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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025026572
(43)【公開日】2025-02-21
(54)【発明の名称】ヒトネクチン－２に特異的な抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20250214BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K16/28
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024213235
(22)【出願日】2024-12-06
(62)【分割の表示】P 2021539922の分割
【原出願日】2020-01-13
(31)【優先権主張番号】62/791,808
(32)【優先日】2019-01-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】504389234
【氏名又は名称】イッサム リサーチ デベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユニバーシティー オブ エルサレム エルティーディー．
(71)【出願人】
【識別番号】518064053
【氏名又は名称】ユニバーシティー オブ リエカ ファカルティー オブ メディシン
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(72)【発明者】
【氏名】マンデルボイム，オフェル
(72)【発明者】
【氏名】ズーカーマン ピンカス
(72)【発明者】
【氏名】ヨニッチ，スティパン
(72)【発明者】
【氏名】レナック ロビス，ティハナ
(72)【発明者】
【氏名】クカン ブルリック、パオラ
(57)【要約】
【課題】ＣＤ１１２Ｒ又はＴＩＧＩＴへのネクチン２の結合を阻害するモノクローナル抗体の提供。
【解決手段】ネクチン－２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、（ｉ）配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ；あるいは（ｉｉ）配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ；を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【選択図】なし
【解決手段】ネクチン－２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、（ｉ）配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ；あるいは（ｉｉ）配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ；を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ネクチン－２に結合する抗体、または少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントであって、前記抗体または抗体フラグメントが、
（ｉ）配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または前記抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、あるいは、
（ｉｉ）配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または前記抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、を含む、抗体または抗体フラグメント。
（ｉ）配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または前記抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、あるいは、
（ｉｉ）配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または前記抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、を含む、抗体または抗体フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は免疫療法の分野にあり、ヒトタンパク質ネクチン－２（ＣＤ１１２）と結合する抗体およびそのフラグメント、これらの抗体およびフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列、ならびにこれらを産生する細胞に関する。本発明はさらに、これらの抗体およびフラグメントを含む治療用および診断用組成物、ならびにこれらを使用して疾患、特に癌を治療および診断する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
癌免疫療法は、例えば、腫瘍細胞上の抗原に特異的な抗体による、抗原提示細胞と腫瘍細胞との融合による、または抗腫瘍Ｔ細胞の特異的活性化による治療によって抗腫瘍免疫応答を生成および増強するために利用される。患者における腫瘍細胞に対して免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を動員する能力は、これまで不治であると考えられていた癌の種類および転移と戦う治療法を提供する。
【0003】
Ｔ細胞仲介免疫応答には、免疫応答の程度を制御する共刺激シグナルと共抑制シグナルとの間のバランスによって調節される複数の連続したステップが含まれる。免疫チェックポイントと呼ばれる抑制性シグナルは、自己寛容の維持および免疫介在性の二次的組織損傷の制限のために重要である。これらの抑制性シグナルは、感染または免疫誘発が解消、悪化、または持続するにつれて変化し、これらの変化はＴ細胞の応答に影響を及ぼして免疫応答を再形成する。
【0004】
免疫チェックポイントタンパク質の発現は腫瘍によって変更される。例えば、癌細胞表面でのプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）のアップレギュレーションにより、Ｔ細胞で発現するチェックポイント分子ＰＤ－１に結合することができる。これは、そうでなければ腫瘍細胞を攻撃し、腫瘍細胞が宿主免疫系を回避することを可能にし得るＴ細胞の阻害をもたらす。したがって、免疫チェックポイントは、癌に対する機能的な細胞免疫の活性化に対する重大な障壁を示す。したがって、Ｔ細胞上の阻害リガンドに特異的な拮抗抗体（例えば、ＰＤ－１）は、癌療法で使用されている免疫チェックポイントに対する標的化薬剤の例である（例えば、ニボルマブおよびペムブロリズマブ）。免疫チェックポイント分子に関する別の例は、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）である。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を含む様々な免疫細胞で発現される共抑制性分子である。ＴＩＧＩＴは、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）と、およびネクチン－２と高い親和性で結合する。
【0005】
ネクチン－２は、ポリオウイルス受容体関連タンパク質２、ポリオウイルス受容体様２、ＣＤ１１２、またはＰＲＲ－２とも呼ばれ、２つのＩｇ様Ｃ２型ドメインとＩｇ様Ｖ型ドメインと、を有する１回膜貫通糖タンパク質である。ネクチン－２は、細胞外マトリックス分子への細胞接着の媒介に関与し、接着結合の原形質膜成分の１つとして機能する。また、ネクチン－２は、単純ヘルペスウイルスおよび仮性狂犬病ウイルスの特定の変異株の侵入受容体としても機能し、これらのウイルスの細胞から細胞への拡散に関与している。この遺伝子の変異は、多発性硬化症の重症度の違いに関連付けられている。重要なことに、ネクチン－２はＴ細胞シグナル伝達の調節因子としても機能し得る。ネクチン－２は、それが結合する受容体に応じて、Ｔ細胞機能の共刺激因子または共阻害因子のいずれかであり得る。ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）に結合すると、これは、Ｔ細胞増殖と、ＩＬ－２、およびＩＦＮγを含むサイトカイン産生とを刺激し、ＰＶＲＩＧ（ＣＤ１１２Ｒ）、および／またはＴＩＧＩＴと相互作用すると、Ｔ細胞増殖を阻害する。これらの２つの相反する相互作用は競合的である。
【0006】
ネクチン－２は、乳癌および卵巣癌を含む様々な腫瘍で過剰発現していることが示された（Ｏｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ ２０１３）。腫瘍細胞にネクチン－２が存在すると、予後不良およびＴ細胞の活性の低下をもたらす（Ｓｔａｍｍ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０１８）。
【0007】
米国特許出願第２０１７／００３７１３３号は、血液媒介性癌、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療法で使用するためのＣＤ１１２（ネクチン－２、ＰＶＲＬ２）、ＣＤ１５５（ＰＶＲ）、ガレクチン－９、ＴＩＭ－３および／またはＴＩＧＩＴに対する阻害剤を開示している。この阻害剤は抗体構築物であり得る。
【0008】
単独で、または他の薬剤と組み合わせて、腫瘍またはウイルス感染細胞を攻撃するために免疫系の細胞を増強し得る、追加のより効果的で、特異的で、安全および／または安定な薬剤を提供するという満たされていない必要性がある。ＣＤ１１２ＲおよびＴＩＧＩＴへのネクチン２の結合を阻害するモノクローナル抗体が、そのような薬剤であり得る。
【発明の概要】
【0009】
本発明は、ネクチン－２タンパク質（ＣＤ１１２）を認識し、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）およびＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）とのその結合を防止し、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞などのリンパ球での抑制活性を阻害する抗体およびそのフラグメントを提供する。本明細書に開示される抗ネクチン－２抗体は、癌細胞上に存在するネクチン－２に結合することができる。これらの抗体およびそのフラグメントは、ＣＤＲ配列の独自のセット、ヒトネクチン－２に対する高い親和性および高い特異性を有することによって特徴付けられ、単独療法および他の抗癌剤との併用として、腫瘍免疫回避と戦うために癌免疫療法で有用である。抗体はウイルス感染症の治療にも有用であり、癌の診断に使用することができる。本発明は、ＣＡＲ－Ｔ細胞および養子療法のためのそれらの使用方法をさらに含む。
【0010】
本明細書に記載の高親和性抗ネクチン－２抗体は、ＴＩＧＩＴ－および／またはＣＤ１１２Ｒ－ネクチン－２相互作用を遮断し、その後、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性を回復することがここで開示される。本発明の抗体は、ヒトネクチン－２に非常に特異的である。これらの特性により、本発明のモノクローナル抗体は、癌免疫療法で使用するための貴重な候補となり、より少ない副作用でより低い用量の投与を可能にする。
【0011】
有利には、本発明による抗ネクチン－２ｍＡｂは、抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ－４ｍＡｂによって誘導されるのと同様の方法でＴ細胞増殖を誘導することが見出された。いくつかの抗ネクチン－２ｍＡｂと臨床的に承認された治療用抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ４のｍＡｂとの組み合わせは、個々のｍＡｂのいずれかによって誘導される活性レベルを超える活性の有意な増加をもたらした。驚くべきことに、本明細書に記載の抗ネクチン－２ｍＡｂと抗ＰＤ－１との組み合わせのいくつかは、腫瘍細胞の死滅における相乗効果を実証した。誘導効果は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）および主にＴ細胞で示された。加えて、ネクチン－２ｍＡｂは、標的癌細胞の存在下でＮＫ細胞の活性化を誘導することができた。さらに、いくつかの抗ネクチン－２抗体は、ＤＮＡＭ－１の共刺激シグナル伝達に対して遮断効果を有さなかったため、免疫誘導シグナルに対して有害な効果を有さなかったことが開示されている。加えて、本明細書に記載される抗体は、ヒトまたはカニクイザルネクチン－２タンパク質に対して非常に特異的であることが見出された。
【0012】
本明細書に開示される抗ネクチン－２ｍＡｂは、抗癌免疫応答をさらに誘発し得る機能的重鎖（Ｆｃ）を有し得る。
【0013】
本明細書に記載の抗ネクチン－２ｍＡｂのいくつかは、免疫に依存しない方法で腫瘍細胞の生存率を低下させることができる可能性がある。
【0014】
一態様によれば、本発明は、ヒトネクチン－２に特異的に結合し、受容体ＴＩＧＩＴおよびＣＤ１１２Ｒのうちの少なくとも１つへのその結合を阻害する抗体、または少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントを提供し、該抗体は、ヒトネクチン－２に対して少なくとも１０－９Ｍの親和性を有する。
【0015】
本発明はまた、Ｔ細胞リンパ球および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とともに、癌の治療で使用するため、ヒトネクチン－２のヒトＴＩＧＩＴとの、またはＣＤ１１２Ｒとの結合を阻害することができる抗体またはその抗体フラグメントを提供し、該抗体は、ヒトネクチン－２に対して少なくとも１０－９Ｍの親和性を有する。
【0016】
いくつかの実施形態によれば、抗体は、ヒトネクチン－２に特異的に結合し、ＴＩＧＩＴおよびＣＤ１１２Ｒへのその結合を阻害する。
【0017】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、および
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、および
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
【0018】
所与の抗体分子のＣＤＲ配列を決定するために当技術分野で知られているいくつかの方法があるが、標準的な明確な方法はない。抗体の重鎖および軽鎖可変領域からのＣＤＲ配列の決定は当技術分野で知られている任意の方法に従って行うことができ、限定されないが、ＫＡＢＡＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＩＭＧＴとして知られている方法が含まれる。選択されたＣＤＲのセットには、２つ以上の方法で特定される配列を含み得、すなわち、例えば、いくつかのＣＤＲ配列はＫＡＢＡＴを使用して決定され、いくつかはＩＭＧＴを使用する。いくつかの実施形態によれば、ｍＡｂ可変領域のＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ法を使用して決定される。
【0019】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはフラグメントは、クローン７と示されるモノクローナル抗体のＣＤＲ配列、すなわち、配列番号７に示される重鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列および配列番号８に示される軽鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列を含むか、あるいはクローン１１に記載のモノクローナル抗体、すなわち、配列番号１７に示される重鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列および配列番号１８に示される軽鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列を含む。
【0020】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＲＦＴＭＳ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0021】
ある特定の実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、（ｉ）配列ＲＦＴＭＳ（配列番号１）を含むＨＣ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含むＨＣ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）を含むＨＣ ＣＤＲ３を含む。
【0022】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【0023】
ある特定の実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、以下を含む：（ｉ）配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）を含むＬＣ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）を含むＬＣ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）を含むＨＣ ＣＤＲ３を含む。
【0024】
いくつかの特定の実施形態によれば、抗体またはフラグメントは、配列ＲＦＴＭＳ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１、配列ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２、配列ＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３、配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列ＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列ＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含むか、あるいは超可変領域（ＨＶＲ）配列における５％以下のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を含むそれらの類似体を含む。
【0025】
いくつかの特定の実施形態によれば、抗体またはフラグメントは、
ｉ．配列番号１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
ｖｉ．配列番号６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
ｉ．配列番号１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
ｖｉ．配列番号６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
【0026】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に示される重鎖可変領域、あるいは重鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体または誘導体を含む。
【0027】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、配列番号８に示される軽鎖可変領域、または軽鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体を含む。
【0028】
特定の実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に示される配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８に示される配列を有する軽鎖可変領域、あるいは軽鎖および／または重鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体を含む。
【0029】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはフラグメントは、クローン１１に示されるモノクローナル抗体のＣＤＲ配列、すなわち、配列番号１７に示される重鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列、および配列番号１８に示される軽鎖可変領域に含まれる３つのＣＤＲ配列を含む。
【0030】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＳＹＷＩＨ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【0031】
ある特定の実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、（ｉ）配列ＳＹＷＩＨ（配列番号１１）を含むＨＣ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）を含むＨＣ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）を含むＨＣ ＣＤＲ３を含む。
【0032】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、配列ＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【0033】
ある特定の実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、（ｉ）配列ＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）を含むＬＣ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）を含むＬＣ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）を含むＨＣ ＣＤＲ３を含む。
【0034】
いくつかの特定の実施形態によれば、抗体またはフラグメントは、配列ＳＹＷＩＨ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ１、配列ＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）を含む重鎖ＣＤＲ２、配列ＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ３、配列ＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列ＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含むか、あるいは超可変領域（ＨＶＲ）配列における５％以下のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を含むそれらの類似体を含む。
