知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025026427
(43)【公開日】2025-02-21
(54)【発明の名称】抗Ａ－βタンパク質抗体、その方法及び使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/18 20060101AFI20250214BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20250214BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20250214BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20250214BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20250214BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20250214BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20250214BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20250214BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20250214BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250214BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20250214BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20250214BHJP
【ＦＩ】
C07K16/18 ZNA
C07K16/46
C12N15/13
C12N15/62 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 N
A61K48/00
A61P25/28
C07K16/18
【審査請求】未請求
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024131943
(22)【出願日】2024-08-08
(31)【優先権主張番号】23190645
(32)【優先日】2023-08-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＮＯＮＩＤＥＴ
(71)【出願人】
【識別番号】591003013
【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100157923
【弁理士】
【氏名又は名称】鶴喰 寿孝
(72)【発明者】
【氏名】ペール－オーラ・フレスクガード
(72)【発明者】
【氏名】ギイ・ジョルジュ
(72)【発明者】
【氏名】ザビーネ・イムホフ－ユング
(72)【発明者】
【氏名】マルクス・ノイバウアー
(72)【発明者】
【氏名】イェンス・ニーブーナー
(72)【発明者】
【氏名】ペトラ・リューガー
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE12
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084NA14
4C084ZA151
4C084ZA152
4C084ZA161
4C084ZA162
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD32
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA21
4H045FA72
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ヒトＡ－βタンパク質に対する抗体（抗Ａ－βタンパク質抗体）、その製造方法、これらの抗体を含有する医薬組成物及びその使用を提供する。
【解決手段】ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体であって、特定のアミノ酸配列から選択されるＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗体を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体であって、特定のアミノ酸配列から選択されるＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗体を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体であって、以下から選択されるＣＤＲ：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメインとを含む、抗体。
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメインとを含む、抗体。
【請求項2】
請求項１に記載の抗体であって、以下の特性：
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－前記重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５の前記ヒトＡ－βタンパク質に対するＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるプラークのインビボでの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－前記重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５の前記ヒトＡ－βタンパク質に対するＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるプラークのインビボでの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
【請求項3】
モノクローナル抗体である、請求項１又は２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項4】
ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体断片である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体であって、
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列、
を含む、抗体。
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列、
を含む、抗体。
【請求項6】
配列番号８４のＶＨ配列と配列番号８０のＶＬ配列とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体であって、前記抗体が、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｄ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｅ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｆ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｇ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｈ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｉ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｊ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｋ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｌ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ及びＹ４３６Ａを有し、一方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｗ及びｉｉ）Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ、及びｉｉ）Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｍ）ａ）～ｌ）のうちの１つであり、Ｃ末端リジン残基を含まない、抗体。
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｄ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｅ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｆ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｇ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｈ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｉ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｊ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｋ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｌ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ及びＹ４３６Ａを有し、一方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｗ及びｉｉ）Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ、及びｉｉ）Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｍ）ａ）～ｌ）のうちの１つであり、Ｃ末端リジン残基を含まない、抗体。
【請求項8】
配列番号８４の重鎖可変ドメイン及び配列番号０１の重鎖定常領域を含む重鎖と、配列番号８０の軽鎖可変ドメイン及び配列番号２９の軽鎖カッパ定常ドメインを含む軽鎖とを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項9】
第１のＮ末端アミノ酸残基としてグルタミン（Ｑ）残基の代わりにピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有する配列番号８４の重鎖可変ドメイン及び配列番号０１の重鎖定常領域を含む重鎖と、配列番号８０の軽鎖可変ドメイン及び配列番号２９の軽鎖カッパ定常ドメインを含む軽鎖とを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項10】
前記抗体が多重特異性抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項11】
単離された核酸分子の組成物であって、前記組成物の前記単離された核酸分子の各々が、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体の１つの鎖をコードする、組成物。
【請求項12】
請求項１１に記載の核酸分子の組成物を含む宿主細胞。
【請求項13】
ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体を製造する方法であって、
－培養培地中で請求項１２に記載の宿主細胞を培養する工程、
－前記宿主細胞又は／及び前記培養培地から前記抗体を回収する工程、並びに
－１つ又は複数のクロマトグラフィー工程を使用して前記抗体を精製する工程
を含む方法。
－培養培地中で請求項１２に記載の宿主細胞を培養する工程、
－前記宿主細胞又は／及び前記培養培地から前記抗体を回収する工程、並びに
－１つ又は複数のクロマトグラフィー工程を使用して前記抗体を精製する工程
を含む方法。
【請求項14】
請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
【請求項15】
医薬として使用するための、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヒトＡ－βタンパク質に対する抗体（抗Ａ－βタンパク質抗体）、その製造方法、これらの抗体を含有する医薬組成物及びその使用に関する。本発明による抗体は、既知の抗Ａ－βタンパク質抗体と比較して改善された技術的及び生物学的特性を示した。
【背景技術】
【0002】
認知症の全症例の約７０％が、認知に不可欠な脳領域及び神経回路の選択的損傷に関連するアルツハイマー病（ＡＤ）によるものである。ＡＤは、特に海馬の錐体ニューロンにおける神経原線維タングル、及びアミロイド沈着物の密なコア及び緩んだ（ｄｅｆｕｓｅｄ）ハローを主に含有する多数のアミロイド斑を特徴とする。
【0003】
細胞外神経炎斑は、「アミロイド」、「アミロイドβ」、「Ａ－β」、「Ａβ４」、「β－Ａ４」又は「Ａβ」と呼ばれる大量の線維性ペプチドを主に含有している。Ｓｅｌｋｏｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０（１９９４）３７３－４０３；Ｋｏｏ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６（１９９９）９９８９－９９９０；米国特許第４，６６６，８２９号；Ｇｌｅｎｎｅｒ ＢＢＲＣ １２（１９８４）１１３１を参照）。このアミロイドは、「アルツハイマー前駆体タンパク質／Ｐアミロイド前駆体タンパク質」（ＡＰＰ）に由来する。ＡＰＰは、一体型膜糖タンパク質であり（Ｓｉｓｏｄｉａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９（１９９２）６０７５を参照）、原形質膜プロテアーゼ、α－セクレターゼによってＡＰ配列内で内部タンパク質分解的に切断される（Ｓｉｓｏｄｉａ（１９９２），Ｊｏｅ．ｃｉｔ．を参照）。さらに、さらなるセクレターゼ活性、特にβ－セクレターゼ及びγ－セクレターゼ活性は、３９アミノ酸（Ａβ３９）、４０アミノ酸（Ａβ４０）、４１アミノ酸（Ａβ４１）、４２アミノ酸（Ａβ４２）又は４３アミノ酸（Ａβ４３）のいずれかを含むアミロイド－β（Ａβ）の細胞外放出をもたらす（Ｓｉｎｈａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９６（１９９９）１１０９４－１０５３；Ｐｒｉｃｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２（１９９８）１０７８－１０８３；国際公開第００／７２８８０号又はＨａｒｄｙ，ＴＩＮＳ ２０（１９９７）１５４を参照）。
【0004】
Ａ－βタンパク質は、いくつかの天然に存在する形態を有し、ヒト形態は、上記のようにＡβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２及びＡβ４３と呼ばれることに留意されたい。最も顕著な形態であるＡβ４２は、以下のアミノ酸配列を有する（Ｎ末端から始まる）：ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶ ＶＩＡ（配列番号４５）。Ａβ４１、Ａβ４０、Ａβ３９では、Ｃ末端のアミノ酸Ａ、ＩＡ及びＶＩＡがそれぞれ欠損している。Ａβ４３では、追加のトレオニン残基が上記の配列のＣ末端に含まれる。
【0005】
Ａβ４０フィブリルを核形成するのに必要な時間は、Ａβ４２フィブリルを核形成するのに必要な時間よりも有意に長いことが示された（例えば、Ｌａｎｓｂｕｒｙ，Ｊｒ．，Ｐ．Ｔ．ａｎｄ Ｈａｒｐｅｒ，Ｊ．Ｄ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６６（１９９７）３８５－４０７を参照）。Ｗａｇｎｅｒ（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０４（１９９９）１２３９－１３３２）に概説されているように、Ａβ４２は、神経炎斑に関連してより頻繁に見出され、インビトロでより原線維形成性であると考えられる。Ａβ４２が、規則正しい非結晶性Ａβペプチドの核依存性重合における「種子」として働くことも示唆された（例えば、Ｊａｒｒｅｔｔ，Ｃｅｌｌ ９３（１９９３）１０５５－１０５８を参照）。改変されたＡＰＰプロセシング及び／又はタンパク質性沈着物を含有する細胞外プラークの生成は、アルツハイマー病からだけでなく、他の神経学的及び／又は神経変性障害に罹患している対象からも知られている。これらの障害には、とりわけ、ダウン症候群、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、パーキンソン病、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、クロイツフェルト・ヤコブ病、ＨＩＶ関連認知症及び運動ニューロパシーが含まれる。
【0006】
これまで、アミロイド関連疾患のための限定された医療介入スキームのみが記載されている。例えば、ガランタミン、リバスチグミン又はドネペジルのようなコリンエステラーゼ阻害剤は、軽度から中等度の疾患のみを有するアルツハイマー患者において有益であると議論されている。しかしながら、これらの薬物のコリン作動性作用に起因する有害事象が報告されている。これらのコリン作動性増強処置はいくらかの症候的利益をもたらすが、治療応答は処置された患者の大部分にとって満足のいくものではない。有意な認知の改善は、処置された患者の約５％のみで起こると推定されており、処置がこの進行性疾患の経過を有意に変化させるという証拠はほとんどない。
【0007】
その結果、より効果的な処置、特に疾患の進行を停止又は遅延させ得る処置に対する多大な臨床的必要性が依然として存在する。
【0008】
さらに、メマンチンのようなＮＭＤＡ受容体アンタゴニストが使用されている。しかしながら、薬理活性のために有害事象が報告されている。さらに、これらのＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを用いたそのような処置は、単に対症的アプローチと考えることができ、疾患改変アプローチと考えることはできない。
【0009】
さらに、アミロイド関連障害を処置するための免疫調節アプローチが提案されている。国際公開第９９／２７９４４号は、Ａ－βペプチドの一部と担体分子とを含み、それにより該担体分子が免疫応答を増強するはずであるコンジュゲートを開示している。別の能動免疫化アプローチは、国際公開第００／７２８８０号に記載されており、Ａ－β断片も免疫応答を誘導するために使用される。
【0010】
さらに、一般的な抗Ａ－β抗体による受動免疫化アプローチが国際公開第９９／２７９４４号又は国際公開第０１／６２８０１号で提案されており、Ａ－βの部分に対する特異的ヒト化抗体が国際公開第０２／４６２３７号、国際公開第０２／０８８３０６号及び国際公開第０２／０８８３０７号に記載されている。国際公開第００／７７１７８号は、加水分解中にβ－アミロイドによって採用される遷移状態に結合する抗体を記載している。国際公開第０３／０７０７６０号は、Ａ－βペプチド上の２つの不連続なアミノ酸配列を認識する抗体分子を開示している。
【0011】
国際公開第２０１４／０３３０７４号は、血液脳関門上の受容体に結合する血液脳関門シャトル及びそれを使用する方法に関する。トランスフェリン受容体モノクローナル抗体を用いたＩｇＧ融合タンパク質の血液脳関門薬物送達は、Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ．（Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．１２（２０１５）２０７－２２２）によって報告されている。Ｙｕ，Ｙ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌａｔ．Ｍｅｄ．６（２０１４）２６１ｒａ１５４－２６１ｒａ１５４）。彼らは、治療的二重特異性抗体が非ヒト霊長類において血液脳関門を通過することを報告した。トランスフェリン受容体及びＡβアミロイドペプチドを標的とする四価二重特異性抗体を毎日皮下投与したアルツハイマー病トランスジェニックマウスの脳におけるアミロイド斑の脱凝集は、Ｓｕｍｂｒｉａ，Ｒ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．１０（２０１３）３５０７－３５１３）によって報告された。Ｎｉｅｗｏｅｈｎｅｒ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（Ｎｅｕｒｏｎ ８１（２０１４）４９－６０９は、一価分子シャトルを使用した治療用抗体の脳浸透及び効力の増加を報告した。
【0012】
国際公開第２０１６／２０７２４０号は、ヒトトランスフェリン受容体のために設計されたオフレートを有する抗トランスフェリン受容体抗体及び血液脳関門シャトルモジュールとしてのそれらの使用を報告した。
【0013】
国際公開第２０１７／０５５５４２号は、ヒトＣＤ２０及びヒトトランスフェリン受容体に対する三価二重特異性抗体、それらの製造方法、これらの抗体を含有する医薬組成物、及びそれらの使用を報告した。
【0014】
国際公開第２００７／０６８４２９号は、可変領域にグリコシル化を有するアミロイドβに対する抗体を報告した。少なくとも１つの抗原結合部位が、重鎖の可変領域（ＶＨ）にグリコシル化アスパラギン（Ａｓｎ）を含むことを特徴とする、精製抗体分子調製物。国際公開第２００７／０６８４２９号は、重鎖の可変領域にグリコシル化アスパラギン（Ａｓｎ）を有する１つ又は２つのグリコシル化抗原結合部位を含む抗体の混合物、すなわち、重鎖の可変領域（ＶＨ）にグリコシル化Ａｓｎを含む抗体のアイソフォームの混合物を報告した。
【0015】
国際公開第２０１７／０５５５４０号は、ヒトＡ－β及びヒトトランスフェリン受容体に対する三価二重特異性抗体、それらの製造方法、これらの抗体を含有する医薬組成物、及びそれらの使用を報告した。
【0016】
欧州特許第２３６８９０７号は、抗Ａβ抗体及びその使用を報告した。
【0017】
Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｅ．らは、バイオプロセス中に治療用抗体グリコシル化を制御する戦略を報告した（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．１１９（２０２２）１３４３－１３５８）。
【発明の概要】
【0018】
本明細書には、ヒトＡ－βタンパク質に対する抗体（抗Ａ－βタンパク質抗体）、その製造方法、これらの抗体を含有する医薬組成物及びその使用が報告される。
【0019】
本発明による抗体は、抗Ａ－β抗体ガンテネルマブのバリアントである。それらは、それらの親抗体と比較して改善された技術的及び生物学的特性を有する。改善は、とりわけ、改善された生産力価、改善された生産収率及び改善されたプロセスロバスト性などの改善された生産特性を包含する。
【0020】
本発明は、少なくとも部分的に、重鎖ＣＤＲ２に特定の変異を導入することによって、及び重鎖ＣＤＲ３を短縮することによって、ガンテネルマブの特性が改善されたという知見に基づいている。この理論に拘束されるものではないが、導入された改変は、Ｆａｂにおける糖占有不均一性を減少させ、脱アミド化ホットスポットを除去し、それによって親抗体ガンテネルマブの凝集傾向を低減させることによって、改善された特性をもたらしたと考えられる。
【0021】
本発明は、少なくとも部分的に、親抗体ガンテネルマブの軽鎖が、本発明による改変重鎖と組み合わせた場合に結合親和性及び特異性を保持するために改変を必要としないという知見に基づく。
【0022】
本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、重鎖ＣＤＲ２中にグリコシル化部位の実質的かつ最大１００％の糖占有を有する。
【0023】
本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、とりわけ、標的結合、発生特性、ＩＨＣ／プラーク結合及びＰＫ挙動に関して改善された特性を有する。
【0024】
本発明は、少なくとも以下の実施形態を包含する。
【0025】
１．ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体であって、以下の特性：
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質のＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるインビボでのプラークの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質のＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるインビボでのプラークの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
【0026】
２．ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体であって、以下から選択されるＣＤＲ：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメインとを含む、抗体。
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメインとを含む、抗体。
【0027】
３．実施形態２に記載の抗体であって、以下の特性：
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質のＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるプラークのインビボでの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質のＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるプラークのインビボでの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
【0028】
４．モノクローナル抗体である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体。
【0029】
５．ヒト化抗体又はキメラ抗体である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
【0030】
６．ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体断片である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の抗体。
【0031】
７．実施形態１～６のいずれか１つに記載の抗体であって、
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列、
を含む、抗体。
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は
（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列、
を含む、抗体。
【0032】
８．配列番号８４のＶＨ配列及び配列番号８０のＶＬ配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の抗体。
【0033】
８ａ．第１のＮ末端アミノ酸残基としてグルタミン（Ｑ）残基の代わりにピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有する配列番号８４のＶＨ配列及び配列番号８０のＶＬ配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の抗体。
【0034】
９．配列番号８４のＶＨ配列及び配列番号８０のＶＬ配列を含むヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する抗体。
【0035】
１０．実施形態１～９のいずれか１つに記載の抗体であって、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｄ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｅ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｆ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｇ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｈ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｉ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｊ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｋ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｌ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ及びＹ４３６Ａを有し、一方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｗ及びｉｉ）Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ、及びｉｉ）Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｍ）ａ）～ｌ）のうちの１つであり、Ｃ末端リジン残基を含まない、抗体。
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｄ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｅ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｆ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｇ）一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有する、ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｈ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｉ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｊ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｋ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅを有し、一方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｌ）両方の重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ及びＹ４３６Ａを有し、一方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｗ及びｉｉ）Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃ並びにそれぞれの他方の重鎖に変異ｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ、及びｉｉ）Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｍ）ａ）～ｌ）のうちの１つであり、Ｃ末端リジン残基を含まない、抗体。
【0036】
１０ａ．ｉＰＳＣ由来ミクログリアによるインビトロでのＡβコーティングビーズの取り込みを媒介する、実施形態１０に記載の抗体。
【0037】
１０ｂ．ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｈ）、ｉ）、ｊ）、ｋ）又はｌ）のＦｃ領域を有する、実施形態１０ａに記載の抗体。
【0038】
１１．表面プラズモン共鳴により決定／測定される０．４ｎＭ以下の親和性で、配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に結合する、実施形態１～１０ｂのいずれか１つに記載の抗体。
【0039】
１２．ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体である、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の抗体。
【0040】
１３．ｉ）配列番号８４の重鎖可変ドメイン及び配列番号０１の重鎖定常領域を含む重鎖と、ｉｉ）配列番号８０の軽鎖可変ドメイン及び配列番号２９の軽鎖カッパ定常ドメインを含む軽鎖とを含む、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の抗体。
【0041】
１３ａ．第１のＮ末端アミノ酸残基としてグルタミン（Ｑ）残基の代わりにピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有する配列番号８４の重鎖可変ドメイン及び配列番号０１の重鎖定常領域を含む重鎖と、配列番号８０の軽鎖可変ドメイン及び配列番号２９の軽鎖カッパ定常ドメインを含む軽鎖とを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。
【0042】
１４．多重特異性抗体である、実施形態１～１３ａのいずれか１つに記載の抗体。
【0043】
１５．ヒトＡ－βタンパク質に結合する少なくとも１つの結合部位と、ヒトＡ－βタンパク質に結合しない少なくとも１つの結合部位／第２の非ヒトＡ－βタンパク質標的とを含む多重特異性抗体である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の抗体。
【0044】
１６．ヒトＡ－βタンパク質に結合しない少なくとも１つの結合部位が、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、α－シヌクレイン、ＣＤ２０、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、グルコセレブロシダーゼ、ヒトトランスフェリン受容体１又はヒトＴＲＥＭ２タンパク質に結合する、実施形態１４～１５のいずれか１つに記載の抗体。
【0045】
１７．多重特異性抗体が、以下の両方に結合する、実施形態１４～１６のいずれか１つに記載の抗体。
ｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトトランスフェリン受容体、又は
ｉｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトＴＲＥＭ２タンパク質、又は
ｉｉｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトＣＤ２０タンパク質、又は
ｉｖ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトα－シヌクレインタンパク質、又は
ｖ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトホスホ－タウタンパク質、又は
ｖｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトグルコセレブロシダーゼ。
１８．実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体であって、
ｉ）配列番号８４の重鎖可変ドメインと配列番号８０の軽鎖可変ドメインとを含む第１の結合部位、
及び
ｉｉ）以下から選択される第２の結合部位
