAGTACAATGTTGTGTATGACCGCTTCCGCAATGCCCCCACCTCTGATGAGAAGACCACG
E Y N V V Y D R F R N A P T S D E K T T
2230 2240 2250 2260 2270 2280
GCTCTCCGCTGCCTTGGTACGGCCGAAGATCCGGCCCTCATCAAACGCACTCTCGGCTTG
A L R C L G T A E D P A L I K R T L G L
2290 2300 2310 2320 2330 2340
GCCCTGGGTGACGAGGTTAAGAACCAGGACATTTACATGCCGCTTGGCGGACTCCGCACT
A L G D E V K N Q D I Y M P L G G L R T
2350 2360 2370 2380 2390 2400
CATGCCGCCGGTATTGAAGCGCGATGGACCTGGGTGAAGGATAACTGGGACACCCTATAC
H A A G I E A R W T W V K D N W D T L Y
2410 2420 2430 2440 2450 2460
CAGCGCCTGCCCCCCGGATTGGGCATGCTCGGAACTGTCCTACAAATCTGCACTGCCTCT
Q R L P P G L G M L G T V L Q I C T A S
2470 2480 2490 2500 2510 2520
TTCTGTACGGAGGCGCAGCTGAAGGATGTTGAGGGCTTCTTCGCCAACAAAGATACCAAG
F C T E A Q L K D V E G F F A N K D T K
2530 2540 2550 2560 2570 2580
GGCTATGACCGTGCTATTGAGCAAAGCCTCGACGCAATCCGCGCCAAGGTCAGCTGGGTT
G Y D R A I E Q S L D A I R A K V S W V
2590 2600 2610 2620 2630 2640
CACCGTGACCGCGCGGATGTTACAGACTGGTTGAAGTCGAAGGGGTACTTCAAAGAAGGT
H R D R A D V T D W L K S K G Y F K E G
2650
GGCAAGCTTTAA
G K L *
【0087】
５Ｐｒｏ１の塩基配列から推定されるアミノ酸配列についてＰｒｏｔｅｉｎ ＢＬＡＳＴにより相動性検索した結果、基質特異性試験からａｒｇｉｎｉｎｅ／ａｌａｎｉｎｅ／ｌｅｕｃｉｎｅ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｔａｌｌｏ―ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅと分類されているＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ由来アミノペプチダーゼ（アクセッション番号、ＥＡＫ９１１４３）と５５％のｉｄｅｎｔｉｔｙがあった。
よって、５Ｐｒｏ１は、ｅｘｏ―型ペプチダーゼに分類され、鰹肉由来タンパク質を末端から加水分解すると予想され、前述のように５Ｐｒｏ１単独では同タンパク質の分解を進めることができないが、５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ１）や７Ｐｒｏ２が断片化したペプチドをさらにアミノ酸や短鎖のペプチドにまで分解することで、培養物の呈味性や生理活性性に寄与すると思われる。
よって、５Ｐｒｏ１は、ｅｘｏ―型ペプチダーゼに分類され、鰹肉由来タンパク質を末端から加水分解すると予想され、前述のように５Ｐｒｏ１単独では同タンパク質の分解を進めることができないが、５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ１）や７Ｐｒｏ２が断片化したペプチドをさらにアミノ酸や短鎖のペプチドにまで分解することで、培養物の呈味性や生理活性性に寄与すると思われる。
【0088】
配列表フリーテキスト
５Ｐｒｏ２／７Ｐｒｏ１（セリンプロテアーゼ）の塩基／アミノ酸配列
5Pro_2/7Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196 (Trypsin-like serine protease)
＜Coding regionのみからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGAAGACCACCCTCGCCTTCCTCTCCGTCCTCTCCAGCGTCCTCGCCAAGGAGAACATC
M K T T L A F L S V L S S V L A K E N I
70 80 90 100 110 120
GTCGGCGGCTCCGAGGCCTCCATCGAGGAGTTCCCCTACCAGATCGGCCTGCTGCAGGGC
V G G S E A S I E E F P Y Q I G L L Q G
130 140 150 160 170 180
GGCTCGCTCATCTGCGGTGGCAGCATCATCGACAACAAGTACATTGTCACCGCCGGCCAC
G S L I C G G S I I D N K Y I V T A G H
190 200 210 220 230 240
TGCGCCGAGGGCCAGTCCGCCAGCGACCTCAGCATCCGCGCCGGCTCCGACTCCTCGTCC
C A E G Q S A S D L S I R A G S D S S S
250 260 270 280 290 300
TCCGGCGGCACCACCGTGGGCGTCTCCTCCATCGCCGTCCACCCGGACTACGACGCCCAG
S G G T T V G V S S I A V H P D Y D A Q
310 320 330 340 350 360
ACCGTCAACAACGACATTGCCATTCTCACCCTCGACCAGGACCTCAAGTACGGCCCCGGC
T V N N D I A I L T L D Q D L K Y G P G
370 380 390 400 410 420
ATCGAGGCCGTCAAGCTCCCTGCCAAGAACGCCTCGCTCCCCTCCGCCGGCACCGTCGGC
I E A V K L P A K N A S L P S A G T V G
430 440 450 460 470 480
ACCATCACCGGCTGGGGCGCCCTCCAGGAGGGCGGCAACGTCTCGCCCACCCTGCAGTCC
T I T G W G A L Q E G G N V S P T L Q S
490 500 510 520 530 540
GTCGAGGTCCCTGTTGTCGACAAGAAGACCTGTGCCCAGGACTACCAGGGCTTCAACGAG
V E V P V V D K K T C A Q D Y Q G F N E
550 560 570 580 590 600
ATCACCGCGAGCATGCTGTGCGCTGGTGAGGAGGAGGGTGGCAAGGACGGCTGCCAGGGT
