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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025026712
(43)【公開日】2025-02-21
(54)【発明の名称】メラニン産生抑制装置及びメラニン産生抑制方法
(51)【国際特許分類】
A61N 5/06 20060101AFI20250214BHJP
【ＦＩ】
A61N5/06 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024217666
(22)【出願日】2024-12-12
(62)【分割の表示】P 2024508020の分割
【原出願日】2023-11-06
(31)【優先権主張番号】P 2022178354
(32)【優先日】2022-11-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2023011024
(32)【優先日】2023-01-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2023104208
(32)【優先日】2023-06-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000114628
【氏名又は名称】ヤーマン株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】小杉 知司
(72)【発明者】
【氏名】山中 一範
(72)【発明者】
【氏名】東平 正志
(57)【要約】
【課題】本開示の肌処理装置及び肌処理方法は、照射された人の肌部位におけるメラニン産生を効果的に抑制するのに好適である。
【解決手段】本開示の肌処理装置及び肌処理方法は、４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ以下の波長範囲に中心波長を有する所定光を発生する光源を備え、光源からの所定光を肌に照射可能である。所定光は、好ましくは、略５０５ｎｍの中心波長を有する。
【選択図】なし
【解決手段】本開示の肌処理装置及び肌処理方法は、４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ以下の波長範囲に中心波長を有する所定光を発生する光源を備え、光源からの所定光を肌に照射可能である。所定光は、好ましくは、略５０５ｎｍの中心波長を有する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ未満の波長範囲に中心波長を有する所定光を発生する光源を備え、
前記光源からの前記所定光を肌に照射可能である、メラニン産生抑制装置。
前記光源からの前記所定光を肌に照射可能である、メラニン産生抑制装置。
【請求項2】
前記所定光は、５０５ｎｍの中心波長を有する、請求項１に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項3】
前記所定光を、０．５ｍＷ／ｃｍ２以上かつ６２ｍＷ／ｃｍ２以下の放射強度で照射する、請求項１又は２に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項4】
前記所定光を、０．０９Ｊ／ｃｍ２以上かつ４５Ｊ／ｃｍ２以下の範囲の照射エネルギで照射する、請求項１又は２に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項5】
前記光源は、ＬＥＤを含む、請求項１又は２に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項6】
１つ以上の動作モードで光の照射を制御する制御部を更に含み、
前記１つ以上の動作モードは、メラニン産生抑制効果に対応付けられている所定動作モード、又は、メラニン産生抑制効果に関連する効果に対応付けられている所定動作モードを有し、
前記制御部は、前記所定動作モードにおいて、前記所定光を出力させる、請求項１又は２に記載のメラニン産生抑制装置。
前記１つ以上の動作モードは、メラニン産生抑制効果に対応付けられている所定動作モード、又は、メラニン産生抑制効果に関連する効果に対応付けられている所定動作モードを有し、
前記制御部は、前記所定動作モードにおいて、前記所定光を出力させる、請求項１又は２に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項7】
ユーザの身体の一部に対向させることが可能な照射部を有し、
前記制御部は、前記所定動作モードにおいて、前記照射部から前記所定光を単独で出力する、請求項６に記載のメラニン産生抑制装置。
前記制御部は、前記所定動作モードにおいて、前記照射部から前記所定光を単独で出力する、請求項６に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項8】
前記所定光の照射時間の占める割合が１／２以上となる１分以上の連続的な光照射が可能である、請求項１又は２に記載のメラニン産生抑制装置。
【請求項9】
４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ未満の波長範囲に中心波長を有する所定光を、人の肌に照射することを含む、メラニン産生抑制方法。
【請求項10】
前記所定光は、略５０５ｎｍの中心波長を有する、請求項９に記載のメラニン産生抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、メラニン産生抑制装置及びメラニン産生抑制方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ピーク波長域が５００ｎｍ～５４０ｎｍで、半値幅１０ｎｍ以下の超狭帯域の緑色光を発生させる超狭帯域光照射手段を備える皮膚創傷治癒装置が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】ＷＯ２０１１／０６７９４１号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
しかしながら、上記のような従来技術では、照射された人の肌部位におけるメラニン産生を効果的に抑制することが難しい。
【0005】
そこで、本開示は、照射された人の肌部位におけるメラニン産生を効果的に抑制することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
１つの側面では、４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ以下の波長範囲に中心波長を有する所定光を発生する光源を備え、
前記光源からの前記所定光を肌に照射可能である、肌処理装置が開示される。
前記光源からの前記所定光を肌に照射可能である、肌処理装置が開示される。
【発明の効果】
【0007】
本開示によれば、照射された人の肌部位におけるメラニン産生を効果的に抑制することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】本実施形態の光照射装置の外観を示す斜視図である。
【図2】ＬＥＤから発生される光（所定光）の特性の説明図である。
【図3】光照射装置に係る制御系の概略を示す図である。
【図3A】制御装置のハードウェア構成の一例を示す図である。
【図4A】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その１）を示す図である。
【図4B】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その２）を示す図である。
