特許 6994116 ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株およびその用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2021-12-14

(45)【発行日】2022-02-04

(54)【発明の名称】ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株およびその用途

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20220128BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20220128BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 25/22 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 25/20 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20220128BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20220128BHJP

   A61K 35/74 20150101ALI20220128BHJP

   A23K 10/16 20160101ALI20220128BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20220128BHJP

【ＦＩ】

C12N1/20 A ZNA

A23L33/135

A61P25/24

A61P25/28

A61P25/22

A61P25/20

A61P25/00

A61P25/16

A61P25/14

A61K35/747

A61K35/74 A

A23K10/16

C12N15/11 Z

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2020541769

(86)(22)【出願日】2019-02-07

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-05-13

(86)【国際出願番号】 KR2019001525

(87)【国際公開番号】W WO2019151843

(87)【国際公開日】2019-08-08

【審査請求日】2020-07-30

(31)【優先権主張番号】10-2018-0013366

(32)【優先日】2018-02-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

【微生物の受託番号】KCTC  KCTC 13278BP

(73)【特許権者】

【識別番号】520106231

【氏名又は名称】コバイオラブス，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チョイ，ヨンビン

(72)【発明者】

【氏名】キム，ジス

(72)【発明者】

【氏名】リ，ジュン－チュル

(72)【発明者】

【氏名】コ，クァン ピョ

(72)【発明者】

【氏名】ナム，テ－ウク

(72)【発明者】

【氏名】キム，ジュン－ヒョン

(72)【発明者】

【氏名】チョ，ボ－ラム

【審査官】竹内 祐樹

(56)【参考文献】

【文献】特開２０１２－０１７２８２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１５－２１３５０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】Kin's 乳酸菌と発酵，Vol.8，2011年，p.1-11

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／００－７／０８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株。

【請求項2】

ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株は、配列番号１で表される１６ｓ ｒＤＮＡ配列を含むものである、請求項１に記載の菌株。

【請求項3】

ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株は、セロトニン分泌増加、炎症性サイトカイン発現抑制、腸内有害菌の減少、および抗酸化作用からなる群より選択されるいずれか一つ以上の特性を示すものである、請求項１に記載の菌株。

【請求項4】

ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む、神経系疾患の予防または治療用の薬学組成物。

【請求項5】

前記神経系疾患は、精神障害または神経変性疾患である、請求項４に記載の薬学組成物。

【請求項6】

前記精神障害は、ストレスによる緊張、不安、憂鬱症、気分障害、不眠症、妄想性障害、強迫性障害、偏頭痛、記憶障害、認知障害、および注意力障害からなる群より選択されたいずれか一つ以上である、請求項５に記載の薬学組成物。

【請求項7】

前記神経変性疾患は、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、脊髄小脳委縮症（Ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ Ａｔｒｏｐｈｙ）、トゥレット症候群（Ｔｏｕｒｅｔｔｅ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フリードライヒ運動失調症（Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ’ｓ Ａｔａｘｉａ）、マチャド・ジョセフ病（Ｍａｃｈａｄｏ－Ｊｏｓｅｐｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、認知症、ジストニア（Ｄｙｓｔｏｎｉａ）、および進行性核上性麻痺（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ Ｐａｌｓｙ）からなる群より選択されたいずれか一つ以上である、請求項５に記載の薬学組成物。

【請求項8】

少なくとも一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含む、請求項４に記載の薬学組成物。

【請求項9】

ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患の予防または改善用食品組成物。

【請求項10】

少なくとも一つ以上の賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含む、請求項９に記載の食品組成物。

【請求項11】

ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む、神経系疾患の予防または改善用の動物飼料用添加剤。

【請求項12】

少なくとも一つ以上の賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含む、請求項１１に記載の動物飼料用添加剤。

【請求項13】

神経系疾患の予防または治療に使用するための、ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物。

【請求項14】

神経系疾患の予防または治療のための予防または治療用薬剤を製造するための、ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）菌株およびその用途に関するものであって、より詳しくは、新規プロバイオティクであるラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株、その生菌体、死菌体、培養物、破砕物または抽出物を含有する組成物およびその人間の精神健康改善のための食品医薬品的用途に関するものである。

【背景技術】

【0002】

プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）は腸内微生物均衡を助ける抗菌活性と酵素活性を有する微生物および前記微生物が生産する生産物をいう。併せて、プロバイオティクスは乾燥細胞や発酵産物形態で人や動物に供給されて、腸内菌叢を改善する単一または複合菌株形態の生菌と定義されている。プロバイオティクスが備えなければならない特性は、人間の腸内を生息地とし、非病原性、無毒性の特性を有し、腸へ行く間に生き残らなければならない。さらに、伝達される食品中で消費される前に生存率と活性を維持し、感染予防として使用される抗生剤に対して敏感でなければならず、抗生剤耐性を有するプラスミドを保有してはならない。また、腸内環境で酸、酵素、胆汁に対する耐性を備えなければならない。

【0003】

このようなプロバイオティクスとしては、消化酵素（ａｍｙｌａｓｅ、ｐｒｏｔｅａｓｅ、ｌｉｐａｓｅ、ｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）生成能力に優れたバチルス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、乳酸を生成するラクトバチルス種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、家畜の糞便に残っている悪臭誘発物質（アンモニア、硫化水素、アミン類など）を代謝過程に用いて悪臭誘発を防ぐ光合成バクテリア（Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ）などがその例として挙げられる。最近、プロバイオティクスは、腸健康改善をはじめとする多様な健康機能改善効果が報告されるにつれて既存の化合物に基づいた治療剤を代替できる主要な治療物質として脚光を浴びている。

【0004】

神経系疾患であって、現代社会に急増するストレスなどによって不安、憂鬱、精神分裂、認知障害などを含む精神障害と、老化と関連があり時々他の神経学的欠損と共に記憶力、運動能力、認知能力および感覚能力のうちの一つ以上の退化または損失が伴う中枢神経系（ＣＮＳ）および／または末梢神経系（ＰＮＳ）の神経細胞の漸次的な消失を特徴とする神経変性疾患が増加している。

【0005】

精神障害を患う患者は、ひどい場合、自殺事故につながれることがあり、特に憂鬱症患者の過半数以上が自殺を考慮すると報告されたことがあり、実際に１０～１５％の患者が自殺を施行すると知られている。憂鬱症は意欲低下と憂鬱感を主要症状にし多様な精神的および身体的症状を起こして日常機能の低下をもたらす疾患であって、一生有病率中の約１５～２０％が憂鬱障害と報告されている。憂鬱症の発病原因についてはまだ明確に明らかになっていないが、他の精神疾患のように多様な生化学的、遺伝的、そして環境的要因が疾病を引き起こすと知られている。憂鬱症の一生有病率は、女性の場合１０～２５％、男性の場合５～１２％程度で、女性でその頻度数が２倍程度多い。

【0006】

このように憂鬱症が今日代表的な高頻度疾患として発病しており、憂鬱症は心身を同時に悪化させる疾患であって、適切に治療されなければ数か月から数年間持続されながら人間関係の瓦解や職業的な生産性の喪失、無能感に陥て死に至ることもあって、患者個人だけでなく家族、社会にまで大きな負担を与えることがある。

【0007】

前記のような憂鬱症の深刻性が報告されてはいるが、いまだに憂鬱症の原因と抗憂欝剤の作用メカニズムが完ぺきに明らかになってはいない。但し、一般に中枢神経系のシナプス内のモノアミン系神経伝達物質であるセロトニン（ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ、５－ＨＴ）が不足すれば憂鬱症が誘発されるということが学界に広く知られている（Ｓｏｄｈｉ ＭＳ ｅｔ ａｌ、Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ ２００４、５９、１１１－１７４）。

【0008】

現在臨床に使用される抗憂欝剤は大部分モノアミン系神経伝達物質の作用を強化する薬物であって、神経細胞のセロトニンやノルエピネフリンの再吸収を抑制する物質（ＳＳＲＩ、ＳＮＲＩ、ＴＣＡｓ系など）、モノアミン酸化酵素抑制剤（ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｏｘｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）のようにセロトニンやドーパミンなどの分解を抑制する物質である。しかし、現在韓国の憂鬱症患者中の約１０－２５％のみが抗憂欝剤治療を受けており、このうちの４０％程度は副作用などによって順応度が落ちて治療を中断すると知られており、さらに抗憂欝剤を服用しても反応がない非反応群（ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）が３３％に達すると報告されており、より効果的な新たな治療剤の開発が必要であるのが実情である。

【0009】

また、神経変性疾患は多様な原因によって脳機能が損傷されながら以前に比べて認知機能が持続的且つ全般的に低下して日常生活に相当な支障を招く症状であって、このような認知障害は漸進的に精神荒廃を招き、結局死を招く、記憶、認知、推論、判断および感情安定の進行性損失を臨床的な特徴とする。

【0010】

このような疾患の一つの例として、アルツハイマー病（ＡＤ）は老人たちの進行性精神的機能喪失（認知症）の通常の原因であり、米国では医学的死亡原因中の４番目のものと見なされる。特に、アルツハイマー病は記憶を含む認知作用において基本的な役割を果たす前脳基底部でコリン性ニューロンの退行と連携している（Ｂｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９８８、１２、１６３－１９５）。また、認知障害および退行性脳障害は多様な人種および種族で世界的に発見され、主要な公共の健康問題になった。現在これら病気は米国のみで約２百万～３百万人に影響を与えていると推定されているが、現在使用される薬物処置では治療が不可能であり、人間寿命が増加するにつれて全世界的に増加していて、初期に予防することができるように注意を払うことが重要であると言える。