【0035】
いくつかの特定の実施形態によれば、抗体またはフラグメントは、
ｉ．配列番号１１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号１２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号１３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号１４で示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号１５で示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
ｖｉ．配列番号１６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
ｉ．配列番号１１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号１２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号１３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号１４で示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号１５で示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
ｖｉ．配列番号１６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
【0036】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、配列番号１７に示される重鎖可変領域、あるいは重鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体または誘導体を含む。
【0037】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、配列番号１８に示される軽鎖可変領域、または軽鎖可変領域配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体を含む。
【0038】
特定の実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、配列番号１７に示される配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８に示される配列を有する軽鎖可変領域、あるいは軽鎖および／または重鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体を含む。
【0039】
いくつかの実施形態によれば、抗体は、単離されたモノクローナル抗体である。
【0040】
いくつかの実施形態によれば、抗体またはそのフラグメントは、少なくとも５×１０－９Ｍの親和性でヒトネクチン－２を認識する。他の実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、５×１０－９Ｍ、１０－９Ｍ、５×１０－１０Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１１Ｍ、またはさらにはより高い親和性でヒトネクチン－２と結合する。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、１０－９Ｍ～１０－１１Ｍの親和性でヒトネクチン－２と結合する。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、１０－９Ｍ～１０－１０Ｍの親和性でヒトネクチン－２と結合する。いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、１０－１０Ｍ～１０－１１Ｍの親和性でヒトネクチン－２と結合する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0041】
上記の単離された抗体およびフラグメントの類似体ならびに誘導体もまた、本発明の範囲内である。
【0042】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメント類似体は、参照抗体の配列の超可変領域と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0043】
ある特定の実施形態によれば、単離された抗体またはそのフラグメントの類似体または誘導体は、参照抗体の配列の可変領域と少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の配列同一性を有する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0044】
いくつかの実施形態によれば、本発明による抗体または抗体フラグメントは、配列番号７または配列番号１７に示される重鎖可変領域、または該配列と少なくとも９５％の配列類似性を有する類似体を含む。
【0045】
いくつかの実施形態によれば、本発明による抗体または抗体フラグメントは、配列番号８または配列番号１８に示される軽鎖可変領域、または該配列と少なくとも９５％の配列類似性を有する類似体を含む。
【0046】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは重鎖および軽鎖を含み、ここでは（ｉ）重鎖は配列番号７を含み、軽鎖は配列番号８を含むか、または（ｉｉ）重鎖は配列番号１７を含み、軽鎖は配列番号１８を含む。当該重鎖または軽鎖と少なくとも９５％の配列類似性を有する抗体またはフラグメントの類似体も含まれる。
【0047】
いくつかの実施形態によれば、類似体は上記の抗体軽鎖または重鎖可変領域と少なくとも９６、９７、９８、または９９％の配列類似性を有する。いくつかの実施形態によれば、類似体は超可変領域のうちの１つ以上のＣＤＲ配列、すなわち、配列番号１、２、３、４、５、６、１１、１２、１３、１４、１５、および１６に示されるＣＤＲ配列のいずれか１つに、１つだけのアミノ酸置換、欠失、または付加を含む。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、アミノ酸置換は保存的置換である。
【0048】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、上記で定められる軽鎖および重鎖領域を有する超可変領域（ＨＶＲ）を含み、１、２、３、４、または５個のアミノ酸が置換、欠失、および／または付加された。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0049】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、上記で定められる軽鎖および重鎖領域を有するＨＶＲを含み、１個のアミノ酸が置換された。特定の実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、上記で定められるＣＤＲを含み、１個のアミノ酸が置換された。
【0050】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセット、および
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、からなる群から選択されるＣＤＲのセットを含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセット、および
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、からなる群から選択されるＣＤＲのセットを含む。
【0051】
本発明はまた、重鎖および軽鎖を含む、抗体またはその結合フラグメントを提供し、該鎖は、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列のセット含み、該セットは
ｉ．配列番号７および８、ならびに
ｉｉ．配列番号１７および１８、からなる群から選択される。
ｉ．配列番号７および８、ならびに
ｉｉ．配列番号１７および１８、からなる群から選択される。
【0052】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、ヒトネクチン－２がＴ細胞またはＮＫ細胞で発現されるＴＩＧＩＴまたはＣＤ１１２Ｒと結合することを阻害することができる。
【0053】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、ヒトネクチン－２がＴ細胞またはＮＫ細胞で発現されるＴＩＧＩＴまたはＣＤ１１２Ｒと結合することを阻害することができる。
【0054】
特定の実施形態によれば、抗体は、キメラ抗体および少なくとも抗体の抗原結合部分を含む抗体フラグメントからなる群から選択される。特定の実施形態によれば、抗体はキメラ抗体である。さらに他の実施形態によれば、キメラ抗体はヒト定常領域を含んだ。特定の実施形態によれば、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、ｄＡｂ、単離されたＣＤＲ領域、単鎖可変領域（ｓｃＦＶ）、単鎖抗体（ｓｃａｂ）、「二重特異的抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）」、および「線状抗体」からなる群から選択される。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0055】
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗体フラグメントは、マウスＩｇＧ１、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＧ４からなる群から選択される定常領域を含む。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0056】
いくつかの特定の実施形態によれば、モノクローナル抗体は、キメラモノクローナル抗体である。
【0057】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体は、ヒト由来の定常領域を含む。
【0058】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＧ４からなる群から選択される。
【0059】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ２からなる群から選択される。
【0060】
いくつかの実施形態によれば、上記で説明される抗体またはそのフラグメントを含むコンジュゲートが提供される。
【0061】
本発明による抗体またはそのフラグメントは、細胞毒性部分、放射性部分、または識別可能な部分に結合され得る。
【0062】
ヒトネクチン－２に対して高い親和性および特異性を有する抗体をコードするポリヌクレオチド配列、ならびにこれらのポリヌクレオチド配列を有するベクターおよび宿主細胞が、本発明の別の態様に従って提供される。
【0063】
いくつかの実施形態によれば、上記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。
【0064】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域を有する抗体（本明細書ではクローン７として識別される）か、または（ｉｉ）配列番号１７の重鎖可変領域および配列番号１８の軽鎖可変領域を有する抗体（本明細書ではクローン１１として識別される）と結合するヒトネクチン－２タンパク質内のエピトープと結合することができる抗体または抗体フラグメントもしくは鎖をコードする。
【0065】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号７および配列番号８と、（ｉｉ）配列番号１７および配列番号１８と、からなる群から選択される配列に示される配列を含む抗体または抗体フラグメントもしくは鎖をコードする。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0066】
さらにいくつかの実施形態によれば、本発明によるポリヌクレオチド配列は、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセットであるか、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセットを含む、抗体または抗体フラグメントもしくは鎖をコードする。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセットであるか、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセットを含む、抗体または抗体フラグメントもしくは鎖をコードする。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0067】
いくつかの実施形態によれば、上記で定められるポリヌクレオチド配列は、抗体、少なくとも抗原結合部分を含む抗体フラグメント、および当該抗体または抗体フラグメントを含む抗体コンジュゲートからなる群から選択される分子をコードする。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0068】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、配列番号７に示される配列、または少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含むモノクローナル抗体重鎖可変領域をコードする。
【0069】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１７に示される配列、または少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含むモノクローナル抗体重鎖可変領域をコードする。
【0070】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、配列番号８に示される配列、または少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含むモノクローナル抗体軽鎖可変領域をコードする。
【0071】
いくつかの実施形態によれば、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１８に示される配列、または少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含むモノクローナル抗体軽鎖可変領域をコードする。
【0072】
本発明は、いくつかの実施形態によれば、上記に開示された少なくとも１つのポリヌクレオチド配列によってコードされる少なくとも１つの配列を含むポリペプチドを提供する。
【0073】
さらなる態様では、本発明は、本発明による少なくとも１つの抗体鎖またはそのフラグメントをコードする核酸分子を含む核酸構築体を提供する。いくつかの実施形態によれば、核酸構築体はプラスミドである。
【0074】
いくつかの実施形態によれば、プラスミドは、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９および配列番号２０からなる群から選択される配列に示される、少なくとも１つのポリヌクレオチド配列を含む。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0075】
さらに別の態様では、本発明は、上記で定められる特定のＣＤＲ配列および／または特定の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗体フラグメントを産生することができる細胞を提供する。
【0076】
いくつかの実施形態によれば、細胞が提供され、上記で開示される少なくとも１つのポリヌクレオチド配列を含む。
【0077】
いくつかの実施形態によれば、細胞はハイブリドーマ細胞においてモノクローナル抗体を産生する。
【0078】
本発明は、別の態様によれば、有効成分として、ヒトネクチン－２を高い親和性および特異性で認識する少なくとも１つの抗体、抗体フラグメント、またはそのコンジュゲート、および任意に少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、塩、または担体を含む医薬組成物を提供し、該少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントは、ヒトネクチン－２のヒトＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒとの結合を阻害することができる。
【0079】
いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物は、上記に開示された可変領域およびＣＤＲ配列を有するクローン７およびクローン１１からなる群から選択されるモノクローナル抗体に結合するヒトネクチン－２タンパク質内のエピトープと結合することができるモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含む。
【0080】
いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物は、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む、少なくとも１つのモノクローナル抗体を含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む、少なくとも１つのモノクローナル抗体を含む。
【0081】
各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0082】
いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物は、配列番号７、および配列番号１７からなる群から選択される配列を有する重鎖可変領域を含む抗体またはそのフラグメントを含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0083】
いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物は、配列番号８、および配列番号１８からなる群から選択される配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはそのフラグメントを含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0084】
特定の実施形態によれば、本医薬組成物は、配列番号７に示される配列を有する重鎖可変領域および配列番号８で示される配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはそのフラグメントを含む。
【0085】
特定の実施形態によれば、本医薬組成物は、配列番号１７に示される配列を有する重鎖可変領域および配列番号１８で示される配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはそのフラグメントを含む。
【0086】
本発明の抗体の単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）分子も提供される。ｓｃＦｖ分子は、１つのポリペプチド鎖で発現される抗体の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態によれば、本発明は、抗ネクチン－２抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むｓｃＦｖ分子を提供する。ある特定の実施形態によれば、ｓｃＦｖは、２つの可変領域の間にヒンジ領域を含む。
【0087】
いくつかの実施形態によれば、ｓｃＦＶ配列は、配列番号２２、配列番号２４に示されるか、または該配列と少なくとも８５％の配列類似性を有するそれらの類似体である。いくつかの実施形態によれば、ｓｃＦｖ類似体は、配列番号２２および配列番号２４から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0088】
ネクチン－２と結合することができる細胞外部分（結合ドメイン）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が本発明の別の態様に従って提供される。
【0089】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、本明細書で説明された提供される抗体またはそのフラグメントのいずれかを含む細胞外部分を含む。
【0090】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、および
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む、ネクチン－２結合部位を含む。
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、および
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む、ネクチン－２結合部位を含む。
【0091】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセット、および
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、からなる群から選択されるＣＤＲセットを含むネクチン－２結合部位を含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセット、および
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、からなる群から選択されるＣＤＲセットを含むネクチン－２結合部位を含む。
【0092】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、配列番号２２または２４を含む抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。
【0093】
いくつかの実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたリンパ球が提供される。
