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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2021-12-07
(45)【発行日】2022-02-15
(54)【発明の名称】植物の耐病性の向上方法
(51)【国際特許分類】
A01H 3/00 20060101AFI20220207BHJP
A01H 5/00 20180101ALI20220207BHJP
A01H 5/04 20180101ALN20220207BHJP
A01H 5/06 20180101ALN20220207BHJP
A01H 5/10 20180101ALN20220207BHJP
【ＦＩ】
A01H3/00
A01H5/00 Z
A01H5/04
A01H5/06
A01H5/10
【請求項の数】
4
(21)【出願番号】P 2021144722
(22)【出願日】2021-09-06
【審査請求日】2021-10-06
(31)【優先権主張番号】P 2021102104
(32)【優先日】2021-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】517411357
【氏名又は名称】田中 節三
(73)【特許権者】
【識別番号】520358380
【氏名又は名称】凍結解凍覚醒技術株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】521270937
【氏名又は名称】光畑 直喜
(74)【代理人】
【識別番号】100137338
【弁理士】
【氏名又は名称】辻田 朋子
(74)【代理人】
【識別番号】100196313
【弁理士】
【氏名又は名称】村松 大輔
(72)【発明者】
【氏名】田中 節三
(72)【発明者】
【氏名】光畑 直喜
【審査官】伊達 利奈
(56)【参考文献】
【文献】特開２０２０－１６２５９８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１８－１８３１１２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特許第６８３０５９１（ＪＰ，Ｂ１）
【文献】特許第６８６４３０４（ＪＰ，Ｂ１）
【文献】植物の生長調節, 2019, Vol.54, No.1, pp.9-16
【文献】Journal of Biotechnology, 2016, Vol.228,pp.3-7
【文献】Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2020, Vol.68, pp.11026-11037
【文献】Physiologia Plantarum, 2003,Vol.117, pp.195-205
【文献】Ｙｍｅｄｉａ，“食卓からバナナが消える？ 世界的なバナナ危機に挑む、熱帯産作物国産化を目指した驚きのバイオ技術”，インターネット，https://www.yanmar.com/jp/about/ymedia/article/tropicalfruits.html
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ０１Ｈ ３／００
Ｃ１２Ｎ １５／００
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物の耐病性を向上する方法であって、前記凍結工程における凍結時最低温度は－５０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
前記耐病性が、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性であり、
以下の（Ａ）又は（Ｂ）に従って行われ、
前記凍結工程に供する前記植物組織は植物の種子、根及び芽から選ばれることを特徴とする、植物の耐病性の向上方法。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
【請求項2】
植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物における耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法であって、前記凍結工程における凍結時最低温度は－５０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
前記対象植物における耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動が、ＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）遺伝子又はそのオーソログの発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現量変動であり、
以下の（Ａ´）又は（Ｂ´）に従って行われ、
前記凍結工程に供する前記植物組織は植物の種子、根及び芽から選ばれることを特徴とする、植物の耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法。
（Ａ´）耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する。
（Ｂ´）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する。
【請求項3】
請求項１又は２に記載の方法を実施する工程を含む、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性が向上した植物を製造する方法。
【請求項4】
凍結工程を経た植物の種子、根及び芽から選ばれる植物組織から水性溶媒により抽出された抽出物を有効成分として含み、前記凍結工程における凍結時最低温度は－５０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
以下の（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の用途に用いられることを特徴とする、植物の耐病性向上及び／又は植物の耐病性に寄与する遺伝子発現量変動誘導用組成物。
（ｉ）べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる耐病性を向上するための用途。
（ｉｉ）ＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）遺伝子又はそのオーソログの発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現量変動の誘導のための用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、遺伝子操作によらずに植物の耐病性を向上する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
人類は古来より品種改良手法により有利な性質を有する植物を作出してきた。従来の品種改良法は一定の特性を固定するために長い年月を要するものであったが、世代促進技術の登場により、固定に要する時間を短縮することが可能となっている。しかし、世代促進技術によっても固定には数年を要するという問題があった。そこで、固定の作業を必要としない葯培養などのバイオテクノロジーが開発されている。
【0003】
また、有利な特性を有する植物を作出する方法として、遺伝子組み換え技術が知られている。遺伝子組み換え技術により、除草剤耐性作物、害虫抵抗性作物、耐病性作物、保存性を増大させた作物が作出されている。
【0004】
一方、ある特定の処理を施すことで突然変異を誘発し、植物の特性を増強する方法が提案されている。例えば、特許文献１には、ガンマ線照射と染色体倍加処理を行なう工程を含む耐寒性を付与する品種改良方法が開示されている。
【0005】
また、遺伝子配列に変更を加えることなく、植物の特性を制御する方法が考案されている。例えば、特許文献２には、植物の栄養成長期において、栽培環境中に起因する塩類ストレス、寡照ストレス、強光ストレス、乾燥ストレス、過湿ストレス、高温ストレス、低温ストレス、栄養ストレス、重金属ストレス、病害ストレス、酸素欠乏ストレス、オゾンストレス、ＣＯ２ストレス、強風ストレスなどのストレス処理をかけることで、植物の次世代における開花時期を制御する方法が開示されている。
【0006】
ところで、日本のほとんどの地域は温帯に属し、北海道や東北地方は亜寒帯（冷帯）に属する。そのため、亜熱帯～熱帯地域で栽培されているような日本の気候での栽培に適していない作物については、輸入に頼っている状況にある。
この問題を解決する画期的な技術として「凍結解凍覚醒法」と呼ばれる技術（特許文献３）及びその改良技術である「酵素液法」と呼ばれる技術（特許文献４及び５）が本発明者によって開発され、これまでに非常に優れた多数の実績をあげている。例えば、凍結解凍覚醒法を適用して国産無農薬バナナが生産されており、岡山県産のものは「もんげーばなな」（登録商標）、「田中節三バナナ」（登録商標）、千葉県産のものは「奇跡のバナナ」（登録商標）という名称で販売されている。また、酵素液法を適用して小麦や米などの穀物が生産されている。
この問題を解決する画期的な技術として「凍結解凍覚醒法」と呼ばれる技術（特許文献３）及びその改良技術である「酵素液法」と呼ばれる技術（特許文献４及び５）が本発明者によって開発され、これまでに非常に優れた多数の実績をあげている。例えば、凍結解凍覚醒法を適用して国産無農薬バナナが生産されており、岡山県産のものは「もんげーばなな」（登録商標）、「田中節三バナナ」（登録商標）、千葉県産のものは「奇跡のバナナ」（登録商標）という名称で販売されている。また、酵素液法を適用して小麦や米などの穀物が生産されている。
【0007】
凍結解凍覚醒法は、凍結して解凍した植物組織を栽培することにより、その植物の特性を増強させる方法である。また、酵素液法は凍結した植物組織から得た抽出液に他の植物組織を接触させることによって、植物の特性を増強させる方法である。すなわち、酵素液法は、凍結解凍覚醒法を経た植物又はその植物組織の抽出液に植物組織を接触（浸漬又は散布）させることで、凍結解凍覚醒法によって増強された植物特性を接触した植物組織に伝搬させる方法といえる。実際に凍結解凍覚醒法と酵素液法で増強することができる植物特性は共通しており、具体的には、成長速度、耐寒性、耐暑性、高地順応特性及び低地順応特性などの環境順応特性、果実や種子の量や大きさ、甘味度、耐病害虫性、耐乾燥性などを増強することができる。また、凍結解凍覚醒法と酵素液法は一定の科、属、種の植物に限定されず、全ての植物に適用可能である。さらに遺伝子発現解析の結果、凍結解凍覚醒法と酵素液法の適用によって変動する遺伝子発現プロファイルは、植物種を問わず、非常に類似していることが確認されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【文献】特開２００６－２５６３２号公報
【文献】特開２０１６－１８２０９４号公報
【文献】特開２０１８－１８３１１２号公報
【文献】特許６８３０５９１号公報
【文献】特許６８６４３０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
農作物の栽培において細菌等を病原体とする感染症は深刻な問題である。
植物の病害として例えばべと病（Ｄａｗｎｙ ｍｉｌｄｅｗ）が知られている。べと病はべと病菌によって起こる病害であり、ツユカビ科の数種の属の糸状菌（かび）によって発生する伝染性（空気および水媒伝染）の病気である。これらの属はそれぞれいくつかの種を含んでいるが、わが国で農作物に被害をもたらす代表的な属はプシュウドペロノスポラ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）、ペロノスポラ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）、プラズモパラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ）、ブレミア（Ｂｒｅｍｉａ）の４属である。
植物の病害として例えばべと病（Ｄａｗｎｙ ｍｉｌｄｅｗ）が知られている。べと病はべと病菌によって起こる病害であり、ツユカビ科の数種の属の糸状菌（かび）によって発生する伝染性（空気および水媒伝染）の病気である。これらの属はそれぞれいくつかの種を含んでいるが、わが国で農作物に被害をもたらす代表的な属はプシュウドペロノスポラ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）、ペロノスポラ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）、プラズモパラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ）、ブレミア（Ｂｒｅｍｉａ）の４属である。
【0010】
野菜類によってべと病の病徴は多少異なるが、一般的には葉に輪郭が不鮮明で退緑色の斑紋を形成し、次第にこれが拡大して多角形で灰白色病斑となり、新生病斑や多湿環境下では病斑裏面には灰白色霜状のかびを生ずる。後にこれは黒色～紫黒色の不整形斑となる。
【0011】
べと病菌の分生子発芽法には２種類があり、すなわち、ウリ科野菜類の分生子発芽は遊走子発芽、他の野菜類の分生子発芽は直接発芽の菌糸発芽である。前者の遊走子は気孔感染、後者の菌糸発芽は気孔と角皮感染である。分生子の発芽適温は概ね１０℃前後、発病適温は（病徴発現温度）１３～２０℃と比較的低い。そのため、盛夏の時期の発生は少ない。宿主に侵入した病原菌は細胞内に吸器を作り養分吸収を行う。不良環境下や病徴の末期には、組織内に耐久器官である卵胞子を形成し、これが第一次伝染の役目を果たす。ホウレンソウべと病では卵胞子が種子伝染としての主要な役目を果たして伝染や発生に関与している。分生子の形成は温度、湿度、光線などの発病環境や宿主の新鮮度などに影響されるが、これらの条件が整うと繰り返し分生子が形成されて伝染、まん延を起こす。
【0012】
べと病に対する農薬としては、シグナムＷＤＧ（ピラクロストロビン・ボスカリド水和剤）、ジマンダイセン水和剤（マンゼブ水和剤）、ストロビーフロアブル（クレソキシムメチル水和剤）、ダコニール１０００（ＴＰＮ水和剤）、ホライズンドライフロアブル（シモキサニル・ファモキサドン水和剤）、ライメイフロアブル（アミスルブロム水和剤）などが知られている。
【0013】
また、農作物の病害としてさび病菌を病原とするさび病（Ｒｕｓｔ）が知られている。さび病菌で起こる病害は、糸状菌（かび）が原因で発生する空気及び水媒伝染性の病害である。野菜類に発生する言葉上でのさび病には白さび病とさび病がある。それらの病原菌である白さび病菌は分類上さび病菌とは異なり、前者は属でＡｌｂｕｇｏ（アルブゴ）属菌であり、後者はＰｕｃｃｉｎｉａ（プクシニア）属菌である。さび病菌は絶対寄生菌で、生きた野菜の細胞に限って生活することができる、つまり人工培養ができない糸状菌である。
【0014】
病斑は紡錘形あるいは楕円形で橙黄色のやや隆起した小形の斑点を生じ、表皮が破れて鐙黄色粉状の夏胞子を飛散する。晩秋には橙黄色病斑に接して黒褐色の斑点（冬胞子層）を形成する。発病が激しい時に葉が汚白色に変色してやがて枯死する。さび病は、春季から秋季まで発生するが、夏季は一時終息する。普通は４、５月および９、１０月頃に発生が多い。被害植物上で冬胞子や夏胞子の形で越年し、翌春夏胞子を飛散して伝染する。春季に多発し、夏季が低温多雨の場合には秋季の発生が助長される。密植栽培で風とおしが悪く、多湿環境下では発病と伝染が盛んに行われる。
【0015】
さび病に対する農薬としては、アミスター２０フロアブル（アゾキシストロビン水和剤）、シグナムＷＤＧ（ピラクロストロビン・ボスカリド水和剤）、ジマンダイセン水和剤（マンゼブ水和剤）、ストロビーフロアブル（クレソキシムメチル水和剤）、トリフミン水和剤（トリフルミゾール水和剤）、ベルクート水和剤（イミノクタジンアルベシル酸塩水和剤）、などがある。
【0016】
植物の病原菌としてシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）が知られている。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）は、グラム陰性で好気性のガンマプロテオ細菌の属であり、シュードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）に属する。その属は、１９１の分類学的に認められた種を含み、そのうちの多くは、植物病原体である。シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）の中でも、シュードモナス・シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）は、繁殖力の強い植物病原体であり、５０種を超える異なる病原型（ｐｖ．）として存在し、それらの多くは、高度の宿主植物特異性を示す。多くの他のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種も植物病原体として作用し得、他のメンバーの中でもとりわけシュードモナス・シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）亜群がある。例えば、シュードモナス・シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）病原型によって起きる商業的に重要な病気としては、石果の細菌性イモチ病、トマトの細菌性斑点病およびエンドウマメの胴枯れ病が挙げられる。また、シュードモナス・シリンガエへの感染により免疫が低下することで多様な植物種にさび病等などの損害を与えることも広く知られている。
【0017】
シュードモナス・シリンガエに対する薬剤としては、例えばアシベンゾラル－Ｓ－メチル（Ａｃｔｉｇａｒｄ／Ｂｉｏｎ、Ｓｙｎｇｅｎｔａ）ならびに抗生物質、例えば硫酸ストレプトマイシンおよびカスガマイシンなどが知られている。
【0018】
その他、菌又は真菌を病原とする植物病害として、いもち病、うどんこ病、から枯病、から黒穂病、こうじ病、ごま葉枯病、さや枯病、しみ腐病、すそ葉枯病、てんぐ巣病、なまぐさ黒穂病、ねむり病、ひょう紋病、もみ枯細菌病、萎黄病、萎凋病、疫病、黄萎病、黄化萎縮病、黄枯病、黄斑病、灰色かび病、灰星病、灰斑病、角斑病、褐条病、褐色雪腐病、褐色輪紋病、褐点病、褐斑病、褐紋病、株枯病、株腐病、乾性黒腐病、乾腐病、眼紋病、菌核病、茎疫病、茎枯病、紅色雪腐病、黒すす病、黒とう病、黒枯病、黒根病、黒根腐病、黒渋病、黒点病、黒斑病、黒腐菌核病、黒変病、黒目粒、黒葉枯病、腰折病、根朽病、根頭がんしゅ病、根腐病、紫斑病、紫紋羽病、小菌核病、小菌核腐敗病、条斑病、赤かび病、赤色菌核病、赤腐病、雪腐小粒菌核病、雪腐大粒菌核病、炭腐病、炭疽病、内穎褐変病、軟腐病、白絹病、白色疫病、白色腐敗病、白紋羽病、白葉枯病、麦角病、斑点病、苗腐病、苗立枯病、腐枯病、腐敗病、紋枯病、葉枯病、葉焼病、葉鞘褐変病、葉腐病、裸黒穂病、落葉病、立枯病、輪紋病などが知られている。これらの病害の予防のために一般的には種々の農薬が使用される。
【0019】
ところで自然界には１４，０００種類を超える植物病原菌が存在すると推定されている。自発的移動手段をもたない植物は自然界において多くの植物病原菌と接触の機会を有するが、この接触が感染に至るケースは少ない。これは、植物が病原菌を認識し独自の免疫反応を誘導することによって病原菌の侵入を防いでいるからである。植物は、植物病原菌が侵入してきたとき、ｐａｔｈｏｇｅｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎｓ（ＰＡＭＰｓ）、またはｍｉｃｒｏｂｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎｓ（ＭＡＭＰｓ）と呼ばれる植物病原菌に広く存在する分子群を認識し、ＰＴＩ（ＰＡＭＰ－ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）と呼ばれる免疫反応を誘導する。
