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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025023952
(43)【公開日】2025-02-19
(54)【発明の名称】液体タンパク質製剤を安定化するための組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/02 20060101AFI20250212BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20250212BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20250212BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20250212BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250212BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20250212BHJP
【ＦＩ】
A61K38/02
A61K9/08
A61K47/26
A61K9/10
A61K39/395 M
A61K39/395 A
A61K9/19
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024187611
(22)【出願日】2024-10-24
(62)【分割の表示】P 2021577359の分割
【原出願日】2020-06-26
(31)【優先権主張番号】62/868,615
(32)【優先日】2019-06-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
(71)【出願人】
【識別番号】509012625
【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】トムリンソン， アンソニー
(72)【発明者】
【氏名】ザラガ， イシドロ アンヘロ エレアザール
(72)【発明者】
【氏名】デメーレ， バルテレミー ルク
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ポリペプチド及び界面活性剤を含む安定な液体医薬製剤を提供する。
【解決手段】ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤であって、界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステルである液体製剤である。
【選択図】図５
【解決手段】ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤であって、界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステルである液体製剤である。
【選択図】図５
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤であって、前記界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステルである、液体製剤。
【請求項2】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが約５～３０ＰＯＥ単位を含む、請求項１に記載の液体製剤。
【請求項3】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが約２０ＰＯＥ単位を含む、請求項１又は２に記載の液体製剤。
【請求項4】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項5】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルがモノエステルである、請求項１から４のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項6】
前記モノエステルが、イソソルビドＰＯＥモノラウレート、イソソルビドＰＯＥモノミリステート、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート、イソソルビドＰＯＥモノステアレート及びイソソルビドＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される、請求項５に記載の液体製剤。
【請求項7】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルがモノエステル、ジエステル、又はそれらの混合物である、請求項１から４のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項8】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが式（Ｉ）：
［式中
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の化合物である、請求項１に記載の液体製剤。
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の化合物である、請求項１に記載の液体製剤。
【請求項9】
ａ及びｂの合計が９である、請求項８に記載の液体製剤。
【請求項10】
Ｒ１がＨであり、Ｒ２が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である、請求項８又は９に記載の液体製剤。
【請求項11】
Ｒ１が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’であり、Ｒ２がＨである、請求項８又は９に記載の液体製剤。
【請求項12】
Ｒ１及びＲ２の両方が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である、請求項８又は９に記載の液体製剤。
【請求項13】
Ｒ’’が非置換Ｃ３－２７アルキルである、請求項８から１２のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項14】
Ｒ’’が非置換Ｃ１１アルキルである、請求項１３に記載の液体製剤。
【請求項15】
Ｒ’’が非置換Ｃ３－２７アルケニルである、請求項８から１２のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項16】
Ｒ’’が非置換Ｃ１７アルケニルである、請求項１５に記載の液体製剤。
【請求項17】
前記界面活性剤の少なくとも約８０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項18】
前記界面活性剤がＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項19】
前記界面活性剤が、ＰＯＥ脂肪酸エステルよりも多量のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む、請求項１８に記載の液体製剤。
【請求項20】
前記ＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む、請求項１８又は１９に記載の液体製剤。
【請求項21】
前記ＰＯＥ脂肪酸エステルが、ＰＯＥモノラウレート、ＰＯＥモノミリステート、ＰＯＥモノパルミテート、ＰＯＥモノステアレート及びＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される、請求項２０に記載の液体製剤。
【請求項22】
前記界面活性剤の約２０％（重量％）未満がＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項23】
前記界面活性剤が、前記液体製剤の約０．０００５％～０．２％（ｗ：ｖ）である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項24】
前記界面活性剤がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項25】
前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項26】
前記タンパク質が抗体である、請求項２５に記載の液体製剤。
【請求項27】
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、及び抗体断片からなる群から選択される、請求項２６に記載の液体製剤。
【請求項28】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片からなる群から選択される、請求項２７に記載の液体製剤。
【請求項29】
前記抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項30】
前記抗体の濃度が約１００ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項２９に記載の液体製剤。
【請求項31】
前記液体製剤が再構成凍結乾燥製剤である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項32】
前記液体製剤が、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬのポリペプチド濃度に輸液で更に希釈される、請求項２９又は３０に記載の液体製剤。
【請求項33】
前記液体製剤が凝集体を実質的に含まない、請求項１から３２のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項34】
前記液体製剤の遊離脂肪酸粒子形成が少ない、請求項１から３２のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項35】
前記界面活性剤の少なくとも約８０％（重量％）が、イソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項１８から３４のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項36】
前記界面活性剤の少なくとも約９０％（重量％）が、イソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項１８から３５のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項37】
ポリペプチド及び界面活性剤を含む凍結乾燥製剤であって、前記界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルあり、前記凍結乾燥製剤が、請求項１８から３６のいずれか一項に記載の液体製剤を凍結乾燥することによって調製される、凍結乾燥製剤。
【請求項38】
請求項１から３６のいずれか一項に記載の液体製剤を封入する容器を含む、製造品。
【請求項39】
前記容器がＩＶバッグである、請求項３８に記載の製造品。
【請求項40】
前記ＩＶバッグが注射装置を含む、請求項３９に記載の製造品。
【請求項41】
前記ＩＶバッグが輸液を含む、請求項３９又は４０に記載の製造品。
【請求項42】
前記容器がバイアル又はプレフィルドシリンジである、請求項３８に記載の製造品。
【請求項43】
希釈剤を封入する第２の容器を更に含む、請求項３８に記載の製造品。
【請求項44】
請求項３７に記載の凍結乾燥製剤を封入する容器を含む、製造品。
【請求項45】
希釈剤を封入する第２の容器を更に含む、請求項４４に記載の製造品。
【請求項46】
ポリペプチド及び界面活性剤を水溶液に添加することを含む液体製剤の作製方法であって、前記界面活性剤の少なくとも７０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルである、方法。
【請求項47】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが約５～３０ＰＯＥ単位を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが約２０ＰＯＥ単位を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルがモノエステルである、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項51】
前記モノエステルが、イソソルビドＰＯＥモノラウレート、イソソルビドＰＯＥモノミリステート、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート、イソソルビドＰＯＥモノステアレート及びイソソルビドＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項52】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルがモノエステル、ジエステル、又はそれらの混合物である、請求項４６から４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが式（Ｉ）：
［式中
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の化合物である、請求項４６に記載の方法。
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の化合物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項54】
ａ及びｂの合計が９である、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
Ｒ１がＨであり、Ｒ２が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である、請求項５３又は５４に記載の方法。
【請求項56】
Ｒ２が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’であり、Ｒ１がＨである、請求項５３又は５４に記載の方法。
【請求項57】
Ｒ１及びＲ２の両方が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である、請求項５３又は５４に記載の方法。
【請求項58】
Ｒ’’が非置換Ｃ３－２７アルキルである、請求項５３から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
Ｒ’’が非置換Ｃ１１アルキルである、請求項５６に記載の方法。
【請求項60】
Ｒ’’が非置換Ｃ３－２７アルケニルである、請求項５３から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項61】
Ｒ’’が非置換Ｃ１７アルケニルである、請求項６０に記載の方法。
【請求項62】
前記界面活性剤がＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む、請求項４６から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
前記界面活性剤の少なくとも約８０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項６２に記載の方法。
【請求項64】
前記界面活性剤の少なくとも約９０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項６２又は６３に記載の方法。
【請求項65】
前記界面活性剤が、ＰＯＥ脂肪酸エステルよりも多量のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む、請求項６２から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項66】
前記ＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む、請求項６２から６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項67】
前記ＰＯＥ脂肪酸エステルが、ＰＯＥモノラウレート、ＰＯＥモノミリステート、ＰＯＥモノパルミテート、ＰＯＥモノステアレート及びＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項68】
前記界面活性剤の約２０％（重量％）未満がＰＯＥ脂肪酸エステルである、請求項６２から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項69】
前記界面活性剤がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む、請求項４６から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項70】
前記界面活性剤が、前記液体製剤の約０．０００５％～０．２％（ｗ：ｖ）である、請求項４６から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項71】
前記ポリペプチドがタンパク質である、請求項４６から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項72】
前記タンパク質が抗体である、請求項７１に記載の方法。
【請求項73】
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、及び抗体断片からなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項74】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片からなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項75】
前記抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項７２から７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項76】
前記抗体の濃度が約１００ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項７５に記載の方法。
【請求項77】
前記液体製剤が、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬの濃度に輸液で更に希釈される、請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項78】
前記液体製剤を凍結乾燥して凍結乾燥製剤を作製することを更に含む、請求項４６から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項79】
前記液体製剤が凝集体を実質的に含まない、請求項４６から７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項80】
前記液体製剤の遊離脂肪酸粒子形成が少ない、請求項４６から７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項81】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルがイソソルビドＰＯＥモノラウレートである、請求項１から４のいずれか一項に記載の液体製剤。
【請求項82】
前記イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルがイソソルビドＰＯＥモノラウレートである、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【0001】
本出願は、２０１９年６月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／８６８，６１５号に対する優先権利益を主張するものであり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【技術分野】
【0002】
本開示は、概して、ポリペプチド及び界面活性剤を含む安定な液体医薬製剤及びそれを作製する方法に関する。
【背景技術】
【0003】
ポリソルベート（ＰＳ）は、生物医薬タンパク質製剤に一般的に使用される界面活性剤であり、化学的加水分解、酸化、及び酵素加水分解を含む様々な分解経路の影響を受けやすいことが示されている。ＰＳの分解は、様々な過酸化物の生成につながる可能性があり、その後、長期保存中にタンパク質中のアミノ酸残基（例えば、メチオニン）を酸化する。Ｌｅｖｉｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９６）９３，１５０３６－１５０４０．これらのアミノ酸残基の酸化は、タンパク質の生物学的活性に潜在的に悪影響を及ぼし、それによってタンパク質製剤中のＰＳの保護効果を制限する。さらに、ポリソルベートは不均一混合物であるので、分解のパターンは、種々の経路間で著しく異なる場合がある。したがって、薬学的タンパク質製剤の開発において、界面活性剤のためのより効率的な賦形剤が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【0004】
本開示は、ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤であって、界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステルである液体製剤を開示する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは約５～３０ＰＯＥ単位を含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは約２０ＰＯＥ単位を含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、モノエステル、ジエステル、又はそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、イソソルビドＰＯＥモノラウレート、イソソルビドＰＯＥモノミリステート、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート、イソソルビドＰＯＥモノステアレート及びイソソルビドＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される。
【0005】
いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、式（Ｉ）：
［式中：
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して素である］
の化合物である。
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して素である］
の化合物である。
【0006】
いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５である。いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は９である。いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は２０である。いくつかの実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨであり、Ｒ１は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２の両方が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換Ｃ３－２７アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換Ｃ１１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換Ｃ３－２７アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ’’は、非置換Ｃ１７アルケニルである。
【0007】
いくつかの実施形態では、界面活性剤はＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約８０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約９０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、ＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＰＯＥ脂肪酸エステルは、ＰＯＥモノラウレート、ＰＯＥモノミリステート、ＰＯＥモノパルミテート、ＰＯＥモノステアレート及びＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約２０％未満がＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約１０％未満がＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、液体製剤中の約０．０００５％～０．２％（ｗ：ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ＰＯＥ脂肪酸エステルよりも多量のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤はソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約１０％未満、約８％未満、約５％未満、約３％未満又は約１％未満がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。
【0008】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドはタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、及び抗体断片からなる群から選択される抗体である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体の濃度は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、液体製剤は再構成凍結乾燥製剤である。いくつかの実施形態では、液体製剤を輸液で約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの濃度に更に希釈する。いくつかの実施形態では、液体製剤は凝集体を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、液体製剤は、遊離脂肪酸粒子形成が少ない。
【0009】
本明細書に記載の任意の液体製剤を封入する容器を含む製造品も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、容器はＩＶバッグである。いくつかの実施形態では、ＩＶバッグは注射装置を含む。いくつかの実施形態では、ＩＶバッグは輸液を含む。ポリペプチド及び界面活性剤を含む凍結乾燥製剤であって、界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである凍結乾燥製剤も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥製剤は、本明細書に開示される任意の液体製剤を凍結乾燥することによって調製される。
