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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025004781
(43)【公開日】2025-01-16
(54)【発明の名称】骨粗鬆症の予防又は治療剤及び医薬組成物
(51)【国際特許分類】
C07J 1/00 20060101AFI20250107BHJP
A61K 31/661 20060101ALI20250107BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20250107BHJP
A61K 31/565 20060101ALN20250107BHJP
【ＦＩ】
C07J1/00 CSP
A61K31/661
A61P19/10
A61K31/565
【審査請求】未請求
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023104391
(22)【出願日】2023-06-26
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （その１） ウェブサイトの掲載日 ２０２２年７月２０日 ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐｓ：／／ｍａｉｎ．ｓｐｓｊ．ｏｒ．ｊｐ／ｔｏｈｒｏｎ／７１ｔｏｈｒｏｎ／ ｈｔｔｐｓ：／／ｍａｉｎ．ｓｐｓｊ．ｏｒ．ｊｐ／ｔｏｈｒｏｎ／７１ｔｏｈｒｏｎ／ｐｒｏｇｒａｍ．ｈｔｍｌ ｈｔｔｐｓ：／／ｍａｉｎ．ｓｐｓｊ．ｏｒ．ｊｐ／ｔｏｈｒｏｎ／７１ｔｏｈｒｏｎ／ｏｒａｌ＿ｊａ．ｐｄｆ （その２） ウェブサイトの掲載日 ２０２２年８月１７日 ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐｓ：／／ｍｅｍｂｅｒ．ｓｐｓｊ．ｏｒ．ｊｐ／ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ／ｔｏｈｒｏｎ２０２２／ ｈｔｔｐｓ：／／ｍｅｍｂｅｒ．ｓｐｓｊ．ｏｒ．ｊｐ／ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ／ｔｏｈｒｏｎ２０２２／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ｉｄ＝２Ｖ１１＆ｐｌａｃｅ＿ｎｕｍ＝１ （その３） 開催日 ２０２２年９月６日 （開催期間：２０２２年９月５日～２０２２年９月７日） 集会名、開催場所 第７１回高分子討論会 国立大学法人北海道大学札幌キャンパス （北海道札幌市北区北１７条西８丁目） （その４） 開催日 ２０２３年１月２６日 （開催期間：２０２３年１月２６日～２０２３年１月２７日） （研究ポスターの公開期間：２０２３年１月２６日～２０２３年２月１０日） 集会名、開催場所 第２７回関西大学先端科学技術シンポジウム （Ｚｏｏｍによるオンライン開催） （その５） ウェブサイトの掲載日 ２０２３年２月１３日 ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ－ｋａｎｓａｉ．ｎｅｔ／１７ｔｈ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ－ｋａｎｓａｉ．ｎｅｔ／１７ｔｈ／ｐｒｏｇｒａｍ．ｈｔｍｌ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ－ｋａｎｓａｉ．ｎｅｔ／１７ｔｈ／ｄｌ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ＿ｐｒｏｇｒａｍ＿１７．ｐｄｆ
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （その６） ウェブサイトの掲載日 ２０２３年２月２２日 ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ－ｋａｎｓａｉ．ｎｅｔ／１７ｔｈ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ－ｋａｎｓａｉ．ｎｅｔ／１７ｔｈ／ｐｒｏｇｒａｍ．ｈｔｍｌ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ－ｋａｎｓａｉ．ｎｅｔ／１７ｔｈ／ｄｌ／ａｂｓｔｒａｃｔ＿２０２２＿ｐｗ．ｐｄｆ （その７） 開催日 ２０２３年３月４日 集会名、開催場所 日本バイオマテリアル学会 関西ブロック第１７回若手研究発表会 大阪公立大学 中百舌鳥キャンパス （大阪府堺市中区学園町１－１ Ｂ３棟１階） （その８） 発行日 ２０２３年３月１日 刊行物 ＫＵ－ＳＭＡＲＴ ＰＲＯＪＥＣＴ ＮＥＷＳＬＥＴＴＥＲ Ｎｏ．１０ 別冊 （研究成果報告書）第２２頁 （その９） 発行日 ２０２３年３月１日 刊行物 ＫＵ－ＳＭＡＲＴ ＰＲＯＪＥＣＴ ＮＥＷＳＬＥＴＴＥＲ Ｎｏ．１０ 別冊 （研究成果報告書）第２５頁 （その１０） 発行日 ２０２３年３月１日 刊行物 ＫＵ－ＳＭＡＲＴ ＰＲＯＪＥＣＴ ＮＥＷＳＬＥＴＴＥＲ Ｎｏ．１０ 別冊 （研究成果報告書）第３０頁
(71)【出願人】
【識別番号】399030060
【氏名又は名称】学校法人 関西大学
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】岩▲崎▼ 泰彦
(72)【発明者】
【氏名】馬渕 隼
【テーマコード（参考）】
4C086
4C091
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086DA09
4C086DA34
4C086GA13
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086NA15
4C086ZA97
4C091AA01
4C091BB03
4C091BB04
4C091BB05
4C091DD01
4C091EE03
4C091FF01
4C091GG01
4C091HH01
4C091JJ01
4C091KK01
4C091LL01
4C091MM03
4C091NN01
4C091PA02
4C091PA09
4C091QQ01
(57)【要約】
【課題】従来技術にみられる副作用を抑制しつつ、高い骨粗鬆症の予防又は治療効果を発揮する、骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供する。
【解決手段】
エストロゲンが担持されたポリリン酸エステル化合物。
【選択図】なし
【解決手段】
エストロゲンが担持されたポリリン酸エステル化合物。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
エストロゲンが担持されたポリリン酸エステル化合物。
【請求項2】
一般式（１）：
［式中、Ｅはエストロゲンから１個の水素原子を除いた１価の基を示す。Ｒ１及びＲ３は同一又は異なって、水素原子、置換基を有していてもよい有機基又はアルカリ金属イオンを示す。Ｒ２は置換基を有していてもよいアルカンジイル基を示す。ｎは１以上の整数を示し、ｎが２以上の整数である場合、２個以上のＲ１及び２個以上のＲ２は同一でも異なっていてもよい。］
で表される、請求項１に記載のポリリン酸エステル化合物。
【化1】
で表される、請求項１に記載のポリリン酸エステル化合物。
【請求項3】
前記エストロゲンがエストロン、エストラジオール、エストリオール又はこれらの誘導体である、請求項２に記載のポリリン酸エステル化合物。
【請求項4】
前記Ｒ１及びＲ３がアルカリ金属イオンである、請求項２に記載のポリリン酸エステル化合物。
【請求項5】
前記Ｒ２が置換基を有していてもよい１，２－エタンジイル基である、請求項２に記載のポリリン酸エステル化合物。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか１項に記載のポリリン酸エステル化合物を有効成分とする、骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【請求項7】
請求項１～５のいずれか１項に記載のポリリン酸エステル化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、骨粗鬆症の予防又は治療剤及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
骨粗鬆症は、女性（特に高齢女性）に多く見られる疾患であることが知られており、高齢化社会において、骨粗鬆症の予防又は治療薬の提供は急務である。
【0003】
骨粗鬆症の治療方法としては、更年期障害、頻尿、膣炎等の泌尿生殖器症状を伴う方であれば、ホルモン補充療法が第一選択となる。ホルモン補充療法は、分泌低下した女性ホルモン（具体的には、エストロゲン）を補う薬物療法であるが、副作用として、癌（特に、子宮体癌、乳癌）、血栓症、心筋梗塞等の発生リスクを高めることが指摘されている（非特許文献１～３）。このため、ホルモン補充療法が採用される際には、癌の発生リスクを抑制するために黄体ホルモンを併用する必要がある。
【0004】
上記以外の骨粗鬆症の治療方法として、ビスホスホネート、デノスマブ等の骨吸収抑制剤を用いる薬物療法も知られている。しかしながら、これらの骨吸収抑制剤は、健全な骨リモデリングまで抑制し、骨が脆弱になる結果、非定型大腿骨骨折や顎骨壊死等を引き起こすといった問題を抱えている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Arch Intern Med. 2006, 166 (9), pp. 1027-1032.
