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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025000069
(43)【公開日】2025-01-07
(54)【発明の名称】鶏卵アレルギー抑制組成物
(51)【国際特許分類】
A23L 33/10 20160101AFI20241224BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20241224BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20241224BHJP
A61K 31/05 20060101ALI20241224BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241224BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20241224BHJP
【ＦＩ】
A23L33/10 ZNA
A23L33/105
A61P37/08
A61K31/05
A61P43/00 111
C12N15/09 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023099711
(22)【出願日】2023-06-19
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】501304836
【氏名又は名称】ホシケミカルズ株式会社
(71)【出願人】
【識別番号】502167821
【氏名又は名称】亀井 淳三
(74)【代理人】
【識別番号】100136560
【弁理士】
【氏名又は名称】森 俊晴
(72)【発明者】
【氏名】亀井 淳三
(72)【発明者】
【氏名】辻 慶一郎
【テーマコード（参考）】
4B018
4C206
【Ｆターム（参考）】
4B018LB01
4B018LB07
4B018LB08
4B018LB10
4B018LE01
4B018LE02
4B018MD08
4B018MD48
4B018ME07
4B018MF01
4C206AA01
4C206AA02
4C206CA19
4C206KA01
4C206MA01
4C206MA04
4C206MA55
4C206MA57
4C206MA72
4C206NA14
4C206ZB13
4C206ZC02
(57)【要約】
【課題】カンナビジオールの特異的な効果に着目して、鶏卵アレルギーの発症を抑制できる組成物を提供する。
【解決手段】カンナビジオールを含有することを特徴とする鶏卵アレルギー抑制組成物である。また、鶏卵アレルギー抑制組成物が、健康食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、サプリメントまたは医薬品であることが好ましい。さらに、カンナビジオールが、腸粘膜マスト細胞からのマストセルプロテアーゼ－１（Ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅａｓｅ－１）の産生を抑制することが好ましく、カンナビジオールが、小腸および大腸におけるインターロイキン－４の発現を抑制することが好ましく、カンナビジオールが、小腸および大腸におけるＳＯＣＳ－３（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３）のｍＲＮＡの発現を抑制することが好ましい。
【選択図】図２
【解決手段】カンナビジオールを含有することを特徴とする鶏卵アレルギー抑制組成物である。また、鶏卵アレルギー抑制組成物が、健康食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、サプリメントまたは医薬品であることが好ましい。さらに、カンナビジオールが、腸粘膜マスト細胞からのマストセルプロテアーゼ－１（Ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅａｓｅ－１）の産生を抑制することが好ましく、カンナビジオールが、小腸および大腸におけるインターロイキン－４の発現を抑制することが好ましく、カンナビジオールが、小腸および大腸におけるＳＯＣＳ－３（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３）のｍＲＮＡの発現を抑制することが好ましい。
【選択図】図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
カンナビジオールを含有することを特徴とする鶏卵アレルギー抑制組成物。
【請求項2】
前記カンナビジオールが、腸粘膜マスト細胞からのマストセルプロテアーゼ－１の産生を抑制する請求項１記載の鶏卵アレルギー抑制組成物。
【請求項3】
前記カンナビジオールが、小腸および大腸におけるインターロイキン－４の発現を抑制する請求項１記載の鶏卵アレルギー抑制組成物。
【請求項4】
前記カンナビジオールが、小腸および大腸におけるＳＯＣＳ－３（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３）のｍＲＮＡの発現を抑制する請求項１記載の鶏卵アレルギー抑制組成物。
【請求項5】
前記カンナビジオールが、大腸粘膜へのＴｈ２細胞の浸潤を抑制する請求項１記載の鶏卵アレルギー抑制組成物。
【請求項6】
健康食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、サプリメントまたは医薬品である請求項１記載の鶏卵アレルギー抑制組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、鶏卵アレルギー抑制組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
アレルギー疾患の一つである食物アレルギーは、鶏卵や牛乳などの食物によって引き起こされ、蕁麻疹や掻痒等の皮膚症状、嘔吐や下痢等の消火器症状、咳や呼吸困難等の呼吸器症状など、全身に様々な症状が発現する。食物アレルギーは若齢期に発症することが多く、５歳ころまでの乳幼児が全体の約８０％を占める（非特許文献１および非特許文献２）。乳幼児期に食物アレルギーを発症すると、成長するにつれて、気管支喘息やアレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎等を発症する、いわゆる「アレルギーマーチ」をたどるリスクが高くなることが報告されている（非特許文献３）。したがって、食物アレルギーの発症を予防することは、臨床上、重要な課題の一つである。
【0003】
これまで、食物アレルギーの予防に関して、様々な取組みが実施されている。例えば、胎児期や授乳中に母体から移行した抗原によって感作を受け、食物アレルギーを発症した可能性について解析する目的で、妊娠中あるいは授乳中の母親が鶏卵や牛乳等のアレルゲンの摂取を回避する試験が行われた。しかしながら、妊娠中あるいは授乳中の母親がアレルゲンの接種を回避しても、生まれた子供のアレルギーを予防する効果は認められなかった（非特許文献４）。また、乳幼児期に鶏卵の摂取を３カ月遅らせると、鶏卵アレルギー発症リスクが高くなること（オッズ比４．４）が報告されている（非特許文献５）。さらに、生後２週間以降に初めて人工乳を摂取した乳幼児は、２週間までに摂取した乳幼児と比較して、牛乳アレルギーの発症リスクが高くなること（オッズ比１９．３０）も報告されている（非特許文献６）。
【0004】
一方、例えば、特許文献１には、カンナビノイドレセプター調節物質を有効成分として含有してなるアレルギー疾患治療剤が、開示され、特許文献４には、カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストを有効成分として含有してなる非即時型アレルギー疾患治療剤が、開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Ｓｕｇｉｔａ Ｋ（Ａｋｄｉｓ ＣＡ．），“Ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ａｎｄ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ａｎｄ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ．”，Ａｌｌｅｒｇｏｌ．ｉｎｔ．，６９，２０４－２１４（２０２０）．
【非特許文献2】Ｐｅｔｅｒｓ ＲＬ，Ｋｒａｗｉｅｃ Ｍ，Ｋｏｐｌｉｎ ＪＪ，“Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ．”，Ｐｅｄｉａｔｒ．ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２，６４７－６５７（２０２１）．
【非特許文献3】Ｙａｎｇ Ｌ，Ｆｕ Ｊ，Ｚｈｏｕ，“Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｍａｒｃｈ．”，Ｆｒｏｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１，１９０７（２０２０）．
【非特許文献4】Ｋｒａｍｅｒ ＭＳ，Ｋａｋｕｍａ Ｒ，“Ｏｐｔｉｍａｌ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄｉｎｇ．”，Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ．Ｒｅｖ．，２０１２，ＣＤ００３５１７（２０１２）