【0094】
いくつかの実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞が提供され、ＣＡＲ－Ｔと表示される。ある特定の実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたＮＫ細胞が提供され、ＣＡＲ－ＮＫと表示される。
【0095】
いくつかの実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたリンパ球の集団が提供される。特定の実施形態によれば、本明細書に記載のＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞またはＮＫ細胞の集団が提供される。
【0096】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、本明細書で説明される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単鎖可変領域（ｓｃＦＶ）を含む。
【0097】
本明細書で説明される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単鎖可変領域（ｓｃＦＶ）もまた、本発明に従って提供される。ある特定の実施形態によれば、可変領域の間にヒンジ領域がある。
【0098】
いくつかの実施形態によれば、ｓｃＦＶ配列は、配列番号２２、配列番号２４に示されるか、または該配列と少なくとも８５％の配列類似性を有するそれらの類似体である。
【0099】
本発明はさらに、いくつかの実施形態において、配列番号２１または配列番号２３に示される配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを提供する。
【0100】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ｓｃＦｖ配列、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζ（ＣＤ３Ｚ、Ｚｅｔｔａ）ドメインからなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質ドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ｓｃＦｖドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ２８ ＴＭドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ３Ｚドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、４１ＢＢドメインを含む。特定の実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインを含む。
【0101】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、本明細書に開示される抗体のネクチン－２結合部位を含むｓｃＦｖ配列と、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインからなる群から選択される少なくとも１つのドメインと、を含む。特定の実施形態によれば、ＣＡＲは、本明細書に開示される抗体のネクチン－２結合部位を含むｓｃＦｖ配列、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインを含む。
【0102】
特定の実施形態によれば、配列番号２２、配列番号２４からなる群から選択されるｓｃＦｖ配列、または該配列のいずれかと少なくとも８５％の配列類似性を有するその類似体、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインを発現する操作されたＴ細胞が提供される。
【0103】
いくつかのの実施形態によれば、配列番号２２、配列番号２４からなる群から選択されるｓｃＦｖ配列、または該配列のいずれかと少なくとも８５％の配列類似性を有するその類似体、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインを発現するＴ細胞を含むＴ細胞の集団が提供される。
【0104】
一態様によれば、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲを含む治療有効量の少なくとも１つのリンパ球を対象に投与することを含む、該対象における癌を治療する方法を提供する。
【0105】
また、ＮＫ細胞上に発現されるＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒとのネクチン－２の結合を阻害することによってＮＫ細胞毒性を回復することに使用するために、本発明による少なくとも１つの抗体、抗体フラグメント、または抗体コンジュゲートを含む医薬組成物が提供される。
【0106】
他の実施形態によれば、抗体、抗体フラグメント、または抗体コンジュゲートは、Ｔ細胞上に発現されるＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒとのヒトネクチン－２の結合を阻害することができる。
【0107】
いくつかの実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、癌免疫療法で、または免疫応答を増強することに使用するためのものである。
【0108】
いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物はさらにＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒを発現するヒトリンパ球をさらに含む。
【0109】
いくつかの実施形態によれば、ヒトリンパ球は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ細胞）からなる群から選択されるキラー細胞である。
【0110】
いくつかの実施形態によれば、キラー細胞は自己または同種異系である。
【0111】
いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物は、ＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒを発現する自己または同種異系ＮＫ細胞を含む。
【0112】
本発明による組成物によって治療可能な癌は、ネクチン－２を発現する任意の癌であり得る。いくつかの実施形態によれば、癌はネクチン－２を過剰発現する。本発明のいくつかの実施形態によれば、癌は転移性癌である。いくつかの実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、転移の形成または分布を阻害すること、または対象における転移の総数を減少させることに使用するためのものである。
【0113】
本発明のいくつかの実施形態によれば、癌は、黒色腫、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、結腸直腸癌、結腸癌、子宮頸癌、腎臓癌、肺癌、甲状腺癌、前立腺癌、脳癌、腎癌、喉癌、喉頭癌、膀胱癌、肝癌、線維肉腫、子宮内膜細胞癌、神経膠芽細胞腫、肉腫、骨髄性、白血病、およびリンパ腫からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0114】
いくつかの実施形態によれば、癌は固形癌である。いくつかの特定の実施形態によれば、固形癌は、乳癌、肺癌、膀胱癌、膵臓癌、および卵巣癌からなる群から選択される。
【0115】
いくつかの実施形態によれば、固形腫瘍は、ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫによって治療される。特定の実施形態によれば、固形腫瘍は、ＣＡＲ－Ｔによって治療される。追加の実施形態によれば、血液癌は、ＣＡＲ－ＮＫまたはＣＡＲ－Ｔ細胞で治療される。特定の実施形態によれば、血液癌は、ＣＡＲ－ＮＫ細胞で治療される。
【0116】
いくつかの実施形態によれば、癌は低悪性度神経膠腫である。いくつかの実施形態によれば、癌は腎臓腎明細胞癌（ＫＩＲＣ）である。いくつかの実施形態によれば、癌は肺腺癌である。
【0117】
ある特定の実施形態によれば、癌は、黒色腫、乳癌、大腸直腸癌、腎臓癌、肺癌、前立腺癌、および脳癌からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0118】
他の実施形態によれば、癌は血液癌である。いくつかの実施形態によれば、本医薬組成物は癌の治療に使用する場合、ヒトリンパ球を伴う。
【0119】
いくつかの実施形態によれば、ヒトリンパ球は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞からなる群から選択されるキラー細胞である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0120】
いくつかの実施形態によれば、キラー細胞は自己または同種異系である。
【0121】
いくつかの実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、ウイルス感染を防止または治療することに使用するためのものである。
【0122】
さらに別の態様によれば、本発明は、本明細書で定められるモノクローナル抗体または抗体フラグメントを使用することによって、ヒトネクチン－２のＴＩＧＩＴまたはＣＤ１１２Ｒとの結合を阻害する方法を提供する。
【0123】
追加の態様によれば、本発明は、免疫応答を増強するための方法を、それを必要とする対象において提供し、該対象に、治療有効量の、本明細書に記載される抗体、抗体フラグメント、または抗体コンジュゲートを投与することを含む。
【0124】
さらに別の態様によれば、本発明は、癌を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、ヒトネクチン－２を高い親和性および特異性で認識してそのリガンドとのその結合を阻害することができる、少なくとも１つの抗体、その抗体フラグメントまたはコンジュゲートを治療有効量含む医薬組成物を投与することを含む。
【0125】
本発明のいくつかの実施形態によれば、治療有効量は、対象における腫瘍サイズまたは転移数の減少をもたらす。
【0126】
いくつかの実施形態によれば、癌を治療する方法は、少なくとも１つの追加の抗癌療法を投与または実施することを含む。ある特定の実施形態によれば、追加の抗癌療法は、手術、化学療法、放射線療法、または免疫療法である。
【0127】
いくつかの実施形態によれば、癌を治療する方法は、ヒトネクチン－２を高い親和性および特異性で認識する抗体および追加の抗癌剤の投与を含む。いくつかの実施形態によれば、追加の抗癌剤は、免疫調節剤、活性化リンパ球細胞、キナーゼ阻害剤、および化学療法剤からなる群から選択される。
【0128】
他の実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、ヒトネクチン－２以外の抗原と結合する抗体、抗体フラグメント、または抗体コンジュゲートである。
【0129】
いくつかの実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、免疫チェックポイント分子に対する抗体である。いくつかの実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、ヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２、癌胚性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＣＴＬＡ－４、ＮＫＧ２Ａ、ＧＩＴＲ、ならびにその他のチェックポイント分子またはそれらの組み合わせからなる群から選択される免疫チェックポイント分子に対する抗体である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。ある特定の実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、ＰＤ－１に対する抗体である。いくつかの実施形態によれば、追加の免疫調節因子は、ＣＴＬＡ－４に対する抗体である。
【0130】
いくつかの実施形態によれば、抗癌剤は、アービタックス（ｅｒｂｉｔｕｘ）、シタラビン、フルダラビン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メトトレキサート、チオグアニン、ゲムシタビン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、カルムスチン、ロムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シスプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、チオテパ、ダカルバジン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、エトポシド、テニポシド、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0131】
いくつかの実施形態によれば、抗癌剤は上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤である。いくつかの実施形態によれば、ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、およびネシツムマブ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（登録商標））からなる群から選択される。いくつかの実施形態によれば、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））である。
【0132】
本発明のいくつかの実施形態によれば、対象はヒト対象である。
【0133】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本使用はさらに、免疫共阻害受容体の活性または発現を下方調節する薬剤の使用を含む。
【0134】
本発明のいくつかの実施形態によれば、免疫細胞はＴ細胞である。
【0135】
本発明のいくつかの実施形態によれば、免疫共阻害受容体は、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＢＹ５５（ＣＤ １６０）、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ１０、および２Ｂ４からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0136】
一態様によれば、本発明は、免疫系の機能および／または活性を調節するための方法を提供し、ネクチン－２のＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒとの結合を本発明による抗体を使用して調節することを含む。
【0137】
いくつかの実施形態によれば、癌を治療する方法は、対象における転移の形成、増殖、または拡散を防止または低減することを含む。
【0138】
いくつかの実施形態によれば、癌を治療する方法は、それを必要とする対象に、ヒトネクチン－２のヒトＴＩＧＩＴおよび／またはＣＤ１１２Ｒとの結合を阻害することができる抗体またはその抗体フラグメントを含む医薬組成物を投与し、さらに該対象のヒトリンパ球を投与することを含む。
【0139】
いくつかの実施形態によれば、ヒトリンパ球は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞からなる群から選択されるキラー細胞である。
【0140】
いくつかの実施形態によれば、キラー細胞は自己または同種異系である。
【0141】
本発明はまた、ウイルス感染を防止または治療する方法を提供し、対象にヒトネクチン－２に特異的な少なくとも１つの抗体、または少なくとも抗原結合ドメインを含むそのフラグメントを投与することを含み、該ｍＡｂまたはそのフラグメントはネクチン－２のＴＩＧＩＴまたはＣＤ１１２Ｒとの結合を阻害することができる。
【0142】
一態様によれば、本発明は、対象における癌を診断または予後診断する方法を提供し、本方法は、該対象の生物学的試料におけるネクチン－２の発現レベルを、本明細書で説明される少なくとも１つの抗体を使用して決定することを含む。
【0143】
本発明はさらに、別の態様によれば、試料中のネクチン－２を決定または定量化する方法を含み、本方法は生物学的試料を抗体または抗体フラグメントと接触させることと、複合体形成のレベルを測定することと、を含み、抗体または抗体フラグメントは、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む。
【0144】
決定および定量化する方法は、いくつかの実施形態に従ってインビトロまたはエクスビボで実施され得るか、またはネクチン－２の発現と関連する状態を診断することに使用され得る。本発明による抗体はまた、スクリーニング方法を構成するために使用され得る。例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ならびにＩＨＣまたはＦＡＣＳなどの方法は、本抗体および当技術分野で知られている方法を使用して分泌性または細胞関連ポリペプチドのレベルを測定するために構築することができる。
【0145】
いくつかの実施形態によれば、細胞で発現されるか、または生体媒質に分泌されるネクチン－２の存在を検出または定量化するための方法は、
ｉ．試料をヒトネクチン－２に特異的な抗体または少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントとともにインキュベーションする工程と、
ｉｉ．結合したネクチン－２を検出可能なプローブを使用して検出する工程と、を含む。
ｉ．試料をヒトネクチン－２に特異的な抗体または少なくとも抗原結合部分を含むその抗体フラグメントとともにインキュベーションする工程と、
ｉｉ．結合したネクチン－２を検出可能なプローブを使用して検出する工程と、を含む。
【0146】
いくつかの実施形態によれば、本方法はさらに、
ｉｉｉ．（ｉｉ）の量を、ネクチン－２の既知量を含む参照試料から得られる標準曲線と比較する工程と、
ｉｖ．試料中のネクチン－２の量を標準曲線から計算する工程と、を含む。
ｉｉｉ．（ｉｉ）の量を、ネクチン－２の既知量を含む参照試料から得られる標準曲線と比較する工程と、
ｉｖ．試料中のネクチン－２の量を標準曲線から計算する工程と、を含む。
【0147】
いくつかの特定の実施形態によれば、試料は体液である。
【0148】
いくつかの実施形態によれば、本方法はインビトロまたはエクスビボで実施される。
【0149】
生物学的試料におけるネクチン－２の発現または存在を測定するためのキットもまた提供され、本発明による少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態によれば、本キットは、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む、抗体または抗体フラグメントを含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む、抗体または抗体フラグメントを含む。
【0150】
一態様によれば、本発明は癌を検出するためのキットを提供し、診断キットは本明細書で開示される抗体またはその抗体フラグメントを含む。
【0151】
いくつかの実施形態によれば、本発明は免疫関連疾患または増殖性疾患を診断、早期検出、重症度を評価、または病期分類する方法を提供し、本発明による抗体あるいはそのフラグメントまたはコンジュゲートを使用して、対象に由来する試料におけるネクチン－２の発現、濃度、または活性を決定すること、およびネクチン－２の発現または活性を、ネクチン－２の発現、濃度、または活性の参照量と比較することを含む。当該参照量は、正常な対象から、その疾患の異なる病期にある際に同一対象から採取された試料から得ることができ、または対象の大集団の臨床データから決定される。
【0152】
本発明のさらなる実施形態および適用可能性の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の趣旨および範囲内での様々な変更および修正は、この詳細な説明から当業者に明らかになるであろうから、詳細な説明および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、単に例示として与えられているにすぎないことは理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0153】
【図1A】ネクチン－２発現レベル（示されているように高いまたは低い）と低悪性度神経膠腫（Ａ）、腎腎明細胞癌（Ｂ）および肺腺癌（Ｃ）患者の生存確率との相関を示す。データセットはＴＣＧＡサイトから取得し、ｏｎｃｏｌｎｃ．ｏｒｇサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７１７／ｐｅｅｒｊ－ｃｓ．６７）．を使用して分析した。
【図1B】ネクチン－２発現レベル（示されているように高いまたは低い）と低悪性度神経膠腫（Ａ）、腎腎明細胞癌（Ｂ）および肺腺癌（Ｃ）患者の生存確率との相関を示す。データセットはＴＣＧＡサイトから取得し、ｏｎｃｏｌｎｃ．ｏｒｇサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７１７／ｐｅｅｒｊ－ｃｓ．６７）．を使用して分析した。
【図1C】ネクチン－２発現レベル（示されているように高いまたは低い）と低悪性度神経膠腫（Ａ）、腎腎明細胞癌（Ｂ）および肺腺癌（Ｃ）患者の生存確率との相関を示す。データセットはＴＣＧＡサイトから取得し、ｏｎｃｏｌｎｃ．ｏｒｇサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７１７／ｐｅｅｒｊ－ｃｓ．６７）．を使用して分析した。
【図2】免疫細胞で発現する受容体と、腫瘍または抗原提示細胞（ＡＰＣ）で発現するネクチン－２に対するそれぞれの親和性の模式図である。ＴＩＧＩＴは、多くの免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の共抑制受容体であり、ＤＮＡＭ－１（ＣＤ２２６とも呼ばれる）は、多くの免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化受容体であり、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧとも呼ばれる）はリンパ系免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）の共抑制受容体であり、ネクチン－２（ＣＤ１１２）は、表示されている親和性に基づいて、主にＣＤ１１２Ｒへの結合を介した免疫細胞の抑制性リガンドである。