【0011】

このような背景下に、神経系疾患に対する効果的な治療剤の開発が急を要するのが実情である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

前記のような問題点を解決するために、本発明者らはプロバイオティクスの健康増進効果が属（ｇｅｎｕｓ）と種（ｓｐｅｃｉｅｓ）の一般的特徴と見にくく特定の菌株（ｓｔｒａｉｎ）特異的な効果に該当するのを考慮して（Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ａ ｊｏｉｎｔ ＦＡＯ／ＷＨＯ ｗｏｒｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｏｎ ｄｒａｆｔｉｎｇ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｆｏｏｄ、Ｌｏｎｄｏｎ Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ、２００２）、多様なプロバイオティクス菌株をスクリーニングして神経系疾患改善に優れた効果を示す菌株を確認することによって本発明を完成するようになった。

【0013】

これにより、本発明の目的は、新規乳酸菌を提供することにある。

【0014】

また、本発明の他の目的は、新規乳酸菌の多様な食品医薬品的用途を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0015】

前記目的を達成するために、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株を提供する。

【0016】

本発明はまた、前記菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む薬学組成物を提供する。

【0017】

本発明はまた、前記菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患予防または治療用薬学組成物を提供する。

【0018】

本発明はまた、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患予防または改善用食品組成物を提供する。

【0019】

本発明はまた、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む動物飼料用添加剤を提供する。

【0020】

本発明はまた、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上の治療学的に有効な量をこれを必要とする個体に投与する段階を含む神経系疾患の予防または治療方法を提供する。

【0021】

本発明はまた、神経系疾患の予防または治療に使用するためのラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物を提供する。

【0022】

本発明はまた、神経系疾患の予防または治療用薬剤を製造するための前記菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物の用途を提供する。

【0023】

本発明はまた、前記菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患予防または改善用食品組成物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】多様なラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属菌株がセロトニン生合成経路の律速酵素であるＴＰＨ－１の発現に及ぼす影響を比較した結果（Ａ）と商業的に販売されている菌株と対比してラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株がＴＰＨ－１の発現に及ぼす影響差を確認した結果（Ｂ）である。

【図2】Ｙ－ＭＡＺＥテストのための実験器具の模式図（Ａ）およびＹ－ＭＡＺＥテストによるラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株投与の変更行動力改善を測定した結果（Ｂ）である。

【図3】Ｙ－ＭＡＺＥテストでラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株投与によるＴＰＨ－２遺伝子発現増加およびセロトニン（５－ＨＴ）濃度増加を確認した結果を示す。

【図4】社会的攻撃（ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ）によって動物モデルにストレスを誘発させるためのケージ（Ａ）および社会的回避実験（ｓｏｃｉａｌ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｔｅｓｔ）のための実験ボックスの模式図（Ｂ）である。

【図5】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株投与時、社会的攻撃によって誘導されたストレス回復力改善効果を社会的回避実験で確認した結果である。

【図6】尾懸垂試験法を示す模式図（Ａ）およびＣ５７ＢＬ／６マウスにラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株投与時、社会的攻撃による誘導されたストレスに対する回復力を尾懸垂試験で確認した結果（Ｂ）である。

【図7】社会的回避実験（Ｓｏｃｉａｌ Ａｖｏｉｄａｎｃｅ Ｔｅｓｔ）動物モデルの脳で、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株投与時、炎症性サイトカインであるＩＬ－１βの発現変化を確認した結果である。

【図8】社会的回避実験（Ｓｏｃｉａｌ Ａｖｏｉｄａｎｃｅ Ｔｅｓｔ）動物モデルで、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株投与時、脾臓でのＣＤ４／ＣＤ８比率変化およびＣＤ３＋ＣＤ４＋内ＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５細胞の変化を確認した結果である。

【図9】ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株に凍結保護剤を処理して凍結乾燥による生存率変化を確認した結果である。

【発明を実施するための形態】

【0025】

別様に定義されない限り、本明細書で使用された全ての技術的および科学的用語は本発明の属する技術分野で熟練した専門家によって通常理解されるものと同一な意味を有する。一般に本明細書で使用された命名法は本技術分野でよく知られていて通常使用されるものである。

【0026】

本発明では、人間に由来した多様なプロバイオティクス菌株のセロトニン生合成能力を比較し、その中でもラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株がセロトニン生合成に特に卓越した効果を示すことを確認し、その神経系疾患に対する優れた予防、改善および治療効果を確認した。また、前記菌株の１６ｓ ｒＤＮＡを分析した結果、前記菌株が従来公示されたことがない新規な菌株であるのを確認した。

【0027】

本発明の一実施形態によれば、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株を提供する。

【0028】

本発明による前記菌株は、配列番号１で表される１６ｓ ｒＤＮＡ配列を含むことを特徴とする。

【0029】

＜配列番号１＞
ＴＡＴＣＡＧＴＡＣＧＴＧＣＴＡＴＡＡＴＧＣＡＧＴＣＧＡＣＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＴＴＧＡＴＴＧＧＴＧＣＴＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＴＴＴＡＣＡＴＴＴＧＡＧＴＧＡＧＴＧＧＣＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＣＡＣＧＴＧＧＧＡＡＡＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＴＡＡＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＴＧＣＴＡＡＴＡＣＣＧＣＡＴＡＡＣＡＡＣＴＴＧＧＡＣＣＧＣＡＴＧＧＴＣＣＧＡＧＣＴＴＧＡＡＡＧＡＴＧＧＣＴＴＣＧＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＴＴＧＧＡＴＧＧＴＣＣＣＧＣＧＧＣＧＴＡＴＴＡＧＣＴＡＧＡＴＧＧＴＧＧＧＧＴＡＡＣＧＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＣＡＡＴＧＡＴＡＣＧＴＡＧＣＣＧＡＣＣＴＧＡＧＡＧＧＧＴＡＡＴＣＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＧＧＡＣＴＧＡＧＡＣＡＣＧＧＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＴＣＣＡＣＡＡＴＧＧＡＣＧＡＡＡＧＴＣＴＧＡＴＧＧＡＧＣＡＡＣＧＣＣＧＣＧＴＧＡＧＴＧＡＡＧＡＡＧＧＧＴＴＴＣＧＧＣＴＣＧＴＡＡＡＡＣＴＣＴＧＴＴＧＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＡＣＴＧＴＴＣＡＧＧＴＡＴＴＧＡＣＧＧＴＡＴＴＴＡＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＣＡＣＧＧＣＴＡＡＣＴＡＣＧＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＧＴＡＧＧＴＧＧＣＡＡＧＣＧＴＴＧＴＣＣＧＧＡＴＴＴＡＴＴＧＧＧＣＧＴＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＴＴＴＴＡＡＧＴＣＴＧＡＴＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＣＴＣＡＡＣＣＧＡＡＧＡＡＧＴＧＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＣＴＴＧＡＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＡＡＣＴＣＣＡＴＧＴＧＴＡＧＣＧＧＴＧＡＡＡＴＧＣＧＴＡＧＡＴＡＴＡＴＧＧＡＡＧＡＡＣＡＣＣＡＧＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＴＧＴＡＡＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＡＴＧＧＧＴＡＧＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＴＡＧＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＡＧＴＣＣＡＴＡＣＣＧＴＡＡＡＣＧＡＴＧＡＡＴＧＣＴＡＡＧＴＧＴＴＧＧＡＧＧＧＴＴＴＣＣＧＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＡＡＣＧＣＡＴＴＡＡＧＣＡＴＴＣＣＧＣＣＴＧＧＧＧＧＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＧＣＡＡＧＧＣＴＧＡＡＡＣＴＣＡＡＡＧＧＡＡＴＴＧＡＣＧＧＧＧＧＧＣＣＣＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＴＧＧＧＡＧＣＡＴＧＴＧＧＧＴＴＴＡＡＴＴＣＡＡＡＧＣＴＡＣＧＣＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＴＡＣＣＣＡＧＧＴＴＴＴＧＡＣＡＴＡＣＴＡＡＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＡＡＡＧＡＧＡＴＴＡＧＡＡＣＧＴＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＧＧＧＡＣＡＴＧＧＧＡＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＧＴＧＣＡＴＧＧＧＴＴＧＧＴＣＧＴＣＡＧＣＴＴＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧＡＧＡＡＴＧＴＴＴＧＧＧＴＴＴＡＡＧＴＴＣＣＣＣＧＡＡＡＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣＣＣＴＴＡＴＴＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＡＴＴＡＡＧＴＴＧＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＡＣＴＧＣＣＧＧＴＧＡＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＧＡＡＧＧＴＧＧＧＧＡＴＧＡＣＧＴＣＡＡＡＴＣＡＴＣＡＴＧＣＣＣＣＴＴＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＣＴＡＣＡＣＡＣＧＴＧＣＴＡＣＡＡＴＧＧＡＴＧＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＴＴＧＣＧＡＡＣＴＣＧＣＧＡＧＡＧＴＡＡＧＣＴＡＡＴＣＴＣＴＴＡＡＡＧＣＣＡＴＴＣＴＣＡＧＴＴＣＧＧＡＴＴＧＴＡＧＧＣＴＧＣＡＡＣＴＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＴＣＧＧＡＡＴＣＧＣＴＡＧＴＡＡＴＣＧＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＴＧＣＣＧＣＧＧＴＧＡＡＴＡＣＧＴＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＴＡＣＡＣＡＣＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＡＧＴＴＴＧＴＡＡＣＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＧＧＴＧＧＧＧＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＧＣＣＴＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧ

【0030】

本発明による菌株は、セロトニン分泌増加、炎症性サイトカイン発現抑制、腸内有害菌の減少、および抗酸化作用からなる群より選択されるいずれか一つ以上の特性を示すことを特徴とする。

【0031】

また、本発明による菌株は、炭素源としてＤ－リボース、Ｄ－ガラクトース、Ｄ－グリコース、Ｄ－フルクトース、Ｄ－マンノース、マンニトール、ソルビトール、α－メチル－Ｄ－マンノシド、α－メチル－Ｄ－グルコシド、Ｎ－アセチル－グルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン（ｅｓｃｕｌｉｎ）、サリシン（ｓａｌｉｃｉｎ）、セロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース（ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ）、スクロース、トレハロース、メレジトース（ｍｅｌｅｚｉｔｏｓｅ）、およびゲンチオビオースからなる群より選択されるいずれか一つ以上を用いることができる。

【0032】

また、本発明による菌株は、ロイシンアリールアミダーゼ、バリンアリールアミダーゼ、α－グルコシダーゼ、およびβ－グルコシダーゼからなる群より選択されるいずれか一つ以上の酵素活性を有する。

【0033】

本発明によるラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株は、人体で毒性がなく安全で治療剤として否定的認識なく容易に接近できる長所と共に、従来の神経系疾患治療剤が有する副作用の危険なく神経系疾患の改善に優れた効果を示して産業的に非常に有用に使用できる。

【0034】

本発明の他の実施形態によれば、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む薬学組成物を提供する。

【0035】

本発明で用語、“培養物”は、乳酸菌を公知の培地で培養させて収得した産物を意味し、前記産物は乳酸菌を含むことができる。前記培地は、公知の液体培地または固体培地から選択でき、例えば、ＭＲＳ液体培地、ＧＡＭ液体培地、ＭＲＳ寒天培地、ＧＡＭ寒天培地、ＢＬ寒天培地であってもよいが、これに制限されるわけではない。本発明で用語、“破砕物”は、乳酸菌を酵素処理、均質化または超音波処理などで破壊された乳酸菌を意味する。また、本発明で用語、“抽出物”は、乳酸菌を公知の抽出溶媒で抽出して収得した産物を意味する。また本発明で用語、“生菌体”は本発明の新規な乳酸菌それ自体を意味し、“死菌体”は加熱、加圧または薬物処理などで殺菌処理された乳酸菌を意味する。

【0036】

本発明による薬学組成物は、神経系疾患の予防または治療に優れた効果を有し、腸内菌叢の回復、抗酸化効果、免疫調節効果などによって薬学組成物として優れた効果を示す。

【0037】

本発明の薬学組成物は、少なくとも一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含むことができる。

【0038】

“薬学的に許容可能な”とは、生理学的に許容され人間に投与される時、通常深刻な胃腸障害、めまい、アレルギー反応またはこれと類似の反応を起こさないことをいう。

【0039】

本発明による組成物は、新規な乳酸菌以外に少なくとも一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含むことができる。本発明の組成物に含まれる賦形剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アラビアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート、および鉱物油などを含むが、これに限定されない。

【0040】

本発明の組成物は、通常の方法によって経口投与のための剤形または非経口投与のための剤形に製剤化でき、製剤化する場合、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、凍結保護剤などを使用して調製できる。

【0041】

本発明の組成物が経口投与のための固形製剤に製剤化された場合、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などを含み、このような固形製剤は有効成分に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート（Ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）、ラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ）またはゼラチンなどを含むことができる。また、単純な賦形剤以外に、マグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤などを含むことができるが、これに限定されない。

【0042】

本発明の組成物が経口投与のための液状製剤に製剤化された場合、懸濁剤、内用液剤、乳剤、およびシロップ剤などを含み、よく使用される単純希釈剤である水、流動パラフィン以外に様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などを含むことができるが、これに限定されない。

【0043】

本発明の組成物が非経口投与のための製剤に製剤化された場合、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、坐剤を含むことができる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどを含むことができるが、これに限定されない。坐剤の基剤としては、ウィテプソール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用できる。

【0044】

本発明の薬学組成物の有効成分である新規な乳酸菌などの含量は、組成物の具体的な形態、使用目的乃至様相によって多様な範囲で調整できる。本発明による薬学組成物において有効成分の含量は大きく制限されず、例えば、組成物総重量を基準にして０．０１～９９重量％、具体的に０．１～７５重量％、より具体的に０．５～５０重量％であってもよい。

【0045】

本発明で用いられる凍結保護剤は、凍結乾燥の間にプロバイオティク剤形を保存し、品質寿命（ｓｈｅｌｆ－ｌｉｆｅ）を向上させるために用いられる。本発明で使用された凍結保護剤は、一般的な糖類を含むことができる。糖類は、モノ－、ジ－、オリゴ－またはポリサッカリド、または少なくとも２つ以上のサッカリドの混合物であってもよい。

【0046】

例えば、スクロース、マルトース、マルトデキストリン、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、イヌリン、グリセロール、ＤＭＳＯ、エチレングリコール、プロピレングリコール、２－メチル－２，４－ペンタンジオール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリグリセロール、脱脂乳、牛乳タンパク質、乳清タンパク質、ベタイン、アドニトール、ラクトースまたはそのある組み合わせからなる群より選択される凍結保護剤が使用できる。

【0047】

好ましくは、凍結保護剤として、スクロース、脱脂乳、およびソルビトールからなる群より選択されるいずれか一つ以上を含むことができる。より好ましくは、スクロース、脱脂乳、およびソルビトールを含むことができ、具体的に組成物総重量に対してスクロース２～２０重量％、ソルビトール２～２０重量％、および脱脂乳５～３０重量％を含むことができる。凍結保護剤の添加によって凍結乾燥された乳酸菌は、顕著に増加した生存率、貯蔵安定性、耐酸性、および耐胆汁性を示すことができる。

【0048】

また、凍結乾燥させた本発明による組成物に、リボフラビン（ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ）、リボフラビンリン酸塩（ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）またはその生理学的に許容可能な塩、グルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎ）、アスコルベート（ａｓｃｏｒｂａｔｅ）、グルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎ）、およびシステインのような抗酸化剤の添加は、保管中の菌株の生存率をさらに増加させることができる。

【0049】

本発明のまた他の実施形態によれば、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患予防または治療用薬学組成物を提供する。

【0050】

本発明で用語“予防”は、本発明の薬学組成物の投与で神経系疾患の症状を抑制するか進行を遅延させる全ての行為を意味する。

【0051】

本発明で用語“治療”は、本発明の薬学組成物の投与で神経系疾患の症状を好転または有利に変更させる全ての行為を意味する。

【0052】

本発明において“神経系疾患”とは、神経系の病理に由来する全ての病像を含む。これにより、本発明は、神経、神経精神、精神、神経変性、神経退行と関連する急性および／または慢性の疾患に対する予防または治療を目的する。

【0053】

このような神経系疾患は、精神障害または神経変性疾患であり得る。

【0054】

精神障害の非制限的な例としては、ストレスによる緊張、不安、憂鬱症、気分障害、不眠症、妄想障害、強迫障害、偏頭痛、記憶障害、認知障害、注意力障害などが挙げられる。また、神経変性疾患の非制限的な例としては、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、脊髄小脳委縮症（Ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ Ａｔｒｏｐｈｙ）、トゥレット症候群（Ｔｏｕｒｅｔｔｅ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フリードライヒ運動失調症（Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ’ｓ Ａｔａｘｉａ）、マチャド・ジョセフ病（Ｍａｃｈａｄｏ－Ｊｏｓｅｐｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、認知症、ジストニア（Ｄｙｓｔｏｎｉａ）、進行性核上性麻痺（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ Ｐａｌｓｙ）などが挙げられる。

【0055】

本発明による神経系疾患予防または治療用薬学組成物は、人体で毒性がなく安全で治療剤として否定的認識なく容易に接近できる長所と共に、従来神経系疾患治療剤が有する副作用の危険がなく神経系疾患の改善に優れた効果を示して産業的に非常に有用に使用できる。本発明による一具体例によれば、本発明の組成物は、セロトニン生合成を誘導して神経系疾患に対する予防、改善、および治療効果を有する。本発明のまた他の具体例によれば、本発明の組成物は、認知能力改善に卓越した効果を示す。本発明のまた他の具体例によれば、本発明の組成物は、ストレス環境で、緊張、憂鬱症、不安などの症状の改善に優れた効果を示す。本発明のまた他の具体例によれば、本発明の組成物は神経系の炎症反応を調節して神経系疾患の予防、治療、および改善に優れた効果を示す。本発明のまた他の具体例によれば、本発明の組成物は、炎症反応を調節することによって神経系疾患に優れた予防、改善、および治療効果を示す。本発明のまた他の具体例によれば、本発明の組成物は免疫不均衡による神経および脳での炎症反応を調節することによって神経系疾患に優れた予防、改善および治療効果を示す。