I T A S M L C A G E E E G G K D G C Q G
610 620 630 640 650 660
GACTCCGGTGGTCCCTTCGTCTCCAACGGTGTCCTTATTGGTATCACCTCCTGGGGCAAT
D S G G P F V S N G V L I G I T S W G N
670 680 690 700 710 720
GGCTGTGCGCGCGCTGGATACCCCGGTGTCTACTCGAGCCCGGCTTACTTCCGTGACTTT
G C A R A G Y P G V Y S S P A Y F R D F
730 740
ATCGAGTCGGTGACTGGTATTTAA
I E S V T G I *
５Ｐｒｏ２／７Ｐｒｏ１（セリンプロテアーゼ）の塩基／アミノ酸配列
5Pro_2/7Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196 (Trypsin-like serine protease)
＜Coding regionのみからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGAAGACCACCCTCGCCTTCCTCTCCGTCCTCTCCAGCGTCCTCGCCAAGGAGAACATC
M K T T L A F L S V L S S V L A K E N I
70 80 90 100 110 120
GTCGGCGGCTCCGAGGCCTCCATCGAGGAGTTCCCCTACCAGATCGGCCTGCTGCAGGGC
V G G S E A S I E E F P Y Q I G L L Q G
130 140 150 160 170 180
GGCTCGCTCATCTGCGGTGGCAGCATCATCGACAACAAGTACATTGTCACCGCCGGCCAC
G S L I C G G S I I D N K Y I V T A G H
190 200 210 220 230 240
TGCGCCGAGGGCCAGTCCGCCAGCGACCTCAGCATCCGCGCCGGCTCCGACTCCTCGTCC
C A E G Q S A S D L S I R A G S D S S S
250 260 270 280 290 300
TCCGGCGGCACCACCGTGGGCGTCTCCTCCATCGCCGTCCACCCGGACTACGACGCCCAG
S G G T T V G V S S I A V H P D Y D A Q
310 320 330 340 350 360
ACCGTCAACAACGACATTGCCATTCTCACCCTCGACCAGGACCTCAAGTACGGCCCCGGC
T V N N D I A I L T L D Q D L K Y G P G
370 380 390 400 410 420
ATCGAGGCCGTCAAGCTCCCTGCCAAGAACGCCTCGCTCCCCTCCGCCGGCACCGTCGGC
I E A V K L P A K N A S L P S A G T V G
430 440 450 460 470 480
ACCATCACCGGCTGGGGCGCCCTCCAGGAGGGCGGCAACGTCTCGCCCACCCTGCAGTCC
T I T G W G A L Q E G G N V S P T L Q S
490 500 510 520 530 540
GTCGAGGTCCCTGTTGTCGACAAGAAGACCTGTGCCCAGGACTACCAGGGCTTCAACGAG
V E V P V V D K K T C A Q D Y Q G F N E
550 560 570 580 590 600
ATCACCGCGAGCATGCTGTGCGCTGGTGAGGAGGAGGGTGGCAAGGACGGCTGCCAGGGT
I T A S M L C A G E E E G G K D G C Q G
610 620 630 640 650 660
GACTCCGGTGGTCCCTTCGTCTCCAACGGTGTCCTTATTGGTATCACCTCCTGGGGCAAT
D S G G P F V S N G V L I G I T S W G N
670 680 690 700 710 720
GGCTGTGCGCGCGCTGGATACCCCGGTGTCTACTCGAGCCCGGCTTACTTCCGTGACTTT
G C A R A G Y P G V Y S S P A Y F R D F
730 740
ATCGAGTCGGTGACTGGTATTTAA
I E S V T G I *
【0089】
配列表フリーテキスト
5Pro_2/7Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196 (Trypsin-like serine protease)
＜Coding regionからなるDNAのCDS表記＞
ATGAAGACCACCCTCGCCTTCCTCTCCGTCCTCTCCAGCGTCCTCGCCAAGGAGAACATCGTCGGCGGCTCCGAGGCCTCCATCGAGGAGTTCCCCTACCAGATCGGCCTGCTGCAGGGCGGCTCGCTCATCTGCGGTGGCAGCATCATCGACAACAAGTACATTGTCACCGCCGGCCACTGCGCCGAGGGCCAGTCCGCCAGCGACCTCAGCATCCGCGCCGGCTCCGACTCCTCGTCCTCCGGCGGCACCACCGTGGGCGTCTCCTCCATCGCCGTCCACCCGGACTACGACGCCCAGACCGTCAACAACGACATTGCCATTCTCACCCTCGACCAGGACCTCAAGTACGGCCCCGGCATCGAGGCCGTCAAGCTCCCTGCCAAGAACGCCTCGCTCCCCTCCGCCGGCACCGTCGGCACCATCACCGGCTGGGGCGCCCTCCAGGAGGGCGGCAACGTCTCGCCCACCCTGCAGTCCGTCGAGGTCCCTGTTGTCGACAAGAAGACCTGTGCCCAGGACTACCAGGGCTTCAACGAGATCACCGCGAGCATGCTGTGCGCTGGTGAGGAGGAGGGTGGCAAGGACGGCTGCCAGGGTGACTCCGGTGGTCCCTTCGTCTCCAACGGTGTCCTTATTGGTATCACCTCCTGGGGCAATGGCTGTGCGCGCGCTGGATACCCCGGTGTCTACTCGAGCCCGGCTTACTTCCGTGACTTTATCGAGTCGGTGACTGGTATTTAA
5Pro_2/7Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196 (Trypsin-like serine protease)
＜Coding regionからなるDNAのCDS表記＞
