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特許7005779急性骨髄性白血病又は転移性乳癌の予防又は治療用薬剤学的組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-01-07
(45)【発行日】2022-02-10
(54)【発明の名称】急性骨髄性白血病又は転移性乳癌の予防又は治療用薬剤学的組成物
(51)【国際特許分類】
C07D 209/40 20060101AFI20220203BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220203BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20220203BHJP
C07D 401/14 20060101ALI20220203BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20220203BHJP
A61K 31/454 20060101ALI20220203BHJP
A61K 31/403 20060101ALN20220203BHJP
A61K 31/5377 20060101ALN20220203BHJP
【ＦＩ】
C07D209/40 CSP
A61P35/02
A61P35/04
C07D401/14
A61K31/496
A61K31/454
A61K31/403
A61K31/5377
【請求項の数】
5
(21)【出願番号】P 2020543443
(86)(22)【出願日】2018-10-30
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-01-14
(86)【国際出願番号】 KR2018013051
(87)【国際公開番号】W WO2019088677
(87)【国際公開日】2019-05-09
【審査請求日】2020-05-07
(31)【優先権主張番号】10-2017-0144142
(32)【優先日】2017-10-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(73)【特許権者】
【識別番号】520150588
【氏名又は名称】ペレメッド カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＰＥＬＥＭＥＤ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000084
【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】キム，ヨンチュル
(72)【発明者】
【氏名】チョン，ピョン－ファ
【審査官】三木 寛
(56)【参考文献】
【文献】特表２００２－５４１２４４（ＪＰ，Ａ）
【文献】欧州特許出願公開第０２５１８１３９（ＥＰ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１５／０２５９２８８（ＵＳ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１４／０２７５１６８（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１６－５１４１６０（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２０１６／０２４３０７７（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１３－５１８８７４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００７－５１９７１３（ＪＰ，Ａ）
【文献】Cheng, Xinlai et al，"Identification of a Water-Soluble Indirubin Derivative as Potent Inhibitor of Insulin-like Growth Factor 1 Receptor through Structural Modification of the Parent Natural Molecule"，Journal of Medicinal Chemistry，2017年，Vol.60(12)，p.4949-4962
【文献】Nam, Sangkil; Scuto, Anna; Yang, Fan; Chen, Wen Yong; et al，"Indirubin derivatives induce apoptosis of chronic myelogenous leukemia cells involving inhibition of Stat5 signaling"，Molecular Oncology，2012年，Vol.6(3)，p.276-283
【文献】Han, Sun-Young et al，"Effects of indirubin derivatives on the FLT3 activity and growth of acute myeloid leukemia cell lines"，Drug Development Research，2010年，Vol.71(4)，p.221-227
【文献】D Marko1, S Schatzle1, A Friedel1, et al，Inhibition of cyclin-dependent kinase 1 (CDK1) by indirubin derivatives in human tumour cells，British Journal of Cancer，2001年，Vol.84，p.283-289
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ ２０９／４０
Ｃ０７Ｄ ４０３／０４
Ａ６１Ｐ ３５／０２
Ａ６１Ｐ ３５／０４
Ｃ０７Ｄ ４０１／１４
Ａ６１Ｋ ３１／４９６
Ａ６１Ｋ ３１／５３７７
Ａ６１Ｋ ３１／４５４
Ａ６１Ｋ ３１／４０３
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
次の化学式（１）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物。【化1】
【化2】
【請求項2】
前記Ｃ1－Ｃ4アルキルエステルはメチルエステルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【請求項3】
前記化学式（１）で表される化合物は、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－２'－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレート、
メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２'－オキソ－［２，３'－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレート、
（２Ｚ，３Ｅ）－５'－フルオロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－２'－オン、
（２Ｚ，３Ｅ）－５'－フルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－２'－オン及び
（２Ｚ，３Ｅ）－５'－フルオロ－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－２'－オンからなる群から選択されるいずれか１つの化合物であることを特徴とする請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【請求項4】
（ａ）次の化学式（１）で表される化合物、その薬剤学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物と、（ｂ）薬学的に許容される担体とを含む、急性骨髄性白血病（Acute myeloid leukemia）又は転移性乳癌の予防又は治療用薬剤学的組成物。【化3】
【化4】
【請求項5】
前記化学式（１）で表される化合物は、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－２'－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレート、
メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２'－オキソ－［２，３'－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレート、
（２Ｚ，３Ｅ）－５'－フルオロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－２'－オン、
（２Ｚ，３Ｅ）－５'－フルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）
エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－２'－オン、及び
（２Ｚ，３Ｅ）－５'－フルオロ－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３'－ビインドリニリデン］－２'－オンからなる群から選択されるいずれか１つの化合物であることを特徴とする請求項４に記載の薬剤学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、インジルビン誘導体を有効成分として含む、急性骨髄性白血病又は転移性乳癌の予防又は治療用薬剤学的組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のクラスＩＩＩに属するＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、造血細胞（hepatopoietic cells）の生存と増殖に重要な役割を果たす［１］。ＦＬＴ３の活性化は、間質細胞により発現するＦＬＴ３リガンドが受容体に結合することにより始まる。その結果、ＦＬＴ３受容体二量化（dimerization）及び自己リン酸化がダウンストリームシグナル伝達経路を誘発するが、それらはＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ及びＳＴＡＴ５シグナル伝達経路に分類される［２］。７０～１００％のＡＭＬ細胞がＦＬＴ３受容体を高いレベルで発現する。白血病におけるＦＬＴ３の重要性が徹底的に調査され、ＦＬＴ３突然変異の個体群はＡＭＬ患者の約１／３であることが報告されている［３］。２つの主要タイプのＦＬＴ３突然変異が現在確認されている。それは、膜近傍領域（juxtamembrane region）におけるＩＴＤ（internal tandem duplication）突然変異と、キナーゼドメインの点突然変異である［４］。これらの突然変異は、化学療法の失敗及び再発の予後に悪影響を与える［５～８］。また、最近の研究によれば、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異がＡＭＬの進行及びＡＭＬの有効な治療学的ターゲットのためのドライバー突然変異（driver mutation）であることを示している［９，１０］。よって、多くの研究者と製薬会社がＦＬＴ３阻害剤を潜在的なＡＭＬ治療剤として見出す試みを重ねてきた。
【0003】
ｌｅｓｔａｕｒｔｉｎｉｂ［１１］、ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎ［１２］、ｔａｎｄｕｔｉｎｉｂ［１３］、ｓｏｒａｆｅｎｉｂ［１４］、ＫＷ－２４４９［１５］、ｑｕｉｚａｒｔｉｎｉｂ［１６］などのＦＬＴ３をターゲットにした様々な臨床候補が報告されている。そのうち、ｌｅｓｔａｕｒｔｉｎｉｂ及びｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎは、インドロカルバゾール誘導体であり、周知の多標的チロシンキナーゼ阻害剤である。ピペラジニル－キナゾリン化合物であるｔａｎｄｕｔｉｎｉｂは、ｃ－Ｋｉｔ及びＰＤＧＦＲだけでなく、ＦＬＴ３も阻害する。これらの阻害剤のほとんどは、初期目的では他のキナーゼをターゲットにしていたが、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異が抑制されることにより、ＡＭＬに変換された。また、乳癌治療剤として用いられていたＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂがＡＭＬ患者の治療にＦＬＴ３阻害剤として効果を発揮することが見出されたので、ＦＬＴ３阻害剤は乳癌と急性白血病の両方に用いることができるものと判断される。
【0004】
現在、ＦＬＴ３阻害剤のほとんどは、ｑｕｉｚａｒｔｉｎｉｂを除いて、主に効能や標的選択性が低いため好ましくないものと考えられている［１７～２０］。よって、現在、強力なＦＬＴ３キナーゼ阻害剤の開発が強く求められている。
【0005】
本明細書全体にわたって多くの論文及び特許文献が参照されており、その引用は次のとおりである。引用された論文及び特許文献の開示内容はその全体が本明細書に参照として組み込まれており、それにより本発明の属する技術分野の水準及び本発明の内容がより明確に説明される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【文献】[1] S.D. Lyman, L. James, J. Zappone, P.R. Sleath, M.P. Beckmann, T. Bird, Characterization of the protein encoded by the flt3 (flk2) receptor-like tyrosine kinase gene, Oncogene. 8 (1993) 815-822. https://www.scopus.com/inward/record.uri?eid=2-s2.0-0027409749&partnerID=40&md5=ca39f6e31e1f6fea56547e6d4398e79d.
【文献】[2] D.L. Stirewalt, J.P. Radich, The role of FLT3 in haematopoietic malignancies, Nat. Rev. Cancer. 3 (2003) 650-665. https://www.scopus.com/inward/record.uri?eid=2-s2.0-0141465061&partnerID=40&md5=74c5831b6ffd9c07c920cdb2268e0abf.
【文献】[3] M. Nakao, S. Yokota, T. Iwai, H. Kaneko, S. Horiike, K. Kashima, Y. Sonoda, T. Fujimoto, S. Misawa, Internal tandem duplication of the flt3 gene found in acute myeloid leukemia, Leukemia. 10 (1996) 1911-1918. https://www.scopus.com/inward/record.uri?eid=2-s2.0-0030451722&partnerID=40&md5=55bd8ef1a79110698496bfafe5d74459.
【文献】[4] Y. Yamamoto, H. Kiyoi, Y. Nakano, R. Suzuki, Y. Kodera, S. Miyawaki, N. Asou, K. Kuriyama, F. Yagasaki, C. Shimazaki, H. Akiyama, K. Saito, M. Nishimura, T. Motoji, K. Shinagawa, A. Takeshita, H. Saito, R. Ueda, R. Ohno, T. Naoe, Activating mutation of D835 within the activation loop of FLT3 in human hematologic malignancies, Blood. 97 (2001) 2434-2439. doi:10.1182/blood.V97.8.2434.
【文献】[5] C. Thiede, C. Steudel, B. Mohr, M. Schaich, U. Schakel, U. Platzbecker, M. Wermke, M. Bornhauser, M. Ritter, A. Neubauer, G. Ehninger, T. Illmer, Analysis of FLT3-activating mutations in 979 patients with acute myelogenous leukemia: association with FAB subtypes and identification of subgroups with poor prognosis, Blood. 99 (2002).
【文献】[6] S. Schnittger, C. Schoch, M. Dugas, W. Kern, P. Staib, C. Wuchter, H. Loffler, C.M. Sauerland, H. Serve, T. Buchner, T. Haferlach, W. Hiddemann, Analysis of FLT3 length mutations in 1003 patients with acute myeloid leukemia: correlation to cytogenetics, FAB subtype, and prognosis in the AMLCG study and usefulness as a marker for the detection of minimal residual disease, Blood. 100 (2002).
【文献】[7] F.M. Abu-Duhier, A.C. Goodeve, G.A. Wilson, M.A. Gari, I.R. Peake, D.C. Rees, E.A. Vandenberghe, P.R. Winship, J.T. Reilly, FLT3 internal tandem duplication mutations in adult acute myeloid leukaemia define a high-risk group, Br. J. Haematol. 111 (2000) 190-195. doi:10.1046/j.1365-2141.2000.02317.x.
【文献】[8] L.-Y. Shih, C.-F. Huang, J.-H. Wu, T.-L. Lin, P. Dunn, P.-N. Wang, M.-C. Kuo, C.-L. Lai, H.-C. Hsu, Internal tandem duplication of FLT3 in relapsed acute myeloid leukemia: a comparative analysis of bone marrow samples from 108 adult patients at diagnosis and relapse, Blood. 100 (2002).
【文献】[9] C.C. Smith, Q. Wang, C.-S. Chin, S. Salerno, L.E. Damon, M.J. Levis, A.E. Perl, K.J. Travers, S. Wang, J.P. Hunt, P.P. Zarrinkar, E.E. Schadt, A. Kasarskis, J. Kuriyan, N.P. Shah, Validation of ITD mutations in FLT3 as a therapeutic target in human acute myeloid leukaemia, Nature. 485 (2012) 260-263. doi:10.1038/nature11016.
【文献】[10] J.S. Welch, T.J. Ley, D.C. Link, C.A. Miller, D.E. Larson, D.C. Koboldt, L.D. Wartman, T.L. Lamprecht, F. Liu, J. Xia, C. Kandoth, R.S. Fulton, M.D. McLellan, D.J. Dooling, J.W. Wallis, K. Chen, C.C. Harris, H.K. Schmidt, J.M. Kalicki-Veizer, C. Lu, Q. Zhang, L. Lin, M.D. O'Laughlin, J.F. McMichael, K.D. Delehaunty, L.A. Fulton, V.J. Magrini, S.D. McGrath, R.T. Demeter, T.L. Vickery, J. Hundal, L.L. Cook, G.W. Swift, J.P. Reed, P.A. Alldredge, T.N. Wylie, J.R. Walker, M.A. Watson, S.E. Heath, W.D. Shannon, N. Varghese, R. Nagarajan, J.E. Payton, J.D. Baty, S. Kulkarni, J.M. Klco, M.H. Tomasson, P. Westervelt, M.J. Walter, T.A. Graubert, J.F. DiPersio, L. Ding, E.R. Mardis, R.K. Wilson, The Origin and Evolution of Mutations in Acute Myeloid Leukemia, Cell. 150 (2012) 264-278. doi:10.1016/j.cell.2012.06.023.
【文献】[11] B.D. Smith, M. Levis, M. Beran, F. Giles, H. Kantarjian, K. Berg, K.M. Murphy, T. Dauses, J. Allebach, D. Small, Single-agent CEP-701, a novel FLT3 inhibitor, shows biologic and clinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloid leukemia, Blood. 103 (2004).
【文献】[12] R.M. Stone, D.J. DeAngelo, V. Klimek, I. Galinsky, E. Estey, S.D. Nimer, W. Grandin, D. Lebwohl, Y. Wang, P. Cohen, E.A. Fox, D. Neuberg, J. Clark, D.G. Gilliland, J.D. Griffin, Patients with acute myeloid leukemia and an activating mutation in FLT3 respond to a small-molecule FLT3 tyrosine kinase inhibitor, PKC412, Blood. 105 (2004).