【図5A】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その３）を示す図である。
【図5B】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その４）を示す図である。
【図5C】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その５）を示す図である。
【図5D】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その６）を示す図である。
【図6A】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その７）を示す図である。
【図6B】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その８）を示す図である。
【図7A】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その９）を示す図である。
【図7B】緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果に係る試験結果（その１０）を示す図である。
【図8】緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果（メラニンの産生を抑制効果）の関係を表す表である。
【図9】緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果の関係を表すグラフ（その１）である。
【図10】緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果の関係を表すグラフ（その２）である。
【図11】緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果の関係を表すグラフ（その３）である。
【図11A】緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果の関係に関する別の試験結果を示すグラフである。
【図12】波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果（その１）を示す図である。
【図13】波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果（その２）を示す図である。
【図14】波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果（その３）を示す図である。
【図15】ケラチン１０の発現量に関する試験結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0009】
以下、添付図面を参照しながら各実施例について詳細に説明する。
【0010】
図１は、本実施例による光照射装置１を示す斜視図である。
【0011】
光照射装置１は、人の肌に照射可能な光を発生する。光は、美容関連効果を有してもよい。この場合、美容関連効果は、任意であり、脱毛、美肌、たるみの解消や、引き締め、脂肪燃焼、リフトアップ、小顔化、肌のハリやツヤ、潤いの向上又はその類の１つ以上の任意の組み合わせを含んでよい。また、美容関連効果は、数値化可能な効果であってもよいし、数値化可能でない効果であってもよい。
【0012】
光照射装置１の機能は、光照射装置１内のコンピュータ単独、又は、光照射装置１内のコンピュータと、外部サーバ及び／又はユーザ端末の組み合わせで実現可能である。また、この場合、光照射装置１の機能を実現するコンピュータ読み取りプログラムは、光照射装置１内のコンピュータにより実行されてもよいし、光照射装置１内のコンピュータと、外部サーバ及び／又はユーザ端末の組み合わせにより実行されてもよい。
【0013】
なお、図１に示す光照射装置１は、ユーザの手により把持可能な携帯型であるが、固定機器にアーム等を介して可動に支持される可動式に適用されてもよい。
【0014】
光照射装置１は、把持部２と、ヘッド部３とを含む。この場合、ユーザは、把持部２を把持して、自身の顔部や体における所望の部位にヘッド部３の肌対向部３ａ（後述）を向けることで、所望の部位に対して光照射装置１からの光を局所的に照射できる。
【0015】
把持部２は、ユーザの手で把持されやすい形態を有する。把持部２には、電源のオン／オフボタンやモード切替ボタン、強さ調整ボタン等のような各種ボタンを含む入力部（図示せず）を含んでよい。なお、各種ボタンは、機械式のボタンであってもよいし、タッチスイッチであってもよい。また、把持部２には、光照射装置１の状態等を表示する表示部（図示せず）が設けられてもよい。
【0016】
ヘッド部３は、把持部２の端部に設けられる。なお、ヘッド部３は、把持部２に対して固定されてもよいし、取り外し可能であってもよいし、把持部２に対して可動であってもよい。また、着脱可能なアタッチメントを複数備えてもよい。
【0017】
ヘッド部３は、略平面状や曲面状（比較的大きい曲率半径の曲面状）の肌対向部３ａを有してよい。正面視での肌対向部３ａの形態（肌対向部３ａに対して垂直な方向に視たときの形態）は、矩形や円形、楕円形、多角形等のような任意である。肌対向部３ａは、ガラスなど、光が透過可能な任意の材料により形成されてよい。本実施例では、肌対向部３ａは、光出射面により形成される。なお、肌対向部３ａは、光出射面が露出した形態であるが、レンズ等により覆われてもよい。肌対向部３ａは、好ましくは、上下方向で肌に対して凹む凹状の形態である。この場合、凹状の部分に肌への浸透対象の対象物を含む化粧品等を含めつつ、光照射による肌処理を行うことができ、肌処理効果を高めることができる。
【0018】
ヘッド部３には、光照射部３０（図１には図示されず、図３参照）が埋設される。光照射部３０は、肌対向部３ａを介して肌に照射される光を生成する。すなわち、光照射部３０は、肌対向部３ａを介して肌に光を照射する。なお、光照射部３０と肌対向部３ａとの間には、光ガイド等のような光学系が配置されてもよいし、光学系が配置されなくてもよい。
【0019】
本実施形態では、光照射部３０は、ＬＥＤ（Ｌｉｇｈｔ Ｅｍｉｔｔｉｎｇ Ｄｉｏｄｅ）３６を含む。ＬＥＤ３６は、１つだけ配置されてもよいが、複数個配置されてもよい。複数個配置される場合、ＬＥＤ３６は、例えば、肌対向部３ａに対して略平行な面内に複数個が配置されてもよい。
【0020】
なお、本実施形態では、光照射装置１は、携帯型であるが、固定型であってもよいし、形態は任意である。また、光照射装置１は、例えば、顔に装着するマスクの形態や体に巻き付けて使用可能な形態であってもよい。また、光照射装置１の照射範囲も任意であり、広範囲に照射する態様とスポット的に照射する態様など様々な態様で肌への照射が可能とされてもよい。また、光照射装置１は、光照射部３０とは別のヘッド部３を有しているが、ヘッド部３と光照射部３０とが一体化した構成であってもよい。
【0021】
図２は、ＬＥＤ３６から発生される光（所定光）の特性の説明図であり、横軸に波長を取り、縦軸に強度を取り、特性の一例が示されている。
【0022】
ＬＥＤ３６は、好ましくは、４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ以下の波長範囲に中心波長を有する所定光を発生する光源である。この波長範囲（及びそのうちの略５０５ｎｍという波長）の優位性の根拠（技術的意義）は、図４Ａ、図４Ｂ、及び図１２以降を参照して後述する。なお、５０５ｎｍ及びその近傍は、厳密には青緑色の波長であり、５２５ｎｍ及びその近傍は、厳密には緑色の波長であるが、以下では４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ以下の波長範囲を、“緑色”と表現する場合がある。