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインと配列番号７２の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号５４の重鎖可変ドメインと配列番号５５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号５６の重鎖可変ドメインと配列番号５７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号５８の重鎖可変ドメインと配列番号５９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｅ）配列番号６０の重鎖可変ドメインと配列番号６１の軽鎖可変ドメイン、又は
ｆ）配列番号６２の重鎖可変ドメインと配列番号６３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｇ）配列番号６４の重鎖可変ドメインと配列番号６５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｈ）配列番号６６の重鎖可変ドメインと配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｉ）配列番号９２の重鎖可変ドメインと配列番号９３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｊ）配列番号９４の重鎖可変ドメインと配列番号９５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｋ）配列番号９６の重鎖可変ドメインと配列番号９７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｌ）配列番号９８の重鎖可変ドメインと配列番号９９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｍ）配列番号１００の重鎖可変ドメインと配列番号１０１の軽鎖可変ドメイン、又は
ｎ）配列番号１０２の重鎖可変ドメインと配列番号１０３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｏ）配列番号１０４の重鎖可変ドメインと配列番号１０５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｐ）配列番号１０６の重鎖可変ドメインと配列番号１０７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｑ）配列番号１０８の重鎖可変ドメインと配列番号１０９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｒ）配列番号１１０の重鎖可変ドメインと配列番号１１１の軽鎖可変ドメイン、又は
ｓ）配列番号１１２の重鎖可変ドメインと配列番号１１３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｔ）配列番号１１４の重鎖可変ドメインと配列番号１１５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｕ）配列番号１１６の重鎖可変ドメインと配列番号１１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｖ）配列番号１１８の重鎖可変ドメインと配列番号１１９の軽鎖可変ドメイン、
を含む二重特異性抗体である、抗体。
ｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトトランスフェリン受容体、又は
ｉｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトＴＲＥＭ２タンパク質、又は
ｉｉｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトＣＤ２０タンパク質、又は
ｉｖ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトα－シヌクレインタンパク質、又は
ｖ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトホスホ－タウタンパク質、又は
ｖｉ）ヒトＡ－βタンパク質及びヒトグルコセレブロシダーゼ。
１８．実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体であって、
ｉ）配列番号８４の重鎖可変ドメインと配列番号８０の軽鎖可変ドメインとを含む第１の結合部位、
及び
ｉｉ）以下から選択される第２の結合部位
ａ）配列番号６８の重鎖可変ドメインと配列番号７２の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号５４の重鎖可変ドメインと配列番号５５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号５６の重鎖可変ドメインと配列番号５７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号５８の重鎖可変ドメインと配列番号５９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｅ）配列番号６０の重鎖可変ドメインと配列番号６１の軽鎖可変ドメイン、又は
ｆ）配列番号６２の重鎖可変ドメインと配列番号６３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｇ）配列番号６４の重鎖可変ドメインと配列番号６５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｈ）配列番号６６の重鎖可変ドメインと配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｉ）配列番号９２の重鎖可変ドメインと配列番号９３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｊ）配列番号９４の重鎖可変ドメインと配列番号９５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｋ）配列番号９６の重鎖可変ドメインと配列番号９７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｌ）配列番号９８の重鎖可変ドメインと配列番号９９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｍ）配列番号１００の重鎖可変ドメインと配列番号１０１の軽鎖可変ドメイン、又は
ｎ）配列番号１０２の重鎖可変ドメインと配列番号１０３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｏ）配列番号１０４の重鎖可変ドメインと配列番号１０５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｐ）配列番号１０６の重鎖可変ドメインと配列番号１０７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｑ）配列番号１０８の重鎖可変ドメインと配列番号１０９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｒ）配列番号１１０の重鎖可変ドメインと配列番号１１１の軽鎖可変ドメイン、又は
ｓ）配列番号１１２の重鎖可変ドメインと配列番号１１３の軽鎖可変ドメイン、又は
ｔ）配列番号１１４の重鎖可変ドメインと配列番号１１５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｕ）配列番号１１６の重鎖可変ドメインと配列番号１１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｖ）配列番号１１８の重鎖可変ドメインと配列番号１１９の軽鎖可変ドメイン、
を含む二重特異性抗体である、抗体。
【0046】
１８ａ．ヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する、又はヒトＡ－βタンパク質及びヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の抗体。
【0047】
１８ｂ．二価抗体である、実施形態１～１８ａのいずれか１つに記載の抗体。
【0048】
１８ｃ．二価又は三価又は四価の抗体である、実施形態１４～１８ｂのいずれか１つに記載の抗体。
【0049】
１８ｄ．二価二重特異性抗体である、実施形態１４～１８ｃのいずれか１つに記載の抗体。
【0050】
１８ｅ．ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマットの二価二重特異性抗体である、実施形態１８ｄに記載の抗体。
【0051】
１８ｆ．ヒトＡ－βタンパク質及びヒトＴＲＥＭ２タンパク質に結合する、実施形態１４～１８ｅのいずれか１つに記載の抗体。
【0052】
１８ｇ．ヒトＡ－βタンパク質及びヒトトランスフェリン受容体１に結合する、実施形態１４～１８ｅのいずれか１つに記載の抗体。
【0053】
１８ｈ．三価二重特異性抗体である、実施形態１４～１８ｃのいずれか１つに記載の抗体。
【0054】
１８ｉ．ＢＳフォーマット又はＴＣＢフォーマットの三価二重特異性抗体である、実施形態１８ｈに記載の抗体。
【0055】
１８ｊ．ヒトＡ－βタンパク質及びヒトトランスフェリン受容体１に結合する、実施形態１４～１８ｃ及び１８ｇ～１８ｈのいずれか１つに記載の抗体。
【0056】
１８ｋ．四価二重特異性抗体である、実施形態１４～１８ｃのいずれか１つに記載の抗体。
【0057】
１８ｌ．２＋２－フォーマットの四価二重特異性抗体である、実施形態１８ｋに記載の抗体。
【0058】
１８ｍ．ヒトＡ－βタンパク質及びヒトＴＲＥＭ２タンパク質に結合する、実施形態１４～１８ｃ及び１８ｋ～１８ｌのいずれか１つに記載の抗体。
【0059】
１８ｎ．ヒトＡ－βタンパク質及びヒトトランスフェリン受容体１に結合する、実施形態１４～１８ｃ及び１８ｋ～１８ｌのいずれか１つに記載の抗体。
【0060】
１８ｏ．三価の三重特異性抗体であり、ヒトＡ－βタンパク質、ヒトトランスフェリン受容体１並びに第３の非ヒトＡ－β及び非ヒトトランスフェリン受容体１標的に結合している、実施形態１４～１８ｃのいずれか１つに記載の抗体。
【0061】
１８ｐ．三価三重特異性抗体であり、ヒトＡ－βタンパク質、ヒトトランスフェリン受容体１及びヒトＴＲＥＭ２に結合している、実施形態１４～１８ｃ及び１８ｏのいずれか１つに記載の抗体。
【0062】
１８ｑ．ＢＳフォーマットの三価三重特異性抗体である、実施形態１８ｏ～１８ｐのいずれか１つに記載の抗体。
【0063】
１８ｒ．ＴＣＢフォーマットの三価三重特異性抗体である、実施形態１８ｏ～１８ｐのいずれか１つに記載の抗体。
【0064】
１９．実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体と細胞傷害剤とを含む免疫コンジュゲート。
【0065】
２０．実施形態１～１８ｒのいずれかに記載の抗体をコードする単離された核酸分子。
【0066】
２１．単離された核酸分子の組成物であって、組成物の単離された核酸分子の各々が、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体の１つの鎖をコードする、組成物。
【0067】
２２．実施形態２０の核酸分子又は実施形態２１の核酸分子の組成物を含む宿主細胞。
【0068】
２３．ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体を産生する方法であって、実施形態２２の宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養培地中で培養することを含む方法。
【0069】
２４．宿主細胞又は／及び培養培地から抗体を回収する工程をさらに含む、実施形態２３に記載の方法。
【0070】
２５．１つ又は複数のクロマトグラフィー工程を用いて、細胞又は／及び培養培地から回収後の抗体を精製する工程をさらに含む、実施形態２３～２４のいずれか１つに記載の方法。
【0071】
２６．実施形態２３～２５のいずれか１つに記載の方法によって産生される抗体。
【0072】
２７．実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体又は実施形態１９の免疫コンジュゲートと、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
【0073】
２８．追加の治療剤をさらに含む、実施形態２７に記載の医薬組成物。
【0074】
２８ａ．追加の治療剤が抗ＴＲＥＭ２抗体である、実施形態２８に記載の医薬組成物。
【0075】
２８ｂ．アルツハイマー病の処置用である、実施形態２７～２８ａのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0076】
２８ｃ．パーキンソン病の処置用である、実施形態２７～２８ａのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0077】
２９．医薬として使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0078】
２９ａ．医薬がアルツハイマー病の処置用である、実施形態２９に記載の抗体。
【0079】
２９ｂ．医薬がパーキンソン病の処置用である、実施形態２９に記載の抗体。
【0080】
３０．脳におけるアミロイド形成に関連する疾患を有する個体における疾患の処置において使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0081】
３１．脳におけるアミロイド斑形成に関連する疾患を有する個体における疾患の処置において使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0082】
３２．脳におけるアミロイド疾患又は障害の処置に使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0083】
３３．疾患が、認知症、アルツハイマー病、運動ニューロパシー、ダウン症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、パーキンソン病、ＨＩＶ関連認知症、ＡＬＳ又は老化に関連するニューロン障害からなる群から選択される、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載の抗体。
【0084】
３４．疾患がアルツハイマー病である、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載の抗体。
【0085】
３４ａ．疾患がパーキンソン病である、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載の抗体。
【0086】
３５．脳におけるアミロイド斑の形成を阻害するのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0087】
３６．脳におけるアミロイド斑の形成を遅らせるのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0088】
３７．脳におけるアミロイド形成の予防において使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0089】
３８．脳におけるアミロイド斑形成の予防において使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0090】
３９．脳におけるアミロイド斑を低減させるのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0091】
４０．脳におけるアミロイド斑を除去するのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0092】
４１．脳におけるアミロイド斑を崩壊させるのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0093】
４２．脳におけるアミロイド斑の形成を阻害するのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0094】
４３．脳におけるアミロイド斑を崩壊させるのに使用するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物。
【0095】
４４．医薬の製造のための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0096】
４５．医薬が、個体の脳におけるアミロイド形成に関連する疾患を処置するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0097】
４６．医薬が、個体の脳におけるアミロイド斑形成に関連する疾患を処置するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0098】
４７．医薬が脳におけるアミロイド疾患又は障害を処置するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0099】
４８．アミロイド疾患が、認知症、アルツハイマー病、運動ニューロパシー、ダウン症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、パーキンソン病、ＨＩＶ関連認知症、ＡＬＳ又は老化に関連するニューロン障害からなる群から選択される、実施形態４７に記載の使用。
【0100】
４９．医薬がアルツハイマー病の処置用である、実施形態４７又は４８のいずれか１つに記載の使用。
【0101】
４９ａ．医薬がパーキンソン病の処置用である、実施形態４７又は４８のいずれか１つに記載の使用。
【0102】
５０．医薬が脳におけるアミロイド斑の形成を阻害するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0103】
５１．医薬が脳におけるアミロイド斑の形成を遅らせるためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0104】
５２．医薬が脳におけるアミロイド形成を予防するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0105】
５３．医薬が脳におけるアミロイド斑形成を予防するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0106】
５４．医薬が脳におけるアミロイド斑を低減させるためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0107】
５５．医薬が脳におけるアミロイド斑を除去するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0108】
５６．医薬が脳におけるアミロイド斑を崩壊させるためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0109】
５７．医薬が脳におけるアミロイド斑の形成を阻害するためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0110】
５８．医薬が脳におけるアミロイド斑を崩壊させるためのものである、実施形態４４に記載の使用。
【0111】
５９．脳におけるアミロイド形成に関連する疾患を有する個体における疾患の処置のための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0112】
６０．脳におけるアミロイド斑形成に関連する疾患を有する個体における疾患の処置のための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0113】
６１．脳におけるアミロイド疾患又は障害の処置のための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0114】
６２．アミロイド疾患が、認知症、アルツハイマー病、運動ニューロパシー、ダウン症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、パーキンソン病、ＨＩＶ関連認知症、ＡＬＳ又は老化に関連するニューロン障害からなる群から選択される、実施形態６１に記載の抗体の使用。
【0115】
６３．医薬がアルツハイマー病の処置用である、実施形態６１～６２のいずれか１つに記載の抗体の使用。
【0116】
６３ａ．医薬がパーキンソン病の処置用である、実施形態６１～６２のいずれか１つに記載の抗体の使用。
【0117】
６４．脳におけるアミロイド斑の形成を阻害するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0118】
６５．脳におけるアミロイド斑の形成を遅らせるための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0119】
６６．脳におけるアミロイド形成の予防のための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0120】
６７．脳におけるアミロイド斑形成の予防のための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0121】
６８．脳におけるアミロイド斑を低減させるための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0122】
６９．脳におけるアミロイド斑を除去するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0123】
７０．脳におけるアミロイド斑を崩壊させるための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0124】
７１．脳におけるアミロイド斑の形成を阻害するための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0125】
７２．脳におけるアミロイド斑を崩壊させるための、実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
【0126】
７３．脳内にアミロイド斑を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【0127】
７４．脳内にアミロイド形成を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【0128】
７５．脳内にアミロイド斑形成を有する又は発生すると予測される個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【0129】
７６．個体に追加の治療剤を投与することをさらに含む、実施形態７３～７５のいずれか１つに記載の方法。
【0130】
７６ａ．追加の治療剤が抗ＴＲＥＭ２抗体である、実施形態７６に記載の方法。
【0131】
７７．個体におけるアミロイド形成に関連する疾患を処置する方法であって、アミロイド形成に関連する疾患を処置するために、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
【0132】
７８．個体における脳内のアミロイド斑形成に関連する疾患を処置する方法であって、アミロイド斑形成に関連する疾患を処置するために、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
【0133】
７９．個体の脳におけるアミロイド疾患又は障害を処置する方法であって、脳における疾患又は障害を処置するために、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
【0134】
８０．脳におけるアミロイド疾患又は障害が、認知症、アルツハイマー病、運動ニューロパシー、ダウン症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、パーキンソン病、ＨＩＶ関連認知症、ＡＬＳ又は老化に関連するニューロン障害からなる群から選択される、実施形態７９に記載の処置方法。
【0135】
８１．疾患がアルツハイマー病である、実施形態７９～８０のいずれか１つに記載の処置方法。
【0136】
８１ａ．疾患がパーキンソン病である、実施形態７９～８０のいずれか１つに記載の処置方法。
【0137】
８２．個体におけるアミロイド形成に関連する疾患を処置する方法であって、アミロイド形成に関連する疾患を処置するために、有効量の実施形態１～１８ｒのいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態１９に記載の免疫コンジュゲート、又は実施形態２７～２８ｃのいずれか１つに記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
【0138】
描写され、特許請求される様々な実施形態に加えて、本開示の主題は、本明細書に開示されるか又は特許請求される特徴の他の組み合わせを有する他の実施形態も対象とする。したがって、本明細書に提示される特定の特徴は、開示される主題が本明細書に開示された特徴の任意の好適な組合せを含むように、開示される主題の範囲内で他の方法で互いに組み合わせることができる。本開示の主題の特定の実施形態の前述の説明は、例証及び説明目的のために提示されている。包括的であるようにも本開示の主題を開示される実施形態に限定するようにも意図されていない。
【発明を実施するための形態】
【0139】
本発明は、少なくとも部分的に、重鎖ＣＤＲ２に特定の変異を導入することによって、及び重鎖ＣＤＲ３を短縮することによって、抗体ガンテネルマブの特性が改善されたという知見に基づいている。この理論に拘束されるものではないが、導入された改変は、Ｆａｂにおける糖占有不均一性を減少させ、脱アミド化ホットスポットを除去し、それによって親抗体ガンテネルマブの凝集傾向を低減させることによって、改善された特性をもたらしたと考えられる。
【0140】
本発明は、少なくとも部分的に、親抗体ガンテネルマブの軽鎖が、本発明による改変重鎖と組み合わせた場合に結合親和性及び特異性を回復するために改変を必要としないという知見に基づく。
【0141】
定義
本明細書で特に定義されていない限り、本発明に関連して使用される科学的及び技術的な用語は、当技術分野の当業者に一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
本明細書で特に定義されていない限り、本発明に関連して使用される科学的及び技術的な用語は、当技術分野の当業者に一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【0142】
本明細書において使用される場合、重鎖及び軽鎖のすべての定常領域及びドメインのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）において説明されるＫａｂａｔナンバリングシステムによりナンバリングされ、本明細書では「Ｋａｂａｔによるナンバリング」と称される。具体的には、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）のＫａｂａｔナンバリングシステム（６４７～６６０頁を参照）を、カッパアイソタイプ及びラムダアイソタイプの軽鎖定常ドメインＣＬに使用し、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付けシステム（６６１～７２３頁を参照）を、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、本明細書では、この場合には、「ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング」と称することによってさらに明確にしている）に使用する。
【0143】
ノブ・イントゥー・ホール二量体化モジュール及び抗体操作におけるその使用は、Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．；Ｒｉｄｇｗａｙ Ｊ．Ｂ．Ｂ．；Ｐｒｅｓｔａ Ｌ．Ｇ．：Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ２，Ｎｕｍｂｅｒ １，Ｆｅｂｒｕａｒｙ １９９６，ｐｐ．７３－７３（１）に記載されている。
【0144】
ヒト免疫グロブリン軽鎖及び重鎖のヌクレオチド配列に関する一般的な情報は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されている。
【0145】
本発明を実施するための有用な方法及び技術は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（ｅｄ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ｔｏ ＩＩＩ（１９９７）；Ｇｌｏｖｅｒ，Ｎ．Ｄ．，ａｎｄ Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｄ．，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（１９８５），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．（ｅｄ．），Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ－ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（１９８６）；Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＣＨＳＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９２）；Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ；Ｎ．Ｙ．，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８７）；Ｃｅｌｉｓ，Ｊ．，ｅｄ．，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９９８）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．，Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）に記載されている。
【0146】
組換えＤＮＡ技術を使用することにより、核酸の誘導体の作製が可能になる。このような誘導体は、例えば、置換、変更、交換、欠失又は挿入によって、個々の又はいくつかのヌクレオチド位置で改変することができる。改変又は誘導体化は、例えば、部位特異的突然変異誘発によって行うことができる。このような改変は、当業者によって容易に行うことができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（１９９９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｓ．Ｇ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ－ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（１９８５）ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄを参照）。
【0147】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈において特に明白な規定がない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、「１つの細胞（ａ ｃｅｌｌ）」への言及は、複数のそのような細胞、及び当業者に公知であるその等価物を含み、他も同様である。同様に、用語「１つの（ａ）」（又は「１つの（ａｎ）」）、「１つ又は複数」、及び「少なくとも１つの」も、本明細書において同義的に使用され得る。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」が同義的に使用され得ることにも留意すべきである。
【0148】
用語「約」は、その後に続く数値の±２０％の範囲を意味する。１つの実施形態において、「約」という用語は、その後に続く数値の±１０％の範囲を意味する。１つの実施形態において、「約」という用語は、その後に続く数値の±５％の範囲を意味する。
【0149】
「アミロイド斑」という用語は、神経細胞間の空間に形成されるミスフォールドタンパク質の凝集体を意味する。これらの異常に構成されたタンパク質は、アルツハイマー病において中心的な役割を果たすと考えられている。アミロイド斑は、記憶及び他の認知機能に関係する脳の領域で最初に発生する。
【0150】
「決定する」という用語は、本明細書において使用される場合、測定する及び分析するという用語も包含する。
【0151】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語も含む。
【0152】
「抗（ヒト）Ａ－βタンパク質抗体」という用語は、抗体がヒトＡ－βタンパク質を標的とする上で診断剤及び／又は治療剤として有用であるような十分な親和性でヒトＡ－βタンパク質を結合することができる抗体を指す。
【0153】
ヒトＡ－βタンパク質は、いくつかの天然に存在する形態を有し、ヒト形態は、Ａβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２及びＡβ４３と呼ばれることに留意されたい。最も顕著な形態であるＡβ４２は、配列番号４５のアミノ酸配列を有する。Ａβ４１、Ａβ４０、Ａβ３９では、Ｃ末端のアミノ酸Ａ、ＩＡ及びＶＩＡがそれぞれ欠損している。Ａβ４３では、追加のスレオニン残基が配列番号４５のＣ末端に含まれる。１つの好ましい実施形態において、本発明による抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する。
【0154】
「中枢神経系」又は「ＣＮＳ」は、身体機能を制御する神経組織の複合体を指し、脳及び脊髄を含む。
【0155】
「抗体」という用語は、本明細書では広義に使用され、所望のヒトＡ－βタンパク質結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体、三重特異性抗体）及びそれらの断片を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。
【0156】
上に詳述したように、本発明による改変抗体は、二重特異性抗体又は多重特異性抗体であり得る。特定の実施形態では、本発明による抗体は、以下のフォーマットの１つの二重特異性抗体である：
－ドメイン交換を伴う完全長抗体（ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマット）：
第１のＦａｂ断片及び第２のＦａｂ断片を含む多重特異性ＩｇＧ抗体であって、第１のＦａｂ断片において、
ａ）ＣＨ１及びＣＬドメインのみが互いに置換されている（すなわち、第１のＦａｂ断片の軽鎖はＶＬ及びＣＨ１ドメインを含み、第１のＦａｂ断片の重鎖はＶＨ及びＣＬドメインを含む）；
ｂ）ＶＨ及びＶＬドメインのみが互いに置換されている（すなわち、第１のＦａｂ断片の軽鎖はＶＨ及びＣＬドメインを含み、第１のＦａｂ断片の重鎖はＶＬ及びＣＨ１ドメインを含む）；又は
ｃ）ＣＨ１とＣＬドメインが互いに置換され、ＶＨ及びＶＬドメインが互いに置換されている（すなわち、第１のＦａｂ断片の軽鎖はＶＨ及びＣＨ１ドメインを含み、第１のＦａｂ断片の重鎖はＶＬ及びＣＬドメインを含む）；及び
第２のＦａｂ断片は、ＶＬ及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを含む重鎖とを含む；
ドメイン交換を伴う完全長抗体は、ＣＨ３ドメインを含む第１の重鎖及びＣＨ３ドメインを含む第２の重鎖を含み、両方のＣＨ３ドメインは、第１の重鎖及び改変された第２の重鎖のヘテロ二量体化を支援するために、それぞれのアミノ酸置換によって相補的に操作される；
－追加の重鎖Ｃ末端結合部位を有する完全長抗体（ＢＳフォーマット）：
以下を含む多重特異性ＩｇＧ抗体：
ａ）完全長抗体軽鎖と完全長抗体重鎖の各々２つの対を含む１つの完全長抗体であって、完全長重鎖と完全長軽鎖の対の各々によって形成される結合部位が第１の抗原に特異的に結合するか、又は一方が第１の抗原に結合し、他方が第２の抗原に結合する、１つの完全長抗体、及び
ｂ）１つの追加のＦａｂ断片であって、追加のＦａｂ断片が完全長抗体の重鎖のうちの１つのＣ末端に融合されており、追加のＦａｂ断片の結合部位が第２の抗原に特異的に結合するか、又は完全長抗体が第１及び第２の抗原に結合している場合、追加のＦａｂが第３の抗原に結合している、１つの追加のＦａｂ断片、