【文献】[13] D.J. DeAngelo, R.M. Stone, M.L. Heaney, S.D. Nimer, R.L. Paquette, R.B. Klisovic, M.A. Caligiuri, M.R. Cooper, J.-M. Lecerf, M.D. Karol, S. Sheng, N. Holford, P.T. Curtin, B.J. Druker, M.C. Heinrich, Phase 1 clinical results with tandutinib (MLN518), a novel FLT3 antagonist, in patients with acute myelogenous leukemia or high-risk myelodysplastic syndrome: safety, pharmacokinetics, and pharmacodynamics, Blood. 108 (2006).
【文献】[14] W. Zhang, M. Konopleva, Y. Shi, T. McQueen, D. Harris, X. Ling, Z. Estrov, A. Quintas-Cardama, D. Small, J. Cortes, M. Andreeff, Mutant FLT3: a direct target of sorafenib in acute myelogenous leukemia., J. Natl. Cancer Inst. 100 (2008) 184-98. doi:10.1093/jnci/djm328.
【文献】[15] Y. Shiotsu, H. Kiyoi, Y. Ishikawa, R. Tanizaki, M. Shimizu, H. Umehara, K. Ishii, Y. Mori, K. Ozeki, Y. Minami, A. Abe, H. Maeda, T. Akiyama, Y. Kanda, Y. Sato, S. Akinaga, T. Naoe, KW-2449, a novel multikinase inhibitor, suppresses the growth of leukemia cells with FLT3 mutations or T315I-mutated BCR/ABL translocation, Blood. 114 (2009).
【文献】[16] P.P. Zarrinkar, R.N. Gunawardane, M.D. Cramer, M.F. Gardner, D. Brigham, B. Belli, M.W. Karaman, K.W. Pratz, G. Pallares, Q. Chao, K.G. Sprankle, H.K. Patel, M. Levis, R.C. Armstrong, J. James, S.S. Bhagwat, AC220 is a uniquely potent and selective inhibitor of FLT3 for the treatment of acute myeloid leukemia (AML), Blood. 114 (2009).
【文献】[17] S. Knapper, A.K. Burnett, T. Littlewood, W.J. Kell, S. Agrawal, R. Chopra, R. Clark, M.J. Levis, D. Small, A phase 2 trial of the FLT3 inhibitor lestaurtinib (CEP701) as first-line treatment for older patients with acute myeloid leukemia not considered fit for intensive chemotherapy, Blood. 108 (2006).
【文献】[18] D.J. De Angelo, R.M. Stone, M.L. Heaney, S.D. Nimer, R. Paquette, R. Bruner-Klisovic, M.A. Caligiuri, M.R. Cooper, J.-M. LeCerf, G. Iyer, M.C. Heinrich, B.J. Druker, Phase II Evaluation of the Tyrosine Kinase Inhibitor MLN518 in Patients with Acute Myeloid Leukemia (AML) Bearing a FLT3 Internal Tandem Duplication (ITD) Mutation., Blood. 104 (2015).
【文献】[19] F. Ravandi, J.E. Cortes, D. Jones, S. Faderl, G. Garcia-Manero, M.Y. Konopleva, S. O’Brien, Z. Estrov, G. Borthakur, D. Thomas, S.R. Pierce, M. Brandt, A. Byrd, B.N. Bekele, K. Pratz, R. Luthra, M. Levis, M. Andreeff, H.M. Kantarjian, Phase I/II study of combination therapy with sorafenib, idarubicin, and cytarabine in younger patients with acute myeloid leukemia., J. Clin. Oncol. 28 (2010) 1856-62. doi:10.1200/JCO.2009.25.4888.
【文献】[20] K.W. Pratz, J. Cortes, G.J. Roboz, N. Rao, O. Arowojolu, A. Stine, Y. Shiotsu, A. Shudo, S. Akinaga, D. Small, J.E. Karp, M. Levis, A pharmacodynamic study of the FLT3 inhibitor KW-2449 yields insight into the basis for clinical response, Blood. 113 (2009).
【文献】[21] S.J. Choi, M.J. Moon, S.D. Lee, S.-U. Choi, S.-Y. Han, Y.-C. Kim, Indirubin derivatives as potent FLT3 inhibitors with anti-proliferative activity of acute myeloid leukemic cells, 2010. doi:10.1016/j.bmcl.2010.01.039.
【文献】[22] T.-C. Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol. Rev. 58 (2006).
【文献】[23] K. Pratz, M. Levis, Incorporating FLT3 inhibitors into acute myeloid leukemia treatment regimens, Leuk. Lymphoma. 49 (2008) 852-863. doi:10.1080/10428190801895352.
【文献】[24] J.T. DiPiro, R.L. Talbert, G.C. Yee, B.G. Wells, L.M. Posey, Pharmacotherapy A Pathophysiologic Approach 9/E, McGraw-Hill Education2014.
【文献】[25] D. Small, FLT3 mutations: biology and treatment., Hematol. Am. Soc. Hematol. Educ. Progr. 2006 (2006) 178-84. doi:10.1182/asheducation-2006.1.178.
【文献】[26] S.K. Tasian, J.A. Pollard, R. Aplenc, Molecular Therapeutic Approaches for Pediatric Acute Myeloid Leukemia, Front. Oncol. 4 (2014) 55. doi:10.3389/fonc.2014.00055.
【文献】[27] K.W. Pratz, S.M. Luger, Will FLT3 inhibitors fulfill their promise in acute meyloid leukemia, Curr. Opin. Hematol. 21 (2014) 72-78. doi:10.1097/MOH.0000000000000022.
【文献】Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明者らは、ＦＬＴ３キナーゼ阻害能を有する新規化合物を見出すべく鋭意研究を重ねた。その結果、所定のインジルビン誘導体化合物が効果的にＦＬＴ３キナーゼを阻害することを解明し、本発明を完成するに至った。
【0008】
よって、本発明は、ＦＬＴ３阻害能を有する新規化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物を提供することを目的とする。
【0009】
また、本発明は、急性骨髄性白血病（Acute myeloid leukemia）の予防又は治療用薬剤学的組成物を提供することを目的とする。
【0010】
さらに、本発明は、転移性乳癌の予防又は治療用薬剤学的組成物を提供することを目的とする。
【0011】
本発明の他の目的及び利点は、以下の詳細な説明、請求の範囲及び図面によりさらに明確になるであろう。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明の一態様は、次の化学式（１）で表される化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物を提供する。
【0013】
【化1】
【0014】
化学式（１）において、Ｒ1は水素、フルオロ又はヒドロキシであり、Ｒ2は水素、ハロゲン、ニトロ、カルボキシ、Ｃ1－Ｃ4アルキルエステル、又はハロゲンで置換もしくは非置換されたＣ1－Ｃ4アルコキシであり、Ｒ3は２－ブロモエチル、化学式（２）、（３）、（４）、（５）、（６），（７）、（８）又は（９）である。
【0015】
【化2】
【0016】
【化3】
【0017】
【化4】
【0018】
【化5】
【0019】
【化6】
【0020】
【化7】
【0021】
【化8】
【0022】
【化9】
【0023】
本発明者らは、新規ＦＬＴ３キナーゼ阻害剤を見出すべく鋭意研究を重ねた。その結果、所定のインジルビン誘導体化合物が効果的にＦＬＴ３キナーゼを阻害することを解明した。
【0024】
本発明の一実施例において、本発明のＲ3は、２－ブロモエチル、化学式（２）、（３）及び（４）からなる群から選択されるいずれか１つの置換基である。より好ましくは、本発明のＲ3は、化学式（２）、（３）及び（４）からなる群から選択されるいずれか１つの置換基であり、さらに好ましくは化学式（３）又は（４）である。
【0025】
【化10】
【0026】
【化11】
【0027】
【化12】
【0028】
本発明の一実施例において、本発明のＲ2はＣ1－Ｃ4アルキルエステルである。本発明の一実施例のＣ1－Ｃ4アルキルエステルに含まれるＣ1－Ｃ4アルキル置換基には、直鎖又は分枝鎖のＣ1－Ｃ4アルキル基が全て含まれ、具体的には、例えばメチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル又はｔｅｒｔ－ブチルであってもよい。本発明のＲ2がカルボキシ置換基である化合物に比べて、Ｒ2がアルキルエステル置換基である化合物において、ＦＬＴ３キナーゼに対するＩＣ５０値がさらに小さくなるので、ＦＬＴ３キナーゼ阻害にさらに効果的であることが分かる。
【0029】
本発明の一実施例において、本発明のＲ2はハロゲンである。具体的には、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素であってもよい。
【0030】
本発明の一実施例において、本発明のＲ2は、ハロゲンで置換もしくは非置換されたＣ1－Ｃ4アルコキシである。本発明の一実施例のＣ1－Ｃ4アルコキシに含まれるＣ1－Ｃ4アルキル置換基には、直鎖又は分枝鎖のＣ1－Ｃ4アルキル基が全て含まれ、具体的には、例えばメチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル又はｔｅｒｔ－ブチルであってもよい。具体的には、ハロゲンで置換されたＣ1－Ｃ4アルコキシはフッ化Ｃ1－Ｃ4アルコキシであってもよく、より具体的にはトリフルオロメトキシであってもよい。
【0031】
本発明の一具体例において、本発明のＣ1－Ｃ4アルキルエステルはメチルエステルである。
【0032】
本発明の一実施例において、本発明のＲ2はＣ1－Ｃ4アルキルエステルであり、Ｒ3は化学式（２）、（３）及び（４）からなる群から選択されるいずれか１つの置換基である。
【0033】
【化13】
【0034】
【化14】
【0035】
【化15】
【0036】
本発明の一具体例において、本発明の化学式（１）で表される化合物は、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－２'－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートジヒドロクロリド（化合物４）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（ヒドロキシイミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボキシレート（化合物１）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボキシレート（化合物２）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－アミノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートヒドロクロリド（化合物３）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートジヒドロクロリド（化合物５）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－モルホリノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートヒドロクロリド（化合物６）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボン酸（化合物８）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－アミノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボン酸ジヒドロクロリド（化合物９）、（２Ｚ，３Ｅ）－２’－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボン酸ジヒドロクロリド（化合物１０）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボン酸ジヒドロクロリド（化合物１１）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－モルホリノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートヒドロクロリド（化合物１２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－ヒドロキシ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１４）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－アミノエトキシ）イミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンヒドロクロリド（化合物１５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ニトロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１６）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－５'－ニトロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１７）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１８）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－５'－ニトロ－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンヒドロクロリド（化合物１９）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－５'－ニトロ－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンヒドロクロリド（化合物２０）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２１）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２３）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２４）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－アミノピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５，５’－ジフルオロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２６）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－モルホリノエトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２７）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３３）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３４）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物３５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物３６）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３７）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－クロロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物３８）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－クロロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物３９）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ブロモ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４０）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ブロモ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４１）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ヨード－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ヨード－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４３）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－（トリフルオロメトキシ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４４）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メトキシピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－（トリフルオロメトキシ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－メトキシ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４６）、及び（２Ｚ，３Ｅ）－５'－メトキシ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４７）からなる群から選択されるいずれか１つの化合物である。
【0037】
本発明の一実施例において、本発明の化学式（１）で表される化合物は、ＦＬＴ３阻害に対するＩＣ50値が１００ｎＭ以下である。より具体的には、化学式（１）で表される化合物は、ＦＬＴ３阻害に対するＩＣ50値が５０ｎＭ以下であり、さらに具体的には４０ｎＭ以下であり、さらに具体的には３５ｎＭ以下であり、さらに具体的には３０ｎＭ以下であり、さらに具体的には２５ｎＭ以下であり、さらに具体的には２０ｎＭ以下であり、さらに具体的には１５ｎＭ以下であり、さらに具体的には１０ｎＭ以下である。
【0038】
本発明の他の態様は、（ａ）化学式（１）で表される化合物、その薬剤学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物と、（ｂ）薬学的に許容される担体とを含む、急性骨髄性白血病（Acute myeloid leukemia）又は転移性乳癌（Metastatic breast cancer）の予防又は治療用薬剤学的組成物を提供する。
【0039】
【化16】
【0040】
化学式（１）において、Ｒ1は水素、フルオロ又はヒドロキシであり、Ｒ2は水素、ハロゲン、ニトロ、カルボキシ、Ｃ1－Ｃ4アルキルエステル、又はハロゲンで置換もしくは非置換されたＣ1－Ｃ4アルコキシであり、Ｒ3は水素、２－ブロモエチル、化学式（２）、（３）、（４）、（５）、（６），（７）、（８）又は（９）である。
【0041】
【化17】
【0042】
【化18】
【0043】
【化19】
【0044】
【化20】
【0045】
【化21】
【0046】
【化22】
【0047】
【化23】
【0048】
【化24】
【0049】