【0023】
所定光は、より好ましくは、図２に示すように、略５０５ｎｍの中心波長を有する。このような中心波長であれば、そうでない場合に比べて、後述するように、照射されたユーザの肌部位におけるメラニン産生を抑制できる。例えば、所定光は、照射されたユーザの肌部位において、所定光を照射しない場合に比べて５％以上、より好ましくは、１０％以上良好なメラニン産生抑制効果を有する態様で、照射可能である。
【0024】
所定光は、好ましくは、半値半幅（図２参照）が±２０ｎｍ以下であり、より好ましくは、±１０ｎｍ程度である。これにより、照射されたユーザの肌部位におけるメラニン産生の抑制効果の最大化を図ることができる。
【0025】
光照射部３０は、所定光を、好ましくは、０．５ｍＷ／ｃｍ２以上かつ６２ｍＷ／ｃｍ２以下の範囲の放射強度で、より好ましくは、１１．５ｍＷ／ｃｍ２以上かつ３０ｍＷ／ｃｍ２以下の範囲の放射強度で、照射する。これに関する試験結果は、図８以降を参照して後述する。
【0026】
また、光照射部３０は、所定光を、好ましくは、０．０９Ｊ／ｃｍ２以上かつ３０Ｊ／ｃｍ２以下の範囲の照射エネルギで、より好ましくは、０．０９Ｊ／ｃｍ２以上かつ１１Ｊ／ｃｍ２以下の範囲の照射エネルギで照射する。
【0027】
なお、複数のＬＥＤ３６の素子を１チップに実装することも可能である。あるいは、ＬＥＤ３６は、他の中心波長を有する他のＬＥＤと組み合わせて１チップ化されてもよい。例えば、ＬＥＤ３６と赤色のＬＥＤを１チップＬＥＤ化する場合、一のチップにおける緑色ＬＥＤと赤色ＬＥＤの数の比率は、適切に適合されてよい。
【0028】
図３は、光照射装置１に係る制御系の概略を示す図である。
【0029】
光照射装置１は、制御装置１００を含み、制御装置１００には、電源９０及びＬＥＤ３６が電気的に接続される。制御装置１００は、電源９０からの電力に基づいて動作し、ＬＥＤ３６を制御する。ＬＥＤ３６は、制御装置１００による制御下で、電源９０からの電力に基づいて動作する。電源９０は、外部電源及び／又は内部電源を含んでよい。なお、内部電源は、充電可能なバッテリであってよい。
【0030】
制御装置１００は、ＬＥＤ３６を介して肌に所定光を照射する。この際、制御装置１００は、所定光の照射時間の占める割合が１／２以上となる１分以上の連続的な光照射を実現してよい。この場合、所定光の照射時間以外の時間は、他の波長の光が照射されてもよいし、光が照射されなくてもよい（すなわち間欠的な所定光の照射であってもよい）。
【0031】
また、制御装置１００は、１つ以上の動作モードでヘッド部３からの光の照射を制御してよい。１つ以上の動作モードは、メラニン産生抑制効果に対応付けられている所定動作モード、又は、メラニン産生抑制効果に関連する効果に対応付けられている所定動作モードを有してよい。この場合、制御装置１００は、所定動作モードにおいて、所定光をヘッド部３から出力させる。
【0032】
【0033】
制御装置１００は、バス１９で接続されたＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）１１、ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）１２、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）１３、補助記憶装置１４、ドライブ装置１５、及び通信インターフェース１７、並びに、通信インターフェース１７に接続された有線送受信部２５及び無線送受信部２６を含む。
【0034】
補助記憶装置１４は、例えばＨＤＤ（Ｈａｒｄ Ｄｉｓｋ Ｄｒｉｖｅ）や、ＳＳＤ（Ｓｏｌｉｄ Ｓｔａｔｅ Ｄｒｉｖｅ）などであり、アプリケーションソフトウェアなどに関連するデータを記憶する記憶装置である。
有線送受信部２５は、有線ネットワークを利用して通信可能な送受信部を含む。有線送受信部２５には、制御対象６０が接続される。ただし、制御対象６０の一部又は全部は、バス１９に接続されてもよいし、無線送受信部２６に接続されてもよい。
有線送受信部２５は、有線ネットワークを利用して通信可能な送受信部を含む。有線送受信部２５には、制御対象６０が接続される。ただし、制御対象６０の一部又は全部は、バス１９に接続されてもよいし、無線送受信部２６に接続されてもよい。
【0035】
無線送受信部２６は、無線ネットワークを利用して通信可能な送受信部である。無線ネットワークは、携帯電話の無線通信網、インターネット、ＶＰＮ（Ｖｉｒｔｕａｌ Ｐｒｉｖａｔｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ）、ＷＡＮ（Ｗｉｄｅ Ａｒｅａ Ｎｅｔｗｏｒｋ）等を含んでよい。また、無線送受信部２６は、近距離無線通信（ＮＦＣ：Ｎｅａｒ Ｆｉｅｌｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）部、ブルートゥース（Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ、登録商標）通信部、Ｗｉ－Ｆｉ（Ｗｉｒｅｌｅｓｓ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ）送受信部、赤外線送受信部などを含んでもよい。なお、制御装置１００は、無線送受信部２６を介してサーバ（図示せず）と通信し、各種情報を取得してもよい。
【0036】
なお、制御装置１００は、記録媒体１６と接続可能であってもよい。記録媒体１６は、所定のプログラムを格納する。この記録媒体１６に格納されたプログラムは、ドライブ装置１５を介して制御装置１００の補助記憶装置１４等にインストールされる。インストールされた所定のプログラムは、制御装置１００のＣＰＵ１１により実行可能となる。例えば、記録媒体１６は、ＣＤ（Ｃｏｍｐａｃｔ Ｄｉｓｃ）－ＲＯＭ、フレキシブルディスク、光磁気ディスク等のように情報を光学的、電気的あるいは磁気的に記録する記録媒体、ＲＯＭ、フラッシュメモリ等のように情報を電気的に記録する半導体メモリ等であってよい。なお、記録媒体１６には、搬送波は含まれない。
【0037】
次に、上述した所定光の効果（メラニン産生の抑制効果）について、試験結果等を参照して、更に説明する。
【0038】
可視光線は生体侵襲性が小さいため、医療分野や美容皮膚分野への応用を目的に生体に対する可視光線の影響についてさまざまな研究がなされてきた（今川ら、日レ医誌、３２、４４４（２０１２））。例えば、赤色光は皮膚の老化を防止し、緑、黄色光は過剰な細胞活動を抑制する手段として重要な役割を果たすとの報告もある。
【0039】
皮膚における色素沈着の原因となるメラニン色素は、メラノサイト内で生成され有害な紫外線からＤＮＡの損傷を防ぐ重要な役割を果たす反面、シミの原因でもありこれを改善したいニーズは高い。そこで細胞活動を抑制する緑色ＬＥＤ光が、同様にメラノーマの活動に影響を及ぼし、メラニン産生量を低減するかについて効果検証を行った。
【0040】
本願発明者は、緑色ＬＥＤによるメラニン産生抑制効果を検証するために、以下に示す試験を、桐蔭横浜大学に依頼した。メラニン産生抑制効果の検証は、同大学にて入手されたマウス由来Ｂ１６４Ａ５細胞（Ｂ１６メラノーマ細胞、理研ＢＲＣ）及びヒト由来メラノーマ細胞（ＨＭＶ－II細胞、（株）ケー・エー・シー）を用いて行われた。また緑色ＬＥＤの光源にはウシオ電機製ＳＭＴ５２５（波長５２５ｎｍ）、ＳＭＴ５０５（波長５０５ｎｍ）を用いた。
【0041】
（Ｂ１６メラノ―マ細胞による細胞生存数）
