【図1】 図１は、ABabDIIマウスにおけるHLA-A *02.01制限HPV16 E6エピトープTIHDIILECVに対する特異的CD8 + T細胞応答の例を示す。ABabDIIマウスを腹腔内に（i.p.）Ｅ６／７発現アデノウイルスで免疫し、続いて皮下に(s.c.) 50μｇのＥ６ペプチドをＩＦＡ中に乳化させた50μｇのＣｐＧ ＯＤＮ１８２６と共に、又はペプチド／ＣｐＧ／ＩＦＡ混合物を単独で投与した。免疫動物の末梢血におけるHPV特異的CD8 + T細胞の存在を、各ブーストの７日後に細胞内IFNγ染色によって評価した。ホルボールミリステートアセテート（PMA）及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(+ctrl)として使用した。

【図2】 図２は、ABabDIIマウスにおけるHLA-A201制限HPV16 E7エピトープTLGIVCPIに対する特異的CD8+ T細胞応答の例を示す。ABabDIIマウスを50μｇのE7ペプチドと共にＩＦＡ中で乳化した50μｇのＣｐＧ ＯＤＮ１８２６と共に尾基部の皮下(s.c.)に免疫した。免疫動物の末梢血におけるHPV特異的CD8+ T細胞の存在を、各ブーストの７日後に細胞内IFNγ染色によって評価した。ホルボールミリステートアセテート（PMA）及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(+ctrl)として使用した。

【図3】 図３は、HLA-A*02.01制限HPV16 E5、E6及びE7エピトープに対する特異的CD8+ T細胞のFACSort戦略（IFNγ捕獲アッセイ）を示す。応答マウス由来の脾臓細胞でCD4+ T細胞を枯渇させ、10-8モルのそれぞれのペプチドで10日間再刺激した。5'RACE PCRのために、HPV特異的CD8+ T細胞を、IFNγ捕獲アッセイを用いてRNA精製バッファーに直接選別した。

【図4】 図４は、新たに調製したヒトPBLのHPV16 E6及びE7 TCR形質導入を示す。1×106の新たに単離又は凍結したhPBMCを、200U/mlの組換えヒトインターロイキン２の存在下で抗CD3及び抗CD28被覆プレートで刺激した。上清と硫酸プロタミンを含むレトロウイルスの添加、それに続くスピノキュレーション（１回目の形質導入）又はレトロネクチン（Takara）で被覆されたプレート上へのウイルスのプレローディング及びスピノキュレーション（２回目の形質導入）によって、48時間及び72時間後に形質導入を行った。形質導入効率を、抗CD8及び抗マウス定常TCRβmAbで染色することによって評価した。

【図5】 図５は、TCRが形質導入されたヒトPBMCのHPV16 E6/E7ペプチド特異的IFN-γの放出を示す；５８５９ＴＣＲは 配列番号３４及び３５に対応する；５８４３Ｂ１４ＴＣＲは配列番号３６及び３７に対応する；１４８００ＴＣＲは配列番号４３及び４４に対応する。IFNγ産生は、1×104個のTCR形質導入T細胞と1×104個のペプチド負荷T2細胞との１６時間共培養の後、酵素結合免疫吸着測定法によって測定した。ホルボールミリステートアセテート（PMA）及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照（max）として用いた。ｕｔ：非形質導入PBMC。

【図6】 図６は、滴定されたE6特異的ペプチド及びCASKI細胞系における、TCR形質導入されたヒトPBMCのHPV16 E6 IFN-γ放出を示す。左パネルは配列番号１４／１５（Ｔ３）のＴＣＲを示し、右パネルは 配列番号１６／１７（Ｔ４）のＴＣＲを示す。IFNγ産生は、1x104個のTCR形質導入T細胞と1x104個のペプチド負荷T2細胞又は1x104個のCASKI細胞系の１６時間共培養の後、酵素結合免疫吸着測定法によって測定した。ホルボールミリステートアセテート（PMA）及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(P+I)として用いた。HLA形質導入された子宮頸癌細胞系SiHa細胞系及び頭頸部癌細胞系SCC-090及びSCC-152についても、CASKI細胞の認識に匹敵するIFNγ放出が見られた（データは示さず）。

【図7】 図７は、新たに調製したヒトPBLのHPV16 E5形質導入及びTCRを形質導入したヒトPBMCのHPV16 E5ペプチド特異的IFN-γ放出を示す。ＴＣＲは配列番号１２／１３（Ｔ２）のＴＣＲが使用された。1×106の新たに単離又は凍結したhPBMCを、200U/mlの組換えヒトインターロイキン２の存在下の抗CD3及び抗CD28被覆プレートで刺激した。上清と硫酸プロタミンを含むレトロウイルスの添加、それに続くスピノキュレーション（１回目の形質導入）又はレトロネクチン（Takara）被覆プレートへのウイルスのプレローディング及びスピノキュレーション（２回目の形質導入）によって、48及び72時間後に形質導入を行った。形質導入効率は抗CD8及び抗マウス定常TCRβmAbで染色することによって評価した。IFNγ産生は、1x104個のTCR形質導入T細胞と1x104個のペプチド負荷T2細胞との１６時間共培養の後、酵素結合免疫吸着測定法によって測定した。ホルボールミリステートアセテート（PMA）及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(P+I)として用いた。