【非特許文献2】The New England Journal of Medicine 2003, 349 (6), pp. 523-534.
【非特許文献3】Best Practice & Research Clinical Obstetrics and Gynaecology 2022, 81, pp. 8-21.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、従来技術にみられる副作用を抑制しつつ、高い骨粗鬆症の予防又は治療効果を発揮する、骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者らは、上記した目的を達成すべく鋭意研究を重ねてきた。その結果、エストロゲンが担持されたポリリン酸エステル化合物を用いた場合に、エストロゲンを単独で使用する際に生じる副作用を回避しつつ、より高い骨粗鬆症の予防又は治療効果を発揮し得ることを見出した。本発明者らは、このような知見に基づき、さらに研究を重ね、本発明を完成した。即ち、本発明は、以下の構成を包含する。
【0008】
項１．エストロゲンが担持されたポリリン酸エステル化合物。
【0009】
項２．一般式（１）：
【0010】
【化1】
で表される、項１に記載のポリリン酸エステル化合物。
【0011】
項３．前記エストロゲンがエストロン、エストラジオール、エストリオール又はこれらの誘導体である、項１又は２に記載のポリリン酸エステル化合物。
【0012】
項４．前記Ｒ１及びＲ３がアルカリ金属イオンである、項２に記載のポリリン酸エステル化合物。
【0013】
項５．前記Ｒ２が置換基を有していてもよい１，２－エタンジイル基である、項２又は３に記載のポリリン酸エステル化合物。
【0014】
項６．項１～５のいずれか１項に記載のポリリン酸エステル化合物を有効成分とする、骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【0015】
項７．項１～５のいずれか１項に記載のポリリン酸エステル化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【発明の効果】
【0016】
本発明の方法によれば、従来技術にみられる副作用を抑制しつつ、高い骨粗鬆症の予防又は治療効果を発揮する、骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1A】合成例１の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1B】合成例２の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1C】参考例１の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1D】実施例１の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1E】実施例２の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1F】参考例２の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1G】実施例３の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1H】実施例４の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1I】参考例３の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1J】実施例５の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1K】実施例６の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1L】参考例４の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1M】実施例７の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図1N】実施例８の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図2】参考例４、実施例７及び実施例８について、（ａ）ｆｌｕｏｒ４８８で修飾された各ポリリン酸エステル化合物の蛍光スペクトル（励起波長：５００ｎｍ）、及び（ｂ）Ｃｙ５で修飾された各ポリリン酸エステル化合物の蛍光スペクトル（励起波長：６２０ｎｍ）である。（ａ）及び（ｂ）のいずれにおいても、蛍光標識されていないポリリン酸エステル化合物（参考例２、実施例３及び実施例４）は蛍光を示さなかった。
【図3】骨芽細胞分化試験のスキーム（図上部）及びその結果（図下部）である。（ａ）は、各ポリリン酸エステル化合物とともに破骨細胞分化誘導培地で培養したＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞について、アリザリンレッドＳ染色結果を示す明視野観察像である。（ｂ）は、染色後のアリザリンレッドＳの定量結果を示すグラフである。
【図4A】破骨細胞分化試験のスキームである。
【図4B】各ポリリン酸エステル化合物とともに破骨細胞分化誘導培地で培養した単球（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ，プライマリー）について、アクチン染色、核染色、ＴＲＡＰ染色後の蛍光観察像である。
【図4C】各ポリリン酸エステル化合物とともに破骨細胞分化誘導培地で培養した単球（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ，プライマリー）について、アクチン染色、核染色、ＴＲＡＰ染色後の明視野観察像である。
【図4D】各ポリリン酸エステル化合物とともに破骨細胞分化誘導培地で培養した単球（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ，プライマリー）について、培養後の破骨細胞数（数密度）を示すグラフである。
【図5A】骨集積性（骨親和性）試験のスキーム（図上部）及びその結果（図下部）である。参考例８（ｆｌｕｏｒ４８８によって蛍光標識されたＰ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ））又は実施例１０（ｆｌｕｏｒ４８８によって蛍光標識されたＥ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ））のポリリン酸エステル化合物を投与したマウスの蛍光イメージングである。
【図5B】同実験のマウス骨切片の明視野観察像及び蛍光観察像である。蛍光観察像において、緑色はｆｌｕｏｒ４８８の位置を、青色は細胞核の位置を示す。
【図6】各ポリリン酸エステル化合物を投与したマウスの大腿骨遠位部のＣＴ像（図上部；左から順に、卵巣摘出擬似手術（ｓｈａｍ）群、卵巣摘出（ＯＶＸ）群、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）投与群、実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）投与群）及び大腿骨遠位部の各骨パラメータ（図下部；左から順に、（ａ）骨量、（ｂ）骨密度、（ｃ）骨梁数、（ｄ）骨梁間隔）の測定結果を示すグラフである。各グラフにおいて、各バーは、左から順に、ｓｈａｍ群（０週間後）、ｓｈａｍ群（６週間後；以降の群においても同様。）、ＯＶＸ群、ＰＥＰ・Ｎａ群、Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ群を示す。
【発明を実施するための形態】
【0018】
本明細書において、「含有」は、「含む（comprise）」、「実質的にのみからなる（consist essentially of）」、及び「のみからなる（consist of）」のいずれも包含する概念である。
【0019】
本明細書において、「Ａ～Ｂ」との数値範囲の表記は、「Ａ以上且つＢ以下」を意味する。
【0020】
「エストロゲン」とは、通常、ステロイドホルモン（卵胞ホルモン）として知られる、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）、エストリオール（Ｅ３）等の化合物を指すが、本明細書においてはこれらに制限されず、卵胞ホルモン様作用を有する、ダイゼイン、ゲニステイン等の植物性エストロゲンを包含する概念である。
【0021】
本明細書において、「ポリリン酸エステル化合物」なる用語は、当業者にとって明らかなように、ポリリン酸ジエステル、ポリリン酸トリエステル又はこれらの共重合体を含む概念である。また、本明細書において、「ポリリン酸エステル化合物」なる用語は、モノリン酸エステル化合物（例えば、モノリン酸ジエステル化合物、モノリン酸トリエステル化合物）を包含する概念である。
【0022】
本明細書において、任意のポリマーが、次式：
【0023】
【化2】
のように表記される場合、当該ポリマー中において、構成単位Ｙ及びＺは、それぞれブロックを形成していてもよく、又は互いにランダムに結合していてもよい。
【0024】
本明細書において、化学式を示す際、便宜上、ポリマー末端に存在する置換基の記載を省略することもあるが、見かけ上ポリマー末端に存在する置換基に限定されるものではない。
【0025】
ポリリン酸エステル化合物