ATGAAGACCACCCTCGCCTTCCTCTCCGTCCTCTCCAGCGTCCTCGCCAAGGAGAACATCGTCGGCGGCTCCGAGGCCTCCATCGAGGAGTTCCCCTACCAGATCGGCCTGCTGCAGGGCGGCTCGCTCATCTGCGGTGGCAGCATCATCGACAACAAGTACATTGTCACCGCCGGCCACTGCGCCGAGGGCCAGTCCGCCAGCGACCTCAGCATCCGCGCCGGCTCCGACTCCTCGTCCTCCGGCGGCACCACCGTGGGCGTCTCCTCCATCGCCGTCCACCCGGACTACGACGCCCAGACCGTCAACAACGACATTGCCATTCTCACCCTCGACCAGGACCTCAAGTACGGCCCCGGCATCGAGGCCGTCAAGCTCCCTGCCAAGAACGCCTCGCTCCCCTCCGCCGGCACCGTCGGCACCATCACCGGCTGGGGCGCCCTCCAGGAGGGCGGCAACGTCTCGCCCACCCTGCAGTCCGTCGAGGTCCCTGTTGTCGACAAGAAGACCTGTGCCCAGGACTACCAGGGCTTCAACGAGATCACCGCGAGCATGCTGTGCGCTGGTGAGGAGGAGGGTGGCAAGGACGGCTGCCAGGGTGACTCCGGTGGTCCCTTCGTCTCCAACGGTGTCCTTATTGGTATCACCTCCTGGGGCAATGGCTGTGCGCGCGCTGGATACCCCGGTGTCTACTCGAGCCCGGCTTACTTCCGTGACTTTATCGAGTCGGTGACTGGTATTTAA
【0090】
配列表フリーテキスト
5Pro_2/7Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196 (Trypsin-like serine protease)
＜Coding regionからなるアミノ酸配列のCDS表記＞
MKTTLAFLSVLSSVLAKENIVGGSEASIEEFPYQIGLLQGGSLICGGSIIDNKYIVTAGHCAEGQSASDLSIRAGSDSSSSGGTTVGVSSIAVHPDYDAQTVNNDIAILTLDQDLKYGPGIEAVKLPAKNASLPSAGTVGTITGWGALQEGGNVSPTLQSVEVPVVDKKTCAQDYQGFNEITASMLCAGEEEGGKDGCQGDSGGPFVSNGVLIGITSWGNGCARAGYPGVYSSPAYFRDFIESVTGI
5Pro_2/7Pro_1_from Aspergillus sydowii MA0196 (Trypsin-like serine protease)
＜Coding regionからなるアミノ酸配列のCDS表記＞
MKTTLAFLSVLSSVLAKENIVGGSEASIEEFPYQIGLLQGGSLICGGSIIDNKYIVTAGHCAEGQSASDLSIRAGSDSSSSGGTTVGVSSIAVHPDYDAQTVNNDIAILTLDQDLKYGPGIEAVKLPAKNASLPSAGTVGTITGWGALQEGGNVSPTLQSVEVPVVDKKTCAQDYQGFNEITASMLCAGEEEGGKDGCQGDSGGPFVSNGVLIGITSWGNGCARAGYPGVYSSPAYFRDFIESVTGI
【0091】
５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ1）の塩基配列から推定されるアミノ酸配列についてＰｒｏｔｅｉｎ ＢＬＡＳＴにより相動性検索した結果、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ ｇａｍｂｉａｅ由来トリプシン様セリンプロテアーゼ（アクセッション番号、Ｐ３５０３５）と４１％のｉｄｅｎｔｉｔｙがあった。よって、５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ1）は、ｅｎｄｏ―型ペプチダーゼに分類され、鰹肉由来タンパク質の配列の内部を加水分解すると予想され、同タンパク質の分解が電気泳動的（図１２（ｂ）および図１３（ａ））にも観察されたと考えられる。
【0092】
７Ｐｒｏ２（セリンプロテアーゼ）の塩基／アミノ酸配列
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
【0093】
配列表フリーテキスト
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionおよびnon-coding regionからなる表記＞
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionおよびnon-coding regionからなる表記＞
【0094】
配列表フリーテキスト
10 20 30 40 50 60
ATGTATTCAGTCAAGCGCACCATCCTCCTGCTCGGAGCTCTTCTTCCTGCGGTCTTTGGT
M Y S V K R T I L L L G A L L P A V F G
70 80 90 100 110 120
GCTCCTATCCTTGAATCTCGCCGGCCCACTGAAAAGGTCCCCGGGAAGTACATCGTGACG
A P I L E S R R P T E K V P G K Y I V T
130 140 150 160 170 180
TTCAAATCTGGCCTGCAGGCCGAGCAGATCGACGCTCACACAACCTGGGCCTCGAATGTC
F K S G L Q A E Q I D A H T T W A S N V
190 200 210 220 230 240
CACAAGCGCAACCTAGAGCGCCGTGATTTGGCTGACCGCGATCTGTACCCGGGTATTGAG
H K R N L E R R D L A D R D L Y P G I E
250 260 270 280 290 300
AAGAACTTCAAGATCCATAAGTTTGCGGCGTACGCCGGTTCCTTTGATGATGCCACCATC
K N F K I H K F A A Y A G S F D D A T I
310 320 330 340 350 360
GAAGAGATTCGAAACAGCAAAGATgtttgtgcccgtcttgaatccccagttgtgctataa
E E I R N S K D
370 380 390 400 410 420
ttgttgacgaccccccagGTGGCTTACGTGGAGGAGGACCAAGTCTGGTACATTGATGCC
V A Y V E E D Q V W Y I D A
430 440 450 460 470 480
GTAACCACCCAGAGCGATGCTCCCTGGGGTCTTGGAGCTATCTCTCACCAAGGAGATGCG
V T T Q S D A P W G L G A I S H Q G D A
490 500 510 520 530 540
AGCACCGACTATATTTACGACACAAGCGCGGGAGCCGACACTTACGCATATGTGGTGGAC
S T D Y I Y D T S A G A D T Y A Y V V D
550 560 570 580 590 600
ACGGGTATCAACGTTGATCACTCGGAATTCGACGGACGCGCCAGTCTTGCCTACAACGCT
T G I N V D H S E F D G R A S L A Y N A
