特開 2025-26939 先駆制御性細胞栄養芽細胞およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2025026939

(43)【公開日】2025-02-26

(54)【発明の名称】先駆制御性細胞栄養芽細胞およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/071 20100101AFI20250218BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 8/02 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 8/64 20060101ALI20250218BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 9/70 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 38/18 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20250218BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20250218BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20250218BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20250218BHJP

【ＦＩ】

C12N5/071 ZNA

C12N5/10

A61K8/02

A61K8/64

A61Q19/00

A61K9/10

A61K9/08

A61K9/12

A61K9/06

A61K9/14

A61K9/16

A61K9/70

A61K9/70 401

A61K38/19

A61K38/20

A61K38/18

A61P17/00

A61P43/00 121

A61K35/12

A61P1/04

A61P1/16

A61P1/18

A61P3/10

A61P11/00

A61P11/06

A61P13/12

A61P15/00

A61P17/06

A61P19/00

A61P19/02

A61P19/10

A61P19/08

A61P21/00

A61P21/04

A61P25/00

A61P27/02

A61P31/00

A61P31/12

A61P31/10

A61P31/04

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/02

A61P37/06

A61P43/00 105

A61P29/00 101

A61P25/28

A61P1/02

A61P7/00

A61P25/02

A61P29/00

C12N5/071

C12N15/09 Z

【審査請求】有

【請求項の数】16

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024201025

(22)【出願日】2024-11-18

(62)【分割の表示】P 2021566167の分割

【原出願日】2020-05-05

(31)【優先権主張番号】62/843,925

(32)【優先日】2019-05-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】514149598

【氏名又は名称】アクセラレイテッド・バイオサイエンシズ・コーポレーション

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100135415

【弁理士】

【氏名又は名称】中濱 明子

(72)【発明者】

【氏名】リー，ジャウ－ナン

(72)【発明者】

【氏名】リー，ユータ

(72)【発明者】

【氏名】リー，トニー・トゥン－イーン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】現在の胚幹細胞およびｉＰＳ細胞のある種の欠点を克服する代替としての、種々の疾患または状態を処置（治療）するための幹細胞療法を提供する。
【解決手段】ｉｎ ｖｉｔｒｏで産生される特定の細胞表面タンパク質およびその組合せを発現する先駆制御性細胞栄養芽細胞およびその組成物、さらにその細胞およびその組成物を利用することによって障害（例えばがん、炎症、または自己免疫疾患）または状態（例えば皮膚の状態）を処置する方法が提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離された先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）であって、
（ｉ）前記ｐｒＣＴＢが、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、ＣＤ５６、インスリン、ヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せを発現し、かつ
（ｉｉ）前記ｐｒＣＴＢが、ｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する、
単離された先駆制御性細胞栄養芽細胞。

【請求項2】

ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、またはそれらの任意の組合せを発現する、請求項１に記載のｐｒＣＴＢ。

【請求項3】

先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団であって、
（ｉ）前記集団が、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、ＣＤ５６、インスリン、ヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せを発現し、かつ
（ｉｉ）前記集団が、ｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する、
細胞の単離された集団。

【請求項4】

前記集団の少なくとも約１０％が、ＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢである、請求項３に記載の細胞の集団。

【請求項5】

前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢである、請求項３または４に記載の細胞の集団。

【請求項6】

前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢである、請求項３から５のいずれか一項に記載の細胞の集団。

【請求項7】

前記集団の少なくとも約５％が、ＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである、請求項３から６のいずれか一項に記載の細胞の集団。

【請求項8】

先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団であって、
（ｉ）前記集団の少なくとも約１０％が、ＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢであるか、
（ｉｉ）前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢであるか、
（ｉｉｉ）前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢであるか、もしくは
（ｉｖ）前記集団の少なくとも約５％が、ＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢであるか、または
それらの任意の組合せである、細胞の単離された集団。

【請求項9】

（ｉ）前記集団の少なくとも約１０％が、ＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢであり、
（ｉｉ）前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢであり、
（ｉｉｉ）前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢであり、かつ
（ｉｖ）前記集団の少なくとも約５％が、ＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである、
請求項３から８のいずれか一項に記載の細胞の集団。

【請求項10】

前記集団の少なくとも約２％が、ＣＤ１６、ＣＤ５６、およびＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである、請求項３から９のいずれか一項に記載の細胞の集団。

【請求項11】

前記ｐｒＣＴＢまたは複数の前記ｐｒＣＴＢが、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）を発現する、請求項１から１０のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項12】

前記ｐｒＣＴＢまたは複数の前記ｐｒＣＴＢが、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する、請求項１から１１のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項13】

前記ｐｒＣＴＢまたは複数の前記ｐｒＣＴＢが、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、可溶性ヒト白血球抗原Ｇ（ｓＨＬＡ－Ｇ）、トランスフォーメーション成長因子β１（ＴＧＦ－β１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、ＣＤ１０５、ＣＤ１４６、またはそれらの任意の組合せをさらに発現する、請求項１から１２のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項14】

前記ｐｒＣＴＢまたは複数の前記ｐｒＣＴＢが、シンシチン、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、またはそれらの組合せを欠いている、請求項１から１３のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項15】

前記ｐｒＣＴＢまたは複数の前記ｐｒＣＴＢが、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せ、または上記のいずれかを運搬するエキソソームを分泌する、請求項１から１４のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項16】

前記サイトカインが、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５）、単球ケ
モアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－１）、単球ケモアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２４（ＣＣＬ２４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２６（ＣＣＬ２６）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＣＬ１０）、フラクタルカイン、およびケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド４（ＣＣＬ４）、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１５に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項17】

前記サイトカインが、インターロイキン１α（ＩＬ－１α）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン（ＩＬ－２）、インターロイキン３（ＩＬ－３）、インターロイキン４（ＩＬ－４）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン１２ｐ４０（ＩＬ－１２ｐ４０）、インターロイキン１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１５または１６に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項18】

前記サイトカインが、インターフェロンα（ＩＦＮ－α）またはインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）を含む、請求項１５から１７のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項19】

前記成長因子が、血小板由来成長因子ホモダイマーＡＡ（ＰＤＧＦ－ＡＡ）、ＰＤＧＦホモダイマーＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）、ＰＤＧＦヘテロダイマー（ＰＤＧＦ－ＡＢ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリータンパク質、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１５から１８のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項20】

前記ｐｒＣＴＢまたは複数の前記ｐｒＣＴＢが、イムノブロット法によって測定して、前記単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する、請求項１から１９のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項21】

前記ｐｒＣＴＢが、イムノブロット法によって測定して、前記単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する、請求項１から２０のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項22】

前記ｐｒＣＴＢが、イムノブロット法によって測定して、前記単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルのＳＯＸ２タンパク質を発現する、請求項１から２１のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項23】

前記単離されたｐｒＣＴＢが、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、Ｋｉ６７、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、ｐ５３、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せの発現を欠く絨毛膜絨毛由来の前駆細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したものである、請求項１から２２のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項24】

前記単離されたｐｒＣＴＢが、絨毛膜絨毛由来の前駆細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したものであり、前記絨毛膜絨毛由来の前駆細胞と前記単離されたｐｒＣＴＢの両方がヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）を発現する、請求項１から２３のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項25】

前記単離されたｐｒＣＴＢがヒト細胞である、請求項１から２４のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項26】

前記単離されたｐｒＣＴＢが、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、サル、または類人猿起源である、請求項１から２４のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項27】

前記単離されたｐｒＣＴＢが遺伝子操作されている、請求項１から２６のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項28】

前記単離されたｐｒＣＴＢが、細胞受容体、免疫チェックポイントタンパク質、サイトカイン、またはそれらの任意の組合せをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項２７に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項29】

前記単離されたｐｒＣＴＢが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはそれらの任意の組合せをコードする外因性遺伝子ポリヌクレオチドを含む、請求項２７に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団。

【請求項30】

薬学的に許容される賦形剤、および請求項１から２９のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団を含む医薬組成物。

【請求項31】

疾患または状態の処置を必要とする対象に請求項１から２９のいずれか一項に記載のｐｒＣＴＢまたは細胞の集団を投与するステップを含む、疾患または状態を処置する方法。

【請求項32】

抗原を保有する標的細胞を死滅させる、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記抗原保有細胞ががん細胞である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記がん細胞が、膀胱がん細胞、骨がん細胞、脳がん細胞、乳がん細胞、頸部の癌腫、結腸直腸がん細胞、食道がん細胞、胃腸がん細胞、造血系悪性疾患、頭頚部扁平上皮細胞癌、白血病、肝がん細胞、肺がん細胞、リンパ腫、骨髄腫、鼻がん細胞、鼻咽頭がん細胞、口腔がん細胞、口腔咽頭がん細胞、卵巣がん細胞、前立腺がん細胞、肉腫、胃がん細胞、黒色腫、甲状腺がん細胞、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記抗原保有細胞が病原体である、請求項３２に記載の方法。

【請求項36】

前記病原体が、ウイルス、細菌、プロトゾア、プリオン、真菌、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

抗原保有標的細胞の集団の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約５０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％を死滅させる、請求項３１から３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

炎症性経路を下方制御する、請求項３１に記載の方法。

【請求項39】

移植拒絶、感染、感染に伴うエンドトキシンショック、関節炎、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、全身発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性ループスエリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性腸炎、刺激性腸症候群、多発性硬化症、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ブドウ膜炎、ぺイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、手術後癒着、発作、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢および末梢神経系の免疫媒介炎症性障害、膵炎、手術後傷害、グラフト対宿主病、心臓疾患、骨の再吸収、火傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝もしくは肺の線維化、歯周炎、または低塩酸症を含む疾患または状態を処置する、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

自己免疫疾患を処置する、請求項３１に記載の方法。

【請求項41】

Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性ループスエリテマトーデス、シェーグレン症候群、強皮症、多発性筋炎、慢性活動性肝炎、混合結合組織病、原発性胆汁性肝硬変、悪性貧血、自己免疫性甲状腺炎、特発性アジソン病、白斑、グルテン感受性腸疾患、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、リウマチ性関節炎、肝硬変、尋常性天疱瘡、自己免疫性不妊、グッドパスチャー病、水疱性類天疱瘡、ディスコイドループス、潰瘍性大腸炎、高密度沈着物疾患、炎症性腸疾患、または乾癬を処置する、請求項３１に記載の方法。

【請求項42】

１型糖尿病を処置する、請求項３１に記載の方法。

【請求項43】

移植拒絶を改善する、請求項３１に記載の方法。

【請求項44】

ケモカイン、インターロイキン、成長因子、またはそれらの任意の組合せ、および薬学的もしくは美容的に許容される賦形剤を含み、細胞を含まない組成物。

【請求項45】

（ｉ）ＣＸＣＬ２、ＭＣＰ－１、フラクタルカイン、ＩＰ－１０、ＭＣＰ－３、エオタキシン、ＭＩＰ－１β、またはそれらの任意の組合せを含むケモカイン、
（ｉｉ）ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１７Ａ、またはそれらの任意の組合せを含むインターロイキン、および
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、またはそれらの任意の組合せを含む成長因子
を含む、請求項４４に記載の組成物。

【請求項46】

ＭＣＰ－１ならびにＣＸＣＬ２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびＶＥＧＦタンパク質の１つ、２つ、３つ、または全てを含む、請求項４４または４５に記載の組成物。

【請求項47】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２が、約１：１～約２：１の重量比を有する、請求項４６に記載の組成物。

【請求項48】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２が、約３：１～約４：１の重量比を有する、請求項４６に記載の組成物。

【請求項49】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６が、約２：１～約３：１の重量比を有する、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項50】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６が、約３：１～約４：１の重量比を有する、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項51】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８が、約４：１～約６：１の重量比を有する、請求項４６から５０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項52】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦが、約４：１～約６：１の重量比を有する、請求項４６から５１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項53】

前記組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦが、約７：１～約９：１の重量比を有する、請求項４６から５１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項54】

ＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含み、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡが約３：１～約５：１の重量比で存在する、請求項４６から５３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項55】

ＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含み、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡが約６：１～約９：１の重量比で存在する、請求項４６から５３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項56】

ＰＤＧＦ－ＡＡおよびＧ－ＣＳＦをさらに含む、請求項４６から５５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項57】

ＰＤＧＦ－ＡＡおよびＦＧＦ－２（ｂＦＧＦ）をさらに含む、請求項４６から５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項58】

ＩＰ－１０、エオタキシン、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＭＤＣ、ＭＣＰ－３、ＩＬ－１２Ｐ７０、ＩＦＮａ、ＩＦＮｒ、ＰＤＧＦ－ＡＢ／ＢＢ、またはＥＧＦのうち１つまたは複数のタンパク質をさらに含む、請求項４６から５７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項59】

皮膚の状態を調節することを必要とする対象に請求項４４から５８のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、皮膚の状態を調節する方法。

【請求項60】

疾患を処置するか、または美容上の用途を提供する、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

皮膚を引き締める、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項62】

皮膚を水和する、請求項５９から６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

皮膚を若返らせる、請求項５９から６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

前記組成物が幹細胞を含まない、請求項５９から６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記組成物がローション、クリーム、液体、ゲル、エマルジョン、懸濁液、ペースト、スティック、エアロゾル、泡、パッチ、粉末、軟膏、ビーズ、マスク、パッド、シート、創傷被覆材、バンデージ、またはそれらの任意の組合せの投薬形態である、請求項５９から６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記組成物が前記対象に局所、皮下、経皮、筋肉内、または腫瘍内投与される、請求項５９から６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記対象が哺乳動物である、請求項５９から６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

前記対象が霊長類である、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記対象がヒトである、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

多能性幹細胞を、線維芽細胞成長因子ならびにヌクレオシド、Ｌ－グルタミン、Ｌ－グルタミンを含むジペプチド、血小板溶解物、またはそれらの組合せを含む培養培地と接触させることによって、前記幹細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させるステップを含む、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を得る方法。

【請求項71】

前記培養培地がヌクレオシド、前記ジペプチド、および血小板溶解物を含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記培養培地が約２ｍＭ～約２００ｍＭのＬ－グルタミンを含む、請求項７０または７１に記載の方法。

【請求項73】

前記接触するステップが約２４時間～４８時間続く、請求項７０から７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記幹細胞が絨毛膜絨毛由来の前駆細胞である、請求項７０から７３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記幹細胞を前記線維芽細胞成長因子と接触させて前記ｐｒＣＴＢに分化させる前に前記幹細胞を前記培養培地とともに培養するステップを含む、請求項７０から７４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

前記培養培地が抗生剤を含まない、請求項７０から７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

前記抗生剤がペニシリン、ストレプトマイシン、またはそれらの任意の組合せである、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記培養培地がレチノイン酸を含まない、請求項７０から７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記培養培地がメルカプトエタノール、ニコチンアミド、またはそれらの組合せを含まない、請求項７０から７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記培養培地がデキサメタゾン、組換えヒトオンコスタチンＭ、ＢＭＰ４、ＨＧＦ、またはそれらの任意の組合せを含まない、請求項７０から７９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記培養培地が動物成分を含まない、請求項７０から８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

前記培養培地がヒト由来の成分を含まない、請求項７０から８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

前記培養培地が血清を含まない、請求項７０から８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

前記培養培地がウシ胎児血清を含まない、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記線維芽細胞成長因子が塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）である、請求項７０から８４のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
[0001]本出願は、参照により全体が本明細書に組み込まれる２０１９年５月６日出願の米国仮特許出願第６２／８４３，９２５号の利益を主張する。

【背景技術】

【0002】

[0002]現在の胚幹細胞およびｉＰＳ細胞のある種の欠点を克服する代替としての、種々の疾患または状態を処置（治療）するための新規な幹細胞療法に対するニーズがある。
参照による組込み
[0003]本明細書における全ての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれ個別の刊行物、特許、および特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるかのように同程度に、参照により組み込まれる。本明細書における用語と組み込まれた参照における用語との間に矛盾が生じた場合には、本明細書の用語が優先する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

[0004]本発明の概要で提供する発明の実施形態は、説明のためのみであって、本明細書で開示した選択的な実施形態の概観を提供することを意味している。本発明の概要は説明的かつ選択的であり、いずれの特許請求の範囲をも限定せず、本明細書で開示または意図した発明の実施形態の全体の範囲を提供するものではなく、本開示または特許請求する発明の実施形態の範囲を限定または拘束するものと解釈すべきでない。

【0004】

[0005]本明細書ではいくつかの態様において、単離された先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）が開示され、（ｉ）ｐｒＣＴＢは、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、ＣＤ５６、インスリン、ヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せを発現し、（ｉｉ）ｐｒＣＴＢは、ｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、またはそれらの任意の組合せを発現する。