【非特許文献5】Ｋｏｐｌｉｎ ＪＪ，他１９名，“Ｃａｎ ｅａｒｌｙ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｇｇ ａｌｌｅｒｇｙ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ？ Ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ ｓｔｕｄｙ．”，Ｊ．ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６，８０７－８１３（２０１０）．
【非特許文献6】Ｋａｔｚ Ｙ，他６名，“Ｅａｒｌｙ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ｃｏｗ’ｓ ｍｉｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ ＩｇＥ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｗ’ｓ ｍｉｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｌｌｅｒｇｙ．”，Ｊ．ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６，７７－８２ ｅ７１（２０１０）．
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】特開２００３－２５２７９６号公報
【特許文献2】特開２００５－１５４２２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
しかしながら、特許文献１および２に記載されている技術は、喘息、アトピー性皮膚炎等のアレルギーに関するものであり、鶏卵由来のアレルギーについては全く検討されていなかった。このように食物アレルギーの予防に関しては多くの研究が行われているものの、食物アレルギー、特に鶏卵由来のアレルギーを十分に抑制できるものではなかった。
【0008】
そこで、本発明の目的は、前記の従来技術の問題点を解決し、カンナビジオールの特異的な効果に着目して、鶏卵アレルギーの発症を抑制できる組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、カンナビジオール自身が有する特異的な機能によって、前記目的を達成し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0010】
即ち、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、カンナビジオールを含有することを特徴とするものである。
【0011】
また、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、前記カンナビジオールが、腸粘膜マスト細胞からのマストセルプロテアーゼ－１（Ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅａｓｅ－１）の産生を抑制することが好ましく、前記カンナビジオールが、小腸および大腸におけるインターロイキン－４の発現を抑制することが好ましい。
【0012】
さらに、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、前記カンナビジオールが、小腸および大腸におけるＳＯＣＳ－３（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３）のｍＲＮＡの発現を抑制することが好ましく、前記カンナビジオールが、大腸粘膜へのＴｈ２細胞の浸潤を抑制することが好ましい。
【0013】
さらにまた、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、健康食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、サプリメントまたは医薬品であることが好ましい。
【発明の効果】
【0014】
本発明によると、鶏卵アレルギーの発症を抑制できる組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】実験例１－１の投与スケジュールを示す図である。
【図2】実験例１－１の糞中水分量の結果を示すグラフである。
【図3】実験例１－１の体重の結果を示すグラフである。
【図4】実験例１－２の投与スケジュールを示す図である。
【図5】実験例１－２の投与期間の影響の結果を示すグラフである。
【図6】実験例２－１のＭｃｐｔ－１の濃度の結果を示すグラフである。
【図7】実験例２－１のＩｇＥ抗体の濃度の結果を示すグラフである。
【図8】実験例２－２の小腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量の結果を示すグラフである。
【図9】実験例２－２の大腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量の結果を示すグラフである。
【図10】実験例２－３の小腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量の結果を示すグラフである。
【図11】実験例２－３の大腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量の結果を示すグラフである。
【図12】実験例２－３の大腸におけるＣＣＬ２血中濃度の結果を示すグラフである。
【図13】実験例２－４の大腸におけるＣＤ４陽性細胞の浸潤に対するＣＢＤの効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0016】
以下、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物について具体的に説明する。
本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、カンナビジオール（以下、「ＣＢＤ」とも称す）を含有することを特徴とするものである。食物アレルギーの原因食物としては、鶏卵、牛乳、小麦、木の実類等があり、このうち最も多いのが鶏卵によるアレルギーである。鶏卵のアレルゲンは、卵白に含まれるタンパク質であり、代表的なものとして、オボアルブミン（ＯＶＡ）（以下、「ＯＶＡ」とも称す）、オボトランスフェリン、オボムコイド、リゾチーム等がある。中でも、オボアルブミン（ＯＶＡ）は、卵白に含まれるタンパク質の５４％を占め、アレルギーの発症に大きく寄与しているものである。本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、カンナビジオールを含有することで、鶏卵アレルギーの発症を抑制できるものである。
本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、カンナビジオール（以下、「ＣＢＤ」とも称す）を含有することを特徴とするものである。食物アレルギーの原因食物としては、鶏卵、牛乳、小麦、木の実類等があり、このうち最も多いのが鶏卵によるアレルギーである。鶏卵のアレルゲンは、卵白に含まれるタンパク質であり、代表的なものとして、オボアルブミン（ＯＶＡ）（以下、「ＯＶＡ」とも称す）、オボトランスフェリン、オボムコイド、リゾチーム等がある。中でも、オボアルブミン（ＯＶＡ）は、卵白に含まれるタンパク質の５４％を占め、アレルギーの発症に大きく寄与しているものである。本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、カンナビジオールを含有することで、鶏卵アレルギーの発症を抑制できるものである。
【0017】
ここで、カンナビジオールとは、麻に含まれるポリフェノールであるカンナビノイドの一種であり、「ＣＢＤ」と表されるものである。本発明においては、通常の食用に使用できるものであれば限定されないが、例えば、ＰｈａｒｍａＨｅｍｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（リュブリャナ,スロベニア）の「ＣＢＤ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ」等を使用することができる。
【0018】
また、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、前記カンナビジオールが、腸粘膜マスト細胞からのマストセルプロテアーゼ－１（Ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅａｓｅ－１、以下「Ｍｃｐｔ－１」とも称す）の産生を抑制することが好ましい。かかるマストセルプロテアーゼ－１とは、腸の上皮に見られるｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｍａｓｔ ｃｅｌｌに発現する唯一のキマーゼである。
【0019】
さらに、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、前記カンナビジオールが、小腸および大腸におけるインターロイキン－４の発現を抑制することが好ましい。かかるインターロイキン－４とは、サイトカインの一種で、１２９個のアミノ酸から構成されるタンパク質であり、マスト細胞等によって産生されるものである。
【0020】
さらにまた、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、前記カンナビジオールが、小腸および大腸におけるＳＯＣＳ－３（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３）のｍＲＮＡの発現を抑制することが好ましい。かかるＳＯＣＳ－３とは、免疫応答など生体の恒常性の維持に必須のＪＡＫ─ＳＴＡＴ経路のネガティブフィードバック因子である。
【0021】