本発明のポリリン酸エステル化合物は、エストロゲンが担持されている。本発明のポリリン酸エステル化合物は、当該特徴を有することにより、エストロゲンを体内の必要としている部位に効率的に送達することができ、したがって、エストロゲンそれ自体を利用する場合と比較して、エストロゲンが有する生理活性をより有効に活用することができる。また、ポリリン酸エステル化合物としては、骨親和性の観点から、ポリリン酸ジエステル、ポリリン酸トリエステル又はこれらの共重合体を含む化合物であることが好ましく、ポリリン酸ジエステル化合物であることがより好ましい。
本発明のポリリン酸エステル化合物は、エストロゲンが担持されている。本発明のポリリン酸エステル化合物は、当該特徴を有することにより、エストロゲンを体内の必要としている部位に効率的に送達することができ、したがって、エストロゲンそれ自体を利用する場合と比較して、エストロゲンが有する生理活性をより有効に活用することができる。また、ポリリン酸エステル化合物としては、骨親和性の観点から、ポリリン酸ジエステル、ポリリン酸トリエステル又はこれらの共重合体を含む化合物であることが好ましく、ポリリン酸ジエステル化合物であることがより好ましい。
【0026】
本発明のポリリン酸エステル化合物としては、その中でも、化合物の安定性、及び合成の容易性の観点から、共有結合によりエストロゲンが担持されているものが好ましく、水酸基由来の酸素原子を介した共有結合によりエストロゲンが担持されているものがより好ましく、水酸基由来の酸素原子を介した共有結合によりエストロゲンが担持され、当該共有結合がリン酸ジエステル結合又はリン酸トリエステル結合を構成しているものがさらに好ましい。
【0027】
本発明のポリリン酸エステル化合物としては、例えば、一般式（１）：
【0028】
【化3】
で表される、ポリリン酸エステル化合物が挙げられる。
【0029】
一般式（１）において、エストロゲンとしては、特に制限されず、例えば、上述の卵胞ホルモン及び植物性エストロゲン等を採用することができる。具体的には、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）、エストリオール（Ｅ３）又はこれらの誘導体（結合型エストロゲン、エチニルエストラジオール等）等の卵胞ホルモン；フラボノイド（フラボノール、フラバノン、フラボン、イソフラボン等）、カルコノイド（カルコン、ジヒドロカルコン等）、フェニルプロパノイド（スチルベン、リグナン等）、クメスタン（クメストロール等）等の植物性エストロゲンが挙げられる。その中でも、一般式（１）において、エストロゲンとしては、骨粗鬆症の予防又は治療の観点から、例えば、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）、エストリオール（Ｅ３）又はこれらの誘導体が好ましく、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）又はこれらの誘導体がより好ましく、エストラジオール（Ｅ２）又はその誘導体がさらに好ましく、エストラジオール吉草酸エステルが特に好ましい。
【0030】
一般式（１）において、Ｅで示される「エストロゲンから１個の水素原子を除いた１価の基」の具体例としては、例えば、
【0031】
【化4】
【0032】
一般式（１）において、Ｒ１及びＲ３で示される有機基としては、特に制限されず、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基等の炭化水素基が挙げられる。
【0033】
アルキル基としては、特に制限されず、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｎ－ペンチル基等の炭素数１～１０（特に１～６）の直鎖状アルキル基の他、例えば、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等の炭素数３～１０（特に３～６）の分岐鎖状アルキル基、及び、例えば、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等の炭素数３～１０（特に５～８）の環状アルキル基も挙げられる。
【0034】
アルケニル基としては、特に制限されず、例えば、エテニル基（ビニル基）、２－プロペニル基（アリル基）、２－ブテニル基等の炭素数１～１０（特に１～６）の直鎖状アルケニル基の他、例えば、イソプロペニル基、２－メチル－１－プロペニル基、２－メチルアリル基等の炭素数３～１０（特に３～６）の分岐鎖状アルキル基が挙げられる。
【0035】
アルキニル基としては、特に制限されず、例えば、エチニル基、ｎ－プロピニル基、ｎ－ブチニル基等の炭素数１～１０（特に１～６）の直鎖状アルケニル基の他、例えば、イソブチニル基、ｓ－ブチニル基、イソペンチニル基等の炭素数３～１０（特に３～６）の分岐鎖状アルキル基が挙げられる。
【0036】
アリール基としては、特に制限されず、単環アリール基、縮環アリール基及び多環アリール基のいずれも採用でき、例えば、フェニル基、ヒドロキシフェニル基、ナフチル基、アントラセニル基、フェナントレニル基、ビフェニル基、ターフェニル基、フルオレニル基、インドリル基、イミダゾリル基、ピレニル基、トリフェニレニル基等の炭素数６～１８のアリール基（特に６～１４）が挙げられる。
【0037】
ヘテロアリール基としては、特に制限されず、単環ヘテロアリール基及び多環ヘテロアリール基のいずれも採用でき、例えば、ピロリジル基、ピロリル基、テトラヒドロチエニル基、チエニル基、オキソラニル基、フラニル基、イミダゾリル基、Ｎ－メチルイミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基、ピペリジル基、ピリジル基、Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－アミノピリジル基、ピラジル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キノキサリル基等が挙げられる。
【0038】
一般式（１）において、Ｒ１及びＲ３で示される有機基（炭化水素基）は、置換基を有していてもよい。当該置換基としては、特に制限されず、例えば、水酸基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）、上記アルキル基、上記アルケニル基、上記アルキニル基、上記アリール基、アルコキシ基（メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等）、カルボキシ基、アミノ基等が挙げられる。置換基を有する場合の置換基の数は、特に制限されず、１～６個が好ましく、１～３個がより好ましい。
【0039】
本発明のポリリン酸エステル化合物は、エストロゲン以外の薬物及び／又は蛍光分子等の機能分子をさらに有していてもよい。この場合、当該機能分子は、例えば、一般式（１）において、Ｒ１及びＲ３で示される有機基（炭化水素基）又はこれが有していてもよい置換基を介してポリリン酸エステル部位に担持（結合）されることができる。当該機能分子の担持（結合）様式としては、特に制限されず、例えば、クリック反応由来のトリアゾリル結合等が挙げられる。
【0040】
一般式（１）において、Ｒ１及びＲ３で示されるアルカリ金属イオンとしては、特に制限されず、例えば、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、セシウムイオン等が挙げられる。Ｒ１及びＲ３で示されるアルカリ金属イオンとしては、その中でも、骨親和性及び骨粗鬆症の予防又は治療の観点から、ナトリウムイオン、カリウムイオンが好ましく、ナトリウムイオンがより好ましい。
【0041】
一般式（１）において、Ｒ１及びＲ３で示される基としては、骨親和性及び骨粗鬆症の予防又は治療の観点からは、水素原子及び／又はアルカリ金属イオンが好ましく、アルカリ金属イオンがより好ましい。具体的には、本発明のポリリン酸エステル化合物に含まれるｎ個のＲ１及びＲ３のうち、８０％以上の数の基が水素原子及び／又はアルカリ金属イオンであることが好ましく、８０％以上の数の基がアルカリ金属イオンであることがより好ましい。
【0042】
一般式（１）において、Ｒ２で示されるアルカンジイル基としては、特に制限されず、例えば、メタンジイル基、エタンジイル基、プロパンジイル基、ブタンジイル基、ペンタンジイル基等が挙げられる。
【0043】
一般式（１）において、Ｒ２で示されるアルカンジイル基は、置換基を有していてもよい。当該置換基としては、特に制限されず、例えば、水酸基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）、上記アルキル基、上記アルケニル基、上記アルキニル基、上記アリール基、アルコキシ基（メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等）、カルボキシ基、アミノ基等が挙げられる。置換基を有する場合の置換基の数は、特に制限されず、１～６個が好ましく、１～３個がより好ましい。
【0044】
一般式（１）において、ｎは、リン酸エステル結合の繰り返し数を意味する１以上の整数である。ｎとしては、骨親和性及び取扱い性の観点から、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０以上の整数が好ましく、２０～１０００の整数がより好ましく、５０～１００の整数がさらに好ましい。本発明のポリリン酸エステル化合物は、ｎが１である場合にも骨親和性を有する。
【0045】
本発明のポリリン酸エステル化合物は、そのポリリン酸エステル部位において、一般式（２－ａ）：
【0046】
【化5】
で表される構成単位（「構成単位Ｔ」と称することもある。）を含み得る。
【0047】
一般式（２－ａ）において、Ｒ１ａとしては、上記一般式（１）について定義される有機基を採用することができる。
【0048】