610 620 630 640 650 660
GCTGGTGGCCAGCACGTTGACAGCGTCGGCCACGGTACCCATGTTGCCGGCACTATCGGT
A G G Q H V D S V G H G T H V A G T I G
670 680 690 700 710 720
GGCAAAACCTACGGTGTTTCCAAGAAGGCCAATCTTCTCTCTGTCAAGGTCTTCCAGGGC
G K T Y G V S K K A N L L S V K V F Q G
730 740 750 760 770 780
GAATCTAGCAGCACCTCCATTATCCTCGATGGCTACAACTGGGCTGCTAACGACATTGTA
E S S S T S I I L D G Y N W A A N D I V
790 800 810 820 830 840
AGCAAGGGCCGCACCGGCAAGTCGGCAATCAATCTGAGTTTGGGTaagtattcgctactg
S K G R T G K S A I N L S L G
850 860 870 880 890 900
cctttccgaaagagtaaacattgctgactggacattgtaggcGGTGGATACTCTTATGCT
G G Y S Y A
910 920 930 940 950 960
TTCAACAATGCAGTCGAAAGCGCATTTGATGAGGGGGTTCTCTCTGTTGTAGCAGCCGGC
F N N A V E S A F D E G V L S V V A A G
970 980 990 1000 1010 1020
AACGAAAACGTGagtctgttcgatattatctgcccaaaagccgatgtctaacaagcatgc
N E N V
1030 1040 1050 1060 1070 1080
aacctcaggttGATGCATCGAACACCAGTCCCGCTTCTGCACCTAACGCTCTTACTGTTG
D A S N T S P A S A P N A L T V A
1090 1100 1110 1120 1130 1140
CGGCTAGCACAGAAAGAAATGCTCGCGCCTCGTTCTCCAACTATGGTAGTGTGGTCGACA
A S T E R N A R A S F S N Y G S V V D I
1150 1160 1170 1180 1190 1200
TCTTTGCCCCCGGTGAAGACATCCTCTCGGCCTGGATTGGCGGAACCACTGCCACTAACA
F A P G E D I L S A W I G G T T A T N T
1210 1220 1230 1240 1250 1260
CCATTTCTGGCACATCTATGGCCACTCCCCATATTGTTGGTTTGTCCCTCTACTTGATCG
I S G T S M A T P H I V G L S L Y L I A
1270 1280 1290 1300 1310 1320
CTCTTGAGGGGCTCTCCACTCCCGCCGATGTGACTTCCCGAATCAAGGAGCTGGCTACCC
L E G L S T P A D V T S R I K E L A T Q
1330 1340 1350 1360 1370 1380
AGGACGTTCTCTCAAACGTGTCTGGCAGCCCCAACGCGCTTGCCTACAACGGCGCTGAAT
D V L S N V S G S P N A L A Y N G A E *
AA
10 20 30 40 50 60
ATGTATTCAGTCAAGCGCACCATCCTCCTGCTCGGAGCTCTTCTTCCTGCGGTCTTTGGT
M Y S V K R T I L L L G A L L P A V F G
70 80 90 100 110 120
GCTCCTATCCTTGAATCTCGCCGGCCCACTGAAAAGGTCCCCGGGAAGTACATCGTGACG
A P I L E S R R P T E K V P G K Y I V T
130 140 150 160 170 180
TTCAAATCTGGCCTGCAGGCCGAGCAGATCGACGCTCACACAACCTGGGCCTCGAATGTC
F K S G L Q A E Q I D A H T T W A S N V
190 200 210 220 230 240
CACAAGCGCAACCTAGAGCGCCGTGATTTGGCTGACCGCGATCTGTACCCGGGTATTGAG
H K R N L E R R D L A D R D L Y P G I E
250 260 270 280 290 300
AAGAACTTCAAGATCCATAAGTTTGCGGCGTACGCCGGTTCCTTTGATGATGCCACCATC
K N F K I H K F A A Y A G S F D D A T I
310 320 330 340 350 360
GAAGAGATTCGAAACAGCAAAGATgtttgtgcccgtcttgaatccccagttgtgctataa
E E I R N S K D
370 380 390 400 410 420
ttgttgacgaccccccagGTGGCTTACGTGGAGGAGGACCAAGTCTGGTACATTGATGCC
V A Y V E E D Q V W Y I D A
430 440 450 460 470 480
GTAACCACCCAGAGCGATGCTCCCTGGGGTCTTGGAGCTATCTCTCACCAAGGAGATGCG
V T T Q S D A P W G L G A I S H Q G D A
490 500 510 520 530 540
AGCACCGACTATATTTACGACACAAGCGCGGGAGCCGACACTTACGCATATGTGGTGGAC
S T D Y I Y D T S A G A D T Y A Y V V D
550 560 570 580 590 600
ACGGGTATCAACGTTGATCACTCGGAATTCGACGGACGCGCCAGTCTTGCCTACAACGCT
T G I N V D H S E F D G R A S L A Y N A
610 620 630 640 650 660
GCTGGTGGCCAGCACGTTGACAGCGTCGGCCACGGTACCCATGTTGCCGGCACTATCGGT
A G G Q H V D S V G H G T H V A G T I G
670 680 690 700 710 720
GGCAAAACCTACGGTGTTTCCAAGAAGGCCAATCTTCTCTCTGTCAAGGTCTTCCAGGGC
G K T Y G V S K K A N L L S V K V F Q G
730 740 750 760 770 780
GAATCTAGCAGCACCTCCATTATCCTCGATGGCTACAACTGGGCTGCTAACGACATTGTA
E S S S T S I I L D G Y N W A A N D I V
790 800 810 820 830 840