また、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、前記カンナビジオールが、大腸粘膜へのＴｈ２細胞の浸潤を抑制することが好ましい。かかるＴｈ２細胞とは、ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の一種で、免疫システムを担うマクロファージ、樹状細胞、およびＢ細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）にヘルパー機能をもたらし、それらの活性化や成熟過程において重要な役割を果たすものである。
【0022】
また、本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物は、健康食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、サプリメントまたは医薬品であることが好ましい。カンナビジオールを含有する組成物を経口摂取することで、鶏卵アレルギーの発症を抑制できる。
【0023】
本発明において、健康食品とは、健康によいことをうたった食品全般のことであり、特別用途食品とは、特別用途食品(特定保健用食品を除く)は、乳児の発育や、妊産婦、授乳婦、えん下困難者、病者などの健康の保持・回復などに適するという特別の用途について表示を行う食品であり、特定保健用食品とは、からだの生理学的機能などに影響を与える保健効能成分(関与成分)を含み、その摂取により、特定の保健の目的が期待できる旨の表示(保健の用途の表示)をする食品であり、栄養機能食品とは、特定の栄養成分の補給のために利用される食品で、栄養成分の機能を表示するもので、対象食品は消費者に販売される容器包装に入れられた一般用加工食品及び一般用生鮮食品であり、機能性食品とは、食品の三次機能（体調調節作用）に着目し、その機能性を標榜した食品であり、栄養補助食品とは、栄養成分を補給または特定の保健の用途に資する食品であり、健康補助食品とは、栄養成分を補給し、または特定の保健の用途に適するもの、その他健康の保持・増進および健康管理のために接種される食品であり、サプリメントとは、健康食品のうち、米国のＤｉｅｔａｒｙ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔのように特定成分が濃縮された錠剤やカプセル剤の形態が主であり、スナック菓子や飲料なども含む食品である。
【0024】
本発明の鶏卵アレルギー抑制組成物の形態としては、錠剤、カプセルが主であるが、例えば、各種飲料、ヨーグルト、チーズ、バター、乳酸菌発酵品等の各種乳製品、流動食、ゼリー、キャンディ、レトルト食品、錠菓、クッキー、カステラ、パン、ビスケット等のような形態であってもよい。
【0025】
さらに、本発明において、本発明の効果が損なわれない範囲で、適宜他の成分等を添加することもできる。質的、量的範囲で上記以外の任意の成分を配合することができ、食品に通常配合される成分、例えば、食品添加物、油性成分、乳化剤、酸化防止剤、香料、各種ビタミン剤、着色剤、薬効成分、ミネラル成分等を配合することができる。
【0026】
また、本発明において、鶏卵アレルギー抑制組成物の製造方法としては、通常の食品の製造方法で製造することができる。
【0027】
以下、本発明について、実施例を用いてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、以下の「実施例」中の配合％は、質量％を示す。また、図中、「ＣＢＤ」は、カンナビジオールを示し、％で配合質量％を示し、「ｃｏｎｔｒｏｌ」および「ｃｏｎｔ」は、コントロールを示す。
【実施例0028】
（実験例１）
（試薬）
カンナビジオール（ＣＢＤ）は、ＰｈａｒｍａＨｅｍｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（リュブリャナ,スロベニア）から購入したＣＢＤ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ（Ｂａｔｃｈ Ｎｏ．ＣＢ０９９０２０１７１Ａ）を使用した。なお、本パウダー中には、カンナビジオールは、９９．３４質量％含まれている。また、オボアルブミン（ＯＶＡ）およびアルミニウムゲルは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス，ミズリー州，米国）から購入して使用した。その他の試薬は、市販品のうち最も純度の高いものを使用した。
（試薬）
カンナビジオール（ＣＢＤ）は、ＰｈａｒｍａＨｅｍｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（リュブリャナ,スロベニア）から購入したＣＢＤ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ（Ｂａｔｃｈ Ｎｏ．ＣＢ０９９０２０１７１Ａ）を使用した。なお、本パウダー中には、カンナビジオールは、９９．３４質量％含まれている。また、オボアルブミン（ＯＶＡ）およびアルミニウムゲルは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス，ミズリー州，米国）から購入して使用した。その他の試薬は、市販品のうち最も純度の高いものを使用した。
【0029】
（使用動物）
６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃ系マウスは、日本エスエルシー株式会社（静岡県浜松市）から購入した。マウスは、温度２４±１℃、湿度５５±５％の施設において飼育し、明暗条件は午前８時点灯、２０時消灯の条件下で飼育した。本実験を行うにあたり、科学的にはもとより、動物福祉の観点からも適切な動物実験の実施を促すことを目的として制定された星薬科大学動物実験指針に従い、星薬科大学の動物実験委員会の承認を得たうえで、動物に対する倫理面を十分に考慮した。
６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃ系マウスは、日本エスエルシー株式会社（静岡県浜松市）から購入した。マウスは、温度２４±１℃、湿度５５±５％の施設において飼育し、明暗条件は午前８時点灯、２０時消灯の条件下で飼育した。本実験を行うにあたり、科学的にはもとより、動物福祉の観点からも適切な動物実験の実施を促すことを目的として制定された星薬科大学動物実験指針に従い、星薬科大学の動物実験委員会の承認を得たうえで、動物に対する倫理面を十分に考慮した。
【0030】
（マウスの処置）
消化器症状を呈する食物アレルギーモデルマウスは、山本らの方法に従って作製した（Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ，他４名，“Ｏｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｆｏｏｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｖｉａ ｂｒｅａｓｔ ｍｉｌｋ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｍｏｔｈｅｒｓ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｆｒｏｍ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｕｓｅ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ ｍｏｄｅｌ．”，Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，７２１０８５（２０１２）．）。
消化器症状を呈する食物アレルギーモデルマウスは、山本らの方法に従って作製した（Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ，他４名，“Ｏｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｆｏｏｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｖｉａ ｂｒｅａｓｔ ｍｉｌｋ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｍｏｔｈｅｒｓ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ ｆｒｏｍ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｕｓｅ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ ｍｏｄｅｌ．”，Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，７２１０８５（２０１２）．）。
【0031】
（実験例１－１）
オボアルブミン（ＯＶＡ）誘発消化管アレルギーモデルマウス（以下、「ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウス」と称す）に対するカンナビジオール（ＣＢＤ）の効果試験