Ｂ１６メラノーマ細胞は６穴のウェルプレートに１×１０４および２×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養後、フェノールレッド不含培地に置換した。緑色ＬＥＤ照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（同仁化学社製）を添加し、３時間培養した。培養後、培地を分注し、４５０ｎｍの吸光度を測定し、細胞生存数を算出した。４５０ｎｍの吸光度が大きいほど、細胞生存数が大きいことを意味する。
Ｂ１６メラノーマ細胞は６穴のウェルプレートに１×１０４および２×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養後、フェノールレッド不含培地に置換した。緑色ＬＥＤ照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（同仁化学社製）を添加し、３時間培養した。培養後、培地を分注し、４５０ｎｍの吸光度を測定し、細胞生存数を算出した。４５０ｎｍの吸光度が大きいほど、細胞生存数が大きいことを意味する。
【0042】
（Ｂ１６メラノ―マ細胞によるメラニン産生抑制の評価）
Ｂ１６メラノーマ細胞は６穴のウェルプレートに１×１０４および２×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養後、１００ｎＭのメラニン合成誘導剤α－ＭＳＨを含むフェノールレッド不含培地に置換した。緑色ＬＥＤ照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養後、細胞をＰＢＳ（－）１ｍＬで洗浄、１０ｗｔ％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む２ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液で細胞を溶解させ、４０５ｎｍに対する吸光度からメラニン産生量を測定した。さらに、ＲＣ ＤＣＴＭプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ社製）を用いて、細胞由来タンパク量を測定した。測定結果をもとに、細胞由来タンパク量あたりのメラニン量を算出した。
Ｂ１６メラノーマ細胞は６穴のウェルプレートに１×１０４および２×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養後、１００ｎＭのメラニン合成誘導剤α－ＭＳＨを含むフェノールレッド不含培地に置換した。緑色ＬＥＤ照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養後、細胞をＰＢＳ（－）１ｍＬで洗浄、１０ｗｔ％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む２ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液で細胞を溶解させ、４０５ｎｍに対する吸光度からメラニン産生量を測定した。さらに、ＲＣ ＤＣＴＭプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ社製）を用いて、細胞由来タンパク量を測定した。測定結果をもとに、細胞由来タンパク量あたりのメラニン量を算出した。
【0043】
（緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果）
波長５０５ｎｍおよび５２５ｎｍの緑色ＬＥＤ光を照射するとＢ１６メラノーマ細胞の生存数が低下し、メラニン産生量が減少することが確認された。この傾向は５０５ｎｍの緑色ＬＥＤ光の方が顕著であった。これは、図４Ａ及び図４Ｂに示す試験結果からわかる。図４Ａは、波長５０５ｎｍの緑色ＬＥＤ光を照射したときの、Ｂ１６メラノーマ細胞の生存数を示す図であり、図４Ｂは、波長５２５ｎｍの緑色ＬＥＤ光を照射したときの、Ｂ１６メラノーマ細胞の生存数を示す図である。本試験では、初期の細胞の濃度が１×１０４（Ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）であるときと、２×１０４（Ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）であるときとで、３０分後の濃度と６０分後の濃度がそれぞれ測定された。
波長５０５ｎｍおよび５２５ｎｍの緑色ＬＥＤ光を照射するとＢ１６メラノーマ細胞の生存数が低下し、メラニン産生量が減少することが確認された。この傾向は５０５ｎｍの緑色ＬＥＤ光の方が顕著であった。これは、図４Ａ及び図４Ｂに示す試験結果からわかる。図４Ａは、波長５０５ｎｍの緑色ＬＥＤ光を照射したときの、Ｂ１６メラノーマ細胞の生存数を示す図であり、図４Ｂは、波長５２５ｎｍの緑色ＬＥＤ光を照射したときの、Ｂ１６メラノーマ細胞の生存数を示す図である。本試験では、初期の細胞の濃度が１×１０４（Ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）であるときと、２×１０４（Ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）であるときとで、３０分後の濃度と６０分後の濃度がそれぞれ測定された。
【0044】
（ヒト由来ＨＭＶ－IIメラノ―マ細胞ＨＭＶ－IIによるメラニン産生抑制の評価）
マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞とヒト由来ＨＭＶ－IIメラノーマ細胞とでは、美白剤に対する薬剤感受性が異なることが報告をされている。上記Ｂ１６細胞の評価においてメラニン産出抑制効果は５０５ｎｍの緑色ＬＥＤ光の方が顕著であっため、ＨＭＶ－II細胞では波長を５０５ｎｍに絞りその影響を評価した。
マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞とヒト由来ＨＭＶ－IIメラノーマ細胞とでは、美白剤に対する薬剤感受性が異なることが報告をされている。上記Ｂ１６細胞の評価においてメラニン産出抑制効果は５０５ｎｍの緑色ＬＥＤ光の方が顕著であっため、ＨＭＶ－II細胞では波長を５０５ｎｍに絞りその影響を評価した。
【0045】
Ｂ１６細胞と異なりＨＭＶ－ＩＩ細胞ではメラニン合成誘導剤α－ＭＳＨ添加によるメラノーマ細胞の増殖効果が低かった。そのためＨＭＶ－ＩＩ細胞の評価にはＭＳＨの増強剤であるＴｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（テオフィリン）をメラニン合成誘導剤として用いた。
１×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬのＨＭＶ－ＩＩ細胞分散液を６６穴のウェルプレートに２ｍＬずつ分注、１×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した後、４０ｍＭの培養後、Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ２５μＬを含むフェノールレッド不含培地２ｍＬに置換した。５０５ｎｍのＬＥＤ光の照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養し、１０ｗｔ％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む２ＭのＮａＯＨ溶液を３００μＬにて２ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液で細胞を溶解させ、４０５ｎｍに対する吸光度からメラニン産生量を測定した。さらに、ＲＣ ＤＣＴＭプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ社製）を用いて、細胞由来タンパク量を測定した。測定結果をもとに、細胞由来タンパク量あたりのメラニン量を算出した。