AGCAAGGGCCGCACCGGCAAGTCGGCAATCAATCTGAGTTTGGGTaagtattcgctactg
S K G R T G K S A I N L S L G
850 860 870 880 890 900
cctttccgaaagagtaaacattgctgactggacattgtaggcGGTGGATACTCTTATGCT
G G Y S Y A
910 920 930 940 950 960
TTCAACAATGCAGTCGAAAGCGCATTTGATGAGGGGGTTCTCTCTGTTGTAGCAGCCGGC
F N N A V E S A F D E G V L S V V A A G
970 980 990 1000 1010 1020
AACGAAAACGTGagtctgttcgatattatctgcccaaaagccgatgtctaacaagcatgc
N E N V
1030 1040 1050 1060 1070 1080
aacctcaggttGATGCATCGAACACCAGTCCCGCTTCTGCACCTAACGCTCTTACTGTTG
D A S N T S P A S A P N A L T V A
1090 1100 1110 1120 1130 1140
CGGCTAGCACAGAAAGAAATGCTCGCGCCTCGTTCTCCAACTATGGTAGTGTGGTCGACA
A S T E R N A R A S F S N Y G S V V D I
1150 1160 1170 1180 1190 1200
TCTTTGCCCCCGGTGAAGACATCCTCTCGGCCTGGATTGGCGGAACCACTGCCACTAACA
F A P G E D I L S A W I G G T T A T N T
1210 1220 1230 1240 1250 1260
CCATTTCTGGCACATCTATGGCCACTCCCCATATTGTTGGTTTGTCCCTCTACTTGATCG
I S G T S M A T P H I V G L S L Y L I A
1270 1280 1290 1300 1310 1320
CTCTTGAGGGGCTCTCCACTCCCGCCGATGTGACTTCCCGAATCAAGGAGCTGGCTACCC
L E G L S T P A D V T S R I K E L A T Q
1330 1340 1350 1360 1370 1380
AGGACGTTCTCTCAAACGTGTCTGGCAGCCCCAACGCGCTTGCCTACAACGGCGCTGAAT
D V L S N V S G S P N A L A Y N G A E *
AA
【0095】
配列表フリーテキスト
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionからなるDNAのCDS表記＞
ATGTATTCAGTCAAGCGCACCATCCTCCTGCTCGGAGCTCTTCTTCCTGCGGTCTTTGGTGCTCCTATCCTTGAATCTCGCCGGCCCACTGAAAAGGTCCCCGGGAAGTACATCGTGACGTTCAAATCTGGCCTGCAGGCCGAGCAGATCGACGCTCACACAACCTGGGCCTCGAATGTCCACAAGCGCAACCTAGAGCGCCGTGATTTGGCTGACCGCGATCTGTACCCGGGTATTGAGAAGAACTTCAAGATCCATAAGTTTGCGGCGTACGCCGGTTCCTTTGATGATGCCACCATCGAAGAGATTCGAAACAGCAAAGATGTGGCTTACGTGGAGGAGGACCAAGTCTGGTACATTGATGCCGTAACCACCCAGAGCGATGCTCCCTGGGGTCTTGGAGCTATCTCTCACCAAGGAGATGCGAGCACCGACTATATTTACGACACAAGCGCGGGAGCCGACACTTACGCATATGTGGTGGACACGGGTATCAACGTTGATCACTCGGAATTCGACGGACGCGCCAGTCTTGCCTACAACGCTGCTGGTGGCCAGCACGTTGACAGCGTCGGCCACGGTACCCATGTTGCCGGCACTATCGGTGGCAAAACCTACGGTGTTTCCAAGAAGGCCAATCTTCTCTCTGTCAAGGTCTTCCAGGGCGAATCTAGCAGCACCTCCATTATCCTCGATGGCTACAACTGGGCTGCTAACGACATTGTAAGCAAGGGCCGCACCGGCAAGTCGGCAATCAATCTGAGTTTGGGTGGTGGATACTCTTATGCTTTCAACAATGCAGTCGAAAGCGCATTTGATGAGGGGGTTCTCTCTGTTGTAGCAGCCGGCAACGAAAACGTGGATGCATCGAACACCAGTCCCGCTTCTGCACCTAACGCTCTTACTGTTGCGGCTAGCACAGAAAGAAATGCTCGCGCCTCGTTCTCCAACTATGGTAGTGTGGTCGACATCTTTGCCCCCGGTGAAGACATCCTCTCGGCCTGGATTGGCGGAACCACTGCCACTAACACCATTTCTGGCACATCTATGGCCACTCCCCATATTGTTGGTTTGTCCCTCTACTTGATCGCTCTTGAGGGGCTCTCCACTCCCGCCGATGTGACTTCCCGAATCAAGGAGCTGGCTACCCAGGACGTTCTCTCAAACGTGTCTGGCAGCCCCAACGCGCTTGCCTACAACGGCGCTGAATAA
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionからなるDNAのCDS表記＞
ATGTATTCAGTCAAGCGCACCATCCTCCTGCTCGGAGCTCTTCTTCCTGCGGTCTTTGGTGCTCCTATCCTTGAATCTCGCCGGCCCACTGAAAAGGTCCCCGGGAAGTACATCGTGACGTTCAAATCTGGCCTGCAGGCCGAGCAGATCGACGCTCACACAACCTGGGCCTCGAATGTCCACAAGCGCAACCTAGAGCGCCGTGATTTGGCTGACCGCGATCTGTACCCGGGTATTGAGAAGAACTTCAAGATCCATAAGTTTGCGGCGTACGCCGGTTCCTTTGATGATGCCACCATCGAAGAGATTCGAAACAGCAAAGATGTGGCTTACGTGGAGGAGGACCAAGTCTGGTACATTGATGCCGTAACCACCCAGAGCGATGCTCCCTGGGGTCTTGGAGCTATCTCTCACCAAGGAGATGCGAGCACCGACTATATTTACGACACAAGCGCGGGAGCCGACACTTACGCATATGTGGTGGACACGGGTATCAACGTTGATCACTCGGAATTCGACGGACGCGCCAGTCTTGCCTACAACGCTGCTGGTGGCCAGCACGTTGACAGCGTCGGCCACGGTACCCATGTTGCCGGCACTATCGGTGGCAAAACCTACGGTGTTTCCAAGAAGGCCAATCTTCTCTCTGTCAAGGTCTTCCAGGGCGAATCTAGCAGCACCTCCATTATCCTCGATGGCTACAACTGGGCTGCTAACGACATTGTAAGCAAGGGCCGCACCGGCAAGTCGGCAATCAATCTGAGTTTGGGTGGTGGATACTCTTATGCTTTCAACAATGCAGTCGAAAGCGCATTTGATGAGGGGGTTCTCTCTGTTGTAGCAGCCGGCAACGAAAACGTGGATGCATCGAACACCAGTCCCGCTTCTGCACCTAACGCTCTTACTGTTGCGGCTAGCACAGAAAGAAATGCTCGCGCCTCGTTCTCCAACTATGGTAGTGTGGTCGACATCTTTGCCCCCGGTGAAGACATCCTCTCGGCCTGGATTGGCGGAACCACTGCCACTAACACCATTTCTGGCACATCTATGGCCACTCCCCATATTGTTGGTTTGTCCCTCTACTTGATCGCTCTTGAGGGGCTCTCCACTCCCGCCGATGTGACTTCCCGAATCAAGGAGCTGGCTACCCAGGACGTTCTCTCAAACGTGTCTGGCAGCCCCAACGCGCTTGCCTACAACGGCGCTGAATAA
【0096】
配列表フリーテキスト
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionからなるアミノ酸配列のCDS表記＞
MYSVKRTILLLGALLPAVFGAPILESRRPTEKVPGKYIVTFKSGLQAEQIDAHTTWASNVHKRNLERRDLADRDLYPGIEKNFKIHKFAAYAGSFDDATIEEIRNSKDVAYVEEDQVWYIDAVTTQSDAPWGLGAISHQGDASTDYIYDTSAGADTYAYVVDTGINVDHSEFDGRASLAYNAAGGQHVDSVGHGTHVAGTIGGKTYGVSKKANLLSVKVFQGESSSTSIILDGYNWAANDIVSKGRTGKSAINLSLGGGYSYAFNNAVESAFDEGVLSVVAAGNENVDASNTSPASAPNALTVAASTERNARASFSNYGSVVDIFAPGEDILSAWIGGTTATNTISGTSMATPHIVGLSLYLIALEGLSTPADVTSRIKELATQDVLSNVSGSPNALAYNGAE
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionからなるアミノ酸配列のCDS表記＞
MYSVKRTILLLGALLPAVFGAPILESRRPTEKVPGKYIVTFKSGLQAEQIDAHTTWASNVHKRNLERRDLADRDLYPGIEKNFKIHKFAAYAGSFDDATIEEIRNSKDVAYVEEDQVWYIDAVTTQSDAPWGLGAISHQGDASTDYIYDTSAGADTYAYVVDTGINVDHSEFDGRASLAYNAAGGQHVDSVGHGTHVAGTIGGKTYGVSKKANLLSVKVFQGESSSTSIILDGYNWAANDIVSKGRTGKSAINLSLGGGYSYAFNNAVESAFDEGVLSVVAAGNENVDASNTSPASAPNALTVAASTERNARASFSNYGSVVDIFAPGEDILSAWIGGTTATNTISGTSMATPHIVGLSLYLIALEGLSTPADVTSRIKELATQDVLSNVSGSPNALAYNGAE
【0097】
配列表フリーテキスト
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionのみからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGTATTCAGTCAAGCGCACCATCCTCCTGCTCGGAGCTCTTCTTCCTGCGGTCTTTGGT
M Y S V K R T I L L L G A L L P A V F G
70 80 90 100 110 120
GCTCCTATCCTTGAATCTCGCCGGCCCACTGAAAAGGTCCCCGGGAAGTACATCGTGACG
A P I L E S R R P T E K V P G K Y I V T
130 140 150 160 170 180
TTCAAATCTGGCCTGCAGGCCGAGCAGATCGACGCTCACACAACCTGGGCCTCGAATGTC
F K S G L Q A E Q I D A H T T W A S N V
190 200 210 220 230 240
CACAAGCGCAACCTAGAGCGCCGTGATTTGGCTGACCGCGATCTGTACCCGGGTATTGAG
H K R N L E R R D L A D R D L Y P G I E
250 260 270 280 290 300
AAGAACTTCAAGATCCATAAGTTTGCGGCGTACGCCGGTTCCTTTGATGATGCCACCATC
K N F K I H K F A A Y A G S F D D A T I
310 320 330 340 350 360
GAAGAGATTCGAAACAGCAAAGATGTGGCTTACGTGGAGGAGGACCAAGTCTGGTACATT
E E I R N S K D V A Y V E E D Q V W Y I
370 380 390 400 410 420
GATGCCGTAACCACCCAGAGCGATGCTCCCTGGGGTCTTGGAGCTATCTCTCACCAAGGA
D A V T T Q S D A P W G L G A I S H Q G
430 440 450 460 470 480
GATGCGAGCACCGACTATATTTACGACACAAGCGCGGGAGCCGACACTTACGCATATGTG
D A S T D Y I Y D T S A G A D T Y A Y V
490 500 510 520 530 540
GTGGACACGGGTATCAACGTTGATCACTCGGAATTCGACGGACGCGCCAGTCTTGCCTAC
V D T G I N V D H S E F D G R A S L A Y
550 560 570 580 590 600
AACGCTGCTGGTGGCCAGCACGTTGACAGCGTCGGCCACGGTACCCATGTTGCCGGCACT
N A A G G Q H V D S V G H G T H V A G T
610 620 630 640 650 660
ATCGGTGGCAAAACCTACGGTGTTTCCAAGAAGGCCAATCTTCTCTCTGTCAAGGTCTTC
I G G K T Y G V S K K A N L L S V K V F
670 680 690 700 710 720
CAGGGCGAATCTAGCAGCACCTCCATTATCCTCGATGGCTACAACTGGGCTGCTAACGAC
Q G E S S S T S I I L D G Y N W A A N D
730 740 750 760 770 780