【0056】

本発明による薬学組成物の投与量は、薬剤学的に有効な量でなければならない。“薬学的に有効な量”は、医学的治療に適用可能な合理的な受益／危険比率で神経系疾患を予防または治療することに十分な量を意味する。有効容量水準は、製剤化方法、患者の状態、および体重、患者の性別、年令、疾患の程度、薬物形態、投与経路および期間、排泄速度、反応感応性などのような要因によって当業者によって多様に選択できる。有効量は、当業者に認識されているように処理の経路、賦形剤の使用、および他の薬剤と共に使用できる可能性によって変わり得る。しかし、好ましい効果のために、経口投与剤の場合、一般に成人に１日に体重１ｋｇ当り本発明の組成物を１日０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇで、好ましくは０．０１～１００ｍｇ／ｋｇで投与することができる。

【0057】

前記のように投与剤を投与する場合、本発明のラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株を１日１×１０^３ＣＦＵ／ｋｇ～１×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇで投与することができる。投与は、一日に１回投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。前記投与量は、いかなる面にも本発明の範囲を限定するのではない。

【0058】

本発明による薬学組成物は、マウス、家畜、人間などの哺乳動物に多様な経路を通じて投与できる。具体的に、本発明の薬学組成物は、経口または非経口投与（例えば、塗布または静脈内、皮下、腹腔内注射）することができるが、経口投与が好ましい。経口投与のための固形製剤には、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、軟質カプセル剤、丸剤などが含まれる。

【0059】

本発明の薬学組成物は特に、経口用単位剤形として、腸溶性被覆された腸溶性製剤として提供できる。本明細書での“腸溶性被覆”は、胃酸によっては分解されずに被覆が維持されるが、小腸では十分に分解されて活性成分が小腸内に放出されるようにする、薬剤学上許容可能な全ての種類の公知の被覆を含む。本発明の“腸溶被覆”は、ｐＨ１のＨＣｌ溶液のような人工胃汁を３６℃～３８℃で接触させる時、２時間以上そのまま維持され、好ましくは以後にｐＨ６．８のＫＨ_２ＰＯ_４緩衝溶液のような人工腸汁で３０分以内に分解される被覆をいう。

【0060】

本発明の腸溶被覆は、１個のコア（ｃｏｒｅ）に約１６～３０、好ましくは１６～２０または２５ｍｇ以下の量で被覆される。本発明の腸溶被覆の厚さが５～１００μｍ、好ましくは２０～８０μｍである場合が、腸溶被覆として満足な結果を示す。腸溶被覆の材料は、公知の高分子物質のうちから適当に選択される。適当な高分子物質は、多数の公知文献（Ｌ．Ｌａｃｈｍａｎ以外、Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ、３版、１９８６、ｐｐ．３６５～３７３；Ｈ．Ｓｕｃｋｅｒ以外、Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ、Ｔｈｉｅｍｅ、１９９１、ｐｐ．３５５－３５９；Ｈａｇｅｒｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈｄｅｒ ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｎ Ｐｒａｘｉｓ、４版、Ｖｏｌ．７、ｐｐ．７３９～７４２、および７６６～７７８、（ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ、１９７１）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１３版、ｐｐ．１６８９～１６９１（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．、Ｃｏ．、１９７０）に列挙されており、セルロースエステル誘導体、セルロースエーテル、アクリル樹脂のメチルアクリレート共重合体、およびマレイン酸およびフタル酸誘導体の共重合体がこれらに含まれ得る。

【0061】

本発明の腸溶被覆は、腸溶被覆溶液をコアに噴霧する通常の腸溶被覆法を使用して製造できる。腸溶被覆工程に使用される適当な溶媒としては、エタノールのようなアルコール、アセトンのようなケトン、ジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）のようなハロゲン化炭化水素溶媒であり、これら溶媒の混合溶媒を使用することもできる。ジ（ｄｉ）－ｎ－ブチルフタレートまたはトリアセチンのような軟化剤を１対約０．０５～約０．３（コーティング材料対軟化剤）の比率で被覆溶液に添加する。噴霧過程を連続的に行うことが適切であり、被覆の条件を考慮して噴霧量を調節することが可能である。噴霧圧は多様に調節することができ、一般に約１～約１．５バー（ｂａｒ）の噴霧圧で満足すべき結果が得られる。

【0062】

経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、エアゾールなどが該当し、よく使用される単純希釈剤である水、流動パラフィン以外に様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。非経口投与のための製剤としては、それぞれ通常の方法によって滅菌された水溶液、液剤、非水性溶剤、懸濁剤、エマルジョン、点眼剤、眼軟膏剤、シロップ、坐剤、エアゾールなどの外用剤および滅菌注射製剤の形態に剤形化して使用できる。局所投与のための製剤は、臨床的処方によって無水型または水性型であってもよい。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどが使用できる。

【0063】

本発明による神経系疾患予防または治療用薬学組成物は、神経系疾患の予防または治療効果を有する公知の有効成分を１種以上さらに含有することもできる。

【0064】

本発明のまた他の実施形態によれば、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患予防または改善用食品組成物を提供する。

【0065】

本発明による食品組成物は食品用または食品添加用組成物であるのを特徴とすることができるが、これに限定されるのではなく、神経系疾患予防または改善に効果がある食品、例えば、食品の主原料、副原料、食品添加剤、健康機能食品または機能性飲料として容易に活用することができる。

【0066】

前記食品とは、栄養素を一つまたはそれ以上含有している天然物または加工品を意味し、好ましくは、ある程度の加工工程を経て直接食べることができる状態になったものを意味し、通常の意味として、食品、食品添加剤、健康機能食品、および機能性飲料を全て含むものをいう。

【0067】

本発明による前記食品組成物を添加することができる食品としては例えば、各種食品類、飲料、ガム、お茶、ビタミン複合剤、機能性食品などがある。追加的に、本願発明で、食品には特殊栄養食品（例えば、調製乳類、嬰幼児食など）、食肉加工品、魚肉製品、豆腐類、ムク類、麺類（例えば、ラーメン類、そば類など）、パン類、健康補助食品、調味食品（例えば、醤油、味噌、コチュジャン、混合醤など）、ソース類、菓子類（例えば、スナック類）、キャンディ類、チョコレート類、ガム類、アイスクリーム類、乳加工品（例えば、発酵乳、チーズなど）、その他の加工食品、キムチ、漬物食品（各種キムチ類、漬物など）、飲料（例えば、果実飲料、野菜類飲料、豆乳類、発酵飲料類など）、天然調味料（例えば、ラーメンスープなど）を含むが、これに限定されない。前記食品、飲料または食品添加剤は、通常の製造方法で製造できる。

【0068】

前記健康機能食品とは、食品に物理的、生化学的、生物工学的手法などを用いて当該食品の機能を特定目的に作用、発現するように付加価値を付与した食品群や食品組成が有する生体防御リズム調節、疾病防止と回復などに関する体内調節機能を生体に対して十分に発現するように設計して加工した食品を意味する。前記機能性食品には食品学的に許容可能な食品補助添加剤を含むことができ、機能性食品の製造に通常使用される適切な担体、賦形剤、および希釈剤をさらに含むことができる。

【0069】

本発明で、前記機能性飲料とはのどの渇きを解消するか味を楽しむために飲むものの総称を意味し、指示された比率で必須成分として前記神経系疾患症状の改善または予防用組成物を含むこと以外に他の成分には特別な制限がなく、通常の飲料のように様々な香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。

【0070】

さらに、前述のもの以外に本発明の神経系疾患症状の改善または予防のための食品組成物を含有する食品は様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤および天然風味剤などの風味剤、着色剤および充填剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有することができ、前記成分は独立的にまたは組み合わせて使用することができる。

【0071】

本発明の食品組成物を含有する食品において、前記本発明による組成物の量は全体食品重量の０．００１重量％～１００重量％で含むことができ、好ましくは１重量％～９９重量％で含むことができ、飲料の場合、１００ｍｌを基準にして０．００１ｇ～１０ｇ、好ましくは０．０１ｇ～１ｇの比率で含むことができるが、健康および衛生を目的とするか健康調節を目的とする長期間摂取の場合には前記範囲以下であってもよく、有効成分は安全性面で何の問題もないため前記範囲以上の量で使用できるので、前記範囲に限定されるのではない。

【0072】

本発明の食品組成物は、少なくとも一つ以上の賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含むことができる。

【0073】

本発明の食品組成物は、前記ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株を独立的にまたは許容可能な担体に添加するか、人間または動物が摂取するに適した組成物形態に製造できる。即ち、他のプロバイオティク細菌を含有しない食品および既にいくつかのプロバイオティク細菌を含有した食品に添加されて使用できる。例えば、本発明の食品を製造することにおいて、本発明の菌株と共に使用可能な他の微生物は人間や動物が摂取するに適し、摂取時病原性有害細菌を抑制するかほ乳動物腸管内の微生物均衡を改善させることができるプロバイオティク活性を有するものであれば、特に制限されない。そのようなプロバイオティク微生物の例としては、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）およびトルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）を含む酵母（ｙｅａｓｔ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、ペニシリン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）などのようなカビおよびラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する細菌などがある。適当なプロバイオティク微生物の具体的な例としては、サッカロマイセスセレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、バチルスコアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルスリチェニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルスサブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウムビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、エンテロコッカスフェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカスフェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルスアシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルスアリメンタリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルスカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルスカルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルスデルブルエッキイー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルスジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルスファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルスガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルスヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルスラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルスロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルスサケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅｉ）、ラクトコッカスラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ペジオコッカスアシジラクチシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）などが挙げられる。好ましくは、優れたプロバイオティク活性を有しながら同時に神経系疾患改善効果に優れたプロバイオティク微生物混合菌を本発明の食品用組成物に追加的に含むことによって、その効果をさらに増進させることができる。本発明の食品用組成物に使用できる担体の例としては、増量剤、高繊維添加剤、カプセル化剤、脂質などであってもよく、このような担体の例は当業界に十分に公知されている。本発明のラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６は、凍結乾燥されるかカプセル化された形態または培養懸濁液や乾燥粉末形態であってもよい。