１×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬのＨＭＶ－ＩＩ細胞分散液を６６穴のウェルプレートに２ｍＬずつ分注、１×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した後、４０ｍＭの培養後、Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ２５μＬを含むフェノールレッド不含培地２ｍＬに置換した。５０５ｎｍのＬＥＤ光の照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養し、１０ｗｔ％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む２ＭのＮａＯＨ溶液を３００μＬにて２ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液で細胞を溶解させ、４０５ｎｍに対する吸光度からメラニン産生量を測定した。さらに、ＲＣ ＤＣＴＭプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ社製）を用いて、細胞由来タンパク量を測定した。測定結果をもとに、細胞由来タンパク量あたりのメラニン量を算出した。
【0046】
（ＨＭＶ－ＩＩ細胞による生存率）
ＨＭＶ－ＩＩ細胞を６穴のウェルプレートに１×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養後、フェノールレッド不含培地に置換した。５０５ｎｍのＬＥＤ照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（同仁化学社製）を添加し、３時間培養した。培養後、培地を分注し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。測定後、ＬＥＤ光未照射の４５０ｎｍの吸光度に対する相対値として生存率を算出した。
ＨＭＶ－ＩＩ細胞を６穴のウェルプレートに１×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養後、フェノールレッド不含培地に置換した。５０５ｎｍのＬＥＤ照射を１日１回、３日間行った後、１日間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（同仁化学社製）を添加し、３時間培養した。培養後、培地を分注し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。測定後、ＬＥＤ光未照射の４５０ｎｍの吸光度に対する相対値として生存率を算出した。
【0047】
（緑色ＬＥＤ光照射によるメラニン産出抑制効果）
５０５ｎｍＬＥＤ光を照射するとＨＭＶ－ＩＩ細胞の生存率が低下し、メラニン産生量が減少することが確認された。
５０５ｎｍＬＥＤ光を照射するとＨＭＶ－ＩＩ細胞の生存率が低下し、メラニン産生量が減少することが確認された。
【0048】
Ｂ１６細胞、ＨＭＶ－ＩＩ細胞の双方において、緑色ＬＥＤ光照射はメラニン産出抑制効果に有効であることが検証された。これは、図５Ａから図５Ｄに示す他の試験結果からわかる。図５Ａから図５Ｄに示す他の試験も、図４Ａ及び図４Ｂを参照して上述した試験と同様に実施された。なお、図５Ｅは、図５Ａから図５Ｄの試験結果から得られる評価結果の表図である。これらからわかるように、５０５ｎｍの方が５２５ｎｍよりもメラニン産生抑制効果が高く、１０分よりも２０分の方が顕著であった。また、５０５ｎｍは３０分、６０分でも抑制が見られたが５２５ｎｍでは３０分では抑制効果が見られなかったが、６０分では抑制されていた。
【0049】
本実施例は、緑色ＬＥＤ光、特に波長５０５ｎｍにおいてシミの原因となるメラニンの産生を抑制する効果が認められた。これは、図６Ａから図７Ｂに示す試験結果からわかる。図６Ａ及び図６Ｂは、それぞれ、１回目と２回目の試験結果を示し、図７Ａ及び図７Ｂは、それぞれ、１回目と２回目の試験結果を示す。図６Ａから図７Ｂに示す他の試験も、図４Ａ及び図４Ｂを参照して上述した試験と同様に実施された。
【0050】
図８から図１１は、他の試験結果を示す図であり、図８は、緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果（メラニンの産生を抑制効果）の関係を表す表であり、図９から図１１は、緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果の関係を表すグラフである。図１１Ａは、緑色ＬＥＤ光の放射強度と効果の関係に関する別の試験結果を示すグラフである。
【0051】
図８から図１１に示す他の試験は、以下の通り行われた。
Ｂ１６メラノーマ４Ａ５は、理研ＢＲＣから提供されたものを用いた。本実験の内容につき、以降に示す細胞という言葉はこれを指すものとする。以下のステップＳ１からステップＳ３に記載のとおりの細胞と細胞培養を行い、培地は以下のものを使用した。
１０．０％（ｖ／ｖ） Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ，Ｃａｔ Ｎｏ．ＳＨ３００７１．０３，Ｈｙｃｌｏｎｅ（登録商標），ＵＫ）および１．０％（ｖ／ｖ）の抗真菌剤（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ １００Ｘ， Ｃａｔ Ｎｏ．１５２４０－０６２，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ，Ｃａｔ Ｎｏ．１０５６６－０１６，Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）を用いた。１００ｎＭのα－Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ（α－ＭＳＨ，Ｃａｔ Ｎｏ． Ｍ４１３５，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）および１００μＭのテオフィリン（Ｃａｔ Ｎｏ． Ｔ１６３３，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）を含む１０％のＦＢＳ含有のＤＭＥＭを調製したもの。
ステップＳ１：細胞培養および継代
６０ｍｍのｄｉｓｈ（Ｃａｔ Ｎｏ．３５３００２，Ｆａｌｃｏｎ（登録商標），ＵＳＡ）に３．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈの密度で細胞を播種し、ＣＯ２インキュベータ内（ＣＯ２濃度＝５％、３７℃）で２４時間培養した。
ステップＳ２：緑色ＬＥＤ光照射
培地を除去し、Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ（－），Ｃａｔ Ｎｏ．１９８６０１，Ｎｉｓｓｕｉ，Ｊａｐａｎ）で洗浄後、８ｍＬのハンクス平衡塩溶液（＋）（ＨＢＳＳ（＋），Ｃａｔ Ｎｏ．０８４－０８９６５，Ｗａｋｏ，ｊａｐａｎ）に交換後、照射条件に従って照射機器を適用した。さらにＨＢＳＳ（＋）を除去し、３ｍＬの試験培地に交換して７２時間培養した。なお、照射条件に関して、照射時間は３分とした。