ATTGTAAGCAAGGGCCGCACCGGCAAGTCGGCAATCAATCTGAGTTTGGGTGGTGGATAC
I V S K G R T G K S A I N L S L G G G Y
790 800 810 820 830 840
TCTTATGCTTTCAACAATGCAGTCGAAAGCGCATTTGATGAGGGGGTTCTCTCTGTTGTA
S Y A F N N A V E S A F D E G V L S V V
850 860 870 880 890 900
GCAGCCGGCAACGAAAACGTGGATGCATCGAACACCAGTCCCGCTTCTGCACCTAACGCT
A A G N E N V D A S N T S P A S A P N A
910 920 930 940 950 960
CTTACTGTTGCGGCTAGCACAGAAAGAAATGCTCGCGCCTCGTTCTCCAACTATGGTAGT
L T V A A S T E R N A R A S F S N Y G S
970 980 990 1000 1010 1020
GTGGTCGACATCTTTGCCCCCGGTGAAGACATCCTCTCGGCCTGGATTGGCGGAACCACT
V V D I F A P G E D I L S A W I G G T T
1030 1040 1050 1060 1070 1080
GCCACTAACACCATTTCTGGCACATCTATGGCCACTCCCCATATTGTTGGTTTGTCCCTC
A T N T I S G T S M A T P H I V G L S L
1090 1100 1110 1120 1130 1140
TACTTGATCGCTCTTGAGGGGCTCTCCACTCCCGCCGATGTGACTTCCCGAATCAAGGAG
Y L I A L E G L S T P A D V T S R I K E
1150 1160 1170 1180 1190 1200
CTGGCTACCCAGGACGTTCTCTCAAACGTGTCTGGCAGCCCCAACGCGCTTGCCTACAAC
L A T Q D V L S N V S G S P N A L A Y N
1210
GGCGCTGAATAA
G A E *
7Pro_2_from A. sydowii MA0196 (elastinolytic serine protease)
＜Coding regionのみからなる表記＞
10 20 30 40 50 60
ATGTATTCAGTCAAGCGCACCATCCTCCTGCTCGGAGCTCTTCTTCCTGCGGTCTTTGGT
M Y S V K R T I L L L G A L L P A V F G
70 80 90 100 110 120
GCTCCTATCCTTGAATCTCGCCGGCCCACTGAAAAGGTCCCCGGGAAGTACATCGTGACG
A P I L E S R R P T E K V P G K Y I V T
130 140 150 160 170 180
TTCAAATCTGGCCTGCAGGCCGAGCAGATCGACGCTCACACAACCTGGGCCTCGAATGTC
F K S G L Q A E Q I D A H T T W A S N V
190 200 210 220 230 240
CACAAGCGCAACCTAGAGCGCCGTGATTTGGCTGACCGCGATCTGTACCCGGGTATTGAG
H K R N L E R R D L A D R D L Y P G I E
250 260 270 280 290 300
AAGAACTTCAAGATCCATAAGTTTGCGGCGTACGCCGGTTCCTTTGATGATGCCACCATC
K N F K I H K F A A Y A G S F D D A T I
310 320 330 340 350 360
GAAGAGATTCGAAACAGCAAAGATGTGGCTTACGTGGAGGAGGACCAAGTCTGGTACATT
E E I R N S K D V A Y V E E D Q V W Y I
370 380 390 400 410 420
GATGCCGTAACCACCCAGAGCGATGCTCCCTGGGGTCTTGGAGCTATCTCTCACCAAGGA
D A V T T Q S D A P W G L G A I S H Q G
430 440 450 460 470 480
GATGCGAGCACCGACTATATTTACGACACAAGCGCGGGAGCCGACACTTACGCATATGTG
D A S T D Y I Y D T S A G A D T Y A Y V
490 500 510 520 530 540
GTGGACACGGGTATCAACGTTGATCACTCGGAATTCGACGGACGCGCCAGTCTTGCCTAC
V D T G I N V D H S E F D G R A S L A Y
550 560 570 580 590 600
AACGCTGCTGGTGGCCAGCACGTTGACAGCGTCGGCCACGGTACCCATGTTGCCGGCACT
N A A G G Q H V D S V G H G T H V A G T
610 620 630 640 650 660
ATCGGTGGCAAAACCTACGGTGTTTCCAAGAAGGCCAATCTTCTCTCTGTCAAGGTCTTC
I G G K T Y G V S K K A N L L S V K V F
670 680 690 700 710 720
CAGGGCGAATCTAGCAGCACCTCCATTATCCTCGATGGCTACAACTGGGCTGCTAACGAC
Q G E S S S T S I I L D G Y N W A A N D
730 740 750 760 770 780
ATTGTAAGCAAGGGCCGCACCGGCAAGTCGGCAATCAATCTGAGTTTGGGTGGTGGATAC
I V S K G R T G K S A I N L S L G G G Y
790 800 810 820 830 840
TCTTATGCTTTCAACAATGCAGTCGAAAGCGCATTTGATGAGGGGGTTCTCTCTGTTGTA
S Y A F N N A V E S A F D E G V L S V V
850 860 870 880 890 900
GCAGCCGGCAACGAAAACGTGGATGCATCGAACACCAGTCCCGCTTCTGCACCTAACGCT
A A G N E N V D A S N T S P A S A P N A
910 920 930 940 950 960
CTTACTGTTGCGGCTAGCACAGAAAGAAATGCTCGCGCCTCGTTCTCCAACTATGGTAGT
L T V A A S T E R N A R A S F S N Y G S
970 980 990 1000 1010 1020
GTGGTCGACATCTTTGCCCCCGGTGAAGACATCCTCTCGGCCTGGATTGGCGGAACCACT
V V D I F A P G E D I L S A W I G G T T
