特許 6991508 製パン用酵母及び製パン用酵母の作出方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2021-12-10

(45)【発行日】2022-01-12

(54)【発明の名称】製パン用酵母及び製パン用酵母の作出方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/18 20060101AFI20220104BHJP

   A21D 2/08 20060101ALI20220104BHJP

   A21D 8/04 20060101ALI20220104BHJP

【ＦＩ】

C12N1/18

A21D2/08

A21D8/04

【請求項の数】 4

(21)【出願番号】P 2017217793

(22)【出願日】2017-11-10

(65)【公開番号】P2019088199

(43)【公開日】2019-06-13

【審査請求日】2020-11-09

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 発行者名：日本食品科学工学会第６４回大会事務局 刊行物名：日本食品科学工学会第６４回大会講演集 発行年月日：平成２９年 ８月２８日

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 集会名：日本食品科学工学会第６４回大会 開催日：平成２９年８月３０日 講演番号３Ｌａ９「低温パン生地発酵力と冷凍耐性を兼ね備えた酵母菌株の作出」、講演番号３Ｌ１０「Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ菌株の交雑によるパン生地発酵力の改良」

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 公開者：公益財団法人北海道科学技術総合振興センター 掲載日：平成２９年７月２６日 ウェブサイトのアドレス＜ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｏａｓｔｅｃ．ｊｐ／ｗｅｂ／ｎｅｗｓ／ｆｉｌｅｓ／ｃ０９５０６９２ｆ１ｄｅ６１ａｅｂ１２０ｄｂ６１８５ｃｂｆ５ｂｅ３９６９９ｆ１ｃ．ｐｄｆ＞，＜ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｏａｓｔｅｃ．ｊｐ／ｗｅｂ／ａｒｃｈｉｖｅ／ａｄｏｐｔｉｏｎ／ｆｉｌｅｓ／Ｈ２９－ｓｔａｒｔ．ｐｄｆ＞

【微生物の受託番号】NPMD  NITE P-02545

【微生物の受託番号】NPMD  NITE P-02509

【微生物の受託番号】NPMD  NITE P-02508

(73)【特許権者】

【識別番号】504300088

【氏名又は名称】国立大学法人帯広畜産大学

(73)【特許権者】

【識別番号】000231981

【氏名又は名称】日本甜菜製糖株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100097825

【弁理士】

【氏名又は名称】松本 久紀

(74)【代理人】

【識別番号】100137925

【弁理士】

【氏名又は名称】松本 紀一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100158698

【弁理士】

【氏名又は名称】水野 基樹

(72)【発明者】

【氏名】小田 有二

(72)【発明者】

【氏名】三雲 大

(72)【発明者】

【氏名】森谷 浩

【審査官】田中 晴絵

(56)【参考文献】

【文献】特開２０１９－３３７３７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１９－３３６９６（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第０２／０５６５２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】PLOS ONE，2016年，11(10)，e0165126

【文献】醸協，1989年，第８４巻、第１２号，８４９－８５３頁

【文献】醸協，1989年，第８４巻、第１号，３４－３７頁

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／１６－ １／１９

Ａ２１Ｄ ２／００－１７／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ ｖａｒ． ｕｖａｒｕｍ） Ｂ３５Ｌ１株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０９）と、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） Ｈ２４Ｕ１Ｍ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０８）とを胞子対細胞接合により交雑することを特徴とする、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属に属する製パン用酵母の作出方法。

【請求項2】

製パン用酵母サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）ｓｐ．ＤＨＢ１９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５４５）。

【請求項3】

請求項２に記載の製パン用酵母を含有するパン生地。

【請求項4】

請求項３に記載のパン生地を発酵させ、その後焼成することを特徴とする、パン類の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、製パン用酵母等に関するものである。詳細には、サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルムに属する菌株とサッカロマイセス・セレビシエに属する菌株の交雑により作出した、より良好な風香味及び形状のパン類が製造可能な製パン用酵母、当該酵母を使用したパン類の製造方法等に関するものである。