【0010】
ポリペプチド及び界面活性剤を水溶液に添加することを含む液体製剤の作製方法も本明細書で提供され、界面活性剤の少なくとも７０％（重量％）はイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは約５～３０ＰＯＥ単位を含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは約２０ＰＯＥ単位を含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４ー２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、モノエステル、ジエステル、又はそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、イソソルビドＰＯＥモノラウレート、イソソルビドＰＯＥモノミリステート、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート、イソソルビドＰＯＥモノステアレート及びイソソルビドＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される。
【0011】
いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、式（Ｉ）：
［式中：
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の化合物である。
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、ただし、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の化合物である。
【0012】
いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５である。いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は９である。いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は２０である。いくつかの実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨであり、Ｒ１は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２の両方が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換Ｃ３－２７アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換Ｃ１１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換Ｃ３－２７アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ’’は、非置換Ｃ１７アルケニルである。
【0013】
いくつかの実施形態では、界面活性剤はＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約８０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、上記方法は、ＰＯＥ脂肪酸エステルを添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、ＰＯＥ脂肪酸エステルが、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から選択される脂肪酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＰＯＥ脂肪酸エステルは、ＰＯＥモノラウレート、ＰＯＥモノミリステート、ＰＯＥモノパルミテート、ＰＯＥモノステアレート及びＰＯＥモノオエレートからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約２０％未満がＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約１０％未満がＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、液体製剤中の約０．０００５％～０．２％（ｗ：ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ＰＯＥ脂肪酸エステルよりも多量のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤はソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約１０％未満、約８％未満、約５％未満、約３％未満又は約１％未満がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。
【0014】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドはタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、及び抗体断片からなる群から選択される抗体である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、液体製剤は再構成凍結乾燥製剤である。いくつかの実施形態では、液体製剤を輸液で約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬの濃度に更に希釈する。いくつかの実施形態では、液体製剤を更に凍結乾燥して、凍結乾燥製剤を調製する。いくつかの実施形態では、液体製剤は凝集体を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、液体製剤は、遊離脂肪酸粒子形成が少ない。
【0015】
本明細書に記載の様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、又は全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができることを理解されたい。本発明のこれら及び他の態様は、当業者に明らかであろう。本発明のこれら及び他の実施形態は、以下の発明を実施するための形態によって更に説明される。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
【0022】
【0023】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
【0028】
【0029】
【0030】
【0031】
【0032】
【0033】
【0034】
【0035】
【0036】
【発明を実施するための形態】
【0037】
本開示は、ポリソルベートの特定の画分が薬学的タンパク質製剤において強い保護効果を提供するという発見に基づいている。具体的には、それらは、同じ保護効果に対してより少ない界面活性剤の使用を可能にし、それにより、ポリソルベートの分解から生じるタンパク質の生物学的活性に対する悪影響を最小限に抑える。一態様では、本開示は、ポリソルベートの１つ以上のかかる画分を含むタンパク質製剤を提供する。本明細書に記載のタンパク質製剤は、製剤中のタンパク質安定性の増加を実証した。本記載はまた、タンパク質製剤を作製するためのキット及び方法を提供する。
【0038】
Ｉ．定義
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を有する。本明細書で言及される全ての特許、出願、公開出願及び他の刊行物は、その全体が参照により組み込まれる。この段落に記載される定義が、参照により本明細書に組み込まれる特許、出願、又は他の刊行物に記載された定義に反するか、あるいは矛盾する場合、この段落に記載された定義は、参照により本明細書に組み込まれる定義よりも優先する。
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を有する。本明細書で言及される全ての特許、出願、公開出願及び他の刊行物は、その全体が参照により組み込まれる。この段落に記載される定義が、参照により本明細書に組み込まれる特許、出願、又は他の刊行物に記載された定義に反するか、あるいは矛盾する場合、この段落に記載された定義は、参照により本明細書に組み込まれる定義よりも優先する。
【0039】
明確にするために別個の実施形態の文脈で説明さる本開示の特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で説明される本開示の様々な特徴は、別個に又は任意の適切なサブコンビネーションで提供されてもよい。特定の方法の工程、試薬、又は条件に関する実施形態の全ての組合せは、本開示によって具体的に包含され、あたかも各々及び全ての組合せが個別に明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。
【0040】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、及び「ｔｈｅ（その）」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【0041】
本明細書における「約」値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体を対象とする変形を含む（かつ説明する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述には、「Ｘ」の記述が含まれる。
【0042】
「薬学的製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される被験体に許容できないほどに有毒な追加の成分を含有しない調製物を指す。いくつかの実施形態では、その製剤は無菌である。
【0043】
「再構成」製剤は、タンパク質が再構成製剤中に分散されるように、凍結乾燥したタンパク質又は抗体製剤を希釈剤に溶解することによって調製されたものである。再構成製剤は、目的のタンパク質で治療される患者への投与（例えば、非経口投与）に適しており、本発明の特定の実施形態では、皮下投与に適したものであり得る。
【0044】
「タンパク質」、「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、本明細書では任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために使用される。ポリマーは、直鎖状でも分岐状でもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。これらの用語はまた、自然に、又は介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、若しくは任意の他の操作又は修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。典型的には、本明細書で使用のタンパク質は、少なくとも約５～２０ｋＤ、あるいは少なくとも約１５～２０ｋＤ、又は少なくとも約２０ｋＤの分子量を有する。例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１つ以上の類縁体を含有するタンパク質、並びに当該技術分野で既知の他の修飾もこの定義に含まれる。特定の実施形態では、本明細書における定義に包含されるポリペプチドの例としては、例えば、レニン等の哺乳類ポリペプチド；成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；アルファ－１－抗トリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；レプチン；凝固因子、例えば、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、及びフォン・ヴィレブランド因子；抗凝固因子、例えば、プロテインＣ；心房性ナトリウム利尿因子；肺界面活性剤；プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼ又はヒト尿若しくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子－アルファ及び－ベータ；腫瘍壊死因子受容体、例えば、細胞死受容体５及びＣＤ１２０；ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；Ｂ－リンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）；増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化時に調節され、Ｔ細胞が正常に発現及び分泌している）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ－１－アルファ）；血清アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；微生物タンパク質、例えば、ベータラクタマーゼ；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えば、ＣＴＬＡ－４；インヒビン；アクチビン；血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤ－ＥＣＧＦ）；血管内皮成長因子ファミリータンパク質（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦＤ、及びＰｌＧＦ）；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）ファミリータンパク質（例えば、ＰＤＧＦ－Ａ、ＰＤＧＦ－Ｂ、ＰＤＧＦ－Ｃ、ＰＤＧＦ－Ｄ、及びそれらの二量体）；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリー、例えば、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦ４、及びＦＧＦ９；上皮成長因子（ＥＧＦ）；ホルモン又は成長因子受容体、例えば、ＶＥＧＦ受容体（複数可）（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、及びＶＥＧＦＲ３）、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体（複数可）（例えば、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及びＥｒｂＢ４ 受容体）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体（複数可）（例えば、ＰＤＧＦＲ－α及びＰＤＧＦＲ－β）、並びに線維芽細胞増殖因子受容体（複数可）；ＴＩＥリガンド（アンジオポイエチン、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２）、アンジオポイエチン受容体、例えば、ＴＩＥ１及びＴＩＥ２；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３、－４、－５、若しくは－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５、若しくはＮＴ－６）、又は神経成長因子、例えば、ＮＧＦ－ｂ；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、又はＴＧＦ－β５を含むＴＧＦ－アルファ及びＴＧＦ－ベータ；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）；ｄｅｓ（ｌ－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）；ＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ１９、及びＣＤ２０；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；ケモカイン、例えば、ＣＸＣＬ１２及びＣＸＣＲ４；インターフェロン（ｉｎｔｅｌｆｅｒｏｎ）、例えば、インターフェロン－アルファ、－ベータ、及び－ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＰ、及びＧ－ＣＳＦ；サイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１～ＩＬ－１０；ミッドカイン；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス抗原、例えば、ＡＩＤＳエンベロープの一部分；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；インテグリン、例えば、ＣＤｌｌａ、ＣＤｌｌｂ、ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ－４、及びＶＣＡＭ；エフリン；Ｂｖ８；デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）；Ｄｅｌ－１；ＢＭＰ９；ＢＭＰｌＯ；フォリスタチン；肝細胞成長因子（ＨＧＦ）／散乱因子（ＳＦ）；Ａｌｋｌ；Ｒｏｂｏ４；ＥＳＭｌ；パールカン；ＥＧＦ様ドメインマルチプル７（ＥＧＦＬ７）；ＣＴＧＦ及びそのファミリーのメンバー；トロンボスポンジン、例えば、トロンボスポンジン１及びトロンボスポンジン２；コラーゲン、例えば、コラーゲンＩＶ及びコラーゲンＸＶＩＩＩ；ニューロピリン、例えば、ＮＲＰ１及びＮＲＰ２；プレイオトロフィン（ＰＴＮ）；プログラニュリン；プロリフェリン；Ｎｏｔｃｈタンパク質、例えば、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ４；セマフォリン、例えば、Ｓｅｍａ３Ａ、Ｓｅｍａ３Ｃ、及びＳｅｍａ３Ｆ；腫瘍関連抗原、例えば、ＣＡ１２５（卵巣癌抗原）、又はＨＥＲ２、ＨＥＲ３若しくはＨＥＲ４の受容体；イムノアドヘシン；並びに上述のポリペプチドのいずれかの断片及び／又はバリアント、並びに例えば、上述のタンパク質のいずれかを含む１つ以上のタンパク質に結合する抗体断片を含む抗体が挙げられる。
【0045】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体等）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及びそれらが所望の生物学的活性を呈する限り抗体断片を包含する。
【0046】
「単離」抗体とは、その自然環境の成分から同定及び分離され、かつ／又は回収された抗体である。その自然環境の汚染物質成分は、抗体の試験的、診断的、又は治療的使用を妨害するであろう物質であり、そのようなものとしては酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）例えば、ローリー法によって決定される、９５重量％超、いくつかの実施形態では、９９重量％超になるまで、（２）例えば、スピニング・カップ・シークエネーターを使用して、Ｎ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）例えば、クマシーブルー又は銀染色を使用して、還元又は非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質性が得られるまで精製される。単離された抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツ抗体を含む。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【0047】
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から成る、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。また、各重鎖と軽鎖は、一定の間隔で鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を持ち、その後に複数の定常ドメインが続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、他端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられる。
【0048】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において同義に使用され、以下に記載のように、その実質的にインタクトな形態の抗体を指し、抗体断片をさすものではない。これらの用語は、具体的には、Ｆｅ領域を含有する重鎖を含む抗体を指す。
【0049】
「抗体断片」は、任意に、その抗原結合領域を含む、インタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子；並びに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【0050】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な変異、例えば、自然に発生する変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。ある特定の実施形態では、このようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、該標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって得られたものである。例えば、この選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、又は組換えＤＮＡクローンのプール等の複数のクローンからの特有のクローンの選択であり得る。選択された標的結合配列が、例えば、標的への親和性を改善し、標的結合配列をヒト化し、細胞培養におけるその産生を改善し、ｉｎ ｖｉｖｏでのその免疫原性を低減し、多特異性抗体等を作製するように更に改変されてもよく、かつ改変された標的結合配列を含む抗体が本発明のモノクローナル抗体でもあることを理解されたい。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向する。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体製剤は、それらが典型的には他の免疫グロブリンで汚染されていないという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られているという抗体の特徴を示し、抗体を何か特定の方法で作製しなければならないと解釈されるものではない。
【0051】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びにそれらが所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片を含む（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１－６８５５（１９８４）を参照されたい）。キメラ抗体にとしては、ＰＲＩＭＡＴＴＺＥＤ（登録商標）抗体が挙げられ、この抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルを目的とする抗原で免疫化することによって産生された抗体に由来する。
【0052】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基により置き換えられるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでもよい。これらの修飾を加えて、抗体の性能を更に洗練させることができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメインのうちの実質的に全てを含み、超可変ループのうちの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲのうちの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｅ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのＦｅの少なくとも一部も含む。更なる詳細については、例えば、ｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。また、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ２３：１０３５－１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）；並びに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照されたい。
【0053】
「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、及び／又は本明細書に開示されヒト抗体を作製するための技術のうちのいずれかを使用して作製された抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリ等の当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍａｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍａｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載される方法もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原投与に応答してこのような抗体を産生するよう改変されているが、その内在性遺伝子座は無能になっているトランスジェニック動物、例えば、免疫化ゼノマウスに抗原を投与することによって調製することが可能である（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により産生されるヒト抗体については、例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい。
【0054】
「安定した」製剤とは、内部のタンパク質が保管時にその物理的安定性及び／若しくは化学的安定性並びに／又は生物学的活性を本質的に保持する製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は、貯蔵時にその物理的及び化学的安定性、並びにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技法が当該技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された露光量及び／又は温度で選択された期間にわたって測定され得る。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、及び／又は目視検査によって）；ＲＯＳ形成の評価（例えば、軽いストレスアッセイ又は２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）ストレスアッセイを使用することによって）；タンパク質の特定のアミノ酸残基（例えば、モノクローナル抗体のＴｒｐ残基及び／又はＭｅｔ残基）の酸化；陽イオン交換クロマトグラフィー、イメージキャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）又はキャピラリゾーン電気泳動を使用して電荷不均一性を評価することによって；アミノ末端又はカルボキシ末端配列分析；質量分析；還元抗体及びインタクト抗体を比較するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシン又はＬＹＳ－Ｃ）分析；タンパク質の生物学的活性又は標的結合機能の評価（例えば、抗体の抗原結合機能）；等を含む様々な異なる方法で定性的及び／又は定量的に評価することができる。不安定性は、凝集、脱アミド（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化及び／又はＴｒｐ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化の違い、賦形剤の分解、微粒子（例えば、遊離脂肪酸粒子）の形成等のいずれか１つ以上を含み得る。