第２の抗原に特異的に結合する追加のＦａｂ断片は、ｉ）ａ）軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が互いに置き換えられている、又はｂ）軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）と重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）が互いに置き換えられているようなドメインクロスオーバーを含むか、又はｉｉ）一本鎖Ｆａｂ断片であり；
完全長抗体は、ＣＨ３ドメインを含む第１の重鎖及びＣＨ３ドメインを含む第２の重鎖を含み、両方のＣＨ３ドメインは、第１の重鎖及び改変された第２の重鎖のヘテロ二量体化を支援するために、それぞれのアミノ酸置換によって相補的に操作される；
－２つの追加の重鎖Ｃ末端結合部位を有する完全長抗体（２＋２－フォーマット）：
以下を含む多重特異性ＩｇＧ抗体：
ａ）完全長抗体軽鎖と完全長抗体重鎖の各々２つの対を含む１つの完全長抗体であって、完全長重鎖と完全長軽鎖の対の各々によって形成される結合部位が第１の抗原に特異的に結合する、１つの完全長抗体、及び
ｂ）２つの追加のＦａｂ断片であって、完全長抗体の重鎖の各Ｃ末端に１つの追加のＦａｂ断片が融合されており、追加のＦａｂ断片の結合部位が第２の抗原に特異的に結合する、２つの追加のＦａｂ断片；
－追加の重鎖Ｎ末端部位を有する完全長抗体（ＴＣＢフォーマット）：
以下を含む多重特異性ＩｇＧ抗体：
ａ）完全長抗体軽鎖と完全長抗体重鎖の各々２つの対を含む１つの完全長抗体であって、完全長重鎖と完全長軽鎖の対の各々によって形成される結合部位が第１の抗原に特異的に結合するか、又は一方が第１の抗原に結合し、他方が第２の抗原に結合する、１つの完全長抗体、及び
ｂ）１つの追加のＦａｂ断片であって、追加のＦａｂ断片が完全長抗体のＦａｂ断片の１つとＦｃ領域との間に挿入されており、追加のＦａｂ断片の結合部位が第２の抗原に特異的に結合するか、又は完全長抗体が第１及び第２の抗原に結合している場合、追加のＦａｂが第３の抗原に結合している、１つの追加のＦａｂ断片、
第２の抗原に特異的に結合する追加のＦａｂ断片は、ａ）軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が互いに置き換えられている、又はｂ）軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）と重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）が互いに置き換えられているようなドメインクロスオーバーを含む；
－１アーム一本鎖フォーマット（＝１アーム一本鎖抗体）：
第１のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、第２のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第２の結合部位とを含む抗体であって、個々の鎖は以下の通りである：
－軽鎖（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖カッパ定常ドメイン）
－軽鎖／重鎖の組み合わせ（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン＋ペプチドリンカー＋可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ノブ変異を有するＣＨ３）
－重鎖（可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ホール変異を有するＣＨ３）；
－２アーム一本鎖フォーマット（＝２アーム一本鎖抗体）：
第１のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、第２のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第２の結合部位とを含む抗体であって、個々の鎖は以下の通りである：
－軽鎖／重鎖１の組み合わせ（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン＋ペプチドリンカー＋可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ホール変異を有するＣＨ３）
－軽鎖／重鎖２の組み合わせ（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン＋ペプチドリンカー＋可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ノブ変異を有するＣＨ３）；
－一般的な軽鎖二重特異性フォーマット（＝一般的な軽鎖二重特異性抗体）：
第１のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、第２のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第２の結合部位とを含む抗体であって、個々の鎖は以下の通りである：
－軽鎖（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン）
－重鎖１（可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ホール変異を有するＣＨ３）
－重鎖２（可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ノブ変異を有するＣＨ３）。
－ドメイン交換を伴う完全長抗体（ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマット）：
第１のＦａｂ断片及び第２のＦａｂ断片を含む多重特異性ＩｇＧ抗体であって、第１のＦａｂ断片において、
ａ）ＣＨ１及びＣＬドメインのみが互いに置換されている（すなわち、第１のＦａｂ断片の軽鎖はＶＬ及びＣＨ１ドメインを含み、第１のＦａｂ断片の重鎖はＶＨ及びＣＬドメインを含む）；
ｂ）ＶＨ及びＶＬドメインのみが互いに置換されている（すなわち、第１のＦａｂ断片の軽鎖はＶＨ及びＣＬドメインを含み、第１のＦａｂ断片の重鎖はＶＬ及びＣＨ１ドメインを含む）；又は
ｃ）ＣＨ１とＣＬドメインが互いに置換され、ＶＨ及びＶＬドメインが互いに置換されている（すなわち、第１のＦａｂ断片の軽鎖はＶＨ及びＣＨ１ドメインを含み、第１のＦａｂ断片の重鎖はＶＬ及びＣＬドメインを含む）；及び
第２のＦａｂ断片は、ＶＬ及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを含む重鎖とを含む；
ドメイン交換を伴う完全長抗体は、ＣＨ３ドメインを含む第１の重鎖及びＣＨ３ドメインを含む第２の重鎖を含み、両方のＣＨ３ドメインは、第１の重鎖及び改変された第２の重鎖のヘテロ二量体化を支援するために、それぞれのアミノ酸置換によって相補的に操作される；
－追加の重鎖Ｃ末端結合部位を有する完全長抗体（ＢＳフォーマット）：
以下を含む多重特異性ＩｇＧ抗体：
ａ）完全長抗体軽鎖と完全長抗体重鎖の各々２つの対を含む１つの完全長抗体であって、完全長重鎖と完全長軽鎖の対の各々によって形成される結合部位が第１の抗原に特異的に結合するか、又は一方が第１の抗原に結合し、他方が第２の抗原に結合する、１つの完全長抗体、及び
ｂ）１つの追加のＦａｂ断片であって、追加のＦａｂ断片が完全長抗体の重鎖のうちの１つのＣ末端に融合されており、追加のＦａｂ断片の結合部位が第２の抗原に特異的に結合するか、又は完全長抗体が第１及び第２の抗原に結合している場合、追加のＦａｂが第３の抗原に結合している、１つの追加のＦａｂ断片、
第２の抗原に特異的に結合する追加のＦａｂ断片は、ｉ）ａ）軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が互いに置き換えられている、又はｂ）軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）と重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）が互いに置き換えられているようなドメインクロスオーバーを含むか、又はｉｉ）一本鎖Ｆａｂ断片であり；
完全長抗体は、ＣＨ３ドメインを含む第１の重鎖及びＣＨ３ドメインを含む第２の重鎖を含み、両方のＣＨ３ドメインは、第１の重鎖及び改変された第２の重鎖のヘテロ二量体化を支援するために、それぞれのアミノ酸置換によって相補的に操作される；
－２つの追加の重鎖Ｃ末端結合部位を有する完全長抗体（２＋２－フォーマット）：
以下を含む多重特異性ＩｇＧ抗体：
ａ）完全長抗体軽鎖と完全長抗体重鎖の各々２つの対を含む１つの完全長抗体であって、完全長重鎖と完全長軽鎖の対の各々によって形成される結合部位が第１の抗原に特異的に結合する、１つの完全長抗体、及び
ｂ）２つの追加のＦａｂ断片であって、完全長抗体の重鎖の各Ｃ末端に１つの追加のＦａｂ断片が融合されており、追加のＦａｂ断片の結合部位が第２の抗原に特異的に結合する、２つの追加のＦａｂ断片；
－追加の重鎖Ｎ末端部位を有する完全長抗体（ＴＣＢフォーマット）：
以下を含む多重特異性ＩｇＧ抗体：
ａ）完全長抗体軽鎖と完全長抗体重鎖の各々２つの対を含む１つの完全長抗体であって、完全長重鎖と完全長軽鎖の対の各々によって形成される結合部位が第１の抗原に特異的に結合するか、又は一方が第１の抗原に結合し、他方が第２の抗原に結合する、１つの完全長抗体、及び
ｂ）１つの追加のＦａｂ断片であって、追加のＦａｂ断片が完全長抗体のＦａｂ断片の１つとＦｃ領域との間に挿入されており、追加のＦａｂ断片の結合部位が第２の抗原に特異的に結合するか、又は完全長抗体が第１及び第２の抗原に結合している場合、追加のＦａｂが第３の抗原に結合している、１つの追加のＦａｂ断片、
第２の抗原に特異的に結合する追加のＦａｂ断片は、ａ）軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が互いに置き換えられている、又はｂ）軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）と重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）が互いに置き換えられているようなドメインクロスオーバーを含む；
－１アーム一本鎖フォーマット（＝１アーム一本鎖抗体）：
第１のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、第２のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第２の結合部位とを含む抗体であって、個々の鎖は以下の通りである：
－軽鎖（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖カッパ定常ドメイン）
－軽鎖／重鎖の組み合わせ（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン＋ペプチドリンカー＋可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ノブ変異を有するＣＨ３）
－重鎖（可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ホール変異を有するＣＨ３）；
－２アーム一本鎖フォーマット（＝２アーム一本鎖抗体）：
第１のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、第２のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第２の結合部位とを含む抗体であって、個々の鎖は以下の通りである：
－軽鎖／重鎖１の組み合わせ（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン＋ペプチドリンカー＋可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ホール変異を有するＣＨ３）
－軽鎖／重鎖２の組み合わせ（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン＋ペプチドリンカー＋可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ノブ変異を有するＣＨ３）；
－一般的な軽鎖二重特異性フォーマット（＝一般的な軽鎖二重特異性抗体）：
第１のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、第２のエピトープ又は抗原に特異的に結合する第２の結合部位とを含む抗体であって、個々の鎖は以下の通りである：
－軽鎖（可変軽鎖ドメイン＋軽鎖定常ドメイン）
－重鎖１（可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ホール変異を有するＣＨ３）
－重鎖２（可変重鎖ドメイン＋ＣＨ１＋ヒンジ＋ＣＨ２＋ノブ変異を有するＣＨ３）。
【0157】
本明細書で使用される場合、対応する重鎖ドメイン及び軽鎖ドメインに関して「互いに置き換えられた」という用語は、上述のドメインクロスオーバーを指す。そのため、ＣＨ１及びＣＬドメインが「互いに置き換えられた」場合、この用語は、項目（ｉ）の下で言及されたドメインクロスオーバー、並びに結果として生じる重鎖及び軽鎖ドメイン配列を指す。したがって、ＶＨ及びＶＬが「互いに置き換えられた」場合、この用語は、項目（ｉｉ）の下で言及されたドメインクロスオーバーを指し、またＣＨ１及びＣＬドメインが「互いに置き換えられ」、かつＶＨ及びＶＬドメインが「互いに置き換えられた」場合、該用語は、項目（ｉｉｉ）の下で言及されたドメインクロスオーバーを指す。
【0158】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合するのと同じ抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；ＤｕｔａＦａｂ（二重特異性Ｆａｂ）及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0159】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の全ての非共有相互作用の合計の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間での１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。
【0160】
「抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）」という用語は、Ｆｃ受容体結合によって媒介される機能であり、エフェクター細胞の存在下での、本明細書に報告される抗体による標的細胞の溶解を指す。ＡＤＣＣは、単球又はＮＫ（ナチュラルキラー）細胞のような、単離直後のＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）又はバフィーコートから精製されたエフェクター細胞などのエフェクター細胞の存在下において、本発明による抗体で、ＣＤ１９発現赤血球（例えば、組換えヒトＣＤ１９を発現するＫ５６２細胞）の調製物を処理することによって測定され得る。標的細胞は、５１Ｃｒで標識され、その後、抗体とともにインキュベートされる。標識した細胞は、エフェクター細胞とともにインキュベートされ、その上清は、放出された５１Ｃｒについて分析される。対照としては、標的内皮細胞とエフェクター細胞とのインキュベーションが挙げられるが、抗体は含まれない。ＡＤＣＣを媒介する初期工程を誘発する抗体の能力は、ＦｃγＲＩ及び／若しくはＦｃγＲＩＩＡ又は（本質的にＦｃγＲＩＩＩＡを発現する）ＮＫ細胞を組み換えにより発現する細胞などの、Ｆｃγ受容体を発現する細胞への、抗体の結合を測定することにより調査される。
【0161】
「多重特異性抗体」は、同じ抗原又は２つの異なる抗原上の少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体を表す。多重特異性抗体は、完全長抗体若しくは抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体又はＤｕｔａＦａｂ）又はその組み合わせ（例えば、完全長抗体＋追加の／融合された１つ又は複数のＦｖ、ｓｃＦｖ若しくはＦａｂ断片）として調製することができる。２つ、３つ又はより多く（例えば、４つ）の機能的な抗原結合部位を有する操作された抗体が報告されている（例えば、ＵＳ２００２／０００４５８７Ａ１を参照）。
【0162】
「（抗原への）結合」という用語は、抗体の、その同族抗原への結合を意味する。結合は、インビトロアッセイにおいて決定され得る。特定の実施形態では、結合は、抗体を表面に結合し、その抗体への抗原の結合を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定する結合アッセイにおいて、測定される。結合の親和性は、ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合の速度定数）、ｋｄ（解離定数）、及びＫＤ（ｋｄ／ｋａ）という語によって定義される。したがって、結合は、抗体とその同族抗原との間の特異的かつ検出可能な相互作用、例えば１Ｅ－４Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）を意味する。「特異的に結合する」とは、１Ｅ－８Ｍ以下、いくつかの実施形態では１Ｅ－１３～１Ｅ－８Ｍ、いくつかの実施形態では１Ｅ－１３～１Ｅ－９Ｍの結合親和性（ＫＤ）を意味する。
【0163】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の供給源又は種に由来する抗体を指し、一方、重鎖及び／又は軽鎖の残りは、異なる供給源又は種に由来する。
【0164】
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかを、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に更に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、及びμと呼ばれる。
【0165】
本明細書で使用される用語「細胞傷害剤」は、細胞機能を阻害し若しくは防止し、かつ／又は細胞死若しくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤としては、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；成長阻害剤；酵素及びその断片、例えば核分解酵素；抗生物質；細菌、真菌、植物又は動物由来の低分子毒素又は酵素的活性毒素等の毒素（その断片及び／又はバリアントを含む）；並びに下記に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗がん剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【0166】
「補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）」という用語は、補体の存在下で本発明による抗体によって誘導される細胞の溶解を指す。ＣＤＣは、補体の存在下での本発明による抗体によるＣＤ１９発現ヒト内皮細胞の処理によって測定することができる。細胞をカルセインで標識することができる。抗体が３０μｇ／ｍｌの濃度で標的細胞の２０％以上の溶解を誘導する場合、ＣＤＣが見出される。補体因子Ｃ１ｑへの結合は、ＥＬＩＳＡで測定することができる。そのようなアッセイでは、原則として、ＥＬＩＳＡプレートは、精製ヒトＣ１ｑ又はヒト血清が添加される本発明による抗体の濃度範囲でコーティングされる。Ｃ１ｑ結合は、Ｃ１ｑに対する抗体、続いてペルオキシダーゼ標識コンジュゲートによって検出される。結合の検出（最大結合Ｂｍａｘ）を、ペルオキシダーゼ基質ＡＢＴＳ（登録商標）（２，２’－アジノ－ジ－［３－エチルベンズチアゾリン－６－スルホネート（６）］）についての４０５ｎｍでの光学密度（ＯＤ４０５）として測定する。
【0167】
「エフェクター機能」は、抗体のクラスにより異なっている抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
【0168】
Ｆｃ受容体結合依存性エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域と、造血細胞上の専門化した細胞表面受容体であるＦｃ受容体（ＦｃＲ）との相互作用によりもたらされ得る。Ｆｃ受容体は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属しており、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して、免疫複合体の食作用による抗体被覆病原体の除去と、対応する抗体で被覆された赤血球及び他の種々の細胞標的（例えば、腫瘍細胞）の溶解との両方を媒介することが示されてきた（例えば、Ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃ．Ｌ，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．４９（１９９１）５１１－５２４を参照されたい）。ＦｃＲは、免疫グロブリンアイソタイプに対するその特異性により定義される：ＩｇＧ抗体に対するＦｃ受容体は、ＦｃγＲと呼ばれる。Ｆｃ受容体結合は、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ｊ．Ｐ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（１９９１）４５７－４９２；Ｃａｐｅｌ，Ｐ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４（１９９４）２５－３４；ｄｅ Ｈａａｓ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６（１９９５）３３０－３４１；及びＧｅｓｓｎｅｒ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．７６（１９９８）２３１－２４８に記載されている。
【0169】
ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に対する受容体（ＦｃγＲ）の架橋は、食作用、抗体依存性細胞傷害、及び炎症性メディエータの放出、並びに免疫複合体の排除及び抗体産生の制御を含む、多種多様なエフェクター機能を誘発する。ヒトでは、ＦｃγＲの３つのクラスが以下のように特徴づけられている。
－ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、高い親和性で単量体ＩｇＧを結合し、マクロファージ、単球、好中球及び好酸球上に発現する。アミノ酸残基Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７及びＰ３２９（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）の少なくとも１つにおけるＦｃ領域 ＩｇＧの改変がＦｃγＲＩへの結合を低減させる。ＩｇＧ１及びＩｇＧ４へと置換された２３３～２３６位のＩｇＧ２残基は、ＦｃγＲＩへの結合を１０3倍低減させ、抗体感作赤血球に対するヒト単球応答を排除した（Ａｒｍｏｕｒ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２６１３－２６２４）；
－ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）は、複合体化したＩｇＧを中等度から低い親和性で結合し、広範に発現される。この受容体は、２つのサブタイプであるＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＢに分けることができる。ＦｃγＲＩＩＡは、殺傷に関与する多くの細胞（例えば、マクロファージ、単球、好中球）に見られ、殺傷プロセスを活性化することができるようである。ＦｃγＲＩＩＢは、阻害プロセスにおいて役割を果たすようであり、Ｂ細胞、マクロファージ、並びに肥満細胞及び好酸球に認められる。Ｂ細胞上では、ＦｃγＲＩＩＢは、免疫グロブリン産生、及び、例えばＩｇＥクラスへのアイソタイプ切り替えをさらに抑制する機能を有するようである。マクロファージ上では、ＦｃγＲＩＩＢは、ＦｃγＲＩＩＡによって媒介される食作用を阻害するように働く。好酸球及び肥満細胞上では、Ｂ形態は、ＩｇＥの、その別個の受容体への結合を通じて、これらの細胞の活性化の抑制を補助し得る。ＦｃγＲＩＩＡに対する結合の低減は、例えば、アミノ酸残基Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｒ２９２及びＫ４１４（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）の少なくとも１つに変異を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗体で見られる；
－ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は、中等度から低い親和性でＩｇＧを結合し、２つのタイプとして存在する。ＦｃγＲＩＩＩＡは、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球並びにいくつかの単球及びＴ細胞上で見られ、ＡＤＣＣを媒介する。ＦｃγＲＩＩＩＢは、好中球で多く発現される。ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合の低減は、例えば、少なくとも１つのアミノ酸残基Ｅ２３３－Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｓ２３９、Ｅ２６９、Ｅ２９３、Ｙ２９６、Ｖ３０３、Ａ３２７、Ｋ３３８及びＤ３７６（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）において変異を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗体で見られる。
－ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、高い親和性で単量体ＩｇＧを結合し、マクロファージ、単球、好中球及び好酸球上に発現する。アミノ酸残基Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７及びＰ３２９（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）の少なくとも１つにおけるＦｃ領域 ＩｇＧの改変がＦｃγＲＩへの結合を低減させる。ＩｇＧ１及びＩｇＧ４へと置換された２３３～２３６位のＩｇＧ２残基は、ＦｃγＲＩへの結合を１０3倍低減させ、抗体感作赤血球に対するヒト単球応答を排除した（Ａｒｍｏｕｒ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２６１３－２６２４）；
－ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）は、複合体化したＩｇＧを中等度から低い親和性で結合し、広範に発現される。この受容体は、２つのサブタイプであるＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＢに分けることができる。ＦｃγＲＩＩＡは、殺傷に関与する多くの細胞（例えば、マクロファージ、単球、好中球）に見られ、殺傷プロセスを活性化することができるようである。ＦｃγＲＩＩＢは、阻害プロセスにおいて役割を果たすようであり、Ｂ細胞、マクロファージ、並びに肥満細胞及び好酸球に認められる。Ｂ細胞上では、ＦｃγＲＩＩＢは、免疫グロブリン産生、及び、例えばＩｇＥクラスへのアイソタイプ切り替えをさらに抑制する機能を有するようである。マクロファージ上では、ＦｃγＲＩＩＢは、ＦｃγＲＩＩＡによって媒介される食作用を阻害するように働く。好酸球及び肥満細胞上では、Ｂ形態は、ＩｇＥの、その別個の受容体への結合を通じて、これらの細胞の活性化の抑制を補助し得る。ＦｃγＲＩＩＡに対する結合の低減は、例えば、アミノ酸残基Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｒ２９２及びＫ４１４（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）の少なくとも１つに変異を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗体で見られる；
－ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は、中等度から低い親和性でＩｇＧを結合し、２つのタイプとして存在する。ＦｃγＲＩＩＩＡは、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球並びにいくつかの単球及びＴ細胞上で見られ、ＡＤＣＣを媒介する。ＦｃγＲＩＩＩＢは、好中球で多く発現される。ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合の低減は、例えば、少なくとも１つのアミノ酸残基Ｅ２３３－Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｓ２３９、Ｅ２６９、Ｅ２９３、Ｙ２９６、Ｖ３０３、Ａ３２７、Ｋ３３８及びＤ３７６（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）において変異を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗体で見られる。
【0170】
Ｆｃ受容体に対するヒトＩｇＧ１上の結合部位のマッピング、上述の変異部位、並びにＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＡへの結合を測定するための方法は、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４において説明されている。
【0171】
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な薬用量及び所要期間で有効な量を指す。
【0172】
本明細書で使用する「Ｆｃ受容体」という用語は、受容体と会合した細胞質ＩＴＡＭ配列の存在を特徴とする活性化受容体を指す（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．及びＢｏｌｌａｎｄ，Ｓ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９（２００１）２７５－２９０を参照されたい）。このような受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＡである。「ＦｃγＲの結合がない」という用語は、１０μｇ／ｍｌの抗体濃度で、抗体のＮＫ細胞への結合が、国際公開第２００６／０２９８７９号において報告された抗ＯＸ４０Ｌ抗体ＬＣ．００１について認められる結合の１０％以下であることを表す。
【0173】
ＩｇＧ４は低減したＦｃＲ結合を示すが、他のＩｇＧサブクラスの抗体は強い結合を示す。しかしながら、Ｐｒｏ２３８、Ａｓｐ２６５、Ａｓｐ２７０、Ａｓｎ２９７（Ｆｃ炭水化物の喪失）、Ｐｒｏ３２９並びに２３４、２３５、２３６及び２３７ Ｉｌｅ２５３、Ｓｅｒ２５４、Ｌｙｓ２８８、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｎ４３４及びＨｉｓ４３５は、変更されるとＦｃＲ結合も低減させる残基である（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４；Ｌｕｎｄ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．９（１９９５）１１５－１１９；Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８６（１９９５）３１９－３２４；及び欧州特許第０３０７４３４号）。特定の実施形態では、本発明による抗体はＩｇＧ１又はＩｇＧ２サブクラスのものであり、変異ＰＶＡ２３６、ＧＬＰＳＳ３３１、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ又はＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａを含む。特定の実施形態では、本明細書に報告される抗体はＩｇＧ４サブクラスのものであり、変異Ｌ２３５Ｅを含む。特定の実施形態では、本発明による抗体は変異Ｓ２２８Ｐをさらに含む。
【0174】
「（ヒト起源の）Ｆｃ領域ポリペプチド」という用語は、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインの少なくとも部分を含有する（ヒト起源の）免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を表す。特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域ポリペプチドは、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。好ましい一実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５のアミノ酸配列を含むか、又はそのバリアントである。しかしながら、Ｆｃ領域ポリペプチド又は完全な抗体重鎖のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。
【0175】
「抗体のＦｃ領域」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン切断に基づいて規定される。特定の実施形態では、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域である。「（ヒト起源の）Ｆｃ領域」は、鎖間ジスルフィド結合を形成するヒンジ領域システイン残基を介して互いに共有結合している（ヒト起源の）２つの重鎖Ｆｃ領域ポリペプチドを含む。
【0176】
本発明による抗体は、Ｆｃ領域として、特定の実施形態では、ヒト起源に由来するＦｃ領域を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒト定常領域のすべての部分を含む。抗体のＦｃ領域は、補体活性化、Ｃ１ｑ結合、Ｃ３活性化、及びＦｃ受容体結合に直接関与している。補体系に対する抗体の影響は、特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃ領域における規定の結合部位によって引き起こされる。そのような結合部位は、最新技術において公知であり、例えば、Ｌｕｋａｓ，Ｔ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７（１９８１）２５５５－２５６０；Ｂｒｕｎｈｏｕｓｅ，Ｒ．及びＣｅｂｒａ，Ｊ．Ｊ．、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（１９７９）９０７－９１７；Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ２８８（１９８０）３３８－３４４；Ｔｈｏｍｍｅｓｅｎ，Ｊ．Ｅ．ら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７（２０００）９９５－１００４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（２０００）４１７８－４１８４；Ｈｅｚａｒｅｈ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５（２００１）１２１６１－１２１６８；Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８６（１９９５）３１９－３２４；及び欧州特許第０３０７４３４号に記載される。そのような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１及びＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング；本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２に記載されるような、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵナンバリングシステムである。サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３の抗体は通常、補体活性化、Ｃ１ｑ結合、及びＣ３活性化を示すのに対し、ＩｇＧ４は、補体系を活性化せず、Ｃ１ｑと結合せず、Ｃ３を活性化しない。
【0177】