【図3A】生成された抗ネクチン－２ｍＡｂの結合および遮断特性の分析である。図３Ａは、内因的にネクチン－２を発現するＭＤＡ－２３１細胞またはネクチン－２を過剰発現する８８６６－ｈネクチン－２細胞への抗ネクチン－２クローンの結合を示している。
【図3B】生成された抗ネクチン－２ｍＡｂの結合および遮断特性の分析である。図３Ｂは、８８６６－ｈネクチン２細胞に結合するＣＤ１１２Ｒ－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。生成された抗体のうち、３つのクローン（＃９、１１、および１３）がこれらの相互作用を部分的に遮断し、１つのクローン（＃７）がそれらを完全に遮断した。
【図3C】生成された抗ネクチン－２ｍＡｂの結合および遮断特性の分析である。図３Ｃは、８８６６－ｈネクチン２細胞に結合するＤＮＡＭ－１－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。クローン１５を除いて、他のクローン（＃７～１３）はどれも活性化受容体ＤＮＡＭ－１のネクチン－２への結合を遮断しなかった。
【図3D】生成された抗ネクチン－２ｍＡｂの結合および遮断特性の分析である。図３Ｄは、抗ネクチン－２クローン７および１１の存在下でＣＨＯＫ１－ｈネクチン２細胞に結合するＴＩＧＩＴ－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。両方のクローンがＴＩＧＩＴ－Ｆｃ結合の＞６６％を遮断している。
【図4A】抗ネクチン－２ｍＡｂ（Ｘ軸に表示）によるネクチン－２の遮断がＮＫ細胞の活性化を増強することを示す。ＮＫ活性化は、ＣＤ１０７ａの表面発現の誘導によって測定され、対照ＩｇＧに対する倍数変化として表される（Ｙ軸）。結果は、ヒト癌細胞株Ａ５４９（肺腺癌）（図４Ａ）およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳腺癌）（図４Ｂ）について示されている。最も重要な効果は、クローン＃３、７、および１１で認められた。＊＝Ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００２（両側スチューデントのｔ検定による）。５人のドナーのうちの１人についての代表的なデータが示されている。クローン７および１１のヒトＩｇＧ１キメラ変異体は、脱顆粒をさらに増加させ（図４Ｃ）、アイソタイプコントロールと比較して＞２００％の脱顆粒をもたらした。＊＊＊ｐ＜０．００２。２人のドナーのうち１人についての代表的なデータが示されている。
【図4B】抗ネクチン－２ｍＡｂ（Ｘ軸に表示）によるネクチン－２の遮断がＮＫ細胞の活性化を増強することを示す。ＮＫ活性化は、ＣＤ１０７ａの表面発現の誘導によって測定され、対照ＩｇＧに対する倍数変化として表される（Ｙ軸）。結果は、ヒト癌細胞株Ａ５４９（肺腺癌）（図４Ａ）およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳腺癌）（図４Ｂ）について示されている。最も重要な効果は、クローン＃３、７、および１１で認められた。＊＝Ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００２（両側スチューデントのｔ検定による）。５人のドナーのうちの１人についての代表的なデータが示されている。クローン７および１１のヒトＩｇＧ１キメラ変異体は、脱顆粒をさらに増加させ（図４Ｃ）、アイソタイプコントロールと比較して＞２００％の脱顆粒をもたらした。＊＊＊ｐ＜０．００２。２人のドナーのうち１人についての代表的なデータが示されている。
【図4C】抗ネクチン－２ｍＡｂ（Ｘ軸に表示）によるネクチン－２の遮断がＮＫ細胞の活性化を増強することを示す。ＮＫ活性化は、ＣＤ１０７ａの表面発現の誘導によって測定され、対照ＩｇＧに対する倍数変化として表される（Ｙ軸）。結果は、ヒト癌細胞株Ａ５４９（肺腺癌）（図４Ａ）およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳腺癌）（図４Ｂ）について示されている。最も重要な効果は、クローン＃３、７、および１１で認められた。＊＝Ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００２（両側スチューデントのｔ検定による）。５人のドナーのうちの１人についての代表的なデータが示されている。クローン７および１１のヒトＩｇＧ１キメラ変異体は、脱顆粒をさらに増加させ（図４Ｃ）、アイソタイプコントロールと比較して＞２００％の脱顆粒をもたらした。＊＊＊ｐ＜０．００２。２人のドナーのうち１人についての代表的なデータが示されている。
【図5A】ｍＡｂ、クローン７および１１のヒトおよびサルのネクチン－２への結合が類似していることを実証する。図５Ａは、ヒトまたはカニクイザル（Ｃｙｎｏ）（ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ネクチン－２（タンパク質ｉｄ：ＸＰ＿００５５８９６０７．１）を発現するＣＨＯ細胞に一連の３倍希釈で１３．３ｎＭ～０．０２ｎＭの範囲で添加された両方のｍＡｂのオーバーレイ結合曲線を示している。このアッセイのＦＡＣＳ分析の結果は、１００％に設定された最大結合と比較した相対結合強度として表される。検出には、ヤギ抗マウス－６４７ Ａｂを１：２５０希釈で使用した。このアッセイのデータ分析の要約も同様に示されており、両方のｍＡｂがヒトおよびカニクイザル（Ｃｙｎｏ）（ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ネクチン－２（タンパク質ＩＤ：ＸＰ＿００５５８９６０７．１）に高い類似の親和性で結合することをさらに示している。抗ネクチン－２ｍＡｂの結合は、Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ（アフリカミドリザル）ネクチン－２（ベロ細胞によって発現されるＸＰ＿００７９９５３４２．１）を使用して調べた。
【図5B】ｍＡｂ、クローン７および１１のヒトおよびサルのネクチン－２への結合が類似していることを実証する。図５Ｂは、図５Ａで記載したＦＡＣＳ分析によってテストされた内因性ヒトネクチン－２（２９３Ｔ細胞で発現）および内因性アフリカミドリザル－ネクチン－２（ベロ細胞で発現）への抗ネクチン－２ｍＡｂの結合を示している（Ａｂ範囲：２０～０．０００３ｎＭ）。この分析は、両方の抗ネクチン－２クローンについて、高い親和性で、ヒトおよびサルの両方のネクチン－２標的への同様のＡｂ結合を明らかにし、これは要約表でも明らかである。
【図6A】Ｔ細胞増殖に対する抗ｈネクチン－２抗体の効果を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、ＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体の存在下で標的細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（６Ａ）またはＡ５４９（６Ｂ）とインキュベートした。結果は、対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。示されているのは、試験された７人を代表する１人のＰＢＭＣドナーの結果である。
【図6B】Ｔ細胞増殖に対する抗ｈネクチン－２抗体の効果を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、ＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体の存在下で標的細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（６Ａ）またはＡ５４９（６Ｂ）とインキュベートした。結果は、対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。示されているのは、試験された７人を代表する１人のＰＢＭＣドナーの結果である。
【図7A】抗ｈネクチン－２抗体単独または既知のチェックポイント遮断薬との併用によるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖への影響を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、ＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体の存在下で標的細胞ＲＫＯ（７Ａ）またはＡ５４９（図７Ｂ）とインキュベートした。結果は、対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。試験されたすべての組み合わせにより、個々の治療でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が大幅に増加した。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。
【図7B】抗ｈネクチン－２抗体単独または既知のチェックポイント遮断薬との併用によるＣＤ８＋Ｔ細胞増殖への影響を示す。ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、ＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体の存在下で標的細胞ＲＫＯ（７Ａ）またはＡ５４９（図７Ｂ）とインキュベートした。結果は、対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。試験されたすべての組み合わせにより、個々の治療でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が大幅に増加した。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。
【図8A】ＩＦＮγの分泌に対する抗ｈネクチン－２抗体の効果を示す。図７で説明したように、ヒトＰＢＭＣを標的細胞とともにインキュベートした。９６時間後、プレートを遠心分離し、上清を回収した。ＩＦＮγの定量化は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製のＨｕｍａｎ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅを使用して、製造元のプロトコルに従って行った。試験された５人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーについての結果が示されている。
【図8B】ＩＦＮγの分泌に対する抗ｈネクチン－２抗体の効果を示す。図７で説明したように、ヒトＰＢＭＣを標的細胞とともにインキュベートした。９６時間後、プレートを遠心分離し、上清を回収した。ＩＦＮγの定量化は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製のＨｕｍａｎ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅを使用して、製造元のプロトコルに従って行った。試験された５人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーについての結果が示されている。
【図9A】抗ｈネクチン－２抗体単独または既知のチェックポイント遮断薬との併用によるｈＰＢＭＣによる腫瘍細胞の死滅に対する影響を示す。図７に記載されているようにアッセイを行った。９６～１２０時間後、免疫細胞を除去し、腫瘍細胞を徹底的に洗浄し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）を使用して、製造元のプロトコルに従って付着性腫瘍細胞の生存率を確立した。すべての結果はキットの線形範囲内であった。結果は、対照と比較して腫瘍細胞の死滅が倍増したものとして示されている。試験されたすべての組み合わせにより、個々の治療と比べて腫瘍細胞の死滅が有意に増加した。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。
【図9B】抗ｈネクチン－２抗体単独または既知のチェックポイント遮断薬との併用によるｈＰＢＭＣによる腫瘍細胞の死滅に対する影響を示す。図７に記載されているようにアッセイを行った。９６～１２０時間後、免疫細胞を除去し、腫瘍細胞を徹底的に洗浄し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）を使用して、製造元のプロトコルに従って付着性腫瘍細胞の生存率を確立した。すべての結果はキットの線形範囲内であった。結果は、対照と比較して腫瘍細胞の死滅が倍増したものとして示されている。試験されたすべての組み合わせにより、個々の治療と比べて腫瘍細胞の死滅が有意に増加した。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。
【図10】インビボでの腫瘍発生に対するネクチン－２ｍＡｂの効果を示している。Ｓｃｉｄ雌マウス（ｎ＝３３）に、マトリゲル中５×１０６ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を皮下注射した。腫瘍が８０～１２０ｍｍ３に達したら、マウスをランダムに３つの群に分け、ＰＢＳ（薄い灰色のひし形）、ｈＩｇＧ１対照Ａｂ（灰色の四角）、またはクローン－７－ヒトＩｇＧ１（２．７．１）（黒丸）（両方とも３ｍｇ／ｋｇで）のいずれかを静脈内（ｉ．ｖ．）注射することにより、盲検法で週２回処置した。＊ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００８。
【図11A】腫瘍細胞死滅およびＰＢＭＣ増殖に対する、ｈＩｇＧ２ Ｆｃを伴うネクチン－２ ｍＡｂの単独またはＰＤ－１との併用のいずれかの効果を示す。Ａ５４９細胞は、Ａｂなし、またはクローン－１１－ヒトＩｇＧ２（２．１１．２）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）（両方とも３．５ｕｇ／ｍｌで）、またはそれらの組み合わせ（それぞれ３．５ｕｇ／ｍｌ）のいずれかを使用して、４ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌの存在下で、Ｅ：Ｔ比７：１でＰＢＭＣと９６時間共インキュベートした。腫瘍細胞の死滅（図１１Ａ）およびＰＢＭＣ（Ｔ細胞）の増殖（図１１Ｂ）が示されている。＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００２、＊＊＊ｐ＜０．０００８。
【図11B】腫瘍細胞死滅およびＰＢＭＣ増殖に対する、ｈＩｇＧ２ Ｆｃを伴うネクチン－２ ｍＡｂの単独またはＰＤ－１との併用のいずれかの効果を示す。Ａ５４９細胞は、Ａｂなし、またはクローン－１１－ヒトＩｇＧ２（２．１１．２）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）（両方とも３．５ｕｇ／ｍｌで）、またはそれらの組み合わせ（それぞれ３．５ｕｇ／ｍｌ）のいずれかを使用して、４ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌの存在下で、Ｅ：Ｔ比７：１でＰＢＭＣと９６時間共インキュベートした。腫瘍細胞の死滅（図１１Ａ）およびＰＢＭＣ（Ｔ細胞）の増殖（図１１Ｂ）が示されている。＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００２、＊＊＊ｐ＜０．０００８。
【図12A】ネクチン－２を発現する腫瘍細胞の存在下での特異的Ｔ細胞活性化に対するクローン７およびクローン１１抗体（それぞれＣＡＲ－Ｔ２．０７およびＣＡＲ－Ｔ２．１１）に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔの効果を示す。健康なドナーからのＰＢＭＣを、ＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。これらの構築物の一般的な概略図を図１２Ａに示し、ここで、ｓｃＦｖは本明細書に記載のネクチン－２ｍＡｂの単鎖を表す。ネクチン－２ ＣＡＲ－Ｔ ＰＢＭＣを、様々なＥ：Ｔ比でＵ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞とインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）、ならびに活性化されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）が示されている。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
【図12B】ネクチン－２を発現する腫瘍細胞の存在下での特異的Ｔ細胞活性化に対するクローン７およびクローン１１抗体（それぞれＣＡＲ－Ｔ２．０７およびＣＡＲ－Ｔ２．１１）に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔの効果を示す。健康なドナーからのＰＢＭＣを、ＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。これらの構築物の一般的な概略図を図１２Ａに示し、ここで、ｓｃＦｖは本明細書に記載のネクチン－２ｍＡｂの単鎖を表す。ネクチン－２ ＣＡＲ－Ｔ ＰＢＭＣを、様々なＥ：Ｔ比でＵ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞とインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）、ならびに活性化されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）が示されている。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
【図12C】ネクチン－２を発現する腫瘍細胞の存在下での特異的Ｔ細胞活性化に対するクローン７およびクローン１１抗体（それぞれＣＡＲ－Ｔ２．０７およびＣＡＲ－Ｔ２．１１）に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔの効果を示す。健康なドナーからのＰＢＭＣを、ＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。これらの構築物の一般的な概略図を図１２Ａに示し、ここで、ｓｃＦｖは本明細書に記載のネクチン－２ｍＡｂの単鎖を表す。ネクチン－２ ＣＡＲ－Ｔ ＰＢＭＣを、様々なＥ：Ｔ比でＵ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞とインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）、ならびに活性化されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）が示されている。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
【図12D】ネクチン－２を発現する腫瘍細胞の存在下での特異的Ｔ細胞活性化に対するクローン７およびクローン１１抗体（それぞれＣＡＲ－Ｔ２．０７およびＣＡＲ－Ｔ２．１１）に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔの効果を示す。健康なドナーからのＰＢＭＣを、ＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。これらの構築物の一般的な概略図を図１２Ａに示し、ここで、ｓｃＦｖは本明細書に記載のネクチン－２ｍＡｂの単鎖を表す。ネクチン－２ ＣＡＲ－Ｔ ＰＢＭＣを、様々なＥ：Ｔ比でＵ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞とインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）、ならびに活性化されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）が示されている。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
【図12E】ネクチン－２を発現する腫瘍細胞の存在下での特異的Ｔ細胞活性化に対するクローン７およびクローン１１抗体（それぞれＣＡＲ－Ｔ２．０７およびＣＡＲ－Ｔ２．１１）に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔの効果を示す。健康なドナーからのＰＢＭＣを、ＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。これらの構築物の一般的な概略図を図１２Ａに示し、ここで、ｓｃＦｖは本明細書に記載のネクチン－２ｍＡｂの単鎖を表す。ネクチン－２ ＣＡＲ－Ｔ ＰＢＭＣを、様々なＥ：Ｔ比でＵ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞とインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）、ならびに活性化されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）が示されている。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
【発明を実施するための形態】
【0154】
本発明は、ヒトネクチン－２に特異的である有効な抗体を提供する。本発明はまた、抗体の治療剤としての製造および使用を提供する。特に、本発明のｍＡｂは、抗腫瘍殺活性を増強するため、そして診断用試薬として使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明は、ネクチン－２を過剰発現する癌細胞に対する免疫活性の効率的な回復のために、ネクチン－２に特異的な抗体を提供する。他の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ウイルス感染の治療に使用するためのものである。抗体は、ネクチン－２を遮断することにより、ヘルペスウイルスの細胞への侵入を防ぐ。
【0155】
本明細書で使用される「抗原」という用語は、抗体形成を誘発することができ、抗体によって特異的に結合されることができる分子または分子の一部を指す。抗原は、１つまたは２つ以上のエピトープを有し得る。上記で言及される特異的結合は、抗原が高度に選択的な方式で対応する抗体と反応するが、他の抗原によって誘発され得る他の多数の抗体とは反応しないことを示すことを意味する。本発明のいくつかの実施形態による抗原は、ネクチン－２タンパク質である。
【0156】
本明細書で使用される「ネクチン－２」または「ネクチン細胞接着分子２」という用語は、ＣＤ１１２およびＰＶＲＬ２としても知られるヒト原形質膜糖タンパク質を指す。ネクチン－２タンパク質は、２つのＩｇ様Ｃ２型ドメインとＩｇ様Ｖ型ドメインとを有する１回膜貫通糖タンパク質である。このタンパク質は、接着結合の原形質膜成分の１つである。また、ネクチン－２は、単純ヘルペスウイルスおよび仮性狂犬病ウイルスの特定の変異株の侵入体としても機能し、これらのウイルスの細胞から細胞への拡散に関与している。本発明による例示的なネクチン－２は、ＳｗｉｓｓＰｏｒｔ、ＵｎｉＰｏｒｔおよびＧｅｎＢａｎｋの記号またはアクセッション番号に記載されている：遺伝子ＩＤ：５８１９、Ｑ９２６９２、Ｉ６８０９３、ＮＰ＿００１０３６１８９．１、ＮＰ＿００２８４７．１、および＃Ｑ９２６９２。