図１は、実験例１－１の投与スケジュールを示す図である。マウスを４群にわけ、コントロール（ｃｏｎｔｒｏｌ）群（以下、「ｃｏｎｔｒｏｌ群」と称す）、オボアルブミン（ＯＶＡ）群（以下、「ＯＶＡ群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）低用量群（以下、「ＣＢＤ低用量群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）高用量群（以下、「ＣＢＤ高用量群」と称す）とした。ＯＶＡ群、ＣＢＤ低用量群およびＣＢＤ高用量群には、アジュバンドとして水酸化アルミニウムゲル（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を含むＯＶＡ（５０μｇ／ｍＬ）・ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）溶液０．２ｍＬを腹腔内投与した。２週間後に同様の処置を行い、合計２回の感作を行った。最終感作から２週間後、ＯＶＡ群、ＣＢＤ低用量群およびＣＢＤ高用量群には、ＯＶＡ（２００ｍｇ／ｍＬ）水溶液０．２５ｍＬを２日に１回、計４回経口投与した。ｃｏｎｔｒｏｌ群には感作期間中はＰＢＳ、惹起期間中は精製水を投与した。また、ｃｏｎｔｒｏｌ群およびＯＶＡ群には普通試料を、ＣＢＤ低用量群にはＣＢＤを０．０１％含む試料（２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、ＣＢＤ高用量群にはＣＢＤを０．０２％含む試料（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ感作初日から実験最終日まで混餌投与した。実験期間中の糞中水分量、実験最終日の体重を測定して、ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウスに対するＣＢＤの効果を評価した。
オボアルブミン（ＯＶＡ）誘発消化管アレルギーモデルマウス（以下、「ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウス」と称す）に対するカンナビジオール（ＣＢＤ）の効果試験
図１は、実験例１－１の投与スケジュールを示す図である。マウスを４群にわけ、コントロール（ｃｏｎｔｒｏｌ）群（以下、「ｃｏｎｔｒｏｌ群」と称す）、オボアルブミン（ＯＶＡ）群（以下、「ＯＶＡ群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）低用量群（以下、「ＣＢＤ低用量群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）高用量群（以下、「ＣＢＤ高用量群」と称す）とした。ＯＶＡ群、ＣＢＤ低用量群およびＣＢＤ高用量群には、アジュバンドとして水酸化アルミニウムゲル（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を含むＯＶＡ（５０μｇ／ｍＬ）・ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）溶液０．２ｍＬを腹腔内投与した。２週間後に同様の処置を行い、合計２回の感作を行った。最終感作から２週間後、ＯＶＡ群、ＣＢＤ低用量群およびＣＢＤ高用量群には、ＯＶＡ（２００ｍｇ／ｍＬ）水溶液０．２５ｍＬを２日に１回、計４回経口投与した。ｃｏｎｔｒｏｌ群には感作期間中はＰＢＳ、惹起期間中は精製水を投与した。また、ｃｏｎｔｒｏｌ群およびＯＶＡ群には普通試料を、ＣＢＤ低用量群にはＣＢＤを０．０１％含む試料（２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、ＣＢＤ高用量群にはＣＢＤを０．０２％含む試料（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ感作初日から実験最終日まで混餌投与した。実験期間中の糞中水分量、実験最終日の体重を測定して、ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウスに対するＣＢＤの効果を評価した。
【0032】
（糞中水分量の算出）
ＯＶＡ経口投与１時間後までに排泄された糞便を回収し、東京理化器械株式会社製の凍結乾燥機ＦＤＭ－１０００（商品名）で２４時間乾燥させた後、以下の計算式、
糞中水分量（質量％）＝（乾燥前の糞便質量 － 乾燥後の糞便質量）／乾燥後の糞便質量×１００
に基づいて、糞中水分量（質量％）を算出した。
ＯＶＡ経口投与１時間後までに排泄された糞便を回収し、東京理化器械株式会社製の凍結乾燥機ＦＤＭ－１０００（商品名）で２４時間乾燥させた後、以下の計算式、
糞中水分量（質量％）＝（乾燥前の糞便質量 － 乾燥後の糞便質量）／乾燥後の糞便質量×１００
に基づいて、糞中水分量（質量％）を算出した。
【0033】
（統計学的有意差検定）
実験値はｍｅａｎ±ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ（Ｓ．Ｅ．）として表示した。統計学的有意差検定にはターキーズテスト（Ｔｕｋｅｙ’ｓ ｔｅｓｔ）を用い、危険率５％未満（ｐ＜０．０５）の場合に有意な差があるとした。
実験値はｍｅａｎ±ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ（Ｓ．Ｅ．）として表示した。統計学的有意差検定にはターキーズテスト（Ｔｕｋｅｙ’ｓ ｔｅｓｔ）を用い、危険率５％未満（ｐ＜０．０５）の場合に有意な差があるとした。
【0034】
ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウスにＣＢＤ（２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙまたは５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を感作初日から混餌投与し、下痢の程度を評価した。図２は、実験例１－１の糞中水分量の結果を示すグラフであり、図３は、実験例１－１の体重の結果を示すグラフである。ＯＶＡ群の糞中水分量は惹起相４日目から増加し始め、６日目においてはｃｏｎｔｒｏｌ群と比べて約２倍有意に高く、下痢の発症が認められた。ＣＢＤを低用量（２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）処置した際の糞中水分量は、ＯＶＡ群と同程度であり、下痢の改善は認められなかった。一方、ＣＢＤを高用量（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）処置した際の糞中水分量は、ＯＶＡ群と比べて有意に低く、下痢が改善され、ＯＶＡ誘発消化管アレルギー症状を抑制できた。なお、ＯＶＡおよびＣＢＤを投与しても、体重に有意な差がみられなかった。
【0035】
（実験例１－２）
オボアルブミン（ＯＶＡ）誘発消化管アレルギーモデルマウスに対するカンナビジオール（ＣＢＤ）の投与期間の影響試験
図４は、実験例１－２の投与スケジュールを示す図である。マウスを４群にわけ、コントロール（ｃｏｎｔｒｏｌ）群（以下、「ｃｏｎｔｒｏｌ群」と称す）、オボアルブミン（ＯＶＡ）群（以下、「ＯＶＡ群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）全期間群（以下、「ＣＢＤ全期間群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）惹起相群（以下、「ＣＢＤ惹起相群」と称す）とした。ＯＶＡ群、ＣＢＤ全期間群およびＣＢＤ惹起相群には、アジュバンドとして水酸化アルミニウムゲル（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を含むＯＶＡ（５０μｇ／ｍＬ）・ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）溶液０．２ｍＬを腹腔内投与した。２週間後に同様の処置を行い、合計２回の感作を行った、最終感作から２週間後、ＯＶＡ群、ＣＢＤ全期間群およびＣＢＤ惹起相群には、ＯＶＡ（２００ｍｇ／ｍＬ）水溶液０．２５ｍＬを２日に１回、計４回経口投与した。ｃｏｎｔｒｏｌ群には感作期間中はＰＢＳ、惹起期間中は精製水を投与した。また、ｃｏｎｔｒｏｌ群およびＯＶＡ群には普通試料を与え、ＣＢＤ全期間群には感作初日から、ＣＢＤ惹起相群には感作終了（ＯＶＡ経口投与）時点から、ＣＢＤを０．０２％含む試料（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ混餌投与した。ＯＶＡ最終投与から１時間後までの糞便を回収し、糞中水分量を算出して、ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウスに対するＣＢＤの投与期間の影響を評価した。
オボアルブミン（ＯＶＡ）誘発消化管アレルギーモデルマウスに対するカンナビジオール（ＣＢＤ）の投与期間の影響試験
図４は、実験例１－２の投与スケジュールを示す図である。マウスを４群にわけ、コントロール（ｃｏｎｔｒｏｌ）群（以下、「ｃｏｎｔｒｏｌ群」と称す）、オボアルブミン（ＯＶＡ）群（以下、「ＯＶＡ群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）全期間群（以下、「ＣＢＤ全期間群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）惹起相群（以下、「ＣＢＤ惹起相群」と称す）とした。ＯＶＡ群、ＣＢＤ全期間群およびＣＢＤ惹起相群には、アジュバンドとして水酸化アルミニウムゲル（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を含むＯＶＡ（５０μｇ／ｍＬ）・ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）溶液０．２ｍＬを腹腔内投与した。２週間後に同様の処置を行い、合計２回の感作を行った、最終感作から２週間後、ＯＶＡ群、ＣＢＤ全期間群およびＣＢＤ惹起相群には、ＯＶＡ（２００ｍｇ／ｍＬ）水溶液０．２５ｍＬを２日に１回、計４回経口投与した。ｃｏｎｔｒｏｌ群には感作期間中はＰＢＳ、惹起期間中は精製水を投与した。また、ｃｏｎｔｒｏｌ群およびＯＶＡ群には普通試料を与え、ＣＢＤ全期間群には感作初日から、ＣＢＤ惹起相群には感作終了（ＯＶＡ経口投与）時点から、ＣＢＤを０．０２％含む試料（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ混餌投与した。ＯＶＡ最終投与から１時間後までの糞便を回収し、糞中水分量を算出して、ＯＶＡ誘発消化管アレルギーモデルマウスに対するＣＢＤの投与期間の影響を評価した。
【0036】