【0020】
一方、植物病原菌側は分泌システムのひとつタイプＩＩＩ分泌装置を介して植物細胞内にエフェクタータンパク質を分泌し、これによってＰＴＩを抑制することが知られている。興味深いことに、このエフェクタータンパク質はその病原菌の宿主植物以外では、ＥＴＩ（ｅｆｆｅｃｔｏｒ－ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）と呼ばれるより強力な免疫反応を誘導する認識物質として機能することもある。すなわち、このエフェクターがＰＴＩを抑制した場合、多くの場合感染が成立するが、エフェクターがＰＴＩを抑制せず、新たにＥＴＩを誘導した場合、感染は成立しない。このようなエフェクターの二面性と植物に存在するＰＴＩとＥＴＩという２つの免疫システムは、植物と病原細菌が共進化してきた結果であると考えられている。
【0021】
これまでに、植物のＰＴＩを誘導することが明らかになっているＰＡＭＰとして、細菌の鞭毛タンパク質フラジェリン、翻訳伸長因子ＥＦ－Ｔｕ、リポ多糖（ＬＰＳ）、ペプチドグリカン、キチンなどが報告されている。マイクロアレイなどを用いたトランスクリプトーム解析によって、これら異なるＰＡＭＰの認識によって共通の遺伝子が発現誘導されることが明らかになっており、植物は異なるＰＡＭＰ認識システムを有するものの、その情報伝達機構と転写因子を介した遺伝子発現制御機構は共通であると考えられている。
【0022】
上述の通り最近の鞭毛タンパク質であるフラジェリンは、ＰＡＭＰとして機能する。各フラジェリン間で配列が保存されているＮ末端領域において認識配列を探索したところ、Ｎ末端領域の２２アミノ酸残基からなるペプチド（ｆｌｇ２２）が免疫反応を誘導することが明らかとなっている。ｆｌｇ２２に対する認識受容体はシロイヌナズナのｆｌｇ２２非感受性変異体ｆｌｓ２（ＦＬＡＧＥＬＬＩＮ－ＳＥＮＳＩＮＧ ２）の解析によって明らかになっている。同定されたｆｌｇ２２の受容体であるＦＬＳ２は、細胞外にロイシンリッチリピート（ＬＲＲ：ｌｅｕｃｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｒｅｐｅａｔ）を、細胞内にセリン／スレオニンキナーゼを有する一回膜貫通型の受容体型キナーゼ（ＲＬＫ）であり、ＬＲＲ ＸＩＩファミリーに属している。細胞外ドメインは２８個のＬＲＲによって構成されており、９番から１５番までのＬＲＲがフラジェリンとの結合に関与することが示されている。
【0023】
上述した通り、細菌や真菌を病原とする病害への対策として農薬の仕様が挙げられるが、環境汚染や人の健康への影響が否めず、その使用は避けるべきである。しかし、農薬を使用せずに、また、遺伝子組み換えなどの方法に依らずに、これら病原菌への耐性を植物に付与する方法は知られていない。
また、遺伝子組み換えや薬剤を使用せずに、植物が本来有する免疫応答反応を強化する方法も知られていない。
また、遺伝子組み換えや薬剤を使用せずに、植物が本来有する免疫応答反応を強化する方法も知られていない。
【0024】
このような問題に鑑み、本発明の解決すべき課題は、遺伝子組み換えや農薬を使用せずに、植物の耐病性を向上させる新規の技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0025】
本発明者らは凍結解凍覚醒法および酵素液法による処理を受けた植物についてトランスクリプトーム解析を実施した。その結果、植物の耐病性向上に寄与する顕著な遺伝子発現変動が観察されることを突き止めた。また、これらの方法によって処理を受けた植物が病害に対する高い耐性を有していることを見出した。本発明はこれらの知見に基づき完成された。
上記課題を解決する本発明は、以下の通りである。
上記課題を解決する本発明は、以下の通りである。
【0026】
［１］ 植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物の耐病性を向上する方法であって、
前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
前記耐病性が、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性であり、
以下の（Ａ）又は（Ｂ）に従って行われることを特徴とする、植物の耐病性の向上方法。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
［２］ 植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物における耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法であって、
前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
前記対象植物における耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動が、ＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）遺伝子又はそのオーソログの発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現量変動であり、
以下の（Ａ´）又は（Ｂ´）に従って行われることを特徴とする、植物の耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法。
（Ａ´）耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する。
（Ｂ´）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する。
［３］ ［１］又は［２］に記載の方法を実施する工程を含む、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性が向上した植物を製造する方法。
［４］ 凍結工程を経た植物組織から水性溶媒により抽出された抽出物を有効成分として含み、
前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
以下の（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の用途に用いられることを特徴とする、植物の耐病性向上及び／又は植物の耐病性に寄与する遺伝子発現量変動誘導用組成物。
（ｉ）べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる耐病性を向上するための用途。
（ｉｉ）ＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子ＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）又はそのオーソログの発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現量変動の誘導のための用途。
前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
前記耐病性が、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性であり、
以下の（Ａ）又は（Ｂ）に従って行われることを特徴とする、植物の耐病性の向上方法。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
［２］ 植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物における耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法であって、
前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
前記対象植物における耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動が、ＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）遺伝子又はそのオーソログの発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現量変動であり、
以下の（Ａ´）又は（Ｂ´）に従って行われることを特徴とする、植物の耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法。
（Ａ´）耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する。
（Ｂ´）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する。
［３］ ［１］又は［２］に記載の方法を実施する工程を含む、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性が向上した植物を製造する方法。
［４］ 凍結工程を経た植物組織から水性溶媒により抽出された抽出物を有効成分として含み、
前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、
以下の（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の用途に用いられることを特徴とする、植物の耐病性向上及び／又は植物の耐病性に寄与する遺伝子発現量変動誘導用組成物。
（ｉ）べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる耐病性を向上するための用途。
（ｉｉ）ＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子又はそのオーソログの発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子ＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）又はそのオーソログの発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現量変動の誘導のための用途。
【発明の効果】
【0027】
本発明によれば、ＲＰＰＬ１遺伝子、ＦＬＳ２遺伝子、ＬＲＫ１０遺伝子の発現上昇、また、ＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の発現抑制といった耐病性に寄与する遺伝子発現変動を誘導し、これによりべと病耐性、さび病耐性、鞭毛を有する細菌への耐性、シュードモナス・シリンガエに対する耐性などを付与し、植物の耐病性を向上させることができる。
【発明を実施するための形態】
【0028】
以下、本発明の実施の形態について詳述する。なお、本発明の範囲は以下に説明する実施形態に限定されないことはいうまでもない。
【0029】
本発明により耐病性を向上することができる植物種に限定はない。例えばパパイア科（Ｃａｒｉｃａｃｅａｅ）、パイナップル科（Ｂｒｏｍｅｌｉａｃｅａｅ）、バショウ科（Ｍｕｓａｃｅａｅ）、ウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）、フトモモ科 Ｍｙｒｔａｃｅａｅ、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）、アオイ科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）、クスノキ科（Ｌａｕｒｅａｃｅａｅ）、トケイソウ科（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａｃｅａｅ）、ムクロジ科（Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ）、フクギ科（Ｃｌｕｓｉａｃｅａｅ）、カキノキ科（Ｅｂｅｎａｃｅａｅ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）、バンレイシ科（Ａｎｎｏｎａｃｅａｅ）、ヤシ科（Ａｒｅｃａｃｅａｅ）、サボテン科（Ｃａｃｔａｃｅａｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）、イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）に属する植物などを例示することができる。
【0030】
より具体的には、パパイア属（Ｃａｒｉｃａ）、アナナス属（Ａｎａｎａｓ）、バショウ属（Ｍｕｓａ）、ラカンカ属 Ｓｉｒａｉｔｉａ、バンジロウ属（Ｐｓｉｄｉｕｍ）、ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）、イチジク属（Ｆｉｃｕｓ）、カカオ属（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ）、コーヒーノキ属（Ｃｏｆｆｅａ）、ニッケイ属（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ）、トケイソウ属（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ）、レイシ属（Ｌｉｔｃｈｉ）、フクギ属（Ｇａｒｃｉｎｉａ）、カキノキ属（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ）、カシロミア属（Ｃａｓｉｍｉｒｏａ）、バンレイシ属（Ａｎｎｏｎａ）、ナツメヤシ属（Ｐｈｏｅｎｉｘ）、ヒモサボテン属（Ｈｙｌｏｃｅｒｅｕｓ）、サクラ属（Ｃｅｒａｓｕｓ）、ダイズ属（Ｇｌｙｃｉｎｅ）、オオムギ属（Ｈｏｒｄｅｕｍ）、コムギ属（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）、トウモロコシ属（Ｚｅａ）、ダイコン属（Ｒａｐｈａｎｕｓ）に属する植物などを例示することができる。
【0031】
本発明は耐病性の向上方法である。ここでいう「耐病性」とは病害への耐性を意味し、その内容は限定されない。
本発明は細菌を病原とする病害への耐性向上のために適用することができる。グラム陽性菌－グラム陰性菌、好気性菌－嫌気性菌、球菌－桿菌のいずれを病原とする病害への耐性をも向上し得る。特に本発明は鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性向上のために用いることが好ましい。
本発明は細菌を病原とする病害への耐性向上のために適用することができる。グラム陽性菌－グラム陰性菌、好気性菌－嫌気性菌、球菌－桿菌のいずれを病原とする病害への耐性をも向上し得る。特に本発明は鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性向上のために用いることが好ましい。
【0032】
本発明は真菌を病原とする病害への耐性向上のために適用することができる。本発明は、糸状菌と酵母の何れを病原とする病害への耐性をも向上し得る。特に本発明は真菌のうち糸状菌を病原とする病害への耐性向上のために用いることが好ましい。
【0033】
本発明は、べと病、さび病、いもち病、うどんこ病、から枯病、から黒穂病、こうじ病、ごま葉枯病、さや枯病、しみ腐病、すそ葉枯病、てんぐ巣病、なまぐさ黒穂病、ねむり病、ひょう紋病、もみ枯細菌病、萎黄病、萎凋病、疫病、黄萎病、黄化萎縮病、黄枯病、黄斑病、灰色かび病、灰星病、灰斑病、角斑病、褐条病、褐色雪腐病、褐色輪紋病、褐点病、褐斑病、褐紋病、株枯病、株腐病、乾性黒腐病、乾腐病、眼紋病、菌核病、茎疫病、茎枯病、紅色雪腐病、黒すす病、黒とう病、黒枯病、黒根病、黒根腐病、黒渋病、黒点病、黒斑病、黒腐菌核病、黒変病、黒目粒、黒葉枯病、腰折病、根朽病、根頭がんしゅ病、根腐病、紫斑病、紫紋羽病、小菌核病、小菌核腐敗病、条斑病、赤かび病、赤色菌核病、赤腐病、雪腐小粒菌核病、雪腐大粒菌核病、炭腐病、炭疽病、内穎褐変病、軟腐病、軸腐病、心腐病、花樟病、果心黒変病、基腐病、パナマ病、シガトカ病、白絹病、白色疫病、白色腐敗病、白紋羽病、白葉枯病、麦角病、斑点病、苗腐病、苗立枯病、腐枯病、腐敗病、紋枯病、葉枯病、葉焼病、葉鞘褐変病、葉腐病、裸黒穂病、落葉病、立枯病、輪紋病から選ばれる１種又は２種以上の病害への耐性向上のために用いることができる。
【0034】
本発明の一つの実施形態は、根腐れ病以外の病害への耐性向上方法である。本実施形態は根腐れ病以外の病害への耐性向上を目的とするものであるが、その実施の結果、根腐れ病への耐性が付随的に向上したとしても、本実施形態の技術的範囲に当然に含まれる。
【0035】
本発明の一つの実施形態は、パナマ病以外の病害への耐性向上方法である。本実施形態はパナマ病以外の病害への耐性向上を目的とするものであるが、その実施の結果、パナマ病への耐性が付随的に向上したとしても、本実施形態の技術的範囲に当然に含まれる。
【0036】
本発明の適用を受けた植物においてはＲＰＰＬ１（Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＲＰＰ１３－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １）遺伝子の顕著な発現向上が観察される。したがって、本発明はＲＰＰＬ１遺伝子又はそのオーソログの発現向上のために適用することができる。
ＲＰＰは“Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ Ｐａｒａｓｉｔｉｃａ”の略であり、ＲＰＰＬ１はペロノスポラ・パラサイティカをはじめとするべと病等の原因となる糸状菌を認識し、その抵抗性をあたえるＲＰＰ１３遺伝子と相同性の高い遺伝子である。ＲＰＰＬ１遺伝子は、ＲＰＰ１３遺伝子と同一の分子機能ＧＯ（ＡＤＰ結合、ＡＴＰ結合）、生物学的プロセスＧＯ（防御反応）が付されている遺伝子であり、防御関連遺伝子として知られている（例えばＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２０，Ｖｏｌ．６８，ｐｐ．１１０２６－１１０３７）。ＲＰＰ１３やＲＰＰＬ１が有するＮＢ－ＡＲＣドメインは、機能性ＡＴＰアーゼドメインである。変異解析の結果、ＮＢ－ＡＲＣドメインは抵抗性蛋白質の活性制御過程で重要な調節的役割を果たしていることが知られている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｏｔａｎｙ，Ｖｏｌｕｍｅ５９，Ｉｓｓｕｅ６，Ａｐｒｉｌ ２００８，Ｐａｇｅｓ１３８３－１３９７．）。
本発明は上述した抵抗性蛋白質の活性調節機能を備えるＮＢ－ＡＲＣドメインを有するＲＰＰＬ１遺伝子の発現向上に起因して、べと病への耐性向上効果を奏する。
ＲＰＰは“Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ Ｐａｒａｓｉｔｉｃａ”の略であり、ＲＰＰＬ１はペロノスポラ・パラサイティカをはじめとするべと病等の原因となる糸状菌を認識し、その抵抗性をあたえるＲＰＰ１３遺伝子と相同性の高い遺伝子である。ＲＰＰＬ１遺伝子は、ＲＰＰ１３遺伝子と同一の分子機能ＧＯ（ＡＤＰ結合、ＡＴＰ結合）、生物学的プロセスＧＯ（防御反応）が付されている遺伝子であり、防御関連遺伝子として知られている（例えばＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２０，Ｖｏｌ．６８，ｐｐ．１１０２６－１１０３７）。ＲＰＰ１３やＲＰＰＬ１が有するＮＢ－ＡＲＣドメインは、機能性ＡＴＰアーゼドメインである。変異解析の結果、ＮＢ－ＡＲＣドメインは抵抗性蛋白質の活性制御過程で重要な調節的役割を果たしていることが知られている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｏｔａｎｙ，Ｖｏｌｕｍｅ５９，Ｉｓｓｕｅ６，Ａｐｒｉｌ ２００８，Ｐａｇｅｓ１３８３－１３９７．）。
