特許 6992385 電気泳動用分離媒体、電気泳動用試薬キット、及び電気泳動方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2021-12-13

(45)【発行日】2022-01-13

(54)【発明の名称】電気泳動用分離媒体、電気泳動用試薬キット、及び電気泳動方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 27/447 20060101AFI20220105BHJP

【ＦＩ】

G01N27/447 315F

G01N27/447 ZNA

G01N27/447 325E

【請求項の数】 6

(21)【出願番号】P 2017192887

(22)【出願日】2017-10-02

(65)【公開番号】P2019066354

(43)【公開日】2019-04-25

【審査請求日】2020-02-26

(73)【特許権者】

【識別番号】000001993

【氏名又は名称】株式会社島津製作所

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】特許業務法人深見特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100098671

【弁理士】

【氏名又は名称】喜多 俊文

(74)【代理人】

【識別番号】100102037

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 裕之

(72)【発明者】

【氏名】荒井 昭博

【審査官】櫃本 研太郎

(56)【参考文献】

【文献】中国特許出願公開第１０１６９３９２５（ＣＮ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１３／０００１０８４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第０２／０８２０８３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開平０８－１４５９４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０２－０４２３５１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００５－１９５５６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表平０６－５０４６１２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表平１０－５０２７３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００８－５４２６８３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００７－０７５０５１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００１－３１４１８７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ２７／４４７

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

水溶性セルロース誘導体と、
単糖に由来する糖アルコールと、
を含む、電気泳動用分離媒体であって、
前記水溶性セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み、
前記糖アルコールは、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、又はこれらの組合わせを含み、
前記水溶性セルロース誘導体の重量平均分子量は、３０００００～３７００００であり、
前記水溶性セルロース誘導体の数平均分子量は、８００００～１６００００であり、
前記水溶性セルロース誘導体の多分散度は、３．０～４．０である、電気泳動用分離媒体。

【請求項2】

前記水溶性セルロース誘導体は、セルロースの繰返し単位中における少なくとも１つのヒドロキシル基の水素原子が、炭素数１～３のアルキル基、炭素数１～３のヒドロキシアルキル基、炭素数２～４のカルボキシアルキル基、－（ＣＨ_２Ｏ）_ｘ－Ｈで表される基、－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ－Ｈで表される基、及び－［ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏ］_ｚ－Ｈで表される基（ｘ、ｙ、ｚは、それぞれ独立に正の整数を示す。）からなる群から選ばれる置換基によって置換されている繰返し単位を含む、請求項１に記載の電気泳動用分離媒体。

【請求項3】

前記水溶性セルロース誘導体は、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びカルボキシメチルセルロースからなる群から選ばれる１種又は２種以上を更に含む、請求項１又は請求項２に記載の電気泳動用分離媒体。

【請求項4】

請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の電気泳動用分離媒体を含む、電気泳動用試薬キット。

【請求項5】

試料中の対象物質の電気泳動方法であって、
（Ａ）請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の電気泳動用分離媒体が充填された流路に、前記試料を導入する工程と、
（Ｂ）前記流路に電圧を印加して電気泳動を行い、前記試料中の前記対象物質の分離を行う工程と、
を含む、電気泳動方法。

【請求項6】

前記対象物質は、核酸又はタンパク質を含む、請求項５に記載の電気泳動方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、電気泳動用分離媒体、電気泳動用試薬キット、及び電気泳動方法に関する。

【背景技術】

【0002】

マイクロチップ電気泳動法及びキャピラリー電気泳動法等の毛細管内で電気泳動を行う方法では、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、タンパク質等の分離媒体として水溶性ポリマー溶液を用いるのが一般的である。上記水溶性ポリマー溶液は、流路内への充填及び置換の容易さと分離性能及び迅速な分離の要件を満たすように選択される。例えば、鎖長の短いＤＮＡを電気泳動する場合には、比較的低分子量で高濃度の水溶性ポリマー溶液を使用する。また、分離するサイズレンジを拡げたり、流路の表面への吸着を促したりする目的で、ランダムコポリマー（例えば、ｐｏｌｙ（アクリルアミド－ｃｏ－ジメチルアクリルアミド））、ブロックコポリマー（例えば、ｐｏｌｙ（エチレンオキサイド）－ｐｏｌｙ（プロピレンオキサイド））及びグラフトコポリマー（例えば、ｐｏｌｙ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）－ｇｒａｆｔ－ポリエチレンオキサイド）等のコポリマー、又は、異種若しくは同種のポリマーを混合した混合ポリマーを使用する例も報告されている（特開２０１４－０５５８２９号公報（特許文献１）等）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【文献】特開２０１４－０５５８２９号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

ところで、近年、任意の塩基配列を改変するゲノム編集技術が急速に進んできた。ゲノム編集技術では目的の塩基配列中における変異の有無を確認するが、数塩基の挿入変異又は欠失変異を毎回ＤＮＡシークエンシングによって確認する手法は、時間と費用がかかるため改善が求められていた。このようなＤＮＡシークエンシングの代替技術として、簡便で安価にスクリーニングできるマイクロチップ電気泳動法が用いられるようになってきた。マイクロチップ電気泳動法によるスクリーニング方法は、例えば以下のようにして行われる。まず、目的の塩基配列を含むゲノムＤＮＡを鋳型に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で、当該目的の塩基配列を含むＤＮＡ産物を増幅する。ここで、当該目的の塩基配列において野生型の配列と変異型の配列とが混在したゲノムＤＮＡを鋳型に用いた場合、ＰＣＲ法によって部分的なミスマッチを含んだ二本鎖ＤＮＡ産物（ヘテロデュープレックスＤＮＡ）が得られる。ヘテロデュープレックスＤＮＡは、相補性が維持された配列同士の二本鎖ＤＮＡ産物（ホモデュープレックスＤＮＡ）と比べて電気泳動における移動度が異なる。そのため、この電気泳動における移動度を指標に目的の塩基配列を含むＤＮＡ産物等をスクリーニングすることが可能になる。