本発明の一実施例において、化学式（１）で表される化合物は、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－２'－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートジヒドロクロリド（化合物４）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（ヒドロキシイミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボキシレート（化合物１）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボキシレート（化合物２）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－アミノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートヒドロクロリド（化合物３）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートジヒドロクロリド（化合物５）、メチル－（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－モルホリノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートヒドロクロリド（化合物６）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（ヒドロキシイミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボン酸（化合物７）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５’－カルボン酸（化合物８）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－アミノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボン酸ジヒドロクロリド（化合物９）、（２Ｚ，３Ｅ）－２’－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボン酸ジヒドロクロリド（化合物１０）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボン酸ジヒドロクロリド（化合物１１）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－モルホリノエトキシ）イミノ）－２’－オキソ－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートヒドロクロリド（化合物１２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－ヒドロキシ－３－（ヒドロキシイミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オン（化合物１３）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－ヒドロキシ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１４）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－アミノエトキシ）イミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンヒドロクロリド（化合物１５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ニトロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１６）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－５'－ニトロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１７）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－ニトロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物１８）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－５'－ニトロ－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンヒドロクロリド（化合物１９）、（２Ｚ，３Ｅ）－５－フルオロ－５'－ニトロ－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンヒドロクロリド（化合物２０）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２１）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２３）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２４）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－アミノピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５，５’－ジフルオロ－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２６）、（２Ｚ，３Ｅ）－５，５’－ジフルオロ－３－（（２－モルホリノエトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物２７）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２８）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物２９）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物３０）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物３１）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３３）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３４）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物３５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンヒドロクロリド（化合物３６）、（２Ｚ，３Ｅ）－５’－フルオロ－３－（（２－（ピペリジン－４－イルアミノ）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２’－オンジヒドロクロリド（化合物３７）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－クロロ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物３８）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－クロロ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物３９）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ブロモ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４０）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ブロモ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４１）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ヨード－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４２）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－ヨード－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４３）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－（トリフルオロメトキシ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４４）、（２Ｚ，３Ｅ）－３－（（２－（４－メトキシピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－５'－（トリフルオロメトキシ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４５）、（２Ｚ，３Ｅ）－５'－メトキシ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４６）、及び（２Ｚ，３Ｅ）－５'－メトキシ－３－（（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－２'－オンジヒドロクロリド（化合物４７）からなる群から選択されるいずれか１つの化合物である。
【0050】
本発明の薬剤学的組成物は、有効成分以外に、薬剤学的として許容される担体を含む。本発明の薬剤学的組成物に含まれる薬剤学的に許容される担体は、製剤時において通常用いられるものであり、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の薬剤学的組成物は、前記成分以外に、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などをさらに含んでもよい。好ましい薬剤学的に許容される担体及び製剤は、非特許文献２８に詳細に記載されている。
【0051】
本発明の薬剤学的組成物の好適な投与量は、製剤化方法、投与方法、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食餌、投与時間、投与経路、排泄速度、反応感度などの要因によって様々に処方されてもよい。なお、本発明の薬剤学的組成物の投与量は、１日当たり１～１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）であることが好ましい。
【0052】
本発明の薬剤学的組成物は、経口又は非経口で投与することができ、非経口投与としては、皮膚への局所塗布、静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、経皮投与などが挙げられる。本発明の薬剤学的組成物が急性骨髄性白血病の治療のために用いられることを考慮すると、投与は静脈注射又は経口投与により行われることが好ましい。
【0053】
本発明の薬剤学的組成物は、当該発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法に従って、薬剤学的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することにより、単位用量形態に製造してもよく、多用量容器内に収納して製造してもよい。ここで、剤形は、オイル又は水性媒質中の溶液、懸濁液又は乳化液の形態でもよく、エキス剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤の形態でもよく、分散剤又は安定化剤をさらに含んでもよい。
【0054】
本発明の薬剤学的組成物は、経口投与してもよく、経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤などが含まれ、これらの固形製剤は、少なくとも１つの本発明の化合物に少なくとも１つの賦形剤、例えばデンプン、炭酸カルシウム、スクロース（sucrose）、ラクトース（lactose）、ゼラチンなどを混合して調製される。また、通常の賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤なども用いられる。経口用液体製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが挙げられ、通常用いられる通常の希釈剤である水、液体パラフィン以外にも種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが用いられてもよい。
【0055】
非経口用製剤としては、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、懸濁溶剤、乳剤、凍結乾燥剤、坐剤などが挙げられる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられてもよい。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（witepsol）、マクロゴール、ツイーン（tween）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセリン、ゼラチンなどが用いられてもよい。
【0056】
本発明の薬剤学的組成物が急性骨髄性白血病又は転移性乳癌の予防又は治療用組成物であることを考慮すると、非経口投与が好ましく、例えば静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与又は局部投与により投与することが好ましい。
【0057】
本発明のインジルビン誘導体は、薬剤学的に許容される塩の形態で用いられてもよく、塩としては、薬学的に許容される遊離酸（free acid）により形成された酸付加塩が挙げられる。酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜硝酸、亜リン酸などの無機酸類と、脂肪族モノ及びジカルボキシレート、フェニル置換されたアルカノエート、ヒドロキシアルカノエート及びアルカンジオエート、芳香族酸類、脂肪族及び芳香族スルホン酸類などの無毒性有機酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、酒石酸、フマル酸などの有機酸から得られる。このような薬学的に無毒な塩類としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩クロリド、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン－１，４－二酸塩、ヘキサン－１，６－二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、クロルベンゼンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β－ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩又はマンデル酸塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0058】
本発明による酸付加塩は、通常の方法、例えば化学式（１）のインジルビン誘導体を有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトン、塩化メチレン、アセトニトリルなどに溶解し、有機酸又は無機酸を加えて生成した沈殿物を濾過、乾燥して作製してもよく、溶媒と過剰量の酸を減圧蒸留し、その後乾燥するか、有機溶媒下で結晶化させて作製してもよい。
【0059】
また、塩基を用いて薬学的に許容される金属塩を形成することができる。アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩は、例えば化合物を過剰量のアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解し、溶解しない化合物の塩を濾過して濾液を蒸発、乾燥させて得る。ここで、金属塩としては、ナトリウム、カリウム又はカルシウム塩を用いることが製薬上好ましい。また、これに対応する銀塩は、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を好適な銀塩（例えば、硝酸銀）と反応させて得る。さらに、本発明には、化学式（１）で表されるインジルビン誘導体及びその薬学的に許容される塩だけでなく、それから作製できる溶媒和物、水和物、立体異性体などが全て含まれる。
【0060】
本発明のさらに他の態様は、（ａ）化学式（１）で表される化合物、その薬剤学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物を含む組成物を個体に投与するステップを含む、急性骨髄性白血病（Acute myeloid leukemia）又は転移性乳癌（Metastatic breast cancer）の予防又は治療方法を提供する。
【0061】
【化25】
【0062】
化学式（１）において、Ｒ1は水素、フルオロ又はヒドロキシであり、Ｒ2は水素、ハロゲン、ニトロ、カルボキシ、Ｃ1－Ｃ4アルキルエステル、又はハロゲンで置換もしくは非置換されたＣ1－Ｃ4アルコキシであり、Ｒ3は、水素、２－ブロモエチル、化学式（２）、（３）、（４）、（５）、（６），（７）、（８）又は（９）である。
【0063】
【化26】
【0064】
【化27】
【0065】
【化28】
【0066】
【化29】
【0067】
【化30】
【0068】
【化31】
【0069】
【化32】
【0070】
【化33】
【0071】
ここで用いられる用語は前述した通りである。本発明による製剤の投与対象となる個体とは、ヒトを含むあらゆる動物を意味する。前記動物は、ヒトだけでなく、それに類似した症状の治療を必要とするウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラクダ、カモシカ、イヌ、ネコなどの哺乳動物であってもよいが、これらに限定されるものではない。
【0072】
本発明における「投与」とは、任意の適切な方法で患者に本発明の薬学的組成物を導入することを意味し、本発明の組成物の投与経路は、標的組織に到達できるものであれば、経口又は非経口の様々な経路で投与することができる。本発明による製剤は、目的とする投与方法で様々な剤形に作製することができる。
【0073】
本発明のさらに他の態様は、急性骨髄性白血病（Acute myeloid leukemia）又は転移性乳癌（Metastatic breast cancer）の予防又は治療のための薬学的組成物の製造のための、化学式（１）で表される化合物、その薬剤学的に許容される塩、溶媒和物又は水和物の使用を提供する。
【0074】
【化34】
【0075】
化学式（１）において、Ｒ1は水素、フルオロ又はヒドロキシであり、Ｒ2は水素、ハロゲン、ニトロ、カルボキシ、Ｃ1－Ｃ4アルキルエステル、又はハロゲンで置換もしくは非置換されたＣ1－Ｃ4アルコキシであり、Ｒ3は、水素、２－ブロモエチル、化学式（２）、（３）、（４）、（５）、（６），（７）、（８）又は（９）である。
【0076】
【化35】
【0077】
【化36】
【0078】
【化37】
【0079】
【化38】
【0080】
【化39】
【0081】
【化40】
【0082】
【化41】
【0083】
【化42】
【発明の効果】
【0084】
以下、本発明の特徴及び利点を要約する。
【0085】
（ａ）本発明は、新規なＦＬＴ３阻害用組成物を提供する。
【0086】
（ｂ）本発明は、急性骨髄性白血病（Acute myeloid leukemia）又は転移性乳癌（Metastatic breast cancer）の予防又は治療用薬剤学的組成物を提供する。
【0087】
（ｃ）本発明の組成物は、ＦＬＴ３キナーゼの活性を効果的に阻害し、急性骨髄性白血病又は転移性乳癌を予防又は治療するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【0088】
【図1】ＬＤＤ－１９３７（化合物４）の構造及びＦＬＴ３キナーゼ活性に対する阻害効果を示す図である。ＡはＬＤＤ－１９３７の化学構造を示す図であり、Ｂは試験管内でのＦＬＴ３キナーゼ活性に対するＬＤＤ－１９３７の効果を示す図である。組換えＦＬＴ３のキナーゼ活性の阻害はＨＴＲＦ分析で測定した。キナーゼ阻害は陰性対照群として１％ＤＭＳＯを用いて計算した。データは３回の独立した実験の平均±ＳＥＭである。
【図2】ＬＤＤ－１９３７（化合物４）の生体内抗腫瘍効能を示す図である。ＭＶ－４－１１細胞をＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に接種した。腫瘍が１００ｍｍ3の平均体積に達したら、２１日間にわたって尾静脈に毎日５ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇのＬＤＤ－１９３７又はＰＢＳ（対照群）をマウスに注射した。Ａは腫瘍の大きさを測定して腫瘍体積を計算した結果を示す図である。Ｂは薬物投与後２１日目にマウスを屠殺し、腫瘍の重量を測定した結果を示す図である。対照群と５ｍｇ／ｋｇ群において解剖された腫瘤の代表的な画像を撮影した（Inset）。データは平均±ＳＥＭである。対照群と比較して＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１である。
【図3】ＬＤＤ－１９３７の投与期間中の体重変化を示す図である。実験開始から２１日間にわたって５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＬＤＤ－１９３７又はＰＢＳ（対照群）を投与したマウスの体重を測定した。
【図4】４種の化合物の４週間投与後の肝臓、腎臓、癌組織の重量変化を示す図である。ＬＤＤ－２６１４は化合物２１を示し、ＬＤＤ－２６３３は化合物２８を示し、ＬＤＤ－２６３４は化合物３４を示し、ＬＤＤ－２６３５は化合物３３を示す。
【図5】４種の化合物の４週間投与後の癌組織の体積変化を示す図である。ＬＤＤ－２６１４は化合物２１を示し、ＬＤＤ－２６３３は化合物２８を示し、ＬＤＤ－２６３４は化合物３４を示し、ＬＤＤ－２６３５は化合物３３を示す。
【図6】４種の化合物の４週間投与後の癌組織の大きさを測定した写真である。ＬＤＤ－２６１４は化合物２１を示し、ＬＤＤ－２６３３は化合物２８を示し、ＬＤＤ－２６３４は化合物３４を示し、ＬＤＤ－２６３５は化合物３３を示す。
【発明を実施するための形態】
【0089】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例はあくまで本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨に沿って本発明がこれらの実施例に限定されないことは、当該技術分野における通常の知識を有する者にとって自明である。
【実施例1】
【0090】
細胞培養
ＭＶ４；１１個のヒト急性骨髄性白血病細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ATCC, Rockville, MD, USA, CRL-9591）から購入し、１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシン及び４ｍＭＬ－グルタミン（Life Technology, Grand Island, NY）を補充したＩＭＤＭ培地（Sigma Co., St. Louis, MO, USA）で細胞を培養した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（転移性乳癌，ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２６）、Ｊｕｒｋａｔ（ヒト急性Ｔリンパ性白血病，ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５２）及びＫ－５６２（ヒト慢性骨髄性白血病，ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４３）細胞はＲＰＭＩ－１６４０（シグマ社）で培養し、ＭＣＦ７（ヒト乳房腺癌，ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２２）及びＰＣ－３（ヒト前立腺腺癌，ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１４３５）細胞は１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ（シグマ社）培地で培養した。培養した細胞を３℃、５％ＣＯ2で培養した。
ＭＶ４；１１個のヒト急性骨髄性白血病細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ATCC, Rockville, MD, USA, CRL-9591）から購入し、１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシン及び４ｍＭＬ－グルタミン（Life Technology, Grand Island, NY）を補充したＩＭＤＭ培地（Sigma Co., St. Louis, MO, USA）で細胞を培養した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（転移性乳癌，ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２６）、Ｊｕｒｋａｔ（ヒト急性Ｔリンパ性白血病，ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５２）及びＫ－５６２（ヒト慢性骨髄性白血病，ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４３）細胞はＲＰＭＩ－１６４０（シグマ社）で培養し、ＭＣＦ７（ヒト乳房腺癌，ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２２）及びＰＣ－３（ヒト前立腺腺癌，ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１４３５）細胞は１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ（シグマ社）培地で培養した。培養した細胞を３℃、５％ＣＯ2で培養した。
【0091】
細胞生存力はＥＺ－Ｃｙｔｏｘ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（DaeilLab, Korea）を用いてテトラゾリウム（tetrazolium）ベースの分析法で評価した。すなわち、２，０００～１５，０００個の細胞を１００μｌの培地で９６ウェルプレートに塗抹した。翌日、細胞を陰性対照群としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）と共に化合物で処理した。薬物添加３日（７２時間）後に、ＥＺ－Ｃｙｔｏｘ ｋｉｔ試薬１５μｌを９６ウェルプレートの各ウェルに入れ、加湿したＣＯ2インキュベータにて３７℃で４時間培養した。培養後に、Ｖｉｃｔｏｒ ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ ｒｅａｄｅｒ（Perkin Elmer, Waltham, MA, USA）を用いて４５０ｎｍの波長で光学密度（ＯＤ）を測定した。ＩＣ50は、Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０１（GraphPad, La Jolla, CA, USA）を用いて非線形回帰（nonlinear regression）により計算した。
【実施例2】
【0092】
化合物の合成及び保管
化合物１～化合物４７をデザインして合成した。
化合物１～化合物４７をデザインして合成した。
【0093】
２－１．合成模式図１
【0094】
【化43】
【0095】
試薬及び反応条件：(a) chloral hydrate, H2NOH・HCl, Na2SO4, water, H2SO4, 100℃, on; (b) Conc. H2SO4, 90℃, 25min; (c) H2SO4, 60℃, 1 hr.
