特許6996771予後不良急性骨髄性白血病の治療へのミトコンドリア活性阻害剤の使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2021-12-20
(45)【発行日】2022-02-04
(54)【発明の名称】予後不良急性骨髄性白血病の治療へのミトコンドリア活性阻害剤の使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/422 20060101AFI20220128BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220128BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220128BHJP
【ＦＩ】
A61K31/422
A61P35/02
A61P43/00 111
【請求項の数】
20
(21)【出願番号】P 2019505429
(86)(22)【出願日】2017-08-01
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-10-03
(86)【国際出願番号】 CA2017050921
(87)【国際公開番号】W WO2018023197
(87)【国際公開日】2018-02-08
【審査請求日】2020-07-21
(31)【優先権主張番号】2,937,896
(32)【優先日】2016-08-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CA
(73)【特許権者】
【識別番号】599116890
【氏名又は名称】ユニベルシテ ドゥ モントリオール
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100150810
【弁理士】
【氏名又は名称】武居 良太郎
(74)【代理人】
【識別番号】100196977
【弁理士】
【氏名又は名称】上原 路子
(72)【発明者】
【氏名】ガイ ソーバゴー
(72)【発明者】
【氏名】イレーヌ バチェッリ
【審査官】小川 知宏
(56)【参考文献】
【文献】Annals of Hematology，2015年，94，201-210
【文献】Mitochondrion，2015年，21，41-48
【文献】Leukemia Research，2014年，38，402-410
【文献】Scientific Reports 6，2016年04月，6，24589
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／４２２
Ａ６１Ｐ ３５／０２
Ａ６１Ｐ ４３／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を含む、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療における使用のための医薬組成物であって、
前記ＡＭＬが、以下の特徴：
（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；
（ｂ）
【表1】
（ｃ）
【表2】
（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに
（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度：
のうち少なくとも１つの特徴を含む、医薬組成物。
【請求項2】
前記ＡＭＬが予後不良ＡＭＬである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記ＡＭＬが、ＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ６、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ９、ＨＯＸＢ－ＡＳ３、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＨＯＸＡ１０－ＡＳ、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１１－ＡＳ、ＭＥＩＳ１およびＰＢＸ３から選択される、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＡ９および／またはＨＯＸＡ１０である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記ＡＭＬが、前記表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記ＡＭＬが、前記表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記ＡＭＬが、中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の細胞遺伝学的または分子的リスク因子を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記ＡＭＬが、中等度の細胞遺伝学的リスクのＡＭＬおよび／またはＮＫ－ＡＭＬである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも２つ又は少なくとも３つの因子を含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および／または変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記ＤＮＡメチル化遺伝子が、ＤＮＭＴ３ＡまたはＩＤＨ１である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１と変異ＦＬＴ３と変異ＤＮＭＴ３Ａとを含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記変異ＦＬＴ３が、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記ＡＭＬが、総細胞数１×１０６個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記ＡＭＬが、総細胞数５×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項16】
前記ＡＭＬが、前記特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも２つ又は少なくとも３つの特徴を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項17】
前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１を有するＮＫ－ＡＭＬである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項18】
前記ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、医薬組成物中に存在する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項19】
対象が小児対象である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項20】
対象が成人対象である、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１６年８月２日に出願されたカナダ特許出願第２，９３７，８９６号の利益を主張するものであり、上記出願はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本願は、２０１６年８月２日に出願されたカナダ特許出願第２，９３７，８９６号の利益を主張するものであり、上記出願はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
（技術分野）
本開示は、全般的には急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、より具体的には通常予後不良であるＡＭＬサブタイプの治療に関するものである。
本開示は、全般的には急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、より具体的には通常予後不良であるＡＭＬサブタイプの治療に関するものである。
【背景技術】
【0003】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は特に致命的な形態の癌の１つであり、患者のほとんどが診断から２年以内に死亡する。ＡＭＬは若年成人の主たる死因の１つとなっている。ＡＭＬは、病態生理学的にも、遺伝学的にも、予後の面でも不均一な新生物の集合である。現在、ＡＭＬ患者は主として細胞遺伝学および分子解析に基づき、予後が著明に対照的なＡＭＬのグループまたは亜群に分類される。現時点で、全ＡＭＬ患者の約４５％が特定の再発性の細胞遺伝学的異常の有無に基づき、様々な予後の異なるグループに分類されている。
【0004】
ＦＬＴ３チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）でＦＬＴ３受容体チロシンキナーゼを標的化することにより、ＦＬＴ３変異ＡＭＬ（一般に臨床転帰が不良である）の治療に有望な結果が得られることが示されているが、ほとんどの患者は奏効が不十分で持続性のものではない。ＴＫＩに対する獲得耐性の誘導も臨床的問題点の１つとして浮上している。また、ＡＭＬで病的に活性化されるその他のキナーゼ、例えばｃ－ＫＩＴおよびＪＡＫ２などの阻害剤でも骨髄応答が得られたのは極めてまれである。
【0005】
このため、ＡＭＬ、例えば予後不良のＡＭＬなどの治療のための新たな治療戦略の特定が必要とされている。
【0006】
本明細書の記載では多数の文献を参照し、その文献の内容は全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【0007】
本開示は以下の項目１～８８を提供する：
【0008】
１．対象の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【0009】
２．対象の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【0010】
３．前記ＡＭＬが予後不良ＡＭＬである、項目１または２に記載の使用。
【0011】
４．前記ＡＭＬが、以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つの特徴を含む、項目１～３のいずれか１項に記載の使用。
【0012】
５．前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を含む、項目４に記載の使用。
【0013】
６．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ６、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ９、ＨＯＸＢ－ＡＳ３、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＨＯＸＡ１０－ＡＳ、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１１－ＡＳ、ＭＥＩＳ１および／またはＰＢＸ３である、項目５に記載の使用。
【0014】
７．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＡ９および／またはＨＯＸＡ１０である、項目６に記載の使用。
【0015】
８．前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を含む、項目４～７のいずれか１項に記載の使用。
【0016】
９．前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を含む、項目４～８のいずれか１項に記載の使用。
【0017】
１０．前記ＡＭＬが、項目１の項目（ｄ）に明記される細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を含む、項目４～９のいずれか１項に記載の使用。
【0018】
１１．前記ＡＭＬが、中等度の細胞遺伝学的リスクのＡＭＬおよび／またはＮＫ－ＡＭＬである、項目１０に記載の使用。
【0019】
１２．前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも２つの因子を含む、項目１０または１１に記載の使用。
【0020】
１３．前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも３つの因子を含む、項目１２に記載の使用。
【0021】
１４．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および／または変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含む、項目４～１３のいずれか１項に記載の使用。
【0022】
１５．前記ＤＮＡメチル化遺伝子が、ＤＮＭＴ３ＡまたはＩＤＨ１である、項目１４に記載の使用。
【0023】
１６．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含み、好ましくは、ＤＮＡメチル化遺伝子がＤＮＭＴ３Ａである、項目１４または１５に記載の使用。
【0024】
１７．前記変異ＦＬＴ３が、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）である、項目４～１６のいずれか１項に記載の使用。
【0025】
１８．前記ＡＭＬが、総細胞数１×１０６個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、項目４～１７のいずれか１項に記載の使用。
【0026】
１９．前記ＡＭＬが、総細胞数５×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、項目１８に記載の使用。
【0027】
２０．前記ＡＭＬが、特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも２つの特徴を含む、項目４～１９のいずれか１項に記載の使用。
【0028】
２１．前記ＡＭＬが、特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも３つの特徴を含む、項目２０に記載の使用。
【0029】
２２．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１を有するＮＫ－ＡＭＬである、項目４～２１のいずれか１項に記載の使用。
【0030】
２３．ミトコンドリア活性阻害剤が、医薬組成物中に存在する、項目１～２２のいずれか１項に記載の使用。
【0031】
２４．対象が小児対象である、項目１～２３のいずれか１項に記載の使用。
【0032】
２５．対象が成人対象である、項目１～２３のいずれか１項に記載の使用。
【0033】
２６．急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療における使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0034】
２７．前記ＡＭＬが予後不良ＡＭＬである、項目２６に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0035】
２８．前記ＡＭＬが、以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つの特徴を含む、項目２６または２７に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0036】
２９．前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を含む、項目２８に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0037】
３０．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ６、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ９、ＨＯＸＢ－ＡＳ３、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＨＯＸＡ１０－ＡＳ、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１１－ＡＳ、ＭＥＩＳ１および／またはＰＢＸ３である、項目２９に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0038】
３１．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＡ９および／またはＨＯＸＡ１０である、項目３０に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0039】
３２．前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を含む、項目２８～３１のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0040】
３３．前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を含む、項目２８～３２のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0041】
３４．前記ＡＭＬが、項目２８の項目（ｄ）に明記される細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を含む、項目２８～３３のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0042】
３５．前記ＡＭＬが、中等度の細胞遺伝学的リスクのＡＭＬおよび／またはＮＫ－ＡＭＬである、項目３４に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0043】
３６．前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも２つの因子を含む、項目２８～３５のいずれか１項に記載の使用のためミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0044】
３７．前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも３つの因子を含む、項目３６に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0045】
３８．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および／または変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含む、項目２８～３７のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0046】
３９．前記ＤＮＡメチル化遺伝子が、ＤＮＭＴ３ＡまたはＩＤＨ１である、項目３８に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0047】
４０．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含み、好ましくは、ＤＮＡメチル化遺伝子がＤＮＭＴ３Ａである、項目３８または３９に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0048】
４１．前記変異ＦＬＴ３が、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）である、項目２８～４０のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0049】
４２．前記ＡＭＬが、総細胞数１×１０６個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、項目２８～４１のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0050】
４３．前記ＡＭＬが、総細胞数５×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、項目４２に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0051】
４４．前記ＡＭＬが、項目２８に明記される特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも２つの特徴を含む、項目２８～４３のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0052】
４５．前記ＡＭＬが、項目２８に明記される特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも３つの特徴を含む、項目４４に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0053】
４６．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１を有するＮＫ－ＡＭＬである、項目２８～４５のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0054】
４７．ミトコンドリア活性阻害剤が、医薬組成物中に存在する、項目２６～４６のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0055】
４８．対象が小児対象である、項目２６～４７のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0056】
４９．対象が成人対象である、項目２６～４７のいずれか１項に記載の使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩。
【0057】
５０．急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療が奏効する可能性を判定する方法であって、前記対象のＡＭＬ細胞が、以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つの特徴を含むかどうかを判定することを含み、前記ＡＭＬ細胞に前記以下の特徴のうち少なくとも１つの特徴がみられることが、対象に前記治療が奏効する可能性が高いことを示す、方法。
【0058】
５１．前記ＡＭＬ細胞が、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を示す、項目５０に記載の方法。
【0059】
５２．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ６、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ９、ＨＯＸＢ－ＡＳ３、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＨＯＸＡ１０－ＡＳ、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１１－ＡＳ、ＭＥＩＳ１および／またはＰＢＸ３である、項目５１に記載の方法。
【0060】
５３．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＡ９および／またはＨＯＸＡ１０である、項目５２に記載の方法。
【0061】
５４．前記ＡＭＬ細胞が、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を示す、項目５０～５３のいずれか１項に記載の方法。
【0062】
５５．前記ＡＭＬ細胞が、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を示す、項目５０～５５のいずれか１項に記載の方法。
【0063】
５６．前記ＡＭＬ細胞が、項目５０の項目（ｄ）に明記される細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を含む、項目５０～５５のいずれか１項に記載の方法。
【0064】
５７．前記ＡＭＬが、中等度の細胞遺伝学的リスクのＡＭＬおよび／またはＮＫ－ＡＭＬである、項目５０～５６のいずれか１項に記載の方法。
【0065】
５８．前記ＡＭＬ細胞が、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも２つの因子を含む、項目５０～５７のいずれか１項に記載の方法。
【0066】
５９．前記ＡＭＬ細胞が、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも３つの因子を含む、項目５８に記載の方法。
【0067】
６０．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および／または変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含む、項目５８に記載の方法。
【0068】
６１．前記ＤＮＡメチル化遺伝子が、ＤＮＭＴ３ＡまたはＩＤＨ１である、項目６０に記載の方法。
【0069】
６２．前記ＡＭＬ細胞が、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含み、好ましくは、ＤＮＡメチル化遺伝子がＤＮＭＴ３Ａである、項目６０または６１に記載の方法。
【0070】
６３．前記変異ＦＬＴ３が、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）である、項目５０～６２のいずれか１項に記載の方法。
【0071】
６４．前記ＡＭＬ細胞のＬＳＣ頻度が、総細胞数１×１０６個当たりＬＳＣ約１個以上である、項目５０～６３のいずれか１項に記載の方法。
【0072】
６５．前記ＡＭＬ細胞のＬＳＣ頻度が、総細胞数５×１０５個当たりＬＳＣ約１個以上である、項目６４に記載の方法。
【0073】
６６．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１を有するＮＫ－ＡＭＬである、項目５０～６５のいずれか１項に記載の方法。
【0074】