【0005】

しかしながら、マイクロチップ電気泳動法によるスクリーニング方法を用いたとしても、ＰＣＲによって得られた二本鎖ＤＮＡ産物１００ｂｐ中の２～８ｂｐの違いを検出するのが限界であり、短鎖領域（例えば２５～２５０ｂｐ）におけるさらなる分離性能の向上が求められている。短鎖領域の二本鎖ＤＮＡ産物の分離性能を上げるために、分離媒体として比較的低分子量の水溶性ポリマーを高濃度で用いる方法が従来から知られていた。しかし、この方法では分離媒体の粘度が上がるため、マイクロチップを繰り返し使用する際の分離媒体の再充填及び置換には、流路に十分な圧力をかけるための装置が別途必要になり、電気泳動装置として大掛かりなものになってしまうという課題を有していた。

【0006】

本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、粘度を上げることなく分離性能が改善された電気泳動用分離媒体を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者は、鋭意研究を行ったところ、水溶性セルロース誘導体を含む電気泳動用分離媒体に、単糖若しくは二糖に由来する糖アルコール又は比較的低分子量の多糖類を加えることで、粘度を上げることなく電気泳動における分離性能が改善することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本願は、以下の発明を提供する。
［１］水溶性セルロース誘導体と、
単糖若しくは二糖に由来する糖アルコール、又は低分子量の多糖類と、を含む、電気泳動用分離媒体。
［２］前記糖アルコールは、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マルチトール、ソルビトール、又はこれらの組合わせを含む、前記［１］に記載の電気泳動用分離媒体。
［３］前記多糖類の重量平均分子量は、１００００～８００００である、前記［１］又は［２］に記載の電気泳動用分離媒体。
［４］前記多糖類は、プルラン、アガロース、デキストラン、デキストリン、アミロース、キサンタンガム、マンナン、ガラクトマンナン、ジェランガム、カラギナン、カードラン、ペクチン、ウェランガム、アルギン酸、アルギン酸塩、アルギン酸エステル、カラヤガム、タマリンドシードガム、ラムザンガム、又はこれらの組合せを含む、前記［１］～［３］のいずれかに記載の電気泳動用分離媒体。
［５］前記糖アルコール又は前記多糖類は、マンニトール、プルラン、又はこれらの組合わせを含む、前記［１］～［４］のいずれかに記載の電気泳動用分離媒体。
［６］前記水溶性セルロース誘導体は、セルロースの繰返し単位中における少なくとも１つのヒドロキシル基の水素原子が、炭素数１～３のアルキル基、炭素数１～３のヒドロキシアルキル基、炭素数２～４のカルボキシアルキル基、－（ＣＨ_２Ｏ）_ｘ－Ｈで表される基、－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ－Ｈで表される基、及び－［ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏ］_ｚ－Ｈで表される基（ｘ、ｙ、ｚは、それぞれ独立に正の整数を示す。）からなる群から選ばれる置換基によって置換されている繰返し単位を含む、前記［１］～［５］のいずれかに記載の電気泳動用分離媒体。
［７］前記水溶性セルロース誘導体は、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びカルボキシメチルセルロースからなる群から選ばれる１種又は２種以上を含む、前記［１］～［６］のいずれかに記載の電気泳動用分離媒体。
［８］前記［１］～［７］のいずれかに記載の電気泳動用分離媒体を含む、電気泳動用試薬キット。
［９］試料中の対象物質の電気泳動方法であって、
（Ａ）前記［１］～［７］のいずれかに記載の電気泳動用分離媒体が充填された流路に、前記試料を導入する工程と、
（Ｂ）前記流路に電圧を印加して電気泳動を行い、前記試料中の前記対象物質の分離を行う工程と、
を含む、電気泳動方法。
［１０］前記対象物質は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）又はタンパク質を含む、前記［９］に記載の電気泳動方法。

【発明の効果】

【0008】

本発明によれば、粘度を上げることなく分離性能が改善された電気泳動用分離媒体を提供することが可能になる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】本実施形態に係る電気泳動用分離媒体と、従来の電気泳動用分離媒体との分離性能を比較したエレクトロフェログラムである。ピークの頂点に表記されている数字は、検出した順に割り当てられた各ピークの番号であり、同一番号は同一ＤＮＡフラグメントを示す。

【図2】ＤＮＡ産物のサイズ（ｂｐ）と、サイズ分解能（％）との相関を示すグラフである。

【図3】ＤＮＡ産物のサイズ（ｂｐ）と、分離可能サイズ差（ｂｐ）との相関を示すグラフである。

【図4】水溶性セルロース誘導体にマンニトールを添加した電気泳動用分離媒体と、水溶性セルロース誘導体にマンニトールを添加していない電気泳動用分離媒体との分離性能を比較したエレクトロフェログラムである。ピークの頂点に表記されている数字は、検出した順に割り当てられた各ピークの番号であり同一番号は同一ＤＮＡフラグメントを示す。

【図5】水溶性セルロース誘導体にマンニトールを添加した電気泳動用分離媒体と、水溶性セルロース誘導体にマンニトールを添加していない電気泳動用分離媒体との分離性能を比較したエレクトロフェログラムである。ピークの頂点に表記されている数字は、各ピークに対応するＤＮＡフラグメントのサイズ（ｂｐ）を示す。また、（ＬＭ）及び（ＵＭ）の表記は、それぞれ低分子量内部標準マーカ、高分子量内部標準マーカを示す。