【0096】
Ｅｔｈｙｌ ４－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏａｔｅをｃｈｌｏｒａｌ ｈｙｄｒａｔｅとＮａ2ＳＯ4水溶液中で一時間加熱した。その後、Ｈｙｄｒｏｘｙａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ物質と反応させ、冷却して得られた固体結果物をｄｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒでフィルターして生成物２を得た。得られた生成物を高濃度の硫酸条件下で９０℃に加熱し、得られた結果物を１Ｎ ＮａＯＨ水溶液で中和した。その後、ＥＡを用いて抽出し、ｒｏｔａｒｙ ｅｖａｐｏｒｔａｔｉｏｎして濃縮した。得られた混合物をＤｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒとＤＣＭの混合液で沈殿させ、その後フィルターして生成物３を得た。それを硫酸とｍｅｔｈａｎｏｌで反応させて沈殿物を得た（生成物４ａ，４ｂ）。
【0097】
２－２．合成模式図２
【0098】
【化44】
【0099】
試薬及び反応条件：(a) Na2CO3, methanol:water(2:1), RT, 3 h (b)Hydroxylamine hydrochloride, pyridine, reflux, 6h
【0100】
ｉｎｄｏｘｙｌ Ｎ，Ｏ－ｄｉａｃｅｔａｔｅ ４ａ－ｂ又はｉｎｄｏｘｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ５に、ＭｅＯＨに溶解したｉｓａｔｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅ ６ａ－ｉを添加して５分間攪拌した。次に、無水Ｎａ2ＣＯ3（２．５ｅｑ）を添加して常温で３時間攪拌した。その後、水を添加してｆｉｌｔｒａｔｉｏｎし、冷水で数回洗浄し、その後沈殿物の形態で５，５’位が置換された生成物７ａ、８ａ－ｉ、９ａ－ｂを得た。次に、得られた生成物をｐｙｒｉｄｉｎｅ（０．１Ｍ）に溶解し、ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（５ｅｑ）を添加して６時間ｒｅｆｌｕｘさせた。その後、混合物を冷却し、１Ｎ ＨＣｌを用いて酸性化し、生じた沈殿物をｆｉｔｒａｔｉｏｎし、水で数回洗浄して得た。最後に、ＤＣＭとｈｅｘａｎｅを用いたｓｏｌｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎにより精製して最終生成物１０ａ、１１ａ－ｉ、１２ａ－ｂを得た。
【0101】
２－３．合成模式図３
【0102】
【化45】
【0103】
試薬及び反応条件：(a) 2-(Boc-amino)ethyl bromide, K2CO3, DMF, RT, overnight; (b) 4N HCl in 1,4-dioxane, DCM, RT, 3 h; (c) 1N NaOH, 1,4-dioxane, 40 ℃, overnight (d) 1,2-dibromoethane, Et3N,DMF,RT, overnight; (e) amines i-vi, DMF, 50 ℃, overnight; (f) 4N HCl in 1,4-dioxane, DCM or THF, 0℃, 30 min or TFA, 0℃, 30 min
【0104】
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ誘導体の代表的な合成法を示す。
【0105】
３－１）ａｌｋｙｌ ａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体のａｌｋｙｌ ａｍｉｎａｔｉｏｎによる代表的な合成法を示す。
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体のａｌｋｙｌ ａｍｉｎａｔｉｏｎによる代表的な合成法を示す。
【0106】
ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体をＤＭＦ（１～４ｍｌ）に溶解し、２－（Ｂｏｃ－ａｍｉｎｏ）ｅｔｈｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ（１．２ｅｑ）、Ｋ2ＣＯ3（２～３ｅｑ）を添加して常温で一晩攪拌した。反応終了後に、ｒｏｔａｒｙ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎによりＤＭＦを濃縮し、その後水を添加して生じた沈殿物をｆｉｌｔｒａｔｉｏｎにより得た。その沈殿物をｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｙで精製してｉｎｄｉｒｕｂｉｎ誘導体生成物１３、１４ａ、１４ｂを得た。次に、得られたｉｎｄｉｒｕｂｉｎ誘導体をＤＣＭ（１ｍｌ）に溶解し、０℃で４Ｎ ＨＣｌ ｉｎ ｄｉｏｘａｎｅ（６～１８ｅｑ）を添加して常温で３時間攪拌した。反応終了後に、生じた沈殿物をｆｉｌｔｒａｔｉｏｎし、ＤＣＭを数回洗浄し、乾燥して清潔なｓｏｌｉｄとして得た。ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ誘導体をｓａｌｔの形態で得た（生成物１５，１６ａ，１６ｂ）。
【0107】
３－２）ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体のａｌｋｙｌａｔｉｏｎによる代表的な合成法を示す。
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体のａｌｋｙｌａｔｉｏｎによる代表的な合成法を示す。
【0108】
ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体をＤＭＦ（１５ｍｌ）に溶解し、１，２－ｄｉｂｒｏｍｏｅｔｈａｎｅ（１０ｅｑ）、ＴＥＡ（３～１０ｅｑ）を添加して常温で一晩攪拌した。反応終了後に、水を添加して生じた沈殿物をｆｉｌｔｒａｔｉｏｎし、水で数回洗浄し、乾燥して清潔なｓｏｌｉｄとして得た（生成物１７ａ，１８ａ－ｉ，１９ａ－ｂ）。次に、得られたｉｎｄｉｒｕｂｉｎ誘導体をＤＭＦに溶解し、ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ、ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ、ｐｙｒｒｏｒｉｄｉｎｅ、ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ試薬（１０～３０ｅｑ）を添加して５０℃で一晩攪拌した。反応終了後に、混合液に水を添加して生じたｓｏｌｉｄをｆｉｌｔｒａｔｉｏｎにより得て、水で数回洗浄した。その後、ａｃｅｔｏｎｅとＭｅＯＨで洗浄し、残留する不純物を除去して所望の生成物を得た（生成物２０ａ－ｃ，２１ａ，２２ａ－ｅ，２３ａ－ｅ，２４ａ－ｃ，２５ａ－ｄ，２６ａ－ｇ，２７ａ－ｂ，２８ａ－ｂ，２９ａ－ｂ，３０ａ－ｂ，３１ａ－ｂ）。次に、得られた生成物をＤＣＭ又はＴＨＦに溶解し、０℃で４Ｎ ＨＣｌ ｉｎ ｄｉｏｘａｎｅを添加して３０分間攪拌した。反応後に生成されたｓｏｌｉｄをｆｉｌｔｒａｔｉｏｎし、ＤＣＭで洗浄してｓａｌｔの形態の所望の生成物を得た（生成物２０ａｓ－ｃｓ，２１ａｓ，２２ａｓ－ｅｓ，２３ａｓ－ｅｓ，２４ａｓ－ｃｓ，２５ａｓ－ｄｓ，２６ａｓ－ｆｓ，２７ａｓ－ｂｓ，２８ａｓ－ｂｓ，２９ａｓ－ｂｓ，３０ａｓ－ｂｓ，３１ａｓ－ｂｓ）。また、化合物２６ｇｓはＴＦＡを用いて同様にｓａｌｔの形態で得た。
【0109】
３－３）ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ誘導体
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ誘導体の代表的な合成法を示す。
以下、合成模式図３により得られるｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ誘導体の代表的な合成法を示す。
【0110】
ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３’－ｏｘｉｍｅ誘導体（生成物１１ｄ，１４ｂ，１８ｄ，２４ａ－２４ｃ）を１，４－ｄｉｏｘａｎｅに溶解し、１Ｎ ＮａＯＨを添加して４０℃で一晩攪拌した。反応終了後に、常温で冷却し、１Ｎ ＨＣｌを添加して酸性化させた。その後、水を濃縮し、濃縮後に残ったＮａＣｌをＭｅＯＨでのｆｉｌｔｒａｔｉｏｎにより除去し、所望の生成物をｓｏｌｉｄとして得た（生成物３２，３３，３５，３１ａｓ－ｃｓ（salt））。また、得られた生成物３３をＤＣＭに溶解し、０℃で４Ｎ ＨＣｌ ｉｎ ｄｉｏｘａｎｅを添加して１０分間攪拌した。反応後に生成されたｓｏｌｉｄをｆｉｌｔｒａｔｉｏｎし、ＤＣＭで洗浄してｓａｌｔの形態の所望の生成物３４を得た。
【0111】
化合物合成の確認
生成物１１ｄ：Methyl (2Z,3E)-3-(hydroxyimino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate（化合物１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.76 - 11.80 (m, 1 H), 11.05 - 11.10 (m, 1 H), 9.17 - 9.21 (m, 1 H), 8.24 (d, J=8.01Hz, 1H), 7.73 - 7.78 (m, 1H), 7.36 - 7.42 (m, 2H), 7.00 - 7.06 (m, 1H), 6.92 - 6.98 (m, 1H), 3.79 - 3.86 (m, 3H).
生成物１８ｄ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-bromoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate（化合物２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.18(s, 1H), 9.36(d, J=1.6 Hz, 1H), 8.23 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.83 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.10(m, 1H), 7.01(d, J=8.0 Hz, 1H), 4.98(t, J=5.6 Hz, 2H), 4.06(t, J=5.6 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H).
生成物１６ｂ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-aminoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate hydrochloride（化合物３）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.66 (s, 1H),11.18 (s, 1H), 9.30 (d, J=1.60 Hz, 1H), 8.24 (d, J=7.78 Hz, 1H), 8.17 (brs, 2H), 7.80 (dd, J=8.13, 1.72 Hz, 1H), 7.41 - 7.48 (m, 2H), 7.04 (ddd, J=7.90, 5.72,2.63 Hz, 1H), 6.98 (d, J=8.01 Hz, 1H), 4.78 - 4.85 (m, 2H), 3.79 - 3.86 (m, 3H), 3.47 (d, J=4.81 Hz, 2H).
生成物２４ａｓ：Methyl (2Z,3E)-2'-oxo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate dihydrochloride（化合物４，ＬＤＤ－１９３７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.70(s, 1H), 11.23(s, 1H), 9.36(s, 1H), 8.27(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.84(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.07(m, 1H), 7.02(d, J=8.8 Hz, 1H), 5.03(m, 2H), 3.88(s, 3H), 3.30 (m, 10H, overlapped with DMSO).
生成物２４ｂｓ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate dihydrochloride（化合物５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.71(s, 1H), 11.22(s, 1H), 9.38(d, J=1.6 Hz, 1H), 8.24(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.84(dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.02(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.96(m, 2H), 3.87(s, 3H), 3.30(m, 10H, overlapped with water).
生成物２４ｃｓ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-morpholinoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate hydrochloride（化合物６）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.70(s, 1H), 11.22(s, 1H), 10.94(brs, 1H, morpholine N+-H), 9.36(s, 1H), 8.26(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.84(dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.49(m, 2H), 7.09(m, 1H), 7.02(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.08(brs, 2H), 3.97(m, 2H), 3.80(s, 3H), 3.81(m, 4H), 3.56(m, 2H), 3.18(m, 2H, partially overlapped with water).
生成物３２：(2Z,3E)-3-(hydroxyimino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid（化合物７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.23(s, 1H), 8.73 - 8.78 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.01(d, J=5.04 Hz, 1H), 7.49 (m, 2H),6.95(d, J=8.0 Hz, 1H).
生成物３５：(2Z,3E)-3-((2-bromoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid（化合物８）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.66(s, 1H), 11.11(s, 1H), 9.34(s, 1H), 8.22(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.63(m, 2H), 7.08(m, 1H), 6.97(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.96(t, J=5.6 Hz, 2H), 4.03(t, J=5.6 Hz, 2H).
生成物３４：(2Z,3E)-3-((2-aminoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid hydrochloride（化合物９）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.18(s, 1H), 9.35(d, J=1.2 Hz, 1H), 8.26(d, J=7.6 Hz, 1H), 8.17(s, 3H, H+), 7.82(dd,J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.00(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.83(t, J=5.2 Hz, 2H), 3.45 (t, J=5.2 Hz, 2H).
生成物３６ａｓ：(2Z,3E)-2'-oxo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid dihydrochloride（化合物１０，ＬＤＤ－１９４０）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.69(s, 1H), 11.17(s, 1H), 9.37(s, 1H), 8.91(brs, 2H, piperazine N+-H), 8.23(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.47(m, 2H), 7.07(m, 1H), 7.00(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.92(brs, 2H), 3.05(m, 10H, overlapped with water).
生成物３６ｂｓ：(2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid dihydrochloride（化合物１１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.16(s, 1H), 9.36(s, 1H), 8.23(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.47(m, 2H), 7.07(m, 1H), 6.99(d, J=8.0 Hz, 1H), 4.93(brs, 2H), 3.17(m, 10H, overlapped with water), 2.77 (s, 3H).
生成物３６ｃｓ：(2Z,3E)-3-((2-morpholinoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid hydrochloride（化合物１２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.67(s, 1H), 11.27(brs, 1H, morpholine N+-H), 11.18(s, 1H), 9.34(s, 1H), 8.25(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 6.99(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.06(brs, 2H), 3.96(m, 2H), 3.80(m, 4H), 3.53(m, 2H), 3.24(m, 2H, partially overlapped with water).