【0157】
本発明による抗体またはそのフラグメントは、ネクチン－２のエピトープに結合する。具体的には、抗体はネクチン－２タンパク質の外部ドメイン（細胞外部分）内のエピトープと結合する。
【0158】
本明細書で使用される「抗原決定基」または「エピトープ」という用語は、特定の抗体と特異的に反応する抗原分子の領域を指す。エピトープに由来するペプチド配列は、単独で、または担体部分と結合して使用され、当技術分野で知られている方法を適用して、動物を免疫して、追加のポリクローナルまたはモノクローナル抗体を生成することができる。エピトープに由来する単離されたペプチドは、抗体を検出する診断方法で使用され得る。
【0159】
親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｓｃａｒａｎｏ Ｓ，Ｍａｓｃｉｎｉ Ｍ，Ｔｕｒｎｅｒ ＡＰ，Ｍｉｎｕｎｎｉ Ｍ．Ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｆｏｒ ａｆｆｉｎｉｔｙ－ｂａｓｅｄ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ．Ｂｉｏｓｅｎｓ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２０１０，２５：９５７－６６に記載されている）などの既知の方法を使用して定量化することができ、例えば、解離定数Ｋｄを使用して計算することができ、Ｋｄが低いほど高い親和性を反映することに留意すべきである。
【0160】
抗体、または免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によってともに連結された２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、各軽鎖はそれぞれの重鎖とジスルフィド結合によって「Ｙ」字型形状で結合される。抗体のタンパク質分解消化は、Ｆｖ（可変フラグメント）およびＦｃ（結晶性フラグメント）ドメインを生じる。抗原結合ドメインであるＦａｂには、ポリペプチド配列が変化する領域が含まれる。Ｆ（ａｂ’）２という用語は、ジスルフィド結合によってともに結合された２つのＦａｂ’アームを表す。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、いくつかの定常ドメイン（ＣＨ）が続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）、およびその他端に定常ドメイン（ＣＬ）を有し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列され、軽鎖定常ドメインは重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列される。軽鎖と重鎖の各対の可変ドメインが抗原結合部位を形成する。軽鎖と重鎖のドメインは同じ全体構造を有し、各ドメインは４つのフレームワーク領域を含み、それらの配列は比較的保存されており、相補性決定領域（ＣＤＲ１～３）として知られる３つの超可変ドメインによって結合されている。これらのドメインは、抗原結合部位の特異性および親和性に寄与する。
【0161】
所与の重鎖または軽鎖可変配列からのＣＤＲの識別または決定は、通常、当技術分野で知られている数少ない方法のうちの１つを使用して行われる。たとえば、そのような決定は、Ｋａｂａｔ（Ｗｕ Ｔ．Ｔ ａｎｄ Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９７０；１３２：２１１－５０）およびＩＭＧＴ（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３、２７：５５－７７）に従ってなされる。
【0162】
「配列を有するＣＤＲ」という用語または同様な用語が使用されるとき、それはＣＤＲが特定された配列を含むという選択肢、およびＣＤＲが特定された配列からなるという選択肢も含む。
【0163】
抗体の抗原特異性は、超可変領域（ＨＶＲ）、つまり、抗原結合部位をともに形成する軽鎖および重鎖の両方の特有のＣＤＲ配列に基づいている。
【0164】
重鎖のアイソタイプ（ガンマ、アルファ、デルタ、イプシロン、またはミュー）は、免疫グロブリンクラス（それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ）を決定する。軽鎖は２つのアイソタイプ（カッパ、κまたはラムダ、λ）のいずれかである。両アイソトープはすべての抗体クラスに認められる。
【0165】
「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体（全長またはインタクトのモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多価抗体、および所望の生物学的活性、すなわちヒトネクチン－２との結合を示すのに十分な長さの抗体フラグメントを含む。
【0166】
本発明による抗体または複数の抗体には、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などのインタクト抗体、ならびにＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントなどのそのタンパク質分解フラグメントが含まれる。単鎖抗体も本発明の範囲内に含まれる。
【0167】
抗体フラグメント
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部分のみを含み、一般的に、インタクト抗体の抗原結合部位を含み、したがって抗原と結合する能力を保持する。本定義によって包含される抗体フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、およびＣＨ１ドメインを有するＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦａｂフラグメントであるＦａｂ’フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント、（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインならびにＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント、（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖフラグメント、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８９，３４１，５４４－５４６）、（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ領域、（ｖｉｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｘ）単鎖抗体分子（例えば、単鎖Ｆｖ、ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４２，４２３－４２６、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１９８８，８５，５８７９－５８８３）、（ｘ）２つの抗原結合部位を有し、同一ポリペプチド鎖に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む「二重特異的抗体」（例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０，６４４４－６４４８）、（ｘｉ）相補的な軽鎖ポリペプチドとともに抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｄセグメントの対（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む「線状抗体」（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，１９９５、８、１０５７－１０６２、および米国特許第５，６４１，８７０号）が含まれる。
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部分のみを含み、一般的に、インタクト抗体の抗原結合部位を含み、したがって抗原と結合する能力を保持する。本定義によって包含される抗体フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、およびＣＨ１ドメインを有するＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦａｂフラグメントであるＦａｂ’フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント、（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインならびにＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント、（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖフラグメント、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８９，３４１，５４４－５４６）、（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ領域、（ｖｉｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｘ）単鎖抗体分子（例えば、単鎖Ｆｖ、ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４２，４２３－４２６、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１９８８，８５，５８７９－５８８３）、（ｘ）２つの抗原結合部位を有し、同一ポリペプチド鎖に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む「二重特異的抗体」（例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０，６４４４－６４４８）、（ｘｉ）相補的な軽鎖ポリペプチドとともに抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｄセグメントの対（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む「線状抗体」（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，１９９５、８、１０５７－１０６２、および米国特許第５，６４１，８７０号）が含まれる。
【0168】
様々な技術が抗体フラグメントの生成のために開発されている。伝統的に、これらのフラグメントは、インタクト抗体のタンパク質分解消化を介して派生された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）。しかし、これらのフラグメントは現在、組換え宿主細胞によって直接的に生成することができる。例えば、抗体フラグメントは、抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨフラグメントを大腸菌から直接的に回収し、化学的に結合してＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））。別の取り組みによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは組換え宿主細胞培養から直接的に単離することができる。抗体フラグメントの生成のための他の技術は、当業者には明らかであろう。他の実施形態では、選択される抗体は単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。
【0169】
単鎖抗体は、抗原結合能力を有し、免疫グロブリン軽鎖および重鎖の可変領域と相同的または類似的であるアミノ酸配列を含む単鎖複合ポリペプチド、すなわち連結されたＶＨ－ＶＬまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）であることができる。単鎖抗体（米国特許第４，９４６，７７８号）を生成するための技術は、ネクチン－２に対する単鎖抗体を生成するために適応することができる。
【0170】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、ほとんど均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る自然発生的な変異の可能性以外は同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一抗原に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対して向けられる。修飾語句「モノクローナル」は、いずれかの特定の方法によって抗体の生成を必要とすると解釈されるべきではない。ｍＡｂは、当業者に知られている方法によって得ることができる。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９７５、２５６、４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって生成され得、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）によって生成され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９１，３５２，６２４－６２８またはＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１－５９７に記載されている技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【0171】
機能的可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）遺伝子の迅速な識別およびクローニングを通したモノクローナル抗体に由来する組換え一価抗原結合分子の設計および開発、ならびに組換え細菌における発現に最適化された合成ＤＮＡ配列の設計およびクローニングは、Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｔ．２０１３、８（６）：１１２５－４８に記載されている。
【0172】
本発明のｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含む任意の免疫グロブリンクラスのものであり得る。ｍＡｂを産生するハイブリドーマは、インビトロまたはインビボで培養することができる。高力価のｍＡｂはインビボ産生によって得ることができ、個々のハイブリドーマからの細胞を未処置の準備したＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注入して、高濃度で所望のｍＡｂを含む腹水を生成する。ｍＡｂは、当業者によく知られている方法を使用して、そのような腹水から、または培養上清から精製され得る。
【0173】
本発明の抗体の超可変領域と特異的に免疫反応性である抗イディオタイプ抗体もまた含まれる。
【0174】
本発明は、軽鎖の３つのＣＤＲおよび重鎖の３つのＣＤＲを含む抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含むモノクローナル抗体または抗体フラグメントを提供し、当該ＡＢＤは、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重可変鎖および配列番号８のアミノ酸配列を含む軽可変鎖（本明細書ではクローン７として識別される）、または（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重可変鎖および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽可変鎖（本明細書ではクローン１１として識別される）を含むモノクローナルマウス抗体のＡＢＤと少なくとも９０％の配列同一性または類似性を有する。そのような抗体は、抗体クローン７、またはクローン１１の対応するＡＢＤと少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、少なくとも９９％の配列同一性または類似性、あるいは１００％の配列同一性を有するＡＢＤドメインを有し得る。
【0175】
配列同一性は、２つの異なる配列間で正確に一致するアミノ酸またはヌクレオチドの量である。配列類似性によって、アミノ酸の保存的置換を同一のアミノ酸として決定することができる。本明細書に記載のポリヌクレオチド配列は、ヒト細胞などの特定の細胞での発現のためにコドン最適化され得る。コドン最適化は、抗体の鎖のコードされたアミノ酸配列を変更しないが、例えば、細胞での発現を増加させる可能性がある。
【0176】
本発明はまた、本発明による抗体分子の保存的アミノ酸変異体を提供する。本発明による変異体はまた、コードされたタンパク質の全分子構造を保存するものとして生成され得る。開示されるタンパク質生成物を構成する個々のアミノ酸の特性を考えると、いくつかの合理的な置換が当業者によって認識されるであろう。アミノ酸置換、すなわち「保存的置換」は、例えば、極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または含まれる残基の両親媒性の性質における類似性に基づいてなされ得る。本明細書で使用される「抗体類似体」という用語は、別の抗体から１つ以上の保存的アミノ酸置換によって派生される抗体を指す。
【0177】
本明細書で使用される「抗体変異体」という用語は、本発明の抗体を含む任意の分子を指す。例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが別の化学的実体と結合されている融合タンパク質は、抗体変異体とみなされる。
【0178】
抗体の配列の類似体および変異体もまた、本出願の範囲内である。これらには、限定されないが、配列内のアミノ酸の保存的および非保存的な置換、挿入、および欠失が含まれる。そのような改変および得られる抗体類似体または変異体は、それらがヒトネクチン－２との抗体の結合を付与する、または改善さえする限り、本発明の範囲内にある。
【0179】
当業者に知られているアミノ酸の保存的置換は、本発明の範囲内である。保存的アミノ酸置換には、１つのアミノ酸を同じタイプの官能基または側鎖、例えば、脂肪族、芳香族、正電荷、負電荷を有する別のものによって交換することを含む。これらの置換は、経口生物学的利用能、浸透、および特定の細胞集団への標的化、免疫原性などを増強し得る。当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸または小さい割合のアミノ酸を変更、追加、または削除する、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加が、「保存的に改変された変異体」であり、変更が化学的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらすことを認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸をもたらす保存的置換リストは、当技術分野でよく知られている。例えば、当技術分野で知られている１つのリストにより、以下の６つの群は各々、互いが保存的置換であるアミノ酸を含む。
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
【0180】
変異鎖配列は、特定のプライマーを使用したシークエンシング法によって決定されることが強調されるべきである。同じ配列で使用される異なるシークエンシング法は、技術的な問題および異なるプライマーにより、特に配列末端で、わずかに異なる配列をもたらし得る。
【0181】
本明細書で使用される「抗体の抗原結合部分を有する分子」および「抗原結合フラグメント」という用語は、任意のアイソタイプで任意の動物細胞株または微生物によって生成されるインタクト免疫グロブリン分子だけでなく、その抗原結合反応性画分、限定されないが、例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、その重鎖および／または軽鎖の可変部分、Ｆａｂミニ抗体（例えば、ＷＯ９３／１５２１０、米国特許出願第０８／２５６，７９０号、同第ＷＯ９６／１３５８３、米国特許出願第０８／８１７，７８８号、同第ＷＯ９６／３７６２１、米国特許出願第０８／９９９，５５４号を参照）、およびそのような反応性画分を組み込む単鎖抗体、ならびに抗体反応性画分が物理的に挿入されている任意の他のタイプの分子を含むことが意図されている。そのような分子は任意の既知の技術によって提供され得、限定されないが、酵素的切断、ペプチド合成、または組換え技術が含まれる。
【0182】
本明細書における抗体は特に「キメラ」抗体を含み、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であり、一方、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来する、または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびにそれらが所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一または相同的である（米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５（１９８４））。加えて、相補性決定領域（ＣＤＲ）グラフト化を実施して、親和性または特異性を含む抗体分子の特定の特性を変更し得る。ＣＤＲグラフトの非限定的な例は、米国特許第５，２２５，５３９号に開示されている。
【0183】
キメラ抗体は、ネズミｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するものなど、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。ヒト抗体（アクセプター抗体と呼ばれる）にほとんど由来する可変領域フレームワーク残基およびマウス抗体（ドナー抗体と呼ばれる）にほとんど由来するＣＤＲを有する抗体は、ヒト化抗体とも呼ばれる。キメラ抗体は主に、適用において免疫原性を低減し、産生における収量を増加するために使用され、例えば、ネズミｍＡｂはハイブリドーマから高い収量を有するが、ヒトにおいて高い免疫原性を有し、そのためヒト／ネズミキメラｍＡｂが使用される。キメラ抗体およびそれらの生成方法は当技術分野で知られている（例えば、ＰＣＴ特許出願ＷＯ８６／０１５３３、同第ＷＯ９７／０２６７１、同第ＷＯ９０／０７８６１、同第ＷＯ９２／２２６５３、ならびに米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，２２５，５３９号）。