６７．急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、より好ましくはムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【0075】
６８．前記ＡＭＬが予後不良ＡＭＬである、項目６７に記載の方法。
【0076】
６９．前記ＡＭＬが、以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つの特徴を含む、項目６７または６８に記載の方法。
【0077】
７０．前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を含む、項目６９に記載の方法。
【0078】
７１．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ６、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ９、ＨＯＸＢ－ＡＳ３、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＨＯＸＡ１０－ＡＳ、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１１－ＡＳ、ＭＥＩＳ１および／またはＰＢＸ３である、項目６９または７０に記載の方法。
【0079】
７２．前記１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が、ＨＯＸＡ９および／またはＨＯＸＡ１０である、項目７１に記載の方法。
【0080】
７３．前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を含む、項目６９～７２のいずれか１項に記載の方法。
【0081】
７４．前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を含む、項目６９～７３のいずれか１項に記載の方法。
【0082】
７５．前記ＡＭＬが、項目６９の項目（ｄ）に明記される細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を含む、項目６９～７４のいずれか１項に記載の方法。
【0083】
７６．前記ＡＭＬが、中等度の細胞遺伝学的リスクのＡＭＬおよび／またはＮＫ－ＡＭＬである、項目６９～７５のいずれか１項に記載の方法。
【0084】
７７．前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも２つの因子を含む、項目６９～７６のいずれか１項に記載の方法。
【0085】
７８．前記ＡＭＬが、前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち少なくとも３つの因子を含む、項目７７に記載の方法。
【0086】
７９．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および／または変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含む、項目７７に記載の方法。
【0087】
８０．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１、変異ＦＬＴ３および変異ＤＮＡメチル化遺伝子を含む、項目８０に記載の方法。
【0088】
８１．前記ＤＮＡメチル化遺伝子が、ＤＮＭＴ３ＡまたはＩＤＨ１、好ましくはＤＮＭＴ３Ａである、項目７９または８０に記載の方法。
【0089】
８２．前記変異ＦＬＴ３が、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）である、項目６９～８１のいずれか１項に記載の方法。
【0090】
８３．前記ＡＭＬが、総細胞数１×１０６個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、項目６９～８２のいずれか１項に記載の方法。
【0091】
８４．前記ＡＭＬが、総細胞数５×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を含む、項目８３に記載の方法。
【0092】
８５．前記ＡＭＬが、変異ＮＰＭ１を有するＮＫ－ＡＭＬである、項目６９～８４のいずれか１項に記載の方法。
【0093】
８６．ミトコンドリア活性阻害剤が、医薬組成物中に存在する、項目６７～８５のいずれか１項に記載の方法。
【0094】
８７．対象が小児対象である、項目６７～８６のいずれか１項に記載の方法。
【0095】
８８．対象が成人対象である、項目６７～８６のいずれか１項に記載の方法。
【0096】
以下に単なる例として記載する本発明の具体的な実施形態に関する非限定的説明を、添付図面を参照しながら読めば、本発明のその他の目的、利点および特徴がさらに明らかになるであろう。
【0097】
添付図面については以下の通りである。
【図面の簡単な説明】
【0098】
【図1-1】ＨＯＸネットワーク遺伝子の発現とＡＭＬの予後との間の関係を示す図である。図１Ａ：生存試験を実施するのに十分な情報が入手可能なＡＭＬ患者のコホートであり本明細書で試験した予後Ｌｅｕｃｅｇｅｎｅ ＡＭＬコホート（ＡＭＬ患者２６３例）を対象にした、ＨＯＸネットワーク遺伝子のメンバーの一貫した高発現（黒、各グラフの右上）およびＨＯＸネットワーク遺伝子のメンバーの一貫した低発現（灰色、各グラフの左下）がみられる患者試料の特定。括弧内の値は各遺伝子の発現の範囲を示す。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；Ｓｔｄ：標準偏差。
【図1-2】ＨＯＸネットワーク遺伝子の発現とＡＭＬの予後との間の関係を示す図である。図１Ｂ：高ＨＯＸネットワーク亜群に属するＡＭＬ患者（下の線、ｎ＝１００）対低ＨＯＸネットワーク亜群に属するＡＭＬ患者（下の線、ｎ＝２７）の全生存期間。図１Ｃ：高ＨＯＸＡ９／ＨＯＸＡ１０ ＡＭＬ試料集団の特定。図１Ｂのｐ値はログランク検定により求めたものである。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；Ｓｔｄ：標準偏差。
【図1-3】ＨＯＸネットワーク遺伝子の発現とＡＭＬの予後との間の関係を示す図である。図１Ｄ：高ＨＯＸＡ９／ＨＯＸＡ１０群に属するＡＭＬ患者（下の線、ｎ＝１３１）および中／低ＨＯＸＡ９／ＨＯＸＡ１０群に属するＡＭＬ患者（上の線、ｎ＝１３２）の全生存期間。図１Ｄのｐ値はログランク検定により求めたものである。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；Ｓｔｄ：標準偏差。
【図2-1】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ａ：６０種類の化合物（表４）に関する一次スクリーニングのワークフローの概要。高ＨＯＸ患者試料（暗灰色、ｎ＝１３１）と中／低ＨＯＸ患者試料（明灰色、ｎ＝１３２）とを識別する代表的な遺伝子としてＨＯＸＡ９およびＨＯＸＡ１０を用いた。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図2-2】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ｂ：ムブリチニブが高ＨＯＸ ＡＭＬ患者細胞を標的とする候補薬物であることを確認するに至った一次スクリーニングの結果のまとめ。水平方向の破線はｐ＝０．０５に相当し、垂直方向の破線はＥＣ５０値の差が２．５倍であることを示す。図２Ｃ：高ＨＯＸ標本（暗灰色、右上）および中／低ＨＯＸ標本（明灰色）を含む検証スクリーニングに含めたＡＭＬ患者試料。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図2-3】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ｄ：検証スクリーニングで測定した高ＨＯＸ ＡＭＬ試料と中／低ＨＯＸ ＡＭＬ試料のＥＣ５０値の差。ｐ値はマン・ホイットニーの検定により求めた。図２Ｅ：異なるＡＭＬ標本２００例で測定したムブリチニブＥＣ５０値の頻度により、ムブリチニブ感受性群（ＥＣ５０＜３７５ｎＭ、ｎ＝１００）とムブリチニブ耐性群（ＥＣ５０≧３７５ｎＭ、ｎ＝１００）が決まる。正常な未分化ＣＤ３４－ポジティブ臍帯血細胞はムブリチニブに対して中程度の感受性を示した（ＥＣ５０＞３７５ｎＭ）。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図2-4】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ｆ：ムブリチニブ感受性群に属する患者とムブリチニブ耐性群に属する患者の全生存期間の差。ｐ値はログランク検定により求めた。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図2-5】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ｇ：ＨＯＸネットワーク遺伝子の過剰発現を強調表示したムブリチニブ感受性標本対ムブリチニブ耐性標本のトランスクリプトームプロファイル。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図2-6】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ｈ：発現の差が最も大きい遺伝子（基準：ｌｏｇ（変化倍数）＞０．８（＝６倍）、ＲＰＫＭ＞０．１）を強調表示したムブリチニブ感受性標本対ムブリチニブ耐性標本のトランスクリプトームプロファイル。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図2-7】高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞の薬理学的応答の特徴付けを示す図である。図２Ｉ：ＲＮＡシーケンシングのデータに適用した偽発見率（ＦＤＲ）補正多重マン・ホイットニーの検定によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本（ｎ＝１００、コホート全体の中央値による分割、ＥＣ５０＝３７５ｎＭ）対ムブリチニブ耐性ＡＭＬ標本（ｎ＝１００）に過小発現（点線より上）または過剰発現（点線より下）した遺伝子のリスト。用いたカットオフ：発現＞０．１ＲＰＫＭ、感受性標本と耐性標本との間のｌｏｇ（変化倍数）＞０．７（遺伝子発現の差が５倍）。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡＮＫＲＤ１８Ｂ：アンキリン反復ドメイン１８Ｂ；ＢＥＮＤ６：ＢＥＮドメイン含有６；ＣＯＬ４Ａ５：ＩＶ型コラーゲンアルファ５；ＦＤＲ：偽発見率；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＫＩＲＲＥＬ：Ｋｉｎ Ｏｆ ＩＲＲＥ Ｌｉｋｅ；ＬＩＮＣ：長鎖非コード；ＬＳＣ：白血病幹細胞；ＭＥＩＳ１：ＭＥＩＳホメオボックス１；ＭＩＲ：マイクロＲＮＡ；ＭＳＬＮ：メソテリン；ＮＫＸ２．３：ＮＫ２ホメオボックス ３；ＰＩ３Ｋ：ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスファート３－キナーゼ；ＰＰＢＰ：前血小板塩基性タンパク質；ＰＲＤＭ１６：ＰＲ／ＳＥＴドメイン１６；ＰＲＧ３：プロテオグリカン３；ＲＰＫＭ：Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ；ＲＴＫ：受容体チロシンキナーゼ；Ｓ１００Ａ１６：Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１６；ＳＮＯＲＤ：低分子核小体ＲＮＡ；ＳＴ１８：腫瘍形成能抑制１８、亜鉛フィンガー；ＺＮＦ：亜鉛フィンガータンパク質。
【図3-1】様々な遺伝学的および臨床的特徴によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本の特徴付けを示す図である。図３Ａ：ボンフェローニ補正後の正確なフィッシャー検定によりムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本（ＥＣ５０＜３７５ｎＭ、ｎ＝１００）およびムブリチニブ耐性ＡＭＬ標本（ＥＣ５０≧３７５ｎＭ、ｎ＝１００）に多数みられた臨床的特徴。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡｂｎＣｈｒ：異常染色体；ＡＳＸＬ１：Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｓｅｘ Ｃｏｍｂｓ Ｌｉｋｅ １、転写調節因子；ＣＥＢＰＡ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ；Ｃｏｍｐｌｅｘ：複合核型；ＤＮＭＴ３Ａ：ＤＮＡ（シトシン－５－）－メチルトランスフェラーゼ３アルファ；ＥＶＩ１：エコトロピックウイルス組込み部位１；ＦＬＴ３：Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＩＤＨ：イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））；Ｉｎｔｅｒ（ＡｂｎＫ）：異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク；ｍ；変異；ＭＬＬ：混合系統白血病１；ＮＫ：正常核型；ＮＰＭ１：ヌクレオフォスミン（核小体リン酸化タンパク質Ｂ２３、ヌマトリン）；ＮＲＡＳ：神経芽腫ＲＡＳウイルス発癌遺伝子ホモログ；ＮＵＰ９８：ヌクレオポリン ９８ｋＤａ；ＲＵＮＸ１：Ｒｕｎｔ関連転写因子１；ＳＲＳＦ２：セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２；ＴＥＴ２：Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２；ＴＰ５３：腫瘍タンパク質Ｐ５３；ＷＴ１：ウイルムス腫瘍１；＋８：８番染色体トリソミー。
【図3-2】様々な遺伝学的および臨床的特徴によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本の特徴付けを示す図である。図３Ｂ：細胞遺伝学的リスクのクラスごとのムブリチニブＥＣ５０値。全パネルの水平方向の直線は中央値を示す。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡｂｎＣｈｒ：異常染色体；ＡＳＸＬ１：Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｓｅｘ Ｃｏｍｂｓ Ｌｉｋｅ １、転写調節因子；ＣＥＢＰＡ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ；Ｃｏｍｐｌｅｘ：複合核型；ＤＮＭＴ３Ａ：ＤＮＡ（シトシン－５－）－メチルトランスフェラーゼ３アルファ；ＥＶＩ１：エコトロピックウイルス組込み部位１；ＦＬＴ３：Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＩＤＨ：イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））；Ｉｎｔｅｒ（ＡｂｎＫ）：異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク；ｍ；変異；ＭＬＬ：混合系統白血病１；ＮＫ：正常核型；ＮＰＭ１：ヌクレオフォスミン（核小体リン酸化タンパク質Ｂ２３、ヌマトリン）；ＮＲＡＳ：神経芽腫ＲＡＳウイルス発癌遺伝子ホモログ；ＮＵＰ９８：ヌクレオポリン ９８ｋＤａ；ＲＵＮＸ１：Ｒｕｎｔ関連転写因子１；ＳＲＳＦ２：セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２；ＴＥＴ２：Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２；ＴＰ５３：腫瘍タンパク質Ｐ５３；ＷＴ１：ウイルムス腫瘍１；＋８：８番染色体トリソミー。
【図3-3】様々な遺伝学的および臨床的特徴によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本の特徴付けを示す図である。図３Ｃ：ボンフェローニ補正後の正確なフィッシャー検定によりムブリチニブ高感受性ＡＭＬ標本（ＥＣ５０＜１００ｎＭ、ｎ＝５９）およびムブリチニブ高耐性ＡＭＬ標本（ＥＣ５０＞１μＭ、ｎ＝５８）に多数みられた変異。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡｂｎＣｈｒ：異常染色体；ＡＳＸＬ１：Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｓｅｘ Ｃｏｍｂｓ Ｌｉｋｅ １、転写調節因子；ＣＥＢＰＡ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ；Ｃｏｍｐｌｅｘ：複合核型；ＤＮＭＴ３Ａ：ＤＮＡ（シトシン－５－）－メチルトランスフェラーゼ３アルファ；ＥＶＩ１：エコトロピックウイルス組込み部位１；ＦＬＴ３：Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＩＤＨ：イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））；Ｉｎｔｅｒ（ＡｂｎＫ）：異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク；ｍ；変異；ＭＬＬ：混合系統白血病１；ＮＫ：正常核型；ＮＰＭ１：ヌクレオフォスミン（核小体リン酸化タンパク質Ｂ２３、ヌマトリン）；ＮＲＡＳ：神経芽腫ＲＡＳウイルス発癌遺伝子ホモログ；ＮＵＰ９８：ヌクレオポリン ９８ｋＤａ；ＲＵＮＸ１：Ｒｕｎｔ関連転写因子１；ＳＲＳＦ２：セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２；ＴＥＴ２：Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２；ＴＰ５３：腫瘍タンパク質Ｐ５３；ＷＴ１：ウイルムス腫瘍１；＋８：８番染色体トリソミー。
【図3-4】様々な遺伝学的および臨床的特徴によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本の特徴付けを示す図である。図３Ｄ：存在する変異遺伝子ごとのムブリチニブＥＣ５０値。図３Ｅ：遺伝子亜群ごとのムブリチニブＥＣ５０値。図３Ｆ：ムブリチニブ感受性患者試料の特徴のまとめ。図３Ｅ～３Ｉのｐ値はマン・ホイットニーの検定により算出したものである。全パネルの水平方向の直線は中央値を示す。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡｂｎＣｈｒ：異常染色体；ＡＳＸＬ１：Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｓｅｘ Ｃｏｍｂｓ Ｌｉｋｅ １、転写調節因子；ＣＥＢＰＡ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ；Ｃｏｍｐｌｅｘ：複合核型；ＤＮＭＴ３Ａ：ＤＮＡ（シトシン－５－）－メチルトランスフェラーゼ３アルファ；ＥＶＩ１：エコトロピックウイルス組込み部位１；ＦＬＴ３：Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＩＤＨ：イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））；Ｉｎｔｅｒ（ＡｂｎＫ）：異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク；ｍ；変異；ＭＬＬ：混合系統白血病１；ＮＫ：正常核型；ＮＰＭ１：ヌクレオフォスミン（核小体リン酸化タンパク質Ｂ２３、ヌマトリン）；ＮＲＡＳ：神経芽腫ＲＡＳウイルス発癌遺伝子ホモログ；ＮＵＰ９８：ヌクレオポリン ９８ｋＤａ；ＲＵＮＸ１：Ｒｕｎｔ関連転写因子１；ＳＲＳＦ２：セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２；ＴＥＴ２：Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２；ＴＰ５３：腫瘍タンパク質Ｐ５３；ＷＴ１：ウイルムス腫瘍１；＋８：８番染色体トリソミー。
【図3-5】様々な遺伝学的および臨床的特徴によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本の特徴付けを示す図である。図３Ｇ：ＮＰＭ１、ＦＬＴ３－ＩＴＤおよびＤＮＭＴ３Ａに変異（ｍ）を有する予後不良患者標本（Ｐａｐａｅｍｍａｎｕｉｌ，Ｅ． ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７４，２２０９－２２２１）対その他のＡＭＬ試料のＥＣ５０値。図３Ｅ～３Ｉのｐ値はマン・ホイットニーの検定により算出したものである。全パネルの水平方向の直線は中央値を示す。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡｂｎＣｈｒ：異常染色体；ＡＳＸＬ１：Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｓｅｘ Ｃｏｍｂｓ Ｌｉｋｅ １、転写調節因子；ＣＥＢＰＡ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ；Ｃｏｍｐｌｅｘ：複合核型；ＤＮＭＴ３Ａ：ＤＮＡ（シトシン－５－）－メチルトランスフェラーゼ３アルファ；ＥＶＩ１：エコトロピックウイルス組込み部位１；ＦＬＴ３：Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＩＤＨ：イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））；Ｉｎｔｅｒ（ＡｂｎＫ）：異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク；ｍ；変異；ＭＬＬ：混合系統白血病１；ＮＫ：正常核型；ＮＰＭ１：ヌクレオフォスミン（核小体リン酸化タンパク質Ｂ２３、ヌマトリン）；ＮＲＡＳ：神経芽腫ＲＡＳウイルス発癌遺伝子ホモログ；ＮＵＰ９８：ヌクレオポリン ９８ｋＤａ；ＲＵＮＸ１：Ｒｕｎｔ関連転写因子１；ＳＲＳＦ２：セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２；ＴＥＴ２：Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２；ＴＰ５３：腫瘍タンパク質Ｐ５３；ＷＴ１：ウイルムス腫瘍１；＋８：８番染色体トリソミー。
【図3-6】様々な遺伝学的および臨床的特徴によるムブリチニブ感受性ＡＭＬ標本の特徴付けを示す図である。図３Ｈ～３Ｉ：正常核型（ＮＫ）亜群（図３Ｈ）および変異ＮＰＭ１（ＮＰＭ１ｍ）を有するＮＫ亜群（図３Ｉ）に属するムブリチニブ感受性群の患者試料対ムブリチニブ耐性群の患者試料の白血病幹細胞（ＬＳＣ）頻度。図３Ｅ～３Ｉのｐ値はマン・ホイットニーの検定により算出したものである。全パネルの水平方向の直線は中央値を示す。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＡｂｎＣｈｒ：異常染色体；ＡＳＸＬ１：Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｓｅｘ Ｃｏｍｂｓ Ｌｉｋｅ １、転写調節因子；ＣＥＢＰＡ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質アルファ；Ｃｏｍｐｌｅｘ：複合核型；ＤＮＭＴ３Ａ：ＤＮＡ（シトシン－５－）－メチルトランスフェラーゼ３アルファ；ＥＶＩ１：エコトロピックウイルス組込み部位１；ＦＬＴ３：Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３；ＨＯＸ：ホメオボックス；ＩＤＨ：イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））；Ｉｎｔｅｒ（ＡｂｎＫ）：異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク；ｍ；変異；ＭＬＬ：混合系統白血病１；ＮＫ：正常核型；ＮＰＭ１：ヌクレオフォスミン（核小体リン酸化タンパク質Ｂ２３、ヌマトリン）；ＮＲＡＳ：神経芽腫ＲＡＳウイルス発癌遺伝子ホモログ；ＮＵＰ９８：ヌクレオポリン ９８ｋＤａ；ＲＵＮＸ１：Ｒｕｎｔ関連転写因子１；ＳＲＳＦ２：セリン／アルギニンリッチスプライシング因子２；ＴＥＴ２：Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２；ＴＰ５３：腫瘍タンパク質Ｐ５３；ＷＴ１：ウイルムス腫瘍１；＋８：８番染色体トリソミー。
【図4-1】ムブリチニブの腫瘍細胞に対する作用を評価した実験の結果を示す図である。図４Ａ：ＯＣＩ－ＡＭＬ３を様々な濃度のムブリチニブで処理してから４日後の生細胞（ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）ネガティブ細胞）の数。図４Ｂ：ＯＣＩ－ＡＭＬ３を様々な濃度のムブリチニブで処理してから２７時間後にＤＭＳＯ処理細胞と比較したＰＩポジティブ細胞（死細胞）の富化倍数。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＥＲＢＢ２：Ｅｒｂ－Ｂ２受容体チロシンキナーゼ２；ＦＩＴＣ：フルオレセインイソチオシアナート；ＰＥ：フィコエリトリン；Ｐｏｓ：ポジティブ。
【図4-2】ムブリチニブの腫瘍細胞に対する作用を評価した実験の結果を示す図である。図４Ｃ：対照ＤＭＳＯ、１００ｎＭムブリチニブまたは１０μＭムブリチニブで処理してから２４時間後のＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞における初期アポトーシス細胞および後期アポトーシス細胞の割合。図４Ｄ：ムブリチニブのＥＲＢＢ２阻害剤ジトシル酸ラパチニブに対するＡＭＬ患者の細胞感受性の比較。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＥＲＢＢ２：Ｅｒｂ－Ｂ２受容体チロシンキナーゼ２；ＦＩＴＣ：フルオレセインイソチオシアナート；ＰＥ：フィコエリトリン；Ｐｏｓ：ポジティブ。
【図4-3】ムブリチニブの腫瘍細胞に対する作用を評価した実験の結果を示す図である。図４Ｅ：ムブリチニブまたは２種類の既知のＥＲＢＢ２阻害剤、すなわちジトシル酸ラパチニブまたはサピチニブで処理した後のＯＣＩ－ＡＭＬ３の用量反応曲線。図４Ｆ：ムブリチニブ感受性患者試料とムブリチニブ耐性患者試料のＥＲＢＢ２遺伝子発現の比較。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＥＲＢＢ２：Ｅｒｂ－Ｂ２受容体チロシンキナーゼ２；ＦＩＴＣ：フルオレセインイソチオシアナート；ＰＥ：フィコエリトリン；Ｐｏｓ：ポジティブ。