【背景技術】

【0002】

製パン工程において製パン用酵母は、パン生地に含まれる糖をエタノールへと変換する際に発生する炭酸ガスで生地を膨張させるとともに、副生成するアルコール、有機酸、エステル等によってパンに特有の風香味を与えている。このような製パン用として入手可能な酵母製品は、２０～３０℃でのパン生地発酵力という形質で選抜されてきたため、ほとんどすべての菌株はサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に分類されている。

【0003】

エタノール発酵力が強いサッカロマイセス・セレビシエは多くの産業に幅広く利用されているが、特に２０～３０℃で発酵が行われる製パンに使用されるのは、上記の通り、この温度域での活性が高いサッカロマイセス・セレビシエに限られている。しかしながら、このような選択基準などから、それらの形質は比較的均一であり、これまでにない特徴を有する製パン用酵母を求めるのには限界がある。

【0004】

これまでの製パン用酵母にない性質のひとつとして挙げられるのが、より良好な風香味や形状のパンになるような形質である。例えば、これまでにパンの風香味を改善する方法としては、製造工程の改変（特許文献１）、副原料の種類及び配合の工夫（特許文献２）、発酵風味液の添加（特許文献３）、自然界から分離した新規な酵母菌株の使用（特許文献４）、薬剤耐性を付与した酵母変異株の適用（特許文献５）などがあり、これらは一定の効果はあるとされているが、現状これで十分とは言えない。

【0005】

このような技術背景において、より良好な風香味や形状等のパン類の製造が可能な、これまでにない性質・特徴を有する製パン用酵母等の開発が当業界において求められていた。

【0006】

一方で、醸造産業においては、サッカロマイセス・セレビシエに属する酵母以外に、８～１０℃での増殖、発酵が良好なサッカロマイセス・バヤヌス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ）に属する酵母がビールやワイン等の醸造に使用されることがある。また、市販のワイン醸造用乾燥酵母には、サッカロマイセス・セレビシエとサッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ ｖａｒ． ｕｖａｒｕｍ；サッカロマイセス・ウバルムとも呼ばれる）との交雑株が使用されている製品もあり（非特許文献１）、さらに、サッカロマイセス・バヤヌスとサッカロマイセス・セレビシエの交雑による作出株をワイン醸造に使用すると風味が改善されたという報告もなされている（非特許文献２）。しかしながら、サッカロマイセス・バヤヌスに属する酵母は低温発酵性であるため、中温域の発酵能が必要とされる製パンに使用することは無理という考えが一般的で、これを親株とした交雑株なども含めてこれまでほとんど製パンに試されたことはなかった。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【文献】特開２０１５－１６５７７９号公報

【文献】特開２０１５－０３７３９３号公報

【文献】特開２０１５－１７３６３３号公報

【文献】特開２０１２－１９１８５１号公報

【文献】特開２００２－２５３２１１号公報

【非特許文献】

【0008】

【文献】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０４，１０１－１１０，２０１５

【文献】Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９９，８５９７－８６０９，２０１５

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明は、より良好な風香味や形状等のパン類が製造可能な実用的な製パン用酵母、当該酵母を用いたパン類の製造方法等を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

上記目的を達成するため、本発明者らは鋭意研究の結果、サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ ｖａｒ． ｕｖａｒｕｍ） Ｂ３５Ｌ１株と、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） Ｈ２４Ｕ１Ｍ株とを胞子対細胞接合により交雑することで、より良好な風香味及び形状のパン類を製造できる実用的な製パン用酵母を取得することができることを見出し、本発明を完成した。

【0011】

すなわち、本発明の実施形態は次のとおりである。
（１）製パン用酵母サッカロマイセスｓｐ. ＤＨＢ１９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５４５）。
（２）（１）に記載の製パン用酵母を含有するパン生地。
（３）（２）に記載のパン生地を発酵させ（例えば２０～３０℃、好ましくは２７～３０℃の温度帯で発酵させ）、その後（発酵終了後）焼成することを特徴とする、パン類の製造方法。
（４）サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム Ｂ３５Ｌ１株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０９）と、サッカロマイセス・セレビシエ Ｈ２４Ｕ１Ｍ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０８）とを胞子対細胞接合により交雑することを特徴とする、サッカロマイセス属に属するより良好な風香味及び形状のパン類が製造可能な製パン用酵母の作出方法。