【0074】

本発明のまた他の実施形態によれば、本発明はラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む動物飼料用添加剤を提供する。

【0075】

本発明の動物飼料用添加剤は、少なくとも一つ以上の賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含むことができる。

【0076】

本発明の動物飼料用添加剤は乾燥または液体状態の製剤形態であってもよく、前記ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株以外に非病原性の他の微生物をさらに含むこともできる。添加できる微生物としては、例えば、タンパク質分解酵素、脂質分解酵素、および糖転化酵素を生産できるバチルスサブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような枯草菌、牛の胃のような嫌気的条件で生理的活性および有機物分解能を有するラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）菌株、家畜の体重を増加させ牛乳の産乳量を増やし飼料の消化吸収率を高める効果を示すアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のような糸状菌（Ｓｌｙｔｅｒ、Ｌ．Ｌ．Ｊ．Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉ．１９７６、４３．９１０－９２６）およびサッカロマイセスセレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のような酵母（Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｄ．Ｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．、１９８３、５６、７３５－７３９；Ｗｉｌｌｉａｍｓ、Ｐ．Ｅ．Ｖ．ｅｔ ａｌ、１９９０、２１１）などが使用できる。

【0077】

本発明の動物飼料用添加剤は、前記ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６以外に、一つ以上の酵素製剤をさらに含むこともできる。添加される酵素製剤は乾燥または液体状態が全て可能であり、酵素製剤としては、リパーゼ（ｌｉｐａｓｅ）のような脂肪分解酵素、フィチン酸（ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）を分解してリン酸塩とイノシトールリン酸塩を作るフィターゼ（ｐｈｙｔａｓｅ）、デンプンとグリコーゲン（ｇｌｙｃｏｇｅｎ）などに含まれているα－１，４－グリコシド結合（ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｂｏｎｄ）を加水分解する酵素であるアミラーゼ（ａｍｙｌａｓｅ）、有機リン酸エステルを加水分解する酵素であるフォスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）、セルロース（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）を分解するカルボキシメチルセルラーゼ（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌａｓｅ）、キシロース（ｘｙｌｏｓｅ）を分解するキシラナーゼ（ｘｙｌａｎａｓｅ）、マルトース（ｍａｌｔｏｓｅ）を二つの分子のグルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）で加水分解するマルターゼ（ｍａｌｔａｓｅ）およびサッカロース（ｓａｃｃｈａｒｏｓｅ）を加水分解してグルコース－フルクトース（ｇｌｕｃｏｓｅ－ｆｒｕｃｔｏｓｅ）混合物を作る転化酵素（ｉｎｖｅｒｔａｓｅ）などのような糖生成酵素などが使用できる。

【0078】

本発明のラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６菌株は動物飼料用添加剤として使用することにおいて、飼料用原料としては各種穀物および大豆蛋白をはじめとするピーナッツ、エンドウ、サトウダイコン、パルプ、穀物副産物、動物内臓粉および魚粉などが使用でき、これらは加工されないかまたは加工されたものを制限なく使用することができる。加工過程は、必ずしもこれに限定されるのではないが、例えば、飼料源料が充填された状態で加圧下に一定の排出口に圧縮される工程で、タンパク質の場合には変性されて利用性が増加する押出成形（ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）を使用するのが好ましい。押出成形（ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）は、熱処理過程を通じてタンパク質を変成させ抗酵素因子を破壊させるなどの長所を有する。また、大豆タンパク質のような場合には、押出成形を通じてタンパク質の消化率を向上させ、大豆に存在するタンパク質分解酵素の阻害剤の一つであるトリプシン阻害剤（ｔｒｙｐｓｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）のような抗栄養因子を不活性化させ、タンパク質分解酵素による消化率向上を増加させて大豆蛋白の栄養的価値を増加させることができる。

【0079】

本発明のまた他の実施形態で、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上の治療学的に有効な量をこれを必要とする個体に投与する段階を含む神経系疾患の予防または治療方法を提供する。

【0080】

本発明において、用語“治療学的に有効な量（または、有効量）”は、好ましい効果を伝達するには非常に十分であるが、医学的判断範囲内で深刻な副作用を十分に防止する程度の適切な量を意味する。本発明の組成物によって体内に投与される微生物の量は、投与経路、投与対象を考慮して適切に調整できる。

【0081】

前記“投与”は、任意の適切な方法で個体に所定の本発明の薬学組成物を提供することを意味する。この時、個体は動物を言い、典型的に本発明の新規な乳酸菌を用いた治療に有益な効果を示すことができる哺乳動物であり得る。このような個体の好ましい例として、人間のような霊長類が含まれ得る。また、このような個体にはアレルギー疾患の症状を有するかこのような症状を有する危険がある個体が全て含まれ得る。

【0082】

本発明のまた他の実施形態で、本発明は、神経系疾患の予防または治療に使用するためのラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物を提供する。

【0083】

本発明のまた他の実施形態で、神経系疾患の予防または治療用薬剤を製造するためのラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物の用途を提供する。

【0084】

以下、実施例を通じて本発明をさらに詳しく説明する。これら実施例はひたすら本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例によって制限されると解釈されないことは当業界で通常の知識を有する者において自明なはずである。

【実施例】

【0085】

実施例１．セロトニン生合成誘導能を有するプロバイオティク菌株のスクリーニング
多くの先行文献でセロトニンが神経系疾患、特に精神障害に主要な役割を担当すると報告されている。乳児および成人由来の糞便から分離した４７種のプロバイオティク菌株（ラクトバチルス属１９種、ビフィドバクテリウム属２８種）およびプロバイオティクス製品として販売中であるラクトバチルスプランタルム種の２種菌株を用いてセロトニン生合成誘導能を評価した。セロトニン生合成誘導能は腸クロム親和性（ｅｎｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｆｆｉｎ ｃｅｌｌ）細胞株であるＲＩＮ１４Ｂに各菌株を処理しセロトニン生合成経路の律速酵素（ｒａｔｅ－ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ）であるＴＰＨ－１（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ－１）の発現が各菌株によってどれくらい促進されるかを観察して確認した。

【0086】

１－１．菌株の培養および培養液の準備
神経系疾患に有効な効果を示す新規菌株をスクリーニングするために、健康な韓国人男女成人あるいは乳児の糞便から分離した４７種の候補乳酸菌を使用した。これら候補乳酸菌をそれぞれ０．５％システインを添加したＭＲＳ培地で培養し、２４時間間隔で総２回の継代培養（ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ）を通じて活性化させた後、各菌株の代謝産物を含む培養液（ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ）を実験に使用した。培養液を収得した後、遠心分離（１３，０００Ｘｇ、５分、４℃）して得られた上層液のｐＨを７．０に補正した後、０．２２μｍ気孔大きさのフィルターを用いて滅菌し、使用前まで４℃で保管した。

【0087】

前記新規菌株スクリーニングに使用された乳酸菌株をそれぞれ、ＫＢＬ３４６、ＫＢＬ６４２、ＫＢＬ３４２、ＫＢＬ６４９、ＫＢＬ３５１、ＫＢＬ６３３、ＫＢＬ６６３、ＫＢＬ６２１、ＫＢＬ６４７、ＫＢＬ６４０、ＫＢＬ６４６、ＫＢＬ６３９、ＫＢＬ４０２、ＫＢＬ６００、ＫＢＬ５９１、ＫＢＬ５３８、ＫＢＬ５０１、ＫＢＬ６５２、ＫＢＬ６６２、ＫＢＬ３８９、ＫＢＬ６１３、ＫＢＬ５４４、ＫＢＬ３９１、ＫＢＬ３９５、ＫＢＬ６４８、ＫＢＬ４９７、ＫＢＬ３８４、ＫＢＬ３５４、ＫＢＬ５００、ＫＢＬ３６２、ＫＢＬ６１２、ＫＢＬ６６４、ＫＢＬ３９７、ＫＢＬ５４５、ＫＢＬ３６３、ＫＢＬ３７４、ＫＢＬ３７５、ＫＢＬ３８５、ＫＢＬ６６５、ＫＢＬ４８１、ＫＢＬ３８１、ＫＢＬ６０５、ＫＢＬ３８３、ＫＢＬ６２４、ＫＢＬ５８５、ＫＢＬ３６５、またはＫＢＬ３９６と命名した。上記菌株のうちのＫＢＬ３４６、ＫＢＬ３４２、ＫＢＬ３５１、ＫＢＬ４０２、ＫＢＬ３８９、ＫＢＬ３９１、ＫＢＬ３９５、ＫＢＬ３８４、ＫＢＬ３５４、ＫＢＬ３６２、ＫＢＬ３９７、ＫＢＬ３６３、ＫＢＬ３７４、ＫＢＬ３７５、ＫＢＬ３８５、ＫＢＬ３８１、ＫＢＬ３８３、ＫＢＬ３６５、ＫＢＬ３９６の１９種の菌株はラクトバチルス属菌株と、ＫＢＬ６４２、ＫＢＬ６４９、ＫＢＬ６３３、ＫＢＬ６６３、ＫＢＬ６２１、ＫＢＬ６４７、ＫＢＬ６４０、ＫＢＬ６４６、ＫＢＬ６３９、ＫＢＬ６００、ＫＢＬ５９１、ＫＢＬ５３８、ＫＢＬ５０１、ＫＢＬ６５２、ＫＢＬ６６２、ＫＢＬ６１３、ＫＢＬ５４４、ＫＢＬ６４８、ＫＢＬ４９７、ＫＢＬ５００、ＫＢＬ６１２、ＫＢＬ６６４、ＫＢＬ５４５、ＫＢＬ６６５、ＫＢＬ４８１、ＫＢＬ６０５、ＫＢＬ６２４、ＫＢＬ５８５の２８種の菌株はビフィドバクテリウム属菌株と確認された。