【図4-4】ムブリチニブの腫瘍細胞に対する作用を評価した実験の結果を示す図である。図４Ｇ：フローサイトメトリーにより測定したＥＲＢＢ２過剰発現ＢＴ４７４乳癌細胞系およびＯＣＩ－ＡＭＬ３ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞系におけるＥＲＢＢ２タンパク質発現とアイソタイプ対照の比較。試料を２μＭのムブリチニブで２４時間処理するか、またはＤＭＳＯで擬似処理した。略号：ＡＭＬ：急性骨髄性白血病；ＥＲＢＢ２：Ｅｒｂ－Ｂ２受容体チロシンキナーゼ２；ＦＩＴＣ：フルオレセインイソチオシアナート；ＰＥ：フィコエリトリン；Ｐｏｓ：ポジティブ。
【図5-1】ムブリチニブが腫瘍細胞死を媒介する作用機序を評価した実験の結果を示す図である。図５Ａ：ＯＣＩ－ＡＭＬ３白血病細胞を６ｍＭのＮ－アセチル－システイン（ＮＡＣ）（活性酸素種（ＲＯＳ）スカベンジャー）または溶媒（水）と４時間プレインキュベートした後、１００ｎＭムブリチニブで２４時間処理するか、または溶媒（ＤＭＳＯ）で処理した。フローサイトメトリーでのアネキシンＶおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色による評価で、ムブリチニブ処理による細胞のアポトーシス死がみられた。ＮＡＣの存在下で細胞を培養したところ、ムブリチニブ誘導性細胞死が減少した。
【図5-2】ムブリチニブが腫瘍細胞死を媒介する作用機序を評価した実験の結果を示す図である。図５Ｂ：細胞内のヒドロキシル、ペルオキシルおよびその他のＲＯＳの活性を測定する蛍光発生色素である２’，７’－ジクロロフルオレセインジアセタート（ＤＣＦＤＡ）を用いたフローサイトメトリー染色であり、ムブリチニブ処理（５００ｎＭ、２４時間）によりＯＣＩ－ＡＭＬ３白血病細胞にＲＯＳ活性が誘導されることを示している。図５Ｃおよび５Ｄは、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）によりムブリチニブ処理ＯＣＩ－ＡＭＬ３またはムブリチニブ未処理ＯＣＩ－ＡＭＬ３で検出されたグルタチオンの還元レベルおよび酸化レベルをそれぞれ示している。図５Ｅは、ムブリチニブ（１μＭ）がＯＣＩ－ＡＭＬ３白血病細胞の酸素消費速度（ＯＣＲ）に及ぼす影響を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ（登録商標）細胞外フラックスアナライザー（Ａｇｉｌｅｎｔ（登録商標））を用いて測定し評価した実験の結果を示している。
【図5-3】ムブリチニブが腫瘍細胞死を媒介する作用機序を評価した実験の結果を示す図である。図５Ｆは、ムブリチニブがミトコンドリア電子伝達鎖（ＥＴＣ）複合体Ｉ（ミトコンドリアの呼吸／活性に極めて重要である）に及ぼす影響を、無細胞アッセイ（ＭｉｔｏＴｏｘ（商標）Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｉ ＯＸＰＨＯＳ活性マイクロプレートアッセイ、Ａｂｃａｍ社）を用いて測定し評価した実験の結果を示している。図５Ｇは、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞系およびＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞系をムブリチニブで処理（３８４ウェルプレートでの６日間の培養アッセイ）したときの用量反応曲線を示すグラフである。図５Ｈは、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞系およびＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞系を他のＥＴＣ阻害剤、すなわち、オリゴマイシン（複合体Ｖ阻害剤、図５Ｈ）で処理した場合の用量反応曲線を示すグラフである。
【図5-4】ムブリチニブが腫瘍細胞死を媒介する作用機序を評価した実験の結果を示す図である。図５Ｉ～５Ｊは、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞系およびＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞系を他のＥＴＣ阻害剤、すなわち、ロテノン（複合体Ｉ阻害剤、図５Ｉ）およびデグエリン（複合体Ｉ阻害剤、図５Ｊ）で処理した場合の用量反応曲線を示すグラフである。
【図7】ムブリチニブおよびメトホルミン塩酸塩のＡＭＬ標本に対する阻害作用を示すグラフである。ＡＭＬ標本２０例について、白血病幹細胞の活性が保存される培養条件（Ｐａｂｓｔ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ １１（４）：４３６－４２）下で１μＭのムブリチニブおよびメトホルミン塩酸塩に対する感受性を試験した。
【図8】Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｉ Ｅｎｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔを製造業者の指示（Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ１０９７２１）の通りに用いて評価したＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞の複合体Ｉ酵素活性に対するムブリチニブの作用を示すグラフである。複合体Ｉ活性は、ＮＡＤＨからＮＡＤ＋への酸化およびＯＤ＝４５０ｎｍでの吸光度を増大させる色素の同時還元により求められる。
【発明を実施するための形態】
【0099】
（発明の開示）
本明細書で使用される遺伝学、分子生物学、生化学および核酸に関する用語および記号は、当該分野の標準的な論文およびテキスト、例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第４版，２０１２（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００１年およびそれに対するのちの改訂）；Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，第２版（Ｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，２００５）；Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第６版（ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ（Ｓｄ），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０１２）；Ｓｔｒａｃｈａｎ ａｎｄ Ｒｅａｄ，Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，第２版（Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９）；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）；Ｇａｉｔ編，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８４）；などのものに従うものである。いずれの用語も、関連分野で確立されているその典型的な意味を有するものと理解されるべきである。
本明細書で使用される遺伝学、分子生物学、生化学および核酸に関する用語および記号は、当該分野の標準的な論文およびテキスト、例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第４版，２０１２（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００１年およびそれに対するのちの改訂）；Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，第２版（Ｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，２００５）；Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第６版（ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ（Ｓｄ），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０１２）；Ｓｔｒａｃｈａｎ ａｎｄ Ｒｅａｄ，Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，第２版（Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９）；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）；Ｇａｉｔ編，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８４）；などのものに従うものである。いずれの用語も、関連分野で確立されているその典型的な意味を有するものと理解されるべきである。
【0100】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書では、その冠詞の文法上の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）の目的語を指すのに使用される。例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ（要素）」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。本明細書全体を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」および「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」（いずれも「含む」という意味）という単語は、記載される段階もしくは要素または段階もしくは要素のグループを包含するが、その他のいかなる段階もしくは要素も段階もしくは要素のグループも除外するものではないことを示すものと理解される。
【0101】
本明細書で言及されるＧｅｎｂａｎｋ、ＲｅｆＳｅｑ、ＵｎｉＰｒｏｔ、ＮＣＢＩおよび／またはＥｎｓｅｍｂｌのアクセッション番号に対応するヌクレオチドおよびアミノ酸配列を含めた情報は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0102】
本明細書に記載される方法はいずれも、本明細書で別途明示されるか、または別の形で文脈によって明らかに否定されない限り、任意の適切な順序で実施することができる。
【0103】
本明細書に記載される例または例示語句（「例えば」、「など」）の使用はいずれも、単に本発明を一層よく説明するのを意図するものであって、別途特許請求されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。
【0104】
本明細書では、「約」という用語はその通常の意味を有する。「約」という用語は、ある数値が、その数値を求めるのに用いる装置もしくは方法に内在する誤差の変動を含むか、または記載される数値に近い数値、例えば記載される数値（もしくは数値の範囲）の１０％または５％以内を包含することを表すのに使用される。
【0105】
本明細書に開示される実施形態および特徴のありとあらゆる組合せおよび部分的組合せが本発明に包含される。例えば、本明細書で特定される遺伝子のうち２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上の遺伝子の任意の組合せという表現が、本明細書に記載される方法で使用され得る。
【0106】
「対象」および「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。一実施形態では、患者は成人ＡＭＬ患者である。一実施形態では、患者は６０歳未満である。別の実施形態では、患者は６０歳以上である。別の実施形態では、ＡＭＬ患者は小児ＡＭＬ患者である。
【0107】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、投与する活性薬剤（ミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）の量であって、治療する疾患（ＡＭＬ）の１つまたは複数の症状をある程度緩和する、例えば、ＡＭＬ細胞の増殖を阻害し、かつ／または細胞死を誘導する量を指す。有効量は、有害作用、例えば正常細胞の増殖の阻害および／または細胞死の誘導を最小限に抑えるよう調整される。
【0108】
本明細書に記載される試験では、高レベルのＨＯＸネットワーク遺伝子を発現し、予後／生存率不良の原因となるＡＭＬ細胞がムブリチニブに対して感受性であることを示す。ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞は、ある特定の特徴を有するＡＭＬ試料、例えば、特定の遺伝子の過剰発現または過小発現、ある特定の細胞遺伝学的または分子的リスク因子、例えば正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、ＦＬＴ３－ＩＴＤおよびＤＮＭＴ３Ａの標本中など、ならびに白血病幹細胞（ＬＳＣ）頻度の高い標本中に大量に存在することもわかった。また、チロシンキナーゼヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２）の阻害剤と特徴付けられるムブリチニブがＡＭＬ細胞中のこのタンパク質を標的としないことも明らかになり、ムブリチニブがミトコンドリアの活性／呼吸、より具体的には電子伝達鎖（ＥＴＣ）の阻害によりＡＭＬ細胞のアポトーシスを誘導し、それにより感受性ＡＭＬ細胞のＲＯＳ産生量を増大させることを示す有力な証拠を記載する。その他のミトコンドリアの活性／呼吸の阻害剤もムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞のアポトーシスを誘導することがわかった。
【0109】
したがって一態様では、本開示は、ＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、例えば電子伝達鎖（ＥＴＣ）阻害剤を投与することを含む、方法を提供する。本開示は、ＡＭＬ、例えば予後不良もしくは高リスクＡＭＬに罹患している対象の治療への、またはＡＭＬ、例えば予後不良もしくは高リスクＡＭＬに罹患している対象を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、例えばＥＴＣ阻害剤の使用を提供する。本開示は、ＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬに罹患している対象の治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、例えばＥＴＣ阻害剤も提供する。
【0110】
別の態様では、本開示は、ある薬剤がＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬを治療するのに適し得るかどうかを判定する方法であって、前記薬剤が生体系（例えば、細胞または細胞抽出物）のミトコンドリアの活性または呼吸を阻害する（例えば、ＥＴＣを阻害する）かどうかを判定することを含み、ミトコンドリア活性の阻害が、その薬剤がＡＭＬの治療に適し得ることを示す、方法を提供する。
【0111】
本明細書で使用される「ミトコンドリア活性阻害剤」（または「ミトコンドリア呼吸阻害剤」）という用語は、酸化的細胞エネルギー産生過程の阻害剤、通常、好気的細胞代謝の阻害剤を指す。「酸化的細胞エネルギー産生過程阻害剤」は、細胞内のトリカルボン酸（ＴＣＡ）回路（クエン酸回路、ＣＡＣまたはクレブス回路としても知られる）（炭水化物、脂肪およびタンパク質を二酸化炭素と水に化学的に変換して利用可能なエネルギー形態にする）の阻害剤または細胞内の酸化的（好気的）解糖（細胞質内でのグルコースからピルビン酸への代謝）もしくは解糖基質（ピルビン酸）の酸化的リン酸化の阻害剤を包含する。本開示によるミトコンドリア活性阻害剤とは、ＥＴＣまたは酸化的リン酸化を遮断する能力を示し、活性酸素種（ＲＯＳ、例えばＨ２Ｏ２など）の産生を引き起こす（すなわち、細胞内のＲＯＳレベルを上昇させる）薬剤のことである、すなわち、ＲＯＳ誘導ミトコンドリア活性阻害剤のことである。ミトコンドリア活性阻害剤の有効量とは、ＡＭＬ細胞に対して毒性を示す（ＡＭＬ細胞増殖を阻害し、かつ／またはＡＭＬ細胞死を誘導する）が、正常な非ＡＭＬ細胞に対しては毒性を示さない（またはあまり毒性を示さない）量のことである。
【0112】
一実施形態では、ミトコンドリア活性阻害剤はＴＣＡ回路阻害剤、例えば、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、アルファケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合体、スクシニルＣｏＡシンターゼ、コハク酸デヒドロゲナーゼ、フマラーゼ、リンゴ酸シンターゼ、グルタミナーゼおよびピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体のうちの１つまたは複数の阻害剤である。いくつかのＴＣＡ回路の阻害剤が当該技術分野で公知である。ＴＣＡ回路阻害剤の例としては、ＮＡＤ＋および／またはＮＡＤＨの枯渇剤（例えば、ヒポグリシンＡおよびその代謝産物メチレンシクロプロピル酢酸、Ｄ（－）－３－ヒドロキシブチラートなどのケトン体、アロキサン、ＰＮＵ）、ピルビン酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば亜ヒ酸塩、ジクロロビニル－システイン、ｐ－ベンゾキノンおよびチアミナーゼなど、クエン酸シンターゼの阻害剤、例えばフルオロ酢酸塩、ハロゲン化酢酸（ヨード酢酸、ブロモ酢酸、クロロ酢酸）、フルオロアセトアミド、ハロゲン化アセチルＣｏＡ（フルオロアセチルＣｏＡ、ブロモアセチルＣｏＡ、クロロアセチルＣｏＡ、ヨードアセチルＣｏＡ）、ハロゲン化クロトン酸（フルオロクロトン酸、ヨードクロトン酸、ブロモクロトン酸、クロロクロトン酸）、ハロゲン化ケトン体（クロロ酢酸、フルオロ酢酸、ブロモ酢酸、ヨードアセト酢酸、フルオロ酪酸、クロロ酪酸、ブロモ酪酸、ヨード酪酸、フルオロアセトン、クロロアセトン、ブロモアセトン、ヨードアセトン）およびハロゲン化オレイン酸（ヨードオレイン酸、ブロモオレイン酸、クロロオレイン酸、フルオロオレイン酸）など、アコニターゼの阻害剤、例えばハロゲン化クエン酸およびハロゲン化クエン酸２Ｒ，３Ｒ異性体（フルオロクエン酸、ブロモクエン酸、クロロクエン酸、ヨードクエン酸）など、イソクエン酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えばジクロロビニルシステイン（ＤＣＶＣ）など、コハク酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えばマロン酸塩、ＤＣＶＣ、ペンタクロロブタジエニルシステイン、２－ブロモヒドロキノン、３－ニトロプロピオン酸およびｃｉｓ－クロトナリド殺真菌剤など、グルタミナーゼの阻害剤、例えば６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）など、その他のＴＣＡ回路阻害剤、例えばグル－ヒドロキシオキサマート、ｐ－クロロマーキュリフェニルスルホン酸、Ｌ－グルタミン酸ガンマヒドロキサマート、ｐ－クロロマーキュリフェニルスルホン酸、アシビシン（アルファ－アミノ－３－クロロ－４，５－ジヒドロ－５－イソオキサゾール酢酸、ハロゲン化グルタミン（フルオログルタミン、ヨードグルタミン、クロログルタミン、ブロモ－グルタミン）またはハロゲン化グルタミン酸（フルオログルタミン酸、ヨードグルタミン酸、クロログルタミン酸、ブロモグルタミン酸）、ハロゲン化アミノ酸など、ならびにその類似体、誘導体および塩が挙げられる。
【0113】
ＥＴＣ（呼吸鎖としても知られる）は、真核細胞のミトコンドリアの膜間腔内に存在する一連のタンパク質複合体であり、酸化還元反応を介して電子供与体から電子受容体へ電子を伝達し、この電子伝達と膜を挟んだプロトン（Ｈ＋イオン）伝達とを共役させて、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の合成を駆動する電気化学的プロトン勾配を生じさせる。ＥＴＣの構成要素は４種類の複合体（複合体Ｉ～ＩＶ）に組織化されており、各複合体には複数の異なる電子伝達体が含まれている。ＮＡＤＨ－コエンザイムＱ還元酵素またはＮＡＤＨデヒドロゲナーゼとしても知られる複合体Ｉは、ＮＡＤＨから電子を受容し、解糖、クエン酸回路、脂肪酸酸化およびＥＴＣの間をつなぐ役割を果たす。コハク酸－コエンザイムＱ還元酵素またはコハク酸デヒドロゲナーゼとしても知られる複合体ＩＩは、コハク酸デヒドロゲナーゼを含み、クエン酸回路とＥＴＣを直接つなぐ役割を果たす。複合体ＩおよびＩＩはともに、複合体ＩＩＩの基質となる還元型コエンザイムＱのＣｏＱＨ２を産生する。コエンザイムＱ還元酵素としても知られる複合体ＩＩＩは、ＣｏＱＨ２から電子を伝達して、複合体ＩＶの基質となるシトクロームｃを還元する。最後に、シトクロームｃ還元酵素としても知られる複合体ＩＶは、シトクロームｃから電子を伝達して酸素分子を水に還元する。
【0114】
本明細書で使用される「ＥＴＣ阻害剤」という用語は、ミトコンドリア電子伝達の任意の段階の阻害剤、例えば、ヒトミトコンドリアＥＴＣの複合体Ｉ、複合体ＩＩ、複合体ＩＩＩおよび／または複合体ＩＶの阻害剤を指し、細胞のＲＯＳ産生を誘導する（すなわち、ＲＯＳレベルを未処理細胞より上昇させる）、すなわちＲＯＳ誘導ＥＴＣ阻害剤である。
【0115】
いくつかのＥＴＣの阻害剤が当該技術分野で公知である。ＥＴＣ阻害剤の例としては、ロテノンおよびその誘導体（例えば、デグエリン、アリールアジドアモルフィゲニン、アモルフィスピロノン、テフロシン、アモルフィゲニン、１２ａ－ヒドロキシアモルフィゲニン、１２ａ－ヒドロキシダルパノールおよび６’－０－Ｄ－グルコピラノシルダルパノール）、テノイルトリフルオロアセトン（ＴＴＦＡ）、ジフェニレンヨードニウムクロリド（ＤＰＩ）、フェンホルミン、ロリニアスタチン１およびロリニアスタチン２、アミタール、２－ヘプチル－４－ヒドロキシキノリン、アンチマイシンＡ１およびその誘導体（例えば、ミキソチアゾール）、有機カルコゲン、例えばエブセレン（Ｅｂｓ）、ジフェニルジセレニド（ＰｈＳｅ）２およびジフェニルジテルリド（ＰｈＴｅ）２など、セロトニン－ノルアドレナリン再取込み二重阻害剤（例えば、ベンラファキシン、Ｏ－デスメチルベンラファキシン、クロミプラミン、デスメチルクロミプラミン、イミプラミン、デュロキセチン、ミルナシプランおよびクロルプロマジン）、リコカルコンＡ、アスコクロリン、ストロビリルビンＢ（Ｓｔｒｏｂｉｌｉｒｕｂｉｎ Ｂ）、ピエリシジン、イミプラミンＮＡＤＨ結合酵素阻害剤、例えば２－アントラセン－カルボン酸など、ＮＡＤＨ結合酵素アンタゴニスト、例えばα－ＮＡＤＨなど、ならびに銅キレート剤、例えばジエチルジチオカルバマートなどが挙げられる。ＥＴＣの複合体ＩＩＩの活性の阻害剤には、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１２／０７０００１５号（例えば、Ｎ－シクロノニル－３－ホルムアミド－２－ヒドロキシベンズアミド）およびＷＯ２０１３／１７４９４７号（例えば、３－ホルムアミド－Ｎ－（ヘプタデカン－９－イル）－２－ヒドロキシベンズアミド、Ｎ－シクロペンタデシル－７－ヒドロキシ－１Ｈ－インダゾール－６－カルボキサミド、３，５－ジクロロ－Ｎ－（３－（３－クロロ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン－５－イル）－２－ヒドロキシベンズアミド、２－（３－ホルムアミド－２－ヒドロキシベンズアミド）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イルオクタノアート、Ｎ－シクロペンタデシル－３－ホルムアミド－２－ヒドロキシベンズアミド、Ｎ－シクロドデシル－３－ホルムアミド－２－ヒドロキシベンズアミド、３，５－ジクロロ－Ｎ－シクロペンタデシル－２－ヒドロキシベンズアミド、３，５－ジクロロ－Ｎ－デシル－２－ヒドロキシベンズアミド、Ｎ－（３，５－ジクロロ－２－ヒドロキシフェニル）ウンデカンアミド、Ｎ－（４－（シクロペンタデシルカルバモイル）フェニル）－３－ホルムアミド－２－ヒドロキシベンズアミド、Ｎ－（ヘプタデカン－９－イル）－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３－（３－クロロ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン－５－イン）プロピル）－７－ヒドロキシ－１Ｈ－イミダゾール－６－カルボキサミド、Ｎ－（３－（３－クロロ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン－５－イル）プロピル）－３－フォマミド（ｆｏｍａｍｉｄｏ）－２－ヒドロキシベンズアミド、Ｎ－（３－（１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン－５－イル）プロピル）－３－フォマミド（ｆｏｍａｍｉｄｏ）－２－ヒドロキシベンズアミド、Ｎ－（３－（１－（ヘプタデカン－９－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）－２－ヒドロキシフェニル）ホルムアミド、Ｎ－（３－（１－シクロペンタデシル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）－２－ヒドロキシフェニル）ホルムアミド、Ｎ－シクロノニル－７－ヒドロキシ－１Ｈ－インダゾール－６－カルボキサミド、Ｎ－シクロノニル－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－４－カルボキサミドおよびＮ－シクロペンタデシル－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－４－カルボキサミド）に記載されているもの、ならびにその類似体、誘導体および塩がある。
【0116】