【0184】
いくつかの実施形態によれば、抗体は、モノクローナル抗体である。
【0185】
いくつかの特定の実施形態によれば、モノクローナル抗体は、キメラモノクローナル抗体である。
【0186】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体は、ヒト由来の定常領域を含む。
【0187】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＧ４からなる群から選択される。
【0188】
いくつかの実施形態によれば、キメラ抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ２からなる群から選択される。
【0189】
特定の実施形態によれば、ヒトネクチン－２を認識するキメラモノクローナル抗体が提供され、これは、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む、抗体または抗体フラグメントを含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣ ＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣ ＣＤＲ３が配列番号３であり、ＬＣ ＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣ ＣＤＲ２が配列番号５であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が配列番号６である、６つのＣＤＲのセット、または
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１が（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２が（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３が（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１が（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２が（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３が（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、を含む、抗体または抗体フラグメントを含む。
【0190】
薬理学
医薬品および薬剤の製剤において、活性剤は、好ましくは、１つ以上の薬学的に許容される担体（複数可）および任意にいずれかの他の治療成分とともに利用される。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合性があり、その受容者に対して過度に有害でないという観点において、薬学的に許容されなければならない。活性剤は、上記のように、所望の薬理学的効果を達成するのに有効な量で、そして所望の曝露を達成するのに適切な量で提供される。
医薬品および薬剤の製剤において、活性剤は、好ましくは、１つ以上の薬学的に許容される担体（複数可）および任意にいずれかの他の治療成分とともに利用される。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合性があり、その受容者に対して過度に有害でないという観点において、薬学的に許容されなければならない。活性剤は、上記のように、所望の薬理学的効果を達成するのに有効な量で、そして所望の曝露を達成するのに適切な量で提供される。
【0191】
典型的には、抗体の抗原結合部分を含む、またはペプチド模倣物を含有する別のポリペプチドを含む本発明の抗体ならびにそのフラグメントおよびコンジュゲートは、治療使用のために無菌の生理食塩水に懸濁される。あるいは、本医薬組成物は、有効成分（抗体の抗原結合部分を含む分子）の放出を制御するために、または患者の系におけるその存在を延長するために製剤化され得る。多数の好適な薬物送達システムが知られており、例えば、埋め込み可能な薬物放出システム、ヒドロゲル、ヒドロキシメチルセルロース、マイクロカプセル、リポソーム、マイクロエマルジョン、マイクロスフェアなどが含まれる。制御放出調製物は、本発明による分子を複合体化または吸着するためにポリマーの使用を通して調製することができる。例えば、生体適合性ポリマーには、ポリ（エチレン－コ－酢酸ビニル）のマトリックス、およびステアリン酸ダイマーとセバリン酸のポリ無水物コポリマーのマトリックスが含まれる。そのようなマトリックスからの本発明による分子、すなわち抗体または抗体フラグメントの放出速度は、分子の分子量、マトリックス内の分子の量、および分散される粒子のサイズに依存する。
【0192】
本発明の医薬組成物は、経口、局所、鼻腔内、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、関節内、病変内、腫瘍内、または非経口などの任意の好適な手段によって投与され得る。通常、静脈内（ｉ．ｖ．）投与が抗体を送達するために使用される。
【0193】
本発明による分子の治療有効量が、とりわけ、投与スケジュール、投与される分子の単位用量、分子が他の治療薬と組み合わせて投与されるか、患者の免疫状態および健康、投与される分子の治療的活性、血液循環におけるその持続性、ならびに治療する医師の判断に依存することは、当業者には明らかであろう。
【0194】
本明細書で使用されるとき、「治療有効量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を治療するのに有効である薬剤の量を指す。癌の場合、薬剤の治療有効量は、癌細胞の数を低減し、腫瘍サイズを低減し、末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止する）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止する）、腫瘍の成長をある程度阻害し、かつ／または障害と関連する症状の１つ以上をある程度緩和し得る。薬剤が成長を妨げ、かつ／または既存の癌細胞を死滅し得る範囲まで、それは細胞増殖抑制性および／または細胞毒性であり得る。癌治療のため、インビボでの効能は、例えば、生存期間、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）、奏効率（ＲＲ）、奏効期間、および／または生活の質を評価することによって判断することができる。
【0195】
本発明による治療にとって修正可能な癌には、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ系悪性腫瘍が含まれる。そのような癌のより具体的な例には、扁平上皮癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌腫、様々なタイプの頭頸部癌、およびＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞性ＮＨＬ、中等度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小非切断細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（脳腫瘍と関連するものなど）、およびメグス症候群と関連する異常な血管増殖が含まれる。好ましくは、癌は、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟組織肉腫、カポシ肉腫、カルシノイド腫、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、および多発性骨髄腫からなる群から選択される。本発明の治療にとって修正可能な癌性状態には、転移性癌が含まれる。
【0196】
他の実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、ネクチン－２の過剰発現を特徴とする癌の治療に使用するためのものである。ネクチン－２の過剰発現と関連する癌のタイプは、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）などの既知のデータベースを使用して特定することができる。ある特定の実施形態によれば、本発明による組成物によって治療可能である癌は、副腎皮質癌（ＡＣＣ）、嫌色素細胞性腎癌（ＫＩＣＨ）、肝臓肝細胞癌（ＬＩＨＣ）、結腸および直腸腺癌（ＣＯＡＤ、ＲＥＡＤ）、膵管腺癌（ＰＡＡＤ）、褐色細胞腫および傍神経節腫（ＰＣＰＧ）、乳頭状腎癌（ＫＩＲＰ）、肺腺癌（ＬＵＡＤ）、頭頸部扁平細胞癌（ＨＮＳＣ）、前立腺腺癌（ＰＲＡＤ）、子宮体子宮内膜癌（ＵＣＥＣ）、子宮頸癌（ＣＥＳＣ）、皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）、中皮腫（ＭＥＳＯ）、尿路上皮膀胱癌（ＢＬＣＡ）、明細胞腎臓癌（ＫＩＲＣ）、肺扁平細胞癌（ＬＵＳＣ）、子宮癌肉腫（ＵＣＳ）、肉腫（ＳＡＲＣ）、卵巣漿液性嚢胞腺癌（ＯＶ）、乳頭状甲状腺癌（ＴＨＣＡ）、多形性神経膠芽細胞腫（ＧＢＭ）、乳癌（ＢＲＣＡ）、低悪性度神経膠腫（ＬＧＧ）、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣ）からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0197】
有効成分としての本発明の分子は、よく知られているように、薬学的に許容され、有効成分と適合性のある賦形剤に溶解、分散、または混合される。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびそれらの組み合わせである。他の好適な担体は当業者によく知られている。加えて、必要に応じて、本組成物は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含むことができる。
【0198】
本発明による医薬組成物は、抗新生物組成物とともに投与され得る。
【0199】
本明細書で使用される「治療」という用語は、治療的治療および予防的または防止的手段の両方を指す。治療を必要とするものには、すでに障害を有するもの、ならびに障害が防止されるべきものが含まれる。
【0200】
「癌」という用語は、一般的に、制御されない細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す、または説明する。癌の例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が含まれる。そのような癌のより具体的な例には、黒色腫、肺、甲状腺、乳房、結腸、前立腺、肝臓、膀胱、腎臓、子宮頸部、膵臓、白血病、リンパ腫、骨髄性、卵巣、子宮、肉腫、胆管、または子宮内膜の癌が含まれる。
【0201】
いくつかの実施形態によれば、癌を治療する方法は、本医薬組成物を、少なくとも１つの追加の抗癌剤の投与を含む治療投与計画の一部として投与することを含む。
【0202】
いくつかの実施形態によれば、抗癌剤は、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、アスパラギナーゼ、アルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0203】
いくつかの実施形態によれば、代謝拮抗剤は、シタラビン、フルダラビン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メトトレキサート、チオグアニン、ゲムシタビン、およびヒドロキシウレアからなる群から選択される。いくつかの実施形態によれば、有糸分裂阻害剤は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびビノレルビンからなる群から選択される。いくつかの実施形態によれば、トポイソメラーゼ阻害剤は、トポテカンおよびイレノテカンからなる群から選択される。いくつかの実施形態によれば、アルキル化剤は、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シスプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、チオテパ、ダカルバジン、およびプロカルバジンからなる群から選択される。いくつかの実施形態によれば、抗腫瘍抗生物質は、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、およびプリカマイシンからなる群から選択される。いくつかの実施形態によれば、トポイソメラーゼＩＩは、エトポシドおよびテニポシドからなる群から選択される。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0204】
いくつかの特定の実施形態によれば、追加の抗癌剤は、ベバシズマブ、カルボプラチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン塩酸塩、ゲムシタビン塩酸塩、トポテカン塩酸塩、チオテパ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。
【0205】
本発明によるモノクローナル抗体は、少なくとも１つの抗癌剤との併用療法の一部として使用され得る。いくつかの実施形態によれば、追加の抗癌剤は、免疫調節剤、活性化リンパ球細胞、キナーゼ阻害剤、または化学療法剤である。
【0206】
いくつかの実施形態によれば、抗癌剤は、作用剤または拮抗剤に関わらず、免疫チェックポイント分子に対する抗体などの免疫調節剤である。
【0207】
チェックポイント免疫療法による遮断は、癌治療の刺激的な新しい場であることを証明している。免疫チェックポイント経路は、自己寛容を維持し、生理学的条件下で免疫系による損傷から組織を保護するために協調して機能する一連の共刺激および阻害分子からなる。腫瘍は、特定のチェックポイント経路を利用して免疫系を回避する。したがって、そのような経路の阻害は、有望な抗癌治療戦略として浮上している。
【0208】
抗細胞毒性Ｔリンパ球４（ＣＴＬＡ－４）抗体イピリムマブ（２０１１年に承認）は、癌患者の治療に有益性を示した最初の免疫療法剤だった。抗体は、Ｔ細胞への抗原提示の際に抑制性シグナルを妨害する。抗プログラム細胞死１（ＰＤ－１）抗体ペンブロリズマブ（２０１４年に承認）は、Ｔ細胞によって発現されるＰＤ－１受容体の負の免疫調節シグナル伝達を遮断する。追加の抗ＰＤ－１剤が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療用に２０１４年に規制当局の承認のために提出された。現在、活発な研究が他の多くの免疫チェックポイント、とりわけ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＮＫＧ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１２Ｒ、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）、およびキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を探求している。
【0209】
いくつかの特定の実施形態によれば、免疫調節剤は、ＣＴＬＡ－４を阻害する抗体、抗ヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２抗体、活性化細胞毒性リンパ球細胞、リンパ球活性化剤、ＣＥＡＣＡＭに対する抗体、ＴＩＧＩＴに対する抗体、ならびにＲＡＦ／ＭＥＫ経路阻害剤からなる群から選択される。各可能性は、本発明の個別の実施形態を表す。いくつかの特定の実施形態によれば、追加の免疫調節剤は、ＰＤ－１に対するｍＡｂ、ＰＤ－Ｌ１に対するｍＡｂ、ＰＤ－Ｌ２に対するｍＡｂ、ＣＥＡＣＡＭ１に対するｍＡｂ、ＣＴＬＡ－４に対するｍＡｂ、ＴＩＧＩＴに対するｍＡｂ、ＰＶＲ、インターロイキン２（ＩＬ－２）、またはリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞から選択される。
【0210】
他の実施形態によれば、追加の抗癌剤は化学療法剤である。本発明による抗体とともに、または別々に投与することができる化学療法剤は、抗癌活性を示す当技術分野で知られているようないずれかの薬剤を含み得、限定されないが、ミトキサントロン、トポイソメラーゼ阻害剤、紡錘体毒ビンカ類であるビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（タキソール）、パクリタキセル、ドセタキセル；アルキル化剤系であるメクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド；メトトレキサート、６－メルカプトプリン、５－フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、ポドフィロトキシン系であるエトポシド、イリノテカン、トポテカン、ダカルバジン；抗生物質であるドキソルビシン（アドリアマイシン）、ブレオマイシン、マイトマイシン；ニトロソウレア系であるカルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、無機イオン系であるシスプラチン、カルボプラチン；インターフェロン、アスパラギナーゼ、ホルモン系であるタモキシフェン、リュープロリド、フルタミド、および酢酸メゲストロールが含まれる。
【0211】
いくつかの実施形態によれば、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体および関連阻害剤、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、Ｌ－アスパラギナーゼ、トポイソメラーゼ阻害剤、インターフェロン、白金配位錯体、アントラセンジオン置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、副腎皮質ステロイド、プロゲスチン、エストロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、抗アンドロゲン、およびゴナドトロピン放出ホルモン類似体から選択される。別の実施形態によれば、化学療法剤は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ロイコボリン（ＬＶ）、イリノテカン、オキサリプラチン、カペシタビン、パクリタキセル、およびドセタキセルからなる群から選択される。１つ以上の化学療法剤を使用することができる。
【0212】
いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、癌の治療に使用するため、または免疫応答の増強に使用するためのものである。
【0213】
「免疫応答の増強する」という用語は、免疫系の応答性を増加し、その記憶を誘発または延長することを指す。本発明による医薬組成物は、ワクチン接種時に免疫系を刺激するために使用され得る。したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、ワクチン接種を改善するために使用することができる。
【0214】
ある特定の実施形態において、癌は、肺、甲状腺、乳房、結腸、黒色腫、前立腺、肝臓、膀胱、腎、子宮頸部、膵臓、白血病、リンパ腫、骨髄性、卵巣、子宮、肉腫、胆管、および子宮内膜細胞の癌から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0215】
いくつかの実施形態によれば、本発明による少なくとも１つの抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物、および追加の免疫調節剤またはキナーゼ阻害剤を含む医薬組成物は、別々の投与によって癌の治療に使用される。
【0216】
さらに別の態様によれば、本発明は、癌を治療する方法をそれを必要とする対象において提供し、当該対象に本発明によるモノクローナル抗体または抗体フラグメントの治療有効量を投与することを含む。
【0217】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、対象に投与されたときに意図された治療効果を有する抗体フラグメントのモノクローナル抗体の十分な量を指す。治療の最終結果を達成するために必要とされる有効量は、例えば、腫瘍の特定のタイプおよび患者の状態の重症度、ならびに併用がさらに放射線と同時投与されるかを含む多くの要因に依存し得る。本発明の文脈における活性剤の有効量（用量）は、期間にわたって対象における有益な治療応答に影響を及ぼすのに十分なものであるべきであり、限定されないが、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖速度の低減、腫瘍および転移の成長の防止、ならびに生存率の向上が含まれる。
【0218】
本明細書で説明される組成物の毒性および治療効能は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、対象化合物についてＩＣ５０（５０％阻害をもたらす濃度）および最大耐量を決定することによって、決定することができる。これらの細胞培養アッセイ、および動物試験から得られるデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲を製剤化するために使用することができる。投与量は、とりわけ、他の関連要因の中でも、使用される投与剤形、選択される投与計画、治療のために使用される薬剤の組成、および利用される投与経路に応じて変化し得る。正確な処方、投与経路、および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。治療される状態の重症度および応答性に応じて、投与はまた、徐放性組成物の単回投与であり得、治療過程は、数日から数週間、または治癒に影響が及ぶ、または病状の減少が達成されるまで継続する。投与される組成物の量は、もちろん、治療される対象、病苦の重症度、投与の手段、処方する医師の判断、および他のすべての関連する要因に依存するであろう。
【0219】
対象に物質、化合物、または薬剤「を投与する」または「の投与」という用語は、当業者に知られている様々な方法のうちの１つを使用して実行することができる。例えば、化合物または薬剤は、経腸的または非経口的に投与することができる。経腸的は、経口、舌下、または直腸を含む胃腸管を介した投与を指す。非経口投与には、静脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、眼、舌下、鼻腔内、吸入、脊髄内、脳内、および経皮（例えば、皮膚管を介した吸収による）による投与が含まれる。化合物または薬剤はまた、再充電可能または生体分解性ポリマーデバイスあるいは他のデバイス、例えば、パッチおよびポンプ、あるいは製剤によって適切に導入することができ、化合物または薬剤の持続放出、徐放、または制御放出をもたらす。投与はまた、例えば、１回、複数回、および／または１回以上の延長した期間で実施することができる。いくつかの実施形態では、投与は、自己投与を含む直接投与、および薬物を処方する行為を含む間接投与の両方を含む。例えば、本明細書で使用する場合、患者に薬物を自己投与するように、または他の人に薬物を投与させるように指示し、かつ／または患者に薬物の処方箋を提供する医師が、その薬物を患者に投与する。