「ＦｃＲｎ」という用語はヒト新生児Ｆｃ受容体を表す。ＦｃＲｎは、リソソーム分解経路からＩｇＧをサルベージするように機能して、低減したクリアランス及び増加した半減期を結果としてもたらす。ＦｃＲｎは、２つのポリペプチド：５０ｋＤａのクラスＩ主要組織適合複合体様タンパク質（α－ＦｃＲｎ）及び１５ｋＤａのβ２－マイクログロブリン（β２ｍ）からなるヘテロ二量体タンパク質である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２－ＣＨ３部分に高い親和性で結合する。ＩｇＧ及びＦｃＲｎの間の相互作用は厳格にｐＨ依存性であり、１：２の化学量論において起こり、１つのＩｇＧがその２つの重鎖を介して２つのＦｃＲｎ分子に結合する（Ｈｕｂｅｒ，Ａ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３０（１９９３）１０７７－１０８３）。ＦｃＲｎ結合は酸性ｐＨ（ｐＨ＜６．５）のエンドソーム中で起こり、ＩｇＧが中性の細胞表面（約７．４のｐＨ）において放出される。相互作用のｐＨ感受性は、エンドソームの酸性環境内の受容体への結合による細胞内分解からの細胞中にピノサイトーシスされたＩｇＧのＦｃＲｎ媒介性保護を促す。ＦｃＲｎは次に、細胞表面へのＩｇＧの再利用、及び細胞外の中性ｐＨ環境へのＦｃＲｎ－ＩｇＧ複合体の曝露の際の血流へのその後の放出を促す。
【0178】
「Ｆｃ領域のＦｃＲｎ結合部分」という用語は、おおよそＥＵ位置２４３～ＥＵ位置２６１及びおおよそＥＵ位置２７５～ＥＵ位置２９３及びおおよそＥＵ位置３０２～ＥＵ位置３１９及びおおよそＥＵ位置３３６～ＥＵ位置３４８及びおおよそＥＵ位置３６７～ＥＵ位置３９３及びＥＵ位置４０８及びおおよそＥＵ位置４２４～ＥＵ位置４４０に伸長する抗体重鎖ポリペプチドの部分を表す。一実施形態では、ＫａｂａｔのＥＵナンバリングによる以下のアミノ酸残基のうちの１つ又は複数が変更される：Ｆ２４３、Ｐ２４４、Ｐ２４５ Ｐ、Ｋ２４６、Ｐ２４７、Ｋ２４８、Ｄ２４９、Ｔ２５０、Ｌ２５１、Ｍ２５２、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｒ２５５、Ｔ２５６、Ｐ２５７、Ｅ２５８、Ｖ２５９、Ｔ２６０、Ｃ２６１、Ｆ２７５、Ｎ２７６、Ｗ２７７、Ｙ２７８、Ｖ２７９、Ｄ２８０、Ｖ２８２、Ｅ２８３、Ｖ２８４、Ｈ２８５、Ｎ２８６、Ａ２８７、Ｋ２８８、Ｔ２８９、Ｋ２９０、Ｐ２９１、Ｒ２９２、Ｅ２９３、Ｖ３０２、Ｖ３０３、Ｓ３０４、Ｖ３０５、Ｌ３０６、Ｔ３０７、Ｖ３０８、Ｌ３０９、Ｈ３１０、Ｑ３１１、Ｄ３１２、Ｗ３１３、Ｌ３１４、Ｎ３１５、Ｇ３１６、Ｋ３１７、Ｅ３１８、Ｙ３１９、Ｉ３３６、Ｓ３３７、Ｋ３３８、Ａ３３９、Ｋ３４０、Ｇ３４１、Ｑ３４２、Ｐ３４３、Ｒ３４４、Ｅ３４５、Ｐ３４６、Ｑ３４７、Ｖ３４８、Ｃ３６７、Ｖ３６９、Ｆ３７２、Ｙ３７３、Ｐ３７４、Ｓ３７５、Ｄ３７６、Ｉ３７７、Ａ３７８、Ｖ３７９、Ｅ３８０、Ｗ３８１、Ｅ３８２、Ｓ３８３、Ｎ３８４、Ｇ３８５、Ｑ３８６、Ｐ３８７、Ｅ３８８、Ｎ３８９、Ｙ３９１、Ｔ３９３、Ｓ４０８、Ｓ４２４、Ｃ４２５、Ｓ４２６、Ｖ４２７、Ｍ４２８、Ｈ４２９、Ｅ４３０、Ａ４３１、Ｌ４３２、Ｈ４３３、Ｎ４３４、Ｈ４３５、Ｙ４３６、Ｔ４３７、Ｑ４３８、Ｋ４３９、及びＳ４４０（ＥＵナンバリング）。
【0179】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
【0180】
「完全長抗体」という用語は、天然抗体の構造に実質的に類似した構造を有する抗体を表す。完全長抗体は、ｉ）可変ドメイン及び定常ドメインをそれぞれ含む２つの完全長抗体軽鎖と、ｉｉ）可変ドメイン、第１の定常ドメイン、ヒンジ領域、第２の定常ドメイン及び第３の定常ドメインをそれぞれ含む２つの完全長抗体重鎖とを含む。完全長抗体は、さらなるドメイン、例えば追加のｓｃＦｖ、又は完全長抗体の鎖の１つ又は複数、好ましくは１つ又は複数の重鎖のＣ末端にコンジュゲートしたｓｃＦａｂ若しくはドメイン交換Ｆａｂを含み得る。
【0181】
「宿主細胞」及び「宿主細胞株」という用語は互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、これらは、継代数にかかわらず、初代の形質転換された細胞と、初代の形質転換された細胞から誘導された子孫を含む。子孫は、親細胞と完全に同一でなくてもよく、突異を含有してもよい。本明細書では、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異体の子孫が、含まれる。
【0182】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。特定の実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループκＩである。特定の実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループＩＩＩである。
【0183】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）のすべて又は実質的にすべてが、非ヒト抗体に対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてが、ヒト抗体に対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」とは、ヒト化を受けた抗体を指す。
【0184】
「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、超可変的な配列（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）であり、及び／又は構造的に定義されるループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／又は抗原に接触する残基（「抗原接触」）を含有するアミノ酸残基ストレッチを含む、抗体可変ドメインのそれぞれの領域を指す。一般的に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを含む。
【0185】
ＨＶＲには、次のものが含まれる：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．及びＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（１９８７）９０１－９１７）、
（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２．）；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）及び９３～１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２～７４５（１９９６））；並びに
（ｄ）アミノ酸残基４６～５６（Ｌ２）、４７～５６（Ｌ２）、４８～５６（Ｌ２）、４９～５６（Ｌ２）、２６～３５（Ｈ１）、２６～３５ｂ（Ｈ１）、４９～６５（Ｈ２）、９３～１０２（Ｈ３）、及び９４～１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ。
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．及びＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（１９８７）９０１－９１７）、
（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２．）；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）及び９３～１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２～７４５（１９９６））；並びに
（ｄ）アミノ酸残基４６～５６（Ｌ２）、４７～５６（Ｌ２）、４８～５６（Ｌ２）、４９～５６（Ｌ２）、２６～３５（Ｈ１）、２６～３５ｂ（Ｈ１）、４９～６５（Ｈ２）、９３～１０２（Ｈ３）、及び９４～１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ。
【0186】
特に示されない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン中の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（前出）に従って本明細書ではナンバリングされている。
【0187】
「～に由来する」という用語は、アミノ酸配列が、少なくとも１つの位置において変更を導入することにより親アミノ酸配列に由来することを表す。そのように由来するアミノ酸配列は、少なくとも１つの対応する位置（抗体Ｆｃ領域についてのＫａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）において対応する親アミノ酸配列から異なる。特定の実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、対応する位置における１～１５アミノ酸残基により異なる。特定の実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、対応する位置における１～１０アミノ酸残基により異なる。特定の実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、対応する位置における１～６アミノ酸残基により異なる。同様に、由来するアミノ酸配列は、その親アミノ酸配列に対して高いアミノ酸配列同一性を有する。特定の実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は８０％又はより高いアミノ酸配列同一性を有する。特定の実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は９０％又はより高いアミノ酸配列同一性を有する。特定の実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は９５％又はより高いアミノ酸配列同一性を有する。１つの好ましい実施形態では、親アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は９８％又はより高いアミノ酸配列同一性を有する。
【0188】
「（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチド」という用語は、「天然」又は「野生型」（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を表す。「バリアント（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチド」という用語は、少なくとも１つの「アミノ酸変更」のために「天然」又は「野生型」（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドに由来するアミノ酸配列を表す。「バリアント（ヒト）Ｆｃ領域」は２つのＦｃ領域ポリペプチドからなり、それにより、両方がバリアント（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドであり得るか、又は一方が（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドであり、かつ他方がバリアント（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドである。
【0189】
特定の実施形態では、ヒトＦｃ領域ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域ポリペプチドのアミノ酸配列を有するか、又はそのバリアントであるか、又はヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域ポリペプチドのアミノ酸配列を有するか、又はそのバリアントであるか、又はヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域ポリペプチドのアミノ酸配列を有するか、又はそのバリアントであるか、又はヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域ポリペプチドのアミノ酸配列を有するか、又はそのバリアントである。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のＦｃ領域ポリペプチドに由来し、配列番号０５又は配列番号１７のＦｃ領域ポリペプチドと比較して少なくとも１つのアミノ酸変異を有する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、約１～約１０個のアミノ酸変異を含む／有する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、約１～約５個のアミノ酸変異を含む／有する。
【0190】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、ＰＧＬＡＬＡ変異及びノブ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１２）を有し、任意にＣ末端リジン残基が欠失している。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、ＰＧＬＡＬＡ変異及びノブ－シス又はホール－シス変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列（配列番号１６又は配列番号１５）を有し、任意にＣ末端リジン残基が欠失している。
【0191】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約８０％の配列相同性を有する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約９０％の配列相同性を有する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約９５％の配列相同性を有する。１つの好ましい実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約９７．５％の相同性を有する。
【0192】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約８０％の配列同一性を有する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約９０％の配列同一性を有する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約９５％の配列同一性を有する。１つの好ましい実施形態では、Ｆｃ領域ポリペプチドは、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドと少なくとも約９７．５％の同一性を有する。好ましい一実施形態では、Ｃ末端リジン残基は欠失している。
【0193】
配列番号０５又は配列番号１７の親（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドに由来するバリアントＦｃ領域ポリペプチドは、親又は野生型配列と比較して含有されるアミノ酸変化によってさらに定義される。したがって、例えば、Ｐ３２９Ｇという用語は、（ヒト）Ｆｃ領域ポリペプチドに由来するＦｃ領域ポリペプチドであって、配列番号０５又は配列番号１７のヒトＦｃ領域ポリペプチドに対してアミノ酸位置３２９にプロリンからグリシンへの変異を有するＦｃ領域ポリペプチドを表す（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）。
【0194】
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０５）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０５）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0195】
変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ変異）を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０６）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０６）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0196】
Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ変異（ノブ－シス－変異）を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０７）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０７）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0197】
Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ（ホール－シス－変異）変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０８）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０８）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0198】
Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ変異及びＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０９）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号０９）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0199】
Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0200】
Ｐ３２９Ｇ変異（ＰＧ変異）を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１１）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１１）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0201】
Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ変異及びＰ３２９Ｇ変異（ＬＡＬＡＰＧ変異）を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１２）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１２）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0202】
Ｐ３２９Ｇ変異及びＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0203】
Ｐ３２９Ｇ変異及びＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１４）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１４）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0204】
Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ及びＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１５）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１５）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0205】
Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ変異及びＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）、任意に、Ｃ末端に追加のリジン残基（Ｋ）が付加される。
【0206】
ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１７）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１７）。
【0207】
Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１８）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１８）。
【0208】
Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ変異及びＰ３２９Ｇ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１９）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１９）。
【0209】
Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２０）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２０）。
【0210】
Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２１）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２１）。
【0211】
Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ及びＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２２）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２２）。
【0212】
Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ及びＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２３）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２３）。
【0213】
Ｐ３２９Ｇ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２４）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２４）。
【0214】
Ｐ３２９Ｇ及びＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２５）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２５）。
【0215】
Ｐ３２９Ｇ及びＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２６）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２６）。
【0216】
Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３２９Ｇ及びＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２７）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２７）。
【0217】
Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３２９Ｇ及びＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域由来Ｆｃ領域ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２８）。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＧＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２８）。
【0218】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むものであり、それにおいて、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに相当し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに相当する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【0219】
「単離された」抗体は、その天然環境の構成要素から分離された抗体である。特定の実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフ（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー又はイオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）分析法によって決定された場合に、９５％超又は９９％超の純度まで精製される。抗体の純度を評価するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．Ｂ ８４８（２００７）７９－８７を参照されたい。
【0220】
「単離された」核酸は、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。
【0221】
「抗ヒトＡ－βタンパク質抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１つ又は複数の核酸分子を指し、単一のプラスミド又は別個のプラスミド中のそのような核酸分子を含む。
【0222】
「免疫コンジュゲート」とは、細胞傷害剤を含むがそれに限定されない、１つ又は複数の異種分子にコンジュゲートされた抗体である。
【0223】
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、限定されないが、家畜動物（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えばヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）が含まれる。特定の実施形態では、個体又は対象はヒトである。
【0224】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、及び／又は同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得るバリアント抗体は例外であり、かかるバリアントは一般的に少量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように解釈すべきではない。例えば、本発明に従うモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法及び本明細書に記載されているモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない。
【0225】
「天然抗体」とは、様々な構造を持つネイティブに存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端までの各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、これに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、これに定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられ得る。
【0226】
「パッケージ添付文書」との用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、このような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含有する。
【0227】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性パーセントを達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のための整列は、当技術分野における技術の範囲内にある種々の方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて生成している。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、使用者用書類と共に、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルし得る。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄを含め、ＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定されており、変わらない。
【0228】
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂに対する、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有する又は含む、所与のアミノ酸配列Ａとして記述され得る）は、以下のように計算される。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡとＢのアラインメントにおいて同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ａ対Ｂの％アミノ酸配列同一性は、Ｂ対Ａの％アミノ酸配列同一性に等しくないことが理解されよう。特に明記しない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性の値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して直前の段落に記載されているように得られる。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡとＢのアラインメントにおいて同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ａ対Ｂの％アミノ酸配列同一性は、Ｂ対Ａの％アミノ酸配列同一性に等しくないことが理解されよう。特に明記しない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性の値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して直前の段落に記載されているように得られる。
【0229】
「医薬製剤」という用語は、調製物中に含有される有効成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤を投与する対象にとって許容できないほど有毒である成分を含有しない調製物を指す。
【0230】
「薬学的に許容され得る担体」は、対象に非毒性の、有効成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【0231】
本明細書で使用されるように、「プラスミド」という用語は、それらが含む別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。用語には、自己複製核酸構造体としてのプラスミド、及びそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたプラスミドが含まれる。特定のプラスミドは、それらが含む核酸の発現を指示することができる。そのようなプラスミドは、本明細書では「発現プラスミド」と称される。
【0232】
「組換え抗体」という用語は、本明細書において使用される場合、組換え手段により調製、発現、作製又は単離された全ての抗体（キメラ、ヒト化及びヒト）を表す。これは、ＮＳ０、ＨＥＫ、ＢＨＫ若しくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から若しくはヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体又は宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現プラスミドを使用して発現された抗体を含む。組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来及び関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しなくてもよい。
【0233】
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及び「処置する（ｔｒｅａｔ）」又は「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などのその文法上の変形）とは、処置されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、又は臨床病理過程中に行われ得る。処置の望ましい効果には、疾患の発生又は再発の予防、症候の緩和、疾患の任意の直接的又は間接的病理学的帰結の縮小、疾患進行速度の減少、病状の回復又は寛解、及び緩解又は予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
【0234】
「価数」という用語は、本出願で使用される場合、（抗体）分子中の指定された結合部位数の存在を表す。したがって、「二価」、「三価」及び「四価」という用語は、（抗体）分子中にそれぞれ２つの結合部位、３つの結合部位及び４つの結合部位が存在することを意味する。
【0235】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体のその抗原への結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般に、各ドメインが４つのフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、類似の構造を有する（例えば、Ｋｉｎｄｔ，Ｔ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（２００７），ｐａｇｅ ９１を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために充分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨ又はＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０（１９９３）８８０－８８７、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２（１９９１）６２４－６２８）を参照されたい。抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとの（同族）対は結合部位を形成する。
【0236】
用語「バリアント」は、それぞれの親分子のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する分子を意味する。典型的には、そのような分子は、１つ又は複数の変化（変異）、挿入又は欠失を有する。特定の実施形態では、本発明による抗体は、天然には存在しないＦｃ領域の少なくとも一部を含む。そのような分子は、親抗体と１００％未満の配列同一性を有する。特定の実施形態では、バリアント抗体は、親抗体のアミノ酸配列と約７５％から１００％未満まで、特に約８０％から１００％未満まで、特に約８５％から１００％未満まで、特に約９０％から１００％未満まで、特に約９５％から１００％未満までのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。好ましい一実施形態では、親抗体及びバリアント抗体は、１（単一）、２、３、５、７又は１０個のアミノ酸残基が異なる。
【0237】
アミロイド形成不全