【0055】
タンパク質は、それが、色及び／若しくは透明度の目視検査時に、又はＵＶ光散乱若しくはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定されたときに、凝集、沈殿、及び／又は変性の兆候をほとんど又は全く示さない場合、薬学的製剤中で「その物理的安定性を保持する」。
【0056】
タンパク質は、所与の時点での化学的安定性が、タンパク質が以下に定義されるその生物学的活性を依然として保持しているとみなされるようなものである場合、薬学的製剤中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、タンパク質の化学的に改変された形態を検出及び定量することによって評定され得る。化学的改変は、例えば、トリプシンペプチドマッピング、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、及び液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を使用して評価され得るタンパク質酸化を含み得る。他のタイプの化学的改変としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィー又はｉｃＩＥＦによって評価され得るタンパク質の電荷改変が挙げられる。
【0057】
所与の時点でのタンパク質の生物学的活性が、例えばモノクローナル抗体の抗原結合アッセイで決定されるように、薬学的製剤が調製された時点で示された生物学的活性の約１０％以内（アッセイの誤差内）である場合、タンパク質は薬学的製剤中で「その生物学的活性を保持する」。本明細書で使用される場合、タンパク質の「生物学的活性」とは、標的に結合するタンパク質の能力、例えば、抗原に結合するモノクローナル抗体の能力を指す。これは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで測定され得る生物学的応答を更に含み得る。かかる活性は、アンタゴニスト活性又はアゴニスト活性であり得る。
【0058】
本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」、「ＰＥＧ」、「ポリエチレンオキシド」、「ＰＥＯ」、「ポリオキシエチレン」、及び「ＰＯＥ」という用語は互換的に使用され得、２つ以上のエチレンオキシドサブユニットで構成されるポリエーテル化合物を指す。「ポリエチレングリコール」は、エチレンオキシドオリゴマー（例えば、２～９個のエチレンオキシド単量体サブユニットを有する）又はエチレンオキシドポリマー（例えば、１０以上の９つのエチレンオキシド単量体サブユニットを有する）から構成され得る。
【0059】
「脂肪酸」は、長鎖炭化水素側鎖（ｓｉｄｅ ｇｒｏｕｐ）を有するカルボン酸である。それらは、メチル基のアルコールへの酸化、アルデヒド、次いで酸の等価物によって炭化水素から誘導される有機一塩基酸で構成される。脂肪酸は、飽和又は不飽和のいずれかであり得る。不飽和脂肪酸の場合、それらはシス（Ｚ）もしくはトランス（Ｅ）配置、又は両方の組合せを有することができる。
【0060】
「アルキル」は、指定の数の炭素原子、例えば、１～２０個の炭素原子、又は１～８個の炭素原子、又は１～６個の炭素原子を有する直鎖及び分岐の炭素鎖を包含する。例えば、Ｃ１－６アルキルは、１～６個の炭素原子の直鎖及び分岐鎖の両方のアルキルを包含する。特定の数の炭素を有するアルキル残基を挙げる場合、その数の炭素を有する全ての分枝鎖及び直鎖バージョンが包含されることが意図され、したがって、例えば、「プロピル」は、ｎ－プロピル及びイソプロピルを含み、「ブチル」は、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル及びｔ－ブチルを含む。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル及び３－メチルペンチルが挙げられるが、これらに限定されない。値の範囲が与えられる場合（例えば、Ｃ１－６アルキル）、その範囲内の各値並びに介在する全ての範囲が含まれる。例えば、「Ｃ１－６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１－６、Ｃ２－６、Ｃ３－６、Ｃ４－６、Ｃ５－６、Ｃ１－５、Ｃ２－５、Ｃ３－５、Ｃ４－５、Ｃ１－４、Ｃ２－４、Ｃ３－４、Ｃ１－３、Ｃ２－３、及びＣ１－２アルキルが挙げられる。
【0061】
「アルケニル」は、指定の数の炭素原子（例えば、２～８個又は２～６個の炭素原子）及び少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する不飽和分枝又は直鎖アルキル基を指す。基は、二重結合（複数可）の周りにシス又はトランス配置（Ｚ又はＥ配置）のいずれかであってもよい。アルケニル基としては、エテニル、プロペニル（例えば、プロパ－１－エン－１－イル、プロパ－１－エン－２－イル、プロパ－２－エン－１－イル（アリル）、プロパ－２－エン－２－イル）及びブテニル（例えば、ブタ－１－エン－１－イル、ブタ－１－エン－２－イル、２－メチル－プロパ－１－エン－１－イル、ブタ－２－エン－１－イル、ブタ－２－エン－１－イル、ブタ－２－エン－２－イル、ブタ－１，３－ジエン－１－イル、ブタ－１，３－ジエン－２－イル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0062】
「置換された」という用語は、特定の基又は部分が、アルコキシ、アシル、アシルオキシ、アルコキシカルボニル、カルボニルアルコキシ、アシルアミノ、アミノ、アミノアシル、アミノカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、シアノ、アジド、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、カルボキシル、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、アラルキル、アミノスルホニル、スルホニルアミノ、スルホニル、オキソ等の置換基を含むがこれらに限定されない１つ以上の置換基を持つこと意味する。「非置換の」という用語は、明記された基が置換基を担持しないことを意味する。「置換された」という用語が構造系を説明するために使用される場合、置換は、系上の任意の原子価許容位置で起こることを意味する。基又は部分が２つ以上の置換基を有する場合、置換基は互いに同じであっても異なっていてもよいことが理解される。いくつかの実施形態では、置換基又は部分は、１～５個の置換基を持つ。いくつかの実施形態では、置換基又は部分は、１つの置換基を持つ。いくつかの実施形態において、置換基又は部分は、２つの置換基を持つ。いくつかの実施形態において、置換基又は部分は、３つの置換基を持つ。いくつかの実施形態において、置換基又は部分は、４つの置換基を持つ。いくつかの実施形態において、置換基又は部分は、５つの置換基を持つ。
【0063】
「任意の」又は「任意に」とは、続いて記載される事象又は状況が生じてもよいこと、又は生じなくてもよいことを意味し、その記載は、その事象又は状況が起こる場合と、それが起こらない場合とを含むことを意味する。例えば、「置換されていてもよいアルキル」は、本明細書で定義される「アルキル」及び「置換アルキル」の両方を包含する。１つ以上の置換基を含有する任意の基に関して、かかる基は、立体的に実際的でなく、合成的に実現不可能であり、及び／又は本質的に不安定である任意の置換又は置換パターンを導入することを意図しないことが当業者によって理解されよう。基又は部分が任意に置換されている場合、本開示は、その基又は部分が置換されている実施形態及びその基又は部分が非置換である実施形態の両方を含むことも理解されよう。
【0064】
「滅菌」製剤は、無菌であるか、又は全ての生存微生物及びそれらの胞子を含まないか、又は本質的に含まない。
【0065】
ＩＩ．ポリペプチド製剤
ポリペプチド及び界面活性剤を含む製剤であって、界面活性剤がポリソルベートの１つ以上の成分を含む製剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は液体製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は凍結乾燥製剤である。
界面活性剤
ポリペプチド及び界面活性剤を含む製剤であって、界面活性剤がポリソルベートの１つ以上の成分を含む製剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は液体製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は凍結乾燥製剤である。
界面活性剤
【0066】
バイオ医薬品製剤は、一般に、界面応力から活性医薬成分を保護するために界面活性剤と共に製剤化される。界面、特に空気－水との相互作用は、撹拌又は長期保存中に治療用タンパク質の凝集を引き起こすことが示されている。ポリソルベートは、バイオ医薬品のためのこれらのタイプの相互作用を防止するために一般的に使用される界面活性剤である。それらは、一般に、それらの高い表面活性、低い臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）及び低い毒性のために選択される。しかしながら、これらの界面活性剤は、関連化合物の不均一な混合物であり、これらは、組合せとして、バイオ医薬品製剤に必要とされる固有の特性をそれらに与える。
【0067】
ポリソルベート（ＰＳ）は、脂肪酸でエステル化されたエトキシル化ソルビタンとして標準的に記載される乳化剤のクラスである。ＰＳは、複数層の不均一性を有する関連化合物の混合物である。第１の層は、脂肪酸エステルのテイル長さである。ＵＳＰ及びＥＰの研究論文は、ＰＳ２０に対するこれらのエステルの分布が、最大１％のカプロン酸（Ｃ６）エステル、１０％のカプリル酸（Ｃ８）エステル、１０％のカプリン酸（Ｃ１０）エステル、７％のステアリン酸（Ｃ１８）エステル、１１％のモノ不飽和Ｃ１８エステル、及び３％の二不飽和Ｃ１８エステルを含む、４０～６０％のラウリン酸（Ｃ１２）エステル、１４～２５％のミリスチン酸（Ｃ１４）エステル、及び７～１５％のパルミチン酸（Ｃ１６）エステルとなるべきであると指示している。更なる不均一性は、ＰＯＥ鎖の長さ並びにジ－及びトリ－エステルの存在に由来する。さらに、ソルビトールからのソルビタンの合成中にイソソルビドも形成され、これは４つではなく２つのＰＯＥアームを有するそれ自体の一連のＰＳ２０様化合物を生成することができる。下記の表１も参照されたい。様々な成分は、著しく異なる溶液及び界面特性を有することがわかっている。特に、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル成分は、ポリペプチドに対してより大きな保護特性を有する。したがって、（例えば、ＥＰ又はＵＳＰの研究論文に記載されているように）ポリソルベートよりも高濃度のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル（例えば、少なくとも７０％（重量％））を使用することにより、液体製剤中のポリペプチドにより大きな保護を提供しながら、より少量の界面活性剤の使用が可能になる。
【0068】
本明細書では、製剤中のポリペプチドを保護するのに有効なポリソルベートの特定の成分を有する界面活性剤を含むバイオ医薬品製剤が提供される。いくつかの実施形態では、これらの成分は、より少ない界面活性剤の使用を可能にするが、より高い安定性を提供する。いくつかの実施形態では、使用される界面活性剤の量が少ないと、遊離脂肪酸粒子の形成が少なくなる。いくつかの実施形態では、これらの成分は、遊離脂肪酸粒子に対するポリペプチドのより大きな保護を提供する。
【0069】
一態様では、界面活性剤はイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む。別の態様では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルを含む。
【0070】
いくつかの実施形態では、各イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及び各ＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、約５～１０ＰＯＥ単位、約１０～１５ＰＯＥ単位、約１５～２０ＰＯＥ単位、約２０～２５ＰＯＥ単位、約２５～３０ＰＯＥ単位、約１５～３０ＰＯＥ単位を有する。いくつかの実施形態では、各イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及び各ＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、５ＰＯＥ単位、６ＰＯＥ単位、７ＰＯＥ単位、８ＰＯＥ単位、９ＰＯＥ単位、１０ＰＯＥ単位、１１ＰＯＥ単位、１２ＰＯＥ単位、１３ＰＯＥ単位、１４ＰＯＥ単位、１５ＰＯＥ単位、１６ＰＯＥ単位、１７ＰＯＥ単位、１８ＰＯＥ単位、１９ＰＯＥ単位、２０ＰＯＥ単位、２１ＰＯＥ単位、２２ＰＯＥ単位、２３ＰＯＥ単位、２４ＰＯＥ単位、２５ＰＯＥ単位、２６ＰＯＥ単位、２７ＰＯＥ単位、２８ＰＯＥ単位、２９ＰＯＥ単位、３０ＰＯＥ単位、又はそれらの組合せを有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、約５～１０ＰＯＥ単位、約１０～１５ＰＯＥ単位、約１５～２０ＰＯＥ単位、約２０～２５ＰＯＥ単位、約２５～３０ＰＯＥ単位、約１５～３０ＰＯＥ単位を有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、５ＰＯＥ単位、６ＰＯＥ単位、７ＰＯＥ単位、８ＰＯＥ単位、９ＰＯＥ単位、１０ＰＯＥ単位、１１ＰＯＥ単位、１２ＰＯＥ単位、１３ＰＯＥ単位、１４ＰＯＥ単位、１５ＰＯＥ単位、１６ＰＯＥ単位、１７ＰＯＥ単位、１８ＰＯＥ単位、１９ＰＯＥ単位、２０ＰＯＥ単位、２１ＰＯＥ単位、２２ＰＯＥ単位、２３ＰＯＥ単位、２４ＰＯＥ単位、２５ＰＯＥ単位、２６ＰＯＥ単位、２７ＰＯＥ単位、２８ＰＯＥ単位、２９ＰＯＥ単位、３０ＰＯＥ単位、又はそれらの組合せを有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは約２０ＰＯＥ単位を有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルの両方が約５～３０ＰＯＥ単位を有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルの両方が約２０ＰＯＥ単位を有する。
【0071】
いくつかの実施形態では、各イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及び各ＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、及び置換されていてもよいアルキニルからなる群から独立して選択される脂肪酸鎖を有する。いくつかの実施形態では、アルキルは直鎖状である。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、非置換Ｃ４－２８アルキルである。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、アシル、ヒドロキシル、シクロアルキル、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、ニトロ、ハロ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル又はヘテロシクリルからなる群から選択される置換基で置換されたＣ４－２８アルキルである。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、非置換Ｃ４－２８アルケニルである。いくつかの実施形態では、アルケニルは、直鎖状又は分枝状である。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される化合物は、１つ以上の二重結合を有する。いくつかの実施形態では、各二重結合は、シス配置を有する。いくつかの実施形態では、各二重結合は、トランス配置を有する。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、アシル、ヒドロキシル、シクロアルキル、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、ニトロ、ハロ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル又はヘテロシクリルからなる群から選択される置換基で置換されたＣ４－２８アルケニルである。
【0072】
いくつかの実施形態では、各イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、１、２、３、又は４つのＰＯＥアームを有する。いくつかの実施形態では、各イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは２つのＰＯＥアームを有する。
【0073】
いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、以下の式（Ｉ）：
［式中：
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、但し、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の構造を有する。
ａ及びｂは独立して２～２８の整数であり、但し、ａ及びｂの合計は５～３０の整数であり；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’（式中、Ｒ’’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルである）からなる群から選択され；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素である］
の構造を有する。
【0074】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、ａとｂの合計は、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０、約２０～２５、約２５～３０、又は約１５～３０である。式（Ｉ）のいくつかの態様では、ａとｂの合計は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０である。いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は９である。いくつかの実施形態では、ａとｂの合計は２０である。式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは水素ではない。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ１とＲ２の両方が－Ｃ（Ｏ）Ｒ’’である。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、任意に置換されているＣ３－２７アルキルである。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換のＣ３－２７アルキルである。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｃ３－２７アルキルは直鎖状である。式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｃ３－２７アルキルは分岐鎖である。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換のＣ５アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１９アルキル、Ｃ２１アルキル、又はＣ２３アルキルである。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換の直鎖Ｃ１１アルキルである。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、任意に置換されているＣ３－２７アルケニルである。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換のＣ３－２７アルケニルである。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｃ３－２７アルケニルは直鎖状である。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、非置換のＣ５アルケニル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１９アルケニル、Ｃ２１アルケニル、又はＣ２３アルケニルである。式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｒ’’は２つ以上の二重結合を有する。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、２つ以上の二重結合はシス配置を有する。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、２つ以上の二重結合はトランス配置を有する。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、シス配置を有する１つの二重結合を有する。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、トランス配置を有する１つの二重結合を有する。式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｒ’’は、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）３ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、－（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）８ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３、－（ＣＨ２）９ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、
－（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、及び
－（ＣＨ２）１１ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３からなる群から選択される。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３であり、二重結合はシス配置を有する。式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｒ’’は－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はシス配置を有する。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はトランス配置を有する。
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、
－（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、及び
－（ＣＨ２）１１ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３からなる群から選択される。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３であり、二重結合はシス配置を有する。式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｒ’’は－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はシス配置を有する。式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はトランス配置を有する。
【0075】
いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも７０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも８０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも９０％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも９５％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。
【0076】
いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、モノエステル、ジエステル、トリエステル、テトラエステル及びそれらの組合せから選択される。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルはモノエステルである。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸モノエステルは、イソソルビドＰＯＥモノカプロエート、イソソルビドＰＯＥモノカプリレート、イソソルビドＰＯＥモノカプレート、イソソルビドＰＯＥモノラウレート、イソソルビドＰＯＥモノミリステート、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート、イソソルビドＰＯＥモノパルミトレエート、イソソルビドＰＯＥモノステアレート、イソソルビドＰＯＥモノオレエート、イソソルビドＰＯＥモノリノレエート、イソソルビドＰＯＥモノリノレネート、及びそれらの組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルはジエステルである。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸ジエステルは、イソソルビドＰＯＥジカプロエート、イソソルビドＰＯＥジカプリレート、イソソルビドＰＯＥジカプレート、イソソルビドＰＯＥジラウレート、イソソルビドＰＯＥジミリステート、イソソルビドＰＯＥジパルミテート、イソソルビドＰＯＥジパルミトレエート、イソソルビドＰＯＥジステアレート、イソソルビドＰＯＥジレエート、イソソルビドＰＯＥジリノレエート、イソソルビドＰＯＥジリノレネート、及びそれらの組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは式（Ｉ）の化合物である。