図５は、実験例１－２の投与期間の影響の結果を示すグラフである。ＣＢＤ（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を感作初日から投与したときの糞中水分量はＯＶＡ群と比較して有意に低く、下痢の発症が抑制された。これに対して、ＣＢＤ（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を感作終了時点から投与しても下痢の発症の抑制効果は認められなかった。このことから、ＣＢＤは、感作初日から継続的に投与することで、オボアルブミン（ＯＶＡ）誘発消化管アレルギー症状を抑制することができた。
【0037】
本発明における、マウスへのＣＢＤ投与量（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）は、体重６０ｋｇのヒト等価用量に換算すると、約４ｍｇ／ｋｇである。これまでに、健康なヒトに対してＣＢＤを６００ｍｇ投与しても血圧や心拍数に影響を及ぼさないこと、依存性や乱用が認められなかったことが報告されている（Ｍａｒｔｉｎ－Ｓａｎｔｏｓ Ｒ，他１０名，“Ａｃｕｔｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｓｉｎｇｌｅ，ｏｒａｌ ｄｏｓｅ ｏｆ ｄ９－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃａｎｎａｂｉｎｏｌ（ＴＨＣ） ａｎｄ ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ（ＣＢＤ） ａｄｍｉｎｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．”，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，１８，４９６６－４９７９‘２０１２）．）。
【0038】
（実験例２）
（試薬）
カンナビジオール（ＣＢＤ）は、ＰｈａｒｍａＨｅｍｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（リュブリャナ,スロベニア）から購入したＣＢＤ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ（Ｂａｔｃｈ Ｎｏ．ＣＢ０９９０２０１７１Ａ）を使用した。なお、本パウダー中には、カンナビジオールは、９９．３４質量％含まれている。また、ＴＲＩ Ｒｅａｇｅｎｔ、オボアルブミン（ＯＶＡ）およびアルミニウムゲルは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス，ミズリー州，米国）から購入して使用した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｕｔｙ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔは、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（フォスターシティー ，カルフォルニア州，米国）から購入したものを使用した。ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（登録商標） Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹＳＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘは、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｒｉｅｓ（ハーキュリーズ，カルフォルニア州，米国）から購入したものを使用した。各種プライマーは、北海道システム・サイエンス株式会社から購入したものを使用した。ＦＳＣ２２ Ｆｒｏｚｅｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａは、Ｌｅｓｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ヌスロッホ，ドイツ）から購入したものを使用した。Ｒａｔ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４ ａｎｔｉｂｏｄｙはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｉｎｃ．（サンディエイゴ，カルフォルニア州，米国）から購入したものを使用した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ４８８ ｄｏｎｋｅｙ ａｎｔｉ－ｒａｔ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．（ウォルサム，マサチューセッツ州，米国）から購入したものを使用した。ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ ｍｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ４’，６－ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２－ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ（ＤＡＰＩ）は、ＶＥＣＴＯＲ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．（ニューアーク，ニュージャージー州，米国）から購入したものを使用した。その他の試薬は、市販品のうち最も純度の高いものを使用した。
（試薬）
カンナビジオール（ＣＢＤ）は、ＰｈａｒｍａＨｅｍｐ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（リュブリャナ,スロベニア）から購入したＣＢＤ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ（Ｂａｔｃｈ Ｎｏ．ＣＢ０９９０２０１７１Ａ）を使用した。なお、本パウダー中には、カンナビジオールは、９９．３４質量％含まれている。また、ＴＲＩ Ｒｅａｇｅｎｔ、オボアルブミン（ＯＶＡ）およびアルミニウムゲルは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス，ミズリー州，米国）から購入して使用した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｕｔｙ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔは、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（フォスターシティー ，カルフォルニア州，米国）から購入したものを使用した。ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（登録商標） Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹＳＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘは、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｒｉｅｓ（ハーキュリーズ，カルフォルニア州，米国）から購入したものを使用した。各種プライマーは、北海道システム・サイエンス株式会社から購入したものを使用した。ＦＳＣ２２ Ｆｒｏｚｅｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａは、Ｌｅｓｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ヌスロッホ，ドイツ）から購入したものを使用した。Ｒａｔ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４ ａｎｔｉｂｏｄｙはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｉｎｃ．（サンディエイゴ，カルフォルニア州，米国）から購入したものを使用した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ４８８ ｄｏｎｋｅｙ ａｎｔｉ－ｒａｔ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．（ウォルサム，マサチューセッツ州，米国）から購入したものを使用した。ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ ｍｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ４’，６－ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２－ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ（ＤＡＰＩ）は、ＶＥＣＴＯＲ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．（ニューアーク，ニュージャージー州，米国）から購入したものを使用した。その他の試薬は、市販品のうち最も純度の高いものを使用した。
【0039】
（使用動物）
６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃ系マウスは、日本エスエルシー株式会社（静岡県浜松市）から購入した。マウスは、温度２４±１℃、湿度５５±５％の施設において飼育し、明暗条件は午前８時点灯、２０時消灯の条件下で飼育した。本実験を行うにあたり、科学的にはもとより、動物福祉の観点からも適切な動物実験の実施を促すことを目的として制定された星薬科大学動物実験指針に従い、星薬科大学の動物実験委員会の承認を得たうえで、動物に対する倫理面を十分に考慮した。