【0005】

[0006]本明細書ではいくつかの態様において、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団が開示され、（ｉ）細胞の集団は、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、ＣＤ５６、インスリン、ヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－
Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せを発現し、（ｉｉ）細胞の集団は、ｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する。

【0006】

[0007]いくつかの例では、集団の少なくとも約１０％はＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、集団の少なくとも約２％はＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、集団の少なくとも約２％はＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、集団の少なくとも約５％はＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである。

【0007】

[0008]本明細書ではいくつかの態様において、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団が開示され、（ｉ）集団の少なくとも約１０％はＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢであるか、（ｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢであるか、（ｉｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢであるか、または（ｉｖ）集団の少なくとも約５％はＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢであるか、またはそれらの任意の組合せである。

【0008】

[0009]いくつかの例では、（ｉ）集団の少なくとも約１０％はＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢであり、（ｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢであり、（ｉｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢであり、かつ（ｉｖ）集団の少なくとも約５％はＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、細胞の集団は、集団の少なくとも約２％がＣＤ１６、ＣＤ５６、およびＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである集団を含む。いくつかの例では、ｐｒＣＤＢまたは複数のｐｒＣＤＢはインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢまたは複数のｐｒＣＴＢは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢまたは複数のｐｒＣＴＢは、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、可溶性ヒト白血球抗原Ｇ（ｓＨＬＡ－Ｇ）、トランスフォーメーション成長因子β１（ＴＧＦ－β１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、ＣＤ１０５、ＣＤ１４６、またはそれらの任意の組合せをさらに発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢまたは複数のｐｒＣＴＢは、シンシチン、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、またはそれらの組合せの発現を欠いている。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢまたは複数のｐｒＣＴＢは、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せ、またはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを分泌する。いくつかの例では、サイトカインは、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５）、単球ケモアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－１）、単球ケモアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２４（ＣＣＬ２４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２６（Ｃ
ＣＬ２６）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＣＬ１０）、フラクタルカイン、およびケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド４（ＣＣＬ４）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、サイトカインは、インターロイキン１α（ＩＬ－１α）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン（ＩＬ－２）、インターロイキン３（ＩＬ－３）、インターロイキン４（ＩＬ－４）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン１２ｐ４０（ＩＬ－１２ｐ４０）、インターロイキン１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、サイトカインは、インターフェロンα（ＩＦＮ－α）またはインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）を含む。いくつかの例では、成長因子は、血小板由来成長因子ホモダイマーＡＡ（ＰＤＧＦ－ＡＡ）、ＰＤＧＦホモダイマーＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）、ＰＤＧＦヘテロダイマー（ＰＤＧＦ－ＡＢ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリータンパク質、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢまたは複数のｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルのＳＯＸ２タンパク質を発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、Ｋｉ６７、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、ｐ５３、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せの発現を欠く絨毛膜絨毛由来の前駆細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したものである。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、絨毛膜絨毛由来の前駆細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したものであり、絨毛膜絨毛由来の前駆細胞と単離されたｐｒＣＴＢの両方がヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）を発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢはヒト細胞である。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、サル、または類人猿起源である。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは遺伝子操作されている。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、細胞受容体、免疫チェックポイントタンパク質、サイトカイン、またはそれらの任意の組合せをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはそれらの任意の組合せをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む。

【0009】

[0010]本明細書ではいくつかの態様において、薬学的に許容される賦形剤または担体、および本明細書に記載したｐｒＣＴＢまたは細胞の集団を含む医薬組成物が開示される。
[0011]本明細書ではいくつかの態様において、疾患または状態の処置を必要とする対象に本明細書に記載したｐｒＣＴＢまたは細胞の集団を投与するステップを含む、疾患または状態を処置する方法が開示される。

【0010】

[0012]いくつかの例では、本方法によって抗原を保有する標的細胞が死滅する。いくつかの例では、抗原保有細胞は抗原提示細胞ではなく、例えば樹状細胞、マクロファージ、またはＢ細胞ではない。いくつかの例では、抗原保有標的細胞はがん細胞である。いくつかの例では、がん細胞には、膀胱がん細胞、骨がん細胞、脳がん細胞、乳がん細胞、頸部の癌腫、結腸直腸がん細胞、食道がん細胞、胃腸がん細胞、造血系悪性疾患、頭頚部扁平上皮細胞癌、白血病、肝がん細胞、肺がん細胞、リンパ腫、骨髄腫、鼻がん細胞、鼻咽頭がん細胞、口腔がん細胞、口腔咽頭がん細胞、卵巣がん細胞、前立腺がん細胞、肉腫、胃がん細胞、黒色腫、甲状腺がん細胞、またはそれらの任意の組合せが含まれる。いくつかの例では、抗原保有細胞は病原体である。いくつかの例では、病原体にはウイルス、細菌、プロトゾア、プリオン、真菌、またはそれらの任意の組合せが含まれる。いくつかの例では、本方法は抗原保有標的細胞の集団の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約５０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％を死滅させる。いくつかの例では、本方法は炎症性経路を下方制御する。いくつかの例では、本方法は、移植拒絶、感染、感染に伴うエンドトキシンショック、関節炎、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、全身発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性ループスエリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性腸炎、刺激性腸症候群、多発性硬化症、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ブドウ膜炎、ぺイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、手術後癒着、発作、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢および末梢神経系の免疫媒介炎症性障害、膵炎、手術後障害、グラフト対宿主病、心臓疾患、骨の再吸収、火傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝もしくは肺の線維化、歯周炎、または低塩酸症を含む疾患または状態を処置する。いくつかの例では、本方法は自己免疫疾患を処置する。いくつかの例では、本方法はＩ型糖尿病、多発性硬化症、全身性ループスエリテマトーデス、シェーグレン症候群、強皮症、多発性筋炎、慢性活動性肝炎、混合結合組織病、原発性胆汁性肝硬変、悪性貧血、自己免疫性甲状腺炎、特発性アジソン病、白斑、グルテン感受性腸疾患、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、リウマチ性関節炎、肝硬変、尋常性天疱瘡、自己免疫性不妊、グッドパスチャー病、水疱性類天疱瘡、ディスコイドループス、潰瘍性大腸炎、高密度沈着物疾患、炎症性腸疾患、または乾癬を処置する。いくつかの例では、本方法は１型糖尿病を処置する。いくつかの例では、本方法は移植拒絶を改善する。

【0011】

[0013]エキソソームを含むセクレトームを含む組成物が本明細書で開示され、セクレトームがケモカイン、サイトカイン、例えばインターロイキン、成長因子、またはそれらの任意の組合せ、および薬学的もしくは美容的に許容される賦形剤を含むか、またはエキソソームがこれらを運搬し、組成物は細胞を含まない。

【0012】

[0014]いくつかの例では、セクレトームが（ｉ）ＣＸＣＬ２、ＭＣＰ－１、フラクタルカイン、ＩＰ－１０、ＭＣＰ－３、エオタキシン、ＭＩＰ－１β、もしくはそれらの任意の組合せを含むケモカイン、（ｉｉ）ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１７Ａ、もしくはそれらの任意の組合せを含むインターロイキン、および（ｉｉｉ）ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、もしくはそれらの任意の組合せを含む成長因子を含むか、またはエキソソームがこれらを運搬する。いくつかの例では、組成物はＭＣＰ－１ならびにＣＸＣＬ２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびＶＥＧＦタンパク質の１つ、２つ、３つ、または全てを含む。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：１～約２：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約３：１～約４：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約２：１～約３：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約３：１～約４：１の重量比を有する。いくつ
かの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４：１～約６：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約４：１～約６：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約７：１～約９：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含み、ＭＣＰ－１とＰＤＧＦ－ＡＡは約３：１～約５：１の重量比で存在する。いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含み、ＭＣＰ－１とＰＤＧＦ－ＡＡは約６：１～約９：１の重量比で存在する。いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡおよびＧ－ＣＳＦをさらに含む。いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡおよびＦＧＦ－２（ｂＦＧＦ）をさらに含む。いくつかの例では、組成物はＩＰ－１０、エオタキシン、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＭＤＣ、ＭＣＰ－３、ＩＬ－１２Ｐ７０、ＩＦＮａ、ＩＦＮｒ、ＰＤＧＦ－ＡＢ／ＢＢ、またはＥＧＦのうち１つまたは複数のタンパク質をさらに含む。

【0013】

[0015]本明細書ではいくつかの態様において、皮膚の状態を調節することを必要とする対象に本明細書に記載した組成物を投与するステップを含む、皮膚の状態を調節する方法が開示される。

【0014】

[0016]いくつかの例では、本方法は疾患を処置するか、または美容上の用途を提供する。いくつかの例では、本方法は皮膚を引き締める。いくつかの例では、本方法は皮膚を水和する。いくつかの例では、本方法は皮膚を若返らせる。いくつかの例では、組成物は幹細胞を含まない。いくつかの例では、組成物は対象に局所、皮下、経皮、筋肉内、または腫瘍内投与される。いくつかの例では、組成物はローション、クリーム、液体、ゲル、エマルジョン、懸濁液、ペースト、スティック、エアロゾル、泡、パッチ、粉末、軟膏、ビーズ、マスク、パッド、シート、創傷被覆材、バンデージ、またはそれらの任意の組合せの投薬形態である。いくつかの例では、対象は哺乳動物である。いくつかの例では、対象は霊長類である。いくつかの例では、対象はヒトである。

【0015】

[0017]本明細書ではいくつかの態様において、多能性幹細胞を、線維芽細胞成長因子ならびにヌクレオシド、Ｌ－グルタミン、Ｌ－グルタミンを含むジペプチド、血小板溶解物、またはそれらの組合せを含む培養培地と接触させることによって、幹細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させるステップを含む、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を得る方法が開示される。

【0016】

[0018]いくつかの例では、培養培地はヌクレオシド、ジペプチド、および血小板溶解物を含む。いくつかの例では、培養培地は約２ｍＭ～約２００ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの例では、接触させるステップは約２４時間～４８時間続く。いくつかの例では、幹細胞は絨毛膜絨毛由来の前駆細胞である。いくつかの例では、本方法は、幹細胞を線維芽細胞成長因子と接触させてｐｒＣＴＢに分化させる前に幹細胞を培養培地とともに培養するステップを含む。いくつかの例では、培養培地は抗生剤を含まない。いくつかの例では、抗生剤はペニシリン、ストレプトマイシン、またはそれらの任意の組合せである。いくつかの例では、培養培地はレチノイン酸を含まない。いくつかの例では、培養培地はメルカプトエタノール、ニコチンアミド、またはそれらの組合せを含まない。いくつかの例では、培養培地はデキサメタゾン、組換えヒトオンコスタチンＭ、ＢＭＰ４、ＨＧＦ、またはそれらの任意の組合せを含まない。いくつかの例では、培養培地は動物成分を含まない。いくつかの例では、培養培地はヒト由来の成分を含まない。いくつかの例では、培養培地は血清を含まない。いくつかの例では、培養培地はウシ胎児血清を含まない。いくつかの例では、線維芽細胞成長因子は塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）である。

【0017】

[0019]本明細書ではいくつかの態様において、単離された先駆制御性細胞栄養芽細胞（
ｐｒＣＴＢ）が開示され、（ｉ）ｐｒＣＴＢは、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、ＣＤ５６、インスリン、ヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せを発現し、（ｉｉ）ｐｒＣＴＢは、ｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、がん細胞または病原体を死滅させる。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、例えばがん細胞のコロニーに浸潤することによって、がん細胞のアポトーシスを誘起し、任意選択でｐｒＣＴＢ自体はがん細胞と接触することによってアポトーシスを受けない。いくつかの例では、がん細胞は固形腫瘍細胞である。いくつかの例では、がん細胞は膵がん細胞、乳がん細胞、肝腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、黒色腫細胞、またはそれらの任意の組合せである。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは炎症性経路を下方制御する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢはＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、シンシチン、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、またはそれらの組合せを欠いている。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、可溶性ヒト白血球抗原Ｇ（ｓＨＬＡ－Ｇ）、トランスフォーメーション成長因子β１（ＴＧＦ－β１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、ＣＤ１０５、ＣＤ１４６、またはそれらの任意の組合せをさらに発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢはヒト細胞である。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは遺伝子操作されている。いくつかの例では、遺伝子操作されたｐｒＣＴＢは、細胞受容体、免疫チェックポイントタンパク質、サイトカイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはそれらの任意の組合せを含む外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せ、または前記のいずれかを運搬するエキソソームを分泌する。いくつかの態様では、本明細書で開示したｐｒＣＴＢおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が本明細書で開示される。いくつかの態様では、疾患または状態の処置を必要とする対象に本明細書に記載した医薬組成物を投与するステップを含む、疾患または状態を処置する方法が本明細書で開示される。いくつかの態様では、本明細書で開示した複数のｐｒＣＴＢを含む細胞の集団が本明細書で開示される。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約１０％が、ＣＤ１６およびＣＤ５６を発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約２％がＣＤ４を発現し、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約２％がＣＤ８を発現し、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約５％がＣＤ１０７を、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約１０％が、Ｃ
Ｄ１６およびＣＤ５６を発現し、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約２％がＣＤ４を発現し、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約２％がＣＤ８を発現し、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約５％がＣＤ１０７を発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢの集団の少なくとも約２％がＣＤ１６、ＣＤ５６、およびＣＤ１０７を発現する。

【0018】

図面の簡単な説明
[0020]本発明の種々の態様を、特に添付した特許請求の範囲によって説明する。本発明の原理を利用する説明的実施形態を説明する以下の詳細な説明および添付した図面を参照することによって、本発明の特徴および利点のより良い理解が得られることになる。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1A】[0021]図１Ａ～１Ｄは、ヒト栄養芽幹（ｈＴＳ）細胞におけるインスリン発現の特徴を示す。図１Ａは、ｈＴＳ細胞におけるインスリンの合成および分泌の分子機構の概略説明図である。図１Ｂは、ＣＲＥＢ１およびＦＡＢＡ抗体がＣＲＥＢ１およびＭＡＦＡレベルを低減することによってインスリン（ＩＮＳ）遺伝子転写を阻害したことをＣｈＩＰ－ｑＰＣＲ解析によって示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝５、インプット：陽性対照（１００％として）、ＩｇＧ：陰性対照。図１Ｃは、グルコース（Ｇｌｕｃ；２０ｍＭ）およびスルホニルウレア（Ｇｌｉ、グリクラジド；１０μＭ）がｈＴＳ細胞（１×１０^６細胞）中でインスリンの分泌を促進した一方、ＶＤＣＣ阻害剤ニフェジピン（Ｎｉｆ；１０μＭ）がインスリンの分泌を阻害することを、セクレトーム解析のＲＩＡによって示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝３、ステューデントｔ－検定、^＊ｐ＜０．０５は対照と比較して有意。図１Ｄは、免疫反応性分子の代表的なイメージングがｈＴＳ細胞における生物学的な役割を特徴解析したことを示す。スケールバーは指示した通りである。