アミロイド斑は、β－アミロイドと呼ばれるタンパク質片が凝集すると形成される。β－アミロイドは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれるはるかに大きなタンパク質が分解されると生成される。ＡＰＰは７７１個のアミノ酸から構成され、２つの酵素によって切断されてβ－アミロイドを生成する。大きなタンパク質は、最初にβ－セクレターゼによって切断され、次にγ－セクレターゼによって切断され、３８、４０又は４２個のアミノ酸で構成され得るβ－アミロイドピースを生成する。４２個のアミノ酸で構成されるβ－アミロイドは、他の長さよりも化学的に「粘着性」であり、したがってプラークを形成する可能性がより高い。研究は、初期段階のアルツハイマー病に関連する３つの遺伝子異常がそれぞれ、Ａβ４２の産生の増加をもたらす方法でγ－セクレターゼの機能を変化させることを示した。
アミロイド斑は、β－アミロイドと呼ばれるタンパク質片が凝集すると形成される。β－アミロイドは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれるはるかに大きなタンパク質が分解されると生成される。ＡＰＰは７７１個のアミノ酸から構成され、２つの酵素によって切断されてβ－アミロイドを生成する。大きなタンパク質は、最初にβ－セクレターゼによって切断され、次にγ－セクレターゼによって切断され、３８、４０又は４２個のアミノ酸で構成され得るβ－アミロイドピースを生成する。４２個のアミノ酸で構成されるβ－アミロイドは、他の長さよりも化学的に「粘着性」であり、したがってプラークを形成する可能性がより高い。研究は、初期段階のアルツハイマー病に関連する３つの遺伝子異常がそれぞれ、Ａβ４２の産生の増加をもたらす方法でγ－セクレターゼの機能を変化させることを示した。
【0238】
どのようにしてβ－アミロイドが神経細胞に毒性損傷を引き起こすかは明確ではないが、いくつかの研究は、それが断片に分裂してフリーラジカルを放出し、その後ニューロンを攻撃し得ることを示唆している。別の理論は、β－アミロイドが神経膜に小孔を形成し、これが神経細胞死を引き起こし得るカルシウムの無調節流入をもたらすというものである。β－アミロイドが神経損傷を引き起こす正確な病理学的プロセスにかかわらず、その結果はニューロンが死滅することである。
【0239】
これらの変性ニューロンとβ－アミロイド凝集体との混合物で構成されるプラークが形成される。これらのプラークは、身体によって分解及び除去することができないため、徐々に脳に蓄積する。このアミロイドの蓄積はアミロイドーシスをもたらし、これはいくつかの神経変性疾患の一因であると考えられている。
【0240】
アミロイド斑は、アルツハイマー病の２つの定義される特徴のうちの一方を形成し、他方は神経原線維タングルである。β－アミロイドはまた、これらのタングルの形成の原因であると考えられており、これもニューロンを損傷し、認知症の症候を引き起こす。技術的には、人はアルツハイマー病のすべての特徴を提示し得るが、脳生検又は陽電子放射断層撮影法がアミロイド斑又は神経原線維タングルの存在を明らかにしない場合、アルツハイマー病の診断は行われない。
【0241】
本発明の実施形態の説明
ガンテネルマブは、Ｎ末端アミノ酸及び中心アミノ酸の両方からなるＡβの立体配座エピトープに対してナノモル以下の親和性で結合する完全ヒトＩｇＧ１抗体である。それは、タンパク質の原線維形態への結合を好む。この抗体の治療原理は、ミクログリアを動員し、食作用を活性化することによってアミロイド斑を解体及び分解するように中枢的に作用することである。それは、新たなプラーク形成を防止する。ガンテネルマブは、実質と血管の両方の凝集した脳Ａβと優先的に相互作用する。抗体は、ヒトマクロファージと共培養されたＡＤ脳切片中のヒトＡβ沈着物の食作用を誘発する。それはまた、ラット脳における長期増強に対するオリゴマーＡβ４２媒介阻害効果を中和する。ＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックマウスでは、ガンテネルマブは脳Ａβに結合し、ミクログリアを動員することによって小さなプラークを低減させ、新しいプラーク形成を防ぐ。ガンテネルマブはＡβの全身レベルを変化させず、これは可溶性Ａβのクリアランスが妨げられないことを示唆する。第３相多施設無作為化二重盲検プラセボ対照試験であるＳＣａｒｌｅｔ ＲｏＡＤガンテネルマブは、標的の関与を示し、プラークのクリアランスをもたらし、脊髄液中のリン酸化タウのレベルが低減した（例えば、Ｓｕｍｎｅｒ，Ｉ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２（２０１８）ａｒｔｉｃｌｅ ２５４；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｌｚｆｏｒｕｍ．ｏｒｇ／ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ／ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂを参照）。
ガンテネルマブは、Ｎ末端アミノ酸及び中心アミノ酸の両方からなるＡβの立体配座エピトープに対してナノモル以下の親和性で結合する完全ヒトＩｇＧ１抗体である。それは、タンパク質の原線維形態への結合を好む。この抗体の治療原理は、ミクログリアを動員し、食作用を活性化することによってアミロイド斑を解体及び分解するように中枢的に作用することである。それは、新たなプラーク形成を防止する。ガンテネルマブは、実質と血管の両方の凝集した脳Ａβと優先的に相互作用する。抗体は、ヒトマクロファージと共培養されたＡＤ脳切片中のヒトＡβ沈着物の食作用を誘発する。それはまた、ラット脳における長期増強に対するオリゴマーＡβ４２媒介阻害効果を中和する。ＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックマウスでは、ガンテネルマブは脳Ａβに結合し、ミクログリアを動員することによって小さなプラークを低減させ、新しいプラーク形成を防ぐ。ガンテネルマブはＡβの全身レベルを変化させず、これは可溶性Ａβのクリアランスが妨げられないことを示唆する。第３相多施設無作為化二重盲検プラセボ対照試験であるＳＣａｒｌｅｔ ＲｏＡＤガンテネルマブは、標的の関与を示し、プラークのクリアランスをもたらし、脊髄液中のリン酸化タウのレベルが低減した（例えば、Ｓｕｍｎｅｒ，Ｉ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２（２０１８）ａｒｔｉｃｌｅ ２５４；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｌｚｆｏｒｕｍ．ｏｒｇ／ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ／ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂを参照）。
【0242】
ガンテネルマブは、グリコシル化部位の２つの群を有する：第１の群は、重鎖ＣＤＲ２内の各Ｆａｂ内のグリコシル化部位を包含し、第２の群は、Ａｓｎ２９７の各Ｆｃ領域内のグリコシル化部位を包含する（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）。
【0243】
グリコシル化部位のグリコシル化パターン、すなわち糖占有は、グリコシル化部位の両方の群の間で異なる。Ｆｃ領域中の各グリコシル化部位の糖鎖占有は均一であり、互いに、並びに他の組換え生産抗体に匹敵する。これとは対照的に、Ｆａｂ中のグリコシル化部位の糖鎖占有は多様であり、すなわち、両方のグリコシル化部位がグリコシル化されているか、又はこれらのグリコシル化部位のうちの１つのみがグリコシル化されているか、又はこれらのグリコシル化部位のいずれもグリコシル化されていない。したがって、組換え生産されたガンテネルマブは、産生細胞から３つの異なるグリコシル化アイソフォームの混合物として得られる。糖鎖占有及びグリコシル化パターンが薬物動態特性並びにプラーク結合に影響を及ぼすので、非グリコシル化アイソフォームを除去する必要がある。異なるグリコフォームは、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）などのクロマトグラフィーを使用して区別及び分離することができる。
【0244】
ここで、本発明者らは、重鎖ＣＤＲ２に特定の変異を導入することによって、及び重鎖ＣＤＲ３を短縮することによって、ガンテネルマブの特性が改善されたことを見出した。この理論に拘束されるものではないが、導入された改変は、Ｆａｂにおける糖占有不均一性を減少させ、脱アミド化ホットスポットを除去し、それによって親抗体ガンテネルマブの凝集傾向を低減させることによって、改善された特性をもたらしたと考えられる。
【0245】
さらに、本発明者らは、親抗体ガンテネルマブの軽鎖が、本発明による改変重鎖と組み合わせた場合に結合親和性及び特異性を保持するために改変を必要としないことを見出した。
【0246】
したがって、本発明の態様は、ヒトＡ－βタンパク質に対する抗体（抗Ａ－βタンパク質抗体）、その製造方法、これらの抗体を含有する医薬組成物及びその使用である。
【0247】
本発明による抗体は、抗Ａ－β抗体ガンテネルマブのバリアントである。それらは、それらの親抗体と比較して改善された技術的及び生物学的特性を有する。改善は、とりわけ、改善された生産力価、改善された生産収率、改善されたグリコシル化均一性、低減した凝集傾向及び改善されたプロセスロバスト性を包含する。
【0248】
本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、重鎖ＣＤＲ２中にグリコシル化部位の実質的かつ最大１００％の糖占有を有する。
【0249】
本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、とりわけ、標的結合、発生特性、ＩＨＣ／プラーク結合及びＰＫ挙動に関して改善された特性を有する。
【0250】
本発明は、少なくとも部分的には、ガンテネルマブのＦａｂ内のグリコシル化部位の完全な除去が、それぞれプラーク結合の低減又はクリアランスの増加をもたらしたという知見に基づいている。したがって、ガンテネルマブのＦａｂグリコシル化部位のグリコシル化の低減又はさらには排除をもたらす改変は不利であり、防止する必要がある。
【0251】
改変されたＦａｂ糖鎖占有を有するガンテネルマブの４つの異なるバリアントが生成されている。
【0252】
改変された重鎖を有する２つのバリアント（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）：
－重鎖Ｓ５３Ｔ変異を導入することによる完全なＦａｂグリコシル化（ｍＡｂ６７５）；
－重鎖Ｎ５２Ｑ変異を導入することによるＦａｂグリコシル化の完全な除去（ｍＡｂ６６３）；
改変された重鎖及び軽鎖を有する２つのバリアント（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）：
－重鎖Ｓ５３Ｔ変異を導入することによる完全なＦａｂグリコシル化及び軽鎖Ｍ９５Ｈ変異を導入することによる重鎖改変の補償（ｍＡｂ６５１）；
－重鎖Ｎ５２Ｑ変異を導入することによるＦａｂグリコシル化の完全な除去及び軽鎖Ｍ９５Ｈ変異を導入することによる重鎖改変の補償（ｍＡｂ６３８）。
－重鎖Ｓ５３Ｔ変異を導入することによる完全なＦａｂグリコシル化（ｍＡｂ６７５）；
－重鎖Ｎ５２Ｑ変異を導入することによるＦａｂグリコシル化の完全な除去（ｍＡｂ６６３）；
改変された重鎖及び軽鎖を有する２つのバリアント（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）：
－重鎖Ｓ５３Ｔ変異を導入することによる完全なＦａｂグリコシル化及び軽鎖Ｍ９５Ｈ変異を導入することによる重鎖改変の補償（ｍＡｂ６５１）；
－重鎖Ｎ５２Ｑ変異を導入することによるＦａｂグリコシル化の完全な除去及び軽鎖Ｍ９５Ｈ変異を導入することによる重鎖改変の補償（ｍＡｂ６３８）。
【0253】
ガンテネルマブの４つのバリアントは、完全にＦａｂグリコシル化されているか、又は完全にＦａｂグリコシル化されていないかのいずれかである。ｍＡｂ６５１を除いて、すべてのバリアントは、ヒトＡ－βタンパク質に対して同じインビトロ結合親和性を有する。
【表1】
【0254】
【0255】
図１は、重鎖ＣＤＲにおける配列ＮＡＳを有する親抗体ガンテネルマブの部分的グリコシル化を示す（約２２～２４秒の整列時間に２つのピーク）。
【0256】
図２は、重鎖ＣＤＲにおける配列ＱＡＳを有するバリアント抗体ｍＡｂ６６３の完全な非グリコシル化を示す（約２２秒の整列時間に１つのピーク）。
【0257】
図３は、重鎖ＣＤＲにおける配列ＱＡＳを有するバリアント抗体ｍＡｂ６７５の完全なグリコシル化を示す（約２３秒の整列時間に１つのピーク）。
【0258】
本発明による抗体並びにガンテネルマブは小規模で生成されており、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いる第１の精製工程の後及び分取サイズ排除クロマトグラフィーを用いる第２の精製工程の後に副生成物分布が分析されている。結果を以下の表に示す。
【表2】
【0259】
４つのバリアントは、それらの結合特性及び特異性に関してさらに特徴付けられている。定性的結果を以下の表に示す。
【表3】
【0260】
個々の特性については、以下でより詳細に説明する。
【0261】
インビトロでのＡ－βプラーク装飾
親抗体のガンテネルマブは、特に１μｇ／ｍｌの濃度で、強い特異的プラーク結合及びいくらかのバックグラウンド、非特異的結合を示す（図４）。
親抗体のガンテネルマブは、特に１μｇ／ｍｌの濃度で、強い特異的プラーク結合及びいくらかのバックグラウンド、非特異的結合を示す（図４）。
【0262】
ＭＡｂ６７５（「１４２」）は、強い特異的プラーク結合を示し、検出可能なバックグラウンド、非特異的結合を示さない（図５）。
【0263】
ＭＡｂ６６３（「１４３」）は、特に１μｇ／ｍｌの濃度で、低い特異的プラーク結合及びいくらかのバックグラウンド、非特異的結合を示す（図６）。
【0264】
ＭＡｂ６５１（「１４４」）は、１μｇ／ｍｌの濃度でさえ、特異的プラーク結合をほとんど示さず、バックグラウンド結合及び非特異的結合も示さない（図７）。
【0265】
ＭＡｂ６３８は、特に１μｇ／ｍｌの濃度で、低い特異的プラーク結合及びいくらかのバックグラウンド、非特異的結合を示す。
【0266】
したがって、ｍＡｂ６７５は、予想外にも、ガンテネルマブと比較した場合に等しい特異的プラーク結合を示したが、バックグラウンド、非特異的結合がはるかに少なかった。したがって、Ｆａｂ中の完全にグリコシル化されたグリコシル化部位は、１μｇ／ｍＬの濃度で、インビトロでバックグラウンド、非特異的結合を低減させることが見出された。
【0267】
染色結果を定性的な形で以下の表に要約する。
【表4-1】
【表4-2】
【0268】
インビボでのＡ－βプラーク装飾
雄ＡＰＰ／ＰＳ２マウス（９月齢、群あたりｎ＝３）に、それぞれ２０ｍｇ／ｋｇのガンテネルマブ及び４つのバリアントを投与した。注射７日後、脳切片における抗体分布を決定した（検出抗体：Ａｌｅｘａ５５５にコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（＃Ａ２１４３３））；Ａ－βタンパク質の共染色：Ａｍｙｌｏ Ｇｌｏ，Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓカタログ番号ＴＲ－３００－ＡＧ；画像設定：倍率３０倍）。結果を図８及び図９に示す。
雄ＡＰＰ／ＰＳ２マウス（９月齢、群あたりｎ＝３）に、それぞれ２０ｍｇ／ｋｇのガンテネルマブ及び４つのバリアントを投与した。注射７日後、脳切片における抗体分布を決定した（検出抗体：Ａｌｅｘａ５５５にコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（＃Ａ２１４３３））；Ａ－βタンパク質の共染色：Ａｍｙｌｏ Ｇｌｏ，Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓカタログ番号ＴＲ－３００－ＡＧ；画像設定：倍率３０倍）。結果を図８及び図９に示す。
【0269】
その結果、ｍＡｂ６７５（図８及び図９の「１４２」）は、予想外にも、ガンテネルマブと比較した場合、インビボでのプラーク結合の改善を示した。したがって、Ｆａｂ内の完全にグリコシル化されたグリコシル化部位がインビボでのＡ－βプラーク結合を増加させることが見出された。
【0270】
薬物動態
４つのガンテネルマブバリアントの薬物動態をラット及びマウスで決定した。
４つのガンテネルマブバリアントの薬物動態をラット及びマウスで決定した。
【0271】
Ｆａｂグリコシル化がなく、軽鎖可変ドメインが改変されていないｍＡｂ６６３は、ラットにおいて血漿クリアランス速度の増加を示すことが見出された。他のすべてのバリアントは、ガンテネルマブと同様の血漿クリアランス速度を示す。
【0272】
結果を図１０に示す。
【0273】
予想外にも、ｍＡｂ６３８、ｍＡｂ６７５及びｍＡｂ６５１は、ガンテネルマブよりも低いクリアランス速度を有する（履歴データ）。血漿クリアランス速度の差は、ｍＡｂ６３８のプラーク装飾の差を説明しないことを指摘しなければならない。
【0274】
ガンテネルマブバリアントの単一用量薬物動態（ＳＤＰＫ）特性は、ＦｃＲｎとヘパリンのアフィニティークロマトグラフィーの組み合わせを使用してさらに評価されている。
【0275】
ＦｃＲｎアフィニティークロマトグラフィー及びヘパリンアフィニティークロマトグラフィーの組み合わせは、ＦｃＲｎ及びヘパリンアフィニティークロマトグラフィーカラム保持時間閾値、及びそれにより、遅いクリアランス、すなわち、長い全身循環半減期を有する抗体が同定され得る二次元保持時間領域を定義することを可能とする。したがって、この組み合わせは、とりわけ、長い全身循環半減期を有する抗体の選択を可能にする。
【0276】
特性評価のために、ＦｃＲｎアフィニティークロマトグラフィーカラム及びヘパリンアフィニティークロマトグラフィーカラムでの保持時間を、それぞれのカラムでの参照抗体の保持時間に基づいて正規化する。それにより、主に遅いクリアランスを有する抗体を含む相対保持時間領域が定義される。より詳細には、この領域は、１．７８未満のＦｃＲｎアフィニティークロマトグラフィーカラム上の相対保持時間（参照抗体として酸化された（Ｈ２Ｏ２処理された）抗Ｈｅｒ３抗体調製物が用いられる）及び０．８７未満のヘパリンアフィニティークロマトグラフィーカラム上の相対保持時間（参照抗体として抗ｐＴａｕ抗体が用いられる）により定義される。この方法の詳細については、国際公開第２０１８／１９７５３３号を参照されたい。
【表5】
【0277】
熱安定性
ｍＡｂ６７５、ｍＡｂ６６３及びｍＡｂ６３８の熱安定性を動的光散乱によって決定した。凝集温度（Ｔａｇｇ）及び融解温度（Ｔｍ）は、熱ランプの適用によって決定されている。予想外にも、試験した３つ全てのバリアントは、親ガンテネルマブと比較して改善された値を示す。
ｍＡｂ６７５、ｍＡｂ６６３及びｍＡｂ６３８の熱安定性を動的光散乱によって決定した。凝集温度（Ｔａｇｇ）及び融解温度（Ｔｍ）は、熱ランプの適用によって決定されている。予想外にも、試験した３つ全てのバリアントは、親ガンテネルマブと比較して改善された値を示す。
【表6】
【0278】
安定性評価
ＭＡｂ６７５、ｍＡｂ６６３及びｍＡｂ６３８を、異なる緩衝系における高温でのインキュベーションによって熱ストレスに供した。
ＭＡｂ６７５、ｍＡｂ６６３及びｍＡｂ６３８を、異なる緩衝系における高温でのインキュベーションによって熱ストレスに供した。
【0279】
ｍＡｂ６３８は、リン酸緩衝生理食塩水中でのインキュベーションによって実質的な単量体損失を示すことが見出されている。
【0280】
しかしながら、予想外にも、３つ全てのガンテネルマブバリアントは、親ガンテネルマブと比較して標的結合に関して改善された安定性を示した。
【表7】
【0281】
すべてのデータ（１００％の均一なＦａｂ糖占有、脱アミド部位除去、野生型軽鎖）を考慮して、ｍＡｂ６７５は、改善された特性を有する最も有利なガンテネルマブバリアントとして同定された。
【0282】
本発明による例示的な抗ヒトＡ－βタンパク質抗体
したがって、本発明は、少なくとも以下の実施形態を包含する。
したがって、本発明は、少なくとも以下の実施形態を包含する。
【0283】
一態様では、本発明は、ヒトＡ－βタンパク質に結合する抗体を提供する。
【0284】
一態様では、本発明は、ヒトＡ－βタンパク質に結合する単離された抗体を提供する。
【0285】
一態様では、本発明は、ヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する抗体を提供する。
【0286】
本発明のすべての態様及び実施形態の特定の実施形態では、本発明による抗Ａ－β抗体は、以下の特性の１つ又は複数を有する：
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質のＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるインビボでのプラークの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する；
－重鎖ＣＤＲ２中に、ＣＥ－ＳＤＳによって決定される少なくとも９５％の糖占有率を有するグリコシル化部位を有する；
－任意の非グリコシル化グリコシル化部位を有する種を含まない；
－配列番号４５のヒトＡ－βタンパク質のＥＣ５０値が０．５ｎＭ以下である；
－インビトロでＡ－βプラークに結合し、脳サンプル中の非Ａ－βタンパク質分子に１μｇ／ｍＬ以下の染色濃度で結合しない；
－ガンテネルマブよりも強くインビボでＡ－βプラークに結合している；
－一元配置Ａｎｏｖａで決定される皮質及び海馬におけるインビボでのプラークの相対占有率が０．２を超えている；
－６８℃を超える熱安定性（ＤＬＳ Ｔａｇｇ／ＤＬＳ Ｔｍ）を有する、
のうちの１つ又は複数を有する、抗体。
【0287】
一態様では、本発明は、以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つすべてのＣＤＲを含む抗Ａ－βタンパク質抗体を提供する：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0288】
一態様では、本発明は、以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３。
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３。
【0289】
好ましい一態様では、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
【0290】
別の態様では、本発明は、以下から選択される少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ配列、少なくとも２つのＶＬ ＣＤＲ配列又は３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する：
（１）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（１）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0291】
別の態様では、本発明の抗体は、以下を含む：
（ａ）以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメイン：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｂ）以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメイン：
（１）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメイン：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｂ）以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメイン：
（１）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0292】
別の態様では、本発明は、以下を含む抗Ａ－βタンパク質抗体を提供する：
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（１）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（２）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（３）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（４）
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0293】
別の態様では、本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４又は配列番号８８のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０又は配列番号９０のＶＬのＣＤＲ配列の１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗Ａ－β抗体は、（１）配列番号８４のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号８０のＶＬのＣＤＲ配列；又は（２）配列番号８８のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号８０のＶＬのＣＤＲ配列；又は（３）配列番号８４のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号９０のＶＬのＣＤＲ配列；又は（４）配列番号８８のＶＨのＣＤＲ配列及び配列番号９０のＶＬのＣＤＲ配列を含む。
【0294】
好ましい一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号８０のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
【0295】
一態様では、本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列のうちの１つ又は複数と、配列番号８４のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、本発明による抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８４のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８４のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８４のＶＨドメインのフレームワークのアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
【0296】
一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号８０のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８０のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８０のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８０のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
【0297】
一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。好ましい一実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ＶＬドメインは、配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0298】
１つの態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；該抗体はヒトＡ－βタンパク質に特異的に結合する。好ましい一実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ＶＬドメインは、配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0299】
別の態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ａ－βタンパク質抗体は、ヒトＡ－βタンパク質に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号８４において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８４のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３。別の態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体であって、配列番号８０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ａ－βタンパク質抗体は、ヒトＡ－βタンパク質に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号８０において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。任意に、抗Ａ－βタンパク質抗体は、配列番号８０のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の態様では、ＶＬは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0300】
別の態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号８４及び配列番号８０のＶＨ配列及びＶＬ配列をそれぞれ含み、これらにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【0301】
本発明のさらなる態様において、上記の態様のいずれかによる抗Ａ－βタンパク質抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一態様では、抗Ａ－βタンパク質抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の態様では、抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書で定義されるインタクトなＩｇＧ１抗体又は他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【表8-1】
【表8-2】
【表8-3】
【0302】
特定の実施形態では、本発明による抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、本発明による抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。本発明による抗体のアミノ酸配列バリアントは、本発明による抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのような改変としては、例えば、本発明による抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、並びに／又はそれへの挿入、及び／若しくは抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられるが、これらに限定されない。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。
【0303】
本発明によるすべての態様及び実施形態の特定の実施形態では、本発明による抗体の重鎖可変ドメインは、第１の残基としてグルタミン（Ｑ）残基の代わりにピログルタミン酸（ｐＥ）残基を含む。
【0304】
ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
特定の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換による突然変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、以下の表において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、以下の表において、「例示的な置換」の見出しの下に提供されており、また、アミノ酸側鎖クラスに関しては以下でさらに説明するとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングする。
特定の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換による突然変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、以下の表において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、以下の表において、「例示的な置換」の見出しの下に提供されており、また、アミノ酸側鎖クラスに関しては以下でさらに説明するとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングする。
【表9-1】
【表9-2】
【0305】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【0306】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【0307】
ある種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ又は複数の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、更なる試験ために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の改変（例えば、改善）を有し、かつ／又は実質的に保持された親抗体の特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して、簡便に生成され得る。簡潔には、１つ又は複数のＨＶＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【0308】
変更（例えば、置換）は、抗体親和性を改善するために、例えば、ＨＶＲにおいて行われてもよい。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｐ．Ｓ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７（２００８）１７９－１９６）、及び／又は抗原と接触する残基において行われてもよく、得られたバリアントＶＨ又はＶＬを結合親和性について試験する。二次ライブラリーの構築及び二次ライブラリーからの再選択による親和性成熟は、例えばＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８（２００２）１－３７に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラー．プローンＰＣＲ、鎖シャフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、このライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３は、しばしば標的とされる。
【0309】
特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する本発明による抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ又は複数のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲ中で行われてよい。そのような変化は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上に提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
【0310】