【0077】
いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルは同じ脂肪酸鎖を有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルは、異なる脂肪酸鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＥ脂肪酸エステルは、ＰＯＥモノカプロエート、ＰＯＥモノカプリレート、ＰＯＥモノカプレート、ＰＯＥモノラウレート、ＰＯＥモノミリステート、ＰＯＥモノパルミテート、ＰＯＥモノパルミトレエート、ＰＯＥモノステアレート、ＰＯＥモノオエレート、ＰＯＥモノリノレエート、ＰＯＥモノリノレネート、ＰＯＥジカプロエート、ＰＯＥジカプリレート、ＰＯＥジカプレート、ＰＯＥジラウレート、ＰＯＥジミリステート、ＰＯＥジパルミテート、ＰＯＥジパルミトレエート、ＰＯＥジステアレート、ＰＯＥジオエレート、ＰＯＥジリノレエート、ＰＯＥジリノレネート、及びそれらの組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノラウレート及びＰＯＥモノラウレートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート及びＰＯＥモノパルミテートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノミリステート及びＰＯＥモノミリステートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノオレエート及びＰＯＥモノオレエートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノリノレエート及びＰＯＥモノリノレエートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ＰＯＥ脂肪酸エステルよりも多量のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約７．５％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．７５％未満、約０．５％未満、又は約０．１％未満（重量％）がＰＯＥ脂肪酸エステルである。
【0078】
別の態様では、界面活性剤はソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、約５～１０ＰＯＥ単位、約１０～１５単位、約１５～２０ＰＯＥ単位、約２０～２５ＰＯＥ単位、約２５～３０ＰＯＥ単位、約１５～３０ＰＯＥ単位を有する。いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、５ＰＯＥ単位、６ＰＯＥ単位、７ＰＯＥ単位、８ＰＯＥ単位、９ＰＯＥ単位、１０ＰＯＥ単位、１１ＰＯＥ単位、１２ＰＯＥ単位、１３ＰＯＥ単位、１４ＰＯＥ単位、１５ＰＯＥ単位、１６ＰＯＥ単位、１７ＰＯＥ単位、１８ＰＯＥ単位、１９ＰＯＥ単位、２０ＰＯＥ単位、２１ＰＯＥ単位、２２ＰＯＥ単位、２３ＰＯＥ単位、２４ＰＯＥ単位、２５ＰＯＥ単位、２６ＰＯＥ単位、２７ＰＯＥ単位、２８ＰＯＥ単位、２９ＰＯＥ単位、３０ＰＯＥ単位、又はそれらの組合せを有する。
【0079】
いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、及び置換されていてもよいアルキニルからなる群から独立して選択される脂肪酸鎖を有する。いくつかの実施形態では、アルキルは直鎖状である。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、非置換Ｃ４－２８アルキルである。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、アシル、ヒドロキシル、シクロアルキル、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、ニトロ、ハロ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル又はヘテロシクリルからなる群から選択される置換基で置換されたＣ４－２８アルキルである。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、非置換Ｃ４－２８アルケニルである。いくつかの実施形態では、アルケニルは、直鎖状又は分枝状である。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される化合物は、１つ以上の二重結合を有する。いくつかの実施形態では、各二重結合は、シス配置を有する。いくつかの実施形態では、各二重結合は、トランス配置を有する。いくつかの実施形態では、脂肪酸鎖は、アシル、ヒドロキシル、シクロアルキル、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、ニトロ、ハロ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル又はヘテロシクリルからなる群から選択される置換基で置換されたＣ４－２８アルケニルである。
【0080】
いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、２、３、又は４つのＰＯＥアームを有する。いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、４つのＰＯＥアームを有する。
【0081】
いくつかの実施形態では、ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、以下の式（ＩＩ）：
［式中：
ｗ、ｚ、ｙ、及びｘは独立して２～２４の整数であり、但し、ｗ、ｚ、ｙ、及びｘの合計は１５～３０の整数であり；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’からなる群から選択され、Ｒ’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルであり；
Ｒ９は、水素である］
の構造を有する。
ｗ、ｚ、ｙ、及びｘは独立して２～２４の整数であり、但し、ｗ、ｚ、ｙ、及びｘの合計は１５～３０の整数であり；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、独立して、水素及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ’からなる群から選択され、Ｒ’は、置換されていてもよいＣ３－２７アルキル又は置換されていてもよいＣ３－２７アルケニルであり；
Ｒ９は、水素である］
の構造を有する。
【0082】
式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、ｗ、ｚ、ｙ及びｘの合計は、約１５～２０、約２０～２５、約２５～３０又は約１５～３０である。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、ｗ、ｚ、ｙ及びｘの合計は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０である。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８の少なくとも１つは水素ではない。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８の少なくとも２つは水素ではない。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’である。いくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７はＨであり、Ｒ８は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’である。いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６はＨであり、Ｒ３及びＲ４は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’である。いくつかの実施形態において、Ｒ６はＨであり、Ｒ５、Ｒ７及びＲ８は－Ｃ（Ｏ）Ｒ’である。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、任意に置換されていたＣ３－２７アルキルである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ３－２７アルキルである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｃ３－２７アルキルは直鎖状である。式（ＩＩ）のいくつかの態様では、Ｃ３－２７アルキルは分岐鎖である。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ５アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１９アルキル、Ｃ２１アルキル、又はＣ２３アルキルである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、非置換の直鎖Ｃ１１アルキルである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、任意に置換されていたＣ３－２７アルケニルである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ３－２７アルケニルである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｃ３－２７アルケニルは直鎖状である。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ５アルケニル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１９アルケニル、Ｃ２１アルケニル、又はＣ２３アルケニルである。式（ＩＩ）のいくつかの態様では、Ｒ’は２つ以上の二重結合を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、２つ以上の二重結合はシス配置を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、２つ以上の二重結合はトランス配置を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、シス配置を有する１つの二重結合を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、トランス配置を有する１つの二重結合を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）３ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、－（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）８ＣＨ３、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３、－（ＣＨ２）９ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、
－（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、及び
－（ＣＨ２）１１ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３からなる群から選択される。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３であり、二重結合はシス配置を有する。式（ＩＩ）のいくつかの態様では、Ｒ’は－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はシス配置を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はトランス配置を有する。
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３、－（ＣＨ２）９ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５ＣＨ３、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、
－（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、及び
－（ＣＨ２）１１ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３からなる群から選択される。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３であり、二重結合はシス配置を有する。式（ＩＩ）のいくつかの態様では、Ｒ’は－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はシス配置を有する。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｒ’は、
－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、両方の二重結合はトランス配置を有する。
【0083】
いくつかの実施形態では、界面活性剤の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも１％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも５％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも１０％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも１５％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。
【0084】
いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、モノエステル、ジエステル、トリエステル又はテトラエステルである。いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、ソルビタンＰＯＥモノカプロエート、ソルビタンＰＯＥモノカプリレート、ソルビタンＰＯＥモノカプレート、ソルビタンＰＯＥモノラウレート、ソルビタンＰＯＥモノミリステート、ソルビタンＰＯＥモノパルミテート、ソルビタンＰＯＥモノパルミトレエート、ソルビタンＰＯＥモノステアレート、ソルビタンＰＯＥモノオエレート、ソルビタンＰＯＥモノリノレエート、ソルビタンＰＯＥモノリノレネート、ソルビタンＰＯＥジカプロエート、ソルビタンＰＯＥジカプリレート、ソルビタンＰＯＥジカプレート、ソルビタンＰＯＥジラウレート、ソルビタンＰＯＥジミリステート、ソルビタンＰＯＥジパルミテート、ソルビタンＰＯＥジパルミトレエート、ソルビタンＰＯＥジステアレート、ソルビタンＰＯＥジオエレート、ソルビタンＰＯＥジリノレエート、ソルビタンＰＯＥジリノレネート、ソルビタンＰＯＥトリカプロエート、ソルビタンＰＯＥトリカプリレート、ソルビタンＰＯＥトリカプレート、ソルビタンＰＯＥトリラウレート、ソルビタンＰＯＥトリミリステート、ソルビタンＰＯＥトリパルミテート、ソルビタンＰＯＥトリパルミトレート、ソルビタンＰＯＥトリステアレート、ソルビタンＰＯＥトリオエレート、ソルビタンＰＯＥトリリノレエート、及びソルビタンＰＯＥトリリノレネートからなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態では、ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、式（ＩＩ）の化合物である。
【0085】
別の態様では、本明細書に開示される界面活性剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、又は約０．１％（ｗ：ｖ）を超える臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。別の態様では、界面活性剤は、約２０ｍＮ／ｍ、約２５ｍＮ／ｍ、約３０ｍＮ／ｍ、約３５ｍＮ／ｍ、約４０ｍＮ／ｍ、約４５ｍＮ／ｍ、約５０ｍＮ／ｍ、約５５ｍＮ／ｍ、又は約６０ｍＮ／ｍ未満の表面張力を有する。
ポリペプチド
ポリペプチド
【0086】
本明細書の開示は、ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤に関する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体製剤中のポリペプチドは本質的に純粋である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体製剤中のポリペプチドは本質的に均質である（すなわち、混入タンパク質を含まない）。「本質的に純粋な」ポリペプチドは、組成物の総重量に基づいて、ポリペプチドの少なくとも約９０重量％を含む組成物を意味する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、組成物の総重量に基づいて少なくとも９５重量％である。「本質的に均質な」ポリペプチドは、組成物の総重量に基づいて、ポリペプチドの少なくとも約９９重量％を含む組成物を意味する。
【0087】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは抗体である。本明細書の抗体は、目的の「抗原」に対するものである。いくつかの実施形態では、抗原は、生物学的に重要なタンパク質であり、疾患又は障害に罹患している哺乳動物への抗体の投与により、その哺乳動物に治療的利益がもたらされ得る。いくつかの実施形態では、非タンパク質抗原（腫瘍関連糖脂質抗原等；例えば、米国特許第５，０９１，１７８号明細書を参照されたい）に対する抗体も企図される。抗原がタンパク質である場合、それは、膜貫通分子（例えば、受容体）又は成長因子等のリガンドであり得る。例示的な抗原としては、本明細書に記載の任意のタンパク質が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示によって包含される抗体の分子標的としては、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ３４等のＣＤポリペプチド；ＨＥＲ受容体ファミリーのメンバー、例えば、ＥＧＦ受容体（ＨＥＲ１）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３又はＨＥＲ４受容体；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１～ＩＬ－１０；ＬＦＡ－１、Ｍａｃｌ、ｐ１５０、９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ及びａｖ／ｂ３インテグリン等の細胞接着分子（例えば、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８又は抗ＣＤ１１ｂ抗体）；成長因子、例えばＶＥＧＦ；ＩｇＥ；血液型抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ－４；プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）；プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）；ポリペプチドＣ等が挙げられる。任意に他の分子にコンジュゲートされた可溶性抗原又はその断片を、抗体を生成するための免疫原として使用することができる。受容体等の膜貫通分子に対しては、これらの断片（例えば、受容体の細胞外ドメイン）が、免疫原として使用され得る。代替的に、膜貫通分子を発現する細胞が、免疫原として使用され得る。このような細胞は、自然源（例えば、がん細胞株）由来であり得るか、又は膜貫通分子を発現するように組換え技法によって形質転換された細胞であり得る。
【0088】
いくつかの実施形態では、抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、ポリ特異性抗体、キメラ抗体及びヘテロコンジュゲート抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片及び全抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片からなる群から選択される。
【0089】
製剤中のポリペプチドは、当該技術分野で公知の方法を使用して、例えばポリペプチドをコードする核酸を含有するベクターで形質転換又はトランスフェクトした細胞を培養することによって、又は合成技術（例えば、組換え技術及びペプチド合成又はこれらの技術の組合せ）によって調製され得るか、又はポリペプチドの内因性供給源から単離され得る。
【0090】
Ａ．タンパク質調製
組換え手段による本開示の方法によって製剤化されるタンパク質の調製は、適切な宿主細胞を発現ベクター又はクローニングベクターでトランスフェクト又は形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地中で培養することによって達成され得る。培地、温度、及びｐＨ等の培養条件は、当業者が過度の実験を行うことなく選択することができる。一般に、細胞培養物の生産性を最大化するための原理、プロトコル、及び実用的な技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ，Ｅｄ．（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９９１）ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓに見ることができる。トランスフェクションの方法は、当業者に公知であり、例えば、ＣａＰＯ４及びＣａＣｌ２トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション等が挙げられる。適切な技術は、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．にも記載されている。更なるトランスフェクション技術は、Ｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ２３：３１５（１９８３）；国際公開第８９／０５８５９号；Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ５２：４５６－４５７（１９７８）、及び米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。
組換え手段による本開示の方法によって製剤化されるタンパク質の調製は、適切な宿主細胞を発現ベクター又はクローニングベクターでトランスフェクト又は形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地中で培養することによって達成され得る。培地、温度、及びｐＨ等の培養条件は、当業者が過度の実験を行うことなく選択することができる。一般に、細胞培養物の生産性を最大化するための原理、プロトコル、及び実用的な技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ，Ｅｄ．（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９９１）ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓに見ることができる。トランスフェクションの方法は、当業者に公知であり、例えば、ＣａＰＯ４及びＣａＣｌ２トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション等が挙げられる。適切な技術は、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．にも記載されている。更なるトランスフェクション技術は、Ｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ２３：３１５（１９８３）；国際公開第８９／０５８５９号；Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ５２：４５６－４５７（１９７８）、及び米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。
【0091】
本方法による製剤化のための所望のタンパク質をコードする核酸は、クローニング又は発現のために複製可能なベクターに挿入され得る。適切なベクターは公的に入手可能であり、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子又はファージの形態をとることができる。適切な核酸配列は、様々な手順によってベクターに挿入され得る。一般に、ＤＮＡは、当該技術分野で公知の技術を用いて適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に挿入される。ベクター成分としては、一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子及びエンハンサ要素、プロモーター、並びに転写終結配列のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。これらの成分の１つ以上を含有する好適なベクターの構築は、当業者に公知である標準的なライゲーション技術を用いる。
【0092】
製剤化されるタンパク質の形態は、培養培地又は宿主細胞溶解物から回収され得る。膜に結合している場合、それは、好適な洗浄剤を使用して、又は酵素的切断によって膜から放出され得る。発現に使用される細胞はまた、凍結融解サイクリング、超音波処理、機械的破壊又は細胞溶解剤等の様々な物理的又は化学的手段によって破壊され得る。
【0093】
製剤化されるタンパク質の精製は、当該技術分野で公知の任意の適切な技術、例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ又はカチオン交換樹脂（例えば、ＤＥＡＥ）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、ＩｇＧ等の汚染物質を除去するためのプロテインＡセファロースカラム（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－７５）を使用したゲル濾過、及びエピトープタグ付き形態に結合するための金属キレートカラム等によって行われ得る。
【0094】
Ｂ．抗体調製
本発明の特定の実施形態では、選択されるタンパク質は抗体である。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体及びヘテロコンジュゲート抗体を含む抗体の産生のための技術を以下に示す。
本発明の特定の実施形態では、選択されるタンパク質は抗体である。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体及びヘテロコンジュゲート抗体を含む抗体の産生のための技術を以下に示す。
【0095】