【図6】水溶性セルロース誘導体にプルランを添加した電気泳動用分離媒体と、水溶性セルロース誘導体にプルランを添加していない電気泳動用分離媒体との分離性能を比較したエレクトロフェログラムである。ピークの頂点に表記されている数字は、各ピークに対応するＤＮＡフラグメントのサイズ（ｂｐ）を示す。また、（ＬＭ）及び（ＵＭ）の表記は、それぞれ低分子量内部標準マーカ、高分子量内部標準マーカを示す。

【図7】水溶性セルロース誘導体にマンニトールを添加した電気泳動用分離媒体と、水溶性セルロース誘導体にマンニトールを添加していない電気泳動用分離媒体との分離性能を比較したエレクトロフェログラムである。ピークの頂点に表記されている数字は、各ピークに対応するＤＮＡフラグメントのサイズ（ｂｐ）を示す。また、（ＬＭ）及び（ＵＭ）の表記は、それぞれ低分子量内部標準マーカ、高分子量内部標準マーカを示す。

【図8】平均重量分子量が大きいＨＰＭＣを含む電気泳動用分離媒体を用いた場合の分離性能を示すエレクトロフェログラムである。ピークの頂点に表記されている数字は、各ピークに対応するＤＮＡフラグメントのサイズ（ｂｐ）を示す。また、（ＬＭ）の表記は低分子量内部標準マーカを示す。

【発明を実施するための形態】

【0010】

以下、本発明の実施形態を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、「Ａ～Ｂ」という表記は、範囲の上限下限（すなわち、Ａ以上Ｂ以下）を意味し、Ａにおいて単位の記載がなく、Ｂにおいてのみ単位が記載されている場合、Ａの単位とＢの単位とは同じである。

【0011】

（電気泳動用分離媒体）
本実施形態に係る電気泳動用分離媒体（以下、単に「電気泳動用分離媒体」という場合がある。）は、水溶性セルロース誘導体と、単糖若しくは二糖に由来する糖アルコール又は低分子量の多糖類と、を含む。上記電気泳動用分離媒体は、このような構成を備えることで、粘度を上げることなく分離性能を改善することが可能になる。ここで、「分離性能」とは、電気泳動によって得られるエレクトロフェログラムにおいて、近接する２本のピークがそれぞれ別個のピークとして識別できる程度に、上記ピークに対応する対象物質を分離して検出できる性能を意味する。電気泳動用分離媒体の分離性能は、後述するサイズ分解能、分離度、分離可能サイズ差等によって評価が可能である。

【0012】

「電気泳動用分離媒体」とは、試料が導入可能であり、当該試料を電気泳動して分離するための媒体を意味する。

【0013】

「水溶性セルロール誘導体」とは、セルロースの繰返し単位中における少なくとも１つのヒドロキシル基（－ＯＨ）をエーテル（－ＯＲ）に変換して、水溶性が向上したセルロース誘導体を意味する。ここで、「水溶性」とは、２５℃、１気圧における蒸留水１００ｇに対して、１ｇ以上の溶解度を有することを意味する。

【0014】

水溶性セルロース誘導体は、セルロースの繰返し単位中における少なくとも１つのヒドロキシル基の水素原子が、炭素数１～３のアルキル基、炭素数１～３のヒドロキシアルキル基、炭素数２～４のカルボキシアルキル基、－（ＣＨ_２Ｏ）_ｘ－Ｈで表される基、－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ－Ｈで表される基、及び－［ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏ］_ｚ－Ｈで表される基（ｘ、ｙ、ｚは、それぞれ独立に正の整数を示す。）からなる群から選ばれる置換基によって置換されている繰返し単位を含むことが好ましい。上記置換基は、炭素数１～３のアルキル基又は炭素数１～３のヒドロキシアルキル基を含むことがより好ましい。

【0015】

すなわち、上記水溶性セルロース誘導体は、下記式（Ｉ）で表される。

【0016】

【化1】

【0017】

式中、Ｒは、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～３のアルキル基、炭素数１～３のヒドロキシアルキル基、炭素数２～４のカルボキシアルキル基、－（ＣＨ_２Ｏ）_ｘ－Ｈで表される基、－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ－Ｈで表される基、及び－［ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）Ｏ］_ｚ－Ｈで表される基（ｘ、ｙ、ｚは、それぞれ独立に正の整数を示す。）からなる群から選ばれることが好ましい。Ｒは、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～３のアルキル基、及び炭素数１～３のヒドロキシアルキル基、からなる群から選ばれることがより好ましい。ｎは正の整数を示す。

【0018】

水溶性セルロース誘導体としては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース及びプロピルセルロース等のアルキルセルロース；ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）及びヒドロキシプロピルセルロース等のヒドロキシアルキルセルロース；ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシエチルエチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）等のヒドロキシアルキルアルキルセルロース；並びにカルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース及びカルボキシプロピルセルロース等のカルボキシアルキルセルロース（アルカリ金属塩等の塩の形態も含む。）、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース等のカルボキシアルキルヒドロキシアルキルセルロース（アルカリ金属塩等の塩の形態も含む）等が挙げられ、これらの中から１つを選択して用いてもよいし、複数を組み合わせて用いてもよい。水溶性セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びカルボキシメチルセルロース、からなる群から選ばれる１種又は２種以上を含むことが好ましい。水溶性セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含むことがより好ましい。