突然変異誘発を標的とし得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｂ．Ｃ．及びＷｅｌｌｓ，Ｊ．Ａ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４（１９８９）１０８１－１０８５によって記載されるように、「アラニンスキャンニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、残基又は標的残基群（例えば、帯電した残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ）が同定され、中性又は負に帯電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。あるいは、又は加えて、抗体と抗原との間の接点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、又は除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を含有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
【0311】
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに１個以上のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端又はＣ末端と酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドとの融合が含まれる。
【0312】
ｂ）Ｆｃ領域グリコシル化バリアント
特定の実施形態では、本発明による抗体は、抗体Ｆｃ領域がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように変更される。本発明による抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位を創出するか又は除去するように、アミノ酸配列を改変することによって簡便に達成されうる。
特定の実施形態では、本発明による抗体は、抗体Ｆｃ領域がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように変更される。本発明による抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位を創出するか又は除去するように、アミノ酸配列を改変することによって簡便に達成されうる。
【0313】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。典型的には、哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって通常結合している分枝状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ １５（１９９７）２６－３２を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体におけるオリゴ糖の改変は、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを生成するために行われうる。
【0314】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体内のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％又は２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析により測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合物、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を算出することにより決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列のバリエーションに起因して、２９７位から上流又は下流に±３アミノ酸、すなわち２９４位から３００位の間に位置する場合もある。このようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；同第２００４／００９３６２１号を参照のこと。「脱フコシル化」又は「フコース欠乏」抗体バリアントに関する刊行物の例としては：米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細；国際公開第２０００／６１７３９号；同第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；同第２００２／０１６４３２８号；同第２００４／００９３６２１号；同第２００４／０１３２１４０号；同第２００４／０１１０７０４号；同第２００４／０１１０２８２号；同第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；同第２００３／０８４５７０号；同第２００５／０３５５８６号；同第２００５／０３５７７８号；同第２００５／０５３７４２号；同第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉ，Ａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６（２００４）１２３９－１２４９；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ，Ｎ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７（２００４）６１４－６２２が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ，Ｊ．ら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９（１９８６）５３３－５４５；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ，Ｎ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７（２００４）６１４－６２２；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４ ２００６）６８０－６８８；及び国際公開第２００３／０８５１０７号）が挙げられる。
【0315】
例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供さ与される。そのような抗体バリアントは、低減されたフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号；米国特許第６，６０２，６８４号；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号に記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；及び同第１９９９／２２７６４号に記載されている。
【0316】
ｃ）Ｆｃ領域バリアント
特定の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸改変が、本発明による抗体のＦｃ領域内に導入され、それによってＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
特定の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸改変が、本発明による抗体のＦｃ領域内に導入され、それによってＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
【0317】
特定の実施形態では、本明細書において、全てではないが一部のエフェクター機能を有し、それによりインビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）が不要又は有害である用途にとって望ましい候補となる、抗体バリアントが企図される。インビトロ及び／又はインビボ細胞毒性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃＲ結合を欠いている（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞が、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．及びＫｉｎｅｔ，Ｊ．Ｐ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（１９９１）４５７－４９２の４６４ページの表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３（１９８６）７０５９－７０６３；及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２（１９８５）１４９９－１５０２を参照されたい）；米国特許第５，８２１，３３７号（例えば、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６（１９８７）１３５１－１３６１を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。このようなアッセイに有用なエフェクタ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。あるいは、又は加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ，Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５（１９９８）６５２－６５６に開示されているような動物モデルで評価してもよい。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ，Ｈ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２（１９９６）１６３－１７１；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０１（２００３）１０４５－１０５２；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．及びＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ １０３（２００４）２７３８－２７４３を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボでのクリアランス／半減期の決定は、当技術分野で公知の方法を用いて行うこともできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（２００６：１７５９－１７６９を参照されたい）。
【0318】
低減したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ又は複数の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ領域バリアントには、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７位のうちの２つ以上で置換を有するＦｃバリアント、例えば、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃバリアントが挙げられる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【0319】
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４を参照されたい）。
【0320】
特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【0321】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ，Ｅ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（２０００）４１７８－４１８４に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち、改善又は減少）をもたらすＦｃ領域内での変更が行われる。
【0322】
増加した半減期と、母体ＩｇＧの胎児への移送に関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合とを有する抗体（Ｇｕｙｅｒ，Ｒ．Ｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７（１９７６）５８７－５９３、及びＫｉｍ，Ｊ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）２４２９－２４３４）は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換をＦｃ領域内に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ領域バリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の１つ又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換が含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【0323】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ，Ａ．Ｒ．及びＷｉｎｔｅｒ，Ｇ．、「Ｎａｔｕｒｅ」第３２２巻（１９８８年）第７３８～７４０頁；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照。
【0324】
ｄ）システイン操作された抗体バリアント
特定の実施形態では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン人工抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能部位に配置され、それは、本明細書でさらに説明するように、例えば薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートさせて免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。特定の実施形態では、以下の残基の１つ又は複数がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように作製され得る。
特定の実施形態では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン人工抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能部位に配置され、それは、本明細書でさらに説明するように、例えば薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートさせて免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。特定の実施形態では、以下の残基の１つ又は複数がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように作製され得る。
【0325】
ｅ）抗体誘導体
特定の実施形態では、本発明による抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するように更に改変され得る。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗体に接続するポリマーの数は、さまざまであってもよく、１つより多いポリマーが接続する場合、ポリマーは、同じ分子であってもよく、又は異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうか等の考慮事項に基づいて決定することができる。
特定の実施形態では、本発明による抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するように更に改変され得る。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗体に接続するポリマーの数は、さまざまであってもよく、１つより多いポリマーが接続する場合、ポリマーは、同じ分子であってもよく、又は異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうか等の考慮事項に基づいて決定することができる。
【0326】
特定の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。特定の実施形態では、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ，Ｎ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２（２００５）１１６００－１１６０５）。放射線は、任意の波長であってよく、限定されないが、通常の細胞に有害ではないが、非タンパク質性部分を、抗体－非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅する温度まで加熱する波長を含む。
【0327】
組換え方法及び組成物
本発明による抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。本発明は、本発明による抗ヒトＡ－β抗体をコードする１つ又は複数の単離された核酸分子を提供する。そのような核酸分子は、本発明による抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを構成するアミノ酸配列（例えば、本発明による抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしていてもよい。特定の実施形態では、そのような核酸分子を含む１つ又は複数のプラスミド（例えば、発現プラスミド）が提供される。特定の実施形態では、そのような核酸分子を含む宿主細胞が提供される。好ましい一実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、以下を用いて形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする第１の核酸分子及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする第２の核酸分子を含むプラスミド、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸分子を含む第１のプラスミド及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸分子を含む第２のプラスミド。特定の実施形態では、宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０細胞）である。特定の実施形態では、抗ヒトＡ－βタンパク質抗体を作製する方法であって、上記に提供される抗体をコードする１つ又は複数の核酸分子を含む宿主細胞を、その抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することとを含む、方法が提供される。
本発明による抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。本発明は、本発明による抗ヒトＡ－β抗体をコードする１つ又は複数の単離された核酸分子を提供する。そのような核酸分子は、本発明による抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを構成するアミノ酸配列（例えば、本発明による抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしていてもよい。特定の実施形態では、そのような核酸分子を含む１つ又は複数のプラスミド（例えば、発現プラスミド）が提供される。特定の実施形態では、そのような核酸分子を含む宿主細胞が提供される。好ましい一実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、以下を用いて形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする第１の核酸分子及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする第２の核酸分子を含むプラスミド、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸分子を含む第１のプラスミド及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸分子を含む第２のプラスミド。特定の実施形態では、宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０細胞）である。特定の実施形態では、抗ヒトＡ－βタンパク質抗体を作製する方法であって、上記に提供される抗体をコードする１つ又は複数の核酸分子を含む宿主細胞を、その抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することとを含む、方法が提供される。
【0328】
抗ヒトＡ－βタンパク質抗体の組換え産生のために、例えば上記のような抗体をコードする核酸分子を単離し、宿主細胞における更なるクローニング及び／又は発現のために１つ又は複数のプラスミドに挿入する。そのような核酸分子は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定され得る。
【0329】
抗体をコードする核酸分子のクローニング又は発現のために適した宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、ＵＳ ５，６４８，２３７号、ＵＳ ５，７８９，１９９号及びＵＳ ５，８４０，５２３号を参照。（大腸菌における抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｉｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照。）発現後、抗体は、適切なフラクション中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、更に精製されてもよい。
【0330】
原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｔ．Ｕ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（２００４）１４０９－１４１４；及びＬｉ，Ｈ．ら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４（２００６）２１０－２１５を参照されたい。
【0331】
（グリコシル化）抗体の発現に適した宿主細胞も、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多くのバキュロウイルス株が同定されており、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、これを昆虫細胞と組み合わせて使用してもよい。
【0332】
植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、米国特許第６，０４０，４９８号、米国特許第６，４２０，５４８号、米国特許第７，１２５，９７８号及び米国特許第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。
【0333】
脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えばＧｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されるような２９３細胞又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ５細胞及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（１９８０）４２１６－４２２０）、及び、骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．及びＷｕ，Ａ．Ｍ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２４８巻、Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（編．）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００４）、２５５－２６８頁を参照されたい。
【0334】
診断及び検出のための方法及び組成物
特定の実施形態では、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかは、生物学的サンプルにおけるＡ－βタンパク質の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合、「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の実施形態では、生物学的サンプルは、細胞又は組織を含む。
特定の実施形態では、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかは、生物学的サンプルにおけるＡ－βタンパク質の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合、「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の実施形態では、生物学的サンプルは、細胞又は組織を含む。
【0335】
特定の実施形態では、診断又は検出の方法において使用するための本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が提供される。特定の実施形態では、生物学的サンプル中のＡ－βタンパク質の存在を検出する方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、Ａ－βタンパク質に対する抗ヒトＡ－βタンパク質抗体の結合に許容される条件下で、生物学的サンプルを本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体と接触させること、及び、複合体が抗ヒトＡ－βタンパク質抗体とＡ－βタンパク質との間で形成されるかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボ方法であり得る。
【0336】
特定の実施形態では、本発明による標識抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が提供される。標識としては、限定されないが、直接的に検出される標識又は部分（例えば、蛍光、色素体、電子密度の高い、化学発光及び放射性標識）、及び例えば酵素反応又は分子相互作用によって、間接的に検出される部分（例えば、酵素又はリガンド）が挙げられる。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）などのルセリフェラーゼ類（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン類、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼなどの糖オキシダーゼ、過酸化水素を使用して、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を利用する酵素と結合した、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定フリーラジカルなどが含まれるが、これらに限定されない。
【0337】
医薬製剤
本発明による抗ヒトＡ－β抗体の医薬製剤は、所望の純度を有するそのような抗体を１つ又は複数の任意の薬学的に許容され得る担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．（ｅｄ．）（１９８０））と、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容され得る担体は、一般的に、採用される用量及び濃度において受領者に無毒であり、以下を含むが、これらに限定されるものではない：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸のような緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリ（ビニルピロリドン）等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン等のアミノ酸。単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖類；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）等の間質性薬物分散剤、例えばｒｈｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質をさらに含む。ｒｈｕＰＨ２０を含む、一部の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ＵＳ ２００５／０２６０１８６及びＵＳ ２００６／０１０４９６８に記載されている。特定の実施形態では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
本発明による抗ヒトＡ－β抗体の医薬製剤は、所望の純度を有するそのような抗体を１つ又は複数の任意の薬学的に許容され得る担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．（ｅｄ．）（１９８０））と、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容され得る担体は、一般的に、採用される用量及び濃度において受領者に無毒であり、以下を含むが、これらに限定されるものではない：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸のような緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリ（ビニルピロリドン）等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン等のアミノ酸。単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖類；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）等の間質性薬物分散剤、例えばｒｈｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質をさらに含む。ｒｈｕＰＨ２０を含む、一部の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ＵＳ ２００５／０２６０１８６及びＵＳ ２００６／０１０４９６８に記載されている。特定の実施形態では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【0338】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤は、酢酸ヒスチジン緩衝液を含む。
【0339】
本明細書における製剤はまた、処置される特定の適応症に必要な２つ以上の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有してもよい。そのような有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
【0340】
有効成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、又は界面重合、例えば、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）又はマクロエマルジョンにおいて、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによって調製されたマイクロカプセル内に封入することができる。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．（ｅｄ．）（１９８０）に開示されている。
【0341】
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、これらのマトリクスは、成形物品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態である。持続放出性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第ＵＳ３７７３９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とγ－Ｌ－グルタミン酸エチルとのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性の乳酸－グリコール酸コポリマー（乳酸－グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）、並びにポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【0342】
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、滅菌のものである。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。一実施形態では、製剤は等張性である。
【0343】
治療方法及び組成物
本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかは、治療方法において使用され得る。
本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかは、治療方法において使用され得る。
【0344】
一態様では、医薬として使用するための本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が提供される。さらなる態様では、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患の予防及び／又は処置に使用するための本発明による抗ヒトＡ－β抗体が提供される。特定の実施形態では、処置方法において使用するための本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が提供される。特定の実施形態では、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患を有する個体を処置する方法において使用するための本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体であって、有効量の本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体を個体に投与することを含む、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が本明細書で提供される。特定の実施形態では、本方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば以下に列挙するもの、又は抗ｐＴａｕ若しくは抗αシヌクレイン抗体を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、プラークの形成及び／又はβ－アミロイド斑の崩壊を阻害するのに使用するための本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が本明細書で提供される。特定の実施形態では、本明細書中には、個体におけるプラークの形成及び／又はβ－アミロイド斑の崩壊を阻害する方法における使用のための本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体であって、プラークの形成を阻害するために、及び／又はβ－アミロイド斑を崩壊させるために、有効量の本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体を個体に投与することを含む抗ヒトＡ－βタンパク質抗体が提供される。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