１．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、一般に、関連する抗原及びアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物中で産生される。関連抗原を、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン又はダイズトリプシンインヒビターにコンジュゲートさせることが有用であり得る。用いることができるアジュバントの例として、フロイント完全アジュバント、及びＭＰＬ－ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）が挙げられる。免疫プロトコルは、当業者であれば過度な実験を行うことなく選択することができる。
ポリクローナル抗体は、一般に、関連する抗原及びアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物中で産生される。関連抗原を、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン又はダイズトリプシンインヒビターにコンジュゲートさせることが有用であり得る。用いることができるアジュバントの例として、フロイント完全アジュバント、及びＭＰＬ－ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）が挙げられる。免疫プロトコルは、当業者であれば過度な実験を行うことなく選択することができる。
【0096】
１ヶ月後、動物を、複数の部位での皮下注射によって、フロイントの完全アジュバント中の元々の量の１／５～１／１０のペプチド又はコンジュゲートで追加免疫する。７～１４日後、動物から採血し、血清を抗体価についてアッセイする。力価がプラトー状態になるまで、動物を追加免疫する。いくつかの実施形態において、動物は、同じ抗原のコンジュゲートで追加免疫されるが、異なるタンパク質に複合され、かつ／又は異なる架橋試薬により複合される。コンジュゲートはまた、タンパク質融合物として組換え細胞培養で作製することもできる。ミョウバン（ａｌｕｍ）等の凝集剤も免疫応答を増強するために、好適に使用される。
【0097】
２．モノクローナル抗体。
モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体の集団から得られ、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然に存在する変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。
モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体の集団から得られ、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然に存在する変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。
【0098】
例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製されてもよく、又は組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製されてもよい。
【0099】
ハイブリドーマ法において、マウス、又はハムスター等の他の適切な宿主動物が、本明細書に上記されるように免疫化されて、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合するであろう抗体を産生するか、又は産生することができるリンパ球が誘発される。あるいは、リンパ球をｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。その後、リンパ球は、ポリエチレングリコール等の好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞に融合されて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【0100】
免疫化剤は、典型的には、製剤化されるタンパク質を含む。一般に、ヒト起源の細胞が望まれる場合は末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、非ヒト哺乳動物源が望まれる場合は脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコール等の適切な融合剤を使用して、リンパ球を不死化細胞株と融合させてハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９－１０３。
【0101】
不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシ及びヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウス骨髄腫細胞株が使用される。したがって、ハイブリドーマ細胞は、非融合の親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する１種以上の物質を任意に含有する適切な培地中で播種され、培養される。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（ＨＡＴ培地）が含まれ、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨げる。
【0102】
好適な不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地等の培地に感受性があるものである。いくつかの実施形態では、骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えば、米国カリフォルニア州サンディエゴのＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒから入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍に由来するもの、並びに米国バージニア州マナッサスのＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能なＳＰ－２細胞（及びその誘導体、例えばＸ６３－Ａｇ８－６５３）である。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【0103】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培地は、抗原に対して指向されるモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。いくつかの実施態様において、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法によって、又は放射免疫測定法（ＲＩＡ）若しくは酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）等のｉｎ ｖｉｔｒｏの結合試験によって決定される。
【0104】
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、再び所望の抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。いくつかの態様では、モノクローナル抗体の結合親和性及び結合特異性は、免疫沈降によって、又はｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等）によって決定することができる。かかる技術及びアッセイは、当該技術分野において公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード解析により決定することができる。
【0105】
所望の特異性、親和性、及び／又は活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞が特定された後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準の方法によって成長し得る（上述のＧｏｄｉｎｇ）。この目的のための好適な培地には、例えば、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍としてｉｎ ｖｉｖｏで増殖させてもよい。
【0106】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手技、例えば、タンパク質Ａ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又は親和性クロマトグラフィー等によって、培養培地、腹水、又は血清から好適に分離される。
【0107】
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているもの、及び上記のものによって作製され得る。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。いくつかの実施態様において、ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの供給源として機能する。単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに入れられてもよく、発現ベクターはその後、免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は骨髄腫細胞等の宿主細胞にトランスフェクトされ、かかる組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６－２６２（１９９３）ａｎｄ Ｐｌｉｉｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１－１８８（１９９２）が挙げられる。
【0108】
更なる実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２－５５４（１９９０）に記載されている技術を使用して生成された抗体ファージライブラリーから抗体を単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）ａｎｄ Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍａｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）には、ファージライブラリーを用いたマウス抗体及びヒト抗体のそれぞれの単離が記載されている。その後の刊行物は、非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略として、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｉ’ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３（１９９２））による高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生、並びにコンビナトリアル感染及びｉｎ ｖｉｖｏ組換えを記載している（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１：２２６５－２２６６（１９９３））。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替手段である。
【0109】
ＤＮＡは、例えば相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部若しくは一部を共有結合することによっても修飾することができる。典型的には、かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに置換されるか、又はそれらは、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに置換されて、抗原に対して特異性を有する１つの抗原結合部位、及び異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製する。
【0110】
本明細書に記載のモノクローナル抗体は一価であってもよく、その調製は当該技術分野で周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖及び修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖架橋を防ぐために、一般にＦｃ領域の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基は、架橋を防ぐために、別のアミノ酸残基で置換されていてもよく、又は欠失されていてもよい。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ法はまた、一価抗体を調製するのにも適している。その断片、特にＦａｂ断片を産生するための抗体の消化は、当該技術分野で公知の日常的な技術を用いて達成することができる。
【0111】
キメラ抗体又はハイブリッド抗体はまた、架橋剤を含む合成タンパク質化学における公知の方法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで調製され得る。例えば、ジスルフィド交換反応を使用して、又はチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を構築してもよい。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオラート及びメチル－４－メルカプトブチリミデートが挙げられる。
【0112】
３．ヒト化抗体。
本発明の抗体は、ヒト化又はヒト抗体を更に含んでもよい。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列等）である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入された（ｉｍｐｏｒｔｅｄ）ＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最も有利には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことになる。Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）。
本発明の抗体は、ヒト化又はヒト抗体を更に含んでもよい。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列等）である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入された（ｉｍｐｏｒｔｅｄ）ＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最も有利には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことになる。Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）。
【0113】
非ヒト抗体のヒト化方法は、当該技術分野において周知である。概して、ヒト化抗体は、非ヒトである源からそれに導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。こうした非ヒトアミノ酸残基は、通常、「移入」残基と呼ばれ、典型的には「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ及び同僚（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））の方法に従って、げっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって行われる。よって、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ないものが非ヒト種の対応する配列で置換されたキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は典型的には、一部のＣＤＲ残基そして場合により一部のＦＲ残基が、齧歯類抗体中の類似部位からの残基で置換されているヒト抗体である。
【0114】
ヒト化抗体の作製に使用されるヒト可変ドメイン（重鎖及び軽鎖の両方）の選択は、抗原性を低減するのに非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法によれば、げっ歯類の抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメインの配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。その後、齧歯類の配列に最も近いヒト配列がヒト化抗体のヒトフレームワークとして認められる。Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍａｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）。別の方法は、軽鎖又は重鎖の特定の下位群の全てのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークがいくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）。
【0115】
抗体は、抗原に対する高親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持してヒト化されることが更に重要である。この目標を達成するために、いくつかの実施態様において、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列及び多様な概念的ヒト化産物の分析プロセスを経て調製される。三次元の免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の予想される三次元立体配座構造を図解及び表示するコンピュータプログラムが入手可能である。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原へ結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基をレシピエント配列及び移入配列から選択して組み合わせることができ、その結果、標的抗原（複数可）に対する親和性の向上等の所望の抗体特性が得られる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的かつ最も実質的に関与する。
【0116】
様々な形態のヒト化抗体が企図される。例えば、ヒト化抗体は、Ｆａｂ等の抗体断片であってもよく、これは、免疫コンジュゲートを生成するために、１つ以上の細胞傷害剤（複数可）と任意にコンジュゲートされる。代替的に、ヒト化抗体は、インタクトＩｇＧｌ抗体等のインタクト抗体であってもよい。
【0117】
４．ヒト抗体
ヒト化の代替策として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、免疫の際に、内因性免疫グロブリン産生なしでヒト抗体の完全なレパートリーを生成する能力があるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが現在可能になっている。例えば、キメラマウス及び生殖系列変異体マウスにおいて、抗体の重鎖接合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失は内因性抗体産生を完全に阻害することが記載されている。こうした生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生をもたらす。例えば、，Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５－２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，１：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号及び国際公開９７／１７８５２号を参照されたい。
ヒト化の代替策として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、免疫の際に、内因性免疫グロブリン産生なしでヒト抗体の完全なレパートリーを生成する能力があるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが現在可能になっている。例えば、キメラマウス及び生殖系列変異体マウスにおいて、抗体の重鎖接合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失は内因性抗体産生を完全に阻害することが記載されている。こうした生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生をもたらす。例えば、，Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５－２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，１：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号及び国際公開９７／１７８５２号を参照されたい。
【0118】
あるいは、ファージディスプレイ技術を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト抗体及び抗体フラグメントを産生することができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２－５５３（１９９０）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍａｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）。この技術によると、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３又はｆｄ等の糸状バクテリオファージの主要あるいは非主要なコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能的抗体断片として提示される。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡのコピーを含有するため、抗体の機能特性に基づく選択は、その特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択にもつながる。このように、ファージは、Ｂ細胞の特性の一部を模倣している。ファージディスプレイは、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：５６４－５７１（１９９３）において概説される様々なフォーマットで実施され得る。ファージディスプレイには、Ｖ遺伝子セグメントの複数の供給源を使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８（１９９１）は、免疫されたマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小規模なランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多種多様なアレイを単離した。免疫されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築し、抗原の多種多様なアレイに対する抗体（自己抗原を含む）を、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１），ｏｒ Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４（１９９３）により記載された技術に基本的に従って単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び同第５，５７３，９０５号も参照されたい。
【0119】
Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．の技術は、ヒトモノクローナル抗体（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）ａｎｄ Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５（１９９１））の調製にも利用可能である。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活性化されているマウスに導入することによって作製することができる。抗原刺激を受けたとき、ヒト抗体産生が観察され、これは、遺伝子再編成、アセンブリ及び抗体レパートリーを含む全ての点でヒトに見られるものに非常に類似している。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、及び以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｉ’ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９－７８３（１９９２）；Ｌｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６８：８５６－８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ３６８：８１２－１３（１９９４），Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８４５－５１（１９９６），Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８２６（１９９６）ａｎｄ Ｌｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５）に記載されている。
【0120】
最後に、ヒト抗体はまた、活性化Ｂ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照されたい）によってｉｎ ｖｉｔｒｏで生成され得る。
【0121】
５．抗体断片
特定の状況では、全抗体ではなく抗体断片を使用することに利点がある。より小さい断片サイズは、迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍へのアクセスの改善をもたらし得る。
特定の状況では、全抗体ではなく抗体断片を使用することに利点がある。より小さい断片サイズは、迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍へのアクセスの改善をもたらし得る。
【0122】