ステップＳ３：培養後にＰＢＳで洗浄後、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（Ｃａｔ Ｎｏ． ＤＡＬ１１００，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標），ＵＳＡ）を無血清ＤＭＥＭにて１０倍希釈したａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を細胞に２ｍＬ処理し、ＣＯ２インキュベータにて３７℃、２時間培養した。ａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を回収して９６穴プレート（Ｃａｔ Ｎｏ．９０１７，ｃｏｓｔａｒ，ＵＳＡ）に２００μＬ入れ、マイクロプレートリーダー（ＳＰＡＲＫ（登録商標）１０Ｍ，ＴＥＣＡＮ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用い５７０ｎｍおよび６００ｎｍの吸光度（ＯＤ５７０，ＯＤ６００）を測定した。ブランクとしてａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を用いた。６０ｍｍｄｉｓｈからａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を除去し、ＰＢＳ（－）で洗浄後にメラニンを可溶化するため、１０％ＤＭＳＯを含有する１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を１ｍＬ加え、８５℃下で１０分間インキュベートした。メラニン溶解液を９６穴プレートに１００μＬ入れ、マイクロプレートリーダーを用い４０５ｎｍの吸光度（ＯＤ４０５）を測定した。対照のＯＤ５７０－６００を１００％として、ＬＥＤ適用群の細胞生存率を算出した。また、対照のＯＤ４０５を１００％として、メラニン生成率を算出した。さらに、対照、ＬＥＤ照射適用群のＯＤ４０５とａｌａｍａｒＢｌｕｅにて測定したＯＤ５７０－６００で除した値を細胞あたりのメラニン生成率として算出した。有意差検定は対照とＬＥＤ適用群を対応のないｔ検定で有意差検定を実施した。検定はいずれも両側で有意水準を５％未満とした。
Ｂ１６メラノーマ４Ａ５は、理研ＢＲＣから提供されたものを用いた。本実験の内容につき、以降に示す細胞という言葉はこれを指すものとする。以下のステップＳ１からステップＳ３に記載のとおりの細胞と細胞培養を行い、培地は以下のものを使用した。
１０．０％（ｖ／ｖ） Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ，Ｃａｔ Ｎｏ．ＳＨ３００７１．０３，Ｈｙｃｌｏｎｅ（登録商標），ＵＫ）および１．０％（ｖ／ｖ）の抗真菌剤（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ １００Ｘ， Ｃａｔ Ｎｏ．１５２４０－０６２，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ，Ｃａｔ Ｎｏ．１０５６６－０１６，Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）を用いた。１００ｎＭのα－Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ（α－ＭＳＨ，Ｃａｔ Ｎｏ． Ｍ４１３５，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）および１００μＭのテオフィリン（Ｃａｔ Ｎｏ． Ｔ１６３３，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）を含む１０％のＦＢＳ含有のＤＭＥＭを調製したもの。
ステップＳ１：細胞培養および継代
６０ｍｍのｄｉｓｈ（Ｃａｔ Ｎｏ．３５３００２，Ｆａｌｃｏｎ（登録商標），ＵＳＡ）に３．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈの密度で細胞を播種し、ＣＯ２インキュベータ内（ＣＯ２濃度＝５％、３７℃）で２４時間培養した。
ステップＳ２：緑色ＬＥＤ光照射
培地を除去し、Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ（－），Ｃａｔ Ｎｏ．１９８６０１，Ｎｉｓｓｕｉ，Ｊａｐａｎ）で洗浄後、８ｍＬのハンクス平衡塩溶液（＋）（ＨＢＳＳ（＋），Ｃａｔ Ｎｏ．０８４－０８９６５，Ｗａｋｏ，ｊａｐａｎ）に交換後、照射条件に従って照射機器を適用した。さらにＨＢＳＳ（＋）を除去し、３ｍＬの試験培地に交換して７２時間培養した。なお、照射条件に関して、照射時間は３分とした。
ステップＳ３：培養後にＰＢＳで洗浄後、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（Ｃａｔ Ｎｏ． ＤＡＬ１１００，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標），ＵＳＡ）を無血清ＤＭＥＭにて１０倍希釈したａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を細胞に２ｍＬ処理し、ＣＯ２インキュベータにて３７℃、２時間培養した。ａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を回収して９６穴プレート（Ｃａｔ Ｎｏ．９０１７，ｃｏｓｔａｒ，ＵＳＡ）に２００μＬ入れ、マイクロプレートリーダー（ＳＰＡＲＫ（登録商標）１０Ｍ，ＴＥＣＡＮ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用い５７０ｎｍおよび６００ｎｍの吸光度（ＯＤ５７０，ＯＤ６００）を測定した。ブランクとしてａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を用いた。６０ｍｍｄｉｓｈからａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を除去し、ＰＢＳ（－）で洗浄後にメラニンを可溶化するため、１０％ＤＭＳＯを含有する１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を１ｍＬ加え、８５℃下で１０分間インキュベートした。メラニン溶解液を９６穴プレートに１００μＬ入れ、マイクロプレートリーダーを用い４０５ｎｍの吸光度（ＯＤ４０５）を測定した。対照のＯＤ５７０－６００を１００％として、ＬＥＤ適用群の細胞生存率を算出した。また、対照のＯＤ４０５を１００％として、メラニン生成率を算出した。さらに、対照、ＬＥＤ照射適用群のＯＤ４０５とａｌａｍａｒＢｌｕｅにて測定したＯＤ５７０－６００で除した値を細胞あたりのメラニン生成率として算出した。有意差検定は対照とＬＥＤ適用群を対応のないｔ検定で有意差検定を実施した。検定はいずれも両側で有意水準を５％未満とした。
【0052】
図８から図１１からわかるように、Ｂ１６メラノーマ細胞に緑色ＬＥＤ（５０５ｎｍ）を照射した際に、いずれの出力においてもメラニン生成率は対照と比較して有意に低い値を示し、メラニン生成抑制を認めた。０．５ｍＷ／ｃｍ２～１１．５ｍＷ／ｃｍ２のなかでも最も出力の高い１１．５ｍＷ／ｃｍ２適用においては、細胞あたりのメラニン生成率についても対照と比較して有意に低い値を示し、本条件の中では最も出力の高いものがより生成能の抑制傾向がみられた。これらから、上述したとおり、光照射部３０から所定光の放射強度は、好ましくは、０．５ｍＷ／ｃｍ２以上の範囲であり、より好ましくは、１１．５ｍＷ／ｃｍ２以上であると、いうことができる。
また、図１１Ａには、波長５２０ｎｍの緑色ＬＥＤ光を、異なる放射強度で照射した場合の効果の相違が示されている。なお、図１１Ａに示す試験についても、図８等と同様の態様で実施された。図１１Ａにおいて、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。ここでは、コントロールに対して、９ｍＷ／ｃｍ２と６２Ｗ／ｃｍ２の各試験結果が比較されている。グラフＡ，Ｂ，Ｃは、それぞれ、細胞生存率、メラニン生成率、細胞あたりのメラニン生成率に対応する。