【0019】

水溶性セルロース誘導体の重量平均分子量（Ｍ_ｗ）は、５００００～２００００００であることが好ましく、２５００００～１３０００００であることがより好ましく、３０００００～３７００００であることが更に好ましい。重量平均分子量が上記範囲にあることによって、濃度の最適化と共に、電気泳動用分離媒体の粘度をできるだけ上げることなく分離性能を更に満足できる条件を容易に見出すことが可能になる。上記重量平均分子量は、光散乱法またはゲル浸透クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）によって測定が可能である。

【0020】

水溶性セルロース誘導体の数平均分子量（Ｍ_ｎ）は、２００００～５０００００であることが好ましく、８００００～１６００００であることがより好ましい。上記数平均分子量は、光散乱法またはゲル浸透クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）によって測定が可能である。

【0021】

水溶性セルロース誘導体の多分散度（Ｍ_ｗ／Ｍ_ｎ）は、１．０～１００．０であってもよく、２．０～２０．０であってもよく、３．０～４．０であってもよい。上記多分散度は、上述した重量平均分子量を数平均分子量で除することによって求めることが可能である。

【0022】

水溶性セルロース誘導体の粘度（濃度２ｗｔ％、温度２５℃）は、５０～４０００ｃＰであることが好ましく、５０～１００ｃＰであることがより好ましい。粘度が上記範囲にあることによって、電気泳動の流路における電気泳動用分離媒体の充填、置換が容易になる。上記粘度は、ブルックフィールド粘度計で測定が可能である。

【0023】

電気泳動用分離媒体における水溶性セルロース誘導体の濃度は、０．２～２．０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．５～１．６％（ｗ／ｖ）であってもよい。

【0024】

水溶性セルロース誘導体は、公知の方法によって製造してもよい。また、水溶性セルロース誘導体は、市販品を精製せずにそのまま用いてもよいし、市販品を精製して用いてもよい。水溶性セルロース誘導体としてＨＰＭＣを用いる場合、市販品としては、例えば、後述する実施例で用いられているシグマアルドリッチジャパン社製のＨＰＭＣが挙げられる。

【0025】

「糖アルコール」とは、糖のカルボニル基が還元された鎖状の多価アルコールを意味する。「単糖又は二糖に由来する糖アルコール」とは、単糖又は二糖を還元することによって得られる糖アルコールを意味する。本実施形態において、糖アルコールとしては、例えば、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マルチトール、ソルビトールが挙げられ、これらの中から１つを選択して用いてもよいし、複数を組み合わせて用いてもよい。なお、糖アルコールに光学異性体（Ｄ体及びＬ体）が存在する場合、いずれの異性体を用いてもよく、又、これらの混合物を用いてもよい。糖アルコールは、マンニトールを含むことが好ましい。

【0026】

電気泳動用分離媒体における糖アルコールの濃度は、１～５ｗｔ％であることが好ましく、１～３ｗｔ％であることがより好ましい。濃度が上記範囲内にあることによって、電気泳動用分離媒体の分離性能を更に改善することが可能になる。

【0027】

「多糖類」とは、単糖がポリグリコシル化した高分子化合物を意味する。本実施形態において「低分子量の多糖類」とは、それ自体ではＤＮＡ等の対象物質に対する分離媒体として機能しない程度に低分子量である多糖類を意味し、例えば、後述する重量平均分子量を有する多糖類が挙げられる。多糖類としては、例えば、プルラン、アガロース、デキストラン、デキストリン、アミロース、キサンタンガム、マンナン、ガラクトマンナン、ジェランガム、カラギナン、カードラン、ペクチン、ウェランガム、アルギン酸、アルギン酸塩（例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸アンモニウム等）、アルギン酸エステル（例えば、アルギン酸プロピレングリコールエステル等）、カラヤガム、タマリンドシードガム、ラムザンガム等が挙げられ、これらの中から１つを選択して用いてもよいし、複数を組み合わせて用いてもよい。多糖類は、プルランを含むことが好ましい。

【0028】

多糖類の重量平均分子量（Ｍ_ｗ）は、１００００～８００００であることが好ましく、２００００～８００００であることがより好ましく、２２８００～８００００であることが更により好ましい。重量平均分子量が上記範囲内にあるものを適量使用することによって、増粘効果を極力抑えることができる。上記重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー法（ＧＰＣ法）によって測定が可能である。

【0029】

電気泳動用分離媒体における多糖類の濃度は、０．２～５ｗｔ％であることが好ましく、０．２５～１．０ｗｔ％であることがより好ましい。濃度が上記範囲内にあることによって、電気泳動用分離媒体の分離性能を更に改善することが可能になる。

【0030】

糖アルコール又は多糖類は、マンニトール、プルラン、又はこれらの組合わせを含むことが好ましい。

【0031】

電気泳動用分離媒体は、通常は液体であり、水溶液であることが好ましく、緩衝能を有する水溶液（以下、「緩衝溶液」という場合がある。）であることがより好ましい。ここで、「緩衝能」とは、溶液中における水素イオン濃度に対する緩衝作用を意味する。上記緩衝溶液としては、ＴＢＥ緩衝溶液（８９ｍＭ Ｔｒｉｓ、８９ｍＭ ホウ酸、２ｍＭ ＥＤＴＡ－Ｎａ_２－ｓａｌｔ、ｐＨ８．３）、ＴＡＥ緩衝溶液（４０ｍＭ トリスヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）、酢酸、１ｍＭ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ－Ｎａ_２－ｓａｌｔ）、ｐＨ８．３）等が挙げられる。また、これら緩衝溶液のイオン強度を変化させて使用する場合もある。例えば、２×ＴＢＥ緩衝溶液（１７８ｍＭ トリスヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）、１７８ｍＭ ホウ酸、４ｍＭ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ－Ｎａ_２－ｓａｌｔ）、ｐＨ８．３）などである。