【図1B】図１Ａの説明と同じ。

【図1C】図１Ａの説明と同じ。

【図1D】図１Ａの説明と同じ。

【図2A】[0022]図２Ａ～２Ｍは、インスリン発現ｈＴＳ細胞におけるＧα_ｑ／１１／ＰＩＰ２／ＩＰ３／ＩＰ３Ｒ／ＣａＭＫＩＩ／ＣＲＥＢ１およびＧβ／ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＧＳＫ３β／ＭＡＦＡシグナル伝達経路を図示する。図２Ａ～２Ｃは、ｑＰＣＲ解析（図２Ａ）により、ｈＴＳ細胞においてグルコース（２０ｍＭ）が細胞膜において甘味受容体Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３の急速な過渡的活性化を刺激し、結果として１５分でＧα_ｑ／１１およびＧβ（図２Ｂ）を含むＧタンパク質シグナルを活性化したことをブロッティング解析によって示す（図２Ｃ）。この作用はＴ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３阻害剤である２，４－ジクロロフェノキシ酢酸（２，４－Ｄ；１００μｇ）によって阻害された（図２Ｂ）。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝５、ステューデントｔ－検定、^＊ｐ＜０．０５：統計的有意。図２Ｄ～２Ｆは、Ｇα_ｑ／１１／ＰＩＰ２／ＩＰ３／ＩＰ３Ｒ／ＣａＭＫＩＩ／ＣＲＥＢ１経路の確立をブロッティング解析によって図示する。活性Ｇα_ｑ／１１は、イノシトールトリホスフェート（ＩＰ３）が小胞体（ＥＲ）の膜においてその受容体ＩＰ３Ｒに作用して細胞内カルシウムレベルを上昇させるようにＩＰ３を誘起し、これが結果としてＣａＭＫＩＩを活性化する。この作用は、Ｇα_ｑ／１１とＣａＭＫＩＩ分子を連結するｓｈＧαによって阻害された。ＣａＭＫＩＩは次にリン酸化（ｐ）によって下流のＣＲＥＢ１を活性化し、これはＣａＭＫＩＩ阻害剤であるＫＮ９３を使用することによってさらに確認された。図２Ｇ～２Ｉは、Ｇβ／ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＧＳＫ３α／β経路の確立を図示する。活性Ｇβは、ｓｅｒ４７３部位におけるＡＫＴのリン酸化（ｐ）によってＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達を、またｓｅｒ２１／９部位におけるリン酸化によってその下流の阻害性ＧＳＫ３α／βを急速に誘起した。これらの作用は、ＰＩ３Ｋ阻害剤であるＬＹ２９４００２およびＡＫＴ阻害剤であるＭＫ２２０６によって阻害された。阻害性ｐＧＳＫα／βは次いでｐＭＡＦＡを、核におけるその存在によって確認される核への局在化に推進し、ｐＭＡＦＡの発現はＧＳＫ３の阻害剤であるＳＢ２１６７６３によって阻害された。図２Ｊは、核細胞質分別によって証拠付けられるように、ｐＣＲＥＢ１とｐＭＡＦＡの両方が核に入ったことを示す。β－アクチン：ローディング対照。α－チューブリンおよびＨ３は、それぞれ細胞質および核のコンパートメントを示す。図２Ｋは、ＣＲＥＢ１ ｓｈＲＮＡによる前処理によってｈＴＳ細胞におけるグルコース刺激（Ｇｌｕ；２０ｍＭ）に応答するインスリンの発現を顕著に低減したが、ＰＤＸ１ ｓｈＲＮＡはそうでなかったことをｑＰＣＲ解析によって示す。Ｃ：対照、ｓｈＧＦＰ：陽性対照。ステューデントｔ－検定、^＊ｐ＜０．０５、ｎ＝４。図２Ｌは、２つの異なる抗インスリン抗体を含む２つのｈＴＳ細胞株におけるインスリンの発現をフローサイトメトリーによって示す。アイソタイプ：対照。図２Ｍは、ナイーブｈＴＳがストレスタンパク質または増殖マーカーＫｉ６７を発現しないが、ＨＳＰ９０を発現することを免疫細胞化学によって示す。スケールバー：５０μｍ。

【図2B】図２Ａの説明と同じ。

【図2C】図２Ａの説明と同じ。

【図2D】図２Ａの説明と同じ。

【図2E】図２Ａの説明と同じ。

【図2F】図２Ａの説明と同じ。

【図2G】図２Ａの説明と同じ。

【図2H】図２Ａの説明と同じ。

【図2I】図２Ａの説明と同じ。

【図2J】図２Ａの説明と同じ。

【図2K】図２Ａの説明と同じ。

【図2L】図２Ａの説明と同じ。

【図2M】図２Ａの説明と同じ。

【図3】[0023]図３は、ｐｒＣＴＢ中のＰＤＸ１、ＨＮＦ－１β、ＮＧＮ３、ＳＯＸ９、ＮＫＸ６．１を含むインスリン関連免疫反応分子、およびインスリンの代表的な画像を示す。バースケールバー：５０μｍ。

【図4A】[0024]図４Ａ～４Ｆを本明細書に記載する。図４Ａは、ｈＴＳＣがＴＧＦ－β１を発現することを免疫細胞化学によって示す。図４Ｂは、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）がＴＧＦ－β１およびビメンチンを上方制御したがＥ－カドヘリンを下方制御したことをウェスタンブロットアッセイによって示す。図４Ｄは、抗ＴＧＦ－β１抗体がこれらの作用を中和したことを示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝３、ステューデントｔ－検定、統計的有意：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．００１。図４Ｃは、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）がＴＧＦ－β１およびビメンチンを上方制御したがＥ－カドヘリンを下方制御したことを免疫細胞化学によって示す。図４Ｅは、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）が、１日のインキュベーションの後にｈＴＳＣが細胞形状において長い紡錘状から短く肥大した形に変化し、核の形状において楕円形からより丸い形に変化する形態学的変化を誘起したことを示す。図４Ｆは、ＦＯＸＡ２がβ－カテニンに対するｓｈＲＮＡの存在下でそれによって減衰する、ｂＦＧＦによって誘起されるＦＯＸＡ２の活性化の確認を示す。ｓｈＧＦＰ（非特異的ｓｈＲＮＡ）をトランスフェクトした細胞を対照として使用し、β－アクチンをローディング対照として使用した。

【図4B】図４Ａの説明と同じ。

【図4C】図４Ａの説明と同じ。

【図4D】図４Ａの説明と同じ。

【図4E】図４Ａの説明と同じ。

【図4F】図４Ａの説明と同じ。

【図5A】[0025]図５Ａ～５Ｃは、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）の生物学的特徴を図示する。図５Ａは、卵管異所性妊娠（妊娠７～８週）の絨毛膜絨毛におけるインスリン発現に付随する免疫反応分子および酸化ストレスタンパク質の代表的な画像を示す。スケールバー：５０μｍ。図５Ｂは、正常妊娠（妊娠７～８週）の絨毛膜絨毛におけるインスリンおよびストレスタンパク質の分布をイメージングによって示す。スケールバー：２００μｍ。図５Ｃは、栄養芽細胞の分化の経路におけるｐｒＣＴＢとｈＴＳ細胞のストレスタンパク質の発現における相違を、正常な子宮妊娠の細胞とも比較した概略説明図である。

【図5B】図５Ａの説明と同じ。

【図5C】図５Ａの説明と同じ。

【図6A】[0026]図６Ａおよび６Ｂは、絨毛膜絨毛におけるストレスタンパク質ｐ５３およびインスリンを発現する合胞結節の、正常な妊娠と損傷した卵子との比較を示す。ストレスを受けた合胞結節は、正常妊娠８週における単一の絨毛膜絨毛において計数された１５を超える陽性細胞を含む区域でインスリンおよびｐ５３を発現することによって定義される（図６Ａ）。一方、妊娠７～８週における損傷した卵子を有する患者の絨毛膜絨毛（図６Ｂ）は、ストレス合胞結節の頻度が（図６Ａ）においてよりも１．９６倍高い（図６Ｂ）ことを示す。合胞結節の数は、２名の助手によって８０視野（図６Ａ）および５０視野（図６Ｂ）で独立に計数された。一方、別の２５視野は示していない。図６Ｃは、４時間の誘起によるＤＥステージにおける細胞形質転換の間の多能性転写因子、免疫反応性ＯＣＴ４イメージング（ＣＤＸ２イメージングではない）の発現の変化を示す。

【図6B】図６Ａの説明と同じ。

【図6C】図６Ｃは、４時間の誘起によるＤＥステージにおける細胞形質転換の間の多能性転写因子、免疫反応性ＯＣＴ４イメージング（ＣＤＸ２イメージングではない）の発現の変化を示す。

【図7A】[0027]図７Ａ～７Ｑを本明細書に記載する。図７Ａは、ＰＬＵＳを含む培養培地（上パネル）中で、ｈＴＳ細胞（左の濃いカラム）およびｐｒＣＴＢ細胞（右の薄いカラム）から分泌されたエキソソーム、ならびに使用したＰＬＵＳ培地における成分の影響を除外した後（下パネル）のナイーブなｈＴＳ細胞（左の濃いカラム）およびナイーブなｐｒＣＴＢ（右の薄いカラム）で提示されたエキソソームのＬｕｍｉｎｅｘ解析を示す。図７Ｂは、ｈＴＳ細胞（左）およびｐｒＣＴＢ（右）における数多くの受容体分子の存在を実証するイムノブロットアッセイの結果を示す。図７Ｃは、イムノブロット解析によるｈＴＳ細胞およびｐｒＣＴＢから放出されたタンパク質のセクレトームアッセイの結果を示す。ｓＨＬＡ－Ｇ：可溶性ＨＬＡ－Ｇ。ｎ＝３。図７Ｄは、ｈＴＳＣが血管形成因子ＣＤ１０５およびＣＤ１４６を発現することをＦＡＣＳ解析によって示す。図７Ｅは、ｈＴＳ細胞（左）およびｐｒＣＴＢ（右）における数多くの受容体分子の存在を実証するイムノブロットアッセイの結果を示す。図７Ｆは、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）がＳＴＡＴ３、ｃ－ＪＵＮ、およびＦａｓリガンド（ＦａｓＬ）の上方制御を誘起したが、Ｆａｓの下方制御を誘起したことをイムノブロットアッセイによって示す。この作用はｓｈＦＧＦＲ１によって阻害された。陰性対照としてｓｈＧＦＰを使用した。図７Ｇ～７Ｊは、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）がＣＲＥＢ１シグナル伝達の活性化を誘起したことをウェスタンブロットアッセイによって示す。図７Ｇは、ｂＦＧＦがその受容体ＦＧＦＲ１および下流のＰＩ３Ｋシグナルを活性化し、これがＦＧＦＲ阻害剤ＰＤ１６６８６６によって阻害されたことを示す。図７Ｈは、ＰＩ３ＫがＡＫＴをリン酸化（ｐ）してＰＩ３Ｋ／ｐＡＫＴシグナル伝達を形成し、これがＰＩ３Ｋ ｓｈＲＮＡによって阻害されたことを示す。図７Ｉは、ｐＡＫＴがその下流のＣＲＥＢ１を活性化し、これがＡＫＴ１ ｓｈＲＮＡ、ＡＫＴ２ ｓｈＲＮＡ、およびＡＫＴ３ ｓｈＲＮＡを含むＡＫＴ抗体を使用することによって中和されたことを示す。図７Ｊは、ｐＡＫＴが直接の相互作用によってその下流のＣＲＥＢ１を活性化したことを免疫沈降（ＩＰ）アッセイによって示す。図７Ｋは、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）が時間依存的にＩＬ－６（左パネル）およびＩＬ－８（右パネル）を誘起したことを示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝３の独立細胞株。ステューデントｔ－検定、統計的有意：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。図７Ｌは、ＩＬ－６（１０ｎｇ／ｍｌ）がｈＴＳＣ中でＩＬ－６Ｒ ｍＲＮＡ、ＣＲＥＢ１ ｍＲＮＡ、およびβ－ｈＣＧ ｍＲＮＡを上方制御し（左パネル）、ＩＬ－８（３０ｎｇ／ｍｌ）がＣＲＥＢ１ ｍＲＮＡおよびＣＤ５６ ｍＲＮＡを上方制御するが従来の受容体ＩＬ－８Ｒを上方制御しない（右パネル）ことを示すＲＴ－ｑＰＣＲ解析を示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝４。ステューデントｔ－検定、統計的有意：^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。図７Ｍ～７Ｎは、ＩＬ－６がβ－ｈＣＧ（＋）ＣＤ５６（＋）ｐｒＣＴＢを生成したことをウェスタンブロットによって示す。図７Ｍは、ＩＬ－６（１０ｎｇ／ｍｌ）がＧｎＲＨＲおよびＩＬ－６Ｒを介してβ－ｈＣＧを誘起し、ＧｎＲＨＲ阻害剤ＥｌａｇｏｌｉｘナトリウムおよびＣＲＥＢ１阻害剤６６６－１５によって阻害されたことを示す。図７Ｎは、ＩＬ－８（３０ｎｇ／ｍｌ）がＣＸＣＲ２／ＳＴＡＴ３シグナル伝達を介してＣＤ５６を誘起し、ＣＸＣＲ２阻害剤ＳＢ２２５００２およびＳＴＡＴ３阻害剤Ｓｔａｔｔｉｃによって阻害されたことを示す。図７Ｏは、ＩＬ－８（３０ｎｇ／ｍｌ）がＣＸＣＲ２／ＣＲＥＢ１およびＣＸＣＲ２／ＳＴＡＴ３の両方のシグナル伝達経路を介してＣＤ４（＋）ｐｒＣＴＢを生成し、ＣＲＥＢ１阻害剤６６６－１５、ＣＲＣＲ２阻害剤ＳＢ２２５００２、およびＳＴＡＴ３阻害剤Ｓｔａｔｔｉｃによって阻害されたことを示す。図７Ｐは、ＩＬ－８（３０ｎｇ／ｍｌ）がＣＸＣＲ２／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路を介してＦｏｘｐ３を誘起し、ＣＲＣＲ２阻害剤ＳＢ２２５００２およびＳＴＡＴ３阻害剤Ｓｔａｔｔｉｃ（Ｅ）によって阻害されたことを示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝３の独立細胞株。ステューデントｔ－検定、統計的有意：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。図７Ｑは、ｂＦＧＦがｐｒＣＴＢ中でＣＤ４とＦｏｘｐ３の共発現を誘起したことを免疫細胞化学によって示す。バースケール：５０μｍ。

【図7B】図７Ａの説明と同じ。

【図7C】図７Ａの説明と同じ。

【図7D】図７Ａの説明と同じ。

【図7E】図７Ａの説明と同じ。

【図7F】図７Ａの説明と同じ。

【図7G】図７Ａの説明と同じ。

【図7H】図７Ａの説明と同じ。

【図7I】図７Ａの説明と同じ。

【図7J】図７Ａの説明と同じ。

【図7K】図７Ａの説明と同じ。

【図7L】図７Ａの説明と同じ。

【図7M】図７Ａの説明と同じ。

【図7N】図７Ａの説明と同じ。

【図7O】図７Ａの説明と同じ。

【図7P】図７Ａの説明と同じ。

【図7Q】図７Ａの説明と同じ。

【図8】[0028]図８は、フローサイトメトリーによって測定したｈＴＳ細胞およびｐｒＣＴＢ中のＣＤ分子、ならびにフローサイトメトリーによって測定したｈＴＳ細胞およびｐｒＣＴＢ中で検出されたＴ細胞およびＮＫ細胞のサブタイプのマーカーを列挙した２つの表を示す。

【図9A】[0029]図９Ａ～９Ｎは、ｈＴＳ細胞およびｐｒＣＴＢにおけるＣＤバイオマーカーの分布についての代表的なフローサイトメトリー解析を示す。図９Ａ～９Ｋは、全部で８個の代表的な試料におけるＦＡＣＳプロット解析を示し、ｈＴＳ細胞（左パネル）およびｐｒＣＴＢ（右パネル）中の、検出できないＣＤ３およびＣＤ４５（図９Ａ）、ＣＤ３４（図９Ｂ）、ならびにＣＤ３およびｇｄＴＣＲ（図９Ｃ）、しかし検出可能なＣＤ（１６＋５６）およびＣＤ１０７ａ（図９Ｄ）、ＣＤ（１６＋５６）（図９Ｅ）、検出可能なＣＤ（１６＋５６）、しかし僅かなＣＤ４（図９Ｆ）、検出可能なＣＤ（１６＋５６）およびＣＤ８（図９Ｇ）、検出可能なＣＤ（１６＋５６）、しかしＣＤ１９なし（図９Ｈ）、検出可能なＣＤ１０７ａ、しかし僅かなＣＤ４（図９Ｉ）、検出可能なＣＤ１０７ａおよびＣＤ８（図９Ｊ）、および検出可能なＣＤ１０７ａ、しかしＣＤ１９なし（図９Ｋ）を示す。図９Ｌおよび９Ｍは、ｈＴＳ細胞（黒色のカラム）およびｐｒＣＴＢ（灰色のカラム）の集団におけるＣＤ分子の分布（図９Ｌ）ならびにＮＫ細胞およびＴ細胞のサブタイプ（図９Ｍ）を示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝８、独立試料。図９Ｎは、免疫染色によるｐｒＣＴＢ中のＣＤ１１ｂおよびＣＤ４９ｆの発現を示す。