また、図１１Ａには、波長５２０ｎｍの緑色ＬＥＤ光を、異なる放射強度で照射した場合の効果の相違が示されている。なお、図１１Ａに示す試験についても、図８等と同様の態様で実施された。図１１Ａにおいて、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。ここでは、コントロールに対して、９ｍＷ／ｃｍ２と６２Ｗ／ｃｍ２の各試験結果が比較されている。グラフＡ，Ｂ，Ｃは、それぞれ、細胞生存率、メラニン生成率、細胞あたりのメラニン生成率に対応する。
【0053】
図１１Ａからわかるように、光照射部３０から所定光の放射強度がある程度以上高くなると、効果が有意に大きくならない（すなわち飽和する）。これらから、上述したとおり、光照射部３０から所定光の放射強度は、好ましくは、０．５ｍＷ／ｃｍ２以上かつ６２ｍＷ／ｃｍ２以下の範囲であり、より好ましくは、１１．５ｍＷ／ｃｍ２以上かつ６２ｍＷ／ｃｍ２以下の範囲であると、いうことができる。また、消費電力の観点からは、６２ｍＷ／ｃｍ２に代えて、３０ｍＷ／ｃｍ２程度の上限値が望ましいともいえる。
【0054】
また、図８から図１１Ａに示す試験では、光照射部３０から所定光の照射エネルギは、０．０９Ｊ／ｃｍ２以上かつ１１Ｊ／ｃｍ２以下の範囲であった。なお、本明細書に開示の他の試験結果も合わせると、光照射部３０から所定光の照射エネルギは、０．０９Ｊ／ｃｍ２以上かつ４５Ｊ／ｃｍ２以下の範囲で試験が行われた。そして、照射エネルギが比較的小さい０．０９Ｊ／ｃｍ２以上かつ１１Ｊ／ｃｍ２以下の範囲でも、有効な効果が確認された。
【0055】
なお、光照射装置１は、ユーザの乾燥状態の肌に、上述した光緑色ＬＥＤ光照射してもよいが、肌への浸透対象を含むジェルや液体などを付与した肌に緑色ＬＥＤ光を照射してもよい。この場合、浸透対象の対象物は、任意である。対象物は、人の皮膚に付与可能な物質であり、典型的には、美容効果などの各種効果を期待できる物質であってよい。
【0056】
次に、図１２以降を参照して、肌に照射する光の好ましい波長範囲について更に説明する。
【0057】
【0058】
図１２は、他の試験結果を示す図であり、波長４５０ｎｍ、５２０ｎｍ、及び８５０ｎｍ（近赤外の波長）のＬＥＤ光を照射した場合の試験結果を示す。図１２では、細胞生存率、メラニン生成率、及び細胞あたりのメラニン生成率について、ＬＥＤ３６の波長４５０ｎｍ、５２０ｎｍ、及び８５０ｎｍのそれぞれを照射した場合の試験結果が示されている。なお、図１２において、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。
【0059】
【0060】
図１２からわかるように、波長５２０ｎｍ及び４５０ｎｍにて優位的にメラニン生成抑制が確認された。すなわち、Ｂ１６メラノーマ細胞の生存数が低下し、メラニン産生量が減少することが示された。また、波長４５０ｎｍよりも５２０ｎｍの方が、メラニン産生抑制効果が高くなる可能性も示唆されたことがわかる。なお、波長８５０ｎｍでは多少の抑制傾向は見られたが有意差はなく、一番低い結果となった。
図１３は、更なる他の試験結果を示す図であり、３種類の波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果を示す図である。図１３では、細胞あたりのメラニン生成率について、ＬＥＤ３６の波長５０５ｎｍ、５２５ｎｍ、及び６３０ｎｍ（赤色の波長）のそれぞれを照射した場合の試験結果が示されている。なお、図１３においても、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。
図１３は、更なる他の試験結果を示す図であり、３種類の波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果を示す図である。図１３では、細胞あたりのメラニン生成率について、ＬＥＤ３６の波長５０５ｎｍ、５２５ｎｍ、及び６３０ｎｍ（赤色の波長）のそれぞれを照射した場合の試験結果が示されている。なお、図１３においても、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。
【0061】
【0062】
図１３からわかるように、波長５２５ｎｍや波長６３０ｎｍでは、波長５０５ｎｍのような有意なメラニン生成抑制が確認されなかった。
図１４は、更なる他の試験結果を示す図であり、４種類の波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果を示す図である。図１４では、細胞生存率について、ＬＥＤ３６の波長４７０ｎｍ（（青色の波長）、４９０ｎｍ、５０５ｎｍ、及び５２５ｎｍのそれぞれを照射した場合の試験結果が示されている。なお、図１４においても、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。
図１４は、更なる他の試験結果を示す図であり、４種類の波長の相違に起因したメラニン産出抑制効果の相違に係る試験結果を示す図である。図１４では、細胞生存率について、ＬＥＤ３６の波長４７０ｎｍ（（青色の波長）、４９０ｎｍ、５０５ｎｍ、及び５２５ｎｍのそれぞれを照射した場合の試験結果が示されている。なお、図１４においても、コントロールとは、何も照射しない試験結果を示す。
【0063】
【0064】
図１４からわかるように、波長４７０ｎｍ、５０５ｎｍ及び５２５ｎｍでは、波長４９０ｎｍに比べて、Ｂ１６メラノーマ細胞の生存率が低いことが示された。すなわち、波長４９０ｎｍに対する波長４７０ｎｍ、５０５ｎｍ及び５２５ｎｍの優位性（メラニン産出抑制効果に係る優位性）が示された。
【0065】
図１５は、ケラチン１０の発現量に関する試験結果を示す図である。図１５では、ケラチン１０の発現量について、ＬＥＤ３６の波長４７０ｎｍ、５０５ｎｍ及び５９０ｎｍ（黄色の波長）のそれぞれを照射した場合の試験結果が示されている。
【0066】
試験方法の概要は以下の通りである。
【0067】
（ステップＳ１）細胞前培養
ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）は培地を用いてＴ－７５フラスコに起眠し、ＣＯ２インキュベータ（５％のＣＯ２，３７°Ｃ，湿潤）内で培養した。約８０％コンフルエントに達した時点で細胞をＴ－２２５フラスコに継代し、必要細胞数が得られるまで培養後、その後の試験に用いた。細胞の継代方法は以下の通り。細胞をＰＢＳ（－／－）で洗浄後、０．０５％のＴｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、トリプシン中和液を加えてトリプシンを中和した。次に、細胞懸濁液を遠心管に回収し、遠心（室温，１８０ｘｇ，５ｍｉｎ）した。上清を除き、新たに培地を加えて細胞を懸濁し、細胞数をカウントした。培地を用いて、目的の細胞密度に懸濁し、試験で使用する培養器に播種した。
ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）は培地を用いてＴ－７５フラスコに起眠し、ＣＯ２インキュベータ（５％のＣＯ２，３７°Ｃ，湿潤）内で培養した。約８０％コンフルエントに達した時点で細胞をＴ－２２５フラスコに継代し、必要細胞数が得られるまで培養後、その後の試験に用いた。細胞の継代方法は以下の通り。細胞をＰＢＳ（－／－）で洗浄後、０．０５％のＴｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、トリプシン中和液を加えてトリプシンを中和した。次に、細胞懸濁液を遠心管に回収し、遠心（室温，１８０ｘｇ，５ｍｉｎ）した。上清を除き、新たに培地を加えて細胞を懸濁し、細胞数をカウントした。培地を用いて、目的の細胞密度に懸濁し、試験で使用する培養器に播種した。