抗体断片を生産するために様々な技術が開発されてきた。伝統的に、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄ．２４：１０７－１１７（１９９２）；ａｎｄ Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１（１９８５））。しかしながら、このような断片は現在、組換え宿主細胞により直接生産することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片は全て、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現されて分泌され得るため、これらの断片の容易な大量生成が可能になる。抗体断片は上記の抗体ファージライブラリから単離することができる。代替として、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から直接回収され、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の増加に伴うＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施形態において、最適な抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開第９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号、及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。抗体断片はまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているように、「直鎖抗体」であってもよい。かかる直鎖抗体断片は、単一特異的又は二重特異的であり得る。
【0123】
６．二重特異性抗体及び多重特異性抗体。
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、同じ又は別のタンパク質上のものを含む、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。あるいは、細胞防御機構を標的抗原発現細胞に集中させて局在化させるために、１つのアームを標的抗原に結合するように備えさせることができ、そして別のアームを白血球上のトリガー分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ３）又はＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲｌ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組み合わせることができる。かかる抗体は、完全長抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来し得る。
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、同じ又は別のタンパク質上のものを含む、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。あるいは、細胞防御機構を標的抗原発現細胞に集中させて局在化させるために、１つのアームを標的抗原に結合するように備えさせることができ、そして別のアームを白血球上のトリガー分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ３）又はＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲｌ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組み合わせることができる。かかる抗体は、完全長抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来し得る。
【0124】
二重特異性抗体を使用して、標的抗原を発現する細胞に細胞毒性剤を局在化させることもできる。かかる抗体は、所望の抗原に結合する１つのアームと、細胞傷害剤（例えば、サポリン、抗インターフェロン－ａ、ビンカアルコロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート又は放射性同位体ハプテン）に結合する別のアームとを有する。公知の二重特異性抗体の例としては、抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃｇＲＩＩＩ（国際公開第９６／１６６７３号）、抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃｇＲＩ（米国特許第５，８３７，２３４号）、抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３（米国特許第５，８２１，３３７号）が挙げられる。
【0125】
二重特異性抗体の作製方法は、当該技術分野で公知である。全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の同時発現に基づくものである。Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３）。免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖はランダムに取り合わされるため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の混合物を生成する可能性があり、そのうち１つだけが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、通常アフィニティークロマトグラフィー工程により行われるが、かなり面倒であり、生成物の収率は低い。同様の手順が、国際公開第９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０：３６５５－３６５９（１９９１）に開示されている。
【0126】
異なるアプローチによると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体－抗原結合部位）が、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。いくつかの実施態様において、この融合は、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの間で行われる。いくつかの実施形態では、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）は、融合物のうちの少なくとも１つに存在する。免疫グロブリン重鎖融合体と、所望により免疫グロブリン軽鎖とをコードしているＤＮＡを別々の発現ベクター中に挿入し、好適な宿主生物の中にコトランスフェクトする。これにより、構築に使用する３つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率をもたらす実施態様において、３つのポリペプチド断片の相互の割合を調節する際に大きな柔軟性がもたらされる。しかしながら、等しい比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率をもたらす場合、又はその比率に特に意味がない場合、２つ若しくは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【0127】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアームにある第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームにあるハイブリッド免疫グロブリン重鎖－軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）から構成される。このような非対称的構造により、不要な免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離が容易になることが見出された。これは、二重特異性分子の半分にのみ免疫グロブリン軽鎖が存在することで、分離が容易になるためである。このアプローチは、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体生成の更なる詳細については、例えばＳｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。
【0128】
国際公開第９６／２７０１１号又は米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別のアプローチによると、一対の抗体分子間の界面を操作して、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にすることができる。いくつかの実施態様において、界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置き換えられる。大きなアミノ酸側鎖をそれよりも小さなもの（例えばアラニン又はスレオニン）で置き換えることにより、大きな側鎖（複数可）と同じ又は類似のサイズを有する代償性「空洞」が第２の抗体分子の界面に創出される。これは、ヘテロ二量体の収率をホモ二量体等の他の不要な最終生成物よりも高める機構を提供する。
【0129】
抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術が文献に記載されている。例えば、化学結合を用いて二重特異性抗体を調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体をタンパク質分解で切断してＦ（ａｂ’）２断片を生成する手順を記載している。これらの断片は、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されて、近接するジチオールを安定させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。その後、生成されたＦａｂ’断片をチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’－ＴＮＢ誘導体の１つをＦａｂ’－ＴＮＢ誘導体に再変換して二重特異性抗体を形成する。生成された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化用薬剤として使用され得る。
【0130】
Ｆａｂ’断片を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から直接回収し、化学的に結合させて二重特異性抗体を形成してもよい。Ｓｈａｌａｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７－２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生について記載している。各Ｆａｂ’断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から別個に分泌され、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの指向性化学的カップリングに供されて、二重特異性抗体を形成した。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及び正常ヒトＴ細胞に結合することができ、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞毒性リンパ球の溶解活性を誘発することもできた。
【0131】
組換え細胞培養から直接二価抗体断片を作製及び単離するための様々な技術も記載されている。例えば、二価ヘテロ二量体は、ロイシンジッパーを使用して製造されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合により、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。この抗体ホモ二量体は、ヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、その後再酸化されて抗体ヘテロ二量体を形成した。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）によって記載される「ダイアボディ」技術は、二重特異性／二価抗体断片を作製するための代替機構を提供した。断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによって、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、ある断片のＶＨ及びＶＬドメインは、別の断片の相補的なＶＬ及びＶＨドメインと対形成することを余儀なくされることにより、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体の使用によって二重特異性／二価抗体断片を作製するための別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
【0132】
２を超える結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【0133】
例示的な二重特異性抗体は、所与の分子上の２つの異なるエピトープに結合し得る。あるいは、抗タンパク質アームは、特定のタンパク質を発現する細胞に細胞防御機構を集中させるために、白血球上のトリガー分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８又はＢ７）、又はＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体はまた、特定のタンパク質を発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用され得る。かかる抗体は、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ又はＴＥＴＡ等の細胞傷害剤又は放射性核種キレート剤に結合するタンパク質結合アーム及びアームを有する。目的の別の二重特異性抗体は、目的のタンパク質に結合し、更に組織因子（ＴＦ）に結合する。
【0134】
製剤
ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤が本明細書で提供される。本明細書に記載の任意の界面活性剤を液体製剤に使用することができる。いくつかの実施形態では、液体製剤中の界面活性剤は、液体製剤の約０．０００５％～０．２％、約０．０００５％～０．００１％、約０．００１％～０．００２％、約０．００２％～０．００３％、約０．００３％～０．００４％、約０．００４％～０．００５％、約０．００５％～０．００６％、約０．００６％～０．００７％、約０．００７％～０．００８％、約０．００８％～０．００９％、約０．００９％～０．０１％、約０．０１％～０．０１５％、約０．０１５％～０．０２％、約０．０２％～０．０２５％、約０．０２５％～０．０３％、約０．０３％～０．０３５％、約０．０３５％～０．０４％、約０．０４％～０．０４５％、約０．０４５％～０．０５％、約０．０５％～０．０５５％、約０．０５５％～０．０６％、約０．０６％～０．０６５％、約０．０６５％～０．０７％、約０．０７％～０．０７５％、約０．０７５％～０．０８％、約０．０８％～０．０８５％、約０．０８５％～０．０９％、約０．０９％～０．０９５％、約０．０９５％～０．１％、約０．１％～０．１１％、約０．１１％～０．１２％、約０．１２％～０．１３％、約０．１３％～０．１４％、約０．１４％～０．１５％、約０．１５％～０．１６％、約０．１６％～０．１７％、約０．１７％～０．１８％、約０．１８％～０．１９％、約０．１９％～０．２％、約０．０００５％～０．０１％、約０．０１％～０．０２％、約０．０２％～０．０３％、約０．０３％～０．０４％、約０．０４％～０．０５％、約０．０５％～０．０６％、約０．０６％～０．０７％、約０．０７％～０．０８％、約０．０８％～０．０９％、約０．０９％～０．１％、約０．１％～０．１２％、約０．１２％～０．１４％、約０．１４％～０．１６％、約０．１６％～０．１８％、約０．１８％～０．２％、又は約０．０００５％～０．０２％（ｗ：ｖ）の濃度を有する。
ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤が本明細書で提供される。本明細書に記載の任意の界面活性剤を液体製剤に使用することができる。いくつかの実施形態では、液体製剤中の界面活性剤は、液体製剤の約０．０００５％～０．２％、約０．０００５％～０．００１％、約０．００１％～０．００２％、約０．００２％～０．００３％、約０．００３％～０．００４％、約０．００４％～０．００５％、約０．００５％～０．００６％、約０．００６％～０．００７％、約０．００７％～０．００８％、約０．００８％～０．００９％、約０．００９％～０．０１％、約０．０１％～０．０１５％、約０．０１５％～０．０２％、約０．０２％～０．０２５％、約０．０２５％～０．０３％、約０．０３％～０．０３５％、約０．０３５％～０．０４％、約０．０４％～０．０４５％、約０．０４５％～０．０５％、約０．０５％～０．０５５％、約０．０５５％～０．０６％、約０．０６％～０．０６５％、約０．０６５％～０．０７％、約０．０７％～０．０７５％、約０．０７５％～０．０８％、約０．０８％～０．０８５％、約０．０８５％～０．０９％、約０．０９％～０．０９５％、約０．０９５％～０．１％、約０．１％～０．１１％、約０．１１％～０．１２％、約０．１２％～０．１３％、約０．１３％～０．１４％、約０．１４％～０．１５％、約０．１５％～０．１６％、約０．１６％～０．１７％、約０．１７％～０．１８％、約０．１８％～０．１９％、約０．１９％～０．２％、約０．０００５％～０．０１％、約０．０１％～０．０２％、約０．０２％～０．０３％、約０．０３％～０．０４％、約０．０４％～０．０５％、約０．０５％～０．０６％、約０．０６％～０．０７％、約０．０７％～０．０８％、約０．０８％～０．０９％、約０．０９％～０．１％、約０．１％～０．１２％、約０．１２％～０．１４％、約０．１４％～０．１６％、約０．１６％～０．１８％、約０．１８％～０．２％、又は約０．０００５％～０．０２％（ｗ：ｖ）の濃度を有する。
【0135】
いくつかの実施形態では、液体製剤中のイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、液体製剤の約０．０００３５％～０．２％、約０．０００３５％～０．０００５％、約０．０００５％～０．００１％、約０．００１％～０．００２％、約０．００２％～０．００３％、約０．００３％～０．００４％、約０．００４％～０．００５％、約０．００５％～０．００６％、約０．００６％～０．００７％、約０．００７％～０．００８％、約０．００８％～０．００９％、約０．００９％～０．０１％、約０．０１％～０．０１５％、約０．０１５％～０．０２％、約０．０２％～０．０２５％、約０．０２５％～０．０３％、約０．０３％～０．０３５％、約０．０３５％～０．０４％、約０．０４％～０．０４５％、約０．０４５％～０．０５％、約０．０５％～０．０５５％、約０．０５５％～０．０６％、約０．０６％～０．０６５％、約０．０６５％～０．０７％、約０．０７％～０．０７５％、約０．０７５％～０．０８％、約０．０８％～０．０８５％、約０．０８５％～０．０９％、約０．０９％～０．０９５％、約０．０９５％～０．１％、約０．１％～０．１１％、約０．１１％～０．１２％、約０．１２％～０．１３％、約０．１３％～０．１４％、約０．１４％～０．１５％、約０．１５％～０．１６％、約０．１６％～０．１７％、約０．１７％～０．１８％、約０．１８％～０．１９％、約０．１９％～０．２％、約０．０００３５％～０．０１％、約０．０１％～０．０２％、約０．０２％～０．０３％、約０．０３％～０．０４％、約０．０４％～０．０５％、約０．０５％～０．０６％、約０．０６％～０．０７％、約０．０７％～０．０８％、約０．０８％～０．０９％、約０．０９％～０．１％、約０．１％～０．１２％、約０．１２％～０．１４％、約０．１４％～０．１６％、約０．１６％～０．１８％、約０．１８％～０．２％、又は約０．０００３５％～０．１４％（ｗ：ｖ）の濃度を有する。
【0136】
液体製剤中のポリペプチドの濃度は、保存構成及び所望の投与経路（例えば、皮下、筋肉内又は硝子体内投与、静脈内注射又は点滴等）に基づいて変化し得る。いくつかの実施形態では、液体製剤中のポリペプチドは、約０．１ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～１．５ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～２．５ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～３．５ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ～４ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～４．５ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～４ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～１５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、又は２００ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。いくつかの実施形態では、液体製剤中のポリペプチドの濃度は約０．５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、液体製剤中のポリペプチドは、約５０ｍｇ／ｍＬ超、約１５０ｍｇ／ｍＬ超、約２００ｍｇ／ｍＬ超、約２５０ｍｇ／ｍＬ超又は約３００ｍｇ／ｍＬ超の濃度を有する。いくつかの実施形態では、液体製剤は、ポリペプチドの濃度を約１～５倍、約５～１０倍、約１０～１５倍、約１５～２０倍、約２０～３０倍、約３０～４０倍、約４０～５０倍、約５０～１００倍、約１００～１５０倍、約１５０～２００倍、約２００～３００倍、約３００～４００倍、約４００～５００倍、約５００～６００倍、約６００～７００倍、約７００～８００倍、約８００～９００倍、約９００～１０００倍、約１０００～１５００倍、約１５００～２０００倍、約２０００～２５００倍、約２５００～３０００倍、又は約３０００～５０００倍減少させるために希釈され得る。
【0137】
いくつかの実施形態において、液体製剤は、輸液で希釈される。いくつかの実施形態では、輸液としては、デキストロース含有溶液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、半生理食塩水又は緩衝生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、生理食塩水（約０．９％（ｗ：ｖ））である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は等張性生理食塩水である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、リン酸緩衝生理食塩水又はクレブス－リンガー液を含むがこれらに限定されない緩衝生理食塩水である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、被験体由来の血液と等張であるか、又はほぼ等張である。生理食塩水は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、又は塩化カルシウム等の塩を含む。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、リン酸緩衝液（リン酸ナトリウム又はリン酸カリウム等）、炭酸ナトリウム、又はＨＥＰＥＳ等の１つ以上の緩衝液を含む。緩衝食塩水を使用する場合、特にその安定性がｐＨ依存性である場合、ｐＨはポリペプチドの治療有効性を最適化する範囲に維持される。
【0138】
Ａ．凍結乾燥製剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体製剤は、再構成凍結乾燥製剤として調製されてもよい。本明細書に記載のポリペプチドを凍結乾燥し、次いで再構成して液体製剤を製造することができる。いくつかの実施形態では、上記の目的のタンパク質の調製後、「凍結乾燥前製剤」が作製される。いくつかの実施形態では、再構成製剤中のポリペプチド濃度は、予備凍結乾燥製剤中よりも高い。いくつかの実施形態では、再構成製剤中のポリペプチド濃度は、予備凍結乾燥製剤中よりも低い。予備凍結乾燥液体製剤及び再構成液体製剤中に存在するポリペプチドの濃度は、所望の用量体積、投与様式等を考慮して決定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体製剤は、再構成凍結乾燥製剤として調製されてもよい。本明細書に記載のポリペプチドを凍結乾燥し、次いで再構成して液体製剤を製造することができる。いくつかの実施形態では、上記の目的のタンパク質の調製後、「凍結乾燥前製剤」が作製される。いくつかの実施形態では、再構成製剤中のポリペプチド濃度は、予備凍結乾燥製剤中よりも高い。いくつかの実施形態では、再構成製剤中のポリペプチド濃度は、予備凍結乾燥製剤中よりも低い。予備凍結乾燥液体製剤及び再構成液体製剤中に存在するポリペプチドの濃度は、所望の用量体積、投与様式等を考慮して決定される。
【0139】
１．凍結乾燥製剤の調製。
凍結乾燥製剤を調製する場合、製剤化されるタンパク質は一般に溶液中に存在する。例えば、本発明の高イオン強度低粘度製剤において、タンパク質は、約４～８、好ましくは約５～７のｐＨのｐＨ緩衝液中に存在し得る。緩衝液の濃度は、例えば、緩衝液及び製剤の（例えば、再構成された製剤の）所望の張度に応じて、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、あるいは約３ｍＭ～約１５ｍＭであり得る。例示的な緩衝液及び／又は塩は、薬学的に許容され得、適切な酸、塩基及びそれらの塩、例えば「薬学的に許容され得る」酸、塩基又は緩衝液の下で定義されるものから作製され得るものである。
凍結乾燥製剤を調製する場合、製剤化されるタンパク質は一般に溶液中に存在する。例えば、本発明の高イオン強度低粘度製剤において、タンパク質は、約４～８、好ましくは約５～７のｐＨのｐＨ緩衝液中に存在し得る。緩衝液の濃度は、例えば、緩衝液及び製剤の（例えば、再構成された製剤の）所望の張度に応じて、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、あるいは約３ｍＭ～約１５ｍＭであり得る。例示的な緩衝液及び／又は塩は、薬学的に許容され得、適切な酸、塩基及びそれらの塩、例えば「薬学的に許容され得る」酸、塩基又は緩衝液の下で定義されるものから作製され得るものである。
【0140】
いくつかの実施形態では、凍結保護剤が予備凍結乾燥製剤に添加される。凍結乾燥前製剤中の凍結乾燥保護剤の量は、一般に、再構成時に得られる製剤が等張になるような量である。しかしながら、高張性再構成製剤も好適であり得る。さらに、凍結乾燥保護剤の量は、凍結乾燥時にタンパク質が許容できない量の分解／凝集が起こるほどに低すぎてはならない。しかしながら、凍結乾燥前製剤中の例示的な凍結乾燥保護剤濃度は、約１０ｍＭ～約４００ｍＭ、あるいは約３０ｍＭ～約３００ｍＭ、あるいは約５０ｍＭ～約１００ｍＭである。例示的な凍結乾燥保護剤には、糖及び糖アルコール、例えばスクロース、マンノース、トレハロース、グルコース、ソルビトール、及びマンニトールが含まれる。しかしながら、特定の状況下では、ある特定の凍結乾燥保護剤も製剤の粘度の増加に寄与し得る。したがって、この効果を最小化又は中和する特定の凍結乾燥保護剤を選択するように注意すべきである。更なる凍結乾燥保護剤は、本明細書において「薬学的に許容され得る糖」とも呼ばれる「凍結乾燥保護剤」の定義の下で上に記載されている。
【0141】
凍結乾燥保護剤に対するタンパク質の比は、それぞれの特定のタンパク質又は抗体と凍結乾燥保護剤との組合せごとに異なり得る。選択されるタンパク質としての抗体及び高タンパク質濃度を有する等張性再構成製剤を生成するための凍結乾燥保護剤としての糖（例えば、スクロース又はトレハロース）の場合、抗体に対する凍結乾燥保護剤のモル比は、抗体１モルに対して約１００～約１５００モルの凍結乾燥保護剤、又は抗体１モルに対して約２００～約１０００モルの凍結乾燥保護剤、例えば抗体１モルに対して約２００～約６００モルの凍結乾燥保護剤であり得る。