６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃ系マウスは、日本エスエルシー株式会社（静岡県浜松市）から購入した。マウスは、温度２４±１℃、湿度５５±５％の施設において飼育し、明暗条件は午前８時点灯、２０時消灯の条件下で飼育した。本実験を行うにあたり、科学的にはもとより、動物福祉の観点からも適切な動物実験の実施を促すことを目的として制定された星薬科大学動物実験指針に従い、星薬科大学の動物実験委員会の承認を得たうえで、動物に対する倫理面を十分に考慮した。
【0040】
（マウスの処置）
マウスを３群にわけ、コントロール（ｃｏｎｔｒｏｌ）群（以下、「ｃｏｎｔｒｏｌ群」と称す）、オボアルブミン（ＯＶＡ）群（以下、「ＯＶＡ群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）群（以下、「ＣＢＤ併用群」と称す）とした。ＯＶＡ群、ＣＢＤ併用群には、アジュバンドとして水酸化アルミニウムゲル（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を含むＯＶＡ（５０μｇ／ｍＬ）・ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）溶液０．２ｍＬを腹腔内投与した。２週間後に同様の処置を行い、合計２回の感作を行った。最終感作から２週間後、ＯＶＡ群、ＣＢＤ併用群には、ＯＶＡ（２００ｍｇ／ｍＬ）水溶液０．２５ｍＬを２日に１回、計４回経口投与した。ｃｏｎｔｒｏｌ群には感作期間中はＰＢＳ、惹起期間中は精製水を投与した。また、ｃｏｎｔｒｏｌ群およびＯＶＡ群には普通試料を、ＣＢＤ併用群にはＣＢＤを０．０２％含む試料（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ感作初日から実験最終日まで混餌投与した。ＯＶＡの最終経口投与から１時間後に、イソフルラン麻酔下で小腸および大腸の中央部（空腸および結腸に相当する）５ｍｍ片を採取し、液体窒素で瞬間凍結した。また、血液を採取し、３，０００×ｇ、４℃、１５分間遠心分離した後、上清を血漿サンプルとして保存した。
マウスを３群にわけ、コントロール（ｃｏｎｔｒｏｌ）群（以下、「ｃｏｎｔｒｏｌ群」と称す）、オボアルブミン（ＯＶＡ）群（以下、「ＯＶＡ群」と称す）、ＯＶＡ＋カンナビジオール（ＣＢＤ）群（以下、「ＣＢＤ併用群」と称す）とした。ＯＶＡ群、ＣＢＤ併用群には、アジュバンドとして水酸化アルミニウムゲル（最終濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を含むＯＶＡ（５０μｇ／ｍＬ）・ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）溶液０．２ｍＬを腹腔内投与した。２週間後に同様の処置を行い、合計２回の感作を行った。最終感作から２週間後、ＯＶＡ群、ＣＢＤ併用群には、ＯＶＡ（２００ｍｇ／ｍＬ）水溶液０．２５ｍＬを２日に１回、計４回経口投与した。ｃｏｎｔｒｏｌ群には感作期間中はＰＢＳ、惹起期間中は精製水を投与した。また、ｃｏｎｔｒｏｌ群およびＯＶＡ群には普通試料を、ＣＢＤ併用群にはＣＢＤを０．０２％含む試料（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ感作初日から実験最終日まで混餌投与した。ＯＶＡの最終経口投与から１時間後に、イソフルラン麻酔下で小腸および大腸の中央部（空腸および結腸に相当する）５ｍｍ片を採取し、液体窒素で瞬間凍結した。また、血液を採取し、３，０００×ｇ、４℃、１５分間遠心分離した後、上清を血漿サンプルとして保存した。
【0041】
（マストセルプロテアーゼ－１（Ｍｃｐｔ－１）の濃度の測定）
血中Ｍｃｐｔ－１の濃度は、ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ－ｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。具体的には、マウスＭｃｐｔ－１（ｍＭｃｐｔ－１） Ｕｎｏｃｏａｔｅｄ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）のプロトコルに従い、９６ウェルプレートをｃａｐｔｕｒｅ ａｎｔｉｂｏｄｙでコーティングした。マウス血漿サンプルをプレートに添加し、ｂｉｏｔｉｎ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ Ｍｃｐｔ－１ａｎｔｉｂｏｄｙ とインキュベートした後、ａｖｉｄｉｎ－ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）と反応させ、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍの吸光度を測定した。
血中Ｍｃｐｔ－１の濃度は、ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ－ｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。具体的には、マウスＭｃｐｔ－１（ｍＭｃｐｔ－１） Ｕｎｏｃｏａｔｅｄ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）のプロトコルに従い、９６ウェルプレートをｃａｐｔｕｒｅ ａｎｔｉｂｏｄｙでコーティングした。マウス血漿サンプルをプレートに添加し、ｂｉｏｔｉｎ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ Ｍｃｐｔ－１ａｎｔｉｂｏｄｙ とインキュベートした後、ａｖｉｄｉｎ－ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）と反応させ、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【0042】
（ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度の測定）
血中ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度は、ＥＬＳＩＡによって測定した。具体的には、ＬＥＧＥＮＤ ＭＡＸ（登録商標） Ｍｏｕｓｅ ＯＶＡ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｉｎｃ．）のプロトコルに従い、マウス血漿サンプルを９６ウェルプレートに添加し、ｍｏｕｓｅ ＯＶＡ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙとインキュベート後、ａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰと反応させ、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍの吸光度を測定した。
血中ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度は、ＥＬＳＩＡによって測定した。具体的には、ＬＥＧＥＮＤ ＭＡＸ（登録商標） Ｍｏｕｓｅ ＯＶＡ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｉｎｃ．）のプロトコルに従い、マウス血漿サンプルを９６ウェルプレートに添加し、ｍｏｕｓｅ ＯＶＡ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙとインキュベート後、ａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰと反応させ、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【0043】
（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｌｉｇａｎｄ（ＣＣＬ）２濃度の測定）
血中ＣＣＬ２濃度は、ＥＬＩＳＡによって測定した。具体的には、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｍｏｕｓｅ ＣＣＬ２／ＪＥ／ＭＣＰ－１ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．， ミネアポリス，ミネソタ州，米国）のプロトコルに従い、マウス血漿サンプルを９６ウェルプレートに添加し、ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ ｍｏｕｓｅ ＭＣＰ－１ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ ＨＲＰと反応させ、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍの吸光度を測定した。
血中ＣＣＬ２濃度は、ＥＬＩＳＡによって測定した。具体的には、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｍｏｕｓｅ ＣＣＬ２／ＪＥ／ＭＣＰ－１ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．， ミネアポリス，ミネソタ州，米国）のプロトコルに従い、マウス血漿サンプルを９６ウェルプレートに添加し、ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ ｍｏｕｓｅ ＭＣＰ－１ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ ＨＲＰと反応させ、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【0044】