【0345】
さらなる態様では、医薬の製造又は調製における本発明による抗ヒトＡ－β抗体の使用が本明細書で提供される。特定の実施形態では、医薬は、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患を処置するためのものである。特定の実施形態では、医薬は、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患を処置する方法に使用するためのものである。特定の実施形態では、本方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば以下に列挙するもの、又は抗ｐＴａｕ若しくは抗αシヌクレイン抗体を個体に投与することをさらに含む。特定の実施形態では、医薬は、プラークの形成及び／又はβ－アミロイド斑の崩壊の阻害のためのものである。特定の実施形態では、医薬は、個体におけるプラークの形成及び／又はβ－アミロイド斑の崩壊を阻害する方法において使用するためのものであり、プラークの形成を阻害するため、及び／又はβ－アミロイド斑を崩壊させるために有効な量の医薬を個体に投与することを含む。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【0346】
さらなる態様では、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患を処置する方法が本明細書で提供される。特定の実施形態では、本方法は、アミロイド形成及び／又はアミロイド斑形成に関連する疾患を有する個体に、有効量の本発明の抗ヒトＡ－βタンパク質抗体を投与することを含む。特定の実施形態では、本方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば以下に示すもの、又は抗ｐＴａｕ若しくは抗αシヌクレイン抗体を個体に投与することをさらに含む。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【0347】
さらなる態様では、個体におけるプラークの形成を阻害する及び／又はβ－アミロイド斑を崩壊させる方法が本明細書で提供される。特定の実施形態では、本方法は、プラークの形成を阻害するために、及び／又はβ－アミロイド斑を崩壊させるために、有効量の本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体を個体に投与することを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
【0348】
さらなる態様では、例えば、上記の治療方法のいずれかで使用するための、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかを含む医薬製剤が本明細書で提供される。特定の実施形態では、医薬製剤は、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。特定の実施形態では、医薬製剤は、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体のいずれかと、例えば以下に示されるような少なくとも１つの追加の治療剤又は抗ｐＴａｕ若しくは抗αシヌクレイン抗体とを含む。
【0349】
本発明による抗体は、単独で、又は治療において他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明による抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、本発明による抗体が処置のために使用されているのと同じ又は異なる神経障害を処置するのに有効な治療剤である。例示的な追加の治療剤には、上記の様々な神経薬、コリンエステラーゼ阻害剤（ドネペジル、ガランタミン、ロバスチグミン及びタクリンなど）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（メマンチンなど）、アミロイドβペプチド凝集阻害剤、抗酸化剤、γ－セクレターゼモジュレーター、神経成長因子（ＮＧＦ）模倣物又はＮＧＦ遺伝子治療、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＨＭＳ－ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン）、アンパキン、カルシウムチャネル遮断薬、ＧＡＢＡ受容体アンタゴニスト、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害剤、静脈内免疫グロブリン、ムスカリン受容体アゴニスト、ニコチン受容体モジュレーター、活性又は受動的アミロイドβペプチド免疫化、ホスホジエステラーゼ阻害剤、セロトニン受容体アンタゴニスト及び抗アミロイドβペプチド抗体が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療剤は、神経学的薬物の１つ又は複数の副作用を軽減する能力について選択される。
【0350】
上述のそのような併用療法は、併用投与（同じ又は別個の製剤中に２つ以上の治療剤が含まれる）及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本明細書に報告される抗体の投与は、追加の治療剤（単数又は複数）の投与前、投与と同時に、及び／又は投与後に行われ得る。特定の実施形態では、本発明による抗ヒトＡ－β抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、又は約１、２若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５若しくは６日以内に行われる。本発明による抗体はまた、限定されないが、放射線療法、行動療法、又は当技術分野で公知であり、処置又は予防される神経障害に適した他の治療法などの他の介入療法と組み合わせて使用することもできる。
【0351】
本発明による抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所処置のために望まれる場合、病変内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投薬は、投与が短時間であるか、又は慢性的であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈内注射又は皮下注射等の注射によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
【0352】
本発明による抗体は、良好な医療行為と一致した方法で製剤化され、投与され、投与されるであろう。これに関連して考慮すべき要因としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。抗体は、必ずしもそうである必要はないが、任意に、問題の障害を予防又は処置するために現在使用されている１つ又は複数の薬剤とともに製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する本発明による抗体の量、障害又は処置の種類、及び上で論じた他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路によって、又は本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、又は適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【0353】
本発明による抗体又は本発明による抗体を含む融合構築物をＢＢＢを横切って輸送する脂質ベースの方法としては、限定されないが、ＢＢＢの血管内皮上の受容体に結合する一価結合実体にカップリングされたリポソームに抗体又は融合構築物をカプセル化すること（例えばＵＳ２００２／００２５３１３を参照）、及び低密度リポタンパク質粒子（例えばＵＳ２００４／０２０４３５４を参照）又はアポリポタンパク質Ｅ（例えばＵＳ２００４／０１３１６９２を参照）に一価結合実体をコーティングすることが挙げられる。
【0354】
疾患の予防又は処置について、本発明による抗体の適切な投薬量は（単独で、又は１つ又は複数の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、処置される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。本発明による抗体は、患者に一度に又は一連の処置にわたって適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば１つ又は複数の個別投与によるか、持続注入によるかに関わらず、約１μｇ／ｋｇ－１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が上記患者への投与のための初期候補用量となり得る。典型的な１日投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。数日間又はそれ以上にわたる反復投与において、症状に応じ、処置は通常、疾患症候の所望の抑制が生じるまで続けられる。抗体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ又は複数の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば毎週又は３週間毎（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。最初のより高い負荷用量、続いて１つ又は複数のより低い用量を投与してもよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
【0355】
上記の製剤又は治療方法のいずれかは、本発明による抗ヒトＡ－βタンパク質抗体の代わりに、又はそれに加えて、本明細書に記載の免疫コンジュゲートを使用して実施され得ることが理解される。
【0356】
製造品
本発明による別の態様では、上述の障害の処置、予防及び／又は診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器に挿入されるか、又は容器に付随するラベル又はパッケージ添付文書とを備えている。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、組成物をそれ自体で、又は症状を処置し、予防し、且つ／若しくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保持しており、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有する静脈用溶液袋又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明による抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を処置するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本発明による抗体を含む組成物が中に収容されている第１の容器；及び（ｂ）さらなる細胞傷害性剤又はその他の治療剤を含む組成物が中に収容されている第２の容器を備えてもよい。この実施形態における製造品は、組成物が特定の症状を処置するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。これに代えて、又はこれに加えて、製造品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器をさらに備えていてもよい。他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、ニードル及びシリンジを含め、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
本発明による別の態様では、上述の障害の処置、予防及び／又は診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器に挿入されるか、又は容器に付随するラベル又はパッケージ添付文書とを備えている。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、組成物をそれ自体で、又は症状を処置し、予防し、且つ／若しくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保持しており、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有する静脈用溶液袋又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明による抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を処置するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本発明による抗体を含む組成物が中に収容されている第１の容器；及び（ｂ）さらなる細胞傷害性剤又はその他の治療剤を含む組成物が中に収容されている第２の容器を備えてもよい。この実施形態における製造品は、組成物が特定の症状を処置するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。これに代えて、又はこれに加えて、製造品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器をさらに備えていてもよい。他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、ニードル及びシリンジを含め、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
【0357】
上記の製造品のいずれも、本発明による抗体の代わりに、又はそれに加えて、本明細書に記載の免疫コンジュゲートを含み得ることが理解される。
【0358】
以下の図、配列及び実施例は、本発明の理解を助けるために提供され、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲において説明される。本発明の要旨から逸脱することなく、記載された手順に改変を加えることができることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【0359】
【図1】ガンテネルマブのＨＩＣクロマトグラム。
【図2】ｍＡｂ６６３のＨＩＣクロマトグラム。
【図3】ｍＡｂ６７５のＨＩＣクロマトグラム。
【図4】ガンテネルマブによるインビトロでのＡ－βプラーク装飾。
【図5】ｍＡｂ６７５によるインビトロでのＡ－βプラーク装飾。
【図6】ｍＡｂ６６３によるインビトロでのＡ－βプラーク装飾。
【図7】ｍＡｂ６５１によるインビトロでのＡ－βプラーク装飾。
【図8】インビボでのＡ－βプラーク装飾の結果。
【図9】インビボでのＡ－βプラーク装飾の結果。
【図10】薬物動態結果。
【0360】
配列の説明
【表10-1】
【表10-2】
【表10-3】
【表10-4】
【実施例0361】
実施例１
材料及び一般的方法
ヒト免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖のヌクレオチド配列に関連する一般的な情報は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に与えられる。抗体鎖のアミノ酸は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））によるナンバリングに従ってナンバリングされ、参照される。
材料及び一般的方法
ヒト免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖のヌクレオチド配列に関連する一般的な情報は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に与えられる。抗体鎖のアミノ酸は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））によるナンバリングに従ってナンバリングされ、参照される。
【0362】
組換えＤＮＡ技術
標準的な方法を使用し、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９に記載されるように、ＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬は、製造者の指示にしたがって使用した。
標準的な方法を使用し、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９に記載されるように、ＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬は、製造者の指示にしたがって使用した。
【0363】
遺伝子合成
化学合成によって作られるオリゴヌクレオチドから、所望の遺伝子セグメントを調製した。ＰＣＲ増幅を含めて、オリゴヌクレオチドをアニーリング及び連結することによって、単一の制限エンドヌクレアーゼ切断部位に隣接する長い遺伝子セグメントを構築し、その後、示された制限部位を介してクローニングした。ＤＮＡ配列決定によって、サブクローニングされた遺伝子断片のＤＮＡ配列を確認した。所与の仕様に従って、Ｇｅｎｅａｒｔ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に遺伝子合成断片を注文した。
化学合成によって作られるオリゴヌクレオチドから、所望の遺伝子セグメントを調製した。ＰＣＲ増幅を含めて、オリゴヌクレオチドをアニーリング及び連結することによって、単一の制限エンドヌクレアーゼ切断部位に隣接する長い遺伝子セグメントを構築し、その後、示された制限部位を介してクローニングした。ＤＮＡ配列決定によって、サブクローニングされた遺伝子断片のＤＮＡ配列を確認した。所与の仕様に従って、Ｇｅｎｅａｒｔ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に遺伝子合成断片を注文した。
【0364】
ＤＮＡ配列決定
ＭｅｄｉＧｅｎｏｍｉｘ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又はＳｅｑｕｉＳｅｒｖｅ ＧｍｂＨ（Ｖａｔｅｒｓｔｅｔｔｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で行われた二本鎖配列決定によって、ＤＮＡ配列を決定した。
ＭｅｄｉＧｅｎｏｍｉｘ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又はＳｅｑｕｉＳｅｒｖｅ ＧｍｂＨ（Ｖａｔｅｒｓｔｅｔｔｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で行われた二本鎖配列決定によって、ＤＮＡ配列を決定した。
【0365】
ＤＮＡ及びタンパク質配列分析及び配列データ管理
配列作成、マッピング、分析、注釈付け及び図示のために、ＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）ソフトウェアパッケージバージョン１０．２及びＩｎｆｏｍａｘのＶｅｃｔｏｒ ＮＴ１ Ａｄｖａｎｃｅ ｓｕｉｔｅバージョン８．０を使用した。
配列作成、マッピング、分析、注釈付け及び図示のために、ＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）ソフトウェアパッケージバージョン１０．２及びＩｎｆｏｍａｘのＶｅｃｔｏｒ ＮＴ１ Ａｄｖａｎｃｅ ｓｕｉｔｅバージョン８．０を使用した。
【0366】
発現ベクター
本発明による抗体の発現のために、ＣＭＶ－イントロンＡプロモーターを用いた若しくは用いないｃＤＮＡ構成又はＣＭＶプロモーターを用いたゲノム構成のいずれかに基づく（例えば、ＨＥＫ２９３細胞における）一過性発現のための発現プラスミドを適用することができる。
本発明による抗体の発現のために、ＣＭＶ－イントロンＡプロモーターを用いた若しくは用いないｃＤＮＡ構成又はＣＭＶプロモーターを用いたゲノム構成のいずれかに基づく（例えば、ＨＥＫ２９３細胞における）一過性発現のための発現プラスミドを適用することができる。
【0367】
抗体発現カセット以外に、ベクターは、
－大腸菌においてこのプラスミドの複製を可能にする複製起点、
－大腸菌においてアンピシリン耐性を与えるβ－ラクタマーゼ遺伝子
を含有する。
－大腸菌においてこのプラスミドの複製を可能にする複製起点、
－大腸菌においてアンピシリン耐性を与えるβ－ラクタマーゼ遺伝子
を含有する。
【0368】
抗体遺伝子の転写ユニットは、以下の要素：
－５’末端の固有の制限部位
－ヒトサイトメガロウイルス由来の最初期遺伝子及びプロモーター、
－ｃＤＮＡ構成の場合におけるイントロンＡ配列、
－ヒト抗体遺伝子由来の５’－非翻訳領域、
－免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
－ｃＤＮＡとしての又はゲノムエクソン－イントロン構成での、それぞれの抗体鎖をコードする核酸、
－ポリアデニル化シグナル配列を有する３’未翻訳領域、
－３’末端の固有の制限部位
から構成される。
－５’末端の固有の制限部位
－ヒトサイトメガロウイルス由来の最初期遺伝子及びプロモーター、
－ｃＤＮＡ構成の場合におけるイントロンＡ配列、
－ヒト抗体遺伝子由来の５’－非翻訳領域、
－免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
－ｃＤＮＡとしての又はゲノムエクソン－イントロン構成での、それぞれの抗体鎖をコードする核酸、
－ポリアデニル化シグナル配列を有する３’未翻訳領域、
－３’末端の固有の制限部位
から構成される。
【0369】
抗体鎖をコードする融合遺伝子は、ＰＣＲ及び／又は遺伝子合成によって作製され、例えば、それぞれのベクター中の固有の制限部位を用いて、一致した核酸セグメントの接続によって、公知の組換え方法及び技術によって組み立てられる。ＤＮＡ配列決定によって、サブクローニングされた核酸配列を確認する。一過性トランスフェクションのために、形質転換された大腸菌培養物（Ｎｕｃｌｅｏｂｏｎｄ ＡＸ、Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）からのプラスミド調製によって、大量のプラスミドを調製する。
【0370】
細胞培養技術
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０００），Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ，Ｊ．Ｓ．，Ｄａｓｓｏ，Ｍ．，Ｈａｒｆｏｒｄ，Ｊ．Ｂ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｊ．ａｎｄ Ｙａｍａｄａ，Ｋ．Ｍ．（ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．に記載されている標準的な細胞培養技術が使用される。
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０００），Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ，Ｊ．Ｓ．，Ｄａｓｓｏ，Ｍ．，Ｈａｒｆｏｒｄ，Ｊ．Ｂ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｊ．ａｎｄ Ｙａｍａｄａ，Ｋ．Ｍ．（ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．に記載されている標準的な細胞培養技術が使用される。
【0371】
ＨＥＫ２９３－Ｆ系における一過性トランスフェクション
抗体は一過性発現によって産生された。したがって、ＨＥＫ２９３－Ｆシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用して、それぞれのプラスミドによるトランスフェクションを行った。簡潔に述べれば、シェークフラスコ又は撹拌発酵槽のいずれかにおいて無血清ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で懸濁状態で生育させたＨＥＫ２９３－Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に各々の発現プラスミド及び２９３ｆｅｃｔｉｎ（商標）又はｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のミックスをトランスフェクトした。２Ｌシェークフラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の場合、ＨＥＫ２９３－Ｆ細胞を６００ｍＬ中１．０＊１Ｅ６細胞／ｍＬの密度で播種し、１２０ｒｐｍ、８％ ＣＯ２でインキュベートする。翌日、約１．５＊１Ｅ６細胞／ｍＬの細胞密度で、細胞を、Ａ）６００μｇの総プラスミドＤＮＡ（１μｇ／ｍＬ）を含む２０ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＢ）１．２ｍＬの２９３フェクチン又はフェクチン（２μＬ／ｍＬ）が補充された２０ｍｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地の約４２ｍＬの混合物でトランスフェクションする。グルコース消費に従って発酵の経過の間にグルコース溶液を加える。分泌された抗体を含有する上清を５～１０日後に採取し、抗体を上清から直接精製するか、又は上清を凍結及び貯蔵する。
抗体は一過性発現によって産生された。したがって、ＨＥＫ２９３－Ｆシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用して、それぞれのプラスミドによるトランスフェクションを行った。簡潔に述べれば、シェークフラスコ又は撹拌発酵槽のいずれかにおいて無血清ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で懸濁状態で生育させたＨＥＫ２９３－Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に各々の発現プラスミド及び２９３ｆｅｃｔｉｎ（商標）又はｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のミックスをトランスフェクトした。２Ｌシェークフラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の場合、ＨＥＫ２９３－Ｆ細胞を６００ｍＬ中１．０＊１Ｅ６細胞／ｍＬの密度で播種し、１２０ｒｐｍ、８％ ＣＯ２でインキュベートする。翌日、約１．５＊１Ｅ６細胞／ｍＬの細胞密度で、細胞を、Ａ）６００μｇの総プラスミドＤＮＡ（１μｇ／ｍＬ）を含む２０ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＢ）１．２ｍＬの２９３フェクチン又はフェクチン（２μＬ／ｍＬ）が補充された２０ｍｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地の約４２ｍＬの混合物でトランスフェクションする。グルコース消費に従って発酵の経過の間にグルコース溶液を加える。分泌された抗体を含有する上清を５～１０日後に採取し、抗体を上清から直接精製するか、又は上清を凍結及び貯蔵する。
【0372】
タンパク質決定
Ｐａｃｅ，ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４（１９９５）２４１１－１４２３に従って、アミノ酸配列に基づいて計算されるモル吸光係数を用いて、２８０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）を決定することによって、精製された抗体及び誘導体のタンパク質濃度を決定した。
Ｐａｃｅ，ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４（１９９５）２４１１－１４２３に従って、アミノ酸配列に基づいて計算されるモル吸光係数を用いて、２８０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）を決定することによって、精製された抗体及び誘導体のタンパク質濃度を決定した。
【0373】
上清中の抗体濃度決定
細胞培養物上清中の抗体の濃度を、プロテインＡアガロースビーズ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）による免疫沈降によって推定した。したがって、６０μＬのプロテインＡアガロースビーズをＴＢＳ－ＮＰ４０（５０ｍＭ ＮａＣｌ及び１％Ｎｏｎｉｄｅｔ－Ｐ４０を補充した１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．５）で３回洗浄した。その後、１～１５ｍＬの細胞培養物上清を、ＴＢＳ－ＮＰ４０中で予め平衡状態にしたプロテインＡアガロースビーズに適用した。室温で１時間インキュベートした後、ビーズを、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ－ＭＣ－フィルタカラム（Ａｍｉｃｏｎ）上で、０．５ｍＬ ＴＢＳ－ＮＰ４０で１回、０．５ｍＬの２ｘリン酸緩衝生理食塩水（２×ＰＢＳ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）で２回洗浄し、０．５ｍＬ １００ｍＭ クエン酸Ｎａ緩衝液（ｐＨ５．０）で４回、簡単に洗浄した。結合した抗体を、３５μＬのＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＬＤＳサンプル緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加えることによって溶出させた。サンプルの半分を、それぞれＮｕＰＡＧＥ（登録商標）サンプル還元剤と合わせ、又は還元せずに残し、７０℃で１０分間加熱した。その結果、５～３０μｌを４～１２％ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用のＭＯＰＳ緩衝液及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用のＮｕＰＡＧＥ（登録商標）抗酸化ランニング緩衝液添加剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＭＥＳ緩衝液を含む）に適用し、クーマシーブルーで染色した。
細胞培養物上清中の抗体の濃度を、プロテインＡアガロースビーズ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）による免疫沈降によって推定した。したがって、６０μＬのプロテインＡアガロースビーズをＴＢＳ－ＮＰ４０（５０ｍＭ ＮａＣｌ及び１％Ｎｏｎｉｄｅｔ－Ｐ４０を補充した１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．５）で３回洗浄した。その後、１～１５ｍＬの細胞培養物上清を、ＴＢＳ－ＮＰ４０中で予め平衡状態にしたプロテインＡアガロースビーズに適用した。室温で１時間インキュベートした後、ビーズを、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ－ＭＣ－フィルタカラム（Ａｍｉｃｏｎ）上で、０．５ｍＬ ＴＢＳ－ＮＰ４０で１回、０．５ｍＬの２ｘリン酸緩衝生理食塩水（２×ＰＢＳ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）で２回洗浄し、０．５ｍＬ １００ｍＭ クエン酸Ｎａ緩衝液（ｐＨ５．０）で４回、簡単に洗浄した。結合した抗体を、３５μＬのＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＬＤＳサンプル緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加えることによって溶出させた。サンプルの半分を、それぞれＮｕＰＡＧＥ（登録商標）サンプル還元剤と合わせ、又は還元せずに残し、７０℃で１０分間加熱した。その結果、５～３０μｌを４～１２％ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用のＭＯＰＳ緩衝液及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用のＮｕＰＡＧＥ（登録商標）抗酸化ランニング緩衝液添加剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＭＥＳ緩衝液を含む）に適用し、クーマシーブルーで染色した。
【0374】
細胞培養物上清中の抗体の濃度を、アフィニティＨＰＬＣクロマトグラフィーによって定量的に測定した。簡単に説明すると、プロテインＡに結合する抗体を含有する細胞培養物上清を、２００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１００ｍＭ クエン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）中、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｏｒｏｓ Ａ／２０カラムに適用し、Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ １１００システムで、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１００ｍＭクエン酸（ｐＨ２．５）を用いて溶出させた。溶出した抗体をＵＶ吸光度及びピーク面積の積分によって定量した。精製した標準ＩｇＧ１抗体を標準とした。
【0375】
又は、細胞培養物上清中の抗体及び誘導体の濃度を、サンドイッチ－ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡによって測定した。簡単に説明すると、ＳｔｒｅｐｔａＷｅｌｌ Ｈｉｇｈ Ｂｉｎｄ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ａ－９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）を、１００μＬ／ウェルのビオチン化抗ヒトＩｇＧ捕捉分子Ｆ（ａｂ’）２＜ｈ－Ｆｃγ＞ＢＩ（Ｄｉａｎｏｖａ）で、０．１μｇ／ｍＬで室温で１時間かけて、又は４℃で一晩かけてコーティングし、その後、２００μＬ／ウェルのＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ、Ｓｉｇｍａ）を用いて３回洗浄した。その後、それぞれの抗体含有細胞培養物上清のＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）における１００μＬ／ウェルの希釈系列をウェルに加え、室温で振盪機で１～２時間インキュベートした。ウェルを２００μＬ／ウェルＰＢＳＴで３回洗浄し、結合した抗体を、室温で振盪機で１～２時間インキュベートすることにより、検出抗体として０．１μｇ／ｍＬの１００μＬ Ｆ（ａｂ’）２＜ｈＦｃγ＞ＰＯＤ（Ｄｉａｎｏｖａ）を用いて検出した。未結合の検出抗体を、２００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄することによって除去した。結合した検出抗体を、１００μＬ ＡＢＴＳ／ウェルを添加し、続いてインキュベートすることによって検出した。吸光度の決定は、Ｔｅｃａｎ Ｆｌｕｏｒ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで、測定波長４０５ｎｍ（リファレンス波長４９２ｎｍ）で行った。
【0376】
分取抗体精製
標準プロトコルを参照して、ろ過された細胞培養物上清から抗体を精製した。簡潔に述べると、抗体を、プロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用し、ＰＢＳで洗浄した。抗体の溶出をｐＨ２．８で達成した後、直ちに中和した。凝集したタンパク質を、ＰＢＳ又は１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）中のサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって単量体抗体から分離した。単量体抗体画分をプールし、（必要に応じて）例えばＭＩＬＬＩＰＯＲＥ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ（３０ ＭＷＣＯ）遠心濃縮器を用いて濃縮し、凍結し、－２０℃又は－８０℃で保存した。サンプルの一部が、その後のタンパク質分析、及び、例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥ、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）又は質量分析による分析的特性評価のために、提供された。