【0032】

電気泳動用分離媒体の粘度（温度２５℃）は、１０～２００ｃＰであることが好ましく、２０～１００ｃＰであることがより好ましい。粘度が上記範囲にあることによって、電気泳動の流路における電気泳動用分離媒体の充填、置換が容易になる。上記粘度は、ブルックフィールド粘度計で測定が可能である。

【0033】

電気泳動用分離媒体は、本実施形態の効果を損なわない範囲において、ＤＮＡ染色試薬（例えば、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、商品名：ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｏｌｄ）、ロンザジャパン社製、商品名：ＧｅｌＳｔａｒ（登録商標）等の他の成分を含んでいてもよい。

【0034】

電気泳動する対象物質として核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を用いる場合、本実施形態に係る電気泳動用分離媒体において、１００～３００ｂｐのサイズ領域におけるサイズ分解能（％）は、３％以下であることが好ましい。ここで、サイズ分解能（％）とは、泳動したＤＮＡフラグメントのサイズ（ｂｐ）に対する分離可能な最小のサイズ差（ｂｐ）の比率を意味する。サイズ分解能は、値が小さい程、サイズの差が小さい２つのＤＮＡフラグメントを精度良く区別でき、分離性能が高いことを意味する。このようなサイズ分解能を有する電気泳動用分離媒体は、ゲノム編集による変異導入の確認のための電気泳動に好適に用いられる。上記サイズ分解能は、電気泳動することで得られるエレクトロフェログラムから求めることが可能である。具体的には、上記サイズ分解能は、上記エレクトロフェログラムにおいて近接した２つのピーク（「第１のピーク」及び「第２のピーク」という。）に着目して、以下の式から求めることができる。ここで、第１のピークのサイズ（ｂｐ）は、第２のピークのサイズ（ｂｐ）より小さいものとする。

サイズ分解能（％）＝（サイズ分離能［ｂｐ］／第１のピークのサイズ［ｂｐ］）
（ただし、サイズ分離能［ｂｐ］＝（近接した２つのピークのサイズ差［ｂｐ］）／Ｒ_ｓ）

【0035】

ここで、Ｒ_ｓは上記近接した２つのピークの幅及び高さがほぼ同じと仮定したときの分離度を意味する。Ｒ_ｓが所定の基準値よりも大きい場合、近接した２つのピークは分離していると判断する。例えば、Ｒ_ｓ≧０．８である場合、近接した２つのピークは十分に分離していると判断してもよい。Ｒ_ｓは、下記式によって求められる。

【0036】

【数1】

【0037】

式中、ｔは泳動時間、ｗ_ｂはベースラインにおけるピーク幅、４σはピークがガウス分布であるとした場合のベースラインにおけるピーク幅、Ｗ_ｈはピーク高さが１／２におけるピーク幅を示す。ｔ及びｗ_ｂにおける下付きの数字は、対応するピークの番号を意味する。ただし、４σは、電気泳動流路内におけるピークの拡がりを分散σ^２＝２Ｄｔ（Ｄは拡散係数）で示すことができるものと仮定し、拡散以外の要因（例えば、試料成分の流路内壁への吸着など）によるピーク拡がりが無視できる場合に用いられる。例えば、ｔ_１は第１のピークの泳動時間を意味し、ｔ_２は第２のピークの泳動時間を意味する。

【0038】

電気泳動する対象物質としてＤＮＡ又はＲＮＡを用いる場合、本実施形態に係る電気泳動用分離媒体において、２５～１００ｂｐのサイズ領域における分離可能サイズ差は、１～５ｂｐであることが好ましく、１～３ｂｐであることがより好ましい。このような分離可能サイズ差を有する電気泳動用分離媒体は、ゲノム編集による変異導入の確認のための電気泳動に好適に用いられる。分離可能サイズ差とは、Ｒ_ｓ＝０．８となるために必要な、２つのピークにおけるフラグメントサイズ（鎖長の大きさ）の差を意味している。上記分離可能サイズ差が小さい程、サイズの差が小さい２つのＤＮＡフラグメントを精度良く分離でき、分離性能が高いことを意味する。上記分離可能サイズ差は、電気泳動することで得られるエレクトロフェログラムから求めることが可能である。

【0039】

本実施形態に係る電気泳動用分離媒体は、水溶性セルロース誘導体と、糖アルコール又は比較的低分子量の多糖類と、を含む。上記電気泳動用分離媒体は、このような構成を備えることで、粘度を上げることなく分離性能を改善することが可能になる。短鎖領域（例えば２５～２５０ｂｐ）の二本鎖ＤＮＡ産物の分離性能を上げるために、分離媒体として比較的低分子量の水溶性ポリマーを高濃度で用いる方法が従来から知られていた。しかし、この方法では分離媒体の粘度が上がるため、マイクロチップを繰り返し使用する際の分離媒体の再充填及び置換には、十分な圧力をかけるための装置が別途必要になり、電気泳動装置として大掛かりなものになってしまうという課題を有していた。上記電気泳動用分離媒体は、それ自体ではＤＮＡ等の対象物質に対する分離媒体として機能しない低分子量の糖アルコール又は多糖類（例えば、分子量が８００００程度またはそれ以下）を、水溶性ポリマーである水溶性セルロース誘導体に添加しているため、粘度を上げずに分離性能を改善することができる。