【発明の効果】

【0012】

本発明によれば、サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム Ｂ３５Ｌ１株と、サッカロマイセス・セレビシエ Ｈ２４Ｕ１Ｍ株とを胞子対細胞接合により交雑することで、より良好な風香味及び形状で総合評価も極めて高いパン類が製造可能であり且つ実際の製パンに十分使用できる発酵力を有する製パン用酵母菌株を作出でき、当該酵母菌株をパン類製造に用いることで、パン類の高品質化を図ることができる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】実施例１で行った交雑株取得の工程概略を示す図である。

【図2】実施例２で行った、ＤＨＢ１９株（黒丸印）、ＮＢＲＣ１０９７０株（三角印）、Ｈ２４株（菱形印）、ＨＰ４６７株（四角印）の各菌株を使用して作成した中種パン生地からの炭酸ガス発生量（ｍｌ／５分／２０ｇ生地）を示すグラフである。なお、横軸は発酵時間（ｈｒ）を表す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本発明においては、まずワイン醸造用酵母として知られているサッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム ＮＢＲＣ１０９７０株のリジン要求性変異株であるＢ３５Ｌ１株と、製パン用酵母として知られているサッカロマイセス・セレビシエ Ｈ２４株のウラシル要求性変異株であるＨ２４Ｕ１Ｍ株とを交雑する。

【0015】

このリジン要求性変異株Ｂ３５Ｌ１株やウラシル要求性変異株Ｈ２４Ｕ１Ｍ株の取得は定法により行えば良く、特段の限定はないが、例えば、ＵＶや化学物質（エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）、Ｎ－メチル－Ｎ－ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）、亜硝酸等）などでＮＢＲＣ１０９７０株、Ｈ２４株を変異処理した後に所定の選択培地（リジン要求性変異株の場合はα－アミノアジピン酸含有培地など、ウラシル要求性変異株の場合は５－フルオロオロチン酸含有培地など）で選択する方法などが例示される。

【0016】

そして、これら変異株を胞子対細胞接合（ｓｐｏｒｅ ｔｏ ｃｅｌｌ ｍａｔｉｎｇ）により交雑する。なお、胞子対細胞接合とは、酵母の胞子（一倍体）と酵母の一倍体栄養細胞との間の異性間の接合により生じた二倍体交雑株を選択する方法を意味し、本発明においては、この胞子対細胞接合以外の接合法を用いることは好ましくない。また、本発明では、Ｂ３５Ｌ１株の胞子とＨ２４Ｕ１Ｍ株の一倍体栄養細胞を交雑するのが特に好適である。

【0017】

このようなＢ３５Ｌ１株とＨ２４Ｕ１Ｍ株の胞子対細胞接合による交雑によって、ＤＨＢ１９株などの、より良好な風香味及び形状で総合評価も極めて高いパン類を製造できる製パン用酵母交雑株が容易に取得できる。そして、このＤＨＢ１９株は、この交雑により取得できた交雑株の中で極めて有用な製パン用酵母であり、以下に示すような菌学的性質を有する。