生成物１０ａ：(2Z,3E)-5-hydroxy-3-(hydroxyimino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one（化合物１３）
1H NMR(300MHz, DMSO-d6)δ (ppm); 13.87(1H, s, NOH), 11.78(1H, s, NH), 11.35(1H, s, N-H), 9.41(1H, d, J=2.8 Hz), 9.32(1H, s, O-H), 8.05(1H, dd, J=11.6, 2.8 Hz), 7.76(1H, d, J=3.2 Hz), 7.29(1H, d, J=11.6 Hz), 7.04(1H, d, J=11.2 Hz) 6.86(1H, dd, J=11.2, 3.2 Hz)
生成物２０ｂｓ：(2Z,3E)-5-hydroxy-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloirde（化合物１４）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.66(s, 1H), 11.46(s, 1H), 9.56(d, J=2.4 Hz, 1H), 9.51(brs, 1H), 8.10(dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.32(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.08(d, J=8.8 Hz, 1H) 6.93(dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 5.01(brs, 2H), 3.27(m, 10H, partially overlapped with water), 2.8(s, 3H).
生成物１６ａ：(2Z,3E)-3-((2-aminoethoxy)imino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloirde（化合物１５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm
11.66 (s, 1 H) 11.18 (s, 1 H) 9.30 (d, J=1.60 Hz, 1 H) 8.24 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 8.17 (br. s., 2 H) 7.80 (dd, J=8.13, 1.72 Hz, 1 H) 7.41 - 7.48 (m, 2 H) 7.04 (ddd, J=7.90, 5.72, 2.63 Hz, 1 H) 6.98 (d, J=8.01 Hz, 1 H) 4.78 - 4.85 (m, 2 H) 3.79 - 3.86 (m, 3 H) 3.47 (d, J=4.81 Hz, 2 H)
生成物２１ａｓ：(2Z,3E)-5'-nitro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物１６）
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.70(s, 1H), 11.25(s, 1H), 9.45 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.23 (d, J=8.4 Hz, 2H), 8.03 (m, 1H), 7.50 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.04 (m, 2H), 4.82 (m, 2 H) 3.81 (m, 3 H) 3.42 (m, 2 H)
生成物１５ａｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-5'-nitro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one（化合物１７）
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.66(s, 1H), 11.47(s, 1H), 9.51(d, J=2.4 Hz, 1H), 9.48(s, 1H), 8.24(brs, 3H), 8.09(dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.78(d, J=2.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.95 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 4.87 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.49 (t, J=4.4 Hz, 2H).
生成物２５ｂｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物１８）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 9.58(1H, d, J=2.1 Hz), 8.14(1H, m), 7.97(1H, dd, J=8.9 ,2.4 Hz), 7.57(1H, m), 7.41(1H, m), 7.08(1H, m), 4.87(2H, m), 2.96(2H, m), 2.38(4H, m), 2.15(3H, m).
生成物２５ｄｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-5'-nitro-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物１９）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.80(m, 1H), 10.79(s, 1H), 8.46(dd, J=11.3, 2.4 Hz, 1H), 8.19(m, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.90(m, 1H), 4.69(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.90(m, 2 H), 2.24(s, 2 H), 1.94(m, 1 H), 1.58(m, 3 H), 1.40(m, 2 H)
生成物２５ｃｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-5'-nitro-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２０）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 9.56(s, 1H), 8.07 d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.88(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.48(s, 1H), 7.34(s, 1H), 7.03(d, J=9.6 Hz, 1H), 4.84(m, 2H), 4.12(m, 2H).
生成物２６ａｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.80(m, 1H), 10.83(m, 1H), 8.44(m, 1H), 8.01(m, 1H), 7.49(m, 1H), 7.38(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.87(dd, J=4.9 Hz, 1H), 4.75(m, 2H), 2.90(m, 2H), 2.74(m, 3H), 2.47(m, 3H).
生成物２６ｂｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.77(m, 1H), 10.81(m, 1H), 8.44(m, 1H), 7.99(dd, J=8.9, 2.8 Hz, 1H), 7.47(dd, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 7.34(td, J=9.0, 2.8 Hz, 1H), 6.98(td, J=8.9, 2.8 Hz, 1H), 6.89(m, 1H), 4.74(m, 2H), 2.92(m, 2H), 2.38(m, 3H), 2.15(m, 3H).
生成物２６ｅｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２３）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.78(m, 1H), 10.79(brs, 1H), 8.41(dd, J=11.3, 2.8 Hz, 1H), 7.97(dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.47(dd, J=8.7, 4.4 Hz, 1H), 7.38(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.89(m, 1H), 4.69(t, J=6.0 Hz, 2H), 2.85(t, J=6.1 Hz, 2H), 1.51(q, J=5.5 Hz, 4H), 1.42 (m, 2H).
生成物２６ｄｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２４）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 10.86(m, 1H), 8.41(dd, J=11.3, 2.8 Hz, 1H), 7.92(dd, J=8.6, 2.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 7.34(td, J=9.1, 2.6 Hz, 1H), 6.97(td, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 6.89(m, 1H), 4.70(t, J=6.0 Hz, 1H), 3.00 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.60(m, 4H), 1.69 (dt, J=6.6, 3.1 Hz, 4H).
生成物２６ｇｓ：(2Z,3E)-3-((2-(4-aminopiperidin-1-yl)ethoxy)imino)-5,5'-difluoro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.32(dd, J=11.1, 2.6 Hz, 1H), 8.01(dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.48(d, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 7.40(m, 1H), 7.04(m, 1H), 6.88(dd, J=8.6, 4.9 Hz, 1H), 5.01(m, 2H), 3.37 (m, 4H), 2.96(dd, J=11.6 Hz, 2H), 2.15 (m, 4H), 1.73 (m, 1H).
生成物２６ｆｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(piperidin-4-ylamino)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２６）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.41(dd, J=11.3, 2.8 Hz, 1H), 7.96(dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.47(dd, J=8.9, 4.3 Hz, 1H), 7.38(1H, m), 6.97(dd, J=9.2, 2.8 Hz, 1H), 6.86(dd, J=8.6, 4.9 Hz, 1H), 4.69(t, J=6.0 Hz, 2H), 2.93(m, 4H), 2.15(m, 2H), 1.72(m, 2H), 1.33(m, 2H).
生成物２６ｃｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-morpholinoethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 9.59(d, J=2.4 Hz, 1H), 8.13(m, 1H), 7.97(d, J=6.1 Hz, 1H), 7.51(s, 1H), 7.37(s, 1H), 7.07(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.83(t, J=5.8 Hz, 1H), 3.17(s, 2H), 2.94(m, 4H), 1.53(m, 5H), 1.38(dd, J=5.3, 0.8 Hz, 3H).
生成物２３ａｓ：(2Z,3E)-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２８）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.84(1H, m, N-H), 10.78(1H, s, N-H), 8.62(1H,d, J=7.9 Hz), 8.17(1H, d, J=7.6 Hz), 7.46(2H, m), 7.15(1H ,td, J=7.6, 1.2 Hz), 7.03(1H, m), 6.99(1H, m), 6.90(1H, d, J=7.6 Hz), 4.69(2H, t, J=6.0 Hz), 3.46(4H, m), 2.84(2H, t, J=6.1 Hz), 2.69(2H, t, J=4.7 Hz), 2.45(2H, m).
生成物２３ｂｓ：(2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２９）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.70(1H, m, N-H), 10.78(1H, s), 8.64(1H, m), 8.17(1H, d, J=7.9 Hz), 7.42(1H, d, J=1.2 Hz), 7.16(1H, td, J=7.6, 1.2 Hz), 7.06(1H, m), 7.00(1H, m), 6.93(1H, m), 4.69(2H, t, J=6.1 Hz), 2.96(2H, m), 2.54(4H, m), 2.39(4H,m), 2.14(3H, s).
生成物２３ｄｓ：(2Z,3E)-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３０）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.61(1H, d, J=6.0 Hz), 8.16(1H, d, J=6.0 Hz), 7.43(1H, m), 7.15(1H, m), 7.03(1H, s), 6.97(1H, m), 6.89(1H, d, J=6.0 Hz), 4.69(2H, m), 2.86(2H, m), 2.08(4H, s), 1.52(3H, m), 1.43(2H, m).
生成物２３ｃｓ：(2Z,3E)-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.69(1H, s, br), 10.76(1H, s), 8.66(1H, m), 8.18(1H, m), 7.46(2H, m), 7.18(1H, m), 7.06(1H, m), 6.98(1H, td, J=7.7, 1.1 Hz), 6.91(1H, dd, J=7.7, 0.6 Hz), 4.69(2H, t, J=6.0 Hz), 2.99(2H, t, J=6.0 Hz), 2.59(4H, m), 1.69(4H, dt, J=6.9, 3.2 Hz).
生成物２３ｅｓ：(2Z,3E)-3-((2-(piperidin-4-ylamino)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.62(1H, d, J=7.6 Hz), 8.17(1H, d, J=7.7 Hz), 7.46(2H,m), 7.15(1H, td, J=7.56, 1.2 Hz), 7.03(1H, td, J=7.2, 1.6 Hz), 7.01(1H, m), 6.91(1H, d, J=7.7 Hz), 4.68(2H, t, J=6.1 Hz), 2.92(4H, m), 2.17(2H, m).
生成物２２ａｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３３）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.83(1H, m, N-H), 10.84(1H, m, N-H), 8.45(1H, dd, J=11.3, 2.8 Hz), 8.21(1H, m), 7.47(2H, m), 7.09(1H, m), 6.99(1H, m), 6.87(1H, dd, J=8.4, 5.0 Hz), 4.76(3H, m), 2.91(2H, m), 2.70(4H, m), 2.47(3H, m).
生成物２２ｂｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３４）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.84(1H, m, N-H), 10.81(1H, m, N-H), 8.47(1H, dd, J=11.3, 2.7 Hz), 8.20(1H, m), 7.46(2H, m), 7.13 (1H,m), 6.99(1H, m), 6.85(1H, dd, J=8.4, 5.0 Hz), 4.74(3H, m), 2.90(2H, m), 2.72(4H, m), 2.45(3H, m), 2.14(3H, m).
生成物２２ｄｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.80(m, 1H), 10.79(s, 1H), 8.46 (dd, J=11.3, 2.4 Hz, 1H), 8.19(m, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.90(m, 1H), 4.69(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.90(m, 2H), 2.24(s, 2H), 1.94(m, 1H), 1.58(m, 3H), 1.40(m, 2H).
生成物２２ｃｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３６）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 10.78(1H, s, br), 8.46(1H, dd, J=11.1, 2.6 Hz), 8.18(1H, m), 7.47(2H, m), 7.09(1H, m), 6.96(1H, dd, J=9.0, 2.6 Hz), 6.87(1H, dd, J=8.4, 5.0 Hz), 4.69(2H, t, J=6.1 Hz), 3.01(2H, t, J=6.0 Hz), 2.61(4H, m), 1.68(4H, dt, J=7.0, 3.2 Hz).
生成物２２ｅｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(piperidin-4-ylamino)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.48(1H, m), 8.17(1H, dd, J=7.6, 0.9 Hz), 7.46 (2H, m), 6.98(1H, d, J=2.8 Hz), 6.89(1H, m), 4.68(2H, t, J=6.1 Hz), 2.93 (4H, m), 2.15(2H, m).
生成物２７ａ：(2Z,3E)-5'-chloro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３８）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.83 (s, 1H), 10.84 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.24 (d,J=7.6Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.88 (d,J=7.9Hz, 1H), 4.69(t, J=6.0 Hz, 2H), 3.46(m, 4H), 2.84(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.69(t, J=4.7Hz, 2H), 2.45(m, 2H).
生成物２７ｂ：(2Z,3E)-5'-chloro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３９）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.85 (s, 1H), 10.82 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.19 (d,J=7.6Hz, 1H), 7.65 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.90 (d,J=7.9Hz, 1H), 4.74(m, 2H), 2.91(m, 2H), 2.40(m, 3H), 2.15(m, 3H).
生成物２８ａ：(2Z,3E)-5'-bromo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４０）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.82 (s, 1H) , 10.76 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.28 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H) 4.72(m, 3H), 2.87(m, 2H), 2.70(4H, m), 2.47(3H, m).
生成物２８ｂ：(2Z,3E)-5'-bromo-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４１）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.82 (s, 1H) , 10.77 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.28 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.74(m, 3H), 2.93(m, 2H), 2.75(m, 4H), 2.45(m, 3H), 2.17(m, 3H,).
生成物２９ａ：(2Z,3E)-5'-iodo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４２）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.83 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 3H), 7.06 (m, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H) 4.75(m, 3H), 2.85(m, 2H), 2.71(4H, m), 2.45(3H, m).
生成物２９ｂ：(2Z,3E)-5'-iodo-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４３）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.82 (s, 1H) , 10.77 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 (m, 3H), 7.08 (m, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.75(m, 3H), 2.90(m, 2H), 2.72(m, 4H), 2.42(m, 3H), 2.17(m, 3H,).
生成物３０ａ：(2Z,3E)-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-(trifluoromethoxy)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４４）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11. 73 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.27 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.41 (m, 2H), 6.99 (m, 2H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H) 4.73(m, 2H), 2.87(m, 2H), 2.76(m, 3H), 2.45(m, 3H).
生成物３０ｂ：(2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-(trifluoromethoxy)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４５）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.68 (s, 1H) 10.88 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.24 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.40 (2H, m), 7.01 (2H, m), 6.94 (1H, d, J = 8.4 Hz) 4.82(2H, m), 2.98(2H, m), 2.41(4H, m), 2.18(3H, m).
生成物３１ａ：(2Z,3E)-5'-methoxy-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４６）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.74 (s, 1H), 10.49 (s, 1H), 8.35 (d,J= 2.2 Hz, 1H), 8.22 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.02 (m, 1H), 6.75 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 6.70 (dd,J= 7.6 Hz, 2.4 Hz, , 1H), 4.75(m, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.90(m, 2H), 2.74(m, 3H), 2.47(m, 3H).