【0040】

さらに、水溶性セルロース誘導体（例えば、ＨＰＭＣ）は、セルロースのヒドロキシル基、ヒドロキシプロピル基等が多数存在し、糖アルコール、多糖類と水素結合を形成し得る。このため、単一成分では分子構造上クロスリンクせず、直鎖上に存在するセルロース誘導体分子同士が、糖アルコールまたは多糖類が介在することにより相互作用し、篩い分け効果を及ぼす網目構造が変化する。さらに、上記セルロースのヒドロキシル基、ヒドロキシプロピル基等は、ＤＮＡとも水素結合し得る。このため、本実施形態に係る電気泳動用分離媒体中を泳動するＤＮＡ産物等は、純粋なサイズによる分離に加えて、水素結合によるアフィニティの影響を受け、分離選択性が変化する。結果として、短鎖領域では、同一のＤＮＡサイズであっても塩基配列の違い、及びわずかな変異の有無によって、電気泳動における移動度に差が生じると本発明者らは考えている。このようなメカニズムを考慮すると、本実施形態において用いられている糖アルコール及び多糖類は、水溶性セルロース誘導体に対して水素結合を形成できるという点で同一の技術的特徴を有している。さらに、糖アルコール、多糖類に限らず、水素結合を形成できる化合物であれば、水溶性セルロース誘導体と組み合わせることで上記電気泳動用分離媒体として用いることが可能である。水素結合を形成できる化合物としては、例えば、ＣＯＯＨ基又はＮＨ_２基を含む化合物等が挙げられる。

【0041】

（電気泳動用試薬キット）
本実施形態に係る電気泳動用試薬キット（以下、「試薬キット」という場合がある。）は、上記電気泳動用分離媒体を含む。試薬キットには、緩衝溶液、ＤＮＡ染色試薬、分子量マーカ、内部標準マーカ、容器、取扱説明書等を含んでいてもよい。

【0042】

（電気泳動方法）
本実施形態に係る電気泳動方法は、試料中の対象物質の電気泳動方法であって、
（Ａ）電気泳動用分離媒体が充填された流路に、前記試料を導入する工程と、
（Ｂ）前記流路に電圧を印加して電気泳動を行い、前記試料中の前記対象物質の分離を行う工程と、
を含む。

【0043】

工程（Ａ）：電気泳動用分離媒体が充填された流路に、試料を導入する工程
工程（Ａ）における「電気泳動用分離媒体が充填された流路」とは、試料中に含まれる対象物質が、電気泳動によって移動するための流路であって、流路内に本実施形態に係る電気泳動用分離媒体が充填されている流路を意味する。上記流路の長さは、特に制限はないが、例えば、１０～４０ｍｍが挙げられる。上記流路のサイズ（例えば、流路であるキャピラリーチューブの内径、マイクロチップ上に設けられた流路の幅等）は、特に制限はないが、例えば、２０～１００μｍが挙げられる。

【0044】

上記流路は、キャピラリーチューブであってもよいし、マイクロチップ上に設けられたマイクロ流路であってもよい。キャピラリーチューブまたはマイクロチップ上に設けられたマイクロ流路がガラス等で構成されている場合、電気浸透流を抑制するため、または試料中に含まれる夾雑成分の吸着を抑制するために、上記流路の表面がコーティング（例えば、ポリアクリルアミドコーティング）されていてもよい。ポリアクリルアミドコーティングは、例えば以下のようにして上記流路の表面に施される。まずメタクリル基を有するシランカップリング剤を、マイクロ流路の表面に作用させて上記表面にメタクリル基を導入する。次に、このメタクリル基にアクリルアミドモノマーを作用させ、所定の条件にて重合反応を進めることで、マイクロ流路の表面にポリアクリルアミドコーティングを行う。

【0045】

流路に導入する試料は、特に制限ないが、溶液であることが好ましく、例えば、ＤＮＡ等が溶解したＴＥ緩衝溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ－Ｎａ_２－ｓａｌｔ、ｐＨ８．０）であってもよい。上記試料は、内部標準マーカを含んでもよい。内部標準マーカとしては、例えば、株式会社島津製作所製、商品名ＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる内部標準マーカが挙げられる。

【0046】

試料中に含まれる対象物質は、イオン化している物質であれば特に制限はないが、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）又はタンパク質を含むことが好ましく、ＤＮＡを含むことがより好ましい。ＤＮＡは、二本鎖ＤＮＡ（例えば、ヘテロデュープレックスＤＮＡ、ホモデュープレックスＤＮＡ等）であってもよいし、一本鎖ＤＮＡであってもよい。

【0047】

上記試料は、流路のどの位置に導入してもよいが、十分な泳動距離を確保する観点から、上記流路の一端側に導入するのが好ましい。

【0048】

工程（Ｂ）：流路に電圧を印加して電気泳動を行い、試料中の対象物質の分離を行う工程
工程（Ｂ）における電圧は、流路の全体又は一部に印加すればよい。十分な泳動距離を確保する観点からは、上記電圧は、流路の両端の間に印加することが好ましい。印加する電圧は、電気泳動流路の長さ、サイズ、試料、対象物質の種類等に応じて適宜決定できる。印加する電圧は、例えば、０．２～１０ｋＶが挙げられる。

【0049】

上記電気泳動方法は、（Ｃ）分離された対象物質を検出する工程を更に含んでいてもよい。工程（Ｃ）は、分離された対象物質を光学的手法によって検出することを含んでいてもよい。光学的手法による検出としては、例えば、吸光度または蛍光の測定が挙げられる。検出に用いる波長は、試料、対象物質の種類等に応じて適宜決定できる。