【0018】

（Ａ）形態学的性質
ＹＰＤ液体培地（乾燥酵母エキス１．０％、ハイポリペプトン２．０％、グルコース２．０％）で３０℃、１日間培養したときの細胞は球形又は楕円形で、大きさは５～９μｍ×４～７μｍで、多極出芽する。また、ＹＰＤ寒天平板培地で３０℃、１日間培養したときのコロニーは淡褐色で、光沢がある。また、ＳＰＯ寒天培地（酢酸カリウム１．０％、酵母エキス０．１％、グルコース０．０５％、寒天２．０％）上で２５℃、１４日培養すると胞子形成が認められる。
（Ｂ）生理的性質
温度２０～３７℃で生育する。
（Ｃ）糖の発酵性
グルコース：＋
ガラクトース：＋
スクロース：＋
マルトース：＋
ラクトース：－
ラフィノース：＋
トレハロース：－
メリビオース：＋
（Ｄ）炭素源の資化性
グルコース：＋＋
ガラクトース：＋＋
Ｌ－ソルボース：－
スクロース：＋＋
マルトース：＋＋
セロビオース：－
トレハロース：＋＋
ラクトース：－
メリビオース：－
ラフィノース：＋＋
メレジトース：＋
イヌリン：－
可溶性デンプン：－
Ｄ－キシロース：－
Ｌ－アラビノース：－
Ｄ－アラビノース：－
Ｄ－リボース：－
Ｌ－ラムノース：－
リビトール：－
Ｄ－マンニトール：－
グリセロール：－
エタノール：＋＋
α－メチルグルコシド：＋＋
サリシン：－
コハク酸：－
クエン酸：－
ミオイノシトール：－
Ｄ－グルコサミン：－

【0019】

また、交雑親株であるＢ３５Ｌ１株及びＨ２４Ｕ１Ｍ株は、以下に示すような菌学的性質を有する。

【0020】

＜Ｂ３５Ｌ１株＞
（Ａ）形態学的性質
ＹＰＤ液体培地（乾燥酵母エキス１．０％、ハイポリペプトン２．０％、グルコース２．０％）で３０℃、１日間培養したときの細胞は球形又は楕円形で、大きさは５～９μｍ×４～８μｍで、多極出芽する。また、ＹＰＤ寒天平板培地で３０℃、１日間培養したときのコロニーは淡褐色で、光沢がある。また、ＳＰＯ寒天培地（酢酸カリウム１．０％、酵母エキス０．１％、グルコース０．０５％、寒天２．０％）上で２５℃、７日培養すると３～４個の球形の胞子を形成する。
（Ｂ）生理的性質
温度２０～３３℃で生育する。
（Ｃ）糖の発酵性
グルコース：＋
ガラクトース：＋
スクロース：＋
マルトース：＋
ラクトース：－
ラフィノース：＋
トレハロース：－
メリビオース：＋
（Ｄ）炭素源の資化性
グルコース：＋＋
ガラクトース：＋＋
Ｌ－ソルボース：－
スクロース：＋＋
マルトース：＋＋
セロビオース：－
トレハロース：＋
ラクトース：－
メリビオース：－
ラフィノース：＋＋
メレジトース：－
イヌリン：－
可溶性デンプン：－
Ｄ－キシロース：－
Ｌ－アラビノース：－
Ｄ－アラビノース：－
Ｄ－リボース：－
Ｌ－ラムノース：－
リビトール：－
Ｄ－マンニトール：＋
グリセロール：＋＋
エタノール：＋＋
α－メチルグルコシド：＋
サリシン：－
コハク酸：－
クエン酸：－
ミオイノシトール：－
Ｄ－グルコサミン：－

【0021】

＜Ｈ２４Ｕ１Ｍ株＞
（Ａ）形態学的性質
ＹＰＤ液体培地（乾燥酵母エキス１．０％、ハイポリペプトン２．０％、グルコース２．０％）で３０℃、１日間培養したときの細胞は球形又は楕円形で、大きさは４～６μｍ×３～５μｍで、多極出芽する。また、ＹＰＤ寒天平板培地で３０℃、１日間培養したときのコロニーは淡褐色で、光沢がある。また、ＳＰＯ寒天培地（酢酸カリウム１．０％、酵母エキス０．１％、グルコース０．０５％、寒天２．０％）上で２５℃、７日培養しても胞子の形成は認められない。
（Ｂ）生理的性質
温度２０～３５℃で生育する。
（Ｃ）糖の発酵性
グルコース：＋
ガラクトース：＋
スクロース：＋
マルトース：＋
ラクトース：－
ラフィノース：＋
トレハロース：－
メリビオース：－
（Ｄ）炭素源の資化性
グルコース：＋＋
ガラクトース：＋＋
Ｌ－ソルボース：－
スクロース：＋＋
マルトース：＋＋
セロビオース：－
トレハロース：＋
ラクトース：－
メリビオース：－
ラフィノース：＋
メレジトース：＋
イヌリン：－
可溶性デンプン：－
Ｄ－キシロース：－
Ｌ－アラビノース：－
Ｄ－アラビノース：－
Ｄ－リボース：－
Ｌ－ラムノース：－
リビトール：－
Ｄ－マンニトール：－
グリセロール：－
エタノール：＋＋
α－メチルグルコシド：－
サリシン：－
コハク酸：－
クエン酸：－
ミオイノシトール：－
Ｄ－グルコサミン：－