1030 1040 1050 1060 1070 1080
GCCACTAACACCATTTCTGGCACATCTATGGCCACTCCCCATATTGTTGGTTTGTCCCTC
A T N T I S G T S M A T P H I V G L S L
1090 1100 1110 1120 1130 1140
TACTTGATCGCTCTTGAGGGGCTCTCCACTCCCGCCGATGTGACTTCCCGAATCAAGGAG
Y L I A L E G L S T P A D V T S R I K E
1150 1160 1170 1180 1190 1200
CTGGCTACCCAGGACGTTCTCTCAAACGTGTCTGGCAGCCCCAACGCGCTTGCCTACAAC
L A T Q D V L S N V S G S P N A L A Y N
1210
GGCGCTGAATAA
G A E *
【0098】
７Ｐｒｏ２の塩基配列から推定されるアミノ酸配列についてＰｒｏｔｅｉｎ ＢＬＡＳＴにより相動性検索した結果、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ ＦＧＳＣ Ａ4等のケラチン分解性セリンプロテアーゼ（アクセッション番号、Ｑ００２０８）と８４％のｉｄｅｎｔｉｔｙがあった。
よって、５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ1）と同様７Ｐｒｏ２もまたｅｎｄｏ―型ペプチダーゼに分類され、鰹肉由来タンパク質の配列の内部を加水分解すると予想される。
よって、５Ｐｒｏ２（７Ｐｒｏ1）と同様７Ｐｒｏ２もまたｅｎｄｏ―型ペプチダーゼに分類され、鰹肉由来タンパク質の配列の内部を加水分解すると予想される。
【0099】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉｉ ＭＡ０１９６を接種・培養して得られた培養物からは、遊離アミノ酸類および可溶性ポリペプチド量が有意に増大した要因として、まず、鰹肉由来タンパク質を５Ｐｒｏ2（７Ｐｒｏ1）や７Ｐｒｏ２といったｅｎｄｏ－型ペプチダーゼが作用することで可溶性の（ポリ）ペプチドが生成し、さらに７Ｐｒｏ１のようなｅｘｏ―型ペプチダーゼがさらに働くことで遊離アミノ酸量が増大することが明らかとなった。
以上より、ＭＡ０１９６株を用いることで、本菌由来の複数のタンパク質分解酵素が協働して作用する鰹節抽出残渣の微生物発酵の製造法の優位性が示された。
以上より、ＭＡ０１９６株を用いることで、本菌由来の複数のタンパク質分解酵素が協働して作用する鰹節抽出残渣の微生物発酵の製造法の優位性が示された。
【0100】
【表6】
【産業上の利用可能性】
【0101】
本発明の製造方法によれば、従来産業廃棄物として廃棄されていただしを取った後の魚節抽出残渣を発酵させることにより、種々の有効成分を含む食品を提供できることから、食料危機問題等に広く適用することができる。
【符号の説明】
【0102】
１ 発酵食品組成物
２ 糸状菌を用いなかった発酵食品組成物の比較参照用コントロール
３ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＢＲＣ１３９５１の乳酸菌
４，６，８，１０，１２，１４，１６ 乳酸菌を用いなかった発酵食品組成物の比較参照用コントロール
５ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ＮＢＲＣ１０７１４７
７ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＮＢＲＣ１５８８３
９ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＮＢＲＣ３２０２
１１ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＢＲＣ１５８８５
１３ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ. ｌａｃｔｉｓ ＮＢＲＣ １００９３３
１５ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＢＲＣ １５８９１
１７ 可溶性画分
１８ 糸状菌を用いなかった可溶性画分の比較参照用コントロール
Ｍ Myoglobin (分子質量 (Da), 17,000; 溶出時間, 8.9 min)
Ｃ cytochrome c (分子質量 (Da), 12,400; 溶出時間, 9.6 min)
Ｂ bacitracin (分子質量 (Da), 1,422; 溶出時間, 11.8 min)
Ｈ N-hippuryl His Leu hydrate (分子質量 (Da), 429; 溶出時間, 12.8 min)
Ｇ glycylglycylglycine（分子質量 (Da), 189; 溶出時間, 13.55 min）
ＢＭ broad range protein marker
ＬＭ low range prptein marker
２ 糸状菌を用いなかった発酵食品組成物の比較参照用コントロール
３ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＢＲＣ１３９５１の乳酸菌
４，６，８，１０，１２，１４，１６ 乳酸菌を用いなかった発酵食品組成物の比較参照用コントロール
５ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ＮＢＲＣ１０７１４７
７ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＮＢＲＣ１５８８３
９ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＮＢＲＣ３２０２
１１ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＢＲＣ１５８８５
１３ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ. ｌａｃｔｉｓ ＮＢＲＣ １００９３３
１５ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＢＲＣ １５８９１
１７ 可溶性画分
１８ 糸状菌を用いなかった可溶性画分の比較参照用コントロール
Ｍ Myoglobin (分子質量 (Da), 17,000; 溶出時間, 8.9 min)
Ｃ cytochrome c (分子質量 (Da), 12,400; 溶出時間, 9.6 min)
Ｂ bacitracin (分子質量 (Da), 1,422; 溶出時間, 11.8 min)
Ｈ N-hippuryl His Leu hydrate (分子質量 (Da), 429; 溶出時間, 12.8 min)
Ｇ glycylglycylglycine（分子質量 (Da), 189; 溶出時間, 13.55 min）
ＢＭ broad range protein marker
ＬＭ low range prptein marker
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【配列表】