本発明は上述した抵抗性蛋白質の活性調節機能を備えるＮＢ－ＡＲＣドメインを有するＲＰＰＬ１遺伝子の発現向上に起因して、べと病への耐性向上効果を奏する。
【0037】
本発明の適用を受けた植物においてはＦＬＳ２（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ２）遺伝子の顕著な発現向上が観察される。したがって、本発明はＦＬＳ２遺伝子又はそのオーソログの発現向上のために適用することができる。
ＦＬＳ２は細菌の鞭毛タンパク質であるＰＡＭＰであるフラジェリンを認識し、免疫反応（ＰＴＩ）を誘導する。ＦＬＳ２遺伝子の発現向上は、鞭毛を有する細菌に対する耐性の向上をもたらす（例えば、化学と生物Ｖｏｌ．５０，Ｎｏ．５，２０１２，３６３－３６９やＰｌａｎｔ Ｓｉｇｎａｌ Ｂｅｈａｖ．２００８ Ｊｕｎ；３（６）：４２３－４２６．などを参照）。
したがって、本発明はＦＬＳ２遺伝子の発現向上に起因する、鞭毛を有する細菌に対する耐性向上効果を奏する。
ＦＬＳ２は細菌の鞭毛タンパク質であるＰＡＭＰであるフラジェリンを認識し、免疫反応（ＰＴＩ）を誘導する。ＦＬＳ２遺伝子の発現向上は、鞭毛を有する細菌に対する耐性の向上をもたらす（例えば、化学と生物Ｖｏｌ．５０，Ｎｏ．５，２０１２，３６３－３６９やＰｌａｎｔ Ｓｉｇｎａｌ Ｂｅｈａｖ．２００８ Ｊｕｎ；３（６）：４２３－４２６．などを参照）。
したがって、本発明はＦＬＳ２遺伝子の発現向上に起因する、鞭毛を有する細菌に対する耐性向上効果を奏する。
【0038】
本発明の適用を受けた植物においてはＵＧＴ７４Ｆ２（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ７４Ｆ２）遺伝子の顕著な発現抑制が観察される。したがって、本発明はＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子又はそのオーソログの発現抑制のために適用することができる。
【0039】
サリチル酸（ＳＡ）は、植物がさまざまなストレスに反応して利用するシグナル分子である。サリチル酸は、グルコースなどの低分子有機化合物と結合して不活性型のサリチル酸となり、植物体の液胞に輸送され、貯蔵されることができる。植物においては、２つの相同性のある酵素、すなわちＵＧＴ７４Ｆ１及びＵＧＴ７４Ｆ２が、グルコースをＵＤＰ－グルコースからＳＡに転移させることにより、ＳＡのグルコース共役体が形成される。ＵＧＴ７４Ｆ１とＵＧＴ７４Ｆ２は７７％が同一であり、活性部位の残基が保存されているにもかかわらず、これらの酵素は異なる生成物の形成を触媒する。この２つの酵素を遺伝子レベルで欠失させると、細菌感染に対する表現型が異なることがわかっている。ＵＧＴ７４Ｆ１遺伝子の変異体では、ＳＡのレベルが低く、シュードモナス・シリンガエからの細菌感染に対する抵抗性が低くなる。一方、ＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の変異体では、ＳＡのレベルが高く、シュードモナス・シリンガエに対する抵抗性も高くなる。同様に、ＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子を過剰発現させると、ＳＡのレベルが低下し、シュードモナス・シリンガエに対する感受性が高まる。ＵＧＴ７４Ｆ１とＵＧＴ７４Ｆ２は、ＳＡをグルコース化する能力を持つことから、遊離ＳＡのレベルを制御し、ひいては植物の病原菌に対する反応を制御することに関与している（例えばＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｖｏｌｕｍｅ７，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：４６６２９（２０１７）、Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔｕｍ，Ｖｏｌｕｍｅ１３２，Ｉｓｓｕｅ４，Ａｐｒｉｌ ２００８，Ｐａｇｅｓ ４１７－４２５などを参照）。
本発明の適用を受けた植物においては、ＵＧＴ７４Ｆ２の顕著な発現抑制が観察される。したがって、本発明はＵＧＴ７４Ｆ２の顕著な発現抑制に起因する、シュードモナス・シリンガエへの感受性低減効果を発揮する。
本発明の適用を受けた植物においては、ＵＧＴ７４Ｆ２の顕著な発現抑制が観察される。したがって、本発明はＵＧＴ７４Ｆ２の顕著な発現抑制に起因する、シュードモナス・シリンガエへの感受性低減効果を発揮する。
【0040】
また、本発明の適用を受けた植物においては、ＬＲＫ１０（Ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０）遺伝子の顕著な発現向上が観察される。したがって、本発明はＬＲＫ１０遺伝子又はそのオーソログの発現向上のために適用することができる。
【0041】
ＬＲＫ１０は細胞外受容体ドメインとキナーゼドメインを有するタンパク質である。ＬＲＫ１０はＲｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｋｉｎａｓｅ Ｌｒ１０とも呼ばれるタンパク質であって、さび病（ｒｕｓｔ）への耐性を植物にもたらす（例えばＴｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ（１９９７）１１（１），４５－５２など）。本発明はＬＲＫ１０遺伝子の顕著な発現向上効果を奏することから、本発明はさび病耐性の向上のために用いることができる。
【0042】
なお、本発明の適用を受けた植物は、耐寒性、成長特性、高温順応性、発芽率、成長均一性、根の張り具合、豊産性、耐病害虫性、耐乾燥性などの植物特性の顕著な向上が見られる（特許文献３、特許文献４、特許文献５などを参照）。したがって、本発明は耐病性の向上の目的に加え、これらの目的のために適用することができる。
【0043】
なお、凍結解凍覚醒法（特許文献３）、酵素液法（特許文献４、５）の有用な効果として耐寒性の向上作用が挙げられる。この作用によって亜熱帯～熱帯地域で栽培されているような植物を日本のような冷涼地において栽培することが可能となる。
一方、上述したさび病の病原であるさび菌や、シュードモナス・シリンガエ、べと病の病原菌は病徴発現温度が比較的低い。そのため、熱帯植物に凍結解凍覚醒法又は酵素法を適用し、これを冷涼地で栽培する場合には、これら病徴発現温度が比較的低い病害を受ける可能性が考えられた。
しかし、凍結解凍覚醒法、酵素液法と工程が共通する本発明の適用によって、比較的低い温度域で病徴発現する病害への耐性が付与される。そのため、凍結解凍覚醒法又は酵素液法の適用による上記の懸念は払しょくされている。
一方、上述したさび病の病原であるさび菌や、シュードモナス・シリンガエ、べと病の病原菌は病徴発現温度が比較的低い。そのため、熱帯植物に凍結解凍覚醒法又は酵素法を適用し、これを冷涼地で栽培する場合には、これら病徴発現温度が比較的低い病害を受ける可能性が考えられた。
しかし、凍結解凍覚醒法、酵素液法と工程が共通する本発明の適用によって、比較的低い温度域で病徴発現する病害への耐性が付与される。そのため、凍結解凍覚醒法又は酵素液法の適用による上記の懸念は払しょくされている。
【0044】
本発明の耐病性向上方法の適用を受けた植物から、有性生殖以外の方法により得た次世代の植物は、増強された特性を引き継ぐ。したがって、本発明の特性増強方法により耐病性が増強された植物を得ることができれば、その植物より得られる、該植物とは独立した植物個体を発生可能な種子以外の植物組織（子株等）から発生した次世代以降の子孫も増強された特性を有する。
【0045】
また、本発明の耐病性向上方法の適用を受けた植物は、接ぎ木の穂木として利用した場合であっても、増強された耐病性を発揮する。
【0046】
以下、本発明の工程について詳述する。本発明は植物組織を凍結する凍結工程を含む。凍結工程に供する植物組織は限定されず、植物の種子、根、芽、茎、葉、花弁などを例示できる。凍結工程に供する際にこれら組織は、そのまま凍結してもよいし、一部を切除し、切片の形態で凍結してもよい。
【0047】
凍結工程においては、植物組織を液体に浸漬した状態で凍結することが好ましい。植物組織を浸漬する液体としては、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、グリセリン、エチレングリコール、糖類などの水溶液からなる凍害防御剤を用いることが好ましい。中でも糖類水溶液、特にトレハロース水溶液を用いることが好ましい。
【0048】
凍結工程における凍結時最低温度の上限は、好ましくは－２０℃以下、より好ましくは－３０℃以下、さらに好ましくは－４０℃以下、さらに好ましくは－５０℃以下、さらに好ましくは－５５℃以下である。
また、凍結時最低温度の下限は、好ましくは－２００℃以上、より好ましくは－１５０℃以上、さらに好ましくは－１００℃以上、さらに好ましくは－８０℃以上、さらに好ましくは－７０℃以上、さらに好ましくは－６５℃以上である。
また、凍結時最低温度の下限は、好ましくは－２００℃以上、より好ましくは－１５０℃以上、さらに好ましくは－１００℃以上、さらに好ましくは－８０℃以上、さらに好ましくは－７０℃以上、さらに好ましくは－６５℃以上である。
【0049】
凍結工程においては急速に凍結時最低温度に降下させるのではなく、緩慢に温度降下させることが好ましい。温度降下の速度は、解凍後の生存率の観点から、平均値として好ましくは０．８℃／日以下、より好ましくは０．６℃／日以下、より好ましくは０．５℃／日以下、さらに好ましくは０．３℃／日以下、さらに好ましくは０．２℃／日、さらに好ましくは０．１℃／日である。
このように緩慢に温度降下させる場合には、凍結工程においてはプログラムフリーザーを用いることが好ましい。
このように緩慢に温度降下させる場合には、凍結工程においてはプログラムフリーザーを用いることが好ましい。
【0050】
凍結工程の期間の下限は、好ましくは１００日以上、より好ましくは１２０日以上、さらに好ましくは１５０日以上、さらに好ましくは１６０日以上、さらに好ましくは１８０日以上である。
なお、「凍結工程の期間」とは、植物組織に温度降下を開始した時点から、解凍工程を開始するまでの期間である。
なお、「凍結工程の期間」とは、植物組織に温度降下を開始した時点から、解凍工程を開始するまでの期間である。
【0051】
本発明の耐病性向上方法は凍結工程を備えることを技術的特徴とする。かかる技術的特徴を備えることは共通であるが、本発明は主に以下の（Ａ）又は（Ｂ）の実施形態をとることができる。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する実施形態。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する実施形態。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する実施形態。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する実施形態。
【0052】
また、本発明の耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する方法は、凍結工程を備えるという技術的特徴を備えることは共通であるが、主に以下の（Ａ´）又は（Ｂ´）の実施形態をとることができる。
（Ａ´）耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する実施形態。
（Ｂ´）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する実施形態。
（Ａ´）耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する実施形態。
（Ｂ´）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導する実施形態。
【0053】
以下、実施形態（Ａ）及び実施形態（Ｂ）のそれぞれについて詳述する。なお、実施形態（Ａ）に関する説明は実施形態（Ａ´）の説明として準用できる。また、実施形態（Ｂ）に関する説明は実施形態（Ｂ´）の説明として準用できる。
【0054】
実施形態（Ａ）は、上述した凍結工程において、耐病性を向上させたい対象植物の植物組織を凍結する実施形態である。本実施形態において耐病性を向上させることができる植物種については、上述した通り一切の限定が無い。
【0055】
本実施形態においては凍結工程を実施した後、植物組織を解凍する。解凍工程における解凍方法は特に制限されない。凍結状態の植物組織を常温に放置することで自然解凍してもよいし、凍結状態の植物組織を流水ですすぎながら解凍してもよい。
【0056】
凍結工程を経た植物は耐病性を獲得している。すなわち、解凍された植物組織から発生させた植物は、凍結工程を経ていない植物に比して高い耐病性を備えている。
【0057】
凍結工程に供した植物組織が植物の種子である場合には、これを常法に従い播種し、植物個体を発生させることができる。
【0058】
凍結工程に供した植物組織が種子以外の植物部位である場合には、これをそのまま土壌や培地に移し発芽させてもよいし、また、細かく細断し常法に従い細胞培養を行い、カルス誘導、不定胚誘導、不定芽誘導を行うことで、植物個体を発生させることができる。
【0059】
次に実施形態（Ｂ）について詳述する。実施形態（Ｂ）は、凍結工程を経た植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい対象植物又はその植物組織を接触させる実施形態である。実施形態（Ｂ）と大きく異なる点は、耐病性を向上させたい対象植物を凍結工程に供するのではない点である。実施形態（Ｂ）の大きな特徴は、凍結工程を経た植物組織の抽出液に、耐病性を向上させたい対象植物又はその植物組織を接触させる接触工程を備える点にある。
【0060】
実施形態（Ｂ）は、対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、当該凍結工程を経た植物組織から抽出液を得る抽出工程を備える。
なお、本明細書において実施形態（Ｂ）における「対象植物とは別の植物組織」とは「耐病性を向上させたい対象植物の植物組織及び耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい対象植物の植物組織とは別の植物組織」という意味である。言い換えると、凍結工程に供する植物組織は、後述の接触工程に供する植物組織とは別であるという意味である。
実施形態（Ｂ）において凍結工程に供する「対象植物とは別の植物組織」の植物種と、「耐病性を向上させたい対象植物」及び「耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい対象植物」は同種であっても異種であってもよい。
なお、本明細書において実施形態（Ｂ）における「対象植物とは別の植物組織」とは「耐病性を向上させたい対象植物の植物組織及び耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい対象植物の植物組織とは別の植物組織」という意味である。言い換えると、凍結工程に供する植物組織は、後述の接触工程に供する植物組織とは別であるという意味である。
実施形態（Ｂ）において凍結工程に供する「対象植物とは別の植物組織」の植物種と、「耐病性を向上させたい対象植物」及び「耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動を誘導させたい対象植物」は同種であっても異種であってもよい。
【0061】
凍結工程を経た植物組織は、凍結状態のまま抽出工程に供してもよいが、好ましくは解凍してから抽出工程に供する。解凍の方法は特に限定されない。凍結状態の植物組織を常温に放置することで自然解凍してもよいし、凍結状態の植物組織を流水ですすぎながら解凍してもよい。好ましくは常温で自然解凍することが好ましい。
【0062】
凍結工程と後述する抽出工程との間に選抜工程を含むことが好ましい。選抜工程は、凍結された植物組織から生きている植物組織を選抜する工程である。
選抜工程の具体的な態様は、生きている植物組織を選抜することができれば制限されない。
選抜工程の具体的な態様は、生きている植物組織を選抜することができれば制限されない。
【0063】
選抜工程の好ましい形態としては、凍結工程を経た植物組織を発酵処理することを含む方法が挙げられる。これは生きている植物組織と死んでいる植物組織の微生物による発酵などへの耐性の差異を利用する方法である。
生きている植物組織は微生物の分解などを受けることなく有形の状態を維持する。一方で、死んでいる植物組織は微生物による分解などを受け、軟化又は液状化する。そのため、発酵処理後には、生きている植物組織と死んでいる植物組織を容易に選別することができる。
生きている植物組織は微生物の分解などを受けることなく有形の状態を維持する。一方で、死んでいる植物組織は微生物による分解などを受け、軟化又は液状化する。そのため、発酵処理後には、生きている植物組織と死んでいる植物組織を容易に選別することができる。
【0064】
発酵処理の方法は特に限定されない。凍結工程を経た植物組織を外気に放置することによって行う方法が好ましく例示できる。
この場合、放置する環境の温度の下限は、好ましくは０℃以上、より好ましくは１０℃以上、さらに好ましくは２０℃以上である。上限は、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４０℃以下である。
この場合、放置する環境の温度の下限は、好ましくは０℃以上、より好ましくは１０℃以上、さらに好ましくは２０℃以上である。上限は、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４０℃以下である。
【0065】
外気に放置する期間は発酵ができれば特に制限されず、好ましくは数日から数週間、具体的には１日～４週間を目安として挙げることができる。
【0066】
発酵処理後に、死んでいる植物組織と生きている植物組織とを分離処理することが好ましい。分離処理は、死んでいる植物組織と生きている植物組織が混在するなかから、生きている植物組織を分離できれば、その具体的な態様は特に限定されない。
上述のとおり、発酵処理を経た後、死んでいる植物組織は微生物により分解され、軟化又は液状化する。そのため発酵処理を経た植物組織を洗浄することにより、死んでいる植物組織を容易に流し去り、除去することができる。洗浄としては水洗が好ましく例示できる。
上述のとおり、発酵処理を経た後、死んでいる植物組織は微生物により分解され、軟化又は液状化する。そのため発酵処理を経た植物組織を洗浄することにより、死んでいる植物組織を容易に流し去り、除去することができる。洗浄としては水洗が好ましく例示できる。
【0067】
実施形態（Ｂ）は凍結工程を経た植物組織から抽出液を得る抽出工程を含む。抽出の方法は特に限定されない。抽出に用いる抽剤は、好ましくは水性溶媒、より好ましくは水又は水溶液が例示できる。
【0068】