【0022】

これらＤＨＢ１９株、Ｂ３５Ｌ１株及びＨ２４Ｕ１Ｍ株は、いずれも独立行政法人製品評価技術基盤機構・特許微生物寄託センター（〒２９２－０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、ＤＨＢ１９株は２０１７年（平成２９年）９月２１日付け、Ｂ３５Ｌ１株及びＨ２４Ｕ１Ｍ株は２０１７年（平成２９年）７月１４日付けで寄託されており、その受託番号は、それぞれＮＩＴＥ Ｐ－０２５４５、ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０９及びＮＩＴＥ Ｐ－０２５０８である。

【0023】

そして、このＤＨＢ１９株などの製パン用酵母交雑株を用いて、小麦粉、水、砂糖、食塩、油脂、酵母等を混捏したパン生地を発酵後、焼成する工程を一気に行うスクラッチ方式などによりパン類製造を行うことができるが、製パン法はこれに限定されるものではない。なお、本発明の製パン用酵母、例えばＤＨＢ１９株は、常温パン生地発酵力（２７～３０℃程度の温度帯でのパン生地発酵力）が特に優れていることが特徴である。

【0024】

このようにして、優れた低温増殖能を備えるワイン醸造用酵母であるサッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルムに属する菌株のリジン要求性変異株であるＢ３５Ｌ１株と、高いパン生地発酵力等を兼ね備える製パン用酵母であるサッカロマイセス・セレビシエ Ｈ２４株のウラシル要求性変異株であるＨ２４Ｕ１Ｍ株との胞子対細胞接合による交雑によって、より良好な風香味及び形状で総合評価も極めて高いパン類が製造可能である実用的な製パン用酵母菌株を作出でき、当該酵母菌株をパン類製造に用いることで、パン類の高品質化を図ることができる。

【0025】

なお、本発明においてより良好な風香味及び形状のパン類とは、焼成後のパン類の形状（内部形状を含む）、香り、味、焼色、色相の少なくとも１以上が市販パン酵母で作製した同種パン類と同等以上であることを意味し、特に、焼成後のパン類の内部形状、香り、味、色相の少なくとも１以上が市販パン酵母で作製した同種パン類よりも優れていることを意味する。また、総合評価が極めて高いパン類とは、焼成後のパン類の形状（内部形状を含む）、香り、味、焼色、色相の各項目を総合的に評価したものが市販パン酵母で作製した同種パン類よりも極めて優れていることを意味する。

【0026】

以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではなく、本発明の技術的思想内においてこれらの様々な変形が可能である。

【実施例1】

【0027】

（交雑株の取得）
本発明の交雑株は、次のような方法で取得した。

【0028】

独立行政法人製品評価技術基盤機構の微生物コレクションから入手したサッカロマイセス・バヤヌス ＮＢＲＣ１０９７０株から北本の方法（日本醸造協会誌，８４［１］，３４－３７，１９８９）によってリジン要求性変異株Ｂ３５Ｌ１株を分離した。一方、冷凍生地用パン酵母菌株サッカロマイセス・セレビシエに由来して接合型ａを示す一倍体菌株Ｈ２４株から、北本の方法（日本醸造協会誌，８４［１２］，８４９－８５３，１９８９）によってウラシル要求性変異株Ｈ２４Ｕ１Ｍ株を分離した。