一般式（２－ａ）において、Ｒ２ａとしては、上記一般式（１）について定義されるアルカンジイル基を採用することができる。
【0049】
また、本発明のポリリン酸エステル化合物は、そのポリリン酸エステル部位において、一般式（２－ｂ）：
【0050】
【化6】
で表される構成単位（「構成単位Ｄ」と称することもある。）を含み得る。
【0051】
一般式（２－ｂ）において、Ｘとしては、水素原子、又は上記一般式（１）について定義されるアルカリ金属イオンを採用することができる。
【0052】
一般式（２－ｂ）において、Ｒ２ｂとしては、上記一般式（１）について定義されるアルカンジイル基を採用することができる。
【0053】
本発明のポリリン酸エステル化合物が構成単位Ｔ及び構成単位Ｄを含む場合、骨親和性及び骨粗鬆症の予防又は治療の観点からは、ポリリン酸エステル化合物中に含まれる構成単位Ｔ及び構成単位Ｄのモル比率（Ｔ：Ｄ）は、０．１：９９．９～９９．９：０．１が好ましく、１：９９～５０：５０がより好ましく、３：９７～１０：９０がさらに好ましい。本発明のポリリン酸エステル化合物は、構成単位Ｄを多く含むほど、特に、Ｘがアルカリ金属イオンである構成単位Ｄを多く含むほど、骨粗鬆症の予防又は治療効果が向上し得る。
【0054】
また、本発明のポリリン酸エステル化合物が構成単位Ｔ及び構成単位Ｄを含む場合、構成単位Ｔの繰り返し数及び構成単位Ｄの繰り返し数の総和が、上記ｎの好ましい範囲にあることが好ましい。
【0055】
本発明のポリリン酸エステル化合物の具体例としては、例えば、
【0056】
【化7】
等が挙げられ、これらに限定されない。
【0057】
本発明のポリリン酸エステル化合物の数平均分子量Ｍｎは、特に制限されず、骨親和性及び骨粗鬆症の予防又は治療の観点からは、１ＨＮＭＲ測定により決定される場合に５００００～２０００００（より好ましくは７５０００～１５００００）であることが好ましく、ＧＰＣ測定により決定される場合に５００００～２０００００（より好ましくは７５０００～１５００００）であることが好ましい。
【0058】
本発明のポリリン酸エステル化合物の分散度Ｍｗ／Ｍｎは、１超の範囲であれば特に制限されず、骨粗鬆症の予防又は治療の観点からは、できる限り小さいことが好ましい。Ｍｗ／Ｍｎは、ＧＰＣ測定により決定することができる。
【0059】
本発明のポリリン酸エステル化合物には、上記化合物の薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物も含まれ得る。
【0060】
薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、フッ酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩等の無機酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、ピルビン酸塩、安息香酸塩等の有機酸塩等が挙げられる。
【0061】
溶媒和物を構成する溶媒としては、水、アルコール（メタノール、エタノール、ｎ － プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等）、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ベンゼン、トルエン、塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。
【0062】
本発明においては、特に指示しない限り異性体はこれをすべて包含する。例えば、不斉炭素原子の存在等による光学異性体（Ｒ、Ｓ体、α、β配置、エナンチオマー、ジアステレオマー）、旋光性を有する光学活性体（Ｄ、Ｌ、ｄ、ｌ体）、回転異性体、これらの任意の割合の混合物、ラセミ混合物は、すべて本発明に含まれる。また、本発明においては、互変異性体による異性体をもすべて包含する。
【0063】
骨粗鬆症の予防又は治療剤
本発明のポリリン酸エステル化合物は、生体内に投与された場合に骨に選択的にエストロゲンを送達することができ、及び／又は、骨に集積した後に周囲の細胞の骨芽細胞分化を促進することができ、及び／又は、骨に集積した後に周囲の細胞の破骨細胞分化を抑制することができる。本発明のポリリン酸エステル化合物は、これらの生理活性を示すことによって、骨梁や骨密度等の骨パラメータを改善することができ、したがって、従来技術にみられる副作用を抑制しつつ、高い骨粗鬆症の予防又は治療効果を発揮する、骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供することができる。
本発明のポリリン酸エステル化合物は、生体内に投与された場合に骨に選択的にエストロゲンを送達することができ、及び／又は、骨に集積した後に周囲の細胞の骨芽細胞分化を促進することができ、及び／又は、骨に集積した後に周囲の細胞の破骨細胞分化を抑制することができる。本発明のポリリン酸エステル化合物は、これらの生理活性を示すことによって、骨梁や骨密度等の骨パラメータを改善することができ、したがって、従来技術にみられる副作用を抑制しつつ、高い骨粗鬆症の予防又は治療効果を発揮する、骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供することができる。
【0064】
本発明のポリリン酸エステル化合物は、リン酸エステル結合を有するため、高い骨親和性（骨集積性）を有し得る。このため、本発明のポリリン酸エステル化合物は、マウスの尾静脈に投与された場合でも、骨選択的に集積し得る。骨親和性は、例えば、光ｉｎ ｖｉｖｏ生体イメージングシステム、免疫組織染色法等により評価することができる。
【0065】
骨芽細胞分化の促進は、特に制限されず、例えば、アリザリンレッドＳ染色法により骨芽細胞におけるカルシウム沈着量を測定することにより評価することができ、及び／又は、ＰＣＲ法により骨芽細胞関連遺伝子（Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｘ、Ｏｐｎ、Ｏｃｎ等）の発現量を測定することにより評価することができる。
【0066】
破骨細胞分化の抑制は、特に制限されず、アクチン染色法によりアクチンリング数を測定することにより評価することができ、及び／又は、ＴＲＡＰ染色法により酒石酸耐性酸性フォスファターゼ活性を測定することにより評価することができ、及び／又は、ＰＣＲ法により破骨細胞関連遺伝子（ＲＡＮＫ、ｃ－Ｆｏｓ、ＮＦＡＴｃ１、ＯＳＣＡＲ等）の発現量を測定することにより評価することができる。
【0067】
骨粗鬆症の予防又は治療効果は、マウスに対して、一定期間、本発明のポリリン酸エステル化合物を一定量投与し、マウス骨切片について、例えば、骨量、骨密度、骨梁数及び骨梁間隔等の骨パラメータを測定することで評価することができる。骨パラメータは、例えば、骨切片のＣＴ像を画像解析することで数値化され得る。ここで、本明細書において、「骨量」とは骨基質と骨塩の量を、「骨密度」とは単位面積あたりの骨量を、「骨梁数」とは海綿骨内部に見られる網目構造を持つ骨質の数を、「骨梁間隔」とは網目構造を持つ骨質の間隔を意味する。当業者にとって明らかなように、骨粗鬆症の予防又は治療効果は、ヒトに対して通常行われるような検査、例えば、二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＸＡ）、ＭＤ法、超音波法、レントゲン法によって評価することもできる。
【0068】
医薬組成物
本発明のポリリン酸エステル化合物を有効成分とする医薬（上記骨粗鬆症の予防又は治療剤を含む）は、その使用目的に合わせて投与方法、剤型、投与量を適宜決定することが可能である。例えば、本発明の化合物を有効成分とする医薬の投与形態は、経口投与でも非経口投与でも良い。剤型としては、例えば錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤、または注射剤、点滴剤、点鼻剤、点眼剤、もしくは坐剤等の非経口投与剤を挙げることができる。これらの製剤は、本発明のポリリン酸エステル化合物と薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として製造することができる。
本発明のポリリン酸エステル化合物を有効成分とする医薬（上記骨粗鬆症の予防又は治療剤を含む）は、その使用目的に合わせて投与方法、剤型、投与量を適宜決定することが可能である。例えば、本発明の化合物を有効成分とする医薬の投与形態は、経口投与でも非経口投与でも良い。剤型としては、例えば錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤、または注射剤、点滴剤、点鼻剤、点眼剤、もしくは坐剤等の非経口投与剤を挙げることができる。これらの製剤は、本発明のポリリン酸エステル化合物と薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として製造することができる。
【0069】
本発明のポリリン酸エステル化合物を有効成分とする医薬又は医薬組成物の有効量は、通常、成人一日当たり経口投与の場合、０．１ｍｇ～１０００ｍｇ程度、非経口投与の場合０．０１～２００ｍｇ程度が適当であり、これを一日に一回乃至複数回投与する。投与量は種々の条件で変動するので、上記投与量範囲より少ない量で充分な場合もある。
【0070】
ポリリン酸エステル化合物の製造方法
本発明のポリリン酸エステル化合物は、その製造方法について特に制限されず、例えば、アニオン開環重合等の開環重合により製造することができる。
本発明のポリリン酸エステル化合物は、その製造方法について特に制限されず、例えば、アニオン開環重合等の開環重合により製造することができる。
【0071】
開環重合で用いられるモノマーとしては、例えば、一般式（３）：
【0072】