抽剤は、糖類又は糖アルコールを含むことが好ましい。より具体的には、単糖類（ブドウ糖、乳糖、トレオース、アラビノース、キシロース、ガラクトース、リボース、グルコース、ソルボース、フルクトース、マンノース）、二糖類（スクロース（ショ糖）、ラクトース（乳糖）、マルトース（麦芽糖）、トレハロース、セロビオース、イソマルトース、イソトレハロース、ネオトレハロース、ネオラクトース、ツラノース、パラチノース）、その他の多糖類（三糖類：ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース、四糖類：アカルボース、スタキオース、グリコーゲン、可溶化デンプン、アミロース、デキストリン、グルカン、β１，３－グルカン、フルクタン、Ｎ－アセチルグルコサミン、キチン、キトサン）、糖アルコール類（キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、マンニトール、マルチトール）、オリゴ糖類（ラフィノース、パノース、マルトトリオース、メレジトース、ゲンチアノース、スタキオース、シクロデキストリン、キシロオリゴ糖、セルロースオリゴ糖、ラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナンオリゴ糖）から選択される１種又は２種以上の糖類又は糖アルコールを含む抽剤を用いることが好ましい。
より好ましくは、糖類又は糖アルコールとしては、スクラロース及びトレハロースを１種又は２種を組み合わせて含む抽剤を用いる。
また、上記糖類又は糖アルコールを含まない抽剤を用いる場合には、抽出工程後に得られた抽出液に上記糖類又は糖アルコールを添加してもよい。
より好ましくは、糖類又は糖アルコールとしては、スクラロース及びトレハロースを１種又は２種を組み合わせて含む抽剤を用いる。
また、上記糖類又は糖アルコールを含まない抽剤を用いる場合には、抽出工程後に得られた抽出液に上記糖類又は糖アルコールを添加してもよい。
【0069】
凍結工程を経た植物組織、より具体的には凍結工程を経て生きている植物組織を破砕する破砕処理を行うことが好ましい。破砕処理の方法としては、すりつぶし処理が好ましく例示できる。
すりつぶし処理は、ミキサー、ボールミルなどの破砕機を用いてもよいが、すり鉢を用いてすりつぶすことにより破砕するのが好ましく例示できる。
すりつぶし処理は、ミキサー、ボールミルなどの破砕機を用いてもよいが、すり鉢を用いてすりつぶすことにより破砕するのが好ましく例示できる。
【0070】
破砕処理において植物組織にかける応力は特に限定されないが、あまり応力をかけずにやさしく破砕することが好ましい。特に好ましくは、すり鉢とすりこぎ棒を用いてやさしくすりつぶす。
【0071】
破砕処理にかける時間は特に限定されないが、好ましくは数十秒から数時間である。具体的には、好ましくは１０秒以上、より好ましくは３０秒以上が下限として挙げられる。上限としては、好ましくは１０時間以下、より好ましくは５時間以下、さらに好ましくは３時間以下とする。
【0072】
植物組織の破砕処理は、植物組織を抽剤に浸漬した状態で行ってもよいが、好ましくは抽剤を添加する前に行う。すなわち、破砕処理を経た植物組織を抽剤に接触させることで、抽出することが好ましい。
【0073】
凍結工程を経た植物組織を抽剤に接触、より具体的には植物組織を抽剤に浸漬することで、植物組織に含まれる成分を抽剤へ移動させ、抽出液を得る。
抽出工程後、抽出液を濾過して植物組織の残渣を除去する工程を設けてもよい。
抽出工程後、抽出液を濾過して植物組織の残渣を除去する工程を設けてもよい。
【0074】
抽出工程において使用する抽剤の量は、特に限定されないが、植物組織１質量部に対して、好ましくは０．５質量部以上、より好ましくは１質量部以上、さらに好ましくは３質量部以上、さらに好ましくは５質量部以上である。
上限も特に限定されず、植物組織１質量部に対して、抽剤の量は、好ましくは１００質量部以下、より好ましくは５０質量部以下、さらに好ましくは２０質量部以下である。
上限も特に限定されず、植物組織１質量部に対して、抽剤の量は、好ましくは１００質量部以下、より好ましくは５０質量部以下、さらに好ましくは２０質量部以下である。
【0075】
抽剤への浸漬時間は特に限定されない。浸漬時間の下限は、限定されないが、好ましくは１分以上、より好ましくは１０分以上、さらに好ましくは３０分以上を目安とすることができる。浸漬時間の上限も限定されないが、好ましくは２日以下、より好ましくは１日以下、さらに好ましくは１２時間以下、さらに好ましくは６時間以下を目安とすることができる。
【0076】
浸漬の際の抽剤の温度も特に限定されない。下限としては、好ましくは０℃以上、より好ましくは１０℃以上が挙げられる。上限としては、好ましくは６０℃以下、より好ましくは５０℃以下、さらに好ましくは４５℃以下、さらに好ましくは４０℃以下が挙げられる。
【0077】
なお、破砕処理により、植物組織に含まれる成分が溶解ないし分散した液体やペーストが得られる場合には、当該液体やペーストも「抽出液」に含まれる。
この場合には、破砕処理そのものが抽出工程を構成することとなる。
この場合には、破砕処理そのものが抽出工程を構成することとなる。
【0078】
なお、本明細書において「抽出液」は、抽出工程を経て一次的に得られた抽出液のみを指す用語ではない。「抽出液」には、一次的に得られた抽出液を任意の液体で希釈した希釈液や、一次的に得られた抽出液を濃縮した濃縮液も含まれる。また、抽出乾燥物を任意の溶液に溶解して得た溶液、言い換えると、一次的に得られた抽出液を溶媒交換したものも「抽出液」に含まれる。
また、上述したように、破砕処理により、植物組織に含まれる成分が溶解ないし分散した液体やペーストが得られる場合には、当該液体やペーストも「抽出液」に含まれる。
また、上述したように、破砕処理により、植物組織に含まれる成分が溶解ないし分散した液体やペーストが得られる場合には、当該液体やペーストも「抽出液」に含まれる。
【0079】
実施形態（Ｂ）は、上述した抽出液に耐病性を向上させたい対象植物又はその植物組織を接触させる接触工程を含む。接触工程に供することで耐病性を向上させる植物は、上述の通りいずれの植物種であっても構わない。
【0080】
なお、接触工程に用いる抽出液の由来である植物と、接触工程に供する植物は、種が同一であっても異なっていても良い。つまり、ある特定の植物種の植物組織を凍結・抽出して得られた抽出液に、該特定の植物種以外の植物種又はその植物組織を接触させても良い。このような異種間適用であっても、本発明の特性増強方法によれば所望の効果を得ることができる。
【0081】
実施形態（Ｂ）は、接触工程の具体的態様によって、さらに以下の実施形態（Ｂ－１）及び（Ｂ－２）に分類することができる。
（Ｂ－１）凍結工程を経た植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい対象植物の植物組織を浸漬させる実施形態
（Ｂ－２）凍結工程を経た植物組織より得た抽出液を、耐病性を向上させたい対象植物に散布する実施形態
以下、それぞれの実施形態について説明する。
（Ｂ－１）凍結工程を経た植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい対象植物の植物組織を浸漬させる実施形態
（Ｂ－２）凍結工程を経た植物組織より得た抽出液を、耐病性を向上させたい対象植物に散布する実施形態
以下、それぞれの実施形態について説明する。
【0082】
まず、浸漬工程を備える実施形態（Ｂ－１）について説明する。浸漬工程に供する植物組織は限定されず、植物の種子、根、芽、茎、葉、花弁などを例示できる。浸漬工程に供する際にこれら組織は、そのまま浸漬してもよいし、一部を切除し、切片の形態で浸漬してもよい。
【0083】
耐病性を向上させたい植物組織が、浸漬工程の前に乾燥されていることも好ましい。植物組織の表面を乾かす程度でよいので、例えば、同植物組織を２，３日天日乾燥すること等が挙げられる。このほか、ドライヤーなどの乾燥機を用いた乾燥を行ってもよい。これにより、浸漬工程における抽出液の植物組織への浸透効率を高めることができる。
【0084】
種皮を有する種子を浸漬工程に供する場合には、該種皮の厚さは、好ましくは３ｃｍ以下、より好ましくは１ｃｍ以下、より好ましくは５ｍｍ以下、より好ましくは３ｍｍ以下であることが好ましい。種皮の厚みが上記範囲であれば、抽出液の浸透効率が良く、短時間で抽出液を種子に浸透させることができる。
このような種子としては、大麦、小麦、大豆、稲などの穀物の種子が、本発明を適用する種子の好ましい例として挙げられる。
このような種子としては、大麦、小麦、大豆、稲などの穀物の種子が、本発明を適用する種子の好ましい例として挙げられる。
【0085】
浸漬時間は特に限定されないが、好ましくは３０分以上、より好ましくは１時間以上、より好ましくは６時間以上、より好ましくは１２時間以上、より好ましくは２４時間以上、さらに好ましくは４８時間以上、さらに好ましくは６０時間以上とする。浸漬時間の上限は、好ましくは３００時間以下、より好ましくは２００時間以下、さらに好ましくは１００時間以下とすることができる。
【0086】
浸漬工程における抽出液の温度は、同工程中に雑菌が生えないような温度で行うことが好ましい。好ましくは０℃以上、より好ましくは５℃以上、さらに好ましくは１０℃以上を目安として挙げることができる。上限としては、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４５℃以下、さらに好ましくは４０℃以下、さらに好ましくは３５℃以下、さらに好ましくは３０℃以下を目安として挙げることができる。
【0087】
浸漬工程で使用する抽出液は、抽出工程により一次的に得られた抽出液を任意の液体で希釈した希釈液であることが好ましい。抽出工程により一次的に得られた抽出液を希釈することで、一度に多くの植物組織を浸漬工程に供することができ、生産効率を向上させることができる。
【0088】
希釈倍率は特に限定されない。希釈後の希釈液の体積は、抽出に用いた植物組織の体積の好ましくは１００倍以上、より好ましくは１０００倍以上、さらに好ましくは５０００倍以上、さらに好ましくは８０００倍以上とすることができる。このような高い希釈率で希釈しても、本発明の効果を十分に得ることができる。
希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１０００００倍以下、より好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２００００倍以下、さらに好ましくは１００００倍以下を目安とすることができる。
希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１０００００倍以下、より好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２００００倍以下、さらに好ましくは１００００倍以下を目安とすることができる。
【0089】
また、植物組織に抽剤を添加せずに破砕処理することで得られた液体ないしペーストを希釈することで希釈液を得る場合には、その希釈倍率は、好ましくは１００倍以上、より好ましくは１０００倍以上、さらに好ましくは５０００倍以上、さらに好ましくは８０００倍以上とすることができる。このような高い希釈率で希釈しても、本発明の効果を十分に得ることができる。
この場合の希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１０００００倍以下、より好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２００００倍以下、さらに好ましくは１００００倍以下を目安とすることができる。
この場合の希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１０００００倍以下、より好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２００００倍以下、さらに好ましくは１００００倍以下を目安とすることができる。
【0090】
希釈に用いる液は、抽剤と同じく、糖類又は糖アルコールを含む液体であることが好ましい。より具体的には、単糖類（ブドウ糖、乳糖、トレオース、アラビノース、キシロース、ガラクトース、リボース、グルコース、ソルボース、フルクトース、マンノース）、二糖類（スクロース（ショ糖）、ラクトース（乳糖）、マルトース（麦芽糖）、トレハロース、セロビオース、イソマルトース、イソトレハロース、ネオトレハロース、ネオラクトース、ツラノース、パラチノース）、その他の多糖類（三糖類：ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース、四糖類：アカルボース、スタキオース、グリコーゲン、可溶化デンプン、アミロース、デキストリン、グルカン、β１，３－グルカン、フルクタン、Ｎ－アセチルグルコサミン、キチン、キトサン）、糖アルコール類（キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、マンニトール、マルチトール）、オリゴ糖類（ラフィノース、パノース、マルトトリオース、メレジトース、ゲンチアノース、スタキオース、シクロデキストリン、キシロオリゴ糖、セルロースオリゴ糖、ラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナンオリゴ糖）から選択される１種又は２種以上の糖類又は糖アルコールを含む液体を希釈のために用いることが好ましい。
より好ましくは、糖類又は糖アルコールとしては、スクラロース及びトレハロースを１種又は２種を組み合わせて含む液体を希釈のために用いる。
より好ましくは、糖類又は糖アルコールとしては、スクラロース及びトレハロースを１種又は２種を組み合わせて含む液体を希釈のために用いる。
【0091】
浸漬工程においては、抽出液１リットル当たり、好ましくは０．５ｋｇ以上、より好ましくは１ｋｇ以上、さらに好ましくは１．５ｋｇ以上の植物組織を浸漬することが好ましい。
抽出液１リットル当たりに浸漬する植物組織の重量の上限は特に制限は無いが、好ましくは３ｋｇ以下、より好ましくは２．５ｋｇ以下とすることが好ましい。
抽出液１リットル当たりに浸漬する植物組織の重量の上限は特に制限は無いが、好ましくは３ｋｇ以下、より好ましくは２．５ｋｇ以下とすることが好ましい。
【0092】
浸漬工程においては、植物組織の全体が抽出液に浸かっている状態であることが好ましい。一度に植物組織の全体が抽出液に浸からない場合には、浸漬工程において植物組織を抽出液中で転動したり攪拌したりすることで、植物組織全体に抽出液が接触する状態を実現しても構わない。
【0093】
浸漬工程を経た植物組織を栽培することにより、耐病性が向上した植物を得ることができる。浸漬工程後の植物組織は何らの処理を行うことなく、そのまま播種することができる。
栽培の方法は特に限定されない。浸漬工程に供した植物組織が植物の種子である場合には、これを常法に従い播種し、植物個体を発生させ、常法に従い栽培することができる。
栽培の方法は特に限定されない。浸漬工程に供した植物組織が植物の種子である場合には、これを常法に従い播種し、植物個体を発生させ、常法に従い栽培することができる。
【0094】
浸漬工程に供した植物組織が種子以外の植物部位である場合には、これをそのまま土壌や培地に移し発芽させてもよいし、また、細かく細断し常法に従い細胞培養を行い、カルス誘導、不定胚誘導、不定芽誘導を行うことで、植物個体を発生させ、栽培することができる。
【0095】
次に実施形態（Ｂ－２）について詳述する。実施形態（Ｂ－２）は、耐病性を向上させたい植物に、上述した抽出液を散布する散布工程を含む実施形態である。
【0096】
なお、散布工程に用いる抽出液の由来である植物組織の植物種と、散布工程に供する植物の植物種は、同一であっても異なっていても良い。つまり、ある特定の植物種の植物組織を凍結・抽出して得られた抽出液を、該特定の植物種以外の植物種に散布しても良い。このような異種間適用であっても、耐病性の向上効果を得ることができる。
【0097】
散布工程において、抽出液を散布する植物の状態は特に限定されない。散布対象とする植物は、田畑等の土壌で栽培している植物、鉢植えやプランター等で栽培している植物、水耕栽培用の培地上で栽培している植物であってもよい。
【0098】
抽出液の散布方法は、特に限定されるものではなく、じょうろや既存の噴霧器を用いて行うことができる。また、抽出液を、植え付けられた植物の任意の部分、例えば、蕾、花、葉、茎、樹木の枝、土壌（根）に散布することができる。
植物の地上部に抽出液を散布する場合、土壌にも同時に散布してもよい。地上部への散布と共に土壌にも抽出液を散布することで、植物が根からも抽出液を吸収することができ、抽出液の有する特性増強の効果がより発揮される。
植物の地上部に抽出液を散布する場合、土壌にも同時に散布してもよい。地上部への散布と共に土壌にも抽出液を散布することで、植物が根からも抽出液を吸収することができ、抽出液の有する特性増強の効果がより発揮される。
【0099】
散布工程で使用する抽出液は、抽出工程により一次的に得られた抽出液を任意の液体で希釈した希釈液であることが好ましい。抽出工程により一次的に得られた抽出液を希釈することで、多くの植物に抽出液を散布することできる。
【0100】
散布工程に用いる抽出液の希釈倍率は、特に限定されない。希釈後の希釈液の体積は、抽出に用いた植物組織の体積の好ましくは１００倍以上、より好ましくは２５０倍以上、さらに好ましくは２５００倍以上、さらに好ましくは１２５００倍以上、さらに好ましくは２００００倍以上とすることができる。このような高い希釈率で希釈しても、本発明の効果を十分に得ることができる。
希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１００００００倍以下、より好ましくは５０００００倍以下、さらに好ましくは２５００００倍以下、さらに好ましくは１２５０００倍以下、さらに好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２５０００倍以下を目安とすることができる。
希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１００００００倍以下、より好ましくは５０００００倍以下、さらに好ましくは２５００００倍以下、さらに好ましくは１２５０００倍以下、さらに好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２５０００倍以下を目安とすることができる。
【0101】
また、植物組織に抽剤を添加せずに破砕処理することで得られた液体ないしペーストを希釈することで希釈液を得る場合には、その希釈倍率は、好ましくは１００倍以上、より好ましくは２５０倍以上、さらに好ましくは２５００倍以上、さらに好ましくは１２５００倍以上、さらに好ましくは２００００倍以上とすることができる。このような高い希釈率で希釈しても、本発明の効果を十分に得ることができる。
この場合の希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１００００００倍以下、より好ましくは５０００００倍以下、さらに好ましくは２５００００倍以下、さらに好ましくは１２５０００倍以下、さらに好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２５０００倍以下を目安とすることができる。
この場合の希釈倍率の上限は特に限定されないが、好ましくは１００００００倍以下、より好ましくは５０００００倍以下、さらに好ましくは２５００００倍以下、さらに好ましくは１２５０００倍以下、さらに好ましくは５００００倍以下、さらに好ましくは２５０００倍以下を目安とすることができる。
【0102】
散布工程における散布量は特に限定されない。例えば、目安として植物の作付面積１ｍ２当たり好ましくは０．０１リットル以上、より好ましくは０．１リットル以上、より好ましくは０．５リットル以上、さらに好ましくは１リットル以上の抽出液を散布することができる。
また、植物の作付面積１ｍ２あたり好ましくは１０００リットル以下、より好ましくは１００リットル以下、さらに好ましくは１０リットル以下の抽出液を散布することができる。
また、植物の作付面積１ｍ２あたり好ましくは１０００リットル以下、より好ましくは１００リットル以下、さらに好ましくは１０リットル以下の抽出液を散布することができる。
【0103】
散布処理は、栽培期間中１回のみ行っても良いし、栽培期間中に複数回行っても良い。栽培期間中に複数回の散布を行う場合には、例えば１日～１カ月毎、好ましくは２日～１週間毎に散布することができる。