一実施形態では、ＥＴＣ阻害剤は、ヒトミトコンドリアＥＴＣの主要なＲＯＳ産生部位であると考えらえている複合体Ｉおよび／または複合体ＩＩＩの活性を阻害する。一実施形態では、ＥＴＣ阻害剤は、ヒトミトコンドリアＥＴＣの複合体ＩＩＩの活性を遮断する。別の実施形態では、ＥＴＣ阻害剤は、ヒトミトコンドリアＥＴＣの複合体（Ｉ）の活性を遮断する。複合体Ｉ阻害剤は、Ｆａｔｏ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，２００９ Ｍａｙ；１７８７（５）：３８４－３９２）の分類によるクラスＡ複合体Ｉ阻害剤である。本明細書で使用される「クラスＡ複合体Ｉ阻害剤」という用語は、細胞のＲＯＳ産生を誘導する複合体Ｉの阻害剤を指す、すなわち、ＲＯＳ誘導複合体Ｉ阻害剤である。クラスＡ複合体Ｉ阻害剤の例としては、ロテノン、ピエリシジンＡ、ロリニアスタチン１およびロリニアスタチン２が挙げられる。一実施形態では、クラスＡ複合体Ｉ阻害剤は、複合体Ｉのキノン結合部位またはその付近に結合する。
【0117】
上記のように、本明細書に記載される試験では、ムブリチニブがミトコンドリア活性、より具体的にはＥＴＣの阻害によりＡＭＬ細胞のアポトーシスを誘導し、それにより白血病細胞のＲＯＳ産生が誘導されることを示す証拠が得られた。ムブリチニブはクラスＡ複合体Ｉ阻害剤に相当する作用機序を示す。
【0118】
したがって、一実施形態では、ＥＴＣ阻害剤はムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩である。したがって、別の態様では、本開示は、細胞内のミトコンドリアの活性または呼吸の阻害、例えばＥＴＣの阻害へのムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用に関するものである。
【0119】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。本開示は、ＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬに罹患している対象の治療への、またはＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬに罹患している対象を治療する薬剤の製造へのムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本開示は、ＡＭＬ、例えば予後不良または高リスクＡＭＬに罹患している対象の治療への使用のためのムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩も提供する。
【0120】
別の態様では、本開示は、予後不良または高リスクＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【0121】
ＴＡＫ－１６５とも呼ばれるムブリチニブ（１－（４－｛４－［（２－｛（Ｅ）－２－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル｝－１，３－オキサゾール－４－イル）メトキシ］フェニル｝ブチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール、ＣＡＳ番号３６６０１７－０９－６）は以下の構造：
を有する。
【化1】
【0122】
ムブリチニブはヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２／ＨＥＲ２）の強力な阻害剤として記載されている（Ｎａｇａｓａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｕｒｏｌ．２００６ Ｍａｙ；１３（５）：５８７－９２）。ムブリチニブを合成する方法は当該技術分野で公知であり、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ／２００１／７７１０７号に記載されている。一実施形態では、本明細書に記載される方法および使用は、ムブリチニブの使用または投与を含む。
【0123】
本発明者らは、ムブリチニブに対する感受性の高いＡＭＬ標本が、（ｉ）ある特定の遺伝子（表１を参照されたい）、特にホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の発現がムブリチニブに対する耐性の高いＡＭＬ標本より高いこと、（ｉｉ）ある特定の遺伝子（表２を参照されたい）の発現がムブリチニブに対する耐性の高いＡＭＬ標本より低いこと；（ｉｉｉ）ある特定の細胞遺伝学的または分子的リスク因子、例えば中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、高ＨＯＸ状態、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子（ＤＮＭＴ３Ａ、ＴＥＴ２、ＩＤＨ１、ＩＤＨ２）、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）など；ならびに（ｉｖ）耐性の高いＡＭＬ標本より白血病幹細胞（ＬＳＣ）頻度が高い、すなわち、総細胞数１×１０６個当たりのＬＳＣが約１個であるＬＳＣ頻度を含めたある特定の特性／特徴を有することを明らかにした。
【0124】
【表1】
【0125】
【表2】
【0126】
したがって、一実施形態では、本明細書に記載される方法／使用により治療する対象は、以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つのものを特徴とするＡＭＬに罹患している。
【0127】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記ＡＭＬが、以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；ならびに（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つの特徴を有する、方法を提供する。
【0128】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療へのミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、上に明記した特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴を有する、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、上に明記した特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴を有する、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩であって、前記ＡＭＬが、上に明記した特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴を有する、ミトコンドリア活性阻害剤を提供する。
【0129】
一実施形態では、治療する対象は、上記の特徴（ａ）～（ｅ）のうち１つまたは複数の特徴を有することが既に確認されている。別の実施形態では、この方法は、ミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与する前に、例えば適切なアッセイを実施することにより、上記の特徴のうち１つまたは複数の特徴を有する対象を特定する段階をさらに含む。
【0130】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象に適した治療法を決定する方法であって、対象のＡＭＬ細胞試料に本明細書に明記される特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴がみられるかどうかを判定することを含み、特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴がみられることが、対象がミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を含む治療法に適した候補であることを示し、特徴（ａ）～（ｅ）がみられないことが、対象がミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を含む治療法に適した候補ではない、すなわち、ミトコンドリア活性阻害剤を含まない治療法の候補であることを示す、方法を提供する。
【0131】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象に適した治療法を決定する方法であって、対象のＡＭＬ細胞試料に本明細書に明記される特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴がみられるかどうかを判定することを含み、特徴（ａ）～（ｅ）のうち少なくとも１つの特徴がみられることが、対象が哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）キナーゼ阻害剤を含む治療法に適した候補ではない（すなわち、ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤を含まない治療法の候補である）ことを示し、特徴（ａ）～（ｅ）がみられないことが、対象が哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）キナーゼ阻害剤、例えば、ＡＺＤ－２０１４（３－（２，４－ビス（（Ｓ）－３－メチルモルホリノ）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－Ｎ－メチルベンズアミド、ビスツセルチブ）、ＡＺＤ－８０５５（（５－（２，４－ビス（（Ｓ）－３－メチルモルホリノ）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル）－２－メトキシフェニル）メタノール）、ＯＳＩ－０２７（（１ｒ，４ｒ）－４－（４－アミノ－５－（７－メトキシ－１Ｈ－インドール－２－イル）イミダゾ［１，５－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）シクロヘキサンカルボン酸）を含む治療法に適した候補であることを示す、方法を提供する。一実施形態では、この方法は、特徴（ａ）、すなわち、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子、例えば、表１に記載されるＨＯＸ遺伝子のうちＨＯＸＡ９および／またはＨＯＸＡ１０などの１つまたは複数の遺伝子の高発現がみられるかどうかを判定することを含む。
【0132】
別の態様では、本開示は、予後不良または高リスクＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象の予後不良または高リスクＡＭＬの治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。別の態様では、本開示は、対象の予後不良または高リスクＡＭＬを治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。別の態様では、本開示は、対象の予後不良または高リスクＡＭＬの治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0133】
別の態様では、本開示は、中リスクＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象の中リスクＡＭＬの治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。別の態様では、本開示は、対象の中リスクＡＭＬを治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。別の態様では、本開示は、対象の中リスクＡＭＬの治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0134】
別の態様では、本開示は、高リスクおよび／または中リスクＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象の高リスクおよび／または中リスクＡＭＬの治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。別の態様では、本開示は、対象の高リスクおよび／または中リスクＡＭＬを治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。別の態様では、本開示は、対象の高リスクおよび／または中リスクＡＭＬの治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0135】
本明細書で使用される「予後」という用語は、推定されるＡＭＬの転帰または経過；患者の回復または生存の可能性の予測を指す。本明細書で使用される「予後不良ＡＭＬ」または「高リスクＡＭＬ」という用語は、現時点で利用可能な治療法に基づき長期生存率（５年以上）が約２５％または２０％未満であるＡＭＬを指す。予後不良ＡＭＬは、例えば、５番染色体または７番染色体の一部欠損、９番染色体と１１番染色体の間での転座、３番染色体の転座または逆位、６番染色体と９番染色体の間での転座、９番染色体と２２番染色体の間での転座、１１番染色体の異常、ＦＬＴ３遺伝子変異、ＥＶＩ１高発現、複合核型（３超となる異常）およびＨＯＸネットワーク遺伝子高発現を伴うことが多い。
【0136】
本明細書で使用される「中リスクＡＭＬ」という用語は、現時点で利用可能な治療法に基づき長期生存率（５年以上）が約６０％～約２５％であるＡＭＬを指す。中リスクＡＭＬは一般に、好ましい細胞遺伝学的異常および特定の好ましくない細胞遺伝学的異常（すなわち、「情報価値のない」細胞遺伝学的異常）が認められず、ＡＭＬ患者の相当な割合（約５５％）を占める。中リスクＡＭＬの例としては、正常核型（ＮＫ）ＡＭＬ、正常核型（ＮＫ）を伴うＡＭＬのＮＵＰ９８－ＮＳＤ１融合、８番染色体トリソミー単独のＡＭＬおよび中等度の異常核型ＡＭＬが挙げられる。
【0137】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬ（例えば、高リスクまたは予後不良ＡＭＬ）を治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を示す（すなわち、高ＨＯＸ ＡＭＬ）、方法を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬ（例えば、高リスクまたは予後不良ＡＭＬ）の治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬ（例えば、高リスクまたは予後不良ＡＭＬ）を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬ（例えば、高リスクまたは予後不良ＡＭＬ）の治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩であって、前記ＡＭＬが、１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を示す、阻害剤を提供する。
【0138】
本開示は、ＡＭＬに罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療が奏効する可能性を判定する方法であって、前記対象のＡＭＬ細胞が１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現を示すかどうかを判定することを含み、前記ＡＭＬ細胞の１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の高レベルの発現が、対象に前記治療が奏効する可能性が高いことを示す、方法も提供する。
【0139】
ＨＯＸ－ＭＥＩＳ－ＰＢＸネットワーク（ＨＯＸネットワーク）の調節解除は、ＡＭＬ患者によくみられる分子異常である（Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｈ．Ｊ． ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １３，１９９３－１９９９（１９９９））。それは例えば２つのＡＭＬサブタイプ、すなわち、ヌクレオフォスミン遺伝子に変異のある正常核型（ＮＫ）を有するＡＭＬ患者（ＮＫ ＮＰＭ１ｍ、患者の２５％前後を占める）および１１ｑ２３上に混合系統白血病遺伝子（ＭＬＬ）を含む染色体転座を有する患者亜群（患者の８％）として検出される。
【0140】
本明細書で使用される「ＨＯＸネットワーク遺伝子」という用語は、転写因子（ＴＦ）ファミリーＨＯＸの調節ネットワークに関与し、造血系統の細胞に発現する遺伝子を指す。造血系統の細胞に発現する「ＨＯＸネットワーク遺伝子」のメンバーとしては、ＨＯＸ遺伝子クラスターＡ、ＢおよびＣ、例えばＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ４、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ６、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ９、ＨＯＸＢ－ＡＳ３、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＨＯＸＡ１０－ＡＳ、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１１－ＡＳおよびＨＯＸＡ－ＡＳ３など、ならびにＭＥＩＳ１およびＰＢＸ３などのその他の遺伝子が挙げられる。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも１種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも２種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも３種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも４種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも５種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも１０種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも１５種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに少なくとも２０種類のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬにＨＯＸＡ９およびＨＯＸＡ１０のうち少なくとも１種類が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬにＨＯＸＡ９およびＨＯＸＡ１０の両方が高発現する。ＨＯＸ遺伝子が高発現するＡＭＬは、予後不良（生存率不良）、中リスク細胞遺伝学、高レベルのＦＬＴ３発現、高頻度のＦＬＴ３およびＮＰＭ１変異およびＬＳＣ高頻度を特徴とする明確なＡＭＬの生物学的亜群を定める（例えば、Ｒｏｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２００４）１８，１０５９－１０６３；Ｋｒａｍａｒｚｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１４ ７：９４を参照されたい）。一実施形態では、ＡＭＬに高発現するＨＯＸネットワーク遺伝子（１つまたは複数）は、表１に記載されるＨＯＸネットワーク遺伝子のうちの１つまたは複数の遺伝子である。
【0141】
一実施形態では、上記の方法は、対象の白血病細胞を含む試料の１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子の発現レベルを測定し、そのレベルを基準レベルまたは対照と比較して、白血病細胞にその１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現または過剰発現しているかどうかを判定し、その１つまたは複数のＨＯＸネットワーク遺伝子が白血病細胞に高発現または過剰発現している場合、その対象をミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療に選択することをさらに含む。
【0142】
本開示は、ＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を示す、方法も提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩であって、前記ＡＭＬが、表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を示す、阻害剤を提供する。
【0143】
本開示は、ＡＭＬに罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療が奏効する可能性を判定する方法であって、前記対象のＡＭＬ細胞が表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現を示すかどうかを判定することを含み、前記ＡＭＬ細胞のその１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現が、対象に前記治療が奏効する可能性が高いことを示す、方法も提供する。
【0144】
一実施形態では、ＡＭＬに表１の少なくとも１種類の遺伝子が高発現（過剰発現）する。一実施形態では、ＡＭＬに表１の少なくとも２種類の遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表１の少なくとも３種類の遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表１の少なくとも４種類の遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表１の少なくとも５種類の遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表１の少なくとも１０種類の遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表１に記載される遺伝子のうち少なくとも１種類、２種類、３種類、４種類、５種類、１０種類またはそれ以上の遺伝子が高発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表１に記載される全遺伝子が高発現する。
【0145】
一実施形態では、上記の方法は、対象の白血病細胞を含む試料において表１の遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを測定し、そのレベルを基準レベルまたは対照と比較して、白血病細胞にその１つまたは複数の遺伝子が高発現または過剰発現しているかどうかを判定し、その１つまたは複数の遺伝子が白血病細胞に高発現または過剰発現している場合、その対象をミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療に選択することをさらに含む。
【0146】
本開示は、ＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を示す、方法も提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩であって、前記ＡＭＬが、表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を示す、阻害剤を提供する。
【0147】
本開示は、ＡＭＬに罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療が奏効する可能性を判定する方法であって、前記対象のＡＭＬ細胞が表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現を示すかどうかを判定することを含み、前記ＡＭＬ細胞のその１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現が、対象に前記治療が奏効する可能性が高いことを示す、方法も提供する。
【0148】
一実施形態では、ＡＭＬに表２の少なくとも１種類の遺伝子が弱発現（過小発現）する。一実施形態では、ＡＭＬに表２の少なくとも２種類の遺伝子が弱発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表２の少なくとも３種類の遺伝子が弱発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表２の少なくとも４種類の遺伝子が弱発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表２の少なくとも５種類の遺伝子が弱発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表２の少なくとも１０種類の遺伝子が弱発現する。一実施形態では、ＡＭＬで上記の全遺伝子がアップレギュレートされる。一実施形態では、ＡＭＬに表２に記載される遺伝子のうち少なくとも１種類、２種類、３種類、４種類、５種類、１０種類またはそれ以上の遺伝子が弱発現する。一実施形態では、ＡＭＬに表２に記載される全遺伝子が弱発現する。
【0149】
一実施形態では、上記の方法は、対象の白血病細胞を含む試料において表２の遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを測定し、そのレベルを基準レベルまたは対照と比較して、白血病細胞にその１つまたは複数の遺伝子が弱発現または過小発現しているかどうかを判定し、その１つまたは複数の遺伝子が白血病細胞に弱発現または過小発現している場合、その対象をミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療に選択することをさらに含む。
【0150】
本明細書に開示される１つまたは複数の遺伝子またはコードされる遺伝子産物（例えば、ｍＲＮＡ、タンパク質）（例えば、ＨＯＸネットワーク遺伝子、表１～３の遺伝子）の発現の判定は、核酸またはタンパク質を検出する任意の既知の方法を用いて実施し得る。諸実施形態では、発現を対照または基準レベル（例えば、ミトコンドリア活性阻害剤に対して耐性または感受性（例えば、ムブリチニブ耐性またはムブリチニブ感受性）であることがわかっているＡＭＬ対象の試料で得られたレベル）と比較して、対象にミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）が奏効する可能性を評価し、その対象をミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩で治療し得るかどうかを判定する。
【0151】