【0068】
（ステップＳ２）細胞処理
細胞は９００，０００ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ／３ｍＬで６０ｍｍディッシュに播種した。播種翌日、培地を５ｍＬ添加し、合計８ｍＬとして、３０秒間機器処理を行った。２４時間±１時間おきに処理を行い、合計３回美顔器処理を行った。塩化カルシウムは初回機器処理時に同様に培地を８ｍＬとし、添加した。その後、７２時間処理を行った。
細胞は９００，０００ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ／３ｍＬで６０ｍｍディッシュに播種した。播種翌日、培地を５ｍＬ添加し、合計８ｍＬとして、３０秒間機器処理を行った。２４時間±１時間おきに処理を行い、合計３回美顔器処理を行った。塩化カルシウムは初回機器処理時に同様に培地を８ｍＬとし、添加した。その後、７２時間処理を行った。
【0069】
（ステップＳ３）ＲＮＡ抽出
最終機器処理から２４時間後の細胞を用いて、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ ＫｉｔによるＲＮＡ抽出を実施した。方法はキットのプロトコルに従った。ＲＮＡ抽出後、ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｅｉｇｈｔを用いて濃度を測定し、－８０℃で保存した。
最終機器処理から２４時間後の細胞を用いて、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ ＫｉｔによるＲＮＡ抽出を実施した。方法はキットのプロトコルに従った。ＲＮＡ抽出後、ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｅｉｇｈｔを用いて濃度を測定し、－８０℃で保存した。
【0070】
（ステップＳ４）定量ＰＣＲ
ＦａｓｔＬａｎｅ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅ Ｋｉｔ 付属のＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｏｂｅ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔを使用し、下表の組成でＯｎｅ Ｓｔｅｐ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲを行った。ＲＮＡサンプルは約１００ｎｇ／μＬとなるように希釈して使用した。ＲＴ－ＰＣＲ反応は、５０℃・３０ｍｉｎ－９５℃・１５ｍｉｎ－（９４℃・１５ｓｅｃ－６０℃・６０ｓｅｃ）×４０ｃｙｃｌｅｓの条件で行った。内部標準遺伝子としてＧＡＰＤＨ遺伝子を用いた。
ＦａｓｔＬａｎｅ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅ Ｋｉｔ 付属のＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｏｂｅ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔを使用し、下表の組成でＯｎｅ Ｓｔｅｐ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲを行った。ＲＮＡサンプルは約１００ｎｇ／μＬとなるように希釈して使用した。ＲＴ－ＰＣＲ反応は、５０℃・３０ｍｉｎ－９５℃・１５ｍｉｎ－（９４℃・１５ｓｅｃ－６０℃・６０ｓｅｃ）×４０ｃｙｃｌｅｓの条件で行った。内部標準遺伝子としてＧＡＰＤＨ遺伝子を用いた。
【0071】
図１５からわかるように、波長５０５ｎｍでは、波長４７０ｎｍ及び５９０ｎｍに比べて、ケラチン１０の発現量が有意に大きくなることが示された。すなわち、波長４７０ｎｍや５９０ｎｍに対する波長５０５ｎｍの優位性（ケラチン１０の発現効果に係る優位性）が示された。
【0072】
ここで、ターンオーバーの機序を説明する。表皮は基底層、有棘層、顆粒層、角質層の４つの層状に配列している。細胞レベルでのターンオーバーは、基底層での細胞増殖、有棘層でのケラチン（Ｋ１０）合成、顆粒層での細胞死（アポトーシスとネクローシス）、角質層での蛋白分解酵素（ＫＬＫ８）による切断の４段階によって行われている。人体の皮膚では、基底層で表皮細胞が生成し、上層へ向かって移動しながら成熟し、角質層で剥離することによって形成される過程をターンオーバーという。
【0073】
ケラチンの合成が減少すれば、表皮の構造が維持できずにしわやたるみが生じる。早いターンオーバーでは、未熟な表皮細胞が角質にならないうちに外界にさらされることになる。また、過剰なターンオーバーはアトピー性皮膚炎の病態を引き起こす。遅いターンオーバーでは、垢となって剥がれるべき角質が残留して肥厚する。さらに異常な遅延は乾癬や角化症などを引き起こす。そのため、細胞増殖以外の指標も、正常なターンオーバーを考える上で必要不可欠な因子である。
【0074】
このように、ターンオーバーの機序より、ケラチン１０は有棘層で発現され、ターンオーバーの過程の中で有用なものである。ケラチン１０が発現しているということは正常なターンオーバーが進んでいると示唆される。
【0075】
また、青色光照射によって、ＴＧＦ－β質なる伝達経路を阻害することにより、ヒト皮膚線維芽細胞における細胞増殖とコラーゲン発現を阻害することを報告する論文も知られている（Ｇｅ Ｇｅ等による論文「Ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ ｂｙ ｂｌｕｅ－ｌｉｇｈｔ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｖｉａ ＴＧＦ－β， ＪＮＫ ａｎｄ ＥＧＦＲ ｐａｔｈｗａｙｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）。この点からも、波長５０５ｎｍが波長４７０ｎｍに比べて有利であることが強く推認される。
【0076】
以上の図４Ａ、図４Ｂ及び図１２から図１５に示す試験結果から、４９０ｎｍよりも長くかつ５２５ｎｍ以下の波長範囲に中心波長を有する光を肌に照射することは、他の波長範囲の中心波長を有する光を肌に照射する場合に比べて、メラニン産出抑制効果やケラチン１０の発現効果の観点から有利であることがわかる。
【0077】
以上、各実施例について詳述したが、特定の実施例に限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された範囲内において、種々の変形及び変更が可能である。また、前述した実施例の構成要素を全部又は複数を組み合わせることも可能である。
【符号の説明】
【0078】
１ 光照射装置（肌処理装置）
２ 把持部
３ ヘッド部
３ａ 肌対向部
３０ 光照射部
３６ ＬＥＤ（Ｌｉｇｈｔ Ｅｍｉｔｔｉｎｇ Ｄｉｏｄｅ）
１００ 制御装置（制御部）
２ 把持部
３ ヘッド部
３ａ 肌対向部
３０ 光照射部
３６ ＬＥＤ（Ｌｉｇｈｔ Ｅｍｉｔｔｉｎｇ Ｄｉｏｄｅ）
１００ 制御装置（制御部）
【図1】
【図2】
【図3】
【図3A】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図5E】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図11A】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