【図9B】図９Ａの説明と同じ。

【図9C】図９Ａの説明と同じ。

【図9D】図９Ａの説明と同じ。

【図9E】図９Ａの説明と同じ。

【図9F】図９Ａの説明と同じ。

【図9G】図９Ａの説明と同じ。

【図9H】図９Ａの説明と同じ。

【図9I】図９Ａの説明と同じ。

【図9J】図９Ａの説明と同じ。

【図9K】図９Ａの説明と同じ。

【図9L】図９Ａの説明と同じ。

【図9M】図９Ａの説明と同じ。

【図9N】図９Ａの説明と同じ。

【図10A】[0030]図１０Ａ～１０Ｋを本明細書に記載する。図１０Ａ～１０Ｄは、トランスウェル浸潤および遊走アッセイの結果を示す。ＭＣＰ－１（図１０Ａおよび１０Ｂ）およびＣＸＣＬ２（図１０Ｃおよび１０Ｄ）は、用量および時間依存的にｈＴＳＣおよびｐｒＣＴＢの両方の移動を顕著に誘起した。図１０Ｅは、妊娠７～８週の正常な絨毛膜絨毛における免疫組織化学を示し、浸潤するＥＶＴが免疫反応性ｐ５３（＋）、シンシチン、β－ｈＣＧ、およびＨＬＡ－Ｇ分子を発現したことが明らかになった。図１０Ｆ～１０Ｇは、ＣＤ５６（＋）ｐｒＣＴＢ（褐色、図１０Ｆの上および中のパネル）およびβ－ｈＣＧ（＋）ｐｒＣＴＢ（褐色、図１０Ｇの上パネル）が着床のためにＥＶＴに向かって移動することを示す（赤矢印）。脱落膜上皮細胞の下の多くのＣＤ５６（＋）（Ｆの下パネル）およびβ－ｈＣＧ（＋）（図１０Ｇの中パネル）のｐｒＣＴＢ。母体脱落膜におけるβ－ｈＣＧ（＋）ｐｒＣＴＢによる動脈内皮細胞の置換はＳＡリモデリング（図１０Ｇの中パネル）を示唆し、脱落膜静脈の管腔内部のβ－ｈＣＧ（＋）ｐｒＣＴＢ（図１０Ｇの下パネル）は静脈の浸潤も示唆している。図１０Ｈ～１０Ｋは、浸潤および遊走アッセイの写真を示す。図１０Ｈ～１０Ｉは、ＭＣＰ－１がｈＴＳＣ（４×１０^３細胞／ｍｌ）の運動を用量依存的に（図１０Ｈ）、またｈＴＳＣとｐｒＣＴＢの両方（それぞれ４×１０^３細胞／ｍｌ）において時間依存的に（図１０Ｉ）、推進したことを示す。図１０Ｊ～１０Ｋは、ＣＸＣＬ２がｈＴＳＣ（４×１０^３細胞／ｍｌ）の運動を時間依存的に（図１０Ｊ）、またｈＴＳＣとｐｒＣＴＢの両方（それぞれ４×１０^３細胞／ｍｌ）において用量依存的に（図１０Ｋ）、推進したことを示す。青色は０．２％クリスタルバイオレット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、１１５９４０）による細胞染色を示す。遊走した細胞（青色）の数は、ヘモサイトメーターまたはフローサイトメーターを使用して計数する。それぞれの試験においてｎ＝３の独立試料。

【図10B】図１０Ａの説明と同じ。

【図10C】図１０Ａの説明と同じ。

【図10D】図１０Ａの説明と同じ。

【図10E】図１０Ａの説明と同じ。

【図10F】図１０Ａの説明と同じ。

【図10G】図１０Ａの説明と同じ。

【図10H】図１０Ａの説明と同じ。

【図10I】図１０Ａの説明と同じ。

【図10J】図１０Ａの説明と同じ。

【図10K】図１０Ａの説明と同じ。

【図11A】[0031]図１１Ａ～１１Ｋを本明細書に記載する。図１１Ａ～１１Ｄは、経時的なｐｒＣＴＢ（矢じり）およびＰＡＮＣ－１（矢印）の比２：１（３×１０^４細胞／ウェル）での共培養を示し、ｐｒＣＴＢによって包みこまれたＰＡＮＣ－１のアポトーシス変化を光学顕微鏡（図１１Ａ）によって示す。免疫細胞化学は、共細胞における２つの生細胞、即ちｐｒＣＴＢ（青、ＣｙｔｏＣａｌｃｅｉｎ４５０染色）およびＰＡＮＣ－１（赤、ＰＫＨ２６染色）の相互作用を示す（図１１Ｂ）。アポトーシスを受けたＰＡＮＣ－１（緑、アポキシン染色、上）および元のままのｐｒＣＴＢ（青、中央）が相互作用によって見られる（併合、矢印、下）（図１１Ｃ）。３Ｄ蛍光顕微鏡は相互作用に際してアポトーシスを受けたＰＡＮＣ－１（緑）および元のままのｐｒＣＴＢ（青）を示す（図１１Ｄ）。図１１Ｅは、ｐｒＣＴＢがＰＤ－Ｌ１を発現した（上、左カラム）が、ＰＤ－１を発現せず（下、左カラム）、一方、ＰＡＮＣ－１がＰＤ－１（上、右カラム）とＰＤ－Ｌ１（下、右カラム）の両方を発現したことを明らかにする免疫細胞化学を示す。図１１Ｆは、ＦａｓＬがｐｒＣＴＢに出現した（上、左カラム）が、ＰＡＮＣ－１では発現しなかった（下、右カラム）一方、ＦａｓがｐｒＣＴＢ（下、左カラム）とＰＡＮＣ－１（上、右カラム）の両方で発現したことを示す。バースケールは示した通りである。図１１Ｇ～１１Ｋは、ｐｒＣＴＢが相互作用に際して固形腫瘍細胞のアポトーシスを誘起したことを示す。図１１ＧはｐｒＣＴＢ（青）が相互作用に際して乳腺ＭＣＦ－７細胞（緑）のアポトーシスを誘起したことを３Ｄ細胞エクスプローラー蛍光顕微鏡によって示す（図１１Ｇ）。図１１Ｈは、ｐｒＣＴＢがＰＤ－Ｌ１を誘起したがＰＤ－１を誘起しなかった（左カラム）一方、ＰＡＮＣ－１がＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の両方を誘起した（右カラム）ことを示す。図１１Ｉは、ｐｒＣＴＢがＦａｓＬとＦａｓの両方を発現した（左カラム）一方、ＰＡＮＣ－１がこれらの両方を発現した（右カラム）ことを示す。図１１Ｊは、ｐｒＣＴＢが抗アポトーシス性のＭｃｌ－１ ｍＲＮＡおよびＢｆｌ－１ ｍＲＮＡを顕著に上方制御したことをＲＴ－ｑＰＣＲ解析によって示す。データは平均±ＳＤを表わす。ｎ＝４、ステューデントｔ－検定、統計的有意：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。図１１Ｋは、ｐｒＣＴＢが２４時間の共培養でＨｕｈ７細胞（肝）、Ｈ１２９９細胞（肺）、ＭＫＮ４５細胞（胃）、ＰＡ－１細胞（卵巣）、およびＡ３７５細胞（黒色腫）のアポトーシス（アポキシン、緑）を惹起したことを３Ｄ細胞エクスプローラー蛍光顕微鏡（Ｎａｎｏｌｉｖｅ，Ｓｗｉｓｓ）による解析によって示す。バースケールは示した通りである。

【図11B】図１１Ａの説明と同じ。

【図11C】図１１Ａの説明と同じ。

【図11D】図１１Ａの説明と同じ。

【図11E】図１１Ａの説明と同じ。

【図11F】図１１Ａの説明と同じ。

【図11G】図１１Ａの説明と同じ。

【図11H】図１１Ａの説明と同じ。

【図11I】図１１Ａの説明と同じ。

【図11J】図１１Ａの説明と同じ。

【図11K】図１１Ａの説明と同じ。

【図12A】[0032]図１２Ａ～１２Ｂは、ＥＶＴから母体脱落膜への遊走におけるＣＤ５６（＋）β－ｈＣＧ（＋）細胞の細胞プロセスを示す。卵管異所性絨毛膜絨毛において、左パネル：ＣＤ５６発現細胞の免疫細胞化学。中パネル：絨毛性間質の間のＣＤ５６（＋）細胞の散発的分布、絨毛性ＣＴＢの内層（黒色矢印）、ＥＶＴ区域における濃縮。右パネル：絨毛性表面およびＥＶＴ区域におけるβ－ｈＣＧ発現栄養芽細胞の分布。正常胎盤絨毛において、左パネル：Ｈ＆Ｅ染色による係留された絨毛、ＥＶＴ、および母体脱落膜組織の組織学的同定。中パネル：ＥＶＴ区域および近傍の脱落膜組織におけるＣＤ５６（＋）細胞の外観。右パネル：目立ったＣＤ５６（＋）細胞が母体脱落膜に出現する。ＣＤ５６（＋）細胞と同様のβ－ｈＣＧ（＋）栄養芽細胞の分布。

【図12B】図１２Ａの説明と同じ。

【発明を実施するための形態】

【0020】

[0033]１つまたは複数の発明実施形態の詳細を、添付した図面、特許請求の範囲、およ
び本明細書において説明する。本明細書で開示し意図した発明実施形態のその他の特徴、目的、および利点は、明示的に除外しない限り、任意の他の実施形態と組み合わせることができる。

【0021】

[0034]ｉｎ ｖｉｔｒｏで産生される独特の先駆制御性細胞栄養芽細胞、その組成物、および障害（例えばがん、炎症、または自己免疫疾患）の処置または状態（例えば皮膚の状態）の改善におけるその使用が、本明細書で開示される。先駆制御性細胞栄養芽細胞は、栄養芽幹細胞とは区別される。先駆制御性細胞栄養芽細胞は、胚幹細胞とも区別される。先駆制御性細胞栄養芽細胞は、原始細胞栄養芽細胞ならびに絨毛性細胞栄養芽細胞（絨毛性ＣＴＢ）、原始合胞体栄養芽細胞（ｐＳＴＢ）、合胞体栄養芽細胞（ＳＴＢ）、および絨毛外細胞栄養芽細胞（ＥＶＴ）を含む原始細胞栄養芽細胞由来の細胞とも区別される。図５Ｃを参照されたい。先駆制御性細胞栄養芽細胞は、胎盤細胞栄養芽細胞とも区別される。いくつかの例では、先駆制御性細胞栄養芽細胞は、先駆絨毛性細胞栄養芽細胞ではない。

【0022】

[0035]他に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、特許請求する主題が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。上記の一般的な記述および以下の詳細な説明は例示および説明のためのみであって、特許請求するいずれの主題をも制限しないことを理解されたい。本出願において、単数の使用は、他に具体的に述べない限り、複数を含む。明細書および添付した特許請求の範囲において使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他を明確に記述しない限り、複数の参照物を含むことに注意されたい。本出願において、「または」の使用は、他に述べない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、ならびに「ｉｎｃｌｕｄｅ」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」、および「ｉｎｃｌｕｄｅｄ」等の他の形の使用は限定的でない。

【0023】

[0036]本明細書で使用する場合、範囲および量は、「約」特定の値または範囲、例えば引用した数値の±１５％として表わすことができる。「約」は正確な量をも含む。したがって、「約５μＬ」は、「約５μＬ」および「５μＬ」をも意味する。一般に、用語「約」は、実験誤差の範囲内と予想される量を含む。

【0024】

[0037]用語「処置する（treating: 治療する）」、「処置（treatment: 治療）」等は
、本明細書において所望の薬学的および／または生理学的な効果を得ることを意味するために使用される。いくつかの例では、個体（例えば肝に関連する疾患または障害に罹患している疑いがある、および／または遺伝的に罹患しやすい個体）は、本明細書に記載した細胞の製剤で予防的に処置され、そのような予防的処置は、肝関連の疾患もしくは障害またはその兆候もしくは症状を完全にまたは部分的に防止する。いくつかの例では、個体は（例えば個体が肝関連の疾患または障害に罹患している場合に）治療的に処置され、そのような治療的処置は疾患もしくは障害の部分的もしくは完全な治癒を惹起し、および／または疾患もしくは障害に帰せられる有害事象を好転させ、および／または疾患もしくは障害を安定させ、および／または疾患もしくは障害の進行を遅延させ、および／または疾患もしくは障害の退縮を惹起する。

【0025】

[0038]処置を必要とする区域への本明細書で開示した細胞の投与（例えば移植）は、限定するものではないが例えば手術中の局所注入、注射、カテーテル手段、インプラント手段等によって達成され、前記インプラントは多孔質、非多孔質、またはゲル状の材料、例えば膜、例えばサイラスティック膜もしくは繊維である。

【0026】

[0039]組成物を哺乳動物に「移植すること」は、当技術において確立された任意の方法によって哺乳動物の体内に組成物を導入することを意味する。導入される組成物は「移植
物」であり、哺乳動物は「レシピエント」である。移植物およびレシピエントは同系、同種、または異種であってよい。さらに、移植は自己移植であってよい。

【0027】

[0040]用語「単離された」は、細胞または細胞の集団に関連して使用する場合、その細胞または細胞の集団が由来する宿主生命体から分離された細胞または細胞の集団の状態を意味する。いくつかの例では、単離された細胞は、同じ宿主生命体から単離された他の細胞と接触している。いくつかの例では、単離された細胞は、任意の他の細胞から分離されている。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、前駆細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導される。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは宿主生命体から得られ、宿主生命体から分離される。

【0028】

[0041]「有効量」は、意図した目的を達成するために十分な治療剤の量である。障害を治療または改善するための組成物の有効量は、障害の症状を低減または除去するために十分な組成物の量である。

【0029】

[0042]本明細書で使用する見出しは整理する目的のためのみであって、記載した主題を限定するものと解釈すべきではない。
細胞および組成物
[0043]いくつかの例では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで単離された先駆制御性細胞栄養芽細胞（
ｐｒＣＴＢ）が本明細書で開示され、単離されたｐｒＣＴＢは、ＨＳＰ９０、インスリン、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、もしくはそれらの任意の組合せのうち１つもしくは複数のタンパク質を発現し、またはｐｒＣＴＢはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを分泌し、またはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを分泌し、および／またはｐｒＣＴＢはｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢはＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、例えばがん細胞のコロニーに浸潤することによって、がん細胞のアポトーシスを誘起し、任意選択でｐｒＣＴＢ自体はがん細胞と接触することによってアポトーシスを受けない。いくつかの例では、がん細胞は固形腫瘍細胞である。いくつかの例では、がん細胞は膵がん細胞、乳がん細胞、肝腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、黒色腫細胞、またはそれらの任意の組合せである。いくつかの例では、がん細胞はＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１を発現する一方、ｐｒＣＴＢはＰＤ－Ｌ１を発現するがＰＤ－１を発現しない。いくつかの例では、がん細胞はＦａｓを発現するがＦａｓＬを発現しない一方、ｐｒＣＴＢはＦａｓおよびＦａｓＬを発現する。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢはＢｆｌ－１およびＭｃｌ－１を発現する。

【0030】

[0044]いくつかの例では、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団が本明細書で開示され、ｐｒＣＴＢの集団は、ＨＳＰ９０、インスリン、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球
免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、もしくはそれらの任意の組合せのうち１つもしくは複数のタンパク質を発現し、またはｐｒＣＴＢはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを分泌し、またはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを分泌し、および／またはｐｒＣＴＢの集団は、ｐ５３、Ｋｉ６７、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、もしくはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、集団の少なくとも約１０％はＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、集団の少なくとも約２％はＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、集団の少なくとも約２％はＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢである。いくつかの例では、集団少なくとも約５％はＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである。

【0031】

[0045]いくつかの例では、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団が本明細書で開示され、（ｉ）集団の少なくとも約１０％はＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢであるか、（ｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢであるか、（ｉｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢであるか、もしくは（ｉｖ）集団の少なくとも約５％はＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢであるか、またはそれらの任意の組合せである。いくつかの例では、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を含む細胞の単離された集団が本明細書で開示され、（ｉ）集団の少なくとも約１０％はＣＤ１６およびＣＤ５６を発現するｐｒＣＴＢであり、（ｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ４を発現するｐｒＣＴＢであり、（ｉｉｉ）集団の少なくとも約２％はＣＤ８を発現するｐｒＣＴＢであり、かつ（ｉｖ）集団の少なくとも約５％はＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢであり、またはそれらの任意の組合せである。いくつかの例では、細胞の集団は、集団の少なくとも約２％がＣＤ１６、ＣＤ５６、およびＣＤ１０７を発現するｐｒＣＴＢである集団を含む。