【化8】
で表される環状リン酸エステル化合物等が挙げられる。当該モノマーの具体例としては、特に制限されず、２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン、２－エトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン、２－ブチノキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン等が挙げられる。一般式（３）で表される環状リン酸エステル化合物は、対応するハロゲン化物をエステル交換反応により変換することで得られ得る。
【0073】
開環重合において、開始剤として、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）、エストリオール（Ｅ３）等のエストロゲンを用いることによって、得られるポリリン酸エステル化合物にエストロゲンを担持させることができる。この方法以外にも、上記モノマーを重合して得られるポリマーに対して、化学的にエストロゲンを付加することによって、本発明のエストロゲンが担持されたポリリン酸エステル化合物を得ることもできる。重合後にエストロゲンを付加する場合には、上記開始剤として、メタノール、エタノール、プロパノール等の脂肪族アルコール、ベンジルアルコール、サリチルアルコール等の芳香族アルコールを採用してもよい。
【0074】
開環重合に用いられる重合触媒としては、環状ホスホランモノマーを重合する際に用いられる公知の金属触媒又は有機触媒が挙げられる。重合触媒としては、その中でも、重合後の分子量分布、触媒の分離し易さの観点から、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５，７－トリアザビシクロ［４，４，０］デカ－５－エン（ＴＢＤ）等の有機触媒が好ましい。
【0075】
開環重合に用いられる停止剤としては、ギ酸、酢酸等の有機酸が挙げられる。
【0076】
開環重合は、水系及び非水系のいずれでも行われ得るが、その中でも、非水系で行われることが好ましい。非水系溶媒としては、上記試薬（モノマー、開始剤、触媒等）を溶解し得る溶媒であれば特に制限されず、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒；１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジエチルホルムアミド等のアミド系溶媒、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒、アセトニトリル等のニトリル系溶媒及びこれらの混合物等が挙げられる。
【0077】
当業者にとって明らかなように、モノマーとして、Ｒ１が有機基である上記環状リン酸エステル化合物を用いた場合には、重合後のポリマーに上記構成単位Ｔを含有させることができる。また、モノマーとして、Ｒ１が水素原子又はアルカリ金属イオンである上記環状リン酸エステル化合物を用いた場合には、重合後のポリマーに上記構成単位Ｄを含有させることができる。さらに、Ｒ１の種類に応じて選択される公知の化学反応によって、重合後のポリマーに含まれる構成単位Ｔを構成単位Ｄに変換してもよく、又は構成単位Ｄを構成単位Ｔに変換してもよい。
【0078】
変換の一例として、Ｒ１がメチル基である構成単位Ｔを含むポリリン酸エステル化合物に対して、トリメチルアミン（ＴＭＡ）を作用させることにより当該メチル基を４級化し、さらにこれを陽イオン交換樹脂に通すことによって、Ｒ１を水素原子に変換する方法が挙げることができる。その他の一例として、Ｒ１が水素原子である構成単位Ｄを含むポリリン酸エステル化合物に対して、水酸化ナトリウム等のアルカリ金属塩を含む水溶液を作用させ、必要に応じてその後純水で透析することによって、Ｒ１をナトリウムイオンに変換する方法が挙げることができる。
【0079】
このように、本製造方法を採用することによって、ポリリン酸エステル化合物の主鎖、側鎖及び／又は末端に種々の官能基を導入することができる。
【0080】
開環重合の反応時間は、重合反応が完了する限りにおいて特に制限されない。その中でも、３０分～２４時間が好ましく、１時間～１２時間がより好ましい。
【0081】
開環重合の反応時間は、重合反応が進行する限りにおいて特に制限されない。その中でも、副反応回避の観点からは、－８０℃～６０℃が好ましく、－４０℃～４０℃がより好ましく、－２０℃～２０℃がさらに好ましい。
【0082】
開環重合は、副反応回避の観点からは、非酸化性雰囲気下、例えば、Ａｒ、Ｎ２等の不活性ガス雰囲気下等で行うことが好ましく、また、酸素濃度が十分に低い減圧下で行うことが好ましい。
【0083】
開環重合において、本発明の効果を損なわない範囲で、公知の開環重合で用いられる添加剤を適宜使用することができる。
【0084】
開環重合後は、必要に応じて、通常の単離及び精製工程を経て、本発明のポリリン酸エステル化合物を高純度且つ高収率で得ることができる。精製工程としては、例えば、再沈殿法、カラムクロマトグラフィー法等が挙げられる。
【実施例0085】
以下、参考例及び実施例を示し、本発明の特徴とするところを一層明確にするが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【0086】
明細書の記載を簡略化するために、以下に示すような略号を用いることもある。試薬又は溶媒において、略号：意味としては、ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ＴＭＡ：トリメチルアミン、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、Ｍ－ＣＳＦ：マクロファージコロニー刺激因子、ＴＲＡＰ：酒石酸耐性酸性フォスファターゼ、ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水溶液である。
【0087】
化学式を示す際、便宜上、ポリマー末端に存在する置換基の記載を省略することもあるが、見かけ上ポリマー末端に存在する置換基に限定されるものではない。
【0088】
（ＮＭＲ測定）
各化合物の１ＨＮＭＲスペクトルは、ＪＥＯＬ ＪＮＭ－ＥＣＺ４００を用いて記録した。化学シフトは、残留溶媒シグナルに対する相対値δ（ｐｐｍ）で報告した。溶媒としてＤ２Ｏを使用した１Ｈスペクトルは、２５℃で記録した。
各化合物の１ＨＮＭＲスペクトルは、ＪＥＯＬ ＪＮＭ－ＥＣＺ４００を用いて記録した。化学シフトは、残留溶媒シグナルに対する相対値δ（ｐｐｍ）で報告した。溶媒としてＤ２Ｏを使用した１Ｈスペクトルは、２５℃で記録した。
【0089】
（ＧＰＣ測定）
得られた各化合物の分子量及び分散度（Ｍｗ／Ｍｎ）は、ゲルクロマトグラフィー（ＧＰＣ）法により測定した。測定条件等を以下に示す。
送液ポンプ：ＰＵ－２０８０
移動相流速：０．７５ｍＬ／分
カラム：ＰＬｇｅｌ ５μｍ ＭＩＸＥＤ－Ｃ（ポリマーラボラトリーズ社製）、Ｓｈｏｄｅｘ ＳＢ８０３＋ＳＢ８０６Ｍ（昭和電工株式会社製）又はＧＳ－３２０／ＧＳ－５２０（ジーエルサイエンス株式会社製）
検出器：ＲＩ－２０３１（日本分光株式会社製）
展開溶媒：クロロホルム（ＣＨＣｌ３）、酢酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
得られた各化合物の分子量及び分散度（Ｍｗ／Ｍｎ）は、ゲルクロマトグラフィー（ＧＰＣ）法により測定した。測定条件等を以下に示す。
送液ポンプ：ＰＵ－２０８０
移動相流速：０．７５ｍＬ／分
カラム：ＰＬｇｅｌ ５μｍ ＭＩＸＥＤ－Ｃ（ポリマーラボラトリーズ社製）、Ｓｈｏｄｅｘ ＳＢ８０３＋ＳＢ８０６Ｍ（昭和電工株式会社製）又はＧＳ－３２０／ＧＳ－５２０（ジーエルサイエンス株式会社製）
検出器：ＲＩ－２０３１（日本分光株式会社製）
展開溶媒：クロロホルム（ＣＨＣｌ３）、酢酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
【0090】
［合成例１：２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン（ＭＰ）］
【0091】
【化9】
【0092】
１０００ｍＬ容量の四つ口フラスコにメタノール（９．３８ｇ，０．２９ｍｏｌ）、２，６－ルチジン（３３ｍＬ，０．２９ｍｏｌ）及びトルエン５００ｍＬを加えた。撹拌機で四つ口フラスコ内の溶液を撹拌（４００ｒｐｍ）しながら、氷浴中で、滴下漏斗を使用して２－クロロ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン（ＣＯＰ；４１．２ｇ，０．２９ｍｏｌ）１００ｍＬを３０分かけて滴下した後、氷浴中で１時間撹拌した。ダイアフラムポンプとガラス漏斗（１７Ｇ４）を用いて、四つ口フラスコ中の反応液を減圧濾過した後、当該濾液をロータリーエバポレーターＮ－１０００（ＥＹＥＬＡ；９０ｈＰａ，４０℃）により濃縮した。最後に、その濃縮物を減圧蒸留して精製した。なお、減圧蒸留は０．４ｋＰａの圧力下、オイルバスの温度を１３５℃にして実施した。なお、このとき、内部に挿通した水銀温度計は１００℃を示していた。得られた２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン（ＭＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ａに示す。ＭＰのピークが確認されたことから、ＭＰの合成が確認された（収率：８３．２％）。
【0093】
［合成例２：２－（３－ブチニロキシ）－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン（ＢＹＰ）］
【0094】
【化10】
【0095】