生成物３１ｂ：(2Z,3E)-5'-methoxy-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４７）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.76 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 8.38 (d,J= 2.1 Hz, 1H), 8.23 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.02 (m, 1H), 6.75 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 6.72 (m,1H), 4.75(m, 2H) , 3.72 (s, 3H), 2.94(m, 2H), 2.36(m, 3H), 2.17(m, 3H).
生成物１１ｄ：Methyl (2Z,3E)-3-(hydroxyimino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate（化合物１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.76 - 11.80 (m, 1 H), 11.05 - 11.10 (m, 1 H), 9.17 - 9.21 (m, 1 H), 8.24 (d, J=8.01Hz, 1H), 7.73 - 7.78 (m, 1H), 7.36 - 7.42 (m, 2H), 7.00 - 7.06 (m, 1H), 6.92 - 6.98 (m, 1H), 3.79 - 3.86 (m, 3H).
生成物１８ｄ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-bromoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate（化合物２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.18(s, 1H), 9.36(d, J=1.6 Hz, 1H), 8.23 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.83 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.10(m, 1H), 7.01(d, J=8.0 Hz, 1H), 4.98(t, J=5.6 Hz, 2H), 4.06(t, J=5.6 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H).
生成物１６ｂ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-aminoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate hydrochloride（化合物３）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.66 (s, 1H),11.18 (s, 1H), 9.30 (d, J=1.60 Hz, 1H), 8.24 (d, J=7.78 Hz, 1H), 8.17 (brs, 2H), 7.80 (dd, J=8.13, 1.72 Hz, 1H), 7.41 - 7.48 (m, 2H), 7.04 (ddd, J=7.90, 5.72,2.63 Hz, 1H), 6.98 (d, J=8.01 Hz, 1H), 4.78 - 4.85 (m, 2H), 3.79 - 3.86 (m, 3H), 3.47 (d, J=4.81 Hz, 2H).
生成物２４ａｓ：Methyl (2Z,3E)-2'-oxo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate dihydrochloride（化合物４，ＬＤＤ－１９３７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.70(s, 1H), 11.23(s, 1H), 9.36(s, 1H), 8.27(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.84(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.07(m, 1H), 7.02(d, J=8.8 Hz, 1H), 5.03(m, 2H), 3.88(s, 3H), 3.30 (m, 10H, overlapped with DMSO).
生成物２４ｂｓ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate dihydrochloride（化合物５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.71(s, 1H), 11.22(s, 1H), 9.38(d, J=1.6 Hz, 1H), 8.24(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.84(dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.02(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.96(m, 2H), 3.87(s, 3H), 3.30(m, 10H, overlapped with water).
生成物２４ｃｓ：Methyl (2Z,3E)-3-((2-morpholinoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylate hydrochloride（化合物６）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.70(s, 1H), 11.22(s, 1H), 10.94(brs, 1H, morpholine N+-H), 9.36(s, 1H), 8.26(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.84(dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.49(m, 2H), 7.09(m, 1H), 7.02(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.08(brs, 2H), 3.97(m, 2H), 3.80(s, 3H), 3.81(m, 4H), 3.56(m, 2H), 3.18(m, 2H, partially overlapped with water).
生成物３２：(2Z,3E)-3-(hydroxyimino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid（化合物７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.23(s, 1H), 8.73 - 8.78 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.01(d, J=5.04 Hz, 1H), 7.49 (m, 2H),6.95(d, J=8.0 Hz, 1H).
生成物３５：(2Z,3E)-3-((2-bromoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid（化合物８）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.66(s, 1H), 11.11(s, 1H), 9.34(s, 1H), 8.22(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.63(m, 2H), 7.08(m, 1H), 6.97(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.96(t, J=5.6 Hz, 2H), 4.03(t, J=5.6 Hz, 2H).
生成物３４：(2Z,3E)-3-((2-aminoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid hydrochloride（化合物９）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.18(s, 1H), 9.35(d, J=1.2 Hz, 1H), 8.26(d, J=7.6 Hz, 1H), 8.17(s, 3H, H+), 7.82(dd,J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.00(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.83(t, J=5.2 Hz, 2H), 3.45 (t, J=5.2 Hz, 2H).
生成物３６ａｓ：(2Z,3E)-2'-oxo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid dihydrochloride（化合物１０，ＬＤＤ－１９４０）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.69(s, 1H), 11.17(s, 1H), 9.37(s, 1H), 8.91(brs, 2H, piperazine N+-H), 8.23(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.47(m, 2H), 7.07(m, 1H), 7.00(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.92(brs, 2H), 3.05(m, 10H, overlapped with water).
生成物３６ｂｓ：(2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid dihydrochloride（化合物１１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.68(s, 1H), 11.16(s, 1H), 9.36(s, 1H), 8.23(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.47(m, 2H), 7.07(m, 1H), 6.99(d, J=8.0 Hz, 1H), 4.93(brs, 2H), 3.17(m, 10H, overlapped with water), 2.77 (s, 3H).
生成物３６ｃｓ：(2Z,3E)-3-((2-morpholinoethoxy)imino)-2'-oxo-[2,3'-biindolinylidene]-5'-carboxylic acid hydrochloride（化合物１２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.67(s, 1H), 11.27(brs, 1H, morpholine N+-H), 11.18(s, 1H), 9.34(s, 1H), 8.25(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 6.99(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.06(brs, 2H), 3.96(m, 2H), 3.80(m, 4H), 3.53(m, 2H), 3.24(m, 2H, partially overlapped with water).
生成物１０ａ：(2Z,3E)-5-hydroxy-3-(hydroxyimino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one（化合物１３）
1H NMR(300MHz, DMSO-d6)δ (ppm); 13.87(1H, s, NOH), 11.78(1H, s, NH), 11.35(1H, s, N-H), 9.41(1H, d, J=2.8 Hz), 9.32(1H, s, O-H), 8.05(1H, dd, J=11.6, 2.8 Hz), 7.76(1H, d, J=3.2 Hz), 7.29(1H, d, J=11.6 Hz), 7.04(1H, d, J=11.2 Hz) 6.86(1H, dd, J=11.2, 3.2 Hz)
生成物２０ｂｓ：(2Z,3E)-5-hydroxy-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloirde（化合物１４）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.66(s, 1H), 11.46(s, 1H), 9.56(d, J=2.4 Hz, 1H), 9.51(brs, 1H), 8.10(dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.32(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.08(d, J=8.8 Hz, 1H) 6.93(dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 5.01(brs, 2H), 3.27(m, 10H, partially overlapped with water), 2.8(s, 3H).
生成物１６ａ：(2Z,3E)-3-((2-aminoethoxy)imino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloirde（化合物１５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm
11.66 (s, 1 H) 11.18 (s, 1 H) 9.30 (d, J=1.60 Hz, 1 H) 8.24 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 8.17 (br. s., 2 H) 7.80 (dd, J=8.13, 1.72 Hz, 1 H) 7.41 - 7.48 (m, 2 H) 7.04 (ddd, J=7.90, 5.72, 2.63 Hz, 1 H) 6.98 (d, J=8.01 Hz, 1 H) 4.78 - 4.85 (m, 2 H) 3.79 - 3.86 (m, 3 H) 3.47 (d, J=4.81 Hz, 2 H)
生成物２１ａｓ：(2Z,3E)-5'-nitro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物１６）
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.70(s, 1H), 11.25(s, 1H), 9.45 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.23 (d, J=8.4 Hz, 2H), 8.03 (m, 1H), 7.50 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.04 (m, 2H), 4.82 (m, 2 H) 3.81 (m, 3 H) 3.42 (m, 2 H)
生成物１５ａｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-5'-nitro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one（化合物１７）
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.66(s, 1H), 11.47(s, 1H), 9.51(d, J=2.4 Hz, 1H), 9.48(s, 1H), 8.24(brs, 3H), 8.09(dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.78(d, J=2.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.95 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 4.87 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.49 (t, J=4.4 Hz, 2H).
生成物２５ｂｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-nitro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物１８）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 9.58(1H, d, J=2.1 Hz), 8.14(1H, m), 7.97(1H, dd, J=8.9 ,2.4 Hz), 7.57(1H, m), 7.41(1H, m), 7.08(1H, m), 4.87(2H, m), 2.96(2H, m), 2.38(4H, m), 2.15(3H, m).
生成物２５ｄｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-5'-nitro-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物１９）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.80(m, 1H), 10.79(s, 1H), 8.46(dd, J=11.3, 2.4 Hz, 1H), 8.19(m, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.90(m, 1H), 4.69(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.90(m, 2 H), 2.24(s, 2 H), 1.94(m, 1 H), 1.58(m, 3 H), 1.40(m, 2 H)
生成物２５ｃｓ：(2Z,3E)-5-fluoro-5'-nitro-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２０）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 9.56(s, 1H), 8.07 d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.88(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.48(s, 1H), 7.34(s, 1H), 7.03(d, J=9.6 Hz, 1H), 4.84(m, 2H), 4.12(m, 2H).
生成物２６ａｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.80(m, 1H), 10.83(m, 1H), 8.44(m, 1H), 8.01(m, 1H), 7.49(m, 1H), 7.38(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.87(dd, J=4.9 Hz, 1H), 4.75(m, 2H), 2.90(m, 2H), 2.74(m, 3H), 2.47(m, 3H).
生成物２６ｂｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.77(m, 1H), 10.81(m, 1H), 8.44(m, 1H), 7.99(dd, J=8.9, 2.8 Hz, 1H), 7.47(dd, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 7.34(td, J=9.0, 2.8 Hz, 1H), 6.98(td, J=8.9, 2.8 Hz, 1H), 6.89(m, 1H), 4.74(m, 2H), 2.92(m, 2H), 2.38(m, 3H), 2.15(m, 3H).
生成物２６ｅｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２３）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.78(m, 1H), 10.79(brs, 1H), 8.41(dd, J=11.3, 2.8 Hz, 1H), 7.97(dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.47(dd, J=8.7, 4.4 Hz, 1H), 7.38(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.89(m, 1H), 4.69(t, J=6.0 Hz, 2H), 2.85(t, J=6.1 Hz, 2H), 1.51(q, J=5.5 Hz, 4H), 1.42 (m, 2H).
生成物２６ｄｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２４）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 10.86(m, 1H), 8.41(dd, J=11.3, 2.8 Hz, 1H), 7.92(dd, J=8.6, 2.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 7.34(td, J=9.1, 2.6 Hz, 1H), 6.97(td, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 6.89(m, 1H), 4.70(t, J=6.0 Hz, 1H), 3.00 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.60(m, 4H), 1.69 (dt, J=6.6, 3.1 Hz, 4H).
生成物２６ｇｓ：(2Z,3E)-3-((2-(4-aminopiperidin-1-yl)ethoxy)imino)-5,5'-difluoro-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.32(dd, J=11.1, 2.6 Hz, 1H), 8.01(dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.48(d, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 7.40(m, 1H), 7.04(m, 1H), 6.88(dd, J=8.6, 4.9 Hz, 1H), 5.01(m, 2H), 3.37 (m, 4H), 2.96(dd, J=11.6 Hz, 2H), 2.15 (m, 4H), 1.73 (m, 1H).
生成物２６ｆｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-(piperidin-4-ylamino)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２６）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.41(dd, J=11.3, 2.8 Hz, 1H), 7.96(dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.47(dd, J=8.9, 4.3 Hz, 1H), 7.38(1H, m), 6.97(dd, J=9.2, 2.8 Hz, 1H), 6.86(dd, J=8.6, 4.9 Hz, 1H), 4.69(t, J=6.0 Hz, 2H), 2.93(m, 4H), 2.15(m, 2H), 1.72(m, 2H), 1.33(m, 2H).
生成物２６ｃｓ：(2Z,3E)-5,5'-difluoro-3-((2-morpholinoethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物２７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 9.59(d, J=2.4 Hz, 1H), 8.13(m, 1H), 7.97(d, J=6.1 Hz, 1H), 7.51(s, 1H), 7.37(s, 1H), 7.07(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.83(t, J=5.8 Hz, 1H), 3.17(s, 2H), 2.94(m, 4H), 1.53(m, 5H), 1.38(dd, J=5.3, 0.8 Hz, 3H).
生成物２３ａｓ：(2Z,3E)-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２８）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.84(1H, m, N-H), 10.78(1H, s, N-H), 8.62(1H,d, J=7.9 Hz), 8.17(1H, d, J=7.6 Hz), 7.46(2H, m), 7.15(1H ,td, J=7.6, 1.2 Hz), 7.03(1H, m), 6.99(1H, m), 6.90(1H, d, J=7.6 Hz), 4.69(2H, t, J=6.0 Hz), 3.46(4H, m), 2.84(2H, t, J=6.1 Hz), 2.69(2H, t, J=4.7 Hz), 2.45(2H, m).
生成物２３ｂｓ：(2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物２９）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.70(1H, m, N-H), 10.78(1H, s), 8.64(1H, m), 8.17(1H, d, J=7.9 Hz), 7.42(1H, d, J=1.2 Hz), 7.16(1H, td, J=7.6, 1.2 Hz), 7.06(1H, m), 7.00(1H, m), 6.93(1H, m), 4.69(2H, t, J=6.1 Hz), 2.96(2H, m), 2.54(4H, m), 2.39(4H,m), 2.14(3H, s).
生成物２３ｄｓ：(2Z,3E)-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３０）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.61(1H, d, J=6.0 Hz), 8.16(1H, d, J=6.0 Hz), 7.43(1H, m), 7.15(1H, m), 7.03(1H, s), 6.97(1H, m), 6.89(1H, d, J=6.0 Hz), 4.69(2H, m), 2.86(2H, m), 2.08(4H, s), 1.52(3H, m), 1.43(2H, m).
生成物２３ｃｓ：(2Z,3E)-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３１）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.69(1H, s, br), 10.76(1H, s), 8.66(1H, m), 8.18(1H, m), 7.46(2H, m), 7.18(1H, m), 7.06(1H, m), 6.98(1H, td, J=7.7, 1.1 Hz), 6.91(1H, dd, J=7.7, 0.6 Hz), 4.69(2H, t, J=6.0 Hz), 2.99(2H, t, J=6.0 Hz), 2.59(4H, m), 1.69(4H, dt, J=6.9, 3.2 Hz).