【0032】

[0046]いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢはインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、もしくはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧまたはｈＣＧ－β）、可溶性ヒト白血球抗原Ｇ（ｓＨＬＡ－Ｇ）、トランスフォーメーション成長因子β１（ＴＧＦ－β１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、ＣＤ１０５、ＣＤ１４６、またはそれらの任意の組合せをさらに発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、シンシチン、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、またはそれらの組合せを欠いている。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せ、またはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを分泌する。いくつかの例では、サイトカインは、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５）、単球ケ
モアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－１）、単球ケモアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２４（ＣＣＬ２４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２６（ＣＣＬ２６）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＣＬ１０）、フラクタルカイン、およびケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド４（ＣＣＬ４）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、サイトカインは、インターロイキン１α（ＩＬ－１α）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン（ＩＬ－２）、インターロイキン３（ＩＬ－３）、インターロイキン４（ＩＬ－４）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン１２ｐ４０（ＩＬ－１２ｐ４０）、インターロイキン１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン１５（Ｉ－１５）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、サイトカインは、インターフェロンα（ＩＦＮ－α）またはインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）を含む。いくつかの例では、成長因子は、血小板由来成長因子ホモダイマーＡＡ（ＰＤＧＦ－ＡＡ）、ＰＤＧＦホモダイマーＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）、ＰＤＧＦヘテロダイマー（ＰＤＧＦ－ＡＢ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリータンパク質、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルのＳＯＸ２タンパク質を発現する。いくつかの例では、絨毛膜絨毛由来の前駆細胞は、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、Ｋｉ６７、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、ｐ５３、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せの発現を欠いている。いくつかの例では、絨毛膜絨毛由来の前駆細胞と単離されたｐｒＣＴＢの両方がヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）を発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ヒト細胞である。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、サル、または類人猿起源である。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む医薬組成物の中に存在する。

【0033】

[0047]いくつかの例では、本明細書で提供される細胞、例えばｐｒＣＴＢは、遺伝子修飾されている。いくつかの例では、細胞は外因性遺伝子、例えばトランスジーンを発現するように遺伝子修飾されている。本明細書で使用される用語「トランスジーン」およびその文法的等価物は、生命体に移入される遺伝子または遺伝物質を意味し得る。例えば、トランスジーンは、生命体に導入される遺伝子を含むＤＮＡのストレッチまたはセグメントであり得る。トランスジーンが生命体に移入されると、生命体はトランスジェニック生命体と称される。トランスジーンは、トランスジェニック生命体の中でＲＮＡまたはポリペ
プチド（例えばタンパク質）を産生するその能力を保持することができる。トランスジーンは異なる核酸、例えばＲＮＡまたはＤＮＡからなっていてよい。トランスジーンは、例えばＴＣＲトランスジーンのように、操作されたＴ細胞受容体をコードし得る。トランスジーンはＴＣＲ配列を含み得る。トランスジーンはオンコジーンを含み得る。トランスジーンは免疫オンコジーンを含み得る。トランスジーンは組換えアームを含み得る。トランスジーンは操作された部位を含み得る。いくつかの例では、トランスジーンはオンコジーンである。いくつかの例では、トランスジーンは免疫オンコジーンである。いくつかの例では、トランスジーンは腫瘍サプレッサー遺伝子である。いくつかの例では、トランスジーンは、タンパク質分解を直接または間接に促進するタンパク質をコードする。いくつかの例では、トランスジーンは腫瘍溶解性遺伝子である。いくつかの例では、トランスジーンは腫瘍細胞のターゲティングにおいてリンパ球を助けることができる。いくつかの例では、トランスジーンはＴ細胞エンハンサー遺伝子である。いくつかの例では、トランスジーンは腫瘍溶解性ウイルス遺伝子である。いくつかの例では、トランスジーンは腫瘍細胞の成長を阻害する。いくつかの例では、トランスジーンは抗がん受容体である。いくつかの例では、トランスジーンは抗血管形成因子である。いくつかの例では、トランスジーンは細胞障害性遺伝子である。例示的なトランスジーンには、それだけに限らないが、ＣＤ２８、誘起性コスティミュレーター（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＣＤ７０、４－１ＢＢＬ、シグナル３、サイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）、ＬＦＡ－３（ＣＤ５８）、ＨＬＡクラスＩ遺伝子、Ｂ７、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ３２、ＣＤ６４、４－１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、膜結合ＩＬ－１５、膜結合ＩＬ－１７、膜結合ＩＬ－２１、膜結合ＩＬ－２、切断されたＣＤ１９、ＶＥＧＦ、カスパーゼ、ケモカイン、または上記のいずれかに対する抗体（例えばモノクローナル抗体）をコードする１つもしくは複数の遺伝子、またはそれらの任意の組合せが含まれる。いくつかの例では、トランスジーンは、細胞または組織の修復に関与するタンパク質（例えばＤＮＡの修復、免疫応答（例えばインターフェロンおよびインターロイキン）に関連するタンパク質、および構造タンパク質）をコードする。いくつかの例では、トランスジーンは、成長因子受容体をコードする。いくつかの例では、本明細書に記載したｐｒＣＴＢは、ＴＣＲ、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはそれらの任意の組合せをコードするトランスジーンを含む。いくつかの例では、ＣＡＲは抗原認識ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの例では、抗原認識ドメインは細胞の外側に曝露することができ、可能な標的分子と相互作用することができる。抗原認識ドメインは、一本鎖可変断片として連結され得るモノクローナル抗体の可変領域を含み得る。いくつかの例では、一本鎖可変断片は、リンカーペプチドと連結され得る免疫グロブリンの可変軽鎖および可変重鎖を含み得る。いくつかの例では、抗体系抗原認識ドメインの代替としてリガンドまたは受容体の系を使用することができる。ヒンジドメインは、膜貫通ドメインを抗原認識ドメインに結合させるために設計し得る。いくつかの例では、ヒンジ領域は、抗原認識ドメインの可撓性を増大させるために設計し得るペプチドであってよい。膜貫通ドメインは、細胞膜にわたる疎水性アルファヘリックスを含み得る。例えば、ＣＡＲにおける膜貫通ドメインとして、ＣＤ２８膜貫通ドメインを使用することができる。いくつかの例では、膜貫通ドメインはＣＡＲを原形質膜に係留することができる。細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを膜貫通ドメインに連結することができ、細胞の内部にあってもよい。いくつかの例では、標的タンパク質が抗原認識ドメインに結合する場合には、細胞内シグナル伝達ドメインは活性化シグナルを伝達することができる。いくつかの例では、シグナル伝達ドメインの活性化は、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のリン酸化を含み得る。分子内シグナル伝達ドメインは、修飾されたＩＴＡＭを含み得る。いくつかの例では、修飾されたＩＴＡＭは、シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３－ゼータドメインを含み得る。いくつかの例では、修飾されたＩＴＡＭシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータ、ＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－ガンマ、ＣＤ３－デルタ、それらの誘導体、またはそれらの任意の組合せを含
み得る。いくつかの例では、細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の共刺激ドメインを含み得る。いくつかの例では、細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数のシグナル伝達ドメインおよび１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの例では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、誘起性共刺激（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、それらの誘導体、またはそれらの任意の組合せからのシグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの例では、本明細書に記載したｐｒＣＴＢは、オンコジーン受容体をコードするトランスジーンを含む。

【0034】

[0048]いくつかの例では、本明細書で開示した細胞を含む組成物は、ヒトを含む哺乳動物への静脈内投与のための医薬組成物として処方される。いくつかの例では、静脈内投与のための組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合には、組成物は、注射部位における疼痛があればこれを改善するための局所麻酔剤も含む。組成物を注入によって投与する場合には、組成物は無菌の医薬グレードの水または食塩水を含む注入ボトルで分注してよい。組成物を注射によって投与する場合には、無菌の注射用水または食塩水のアンプルを準備して、それにより投与の前に成分を混合することができる。

【0035】

[0049]一態様では、本明細書で開示した細胞を含む組成物（例えば医薬組成物）が本明細書で開示される。いくつかの例では、組成物は薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含む。そのような担体には、それだけに限らないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、およびそれらの組合せが含まれる。他の例では、コロイド分散系が使用される。コロイド分散系には、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む油に基づく系が含まれる。

【0036】

セクレトームおよび組成物
[0050]いくつかの態様では、本明細書に記載した栄養芽幹細胞またはｐｒＣＴＢのセク
レトームを含む組成物が本明細書で開示される。いくつかの例では、セクレトームは、栄養芽幹細胞またはｐｒＣＴＢによって分泌されるエキソソームおよび栄養芽幹細胞またはｐｒＣＴＢによって分泌されるその他の可溶性分子（例えばタンパク質、核酸、および脂質）を含む。

【0037】

[0051]いくつかの例では、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、またはそれらの任意の組合せを含む組成物が本明細書で開示される。いくつかの例では、組成物はエキソソームを含み、エキソソームはケモカイン、インターロイキン、成長因子、またはそれらの任意の組合せ、および薬学的もしくは美容的に許容される賦形剤を運搬する。いくつかの例では、組成物は細胞を含まない。いくつかの例では、組成物が（ｉ）ＣＸＣＬ２、ＭＣＰ－１、フラクタルカイン、ＩＰ－１０、ＭＣＰ－３、エオタキシン、ＭＩＰ－１β、もしくはそれらの任意の組合せを含むケモカイン、（ｉｉ）ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１７Ａ、もしくはそれらの任意の組合せを含むインターロイキン、および（ｉｉｉ）ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、もしくはそれらの任意の組合せを含む成長因子を含むか、またはエキソソームがこれらを運搬する。

【0038】

[0052]いくつかの例では、組成物はＭＣＰ－１ならびにＣＸＣＬ２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびＶＥＧＦタンパク質の１つ、２つ、３つ、または全てを含む。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：１～約２．５：１の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１．０：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２．０：１、２．１：、２．２：１、２．３：１、２．４：１、または２．５：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約２．０
の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約３：１～約４：１または約３：１～約５：１の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約３：１、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．５、５、または４．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約３．２の重量比を有する。

【0039】

[0053]いくつかの例では、組成物はＭＣＰ－１ならびにＣＸＣＬ２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびＶＥＧＦタンパク質の１つ、２つ、３つ、または全てを含む。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：７～約１：４の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、１：７．０、１：６．８、１：６．６、１：６．４、１：６．２、１：６、１：５．８、１：５．６、１：５．４、１：５．２、１：５．０、１：４．８、１：４．６、１：４．４、１：４．２、または１：４．０．の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：５．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：４～約１：１．５の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：４．０、１：３．８、１：３．６、１：３．４、１：３．２、１：３．０、１：２．８、１：２．６、１：２．４、１：２．２、１：２．０、１；１．８、１：１．７、１：１．６、または１：１．５の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＣＸＣＬ２は、約１：４～約１：２．５の重量比を有する。

【0040】

[0054]いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約２：１～約３：１の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約２．３の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約２．５の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約３：１～約４：１の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、または４．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約３．６の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－６は、約３．８の重量比を有する。

【0041】

[0055]いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４：１～約６：１の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、または６．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４．６の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４．４の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４．９の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＩＬ－８は、約４．５の重量比を有する。

【0042】

[0056]いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約５：１～約７：１の重量比を有する。例えば、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、または７．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約５．６の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約６．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約７：１～約９：１、例えば７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．
９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、または９．０の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約７．６：１の重量比を有する。いくつかの例では、組成物中のＭＣＰ－１とＶＥＧＦは、約７．３：１の重量比を有する。

【0043】

[0057]いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含む。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは、約３：１～約５：１、例えば約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５．０の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約３．５の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約６：１～約９：１、例えば約６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、または９．０の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約７．８の重量比で存在する。

【0044】

[0058]いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含む。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約１：２．５～約１：１．５、例えば約１：２．５、１：２．４、１：２．３、１：２．２、１：２．１、１：２．０、１：１．９、１：１．８、１：１．７、１：１．６、または１：１．５の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約０．６の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約１：１．５～約１．５：１、例えば約１：１．５、１：１．４、１：１．３、１：１．２、１：１．１、１：１．０、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、または１．５：１の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約１．２の重量比で存在する。

【0045】

[0059]いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡをさらに含む。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約３：１～約５：１、例えば３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５．０の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約３．５の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約６：１～約９：１、例えば約６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、または９．０の重量比で存在する。いくつかの例では、ＭＣＰ－１およびＰＤＧＦ－ＡＡは約７．８の重量比で存在する。

【0046】

[0060]いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡおよびＧ－ＣＳＦをさらに含む。いくつかの例では、組成物はＰＤＧＦ－ＡＡおよびＦＧＦ－２（ｂＦＧＦ）をさらに含む。いくつかの例では、組成物は、ＩＰ－１０、エオタキシン、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＭＤＣ、ＭＣＰ－３、ＩＬ－１２Ｐ７０、ＩＦＮａ、ＩＦＮｒ、ＰＤＧＦ－ＡＢ／ＢＢ、またはＥＧＦのうち１つまたは複数のタンパク質をさらに含む。

【0047】

[0061]いくつかの例では、組成物は核酸、例えばｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはＤＮＡをさらに含む。いくつかの例では、組成物は、ｐｒＣＴＢまたは栄養芽幹細胞から分泌される脂質分子をさらに含む。

【0048】

[0062]いくつかの例では、本明細書で開示される組成物は無菌であってよい。いくつかの例では、組成物は常在微生物を含んでよい。微生物はウイルス、細菌、真核細胞、またはそれらの任意の組合せであってよい。いくつかの例では、微生物は病原性でなくてよい
。いくつかの例では、組成物は約１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）／グラム（ｇ）、５０ＣＦＵ／ｇ、１００ＣＦＵ／ｇ、１５０ＣＦＵ／ｇ、２００ＣＦＵ／ｇ、３００ＣＦＵ／ｇ、４００ＣＦＵ／ｇ、５００ＣＦＵ／ｇ、６００ＣＦＵ／ｇ、７００ＣＦＵ／ｇ、８００ＣＦＵ／ｇ、９００ＣＦＵ／ｇ、または１０００ＣＦＵ／ｇ未満の濃度で細菌を含み得る。いくつかの例では、組成物は約１０ＣＦＵ／ｇ～約１０００ＣＦＵ／ｇ、１０ＣＦＵ／ｇ～約５０ＣＦＵ／ｇ、２０ＣＦＵ／ｇ～約１００ＣＦＵ／ｇ、５０ＣＦＵ／ｇ～約２００ＣＦＵ／ｇ、１００ＣＦＵ／ｇ～約２５０ＣＦＵ／ｇ、２００ＣＦＵ／ｇ～約５００ＣＦＵ／ｇ、５００ＣＦＵ／ｇ～約７００ＣＦＵ／ｇ、または６００ＣＦＵ／ｇ～約１０００ＣＦＵ／ｇの濃度で細菌を含み得る。いくつかの例では、組成物はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、またはそれらの任意の組合せを実質的に含まない（例えば少なくとも９５％含まない）か、または含まない。

【0049】

[0063]いくつかの例では、本明細書で開示した組成物は、鉛等の重金属、ビチオノール、クロロフルオロカーボン噴射剤、ニトロソアミン、クロロホルム、ハロゲン化サリチルアニリド、ヘキサクロロフェン、水銀化合物、１，４－ジオキサン、塩化メチレン、禁止されているウシ由来材料、日焼け止め化合物、塩化ビニル、ジルコニウム含有複合体、またはそれらの任意の組合せを含まないのがよい。いくつかの例では、禁止されているウシ由来材料には、脳、頭蓋骨、眼球、三叉神経節、脊髄、脊柱、後根神経節、扁桃腺、小腸の遠位回腸、またはそれらの任意の組合せが含まれ得る。いくつかの例では、組成物は、１０（百万分率）ｐｐｍまたはそれ未満のレベルで鉛を含んでよい。

【0050】

[0064]いくつかの例では、本明細書の組成物は、着色剤、香料、パラベン、フタレート、アルコール、またはそれらの任意の組合せを含まない。いくつかの例では、着色剤、香料、パラベン、フタレート、またはアルコールは、組成物中に僅かなレベル、例えば５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満で存在する。いくつかの例では、偶発的な含有物は、組成物中で技術的／構造的、機能的、またはそれらの任意の組合せの効果を有さず、例えば活性含有物でない。いくつかの例では、組成物は、を含まない。

【0051】

[0065]いくつかの例では、本明細書で開示した賦形剤には、水、グリセロール、食塩水、植物油（例えば種油）、果実油、花卉抽出物、鉱油、合成油、糖化合物、ケイ酸塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、塩化ナトリウム、塩化カリウム、乳酸、デンプン、糖アルコール、セルロース、活性炭、グリセリン、バター、アミン酸、パラフィン、蜂蜜、ワックス、蜜蝋、寒天、炭酸カルシウム、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、キサンタンガム、安息香酸、ポリエチレングリコール、シリコン、それらの誘導体、それらの塩、またはそれらの任意の組合せが含まれ得る。