【0088】

また、商業的に販売中である製品であってラクトバチルスプランタルムＰＳ１２８単一菌株から構成されたＳｏｌａｃｅ（Ｏｒｙｘ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｃ．、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ、ＵＳＡ）製品とラクトバチルスプランタルム２９９ｖ単一菌株から構成されたＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（Ｑｕｅｓｔ Ｖｉｔａｍｉｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｋｉｎｇｓｔｏｎｅ、Ｈｅｒｅｆｏｒｄ、ＵＫ）製品をそれぞれ購入して、ラクトバチルスプランタルム菌株を候補乳酸菌と同一な過程の培養および活性化過程を経て培養液を収得して実験に使用した。

【0089】

１－２．ＲＩＮ１４Ｂ細胞株の培養
ＲＩＮ１４Ｂ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２０５９）細胞株は、３７℃、５％ＣＯ_２条件で１０％ＦＢＳ、ペニシリン（１００μｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）が添加されたＲＰＭＩ １６４０培地で培養し、３日に一回ずつ継代培養した。ＲＩＮ１４Ｂ細胞株を２４ウェルプレートに４×１０^５ｃｅｌｌｓ／ウェルずつ分注し、２４時間培養した後、菌株培養液を処理した。

【0090】

１－３．菌株培養液の処理
実施例１－２で２４ウェルプレートに分注しておいたＲＩＮ１４Ｂ細胞株から培地を除去した後、ＰＢＳ（５００μｌ／ウェル）で１回洗浄した。その後、実施例１－１で準備した菌株培養液５００μｌを処理するか、陽性対照群としてセロトニン合成誘導能が報告されたデオキシコレート（ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）のｐＨを７．０に補正後フィルターで滅菌したＭＲＳ培地に希釈して最終濃度が２５μＭになるように５００μｌ処理し、３７℃、５％ＣＯ_２条件で１時間培養した後、細胞と上層液を収去してＴＰＨ－１（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ－１）酵素の発現量を確認した。

【0091】

１－４．ｑＲＴ－ＰＣＲ法によるＴＰＨ－１発現量測定
ＴＰＨ－１（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ－１）の発現量を確認するために、Ｅａｓｙ－ｓｐｉｎ^ＴＭ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｉｎｔｒｏｎ）を使用して製造者方式によって実施例１－３で得られた細胞のＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡでＨｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ＲＮＡ－ｔｏ－ｃＤＮＡ^ＴＭＫｉｔを使用して製造者方式によってｃＤＮＡを合成した後、Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ（ＱＩＡＧＥＮ）、Ｒｏｔｏｒｇｅｎｅ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲキットまたはＱｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ ５（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）、Ｐｏｗｅｒ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してｑＲＴ－ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）を行った。

【0092】

ＴＰＨ－１発現量は下記表１に記載されたとおり、Ｔｐｈ－１ ＦおよびＴｐｈ１ Ｒプライマーを使用するか、Ｔｐｈ－１Ａ ＦおよびＴｐｈ－１Ａ Ｒプライマーを使用した測定値をＲａｔ Ｂ－ａｃｔｉｎ ＦおよびＲａｔ Ｂ－ａｃｔｉｎ Ｒプライマーで測定したβ－ａｃｔｉｎ測定値対比相対発現量差で計算した（ｄｅｌｔａ－ｄｅｌａｔａ ＣＴ ａｎａｌｙｓｉｓ）。ｑＲＴ－ＰＣＲに使用したプライマーと温度条件は、それぞれ下記表１および表２に整理した。

【0093】

【表1】

【0094】

【表2】

【0095】

上記条件下に行った実験結果を図１に示した。

【0096】

図１Ａ（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ（ＱＩＡＧＥＮ）、Ｒｏｔｏｒｇｅｎｅ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲキット使用、Ｔｐｈ－１ ＦおよびＴｐｈ１ Ｒプライマー）から分かるように、ＫＢＬ３９６菌株を処理した群で、他の菌株を処理した群および２５μＭのデオキシコレートを処理した群に比べて最大２～４倍多くのＴＰＨ－１発現量を示した。

【0097】

また、商業的に利用可能なラクトバチルスプランタルム菌株と比較した結果を図１Ｂ（Ｑｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ ５（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）、Ｐｏｗｅｒ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、Ｔｐｈ－１Ａ ＦおよびＴｐｈ－１Ａ Ｒプライマー使用）に示した。図１Ｂのように、本発明による菌株であってＫＢＬ３９６菌株がＴＰＨ－１発現誘導能が優れたのを確認することができた（Ｑ１、ラクトバチルスプランタルム２９９ｖ；Ｓ１、ラクトバチルスプランタルムＰＳ１２８）。

【0098】

前記結果を通じて正常的な韓国人成人女性の糞便から分離した菌株であって三星ソウル病院で臨床研究承認（ＩＲＢ Ｎｏ．１４４－２０１１－０７－１１）下に供与者の同意を受けて採取した菌株であるＫＢＬ３９６菌株が優れたセロトニン合成誘導能を有するのを確認した。

【0099】

実施例２．ＫＢＬ３９６菌株が含まれている飼料の製造および動物モデルへの飼料投与
実施例１を通じてＫＢＬ３９６菌株がセロトニン生合成に優れた効果を示すのをｉｎ ｖｉｔｒｏで確認したところ、ＫＢＬ３９６菌株が生体内でも神経系疾患に優れた効果を示すか確認してみるために、前臨床試験で動物モデルを用いた実験を行おうとし、このためにＫＢＬ３９６菌株が含まれている飼料を製造し、これを動物モデルに投与した。

【0100】

２－１．飼料の製造
経口胃管栄養法（Ｏｒａｌ ｇａｖａｇｅ）の場合、実験動物に大きなストレスを招き、このようなストレスが実験結果の客観性に影響（ｂｉａｓ）を与えることがあるため、動物モデルには前記菌株を混合して製造した飼料の形態で投与する実験を計画した。

【0101】

菌株の投与のために使用された飼料は、次のような方法で製造した。ＫＢＬ３９６菌株はＭＲＳ培地で２４時間培養して活性化させ、新たなＭＲＳ培地に１％接種して（ｖ／ｖ）２４時間継代培養した。その後、培養液を６０００ｒｐｍ、４℃の条件で２０分間遠心分離して上層液を捨てて、４℃ １ｘ ＰＢＳでペレット（ｐｅｌｌｅｔ）をほぐした。この時、１ｘ ＰＢＳは培養液体積の５０％以上を入れて十分にほぐすことができるようにした。その後、前記と同一な条件で遠心分離し、洗浄（Ｗａｓｈｉｎｇ）を２回繰り返した後、ペレットを１ｘ ＰＢＳでほぐした（菌株濃縮液）。

【0102】

放射線滅菌された飼料を粉砕して粉末形態に作った後、予め準備した菌株濃縮液に混合してこねて、適当な大きさで作って－８０℃で２４時間凍らせた。その後、４８－７２時間凍結乾燥して使用前まで－８０℃に保管した。飼料に含まれているＫＢＬ３９６菌株の量は飼料１ｇ当り約１×１０^９ＣＦＵになるようにし、対照群も同一な質量のＰＢＳ試料を混合して、菌株を混合して製造した飼料と同様な方法で製作し、－８０℃に保管した。

【0103】

２－２．飼料の投与
‘ＰＢＳが含まれている飼料’および‘ＫＢＬ３９６菌株が含まれている飼料’は製造後、－８０℃に保管し毎日新しく取り出して毎日午前９時に提供し、Ｃ５７ＢＬ／６マウス一匹当り３－５ｇの飼料を供給（週齢によってその量を増やした）した。飼料供給時、残った飼料は収去して飼料摂取量および菌株摂取量を計算した。飼料は２８日以上投与しながら動物モデルを観察した。

【0104】

実施例３．ＫＢＬ３９６菌株投与による認知能力改善効果（Ｙ－ＭＡＺＥ実験）
２８日間の菌投与以後、Ｙ－ｍａｚｅ実験を行ってＫＢＬ３９６菌株の認知能力改善効果を確認した。本発明で使用した動物モデルは、７週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスであって、ＰＢＳ対照群、ＫＢＬ３９６菌株処理群の二つのグループそれぞれ８匹で実験を行った。

【0105】

Ｙ－ＭＡＺＥ実験は、動物モデルを用いた認知能力判断のために考案された行動実験である。実験にはＹ字形態の１２０°角度を成す３個の通路を構成し、各通路をＡ、Ｂ、Ｃに定めた後、一つの通路に実験動物を置いて８分間自由に動くようにした後、各通路に入った回数と順序を天井に設置されたカメラおよびこれに連結されたコンピュータプログラムで観察して記録した。この時、各通路に入った回数と順序は尾が完全に入った場合に限って記録し、繰り返して同一な枝通路に再び入った場合も記録した。３個の互いに異なる通路に順次に入った場合（実際変更、ａｃｔｕａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）、即ち、ＡＢＣ、ＣＡＢ、ＢＡＣなどの順に入った場合、１点ずつ付与し、％変更行動力（％ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ）は以下の式によって計算した。