次いで、下に開示する方法などのよく用いられる方法に従い、例えば核酸増幅法を用いて、または用いずに、上記の遺伝子に対応する核酸のレベル（例えば、転写物）を評価することができる。いくつかの実施形態では、核酸増幅法を用いて、１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出することができる。例えば、様々な周知の確立されたいずれかの方法論により単離した核酸基質を用いる増幅法および検出法にオリゴヌクレオチドプライマーおよび／またはプローブを使用し得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．６０５－１６（Ｐｅｒｓｉｎｇ ｅｔ ａｌ．編（１９９３）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００１年およびそれに対するのちの改訂））。核酸を増幅する方法としては、特に限定されないが、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８００，１５９号；同第４，９６５，１８８号を参照されたい）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｗｅｉｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１２９２－９３（１９９１）を参照されたい）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）（例えば、Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：３９２－３９６（１９９２）；米国特許第５，２７０，１８４号および同第５，４５５，１６６号を参照されたい）、高温ＳＤＡ（ｔＳＤＡ）（例えば、欧州特許第０６８４３１５号を参照されたい）ならびに米国特許第５，１３０，２３８号；Ｌｉｚａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌ．６：１１９７－１２０２（１９８８）；Ｋｗｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３－７７（１９８９）；Ｇｕａｔｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４－７８（１９９０）；米国特許第５，４８０，７８４号；同第５，３９９，４９１号；米国特許出願公開第２００６／４６２６５号に記載されている方法が挙げられる。これらの方法には、ＲＮＡポリメラーゼを用いて標的領域の複数のＲＮＡ転写物を産生させる転写増幅法（ＴＭＡ）の使用が含まれる（例えば、米国特許第５，４８０，７８４号；同第５，３９９，４９１号および米国特許出願公開第２００６／４６２６５号を参照されたい）。核酸のレベルは、ＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡ－ｓｅｑ）などの「次世代シーケンシング」（ＮＧＳ）法でも測定し得る。一実施形態では、１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを測定する方法は、核酸増幅の段階を含む。
【0152】
核酸または増幅産物は、プローブ（例えば、標識プローブ）と核酸または増幅産物の一部分とをハイブリダイズさせることにより検出または定量化し得る。プライマーおよび／またはプローブを検出可能な標識で標識してよく、このような標識は、例えば、蛍光部分、化学発光部分、放射性同位元素、ビオチン、アビジン、酵素、酵素基質またはその他の反応基であり得る。本明細書で使用される「検出可能な標識」という用語は、適切な検出システムを用いて検出され得るシグナル（例えば、光）を発する部分を指す。本明細書に記載される方法には任意の適切な標識を使用し得る。検出可能な標識としては、例えば、酵素または酵素基質、反応基、発色団、例えば色素または着色粒子など、生物発光部分、リン光部分または化学発光部分を含めた発光部分および蛍光部分が挙げられる。一実施形態では、検出可能な標識は蛍光部分である。よく用いられるフルオロフォアとしては、特に限定されないが、フルオレセイン、５－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、２’７’－ジメトキシ－４’５’－ジクロロ－６－カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、ローダミン、６－カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６－カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸ）、４－（４’－ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）および５－（２’－アミノエチル）アミノナフタレン－１－スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）が挙げられる。フルオロフォアは、特に限定されないが：ＦＡＭ、ＴＥＴ、ＨＥＸ、Ｃｙ３、ＴＭＲ、ＲＯＸ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）、ＬＣ赤６４０、Ｃｙ５およびＬＣ赤７０５を含めた当該技術分野で公知の任意のフルオロフォアであり得る。本明細書に提供される方法および組成物に使用するフルオロフォアを、例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（ノバート、カリフォルニア州）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（カールスバド、カリフォルニア州）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社（ピスカタウェイ、ニュージャージー州）、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（コーラルビル、アイオワ州）およびＲｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ社（インディアナポリス、インディアナ州）から購入し得る。いくつかの実施形態では、特定の分光測光サーマルサイクラーなどの特定の検出器に使用できるように、機器の光源に応じてフルオロフォアを選択する。いくつかの実施形態では、２つ以上の標的核酸を検出するよう（マルチプレックスアッセイ）アッセイをデザインする場合、互いに十分に離れた吸収波長および発光波長を有する（すなわち、スペクトルの重複が最小限に抑えられた）２つ以上の異なるフルオロフォアを選択し得る。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の特定の消光剤を用いて十分に機能するようフルオロフォアを選択する。蛍光標識と消光剤の適切な組合せの代表例には、蛍光ＦＡＭ（励起最大波長＝４９４ｎｍ、発光最大波長＝５２０ｎｍ）と、ＺＥＮ（商標）消光剤（略称なし；吸収最大波長５３２ｎｍ）と、アイオワブラックフルオレセイン消光剤（ＩＢＦＱ、吸収最大波長＝５３１ｎｍ）（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標）社）とを含む、ＦＡＭ／ＺＥＮ／ＩＢＦＱがある。検出可能な標識および／または消光剤とプライマーおよび／またはプローブは、当該技術分野で周知の標準的方法論に従って共有結合させることができる。
【0153】
その他の周知の検出技術としては、例えば、ゲルろ過、ゲル電気泳動およびアンプリコンの可視化ならびに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、例えば、リアルタイムＴＭＡまたはリアルタイムＰＣＲを用い、増幅産物を蓄積させてそのレベルを検出する。一実施形態では、１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを測定する方法は、プローブによる核酸または増幅産物の検出または定量化の段階を含む。
【0154】
一実施形態では、上記の方法は、異なる試料間での比較を容易にするため、遺伝子発現レベルを正規化する段階、すなわち、上記の遺伝子について測定したレベルを安定に発現する対照遺伝子（またはハウスキーピング遺伝子）に対して正規化することを含む。本明細書で使用される「正規化すること」または「正規化」は、細胞投入量、核酸（ＲＮＡ）またはタンパク質の質、逆転写（ＲＴ）の効率、増幅、標識、精製などの「外因性」パラメータ、すなわち、試料中の細胞による遺伝子発現の実際の「内因性」のばらつきに起因しない差を考慮に入れるため、異なる試料間の生の遺伝子発現値／データの試料間のばらつきを補正することを指す。このような正規化は、１つまたは複数の「ハウスキーピング」または「対照」遺伝子、すなわち、異なる組織の細胞間でも異なる実験条件下でも発現が一定である（すなわち、比較的ばらつきが小さい）ことがわかっている遺伝子について測定した遺伝子発現値／データに基づき被験遺伝子（または目的とする遺伝子）の生の遺伝子発現値／データを補正することにより実施する。したがって、一実施形態では、上記の方法は、生体試料中のハウスキーピング遺伝子の発現レベルを測定することをさらに含む。適切なハウスキーピング遺伝子は当該技術分野で公知であり、いくつかの例が、下の表３に示されるものを含め、国際公開第２０１４／１３４７２８号に記載されている。
【0155】
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【0156】
その他のよく用いられるハウスキーピング遺伝子としては、ＴＢＰ、ＹＷＨＡＺ、ＰＧＫ１、ＬＤＨＡ、ＡＬＤＯＡ、ＨＰＲＴ１、ＳＤＨＡ、ＵＢＣ、ＧＡＰＤＨ、ＡＣＴＢ、Ｇ６ＰＤ、ＶＩＭ、ＴＵＢＡ１Ａ、ＰＦＫＰ、Ｂ２Ｍ、ＧＵＳＢ、ＰＧＡＭ１およびＨＭＢＳが挙げられる。
【0157】
一実施形態では、１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを測定する方法は、対象の生体試料中の１つまたは複数のハウスキーピング遺伝子の発現レベルを測定することをさらに含む。
【0158】
別の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子またはコードされる遺伝子産物の発現をタンパク質レベルで測定する。タンパク質の量／レベルを測定する方法は当該技術分野で周知である。タンパク質のレベルは、タンパク質と特異的に結合するリガンド、例えば抗体またはそのフラグメントなどを用いて直接検出し得る。諸実施形態では、複合体の検出および定量化を容易にするため、そのような結合分子または試薬（例えば、抗体）を標識／コンジュゲートして、例えば、放射能、発色団、フルオロフォアまたは酵素で標識する（直接的検出）。あるいは、結合分子または試薬を用い、次いで、その結合分子または試薬を特異的に認識する第二のリガンド（または第二の結合分子）を用いて［タンパク質／結合分子または試薬］複合体を検出することにより、タンパク質レベルを間接的に検出してもよい（間接的検出）。複合体の検出および定量化を容易にするため、そのような第二のリガンドを放射能、発色団、フルオロフォアまたは酵素で標識し得る。イムノアッセイの抗体を標識するのに用いられる酵素は当該技術分野で公知であり、最も広く用いられているのが西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およびアルカリホスファターゼ（ＡＰ）である。結合分子または試薬の例としては、抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）、天然または合成のリガンドなどが挙げられる。
【0159】
試料中のタンパク質の量／レベルを測定する方法の例としては、特に限定されないが、ウエスタンブロット、免疫ブロット、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、化学発光、蛍光偏光、リン光、免疫組織化学的（ＩＨＣ）解析、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、抗体アレイ、顕微鏡法（例えば、電子顕微鏡法）、フローサイトメトリー、プロテオミクスベースのアッセイ、および特に限定されないが他のタンパク質パートナーと結合または相互作用するリガンドを含めたタンパク質の特性または活性、酵素活性、蛍光に基づくアッセイが挙げられる。例えば、目的のタンパク質が、所与の標的をリン酸化することがわかっているキナーゼである場合、被験化合物の存在下で標的のリン酸化レベルを測定することにより目的のタンパク質のレベルまたは活性を求め得る。目的のタンパク質が、１つまたは複数の所与の標的遺伝子の発現を誘導することがわかっている転写因子である場合、標的遺伝子（１つまたは複数）の発現レベルを測定することにより目的のタンパク質のレベルまたは活性を求め得る。
【0160】
「対照レベル」または「基準レベル」は本明細書では互換的に使用され、同等の「対照」試料で測定した別個のベースラインレベルを広く指すものであり、このような「対照」試料は一般に、目的の遺伝子の発現レベルがわかっており、かつ／またはミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）が奏効するかどうかがわかっている対象の試料、例えば、ミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）が奏効しないことがわかっている対象のＡＭＬ試料である。対応する対照レベルは、複数の基準対象または対照対象で測定したレベルに基づき算出した平均値または中央値レベルに対応するレベル（例えば、所定の基準または確立された基準）であり得る。対照レベルは、当該技術分野で認められている、または対照対象１例もしくは対照対象のグループ（例えば、ミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）が奏効しないことがわかっている対象のグループ）の試料で測定したレベルに基づき確立された所定の「カットオフ」値であり得る。例えば、「閾値基準レベル」は、ミトコンドリア活性阻害剤が奏効する可能性のある（例えば、ムブリチニブ感受性）ＡＭＬ対象と、ミトコンドリア活性阻害剤が奏効する可能性が低い（例えば、ムブリチニブ耐性）対象とを統計的に有意な方法で識別することを可能にする遺伝子（１つまたは複数）の最小発現レベル（カットオフ）に対応するレベルであり得、これは、例えば、ミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）の薬理学的奏効が異なるＡＭＬ患者の試料を用いて求め得るものである。あるいは、「閾値基準レベル」は、ミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）に感受性を示すＡＭＬ対象と、ミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブ）に耐性を示すＡＭＬ対象とを統計的に有意な方法で最良に、または最適に識別することを可能にする遺伝子発現レベル（カットオフ）に対応するレベルであり得る。対応する基準／対照レベルは、年齢、性別、人種またはその他のパラメータに合わせて調整または正規化し得る。したがって、「対照レベル」は、あらゆる対象に個別に等しく適用できる単一の数字／値であり得るか、または対照レベルは、特定の患者の亜群に応じて異なるものであり得る。したがって、例えば、高齢男性の対照レベルが若年男性のものと異なる可能性があり、女性の対照レベルが男性のものと異なる可能性がある。例えば、被験集団を可能性が低いグループ、可能性が中程度のグループおよび／または可能性が高いグループなどのグループに、あるいは四分位または五分位に均等（または不均等）に分ける場合、所定の基準レベルを分けることができる。本発明による対照レベルは、所定のレベルまたは基準のほかにも、実験試料と並行して試験する他の試料（例えば、目的の遺伝子の発現レベルがわかっており、かつ／またはムブリチニブに対して奏効するかどうかがわかっている対象の試料）で測定したレベルであり得ることも理解されよう。基準レベルまたは対照レベルは、正規化したレベル、すなわち、ハウスキーピング遺伝子の発現に基づき正規化した基準値または対照値に対応するものであり得る。
【0161】
本明細書で使用される「高発現」または「高レベルの発現」（過剰発現）は、（ｉ）試料中に存在する１つもしくは複数の所与の細胞において上記の遺伝子（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）のうち１つもしくは複数の遺伝子の発現が（対照より）高いこと、および／または（ｉｉ）試料中の上記１つもしくは複数の遺伝子を発現する細胞の量が（対照より）多いことを指す。本明細書で使用される「低／弱発現」または「低／弱レベルの発現」（過小発現）は、（ｉ）試料中に存在する１つもしくは複数の所与の細胞において１つもしくは複数の遺伝子（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）の発現が（対照より）低いこと、および／または（ｉｉ）試料中の上記１つもしくは複数の遺伝子を発現する細胞の量が（対照より）少ないことを指す。一実施形態では、高い、または低いは、対照レベル（例えば、所定のカットオフ値）を上回る、または下回る発現レベルを指す。別の実施形態では、高い、または低いは、対照レベル（例えば、所定のカットオフ値）を少なくとも１標準偏差上回る、または下回る（例えば、適切な統計解析を用いて求めた場合に統計的に有意である）発現レベルを指し、「同程度の発現」または「同レベルの発現」は、対照レベル（例えば、所定のカットオフ値）を１標準偏差未満上回る、または下回る（例えば、偽発見率（ＦＤＲ）／ｑ値、スチューデントのｔ検定／ｐ値、マン・ホイットニーの検定／ｐ値などの適切な統計解析を用いて求めた場合に統計的に有意でない）発現レベルを指す。諸実施形態では、高い、または低いは、対照レベル（例えば、所定のカットオフ値）を少なくとも１．５標準偏差、２標準偏差、２．５標準偏差、３標準偏差、４標準偏差または５標準偏差上回る、または下回る発現レベルを指す。別の実施形態では、「高発現」は、被験試料での対照レベルより少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、４５％または５０％高い発現を指す。一実施形態では、「低発現」は、被験試料での対照レベルより少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％低い発現を指す。別の実施形態では、高い、または低いは、被験試料における対照試料より少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２５倍または５０倍高いまたは低い発現レベルを指す。
【0162】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）を投与することを含み、前記ＡＭＬが、以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ（例えば、単一アレルまたは両アレル）、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＭＴ３Ａ、変異ＴＥＴ２、変異ＩＤＨ１、変異ＩＤＨ２、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、中等度の細胞遺伝学的リスク、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子を示す、方法を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象の治療へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）の使用であって、前記ＡＭＬが、上記の細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象を治療する薬剤の製造へのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）の使用であって、前記ＡＭＬが、上記の細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を示す、使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＡＭＬの治療への使用のためのミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）であって、前記ＡＭＬが、上記の細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子を示す、阻害剤を提供する。
【0163】
一実施形態では、対象は、中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）および／または高ＨＯＸ発現を特徴とするＡＭＬに罹患している。一実施形態では、対象は、中等度の細胞遺伝学的リスクを有するＡＭＬに罹患している。一実施形態では、対象は、正常核型（ＮＫ）を有するＡＭＬに罹患している。一実施形態では、対象は、高ＨＯＸ発現を有するＡＭＬに罹患している。
【0164】
本開示は、ＡＭＬに罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）が奏効する可能性を判定する方法であって、前記対象のＡＭＬ細胞が、以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＭＴ３Ａ、変異ＴＥＴ２、変異ＩＤＨ１、変異ＩＤＨ２、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、中等度の細胞遺伝学的リスク、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子を示すかどうかを判定することを含み、前記ＡＭＬ細胞に前記細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子が存在することが、対象に前記治療が奏効する可能性が高いことを示す、方法も提供する。一実施形態では、上記の変異遺伝子の変異は、表５Ｂに示される位置のうち１つまたは複数の位置にある。さらなる実施形態では、上記の変異遺伝子の変異は、表５Ｂに示される変異のうち１つまたは複数の変異である。
【0165】
一実施形態では、方法／使用はＮＫ－ＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＦＬＴ３（例えば、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３、ＦＬＴ３－ＩＴＤ）を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＣＥＢＰＡを有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＤＮＭＴ３Ａを有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＴＥＴ２を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＩＤＨ１を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＩＤＨ２を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＲＵＮＸ１を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＷＴ１を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、変異ＳＲＳＦ２を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では。方法／使用は、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、８番染色体トリソミー（＋８）を有するＡＭＬを治療するためのものである。一実施形態では、方法／使用は、異常染色体（５／７）を有するＡＭＬを治療するためのものである。
【0166】
一実施形態では、方法は、上記の細胞遺伝学的または分子的リスク因子のうち２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上の因子の任意の組合せを有するＡＭＬを治療するためのものである。
【0167】
一実施形態では、ＡＭＬは、ＭＬＬ転座を有するＡＭＬではない。一実施形態では、ＡＭＬはＥＶＩ１再構成ＡＭＬではない。一実施形態では、ＡＭＬは、コア結合因子（ＣＢＦ）ＡＭＬ、例えばｔ（８：２１）またはｉｎｖ（１６）染色体再構成を有するＡＭＬではない。一実施形態では、ＡＭＬは、変異ＮＲＡＳ、変異ｃ－ＫＩＴおよび／または変異ＴＰ５３を有するＡＭＬではない。
【0168】
一実施形態では、ＡＭＬは、変異ＮＰＭ１を有するＮＫ－ＡＭＬである。一実施形態では、ＡＭＬ細胞は、変異ＮＰＭ１と、変異ＦＬＴ３（例えば、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３、ＦＬＴ３－ＩＴＤ）と、ＤＮＭＴ３Ａなどの変異ＤＮＡメチル化遺伝子とを含む。さらなる実施形態では、ＡＭＬ細胞は、変異ＮＰＭ１と、変異ＦＬＴ３（例えば、遺伝子内縦列重複を有するＦＬＴ３、ＦＬＴ３－ＩＴＤ）と、ＤＮＭＴ３Ａなどの変異ＤＮＡメチル化遺伝子とを含み、変異ＮＲＡＳを含まない。
【0169】
本明細書に明記される細胞遺伝学的および分子的リスク因子は、２００８年の世界保健機関（ＷＨＯ）の分類（Ｖａｒｄｉｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００９ １１４：９３７－９５１）および近年のゲノム分類の進歩（Ｐａｐａｅｍｍａｎｕｉｌ，Ｅ． ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７４，２２０９－２２２１，２０１６）に基づくものである。
【0170】
別の実施形態では、上記の方法／使用は、対象の白血病細胞を含む試料中に本明細書に明記される細胞遺伝学的および分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子が存在する（または存在しない）ことを判定し、細胞遺伝学的および分子的リスク因子のうち１つまたは複数の因子が存在する場合、その対象をミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療に選択することをさらに含む。
【0171】