【0029】

次に、このＢ３５Ｌ１株とＨ２４Ｕ１Ｍ株を用いて、胞子対細胞接合により交雑を行った。具体的には、まずＢ３５Ｌ１株をＳＰＯ寒天培地（酢酸カリウム：１．０％、乾燥酵母エキス：０．１％、グルコース：０．０５％、寒天：２．０％）に接種し、３０℃で３～５日間培養して胞子化させた。胞子を含んだ子嚢は細胞壁溶解酵素ザイモリエイス（ナカライテスク株式会社製品、登録商標）で処理後、ＹＰＤ寒天培地の片側に塗り付け、同寒天培地のもう片一方にはＨ２４Ｕ１Ｍ株を塗り付けた。Ｂ３５Ｌ１株の胞子（α型）を顕微鏡下でマイクロマニュピレーターを使用して取り出して、ＹＰＤ寒天培地の中央でこの一個のＢ３５Ｌ１株α型胞子と一個のＨ２４Ｕ１Ｍ株一倍体栄養細胞（ａ型）を隣合わせにして３０℃、２日間培養することにより、接合させた。そして、出現増殖したコロニーをＭＭ寒天平板培地上で画線接種することにより交雑二倍体ＤＨＢ１９株を純粋分離した。この交雑株取得の工程概略を図１に示した。

【実施例2】

【0030】

（パン生地発酵力確認試験）
実施例１で得られたＤＨＢ１９株の３０℃におけるパン生地発酵力を、ＮＢＲＣ１０９７０株、Ｈ２４株、及び、市販パン酵母分離株であるサッカロマイセス・セレビシエ ＨＰ４６７株と比較確認するため、以下の試験を実施した。

【0031】

ＤＨＢ１９株、ＮＢＲＣ１０９７０株、Ｈ２４株、ＨＰ４６７株の各菌株を、５０ｍｌ三角フラスコ中のＹＰＤ培地（乾燥酵母エキス：１．０％、ハイポリペプトン：２．０％、グルコース：２．０％）１０ｍｌで３０℃、２４時間往復振盪培養（１５０ｒｐｍ）し、そのうちの０．６ｍｌを３００ｍｌバッフル付き三角フラスコ中のＹＰＳ培地（バクト酵母エキス：２．０％、バクトペプトン：４．０％、ＫＨ_２ＰＯ_４：０．２％、ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ：０．１％、ＮａＣｌ：２．０％、アデカノールＬＧ－２９４：０．０５％、スクロース：２．０％）６０ｍｌに接種して２４時間、３０℃で旋回振盪培養（１５０ｒｐｍ）した。培養後の各菌体は遠心分離で回収し、蒸留水で２回洗浄してから乾燥させた吸収板の上に数分間置いて培養湿菌体を得た。培養菌体の固形分は約３０％になるが、一部を乾燥させて正確な数値を算出し、以下の実験では固形分３３％に換算した重量として培養菌体を生地調製に使用した。

【0032】

各酵母について、小麦粉（強力）１０ｇ、スクロース０．５ｇ及びＮａＣｌ０．２ｇを含む蒸留水５．５ｍｌと、酵母菌体０．２ｇを含む懸濁液１．０ｍｌを１分間混捏した。調製した低糖パン生地（小麦粉重量に対して５％スクロース及び２％ＮａＣｌを含む）は２．４ｃｍ×２０ｃｍの試験管に入れ、発生する炭酸ガス量を飽和食塩水中のメスシリンダーに導いて、３０℃で２時間当たりに発生する炭酸ガス発生量をパン生地発酵力として測定した。なお、これらの操作はすべて３０℃で行った。

【0033】

この結果を下記表１に示す。ＤＨＢ１９株は、３０℃での低糖パン生地発酵力が５１．５ｍｌ／２ｈ／１０ｇ小麦粉であり、市販パン酵母であるＨＰ４６７株よりも高かった。つまり、交雑株ＤＨＢ１９株は、ワイン醸造用酵母であり通常のパン生地発酵温度では発酵力が低いＮＢＲＣ１０９７０株のリジン要求性変異株を親株のひとつとしながら、市販パン酵母以上の低糖パン生地発酵力を有する株であることが明らかとなった。