生成物２３ｅｓ：(2Z,3E)-3-((2-(piperidin-4-ylamino)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３２）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.62(1H, d, J=7.6 Hz), 8.17(1H, d, J=7.7 Hz), 7.46(2H,m), 7.15(1H, td, J=7.56, 1.2 Hz), 7.03(1H, td, J=7.2, 1.6 Hz), 7.01(1H, m), 6.91(1H, d, J=7.7 Hz), 4.68(2H, t, J=6.1 Hz), 2.92(4H, m), 2.17(2H, m).
生成物２２ａｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３３）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.83(1H, m, N-H), 10.84(1H, m, N-H), 8.45(1H, dd, J=11.3, 2.8 Hz), 8.21(1H, m), 7.47(2H, m), 7.09(1H, m), 6.99(1H, m), 6.87(1H, dd, J=8.4, 5.0 Hz), 4.76(3H, m), 2.91(2H, m), 2.70(4H, m), 2.47(3H, m).
生成物２２ｂｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３４）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.84(1H, m, N-H), 10.81(1H, m, N-H), 8.47(1H, dd, J=11.3, 2.7 Hz), 8.20(1H, m), 7.46(2H, m), 7.13 (1H,m), 6.99(1H, m), 6.85(1H, dd, J=8.4, 5.0 Hz), 4.74(3H, m), 2.90(2H, m), 2.72(4H, m), 2.45(3H, m), 2.14(3H, m).
生成物２２ｄｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(piperidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３５）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 11.80(m, 1H), 10.79(s, 1H), 8.46 (dd, J=11.3, 2.4 Hz, 1H), 8.19(m, 1H), 7.48(m, 2H), 7.08(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.90(m, 1H), 4.69(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.90(m, 2H), 2.24(s, 2H), 1.94(m, 1H), 1.58(m, 3H), 1.40(m, 2H).
生成物２２ｃｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one hydrochloride（化合物３６）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 10.78(1H, s, br), 8.46(1H, dd, J=11.1, 2.6 Hz), 8.18(1H, m), 7.47(2H, m), 7.09(1H, m), 6.96(1H, dd, J=9.0, 2.6 Hz), 6.87(1H, dd, J=8.4, 5.0 Hz), 4.69(2H, t, J=6.1 Hz), 3.01(2H, t, J=6.0 Hz), 2.61(4H, m), 1.68(4H, dt, J=7.0, 3.2 Hz).
生成物２２ｅｓ：(2Z,3E)-5'-fluoro-3-((2-(piperidin-4-ylamino)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３７）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm); 8.48(1H, m), 8.17(1H, dd, J=7.6, 0.9 Hz), 7.46 (2H, m), 6.98(1H, d, J=2.8 Hz), 6.89(1H, m), 4.68(2H, t, J=6.1 Hz), 2.93 (4H, m), 2.15(2H, m).
生成物２７ａ：(2Z,3E)-5'-chloro-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３８）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.83 (s, 1H), 10.84 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.24 (d,J=7.6Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.88 (d,J=7.9Hz, 1H), 4.69(t, J=6.0 Hz, 2H), 3.46(m, 4H), 2.84(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.69(t, J=4.7Hz, 2H), 2.45(m, 2H).
生成物２７ｂ：(2Z,3E)-5'-chloro-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物３９）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.85 (s, 1H), 10.82 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.19 (d,J=7.6Hz, 1H), 7.65 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.90 (d,J=7.9Hz, 1H), 4.74(m, 2H), 2.91(m, 2H), 2.40(m, 3H), 2.15(m, 3H).
生成物２８ａ：(2Z,3E)-5'-bromo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４０）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.82 (s, 1H) , 10.76 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.28 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H) 4.72(m, 3H), 2.87(m, 2H), 2.70(4H, m), 2.47(3H, m).
生成物２８ｂ：(2Z,3E)-5'-bromo-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４１）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.82 (s, 1H) , 10.77 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.28 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.74(m, 3H), 2.93(m, 2H), 2.75(m, 4H), 2.45(m, 3H), 2.17(m, 3H,).
生成物２９ａ：(2Z,3E)-5'-iodo-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４２）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.83 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 3H), 7.06 (m, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H) 4.75(m, 3H), 2.85(m, 2H), 2.71(4H, m), 2.45(3H, m).
生成物２９ｂ：(2Z,3E)-5'-iodo-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４３）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.82 (s, 1H) , 10.77 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 (m, 3H), 7.08 (m, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.75(m, 3H), 2.90(m, 2H), 2.72(m, 4H), 2.42(m, 3H), 2.17(m, 3H,).
生成物３０ａ：(2Z,3E)-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-(trifluoromethoxy)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４４）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11. 73 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.27 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.41 (m, 2H), 6.99 (m, 2H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H) 4.73(m, 2H), 2.87(m, 2H), 2.76(m, 3H), 2.45(m, 3H).
生成物３０ｂ：(2Z,3E)-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-5'-(trifluoromethoxy)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４５）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.68 (s, 1H) 10.88 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.24 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.40 (2H, m), 7.01 (2H, m), 6.94 (1H, d, J = 8.4 Hz) 4.82(2H, m), 2.98(2H, m), 2.41(4H, m), 2.18(3H, m).
生成物３１ａ：(2Z,3E)-5'-methoxy-3-((2-(piperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４６）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.74 (s, 1H), 10.49 (s, 1H), 8.35 (d,J= 2.2 Hz, 1H), 8.22 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.02 (m, 1H), 6.75 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 6.70 (dd,J= 7.6 Hz, 2.4 Hz, , 1H), 4.75(m, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.90(m, 2H), 2.74(m, 3H), 2.47(m, 3H).
生成物３１ｂ：(2Z,3E)-5'-methoxy-3-((2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)imino)-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one dihydrochloride（化合物４７）
1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ(ppm) 11.76 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 8.38 (d,J= 2.1 Hz, 1H), 8.23 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.02 (m, 1H), 6.75 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 6.72 (m,1H), 4.75(m, 2H) , 3.72 (s, 3H), 2.94(m, 2H), 2.36(m, 3H), 2.17(m, 3H).
【0112】
得られた化合物をＤＭＳＯ（Fisher, Waltham, MA, USA）に１０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で溶解し、－２０℃で保管した。
【実施例3】
【0113】
Ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ分析
ＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害は、ＨＴＲＦ（homogeneous, time-resolved fluorescence）分析を用いて測定した。ＦＬＴ３キナーゼドメインを含有する組換えタンパク質は、Ｃａｒｎａ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Japan）から購入した。最適な酵素、ＡＴＰ及び基質濃度は、メーカーの指示に従ってＨＴＲＦ ＫｉｎＥＡＳＥキット（Cisbio, France）により確立した。ＦＬＴ３酵素をキナーゼ反応バッファ（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０），５００μＭ ＡＴＰ，０．１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム，５ｍＭ ＭｇＣｌ2，１ｍＭ ＤＴＴ，０．０１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ），０．０２％ＮａＮ3）中で、希釈した化合物及びペプチド基質と順次混合した。検出用試薬を添加し、その後Ｖｉｃｔｏｒ ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ ｒｅａｄｅｒ（Perkin Elmer, Waltham, MA, USA）でＴＲ－ＦＲＥＴ信号を測定した。ＩＣ50は、Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０１（GraphPad）を用いて非線形回帰分析（nonlinear regression）により計算した。ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ｃＭＥＴ及びＲＥＴ ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ分析も、ＨＴＲＦ分析を用いて行った。
ＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害は、ＨＴＲＦ（homogeneous, time-resolved fluorescence）分析を用いて測定した。ＦＬＴ３キナーゼドメインを含有する組換えタンパク質は、Ｃａｒｎａ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Japan）から購入した。最適な酵素、ＡＴＰ及び基質濃度は、メーカーの指示に従ってＨＴＲＦ ＫｉｎＥＡＳＥキット（Cisbio, France）により確立した。ＦＬＴ３酵素をキナーゼ反応バッファ（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０），５００μＭ ＡＴＰ，０．１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム，５ｍＭ ＭｇＣｌ2，１ｍＭ ＤＴＴ，０．０１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ），０．０２％ＮａＮ3）中で、希釈した化合物及びペプチド基質と順次混合した。検出用試薬を添加し、その後Ｖｉｃｔｏｒ ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ ｒｅａｄｅｒ（Perkin Elmer, Waltham, MA, USA）でＴＲ－ＦＲＥＴ信号を測定した。ＩＣ50は、Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０１（GraphPad）を用いて非線形回帰分析（nonlinear regression）により計算した。ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ｃＭＥＴ及びＲＥＴ ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ分析も、ＨＴＲＦ分析を用いて行った。
【0114】
ＩＲＡＫ４に対するＩｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ分析は、ＵＬｉｇｈｔ－ｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ３８９）ペプチド（リン酸化モチーフＦＬＧＦＴＹＶＡＰ）を含むＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ Ｋｉｎａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Perkin Elmer）を用いて行った。分析は、順次希釈した化合物と５０ｎＭ ＵＬｉｇｈｔ－ｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ３８９）ペプチド及び５００μＭ ＡＴＰを混合した酵素からなり、キナーゼバッファ（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、１ｍＭ ＥＧＴＡ、２ｍＭ ＤＴＴ及び０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）で予め希釈しておいたものを用いた。キナーゼ反応は、２５℃で９０分間インキュベーションし、１０ｍＭ ＥＤＴＡを添加して中断した。ホスホ基質の検出のために、検出バッファ（detection buffer）で希釈したＥｕ－抗－ホスホ－ｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ３８９）抗体を２ｎＭの最終濃度で添加し、反応物を２５℃で１時間インキュベーションした。信号をＥｎＶｉｓｉｏｎ ｍｕｌｔｉ－ｌａｂｅｌ ｒｅａｄｅｒで測定した。