細胞遺伝学的または分子的リスク因子（変異（１つまたは複数）、転座、融合、染色体異常など）を特定する方法およびキットは当該技術分野で周知であり、例えば、核型、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＤＮＡシーケンシングおよびマイクロアレイ技術がこれに含まれる（例えば、Ｇｕｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎ．２０１０ Ｊａｎ；１２（１）：３－１６を参照されたい）。試料中の変異（１つまたは複数）、転座、融合などの存在の判定は、任意の適切な方法を用いて実施し得る（例えば、Ｓｙｖａｎｅｎ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ．２００１ Ｄｅｃ；２（１２）：９３０－４２を参照されたい）。例えば、変異（１つまたは複数）の存在をゲノムＤＮＡ、転写物（ＲＮＡまたはｃＤＮＡ）またはタンパク質のレベルで検出し得る。配列および多型を核酸レベルで決定するのに適した方法の例としては、例えば「次世代シーケンシング」法（例えば、ゲノムシーケンシング、ＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡ－ｓｅｑ））またはその他のシーケンシング法による、例えばゲノムＤＮＡまたは転写物（ｃＤＮＡ）中の変異（１つまたは複数）を含む核酸配列のシーケンシング；（同等のハイブリダイゼーション条件下、例えばストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で）変異（１つまたは複数）を含む核酸配列と特異的にハイブリダイズすることが可能であり、変異（１つまたは複数）を含まない対応する核酸配列とはハイブリダイズしない（または少ない程度にハイブリダイズする）核酸プローブのハイブリダイゼーション（例えば、分子ビーコン）；制限断片長多型解析（ＲＦＬＰ）；増幅断片長多型ＰＣＲ（ＡＦＬＰ－ＰＣＲ）；変異（１つまたは複数）を含む核酸配列と特異的にハイブリダイズするプライマーを使用し、プライマーが、変異（１つまたは複数）が存在する場合は増幅産物を産生し、変異（１つまたは複数）を含まない核酸配列を増幅の鋳型に使用する場合はその同じ増幅産物を産生しない、変異（１つまたは複数）を含む核酸フラグメントの増幅、核酸配列ベースの増幅（Ｎａｓｂａ）、プライマー伸長アッセイ、ＦＬＡＰエンドヌクレアーゼアッセイ（インベーダーアッセイ、Ｏｌｉｖｉｅｒ Ｍ．（２００５）．Ｍｕｔａｔ Ｒｅｓ．５７３（１－２）：１０３－１０）、５’－ヌクレアーゼアッセイ（ＭｃＧｕｉｇａｎ Ｆ．Ｅ．およびＲａｌｓｔｏｎ Ｓ．Ｈ．（２００２）Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ Ｇｅｎｅｔ．１２（３）：１３３－６）、オリゴヌクレオチドリガーゼアッセイが挙げられる。その他の方法としては、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション解析および一本鎖立体配座多形解析が挙げられる。ＳＮＰ遺伝子型同定プラットフォームがいくつか市販されている。ほかの方法については当業者に明らかであろう。
【0172】
変異（１つまたは複数）および／または融合（１つまたは複数）の存在の判定は、ポリペプチド／タンパク質レベルでも実施し得る。ポリペプチドレベルで変異を検出するのに適した方法の例としては、コードされるポリペプチドのシーケンシング；変異ポリペプチドに未変異ポリペプチドと比較して質量分析またはＨＰＬＣスペクトルの変化がみられる、コードされるポリペプチドの消化とそれに続くペプチドフラグメントの質量分析またはＨＰＬＣ解析；および変異ポリペプチドに対し対応する未変異ポリペプチドと比較して変化した免疫反応性を示す免疫学的試薬（例えば、抗体、リガンド）を用いる免疫検出が挙げられる。免疫検出では、抗タンパク質抗体または抗タンパク質抗体に結合する二次抗体と結合させた酵素標識、クロモ力学的標識、放射性標識、磁気標識または発光標識の使用によりポリペプチド分子と抗タンパク質抗体との間の結合量を測定することができる。さらに、その他の高親和性リガンドを使用し得る。用いることができるイムノアッセイとしては、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットおよび当業者に公知のその他の技術が挙げられる（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９ならびにＥｄｗａｒｄｓ Ｒ，Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９９を参照されたい）。変異ポリペプチドに対し対応する未変異ポリペプチドと比較して変化した免疫反応性を示す抗体を作製する方法については、のちにさらに詳細に記載する。
【0173】
上記の検出技術はいずれも、マイクロアレイ、例えば、ＳＮＰマイクロアレイ、ＤＮＡマイクロアレイ、タンパク質アレイ、抗体マイクロアレイ、組織マイクロアレイ、電子バイオチップまたはタンパク質チップをベースとする技術の形式で用いてもよい（Ｓｃｈｅｎａ Ｍ．，Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｂｉｏｃｈｉｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｅａｔｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎａｔｉｃｋ，Ｍａｓｓ．，２０００を参照されたい）。
【0174】
別の実施形態では、本明細書に記載されるＡＭＬ細胞の１つまたは複数の特徴の存在を確認するための方法は、対象から生体試料を採取または収集することをさらに含む。様々な実施形態では、試料は、変異（１つまたは複数）の検出に適した生物学的材料、例えばゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ（ｃＤＮＡ）および／またはタンパク質を含有する任意の入手源、例えば、白血病細胞（ＡＭＬ細胞）を含む対象の組織または細胞試料（血液細胞、免疫細胞（例えば、リンパ球）などに由来するものであり得る。試料を細胞精製／濃縮技術に供して、特定の細胞亜群または細胞型（１つまたは複数）に富む細胞集団を入手し得る。試料をよく用いられる単離および／または精製技術に供して核酸（ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ）および／またはタンパク質を濃縮し得る。したがって、一実施形態では、この方法を単離した核酸および／またはタンパク質試料、例えば単離ゲノムＤＮＡなどで実施し得る。生体試料は、体液、組織または細胞試料を収集する任意の方法、例えば血液細胞試料を収集する静脈穿刺などを用いて収集し得る。
【0175】
本開示は、ＡＭＬを治療する方法であって、必要とする対象に有効量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記ＡＭＬが、総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す、方法も提供する。
【0176】
本開示は、ＡＭＬに罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療が奏効する可能性を判定する方法であって、前記対象のＡＭＬ細胞のＬＳＣ頻度を求めることを含み、総細胞数１×１０６個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度が、対象に前記治療が奏効する可能性が高いことを示す、方法も提供する。
【0177】
一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数９×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数８×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数７×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数６×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数５×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数４×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数３×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数２×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。一実施形態では、ＡＭＬは、総細胞数１×１０５個当たりのＬＳＣが約１個以上であるＬＳＣ頻度を示す。
【0178】
ＡＭＬ細胞試料のＬＳＣ頻度は、当該技術分野で公知の方法を用いて、例えば、のちに記載する試験に用いるように、ＬＳＣ関連マーカー（ＣＤ３４＋ＣＤ３８－）および光散乱異常を用いるフローサイトメトリーベースのアッセイ（Ｔｅｒｗｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４ Ｓｅｐ ２２；９（９）：ｅ１０７５８７）を用いて、またはＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ２Ｒγｃ欠損（ＮＳＧ）マウスをベースとする異種移植モデルに限界希釈法（ＬＤＡ）（Ｓａｒｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１１；１２１（１）：３８４－３９５；Ｐａｂｓｔ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２７，２０１８－２０２７および米国特許出願公開第２０１４／０３４３０５１（Ａ１）号）を用いて測定し得る。一実施形態では、のちの実施例に記載するＮＳＧマウスに限界希釈法を用いてＬＳＣ頻度を測定する。
【0179】
一実施形態では、上記の方法は、対象の白血病細胞を含む試料のＬＳＣ頻度を測定し、ＬＳＣ頻度が総細胞数１×１０６個当たりＬＳＣ約１個以上である場合、その対象をムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療に選択することをさらに含む。
【0180】
別の実施形態では、ミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩をプロドラッグとして、例えば薬学的に許容されるエステルとして投与／使用する。「プロドラッグ」という用語は、薬理学的に許容され、投与する対象に対して実質的に無毒性である活性薬剤（ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩などのミトコンドリア活性阻害剤）の類似体を指す。より具体的には、プロドラッグは、活性薬剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩）の生物学的効果および特性を保持しており、温血動物の血流中に吸収されると、親活性薬剤が生じるように切断または代謝される。化合物のプロドラッグを作製する方法は当該技術分野で公知である。
【0181】
本開示の方法では、ミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を任意の従来の経路を用いて、例えば、経口的に、静脈内に、非経口的に、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、鼻腔内に、または経肺的に（例えば、エアゾール）投与し得る。
【0182】
一実施形態では、ミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、医薬組成物中に存在する。したがって、別の態様では、本発明は、対象のＡＭＬの治療への使用のための組成物であって、ミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩などを含む、組成物を提供する。
【0183】
一実施形態では、組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体または添加剤を含む。組成物に補助的活性化合物を組み込んでもよい。担体／添加剤は、例えば、静脈内投与、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与または経肺投与（例えば、エアゾール）に適したものであり得る（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｂｙ Ｌｏｙｄ Ｖ Ａｌｌｅｎ，Ｊｒ，２０１２，第２２版，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ｂｙ Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２，第７版，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。医薬組成物は、当該技術分野で公知の標準的方法を用いて、所望の純度のムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩と、１つまたは複数の任意選択の薬学的に許容される担体および／または添加剤とを混合することにより調製し得る。
【0184】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体または添加剤」という用語は、その当該技術分野での通常の意味を有し、有効成分（ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩などのミトコンドリア活性阻害剤）そのものではなく、有効成分の生物活性の効果に干渉することがなく、対象に対して毒性を示さない、すなわち、対象に対して毒性を示さない種類の担体もしくは添加剤であり、かつ／または対象に対して毒性を示さない量で使用するものである、任意の成分を指す。添加剤／担体としては、例えば、結合剤、滑沢剤、希釈剤、充填剤、増粘剤、崩壊剤／溶出促進剤、可塑剤、コーティング剤、バリア層製剤、滑沢剤、界面活性剤、安定剤、放出遅延剤、透過促進剤、滑剤、固化阻止剤、抗粘着剤、安定剤、帯電防止剤、膨張剤およびその他の成分が挙げられる。当業者には認識されるように、単一の添加剤が同時に２種類以上の機能を果たし得る、例えば、結合剤と増粘剤の両方として機能し得る。同じく当業者には認識されるように、上記の用語は必ずしも互いに排他的であるわけではない。
【0185】
有用な希釈剤、例えば充填剤としては、例えば、特に限定されないが、第二リン酸カルシウム、二リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、セルロース、カオリン、塩化ナトリウム、デンプン、粉末糖、コロイド状二酸化ケイ素、酸化チタン、アルミナ、タルク、コロイドシリカ、微結晶性セルロース、ケイ化微結晶性セルロースおよびその組合せが挙げられる。最小限の薬物量の錠剤のかさを増大させて十分な大きさおよび重量の錠剤にすることができる充填剤としては、クロスカルメロースナトリウムＮＦ／ＥＰ（例えば、Ａｃ－Ｄｉ－ＳｏＩ（商標））；無水ラクトースＮＦ／ＥＰ（例えば、Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ（商標）ＤＣＬ ２１）；および／またはポビドンＵＳＰ／ＥＰが挙げられる。
【0186】
結合剤材料としては、例えば、特に限定されないが、デンプン（コーンスターチおよびアルファ化デンプンを含む）、ゼラチン、糖（スクロース、グルコース、デキストロースおよびラクトースを含む）、ポリエチレングリコール、ポビドン、ロウならびに天然ゴムおよび合成ゴム、例えば、アラビアゴムアルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系ポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、コロイド状二酸化ケイ素ＮＦ／ＥＰ（例えば、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌ（商標）Ｍ５Ｐ）、ケイ化微結晶性セルロース（ＳＭＣＣ）、例えば、ケイ化微結晶性セルロースＮＦ／ＥＰ（例えば、Ｐｒｏｓｏｌｖ（商標）ＳＭＣＣ９０）および二酸化ケイ素、その混合物など）、ｖｅｅｇｕｍならびにその組合せが挙げられる。
【0187】
有用な滑沢剤としては、例えば、キャノーラ油、パルミトステアリン酸グリセリン、水素化植物油（タイプＩ）、酸化マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、ポロキサマー、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸フマル酸ナトリウム、ステアリン酸、タルクおよびステアリン酸亜鉛、グリセリルベハパート（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｂｅｈａｐａｔｅ）、ラウリル硫酸マグネシウム、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム／酢酸ナトリウム（組合せ）、ＤＬ－ロイシン、ステアリン酸カルシウム、ナトリウムステアリルフマラート、その混合物などが挙げられる。
【0188】
増量剤としては、例えば、微結晶性セルロース、例えば結合剤の特性も有するＡＶＩＣＥＬ（登録商標）（ＦＭＣ社）またはＥＭＣＯＣＥＬ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ社）；第二リン酸カルシウム、例えばＥＭＣＯＭＰＲＥＳＳ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ社）；硫酸カルシウム、例えばＣＯＭＰＡＣＴＲＯＬ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ社）；およびデンプン、例えばＳｔａｒｃｈ １５００；およびポリエチレングリコール（ＣＡＲＢＯＷＡＸ（登録商標））が挙げられる。
【0189】
崩壊剤または溶出促進剤としては、デンプン、粘土、セルロース、アルギン酸塩、ゴム、架橋ポリマー、コロイド状二酸化ケイ素、オスモゲン、その混合物など、例えば、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＡＣ－ＤＩ－ＳＯＬ（登録商標））、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム（ＥＸＰＬＯＴＡＢ（登録商標）、ＰＲＩＭＯ ＪＥＬ（登録商標））架橋ポリビニルポリピロリドン（ＰＬＡＳＯＮＥ－ＸＬ（登録商標））、塩化ナトリウム、スクロース、ラクトースおよびマンニトールなどが挙げられる。
【0190】
固体経口剤形のコアおよび／またはコーティングに使用可能な接着防止剤および滑剤としては、特にタルク、デンプン（例えば、コーンスターチ）、セルロース、二酸化ケイ素、ラウリル硫酸ナトリウム、コロイド状二酸化ケイ素およびステアリン酸金属塩を挙げ得る。
【0191】
シリカ流動調節剤の例としては、コロイド状二酸化ケイ素、ケイ酸アルミニウムマグネシウムおよびグアーガムが挙げられる。
【0192】
適切な界面活性剤としては、薬学的に許容される非イオン性、イオン性および陰イオン性の界面活性剤が挙げられる。界面活性剤の例にはラウリル硫酸ナトリウムがある。必要に応じて、投与する医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの無毒性の補助物質、例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウラート、酢酸トリエタノールアミンナトリウム、オレイン酸トリエタノールアミン塩なども少量含有し得る。必要に応じて、香味剤、着色剤および／または甘味剤も添加し得る。
【0193】
安定剤の例としては、アラビアゴム、アルブミン、ポリビニルアルコール、アルギン酸、ベントナイト、第二リン酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コロイド状二酸化ケイ素、シクロデキストリン、モノステアリン酸グリセリル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、三ケイ酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、プロピレングリコール、アルギン酸プロピレングリコール、アルギン酸ナトリウム、カルナウバロウ、キサンタンガム、デンプン、ステアリン酸塩（１つまたは複数）、ステアリン酸、ステアリン酸モノグリセリドおよびステアリルアルコールが挙げられる。
【0194】
増粘剤の例は、例えば、タルクＵＳＰ／ＥＰ、天然ゴム、例えばグアーガムもしくはアラビアゴムなど、またはセルロース誘導体、例えば微結晶性セルロースＮＦ／ＥＰ（例えば、Ａｖｉｃｅｌ（商標）ＰＨ１０２）、メチルセルロース、エチルセルロースもしくはヒドロキシエチルセルロースなどであり得る。有用な増粘剤には、様々な粘度等級のものが入手可能な補助剤であるヒドロキシプロピルメチルセルロースがある。
【0195】
可塑剤の例としては、アセチル化モノグリセリド（食品添加物として使用することができる）；食品包装、医療製品、化粧品および小児用玩具に使用されるクエン酸アルキル；クエン酸トリエチル（ＴＥＣ）；ＴＥＣより沸点が高く揮発性が低いクエン酸アセチルトリエチル（ＡＴＥＣ）；クエン酸トリブチル（ＴＢＣ）；ＰＶＣおよび塩化ビニルコポリマーと適合性があるクエン酸アセチルトリブチル（ＡＴＢＣ）；ガム剤および放出制御医薬にも使用されるクエン酸トリオクチル（ＴＯＣ）；クエン酸アセチルトリオクチル（ＡＴＯＣ）；ＰＶＣと適合性があり、放出制御医薬にも使用されるクエン酸トリヘキシル（ＴＨＣ）；ＰＶＣと適合性があるクエン酸アセチルトリヘキシル（ＡＴＨＣ）；ＰＶＣと適合性があるクエン酸ブチリルトリヘキシル（ＢＴＨＣ、クエン酸トリヘキシルｏ－ブチリル）；ＰＶＣと適合性があるクエン酸トリメチル（ＴＭＣ）；アルキルスルホン酸フェニルエステル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはその任意の組合せが挙げられる。任意選択で、可塑剤はクエン酸トリエチルＮＦ／ＥＰを含み得る。
【0196】
透過促進剤の例としては、スルホキシド（ジメチルスルホキシド、ＤＭＳＯなど）、アゾン（例えば、ラウロカプラム）、ピロリドン（例えば、２－ピロリドン、２Ｐ）、アルコールおよびアルカノール（エタノールまたはデカノール）、グリコール（例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）、界面活性剤ならびにテルペンが挙げられる。
【0197】
一実施形態では、医薬組成物は経口製剤であり、経口投与用のものである。一実施形態では、医薬組成物は錠剤または丸剤の形態である。
【0198】
経口投与に適した製剤としては、（ａ）液剤、例えば有効量の活性薬剤（１つまたは複数）／組成物（１つまたは複数）を水、生理食塩水またはＰＥＧ４００などの希釈剤に懸濁させたものなど；（ｂ）それぞれ所定量の有効成分を液体、固体、顆粒またはゼラチンとして含有するカプセル剤、サシェ剤または錠剤；（ｃ）適切な液体を用いた懸濁剤；および（ｄ）適切な乳剤を挙げ得る。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、コーンスターチ、バレイショデンプン、微結晶性セルロース、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびその他の添加剤、着色剤、充填剤、結合剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、香味剤、色素、崩壊剤ならびに薬学的に適合する担体のうち１つまたは複数のものを含み得る。トローチ剤形態は、香味剤、例えばスクロース中に有効成分を含み得るほか、香錠剤は、不活性な基剤、例えばゼラチンとグリセリンまたはスクロースとアラビアゴムの乳剤、ゲル剤などに有効成分を含み、有効成分に加えて当該技術分野で公知の担体を含有する。
【0199】
任意の適切な量のミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブもしくはその薬学的に許容される塩またはそれを含む医薬組成物を対象に投与し得る。用量は、投与様式を含めた多数の因子によって決まる。単一用量内に含まれるミトコンドリア活性阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩の量は通常、重大な中毒を引き起こさず効果的にＡＭＬを予防する、遅延させる、または治療する量となる。
【0200】
ＡＭＬの重症度の予防、治療または軽減に適したミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブもしくはその薬学的に許容される塩または組成物の用量は、例えば、治療するＡＭＬのタイプ、ＡＭＬの重症度および経過、ミトコンドリア活性阻害剤または組成物を予防目的または治療目的のいずれで投与するのか、これまでの治療法、患者の病歴およびミトコンドリア活性阻害剤または組成物に対する応答、ならびに主治医の判断によって決まる。ミトコンドリア活性阻害剤、例えば、ムブリチニブもしくはその薬学的に許容される塩または組成物は、一度に、または一連の治療で患者に投与するのが適切であり得る。好ましくは、ヒトを対象に試験する前に、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、次いで有用な動物モデルで用量反応曲線を求めるのが望ましい。本開示は、ミトコンドリア活性阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびそれを含む組成物の用量を提供する。例えば、ＡＭＬのタイプおよび重症度に応じて、１日当たり体重１ｋｇに対し約１μｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）のミトコンドリア活性阻害剤を投与し得る。諸実施形態では、有効量は、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ／２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇであり得、２５ｍｇ／ｋｇの増分で１０００ｍｇ／ｋｇまで増加するか、または上記の値のうち任意の２つの値の範囲内に収まり得る。典型的な１日用量は、上記の因子に応じて約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲内に収まり得る。数日以上にわたって反復投与する場合、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が認められるまで治療を継続する。ただし、これ以外の投与レジメンも有用であり得る。この治療法の進捗は、従来の技術およびアッセイにより容易にモニターされる。ミトコンドリア活性阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を任意の適切な投与スケジュール／レジメンに従って、例えば、１日２回、１日１回、２日毎、週２回、毎週などで投与し得る。一実施形態では、投与は１日１回である。