標準プロトコルを参照して、ろ過された細胞培養物上清から抗体を精製した。簡潔に述べると、抗体を、プロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用し、ＰＢＳで洗浄した。抗体の溶出をｐＨ２．８で達成した後、直ちに中和した。凝集したタンパク質を、ＰＢＳ又は１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）中のサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって単量体抗体から分離した。単量体抗体画分をプールし、（必要に応じて）例えばＭＩＬＬＩＰＯＲＥ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ（３０ ＭＷＣＯ）遠心濃縮器を用いて濃縮し、凍結し、－２０℃又は－８０℃で保存した。サンプルの一部が、その後のタンパク質分析、及び、例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥ、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）又は質量分析による分析的特性評価のために、提供された。
【0377】
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲルシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造業者の説明書に従って、使用した。特に、１０％又は４～１２％のＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ（登録商標）Ｂｉｓ－ＴＲＩＳ Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲル（ｐＨ６．４）、及びＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＭＥＳ（還元型ゲル、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）抗酸化ランニング緩衝液添加剤を含む）又はＭＯＰＳ（非還元型ゲル）ランニング緩衝液を使用した。
ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲルシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造業者の説明書に従って、使用した。特に、１０％又は４～１２％のＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ（登録商標）Ｂｉｓ－ＴＲＩＳ Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲル（ｐＨ６．４）、及びＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＭＥＳ（還元型ゲル、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）抗酸化ランニング緩衝液添加剤を含む）又はＭＯＰＳ（非還元型ゲル）ランニング緩衝液を使用した。
【0378】
ＣＥ－ＳＤＳ
マイクロ流体Ｌａｂｃｈｉｐ技術（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）を使用して、ＣＥ－ＳＤＳによって純度及び抗体完全性を分析した。したがって、製造業者の説明書に従ってＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔを使用して、ＣＥ－ＳＤＳ分析用に５μｌの抗体溶液を調製し、ＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃｈｉｐを使用してＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステムで分析した。ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してデータを分析した。
マイクロ流体Ｌａｂｃｈｉｐ技術（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）を使用して、ＣＥ－ＳＤＳによって純度及び抗体完全性を分析した。したがって、製造業者の説明書に従ってＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔを使用して、ＣＥ－ＳＤＳ分析用に５μｌの抗体溶液を調製し、ＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃｈｉｐを使用してＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステムで分析した。ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してデータを分析した。
【0379】
分析用サイズ排除クロマトグラフィ
抗体の凝集及びオリゴマー状態の決定のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって実施した。簡潔に述べると、プロテインＡ精製抗体を、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ（登録商標）システムで３００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４／Ｋ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．５）中のＴｏｓｏｈ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷカラムに、又はＤｉｏｎｅｘ ＨＰＬＣ－Ｓｙｓｔｅｍの２×ＰＢＳ中のＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。溶出した抗体をＵＶ吸光度及びピーク面積の積分によって定量した。ＢｉｏＲａｄ Ｇｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄ １５１－１９０１が標準として機能した。
抗体の凝集及びオリゴマー状態の決定のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって実施した。簡潔に述べると、プロテインＡ精製抗体を、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ（登録商標）システムで３００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４／Ｋ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．５）中のＴｏｓｏｈ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷカラムに、又はＤｉｏｎｅｘ ＨＰＬＣ－Ｓｙｓｔｅｍの２×ＰＢＳ中のＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。溶出した抗体をＵＶ吸光度及びピーク面積の積分によって定量した。ＢｉｏＲａｄ Ｇｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄ １５１－１９０１が標準として機能した。
【0380】
質量分析法
このセクションでは、二重特異性抗体の特徴付けを、それらの正しいアセンブリに重点を置いて説明する。予想される一次構造を、脱グリコシル化インタクト抗体、及び特別な場合には脱グリコシル化／制限ＬｙｓＣ消化抗体のエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）によって分析した。
このセクションでは、二重特異性抗体の特徴付けを、それらの正しいアセンブリに重点を置いて説明する。予想される一次構造を、脱グリコシル化インタクト抗体、及び特別な場合には脱グリコシル化／制限ＬｙｓＣ消化抗体のエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）によって分析した。
【0381】
抗体を、リン酸緩衝液又はＴｒｉｓ緩衝液中、タンパク質濃度１ｍｇ／ｍｌで、３７℃で１７時間までの時間、Ｎ－グリコシダーゼＦを用いて脱グリコシル化した。制限ＬｙｓＣ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、マンハイム、ドイツ）消化は、Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８）中、１００μｇの脱グリコシル化抗体を用いて、それぞれ室温で１２０時間又は３７℃で４０分間行った。質量分析の前に、サンプルを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのＨＰＬＣによって脱塩した。合計質量を、ＴｒｉＶｅｒｓａ ＮａｎｏＭａｔｅ ｓｏｕｒｃｅ（Ａｄｖｉｏｎ）が取り付けられたｍａＸｉｓ ４Ｇ ＵＨＲ－ＱＴＯＦ ＭＳシステム（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）でのＥＳＩ－ＭＳによって決定した。
【0382】
化学分解試験
サンプルを３つのアリコートに分け、２０ｍＭ Ｈｉｓ／Ｈｉｓ＊ＨＣｌ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０又はＰＢＳにそれぞれ再緩衝化し、４０°Ｃ（Ｈｉｓ／ＮａＣｌ）又は３７℃（ＰＢＳ）で保存した。対照サンプルを－８０℃で保存した。
サンプルを３つのアリコートに分け、２０ｍＭ Ｈｉｓ／Ｈｉｓ＊ＨＣｌ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０又はＰＢＳにそれぞれ再緩衝化し、４０°Ｃ（Ｈｉｓ／ＮａＣｌ）又は３７℃（ＰＢＳ）で保存した。対照サンプルを－８０℃で保存した。
【0383】
インキュベーションが終了した後、サンプルを相対活性濃度（ＢＩＡｃｏｒｅ）、凝集（ＳＥＣ）及び断片化（キャピラリー電気泳動又はＳＤＳ－ＰＡＧＥ）について分析し、未処理対照と比較した。
【0384】
熱安定性
サンプルを、２０ｍＭヒスチジン／ヒスチジンクロリド、１４０ｍＭ ＮａＣｌ中、ｐＨ ６．０で１ｍｇ／ｍＬの濃度にて調製し、０．４μｍフィルタプレートで遠心分離して光学３８４ウェルプレートに移し、パラフィンオイルで覆った。流体力学的半径を、サンプルを２５℃から８０℃まで０．０５℃／分の速度で加熱しながら、ＤｙｎａＰｒｏプレートリーダー（ワイアット）で動的光散乱法によって繰り返し測定した。
サンプルを、２０ｍＭヒスチジン／ヒスチジンクロリド、１４０ｍＭ ＮａＣｌ中、ｐＨ ６．０で１ｍｇ／ｍＬの濃度にて調製し、０．４μｍフィルタプレートで遠心分離して光学３８４ウェルプレートに移し、パラフィンオイルで覆った。流体力学的半径を、サンプルを２５℃から８０℃まで０．０５℃／分の速度で加熱しながら、ＤｙｎａＰｒｏプレートリーダー（ワイアット）で動的光散乱法によって繰り返し測定した。
【0385】
あるいは、サンプルを１０μＬのマイクロキュベットアレイに移し、２５℃～９０℃まで０．１℃／分の速度で加熱しながら、静的光散乱データ、並びに２６６ｎｍレーザーで励起した際の蛍光データを、Ｏｐｔｉｍ１０００装置（Ａｖａｃｔａ Ｉｎｃ．）を用いて記録した。
【0386】
凝集開始温度は、流体力学半径（ＤＬＳ）又は散乱光強度（Ｏｐｔｉｍ１０００）が増加し始める温度として定義される。
【0387】
あるいは、サンプルを９μＬのマルチキュベットアレイに移した。Ｏｐｔｉｍ１０００装置（Ａｖａｃｔａ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｉｎｃ．）において、マルチキュベットアレイを３５℃から９０℃まで０．１℃／分の一定速度で加熱した。装置は、およそ０．５℃ごとにデータ点を用いて２６６ｎｍレーザーの散乱光の強度を連続的に記録する。光散乱強度を温度に対してプロットした。凝集開始温度（Ｔａｇｇ）は、散乱光強度が増加し始める温度であると定義される。
【0388】
融点は、蛍光強度対波長のグラフの変曲点として定義される。
【0389】
マウス
マウスＦｃＲｎ鎖遺伝子を欠損しているが、ヒトＦｃＲｎ鎖遺伝子について半接合性トランスジェニックであるＢ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔｔｍ１ＤｃｒＴｇ（ＦＣＧＲＴ）２７６Ｄｃｒマウス（ｍｕＦｃＲｎ－／－ｈｕＦｃＲｎ ｔｇ＋／－、系統２７６）を薬物動態研究のために使用した。マウスの飼育を特定の病原体を含まない条件下で行った。マウスはＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ、ＵＳＡ）から得た（雌、４～１０週齢、投薬時に体重１７～２２ｇ）。全ての動物実験はｔｈｅ Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｐｐｅｒ Ｂａｖａｒｉａ、Ｇｅｒｍａｎｙにより承認され（許可番号５５．２－１－５４－２５３２．２－２８－１０）、ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｕｎｉｏｎ Ｎｏｒｍａｔｉｖｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌｓに従ってＡＡＡＬＡＣ認定動物施設において行われた。動物を標準的なケージ中で飼育し、研究の全期間中に食餌及び水を自由にとらせた。
マウスＦｃＲｎ鎖遺伝子を欠損しているが、ヒトＦｃＲｎ鎖遺伝子について半接合性トランスジェニックであるＢ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔｔｍ１ＤｃｒＴｇ（ＦＣＧＲＴ）２７６Ｄｃｒマウス（ｍｕＦｃＲｎ－／－ｈｕＦｃＲｎ ｔｇ＋／－、系統２７６）を薬物動態研究のために使用した。マウスの飼育を特定の病原体を含まない条件下で行った。マウスはＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ、ＵＳＡ）から得た（雌、４～１０週齢、投薬時に体重１７～２２ｇ）。全ての動物実験はｔｈｅ Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｐｐｅｒ Ｂａｖａｒｉａ、Ｇｅｒｍａｎｙにより承認され（許可番号５５．２－１－５４－２５３２．２－２８－１０）、ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｕｎｉｏｎ Ｎｏｒｍａｔｉｖｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌｓに従ってＡＡＡＬＡＣ認定動物施設において行われた。動物を標準的なケージ中で飼育し、研究の全期間中に食餌及び水を自由にとらせた。
【0390】
薬物動態研究
抗体の単回用量を１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルにおいて側尾静脈を介してｉ．ｖ．で注射した。計９つの血清収集時点（投薬後０．０８、２、８、２４、４８、１６８、３３６、５０４及び６７２時間）をカバーするようにマウスを各６匹のマウスの３つの群に分けた。各マウスを２回、イソフルラン（商標）（ＣＰ－Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ、Ｂｕｒｇｄｏｒｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いた浅麻酔下で行った後眼窩出血に供し、３つ目の血液サンプルを安楽死の時点で収集した。血液を血清チューブ（Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ５００Ｚ－Ｇｅｌ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に収集した。２ｈのインキュベーション後に、サンプルを９．３００ｇで３分間遠心分離して血清を得た。遠心分離後に、血清サンプルを分析まで－２０℃で凍結貯蔵した。
抗体の単回用量を１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルにおいて側尾静脈を介してｉ．ｖ．で注射した。計９つの血清収集時点（投薬後０．０８、２、８、２４、４８、１６８、３３６、５０４及び６７２時間）をカバーするようにマウスを各６匹のマウスの３つの群に分けた。各マウスを２回、イソフルラン（商標）（ＣＰ－Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ、Ｂｕｒｇｄｏｒｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いた浅麻酔下で行った後眼窩出血に供し、３つ目の血液サンプルを安楽死の時点で収集した。血液を血清チューブ（Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ５００Ｚ－Ｇｅｌ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に収集した。２ｈのインキュベーション後に、サンプルを９．３００ｇで３分間遠心分離して血清を得た。遠心分離後に、血清サンプルを分析まで－２０℃で凍結貯蔵した。
【0391】
ＰＫ分析
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）１．１．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用してノンコンパートメント解析により薬物動態パラメーターを算出した。
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）１．１．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用してノンコンパートメント解析により薬物動態パラメーターを算出した。
【0392】
簡潔に述べれば、抗体の非線形減少に起因する対数台形法により曲線下面積（ＡＵＣ０－ｉｎｆ）値を算出し、最後の時点において観察された濃度からの外挿を用いて、見かけの終点速度定数λｚを使用して無限大に外挿した。
【0393】
投薬速度（Ｄ）をＡＵＣ０－ｉｎｆで割ったものとして血漿クリアランスを算出した。見かけの消失半減期（Ｔ１／２）は式Ｔ１／２＝ｌｎ２／λｚから導出した。
【0394】
実施例２
発現及び精製
抗体は、一般的な材料及び方法のセクションで上述したように作製した。
発現及び精製
抗体は、一般的な材料及び方法のセクションで上述したように作製した。
【0395】
抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーの組み合わせによって上清から精製した。得られた生成物を、質量分析法によって属性について特性決定し、ＣＥ－ＳＤＳによって純度、単量体含有量及び安定性などの分析特性を特性決定した。
【0396】
予想される一次構造を、一般的な方法のセクションに記載されるように、脱グリコシル化インタクト抗体及び脱グリコシル化／プラスミン消化抗体又は代替的に脱グリコシル化／制限ＬｙｓＣ消化抗体のエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）によって分析した。
【0397】
追加の分析方法（例えば、熱安定性、質量分析及び機能評価）は、プロテインＡ及びＳＥＣ精製後にのみ適用した。
【0398】
実施例３
ＥＬＩＳＡによるインビトロでのＡβ１－４０繊維への結合の決定
原線維Ａβに対する抗体の結合をＥＬＩＳＡアッセイによって測定する。簡潔には、Ａβ（１－４０）を、ＰＢＳ中７μｇ／ｍＬでＭａｘｉｓｏｒｂプレート上に３７℃で３日間コーティングして、原線維Ａβを生成し、次いで、室温で３時間乾燥させる。プレートをＰＢＳ（ブロッキング緩衝液）中の１％ ＣｒｏｔｅｉｎＣ及び０．１％ ＲＳＡで室温で１時間ブロッキングし、次いで洗浄緩衝液で１回洗浄する。抗体又は対照をブロッキング緩衝液中１００ｎＭまでの濃度で添加し、４℃で一晩インキュベートする。４回の洗浄工程の後、ブロッキング緩衝液（１ ＲＴ）中の１：１０，０００希釈での抗ヒト－ＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）の添加、その後の６回の洗浄及びＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）中でのインキュベーションによって構築物を検出する。１Ｎ ＨＣｌで発色を停止させた後、吸光度を４５０ｎｍで読み取る。
ＥＬＩＳＡによるインビトロでのＡβ１－４０繊維への結合の決定
原線維Ａβに対する抗体の結合をＥＬＩＳＡアッセイによって測定する。簡潔には、Ａβ（１－４０）を、ＰＢＳ中７μｇ／ｍＬでＭａｘｉｓｏｒｂプレート上に３７℃で３日間コーティングして、原線維Ａβを生成し、次いで、室温で３時間乾燥させる。プレートをＰＢＳ（ブロッキング緩衝液）中の１％ ＣｒｏｔｅｉｎＣ及び０．１％ ＲＳＡで室温で１時間ブロッキングし、次いで洗浄緩衝液で１回洗浄する。抗体又は対照をブロッキング緩衝液中１００ｎＭまでの濃度で添加し、４℃で一晩インキュベートする。４回の洗浄工程の後、ブロッキング緩衝液（１ ＲＴ）中の１：１０，０００希釈での抗ヒト－ＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）の添加、その後の６回の洗浄及びＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）中でのインキュベーションによって構築物を検出する。１Ｎ ＨＣｌで発色を停止させた後、吸光度を４５０ｎｍで読み取る。
【0399】
実施例４
本発明による抗体を使用した間接免疫蛍光法によるアルツハイマー病患者の脳切片からの天然ヒトβ－アミロイド斑の染色
抗体は、間接免疫蛍光を使用する免疫組織化学分析によって、天然のヒトβアミロイド斑を染色する能力について試験することができる。真のヒトβ－アミロイド斑の特異的かつ高感度の染色を実証することができる。アルツハイマー病と陽性に診断された患者から死後に得られた側頭皮質からの非固定組織のクライオスタット切片を間接免疫蛍光法によって標識する。２工程インキュベーションを使用して、Ａｌｅｘａ５５５色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）にコンジュゲートさせた親和性精製ヤギ抗ヒト（ＧＡＨ５５５）ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）によって明らかにされる結合二重特異性抗体を検出する。対照は、無関係のヒトＩｇＧ１抗体（Ｓｉｇｍａ）及び二次抗体のみを含むことができ、これらはすべて陰性結果を与えるはずである。
本発明による抗体を使用した間接免疫蛍光法によるアルツハイマー病患者の脳切片からの天然ヒトβ－アミロイド斑の染色
抗体は、間接免疫蛍光を使用する免疫組織化学分析によって、天然のヒトβアミロイド斑を染色する能力について試験することができる。真のヒトβ－アミロイド斑の特異的かつ高感度の染色を実証することができる。アルツハイマー病と陽性に診断された患者から死後に得られた側頭皮質からの非固定組織のクライオスタット切片を間接免疫蛍光法によって標識する。２工程インキュベーションを使用して、Ａｌｅｘａ５５５色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）にコンジュゲートさせた親和性精製ヤギ抗ヒト（ＧＡＨ５５５）ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）によって明らかにされる結合二重特異性抗体を検出する。対照は、無関係のヒトＩｇＧ１抗体（Ｓｉｇｍａ）及び二次抗体のみを含むことができ、これらはすべて陰性結果を与えるはずである。
【0400】
実施例５
アルツハイマー病のマウスモデルにおける本発明による抗体によるインビボβ－アミロイド斑装飾
抗体を、インビボでβ－アミロイド斑を免疫装飾するそれらの能力について、ＡＤ関連アミロイドーシスのマウスモデルであるＡＰＰ／ＰＳ２二重トランスジェニックマウス（Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２３（２００３）８９８９－９００３）において試験した。これにより、脳浸透及びアミロイド－βプラークへの結合の程度の評価が可能になった。抗体を異なる用量で投与し、６日後、動物にリン酸緩衝食塩水を灌流し、脳をドライアイス上で凍結し、凍結切片化のために調製する。
アルツハイマー病のマウスモデルにおける本発明による抗体によるインビボβ－アミロイド斑装飾
抗体を、インビボでβ－アミロイド斑を免疫装飾するそれらの能力について、ＡＤ関連アミロイドーシスのマウスモデルであるＡＰＰ／ＰＳ２二重トランスジェニックマウス（Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２３（２００３）８９８９－９００３）において試験した。これにより、脳浸透及びアミロイド－βプラークへの結合の程度の評価が可能になった。抗体を異なる用量で投与し、６日後、動物にリン酸緩衝食塩水を灌流し、脳をドライアイス上で凍結し、凍結切片化のために調製する。
【0401】
β－アミロイド斑に結合した抗体の存在を、１５μｇ／ｍｌの濃度でＡｌｅｘａ５５５色素（ＧＡＨ５５５）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）にコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を用いた単一標識間接免疫蛍光法のいずれかにより、室温で１時間、非固定クライオスタット切片を用いて評価した。アミロイド斑の対比染色は、０．５μｇ／ｍｌの濃度でＡｌｅｘａ４８８にコンジュゲートしたＡβに対するマウスモノクローナル抗体であるＢＡＰ－２と室温で１時間インキュベートすることによって行うことができる。スライドを蛍光封入剤（Ｓ３０２３ Ｄａｋｏ）で包埋し、共焦点レーザー顕微鏡法によって画像化を行う。
【0402】
実施例６
ＦｃＲｎ及びヘパリンのアフィニティークロマトグラフィー
ＦｃＲｎアフィニティーカラムの調製
ＨＥＫ２９３細胞中でのＦｃＲｎの発現
ＦｃＲｎ及びβ－２－マイクログロブリンのコーディング配列を含有する２つのプラスミドのＨＥＫ２９３細胞へのトランスフェクションによりＦｃＲｎを一過的に発現させた。トランスフェクトされた細胞をシェーカーフラスコ中、３６．５℃、１２０ｒｐｍ（シェーカー振幅５ｃｍ）、８０％の湿度及び７％のＣＯ２で培養した。細胞を２～３日毎に３～４＊１０５細胞／ｍｌの密度に希釈した。
ＦｃＲｎ及びヘパリンのアフィニティークロマトグラフィー
ＦｃＲｎアフィニティーカラムの調製
ＨＥＫ２９３細胞中でのＦｃＲｎの発現
ＦｃＲｎ及びβ－２－マイクログロブリンのコーディング配列を含有する２つのプラスミドのＨＥＫ２９３細胞へのトランスフェクションによりＦｃＲｎを一過的に発現させた。トランスフェクトされた細胞をシェーカーフラスコ中、３６．５℃、１２０ｒｐｍ（シェーカー振幅５ｃｍ）、８０％の湿度及び７％のＣＯ２で培養した。細胞を２～３日毎に３～４＊１０５細胞／ｍｌの密度に希釈した。
【0403】
一過性発現のために、１４ｌステンレス鋼バイオリアクターを３６．５℃、ｐＨ７．０±０．２、ｐＯ２ ３５％（Ｎ２及び空気でのガス処理、総気体流れ２００ｍｌ分－１）並びに１００～４００ｒｐｍの撹拌器速度において８ｌの培養体積と共に開始させた。細胞密度が２０＊１０５細胞／ｍｌに達した時に、１０ｍｇのプラスミドＤＮＡ（等モル量の両方のプラスミド）を４００ｍｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に希釈した。２０ｍｌの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をこの混合物に加え、これを次に室温で１５分間インキュベートした後、発酵槽に移した。翌日から、細胞に連続モードで栄養分を供給した。フィード溶液を５００ｍｌ／日の速度で加え、必要に応じてグルコースを加えて２ｇ／ｌより高いレベルを保った。４０００ｒｐｍで９０分間、１ｌバケツを用いるスイングヘッド遠心分離機を使用してトランスフェクションの７日後に上清を回収した。上清（１３Ｌ）をＳａｒｔｏｂｒａｎ Ｐフィルタ（０．４５μｍ＋０．２μｍ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）により除去し、ＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体をそこから精製した。
【0404】
新生児Ｆｃ受容体のビオチン化
３ｍｇのＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体を１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含有する５．３ｍＬの２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液に溶解／希釈し、２５０μＬのＰＢＳ及び１タブレット完全プロテアーゼ阻害剤（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＵＬＴＲＡ Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）に加えた。製造者の指示（Ｂｕｌｋ ＢＩＲＡ、Ａｖｉｄｉｔｙ ＬＬＣ）に従ってＡｖｉｄｉｔｙからのビオチン化キットを使用してＦｃＲｎをビオチン化した。ビオチン化反応を室温で終夜行った。
３ｍｇのＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体を１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含有する５．３ｍＬの２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム緩衝液に溶解／希釈し、２５０μＬのＰＢＳ及び１タブレット完全プロテアーゼ阻害剤（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＵＬＴＲＡ Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）に加えた。製造者の指示（Ｂｕｌｋ ＢＩＲＡ、Ａｖｉｄｉｔｙ ＬＬＣ）に従ってＡｖｉｄｉｔｙからのビオチン化キットを使用してＦｃＲｎをビオチン化した。ビオチン化反応を室温で終夜行った。
【0405】
ビオチン化ＦｃＲｎを１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ５．５を含む２０ｍＭのＭＥＳ緩衝液（緩衝液Ａ）に対して４℃で終夜透析して過剰なビオチンを除去した。
【0406】
ストレプトアビジンセファロースへの連結
ストレプトアビジンセファロースへの連結のために、１ｍＬのストレプトアビジンセファロース（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）をビオチン化及び透析されたＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体に加え、４℃で一晩インキュベートした。ＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体誘導体化セファロースを４．６ｍｍ×５０ｍｍのクロマトグラフィーカラム（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ）に充填した。カラムを８０％の緩衝液Ａ及び２０％の緩衝液Ｂ（２０ｍＭのＴｒｉｓ（ヒドロキシメチル）アミノメタンｐＨ８．８、１４０ｍＭのＮａＣｌ）中で貯蔵した。
ストレプトアビジンセファロースへの連結のために、１ｍＬのストレプトアビジンセファロース（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）をビオチン化及び透析されたＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体に加え、４℃で一晩インキュベートした。ＦｃＲｎβ－２－マイクログロブリン複合体誘導体化セファロースを４．６ｍｍ×５０ｍｍのクロマトグラフィーカラム（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ）に充填した。カラムを８０％の緩衝液Ａ及び２０％の緩衝液Ｂ（２０ｍＭのＴｒｉｓ（ヒドロキシメチル）アミノメタンｐＨ８．８、１４０ｍＭのＮａＣｌ）中で貯蔵した。
【0407】
ＦｃＲｎアフィニティーカラム及びｐＨ勾配を使用するクロマトグラフィー
条件：
カラム寸法：５０ｍｍｘ４．６ｍｍ
ローディング：３０μｇのサンプル
緩衝液Ａ：２０ｍＭのＭＥＳ、１４０ｍＭのＮａＣｌを含有、ｐＨ５．５に調整
緩衝液Ｂ：２０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ、１４０ｍＭのＮａＣｌを含有、ｐＨ８．８に調整
条件：
カラム寸法：５０ｍｍｘ４．６ｍｍ
ローディング：３０μｇのサンプル
緩衝液Ａ：２０ｍＭのＭＥＳ、１４０ｍＭのＮａＣｌを含有、ｐＨ５．５に調整
緩衝液Ｂ：２０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ、１４０ｍＭのＮａＣｌを含有、ｐＨ８．８に調整
【0408】
３０μｇのサンプルを、緩衝液Ａで平衡化したＦｃＲｎアフィニティーカラムに適用した。０．５ｍＬ／分の流速での２０％の緩衝液Ｂ中の１０分の洗浄工程後に、７０分にわたる２０％から７０％への緩衝液Ｂの線形勾配を用いて溶出を行った。２８０ｎｍの波長におけるＵＶ光吸収を検出のために使用した。各実施後に２０％の緩衝液Ｂを使用してカラムを１０分間再生させた。
【0409】
相対保持時間の算出のために、（Ｂｅｒｔｏｌｅｔｔｉ－Ｃｉａｒｌｅｔ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（２００９）１８７８－１８８２）に従って０．０２％の過酸化水素を用いて１８時間酸化させた標準サンプル（抗Ｈｅｒ３抗体（配列番号５２及び５３）をシークエンスの開始時及び各１０回のサンプル注入後に流した。
【0410】
簡潔に述べれば、１０ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ７．０中の抗体（９ｍｇ／ｍＬ）を０．０２％の最終濃度までＨ２Ｏ２と混合し、室温で１８時間インキュベートした。反応をクエンチするために、予備冷却された１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５．０にサンプルを徹底的に透析した。
【0411】
相対保持時間は以下の式に従って算出した。
ｔ＿（ｒｅｌ，ｉ）＝（ｔ＿ｉ－ｔ＿ピーク２）／（ｔ＿ピーク３－ｔ＿ピーク２）
ｔ＿（ｒｅｌ，ｉ）＝（ｔ＿ｉ－ｔ＿ピーク２）／（ｔ＿ピーク３－ｔ＿ピーク２）
【0412】
ピークの定義については、国際公開第２０１８／１９７５３３号の図１を参照されたい。
【0413】
ヘパリンアフィニティーカラム及びｐＨ勾配を使用するクロマトグラフィー
条件：
カラム寸法：５０ｍｍｘ５．０ｍｍ
ローディング：２０～５０μｇのサンプル
緩衝液Ａ：５０ｍＭのＴＲＩＳ ｐＨ７．４
緩衝液Ｂ：５０ｍＭのＴＲＩＳ ｐＨ７．４、１０００ｍＭのＮａＣｌ
条件：
カラム寸法：５０ｍｍｘ５．０ｍｍ
ローディング：２０～５０μｇのサンプル
緩衝液Ａ：５０ｍＭのＴＲＩＳ ｐＨ７．４
緩衝液Ｂ：５０ｍＭのＴＲＩＳ ｐＨ７．４、１０００ｍＭのＮａＣｌ
【0414】
低塩緩衝液（≦２５ｍＭのイオン強度）中の２０～５０μｇのタンパク質サンプルを、室温で緩衝液Ａを用いて予備平衡化されたＴＳＫｇｅｌ Ｈｅｐａｒｉｎ－５ＰＷ Ｇｌａｓｓ ｃｏｌｕｍｎ、５．０×５０ｍｍ（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｔｏｋｙｏ／Ｊａｐａｎ）に適用した。０．８ｍｇ／ｍＬの流速において３２分にわたり０～１００％の緩衝液Ｂの線形勾配を用いて溶出を行った。２８０ｎｍの波長におけるＵＶ光吸収を検出のために使用した。あらゆる注入シークエンスを保持時間標準品（抗ｐＴａｕ抗体；配列番号５０及び５１）と共に開始し、それを使用して以下の式に従って相対保持時間を算出した。
ｔ＿（ｒｅｌ，ｉ）＝ｔ＿ｉ／ｔ＿ｐＴａｕ
（ｔｒｅｌ，ｉ：ピークｉの相対保持時間；ｔｉ：ピークｉの保持時間；ｔｐＴａｕ：抗ｐＴａｕ抗体ピークの保持時間）。
ｔ＿（ｒｅｌ，ｉ）＝ｔ＿ｉ／ｔ＿ｐＴａｕ
（ｔｒｅｌ，ｉ：ピークｉの相対保持時間；ｔｉ：ピークｉの保持時間；ｔｐＴａｕ：抗ｐＴａｕ抗体ピークの保持時間）。
【0415】
上述の発明を、理解を明確にする目的で、説明及び実施例によって、ある程度詳細に説明してきたが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】
【外国語明細書】