１０００ｍＬ容量の四つ口フラスコに２－ブチン－１－オール（１４．２ｍＬ，０．２０ｍｏｌ）、２，６－ルチジン（２３ｍＬ，０．２０ｍｏｌ）及びトルエン４００ｍＬを加えた。撹拌機で四つ口フラスコ内の溶液を撹拌（４００ｒｐｍ）しながら、氷浴中で、滴下漏斗を使用してＣＯＰ（２８．０ｇ，０．２０ｍｏｌ）１００ｍＬを１時間かけて滴下した後、氷浴中で２時間撹拌した。ダイアフラムポンプとガラス漏斗（１７Ｇ４）を用いて、四つ口フラスコ中の反応液を減圧濾過した後、当該濾液をロータリーエバポレーター（９０ｈＰａ，４０℃）により濃縮した。最後に、その濃縮物を減圧蒸留して精製した。なお、減圧蒸留は０．４ｋＰａの圧力下、オイルバスの温度を１６５℃にして実施した。なお、このとき、内部に挿通した水銀温度計は１４０℃を示していた。得られた２－（３－ブチニロキシ）－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン（ＢＹＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｂに示す。ＢＹＰのピークが確認されたことから、ＢＹＰの合成が確認された（収率：２４．５％）。
【0096】
［参考例１：ポリ（２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン）（ＰＭＰ）］
【0097】
【化11】
【0098】
撹拌子を入れた５０ｍＬナスフラスコに三方コックを取り付け、一方のコックをアルゴンガスに、他方のコックをダイアフラムポンプに繋ぎ、減圧下でアルコールランプを用いてナスフラスコを加熱し、アルゴンガスを供給することで脱気した（３回）。次に、１０ｍＬプラスチックシリンジを用いてナスフラスコにＭＰ（８．２１ｇ，５９．５ｍｍｏｌ）を加え、３０分間減圧した。その後、５０μＬマイクロシリンジを用いてベンジルアルコール（８８．９μＬ，０．８６ｍｍｏｌ）をナスフラスコに添加した。これを氷浴に移し、１００μＬマイクロシリンジを用いてＤＢＵ（１２８μＬ，０．８６ｍｍｏｌ）を添加した。氷浴中で１０分間撹拌した後、マイクロピペットを用いて酢酸（４９．２μＬ，０．８６ｍｍｏｌ）を添加し，反応を停止させた。反応混合物を再沈殿（貧溶媒：ジエチルエーテル，良溶媒：メタノール）によって精製した後、デシケータを用いて減圧乾燥した。得られたポリ（２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン）（ＰＭＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｃに示す。ＰＭＰのピークが確認されたことから、ＰＭＰの合成が確認された。
【0099】
［実施例１：エストロン－ポリ（２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン）（Ｅ１－ＰＭＰ）］
【0100】
【化12】
【0101】
ベンジルアルコール（８８．９μＬ，０．８６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ４．５ｍＬに溶解したエストロン（Ｅ１；０．２３ｇ，０．８６ｍｍｏｌ）に代えたこと、及び、再沈殿の際の良溶媒としてＤＭＦを用いたこと以外は、参考例１と同様の操作を行った。得られたエストロン－ポリ（２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン）（Ｅ１－ＰＭＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｄに示す。Ｅ１－ＰＭＰのピークが確認されたことから、Ｅ１－ＰＭＰの合成が確認された。
【0102】
［実施例２：エストラジオール－ポリ（２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン）（Ｅ２－ＰＭＰ）］
【0103】
【化13】
【0104】
エストロン（Ｅ１）をエストラジオール（Ｅ２；０．３１ｇ，０．８６ｍｍｏｌ）に代えたこと以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られたエストラジオール－ポリ（２－メトキシ－２－オキソ－１，３，２－ジオキサホスホラン）（Ｅ２－ＰＭＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｅに示す。Ｅ２－ＰＭＰのピークが確認されたことから、Ｅ２－ＰＭＰの合成が確認された。
【0105】
【表1】
【0106】
［参考例２：ポリエチレンホスフェートナトリウム塩（ＰＥＰ・Ｎａ）］
【0107】
【化14】
【0108】
１００ｍＬナスフラスコ内でＰＭＰ（５．９９ｇ，０．０４３ｕｎｉｔ ｍｏｌ）を超純水２０ｍＬに溶解し、そこに３０％ＴＭＡ水溶液１７．００ｇ（ＴＭＡ：５．１０ｇ，０．０８６ｍｏｌ）を混合し、室温で一晩撹拌した。混合物に、純水で洗浄したＩｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｒＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）５０ｇを添加し、１時間撹拌した。その後、ガラス漏斗（１７Ｇ４）を用いて吸引濾過し、陽イオン交換樹脂ＩｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｒＡｍｂｅｒｌｉｔｅを除去した。ＩｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｒＡｍｂｅｒｌｉｔｅ５０ｇを用いて同じ操作を再度繰り返し、ＩｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｒＡｍｂｅｒｌｉｔｅ１０ｇを用いて同じ操作を再度繰り返した。１ＭＮａＯＨ水溶液及び０．１ＭＮａＯＨ水溶液を適宜用いて、得られた溶液のｐＨを７に調整し、２日間純水で透析した（ＭＷＣＯ：１０００）。透析後に得られた溶液をフィルター濾過により濾過し、凍結乾燥後の試料を測定又は試験に用いるまで保存した。得られたポリエチレンホスフェートナトリウム塩（ＰＥＰ・Ｎａ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｆに示す。ＰＥＰ・Ｎａのピークが確認されたことから、ＰＥＰ・Ｎａの合成が確認された。
【0109】
［実施例３：エストロン－ポリエチレンホスフェートナトリウム塩（Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａ）］
【0110】
【化15】
【0111】
ＰＭＰをＥ１－ＰＭＰ（５．９９ｇ，０．０４３ｕｎｉｔ ｍｏｌ）に代えたこと以外は、参考例２と同様の操作を行った。得られたエストロン－ポリエチレンホスフェートナトリウム塩（Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｇに示す。Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａのピークが確認されたことから、Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａの合成が確認された。ＰＥＰ・Ｎａと組み合わせることによって、本来は難水溶性化合物であるエストロンを水に溶解することができた。
【0112】
［実施例４：エストラジオール－ポリエチレンホスフェートナトリウム塩（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）］
【0113】
【化16】
【0114】
ＰＭＰをＥ２－ＰＭＰ（６．０１ｇ，０．０４３ｕｎｉｔ ｍｏｌ）に代えたこと以外は、参考例２と同様の操作を行った。得られたエストラジオール－ポリエチレンホスフェートナトリウム塩（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｈに示す。Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａのピークが確認されたことから、Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａの合成が確認された。ＰＥＰ・Ｎａと組み合わせることによって、本来は難水溶性化合物であるエストラジオールを水に溶解することができた。
【0115】
【表2】
【0116】
［参考例３：Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）］
【0117】
【化17】
【0118】
ＭＰを、ＭＰ（７．４５ｇ，５４．０ｍｍｏｌ）及びＢＹＰ（１．０６ｇ，６．０ｍｍｏｌ）の混合物に代えたこと以外は、参考例１と同様の操作を行った。得られたリン酸ジエステル－リン酸トリエステル共重合体（Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ））の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｉに示す。Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）のピークが確認されたことから、Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）の合成が確認された。
【0119】
［実施例５：Ｅ１－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）］
【0120】
【化18】
【0121】