（小腸および大腸からのトータルＲＮＡ精製）
小腸または大腸約２０ｍｇからＴＲＩ Ｒｅａｇｅｎｔを用いてトータルＲＮＡを抽出した。得られた溶液をｎａｎｏｄｒｏｐ－ｌｉｅｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）により２６０ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度を測定し、純度の確認およびＲＮＡ濃度（ｎｇ／μＬ）を算出した。
小腸または大腸約２０ｍｇからＴＲＩ Ｒｅａｇｅｎｔを用いてトータルＲＮＡを抽出した。得られた溶液をｎａｎｏｄｒｏｐ－ｌｉｅｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）により２６０ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度を測定し、純度の確認およびＲＮＡ濃度（ｎｇ／μＬ）を算出した。
【0045】
（Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ）
ＲＮＡ １μｇからｈｉｇｈ ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔを用いてｃＤＮＡを合成した。下記表１に示す各種プライマーを作成し、Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲを行い、各遺伝子の発現を検出した。すなわち、ＰＣＲプレートの各ウェルへＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（登録商標） Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ５μＬ、目的遺伝子のｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ （５ｐｍｏｌ／μＬ）０．６μＬ、ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ （５ｐｍｏｌ／μＬ）０．６μＬ、ｃＤＮＡ溶液２μＬ、ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ ２．８μＬを加えた。温度条件はｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅとして７２℃で３０秒とした。増幅過程の蛍光強度をＣＦＸ Ｃｏｎｎｅｃｔ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によりモニタリングした。ｍＲＮＡ発現量は１８ＳｒＲＮＡを用いてノーマライズした。なお、表１中、ＩＬは、インターロイキン、ＳＯＣＳは（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を示す。
ＲＮＡ １μｇからｈｉｇｈ ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔを用いてｃＤＮＡを合成した。下記表１に示す各種プライマーを作成し、Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲを行い、各遺伝子の発現を検出した。すなわち、ＰＣＲプレートの各ウェルへＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（登録商標） Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ５μＬ、目的遺伝子のｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ （５ｐｍｏｌ／μＬ）０．６μＬ、ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ （５ｐｍｏｌ／μＬ）０．６μＬ、ｃＤＮＡ溶液２μＬ、ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ ２．８μＬを加えた。温度条件はｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅとして７２℃で３０秒とした。増幅過程の蛍光強度をＣＦＸ Ｃｏｎｎｅｃｔ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によりモニタリングした。ｍＲＮＡ発現量は１８ＳｒＲＮＡを用いてノーマライズした。なお、表１中、ＩＬは、インターロイキン、ＳＯＣＳは（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を示す。
【0046】
【表1】
【0047】
（蛍光免疫組織化学染色）
ＯＶＡ最終投与１時間後の大腸の中央部（結腸に相当する）１０ｍｍ片を採取し、４質量％パラホルムアルデヒド－ＰＢＳ溶液に浸漬させ、組織を固定した。ＦＳＣ２２Ｆｒｏｚｅｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａを用いて組織を包埋し、１０μｍの厚さの切片をスライドガラス上に作製した。スライドガラスは、ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（０．００１質量％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、０．０３質量％ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ｉｎ ＰＢＳ）で処理した後、ｒａｔ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４ ａｎｔｉｂｏｄｙ、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ４８８ ｄｏｎｋｅｙ ａｎｔｉ－ｒａｔ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）と反応させた。ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ ｍｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ＤＡＰＩで封入した後、顕鏡した。
ＯＶＡ最終投与１時間後の大腸の中央部（結腸に相当する）１０ｍｍ片を採取し、４質量％パラホルムアルデヒド－ＰＢＳ溶液に浸漬させ、組織を固定した。ＦＳＣ２２Ｆｒｏｚｅｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａを用いて組織を包埋し、１０μｍの厚さの切片をスライドガラス上に作製した。スライドガラスは、ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（０．００１質量％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、０．０３質量％ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ｉｎ ＰＢＳ）で処理した後、ｒａｔ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４ ａｎｔｉｂｏｄｙ、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ４８８ ｄｏｎｋｅｙ ａｎｔｉ－ｒａｔ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）と反応させた。ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ ｍｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ＤＡＰＩで封入した後、顕鏡した。
【0048】
（統計学的有意差検定）
実験値はｍｅａｎ±ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ（Ｓ．Ｅ．）として表示した。統計学的有意差検定にはターキーズテスト（Ｔｕｋｅｙ’ｓ ｔｅｓｔ）を用い、危険率５％未満（ｐ＜０．０５）の場合に有意な差があるとした。
実験値はｍｅａｎ±ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ（Ｓ．Ｅ．）として表示した。統計学的有意差検定にはターキーズテスト（Ｔｕｋｅｙ’ｓ ｔｅｓｔ）を用い、危険率５％未満（ｐ＜０．０５）の場合に有意な差があるとした。
【0049】
（実験例２－１）
（Ｍｃｐｔ－１濃度およびＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度に及ぼすＣＢＤの影響）
図６は、実験例２－１のＭｃｐｔ－１の濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の結果を示すグラフであり、図７は、実験例２－１のＩｇＥ抗体の濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の結果を示すグラフである。図６から、腸粘膜マスト細胞から産生されるセリンプロテアーゼ（Ｍｃｐｔ）－１の血中濃度は、ＯＶＡ群は、ＯＶＡの投与により、ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して有意に増加した。これに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、ＯＶＡによるＭｃｐｔ－１の濃度が低くなり、ＯＶＡによるＭｃｐｔ－１の産生を抑制した。また、このときのＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体の血中濃度は、図７に示すように、ＯＶＡ群とＣＢＤ併用群との間に有意な差は認められなかった。このことから、ＣＢＤは、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体の産生量に影響を及ぼすことなく、マスト細胞の活性化を抑制した。