【0052】

使用方法
[0066]いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、対象に、静脈内、皮下、経皮、吸
入、経口、筋肉内、または腫瘍内投与される。いくつかの例では、対象は哺乳動物である。いくつかの例では、対象は霊長類である。いくつかの例では、対象はヒトである。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）を発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）
、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せを発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ベータ－ホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）、可溶性ヒト白血球抗原Ｇ（ｓＨＬＡ－Ｇ）、トランスフォーメーション成長因子β１（ＴＧＦ－β１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、ＣＤ１０５、ＣＤ１４６、またはそれらの任意の組合せをさらに発現する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、シンシチン、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、またはそれらの組合せを欠いている。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せ、またはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを分泌する。いくつかの例では、サイトカインは、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５）、単球ケモアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－１）、単球ケモアトラクタントプロテイン－１（ＭＣＰ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２４（ＣＣＬ２４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２６（ＣＣＬ２６）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２２（ＣＣＬ２２）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＣＬ１０）、フラクタルカイン、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド４（ＣＣＬ４）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、サイトカインは、インターロイキン１α（ＩＬ－１α）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン（ＩＬ－２）、インターロイキン３（ＩＬ－３）、インターロイキン４（ＩＬ－４）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン１２ｐ４０（ＩＬ－１２ｐ４０）、インターロイキン１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン１５（Ｉ－１５）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、サイトカインは、インターフェロンα（ＩＦＮ－α）またはインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）を含む。いくつかの例では、成長因子は、血小板由来成長因子ホモダイマーＡＡ（ＰＤＧＦ－ＡＡ）、ＰＤＧＦホモダイマーＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）、ＰＤＧＦヘテロダイマー（ＰＤＧＦ－ＡＢ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリータンパク質、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルの活性化されたシグナルトランスデューサー／転写アクチベーター３（ＳＴＡＴ３）または転写因子ｃ－ＪＵＮを有する。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、イムノブロット法によって測定して、単離されたｐｒＣＴＢがｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した元の前駆細胞よりも少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．５、２、２．２、２．５、２．８、３、３．５、４、５、８、１０倍高いレベルのＳＯＸ２タンパク質を発現する。いくつかの例では、前駆細胞は、ｐ５３、グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、Ｋｉ６７、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せの発現を欠いている。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、ヒト細胞である。いくつかの例では、単離されたｐｒＣＴＢは、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、サル、または類人猿起源である。

【0053】

[0067]いくつかの例では、抗原を保有する標的細胞を死滅させる必要がある対象に先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を投与することを含む、抗原保有標的細胞を死滅させる方法が本明細書で開示され、単離されたｐｒＣＴＢは、ＨＳＰ９０、インスリン、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せ、およびグルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、Ｋｉ６７、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、ｐ５３、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せを含む１つまたは複数のタンパク質を発現する。いくつかの例では、抗原保有細胞は抗原提示細胞ではなく、例えば樹状細胞、マクロファージ、またはＢ細胞ではない。いくつかの例では、抗原保有標的細胞はがん細胞である。いくつかの例では、がん細胞は固形腫瘍細胞である。いくつかの例では、がん細胞は血液がん細胞である。いくつかの例では、がん細胞は膀胱がん細胞、骨がん細胞、脳がん細胞、乳がん細胞、頸部の癌腫、結腸直腸がん細胞、食道がん細胞、胃腸がん細胞、造血系悪性疾患、頭頚部扁平上皮細胞癌、白血病、肝がん細胞、肺がん細胞、リンパ腫、骨髄腫、鼻がん細胞、鼻咽頭がん細胞、口腔がん細胞、口腔咽頭がん細胞、卵巣がん細胞、前立腺がん細胞、肉腫、胃がん細胞、黒色腫、甲状腺がん細胞、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、抗原保有標的細胞は病原体である。いくつかの例では、病原体はウイルス、細菌、プロトゾア、プリオン、真菌、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、本方法は抗原保有標的細胞の集団の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約５０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％を死滅させる。

【0054】

[0068]いくつかの例では、炎症性経路を下方制御する必要がある対象に先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を投与することを含む、炎症性経路を下方制御する方法が本明細書で開示され、（ｉ）単離されたｐｒＣＴＢは、（ａ）ＨＳＰ９０、インスリン、ＣＤ４、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、アポトーシスシグナル受容体（Ｆａｓ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫２関連タンパク質Ａ１（ＢＣＬ２Ａ１またはＢｆｌ－１）、ミエロイド細胞白血病シーケンス１（Ｍｃｌ－１）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ３４、またはそれらの任意の組合せ、および（ｂ）グルタメートデカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、Ｋｉ６７、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、ｐ５３、可溶性ＣＤ４０－リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）、またはそれらの任意の組合せを発現し、（ｉｉ）単離されたｐｒＣＴＢは、ケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを分泌し、またはケモカイン、サイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを分泌する。

【0055】

[0069]いくつかの例では、本方法は、移植拒絶、感染、感染に伴うエンドトキシンショック、関節炎、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、全身発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性ループスエリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、骨盤
内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性腸炎、刺激性腸症候群、多発性硬化症、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ブドウ膜炎、ぺイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、手術後癒着、発作、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢および末梢神経系の免疫媒介炎症性障害、膵炎、手術後傷害、グラフト対宿主病、心臓疾患、骨の再吸収、火傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝もしくは肺の線維化、歯周炎、または低塩酸症を含む疾患または状態を処置する。いくつかの例では、本方法は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性ループスエリテマトーデス、シェーグレン症候群、強皮症、多発性筋炎、慢性活動性肝炎、混合結合組織病、原発性胆汁性肝硬変、悪性貧血、自己免疫性甲状腺炎、特発性アジソン病、白斑、グルテン感受性腸疾患、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、リウマチ性関節炎、肝硬変、尋常性天疱瘡、自己免疫性不妊、グッドパスチャー病、水疱性類天疱瘡、ディスコイドループス、潰瘍性大腸炎、高密度沈着物疾患、炎症性腸疾患、または乾癬を含む自己免疫疾患を処置する。いくつかの例では、本方法は１型糖尿病を処置する。いくつかの例では、本方法は移植拒絶を改善する。

【0056】

[0001]いくつかの例では、皮膚の状態を調節することを必要とする対象に、ケモカイン、インターロイキン等のサイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せ、またはケモカイン、インターロイキン等のサイトカイン、成長因子、もしくはそれらの任意の組合せを運搬するエキソソームを含む組成物（例えば医薬組成物）を投与することを含む、皮膚の状態を調節する方法が本明細書で開示される。いくつかの例では、本方法は皮膚の状態を改善し、それにより皮膚の状態は、本方法の適用前と比較して、本方法の適用後に１つまたは複数のより良い特徴を有する。いくつかの例では、ケモカインは、ＧＲＯ、ＭＣＰ－１、フラクタルカイン、ＩＰ－１０，ＭＣＰ－３、エオタキシン、ＭＩＰ－１β、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、組成物は、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２Ｐ４０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１７Ａ、またはそれらの任意の組合せを含むインターロイキンを含む。いくつかの例では、成長因子は、ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの例では、本方法は、美容上の用途を提供する。いくつかの例では、本方法は皮膚を引き締める。いくつかの例では、本方法は皮膚を水和する。いくつかの例では、本方法は皮膚を若返らせる。いくつかの例では、組成物は幹細胞を継代した後の培地である。いくつかの例では、幹細胞は本明細書に記載した単離された先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）である。いくつかの例では、継代数は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。いくつかの例では、幹細胞は培地中で少なくとも約１～３日、例えば約１～２日、例えば培地を回収する前に培養される。いくつかの例では、幹細胞は培地中で少なくとも約１２～２４時間、例えば培地を回収する前に培養される。いくつかの例では、継代数は５～１０である。いくつかの例では、継代は約１、２、または３日ごとに行なう。いくつかの例では、継代は約２、４、６、８、１２、１６、２０、または２４時間ごとに行なう。いくつかの例では、培地は幹細胞を含まない。いくつかの例では、組成物はクリーム、液体、ゲル、ローション、ミスト、カプセル、またはマスクの形態である。いくつかの例では、本方法は皮膚疾患を処置するために使用できる。いくつかの例では、皮膚疾患は、湿疹、乾癬、にきび、酒さ、魚鱗癬、白斑、蕁麻疹、脂漏性皮膚炎、帯状疱疹、日焼け、火傷、接触皮膚炎、発疹、またはそれらの任意の組合せであり得る。いくつかの例では、本方法は、皮膚の老化の外観、光による老化、またはそれらの任意の組合せを低減することができる。いくつかの例では、本方法は瘢痕の外観を低減することができる。いくつかの例では、本方法は創傷治癒を改善することができる。いくつかの例では、本方法は、傷、良性腫瘍、老化による染み、がん性増殖、潰瘍、感染、またはそれらの任意の組合せを防止し、低減し、または除去することができる。いくつかの例では、本方法は、皮膚の線、しわ、またはそれらの任意の組合せを防止、低減し、または除去することができる。いくつかの例では、線またはしわは、カラスの足跡、微笑線、渋面線、額のしわ、ティアトラフ
、ウサギ様の線、ほうれい線、マリオネット線、心理的な溝、ネックライン、老化によるしわ、しわ線、弾力性のしわ、表情線、重力によるたるみ、動的しわ、静的しわ、委縮性しわ（ａｔｒｏｐｈｉｃ ｗｒｉｎｋｅｓ）、委縮性しわ（ａｔｒｏｐｈｉｃ ｃｒｉｎｋｌｉｎｇ ｒｈｙｔｉｄｓ）、またはそれらの任意の組合せであってよい。いくつかの例では、本方法は、皮膚の体積、弾性、またはそれらの任意の組合せの喪失を防止し、低減し、または除去することができる。いくつかの例では、本方法は、皮膚のたるみ、皮膚の鈍い色調、まだらの変色、肌荒れ、乾燥肌、皮膚の痒み、皮膚の菲薄化、またはそれらの任意の組合せを防止し、低減し、または除去することができる。いくつかの例では、本方法は、皮膚の状態、皮膚の疾患、またはそれらの任意の組合せを改善または改良することができる。いくつかの例では、本方法は、皮膚を湿潤化し、引き締め、引き上げ、または若返らせることができる。いくつかの例では、本方法は、皮膚の健康、平滑性、汚点のなさ、半透明性、強靭性、またはそれらの任意の組合せを回復または持続することができる。いくつかの例では、本方法は、皮膚のグリコサミノグリカン、真皮、コラーゲン、およびエラスチンの治癒、処置、修復、またはそれらの任意の組合せを行うことができる。いくつかの例では、改善された皮膚の健康は、しわ重症度評定スケール、経上皮水分損失測定、皮膚色測定、皮膚表面トポグラフィー測定、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）による粘弾性測定、組織学的検査、またはそれらの任意の組合せによって測定することができる。いくつかの例では、改善された皮膚の健康は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）等の診断イメージによって測定することができる。いくつかの例では、測定は組成物の投与の前後で比較することができる。いくつかの例では、測定は標準と比較することができる。

【0057】

[0070]別の態様では、細胞を対象に（例えば対象の肝に）グラフトするために有効な量で本明細書の細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における状態を処置する方法が本明細書で開示される。いくつかの例では、細胞は薬学的に許容される担体の中で投与される。いくつかの例では、薬学的に許容される担体は、食塩水、例えばリン酸塩緩衝食塩水、またはウシ胎児血清を含む。いくつかの例では、細胞は、ｍｌあたり約１×１０^６～約１００×１０^６細胞、ｍｌあたり約１×１０^６～約２５０×１０^６細胞、ｍｌあたり約１×１０^６～約５００×１０^６細胞、またはｍｌあたり約１０×１０^６～約４０×１０^６細胞を含む懸濁液中で投与される。いくつかの例では、細胞は、約１～５ｍｌ、１～１０ｍｌ、１～５０ｍｌ、１～１００ｍｌ、または１０～１５０ｍｌの体積で投与される。いくつかの例では、対象はヒトである。いくつかの例では、投与は注射、例えば静脈内注射を含む。いくつかの例では、注射は肝静脈に投与される。いくつかの例では、注射は肝動脈に投与される。いくつかの例では、状態は肝関連疾患または障害である。いくつかの例では、状態は肝不全である。いくつかの例では、肝関連疾患または障害は、アラジール症候群、アルファ１アンチトリプシン欠乏症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆道閉鎖症、肝硬変、肝の嚢胞性疾患、アルコール関連肝疾患および非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を含む脂肪肝疾患、ガラクトース血症、胆石、ギルバート症候群、ヘモクロマトーシス、肝嚢胞、肝がん、妊娠時の肝疾患（任意選択で妊娠時急性脂肪肝、妊娠時肝内胆汁鬱滞、子癇前症、またはＨＥＬＬＰ症候群（溶血、肝検査値の上昇、血小板の減少））、新生児肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、ポルフィリン症、ライ症候群、サルコイドーシス、中毒性肝炎、１型グリコーゲン蓄積疾患、チロシン血症、ウイルス性肝炎、ウィルソン病、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0058】

[0071]本明細書で開示した細胞の投与の様式には、それだけに限らないが、全身静脈内注射および意図した活性部位への直接注射（例えば内視鏡的逆行注射）が含まれる。製剤は任意の便利な経路、例えば注入またはボーラス注射によって投与することができ、他の生物活性薬剤とともに投与することができる。いくつかの例では、投与は全身性の限局的投与である。

【0059】

[0072]いくつかの態様では、本明細書で開示した細胞を対象に移植するための組成物お
よび方法が本明細書で提供される。いくつかの例では、対象には細胞が（例えば静脈内、筋肉内、経皮、内視鏡的逆行注射、またな腹腔内で）注射される。いくつかの例では、対象は移植に先立って免疫抑制剤で処置されていない。いくつかの例では、本方法は、患者を免疫抑制剤、例えばＦＫ－５０６、シクロスポリン、またはＧＡＤ６５抗体で処置することをさらに含む。

【0060】

[0073]いくつかの例では、本明細書に記載した細胞は、細胞を特定の組織にターゲティングするために適した送達システムによって、標的部位（例えば肝の欠損部分）に送達される。例えば、細胞は、標的部位における細胞の遅い放出を可能にする送達ビヒクルの中にカプセル化される。送達ビヒクルは、これが特定の組織に特異的に標的されるように修飾される。標的送達システムの表面は、種々の方法によって修飾される。リポソーマル標的送達システムの場合には、標的リガンドをリポソーマル二重層との安定な会合状態に維持するために、脂質基がリポソームの脂質二重層の中に組み込まれる。

【0061】

[0074]本明細書に記載した細胞の投与は、任意選択で（１）注射する細胞の量を増加または減少させること、（２）注射の回数を変化させること、または（３）細胞の送達の方法を変化させること、によって個体に合わせて調整される。

【0062】

検出方法
[0075]上述のバイオマーカーの発現または存在を決定する方法は当技術で公知であり、
例えばフローサイトメトリー、免疫組織化学、ウェスタンブロット、免疫沈降法、磁気ビーズ選択、およびこれらの細胞表面マーカーのいずれかを発現する細胞の定量によって測定することができる。バイオマーカーＲＮＡの発現のレベルは、ＲＴ－ＰＣＲ、Ｑｔ－ＰＣＲ、マイクロアレイ、ノーザンブロット、またはその他の同様の技術によって測定することができる。

【0063】

[0076]「発現を検出する」または「発現レベルを検出する」は、生体試料におけるバイオマーカータンパク質または遺伝子の発現レベルまたは存在を決定することを意図している。即ち、「発現を検出する」は、バイオマーカーが発現されていない、検出できる程度に発現されていない、低レベルで発現されている、正常レベルで発現されている、または過発現されている、という場合を包含する。

【0064】

[0077]いくつかの例では、本明細書に記載したバイオマーカーの発現または存在は、例えば免疫組織化学手法またはｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよびＲＴ－ＰＣＲ等の核酸に基づく手法を使用して、核酸レベルで決定される。いくつかの例では、１つまたは複数のバイオマーカーの発現または存在は、核酸増幅のための手段、核酸シーケンシングのための手段、核酸マイクロアレイ（ＤＮＡおよびＲＮＡ）を利用する手段、または特異的にラベルしたプローブを使用するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションのための手段によって行なわれる。

【0065】

[0078]いくつかの例では、バイオマーカーの発現または存在の決定は、ゲル電気泳動によって行なわれる。いくつかの例では、決定は膜への転写および特異的プローブとのハイブリダイゼーションによって行なわれる。いくつかの例では、バイオマーカーの発現または存在の決定は、診断イメージング手法によって行なわれる。いくつかの例では、バイオマーカーの発現または存在の決定は、検出可能な固体基質によって行なわれる。いくつかの例では、検出可能な固体基質は、抗体によって機能化された常磁性ナノ粒子である。

【0066】

[0079]いくつかの例では、バイオマーカーの発現または存在は、ＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）レベルである。いくつかの例では、ＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）レベルを検出する手法には、それだけに限らないが、サザンまたはノーザン解析、ポリメラーゼ連鎖反応解析、
およびプローブアレイが含まれる。