【0106】

％変更行動力＝実際変更（ａｃｔｕａｌ ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ）／最高変更（ｍａｘｉｍｕｍ ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ）×１００（最高変更：総入場回数－２）

【0107】

その結果を図２に示した。図２から分かるように、ＫＢＬ３９６を投与した動物モデルでＰＢＳ対照群を投与した動物モデルに比べて有意に高い認知能力改善効果を示すのを確認することができた。

【0108】

実施例４．ＫＢＬ３９６菌株投与による脳のセロトニン増加効果
ＫＢＬ３９６菌株投与が脳のセロトニンを増加させることができるかを確認した。

【0109】

まず、脳組織のセロトニン生合成経路の律速酵素であるＴＰＨ－２（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ－２）の量を酵素のｍＲＮＡ量を通じて確認した。実施例３の動物モデルで得られた脳組織から実施例１－４と同様な方法によってＲＮＡを抽出してｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡでＲｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ（ＱＩＡＧＥＮ）、Ｒｏｔｏｒｇｅｎｅ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲキットおよび次のＴＰＨ－２ｆ、ＴＰＨ－２ｒプライマーを使用してＴＰＨ－２の発現量を確認した。その他の実験条件およびＧＡＰＤＨ遺伝子発現量との比較を通じた結果の分析は実施例１－４と同様に行われた。

【0110】

ＴＰＨ－２ｆ：５’ＣＡＧＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＡＣＴＴ３’（配列番号８）
ＴＰＨ－２ｒ：５’ＧＣＡＡＧＡＣＡＧＣＧＧＴＡＧＴＧＴＴＣＴ３’（配列番号９）

【0111】

前記条件下に行った実験結果を図３Ａに示した。ＫＢＬ３９６を投与した動物モデル（ＫＢＬ３９６）でＰＢＳ対照群を投与した動物モデル（ＰＢＳ）に比べて有意に高いＴＰＨ２遺伝子が発現されているのを確認して、セロトニン生合成が促進できるのを確認した。

【0112】

その次に、脳組織のセロトニン濃度を直接測定するために、ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）を実施した。実施例３の動物モデルから得られた脳組織にｓｔａｉｎｌｅｓｓ ｓｔｅｅｌ ｂｅａｄ（５ｍｍ、Ｑｉａｇｅｎ）とＴ－ＰＥＲ^ＴＭ Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｓｉｇｍａ）を入れてＴｉｓｓｕｅ ｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して３０ｈｚの条件で１０分間組織を破砕した。破砕された混合物で遠心分離を行って（４℃、１１０００Ｇ、１５分）中間層の水溶性層を収得して分析に使用する前まで－８０℃に保管した（‘水溶性試料’）。‘水溶性試料’のセロトニンの量を測定するためにＳｅｒｏｔｏｎｉｎ Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ＥＬＩＳＡ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｅａｇｌｅ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて製造者方法により試料を準備してＳｐａｒｋ １０Ｍ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｔｅｃａｎ）を通じて分析した。

【0113】

測定されたセロトニン（５－ＨＴ）の分析結果を図３Ｂに示した。ＫＢＬ３９６を投与した動物モデル（ＫＢＬ３９６）で、ＰＢＳ対照群を投与した動物モデル（ＰＢＳ）に比べて二倍以上高濃度のセロトニン（５－ＨＴ）が測定されるのを確認して、ＫＢＬ３９６菌株が脳のセロトニン濃度を実際に増加させるのを確認した。

【0114】

実施例５．ＫＢＬ３９６菌株投与によるストレス回復力改善効果（社会的回避実験）
社会的回避実験（Ｓｏｃｉａｌ Ａｖｏｉｄａｎｃｅ Ｔｅｓｔ）は、動物モデルを用いてストレスに対する影響を評価するために考案された行動実験である。本発明では、ＫＢＬ３９６菌株のストレス露出に対する抵抗性増進効果を確認するために、マウスにストレスを誘発させた後、ＫＢＬ３９６菌株投与による社会的回避実験を行った。

【0115】

まず、本発明で使用した動物モデルは、７週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスであって、ＰＢＳ対照群、ＰＢＳ＋ストレス処理群、ＫＢＬ３９６菌株処理群、ＫＢＬ３９６菌株＋ストレス処理群の四つのグループそれぞれ８匹で実験を行った。

【0116】

総４週（２８日）間‘ＰＢＳが含まれている飼料’または‘ＫＢＬ３９６菌株が含まれている飼料’を投与しマウスをストレスに露出させた。ストレスに露出される７日の期間にも、飼料は‘ＰＢＳが含まれている飼料’または‘ＫＢＬ３９６菌株が含まれている飼料’を持続的に提供した。

【0117】

図４は、社会的攻撃（ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ）によって動物モデルにストレスを誘発させるためのケージ（Ａ）および社会的回避実験（ｓｏｃｉａｌ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｔｅｓｔ）のための実験ボックスの模式図（Ｂ）である。マウスにストレスを誘発するためにＣ５７ＢＬ／６マウスをＣＤ－１マウスと中央に孔の空いたアクリル板から製作された透明な境界壁を挟んで同一のケージで生活するようにした。７日の期間中、一日に１回Ｃ５７ＢＬ／６マウスを大きくて攻撃的なＣＤ－１マウスの有る所に移し、ＣＤ－１マウスによって物理的攻撃を受けるようにした（Ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ）。総５分間の攻撃が行われた後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを既存に接触していない新たなＣＤ－１マウスと透明な境界壁を挟んで互いに反対側で２４時間生活するようにした。２４時間、Ｃ５７ＢＬ／６マウスはＣＤ－１マウスの脅威に露出され攻撃者（ａｇｇｒｅｓｓｏｒ）ＣＤ－１マウスの存在を持続的に認識するようになるので、社会的攻撃（Ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ）時の物理的ストレス（ｐｈｙｓｉｃａｌ ｓｔｒｅｓｓ）だけでなく、以後の精神的ストレス（ｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｅｓｓ）にも露出されるようにした。

【0118】

その後、ストレス露出による行動変化を評価するために社会的回避実験を行った。社会的回避実験は同一な行動実験ボックスで行い、総二セットで行った。一番目のセットでは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスをボックスの中間に置いて３分間自由に動くようにした。二番目のセットでは、ＣＤ－１マウスを隔離容器（ｒｅｍｏｖａｂｌｅ ｅｎｃｌｏｓｕｒｅ）に閉じ込め、行動実験ボックスの一側面の中間に位置させた後、３分間Ｃ５７ＢＬ／６マウスの行動を観察した。この時、物理的攻撃（Ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ）に露出されたＣ５７ＢＬ／６マウスはＣＤ－１マウスの存在を確認すれば反対側コーナー（ｃｏｒｎｅｒ ｚｏｎｅ）に逃げて動かない行動様相を示し、Ｃ５７ＢＬ／６がコーナー（ｃｏｒｎｅｒ ｚｏｎｅ）に留まる時間を測定して社会的回避程度を判断した。

【0119】

その結果を図５に示した。図５から分かるように、本発明のＫＢＬ３９６を投与したマウスでは、社会的攻撃ストレスを誘発した時（ＫＢＬ３９６＋ＳＴＲ）、社会的回避程度が顕著に改善されるのを確認することができた。

【0120】

実施例６．ＫＢＬ３９６菌株投与による憂鬱症改善効果（尾懸垂実験）
実施例５で社会的攻撃ストレスを受けたＣ５７ＢＬ／６マウスは憂鬱症類似行動（ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ－ｌｉｋｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ）を示し、これは学界に既に構築された憂鬱症マウスモデルである。本発明では、ＫＢＬ３９６菌株の投与による憂鬱症改善効果を確認するために社会的攻撃ストレスを受けたＣ５７ＢＬ／６マウスに尾懸垂実験（ｔａｉｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｔｅｓｔ）を行った。

【0121】

具体的に、菌株の投与とストレス露出を通じた憂鬱症の誘導は実施例５の方法と同様に行い、社会的攻撃ストレスを受ける間にも菌株は同一に投与された。

【0122】

社会的攻撃ストレスを受けたＣ５７ＢＬ／６マウスをそれぞれ分離された区域で尾端部から約１ｃｍ離れた部分に付着されたテープによって逆さにつるし、実験時間総６分中の最後４分間不動時間を測定した。不動状態は吊られた状態で何の動きもなく完全に止まっている状態を意味する。

【0123】

尾懸垂実験結果を図６に示した。図６から分かるように、憂鬱症が誘導された対照群（ＰＢＳ＋ＳＴＲ）に比べて、ＫＢＬ３９６投与群（ＫＢＬ３９６＋ＳＴＲ）では同一なストレスに露出されたにもかかわらず、正常対照群と同一な水準に憂鬱症が回復されたのを確認することができた。

【0124】

以上の結果から、ＫＢＬ３９６菌株の投与が認知能力改善効果およびストレスによる憂鬱症の予防および治療効果があるのが分かる。

【0125】

実施例７．ＫＢＬ３９６菌株投与による脳の炎症反応調節効果
ＫＢＬ３９６菌株投与による脳の炎症反応調節効果を確認するために、実施例５の動物モデルから得られた脳組織の総タンパク質を抽出、ＥＬＩＳＡを行って炎症性サイトカインであるＩＬ－１βの量を確認した。実施例５の動物モデル脳組織から実施例４と同様な過程で‘水溶性試料’を収得した。‘水溶性試料’のタンパク質濃度測定は、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）を使用して製造者方法により行われた。ＩＬ－１βの量を測定するために、Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－１β ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて製造者方法により試料を準備して実施例４と同様な過程で分析した。