（Ｍｃｐｔ－１濃度およびＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度に及ぼすＣＢＤの影響）
図６は、実験例２－１のＭｃｐｔ－１の濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の結果を示すグラフであり、図７は、実験例２－１のＩｇＥ抗体の濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の結果を示すグラフである。図６から、腸粘膜マスト細胞から産生されるセリンプロテアーゼ（Ｍｃｐｔ）－１の血中濃度は、ＯＶＡ群は、ＯＶＡの投与により、ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して有意に増加した。これに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、ＯＶＡによるＭｃｐｔ－１の濃度が低くなり、ＯＶＡによるＭｃｐｔ－１の産生を抑制した。また、このときのＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体の血中濃度は、図７に示すように、ＯＶＡ群とＣＢＤ併用群との間に有意な差は認められなかった。このことから、ＣＢＤは、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体の産生量に影響を及ぼすことなく、マスト細胞の活性化を抑制した。
【0050】
（実験例２－２）
（小腸および大腸におけるＩＬ－４の発現量に対するＣＢＤの効果）
図８は、実験例２－２の小腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフであり、図９は、実験例２－２の大腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフである。小腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約３０倍増加していた。また、大腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約１５０倍増加していた。これに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、小腸および大腸のいずれにおいても、ＯＶＡによるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）が、有意に抑制された。このことから、ＣＢＤは、小腸および大腸において、ＯＶＡによるＩＬ－４の発現増加を抑制した。
（小腸および大腸におけるＩＬ－４の発現量に対するＣＢＤの効果）
図８は、実験例２－２の小腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフであり、図９は、実験例２－２の大腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフである。小腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約３０倍増加していた。また、大腸におけるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約１５０倍増加していた。これに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、小腸および大腸のいずれにおいても、ＯＶＡによるＩＬ－４のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）が、有意に抑制された。このことから、ＣＢＤは、小腸および大腸において、ＯＶＡによるＩＬ－４の発現増加を抑制した。
【0051】
（実験例２－３）
（小腸および大腸におけるＴｈ２サイトカインの産生能に対するＣＢＤの効果）
図１０は、実験例２－３の小腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフであり、図１１は、実験例２－３の大腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフである。小腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約４．５倍増加していた。また、大腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約１０倍増加していた。これに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、小腸および大腸のいずれにおいても、ＯＶＡによるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）が、有意に抑制された。また、図１２は、実験例２－３の大腸におけるＣＣＬ２血中濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の結果を示すグラフである。Ｔｈ２細胞の分化調節に関わるＣＣＬ２の血中濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）は、ＯＶＡ群では顕著な増加が認められたのに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、この増加が抑制された。Ｔｈ２細胞において、ＩＬ－４の産生能と相関するＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量およびＴｈ２細胞の分化調節に関わるＣＣＬ２の血中濃度の結果から、ＣＢＤは、小腸および大腸において、Ｔｈ２細胞の活性化を抑制した。
（小腸および大腸におけるＴｈ２サイトカインの産生能に対するＣＢＤの効果）
図１０は、実験例２－３の小腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフであり、図１１は、実験例２－３の大腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の結果を示すグラフである。小腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約４．５倍増加していた。また、大腸におけるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を調べたところ、ＯＶＡ群ではｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約１０倍増加していた。これに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、小腸および大腸のいずれにおいても、ＯＶＡによるＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量（Ｒｅｌａｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）が、有意に抑制された。また、図１２は、実験例２－３の大腸におけるＣＣＬ２血中濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の結果を示すグラフである。Ｔｈ２細胞の分化調節に関わるＣＣＬ２の血中濃度（Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）は、ＯＶＡ群では顕著な増加が認められたのに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群は、この増加が抑制された。Ｔｈ２細胞において、ＩＬ－４の産生能と相関するＳＯＣＳ－３のｍＲＮＡの発現量およびＴｈ２細胞の分化調節に関わるＣＣＬ２の血中濃度の結果から、ＣＢＤは、小腸および大腸において、Ｔｈ２細胞の活性化を抑制した。
【0052】
（実験例２－４）
（大腸におけるＣＤ４陽性細胞の浸潤に対するＣＢＤの効果）
図１３は、実験例２－４の大腸におけるＣＤ４陽性細胞の浸潤に対するＣＢＤの効果を示すグラフであり、Ｔｈ２細胞の膜表面に認められるＣＤ４抗原を染色することにより、大腸粘膜におけるＴｈ２細胞数を示したものである。ＯＶＡ群ではＣＤ４陽性細胞が多数認められたのに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群では、ＣＤ４陽性細胞がｃｏｎｔｒｏｌ群と同程度であった。このことから、ＣＢＤは、大腸粘膜へのＴｈ２細胞の浸潤を抑制した。
（大腸におけるＣＤ４陽性細胞の浸潤に対するＣＢＤの効果）
図１３は、実験例２－４の大腸におけるＣＤ４陽性細胞の浸潤に対するＣＢＤの効果を示すグラフであり、Ｔｈ２細胞の膜表面に認められるＣＤ４抗原を染色することにより、大腸粘膜におけるＴｈ２細胞数を示したものである。ＯＶＡ群ではＣＤ４陽性細胞が多数認められたのに対して、ＣＢＤを併用したＣＢＤ併用群では、ＣＤ４陽性細胞がｃｏｎｔｒｏｌ群と同程度であった。このことから、ＣＢＤは、大腸粘膜へのＴｈ２細胞の浸潤を抑制した。
【0053】
（実施例１、比較例１）
実施例１の鶏卵アレルギー抑制組成物および比較例１の組成物を作成した。
実施例１の鶏卵アレルギー抑制組成物および比較例１の組成物を作成した。
【0054】
実施例１の鶏卵アレルギー抑制組成物は、比較例１の組成物よりＯＶＡ誘発消化管アレルギー症状抑制効果が良好であった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