【0067】

[0080]ｍＲＮＡレベルの検出のための１つの方法は、単離されたｍＲＮＡを、検出される遺伝子によってコードされるｍＲＮＡにハイブリダイズする核酸分子（プローブ）と接触させることを含む。核酸プローブは、例えば全長のｃＤＮＡまたはその部分、例えば本明細書に記載したバイオマーカーをコードするｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと厳しい条件下で特異的にハイブリダイズするために十分な少なくとも７、１５、３０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドからなる。ｍＲＮＡのプローブとのハイブリダイゼーションは、バイオマーカーまたはその他の目的のタンパク質が発現していることを示す。

【0068】

[0081]いくつかの例では、ｍＲＮＡは固体表面上に固定化され、例えば単離されたｍＲＮＡをアガロースゲルの上に泳動させ、ｍＲＮＡをゲルからニトロセルロース等の膜に転写することによって、プローブと接触させられる。いくつかの例では、プローブが固体表面上に固定化され、ｍＲＮＡが例えば遺伝子チップアレイ中でプローブと接触させられる。当業者であれば、バイオマーカーまたはその他の目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルの検出における使用のための既知のｍＲＮＡ検出法を容易に適合させる。

【0069】

[0082]試料中の目的のｍＲＮＡのレベルを決定するための代替の方法には、例えばＲＴ－ＰＣＲ、リガーゼ連鎖反応、自己持続配列複製、転写増幅システム、Ｑ－ベータレプリカーゼ、ローリングサークル複製、またはその他の任意の核酸増幅法による核酸増幅のプロセス、およびそれに続く当業者には既知の手法を使用する増幅された分子の検出が含まれる。これらの検出スキームは、核酸分子が極めて少ない数で存在する場合には、核酸分子の検出のために特に有用である。いくつかの例では、バイオマーカーの発現は、定量的蛍光ＲＴ－ＰＣＲ（例えばＴＡＱＭＡＮシステム）によって評価される。

【0070】

[0083]目的のＲＮＡの発現レベルは、（例えばノーザン、ドット、その他のハイブリダイゼーション分析において使用されるような）膜ブロット、またはマイクロウェル、試料チューブ、ゲル、ビーズ、もしくは繊維（または結合した核酸を含む任意の固体支持体）を使用してモニターされる。発現の検出は、溶液中で核酸プローブを使用することも含む。

【0071】

[0084]いくつかの例では、１つまたは複数のバイオマーカーの発現または存在を決定するためにマイクロアレイが使用される。核酸マイクロアレイは、多数の遺伝子の発現レベルの同時測定のための１つの方法を提供する。それぞれのアレイは、固体支持体に結合させた捕捉プローブの再現可能なパターンからなる。標識されたＲＮＡまたはＤＮＡがアレイ上で相補的プローブにハイブリダイズし、次いでレーザースキャンニングによって検出される。アレイ上のそれぞれのプローブのハイブリダイゼーション強度が決定され、相対的遺伝子発現レベルを表わす定量値に変換される。試料中の多数のＲＮＡについての遺伝子発現プロファイルを決定するために、高密度オリゴヌクレオチドアレイが特に有用である。

【0072】

[0085]いくつかの例では、アレイは、実際上いかなる形状の表面または多数の表面上でさえも、作成される。いくつかの例では、アレイは平坦なアレイ表面である。いくつかの例では、アレイは、ビーズ、ゲル、ポリマー表面、光ファイバー等の繊維、ガラス、またはその他の任意の適切な基材の上のペプチドまたは核酸を含む。いくつかの例では、アレイは、診断またはその他の全てを含むデバイスの操作を可能にするように包装される。

【0073】

[0086]いくつかの例では、本明細書に記載したバイオマーカーの発現または存在は、例えば特定のバイオマーカータンパク質を指向する抗体を使用してタンパク質レベルで決定
される。これらの抗体は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、マルチプレキシング技術、免疫沈降法、または免疫組織化学手法等の種々の方法において使用される。いくつかの例では、バイオマーカーの検出はＥＬＩＳＡによって達成される。いくつかの例では、バイオマーカーの検出は電気化学発光法（ＥＣＬ）によって達成される。

【0074】

[0087]生体試料中のバイオマーカーを特異的に同定および定量するための任意の手段が意図される。即ち、いくつかの例では、生体試料中の目的のバイオマーカータンパク質の発現レベルは、そのバイオマーカータンパク質と特異的に相互作用することができる結合タンパク質またはその生物学的に活性なバリアントによって検出される。いくつかの例では、標識された抗体、その結合部分、またはその他の結合パートナーが使用される。単語「標識」は、本明細書で使用する場合、抗体に直接または間接にコンジュゲートして、それにより「標識された」抗体を生成する検出可能な化合物または組成物を意味する。いくつかの例では、標識はそれ自体検出可能（例えば放射性同位元素標識または蛍光標識）であるか、または酵素標識の場合には検出可能な基質化合物または組成物の化学的変化を触媒する。

【0075】

[0088]バイオマーカータンパク質の検出のための抗体は、起源としてモノクローナルもしくはポリクローナルであるか、または合成もしくは組換えにより産生される。複合体化したタンパク質の量、例えば結合タンパク質、例えばバイオマーカータンパク質と特異的に結合する抗体と会合したバイオマーカータンパク質の量は、当業者には既知の標準的なタンパク質検出方法を使用して決定される。免疫学的アッセイの設計、理論、およびプロトコールの詳細な総説は、当技術における数多くのテキストに見られる。

【0076】

[0089]抗体を標識するために使用されるマーカーの選択は、用途に応じて変化することになる。しかし、マーカーの選択は当業者には容易に決定可能である。これらの標識された抗体は、免疫アッセイならびに任意の目的のバイオマーカーまたはタンパク質の存在を検出するための組織学的応用において使用される。標識された抗体はポリクローナルまたはモノクローナルである。さらに、目的のタンパク質の検出における使用のための抗体は、放射活性原子、酵素、発色性もしくは蛍光性の部分、または本明細書の他の箇所に記載した比色タグによって標識される。タグ付け標識の選択も、所望の検出限界によることになる。酵素アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）によって、典型的には酵素タグ付けした複合体と酵素基質との相互作用によって形成される着色生成物の検出が可能になる。検出可能な標識として働く放射性核種には、例えばＩ－１３１、Ｉ－１２３、Ｉ－１２５、Ｙ－９０、Ｒｅ－１８８、Ｒｅ－１８６、Ａｔ－２１１、Ｃｕ－６７、Ｂｉ－２１２、およびＰｄ－１０９が含まれる。検出可能な標識として働く酵素の例には、それだけに限らないが、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、およびグルコース－６－ホスフェートデヒドロゲナーゼが含まれる。発色性部分には、それだけに限らないが、フルオレセインおよびローダミンが含まれる。抗体は当技術で既知の方法によってこれらの標識にコンジュゲートされる。例えば、酵素および発色性部分は、ジアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミド、その他のカップリング剤によって、抗体にコンジュゲートされる。あるいは、コンジュゲーションはリガンド－受容体のペアによって起こる。好適なリガンド－受容体ペアの例としては、ビオチン－アビジンまたはビオチン－ストレプトアビジン、および抗体－抗原が挙げられる。

【0077】

[0090]いくつかの例では、生体試料中の１つもしくは複数のバイオマーカーまたは目的のタンパク質の発現または存在は、放射免疫アッセイもしくは酵素連結免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、競合結合酵素連結免疫アッセイ、ドットブロット、ウェスタンブロット、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等のクロマトグラフィー、または当技術で既知のその他のアッセイによって決定される。即ち、検出アッセイには、それだけに限らないが、イムノブロット法、免疫拡散、免疫電気泳動、または免疫沈降法等のステップが含ま
れる。

【0078】

先駆制御性細胞栄養芽細胞を得る方法
[0091]いくつかの実施形態では、本明細書におけるｐｒＣＴＢ（例えばヒトｐｒＣＴＢ
）は、多能性幹細胞、例えば絨毛膜絨毛由来の前駆細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導される。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢは、１つまたは複数の分化因子を添加した培養培地中で多能性幹細胞から分化する。いくつかの例では、幹細胞は絨毛膜絨毛由来の前駆細胞である。いくつかの例では、絨毛膜絨毛由来の前駆細胞は哺乳動物の栄養芽幹細胞、例えばヒト栄養芽幹細胞を含む。

【0079】

[0092]いくつかの例では、培養培地中で多能性幹細胞を線維芽細胞成長因子と接触させることによってｉｎ ｖｉｔｒｏで幹細胞を分化させることを含む、先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）を得る方法が本明細書で開示される。いくつかの例では、培養培地はヌクレオシド、Ｌ－グルタミン、Ｌ－グルタミンを含むジペプチド、血小板溶解物、またはそれらの組合せを含む。いくつかの例では、培養培地はヌクレオシド、ジペプチド、および血小板溶解物を含む。いくつかの例では、培養培地は約２ｍＭ～約２００ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0080】

[0093]いくつかの例では、多能性幹細胞、例えばヒト栄養芽幹細胞は、線維芽細胞成長因子と約２４時間～４８時間、接触させられ、それによりｐｒＣＴＢが生成する。いくつかの例では、接触は少なくとも約１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、４０時間、または４４時間である。いくつかの例では、接触は長くとも約２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、４０時間、４４時間、または４８時間である。

【0081】

[0094]いくつかの例では、多能性幹細胞、例えばヒト栄養芽幹細胞は、幹細胞が５～１０継代である場合に、線維芽細胞成長因子と接触させられる。いくつかの例では、多能性幹細胞は、幹細胞が２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５継代である場合に、線維芽細胞成長因子と接触させられる。

【0082】

[0095]いくつかの例では、本方法は、幹細胞を線維芽細胞成長因子と接触させてｐｒＣＴＢに分化させる前に、幹細胞を培養培地とともに培養することを含む。
[0096]いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、抗生剤、例えばペニシリン、ストレプトマイシン、またはそれらの任意の組合せを含まない。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、レチノイン酸を含まない。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、メルカプトエタノール、ニコチンアミド、またはそれらの組合せを含まない。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、デキサメタゾン、組換えヒトオンコスタチンＭ、ＢＭＰ４、ＨＧＦ、またはそれらの任意の組合せを含まない。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、異種成分を含まず、例えば動物成分を含まない。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、ヒト由来成分および動物由来成分を含まず、例えば化学的に定義された培地である。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、血清を含まない。いくつかの例では、ｐｒＣＴＢを得るためおよび／または維持するための培養培地は、ウシ胎児血清を含まない。

【0083】

[0097]いくつかの例では、線維芽細胞成長因子は塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）である。いくつかの例では、幹細胞は約１ｎｇ／ｍｌ～約１００ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦ
と接触させられる。いくつかの例では、幹細胞は約２ｎｇ／ｍｌ～約５０ｎｇ／ｍｌ、約４ｎｇ／ｍｌ～約３０ｎｇ／ｍｌ、約６ｎｇ／ｍｌ～約１５ｎｇ／ｍｌ、または約８ｎｇ／ｍｌ～約１２ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦと接触させられる。いくつかの例では、幹細胞は約６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１１ｎｇ／ｍｌ、１２ｎｇ／ｍｌ、１３ｎｇ／ｍｌ、１４ｎｇ／ｍｌ、または１５ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦと接触させられる。いくつかの例では、幹細胞は約１０ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦと接触させられる。

【0084】

哺乳動物の栄養芽幹細胞を得る方法
[0098]いくつかの実施形態では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばヒ
ト栄養芽幹ｈＴＳ細胞）は、臍帯、羊水、羊膜、Ｗｈａｒｔｏｎのジェリー、絨毛膜絨毛、胎盤、または異所性妊娠から、胚を撹乱せず、破壊もしない様式で単離することができる。

【0085】

[0099]いくつかの例では、本明細書に記載した哺乳動物の栄養芽幹細胞は、抗生剤、例えばペニシリン、ストレプトマイシン、またはそれらの任意の組合せを含まない培養培地中で培養される。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るための培養培地は、レチノイン酸を含まない。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るためおよび／または継代するための培養培地は、メルカプトエタノール、ニコチンアミド、またはそれらの組合せを含まない。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るためおよび／または継代するための培養培地は、デキサメタゾン、組換えヒトオンコスタチンＭ、ＢＭＰ４、ＨＧＦ、またはそれらの任意の組合せを含まない。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るためおよび／または継代するための培養培地は、異種成分を含まず、例えば動物成分を含まない。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るためおよび／または継代するための培養培地は、ヒト由来成分および動物由来成分を含まず、例えば化学的に定義された培地である。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るためおよび／または継代するための培養培地は、血清を含まない。いくつかの例では、哺乳動物の栄養芽幹細胞を得るためおよび／または継代するための培養培地は、ウシ胎児血清を含まない。

【0086】

[00100]一例では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばｈＴＳ細胞）は
、羊水穿刺生検または羊水から単離することができる。一例では、羊水穿刺は、妊娠中に胎児を取り囲んでいる羊水の少量の試料を得るために使用される手順であり得る。一例では、羊水穿刺は、染色体異常のリスクが増大している妊娠１５週～２０週の女性、例えば出産時に３５歳を超える女性、または染色体異常もしくは神経管欠損のリスクの増大を示す異常な母体血清（血液）スクリーニング検査を有していた女性に提案することができる。一例では、針、例えば長く細い中空の針を、超音波ガイドとともに腹部を通して子宮および羊膜嚢の中に使用することができる。所定量、例えば約３０ｍｌ（１オンス）の羊水をシリンジの中に引きだすことができる。

【0087】

[00101]別の例では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばｈＴＳ細胞）
は、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ授精（ＩＶＦ）等の生殖治療と併用した着床前遺伝子診断（ＰＧＤ）の間に、分割球生検から得ることができる。一例では、本明細書における細胞は、胎盤胞の生検のための方法によって産生することができ、胎盤胞の残りは着床し、妊娠およびその後の生体出産がもたらされ、例えば胎盤胞から透明帯を除去して胎盤胞を生検する。

【0088】

[00102]別の例では、本明細書における哺乳動物の栄養幹芽細胞（例えばｈＴＳ細胞）
は、出産前の絨毛膜絨毛のサンプリング（ＣＶＳ）から得ることができる。一例では、ＣＶＳは、染色体異常およびその他のある種の遺伝的問題について検査するために胎盤から
組織の試料を採取することを含む出産前検査であり得る。一例では、ＣＶＳは妊娠１０週～１２週の間に実施することができる。一例では、ＣＶＳの手順は経頸管であり、例えば組織試料を得るために頸部を通して胎盤の中にカテーテルを挿入する。一例では、ＣＶＳの手順は経腹部であり、組織試料を得るために腹部および子宮を通して胎盤の中に針を挿入する。

【0089】

[00103]一例では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばｈＴＳ細胞）は
、満期妊娠の後に胎盤生検から得ることができる。一例では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばｈＴＳ細胞）は、経膣出産または帝王切開出産の後で胎盤から単離することができる。

【0090】

[00104]いくつかの実施形態では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えば
ｈＴＳ細胞）は、妊娠第１期の絨毛膜絨毛サンプリング（例えば妊娠期間８^＋３～１２^＋０週）または帝王切開出産からの満期胎盤から単離することができる。絨毛膜組織を羊膜から分離し、細切し、および／または（例えば０．０５％のトリプシンＥＤＴＡで、例えば２０分間）酵素消化することができる。続いて細胞を遠心分離（例えば１５００ｒｐｍ、例えば５分間）し、計数し、および／または培地（例えばＤｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地＋１０％ウシ胎児血清）中で再播種（例えばｃｍ^２あたり１０^４細胞）する。一例では、単離された細胞はプラスチック付着性であり得る。一例では、細胞は４～８継代で使用することができる。

【0091】

[00105]一例では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばｈＴＳ細胞）は
、以下の手順に従って満期（例えば妊娠３８～４０週）胎盤から単離することができる。臍帯血を胎盤から流出させ、次いで胎盤を注意深く切開する。収集した組織片を（例えばリン酸緩衝食塩水で）数回洗浄し、次いで（例えば機械的に）細切し、（例えば０．２５％のトリプシン－ＥＤＴＡで）酵素消化する。次いで遠心分離によってホモジネートをペレット化し、完全培地（例えば１０％のウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および／または１００ｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地）中に懸濁する。好適な条件、例えば水で飽和した雰囲気および５％のＣＯ_２、３７℃で、細胞培養を維持する。定期的に、例えば毎週１～２回、培地を交換する。細胞が所望のコンフルエンスのレベル、例えば８０％コンフルエンスを超えれば、例えば０．２５％のトリプシン／ＥＤＴＡで細胞を回収し、例えば１：３の希釈で再播種する。