【0126】

測定されたＩＬ－１βの分析結果を図７に示した。憂鬱症が誘導されたマウス（ＰＢＳ＋ＳＴＲ）の脳では正常マウス（ＰＢＳ）の脳に比べて炎症性サイトカインであるＩＬ－１βの濃度が増加したが、ＫＢＬ３９６投与群（ＫＢＬ３９６およびＫＢＬ３９６＋ＳＴＲ）の脳ではストレス露出有無に関係なく正常対照群と類似の水準にＩＬ－１βの濃度が維持されるのを確認することができた。

【0127】

実施例８．ＫＢＬ３９６菌株投与によるストレス誘発免疫不均衡調節効果
ＣＤ４＋Ｔ細胞は抗炎症、ＣＤ８＋Ｔ細胞は炎症促進に寄与すると認識されており、これらの相対比であるＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌ ｒａｔｉｏの減少は感染抵抗性の減少および免疫老化のような免疫不均衡を招く。また、調節Ｔ細胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ、Ｔｒｅｇ）は免疫系の過度な反応を防止するための免疫調節の役割を担当する。このようにＴ細胞によって調節される免疫の不均衡がもたらされる場合、炎症反応が現れるようになり、特に神経および脳での炎症反応は認知症など退行性脳疾患および憂鬱症などを誘発する可能性が高い。ＫＢＬ３９６菌株が免疫調節に関与するＴ細胞にどのような影響を与えるか確認するために、実施例５のマウスの脾臓（ｓｐｌｅｅｎ）組織および腸間膜リンパ節細胞でフローサイトメトリー（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇ、ＦＡＣＳ）を行った。

【0128】

組織は、犠牲時１０％ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地に入れてｉｃｅに保管した。細胞の損失を防止するために、犠牲直後サンプリングした組織を７０μｍ ｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎｅｒに濾して単一細胞を得た後、ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅを通じて染色して生きている細胞の数を定量した。その後、１×１０^７個の細胞を９６ｗｅｌｌに移した後、確認しようとする免疫マーカを標的とする蛍光抗体を付けた。ここに使用された免疫マーカはそれぞれ、ＦＩＴＣ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ３、ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４、ＰＥ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ８、ＰＥ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＦＯＸＰ３、ＡＰＣ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ２５ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（以上、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）である。その後、ＢＤ ＦＡＣＳＶｅｒｓｅ^ＴＭ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって フローサイトメトリーを行い、Ｆｌｏｗｊｏ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して免疫細胞を分析した。

【0129】

フローサイトメトリー結果を図８に提示した。ストレスに露出されたマウス（ＰＢＳ＋ＳＴＲ）は正常マウス（ＰＢＳ）に比べて脾臓組織のＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞比率が減少して炎症にぜい弱になったが、ＫＢＬ３９６菌株を投与時、（ＫＢＬ３９６＋ＳＴＲ）比率が有意に回復するのを確認することができた（図８Ａ）。また、腸間膜リンパ節の調節Ｔ細胞の量もストレス露出によって減少したが（ＰＢＳ＋ＳＴＲ）、ＫＢＬ３９６菌株を投与時（ＫＢＬ３９６＋ＳＴＲ）ストレスを受けないマウスに同様に回復されるのを確認することができた（図８Ｂ）。したがって、ストレス露出による免疫不均衡がＫＢＬ３９６菌株投与によって緩和できるのを確認した。

【0130】

実施例９．ＫＢＬ３９６菌株の炭素源利用能および酵素活性確認
ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株の生理学的特性のうちの炭素源利用性をＡＰＩ Ｋｉｔ（モデル名：ＡＰＩ５０ ＣＨＬ；製造会社：ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ’ｓ、ＵＳＡ）による糖発酵試験で分析し、その結果を下記表３に示した。下記表３で、“＋”は炭素源利用性が陽性である場合を示す。

【0131】

また、ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株の生理学的特性のうちの酵素活性をＡＰＩ Ｋｉｔ（モデル名：ＡＰＩ－ＺＹＭ ＣＨＬ；製造会社：ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ’ｓ、ＵＳＡ）による酵素活性実験で分析し、その結果を下記表４に示した。下記表４で、“＋”は酵素活性がある場合を示す。

【0132】

【表3】

【0133】

【表4】

【0134】

実施例１０．ＫＢＬ３９６菌株の製剤
発酵器を稼動して確保したＫＢＬ３９６菌株を遠心分離機を用いて収穫した後、残った培地上層液を廃棄し、１Ｘ ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ）で洗浄することによって培養液の残余物を除去した。安定した凍結乾燥のための剤形（ＣＰＡ）に脱脂乳、スクロースおよびソルビトール（剤形総重量に対してｓｋｉｍ ｍｉｌｋ １１％＋ｓｕｃｒｏｓｅ ４．２９％＋ｓｏｒｂｉｔｏｌ ５．６９％）で処理し、陰性対照群として１Ｘ ＰＢＳを処理して凍結乾燥を行った。遠心分離機で収穫した菌株は除去した上層液の２０倍に濃縮して凍結保護剤（ＣＰＡ）を処理し、ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ －８０℃で２４時間凍結した後、完了した菌株は２次にかけた細密粉砕を行って生存率を確認した。凍結乾燥時の生存率は凍結前と凍結乾燥後のＣＦＵ係数結果で確認した。

【0135】

その結果、図９のように、１Ｘ ＰＢＳを処理した結果、２５．８％の生存率を示した反面、ＣＰＡを処理した時は９５％の生存率を示して、凍結乾燥による生存率の明確な増加効果を確認することができた。

【0136】

ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株の受託情報
本発明の発明者らはラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６ ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰを２０１７年５月２９日に公認寄託機関である韓国生物資源センター（住所：大韓民国５６２１２全羅北道井邑市イプシンギル１８１、韓国生命工学研究院）に特許寄託してＫＣＴＣ１３２７８ＢＰの受託番号の付与を受けた。

【0137】

以上のように、本発明を前記の実施例を通じて説明したが、本発明が必ずしもこれのみに限定されるのではなく、本発明の範疇と思想を逸脱しない範囲内で多様な変形実施が可能であるのはもちろんである。したがって、本発明の保護範囲は本発明に添付された特許請求の範囲に属する全ての実施形態を含むと解釈されなければならない。

【産業上の利用可能性】

【0138】

本発明によるラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＫＢＬ３９６）ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物は人体で毒性がなくて安全であり治療剤として否定的認識なく容易に接近できる長所と共に、従来神経系疾患治療剤が有する副作用の危険がなく神経系疾患の改善に優れた効果を示し産業的に非常に有用に使用できる。
本開示は以下の実施形態を包含する。
[１] ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株。
[２] ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株は、配列番号１で表される１６ｓ ｒＤＮＡ配列を含むものである実施形態１に記載の菌株。
[３] ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株は、セロトニン分泌増加、炎症性サイトカイン発現抑制、腸内有害菌の減少、および抗酸化作用からなる群より選択されるいずれか一つ以上の特性を示すものである、実施形態１に記載の菌株。
[４] ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む薬学組成物。
[５] 前記薬学組成物は、神経系疾患の予防または治療用である、実施形態４に記載の薬学組成物。
[６] 前記神経系疾患は、精神障害または神経変性疾患である、実施形態５に記載の薬学組成物。
[７] 前記精神障害は、ストレスによる緊張、不安、憂鬱症、気分障害、不眠症、妄想性障害、強迫性障害、偏頭痛、記憶障害、認知障害、および注意力障害からなる群より選択されたいずれか一つ以上である、実施形態６に記載の薬学組成物。
[８] 前記神経変性疾患は、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、脊髄小脳委縮症（Ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ Ａｔｒｏｐｈｙ）、トゥレット症候群（Ｔｏｕｒｅｔｔｅ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フリードライヒ運動失調症（Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ’ｓ Ａｔａｘｉａ）、マチャド・ジョセフ病（Ｍａｃｈａｄｏ－Ｊｏｓｅｐｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、認知症、ジストニア（Ｄｙｓｔｏｎｉａ）、および進行性核上性麻痺（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ Ｐａｌｓｙ）からなる群より選択されたいずれか一つ以上である、実施形態６に記載の薬学組成物。
[９] 少なくとも一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含む、実施形態４に記載の薬学組成物。
[１０] ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む神経系疾患の予防または改善用食品組成物。
[１１] 少なくとも一つ以上の賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含む、実施形態１０に記載の食品組成物。
[１２] ラクトバチルスプランタルムＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む動物飼料用添加剤。
[１３] 少なくとも一つ以上の賦形剤および／または凍結乾燥剤をさらに含む、実施形態１２に記載の動物飼料用添加剤。
[１４] ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上の治療学的に有効な量をこれを必要とする個体に投与する段階を含む、神経系疾患の予防または治療方法。
[１５] 神経系疾患の予防または治療に使用するための、ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物。
[１６] 神経系疾患の予防または治療のための予防または治療用薬剤を製造するための、ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＫＢＬ３９６（ＫＣＴＣ１３２７８ＢＰ）菌株、前記菌株の培養物、前記菌株の破砕物、および前記菌株の抽出物からなる群より選択された１種以上を含む組成物の使用。

【0139】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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