【0201】
一実施形態では、医薬組成物は、ミトコンドリア活性阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ含む。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ミトコンドリア活性阻害剤、好ましくはクラスＡ ＥＴＣ複合体Ｉ阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約２ｍｇ～約３０ｍｇ、約５ｍｇ～約２５ｍｇもしくは２０ｍｇ、または約１０ｍｇ含む。
【0202】
一実施形態では、上記の治療は、２種類以上の（すなわち、組合せの）活性薬剤／治療剤または治療法の使用／投与を含み、そのうち１種類はミトコンドリア活性阻害剤、例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩を用いるものである。本開示の予防剤／治療剤および／または組成物の組合せは、任意の従来の剤形として（例えば、連続的に、同時に、異なる時間に）投与または共投与し得る。本開示における共投与は、臨床転帰を改善するため同時治療の過程で２種類以上の治療薬を投与することを指す。このような共投与は、同一の広がりをもつ、つまり、重複する期間の間に実施するものであってもよい。例えば、第一の薬剤（例えば、ムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩などのミトコンドリア活性阻害剤）を第二の活性薬剤または治療薬の投与の前に、同時に、前後に、または後に患者に投与し得る。一実施形態では、薬剤を単一の組成物の形で組み合わせて／製剤化して同時に投与し得る。一実施形態では、１つまたは複数の活性薬剤を、現時点で問題の障害の予防または治療に使用している１つまたは複数の薬剤、例えば、ＡＭＬの治療に使用している化学療法薬と組み合わせて使用／投与する。ムブリチニブを他のＡＭＬの治療法、例えば幹細胞／骨髄移植と組み合わせて使用してもよい。
【0203】
別の態様では、本開示は、ＡＭＬに罹患している対象にミトコンドリア活性阻害剤、例えばムブリチニブまたはその薬学的に許容される塩による治療が奏効する可能性があるかどうかを判定する方法であって、ＡＭＬが以下の特徴：（ａ）１つまたは複数のホメオボックス（ＨＯＸ）ネットワーク遺伝子の高レベルの発現；（ｂ）表１に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の高レベルの発現；（ｃ）表２に示される遺伝子のうち１つまたは複数の遺伝子の低レベルの発現；（ｄ）以下の細胞遺伝学的または分子的リスク因子：中等度の細胞遺伝学的リスク、正常核型（ＮＫ）、変異ＮＰＭ１、変異ＣＥＢＰＡ、変異ＦＬＴ３、変異ＤＮＡメチル化遺伝子、変異ＲＵＮＸ１、変異ＷＴ１、変異ＳＲＳＦ２、異常核型を伴う中等度の細胞遺伝学的リスク（ｉｎｔｅｒｎ（ａｂｎＫ））、８番染色体トリソミー（＋８）および染色体異常（５／７）のうち１つまたは複数の因子；および（ｅ）総細胞数１×１０６個当たりの白血病幹細胞（ＬＳＣ）が約１個以上であるＬＳＣ頻度のうち少なくとも１つの特徴を有するかどうかを判定することを含み；前記ＡＭＬに上記の特徴のうち少なくとも１つの特徴がみられることが、患者にミトコンドリア活性阻害剤による治療が奏効する可能性があることを示す、方法を提供する。
【0204】
上記の特徴を測定する方法は当該技術分野で周知であり、代表的な方法については上に記載されている。
【0205】
（本発明を実施するための形態（１つまたは複数））
以下の非限定的な例により本発明をさらに詳細に説明する。
以下の非限定的な例により本発明をさらに詳細に説明する。
【0206】
実施例１：材料および方法
ヒト白血病試料
この試験は、モントリオール大学、メゾヌーヴ・ロズモン病院およびシャルル＝ル・モワーヌ病院（ロンゲイユ、ケベック州、カナダ）研究倫理委員会（ＲＥＢ）による承認を受けたものである。ＡＭＬ試料はいずれも、２００１年～２０１７年にＢａｎｑｕｅ ｄｅ Ｃｅｌｌｕｌｅｓ Ｌｅｕｃｅｍｉｑｕｅｓ ｄｕ Ｑｕｅｂｅｃ（ＢＣＬＱ）の手順に従いインフォームドコンセントを得て収集したものである。同意を得た母親から臍帯血液（ＣＢ）単位を収集し、ＥａｓｙＳｅｐ（登録商標）ポジティブ選択キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、バンクーバー、カナダ、カタログ番号１８０５６）でヒトＣＤ３４＋ＣＢ細胞を単離した（Ｆａｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４ Ｓｅｐ １９；３４５（６２０３）：１５０９－１２）。
ヒト白血病試料
この試験は、モントリオール大学、メゾヌーヴ・ロズモン病院およびシャルル＝ル・モワーヌ病院（ロンゲイユ、ケベック州、カナダ）研究倫理委員会（ＲＥＢ）による承認を受けたものである。ＡＭＬ試料はいずれも、２００１年～２０１７年にＢａｎｑｕｅ ｄｅ Ｃｅｌｌｕｌｅｓ Ｌｅｕｃｅｍｉｑｕｅｓ ｄｕ Ｑｕｅｂｅｃ（ＢＣＬＱ）の手順に従いインフォームドコンセントを得て収集したものである。同意を得た母親から臍帯血液（ＣＢ）単位を収集し、ＥａｓｙＳｅｐ（登録商標）ポジティブ選択キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、バンクーバー、カナダ、カタログ番号１８０５６）でヒトＣＤ３４＋ＣＢ細胞を単離した（Ｆａｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４ Ｓｅｐ １９；３４５（６２０３）：１５０９－１２）。
【0207】
化学スクリーニング
初代細胞：凍結ＡＭＬ単核細胞を２０％ＦＢＳとＤＮアーゼＩ（１００μｇ／ｍＬ）とを含有するイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中、３７℃で解凍した。次いで、既に報告されている最適化ＡＭＬ増殖培地（Ｐａｂｓｔ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄｓ １１，４３６－４４２，２０１４）：ＩＭＤＭ、１５％ＢＩＴ（ウシ血清アルブミン、インスリン、トランスフェリン；Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標））、１００ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍＬ ＦＬＴ３－Ｌ、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－３、２０ｎｇ／ｍＬ Ｇ－ＣＳＦ（Ｓｈｅｎａｎｄｏａｈ（登録商標））、１０－４Ｍ β－メルカプトエタノール、５００ｎＭ ＳＲ１（Ａｌｉｃｈｅｍ（登録商標））、５００ｎＭ ＵＭ７２９（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ（ＩＲＩＣ）の医薬品化学コア施設で合成したもの）、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍＬ）およびシプロフロキサシン（１０μｇ／ｍＬ）で細胞を培養した。
初代細胞：凍結ＡＭＬ単核細胞を２０％ＦＢＳとＤＮアーゼＩ（１００μｇ／ｍＬ）とを含有するイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中、３７℃で解凍した。次いで、既に報告されている最適化ＡＭＬ増殖培地（Ｐａｂｓｔ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄｓ １１，４３６－４４２，２０１４）：ＩＭＤＭ、１５％ＢＩＴ（ウシ血清アルブミン、インスリン、トランスフェリン；Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標））、１００ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍＬ ＦＬＴ３－Ｌ、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－３、２０ｎｇ／ｍＬ Ｇ－ＣＳＦ（Ｓｈｅｎａｎｄｏａｈ（登録商標））、１０－４Ｍ β－メルカプトエタノール、５００ｎＭ ＳＲ１（Ａｌｉｃｈｅｍ（登録商標））、５００ｎＭ ＵＭ７２９（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ（ＩＲＩＣ）の医薬品化学コア施設で合成したもの）、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍＬ）およびシプロフロキサシン（１０μｇ／ｍＬ）で細胞を培養した。
【0208】
拡大したＣＢ細胞とは、Ｆａｒｅｓ ｅｔ ａｌ．（上記）に記載されている通りに新鮮なＣＢ細胞をＵＭ１７１を添加して６日間培養して得られた細胞のことである。新鮮なＣＢ細胞とは、Ｆａｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４ Ｓｅｐ １９；３４５（６２０３）：１５０９－１２に記載されている通りに、ポジティブＣＤ３４選択（ＥａｓｙＳｅｐ（登録商標）キット、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、バンクーバー、カナダ）により臍帯血標本から直接収集した細胞のことである。ＳＣＦ １００ｎｇ／ｍＬ、ＴＰＯ １００ｎｇ／ｍＬ，ＦＬＴ３－Ｌ ５０ｎｇ／ｍＬ（Ｓｈｅｎａｎｄｏａｈ（登録商標））、Ｇｌｕｔａｍａｘ（登録商標）１×、ＬＤＬ １０μｇ／ｍＬ、シプロフロキサシン１０μｇ／ｍＬ、５００ｎＭ ＳＲ１（Ａｌｉｃｈｅｍ（登録商標））および３５ｎＭ ＵＭ１７１（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ（ＩＲＩＣ）の医薬品化学コア施設で合成したもの）を含有するＳｔｅｍＳｐａｎ（登録商標）－ＡＣＦ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ０９８５５）でＣＢ細胞（新鮮なＣＢ細胞および拡大したＣＢ細胞）を培養した。
【0209】
細胞系。ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞をアルファ－ＭＥＭ、２０％ＦＢＳで維持し、一方、乳腺腫瘍ＢＴ４７４細胞をＤＭＥＭ １０％ＦＢＳで維持した。ＢＴ４７４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－２０（商標））はＳｙｌｖｉｅ Ｍａｄｅｒ氏の研究室から寄贈されたものであり、一方、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞およびＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞はドイツ細胞バンク（ＤＳＭＺ、アクセション番号はそれぞれＡＣＣ５８２およびＡＣＣ２４７）から購入したものである。
【0210】
化合物。いずれの粉末も使用直前にＤＭＳＯに溶かし、培地で希釈した。全条件で最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％とした。Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ社、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ社、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社、ＡｄｏｏＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、Ｃａｙｍａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ社およびＳｙｎｋｉｎａｓｅ社を含めた様々な供給業者から６０種類の化合物を購入した。
【0211】
細胞用量反応生存能アッセイ。親細胞を３８４ウェルプレートに１ウェル当たり５，０００個／５０μＬの密度で播種した。最初のスクリーニングでは、化合物を段階希釈（１０希釈、１：３、１０μＭまたは２０μＭから開始）して播種細胞に二重反復で加えた。追加の化合物を加えずに０．１％ＤＭＳＯで処理した細胞をネガティブ対照として用いた。６日間培養した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を製造業者の指示通りに用いて、１ウェル当たりの生存細胞数を評価した。阻害のパーセントを以下の通りに算出した：１００－（１００×（平均発光値（化合物）／平均発光値（ＤＭＳＯ））；式中、平均発光値（化合物）は化合物処理細胞で得られた発光シグナルの平均値に対応し、平均発光値（ＤＭＳＯ）は対照ＤＭＳＯ処理細胞で得られた発光シグナルの平均値に対応する。
【0212】
ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ（登録商標）ＳＡＲｖｉｅｗ Ｓｕｉｔｅ（ＩＤＢＳ社、ロンドン、イギリス）およびＧｒａｐｈＰａｄ（登録商標）Ｐｒｉｓｍ ４．０３（ラホヤ、カリフォルニア州、米国）を用いて４パラメータ非線形カーブフィッティング法によりＥＣ５０値（５０％の阻害に達するのに必要な化合物の濃度に相当する）を算出した。
【0213】
白血病幹細胞（ＬＳＣ）頻度の評価
既に詳述されている（Ｐａｂｓｔ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２７，２０１８－２０２７，２０１６）通りに、免疫不全ＮＳＧマウスに限界希釈法を用いてＬＳＣ頻度を評価した。ＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（登録商標）（バーハーバー、メイン州）から購入し、無病原菌動物施設で飼育した。いずれのＡＭＬ試料も、致死量未満の放射線（２５０ｃＧｙ、１３７Ｃｓ－ガンマ発生源）を照射した８～１２週齢のＮＳＧマウスに尾静脈から移植した。ＡＭＬ細胞を解凍後、レシピエントマウス４匹からなるグループに４種類の異なる細胞投与量で直接移植した。移植から１０～１６週間後、マウス骨髄へのヒト白血病生着をフローサイトメトリーにより判定した。平均１５０，０００のゲート事象が得られた。骨髄細胞集団のうちヒト細胞が１％超占めていた場合、マウスをポジティブと見なした。白血病によるものではないことが明らかな死亡（例えば、照射から最初の２週間）がみられた場合のみマウスを除外した。未分取の患者試料中に存在する白血病細胞と正常細胞の生着を識別するため、ＣＤ４５＋ＣＤ３３＋細胞またはＣＤ４５＋ＣＤ３４＋細胞の割合がＣＤ１９＋ＣＤ３３－またはＣＤ３＋の割合より大きいレシピエントに限り、白血病起源の細胞を保有するものと見なした。
既に詳述されている（Ｐａｂｓｔ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２７，２０１８－２０２７，２０１６）通りに、免疫不全ＮＳＧマウスに限界希釈法を用いてＬＳＣ頻度を評価した。ＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（登録商標）（バーハーバー、メイン州）から購入し、無病原菌動物施設で飼育した。いずれのＡＭＬ試料も、致死量未満の放射線（２５０ｃＧｙ、１３７Ｃｓ－ガンマ発生源）を照射した８～１２週齢のＮＳＧマウスに尾静脈から移植した。ＡＭＬ細胞を解凍後、レシピエントマウス４匹からなるグループに４種類の異なる細胞投与量で直接移植した。移植から１０～１６週間後、マウス骨髄へのヒト白血病生着をフローサイトメトリーにより判定した。平均１５０，０００のゲート事象が得られた。骨髄細胞集団のうちヒト細胞が１％超占めていた場合、マウスをポジティブと見なした。白血病によるものではないことが明らかな死亡（例えば、照射から最初の２週間）がみられた場合のみマウスを除外した。未分取の患者試料中に存在する白血病細胞と正常細胞の生着を識別するため、ＣＤ４５＋ＣＤ３３＋細胞またはＣＤ４５＋ＣＤ３４＋細胞の割合がＣＤ１９＋ＣＤ３３－またはＣＤ３＋の割合より大きいレシピエントに限り、白血病起源の細胞を保有するものと見なした。
【0214】
フローサイトメトリー染色
以下のＦＡＣＳ抗体を用いた：抗ヒトＣＤ４５ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３０４０２９）、ＣＤ４５フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３０４００６）、ＣＤ３３フィコエリトリン（ＰＥ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５５４５０）、ＣＤ３３ ＢＶ４２１（ＢＤ社、５６２８５４）、ＣＤ３４抗原提示細胞（ＡＰＣ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５５８２４）、ＣＤ３４ ＡＰＣ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、１０６１３）、ＣＤ３ ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５５３３２）、ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｃｙ７（ＢＤ社、５６０１５８）、ＣＤ８ ＡＰＣ（ＢＤ社、５５５３６９）、ＣＤ３ ＰＥ－Ｃｙ５（ＢＤ社、５５５３３４）、ＣＤ１９ ＰＥ－Ｃｙ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５７８３５）、抗マウスＣＤ４５．１ ＡＰＣ－ｅｆｌｕｏｒ７３０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、４７－０４５３－８２）、ＥＲＢＢ２－ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（登録商標）社、３２４４０６）、アネキシンＶ ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（登録商標）社、５５６４１９）。最終濃度１μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムを用いて死細胞を染色した。ＲＯＳ定量化には、通常の増殖条件下で細胞を１μＭ Ｈ２ＤＣＦＤＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社、Ｄ３９９）で染色した。ＬＳＲＩＩ（登録商標）フローサイトメータ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（登録商標）社）、ＢＤ Ｃａｎｔｏ（登録商標）ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）またはＩＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ（登録商標）社）で細胞を解析し、結果をＢＤ蛍光励起セルソーター（ＦＡＣＳ）Ｄｉｖａ（登録商標）４．１およびＦｌｏｗＪｏ（登録商標）Ｘソフトウェアで解析した。
以下のＦＡＣＳ抗体を用いた：抗ヒトＣＤ４５ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３０４０２９）、ＣＤ４５フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３０４００６）、ＣＤ３３フィコエリトリン（ＰＥ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５５４５０）、ＣＤ３３ ＢＶ４２１（ＢＤ社、５６２８５４）、ＣＤ３４抗原提示細胞（ＡＰＣ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５５８２４）、ＣＤ３４ ＡＰＣ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、１０６１３）、ＣＤ３ ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５５３３２）、ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｃｙ７（ＢＤ社、５６０１５８）、ＣＤ８ ＡＰＣ（ＢＤ社、５５５３６９）、ＣＤ３ ＰＥ－Ｃｙ５（ＢＤ社、５５５３３４）、ＣＤ１９ ＰＥ－Ｃｙ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、５５７８３５）、抗マウスＣＤ４５．１ ＡＰＣ－ｅｆｌｕｏｒ７３０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、４７－０４５３－８２）、ＥＲＢＢ２－ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（登録商標）社、３２４４０６）、アネキシンＶ ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（登録商標）社、５５６４１９）。最終濃度１μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムを用いて死細胞を染色した。ＲＯＳ定量化には、通常の増殖条件下で細胞を１μＭ Ｈ２ＤＣＦＤＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社、Ｄ３９９）で染色した。ＬＳＲＩＩ（登録商標）フローサイトメータ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（登録商標）社）、ＢＤ Ｃａｎｔｏ（登録商標）ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）またはＩＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ（登録商標）社）で細胞を解析し、結果をＢＤ蛍光励起セルソーター（ＦＡＣＳ）Ｄｉｖａ（登録商標）４．１およびＦｌｏｗＪｏ（登録商標）Ｘソフトウェアで解析した。
【0215】
次世代シーケンシングおよび変異定量化
シーケンシング、変異解析および転写物定量化のワークフローが既に記載されている（Ｌａｖａｌｌｅｅ，Ｖ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２５，１４０－１４３，２０１４；Ｌａｖａｌｌｅｅ，Ｖ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４７，１０３０－１０３７，２０１５）。簡潔に述べれば、ＴｒｕＳｅｑ（登録商標）ＲＮＡ／ＴｒｕＳｅｑ（登録商標）ＤＮＡ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔｓ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標））を用いてライブラリーを構築した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）ＨｉＳｅｑ ２０００を２００サイクルのペアエンドランを用いてシーケンシングを実施した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）Ｃａｓａｖａ １．８．２パッケージおよびＥｌａｎｄｖ２マッピングソフトウェアを用いて、ＲｅｆＳｅｑアノテーション（ＵＣＳＣ、２０１４年４月１６日）に従い配列データを参照ゲノムｈｇ１９にマップした。Ｃａｓａｖａ １．８．２を用いてバリアントを特定し、Ｔｏｐｈａｔ ２．０．７およびＣｕｆｆｌｉｎｋｓ ２．１．１を用いて、部分的タンデム重複などの融合または大きい変異を特定した。
シーケンシング、変異解析および転写物定量化のワークフローが既に記載されている（Ｌａｖａｌｌｅｅ，Ｖ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２５，１４０－１４３，２０１４；Ｌａｖａｌｌｅｅ，Ｖ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４７，１０３０－１０３７，２０１５）。簡潔に述べれば、ＴｒｕＳｅｑ（登録商標）ＲＮＡ／ＴｒｕＳｅｑ（登録商標）ＤＮＡ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔｓ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標））を用いてライブラリーを構築した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）ＨｉＳｅｑ ２０００を２００サイクルのペアエンドランを用いてシーケンシングを実施した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）Ｃａｓａｖａ １．８．２パッケージおよびＥｌａｎｄｖ２マッピングソフトウェアを用いて、ＲｅｆＳｅｑアノテーション（ＵＣＳＣ、２０１４年４月１６日）に従い配列データを参照ゲノムｈｇ１９にマップした。Ｃａｓａｖａ １．８．２を用いてバリアントを特定し、Ｔｏｐｈａｔ ２．０．７およびＣｕｆｆｌｉｎｋｓ ２．１．１を用いて、部分的タンデム重複などの融合または大きい変異を特定した。
【0216】
転写物レベルをマップされたリード１００万個当たりのキロベース当たりのリード数（Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ）（ＲＰＫＭ）で表し、ＲｅｆＳｅｑアノテーション（ＵＣＳＣ、２０１４年４月１６日）に従い遺伝子に注釈を付けた。
【0217】
ＬＣ／ＭＳによる代謝産物測定（クエン酸回路中間物質およびグルタチオン）