【0092】

[00106]別の例では、本明細書における哺乳動物の栄養芽幹細胞（例えばｈＴＳ細胞）
は、出産後、下記の手順に従ってヒト胎盤から単離することができる。絨毛膜を羊膜から引き剥がすことによって分離する。脱落膜組織を（例えば機械的に）細切し、（例えばＤｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝食塩水で）洗浄し、小片（例えば約２×２ｃｍ）に切断する。絨毛膜を小片に刻み、酵素（例えば０．５％トリプシン－ＥＤＴＡで例えば５分間）処理し、コラゲナーゼＩで消化する（例えば３７℃のインキュベーター中、０．３％で２０～３０分間）。次いで動員された細胞を収集して細胞ストレーナー（例えば１００μｍ）に通す。濾過した細胞を遠心分離（例えば２，５００ｒｐｍ、例えば５分間）によって収集する。細胞を培地（例えば１０％のウシ胎児血清および／または１％のペニシリン－ストレプトマイシンを添加したα改変ミニマムエッセンシャル培地）中に再懸濁し、好適な条件（例えば３７℃および／または５％ＣＯ_２）下に容器（例えばＴ２５フラスコ）内で培養する。絨毛膜ＭＳＣが所望のコンフルエンシー、例えば７０％コンフルエンシーに達するまで定期的、例えば３日ごとに、培地を交換する。

【0093】

[00107]別の例では、絨毛膜絨毛は、異所性妊娠した女性の破裂していない着床前の胚
の卵管（例えば妊娠期間５～７週）から得ることができる。微小な絨毛膜組織を好適な培地（例えば無血清α－ＭＥＭ）中でよく細切し、顕微鏡下に同定し、ある時間（例えば１
５分間）、（例えば０．０２５％のトリプシン／ＥＤＴＡ）でトリプシン処理し、培地（例えば１０％のＦＢＳを含むα－ＭＥＭ）を加えることによって反応を停止する。接着性細胞を得て、好適な条件（例えば調整済みのα－ＭＥＭ、１０％のＦＢＳ、および１％のペニシリン－ストレプトマイシン、３７℃、５％ＣＯ_２中）下で培養する。２回の継代の後、ｈＣＧのレベルは市販のキット（例えばＤａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）で測定して不検出になり得る。

【0094】

キット／製造用物品
[00108]本明細書に記載した１つまたは複数の方法および組成物を用いる使用のためのキットおよび製造用物品が本明細書で開示される。そのようなキットには、担体、パッケージ、またはバイアル、チューブ、その他の１つもしくは複数の容器を収容するために区画された容器が含まれ、容器のそれぞれは、本明細書に記載した方法において使用される個別の要素の１つを含む。好適な容器には、例えばボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる。いくつかの例では、容器はガラスまたはプラスチック等の種々の材料から形成される。

【0095】

[00109]本明細書で提供する製造用物品は、包装材料を含む。医薬包装材料の例には、
それだけに限らないが、ブリスターパック、ボトル、チューブ、バッグ、コンテナ、ボトル、ならびに選択した剤型および意図した使用様式に適した任意の包装材料が含まれる。

【0096】

[00110]例えば、容器は、本明細書で開示した組成物中に含まれてもよいｈＴＳ細胞を
含む。そのようなキットは、任意選択で識別用の記載または本明細書に記載した方法における使用に関するラべルもしくは説明書を含む。

【0097】

[00111]キットは、典型的には内容物および／または使用のための説明を列挙したラベ
ル、ならびに使用説明書を含む添付文書を含む。説明書の組も典型的には含まれる。
[00112]いくつかの例では、ラベルは容器の上にあるか、容器に付随している。いくつ
かの例では、ラベルを形成する文字、数字、またはその他のキャラクターが容器自体に付着、鋳込み、または食刻されている場合には、ラベルは容器の上にあり、ラベルが容器を保持するレセプタクルまたは担体の中に例えば添付文書として存在する場合には、ラベルは容器に付随している。いくつかの例では、ラベルは内容物が特定の治療用途に使用されることを表示するために使用される。ラベルは、例えば本明細書に記載した方法における内容物の使用のための指示も表示する。

【0098】

実施例
[00113]以下の実施例は非限定的であり、本発明の種々の態様および特徴を単に代表するのみである。

【実施例0099】

ストレス時におけるヒト栄養芽幹（ｈＴＳ）細胞の形質転換特性
[00114]胚盤胞栄養芽細胞が卵管における胚の輸送の間の母体の高血糖の脅威にどのよ
うに対処するかを検討するため、高グルコース（２０ｍＭ）の影響をｈＴＳ細胞について試験した。グルコースが細胞膜における甘味受容体Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３の過渡的な活性化を急速に誘起し、結果として細胞におけるＧタンパク質シグナル伝達を活性化し、Ｇαｑ／１１／ＣａＭＫＩＩ／ＣＲＥＢ１およびＧβ／ＧＳＫ３β／ＭＡＦＡシグナル伝達経路を生じることが見出された（図１Ａ）。制御的な分子機構を補助的な情報で示す（図２Ａ～２Ｊ）。核においては、２つのＧタンパク質経路が協同して、インスリンを産生する転写のためのインスリン遺伝子のプロモーターを標的としていた（図１Ａ）。ＣｈＩＰ－ｑＰＣＲ解析から、特異的ｓｈＲＮＡによる転写因子ＣＲＥＢ１およびＭＡＦＡのノックダウンにより、インスリンの発現が低減された（図１Ｂ）。一方、活性化されたＴ１Ｒ２／
Ｔ１Ｒ３シグナル伝達は、グルコースセンサーおよびトランスポーターＧＬＵＴ２を誘起して、細胞内へのグルコースの進入を促進した。グルコースはＡＴＰの産生を強化して、Ｌ型のボルテージゲートされたＣａ２＋チャネル（ＶＧＣＣ）を開き、細胞外カルシウムの細胞内への進入をもたらし、これが放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって検出されるインスリンの培養培地への分泌を促進する。この作用は、スルホニルウレアがインスリンの分泌を促進し、一方ＶＧＣＣ阻害剤のニフェジピンがＲＩＡによって測定されるインスリンの分泌をブロックしたことによって確認された（図１Ｃ）。これらの結果は、グルコースがｈＴＳ細胞中におけるインスリンの合成および分泌の制御を可能にすることを示唆した。ｑＰＣＲ解析によって測定して、このインスリンの発現は、ＣＲＥＢ１シグナルに帰せられるが、従来の膵および十二指腸のホメオボックス１（ＰＤＸ１）には帰せられない（図２Ｋ）。

【0100】

[00115]さらに、免疫蛍光イメージング研究によって、インスリン、ＣＲＥＢ１、Ｃａ
ＭＫＩＩ、ＧＬＵＴ２、およびＭＡＦＡだけでなく、β－ｈＣＧ、組織適合性抗原ＨＬＡ－Ｇ、および多能性転写因子ＣＤＸ２もｈＴＳ細胞中で発現したが、ＯＣＴ４（オクタマー結合転写因子４）は発現しないことが明らかになった（図１Ｄ）。ストレスタンパク質であるヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）も発現した。しかしｈＴＳ細胞は増殖マーカーＫｉ６７、タンパク質フォールディングアクチベーターＨＳＰ７０、腫瘍サプレッサーｐ５３、自己抗原ＧＡＤ６５、および細胞間融合タンパク質シンシチンを発現せず（図２Ｍ）、ｈＴＳＣがＴＥ分化栄養芽細胞の最初の位置にあるという概念を支持した。

【0101】

[00116]ｈＴＳ細胞に対するグルコースのストレス効果を形態学的にさらに検討し、β
細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養における特異的染色である亜鉛キレート剤ジチゾン（ＤＴＺ）の陽性染色によって、高グルコースが接着性線維芽細胞の特徴から３Ｄ凝集細胞クラスターへの細胞変化を急速に誘起したことを示した。高グルコースを停止することによって、細胞がクラスターから急速に放出されて培養皿に再び付着し、元の線維芽細胞の特徴に戻った。細胞のプロセスはコンピューター顕微鏡ビデオシステム（Ｏｌｙｍｐｕｓ，ＩＸ－８１，ＤＰ３０，ＭＩＵ－ＩＢＣ－ＩＦ－２）によって記録し、付録のオンラインビデオ（ビデオＳ１）に示す。さらに、細胞クラスターの超構造研究によって、細胞質対核の比が大きく、２つの細胞の間にデスモソーム結合を伴うことが明らかになった。膵β細胞におけるものと同様に、種々の空のベシクル、豊富なミトコンドリア、およびベシクル中の未成熟の顆粒が、細胞質区画内で観察された。この目的のため、ｈＴＳ細胞が外部の脅威に対処するためにインスリンおよびストレスタンパク質ＨＳＰ９０を発現する能力を有する一方、ｈＴＳ細胞はグルコース刺激に対して高度に影響を受けやすく、これがｈＴＳ細胞の可逆の細胞形質転換を惹起し得ることが実証された。

【実施例0102】

先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ誘起
[00117]本実施例では、栄養外胚葉由来のｈＴＳ細胞に対するｂＦＧＦの影響を検討し
た。１つの実験では、ｐｒＣＴＢをｈＴＳ細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで誘起した。

【0103】

[00118]ｂＦＧＦは、ＴＧＦ－β１を介して上皮間葉移行（ＥＭＴ）を誘起する。
[00119]ｂＦＧＦはｈＴＳＣにおいてＴＧＦ－β１の発現を誘起し（図４Ａ）、間葉系
細胞マーカーであるビメンチンを上方制御したが、細胞間接着タンパク質Ｅ－カドヘリンを下方制御したことが、ウェスタンブロットアッセイ（図４Ｂ）および免疫細胞化学（図４Ｃ）によって発見された。これらの作用は、ＴＧＦ－β１抗体による前処理によって中和された（図４Ｄ）。光学顕微鏡によって、細胞の形状が細長い紡錘状からより丸い核を有する太く短い特徴へと変化することが明らかになった（図４Ｅ）。これらの現象は、ｂＦＧＦが遊走および浸潤の能力を得るようにＥＭＴを誘起することを示唆した。

【0104】

[00120]ｂＦＧＦは、ｍＲＮＡ－１２４αを介して胚体内胚葉のシグネチャーを促進す
る。
[00121]ｂＦＧＦは細胞膜において受容体ＦＧＦＲ１を標的としてＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／
ＣＲＥＢ１シグナル伝達経路の活性化を誘起したことが見出された。ＤＩＡＮＡ－ｍｉｒＧｅｎ ２．０のコンピューターサーベイにより、ｂＦＧＦによって誘起されたＣＲＥＢ１は、ミクロＲＮＡ－１２４ａ（ｍｉＲ－１２４ａ）のプロモーターにおいてコンセンサスＣＲＥＢ結合配列（ＴＧＡＣＧＴＣＡ）を標的とすることがｑＰＣＲ解析によって確認された一方、ＣＲＥＢ１のノックダウンによってｍｉＲ－１２４ａの発現が低減した。ＣＲＥＢ１とｍｉＲ－１２４ａとの間の正の相関が観察された。

【0105】

[00122]ｍｉＲ－１２４ａの下流エフェクターへの洞察を得るため、ルシフェラーゼリ
ポーター遺伝子アッセイのためにｐＧＬ４．５１ベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用するＳＭＡＤ４、ＧＳＫ３β、およびＣＤＸ２のプラスミドを構築した。第１に、ｍｉＲ－１２４ａはＳＭＡＤ４遺伝子を標的として阻害性ＳＭＡＤ４を産生することが示された。ＳＭＡＤ４はＳＭＡＤ２／３と相互作用して転写のためのＭＩＸＬ１遺伝子の中枢プロモーター中の配列に結合することができるので、阻害性ＳＭＡＤ４は阻害性ホメオドメインタンパク質ＭＩＸＬ１を惹起した。これはＳＭＡＤ４ ｓｈＲＮＡを使用することによって確認され、画像研究を支持した（ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）は対照と比較して１５分でＭＩＸＬ１の見かけの発現を誘起することが明らかになり、ＭＩＸＬ１の発現の強度は４時間の誘起で低下し、過渡的な発現であることを示している）。第２に、ｍｉＲ－１２４ａはグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を抑制することが示され、これはｍｉＲ－１２４ａおよび抗ｍｉＲ－１２４ａ抗体の前処理によって確認された。結果として、阻害性ＧＳＫ３βは、下流のβ－カテニンの蓄積を惹起し、転写のためにＦＯＸＡ２遺伝子を標的とする核移行をもたらすことが、β－カテニンアッセイに対してｓｈＲＮＡを使用することによって証明された（図４Ｆ）。そしてまた、フォークヘッドボックスタンパク質Ａ２（ＦＯＸＡ２）がＰＤＸ１の発現を制御し、プロエンドクリン転写因子ニューロゲニン３（ＮＧＮ３）がエンドクリン細胞分化の決定に関与することに寄与する。第３に、ｍｉＲ－１２４ａはＣＤＸ２遺伝子を標的としてＣＤＸ２合成を阻害し、これはｍｉＲ－１２４ａおよび抗ｍｉＲ－１２４ａ抗体の前処理によって確認された。下方制御されたＣＤＸ２は、ＯＣＴ４の上方制御をもたらした。次に、ＯＣＴ４は転写のためのＳＯＸ１７遺伝子を標的としてＳＯＸ１７（ＳＲＹ－ボックスタンパク質１７）を産生し、これは画像研究によって支持された。合わせると、ｂＦＧＦはｍｉＲ－１２４ａが８時間の誘起においてＳＯＸ１７、ＦＯＸＡ２、およびＯＣＴ４の上方制御、ならびにＭＩＸＬ１の下方制御によって結果的に胚体内胚葉（ＤＥ）のシグネチャーを得ることを促進することができ、これはさらなるインスリンの発現に寄与し得ることが実証された。

【0106】

[00123]ｂＦＧＦは、ｈＴＳ細胞からのｐｒＣＴＢの生成を誘起する。
[00124]ＰＤＸ１、膵転写因子１タンパク質（ＰＴＦ１ａ）、ＳＯＸ９、およびホメオ
ボックス１タンパク質ＮＫＸ（ＮＫＸ６．１）を含む膵前駆細胞バイオマーカーの顕著な上方制御が、ｂＦＧＦ誘起の８時間で注目された。これらの分子シグナルの出現は、誘起２０時間でＮＧＮ３、プロインスリンＣ－ペプチド、およびインスリンの発現を開始した。インスリンの他に、免疫蛍光イメージングによって、ｂＦＧＦ処理したｈＴＳ細胞においてＰＤＸ１、肝細胞核因子１－β（ＨＮＦ１Ｂ）、ＮＧＮ３、ＳＯＸ９、ＮＫＸ６．１、およびインスリン、ならびにＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２、グルカゴン、ソマトスタチン、ＧＬＵＴ２、およびポリペプチド（ＰＰ）を含む種々の膵前駆細胞および内分泌細胞マーカーの存在が確認された（図３）。

【0107】

[00125]次に、ｂＦＧＦによって誘起されたｈＴＳ細胞が最初にＣＤＸ２を発現したが
、ＯＣＴ４を発現しないことが発見された（図５Ｃ）。分化が進行するとともに、ＯＣＴ４は上方制御されるが、ＣＤＸ２は下方制御され、８時間の誘起でＤＥステージの多能性が制御された。ＯＣＴ４が徐々に下方制御されると、ＮＡＮＯＧは中内胚葉のステージと同様の１２時間の誘起におけるピークに上方制御された。ＨＳＰ９０は、分化している栄養芽細胞におけるＯＣＴ４およびＮＡＮＯＧのレベルを維持していた。分化が前駆細胞のステージに入るとともに、１２時間の誘起の後、その日の終わりに向けて、ＮＡＮＯＧは下方制御されたが、ＳＯＸ２は上方制御を持続し、インスリンを発現するｐｒＣＴＢが形成された。注意すべきことに、これらの分子プロセスは膵におけるβ細胞の発達と同様であるが、先に述べたｈＴＳ細胞におけるグルコースによって誘起されるインスリンの発現とは区別される。多能性転写因子における時間空間的な変化は、主として相互の負の自己制御機構に帰せられる一方、ＳＯＸ２はｐｒＣＴＢの幹細胞性の維持において主な役割を果たしている。この目的のため、ｂＦＧＦは、インスリンを発現する新規な膵外の組織特異的表現型への単離されたｈＴＳ細胞の分化を効率的に誘起することができることが本発明者らの実験で実証された。これは本明細書において先駆制御性細胞栄養芽細胞（ｐｒＣＴＢ）と称する。ここで実証したように、ｐｒＣＴＢはｉｎ ｖｉｔｒｏの栄養芽細胞の分化の間、主としてＳＯＸ２によって維持することができる。