【0220】
抗体は、一般に、約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇ患者の体重、一般に約０．５～約１０ｍｇ／ｋｇ、そしてしばしば約１～約５ｍｇ／ｋｇの範囲で投与される。これに関連して、少なくとも１２時間、好ましくは少なくとも４日、より好ましくは２１日までの循環半減期を有する抗体を使用することが好ましい。キメラ抗体は、１４～２１日までの循環半減期を有すると予想される。いくつかの例では、大量の負荷用量を投与した後、治療期間にわたって間欠的な（例えば、毎週）維持用量を投与することが有効であり得る。抗体はまた、徐放性送達システム、ポンプ、および連続注入のための他の既知の送達システムによって送達することができる。
【0221】
本発明の抗体は、癌を治療するためにＣＡＲを含む操作されたリンパ球を利用するＣＡＲベースの養子免疫療法で使用することができる。ＣＡＲ－Ｔ系は、非限定的な例として本明細書に記載されている。
【0222】
Ｔ細胞療法は、癌または腫瘍の治療にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を利用する（すなわち、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法）。ＣＡＲ－Ｔ細胞療法は、腫瘍細胞に作用して腫瘍細胞のアポトーシスを引き起こす遺伝子操作されたＴ細胞を癌患者に投与することを伴う細胞免疫療法である。遺伝子操作されたＴ細胞は、遺伝子導入技術を使用して、ＣＤ３ζ鎖配列のフラグメントなどの細胞内ドメインと結合した抗体の可変領域（ＶＬおよびＶＨ）を有するＣＡＲをＴ細胞上で発現させることによって調製される。ＣＡＲは、腫瘍抗原に特異的なモノクローナル抗体の可変領域の軽鎖と重鎖とが互いに結合し、次にＣ末端側においてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合するキメラタンパク質の総称である。
【0223】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζドメインからなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質ドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ２８ ＴＭドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、４１ＢＢドメインを含む。特定の実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζドメインを含む。
【0224】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、４－１ＢＢ（または４１ＢＢまたはＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＭＹＤ８８－ＣＤ４０、またはＣＤ２８に由来する共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ、４１ＢＢおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含む。
【0225】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＴＭ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３ζ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＴＭ、およびＩＣＯＳ ＴＭから選択される膜貫通ドメイン（ＴＭ）を含む。
【0226】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、ヒンジ領域配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ヒンジ領域配列は、ＣＤ８、ＣＤ２８、またはＩｇＧ４ヒンジに由来する。
【0227】
いくつかの実施形態によれば、本発明による重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供される。ある特定の実施形態によれば、その表面に発現されているＣＡＲを有する遺伝子改変リンパ球が提供される。いくつかの特定の実施形態によれば、その表面に発現されているＣＡＲを有する遺伝子改変Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）が提供される。
【0228】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、ならびに
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む、ネクチン－２結合部位を含む。
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、ならびに
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、または該抗体もしくはフラグメントの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するその類似体もしくは誘導体、からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む、ネクチン－２結合部位を含む。
【0229】
いくつかの実施形態によれば、類似体または誘導体は、該抗体またはフラグメント配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。
【0230】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、ならびに
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む、ネクチン－２結合部位を含む。
ｉ．配列番号７を含む重鎖（ＨＣ）可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号８を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域の３つのＣＤＲ、ならびに
ｉｉ．配列番号１７を含む重鎖可変領域の３つのＣＤＲおよび配列番号１８を含む軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ、からなる群から選択される６つのＣＤＲ配列のセットを含む、ネクチン－２結合部位を含む。
【0231】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセット、および
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、からなる群から選択されるＣＤＲセットを含むネクチン－２結合部位を含む。
ｉ．ＨＣ ＣＤＲ１がＲＦＴＭＳ（配列番号１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＤＲＤＦＹＧＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＦＡＳＴＲＥＳ（配列番号５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＨＹＴＴＰＬＴ（配列番号６）である、６つのＣＤＲのセット、および
ｉｉ．ＨＣ ＣＤＲ１配列がＳＹＷＩＨ（配列番号１１）であり、ＨＣ ＣＤＲ２がＡＶＹＰＧＮＳＤＳＮＹＮＱＫＦＫＡ（配列番号１２）であり、ＨＣ ＣＤＲ３がＬＶＧＴＦＤＹ（配列番号１３）であり、ＬＣ ＣＤＲ１がＫＡＳＱＮＶＧＩＮＶＶ（配列番号１４）であり、ＬＣ ＣＤＲ２がＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１５）であり、かつＬＣ ＣＤＲ３がＱＱＹＮＴＮＰＦＴ（配列番号１６）である、６つのＣＤＲのセット、からなる群から選択されるＣＤＲセットを含むネクチン－２結合部位を含む。
【0232】
いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、配列番号２０または２２を含む抗原結合ドメイン、もしくは配列番号２０または２２と少なくとも８５％の同一性を有する同類体と、膜貫通ドメインと、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインと、を含む。
【0233】
ある特定の態様によれば、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲを含む細胞を提供する。いくつかの実施形態によれば、細胞は、本発明のＣＡＲを発現するか、または発現することができる。いくつかの実施形態によれば、細胞はリンパ球である。いくつかの実施形態によれば、細胞は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される。
【0234】
いくつかの実施形態によれば、Ｔ細胞などの細胞は、本発明のＣＡＲをコードする核酸分子を含む。他の実施形態によれば、Ｔ細胞などの細胞は、本発明のＣＡＲをコードする核酸分子を含む核酸構築物を含む。さらなる実施形態によれば、本発明は、本発明のＣＡＲをコードする核酸構築物または分子を含むベクターを提供する。そのような実施形態によれば、Ｔ細胞は、本発明のＣＡＲを発現または発現することができる。
【0235】
いくつかの実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたリンパ球が提供される。いくつかの実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞が提供される。
【0236】
追加の実施形態によれば、本明細書で説明されるＣＡＲを発現するように操作されたＮＫ細胞が提供される。
【0237】
本発明のＣＡＲは、膜貫通ドメイン（ＴＭドメイン）、共刺激ドメイン、および活性化ドメインを含む。いくつかの実施形態によれば、ＴＭドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８およびＣＤ８、または元の配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するその類似体から選択される受容体のＴＭドメインであり、および／または共刺激ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ｉＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ８０、およびＣＤ７０、元の配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するその類似体ならびにこれらの任意の組み合わせから選択されるタンパク質の共刺激ドメインから選択され、および／または活性化ドメインは、ＦｃＲγおよびＣＤ３－ζ活性化ドメインから選択される。いくつかの実施形態によれば、ＣＡＲは、主要なペプチドを含む。
【0238】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、本発明の複数の細胞、例えば、ＣＡＲ表示細胞を含む細胞組成物を提供する。
【0239】
「約」という用語は、特定の値について許容可能なエラー範囲、たとえば５％または１０％までが想定させるべきであることを意味する。
【0240】
診断
本発明はさらに、癌を診断および予後診断するための方法を開示する。
本発明はさらに、癌を診断および予後診断するための方法を開示する。
【0241】
一態様によれば、本発明は、対象における癌または感染症の診断的および／または予後診断的方法を提供し、本方法は、当該対象の生物学的試料におけるネクチン－２の発現レベルを本明細書で説明される少なくとも１つの抗体を使用して決定する工程を含む。
【0242】
「生物学的試料」という用語は、診断またはモニタリングアッセイで使用され得る生物から得られる様々な試料タイプを包含する。本用語は、生物学的起源の血液および他の液体試料、生検標本などの固体組織試料、あるいは組織培養またはそれらに由来する細胞およびその子孫を包含する。さらに、本用語は、循環性腫瘍または他の細胞を包含し得る。本用語は、具体的には臨床試料を包含し、さらに細胞培養中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、尿、羊水、眼試料のための眼房水および硝子体水を含む生物学的液体、ならびに組織試料を含む。本用語はまた、試薬による処理、可溶化、または特定成分の豊富化などの達成後に任意の方法で操作されている試料を包含する。
【0243】
ネクチン－２の発現レベルの決定は、本明細書で説明される標識された抗ネクチン－２抗体によって実施することができる。発現の決定は、例えば、ＥＬＩＳＡによって実施することができる。
【0244】
本発明の方法はさらに、当該発現レベルをコントロールレベルと比較するステップを含むことができる。
【0245】
以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態をさらに詳しく示すために提示される。それらは決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例0246】
ここで、上記の説明とともに本発明を非限定的に説明する以下の実施例を参照する。
【0247】
一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される実験手順には、分子的、生化学的、微生物学的、免疫学的、および組換えＤＮＡ技術が含まれる。そのような技術は当技術分野でよく知られている。よく知られている手順に言及している他の全般的な参考が、読者の便宜のためにこの文書全体を通して提供される。
【0248】
実施例１．ネクチン－２ｍＲＮＡの高発現は、様々な癌患者の生存確率の低さと相関している。
ネクチン－２ｍＲＮＡ発現と生存確率との間の相関関係をＴＣＧＡサイトからのデータで調べ、ｏｎｃｏｌｎｃ．ｏｒｇサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７１７／ｐｅｅｒｊ－ｃｓ．６７）を使用して分析した。この相関関係は、低悪性度神経膠腫（図１Ａ；ｐ＝５．２２Ｅ－５）、腎臓の腎明細胞癌（図１Ｂ；ｐ＝０．０００３７）、および肺腺癌（図１Ｃ；ｐ＝０．０３１９）の患者について、図１の矢印で示されている。
ネクチン－２ｍＲＮＡ発現と生存確率との間の相関関係をＴＣＧＡサイトからのデータで調べ、ｏｎｃｏｌｎｃ．ｏｒｇサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７１７／ｐｅｅｒｊ－ｃｓ．６７）を使用して分析した。この相関関係は、低悪性度神経膠腫（図１Ａ；ｐ＝５．２２Ｅ－５）、腎臓の腎明細胞癌（図１Ｂ；ｐ＝０．０００３７）、および肺腺癌（図１Ｃ；ｐ＝０．０３１９）の患者について、図１の矢印で示されている。
【0249】
実施例２．ネクチン－２は特定の受容体を介して免疫細胞に結合して影響を及ぼす。
免疫細胞で発現する受容体と、腫瘍または抗原提示細胞（ＡＰＣ）で発現するネクチン－２に対するそれぞれの親和性の模式図（図２）である。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞の共抑制受容体に関連し、ＤＮＡＭ－１（ＣＤ２２６とも呼ばれる）は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化受容体に関連し、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧとも呼ばれる）はリンパ系免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）の共抑制受容体に関連し、ネクチン－２（ＣＤ１１２）は、主にＣＤ１１２Ｒへの結合を介した免疫細胞の抑制性リガンドである。本発明によれば、抗ネクチン－２ ｍＡｂは、ネクチン－２とそのリガンドＣＤ１１２Ｒおよび／またはＴＩＧＩＴとの相互作用を遮断し、免疫細胞の活性化を増加させることができる。
免疫細胞で発現する受容体と、腫瘍または抗原提示細胞（ＡＰＣ）で発現するネクチン－２に対するそれぞれの親和性の模式図（図２）である。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞の共抑制受容体に関連し、ＤＮＡＭ－１（ＣＤ２２６とも呼ばれる）は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化受容体に関連し、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧとも呼ばれる）はリンパ系免疫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞）の共抑制受容体に関連し、ネクチン－２（ＣＤ１１２）は、主にＣＤ１１２Ｒへの結合を介した免疫細胞の抑制性リガンドである。本発明によれば、抗ネクチン－２ ｍＡｂは、ネクチン－２とそのリガンドＣＤ１１２Ｒおよび／またはＴＩＧＩＴとの相互作用を遮断し、免疫細胞の活性化を増加させることができる。
【0250】
実施例３．抗ネクチン－２ｍＡｂの結合および遮断特性の分析。
ネクチン－２クローンは、ネクチン－２を発現しない親の８８６６細胞（ＥＢＶ陽性バーキットリンパ腫）に結合しなかった。図３Ａは、内因的にネクチン－２を発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳腺癌）細胞（黒色バー）への、またはネクチン－２を過剰発現する８８６６－ｈネクチン－２細胞（灰色バー）への抗ネクチン－２クローンの結合を示している。ｍＡｂのすべては、ハイブリドーマ上清から３０ｕｌ／ウェルで使用した。検出には、ヤギ抗マウス－６４７ Ａｂを１：２５０希釈で使用した。図３Ｂは、８８６６－ｈネクチン２細胞に結合するＣＤ１１２Ｒ－Ｆｃ（ＩｇＧ１のヒトＦｃ領域に融合したＣＤ１１２Ｒの細胞外ドメイン）のＦＡＣＳ分析の結果を示している。生成された抗体のうち、３つのクローン（＃９、１１、および１３）がこれらの相互作用を部分的に遮断し、１つのクローン（＃７）がそれらを完全に遮断した。図３Ｃは、８８６６－ｈネクチン２細胞に結合するＤＮＡＭ－１－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。クローン１５を除いて、他のクローン（＃７～１３）はどれも活性化受容体ＤＮＡＭ－１のネクチン－２への結合を遮断しなかった。図３Ｄは、抗ネクチン－２クローン７および１１の存在下でＣＨＯＫ１－ｈネクチン２細胞に結合するＴＩＧＩＴ－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。両方のクローンがＴＩＧＩＴ－Ｆｃ結合の＞６６％を遮断している。Ｆｃタンパク質のすべてを２０ｕｇ／ｍｌで使用し、３０ｕｌ／ウェルの示されたｍＡｂ上清と共インキュベートした。検出には、抗ヒト－ＡＰＣ Ａｂを１：２００希釈で使用した（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＢ＿２３４０５２６）。これらの結果は、クローンのいくつかが、活性化受容体の結合にいかなる干渉もすることなく、抑制性受容体の結合を防ぐことができることを示唆している。
ネクチン－２クローンは、ネクチン－２を発現しない親の８８６６細胞（ＥＢＶ陽性バーキットリンパ腫）に結合しなかった。図３Ａは、内因的にネクチン－２を発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳腺癌）細胞（黒色バー）への、またはネクチン－２を過剰発現する８８６６－ｈネクチン－２細胞（灰色バー）への抗ネクチン－２クローンの結合を示している。ｍＡｂのすべては、ハイブリドーマ上清から３０ｕｌ／ウェルで使用した。検出には、ヤギ抗マウス－６４７ Ａｂを１：２５０希釈で使用した。図３Ｂは、８８６６－ｈネクチン２細胞に結合するＣＤ１１２Ｒ－Ｆｃ（ＩｇＧ１のヒトＦｃ領域に融合したＣＤ１１２Ｒの細胞外ドメイン）のＦＡＣＳ分析の結果を示している。生成された抗体のうち、３つのクローン（＃９、１１、および１３）がこれらの相互作用を部分的に遮断し、１つのクローン（＃７）がそれらを完全に遮断した。図３Ｃは、８８６６－ｈネクチン２細胞に結合するＤＮＡＭ－１－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。クローン１５を除いて、他のクローン（＃７～１３）はどれも活性化受容体ＤＮＡＭ－１のネクチン－２への結合を遮断しなかった。図３Ｄは、抗ネクチン－２クローン７および１１の存在下でＣＨＯＫ１－ｈネクチン２細胞に結合するＴＩＧＩＴ－ＦｃのＦＡＣＳ分析の結果を示している。両方のクローンがＴＩＧＩＴ－Ｆｃ結合の＞６６％を遮断している。Ｆｃタンパク質のすべてを２０ｕｇ／ｍｌで使用し、３０ｕｌ／ウェルの示されたｍＡｂ上清と共インキュベートした。検出には、抗ヒト－ＡＰＣ Ａｂを１：２００希釈で使用した（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＢ＿２３４０５２６）。これらの結果は、クローンのいくつかが、活性化受容体の結合にいかなる干渉もすることなく、抑制性受容体の結合を防ぐことができることを示唆している。
【0251】
実施例４．抗ネクチン２ｍＡｂによるネクチン－２の遮断は、ＮＫ細胞の活性化を促進する。
健康なドナーからのＮＫ細胞を、異なるｍＡｂおよび標的細胞株の存在下で２：１のＥ：Ｔ比で３７℃で２時間インキュベートした。ＮＫ細胞活性化は、ＣＤ１０７ａの表面発現の誘導によって測定され、対照ＩｇＧに対する倍数変化として表示される（Ｙ軸）。すべてのｍＡｂは、５ｕｇ／ｍｌで使用された。ヒト癌細胞株Ａ５４９（図４Ａおよび４Ｃ、肺腺癌）およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図４Ｂ、乳腺癌）の結果を図４に示す。最も重要な効果は、クローン＃３、７、および１１で認められた。＊＝Ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００２（両側スチューデントのｔ検定による）。５人のドナーのうちの１人についての代表的なデータが示されている。クローン７および１１のヒトＩｇＧ１キメラ変異体は、脱顆粒をさらに増加させ（図４Ｃ）、アイソタイプコントロールと比較して＞２００％の脱顆粒をもたらした。＊＊＊ｐ＜０．００２。２人のドナーのうち１人についての代表的なデータが示されている。このデータは、特定のクローンによるネクチン－２の遮断が、多くの標的に対するＮＫ細胞の活性を増加させることを示唆している。さらに、エフェクターＦｃを有することが、ＮＫ活性がさらに増加させ、ｍＡｂに対する別の可能な作用様式を示唆している。