【0142】
本明細書における製剤は、必要に応じて、治療される特定の適応症のための１つよりも多くのタンパク質、例えば、他のタンパク質に悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有し得る。例えば、所望の標的（例えば、受容体又は抗原）に結合する２種以上の抗体を単一の製剤で提供することが望ましい場合がある。このようなタンパク質は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
【0143】
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌されなければならない。これは、凍結乾燥及び再構成の前又は後に、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。あるいは、混合物全体の無菌性は、例えば、タンパク質を除く成分を約１２０℃で約３０分間オートクレーブすることによって達成され得る。
【0144】
タンパク質、任意要素の凍結保護剤及び他の任意要素の成分を一緒に混合した後、製剤を凍結乾燥する。この目的のために、Ｈｕｌｌ５０（商標）（Ｈｕｌｌ、米国）又はＧＴ２０（商標）（Ｌｅｙｂｏｌｄ－Ｈｅｒａｅｕｓ、ドイツ）凍結乾燥機等の多くの異なる凍結乾燥機が利用可能である。凍結乾燥は、製剤を凍結し、続いて一次乾燥に適した温度で凍結物から氷を昇華させることによって達成される。この条件下では、生成物の温度は、共晶点又は製剤の崩壊温度より低い。典型的には、一次乾燥のための保存温度は、典型的には約５０～２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で約－３０～２５℃の範囲である（但し、生成物が一次乾燥中に凍結したままであることを条件とする）。試料を保持する容器（例えば、ガラスバイアル）の製剤、サイズ及び種類、並びに液体の体積は、乾燥に必要な時間を主に決定し、これは数時間から数日（例えば、４０～６０時間）の範囲であり得る。任意に、生成物中の所望の残留水分レベルに応じて、二次乾燥段階を実施することもできる。二次乾燥が実施される温度は、主に容器の種類及びサイズ並びに用いられるタンパク質の種類に応じて、約０～４０℃の範囲である。例えば、凍結乾燥の水除去段階全体にわたる保存温度は、約１５～３０℃（例えば、約２０℃）であり得る。二次乾燥に必要な時間及び圧力は、例えば温度及び他のパラメータに依存して、適切な凍結乾燥ケーキを生成する時間及び圧力である。二次乾燥の時間は、生成物中の所望の残留水分レベルによって決定され、典型的には少なくとも約５時間（例えば、１０～１５時間）かかる。圧力は、一次乾燥工程中に用いられる圧力と同じであってもよい。凍結乾燥条件は、製剤及びバイアルサイズに応じて変えることができる。
【0145】
２．凍結乾燥製剤の再構成。
患者への投与前に、凍結乾燥製剤は、再構成製剤中のタンパク質濃度が少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約５０ｍｇ／ｍＬ～約４００ｍｇ／ｍＬ、あるいは約８０ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、あるいは約９０ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬであるように、薬学的に許容され得る希釈剤で再構成される。再構成製剤中のそのような高いタンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図される場合に特に有用であると考えられる。しかしながら、静脈内投与等の他の投与経路では、再構成製剤中のタンパク質のより低い濃度が望ましい場合がある（例えば、再構成製剤中の約０．１～２ｍｇ／ｍＬ、約２～１０ｍｇ／ｍＬ、又は約１０～５０ｍｇ／ｍＬのタンパク質）。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質濃度よりも有意に高い。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質濃度よりも有意に低い。
患者への投与前に、凍結乾燥製剤は、再構成製剤中のタンパク質濃度が少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約５０ｍｇ／ｍＬ～約４００ｍｇ／ｍＬ、あるいは約８０ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、あるいは約９０ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬであるように、薬学的に許容され得る希釈剤で再構成される。再構成製剤中のそのような高いタンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図される場合に特に有用であると考えられる。しかしながら、静脈内投与等の他の投与経路では、再構成製剤中のタンパク質のより低い濃度が望ましい場合がある（例えば、再構成製剤中の約０．１～２ｍｇ／ｍＬ、約２～１０ｍｇ／ｍＬ、又は約１０～５０ｍｇ／ｍＬのタンパク質）。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質濃度よりも有意に高い。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質濃度よりも有意に低い。
【0146】
再構成は、一般に、完全な水和を確実にするために約２５℃の温度で行われるが、必要に応じて他の温度を用いてもよい。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の種類、賦形剤（複数可）及びタンパク質の量に依存する。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩水溶液、リンゲル液、又はデキストロース溶液が含まれる。希釈剤は、任意に保存剤を含有する。例示的な保存剤が上に記載されており、芳香族アルコール、例えばベンジル又はフェノールアルコールが好ましい保存剤である。用いられる保存剤の量は、タンパク質との適合性及び保存効力試験のために異なる保存剤濃度を評価することによって決定される。例えば、保存剤が芳香族アルコール（ベンジルアルコール等）である場合、約０．１～２．０％、又は約０．５～１．５％、又は約１．０～１．２％の量で存在することができる。
【0147】
いくつかの実施形態では、再構成された液体製剤を含むがこれに限定されない液体製剤は、凝集体を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、液体製剤（再構成された液体製剤が含まれるが、これに限定されない）は、遊離脂肪酸粒子形成が少ない。
【0148】
ＩＩＩ．液体製剤の作製方法
また、ここでは、水溶液にポリペプチド及び界面活性剤を添加することを含む液体製剤を作製する方法も提供され、界面活性剤はポリソルベートの１つ以上の成分を含む。
また、ここでは、水溶液にポリペプチド及び界面活性剤を添加することを含む液体製剤を作製する方法も提供され、界面活性剤はポリソルベートの１つ以上の成分を含む。
【0149】
いくつかの実施形態では、界面活性剤はイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤はＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、約５～３０のＰＯＥ単位を有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から独立して選択される脂肪酸鎖を有する。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは式（Ｉ）の化合物である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％（重量％）がイソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステル及びＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、イソソルビドＰＯＥ脂肪酸エステルは、イソソルビドＰＯＥモノカプロエート、イソソルビドＰＯＥモノカプリレート、イソソルビドＰＯＥモノカプレート、イソソルビドＰＯＥモノラウレート、イソソルビドＰＯＥモノミリステート、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート、イソソルビドＰＯＥモノパルミトレエート、イソソルビドＰＯＥモノステアレート、イソソルビドＰＯＥモノオレエート、イソソルビドＰＯＥモノリノレエート、イソソルビドＰＯＥモノリノレネート、及びそれらの組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＯＥ脂肪酸エステルは、ＰＯＥモノカプロエート、ＰＯＥモノカプリレート、ＰＯＥモノカプレート、ＰＯＥモノラウレート、ＰＯＥモノミリステート、ＰＯＥモノパルミテート、ＰＯＥモノパルミトレエート、ＰＯＥモノステアレート、ＰＯＥモノオレエート、ＰＯＥモノリノレエート、ＰＯＥモノリノレネート、及びそれらの組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノラウレート及びＰＯＥモノラウレートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノパルミテート及びＰＯＥモノパルミテートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノミリステート及びＰＯＥモノミリステートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノオレエート及びＰＯＥモノオエレートを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、イソソルビドＰＯＥモノリノレエート及びＰＯＥモノリノレエートを含む。
【0150】
いくつかの実施形態では、界面活性剤はソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを更に含む。いくつかの実施形態では、ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、独立して、置換されていてもよいＣ４－２８アルキル及び置換されていてもよいＣ４－２８アルケニルからなる群から独立して選択される脂肪酸鎖を有する。いくつかの実施形態では、ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、式（ＩＩ）の化合物である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも１％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも５％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも１０％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。いくつかの実施形態では、界面活性剤の少なくとも１５％（重量％）がソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルである。
【0151】
いくつかの実施形態では、各ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルは、ソルビタンＰＯＥモノカプロエート、ソルビタンＰＯＥモノカプリレート、ソルビタンＰＯＥモノカプレート、ソルビタンＰＯＥモノラウレート、ソルビタンＰＯＥモノミリステート、ソルビタンＰＯＥモノパルミテート、ソルビタンＰＯＥモノパルミトレエート、ソルビタンＰＯＥモノステアレート、ソルビタンＰＯＥモノオエレート、ソルビタンＰＯＥモノリノレエート、ソルビタンＰＯＥモノリノレネート、ソルビタンＰＯＥジカプロエート、ソルビタンＰＯＥジカプリレート、ソルビタンＰＯＥジカプレート、ソルビタンＰＯＥジラウレート、ソルビタンＰＯＥジミリステート、ソルビタンＰＯＥジパルミテート、ソルビタンＰＯＥジパルミトレエート、ソルビタンＰＯＥジステアレート、ソルビタンＰＯＥジオエレート、ソルビタンＰＯＥジリノレエート、ソルビタンＰＯＥジリノレネート、ソルビタンＰＯＥトリカプロエート、ソルビタンＰＯＥトリカプリレート、ソルビタンＰＯＥトリカプレート、ソルビタンＰＯＥトリラウレート、ソルビタンＰＯＥトリミリステート、ソルビタンＰＯＥトリパルミテート、ソルビタンＰＯＥトリパルミトレート、ソルビタンＰＯＥトリステアレート、ソルビタンＰＯＥトリオエレート、ソルビタンＰＯＥトリリノレエート、及びソルビタンＰＯＥトリリノレネートからなる群から独立して選択される。
【0152】
本明細書に記載の任意の界面活性剤を、液体製剤を作製する方法において使用することができる。
【0153】
いくつかの実施形態では、液体製剤中の界面活性剤は、液体製剤の約０．０００５％～０．２％、約０．０００５％～０．００１％、約０．００１％～０．００２％、約０．００２％～０．００３％、約０．００３％～０．００４％、約０．００４％～０．００５％、約０．００５％～０．００６％、約０．００６％～０．００７％、約０．００７％～０．００８％、約０．００８％～０．００９％、約０．００９％～０．０１％、約０．０１％～０．０１５％、約０．０１５％～０．０２％、約０．０２％～０．０２５％、約０．０２５％～０．０３％、約０．０３％～０．０３５％、約０．０３５％～０．０４％、約０．０４％～０．０４５％、約０．０４５％～０．０５％、約０．０５％～０．０５５％、約０．０５５％～０．０６％、約０．０６％～０．０６５％、約０．０６５％～０．０７％、約０．０７％～０．０７５％、約０．０７５％～０．０８％、約０．０８％～０．０８５％、約０．０８５％～０．０９％、約０．０９％～０．０９５％、約０．０９５％～０．１％、約０．１％～０．１１％、約０．１１％～０．１２％、約０．１２％～０．１３％、約０．１３％～０．１４％、約０．１４％～０．１５％、約０．１５％～０．１６％、約０．１６％～０．１７％、約０．１７％～０．１８％、約０．１８％～０．１９％、約０．１９％～０．２％、約０．０００５％～０．０１％、約０．０１％～０．０２％、約０．０２％～０．０３％、約０．０３％～０．０４％、約０．０４％～０．０５％、約０．０５％～０．０６％、約０．０６％～０．０７％、約０．０７％～０．０８％、約０．０８％～０．０９％、約０．０９％～０．１％、約０．１％～０．１２％、約０．１２％～０．１４％、約０．１４％～０．１６％、約０．１６％～０．１８％、約０．１８％～０．２％、又は約０．０００５％～０．０２％（ｗ：ｖ）の濃度を有する。
【0154】
液体製剤中のポリペプチドの濃度は、保存構成及び所望の投与経路（例えば、皮下、筋肉内又は硝子体内投与、静脈内注射又は点滴等）に基づいて変化し得る。いくつかの実施形態では、液体製剤中のポリペプチドは、約０．１ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～１．５ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～２．５ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～３．５ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ～４ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～４．５ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～４ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～１５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、又は２００ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。いくつかの実施形態では、液体製剤中のポリペプチドの濃度は約０．５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、液体製剤中のポリペプチドは、約５０ｍｇ／ｍＬ超、約１５０ｍｇ／ｍＬ超、約２００ｍｇ／ｍＬ超、約２５０ｍｇ／ｍＬ超又は約３００ｍｇ／ｍＬ超の濃度を有する。
【0155】
いくつかの実施形態では、上記方法は、ポリペプチドの濃度を約１～５倍、約５～１０倍、約１０～１５倍、約１５～２０倍、約２０～３０倍、約３０～４０倍、約４０～５０倍、約５０～１００倍、約１００～１５０倍、約１５０～２００倍、約２００～３００倍、約３００～４００倍、約４００～５００倍、約５００～６００倍、約６００～７００倍、約７００～８００倍、約８００～９００倍、約９００～１０００倍、約１０００～１５００倍、約１５００～２０００倍、約２０００～２５００倍、約２５００～３０００倍又は約３０００～５０００倍減少させるために液体製剤を希釈することを更に含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、液体製剤を輸液で希釈することを更に含む。いくつかの実施形態では、輸液としては、デキストロース含有溶液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、又は緩衝生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、生理食塩水（約０．９％（ｗ：ｖ））である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は等張性生理食塩水である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、リン酸緩衝生理食塩水又はクレブス－リンガー液を含むがこれらに限定されない緩衝生理食塩水である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、被験体由来の血液と等張であるか、又はほぼ等張である。生理食塩水は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、又は塩化カルシウム等の塩を含む。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、リン酸緩衝液（リン酸ナトリウム又はリン酸カリウム等）、炭酸ナトリウム、又はＨＥＰＥＳ等の１つ以上の緩衝液を含む。緩衝食塩水を使用する場合、特にその安定性がｐＨ依存性である場合、ｐＨはポリペプチドの治療有効性を最適化する範囲に維持される。いくつかの実施形態では、液体製剤は、被験体への投与前に希釈される。
【0156】
液体製剤が凍結乾燥製剤を再構成することによって調製される場合、再構成は一般に、完全な水和を保証するために約２５℃の温度で行われるが、所望に応じて他の温度を使用してもよい。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の種類、賦形剤（複数可）及びポリペプチドの量に依存する。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩水溶液、リンゲル液、又はデキストロース溶液が含まれる。希釈剤は、任意に保存剤を含有する。
【0157】
いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるポリペプチドは抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、ポリ特異性抗体、キメラ抗体又はヘテロコンジュゲート抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片及び全抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片からなる群から選択される。
【0158】
別の態様では、上記方法を使用して、本明細書に記載の任意の液体製剤を作製することができる。
【0159】
ＩＶ．製造品
ここでは、液体製剤を封入する容器を含む製造品が提供され、液体製剤はポリペプチド及び界面活性剤を含み、界面活性剤はポリソルベートの１つ以上の成分を含む。
ここでは、液体製剤を封入する容器を含む製造品が提供され、液体製剤はポリペプチド及び界面活性剤を含み、界面活性剤はポリソルベートの１つ以上の成分を含む。
【0160】
製造品は容器を含む。適切な容器としては、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（例えば、シングルチャンバーシリンジ又はデュアルチャンバーシリンジ）、試験管、及び静脈内治療（ＩＶ）バッグが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＩＶバッグは輸液を含む。いくつかの実施形態では、輸液としては、デキストロース含有溶液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、又は緩衝生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。容器は、ガラス、金属合金（例えば、ステンレス鋼）、又はプラスチック等の様々な材料から形成されてもよい。液体製剤を保持する容器上にあるか又はそれに付随するラベルは、再構成及び／又は使用のための指示を示し得る。いくつかの実施形態では、ラベルは、製剤が皮下投与に有用であるか、又は皮下投与を意図していることを更に示し得る。いくつかの実施形態では、標識は、製剤が静脈内投与（例えば、ボーラスとして、又は一定期間にわたる連続注入によって、筋肉内、腹腔内、脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、又は髄腔内投与によって）に有用であるか又は意図されていることを更に示し得る。いくつかの実施形態では、ラベルは、形成が硝子体内投与に有用であるか、又は硝子体内投与を意図していることを更に示し得る。製剤を保持する容器は、液体製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする多用途バイアルであり得る。いくつかの実施形態では、製造品は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬの濃度のポリペプチドを含む。製造品は、適切な希釈剤（例えば、水、製剤緩衝液、界面活性剤溶液及び輸液、例えばデキストロース含有溶液、生理食塩水、乳酸加リンゲル液及びＢＷＦＩ）を含む第２の容器を更に含んでもよい。希釈剤と液体製剤とを混合すると、希釈製剤中の最終タンパク質濃度は一般に少なくとも０．００１ｍｇ／ｍＬになる。いくつかの実施形態では、希釈剤を凍結乾燥製剤と混合して再構成液体製剤を形成する。いくつかの実施形態では、再構成された液体製剤を含む液体製剤中の最終タンパク質濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬである。製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、及び使用に関する指示を有する添付文書を含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含み得る。いくつかの態様では、製造品は、静脈内投与のためのシリンジ若しくは機器、及び／又は投与のための凍結乾燥組成物を調製するための滅菌緩衝液を含有する。
【0161】
別の態様では、製造品は、本明細書に記載の任意の液体製剤を含有し得る。別の態様では、製造品は、本明細書に記載の任意の作製方法に従って調製される液体製剤を含有し得る。
【0162】
Ｖ．液体製剤を使用する医薬品及び治療方法
有効量の本明細書に記載の液体製剤を、それを必要とする被験体に投与することを含む、対象の疾患又は障害を治療する方法も本明細書で提供される。液体製剤中のポリペプチドによる治療を必要とする患者を治療するための医薬の調製における本明細書に記載の液体製剤の使用も本明細書で提供される。液体製剤中のポリペプチドによる治療を必要とする被験体の疾患又は障害を治療するための本明細書に記載の液体製剤も提供される。有効量の液体製剤を患者に投与することを含む、患者を治療するための本明細書に記載の液体製剤も提供される。
有効量の本明細書に記載の液体製剤を、それを必要とする被験体に投与することを含む、対象の疾患又は障害を治療する方法も本明細書で提供される。液体製剤中のポリペプチドによる治療を必要とする患者を治療するための医薬の調製における本明細書に記載の液体製剤の使用も本明細書で提供される。液体製剤中のポリペプチドによる治療を必要とする被験体の疾患又は障害を治療するための本明細書に記載の液体製剤も提供される。有効量の液体製剤を患者に投与することを含む、患者を治療するための本明細書に記載の液体製剤も提供される。
【0163】
製剤中の抗体がＨＥＲ２に結合する場合、懸濁製剤を使用して癌を治療することができる。癌は、一般に、本明細書のＨＥＲ２抗体が癌細胞に結合することができるように、ＨＥＲ２発現細胞を含む。したがって、この実施形態における本発明は、対象におけるＨＥＲ２発現癌を治療する方法であって、癌を治療するのに有効な量でＨＥＲ２抗体薬学製剤を被験体に投与することを含む方法に関する。ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ又はペルツズマブ）で本明細書において治療される例示的な癌は、ＨＥＲ２陽性乳癌又は胃癌である。
【0164】
製剤中の抗体がＣＤ２０等のＢ細胞表面マーカーに結合する場合、製剤は、ＮＨＬ若しくはＣＬＬ等のＢ細胞悪性腫瘍、又は自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ又は血管炎）を治療するために使用され得る。
【0165】
製剤中の抗体がＶＥＧＦ（例えば、ベバシズマブ）に結合する場合、製剤は、血管新生を阻害するため、癌（例えば、結腸直腸、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）、神経膠芽腫、乳癌及び腎細胞癌）を治療するため、又は加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）若しくは黄斑浮腫を治療するために使用され得る。
【0166】
適応症が癌である場合、患者は、懸濁製剤と化学療法剤との組合せで治療され得る。併用投与は、別個の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する共投与又は同時投与、及びいずれかの順での連続投与を含み、両方（又は全て）の活性薬剤がそれらの生物学的活性を同時にもたらす期間が存在する。したがって、化学療法剤は、組成物の投与の前又はそれに続いて投与され得る。この実施形態では、化学療法剤の少なくとも１回の投与と製剤の少なくとも１回の投与との間のタイミングは、およそ１ヶ月以下、又はおよそ２週間以下である。あるいは、化学療法剤及び製剤は、単一の製剤又は別個の製剤で患者に同時に投与される。
【0167】
懸濁製剤による治療は、疾患又は障害の徴候又は症状の改善をもたらすであろう。さらに、化学療法剤と抗体製剤との組合せによる治療は、患者に対して相乗的な、又は相加的な治療上の利益をもたらし得る。