【0050】

本実施形態に係る電気泳動方法は、例えば、マイクロチップ電気泳動装置によって、工程（Ａ）から工程（Ｃ）を全自動で行ってもよい。マイクロチップ電気泳動装置としては、例えば、株式会社島津製作所製のＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）（商品名）が挙げられる。具体的には、まずマイクロチップ電気泳動装置にマイクロチップ（例えば、株式会社島津製作所製、商品名 Ｔｙｐｅ ＷＥ）、電気泳動用分離媒体、試料、及び内部標準マーカをセットする。その後、電気泳動用分離媒体を充填する圧力（１００～５００ｋＰａ）、及びマイクロチップ上に設けられた流路の両端に印加する電圧（０．２～１．４ｋＶ）を必要に応じて変更して、全自動で電気泳動を行う。

【0051】

本実施形態に係る電気泳動方法は、ゲノム編集による変異導入の確認のための電気泳動に好適であり、特に、ヘテロデュープレックスＤＮＡ産物の分離に好適である。

【実施例】

【0052】

以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。

【0053】

（電気泳動用分離媒体の調製）
１．ＨＰＭＣを含有するＴＢＥ緩衝溶液の調製
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は、市販品（シグマアルドリッチジャパン社製）を精製せずそのまま使用した。ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって各ＨＰＭＣの数平均分子量（Ｍ_ｎ）、重量平均分子量（Ｍ_ｗ）、及び多分散度（Ｍ_ｗ／Ｍ_ｎ）を測定した。具体的には、分子量既知の標準試料（分子量５０４～１８０００００）を用いて、ＧＰＣ分析を行い、その溶出時間から較正曲線を作成した。測定対象である各ＨＰＭＣを含む試料（濃度０．４％（ｗ／ｖ））を用いて、標準試料の場合と同様の分析条件にてＧＰＣ分析を行い、上記較正曲線に基づいてＭ_ｎ、Ｍ_ｗ、及びＭ_ｗ／Ｍ_ｎを求めた。

【0054】

ＧＰＣの分析条件
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ ＯＨｐａｋ ＳＢ－８０６Ｍ ＨＱ、ガードカラムＳｈｏｄｅｘ ＯＨｐａｋ ＳＢ－Ｇ
移動相：０．１ｍｏｌ／Ｌ硝酸ナトリウム
流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度：４０℃
検出器：示差屈折率計、株式会社島津製作所製、ＲＩＤ－２０Ａ（商品名）

【0055】

各ＨＰＭＣの粘度は、ブルックフィールド粘度計で測定した。具体的には、以下の手順で測定した。まずＮＩＳＴ準拠の粘度計標準液（１００ｍＰａ・ｓ）を用いて測定法の妥当性を検証し、測定対象であるＨＰＭＣを含む試料（濃度 ２．０％（ｗ／ｖ））を同様の条件にて粘度測定を行った。
粘度測定条件
粘度計：ブルックフィールドＤＶ－ＩＩ＋ Ｐｒｏ
スピンドル：ＣＰＡ－４０Ｚ
温度：２５℃
表１に使用したＨＰＭＣの一覧表を示す。

【0056】

【表1】

【0057】

その後、２×ＴＢＥ緩衝溶液（１７８ｍＭ Ｔｒｉｓ、１７８ｍＭ ホウ酸、４ｍＭ ＥＤＴＡ－Ｎａ_２－ｓａｌｔ、ｐＨ８．３）に、濃度が２％（ｗ／ｖ）となるように各ＨＰＭＣを完全に溶解して、ＨＰＭＣを含有するＴＢＥ緩衝溶液を得た。ＨＰＭＣを含有するＴＢＥ緩衝溶液は、使用時まで、下限臨界溶液温度（４５℃）を超えないように保管した。また、熱負荷によって緩衝溶液中のＨＰＭＣが不溶化する場合は、冷却によって再溶解した。

【0058】

２．電気泳動用分離媒体の調製
調製したＨＰＭＣを含有するＴＢＥ緩衝溶液に、ＤＮＡ染色試薬であるＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｏｌｄ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、商品名）を、１／１００００希釈になるよう溶解し、更にマンニトール又はプルランを後述する濃度となるように溶解し、十分混合することによって電気泳動用分離媒体を得た。

【0059】

（電気泳動用試料の調製）
対象物質であるＤＮＡサイズマーカ（２５ｂｐ ＤＮＡラダー、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、又は２５ｂｐ ＤＮＡステップラダー、Ｐｒｏｍｅｇａ社製を、７．２～２０ｎｇ／μＬになるようＴＥ緩衝溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ－Ｎａ_２－ｓａｌｔ、ｐＨ８．０）で希釈して、電気泳動用試料を調製した。内部標準マーカは、ＤＮＡ分析用のものを使用した（株式会社島津製作所製、商品名ＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キット）。

【0060】

（データの測定手順）
マイクロチップ電気泳動装置（株式会社島津製作所製、商品名ＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標））にマイクロチップ（株式会社島津製作所製、商品名 Ｔｙｐｅ ＷＥ）、電気泳動用分離媒体、試料、及び内部標準マーカをセットした。その後、電気泳動用分離媒体を充填する圧力（１００～５００ｋＰａ）、及びマイクロチップ上に設けられた流路の両端に印加する電圧（０．２～１．４ｋＶ）を必要に応じて変更して、全自動で電気泳動を行い、得られた実験データを分析した。