ＭＰを、ＭＰ（７．４２ｇ，５３．７ｍｍｏｌ）及びＢＹＰ（１．０３ｇ，５．９ｍｍｏｌ）の混合物に代えたこと以外は、実施例１と同様の操作を行った。得られたＥ１－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｊに示す。Ｅ１－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）のピークが確認されたことから、Ｅ１－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）の合成が確認された。
【0122】
［実施例６：Ｅ２－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）］
【0123】
【化19】
【0124】
ＭＰを、ＭＰ（７．４１ｇ，５３．７ｍｍｏｌ）及びＢＹＰ（１．０５ｇ，６．０ｍｍｏｌ）の混合物に代えたこと以外は、実施例２と同様の操作を行った。得られたＥ２－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｋに示す。Ｅ２－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）のピークが確認されたことから、Ｅ２－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）の合成が確認された。
【0125】
【表3】
【0126】
［参考例４：Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）］
【0127】
【化20】
【0128】
参考例３で得られたＰ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）に対して、参考例２～４と同様の操作を行った。得られたＰ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｌに示す。Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）のピークが確認されたことから、Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の合成が確認された。
【0129】
［実施例７：Ｅ１－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）］
【0130】
【化21】
【0131】
実施例５で得られたＥ１－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）に対して、参考例２～４と同様の操作を行った。得られたＥ１－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｍに示す。Ｅ１－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）のピークが確認されたことから、Ｅ１－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の合成が確認された。
【0132】
［実施例８：Ｅ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）］
【0133】
【化22】
【0134】
実施例６で得られたＥ２－Ｐ（ＭＰ－ｃｏ－ＢＹＰ）に対して、参考例２～４と同様の操作を行った。得られたＥ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１Ｍに示す。Ｅ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）のピークが確認されたことから、Ｅ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の合成が確認された。
【0135】
【表4】
【0136】
［参考例５：Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の蛍光修飾］
【0137】
【化23】
【0138】
５ｍＬ褐色スクリュー管瓶内でＰ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）３００ｍｇを超純水／ＤＭＳＯ（４／１，ｖ／ｖ）１２４８μＬに溶解した。そこにＬ（＋）－アスコルビン酸ナトリウム水溶液（２．６Ｍ，３２．１μＬ）、硫酸銅（ＩＩ）水溶液（１．６Ｍ，５．０１μＬ）、及び、Ｃｙ５－ａｚｉｄｅ又はＡｚｉｄｅ－ｆｌｕｏｒ４８８溶液（１０ｍｇ／ｍＬ，１２４．８μＬ）添加し，室温暗所で１５時間撹拌した。その後、５日間純水で透析した（ＭＷＣＯ：１０００）。透析後に得られた溶液をフィルター濾過により濾過し、凍結乾燥後の試料を測定又は試験に用いるまで保存した。
【0139】
［実施例９：Ｅ１－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の蛍光修飾］
【0140】
【化24】
【0141】
Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）をＥ１－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）に代えたこと以外は、参考例５と同様の操作を行った。
【0142】
［実施例１０：Ｅ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）の蛍光修飾］
【0143】
【化25】
【0144】
Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）をＥ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ）に代えたこと以外は、参考例５と同様の操作を行った。
【0145】
合成した各種ＰＥＰ・Ｎａ－Ｃｙ５およびＰＥＰ・Ｎａ－ｆｌｕｏｒ ４８８の蛍光スペクトルを図２（ａ）及び（ｂ）に示す。蛍光修飾した各種ＰＥＰ・Ｎａにピークがみられたことから、各種ＰＥＰ・Ｎａに蛍光物質を修飾できたことが確認された。また、それぞれの蛍光強度を比較して、大きな差はなかった。
【0146】
（骨芽細胞分化の評価）
図３に示すスキームに従って、骨芽細胞分化への影響を評価した。９６ウェルマイクロプレートにおいて、マウス頭蓋冠由来骨芽細胞様細胞株ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞を４×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、１０％ＦＢＳ含有αＭＥＭ培地を用いて２日間培養した。培養は、３７℃で、加湿された５％ＣＯ２雰囲気下で行った。その後、Ｌ－アスコルビン酸（５０μｇ／ｍＬ）及びβ－グリセロリン酸（１０ｍＭ）を含有する分化誘導培地を用いて２８日間培養した。その際、終濃度が０ｍｇ／ｍＬ（ＰＢＳのみ）、０．００５ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ又は０．５ｍｇ／ｍＬとなるように、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）、実施例３（Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａ）又は実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）を培地に添加した。２８日後、アリザリンレッドＳ染色法によって骨芽細胞分化を評価した。染色後の明視野観察像である図３（ａ）から明らかなように、エストロゲンを含有する実施例２及び３を用いた場合に石灰化が促進されている。また、染色後のアリザリンレッドＳを石灰化結節溶解液で溶解し、溶解後の溶液の波長４１５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーを用いて測定した。その結果を図３（ｂ）に示す。
図３に示すスキームに従って、骨芽細胞分化への影響を評価した。９６ウェルマイクロプレートにおいて、マウス頭蓋冠由来骨芽細胞様細胞株ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞を４×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、１０％ＦＢＳ含有αＭＥＭ培地を用いて２日間培養した。培養は、３７℃で、加湿された５％ＣＯ２雰囲気下で行った。その後、Ｌ－アスコルビン酸（５０μｇ／ｍＬ）及びβ－グリセロリン酸（１０ｍＭ）を含有する分化誘導培地を用いて２８日間培養した。その際、終濃度が０ｍｇ／ｍＬ（ＰＢＳのみ）、０．００５ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ又は０．５ｍｇ／ｍＬとなるように、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）、実施例３（Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａ）又は実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）を培地に添加した。２８日後、アリザリンレッドＳ染色法によって骨芽細胞分化を評価した。染色後の明視野観察像である図３（ａ）から明らかなように、エストロゲンを含有する実施例２及び３を用いた場合に石灰化が促進されている。また、染色後のアリザリンレッドＳを石灰化結節溶解液で溶解し、溶解後の溶液の波長４１５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーを用いて測定した。その結果を図３（ｂ）に示す。
【0147】
（破骨細胞分化の評価）