【0104】
その他、散布工程を備える実施形態（Ｂ－２）が適用可能な植物種、抽出液の希釈に用いる液に関しては、実施形態（Ｂ－１）の説明がそのまま当てはまる。
また、上述した実施形態（Ｂ－１）と実施形態（Ｂ－２）が組み合わさった実施形態（浸漬工程と散布工程を両方備える実施の形態）としてもよい。
また、上述した実施形態（Ｂ－１）と実施形態（Ｂ－２）が組み合わさった実施形態（浸漬工程と散布工程を両方備える実施の形態）としてもよい。
【0105】
以上の通り実施形態（Ｂ）を備える本発明によれば、植物の耐病性を向上させることができる。言い換えると凍結工程を経た植物の抽出液は、耐病性向上の用途に用いることができる。すなわち、発明は、凍結を経た植物組織から抽出された抽出物を含む植物の耐病性向上用組成物にもある。
【0106】
本発明の耐病性向上用組成物は、上述した製造方法により製造される抽出液を含む。また、この抽出液を乾燥して溶媒を除去して得られた抽出乾燥物も本発明に含まれる。抽出乾燥物を得る方法は特に限定されないが、噴霧乾燥や凍結乾燥が挙げられる。
【0107】
本発明の好ましい形態では、耐病性向上用組成物は、細菌又は真菌を病原とする病害への耐性向上のために用いられる。また、本発明の耐病性向上用組成物は、ＲＰＰＬ１遺伝子の発現上昇、ＦＬＳ２遺伝子の発現上昇、ＬＲＫ１０遺伝子の発現上昇及びＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の発現抑制から選ばれる、耐病性に寄与する遺伝子発現変動の誘導のために用いられる。また、本発明の耐病性向上用組成物は、べと病耐性、さび病耐性、鞭毛を有する細菌への耐性、シュードモナス・シリンガエに対する耐性から選ばれる耐病性の向上のために用いられる。
【実施例】
【0108】
＜試験例Ａ１＞パパイアへの適用
パパイアの種子をトレハロース水溶液に浸漬した状態で、プログラムフリーザー内に静置し凍結した。凍結は０．５℃／日の温度降下速度で１８０日間かけて緩慢に行い、凍結時最低温度が－６０℃となるように行った。凍結したパパイアの種子を流水ですすぐことにより解凍し、これを播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
パパイアにおいては、パパイア軸腐病（病原：Ｂｏｔｒｙｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ、Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｐ．、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ、Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｃａｒｉｃａｅ）、パパイア黒腐病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐ．）、軟腐病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ Ｂｒｅｄａ ｄｅ Ｈａａｎ）、パパイア褐斑病（病原：Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のパパイアにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
パパイアの種子をトレハロース水溶液に浸漬した状態で、プログラムフリーザー内に静置し凍結した。凍結は０．５℃／日の温度降下速度で１８０日間かけて緩慢に行い、凍結時最低温度が－６０℃となるように行った。凍結したパパイアの種子を流水ですすぐことにより解凍し、これを播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
パパイアにおいては、パパイア軸腐病（病原：Ｂｏｔｒｙｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ、Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｐ．、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ、Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｃａｒｉｃａｅ）、パパイア黒腐病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐ．）、軟腐病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ Ｂｒｅｄａ ｄｅ Ｈａａｎ）、パパイア褐斑病（病原：Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のパパイアにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
【0109】
＜試験例Ａ２＞パイナップルへの適用
パイナップルの種子を試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍処理し、これを播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
パイナップルの種子を試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍処理し、これを播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0110】
パイナップルにおいては心腐病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｎｎａｍｏｍｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｌｍｉｖｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）、花樟病（病原：Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｒｉｎａｎｕｓ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐｅｒｏｘｙｄａｎｓ、Ｅｒｗｉｎｉａ ａｎａｎａｓ）、果心黒変病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、基腐病（病原：Ｃｅｒａｔｏｓｙｓｔｉｓ ｐａｒａｄｏｘａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のパイナップルにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のパイナップルにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
【0111】
＜試験例Ａ３＞バナナへの適用
バナナの子株の根を輪切りにし、これを試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍した。凍結解凍後の子株の根を細断し、この断片化した生長細胞塊を培地上で培養し発芽させた。ある程度成長した苗を土壌に移し栽培を行った。なお、栽培は日本の岡山県で行った。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
バナナの子株の根を輪切りにし、これを試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍した。凍結解凍後の子株の根を細断し、この断片化した生長細胞塊を培地上で培養し発芽させた。ある程度成長した苗を土壌に移し栽培を行った。なお、栽培は日本の岡山県で行った。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0112】
バナナにおいてはパナマ病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｂｅｎｓｅ）、シガトカ病（病原：Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｆｉｊｉｅｎｓｉｓ）、炭疽病（病原：Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｍｕｓａｅ）などを病原菌とするなどの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のバナナにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のバナナにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
【0113】
＜試験例Ａ４＞バナナへの適用
バナナの株元から生えたわき芽を切り取り、葉と根を切り落とし、タケノコ状に加工した。これを試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍した。解凍後のわき芽を鉢に植えた。その後、茎は腐り消失したが、新芽が発芽することを確認した。この新芽を栽培した。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のバナナにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
バナナの株元から生えたわき芽を切り取り、葉と根を切り落とし、タケノコ状に加工した。これを試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍した。解凍後のわき芽を鉢に植えた。その後、茎は腐り消失したが、新芽が発芽することを確認した。この新芽を栽培した。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のバナナにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定割合観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
【0114】
＜試験例Ａ５＞コーヒーの特性増強
コーヒーは生育が非常に難しい植物であるといわれる。雨量、日照量、温度、土質の四つの条件全てが適切な状態でなければ成長しない上に、成木し実をつけるまでに３年程度の期間を必要とする。アラビカ種はさび病に弱く、セイロン(スリランカ)、インドネシアなどで栽培されていたアラビカ種が全滅したことが知られている。中でも、ティピカ種はアラビカ種の中でも最も古い品種で、収穫量が少なく耐病性も低いため、数あるコーヒー種の中でも特に生育が難しい品種である。また、コーヒー全体の０．０１％と流通量が極めて低い。
本試験例では、試験例Ａ１と同様の手順によりティピカ種コーヒーの種子に凍結解凍処理を行い、これを岡山県において播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
コーヒーは生育が非常に難しい植物であるといわれる。雨量、日照量、温度、土質の四つの条件全てが適切な状態でなければ成長しない上に、成木し実をつけるまでに３年程度の期間を必要とする。アラビカ種はさび病に弱く、セイロン(スリランカ)、インドネシアなどで栽培されていたアラビカ種が全滅したことが知られている。中でも、ティピカ種はアラビカ種の中でも最も古い品種で、収穫量が少なく耐病性も低いため、数あるコーヒー種の中でも特に生育が難しい品種である。また、コーヒー全体の０．０１％と流通量が極めて低い。
本試験例では、試験例Ａ１と同様の手順によりティピカ種コーヒーの種子に凍結解凍処理を行い、これを岡山県において播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0115】
上述の通りコーヒーにおいてはさび菌を病原菌とするさび病が最悪の病害であり、その対策が欠かせない。しかし、本試験例においては、特に耐病性が低いことが知られているティピカ種コーヒーの栽培において抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかったにも関わらず、さび病を含むいずれの病害の発生も認められなかった。また、通常は成木し実をつけるまでに３年程度の期間を要するが、本試験例においては播種後１年程度で開花・結実が観察された。
なお本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のティピカ種コーヒーにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が相当の割合で観察された。
なお本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のティピカ種コーヒーにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする上述した病害の発生が相当の割合で観察された。
【0116】
＜試験例Ａ６＞その他の植物種への適用
下に列挙する植物の種子を試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍処理し、処理後の植物組織から植物個体を発生させ栽培した。何れの植物種の栽培においても農薬を一切使用しなかったが病害の発生は見られなかった。
羅漢果、グアバ、スターフルーツ、いちじく、カカオ、セイロンシナモン、パッションフルーツ、ライチ、マンゴスチン、ブラックサポテ、ホワイトサポテ、棘葉シュガーアップル、デーツ椰子、レッドドラゴンフルーツ、アーモンド、青首大根
なお本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の上記植物種においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。
下に列挙する植物の種子を試験例Ａ１と同様の方法により凍結解凍処理し、処理後の植物組織から植物個体を発生させ栽培した。何れの植物種の栽培においても農薬を一切使用しなかったが病害の発生は見られなかった。
羅漢果、グアバ、スターフルーツ、いちじく、カカオ、セイロンシナモン、パッションフルーツ、ライチ、マンゴスチン、ブラックサポテ、ホワイトサポテ、棘葉シュガーアップル、デーツ椰子、レッドドラゴンフルーツ、アーモンド、青首大根
なお本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の上記植物種においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。
【0117】
＜試験例Ｂ１＞パパイア抽出液を用いた小麦の耐病性向上
市販のパパイアの種子をトレハロース水溶液に浸漬した状態で、プログラムフリーザー内に静置し凍結した。凍結は０．５℃／日の温度降下速度で１８０日間かけて緩慢に行い、凍結時最低温度が－６０℃となるように行った。
市販のパパイアの種子をトレハロース水溶液に浸漬した状態で、プログラムフリーザー内に静置し凍結した。凍結は０．５℃／日の温度降下速度で１８０日間かけて緩慢に行い、凍結時最低温度が－６０℃となるように行った。
【0118】
凍結したパパイアの種子を室温（２５℃）で自然解凍した。これを１週間、外気（２５℃）に放置した。凍結工程で死んだ種子は外気下での放置によって発酵し、軟化ないし液状化した。種子をザルに載せて水洗することで、この発酵した種子（つまり死んだ種子）を洗い流し、生きている種子のみを選別した。
【0119】
ザルに残った、生きている種子をすり鉢とすりこぎ棒を用いて優しくすりつぶして破砕してペーストを得た。ペースト１ｃｃをスクラロース及びトレハロースの水溶液で１０Ｌに希釈し（約８０００倍から１００００倍に希釈）、希釈された抽出液を調製した。
【0120】
希釈された抽出液１０Ｌに対し、２０ｋｇの小麦「ふくほのか」の種子を浸漬し、７２時間置いた。なお、浸漬した種子は、浸漬の前に２、３日天日で自然乾燥された状態のものを使用した。浸漬工程を経た種子を岡山県の農場において播種し、栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0121】
小麦においては、コムギ黒節病（病原：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｊａｐｏｎｉｃａ）、コムギ赤かび病（病原：Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ａｖｅｎａｃｅａ Ｃｏｏｋ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｎｉｖａｌｅ、Ｃａｓａｔｉ ｆ．ｓｐ．ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、コムギ赤さび病（病原：Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｒｅｃｏｎｄｉｔａ Ｒｏｂｅｒｇｅ ｅｘ Ｄｅｓｍａｚｉｅｒｅｓ）、コムギ麦角病（病原：Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、コムギ眼紋病（病原：Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａ ｈｅｒｐｏｔｒｉｃｈｏｉｄｅｓ）、コムギ裸黒穂病（病原：Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｎｕｄａ）、コムギ葉枯病（病原：Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ Ｒｏｂｅｒｇｅ ｅｘ Ｄｅｓｍａｚｉｅｒｅｓ）、コムギ斑点病（病原：Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、コムギふ枯病（病原：Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ Ｍｕｅｌｌｅｒ）、コムギいもち病（病原：Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚａｅ Ｃａｖａｒａ）、コムギ株腐病（病原：Ｃｅｒａｔｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、コムギ角斑病（病原：Ｓｅｌｅｎｏｐｈｏｍａ ｄｏｎａｃｉｓ）、コムギから枯病（病原：Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｈｏｒｄｅｉｃｏｌａ Ｈａｒａ）、コムギから黒穂病（病原：Ｕｒｏｃｙｓｔｉｓ ａｇｒｏｐｙｒｉ）、コムギ褐色雪腐病（病原：Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｗａｙａｍａｉ Ｉｔｏ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｄｄｉｃｕｍ Ｈｉｒａｎｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉｅｎｓｅ Ｈｉｒａｎｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｋａｎｏｇａｎｅｎｓｅ Ｌｉｐｐｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｖａｎｔｅｒｐｏｏｌｉｉ Ｖ． Ｋｏｕｙｅａｓ ｅｔ Ｈ． Ｋｏｕｙｅａｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｖｏｌｕｔｕｍ Ｖａｎｔｅｒｐｏｏｌ ｅｔ Ｔｒｕｓｃｏｔｔ）、コムギ黄枯病（病原：Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．）