【0168】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される液体製剤は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される液体製剤は、投与が少なくとも約３０分又はそれを超えて行われるように制御された投与速度で静脈内注射によって投与される。投与される投与スケジュール及び実際の投与量は、感染の性質及び重症度、患者の年齢、体重及び全般的な健康状態、並びに治療される疾患又は障害等の要因に応じて異なり得、医療従事者にとって確認可能である。液体製剤は、一度に、又は一連の治療にわたって被験体に好適に投与される。疾患のタイプ及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１～２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体は、例えば、１回以上の別個の投与によるかどうかにかかわらず、患者への投与のための初期候補投与量である。抗体の投与量は、一般に、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約ｌ０ｍｇ／ｋｇである。したがって、化学療法剤が投与される場合、通常、既知の投薬量で投与されるか、又は薬物の複合作用若しくは化学療法剤の投与に起因する負の副作用のために、任意に低減される。
【実施例0169】
以下の実施例は、発明を例示するために供与されるのであって、限定するものではない。当業者は、以下の手順が当業者に公知の方法を使用して修正され得ることを認識するであろう。
【0170】
材料：
モノクローナル抗体Ａ～Ｄは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（米国カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）によって製造された。約９９％のラウリン酸エステルを含有するポリソルベート２０は、ＢＡＳＦ ＳＥ（ドイツ国ルートヴィヒスハーフェン）によって合成された。約９８％のオレイン酸エステルを含有するポリソルベート８０ ＨＸ２超純度グレードは、ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ Ｃｏｒｐ．（カリフォルニア州アーバイン）によって合成された。全てのポリソルベートサンプルは、使用しない場合、２～８℃で窒素オーバーレイを用いて保存した。アセトニトリル及びメタノール（ＨＰＬＣグレード）を、Ａｖａｎｔｏｒ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．（ニュージャージー州ピリプスブルク）から購入した。
モノクローナル抗体Ａ～Ｄは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（米国カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）によって製造された。約９９％のラウリン酸エステルを含有するポリソルベート２０は、ＢＡＳＦ ＳＥ（ドイツ国ルートヴィヒスハーフェン）によって合成された。約９８％のオレイン酸エステルを含有するポリソルベート８０ ＨＸ２超純度グレードは、ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ Ｃｏｒｐ．（カリフォルニア州アーバイン）によって合成された。全てのポリソルベートサンプルは、使用しない場合、２～８℃で窒素オーバーレイを用いて保存した。アセトニトリル及びメタノール（ＨＰＬＣグレード）を、Ａｖａｎｔｏｒ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．（ニュージャージー州ピリプスブルク）から購入した。
【0171】
実施例１ ポリソルベート分画及び分析
ポリソルベート分画
ポリソルベート（ＰＳ）の分画を、Ｇｉｌｓｏｎ ＰＬＣ－２０５０ Ｐｒｅｐ ＨＰＬＣシステムを使用して行った。全てのＰＳサンプルについて、２グラムのポリソルベート２０（ＰＳ２０）又はポリソルベート８０（ＰＳ８０）を８ｍＬの＞１８ＭΩｃｍ水に溶解し、Ｗａｔｅｒｓ Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ４カラム（３０×１００ｍｍ）に注入した。次いで、＞１８ＭΩ・ｃｍの水（移動相Ａ）及びアセトニトリル（移動相Ｂ）の勾配を用いて試料を分画した。勾配条件は以下の通りであった：０．０～３．０分、５％Ｂ；３．０～２０．０分、５～１００％Ｂ；２０．０～２７．０分、１００％Ｂ；２７～２７．１分、１００～５％Ｂ；２７．１～３０．０分、５％Ｂ。流速は４０ｍＬ／分であり、総運転時間は３０分であった。２５ｍＬの画分を実行中に回収した。次いで、これらの画分を、後続の段落に記載される帯電エアロゾル検出を伴う逆相超高速液体クロマトグラフィー法（ＲＰ－ＵＨＰＬＣ－ＣＡＤ）を使用して分析した。分析後、画分をプールし、ロータリーエバポレーターを用いて乾燥させた。
ポリソルベート分画
ポリソルベート（ＰＳ）の分画を、Ｇｉｌｓｏｎ ＰＬＣ－２０５０ Ｐｒｅｐ ＨＰＬＣシステムを使用して行った。全てのＰＳサンプルについて、２グラムのポリソルベート２０（ＰＳ２０）又はポリソルベート８０（ＰＳ８０）を８ｍＬの＞１８ＭΩｃｍ水に溶解し、Ｗａｔｅｒｓ Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ４カラム（３０×１００ｍｍ）に注入した。次いで、＞１８ＭΩ・ｃｍの水（移動相Ａ）及びアセトニトリル（移動相Ｂ）の勾配を用いて試料を分画した。勾配条件は以下の通りであった：０．０～３．０分、５％Ｂ；３．０～２０．０分、５～１００％Ｂ；２０．０～２７．０分、１００％Ｂ；２７～２７．１分、１００～５％Ｂ；２７．１～３０．０分、５％Ｂ。流速は４０ｍＬ／分であり、総運転時間は３０分であった。２５ｍＬの画分を実行中に回収した。次いで、これらの画分を、後続の段落に記載される帯電エアロゾル検出を伴う逆相超高速液体クロマトグラフィー法（ＲＰ－ＵＨＰＬＣ－ＣＡＤ）を使用して分析した。分析後、画分をプールし、ロータリーエバポレーターを用いて乾燥させた。
【0172】
ポリソルベート画分純度分析
Ｔｈｅｒｍｏ Ｃｏｒｏｎａ Ｕｌｔｒａ ＣＡＤ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｈ－Ｃｌａｓｓシステムを使用して、分画ＰＳ試料をプール及び純度について評価した。使用したカラムは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ８カラム（２．１×５０ｍｍ、１２０Å、及び粒径２．５μｍ）であった。勾配は以下の通りであった：０．０～０．５分、５％Ｂ；０．５～５．０分、５～１００％Ｂ；５．０～６．０分、１００％Ｂ；６．０～６．１分、１００～５％Ｂ；６．１～８．０分、５％Ｂ。ＣＡＤを、１０Ｈｚでのデータ収集及び３０℃でのネブライザー温度で行った。
Ｔｈｅｒｍｏ Ｃｏｒｏｎａ Ｕｌｔｒａ ＣＡＤ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｈ－Ｃｌａｓｓシステムを使用して、分画ＰＳ試料をプール及び純度について評価した。使用したカラムは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ８カラム（２．１×５０ｍｍ、１２０Å、及び粒径２．５μｍ）であった。勾配は以下の通りであった：０．０～０．５分、５％Ｂ；０．５～５．０分、５～１００％Ｂ；５．０～６．０分、１００％Ｂ；６．０～６．１分、１００～５％Ｂ；６．１～８．０分、５％Ｂ。ＣＡＤを、１０Ｈｚでのデータ収集及び３０℃でのネブライザー温度で行った。
【0173】
結果
ＰＳ２０及びＰＳ８０の画分を精製し、ロータリーエバポレーターで乾燥させた。ＲＰ－ＵＨＰＬＣ－ＣＡＤによって決定されるそれらの相対純度を以下の表１に示す。３つの画分を精製し、各ＰＳタイプから分析した。ＰＳ２０の場合、これらの画分は以下の通りであった：ＰＯＥ－ソルビタンモノラウレート（「画分１又はＦ１ａ」）、ＰＯＥ－イソソルビドモノラウレート及びＰＯＥモノラウレート（Ｎ約１０）（「画分２又はＦ２ａ」）、及びＰＯＥ－ソルビタンジラウレート（「画分３又はＦ３ａ」）。ＰＳ８０の場合、画分は以下の通りであった：ＰＯＥ－ソルビタンモノオレエート（「画分１又はＦ１ｂ」）、ＰＯＥ－イソソルビドモノオレエート及びＰＯＥモノオレエート（Ｎ約１０）（「画分２又はＦ２ｂ」）、及びＰＯＥ－ソルビタンジオレエート（「画分３又はＦ３ｂ」）。各画分の同一性をＬＣ－ＭＳ分析により確認した。逆相ＵＨＰＬＣ－ＣＡＤ分析により、ポリソルベートエステル画分の最も疎水性の高いものはＦ３であり、次いでＦ２、次いでＦ１が最も疎水性が低いことが確認された（図１Ａ及び１Ｂ）。
ＰＳ２０及びＰＳ８０の画分を精製し、ロータリーエバポレーターで乾燥させた。ＲＰ－ＵＨＰＬＣ－ＣＡＤによって決定されるそれらの相対純度を以下の表１に示す。３つの画分を精製し、各ＰＳタイプから分析した。ＰＳ２０の場合、これらの画分は以下の通りであった：ＰＯＥ－ソルビタンモノラウレート（「画分１又はＦ１ａ」）、ＰＯＥ－イソソルビドモノラウレート及びＰＯＥモノラウレート（Ｎ約１０）（「画分２又はＦ２ａ」）、及びＰＯＥ－ソルビタンジラウレート（「画分３又はＦ３ａ」）。ＰＳ８０の場合、画分は以下の通りであった：ＰＯＥ－ソルビタンモノオレエート（「画分１又はＦ１ｂ」）、ＰＯＥ－イソソルビドモノオレエート及びＰＯＥモノオレエート（Ｎ約１０）（「画分２又はＦ２ｂ」）、及びＰＯＥ－ソルビタンジオレエート（「画分３又はＦ３ｂ」）。各画分の同一性をＬＣ－ＭＳ分析により確認した。逆相ＵＨＰＬＣ－ＣＡＤ分析により、ポリソルベートエステル画分の最も疎水性の高いものはＦ３であり、次いでＦ２、次いでＦ１が最も疎水性が低いことが確認された（図１Ａ及び１Ｂ）。
【表1】
【0174】
実施例２ 臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）決定
精製ＰＳ画分を、蛍光色素Ｎ－フェニルナフタレン－１－アミン（ＮＰＮ）を使用して、それらの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）について評価した。このアッセイを、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０５Ｍ ＴＲＩＳ、５％ＡＣＮ、５μＭ Ｎ－フェニル－１－ナフチルアミン及び１５ｐｐｍ Ｂｒｉｊ３５で構成される希釈剤にｐＨ８．０で２倍連続希釈を行うことによって実施した。３５０ｎｍで励起し、４２０ｎｍで発光するＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５蛍光プレートリーダーでサンプルを直ちに分析した。
精製ＰＳ画分を、蛍光色素Ｎ－フェニルナフタレン－１－アミン（ＮＰＮ）を使用して、それらの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）について評価した。このアッセイを、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０５Ｍ ＴＲＩＳ、５％ＡＣＮ、５μＭ Ｎ－フェニル－１－ナフチルアミン及び１５ｐｐｍ Ｂｒｉｊ３５で構成される希釈剤にｐＨ８．０で２倍連続希釈を行うことによって実施した。３５０ｎｍで励起し、４２０ｎｍで発光するＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５蛍光プレートリーダーでサンプルを直ちに分析した。
【0175】
ＰＳ２０の場合、ＣＭＣの増加の順序は、疎水性の順序と一致して、Ｆ３ａ＞Ｆ２ａ＞Ｆ１ａであった。ＣＭＣは広く分離されており、Ｆ１ａについては約０．１重量％、Ｆ２ａについては約０．０１５重量％、Ｆ３ａについては約０．００１重量％であり、これはベースラインからのおよそ５００蛍光単位の変化に対応する（図２Ａ）。対照的に、ＰＳ８０エステルＣＭＣは同様の順序を有していたが、値の範囲ははるかに狭く、わずか０．００１～０．００３重量％に及んだ（図２Ｂ）。
【0176】
実施例３ 分画ＰＳサンプルの表面活性
ＰＳの精製画分の表面活性を、粗面化白金Ｗｉｌｈｅｍｙプレートを使用してＫｒｕｅｓｓ（ドイツ国ハンブルグ）Ｋ１００ Ｆｏｒｃｅ Ｔｅｎｓｉｏｍｅｔｅｒを使用して決定した。蒸発を防ぐため、７０％超の相対湿度で室温（２０～２５℃）でサンプルを測定した。試験前に、ＰＳ２０の精製画分をそれぞれ精製水に０．２ｍｇ／ｍＬまで溶解した。気泡を導入しないように特に注意して、３ミリリットルのサンプルをサンプルホルダーに入れた。各サンプルの表面張力の変化を、６０分で平衡になるまで、毎秒一回測定した。ＰＳ８０分析についても同じ手順に従った。
ＰＳの精製画分の表面活性を、粗面化白金Ｗｉｌｈｅｍｙプレートを使用してＫｒｕｅｓｓ（ドイツ国ハンブルグ）Ｋ１００ Ｆｏｒｃｅ Ｔｅｎｓｉｏｍｅｔｅｒを使用して決定した。蒸発を防ぐため、７０％超の相対湿度で室温（２０～２５℃）でサンプルを測定した。試験前に、ＰＳ２０の精製画分をそれぞれ精製水に０．２ｍｇ／ｍＬまで溶解した。気泡を導入しないように特に注意して、３ミリリットルのサンプルをサンプルホルダーに入れた。各サンプルの表面張力の変化を、６０分で平衡になるまで、毎秒一回測定した。ＰＳ８０分析についても同じ手順に従った。
【0177】
表面張力の結果は、平衡時に、０．０２重量％の同じ濃度では、ＰＳ２０ Ｆ３ａ及びＦ２ａ画分は、疎水性の低いＦ１ａ画分よりも表面張力を低下させるのに顕著に有効であることを示した（図３Ａ）。ＰＳ８０ Ｆ１ｂ～Ｆ３ｂ画分についても同様の傾向が見られる（図３Ｂ）。興味深いことに、ＰＳ２０画分Ｆ３ａの表面張力はＦ２ａとほぼ同じであり、ＰＳ８０画分Ｆ３ｂの表面張力もＦ２ｂと同様である。さらに、全てのエステル画分を含有する未分画ＰＳ２０は、Ｆ３ａ又はＦ２ａ画分よりも表面張力を更に低下させた（図３Ａ）。対照的に、未分画ＰＳ８０は、そのＦ１ｂ画分とＦ３ｂ画分との間の表面張力を示した（図３Ｂ）。
【0178】
実施例４ ミセル径の動的光散乱
Ｍａｌｖｅｒｎ（マサチューセッツ州ウェストボロー）Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで動的光散乱（ＤＬＳ）を行った。測定を、各画分のＣＭＣを超えるように、各画分サンプルを水中で１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度に希釈することによって行った。
Ｍａｌｖｅｒｎ（マサチューセッツ州ウェストボロー）Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで動的光散乱（ＤＬＳ）を行った。測定を、各画分のＣＭＣを超えるように、各画分サンプルを水中で１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度に希釈することによって行った。
【0179】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用し、また研究した全てのエステル画分のＣＭＣをはるかに超える１重量％の画分濃度を使用して、ミセル半径又は流体力学半径（Ｒｈ）を得た。ＰＳ ２０については、未分画ＰＳ２０のＲｈは約４ｎｍであり、Ｆ２ａ及びＦ３ａ画分は約３．９ｎｍであった。Ｆ１ａモノエステルのＲｈは、３．５ ｎｍ付近とやや小さい（図４Ａ）。ＰＳ８０の場合、ミセル径は、Ｒｈが４．５ｎｍ付近で類似しているＦ２ｂ画分及びＦ３ｂ画分と比較して、未分画ＰＳ８０サンプル（Ｒｈ約４．８ｎｍ）についても同様に少し大きくなった。Ｆ１ ａと同様に、Ｆ１ｂのＲｈはＰＳ８０サンプルセットで最も小さいが、Ｒｈ約４．３ｎｍではそれほど大きくない（図４Ｂ）。
【0180】
実施例５ 撹拌保護研究
撹拌研究を使用して表面誘起凝集を防止する能力について、精製画分を試験した。ｍＡｂＡを０．９％生理食塩水で０．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、これは１０ｍＬのＰＥＴＧバイアルにおいてＰＳ２０画分（Ｆ１ａ、Ｆ２ａ及びＦ３ａ ０．０００１％～０．０１％、ｗ：ｖ）のそれぞれを様々な量で含んだ。これらのバイアルをオービタルシェーカー上で１８０ＲＰＭにて周囲温度で２時間撹拌した。撹拌後、倍率１０倍及び回転のＢｏｓｃｈ ＡＰＫシステムを用いて試料を観察した。
撹拌研究を使用して表面誘起凝集を防止する能力について、精製画分を試験した。ｍＡｂＡを０．９％生理食塩水で０．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、これは１０ｍＬのＰＥＴＧバイアルにおいてＰＳ２０画分（Ｆ１ａ、Ｆ２ａ及びＦ３ａ ０．０００１％～０．０１％、ｗ：ｖ）のそれぞれを様々な量で含んだ。これらのバイアルをオービタルシェーカー上で１８０ＲＰＭにて周囲温度で２時間撹拌した。撹拌後、倍率１０倍及び回転のＢｏｓｃｈ ＡＰＫシステムを用いて試料を観察した。
【0181】
撹拌研究中、Ｆ２ａは、撹拌時に目に見える粒子形成から保護するために最低濃度を必要とし、Ｆ１ａが最も必要とすることが観察された。Ｆ３ａ及び全ラウレートＰＳ２０は、同様の結果をもたらした（図５）。Ｆ２ａは、より高いＣＭＣ及びＦ３ａ及び全てのラウレートＰＳ２０に匹敵する平衡表面張力の影響を有したが、撹拌応力及び粒子形成に対してｍＡｂを最も保護した。
【0182】
実施例６ ＩＶバッグ撹拌モデル研究
撹拌研究を使用して表面誘起凝集を防止する能力について、精製画分を試験した。ｍＡｂＢ及びｍＡｂＣを０．９％生理食塩水の緩衝液で０．５ ｍｇ／ｍＬに希釈し、これは５ｍＬのＰＥＴＧバイアルにおいてＰＳ２０画分（Ｆ１ａ、Ｆ２ａ及びＦ３ａ ０．０００１％～０．０１％、ｗ／ｖ）のそれぞれを様々な量で含んだ。これらのサンプルをオービタルシェーカー上で１８０ＲＰＭにて周囲温度で２時間撹拌した。撹拌後、倍率１０倍及び回転のＢｏｓｃｈ ＡＰＫシステムを用いて試料を観察した。試料をＨＩＡＣ（高精度流体粒子計数）に供して製剤中のＳＶＰ（サブビジブル粒子）を定量し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ（サイズ排除高速液体クロマトグラフィー）に供して製剤中のＨＭＷＦ（高分子量画分）及び活性抗体の濃度を定量した。ＳＥＣ及びＩＥＣは、バイナリポンプ及びダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣで行った。サブビジブル粒子測定は、Ｒｏｙｃｏ製のＨＩＡＣ ９７０３＋Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｕｎｔｅｒで行った。
撹拌研究を使用して表面誘起凝集を防止する能力について、精製画分を試験した。ｍＡｂＢ及びｍＡｂＣを０．９％生理食塩水の緩衝液で０．５ ｍｇ／ｍＬに希釈し、これは５ｍＬのＰＥＴＧバイアルにおいてＰＳ２０画分（Ｆ１ａ、Ｆ２ａ及びＦ３ａ ０．０００１％～０．０１％、ｗ／ｖ）のそれぞれを様々な量で含んだ。これらのサンプルをオービタルシェーカー上で１８０ＲＰＭにて周囲温度で２時間撹拌した。撹拌後、倍率１０倍及び回転のＢｏｓｃｈ ＡＰＫシステムを用いて試料を観察した。試料をＨＩＡＣ（高精度流体粒子計数）に供して製剤中のＳＶＰ（サブビジブル粒子）を定量し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ（サイズ排除高速液体クロマトグラフィー）に供して製剤中のＨＭＷＦ（高分子量画分）及び活性抗体の濃度を定量した。ＳＥＣ及びＩＥＣは、バイナリポンプ及びダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣで行った。サブビジブル粒子測定は、Ｒｏｙｃｏ製のＨＩＡＣ ９７０３＋Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｕｎｔｅｒで行った。
【0183】
観察結果は、試験した全ての画分がｍＡｂＢ（図６Ａ）及びｍＡｂＣ（図６Ｂ）を保護することを示唆した。ｍＡｂ Ｂ（図７Ａ）及びｍＡｂＣ（図７Ｂ）についてのＨＩＡＣの結果は、全ての画分がサブビジブル粒子の数を減少させることができることを示し、より低いレベルの凝集を示した。Ｆ２ａは、凝集レベルを低下させる点でＨＰ又は全てのラウレートＰＳ２０と同程度に良好又はより良好である。ＳＥＣ－ＨＰＬＣアッセイの結果は、撹拌中に全ての画分が％ＨＭＷＦを低下させ（図８Ａ及び図８Ｂ）、ｍＡｂＢ（図８Ａ及び図９Ａ）とｍＡｂＣ（図８Ｂ及び図９Ｂ）の両方の抗体製剤の可溶性画分図９Ａ及び図９Ｂ）をより良好に保存したことを示した。Ｆ２ａは、より低い界面活性剤濃度（図８Ａ、図８Ｂ、図９Ａ、及び図９Ｂ）で特に効果的である。全ての界面活性剤がタンパク質の分解の緩和に成功した。
【0184】
実施例７ 安定性研究
製剤の長期安定性を、タンパク質ｍＡｂＣ及びｍＡｂＤ（それぞれ３０ｍｇ／ｍＬ）を含むＰＳ２０及びＦ２ａ（それぞれ０．０２％ ｗ／ｖ）の製剤について試験した。製剤を５℃、２５℃、及び４０℃で保存し、様々な間隔で目視検査（ＡＰＫ）、ＨＩＡＣ、及びＳＥＣ－ＨＰＬＣに供した。ＰＳ２０及びＦ２ａの製剤も５℃、２５℃及び４０℃でＩＥＣに供した。
製剤の長期安定性を、タンパク質ｍＡｂＣ及びｍＡｂＤ（それぞれ３０ｍｇ／ｍＬ）を含むＰＳ２０及びＦ２ａ（それぞれ０．０２％ ｗ／ｖ）の製剤について試験した。製剤を５℃、２５℃、及び４０℃で保存し、様々な間隔で目視検査（ＡＰＫ）、ＨＩＡＣ、及びＳＥＣ－ＨＰＬＣに供した。ＰＳ２０及びＦ２ａの製剤も５℃、２５℃及び４０℃でＩＥＣに供した。
【0185】
【0186】
４０℃で保存した製剤についてのＨＩＡＣの結果は、両方の界面活性剤が、最大一ヶ月間保存した場合でさえ、４０℃でｍＡｂＣ（図１１Ａ）及びｍＡｂＤ（図１１Ｂ）の両方の製剤中におけるサブビジブル粒子の形成を制限するのに有効であることを示した。
【0187】
４０℃で保存した製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣ結果は、両方の界面活性剤がｍＡｂＣ（図１２Ａ）とｍＡｂＤ（図１２Ｂ）の両方の製剤における凝集の制限に有効であることを示した。ＳＥＣの結果はまた、両方の界面活性剤が、ｍＡｂＣ（図１３Ａ）及びｍＡｂＤ（図１３Ｂ）の両方の製剤中の活性抗体の濃度を４０℃で最大１ヶ月間維持するのに有効であることを示した。
【0188】
４０℃で保存した製剤のＩＥＣデータは、両方の界面活性剤がｍＡｂＣの分解を制限し、４０℃で１ヶ月間（図１４）同様の有効性を示すことを示した。
【0189】
【0190】
２５℃で保存した製剤についてのＨＩＡＣの結果は、両方の界面活性剤が、最大３ヶ月間保存した場合でさえ、２５℃でｍＡｂＣ（図１６Ａ）及びｍＡｂＤ（図１６Ｂ）の両方の製剤中におけるサブビジブル粒子の形成を制限するのに有効であることを示した。
【0191】
２５℃で保存した製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣ結果は、両方の界面活性剤が（図１７Ａ）及びｍＡｂＤ（図１７Ｂ）の両方の製剤における凝集の制限に有効であることを示した。ＳＥＣの結果はまた、両方の界面活性剤が、ｍＡｂＣ（図１８Ａ）及びｍＡｂＤ（図１８Ｂ）の両方の製剤中の活性抗体の濃度を２５℃で最大３ヶ月間維持するのに有効であることを示した。
【0192】
２５℃で保存した製剤のＩＥＣデータは、両方の界面活性剤が２５℃で３ヶ月間（図１９）同様の有効性でｍＡｂＣの分解を制限することを示した。
【0193】
【0194】
５℃で保存した製剤についてのＨＩＡＣの結果は、両方の界面活性剤が、最大３ヶ月間保存した場合でさえ、５℃でｍＡｂＣ（図２１Ａ）及びｍＡｂＤ（図２１Ｂ）の両方の製剤中におけるサブビジブル粒子の形成を制限するのに有効であることを示した。
【0195】
５℃で保存した製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣ結果は、両方の界面活性剤がｍＡｂＣ（図２２Ａ）とｍＡｂＤ（図２２Ｂ）の両方の製剤における凝集の制限に有効であることを示した。ＳＥＣの結果はまた、両方の界面活性剤が、ｍＡｂＣ（図２３Ａ）及びｍＡｂＤ（図２３Ｂ）の両方の製剤中の活性抗体の濃度を５℃で最大３ヶ月間維持するのに有効であることを示した。
【0196】
５℃で保存した製剤のＩＥＣデータは、両方の界面活性剤が５℃で３ヶ月間（図２４）同様の有効性でｍＡｂＣの分解を制限することを示した。
【0197】
実施例８ 強制分解研究
ＰＳ２０及びＦ２ａ（それぞれｐＨ＝６．０の製剤緩衝液中）をシュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ）（ＰＣＬ）由来のリパーゼ酵素により２．５Ｕ／ｍＬの濃度で強制分解に供した。得られた混合物をＨＩＡＣに供して、サブビジブル（ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ）粒子及びインタクト界面活性剤の割合を定量した。結果は、Ｆ２ａが、酵素によるより多くの分解にもかかわらず、より少ないＳＶＰを産生したことを示した（図２５）。
ＰＳ２０及びＦ２ａ（それぞれｐＨ＝６．０の製剤緩衝液中）をシュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ）（ＰＣＬ）由来のリパーゼ酵素により２．５Ｕ／ｍＬの濃度で強制分解に供した。得られた混合物をＨＩＡＣに供して、サブビジブル（ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ）粒子及びインタクト界面活性剤の割合を定量した。結果は、Ｆ２ａが、酵素によるより多くの分解にもかかわらず、より少ないＳＶＰを産生したことを示した（図２５）。
【0198】
概要
Ｆ２ａは、一般的に使用される界面活性剤賦形剤であるＰＳ２０と比較した場合、バイオ医薬品に対してより保護的であることが示されている。この界面活性剤は、ＰＳ２０及びＰＳ８０のような従来のポリソルベートの優れた代替物となり得る魅力的な特性を有する。
Ｆ２ａは、一般的に使用される界面活性剤賦形剤であるＰＳ２０と比較した場合、バイオ医薬品に対してより保護的であることが示されている。この界面活性剤は、ＰＳ２０及びＰＳ８０のような従来のポリソルベートの優れた代替物となり得る魅力的な特性を有する。
【0199】
撹拌ストレス研究では、ＡＰＫを使用して試験した場合、Ｆ２ａがｍＡｂＡの粒子形成からより保護的であることがわかった。別の研究では、Ｆ２ａは、ＡＰＫによる粒子試験、ＨＩＡＣによるサブビジブル粒子数、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによる％ＨＭＷＦ、及びＳＥＣ－ＨＰＬＣによって試験した可溶性抗体の濃度に基づいて、ｍＡｂＢ及びＣに対し、Ｆ２ａとＨＰ ＰＳ２０との間の撹拌ストレスからの同様の保護を示した。
【0200】
安定性研究において、Ｆ２ａは、２つのｍＡｂであるｍＡｂＣ及びｍＡｂＤについて、ＡＰＫ及びＨＩＡＣによる粒子形成の防止においてＨＰ ＰＳ２０と同様に有効であることが観察された。Ｆ２ａはまた、５℃、２５℃及び４０℃での貯蔵に対しｍＡｂＣ及びｍＡｂＤの両方についてＳＥＣ－ＨＰＬＣによるＨＭＷＦの防止に関しＨＰ ＰＳ２０と同様の保護を有していた。
【0201】
強制分解研究では、Ｆ２ａは、サブビジブル及び可視脂肪酸粒子を形成する前に、ＨＰ ＰＳ２０よりも酵素的に分解され得ることが示された。これは、この種の脂肪酸関連粒子形成を受けにくい界面活性剤としてのＦ２ａに利点をもたらす。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図10A】
【図10B】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図13A】
【図13B】
【図14】
【図15A】
【図15B】
【図16A】
【図16B】
【図17A】
【図17B】
【図18A】
【図18B】
【図19】
【図20A】
【図20B】
【図21A】
【図21B】
【図22A】
【図22B】
【図23A】
【図23B】
【図24】
【図25】
【手続補正書】
【提出日】2024-11-18
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ポリペプチド及び界面活性剤を含む液体製剤であって、前記界面活性剤の少なくとも約７０％（重量％）がイソソルビドポリオキシエチレン（ＰＯＥ）脂肪酸エステルである、液体製剤。
【外国語明細書】