【0034】

【表1】

【0035】

さらには、ＤＨＢ１９株、ＮＢＲＣ１０９７０株、Ｈ２４株、ＨＰ４６７株の各菌株を使用し、糖を添加しない中種パン生地からの炭酸ガス発酵の経時変化を確認した。まず、各酵母について、小麦粉（日清製粉カメリヤ）１００ｇ、酵母菌体２．０ｇ及び蒸留水６１．４ｍｌをピンミキサーで３分間混捏し、捏ね上げたときの温度が２４．０±１．０℃になるように生地を調製した。そして、パン生地２０ｇを分割し、５分当たりに発生する炭酸ガス量の変化をファーモグラフ（アトー株式会社製品）にて測定した。

【0036】

この結果を図２に示した。なお、測定開始後１時間以降における炭酸ガス発生は、酵母細胞が小麦粉中のデンプンからアミラーゼ類の作用で生成するマルトースを発酵することによるものであるが、それを消費し尽くすと低下する。上記表１の結果と同様に、交雑株ＤＨＢ１９株は、中種生地発酵力が低いＮＢＲＣ１０９７０株のリジン要求性変異株を親株のひとつとしながら、市販パン酵母ＨＰ４６７株よりも格段に高い中種パン生地発酵力を有する株であることが明らかとなった。

【0037】

また、これら各菌株及び、ＤＨＢ１９株と同じ親株であるＢ３５Ｌ１株とＨ２４Ｕ１Ｍ株の希少接合による交雑により取得された交雑三倍体ＨＢ３５株（特願２０１７－１５７２８０）について、常温（３０℃）での中種パン生地発酵力の比較確認を行った。まず、小麦粉（日清製粉カメリヤ）１０ｇ、各酵母菌体０．２ｇ及び蒸留水６．５ｍｌをピンミキサーで３分間混捏し、捏ね上げたときの温度が２４．０±１．０℃になるように生地を調製した。調製したパン生地を２．４ｃｍ×２０ｃｍの試験管に入れ、発生する炭酸ガス量を飽和食塩水中のメスシリンダーに導いて、３０℃で２時間当たりに発生する炭酸ガス発生量を測定した。なお、これらの操作はすべて３０℃で行った。

【0038】

この結果を下記表２に示す。ＤＨＢ１９株は、３０℃での中種パン生地発酵力が４５．４ｍｌ／２ｈ／１０ｇ小麦粉であり、Ｈ２４株の中種パン生地発酵力よりは低いものの、ＮＢＲＣ１０９７０株、ＨＰ４６７株、ＨＢ３５株の中種パン生地発酵力よりかなり高い値であった。したがって、交雑二倍体ＤＨＢ１９株は、市販パン酵母ＨＰ４６７株だけでなく、同じ親株の希少接合による交雑で得られた交雑三倍体ＨＢ３５株よりも高い中種パン生地発酵力を備えていることが明らかとなった。

【0039】

【表2】

【実施例3】

【0040】

（パン品質確認試験）
実施例１で得られたＤＨＢ１９株、あるいは市販パン酵母サッカロマイセス・セレビシエ ＨＰ４６７株を使用して中種法で作製した食パンの品質を比較確認するため、以下の試験を実施した。

【0041】

小麦粉（カメリヤ）２１０ｇ、各酵母培養菌体６．０ｇ（いずれも固形分３３％）、アスコルビン酸溶液０．１５ｍｌ（２０ｍｇ／ｍｌ）及び蒸留水１２６ｍｌをピンミキサーで３分間混捏し、捏ね上げたときの温度が２４．０±１．０℃になるように中種生地を調製した。これを３０℃、４．５時間発酵させた後、小麦粉９０ｇ、砂糖１５．０ｇ、食塩６．０ｇ、ショートニング１５．０ｇ及び蒸留水７５ｍｌを加えて、約４分間混捏し、捏ね上げたときの温度が３０．０±０．５℃になるように本捏生地を調製した。さらに、３０℃、２０分のフロアタイム後、生地を１００ｇずつ手で分割して丸めて３０℃、１５分のベンチタイムをとった。これをモルダーで成型し、３８℃、湿度８５％の最終発酵を５５分行ってから１８０℃、２５分焼成した。これを室温で放冷後、重量と容積を測定して比容積を算出した。