【0061】

（本実施形態に係る電気泳動用分離媒体と、従来の電気泳動用分離媒体との比較）
本実施形態に係る電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）＋３％（ｗ／ｖ）マンニトール；実施例１）と、従来から用いられている電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）（重量平均分子量Ｍ_ｗ＝４７５０００、多分散度Ｍ_ｗ／Ｍ_ｎ＝４．２８、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度９０ｃＰ（２ｗｔ％、２５℃））；比較例１）とを比較した実験結果を図１～３及び表２に示す。図２、３及び表２において、「Ａ０３０８Ａ」、「Ｗ７６１３」との表記はチップＩＤを示しており、異なるチップを用いたこと以外は同じ分離条件で測定を行っており、いずれも実施例１に含まれる。対象物質はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製のＤＮＡサイズマーカ（～５００ｂｐ）を、内部標準マーカはＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる高分子側のマーカを用いた。

【0062】

エレクトロフェログラム（図１）を比較すると、電気泳動用分離媒体の粘度が同程度であるにもかかわらず、実施例１では、比較例１よりも泳動時間が遅くなると同時に、３００ｂｐ付近における各ピーク間の間隔が広がっており、分離性能が改善していた。さらに、１００～３００ｂｐまでのサイズ領域におけるサイズ分解能（％）は、比較例１では約４％程度であるのに対して、実施例１では約３％程度にまで改善していた（図２）。また、２５～１００ｂｐの分離可能サイズ差は、比較例１では３～４ｂｐであるのに対して、実施例１では３ｂｐ以下にまで改善していた（図３）。

【0063】

【表2】

【0064】

（ＨＰＭＣにマンニトールを添加することによる分離性能の改善効果の検証）
本実施形態に係る電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）＋１ｗｔ％マンニトール；実施例２）と、マンニトールを添加していない電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）；比較例２）とを比較した実験結果を図４及び表３に示す。対象物質はＰｒｏｍｅｇａ社製の２５ｂｐステップラダー（～３００ｂｐ）を用いた。内部標準マーカはＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる高分子側のマーカを用いた。１ｗｔ％のマンニトールを添加することによって、泳動時間が遅くなると同時に、３００ｂｐ付近における各ピーク間の間隔が広がっており、分離性能が改善していた。

【0065】

【表3】

【0066】

次に、本実施形態に係る電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）＋３ｗｔ％マンニトール；実施例３）と、マンニトールを添加していない電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）；比較例３）とを比較した実験結果を図５及び表４に示す。対象物質はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製の２５ｂｐステップラダー（～５００ｂｐ）を用いた。内部標準マーカはＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる高分子側のマーカを用いた。３ｗｔ％のマンニトールを添加することによって、泳動時間が遅くなると同時に、３００ｂｐ付近における各ピーク間の間隔が広がっており、分離性能が改善していた。特に１２５ｂｐ付近のピークは、２つのピークに分離しており、分離性能が大きく改善していることが示されている。

【0067】

【表4】

【0068】

（ＨＰＭＣにプルランを添加することによる分離性能の改善効果の検証）
本実施形態に係る電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）＋０．２５ｗｔ％プルラン；実施例４）と、プルランを添加していない電気泳動用分離媒体（２．０％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃２）；比較例４））とを比較した実験結果を図６及び表５に示す。用いたプルランの重量平均分子量は、２２８００であった。対象物質はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製の２５ｂｐステップラダー（～５００ｂｐ）を用いた。内部標準マーカはＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる高分子側のマーカを用いた。０．２５ｗｔ％のプルランを添加することによって、ピーク幅を拡げずに泳動時間を遅延させる効果が認められ、例えば、２００ｂｐの分離度（Ｒ_ｓ）は、２．３７から２．５５に改善されていた。

【0069】

【表5】

【0070】

（重量平均分子量が異なるＨＰＭＣを用いたときの実験データ）
本実施形態に係る電気泳動用分離媒体（１．６％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃１）＋３ｗｔ％マンニトール；実施例５）と、マンニトールを添加していない電気泳動用分離媒体（１．６％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃１）；比較例５）とを比較した実験結果を図７及び表６に示す。対象物質はＰｒｏｍｅｇａ社製の２５ｂｐステップラダー（～３００ｂｐ）を用いた。内部標準マーカはＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮＡ（登録商標）用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる高分子側のマーカを用いた。重量平均分子量が小さいＨＰＭＣを用いた場合でも、３ｗｔ％のマンニトールを添加することによって、泳動時間が遅くなると同時に、３００ｂｐ付近における各ピーク間の間隔が広がっており、全体的に分離性能が改善した（１００ｂｐ：Ｒ_ｓ＝３．６１→４．７１、２００ｂｐ：Ｒ_ｓ＝１．８４→２．２９、３００ｂｐ：Ｒ_ｓ＝１．２３→１．５０）。

【0071】

【表6】

【0072】

次に、電気泳動用分離媒体として、０．５％（ｗ／ｖ）ＨＰＭＣ（表１の＃３）の溶液（比較例６）の実験結果を図８及び表７に示す。対象物質はＰｒｏｍｅｇａ社製の２５ｂｐステップラダー（～３００ｂｐ）を用いた。内部標準マーカはＭＣＥ（登録商標）－２０２ ＭｕｌｔｉＮ（登録商標）Ａ用ＤＮＡ－５００試薬キットに含まれる高分子側のマーカを用いた。高分子量のＨＰＭＣを希釈して使用したことにより泳動時間の短い分離が得られているが、この場合でもマンニトールを添加することによって泳動時間の遅延効果と分離性能の改善が示唆される。

【0073】

【表7】

【0074】

以上のように本発明の実施形態及び実施例について説明を行なったが、上述の各実施形態及び各実施例の構成を適宜組み合わせることも当初から予定している。

【0075】

今回開示された実施の形態及び実施例はすべての点で例示であって、制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した実施の形態及び実施例ではなく特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味、及び範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】