【実施例4】
【0115】
マウス腫瘍異種移植（Xenograft MV4;11）
ＭＶ４；１１細胞を雌ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕ（無胸腺ヌード）マウス（マウス１匹当たり５×１０6細胞）の側腹部に皮下接種した。腫瘍の平均体積が１００ｍｍ3に達したら（概して接種後１４日目）、マウスをランダムに３群に分け（対照群1群当たりｎ＝１０，５ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ １群当たりｎ＝６）、ＰＢＳ中５ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇのＬＤＤ－１９３７を２０ｍｌ／ｋｇで、又は純ＰＢＳ（対照群）を尾静脈内に注入した。薬物又は対照群のＰＢＳを２１日間にわたって毎日注入した。腫瘍の大きさを２１日間に週２回測定し、腫瘍の体積を次の式で計算した。
ＭＶ４；１１細胞を雌ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕ（無胸腺ヌード）マウス（マウス１匹当たり５×１０6細胞）の側腹部に皮下接種した。腫瘍の平均体積が１００ｍｍ3に達したら（概して接種後１４日目）、マウスをランダムに３群に分け（対照群1群当たりｎ＝１０，５ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ １群当たりｎ＝６）、ＰＢＳ中５ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇのＬＤＤ－１９３７を２０ｍｌ／ｋｇで、又は純ＰＢＳ（対照群）を尾静脈内に注入した。薬物又は対照群のＰＢＳを２１日間にわたって毎日注入した。腫瘍の大きさを２１日間に週２回測定し、腫瘍の体積を次の式で計算した。
【0116】
Ｖ（体積）＝Ｘ（長さ）×Ｄ（幅）2／２
【0117】
２１日後にマウスを屠殺し、腫瘍の重量を測定した。
【実施例5】
【0118】
マウス腫瘍異種移植（Xenograft MDA-MB-231）
Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕ ｍｉｃｅ（Female）６－ｗｅｅｋｓ－ｏｌｄを中央実験動物から購入して用いた。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株をＡＴＣＣから購入して用いた。Ｔｕｍｏｒ ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌを作製するために、１匹当たりのＩｎｏｃｕｌａｔｉｏｎした細胞の数を１×１０7個とし、溶媒としてｃｏｒｎｉｎｇ ｍａｔｒｉｇｅｌ／ＰＢＳ ｍｉｘ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １００ｕＬを用いた。薬物の投与は、ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅの大きさが２００～３００ｍｍ3になったときに開始した（Ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅの測定は毎日行うことを原則とし、ｖｏｌｕｍｅは次の式で計算した）。
Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕ ｍｉｃｅ（Female）６－ｗｅｅｋｓ－ｏｌｄを中央実験動物から購入して用いた。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株をＡＴＣＣから購入して用いた。Ｔｕｍｏｒ ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌを作製するために、１匹当たりのＩｎｏｃｕｌａｔｉｏｎした細胞の数を１×１０7個とし、溶媒としてｃｏｒｎｉｎｇ ｍａｔｒｉｇｅｌ／ＰＢＳ ｍｉｘ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １００ｕＬを用いた。薬物の投与は、ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅの大きさが２００～３００ｍｍ3になったときに開始した（Ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅの測定は毎日行うことを原則とし、ｖｏｌｕｍｅは次の式で計算した）。
【0119】
Ｖ（体積）＝Ｘ（長さ）×Ｄ（幅）2／２
【0120】
候補物質であるＬＤＤ－２６１４（化合物２１）、２６３３（化合物２８）、２６３４（化合物３４）、２６３５（化合物３３）は２０ｍｇ／ｋｇ／ｐ．ｏ／ｄａｙ、対照物質であるＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎは５ｍｇ／ｋｇ／ｉ．ｐ（once a week）で４週間投与した。
【0121】
実験結果
１．ＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害剤としてのＬＤＤ－１９３７
表１はＦＬＴ３及びＭＶ４；１１に対する阻害活性を示す表である。
１．ＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害剤としてのＬＤＤ－１９３７
表１はＦＬＴ３及びＭＶ４；１１に対する阻害活性を示す表である。
【0122】
【化46】
【0123】
【表1】
【0124】
表２は化合物１３～３７のＦＬＴ３、ＭＶ４；１１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１に対する阻害活性を示す表である。
【0125】
【表2】
【0126】
各化合物の活性は３回にわたって試験した。
【0127】
本発明者らは、以前、急性骨髄性白血病細胞の成長を効果的に阻害する強力なＦＬＴ３阻害剤として、一連の５－置換されたインジルビン誘導体を報告した［２１］。インジルビンは、強力なキナーゼ阻害効果を有するが、水に対する低い溶解度が生理的な問題を発生させる。これらインジルビン誘導体の溶解度の問題を解決するために、本発明者らは分子上に親水性官能基を有する新たなアナログを考案し、合成した。
【0128】
近年、本発明者らは、ＦＬＴ３－ＩＴＤを発現するヒト白血病細胞株であるＭＶ４；１１に対する抗増殖活性が欠如したＦＬＴ３キナーゼ（ＩＣ50＝８ｎＭ）を５－カルボキシインジルビン誘導体７が強力に阻害することを見出した（参照：表１）。興味深いことに、対応する５－カルボキシエステルアナログ１は、ＦＬＴ３阻害活性が非常に弱いにもかかわらず、ＭＶ４；１１細胞（ＩＣ50＝４１ｎＭ）に対して強力な抗増殖活性を示した。よって、本発明者らは、インジルビン骨格の３'位におけるさらなる誘導体化により、ＦＬＴ３キナーゼとＭＶ４；１１の成長阻害活性を増加させるための最適化を試みた。
【0129】
他のキナーゼに対するインジルビンオキシム誘導体の３'－アルキル置換は、より高い効能及び水溶解度のような利点を与えることが報告されている。ＦＬＴ３阻害剤として５－カルボン酸又はエステル基を有する３'－アルキル置換されたインジルビンオキシム誘導体の報告はなかったので、本発明者らは、３'オキシム位におけるアルキル置換の利点を得るべくこのようなアナログを合成した。３'－置換されたインジルビンアナログの阻害効果を表１に示す。一般に、アルキル置換された化合物は、ＦＬＴ３及びＭＶ４；１１の両方に対して、化合物１及び７よりも向上した阻害活性を示す。５－エステル置換された化合物１のアナログは、ＦＬＴ３キナーゼだけでなく、ＭＶ４；１１細胞に対する強力な阻害活性を示した。しかし、５－カルボキシ誘導体（９～１２）は、ＦＬＴ３キナーゼに対する強力な阻害活性にもかかわらず、５－エステルアナログ（３～６）よりも若干低い阻害活性を示した。ＦＬＴ３及びＭＶ４；１１阻害効果は、Ｒ位の置換基に依存する。ＦＬＴ３阻害活性は、モルホリン、エチルブロマイド＜Ｎ－メチルピペラジン＜アミン、ピペラジンの順に高かった。ＭＶ４；１１の阻害活性は、モルホリン、エチルブロマイド＜アミン、Ｎ－メチルピペラジン＜ピペラジンの順に高かった。Ｒ位のエチルブロマイド及びモルホリン置換（化合物２、６、８及び１２）は、ＦＬＴ３及びＭＶ４；１１に対する阻害能力に決定的な影響を与えなかった。エチルピペラジン化合物４及び１０は、各系においてＦＬＴ３（ＩＣ50＝３ｎＭ）及びＭＶ４；１１（ＩＣ50＝１及び４０ｎＭ）に対する最も強力な阻害活性を示した。さらに、化合物４は、周知のＦＬＴ３阻害剤であるＣＥＰ－７０１より、ＭＶ４；１１細胞の成長をさらに強力に阻害した。驚くべきことに、全てアルキル置換された一連の５－メチルエステル化合物１は、ＦＬＴ３キナーゼに対する大幅に向上した阻害活性を示した。エチルピペラジン置換された化合物４は、初期化合物１と比較して、それぞれ１０００倍及び４０倍増強された活性を有するＦＬＴ３（ＩＣ50＝３ｎＭ）及びＭＶ４；１１（ＩＣ50＝１ｎＭ）の両方において最も強力な活性を示した。また、５－カルボン酸インジルビン７の３’－オキシム位におけるアルキル置換体の導入は、ＭＶ４；１１に対する阻害効果を大幅に改善した。５－メチルエステル系と同様に、ピペラジン置換された化合物１０は、ＦＬＴ３及びＭＶ４；１１の両方において最も強力な阻害効果を示した。しかし、化合物１０は、ＦＬＴ３キナーゼに対するそれらの強力な阻害活性にもかかわらず、ＭＶ４；１１細胞に対してのみ中等度の阻害活性を示した。本発明者らは、５－カルボン酸誘導体が細胞膜を通過するので、過剰な極性であると予測した。
【0130】
受容体チロシンキナーゼ阻害剤を確認する過程において、複数のインジルビンアナログを合成して構造活性相関（Structure activity relationship）を調べた（表１）。１２個の化合物のうち化合物４（ＬＤＤ－１９３７）（図１のＡ）のメチル（２Ｚ，３Ｅ）－２'－オキソ－３－（（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－［２，３’－ビインドリニリデン］－５'－カルボキシレートジヒドロクロリドを選定し、さらに特性分析を行った。図１のＢに示すように、ＦＬＴ３キナーゼ活性に対する化合物４（ＬＤＤ－１９３７）のＩＣ50は３ｎＭであった。化合物４の他のキナーゼ活性に対するＩＣ50値も測定した（表３）。ＦＬＴ３と他のキナーゼでは、ＩＣ50の差が少なくとも１７０倍であった。
【0131】
【表3】
【0132】
２．ＬＤＤ－１９３７のＭＶ４；１１細胞増殖阻害及び選択的なアポトーシス性細胞死の誘導
ＭＶ４；１１細胞は、受容体チロシンキナーゼＦＬＴ３突然変異を有する白血病細胞である。ＦＬＴ３活性の構成的活性化（constitutive activation）を誘発する膜近傍ドメイン（juxtamembrane domain）において、ＩＴＤ（internal tandem duplication）を有するＦＬＴ３突然変異（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）がＭＶ４；１１細胞に存在する［３］。ＭＶ４；１１細胞の成長と生存はＦＬＴ３活性に依存することが知られている［２３］。ＬＤＤ－１９３７による細胞毒性を測定した。それを表４に示す。不死化Ｔリンパ球Ｊｕｒｋａｔ細胞（Immortalized T lymphocytes Jurkat cells）、前立腺癌ＰＣ－３細胞、乳癌ＭＣＦ－７細胞及び赤血球減少症Ｋ５６２細胞も細胞毒性分析に用いた。ＭＶ４；１１細胞は、他の細胞株と比較して、ＬＤＤ－１９３７処理（ＧＩ50＝１ｎＭ）に対して高い感度を示した。ＧＩ50値の観点から、ＬＤＤ－１９３７は、ＭＶ４；１１細胞に対して他の細胞株の１０００～２０００倍の効能を示した。
ＭＶ４；１１細胞は、受容体チロシンキナーゼＦＬＴ３突然変異を有する白血病細胞である。ＦＬＴ３活性の構成的活性化（constitutive activation）を誘発する膜近傍ドメイン（juxtamembrane domain）において、ＩＴＤ（internal tandem duplication）を有するＦＬＴ３突然変異（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）がＭＶ４；１１細胞に存在する［３］。ＭＶ４；１１細胞の成長と生存はＦＬＴ３活性に依存することが知られている［２３］。ＬＤＤ－１９３７による細胞毒性を測定した。それを表４に示す。不死化Ｔリンパ球Ｊｕｒｋａｔ細胞（Immortalized T lymphocytes Jurkat cells）、前立腺癌ＰＣ－３細胞、乳癌ＭＣＦ－７細胞及び赤血球減少症Ｋ５６２細胞も細胞毒性分析に用いた。ＭＶ４；１１細胞は、他の細胞株と比較して、ＬＤＤ－１９３７処理（ＧＩ50＝１ｎＭ）に対して高い感度を示した。ＧＩ50値の観点から、ＬＤＤ－１９３７は、ＭＶ４；１１細胞に対して他の細胞株の１０００～２０００倍の効能を示した。
【0133】
【表4】
【0134】
３．ＬＤＤ－１９３７のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍成長阻害
ＬＤＤ－１９３７のｉｎ ｖｉｖｏ効能を試験するために、ＭＶ４；１１異種移植研究を行った。ＭＶ４；１１細胞をＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスに皮下注射し、腫瘍を約１００ｍｍ3まで成長させた。次に、ＬＤＤ－１９３７又はＰＢＳ対照群を３週間静脈内投与した。図２のＡに示すように、ＬＤＤ－１９３７群の腫瘍の大きさは、対照群の腫瘍の大きさより大幅に小さかった。特に、１０ｍｇ／ｋｇ群においては、腫瘍の体積の測定３日目から腫瘍が消失した（図２のＡ）。腫瘍注入部位を解剖し、１０ｍｇ／ｋｇ群における腫瘍の完全な消失を確認した。よって、対照群と５ｍｇ／ｋｇ群においてのみ腫瘍の重量の測定が可能であり、ＬＤＤ－１９３７群の５ｍｇ／ｋｇにおいて有意な減少を示した（図２のＢ）。投与期間中に、群間において体重に有意な差はなかった（図３）。
ＬＤＤ－１９３７のｉｎ ｖｉｖｏ効能を試験するために、ＭＶ４；１１異種移植研究を行った。ＭＶ４；１１細胞をＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスに皮下注射し、腫瘍を約１００ｍｍ3まで成長させた。次に、ＬＤＤ－１９３７又はＰＢＳ対照群を３週間静脈内投与した。図２のＡに示すように、ＬＤＤ－１９３７群の腫瘍の大きさは、対照群の腫瘍の大きさより大幅に小さかった。特に、１０ｍｇ／ｋｇ群においては、腫瘍の体積の測定３日目から腫瘍が消失した（図２のＡ）。腫瘍注入部位を解剖し、１０ｍｇ／ｋｇ群における腫瘍の完全な消失を確認した。よって、対照群と５ｍｇ／ｋｇ群においてのみ腫瘍の重量の測定が可能であり、ＬＤＤ－１９３７群の５ｍｇ／ｋｇにおいて有意な減少を示した（図２のＢ）。投与期間中に、群間において体重に有意な差はなかった（図３）。
【0135】
４．４種の化合物のｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効果
４種のインジルビン誘導体のｉｎ ｖｉｖｏ効能を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植研究を行った。培養した細胞をＢＡＬＢ／Ｃ ｎｕ／ｎｕ（female）マウスに移植し、腫瘍を約２００ｍｍ3～３００ｍｍ3に成長させた。次に、４種のインジルビン誘導体ＬＤＤ－２６１４（化合物２１）、２６３３（化合物２８）、２６３４（化合物３４）、２６３５（化合物３３）をそれぞれ２０ｍｇ／ｋｇで投与した。比較群としてＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ５ｍｇ／ｋｇを４週間投与した。図４に示すように、４種の化合物の投与後に、肝臓と腎臓の重量には大きな差がなかったが、癌組織の重量には差があった。同じ期間中に、癌組織の体積が比較群と同レベルまで減少することが確認された（図５）。腫瘍注入部位を解剖し、２６３３（化合物２８）、２６３４（化合物３４）、２６３５（化合物３３）の３種の化合物が比較群と同等の抗癌効果を発揮することを確認した（図６）。
４種のインジルビン誘導体のｉｎ ｖｉｖｏ効能を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植研究を行った。培養した細胞をＢＡＬＢ／Ｃ ｎｕ／ｎｕ（female）マウスに移植し、腫瘍を約２００ｍｍ3～３００ｍｍ3に成長させた。次に、４種のインジルビン誘導体ＬＤＤ－２６１４（化合物２１）、２６３３（化合物２８）、２６３４（化合物３４）、２６３５（化合物３３）をそれぞれ２０ｍｇ／ｋｇで投与した。比較群としてＤｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ５ｍｇ／ｋｇを４週間投与した。図４に示すように、４種の化合物の投与後に、肝臓と腎臓の重量には大きな差がなかったが、癌組織の重量には差があった。同じ期間中に、癌組織の体積が比較群と同レベルまで減少することが確認された（図５）。腫瘍注入部位を解剖し、２６３３（化合物２８）、２６３４（化合物３４）、２６３５（化合物３３）の３種の化合物が比較群と同等の抗癌効果を発揮することを確認した（図６）。
【0136】
ＦＭＳ様受容体チロシンキナーゼ－３（ＦＬＴ３）は、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）系に属し、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者の１／３においてＦＬＴ３突然変異が観察される。前述したように、本発明者らは、インジルビン骨格を含む強力なＦＬＴ３阻害剤、ＬＤＤ－１９３７を確認した。ＦＬＴ３に対するＬＤＤ－１９３７の強力な阻害活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ分析（ＩＣ50＝３ｎＭ）において確認された。ＬＤＤ－１９３７化合物は、ＭＶ４（１１細胞（ＧＩ50＝１ｎＭ））の成長を選択的に阻害し、アポトーシス細胞死を誘発した。ＬＤＤ－１９３７は、Ｇ2／Ｍステップで細胞周期停止（cell cycle arrest）を起こし、サブ－Ｇ1ステップで細胞集団（population）を増加させた。ＦＬＴ３のダウンストリームシグナリングであるＳＴＡＴ５のリン酸化は、ＬＤＤ－１９３７により用量依存的に大幅に減少した。マウスのＬＤＤ－１９３７の薬物動態学的特性（Pharmacokinetic properties）を調べた。次に、ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果をＭＶ４；１１異種移植（xenograft）により評価した。ｎｕ／ｎｕマウスに５ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇで静脈投与すると、腫瘍の体積と重量が対照群に比べて有意に減少した。
【0137】
以上、本発明の特定の部分を詳細に記述したが、当業界における通常の知識を有する者にとってこれらの具体的な記述は単に好ましい実現形態にすぎないので、本発明がこれらに限定されるものでないことは明白である。よって、本発明の実質的な範囲は、特許請求の範囲とその等価物によって定義されるものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