、コムギ黄さび病（病原：Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｐ ｖａｒ． ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）、コムギ黒変病（病原：Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｕｍ）、コムギ黒点病（病原：Ｅｐｉｃｏｃｃｕｍ ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓ Ｅｈｒｅｎｂｅｒｇ ｅｘ Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ）、コムギ紅色雪腐病（病原：Ｍｉｃｒｏｎｅｃｔｒｉｅｌｌａ ｎｉｖａｌｉｓ）、コムギ黒目粒（病原：Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）、コムギ黒さび病（病原：Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ Ｐｅｒｓｏｏｎ ｓｕｂｓｐ． ｇｒａｍｉｎｉｓ）、コムギなまぐさ黒穂病（病原：Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｃａｒｉｅｓ、Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｆｏｅｔｉｄａ）、コムギ黄斑病（病原：Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓ）、コムギ黄化萎縮病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、コムギすそ葉枯病（病原：Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｔｒｉｔｉｃｉ Ｈｏｒｉ ｅｔ Ｅｎｊｏｊｉ）、コムギ炭そ病（病原：Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、コムギ立枯病（病原：Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ）、コムギうどんこ病（病原：Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ ｆ． ｓｐ． ｔｒｉｔｉｃｉ Ｍａｒｃｈａｌ）、コムギ雪腐小粒菌核病（病原：Ｔｙｐｈｕｌａ ｉｎｃａｒｎａｔａ Ｌａｓｃｈ ｅｘ Ｆｒｉｅｓ、Ｔｙｐｈｕｌａ ｉｓｈｉｋａｒｉｅｎｓｉｓ Ｉｍａｉ）、コムギ雪腐大粒菌核病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｂｏｒｅａｌｉｓ Ｂｕｂａｋ ｅｔ Ｖｌｅｕｇｅｌ）、コムギ条斑病（病原：Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅｕｍ Ｎｉｓｉｋａｄｏ ｅｔ Ｉｋａｔａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする上述の病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする上述の病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、これら病害やべと病、シュードモナス・シリンガエ感染症などが一切発生しなかった。
【0122】
＜試験例Ｂ２＞パパイア抽出液を用いた小麦の耐病性向上
試験例Ｂ１と同様の手順により、パパイア種子の抽出液に浸漬した小麦の種子を得た。これを宮崎県宮崎市内の農場に播種して栽培を行った。本試験例においても、抗菌性農薬を含むいずれの農薬を用いなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
試験例Ｂ１と同様の手順により、パパイア種子の抽出液に浸漬した小麦の種子を得た。これを宮崎県宮崎市内の農場に播種して栽培を行った。本試験例においても、抗菌性農薬を含むいずれの農薬を用いなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0123】
＜試験例Ｂ３＞小麦抽出液を使用した小麦の耐病性向上
抽出液の調製にパパイアの種子に代えて小麦の種子を使用した以外は、試験例Ｂ１と同様の手順で試験を行った。つまり、凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製し、その抽出液に小麦の種子を浸漬し、この種子を畑に播種して栽培を行った。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
抽出液の調製にパパイアの種子に代えて小麦の種子を使用した以外は、試験例Ｂ１と同様の手順で試験を行った。つまり、凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製し、その抽出液に小麦の種子を浸漬し、この種子を畑に播種して栽培を行った。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0124】
＜試験例Ｂ４＞パパイア抽出液を使用したトウモロコシの耐病性向上
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法によりトウモロコシの種子を当該抽出液に浸漬した。このトウモロコシの種子を中国の海南省（海南基地）において栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法によりトウモロコシの種子を当該抽出液に浸漬した。このトウモロコシの種子を中国の海南省（海南基地）において栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0125】
トウモロコシにおいては、黒穂病（病原：Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ）、ごま葉枯病（病原：Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｈｅｔｅｒｏｓｔｒｏｐｈｕｓ）、すす紋病（Ｓｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａ ｔｕｒｃｉｃａ）、褐斑病（病原：Ｋａｂａｔｉｅｌｌａ ｚｅａｅ）、紋枯病（病原： Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、条斑細菌病（病原：Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓ）、褐条病（病原：Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ａｖｅｎａｅ ｓｕｂｓｐ．ａｖｅｎａｅ）、ひょう紋病（病原：Ｇｌｏｅｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉ）、いもち病（病原：Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｇｒｉｓｅａ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｓｐ．）、苗立枯病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｖｅｎａｃｅｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．）、ピシウム苗立枯病（病原：Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｙｌｖａｔｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｉｎｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｒｏｅｃａｎｄｒｕｍ）、根腐病（病原：Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｃｏｌａ）、根朽病（病原： Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小トウモロコシにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、上述の病害を含むいずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小トウモロコシにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、上述の病害を含むいずれの病害も一切発生しなかった。
【0126】
＜試験例Ｂ５＞パパイア抽出液を使用した大豆の耐病性向上
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法により大豆の種子を当該抽出液に浸漬した。この大豆の種子を中国において栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法により大豆の種子を当該抽出液に浸漬した。この大豆の種子を中国において栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0127】
大豆においては、ダイズてんぐ巣病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ）、ダイズ斑点細菌病（病原：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｇｌｙｃｉｎｅａ）、ダイズ葉焼病（病原：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ． ｇｌｙｃｉｎｅｓ）、ダイズ赤かび病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｏｓｅｕｍ Ｌｉｎｋ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ）、ダイズべと病（病原：Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｍａｎｓｈｕｒｉｃａ）、ダイズ葉腐病（病原：Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、ダイズ灰星病（病原：Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ ｓｏｊａｅｃｏｌａ Ｍａｓｓａｌｏｎｇｏ）、ダイズ斑点病（病原：Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏｊｉｎａ Ｈａｒａ）、ダイズ萎ちょう病（病原：Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ Ｋｌｅｂａｈｎ）、ダイズ株枯病（病原：Ｏｐｈｉｏｎｅｃｔｒｉａ ｓｏｊａｅ Ｈａｒａ）、ダイズ灰斑病（病原：Ｐｌｅｏｓｐｈａｅｒｕｌｉｎａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）、ダイズ褐斑病（病原：Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｓｏｊａｅ Ｈｏｒｉ）、ダイズ褐色輪紋病（病原：Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）、ダイズ褐点病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）、ダイズ褐紋病（病原：Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ Ｈｅｍｍｉ）、ダイズ菌核病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、ダイズ黒点病（病原：Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ）、ダイズ黒とう病（病原：Ｅｌｓｉｎｏｅ ｇｌｙｃｉｎｅｓ Ｊｅｎｋｉｎｓ）、ダイズ茎疫病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｏｊａｅ Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ Ｇｅｒｄｅｍａｎｎ）、ダイズ茎枯病（病原：Ｐｈｏｍａ ｓｐ．）、ダイズ黒枯病（病原：Ｐｅｃｋｉａ ｓｐ．）、ダイズ黒根病（病原：Ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ ｓｐ．）、ダイズ黒根腐病（病原：Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｃｒｏｔａｌａｒｉａｅ）、ダイズ紫紋羽病（病原：Ｈｅｌｉｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍｏｍｐａ Ｔａｎａｋａ）、ダイズねむり病（病原：Ｓｅｐｔｏｇｌｏｅｕｍ ｓｏｊａｅ Ｙｏｓｈｉｉ ｅｔ Ｎｉｓｈｉｚａｗａ）、ダイズフォモプシス腐敗病（病原：Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｌｏｎｇｉｃｏｌｌａ Ｈｏｂｂｓ）、ダイズ落葉病（病原：Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｇｒｅｇａｔａ）、ダイズリゾクトニア根腐病（病原：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｋｕｈｎ）、ダイズ輪紋病（病原：Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ Ｓａｃｃａｒｄｏ）、ダイズさび病（病原：Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ Ｓｙｄｏｗ）、ダイズさや枯病（病原：Ｍａｃｒｏｐｈｏｍａ ｍａｍｅ Ｈａｒａ）、ダイズ紫斑病（病原：Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｋｉｋｕｃｈｉｉ Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ Ｔｏｍｏｙａｓｕ）、ダイズ白絹病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ Ｃｕｒｚｉ）、ダイズ白紋羽病（病原：Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ Ｐｒｉｌｌｉｅｕｘ）、ダイズ炭腐病（病原：Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、ダイズ炭そ病（病原：Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｔｒｕｎｃａｔｕｍ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｔｒｉｆｏｌｉｉ Ｂａｉｎ ｅｔ Ｅｓｓａｒｙ、Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ （Ｈｏｒｉ） Ｌｅｈｍａｎ ｅｔ Ｗｏｌｆ、Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐ．）、ダイズ立枯病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ ：Ｆｒｉｅｓ ｆ． ｓｐ． ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌｕｍ、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の大豆においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の大豆においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0128】
＜試験例Ｂ６＞パパイア抽出液を使用した小麦の耐病性向上
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法により小麦の種子を当該抽出液に浸漬した。この小麦の種子を中国において栽培した。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法により小麦の種子を当該抽出液に浸漬した。この小麦の種子を中国において栽培した。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0129】
＜試験例Ｂ７＞パパイア抽出液を使用した小麦の耐病性向上
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法により小麦の種子を当該抽出液に浸漬した。この小麦の種子をロシアの永久凍土に播種し栽培した。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
試験例Ｂ１と同様の方法によりパパイアの種子から抽出液を調製し、試験例Ｂ１と同様の方法により小麦の種子を当該抽出液に浸漬した。この小麦の種子をロシアの永久凍土に播種し栽培した。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の小麦においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0130】
＜試験例Ｂ８＞小麦抽出液を用いた人参の耐病性向上
小麦の種子をトレハロース水溶液に浸漬した状態で、プログラムフリーザー内に静置し凍結した。凍結は０．５℃／日の温度降下速度で１８０日間かけて緩慢に行い、凍結時最低温度が－６０℃となるように行った。
小麦の種子をトレハロース水溶液に浸漬した状態で、プログラムフリーザー内に静置し凍結した。凍結は０．５℃／日の温度降下速度で１８０日間かけて緩慢に行い、凍結時最低温度が－６０℃となるように行った。
【0131】
凍結した小麦の種子を室温（２５℃）で自然解凍した。これを１週間、外気（２５℃）に放置した。凍結工程で死んだ種子は外気下での放置によって発酵し、軟化ないし液状化した。種子をザルに載せて水洗することで、この発酵した種子（つまり死んだ種子）を洗い流し、生きている種子のみを選別した。
【0132】
ザルに残った、生きている種子をすり鉢とすりこぎ棒を用いて優しくすりつぶして破砕してペーストを得た。ペースト１ｃｃをスクラロース及びトレハロースの水溶液で１０Ｌに希釈し（約８０００倍から１００００倍に希釈）、希釈された抽出液を調製した。
【0133】
希釈された抽出液に人参の種子を浸漬し、７２時間置いた、この浸漬工程を経た種子を岐阜県の土壌に播種し栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0134】