【0042】

この結果を下記表３に示す。ＤＨＢ１９株を使用して作製した食パンの比容積は、ＨＰ４６７株を使用して作製した食パンの比容積よりは若干低いものの、５．０以上で十分に評価できる値であった。

【0043】

【表3】

【0044】

次に作製した各食パン及び実施例２で示したＨＢ３５株を用いて同様に作製した食パンについて、訓練された８人のパネリストでボリューム、形状、焼色、内部形状、やわらかさ、色相、香り、味及び総合評価について官能評価を行った。評価基準は、ＨＰ４６７株を使用して作製した食パンを５０点として設定し、ＤＨＢ１９株を使用して作製した食パン及びＨＢ３５株を使用して作製した食パンを０点（不良）～１００点（良好）で比較・評価した点数から平均値を算出した。

【0045】

これらの結果を下記表４に示す。ＤＨＢ１９株を使用して作製した食パンは、ボリュームを除く評価項目においてＨＰ４６７株を使用して作製した食パンと同等以上であり、特に、総合評価においては、ＨＰ４６７株を使用して作製した食パンを大きく上回るきわめて良好な評価であった。これに対して、ＨＢ３５株を使用して作製した食パンは、ＨＰ４６７株を使用して作製した食パンを上回る評価項目はひとつもなかった。

【0046】

【表4】

【0047】

以上より、サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム Ｂ３５Ｌ１株と、サッカロマイセス・セレビシエ Ｈ２４Ｕ１Ｍ株とを胞子対細胞接合により交雑することで、より良好な風香味及び形状のパン類が製造可能な実用的な製パン用酵母菌株を作出でき、当該菌株を適用することにより風香味及び形状がより好適なパン類等を効果的に製造できるようになることが示された。

【0048】

また、希少接合による交雑で得られた交雑三倍体ＨＢ３５株は冷凍耐性及び低温パン生地発酵力が優れているという特性を有しているが、同じ親株の胞子対細胞接合による交雑で得られた交雑二倍体ＤＨＢ１９株は、冷凍耐性や低温パン生地発酵力はＨＢ３５株より劣るものの、常温パン生地発酵力（特に中種パン生地発酵力）や得られるパン類の風香味・形状等はＨＢ３５株よりも優れており、より良好な風香味や形状等のパン類が製造可能な実用的な製パン用酵母取得という課題解決における胞子対細胞接合による交雑法の優位性も立証された。

【0049】

本発明を要約すれば、以下の通りである。

【0050】

本発明は、より良好な風香味や形状等のパン類が製造可能な実用的な製パン用酵母、当該酵母を用いたパン類の製造方法等を提供することを目的とする。

【0051】

そして、サッカロマイセス・バヤヌス Ｂ３５Ｌ１株と、サッカロマイセス・セレビシエ Ｈ２４Ｕ１Ｍ株とを胞子対細胞接合により交雑することで、より良好な風香味及び形状のパン類を製造できる実用的な製パン用酵母の取得ができ、当該酵母をパン類製造に用いることで風香味及び形状がより好適なパン類を製造できる。

【受託番号】

【0052】

本発明において寄託されている微生物の受託番号を下記に示す。
（１）サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）ｓｐ． ＤＨＢ１９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５４５）。
（２）サッカロマイセス・バヤヌス・バー・ウバルム（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ ｖａｒ． ｕｖａｒｕｍ） Ｂ３５Ｌ１株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０９）。
（３）サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） Ｈ２４Ｕ１Ｍ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０２５０８）。

【図1】

【図2】