ＭｃＧｉｌｌ ＭｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓプラットフォームでＬＣ／ＭＳによる代謝産物測定を実施した。基準となる代謝産物標準品をＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、ＬＣ／ＭＳグレードの溶媒および添加剤、すわなち、酢酸アンモニウム、ギ酸、水、メタノールおよびアセトニトリルをＦｉｓｈｅｒ社から購入した。ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞（５００万個、四重反復、ＤＭＳＯまたはムブリチニブ５００ｎＭで２０時間処理）を氷冷１５０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ７．２）で２回洗浄した。次いで、ＬＣ／ＭＳグレードのメタノール５０％／水５０％混合物３８０μｌおよび冷アセトニトリル２２０μｌを用いて代謝産物を抽出した。次いで、１．４ｍｍのセラミックビーズで２分間、３０Ｈｚで攪拌する（ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ、Ｑｉａｇｅｎ社）ことにより試料をホモジナイズした。ライセートに体積３００μｌの氷冷水および６００μｌの氷冷塩化メチレンを加えた。試料をボルテックスし、氷上に１０分間静置して相分離させた後、４，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上の水層を予冷した新たなチューブに移した。最終的に、－４℃で稼働させた真空遠心分離（Ｌａｂｃｏｎｃｏ社）により試料を乾燥させ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータ収集の準備が整うまで－８０℃で保管した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ解析には、最初に標本を水５０μｌに再懸濁させ、１５，０００ｒｐｍ、１℃で１５分間遠心分離することにより清澄化した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ解析の持続時間中、試料をオートサンプラー内で４℃に維持した。Ｓｃｈｅｒｚｏ ＳＭ－Ｃ１８（３ｍｍ×１５０ｍｍ）３μｍカラムおよびガードカラム（Ｉｍｔａｋｔ ＵＳＡ社）を１０℃で稼働させて用いて、標本をＵ－ＨＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）（１２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）により分離した。
ＭｃＧｉｌｌ ＭｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓプラットフォームでＬＣ／ＭＳによる代謝産物測定を実施した。基準となる代謝産物標準品をＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、ＬＣ／ＭＳグレードの溶媒および添加剤、すわなち、酢酸アンモニウム、ギ酸、水、メタノールおよびアセトニトリルをＦｉｓｈｅｒ社から購入した。ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞（５００万個、四重反復、ＤＭＳＯまたはムブリチニブ５００ｎＭで２０時間処理）を氷冷１５０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ７．２）で２回洗浄した。次いで、ＬＣ／ＭＳグレードのメタノール５０％／水５０％混合物３８０μｌおよび冷アセトニトリル２２０μｌを用いて代謝産物を抽出した。次いで、１．４ｍｍのセラミックビーズで２分間、３０Ｈｚで攪拌する（ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ、Ｑｉａｇｅｎ社）ことにより試料をホモジナイズした。ライセートに体積３００μｌの氷冷水および６００μｌの氷冷塩化メチレンを加えた。試料をボルテックスし、氷上に１０分間静置して相分離させた後、４，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上の水層を予冷した新たなチューブに移した。最終的に、－４℃で稼働させた真空遠心分離（Ｌａｂｃｏｎｃｏ社）により試料を乾燥させ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータ収集の準備が整うまで－８０℃で保管した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ解析には、最初に標本を水５０μｌに再懸濁させ、１５，０００ｒｐｍ、１℃で１５分間遠心分離することにより清澄化した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ解析の持続時間中、試料をオートサンプラー内で４℃に維持した。Ｓｃｈｅｒｚｏ ＳＭ－Ｃ１８（３ｍｍ×１５０ｍｍ）３μｍカラムおよびガードカラム（Ｉｍｔａｋｔ ＵＳＡ社）を１０℃で稼働させて用いて、標本をＵ－ＨＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）（１２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）により分離した。
【0218】
Ｓｅａｈｏｒｓｅ代謝フラックス実験
９６ウェルＳｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＸＦｅ９６（登録商標）またはＸＦｅ２４（登録商標）を製造業者の指示（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）通りに用いて、酸素消費速度および細胞外酸性化速度を測定した。Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ Ｂａｓｅ培地に、ミトコンドリアストレス試験の場合は１ｍＭピルビン酸塩、２ｍＭグルタミンおよび１０ｍＭグルコースを添加し、解糖ストレス試験の場合は１ｍＭピルビン酸塩、２ｍＭグルタミンを添加し、グルコースは添加しなかった。次いで、アッセイの前にＳｅａｈｏｒｓｅ培地のｐＨを７．４に調整した。簡潔に述べれば、ポリ－リジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｐ４７０７）で３時間プレコートしたＳｅａｈｏｒｓｅ ９６ウェル（または２４ウェル）プレートに白血病細胞をウェル毎に温度／ＣＯ２を予め調整したＳｅａｈｏｒｓｅ培地１００μＬ中７５，０００個／ウェル（または１５０μＬ中１５０，０００個／ウェル）の密度で播種した。次いで、Ｓｅａｈｏｒｓｅプレートを１４００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで、Ｓｅａｈｏｒｓｅ培地をさらに７５μＬ（または３７５μＬ）加え、最終的に、一定体積２５μＬ（または７５μＬ）の化合物を添加することにより、細胞を製造業者の指示通りに解析した。化合物をムブリチニブは１μＭ、オリゴマイシンは１μＭ、ＦＣＣＰは０．５μＭ、ロテノン／アンチマイシンＡは０．５μＭ、グルコースは１０ｍＭおよび２－デオキシ－グルコースは５０ｍＭの最終濃度で細胞に急激に注入した。
９６ウェルＳｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＸＦｅ９６（登録商標）またはＸＦｅ２４（登録商標）を製造業者の指示（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）通りに用いて、酸素消費速度および細胞外酸性化速度を測定した。Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ Ｂａｓｅ培地に、ミトコンドリアストレス試験の場合は１ｍＭピルビン酸塩、２ｍＭグルタミンおよび１０ｍＭグルコースを添加し、解糖ストレス試験の場合は１ｍＭピルビン酸塩、２ｍＭグルタミンを添加し、グルコースは添加しなかった。次いで、アッセイの前にＳｅａｈｏｒｓｅ培地のｐＨを７．４に調整した。簡潔に述べれば、ポリ－リジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｐ４７０７）で３時間プレコートしたＳｅａｈｏｒｓｅ ９６ウェル（または２４ウェル）プレートに白血病細胞をウェル毎に温度／ＣＯ２を予め調整したＳｅａｈｏｒｓｅ培地１００μＬ中７５，０００個／ウェル（または１５０μＬ中１５０，０００個／ウェル）の密度で播種した。次いで、Ｓｅａｈｏｒｓｅプレートを１４００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで、Ｓｅａｈｏｒｓｅ培地をさらに７５μＬ（または３７５μＬ）加え、最終的に、一定体積２５μＬ（または７５μＬ）の化合物を添加することにより、細胞を製造業者の指示通りに解析した。化合物をムブリチニブは１μＭ、オリゴマイシンは１μＭ、ＦＣＣＰは０．５μＭ、ロテノン／アンチマイシンＡは０．５μＭ、グルコースは１０ｍＭおよび２－デオキシ－グルコースは５０ｍＭの最終濃度で細胞に急激に注入した。
【0219】
ＥＴＣ複合体Ｉ活性の無細胞アッセイ
ＭｉｔｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社（Ａｂｃａｍ社、ケンブリッジ、イギリス）からＥＴＣ複合体Ｉ活性の無細胞キットアッセイを購入し、製造業者のプロトコルに従って使用した。ＧｒａｐｈＰａｄ（登録商標）Ｐｒｉｓｍ ４．０３（ラホヤ、カリフォルニア州、米国）を用いて４パラメータ非線形カーブフィッティング法によりＩＣ５０値を算出した。
ＭｉｔｏＳｃｉｅｎｃｅｓ社（Ａｂｃａｍ社、ケンブリッジ、イギリス）からＥＴＣ複合体Ｉ活性の無細胞キットアッセイを購入し、製造業者のプロトコルに従って使用した。ＧｒａｐｈＰａｄ（登録商標）Ｐｒｉｓｍ ４．０３（ラホヤ、カリフォルニア州、米国）を用いて４パラメータ非線形カーブフィッティング法によりＩＣ５０値を算出した。
【0220】
統計処理
ウィルコクソン順位和検定を用いて差次的遺伝子発現の解析を実施し、既に記載されている通りに偽発見率（ＦＤＲ）法を網羅的遺伝子解析に適用した（Ｌａｖａｌｌｅｅ，Ｖ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２５，１４０－１４３，２０１４）。予後Ｌｅｕｃｅｇｅｎｅコホートに属する患者について全生存期間の差のｐ値をログランク検定により算出した。
ウィルコクソン順位和検定を用いて差次的遺伝子発現の解析を実施し、既に記載されている通りに偽発見率（ＦＤＲ）法を網羅的遺伝子解析に適用した（Ｌａｖａｌｌｅｅ，Ｖ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２５，１４０－１４３，２０１４）。予後Ｌｅｕｃｅｇｅｎｅコホートに属する患者について全生存期間の差のｐ値をログランク検定により算出した。
【0221】
実施例２：高ＨＯＸ ＡＭＬ患者は一般に疾患予後が不良である。
ＡＭＬ細胞試料のＨＯＸネットワークに属する遺伝子の発現が一貫して高い（図１Ａ）ことは、患者の全生存期間が有意に短いことと相関があることがわかった（図１Ｂ）。図１Ｃから、白血病細胞のＨＯＸＡ９発現とＨＯＸＡ１０発現の間に相関があることがわかり、図１Ｄから、高ＨＯＸＡ９／ＨＯＸＡ１０群に属するＡＭＬ患者の生存期間が、図１Ｂに示される高ＨＯＸネットワーク亜群に属する患者のものと同程度であることがわかり、このことは、ＨＯＸＡ９とＨＯＸＡ１０の高発現を高ＨＯＸネットワーク患者の検出の代用として用い得ることを示している。全体的にみると、以上のデータから、ＨＯＸネットワーク遺伝子の高発現を示すＡＭＬ細胞を有する患者は予後不良であり、適切なＡＭＬ治療から利益を受ける可能性があることがわかる。
ＡＭＬ細胞試料のＨＯＸネットワークに属する遺伝子の発現が一貫して高い（図１Ａ）ことは、患者の全生存期間が有意に短いことと相関があることがわかった（図１Ｂ）。図１Ｃから、白血病細胞のＨＯＸＡ９発現とＨＯＸＡ１０発現の間に相関があることがわかり、図１Ｄから、高ＨＯＸＡ９／ＨＯＸＡ１０群に属するＡＭＬ患者の生存期間が、図１Ｂに示される高ＨＯＸネットワーク亜群に属する患者のものと同程度であることがわかり、このことは、ＨＯＸＡ９とＨＯＸＡ１０の高発現を高ＨＯＸネットワーク患者の検出の代用として用い得ることを示している。全体的にみると、以上のデータから、ＨＯＸネットワーク遺伝子の高発現を示すＡＭＬ細胞を有する患者は予後不良であり、適切なＡＭＬ治療から利益を受ける可能性があることがわかる。
【0222】
実施例３：ムブリチニブは高ＨＯＸ ＡＭＬ細胞を効果的に阻害する。
ＨＯＸＡ９およびＨＯＸＡ１０の高発現を高ＨＯＸネットワーク患者試料の検出の代用として用いて、ＲＡＳおよびＰＩ３Ｋ経路のメンバーである受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を標的とする６０種類の阻害剤と接触させた高ＨＯＸ標本と中／低ＨＯＸ標本とで生存率を比較して評価した（図２Ａ、表４）。
ＨＯＸＡ９およびＨＯＸＡ１０の高発現を高ＨＯＸネットワーク患者試料の検出の代用として用いて、ＲＡＳおよびＰＩ３Ｋ経路のメンバーである受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を標的とする６０種類の阻害剤と接触させた高ＨＯＸ標本と中／低ＨＯＸ標本とで生存率を比較して評価した（図２Ａ、表４）。
【0223】
【表4-1】
【表4-2】
【0224】
高ＨＯＸ患者の細胞は、中／低ＨＯＸ試料と比較してＲＴＫ ＥＲＢＢ２阻害剤ムブリチニブに対する感受性が有意に高かった（図２Ｂ）。その他の被験化合物では感受性の統計的有意差はみられなかった。
【0225】
さらに大きいＡＭＬ試料のコホートを対象とした用量反応検証スクリーニングでは、高ＨＯＸ患者の細胞の方が中／低ＨＯＸ ＡＭＬ細胞よりムブリチニブに対する感受性が有意に高いことが確認された（図２Ｃ～２Ｄ）。被験ＡＭＬ集団のムブリチニブＥＣ５０の中央値は約３７５ｎＭであった（図２Ｅ）。ムブリチニブ感受性群に属する患者（ＥＣ５０＜３７５ｎＭ）は、ムブリチニブ耐性群の患者（ＥＣ５０≧３７５ｎＭ、図２Ｆ）より全生存期間が有意に短い。ムブリチニブ感受性群に属する標本は実施例２に示した結果と同じように、ＨＯＸネットワークの遺伝子を過剰発現する（図２Ｇ）。発現の差が最も大きい遺伝子（ＲＰＫＭ値の差が６倍、ＲＰＫＭ＞０．１）を図２Ｈに示し、ＡＭＬのムブリチニブ感受性トランスクリプトームシグネチャー全体を図２Ｉ、表１（ムブリチニブ感受性細胞に５倍超のＲＰＫＭ値で過剰発現した遺伝子、ＲＰＫＭ＞０．１）および表２（ムブリチニブ感受性細胞に５倍超のＲＰＫＭ値で過小発現した遺伝子、ＲＰＫＭ＞０．１）に示す。以上のデータを考え合わせると、ムブリチニブは、ＨＯＸネットワーク遺伝子が高発現するＡＭＬ患者の治療に優れた候補薬物であることがわかる。
【0226】
実施例４：古典的な遺伝学的／細胞遺伝学的分類によるムブリチニブ標的集団
ムブリチニブに対する感受性の高いＡＭＬサブタイプを特定することを目的とした１組の実験の結果を図３Ａ～３Ｇおよび表５Ａ～５Ｂに示す。図３Ａ、３Ｂおよび３Ｆから、ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞は、中等度の細胞遺伝学的リスクのクラスに属する頻度が最も高く、ＮＰＭ１、ＩＤＨ１、ＳＲＳＦ２、ＣＥＢＰＡ、ＤＮＭＴ３ＡまたはＦＬＴ３－ＩＴＤに変異を有することが多く（図３Ｃ、３Ｄおよび３Ｇ）、一般に正常核型を有する（ＮＫ、図３Ａ、３Ｅおよび３Ｆ）ことがわかる。ムブリチニブ耐性標本と比較してムブリチニブ感受性標本に最も顕著に富化された変異がみられたのは、ＩＤＨ１、ＳＲＳＦ２およびＣＥＢＰＡであったのに対し、ＡＭＬ試料のＮＲＡＳ、ＫＩＴ、ＩＴＤではないＦＬＴ３およびＴＰ５３の変異は、ムブリチニブ感受性群にはムブリチニブ耐性群と比較して少数みられた（表５Ａ）。変異の詳細を表５Ｂに示す。
ムブリチニブに対する感受性の高いＡＭＬサブタイプを特定することを目的とした１組の実験の結果を図３Ａ～３Ｇおよび表５Ａ～５Ｂに示す。図３Ａ、３Ｂおよび３Ｆから、ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞は、中等度の細胞遺伝学的リスクのクラスに属する頻度が最も高く、ＮＰＭ１、ＩＤＨ１、ＳＲＳＦ２、ＣＥＢＰＡ、ＤＮＭＴ３ＡまたはＦＬＴ３－ＩＴＤに変異を有することが多く（図３Ｃ、３Ｄおよび３Ｇ）、一般に正常核型を有する（ＮＫ、図３Ａ、３Ｅおよび３Ｆ）ことがわかる。ムブリチニブ耐性標本と比較してムブリチニブ感受性標本に最も顕著に富化された変異がみられたのは、ＩＤＨ１、ＳＲＳＦ２およびＣＥＢＰＡであったのに対し、ＡＭＬ試料のＮＲＡＳ、ＫＩＴ、ＩＴＤではないＦＬＴ３およびＴＰ５３の変異は、ムブリチニブ感受性群にはムブリチニブ耐性群と比較して少数みられた（表５Ａ）。変異の詳細を表５Ｂに示す。
【0227】
【表5】
【0228】
【表6-1】
【表6-2】
ＡＳＸＬ１＝ＮＭ＿０１５３３８；ＣＥＢＰＡ＝ＮＭ＿００４３６４；ＤＮＭＴ３Ａ＝ＮＭ＿０２２５５２；ＦＬＴ３＝ＮＭ＿００４１１９；ＩＤＨ１＝ＮＭ＿００５８９６；ＩＤＨ２＝ＮＭ＿００２１６８；ＫＩＴ＝ＮＭ＿００１０９３７７２；ＮＰＭ１＝ＮＭ＿００２５２０；ＮＲＡＳ＝ＮＭ＿００２５２４；ＲＵＮＸ１＝ＮＭ＿００１７５４；ＳＲＳＦ２＝ＮＭ＿００３０１６；ＴＥＴ２＝ＮＭ＿０１７６２８；ＴＰ５３＝ＮＭ＿００１２７６７６０；ＷＴ１＝ＮＭ＿０２４４２６。
【0229】
注目すべきなのは、近年特に予後不良であることが明らかになった（Ｐａｐａｅｍｍａｎｕｉｌ，Ｅ． ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７４，２２０９－２２２１，２０１６）ＮＰＭ１、ＤＮＭＴ３ＡおよびＦＬＴ３－ＩＴＤに同時に変異のあるＡＭＬ標本は、ムブリチニブに対して特に感受性が高いことがわかった（ＥＣ５０の中央値は他のＡＭＬサブタイプが４２３ｎＭであるのに対し９６ｎＭである、図３Ｇ）ことである。ＮＫを有する標本（ＡＭＬ患者の３０％を占める、図３Ｈ）またはＮＫおよびＮＰＭ１変異を有する試料（ＡＭＬ患者試料の２５％を占める、図３Ｉ）に注目すると、免疫不全マウスを用いた限界希釈法から、ムブリチニブ感受性標本の白血病幹細胞（ＬＳＣ）の頻度がムブリチニブ耐性試料より有意に高いことがわかる。一般に、ＬＳＣ頻度が高いと微小残存病変（ＭＲＤ）が増大し予後不良になることがわかっている（例えば、Ｍｏｓｈａｖｅｒ Ｂ． ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２６，３０５９－３０６７（２００８）を参照されたい）。全体的にみると、以上の結果は、ムブリチニブによる治療から最も利益を受けると思われるＡＭＬ患者集団の選択に有用な指標となり、ムブリチニブに対する感受性と患者試料のＬＳＣ頻度との間に何らかの関係がある可能性を示す証拠となる。
【0230】
実施例５：ＡＭＬにおけるムブリチニブの作用機序の評価
ムブリチニブ処理は用量依存性に生細胞数の減少（ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）ネガティブ細胞の減少により測定される）を引き起こす（図４Ａ）。死（ＰＩポジティブ）細胞数の増加により細胞が減少し（図４Ｂ）、死細胞は、ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞系ＯＣＩ－ＡＭＬ３のアネキシンＶ染色（アポトーシスのマーカー）の増大により示唆されるように、アポトーシスにより死滅するものと思われる（図４Ｃ）。
ムブリチニブ処理は用量依存性に生細胞数の減少（ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）ネガティブ細胞の減少により測定される）を引き起こす（図４Ａ）。死（ＰＩポジティブ）細胞数の増加により細胞が減少し（図４Ｂ）、死細胞は、ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞系ＯＣＩ－ＡＭＬ３のアネキシンＶ染色（アポトーシスのマーカー）の増大により示唆されるように、アポトーシスにより死滅するものと思われる（図４Ｃ）。
【0231】
ムブリチニブは特異的ＥＲＢＢ２阻害剤として記載されており（Ｎａｇａｓａｗａ，Ｊ． ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｕｒｏｌ １３，５８７－５９２，２００６）、次に、ムブリチニブがこの標的を介してＡＭＬ細胞に作用するかどうかを評価した。また別の強力なＥＲＢＢ２阻害剤ラパチニブを一次スクリーニングに含め（図２Ａ）；特筆すべきことに、試験したＡＭＬ患者標本は４１例とも、ムブリチニブとは対照的にラパチニブに耐性を示した（図４Ｄ）。同様に、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞はムブリチニブには感受性を示したが、別の２つの強力なＥＲＢＢ２阻害剤であるラパチニブにもサピチニブにも感受性を示さず（図４Ｅ）、このことは、ムブリチニブのＡＭＬ細胞に対する作用がＥＲＢＢ２阻害剤のクラスと共通するものではないことを示す証拠となる。全体的にみると、ムブリチニブに対して感受性を示したＡＭＬ患者細胞は、ＥＲＢＢ２遺伝子の発現レベルがムブリチニブ耐性標本と同程度に低レベルであった（中央値は約０．５ＲＰＫＭ、図４Ｆ）。最後に、ＥＲＢＢ２発現のフローサイトメトリー解析では、ムブリチニブ感受性ＡＭＬ細胞系ＯＣＩ－ＡＭＬ３がポジティブ対照の乳癌細胞系ＢＴ４７４とは対照的に、検出可能なレベルのＥＲＢＢ２タンパク質を発現しないことが明らかになった（図４Ｇ）。以上の結果を考え合わせると、ムブリチニブがＥＲＢＢ２以外の標的を介してＡＭＬ細胞に細胞死を誘導することがわかる。
【0232】
次に、ムブリチニブ処理によって誘導されるアポトーシスに、例えば活性酸素種（ＲＯＳ）の増大による酸化ストレスが関与するかどうかを評価した。図５Ａからわかるように、ＡＭＬ３白血病細胞をＲＯＳスカベンジャーであるＮ－アセチル－システイン（ＮＡＣ）の存在下でインキュベートした場合、ムブリチニブ誘導性アポトーシスが有意に減少した。また、ムブリチニブで処理したＡＭＬ３細胞では、２’，７’－ジクロロフルオレセインジアセタート（ＤＣＦＤＡ）蛍光発生色素により評価したＲＯＳ活性（ヒドロキシル、ペルオキシル）のレベルの増大がみられた（図５Ｂ）。また、上記の白血病細胞では、ムブリチニブで処理すると（５００ｎＭ、２４時間）、ＤＭＳＯ対照と比較して酸化グルタチオンのレベルが増大し（図５Ｃ）、還元型グルタチオンのレベルが低下し（図５Ｄ）、このことは、ムブリチニブが感受性白血病細胞に酸化ストレスを誘導することを示している。
【0233】
感受性白血病細胞のムブリチニブ誘導性酸化ストレスがミトコンドリアの活性、すなわち電子伝達鎖（ＥＴＣ）の活性に影響を及ぼすかどうかを評価するため、ムブリチニブで処理した細胞の酸素消費速度を測定した。図５Ｅからわかるように、ＯＣＩ－ＡＭＬ３白血病細胞にムブリチニブ（１μＭ）を急激に注入したところ、この細胞の酸素消費速度に支障を来たした。図５Ｆに示されるデータから、ムブリチニブがＥＴＣ複合体Ｉの活性に対して阻害作用を示すことがわかる。図５Ｇから、白血病細胞系ＯＣＩ－ＡＭＬ５がＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞とは対照的に、ムブリチニブ誘導性細胞死に対して耐性であることがわかり、このことは、これらの細胞系に代謝機能またはミトコンドリア機能の相違があることを示唆している。この仮説と一致するように、ＯＣＩ－ＡＭＬ３は、オリゴマイシン（Ｆ１－Ｆ０ＡＴＰシンターゼ、複合体Ｖの阻害剤、図５Ｈ）、ロテノン（クラスＡ複合体Ｉ阻害剤、図５Ｉ）およびデグエリン（クラスＡ複合体Ｉ阻害剤、図５Ｊ）などの他のミトコンドリア活性阻害剤に対する感受性がＯＣＩ－ＡＭＬ５より高いことがわかった。
【0234】
図６Ａ～６Ｅに示される結果から、ムブリチニブ処理がＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞のクエン酸回路の複数の中間物質、すなわち、クエン酸（図６Ａ）、アルファ－ケトグルタル酸（図６Ｂ）、コハク酸（図６Ｃ）、フマル酸（図６Ｄ）およびリンゴ酸（図６Ｅ）のレベルを低下させることがわかり、ムブリチニブによってこの白血病細胞のミトコンドリア活性／呼吸に支障を来たすことが裏付けられる。
【0235】
抗糖尿病薬メトホルミンは、腫瘍細胞系（前立腺、悪性メラノーマおよび乳腺）の増殖を阻害し、オートファジーの増強を介して相乗的にＦＬＴ３－ＩＴＤ＋ＡＭＬ細胞をキナーゼ阻害剤ソラフェニブに対して感受性にすることがわかっている（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３９：１４２１－１４２７）。メトホルミンは、ＨＣＴ１１６ ｐ５３－／－大腸癌細胞のミトコンドリア複合体Ｉを阻害するが、ロテノンおよびアンチマイシンとは対照的に、この細胞によるＲＯＳ（Ｈ２Ｏ２）産生は増大させないこともわかっている（Ｗｈｅａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４．Ｅｌｉｆｅ．１３（３）：ｅ０２２４２）。このため、次に、ＡＭＬ細胞に対するムブリチニブの作用とメトホルミンの作用との間に相関があるかどうかを検討した。図７に示されるように、試験したＡＭＬ標本２０例全体で各化合物によって誘導されたＡＭＬ細胞阻害の割合を比較すると、白血病細胞に対するムブリチニブの阻害作用とメトホルミンの阻害作用との間に相関はみられない（ピアソン相関係数ｒ＝－０．１７）ことがわかり、このことは、上記の２種類の化合物が異なる作用機序を介して作用し、異なるＡＭＬ細胞を標的とすることを示す証拠となる。
【0236】
Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｉ Ｅｎｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔを製造業者の指示（Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ１０９７２１）の通りに用いて、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞の複合体Ｉ酵素活性に対するムブリチニブの阻害作用をさらに評価した。このアッセイは、ユビキノンの存在に依存しない複合体Ｉのジアホラーゼ型活性を測定するものであり、このため、ユビキノン結合部位またはその付近に結合するロテノンなどの阻害剤がこのアッセイを阻害することはない。図８に示される結果から、ムブリチニブの複合体Ｉに対する阻害作用が、ロテノンなどのクラスＡ阻害剤について記載されている（Ｆａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，２００９ Ｍａｙ；１７８７（５）：３８４－３９２）のと同じくＮＡＤＨ非依存性であることがわかり、このことは、ムブリチニブがこの細胞のＲＯＳを増大させることができることと一致する。
【0237】
ここまで、具体的な実施形態により本発明を説明してきたが、添付の「特許請求の範囲」で定められる本発明の趣旨および本質から逸脱することなく本発明を改変することができる。
【図1-1】
【図1-2】
【図1-3】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図2-4】
【図2-5】
【図2-6】
【図2-7】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図3-4】
【図3-5】
【図3-6】
【図4-1】
【図4-2】
【図4-3】
【図4-4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図5-4】
【図6-1】
【図6-2】
【図7】
【図8】