健康なドナーからのＮＫ細胞を、異なるｍＡｂおよび標的細胞株の存在下で２：１のＥ：Ｔ比で３７℃で２時間インキュベートした。ＮＫ細胞活性化は、ＣＤ１０７ａの表面発現の誘導によって測定され、対照ＩｇＧに対する倍数変化として表示される（Ｙ軸）。すべてのｍＡｂは、５ｕｇ／ｍｌで使用された。ヒト癌細胞株Ａ５４９（図４Ａおよび４Ｃ、肺腺癌）およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図４Ｂ、乳腺癌）の結果を図４に示す。最も重要な効果は、クローン＃３、７、および１１で認められた。＊＝Ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００２（両側スチューデントのｔ検定による）。５人のドナーのうちの１人についての代表的なデータが示されている。クローン７および１１のヒトＩｇＧ１キメラ変異体は、脱顆粒をさらに増加させ（図４Ｃ）、アイソタイプコントロールと比較して＞２００％の脱顆粒をもたらした。＊＊＊ｐ＜０．００２。２人のドナーのうち１人についての代表的なデータが示されている。このデータは、特定のクローンによるネクチン－２の遮断が、多くの標的に対するＮＫ細胞の活性を増加させることを示唆している。さらに、エフェクターＦｃを有することが、ＮＫ活性がさらに増加させ、ｍＡｂに対する別の可能な作用様式を示唆している。
【0252】
実施例５．ネクチン－２は様々な癌細胞で発現される。
様々なヒト腫瘍細胞株におけるネクチン－２およびＰＶＲの発現をＦＡＣＳによって分析した。分析は、黒色腫細胞、乳癌細胞、大腸直腸癌（ＣＲＣ）細胞、腎臓細胞（ＨＥＫ）、肺癌細胞、前立腺癌細胞、および脳腫瘍細胞（ＧＢＭ）に対して行われ、すべてＰＶＲおよびネクチン－２を発現する。市販の抗ネクチン－２（クローンＴｘ３１）および社内の抗ＰＶＲｍＡｂを使用した。すべてのｍＡｂは、２ｕｇ／ｍｌで使用された。検出には、ヤギ抗マウス－６４７を１：２５０希釈で使用した。ネクチン－２は様々な癌細胞で高度に発現していることが判明した。
様々なヒト腫瘍細胞株におけるネクチン－２およびＰＶＲの発現をＦＡＣＳによって分析した。分析は、黒色腫細胞、乳癌細胞、大腸直腸癌（ＣＲＣ）細胞、腎臓細胞（ＨＥＫ）、肺癌細胞、前立腺癌細胞、および脳腫瘍細胞（ＧＢＭ）に対して行われ、すべてＰＶＲおよびネクチン－２を発現する。市販の抗ネクチン－２（クローンＴｘ３１）および社内の抗ＰＶＲｍＡｂを使用した。すべてのｍＡｂは、２ｕｇ／ｍｌで使用された。検出には、ヤギ抗マウス－６４７を１：２５０希釈で使用した。ネクチン－２は様々な癌細胞で高度に発現していることが判明した。
【0253】
実施例６．ヒトおよびカニクイザルのネクチン－２への抗ネクチン－２ｍＡｂの同様の結合。
ヒトのネクチン－２（タンパク質ｉｄ：Ｑ９２６９２）およびカニクイザル（Ｃｙｎｏ）（ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、タンパク質ｉｄ：ＸＰ＿００５５８９６０７．１）のネクチン－２に結合する抗ネクチン－２ｍＡｂ（クローン７および１１）を調べた。カニクイザルとヒトネクチン－２との間のタンパク質ブラストは、成熟タンパク質の細胞外ドメインが種間で１４アミノ酸の違いを有していることを明らかにした。図５Ａは、ヒトまたはＣｙｎｏのネクチン－２のいずれかを発現するＣＨＯ細胞に一連の３倍希釈で１３．３ｎＭ～０．０２ｎＭの範囲で添加された両方のｍＡｂのオーバーレイ結合曲線を示している。このアッセイのＦＡＣＳ分析の結果は、１００％に設定された最大結合と比較した相対結合強度として表される。検出には、ヤギ抗マウス－６４７ Ａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＢ＿２３３８９１０）を１：２５０希釈で使用した。このアッセイのデータ分析の要約も同様に示されており、両方のｍＡｂがヒトおよびＣｙｎｏのネクチン－２に高い類似の親和性で結合することをさらに示している。
ヒトのネクチン－２（タンパク質ｉｄ：Ｑ９２６９２）およびカニクイザル（Ｃｙｎｏ）（ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、タンパク質ｉｄ：ＸＰ＿００５５８９６０７．１）のネクチン－２に結合する抗ネクチン－２ｍＡｂ（クローン７および１１）を調べた。カニクイザルとヒトネクチン－２との間のタンパク質ブラストは、成熟タンパク質の細胞外ドメインが種間で１４アミノ酸の違いを有していることを明らかにした。図５Ａは、ヒトまたはＣｙｎｏのネクチン－２のいずれかを発現するＣＨＯ細胞に一連の３倍希釈で１３．３ｎＭ～０．０２ｎＭの範囲で添加された両方のｍＡｂのオーバーレイ結合曲線を示している。このアッセイのＦＡＣＳ分析の結果は、１００％に設定された最大結合と比較した相対結合強度として表される。検出には、ヤギ抗マウス－６４７ Ａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＢ＿２３３８９１０）を１：２５０希釈で使用した。このアッセイのデータ分析の要約も同様に示されており、両方のｍＡｂがヒトおよびＣｙｎｏのネクチン－２に高い類似の親和性で結合することをさらに示している。
【0254】
抗ネクチン－２ｍＡｂの結合も、Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ（アフリカミドリザル）由来のベロ細胞を使用して調べた。この種は、ヒトネクチン－２と９７％の類似性でネクチン－２タンパク質（ＸＰ＿００７９９５３４２．１）を発現する。図５Ｂは、図５Ａで記載したＦＡＣＳ分析によってテストされた内因性ヒトネクチン－２（２９３Ｔ細胞で発現）および内因性アフリカミドリザル－ネクチン－２（ベロ細胞で発現）への抗ネクチン－２ｍＡｂの結合を示している（Ａｂ範囲：２０～０．０００３ｎＭ）。この分析は、両方の抗ネクチン－２クローンについて、高い親和性で、ヒトおよびサルの両方のネクチン－２標的への同様のＡｂ結合を明らかにし、これは要約表でも明らかである。
【0255】
実施例７．抗ｈネクチン－２ｍＡｂはＴ細胞の増殖に影響を及ぼす。
ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ（Ｃ３４５５４、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）標識し、０．２ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体２ｕｇ／ｍｌの存在下で標的細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図６Ａ）またはＡ５４９（図６Ｂ）とインキュベートした。インキュベーション後、免疫細胞を収集し、抗ヒトＣＤ８で染色した。ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞増殖は、ＣＦＳＥシグナル強度によって評価された。ｍＩｇＧ処理細胞のＣＦＳＥレベルを１に設定した。結果は、この対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。実験は４回行った；すべてのｐ値は両側スチューデントのｔ検定で０．０２未満であった。示されているのは、試験された７人を代表する１人のＰＢＭＣドナーの結果である。データは、示されたクローンによるネクチン－２の遮断が、様々な起源からの腫瘍細胞の存在下でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を増加させることを示唆している。
ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ（Ｃ３４５５４、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）標識し、０．２ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体２ｕｇ／ｍｌの存在下で標的細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図６Ａ）またはＡ５４９（図６Ｂ）とインキュベートした。インキュベーション後、免疫細胞を収集し、抗ヒトＣＤ８で染色した。ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞増殖は、ＣＦＳＥシグナル強度によって評価された。ｍＩｇＧ処理細胞のＣＦＳＥレベルを１に設定した。結果は、この対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。実験は４回行った；すべてのｐ値は両側スチューデントのｔ検定で０．０２未満であった。示されているのは、試験された７人を代表する１人のＰＢＭＣドナーの結果である。データは、示されたクローンによるネクチン－２の遮断が、様々な起源からの腫瘍細胞の存在下でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を増加させることを示唆している。
【0256】
実施例８．抗ｈネクチン－２ｍＡｂは、単独で、または既知のチェックポイント遮断薬と組み合わせて、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖に影響を及ぼす。
Ｔ細胞増殖に対するｍＡｂの効果を調べるために、ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、０．２ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌおよび示されたｍＡｂの２ｕｇ／ｍｌの存在下で、標的的ＲＫＯ（ヒト大腸癌細胞；図７Ａ）またはＡ５４９（図７Ｂ）細胞とインキュベートした。併用治療では、各ｍＡｂを２ｕｇ／ｍｌで添加した。インキュベーション後、免疫細胞を収集し、抗ヒトＣＤ８で染色した。全集団およびＣＤ８増殖細胞を分析し、ｍＩｇＧ処理細胞のＣＦＳＥレベルを１に設定した。実験は４回行った；すべてのｐ値は両側スチューデントのｔ検定で０．０２未満であった。結果は、対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。試験されたすべての組み合わせにより、個々の治療でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が大幅に増加した。
Ｔ細胞増殖に対するｍＡｂの効果を調べるために、ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、０．２ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌおよび示されたｍＡｂの２ｕｇ／ｍｌの存在下で、標的的ＲＫＯ（ヒト大腸癌細胞；図７Ａ）またはＡ５４９（図７Ｂ）細胞とインキュベートした。併用治療では、各ｍＡｂを２ｕｇ／ｍｌで添加した。インキュベーション後、免疫細胞を収集し、抗ヒトＣＤ８で染色した。全集団およびＣＤ８増殖細胞を分析し、ｍＩｇＧ処理細胞のＣＦＳＥレベルを１に設定した。実験は４回行った；すべてのｐ値は両側スチューデントのｔ検定で０．０２未満であった。結果は、対照と比較して増殖が倍増したものとして示されている。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。試験されたすべての組み合わせにより、個々の治療でＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が大幅に増加した。
【0257】
実施例９．抗ｈネクチン－２抗体はＩＦＮγの分泌に影響を及ぼす。
ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、０．２ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体の２ｕｇ／ｍｌの存在下で、標的細胞ＲＫＯ（図８Ａ）またはＡ５４９（図８Ｂ）とインキュベートした。併用治療では、各ｍＡｂを２ｕｇ／ｍｌで添加した。９６時間後、プレートを遠心分離し、上清を回収した。ＩＦＮγの定量化は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製のＨｕｍａｎ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅを使用して、製造元のプロトコルに従って行った。試験された５人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーについての結果が示されている。治療のすべては、ＩＦＮγ分泌の有意な増加をもたらした（ｐ＜０．００１両側スチューデントのｔ検定）。
ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ標識し、０．２ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌおよび示された抗体の２ｕｇ／ｍｌの存在下で、標的細胞ＲＫＯ（図８Ａ）またはＡ５４９（図８Ｂ）とインキュベートした。併用治療では、各ｍＡｂを２ｕｇ／ｍｌで添加した。９６時間後、プレートを遠心分離し、上清を回収した。ＩＦＮγの定量化は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製のＨｕｍａｎ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅを使用して、製造元のプロトコルに従って行った。試験された５人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーについての結果が示されている。治療のすべては、ＩＦＮγ分泌の有意な増加をもたらした（ｐ＜０．００１両側スチューデントのｔ検定）。
【0258】
実施例１０．抗ｈネクチン－２抗体単独または既知のチェックポイント遮断薬との併用は、ｈＰＢＭＣによる腫瘍細胞の死滅に影響を及ぼす。
実施例８に記載のようにアッセイを実施した。９６～１２０時間後、免疫細胞を除去し、腫瘍細胞を徹底的に洗浄し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）を使用して、製造元のプロトコルに従って付着性腫瘍細胞の生存率を確立した。すべての結果はキットの線形範囲内であった。ｍＩｇＧで処理したウェルの腫瘍細胞の死滅を１に設定した。すべての個別の治療は、腫瘍細胞の死滅を有意に増加させた（ｐ＜０．０１両側ｔ検定）（図９Ａ、ＲＫＯ；図９Ｂ、Ａ５４９）。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。試験されたほとんどの組み合わせは、個々の治療と比べて腫瘍細胞の死滅を有意に増加させた。
実施例８に記載のようにアッセイを実施した。９６～１２０時間後、免疫細胞を除去し、腫瘍細胞を徹底的に洗浄し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）を使用して、製造元のプロトコルに従って付着性腫瘍細胞の生存率を確立した。すべての結果はキットの線形範囲内であった。ｍＩｇＧで処理したウェルの腫瘍細胞の死滅を１に設定した。すべての個別の治療は、腫瘍細胞の死滅を有意に増加させた（ｐ＜０．０１両側ｔ検定）（図９Ａ、ＲＫＯ；図９Ｂ、Ａ５４９）。試験された２人のドナーのうち１人のＰＢＭＣドナーの結果が示されている。試験されたほとんどの組み合わせは、個々の治療と比べて腫瘍細胞の死滅を有意に増加させた。
【0259】
実施例１１．ネクチン－２ｍＡｂはインビボで腫瘍の発生を有意に阻害する。
Ｓｃｉｄ雌マウス（ｎ＝３３）に、マトリゲル中５×１０６ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を皮下注射した。腫瘍が８０～１２０ｍｍ３に達したら、マウスをランダムに３つの群に分け、ＰＢＳ（薄い灰色のひし形；図１０）、ｈＩｇＧ１対照Ａｂ（灰色の四角）、またはクローン－７－ヒトＩｇＧ１（２．７．１）（黒丸）（両方とも３ｍｇ／ｋｇで）のいずれかを静脈内（ｉ．ｖ．）注射することにより、盲検法で週２回処置した。図１０に示すように、クローン２．７．１では、治療後７日目から有意な腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が観察され、試験終了時に５４％に達した。＊ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００８。
Ｓｃｉｄ雌マウス（ｎ＝３３）に、マトリゲル中５×１０６ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を皮下注射した。腫瘍が８０～１２０ｍｍ３に達したら、マウスをランダムに３つの群に分け、ＰＢＳ（薄い灰色のひし形；図１０）、ｈＩｇＧ１対照Ａｂ（灰色の四角）、またはクローン－７－ヒトＩｇＧ１（２．７．１）（黒丸）（両方とも３ｍｇ／ｋｇで）のいずれかを静脈内（ｉ．ｖ．）注射することにより、盲検法で週２回処置した。図１０に示すように、クローン２．７．１では、治療後７日目から有意な腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が観察され、試験終了時に５４％に達した。＊ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０２、＊＊＊ｐ＜０．００８。
【0260】
実施例１２．ヒトＩｇＧ２Ｆｃを含むキメラネクチン－２ｍＡｂは、抗ＰＤ－１ｍＡｂとの相乗効果で、腫瘍細胞の死滅およびＰＢＭＣ増殖の増加をもたらす。
Ａ５４９細胞は、Ａｂなし、またはクローン－１１－ｈＩｇＧ２（２．１１．２）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（両方とも３．５ｕｇ／ｍｌで）、またはそれらの組み合わせ（それぞれ３．５ｕｇ／ｍｌ）のいずれかを使用して、４ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌの存在下で、Ｅ：Ｔ比７：１でＰＢＭＣと９６時間共インキュベートした。２．１１．２治療群では、腫瘍細胞死滅（図１１Ａ）およびＰＢＭＣ（Ｔ細胞）増殖（図１１Ｂ）の有意な増加が見られ、抗ＰＤ－１ Ａｂ Ｋｅｙｔｒｕｄａと組み合わせるとさらに増加した。＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００２、＊＊＊ｐ＜０．０００８。
Ａ５４９細胞は、Ａｂなし、またはクローン－１１－ｈＩｇＧ２（２．１１．２）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（両方とも３．５ｕｇ／ｍｌで）、またはそれらの組み合わせ（それぞれ３．５ｕｇ／ｍｌ）のいずれかを使用して、４ｕｇ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌの存在下で、Ｅ：Ｔ比７：１でＰＢＭＣと９６時間共インキュベートした。２．１１．２治療群では、腫瘍細胞死滅（図１１Ａ）およびＰＢＭＣ（Ｔ細胞）増殖（図１１Ｂ）の有意な増加が見られ、抗ＰＤ－１ Ａｂ Ｋｅｙｔｒｕｄａと組み合わせるとさらに増加した。＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００２、＊＊＊ｐ＜０．０００８。
【0261】
実施例１３．クローン７および１１に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、ネクチン－２を発現する腫瘍細胞の存在下で特異的に活性化される。
健康なドナーからのＰＢＭＣを、本発明によるｓｃＦｖ分子および少なくとも１つの調節、膜貫通および／または刺激領域を含む異なるＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。図１２Ａに示す概略図では、ＣＡＲ－Ｔは、ｓｃＦｖと、４つの領域；ＣＤ８ストーク、ＣＤ２８ ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζと、を含む。ネクチン－２ＣＡＲ－Ｔ２．０７（クローン７に由来する結合部位）またはＣＡＲ－Ｔ ２．１１（クローン１１に由来する結合部位）ＰＢＭＣを、Ｕ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞と様々なＥ：Ｔ比でインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）は、試験されたＥ：Ｔ比の大部分で有意であって（ＮＳで示された場合を除いてｐ＜０．００５）ならびに活性化ＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌で有意であった（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
健康なドナーからのＰＢＭＣを、本発明によるｓｃＦｖ分子および少なくとも１つの調節、膜貫通および／または刺激領域を含む異なるＣＡＲ－Ｔ構築物で形質導入した。図１２Ａに示す概略図では、ＣＡＲ－Ｔは、ｓｃＦｖと、４つの領域；ＣＤ８ストーク、ＣＤ２８ ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζと、を含む。ネクチン－２ＣＡＲ－Ｔ２．０７（クローン７に由来する結合部位）またはＣＡＲ－Ｔ ２．１１（クローン１１に由来する結合部位）ＰＢＭＣを、Ｕ９３７またはＢＴ－４７４標的細胞と様々なＥ：Ｔ比でインキュベートした。標的細胞の死滅（図１２Ｂおよび１２Ｄ）は、試験されたＥ：Ｔ比の大部分で有意であって（ＮＳで示された場合を除いてｐ＜０．００５）ならびに活性化ＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌で有意であった（図１２Ｃおよび１２Ｅ、ｐ＜０．０３）。図１２Ｂ～Ｅは、各細胞株に対して実施された３つの実験のうちの代表的な実験を示している（ＣＡＲ－Ｔ２．０７灰色のバー、ＣＡＲ－Ｔ２．１１黒いバー）。
【0262】
実施例１４．抗体配列
表１は、本発明の抗体配列のいくつかを詳述している。
表１は、本発明の抗体配列のいくつかを詳述している。
【表1】
【0263】
前述の特定の実施形態の説明は、本発明の一般的な性質を完全に明らかにするので、他の人は、現在の知識を適用することによって、過度の実験なしに、および一般的な概念から逸脱することなく、かかる特定の実施形態の様々な用途に容易に修正および／または適合することができ、したがって、かかる適合および変更は、本開示の実施形態の均等物の意味および範囲内で理解されるべきであり、そのように意図されている。本明細書で使用される表現または用語は、説明を目的としたものであり、限定を目的としたものではないことを理解されたい。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図12D】
【図12E】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2025-01-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】