人参においては、萎黄病（病原：ファイトプラズマ）、根頭がんしゅ病（病原：Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、うどんこ病（病原：Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｈｅｒａｃｌｅｉ）、黒葉枯病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｄａｕｃｉ）、黒斑病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｒａｄｉｃｉｎａ）、菌核病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、乾腐病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、紫紋羽病（病原：Ｈｅｌｉｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍｏｍｐａ）、白絹病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ）、しみ腐病（病原：Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｕｌｃａｔｕｍ）、根腐病（病原：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の人参においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の人参においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0135】
＜試験例Ｂ９＞小麦抽出液を用いた朝鮮人参の耐病性向上
試験例Ｂ８と同様の手順により小麦の種子の抽出液を得た。希釈された抽出液に朝鮮人参の根を浸漬し、７２時間置いた。この浸漬工程を経た根を岡山県の土壌に植え、栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ８と同様の手順により小麦の種子の抽出液を得た。希釈された抽出液に朝鮮人参の根を浸漬し、７２時間置いた。この浸漬工程を経た根を岡山県の土壌に植え、栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0136】
朝鮮人参においては、斑点病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐａｎａｘ Ｗｈｅｔｚｅｌ）、赤腐病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ａｒａｌｉａｖｏｒａ）、白色腐敗細菌病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐ．）、腰折病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｃｔｏｒｕｍ）、フザリウム病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）、乾性黒腐病（病原：Ｐｈｏｍａ ｐａｎａｃｉｃｏｌａ）、菌核病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｐ．）、根腐病（病原：Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ ｄｅｓｔｒｕｃｔａｎｓ）、白紋羽病（病原：Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ Ｐｒｉｌｌｉｅｕｘ）、炭疽病（病原：Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｐａｎａｃｉｃｏｌａ）、苗腐病（病原：Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｙｒｉｏｔｙｌｕｍ）、灰色かび病（病原：Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の朝鮮人参においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の朝鮮人参においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0137】
＜試験例Ｂ１０＞その他の植物の耐病性向上
以下に列挙する植物の種子を試験例Ｂ１と同様の方法により、パパイアの種子から抽出した抽出液で処理し、播種して栽培した。なお、栽培は日本の岡山県で行った。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
コーヒー、チリヘーゼルナッツ、ゴールデンエッグフルーツ、バナナ、ドワーフココナッツ、カカオ、ライチ、パームヤシ、山椒、ドリアン、カシューナッツ、キャロブ、ポポーマンゴー、アカシア、ヒノキ、パイナップル、グアバ、アサイー、デーツ、バクパリ、ダニエリ
以下に列挙する植物の種子を試験例Ｂ１と同様の方法により、パパイアの種子から抽出した抽出液で処理し、播種して栽培した。なお、栽培は日本の岡山県で行った。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
コーヒー、チリヘーゼルナッツ、ゴールデンエッグフルーツ、バナナ、ドワーフココナッツ、カカオ、ライチ、パームヤシ、山椒、ドリアン、カシューナッツ、キャロブ、ポポーマンゴー、アカシア、ヒノキ、パイナップル、グアバ、アサイー、デーツ、バクパリ、ダニエリ
【0138】
その結果、上に列挙した何れの植物種においても、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、べと病、さび病、シュードモナス・シリンガエ感染症などを含む病害が発生しなかった。なお、本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の上記植物においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。
【0139】
＜試験例Ｂ１１＞散布による特性増強（ネギ）
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液を定植後２週間のネギに１株当たり約５０ｍｌ、５日毎に散布して栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液を定植後２週間のネギに１株当たり約５０ｍｌ、５日毎に散布して栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0140】
ネギにおいては、萎黄病（病原：ファイトプラズマ）、べと病（病原：Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）、萎凋病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｅｐａｅ）、疫病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）、白色疫病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｏｒｒｉ）、黄斑病（病原：Ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｌｌｉｉ）、黒渋病（病原：Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ａｌｌｉｃｉｎａ）、さび病（病原：Ｐｕｃｃｉｎｉａ ａｌｌｉｉ）、黒斑病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｏｒｒｉ）、葉枯病（病原：Ｐｌｅｏｓｐｏｒａ ｈｅｒｂａｒｕｍ、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａ ａｌｌｉｉ、Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ ｂｏｔｒｙｏｓｕｍ）、黒腐菌核病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｃｅｐｉｖｏｒｕｍ）、小菌核病（病原：Ｃｉｂｏｒｉｎｉａ ａｌｌｉｉ）、小菌核腐敗病（病原：Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｑｕａｍｏｓａ）、白絹病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ）、苗立枯病（病原：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、軟腐病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ． ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のネギにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のネギにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0141】
＜試験例Ｂ１２＞散布による稲の耐病性向上
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液を稲苗に散布して栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液を稲苗に散布して栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0142】
稲においては、ばか苗病（病原：Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、ごま葉枯病（病原：Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｍｉｙａｂｅａｎｕｓ）、苗立枯病（病原：Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｐ．、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐｐ．、Ｍｕｃｏｒ ｓｐｐ．）、いもち病（病原：Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｇｒｉｓｅａ）、紋枯病（病原：Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、赤色菌核病（病原：Ｗａｉｔｅａ ｃｉｒｃｉｎａｔａ）、黄化萎縮病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、稲こうじ病（病原：Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｖｉｒｅｎｓ）、褐条病（病原：Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ａｖｅｎａｅ ｓｕｂｓｐ． ａｖｅｎａｅ）、苗立枯細菌病（病原：Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｌａｎｔａｒｉｉ）、もみ枯細菌病（病原：Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ）、白葉枯病（病原：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ）、葉鞘褐変病（病原：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｕｓｃｏｖａｇｉｎａｅ）、内穎褐変病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ａｎａｎａｓ）、黄萎病（病原：Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の稲においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の稲においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0143】
＜試験例Ｂ１３＞散布による空豆の耐病性向上
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液を広島県呉市で土壌栽培している空豆に散布して栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液を広島県呉市で土壌栽培している空豆に散布して栽培した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0144】
空豆においてはソラマメ褐斑病（病原：Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｆａｂａｅ）、ソラマメ赤色斑点病（病原：Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｆａｂａｅ）、ソラマメ立枯病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｖｅｎａｃｅｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ソラマメさび病（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ｖｉｃｉａｅ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の空豆においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の空豆においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0145】
＜試験例Ｂ１４＞散布によるキャベツの耐病性向上
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液をプランターで栽培しているキャベツに散布した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。この抽出液をプランターで栽培しているキャベツに散布した。栽培にあたっては細菌及び真菌に対する抗菌性農薬を含むいずれの農薬も用いなかった。
【0146】
キャベツにおいては、キャベツ黒腐病（病原：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．）、キャベツべと病（病原：Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ Ｇａｅｕｍａｎｎｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、キャベツ菌核病（病原：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、キャベツ苗立枯病（病原：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｋｕｈｎ）、キャベツ輪紋病（病原：Ａｓｔｅｒｏｍｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃａｅ）、キャベツバーティシリウム萎ちょう病（病原：Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ Ｋｌｅｂａｈｎ）、キャベツ軟腐病（病原：Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ． ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、キャベツ灰色かび病（病原：Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）、キャベツ黒斑病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、キャベツ根こぶ病（病原：Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ Ｗｏｒｏｎｉｎ）、キャベツ白さび病（病原：Ａｌｂｕｇｏ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、キャベツ黒斑細菌病（病原：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｍａｃｕｌｉｃｏｌａ）、キャベツ腐敗病（病原：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｒｇｉｎａｌｉｓ ｐｖ． ｍａｒｇｉｎａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖａ）、キャベツ萎黄病（病原：Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ）、キャベツ黒すす病（病原：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、キャベツ根朽病（病原：Ｐｈｏｍａ ｌｉｎｇａｍ）、キャベツうどんこ病（病原：Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｐｏｌｙｇｏｎｉ ｄｅ Ｃａｎｄｏｌｌｅ）などの病害が発生することが知られている。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のキャベツにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例のキャベツにおいては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。一方、本発明を適用した本試験例においては、抗菌性農薬を用いなかったにも関わらず、いずれの病害も一切発生しなかった。
【0147】
＜試験例Ｂ１５＞散布による特性増強（その他の植物）
試験例Ｂ３と同様の方法により小麦の種子から抽出し、この抽出液を散布しながらトマト、ピーマン、小麦、アサガオ及びスイカを栽培した。その結果、何れの植物においても病害の発生が観察されなかった。なお、本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の上記植物においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。
試験例Ｂ３と同様の方法により小麦の種子から抽出し、この抽出液を散布しながらトマト、ピーマン、小麦、アサガオ及びスイカを栽培した。その結果、何れの植物においても病害の発生が観察されなかった。なお、本発明を適用しなかったこと以外は同条件で栽培した比較例の上記植物においては、細菌及び糸状菌を病原とする病害の発生が一定の割合で観察された。
【0148】
＜試験例Ｂ１６＞ネギ栽培におけるべと病の発病率の比較試験
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。広島県呉市倉橋町においてこの抽出液を散布してネギを栽培した。比較例として抽出液の散布を行わないこと以外は同条件にてネギを栽培した。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。広島県呉市倉橋町においてこの抽出液を散布してネギを栽培した。比較例として抽出液の散布を行わないこと以外は同条件にてネギを栽培した。
【0149】
べと病が発生しやすい雨の多い６月及び９月に収穫時期を迎えたネギについて、べと病の発病率を集計し、実施例におけるべと病発生の低減率（低減率＝（比較例における発病率－実施例における発病率）×１００／比較例における発病率）を算出した。その結果、実施例のネギは比較例のネギと比較して、べと病の発生率が３０％低減した。また、比較例のネギは長雨の影響によって細菌及び糸状菌が繁殖することでほぼ全て腐ってしまい、出荷不可能な状態となった。一方、実施例のネギは、長雨の影響をものともせず、ほぼ全て出荷可能な状態で収穫することができた。
【0150】
また、雨の多い６月及び９月以外の時期に収穫時期を迎えたネギについても、べと病発生の低減率を計算した。その結果、実施例のネギは比較例のネギと比較して、べと病の発生率が７０％低減した。
【0151】
＜試験例Ｂ１８＞ネギ栽培におけるさび病の発病率の比較試験