図４Ａに示すスキームに従って、破骨細胞分化への影響を評価した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスの骨髄から単球を単離した。９６ウェルマイクロプレートにおいて、単離した単球を１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、Ｍ－ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びプロスタグランジンＥ２（０．１μＭ）を含有する培地を用いて３日間培養した。その後、Ｍ－ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）、プロスタグランジンＥ２（０．１μＭ）及びＲＡＮＫＬ（１０ｎｇ／ｍＬ）を含有する分化誘導培地を用いて４日間培養した。その際、終濃度が０ｍｇ／ｍＬ（ＰＢＳのみ）、０．００５ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ又は０．５ｍｇ／ｍＬとなるように、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）、実施例３（Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａ）又は実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）を培地に添加した。４日後、アクチン染色法、核染色法、ＴＲＡＰ染色法によって破骨細胞分化を評価した。染色後の蛍光観察像及び明視野観察像をそれぞれ図４Ｂ及び図４Ｃに示す。これらの観察像において、アクチンリングを形成している３つ以上の核を有し、且つＴＲＡＰ陽性である細胞を破骨細胞とみなした。各培養条件下で培養した後の破骨細胞数を図４Ｄに示す。エストロゲンを有しない参考例２を用いた場合には破骨細胞数が変化しなかった一方で、エストロゲンを有する実施例３及び４を用いた場合には破骨細胞分化が優位に抑制された。特に、エストラジオール（Ｅ２）を含有する実施例４を用いた場合、より有効に破骨細胞分化が抑制された。
図４Ａに示すスキームに従って、破骨細胞分化への影響を評価した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスの骨髄から単球を単離した。９６ウェルマイクロプレートにおいて、単離した単球を１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、Ｍ－ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びプロスタグランジンＥ２（０．１μＭ）を含有する培地を用いて３日間培養した。その後、Ｍ－ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）、プロスタグランジンＥ２（０．１μＭ）及びＲＡＮＫＬ（１０ｎｇ／ｍＬ）を含有する分化誘導培地を用いて４日間培養した。その際、終濃度が０ｍｇ／ｍＬ（ＰＢＳのみ）、０．００５ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ又は０．５ｍｇ／ｍＬとなるように、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）、実施例３（Ｅ１－ＰＥＰ・Ｎａ）又は実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）を培地に添加した。４日後、アクチン染色法、核染色法、ＴＲＡＰ染色法によって破骨細胞分化を評価した。染色後の蛍光観察像及び明視野観察像をそれぞれ図４Ｂ及び図４Ｃに示す。これらの観察像において、アクチンリングを形成している３つ以上の核を有し、且つＴＲＡＰ陽性である細胞を破骨細胞とみなした。各培養条件下で培養した後の破骨細胞数を図４Ｄに示す。エストロゲンを有しない参考例２を用いた場合には破骨細胞数が変化しなかった一方で、エストロゲンを有する実施例３及び４を用いた場合には破骨細胞分化が優位に抑制された。特に、エストラジオール（Ｅ２）を含有する実施例４を用いた場合、より有効に破骨細胞分化が抑制された。
【0148】
（骨集積性（骨親和性）の評価）
図５Ａに示すスキームに従って、本発明の骨集積性（骨親和性）を評価した。以降の動物実験では、動物福祉の観点から、ポリリン酸エステル化合物に担持させるエストロゲンとしてエストラジオール（Ｅ２）を用いた。
図５Ａに示すスキームに従って、本発明の骨集積性（骨親和性）を評価した。以降の動物実験では、動物福祉の観点から、ポリリン酸エステル化合物に担持させるエストロゲンとしてエストラジオール（Ｅ２）を用いた。
【0149】
卵巣摘出によってエストロゲンの分泌を欠損させたＩＣＲマウス（ＯＶＸマウス；８週齢，ｎ＝１）を使用した。ＯＶＸマウスを作製して１日後、参考例８（ｆｌｕｏｒ４８８によって蛍光標識されたＰ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ））又は実施例１０（ｆｌｕｏｒ４８８によって蛍光標識されたＥ２－Ｐ（ＥＰ・Ｎａ－ｃｏ－ＢＹＰ））のＰＢＳ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）をマウスの尾静脈に１回投与した。対照群にはｆｌｕｏｒ４８８のＤＭＳＯ溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を１回投与した。各マウスに対して、２週間後（１０週齢時点）及び４週間後（１２週齢時点）にも同じ用量を各１回投与した。投与した各溶液は同程度の発光を示した。２週間後（１４週齢時点）、各マウスを屠殺し、心臓、肺、腎臓、肝臓、脾臓、膵臓及び大腿骨背部を採取し、これらのＩＶＩＳ像を得た（図５Ａ）。励起／吸光フィルターとして４９４ｎｍ／５１７ｎｍ（Ｅｘ／Ｅｍ）を採用した。ＩＶＩＳ像から明らかなように、実施例１０のポリリン酸エステル化合物は、参考例８よりも高い骨親和性を示した。骨切片の蛍光観察像（図５Ｂ）からも明らかなように、本発明のポリリン酸エステル化合物は、高い骨親和性を有することにより、マウス内に投与された後、積極的に骨に吸着する。
【0150】
（骨溶解抑制効果の評価）
本発明の骨溶解抑制効果を評価した。ＯＶＸマウス（８週齢，ｎ＝４）に対して、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）又は実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）のＰＢＳ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を尾静脈に１回投与した。対照群として、卵巣摘出擬似手術（ｓｈａｍ）群及びＰＢＳ投与群（ＯＶＸ）を用意した。各マウスに対して、２週間後（１０週齢時点）及び４週間後（１２週齢時点）にも同じ用量を各１回投与した。２週間後（１４週齢時点）、各マウスを屠殺し、大腿骨を採取し、大腿骨遠位部のＣＴ像を取得し（図６上部）、これを用いて骨パラメータ（骨量、骨密度、骨梁数及び骨梁間隔）を評価した（図６下部）。その結果、特にＰＢＳ投与群（ＯＶＸ）において顕著であるように、卵巣摘出手術によって、骨量（ａ）、骨密度（ｂ）及び骨梁数（ｃ）が低下し、骨梁間隔（ｄ）が増大した。すなわち、卵巣摘出手術によって、骨溶解現象が確認された。これに対し、参考例２を投与した群（ＰＥＰ・Ｎａ）では微量に骨溶解が抑制され、実施例４を投与した群（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）では、骨溶解が顕著に抑制され、いずれのパラメータにおいても手術直後の数値と同程度の数値を示した。以上から、本発明のポリリン酸エステル化合物は、有望な骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供することが可能である。
本発明の骨溶解抑制効果を評価した。ＯＶＸマウス（８週齢，ｎ＝４）に対して、参考例２（ＰＥＰ・Ｎａ）又は実施例４（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）のＰＢＳ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を尾静脈に１回投与した。対照群として、卵巣摘出擬似手術（ｓｈａｍ）群及びＰＢＳ投与群（ＯＶＸ）を用意した。各マウスに対して、２週間後（１０週齢時点）及び４週間後（１２週齢時点）にも同じ用量を各１回投与した。２週間後（１４週齢時点）、各マウスを屠殺し、大腿骨を採取し、大腿骨遠位部のＣＴ像を取得し（図６上部）、これを用いて骨パラメータ（骨量、骨密度、骨梁数及び骨梁間隔）を評価した（図６下部）。その結果、特にＰＢＳ投与群（ＯＶＸ）において顕著であるように、卵巣摘出手術によって、骨量（ａ）、骨密度（ｂ）及び骨梁数（ｃ）が低下し、骨梁間隔（ｄ）が増大した。すなわち、卵巣摘出手術によって、骨溶解現象が確認された。これに対し、参考例２を投与した群（ＰＥＰ・Ｎａ）では微量に骨溶解が抑制され、実施例４を投与した群（Ｅ２－ＰＥＰ・Ｎａ）では、骨溶解が顕著に抑制され、いずれのパラメータにおいても手術直後の数値と同程度の数値を示した。以上から、本発明のポリリン酸エステル化合物は、有望な骨粗鬆症の予防又は治療剤を提供することが可能である。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図1E】
【図1F】
【図1G】
【図1H】
【図1I】
【図1J】
【図1K】
【図1L】
【図1M】
【図1N】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5A】
【図5B】
【図6】