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製し、この抽出液を散布してネギを栽培した。抽出液の散布を行わないこと以外は同条件にて比較例のネギを栽培した。収穫時期を迎えたネギについて、赤さび病、白さび病の発病率を集計し、実施例における赤さび病及び白さび病の発生の低減率を算出した。その結果、実施例のネギにおける赤さび病及び白さび病の低減率は１００％であった。
栽培過程において、実施例のネギにおいても赤さび病及び白さび病の病徴が観察される葉及び茎が若干発生した。しかし、これを除去することでそれ以上の感染拡大は起こらず、上述の収穫時期における病害発生の低減率１００％を達成した。なお、比較例のネギにおいては、栽培過程において上記病徴の観察された葉及び茎を除去しても感染拡大を食い止めることができず、収穫時期において出荷できる状態のネギは得られなかった。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製し、この抽出液を散布してネギを栽培した。抽出液の散布を行わないこと以外は同条件にて比較例のネギを栽培した。収穫時期を迎えたネギについて、赤さび病、白さび病の発病率を集計し、実施例における赤さび病及び白さび病の発生の低減率を算出した。その結果、実施例のネギにおける赤さび病及び白さび病の低減率は１００％であった。
栽培過程において、実施例のネギにおいても赤さび病及び白さび病の病徴が観察される葉及び茎が若干発生した。しかし、これを除去することでそれ以上の感染拡大は起こらず、上述の収穫時期における病害発生の低減率１００％を達成した。なお、比較例のネギにおいては、栽培過程において上記病徴の観察された葉及び茎を除去しても感染拡大を食い止めることができず、収穫時期において出荷できる状態のネギは得られなかった。
【0152】
＜試験例Ｂ１９＞ジャガイモ栽培におけるそうか病及びエキ病の発病率の比較試験
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。切り分けたジャガイモの種芋をこの抽出液に浸漬し、２月下旬に広島県呉市倉橋町の畑に植えた。抽出液への浸漬を行わないこと以外は同条件にて比較例のジャガイモを栽培した。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製した。切り分けたジャガイモの種芋をこの抽出液に浸漬し、２月下旬に広島県呉市倉橋町の畑に植えた。抽出液への浸漬を行わないこと以外は同条件にて比較例のジャガイモを栽培した。
【0153】
収穫時期を迎えたジャガイモについて、そうか病及びエキ病の発病率を集計し、実施例におけるそうか病及びエキ病発生の低減率を算出した。その結果、実施例のジャガイモは比較例のジャガイモと比較して、そうか病及びエキ病の発生率が１００％低減した。つまり、実施例のジャガイモにおいては、そうか病及びエキ病が一切発生しなかった。
【0154】
＜試験例Ｂ２０＞春菊栽培におけるべと病の発病率の比較試験
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製し、この抽出液を散布して春菊を栽培した。抽出液の散布を行わないこと以外は同条件にて比較例の春菊を栽培した。収穫時期を迎えた春菊について、べと病の発病率を集計し、実施例におけるべと病の発生の低減率を算出した。その結果、実施例の春菊におけるべと病の低減率は１００％であった。
試験例Ｂ３と同様の方法で凍結工程を経た小麦の種子から抽出液を調製し、この抽出液を散布して春菊を栽培した。抽出液の散布を行わないこと以外は同条件にて比較例の春菊を栽培した。収穫時期を迎えた春菊について、べと病の発病率を集計し、実施例におけるべと病の発生の低減率を算出した。その結果、実施例の春菊におけるべと病の低減率は１００％であった。
【0155】
＜栽培実験のまとめ＞
以上の通り、本発明の耐病性向上方法（実施形態（Ａ）及び実施形態（Ｂ））の適用により、植物種によらず細菌及び真菌を病原とする病害耐性を含む耐病性の向上効果が得られることが実証された。
以下、栽培実験の結果を分子生物学的に分析するために実施した遺伝子発現解析試験について説明する。
以上の通り、本発明の耐病性向上方法（実施形態（Ａ）及び実施形態（Ｂ））の適用により、植物種によらず細菌及び真菌を病原とする病害耐性を含む耐病性の向上効果が得られることが実証された。
以下、栽培実験の結果を分子生物学的に分析するために実施した遺伝子発現解析試験について説明する。
【0156】
＜遺伝子発現解析＞
本発明による処理を受けた試験例Ａ１の実施例のパパイア、試験例Ａ５の実施例のコーヒー、試験例Ａ６の実施例の青首大根そして試験例Ｂ１の実施例の小麦と、本発明の処理を行わずに実施例と同一栽培条件で栽培したそれぞれの植物（比較例）から、葉を採取した。採取した葉からＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出しＲＮＡ－ｓｅｑ解析を行った。
本発明による処理を受けた試験例Ａ１の実施例のパパイア、試験例Ａ５の実施例のコーヒー、試験例Ａ６の実施例の青首大根そして試験例Ｂ１の実施例の小麦と、本発明の処理を行わずに実施例と同一栽培条件で栽培したそれぞれの植物（比較例）から、葉を採取した。採取した葉からＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出しＲＮＡ－ｓｅｑ解析を行った。
【0157】
ＲＮＡ－ｓｅｑ解析にあたり、リファレンスゲノムを用いないＤｅ ｎｏｖｏ ＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ法（以降、Ｄｅ ｎｏｖｏ ＲＮＡ－ｓｅｑと記載）を実施した。すなわち、転写物として得られた未知ＲＮＡのｃＤＮＡ配列を、Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）を用いて既知のデータベースｃＤＮＡ 配列 （以降，リファレンスｃＤＮＡ配列と記載）と比較することで、既知遺伝子と類似性の高い遺伝子転写物の発現量を調査した。リファレンスｃＤＮＡ配列は、モデル植物として精度の高いシロイヌナズナｃＤＮＡ配列データベースを利用し、これらに類似性の高い遺伝子転写物量を計算した。
【0158】
具体的には、実施例と比較例の植物の葉から、ＲＮＡ抽出キット（ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎＲ ＲＮＡ Ｐｌａｎｔ，Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ社）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡ を抽出した。Ａｇｉｌｅｎｔ ２２００ ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎを用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡの定量を行なった後、ライブラリー調製キット（ＴｒｕＳｅｑ Ｓｔｒａｎｄｅｄ ｍＲＮＡ Ｓａｍｐｌｅ ＰｒｅｐＫｉｔ，Ｉｌｌｕｍｉｎａ社）でｃＤＮＡライブラリーを調製した。作製したライブラリーを次世代シーケンサー（ＨｉＳｅｑ ２５００，Ｉｌｌｕｍｉｎａ社）で配列解析し、シーケンスリードデータを取得した。取得したリードデータからＣｕｔ ａｄｅｐｔソフトウェア（ｖ１．３）を用いてアダプター配列を除去後、低クオリティのリード配列をＳｉｃｋｌｅソフトウェア（ｖ１．２００）を用いて除去した。得られたデータを用い、Ｔｒｉｎｉｔｙソフトウェア（ｖ２．０．６）によるリファレンスシロイヌナズナｃＤＮＡ配列へのＤｅ ｎｏｖｏアセンブルを行った。
アセンブルにより得られた転写産物の配列にＢＬＡＳＴ解析を行い、類似性の高い遺伝子を抽出した。次に、実施例と比較例で遺伝子あたりのＦｒａｇｍｅｎｔｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｖａｌｕｅ（ＦＰＫＭ値）に２倍以上の差があった発現変動遺伝子（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅ， ＤＥＧ）を抽出した。最終的に重複している遺伝子を取り除き、遺伝子発現差異を確認した。
アセンブルにより得られた転写産物の配列にＢＬＡＳＴ解析を行い、類似性の高い遺伝子を抽出した。次に、実施例と比較例で遺伝子あたりのＦｒａｇｍｅｎｔｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｖａｌｕｅ（ＦＰＫＭ値）に２倍以上の差があった発現変動遺伝子（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅ， ＤＥＧ）を抽出した。最終的に重複している遺伝子を取り除き、遺伝子発現差異を確認した。
【0159】
その結果、比較例のパパイアに対して実施例のパパイアにおいては、耐病性に関与するＲＰＰＬ１遺伝子の３．３倍の発現量増加、ＦＬＳ２遺伝子の２．５倍の発現量増加が観察された。
【0160】
比較例の青首大根に対して実施例の青首大根においては、耐病性に関与するＲＰＰＬ１遺伝子の３．６倍の発現量増加、ＦＬＳ２遺伝子の６．９倍の発現量増加が観察された。
【0161】
比較例のコーヒーに対して実施例のコーヒーにおいては、耐病性に関与するＲＰＰＬ１遺伝子の５８４倍の発現量増加、ＦＬＳ２遺伝子の３．９倍の発現量増加、ＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の６７０分の１の発現量減少が観察された。
【0162】
比較例の小麦に対して実施例の小麦においては、耐病性に関与するＲＰＰＬ１遺伝子の３６１０７倍の発現量増加、ＦＬＳ２遺伝子の６６９１３倍の発現量増加、ＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の１１０分の１の発現量減少、ＬＲＫ１０遺伝子の６０６４倍の発現量増加が観察された。
【0163】
＜結果のまとめ＞
遺伝子発現量解析によって、本発明の適用を受けたいずれの植物においても耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動が観察された。具体的には、ペロノスポラ・パラサイティカをはじめとする糸状菌を認識し、べと病への耐性を付与するＲＰＰＬ１遺伝子の顕著な発現量増加、鞭毛タンパク質であるフラジェリンを認識し免疫応答を誘導するＦＬＳ２遺伝子の顕著な発現量増加、シュードモナス・シリンガエに対する感受性に関与するＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の顕著な発現量減少、そして、さび病への耐性をもたらすＬＲＫ１０遺伝子の顕著な発現量増加が観察された。
遺伝子発現量解析の結果は、試験例Ａ１～Ａ６及び試験例Ｂ１～Ｂ２０の栽培実験において観察された優れた耐病性向上効果を分子生物学的観点から裏付けるものである。
遺伝子発現量解析によって、本発明の適用を受けたいずれの植物においても耐病性の向上に寄与する遺伝子発現量変動が観察された。具体的には、ペロノスポラ・パラサイティカをはじめとする糸状菌を認識し、べと病への耐性を付与するＲＰＰＬ１遺伝子の顕著な発現量増加、鞭毛タンパク質であるフラジェリンを認識し免疫応答を誘導するＦＬＳ２遺伝子の顕著な発現量増加、シュードモナス・シリンガエに対する感受性に関与するＵＧＴ７４Ｆ２遺伝子の顕著な発現量減少、そして、さび病への耐性をもたらすＬＲＫ１０遺伝子の顕著な発現量増加が観察された。
遺伝子発現量解析の結果は、試験例Ａ１～Ａ６及び試験例Ｂ１～Ｂ２０の栽培実験において観察された優れた耐病性向上効果を分子生物学的観点から裏付けるものである。
【0164】
なお、試験例Ｂ１～Ｂ２０においては凍結工程を経た種子より抽出した抽出液を用いている。しかし、試験例Ａ１～Ａ６の結果も総合考慮すると、種子以外の植物組織から抽出した抽出液であっても、試験例Ｂ１～Ｂ２０に示したものと同一の耐病性向上効果が得られることが当然に推認できる。
【0165】
本願出願日当時には、凍結解凍覚醒法と酵素液法が周知であった（特許文献３～５）。凍結解凍覚醒法と酵素液法は同様の作用効果を有しており、両発明の適用を受けた植物においては、同様の遺伝子発現プロファイルの変動が観察されることがわかっている。上述の遺伝子発現解析でもこれを再確認している。
凍結解凍覚醒法と酵素液法の共通点は凍結工程であることを考慮すると、凍結工程を引き金として、エピジェネティックな変化とそれに起因する特性増強を惹起する、何らかの特定因子が生じることが合理的に導き出される。凍結解凍覚醒法においては、凍結工程を経ることで生じた前記特定因子が、植物細胞に作用することで、エピジェネティックな変化を誘起していると考えられる。一方で、酵素液法においては、凍結工程を経ることで生じた前記特定因子が抽出液に含まれており、当該抽出液に浸漬された植物組織を構成する細胞にこの特定因子が作用することで、凍結解凍覚醒法と同様のエピジェネティックな変化を植物細胞にもたらしているものと理解できる。
凍結解凍覚醒法と酵素液法の共通点は凍結工程であることを考慮すると、凍結工程を引き金として、エピジェネティックな変化とそれに起因する特性増強を惹起する、何らかの特定因子が生じることが合理的に導き出される。凍結解凍覚醒法においては、凍結工程を経ることで生じた前記特定因子が、植物細胞に作用することで、エピジェネティックな変化を誘起していると考えられる。一方で、酵素液法においては、凍結工程を経ることで生じた前記特定因子が抽出液に含まれており、当該抽出液に浸漬された植物組織を構成する細胞にこの特定因子が作用することで、凍結解凍覚醒法と同様のエピジェネティックな変化を植物細胞にもたらしているものと理解できる。
【0166】
ここで、凍結解凍覚醒法と同工程で実施した試験例Ａ１～Ａ６によって、植物の種子、根、わき芽など様々な植物組織を凍結したいずれの場合であっても同様に耐病性の向上効果が得られた。つまり、上述した特性増強（耐病性向上）を惹起する前記特定因子は、凍結工程に供する植物組織の種類に依存しないこと、すなわち、凍結工程に供した全ての種類の植物組織において生じるものであることを理解することができる。
また、特性を増強したい対象の植物組織に「植物の特性増強の因子」が直接的又は間接的に作用する「作用点」が存在していなければ、当該対象の植物組織の特性増強を惹起することができないのは自明である。「作用点」としては、細胞膜上、細胞質内又は核内に存在するレセプターや、遺伝子発現を制御するシグナル伝達経路に関与するタンパク質や、転写因子などが考えられる。
この点、試験例Ａ１～Ａ６によって、何れの植物組織を凍結した場合であっても同様の特性増強効果が得られたことが実証されている。このことから、全ての植物組織において「植物の特性増強の因子」が作用する「作用点」が存在することが理解できる。
以上説明した試験例Ａ１～Ａ６の結果と技術常識から理解できる事項を踏まえて、凍結解凍覚醒法と酵素液法が植物組織の特性増強効果を発揮するメカニズムを説明する。
また、特性を増強したい対象の植物組織に「植物の特性増強の因子」が直接的又は間接的に作用する「作用点」が存在していなければ、当該対象の植物組織の特性増強を惹起することができないのは自明である。「作用点」としては、細胞膜上、細胞質内又は核内に存在するレセプターや、遺伝子発現を制御するシグナル伝達経路に関与するタンパク質や、転写因子などが考えられる。
この点、試験例Ａ１～Ａ６によって、何れの植物組織を凍結した場合であっても同様の特性増強効果が得られたことが実証されている。このことから、全ての植物組織において「植物の特性増強の因子」が作用する「作用点」が存在することが理解できる。
以上説明した試験例Ａ１～Ａ６の結果と技術常識から理解できる事項を踏まえて、凍結解凍覚醒法と酵素液法が植物組織の特性増強効果を発揮するメカニズムを説明する。
【0167】
凍結解凍覚醒法（実施形態（Ａ））は、凍結工程を経た植物組織に成長特性と耐寒性、そして耐病性を付与する方法であるが、上述した通り凍結工程に供する植物組織に限定は無い。つまり、その種類が何であれ植物組織を凍結すれば「植物の特性増強の因子」が生じ、当該因子の作用によりエピジェネティックな変化が起こり、遺伝子プロファイルの変化が生じることで、成長特性と耐寒性の増強が惹起される。
【0168】
一方の酵素液法（実施形態（Ｂ））も凍結解凍覚醒法と同じく凍結工程を備える。酵素液法においても同様に凍結工程を経た植物組織には「植物の特性増強の因子」が生じる。上述の通り、植物組織の種類に依らず、凍結工程に供した全ての植物組織において「植物の特性増強の因子」が生じる。
その後、凍結工程を経た植物組織から抽出液を得る抽出工程が行われるが、凍結工程を経た植物組織には「植物の特性増強の因子」が含まれるため、抽出液にも「植物の特性増強の因子」が当然に含まれる。この抽出液に植物組織を接触させれば、植物組織を構成する細胞に「植物の特性増強の因子」が作用することで、凍結解凍覚醒法と同様のエピジェネティックな変化が植物細胞にもたらされるものと理解することができる。
その後、凍結工程を経た植物組織から抽出液を得る抽出工程が行われるが、凍結工程を経た植物組織には「植物の特性増強の因子」が含まれるため、抽出液にも「植物の特性増強の因子」が当然に含まれる。この抽出液に植物組織を接触させれば、植物組織を構成する細胞に「植物の特性増強の因子」が作用することで、凍結解凍覚醒法と同様のエピジェネティックな変化が植物細胞にもたらされるものと理解することができる。
【0169】
以上をまとめると、酵素液法（実施形態（Ｂ））によって植物を処理する場合、凍結工程を経た植物組織より抽出される抽出液においては、植物組織の種類を問わず「植物の特性増強の因子」が含まれ、一方の抽出液に接触させる植物組織においてはその種類を問わず「植物の特性増強の因子」が作用する「作用点」が存在する。
したがって、実施形態（Ｂ）においては凍結工程に供する植物組織の種類に限定はなく、また接触工程に供する植物組織の種類にも限定は無いことが当然に理解できる。
したがって、実施形態（Ｂ）においては凍結工程に供する植物組織の種類に限定はなく、また接触工程に供する植物組織の種類にも限定は無いことが当然に理解できる。
【産業上の利用可能性】
【0170】
本発明は農作物の生産技術に適用できる。
【要約】
【課題】遺伝子組み換えや農薬を使用せずに、植物の耐病性を向上させる新規の技術を提供することを課題とする。
【解決手段】 植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物の耐病性を向上する方法であって、前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、前記耐病性が、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性であり、以下の（Ａ）又は（Ｂ）に従って行われることを特徴とする、植物の耐病性の向上方法。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
【選択図】なし
【解決手段】 植物組織を凍結する凍結工程を含む、対象植物の耐病性を向上する方法であって、前記凍結工程における凍結時最低温度は－２０℃以下であり、前記凍結工程における温度降下の速度は０．８℃／日以下であり、前記凍結工程の期間は１００日以上であり、前記耐病性が、べと病に対する耐性、鞭毛を有する細菌を病原とする病害への耐性、シュードモナス・シリンガエ感染症への耐性及びさび病耐性から選ばれる１種又は２種以上の耐病性であり、以下の（Ａ）又は（Ｂ）に従って行われることを特徴とする、植物の耐病性の向上方法。
（Ａ）耐病性を向上させたい前記対象植物の植物組織を前記凍結工程に供することで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
（Ｂ）前記対象植物とは別の植物組織を前記凍結工程に供し、該別の植物組織より得た抽出液に、耐病性を向上させたい前記対象植物を接触させることで、該対象植物の前記耐病性を向上する。
【選択図】なし